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KR20210097228A - 타우 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법 - Google Patents

타우 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법 Download PDF

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KR20210097228A
KR20210097228A KR1020217024207A KR20217024207A KR20210097228A KR 20210097228 A KR20210097228 A KR 20210097228A KR 1020217024207 A KR1020217024207 A KR 1020217024207A KR 20217024207 A KR20217024207 A KR 20217024207A KR 20210097228 A KR20210097228 A KR 20210097228A
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KR
South Korea
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certain embodiments
modified
oligonucleotide
nucleosides
tau
Prior art date
Application number
KR1020217024207A
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English (en)
Inventor
홀리 코르다지비츠
Original Assignee
바이오젠 엠에이 인코포레이티드
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Publication date
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Abstract

세포 또는 동물에서 타우 mRNA의 양 또는 활성을 감소시키고, 소정의 경우에 세포 또는 동물에서 타우 단백질의 양을 감소시키기 위한 화합물, 방법 및 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 화합물, 방법 및 약제학적 조성물은 신경퇴행성 질환의 적어도 하나의 증상을 경감시키는 데 유용하다. 이러한 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 및 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가를 포함한다. 이러한 신경퇴행성 질환은 타우병증, 알츠하이머병, 전두측두엽 치매(FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비(PSP), 만성 외상성 뇌병증(CTE), 뇌피질 기저 신경절 퇴행증(CBD), 뇌전증 및 드라벳 증후군을 포함한다.

Description

타우 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법 {COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING TAU EXPRESSION}
서열 목록
본 출원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 176KB 크기인 2017년 9월 7일자에 생성된 BIOL0285WOSEQ_ST25라 칭한 파일로 제공된다. 서열 목록의 전자 포맷의 정보는 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다.
분야
세포 또는 동물에서 타우 mRNA의 양 또는 활성을 감소시키고, 소정의 경우에 세포 또는 동물에서 타우 단백질의 양을 감소시키기 위한 화합물, 방법 및 약제학적 조성물이 제공된다. 이러한 화합물, 방법 및 약제학적 조성물은 신경퇴행성 질환의 적어도 하나의 증상을 경감시키는 데 유용하다. 이러한 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 및 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가를 포함한다. 이러한 신경퇴행성 질환은 타우병증, 알츠하이머병, 전두측두엽 치매(Fronto-temporal Dementia: FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비(Progressive Supranuclear Palsy: PSP), 만성 외상성 뇌병증(Chronic Traumatic Encephalopathy: CTE), 뇌피질 기저 신경절 퇴행증(Corticobasal Ganglionic Degeneration: CBD), 뇌전증 및 드라벳 증후군을 포함한다.
타우의 1차 기능은 유사분열, 세포질분열 및 소포 수송에 관여된 세포골격의 중요한 구조 성분인 미세소관에 결합하고, 이를 안정화시킨다. 타우는 다수의 조직에서 발견되지만, 특히 뉴런의 엑손에서 풍부하다. 인간에서, 엑손 2, 3 및 10의 대안적인 스플라이싱에 의해 생성된 타우의 6개의 아이소폼이 있다. 단백질의 N 말단에서의 엑손 2 및 3의 스플라이싱은 0개, 1개 또는 2개의 29 아미노산 산성 도메인의 포함을 발생시키고, 각각 0N, 1N 또는 2N 타우라 칭해진다. 타우 기능에 대한 이 도메인의 영향은 완전히 명확하지 않지만, 혈장 막과의 상호작용에서 역할을 할 수 있다. C 말단에서의 엑손 10의 포함은 엑손 10에 의해 코딩된 미세소관 결합 도메인의 포함을 발생시킨다. 타우에서 그 외에 3개의 미세소관 결합 도메인이 있으므로, 이 타우 아이소폼(엑손 10 포함됨)은 4R 타우라 칭해지고, 여기서 'R'은 미세소관 결합 도메인의 반복의 수를 의미한다. 엑손 10이 없는 타우는 3R 타우라 칭해진다. 더 많은 미세소관 결합 도메인(3R과 비교된 4R)은 미세소관에 대한 결합을 증가시키므로, 4R 타우는 미세소관 결합 및 어셈블리를 아마도 상당히 증가시킨다. 3R/4R 타우의 비율은 발전적으로 조절되고, 태아 조직은 배타적으로 3R 타우를 발현하고, 성인 인간 조직은 3R/4R 타우의 대략 동등한 수준을 발현한다. 3R/4R 타우의 정상 비율로부터의 편차는 신경퇴행성 FTD 타우병증의 특징이다. 성인 동물에서 차후 단계에서 3R/4R 타우 비율을 변경하는 것이 타우 발병에 어떻게 영향을 미치는지는 공지되어 있지 않다.
세린-트레오닌 지향된 인산화는 타우의 미세소관 결합 능력을 조절한다. 과인산화는 미세소관으로부터 타우의 탈착을 촉진한다. 타우의 다른 번역 후 변형이 기재되어 있지만, 이들의 중요성은 명확하지 않다. 타우의 인산화는 또한 태아 조직에서의 더 높은 인산화 및 성인에서의 훨씬 더 낮은 인산화에 의해 발육상으로 조절된다. 신경퇴행성 장애의 하나의 특징은 비정상적으로 증가된 타우 인산화이다. 미세소관 네트워크는 세포의 형태를 유지시키고 수송 기계를 조작하기 위해 필요한 구조 통합성을 포함하여 세포 내에 많은 중요한 과정에 관여된다. 미세소관에 대한 타우의 결합이 미세소관을 안정화시키므로, 타우는 아마도 이들 과정 중 몇몇의 중요한 매개자이고, 신경퇴행성 질환에서의 정상 타우의 파괴는 이 중요한 세포 과정 중 몇몇을 파괴할 수 있다. 타우가 신경퇴행성 증후군에서 중요할 수 있다는 초기 표시자 중 하나는 타우가 알츠하이머병에서 신경섬유 봉입체(neurofibrillary inclusion)의 중요한 성분이라는 인식이다. 사실, 신경섬유 봉입체는 과인산화된 타우 단백질의 응집체이다. 아밀로이드 베타 함유 반과 함께, 신경섬유 봉입체는 알츠하이머병의 특징이고, 인지 손상과 상당히 상관된다. AD에서의 타우 축적의 95%는 뉴런 과정에서 발견되고, 신경염 이상증이라 칭해진다. 이 미세소관 연관된 단백질이 미세소관으로부터 유리되고, 단백질의 축적을 형성하는 과정(들) 및 이것이 뉴런 독성과 어떻게 관련되는지가 잘 이해되지 않는다.
뉴런 타우 봉입체는 알츠하이머병뿐만 아니라, 전두측두엽 치매(Frontotemporal dementia: FTD), PSP 및 CBD의 하위집단의 병리학적 특징이다. 타우와 신경퇴행 사이의 연관은 타우 유전자에서의 돌연변이가 FTD의 하위집단을 야기한다는 발견에 의해 굳어진다. 이 유전적 데이터는 타우의 3R:4R 비율의 중요성을 또한 강조한다. FTD를 야기하는 많은 타우 돌연변이는 타우 스플라이싱의 변경을 발생시키고, 이는 엑손 10의 우선적 포함 및 이에 따라 증가된 4R 타우를 발생시킨다. 전체 타우 수준은 정상이다. 타우 아이소폼 변경 또는 아미노산 변경 또는 둘 다가 신경퇴행을 야기하는지는 여전히 공지되어 있지 않다. 최근의 데이터는 PSP가 증가된 4R:3R 타우 비율과 또한 연관될 수 있다는 것을 제안한다.
신경퇴행에 대한 타우 비율의 영향을 이해하는 것을 돕기 위해, 스플라이싱 타우 돌연변이 중 하나(N279K)에 기초한 마우스 모델은 타우 촉진자 및 엑손 10의 플랭킹 인트론 서열을 포함하는 미니유전자를 사용하여 생성되었다. 인간에서처럼, 이 마우스는 WT 타우를 발현하는 형질전환과 비교하여 4R 타우의 증가된 수준을 나타내고, 행동 및 운동 비정상, 및 뇌 및 척수에서의 응집된 타우의 축적을 발생시킨다.
타우 단백질은 알츠하이머병, FTD, PSP, CBD, 권투선수 치매, 염색체와 연결된 파킨슨병, 리티고-보딕병(Lytico-Bodig disease), 매듭 우세 치매, 신경교종, 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화성 범뇌염, 연독성뇌증, 결절성 경화증, 할러포르탠-스파츠병(Hallervorden-Spatz disease), 픽병, 호은성 입자 질환, 피질기저 퇴행 또는 전두측두엽 퇴행 및 기타를 포함하는 뇌의 다수의 질환과 연관된다. 타우 연관 장애, 예컨대 AD는 노인에서 치매의 가장 흔한 원인이다. AD는 세계적으로 예상된 1500만 명의 사람 및 85세 이상의 집단의 40%에 영향을 미친다. AD는 타우 신경섬유 봉입체(NFT) 및 아밀로이드-β(Aβ) 반의 2개의 병리학적 특징을 특징으로 한다.
이러한 신경퇴행성 질환을 치료하기 위한 허용 가능한 옵션의 결여가 현재 있다. 따라서, 이러한 질환의 치료를 위한 방법을 제공하는 것이 본 명세서에서 목적이다.
세포 또는 동물에서 타우 mRNA의 양 또는 활성을 감소시키고, 소정의 경우에 타우 단백질의 양을 감소시키기 위한 화합물 및 방법이 본 명세서에 제공된다. 소정의 실시형태에서, 동물은 신경퇴행성 질환을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 동물은 타우병증, 알츠하이머병, 전두측두엽 치매(FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비(PSP), 만성 외상성 뇌병증(CTE), 뇌피질 기저 신경절 퇴행증(CBD), 뇌전증 또는 드라벳 증후군을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 타우 mRNA의 발현을 감소시키기에 유용한 화합물은 올리고머 화합물이다. 소정의 실시형태에서, 화합물 814907호는 타우 mRNA 및/또는 타우 단백질의 발현을 감소시키기에 유용하다.
신경퇴행성 질환의 적어도 하나의 증상을 예방하거나 경감시키기에 유용한 방법이 또한 제공된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 및 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가이다. 소정의 실시형태에서, 예방 또는 경감은 기억의 유지 또는 개선, 운동 기능의 유지 또는 개선, 및/또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 유지 또는 감소를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 증상의 이러한 예방 또는 경감은 이러한 증상의 발생의 진행의 속도의 감소 또는 지연이다.
상기 일반 설명 및 하기 상세한 설명 둘 다가 오직 예시적이고 설명적이고 제한이 아닌 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서, 단수의 사용은, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 복수를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "또는"의 사용은, 달리 기술되지 않는 한, "및/또는"을 의미한다. 더구나, 용어 "포함하는", 및 다른 형태, 예컨대 "포함한다" 및 "포함된다"의 사용은 제한이 아니다. 또한, "요소" 또는 "성분"과 같은 용어는, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 하나의 단위를 포함하는 요소 및 성분 및 하나 초과의 아단위를 포함하는 요소 및 성분 둘 다를 포함한다.
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정의
특정한 정의가 제공되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 치유성 및 약제학적 화학과 연결되어 사용된 명명법 및 이들의 절차 및 기법은 널리 공지되고 당해 분야에 흔히 사용되는 것이다. 허용되는 경우, 본 개시내용에 걸쳐 언급된 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 다른 공보 및 다른 데이터는 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다.
달리 표시되지 않는 한, 하기 용어는 하기 의미를 갖는다:
정의
본 명세서에 사용된 바대로, "2'-데옥시뉴클레오사이드"는 천연 발생 데옥시리보핵산(DNA)에서 발견된 바와 같은 2'-H(H) 퓨라노실 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 소정의 실시형태에서, 2'-데옥시뉴클레오사이드는 변형된 핵염기를 포함할 수 있거나, RNA 핵염기(유라실)를 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, "2'-치환된 뉴클레오사이드"는 2'-치환된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, 당 모이어티와 관련하여 "2'-치환된"은 H 또는 OH 이외의 적어도 하나의 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "투여하는"은 동물에 약제학적 물질을 제공하는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "동물"은 인간 또는 비인간 동물을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "안티센스 활성"은 이의 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화에 기인한 임의의 검출 가능한 및/또는 측정 가능한 변화를 의미한다. 소정의 실시형태에서, 안티센스 활성은 안티센스 화합물의 부재 하에 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준과 비교하여 이러한 표적 핵산에 의해 코딩된 표적 핵산 또는 단백질의 양 또는 발현의 감소이다.
본 명세서에 사용된 바대로, "안티센스 화합물"은 적어도 하나의 안티센스 활성을 달성할 수 있는 올리고머 화합물 또는 올리고머 듀플렉스를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 치료에 관한 "경감시킨다"는 치료의 부재 하에 동일한 증상에 대한 적어도 하나의 증상의 개선을 의미한다. 소정의 실시형태에서, 경감은 증상의 중증도 또는 빈도의 감소, 또는 증상의 중증도 또는 빈도에서의 진행의 지연된 발생 또는 느려짐이다. 소정의 실시형태에서, 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가이다. 소정의 실시형태에서, 이들 증상의 경감은 기억의 유지 또는 개선, 운동 기능의 유지 또는 개선, 및/또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 유지 또는 감소를 발생시킨다.
본 명세서에 사용된 바대로, "신경퇴행성 질환의 적어도 하나의 증상"은 기억 상실, 운동 기능 상실, 또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "이환식 뉴클레오사이드" 또는 "BNA"는 이환식 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "이환식 당" 또는 "이환식 당 모이어티"는 2개의 고리를 포함하는 변형된 당 모이어티(여기서, 제2 고리는 제1 고리에서 원자의 2개를 연결하는 브릿지를 통해 형성되어서 이환식 구조를 형성함)를 의미한다. 소정의 실시형태에서, 이환식 당 모이어티의 제1 고리는 퓨라노실 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, 이환식 당 모이어티는 퓨라노실 모이어티를 포함하지 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, "키랄 풍부화 집단(chirally enriched population)"은, 특정한 키랄 중앙에서 특정한 입체화학 배좌를 함유하는 집단 내의 분자의 수 또는 백분율이, 특정한 키랄 중앙이 입체랜덤인 경우, 집단 내의 동일한 특정한 키랄 중앙에서 동일한 특정한 입체화학 배좌를 함유하는 것으로 예상된 분자의 수 또는 백분율보다 큰, 동일한 분자식의 복수의 분자를 의미한다. 각각의 분자 내의 다수의 키랄 중앙을 갖는 분자의 키랄 풍부화 집단은 하나 이상의 입체랜덤 키랄 중앙을 함유할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 분자는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 소정의 실시형태에서, 분자는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물이다.
