Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

KR20210057726A - 항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도 - Google Patents

항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210057726A
KR20210057726A KR1020217006492A KR20217006492A KR20210057726A KR 20210057726 A KR20210057726 A KR 20210057726A KR 1020217006492 A KR1020217006492 A KR 1020217006492A KR 20217006492 A KR20217006492 A KR 20217006492A KR 20210057726 A KR20210057726 A KR 20210057726A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
amino acid
seq
acid sequence
antigen
Prior art date
Application number
KR1020217006492A
Other languages
English (en)
Inventor
카일 스티븐 니센
다르마라즈 새뮤얼
찰스 레이 홀스트
매튜 로스 드리버
딘 셰퍼드
로즈메리 제이. 아커스트
암하 아타킬리트
도미니크 마이어
아이작 제이. 론돈
조셉 달 포르토
Original Assignee
화이자 인코포레이티드
더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 화이자 인코포레이티드, 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 filed Critical 화이자 인코포레이티드
Publication of KR20210057726A publication Critical patent/KR20210057726A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2839—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the integrin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/6857—Antibody fragments
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편을 제공한다. 본 발명은 항체의 용도 및 연관 사용 방법을 포함한다.

Description

항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도
관련 출원
본 출원은 2018년 9월 7일에 출원된 미국 일련 번호 62/728,688, 및 2019년 8월 23일에 출원된 미국 일련 번호 62/890,945를 우선권 주장하며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 명세서는 2019년 9월 5일에 제출된 서열 목록을 추가로 참조로 포함한다. 37 C.F.R. § 1.52(e)(5)에 따라, PC72413A_SequenceListing_ST25.txt로 확인되는 서열 목록 텍스트 파일은 184,211 바이트이고, 2019년 9월 3일에 생성되었다. 본원과 함께 전자 제출된 서열 목록은 본 명세서의 범주를 넘어 연장되지 않고, 따라서 새로운 내용을 함유하지 않는다.
공동 연구 성명서 당사자
본원에 청구된 발명은 하기 열거된 공동 연구 협정 당사자에 의해 또는 그를 대신하여 이루어졌다. 공동 연구 협정은 청구된 발명이 이루어진 날짜 또는 그 이전에 발효되었으며 청구된 발명은 공동 연구 협정의 범주 내에서 수행된 활동의 결과로서 이루어졌다. 공동 연구 협정 당사자는 샌프란시스코 캠퍼스를 대표하는 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아(THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CALIFORNIA) 및 화이자 인크.(PFIZER INC.)이다.
분야
본 발명은 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편, 및 그의 조성물, 방법 및 용도에 관한 것이다.
형질전환 성장 인자 β (TGFβ)는 적응성 및 선천성 면역의 강력한 억제자이고, 조절 T 세포의 하위세트에 의한 면역 억제의 중요한 매개자이다. TGFβ는 Th17 세포의 유도에 필요하며, 이는 과립구성 염증의 유도를 통해 종양 진행을 촉진할 수 있고, 종양 세포의 상피 중간엽 변환, 및 일부 고형 종양으로부터의 면역 세포의 배제에 기여할 수 있는 섬유화 종양 기질의 분비 및 축적을 촉진한다. 모든 이들 이유로, TGFβ의 억제가, 특히 소위 "면역-배제된" 종양에서 보조 면역요법으로서 연구되어 왔다 (Gorelik et al., Nat. Med. 7:1118-1122, 2001; Tauriello et al., Nature 554:538-543, 2018; Mariathasan et al., Nature 554:544-548, 2018, Dodagatta et al., J Immunother Cancer. 7: 62. 2019; 미국 특허 번호 10,167,334). 그러나, TGFβ는 많은 생물계에서 중요한 항상성 역할을 하기 때문에, TGFβ 신호전달의 전신 표적화는 원치 않는 부작용으로 인해 수많은 도전과제를 제시한다 (Hata and Akhurst Nat. Rev. Drug Dev. 11, 791-811, 2012; Akhurst et al., Cold Spring Harbor Perspectives. 10, 2017; Flavell et al., Nat. Rev. Immunol. 10:554-567, 2010).
이전의 연구는 TGFβ 신호전달의 억제가 체크포인트 억제와 조합된 방사선 또는 백신 요법에 대한 반응을 증진시킬 수 있음을 제시하였다 (Vanpouille-Box et al., Cancer Res. 75:2232-2242, 2015; Terabe et al., OncoImmunology 6(5):e1308616, 2017). TGFβ의 생체내 활성은 여러 메카니즘을 통해 조절된다. 예를 들어, TGFβ는 절단된 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 도메인이 활성 TGFβ 성숙 펩티드를 감싸고 있는 불활성 또는 잠복성 복합체로서 분비된다. 잠복성-TGFβ는 잠복성 TGFβ 결합 단백질 (LTBP)을 통해 세포외 매트릭스에 공유 연결될 수 있거나, 또는 당단백질-A 반복 우세 단백질 (GARP)에 의해 세포 표면 상에 디스플레이될 수 있다. 초기 시험관내 데이터는 TGFβ의 잠복성 복합체가 고온, 산성 pH, 및 다양한 프로테아제에 의해 활성화될 수 있음을 제시하였지만 (Annes et al., J Cell Sci. 116:217-24, 2003), 이들 메카니즘의 생체내 중요성은 여전히 결정되어야 하는 것으로 남아있다.
잠복성-TGFβ 활성화에 대한 αv 인테그린 패밀리의 구성원, 구체적으로 αvβ1, αvβ6, 및 αvβ8의 역할이 입증되었다. 인테그린 αvβ8은 ITGαV 및 ITGβ8 서브유닛으로 이루어진 막횡단 비공유 이종이량체이다. αvβ8 발현은 αv 인테그린 중에서 독특하며, 면역 세포, 예컨대 수지상 세포, T 조절 세포, 및 종양 연관 대식세포에 의한 그의 발현은 능동 면역 반응의 조절을 위한 TGFβ의 맥락상의 활성화제로서 대두되었다. 수지상 세포 (DC)에 의한 αvβ8 발현은 T-세포 자극 동안 TGFβ 생산의 매개자로서 작용하고, 면역 반응 동안 Th1 분화를 대가로 하여 Treg 및 Th17 세포의 분화 및 발생에 강하게 영향을 미친다. DC 또는 모든 백혈구에서 Itgb8의 조건부 결실을 갖는 마우스는 항원-특이적 Th17 세포의 TGFβ-의존성 유도의 현저한 억제를 입증하고, 후속적으로 다발성 경화증 (실험적 자가면역 뇌척수염) 및 알레르기성 천식과 같은 자가면역의 특정 전임상 모델에서 기관 기능장애로부터 보호된다 (Travis et al., Nature. 449(7160):361-5, 2007; Melton et al., J Clin. Invest. 120(12):4436-44, 2010).
TGFβ는 면역 억제 세포의 분화 및 그의 종양으로의 동원 둘 다에서, 그리고 면역 억제 종양 미세환경에 기여하는 종양 고유 인자로서 그 역할을 한다. 일부 암에서, TGFβ는 혈관신생, 전이, 상피-중간엽 이행, 및 아마도 가장 중요하게는 침윤 면역 세포의 억제를 포함한 종양 미세환경의 수많은 측면에 영향을 미침으로써 종양-촉진성일 수 있다.
따라서, 종양 미세환경에서의 TGFβ의 현저한 역할 및 TGFβ 신호전달의 전신 표적화와 연관된 수많은 도전과제의 관점에서 (Hata and Akhurst Nat. Rev. Drug Dev. 11, 791-811, 2012; Akhurst et al., Cold Spring Harbor Perspectives 10, 2017; Flavell et al., Nat. Rev. Immunol. 10:554-567, 2010), αvβ8-의존성 잠복성-TGFβ 활성화의 선택적 억제를 위한 전략을 개발하는 것에 대한 필요가 존재한다.
αvβ8 인테그린 (또한 본원에서 "AVB8", "αvβ8" 또는 "avb8"로도 상호교환가능하게 지칭됨) (예를 들어, 인간, 마우스, 시노몰구스 원숭이, 및/또는 래트로부터의 αvβ8 인테그린)에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, 인간화 및 키메라 항체) 및 그의 항원-결합 단편이 본원에 개시된다. 특정 측면에서, 항체 및 그의 항원-결합 단편은 αvβ8 인테그린에 결합하고, 궁극적으로 예를 들어 종양 또는 종양 미세환경에서 TGFβ (예를 들어, TGFβ1 및 TGFβ3) 신호전달을 감소시킨다.
성숙 TGFβ는 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 도메인과의 복합체로, 불활성 또는 잠복성 형태로 존재한다. αvβ8 인테그린의 LAP에 대한 결합은 활성 TGFβ (예를 들어, TGFβ1 및 TGFβ3)의 방출을 유발한다. LAP에 대한 αvβ8 인테그린의 결합을 감소시키는 것은 활성 TGFβ의 방출을 방지함으로써 TGFβ 신호전달을 감소시킬 수 있다. TGFβ는, 예를 들어 종양 미세환경에서 면역 억제 효과를 갖는 것으로 공지되어 있고, 따라서 본원에 기재된 항체를 사용하여 TGFβ 활성 및/또는 신호전달을 감소시키는 것은 면역 반응, 예를 들어, 생체내 항종양 반응의 활성화를 발생시킬 수 있다.
면역 세포 (예를 들어, 수지상 세포, T 조절 세포, 종양-연관 대식세포) 및 종양 세포 상에서의 αvβ8 인테그린의 국한된 발현으로 인해, 본원에 개시된 항체는 TGFβ 신호전달의 보다 표적화된, 비-전신 감소를 발생시킬 수 있다. 따라서, 개시내용의 항체 및 그의 항원-결합 단편은 면역계 및/또는 종양 미세환경에서 TGFβ 활성의 보다 선택적인 길항작용을 가능하게 하고, 이에 의해 대상체에서 항종양 면역 반응을 증진시킨다. 본원에 개시된 일부 실시양태에서, αvβ8 인테그린에 대한 항체는, 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암을 포함한 여러 암에 대한 동물 모델에서, 단독으로 또는 다른 면역조정제, 예컨대 체크포인트 억제제의 조정제 (예를 들어, PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제 또는 4-1BB의 효능제), 또는 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발하는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 특정 측면에서, 개시내용은 높은 친화도 및 특이성으로 αvβ8 인테그린에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편, 항체 및 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포, 및 그를 제조하는 방법을 제공한다. 특정 측면에서, 항체 및 그의 항원-결합 단편은 변경된 이펙터 기능을 나타낸다 (예를 들어, 감소된 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성 및/또는 감소된 보체 의존성 세포독성 (CDC) 활성을 가짐). 특정 측면에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 항원-결합 단편은 이들이 유래된 뮤린 하이브리도마 항체 및 그의 항원-결합 단편과 비교하여 αvβ8 인테그린에 대해 증진된 결합 친화도를 나타낸다. 본원에 개시된 인간화 항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 항원-결합 단편은 장애, 예컨대 암성 장애 (예를 들어, 고형 및 연조직 종양)를 치료, 예방 및/또는 진단하기 위해 단독으로, 또는 다른 작용제 또는 치료 양식 (예를 들어, 면역조정제 또는 항암 요법)과 조합되어 사용될 수 있다. 이에 따라, αvβ8 인테그린을 검출하기 위한 조성물 및 방법, 뿐만 아니라 항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 항원-결합 단편을 사용하여 암을 비롯한 다양한 장애를 치료하는 방법이 개시된다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상용 실험에 지나지 않는 것을 사용하여 본원에 기재된 본 발명의 구체적 실시양태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 실시양태 (E)에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.
E1. 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
i. 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 9,969,804에 개시된 바와 같은, 예를 들어 본 명세서의 서열식별번호(SEQ ID NO): 20-33 및 71-76에 제시된 바와 같은 아미노산 서열로 확인되는 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도, 예를 들어 본 발명의 ADWA11 항체는 536 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 510, 520, 530, 531, 532, 533, 534, 또는 535 pM)의 KD를 가짐;
ii. 예를 들어 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 200 pM 이하 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 180, 190 또는 200 pM)인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
iii. 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
iv. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 489 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 460, 470, 480, 485, 486, 487, 또는 488 pM)인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
v. 정제된 마우스 αvβ8 인테그린에 대해 70.8 +/- 19.9 pM인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
vi. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 507 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 또는 506 pM)인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
vii. 정제된 시노몰구스 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하인 시노몰구스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
viii. 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
ix. 예를 들어 비아코어(Biacore) 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 또는 98 pM)인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도;
x. 뮤린 항체 ADWA11의 것보다 낮은, 예를 들어 183 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 181, 또는 182 pM)인, TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
xi. 약 199 +/- 93.6 pM의, U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
xii. 약 100 pM 내지 약 300 pM인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
xiii. 약 126 +/- 34 pM (예를 들어, 약 50, 60, 70 80, 90, 100, 110, 115, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 또는 190 pM)의 U251 세포에 대한 EC50;
xiv. 약 256 +/- 115 pM (예를 들어, 약 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 290, 300, 320, 340, 360, 380, 400 pM)의 U251 세포에 대한 EC50;
xv. 약 80 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC50;
xvi. 약 115 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
xvii. 약 145+/-23.7 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
xviii. 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
xix. 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
a. 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
b. 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
c. 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
d. 약 21 -33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
e. 약 12일의 말기 반감기 (t1/2);
f. 약 15-17일의 말기 반감기 (t1/2); 또는
xx. 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합.
E2. 실시양태 E1에 있어서, 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 536 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 510, 520, 530, 531, 532, 533, 534, 또는 535 pM)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E3. 실시양태 E1 또는 E2에 있어서, 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD가, 예를 들어 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 pM)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E4. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 489 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 460, 470, 480, 485, 486, 487, 또는 488 pM)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E5. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 약 70.8 +/- 19.9 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E6. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 507 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 또는 506 pM)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E7. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 100 pM 미만인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E8. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD가 약 160 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E9. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 pM)인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대해 대략 동등한 친화도를 나타내는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E10. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 또는 98 pM)인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대해 대략 동등한 친화도를 나타내는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E11. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50이 뮤린 항체 ADWA11 미만, 예를 들어 183 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 181, 또는 182 pM)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E12. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50이 약 199 +/- 93.6 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E13. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50이 약 100 pM 내지 약 300 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E14. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, U251 세포에 대한 EC50이 약 126 pM 플러스 또는 마이너스 34 pM의 표준 편차인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E15. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, U251 세포에 대한 EC50이 약 256 pM 플러스 또는 마이너스 115 pM의 표준 편차인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E16. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, U251 세포에 대한 EC50이 약 100 pM 내지 약 400 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E17. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, C8-S 세포에 대한 EC50이 약 115 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E18. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, C8-S 세포에 대한 EC50이 약 145 +/- 23.7 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E19. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, C8-S 세포에 대한 EC50이 약 110 pM 내지 약 180 pM인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E20. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서,
(i) 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
(ii) 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
(iii) 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
(iv) 약 21 - 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
(v) 약 12-17일의 말기 반감기 (t1/2)
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터를 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E21. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합을 나타내는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E22. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기 특성 중 적어도 1개를 추가로 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(i) αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간, 마우스, 시노몰구스 원숭이, 및/또는 래트로부터의 αvβ8 인테그린)에 특이적으로 결합함;
(ii) αvβ8 인테그린 및 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 사이의 상호작용을 감소시킴;
(iii) TGF-β 신호전달을 감소시킴;
(iv) αvβ8 인테그린-매개된 TGFβ 활성화를 IC50 ≤10 nM로 효과적으로 차단함;
(v) 비-인간 영장류 (NHP) 오르토로그에 대해 대등한 Kd (5-배 이내)를 가짐;
(vi) 인간 αvβ8에 선택적으로 결합하고, αvβ8의 상동체 (예를 들어, αvβ1, αvβ3, αvβ5 및 αvβ6)에는 검출가능하게 결합하지 않음;
(vii) 단독으로 또는 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 조정제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제, 또는 자극 분자, 예를 들어 4-1BB의 효능제와 조합되어 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(viii) 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(ix) 단독으로 또는 면역조정제 (예를 들어, PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 억제제)와 조합되어, 예를 들어 ≤ 10mg/kg으로 투여된 경우에, 동계 종양 이식편 모델에서 종양 성장의 적어도 60% 감소를 나타냄;
(x) 대상체에게 투여된 경우에, 1종 이상의 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 길항제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 길항제, 또는 면역 반응의 활성화제, 예를 들어 4-1BB 효능제의 존재 하에 항종양 반응을 증가시킴;
(xi) 종양 모델에서 αvβ8 인테그린의 발현에 의존하지 않는 효능을 가짐;
(xii) 종양 미세환경에서 CD8+ GzmB+ T 세포의 존재비를 증가시킴;
(xiii) 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암의 동계 모델에서 체크포인트 억제제의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체)와 조합되어 사용된 경우에 종양 성장의 감소, 예를 들어 적어도 > 80% 감소를 나타냄;
(xiv) 카플란-마이어 분석에 의해 결정된 바와 같이, 대상체의 전체 생존에서 통계적으로 유의한 개선을 나타냄;
(xv) 고도의 열 안정성을 가짐;
(xvi) 고농도에서 최소 응집을 나타냄; 및
(xvii) 대규모 제조 조건에서 재현가능한 발현 및 순도를 나타낼 수 있음.
E23.
(i) 서열식별번호: 8 또는 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9 또는 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 10 또는 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 11 또는 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12 또는 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 13 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 또는
(ii) 서열식별번호: 8 또는 14에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9 또는 15에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 10 또는 16에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 11 또는 17에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12 또는 18에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L2, 또는
서열식별번호: 13 또는 19에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L3
으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 CDR, 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서:
CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3 중 임의의 것은
(a) 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27,
(b) 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33,
(c) 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73, 또는
(d) 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76
중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
대안적으로, 또는 본원에 제공된 실시양태 (예를 들어, E1-E23) 중 임의의 것과 조합되어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기 측면, 특색, 및 실시양태 중 1개 이상을 갖는다.
E24.
(i) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 또는
(ii) 서열식별번호: 8에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 10에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 11에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L2, 또는
서열식별번호: 13에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L3
으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 CDR, 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서:
CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3 중 임의의 것은
(a) 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27, 또는
(b) 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73
중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E25. 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR), 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E26. 실시양태 E24 또는 E25에 있어서,
서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및
서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E27. 실시양태 E24-E26 중 어느 하나에 있어서,
서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E28. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E29.
DYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 8)을 포함하는 CDR-H1;
WIDPDX1GNTIYX2PKFQG의 아미노산 서열 (서열식별번호: 131)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X1은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X2는 아미노산, D 이외의 아미노산, D의 보존적 치환, D, 또는 E 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 10)을 포함하는 CDR-H3;
RSTKSLX3HFNGNTYLF의 아미노산 서열 (서열식별번호: 132)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X3은 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YYMSX4LAS의 아미노산 서열 (서열식별번호: 133)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X4는 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및/또는
X5QSLEYPFT의 아미노산 서열 (서열식별번호: 134)을 포함하는 CDR-L3이며, 여기서 X5는 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L3
으로부터의 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR) 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27, 또는 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E30. 실시양태 E29에 있어서, X1이 Q이고 X2가 E인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E31. 실시양태 E29 또는 E30에 있어서, X3이 S인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E32. 실시양태 E29-E31 중 어느 하나에 있어서, X4가 S인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E33. 실시양태 E29-E32 중 어느 하나에 있어서, X5가 Q인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E34. 실시양태 E29에 있어서, X1이 Q이고, X2가 E이고, X3이 S이고, X5가 Q인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E35. 실시양태 E29에 있어서, X1이 Q이고, X2가 E이고, X3이 S인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E36. 실시양태 E29에 있어서, X1이 Q이고, X2가 E이고, X3이 S이고, X4가 S이고, X5가 Q인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E37.
DYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 8)을 포함하는 CDR-H1;
WIDPDX1GX2TIYX3X4X5X6X7G의 아미노산 서열 (서열식별번호: 167)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X1은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X2는 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X3은 아미노산, D 이외의 아미노산, D의 보존적 치환, D, 또는 E 중 어느 하나일 수 있고; X4는 아미노산, P 이외의 아미노산, P의 보존적 치환, P, Q, D, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X5는 아미노산, K 이외의 아미노산, K의 보존적 치환, K, S, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X6은 아미노산, F 이외의 아미노산, F의 보존적 치환, F, 또는 V 중 어느 하나일 수 있고; X7은 아미노산, Q 이외의 아미노산, Q의 보존적 치환, Q, 또는 K 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 10)을 포함하는 CDR-H3;
RSTKSX8X9HFNGNX10YLF의 아미노산 서열 (서열식별번호: 168)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X8은 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 I 중 어느 하나일 수 있고; X9는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있고; X10은 아미노산, T 이외의 아미노산, T의 보존적 치환, T, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YX11X12SX13LX14S의 아미노산 서열 (서열식별번호: 169)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X11은 아미노산, Y 이외의 아미노산, Y의 보존적 치환, Y, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X12는 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X13은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있고; X14는 아미노산, A 이외의 아미노산, A의 보존적 치환, A, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및/또는
X15QSX16X17X18PX19T의 아미노산 서열 (서열식별번호: 170)을 포함하는 CDR-L3이며, 여기서 X15는 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X16은 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 Y 중 어느 하나일 수 있고; X17은 아미노산, E 이외의 아미노산, E의 보존적 치환, E, 또는 S 중 어느 하나일 수 있고; X18은 아미노산, Y 이외의 아미노산, Y의 보존적 치환, Y, 또는 T 중 어느 하나일 수 있고; X19는 아미노산, F 이외의 아미노산, F의 보존적 치환, F, L, 또는 W 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L3
으로부터의 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR) 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27, 또는 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 임의로 여기서:
X1은 Q이고, X2는 N이고, X3은 E이고, X4는 P이고, X5는 K이고, X6은 F이고, X7은 Q이고/거나,
X8은 L이고, X9는 S이고, X10은 T이고/거나,
X11은 Y이고, X12는 M이고, X13은 S이고, X14는 A이고/거나,
X15은 Q이고, X16은 L이고, X17은 E이고, X18은 Y이고, X19는 F인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E38.
DYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 8)을 포함하는 CDR-H1;
WIDPDX1GNTIYX2PKX3QG의 아미노산 서열 (서열식별번호: 171)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X1은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X2는 아미노산, D 이외의 아미노산, D의 보존적 치환, D, 또는 E 중 어느 하나일 수 있고; X3은 아미노산, F 이외의 아미노산, F의 보존적 치환, F, 또는 V 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 10)을 포함하는 CDR-H3;
RSTKSLX4HFNGNTYLF의 아미노산 서열 (서열식별번호: 172)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X4는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YYX5SX6LAS의 아미노산 서열 (서열식별번호: 173)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X5는 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X6은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및/또는
X7QSX8EYPFT의 아미노산 서열 (서열식별번호: 174)을 포함하는 CDR-L3이며, 여기서 X7은 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X8은 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 Y 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L3
으로부터의 중쇄 가변 영역 (예를 들어, H1, H2 또는 H3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR) 및/또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L1, L2 또는 L3)으로부터의 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27, 또는 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 임의로 여기서:
X1은 Q이고, X2는 E이고, X3은 F이고/거나,
X4는 S이고/거나,
X5는 M이고, X6은 S이고/거나,
X7은 Q이고, X8은 L인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E39. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E40. 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E41. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR-L1 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E42. 서열식별번호: 189, 190 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E43. 서열식별번호: 185 또는 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E44. 서열식별번호: 189, 190 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개 및 서열식별번호: 185 또는 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 카바트에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E45.
(i) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 또는
(ii) 서열식별번호: 14에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 15에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 16에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 17에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 18에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L2, 또는
서열식별번호: 19에 비해 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하는 CDR-L3
으로부터 선택된 1개 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서:
CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3 중 임의의 것은
(a) 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33, 또는
(b) 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76
중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E46.
서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 및
서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2
로부터 선택된 1개 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E47. 실시양태 E45 또는 E46에 있어서,
서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및
서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3
을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E48. 실시양태 E45-E47 중 어느 하나에 있어서,
서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E49.
서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E50.
GFNIKDYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 14)을 포함하는 CDR-H1;
WIDPDX1GN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 135)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X1은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 포함하는 CDR-H3;
STKSLX2HFNGNTYL의 아미노산 서열 (서열식별번호: 136)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X2는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YYMSX3의 아미노산 서열 (서열식별번호: 137)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X3은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및
QSLEYPFT의 아미노산 서열 (서열식별번호: 19)을 포함하는 CDR-L3
을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33, 또는 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E51. 실시양태 E50에 있어서, X1이 Q이고, X2가 S이고, X3이 S인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E52.
GFNIX1DYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 175)을 포함하는 CDR-H1이며, 여기서 X1은 아미노산, K 이외의 아미노산, K의 보존적 치환, K, 또는 A 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H1;
WIDPDX2GX3의 아미노산 서열 (서열식별번호: 176)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X2는 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있고; X3은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 포함하는 CDR-H3;
STKSX4X5HFNGNX6YL의 아미노산 서열 (서열식별번호: 177)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X4는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 I 중 어느 하나일 수 있고; X5는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있고; X6은 아미노산, T 이외의 아미노산, T의 보존적 치환, T, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YX7X8SX9의 아미노산 서열 (서열식별번호: 178)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X7은 아미노산, Y 이외의 아미노산, Y의 보존적 치환, Y, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X8은 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X9는 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및
QSX10X11X12PX13T의 아미노산 서열 (서열식별번호: 197)을 포함하는 CDR-L3이며, 여기서 X10은 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 Y 중 어느 하나일 수 있고; X11은 아미노산, E 이외의 아미노산, E의 보존적 치환, E, 또는 S 중 어느 하나일 수 있고; X12는 아미노산, Y 이외의 아미노산, Y의 보존적 치환, Y, 또는 T 중 어느 하나일 수 있고; X13은 아미노산, F 이외의 아미노산, F의 보존적 치환, F, L, 또는 W 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L3
을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33, 또는 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 임의로 여기서:
X1은 Q이고, X2는 N이고, X3은 E이고, X4는 P이고, X5는 K이고, X6은 F이고, X7은 Q이고/거나,
X8은 L이고, X9는 S이고, X10은 T이고/거나,
X11은 Y이고, X12는 M이고, X13은 S이고, X14는 A이고/거나,
X15은 Q이고, X16은 L이고, X17은 E이고, X18은 Y이고, X19는 F인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E53.
GFNIKDYYMN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 14)을 포함하는 CDR-H1;
WIDPDX1GN의 아미노산 서열 (서열식별번호: 135)을 포함하는 CDR-H2이며, 여기서 X1은 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 Q 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-H2;
RLLMDY의 아미노산 서열 (서열식별번호: 16)을 포함하는 CDR-H3;
STKSLX2HFNGNTYL의 아미노산 서열 (서열식별번호: 136)을 포함하는 CDR-L1이며, 여기서 X2는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L1;
YYX3SX4의 아미노산 서열 (서열식별번호: 179)을 포함하는 CDR-L2이며, 여기서 X3은 아미노산, M 이외의 아미노산, M의 보존적 치환, M, 또는 A 중 어느 하나일 수 있고; X4는 아미노산, N 이외의 아미노산, N의 보존적 치환, N, 또는 S 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L2; 및
QSX5EYPFT의 아미노산 서열 (서열식별번호: 180)을 포함하는 CDR-L3이며, 여기서 X5는 아미노산, L 이외의 아미노산, L의 보존적 치환, L, 또는 Y 중 어느 하나일 수 있는 것인 CDR-L3
을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며;
예를 들어, 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33, 또는 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76의 아미노산 서열을 포함하지 않고, 임의로 여기서:
X1은 Q이고/거나,
X2는 S이고/거나,
X3은 M이고, X4는 S이고/거나,
X5는 L인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E54. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E55. 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E56. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR-L1 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E57. 서열식별번호: 189, 190 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E58. 서열식별번호: 185 또는 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E59. 서열식별번호: 189, 190 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개 및 서열식별번호: 185, 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드로부터의 CDR 서열 중 1, 2, 또는 3개를 포함하며, 여기서 CDR 서열은 코티아에 따라 정의된 바와 같은 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E60. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E61. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역의 VL 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E62. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E63. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E64. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E65. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역의 VL 프레임워크 영역에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E66. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 아미노산 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E67. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 아미노산 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 치환을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3 또는 4개)을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E68. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, E233, E318, K320, 및 R322로부터 선택된 1개 이상의 위치에서 치환 (예를 들어, E233P, E318A, K320A, 및 R322A)을 포함하는 뮤린 IgG1 Fc 영역을 포함하며, 예를 들어 여기서 뮤린 IgG1 Fc 영역은 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 E233P, E318A, K320A, 및 R322A 치환 중 1개 이상을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,624,821 참조).
E69. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, L234, L235, 및 G237로부터 선택된 1개 이상의 위치에서 치환 (예를 들어, L234A, L235A, 및 G237A)을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하며, 예를 들어 여기서 인간 IgG1 Fc 영역은 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 L234A, L235A, 및 G237A 치환 중 1개 이상을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E70. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 VH 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 VH 영역을 추가로 포함하며, 여기서 VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 T28, F29, A49, R72, N74, A75, 및/또는 L79에서의 1개 이상의 치환 (예를 들어, T28N, F29I, A49G, R72A, N74T, A75S 및 L79A로부터 선택된 1개 이상의 치환)을 포함하고, 임의로 여기서 VH 영역은 치환:
(i) T28N 및 F29I;
(ii) T28N, F29I, 및 R72A;
(iii) T28N, F29I, R72A, A49G, 및 L79A;
(iv) T28N, F29I, R72A, N74T, 및 A75S; 또는
(v) T28N, F29I, R72A, A49G, L79A, N74T, 및 A75S
를 포함하고, 여기서 (i)-(v)는 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같고, 임의로 여기서:
VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 치환 T28N, F29I, R72A, A49G, L79A, N74T, 및 A75S를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E71. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기:
서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(a) 위치 28에서의 Asn,
(b) 위치 29에서의 Ile,
(c) 위치 49에서의 Gly,
(d) 위치 72에서의 Ala,
(e) 위치 74에서의 Thr,
(f) 위치 75에서의 Ser, 및
(g) 위치 79에서의 Ala
중 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6개, 또는 모두)을 포함하는 VH 영역을 추가로 포함하며, 임의로 여기서 VH 영역은:
서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(i) 위치 28에서의 Asn 및 위치 29에서의 Ile;
(ii) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 및 위치 72에서의 Ala;
(iii) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 및 위치 79에서의 Ala;
(iv) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 74에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser; 또는
(v) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 721에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 위치 79에서의 Ala, 위치 74에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser
을 포함하고, 임의로 여기서:
VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된, 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 위치 79에서의 Ala, 위치 743에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser을 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E72. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 VL 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 VL 영역을 추가로 포함하며, 여기서 VH 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 Y36 및/또는 L46에서의 1개 이상의 치환 (예를 들어, Y36F 및/또는 L46R)을 포함하고, 임의로 여기서 VL 영역은 치환:
(i) L46R; 또는
(ii) L46R 및 Y36F
를 포함하고, 여기서 (i)-(v)는 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같고, 임의로 여기서 VL 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 치환 L46R을 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E73. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기:
서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(a) 위치 36에서의 Tyr, 및
(b) 위치 46에서의 Leu
중 하나 또는 둘 다를 포함하는 VL 영역을 추가로 포함하며, 임의로 여기서 VL 영역은:
서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(i) 위치 46에서의 Leu; 또는
(ii) 위치 46에서의 Leu 및 위치 36에서의 Tyr
을 포함하고, 임의로 여기서:
VL 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 위치 46에서의 Leu를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E74. 상기 실시양태 중 어느 하나의 1개 이상의 CDR을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 1개 이상의 CDR은 적어도 1개의 아미노산 변경을 포함하지만 2, 3 또는 4개 이하의 변경 (예를 들어, 치환, 결실, 또는 삽입, 예를 들어 보존적 치환)을 포함하고; 여기서 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3은 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 25, 26, 및 27, 각각 서열식별번호: 22, 23, 24, 71, 72, 및 73, 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 31, 32, 및 33, 또는 각각 서열식별번호: 28, 29, 30, 74, 75, 및 76의 아미노산 서열을 포함하지 않는 것인, 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E75. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 표 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E76. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 표 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E77. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E78. 실시양태 E77에 있어서, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E79. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E80. 실시양태 E79에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 (예를 들어, 100%)을 갖는 VL 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E81. 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E82. 실시양태 E81에 있어서, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 (예를 들어, 100%)을 갖는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E83. 실시양태 E81 또는 E82에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 (예를 들어, 100%)을 갖는 VL 영역을 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E84. 실시양태 E81에 있어서, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E85. 실시양태 E84에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E86. 서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E87. 실시양태 E86에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 (예를 들어, 100%)을 갖는 VL 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E88. 실시양태 E86 또는 E87에 있어서, 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 (예를 들어, 100%)을 갖는 VH 영역을 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E89. 실시양태 E86에 있어서, 서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E90. 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 상기 서열식별번호: 39의 1개 이상의 아미노산 잔기는 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 K30A, N55Q, N57Q, D61E, P62A, K63A, 및 F64V로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E91. 하기:
서열식별번호: 39에 따라 넘버링된
(a) 위치 30에서의 Ala
(b) 위치 55에서의 Gln,
(c) 위치 57에서의 Gln,
(d) 위치 61에서의 Glu,
(e) 위치 62에서의 Ala,
(f) 위치 63에서의 Ala, 및
(g) 위치 64에서의 Val
중 적어도 1개를 포함하는 VH 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E92. 실시양태 E90에 있어서, 상기 서열식별번호: 39가
서열식별번호: 39에 따라 넘버링된
(i) N55Q 및 D61E; 또는
(ii) N55Q, D61E, 및 F64V
를 포함하며, 임의로 여기서 상기 서열식별번호: 39는 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 N55Q 및 D61E 치환을 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E93. 실시양태 E91에 있어서, VH 영역이
서열식별번호: 39에 따라 넘버링된
(i) 위치 55에서의 Gln 및 위치 61에서의 Glu; 또는
(ii) 위치 55에서의 Gln, 위치 61에서의 Glu, 및 위치 64에서의 Val
을 포함하며, 임의로 여기서 VH 영역은 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 위치 55에서의 Gln 및 위치 61에서의 Glu를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E94. 실시양태 E90 또는 E92에 있어서, 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 추가로 포함하며, 여기서 상기 서열식별번호: 47의 1개 이상의 아미노산 잔기는 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, Y55A, M56A, N58S, A60Q, M94Q, L97Y, F101L, F101W, 및 Q105G, 또는 그의 임의의 조합으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 임의로 여기서 상기 서열식별번호: 47의 1개 이상의 아미노산 잔기는 L30S, M56A, N58S, M94Q, L97Y, 및 Q105G로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E95. 실시양태 E91 또는 E93에 있어서, 하기:
서열식별번호: 47에 따라 넘버링된
(a) 위치 30에서의 Ser,
(b) 위치 55에서의 Ala,
(c) 위치 56에서의 Ala,
(d) 위치 58에서의 Ser,
(e) 위치 60에서의 Gln,
(f) 위치 94에서의 Gln,
(g) 위치 97에서의 Tyr,
(h) 위치 101에서의 Leu,
(i) 위치 101에서의 Trp, 및
(j) 위치 105에서의 Gly
중 적어도 1개를 포함하는 VL 영역을 추가로 포함하며, 임의로 여기서 VL 영역은 하기:
(a) 위치 30에서의 Ser,
(b) 위치 56에서의 Ala,
(c) 위치 58에서의 Ser,
(d) 위치 94에서의 Gln,
(e) 위치 97에서의 Tyr, 및
(f) 위치 105에서의 Gly
중 적어도 1개를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E96. 실시양태 E94에 있어서, 상기 서열식별번호: 47이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, M56A, N58S, M94Q, L97Y, 및/또는 Q105G 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E97. 실시양태 E95에 있어서, VL 영역이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된, 위치 30에서의 Ser, 위치 56에서의 Ala, 위치 58에서의 Ser, 위치 94에서의 Gln, 위치 97에서의 Tyr, 및/또는 위치 105에서의 Gly를 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E98. 실시양태 E94에 있어서, 상기 서열식별번호: 47이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, N58S, M94Q, 및/또는 Q105G 치환을 포함하고, 임의로 여기서 상기 서열식별번호: 47은 L30S, N58S, M94Q, 및 Q105G 치환을 모두 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E99. 실시양태 E95에 있어서, VL 영역이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 위치 30에서의 Ser, 위치 58에서의 Ser, 위치 94에서의 Gln, 및/또는 위치 105에서의 Gly를 포함하며, 임의로 여기서 VL 영역은 위치 30에서의 Ser, 위치 58에서의 Ser, 위치 94에서의 Gln, 및 위치 105에서의 Gly를 모두 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E100. 실시양태 E94에 있어서, 상기 서열식별번호: 39가 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 N55Q 및 D61E 치환을 포함하고, 상기 서열식별번호: 47이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, N58S, M94Q, 및 Q105G 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E101. 실시양태 E95에 있어서, VH 영역이 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 위치 55에서의 Gln 및 위치 61에서의 Glu를 포함하고, VL 영역이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 위치 30에서의 Ser, 위치 58에서의 Ser, 위치 94에서의 Gln, 및 위치 105에서의 Gly를 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E102. 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 상기 서열식별번호: 47의 1개 이상의 아미노산 잔기는 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, Y55A, M56A, N58S, A60Q, M94Q, L97Y, F101L, F101W, 및 Q105G, 또는 그의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 1개의 아미노산 치환 (예를 들어, L30S, M56A, N58S, M94Q, L97Y, 및 Q105G 모두)을 포함하고, 임의로 여기서 상기 서열식별번호: 47의 1개 이상의 아미노산 잔기는 L30S, M56A, N58S, M94Q, L97Y, 및 Q105G로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
103. 실시양태 E102에 있어서, 상기 서열식별번호: 47이 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, N58S, M94Q, 및/또는 Q105G 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E104. 실시양태 E102에 있어서, 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 추가로 포함하고, 여기서 서열식별번호: 39의 서열은 서열식별번호: 39에 따라 넘버링된 K30A, N55Q, N57Q, D61E, P62A, K63A, 및 F64V, 또는 그의 임의의 조합으로부터 선택된 1개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E105. 실시양태 E104에 있어서, 상기 서열식별번호: 39가 N55Q 및 D61E 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E106. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 2 또는 3에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E107. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 5에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E108. 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E109. 서열식별번호: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E110.
(a) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및
(b) C-말단 리신 잔기를 갖거나 갖지 않는, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄
를 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E111. ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는 둘 다를 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E112. 서열식별번호: 2 또는 3에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% (예를 들어, 100%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 임의로 여기서 중쇄는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E113. 서열식별번호: 5에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% (예를 들어, 100%) 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 임의로 여기서 경쇄는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 것인 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 추가로 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E114. 서열식별번호: 2를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E115. 서열식별번호: 3을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 5를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E116.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하며;
서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 전체 VH 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3 및 FR4 포함)의 아미노산 서열의 적어도 1개의 변경, 그러나 20개 미만의 변경, 예를 들어 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3개 또는 4개 모두)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E117.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하며;
서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역의 VL 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 전체 VL 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3, 및 FR4 포함)의 아미노산 서열의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15개의 변경, 그러나 20개 미만의 변경, 예를 들어 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E118.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하며;
IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 아미노산 서열 내의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 전체 VH 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3, 및 FR4 포함)의 아미노산 서열의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15개의 변경, 그러나 20개 미만의 변경, 예를 들어 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4)을 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E119.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하며;
IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 VH 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 VH 영역을 포함하는 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 T28, F29, A49, R71, N73, A74, 및/또는 L78에서의 1개 이상의 치환 (예를 들어, T28N, F29I, A49G, R72A, N74T, A75S 및 L79A로부터 선택된 1개 이상의 치환)을 포함하고, 임의로 여기서 VH 영역은 치환:
(i) T28N 및 F29I;
(ii) T28N, F29I, 및 R72A;
(iii) T28N, F29I, R72A, A49G, 및 L79A;
(iv) T28N, F29I, R72A, N74T, 및 A75S; 또는
(v) T28N, F29I, R72A, A49G, L79A, N74T, 및 A75S
를 포함하고, 여기서 (i)-(v)는 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같고, 임의로 여기서:
VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 치환 T28N, F29I, R72A, A49G, L79A, N74T, 및 A75S를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E120.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
하기:
서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(a) 위치 28에서의 Asn,
(b) 위치 29에서의 Ile,
(c) 위치 49에서의 Gly,
(d) 위치 72에서의 Ala,
(e) 위치 74에서의 Thr,
(f) 위치 75에서의 Ser, 및
(g) 위치 79에서의 Ala
중 1개 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6개, 또는 모두)을 포함하는 VH 영역을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서 VH 영역은:
서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(i) 위치 28에서의 Asn 및 위치 29에서의 Ile;
(ii) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 및 위치 72에서의 Ala;
(iii) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 및 위치 79에서의 Ala;
(iv) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 74에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser; 또는
(v) 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 위치 79에서의 Ala, 위치 74에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser
을 포함하고, 임의로 여기서:
VH 영역은 서열식별번호: 127의 아미노산 서열에 따라 넘버링된, 위치 28에서의 Asn, 위치 29에서의 Ile, 위치 72에서의 Ala, 위치 49에서의 Gly, 위치 79에서의 Ala, 위치 74에서의 Thr, 및 위치 75에서의 Ser을 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E121.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 전체 VL 프레임워크 영역 (FR1, FR2, FR3, 및 FR4 포함)의 아미노산 서열의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15개의 변경, 그러나 20개 미만의 변경, 예를 들어 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4)을 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E122.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 VL 아미노산 서열의 변이체를 포함하는 VL 영역을 포함하는 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 VL 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 Y36 및/또는 L46에서의 1개 이상의 치환 (예를 들어, Y36F 및/또는 L46R)을 포함하고, 임의로 여기서 VL 영역은 치환:
(i) L46R; 또는
(ii) L46R 및 Y36F
를 포함하고, 여기서 (i) 및 (ii)는 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링되고, 임의로 여기서 VL 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 치환 L46R을 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E123.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
하기:
서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(a) 위치 36에서의 Tyr, 및
(b) 위치 46에서의 Leu
중 하나 또는 둘 다를 포함하는 VL 영역을 포함하는 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 임의로 여기서 VL 영역은:
서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된
(i) 위치 46에서의 Leu; 또는
(ii) 위치 46에서의 Leu 및 위치 36에서의 Tyr
을 포함하고, 임의로 여기서:
VL 영역은 서열식별번호: 128의 아미노산 서열에 따라 넘버링된 위치 46에서의 Leu를 포함하는 것인
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E124.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
예를 들어 표 1에 제시된 뮤린 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 E233, E318, K320, 및 R322 (예를 들어, E233P, E318A, K320A, 및 R322A)로부터 선택된 1개 이상의 치환을 포함하는 뮤린 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E125. 실시양태 E124에 있어서, 뮤린 IgG1 Fc 영역이, 예를 들어 표 1에 제시된 뮤린 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 E233P, E318A, K320A, 및 R322A 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E126.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
예를 들어 표 1에 제시된 인간 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 L234, L235, 및 G237 (예를 들어, L234A, L235A, 및 G237A)로부터 선택된 1개 이상의 치환을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E127. 실시양태 E126에 있어서, 인간 IgG1 Fc 영역이, 예를 들어 표 1에 제시된 인간 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 L234A, L235A, 및 G237A 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E128.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E129.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역의 VL 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E130.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 아미노산 서열 내의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E131.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E132.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
예를 들어 표 1에 제시된 뮤린 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 E233, E318, K320, 및 R322 (예를 들어, E233P, E318A, K320A, 및 R322A)로부터 선택된 1개 이상의 치환을 포함하는 뮤린 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E133. 실시양태 E132에 있어서, 뮤린 IgG1 Fc 영역이, 예를 들어 표 1에 제시된 뮤린 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 E233P, E318A, K320A, 및 R322A 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E134.
서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
예를 들어 표 1에 제시된 인간 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 L234A, L235A, 및 G237A 치환을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E135.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E136.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 74의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역의 VH 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E137.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
서열식별번호: 7, 47-69, 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역의 VL 프레임워크 영역에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E138.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E139.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 배선 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 또는 FR4 중 1, 2, 3, 또는 4개)을 추가로 포함하는
인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E140.
서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3
을 포함하고;
예를 들어 표 1에 제시된 인간 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 위치 L234, L235, 및 G237 (예를 들어, L234A, L235A, 및 G237A)로부터 선택된 1개 이상의 치환을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함하는
단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E141. 실시양태 E140에 있어서, 인간 IgG1 Fc 영역이, 예를 들어 표 1에 제시된 인간 IgG1 Fc에 비해 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 바와 같이 L234A, L235A, 및 G237A 치환을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E142. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E143. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 다가 항체 (예를 들어, 2가 항체)인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E144. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 인간화 항체, 인간 항체, 뮤린 항체, 키메라 항체, 또는 낙타류 항체인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E145.
(i) 각각 서열식별번호: 6 및 7, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(ii) 각각 서열식별번호: 34 및 65, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(iii) 각각 서열식별번호: 34 및 62, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(iv) 각각 서열식별번호: 34 및 66, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(v) 각각 서열식별번호: 34 및 63, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(vi) 각각 서열식별번호: 34 및 64, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(vii) 각각 서열식별번호: 37 및 65, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(viii) 각각 서열식별번호: 37 및 62, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(ix) 각각 서열식별번호: 37 및 66, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(x) 각각 서열식별번호: 37 및 63, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xi) 각각 서열식별번호: 37 및 64, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xii) 각각 서열식별번호: 36 및 65, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xiii) 각각 서열식별번호: 36 및 62, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xiv) 각각 서열식별번호: 36 및 66, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xv) 각각 서열식별번호: 36 및 63, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xvi) 각각 서열식별번호: 36 및 64, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xvii) 각각 서열식별번호: 35 및 65, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xviii) 각각 서열식별번호: 35 및 62, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xix) 각각 서열식별번호: 35 및 66, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xx) 각각 서열식별번호: 35 및 63, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxi) 각각 서열식별번호: 35 및 64, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxii) 각각 서열식별번호: 38 및 65, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxiii) 각각 서열식별번호: 38 및 62, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxiv) 각각 서열식별번호: 38 및 66, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxv) 각각 서열식별번호: 38 및 63, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxvi) 각각 서열식별번호: 38 및 64, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxvii) 각각 서열식별번호: 20 및 21, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxviii) 각각 서열식별번호: 88 및 47, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxix) 각각 서열식별번호: 89 및 47, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxx) 각각 서열식별번호: 90 및 47, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxi) 각각 서열식별번호: 90 및 92, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxii) 각각 서열식별번호: 39 및 47, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxiii) 각각 서열식별번호: 6 및 67, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxiv) 각각 서열식별번호: 6 및 68, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxv) 각각 서열식별번호: 6 및 69, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxvi) 각각 서열식별번호: 93 및 67, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxvii) 각각 서열식별번호: 93 및 68, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
(xxxviii) 각각 서열식별번호: 93 및 69, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는
(xxxix) 각각 서열식별번호: 93 및 7, 또는 그에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열
의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하고, 임의로 여기서:
VH 영역 및 VL 영역은
(i) 각각 서열식별번호: 6 및 7;
(ii) 각각 서열식별번호: 34 및 65;
(iii) 각각 서열식별번호: 34 및 62;
(iv) 각각 서열식별번호: 34 및 66;
(v) 각각 서열식별번호: 34 및 63;
(vi) 각각 서열식별번호: 34 및 64;
(vii) 각각 서열식별번호: 37 및 65;
(viii) 각각 서열식별번호: 37 및 62;
(ix) 각각 서열식별번호: 37 및 66;
(x) 각각 서열식별번호: 37 및 63;
(xi) 각각 서열식별번호: 37 및 64;
(xii) 각각 서열식별번호: 36 및 65;
(xiii) 각각 서열식별번호: 36 및 62;
(xiv) 각각 서열식별번호: 36 및 66;
(xv) 각각 서열식별번호: 36 및 63;
(xvi) 각각 서열식별번호: 36 및 64;
(xvii) 각각 서열식별번호: 35 및 65;
(xviii) 각각 서열식별번호: 35 및 62;
(xix) 각각 서열식별번호: 35 및 66;
(xx) 각각 서열식별번호: 35 및 63;
(xxi) 각각 서열식별번호: 35 및 64;
(xxii) 각각 서열식별번호: 38 및 65;
(xxiii) 각각 서열식별번호: 38 및 62;
(xxiv) 각각 서열식별번호: 38 및 66;
(xxv) 각각 서열식별번호: 38 및 63;
(xxvi) 각각 서열식별번호: 38 및 64;
(xxvii) 각각 서열식별번호: 20 및 21;
(xxviii) 각각 서열식별번호: 88 및 47;
(xxix) 각각 서열식별번호: 89 및 47;
(xxx) 각각 서열식별번호: 90 및 47;
(xxxi) 각각 서열식별번호: 90 및 92;
(xxxii) 각각 서열식별번호: 39 및 47;
(xxxiii) 각각 서열식별번호: 6 및 67;
(xxxiv) 각각 서열식별번호: 6 및 68;
(xxxv) 각각 서열식별번호: 6 및 69;
(xxxvi) 각각 서열식별번호: 93 및 67;
(xxxvii) 각각 서열식별번호: 93 및 68;
(xxxviii) 각각 서열식별번호: 93 및 69; 또는
(xxxix) 각각 서열식별번호: 93 및 7
의 아미노산 서열을 포함하는 것인
αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E146. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역 (Fc)을 포함하거나 또는 이를 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E147. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택된 이소형에 속하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E148. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, IgG1 또는 IgG2 (예를 들어, 인간 IgG1 또는 인간 IgG2)의 중쇄 불변 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E149. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 인간 IgG1인 중쇄 불변 영역을 포함하거나 또는 이를 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E150. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 카파 또는 람다의 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 포함하거나 또는 이를 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E151. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 카파 (예를 들어, 인간 카파) 경쇄 불변 영역을 포함하거나 또는 이를 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E152. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 이펙터 세포 기능을 감소시키기 위해 변경된 힌지 영역을 갖는 중쇄의 Fc 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E153. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 감소된 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 및/또는 감소된 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E154. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 인간 IgG1과 비교하여 Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 L234, L235 또는 G237의 적어도 1개의 위치에서 치환을 갖는 힌지 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E155. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, Eu 넘버링 스킴에 따라 넘버링된 L234A, L235A, 및 G237A로부터 선택된 적어도 1개의 치환을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E156. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAP의 아미노산 서열 (서열식별번호: 126)을 포함하는 힌지 영역을 갖는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E157. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 T-세포 에피토프를 제거하기 위해 변경된 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E158. 실시양태 E157에 있어서, 서열식별번호: 47에 따라 넘버링된 L30S, N58S, M56A, M94Q, L97Y 및 Q105G로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 치환을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E159. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(i) 뮤린 항체 ADWA11 미만, 예를 들어 536 pM 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
(ii) 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iii) 100 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iv) 100 pM 미만인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(v) 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(vi) 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도;
(vii) 183 pM 미만인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(viii) 약 100 pM 내지 약 300 pM인 U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(ix) 약 100 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC50;
(x) 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xi) 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
a. 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
b. 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
c. 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
d. 약 21 - 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
e. 약 12-17일의 말기 반감기 (t1/2); 및
(xii) 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합.
E160. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(i) αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하지만, 다른 인테그린에 대해서는 그렇지 않음;
(ii) αvβ8 인테그린 및 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 사이의 상호작용을 감소시킴;
(iii) TGF-β 신호전달을 감소시킴;
(iv) αvβ8 인테그린-매개된 TGFβ 활성화를 IC50 ≤10 nM로 효과적으로 차단함;
(v) 비-인간 영장류 (NHP) 오르토로그에 대해 대등한 Kd (5-배 이내)를 가짐;
(vi) 인간 αvβ8에 선택적으로 결합하고, αvβ8의 상동체 (예를 들어, αvβ1, αvβ3, αvβ5 및 αvβ6)에는 검출가능하게 결합하지 않음;
(vii) 단독으로 또는 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 조정제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제, 또는 자극 분자, 예를 들어 4-1BB의 효능제와 조합되어 암, 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암의 인간 대상체 또는 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(viii) 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(ix) 단독으로 또는 면역조정제 (예를 들어, PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제)와 조합되어, 예를 들어 ≤ 10mg/kg으로 투여된 경우에, 동계 종양 이식편 모델에서 종양 성장의 적어도 60% 감소를 나타냄;
(x) 대상체, 예를 들어 마우스 또는 인간 대상체에게 투여된 경우에, 1종 이상의 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 길항제 또는 체크포인트 활성화제의 효능제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 길항제, 또는 면역 반응의 활성화제, 예를 들어 4-1BB 효능제의 존재 하에 항종양 반응을 증가시킴;
(xi) 종양 모델에서 αvβ8 인테그린의 발현에 의존하지 않는 효능을 가짐;
(xii) 예를 들어 단독요법으로서, 종양 미세환경에서 CD8+ GzmB+ T 세포의 존재비를 증가시킬 수 있음;
(xiii) 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암의 동계 모델에서 체크포인트 억제제의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체)와 조합되어 사용된 경우에 종양 성장의 감소, 예를 들어 적어도 > 80% 감소를 나타냄;
(xiv) 카플란-마이어 분석에 의해 결정된 바와 같이, 대상체의 전체 생존에서 통계적으로 유의한 개선을 나타냄;
(xv) 고도의 열 안정성을 나타냄;
(xvi) 고농도에서 최소 응집을 나타냄; 및
(xvii) 대규모 제조 조건에서 재현가능한 발현 및 순도를 나타낼 수 있음.
E161. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
(i) 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 536 pM 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
(ii) 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iii) 100 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iv) 100 pM 미만인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(v) 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(vi) 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도;
(vii) 183 pM 미만인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(viii) 약 100 pM 내지 약 300 pM의 U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(ix) 약 126 pM 플러스 또는 마이너스 34 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
(x) 약 256 pM 플러스 또는 마이너스 115 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
(xi) 약 80 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC50;
(xii) 약 115 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xiii) 약 145 pM 플러스 또는 마이너스 23.7 pM의 표준 편차의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xiv) 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xv) 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
a. 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
b. 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
c. 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
d. 약 21 - 33 1mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
e. 약 12-17일의 말기 반감기 (t1/2); 및
(xvi) 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합.
E162. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하의 KD로 인간 αvβ8 인테그린에 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E163. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 536 pM 미만의 KD로 인간 αvβ8 인테그린에 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E164. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 183 pM 미만의 IC50으로 TGFβ 활성화를 억제하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E165. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 100 pM 내지 약 300 pM의 IC50으로 TGFβ 활성화를 억제하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E166. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 199 +/- 93.6 pM의 IC50으로 U251 세포에서 TGFβ 활성화를 억제하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E167. 상기 실시양태 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
E168. 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산 분자.
E169.
(i) 서열식별번호: 1, 183, 189 또는 191에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
(ii) 서열식별번호: 190에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
(iii) 서열식별번호: 192 또는 193에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98% 또는 100% 서열 동일성을 갖고 중쇄 불변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
(iv) ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열
을 포함하는 핵산 분자.
E170.
(i) 서열식별번호: 4 또는 185에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
(ii) 서열식별번호: 186에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열;
(iii) 서열식별번호: 194에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖고 경쇄 불변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
(iv) ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 87% 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열
을 포함하는 핵산 분자.
E171. 서열식별번호: 1 또는 183에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 4에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
E172. 서열식별번호: 189 또는 191에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 185에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
E173. 실시양태 E168-E172 중 어느 하나의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
E174. 실시양태 E168-E172 중 어느 하나의 핵산 분자 또는 실시양태 E173의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
E175. 실시양태 E174에 있어서, 포유동물 세포, 예를 들어 인간 세포인 숙주 세포.
E176. 실시양태 E175에 있어서, CHO 세포, COS 세포, HEK-293 세포, NS0 세포, PER.C6® 세포, 또는 Sp2.0 세포인 숙주 세포.
