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KR20180085740A - 항-약물 항체의 형성을 감소시키기 위한 ii형 항-cd20 항체 - Google Patents

항-약물 항체의 형성을 감소시키기 위한 ii형 항-cd20 항체 Download PDF

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KR20180085740A
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South Korea
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antibody
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heavy chain
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마리나 바카크
스테판 에버스
크리스티안 클라인
파벨 피사
에바 로쓰만
요세 사로
파블로 우마나
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 질병의 치료 방법, 및 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질병, 특히 B-세포 증식성 질환의 치료 방법, 및 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여에 응답하는 부작용을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

Description

항-약물 항체의 형성을 감소시키기 위한 II형 항-CD20 항체
본 발명은 질병의 치료 방법, 및 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질병, 특히 B-세포 증식성 질환의 치료 방법, 및 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여에 응답하는 부작용을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
임상 환경에 사용하기 위해 입수할 수 있는 다수의 생물공학-유도된 치료제들이 최근 수년간 대단히 증가하였으며, 여기에는 재조합 인간 사이토킨(예를 들어 α 및 β 인터페론, 인터류킨-2), 세포 성장 인자(예를 들어 GM-CSF), 호르몬(예를 들어 글루카곤), 신경근육 길항물질(예를 들어 보툴리늄 독소), 혈액 제품(예를 들어 응혈인자 VIII), 재조합 수용체(예를 들어 에타너셉트) 및 단클론 항체가 있다. 치료 단백질들은 일반적으로 안전하고 무독성인 것으로 간주되지만, 항-약물 항체(ADA)로서 공지된, 이들 치료제에 대한 항체가 치료 중에 발생할 수 있다. ADA는 다양한 치료제들, 예를 들어 에리쓰로포이에틴, 인자 VIII, 인슐린, 면역독소 및 단클론 항체와 관련하여 관찰되었다(문헌[Schellekens and Casadevall, J Neurol (2004), 251 [Suppl 2]:II/4-II/9]; 문헌[Mossoba et al., Clin Cancer Res (2011) 17(11): 3697-3705]; 문헌[Hsu et al., British Journal of Dermatology (2014) 170, 261-273]). ADA 형성은 예를 들어 TNF 차단제로 치료된 자가면역 환자에서 흔하며 임상 결과에 영향을 미친다(문헌[Schaeverbecke et al., Rheumatology (2015) doi: 10.1093/rheumatology/kev277]).
ADA의 발생은 치료제의 혈청 농도 및 기능에 영향을 미칠 수 있다. ADA의 존재는 치료제와 항체간의 면역 복합체의 형성(중화, 비-중화 또는 이 둘 모두)을 통해 상기 치료제의 제거를 증가시키고, 따라서 상기 치료제의 반감기를 감소시킬 수 있다. 더욱 또한, 상기 치료제의 활성 및 유효성이 상기 치료제에 대한 항체의 결합을 통해 감소할 수 있다. ADA는 또한 알러지 또는 과민 반응 및 다른 부작용들과 관련될 수 있다.
이들 면역 응답과 관련된 부작용은 치료제의 안전성 및 효능 프로파일에 영향을 미칠 수 있기 때문에, ADA를 극복하거나 억제하기 위한 전략의 확인 및 개발이 대단히 중요하다.
다수의 단백질 공학 접근법들, 예를 들어 단백질 B 세포 에피토프의 가림 또는 변경 또는 단백질 T 세포 에피토프의 변형이 단백질 치료제의 면역원성을 감소시키기 위해 연구되었다. 그러나, 이들 접근법의 임상적 안전성 및 성공은 시험되지 않았으며 평가에 상당한 정도의 시간이 필요할 것이다. 따라서, ADA 응답을 방지하기 위해 FDA-승인된 시약들을 사용하는 새로운 중재를 개발할 필요가 시급하다.
숙주 면역 억제를 목적으로 하는 화학요법-기반 접근법들이 보고되었다(문헌[Mossoba et al., Clin Cancer Res (2011) 17(11): 3697-3705]).
항-CD20 항체 리툭시맵이 폼페병 환자에서 효소 대체 요법에 대한 관용을 성취하기 위해 메토트렉세이트 및 정맥내 면역 글로불린과 함께 사용되었다(문헌[Mendelsohn et al., NEJM (2009) 360:2, 194-195]). 그러나, 임상 시험에서, 리툭시맵에 의한 숙주 사전치료는 면역독소 LMB-1에 대한 인간 면역 응답을 억제하지 못했다(문헌[Hassan et al., Clin Cancer Res (2004) 10, 16-18]).
B-세포 증식성 질환은 백혈병과 림프종을 모두 포함하는 암의 이종 그룹을 나타낸다. 림프종은 림프 세포로부터 발생하며 2개의 주요 범주: 호지킨 림프종(HL) 및 비-호지킨 림프종(NHL)을 포함한다. 미국에서 B 세포 기원의 림프종은 모든 비-호지킨 림프종 사례의 대략 80 내지 85%를 차지하며, 상기 기원의 B-세포에서 유전자형 및 표현형 발현 패턴을 기준으로 상기 B-세포 부분집합내에 상당한 이질성이 존재한다. 예를 들어, B 세포 림프종 부분집합은 느리게 성장하는 무통성이면서 불치성인 질병, 예를 들어 여포성 림프종(FL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)뿐만 아니라, 보다 공격적인 하위유형인 외투세포 림프종(MCL) 및 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)을 포함한다.
B-세포 증식성 질환의 치료에 대한 다양한 작용제들의 입수 가능성에도 불구하고, 환자에서 관해를 연장시키고 치유율을 개선시키기 위해 안전하고 유효한 치료법을 개발할 필요가 계속되고 있다.
현재 연구되고 있는 전략은 악성 B 세포에 대한 T 세포의 관여이다. T 세포를 악성 B 세포에 대해 유효하게 관여시키기 위해서, 최근 2가지 접근법이 개발되었다. 이들 2가지 접근법은: 1) 종양 세포를 인식하기 위해 생체외에서 조작된 T 세포의 투여(또한 키메릭 항원 수용체-매개된 T 세포 요법[CAR-T 세포]으로서 공지됨)(문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]); 및 2) 내인성 T 세포, 예를 들어 이중특이성 항체를 활성화시키는 작용제의 투여(문헌[Oak and Bartlett, Expert Opin Investig Drugs (2015) 24, 715-724])이다.