본 명세서에 사용된 바대로, "절단 가능한 모이어티"는 예를 들어 세포, 동물 또는 인간 내에 생리학적 조건 하에 절단된 결합 또는 원자의 군을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 올리고뉴클레오타이드에 관한 "상보성"은, 올리고뉴클레오타이드 및 다른 핵산의 핵염기 서열이 반대의 방향으로 정렬될 때, 적어도 70%의 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 또는 하나 이상의 이의 영역 및 또 다른 핵산의 핵염기 또는 하나 이상의 이의 영역이 서로와 수소 결합할 수 있다는 것을 의미한다. 상보성 핵염기는 서로와 수소 결합을 형성할 수 있는 핵염기를 의미한다. 상보성 핵염기 쌍은 아데닌(A) 및 타이민(T), 아데닌(A) 및 유라실(U), 사이토신(C) 및 구아닌(G), 5-메틸사이토신(mC) 및 구아닌(G)을 포함한다. 상보성 올리고뉴클레오타이드 및/또는 핵산은 각각의 뉴클레오사이드에서 핵염기 상보성을 가질 필요가 없다. 오히려, 몇몇 미스매치는 관용된다. 본 명세서에 사용된 바대로, 올리고뉴클레오타이드에 관한 "완전히 상보성" 또는 "100% 상보성"은 올리고뉴클레오타이드가 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드에서 또 다른 올리고뉴클레오타이드 또는 핵산에 상보성이라는 것을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "공액기"는 올리고뉴클레오타이드에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된 원자의 군을 의미한다. 공액기는 공액 모이어티를 올리고뉴클레오타이드에 부착시키는 공액 모이어티 및 공액 링커를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "공액 링커"는 공액 모이어티를 올리고뉴클레오타이드에 연결하는 적어도 하나의 결합을 포함하는 원자의 군을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "공액 모이어티"는 공액 링커를 통해 올리고뉴클레오타이드에 부착된 원자의 군을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 올리고뉴클레오타이드의 맥락에서 "인접한"은 뉴클레오사이드, 핵염기, 당 모이어티, 또는 서로에 바로 인접한 뉴클레오사이드간 연결을 의미한다. 예를 들어, "인접한 핵염기"는 서열에서 서로에 바로 인접한 핵염기를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "갭머"는 하나 이상의 뉴클레오사이드를 갖는 외부 영역 사이에 배치된 RNase H 절단을 지지하는 복수의 뉴클레오사이드를 갖는 내부 영역을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 의미하고, 내부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드는 외부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드로부터 화학적으로 구별된다. 내부 영역은 "갭"이라 칭해질 수 있고, 외부 영역은 "날개"라 칭해질 수 있다. 달리 표시되지 않는 한, "갭머"는 당 모티프를 의미한다. 달리 표시되지 않는 한, 갭머의 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티는 비변형된 2'-데옥시퓨라노실이다. 따라서, 용어 "MOE 갭머"는 2'-데옥시뉴클레오사이드의 날개 및 갭 둘 다에서 2'-MOE 뉴클레오사이드의 당 모티프를 갖는 갭머를 나타낸다. 달리 표시되지 않는 한, MOE 갭머는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결 및/또는 변형된 핵염기를 포함할 수 있고, 이러한 변형은 반드시 당 변형의 갭머 패턴을 따르지 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, "혼성화"는 상보성 올리고뉴클레오타이드 및/또는 핵산의 쌍 짓기 또는 어닐링을 의미한다. 특정한 기전으로 제한되지는 않지만, 혼성화의 가장 흔한 기전은 상보성 핵염기 사이의 왓슨-크릭(Watson-Crick), 후그스틴(Hoogsteen) 또는 역전된 후그스틴 수소 결합일 수 있는 수소 결합을 수반한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 용어 "뉴클레오사이드간 연결"은 올리고뉴클레오타이드에서 인접한 뉴클레오사이드 사이의 공유 연결이다. 본 명세서에 사용된 바대로, "변형된 뉴클레오사이드간 연결"은 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결 이외의 임의의 뉴클레오사이드간 연결을 의미한다. "포스포로티오에이트 연결"은 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결의 비브릿징 산소 원자 중 하나가 황 원자에 의해 대체된 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다.
본 명세서에 사용된 바대로, "링커-뉴클레오사이드"는 올리고뉴클레오타이드를 공액 모이어티에 직접적으로 또는 간접적으로 연결시키는 뉴클레오사이드를 의미한다. 링커-뉴클레오사이드는 올리고머 화합물의 공액 링커 내에 위치한다. 링커-뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드와 인접하더라도 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오타이드 부분의 일부인 것으로 생각되지 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, "비이환식 변형된 당 모이어티"는 제2 고리를 형성하도록 당의 2개의 원자 사이에 브릿지를 형성하지 않는 치환기와 같은 변형을 포함하는 변형된 당 모이어티를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "미스매치" 또는 "비상보성"은, 제1 및 제2 올리고머 화합물이 정렬될 때, 제2 올리고뉴클레오타이드 또는 표적 핵산의 상응하는 핵염기에 상보성이 아닌 제1 올리고뉴클레오타이드의 핵염기를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "MOE"는 메톡시에틸을 의미한다. "2'-MOE"는 퓨라노실 고리의 2' 위치에서의 -OCH2CH2OCH3 기를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "모티프"는 올리고뉴클레오타이드에서 비변형된 및/또는 변형된 당 모이어티, 핵염기, 및/또는 뉴클레오사이드간 연결의 패턴을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "mRNA"는 단백질을 코딩하는 RNA 전사체를 의미하고, 달리 기재되지 않는 한, 프리-mRNA 및 성숙 mRNA를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "핵염기"는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "비변형된 핵염기"는 아데닌(A), 타이민(T), 사이토신(C), 유라실(U) 및 구아닌(G)이다. 본 명세서에 사용된 바대로, "변형된 핵염기"는 적어도 하나의 비변형된 핵염기와 쌍을 지을 수 있는 비변형된 A, T, C, U 또는 G 이외의 원자의 군이다. "5-메틸사이토신"은 변형된 핵염기이다. 보편적 염기는 5개 중 임의의 1개의 비변형된 핵염기와 쌍을 지을 수 있는 변형된 핵염기이다. 본 명세서에 사용된 바대로, "핵염기 서열"은 임의의 당 또는 뉴클레오사이드간 연결 변형과 독립적인 핵산 또는 올리고뉴클레오타이드에서의 인접한 핵염기의 순서를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "뉴클레오사이드"는 핵염기 및 당 모이어티를 포함하는 화합물을 의미한다. 핵염기 및 당 모이어티는 각각 독립적으로 비변형되거나 변형된다. 본 명세서에 사용된 바대로, "변형된 뉴클레오사이드"는 변형된 핵염기 및/또는 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 변형된 뉴클레오사이드는 핵염기가 결여된 비염기성 뉴클레오사이드를 포함한다. "연결된 뉴클레오사이드"는 연속 순서로 연결된 뉴클레오사이드이다(즉, 연결된 것 사이에 추가적인 뉴클레오사이드가 존재하지 않음).
본 명세서에 사용된 바대로, "올리고머 화합물"은 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 하나 이상의 추가적인 특징, 예컨대 공액기 또는 말단 기를 의미한다. 올리고머 화합물은 제1 올리고머 화합물에 상보성인 제2 올리고머 화합물과 쌍을 지을 수 있거나, 쌍을 짓지 않을 수 있다. "단일 가닥 올리고머 화합물"은 쌍을 짓지 않은 올리고머 화합물이다. 용어 "올리고머 듀플렉스"는 상보성 핵염기 서열을 갖는 2개의 올리고머 화합물에 의해 형성된 듀플렉스를 의미한다. 올리고머 듀플렉스의 각각의 올리고머 화합물은 "듀플렉스의 올리고머 화합물"이라 칭해질 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, "올리고뉴클레오타이드"는 뉴클레오사이드간 연결을 통해 연결이 된 연결된 뉴클레오사이드의 가닥을 의미하고, 각각의 뉴클레오사이드 및 뉴클레오사이드간 연결은 변형되거나 비변형될 수 있다. 달리 표시되지 않는 한, 올리고뉴클레오타이드는 8개 내지 50개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 본 명세서에 사용된 바대로, "변형된 올리고뉴클레오타이드"는 적어도 하나의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드간 연결이 변형된 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "비변형된 올리고뉴클레오타이드"는 임의의 뉴클레오사이드 변형 또는 뉴클레오사이드간 변형을 포함하지 않는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제"는 동물에게 투여하는 데 사용하기에 적합한 임의의 물질을 의미한다. 소정의 이러한 담체는 약제학적 조성물이 대상체에 의한 경구 섭취를 위해 예를 들어 정제, 환제, 드라제, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 및 로젠지로서 제제화되게 한다. 소정의 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제는 무균 물; 무균 식염수; 또는 무균 완충제 용액이다.
본 명세서에 사용된 바대로 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 화합물의 생리학적으로 및 약제학적으로 허용 가능한 염, 예컨대 올리고머 화합물, 즉 모 화합물의 원하는 생리학적 활성을 보유하고 이에 대한 원치 않는 독성학적 효과를 부여하지 않는 염을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로 "약제학적 조성물"은 대상체에 투여하기에 적합한 물질의 혼합물을 의미한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 안티센스 화합물 및 무균 수성 용액을 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 소정의 세포주에서의 자유 흡수 검정에서의 활성을 보여준다.
본 명세서에 사용된 바대로, "인 모이어티"는 인 원자를 포함하는 원자의 군을 의미한다. 소정의 실시형태에서, 인 모이어티는 모노-, 다이- 또는 트라이-포스페이트 또는 포스포로티오에이트를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "프로드럭"은 동물 또는 이의 세포 내에 상이한 형태로 전환되는 신체 외부의 형태의 치료제를 의미한다. 통상적으로, 동물 내의 프로드럭의 전환은 세포 또는 조직에 존재하는 효소(예를 들어, 내인성 또는 바이러스 효소) 또는 화학물질의 작용에 의해 및/또는 생리학적 조건에 의해 수월해진다.
본 명세서에 사용된 바대로, "양 또는 활성의 감소 또는 저해"는 비치료된 또는 대조군 샘플에서의 전사 발현 또는 활성에 대한 전사 발현 또는 활성의 감소 또는 봉쇄를 의미하고, 전사 발현 또는 활성의 완전 제거를 반드시 나타내지 않는다.
본 명세서에 사용된 바대로, "RNAi 화합물"은 표적 핵산 및/또는 표적 핵산에 의해 코딩된 단백질을 조정하도록 RISC 또는 Ago2를 통해 적어도 부분적으로 작용하는 안티센스 화합물을 의미한다. RNAi 화합물은 이중 가닥 siRNA, 단일 가닥 RNA(ssRNA) 및 마이크로RNA, 예를 들어 마이크로RNA 모방체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, RNAi 화합물은 표적 핵산의 양, 활성, 및/또는 스플라이싱을 조정한다. 용어 RNAi 화합물은 RNase H를 통해 작용하는 안티센스 화합물을 배제한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 올리고뉴클레오타이드에 관한 "자가 상보성"은 적어도 부분적으로 자체로 혼성화하는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "표준 세포 검정"은 실시예 1에 기재된 검정 및 이의 합당한 변형을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 동일한 분자식의 분자의 집단의 맥락에서 "입체랜덤 키랄 중앙"은 랜덤 입체화학 배좌를 갖는 키랄 중앙을 의미한다. 예를 들어, 입체랜덤 키랄 중앙을 포함하는 분자의 집단에서, 입체랜덤 키랄 중앙의 (S) 배좌를 갖는 분자의 수는 입체랜덤 키랄 중앙의 (R) 배좌를 갖는 분자의 수와 동일할 수 있지만, 반드시는 아니다. 키랄 중앙의 입체화학 배좌는 입체화학 배좌를 조절하도록 설계되지 않은 합성 방법의 결과일 때 랜덤인 것으로 생각된다. 소정의 실시형태에서, 입체랜덤 키랄 중앙은 입체랜덤 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
본 명세서에 사용된 바대로, "당 모이어티"는 비변형된 당 모이어티 또는 변형된 당 모이어티를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, "비변형된 당 모이어티"는 RNA에서 발견된 바와 같은 2'-OH(H) 퓨라노실 모이어티("비변형된 RNA 당 모이어티") 또는 DNA에서 발견된 바와 같은 2'-H(H) 모이어티("비변형된 DNA 당 모이어티")를 의미한다. 비변형된 당 모이어티는 각각 1', 3' 및 4' 위치에서의 1개의 수소, 3' 위치에서의 산소 및 5' 위치에서의 2개의 수소를 갖는다. 본 명세서에 사용된 바대로, "변형된 당 모이어티" 또는 "변형된 당"은 변형된 퓨라노실 당 모이어티 또는 당 대용물(sugar surrogate)을 의미한다. 본 명세서에 사용된 바대로, 변형된 퓨라노실 당 모이어티는 비변형된 당 모이어티의 적어도 하나의 수소 대신에 비수소 치환기를 포함하는 퓨라노실 당을 의미한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 퓨라노실 당 모이어티는 2'-치환된 당 모이어티이다. 이러한 변형된 퓨라노실 당 모이어티는 이환식 당 및 비이환식 당을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "당 대용물"은 올리고뉴클레오타이드에서 핵염기를 또 다른 기, 예컨대 뉴클레오사이드간 연결, 공액기 또는 말단 기에 연결할 수 있는 퓨라노실 모이어티 이외를 갖는 변형된 당 모이어티를 의미한다. 당 대용물을 포함하는 변형된 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드 내의 하나 이상의 위치로 도입될 수 있고, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 상보성 올리고머 화합물 또는 핵산에 혼성화할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바대로, "표적 핵산" 및 "표적 RNA"는 안티센스 화합물이 영향을 미치도록 설계된 핵산을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "표적 영역"은 올리고머 화합물이 혼성화하도록 설계된 표적 핵산의 일부를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "말단 기"는 올리고뉴클레오타이드의 말단에 공유 연결된 화학 기 또는 원자의 군을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바대로, "치료학적 유효량"은 동물에게 치료학적 이익을 제공하는 약제학적 물질의 양을 의미한다. 예를 들어, 치료학적 유효량은 질환의 증상을 개선한다.
본 개시내용은 하기 비제한적인 번호 있는 실시형태를 제공한다:
실시형태 1: 하기 화학식에 따른 변형된 올리고뉴클레오타이드:
Figure pat00001
본 명세서에서의 정의 및 본 개시내용과 일치하여, 실시형태 1의 화합물은 임의의, 모든 또는 무의 연결의 입체화학을 고의적으로 제어함으로써 이루어질 수 있다.