E177. 실시양태 E174-E176 중 어느 하나의 숙주 세포를, 항체 또는 항원-결합 단편이 상기 숙주 세포에 의해 발현되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, 인간 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법.
E178. 실시양태 E177에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 단리하는 것을 추가로 포함하는 방법.
E179. TGFβ 신호전달의 감소를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167 중 어느 하나의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 TGFβ 신호전달을 감소시키는 방법.
E180. αvβ8 인테그린 활성의 감소를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 αvβ8 인테그린 활성을 감소시키는 방법.
E181. 이상 (예를 들어, 증가된) TGFβ 신호전달과 연관되거나 그에 의해 매개되는 질환, 장애, 또는 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이상 (예를 들어, 증가된) TGFβ 신호전달과 연관되거나 그에 의해 매개되는 질환, 장애, 또는 상태를 치료하는 방법.
E182. 항종양 반응의 유도를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167 중 어느 하나의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 항종양 반응을 유도하는 방법이며, 임의로 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제2 요법과 조합되어 투여되고, 임의로 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 제2 요법은 동시에, 순차적으로, 또는 개별적으로 투여되고, 임의로 여기서:
(i) 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제2 요법의 투여 전에 투여되거나, 또는
(ii) 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 제2 요법의 투여 후에 투여되는 것인
방법.
E183. 실시양태 E1-E167 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 αvβ8 인테그린의 활성을 감소시키는데 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
E184. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
E185. 실시양태 E184에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는 것인 방법:
(i) αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간, 마우스, 시노몰구스 원숭이, 및/또는 래트로부터의 αvβ8 인테그린)에 특이적으로 결합함;
(ii) αvβ8 인테그린 및 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 사이의 상호작용을 감소시킴;
(iii) TGF-β 신호전달을 감소시킴;
(iv) αvβ8 인테그린-매개된 TGFβ 활성화를 IC50 ≤10 nM로 차단함;
(v) 비-인간 영장류 (NHP) 오르토로그에 대해 대등한 Kd (5-배 이내)를 가짐;
(vi) 인간 αvβ8에 선택적으로 결합하고, αvβ8의 상동체 (예를 들어, αvβ1, αvβ3, αvβ5 및 αvβ6)에는 검출가능하게 결합하지 않음;
(vii) 단독으로 또는 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 조정제, 예를 들어 PD-1, CTLA-4의 억제제, 또는 자극 분자, 예를 들어 4-1BB의 효능제와 조합되어, 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및 결장암으로부터 선택된 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(viii) 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(ix) 예를 들어 ≤ 10mg/kg으로 투여된 경우에, 동계 종양 이식편 모델에서 종양 성장의 적어도 60% 감소를 나타냄;
(x) 대상체, 예를 들어 마우스 또는 인간 대상체에게 투여된 경우에, 1종 이상의 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 길항제, 예를 들어 PD-1 또는 CTLA-4의 길항제, 또는 면역 반응의 활성화제, 예를 들어 4-1BB 효능제의 존재 하에 항종양 반응을 증가시킴;
(xi) 종양 모델에서 αvβ8 인테그린의 발현에 의존하지 않는 효능을 가짐;
(xii) 예를 들어 단독요법으로서, 종양 미세환경에서 CD8+ GzmB+ T 세포의 존재비를 증가시키는데 충분함;
(xiii) 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암의 동계 모델에서 체크포인트 억제제의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체)와 조합되어 사용된 경우에 종양 성장의 적어도 80% 감소를 나타냄;
(xiv) 카플란-마이어 분석에 의해 결정된 바와 같이, 대상체, 예를 들어 인간 또는 마우스의 전체 생존에서 통계적으로 유의한 개선을 나타냄;
(xv) 고도의 열 안정성을 나타냄;
(xvi) 고농도에서 최소 응집을 나타냄; 및
(xvii) 대규모 제조 조건에서 재현가능한 발현 및 순도를 나타낼 수 있음.
E186. 실시양태 E184 또는 E185에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는 것인 방법:
(i) 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 536 pM 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
(ii) 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iii) 100 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(iv) 100 pM 미만인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(v) 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
(vi) 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도를 나타냄;
(vii) 183 pM 미만인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(viii) 약 199 +/- 93.6 pM의, U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(ix) 약 100 pM 내지 약 300 pM인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
(x) 약 126 pM 플러스 또는 마이너스 34 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
(xi) 약 256 pM 플러스 또는 마이너스 115 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
(xii) 약 80 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC50;
(xiii) 약 115 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xiv) 약 145 pM 플러스 또는 마이너스 23.7 pM의 표준 편차의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xv) 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
(xvi) 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
a. 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
b. 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
c. 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
d. 약 21 - 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
e. 약 12-17일의 말기 반감기 (t1/2); 및
(xvii) 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대해 어떠한 검출가능한 결합도 나타내지 않음.
E187. 실시양태 E184-E186 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 실시양태 E1-E166 중 어느 하나에 따른 것 또는 실시양태 E167의 제약 조성물인 방법.
E188. 실시양태 E184-E187 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 CD45+ 세포, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및/또는 그랜자임 B 발현 세포 침윤을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E189. 실시양태 E184-E188 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 CD8+ T 세포 침윤을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E190. 실시양태 E184-E189 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 CD8+ T 세포 상에서의 그랜자임 B의 발현을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E191. 실시양태 E184-E190 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 상승된 수준의 Ly6G 발현을 갖는 염증성 대식세포의 축적을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E192. 실시양태 E184-E191 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 CD45+CD11b+CD11c-Ly6G-Ly6C고CD206저 염증성 대식세포의 축적을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E193. 실시양태 E184-E192 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 제2 요법에 대한 반응을 증가시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
E194. 실시양태 E184-E193 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 효능이, 동물 종양 모델에 투여된 경우, 종양 모델에 의한 αvβ8 인테그린의 발현에 의존하지 않는 것인 방법.
E195. 실시양태 E184-E194 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 투여가 제2 요법과 조합되어 이루어지는 것인 방법.
E196. 실시양태 E195에 있어서, 제2 요법이 항암 요법, 세포독성제 또는 세포증식억제제, 예를 들어 화학요법제, 호르몬 치료, 백신, 및/또는 면역요법을 포함하는 것인 방법.
E197. 실시양태 E195 또는 E196에 있어서, 제2 요법이 수술, 방사선, 동결수술, 및/또는 열요법이거나 또는 이를 포함하는 것인 방법.
E198. 실시양태 E195-E197 중 어느 하나에 있어서, 제2 요법이 면역 체크포인트 분자의 조정제, 예를 들어 억제제 또는 효능제를 포함하고, 임의로 여기서 제2 요법이 PD1, PD-L1, 4-1BB, OX40, CTLA-4, PD-L2, TIM-3, LAG-3, VISTA, CD160, BTLA, TIGIT, 2B4, TGFβ, LAIR1 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 체크포인트 분자의 조정제이거나 또는 이를 포함하는 것인 방법.
E199. 실시양태 E198에 있어서, 면역 체크포인트 분자의 억제제가 PD1, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, TIM-3, LAG-3, VISTA, BTLA, TIGIT, 2B4, TGFβ, 또는 LAIR1의 억제제인 방법.
E200. 실시양태 E199에 있어서, 면역 체크포인트 분자의 억제제가 PD1의 억제제, 예를 들어 PD1에 대한 항체인 방법.
E201. 실시양태 E199에 있어서, 면역 체크포인트 분자의 억제제가 억제제 CTLA-4, 예를 들어 CTLA-4에 대한 항체 또는 가용성 CTLA-4 융합체인 방법.
E202. 실시양태 E195-E201 중 어느 하나에 있어서, 제2 요법이 공동자극 분자의 효능제를 포함하는 것인 방법.
E203. 실시양태 E202에 있어서, 공동자극 분자의 효능제가 4-1BB (CD137), OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, 또는 B7-H3 중 적어도 1개로부터 선택된 것인 방법.
E204. 실시양태 E202에 있어서, 공동자극 분자의 효능제가 41-BB 효능제인 방법.
E205. 실시양태 E195-E204에 있어서, 제2 요법이 PARP1의 억제제 (예를 들어, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 벨리파립, 이니파립, 탈라조파립, 3-아미노벤즈아미드, CEP9722, E7016, BSI-201, KU-0059436, AG014699, MK-4827, 또는 BGB-290)를 포함하는 것인 방법.
E206. 실시양태 E184-E205 중 어느 하나에 있어서, 암이 고형 종양, 혈액암 (예를 들어, 백혈병, 림프종, 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종), 및 전이성 병변으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
E207. 실시양태 E206에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.
E208. 실시양태 E206 또는 E207에 있어서, 암이 고형 종양이고, 악성종양, 예를 들어, 육종 및 암종, 예를 들어, 다양한 기관계의 선암종, 예컨대 폐 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC)), 유방, 난소, 림프, 위장 (예를 들어, 결장), 항문, 생식기 및 비뇨생식관 (예를 들어, 신장, 요로상피, 방광 세포, 전립선), 인두, CNS (예를 들어, 뇌, 신경 또는 신경교 세포), 두경부 (예를 들어, 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC), 피부 (예를 들어, 흑색종, 예를 들어, 진행성 흑색종), 췌장, 결장, 직장, 신장 (예를 들어, 신세포 암종), 간에 영향을 미치는 것, 소장암 및 식도암, 위-식도암, 갑상선암, 및 자궁경부암으로부터 선택된 것인 방법.
E209. 실시양태 E184-E208 중 어느 하나에 있어서, 암이 림프증식성 질환 (예를 들어, 이식후 림프증식성 질환) 또는 혈액암, T-세포 림프종, B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 또는 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병 또는 림프성 백혈병)인 방법.
E210. 실시양태 E184-E209 중 어느 하나에 있어서, 암이 초기, 중기, 후기 또는 전이성 암인 방법.
E211. 실시양태 E184-E210 중 어느 하나에 있어서, 암이 신세포 암종, 난소암, 및 두경부 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
E212. 실시양태 E211에 있어서, 체크포인트 억제제의 억제제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 억제제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
E213. 실시양태 E212에 있어서, PD-L1의 억제제가 아벨루맙이 아닌 것인 방법.
E214. 실시양태 E211 또는 E212에 있어서, 암이 신암, 예를 들어, 신세포 암종 (RCC)인 방법.
E215. 실시양태 E214에 있어서, 암이 전이성 RCC, 투명 세포 신세포 암종 (ccRCC), 비-투명-세포 신세포 암종 (ncRCC), 및 고위험 신세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 신암인 방법.
E216. 실시양태 E215에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 1차 또는 2차 요법으로서 투여되는 것인 방법.
E217. 실시양태 E184-E216 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 1차 요법으로서 투여되는 것인 방법.
E218. 실시양태 E184-E216 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 2차 요법으로서 투여되는 것인 방법.
E219. 실시양태 E184-E212 중 어느 하나에 있어서, 암이 난소암인 방법.
E220. 실시양태 E219에 있어서, 제2 요법이 PARP1의 억제제 (예를 들어, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 벨리파립, 이니파립, 탈라조파립, 3-아미노벤즈아미드, CEP9722, E7016, BSI-201, KU-0059436, AG014699, MK-4827, 또는 BGB-290)인 방법.
E221. 실시양태 E219에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 2차 요법으로서 투여되고, 임의로 여기서 대상체는 백금-저항성인 방법.
E222. 실시양태 E219에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 1차 요법으로서 투여되는 것인 방법.
E223. 실시양태 E184-E222 중 어느 하나에 있어서, 암이 두경부 편평 세포 암종인 방법.
E224. 실시양태 E223에 있어서, 방사선 요법의 투여를 추가로 포함하는 방법.
E225. 실시양태 E223 또는 E224에 있어서, 암이 백금-저항성 및/또는 재발성 암인 방법.
E226. 실시양태 E179-E225 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체가 인간인 방법.
E227. 실시양태 E179-E226 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약 조성물을 정맥내로 투여하는 것을 포함하는 방법.
E228. 실시양태 E179-E227 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약 조성물을 피하로 투여하는 것을 포함하는 방법.
E229. 실시양태 E179-E228 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제약 조성물이 약 1주 2회, 1주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 1개월 2회, 1개월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회 또는 12개월마다 1회 투여되는 것인 방법.
E230. 실시양태 E179-E229 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 2주마다, 예를 들어, 최대 12회 (예를 들어, 최대 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3회) 투여되는 것인 방법.
E231. 실시양태 E230에 있어서, 각각의 투여가 5-10 mg/kg (예를 들어, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg)의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 것인 방법.
E232. 실시양태 E231에 있어서, 각각의 투여가 약 7 mg/kg을 포함하는 것인 방법.
E233. 실시양태 E179-E229 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 4주마다, 예를 들어, 최대 6회 (예를 들어, 최대 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1회) 투여되는 것인 방법.
E234. 실시양태 E233에 있어서, 각각의 투여가 10-15 mg/kg (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 mg/kg)의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 것인 방법.
E235. 실시양태 E234에 있어서, 각각의 투여가 약 12 mg/kg을 포함하는 것인 방법.
E236. 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167의 제약 조성물을 사용하여 샘플, 조직, 또는 세포에서 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)을 검출하는 방법이며, 샘플, 조직 또는 세포를 항체와 접촉시키는 단계 및 항체를 검출하는 단계를 포함하는 방법.
E237. 실시양태 E1-E166 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E167의 제약 조성물을 포함하는 키트.
E238. 실시양태 E1-E167 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어 본원에 기재된 방법 실시양태 중 어느 하나에서 의약으로서 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
E239.
(a) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1 (CDR-L1); 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 (CDR-H1); 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(b) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(c) ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 영역 및 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(d) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(e) 서열식별번호: 62-66으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 34-38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(f) 서열식별번호: 47 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 39 및 88-91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(g) 서열식별번호: 7 및 67-69로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(h) 서열식별번호: 7, 47-69 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(i) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 (LC) 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 (HC) 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(j) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(k) 서열식별번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 124 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
(l) 서열식별번호: 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 VL 영역 및 서열식별번호: 190의 핵산 서열에 의해 코딩된 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및
(m) 서열식별번호: 185의 핵산 서열에 의해 코딩된 LC 영역 및 서열식별번호: 189 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편
으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 항체 또는 단편인, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E240. 실시양태 E239에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E241. 실시양태 E239 또는 E240에 있어서, 서열식별번호: 7과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E242. 실시양태 E239에 있어서, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E243. 실시양태 E239 또는 E242에 있어서, 서열식별번호: 5와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E244. 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및/또는 서열식별번호: 7, 47-69, 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E245.
(i) 서열식별번호: 2 또는 3에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 HC; 및/또는
(ii) 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 LC
를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E246. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열로 이루어진 LC 및 서열식별번호: 2 또는 3의 아미노산 서열로 이루어진 HC를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
E247.
서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 항체 VL 영역; 및
서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 항체 VH 영역
을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
E248. 실시양태 E247에 있어서, 서열식별번호: 181 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 불변 영역 및 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 불변 영역을 포함하는 단리된 항체.
E249.
a) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 제1, 제2 및 제3 CDR을 포함하는 항체 VL 영역;
서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 제1, 제2 및 제3 CDR을 포함하는 항체 VH 영역;
서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 불변 (CL) 영역; 및
서열식별번호: 181 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 (CH) 불변 영역;
b) 서열식별번호: 7과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 VL 영역; 및 서열식별번호: 6과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 VH 영역; 또는
c) 서열식별번호: 5와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 HC
를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
E250. ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 항체 VH 및 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 항체 VL을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E251. 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
a. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 약 536 pM 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
b. 약 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
c. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어, 약 489 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
d. 약 100 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
e. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 약 507 pM 미만인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
f. 약 100 pM 이하인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
g. 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
h. 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 약 100 pM 미만인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도;
i. 약 100 pM 내지 약 300 pM인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
j. 약 100 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC30;
k. 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50; 및
l. 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
i. 약 0.12 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
ii. 약 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
iii. 약 36 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
iv. 약 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2);
v. 약 15 내지 17일의 말기 반감기 (t1/2); 및
vi. 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합.
E252. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 카바트의 Eu 넘버링에 따라 넘버링된 바와 같은, 위치 L234, L235, 및 G237로부터 선택된 1개 이상의 치환 (예를 들어, L234A, L235A, 및 G237A 중 1개 이상)을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E253. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 인간화 항체, 인간 항체, 뮤린 항체, 키메라 항체, 또는 낙타류 항체인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E254. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 항체 중쇄 이소형이 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택되고/거나; 경쇄 불변 영역이 카파 또는 람다로부터 선택된 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E255. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 항체 중쇄 이소형이 IgG1이고/거나 경쇄 불변 영역이 카파 경쇄인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E256. αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 실시양태 E242의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
E257. 상기 실시양태 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
E258. 실시양태 E257에 있어서, i) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 중쇄 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 경쇄를 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, ii) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 중쇄 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 경쇄를 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 iii) 둘 다를 포함하는 제약 조성물.
E259. 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
E260. 실시양태 E259에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 VH 영역, VL 영역, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 190의 핵산 서열, 서열식별번호: 186의 핵산 서열, 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
E261. 실시양태 E259에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 192 또는 193의 핵산 서열; 서열식별번호: 194의 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
E262. 실시양태 E259에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 HC, LC, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 189 또는 190의 핵산 서열; 서열식별번호: 185의 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
E263. 실시양태 E259에 있어서, ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열, ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열, 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
E264. 실시양태 E259에 있어서, 서열식별번호: 189 또는 서열식별번호: 191에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열; 서열식별번호: 185에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
E265. 실시양태 E259-E264 중 어느 하나의 핵산을 포함하는 벡터.
E266. 실시양태 E259-E264 중 어느 하나의 핵산 또는 실시양태 E265의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
E267. 실시양태 E265에 있어서, CHO 세포, COS 세포, HEK-293 세포, NS0 세포, PER.C6® 세포, 및 Sp2.0 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물 세포인 숙주 세포.
E268. 실시양태 266의 숙주 세포를, 항체 또는 단편이 숙주 세포에 의해 발현되는 조건 하에 배양하는 단계 및 항체 또는 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법.
E269. αvβ8 인테그린 활성의 감소를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E257 또는 E258의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 αvβ8 인테그린 활성을 감소시키는 방법.
E270. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E257 또는 E258의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
E271. 실시양태 E270에 있어서, 세포독성제, 세포증식억제제, 화학요법제, 호르몬 치료, 백신, 면역요법, 수술, 방사선, 동결수술, 열요법 또는 그의 조합을 추가로 투여하는 방법.
E272. 실시양태 E271에 있어서, 추가로 투여하는 것이 치료 유효량의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조합물의 투여와 동시, 순차적 또는 별개인 방법.
E273. 실시양태 E271에 있어서, 면역요법이 항-PD1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, 항-CTLA-4 항체, 가용성 CTLA-4 융합 단백질 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 체크포인트 분자의 조정제를 포함하고, 여기서 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이 아닌 것인 방법.
E274. 실시양태 E270-E273 중 어느 하나에 있어서, 암이 두경부의 편평 세포 암종, 투명 세포 또는 유두상 세포 유형을 갖는 신세포 암종, 난소암, 난관암, 원발성 복막암, 위암, 위식도 접합부 암, 식도암, 폐 편평 세포암, 췌장관 선암종, 담관암종, 자궁암, 흑색종, 요로상피 암종 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
E275. 실시양태 E239-E256의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 샘플, 조직 또는 세포에서 αvβ8 인테그린을 검출하는 방법이며, 샘플, 조직 또는 세포를 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
E276. 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 단편 또는 실시양태 E257 또는 E258의 제약 조성물을 포함하고, 임의로 실시양태 E273의 조정제를 포함하는 키트.
E277. 실시양태 E239-E258 중 어느 하나에 있어서, 암의 치료를 위해 αvβ8 인테그린 활성의 감소를 필요로 하는 대상체에서 αvβ8 인테그린 활성을 감소시키는데 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
E278. 실시양태 E239-E258 중 어느 하나에 있어서, 임의로 면역요법과 조합하여 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하기 위한 것이고, 여기서 조합은 임의로 상승작용적 치료 효과를 제공하는 것인, 암을 치료하는데 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
E279. 실시양태 E278에 있어서, 암이 두경부의 편평 세포 암종, 투명 세포 또는 유두상 세포 유형을 갖는 신세포 암종, 난소암, 난관암, 원발성 복막암, 위암, 위식도 접합부 암, 식도암, 폐 편평 세포암, 췌장관 선암종, 담관암종, 자궁암, 흑색종, 요로상피 암종 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의로 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물 또는 조합이 면역요법 또는 방사선 요법의 투여와 함께 사용하기 위한 것인, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
E280. 암을 치료하기 위한 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 실시양태 E257 또는 E258의 제약 조성물의 용도.
E281. 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 실시양태 E239-E256 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도.
E282. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 (ii) 항-PD1, 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 면역 체크포인트 분자의 조정제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
E283. 실시양태 E282에 있어서, 암이 편평 세포 암종인 방법.
E284. 실시양태 E282에 있어서, 암이 유방암 또는 결장암인 방법.
E285. 실시양태 E282-E284 중 어느 하나에 있어서, 조정제가 항-PD1 항체, 항-PD-L1 항체, 및 항-PD-L2 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
본 발명의 상기 발명의 내용 뿐만 아니라 하기 발명의 상세한 설명은 첨부 도면과 함께 읽을 경우 더 잘 이해될 것이다. 본 발명을 예시하기 위해 하기 도면 실시양태(들)를 제시하지만, 본 발명이 제시된 정확한 배열 및 수단으로 제한되지는 않는다는 것을 이해해야 한다.
도 1a는 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11 ("mADWA11" "ADWA11" 또는 "하이브리도마 마우스 ADWA11"로 지칭됨; 서열식별번호: 20), 인간화 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4) 항체 ("huADWA11-2.4", "ADWA11 2.4" 또는 "인간화 ADWA11-2.4"; 서열식별번호: 6), 및 IGHV3-07 배선 ("IMGT" 또는 "DP-54"; 서열식별번호: 195) 서열의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 비교한 서열 정렬을 보여준다. 밑줄표시된 아미노산 잔기는 카바트에 따른 CDR 서열이다.
도 1b는 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11 ("mADWA11" "AWDA11" 또는 "하이브리도마 마우스 ADWA11"로 지칭됨; 서열식별번호: 21), 인간화 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4) 항체 ("huADWA11-2.4", "ADWA11 2.4" 또는 "인간화 ADWA11 2.4"; 서열식별번호: 7), 및 IGKV1-39 배선 ("IMGT" 또는 "DPK-9"; 서열식별번호: 196) 서열의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 비교한 서열 정렬을 보여준다. 밑줄표시된 아미노산 잔기는 카바트에 따른 CDR 서열이다.
도 2는 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 인간 인테그린 αvβ3 ("AVB3") 및 αvβ6 ("AVB6")에 대한 마우스 하이브리도마 항체 ADWA2 및 ADWA11의 결합 특이성을 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. ADWA2 및 ADWA11은 인테그린 αvβ3 ("AVB3") 및 αvβ6 ("AVB6")에 결합하지 않은 반면, 대조군 αV 결합 항체 ("알파V mAb")는 αvβ3 및 αvβ6 둘 다에 결합하였다.
도 3a는 ELISA에 의해 결정된 바와 같이 마우스 하이브리도마 ADWA11 항체가 인간 αvβ8에 결합하였음을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다.
도 3b는 ELISA에 의해 결정된 바와 같이 인간화 항체 ADWA11 VH05/VK01(2.4)이 인간 αvβ8에 결합하였음을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다.
도 4a는 인간 αvβ8에 대한 모 인간화 ADWA11_VH05/VK01 (ADWA VH_1.5 및 ADWA VL_1.1) 항체의 결합 친화도와 비교하여, 인간 αvβ8에 대한 중쇄 가변 영역에서 K30A, N55Q, N57Q, D61E, P62A, 또는 K63A 아미노산 치환을 갖는 ADWA11 VH05/VK01 Fab의 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 결합 친화도를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 중쇄 가변 영역에서 K30A, N55Q, N57Q, D61E, P62A, 또는 K63A 아미노산 치환을 갖는 Fab는 인간 αvβ8에 대한 결합 친화도를 보유하였다.
도 4b는 인간 αvβ8에 대한 모 ADWA11 VH05-2/VK01 항체의 결합 친화도와 비교하여, 인간 αvβ8에 대한 중쇄 가변 영역 (예를 들어, F64V) 또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L30S, Y55A, A60Q, M94Q, L97Y, F101L, F101W, 또는 Q105G)에서 아미노산 치환을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab의 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 결합 친화도를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 경쇄 가변 영역에서 Y55A, A60Q, F101L, 또는 F101W 아미노산 치환을 갖는 Fab는 인간화 ADWA11 VH05-2/VK01 항체와 비교하여 인간 αvβ8에 대해 감소된 결합 친화도를 나타내었다. 다른 시험된 Fab는 인간 αvβ8에 대한 결합 친화도를 보유하였다.
도 4c는 모 항체 (VH05-2_VK01 모)와 비교하여, 인간 αvβ8에 대한, 표 5에 제시된 바와 같은 아미노산 치환의 조합을 갖는 VH05-2/VK01(2.1) (ADWA11 2.1), VH05-2/VK01(2.2) (ADWA 2.2), VH05-2/VK01(2.3) (ADWA 2.3), VH05-2/VK01(2.4) (ADWA 2.4), VH05-2(F64V)/VK01(2.1), VH05-2(F64V)/VK01(2.3), 및 VH05-2(F64V)/VK01(2.4)로 지칭되는 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab의 ELISA에 의해 결정된 바와 같은 결합 친화도를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 각각의 시험된 Fab는 인간 αvβ8에 대한 결합 친화도를 보유하였다.
도 5는 비아코어에 의해 결정된 바와 같은, 인간 인테그린 αvβ3 (avb3) 및 αvβ6 (avb6)에 대한 마우스 하이브리도마 ADWA11 ("MsADWA11" 또는 "mADWA11") 및 인간화 ADWA11 VH05-1/VK01 ("ADWA11 5-1_1") 및 ADWA11 VH05-2/VK01 ("ADWA11 5-2_1")의 결합 특이성을 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. ADWA11 항체는 인테그린 αvβ3 (avb3) 및 αvβ6 (avb6)에 결합하지 않은 반면, 대조군 αV 결합 항체 ("항-av")는 αvβ3 및 αvβ6 둘 다에 결합하였다.
도 6a는 인간 αvβ8에 대한 하이브리도마 ADWA11 ("Ms ADWA11") Fab에 대한 대표적인 비아코어 결합 트레이스를 보여준다.
도 6b는 인간 αvβ8에 대한, ADWA11 VH05-2/VK01(2.4) 또는 "ADWA11 2.4" Fab로도 지칭되는 인간화 ADWA11_5-2 2.4 Fab에 대한 대표적인 비아코어 결합 트레이스를 보여준다.
도 6c는 본원에서 ADWA11 5-2 2.4 (또한 ADWA11 2.4 및 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)로도 공지됨)로 지칭되는 인간화 Fab ADWA11이 모 마우스 항체 Fab ("MsADWA11")와 비교하여, 비아코어에 의해 평가된 바와 같이, 인간 αvβ8에 대한 친화도 및 교차 종 반응성을 보유한다는 것을 보여주는 대표적인 표를 보여준다. ADWA11 5-2 2.4는 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8에 대해 <200 pM의 KD의 동등한 친화도를 입증하였다. 모 마우스 항체는 인간, 시노몰구스, 및 마우스 αvβ8에 대해 489-536 pM의 KD의 동등한 친화도를 입증하였다.
도 7a는 중쇄 가변 영역 (예를 들어, F64V), 또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L30S, M94Q, L97Y, F101L, 또는 Q105G)에서 단일 아미노산 치환을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 (모) Fab ("ADWA11")에 대한 U251 세포 결합 데이터를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. 경쇄 가변 영역에서 F101L 아미노산 치환을 갖는 Fab는 모 항체와 비교하여 U251 세포 (인간 αvβ8)에 대해 감소된 결합을 나타내었다. 다른 시험된 Fab는 U251 세포 (인간 αvβ8)에 대한 결합을 보유하였다.
도 7b는 경쇄 가변 영역에서 단일 아미노산 치환 (예를 들어, M56A 또는 N58S)을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 (모) Fab ("ADWA11")에 대한 U251 세포 결합 데이터를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. M56A 및 N58S Fab는 U251 세포 (인간 αvβ8)에 대한 결합을 보유하였다.
도 7c는 모 항체와 비교하여 표 5에 따른 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.1 (F64V), 2.3 (F64V), 및 2.4 (F64V)로 지칭되는 아미노산 치환의 조합을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab ("ADWA11")에 대한 U251 세포 결합 데이터를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 각각의 시험된 Fab는 고정된 U251 세포에 대한 결합을 보유하였다.
도 8은 U251 세포에 대한 항체 ADWA11 mIgG_4mut 및 ADWA11 VH05/VK01의 결합 친화도를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다.
도 9a는 ADWA11_VH05-2/VK01 (2.1) 및 ADWA11_VH05-2/VK01 (2.4)로 지칭되는 아미노산 치환의 조합을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01의 U251 (인간 교모세포종) 또는 C8-S (마우스 성상세포) 세포에 대한 결합을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. ADWA11 VH05-2/VK01(2.1) 및 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4) 항체는 U251 세포 (인간 avb8) 및 C8-S (마우스 avb8)에 대한 결합을 보유하였다.
도 9b는 αvβ3, αvβ5, αvβ6, 및 αvβ8을 발현하는 HEK 세포에 대한 인테그린 특이적 항체, 예컨대, ADWA11 VH05-2/VK01 (2.4)의 결합을 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 결과는 αvβ8을 발현하는 HEK 세포에 대한 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)의 포화가능한 결합 및 αvβ3, αvβ5, αvβ6을 발현하는 세포에 대한 비결합을 보여준다. 이들 결과는 인간 αvβ8에 대한 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)의 특이적 결합을 입증한다. 도 10a는 U251 세포에 의한 TGFβ 전사활성화에 대한 마우스 하이브리도마 ADWA11 ("mFab") 및 인간화 ADWA11 Fab: ADWA11 VH01/VK01, ADWA11 VH02/VK01, ADWA11 VH02/VK02, ADWA11 VH05/VK02, 및 ADWA11 VH05/VK01의 효과를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. VH01/VK01, VH02/VK01, 및 VH02/VK02 Fab는 감소된 활성을 나타낸 반면에, VH05/VK01은 활성을 보유하였으며, VH05/VK02는 마우스 하이브리도마 ADWA11 Fab ("mFab")와 비교하여 U251 전사활성화 검정에서 TGFβ 활성화를 차단하는 개선된 활성을 입증하였다.
도 10b는 U251 세포에서 TGFβ 전사활성화에 대한 중쇄 가변 영역 (예를 들어, F64V) 또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L30S, M94Q, L97Y, F101L, F101W, 또는 Q105G)에서 아미노산 치환을 갖는 표시된 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab의 효과를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. 경쇄 가변 영역에서 F101L 또는 F101W 단일 아미노산 치환을 갖는 Fab는 인간화 모 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab와 비교하여 TGFβ 전사활성화에 대해 감소된 효과를 나타내었다. 다른 시험된 Fab는 TGFβ 전사활성화 검정에서 활성을 보유하였다.
도 10c는 표 5에 따른 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.1 (F64V), 2.3 (F64V), 및 2.4 (F64V)로 지칭되는 아미노산 치환의 조합을 포함하는, 아미노산 치환을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab의 효과를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. VH02-2/VK01(2.3) 및 VH05-2(F64V)/VK01(2.3) Fab는 모 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab와 비교하여 TGFβ 전사활성화에 대해 감소된 효과를 나타내었다. 다른 시험된 Fab는 TGFβ 전사활성화 검정에서 활성을 보유하였다.
도 10d는 중쇄 가변 영역 (예를 들어, F64V) 또는 경쇄 가변 영역 (예를 들어, L30S, M94Q, L97Y, Q105G, M56A, 또는 N58S)에서 표시된 아미노산 치환을 갖는 ADWA11 VH05-2/VK01 (모) Fab의 효과를 비교한 대표적인 그래프를 보여준다. 시험된 Fab는 모 ADWA11 VH05-2/VK01 Fab와 비교하여 TGFβ 전사활성화 검정에서 활성을 보유하였다.
도 10e는 U251 세포에 의한 TGFβ 전사활성화에 대한 인간화 ADWA11 VH05/VK01, VH05/VK01-D61E (VH05-1/VK01), 및 VH05/VK01-N55Q-D61E (VH05-2/VK01) IgG의 효과를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 시험된 항체는 TGFβ 전사활성화 검정에서 활성을 보유하였다.
도 10f는 이소형 대조군 항체와 비교하여, U251 세포 (좌측 패널) 및 C8-S (우측 패널)에 의한 TGFβ 전사활성화에 대한 ADWA11_VH05-2_VK01(2.4)의 효과를 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 추가의 실험은 U251 세포를 사용한 TGFβ 전사활성화 검정에서 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)에 대한 IC50이 199 ± 93.6 pM (평균 ± 표준 편차)임을 입증하였다.
도 11은 표 1에 제시된 양성 대조군 펩티드와 비교하여 상이한 ADWA11 VH05-2VK01 CDR 펩티드에 대한 반응자 (항원성)의 백분율을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 펩티드 항원성 스코어를 사용하여 감소된 면역원성 위험을 갖는 가능한 CDR 서열을 선택하였다.
도 12a는 EMT6 유방암 종양 모델에서 항-αvβ8 (ADWA11), 항-PD1 항체 ("PD-1", RMP1-14), mIgG1_4mut 이소형 (2B8), 및 래트 IgG2a이소형 (2A3) 처리의 조합의 효능을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼를 사용하여 1주에 3회 측정하고, 종양 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하였다. 각각의 군에 8/10마리 미만의 마우스가 남아있을 때까지 각각의 처리군에서의 평균 종양 부피 +/- SEM을 플롯팅하였다. 생존은 1000mm3에 도달할 때까지의 시간으로서 정의하였다. 항-PD1 및 ADWA11의 조합물은 시험된 다른 조합물보다 더 큰 정도로 종양 성장을 억제하고 전체 생존을 개선시켰다.
도 12b는 상부 패널의 EMT6 유방암 모델에서 단독요법으로서의 1, 3, 10, 및 20 mg/kg의 항-αvβ8 항체 (ADWA11) 및 이소형 대조군 (mIgG1_4mut 이소형 (2B8))의 효능을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 또한, EMT6 유방암 종양 모델에서의 항-αvβ8 항체 ADWA11, 1, 3, 10, 및 20 mg/kg과 항-PD1 항체 (RMP1-14, 10 mg/kg) 및 래트 IgG2a 이소형 (2A3)의 조합을 제시한다. 마우스를 연구의 제0일, 제4일, 및 제8일에 항체로 처리하고, 종양 성장을 디지털 캘리퍼를 사용하여 1주에 3회 측정하고, 종양 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하였다.
도 13은 EMT6 종양 모델에서의 항-αvβ8 (ADWA11), 항-41BB (MAB9371), 항-CTL4 (9D9), mIgG1_4mut 이소형 (2B8), 및 래트 IgG2a 이소형 (2A3) 처리의 조합의 효능을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼를 사용하여 1주에 3회 측정하고, 종양 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하고, 각각의 군에 8/10마리 미만의 마우스가 남아있을 때까지 각각의 처리군에서의 평균 종양 부피 +/- SEM을 플롯팅하고, 생존은 1000mm3에 도달할 때까지의 시간으로서 정의하였다. 항-4-1BB 및 ADWA11 또는 항-CLTA4 및 ADWA11 처리의 조합은 시험된 다른 조합보다 더 큰 정도로 종양 성장을 억제하고 전체 생존을 개선시켰다.
도 14a는 항-αvβ8 항체 및 방사선 요법의 조합 (ADWA11 + 5Gy 방사선 군)이 CT26 종양 모델에서 이소형 대조군과의 방사선 요법 (mIgG4mut (2B8) + 5Gy 방사선 군)보다 더 큰 정도로 종양 성장을 억제하고 전체 생존을 개선시켰음을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼를 사용하여 1주에 3회 측정하고, 종양 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하고, 각각의 처리군에서의 평균 종양 부피 +/- SEM을 플롯팅하고, 생존은 1000mm3에 도달할 때까지의 시간으로서 정의하였다. * p < 0.05 vs 처리 없음, ** P < 0.05 vs 방사선 + 2B8.
도 14b 상부 그래프는 10 mg/kg의 이소형 대조군 (대조군), 또는 ADWA11 항체 (항-ITGαVβ8)로 제0일, 제4일, 및 제8일에 처리한 마우스로부터 제12일에 수집한 CT26 종양 조직에서의 CD45, CD8, 및 그랜자임 B 발현 세포의 밀도를 도시하며, n = 6; p = P-값이다. 하부 그래프는 이소형 대조군 (이소형), ADWA11 항체 (항-ITGαVβ8), 5 Gy의 종양 표적화 방사선과 조합된 이소형, 또는 5Gy의 종양 표적화 방사선과 조합된 ADWA11 항체의 제1 10 mg/kg 용량의 12일 후에 수집된 종양 조직에서의 CD45, CD8, 그랜자임B, 및 IFNγ의 유전자 발현을 도시한다. 항체 처리는 연구의 제1일, 제4일, 및 제8일에 정맥내로 투여하였고, 방사선 요법은 연구의 제5일에 투여하였다. 5마리의 마우스를 각각의 처리군에 포함시켰고; 평균 및 평균의 표준 오차를 그래프화하였다.
도 15는 EMT6 종양 모델에서의 CD45 (총 림프구 및 골수 세포), CD3 (총 T 세포), CD4 T 세포, CD8 T 세포, 및 그랜자임 B (활성화된 CD8 및 NK 세포)의 밀도의 IHC 분석을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. ADWA11(2.4) (또한 본원에서 ADWA11VH05-2/VK01(2.4)로도 지칭됨) 처리는 분석된 모든 세포 유형의 밀도를 증가시켰다. N = 군당 10, 양측 t-검정에 대한 p 값을 그래프 상에 라벨링하였다.
도 16a는 CCK168 종양 모델에 대한 처리 요법을 보여주는 다이어그램을 보여준다. 4개의 처리군에 대한 종양 세포의 이식 및 복강내 (i.p.) 항체 주사에 대한 시간 라인이 제공된다.
도 16b는 CCK168 종양 모델에서의 생존에 대한 컷오프로서 2000 mm3의 종양 부피를 사용한 대표적인 카플란-마이어 생존 곡선을 보여준다. 각 군에서 n=10. 로그-순위 만텔-콕스 검정에 의해 **p<0.01.
도 16c는 도 16b에 제시된 종양의 개별 성장 곡선을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 종양이 ≥ 2000 mm3에 도달하였을 때 또는 광범위한 종양 궤양화가 관찰되는 경우, 45-일 종점 전에 마우스를 안락사시켰다. 항-PD1 항체 및 ADWA11 처리의 조합은 항-PD1 항체, ADWA11, 또는 이소형 대조군 처리 단독 또는 개별 효과를 단순히 함께 합한 것보다 종양 성장을 상승작용적으로 억제하고 전체 생존을 더 큰 정도로 개선시켰다. 제시된 데이터는 3회의 독립적인 생물학적 반복실험을 대표한다.
도 17a는 종양 침윤 단핵구, 대식세포, 및 수지상 세포의 확인을 위한 게이팅 전략을 도시한다. 살아있는 단일 세포를 먼저 Ly6G, SiglecF, CD90 및 B220을 포함하는 덤프 게이트로 게이팅하여 호중구, 호산구, 림프구 및 B 세포를 제거하였다. 이어서, 음성 염색 세포를 유동 세포측정법에 의해 분석하고 게이팅하였다. 대식세포는 CD45+CD11b+CD64고F4/80고로서 확인되었고, 수지상 세포는 CD45+CD11b+F4/80-CD64-MHCII고CD11c고로서 확인되었다. 대식세포 집단 중에서, 면역자극 대식세포와 일치하는 프로파일은 Ly6C고CD206저로서 확인되었고, 면역억제 대식세포는 Ly6C저CD206고로서 확인되었다. 덤프 채널 Ly6G+SiglecF+CD90.2+B220+.
도 17b는 도 17a에 기재된 분해된 종양에서 다색 유동 세포측정 패널의 일부로서 분석된 인테그린 αvβ8에 대한 세포 표면 염색을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. CCK168 종양 모델에서 형광 마이너스 원 대조군 염색 (FMO) 및 ADWA11 항체 염색을 보여주는 대표적인 유동 세포측정 플롯. N=4 종양.
도 18a는 CCK168로부터 단리된 CD45-음성 세포에 대한 ADWA11 염색을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 살아있는 단일 세포를 CD45의 존재에 대해 분석하였다. CCK168 종양 모델에서 CD45 음성 세포의 4%는 ADWA11 항체 사용 시 αvβ8 발현에 대해 양성이었다.
도 18b는 CCK168, CT26, 및 EMT6 세포주에서의 αvβ8의 발현을 도시한다. 살아있는 단일 세포를 이소형 및 항-αvβ8 (ALDWA11) 염색 항체를 사용하여 유동 세포측정법에 의해 αvβ8 발현에 대해 분석하였다. CCK168 및 EMT6 세포주는 αvβ8의 검출가능한 발현을 갖는 반면, CT26 세포주는 그렇지 않다.
도 19a는 대조군 항체 단독, 항-PD1, ADWA11 또는 조합된 항-PD1 및 ADWA11로 처리된 CCK168 종양을 갖는 마우스의 총 종양내 CD8+ T 세포 수를 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 모든 CD45+ 세포의 CD4 및 CD8 발현에 대한 대표적인 유동 세포측정법 플롯이 각각의 군 내의 각각의 마우스에 대한 CD8+ 세포 수 대 CD45+ 세포의 비와 함께 제시된다.
도 19b는 항-CD8 및 DAPI에 대해 염색된, 각각의 처리군 내의 마우스로부터 수거된 CCK168 종양 절편의 대표적인 면역형광 현미경사진을 보여준다. 축척 막대, 50 μm.
도 19c는 각각의 군 내의 각각의 마우스에서 검출가능한 그랜자임 B를 발현하는 CD8+ 세포의 백분율과 함께, CD8 발현에 대해 게이팅된 세포에서의 그랜자임 B에 대한 세포내 염색을 보여주는 대표적인 유동 세포측정 플롯을 보여준다.
도 19d는 CD45+Ly6G-CD11b+CD64고F4/80고로서 게이팅된 세포에 대한 면역자극 대식세포 (Ly6c고, CD206저), 및 면역억제 대식세포 (CD206고, Ly6c 저)를 보여주는 대표적인 유동 세포측정 플롯을 보여준다. 대식세포 집단 중에서, 각각의 마우스에 대한 면역자극 대식세포의 백분율과 함께, 면역자극 대식세포는 Ly6C고CD206저로서 확인되었고, 면역억제 대식세포는 Ly6C저CD206고로서 확인되었다. 그래프에서의 데이터는 평균 ± SEM이고, 군당 n=10이다. 일원 ANOVA에 의해 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
도 20은 CCK168 종양 미세환경에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포 상에서의 ADWA11 염색을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 살아있는 단일 CD45+ 세포를 CD4 및 CD8에 대해 게이팅하고, ADWA11로 염색하였다. 4개의 처리군 각각으로부터의 마우스에 대한 대표적인 플롯을 제시한다.
도 21a는 CD8+ T 세포의 면역-고갈을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 현미경사진은 항-CD8 고갈 항체 또는 이소형 대조군 항체를 사용한 선행 처리의 존재 또는 부재 하에서의, 조합 항-PD-1/ADWA11 요법 후에 단리된 CCK168 종양에서 DAPI로 대조염색된 항-CD8에 의한 면역염색을 보여준다.
도 21b는 ADWA11/항-PD-1 조합 요법 24시간 전에 항-CD8 고갈 항체 또는 이소형 대조군 항체로 전처리된 CCK168 종양에 대한 평균 종양 성장 곡선을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다.
도 21c는 항-CD8 고갈 항체 또는 이소형 대조군 항체로 1일 전에 사전처리된, ADWA11/항-PD-1 조합 요법 후 CCK168 종양을 보유하는 마우스의 생존을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 데이터는 퍼센트 생존으로서 보고되며, 각각의 군에서 n=10이다. 로그-순위 만텔-콕스 검정에 의해 **p<0.01.
도 22a는 ADWA-11 또는 대조군 항체로 처리된 마우스로부터 수거되고, 대식세포를 검출하기 위해 CD8에 대한 항체, F4/80로 염색되고 TGFβ 신호전달을 검출하기 위해 포스포-SMAD3에 대한 항체 (pS3)로 염색된 CCK168 종양을 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 저출력 병합 영상 및 pSMAD3만을 보여주는 영상은 좌측에 제시되고, 확대된 병합 영상 및 박스 구역으로부터의 각각의 단일 항체에 대한 영상은 우측에 제시된다.
도 22b는 대조군 및 ADWA11 처리된 마우스에서의 pSmad3 (pS3) 염색 밀도의 정량화를 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. ADWA11 처리는 CCK168 종양에서 pSmad3 밀도를 감소시켰다.
도 23a는 30종의 상이한 인간 암에서의 인테그린-β8 mRNA 발현에 대해 더 캔서 게놈 아틀라스(The Cancer Genome Atlas) (TCGA)로부터 추출된 데이터를 제시하는 대표적인 그래프를 보여준다. 각각의 점은 개별 종양 샘플을 나타낸다. 본 도면에 제시된 결과는 TCGA 리서치 네트워크에 의해 생성된 데이터에 기초한다.
도 23b는 성숙 단핵구 (CD16+ 단핵구), 종양 연관 대식세포 (CD14+ 대식세포), 2개의 단핵구 유래 수지상 세포 집단 (BCDA1+ moDC 및 BCDA3+ moDC) 또는 호산구에 대해 게이팅되고 αvβ8의 발현에 대해 염색된, 신선한, 식별방지 난소 암종 및 신세포 암종으로부터 분해된 세포의 유동 세포측정 데이터를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 정상 편도로부터의 조직을 또한 대조군으로서 분석하였다. 게이팅 전략은 도 23c에 제시되고; 각각의 종양 유형에 대해 n=2이다.
도 23c는 인간 종양 생검 샘플에 대한 게이팅 전략을 보여주는 대표적인 그래프이다. 살아있는 단일 CD45+ 세포를 SSC-A(hi)에 대해 게이팅하여 과립구를 제거하였다. SSC-A(lo)를 HLA-DR+CD3-에 대해 게이팅하고, CD14 및 CD16으로 염색하였다. CD14+CD16+는 CD16+ 단핵구로 지정되었다. CD16- 세포를 CD11c에 대해 추가로 염색하였다. CD14+CD11c+ 세포를 추가로 CD1c 및 CD141로 염색하였다. CD1c+CD141-은 CD1c+ MoDC로 지정되었다. CD141+CD1c-는 CD141+ MoDC로 지정되었다. CD1c-CD141- 세포를 추가로 CD64로 염색하고, CD64+ 집단을 CD14+TAM으로 지정하였다.
도 24a는 0.01 내지 10 mg/ml 범위의 농도의 ADWA11을 사용하여 수행된 TMLC 세포 공동-배양 생물검정의 결과를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. TGFβ 활성은 PAI-1 루시페라제 리포터 활성에 기초한 상대 루시페라제 단위로서 보고된다. ADWA11 용량당 n=3, 3회 반복.
도 24b는 0.001 내지 10 mg/ml의 농도의 ADWA-11의 존재 하에 TGFβ1의 잠복성 연관 펩티드 (LAP)로 코팅된 접시 상에서 수행된 세포 부착 검정의 결과를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 부착 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하고, 부착은 595 nm에서의 흡광도로 표현하였다. ADWA11 용량당 n=3, 3회 반복.
도 24c는 인테그린 αvβ3, αvβ5, αvβ6, 및 αvβ8에 대한 항체가 이들 인테그린 중 어떠한 것도 발현하지 않는 야생형 결장 암종 세포, SW-480 또는 β3 (SW-itgb3), β6 (SW-itgb6), 또는 β8 (SW-itgb8)을 발현하도록 형질감염된 SW-480 세포의 유동 세포측정법에 사용되었음을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 시험된 각각의 항체 및 세포 유형에 대한 대표적인 유동 세포측정 플롯이 제시된다.
도 25a는 TG32 마우스에서 ADWA11(2.4)의 0.1, 0.3, 및 3 mg/kg i.v. 투여에 대해 피팅된 2-구획 비-선형 약동학적 모델을 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 원: 관찰된 데이터. 선: 모델 피트.
도 25b는 TG32 마우스에서 ADWA11 2.4의 3 mg/kg i.v. 투여에 대해 피팅된 2-구획 약동학적 모델을 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 원: 관찰된 데이터. 선: 모델 피트.
도 26은 각각 4, 40, 및 100 mg/kg으로의 단일 IV 볼루스 투여 후 시노몰구스 원숭이에서의 ADWA11 2.4의 2-구획 약동학을 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 원: 관찰된 데이터. 선: 모델 피트.
도 27a-27b는 12 mg/kg Q28D 및 7 mg/kg Q14D 후의 예측된 인간 ADWA11 2.4 약동학을 예시하는 대표적인 그래프를 보여준다. CP는 예측된 혈장 농도이고; CAVG는 Cavg 또는 평균 혈장 농도이고; 설치류 NOAEL은 설치류에서의 Cave 무관찰 유해 효과 수준이고; NHP NOAEL은 비인간 영장류에서의 Cave 무관찰 유해 효과 수준이다.
도 28은 CCK168 종양 모델에 대한 생존에 대한 컷오프로서 2000 mm3의 종양 부피를 사용한 카플란-마이어 생존 곡선을 보여주는 대표적인 그래프를 도시한다. 처리군은 이소형 대조군, 항-PD1 항체, ADWA11_4mut, 및 항-PD1 항체 및 ADWA11_4mut의 조합이었다. 항-PD1 항체 및 ADWA11_4mut 처리의 조합은 항-PD1 항체, ADWA11_4mut, 또는 이소형 대조군 처리 단독 또는 조합 처리의 예상되는 상가적 효과보다 더 큰 정도로 전체 생존을 상승작용적으로 개선시켰다.
도 29a는 피하 CT26 세포가 이식되고 제5일에 이소형 대조군 항체, 항-PD1, ADWA11_4mut, 또는 항-PD1 및 ADWA11_4mut의 조합, 플러스 5 Gy 방사선량으로 처리된 마우스에서의 대표적인 생존 곡선을 도시한 그래프를 보여주고, 도 29b는 그러한 마우스에서의 대표적인 개별 종양 성장 곡선을 보여준다. 이소형 대조군 항체로 처리된 마우스의 한 군은 방사선 요법을 받지 않았다. 데이터는 퍼센트 생존으로서 보고되며, 각각의 군에서 n=10이다. 로그-순위 만텔-콕스 검정에 의해 *** p<0.001, ****p<0.0001.
도 29c는 처리 개시 50일 후에 생존한 CT26-치유된 마우스에서의 대표적인 종양 재-챌린지를 도시한 그래프를 보여준다. 방사선 요법과 조합하여 면역요법을 개시한 지 51일 후에 CT-26-치유된 마우스의 원래의 종양 이식 부위의 반대측 측복부에 모 CT26 세포를 이식하였다. 대조군 마우스에는 방사선이 제공되지 않았고, 이전에 종양 세포에 노출되지 않았다. 재-챌린지된 마우스를 30일 동안 추적하였다. 대조군, n= 10; RT 플러스 항-PD1, n=3; RT 플러스 ADWA11_mut, n=5; RT 플러스 ADWA11_mut 및 항-PD1, n=7.
도 30a는 이소형 대조군 항체, ADWA11_4mut, 4-1BB, 항-CTLA4, 항-PD-1, 또는 ADWA-11_4mut 및 4-1BB, 항-CTLA4 또는 항-PD-1의 조합에 의한 처리 후에 EMT6 세포가 동소 이식된 마우스에서의 대표적인 생존 곡선을 도시한 그래프를 보여주고, 도 30b는 그러한 마우스에서의 대표적인 개별 성장 곡선을 도시한 그래프를 보여준다. 데이터는 퍼센트 생존으로서 보고되며, 각각의 군에서 n=10이다. 로그-순위 만텔-콕스 검정에 의해 **** p<0.0001.
도 30c는 항-CTLA4 또는 4-1BB의 활성화제로 처리한 마우스에 대한 대표적인 생존 곡선을 도시한 그래프를 보여주고, 도 30d는 그러한 마우스에 대한 대표적인 개별 성장 곡선을 도시한 그래프를 보여준다.
도 30e는 ADWA-11_4mut 및 항-CTLA4의 상승작용적 조합 또는 ADWA-11_4mut 및 4-1BB의 활성화제의 상승작용적 조합으로의 처리 후에, 종양이 완전히 퇴행된, 50일 생존한 마우스에서의 종양 재-챌린지로부터의 결과를 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 대조군 마우스는 이전에 종양에 노출되지 않았다. 재-챌린지된 마우스를 30일 동안 평가하였다. n= 5 대조군, n= 6 ADWA-11_4mut + 항-CTLA4, n=5 ADWA-11_4mut + 4-1BB.
도 31a는 CD8a 및 그랜자임B 특이적 택맨 프로브를 사용한 MC38 종양 조직에서의 mRNA 유전자 발현 분석을 도시한다. 종양 조직을 표시된 투여량 수준으로의 이소형 대조군 또는 ADWA11 2.4 항체의 제1 용량 12일 후에 수집하였다. 처리는 연구의 제1일, 제5일, 및 제9일에 정맥내로 투여하였고, 5마리의 마우스를 각각의 처리군에 포함시켰다. * = p-값 < 0.05.
도 31b는 이소형 (10mg/kg), ADWA11 2.4 (10mg/kg), 항-PD-1 항체 (RMP1-14, 10 mg/kg), 및 조합된 ADWA11 2.4 (10mg/kg) 및 항-PD1 항체 (RMP1-14, 10 mg/kg) 처리된 마우스에서의 MC38 종양 모델에서의 종양 성장 속도를 도시한 대표적인 그래프를 보여준다. 추가적으로, 10mg/kg의 항-PD-1 항체 (RMP1-14)와 조합된 0.03, 0.3, 3, 및 30 mg/kg 용량의 ADWA11 (항-ITGAVB8 (ADWA11_mIgG_4mut) 항체로 처리된 마우스에서의 MC38 종양의 종양 성장 속도를 보여주는 대표적인 그래프를 보여준다. 모든 그래프에서, 항체는 연구의 제1일, 제5일, 및 제9일에 투여되었다.
αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편, 및 추가로, αvβ8 인테그린 활성에 대해 길항작용하거나 (예를 들어, TGFβ의 활성화에 대해 길항작용하거나, TGFβ 생산의 매개에 대해 길항작용하거나, Treg 및 Th17 세포의 조정에 대해 길항작용하거나) 또는 TGFβ1 및 TGFβ3과의 그의 상호작용, 또는 활성 TGFβ의 방출에 대해 길항작용하는 항체가 본원에 개시된다. 항-αvβ8 인테그린 항체를 제조하는 방법, 항-αvβ8 인테그린 항체를 포함하는 조성물, 및 항-αvβ8 인테그린 항체를 사용하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)에 결합하는 재조합, 예를 들어, 인간화 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, αvβ8 인테그린에 결합하는 항체를 형성할 수 있는 인간화 항체 중쇄 및 경쇄가 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 특정한 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 인간화 항체, 중쇄 및 경쇄가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간화 항-αvβ8 인테그린 항체는 변경된 이펙터 기능을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 다른 면에서는 동일한 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체에 비해 감소된 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC) 활성을 갖는다.
αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)에 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 항체 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 인간화 항체를 비롯한 항-αvβ8 인테그린 항체를 발현하는 숙주 세포가 제공된다. 인간화 항체를 비롯한 항-αvβ8 인테그린 항체를 사용한 치료 방법이 제공된다.
인간화 항체를 포함한 항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 항원-결합 단편은 이상 (예를 들어, 증가된) TGFβ 신호전달에 의해 유발되고/거나 그와 연관된 질환, 장애, 또는 상태의 예방, 치료, 및/또는 호전에 사용될 수 있다. 이러한 질환, 장애, 또는 상태는 암을 포함한다 (예를 들어, 이상 (예를 들어, 증가된) TGFβ 신호전달에 의한 암 세포의 증식을 제어함).
어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 성숙 TGFβ는 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 도메인과의 복합체로 불활성 또는 잠복성 형태로 존재한다. αvβ8 인테그린의 LAP에 대한 결합은 활성 TGFβ (예를 들어, TGFβ1 및 TGFβ3)의 방출을 유발한다. LAP에 대한 αvβ8 인테그린의 결합을 감소시키는 것은 활성 TGFβ의 방출을 방지함으로써 TGFβ 신호전달을 감소시킬 수 있다. TGFβ는 예를 들어 종양 미세환경에서 면역 억제 효과를 갖는 것으로 공지되어 있고, 따라서 본원에 기재된 항체를 사용한 TGFβ 활성 및/또는 신호전달의 감소는 면역 반응, 예를 들어, 생체내 항종양 반응의 활성화를 발생시킬 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 항체 및 그의 항원-결합 단편은 면역계 및/또는 종양 미세환경에서 TGFβ 활성의 선택적 길항작용을 가능하게 하여, 대상체에서 항종양 면역 반응을 증진시킬 수 있다. 본원의 실시예에 개시된 일부 실시양태에서, αvβ8 인테그린에 대한 항체 및 그의 항원-결합 단편은 편평 세포 암종, 유방암 및 결장암을 비롯한 여러 암에 대한 동물 모델에서 단독으로 또는 다른 면역조정제, 예컨대 체크포인트 억제제의 조정제 (예를 들어, PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제 또는 4-1BB의 효능제), 또는 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발하는 것으로 제시되었다. 따라서, 인간화 항체를 포함한 항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 항원-결합 단편은 암, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 신세포 암종 (RCC), 난소암, 또는 두경부 편평 세포 암종 (SCCHN)으로부터 선택된 고형 종양의 예방, 치료 및/또는 호전에서 단독으로 또는 제2 요법과 조합되어 사용될 수 있다.
본원에 사용된 섹션 표제는 단지 조직화 목적을 위한 것이며, 기재된 대상을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
특허 출원, 특허 공개, 및 진뱅크 수탁 번호를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 참고문헌이 구체적으로 및 개별적으로 그 전문이 참조로 포함되는 것으로 표시되는 바와 같이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재되거나 언급된 기술 및 절차는, 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al., eds., (2003)); the series METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995); and Cancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)]; 및 그의 업데이트된 버전에 기재된 널리 이용되는 방법론과 같이, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 널리 이해되고, 통상적인 방법론을 이용하여 통상적으로 사용된다.
I. 정의
본 발명은 본 발명의 예시적인 실시양태의 하기 상세한 설명 및 그 안에 포함된 실시예를 참조하여 보다 용이하게 이해될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상충되는 경우에는, 정의를 비롯하여 본 명세서가 우선할 것이다.
또한, 내용에 의해 달리 요구되거나 명백하게 지시되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수형을 포함할 것이다.
본원에 기재된 발명의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태로 "이루어진 것" 및/또는 "본질적으로 이루어진 것"을 포함하는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 단수 형태는 달리 나타내지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 명백하게 언급되지 않거나 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 다중 종속항의 문맥에서, "또는"의 사용은 이전의 하나 초과의 독립항 또는 종속항을 인용하는 것이다.
"약" 또는 "대략"은, 측정가능한 수치 변수와 관련하여 사용될 때, 변수의 표시된 값 및 표시된 값의 실험 오차 내 (예를 들어, 평균에 대한 95% 신뢰 구간 내) 또는 표시된 값의 10 퍼센트 내 (이 중 더 큰 쪽)에 있는 변수의 모든 값을 지칭한다. 수치 범위는 범위를 규정하는 수를 포함한다.
본 발명의 넓은 범주를 명시한 수치 범위 및 파라미터는 근사치이지만, 구체적 예에서 명시된 수치 값은 가능한 정확하게 기록된 것이다. 그러나, 임의의 수치 값은 그의 각각의 시험 측정에서 확인되는 표준 편차로부터 필연적으로 생성되는 특정 오차를 고유하게 포함한다. 더욱이, 본원에 개시된 모든 범위는 그에 포함된 임의의 및 모든 하위범위를 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, "1 내지 10"으로 언급된 범위는 1의 최소 값과 10의 최대 값 사이 (및 그 자체도 포함)의 임의의 및 모든 하위범위; 즉, 1 또는 그 초과의 최소 값, 예를 들어 1 내지 6.1로 시작하여 10 또는 그 미만의 최대 값, 예를 들어 5.5 내지 10으로 끝나는 모든 하위범위를 포함하는 것으로 간주되어야 한다.
본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함하다", 또는 "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 언급된 정수 또는 정수 군을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 정수 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수형을 포함할 것이다. 용어 "예를 들어" 또는 "예를 들면"에 이어지는 임의의 예(들)는 포괄적인 것으로 또는 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
실시양태가 표현 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 경우에, "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"과 관련하여 기재된 다른 유사한 실시양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
본 발명의 측면 또는 실시양태가 마쿠쉬 군 또는 다른 대안적 그룹화와 관련하여 기재되는 경우에, 본 발명은 총괄적으로 열거된 전체 군, 뿐만 아니라 상기 군의 개별적인 각각의 구성원, 및 주요 군의 모든 가능한 하위군, 뿐만 아니라 군 구성원 중 1개 이상이 부재하는 주요 군을 포괄한다. 본 발명은 또한 청구된 발명에서 임의의 군 구성원 중 1개 이상의 명확한 배제를 고려한다.
본원에 사용된 용어는 특정한 실시양태의 기재를 목적으로 할 뿐이며, 이를 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서 및 하기 청구범위에서, 하기 의미를 갖는 것으로 정의될 다수의 용어가 언급될 것이다:
용어 "단리된 분자" (여기서 분자는, 예를 들어 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 또는 항체 또는 그의 단편임)는 그의 유래 기원 또는 공급원에 의해 (1) 그의 천연 상태에서 동반되는 자연적으로 회합되는 성분과 회합되지 않거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 분자가 실질적으로 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 자연에서 발생하지 않는 분자이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나, 또는 그것이 자연적으로 유래되는 세포와 상이한 세포 시스템에서 발현되는 분자는 그의 자연적으로 회합되는 성분으로부터 "단리"될 것이다. 관련 기술분야에 널리 공지된 정제 기술을 사용하여, 단리에 의해 자연적으로 회합된 성분이 분자에 실질적으로 없게 할 수 있다. 관련 기술분야에 널리 공지된 다수의 수단에 의해 분자 순도 또는 균질성을 검정할 수 있다. 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 사용하고 관련 기술분야에 널리 공지된 기술을 사용하여 폴리펩티드를 가시화하도록 겔을 염색하여 폴리펩티드 샘플의 순도를 검정할 수 있다. 특정 목적을 위해, HPLC 또는 정제를 위해 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 수단을 사용함으로써 보다 고도의 분할이 제공될 수 있다.
본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은, 대상 종이 존재하는 우세한 종이고 (즉, 몰 기준으로 조성물 중의 임의의 다른 개별 종보다 더 풍부함), 바람직하게는 실질적으로 정제된 분획은, 대상 종 (예를 들어, 항체 또는 수용체를 비롯한 당단백질)이 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 약 50 퍼센트 (몰 기준으로)를 구성하는 조성물이다. 일반적으로, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물 중에 존재하는 모든 거대분자 종의 약 80 퍼센트 초과, 보다 바람직하게는 약 85%, 90%, 95%, 및 99% 초과를 구성할 것이다. 가장 바람직하게는, 대상 종은 본질적으로 균질하게 정제되며 (오염물 종이 통상적인 검출 방법에 의해 조성물에서 검출될 수 없음), 여기서 조성물은 본질적으로 단일 거대분자 종으로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 실질적으로 순수한 물질은 적어도 50% 순수하고 (즉, 오염물이 없음), 보다 바람직하게는 적어도 90% 순수하고, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순수하고, 보다 더 바람직하게는 적어도 98% 순수하고, 가장 바람직하게는 적어도 99% 순수하다.
용어 "동일성"은, 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 서열을 비교함으로써 결정되는 바와 같은, 2종 이상의 폴리펩티드 분자 또는 2종 이상의 핵산 분자의 서열들 사이의 관계를 지칭한다. 관련 기술분야에서, "동일성"은 또한, 경우에 따라 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열의 스트링 사이의 매치에 의해 결정되는 바와 같은, 폴리펩티드 또는 핵산 분자 서열 사이의 서열 관련성의 정도를 의미한다. "동일성"은 컴퓨터 프로그램의 특정한 수학적 모델 (즉, "알고리즘")에 의해 어드레싱된 갭 정렬에 의해 2개 이상의 서열 사이의 동일한 매치의 퍼센트를 측정한다.
용어 "유사성"은 "동일성"에 관련된 개념이지만, 그와는 대조적으로 동일한 매치 및 보존적 치환 매치 둘 다를 포함하는 유사성의 척도를 지칭한다. 보존적 치환은 폴리펩티드에 적용되고 핵산 분자에는 적용되지 않기 때문에, 유사성은 단지 폴리펩티드 서열 비교만을 다룬다. 2개의 폴리펩티드 서열이, 예를 들어 20개 중 10개의 동일한 아미노산을 가지며, 나머지는 모두 비보존적 치환이라면, 퍼센트 동일성 및 유사성은 둘 다 50%일 것이다. 동일한 예에서, 보존적 치환이 있는 위치가 5개 더 있다면, 퍼센트 동일성은 여전히 50%이지만 퍼센트 유사성은 75%일 것이다 (20개 중 15개). 따라서, 보존적 치환이 있는 경우에, 2개의 폴리펩티드 서열 사이의 유사성 정도는 그 2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성보다 더 클 것이다.
본 발명에 따른 폴리펩티드 또는 항체 "단편" 또는 "부분"은 절단에 의해, 예를 들어 폴리펩티드의 N 및/또는 C-말단 끝으로부터 1개 이상의 아미노산을 제거하는 것에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방식으로 최대 10개, 최대 20개, 최대 30개, 최대 40개 또는 그 초과의 아미노산을 N 및/또는 C 말단으로부터 제거할 수 있다. 단편은 또한, 1개 이상의 내부 결실에 의해 생성될 수 있다.
변이체 항체는 상기 논의된 특이적 서열 및 단편으로부터 1, 2, 3, 4, 5, 최대 10개, 최대 20개, 또는 최대 30개 또는 그 초과의 아미노산 치환 및/또는 결실 및/또는 삽입을 포함할 수 있다. "결실" 변이체는 개개의 아미노산의 결실, 작은 아미노산 군, 예컨대 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산의 결실, 또는 보다 큰 아미노산 영역의 결실, 예컨대 특이적 아미노산 도메인 또는 다른 특색의 결실을 포함할 수 있다. "삽입" 변이체는 개개의 아미노산의 삽입, 작은 아미노산 군, 예컨대 2, 3, 4 또는 5개 아미노산의 삽입, 또는 보다 큰 아미노산 영역의 삽입, 예컨대 특이적 아미노산 도메인 또는 다른 특색의 삽입을 포함할 수 있다. "치환" 변이체는 바람직하게는, 1개 이상의 아미노산의 동일한 수의 아미노산으로의 대체 및 보존적 아미노산 치환시키는 것을 수반한다. 예를 들어, 아미노산은 유사한 특성을 갖는 대안적 아미노산, 예를 들어 또 다른 염기성 아미노산, 또 다른 산성 아미노산, 또 다른 중성 아미노산, 또 다른 하전된 아미노산, 또 다른 친수성 아미노산, 또 다른 소수성 아미노산, 또 다른 극성 아미노산, 또 다른 방향족 아미노산 또는 또 다른 지방족 아미노산으로 치환될 수 있다.
치환 변이체는, 항체 분자 내의 적어도 1개의 아미노산 잔기가 제거되고 그 위치에 상이한 잔기가 삽입된다. 치환 돌연변이유발을 위한 가장 관심 부위는 초가변 영역을 포함하지만, 프레임워크 변경도 또한 고려된다. 보존적 치환은 하기에서 "보존적 치환"의 표제 하에 제시된다. 이러한 치환이 생물학적 활성에서 변화를 발생시키는 경우에, 하기에 제시되거나 또는 아미노산 부류와 관련하여 하기에 추가로 기재되는 바와 같은 "예시적인 치환"으로 명명된 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있고 생성물이 스크리닝될 수 있다.
아미노산 및 치환
Figure pct00001
항체의 생물학적 특성에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 예를 들어 베타-시트 또는 나선형 입체형태로서, 치환 영역 내의 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 것에 대한 그의 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 기초하여 하기 군으로 분류된다:
i. 비극성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
ii. 비하전 극성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
iii. 산성 (음으로 하전): Asp, Glu;
iv. 염기성 (양으로 하전): Lys, Arg;
v. 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및
vi. 방향족: Trp, Tyr, Phe, His.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 1개의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것에 의해 이루어진다.
예를 들어, 이루어질 수 있는 치환 중 한 유형은 화학적으로 반응성일 수 있는 항체 내의 1개 이상의 시스테인을 또 다른 잔기, 예컨대 비제한적으로 알라닌 또는 세린으로 변화시키는 것이다. 예를 들어, 비-정규 (예를 들어, 바람직하지 않거나 통상적이지 않은) 시스테인의 치환이 있을 수 있다. 치환은 항체의 가변 도메인의 CDR 또는 프레임워크 영역에서 또는 불변 영역에서 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 시스테인은 정규 (예를 들어, 바람직하거나 가장 통상적인) 시스테인이다. 또한, 항체의 적절한 입체형태 유지에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선시키고 이상 가교를 방지할 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)이 항체에 첨가되어 그의 안정성을 개선시킬 수 있고, 이는 특히 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우에 그러하다.
"항체"는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역 내에 위치하는 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본원에 사용된 상기 용어는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 달리 명시되지 않는 한, 특이적 결합에 대해 무손상 항체와 경쟁하는 그의 임의의 항원-결합 단편, 항원-결합 단편을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형상을 포괄한다. 항원-결합 단편은, 예를 들어 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, 도메인 항체 (dAb, 예를 들어 상어 및 낙타류 항체), 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한 단편, 단일 쇄 가변 단편 항체 (scFv), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv, 및 폴리펩티드에 대한 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 이뮤노글로불린의 적어도 부분을 함유하는 폴리펩티드를 포함한다.
항체는 임의의 부류, 예컨대 IgG, IgA, 또는 IgM (또는 그의 하위부류)의 항체를 포함하고, 항체가 임의의 특정한 부류일 필요는 없다. 그의 중쇄 (HC)의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류로 할당될 수 있다. 이뮤노글로불린의 5종의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 나뉘어질 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 불린다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 형상은 널리 공지되어 있다.
본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항원-결합 단편" (또는 간단히 "항체 부분")은 항원 (예를 들어, αvβ8 인테그린)과 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유하는 항체의 1개 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 용어 항체의 "항원-결합 단편" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 디술피드-연결된 Fv (dsFv), 및 항-이디오타입 (항-Id) 항체 및 인트라바디를 포함한다. 게다가, Fv 단편의 2개의 도메인 VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 재조합 방법을 사용하여 이들이 단일 단백질 쇄로서 제조되게 할 수 있는 합성 링커에 의해 이들을 연결시킬 수 있고, 여기서 VL 및 VH 영역은 쌍형성하여 1가 분자를 형성한다 (단일 쇄 Fv (scFv)로서 공지됨; 예를 들어, 문헌 [Bird et al., Science 242:423-426 (1988) 및 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원-결합 단편"에 포괄되는 것으로 의도된다. 다른 형태의 단일 쇄 항체, 예컨대 디아바디도 또한 포괄된다. 디아바디는 VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄 상에서 발현되지만 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써 도메인이 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍형성하게 되어 2개의 항원 결합 부위를 생성하는 2가의 이중특이적 항체이다 (예를 들어, 문헌 [Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-1123] 참조).
항체는 인간, 원숭이, 돼지, 말, 토끼, 개, 고양이, 마우스 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 포유동물, 또는 다른 동물, 예컨대 조류 (예를 들어, 닭), 어류 (예를 들어, 상어), 및 낙타류 (예를 들어, 라마)로부터 유래될 수 있다.
항체의 "가변 영역"은 단독의 또는 조합된 항체 경쇄의 가변 영역 (VL) 또는 항체 중쇄의 가변 영역 (VH)을 지칭한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각, 초가변 영역 (HVR)으로도 공지되어 있는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역 (FR)으로 이루어지고, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. 특히 CDR 영역 외부의 (즉, 프레임워크 영역 내의) 아미노산 잔기에서 치환을 포함하는, 대상 가변 영역의 변이체가 요망되는 경우에, 대상 가변 영역을 대상 가변 영역과 동일한 정규 부류의 CDR1 및 CDR2 서열을 함유하는 다른 항체의 가변 영역과 비교함으로써 적절한 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 아미노산 치환을 확인할 수 있다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196(4): 901-917, 1987).
특정 실시양태에서, CDR의 한정적 묘사 및 항체의 결합 부위를 포함하는 잔기의 확인은 항체의 구조를 해석하고/하거나 항체-리간드 복합체의 구조를 해석함으로써 달성된다. 특정 실시양태에서, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다양한 기술, 예컨대 X선 결정학에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 사용하여 CDR 영역을 확인하거나 근사화할 수 있다. 특정 실시양태에서, 다양한 분석 방법을 사용하여 CDR 영역을 확인하거나 근사화할 수 있다. 이러한 방법의 예는 카바트(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의, AbM 정의, 접촉 정의, 및 입체형태적 정의를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
CDR을 형성하는 아미노산 잔기를 넘버링하기 위한 여러 넘버링 방법이 관련 기술분야에 존재한다. 카바트 넘버링 방법은 항체에서 잔기를 넘버링하기 위한 표준이고, 또한 전형적으로 CDR을 확인하는데 사용된다. 예를 들어, 문헌 [Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8]을 참조한다. 코티아 정의는 카바트 정의와 유사하지만, 코티아 정의는 특정 구조적 루프 영역의 위치를 고려한다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17; Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-83]을 참조한다. AbM 정의는 항체 구조를 모델링하는 옥스포드 몰레큘라 그룹(Oxford Molecular Group)에서 제조된 컴퓨터 프로그램의 통합 스위트를 사용한다. 예를 들어, 문헌 [Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; "AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd]을 참조한다. AbM 정의는 지식 데이터베이스와 순이론적 방법, 예컨대 문헌 [Samudrala et al., 1999, "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198]에 기재된 것의 조합을 사용하여 1차 서열로부터 항체의 3차 구조를 모델링한다.
접촉 정의는 입수가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다. 예를 들어, 문헌 [MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45]을 참조한다. 본원에서 CDR의 "입체형태적 정의"로 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 이루는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166]을 참조한다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고 이들이 특정한 잔기 또는 잔기의 군이 항원 결합에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 보다 짧아지거나 보다 길어질 수 있을지라도, 적어도 카바트 CDR의 일부와 중첩될 것이다. 본원에 사용된 CDR은 접근법들의 조합을 포함하여, 관련 기술분야에 공지된 임의의 접근법에 의해 정의되는 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 방법은 임의의 이들 접근법에 따라 정의된 CDR을 사용할 수 있다. 1개 초과의 CDR을 함유하는 임의의 주어진 실시양태의 경우에, CDR은 카바트, 코티아, 확장형, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태적 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.
항체 또는 그에 의해 특이적으로 결합되는 항원과 관련하여 본원에 사용된 "접촉 잔기"는 동족 항체/항원 상에 존재하는 아미노산 잔기의 중원자의 4 Å 이하 이내에 있는 적어도 1개의 중원자 (즉, 수소가 아님)를 포함하는 항체/항원 상에 존재하는 아미노산 잔기를 지칭한다.
"프레임워크" (FR) 잔기는 CDR 잔기 이외의 항체 가변 도메인 잔기이다. VH 또는 VL 도메인 프레임워크는 하기 구조: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4의, CDR이 사이에 배치된 4개의 프레임워크 하부-영역, FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
가변 도메인 내의 잔기는 전형적으로 카바트에 따라 넘버링되며, 이는 항체 컴파일링의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용되는 넘버링 시스템을 제공한다. 문헌 [Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]을 참조한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 그 내로의 삽입에 상응하는, 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음에 단일 아미노산 삽입물 (카바트에 따라 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기 (예를 들어, 카바트에 따라 잔기 82a, 82b 및 82c)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 항체 서열을 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 상동성 영역에서 정렬함으로써 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. 카바트 넘버링을 배정하기 위한 다양한 알고리즘이 이용가능하다. 가변 영역 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H2, 및 CDR-H3에 카바트 넘버링을 배정하기 위해 아비시스(Abysis)의 버전 2.3.3 배포로 실행되는 알고리즘 (www.abysis.org)이 사용될 수 있고, 이어서 CDR-H1에 대해 AbM 정의가 사용될 수 있다.
본원에 사용된 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종의 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 집단을 구성하는 개별 항체들은 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원 부위에 대해 지시되는 것이다. 추가로, 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 특징이 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 것임을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495]에 최초로 기재되었던 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 것과 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수도 있다. 모노클로날 항체는 또한 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 본원에 사용된 "인간화" 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 이뮤노글로불린, 이뮤노글로불린 쇄, 또는 그의 단편 (예컨대 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)인, 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화 항체는 수용자의 CDR로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이다. 인간화 항체는 수용자 항체에서도, 이입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않지만, 항체 성능을 추가로 정밀화 및 최적화시키기 위해 포함되는 잔기를 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 친화도 성숙될 수 있다. 예를 들어, 친화도 성숙 항체는 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 생산될 수 있다 (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:`9-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-9; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896; 및 WO2004/058184).
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 구체적으로 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다.
용어 "키메라 항체"는 가변 영역 서열이 하나의 종으로부터 유래되고 불변 영역 서열이 또 다른 종으로부터 유래된 항체, 예컨대 가변 영역 서열이 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역 서열이 인간 항체로부터 유래되거나 또는 그 반대인 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 상기 용어는 또한 하나의 종으로부터의 하나의 개체 (예를 들어, 제1 마우스)로부터의 V 영역 및 동일한 종으로부터의 또 다른 개체 (예를 들어, 제2 마우스)로부터의 불변 영역을 포함하는 항체를 포괄한다.
용어 "항원 (Ag)"은 Ag를 인식하는 항체 (Ab)를 생성하거나 또는 발현 라이브러리 (예를 들어, 특히 파지, 효모 또는 리보솜 디스플레이 라이브러리)를 스크리닝하기 위해 면역적격 척추동물의 면역화에 사용되는 분자 엔티티를 지칭한다. 본원에서, Ag는 보다 광범위하게 언급되고, 일반적으로 Ab에 의해 특이적으로 인식되는 표적 분자를 포함하는 것으로 의도되며, 따라서 Ab를 생성하기 위한 면역 공정에 사용되거나 또는 Ab를 선택하기 위한 라이브러리 스크리닝에 사용되는 분자의 단편 또는 모방체를 포함한다. 따라서, αvβ8 인테그린에 결합하는 본 발명의 항체의 경우에, 포유동물 종으로부터의 전장 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간, 원숭이, 마우스 및 래트 αvβ8 인테그린) (그의 단량체 및 다량체, 예컨대 이량체, 삼량체 등 포함), 뿐만 아니라 αvβ8 인테그린의 말단절단된 및 다른 변이체가 항원으로서 지칭된다.
일반적으로, 용어 "에피토프"는 항체가 특이적으로 결합하는 항원 (예를 들어, 단백질, 핵산, 탄수화물, 또는 지질 등)의 부위 또는 영역, 즉 항체와 물리적으로 접촉하는 부위 또는 영역을 지칭한다. 따라서, 용어 "에피토프"는 항체의 항원-결합 영역 중 1개 이상에서 항체에 의해 인식되고 결합될 수 있는 분자의 그 부분을 지칭한다. 전형적으로, 에피토프는 "항체 또는 그의 항원-결합 부분" (Ab)과 그의 상응하는 항원 사이의 분자 상호작용의 맥락에서 정의된다. 에피토프는 종종 분자, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄의 표면 그룹화로 이루어지고, 특정의 3차원 구조적 특징 뿐만 아니라 특정의 전하 특징을 갖는다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 단백질 에피토프일 수 있다. 단백질 에피토프는 선형 또는 입체형태적일 수 있다. 선형 에피토프에서, 단백질 및 상호작용하는 분자 (예컨대, 항체) 사이의 모든 상호작용 지점은 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 발생한다. "비선형 에피토프" 또는 "입체형태적 에피토프"는 에피토프에 특이적인 항체가 결합하는 항원성 단백질 내의 불연속 폴리펩티드 (또는 아미노산)를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "항원성 에피토프"는 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 통상적인 면역검정에 의해 결정되는 바와 같은, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 일부로서 정의된다. 대안적으로, 발견 과정 동안, 항체의 생성 및 특징화는 바람직한 에피토프에 대한 정보를 규명할 수 있다. 이어서 이러한 정보로부터, 동일한 에피토프에 대한 결합에 대해 항체를 경쟁적으로 스크리닝할 수 있다. 이를 달성하기 위한 접근법은 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 서로 경쟁 또는 교차 경쟁하는 항체, 예를 들어 항원에의 결합에 대해 경쟁하는 항체를 발견하기 위한 경쟁 및 교차 경쟁 연구를 수행하는 것이다.
에피토프에 "우선적으로 결합"하거나 "특이적으로 결합" (본원에서 상호교환가능하게 사용됨)하는 항체는 관련 기술분야에서 널리 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 측정하는 방법도 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 대안적 세포 또는 물질보다 특정한 세포 또는 물질과 보다 빈번하게, 보다 신속하게, 보다 긴 지속기간으로 및/또는 보다 큰 친화도로 반응하거나 회합하는 경우에, 분자는 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타내는 것으로 언급된다. 항체는 다른 물질에 결합하는 것보다 보다 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게, 및/또는 보다 긴 지속기간으로 결합하는 경우에, 표적에 "특이적으로 결합"하거나 "우선적으로 결합"한다. 또한, 항체는 샘플 중에 존재하는 다른 물질에 결합하는 것보다 샘플 중 표적에 대해 보다 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게, 및/또는 보다 긴 지속기간으로 결합하는 경우에, 표적에 "특이적으로 결합"하거나 "우선적으로 결합"한다. 예를 들어, αvβ8 인테그린 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 αvβ8 인테그린 에피토프 또는 비-αvβ8 인테그린 에피토프에 결합하는 것보다 이 에피토프에 보다 큰 친화도, 결합력으로, 보다 용이하게 및/또는 보다 긴 지속기간으로 결합하는 항체이다. 또한, 이러한 정의는, 예를 들어 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다는 것으로 해석되는 것으로 이해된다. 따라서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수는 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다. 일반적으로, 반드시 그러한 것은 아니지만, 결합에 대한 언급은 우선적 결합을 의미한다. "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 특이적 분자를 인식하고 그에 결합하지만, 샘플 중의 다른 분자는 실질적으로 인식하지 않거나 결합하지 않는 화합물, 예를 들어 단백질, 핵산, 항체 등을 포함한다. 예를 들어, 샘플 중의 동족 리간드 또는 결합 파트너 (예를 들어, αvβ8 인테그린에 결합하는 항-αvβ8 인테그린 항체)를 인식하고 그에 결합하지만, 샘플 중의 다른 분자는 실질적으로 인식하지 않거나 결합하지 않는 항체 또는 펩티드 수용체는 그러한 동족 리간드 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합한다. 따라서, 지정된 검정 조건 하에, 명시된 결합 모이어티 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 수용체 또는 그의 리간드 결합 부분)가 특정한 표적 분자에 우선적으로 결합하며, 시험 샘플 중에 존재하는 다른 성분에는 유의한 양으로 결합하지 않는다.