상기 첫 번째 접근법의 일례가 모데(Maude) 등에 의한 연구에서 보고되었는데, 여기에서 30명의 성인 및 소아 환자를 CD19-지향된 키메릭 항원 수용체 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 자기유래 T 세포(CTL019 CAR-T 세포)로 치료하였다. 그 결과 67%의 6-개월 무합병증 생존률 및 78%의 전체 생존률을 근거로 지속된 관해가 생성되었다. 그러나, 모든 환자는 사이토킨 방출 증후군(CRS)(종양 크기와 관련된다)을 가졌으며 환자의 27%는 중증 CRS를 가졌다. 원인 불명의 중추신경계 독성이 또한 높은 빈도로 주목되었다.
대조적으로, 두 번째 접근법(종양 표적을 인식하기 위해 내인성 T 세포를 활성화시킴을 수반한다)은 이러한 확장성 장애물을 우회하며, 또한 경쟁적인 효능, 안전성 데이터 및 잠재적으로 장기적인 응답 지속기간을 제공할 수 있다. 상이한 CD20+ 혈액암에서, 상기 접근법은 블리나투모맵, 최근에 최소 잔류 질병-양성 급성 림프구성 백혈병(ALL) 환자에 대해 승인된 CD19CD3 표적화 T 세포 이중특이성 분자(문헌[Bargou et al., Science (2008) 321, 974-977])에 의해 가장 잘 예시된다. 상기 화합물(2개의 단쇄 Fv 단편으로 구성된다(소위 BiTE(등록상표) 포맷))은 세포용해성 T 세포에 의한 CD19+ 세포의 용해를 지시한다. 블리나투모맵의 주요 구속은 그의 짧은 반감기(대략 2시간)이며, 4 내지 8주에 걸쳐 펌프를 통한 연속 주입이 필요하다. 그럼에도 불구하고, 상기는 재발/무반응성 비-호지킨 림프종(r/r NHL) 및 ALL 모두의 환자들에서 강력한 효능을 가지며, 중증 사이토킨 방출 증후군 및 CNS 독성을 경감시키기 위해서 점진적으로 증가하는 투여(SUD)를 필요로 한다(문헌[Nagorsen and Baeuerle, Exp Cell Res (2011) 317, 1255-1260]).
상기 CD20 CD30 표적화 T 세포 이중특이성 분자, CD20XCD3 bsAB는 차세대의 B 세포 표적화 항체의 또 다른 예이다. CD20XCD3 bsAB는 B 세포상에서 발현된 CD20 및 T 세포상에 존재하는 CD3 입실론 쇄(CD3e)를 표적화하는 T 세포 이중특이성(TCB) 항체이다.
CD20XCD3 bsAB의 작용 기전은 CD20+ B 세포 및 CD3+ T 세포에 동시에 결합하여, T-세포 활성화 및 B 세포의 T-세포 매개된 살해를 유도함을 포함한다. CD20+ B 세포의 존재하에서(순환하든지 또는 조직 거주하든지), 약물학적 활성 용량은 T-세포 활성화 및 관련된 사이토킨 방출을 촉발시킬 것이다. CD20XCD3 bsAB는 경쟁적인 T 세포 관여제에 비해 비임상 모델에서 증대된 효능을 보였으며, IgG-기재 포맷을 갖는 경우, 블리나투모맵에 비해 크게 개선된 반감기를 갖는다.
사이토킨 방출은 T 세포 활성화의 결과이다. 테제네로(TeGenero)에 의해 수행된 1상 연구(문헌[Suntharalingam et al., N Engl J Med (2006) 355,1018-1028])에서, 모든 6명의 건강한 자원자는 부적합하게 투여된 T-세포 자극 초-작용물질 항-CD28 단클론 항체의 주입-후 급속하게 치명에 가까운 중증 사이토킨 방출 증후군(CRS)을 경험하였다. 보다 최근에, 상기에 언급된 모데 등에 의한 CD19-표적화의 연구에서, 재발된 ALL을 갖는 환자(모두 30명의 환자)의 키메릭 항원 수용체 T 세포(CAR-T 세포) 치료는 사이토킨 방출을 가졌으며, 이는 상기 환자의 27%에서 중증으로 분류되었다. CRS는 CAR-T 세포 요법의 통상적이지만 심한 합병증이다(문헌[Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178]에서 리뷰됨).
중증 CRS 및 CNS 독성이 또한 CD19-CD3 T 세포 이중특이성 작용제, 블리나투모맵에 대해 빈번히 관찰되었다(문헌[Klinger et al., Blood. 2012;119(26):6226-6233]). 모든 임상 시험에서 블리나투모맵을 수용한 환자들에서, 신경학적 독성이 환자의 대략 50%에서 발생하였으며, 관찰된 독성의 유형은 패키지 삽입지에서 충분히-정의된다.
CNS 독성이 초기 사이토킨 방출 또는 T 세포 활성화에 관련있는지 혹은 어떻게 관련있는지는 충분히 이해되고 있지 않다. 블리나투모맵과 유사하게, CNS AE(정신착란에서부터 전반적인 뇌증에 이르는 범위)가 CD19-표적화 CAR-T 세포로 치료된 r/r ALL이 있는 환자의 43%(13/30)에 대해 보고되었다(문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]; 문헌[Ghorashian et al., Br J Haematol (2015) 169, 463-478]). CRS의 증상 후에 전형적으로 발생한 신경학적 독성 효과는 절정이었다가 해소되기 시작하였으나; 중증 CRS와 직접적인, 명료한 관련은 밝혀지지 않았다. 저자들은 신경독성의 기전이 직접적인 CAR-T-세포-매개된 독성을 수반하거나 또는 사이토킨-매개될 수 있음을 제안하였다. 대조적으로, 중증 CRS와 신경독성(예를 들어 뇌증)간의 관련은 CD19-표적화 CAR-T 세포 요법의 또 다른 연구에서 제시되었으며(문헌[Davila et al., Sci Transl Med (2014) 6, 224ra25]) 직접적인 CAR-T-유발된 손상에 비해, 일반적인 T 세포 활성화에 기인하는 것으로 추측되었다.