실시형태 2: 하기 화학식에 따른 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물: mCes mCeo Ges Tes Tes Tds Tds mCds Tds Tds Ads mCds mCds Aes mCeo mCes mCes Te; 여기서,
A = 아데닌이고,
mC = 5-메틸사이토신이고,
G = 구아닌이고,
T = 타이민이고,
e = 2'-MOE 뉴클레오사이드이고,
d = 2'-데옥시뉴클레오사이드이고,
s = 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고,
o = 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결이다.
실시형태 3: 공액기를 포함하는 실시형태 2의 올리고머 화합물.
실시형태 4: 실시형태 2 또는 실시형태 3의 올리고머 화합물을 포함하는 올리고머 듀플렉스.
실시형태 5: 실시형태 1에 따른 변형된 올리고뉴클레오타이드, 실시형태 2 또는 실시형태 3에 따른 올리고머 화합물 또는 실시형태 4에 따른 올리고머 듀플렉스를 포함하거나 이들로 이루어진 안티센스 화합물.
실시형태 6: 실시형태 1에 따른 변형된 올리고뉴클레오타이드, 실시형태 2 또는 실시형태 3에 따른 올리고머 화합물 또는 실시형태 4에 따른 올리고머 듀플렉스, 또는 이의 염 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
실시형태 7: 실시형태 6에 있어서, 염은 나트륨인, 조성물.
실시형태 8: 실시형태 6 또는 실시형태 7에 따른 약제학적 조성물을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시형태 9: 치료학적 유효량의 실시형태 6 또는 실시형태 7에 따른 약제학적 조성물을 타우와 연관된 질환을 갖거나 이를 발생시킬 위험에 있는 개인에게 투여하는 단계; 및 이로써 타우와 연관된 질환을 치료하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 10: 실시형태 9에 있어서, 타우와 연관된 질환은 신경퇴행성 질환인, 방법.
실시형태 11: 실시형태 10에 있어서, 신경퇴행성 질환은 타우병증, 알츠하이머병, 전두측두엽 치매(FTD), FTDP-17, 진행성 핵상 마비(PSP), 만성 외상성 뇌병증(CTE), 뇌피질 기저 신경절 퇴행증(CBD), 뇌전증 또는 드라벳 증후군 중 임의의 것인, 방법.
실시형태 12: 실시형태 10 또는 실시형태 11에 있어서, 신경퇴행성 질환의 적어도 하나의 증상은 경감되는, 방법.
실시형태 13: 실시형태 12에 있어서, 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 및 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가 중 임의의 것인, 방법.
실시형태 14: 하기 식에 따른 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 염:
Figure pat00002
실시형태 15. 실시형태 14에 있어서, 화학식의 나트륨염인, 변형된 올리고뉴클레오타이드.
실시형태 16. 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5' 날개 분절, 중앙 갭 분절 및 3' 날개 분절로 이루어진 갭머이고, 여기서,
5' 날개 분절은 5개의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 이루어지고,
중앙 갭 분절은 8개의 2'-데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고,
3' 날개 분절은 5개의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 이루어지고;
변형된 올리고뉴클레오타이드는 핵염기 서열 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3'(서열 번호 8)를 갖고, 각각의 사이토신은 5-메틸사이토신이고; 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 연결은 5'로부터 3'로 sossssssssssssoss, s는 각각 포스포로티오에이트 연결이고, o는 각각 포스포다이에스터 연결인, 화합물.
실시형태 17. 변형된 올리고뉴클레오타이드로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5' 날개 분절, 중앙 갭 분절 및 3' 날개 분절로 이루어진 갭머이고, 여기서
5' 날개 분절은 5개의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 이루어지고,
중앙 갭 분절은 8개의 2'-데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고,
3' 날개 분절은 5개의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 이루어지고;
변형된 올리고뉴클레오타이드는 핵염기 서열 5'-CCGTTTTCTTACCACCCT-3'(서열 번호 8)을 갖고, 각각의 사이토신은 5-메틸사이토신이고; 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 연결은 5'로부터 3'로 sossssssssssssoss이고, s는 각각 포스포로티오에이트 연결이고, o는 각각 포스포다이에스터 연결인, 변형된 올리고뉴클레오타이드.
실시형태 18. 임의의 실시형태 14, 15 또는 17의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 키랄 풍부화 집단으로서, 집단은 특정한 입체화학 배좌를 갖는 적어도 하나의 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 19. 실시형태 18에 있어서, 집단은 (Sp) 배좌를 갖는 적어도 하나의 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 20. 실시형태 18에 있어서, 집단은 (Rp) 배좌를 갖는 적어도 하나의 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 21. 실시형태 18에 있어서, 집단은 각각의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에서 특정한 독립적으로 선택된 입체화학 배좌를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 22. 실시형태 21에 있어서, 집단은 각각의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에서 (Sp) 배좌를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 23. 실시형태 21에 있어서, 집단은 각각의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에서 (Rp) 배좌를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 24. 실시형태 21에 있어서, 집단은 하나의 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에서 (Rp) 배좌 및 각각의 나머지 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결에서 (Sp) 배좌를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 25. 실시형태 18 또는 실시형태 21에 있어서, 집단은 5'→3' 방향으로 Rp, Sp 및 Sp 배좌의 적어도 3 인접한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 26. 임의의 실시형태 1 내지 17의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 키랄 풍부화 집단으로서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 모든 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결은 입체랜덤인, 키랄 풍부화 집단.
실시형태 27. 임의의 실시형태 14, 15, 또는 17의 변형된 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
실시형태 28. 임의의 실시형태 18 내지 26의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
실시형태 29. 실시형태 27 또는 실시형태 28에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 희석제는 인산염 완충 식염수(phosphate-buffered saline: PBS) 또는 인공 CSF(artificial CSF: aCSF)인, 약제학적 조성물.
실시형태 30. 실시형태 27 또는 실시형태 28에 있어서, 약제학적 조성물은 변형된 올리고뉴클레오타이드 및 인산염 완충 식염수(PBS) 또는 인공 CSF(aCSF)로 본질적으로 이루어진, 약제학적 조성물.
I. 소정의 올리고뉴클레오타이드
소정의 실시형태에서, 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 올리고뉴클레오타이드가 본 명세서에 제공된다. 올리고뉴클레오타이드는 비변형된 올리고뉴클레오타이드(RNA 또는 DNA)일 수 있거나, 변형된 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. 변형된 올리고뉴클레오타이드는 비변형된 RNA 또는 DNA에 비해 적어도 하나의 변형을 포함한다. 즉, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드(변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기 포함) 및/또는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다.
A. 소정의 변형된 뉴클레오사이드
변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티 또는 변형된 핵염기 또는 변형된 당 모이어티 및 변형된 핵염기 둘 다를 포함한다.
1. 소정의 당 모이어티
소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 비이환식 변형된 당 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 이환식 또는 삼환식 당 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 이러한 당 대용물은 변형된 당 모이어티의 다른 유형의 것에 상응하는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 하나 이상의 치환기를 갖는 퓨라노실 고리를 포함하는 비이환식 변형된 당 모이어티이고, 이들 치환기 중 어느 것도 이환식 구조를 형성하도록 퓨라노실 고리의 2개의 원자를 브릿징하지 않는다. 이러한 비브릿징 치환기는 2', 4', 및/또는 5' 위치에서의 치환기(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 퓨라노실의 임의의 위치에 있을 수 있다. 소정의 실시형태에서, 비이환식 변형된 당 모이어티의 하나 이상의 비브릿징 치환기는 분지된다. 비이환식 변형된 당 모이어티에 적합한 2'-치환기의 예는 2'-F, 2'-OCH3("OMe" 또는 "O-메틸") 및 2'-O(CH2)2OCH3("MOE")을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 2'-치환기는 할로, 알릴, 아미노, 아지도, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-C1-C10 알콕시, O-C1-C10 치환된 알콕시, O-C1-C10 알킬, O-C1-C10 치환된 알킬, S-알킬, N(Rm)-알킬, O-알켄일, S-알켄일, N(Rm)-알켄일, O-알킨일, S-알킨일, N(Rm)-알킨일, O-알킬레닐-O-알킬, 알킨일, 알크아릴, 아르알킬, O-알크아릴, O-아르알킬, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn) 또는 OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn)(여기서, Rm 및 Rn은 각각 독립적으로, H, 아미노 보호기, 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬임), 및 U.S. 6,531,584(Cook 등); U.S. 5,859,221(Cook 등); 및 U.S. 6,005,087(Cook 등)에 기재된 2'-치환기로부터 선택된다. 이 2'-치환기의 소정의 실시형태는 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카복시, 벤질, 페닐, 나이트로(NO2), 티올, 티오알콕시, 티오알킬, 할로겐, 알킬, 아릴, 알켄일 및 알킨일로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 추가로 치환될 수 있다. 비이환식 변형된 당 모이어티에 적합한 4'-치환기의 예는 알콕시(예를 들어, 메톡시), 알킬, 및 WO 2015/106128(Manoharan 등)에 기재된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 비이환식 변형된 당 모이어티에 적합한 5'-치환기의 예는 5'-메틸(R 또는 S), 5'-비닐 및 5'-메톡시를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 비이환식 변형된 당 모이어티는 하나 초과의 비브릿징 당 치환기, 예를 들어 2'-F-5'-메틸 당 모이어티 및 WO 2008/101157(Migawa 등) 및 US2013/0203836(Rajeev 등)에 기재된 변형된 당 모이어티 및 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 2'-치환된 비이환식 변형된 뉴클레오사이드는 F, NH2, N3, OCF3, OCH3, O(CH2)3NH2, CH2CH=CH2, OCH2CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 및 N-치환된 아세트아마이드(OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn))(여기서, Rm 및 Rn은 각각 독립적으로 H, 아미노 보호기, 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬임)로부터 선택된 비브릿징 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 2'-치환된 뉴클레오사이드 비이환식 변형된 뉴클레오사이드는 F, OCF3, OCH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(CH3)2, O(CH2)2O(CH2)2N-(CH3)2 및 OCH2C(=O)-N(H)CH3("NMA")으로부터 선택된 비브릿징 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 2'-치환된 비이환식 변형된 뉴클레오사이드는 F, OCH3 및 OCH2CH2OCH3으로부터 선택된 비브릿징 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
소정의 변형된 당 모이어티는 퓨라노실 고리의 2개의 원자를 브릿징하여 제2 고리를 형성하여서 이환식 당 모이어티를 생성시키는 치환기를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 이환식 당 모이어티는 4'와 2'의 퓨라노스 고리 원자 사이에 브릿지를 포함한다. 이러한 4' 내지 2' 브릿징 당 치환기의 예는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2'("LNA"), 4'-CH2-S-2', 4'-(CH2)2-O-2'("ENA"), 4'-CH(CH3)-O-2'("구속된 에틸" 또는 "cEt"라고 칭함), 4'-CH2-O-CH2-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-C-H(CH2OCH3)-O-2'("구속된 MOE" 또는 "cMOE") 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 7,399,845(Seth 등), U.S. 7,569,686(Bhat 등), U.S. 7,741,457(Swayze 등) 및 U.S. 8,022,193(Swayze 등)), 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,283(Seth 등)), 4'-CH2-N(OCH3)-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,425(Prakash 등)), 4'-CH2-O-N(CH3)-2'(예를 들어, U.S. 7,696,345(Allerson 등) 및 U.S. 8,124,745(Allerson 등)), 4'-CH2-C-(H)(CH3)-2'(예를 들어, 문헌[Zhou, et al., J. Org. Chem.,2009, 74, 118-134] 참조), 4'-CH2-C-(=CH2)-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,426(Seth 등)), 4'-C(RaRb)-N(R)-O-2', 4'-C(RaRb)-O-N(R)-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' 및 4'-CH2-N(R)-O-2'(여기서, R, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, 보호기 또는 C1-C12 알킬임)(예를 들어, U.S. 7,427,672(Imanishi 등))을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
소정의 실시형태에서, 이러한 4' 내지 2' 브릿지는 독립적으로 -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- 및 -N(Ra)-로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 4개의 연결된 기를 포함하고;
여기서,
x는 0, 1 또는 2이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, 보호기, 하이드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알켄일, 치환된 C2-C12 알켄일, C2-C12 알킨일, 치환된 C2-C12 알킨일, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 지환식 라디칼, 치환된 C5-C7 지환식 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실(C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐(S(=O)2-J1) 또는 설폭실(S(=O)-J1)이고;
J1 및 J2는 각각 독립적으로 H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알켄일, 치환된 C2-C12 알켄일, C2-C12 알킨일, 치환된 C2-C12 알킨일, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실(C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬 또는 보호기이다.
추가적인 이환식 당 모이어티는 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443, Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740, Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 20017, 129, 8362-8379]; U.S. 7,053,207(Wengel 등); U.S. 6,268,490(Imanishi 등); U.S. 6,770,748(Imanishi 등); U.S. RE44,779(Imanishi 등); U.S. 6,794,499(Wengel 등); U.S. 6,670,461(Wengel 등); U.S. 7,034,133(Wengel 등); U.S. 8,080,644(Wengel 등); U.S. 8,034,909(Wengel 등); U.S. 8,153,365(Wengel 등); U.S. 7,572,582(Wengel 등); 및 U.S. 6,525,191(Ramasamy 등); WO 2004/106356(Torsten 등); WO 1999/014226(Wengel 등); WO 2007/134181(Seth 등); U.S. 7,547,684(Seth 등); U.S. 7,666,854(Seth 등); U.S. 8,088,746(Seth 등); U.S. 7,750,131(Seth 등); U.S. 8,030,467(Seth 등); U.S. 8,268,980(Seth 등); U.S. 8,546,556(Seth 등); U.S. 8,530,640(Seth 등); U.S. 9,012,421(Migawa 등); U.S. 8,501,805(Seth 등); 및 U.S. 특허 공보 US 제2008/0039618호(Allerson 등) 및 US2015/0191727(Migawa 등)을 참조한다.
소정의 실시형태에서, 이러한 이환식 당 모이어티를 도입한 이환식 당 모이어티 및 뉴클레오사이드는 이성질체 배좌로 추가로 한정된다. 예를 들어, (본 명세서에 기재된) LNA 뉴클레오사이드는 α-L 배좌 또는 β-D 배좌일 수 있다.
Figure pat00003
α-L-메틸렌옥시(4'-CH2-O-2') 또는 α-L-LNA 이환식 뉴클레오사이드는 안티센스 활성을 나타낸 올리고뉴클레오타이드로 도입된다(Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372). 본 명세서에서, 이환식 뉴클레오사이드의 일반적인 설명은 이성질체 배좌 둘 다를 포함한다. 특정한 이환식 뉴클레오사이드(예를 들어, LNA 또는 cEt)의 위치가 본 명세서에서 예시된 실시형태에서 확인될 때, 이들은, 달리 기재되지 않는 한, β-D 배좌로 있다.