다양한 검정 포맷을 사용하여 관심 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 펩티드를 선택할 수 있다. 항원과 특이적으로 반응하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 동족 리간드 또는 결합 파트너와 특이적으로 결합하는 수용체 또는 그의 리간드 결합 부분을 확인하는데 사용될 수 있는 많은 검정 중에서 특히, 예를 들어 고체 상 ELISA 면역검정, 면역침전, 비아코어™ (지이 헬스케어, 뉴저지주 피스카타웨이), KinExA, 형광-활성화 세포 분류 (FACS), 옥테트(Octet)™ (포르테바이오, 인크.(ForteBio, Inc.), 캘리포니아주 멘로 파크) 및 웨스턴 블롯 분석이 있다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 노이즈의 적어도 2배, 보다 전형적으로 배경의 10배 초과, 보다 더 전형적으로 배경의 50배 초과, 보다 전형적으로 배경의 100배 초과, 보다 더 전형적으로 배경의 500배 초과, 보다 더 전형적으로 배경의 1000배 초과, 보다 더 전형적으로 배경의 10,000배 초과일 것이다. 추가적으로, 항체는 평형 해리 상수 (KD)가 ≤ 1 μM, 바람직하게는 ≤ 100 nM, 보다 바람직하게는 ≤ 10 nM, 보다 더 바람직하게는 ≤ 100 pM, 보다 더 바람직하게는 ≤ 10 pM, 및 보다 더 바람직하게는 ≤ 1 pM인 경우에 항원에 "특이적으로 결합"하는 것으로 언급된다. 일부 실시양태에서, 항체는 평형 해리 상수 (KD)가 ≤ 7 nM인 경우에 항원에 "특이적으로 결합"하는 것으로 언급된다.
용어 "결합 친화도"는 2개의 분자, 예를 들어 항체 또는 그의 단편과 항원 사이의 비-공유 상호작용의 강도의 척도로서 본원에 사용된다. 용어 "결합 친화도"는 1가 상호작용 (내인성 활성)을 기재하는데 사용된다.
추가적으로, αvβ8 인테그린-발현 세포에 대한 항-αvβ8 인테그린 항체의 결합 친화도를 결정하기 위해, 세포 결합 실험을 수행하여 겉보기 친화도를 결정할 수 있다. 표적을 발현하는 세포에 대한 항체 결합의 겉보기 친화도는, 항원 결합 집단의 기하 평균 형광 강도 (gMFI)를 유동 세포측정법에 의해 정량화한 평형 결합 적정 곡선의 EC50으로서 계산될 수 있다.
1가 상호작용을 통한 2개의 분자, 예를 들어 항체 또는 그의 단편과 항원 사이의 결합 친화도는 해리 상수 (KD)의 결정에 의해 정량화될 수 있다. 다음으로 KD는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 방법 (비아코어)을 사용하여 복합체 형성 및 해리의 동역학을 측정함으로써 결정될 수 있다. 1가 복합체의 회합 및 해리에 상응하는 속도 상수는 각각 회합 속도 상수 ka (또는 kon) 및 해리 속도 상수 kd (또는 koff)로 지칭된다. KD는 방정식 KD = kd / ka를 통해 ka 및 kd와 관련된다. 해리 상수의 값은 널리 공지된 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 예를 들어 문헌 [Caceci et al., (1984, Byte 9: 340-362)]에 제시된 바와 같은 방법에 의해 심지어 복합 혼합물에 대해서도 연산될 수 있다. 예를 들어, KD는 문헌 [Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432)]에 개시된 바와 같은 이중-필터 니트로셀룰로스 필터 결합 검정을 사용하여 확립될 수 있다. 표적 항원에 대한 리간드, 예컨대 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 다른 표준 검정이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이는 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯, RIA, 및 유동 세포측정 분석, 및 본원의 다른 곳에 예시된 다른 검정을 포함한다. 항체의 결합 동역학 및 결합 친화도는 또한, 관련 기술분야에 공지된 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해, 예를 들어 비아코어™ 시스템 또는 KinExA를 사용하여 평가될 수 있다.
항원에 대한 항체의 결합을, 표적의 또 다른 리간드, 예컨대 또 다른 항체 또는 표적과 달리 결합하는 가용성 수용체에 의한 표적의 결합과 비교하는 경쟁적 결합 검정이 실시될 수 있다. 50% 억제가 발생되는 농도는 Ki로서 공지되어 있다. 이상적 조건 하에, Ki는 KD와 등가이다. Ki 값은 결코 KD보다 낮지 않을 것이므로, KD에 대한 상한치를 제공하기 위해 Ki의 측정을 편리하게 대체시킬 수 있다.
상이한 분자 상호작용과 연관된 결합 친화도의 상기 정의에 따라, 예를 들어 주어진 항원에 대한 상이한 항체의 결합 친화도를 비교하는 것은 개개의 항체/항원 복합체에 대한 KD 값을 비교하는 것에 의해 비교될 수 있다. 항체 또는 다른 결합 파트너에 대한 KD 값은 관련 기술분야에 널리 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. KD를 결정하기 위한 하나의 방법은, 전형적으로 바이오센서 시스템, 예컨대 비아코어® 시스템을 사용하여 표면 플라즈몬 공명을 사용하는 것이다.
유사하게, 상호작용의 특이성은 관심 상호작용, 예를 들어 항체와 항원 사이의 특이적 상호작용에 대한 KD 값을 결정하고, 이를 비관심 상호작용, 예를 들어 αvβ8 인테그린에 결합하지 않는 것으로 공지된 대조군 항체의 상호작용의 KD 값과 비교함으로써 평가될 수 있다.
그의 표적과 특이적으로 결합하는 항체는 그의 표적과 고친화도로 결합할 수 있고, 즉 상기 논의된 바와 같이 낮은 KD를 나타낼 수 있고, 다른 비-표적 분자와 보다 낮은 친화도로 결합할 수 있다. 예를 들어, 항체는 비-표적 분자에 1 x 10-6 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10-5 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10-4 M 이상, 보다 바람직하게는 1 x 10-3 M 이상, 보다 더 바람직하게는 1 x 10-2 M 이상의 KD로 결합할 수 있다. 본 발명의 항체는 바람직하게는, 또 다른 비-αvβ8 인테그린 분자에의 결합에 대한 그의 친화도보다 적어도 2-배, 10-배, 50-배, 100-배, 200-배, 500-배, 1,000-배 또는 10,000-배 또는 그 초과의 친화도로 그의 표적에 결합할 수 있다.
항체와 관련하여 본원에 사용된 용어 "경쟁하다"는 제1 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 결합과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합하여, 제1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합의 결과가 제2 항체의 부재 하에서의 제1 항체의 결합과 비교하여 제2 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 것을 의미한다. 제2 항체가 그의 에피토프에 결합하는 것이 또한 제1 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 대안적인 경우도 가능하지만, 반드시 그러할 필요는 없다. 즉, 제2 항체는 제1 항체가 그의 각각의 에피토프에 결합하는 것을 억제하지 않으면서 제1 항체는 제2 항체가 그의 에피토프에 결합하는 것을 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 동일한 정도, 보다 큰 정도, 또는 보다 적은 정도와 관계없이 다른 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드의 결합을 검출가능하게 억제하는 경우에, 항체는 그의 각각의 에피토프(들)의 결합에 대해 서로 "교차 경쟁"하는 것으로 언급된다. 경쟁 및 교차 경쟁 항체 둘 다가 본 발명에 포괄된다. 이러한 경쟁 또는 교차 경쟁이 일어나는 메카니즘 (예를 들어, 입체 장애, 입체형태적 변화, 또는 공통 에피토프 또는 그의 부분에 대한 결합)과는 관계없이, 통상의 기술자는 본원에 제공되는 교시내용에 기초하여 본원에 개시된 방법에 이러한 경쟁 및/또는 교차 경쟁 항체가 포괄되며 유용할 수 있음을 인지할 것이다.
표준 경쟁 검정을 사용하여 2종의 항체가 서로 경쟁하는지 여부를 결정할 수 있다. 항체 경쟁에 대한 하나의 적합한 검정은, 전형적으로 바이오센서 시스템 (예컨대 비아코어® 시스템)을 사용하는 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 기술을 사용하여 상호작용의 정도를 측정할 수 있는 비아코어 기술의 사용을 수반한다. 예를 들어, SPR은 하나의 항체가 제2 항체의 결합을 억제하는 능력을 결정하는 시험관내 경쟁적 결합 억제 검정에 사용될 수 있다. 항체 경쟁을 측정하기 위한 또 다른 검정은 ELISA-기반 접근법을 사용한다.
추가로, 경쟁에 기초하여 항체를 "비닝"하기 위한 고처리량 과정이 국제 특허 출원 번호 WO2003/48731에 기재되어 있다. 하나의 항체 (또는 단편)가 또 다른 항체 (또는 단편)의 αvβ8 인테그린에의 결합을 감소시킨다면, 경쟁이 존재한다. 예를 들어, 상이한 항체가 순차적으로 첨가되는, 순차적 결합 경쟁 검정이 사용될 수 있다. 제1 항체는 포화에 근접한 결합에 도달할 때까지 첨가될 수 있다. 이어서, 제2 항체가 첨가된다. 제2 항체의 αvβ8 인테그린에 대한 결합이 검출되지 않거나, 또는 제1 항체 부재 하의 병행 검정 (이 값은 100%로 설정될 수 있음)과 비교하여 유의하게 감소 (예를 들어, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 감소)되는 경우에, 2종의 항체는 서로 경쟁하는 것으로 간주된다.
또한, 여러 항체 사이의 잠재적 에피토프를 평가하기 위해 인간 및 마우스 αvβ8 인테그린 단백질 사이의 도메인 스와핑을 사용하는 예시적인 항체 에피토프 비닝 검정이 실시예 9에 제공된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공된 교시내용에 기초하여, 서로에 대해 적어도 2개의 항체의 표적에 대한 결합을 결정하기 위해 사용될 수 있는 관련 기술분야에 공지된 매우 다양한 검정이 존재하고, 이러한 검정은 본원에 포함된다는 것을 인지할 것이다.
항-αvβ8 인테그린 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 특징화될 수 있다. 예를 들어, 한 방법은 그것이 결합하는 에피토프를 확인하는 것, 또는 "에피토프 맵핑"이다. 예를 들어, 문헌 [Chapter 11 of Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999]에 기재된 바와 같이, 항체-항원 복합체의 결정 구조 규명, 경쟁 검정, 유전자 단편 발현 검정, 및 합성 펩티드-기반 검정을 비롯하여 단백질 상에서 에피토프의 위치를 맵핑하고 특징화하는 관련 기술분야에 공지된 많은 방법이 존재한다. 추가의 예에서, 에피토프 맵핑을 사용하여 항-αvβ8 인테그린 항체가 결합하는 서열을 결정할 수 있다. 에피토프 맵핑은 다양한 공급업체, 예를 들어 펩스캔 시스템즈(Pepscan Systems) (네덜란드 8219 피에이치 렐리스타드 에델헤르트벡 15)로부터 상업적으로 입수가능하다. 에피토프는 선형 에피토프, 즉 아미노산의 단일 스트레치 내에 함유된 것일 수 있거나, 또는 반드시 단일 스트레치 내에 함유된 것은 아닐 수 있는 아미노산의 3차원 상호작용에 의해 형성된 입체형태적 에피토프일 수 있다. 다양한 길이의 펩티드 (예를 들어, 적어도 4-6개 아미노산 길이)가 단리 또는 합성되어 (예를 들어, 재조합적으로), 항-αvβ8 인테그린 항체를 사용한 결합 검정에 사용될 수 있다.
또한, 항-αvβ8 인테그린 항체가 결합하는 에피토프는 αvβ8 인테그린 서열 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린 서열)로부터 유래된 중첩 펩티드를 사용하고 이러한 항체에 의한 결합을 결정하는 것에 의한 체계적 스크리닝에서 결정될 수 있다. 유전자 단편 발현 검정에 따라, αvβ8 인테그린을 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 무작위로 또는 특이적 유전적 구축에 의해 단편화할 수 있고, αvβ8 인테그린의 발현된 단편과 시험하고자 하는 항체의 반응성을 결정한다. 유전자 단편은, 예를 들어 방사성 아미노산의 존재 하에 PCR에 의해 생성된 후 시험관내에서 전사되고 단백질로 번역될 수 있다. 이어서, 방사성 표지된 αvβ8 인테그린 단편에의 항체의 결합을 면역침전 및 겔 전기영동에 의해 결정한다.
특정 에피토프는 또한 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된 무작위 펩티드 서열의 큰 라이브러리 (파지 라이브러리) 또는 효모 (효모 디스플레이)를 사용하여 확인할 수 있다. 대안적으로, 중첩 펩티드 단편의 한정된 라이브러리를 시험 항체와의 결합에 대해 간단한 결합 검정에서 시험할 수 있다. 추가의 예에서, 항원의 돌연변이유발, 도메인 스와핑 실험 및 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여, 에피토프 결합에 요구되고/거나 충분하고/거나 필요한 잔기를 확인할 수 있다. 예를 들어, αvβ8 인테그린 폴리펩티드의 다양한 잔기를 알라닌으로 대체시킨 돌연변이체 αvβ8 인테그린을 사용하여 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 실험을 수행할 수 있다. 돌연변이체 αvβ8 인테그린에 대한 항체의 결합을 평가함으로써, 항체 결합에 대한 특정한 αvβ8 인테그린 잔기의 중요성을 평가할 수 있다.
항-αvβ8 인테그린 항체를 특징화하는데 사용될 수 있는 또 다른 방법은 동일한 항원, 즉 αvβ8 인테그린 상의 다양한 단편에 결합하는 것으로 공지된 다른 항체와의 경쟁 검정을 사용하여, 항-αvβ8 인테그린 항체가 다른 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하는 것이다. 경쟁 검정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
추가로, 주어진 항체/항원 결합 쌍에 대한 에피토프는 다양한 실험적 및 컴퓨터적 에피토프 맵핑 방법을 사용하여 상이한 상세 수준에서 규정되고 특징화될 수 있다. 실험적 방법은 돌연변이유발, X선 결정학, 핵 자기 공명 (NMR) 분광분석법, 수소/중수소 교환 질량 분광측정법 (H/D-MS) 및 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 다양한 경쟁 결합 방법을 포함한다. 각 방법은 고유한 원리에 의존하기 때문에, 에피토프의 기재는 이를 결정하는 방법과 밀접하게 연결된다. 따라서, 주어진 항체/항원 쌍에 대한 에피토프는 사용된 에피토프 맵핑 방법에 따라 차별적으로 규정될 것이다.
그의 가장 상세한 수준에서, Ag와 Ab 사이의 상호작용에 대한 에피토프는 Ag-Ab 상호작용에 존재하는 원자 접촉을 규정하는 공간 좌표 뿐만 아니라 결합 열역학에 대한 그의 상대적 기여도에 관한 정보에 의해 규정될 수 있다. 덜 상세한 수준에서는, 에피토프가 Ag와 Ab 사이의 원자 접촉을 규정하는 공간 좌표에 의해 특징화될 수 있다. 추가로 덜 상세한 수준에서, 에피토프는 특정 기준에 의해, 예를 들어 Ab 및 Ag 내의 원자 (예를 들어, 중원자, 즉 비-수소 원자) 사이의 거리에 의해 규정되는 바와 같이 그것이 포함하는 아미노산 잔기에 의해 특징화될 수 있다. 추가로 덜 상세한 수준에서, 에피토프는 기능을 통해, 예를 들어 다른 Ab와의 경쟁 결합에 의해 특징화될 수 있다. 에피토프는 또한, 또 다른 아미노산에 의한 치환이 Ab와 Ag 사이의 상호작용의 특징을 변경시킬 아미노산 잔기를 포함하는 것으로서 보다 일반적으로 규정될 수 있다 (예를 들어, 알라닌 스캐닝 사용).
사용된 에피토프 맵핑 방법에 따라 에피토프의 기재 및 정의가 상이한 상세 수준에서 수득된다는 사실로부터, 동일한 Ag 상의 상이한 Ab에 대한 에피토프를 비교하는 것은 상이한 상세 수준에서 유사하게 수행될 수 있다는 결론이 나온다.
아미노산 수준에서 기재된, 예를 들어 X선 구조로부터 결정된 에피토프는, 이들이 동일한 아미노산 잔기 세트를 함유하는 경우에 동일한 것으로 언급된다. 에피토프는 적어도 1개의 아미노산이 에피토프에 의해 공유되는 경우에 중첩되는 것으로 언급된다. 에피토프는 에피토프에 의해 공유되는 아미노산 잔기가 전혀 없는 경우에 별개인 (고유한) 것으로 언급된다.
경쟁 결합을 특징으로 하는 에피토프는 상응하는 항체의 결합이 상호 배타적인 경우, 즉 한 항체의 결합이 다른 항체의 동시 또는 연속 결합을 배제하는 경우에 중첩되는 것으로 언급된다. 에피토프는 항원이 상응하는 항체 둘 다의 결합을 동시에 수용할 수 있는 경우에 별개인 (고유한) 것으로 언급된다.
용어 "파라토프"의 정의는 상기 "에피토프"의 정의로부터 관점을 반전시킴으로써 유래된다. 따라서, 용어 "파라토프"는 항원에 특이적으로 결합하는 항체 상의 부위 또는 영역, 즉 본원의 다른 곳에서 "접촉"으로서 정의된 바와 같이 항원 (αvβ8 인테그린, 또는 그의 부분)과 접촉하는 항체 상의 아미노산 잔기를 지칭한다.
주어진 항체/항원 쌍에 대한 에피토프 및 파라토프는 상용 방법에 의해 확인할 수 있다. 예를 들어, 에피토프의 일반적인 위치는 상이한 단편 또는 변이체 αvβ8 인테그린 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체의 능력을 평가함으로써 결정할 수 있다. 항체와 접촉하는 αvβ8 인테그린 내의 특이적 아미노산 (에피토프), 및 αvβ8 인테그린과 접촉하는 항체 내의 특이적 아미노산 (파라토프)은 또한, 상용 방법, 예컨대 실시예에 기재된 방법을 사용하여 결정할 수 있다. 예를 들어, 항체와 표적 분자를 합할 수 있고, 항체/항원 복합체를 결정화할 수 있다. 복합체의 결정 구조를 결정할 수 있고, 이를 사용하여 항체와 그의 표적 사이의 상호작용의 특이적 부위를 확인할 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 본원에 구체적으로 개시된 본 발명의 항체와 동일한 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)의 에피토프 또는 도메인과 결합할 수 있다. 이러한 확인 목적을 위해 사용될 수 있는 분석 및 검정은 실시예 1-26에 기재된 바와 같은 생물학적 활성 검정에서 관심 항체와 αvβ8 인테그린 수용체 사이의 αvβ8 인테그린의 결합에 대한 경쟁을 평가하는 검정을 포함한다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 본원에 기재된 바와 같이 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)과의 결합에 대해 본 발명의 또 다른 항체와 경쟁 또는 교차-경쟁하는 능력을 가질 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 αvβ8 인테그린 또는 본원에 개시된 항체에 의해 결합되는 αvβ8 인테그린의 적합한 단편 또는 변이체에의 결합에 대해 본원에 기재된 항체와 경쟁 또는 교차-경쟁할 수 있다.
즉, 제1 항체가 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 제2 항체와 경쟁하지만, 제2 항체가 먼저 αvβ8 인테그린에 결합된 경우에는 경쟁하지 않는다면, 이는 제2 항체와 "경쟁"하는 것으로 간주된다 (또한 단방향성 경쟁으로도 지칭됨). 어느 항체가 먼저 αvβ8 인테그린에 결합되었는지에 상관없이 항체가 또 다른 항체와 경쟁하는 경우이면, 항체는 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 다른 항체와 "교차-경쟁"한다. 이러한 경쟁 또는 교차-경쟁 항체는 표준 결합 검정에서 본 발명의 공지된 항체와 경쟁/교차-경쟁하는 능력에 기초하여 확인될 수 있다. 예를 들어 비아코어™ 시스템을 사용하는 것에 의한, 예를 들어 SPR, ELISA 검정 또는 유동 세포측정법을 사용하여 경쟁/교차-경쟁을 입증할 수 있다. 이러한 경쟁/교차 경쟁은 2개의 항체가 동일하거나, 중첩되거나 또는 유사한 에피토프에 결합한다는 것을 시사할 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체는 시험 항체가 표적 분자 상의 결합 부위에 대해 참조 항체와 경쟁/교차-경쟁할 수 있는지 여부를 평가하는 결합 검정을 포함하는 방법에 의해 확인할 수 있다. 경쟁적 결합 검정을 수행하는 방법은 본원에 개시되어 있고/거나 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어 이는 본 발명의 참조 항체가 표적 분자에 결합할 수 있는 조건을 사용하여 항체를 표적 분자에 결합시키는 것을 수반할 수 있다. 이어서, 항체/표적 복합체를 시험/제2 항체에 노출시킬 수 있고, 시험 항체가 항체/표적 복합체로부터 본 발명의 참조 항체를 대체할 수 있는 정도를 평가할 수 있다. 대안적 방법은 항체 결합을 허용하는 조건 하에 시험 항체를 표적 분자와 접촉시킨 다음, 그러한 표적 분자가 결합할 수 있는 본 발명의 참조 항체를 첨가하고, 본 발명의 참조 항체가 항체/표적 복합체로부터 시험 항체를 대체할 수 있는 정도 또는 표적에 동시에 결합할 수 있는 정도 (즉, 비-경쟁 항체)를 평가하는 것을 수반할 수 있다.
본 발명의 참조 항체가 표적에 결합하는 것을 억제하는 시험 항체의 능력은, 시험 항체가 표적에의 결합에 대해 본 발명의 참조 항체와 경쟁할 수 있으므로, 시험 항체가 본 발명의 참조 항체와 동일한, 또는 실질적으로 동일한 αvβ8 인테그린 단백질 상의 에피토프 또는 영역에 결합한다는 것을 입증한다. 이러한 방법에서 본 발명의 참조 항체와 경쟁하는 것으로 확인된 시험 항체도 또한 본 발명의 항체이다. 시험 항체가 본 발명의 참조 항체와 동일한 영역에서 αvβ8 인테그린에 결합할 수 있고 본 발명의 참조 항체와 경쟁할 수 있다는 사실은, 시험 항체가 본 발명의 항체와 동일한 결합 부위에서 리간드로서 작용할 수 있고, 따라서 시험 항체가 참조 항체의 작용을 모방할 수 있고, 따라서 본 발명의 항체라는 것을 시사한다. 이는 본원의 다른 곳에서 보다 충분하게 기재된 바와 같은 검정을 사용하여, 시험 항체의 존재 하의 αvβ8 인테그린의 활성을 달리 동일한 조건 하에 참조 항체의 존재 하의 αvβ8 인테그린의 활성과 비교하는 것에 의해 확인될 수 있다.
본 발명의 참조 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 본원에 기재된 바와 같은 항체, 예를 들어, 표 1의 항체, 및 αvβ8 인테그린에 결합하는 능력을 보유하는 본원에 기재된 바와 같은 그의 임의의 변이체 또는 단편일 수 있다.
앞서 본원의 다른 곳에 언급된 바와 같이, 특이적 결합은 표적이 아닌 분자에 대한 항체의 결합을 참조하여 평가될 수 있다. 이러한 비교는 표적에 결합할 수 있는 항체의 능력을 또 다른 분자에 결합할 수 있는 항체의 능력과 비교함으로써 이루어질 수 있다. 이러한 비교는 KD 또는 Ki의 평가에서 상기 기재된 바와 같이 이루어질 수 있다. 이러한 비교에 사용된 다른 분자는 표적 분자가 아닌 임의의 분자일 수 있다. 바람직하게는, 다른 분자는 표적 분자와 동일하지 않다. 바람직하게는 표적 분자는 표적 분자의 단편이 아니다.
특이적 결합을 결정하기 위해 사용된 다른 분자는 표적에 대한 구조 또는 기능에 있어서 비관련될 수 있다. 예를 들어, 다른 분자는 비관련 물질 또는 환경에 수반되는 물질일 수 있다.
특이적 결합을 결정하기 위해 사용된 다른 분자는 표적 분자, 예를 들어 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린)과 동일한 생체내 경로에 수반되는 또 다른 분자일 수 있다. 본 발명의 항체가 이러한 또 다른 분자를 초과하는 αvβ8 인테그린에 대한 특이성을 반드시 갖게 함으로써, 원치않는 생체내 교차 반응성을 회피할 수 있다.
본 발명의 항체는 표적 분자와 관련된 일부 분자에 결합할 수 있는 능력을 보유할 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 항체는 특정한 표적 분자에 대한 특이성을 가질 수 있다. 예를 들어, 이는 본원에 기재된 바와 같은 하나의 표적 분자에 결합할 수 있지만, 본원에 기재된 것과 상이한 표적 분자에는 결합할 수 없거나 또는 유의하게 감소된 친화도로 결합할 수 있다. 예를 들어, 전장 성숙한 인간 αvβ8 인테그린을 표적으로서 사용할 수 있지만, 그러한 표적에 결합하는 항체는, 예를 들어 다른 종으로부터의 다른 αvβ8 인테그린 단백질, 예컨대 다른 포유동물 αvβ8 인테그린에는 결합할 수 없거나 또는 보다 낮은 친화도로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 및 마우스 αvβ8 인테그린 둘 다에 결합한다.
"Fc 융합" 단백질은 1종 이상의 폴리펩티드가 Fc 폴리펩티드에 작동가능하게 연결된 단백질이다. Fc 융합체는 이뮤노글로불린의 Fc 영역을 융합 파트너와 조합한다.
"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. "변이체 Fc 영역"은 적어도 1개의 아미노산 변형으로 인해 천연 서열 Fc 영역의 아미노산 서열과 상이하지만 천연 서열 Fc 영역의 적어도 하나의 이펙터 기능은 유지하는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 1개의 아미노산 치환, 예를 들어 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환을 갖고, 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역 내에 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 서열 동일성, 가장 바람직하게는 이와 적어도 약 90% 서열 동일성, 보다 바람직하게는 이와 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 서열 동일성을 보유할 것이다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 항체의 "불변 영역"은 단독의 또는 조합된 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을 지칭한다.
본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 "IgG Fc 영역", "Fc 영역", "Fc 도메인" 및 "Fc"는 IgG 분자의 파파인 소화에 의해 수득되는 결정화가능한 단편과 상관된 IgG 분자의 부분을 지칭한다. 본원에 사용된 용어는 제1 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인을 제외한 항체의 불변 영역에 관한 것이고, 추가로 그 영역의 부분에 관한 것이다. 따라서, Fc는 IgA, IgD, 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인, 및 이들 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단, 또는 그의 부분을 지칭한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc는 이뮤노글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3 (C 감마 2 및 C 감마 3) 및 Cγ1 (C 감마 1) 및 Cγ2 (C 감마 2) 사이의 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 C226 또는 P230에서 그의 카르복실-말단까지의 잔기를 포함하는 것으로 정의되고, 여기서 넘버링은 문헌 [Kabat et al., 1991]에 기재된 바와 같은 문헌 [Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85]의 Eu 인덱스에 따른다. 전형적으로, Fc 도메인은 인간 IgG1 불변 도메인의 아미노산 잔기 약 236에서 약 447을 포함한다. 예시적인 인간 야생형 IgG1 Fc 도메인 아미노산 서열은 서열식별번호: 81 및 서열식별번호: 82 (임의적인 말단 리신 (K) 잔기 포함)에 제시된다. Fc 폴리펩티드는 단리된 이 영역을 지칭할 수 있거나, 또는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 Fc 융합 단백질과 관련하여 이 영역을 지칭할 수 있다.
중쇄 불변 도메인은 Fc 영역을 포함하고, 추가로 IgG 중쇄의 CH1 도메인 및 힌지 뿐만 아니라 CH2 및 CH3 (및, 임의로, IgA 및 IgE의 CH4) 도메인을 포함한다.
"기능적 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 적어도 하나의 이펙터 기능을 보유한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성; 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향-조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능에는 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인 (예를 들어, 항체 가변 도메인 또는 그의 항원-결합 단편)과 조합될 것이 요구되고, 이러한 항체 이펙터 기능을 평가하기 위해 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정을 사용하여 평가할 수 있다.
"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역 뿐만 아니라 그의 자연 발생 변이체를 포함한다.
"변이체 Fc 영역"은 적어도 1개의 아미노산 변형에 의해 천연 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다.
"Fc 수용체" 및 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 일부 실시양태에서, FcγR은 천연 인간 FcR이다. 일부 실시양태에서, FcR은 IgG 항체에 결합하는 것 (감마 수용체)이고, FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함하며, 이들은 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 주로 그의 세포질 도메인이 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (예를 들어, 문헌 [Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은, 예를 들어, 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)]에 고찰되어 있다. 향후 확인될 것을 포함한 다른 FcR이 본원의 용어 "FcR"에 포괄된다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 또한 모체 IgG의 태아로의 전달 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) 및 이뮤노글로불린의 항상성 조절을 담당하는 신생아 수용체 FcRn을 포함한다. FcRn에의 결합의 측정 방법은 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ghetie and Ward., Immunol. Today 18(12):592-598 (1997); Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637- 640 (1997); Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004); WO 2004/92219 (Hinton et al.)] 참조).
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에서 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 Clq 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어 B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화를 포함한다.
"인간 이펙터 세포"는 1개 이상의 FcR을 발현하고 이펙터 기능을 수행하는 백혈구이다. 특정 실시양태에서, 세포는 적어도 FcγRIII을 발현하고 ADCC 이펙터 기능(들)을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연 킬러 (NK) 세포, 단핵구, 대식세포, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함한다. 이펙터 세포는 천연 공급원, 예를 들어 혈액으로부터 단리될 수 있다.
"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포 (예를 들어 NK 세포, 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR) 상에 결합된 분비된 Ig가, 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합한 후 세포독소로 표적 세포를 사멸시킬 수 있도록 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. ADCC를 매개하기 위한 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]의 464페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337 또는 미국 특허 번호 6,737,056 (Presta)에 기재된 바와 같은 시험관내 ADCC 검정을 수행할 수 있다. 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 PBMC 및 NK 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 바와 같이 동물 모델에서 평가될 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열을 갖는 추가의 항체 및 증가 또는 감소된 ADCC 활성은, 예를 들어, 미국 특허 번호 7,923,538 및 미국 특허 번호 7,994,290에 기재되어 있다.
"증진된 ADCC 활성"을 갖는 항체는 모 항체와 비교하여 시험관내 또는 생체내에서 ADCC를 매개하는데 더 효과적인 항체를 지칭하고, 여기서 항체 및 모 항체는 적어도 1개의 구조적 측면에서 상이하고, 검정에 사용되는 이러한 항체 및 모 항체의 양은 본질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, 항체 및 모 항체는 동일한 아미노산 서열을 갖지만, 항체는 비-푸코실화된 것이고 모 항체는 푸코실화된 것이다. 일부 실시양태에서, ADCC 활성은 본원에 개시된 바와 같은 시험관내 ADCC 검정을 사용하여 결정될 것이지만, 예를 들어 동물 모델 등에서의, ADCC 활성을 결정하기 위한 다른 검정 또는 방법이 고려된다. 일부 실시양태에서, 증진된 ADCC 활성을 갖는 항체는 Fc 감마 RIIIA에 대해 증진된 친화도를 갖는다.
"변경된" FcR 결합 친화도 또는 ADCC 활성을 갖는 항체는 모 항체와 비교하여 증진되거나 감소된 FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성을 갖는 것이고, 여기서 항체 및 모 항체는 적어도 1개의 구조적 측면에서 상이하다. FcR에 대해 "증가된 결합을 나타내는" 항체는 모 항체보다 더 나은 친화도로 적어도 1개의 FcR에 결합한다. FcR에 대해 "감소된 결합을 나타내는" 항체는 모 항체보다 더 낮은 친화도로 적어도 1개의 FcR에 결합한다. FcR에 대해 감소된 결합을 나타내는 이러한 항체는 FcR에 대해 인지가능한 결합을 거의 또는 전혀 보유하지 않을 수 있고, 예를 들어 천연 서열 IgG Fc 영역과 비교하여 FcR에 대해 0-20 퍼센트 결합을 보유할 수 있다.
"Fc 감마 RIIIA에 대한 증진된 친화도"는 모 항체보다 Fc 감마 RIIIA (또한, 일부 경우에, CD 16a로도 지칭됨)에 대해 더 큰 친화도를 갖는 항체를 지칭하고, 여기서 항체 및 모 항체는 적어도 1개의 구조적 측면에서 상이하다.
"당형태"는 다양한 탄수화물 단위의 연결을 포함하는 복잡한 올리고사카라이드 구조를 지칭한다. 이러한 구조는, 예를 들어, 문헌 [Essentials of Glycobiology Varki et al., eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1999)]에 기재되어 있으며, 문헌은 또한 표준 당생물학 명명법에 대한 개관을 제공한다. 이러한 당형태는 G2, G1, G0, G-1, 및 G-2를 포함하나 이에 제한되지는 않는다 (예를 들어, 국제 특허 공개 번호 WO 99/22764 참조).
"글리코실화 패턴"은 단백질 (예를 들어, 당형태)에, 뿐만 아니라 당형태 (들)가 단백질의 펩티드 백본에 공유 부착되는 부위(들)에, 보다 구체적으로는 이뮤노글로불린 단백질에 공유 부착된 탄수화물 단위의 패턴으로 정의된다.
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에서의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 전형적 보체 경로의 활성화는 그의 동족 항원에 결합되는 (적절한 하위부류의) 항체에의 보체 시스템의 제1 성분 (Clq)의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위하여, 예를 들어 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정이 수행될 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열 및 증가 또는 감소된 Clq 결합 능력을 갖는 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551 B l, 미국 특허 번호 7,923,538, 미국 특허 번호 7,994,290 및 WO 1999/51642에 기재되어 있다. 또한 예를 들어, 문헌 [Idusogie et al., J.]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "야생형 아미노산", "야생형 IgG", "야생형 항체" 또는 "야생형 mAb"는 특정 집단 (예를 들어, 인간, 마우스, 래트, 세포 등) 내에서 자연적으로 발생하는 아미노산 또는 핵산의 서열을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "αvβ8 인테그린"은 일반적으로 알파 인테그린 서브유닛 (예를 들어 인테그린 알파-V 서브유닛, 예를 들어 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 예를 들어 ITGAV) 및 베타 인테그린 서브유닛 (예를 들어 인테그린 서브유닛 베타 8, 예를 들어 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 예를 들어 ITGB8)을 포함하는 단백질 복합체를 지칭한다. 본원에 사용된 "인간 αvβ8 인테그린"은 일반적으로, 예를 들어 서열식별번호: 77의 서열을 포함하는 인간 ITGAV 알파 서브유닛 및 예를 들어 서열식별번호: 78의 서열을 포함하는 인간 ITGB8 베타 서브유닛을 포함하는 αvβ8 인테그린을 지칭한다. 본원에 사용된 "뮤린 αvβ8 인테그린" 또는 "마우스 αvβ8 인테그린"은 일반적으로, 예를 들어 서열식별번호: 79의 서열을 포함하는 뮤린 ITGAV 알파 서브유닛 및 예를 들어 서열식별번호: 80의 서열을 포함하는 뮤린 ITGB8 베타 서브유닛을 포함하는 αvβ8 인테그린을 지칭한다. 용어 αvβ8 인테그린은 전형적으로 인간, 시노몰구스 원숭이, 래트, 토끼, 및 마우스를 포함하나 이에 제한되지는 않는 αvβ8 인테그린 상동체 및 오르토로그를 포함한다. 본원에 사용된 "αvβ8 인테그린"은 전형적으로 포유동물 αvβ8 인테그린, 예를 들어, 인간, 래트, 마우스, 비-인간 영장류, 소, 양, 또는 돼지αvβ8 인테그린 (예를 들어, 각각 인간, 래트, 마우스, 비-인간 영장류, 소, 양, 또는 돼지로부터의 인테그린 알파-V 서브유닛 및 인테그린 베타 8 서브유닛을 포함함)을 지칭한다. 인테그린 알파-V 서브유닛의 비제한적인 예시적인 예는 인간 (예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 P06756.2, 서열식별번호: 77 참조), 시노몰구스 원숭이 (예를 들어, 서열식별번호: 84 참조), 및 마우스 (예를 들어, 서열식별번호: 79 참조) αvβ8 인테그린을 포함한다. 인테그린 베타 8 서브유닛의 비제한적인 예시적인 예는 인간 (예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 P26012.1, 서열식별번호: 78 참조), 시노몰구스 원숭이 (예를 들어, 서열식별번호: 85 참조), 및 마우스 (예를 들어, 서열식별번호: 80 참조) αvβ8 인테그린을 포함한다. 용어 "αvβ8 인테그린"은 또한 이러한 αvβ8 인테그린 서브유닛 분자의 단편, 변이체, 이소형, 및 다른 상동체를 포괄한다. 변이체 αvβ8 인테그린 분자는 일반적으로 자연 발생 αvβ8 인테그린과 동일한 유형의 활성, 예컨대 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 αvβ8 인테그린 리간드에 결합하는 능력, 수용체-매개 활성을 유도하는 능력, 및 본 발명의 항체 또는 그의 항원-단편에 결합하거나 결합하지 않는 능력을 갖는 것을 특징으로 할 것이다.
TGFβ 및 LAP에 대한 예시적인 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, TGFβ1 및 LAP를 포함하는 전구체 폴리펩티드 (예를 들어, 인간 서열 유니프롯 수탁 번호 P01137)는 LAP에 상응하는 유니프롯 수탁 번호 P01137의 약 아미노산 30-278 및 인간 TGFβ1에 상응하는 유니프롯 수탁 번호 P01137의 약 아미노산 279-390으로 번역후 프로세싱된다. 유사하게, TGFβ3 및 LAP를 포함하는 전구체 폴리펩티드 (예를 들어, 인간 서열 유니프롯 수탁 번호 P10600)는 LAP에 상응하는 유니프롯 수탁 번호 P10600의 약 아미노산 24-300 및 인간 TGFβ3에 상응하는 유니프롯 수탁 번호 10600의 약 아미노산 301-412로 번역후 프로세싱된다.
αvβ8 인테그린은 αvβ8 인테그린의 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 12개 이상 또는 15개 이상의 표면 접근가능한 잔기를 포함할 수 있다. 표적 분자는 αvβ8 인테그린으로부터의 공지된 에피토프를 포함할 수 있다.
본원의 다른 곳에 요약된 바와 같이, 항체 분자의 특정 위치는 변경될 수 있다. 본원에 사용된 "위치"는 단백질의 서열 내의 자리를 의미한다. 위치는 순차적으로 또는 확립된 포맷에 따라 넘버링될 수 있고, 예를 들어 EU 인덱스 및 카바트 인덱스를 사용하여 항체의 아미노산 잔기를 넘버링할 수 있다. 예를 들어, 위치 297은 인간 항체 IgG1 내의 위치이다. 상응하는 위치는 일반적으로 다른 모 서열과의 정렬을 통해 상기 요약된 바와 같이 결정된다.
본원에 사용된 "잔기"는 단백질 내의 위치 및 그의 연관 아미노산 실체를 의미한다. 예를 들어, 아스파라긴 297 (또한 Asn297로도 지칭됨, 또한 N297로도 지칭됨)은 인간 항체 IgG1 내의 잔기이다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드 쇄를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 그의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 쇄 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 구조에 대한 변형이 존재하는 경우에, 이는 쇄의 어셈블리 전에 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열에 비-뉴클레오티드 성분이 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해, 중합 후에 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은 예를 들어 자연 발생 뉴클레오티드 중 1개 이상의 유사체로의 "캡" 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 예를 들어 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카르바메이트 등) 및 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것, 펜던트 모이어티, 예컨대 예를 들어 단백질 (예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)을 함유하는 것, 삽입제 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등)를 갖는 것, 킬레이트화제 (예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)를 함유하는 것, 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)을 갖는 것 뿐만 아니라, 폴리뉴클레오티드(들)의 비변형된 형태를 포함한다. 추가로, 당에 원래 존재하는 임의의 히드록실 기는, 예를 들어 포스포네이트 기, 포스페이트 기에 의해 대체되거나, 표준 보호기에 의해 보호되거나, 또는 추가의 뉴클레오티드에 대한 추가의 연결을 제조하기 위해 활성화될 수 있거나, 또는 고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH가 인산화되거나, 또는 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자의 유기 캡핑 기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 히드록실이 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한, 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보시클릭 당 유사체, 알파- 또는 베타-아노머 당, 에피머 당, 예컨대 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비-시클릭 유사체 및 무염기성 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 메틸 리보시드를 비롯하여, 일반적으로 관련 기술분야에 공지된 유사한 형태의 리보스 또는 데옥시리보스 당을 함유할 수 있다. 1개 이상의 포스포디에스테르 연결이 대안적인 연결 기에 의해 대체될 수 있다. 이들 대안적인 연결 기는 포스페이트가 P(O)S ("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), (O)NR2 ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2 ("포름아세탈")로 대체된 실시양태를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H 또는 임의로 에테르 (-O-) 연결을 함유하는 치환되거나 비치환된 알킬 (1-20 C), 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아랄딜이다. 폴리뉴클레오티드 내의 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 상기 기재는 RNA 및 DNA를 비롯하여 본원에서 지칭되는 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.
본원에 사용된 "벡터"는 숙주 세포 내에 1개 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달할 수 있는, 바람직하게는 이를 발현시킬 수 있는 구축물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 회합된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜 내에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 특정 진핵 세포, 예컨대 생산자 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"숙주 세포"는 폴리뉴클레오티드 삽입물의 혼입을 위한 벡터(들)의 수용자일 수 있거나 수용자였던 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 상기 자손은 자연적, 우연적 또는 고의의 계획적인 돌연변이로 인해 원래의 모 세포와 반드시 (형태학적으로 또는 게놈 DNA 상보성에서) 완전하게 동일할 필요는 없을 수 있다. 숙주 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 생체내 형질감염 및/또는 형질전환된 세포를 포함한다.
숙주 세포는 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 예시적인 진핵 세포는 포유동물 세포, 예컨대 영장류 또는 비-영장류 동물 세포; 진균 세포, 예컨대 효모; 식물 세포; 및 곤충 세포를 포함한다.
세포 배양, 및 단백질 또는 폴리펩티드의 발현에 감수성인 임의의 숙주 세포가 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물이다. 발현을 위한 숙주로서 입수가능한 포유동물 세포주는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (ATCC)으로부터 입수가능한 다수의 불멸화된 세포주를 포함한다. 비제한적인 예시적인 포유동물 세포는 NS0 세포, HEK 293 및 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 및 그의 유도체, 예컨대 293-6E 및 CHO DG44 세포, CHO DXB11, 및 포텔리젠트® CHOK1SV 세포 (바이오와(BioWa)/론자, 뉴저지주 앨런데일)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 포유동물 숙주 세포는 또한 인간 자궁경부 암종 세포 (HeLa, ATCC CCL 2), 새끼 햄스터 신장 (BHK, ATCC CCL 10) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 및 인간 간세포성 암종 세포 (예를 들어, Hep G2)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 포유동물 세포의 다른 비제한적 예는 인간 망막모세포 (PER.C6®; 크루셀(CruCell), 네덜란드 라이덴); SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주 293 (HEK 293) 또는 현탁 배양물 중 성장을 위해 서브클로닝된 293 세포 (Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36:59); 마우스 세르톨리 세포 (TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251); 원숭이 신장 세포 (CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1 587); 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포 (W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포 (Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51); TR1 세포 (Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68); MRC 5 세포; FS4 세포; 인간 간세포암 세포주 (Hep G2); 및 BALB/c 마우스 골수종 세포주 (NS0/1, ECACC 번호 85110503), NS0 세포 및 Sp2/0 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 수많은 골수종 세포주를 포함한다.
추가적으로, 폴리펩티드 또는 단백질을 발현하는 임의의 수의 상업적으로 및 비상업적으로 입수가능한 세포주가 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상이한 세포주가 상이한 영양 요건을 가질 수 있고/거나 최적 성장 및 폴리펩티드 또는 단백질 발현을 위해 상이한 배양 조건을 필요로 할 수 있다는 것을 인지할 것이며, 필요에 따라 조건들을 변형시킬 수 있을 것이다.
본 발명은 곤충 세포계, 효모 발현 시스템, 또는 포유동물 세포계, 예컨대 비제한적으로 CHO 세포에서의 관심 단백질의 생산, 예컨대 발현을 위한 관련 기술분야에 공지되어 있거나 본원에 개시된 임의의 진핵 발현 시스템을 포함한다.
본원에 사용된 "발현 제어 서열"은 핵산의 전사를 지시하는 핵산 서열을 의미한다. 발현 제어 서열은 프로모터, 예컨대 구성적 또는 유도성 프로모터, 또는 인핸서일 수 있다. 발현 제어 서열은 전사될 핵산 서열에 작동가능하게 연결된다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 용어 "리더 펩티드" 또는 "리더 서열" 또는 "리더 신호 서열" 또는 "신호 서열"은 핵산 분자의 5' 말단 상에 및/또는 폴리펩티드의 N-말단에 또는 그 근처에 존재할 수 있는 임의의 핵산 서열 또는 이에 의해 코딩된 아미노산 서열을 의미하며, 존재하는 경우, 이는 세포로부터의 폴리펩티드의 분비를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 목적지 소기관으로의 폴리펩티드의 수송을 매개할 수 있다. 이러한 리더 서열은 예를 들어 ATGGGATGGAGCTGTATCATCCTCTTCTTGGTAGCAACAGCTACAGGCGTGCACTCC (서열식별번호: 187)를 포함하는 핵산 서열, 및 이에 의해 코딩된 아미노산 서열, 예컨대 비제한적으로 MGWSCIILFLVATATGVHS (서열식별번호: 188)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명은 폴리펩티드를 목적하는 소기관, 예를 들어, 내형질 세망으로 수송하고/거나 세포로부터 분비될 수 있는, 관련 기술분야에 공지되어 있거나 확인될 이들 및 임의의 다른 리더 신호 (핵산 및 아미노산 서열)를 포괄한다. 일반적으로, 신호 펩티드는 성숙 폴리펩티드로부터 제거되고/거나 그에 존재하지 않는다.
본원에 사용된 "치료"는 유익하거나 목적하는 임상 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 목적하는 임상 결과는 다음 중 한 가지 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 생존율 개선 (사망률 감소), 질환에 대한 염증 반응의 감소, 조직 섬유증의 양의 감소, 질환 병변의 외관 상의 개선, 국소 부위에 대한 병리학적 병변의 제한, 질환으로부터의 손상 정도의 감소, 질환의 지속기간 감소, 및/또는 질환과 관련된 증상의 수, 정도 또는 지속기간 감소. 용어는 본 발명의 화합물 또는 작용제를 투여하여 질환의 증상, 합병증, 또는 생화학적 징후의 개시를 방지 또는 지연시키거나, 증상을 완화시키거나, 또는 질환, 상태, 또는 장애의 추가적인 발달을 저지 또는 억제하는 것을 포함한다. 치료는 예방적 (질환의 개시를 방지 또는 지연시키거나, 또는 그의 임상적 또는 준임상적 증상의 징후를 방지하기 위함)이거나, 또는 질환의 징후 이후에 증상의 치료적 억제 또는 완화일 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환, 상태 또는 장애는 암이다.
본원에 사용된 용어 "암"은 조직병리학적 유형 또는 침습 병기에 관계없이, 모든 유형의 암성 성장 또는 종양원성 과정, 전이성 조직 또는 악성으로 형질전환된 세포, 조직, 또는 기관을 포함하는 것으로 의도된다. 암성 장애의 예는 고형 종양, 혈액암, 연부 조직 종양, 및 전이성 병변을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 고형 종양의 예는 다양한 기관계의 악성종양, 예를 들어, 육종, 및 암종 (선암종 및 편평 세포 암종 포함), 예컨대 간, 폐, 유방, 림프, 위장 (예를 들어, 결장), 비뇨생식관 (예를 들어, 신장, 요로상피 세포), 전립선 및 인두에 영향을 미치는 것을 포함한다. 선암종은 악성종양, 예컨대 대부분의 결장암, 직장암, 신세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 소장암 및 식도암을 포함한다. 편평 세포 암종은, 예를 들어, 폐, 식도, 피부, 두경부 영역, 구강, 항문, 및 자궁경부에서의 악성종양을 포함한다. 한 실시양태에서, 암은 흑색종, 예를 들어, 진행 병기 흑색종이다. 상기 언급된 암의 전이성 병변도 또한 본 발명의 방법 및 조성물을 사용하여 치료될 수 있다. 본원에 개시된 항체 분자를 사용하여 성장이 치료, 예를 들어 감소될 수 있는 예시적인 암은 전형적으로 면역요법에 반응성인 암을 포함한다.
"완화시키는 것"은 항-αvβ8 인테그린 항체를 투여하지 않은 것과 비교하여 1종 이상의 증상을 약화시키는 것 또는 개선을 의미한다. "완화시키는 것"은 또한 증상의 지속기간을 단축시키는 것 또는 감소를 포함한다.
본원에 사용된 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 "유효 투여량" 또는 "유효량"은 어느 1종 이상의 유익하거나 목적하는 결과에 영향을 미치기에 충분한 양이다. 보다 구체적 측면에서, 유효량은 질환, 예를 들어 암의 증상을 방지, 경감 또는 완화시켜 주고/거나 치료하고자 하는 대상체의 생존을 연장시킨다. 예방적 사용의 경우에, 유익하거나 목적하는 결과는 위험의 제거 또는 감소, 중증도의 감소, 또는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 질환의 발달 동안 나타나는 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 비롯한 질환의 개시의 지연을 포함한다. 치료적 사용의 경우에, 유익하거나 목적하는 결과는 αvβ8 인테그린 매개된 질환, 장애 또는 상태의 1종 이상의 증상의 감소, 질환을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, 또 다른 의약의 효과의 증진, 및/또는 환자의 질환 진행의 지연과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효 투여량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적상, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 예방적 또는 치유적 치료를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하기에 충분한 양이다. 임상적 문맥에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 또는 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "유효 투여량"은 1종 이상의 치료제의 투여와 관련하여 고려될 수 있고, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우에 유효량으로 주어진 것으로 간주될 수 있다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1종 이상의 요법 (예를 들어, 본원에서 "제2 요법"으로 지칭됨)과 조합되어 투여될 수 있다. "와 조합되어"는, 이들 전달 방법이 본원에 기재된 범주 내일지라도, 요법 또는 치료제가 동시에 투여되어야 하고/거나 함께 전달되기 위해 제제화되어야 한다는 것을 암시하는 것으로 의도되지 않는다. 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1종 이상의 다른 추가의 요법 또는 치료제와 공동으로, 그 전에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 제2 요법, 예를 들어, 다른 작용제 또는 치료 프로토콜은 임의의 순서로 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 작용제는 그러한 작용제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케줄로 투여될 것이다. 추가로, 이러한 조합에 이용되는 추가의 치료제는 단일 조성물로 함께 투여될 수 있거나 또는 상이한 조성물로 개별적으로 투여될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 일부 실시양태에서, 조합되어 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 것보다 더 낮을 것이다.
"상승작용적 조합" 또는 "상승작용적으로 작용하는 조합"은, 조합된 개별 요법의 단순한 상가적 효과와 비교할 때 예측되지 않는 증가된 효과를 나타내는 조합이다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 또한, 가축 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 닭 등), 스포츠 동물, 애완동물, 영장류, 말, 개, 고양이, 마우스 및 래트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 αvβ8 인테그린의 그의 수용체에 대한 결합 및 그에 의해 매개되는 신호전달에 의해 매개되거나 또는 그와 연관된 질환, 장애 또는 상태에 걸릴 위험이 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 본원에 기재된 바와 같은 장애 또는 상태, 예를 들어 암을 갖는다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체" 또는 "제약상 허용되는 부형제"는 활성 성분과 조합되는 경우에 상기 성분이 생물학적 활성을 보유하게 하고 대상체의 면역계와 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 예는 임의의 표준 제약 담체, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 오일/물 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여에 바람직한 희석제는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 또는 통상의 (0.9%) 염수이다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 공지된 통상적인 방법에 의해 제제화된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 및 Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000] 참조).
예시적인 방법 및 물질이 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질도 또한 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
II. 항-αvβ8 인테그린 항체
본 발명은 αvβ8 인테그린에 결합하는 항체 및 그의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 바람직하게는, 항체는 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하며, 즉 이는 αvβ8 인테그린에 결합하지만, 다른 αv 인테그린 (예를 들어, αvβ3 인테그린, αvβ5 인테그린 및 αvβ6 인테그린)에는 검출가능하게 결합하지 않거나 보다 낮은 친화도로 결합한다. 본 발명은 추가로 변경된 이펙터 기능을 나타내는 항-αvβ8 인테그린 항체에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 변경된 이펙터 기능은 감소된 ADCC이다. 일부 실시양태에서, 변경된 이펙터 기능은 감소된 CDC이다. 본 발명은 또한 이러한 항체를 포함하는 조성물, 뿐만 아니라 치료 및 제약 용도를 비롯한 이러한 항체의 용도에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 9,969,804에 개시된 바와 같은, 예를 들어 본 명세서의 서열식별번호: 20-33 및 71-76에 제시된 바와 같은, 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11 (또한 ADWA11, mADWA11, mADWA-11로도 지칭됨)로부터 유래되었지만 동일하지는 않은, 경쇄 서열 또는 그의 단편 및 중쇄 서열 또는 그의 단편을 갖는 항체를 포함하는 하기 중 임의의 것 또는 조성물 (제약 조성물 포함)을 제공한다.
본 발명에 유용한 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄 (ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 단편을 포함하는 융합 단백질 (예를 들어, 도메인 항체), 인간화 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유 변형된 항체를 비롯한 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 형상의 이뮤노글로불린 분자를 포괄할 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간, 또는 임의의 다른 기원일 수 있다 (키메라 또는 인간화 항체 포함). 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 인간 또는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 키메라 항체이다.
본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 및 마우스 항체의 생산을 위한 일반적 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있고/거나 본원에 기재되어 있다.
초기 확인에 이어, 후보 항-αvβ8 인테그린 항체의 활성은 표적화된 생물학적 활성을 시험하는 것으로 공지된 생물검정에 의해 추가로 확인되고 정밀화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 시험관내 세포 검정을 사용하여 후보 항-αvβ8 인테그린 항체를 추가로 특징화한다. 예를 들어, 생물검정을 사용하여 후보를 직접적으로 스크리닝할 수 있다. 항-αvβ8 인테그린 항체를 확인하고 특징화하는 방법의 일부가 실시예에 상세하게 기재되어 있다.
하기 표 1은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 뮤린, 키메라, 및 인간화 항-αvβ8 인테그린 항체에 대한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열의 요약이다. 중쇄 및 경쇄 CDR의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열, 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열, 및 중쇄 및 경쇄의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열이 본 표에 제시된다. 일반적으로, 구체적으로 나타내지 않는 한, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체는 표 1에 제시된 바와 같은 1개 이상의 카바트 CDR 및/또는 코티아 초가변 루프의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체는 표 1에 제시된 바와 같은 1개 이상의 VH 및/또는 VL 서열의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체는 표 1에 기재된 바와 같은 1개 이상의 프레임워크 영역 (예를 들어, FR1, FR2, FR3, 및 FR4)의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일반적으로, 표 1에 제시된 바와 같이, 각각의 VH 및 VL 서열은 전형적으로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다는 것이 이해될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체가 중쇄 폴리펩티드 상에 C-말단 리신 (K) 아미노산 잔기를 포함하는 (예를 들어, 인간 IgG1 중쇄가 말단 리신을 포함하는) 경우에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 리신 잔기가 클리핑되어 C-말단 리신 잔기가 결여된 중쇄를 갖는 항체가 생성될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 추가적으로, 항체 중쇄는 리신을 코딩하지 않는 핵산을 사용하여 생산될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 달리 존재하는 말단 리신이 존재하지 않는 중쇄를 포함한다.
표 1: αvβ8 인테그린 항체 및 다른 펩티드에 대한 아미노산 및 뉴클레오티드 서열.
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
*일부 펩티드에서, 메티오닌이 노르류신으로 대체되었다.
표 14: 카바트에 따른 예시적인 중쇄 CDR
Figure pct00024
Figure pct00025
표 15: 카바트에 따른 예시적인 경쇄 CDR
Figure pct00026
Figure pct00027
표 16: 코티아에 따른 예시적인 중쇄 CDR
Figure pct00028
Figure pct00029
표 17: 코티아에 따른 예시적인 경쇄 CDR
Figure pct00030
Figure pct00031
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11-13, 17-19, 25-27, 31-33, 또는 71-76 중 적어도 1개의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 8-10, 14-16, 22-24, 또는 28-30 중 적어도 1개의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 20의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 34-46, 88-91 또는 93 중 어느 하나의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 47-69 또는 92 중 어느 하나의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 124 또는 서열식별번호: 182의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 123의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 124 또는 서열식별번호: 182의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 123의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, 및 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열에 제시된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3 아미노산 서열, 및 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3, 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 6)에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함할 수 있다. VH는 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 6)에 대해 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. VH는 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 6)을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함할 수 있다. VH는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. VH는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열로 이루어진 VH를 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7, 47-69 및 92 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 7)과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. VL은 서열식별번호: 7, 47-69 및 92 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 7)과 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. VL은 서열식별번호: 7, 47-69 및 92 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 7)을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. VL은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열과 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. VL은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열로 이루어진 VL을 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 6)을 포함하는 VH를 포함하고, IgG1 불변 도메인 (예를 들어, 서열식별번호: 81, 82, 181 또는 184 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 불변 도메인)을 추가로 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 항원-결합 단편, 변이체는 전장 중쇄에 대해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 보존적 또는 비-보존적 치환, 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 부가 및/또는 결실을 포함한다. 추가의 측면에서, 변이체는 전장 중쇄와 적어도 65%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 공유하며, 여기서 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 중쇄를 포함하고, 서열식별번호: 181 또는 서열식별번호: 184의 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 불변 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열로 이루어진 VH를 포함하고, 서열식별번호: 181 또는 서열식별번호: 184의 아미노산 서열로 이루어진 IgG1 불변 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능(들)이 결여되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된; 특히 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 (예를 들어, 인간) 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어 카파 (예를 들어, 서열식별번호: 83의 아미노산 서열에 의해 코딩됨) 또는 람다의 (예를 들어, 인간) 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. 불변 영역은 항체의 특성을 변형시키기 위해 (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능, 및/또는 보체 기능 중 1종 이상을 증가 또는 감소시키기 위해) 변경, 예를 들어, 돌연변이될 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능을 갖고; 보체를 고정시킬 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 이펙터 세포를 동원하지 않거나; 보체를 고정시키지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 Fc 수용체에 결합하는 감소된 능력을 갖거나 또는 그러한 능력을 갖지 않는다. 예를 들어, 이는 Fc 수용체에 대한 결합을 지지하지 않는 이소형 또는 하위유형, 단편 또는 다른 돌연변이체이고, 예를 들어 이는 돌연변이되거나 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 갖는다.
항체 불변 영역을 변경시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 변경된 기능, 예를 들어 이펙터 리간드, 예컨대 세포 상의 FcR, 또는 보체의 C1 성분에 대한 변경된 친화도를 갖는 항체는 항체의 불변 부분 내의 적어도 1개의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체함으로써 생산될 수 있다 (예를 들어, EP 388151 A1, 미국 특허 번호 5,624,821 및 미국 특허 번호 5,648,260 참조, 이들 모두의 내용은 본원에 참조로 포함됨). 뮤린 또는 다른 종 이뮤노글로불린에 적용될 경우에 이들 기능을 감소시키거나 제거할 유사한 유형의 변경이 기재될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7, 47-69 및 92 중 어느 하나의 아미노산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 7)을 포함하는 VL을 포함하는 경쇄를 포함하고, 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 카파 불변 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열로 이루어진 VL을 포함하는 경쇄를 포함하고, 서열식별번호: 83의 아미노산 서열로 이루어진 카파 불변 도메인을 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 2의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 (HC)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 2의 아미노산 서열로 이루어진 HC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능(들)이 결여되어 있다.
일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 (HC)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열로 이루어진 HC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능(들)이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열로 이루어진 LC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능이 결여되어 있다.
배선 치환
특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기 중쇄 CDR 서열: (i) 서열식별번호: 22를 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 23을 포함하는 CDR-H2, 및 서열식별번호: 24를 포함하는 CDR-H3; 및/또는 (ii) 하기 경쇄 CDR 서열: 서열식별번호: 25 또는 71을 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 26 또는 72를 포함하는 CDR-L2, 및 서열식별번호: 27 또는 73을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기 중쇄 CDR 서열: (i) 서열식별번호: 28을 포함하는 CDR-H1, 서열식별번호: 29를 포함하는 CDR-H2, 및 서열식별번호: 30을 포함하는 CDR-H3; 및/또는 (ii) 하기 경쇄 CDR 서열: 서열식별번호: 31 또는 74를 포함하는 CDR-L1, 서열식별번호: 32 또는 75를 포함하는 CDR-L2, 및 서열식별번호: 33 또는 76을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 이들은 마우스 CDR이고, 바람직하게는 인간 VH 및 VL 도메인의 맥락으로 그라프팅되거나 달리 부가된다. 매우 다양한 수용자 인간 배선 서열이 이용가능하고, 비-인간 종 항체를 인간에서 사용하기 위해 "인간화"하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있을 것이고, 또한 본원의 다른 곳에서 논의될 것이다. 따라서, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 마우스 CDR 서열이 인간 V 도메인 아미노산 서열의 맥락으로 위치할 수 있음을 인지할 것이다. 그렇게 함에 있어서, 일반적으로 항체 결합 및 원래의 모 (즉, 공여자) 항체의 다른 바람직한 특징을 보존하기 위해 수용자 인간 배선 서열에 대한 변화가 이루어진다. CDR 및 프레임워크 영역 (FW) 둘 다는 다음과 같이 조작될 수 있다.
특정 실시양태에서, CDR-L1에서, 서열식별번호: 25, 31, 71, 또는 74의 아미노산 서열 대비 11개 이하, 또는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 특정 실시양태에서, CDR-L2에서, 서열식별번호: 26, 32, 72, 또는 75의 아미노산 서열 대비 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 특정 실시양태에서, CDR-L3에서, 서열식별번호: 27, 33, 73, 76의 아미노산 서열 대비 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 일부 실시양태에서, CDR-H1에서, 서열식별번호: 22 또는 28의 아미노산 서열 대비 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 일부 실시양태에서, CDR-H2에서, 서열식별번호: 23 또는 29의 아미노산 서열 대비 17개 이하, 16개 이하, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 또는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 일부 실시양태에서, CDR-H3에서, 서열식별번호: 24 또는 30의 아미노산 서열 대비 12개 이하, 11개 이하, 또는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 치환이 이루어진다. 특정 실시양태에서, 치환(들)은 결합 친화도 (KD) 값을 1000-배 초과, 100-배 초과, 또는 10-배 초과로 변화시키지 않는다. 특정 실시양태에서, 치환은 표 1에 따른 보존적 치환이다.
특정 실시양태에서, 치환은 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2017/0073395 및 문헌 [Townsend et al., 2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112(50):15354-15359]에 기재된 바와 같은, 인간 아미노산 함량을 증가시키고 항체의 면역원성을 잠재적으로 감소시키기 위한, (공여자) CDR 잔기를 상응하는 인간 배선 (수용자) 잔기로 대체하는 인간 배선 치환이다.
항체 CDR에 인간 배선 잔기를 도입하기 위한 방법 및 라이브러리는 미국 특허 출원 공개 번호 2017/0073395, 및 문헌 [Townsend et al., 2015, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112(50):15354-15359]에 상세하게 기재되어 있고, 둘 다는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 배선 VH 프레임워크 서열을 포함하는 VH 프레임워크를 포함할 수 있다. VH 프레임워크 서열은 인간 VH3 배선, VH1 배선, VH5 배선, 또는 VH4 배선으로부터의 것일 수 있다. 바람직한 인간 배선 중쇄 프레임워크는 VH1, VH3, 또는 VH5 배선으로부터 유래된 프레임워크이다. 예를 들어, 하기 배선으로부터의 VH 프레임워크가 사용될 수 있다: IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48 (배선 명칭은 IMGT 배선 정의에 기초함). 바람직한 인간 배선 경쇄 프레임워크는 Vκ 또는 Vλ 배선으로부터 유래된 프레임워크이다. 예를 들어, 하기 배선으로부터의 VL 프레임워크가 사용될 수 있다: IGKV1-39, IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11 (배선 명칭은 IMGT 배선 정의에 기초함). 대안적으로 또는 추가로, 프레임워크 서열은 인간 배선 컨센서스 프레임워크 서열, 예컨대 인간 Vλ1 컨센서스 서열, Vκ1 컨센서스 서열, Vκ2 컨센서스 서열, Vκ3 컨센서스 서열, VH3 배선 컨센서스 서열, VH1 배선 컨센서스 서열, VH5 배선 컨센서스 서열, 또는 VH4 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 프레임워크의 서열은 다양한 공중 데이터베이스, 예컨대 V-베이스, IMGT, NCBI 또는 아비시스로부터 입수가능하다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 배선 VL 프레임워크 서열을 포함하는 VL 프레임워크를 포함할 수 있다. VL 프레임워크는 그것이 유래된 배선과의 기능적 및 구조적 유사성을 여전히 유지하면서 1개 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, VL 프레임워크는 인간 배선 VL 프레임워크 서열과 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하다. 일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 배선 VL 프레임워크 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함하는 VL 프레임워크를 포함한다. 일부 측면에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실은 단지 프레임워크 영역에만 존재한다. 일부 측면에서, % 동일성은 CDR로서 본원에 정의된 그러한 부분을 제외한 VL과의 유사성에 기초한다.
인간 배선 VL 프레임워크는 DPK9 (IMGT 명칭: IGKV1-39, 예를 들어, 서열식별번호: 128)의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 IGKV2-28의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 DPK18 (IMGT 명칭: IGKV2-30)의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 DPK24 (IMGT 명칭: IGKV4-1)의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 HK102_V1 (IMGT 명칭: IGKV1-5)의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 Vg_38K (IMGT 명칭: IGKV3-11)의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vλ 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vλ1 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vλ3 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vκ 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vκ1 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vκ2 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VL 프레임워크는 인간 Vκ3 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다.
일부 측면에서, VL 프레임워크는 DPK9 (서열식별번호: 128)이다. DPK-9의 FW 영역에 대해 각각 99, 97, 97, 96, 80, 76, 66, 97, 97, 96, 76, 및 74 % 동일성을 포함할 수 있고 공통 구조적 특색 (카바트 넘버링) (A) CDR 바로 아래의 잔기 (버니어 구역), L2, L4, L35, L36, L46, L47, L48, L49, L64, L66, L68, L69, L71 , (B) VH/VL 쇄 패킹 잔기: L36, L38, L44, L46, L87 및 (C) 정규 CDR 구조 지지 잔기 L2, L48, L64, L71에서 1개 이하의 아미노산 차이를 포함할 수 있는, 예를 들어 IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11을 포함한, 서열식별번호: 11-13 및 17-19의 CDR; 및 하기 VL 아미노산 서열: 7, 47-69 및 92에 의해 명시된 CDR을 포함하는 다른 유사한 프레임워크 영역도 또한 본 발명의 유리한 항체를 전달할 것으로 예측된다 (문헌 [Lo, "Antibody Humanization by CDR Grafting", (2004) Antibody Engineering, Vol. 248, Methods in Molecular Biology pp 135-159 및 O'Brien and Jones, "Humanization of Monoclonal Antibodies by CDR Grafting", (2003) Recombinant Antibodies for Cancer Therapy, Vol. 207, Methods in Molecular Biology pp 81-100] 참조). 특히 바람직한 것은 DPK9에 대해 각각 99, 97, 97, 96, 80, 76, 66% 동일성을 공유하고 이들 공통 구조적 특색에서 어떠한 아미노산 차이도 갖지 않는 IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, 또는 IGKV3-11의 프레임워크 영역이다. 일부 측면에서, % 동일성은 CDR로서 본원에 정의된 그러한 부분을 제외한 VL과의 유사성에 기초한다.
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 배선 VH 프레임워크 서열을 포함하는 VH 프레임워크를 포함할 수 있다. VH 프레임워크는 그것이 유래된 배선과의 기능적 및 구조적 유사성을 여전히 유지하면서 1개 이상의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, VH 프레임워크는 인간 배선 VH 프레임워크 서열과 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하다. 일부 측면에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 배선 VH 프레임워크 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 포함하는 VH 프레임워크를 포함한다. 일부 측면에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 치환, 부가 또는 결실은 단지 프레임워크 영역에만 존재한다. 일부 측면에서, % 동일성은 CDR로서 본원에 정의된 그러한 부분을 제외한 VH와의 유사성에 기초한다.
인간 배선 VH 프레임워크는, 예를 들어, IGHV3-07 (또한 DP-54로도 공지됨), IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VH 프레임워크는 인간 VH 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VH 프레임워크는 인간 VH3 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VH 프레임워크는 인간 VH5 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VH 프레임워크는 인간 VH1 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다. 인간 배선 VH 프레임워크는 인간 VH4 배선 컨센서스 서열의 프레임워크일 수 있다.
일부 측면에서, VH 프레임워크는 IGHV3-07 (서열식별번호: 127)이다. DP-54의 FW 영역에 대해 각각 93, 92, 92, 99, 97, 97, 96, 96, 94, 94, 93, 92% 동일성을 포함할 수 있고 공통 구조적 특색 (카바트 넘버링) (A) CDR 바로 아래의 잔기 (버니어 구역), H2, H47, H48, 및 H49, H67, H69, H71, H73, H93, H94 , (B) VH/VL 쇄 패킹 잔기: H37, H39, H45, H47, H91, H93 및 (C) 정규 CDR 구조 지지 잔기 H24, H71, H94에서 1개 이하의 아미노산 차이를 포함할 수 있는, IGHV3-07, IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 또는 IGHV3-48을 포함한, 서열식별번호: 8-10 및 14-16의 CDR; 및 하기 VH 아미노산 서열: 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93 중 임의의 것에 의해 명시된 CDR을 포함하는 다른 유사한 프레임워크 영역도 또한 본 발명의 유리한 항체를 전달할 것으로 예측된다 (문헌 [Lo 2004, 및 O'Brien and Jones 2003] 참조). DP-50, IGHV3-30*09, IGHV3-30*15의 예시적인 프레임워크 영역은 DP-54에 대해 각각 93, 92 및 92 % 동일성을 공유하고 이들 공통 구조적 특색에서 어떠한 아미노산 차이도 갖지 않는다. 일부 측면에서, % 동일성은 CDR로서 본원에 정의된 그러한 부분을 제외한 VH와의 유사성에 기초한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (i) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및/또는 (ii) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 66%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 76%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 이들 VL 및 VH 서열의 임의의 조합이 또한 본 발명에 포괄된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 (i) 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 HC; 및/또는 (ii) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함한다. 이들 HC 및 LC 서열의 임의의 조합이 또한 본 발명에 포괄된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 Fc 도메인을 포함한다. Fc 도메인은 IgA (예를 들어, IgA1 또는 IgA2), IgG, IgE, 또는 IgG (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)로부터 유래될 수 있다.
본 발명은 인간 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 잠복성 연관 펩티드 (LAP)와 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다. 예를 들어, 인간 αvβ8 인테그린에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 결합이 인간 αvβ8 인테그린에 대한 LAP의 후속 결합을 방해하는 경우에, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 LAP와 인간 αvβ8 인테그린 결합에 대해 경쟁한다.
본 발명에 의해 제공된 항체 및 항원-결합 단편은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄 (ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 단편을 포함하는 융합 단백질, 도메인 항체 (dAb), 인간화 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유 변형된 항체를 포함한, 요구되는 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 구성의 이뮤노글로불린 분자를 포함한다. 항체 및 항원-결합 단편은 뮤린, 래트, 인간 또는 임의의 다른 기원 (키메라 또는 인간화 항체 포함)의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체이다. 특정 실시양태에서, 항체는 인간 항체이다. 특정 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다.
항-αvβ8 인테그린 항체의 생물학적 활성
αvβ8 인테그린 상의 에피토프에 결합하는 것에 더하여, 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 생물학적 활성을 매개할 수 있다. 즉, 본 발명은 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하고, 하기로부터 선택된 적어도 1종의 검출가능한 활성을 매개하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다:
(i) αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간, 마우스, 시노몰구스 원숭이, 및/또는 래트로부터의 αvβ8 인테그린)에 특이적으로 결합함;
(ii) αvβ8 인테그린 및 잠복성 연관 펩티드 (LAP) 사이의 상호작용을 감소시킴;
(iii) TGF-β 신호전달을 감소시킴;
(iv) αvβ8 인테그린-매개된 TGFβ 활성화를 IC50 ≤10 nM로 효과적으로 차단함;
(v) 비-인간 영장류 (NHP) 오르토로그에 대해 대등한 Kd (5-배 이내)를 가짐;
(vi) 인간 αvβ8에 선택적으로 결합하고, αvβ8의 상동체 (예를 들어, αvβ1, αvβ3, αvβ5 및 αvβ6)에는 검출가능하게 결합하지 않음;
(vii) 단독으로 또는 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 조정제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, CTLA-4의 억제제, 또는 자극 분자, 예를 들어 4-1BB의 효능제와 조합되어 편평 세포 암종, 유방암, 및 결장암으로부터 선택된 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(viii) 항암 요법, 예를 들어 방사선요법과 조합되어 암에 대한 동물 모델에서 성장 억제 및/또는 완전한 종양 퇴행을 유발함;
(ix) 예를 들어 ≤ 10mg/kg으로 투여된 경우에, 동계 종양 이식편 모델에서 종양 성장의 적어도 60% 감소를 나타냄;
(x) 대상체, 예를 들어 마우스 또는 인간 대상체에게 투여된 경우에, 1종 이상의 면역조정제, 예를 들어 체크포인트 억제제의 길항제 또는 체크포인트 활성화제의 효능제, 예를 들어 PD-1, PD-L1, 또는 CTLA-4의 길항제, 또는 면역 반응의 활성화제, 예를 들어 4-1BB 효능제의 존재 하에 항종양 반응을 증가시킴;
(xi) 종양 모델에서 αvβ8 인테그린의 발현에 의존하지 않는 효능을 가짐;
(xii) 예를 들어 단독요법으로서, 종양 미세환경에서 CD8+ GzmB+ T 세포의 존재비를 증가시킴;
(xiii) 예를 들어 편평 세포 암종, 유방암, 및/또는 결장암의 동계 모델에서 체크포인트 억제제의 길항제 (예를 들어, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체)와 조합되어 사용된 경우에 종양 성장의 감소, 예를 들어 적어도 > 80% 감소를 나타냄;
(xiv) 카플란-마이어 분석에 의해 결정된 바와 같이, 대상체, 예를 들어 인간 또는 마우스의 전체 생존에서 통계적으로 유의한 개선을 나타냄;
(xv) 고도의 열 안정성 및 높은 농도에서의 최소 응집을 비롯한 적합한 제제 특성을 나타냄; 또는
(xvi) 대규모 제조 조건에서 재현가능한 발현 및 순도를 나타낼 수 있음.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는다:
i. 뮤린 항체 ADWA11의 KD 미만, 예를 들어 536 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 510, 520, 530, 531, 532, 533, 534, 또는 535 pM)인 KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
ii. 예를 들어 정제된 인간 αvβ8 인테그린에 대해 100 pM 이하 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 pM)인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
iii. 뮤린 항체 ADWA11의 KD 미만, 예를 들어 489 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 460, 470, 480, 485, 486, 487, 또는 488 pM)인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
iv. 뮤린 항체 ADWA11의 KD 미만, 예를 들어 507 pM 미만 (예를 들어, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 370, 400, 450, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 또는 506 pM)인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
v. 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
vi. 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 예를 들어 100 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 95 pM)인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도를 나타냄;
vii. 뮤린 항체 ADWA11보다 낮은, 예를 들어 183 pM 미만 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 181, 또는 182 pM)인, TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
viii. 약 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320 또는 340 pM의, U251 세포에서의 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
ix. 약 126 pM 플러스 또는 마이너스 34 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
x. 약 256 pM 플러스 또는 마이너스 115 pM의 표준 편차의 U251 세포에 대한 EC50;
xi. 약 115 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50;
xii. 약 145 pM 플러스 또는 마이너스 23.7 pM의 표준 편차의 C8-S 세포에 대한 EC50;
xiii. 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
a. 약 0.12 - 0.15 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
b. 약 0.15 - 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
c. 약 36 - 39 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
d. 약 21 - 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2); 및/또는
e. 약 12-17일의 말기 반감기 (t1/2); 또는
xiv. 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대해 어떠한 검출가능한 결합도 나타내지 않음.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 αvβ8 인테그린 + 세포 (예를 들어, αvβ8 인테그린을 발현하는 세포)에 높은 겉보기 친화도로 결합한다. 겉보기 친화도 결합은 표적 단백질 (예를 들어, αvβ8 인테그린)을 발현하는 세포에 대한 항체 결합을 검출하기 위해 유동 세포측정법을 사용하여 평가할 수 있다. 세포는 αvβ8 인테그린을 코딩하는 핵산에 의해 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염될 수 있다. 대안적으로 세포는 그의 표면 상에 αvβ8 인테그린을 자연 발현하는 세포일 수 있다. αvβ8 인테그린 + 세포의 공급원과 무관하게, 세포에 대한 항체의 결합은 관련 기술분야에서 인식되는 다양한 방법을 사용하여 용이하게 평가될 수 있다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간 αvβ8 인테그린, 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린, 마우스 αvβ8 인테그린, 래트 αvβ8 인테그린에 결합한다.
본 발명은 αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하고 αvβ8 인테그린에 의해 매개되는 활성 (예를 들어, TGFβ 신호전달, αvβ8 인테그린과 잠복성 연관 펩티드 (LAP)의 상호작용을 억제함으로써 매개될 수 있음)에 대해 길항작용하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함한다. TGFβ 신호전달에 의해 매개되는 활성의 억제를 결정하기 위한 많은 검정이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 하나의 이러한 검정은 TGFβ 경로 전사활성화 검정이다. 이러한 검정의 한 예에서, TGFβ 신호전달 및 경로 활성화의 마커로서의 역할을 할 수 있는 SMAD의 발현이 루시페라제 리포터의 사용을 통해 모니터링된다. 따라서, 항-αvβ8 인테그린 항체가 αvβ8 인테그린에 결합하고 (예를 들어, αvβ8 인테그린과 LAP의 상호작용을 억제함으로써) TGFβ 신호전달의 효과를 길항작용하는 능력은 항체의 존재 또는 부재 하에 발현되는 SMAD의 수준을 측정함으로써 평가된다. 바람직하게는, 항체는 루시페라제의 용량-의존성 감소를 약 1 pM, 약 2 pM, 약 3 pM, 약 4 pM, 약 5 pM, 약 6 pM, 약 7 pM, 약 8 pM, 약 9 pM, 약 10 pM, 약 20 pM, 약 30 pM, 약 40 pM, 약 50 pM, 약 60 pM, 약 70 pM, 약 80 pM, 약 90 pM, 약 100 pM, 약 125 pM, 약 150 pM, 약 175 pM, 약 200, pM, 약 225 pM, 약 250 pM, 약 275 pM, 약 300 pM, 약 400 pM, 또는 약 500 pM의 EC50 (예를 들어 약 1 pM 내지 약 100 pM의 EC50, 예를 들어 약 1 pM 내지 약 200 pM의 EC50, 예를 들어 약 1 pM 내지 약 300 pM의 EC50, 예를 들어 약 1 pM 내지 약 400 pM의 EC50, 예를 들어 약 1 pM 내지 약 500 pM의 EC50)으로 매개할 수 있다. 보다 바람직하게는, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 TGFβ 신호전달 (예를 들어, TGFβ 전사활성화, 예를 들어, SMAD의 TGFβ 전사활성화)을 약 100 pM의 EC50 (예를 들어 약 5 pM 내지 약 175 pM의 EC50, 예를 들어 약 25 pM 내지 약 175 pM의 EC50, 예를 들어 약 100 pM, 약 105 pM, 약 110 pM, 약 115 pM, 약 120 pM, 약 125 pM, 약 130 pM, 약 135 pM, 약 140 pM, 약 145 pM, 약 150 pM, 약 155 pM, 약 160 pM, 약 165 pM, 약 170 pM, 또는 약 175 pM의 EC50)으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 TGFβ 신호전달 (예를 들어, TGFβ 전사활성화, 예를 들어, SMAD의 TGFβ 전사활성화)을 약 5 nM 미만 (예를 들어, 약 0.001, 0.01, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.1, 5.5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 또는 25 nM 미만)의 EC50으로 억제한다. 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 TGFβ 신호전달 (예를 들어, TGFβ 전사활성화, 예를 들어, SMAD의 TGFβ 전사활성화)을 약 5 nM (예를 들어, 약 0.001, 0.01, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.1, 5.5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 또는 25 nM)의 EC50으로 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 TGFβ 신호전달을 약 145 +/- 23.7 pM의 EC50으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 C8-S에서의 TGFβ 신호전달을 약 145 +/- 23.7pM의 EC50으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 C8-S 세포에서의 TGFβ 신호전달을 약 110 pM 내지 약 180 pM의 EC50으로 억제한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 TGFβ 신호전달을 약 256 +/- 115 pM의 EC50으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 U251 세포에서의 TGFβ 신호전달을 약 256 +/- 115 pM의 EC50으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 U251 세포에서의 TGFβ 신호전달을 약 80 pM 내지 약 400 pM의 EC50으로 억제한다.
본 발명은 인간 αvβ8 인테그린에 결합하지만, 인간 단백질 αvβ3 인테그린, αvβ5 인테그린 또는 αvβ6 인테그린에는 검출가능하게 결합하지 않는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포괄한다.
III. 항-αvβ8 인테그린 항체 발현 및 생산
항-αvβ8 인테그린 항체를 코딩하는 핵산
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 및 변형된 항체를 포함한 임의의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 또한 본원에 기재된 임의의 폴리뉴클레오티드를 제조하는 방법을 제공한다. 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 제조 및 발현될 수 있다.
목적하는 항체, 정의된 항체 단편, 또는 그의 항원-결합 단편, 및 이러한 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 핵산의 서열은 표준 서열분석 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 목적하는 항체, 정의된 항체 단편, 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산 서열은 재조합 생산 및 특징화를 위해 다양한 벡터 (예컨대 클로닝 및 발현 벡터) 내로 삽입될 수 있다. 중쇄, 정의된 항체 단편, 또는 중쇄의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산, 및 경쇄, 정의된 항체 단편, 또는 경쇄의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산은 동일한 벡터 또는 상이한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
상기 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 및 보다 바람직하게는 동일한 아미노산 서열을 코딩한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 2, 3, 및 5-76으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 1종 이상의 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1, 4, 183, 185, 186, 189, 190 또는 191에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드), 또는 서열식별번호: 2, 3, 5-76, 88-93, 123, 124 및 182와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한, 보다 바람직하게는 그와 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 1, 183, 189 또는 191 중 1개 이상으로서 제시된 바와 같은 항체 중쇄를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 1, 183, 189 또는 191과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 4 또는 185 중 1개 이상으로서 제시된 바와 같은 항체 경쇄를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 4 또는 185와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 190에 제시된 바와 같은 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 190과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 186에 제시된 바와 같은 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 186과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 192 또는 193에 제시된 바와 같은 항체 중쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 192 또는 193과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 중쇄 불변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 194에 제시된 바와 같은 항체 경쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 서열식별번호: 194와 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 항체 경쇄 불변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 189에 제시된 바와 같은 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 서열식별번호: 190에 제시된 바와 같은 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 서열식별번호: 185에 제시된 바와 같은 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 수탁 번호 PTA-124917 및/또는 수탁 번호 PTA-124918로 ATCC에 기탁된 플라스미드의 DNA 삽입물의 핵산 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 수탁 번호 PTA-124917 및/또는 수탁 번호 PTA-124918로 ATCC에 기탁된 플라스미드 내의 삽입물의 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 1, 183 및 4에 제시된 바와 같은 1개 이상의 핵산 분자를 포함하는 세포를 제공한다.
본 발명은 서열식별번호: 185, 189 및 190에 제시된 바와 같은 1개 이상의 핵산 분자를 포함하는 세포를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 항-αvβ8 인테그린 항체 (예를 들어, 항-인간 αvβ8 인테그린 항체)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 그의 변이체를 제공하며, 여기서 이러한 변이체 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 임의의 특정 핵산 서열과 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 87%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 공유한다. 이들 양은 제한적인 것으로 의도되지 않고, 언급된 백분율 사이의 증분은 개시내용의 일부로서 구체적으로 고려된다.
본 발명은 본원에 기재된 핵산 분자에 의해 코딩된 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, VH 및 VL 도메인, 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 전장 HC 또는 LC는 별개의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된다. 대안적으로, VH 및 VL 둘 다, 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 HC 및 LC는 단일 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된다.
임의의 이러한 서열에 상보적인 폴리뉴클레오티드도 또한 본 개시내용에 포괄된다. 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 (코딩 또는 안티센스) 또는 이중 가닥일 수 있고, DNA (게놈, cDNA 또는 합성) 또는 RNA 분자일 수 있다. RNA 분자는 인트론을 함유하고 1-대-1 방식으로 DNA 분자에 상응하는 HnRNA 분자, 및 인트론을 함유하지 않는 mRNA 분자를 포함한다. 추가의 코딩 또는 비-코딩 서열이 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 내에 존재할 수 있으나 반드시 그럴 필요는 없고, 폴리뉴클레오티드는 다른 분자 및/또는 지지체 물질에 연결될 수 있으나 반드시 그럴 필요는 없다.
폴리뉴클레오티드는 천연 서열 (즉, 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 내인성 서열)을 포함할 수 있거나, 또는 이러한 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 코딩된 폴리펩티드의 면역반응성이 천연 면역반응성 분자에 비해 저하되지 않도록 1개 이상의 치환, 부가, 결실 및/또는 삽입을 함유한다. 코딩된 폴리펩티드의 면역반응성에 대한 효과는 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체는 천연 항체 또는 그의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 70% 동일성, 일부 실시양태에서 적어도 약 80% 동일성, 일부 실시양태에서 적어도 약 90% 동일성, 및 일부 실시양태에서 적어도 약 95% 동일성을 나타낸다. 이들 양은 제한적인 것으로 의도되지 않고, 언급된 백분율 사이의 증분은 개시내용의 일부로서 구체적으로 고려된다.
2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열은, 2개의 서열 내 뉴클레오티드 또는 아미노산의 서열이 하기 기재된 바와 같이 최대한 상응하게 정렬되었을 때 동일하면 "동일"한 것으로 언급된다. 전형적으로, 2개의 서열 사이의 비교는 비교 윈도우에 걸쳐 서열을 비교하여 서열 유사성의 국부 영역을 확인하고 비교함으로써 수행된다. 본원에 사용된 "비교 윈도우"는 적어도 약 20개의 인접 위치, 통상적으로는 30개 내지 약 75개, 또는 40개 내지 약 50개 인접 위치의 절편을 지칭하고, 여기서 2개의 서열을 최적으로 정렬한 후에 서열을 인접 위치의 수가 동일한 참조 서열과 비교할 수 있다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 디폴트 파라미터를 사용하여 생물정보학 소프트웨어의 레이저진(Lasergene)® 스위트 내의 메갈라인(MegAlign)® 프로그램 (디엔에이스타®, 인크.(DNASTAR®, Inc.), 위스콘신주 매디슨)을 사용하여 수행될 수 있다. 이 프로그램은 하기 참고 문헌에 기재된 여러 정렬 도식을 구체화한다: 문헌 [Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730].