사이토킨 방출 및/또는 CNS-관련된 독성은, CD3+ 세포를 조직-제한된(즉 비-순환) 표적 세포에 결부시키는 다른 T 세포 이중특이성 항체에 비해, CD3+ 세포를 B 세포에 결부시키는 T 세포 이중특이성 항체에서 특히 현저하다.
따라서 NHL 및 CLL과 같은 B-세포 증식성 질환을 갖는 환자의 치료에 현저하게 기여할 가능성을 갖는 상기 유망한 작용제들의 상기와 같은 부작용을 감소시키거나 예방하는 방법이 필요하다.
본 발명은 (i) 개체에 대한 면역원성 치료제의 투여에 응답하는 ADA의 형성이 유효하고 지속적으로 예방될 수 있고, (ii) 개체에 대한 치료제, 특히 CD20XCD3 bsAB와 같은 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출이, II형 항-CD20 항체, 예를 들어 오비누투주맵에 의한 상기 개체의 사전치료에 의해 현저하게 감소될 수 있다는 놀라운 발견을 근거로 한다.
오비누투주맵은 항체-의존적인 세포 세포독성(ADCC) 및 항체-의존적인 세포 식균작용(ADCP), 낮은 보체-의존적인 세포독성(CDC) 활성, 및 높은 직접적인 세포사 유도를 유도하는, CD20 항원에 높은-친화성으로 결합하는 인간화된 당-공학 II형 항-CD20 mAb이다. 지금까지, 오비누투주맵의 안전성 프로파일(사이토킨 방출 포함)이, 진행중인 오비누투주맵 임상 시험에서 수백명의 환자에서 평가되고 관리되어 왔다.
이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 오비누투주맵(GAZYVA(등록상표)) 사전치료(GPT)는, 투여 출발로부터 종양 세포 제거를 매개하기에 매우 충분한 치료제의 노출 수준을 지지하면서 (T-세포 활성화)치료제에 의한 강한 전신 T 세포 활성화로부터 고도로 관련된 부작용(AE)(예를 들어 CRS)의 위험을 감소시키기 위해서 말초 혈액 및 2차 림프 기관 모두에서 B 세포의 빠른 고갈을 지원해야 한다. CD20XCD3 bsAB와 같은 (T-세포 활성화)치료제의 안전성 프로파일을 지지하는 외에, GPT는 또한 치료제 분자에 대한 항-약물 항체(ADA) 형성의 예방을 도와야 한다.
환자들의 경우, GPT는 증대된 안전성 프로파일과 함께 보다 양호한 약물 노출로 번역되어야 한다.
GPT는 사용되는 다른 방법들, 예를 들어 점진적으로 증가하는 투여(SUD)에 비해, 상기 목적을 수행하는데 더 유효해야 한다. 예를 들어, 오비누투주맵의 단일 용량은 재발/무반응성 환자가, 일단 결정되었으면 점진적 증가 투여로부터의 시간 지연없이 CD20XCD3 bs AB와 같은 T-세포 활성화 치료제의 전체 치료학적 용량을 수용할 수 있게 한다. 이와 대조적으로, 최근에 진행중인 2상 시험에서 r/r DLBCL 환자에 대한 블리나투모맵 투여 섭생이 이중의 점진적 증가 접근법(즉 9 → 28 → 112 ㎍/㎡/일)을 통합했으며, 따라서 112 ㎍/㎡/일의 최대 용량에 도달하는데 14일이 요구됨을 보고하였다(문헌[Viardot el at., Hematol Oncol (2015) 33, 242(Abstract 285)]). 실시예에 나타낸 바와 같이, 오비누투주맵에 의한 사전치료에 따라서, 키노몰구스 원숭이에게 CD20XCD3 bsAB의 투여는 GPT 없이 허용되는 것보다 10배 더 높은 수준까지 허용되었다. 1차 CD20XCD3 bs AB 주사와 관련하여 말초 혈액에서 강하게 감소된 사이토킨 방출과 함께 효율적인 말초 혈액 B-세포 고갈 및 항-종양 활성이 GPT시 관찰되었다.
따라서, 첫 번째 태양에서 본 발명은 개체에게 치료제 투여 전에 II형 항-CD20 항체를 투여함을 포함하는, (i) 상기 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키고/시키거나 (ii) 상기 개체에서 상기 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 하나의 실시태양에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
추가의 태양에서, 본 발명은 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다.
추가의 태양에서, 본 발명은 개체에게 치료제 투여 전에 II형 항-CD20 항체를 투여함을 포함하는, (i) 상기 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키고/시키거나 (ii) 상기 개체에서 상기 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체를 제공한다.
하나의 실시태양에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
추가의 태양에서, 본 발명은 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체를 제공하며, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서(상기 치료제의 투여에 응답하는) 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다.
추가의 태양에서, 본 발명은 (i) 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키고/시키거나 (ii) 개체에서 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 약제의 제조에서 II형 항-CD20 항체의 용도를 제공하며, 여기에서
상기 약제는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 사용되도록 되어 있으며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다.
더욱 추가의 태양에서, 본 발명은 (i) 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키고/시키거나 (ii) 개체에서 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 키트를 제공하며, 상기 키트는 II형 항-CD20 항체 조성물 및
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 II형 항-CD20 항체 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 조성물 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다. 하나의 실시태양에서, 상기 키트는 치료제 조성물을 추가로 포함한다.
본 발명은 추가의 태양에서 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 치료제를 제공하며, 여기에서 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다.
본 발명은 더욱 추가의 태양에서 개체에서 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서 치료제의 용도를 제공하며, 여기에서 상기 치료는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다.
본 발명은 추가의 태양에서 개체에서 질병을 치료하기 위한 키트를 제공하며, 상기 키트는 치료제 조성물 및
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 치료제 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 조성물 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 바람직하게는 T 세포 활성화 치료제이다. 하나의 실시태양에서, 상기 키트는 II형 항-CD20 항체 조성물을 포함한다.