소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 하나 이상의 비브릿징 당 치환기 및 하나 이상의 브릿징 당 치환기(예를 들어, 5'-치환된 및 4'-2' 브릿징된 당)를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 당 모이어티의 산소 원자는 예를 들어 황, 탄소 또는 질소 원자에 의해 대체된다. 소정의 이러한 실시형태에서, 이러한 변형된 당 모이어티는 또한 본 명세서에 기재된 바와 같은 브릿징 및/또는 비브릿징 치환기를 포함한다. 예를 들어, 소정의 당 대용물은 4'-황 원자 및 2'-위치(예를 들어, U.S. 7,875,733(Bhat 등) 및 U.S. 7,939,677(Bhat 등) 참조) 및/또는 5' 위치에서의 치환을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 당 대용물은 5개의 원자 이외를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, 당 대용물은 6원 테트라하이드로피란("THP")을 포함한다. 이러한 테트라하이드로피란은 추가로 변형되거나 치환될 수 있다. 이러한 변형된 테트라하이드로피란을 포함하는 뉴클레오사이드는 헥시톨 핵산("HNA"), 아니톨 핵산("ANA"), 만니톨 핵산("MNA")(예를 들어, 문헌[Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. 2002, 10, 841-854] 참조), 플루오로 HNA:
Figure pat00004
("F-HNA", 예를 들어, U.S. 8,088,904(Swayze 등); U.S. 8,440,803(Swayze 등); U.S. 8,796,437(Swayze 등); 및 U.S. 9,005,906(Swayze 등); F-HNA는 또한 F-THP 또는 3'-플루오로 테트라하이드로피란이라 칭해질 수 있음), 및 하기 화학식을 갖는 추가적인 변형된 THP 화합물을 포함하는 뉴클레오사이드를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다:
Figure pat00005
(식 중, 독립적으로, 각각의 상기 변형된 THP 뉴클레오사이드에 대해:
Bx는 핵염기 모이어티이고;
T3 및 T4는 각각 독립적으로 변형된 THP 뉴클레오사이드를 올리고뉴클레오타이드의 나머지에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결기이거나, T3 및 T4 중 하나는 변형된 THP 뉴클레오사이드를 올리고뉴클레오타이드의 나머지에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결기이고, T3 및 T4 중 다른 하나는 H, 하이드록실 보호기, 연결된 공액기, 또는 5' 또는 3'-말단 기이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알켄일, 치환된 C2-C6 알켄일, C2-C6 알킨일 또는 치환된 C2-C6 알킨일이고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 치환된 또는 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN(여기서, X는 O, S 또는 NJ1이고, 각각의 J1, J2 및 J3은 각각 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬임)로부터 선택됨).
소정의 실시형태에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7가 각각 H인 변형된 THP 뉴클레오사이드가 제공된다. 소정의 실시형태에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 H 이외이다. 소정의 실시형태에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 메틸이다. 소정의 실시형태에서, R1 및 R2 중 하나가 F인 변형된 THP 뉴클레오사이드가 제공된다. 소정의 실시형태에서, R1은 F이고, R2는 H이고, 소정의 실시형태에서, R1은 메톡시이고, R2는 H이고, 소정의 실시형태에서, R1은 메톡시에톡시이고, R2는 H이다.
소정의 실시형태에서, 당 대용물은 5개 초과의 원자 및 1개 초과의 이종원자를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들어, 모르폴리노 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드 및 올리고뉴클레오타이드에서의 이의 용도가 보고되어 있다(예를 들어, 문헌[Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510] 및 U.S. 5,698,685(Summerton 등); U.S. 5,166,315(Summerton 등); U.S. 5,185,444(Summerton 등); 및 U.S. 5,034,506(Summerton 등) 참조). 여기 사용된 바대로, 용어 "모르폴리노"는 하기 구조를 갖는 당 대용물을 의미한다:
Figure pat00006
소정의 실시형태에서, 모르폴리노는 예를 들어 상기 모르폴리노 구조로부터 다양한 치환기를 첨가 또는 변경함으로써 변형될 수 있다. 이러한 당 대용물은 본 명세서에서 "변형된 모르폴리노"라 칭해진다.
소정의 실시형태에서, 당 대용물은 비사이클릭 모이어티를 포함한다. 이러한 비사이클릭 당 대용물을 포함하는 뉴클레오사이드 및 올리고뉴클레오타이드의 예는 펩타이드 핵산("PNA"), 비사이클릭 뷰틸 핵산(예를 들어, 문헌[Kumar et al., Org. Biomol. Chem., 2013, 11, 5853-5865] 참조), 및 WO2011/133876(Manoharan 등)에 기재된 뉴클레오사이드 및 올리고뉴클레오타이드를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
변형된 뉴클레오사이드에서 사용될 수 있는 많은 다른 이환식 및 삼환식 당 및 당 대용물 고리 시스템은 당해 분야에 공지되어 있다.
2. 소정의 변형된 핵염기
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 비변형된 핵염기를 포함하는 하나 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 변형된 핵염기를 포함하는 하나 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는, 비염기성 뉴클레오사이드라 칭해지는, 핵염기를 포함하지 않는 하나 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 변형된 핵염기는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미다이온, 알킬 또는 알킨일 치환된 피리미딘, 알킬 치환된 퓨린, 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 핵염기는 2-아미노프로필아데닌, 5-하이드록시메틸사이토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 6-N-메틸구아닌, 6-N-메틸아데닌, 2-프로필아데닌, 2-티오유라실, 2-티오타이민 및 2-티오사이토신, 5-프로피닐(-C≡C-CH3) 유라실, 5-프로피닐사이토신, 6-아조유라실, 6-아조사이토신, 6-아조타이민, 5-리보실유라실(슈도유라실), 4-티오유라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실, 8-아자 및 다른 8-치환된 퓨린, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트라이플루오로메틸, 5-할로유라실, 및 5-할로사이토신, 7-메틸구아닌, 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노아데닌, 7-데아자구아닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 3-데아자아데닌, 6-N-벤조일아데닌, 2-N-아이소뷰티릴구아닌, 4-N-벤조일사이토신, 4-N-벤조일유라실, 5-메틸 4-N-벤조일사이토신, 5-메틸 4-N-벤조일유라실, 보편적 염기, 소수성 염기, 무차별 염기, 크기 연장된 염기 및 불화 염기로부터 선택된다. 추가의 변형된 핵염기는 삼환식 피리미딘, 예컨대 1,3-다이아자페녹사진-2-온, 1,3-다이아자페노티아진-2-온 및 9-(2-아미노에톡시)-1,3-다이아자페녹사진-2-온(G-클램프)을 포함한다. 변형된 핵염기는 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클에 의해 대체된 것, 예를 들어 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈을 또한 포함할 수 있다. 추가의 핵염기는 U.S. 3,687,808(Merigan 등)에 개시된 것, 문헌[The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613; Sanghvi, Y.S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. and Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288]에 개시된 것; 및 문헌[Chapters 6 and 15, Antisense Drug Technology, Crooke S.T., Ed., CRC Press, 2008, 163-166 and 442-443]에 개시된 것을 포함한다.
소정의 상기 기재된 변형된 핵염기, 및 다른 변형된 핵염기의 제조를 교시하는 공보는, 제한 없이, US2003/0158403(Manohara 등); US2003/0175906(Manoharan 등); U.S. 4,845,205(Dinh 등); U.S. 5,130,302(Spielvogel 등); U.S. 5,134,066(Rogers 등); U.S. 5,175,273(Bischofberger 등); U.S. 5,367,066(Urdea 등); U.S. 5,432,272(Benner 등); U.S. 5,434,257(Matteucci 등); U.S. 5,457,187(Gmeiner 등); U.S. 5,459,255(Cook 등); U.S. 5,484,908(Froehler 등); U.S. 5,502,177(Matteucci 등); U.S. 5,525,711(Hawkins 등); U.S. 5,552,540(Haralambidis 등); U.S. 5,587,469(Cook 등); U.S. 5,594,121(Froehler 등); U.S. 5,596,091(Switzer 등); U.S. 5,614,617(Cook 등); U.S. 5,645,985(Froehler 등); U.S. 5,681,941(Cook 등); U.S. 5,811,534(Cook 등); U.S. 5,750,692(Cook 등); U.S. 5,948,903(Cook 등); U.S. 5,587,470(Cook 등); U.S. 5,457,191(Cook 등); U.S. 5,763,588(Matteucci 등); U.S. 5,830,653(Froehler 등); U.S. 5,808,027(Cook 등); 6,166,199(Cook 등); 및 U.S. 6,005,096(Matteucci 등)을 포함한다.
3. 소정의 변형된 뉴클레오사이드간 연결
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드는 임의의 뉴클레오사이드간 연결을 이용하여 함께 연결될 수 있다. 뉴클레오사이드간 연결기의 2개의 주요 종류는 인 원자의 존재 또는 부재에 의해 정의된다. 대표적인 인 함유 뉴클레오사이드간 연결은 포스포다이에스터 결합("P=O")(비변형된 또는 천연 발생 연결이라고도 칭함), 포스포트라이에스터, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 및 포스포로티오에이트("P=S") 및 포스포로다이티오에이트("HS-P=S")를 함유하는 포스페이트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 대표적인 인 비함유 뉴클레오사이드간 연결기는 메틸렌메틸이미노(-CH2-N(CH3)-O-CH2-), 티오다이에스터, 티오노카바메이트(-O-C(=O)(NH)-S-); 실록산(-O-SiH2-O-); 및 N,N'-다이메틸하이드라진(-CH2-N(CH3)-N(CH3)-)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 천연 발생 포스페이트 연결과 비교하여, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레아제 내성을 변경, 통상적으로 증가시키도록 이용될 수 있다. 인 함유 및 인 비함유 뉴클레오사이드간 연결의 제조의 방법은 숙련자에게 널리 공지되어 있다.
키랄 중앙을 갖는 대표적인 뉴클레오사이드간 연결은 알킬포스포네이트 및 포스포로티오에이트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 키랄 중앙을 갖는 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 특정한 입체화학 배좌에서 입체랜덤 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단으로서 또는 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단으로서 제조될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 모든 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이 입체랜덤인 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 이러한 변형된 올리고뉴클레오타이드는 각각의 포스포로티오에이트 연결의 입체화학 배좌의 랜덤 선택을 발생시키는 합성 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 숙련자에 의해 널리 이해되는 것처럼, 각각의 개별 올리고뉴클레오타이드 분자의 각각의 개별 포스포로티오에이트는 한정된 입체배좌를 갖는다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 특정한 독립적으로 선택된 입체화학 배좌에서 하나 이상의 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된다. 소정의 실시형태에서, 특정한 포스포로티오에이트 연결의 특정한 배좌는 집단에서 적어도 65%의 분자에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 특정한 포스포로티오에이트 연결의 특정한 배좌는 집단에서 적어도 70%의 분자에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 특정한 포스포로티오에이트 연결의 특정한 배좌는 집단에서 적어도 80%의 분자에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 특정한 포스포로티오에이트 연결의 특정한 배좌는 집단에서 적어도 90%의 분자에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 특정한 포스포로티오에이트 연결의 특정한 배좌는 집단에서 적어도 99%의 분자에 존재한다. 변형된 올리고뉴클레오타이드의 이러한 키랄 풍부화 집단은 당해 분야에 공지된 합성 방법, 예를 들어 문헌[Oka et al., JACS 125, 8307(2003), Wan et al. Nuc. Acid. Res. 42, 13456(2014)] 및 WO 2017/015555에 기재된 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 (Sp) 배좌에서 적어도 하나의 표시된 포스포로티오에이트를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 (Rp) 배좌에서 적어도 하나의 포스포로티오에이트를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된다. 소정의 실시형태에서, (Rp) 및/또는(Sp) 포스포로티오에이트를 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 각각 하기 화학식(여기서, "B"는 핵염기를 나타냄) 중 하나 이상을 포함한다:
Figure pat00007
달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드의 키랄 뉴클레오사이드간 연결은 입체랜덤 또는 특정한 입체화학 배좌로 있을 수 있다.
중성 뉴클레오사이드간 연결은, 제한 없이, 포스포트라이에스터, 메틸포스포네이트, MMI(3'-CH2-N(CH3)-O-5'), 아마이드-3(3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), 아마이드-4(3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), 폼아세탈(3'-O-CH2-O-5'), 메톡시프로필 및 티오폼아세탈(3'-S-CH2-O-5')을 포함한다. 추가의 중성 뉴클레오사이드간 연결은 실록산(다이알킬실록산), 카복실레이트 에스터, 카복스아마이드, 설파이드, 설포네이트 에스터 및 아마이드를 포함하는 비이온성 연결을 포함한다(예를 들어, 문헌[Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi and P.D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Chapters 3 and 4, 40-65] 참조). 추가의 중성 뉴클레오사이드간 연결은 혼합된 N, O, S 및 CH2 성분 부분을 포함하는 비이온성 연결을 포함한다.
B. 소정의 모티프
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 변형된 당 모이어티를 포함하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 변형된 핵염기를 포함하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 이러한 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 변형된, 비변형된, 및 다르게 변형된 당 모이어티, 핵염기, 및/또는 뉴클레오사이드간 연결은 패턴 또는 모티프를 한정한다. 소정의 실시형태에서, 당 모이어티, 핵염기, 및 뉴클레오사이드간 연결의 패턴은 서로에 각각 독립적이다. 따라서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 이의 당 모티프, 핵염기 모티프 및/또는 뉴클레오사이드간 연결 모티프에 의해 기재될 수 있다(본 명세서에 사용된 바대로, 핵염기 모티프는 핵염기의 서열에 독립적인 핵염기에 대한 변형을 기재한다).
1. 소정의 당 모티프
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 한정된 패턴 또는 당 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 당 및/또는 비변형된 당 모이어티의 하나 이상의 유형을 포함한다. 소정의 경우에, 이러한 당 모티프는 본 명세서에 기재된 임의의 당 변형을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 2개의 외부 영역 또는 "날개" 및 중앙 또는 내부 영역 또는 "갭"에 의해 한정된 갭머 모티프를 갖는 영역을 포함하고 이것으로 이루어진다. 갭머 모티프의 3개의 영역(5'-날개, 갭 및 3'-날개)은 뉴클레오사이드의 인접한 서열을 형성하고, 여기서 각각의 날개의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부는 갭의 뉴클레오사이드의 당 모이어티의 적어도 일부와 다르다. 구체적으로, 적어도 갭에 가장 가까운 각각의 날개(5'-날개의 3'-가장가까운 뉴클레오사이드 및 3'-날개의 5'-가장가까운 뉴클레오사이드)의 뉴클레오사이드의 당 모이어티는 이웃하는 갭 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 달라서, 날개 및 갭 사이의 경계를 한정한다(즉, 날개/갭 연접부). 소정의 실시형태에서, 갭 내의 당 모이어티는 서로 동일하다. 소정의 실시형태에서, 갭은 갭의 하나 이상의 다른 뉴클레오사이드의 당 모이어티와 다른 당 모이어티를 갖는 하나 이상의 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 2개의 날개의 당 모티프는 서로 동일하다(대칭 갭머). 소정의 실시형태에서, 5'-날개의 당 모티프는 3'-날개의 당 모티프와 다르다(비대칭 갭머).