일부 실시양태에서, "서열 동일성의 백분율"은 적어도 20개 위치의 비교 윈도우에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정되고, 여기서 비교 윈도우 내의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 일부는 2개 서열의 최적의 정렬을 위해 참조 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교 시 20 퍼센트 이하, 통상적으로 5 내지 15 퍼센트, 또는 10 내지 12 퍼센트의 부가 또는 결실 (즉, 갭)을 포함할 수 있다. 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 둘 다의 서열에서 발생한 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 참조 서열 내의 전체 위치의 수 (즉, 윈도우 크기)로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산된다.
변이체는 또한 또는 대안적으로, 천연 유전자, 또는 그의 일부 또는 상보체에 실질적으로 상동성일 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오티드 변이체는 천연 항체를 코딩하는 자연 발생 DNA 서열 (또는 상보적 서열)에 중간 정도의 엄격한 조건 하에 혼성화될 수 있다.
적합한 "중간 정도의 엄격한 조건"은 5X SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0)의 용액에서 사전세척하고; 50℃-65℃, 5X SSC에서 밤새 혼성화시킨 후; 0.1 % SDS를 함유하는 각각 2X, 0.5X 및 0.2X SSC로 65℃에서 20분 동안 2회 세척하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 "고도로 엄격한 조건" 또는 "고 엄격도 조건"은 (1) 세척 동안 낮은 이온 강도 및 높은 온도, 예를 들어 50℃에서 0.015 M 염화나트륨/0.0015 M 시트르산나트륨/0.1% 소듐 도데실 술페이트를 사용하거나; (2) 혼성화 동안 42℃에서 변성제, 예컨대 포름아미드, 예를 들어 0.1% 소 혈청 알부민/0.1% 피콜/0.1% 폴리비닐피롤리돈/750 mM 염화나트륨, 75 mM 시트르산나트륨을 함유하는 50 mM 인산나트륨 완충제 (pH 6.5)를 함유하는 50% (v/v) 포름아미드를 사용하거나; 또는 (3) 42℃에서 50% 포름아미드, 5X SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 6.8), 0.1% 피로인산나트륨, 5X 덴하르트 용액, 초음파처리된 연어 정자 DNA (50 μg/mL), 0.1% SDS 및 10% 덱스트란 술페이트를 사용하고, 42℃에서 0.2X SSC (염화나트륨/시트르산나트륨) 및 55℃에서 50% 포름아미드 중에서 세척한 다음, 55℃에서 EDTA가 함유된 0.1X SSC로 이루어진 고엄격도 세척을 수행하는 것이다. 통상의 기술자는 프로브 길이 등과 같은 인자를 조절하기 위해 필요한 온도, 이온 강도 등의 조정 방법을 인식할 것이다.
유전자 코드의 축중성으로 인해 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 많은 뉴클레오티드 서열이 존재한다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 인지할 것이다. 이들 폴리뉴클레오티드 중 일부는 임의의 천연 유전자의 뉴클레오티드 서열에 대해 최소의 상동성을 보유한다. 그럼에도 불구하고, 코돈 용법에서의 차이로 인해 달라지는 폴리뉴클레오티드가 본 개시내용에서 구체적으로 고려된다. 추가로, 본원에 제공되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자의 대립유전자는 본 개시내용의 범주 내에 속한다. 대립유전자는 뉴클레오티드의 1개 이상의 돌연변이 또는 변경, 예컨대 결실, 부가 및/또는 치환의 결과로서 변경된 내인성 유전자이다. 생성된 mRNA 및 단백질은 변경된 구조 또는 기능을 가질 수 있지만, 반드시 그러할 필요는 없다. 대립유전자는 표준 기술 (예컨대, 혼성화, 증폭 및/또는 데이터베이스 서열 비교)을 사용하여 확인될 수 있다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 화학적 합성, 재조합 방법 또는 PCR을 사용하여 수득될 수 있다. 화학적 폴리뉴클레오티드 합성 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본원에 상세하게 기재될 필요가 없다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공되는 서열 및 상업적 DNA 합성기를 사용하여 목적하는 DNA 서열을 생성할 수 있다.
재조합 방법을 사용하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 경우에, 본원에 추가로 논의된 바와 같이, 목적 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 적합한 벡터 내로 삽입할 수 있고, 이어서 상기 벡터를 복제 및 증폭을 위해 적합한 숙주 세포 내로 도입할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 숙주 세포 내로 삽입될 수 있다. 직접 흡수, 세포내이입, 형질감염, F-정합 또는 전기천공에 의해 외인성 폴리뉴클레오티드를 도입하여 세포를 형질전환시킨다. 도입되면, 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포 내에서 비-통합 벡터 (예컨대, 플라스미드)로서 유지될 수 있거나, 또는 숙주 세포 게놈 내로 통합될 수 있다. 이와 같이 증폭된 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 숙주 세포로부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., 1989]을 참조한다.
대안적으로, PCR은 DNA 서열의 재생산을 허용한다. PCR 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 미국 특허 번호 4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 및 4,683,202, 뿐만 아니라 문헌 [PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al., eds., Birkauswer Press, Boston, 1994]에 기재되어 있다.
RNA는 적절한 벡터 내의 단리된 DNA를 사용하여 이를 적합한 숙주 세포 내로 삽입함으로써 수득할 수 있다. 세포가 복제되고 DNA가 RNA로 전사되면, 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., 1989]에 제시된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 RNA를 단리할 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 벡터는 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 유사한 양 (예컨대 유사한 몰량 또는 유사한 질량 양)으로 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 5:1 내지 1:5의 제1 벡터 및 제2 벡터의 몰- 또는 질량-비가 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:1 내지 1:5의 질량 비가 사용된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:2의 질량비가 사용된다.
벡터
일부 실시양태에서, CHO 또는 CHO-유래 세포에서의, 또는 NSO 세포에서의 폴리펩티드의 발현에 최적화된 벡터가 선택된다. 예시적인 이러한 벡터는, 예를 들어, 문헌 [Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)]에 기재되어 있다.
적합한 클로닝 및 발현 벡터는 다양한 성분, 예컨대 프로모터, 인핸서, 및 다른 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 또한 상이한 벡터 내로의 항체 가변 도메인의 후속 클로닝을 가능하게 하도록 구축될 수 있다. 적합한 클로닝 벡터는 표준 기술에 따라 구축될 수 있거나, 또는 관련 기술분야에서 이용가능한 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하고자 하는 숙주 세포에 따라 달라질 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자기-복제 능력을 가질 것이고/거나 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 보유할 수 있고/있거나 벡터를 함유하는 클론을 선택하는데 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 보유할 수 있다. 적합한 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어 pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 이들 및 많은 다른 클로닝 벡터는 바이오라드(BioRad), 스트라테진(Strategene) 및 인비트로젠(Invitrogen)과 같은 판매업체로부터 입수가능하다. 발현 벡터가 추가로 제공된다. 발현 벡터는 일반적으로 개시내용에 따른 폴리뉴클레오티드를 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 구축물이다. 이는 발현 벡터가 숙주 세포 내에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제가능하여야 한다는 것을 의미한다. 적합한 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 레트로바이러스, 코스미드, 및 PCT 공개 번호 WO 87/04462에 개시된 발현 벡터(들)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 벡터 성분은 일반적으로 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다: 신호 서열; 복제 기점; 1개 이상의 마커 유전자; 적합한 전사 제어 요소 (예컨대, 프로모터, 인핸서 및 종결인자). 발현 (즉, 번역)을 위해서는 통상적으로 1개 이상의 번역 제어 요소, 예컨대 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위 및 정지 코돈이 또한 필요하다.
관심 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터 및/또는 폴리뉴클레오티드 그 자체는 전기천공; 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란 또는 다른 물질을 사용한 형질감염; 미세발사체 충격; 리포펙션; 및 감염 (예를 들어, 벡터가 감염원, 예컨대 백시니아 바이러스인 경우)을 비롯한, 수많은 적절한 수단 중 임의의 것에 의해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 도입 벡터 또는 폴리뉴클레오티드의 선택은 종종 숙주 세포의 특색에 따라 달라질 것이다.
숙주 세포
항체 또는 그의 항원-결합 단편은 적합한 숙주 세포를 사용하여 재조합적으로 제조될 수 있다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 핵산은 발현 벡터 내로 클로닝될 수 있고, 이는 이어서 숙주 세포, 예컨대 이. 콜라이(E. coli) 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 달리 이뮤노글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포 내로 도입되어, 재조합 숙주 세포에서 항체의 합성이 수득될 수 있다. 바람직한 숙주 세포는 관련 기술분야에 널리 공지된 많은 세포 중, CHO 세포, 인간 배아 신장 HEK-293 세포, 또는 Sp2.0 세포를 포함한다. 항체 단편은 전장 항체의 단백질분해 또는 다른 분해에 의해, 재조합 방법에 의해, 또는 화학적 합성에 의해 생산될 수 있다. 항체의 폴리펩티드 단편, 특히 최대 약 50개의 아미노산의 보다 짧은 폴리펩티드는 화학적 합성에 의해 편리하게 제조될 수 있다. 단백질 및 펩티드에 대한 화학적 합성 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고 상업적으로 입수가능하다.
다양한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 중쇄 및/또는 항-αvβ8 인테그린 경쇄는 원핵 세포, 예컨대, 박테리아 세포에서; 또는 진핵 세포, 예컨대, 진균 세포 (예컨대, 효모), 식물 세포, 곤충 세포 및 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 이러한 발현은 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 절차에 따라 수행될 수 있다. 폴리펩티드를 발현시키는데 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함한 COS 세포; 293-6E 세포를 포함한 293 세포; CHO-S, DG44. Lecl3 CHO 세포, 및 FUT8 CHO 세포를 포함한 CHO 세포; PER.C6® 세포 (크루셀); 및 NSO 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 중쇄 및/또는 항-αvβ8 인테그린 경쇄는 효모에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 미국 공개 번호 US 2006/0270045 Al을 참조한다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 중쇄 및/또는 항-αvβ8 인테그린 경쇄에 목적하는 번역후 변형을 만드는 능력에 기초하여 특정한 진핵 숙주 세포가 선택된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, CHO 세포는 293 세포에서 생산된 동일한 폴리펩티드보다 더 높은 시알릴화 수준을 갖는 폴리펩티드를 생산한다.
1개 이상의 핵산을 목적하는 숙주 세포 내로 도입하는 것은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 양이온성 지질-매개 형질감염, 전기천공, 형질도입, 감염 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다. 비제한적인 예시적인 방법은 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)]에 기재되어 있다. 핵산은 임의의 적합한 방법에 따라 목적하는 숙주 세포를 일시적으로 또는 안정하게 형질감염시킬 수 있다.
항-αvβ8 인테그린 항체는 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 이러한 방법은 친화성 매트릭스 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 사용을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 친화성 리간드는 항체 불변 영역에 결합하는 리간드를 포함한다. 예를 들어, 불변 영역에 결합하고, 항-αvβ8 인테그린 항체를 정제하는 데 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G, 또는 항체 친화성 칼럼이 사용될 수 있다. 소수성 상호작용 크로마토그래피, 예를 들어, 부틸 또는 페닐 칼럼이 또한 일부 폴리펩티드를 정제하는데 적합할 수 있다. 많은 폴리펩티드 정제 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 무세포 시스템에서 생산된다. 비제한적인 예시적인 무세포 시스템은, 예를 들어, 문헌 [Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 기재되어 있다.
IV. 용도 및 의료 요법
치료 용도
일부 측면에서, 본 발명은 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 αvβ8 인테그린 활성을 억제하는 치료 방법을 제공한다. 치료되는 장애는 αvβ8 인테그린 활성 또는 신호전달의 제거, 억제 또는 감소에 의해 개선되거나, 호전되거나, 억제되거나 또는 예방되는 임의의 질환 또는 상태이다. 특히, 인간화 및 키메라 항체를 포함한 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체는 대상체에서 (예를 들어, 암을 갖는 대상체의 종양 미세환경 내에서) 이상 (예를 들어, 증가된) αvβ8 인테그린 활성 및/또는 TGFβ 신호전달에 의해 유발되고/거나 그와 연관된 질환, 장애 또는 상태의 예방, 치료, 및/또는 호전에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애, 또는 상태는 호흡기 상태 (예를 들어, 천식), 섬유증, 또는 빈혈을 포함한다. 일부 실시양태에서, 질환, 장애, 또는 상태는 백신으로 치료가능하거나 예방가능하다.
일부 측면에서, 본 발명은, 예를 들어, 수지상 세포, T 조절 세포, 종양 연관 대식세포, 및/또는 종양 자체의 세포를 포함한, 종양 미세환경 내의 세포에서 αvβ8-의존성 잠복성-TGFβ 활성화를 선택적으로 억제하는 방법을 제공한다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체의 투여에 의해 매개되는 면역계 및/또는 종양 미세환경 내에서의 TGFβ 활성화의 보다 정확하고 선택적인 길항작용은 TGFβ의 보다 광범위한 항상성 기능을 교란시키지 않으면서 대상체에서 항종양 면역 반응에 기여할 수 있다. TGFβ의 보다 광범위한 항상성 기능을 교란시키지 않는 대상체 내에서의 이러한 항종양 면역 반응은 전신 TGFβ 억제에 비해 안전성 및 치료 이점을 제공할 것으로 예상될 수 있다.
본원에 제공된 방법은 또한 대상체에서 (예를 들어, 암을 갖는 대상체의 종양 미세환경 내에서) TGFβ 활성 (예를 들어, TGFβ 종양-촉진 활성)을 감소 및/또는 약화시키는데 사용될 수 있다. 종양 미세환경 내에서 혈관신생, 전이, 상피-중간엽 이행, 및/또는 침윤 면역 세포 (예를 들어, 종양 침윤 림프구, 예를 들어, T 세포, B 세포, 자연 킬러 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구, 및 호염기구)의 억제에 영향을 미치는 TGFβ 활성은 대상체 (예를 들어, 암을 갖는 대상체)에게 치료 유효량의 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체를 투여하는 것에 의해 감소 및/또는 약화될 수 있다.
일부 경우에, 암을 갖는 대상체에게의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 투여는 대상체로부터 획득된 종양 샘플 (예를 들어, 고형 종양 샘플)에서 침윤 면역 세포, 예를 들어, CD45 총 림프구 및 골수 세포, CD3 T 세포, CD4 T 세포, CD8 T 세포, 및 그랜자임B 발현 세포 (예를 들어, 활성화된 CD8 및 NK 세포)의 양 (예를 들어, 면역조직화학 (IHC) 분석에 의해 결정된 바와 같은 밀도)을 증가시킨다. 침윤 면역 세포의 양 (예를 들어, 밀도)의 증가는, 예를 들어, 암을 갖는 대상체로부터 획득된 종양 샘플 (예를 들어, 고형 종양 샘플)의 면역조직화학 (IHC) 분석에 의해, 참조 종양 샘플 (예를 들어, 동일한 대상체 또는 유사한 암을 갖는 상이한 대상체로부터 수득된 종양 샘플, 여기서 종양 샘플은 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 투여 (예를 들어, 제1 투여 또는 후속 투여) 전에 획득됨)로부터 획득된 침윤 면역 세포의 양 (예를 들어, 밀도)과 비교하여 결정될 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 암성 종양의 성장이 억제 또는 감소되도록 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 대상체를 생체내 치료하는 것에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 생체내 치료된 대상체는 원발성 암, 예를 들어 국부 진행성 암을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 생체내 치료된 대상체는 재발성 암, 예를 들어 전이성 암을 갖는다.
한 측면에서, 본 발명은 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 αvβ8 인테그린, 인테그린 β8 (ITGβ8) 및/또는 인테그린 αV (ITGαV)를 발현하는 암 또는 종양을 갖는 대상체를 생체내 치료하는 것에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 발현은 단백질 발현이다. 일부 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 발현은 mRNA 발현이다. 일부 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 발현은 정상 조직 또는 샘플, 대조군 조직 또는 샘플, 치료 전 조직 또는 샘플 및/또는 치료 후 조직 또는 샘플에서의 αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린 발현의 수준에 비해 증가된 발현이다. 한 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 상대 발현 수준을 결정하는데 사용되는 조직 또는 샘플은 암 또는 종양을 갖는 대상체로부터, 동일한 유형의 암 또는 종양 또는 상이한 유형의 암 또는 종양을 갖는 상이한 대상체로부터, 또는 암 또는 종양을 갖지 않는 대상체로부터 수득될 수 있다.
일부 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 mRNA 발현은 정상 조직 또는 샘플, 대조군 조직 또는 샘플, 치료 전 조직 또는 샘플 및/또는 치료 후 조직 또는 샘플에서의 발현의 수준에 비해 증가된 발현이다. 일부 실시양태에서, αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 mRNA 발현은 정상 조직 또는 샘플, 대조군 조직 또는 샘플, 치료 전 조직 또는 샘플 및/또는 치료 후 조직 또는 샘플에서의 αvβ8, β8 인테그린 및/또는 αV 인테그린의 mRNA 발현의 수준에 비해 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 150%, 약 200%, 약 300%, 약 400%, 약 500%만큼 증가된다.
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 암성 종양의 성장을 억제하기 위해 단독으로 (예를 들어, 단독요법으로서) 사용될 수 있다. 대안적으로, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 표준 관리 치료 (예를 들어, 암 또는 감염성 장애의 경우), 또 다른 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 면역조정제 (예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료 암 백신; 또는 다른 형태의 세포 면역요법 중 1종 이상과 조합되어 사용될 수 있다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
한 실시양태에서, 방법은 암의 생체내 치료에 적합하다. 면역의 증진을 달성하기 위해, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 관심 항원과 함께 투여될 수 있다. 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 1종 이상의 작용제와 조합되어 투여되는 경우에, 조합물은 임의의 순서로 또는 동시에 투여될 수 있다.
또 다른 측면에서, 대상체를 치료하는 방법, 예를 들어, 대상체에서 과다증식성 상태 또는 장애 (예를 들어, 암), 예를 들어, 고형 종양, 혈액암, 연부 조직 종양, 또는 전이성 병변을 감소 또는 호전시키는 방법이 제공된다. 방법은 대상체에게 본원에 기재된 1종 이상의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 단독으로 또는 다른 작용제 또는 치료 양식과 조합하여 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 치료 나이브 대상체에서 1차 요법으로서, 또는 예를 들어 암의 재발 또는 진행 후 2차 요법으로서 투여될 수 있다.
본원에 개시된 항체 분자를 사용하여 성장이 치료, 예를 들어 감소될 수 있는 예시적인 암은 전형적으로 면역요법에 반응성인 암을 포함한다. 치료를 위한 암의 비제한적 예는 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종, 피부 흑색종), 신세포암 (RCC) (예를 들어, 투명 세포 암종, 유두상 세포 암종), 전립선암 (예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 유방암, 난소암 (예를 들어, 상피 난소암, 난관 또는 원발성 복막암), 두경부암 (예를 들어, 두경부 편평 세포 암종 (SCCHN)), 결장암, 식도암 (예를 들어, 선암종 및 편평 세포 암종), 위암 (예를 들어, 위 및 위식도 접합부의 선암종), 췌장암 (예를 들어, 췌장관 선암종), 담관암 (예를 들어, 담관암종); 자궁내막암 (예를 들어, 자궁체부 자궁내막 암종), 요로상피 암종 및 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암, 편평 세포암)을 포함한다. 추가적으로, 불응성 또는 재발성 악성종양이 본원에 기재된 항체 분자를 사용하여 치료될 수 있다.
치료될 수 있는 다른 암의 예는 피부 또는 안내 악성 흑색종, 직장암, 항문암, 고환암, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 메르켈 세포암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함한 만성 또는 급성 백혈병, 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS) 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암 (예를 들어, 중피종), 및 상기 암의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 신세포 암종, 난소암, 두경부 편평 세포 암종 및 피부암 (예를 들어, 흑색종, 예를 들어 진행성 흑색종)으로부터 선택된다.
일부 경우에, 암은 고형 종양, 혈액암 (예를 들어, 백혈병, 림프종, 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종), 및 전이성 병변으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 암은 고형 종양, 예를 들어, 고형 종양 예컨대 악성종양, 예를 들어, 육종 및 암종, 예를 들어, 다양한 기관계의 선암종, 예컨대 폐 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC)), 유방, 난소, 림프, 위장 (예를 들어, 결장), 항문, 생식기 및 비뇨생식관 (예를 들어, 신장, 요로상피, 방광 세포, 전립선), 인두, CNS (예를 들어, 뇌, 신경 또는 신경교 세포), 두경부 (예를 들어, 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC), 피부 (예를 들어, 흑색종, 예를 들어, 진행성 흑색종), 췌장, 결장, 직장, 신장 (예를 들어, 신세포 암종), 간에 영향을 미치는 것, 소장암 및 식도암, 위-식도암, 갑상선암, 및 자궁경부암일 수 있다. 일부 경우에, 암은 림프증식성 질환 (예를 들어, 이식후 림프증식성 질환) 또는 혈액암, T-세포 림프종, B-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 또는 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병 또는 림프성 백혈병)일 수 있다. 일부 경우에, 암은 초기, 중기, 후기 또는 전이성 암이다. 특정한 경우에, 암은 신세포 암종, 난소암, 또는 두경부 편평 세포 암종이다.
다른 실시양태에서, 암은 백혈병 또는 림프종을 포함하나 이에 제한되지는 않는 혈액 악성종양 또는 암이다. 예를 들어, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 암 및 악성종양, 예컨대 비제한적으로, 예를 들어, 예를 들어 B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), 급성 림프성 백혈병 (ALL)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 급성 백혈병; 예를 들어 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 만성 백혈병; 예를 들어 B 세포 전림프구성 백혈병, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종, 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 및 골수 혈액 세포의 비유효 생산 (또는 이형성증)에 의해 연관된 혈액 상태의 다양한 집합인 "전백혈병"을 포함하나 이에 제한되지는 않는 추가의 혈액암 또는 혈액 상태 등을 치료하는데 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 암은 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암 (NSCLC) (예를 들어, 편평 및/또는 비-편평 조직학을 갖는 NSCLC, 또는 NSCLC 선암종)), 흑색종 (예를 들어, 진행성 흑색종), 피부 세포 암종 (피부 SCC) (예를 들어, 전이성 피부 SCC), 신암 (예를 들어, 신세포 암종, 예를 들어 투명 세포 신세포 암종), 간암, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종), 전립선암, 유방암 (예를 들어, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 또는 Her2/neu 중 1, 2종 또는 모두를 발현하지 않는 유방암, 예를 들어 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 췌장암, 두경부암 (예를 들어, 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC), 항문암, 위-식도암, 갑상선암, 자궁경부암, 림프증식성 질환 (예를 들어, 이식후 림프증식성 질환) 또는 혈액암, T-세포 림프종, 비-호지킨 림프종, 또는 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병)으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 암은 암종 (예를 들어, 진행성 또는 전이성 암종), 흑색종 또는 폐 암종, 예를 들어, 비소세포 폐 암종으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 암은 폐암, 예를 들어, 비소세포 폐암이다.
또 다른 실시양태에서, 암은 전립선암, 예를 들어, 진행성 전립선암이다.
또 다른 실시양태에서, 암은 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종이다.
또 다른 실시양태에서, 암은 신암, 예를 들어, 신세포 암종 (RCC) (예를 들어, 전이성 RCC 또는 투명 세포 신세포 암종)이다.
일부 실시양태에서, 암은 피부암 (예를 들어 흑색종, 예를 들어 진행성 흑색종, 예를 들어 피부 편평 세포 암종, 예를 들어 전이성 피부 편평 세포 암종)이다.
한 실시양태에서, 암은 흑색종, 예를 들어, 진행성 흑색종이다. 한 실시양태에서, 암은 다른 요법에 반응하지 않는 진행성 또는 절제불가능한 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 암은 신암, 예를 들어, 신세포 암종 (RCC)이다. 일부 경우에, 신암은 전이성 RCC, 투명 세포 신세포 암종 (ccRCC), 또는 비-투명 세포 신세포 암종 (ncRCC)이다. 일부 경우에, 암이 RCC, 예를 들어, ccRCC인 경우에, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1차 또는 2차 요법으로서 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암이 난소암인 경우에, 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 백금-저항성 환자에 대해 2차 요법으로서 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 백금-저항성 및/또는 재발성 암이다.
본원에 개시된 방법 및 조성물은 상기 언급된 암과 연관된 전이성 병변을 치료하는데 유용하다.
조합 요법
종양은 매우 다양한 메카니즘에 의해 숙주 면역 감시를 피한다. 많은 이들 메카니즘은 종양에 의해 발현되고 면역억제성인 단백질의 불활성화에 의해 극복될 수 있다. 이들은 특히 TGF-베타 (Kehrl, J. et al., (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050), IL-10 (Howard, M. & O'Garra, A. (1992) Immunology Today 13: 198-200), 및 Fas 리간드 (Hahne, M. et al., (1996) Science 274: 1363-1365)를 포함한다. 각각의 이들 개체에 대한 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역억제제의 효과를 상쇄시키고 숙주에 의한 종양 면역 반응을 유리하게 하기 위해 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합되어 사용될 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 비접합된 형태로 또는 제2 작용제, 예를 들어 세포독성 약물, 방사성동위원소, 또는 단백질, 예를 들어 단백질 독소 또는 바이러스 단백질에 접합되어 사용될 수 있다. 이 방법은 항체 분자를 단독으로 또는 세포독성 약물에 접합시켜, 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 항체 분자는 다양한 치료제, 예를 들어 세포독성 모이어티, 예를 들어 치료 약물, 방사성동위원소, 식물, 진균, 또는 박테리아 기원의 분자, 또는 생물학적 단백질 (예를 들어, 단백질 독소) 또는 입자 (예를 들어, 재조합 바이러스 입자, 예를 들어 바이러스 코트 단백질을 통함), 또는 그의 혼합물을 전달하는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다른 요법과 조합되어 사용되어, 2가지 개별 요법을 부가하는 단순한 상가적 효과보다 더 큰 효과를 제공할 수 있는 예상외의 상승작용적 치료 효과를 제공할 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 1종 이상의 추가의 치료제, 예를 들어, 1종 이상의 항암제, 세포독성제 또는 세포증식억제제, 호르몬 치료, 백신, 및/또는 다른 면역요법과 공동-제제화되고/거나 공-투여되는 본 발명의 조성물을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 분자는 수술, 방사선, 동결수술, 및/또는 열요법을 포함한 다른 치유적 치료 양식과 조합되어 투여된다. 이러한 상승작용적 조합 요법은 유리하게는 투여되는 치료제의 보다 낮은 투여량을 이용함으로써, 다양한 단독요법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물은 다른 항체 분자, 화학요법, 다른 항암 요법 (예를 들어, 표적화된 항암 요법, 또는 종양용해 약물), 세포독성제, 면역-기반 요법 (예를 들어, 시토카인), 외과적 및/또는 방사선 절차 중 1종 이상과 조합되어 투여된다. 조합되어 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 항미세관제, 토포이소머라제 억제제, 항대사물, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라시클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진하는 작용제, 프로테오솜 억제제, 및 방사선 (예를 들어, 국부 또는 전신 조사)을 포함한다.
대안적으로, 또는 상기 조합과 조합되어, 본원에 기재된 방법 및 조성물은 면역조정제 (예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 억제 분자의 억제제); 백신, 예를 들어, 치료 암 백신; 또는 세포 면역요법의 다른 형태 중 1종 이상과 조합되어 투여될 수 있다.
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 예시적인 비제한적 상승작용적 조합 및 용도는 하기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 공동자극 분자 또는 억제 분자의 조정제, 예를 들어, 공동-억제 리간드 또는 수용체와 조합되어 투여된다.
한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 공동자극 분자의 조정제, 예를 들어, 효능제와 조합되어 투여된다. 한 실시양태에서, 공동자극 분자의 효능제는 4-1BB (CD137), OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, 또는 B7-H3의 효능제 (예를 들어, 효능작용 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 가용성 융합체)로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역조정제, 예를 들어, 공동자극 분자, 예를 들어, 4-1BB (CD137), CD28, CD27, ICOS 및 GITR의 공동자극 도메인을 포함하는 양성 신호와 연관된 효능제 또는 조정제와 조합되어 사용된다.
예시적인 GITR 조정제는, 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체 (예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예컨대 미국 특허 번호: 6,111,090, 유럽 특허 번호: 090505B1, 미국 특허 번호: 8,586,023, PCT 공개 번호: WO 2010/003118 및 2011/090754에 기재된 GITR 융합 단백질, 또는 예를 들어, 미국 특허 번호: 7,025,962, 유럽 특허 번호: 1947183B1, 미국 특허 번호: 7,812,135, 미국 특허 번호: 8,388,967, 미국 특허 번호: 8,591,886, 유럽 특허 번호: EP 1866339, PCT 공개 번호: WO 2011/028683, PCT 공개 번호: WO 2013/039954, PCT 공개 번호: WO2005/007190, PCT 공개 번호: WO 2007/133822, PCT 공개 번호: WO2005/055808, PCT 공개 번호: WO 99/40196, PCT 공개 번호: WO 2001/03720, PCT 공개 번호: WO99/20758, PCT 공개 번호: WO2006/083289, PCT 공개 번호: WO 2005/115451, 미국 특허 번호: 7,618,632, 및 PCT 공개 번호: WO 2011/051726에 기재된 항-GITR 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역 체크포인트 분자의 억제 분자의 억제제와 조합되어 투여된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 용어 "면역 체크포인트"가 CD4 및 CD8 T 세포의 세포 표면 상의 분자의 군을 의미한다는 것을 이해할 것이다. 이들 분자는 항종양 면역 반응을 하향-조정 또는 억제하는 "브레이크"로서 효과적으로 기능할 수 있다. 면역 체크포인트 분자는 면역 세포를 직접 억제하는 프로그램화된 사멸 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구 항원 4 (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, LAG-3 및 TIM-3을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 방법에 유용한 면역 체크포인트 억제제로서 작용할 수 있는 면역요법제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM-3, LAG-3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CEACAM, 및/또는 TGF 베타의 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 억제 분자의 억제는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서의 억제에 의해 수행될 수 있다. 실시양태에서, 억제 핵산 (예를 들어, dsRNA, siRNA 또는 shRNA)은 억제 분자의 발현을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 억제 신호의 억제제는 억제 분자에 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어, 가용성 리간드, 또는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
한 실시양태에서, 억제제는 가용성 리간드 (예를 들어, CTLA-4-Ig 또는 TIM-3-Ig), 또는 PD-1, PD-L1, PD-L2 또는 CTLA4에 결합하는 항체 또는 항체 단편이다. 예를 들어, 항-PD-1 항체 분자는, 예를 들어, 암 (예를 들어, 흑색종, 예를 들어 전이성 흑색종; 폐암, 예를 들어 비소세포 폐 암종; 또는 전립선암으로부터 선택된 암)을 치료하기 위해 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, 이필리무맙과 조합되어 투여될 수 있다. 예시적인 항-CTLA4 항체는 트레멜리무맙 (화이자로부터 입수가능한 IgG2 모노클로날 항체, 이전에 티실리무맙, CP-675,206으로 공지됨); 및 이필리무맙 (CTLA-4 항체, 또한 MDX-010, CAS No. 477202-00-9로도 공지됨)을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 치료 후에, 예를 들어 흑색종의 치료 후에, 항-CTLA4 항체 (예를 들어, 이필리무맙)와 함께, BRAF 억제제 (예를 들어, 베무라페닙 또는 다브라페닙)와 함께 또는 없이 투여된다. 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙의 예시적인 용량은 약 3 mg/kg이다.
숙주 면역 반응성을 활성화시키기 위해 사용될 수 있는 다른 항체가 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합되어 사용될 수 있다. 이들은 DC 기능 및 항원 제시를 활성화시키는 수지상 세포의 표면 상의 분자를 포함한다. 항-CD40 항체는 T 세포 헬퍼 활성을 효과적으로 대체할 수 있고 (Ridge, J. et al., (1998) Nature 393: 474-478), 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 함께 사용될 수 있다. T 세포 공동자극 분자, 예컨대 CTLA-4 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,811,097), OX-40 (Weinberg, A. et al., (2000) Immunol 164: 2160-2169), 4-1BB (Melero, I. et al., (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997), 및 ICOS (Hutloff, A. et al., (1999) Nature 397: 262-266)에 대한 항체가 또한 증가된 수준의 T 세포 활성화를 제공할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 관련 기술분야에 공지된 PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 1종 이상의 억제제와 조합되어 투여된다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역 체크포인트 억제제로 이전에 치료받지 않은 대상체에게 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-PD-L2 항체 또는 그의 항원-결합 단편)와 공동으로 투여된다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 면역 체크포인트 억제제로 이전에 치료받았고 암 또는 종양이 진행된 (예를 들어, 국부 진행된, 전이된) 대상체에게 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-PD-L2 항체 또는 그의 항원-결합 단편)와 공동으로 투여된다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 28-일 사이클에서 격주로 (예를 들어, 2주마다) 투여되고, 면역 체크포인트 억제제는 각각의 28-일 사이클의 제1일에 4주마다 투여된다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 28-일 사이클에서 격주로 투여되고, 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-PD-L2 항체 또는 그의 항원-결합 단편)는 암 또는 종양을 갖는 대상체에게 각각의 28-일 사이클의 제1일에 4주마다 투여된다. 한 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PCT 공개 번호 WO2016/092419에 기재된 항-PD1 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (예를 들어, RN888, PF-06801591 또는 사산리맙으로 지칭됨)이다. 한 실시양태에서, 암 또는 종양은 편평 세포 암종, 예를 들어 두경부 편평 세포 암종 (SCCHN), 신세포 암종 (RCC), 유방암, 또는 결장암이다.
PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 억제제는 항체, 그의 항원-결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질, 또는 올리고펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 MDX-1106, 머크(Merck) 3475 또는 CT-011로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙/옵디보(Opdivo)®, 펨브롤리주맙/키트루다(Keytruda)®, 스파르탈리주맙, 피딜리주맙, 티슬레리주맙, AMP-224, AMP-514, 세미플리맙, 또는 사산리맙 (RN888, mAb7, PF-06801591)이다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736, MPDL3280A (YW243.55.s70), BMS-936559 (MDX-1105), 아테졸리주맙/테센트릭(Tecentriq)®, 두르발루맙/임피지(Imfizi)® 또는 아벨루맙/바벤시오(Bavencio)®이다. 한 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이 아니다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 mAb7 (또한 RN888, PF-06801591 또는 사산리맙으로 지칭됨)을 포함하나 이에 제한되지는 않는, PCT 공개 번호 WO2016/092419에 기재된 것이다.
일부 실시양태에서, PD-1 억제제는 이뮤노어드헤신 (예를 들어, 이뮤노글로불린 서열의 불변 영역 (예를 들어, Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 이뮤노어드헤신)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 억제제는 AMP-224이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD-L1 결합 길항제는 YW243.55.s70 (또한 MPDL3280A, 아테졸리주맙으로 공지됨), MEDI-4736, MSB-0010718C, or MDX-1105로부터 선택된다. 또한 BMS-936559로 공지되어 있는 MDX-1105는 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 항체이다. 또한 MPDL3280A로 지칭되는 항체 YW243.55.s70 (중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열은 각각 서열식별번호: 20 및 21에 제시됨)은 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-L1이다.
또한 MDX-1106-04, ONO-4538 또는 BMS-936558로 공지되어 있는 MDX-1106은 WO2006/121168에 기재된 항-PD-1 항체이다. 또한 MK-3475 또는 SCH-900475로 공지되어 있는 머크 3745는 WO2009/114335에 기재된 항-PD-1 항체이다. 피딜리주맙 (CT-011; 큐어 테크(Cure Tech))은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG1k 모노클로날 항체이다. 피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 모노클로날 항체는 WO2009/101611에 개시되어 있다. 다른 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙 (상표명 키트루다, 이전에 람브롤리주맙, 또한 MK-3475로도 공지됨)은, 예를 들어, 문헌 [Hamid, O. et al., (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44]에 개시되어 있다. AMP-224 (B7-DCIg; 암플리뮨(Amplimmune); 예를 들어 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 개시됨)는 PD-1과 B7-H1의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합체 가용성 수용체이다. 다른 항-PD-1 항체는 AMP-514 (암플리뮨), 특히, 예를 들어 US 8,609,089, US 2010028330, 및/또는 US 20120114649에 개시된 항-PD-1 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 MDX-1106이다. MDX-1106에 대한 대체 명칭은 MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558 또는 니볼루맙을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (CAS 등록 번호: 946414-94-4)이다. 니볼루맙 (또한 BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭됨; 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb))은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전 인간 IgG4 모노클로날 항체이다. 니볼루맙 (클론 5C4) 및 PD-1에 특이적으로 결합하는 다른 인간 모노클로날 항체는 US 8,008,449 및 WO2006/121168에 개시되어 있다. 람브롤리주맙 (또한 펨브롤리주맙 또는 MK03475로도 지칭됨; 머크)은 PD-1에 결합하는 인간화 IgG4 모노클로날 항체이다. 펨브롤리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 항체는 US 8,354,509 및 WO2009/114335에 개시되어 있다. MDPL3280A (제넨테크(Genentech)/로슈(Roche))는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 모노클로날 항체이다. MDPL3280A (또한 YW243.55.s70으로도 공지됨), 및 PD-L1에 대한 다른 인간 모노클로날 항체는 미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 공개 번호 20120039906에 개시되어 있다. YW243.55.s70의 서열 (중쇄 및 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 20 및 21에 제시됨)은 또한 WO2010/077634 및 US8,217,149에 제시되어 있다. MDX-1105 (또한 BMS-936559로도 지칭됨), 및 다른 항-PD-L1 결합제는 WO2007/005874에 개시되어 있다.
다른 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 시토카인, 예를 들어, 인터류킨-21, 인터류킨-2, 인터류킨-12, 또는 인터류킨-15와 조합되어 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 시토카인의 조합은 암, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 암 (예를 들어, 고형 종양 또는 흑색종)을 치료하는데 사용된다.
본원에 기재된 모든 방법에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 다른 형태의 면역요법 예컨대 시토카인 치료 (예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2, IL-21), 또는 종양 항원의 증진된 제시를 제공하는 이중특이적 항체 요법과 조합될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Holliger (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak (1994) Structure 2:1121-1123] 참조).
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합되어 사용될 수 있는 예시적인 면역조정제는, 예를 들어, 아푸투주맙 (로슈®로부터 입수가능함); 페그필그라스팀 (뉴라스타(Neulasta)®); 레날리도미드 (CC-5013, 레블리미드(Revlimid) ®); 탈리도미드 (탈로미드(Thalomid)®), 악티미드 (CC4047); 및 시토카인, 예를 들어, IL-21 또는 IRX-2 (인터류킨 1, 인터류킨 2, 및 인터페론 γ를 포함한 인간 시토카인의 혼합물, CAS 951209-71-5, 아이알엑스 테라퓨틱스(IRX Therapeutics)로부터 입수가능함)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 암은 난소암이고, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 PARP1의 억제제 (예를 들어, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 벨리파립, 이니파립, 탈라조파립, 3-아미노벤즈아미드, CEP 9722, E7016, BSI-201, KU-0059436, AG014699, MK-4827, 또는 BGB-290)와 조합되어 투여된다.
일부 실시양태에서, 암은 두경부암, 예를 들어 두경부 편평 세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 방사선 요법과 조합되어 투여된다.
진단 용도
본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 또한, 예를 들어 진단 목적을 위해, 샘플 내의 αvβ8 인테그린 또는 αvβ8 인테그린-발현 세포를 검출 및/또는 측정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 단편은 αvβ8 인테그린의 이상 발현 (예를 들어, 과다발현, 과소발현, 발현의 결여 등)을 특징으로 하는 상태 또는 질환을 진단하는데 사용될 수 있다. αvβ8 인테그린에 대한 예시적인 진단 검정은 환자로부터 수득한 샘플을 본 발명의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함할 수 있고, 여기서 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 검출가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지된다.
한 측면에서, 본 발명은 시험관내에서 (예를 들어, 생물학적 샘플, 예컨대 암성 조직으로부터의 조직 생검에서) 또는 생체내에서 (예를 들어, 대상체의 생체내 영상화에서) αvβ8 인테그린 단백질의 존재를 검출하기 위한 진단 방법을 제공한다. 방법은 (i) 샘플을 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키거나, 또는 대상체에게 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 단계; (임의로) (ii) 참조 샘플, 예를 들어, 대조군 샘플 (예를 들어, 대조군 생물학적 샘플, 예컨대 혈장, 조직, 생검 또는 대조군 대상체)과 접촉시키는 단계; 및 (iii) 항체 또는 그의 항원-결합 단편과, 샘플 또는 대상체, 또는 대조군 샘플 또는 대상체 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 여기서 대조군 샘플 또는 대상체 대비 샘플 또는 대상체에서의 복합체의 형성에서의 변화, 예를 들어 통계적으로 유의한 변화는 샘플 내 αvβ8 인테그린의 존재를 나타낸다. 항체 분자는 결합된 또는 비결합된 항체의 검출을 용이하게 하기 위해 검출가능한 물질로 직접적으로 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 적합한 검출가능한 물질은 상기 기재되고 하기에 보다 상세하게 기재된 바와 같은 다양한 효소, 보결분자단, 형광 물질, 발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다.
용어 "샘플"은 폴리펩티드를 검출하는데 사용되는 샘플을 지칭하며, 세포, 세포 용해물, 단백질 또는 세포의 막 추출물, 체액, 또는 조직 샘플을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
항체 분자와 αvβ8 인테그린 사이의 복합체 형성은 αvβ8 인테그린 항원에 결합된 결합 분자 또는 비결합된 결합 분자를 측정하거나 시각화함으로써 검출될 수 있다. 통상적인 검출 검정, 예를 들어, 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA), 방사선면역검정 (RIA) 또는 조직 면역조직화학이 사용될 수 있다. 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 표지하는 것에 대한 대안으로, 검출가능한 물질로 표지된 표준물 및 비표지된 항체 분자를 이용하는 경쟁 면역검정에 의해 αvβ8 인테그린의 존재가 샘플에서 검정될 수 있다. 이러한 검정에서, 생물학적 샘플, 표지된 표준물, 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 조합되고, 비표지된 결합 분자에 결합된 표지된 표준물의 양이 결정된다. 샘플 중 αvβ8 인테그린의 양은 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 결합된 표지된 표준물의 양에 반비례한다.
V. 조성물
본 개시내용은 또한 유효량의 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 이러한 조성물의 예, 뿐만 아니라 제제화 방법이 또한 본원에 기재된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 1종 이상의 항-αvβ8 인테그린 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 인간, 마우스, 시노몰구스 원숭이, 또는 래트로부터의 αvβ8 인테그린)을 인식한다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체는 목적하는 면역 반응, 예컨대 항체-매개 용해 또는 ADCC를 촉발할 수 있는 불변 영역을 포함한다.
본 개시내용에 사용된 조성물은 동결건조 제제 또는 수용액 형태의 제약상 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체" 또는 "제약상 허용되는 부형제"는 활성 성분과 조합되는 경우에 상기 성분이 생물학적 활성을 보유하게 하고 대상체의 면역계와 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 예는 임의의 표준 제약 담체, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 오일/물 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여에 바람직한 희석제는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 또는 통상의 (0.9%) 염수이다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 통상적인 방법에 의해 제제화된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; 및 Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Mack Publishing, 2000] 참조).
허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트란을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어 Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 본원에 추가로 기재되어 있다.
항-αvβ8 인테그린 항체 및 그의 조성물은 또한 작용제의 유효성을 증진 및/또는 보완하는 역할을 하는 추가의 치료제 (예를 들어, 면역 체크포인트 분자의 억제제)를 포함한 다른 작용제와 함께 사용될 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제약 조성물을 포함한 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1 또는 4의 폴리뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 183 또는 4의 폴리뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 185 또는 189의 폴리뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 185 또는 191의 폴리뉴클레오티드 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
또 다른 측면에서, 폴리뉴클레오티드는 개시내용의 항체의 VH, VL 및/또는 VH 및 VL 둘 다를 코딩할 수 있다. 즉, 조성물은 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 단일 폴리뉴클레오티드 또는 1종 초과의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 개시내용의 제약 화합물은 1종 이상의 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다. 이러한 염의 예는 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 산 부가염은 비독성 무기 산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 아인산 등으로부터 유래된 것, 뿐만 아니라 비독성 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시 알칸산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 술폰산 등으로부터 유래된 것을 포함한다. 염기 부가염은 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등으로부터 유래된 것, 뿐만 아니라 비독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등으로부터 유래된 것을 포함한다.
본 개시내용의 제약 조성물은 또한 제약상 허용되는 항산화제를 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 항산화제의 예는 다음을 포함한다: (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비-수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재의 방지는 멸균 절차, 및 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 함유시키는 것 둘 다에 의해 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.
제약 조성물은 전형적으로, 제조 및 저장 조건 하에서 멸균되고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제제화될 수 있다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅제, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 조성물에 포함시키는 것이 적합할 것이다. 주사가능한 조성물의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 필요량의 활성 화합물을 상기 열거된 성분 중 하나 또는 그의 조합과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후에, 필요에 따라 멸균 마이크로여과하여 제조될 수 있다.
일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내에 혼입시켜 제조한다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 활성 성분 플러스 이전에 멸균-여과된 그의 용액으로부터의 임의의 추가의 목적하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 냉동-건조 (동결건조)이다.
본 개시내용의 제약 조성물은 안과적 투여에 적합한 제제로 제조, 패키지 또는 판매될 수 있다. 이러한 제제는, 예를 들어 수성 또는 유성 액체 담체 중 활성 성분의 0.1%-1.0% (w/w) 용액 또는 현탁액을 포함하는 점안제의 형태일 수 있다. 이러한 점안제는 완충제, 염, 또는 본원에 기재된 1종 이상의 다른 추가의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 유용한 다른 안과적으로 투여가능한 제제는 미세결정질 형태 또는 리포좀 제제로 활성 성분을 포함하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 "추가의 성분"은 하기: 부형제; 표면 활성제; 분산제; 불활성 희석제; 과립화제 및 붕해제; 결합제; 윤활제; 감미제; 향미제; 착색제; 보존제; 생리학상 분해성 조성물, 예컨대 젤라틴; 수성 비히클 및 용매; 유성 비히클 및 용매; 현탁화제; 분산제 또는 습윤제; 유화제, 완화제; 완충제; 염; 증점제; 충전제; 유화제; 항산화제; 항생제; 항진균제; 안정화제; 및 제약상 허용되는 중합체성 또는 소수성 물질 중 1종 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 개시내용의 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 "추가의 성분"은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Genaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1985)]에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1 mL의 수성 완충 용액 중에 100 mg의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 함유하는 바이알로 제제화된다.
한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 0.1 mg/mL, 약 1 mg/mL, 약 2 mg/mL, 약 3 mg/mL, 약 4 mg/mL, 5 mg/mL, 또는 일부 실시양태에서, 약 10 mg/mL, 또는 일부 실시양태에서, 약 15 mg/mL, 또는 일부 실시양태에서, 약 20 mg/mL의 항체, 또는 일부 실시양태에서, 약 25 mg/mL, 또는 일부 실시양태에서, 약 50 mg/mL, 또는 일부 실시양태에서, 약 100 mg/mL 및 5% 덱스트로스를 함유하는 멸균 수용액으로서 정맥내 제제로 투여된다. 일부 실시양태에서, 정맥내 제제는 5% 덱스트로스 중에 0.1 mg/mL 내지 15 mg/mL의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 함유하는 멸균 수용액이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아세트산나트륨, 폴리소르베이트 80, 및 염화나트륨을 함유하는 pH 약 5 내지 6 범위의 조성물로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 정맥내 제제는 5 또는 10 mg/mL의 항체를 20 mM 아세트산나트륨, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80, 및 140 mM 염화나트륨과 함께 함유하는 pH 5.5의 멸균 수용액이다. 추가로, 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 용액은 많은 다른 화합물 중에서, 히스티딘, 만니톨, 수크로스, 트레할로스, 글리신, 폴리(에틸렌) 글리콜, EDTA, 메티오닌 및 그의 임의의 조합, 및 관련 기술분야에 공지된 많은 다른 화합물을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 하기 성분: 50 mg/mL 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 항원-결합 단편, 20 mM 히스티딘, 8.5% 수크로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80, 0.005% EDTA, pH 5.8을 포함하고; 또 다른 실시양태에서 본 발명의 제약 조성물은 하기 성분: 100 mg/mL 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 항원-결합 단편, 10 mM 히스티딘, 5% 수크로스, 및 0.01% 폴리소르베이트 80, pH 5.8을 포함한다. 이러한 조성물은 액체 제제 또는 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 분말이 전체 부피로 재구성되는 경우에, 조성물은 동일한 제제를 유지한다. 대안적으로, 분말은 절반 부피로 재구성될 수 있고, 그러한 경우에 조성물은 100 mg 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 20 mM 히스티딘, 10% 수크로스, 및 0.02% 폴리소르베이트 80, pH 5.8을 포함한다.
한 실시양태에서, 용량의 일부는 정맥내 볼루스에 의해 투여되고, 나머지는 항체 제제의 주입에 의해 투여된다. 예를 들어, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 0.01 mg/kg 정맥내 주사는 볼루스로서 주어질 수 있고, 항체 용량의 나머지는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다. 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 미리 결정된 용량은, 예를 들어 1시간 30분 내지 2시간 내지 5시간의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다.
작용제가 예를 들어 소분자인 치료제와 관련하여, 이는 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같이 생리학상 허용되는 에스테르 또는 염의 형태로, 예컨대 생리학상 허용되는 양이온 또는 음이온과 조합되어 제약 조성물 중에 존재할 수 있다.
본원에 기재된 제약 조성물의 제제는 약리학 기술분야에 공지되어 있거나 이후에 개발될 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 정제용 방법은 활성 성분을 담체 또는 1종 이상의 다른 보조 성분과 회합시키는 단계, 및 이어서, 필요한 경우 또는 바람직한 경우에, 생성물을 목적하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 성형 또는 패키지하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 내독소 및/또는 관련 발열성 물질이 실질적으로 없는 발열원-무함유 제제이다. 내독소는 미생물 내부에 한정되고 미생물이 붕괴되거나 사멸되는 경우에 방출되는 독소를 포함한다. 발열성 물질은 또한, 박테리아 및 다른 미생물의 외막으로부터의 열-유도성, 열안정성 물질 (당단백질)을 포함한다. 이들 물질 둘 다는 인간에게 투여되는 경우에 열, 저혈압 및 쇼크를 유발할 수 있다. 잠재적인 유해한 효과로 인해, 정맥내로 투여되는 제약 약물 용액으로부터 심지어 적은 양의 내독소도 제거하는 것이 유리하다. 미국 식품 의약품국 ("FDA")은 정맥내 약물 적용을 위한 단일 1시간 기간 내에 체중 킬로그램당 용량당 5 내독소 단위 (EU)의 상한치를 설정하였다 (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)). 치료 단백질을 체중 킬로그램당 수백 또는 수천 밀리그램의 양으로 투여하는 경우에, 심지어 미량의 내독소도 제거하는 것이 유리하다. 한 실시양태에서, 조성물 중의 내독소 및 발열원 수준은 10 EU/mg 미만, 또는 5 EU/mg 미만, 또는 1 EU/mg 미만, 또는 0.1 EU/mg 미만, 또는 0.01 EU/mg 미만, 또는 0.001 EU/mg 미만이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물 중의 내독소 및 발열원 수준은 약 10 EU/mg 미만, 또는 약 5 EU/mg 미만, 또는 약 1 EU/mg 미만, 또는 약 0.1 EU/mg 미만, 또는 약 0.01 EU/mg 미만, 또는 약 0.001 EU/mg 미만이다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여는 경구, 비경구, 근육내, 비강내, 질, 직장, 설측, 설하, 협측, 협부내, 정맥내, 피부, 피하 또는 경피이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 조성물을 다른 요법, 예컨대 수술, 화학요법, 호르몬 요법, 생물학적 요법, 면역요법 또는 방사선 요법과 조합하여 투여하는 것을 추가로 포함한다.
VI. 투약/투여
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 항체는 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합된다. 치료 및 진단제의 제제는 예를 들어 동결건조 분말, 슬러리, 수용액, 로션 또는 현탁액 형태로 생리학상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 함께 혼합함으로써 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Hardman, et al., (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N. Y.; Avis, et al., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al., (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al., (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.] 참조).
치료를 위한 투여 요법을 선택하는 것은 엔티티의 혈청 또는 조직 교체율, 증상 수준, 엔티티의 면역원성 및 생물학적 매트릭스에서의 표적 세포의 접근성을 비롯한 여러 인자에 따라 달라진다. 특정 실시양태에서, 투여 요법은 허용되는 부작용 수준과 일치하여 환자에게 전달되는 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달되는 생물제제의 양은 부분적으로 특정한 엔티티 및 치료되는 상태의 중증도에 따라 달라진다. 항체, 시토카인, 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 것에 대한 지침은 입수 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Wawrzynczak, 1996, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y.; Bach (ed.),1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N. Y.; Baert, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom, et al., 1999, New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon, et al., 2001, New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz, et al., 2000, New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh, et al., 2003, New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky, et al., 2000, New Engl. J. Med. 343:1594-1602] 참조).
적절한 용량을 결정하는 것은 예를 들어 치료에 영향을 미치는 것으로 관련 기술분야에 공지되어 있거나 그러한 것으로 의심되거나, 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예측되는 파라미터 또는 인자를 사용하여 임상의에 의해 이루어진다. 일반적으로, 용량은 최적 용량보다 다소 적은 양에서 시작하며, 그후 임의의 부정적 부작용에 비해 목적하거나 최적인 효과가 달성될 때까지 소량 증분으로 증가된다. 중요한 진단 척도는, 예를 들어 염증의 증상 또는 생산된 염증성 시토카인의 수준을 포함한다.
본 개시내용의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성이지 않으면서, 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다. 선택되는 투여량 수준은 사용된 본 개시내용의 특정한 조성물, 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정한 화합물의 배출 속도, 치료의 지속기간, 사용된 특정한 조성물과 조합되어 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 전반적 건강 및 과거 병력, 및 의학 기술분야에 널리 공지되어 있는 기타 인자를 비롯한 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물은 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어 1일, 1주, 또는 1주에 1-7회 간격의 투여에 의해 제공될 수 있다. 용량은 정맥내로, 피하로, 국소로, 경구로, 비강으로, 직장으로, 근육내, 뇌내로 또는 흡입에 의해 제공될 수 있다. 구체적 용량 프로토콜은 유의한 바람직하지 않은 부작용을 회피하는 최대 용량 또는 투여 빈도를 수반하는 것이다. 전체 매주 용량은 적어도 0.05 μg/kg 체중, 적어도 0.2 μg/kg, 적어도 0.5 μg/kg, 적어도 1 μg/kg, 적어도 10 μg/kg, 적어도 100 μg/kg, 적어도 0.2 mg/kg, 적어도 1.0 mg/kg, 적어도 2.0 mg/kg, 적어도 10 mg/kg, 적어도 15 mg/kg, 적어도 20 mg/kg, 적어도 25 mg/kg, 또는 적어도 50 mg/kg일 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Yang, et al., 2003, New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, et al., 2002, New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, et al., 1999, J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji, et al., 2003, Cancer. Immunol. Immunother. 52: 133-144] 참조). 용량은 적어도 15 μg, 적어도 20 μg, 적어도 25 μg, 적어도 30 μg, 적어도 35 μg, 적어도 40 μg, 적어도 45 μg, 적어도 50 μg, 적어도 55 μg, 적어도 60 μg, 적어도 65 μg, 적어도 70 μg, 적어도 75 μg, 적어도 80 μg, 적어도 85 μg, 적어도 90 μg, 적어도 95 μg, 또는 적어도 100 μg일 수 있다. 대상체에게 투여되는 용량은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12회, 또는 그 초과 회일 수 있다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 경우에, 환자에게 투여되는 투여량은 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 100 mg/kg 환자 체중일 수 있다. 투여량은 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 20 mg/kg 환자 체중, 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 10 mg/kg 환자 체중, 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 5 mg/kg 환자 체중, 0.0001 내지 2 mg/kg 환자 체중, 0.0001 내지 1 mg/kg 환자 체중, 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 0.75 mg/kg 환자 체중, 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 0.5 mg/kg 환자 체중, 0.0001 mg/kg 환자 체중 내지 0.25 mg/kg 환자 체중, 0.0001 내지 0.15 mg/kg 환자 체중, 0.0001 내지 0.10 mg/kg 환자 체중, 0.001 내지 0.5 mg/kg 환자 체중, 0.01 내지 0.25 mg/kg 환자 체중 또는 0.01 내지 0.10 mg/kg 환자 체중일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는 투여량은 약 0.1 mg/kg 환자 체중, 약 0.3 mg/kg 환자 체중, 약 2 mg/kg 환자 체중 또는 약 3.0 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는 투여량은 약 0.4 mg/kg 환자 체중, 약 4 mg/kg 환자 체중, 약 40 mg/kg 환자 체중 또는 약 100 mg/kg 환자 체중이다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 14일마다 투여되는 투여량은 약 1 mg/kg 환자 체중 내지 약 12 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 14일마다 투여되는 투여량은 약 2 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 14일마다 투여되는 투여량은 약 7 mg/kg 환자 체중이다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 28일마다 투여되는 투여량은 약 1 mg/kg 환자 체중 내지 약 20 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 28일마다 투여되는 투여량은 약 4 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 이를 필요로 하는 환자에게 28일마다 투여되는 투여량은 약 12 mg/kg 환자 체중이다.
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 투여량은 환자의 체중 (킬로그램 (kg) 단위)을 사용하여 mg/kg으로 투여되는 용량을 곱하여 계산될 수 있다. 본 개시내용의 항체의 투여량은 150 μg/kg 환자 체중 이하, 125 μg/kg 환자 체중 이하, 100 μg/kg 환자 체중 이하, 95 μg/kg 환자 체중 이하, 90 μg/kg 환자 체중 이하, 85 μg/kg 환자 체중 이하, 80 μg/kg 환자 체중 이하, 75 μg/kg 환자 체중 이하, 70 μg/kg 환자 체중 이하, 65 μg/kg 환자 체중 이하, 60 μg/kg 환자 체중 이하, 55 μg/kg 환자 체중 이하, 50 μg/kg 환자 체중 이하, 45 μg/kg 환자 체중 이하, 40 μg/kg 환자 체중 이하, 35 μg/kg 환자 체중 이하, 30 μg/kg 환자 체중 이하, 25 μg/kg 환자 체중 이하, 20 μg/kg 환자 체중 이하, 15 μg/kg 환자 체중 이하, 10 μg/kg 환자 체중 이하, 5 μg/kg 환자 체중 이하, 2.5 μg/kg 환자 체중 이하, 2 μg/kg 환자 체중 이하, 1.5 μg/kg 환자 체중 이하, 1 μg/kg 환자 체중 이하, 0.5 μg/kg 환자 체중 이하, 또는 0.1 μg/kg 환자 체중 이하일 수 있다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 단위 용량은 0.1 mg 내지 200 mg, 0.1 mg 내지 175 mg, 0.1 mg 내지 150 mg, 0.1 mg 내지 125 mg, 0.1 mg 내지 100mg, 0.1 mg 내지 75 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 30 mg, 0.1 mg 내지 20 mg, 0.1 mg 내지 15 mg, 0.1 mg 내지 12 mg, 0.1 mg 내지 10 mg, 0.1 mg 내지 8 mg, 0.1 mg 내지 7 mg, 0.1 mg 내지 5 mg, 0.1 내지 2.5 mg, 0.25 mg 내지 20 mg, 0.25 내지 15 mg, 0.25 내지 12 mg, 0.25 내지 10 mg, 0.25 내지 8 mg, 0.25 mg 내지 7 mg, 0.25 mg 내지 5 mg, 0.5 mg 내지 2.5 mg, 1 mg 내지 20 mg, 1 mg 내지 15 mg, 1 mg 내지 12 mg, 1 mg 내지 10 mg, 1 mg 내지 8 mg, 1 mg 내지 7 mg, 1 mg 내지 5 mg, 또는 1 mg 내지 2.5 mg일 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 100 mg, 약 300 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 800 mg, 약 1200 mg, 약 1400 mg 또는 약 1600 mg의 단위 용량으로 투여된다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 투여량은 대상체에서 적어도 0.1 μg/mL, 적어도 0.5 μg/mL, 적어도 1 μg/mL, 적어도 2 μg/mL, 적어도 5 μg/mL, 적어도 6 μg/mL, 적어도 10 μg/mL, 적어도 15 μg/mL, 적어도 20 μg/mL, 적어도 25 μg/mL, 적어도 50 μg/mL, 적어도 100 μg/mL, 적어도 125 μg/mL, 적어도 150 μg/mL, 적어도 175 μg/mL, 적어도 200 μg/mL, 적어도 225 μg/mL, 적어도 250 μg/mL, 적어도 275 μg/mL, 적어도 300 μg/mL, 적어도 325 μg/mL, 적어도 350 μg/mL, 적어도 375 μg/mL, 또는 적어도 400 μg/mL의 혈청 역가를 달성할 수 있다. 대안적으로, 본 개시내용의 항체의 투여량은 대상체에서 적어도 0.1 μg/mL, 적어도 0.5 μg/mL, 적어도 1 μg/mL, 적어도 2 μg/mL, 적어도 5 μg/mL, 적어도 6 μg/mL, 적어도 10 μg/mL, 적어도 15 μg/mL, 적어도 20 μg/mL, 적어도 25 μg/mL, 적어도 50 μg/mL, 적어도 100 μg/mL, 적어도 125 μg/mL, 적어도 150 μg/mL, 적어도 175 μg/mL, 적어도 200 μg/mL, 적어도 225 μg/mL, 적어도 250 μg/mL, 적어도 275 μg/mL, 적어도 300 μg/mL, 적어도 325 μg/mL, 적어도 350 μg/mL, 적어도 375 μg/mL, 또는 적어도 400 μg/mL의 혈청 역가를 달성할 수 있다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용량은 반복될 수 있고, 투여는 적어도 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 또는 적어도 6개월만큼 분리될 수 있다.
특정한 환자에 대한 유효량은 치료하고자 하는 상태, 환자의 전반적 건강, 투여 방법, 경로 및 용량, 및 부작용의 중증도와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Maynard, et al., 1996, A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, FIa.; Dent, 2001, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ, London, UK] 참조).
투여 경로는 예를 들어 국소 또는 피부 적용, 정맥내, 복강내, 뇌내, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 병변내 주사 또는 주입, 또는 지속 방출 시스템 또는 임플란트에 의할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Sidman et al., 1983, Biopolymers 22:547-556; Langer, et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277; Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105; Epstein, et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692; Hwang, et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034]; 미국 특허 번호 6,350466 및 6,316,024 참조). 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 정맥내로 투여된다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 피하로 투여된다.
필요한 경우에, 조성물은 가용화제 및 주사 부위에서 통증을 완화시키기 위한 국부 마취제, 예컨대 리도카인을 또한 포함할 수 있다. 또한, 예를 들어 흡입기 또는 네뷸라이저의 사용, 및 에어로졸화제를 사용한 제제화에 의한 폐 투여도 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540, 및 4,880,078; 및 PCT 공개 번호 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, 및 WO 99/66903을 참조하고, 이는 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 조성물은 알케르메스 에어(Alkermes AIR)™ 폐 약물 전달 기술 (알케르메스, 인크.(Alkermes, Inc.); 매사추세츠주 캠브리지)을 사용하여 투여된다.
본 개시내용의 조성물은 또한, 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법 중 하나 이상을 이용하여 하나 이상의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 통상의 기술자가 인지할 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 달라질 것이다. 본 개시내용의 항체에 대해 선택된 투여 경로는, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 피하, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 비경구 투여는 경장 및 국소 투여 이외의 다른, 통상적으로 주사에 의한 투여 방식을 나타낼 수 있고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 대안적으로, 본 개시내용의 조성물은 비-비경구 경로, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통해, 예를 들어 비강내로, 경구로, 질내로, 직장으로, 설하로 또는 국소로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 제어 방출 또는 지속 방출 시스템으로 투여되는 경우에, 제어 또는 지속 방출을 달성하기 위해 펌프가 사용될 수 있다 (상기 문헌 [Langer]; 문헌 [Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:501; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:514] 참조).
중합체 물질이 본 개시내용의 치료제의 제어 또는 지속 방출을 달성하기 위해 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, FL. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. ScL Rev. Macromol. Chem. 23:61] 참조; 또한 문헌 [Levy et al., 1985, Science 11 225:190; During et al., 19Z9, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71: 105)]; 미국 특허 번호 5,679,377; 미국 특허 번호 5,916,597; 미국 특허 번호 5,912,015; 미국 특허 번호 5,989,463; 미국 특허 번호 5,128,326; PCT 공개 번호 WO 99/15154; 및 PCT 공개 번호 WO 99/20253 참조). 지속 방출 제제에 사용되는 중합체의 예는 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드 (PLG), 폴리무수물, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리비닐 알콜, 폴리아크릴아미드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리락티드 (PLA), 폴리락티드-코-글리콜리드 (PLGA), 및 폴리오르토에스테르를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 지속 방출 제제에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출가능한 불순물이 없고, 저장, 멸균에 대해 안정하고, 생분해성이다. 제어 또는 지속 방출 시스템은 예방적 또는 치료적 표적에 인접하여 위치할 수 있고, 따라서 오직 전신 용량의 분획만을 필요로 한다 (예를 들어, 문헌 [Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 상기 문헌, vol. 2, pp. 115-138 (1984)] 참조).
제어 방출 시스템은 문헌 [Langer, 1990, Science 249:1527-1533]에 의한 검토에서 논의되어 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 기술을 사용하여 본 개시내용의 1종 이상의 항체 또는 그의 접합체를 포함하는 지속 방출 제제를 생성할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,526,938, 국제 특허 공개 번호 WO 91/05548, WO 96/20698, 문헌 [Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy and Oncology 59:179-189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Ml. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, 및 Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Ml. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-160]을 참조하고, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체, 또는 그의 항원-결합 단편이 국소로 투여되는 경우에, 이는 연고, 크림, 경피 패치, 로션, 겔, 샴푸, 스프레이, 에어로졸, 용액, 에멀젼, 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 다른 형태로 제제화될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 19th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995)]을 참조한다. 비-분무가능한 국소 투여 형태의 경우에, 국소 적용에 상용성인 담체 또는 1종 이상의 부형제를 포함하고 일부 경우에 물보다 큰 동적 점도를 갖는 점성 내지 반고체 또는 고체 형태가 전형적으로 사용된다. 적합한 제제는, 원하는 경우에 멸균되거나, 또는 예를 들어 삼투압과 같은 다양한 특성에 영향을 미치기 위한 보조제 (예를 들어, 보존제, 안정화제, 습윤제, 완충제, 또는 염)와 혼합되는, 용액, 현탁액, 에멀젼, 크림, 연고, 분말, 도찰제, 살브 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다른 적합한 국소 투여 형태는 활성 성분이 일부 경우에 고체 또는 액체 불활성 담체와 조합되어 가압 휘발성 물질 (예를 들어, 기체상 추진제, 예컨대 프레온)과의 혼합물 중에 또는 압착병 내에 패키지되는 분무가능한 에어로졸 제제를 포함한다. 보습제 또는 함습제가 또한 원하는 경우에 제약 조성물 및 투여 형태에 첨가될 수 있다. 이러한 추가의 성분의 예는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물이 비강내로 투여되는 경우에, 이는 에어로졸 형태, 스프레이, 미스트 또는 점적제의 형태로 제제화될 수 있다. 특히, 본 개시내용에 따라 사용하기 위한 예방제 또는 치료제는 적합한 추진제 (예를 들어, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체)를 사용하여, 가압 팩 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제공물의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우에, 투여 단위는 계량된 양을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 캡슐 및 카트리지 (예를 들어, 젤라틴으로 구성됨)는 화합물의 분말 믹스 및 적합한 분말 베이스, 예컨대 락토스 또는 전분을 함유하여 제제화될 수 있다.
추가의 치료제, 예를 들어 면역 체크포인트 분자, 시토카인, 스테로이드, 화학요법제, 항생제 또는 방사선 요법과 함께 공동-투여 또는 치료하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Hardman, et al., (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams and Wilkins, Phila., Pa.] 참조).
치료제의 유효량은 증상을 적어도 10퍼센트; 적어도 20퍼센트; 적어도 약 30퍼센트; 적어도 40퍼센트, 또는 적어도 50퍼센트만큼 감소시킬 수 있다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 항원-결합 단편과 조합되어 투여될 수 있는 추가의 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 본 개시내용의 항체와 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 간격, 약 1시간 간격, 약 1 내지 약 2시간 간격, 약 2시간 내지 약 3시간 간격, 약 3시간 내지 약 4시간 간격, 약 4시간 내지 약 5시간 간격, 약 5시간 내지 약 6시간 간격, 약 6시간 내지 약 7시간 간격, 약 7시간 내지 약 8시간 간격, 약 8시간 내지 약 9시간 간격, 약 9시간 내지 약 10시간 간격, 약 10시간 내지 약 11시간 간격, 약 11시간 내지 약 12시간 간격, 약 12시간 내지 18시간 간격, 18시간 내지 24시간 간격, 24시간 내지 36시간 간격, 36시간 내지 48시간 간격, 48시간 내지 52시간 간격, 52시간 내지 60시간 간격, 60시간 내지 72시간 간격, 72시간 내지 84시간 간격, 84시간 내지 96시간 간격, 또는 96시간 내지 120시간 간격으로 투여될 수 있다. 2종 이상의 요법은 1회의 동일한 환자 방문에서 투여될 수 있다.
항체 분자를 투여하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 하기에 기재된다. 사용되는 분자의 적합한 투여량은 대상체의 연령 및 체중 및 사용되는 특정한 약물에 좌우될 것이다. 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항체 분자의 투여량 및 치료 요법은 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 주사에 의해 (예를 들어, 피하로 또는 정맥내로) 약 1 내지 30 mg/kg, 예를 들어, 약 5 내지 25 mg/kg, 약 10 내지 20 mg/kg, 약 10 내지 약 14 mg/k, 약 5 내지 9 mg/kg, 약 7 mg/kg, 또는 약 12 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg 또는 10 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 17 mg/kg, 약 18 mg/kg, 약 19 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 30 mg/kg, 또는 약 40 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 1-5 mg/kg, 약 5-10 mg/kg, 또는 약 10-15 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 0.5-2, 2-4, 2-5, 2-6, 2-7, 2-8, 2-9, 2-10, 2-15, 5-15, 또는 5-20 mg/kg의 용량으로 투여된다.
투여 스케줄은, 예를 들어, 1주 1회 내지 2, 3, 4, 5, 또는 6주마다 1회로 달라질 수 있다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 격주로 (예를 들어, 2주마다 또는 격주) 약 10 내지 20 mg/kg (예를 들어, 약 7 mg/kg 또는 약 12 mg/kg)의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 1개월에 1회 (예를 들어, 4주마다) 약 10 내지 20 mg/kg (예를 들어, 약 7 mg/kg 또는 약 12 mg/kg)의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 격주 기준으로 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 100 mg, 약 300 mg, 약 800 mg, 약 1200 mg 또는 약 1600 mg의 단위 용량으로 격주 기준으로 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 약 100 mg, 약 300 mg, 약 800 mg, 약 1200 mg 또는 약 1600 mg의 단위 용량으로 격주 기준으로 정맥내로 투여되고, 항-PD1 억제제는 4주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-PD1 억제제는 300 mg의 단위 용량으로 피하로 투여되는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-PD1 억제제는 PCT 공개 번호 WO2016/092419에 기재된 항-PD1 항체 (예를 들어, mAb7, 또한 RN888, PF-06801591, 또는 사산리맙으로 지칭됨)이다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 약 1주 2회, 1주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 1개월 2회, 1개월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회, 6개월마다 1회, 7개월마다 1회, 8개월마다 1회, 9개월마다 1회, 10개월마다 1회, 11개월마다 1회 또는 12개월마다 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 2주마다, 예를 들어 최대 12회 (예를 들어, 최대 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3회) 투여된다. 일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 4주마다, 예를 들어 최대 12회 (예를 들어, 최대 10, 8, 6, 5, 4, 또는 3회) 투여된다.
일부 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 각각의 투여는 5-10 mg/kg (예를 들어, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg)의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 예를 들어 각각의 투여는 약 7 mg/kg을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 4주마다, 예를 들어 최대 6회 (예를 들어, 최대 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1회) 투여된다.
다른 실시양태에서, 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 각각의 투여는 10-15 mg/kg (예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15 mg/kg)의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 예를 들어 각각의 투여는 약 12 mg/kg을 포함한다.
본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 다른 요법은 주기적으로 투여될 수 있다. 주기 요법은 시간 기간 동안 제1 요법 (예를 들어, 제1 예방제 또는 치료제)의 투여에 이어서 시간 기간 동안 제2 요법 (예를 들어, 제2 예방제 또는 치료제)의 투여, 임의로 그에 이어서 시간 기간 동안의 제3 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)의 투여 등, 및 이러한 순차적 투여의 반복, 즉 요법 중 하나에 대한 내성의 발생을 감소시키고/거나, 요법 중 하나의 부작용을 회피 또는 감소시키고/거나, 요법의 효능을 개선시키기 위한 주기를 수반한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 생체내 적절한 분포를 보장하기 위해 제제화될 수 있다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽 (BBB)은 많은 고도로 친수성인 화합물을 배제시킨다. 본 개시내용의 치료 화합물이 (원하는 경우에) BBB를 횡단하도록 보장하기 위해, 이를 예를 들어 리포솜 내에 제제화할 수 있다. 리포솜을 제조하는 방법에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 4,522,811; 5,374,548; 및 5,399,331을 참조한다. 리포솜은 특정 세포 또는 기관 내로 선택적으로 수송되는 1개 이상의 모이어티를 포함할 수 있고, 따라서 표적화 약물 전달을 증진시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685] 참조). 예시적인 표적화 모이어티는 폴레이트 또는 비오틴 (예를 들어, 미국 특허 5,416,016); 만노시드 (Umezawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038); 항체 (P. G. Bloeman et al., 1995, FEBS Lett. 357: 140; M. Owais et al., 1995, Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180); 계면활성제 단백질 A 수용체 (Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134); pl20 (Schreier et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:9090)을 포함하며; 또한 문헌 [K. Keinanen; M.L. Laukkanen, 1994, FEBS Lett. 346:123; Killion; Fidler, 1994; Immunomethods 4:273]을 참조한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 단독으로 또는 다른 요법 조합하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 프로토콜을 제공한다. 본 개시내용의 조합 요법의 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 병용 또는 순차 투여될 수 있다. 본 개시내용의 조합 요법의 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 또한, 주기적으로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 조합 요법의 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 공동으로 투여될 수 있다. 용어 "공동으로"는 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 정확하게 동시에 투여하는 것으로 제한되지 않고, 오히려 본 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물을, 본 개시내용의 항체 또는 그의 접합체가 다른 요법(들)과 함께 작용하여 이들을 달리 투여한 경우보다 증가된 이익을 제공할 수 있도록 하는 순서로 그러한 시간 간격 내에 대상체에게 투여한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 각각의 요법은 동시에 또는 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 대상체에게 투여될 수 있지만; 동시에 투여되지 않을 경우에도, 이들은 목적하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 충분히 가까운 시간 내에 투여되어야 한다. 각각의 요법은 임의의 적절한 형태로 및 임의의 적합한 경로에 의해 대상체에게 개별적으로 투여될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)는 대상체에게 15분 미만, 30분 미만, 1시간 미만 간격, 약 1시간 간격, 약 1시간 내지 약 2시간 간격, 약 2시간 내지 약 3시간 간격, 약 3시간 내지 약 4시간 간격, 약 4시간 내지 약 5시간 간격, 약 5시간 내지 약 6시간 간격, 약 6시간 내지 약 7시간 간격, 약 7시간 내지 약 8시간 간격, 약 8시간 내지 약 9시간 간격, 약 9시간 내지 약 10시간 간격, 약 10시간 내지 약 11시간 간격, 약 11시간 내지 약 12시간 간격, 24시간 간격, 48시간 간격, 72시간 간격, 또는 1주 간격으로 투여된다. 다른 실시양태에서, 2종 이상의 요법 (예를 들어, 예방제 또는 치료제)는 동일한 환자 방문에서 투여된다.
조합 요법의 예방제 또는 치료제는 대상체에게 동일한 제약 조성물로 투여될 수 있다. 대안적으로, 조합 요법의 예방제 또는 치료제는 대상체에게 개별 제약 조성물로 공동으로 투여될 수 있다. 예방제 또는 치료제는 대상체에게 동일한 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다.
VII. 키트
개시내용은 또한 본원에 기재된 임의의 또는 모든 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 개시내용의 키트는 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 1개 이상의 용기, 및 본원에 기재된 개시내용의 임의의 방법에 따른 사용에 대한 지침서를 포함한다. 일반적으로, 이들 지침서는 상기 기재된 치유적 치료를 위한 항체의 투여에 관한 설명을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 단일-용량 투여 단위를 생성하기 위해 제공된다. 특정 실시양태에서, 키트는 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제제를 갖는 제2 용기 둘 다를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 어플리케이터, 예를 들어 단일 및 다중 챔버 사전-충전 시린지 (예를 들어, 액체 시린지 및 리오시린지)를 함유하는 키트가 포함된다.
항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 사용에 관한 지침서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투약 스케쥴, 및 투여 경로에 대한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지 (예를 들어, 다중-용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다. 개시내용의 키트에 제공되는 지침서는 전형적으로 라벨 또는 패키지 삽입물 (예를 들어, 키트에 포함되어 있는 종이 시트) 상의 서면 지침서이지만, 기계-판독식 지침서 (예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크에 저장된 지침서)가 또한 허용된다.
개시내용의 키트는 적합한 패키지 내에 존재한다. 적합한 패키지는 바이알, 병, 단지, 가요성 패키지 (예를 들어, 밀봉 마일라(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 특정 장치, 예컨대 흡입기, 비강 투여 장치 (예를 들어, 아토마이저) 또는 주입 장치, 예컨대 미니펌프와 조합하여 사용하기 위한 패키지가 고려된다. 키트는 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있음). 또한 용기도 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있음). 조성물 내의 적어도 1종의 활성제는 개시내용의 항-αvβ8 인테그린 항체이다. 용기는 본원에 기재된 바와 같은 추가의 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 적어도 1종의 항-PD1 항체, 예컨대 비제한적으로 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 스파르틸리주맙, 피딜리주맙, 티슬레리주맙, 세미플리맙, 사산리맙 (mAb7, RN888, PD-06801591), AMP-224, AMP-514를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 임의로 추가의 성분, 예컨대 완충제 및 해석 정보를 제공할 수 있다. 통상적으로, 키트는 용기, 및 용기 상의 또는 그와 결합된 라벨 또는 패키지 삽입물(들)을 포함한다.
개시내용은 또한, 본원에 기재된 임의의 또는 모든 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 진단 키트를 제공한다. 진단 키트는, 예를 들어 샘플에서 αvβ8 인테그린의 존재를 검출하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 진단 키트는 αvβ8 인테그린-매개 질환, 장애 또는 상태 또는 αvβ8 인테그린 결핍 질환, 장애 또는 상태가 발생할 위험에 처하게 될 수 있는 잠복성 질환, 장애 또는 상태를 가진 개체를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 진단 키트는 αvβ8 인테그린 매개 질환 또는 αvβ8 인테그린 결핍 질환, 장애 또는 상태를 갖는 것으로 의심되는 개체에서 αvβ8 인테그린의 존재 및/또는 수준을 검출하는데 사용될 수 있다.
개시내용의 진단 키트는 본원에 기재된 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 1개 이상의 용기, 및 본원에 기재된 개시내용의 임의의 방법에 따른 사용에 대한 지침서를 포함한다. 일반적으로, 이들 지침서는 αvβ8 인테그린 매개 질환 또는 αvβ8 인테그린 결핍 질환, 장애 또는 상태에 걸릴 위험이 있거나 이러한 질환에 걸린 것으로 의심되는 개체에서 αvβ8 인테그린의 존재를 검출하기 위한 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 사용에 관한 설명을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예시적인 진단 키트는 시약, 예컨대 예를 들어 항-αvβ8 인테그린 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 음성 대조군 샘플, 양성 대조군 샘플, 및 키트의 사용에 대한 지침서를 함유하도록 구성될 수 있다.
VIII. 등가물
상기 설명 및 하기 실시예는 개시내용의 특정의 구체적인 실시양태를 상술하고, 본 발명자들이 고려하는 최적 방식을 기재한다. 그러나, 상기 상세한 내용이 텍스트로 나타날 수 있더라도, 본 개시내용은 많은 방식으로 실시될 수 있고, 본 개시내용은 첨부된 청구범위 및 그의 임의의 등가물에 따라 해석되어야 한다는 것이 인지될 것이다.
개시된 교시내용이 다양한 용도, 방법, 키트 및 조성물과 관련하여 기재되었지만, 본원의 교시내용 및 하기의 청구된 개시내용을 벗어나지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 인지될 것이다. 하기 예는 개시된 교시내용을 더 잘 예시하기 위해 제공되며, 본원에 제시된 교시내용의 범주를 제한하는 것으로 의도되지는 않는다. 본 발명의 교시내용이 이들 예시적인 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 이들 예시적인 실시양태의 수많은 변경 및 변형이 과도한 실험 없이 가능하다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 쉽게 이해할 것이다. 모든 이러한 변경 및 변형은 본 발명의 교시내용의 범주 내에 속한다.
특허, 특허 출원, 논문, 교과서 등 및 그에 인용된 참고문헌을 비롯하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은 이미 인용되지 않은 정도까지 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등을 포함하나 이에 제한되지 않는, 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 본 출원과 상이하거나 상충되는 경우에, 본 출원이 우선한다.
IX. 일반적 기술