본 발명의 방법, 용도, II형 항-CD20 항체, 치료제 및 키트는 본 명세서에서 하기에 기재되는 특징들 중 어느 하나를 단독으로 또는 함께 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
보다 구체적인 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
특정한 실시태양에서 상기 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
또 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 CD3, 특히 CD3 입실론에 특이적으로 결합한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
또 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 면역접합체는 (a) CEA에 특이적으로 결합하고 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 및 (b) 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드를 포함한다.
특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 CEA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분, 및
(ii) CEA에 특이적으로 결합하고 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 치료제는 CEA TCB를 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 T 세포 활성화 치료제이다.
하나의 실시태양에서, 상기 T-세포 활성화 치료제는 항체, 특히 다중특이성(예를 들어 이중특이성) 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 B-세포 항원, 특히 악성 B-세포 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 CD20에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 다중특이성 항체, 특히 이중특이성 항체이다.
하나의 실시태양에서, 상기 다중특이성 항체는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 다중특이성 항체는 (i) CD3 및 (ii) CD20 및 CD19 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 다중특이성 항체는 CD3 및 CD20에 특이적으로 결합한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분, 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR) 또는 CAR, 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD20-양성 B-세포 질환이다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
도 1. 오비누투주맵(리툭시맵이나 비히클은 아님)에 의한 전처리가 키노몰구스 원숭이에서 파상풍 변성독소 특이성 드 노보 IgG 항체 응답을 감쇠시킨다. 리툭산은 각각 리툭시맵 및 GA101 오비누투주맵을 가리킨다.
도 2. 홍역에 대해 기준선 역가를 갖는 동물에서 홍역/풍진 추가 백신화에 의한 면역 재-공격에 응답하여 홍역 특이성 IgG 항체 생성에 의한 기억 회상 응답이 키노몰구스 원숭이에서 오비누투주맵 또는 리툭시맵에 의해 영향을 받지 않는다. 리툭산은 각각 리툭시맵 및 GA101 오비누투주맵을 가리킨다.
도 3. 오비누투주맵 전-처리(BL = 기준선)의 출발 전, RO6895882(C1D1 = 1주기 1일) 처리의 출발 전 및 RO6895882 처리 도중의 말초 혈액 샘플 중의 B 세포수(CD45+CD19+). 라인/기호는 개별적인 환자들을 나타낸다. C1D1 시점으로부터 전진하여, 상기 말초 혈액 샘플에서 B 세포를 검출할 수 없었다.
도 4. 기준선(BL) 및 오비누투주맵 처리 후(처리된) 수집된 종양 생검에서 유식 세포측정에 의해 검출된 CD19+ 세포(B 세포)의 감소. RO6895882 처리 전 또는 처리 중에 처리-중(on-treatment) 샘플을 수득하였다. CD19(B 림프구)에 대해 양성 염색된 CD45+ 세포(림프구)의 비율이 강하게 감소하였다(B). CD16+ 세포(자연살해 세포)(A) 또는 CD3+ 세포(T 림프구)(C)의 비율에 대해서는 뚜렷한 변화가 없었다. 라인은 개별 환자를 나타낸다.
도 5. 면역조직화학에 의해 측정된 기준선(BL) 및 오비누투주맵 처리 후(처리된) 수집된 종양 생검에서 B 세포의 감소. RO6895882 처리 전 또는 처리 중에 처리 샘플을 수득하였다. B 림프구의 밀도를 CD20(A,B) 및 PAX5(C,D) 염색에 의해 측정하였다. 상기 두 방법 모두 종양 및 주변 정상 조직 중 B 림프구의 고갈을 검출하였다. 라인은 개별 환자를 나타낸다.
도 6. 본 발명에 유용한 T 세포 활성화 이중특이성 항원 결합 분자(TCB)의 전형적인 배열들. (A,D) "1+1 CrossMab" 분자의 삽화. (B,E) 교번 순서의 Crossfab 및 Fab 성분("뒤집어진")을 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (C,F) "2+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (G,K) 교번 순서의 Crossfab 및 Fab 성분("뒤집어진")을 갖는 "1+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (H,L) "1+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (I,M) 2개의 CrossFab를 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (J,N) 2개의 CrossFab 및 교번 순서의 Crossfab 및 Fab 성분("뒤집어진")을 갖는 "2+1 IgG Crossfab" 분자의 삽화. (O,S) "Fab Crossfab" 분자의 삽화. (P,T) "Cross-Fab" 분자의 삽화. (Q,U) "(Fab)2-Crossfab" 분자의 삽화. (R,V) "Crossfab-(Fab)2" 분자의 삽화. (W,Y) "Fab-(Crossfab)2" 분자의 삽화. (X,Z) "(Crossfab)2-Fab" 분자의 삽화. 검은색 점: 이종이량체화를 촉진하는 Fc 도메인 중 임의의 변형. ++, --: CH1 및 CL 도메인 중에 임의로 도입된 반대 전하의 아미노산. Crossfab 분자는 VH 및 VL 영역의 교환을 포함하는 것으로서 묘사되지만, -전하 변형이 CH1 및 CL 도메인에 도입되지 않은 실시태양에서- CH1 및 CL 도메인의 교환을 선택적으로 포함할 수도 있다.
도 7. 상이한 처리 그룹들에서 말초 혈액 중 B 세포 및 T 세포수. 1차 및 2차 CD20XCD3 bsAB 투여 24시간 및 72시간후 비히클 및 CD20XCD3 bsAB-처리된 완전히 인간화된 NOG 마우스의 말초 혈액 중 CD19+ B 세포(A) 및 CD3+ T 세포(B)의 유식세포측정 분석. 검은색 화살표는 CD20XCD3 bsAB 투여일을 가리킨다.
도 8. 상이한 처리 그룹들 가운데 말초 혈액 중에 방출된 사이토킨. 1차 및 2차 CD20XCD3 bsAB 투여 24시간 및 72시간후 비히클 및 처리된 마우스의 혈중 사이토킨의 복합 분석. 막대그래프 막대는 표준 편차를 가리키는 오차 막대와 함께 5마리 동물의 평균을 나타낸다. IFNγ(A), TNFα(B) 및 IL-6(C)에 대한 전형적인 그래프들을 나타낸다. 오비누투주맵 전-처리의 존재 및 부재하의 CD20XCD3 bsAB의 1차 주사의 사이토킨 방출을 비교한다(비교되는 막대를 연결 라인에 의해 표시한다).