소정의 실시형태에서, 갭머의 날개는 1개 내지 5개의 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 갭머의 각각의 날개의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이다.
소정의 실시형태에서, 갭머의 갭은 7개 내지 12개의 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 갭머의 갭의 각각의 뉴클레오사이드는 비변형된 2'-데옥시 뉴클레오사이드이다.
소정의 실시형태에서, 갭머는 데옥시 갭머이다. 실시형태에서, 각각의 날개/갭 연접부의 갭 측에서의 뉴클레오사이드는 비변형된 2'-데옥시 뉴클레오사이드이고, 각각의 날개/갭 연접부의 날개 측에서의 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이다. 소정의 실시형태에서, 갭의 각각의 뉴클레오사이드는 비변형된 2'-데옥시 뉴클레오사이드이다. 소정의 실시형태에서, 갭머의 각각의 날개의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이다.
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 완전히 변형된 당 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 이것으로 이루어진다. 이러한 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 완전히 변형된 영역의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 전체 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 완전히 변형된 당 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 이것으로 이루어지고, 완전히 변형된 영역 내의 각각의 뉴클레오사이드는 균일하게 변형된 당 모티프라 본 명세서에서 칭해지는 동일한 변형된 당 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 완전히 변형된 올리고뉴클레오타이드는 균일하게 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 소정의 실시형태에서, 균일하게 변형된 것의 각각의 뉴클레오사이드는 동일한 2'-변형을 포함한다.
여기서, 갭머의 3개의 영역의 길이(뉴클레오사이드의 수)는 표시를 이용하여 제공될 수 있다 [5'-날개에서의 뉴클레오사이드의 수] - [갭에서의 뉴클레오사이드의 수] - [3'-날개에서의 뉴클레오사이드의 수]. 따라서, 5-8-5 갭머는 각각의 날개에서 5개의 연결된 뉴클레오사이드 및 갭에서 8개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 이러한 명명법은 특정한 변형이 뒤따르는 경우, 그 변형은 날개에서의 변형이고, 갭 뉴클레오사이드는 비변형된 데옥시뉴클레오사이드 당을 포함한다. 따라서, 5-8-5 MOE 갭머는 5'-날개에서 5개의 연결된 MOE 변형된 뉴클레오사이드, 갭에서 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드 및 3'-날개에서 5개의 연결된 MOE 뉴클레오사이드로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5-8-5 MOE 갭머이다.
2. 소정의 핵염기 모티프
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 한정된 패턴 또는 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 및/또는 비변형된 핵염기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 각각의 핵염기는 변형된다. 소정의 실시형태에서, 핵염기 중 어느 것도 변형되지 않는다. 소정의 실시형태에서, 각각의 퓨린 또는 각각의 피리미딘은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 아데닌은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 구아닌은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 타이민은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 유라실은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 사이토신은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드 내의 사이토신 핵염기의 일부 또는 전부는 5-메틸사이토신이다. 소정의 실시형태에서, 사이토신 핵염기의 전부는 5-메틸사이토신이고, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 다른 핵염기의 전부는 비변형된 핵염기이다.
소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 변형된 핵염기의 블록을 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에 있다. 소정의 실시형태에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단의 3개의 뉴클레오사이드 내이다. 소정의 실시형태에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단에 있다. 소정의 실시형태에서, 블록은 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단의 3개의 뉴클레오사이드이다.
소정의 실시형태에서, 갭머 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 변형된 핵염기를 포함하는 1개의 뉴클레오사이드는 갭머 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 중앙 갭에 있다. 소정의 이러한 실시형태에서, 상기 뉴클레오사이드의 당 모이어티는 2'-데옥시리보실 모이어티이다. 소정의 실시형태에서, 변형된 핵염기는 2-티오피리미딘 및 5-프로핀피리미딘으로부터 선택된다.
3. 소정의 뉴클레오사이드간 연결 모티프
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 한정된 패턴 또는 모티프에서 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 및/또는 비변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 각각의 뉴클레오사이드간 연결기는 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결(P=O)이다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결기는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결(P=S)이다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 및 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 각각의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결은 입체랜덤 포스포로티오에이트, (Sp) 포스포로티오에이트 및 (Rp) 포스포로티오에이트로부터 독립적으로 선택된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 모티프는 갭머이고, 갭 내의 뉴클레오사이드간 연결은 모두 변형된다. 소정의 이러한 실시형태에서, 날개에서의 뉴클레오사이드간 연결의 일부 또는 전부는 비변형된 포스페이트 연결이다. 소정의 실시형태에서, 말단 뉴클레오사이드간 연결은 변형된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 당 모티프는 갭머이고, 뉴클레오사이드간 연결 모티프는 적어도 하나의 날개에서 적어도 하나의 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결을 포함하고, 적어도 하나의 포스포다이에스터 연결은 말단 뉴클레오사이드간 연결이 아니고, 나머지 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 포스포로티오에이트 연결의 전부는 입체랜덤이다. 소정의 실시형태에서, 날개에서의 포스포로티오에이트 연결의 전부는 (Sp) 포스포로티오에이트이고, 갭은 적어도 하나의 Sp, Sp, Rp 모티프를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 이러한 뉴클레오사이드간 연결 모티프를 포함하는 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대해 풍부화된다.
C. 소정의 길이
활성을 제거하지 않으면서 올리고뉴클레오타이드의 길이를 증가시키거나 감소시킬 수 있다. 예를 들어, Woolf 등의 문헌(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992)에서, 일련의 올리고뉴클레오타이드 13개 내지 25개의 핵염기 길이는 난모세포 주사 모델에서 표적 RNA의 절단을 유도하는 이의 능력에 대해 시험되었다. 올리고뉴클레오타이드의 말단 근처의 8개 또는 11개의 미스매치 염기를 갖는 올리고뉴클레오타이드 25 핵염기 길이는 미스매치를 함유하지 않는 올리고뉴클레오타이드보다 더 적은 정도로 이지만 표적 mRNA의 특이적 절단을 지시할 수 있다. 유사하게, 표적 특이적 절단은 13개의 핵염기 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 1개 또는 3개의 미스매치를 갖는 것을 사용하여 달성되었다.
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드(변형된 올리고뉴클레오타이드 포함)는 길이의 임의의 다양한 범위를 가질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 X개 내지 Y개의 연결된 뉴클레오사이드(여기서, X는 범위에서 뉴클레오사이드의 가장 작은 수를 나타내고, Y는 범위에서 뉴클레오사이드의 가장 큰 수를 나타냄)로 이루어진다. 소정의 이러한 실시형태에서, X 및 Y는 각각 독립적으로 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 및 50으로부터 선택되고; 단 X=Y이다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 12 내지 13, 12 내지 14, 12 내지 15, 12 내지 16, 12 내지 17, 12 내지 18, 12 내지 19, 12 내지 20, 12 내지 21, 12 내지 22, 12 내지 23, 12 내지 24, 12 내지 25, 12 내지 26, 12 내지 27, 12 내지 28, 12 내지 29, 12 내지 30, 13 내지 14, 13 내지 15, 13 내지 16, 13 내지 17, 13 내지 18, 13 내지 19, 13 내지 20, 13 내지 21, 13 내지 22, 13 내지 23, 13 내지 24, 13 내지 25, 13 내지 26, 13 내지 27, 13 내지 28, 13 내지 29, 13 내지 30, 14 내지 15, 14 내지 16, 14 내지 17, 14 내지 18, 14 내지 19, 14 내지 20, 14 내지 21, 14 내지 22, 14 내지 23, 14 내지 24, 14 내지 25, 14 내지 26, 14 내지 27, 14 내지 28, 14 내지 29, 14 내지 30, 15 내지 16, 15 내지 17, 15 내지 18, 15 내지 19, 15 내지 20, 15 내지 21, 15 내지 22, 15 내지 23, 15 내지 24, 15 내지 25, 15 내지 26, 15 내지 27, 15 내지 28, 15 내지 29, 15 내지 30, 16 내지 17, 16 내지 18, 16 내지 19, 16 내지 20, 16 내지 21, 16 내지 22, 16 내지 23, 16 내지 24, 16 내지 25, 16 내지 26, 16 내지 27, 16 내지 28, 16 내지 29, 16 내지 30, 17 내지 18, 17 내지 19, 17 내지 20, 17 내지 21, 17 내지 22, 17 내지 23, 17 내지 24, 17 내지 25, 17 내지 26, 17 내지 27, 17 내지 28, 17 내지 29, 17 내지 30, 18 내지 19, 18 내지 20, 18 내지 21, 18 내지 22, 18 내지 23, 18 내지 24, 18 내지 25, 18 내지 26, 18 내지 27, 18 내지 28, 18 내지 29, 18 내지 30, 19 내지 20, 19 내지 21, 19 내지 22, 19 내지 23, 19 내지 24, 19 내지 25, 19 내지 26, 19 내지 29, 19 내지 28, 19 내지 29, 19 내지 30, 20 내지 21, 20 내지 22, 20 내지 23, 20 내지 24, 20 내지 25, 20 내지 26, 20 내지 27, 20 내지 28, 20 내지 29, 20 내지 30, 21 내지 22, 21 내지 23, 21 내지 24, 21 내지 25, 21 내지 26, 21 내지 27, 21 내지 28, 21 내지 29, 21 내지 30, 22 내지 23, 22 내지 24, 22 내지 25, 22 내지 26, 22 내지 27, 22 내지 28, 22 내지 29, 22 내지 30, 23 내지 24, 23 내지 25, 23 내지 26, 23 내지 27, 23 내지 28, 23 내지 29, 23 내지 30, 24 내지 25, 24 내지 26, 24 내지 27, 24 내지 28, 24 내지 29, 24 내지 30, 25 내지 26, 25 내지 27, 25 내지 28, 25 내지 29, 25 내지 30, 26 내지 27, 26 내지 28, 26 내지 29, 26 내지 30, 27 내지 28, 27 내지 29, 27 내지 30, 28 내지 29, 28 내지 30, 또는 29 내지 30의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
D. 소정의 변형된 올리고뉴클레오타이드
소정의 실시형태에서, 상기 변형(당, 핵염기, 뉴클레오사이드간 연결)은 변형된 올리고뉴클레오타이드로 도입된다. 소정의 실시형태에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 이의 변형 모티프 및 전체 길이를 특징으로 한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 매개변수는 각각 서로 독립적이다. 따라서, 달리 표시되지 않는 한, 갭머 당 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 변형되거나 비변형될 수 있고, 당 변형의 갭머 변형 패턴을 따르거나 따르지 않을 수 있다. 예를 들어, 당 갭머의 날개 영역 내의 뉴클레오사이드간 연결은 서로 동일하거나 상이할 수 있고, 당 모티프의 갭 영역의 뉴클레오사이드간 연결로부터 동일하거나 상이할 수 있다. 마찬가지로, 이러한 당 갭머 올리고뉴클레오타이드는 당 변형의 갭머 패턴과 독립적인 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함할 수 있다. 달리 표시되지 않는 한, 모든 변형은 핵염기 서열에 독립적이다.
E. 소정의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단
집단의 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전부가 동일한 분자식을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 집단은 입체랜덤 집단 또는 키랄 풍부화 집단일 수 있다. 모든 변형된 올리고뉴클레오타이드의 모든 키랄 중앙은 입체랜덤 집단에서 입체랜덤이다. 키랄 풍부화 집단에서, 적어도 하나의 특정한 키랄 중앙은 집단의 변형된 올리고뉴클레오타이드에서 입체랜덤이 아니다. 소정의 실시형태에서, 키랄 풍부화 집단의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 β-D 리보실 당 모이어티에 대해 풍부화되고, 모든 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결은 입체랜덤이다. 소정의 실시형태에서, 키랄 풍부화 집단의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 특정한 입체화학 배좌에서 β-D 리보실 당 모이어티 및 적어도 하나의, 특정한 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결 둘 다에 풍부화된다.
F. 핵염기 서열
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드(비변형된 또는 변형된 올리고뉴클레오타이드)는 이의 핵염기 서열에 의해 추가로 기재된다. 소정의 실시형태에서 올리고뉴클레오타이드는 제2 올리고뉴클레오타이드 또는 확인된 기준 핵산, 예컨대 표적 핵산에 상보성인 핵염기 서열을 갖는다. 소정의 이러한 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드의 영역은 제2 올리고뉴클레오타이드 또는 확인된 기준 핵산, 예컨대 표적 핵산에 상보성인 핵염기 서열을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드의 영역 또는 전체 길이의 핵염기 서열은 제2 올리고뉴클레오타이드 또는 핵산, 예컨대 표적 핵산에 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 상보성이다.
II. 소정의 올리고머 화합물
소정의 실시형태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오타이드(변형된 또는 비변형된) 및 임의로 하나 이상의 공액기 및/또는 말단 기로 이루어진 올리고머 화합물을 제공한다. 공액기는 하나 이상의 공액 모이어티 및 공액 모이어티를 올리고뉴클레오타이드에 연결하는 공액 링커로 이루어진다. 공액기는 올리고뉴클레오타이드의 어느 한 말단 또는 양 말단에 및/또는 임의의 내부 위치에서 부착될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 공액기는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드의 2'-위치에 부착된다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드의 어느 한 말단 또는 양 말단에 부착된 공액기는 말단 기이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 공액기 또는 말단 기는 올리고뉴클레오타이드의 3' 및/또는 5' 말단에서 부착된다. 소정의 이러한 실시형태에서, 공액기(또는 말단 기)는 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단에서 부착된다. 소정의 실시형태에서, 공액기는 올리고뉴클레오타이드의 3' 말단의 근처에서 부착된다. 소정의 실시형태에서, 공액기(또는 말단 기)는 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단에서 부착된다. 소정의 실시형태에서, 공액기는 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단의 근처에서 부착된다.