본 발명은 구체적 합성 제조 방법으로 제한되지 않고, 이는 당연히 다양화될 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 기술 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수대상을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수대상을 포함할 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며 통상적으로 사용되는 것들이다.
본 발명의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내에 있는 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌, 예컨대 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002); Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)]에 충분히 설명되어 있다.
효소적 반응 및 정제 기술은 제조업체의 설명서에 따라, 관련 기술분야에서 통상적으로 수행되는 바와 같이 또는 본원에 기재된 바와 같이 수행된다. 본원에 기재된 분석 화학, 생화학, 면역학, 분자 생물학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 실험실 절차 및 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며 통상적으로 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 제제, 제제화, 및 전달, 및 환자의 치료를 위해 표준 기술이 사용된다.
X. 생물학적 기탁
본 발명의 대표적인 물질은 미국 20110-2209 버지니아주 마나사스 유니버시티 불러바드 10801의 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에 2018년 2월 13일에 기탁되었다. ATCC 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 벡터 ADWA11 VH05-02 -VH는 VH05-2_VK01(2.4) 및 ADWA11 5-2 2.4로도 공지되어 있는 항체 ADWA11 2.4의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 삽입물을 포함한다. ATCC 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 벡터 ADWA11 VK2.4 -VL은 VH05-2_VK01(2.4) 및 ADWA11 5-2 2.4로도 공지되어 있는 항체 ADWA11 2.4의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 삽입물을 포함한다.
기탁은 특허절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약 및 이러한 조약 (부다페스트 조약) 하의 규정의 조항 하에 이루어졌다. 이것은 기탁일로부터 30년 동안 기탁물의 살아있는 배양물의 유지를 보장한다. 기탁은 부다페스트 조약의 조항 하에 ATCC에 의해 입수가능하고, 어느 것이든 먼저 도래하는 관련 미국 특허의 허여 시 또는 임의의 미국 또는 해외 특허 출원의 공중에게의 공개 시 공중에게 기탁 배양물의 자손의 영구적이고 비제한적인 입수가능성을 보증하고, 35 U.S.C. 섹션 122에 따라 그에 대한 권리가 있는 미국 특허 상표 감독관 및 그에 따르는 감독관의 규칙 (37 C.F.R. 섹션 1.14 포함, 특히 886 OG 638 참조)에 의해 결정된 것에 대한 자손의 입수가능성을 보증하는, 화이자 인크.와 ATCC 사이의의 합의에 따를 것이다.
본 출원의 소유자는 기탁된 물질의 배양물이 적합한 조건 하에서의 배양 시 사멸하거나 또는 손실 또는 파괴될 경우에, 그 물질을 통지 하에 또 다른 동일한 것으로 신속하게 대체할 것에 동의하였다. 기탁 물질의 입수가능성은 그의 특허법에 따른 임의의 정부의 권한 하에 보장된 권리에 반하여 본 발명을 실시하는 것에 대한 허가로 간주되지 않는다.
실시예
개시내용은 하기 실험 실시예를 참조하여 추가로 상세하게 기재된다. 이들 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되고, 달리 명시되지 않는 한 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 개시내용은 어떠한 방식으로든 하기 실시예로 제한되는 것으로서 해석되어서는 안되고, 오히려 본원에 제공된 교시내용의 결과로서 명백해지는 임의의 및 모든 변형을 포괄하는 것으로 해석되어야 한다.
실시예 1: 항-αvβ8 인테그린 마우스 하이브리도마 항체의 생성
인간 αvβ8 인테그린에 대한 마우스 하이브리도마 항체를 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 9,969,804에 일반적으로 기재된 바와 같은 방법에 따라 생성하였다.
간략하게, 출생후 생존을 가능하게 하기 위해 이계교배 CD1 배경으로 교배시킨 인테그린 β8 녹아웃 마우스를, 항-αvβ8 항체의 허용되는 역가가 생성될 때까지 2주마다 마우스당 50 μg의 투여량으로 재조합 인간 αvβ8 인테그린 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 4135-AV-050)으로 면역화하였다. 이어서 면역화된 마우스로부터의 혈청을 고체 상 면역검정에 의해 스크리닝하여 마우스에 대해 하이브리도마 생성을 확인하였다.
생성된 하이브리도마로부터의 항체를, 음성 대조군으로서 인테그린 αvβ8 또는 αvβ3 또는αvβ6을 발현하도록 형질감염시킨 SW480 세포를 사용하여 유동 세포측정법에 의해 추가로 특징화하였다. Sw480 세포는 정상적으로는 αvβ5를 제외한 어떠한 αv 인테그린도 발현하지 않는다. 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11 (또한 ADWA11로도 지칭됨)이 확인되었고, 이러한 항체의 특이성을 확인하기 위해 표지된 ADWA-11 또는 αvβ5 (Alula) 또는 αvβ3 (Axum-2) 또는 αvβ6 (10D5)에 대한 항체를 사용하여 각각의 세포주에 대해 유동 세포측정법을 수행하였다 (Su et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 36:377-386, 2007; Su et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 185: 58-66, 2012; Huang et al., J. Cell Sci. 111 (Pt 15): 2189-2195).
또한 TGFβ1 잠복성 연관 펩티드 1 μg/ml로 코팅된 디쉬 상에서 인테그린 αvβ8을 발현하는 U251 세포를 사용하여 세포 부착 검정을 수행하였다 (Kueng et al., Anal. Biochem. 182: 16-19, 1989). TGFβ 활성의 차단은 반딧불이 루시페라제 발현을 구동하는 PAI-1 프로모터의 TGFβ 감수성 부분을 발현하는 밍크 폐 상피 세포를 사용하는 TMLC 루시페라제 검정에 의해 결정하였다 (Abe et al., Anal. Biochem. 216:276-284, 1994). 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 수행된 하이브리도마 스크리닝에 기초하여, 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11을 추가의 평가를 위해 선택하였다.
실시예 2: 항-αvβ8 인테그린 마우스 하이브리도마 항체의 인간화
미국 특허 번호 9,969,804에 개시되고, 본 명세서의 예를 들어 서열식별번호: 20-33 및 71-76에 제시된 바와 같은 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11을, 뮤린 CDR 서열을 경쇄 배선 프레임워크 IGKV2-28, IGKV2-30, IGKV4-1, IGKV1-39 (또한 본원에서 DPK9로도 지칭됨), 및 IGKV3-11, 뿐만 아니라 중쇄 배선 프레임워크 IGHV3-7 (또한 본원에서 DP54로도 지칭됨), IGHV1-46, IGHV3-23, IGHV3-30, IGHV1-69, 및 IGHV3-48을 포함하는 표 1에 열거된 바와 같은 다양한 인간 배선 프레임워크에 그라프팅시켜 인간화하였다 (예를 들어, IMGT 데이터베이스 참조).
본원에서 "인간화 ADWA-11"로서 지칭되는 인간화 항체는 IGKV1-39 (예를 들어, DPK9) 경쇄 배선 프레임워크 및 IGHV3-7 (예를 들어, DP54) 중쇄 배선 프레임워크에 그라프팅된, 서열식별번호: 20-33 및 71-76에 제시된 바와 같은 6개의 뮤린 CDR 서열의 세트를 포함하였다. 또한 하기 표 1.1 및 1.2에 제시된 바와 같이 다른 배선 프레임워크 변이체를 시도하였다.
표 1.1
Figure pct00032
Figure pct00033
표 1.2
Figure pct00034
Figure pct00035
마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11 ("하이브리도마 mADWA-11" 및 "mADWA11"로 지칭됨), 인간화 ADWA-11 항체 ("huADWA11-2.4"), 및 IGHV3-07 및 IGKV1-39 배선 서열의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 비교하는 서열 정렬을 도 1a 및 1b에 제시한다. 밑줄표시된 아미노산 잔기는 카바트에 따른 CDR 서열이고, 볼드체 아미노산 잔기는 코티아에 따른 CDR 서열이다.
실시예 3: 인간화 항-αvβ8 인테그린 항체 내로의 프레임워크 돌연변이의 도입
마우스 하이브리도마 항체 ADWA11의 결합 친화도와 비교하여 αvβ8 인테그린에 대한 인간화 ADWA-11 항체의 결합 친화도를 개선시키기 위해, 표 2에 나타낸 바와 같이 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)에 프레임워크 치환을 갖는 여러 변이체를 생성하였다. 본 실시예에 기재된 중쇄 잔기는 서열식별번호: 127에 따라 넘버링되었다. 본 실시예에 기재된 경쇄 잔기는 서열식별번호: 128에 따라 넘버링되었다.
표 2. 인간화 ADWA11 항체 내로 도입된 프레임워크 치환
Figure pct00036
표 2에 열거된 다양한 세트의 프레임워크 치환을 조합함으로써 인간화 ADWA11 항체 변이체를 생성하였다. 이러한 조합은 ADWA11 VH01, ADWA11 VH02, ADWA11 VH03, ADWA11 VH04, 또는 ADWA11 VH05의 VH, 및 ADWA11 VK01 또는 ADWA11 VK02의 VL을 갖는 항체를 생성하였다.
인간화 ADWA11 항체 변이체 ADWA11 VH01/VK01, ADWA11 VH02/VK01, ADWA11 VH03/VK01, ADWA11 VH03/VK02, 및 ADWA11 VH05/VK01을 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 생성하고 평가하였다.
ADWA11 VH01/VK01로 지정된 인간화 ADWA11 항체 변이체는 VH에서 T28N 및 F29I 치환 (서열식별번호: 88), 및 VL에서 L46R 치환 (서열식별번호: 47)을 포함하였다.
인간화 ADWA11 항체 변이체 ADWA11 VH02/VK01은 VH에서 T28N, F29I, 및 R72A 치환 (서열식별번호: 89), 및 VL에서 L46R 치환 (서열식별번호: 47)을 포함하였다.
인간화 ADWA11 항체 변이체 ADWA11 VH03/VK01은 VH에서 T28N, F29I, R72A, A49G, 및 L79A 치환 (서열식별번호: 90), 및 VL에서 L46R 치환 (서열식별번호: 47)을 포함하였다.
인간화 ADWA11 항체 변이체 ADWA11 VH03/VK02는 VH에서 T28N, F29I, R72A, A49G, 및 L79A 치환 (서열식별번호: 90), 및 VL에서 L46R 및 Y36F 치환 (서열식별번호: 92)을 포함하였다.
인간화 ADWA11 항체 변이체 ADWA11 VH05/VK01은 VH에서 T28N, F29I, R72A, A49G, L79A, N74T, 및 A75S 치환 (서열식별번호: 39), 및 VL에서 L46R 치환 (서열식별번호: 47)을 포함하였다.
αvβ8 인테그린에 대한 ADWA11 VH01/VK01, ADWA11 VH02/VK01, ADWA11 VH03/VK01, ADWA11 VH03/VK02, 및 ADWA11 VH05/VK01의 Fab 결합 친화도를 결정하고 표 3에 열거하였다. 추가적으로, TGF-β 활성화의 억제에 대한 IC50 값을 또한 각각의 항체에 대해 결정하고 표 3에 열거하였다.
표 3. 인간화 ADWA11 항체 변이체의 특징화
Figure pct00037
표 3에 제시된 바와 같이, ADWA11 VH03/VK01, ADWA11 VH03/VK02, 및 ADWA11 VH05/VK01은 각각 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11과 비교하여 αvβ8 인테그린에 대해 개선된 결합 친화도를 입증하였다. ADWA11 VH03/VK01 (GBT) 및 ADWA11 VH05/VK01은 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11에 대해 결정된 536 pM의 KD보다 적어도 5-배 더 낮은 KD 값을 나타내는 100 pM 미만의 KD로 αvβ8 인테그린에 각각 결합하였다. 추가로, ADWA11 VH03/VK01 및 ADWA11 VH05/VK01은 각각 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11과 비교하여 TGF-β 전사활성화의 억제에 대해 더 낮은 IC50 값을 입증하였다.
본원에 일반적으로 기재된 바와 같이, ADWA11 VH05/VK01은 또한 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11의 활성, 특이성, 및 종 교차 반응성을 보유하는 것으로 추가로 결정되었다. 따라서, 본 실시예는 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11의 결합 친화도와 비교하여 αvβ8 인테그린에 대한 인간화 ADWA-11 항체의 개선된 결합 친화도를 입증한다.
실시예 4: 인간화 ADWA11 항체 변이체의 최적화
표 4에 열거된 바와 같은 단일 아미노산 치환을 인간화 항체 ADWA11 VH05/VK01의 안정성을 개선시키고/거나 면역원성을 감소시키는 그의 능력에 대해 평가하였다. 본 실시예에 기재된 중쇄 잔기는 ADWA11 VH05 (서열식별번호: 39)에 따라 넘버링된다. 본 실시예에 기재된 경쇄 잔기는 ADWA11 VK01 (서열식별번호: 47)에 따라 넘버링된다.
표 4. 단일 아미노산 치환
Figure pct00038
본원에 추가로 제시된 바와 같이, 중쇄의 가변 영역에서 K30A, N55Q, N57Q, D61E, 또는 P62A, 및 경쇄의 가변 영역에서 L30S, M56A, N58S, M94Q, L97Y, 또는 Q105G를 포함하는 단일 치환이 모 분자의 활성을 보유하는 것으로 밝혀졌다 (도 4a-4b). 추가적으로, 표 5에 열거된 바와 같은 상이한 단일 아미노산 치환의 조합을 또한 평가하였고, N55Q 및 D61E를 포함하는 이중 돌연변이체, 또는 N55Q, D61E, 및 F64V를 포함하는 삼중 돌연변이체를 함유하는 중쇄 서열이, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 모 분자의 활성을 보유하는 것으로 밝혀졌다 (도 4c).
보다 구체적으로, 표 5에 열거된 아미노산 치환의 조합을 포함하는, ADWA11 2.1 ("2.1"), ADWA11 2.2 ("2.2"), ADWA11 2.3 ("2.3"), 및 ADWA11 2.4 ("2.4")로 지칭되는 ADWA11 VH05/VK01 변이체를 생성하였다. ADWA11 VH05-2/VK01 변이체 ADWA11 2.1 및 ADWA11 2.4는, 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 보다 유리한 발현 및 활성 특성을 갖는 것으로 제시되었다. 본 실시예는 단일 아미노산 치환이 인간화 항체 ADWA11 VH05/VK01의 안정성을 개선시키고/거나 면역원성을 감소시켰음을 입증한다.
표 5. 아미노산 치환의 조합
Figure pct00039
실시예 5: 이펙터 기능이 없는 항-αvβ8 항체의 생성
표 1에 열거된 바와 같은 본 발명의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 이뮤노글로불린 G (IgG) 분자 내로 서브클로닝함으로써, 감소된 Fc-감마 수용체 결합 및 감소된 이펙터 기능 (예를 들어, 감소된 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 감소된 보체 의존성 세포독성 (CDC) 기능)을 갖는 항-αvβ8 인테그린 항체를 생성하였다.
이펙터 기능이 없는 마우스 항체를 생성하기 위해, 미국 공개 번호 US2009/0155256에 요약된 바와 같이, 마우스 하이브리도마 항체 ADWA-11로부터의 가변 영역을 E233P, E318A, K320A, 및 R322A 단일 아미노산 치환을 함유하는 마우스 IgG1 Fc 백본 내로 서브클로닝하였다. 이 항체는 본원에서 ADWA-11_4mut, 및 mIgG_4mut로 지칭된다. 마우스 avB8에 대한 ADWA-11_4mut 결합은 C8-S 마우스 성상세포 (ATCC)를 사용하여 평가하였고, TGFB 활성화의 차단은 공동-배양 TMLC 루시페라제 검정에서 C8-S 세포를 사용하여 결정하였다.
이펙터 기능이 없는 인간 항체를 생성하기 위해, 인간화 항체 ADWA11 VH05VK01로부터의 가변 영역을 힌지 영역 내에 L234A, L235A, 및 G237A 단일 아미노산 치환을 함유하는 인간 IgG1 Fc 백본 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음) 내로 서브클로닝하였고, 이에 힌지 영역은 야생형 힌지 영역 아미노산 서열 EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (서열식별번호: 125) 대신 아미노산 서열 EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAP (서열식별번호: 126)를 포함하였다. 이펙터 기능이 없는 이러한 인간 모노클로날 항체는 본원에서 hIgG_VH05VK01로 지칭된다.
hIgG_VH05VK01의 경쇄 (서열식별번호: 123) 및 중쇄 (서열식별번호: 124)의 다양한 특색이 하기 서열에서 확인된다.
Figure pct00040
인간화 ADWA11VH05VK01의 상기 경쇄 및 중쇄 서열에서, CDR 서열은 밑줄표시되고; N-연결된 글리코실화 컨센서스 서열 부위는 중쇄의 아미노산 잔기 N295, S296, 및 T297에 존재하고; 잠재적 절단 부위는 중쇄의 아미노산 잔기 D52 및 P53에 존재하고; 잠재적 탈아미드화 부위는 경쇄의 아미노산 잔기 N33, G34, N35, 및 T36, 및 중쇄의 아미노산 잔기 N57, T58, N77, S78, N84, 및 S85에 존재하고; 잠재적 이성질화 부위는 중쇄의 아미노산 잔기 D90 및 T91에 존재하고; 잠재적 메티오닌 산화 부위는 경쇄의 아미노산 잔기 M4 및 M56, 및 중쇄의 M34, M102, 및 M426에 존재하고; 삼중 알라닌 돌연변이체는 중쇄의 아미노산 잔기 A232 A233, 및 A235에 존재하고; CDR 외부의 비-인간 잔기는 경쇄의 아미노산 잔기 R51, 및 중쇄의 G49, A72, T74, S75, 및 A79에 존재한다. 본 실시예에 기재된 중쇄 및 경쇄 내의 잔기는 각각 서열식별번호: 124 및 서열식별번호: 123에 따라 넘버링된다.
실시예 6: ELISA에 의한 항-αvβ8 인테그린 항체의 평가
ELISA 방법
비오티닐화된 인간 αvβ8 인테그린 (0.6 μg/ml의 50 μl)을 스트렙타비딘으로 코팅된 ELISA 플레이트 상에 포획하였다. 차단 및 세척 후, 관심 항체 (예를 들어, 뮤린, 키메라, 또는 인간화 변이체)를 다양한 희석으로 상이한 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 검출 항체, 항-인간 IgG-HRP를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 효소 기질 (TMB)을 첨가하여 10분 동안 발색시켰다. 0.16 M 황산의 첨가에 의해 효소 반응물을 켄칭하고, 최종 신호 강도를 450 nm에서 측정하였다.
결과
인간 αvβ8 (hαvβ8) 인테그린에 결합하는 것으로 확인된 마우스 하이브리도마 항체를 밀접하게 관련된 인테그린 인간 αvβ3 및 인간 αvβ6에 대한 결합에 대해 카운터 스크리닝하여, hαvβ8에 특이적으로 결합하는 뮤린 항체를 선택하였다. 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11은 hαvβ8 인테그린에 대해 특이적이었고, 밀접하게 관련된 인테그린 hαvβ3 또는 hαvβ6에는 결합하지 않았다 (도 2). 그러나, 인간화 ADWA11 항체 ADWA11 VH05/VK01은 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11과 비교하여 αvβ8 인테그린에 대해 실질적으로 개선된 친화도를 나타내었다 (도 3a-3b).
표 4 및 5에 열거된 바와 같은 아미노산 치환의 단일 또는 조합을 갖는 ADWA11 VH05/VK01의 항-αvβ8 인테그린 Fab 분자를 또한 hαvβ8 인테그린에의 결합에 대해 ELISA에 의해 평가하였다 (도 4a-4c). 도 4a에 제시된 바와 같이, 중쇄 가변 영역에서 K30A, N55Q, N57Q, D61E, P62A, 또는 K63A 단일 아미노산 치환을 갖는 Fab는 hαvβ8에 대한 결합 친화도를 보유하였다. 도 4b에 제시된 바와 같이, 경쇄 가변 영역에서 Y55A, A60Q, F101L, 또는 F101W 단일 아미노산 치환을 갖는 Fab는, 모 항체와 비교하여 hαvβ8에 대해 감소된 결합 친화도를 나타내었다. 도 4c에 제시된 바와 같이, 표 5에 열거된 바와 같은 아미노산 치환의 조합을 갖는 Fab는 hαvβ8에 대한 결합 친화도를 보유하였다.
본 실시예는 인간화 ADWA11 항체 ADWA11 VH05/VK01이 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11과 비교하여 αvβ8 인테그린에 대해 실질적으로 개선된 친화도를 나타내었고, 단일 아미노산 치환을 갖는 일부 Fab가 hαvβ8에 대한 결합을 보유하였다는 것을 입증한다.
실시예 7: 비아코어™에 의한 항-αvβ8 인테그린 항체의 평가
방법
비오티닐화된 재조합 αvβ8 인테그린을 스트렙타비딘-코팅된 비아코어™ 칩 (지이 헬스케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences)) 상에 포획하고, Fab 단편에 대한 결합 반응 대 시간을 일련의 Fab 농도에 걸쳐 측정하였다. 동역학적 곡선 피트와 오버레이된 대표적인 배경 차감 비아코어™ 센소그램을 수득하였다.
보다 구체적으로, 재조합 αvβ8 인테그린 (예를 들어, 알앤디 시스템즈)을 1차 아민을 통해 비오틴 표지하고, 비아코어™ T200 기기 (지이 헬스케어 라이프 사이언시스)를 사용하여 센서 칩 SA 상에 고정시켰다. Fab 결합 실험을 25℃에서 0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 1-2 mM MgCl2 및 0.005% v/v 계면활성제 P20 (HBS-P) 완충제 중에서 30 μl/분 유속을 사용하여 수행하였다. 각각의 Fab 농도에 대해 회합을 5-10분 동안 모니터링하고, 추가의 15-20분 동안 해리를 모니터링하였다. 각각의 주입 후에, 칩 표면을 IgG 용리 완충제 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))로 재생시켰다. 모든 데이터를 비아코어™ T200 평가 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 포획된 인테그린 없이 스트렙타비딘과 커플링된 인접한 유동 셀, 및 완충제 단독 주입을 사용하여 데이터를 이중 배경 차감하였다. 적어도 3회 실험에 대한 동역학적 상수를 수득하고 평균으로서 보고하였다.
결과
다양한 종으로부터의 αvβ8 인테그린에 대한 항체 결합을 평가하였다. 마우스 하이브리도마 ADWA-11 Fab 및 인간화 ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4) Fab는 둘 다 다른 종의 αvβ8 인테그린과 교차 반응하는 것으로 밝혀졌다. 마우스 하이브리도마 ADWA-11 Fab는 인간 αvβ8 인테그린, 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린, 및 마우스 αvβ8 인테그린과 교차 반응하였다. 인간화 ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4) Fab는 인간 αvβ8 인테그린, 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린, 및 마우스 αvβ8 인테그린과 교차 반응하였다. 추가적으로, 이들 항체를 관련 인테그린 hαvβ3 또는 hαvβ6에 결합하는 그의 능력에 대해 평가하였다. 이들 항체는, 도 5에 제시된 바와 같이, 비아코어 검정에서 hαvβ8에 대해 특이적이었고, 밀접하게 관련된 인테그린 hαvβ3 또는 hαvβ6에는 결합하지 않았다.
표 6에 열거된 친화도 측정의 비교는 인간화 ADWA-11 Fab가, 인간 αvβ8 인테그린 및 마우스 αvβ8 인테그린에의 결합에 대한 마우스 하이브리도마 ADWA-11 Fab의 KD와 비교하여, 인간 αvβ8 인테그린 및 마우스 αvβ8 인테그린 둘 다에의 결합에 대해 더 낮은 KD를 갖는다는 것을 보여준다. 보다 구체적으로, 인간화 ADWA-11 Fab는 마우스 하이브리도마 ADWA-11 Fab의 각각의 KD 값과 비교하여 인간 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 약 2.5-배 더 낮은 KD 및 마우스 αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 약 3.5-배 더 낮은 KD를 가졌다. 이들 데이터는 마우스 하이브리도마 항체에 비해 인간화 항-αvβ8 항체의 전반적인 실질적 친화도 개선을 보여준다 (도 6a-6b 및 표 6).
본원에서 또한 ADWA-11 VH05-2/VK01(2.4) 및 ADWA11 5-2 2.4로도 지칭되는 Fab ADWA11 2.4의 단량체 KD를 평가하기 위해, 모 마우스 IgG, 재조합 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8을 비아코어 칩 상에 고정시키고, Fab의 ka 및 kd를 본원에 일반적으로 기재된 바와 같이 결정하였다 (표 6). ADWA11 2.4는 <200 pM의 KD로 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8에 대해 동등한 친화도를 입증하였지만, 매우 느린 kd로 인해 KD의 정확한 결정은 가능하지 않았다. 모 마우스 IgG는 인간, 시노몰구스, 및 마우스 αvβ8에 대해 동등한 친화도 KD (489-536 pM의 KD)를 입증하였다 (래트는 시험되지 않음) (도 6c).
추가의 비아코어 실험으로 ADWA11 2.4에 대한 추정 KD 값을, 인간 및 시노몰구스 αvβ8에 대해서는 < 100 pM의 KD 및 마우스 αvβ8에 대해서는 70.8 ± 19.9 pM (평균 ± 표준 편차)로 정밀화하였다.
표 6. 비아코어에 의해 평가된 바와 같은 αvβ8 인테그린 종 친화도 (n ≥ 3)
Figure pct00041
ADWA11 2.4의 특이성을 평가하기 위해, 재조합 인간 αvβ6 및 αvβ3을 비아코어 칩 상에 고정시키고, ADWA11 2.4의 모 뮤린 및 인간화 mAb 변이체의 결합을 결정하였다. 모 하이브리도마 및 인간화 mAb는 αvβ3 또는 αvβ6에 결합하지 않았지만, 개별 비아코어 실험에서 αvβ8에 대한 결합이 관찰되었다. 범-인테그린 αV 항체를 사용하여 비아코어 칩 상의 αvβ3 또는 αvβ6 재조합 단백질의 고정화를 입증하였다. 따라서, 본 실시예는 또한 αvβ8에 대한 인간화 항체의 특이성을 입증한다.
실시예 8: 세포 결합 검정에서의 항-αvβ8 인테그린 항체의 평가
방법
MEM 10% hiFBS 중에서 배양된 인간 교모세포종 U251 (시그마(Sigma)) 또는 C8-S (ATCC) 세포를 사용하여 세포 결합 실험을 수행하였다. 70-90% 전면생장률로 성장한 세포를 0.05% 트립신으로 탈착시키고, 2% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하였다.
인간 αvβ3, αvβ5, αvβ6, αvβ8을 과다발현하는 HEK293-F 세포를 사용한 세포-결합 실험을 위해, 전장 인간 인테그린 베타 3 (수탁 번호 NP_000203.2), 인간 인테그린 베타 5 (수탁 번호 NP_002204.2), 인간 인테그린 베타 6 (수탁 번호 NP_000879.2), 또는 인간 인테그린 베타 8 (수탁 번호 NP_002205.1)을 일시적으로 발현하는 HEK293-F 세포를 독점적 벡터 및 판매업체 제공 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 세포를 4일 후에 수거하고, 인테그린 발현에 대해 분석하였다. 인테그린 αvβ3, αvβ5, αvβ6, αvβ8 발현을 특징화하기 위해, 100,000개의 세포를 표시된 상업적으로 입수가능한 항체 또는 직접 접합된 독점적 항체 중에서 30분 동안 1:2000의 라이브/데드(LIVE/DEAD) 고정가능한 세포 염색 (인비트로젠)과 함께 인큐베이션하여 살아있는 세포를 구별하였다. 세포를 5분 동안 300 g의 힘으로 회전시켰다. 이어서, 세포를 세척 완충제 (PBS+0.2% BSA)로 2회 세척하여 과량의 미결합 항체를 제거하고, 비디 바이오사이언시스 포르테사 유동 세포측정기 상에서 분석하였다.
살아있는 세포-결합 프로토콜: 100,000개의 세포를 항-αvβ8 또는 인간 IgG1_3mut 이소형 항체의 일련의 희석물과 얼음 상에서 3 내지 4시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 5분 동안 300 g의 힘으로 회전시켰다. 이어서, 세포를 세척 완충제 (PBS+0.2% BSA)로 3회 세척하여 과량의 미결합 항체를 제거하였다. 철저히 세척한 후, 세포를 1:1000 희석된 Fab'2 항-인간 Fc-PE (인비트로젠) 또는 염소 Fab'2 항-마우스-APC (잭슨 랩스(Jackson Labs))와 함께, 1:2000의 라이브/데드 고정가능한 세포 염색 (인비트로젠)과 함께 인큐베이션하여 살아있는 세포를 구별하였다. 전체 내용물을 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 염색된 세포를 비디 바이오사이언시스 포르테사 유동 세포측정기 (살아있는 세포에 대해 게이팅됨) 상에서 플로우조 분석 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 상이한 항체 농도에서의 평균 형광 강도 (MFI)를 다양한 항체에 대해 플롯팅하였다.
고정된 세포-결합 프로토콜: 일부 경우에, MEM 또는 10% hiFBS 중에서 배양된 인간 교모세포종 U251 (시그마) 세포를 사용하여 세포 결합 실험을 수행하였다. 70-90% 전면생장률로 성장한 세포를 0.05% 트립신으로 탈착시키고, 2% BSA를 함유하는 PBS로 2회 세척하였다. U251 (25,000개 세포)을 1:2000의 라이브/데드 고정가능한 세포 염색 (인비트로젠)과 함께 인큐베이션하여 살아있는 세포를 구별하였다. 세포를 5분 동안 300 g의 힘으로 회전시키고, 세척 완충제 (PBS + 0.2% BSA)로 세척한 다음, 2% 파라포름알데히드로 실온에서 10분 동안 고정시켰다. 고정된 세포를 세척 완충제로 2회 세척한 다음, 관심 항-αvβ8 항체의 일련의 희석물을 37도에서 1시간 동안 첨가하였다. 세포를 세척 완충제로 3회 세척하여 과량의 미결합 항체를 제거하였다. 철저히 세척한 후, 1:1000 희석된 Fab'2 항-인간 Fc-PE (인비트로젠) 또는 항-인간 카파 경쇄-APC (인비트로젠) 검출 항체를 세포에 첨가하고, 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 염색된 세포를 비디 바이오사이언시스 포르테사 유동 세포측정기 (살아있는 세포에 대해 게이팅됨) 상에서 플로우조 분석 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 상이한 항체 농도에서의 평균 형광 강도 (MFI)를 다양한 항체에 대해 플롯팅하였다.
결과
F64V를 포함한 중쇄 가변 영역에서의 단일 아미노산 치환 또는 L30S, M94Q, L97Y, F101L, F101W, 또는 Q105G를 포함한 경쇄 가변 영역에서의 단일 아미노산 치환, 또는 표 5에서 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.1 (F64V), 2.2 (F64V), 2.3 (F64V), 및 2.4 (F64V)로 지칭되는 아미노산 치환의 조합을 갖는 ADWA11 VH05/VK01 Fab에 대한 고정된 U251 세포 결합 데이터를 수득하고 모 항체와 비교하였다 (도 7a-7c).
또한 항체 mIgG_4mut 및 hIgG_VH05VK01 (또한 ADWA11 2.4로도 지칭되고, 실시예 5에 추가로 기재됨)에 대한 U251 세포 결합 데이터를 수득하였다 (도 8). U251 세포에 대한 mIgG_4mut 및 hIgG_3mut_VH05VK01의 겉보기 친화도를 하기 표 7에 제시한다. 이들 데이터는 hIgG_3mut_VH05VK01가 mIgG_4mut와 비교하여 더 높은 친화도를 갖는 것으로 결정되었음을 입증한다.
표 7. U251 세포 결합 검정으로부터의 친화도 값
Figure pct00042
U251 (인간 교모세포종) 또는 C8-S (마우스 성상세포) 세포에 대한 ADWA11 2.4의 겉보기-친화도를 또한 본원에 일반적으로 기재된 바와 같은 방법에 따라 세포-결합 검정에서 평가하였다. 간략하게, 세포를 ADWA11 2.4의 연속 희석물과 함께 얼음 상에서 4시간 동안 인큐베이션한 다음, 항-인간-PE 2차 항체를 사용하여 결합된 항체를 검출하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. ADWA11 2.4는 인간 αvβ8 및 마우스 αvβ8-발현 세포에 대한 포화가능한 결합을 입증하였고, U251 (인간 αvβ8) 세포-결합 검정에서 평균 EC50은 126 pm 플러스 또는 마이너스 34 pM의 표준 편차였다 (도 9a; n = 3).
추가의 연구에서, 인간 U251 세포에 대한 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4) 결합의 EC50은 256 ± 115 pM (7개의 독립적인 실험에서 평균 ± 표준 편차)인 것으로 결정되었고, 마우스 C8-S 세포에 대한 결합은 145 ± 23.7 pM (4개의 독립적인 실험에서 평균 ± 표준 편차)인 것으로 결정되었다.
일시적으로 과다발현된 인테그린 β 패밀리 구성원을 사용한 HEK293F 세포-결합 실험은 ADWA11 2.4가 인간 αvβ8을 발현하는 세포에 특이적으로 결합하지만, αvβ3, αvβ5, 또는 αvβ6을 발현하는 세포에는 결합하지 않는다는 것을 입증한다 (도 9b). 따라서, ADWA11 2.4는 모 마우스 항체 ADWA11과 비교하여 개선된 특징을 입증하였고, 이에 의해 인간화 ADWA11 2.4는 잠재적으로 개선된 인간 치료제인 것으로 시사되었다.
실시예 9: αvβ8 유도된 TGF-β 활성화 검정에서의 항-αvβ8 인테그린 항체의 평가
방법
TGFβ 경로 전사활성화에 대한 항-αvβ8 항체의 효과를 U251-MG (시그마) 및 Mv1Lu-SMAD-루시페라제 리포터 세포를 사용하여 측정하였다. 일부 실험에서, C8-S 마우스 성상세포를 U251 세포 대신 사용하였다. 간략하게, 밍크 폐 상피 세포주 MvLu1 세포 (ATCC)를 시그날(Cignal) SMAD 리포터 (luc) 렌티바이러스 입자 (사바이오사이언스(SABioscience))로 50의 감염 다중도 (MOI)로 형질도입하였다. 2μg/mL 퓨로마이신이 보충된 완전 성장 배지 (L-글루타민 + 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 MEM 플러스 10% 태아 소 혈청 (FBS))에서 세포를 배양하여 SMAD 반딧불이 루시페라제 구축물을 발현하는 안정한 세포주를 생성하였다. 실험을 위해, U251 세포 (2% 목탄-스트리핑 FBS를 함유하는 MEM 배지 중 50 μL 중 5000개 세포)를 투명한 바닥의 백색-벽 TC-처리된 96 웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 항-αvβ8 항체, 예를 들어, FAB 항체의 일련의 희석물을 2% 목탄-스트리핑 FBS를 함유하는 MEM 배지 중에 제조하고, 플레이팅된 U251 세포에 웰당 25μl로 첨가하였다. 1시간의 인큐베이션 후에, Mv1Lu-SMAD-루시페라제 리포터 세포를 각각의 웰에 첨가하고 (25 μL 중 5000개 세포/웰), 37℃에서 18시간의 인큐베이션 후에 브라이트 글로 시약 (프로메가(Promega))을 사용하여 제조업체가 제안하는 프로토콜에 따라 루시페라제 활성을 측정하였다. 엔비전 플레이트 판독기를 사용하여 1s 통합 시간으로 발광을 측정하였다.
결과
감소된 루시페라제 활성을 평가함으로써 U251 세포의 αvβ8 유도된 TGF-β 전사활성화에 대한 다양한 항체의 억제 활성을 모니터링하였다 (도 10a-10f).
도 10a는 실시예 3에 기재된 바와 같이 생성된 항체의 비교를 도시하고, ADWA11 VH05/VK01 (또한 VH05-VK01 Fab로도 지칭됨)과 모 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11 (mFab) 사이의 비교를 포함한다. TGF-β 전사활성화 검정에서 겉보기 친화도에 의해 측정된 EC50 값은 모 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11 (mFab)에 대한 4.6 nM로부터 ADWA11 VH05/VK01 (또한 VH05-VK01 Fab로도 지칭됨)에 대한 1.3 nM로 개선되었다.
U251 세포에 의한 TGFβ 전사활성화에 대한 ADWA11 VH05/VK01의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에서 이루어진 아미노산 치환의 영향을 또한 평가하였다 (도 10b-10d). 경쇄 가변 영역에서 F101L 또는 F101W 단일 아미노산 치환을 갖는 Fab는 ADWA11 VH05/VK01 Fab와 비교하여 감소된 TGFβ 전사활성화를 나타내었다.
U251 세포의 αvβ8 유도된 TGF-β 전사활성화에 대한 인간화 ADWA-11 IgG 분자의 효과의 비교를 또한 루시페라제 활성 검정을 사용하여 모니터링하였다 (도 10e). 이들 데이터는 VH05/VK01-D61E 및 -N55Q-D61E 돌연변이체가 TGFβ 전사활성화에 대해 대등한 효과를 갖는다는 것을 보여준다.
대안적으로 본원에서 ADWA11 2.4로 지칭되는 ADWA11_VH05-2_VK01(2.4)의 효능을 평가하기 위해, TGFβ-감수성 루시페라제 리포터 세포 시스템을 사용하여 αvβ8을 내인성으로 발현하는 인간 및 마우스 세포와의 공동-배양 시스템을 확립하였다. 간략하게, U251 (인간 교모세포종) 또는 C8-S (마우스 성상세포) 세포를 시그날 SMAD 리포터 (luc) 렌티바이러스 입자 (사바이오사이언스)로 50의 감염 다중도 (MOI)로 안정하게 형질도입된 밍크 폐 상피 세포 (Mv1Lu) (Mv1Lu-Smad 세포)와 함께 플레이팅하였다. Mv1Lu-Smad 세포는 U251 또는 C8-S 세포에 의해 생성된 TGFβ에 반응하고, αvβ8 기능의 억제는 루시페라제 활성의 감소에 의해 모니터링될 수 있다. 도 10f는 이소형 음성 대조군 항체와 비교하여, U251 세포 및 C8-S에 의한 TGFβ 전사활성화에 대한 ADWA11 2.4의 효과를 보여준다.
이들 데이터는 ADWA11 2.4가 마우스 ADWA11 모노클로날 항체를 포함한 다른 항체보다 αvβ8 유도된 TGF-β 전사활성화의 더 강력한 억제제임을 입증한다. U251 세포를 사용한 TGFβ 전사활성화 검정에서 ADWA11 VH05-2/VK01(2.4)에 대한 IC50은 199 ± 93.6 pM인 것으로 결정되었다 (5회의 독립적인 실험에서 평균 ± 표준 편차).
실시예 10: 항-αvβ8 인테그린 항체의 면역원성의 평가
주요 조직적합성 복합체 (MHC)에 결합하는 펩티드의 기능적 유의성을 T 세포 증식 검정에 의해 평가하였다. T-헬퍼 세포 상에서 발현되는 막횡단 당단백질인 CD4는 항원 제시 세포 (APC)의 표면 상의 펩티드 결합된 MHC 부류 II 분자를 인식한다. 이러한 상호작용은 T-헬퍼 세포의 증식을 발생시키고, 이는 면역 반응으로 이어진다. 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르 (CFSE) 염료를 함유하는 개별 세포의 형광 강도에서의 감소에 의해 T-세포 증식을 모니터링하였다. 프로이뮨(ProImmune)의 리빌(REVEAL)® 면역원성 시스템 T 세포 검정은 유동 세포측정 방법을 사용하여 CFSE 염료 표지된 세포의 분열을 분석한다. 다양한 공여자로부터의 PMBC를 CFSE와 함께 인큐베이션하여 세포내 형광 접합체를 형성시켰다. CFSE의 형광 강도는 각각의 연속 세포 분열을 통해 반으로 줄고, 따라서 세포 증식의 측정을 가능하게 한다. 이러한 신뢰할 수 있고 재현가능한 CFSE-표지된 T 세포 검정은 MHCII 제시된 펩티드 상의 잠재적인 CD4-T 세포 에피토프를 결정하는데 유용하다. 인플루엔자/파상풍 및 투베르쿨린 정제된 단백질 유도체 (PPD)로부터 유래된 펩티드 대조군을 세포 증식에 대한 양성 대조군으로서 사용하였다.
CDR을 포괄하는 29개의 펩티드를 51명의 공여자로부터 유래된 PBMC를 사용하여 T-세포 증식에 대해 시험하였다 (표 1, 서열식별번호: 94-122). CFSE 표지된 PBMC를 7일 동안 시험 펩티드와 함께 인큐베이션하고, CD4+ T 세포 증식의 정도를 유동-세포측정 방법에 의해 모니터링하였다. 최적화된 분자로부터 유래된 펩티드에 대한 반응자의 수를 상응하는 배선 서열 펩티드에 대한 반응자의 수와 비교하였다.
공지된 MHC 부류 II 에피토프를 포함하는 참조 항원을 본 연구에 사용하였다. 투베르쿨린 정제된 단백질 유도체 (PPD)는 미코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis)의 유도체이고, 5μg/ml의 최종 검정 농도로 사용되었다. PBMC 공여자의 대략 70-100%는 이전의 백신접종의 결과로서, 즉 기억 면역 반응을 통해 이 단백질에 반응할 것으로 예상된다.
키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH)은 인식된 강력한 나이브 단백질 면역원으로, 검정에서 0.25mg/ml의 최종 농도로 사용되었다. 전형적으로 공여자의 50-80%가 이러한 단백질에 반응할 것으로 예상될 수 있고, 이는 아마도 나이브 면역 반응에 의해 구동될 것이다.
합성 펩티드 HA는 인플루엔자 A 헤마글루티닌 (PKYVKQNTLKLAT, 잔기 307-3192; 서열식별번호: 129)로부터 유래되고, 5μM의 최종 검정 농도로 사용되었다. 공여자의 최대 50%에서 반응을 도출할 것으로 예상된다.
합성 펩티드 TT (AQYIKANSKFIGITEL (서열식별번호: 130), 파상풍 톡소이드로부터의 TET 830 변형된/T-헬퍼 에피토프)는 T-세포 활성화를 유도하는 범용 인간 파상풍 독소 T 세포 에피토프이고, 백신접종에서 헬퍼 펩티드로서 사용된다. 이를 5uM의 최종 검정 농도로 사용하였고, 공여자의 최대 45%가 반응할 것으로 예상되었다.
중쇄에서의 F64V 치환 (서열식별번호: 105)은 면역원성을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 51명의 공여자의 PBMC 중 11개는 CD4+ T 세포 증식 검정에서 반응하였고, 어떠한 공여자도 상응하는 배선 서열에는 감수성이지 않았다. Q105G (서열식별번호: 111), L30S (서열식별번호: 106), M94Q (서열식별번호: 107), 및 N58S (서열식별번호: 113)를 포함하는 다른 치환은 표 8에 제시된 바와 같이 각각 상이한 정도로 면역원성을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 양성 대조군 펩티드와 비교하여 상이한 CDR 펩티드에 대한 반응자 백분율을 도 11에 제시한다.
표 8
Figure pct00043
#공여자 PBMC의 수는 CD4+ T 세포 증식 검정에서 반응하였다.
이들 데이터는 ADWA11 2.4를 포함한 본 발명의 특정 항체가 마우스 모 mAb ADWA11과 비교하여 감소된 T 세포 반응을 나타낸다는 것을 입증한다. 이들 결과는 ADWA11 2.4가 그의 마우스 모 항체와 비교하여 개선된 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
실시예 11: αvβ8의 억제는 EMT6 종양 모델에서 항-PD-1 요법의 효능을 개선시킨다
방법
이 연구에서, 3x105 EMT6 (ATCC) 세포를 Balb/c 마우스 (찰스 리버 래보러토리(Charles River Laboratory))의 제4 유방 지방 패드 내로 또는 피하로 이식하였다. 마우스를 그의 종양이 평균 50 mm3에 도달하였을 때 처리군으로 무작위화한 다음, 처리를 개시하였다. 처리를 위해, 마우스에게 10 mg/kg의 용량의 표시된 항체 2A3_래트 IgG ("2A3"; 바이오엑셀(BioXcell)), 항-PD-1 항체 ("PD1"; 클론 RMP1-14, 바이오엑셀), 2B8_mIgG1_4mut ("2B8"), 또는 ADWA11_mIgG1_4mut (ADWA11)를 총 3회 투여량 투여로 4일마다 정맥내 주사에 의해 제공하였다. 종양을 2차원으로 측정하여 성장을 모니터링하였고, 여기서 부피 (V) = ½ L x W2이고, L (길이)은 종양의 가장 긴 직경으로서 정의되고, W (폭)는 L과 수직이다. 연구 종료시까지 주당 2-3회 종양 측정치를 기록하였다.
결과
항-PD1 요법과 조합된 항-αvβ8 (ADWA11) (ADA11 + PD1)은 항-PD1 또는 항-αvβ8 단독요법 처리군에 비해 상승작용적이고 유의하게 종양 성장을 감소시켰고 생존을 개선시켰다 (도 12a 및 12b).
10 mg/kg 단독요법 용량 군에서 ADWA11 처리는 연구의 제13일에 47.1% 종양 성장 억제 (TGI)를 발생시켰지만, TGI는 일시적이었고, 어떠한 마우스도 연구의 종료에 도달하지 못했다 (제51일에 0% 생존). 항-PD1 단독요법 처리는 연구의 제14일에 15% TGI를 발생시켰고, 어떠한 마우스도 연구의 종료에 도달하지 못했다 (제51일에 0% 생존). 그에 비해, 항-PD-1 항체와 조합된 ADWA11 (10mg/kg 용량 군)은 연구의 제14일에 90.0% TGI를 발생시켰고, 마우스의 60%가 연구의 종료에 도달하였다 (제51일에 60% 생존).
이들 결과는 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 PD-1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체와 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 PD-1 억제제와 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
실시예 12: αvβ8의 억제는 EMT6 모델에서 4-1BB 및 항-CTLA4 요법의 효능을 개선시킨다
방법
이 EMT6 종양 효능 연구에서, 1x106 EMT6 (ATCC) 세포를 Balb/c 마우스(찰스 리버 래보러토리)의 제4 유방 지방 패드 내로 이식하였다. 종양이 평균 100mm3에 도달하였을 때 마우스를 무작위화하고, 처리를 개시하였다. 마우스에게 4-1BB (MAB9371 알앤디 시스템즈, 1mg/kg 제0일 및 제4일), 항-CTLA4 (클론 9D9 바이오엑셀, 10mg/kg 제0일, 제4일, 및 제8일), 항-αvβ8 (ADWA11, 10mg/kg 제0일, 제4일, 및 제8일), 2B8_mIgG_4mut (10mg/kg, 제0일, 제4일, 및 제8일), 또는 2A3_래트 IgG (바이오엑셀, 10mg/kg 제0일, 제4일, 및 제8일)의 i.v. 투여를 제공하였다. 종양을 2차원으로 측정하여 성장을 모니터링하였고, 여기서 부피 (V) = ½ L x W2이고, L (길이)은 종양의 가장 긴 직경으로서 정의되고, W (폭)는 L과 수직이다. 연구 종료시까지 주당 2-3회 종양 측정치를 기록하였다.
면역조직화학 (IHC) 분석: 맞춤형 프로토콜 및 레이카 본드-맥스 (Leica Bond-max) 자동화 IHC 염색기를 사용하여 CD8, CD45, 및 그랜자임 B 발현에 대한 4 mm 두께 포르말린 고정 파라핀 포매 (FFPE) 종양 조직 절편을 제조하였다. 영상은 레이카/아페리오(Aperio) AT2 전체 슬라이드 디지털 스캐너 상에서 20X 배율 설정을 사용하여 획득하였다. 비지오팜 7.2(Visiopharm 7.2) 소프트웨어에서 생성된 맞춤 알고리즘을 사용하여 영상을 분석하고, 각각의 관심 표적에 대해 최적화하였다. 생존 조직에 대해 세포 카운팅을 수행하고, 생존 조직 면적에 의해 정규화하였다. 세포 밀도는 하기 방정식: 세포/μm2 = (#양성 세포/생존 종양 면적 (μm2))*1 x 106을 사용하여 계산하였다. 퍼센트 대상 밀도는 하기 방정식: 염색 면적 (μm2)/생존 종양 면적 (μm2)을 사용하여 계산하였다.
결과
항-4-1BB 또는 항-CTLA4와 조합된 항-αvβ8 (ADWA11)은 항-4-1BB, 항-CTLA4, 또는 항-αvβ8 단독요법 처리군에 비해 유의하고 상승작용적이게 종양 성장을 감소시켰고 생존을 개선시켰다 (도 13).
항-αvβ8 항체를 사용한 처리 후 종양 침윤 세포 밀도에서의 변화를 평가하였다 (도 15). EMT6 종양 모델에서 CD45 (총 림프구 및 골수 세포), CD3 (총 T 세포), CD4 T 세포, CD8 T 세포, 및 그랜자임 B (활성화된 CD8 및 NK 세포) 염색의 밀도의 IHC 분석에 의해 림프구 존재비를 정량화하였다. 이들 데이터는 항-αvβ8 단독요법이 총 CD45+ 세포, CD4+ T 세포, 및 CD8+ T 세포의 존재비를 증가시켰고, 그랜자임 B 발현 세포의 밀도를 매우 유의하게 증가시켰음을 입증하였다 (각각의 군에 대해 n = 10).
이소형 대조군 또는 ADWA11 (2.4)로 처리된 마우스로부터 제11일에 (제0일, 제3일, 제6일, 제9일에 항체 처리) 종양 조직에서의 종양 림프구 존재비를 분석하였다 (도 15). ADWA11 (2.4) 처리는 종양 미세환경에서 총 백혈구 (CD45+, 1540±558 vs 2470±407), CD8 T 세포 (CD8+, 76.3±62.7 vs 170±74.2) 및 세포독성 세포 (% 그랜자임 B 밀도, 11.8±11.0 vs 106±35.1)의 밀도를 증가시켰다 (이소형 vs ADWA11 (2.4) 처리에서의 mm2당 세포 CD45+의 평균 수, 세포 CD8+의 평균 수, 또는 평균 % 그랜자임 B 염색 면적 ± 표준 편차).
이들 결과는 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 4-1BB의 효능제, 예를 들어 항-4-1BB 항체와 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 4-1BB의 효능제와 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
이들 결과는 또한 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 CTLA4의 억제제, 예를 들어 항-CTLA4 항체와 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 CTLA4의 억제제와 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
실시예 13: αvβ8의 억제는 CT26 종양 모델에서 방사선 요법의 효능을 개선시킨다
방법
CT26 종양 효능 연구: 4x105 CT26 (ATCC) 세포를 Balb/c 마우스 (찰스 리버 래보러토리)의 측복부에 피하로 이식하였다. 종양이 평균 100mm3에 도달하였을 때 마우스를 무작위화하고, 처리를 개시하였다. 마우스에게 4일마다 3회의 총 용량의 2B8_mIgG1_4mut (사내) 이소형 대조군 또는 ADWA11_mIgG1_4mut의 10mg/kg i.v. 용량, 및 제1 용량 후 제5일에 5Gy 종양 표적화 방사선의 단일 선량을 제공하였다. 종양을 2차원으로 측정하여 성장을 모니터링하였고, 여기서 부피 (V) = ½ L x W2이고, L (길이)은 종양의 가장 긴 직경으로서 정의되고, W (폭)는 L과 수직이다. 연구 종료시까지 주당 2-3회 종양 측정치를 기록하였다.
유전자 발현의 qPCR 분석: 종양 조직을 수집하고, 30 mg의 조직을 오민 비드 루프토르(Omin Bead Ruptor)를 사용하여 RN이지 플러스 미니 키트(RNeasy Plus Mini Kit)에 공급된 900 μL의 용해 완충제 중에서 균질화시켰다. RN이지 플러스 미니 키트 및 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 균질화된 종양 샘플로부터 RNA를 단리하였다. 2 μg의 총 RNA 및 고성능 cDNA 역전사 키트를 사용하여 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 cDNA를 합성하였다. 50 ng의 cDNA 및 유전자-특이적 택맨 프라이머, 택맨 유니버셜 마스터 믹스 II(TaqMan Universal Master Mix II), 및 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 유전자 발현을 분석하였다. ViiA7 실시간 qPCR 시스템을 qPCR 연구에 사용하였다. 각각의 샘플에 대한 역치 사이클 (CT)을 권장 비교 CT 방법을 사용하여 분석하였고, 표적 유전자의 발현을 이소형 대조군과 비교하여 처리군의 배수 변화로서 보고하였다. 양측 독립표본 스튜던트 T-검정을 사용하여 처리군을 이소형 대조군과 비교하였고, 유의성은 < 0.05에서 보고되었다.
면역조직화학 (IHC) 분석: 맞춤형 프로토콜 및 레이카 본드-맥스 (Leica Bond-max) 자동화 IHC 염색기를 사용하여 CD8, CD45, 및 그랜자임 B 발현에 대한 4 mm 두께 포르말린 고정 파라핀 포매 (FFPE) 종양 조직 절편을 제조하였다. 영상은 레이카/아페리오(Aperio) AT2 전체 슬라이드 디지털 스캐너 상에서 20X 배율 설정을 사용하여 획득하였다. 비지오팜 7.2(Visiopharm 7.2) 소프트웨어에서 생성된 맞춤 알고리즘을 사용하여 영상을 분석하고, 각각의 관심 표적에 대해 최적화하였다. 생존 조직에 대해 세포 카운팅을 수행하고, 생존 조직 면적에 의해 정규화하였다. 세포 밀도는 하기 방정식: 세포/μm2 = (#양성 세포/생존 종양 면적 (μm2))*1 x 106을 사용하여 계산하였다.
결과
방사선 요법과 조합된 항-αvβ8 항체 (ADWA11)는 방사선 요법 단독에 비해 유의하게 종양 성장을 감소시키고 생존을 개선시켰다 (도 14a).
CT26 연구에서, ADWA11 항체 (항-ITGαVβ8) 단독요법은 연구의 제19일에 64.3% TGI를 발생시켰지만, 반응은 일시적이었고, 10마리의 마우스 중 단지 1마리만이 연구의 종료에 도달하였다 (10% 생존, 제57일). 방사선 요법 단독 (제5일에 5 그레이 (Gy) 선량)은 57.7% 종양 성장 억제를 발생시켰고 (제18일), 20마리 마우스 중 1마리가 연구의 종료에 도달하였다 (5% 생존, 제57일). 그에 비해, 방사선 요법과 조합된 ADWA11 처리는 87.7% 종양 성장 억제를 발생시켰고 (제19일, 10 mg/kg ADWA11 및 5 Gy 방사선 요법 선량 군), 19마리의 마우스 중 9마리가 연구의 종료에 도달하였다 (47.4% 생존, 제57일).
CT26 종양 모델에서 종양 림프구 존재비에 대한 ADWA11의 효과를 조사하기 위해, 종양 조직을 이소형 대조군 또는 ADWA11 VH05-2/VK01 (항-ITGαVβ8)로 처리된 마우스로부터 제12일 (제0일, 제4일, 제8일에 항체 처리)에 수집하고, IHC에 의해 림프구 마커에 대해 분석하였다 (도 14b, 상부 패널). ADWA11 VH05-2/VK01 처리는 총 CD45+ 백혈구의 밀도를 증가시켰다; 이소형: 367±128, ADWA11 VH05-2/VK01: 695±94.8 (mm2당 세포의 평균 수 ± 표준 편차). CD8+ T 세포; 이소형: 173±79.3, ADWA11 VH05-2/VK01: 374±80.4 (mm2당 세포의 평균 수 ± 표준 편차). 그랜자임 B 발현 세포독성 세포, 이소형: 종양 미세환경에서 264±65.5, ADWA11 VH05-2/VK01: 514±91.7 (mm2당 세포의 평균 수 ± 표준 편차). 추가적으로, 방사선 요법과 조합된 항-ADWA11 처리는 종양 미세환경에서 CD45 (3.86±0.979), CD8a (5.45±3.53), 그랜자임 B (4.21±1.02), 및 IFNγ (5.53±2.13)의 mRNA 발현 수준을 증가시켰다 (배수 변화 ± 표준 편차 vs 이소형 처리군) (도 14b, 하부 패널).
이들 연구는 항-ITGαVβ8 (ADWA11_mIgG1_4mut) 처리가 종양 미세환경에서 활성화된 림프구의 존재비를 증가시키고, 종양 표적화 방사선과 조합 시 종양 퇴행 및 장기간 생존을 유발하는데 효과적임을 입증한다.
이들 결과는 또한 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 방사선 요법과 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 방사선 요법과 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
실시예 14: 신규한 종양 면역의 억제제 및 종양 면역요법을 위한 표적으로서의 인테그린 αvβ8의 평가
본 연구에서, Itgb8 녹아웃 마우스를 재조합 αvβ8로 면역화하여 생성한 강력한 αvβ8 차단 모노클로날 항체 (ADWA-11)를 사용하여, 이러한 인테그린의 억제가 항종양 면역을 용이하게 할 수 있는지 조사하였다.
비-신생물성 조직에서, αvβ8 인테그린은 신경상피, 섬유모세포, 수지상 세포, 및 T 세포 상에서 발현되고, 중요한 면역조정제인 잠복성 형질전환 성장 인자 β (TGFβ)를 활성화시킬 수 있다. 본원에 제시된 바와 같이, 암종 내에서, 골수 세포는 αvβ8 인테그린을 발현하고, αvβ8을 차단하는 강력한 모노클로날 항체 (ADWA-11)는, 특히 다른 면역조정제 (항-PD1, 항-CTLA-4 또는 4-1BB) 또는 방사선요법과 조합되었을 때, 편평 세포 암종, 유방암 및 결장암의 동계 모델에서 성장 억제 또는 완전한 종양 퇴행을 유발한다. ADWA-11에 의한 처리는 CD8+ T 세포의 종양 침윤 및 그랜자임 B 발현을 증가시키고, 염증유발성 대 억제성 종양 연관 대식세포의 비를 증진시킨다. 대부분의 인간 종양은 ITGB8 mRNA를 발현하고, 본원에 제시된 바와 같이, 인간 난소 및 신세포 암종의 생검에서 단핵구, 대식세포, 및 수지상 세포 하위세트 상에 높은 수준의 표면 αvβ8 발현이 존재한다. 이들 발견은 αvβ8 인테그린을 암 면역요법을 위한 유망한 새로운 표적으로서 확인시켜준다.
편평 세포 암종 모델에서 ADWA-11 및 항-PD-1을 사용한 효과적인 상승작용적 조합 면역요법
단독으로 또는 항-PD-1 항체와 조합된 ADWA11의 효과를 확립된 편평 세포 암종 (CCK168 세포)의 동계 종양 모델에서 검사하였다 (도 16a 및 도 28). FVB 마우스로부터 유래된 화학적으로 유도된 편평 세포 암종 세포주인 CCK168 세포를 동계 야생형 FVB 마우스의 배외측 우측 측복부에 피하로 1.5x104개 세포/마우스의 투여량으로 주사하였다.
종양을 14일에 걸쳐 성장시켰다. 실험을 위해 선택된 마우스는 직경이 적어도 5mm인 종양 크기를 가졌고, 종양 크기에 기초하여 스터디로그(studylog) 소프트웨어를 사용하여 상이한 처리군 사이에 최적으로 분배하였다. 마우스를 칭량하고, 종양 크기를 추적가능한 디지털 캘리퍼 (피셔 사이언티픽, 모델 #14-648-17)를 사용하여 연구의 지속기간 동안 격일로 측정하였다. 종양 크기가 2000 mm3에 도달하거나 이를 초과했을 때 또는 종양 부위에 큰 궤양화가 발생했을 때 마우스를 안락사시켰다.
마우스를 제0일 및 제7일에 하이브리도마 항체 ADWA11 또는 이소형-매칭된 대조군 항체로 처리하고, 제0일, 제4일 및 제8일에 마우스 항-PD-1 항체 (RMP1-14, 바이오엑셀) 또는 그의 이소형-매칭된 대조군 항체로 처리하였다 (제0일은 요법의 제1일임). 각각의 군에 대한 적절한 항체 및 이소형 대조군 항체를, 각각의 항체, ADWA11, 항-PD-1 항체 (RMP1-14, 바이오엑셀), 대조군 항체 ADWA-21 (ADWA11에 대한 것), 및 대조군 2A3 (바이오엑셀)의 10mg/Kg의 용량으로 복강내로 주사하였다. 대조군 ADWA-21은 인간 인테그린-β8에 결합하지만 마우스 인테그린-β8에는 결합하지 않는다.
CCK168 종양은 항-PD1 항체에 대해 최소 반응을 입증하였지만, ADWA11 단독요법으로 처리된 10마리의 마우스 중 5마리가 종양 퇴행을 나타내었다 (도 16b-16c). ADWA11 및 항-PD1 항체의 조합 요법은 10개의 종양 중 8개의 완전한 퇴행을 유도하였고, 마우스를 하이브리도마 ADWA11 및 항-PD1 항체 (도 16b) 또는 ADWA11_4mut_mIgG1 및 항-PD1 항체 (도 28)로 처리하였을 때 전체 생존의 유의한 증가를 유도하였다.
생존 마우스를 종양 퇴행 후 최대 2년 동안 관찰하였고, 어떠한 것도 후속 종양 재성장의 증거를 나타내지 않았다. 조합 요법 후 완전 퇴행을 갖는 2회의 반복 실험으로부터의 13마리의 마우스 및 ADWA11로의 단독요법 후 완전 퇴행을 갖는 3마리의 마우스를 CCK168 세포로 1회 또는 2회 재-챌린지하였고, 어떠한 마우스에서도 종양 성장이 존재하지 않았고, 이는 장기간의 종양 면역의 발생을 입증한다.
이들 결과는 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 PD-1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체와 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 PD-1 억제제와 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
표면 인테그린 αvβ8은 종양 미세환경 내의 골수 세포 상에 존재한다.
유동 세포측정법을 이용하여 αvβ8 이종이량체로서 발현되는 것으로 추정되는, 인테그린 β8을 발현하는 종양의 세포 유형을 확인하였다 (도 17a 및 도 17b). αvβ8 발현은 CCK168 종양 내의 80% 초과의 CD45+CD11b+F4/80+CD64+ 대식세포 및 20% 미만의 CD45+CD11b+F4/80-CD64-CD11c+MHCII고 수지상 세포 상에서 용이하게 검출가능하였다 (도 17b). αvβ8은 초기 침윤 (염증유발) Ly6C+ 세포 및 면역억제 CD206+ 세포를 포함하여, 검사한 대식세포 하위집단 각각에서 유사한 수준으로 발현되었다 (도 17b). αvβ8은 또한 시험관내 CCK168 종양 세포 상에서 발현되었다 (도 18b). 또한 생체내 CD45- 종양 및 기질 세포 상에서 낮은 수준의 αvβ8 발현이 발견되었다 (도 18a). αvβ8의 발현은 종양내 T 세포 상에서는 발견되지 않았다 (도 20).
동물
모든 동물 연구는 샌프란시스코 소재의 캘리포니아 대학교 동물 실험 윤리 위원회 및 화이자, 인크.의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행하였다. 사용된 야생형 FVB/N 마우스는 잭슨 래보러토리즈 (더 잭슨 래보러토리즈(The Jackson Laboratories), 스톡 #001800)로부터 구입하거나, 또는 이 스톡으로부터 유래된 본 발명자들의 육종 콜로니로부터 유도하였다. 야생형 Balb/c 마우스는 찰스 리버 래보러토리즈 (찰스 리버 래보러토리즈, 계통 코드 028)로부터 구입하였다.
인간 종양 프로세싱
모든 인간 샘플의 경우, 모든 대상체로부터 사전 동의를 얻고, 임상시험 심사 위원회 (IRB) 승인에 따라 작업을 수행하였다. 신선한 조직을 수집하고, 암 내에서 면역 하위세트를 프로파일링하기 위해 개발되고 최적화된 번역 플랫폼인 UCSF 면역프로파일러 작업흐름을 통해 프로세싱하였다. 간략하게, 수술실에서 조직을 획득하고, 절제 4시간 내에 실험실로 수송하였다. 조직을 격렬하게 세절하고 (<1 mm 덩어리), 개발된 표준 작업 절차에 기초하여 효소적으로 소화시켰다 (3 mg/ml 콜라게나제 A, 50 U/ml DNase I). 면역 집단을 멀티플렉스화 유동 세포측정법 (>60 색상)에 적용하여 공지된 하위세트 및 그의 αvβ8의 발현의 비례성 및 평균 형광 강도를 분석하였다. 모든 항체는 비디 파밍겐(BD Pharmingen), 이바이오사이언스(eBioscience), 인비트로젠(Invitrogen), 또는 바이오레전드(BioLegend)로부터 구입하였다. 항-αvβ8 항체를 이전에 기재된 바와 같이 생성하였다. 세포 분류를 포함한 모든 유동 세포측정법을 특수-주문 비디 FACS아리아(BD FACSAria) 융합 유동 세포측정기 상에서 수행하였다. 유동 세포측정 데이터의 분석은 플로우조를 사용하여 수행하였다.
유동 세포측정 프로토콜
가위 및 비절개 박리를 사용하여 마우스로부터 피하 종양을 단리하였다. 종양을 C10 배지 (RPMI 1640, Hepes 1%, 페니실린/스트렙토마이신 1X, 소 태아 혈청 10%, 피루브산나트륨 1 mM, 비-필수 아미노산 1X, 및 베타-메르캅토에탄올 0.45%) 중에서 제조된 콜라게나제 XI (시그마 C9407) 2 mg/mL, 히알루로니다제 (시그마 H3506) 0.5 mg/ML, 및 DNase (시그마 DN25) 0.1 mg/mL의 소화 칵테일이 담긴 페트리 디쉬에 넣었다. 종양을 멸균 가위를 사용하여 세절하였다. 생성된 세포의 슬러리를 50 mL 원추형 튜브 (피셔 사이언티픽 #14-432-22)로 옮기고, 종양을 세절하는데 사용된 페트리 디쉬를 2 mL C10 배지로 세정하여 나머지 세포를 포획하였다. 세포를 진탕기 내에서 255 rpm에서 45분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 15 mL의 C10 배지를 소화된 종양 세포에 첨가하고, 15초 동안 부드럽게 볼텍싱하였다. 세포 슬러리를 100 μm 메쉬 스트레이너 (팔콘(Falcon)® #352360)를 통해 깨끗한 50 mL 원추형 튜브 내로 통과시켰다. 세포를 5분 동안 200 g에서 4℃에서 원심분리에 의해 펠릿화하고, PBS 중에 재구성하였다. 카운트레스 II(Countless II) FL 혈구계 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))를 사용하여 세포 카운트를 수행하였다.
단리된 단일 세포 제제를 세포 표면 및 세포내 염색에 사용하였다. 카운팅 후, 10 x 106개 세포를 염색을 위해 v-형상 96-웰 플레이트의 각각의 웰로 옮겼다. 1:1000의 고스트 다이(Ghost Dye)™ 바이올렛 510 (톤보 바이오사이언스(TONBO bioscience)#13-0870)으로 4℃에서 20분 동안 라이브 데드 염색하였다. 항-CD16/30 (이바이오사이언스 #14061)을 사용하여 4℃에서 10분 동안 Fc 수용체 및 비-특이적 결합을 차단하였다. 표면 염색을 4℃에서 20분 동안 수행하였다. 세포내 염색을 위해, 세포를 실온에서 20분 동안 픽스/펌(Fix/Perm) 완충제 (이바이오사이언스 #88-8824) 중에서 인큐베이션한 다음, 4℃에서 20분 동안 항체 칵테일로 세포내 시토카인 염색하였다. 염색이 완료된 후, 분석을 위해 세포를 유동 세포측정 완충제 (2%FBS, 페니실린/스트렙토마이신/글루타메이트, EDTA 2 mM 함유 PBS)로 옮겼다.
T 세포 염색 실험에 사용된 항체: ICOS FITC (이바이오사이언스#11-9949-80), CD25 AF780 (이바이오사이언스#47-0251-82), CD45.1 AF700 (바이오레전드#110723), CD8 BV605 (바이오레전드#100743), CD4 BV650 (바이오레전드#100546), Ki-67 PE-Cy7 (비디 바이오사이언시스#561283), CTLA4 PE (비디 바이오사이언시스#553720), 및 FoxP3 PB-e450 (이바이오사이언시스#48-5773-82).
세포내 시토카인 염색 실험에 사용된 항체: CD3 APC (이바이오사이언스#17-0032-82), NK1.1 APC-AF780 (이바이오사이언스#47-5941-80), CD45.1 AF700 (바이오레전드#110723), CD4 BV650 (바이오레전드#104729), CD8 BV605 (바이오레전드#100546), IFN-γ FITC (이바이오사이언스#11-7311-82), IL-17A PE-Cy7 (바이오레전드#506921), 그랜자임-B PE (이바이오사이언스#12-8898-82), FasL PerCP-이플루오르710 (이바이오사이언스#46-5911-82), 및 FoxP3 PB-e450 (이바이오사이언스#48-5773-82).
골수 세포 염색 실험에 사용된 항체: Ly6G BV785 (바이오레전드#127645), SiglecF BV785 (비디 바이오사이언시스#740956), CD90.2 BV785 (바이오레전드#10533), B220 BV785 (바이오레전드#103246), CD45.1 AF700 (바이오레전드#110724), CD11b AF780 (이바이오사이언스#47-0112-82), CD206 PerCP-Cy5.5 (바이오레전드#141716), F4/80 PE (바이오레전드#123109), CD11c BV650 (바이오레전드#117339), Ly6C BV605 (바이오레전드#128035), MHC-II PB-e450 (이바이오사이언스#48-5321), CD24 PE-Cy7 (바이오레전드#101822), CD103 FITC (이바이오사이언스#11-1031-82), ADWA11 APC (본 발명자들의 실험실에서 접합한 맞춤제작물), 및 CD64 FITC (바이오레전드#139316).
NK 세포 염색 실험에 사용된 항체: CD45.1 AF700 (바이오레전드#110724), CD3 APC (이바이오사이언스#17-0032-82), NK1.1 APC-AF780 (이바이오사이언스#47-5941-80), CD314-NKG2D PE (이바이오사이언스#12-5882-82), CD226-DNAM-1 PerCP-Cy5.5 (바이오레전드#128814), CD335-NKp46 FITC (이바이오사이언스#11-3351-82), CD107a-LAMP-1 PE-Cy7 (바이오레전드#121620), 및 CD49b 이플루오르450 (이바이오사이언스#48-5971-82).
세포 자극을 위해, 세포를 세포 표면 및 세포내 염색 전에 자극하였다. 웰당 200 μl의 C10 배지 중 대략 3x106개의 세포를 둥근 바닥 96-웰 플레이트에서 조직 배양 인큐베이터 내에서 5% CO2 하에 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 자극 칵테일 (이노마이신, PMA, 브레펠딘-A, 및 모넨신 500x 자극 칵테일 톰보 #TNB4975-UL100)을 세포에 첨가하고, 이를 조직 배양 인큐베이터 내에서 5% CO2 하에 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 상기 약술된 바와 같이 염색을 위해 v-바닥 웰로 옮겼다. 비디 LSR포르테사(BD LSRFortessa)™ (비디 바이오사이언시즈)를 사용하여 유동 세포측정법을 수행하고, 플로우조™ (트리 스타 인크.(Tree Star Inc.))를 사용하여 분석하였다.
ADWA11은 종양 침윤을 증가시키고, 세포독성 CD8+ T 세포의 분화를 증진시키며, 염증성 단핵구 대 억제 대식세포의 비를 상승시킨다
면역 침윤물의 성질에 대한 ADWA11 (항-PD1의 존재 또는 부재 하)의 효과를 또한 특징화하였다 (Thomas et al., Cancer Cell 8:369-380, 2005; Wu et al., Cancer Immunol. Res. 2:487-500, 2014). 이러한 모델에서 항-PD1의 처리는 종양 CD8+ T 세포의 총수에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았지만, ADWA11의 처리는 CD8 T 세포 침윤을 극적으로 증가시켰고, 이는 절제된 종양을 면역염색함에 의한 가장 명백한 효과이다 (도 19a-19b). ADWA11은 또한 그랜자임 B를 발현하는 CD8+ T 세포의 백분율을 유의하게 증가시킨 반면에 (도 19c), 항-PD1의 처리는 어떠한 효과도 갖지 않았다. 염증성 단핵구는 또한 숙주 면역 반응의 종양 회피에 기여한다. Ly6C는 염증성 단핵구 상에서 발현되고, Ly6C의 발현은 종양 미세환경에서 억제 특성을 갖는 종양 연관 대식세포에서 감소된다 (Franklin et al., Science 344:921-925, 2014; Movahedi et al., Cancer Res. 70:5728-5739). 골수 집단의 추가의 분류는 ADWA11 처리가 CD45+CD11b+CD11c-Ly6G-Ly6C고CD206저 염증성 대식세포의 축적을 특이적으로 증가시켰음을 보여주었다 (도 19d) (Ostuni et al., Trends Immunol. 36:229-239, 2015; Noy et al., Immunity 41:49-61, 2014). 분석된 시점에서 어떠한 처리도 CD4+ T 세포 수, CD4+ FoxP3+ 조절 T 세포, 또는 T 세포 하위세트에 의한 인터페론-γ 발현에 대해 유의한 효과를 갖지 않았고, 본 발명자들은 어떠한 T 세포 하위세트에서도 IL-17의 유의한 발현을 확인할 수 없었다 (데이터는 제시되지 않음).
면역염색을 위해, 종양을 수거하고, 4% 파라포름알데히드 중에서 4℃에서 밤새 고정시켰다. 고정된 종양을 30% 수크로스 용액 중에 4℃에서 밤새 침지시키고, O.C.T. 화합물 (티슈 텍(Tissue Tek)® #4583) 중에 포매시키고, 15 μm로 동결절편화하였다. 동결된 절편을 이전에 기재된 프로토콜에 의해 염색하였다 (Henderson et al., Nat. Med. 19:1617-1624, 2013; Rock et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108:E1475-1483, 2011). 간략하게, 동결절편을 투과화하고, PBS 중 0.3% 트리톤 X-100 및 3% BSA로 차단하였다. 절편을 1차 항체와 함께 실온에서 밤새 인큐베이션한 다음, 형광단-접합된 1차 및 2차 항체와 함께 인큐베이션하고, 이어서 프로롱 골드(Prolong Gold) (인비트로젠)와 함께 마운팅하였다.
면역염색에 사용된 항체: 래트 항-F4/80 (알렉사 플루오르 647-접합됨, 세로텍(Serotec), 클론 C1, 1:100), 토끼 항-포스포-Smad3 (에피토믹스(Epitomics), 1880-1; 1:100), 래트 항-CD8 (알렉사 플루오르 488-또는 594-접합됨, 바이오레전드, 클론 53-6.7, 1:100). 알렉사 플루오르 488-, 555-, 647-접합된 당나귀 항-토끼, 및 항-래트 (인비트로젠). 자이스(Zeiss) LSM780 및 LSM5 파스칼 현미경에서 공초점 현미경검사를 수행하였다.
모든 정량화는 샘플의 얇은 (1 에어리 유닛; ~1μm) 광학 절편을 나타내는 고해상도 공초점 영상을 사용하여 수행하였다. 이미지J(ImageJ) 소프트웨어를 사용하여 영상을 분석하였다. 각각의 군은 적어도 5마리의 대조군, 및 5마리의 처리된 (ADWA11) 마우스로부터의 샘플을 함유하였다. 동일한 공초점 설정을 사용하여 각각의 조직 절편으로부터 4개의 영상 (필드 크기 425.10 x 425.10μm)를 무작위로 취하였다. 영상을 동일한 역치에 두고, 이어서 근섬유모세포 염색 또는 포스포-Smad3에 의해 커버된 면적을 계산하였다.
조합된 ADWA11 및 항-PD1 요법의 유익한 상승작용적 효과는 CD8+ T 세포 고갈에 의해 제거되었다.
ADWA11 요법의 가장 극적인 효과가 CD8+ T 세포 상에서 관찰되었기 때문에, 본원에서 이들 세포가 ADWA11의 항종양 효과를 구동하는지 결정하고자 하였다. 제0일에 개시되는 치료 약물의 각각의 투여의 24시간 전에 10 mg/Kg의 용량의 항-CD-8a (바이오엑셀® BE0004-1 클론 53-6.72) 항체 또는 대조군 항체를 복강내로 주사하는 것을 사용하여 CCK168 종양-보유 마우스에서 세포독성 T 세포를 고갈시켰다. 합한 ADWA11 (10 mg/Kg) 및 항-PD1 (10 mg/Kg)을 제1일, 제5일, 및 제9일에 주사하였다. 본원에 기재된 방법에 따른 면역염색은 효과적인 CD8 고갈을 보여주었고 (도 21a), 이는 ADWA11 및 항-PD1의 조합 요법의 유익한 효과 (예를 들어, 생존 및 종양 퇴행)를 완전히 제거하였다 (도 21b-21c).
이들 데이터는 CD8+ T 세포가 항-avb8, 예를 들어 ADWA11 매개된 항종양 효과에 중요하다는 것을 시사한다.
활성 TGFβ 신호전달의 마커인 pSmad3은 CCK168 종양 세포 및 종양 미세환경의 세포에 존재하고, 신호전달은 ADWA11에 의한 처리에 의해 광범위하게 억제된다
αvβ8 인테그린의 가장 잘 특징화된 생체내 기능은 잠복성 TGFβ의 국부 활성화이기 때문에, 비처리 종양에서의 세포가 TGFβ 신호전달의 증거를 나타내는지 및 이러한 신호전달이 ADWA11 요법에 의해 억제 또는 저해되는지를 결정하고자 하였다. TGFβ 수용체로부터 활발하게 신호전달하는 CCK168 종양 내의 세포 유형을 확인하기 위해, 세포 (CD8+ T 세포, F4/80 대식세포 및 CD11c 수지상 세포)가 활성 TGFβ에 반응한다는 증거로서, TGFβ 신호전달의 근위 단계인 인산화된 SMAD3에 대한 항체에 의한 면역염색을 사용하였다. 검사한 CCK168 종양은 종양 전반에 걸쳐 풍부한 네트워크의 대식세포 (도 22a) 및 단지 소수의 삽입된 DC를 가졌다. pSMAD3은 종양 내에서, 통상적으로 F4/80+ 대식세포에 인접한 세포에서 용이하게 검출되었지만, 대식세포 자체에서는 검출되지 않았다. CD8+ T 세포는 비처리 마우스에서 희박하였고, AWDA-11로 처리된 마우스로부터의 종양에서 실질적으로 더 풍부하였다. pSMAD3 염색은 이들 세포에서 관찰되지 않았다. 비처리 종양에서, 높은 수준의 pSMAD3이 종양 미세환경 전반에 걸쳐 관찰되었지만; pSMAD3 염색은 ADWA11에 의한 처리에 의해 광범위하게 억제되었다 (도 22a). 따라서, 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 이들 데이터는, 일부 실시양태에서, αvβ8 활성이 이들 종양에서의 TGFβ 활성화에 필수적이지만, αvβ8에 의해 활성화된 경우 CD8+ T 세포 축적, 그랜자임 B 발현 및 대식세포 하위세트 분포에 대한 TGFβ의 효과는 간접적이거나 종양 미세환경 외부에서 발생한다는 것을 나타낸다.
무이펙터 ADWA11은 CCK168 편평 세포 암종 모델 및 CT-26 암종에서 종양 성장을 억제하고, 전체 생존을 개선시키고, 지속적인 항종양 면역을 유도한다
Fc 수용체와 상호작용할 수 있는 천연 뮤린 항체를 사용하여 초기 연구를 수행하였다. 따라서, ADWA11의 항종양 효과는 종양 세포 또는 종양 침윤 대식세포 또는 수지상 세포의 항체-의존성-세포-세포독성 (ADCC)에 기인할 수 있는 것이 가능하였다. ADWA11 활성에 대한 ADCC의 효과를 결정하기 위해, 마우스 항체의 IgG1 Fc 도메인 내에 4개의 치환을 도입하여 이펙터 기능을 제거함으로써, ADWA11_4mut로 불리는 재조합, Fc "무이펙터" 버전의 ADWA11을 생성하였다. 이들 치환은 이전에 Fc 수용체에 대한 항체 결합을 완전히 제거하는 것으로 밝혀졌다 (Alegre et al., J. Immunol. 148: 3461-3468, 1992; Hezareh et al., J. Virol. 75: 12161-12168, 2001). ADWA11_4mut는 CCK168 모델에서 야생형 항체만큼 효과적이었다 (도 28). 또한, ADWA11_4mut 항체를 2개의 동계 종양 모델 (즉, CT26 및 EMT6 종양 모델)에서 효능에 대해 시험하였다.
CT-26 세포를 CCK168에 더하여 선택하였는데, 전자에 검출가능한 αvβ8 발현이 완전히 결여되어 있기 때문이다 (도 18b). CT-26 마우스 결장 암종 세포 (ATCC® CRL-2638™)를 암컷 Balb/c 마우스 (찰스 리버 랩스)의 피하 측복부 내로 4 x 105개 세포/마우스의 투여량으로 주사하였다. 연구에 포함시키기 위해 종양을 50-100 mm3의 크기로 성장시켰다. 이들 연구를 위해, ADWA11_4mut 또는 이소형 대조군 2B8_mIgG_4mut를 제0일, 제4일, 제8일, 제12일에 주사하고, 항-PD1 항체 (RMP1-14, 바이오엑셀) 또는 이소형 대조군 2A3_래트 IgG (바이오엑셀)를 제0일, 제4일, 제8일에 정맥내로 주사하였다. 모든 항체를 10mg/Kg으로 투여하였다. 제5일에, 비 방사선 처리 대조군을 제외한 모든 마우스를 종양 표적화 5 Gy 선량의 방사선에 노출시켰다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼로 1주에 2회 측정하고, 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하였다. 재-챌린지 실험을 위해, 제51일 (제1 항체 처리 후)에 완전 반응을 갖는 마우스 및 나이브 마우스에게 PBS 중 2.5 x 105개의 CT26 세포를 반대측 측복부에 이식하고, 종양 성장을 상기 기재된 바와 같이 모니터링하였다.
둘 다의 모델에서, ADWA11_mut4는 항종양 반응을 구동하는데 효과적이었고 (도 28), 이는 ADCC 기능이 ADWA11-매개된 항종양 효과에 필요하지 않다는 것을 입증한다.
ADWA11은 다중 암종 모델에서 효과적이고, 방사선 요법 및 항-PD-1, 항-CTLA-4 및 4-1BB 요법의 효과를 증진시킨다.
다른 고형 종양 모델에서의 ADWA11의 효능 및 ADWA11이 추가의 면역조정 요법의 유익한 효과를 보다 광범위하게 증진시킬 수 있는지 여부를 결정하였다. CT-26 암종에 대한 방사선 요법의 효과를 증진시키는 ADWA11의 능력을 또한 검사하였는데, 이는 이 종양이 이전에 방사선감수성인 것으로 밝혀졌고, 시험관내 또는 생체내에서 αvβ8을 발현하지 않으며, TGFB 수용체 소분자 억제제에 반응성인 것으로 밝혀졌기 때문이다 (Young et al., PloS One 11:e0157164, 2016). 요법으로서 단지 최소로 효과적인 방사선량의 사용 시, ADWA11_4mut 또는 항-PD-1의 부가는 각각 5/9 및 3/10 완전 반응자로 마우스의 종양 퇴행 및 전체 생존을 유의하게 증가시켰다 (도 29a 및 29b). 흥미롭게도, ADWA11에의 항-PD1의 부가는 이 모델에서 추가의 이익을 거의 부가하지 않았고, 이는 αvβ8의 억제가 체크포인트 억제제의 부재 하에서도 효과적일 수 있다는 추가의 증거를 제공한다. 원발성 종양의 완전한 퇴행을 나타내고 단독요법 또는 조합 요법을 받은 생존 마우스에게 초기 요법의 적어도 51일 후에 동일한 CT-26 종양 세포를 반대측 상에 재-챌린지하였다. 몇몇 마우스에서 반대측 종양에 의해 최소 종양 성장이 관찰되었다. 초기에 성장한 작은 종양은 모두 후속적으로 완전한 퇴행을 나타내었고, 이는 일부 실시양태에서, ADWA11을 사용한 성공적인 처리가 다른 면역조정제에 대해 이전에 기재된 바와 같이 장기간의 항종양 면역으로 이어질 수 있다는 것을 나타낸다 (Ascierto et al., J. Transl. Med. 15:205, 2017) (도 29c). 퇴행된 원발성 종양 중 어떠한 것도 재성장을 나타내지 않았다.
ADWA11_4mut는 EMT6 유방 암종 모델에서 효과적이고, 항-CTLA-4 및 항-4-1BB의 효과를 증진시킨다.
면역 배제된 종양 미세환경 및 낮은 수준의 αvβ8 발현을 갖는 유방 암종의 EMT-6 모델을 사용하여 ADWA11_4mut와 조합된 항-PD-1, 항-CTLA-4 (이는 최근 항-PD1과 상이한 분자 메카니즘을 통해 작용하는 것으로 밝혀졌음 (Wei et al., Cell 170:1120-1133, 2017)), 또는 CD8+ T 세포 상에서 발현되는 공동자극 수용체인 4-1BB의 효능제 (Kang et al., Cancer Res. 2017)의 효과를 검사하였다.
ADWA11_4mut를 또한 EMT-6 종양 모델에서 시험하였다. 1 X 106개의 EMT6 세포 (마우스 상피 유방 암종 세포주; ATCC®, CRL2755™)를 암컷 Balb/c 마우스 (찰스 리버 랩스)의 제4 유방 지방 패드 내로 주사하였다. 종양을 50-100 mm3의 크기까지 성장시켰다. 마우스를 항체 처리군으로 무작위화하였고, 조작자는 처리군에 대해 맹검상태였다. ADWA11_4mut 10mg/kg 또는 대조군 2B8_mIgG4mut 10mg/kg, 항-CTLA4 (9D9 바이오엑셀) 또는 이소형 대조군 이.테넬라(E.tenella)-mIgG2b 10mg/kg을 제0일, 제4일 및 제8일에 주사하고, 항-4-1BB (MAB9371, 알앤디 시스템즈) 1 mg/kg을 제0일 및 제4일에 정맥내 경로를 통해 주사하였다. 종양 성장을 디지털 캘리퍼로 1주에 2회 측정하고, 부피 (길이 x 폭 x 폭 x 0.5)로서 보고하였다.
항-PD1, 항-CTLA4 또는 항-41-BB 단독요법은 유의한 초기 종양 퇴행을 나타내었지만, 오직 항-4-1BB로 처리된 1마리의 마우스 및 항-PD1로 처리된 1마리의 마우스만이 완전 퇴행을 가졌다 (도 30a-d). 대조적으로, 항-PD-1, 항-CTLA4 또는 항-4-1BB와 조합하여 ADWA11로 처리된 마우스의 대략 70%는 완전한 퇴행, 장기간 생존 및 장기간 종양 면역을 시사하는 EMT6 종양 세포 재챌린지에 대한 저항성을 가졌다 (도 30e). 재-챌린지 실험을 위해, 제51일 (제1항체 처리 후)에 완전 반응을 갖는 마우스 및 나이브 마우스에게 1 X 106개의 EMT-6 세포를 반대측 지방 패드에 이식하고, 종양 성장을 상기 기재된 바와 같이 모니터링하였다.
이들 데이터는 ADWA11 2.4를 포함한 ADWA11 항체가 PD-1 또는 CTLA4의 억제제 (예를 들어, PD-1 또는 CTLA-4에 결합함으로써 각각 PD-1 또는 CTLA-4의 효과를 억제하는 길항제 항체) 및/또는 4-1BB의 효능제 (예를 들어, 4-1BB의 생물학적 활성을 증가시키는 효능제 항체)와 조합될 때 상승작용적 치료 효과를 제공한다는 것을 처음으로 입증한다. 이들 데이터는 ADWA11 2.4가 예를 들어 PD-1 또는 CTLA4의 억제제, 또는 예를 들어 4-1BB의 효능제와 조합될 때 상승작용적 치료 항종양 반응을 제공할 수 있는 잠재적인 인간 치료제임을 시사한다.
인테그린 αvβ8 유전자 발현 및 인간 종양에서의 염색
ITGB8 mRNA 발현에 대한 더 캔서 게놈 아틀라스 (TCGA)의 조사는 검사된 30개의 종양 유형 중 거의 모든 인간 종양이 검출가능한 강건한 수준의 ITGB8 mRNA를 발현하고, 가장 높은 수준의 발현은 난소 및 신세포 암종에서 검출된다는 것을 밝혀내었다 (도 23a). 전체 종양 용해물에서의 ITGB8 발현은 침윤 면역 세포 상에서의 αvβ8의 발현을 반영할 수 있다. 이를 시험하기 위해, 다중-패널 유동 세포측정법을 수행하여 신선하게 수거되고 분해된 인간 종양 절제 및 생검의 시편의 단일 세포에서의 αvβ8 단백질의 발현을 평가하였다. 2개의 인간 난소 암종 및 2개의 신세포 암종의 분석은 CD16+ 단핵구, CD14+ 종양 연관 대식세포 및 BCDA1+ 및 BCDA3+ 단핵구-유래 수지상 세포 상에서 발현된 실질적인 αvβ8을 보여주었다 (도 23b).
논의
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, ADWA11은 αvβ8 인테그린을 차단하는데 특이적인 모노클로날 항체이고, 단독으로 사용되는 경우에 효과적인 항종양 면역요법이다. 예를 들어, ADWA11은 CCK168 피부 편평 세포 암종에서 항종양 활성을 입증하였다. 추가적으로 또는 대안적으로, 면역조정제 (예를 들어, 항-PD-1, 항-CTLA-4, 및 항-4-1BB) 또는 방사선요법과 조합된 ADWA11은 3가지의 상이한 마우스 계통 배경의 상피 암종의 3가지 동계 동종이식편 모델에서 강력하고 상승작용적으로 증진된 항종양 활성을 입증하였다. 일부 실시양태에서, αvβ8의 억제는, 이들 세포에서의 그랜자임 B의 발현에 의해 평가된 바와 같이, 종양 내 CD8+ T 세포의 수 및 그의 세포독성 분화를 증가시켰다. CD8+ T 세포의 고갈은 ADWA11 및 항-PD1 처리의 항종양 효과를 제거하였고, 이는 일부 실시양태에서, CD8 T 세포에 의한 증진된 종양 세포 사멸이 ADWA11의 효능에 중요하다는 것을 나타낸다. CD8+ T 세포에 대한 효과에 더하여, ADWA11은 종양 미세환경에서 면역자극 단핵구의 수를 증가시켰다 (Franklin et al., Science 344:921-925, 2014; Movahedi et al., Cancer Res. 70:5728-5739, 2010; Ostuni, Trends Immunol. 36: 229-239, 2015; Noy et al., Immunity 41:49-61, 2014). 면역억제 대식세포의 수에서 어떠한 차이도 없었지만, 이들 대식세포는, 수지상 세포와 함께, 높은 수준의 검출가능한 αvβ8을 발현하였다. 시험된 제1 종양 세포주인 CCK168 세포는 시험관내 유의한 표면 수준의 αvβ8을 발현하였지만, 수거된 종양으로부터의 비-조혈 세포 상에서는 유동 세포측정법에 의하면 αvβ8의 발현이 거의 발견되지 않았고, 이는 일부 실시양태에서, 이들 악성 세포가 생체내 종양을 형성하는 경우에 발현이 상실된다는 것을 나타낸다. 그럼에도 불구하고 ADWA11의 항종양 효과가 ADCC를 통한 악성 세포의 직접적 표적화로 인한 것이라는 가능성은 어떠한 검출가능한 αvβ8도 발현하지 않는 세포 (즉, CT-26 결장 암종 세포)에서 재조합 무이펙터 ADWA11 항체를 사용하여 상기 발견을 반복함으로써 배제되었다. 무이펙터 항체는 3가지 종양 모델 CCK168, CT-26 및 EMT-6에서 종양 성장을 억제할 수 있었고, 이 중 CT-26은 αvβ8의 검출불가능한 발현을 가졌다. 또한, ADWA11을 사용한 단기간 요법은 장기간 종양 억제 및 후속 재-챌린지에 대한 저항성으로 이어졌고, 이는 일부 실시양태에서 장기간 항종양 면역의 유도를 나타낸다. 종합하면, 이들 데이터는 일부 실시양태에서 인테그린 αvβ8 차단이 선천성 면역 세포 또는 T 조절 세포 상의 αvβ8을 차단시켜 종양에 대한 적응 면역을 증진시킴으로써 종양 억제를 유발한다는 것을 나타낸다.
수지상 세포, 조절 T 세포, 섬유모세포, 기도 상피 세포 및 신경상피 상에서 발현된 αvβ8에 의한 TGFβ 활성화는 이전에 제시된 바 있지만 (Travis et al., Nature 449:361-365, 2007; Melton et al., J. Clin. Invest. 120:4436-4444, 2010; Arnold et al., J. Neurosci. 32(4):1197-1206, 2012; Fenton et al., Mucosal Immunol. 10:624-634, 2017; Mu et al., J. Cell Biol. 157:493-507, 2002; Proctor et al., J. Neurosci. 25:9940-9948, 2005; Edwards et al., J. Immunol. 193:2843-2849, 2014), 인테그린 αvβ8 발현의 전체 범위를 규정하는 것은 조직 염색에 대해 신뢰할 수 있는 시약의 부재로 인해 제한되었다. 본원에 제시된 실시예에서, 유동 세포측정법에 의해 인테그린 αvβ8을 검출할 수 있는 새롭게 개발된 항체를 사용하여, 종양 연관 대식세포 및 수지상 세포가 뮤린 암종에서 αvβ8에 대한 높은 세포 표면 염색을 나타내는 주요 세포 유형임을 입증하였다. 이는 일부 실시양태에서, 이들 세포 유형 중 1종 이상에서의 발현이 국부 항종양 면역의 αvβ8-매개된 억제에 중요하다는 것을 나타낸다.
본원에 제시된 실시예에서, 조절 T 세포 (Treg)를 포함한 T 세포 상에서의 αvβ8 발현은 검출되지 않았다.
αvβ8을 포함한 인테그린에 의한 TGFβ의 활성화는 치밀하게 공간적으로 제한되어, αvβ8-발현 세포가 TGFβ를 이들이 직접 접촉하는 세포에 국부적으로로 제시하도록 한다 (Travis et al., Nature 449:361-365, 2007; Munger et al., Cell 96:319-328, 1999). TGFβ는 이펙터 T 세포의 활성을 억제하는 것으로 기재되어 있다. 본원에 제시된 실시예에서 입증된 바와 같이, CD8+ T 세포는 ADWA11 처리된 종양에서 증가되고, 그랜자임 B를 발현할 가능성이 보다 크며, ADWA11의 보호 효과를 매개하는데 중요하다. 일부 실시양태에서, 선천성 면역 세포에 대한 αvβ8의 억제 효과는 CD8 T 세포에 대한 활성 TGFβ의 직접 제시로 인한 것이다. 그러나, pSMAD3에 대한 면역염색은 CD8+ T 세포에서의 TGFβ 신호전달의 증거를 밝히지는 못했지만, 비-조혈 세포 (예를 들어, 종양 세포)에서 강건한 신호전달을 제시하였다. 따라서, 일부 실시양태에서, 종양 세포 및 일부 다른 종양 연관 비-조혈 세포 (예를 들어, 섬유모세포)는 αvβ8에 의해 활성화된 TGFβ에 반응하고 국부 종양 면역을 억제하는 기능적으로 중요한 세포이다.
본원에 제시된 실시예에 기재된 바와 같이, αvβ8 인테그린은 다중 뮤린 및 인간 종양에서 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포 상에서 광범위하게 발현되고, 항종양 면역 반응의 강력한 조정제이다. 이러한 인테그린을 표적화하는 단독요법 (예를 들어, ADWA11)은 일부 종양에서 효과적이다. 또한, 효능은 αvβ8의 억제 (예를 들어, ADWA11에 의한 처리)를 체크포인트 억제제 (예를 들어, 항-PD1 또는 항-CTLA4) 또는 면역 활성화제 (예를 들어, 항-4-1BB)와 조합함으로써 또는 αvβ8 단독요법을 방사선요법과 조합함으로써 상승작용적으로 증진된다. 종합하면, 이들 결과는 αvβ8 인테그린을 종양 면역요법을 위한 신규 표적으로서 확인시켜준다.
실시예 15: ADWA11 2.4의 추가의 생체내 평가
항-αvβ8 평가를 위한 종양 모델의 요약
면역적격 마우스에서 동계 종양 모델을 사용하여 생체내 효능을 평가하였다. 인간화된 ADWA11 2.4와의 노출을 제한하는 강한 항-종 약물 반응으로 인해 모 마우스 하이브리도마 항체 ADWA11_4mut의 무이펙터 버전으로 효능 연구를 수행하였다.
표 9. 항-αvβ8 평가를 위한 종양 모델
Figure pct00044
EMT6 모델에서의 효능
EMT6 종양 모델 연구를 동소에서 수행하고 (제4 유방 지방 패드), 체크포인트 억제제의 존재 또는 부재 하에서의 항-αvβ8에 의한 처리를 공동으로 수행하였다.
찰스 리버 Balb/c 마우스 (군당 n = 10)에게 3x105개 또는 1x106개 EMT6 세포/마우스를 이식하였다. 처리는 50mm3 또는 100mm3의 평균 종양 부피에서 개시하였다.
뮤린 모 항-αvβ8 항체 ADWA11_4mut를 모든 연구에서 총 3회 용량 동안 4일마다 1회 10mg/kg으로 투여하였다. 항-PD1 항체 (클론 RMP1-14, 바이오엑셀)를 총 3회 용량 동안 4일마다 1회 10mg/kg으로 투여하고, 4-1BB 효능제 mAb (클론 MAB9371, 알앤디 시스템즈)를 총 2회 용량 동안 4일마다 1회 1mg/kg으로 투여하고, 항-CTLA4 (클론 9D9, 바이오엑셀)를 총 3회 용량 동안 4일마다 1회 10mg/kg으로 투여하였다.
3x105개 세포를 이식하고 50mm3에서 처리를 개시한 경우에 ~50% 종양 성장 억제 (TGI)의 항-αvβ8 단독요법 효능 (제10일-제20일)이 관찰되었다. 그러나, 1x106개 세포를 이식하고 100mm3에서 처리를 개시한 경우에는 항-αvβ8 단독요법 TGI가 관찰되지 않았다. 2가지 연구 사이의 항-αvβ8 단독요법 TGI에서의 차이는 불명확하지만; 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 1x106개 세포가 이식되었을 때의 이러한 모델의 신속한 종양 성장 속도는 αvβ8-차단의 항종양 반응을 제한하거나 능가할 수 있다. 중요하게는, 항-αvβ8은 항-PD1 (7/10 완전 반응), 4-1BB 효능제 (5 완전 반응), 및 항-CTLA4 (6 완전 반응)와의 유의한 상승작용적 처리 효과를 입증하였고, 단독요법 및 이소형 대조군과 비교하여 증가된 생존을 발생시켰다. 따라서, 이들 데이터는 ADWA11 항체가 EMT-6 종양 모델에서 항종양 반응을 제공할 수 있다는 것을 시사한다.
항-CTLA4 또는 4-1BB 효능제 단독요법은 유의한 반응 (~50% TGI, 제8일-제20일)을 입증하였지만; 반응은 일시적이었고, 종양은 궁극적으로 반응을 능가하였다. 조합 처리가 항혈관신생 또는 항증식 반응과 비교하여 EMT6 종양에 대해 세포성 반응을 발생시켰음을 입증하기 위해, 완전 반응을 갖는 마우스에게 제51일 (제1 용량 후)에 제2 EMT6 종양 이식물을, 그러나 추가의 약물 처리는 없이 재-챌린지하였다. EMT6 종양은 나이브 마우스에서 신속하게 성장하였지만, 완전 반응 마우스에서는 신속하게 제거되었고, 이는 일부 실시양태에서, 종양 세포에 대한 세포성 면역의 발생, 예를 들어, 직접적인 종양 세포 사멸이 항혈관신생 또는 항증식에 의해 매개되지 않는다는 것을 나타낸다.
EMT6 종양 모델에서의 림프구 존재비의 정량화
EMT6 종양 미세환경에 대한 항-αvβ8 처리의 영향을 조사하기 위해, 림프구 하위세트의 존재비를 IHC에 의해 정량화하였다. 간략하게, 찰스 리버 Balb/c 마우스 (군당 n = 10)에 1x106개의 EMT6 세포를 이식하고, 100mm3의 평균 종양 부피에서 처리를 개시하였다 (제0일). 항-αvβ8 ADWA11 2.4 항체를 총 4회 용량 동안 3일마다 (예를 들어, 제0일, 제3일, 제6일, 및 제9일) 10mg/kg으로 투여하고, 제11일에 종양을 수거하였다 (제4 용량의 48시간 후).
CD45 (총 림프구 및 골수 세포), CD3 (총 T 세포), CD4 T 세포, CD8 T 세포, 및 그랜자임 B (활성화된 CD8 및 NK 세포) 염색의 밀도의 면역조직화학 (IHC) 분석은 항-αvβ8 단독요법이 총 CD45, CD4 T 세포, CD8 T 세포의 존재비를 증가시켰고, 그랜자임 B 발현 세포의 밀도를 매우 유의하게 증가시켰음을 입증하였다 (각각의 군에 대해 n = 10) (도 15). IHC 데이터는, 일부 실시양태에서, ADWA11 2.4 단독요법이 αvβ8의 예상된 작용 메카니즘 (MOA)과 일치하게 종양 미세환경을 변화시키기에 충분하다는 것을 나타내었다.
CT26 모델에서의 효능
αvβ8 발현의 부재, 항-PD1 요법에 대한 부분 반응, 및 준최적 용량의 방사선에 의한 TGFβ 소분자 억제제의 상승작용적 TGI에 대한 문헌 증거에 기초하여 CT26 모델을 선택하였다. 방사선 요법 (RT)은 면역학적 세포 사멸 및 신생 DC-T 세포 프라이밍을 유도하는 그의 능력으로 인해 특히 중요하며, 여기서 αvβ8은 잠재적으로 T-세포 분화 및 활성화를 실현하는데 중요한 역할을 한다. 간략하게, 찰스 리버 Balb/c 마우스 (각각의 군에 대해 n = 10)에 4e5개의 세포를 피하로 이식하고, 100mm3의 평균 종양 부피에서 처리를 개시하였다.
뮤린 항-αvβ8 이펙터 널 항체 ADWA11_4mut를 10mg/kg Q4D x 4로 투여하고, 항-PD1 (클론 RMP1-14, 바이오엑셀)을 10mg/kg Q4D x 3으로 투여하고, mAb의 제1 용량의 5일 후에 5Gy 선량의 종양 표적화 방사선을 수행하였다. 항-αvβ8을 RT와 함께 포함시키는 것은 TGI의 유의한 증가를 발생시켰고, 5/9마리의 마우스가 완전 반응을 나타내었다. 항-PD1을 RT와 함께 포함시키는 것은 항-αvβ8과 비교하여 덜 유의한 TGI를 발생시켰고, 3/10마리의 마우스가 완전 반응을 입증하였다. RT, 항-αvβ8, 및 항-PD1의 삼중 조합은 매우 유의한 TGI를 발생시켰고, 7/10마리의 마우스가 완전 반응을 가졌다. EMT6 연구와 유사하게, 완전 반응을 갖는 마우스는 CT26 세포에 의한 재-챌린지에 대해 면역되었다.
CT26 종양 침윤 세포 집단의 면역표현형결정
CT26 종양 미세환경에 대한 항-αvβ8 처리의 영향을 조사하기 위해, 림프구 하위세트의 존재비를 유동 세포측정법에 의해 정량화하였다. 간략하게, 찰스 리버 Balb/c 마우스 (각각의 군에 대해 n = 6)에 4e5개의 세포를 피하로 이식하고, 100mm3의 평균 종양 부피에서 처리를 개시하였다. 항-αvβ8 ADWA11 2.4를 10 mg/kg 또는 1 mg/kg Q3D x 3으로 투여하고, 제8일 (제3 용량의 48시간 후)에 종양을 수거하였다. 종양을 해리시키고, 림프구 집단을 CyTOF 세포측정법에 의해 정량화하였다. 항-αvβ8 (10 및 1 mg/kg)은 CD3 T 세포 게이트에서 CD8 T 세포의 존재비를 증가시켰다. 추가적으로, CD8 세포는 활성화된 표현형의 마커인 그랜자임 B를 보다 빈번하게 발현하였다.
요약
종합하면, EMT6 및 CT26 효능 및 PD 연구는 (1) 항-αvβ8이 다중 체크포인트 억제제에 대한 반응을 상승작용적으로 증가시키고; (2) 항-αvβ8 효능은 종양 세포에 의한 αvβ8의 발현에 의존적이지 않고; (3) 항-αvβ8 ADWA11 2.4 단독요법이 종양 미세환경에서 CD8+ GzmB+ T세포의 존재비를 증가시키는데 충분하다는 것을 입증한다.
실시예 16: 인간 FcRn 트랜스제닉 (TG32) 마우스에서의 ADWA11 2.4 약동학
TG32 마우스 모델은 선형 약동학을 나타내는 IgG1 및 IgG2 mAb의 인간 약동학을 예측하기 위한 원숭이 모델만큼 우수한 것으로 밝혀졌다. ADWA11 2.4의 약동학을 TG32 마우스에서 단일 IV 볼루스 용량을 0.1, 0.3, 또는 3 mg/kg으로 투여한 후에 평가하였다. 이어서 혈청 약물 농도를 측정하였다. 도 25a 및 도 25b에 제시된 바와 같이, 항체 클리어런스에서 용량-의존성 감소의 명백한 경향이 관찰되었다. 이는 세포 표면 표적과 상호작용하는 모노클로날 항체에 대해 전형적이며, 표적 수용체, αvβ8이 클리어런스 메카니즘으로서 작용할 수 있음을 나타낸다. 결과로서, 2개의 별개의 약동학적 모델을 사용하여 선형 (전형적인 FcRn 매개 항체 클리어런스 메카니즘) vs. 비-선형 (αvβ8-매개) 클리어런스 경로를 기재하였다. 선형 클리어런스에 대한 파라미터의 추정을 위해, 2-구획 집단 약동학 모델을 사용하여 3 mg/kg 데이터를 단독으로 피팅하였다 (도 25a). 다중 용량에 걸친 비-선형 클리어런스에 대한 약동학적 파라미터의 추정을 위해, 2-구획 포화가능한 모델 (미카엘리스 멘텐)을 사용하여 모든 데이터 (0.1, 0.3, 3 mg/kg)를 피팅하였다 (도 25b). 추정된 선형 및 비-선형 약동학적 파라미터를 각각 표 10 및 11에 제시한다. 선형 약동학적 파라미터는 TG32 마우스에서 전형적인 mAb에 대해 관찰된 범위 내에 있다.
표 10. TG32 마우스에서의 2-구획 약동학적 파라미터 (IV, 3 mg/kg)
Figure pct00045
CL: 중심 구획으로부터의 클리어런스; CLD: 구획간 분포 클리어런스; V1: 중심 구획에 대한 분포 부피; V2: 말초 구획에 대한 분포 부피; t1/2, 추정 파라미터에 기초하여 계산된 말단 반감기.
표 11. TG32 마우스에서의 2-구획 비-선형 약동학적 파라미터 (IV, 0.1, 0.3, 및 3 mg/kg)
Figure pct00046
Vmax: 최대 속도; Km: 반수 최대 속도를 달성하기 위한 기질 농도; CLD: 구획간 분포 클리어런스; V1: 중심 구획에 대한 분포 부피; V2: 말초 구획에 대한 분포 부피.
혈청 약동학에 기초하여 관찰된 표적 매개 약물 배치 (TMDD)와 일치하게, 다중 조직 (포화 표적 결합으로 인함), 특히 신장 내로의 약물 분포의 용량-의존성 감소가 또한 조직 분포 연구에서 관찰되었다.
실시예 17: 비-인간 영장류 (NHP)에서의 약동학
NHP 탐색적 독성학 연구에서 4, 40, 또는 100 mg/kg의 다중 용량 투여 연구의 제1 용량 후에 ADWA11 2.4의 약동학을 평가하였다. 도 26에 제시된 바와 같이, ADWA11 2.4의 노출은 표적 매개 약물 배치 (TMDD)에 대한 포화 범위를 초과하기 때문에 이러한 용량 범위 내에서 선형인 것으로 보인다. 2-구획 선형 모델을 사용하여 데이터를 피팅하였고 (도 26), 추정되는 약동학적 파라미터를 표 12에 제시하였다. 관찰된 CL 및 분포 부피는 전형적인 mAb에 대한 범위 내에 있는 반면에, 말기 t1/2은 범위의 짧은 말단 상에 있는 것으로 보인다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 이는 단지 투여 후 7일까지만 샘플링됨에 따라 잘 규정되지 않은 말기로 인한 것일 수 있다 (ETS 연구 설계의 한계).
표 12. NHP에서의 2-구획 약동학적 파라미터 (IV, 4, 40, 및 100 mg/kg-제1 용량)
Figure pct00047
CL: 중심 구획으로부터의 클리어런스; CLD: 구획간 분포 클리어런스; V1: 중심 구획에 대한 분포 부피; V2: 말초 구획에 대한 분포 부피; t1/2, 추정 파라미터에 기초하여 계산된 말단 반감기.
실시예 18: 단독요법으로서의, 및 항-PD-1과 공동-투여된 경우의, 뮤린 대용물 항체의 약동학
모 (마우스 IgG)에 대한 단일 용량 약동학적 데이터는 이용가능하지 않았지만, 여러 효능 연구에서 최대 4개의 시점에서 노출이 측정되었고, 이는 이들 연구 전반에 걸쳐 일관된 것으로 보였다. 모 (마우스 IgG)의 노출은 조사된 용량 범위 (1, 3, 및 10 mg/kg) 내에서 선형인 것으로 보이고, 이는 인간화 항체, ADWA11 2.4에 대해 TG32 마우스에서 추정된 바와 같은 포화 TMDD와 일치한다. 2 구획 약동학 모델을 용량-반응 EMT6 종양 모델 연구에서 노출 데이터에 피팅하여, TG32 마우스에서 인간화 항체에 대해 상기 보고된 값에 다른 파라미터를 고정시키고 CL만을 추정하였다. 이들 종양 보유 마우스에서 모 (마우스 IgG)의 추정 CL은 0.74 mL/hr/kg이었다.
모 (마우스 IgG)의 노출은 항-PD-1 항체를 사용한 반복 공동-투여 연구 후, 뮤린 대용물 항체 단독을 투여하거나 대조군 래트 IgG 2A3을 공동-투여한 것과 비교하여 ~5-50x 더 낮은 것으로 보인다. 이러한 현상은 2개의 상이한 종양 모델 (CT26 및 EMT6)을 사용한 2개의 별개의 연구에서 관찰되었다. 보다 낮은 노출은 PD-1 녹아웃 마우스에서 보고된 바와 같이 (Nishimura H et al., 1998, International Immunol. 10(10): 1563-72), 항-PD-1의 존재 하에 증가된 ADA 형성으로 인한 것일 수 있다. 항-PD-1 항체 (펨브롤리주맙) 처리 후 증가된 ADA 형성이 또한 임상에서 보고되었다.
실시예 19: 인간 PK/노출 예측
TG32 마우스로부터의 선형 약동학적 파라미터를 척도화함으로써, 표적 매개 약물 배치 (TMDD)를 포화시키는 용량에서 ADW11 2.4의 인간 약동학적 프로파일을 예측하였다 (표 13). 예상되는 선형 인간 약동학적 파라미터를 표 13에 제시한다. 또한, 플랫폼 PBPK 모델을 사용하여 측정된 AC-SINS 결합 (스코어 = 2, 섹션 2.4)에 기초하여 0.12 mL/hr/kg의 선형 인간 CL을 예측하였다. NHP로부터의 알로메트릭 척도화에 의해 0.086 mL/hr/kg의 선형 인간 CL을 예측하였다. 이들 CL 값은 TG32 알로메트릭 척도화에 기초한 예측 (0.15 mL/hr/kg)에 대해 2x 범위 내에 있고, 이는 TMDD를 포화시키는 용량에서 ADW11 2.4가 모노클로날 항체에 대해 전형적인 약동학적 프로파일을 가질 것임을 추가로 지지한다.
이들 결과는 ADWA11 2.4가 잠재적인 유용한 인간 치료 항체임을 나타낸다.
표 13. ADWA11 2.4에 대한 예상되는 인간 선형 약동학적 파라미터
Figure pct00048
CL: 중심 구획으로부터의 클리어런스; CLD: 구획간 분포 클리어런스; V1: 중심 구획에 대한 분포 부피; V2: 말초 구획에 대한 분포 부피; t1/2, 추정 파라미터에 기초하여 계산된 말단 반감기.
추가의 단일-용량 ADWA11 (2.4) IV 및 SC PK 및/또는 TK를 수컷 hFcRn TG32 마우스 (n=4 또는 8/용량 군) 및 수컷 시노몰구스 원숭이 (n=1/용량 군)에서 특징화하고, 본원에서 이전에 제시된 인간 약동학적 파라미터를 수정하였다. 보다 구체적으로, 단일 IV 투여 (TG32 마우스 및 시노몰구스 원숭이에서 0.1, 0.3, 및 3 mg/kg) 후, ADWA11 (2.4)의 PK는 둘 다의 종에서 CL에서 용량-의존성 감소 경향을 가지며 비-선형이었고, 이는 포화가능한 표적-매개 약물 배치와 일치하였다. 포화가능한 클리어런스를 초과하는 용량에서, ADWA11 (2.4)의 PK는 선형이고 전형적인 인간 IgG1 mAb와 일치한다. 10 mg/kg의 단일 SC 투여 후 평균 PK 및 TK 파라미터, Tmax를 투여 240시간 후에 관찰하였고, 3 mg/kg의 단일 IV 투여 후 용량-정규화된 AUCinf와의 비교에 기초하여 생체이용률은 대략 100%인 것으로 추정되었다.
ADWA11 (2.4)은 본원의 다른 곳에서 이전에 제시된 것보다 더 낮은 용량에서 용량-의존성일 것으로 예상된다. 이에, 선형 및 비-선형 클리어런스 둘 다를 포함하는 시노몰구스 원숭이 PK 모델의 알로메트릭 척도화에 기초하여 ADWA11 (2.4)의 인간 PK를 예측하였다. 수정된 예측된 인간 PK 파라미터는 하기와 같다: 중심 구획에 대한 분포 부피에 대해 36 mL/kg, 말초 구획에 대한 분포 부피에 대해 33 mL/kg, 중심 구획으로부터의 클리어런스 (선형 CL)에 대해 0.12 mL/kg/h, 구획간 클리어런스에 대해 0.51 mL/kg/h, 및 비선형 클리어런스에 대해 0.46 μg/mL/h의 비선형 제거의 최대 속도 및 0.42 μg/mL의 Km. 이 모델은 ADWA11 (2.4)의 비선형 클리어런스가 14 μg/mL 혈장 농도 초과에서 포화될 가능성이 있는 것으로 예측하고, 예측되는 t½은 대략 15 내지 17일이다.
실시예 20: 약동학-약역학 관계 및 효과적인 인간 용량의 예측
동계 마우스 종양 모델에서 명백한 노출-TGI 반응의 부재 하에, 10 mg/kg 용량은 효과적인 농도의 추정을 위한 효과적인 용량으로 간주되었다. 모 (마우스 IgG)에 대한 약동학적 모델을 사용하여, 제12일 (10 mg/kg으로의 Q4D x 3 투여에 의한 연구에서 마지막 용량의 4일 후)의 평균 농도 (Cavg)는 107 μg/mL인 것으로 추정되었다. 유사하게, 약간 더 높지만, 이용가능한 노출 데이터로부터 선형 사다리꼴 규칙을 사용하여 AUC를 계산함으로써 Cavg 값을 추정하였다.
이들 효과적인 농도 수준에서 ADWA11 2.4에 대해 전형적인 항체 약동학이 예상됨에 따라, 척도화된 TG32 마우스 파라미터를 갖는 2-구획 약동학 모델 (표 13)을 인간 용량 예측에 사용하였다 (Betts et al., MABS (2018) 1-14). 또한, 척도화된 NHP 약동학적 파라미터를 사용하여 예측된 인간 용량은 TG32 마우스를 사용하여 예측된 것과 단지 약 20%만큼 상이하였다. Cavg와 매칭시키기 위해, Q14D x 3 투여의 경우에는 7 mg/kg의 효과적인 인간 IV 용량이 예측되고, Q28D x 3 투여의 경우에는 12 mg/kg의 IV 용량이 예측된다 (도 27a-27b). 용량은 또한 특정한 환자 집단, 임상 적응증 및/또는 임상 징후 및 증상에 따라 조정될 수 있다.
ADWA11 2.4의 인간 PK 예측을 시노몰구스 원숭이로부터의 알로메트릭 척도화 및 추가의 전임상 효능 연구의 결과에 기초하여 정밀화하였다. 효과적인 용량 예측 (Ceff)은 상기 2개의 마우스 종양 모델을 사용한 상이한 연구에 걸친 종양 성장 억제에 대한 반수-최대 효과의 10x와 동일한 혈장 농도로서 결정하였다. Ceff는 모든 연구에 걸쳐 10-98 nM의 범위인 것으로 추정되었고; 따라서, 보존적 접근법을 사용하여 목표 Ceff로서 100 nM (범위의 상한)을 규정하였다. ADWA11 2.4의 인간 효과적 용량은 대략 2 mg/kg IV Q14D 또는 4 mg/kg IV Q28D인 것으로 예측되고, 이는 추정되는 최저 약물 농도 (100 nM)에서 >IC90 종양 성장 억제 커버리지를 제공할 것으로 예측되었다. 예측되는 효과적인 용량에서 정상 상태에서의 예상되는 Cmax, Cave 및 Cmin은 각각 2 mg/kg Q14D (IV) 후에 84, 44 및 29 μg/mL, 및 4 mg/kg Q28D (IV) 후에 132, 45 및 21 μg/mL이다. 예측되는 인간 t½은 예측되는 효과적인 용량에서 대략 15 내지 17일이다.
이들 결과는 ADWA11 2.4가 상업적으로 실현가능하고 생산하기에 합리적인 양으로 투여될 수 있다는 점에서 잠재적인 유용한 인간 치료 항체임을 지지한다.
실시예 21: CD-1 마우스에서의 반복-용량 독성동태학
GLP 반복-용량 독성 연구의 일부로서 CD-1 마우스 (n = 3/성별/용량 군)에게 총 4회 용량 동안 10 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주로 ADWA11 2.4를 매주 정맥내 (IV) 또는 피하 (SC) 투여한 후에 독성동태학 및 항-약물 항체 평가를 수행하였다.
연구 동안 임의의 시점에 비히클 대조군으로부터 수집되고 분석된 샘플에서 정량화가능한 농도의 ADWA11 2.4는 존재하지 않았다. 데이터의 정성적 검토에 기초하면, 전신 노출에서 일관된 성별-관련 차이는 존재하지 않았고 (Cmax 및 AUC168에 의해 평가된 바와 같음), 따라서 군 평균 독성동태학적 파라미터는 수컷 및 암컷 CD-1 마우스 둘 다로부터의 조합 데이터를 사용하여 제시된다 (표 18).
표 18. CD-1 마우스에서의 ADWA11 2.4에 대한 전체 평균 독성동태학적 파라미터.
Figure pct00049
AUC168 = 시간 0에서 168시간까지의 농도-시간 곡선하 면적; Cmax = 최대 관찰 농도; Tmax = Cmax가 처음 관찰된 시간.
IV 투여 후, 전신 노출은 용량 증가에 따라 제1일에는 대략 용량-비례 방식으로, 제22일에는 용량-비례 방식 미만으로 증가되었다. 평균 축적 비 (AUC168, 제22일/제1일)는 각각 10 mg/kg/주 (IV), 100 mg/kg/주 (SC) 및 200 mg/kg/주 (IV)의 경우 3.0, 0.6, 및 1.0이었다. 100 mg/kg/주 (SC) 및 200 mg/kg/주 (IV)로의 반복 투여 후 축적의 결여는 이들 용량 군 내의 동물에서의 ADA의 존재와 관련될 수 있다.
ADWA11 2.4에 대한 ADA 유도의 전체 발생률은 28%였다 (5/18마리의 동물). ADWA11 2.4에 대한 ADA 유도의 발생률은 10 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주로 ADWA11 2.4가 투여된 CD-1 마우스에서 각각 0% (0/6마리 동물), 67% (4/6마리 동물) 및 17% (1/6마리 동물)였다. 일반적으로, ADA-양성 동물에서의 노출은 ADA-음성 동물과 비교하여 유사하거나 더 낮았다.
실시예 22: 시노몰구스 원숭이에서의 반복-용량 독성동태학
GLP 반복-용량 독성 연구의 일부로서 시노몰구스 원숭이에게 총 5회 용량 동안 8 (IV), 100 (SC) 및 200 (IV) mg/kg/주로 ADWA11 2.4를 매주 정맥내 (IV) 또는 피하 (SC) 투여한 후에 독성동태학 및 항-약물 항체 평가를 수행하였다.
연구 동안 임의의 시점에 비히클 대조군으로부터, 또는 제1일에 투여 전 임의의 시험 물품-투여 군으로부터 수집되고 분석된 샘플에서 정량화가능한 농도의 ADWA11 2.4는 존재하지 않았다. 용량 군에 걸쳐 전신 노출에서 명백한 성별-관련 차이는 존재하지 않았고 (Cmax 및 AUC168에 의해 평가된 바와 같음); 따라서, 군 평균 TK 파라미터를 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이 둘 다로부터의 조합 데이터를 사용하여 논의 및 제시하였다 (표 19).
표 19. 시노몰구스 원숭이에서의 ADWA11 2.4에 대한 전체 평균 독성동태학적 파라미터.
Figure pct00050
AUC168 = 시간 0에서 168시간까지의 농도-시간 곡선하 면적; Cmax = 최대 관찰 농도; Tmax = Cmax가 처음 관찰된 시간.
8 (IV), 100 (SC) 및 200 (IV) mg/kg의 매주 투여 후, 전신 노출은 제1일 및 제22일 둘 다에 대략 용량-비례적으로 증가되었고, 축적 비 (연구 제22일/연구 제1일)는 대략 2.3 내지 2.6 범위였다.
ADWA11 2.4에 대한 ADA 유도의 전체 발생률은 모든 용량 군에 걸쳐 39%였다 (7/18마리의 동물). ADAW11 2.4에 대한 ADA 유도의 발생률은 8 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주의 용량으로 ADAW11 2.4가 투여된 동물에 대해 각각 17% (1/6), 33% (2/6) 및 67% (4/6)였다. 일반적으로, 노출은 ADA-음성 동물과 비교하여 ADA-양성 동물에서 일반적으로 유사하였다.
실시예 23: 마우스 및 시노몰구스 원숭이에서의 비-임상 독성학
AWA11 2.4를 최대 1개월의 지속기간의 정맥내 (IV) 및 피하 (SC) 연구에서 마우스 및 시노몰구스 원숭이에게 투여하였다. 이들 연구에서 확인된 표적 기관은 골, 비장, 및 임상 화학 변화를 포함하였지만, 변화는 유해한 것으로 간주되지 않았다. 1-개월 연구에서 무 유해 효과 수준 (NOAEL)은 각각 마우스의 경우에 200 mg/kg/주 IV (Cmax 및 AUC168 6510 μg/mL 및 267000 μg·h/mL)이고, 시노몰구스 원숭이의 경우에 (Cmax 및 AUC168 11,400 μg/mL 및 1,100,000 μg·h/mL)였다.
단일-용량 독성
ADWA11 2.4는 2주 관찰 단계 후에 암컷 CD-1 마우스에서 10, 30, 또는 100 mg/kg의 단일 SC 용량 후에 허용되었다. 연구 동안 시험 물품-관련 발견은 없었고, 평균 전신 노출은 곡선하 면적 (AUC)에 의해 측정된 바와 같이 각각의 용량에 의해 용량-비례 방식으로 증가되었다. 100 mg/kg에서, 평균 Cmax 및 AUC336은 각각 795 μg/mL 및 148,000 μg*h/mL였다.
반복-용량 독성
연구 1: 연구 1에서, 암컷 CD-1 마우스에게 ADWA11 2.4를 제1일, 제4일, 제8일, 제11일, 및 제14일에 0, 1, 10, 또는 100 mg/kg/용량의 용량으로 IV 볼루스에 의해 투여하였다. 모든 마우스는 연구 지속기간 동안 생존하였고, 모든 용량은 허용되었다. 100 mg/kg/용량에서, 대조군 평균과 비교하여 임상 화학 파라미터에서 시험 물품-관련 차이가 존재하였고, 이는 보다 낮은 글루코스 (0.75x), 및 보다 높은 인 (1.35x), 글로불린 (1.09x), 및 혈액 우레아 질소 (1.18x)를 포함하며, 어떠한 연관되는 현미경상 발견이나 명백한 용량 관계 (글루코스 및 인)는 존재하지 않았다. ≤10 mg/kg/용량에서, 임상 화학 파라미터에서의 시험 물품-관련 차이는 대조군 평균과 비교하여 보다 낮은 글루코스 (단지 10 mg/kg/용량에서만 0.77x) 및 보다 높은 인 (1.26x)을 포함하였다. 평균 전신 노출은 용량 증가에 따라 제1일 및 제11일에 대략 용량 비례 방식으로 증가하였다. 100 mg/kg/용량에서, 최고 투여 용량, 평균 Cmax 및 AUC48은 제11일에 4510 μg/mL 및 124,000 μg·h/mL였다.
연구 2: 연구 2에서, 시노몰구스 원숭이에게 ADWA11 2.4를 제1일, 제8일 및 제14일에 0, 4, 40, 또는 100 mg/kg/용량의 용량으로 매주 1회 IV 볼루스에 의해 투여하였다. 모든 원숭이는 연구 지속기간 동안 생존하였고, 모든 용량은 허용되었다. 유일한 시험 물품-관련 발견은 100 mg/kg/용량 군의 암컷 (0.21x 기준선) 및 수컷 (0.44x 기준선) 원숭이 둘 다에서의 CD8+ 나이브 T 세포의 감소였지만, 4 또는 40 mg/kg/용량 군에서는 어떠한 변화도 관찰되지 않았다. 평균 전신 노출은 용량 증가에 따라 제1일에 대략 용량 비례 방식으로 증가하였다. 100 mg/kg/용량에서, 최고 투여 용량, 평균 Cmax 및 AUC168은 제1일에 3550 μg/mL 및 162,000 μg/mL였다.
연구 3: 연구 3에서, 수컷 시노몰구스 원숭이에게 ADWA11 2.4를 제1일에 0.1, 0.3, 또는 3 mg/kg의 용량으로 IV 볼루스 주사에 의해, 또는 10 mg/kg의 SC 주사에 의해 투여하였다. 후속적으로, 제1일에 0.1 또는 0.3 mg/kg (IV)을 투여한 동물에게 또한 제8일에 SC 주사에 의해 각각 30 또는 100 mg/kg을 투여하였다. 모든 투여된 용량/투여 경로는 허용되었다. 용량 투여 후 22- 또는 29-일 관찰 기간에 걸쳐 시험 물품-관련 생존-중 관찰사항 (즉, 임상 징후, 또는 체중 또는 음식물 소비에서의 변화)은 없었다. 주사 부위에서 홍반 또는 부종의 증거는 없었다.
제1일에 0.1, 0.3, 및 3 mg/kg의 단일 IV 투여 후, 전신 약물 노출은 0.1 내지 0.3 mg/kg에서 용량-비례적으로 증가되었고, 0.3 내지 3 mg/kg에서 용량-비례를 초과하여 증가되었다. 제1일에 10 mg/kg으로, 또는 제8일에 30 mg/kg 및 100 mg/kg으로 단일 SC 투여한 후, 전신 약물 노출은 용량-비례적으로 증가되었다. 3 mg/kg IV 용량 대비 SC 생체이용률은 10, 30, 및 100 mg/kg에서 각각 103%, 79%, 및 100%였다. 시노몰구스 원숭이에게 ADWA11 2.4를 0.1, 0.3, 또는 3 mg/kg (IV) 또는 10, 30, 또는 100 mg/kg (SC)으로 투여하는 것은 허용되었고, 용량에 따라 전신 노출이 증가되었다.