도 9. CD20XCD3 bsAB, 오비누투주맵 및 오비누투주맵 전처리(Gpt) + CD20XCD3 bsAB의 항-종양 활성. 완전히 인간화된 NOG 마우스에서 단독요법으로서 CD20XCD3 bsAB 및 오비누투주맵 또는 Gpt + CD20XCD3 bsAB의 항-종양 활성. 검은색 화살표는 치료법의 출발을 가리킨다. (8<n<10). 종양 모델: WSU-DLCL2.
도 10. CD20XCD3 bsAB 및 Gpt + CD20XCD3 bsAB 처리 투여에 따른 키노몰구스 원숭이의 말초 혈액 중에 방출된 사이토킨. (A) IFNγ, (B) IL-8, (C) TNFα, (D) IL-2, (E) IL-6.
도 11. WSU-DLCL2 종양을 갖는 완전히 인간화된 NOG 마우스에서 CD20XCD3 bsAB 및 오비누투주맵 전처리(Gpt)의 점진적 증가 투여시 항-종양 활성. 마우스는 분할된 용량의 CD20XCD3 bsAB(0.15, 0.05, 0.015 ㎎/㎏ IV) 또는 Gpt(10 ㎎/㎏ 오비누투주맵)로서 1차 요법(화살표), 이어서 9 처리 주기(즉 9주) 동안 CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏(전체 용량)의 매주 정맥내 주사를 수용하였다. 비히클 그룹에서, 한 마리의 단일 마우스를 18일부터 나타낸다. 다른 그룹들의 경우, n = 9 또는 10. 종양 모델: 피하 주사된 WSU-DLCL2. [CD20XCD3 bsAB 0.05 ㎎/㎏ + CD20XCD3 bsAB 0.05 ㎎/㎏] 대 [오비누투주맵 10 ㎎/㎏ + CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏] *p = 0.018(듄네트 방법에 의한 sAUC의 일원 ANOVA 분석).
도 12. WSU-DLCL2 종양을 갖는 완전히 인간화된 NOG 마우스로부터의 폐에서 T-세포 염색, (A-D) 1차 처리 7일 후, 및 (E-H) 2차 처리 24시간 후. 처리 그룹들은 하기와 같다(단일 처리 또는 1차 + 2차 처리): (A) 비히클, (B) 오비누투주맵 10 ㎎/㎏, (C) CD20XCD3 bsAB 0.15 ㎎/㎏, (D) CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏, (E) 비히클 + 비히클, (F) 오비누투주맵 10 ㎎/㎏ + CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏, (G) CD20XCD3 bsAB 0.15 ㎎/㎏ + CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏, (H) 비히클 + CD20XCD3 bsAB 0.5 ㎎/㎏. 폐 절편은 항-CD3 항체로 면역조직화학적으로 염색되었다(어두운 색); 핵은 헤마톡실린으로 대조염색되었다. 배율 20x, 화살표는 혈관주위 CD3 양성 세포의 증가를 가리킨다.
도 13. 0.5 ㎎/㎏의 CD20XCD3 bsAB에 의한 단일 처리 후 24시간째에 죽인 인간화된 NOG 마우스의 폐. 혈관 중 내피 세포층에 대한 T 세포(화살표)의 변연화 및 부착. 극히 소수의 T 세포가 혈관주위 공간으로 이동하였다(별표). (A) 20x 배율, (B) 40x 배율.
도 14. 키노몰구스 원숭이에서 오비누투주맵 전처리의 존재 또는 부재하의 단일 정맥내 투여에 따른 CD20XCD3 bsAB의 혈청 농도-시간 곡선. 키노몰구스 원숭이에게 오비누투주맵 전처리(Gpt)(50 ㎎/㎏, CD20XCD3 bsAB 투여 4일전)의 존재 또는 부재하에 단일 IV 용량의 100 내지 1000 ㎍/㎏ CD20XCD3 bsAB를 투여하였다. 6마리의 동물을 각 용량 그룹에서 나타내며 데이터는 평균±SD로서 나타낸다.
정의
용어들을 본 명세서에서 하기에 달리 정의되지 않는 한 당해 분야에 일반적으로 사용되는 바와 같이 사용한다.
CD20(또한 B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5 및 LF5로서 공지됨; 인간 단백질은 UniProt 데이터베이스 엔트리 P11836에서 특성화된다)은 전구-B 및 성숙한 B 림프구상에서 발현된 대략 35 kD의 분자량을 갖는 소수성 막관통 단백질이다(문헌[Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; 문헌[Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; 문헌[Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; 문헌[Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; 문헌[Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]). 상응하는 인간 유전자는 세포막에 걸쳐있는 4-도메인, 아과 A, 구성원 1(또한 MS4A1으로서 공지됨)이다. 상기 유전자는 상기 세포막에 걸쳐있는 4A 유전자과의 구성원을 암호화한다. 상기 발생기 단백질과의 구성원은 공통적인 구조적 특징 및 유사한 인트론/엑손 이어맞추기 경계를 특징으로 하며 조혈 세포 및 비림프 조직 중에서 독특한 발현 패턴을 나타낸다. 상기 유전자는 B-세포의 혈장 세포로의 발생 및 분화에 한 역할을 하는 B-림프구 표면 분자를 암호화한다. 상기 과 구성원은 과 구성원들의 집단 중에서 11q12에 국소화된다. 상기 유전자의 선택적인 이어맞추기는 동일한 단백질을 암호화하는 2개의 전사물 변체를 생성시킨다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "CD20"이란 용어는 달리 나타내지 않는 한, 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CD20을 지칭한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 CD20뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 CD20을 포함한다. 상기 용어는 또한 CD20의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, CD20은 인간 CD20이다. 예시적인 인간 CD20의 아미노산 서열은 서열번호 1에 나타낸다.