말단 기의 예는 공액기, 캡핑기, 포스페이트 모이어티, 보호기, 변형된 또는 비변형된 뉴클레오사이드, 및 독립적으로 변형된 또는 비변형된 2개 이상의 뉴클레오사이드를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
A. 소정의 공액기
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 공액기에 공유 부착된다. 소정의 실시형태에서, 공액기는 약력학, 약동학, 안정성, 결합, 흡수, 조직 분포, 세포 분포, 세포 흡수, 전하 및 청소율(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 부착된 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 특성을 변경시킨다. 소정의 실시형태에서, 공액기는 부착된 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 올리고뉴클레오타이드의 부착이 가능하게 하는 형광단 또는 리포터 기에 새로운 특성을 부여한다. 소정의 공액기 및 공액 모이어티, 예를 들어 콜레스테롤 모이어티(Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), 콜산(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4, 1053-1060), 티오에터, 예를 들어 헥실-S-트리틸티올(Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1993, 3, 2765-2770), 티오콜레스테롤(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), 지방족 사슬, 예를 들어 도데칸-다이올 또는 운데실 잔기(Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), 인지질, 예를 들어 다이-헥사데실-rac-글라이세롤 또는 트라이에틸-암모늄 1,2-다이-O-헥사데실-rac-글라이세로-3-H-포스포네이트(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글라이콜 사슬(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), 또는 아다만탄 아세트산 팔미틸 모이어티(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937), 토코페롤 기(Nishina et al., Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015, 4, e220; 및 Nishina et al., Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740), 또는 GalNAc 클러스터(예를 들어, WO2014/179620)는 이전에 기재되어 있다.
1. 공액 모이어티
공액 모이어티는, 제한 없이, 인터칼레이터(intercalator), 리포터 분자, 폴리아민, 폴리아마이드, 펩타이드, 탄수화물, 비타민 모이어티, 폴리에틸렌 글라이콜, 티오에터, 폴리에터, 콜레스테롤, 티오콜레스테롤, 콜산 모이어티, 폴레이트, 지질, 인지질, 바이오틴, 페나진, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아다만탄, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린, 형광단 및 염료를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 공액 모이어티는 활성 약물 물질, 예를 들어 아스피린, 와파린, 페닐부타존, 이부프로펜, 수프로펜, 펜-부펜, 케토프로펜, (S)-(+)-프라노프로펜, 카르프로펜, 단실사르코신, 2,3,5-트라이요오도벤조산, 핑고리모드, 플루페남산, 폴린산, 벤조티아디아지드, 클로로티아자이드, 디아제핀, 인도-메티신, 바르비투레이트, 세팔로스포린, 설파 약물, 항당뇨병제, 항균제 또는 항생제를 포함한다.
2. 공액 링커
공액 모이어티는 공액 링커를 통해 올리고뉴클레오타이드에 부착된다. 소정의 올리고머 화합물에서, 공액 링커는 단일 화학 결합이다(즉, 공액 모이어티는 단일 결합을 통해 올리고뉴클레오타이드에 직접적으로 부착된다). 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 사슬 구조, 예컨대 하이드로카빌 사슬, 또는 반복 단위, 예컨대 에틸렌 글라이콜, 뉴클레오사이드 또는 아미노산 단위의 올리고머를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 공액 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아마이드, 다이설파이드, 폴리에틸렌 글라이콜, 에터, 티오에터 및 하이드록실아미노로부터 선택된 하나 이상의 기를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 공액 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아마이드 및 에터기로부터 선택된 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 알킬 및 아마이드기로부터 선택된 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 알킬 및 에터기로부터 선택된 기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 적어도 하나의 인 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 적어도 하나의 포스페이트기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 적어도 하나의 중성 연결기를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 상기 기재된 공액 링커를 포함하는 공액 링커는 이작용성 연결 모이어티, 예를 들어 모 화합물에 공액기를 부착하기에 유용한 것으로 당해 분야에 공지된 것, 예컨대 본 명세서에 제공된 올리고뉴클레오타이드이다. 일반적으로, 이작용성 연결 모이어티는 적어도 2개의 작용기를 포함한다. 작용기의 하나는 모 화합물에서 특정한 부위에 결합하도록 선택되고, 다른 것은 공액기에 결합하도록 선택된다. 이작용성 연결 모이어티에서 사용된 작용기의 예는 친핵성 기와 반응하기 위한 친전자체 및 친전자성 기와 반응하기 위한 친핵체를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 이작용성 연결 모이어티는 아미노, 하이드록실, 카복실산, 티올, 알킬, 알켄일 및 알킨일로부터 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
공액 링커의 예는 피롤리딘, 8-아미노-3,6-다이옥사옥탄산(ADO), 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로-헥산-1-카복실레이트(SMCC) 및 6-아미노헥산산(AHEX 또는 AHA)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 다른 공액 링커는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬, 치환된 또는 비치환된 C2-C10 알켄일 또는 치환된 또는 비치환된 C2-C10 알킨일(여기서, 바람직한 치환기의 비제한적인 목록은 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카복시, 벤질, 페닐, 나이트로, 티올, 티오알콕시, 할로겐, 알킬, 아릴, 알켄일 및 알킨일을 포함함)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
소정의 실시형태에서, 공액 링커는 1개 내지 10개의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 2개 내지 5개의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 정확히 3개의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 TCA 모티프를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 링커-뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오사이드이다. 소정의 실시형태에서 이러한 링커-뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 링커-뉴클레오사이드는 비변형된다. 소정의 실시형태에서, 링커-뉴클레오사이드는 퓨린, 치환된 퓨린, 피리미딘 또는 치환된 피리미딘으로부터 선택된 임의로 보호된 헤테로사이클릭 염기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 유라실, 타이민, 사이토신, 4-N-벤조일사이토신, 5-메틸사이토신, 4-N-벤조일-5-메틸-사이토신, 아데닌, 6-N-벤조일아데닌, 구아닌 및 2-N-아이소뷰티릴구아닌으로부터 선택된 뉴클레오사이드이다. 통상적으로, 링커-뉴클레오사이드가 표적 조직에 도달한 후 올리고머 화합물로부터 절단되는 것이 바람직하다. 따라서, 링커-뉴클레오사이드는 통상적으로 서로에 및 절단 가능한 결합을 통해 올리고머 화합물의 나머지에 연결된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 절단 가능한 결합은 포스포다이에스터 결합이다.
여기서, 링커-뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 일부인 것으로 생각되지 않는다. 따라서, 올리고머 화합물이 연결된 뉴클레오사이드의 기재된 수 또는 범위 및/또는 기준 핵산에 대한 기재된 상보성 백분율로 이루어진 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 올리고머 화합물이 또한 링커-뉴클레오사이드를 포함하는 공액 링커를 포함하는 공액기를 포함하는 실시형태에서, 이 링커-뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 길이를 향해 계수되지 않고, 기준 핵산에 대한 올리고뉴클레오타이드의 상보성 백분율을 결정하는 데 사용되지 않는다. 예를 들어, 올리고머 화합물은 (1) 8개 내지 30개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드 및 (2) 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드와 인접한 1개 내지 10개의 링커-뉴클레오사이드를 포함하는 공액기를 포함할 수 있다. 이러한 올리고머 화합물에서 인접한 연결된 뉴클레오사이드의 전체 수는 30개 초과이다. 대안적으로, 올리고머 화합물은 공액기 없이 8개 내지 30개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 이러한 올리고머 화합물에서 인접한 연결된 뉴클레오사이드의 전체 수는 30개 미만이다. 달리 표시되지 않는 한, 공액 링커는 10개 이하의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 5개 이하의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 3개 이하의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 2개 이하의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 공액 링커는 1개 이하의 링커-뉴클레오사이드를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 공액기가 올리고뉴클레오타이드로부터 절단되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 소정의 상황에서, 특정한 공액 모이어티를 포함하는 올리고머 화합물은 특정한 세포 유형에 의해 더 양호하게 흡수되지만, 올리고머 화합물이 흡수되면, 절단된 공액기가 비접합된 또는 모 올리고뉴클레오타이드를 방출하는 것이 바람직하다. 따라서, 소정의 공액 링커는 하나 이상의 절단 가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 결합이다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함하는 원자의 군이다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 4개 초과의 절단 가능한 결합을 갖는 원자의 군을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 세포 또는 세포이하 구획, 예컨대 리소좀 내에서 선택적으로 절단된다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 내인성 효소, 예컨대 뉴클레아제에 의해 선택적으로 절단된다.
소정의 실시형태에서, 절단 가능한 결합은 아마이드, 에스터, 에터, 포스포다이에스터의 에스터 중 하나 또는 둘 다, 포스페이트 에스터, 카바메이트 또는 다이설파이드로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 결합은 포스포다이에스터의 에스터 중 하나 또는 둘 다이다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 포스페이트 또는 포스포다이에스터를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 올리고뉴클레오타이드와 공액 모이어티 또는 공액기 사이의 포스페이트 연결이다.
소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 하나 이상의 링커-뉴클레오사이드를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 소정의 이러한 실시형태에서, 하나 이상의 링커-뉴클레오사이드는 서로에 및/또는 절단 가능한 결합을 통해 올리고머 화합물의 나머지에 연결된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 절단 가능한 결합은 비변형된 포스포다이에스터 결합이다. 소정의 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 포스페이트 뉴클레오사이드간 연결에 의해 올리고뉴클레오타이드의 3' 또는 5'-말단 뉴클레오사이드에 부착되고, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 연결에 의해 공액 링커 또는 공액 모이어티의 나머지에 공유 부착된 2'-데옥시 뉴클레오사이드이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 절단 가능한 모이어티는 2'-데옥시아데노신이다.
B. 소정의 말단 기
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 하나 이상의 말단 기를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 올리고머 화합물은 안정화된 5'-포스페이트를 포함한다. 안정화된 5'-포스페이트는 5'-포스포네이트, 예를 들어 5'-비닐포스포네이트(이들로 제한되지는 않음)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 말단 기는 하나 이상의 비염기성 뉴클레오사이드 및/또는 인버티드 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 말단 기는 하나 이상의 2'-연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 2'-연결된 뉴클레오사이드는 비염기성 뉴클레오사이드이다.
III. 올리고머 듀플렉스
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 올리고머 화합물은 표적 핵산의 것에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 제2 올리고머 화합물와 쌍을 지어서 올리고머 듀플렉스를 형성한다. 이러한 올리고머 듀플렉스는 표적 핵산에 상보성인 영역을 갖는 제1 올리고머 화합물 및 제1 올리고머 화합물에 상보성인 영역을 갖는 제2 올리고머 화합물을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 올리고머 듀플렉스의 제1 올리고머 화합물은 (1) 변형된 또는 비변형된 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 공액기 및 (2) 제2 변형된 또는 비변형된 올리고뉴클레오타이드 및 임의로 공액기를 포함하거나, 이들로 이루어진다. 올리고머 듀플렉스의 올리고머 화합물 중 어느 하나 또는 둘 다는 공액기를 포함할 수 있다. 올리고머 듀플렉스의 각각의 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오타이드는 비상보성 오버행잉 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다.
IV. 안티센스 활성
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물 및 올리고머 듀플렉스는 표적 핵산에 혼성화하여서, 적어도 하나의 안티센스 활성을 발생시킬 수 있고; 이러한 올리고머 화합물 및 올리고머 듀플렉스는 안티센스 화합물이다. 소정의 실시형태에서, 안티센스 화합물은 표준 세포 검정에서 표적 핵산의 양 또는 활성을 25% 이상만큼 감소시키거나 저해할 때 안티센스 활성을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 안티센스 화합물은 하나 이상의 표적 핵산에 선택적으로 영향을 미친다. 이러한 안티센스 화합물은 하나 이상의 표적 핵산에 혼성화하여서, 하나 이상의 원하는 안티센스 활성을 발생시키거나, 하나 이상의 비표적 핵산에 혼성화하지 않거나, 상당한 원치 않는 안티센스 활성을 발생시키는 방식으로 하나 이상의 비표적 핵산에 혼성화하지 않는 핵염기 서열을 포함한다.
소정의 안티센스 활성에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산을 절단하는 단백질의 동원을 발생시킨다. 예를 들어, 소정의 안티센스 화합물은 표적 핵산의 RNase H 매개된 절단을 발생시킨다. RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단시키는 세포 엔도뉴클레아제이다. 이러한 RNA:DNA 듀플렉스에서의 DNA는 비변형된 DNA일 필요는 없다. 소정의 실시형태에서, RNase H 활성을 유발하도록 충분히 "DNA 유사한" 안티센스 화합물이 본 명세서에 기재된다. 소정의 실시형태에서, 갭머의 갭에서 하나 이상의 비-DNA-유사 뉴클레오사이드는 관용된다.
소정의 안티센스 활성에서, 안티센스 화합물 또는 안티센스 화합물의 일부는 RNA 유도된 슬라이싱 복합체(RISC)로 로딩되어서, 궁극적으로 표적 핵산을 절단시킨다. 예를 들어, 소정의 안티센스 화합물은 Argonaute에 의한 표적 핵산의 절단을 발생시킨다. RISC로 로딩된 안티센스 화합물은 RNAi 화합물이다. RNAi 화합물은 이중 가닥(siRNA) 또는 단일 가닥(ssRNA)일 수 있다.
소정의 실시형태에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산을 절단하는 단백질의 동원을 발생시키지 않는다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산의 스플라이싱의 변경을 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산과 단백질 또는 다른 핵산 사이의 결합 상호작용의 저해를 발생시킨다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산의 번역을 변경을 발생시킨다.
안티센스 활성은 직접적으로 또는 간접적으로 관찰될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 안티센스 활성의 관찰 또는 검출은 이러한 표적 핵산에 의해 코딩된 표적 핵산 또는 단백질의 양의 변화, 핵산 또는 단백질의 스플라이스 변이체의 비율의 변화, 및/또는 세포 또는 동물에서의 표현형 변화의 관찰 또는 검출을 수반한다.
V. 소정의 표적 핵산
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 표적 핵산에 상보성인 영역을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하거나 이것으로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산은 내인성 RNA 분자이다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산은 단백질을 코딩한다. 소정의 이러한 실시형태에서, 표적 핵산은 성숙 mRNA 및 프리-mRNA, 예를 들어 인트론, 엑손 및 비번역된 영역으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 표적 RNA는 성숙 mRNA이다. 소정의 실시형태에서, 표적 핵산은 프리-mRNA이다. 소정의 이러한 실시형태에서, 표적 영역은 전부 인트론 내이다. 소정의 실시형태에서, 표적 영역은 인트론/엑손 정크션에 걸친다. 소정의 실시형태에서, 표적 영역은 인트론 내에 적어도 50%이다.