연구 4: 연구 4에서, 수컷 및 암컷 CD-1 마우스에게 ADWA11 2.4를 1개월 동안 0 (IV 및 SC), 10 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주의 IV 및/또는 SC 용량으로 (총 5회 용량) 매주 1회 투여하였다. 시험 물품-관련 발견은 임상 화학, 비장에서의 면역표현형결정 파라미터, 및 비장 중량에서 비유해 변경으로 제한되었다.
제5일에 사망한 상태로 발견된 1마리의 100 (SC) mg/kg/주 수컷을 제외하고 모든 동물은 스케줄링된 부검 시까지 생존하였지만; 이 동물의 사망은 시험 물품과 관련된 것으로 보이지 않았다. 사후 자가용해가 다양한 기관에서 관찰되었고, 200 (IV) mg/kg/주 군에서의 사망 원인은 병행 대조군과 비교하여 둘 다의 성별에서 보다 높은 글로빈 (1.15x 내지 1.16x), 암컷에서 보다 낮은 AG 비 (0.85x), 및 수컷에서 보다 높은 총 단백질 (1.11x)을 포함하였다. mAb 시험 물품의 투여는 전신 감마 글로불린 농도를 증가시켰고, 이는 아마도 혈청 단백질에서의 이들 변경에 기여할 것이다. 그의 작은 규모 및 연관된 현미경적 또는 육안적 발견의 결여로 인해, 임상 화학 파라미터에서의 이들 관찰은 비유해하였다. 비장에서, 시험 물품-관련된 암컷에서의 CD8+ T 세포의 보다 낮은 수 (0.52x, 0.65x, 및 0.60x 대조군 평균) 및 수컷에서의 활성화 마커 CD25를 발현하는 CD4+ T 세포의 보다 높은 백분율 (1.62x, 1.90x, 및 1.52x 대조군 평균)이 제30일에 각각 10 (IV), 100 (SC), 및 200 (IV) mg/kg/주에서 주목되었다. 평균 절대 및 상대 (신체 및 뇌 중량 대비) 비장 중량은 200 (IV) mg/kg/주에서 암컷에서 보다 낮았다 (0.86x 내지 0.88x 대조군). 보다 낮은 비장 중량에 대해 상관관계가 있는 육안적 또는 현미경적 발견은 없었다. 데이터의 정성적 검토에 기초하면, Cmax 및 AUC168에 의해 평가된 바와 같이 전신 노출에서 일관된 성별-관련 차이는 없었다. 전신 노출은 IV 또는 SC 용량 증가에 따라 증가되었다. 반복 투여 후, 노출은 10 mg/kg/주 (IV)에서 증가되었고, 100 (SC) mg/kg/주에서 감소되었고, 200 (IV) mg/kg/주에서 동일하게 유지되었다. ADWA11 2.4에 대한 항-약물 항체 (ADA) 유도의 발생률은 10 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주에서 각각 0% (0/6), 67% (4/6) 및 17% (1/6)였다. ADWA11 2.4의 투여 1개월 후에 심장 또는 피부에서 ADWA11 2.4 관련 현미경적 발견의 증거는 없었다.
반복 용량 투여 후, ADA-양성 동물에서의 노출은 ADA-음성 동물과 비교 시 유사하거나 약간 더 낮았다. 투여된 최고 용량, 200 (IV) mg/kg/주는 임의의 용량에서의 유해 발견의 결여에 기초하여 무관찰 유해 효과 수준 (NOAEL)으로서 확인되었고, 이는 제22일의 Cmax 6,510 μg/mL 및 AUC168 267,000 μg·h/mL와 연관되었다.
연구 5: 연구 5에서, 시노몰구스 원숭이에게 ADWA11 2.4를 1개월 동안 0 (IV 및 SC), 8 (IV), 200 (IV), 또는 100 (SC) mg/kg/주의 IV 및/또는 SC 용량으로 (총 5회 용량) 투여하였다. 본 연구에서 유해한 시험 물품-관련 발견은 없었다. 비유해 시험 물품-관련 발견은 100 (SC) mg/kg/주에서 수컷에서의 늑연골 접합부에서의 일측성 골단 이형성증 및 암컷에서의 혈청 단백질의 변경 (글로불린 증가 (최대 1.29x), 총 단백질 (최대 1.10x), 및/또는 알부민 글로불린 비 감소 (0.75x까지)), 및 200 (IV) mg/kg/주에서 둘 다의 성별에서의 상기를 포함하였다. 전신 노출 (Cmax 및 AUC168에 의해 평가된 바와 같음)은 수컷 및 암컷에서 용량 군에 걸쳐 유사하였고, IV 용량 군에서의 평균 전신 노출은 용량 증가에 따라 제1일 및 제22일에 대략 용량-비례 방식으로 증가되었다. 노출은 군에 걸쳐 반복 투여 후에 더 높았다. ADWA11 2.4의 투여 1개월 후에 심장 또는 피부에서 ADWA11 2.4 관련 현미경적 발견의 증거는 없었다.
ADA 유도의 발생률은 8 (IV), 100 (SC), 또는 200 (IV) mg/kg/주 용량으로 ADWA11 2.4가 투여된 동물에 대해 각각 17% (1/6마리의 동물), 33% (2/6마리의 동물) 및 67% (4/6마리의 동물)였고; ADWA11 2.4에 대한 ADA 유도의 발생률은 모든 용량 군에 걸쳐 39%였다. 혈청 노출은 ADA-음성 동물과 비교하여 ADA-양성 동물에서 일반적으로 유사하였다. ADWA11 2.4의 매주 1회 IV 또는 SC 투여 후, 임의의 생존-중 또는 사후 평가에서의 유해 발견의 결여에 기초하여, 200 (IV) mg/kg/주가 원숭이에서의 이러한 1-개월 독성 연구에서의 NOAEL로서 확인되었다. 200 (IV) mg/kg/주에서, 제22일의 평균 Cmax는 11,400 μg/mL였고, 평균 AUC168은 1,100,000 μg·h/mL였다.
1-개월 연구에서의 NOAEL은 마우스 (Cmax 및 AUC최종 6510 μg/mL 및 267000 μg·h/mL) 및 시노몰구스 원숭이 (Cmax 및 AUC최종 11,400 μg/mL 및 1,100,000 μg·h/mL) 둘 다에 대해 각각 200 mg/kg IV였다.
실시예 24: 시험관내 보체 단백질 C1q 및 FcR 결합
ADWA11 2.4가 보체 의존성 세포독성 (CDC) 및 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 유발하는 잠재력을 시험관내 스크리닝 검정에서 각각 C1q 및 Fc 감마 수용체 (FcγR)의 결합을 통해 조사하였다. ADWA11 2.4는 시험된 농도 (최대 30 μg/mL)에서 C1q에 결합하지 않았고, 따라서 CDC를 유도할 잠재력이 낮은 것으로 간주된다. 시험된 모든 FcγR에 대한 ADWA11 2.4 결합은 음성 대조군 항체에 대한 결합과 비교하여 유사하거나 더 낮았고, 양성 대조군 항체에 대한 결합과 비교하여 더 낮았다. 따라서, ADWA11 2.4는 ADCC 활성을 도출할 잠재력이 낮은 것으로 간주된다.
실시예 25: 시험관내 시토카인 방출 검정
8명의 인간 공여자로부터의 샘플을 사용하여 전혈 및 PBMC 포맷으로 시험관내 시토카인 방출 검정을 수행하였다. ADWA11 2.4와의 인큐베이션 후에 어떠한 시험-물품 관련 TNF, IL-6 또는 INF-γ 방출도 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 상기 기재된 마우스 및 원숭이 연구에서의 ADWA11 2.4의 투여 후 혈청 시토카인 프로파일의 변화의 결여와 일치한다.
실시예 26: αvβ8의 억제는 MC38 종양 모델에서 항-PD-1 요법의 효능을 개선시킨다
방법:
본 연구에서, MC38 뮤린 결장 암종 세포주를 10% 태아 소 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/mL 페니실린 G 나트륨, 100 μg/mL 스트렙토마이신 술페이트, 및 25 μg/mL 겐타미신을 함유하는 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) 중에 유지시켰다. 세포를 5% CO2 및 95% 공기의 분위기 하에 37℃의 가습 인큐베이터 내에서 조직 배양 플라스크에서 배양하였다. 종양 이식 당일에, MC38 종양 세포를 지수 성장 동안 수거하고, 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중에 재현탁시켰다. 각각의 마우스에게 우측 측복부에 피하로 (sc) 0.1 mL 현탁액 중 5 x 105개 세포를 제공하였다. 평균 부피가 80-120 mm3 범위에 접근함에 따라 성장을 모니터링하기 위해 종양을 2차원으로 측정하였다. 부피 (V) = ½ L x W2이고, L (길이)은 종양의 가장 긴 직경으로서 정의되고, W (폭)는 L과 수직이다. 연구 제1일에, 동물을 군 평균 종양 부피가 100 mm3인 7개의 군으로 분류하고 (군당 n = 10), 하기 기재된 바와 같이 처리하였다. 종양 측정은 종양 부피가 1200 mm3 초과에 도달할 때까지 주당 2-3회 기록하였다.
오민 비드 루프토르를 사용하여 RN이지 플러스 미니 키트에 공급된 900 μL의 용해 완충제 중에 균질화시킨 30 mg의 수거 종양 조직에 대해 유전자 발현의 정량적 PCR (qPCR) 분석을 수행하였다. RN이지 플러스 미니 키트 및 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 균질화된 종양 샘플로부터 RNA를 단리하였다. RNA 농도를 에포크 바이오텍(Epoch BioTek) 분광광도계를 사용하여 정량화하고, ddH20으로 200 ng/μL로 재현탁시켰다. 2 μg의 총 RNA 및 고성능 cDNA 역전사 키트를 사용하여 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 cDNA를 합성하였다. 50 ng의 cDNA 및 유전자-특이적 택맨 프라이머, 택맨 유니버셜 마스터 믹스 II(TaqMan Universal Master Mix II), 및 판매업체 권장 프로토콜을 사용하여 유전자 발현을 분석하였다. ViiA7 실시간 qPCR 시스템을 qPCR 연구에 사용하였다. 각각의 샘플에 대한 역치 사이클 (CT)을 권장 비교 CT 방법을 사용하여 분석하였고, 표적 유전자의 발현을 이소형 대조군과 비교하여 처리군의 배수 변화로서 보고하였다. 양측 독립표본 스튜던트 T-검정을 사용하여 처리군을 이소형 대조군과 비교하였고, 유의성은 < 0.05에서 보고되었다.
결과:
종양 림프구 존재비에 대한 αvβ8-차단의 효과를 조사하기 위해, 종양 조직을 이소형 대조군 또는 ADWA11 VH05-2/VK01 (ADWA 2.4)로 처리된 마우스로부터 제12일 (제1일, 제5일, 제9일에 항체 처리)에 수집하고, 정량적 PCR에 의해 림프구 마커 mRNA 발현에 대해 분석하였다. ADWA11 VH05-2/VK01(ADWA 2.4) 처리는 종양 미세환경에서 CD8a (2.62±0.763) 및 그랜자임 B (5.79±1.55)의 발현 수준을 증가시켰다 (배수 변화 ± 표준 편차 vs 이소형 군, 10 mg/kg 처리군) (도 31a). 이들 데이터는 ADWA11 2.4 항체를 사용한 처리가 종양 미세환경에서 종양 퇴행에서 소정의 역할을 하는 활성화된 림프구의 존재비를 증가시킨다는 것을 입증한다.
ADWA11 2.4 처리는 연구의 제15일에 18% TGI를 발생시킨 한편, 항-PD-1 항체 (RMP1-14) 처리는 연구의 제16일에 10.3% TGI를 발생시켰고 어떠한 마우스도 연구의 종료에 도달하지 못했다 (제30일에 0% 생존). 그에 비해, 항-PD-1과 조합된 ADWA11 2.4는 연구 제16일에 35.8% TGI를 발생시켰고, 마우스의 60%는 연구의 종료에 도달하였다 (제30일에 % 생존) (도 31b 상부 패널).
이들 결과는 본원에 사용된 항체에 의해 예시된 바와 같은 항-PD1 및 항-αvβ8의 조합 요법이 예상외의 상승작용적 항종양 효과를 제공한다는 것을 입증한다. 이들 데이터는 본원에 개시된 신규 항-αvβ8 (예를 들어, ADWA11 2.4) 항체 및 관련 기술분야에 널리 공지된 항-PD-1 항체의 조합 요법이 종양의 치료를 위한 잠재적인 신규 요법을 제공한다는 것을 나타낸다.
개시된 교시내용이 다양한 용도, 방법, 키트 및 조성물과 관련하여 기재되었지만, 본원의 교시내용 및 하기의 청구된 본 발명을 벗어나지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 인지될 것이다. 하기 예는 개시된 교시내용을 더 잘 예시하기 위해 제공되며, 본원에 제시된 교시내용의 범주를 제한하는 것으로 의도되지는 않는다. 본 발명의 교시내용이 이들 예시적인 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 이들 예시적인 실시양태의 수많은 변경 및 변형이 과도한 실험 없이 가능하다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 쉽게 이해할 것이다. 모든 이러한 변경 및 변형은 본 발명의 교시내용의 범주 내에 속한다.
특허, 특허 출원, 논문, 교과서 등 및 그에 인용된 참고문헌을 비롯하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은 이미 인용되지 않은 정도까지 모든 목적상 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등을 포함하나 이에 제한되지 않는, 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 본 출원과 상이하거나 상충되는 경우에, 본 출원이 우선한다.
다양한 변형 및 변경이 본 발명의 범주 또는 취지에서 벗어나지 않으면서 본 발명에서 이루어질 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다. 본원에 개시된 본 발명의 명세서 및 실시의 고려 사항으로부터 본 발명의 다른 실시양태는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다. 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 여겨지며, 본 발명의 실제 범주 및 취지는 하기 청구범위에 의해 제시되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> PFIZER INC. THE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF CALIFORNIA <120> ANTI-ALPHAvBETA8 ANTIBODIES AND COMPOSITIONS AND USES THEREOF <130> PC72413A <140> <141> <150> 62/728,688 <151> 2018-09-07 <150> 62/890,945 <151> 2019-08-23 <160> 197 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1392 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgt gcactccgag 60 gtgcagctgg tggaaagcgg aggaggcctg gtgcagcctg gaggaagcct gaggctgagc 120 tgtgccgcca gcggcttcaa catcaaggac tactacatga actgggtgag gcaggcccct 180 ggcaaaggac tggagtgggt gggctggatc gaccccgacc agggcaacac catctacgag 240 cccaagttcc agggcaggtt caccatcagc gccgacacca gcaagaacag cgcctacctg 300 cagatgaact ccctgagggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag gaggctgctg 360 atggactact ggggccaggg cacactggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca 420 tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 540 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 600 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact 720 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgctgggg caccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct atagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tcccccggaa aa 1392 <210> 2 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 3 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 4 <211> 714 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgt gcactccgac 60 atccagatga cccagtcccc ttccagcctg agcgcttccg tgggcgacag ggtgaccatc 120 acctgcaggt ccaccaagtc cctgtcccac ttcaacggca acacctacct gttctggtac 180 cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagagg ctgatctact acatgtcctc cctggcctcc 240 ggagtgccct ccaggttctc cggatccggc tccggcaccg acttcaccct gaccatctcc 300 tccctgcagc ccgaggattt cgccacctac tactgccagc agtccctgga gtaccccttc 360 accttcggcg gcggcaccaa ggtggagatc aaacgaactg tggctgcacc atctgtcttc 420 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 480 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 540 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 600 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 660 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 714 <210> 5 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 6 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Arg Leu Leu Met Asp Tyr 1 5 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Tyr Tyr Met Ser Ser Leu Ala Ser 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 13 Gln Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn 1 5 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Arg Leu Leu Met Asp Tyr 1 5 <210> 17 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 1 5 10 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Tyr Tyr Met Ser Ser 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 20 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Phe Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Leu Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Lys Ala Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 21 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Asp Ile Val Met Thr Gln Ala Ala Pro Ser Val Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 Arg Leu Leu Met Asp Tyr 1 5 <210> 25 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 Arg Leu Leu Met Asp Tyr 1 5 <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 1 5 10 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 Tyr Tyr Met Ser Asn 1 5 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 34 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 35 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 39 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Gln Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Ala Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 44 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 44 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Gln Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 45 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 45 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 46 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Ala Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 47 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 47 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 48 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Ile Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 49 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 49 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 50 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 50 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 51 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 51 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 52 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 52 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 53 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 53 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 54 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 54 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 55 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 56 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 56 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 57 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 57 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 58 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 58 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 59 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 60 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 60 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 61 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 61 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 62 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 62 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 63 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 63 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 64 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 64 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 65 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 65 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 66 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 66 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro 50 55 60 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 67 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 67 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 68 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 68 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 69 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 69 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Ser His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 70 <211> 325 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 70 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 100 105 110 Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 115 120 125 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 130 135 140 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 145 150 155 160 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 165 170 175 Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu 180 185 190 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala 195 200 205 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 210 215 220 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 225 230 235 240 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 245 250 255 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 260 265 270 Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 275 280 285 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 290 295 300 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 305 310 315 320 Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 71 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 71 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 72 Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 73 Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 74 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 74 Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 1 5 10 <210> 75 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 75 Tyr Tyr Met Ser Asn 1 5 <210> 76 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 76 Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 77 <211> 1002 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 77 Met Leu Leu Gly Thr Leu Leu Leu Ile Leu Tyr Ile Leu Met Leu Cys 1 5 10 15 Arg Met Phe Leu Leu Val Gly Ala Pro Lys Ala Asn Thr Thr Gln Pro 20 25 30 Gly Ile Val Glu Gly Gly Gln Val Leu Lys Cys Asp Trp Ser Ser Thr 35 40 45 Arg Arg Cys Gln Pro Ile Glu Phe Asp Ala Thr Gly Asn Arg Asp Tyr 50 55 60 Ala Lys Asp Asp Pro Leu Glu Phe Lys Ser His Gln Trp Phe Gly Ala 65 70 75 80 Ser Val Arg Ser Lys Gln Asp Lys Ile Leu Ala Cys Ala Pro Leu Tyr 85 90 95 His Trp Arg Thr Glu Met Lys Gln Glu Arg Glu Pro Val Gly Thr Cys 100 105 110 Phe Leu Gln Asp Gly Thr Lys Thr Val Glu Tyr Ala Pro Cys Arg Ser 115 120 125 Gln Asp Ile Asp Ala Asp Gly Gln Gly Phe Cys Gln Gly Gly Phe Ser 130 135 140 Ile Asp Phe Thr Lys Ala Asp Arg Val Leu Leu Gly Gly Pro Gly Ser 145 150 155 160 Phe Tyr Trp Gln Gly Gln Leu Ile Ser Asp Gln Val Ala Glu Ile Val 165 170 175 Ser Lys Tyr Asp Pro Asn Val Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Asn Gln Leu 180 185 190 Ala Thr Arg Thr Ala Gln Ala Ile Phe Asp Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr 195 200 205 Ser Val Ala Val Gly Asp Phe Asn Gly Asp Gly Ile Asp Asp Phe Val 210 215 220 Ser Gly Val Pro Arg Ala Ala Arg Thr Leu Gly Met Val Tyr Ile Tyr 225 230 235 240 Asp Gly Lys Asn Met Ser Ser Leu Tyr Asn Phe Thr Gly Glu Gln Met 245 250 255 Ala Ala Tyr Phe Gly Phe Ser Val Ala Ala Thr Asp Ile Asn Gly Asp 260 265 270 Asp Tyr Ala Asp Val Phe Ile Gly Ala Pro Leu Phe Met Asp Arg Gly 275 280 285 Ser Asp Gly Lys Leu Gln Glu Val Gly Gln Val Ser Val Ser Leu Gln 290 295 300 Arg Ala Ser Gly Asp Phe Gln Thr Thr Lys Leu Asn Gly Phe Glu Val 305 310 315 320 Phe Ala Arg Phe Gly Ser Ala Ile Ala Pro Leu Gly Asp Leu Asp Gln 325 330 335 Asp Gly Phe Asn Asp Ile Ala Ile Ala Ala Pro Tyr Gly Gly Glu Asp 340 345 350 Lys Lys Gly Ile Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg Ser Thr Gly Leu Asn 355 360 365 Ala Val Pro Ser Gln Ile Leu Glu Gly Gln Trp Ala Ala Arg Ser Met 370 375 380 Pro Pro Ser Phe Gly Tyr Ser Met Lys Gly Ala Thr Asp Ile Asp Lys 385 390 395 400 Asn Gly Tyr Pro Asp Leu Ile Val Gly Ala Phe Gly Val Asp Arg Ala 405 410 415 Ile Leu Tyr Arg Ala Arg Pro Val Ile Thr Val Asn Ala Gly Leu Glu 420 425 430 Val Tyr Pro Ser Ile Leu Asn Gln Asp Asn Lys Thr Cys Ser Leu Pro 435 440 445 Gly Thr Ala Leu Lys Val Ser Cys Phe Asn Val Arg Phe Cys Leu Lys 450 455 460 Ala Asp Gly Lys Gly Val Leu Pro Arg Lys Leu Asn Phe Gln Val Glu 465 470 475 480 Leu Leu Leu Asp Lys Leu Lys Gln Lys Gly Ala Ile Arg Arg Ala Leu 485 490 495 Phe Leu Tyr Ser Arg Ser Pro Ser His Ser Lys Asn Met Thr Ile Ser 500 505 510 Arg Gly Gly Leu Met Gln Cys Glu Glu Leu Ile Ala Tyr Leu Arg Asp 515 520 525 Glu Ser Glu Phe Arg Asp Lys Leu Thr Pro Ile Thr Ile Phe Met Glu 530 535 540 Tyr Arg Leu Asp Tyr Arg Thr Ala Ala Asp Thr Thr Gly Leu Gln Pro 545 550 555 560 Ile Leu Asn Gln Phe Thr Pro Ala Asn Ile Ser Arg Gln Ala His Ile 565 570 575 Leu Leu Asp Cys Gly Glu Asp Asn Val Cys Lys Pro Lys Leu Glu Val 580 585 590 Ser Val Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ile Tyr Ile Gly Asp Asp Asn Pro 595 600 605 Leu Thr Leu Ile Val Lys Ala Gln Asn Gln Gly Glu Gly Ala Tyr Glu 610 615 620 Ala Glu Leu Ile Val Ser Ile Pro Leu Gln Ala Asp Phe Ile Gly Val 625 630 635 640 Val Arg Asn Asn Glu Ala Leu Ala Arg Leu Ser Cys Ala Phe Lys Thr 645 650 655 Glu Asn Gln Thr Arg Gln Val Val Cys Asp Leu Gly Asn Pro Met Lys 660 665 670 Ala Gly Thr Gln Leu Leu Ala Gly Leu Arg Phe Ser Val His Gln Gln 675 680 685 Ser Glu Met Asp Thr Ser Val Lys Phe Asp Leu Gln Ile Gln Ser Ser 690 695 700 Asn Leu Phe Asp Lys Val Ser Pro Val Val Ser His Lys Val Asp Leu 705 710 715 720 Ala Val Leu Ala Ala Val Glu Ile Arg Gly Val Ser Ser Pro Asp His 725 730 735 Ile Phe Leu Pro Ile Pro Asn Trp Glu His Lys Glu Asn Pro Glu Thr 740 745 750 Glu Glu Asp Val Gly Pro Val Val Gln His Ile Tyr Glu Leu Arg Asn 755 760 765 Asn Gly Pro Ser Ser Phe Ser Lys Ala Met Leu His Leu Gln Trp Pro 770 775 780 Tyr Lys Tyr Asn Asn Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Leu His Tyr Asp Ile 785 790 795 800 Asp Gly Pro Met Asn Cys Thr Ser Asp Met Glu Ile Asn Pro Leu Arg 805 810 815 Ile Lys Ile Ser Ser Leu Gln Thr Thr Glu Lys Asn Asp Thr Val Ala 820 825 830 Gly Gln Gly Glu Arg Asp His Leu Ile Thr Lys Arg Asp Leu Ala Leu 835 840 845 Ser Glu Gly Asp Ile His Thr Leu Gly Cys Gly Val Ala Gln Cys Leu 850 855 860 Lys Ile Val Cys Gln Val Gly Arg Leu Asp Arg Gly Lys Ser Ala Ile 865 870 875 880 Leu Tyr Val Lys Ser Leu Leu Trp Thr Glu Thr Phe Met Asn Lys Glu 885 890 895 Asn Gln Asn His Ser Tyr Ser Leu Lys Ser Ser Ala Ser Phe Asn Val 900 905 910 Ile Glu Phe Pro Tyr Lys Asn Leu Pro Ile Glu Asp Ile Thr Asn Ser 915 920 925 Thr Leu Val Thr Thr Asn Val Thr Trp Gly Ile Gln Pro Ala Pro Met 930 935 940 Pro Val Pro Val Trp Val Ile Ile Leu Ala Val Leu Ala Gly Leu Leu 945 950 955 960 Leu Leu Ala Val Leu Val Phe Val Met Tyr Arg Met Gly Phe Phe Lys 965 970 975 Arg Val Arg Pro Pro Gln Glu Glu Gln Glu Arg Glu Gln Leu Gln Pro 980 985 990 His Glu Asn Gly Glu Gly Asn Ser Glu Thr 995 1000 <210> 78 <211> 769 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 78 Met Cys Gly Ser Ala Leu Ala Phe Phe Thr Ala Ala Phe Val Cys Leu 1 5 10 15 Gln Asn Asp Arg Arg Gly Pro Ala Ser Phe Leu Trp Ala Ala Trp Val 20 25 30 Phe Ser Leu Val Leu Gly Leu Gly Gln Gly Glu Asp Asn Arg Cys Ala 35 40 45 Ser Ser Asn Ala Ala Ser Cys Ala Arg Cys Leu Ala Leu Gly Pro Glu 50 55 60 Cys Gly Trp Cys Val Gln Glu Asp Phe Ile Ser Gly Gly Ser Arg Ser 65 70 75 80 Glu Arg Cys Asp Ile Val Ser Asn Leu Ile Ser Lys Gly Cys Ser Val 85 90 95 Asp Ser Ile Glu Tyr Pro Ser Val His Val Ile Ile Pro Thr Glu Asn 100 105 110 Glu Ile Asn Thr Gln Val Thr Pro Gly Glu Val Ser Ile Gln Leu Arg 115 120 125 Pro Gly Ala Glu Ala Asn Phe Met Leu Lys Val His Pro Leu Lys Lys 130 135 140 Tyr Pro Val Asp Leu Tyr Tyr Leu Val Asp Val Ser Ala Ser Met His 145 150 155 160 Asn Asn Ile Glu Lys Leu Asn Ser Val Gly Asn Asp Leu Ser Arg Lys 165 170 175 Met Ala Phe Phe Ser Arg Asp Phe Arg Leu Gly Phe Gly Ser Tyr Val 180 185 190 Asp Lys Thr Val Ser Pro Tyr Ile Ser Ile His Pro Glu Arg Ile His 195 200 205 Asn Gln Cys Ser Asp Tyr Asn Leu Asp Cys Met Pro Pro His Gly Tyr 210 215 220 Ile His Val Leu Ser Leu Thr Glu Asn Ile Thr Glu Phe Glu Lys Ala 225 230 235 240 Val His Arg Gln Lys Ile Ser Gly Asn Ile Asp Thr Pro Glu Gly Gly 245 250 255 Phe Asp Ala Met Leu Gln Ala Ala Val Cys Glu Ser His Ile Gly Trp 260 265 270 Arg Lys Glu Ala Lys Arg Leu Leu Leu Val Met Thr Asp Gln Thr Ser 275 280 285 His Leu Ala Leu Asp Ser Lys Leu Ala Gly Ile Val Val Pro Asn Asp 290 295 300 Gly Asn Cys His Leu Lys Asn Asn Val Tyr Val Lys Ser Thr Thr Met 305 310 315 320 Glu His Pro Ser Leu Gly Gln Leu Ser Glu Lys Leu Ile Asp Asn Asn 325 330 335 Ile Asn Val Ile Phe Ala Val Gln Gly Lys Gln Phe His Trp Tyr Lys 340 345 350 Asp Leu Leu Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ile Ala Gly Glu Ile Glu Ser 355 360 365 Lys Ala Ala Asn Leu Asn Asn Leu Val Val Glu Ala Tyr Gln Lys Leu 370 375 380 Ile Ser Glu Val Lys Val Gln Val Glu Asn Gln Val Gln Gly Ile Tyr 385 390 395 400 Phe Asn Ile Thr Ala Ile Cys Pro Asp Gly Ser Arg Lys Pro Gly Met 405 410 415 Glu Gly Cys Arg Asn Val Thr Ser Asn Asp Glu Val Leu Phe Asn Val 420 425 430 Thr Val Thr Met Lys Lys Cys Asp Val Thr Gly Gly Lys Asn Tyr Ala 435 440 445 Ile Ile Lys Pro Ile Gly Phe Asn Glu Thr Ala Lys Ile His Ile His 450 455 460 Arg Asn Cys Ser Cys Gln Cys Glu Asp Asn Arg Gly Pro Lys Gly Lys 465 470 475 480 Cys Val Asp Glu Thr Phe Leu Asp Ser Lys Cys Phe Gln Cys Asp Glu 485 490 495 Asn Lys Cys His Phe Asp Glu Asp Gln Phe Ser Ser Glu Ser Cys Lys 500 505 510 Ser His Lys Asp Gln Pro Val Cys Ser Gly Arg Gly Val Cys Val Cys 515 520 525 Gly Lys Cys Ser Cys His Lys Ile Lys Leu Gly Lys Val Tyr Gly Lys 530 535 540 Tyr Cys Glu Lys Asp Asp Phe Ser Cys Pro Tyr His His Gly Asn Leu 545 550 555 560 Cys Ala Gly His Gly Glu Cys Glu Ala Gly Arg Cys Gln Cys Phe Ser 565 570 575 Gly Trp Glu Gly Asp Arg Cys Gln Cys Pro Ser Ala Ala Ala Gln His 580 585 590 Cys Val Asn Ser Lys Gly Gln Val Cys Ser Gly Arg Gly Thr Cys Val 595 600 605 Cys Gly Arg Cys Glu Cys Thr Asp Pro Arg Ser Ile Gly Arg Phe Cys 610 615 620 Glu His Cys Pro Thr Cys Tyr Thr Ala Cys Lys Glu Asn Trp Asn Cys 625 630 635 640 Met Gln Cys Leu His Pro His Asn Leu Ser Gln Ala Ile Leu Asp Gln 645 650 655 Cys Lys Thr Ser Cys Ala Leu Met Glu Gln Gln His Tyr Val Asp Gln 660 665 670 Thr Ser Glu Cys Phe Ser Ser Pro Ser Tyr Leu Arg Ile Phe Phe Ile 675 680 685 Ile Phe Ile Val Thr Phe Leu Ile Gly Leu Leu Lys Val Leu Ile Ile 690 695 700 Arg Gln Val Ile Leu Gln Trp Asn Ser Asn Lys Ile Lys Ser Ser Ser 705 710 715 720 Asp Tyr Arg Val Ser Ala Ser Lys Lys Asp Lys Leu Ile Leu Gln Ser 725 730 735 Val Cys Thr Arg Ala Val Thr Tyr Arg Arg Glu Lys Pro Glu Glu Ile 740 745 750 Lys Met Asp Ile Ser Lys Leu Asn Ala His Glu Thr Phe Arg Cys Asn 755 760 765 Phe <210> 79 <211> 1044 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 79 Met Ala Ala Pro Gly Arg Leu Leu Leu Arg Pro Arg Pro Gly Gly Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Pro Gly Leu Leu Leu Pro Leu Ala Asp Ala Phe Asn 20 25 30 Leu Asp Val Glu Ser Pro Ala Glu Tyr Ala Gly Pro Glu Gly Ser Tyr 35 40 45 Phe Gly Phe Ala Val Asp Phe Phe Glu Pro Ser Thr Ser Ser Arg Met 50 55 60 Phe Leu Leu Val Gly Ala Pro Lys Ala Asn Thr Thr Gln Pro Gly Ile 65 70 75 80 Val Glu Gly Gly Gln Val Leu Lys Cys Glu Cys Ser Ser Ser Arg Arg 85 90 95 Cys Gln Pro Ile Glu Phe Asp Ser Thr Gly Asn Arg Asp Tyr Ala Lys 100 105 110 Asp Asp Pro Leu Glu Phe Lys Ser His Gln Trp Phe Gly Ala Ser Val 115 120 125 Arg Ser Lys Gln Asp Lys Ile Leu Ala Cys Ala Pro Leu Tyr His Trp 130 135 140 Arg Thr Glu Met Lys Gln Glu Arg Glu Pro Val Gly Thr Cys Phe Leu 145 150 155 160 Gln Asp Gly Thr Lys Thr Val Glu Tyr Ala Pro Cys Arg Ser Lys Asn 165 170 175 Ile Asp Ala Asp Gly Gln Gly Phe Cys Gln Gly Gly Phe Ser Ile Asp 180 185 190 Phe Thr Lys Ala Asp Arg Val Leu Leu Gly Gly Pro Gly Ser Phe Tyr 195 200 205 Trp Gln Gly Gln Leu Ile Ser Asp Gln Val Ala Glu Ile Ile Ser Lys 210 215 220 Tyr Asp Pro Asn Val Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Asn Gln Leu Ala Thr 225 230 235 240 Arg Thr Ala Gln Ala Ile Phe Asp Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Val 245 250 255 Ala Val Gly Asp Phe Asn Gly Asp Gly Ile Glu Asp Phe Val Ser Gly 260 265 270 Val Pro Arg Ala Ala Arg Thr Leu Gly Met Val Tyr Ile Tyr Asp Gly 275 280 285 Lys Asn Met Ser Ser Leu His Asn Phe Thr Gly Glu Gln Met Ala Ala 290 295 300 Tyr Phe Gly Phe Ser Val Ala Ala Thr Asp Ile Asn Gly Asp Asp Tyr 305 310 315 320 Ala Asp Val Phe Ile Gly Ala Pro Leu Phe Met Asp Arg Gly Ser Asp 325 330 335 Gly Lys Leu Gln Glu Val Gly Gln Val Ser Val Ser Leu Gln Arg Ala 340 345 350 Val Gly Asp Phe Gln Thr Thr Lys Leu Asn Gly Phe Glu Val Phe Ala 355 360 365 Arg Phe Gly Ser Ala Ile Ala Pro Leu Gly Asp Leu Asp Gln Asp Gly 370 375 380 Phe Asn Asp Ile Ala Ile Ala Ala Pro Tyr Gly Gly Glu Asp Lys Lys 385 390 395 400 Gly Leu Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg Ser Thr Gly Leu Asn Ser Val 405 410 415 Pro Ser Gln Ile Leu Glu Gly Gln Trp Ala Ala Gln Ser Met Pro Pro 420 425 430 Ser Phe Gly Tyr Ser Met Lys Gly Ala Thr Asp Val Asp Arg Asn Gly 435 440 445 Tyr Pro Asp Leu Val Val Gly Ala Phe Gly Val Asp Arg Ala Val Leu 450 455 460 Tyr Arg Ala Arg Pro Val Val Thr Val Asn Ala Gly Leu Glu Val Tyr 465 470 475 480 Pro Ser Ile Leu Asn Gln Asp Asn Lys Ile Cys Pro Leu Pro Gly Thr 485 490 495 Ala Leu Lys Val Ser Cys Phe Asn Val Arg Phe Cys Leu Lys Ala Asp 500 505 510 Gly Lys Gly Thr Leu Pro Arg Lys Leu His Phe Gln Val Glu Leu Leu 515 520 525 Leu Asp Lys Leu Lys Gln Lys Gly Ala Ile Arg Arg Ala Leu Phe Leu 530 535 540 His Asn Arg Ser Pro Val His Ser Lys Thr Met Thr Val Phe Arg Gly 545 550 555 560 Gly Gln Met Gln Cys Glu Glu Leu Val Ala Tyr Leu Arg Asp Glu Ser 565 570 575 Glu Phe Arg Asp Lys Leu Thr Pro Ile Thr Ile Phe Met Glu Tyr Arg 580 585 590 Leu Asp Gln Arg Thr Ala Ala Asp Ala Thr Gly Leu Gln Pro Ile Leu 595 600 605 Asn Gln Phe Thr Pro Ala Asn Val Ser Arg Gln Ala His Ile Leu Leu 610 615 620 Asp Cys Gly Glu Asp Asn Val Cys Lys Pro Lys Leu Glu Val Ser Val 625 630 635 640 Asn Ser Asp Gln Lys Lys Ile Tyr Ile Gly Asp Asp Asn Pro Leu Thr 645 650 655 Leu Thr Val Lys Ala Gln Asn Gln Gly Glu Gly Ala Tyr Glu Ala Glu 660 665 670 Leu Ile Val Ser Ile Pro Pro Gln Ala Asp Phe Ile Gly Val Val Arg 675 680 685 Asn Asn Glu Ala Leu Ala Arg Leu Ser Cys Ala Phe Lys Thr Glu Asn 690 695 700 Gln Thr Arg Gln Val Val Cys Asp Leu Gly Asn Pro Met Lys Ala Gly 705 710 715 720 Thr Gln Leu Leu Ala Gly Leu Arg Phe Ser Val His Gln Gln Ser Glu 725 730 735 Met Asp Thr Ser Val Lys Phe Asp Leu Lys Ile Gln Ser Ser Asn Ser 740 745 750 Phe Asp Asn Val Ser Pro Val Val Ser Tyr Lys Val Asp Leu Ala Val 755 760 765 Leu Ala Ala Val Glu Ile Arg Gly Val Ser Ser Pro Asp His Ile Phe 770 775 780 Leu Pro Ile Pro Asn Trp Glu Tyr Lys Glu Asn Pro Glu Thr Glu Glu 785 790 795 800 Asp Val Gly Pro Ile Val Gln His Ile Tyr Glu Leu Arg Asn Asn Gly 805 810 815 Pro Ser Ser Phe Ser Lys Ala Ile Leu Asn Leu Gln Trp Pro Tyr Lys 820 825 830 Tyr Asn Asn Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Leu His Tyr Asp Ile Asp Gly 835 840 845 Pro Met Asn Cys Thr Ala Asp Thr Glu Ile Asn Pro Leu Arg Ile Lys 850 855 860 Thr Pro Glu Lys Asn Asp Thr Ala Ala Ala Gly Gln Gly Glu Arg Asn 865 870 875 880 His Leu Ile Thr Lys Arg Asp Leu Thr Leu Arg Glu Gly Asp Val His 885 890 895 Thr Leu Gly Cys Gly Ile Ala Lys Cys Leu Gln Ile Thr Cys Gln Val 900 905 910 Gly Arg Leu Asp Arg Gly Lys Ser Ala Ile Leu Tyr Val Lys Ser Leu 915 920 925 Leu Trp Thr Glu Thr Phe Met Asn Lys Glu Asn Gln Asn His Ser Tyr 930 935 940 Ser Leu Lys Ser Ser Ala Ser Phe Asn Ile Ile Glu Phe Pro Tyr Lys 945 950 955 960 Asn Leu Pro Ile Glu Asp Leu Phe Asn Ser Thr Leu Val Thr Thr Asn 965 970 975 Ile Thr Trp Gly Ile Gln Pro Ala Pro Met Pro Val Pro Val Trp Val 980 985 990 Ile Ile Leu Ala Val Leu Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Val Leu Val 995 1000 1005 Phe Val Met Tyr Arg Met Gly Phe Phe Lys Arg Val Arg Pro Pro 1010 1015 1020 Gln Glu Glu Gln Glu Arg Glu Gln Leu Gln Pro His Glu Asn Gly 1025 1030 1035 Glu Gly Asn Ser Glu Thr 1040 <210> 80 <211> 767 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 80 Met Cys Gly Ser Ala Leu Ala Phe Leu Thr Ala Ala Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 His Asn Cys Gln Arg Gly Pro Ala Leu Val Leu Gly Ala Ala Trp Val 20 25 30 Phe Ser Leu Val Leu Gly Leu Gly Gln Ser Glu His Asn Arg Cys Gly 35 40 45 Ser Ala Asn Val Val Ser Cys Ala Arg Cys Leu Gln Leu Gly Pro Glu 50 55 60 Cys Gly Trp Cys Val Gln Glu Asp Phe Val Ser Gly Gly Ser Gly Ser 65 70 75 80 Glu Arg Cys Asp Thr Val Ser Ser Leu Ile Ser Lys Gly Cys Pro Val 85 90 95 Asp Ser Ile Glu Tyr Leu Ser Val His Val Val Thr Ser Ser Glu Asn 100 105 110 Glu Ile Asn Thr Gln Val Thr Pro Gly Glu Val Ser Val Gln Leu His 115 120 125 Pro Gly Ala Glu Ala Asn Phe Met Leu Lys Val Arg Pro Leu Lys Lys 130 135 140 Tyr Pro Val Asp Leu Tyr Tyr Leu Val Asp Val Ser Ala Ser Met His 145 150 155 160 Asn Asn Ile Glu Lys Leu Asn Ser Val Gly Asn Asp Leu Ser Lys Lys 165 170 175 Met Ala Leu Tyr Ser Arg Asp Phe Arg Leu Gly Phe Gly Ser Tyr Val 180 185 190 Asp Lys Thr Val Ser Pro Tyr Ile Ser Ile His Pro Glu Arg Ile His 195 200 205 Asn Gln Cys Ser Asp Tyr Asn Leu Asp Cys Met Pro Pro His Gly Tyr 210 215 220 Ile His Val Leu Ser Leu Thr Glu Asn Ile Thr Glu Phe Glu Lys Ala 225 230 235 240 Val His Arg Gln Lys Ile Ser Gly Asn Ile Asp Thr Pro Glu Gly Gly 245 250 255 Phe Asp Ala Met Leu Gln Ala Ala Val Cys Glu Ser His Ile Gly Trp 260 265 270 Arg Lys Glu Ala Lys Arg Leu Leu Leu Val Met Thr Asp Gln Thr Ser 275 280 285 His Leu Ala Leu Asp Ser Lys Leu Ala Gly Ile Val Val Pro Asn Asp 290 295 300 Gly Asn Cys His Leu Lys Asn Asn Val Tyr Val Lys Ser Thr Thr Met 305 310 315 320 Glu His Pro Ser Leu Gly Gln Leu Ser Glu Lys Leu Ile Asp Asn Asn 325 330 335 Ile Asn Val Ile Phe Ala Val Gln Gly Lys Gln Phe His Trp Tyr Lys 340 345 350 Asp Leu Leu Pro Leu Leu Pro Gly Ala Ile Ala Gly Glu Ile Glu Ser 355 360 365 Lys Ala Ala Asn Leu Asn Asn Leu Val Val Glu Ala Tyr Lys Lys Ile 370 375 380 Ile Ser Glu Val Lys Val Gln Leu Glu Asn Gln Val His Gly Val His 385 390 395 400 Phe Asn Ile Thr Ala Ile Cys Pro Asp Gly Ala Arg Lys Pro Gly Ile 405 410 415 Ser Gly Cys Gly Asn Val Thr Ser Asn Asp Glu Val Leu Phe Asn Val 420 425 430 Thr Val Val Met Lys Thr Cys Asp Ile Met Gly Gly Lys Asn Tyr Ala 435 440 445 Ile Ile Lys Pro Ile Gly Phe Asn Glu Thr Thr Lys Val His Ile His 450 455 460 Arg Ser Cys Ser Cys Gln Cys Glu Asn His Arg Gly Leu Lys Gly Gln 465 470 475 480 Cys Ala Glu Ala Ala Pro Asp Pro Lys Cys Pro Gln Cys Asp Asp Ser 485 490 495 Arg Cys His Phe Asp Glu Asp Gln Phe Pro Ser Glu Thr Cys Lys Pro 500 505 510 Gln Glu Asp Gln Pro Val Cys Ser Gly Arg Gly Val Cys Ile Cys Gly 515 520 525 Lys Cys Leu Cys His Lys Thr Lys Leu Gly Arg Val Tyr Gly Gln Tyr 530 535 540 Cys Glu Lys Asp Asp Phe Ser Cys Pro Tyr Leu His Gly Asp Val Cys 545 550 555 560 Ala Gly His Gly Glu Cys Glu Gly Gly Arg Cys Gln Cys Phe Ser Gly 565 570 575 Trp Glu Gly Asp Arg Cys Gln Cys Pro Ser Ala Ser Ala Gln His Cys 580 585 590 Val Asn Ser Lys Gly Gln Val Cys Ser Gly Arg Gly Thr Cys Val Cys 595 600 605 Gly Arg Cys Glu Cys Thr Asp Pro Arg Ser Ile Gly Arg Leu Cys Glu 610 615 620 His Cys Pro Thr Cys His Leu Ser Cys Ser Glu Asn Trp Asn Cys Leu 625 630 635 640 Gln Cys Leu His Pro His Asn Leu Ser Gln Ala Ala Leu Asp Gln Cys 645 650 655 Lys Ser Ser Cys Ala Val Met Glu Gln His Arg Met Asp Gln Thr Ser 660 665 670 Glu Cys Leu Ser Gly Pro Ser Tyr Leu Arg Ile Phe Phe Ile Ile Phe 675 680 685 Ile Val Thr Phe Leu Ile Gly Leu Leu Lys Val Leu Ile Ile Arg Gln 690 695 700 Val Ile Leu Gln Trp Asn Asn Asn Lys Ile Lys Ser Ser Ser Asp Tyr 705 710 715 720 Arg Met Ser Ala Ser Lys Lys Asp Lys Leu Ile Leu Gln Ser Val Cys 725 730 735 Thr Arg Ala Val Thr Tyr Arg Arg Glu Lys Pro Glu Glu Ile Lys Met 740 745 750 Asp Ile Ser Lys Leu Asn Ala Gln Glu Ala Phe Arg Cys Asn Phe 755 760 765 <210> 81 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 81 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 82 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 82 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 83 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 84 <211> 1048 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 84 Met Ala Ser Pro Pro Arg Arg Arg Leu Arg Leu Gly Pro Arg Gly Leu 1 5 10 15 Pro Leu Leu Leu Ser Gly Leu Leu Leu Pro Leu Cys Arg Ala Phe Asn 20 25 30 Leu Asp Val Asp Ser Pro Ala Glu Tyr Ser Gly Pro Glu Gly Ser Tyr 35 40 45 Phe Gly Phe Ala Val Asp Phe Phe Val Pro Ser Ala Ser Ser Arg Met 50 55 60 Phe Leu Leu Val Gly Ala Pro Lys Ala Asn Thr Thr Gln Pro Gly Ile 65 70 75 80 Val Glu Gly Gly Gln Val Leu Lys Cys Asp Trp Ser Ser Thr Arg Arg 85 90 95 Cys Gln Pro Ile Glu Phe Asp Ala Thr Gly Asn Arg Asp Tyr Ala Lys 100 105 110 Asp Asp Pro Leu Glu Phe Lys Ser His Gln Trp Phe Gly Ala Ser Val 115 120 125 Arg Ser Lys Gln Asp Lys Ile Leu Ala Cys Ala Pro Leu Tyr His Trp 130 135 140 Arg Thr Glu Leu Lys Gln Glu Arg Glu Pro Val Gly Thr Cys Phe Leu 145 150 155 160 Gln Asp Gly Thr Lys Thr Val Glu Tyr Ala Pro Cys Arg Ser Gln Asp 165 170 175 Ile Asp Ala Asp Gly Gln Gly Phe Cys Gln Gly Gly Phe Ser Ile Asp 180 185 190 Phe Thr Lys Ala Asp Arg Val Leu Leu Gly Gly Pro Gly Ser Phe Tyr 195 200 205 Trp Gln Gly Gln Leu Ile Ser Asp Gln Val Ala Glu Ile Val Ser Lys 210 215 220 Tyr Asp Pro Asn Val Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Asn Gln Leu Ala Thr 225 230 235 240 Arg Thr Ala Gln Ala Ile Phe Asp Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Val 245 250 255 Ala Val Gly Asp Phe Asn Gly Asp Gly Ile Asp Asp Phe Val Ser Gly 260 265 270 Val Pro Arg Ala Ala Arg Thr Leu Gly Met Val Tyr Ile Tyr Asp Gly 275 280 285 Lys Asn Met Ser Ser Ile Tyr Asn Phe Thr Gly Asp Gln Met Ala Ala 290 295 300 Tyr Phe Gly Phe Ser Val Ala Ala Thr Asp Ile Asn Gly Asp Asp Tyr 305 310 315 320 Ala Asp Val Phe Ile Gly Ala Pro Leu Phe Met Asp Arg Gly Ser Asp 325 330 335 Gly Lys Leu Gln Glu Val Gly Gln Val Ser Val Ser Leu Gln Arg Ala 340 345 350 Ser Gly Asp Phe Gln Thr Thr Lys Leu Asn Gly Phe Glu Val Phe Ala 355 360 365 Arg Phe Gly Ser Ala Ile Ala Pro Leu Gly Asp Leu Asp Gln Asp Gly 370 375 380 Phe Asn Asp Ile Ala Ile Ala Ala Pro Tyr Gly Gly Glu Asp Lys Lys 385 390 395 400 Gly Ile Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg Ser Thr Gly Leu Asn Ala Val 405 410 415 Pro Ser Gln Ile Leu Glu Gly Gln Trp Ala Ala Arg Ser Met Pro Pro 420 425 430 Ser Phe Gly Tyr Ser Met Lys Gly Ala Thr Asp Ile Asp Lys Asn Gly 435 440 445 Tyr Pro Asp Leu Ile Val Gly Ala Phe Gly Val Asp Arg Ala Ile Leu 450 455 460 Tyr Arg Ala Arg Pro Val Ile Thr Val Asn Ala Gly Leu Glu Val Tyr 465 470 475 480 Pro Ser Ile Leu Asn Gln Asp Asn Lys Thr Cys Ser Leu Pro Gly Thr 485 490 495 Ala Leu Lys Val Ser Cys Phe Asn Val Arg Phe Cys Leu Lys Ala Asp 500 505 510 Gly Lys Gly Val Leu Pro Arg Lys Leu Asn Phe Gln Val Glu Leu Leu 515 520 525 Leu Asp Lys Leu Lys Gln Lys Gly Ala Ile Arg Arg Ala Leu Phe Leu 530 535 540 Tyr Ser Arg Ser Pro Ser His Ser Lys Asn Met Thr Ile Ser Arg Gly 545 550 555 560 Gly Leu Met Gln Cys Glu Glu Leu Ile Ala Tyr Leu Arg Asp Glu Ser 565 570 575 Glu Phe Arg Asp Lys Leu Thr Pro Ile Thr Ile Phe Met Glu Tyr Trp 580 585 590 Leu Asp Tyr Arg Thr Ala Ala Asp Thr Thr Gly Leu Gln Pro Ile Leu 595 600 605 Asn Gln Phe Thr Pro Ala Asn Ile Ser Arg Gln Ala His Ile Leu Leu 610 615 620 Asp Cys Gly Glu Asp Asn Val Cys Lys Pro Lys Leu Glu Val Phe Val 625 630 635 640 Asp Ser Asp Gln Lys Lys Ile Tyr Ile Gly Asp Asp Asn Pro Leu Thr 645 650 655 Leu Ile Val Lys Ala Gln Asn Gln Gly Glu Gly Ala Tyr Glu Ala Glu 660 665 670 Leu Ile Val Ser Ile Pro Leu Gln Ala Asp Phe Ile Gly Val Val Arg 675 680 685 Asn Ser Glu Ala Leu Ala Arg Leu Ser Cys Ala Phe Lys Thr Glu Asn 690 695 700 Gln Thr Arg Gln Val Val Cys Asp Leu Gly Asn Pro Met Lys Ala Gly 705 710 715 720 Thr Gln Leu Leu Ala Gly Leu Arg Phe Ser Val His Gln Gln Ser Glu 725 730 735 Met Asp Thr Ser Val Lys Phe Asp Leu Gln Ile Gln Ser Ser Asn Leu 740 745 750 Phe Asp Lys Val Ser Pro Val Val Ser His Lys Val Asp Leu Ala Val 755 760 765 Leu Ala Ala Val Glu Ile Arg Gly Val Ser Ser Pro Asp His Ile Phe 770 775 780 Leu Pro Ile Pro Asn Trp Glu His Lys Glu Asn Pro Glu Thr Glu Glu 785 790 795 800 Asp Val Gly Pro Val Val Gln His Ile Tyr Glu Leu Arg Asn Asn Gly 805 810 815 Pro Ser Ser Phe Ser Lys Ala Met Leu His Leu Gln Trp Pro Tyr Lys 820 825 830 Tyr Asn Asn Asn Thr Leu Leu Tyr Ile Leu His Tyr Asp Ile Asp Gly 835 840 845 Pro Met Asn Cys Thr Ser Asp Met Glu Ile Asn Pro Leu Arg Ile Lys 850 855 860 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Thr Glu Lys Asn Asp Thr Val Ala Gly Gln 865 870 875 880 Gly Glu Arg Asp His Leu Ile Thr Lys Arg Asp Leu Ala Leu Ser Glu 885 890 895 Gly Asp Ile His Thr Leu Gly Cys Gly Val Ala Gln Cys Leu Lys Ile 900 905 910 Val Cys Gln Val Gly Arg Leu Asp Arg Gly Lys Ser Ala Ile Leu Tyr 915 920 925 Val Lys Ser Leu Leu Trp Thr Glu Thr Phe Met Asn Lys Glu Asn Gln 930 935 940 Asn His Ser Tyr Ser Leu Lys Ser Ser Ala Ser Phe Asn Val Ile Glu 945 950 955 960 Phe Pro Tyr Lys Asn Leu Pro Ile Glu Asp Ile Thr Asn Ser Thr Leu 965 970 975 Val Thr Thr Asn Val Thr Trp Gly Ile Gln Pro Ala Pro Met Pro Val 980 985 990 Pro Val Trp Val Ile Ile Leu Ala Val Leu Ala Gly Leu Leu Leu Leu 995 1000 1005 Ala Val Leu Val Phe Val Met Tyr Arg Met Gly Phe Phe Lys Arg 1010 1015 1020 Val Arg Pro Pro Gln Glu Glu Gln Glu Arg Glu Gln Leu Gln Pro 1025 1030 1035 His Glu Asn Gly Glu Gly Asn Ser Glu Thr 1040 1045 <210> 85 <211> 769 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 85 Met Cys Gly Ser Ala Leu Ala Phe Phe Thr Ala Ala Phe Val Cys Leu 1 5 10 15 Gln Asn Asp Arg Arg Gly Pro Ala Ser Phe Leu Trp Ala Ala Trp Val 20 25 30 Leu Ser Leu Val Leu Gly Leu Gly Gln Gly Glu Asp Asn Ile Cys Ala 35 40 45 Ser Ser Asn Ala Ala Ser Cys Ala Arg Cys Leu Ala Leu Gly Pro Glu 50 55 60 Cys Gly Trp Cys Val Gln Glu Asp Phe Ile Ser Gly Gly Ser Arg Ser 65 70 75 80 Glu Arg Cys Asp Ile Val Ser Asn Leu Ile Ser Lys Gly Cys Ser Val 85 90 95 Asp Ser Ile Glu Tyr Pro Ser Val His Val Ile Ile Pro Thr Glu Asn 100 105 110 Glu Ile Asn Thr Gln Val Thr Pro Gly Glu Val Ser Ile Gln Leu Arg 115 120 125 Pro Gly Ala Glu Ala Asn Phe Met Leu Lys Ile His Pro Leu Lys Lys 130 135 140 Tyr Pro Val Asp Leu Tyr Tyr Leu Val Asp Val Ser Ala Ser Met His 145 150 155 160 Asn Asn Ile Glu Lys Leu Asn Ser Val Gly Asn Asp Leu Ser Arg Lys 165 170 175 Met Ala Phe Phe Ser Arg Asp Phe Arg Leu Gly Phe Gly Ser Tyr Val 180 185 190 Asp Lys Thr Val Ser Pro Tyr Ile Ser Ile His Pro Glu Arg Ile His 195 200 205 Asn Gln Cys Ser Asp Tyr Asn Leu Asp Cys Met Pro Pro His Gly Tyr 210 215 220 Ile His Val Leu Ser Leu Thr Glu Asn Ile Thr Glu Phe Glu Lys Ala 225 230 235 240 Val His Arg Gln Lys Ile Ser Gly Asn Ile Asp Thr Pro Glu Gly Gly 245 250 255 Phe Asp Ala Met Leu Gln Ala Ala Val Cys Glu Ser His Ile Gly Trp 260 265 270 Arg Lys Glu Ala Lys Arg Leu Leu Leu Val Met Thr Asp Gln Thr Ser 275 280 285 His Leu Ala Leu Asp Ser Lys Leu Ala Gly Ile Val Val Pro Asn Asp 290 295 300 Gly Asn Cys His Leu Lys Asn Asn Val Tyr Val Lys Ser Thr Thr Met 305 310 315 320 Glu His Pro Ser Leu Gly Gln Leu Ser Glu Lys Leu Ile Asp Asn Asn 325 330 335 Ile Asn Val Ile Phe Ala Val Gln Gly Lys Gln Phe His Trp Tyr Lys 340 345 350 Asp Leu Leu Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ile Ala Gly Glu Ile Glu Ser 355 360 365 Lys Ala Ala Asn Leu Asn Asn Leu Val Val Glu Ala Tyr Gln Lys Leu 370 375 380 Ile Ser Glu Val Lys Val His Val Glu Asn Gln Val Gln Gly Val Tyr 385 390 395 400 Phe Asn Ile Thr Ala Ile Cys Pro Asp Gly Ser Arg Lys Pro Gly Met 405 410 415 Glu Gly Cys Arg Asn Val Thr Ser Asn His Glu Val Leu Phe Asn Val 420 425 430 Thr Val Thr Met Lys Lys Cys Asp Val Thr Gly Gly Lys Asn Tyr Ala 435 440 445 Ile Ile Lys Pro Ile Gly Phe Asn Glu Thr Ala Lys Ile His Ile His 450 455 460 Arg Asn Cys Ser Cys Gln Cys Glu Asp Asn Arg Gly Pro Lys Gly Lys 465 470 475 480 Cys Val Asp Glu Thr Phe Leu Asp Ser Lys Cys Phe Gln Cys Asp Glu 485 490 495 Asn Lys Cys His Phe Asp Glu Asp Gln Phe Ser Ser Glu Ser Cys Lys 500 505 510 Ser His Lys Asp Gln Pro Val Cys Ser Gly Arg Gly Val Cys Val Cys 515 520 525 Gly Lys Cys Ser Cys His Lys Ile Lys Leu Gly Lys Val Tyr Gly Lys 530 535 540 Tyr Cys Glu Lys Asp Asp Phe Ser Cys Pro Tyr His His Gly Asn Leu 545 550 555 560 Cys Ala Gly His Gly Glu Cys Glu Ala Gly Arg Cys Gln Cys Phe Ser 565 570 575 Gly Trp Glu Gly Asp Arg Cys Gln Cys Pro Ser Ala Ala Ala Gln His 580 585 590 Cys Val Asn Ser Lys Gly Gln Val Cys Ser Gly Arg Gly Thr Cys Val 595 600 605 Cys Gly Arg Cys Glu Cys Thr Asp Pro Arg Ser Ile Gly Arg Phe Cys 610 615 620 Glu His Cys Pro Thr Cys His Thr Ala Cys Lys Glu Asn Trp Asn Cys 625 630 635 640 Val Gln Cys Leu His Pro His Asn Leu Ser Gln Ala Ile Leu Asp Gln 645 650 655 Cys Lys Thr Ser Cys Ala Leu Met Glu Gln Gln His Tyr Val Asp Gln 660 665 670 Thr Ser Glu Cys Phe Ser Ser Pro Ser Tyr Leu Arg Ile Phe Phe Ile 675 680 685 Ile Phe Ile Val Thr Phe Leu Ile Gly Leu Leu Lys Val Leu Ile Ile 690 695 700 Arg Gln Val Ile Leu Gln Trp Asn Ser Asn Lys Ile Lys Ser Ser Ser 705 710 715 720 Asp Tyr Arg Val Ser Ala Ser Lys Lys Asp Lys Leu Ile Leu Gln Ser 725 730 735 Val Cys Thr Arg Ala Val Thr Tyr Arg Arg Glu Lys Pro Glu Glu Ile 740 745 750 Lys Met Asp Ile Ser Lys Leu Asn Ala His Glu Thr Phe Arg Cys Asn 755 760 765 Phe <210> 86 <211> 324 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 86 Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala 1 5 10 15 Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60 Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val 65 70 75 80 Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro 100 105 110 Pro Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu 115 120 125 Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser 130 135 140 Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu 145 150 155 160 Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr 165 170 175 Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn 180 185 190 Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro 195 200 205 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln 210 215 220 Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val 225 230 235 240 Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val 245 250 255 Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln 260 265 270 Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn 275 280 285 Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val 290 295 300 Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His 305 310 315 320 Ser Pro Gly Lys <210> 87 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 87 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 35 40 45 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 65 70 75 80 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 85 90 95 Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105 <210> 88 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 89 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 89 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 90 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 90 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 91 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 91 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 92 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 92 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 93 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 93 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Val 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 94 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 94 Glu Pro Lys Phe Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser 1 5 10 15 <210> 95 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 95 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp 1 5 10 15 <210> 96 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 96 Thr Ala Val Tyr Tyr Ser Ala Arg Arg Leu Leu Xaa Asp Tyr Trp 1 5 10 15 <210> 97 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 97 Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr 1 5 10 15 <210> 98 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 98 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val 1 5 10 15 <210> 99 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 99 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Xaa Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val 1 5 10 15 <210> 100 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 100 Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 1 5 10 15 <210> 101 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 101 Leu Ile Tyr Tyr Xaa Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 1 5 10 15 <210> 102 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 102 Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 103 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 103 Phe Ala Thr Tyr Tyr Ser Xaa Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 104 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 104 Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 15 <210> 105 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 105 Glu Pro Lys Val Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser 1 5 10 15 <210> 106 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 106 Lys Ser Leu Ser His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr 1 5 10 15 <210> 107 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 107 Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 108 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 108 Phe Ala Thr Tyr Tyr Ser Gln Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 109 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 109 Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 110 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 110 Phe Ala Thr Tyr Tyr Ser Xaa Gln Ser Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 10 15 <210> 111 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 111 Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 15 <210> 112 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 112 Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 1 5 10 15 <210> 113 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 113 Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro 1 5 10 15 <210> 114 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 114 Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Xaa Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro 1 5 10 15 <210> 115 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 115 Gln Gly Asp Ser Leu Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln 1 5 10 15 <210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 116 Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys His Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro 1 5 10 15 <210> 117 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 117 Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ser Arg Ser Ile Trp Gly Asn Pro 1 5 10 15 <210> 118 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 118 Glu Ala Asp Tyr Tyr Ser Xaa Ser Arg Ser Ile Trp Gly Asn Pro 1 5 10 15 <210> 119 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 119 Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Thr 1 5 10 15 <210> 120 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 120 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Ser His Thr Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 15 <210> 121 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 121 Asn Pro Pro Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser 1 5 10 15 <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 122 Asp Thr Ala Val Val Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Gly Ile Ser Arg 1 5 10 15 <210> 123 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 123 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 124 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 124 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 125 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 125 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 20 <210> 126 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 126 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro 20 <210> 127 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 128 <211> 95 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 128 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95 <210> 129 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 129 Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr 1 5 10 <210> 130 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 130 Ala Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu 1 5 10 15 <210> 131 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 131 Trp Ile Asp Pro Asp Xaa Gly Asn Thr Ile Tyr Xaa Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 132 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 132 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Xaa His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 133 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 133 Tyr Tyr Met Ser Xaa Leu Ala Ser 1 5 <210> 134 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 134 Xaa Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 135 Trp Ile Asp Pro Asp Xaa Gly Asn 1 5 <210> 136 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 136 Ser Thr Lys Ser Leu Xaa His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 1 5 10 <210> 137 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 137 Tyr Tyr Met Ser Xaa 1 5 <210> 138 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 138 Arg Ser Thr Lys Ser Ile Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 139 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 139 Ser Thr Lys Ser Ile Leu His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 1 5 10 <210> 140 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 140 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 141 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 141 Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Phe Asn Gly Asn Ser Tyr Leu 1 5 10 <210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 142 Tyr Ala Met Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 143 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 143 Tyr Ala Met Ser Asn 1 5 <210> 144 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 144 Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 145 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 145 Tyr Tyr Ala Ser Asn 1 5 <210> 146 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 146 Tyr Tyr Met Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 147 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 147 Met Gln Ser Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 148 Gln Ser Tyr Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 149 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 149 Met Gln Ser Leu Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 150 Gln Ser Leu Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 151 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 151 Met Gln Ser Leu Glu Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 152 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 152 Gln Ser Leu Glu Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 153 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 153 Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 154 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 154 Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 155 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 155 Met Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 156 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 156 Gln Ser Leu Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 157 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 157 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 158 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 158 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 159 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 159 Gly Phe Asn Ile Ala Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 160 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 160 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 161 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 161 Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 162 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 162 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Gln Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 163 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 163 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 164 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Gln 1 5 <210> 165 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 165 Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Ala Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 166 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 166 Trp Ile Asp Pro Asp Gln Gly Asn Thr Ile Tyr Glu Pro Lys Val Gln 1 5 10 15 Gly <210> 167 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(16) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 167 Trp Ile Asp Pro Asp Xaa Gly Xaa Thr Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Gly <210> 168 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 168 Arg Ser Thr Lys Ser Xaa Xaa His Phe Asn Gly Asn Xaa Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 169 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 169 Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Leu Xaa Ser 1 5 <210> 170 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 170 Xaa Gln Ser Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 171 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 171 Trp Ile Asp Pro Asp Xaa Gly Asn Thr Ile Tyr Xaa Pro Lys Xaa Gln 1 5 10 15 Gly <210> 172 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 172 Arg Ser Thr Lys Ser Leu Xaa His Phe Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 173 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 173 Tyr Tyr Xaa Ser Xaa Leu Ala Ser 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 174 Xaa Gln Ser Xaa Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 175 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 175 Gly Phe Asn Ile Xaa Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 176 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 176 Trp Ile Asp Pro Asp Xaa Gly Xaa 1 5 <210> 177 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 177 Ser Thr Lys Ser Xaa Xaa His Phe Asn Gly Asn Xaa Tyr Leu 1 5 10 <210> 178 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 178 Tyr Xaa Xaa Ser Xaa 1 5 <210> 179 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 179 Tyr Tyr Xaa Ser Xaa 1 5 <210> 180 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 180 Gln Ser Xaa Glu Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 181 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 181 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 182 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 182 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asp Pro Asp Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Leu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 183 <211> 1389 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 183 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgt gcactccgag 60 gtgcagctgg tggaaagcgg aggaggcctg gtgcagcctg gaggaagcct gaggctgagc 120 tgtgccgcca gcggcttcaa catcaaggac tactacatga actgggtgag gcaggcccct 180 ggcaaaggac tggagtgggt gggctggatc gaccccgacc agggcaacac catctacgag 240 cccaagttcc agggcaggtt caccatcagc gccgacacca gcaagaacag cgcctacctg 300 cagatgaact ccctgagggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag gaggctgctg 360 atggactact ggggccaggg cacactggtc accgtctcct cagcctccac caagggccca 420 tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 540 accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 600 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact 720 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgctgggg caccgtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct atagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tcccccgga 1389 <210> 184 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 184 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 185 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 185 gacatccaga tgacccagtc cccttccagc ctgagcgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca ggtccaccaa gtccctgtcc cacttcaacg gcaacaccta cctgttctgg 120 taccagcaga agcccggcaa ggcccccaag aggctgatct actacatgtc ctccctggcc 180 tccggagtgc cctccaggtt ctccggatcc ggctccggca ccgacttcac cctgaccatc 240 tcctccctgc agcccgagga tttcgccacc tactactgcc agcagtccct ggagtacccc 300 ttcaccttcg gcggcggcac caaggtggag atcaaacgaa ctgtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 <210> 186 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 186 gacatccaga tgacccagtc cccttccagc ctgagcgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca ggtccaccaa gtccctgtcc cacttcaacg gcaacaccta cctgttctgg 120 taccagcaga agcccggcaa ggcccccaag aggctgatct actacatgtc ctccctggcc 180 tccggagtgc cctccaggtt ctccggatcc ggctccggca ccgacttcac cctgaccatc 240 tcctccctgc agcccgagga tttcgccacc tactactgcc agcagtccct ggagtacccc 300 ttcaccttcg gcggcggcac caaggtggag atcaaa 336 <210> 187 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 187 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggcgt gcactcc 57 <210> 188 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 188 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 189 <211> 1335 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 189 gaggtgcagc tggtggaaag cggaggaggc ctggtgcagc ctggaggaag cctgaggctg 60 agctgtgccg ccagcggctt caacatcaag gactactaca tgaactgggt gaggcaggcc 120 cctggcaaag gactggagtg ggtgggctgg atcgaccccg accagggcaa caccatctac 180 gagcccaagt tccagggcag gttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa cagcgcctac 240 ctgcagatga actccctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggaggctg 300 ctgatggact actggggcca gggcacactg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 360 ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgctg gggcaccgtc agtcttcctc 720 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtcccccg gaaaa 1335 <210> 190 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 190 gaggtgcagc tggtggaaag cggaggaggc ctggtgcagc ctggaggaag cctgaggctg 60 agctgtgccg ccagcggctt caacatcaag gactactaca tgaactgggt gaggcaggcc 120 cctggcaaag gactggagtg ggtgggctgg atcgaccccg accagggcaa caccatctac 180 gagcccaagt tccagggcag gttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa cagcgcctac 240 ctgcagatga actccctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggaggctg 300 ctgatggact actggggcca gggcacactg gtcaccgtct cctca 345 <210> 191 <211> 1332 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 191 gaggtgcagc tggtggaaag cggaggaggc ctggtgcagc ctggaggaag cctgaggctg 60 agctgtgccg ccagcggctt caacatcaag gactactaca tgaactgggt gaggcaggcc 120 cctggcaaag gactggagtg ggtgggctgg atcgaccccg accagggcaa caccatctac 180 gagcccaagt tccagggcag gttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa cagcgcctac 240 ctgcagatga actccctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caggaggctg 300 ctgatggact actggggcca gggcacactg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 360 ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 660 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgctg gggcaccgtc agtcttcctc 720 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtcccccg ga 1332 <210> 192 <211> 987 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 192 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggca 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc ccccgga 987 <210> 193 <211> 990 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 193 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggca 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc ccccggaaaa 990 <210> 194 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 194 cgaactgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 195 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 195 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 196 <211> 95 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 196 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95 <210> 197 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 197 Gln Ser Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5