"항-CD20 항체" 및 "CD20에 결합하는 항체"란 용어는 상기 항체가 CD20을 표적화하는 진단제 및/또는 치료제로서 유용하기에 충분한 친화성으로 CD20에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 하나의 실시태양에서, 관련되지 않은 비-CD20 단백질에의 항-CD20 항체의 결합 정도는 예를 들어 방사성면역분석(RIA)에 의해 측정된 바와 같은 CD20에 대한 상기 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 몇몇 실시태양에서, CD20에 결합하는 항체는 ≤1 μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM(예를 들어 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리상수(Kd)를 갖는다. 몇몇 실시태양에서, 항-CD20 항체는 상이한 종들로부터의 CD20 중에서 보존되는 CD20의 에피토프에 결합한다.
"II형 항-CD20 항체"는 문헌[Cragg et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; 문헌[Cragg et al., Blood 101 (2003) 1045-1052], 문헌[Klein et al., mAbs 5 (2013), 22-33]에 기재되고 하기 표 1에 요약된 바와 같은 II형 항-CD20 항체의 결합 성질 및 생물학적 활성을 갖는 항-CD20 항체를 의미한다.
[표 1]
Figure pct00001
II형 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 오비누투주맵(GA101), 토시투무맵(B1), 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1(WO 2005/044859에 개시된 바와 같은 키메릭 인간화된 IgG1 항체), 11B8 IgG1(WO 2004/035607에 개시된 바와 같은) 및 AT80 IgG1을 포함한다.
I형 항-CD20 항체의 예는 예를 들어 리툭시맵, 오파투무맵, 벨투주맵, 오카라투주맵, 오크렐리주맵, PRO131921, 우블리툭시맵, HI47 IgG3(ECACC, 하이브리도마), 2C6 IgG1(WO　2005/103081에 개시된 바와 같은), 2F2 IgG1(WO　2004/035607 및 WO　2005/103081에 개시된 바와 같은) 및 2H7 IgG1(WO　2004/056312에 개시된 바와 같은)을 포함한다.
"인간화된 B-Ly1 항체"란 용어는 WO　2005/044859 및 WO　2007/031875에 개시된 바와 같은 인간화된 B-Ly1 항체를 지칭하며, 이는 IgG1으로부터의 인간 불변 도메인과의 키메라화 및 인간화에 따라(WO　2005/044859 및 WO　2007/031875를 참조하시오) 쥐 단클론 항-CD20 항체 B-Ly1(쥐 중쇄(VH): 서열번호 2의 가변 영역; 쥐 경쇄(VL): 서열번호 3의 가변 영역)로부터 수득되었다(문헌[Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3　(1987) 131-139]을 참조하시오). 이들 "인간화된 B-Ly1 항체"는 WO　2005/044859 및 WO　2007/031875에 상세히 개시되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "사이토킨"이란 용어는 생물학적 또는 세포 기능 또는 과정(예를 들어 면역성, 염증 및 항상성)을 매개하고/하거나 조절하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "사이토킨"이란 용어는 "림포킨", "케모킨", "모노킨" 및 "인터류킨"을 포함한다. 유용한 사이토킨의 예는 비제한적으로 GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, 및 TNF-β를 포함한다. 특정한 사이토킨은 IL-2이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "사이토킨"이란 용어는 또한 상응하는 야생형 사이토킨의 아미노산 서열 중 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 사이토킨 변체, 예를 들어 문헌[Sauv
Figure pct00002
et al., Proc Natl Acad Sci USA 88, 4636-40 (1991)]; 문헌[Hu et al., Blood 101, 4853-4861 (2003)] 및 미국특허 공보 2003/0124678; 문헌[Shanafelt et al., Nature Biotechnol 18, 1197-1202 (2000)]; 문헌[Heaton et al., Cancer Res 53, 2597-602 (1993)] 및 미국특허 제 5,229,109 호; 미국특허 공보 2007/0036752; WO 2008/0034473; WO 2009/061853; 또는 WO 2012/107417에 기재된 IL-2 변체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "인터류킨-2" 또는 "IL-2"란 용어는 달리 나타내지 않는 한 임의의 척추동물 공급원, 예를 들어 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물로부터의 임의의 고유의 IL-2를 지칭한다. 상기 용어는 가공되지 않은 IL-2뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 IL-2를 포함한다. 상기 용어는 또한 IL-2의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 예시적인 인간 IL-2의 아미노산 서열을 서열번호 12에 나타낸다. 가공되지 않은 인간 IL-2는 성숙한 IL-2 분자 중에 없는 서열번호 31의 서열을 갖는 N-말단 20 아미노산 신호 펩타이드를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "인터류킨-2"란 용어는 또한 상응하는 야생형 사이토킨의 아미노산 서열 중에 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함하는 IL-2 변체, 예를 들어 문헌[Sauv
Figure pct00003