A. 표적 핵산에 대한 상보성/미스매치
활성을 제거하지 않으면서 미스매치 염기를 도입할 수 있다. 예를 들어, Gautschi 등(J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001)은 시험관내 및 생체내 bcl-2 및 bcl-xL 둘 다의 발현을 감소시키기 위해 bcl-2 mRNA에 100% 상보성을 갖고, bcl-xL mRNA에 3 미스매치를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 능력을 입증하였다. 더구나, 이 올리고뉴클레오타이드는 생체내 강력한 항-종양 활성을 입증하였다. Maher 및 Dolnick(Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)는 토끼 망상적혈구 검정에서 인간 DHFR의 번역을 막는 이의 능력에 대해 각각 일련의 탠덤 14개의 핵염기 올리고뉴클레오타이드, 및 2개 또는 3개의 탠덤 올리고뉴클레오타이드의 서열로 이루어진 28개 및 42개의 핵염기 올리고뉴클레오타이드를 시험하였다. 3개의 14 핵염기 올리고뉴클레오타이드는 각각 단독으로 28개 또는 42개의 핵염기 올리고뉴클레오타이드보다 더 적당한 수준에서지만 번역을 저해할 수 있었다.
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드의 전체 길이에 걸쳐 표적 핵산에 상보성인 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 99%, 95%, 90%, 85% 또는 80% 상보성이다. 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드의 전체 길이에 걸쳐 표적 핵산에 적어도 80% 상보성이고, 표적 핵산에 100% 또는 전부 상보성인 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 완전 상보성의 영역은 6개 내지 20개, 10개 내지 18개 또는 18개 내지 20개의 핵염기 길이이다.
소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 표적 핵산에 대해 하나 이상의 미스매칭된 핵염기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 표적에 대한 안티센스 활성은 이러한 미스매치에 의해 감소하지만, 비표적에 대한 활성은 더 높은 양만큼 감소한다. 따라서, 소정의 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물의 선택도는 개선된다. 소정의 실시형태에서, 미스매치는 갭머 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드 내에 특이적으로 배치된다. 소정의 실시형태에서, 미스매치는 갭 영역의 5' 말단으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 위치에 있다. 소정의 실시형태에서, 미스매치는 갭 영역의 3' 말단으로부터 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 위치에 있다. 소정의 실시형태에서, 미스매치는 날개 영역의 5' 말단으로부터 1, 2, 3 또는 4 위치에 있다. 소정의 실시형태에서, 미스매치는 날개 영역의 3' 말단으로부터 4, 3, 2 또는 1 위치에 있다.
B. 타우
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 표적 핵산에 상보성인 영역을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하거나 이것으로 이루어지고, 표적 핵산은 타우이다. 소정의 실시형태에서, 타우 핵산은 서열 번호 1에 기재된 서열(뉴클레오타이드 2624000 내지 2761000으로부터 절두된 GENBANK 수탁 번호 NT_010783.14)을 갖는다.
소정의 실시형태에서, 세포를 서열 번호 1에 상보성인 올리고머 화합물과 접촉시키는 것은 타우 mRNA의 양을 감소시키고, 소정의 실시형태에서 타우 단백질의 양을 감소시킨다. 소정의 실시형태에서, 동물에서의 세포를 서열 번호 1에 상보성인 올리고머 화합물과 접촉시키는 것은 신경퇴행성 질환의 하나 이상의 증상을 경감시킨다. 소정의 실시형태에서, 증상은 기억 상실, 운동 기능 상실, 또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 증가이다. 소정의 실시형태에서, 동물에서의 세포를 서열 번호 1에 상보성인 올리고뉴클레오타이드와 접촉시키는 것은 기억의 유지 또는 개선, 운동 기능의 유지 또는 개선, 및/또는 신경섬유 봉입체의 수 및/또는 용적의 유지 또는 감소를 발생시킨다.
C. 소정의 조직에서의 소정의 표적 핵산
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 표적 핵산에 상보성인 영역을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하거나 이것으로 이루어지고, 표적 핵산은 중추 신경계(CNS)에서 발현된다.
VI. 소정의 약제학적 조성물
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 올리고머 화합물 또는 이의 염을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 기재된다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 무균 식염수 용액 및 하나 이상의 올리고머 화합물을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 무균 식염수 용액 및 하나 이상의 올리고머 화합물로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 무균 식염수는 약제학적 등급 식염수이다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 올리고머 화합물 및 무균 물을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나의 올리고머 화합물 및 무균 물로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 무균 물은 약제학적 등급 물이다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 올리고머 화합물 및 인산염 완충 식염수(PBS)를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 올리고머 화합물 및 무균 PBS로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 무균 PBS는 약제학적 등급 PBS이다.
소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 올리고머 화합물 및 하나 이상의 부형제를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 부형제는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글라이콜, 젤라틴, 락토스, 아밀라제, 스테아르산마그네슘, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물은 약제학적 조성물 또는 제제의 제조를 위해 약제학적으로 허용 가능한 활성 및/또는 불활성 물질과 혼합될 수 있다. 약제학적 조성물의 제제에 대한 조성물 및 방법은 투여 경로, 질환의 정도 또는 투여되는 용량(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 다수의 기준에 따라 달라진다.
소정의 실시형태에서, 올리고머 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 올리고머 화합물의 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염, 올리고머 화합물의 에스터 또는 이러한 에스터의 염을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 올리고머 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은, 인간을 포함하는 동물에 대한 투여 시, 생물학적으로 활성인 대사물질 또는 이의 잔류물을 (직접적으로 또는 간접적으로) 제공할 수 있다. 따라서, 예를 들어 본 개시내용은 또한 올리고머 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염, 프로드럭, 이러한 프로드럭의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 다른 생물등가물에 관한 것이다. 적합한 약제학적으로 허용 가능한 염은 나트륨염 및 칼륨염을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 프로드럭은 올리고뉴클레오타이드에 부착된 하나 이상의 공액기를 포함하고, 공액기는 신체 내의 내인성 뉴클레아제에 의해 절단된다.
지질 모이어티는 다양한 방법에서 핵산 치료에서 사용된다. 소정의 이러한 방법에서, 핵산, 예컨대 올리고머 화합물은 양이온성 지질 및 중성 지질의 혼합물로 이루어진 미리 형성된 리포솜 또는 리포플렉스로 도입된다. 소정의 방법에서, 모노- 또는 폴리-양이온성 지질과의 DNA 복합체는 중성 지질의 존재 없이 형성된다. 소정의 실시형태에서, 지질 모이어티는 특정한 세포 또는 조직에 대한 약제학적 물질의 분포를 증가시키도록 선택된다. 소정의 실시형태에서, 지질 모이어티는 지방 조직에 대한 약제학적 물질의 분포를 증가시키도록 선택된다. 소정의 실시형태에서, 지질 모이어티는 근육 조직에 대한 약제학적 물질의 분포를 증가시키도록 선택된다.
소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 전달 시스템을 포함한다. 전달 시스템의 예는 리포솜 및 에멀션을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 전달 시스템은 소정의 약제학적 조성물, 예를 들어 소수성 화합물을 포함하는 것을 제조하는 데 유용하다. 소정의 실시형태에서, 소정의 유기 용매, 예컨대 다이메틸설폭사이드를 사용한다.
소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 특이적 조직 또는 세포 유형에 본 발명의 하나 이상의 약제학적 물질을 전달하도록 설계된 하나 이상의 조직 특이적 전달 분자를 포함한다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 조직 특이적 항체에 의해 코팅된 리포솜을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 공용매 시스템을 포함한다. 소정의 이러한 공용매 시스템은 예를 들어 벤질 알코올, 비극성 계면활성제, 수혼화성 유기 중합체 및 수성 상을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 공용매 시스템은 소수성 화합물에 사용된다. 이러한 공용매 시스템의 비제한적인 예는 3% w/v의 벤질 알코올, 8% w/v의 비극성 계면활성제 폴리소르베이트 80(상표명) 및 65% w/v의 폴리에틸렌 글라이콜 300을 포함하는 절대 에탄올의 용액인 VPD 공용매 시스템이다. 이러한 공용매 시스템의 비율은 이의 용해도 및 독성 특징을 상당히 변경하지 않으면서 상당히 변할 수 있다. 더구나, 공용매 성분의 정체는 변할 수 있고, 예를 들어 폴리소르베이트 80(상표명) 대신에 다른 계면활성제를 사용할 수 있고, 폴리에틸렌 글라이콜의 분획 크기는 변할 수 있고, 다른 생체적합성 중합체는 폴리에틸렌 글라이콜, 예를 들어 폴리비닐 피롤리돈을 대체할 수 있고, 다른 당 또는 다당류는 덱스트로스를 대체할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 경구 투여를 위해 제조된다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 협측 투여를 위해 제조된다. 소정의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 주사(예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내, 척추강내, 뇌실내 등)에 의한 투여를 위해 제조된다. 소정의 이러한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 담체를 포함하고, 수성 용액, 예컨대 물 또는 생리학적으로 상용성인 완충제, 예컨대 행크 용액, 링거액 또는 생리학적 식염수 완충제 중에 제제화된다. 소정의 실시형태에서, 다른 성분(예를 들어, 용해도를 돕거나 보존제로서 작용하는 성분)이 포함된다. 소정의 실시형태에서, 주사용 현탁액은 적절한 액체 담체, 현탁제 등을 사용하여 제조된다. 소정의 주사용 약제학적 조성물은 단위 제형, 예를 들어 앰플 또는 다용량 용기에 존재한다. 소정의 주사용 약제학적 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀션이고, 제제화제, 예컨대 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 주사용 약제학적 조성물에서 사용하기에 적합한 소정의 용매는 친유성 용매 및 지방 오일, 예컨대 참깨유, 합성 지방산 에스터, 예컨대 에틸 올레에이트 또는 트라이글라이세라이드 및 리포솜을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 수성 주사 현탁액은 함유할 수 있다.
VII. 소정의 화합물
소정의 실시형태에서, 화합물 814907호는 (5'로부터 3'로) CCGTTTTCTTACCACCCT(본 명세서에서 서열 번호 8로 도입)의 서열을 갖는 5-8-5 MOE 갭머를 특징으로 하고, 각각의 뉴클레오사이드 1-5 및 14-18은 2'-MOE 뉴클레오사이드이고, 각각의 뉴클레오사이드 6-13은 2'-데옥시뉴클레오사이드이고, 뉴클레오사이드 2 및 뉴클레오사이드 3 및 뉴클레오사이드 15 내지 뉴클레오사이드 16 사이의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결이고, 뉴클레오사이드간 연결의 나머지는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고, 각각의 사이토신은 5-메틸사이토신이다.
소정의 실시형태에서, 화합물 814907호는 하기 화학 표시를 특징으로 한다: mCes mCeo Ges Tes Tes Tds Tds mCds Tds Tds Ads mCds mCds Aes mCeo mCes mCes Te; 여기서
A = 아데닌이고,
mC = 5-메틸사이토신이고,
G = 구아닌이고,
T = 타이민이고,
e = 2'-MOE 뉴클레오사이드이고,
d = 2'-데옥시뉴클레오사이드이고,
s = 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이고,
o = 포스포다이에스터 뉴클레오사이드간 연결이다.
소정의 실시형태에서, 화합물 814907호는 하기 화학 구조를 특징으로 한다:
Figure pat00008
구조 1. 화합물 814907호
VIII. 소정의 벤치마크
소정의 실시형태에서, WO 2015/010135에 처음에 기재된 화합물 623782호(이하 실시예 1에 규명됨)는 벤치마크이다. 화합물 623782호는 효력, 효율 및 관용성의 면에서 WO 2015/010135에 기재된 화합물 중에 상위 수행자이다. 화합물 623782호는 실시예 1 및 실시예 2에서 이하 기재된 비교용 연구에서 화합물 623782호와 비교하여 화합물 814907호(이하 실시예 1에 규명됨)의 우수한 효율 및 관용성을 나타내기 위한 벤치마크로서 제공된다.
실시예 1에서 입증된 바대로, 화합물 814907호는 30㎍, 100㎍, 500㎍에 의해 치료된 타우 형질전환 마우스에서 25㎍의 ED50을 달성하는 한편, 화합물 623782호는 10㎍, 30㎍, 100㎍, 300㎍, 700㎍에 의해 치료된 타우 형질전환 마우스에서 94㎍의 ED50을 달성하였다. 따라서, 화합물 814907호는 화합물 623782호보다 더 효율적이다.
실시예 2에서 입증된 바대로, 야생형 마우스에 대한 화합물 814907호의 투여는 푸르키네 세포 손실 무를 발생시키는 한편, 화합물 623782호의 투여는 11마리 중 3마리의 동물에서 칼빈딘 염색된 소뇌 절편에서 푸르키네 세포 손실을 발생시켰다. 따라서, 화합물 814907호는 화합물 623782호보다 더 관용성이다.
비제한적인 개시내용 및 참고에 의한 포함
본 명세서에 기재된 각각의 문헌 및 특허 공보는 그 전문이 참고로 포함된다.
본 명세서에 기재된 소정의 화합물, 조성물 및 방법이 소정의 실시형태에 따라 구체적으로 기재되어 있지만, 하기 실시예는 본 명세서에 기재된 화합물을 예시하도록 오직 작용하고, 이를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 출원에 기재된 각각의 참고문헌, 수탁 번호 등은 그 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.
이 출원을 동반하는 서열 목록은 필요한 바대로 "RNA" 또는 "DNA"로서 각각의 서열을 식별하지만, 실제로, 이 서열은 화학 변형의 임의의 조합에 의해 변형될 수 있다. 당해 분야의 숙련자는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 기재하기 위한 "RNA" 또는 "DNA"로서의 이의 지칭이 소정의 경우에 임의라는 것을 용이하게 이해할 것이다. 예를 들어, 2'-OH 당 모이어티 및 타이민 염기를 포함하는 뉴클레오사이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 변형된 당을 갖는 DNA(DNA의 하나의 2'-H 대신에 2'-OH)로서 또는 변형된 염기를 갖는 RNA(RNA의 유라실 대신에 타이민(메틸화된 유라실))로서 기재될 수 있다. 따라서, 서열 목록에서의 것(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 본 명세서에 제공된 핵산 서열은 천연 또는 변형된 RNA 및/또는 DNA, 예를 들어 변형된 핵염기를 갖는 이러한 핵산(이들로 제한되지는 않음)의 임의의 조합을 함유하는 핵산을 포함하도록 의도된다. 추가의 예의 방식으로, 제한 없이, 핵염기 서열 "ATCGATCG"를 갖는 올리고머 화합물은, 변형되든 또는 비변형되든, 이러한 핵염기 서열을 갖는 임의의 올리고머 화합물, 예를 들어 RNA 염기를 포함하는 이러한 화합물, 예컨대 서열 "AUCGAUCG"를 갖는 것 및 몇몇 DNA 염기 및 몇몇 RNA 염기를 갖는 것, 예컨대 "AUCGATCG" 및 다른 변형된 핵염기를 갖는 올리고머 화합물, 예컨대 "ATmCGAUCG"(여기서, mC는 5-위치에서 메틸기를 포함하는 사이토신 염기를 나타냄)(이들로 제한되지는 않음)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 소정의 화합물(예를 들어, 변형된 올리고뉴클레오타이드)은 하나 이상의 비대칭 중앙을 갖고, 이에 따라 (R) 또는 (S)로서, 예컨대 당 아노머에 대해 α 또는 β로서, 또는 예컨대 아미노산 등에 대해 (D) 또는 (L)로서 절대 입체화학의 면에서 한정될 수 있는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 다른 입체이성질체 배좌를 발생시킨다. 소정의 입체이성질체 배좌를 갖는 것으로 그려지거나 기재된 본 명세서에 제공된 화합물은 오직 표시된 화합물을 포함한다. 비한정된 입체화학에 의해 그려지거나 기재된 본 명세서에 제공된 화합물은, 달리 기재되지 않는 한, 모든 이러한 가능한 이성질체, 예를 들어 이의 입체랜덤 및 광학적으로 순수한 형태를 포함한다. 마찬가지로, 본 명세서에서 화합물의 호변이체 형태는 달리 표시되지 않는 한 또한 포함된다. 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 올리고머 화합물 및 변형된 올리고뉴클레오타이드는 상응하는 염 형태를 포함하도록 의도된다.