Claims (47)

  1. (a) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1 (CDR-L1); 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 (CDR-H1); 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (b) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3; 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (c) ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL) 영역 및 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH) 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (d) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (e) 서열식별번호: 62-66으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 34-38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (f) 서열식별번호: 47 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 39 및 88-91로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (g) 서열식별번호: 7 및 67-69로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (h) 서열식별번호: 7, 47-69 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (i) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 (LC) 영역 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 (HC) 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (j) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (k) 서열식별번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 124 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
    (l) 서열식별번호: 186의 핵산 서열에 의해 코딩된 VL 영역 및 서열식별번호: 190의 핵산 서열에 의해 코딩된 VH 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및
    (m) 서열식별번호: 185의 핵산 서열에 의해 코딩된 LC 영역 및 서열식별번호: 189 또는 191의 핵산 서열에 의해 코딩된 HC 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1개의 항체 또는 단편인, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열식별번호: 7과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역 및 서열식별번호: 6과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  4. 제1항에 있어서, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  5. 제1항 또는 제4항에 있어서, 서열식별번호: 5와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 HC 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  6. 서열식별번호: 6, 34-46, 88-91, 및 93으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및/또는 서열식별번호: 7, 47-69, 및 92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  7. (i) 서열식별번호: 2 또는 3에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 HC; 및/또는
    (ii) 서열식별번호: 5에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항체 LC
    를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  8. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열로 이루어진 LC 및 서열식별번호: 2 또는 3의 아미노산 서열로 이루어진 HC를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  9. 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 항체 VL 영역; 및
    서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 포함하는 항체 VH 영역
    을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  10. 제9항에 있어서, 서열식별번호: 181 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 불변 영역 및 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 불변 영역을 포함하는 단리된 항체.
  11. a) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역으로부터의 제1, 제2 및 제3 CDR을 포함하는 항체 VL 영역;
    서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역으로부터의 제1, 제2 및 제3 CDR을 포함하는 항체 VH 영역;
    서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 항체 경쇄 불변 (CL) 영역; 및
    서열식별번호: 181 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 항체 중쇄 (CH) 불변 영역;
    b) 서열식별번호: 7과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 VL 영역; 및 서열식별번호: 6과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 VH 영역; 또는
    c) 서열식별번호: 5와 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 LC 영역 및 서열식별번호: 2 또는 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항체 HC
    를 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  12. ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 항체 VH 및 ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 삽입물에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 항체 VL을 포함하는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  13. 하기 특성 중 적어도 1개를 갖는, αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편:
    m. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 약 536 pM 미만인, KD로서 표현되는 인간 αvβ8 인테그린에 대한 결합 친화도;
    n. 약 100 pM 이하인 인간 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    o. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어, 약 489 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    p. 약 100 pM 미만인 마우스 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    q. 뮤린 항체 ADWA11의 경우의 KD 미만, 예를 들어 약 507 pM 미만인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    r. 약 100 pM 이하인 시노몰구스 원숭이 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    s. 약 160 pM인 래트 αvβ8 인테그린에 대한 KD;
    t. 예를 들어 비아코어 친화도 검정을 사용하여 결정된 바와 같이, 약 100 pM 미만인 KD를 갖는, 인간, 시노몰구스, 마우스, 및 래트 αvβ8 인테그린 중 적어도 2, 3종, 또는 모두에 대한 대략 동등한 친화도;
    u. 약 100 pM 내지 약 300 pM인 TGFβ 전사활성화의 억제에 대한 IC50;
    v. 약 100 pM 내지 약 400 pM의 U251 세포에 대한 EC30;
    w. 약 110 pM 내지 약 180 pM의 C8-S 세포에 대한 EC50; 및
    x. 하기로부터 선택된 적어도 1개의 예측되는 인간 약동학적 (PK) 파라미터:
    vii. 약 0.12 mL/h/kg의 중심 구획으로부터의 클리어런스 (CL);
    viii. 약 0.51 mL/h/kg의 구획간 분포 클리어런스 (CLF);
    ix. 약 36 mL/kg의 중심 구획에 대한 분포 부피 (V1);
    x. 약 33 mL/kg의 말초 구획에 대한 분포 부피 (V2);
    xi. 약 15 내지 17일의 말기 반감기 (t1/2); 및
    xii. 인간 Fcγ 수용체 또는 C1q에 대한 비 검출가능한 결합.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 카바트의 Eu 넘버링에 따라 넘버링된 바와 같은, 위치 L234, L235, 및 G237로부터 선택된 1개 이상의 치환 (예를 들어, L234A, L235A, 및 G237A 중 1개 이상)을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화 항체, 인간 항체, 뮤린 항체, 키메라 항체, 또는 낙타류 항체인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 중쇄 이소형이 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 그의 임의의 변이체로부터 선택되고/거나; 경쇄 불변 영역이 카파 또는 람다로부터 선택된 것인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 중쇄 이소형이 IgG1이고/거나 경쇄 불변 영역이 카파 경쇄인 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  18. αvβ8 인테그린에의 결합에 대해 제4항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 경쟁하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, i) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 중쇄 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 경쇄를 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, ii) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 중쇄 및 서열식별번호: 5의 아미노산 서열에 의해 코딩된 항체 경쇄를 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 iii) 둘 다를 포함하는 제약 조성물.
  21. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  22. 제21항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 VH 영역, VL 영역, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 190의 핵산 서열, 서열식별번호: 186의 핵산 서열, 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
  23. 제21항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 중쇄 불변 영역, 경쇄 불변 영역, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 192 또는 193의 핵산 서열; 서열식별번호: 194의 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
  24. 제21항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 HC, LC, 또는 둘 다를 코딩하고, 서열식별번호: 189 또는 190의 핵산 서열; 서열식별번호: 185의 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
  25. 제21항에 있어서, ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124917을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열, ATCC에 기탁된 수탁 번호 PTA-124918을 갖는 플라스미드의 삽입물의 핵산 서열, 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
  26. 제21항에 있어서, 서열식별번호: 189 또는 서열식별번호: 191에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열; 서열식별번호: 185에 대해 적어도 80%, 85%, 87%, 90%, 92%, 93%, 95%, 97%, 98%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열; 또는 둘 다를 포함하는 단리된 핵산.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 벡터.
  28. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항의 핵산 또는 제27항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  29. 제27항에 있어서, CHO 세포, COS 세포, HEK-293 세포, NS0 세포, PER.C6® 세포, 및 Sp2.0 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물 세포인 숙주 세포.
  30. 제28항의 숙주 세포를, 항체 또는 단편이 숙주 세포에 의해 발현되는 조건 하에 배양하는 단계 및 항체 또는 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제조하는 방법.
  31. αvβ8 인테그린 활성의 감소를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 αvβ8 인테그린 활성을 감소시키는 방법.
  32. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 세포독성제, 세포증식억제제, 화학요법제, 호르몬 치료, 백신, 면역요법, 수술, 방사선, 동결수술, 열요법 또는 그의 조합을 추가로 투여하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 추가로 투여하는 것이 치료 유효량의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조합물의 투여와 동시, 순차적 또는 별개인 방법.
  35. 제33항에 있어서, 면역요법이 항-PD1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, 항-CTLA-4 항체, 가용성 CTLA-4 융합 단백질 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 체크포인트 분자의 조정제를 포함하고, 여기서 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이 아닌 것인 방법.
  36. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 두경부의 편평 세포 암종, 투명 세포 또는 유두상 세포 유형을 갖는 신세포 암종, 난소암, 난관암, 원발성 복막암, 위암, 위식도 접합부 암, 식도암, 폐 편평 세포암, 췌장관 선암종, 담관암종, 자궁암, 흑색종, 요로상피 암종 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  37. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용하여 샘플, 조직 또는 세포에서 αvβ8 인테그린을 검출하는 방법이며, 샘플, 조직 또는 세포를 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
  38. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 단편 또는 제19항 또는 제20항의 제약 조성물을 포함하고, 임의로 제35항의 조정제를 포함하는 키트.
  39. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료를 위해 αvβ8 인테그린 활성의 감소를 필요로 하는 대상체에서 αvβ8 인테그린 활성을 감소시키는데 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
  40. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 임의로 면역요법과 조합하여 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하기 위한 것이고, 여기서 조합은 임의로 상승작용적 치료 효과를 제공하는 것인, 암을 치료하는데 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
  41. 제40항에 있어서, 암이 두경부의 편평 세포 암종, 투명 세포 또는 유두상 세포 유형을 갖는 신세포 암종, 난소암, 난관암, 원발성 복막암, 위암, 위식도 접합부 암, 식도암, 폐 편평 세포암, 췌장관 선암종, 담관암종, 자궁암, 흑색종, 요로상피 암종 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의로 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물 또는 조합이 면역요법 또는 방사선 요법의 투여와 함께 사용하기 위한 것인, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물.
  42. 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 제약 조성물의 용도.
  43. 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도.
  44. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (i) αvβ8 인테그린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편 및 (ii) 항-PD1, 항-PD-L1 또는 항-PD-L2 면역 체크포인트 분자의 조정제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 암이 편평 세포 암종인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 암이 유방암 또는 결장암인 방법.
  47. 제44항에 있어서, 조정제가 항-PD1 항체, 항-PD-L1 항체, 및 항-PD-L2 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
KR1020217006492A 2018-09-07 2019-09-05 항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도 KR20210057726A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862728688P 2018-09-07 2018-09-07
US62/728,688 2018-09-07
US201962890945P 2019-08-23 2019-08-23
US62/890,945 2019-08-23
PCT/US2019/049748 WO2020051333A1 (en) 2018-09-07 2019-09-05 Anti-avb8 antibodies and compositions and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210057726A true KR20210057726A (ko) 2021-05-21