et al., Proc Natl Acad Sci USA 88, 4636-40 (1991)]; 문헌[Hu et al., Blood 101, 4853-4861 (2003)] 및 미국특허 공보 2003/0124678; 문헌[Shanafelt et al., Nature Biotechnol 18, 1197-1202 (2000)]; 문헌[Heaton et al., Cancer Res 53, 2597-602 (1993)] 및 미국특허 제 5,229,109 호; 미국특허 공보 2007/0036752; WO 2008/0034473; WO 2009/061853; 또는 WO 2012/107417에 기재된 IL-2 변체를 포함함을 의미한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "IL-2 돌연변이체" 또는 "돌연변이 IL-2 폴리펩타이드"란 용어는 완전길이 IL-2, 절두된 형태의 IL-2 및 IL-2가 예를 들어 융합 또는 화학적 접합에 의해 또 다른 분자에 결합되는 형태를 포함하여 상기 IL-2 분자의 다양한 형태의 임의의 돌연변이체 형태를 포함함을 의미한다. "완전 길이"는 IL-2를 참조하여 사용될 때 성숙한, 자연길이 IL-2 분자를 의미하고자 한다. 예를 들어 완전길이 인간 IL-2는 133 아미노산(예를 들어 서열번호 12를 참조하시오)을 갖는 분자를 지칭한다. 상기 다양한 형태의 IL-2 돌연변이체는 IL-2와 CD25와의 상호작용에 영향을 미치는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 가짐을 특징으로 한다. 상기 돌연변이는 그 위치에 통상적으로 위치하는 야생형 아미노산 잔기의 치환, 결실, 절두 또는 변형을 포함할 수 있다. 아미노산 치환에 의해 수득되는 돌연변이체가 바람직하다. 달리 나타내지 않는 한, IL-2 돌연변이체는 본 명세서에서 IL-2 돌연변이 펩타이드 서열, IL-2 돌연변이 폴리펩타이드, IL-2 돌연변이 단백질 또는 IL-2 돌연변이 유사체로서 지칭될 수 있다. 다양한 형태의 IL-2의 명칭은 본 명세서에서 서열번호 12에 나타낸 서열에 관하여 이루어진다. 다양한 명칭들이 본 명세서에서 동일한 돌연변이를 가리키기는데 사용될 수 있다. 예를 들어 42번 위치의 페닐알라닌으로부터 알라닌으로의 돌연변이를 42A, A42, A42, F42A 또는 Phe42Ala로 나타낼 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "사이토킨의 방출" 또는 "사이토킨 방출"이란 용어는 "사이토킨 폭풍" 또는 "사이토킨 방출 증후군"("CRS"로서 약기함)과 유의어이며, 치료제의 투여 중에 또는 투여 직후에(예를 들어 1일 이내에), 불리한 증상들을 생성시키는, 개체의 혈중 사이토킨, 특히 종양괴사인자 알파(TNF-α), 인터페론 감마(IFN-γ), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-2(IL-2) 및/또는 인터류킨-8(IL-8) 수준의 증가를 지칭한다. 사이토킨 방출은 치료제에 대한 통상적인 불리한 약물 반응인 주입-관련 반응(IRR)의 한 유형이며, 치료제의 투여에 때맞춰 관련된다. IRR은 전형적으로 치료제 투여 중 또는 직후, 즉 전형적으로 주입 후 24시간 이내, 우세하게는 1차 주입시 발생한다. 일부 예에서, 예를 들어 CAR-T 세포의 투여 후, CRS는 또한 오직 나중에, 예를 들어 투여 후 수일째에 상기 CAR-T 세포의 확대시 발생할 수 있다. 상기 발생률 및 중증도는 전형적으로 후속 주입에 따라 감소된다. 증상은 징후적 불편감에서부터 치명적인 사건에 이르는 범위일 수 있으며, 발열, 오한, 어지러움, 고혈압, 저혈압, 호흡곤란, 안절부절 증상, 발한, 홍조, 피부 발진, 빈맥, 빈호흡, 두통, 종양 통증, 오심, 구토 및/또는 기관 부전을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "아미노산 돌연변이"란 용어는 아미노산 치환, 결실, 삽입 및 변형을 포함함을 의미한다. 치환, 결실, 삽입 및 변형의 임의의 조합을, 최종 구조물이 목적하는 특징, 예를 들어 CD25 또는 Fc 수용체에의 감소된 결합을 갖는 한, 최종 구조물에 도달하도록 만들 수 있다. 아미노산 서열 결실 및 삽입은 아미노산의 아미노- 및/또는 카복시-말단 결실 및 삽입을 포함한다. 특정한 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 예를 들어 IL-2 폴리펩타이드 또는 Fc 영역의 결합 특성의 변경을 위해서, 비-보존적인 아미노산 치환, 즉 하나의 아미노산의, 상이한 구조 및/또는 화학적 성질을 갖는 또 다른 아미노산에 의한 교체가 특히 바람직하다. 아미노산 치환은 비-천연 아미노산에 의한 또는 20개 표준 아미노산의 천연 아미노산 유도체(예를 들어 4-하이드록시프롤린, 3-메틸히스티딘, 오르니틴, 호모세린, 5-하이드록시리신)에 의한 교체를 포함한다. 아미노산 돌연변이를 당해 분야에 주지된 유전학적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 유전학적 방법은 부위-지향된 돌연변이유발, PCR, 유전자 합성 등을 포함할 수 있다. 유전공학이외의 방법, 예를 들어 화학적 변형에 의해 아미노산의 측쇄 그룹을 변경시키는 방법이 또한 유용할 수 있는 것으로 생각된다. 다양한 명칭을 동일한 아미노산 돌연변이를 가리키기 위해 본 명세서에서 사용할 수 있다. 예를 들어, Fc 영역의 329번 위치의 프롤린으로부터 글리신으로의 치환을 329G, G329, G329, P329G, 또는 Pro329Gly로서 나타낼 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "CD25" 또는 "IL-2 수용체의 α-서브유닛"이란 용어는 달리 나타내지 않는 한 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CD25를 지칭한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 CD25뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 CD25를 포함한다. 상기 용어는 또한 CD25의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 몇몇 실시태양에서 CD25는 인간 CD25이다. 인간 CD25의 아미노산 서열을 UniProt(www.uniprot.org) 수납 번호 P01589, 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000408에 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "고-친화성 IL-2 수용체"란 용어는 IL-2 수용체의 이종삼량체성 형태를 지칭하며, 이는 수용체 γ-서브유닛(또한 통상적인 사이토킨 수용체 γ-서브유닛, γc, 또는 CD132로서 공지됨), 수용체 β-서브유닛(또한 CD122 또는 p70으로서 공지됨) 및 수용체 α-서브유닛(또한 CD25 또는 p55로서 공지됨)으로 이루어진다. 대조적으로 "중간-친화성 IL-2 수용체"란 용어는 α-서브유닛 없이, γ-서브유닛 및 β-서브유닛만을 포함하는 IL-2 수용체를 지칭한다(리뷰를 위해서 예를 들어 문헌[Olejniczak and Kasprzak, Med Sci Monit 14, RA179-189 (2008)]을 참조하시오).
"친화성"은 분자의 단일 결합 부위(예를 들어 수용체)와 그의 결합짝(예를 들어 리간드)간의 비-공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "결합 친화성"은 결합쌍의 구성원들(예를 들어 수용체와 리간드)간의 1:1 상호작용을 반영하는 본래의 결합 친화성을 지칭한다. 분자 X의 그의 짝 Y에 대한 친화성을 일반적으로 해리상수(KD)(해리속도와 결합속도 상수(각각 koff 및 kon)의 비이다)에 의해 나타낼 수 있다. 따라서, 균등한 친화성은 속도 상수들의 비가 동일하게 남아있는 한 상기 상이한 속도 상수들을 포함할 수 있다. 친화성을 당해 분야에 공지된 잘 확립된 방법들에 의해 측정할 수 있다. 친화성을 측정하기 위한 특정한 방법은 표면 플라스몬 공명(SPR)이다.