본 명세서에 기재된 화합물은 하나 이상의 원자가 표시된 원소의 비방사성 동위원소 또는 방사성 동위원소에 의해 대체된 변동을 포함한다. 예를 들어, 수소 원자를 포함하는 본 명세서에서 화합물은 각각의 1H 수소 원자에 대해 모든 가능한 중수소 치환을 포함한다. 본 명세서에서 화합물에 의해 포함된 동위원소 치환은 1H 대신에 2H 또는 3H, 12C 대신에 13C 또는 14C, 14N 대신에 15N, 16O 대신에 17O 또는 18O, 및 32S 대신에 33S, 34S, 35S 또는 36S를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 소정의 실시형태에서, 비방사성 동위원소 치환은 치료학적 또는 조사 도구로서 사용하기에 유리한 올리고머 화합물에서 새로운 특성을 부여할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 방사성 동위원소 치환은 조사 또는 진단 목적, 예컨대 영상화에 적합한 화합물을 만들 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 개시내용의 소정의 실시형태를 예시하고, 제한이 아니다. 더구나, 구체적인 실시형태가 제공될 때, 본 발명자들은 이 구체적인 실시형태의 포괄적인 적용을 고려한다. 예를 들어, 특정한 모티프를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 개시내용이 동일하거나 유사한 모티프를 갖는 추가적인 올리고뉴클레오타이드에 대한 합당한 지원을 제공한다. 그리고, 예를 들어 특정한 고친화도 변형이 특정한 위치에서 나타날 때, 다른 동일한 위치에서의 고친화도 변형은, 달리 표시되지 않는 한, 적합하게 생각된다.
실시예 1: 형질전환 마우스에서의 인간 타우 mRNA에 대한 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효과
하기 표에 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 인간 타우 프리-mRNA에 100% 상보성이다(GENBANK 수탁 번호 NT_010783.14, 뉴클레오타이드 2624000 내지 2761000으로부터 절두됨, 본 명세서에서 서열 번호 1로 지칭). 변형된 올리고뉴클레오타이드의 효율을 인간 타우 형질전환 마우스에서 시험하였다(Duff et al., Neurobiology of Disease 7:87-98, 2000). 각각의 마우스는 ICV 볼루스 주사에 의해 하기 표에 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 PBS 비히클 단독의 용량을 받았다. 각각의 치료 그룹은 2마리 내지 4마리의 마우스로 이루어진다. 올리고뉴클레오타이드 투여 몇 일 후, 마우스를 희생시키고, 조직을 수집하였다. RNA를 피질로부터 추출하고, RT-qPCR에 의해 분석하여 인간 타우 mRNA 수준을 결정하였다. 하기 서열을 갖는 프라이머 프로브 세트 RTS3104를 사용하였다: 정방향 프라이머 5'-AAGATTGGGTCCCTGGACAAT-3'(본 명세서에서 서열 번호 5라 지칭); 역방향 프라이머 5'-AGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATT-3'(본 명세서에서 서열 번호 6이라 지칭); 프로브 5'-CACCCACGTCCCTGGCGGA-3'(본 명세서에서 서열 번호 7이라 지칭). 결과는 비히클 치료 그룹과 비교하여 각각의 치료 그룹에 대해 인간 타우 mRNA 발현의 평균 저해 백분율로서 하기 표에 제시되어 있다. 각각의 변형된 올리고뉴클레오타이드에 대한 반 최대 유효 용량(ED50)은 비선형 회귀 분석을 이용하여 계산되었다.
Figure pat00009
실시예 2: 인간 타우를 표적화하는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 관용성
실시예 1에 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드의 관용성을 야생형 마우스에서 시험하였다. 각각의 마우스는 700㎍의 용량에서 화합물 623782호 또는 화합물 814907호의 700㎍의 주사, 또는 PBS 비히클 단독을 받았다. 변형된 올리고뉴클레오타이드 투여 후 8주에, 마우스를 희생시키고, 조직을 수집하였다. H&E, IBA1, GFAP 및 칼빈딘 염색을 이용하여 소뇌의 절편에서 병리조직학을 수행하고, 화합물 814907호 치료된 마우스에서 비히클 치료된 마우스에 대한 비정상이 관찰되지 않았다. 필적하는 실험에서, 화합물 623782호에 의해 치료된 11마리 중 3마리의 동물에서 칼빈딘 염색된 소뇌 절편에서 푸르키네 세포 손실이 관찰되었다.
실시예 3: 13주 동안 반복 용량 척추강내 주사 이후의 사이노몰구스 원숭이에서의 화합물 814907호의 효과
사이노몰구스 원숭이를 화합물 814907호에 의해 시험하여 13주 동안 반복 척추강내 요추 볼루스 주사 이후의 3회 용량 수준에서 국소 및 전신 관용성 및 약동학을 결정하였다. 화합물 814907호는 원숭이 타우 mRNA에 대한 완전한 서열 상동성을 공유하고, 이 종에서 약리학적 활성을 나타낸다.
치료
2년령 내지 4년령의 범위의 사이노몰구스 원숭이를 척추강내로 비히클 대조군(n=12) 또는 화합물 814907호(L3-L4)에 의해 치료하였다. 동물에 1일, 14일, 28일, 56일 및 84일에 투약하였다. 치료 그룹은 화합물 814907호의 4mg(n=6), 12mg(n=6) 또는 35mg(n=14)을 받았다. 동물(비히클 대조군으로부터의 4마리의 동물 및 35mg 치료 그룹으로부터의 4마리의 동물)을 98일 또는 155일에 희생시켰다.
관용성
관용성의 평가는 임상 관찰, 신체 체중, 음식 소모, 신체 및 신경 검사, 신경행동 관찰(변형된 Irwin 시험(Irwin, 1968)), 심전도(electrocardiogram: ECG) 및 혈압 평가, 안과학, 응고, 혈액학, 임상 화학(혈액 및 뇌척수액[CSF]), 세포 계수(CSF 단독), 혈액 가스 평가, 뇨 분석 및 해부학적 병리학 평가에 기초한다. 완전한 검시를 임의의 거시적인 비정상의 기록에 의해 수행하였다. 장기 중량을 취하고, 미시적인 검사를 수행하였다. 보체 분석을 위해 혈액을 수집하였다. 또한, 독성학적 평가를 위해 (검시 시) 혈액, CSF 및 조직을 수집하였다.
13주 동안(처음 1개월 동안 이주마다, 이후 개월마다) 4mg, 12mg 또는 35mg의 화합물 814907호의 척추강내 투여는 모든 시험된 투약 섭생에서 수컷 및 암컷 사이노몰구스 원숭이에서 양호한 국소 및 전신 관용성을 보여주었다.
활성
사이노몰구스 원숭이 타우 mRNA의 저해에 대해 뇌 및 척수 조직을 분석하였다. 뇌 슬라이스 및 척수 샘플을 수집하고 액체 질소 중에 플래시 동결하고, 동결 저장하였다(-60℃ 내지 -90℃). 샘플링 시에, 2㎜ 생검 펀치를 사용하여 동결된 뇌 슬라이스로부터 RNA 분석을 위해 샘플을 수집하였다. 다수의 척수 및 뇌 영역으로부터 펀치를 취했다.
대조군 또는 화합물 814907호에 의해 치료된 사이노몰구스 원숭이로부터의 뇌 및 척수 샘플로부터의 전체 RNA를 Life Technologies 미니-RNA 정제 키트를 사용하여 정제하고, 실시간 PCR 분석으로 처리하였다. 원수이 프라이머 프로브 세트 rhMATPT LTS01278(정방향 서열 AGGACAGAGTGCAGTCGAAGATC, 본 명세서에서 서열 번호 9라 지칭; 역방향 서열 AGGTCAGCTTGTGGGTTTCAA, 본 명세서에서 서열 번호 10이라 지칭; 프로브 서열 CACCCATGTCCCTGGCGGAGG, 본 명세서에서 서열 번호 11이라 지칭)를 사용하여 RNA 수준을 측정하였다. 이후, 타우 RNA를 하우스키핑 유전자 사이클로필린 A로 정규화하였다. 모든 qPCR 반응을 3회 실행하였다. 인공 CSF에 의해 치료된 동물에서 mRNA 수준에 대해 데이터를 기록하였다.
하기 표에 기재된 바대로, 대조군 치료된 마우스와 비교하여 화합물 814907호에 의한 치료 후 척수 및 다수의 CNS 영역에서의 타우 RNA 수준의 상당한 및 용량 반응성 감소가 있었다.
Figure pat00010
실시예 4: 화합물 814907호에 의한 I-IIa상 인간 임상 실험
50세 내지 74세의 경증 알츠하이머병(AD)을 갖는 환자에서 안전성, 관용성, 약동학 및 약력학을 평가하기 위해 무작위화된, 이중 맹검, 위약 제어 연구에서 화합물 814907호의 다수의 상승 용량을 평가하였다. 적격인 환자는 AD에 대한 임상 기준을 만족시키는 것 이외에 아밀로이드 및 타우 병리학의 CSF AD 바이오마커 증거를 가질 것이다. 경증 AD 환자의 4의 상승 용량 수준 코호트는 순차적으로 등록되고, 화합물 814907호 또는 위약을 받도록 3:1 무작위화될 것이다. 각각의 환자는 용량 사이의 28일 간격으로 화합물 814907호 또는 위약의 4의 용량을 받을 것이다. 환자는 3개월 치료 기간(1일, 29일, 57일, 85일) 동안 4주 간격으로 화합물 814907호의 4의 척추강내(IT) 볼루스 용량을 받을 것이다. 화합물 814907호 또는 위약의 각각의 용량은 단일 20㎖의 IT 볼루스 주사로서 투여될 것이다. 투여는 L3/L4 공간으로 삽입된 작은 게이지 침을 사용하여 요추 천자를 통해서일 것이다.
안전성 및 관용성 평가
연구 동안 환자 안전성은 면밀히 모니터링될 것이다. 안전성 및 관용성 평가는 하기를 포함하고: 신체 검사 및 표준 신경학적 평가(기저부(fundi) 포함), 활력 징후(HR, BP, 기립성 변화, 체중), ECG, AEs 및 동반 약제, 콜롬비아 자살 위험성 평가 척도(Columbia Suicide Severity Rating Scale: C-SSRS), CSF 안전성 랩(세포 계수, 단백질, 포도당), 혈장 실험실 시험(임상 화학, 혈액학), 소변검사 및 신경촬영 평가는 3T MRI 스캐너를 사용하여 수행될 것이다. 임상 및 용적측정 신경촬영 측정치는 예상되지 못한 악화를 모니터링하도록 사용될 것이다.
약동학적 평가
CSF 샘플은 PK 분석을 위해 각각의 투여 일(1일, 29일, 57일, 85일)에 및 치료 후 기간 동안 사전 용량이 수집될 것이다.
탐구적 평가
생화학적, 신경촬영, 매일의 삶의 기능/활동을 수행하는 능력, 인지, 및 신경정신병학적 매개변수가 평가될 것이다.
생화학적 매개변수는 표적 관여를 포함하는 잠재적인 CSF 및 혈액/혈장 바이오마커, 뉴런 및 시냅스 손상 마커, 선천성 면역 활성화 마커, 보체 성분 및 지질 관련된 바이오마커를 포함한다.
신경촬영 매개변수는 구조적 MRI(해마, 전뇌 및 심실 용적), 동맥 스핀 표지(Arterial Spin Labelling: ASL), 확산 텐서 영상화(diffusion tensor imaging: DTI) 및 FDG-PET(오직 코호트 C 및 D)를 포함한다.
매일의 삶의 기능/활동을 수행하는 능력 매개변수는 기능 활동 질의(Functional Activities Questionnaire: FAQ)에 의한 평가를 포함한다.
인지 매개변수는 신경정신병학적 상태의 평가(Assessment of Neuropsychological Status: RBANS) 및 미니-심리 상태 검사(MMSE)에 대한 반복 가능한 배터리(Repeatable Battery)에 의한 평가를 포함한다.
신경정신병학적 매개변수는 신경정신병학적 항목 - 질의(NPI-Q)에 의한 평가를 포함한다.
SEQUENCE LISTING <110> Ionis Pharmaceuticals, Inc. <120> COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING TAU EXPRESSION <130> BIOL0285WO <150> 62/450,469 <151> 2017-01-25 <150> 62/401,723 <151> 2016-09-29 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 137001 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 caaaaattag ccgggagtgg tggcatatgc ctgtaatccc agtagctggg aggctgagac 60 aggaaaatcg cttgaacccg ggaaacaggt tgcagtgagc cgagatcgtg ccactgcact 120 ccagcctggg caacagagcg agactccatc tcaaaaaaac aaaacaaaca cacacaaaaa 180 accaaaaata aataaataaa atgatcactt ctgaatactg atctaactag gggttgcagg 240 gtgggctgat atagggagaa actggagagc aaggagatca ctaaggtccc tacatgtcca 300 gaaccaagat agaggtcttg aactaggatg gtggcagtta gaacaacaac aacaaaaagt 360 caattccagg ctgagtgcag tggctcatgc ttgtaatccc aacgctttgg gaggctgagg 420 tgggagttag aaagcagcct gggcaacact gcaagacctc ctctctaaaa aaaaaaaaaa 480 aaaaaagtta gccaggtgtg gtggtgccca cctgtagtcc cagcaactca gaaggctgag 540 gtgggaagat tgcttgagcc ccaggagttc aagcttgccg tgagctacga ttgtgccact 600 gcactccagc 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