Family

ID=67998735

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217006492A KR20210057726A (ko) 2018-09-07 2019-09-05 항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도

Country Status (16)

Country Link
US (2) US11359024B2 (ko)
EP (1) EP3847194A1 (ko)
JP (1) JP2022508015A (ko)
KR (1) KR20210057726A (ko)
CN (1) CN112823167A (ko)
AU (1) AU2019336197A1 (ko)
BR (1) BR112021004287A2 (ko)
CA (1) CA3107137A1 (ko)
CO (1) CO2021002954A2 (ko)
IL (1) IL280317A (ko)
MX (1) MX2021002690A (ko)
PE (1) PE20211605A1 (ko)
PH (1) PH12021550361A1 (ko)
SG (1) SG11202100888WA (ko)
TW (1) TW202024131A (ko)
WO (1) WO2020051333A1 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4087649A1 (en) 2020-01-11 2022-11-16 Scholar Rock, Inc. Tgfbeta inhibitors and use thereof
JP2023511255A (ja) 2020-01-11 2023-03-17 スカラー ロック インコーポレイテッド ＴＧＦ－β阻害剤及びその使用
CA3171172A1 (en) 2020-01-15 2021-07-22 The Regents Of The University Of California Antibodies that bind integrin avb8 and uses thereof
CN114195893A (zh) * 2020-09-17 2022-03-18 百奥泰生物制药股份有限公司 抗整联蛋白抗体或抗原结合片段及其应用
WO2022204581A2 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Scholar Rock, Inc. Tgf-beta inhibitors and use thereof
EP4348260A2 (en) 2021-06-03 2024-04-10 Scholar Rock, Inc. Tgf-beta inhibitors and therapeutic use thereof
CN118542937A (zh) * 2023-02-24 2024-08-27 恒翼生物医药(上海)股份有限公司 抗αvβ3抗体和抗PD-1抗体的联合药物
WO2024187051A1 (en) 2023-03-07 2024-09-12 Scholar Rock, Inc. Tgf-beta inhibitors for use for treating resistant or unresponsive cancer in patients
US20240327522A1 (en) * 2023-03-31 2024-10-03 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
CN117126282B (zh) * 2023-10-26 2024-01-12 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗体及其在制备阻断αvβ8与Latent TGF-β的结合的药物中的应用
CN117143241B (zh) * 2023-10-26 2024-02-23 迈威(上海)生物科技股份有限公司 与人整合素蛋白itgav/itgb8特异性结合的单克隆抗体

Family Cites Families (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3381783D1 (de) 1982-03-03 1990-09-13 Genentech Inc Menschliches antithrombin iii, dns sequenzen dafuer, expressions- und klonierungsvektoren die solche sequenzen enthalten und damit transformierte zellkulturen, verfahren zur expression von menschlichem antithrombin iii und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
DE3378250D1 (en) 1982-04-22 1988-11-24 Ici Plc Continuous release formulations
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
GB8905669D0 (en) 1989-03-13 1989-04-26 Celltech Ltd Modified antibodies
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
WO1991005548A1 (en) 1989-10-10 1991-05-02 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
JP2571874B2 (ja) 1989-11-06 1997-01-16 アルカーメス コントロールド セラピューティクス，インコーポレイテッド タンパク質マイクロスフェア組成物
US5290540A (en) 1991-05-01 1994-03-01 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method for treating infectious respiratory diseases
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US6132764A (en) 1994-08-05 2000-10-17 Targesome, Inc. Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents
JPH10511957A (ja) 1995-01-05 1998-11-17 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ ミシガン 表面改質ナノ微粒子並びにその製造及び使用方法
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
JP2000507912A (ja) 1995-08-31 2000-06-27 アルカームズ コントロールド セラピューティックス，インコーポレイテッド 作用剤の徐放性組成物
WO1997032572A2 (en) 1996-03-04 1997-09-12 The Penn State Research Foundation Materials and methods for enhancing cellular internalization
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
DE69738749D1 (de) 1996-08-16 2008-07-17 Schering Corp Zelloberflächen-antigen aus säugetieren und verwandte reagenzien
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
WO1998031346A1 (en) 1997-01-16 1998-07-23 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
CA2308114A1 (en) 1997-10-21 1999-04-29 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor receptor-like proteins tr11, tr11sv1, and tr11sv2
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
CA2319236A1 (en) 1998-02-09 1999-08-12 Genentech, Inc. Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
WO1999051642A1 (en) 1998-04-02 1999-10-14 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
JP2002518432A (ja) 1998-06-24 2002-06-25 アドバンスト インハレーション リサーチ，インコーポレイテッド 吸入器から放出される大多孔性粒子
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2295040T3 (es) 1999-07-12 2008-04-16 Genentech, Inc. Promocion o inhibicion de la angiogenesis y cardiovascularizacion mediante homologos del ligando / receptor del factor de necrosis del tumor.
ATE395413T1 (de) 2001-12-03 2008-05-15 Amgen Fremont Inc Antikörperkategorisierung auf der grundlage von bindungseigenschaften
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
BR0316880A (pt) 2002-12-23 2005-10-25 Wyeth Corp Anticorpos contra pd-1 e usos dos mesmos
ES2382918T3 (es) 2002-12-24 2012-06-14 Rinat Neuroscience Corp. Anticuerpos anti-NGF y procedimientos que usan los mismos
RU2369636C2 (ru) 2003-05-23 2009-10-10 Уайт Лиганд gitr и связанные с лигандом gitr молекулы и антитела и варианты их применения
EP1660126A1 (en) 2003-07-11 2006-05-31 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
DK1678314T3 (da) 2003-10-22 2012-12-03 Keck Graduate Inst Fremgangsmåde til syntetisering af heteromultimere polypeptider i gær ved anvendelse af en haploid parringsstrategi
WO2005055808A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Genzyme Corporation Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
WO2006083289A2 (en) 2004-06-04 2006-08-10 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
US7501121B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-10 Wyeth IL-13 binding agents
CA2602777C (en) 2005-03-25 2018-12-11 Tolerrx, Inc. Gitr binding molecules and uses therefor
EP3530736A3 (en) 2005-05-09 2019-11-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SG163554A1 (en) 2005-07-01 2010-08-30 Medarex Inc Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (pd-l1)
CN104072614B (zh) * 2005-07-08 2017-04-26 生物基因Ma公司 抗-αvβ6 抗体及其用途
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
WO2007133822A1 (en) 2006-01-19 2007-11-22 Genzyme Corporation Gitr antibodies for the treatment of cancer
EP2119780B1 (en) 2007-01-24 2015-03-25 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genetically recombinant antibody composition having enhanced effector activity
US8354509B2 (en) 2007-06-18 2013-01-15 Msd Oss B.V. Antibodies to human programmed death receptor PD-1
CA2693677C (en) 2007-07-12 2018-02-13 Tolerx, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
DK2242773T3 (en) 2008-02-11 2017-09-25 Cure Tech Ltd Monoclonal antibodies for tumor treatment
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
CA2729810A1 (en) 2008-07-02 2010-01-07 Emergent Product Development Seattle, Llc Tgf-.beta. antagonist multi-target binding proteins
PE20110435A1 (es) 2008-08-25 2011-07-20 Amplimmune Inc Composiciones antagonistas del pd-1
EP2328920A2 (en) 2008-08-25 2011-06-08 Amplimmune, Inc. Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer
US8586023B2 (en) 2008-09-12 2013-11-19 Mie University Cell capable of expressing exogenous GITR ligand
SG172059A1 (en) 2008-12-09 2011-07-28 Genentech Inc Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
CN102597001B (zh) * 2009-08-19 2014-07-30 默克专利有限公司 在ffpe材料中用于检测整联蛋白复合体的抗体
HUE049825T2 (hu) 2009-09-03 2020-10-28 Merck Sharp & Dohme Anti-GITR antitestek
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
PT2519543T (pt) 2009-12-29 2016-10-07 Emergent Product Dev Seattle Proteínas de ligação de heterodímero e suas utilizações
AU2011217848B8 (en) * 2010-02-18 2015-09-24 The Regents Of The University Of California Integrin aVB8 neutralizing antibody
ES2692379T3 (es) * 2010-11-01 2018-12-03 Symphogen A/S Anticuerpos anti-HER3 y composiciones
EP2744823B1 (en) * 2011-08-17 2017-08-02 The Regents of the University of California Antibodies that bind integrin alpha-v beta-8
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
ES2823648T3 (es) 2013-04-01 2021-05-07 Univ California Métodos y composiciones para tratar y prevenir enfermedades asociadas con la integrina AVB8
CN107405396A (zh) * 2014-06-17 2017-11-28 加州大学评议会 改进的α‑Vβ‑8抗体
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
CN108136001B (zh) 2015-04-03 2022-07-29 佐马技术有限公司 使用TGF-β抑制剂和PD-1抑制剂治疗癌症
KR20240093883A (ko) * 2015-04-28 2024-06-24 자임워크스 비씨 인코포레이티드 변형된 항원 결합 폴리펩티드 작제물 및 이의 용도
US10647756B2 (en) 2015-05-18 2020-05-12 Pfizer Inc. Humanized antibodies
US20190144547A1 (en) * 2015-11-23 2019-05-16 Merck Patent Gmbh Anti-alpha-v integrin antibody for the treatment of fibrosis and/or fibrotic disorders
US10954304B2 (en) * 2016-09-29 2021-03-23 The Regents Of The University Of California Neutralizing antibodies to the αvβ8 integrin complex for immunotherapy

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021002690A (es) 2021-05-12
PE20211605A1 (es) 2021-08-23
JP2022508015A (ja) 2022-01-19
CA3107137A1 (en) 2020-03-12
CO2021002954A2 (es) 2021-03-19
BR112021004287A2 (pt) 2021-08-03
US11359024B2 (en) 2022-06-14
TW202024131A (zh) 2020-07-01
WO2020051333A8 (en) 2020-06-25
CN112823167A (zh) 2021-05-18
WO2020051333A1 (en) 2020-03-12
US20200079855A1 (en) 2020-03-12
AU2019336197A1 (en) 2021-02-18
EP3847194A1 (en) 2021-07-14
US20220289850A1 (en) 2022-09-15
SG11202100888WA (en) 2021-02-25
IL280317A (en) 2021-03-01
PH12021550361A1 (en) 2021-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210057726A (ko) 항-αvβ8 항체 및 그의 조성물 및 용도
US20220390463A1 (en) Tumor necrosis factor-like ligand 1a specific antibodies and compositions and uses thereof
KR102505349B1 (ko) Flt3에 특이적인 항체 및 이의 용도
KR102665542B1 (ko) T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자 CD3 ABD 엽산 수용체 1(FolR1) 및 PD-1 축 결합 길항물질의 조합 요법
KR20220110224A (ko) Bcma에 결합하는 항체 및 이의 용도
KR20180082563A (ko) 글루코코르티코이드-유도된 종양 괴사 인자 수용체 (gitr)에 대한 항체 및 그의 용도
AU2016340989A1 (en) Anti-IL-2 antibodies and compositions and uses thereof
AU2014348676A1 (en) Tumor necrosis factor-like ligand 1A specific antibodies and compositions and uses thereof
US10946092B1 (en) Antibodies binding LAG3 and methods of treatment using them
CA3025536A1 (en) Anti-cxcr5 antibodies and compositions and uses thereof
US20240101674A1 (en) Pd1 and vegfr2 dual-binding agents
KR20220160555A (ko) Cd40에 결합하는 항체 및 이의 용도
KR20230022246A (ko) 치료 항체 및 그의 용도
KR20160072268A (ko) 항-efna4 항체-약물 접합체
RU2812478C2 (ru) АНТИ-αvβ8 АНТИТЕЛА И КОМПОЗИЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
KR20230060531A (ko) Pd-1에 결합하는 항체 및 이의 용도
KR20220166795A (ko) Ctla4에 결합하는 항체 및 이의 용도
US20240117030A1 (en) Multispecific antibodies and uses thereof
RU2773758C2 (ru) Связывающиеся с pd-1 антитела и способы их применения
RU2812280C1 (ru) Связывающиеся с pd-1 антитела и способы их применения
KR102768098B1 (ko) Cd70에 특이적인 항체 및 이의 용도
KR20230107478A (ko) 치료 항체 및 그의 용도
KR20200115596A (ko) Cd70에 특이적인 항체 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20210303

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20220830

Comment text: Request for Examination of Application

PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20250212

Patent event code: PE09021S01D