"감소"(및 그의 문법적 변형, 예를 들어 "감소하다" 또는 "감소하는"), 예를 들어 B 세포수 또는 ADA 형성 또는 사이토킨 방출의 감소는 당해 분야에 공지된 적합한 방법에 의해 측정된 바와 같은 각 량의 감소를 지칭한다. 명확성을 위해서, 상기 용어는 또한 0(또는 상기 분석 방법의 검출 한계 아래)까지의 감소, 즉 완전한 제거 또는 파괴를 포함한다. 환언하면, "증가된"은 각 량의 증가를 지칭한다.
"조절성 T 세포" 또는 "Treg 세포"는 다른 T 세포의 응답을 억제할 수 있는 특수 유형의 CD4+ T 세포를 의미한다. Treg 세포는 IL-2 수용체(CD25)의 α-서브유닛 및 전사인자 포크헤드 박스 P3(FOXP3)(문헌[Sakaguchi, Annu Rev Immunol 22, 531-62 (2004)])의 발현을 특징으로 하며, 종양에 의해 발현된 경우를 포함하여, 항원에 대한 말초 자가관용의 유도 및 유지에 중요한 역할을 한다. Treg 세포는 그의 기능 및 발생 및 그의 억제 특성의 유도에 IL-2를 필요로 한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "항원 결합 부분"이란 용어는 항원성 결정인자에 특이적으로 결합하는 폴리펩타이드 분자를 지칭한다. 하나의 실시태양에서, 항원 결합 부분은 상기 부분이 부착하는 존재(예를 들어 사이토킨 또는 2차 항원 결합 부분)를 표적 부위, 예를 들어 항원성 결정인자를 갖는 특정 유형의 종양 세포 또는 종양 기질로 향하게 할 수 있다. 항원 결합 부분은 본 명세서에서 추가로 정의되는 바와 같은 항체 및 그의 단편을 포함한다. 바람직한 항원 결합 부분은 항체 중쇄 가변 영역 및 항체 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체의 항원 결합 도메인을 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 항원 결합 부분은 본 명세서에 추가로 정의되고 당해 분야에 공지된 바와 같은 항체 불변 영역을 포함할 수 있다. 유용한 중쇄 불변 영역은 5개의 아이소타입: α, δ, ε, γ 또는 μ 중 어느 하나를 포함한다. 유용한 경쇄 불변 영역은 2개의 아이소타입: κ 및 λ 중 어느 하나를 포함한다.
"특이적으로 결합하는"은 상기 결합이 항원에 대해 선택적이며 불필요하거나 비-특이적인 상호작용과 구분될 수 있음을 의미한다. 특정한 항원성 결정인자에 결합하는 항원 결합 부분의 능력을 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA) 또는 당해 분야의 숙련가에게 친숙한 다른 기법, 예를 들어 표면 플라스몬 공명 기법(BIAcore 장비상에서 분석됨)(문헌[Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)]), 및 전통적인 결합 분석(문헌[Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)])을 통해 측정할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "항원성 결정인자"는 "항원" 및 "에피토프"와 유의어이며, 항원 결합 부분이 결합하여 항원 결합 부분-항원 복합체를 형성하는 폴리펩타이드 거대분자상의 부위(예를 들어 아미노산의 연속적인 신장부 또는 연속적이지 않은 아미노산의 상이한 영역들로 구성된 형태적 배열)를 지칭한다. 유용한 항원성 결정인자는 예를 들어 종양 세포의 표면상에서, 바이러스-감염된 세포의 표면상에서, 다른 병든 세포의 표면상에서, 혈청 중에서 자유롭게 및/또는 세포외 기질(ECM) 중에서 발견될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "폴리펩타이드"란 용어는 아미드 결합(또한 펩타이드 결합으로서 공지됨)에 의해 선형으로 연결되는 단량체들(아미노산)로 구성된 분자를 지칭한다. "폴리펩타이드"란 용어는 2개 이상 아미노산의 임의의 쇄를 지칭하며 특정 길이의 생성물을 지칭하는 것은 아니다. 따라서, 펩타이드, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 올리고펩타이드, "단백질", "아미노산 쇄", 또는 2개 이상의 아미노산의 쇄를 지칭하는데 사용되는 임의의 다른 용어가 상기 "폴리펩타이드"의 정의내에 포함되며, 상기 "폴리펩타이드"란 용어는 이들 용어 중 어느 하나 대신에 또는 이들과 호환가능하게 사용될 수 있다. 상기 "폴리펩타이드"란 용어는 또한 상기 폴리펩타이드의 발현-후 변형, 예를 들어 비제한적으로 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기, 단백질분해적 절단에 의한 유도체화, 또는 비천연 아미노산에 의한 변형의 생성물들을 지칭하고자 한다. 폴리펩타이드는 천연의 생물학적 공급원으로부터 유래되거나 또는 재조합 기술에 의해 생성될 수 있으나, 반드시 지정된 핵산 서열로부터 번역되지는 않는다. 상기를 임의의 방식으로, 예를 들어 화학 합성에 의해 생성시킬 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드는 약 3 이상, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 25 이상, 50 이상, 75 이상, 100 이상, 200 이상, 500 이상, 1,000 이상, 또는 2,000 이상 아미노산의 크기일 수 있다. 폴리펩타이드는 한정된 3차원 구조를 가질 수 있지만, 반드시 상기와 같은 구조를 가질 필요는 없다. 한정된 3차원 구조를 갖는 폴리펩타이드는 폴딩된으로서 지칭되며, 한정된 3차원 구조를 갖지 않는 폴리펩타이드는 다수의 상이한 형태를 채용할 수 있고 폴딩되지 않은으로서 지칭된다.
"단리된" 폴리펩타이드 또는 변체 또는 그의 유도체는 그의 자연 환경에 존재하지 않는 폴리펩타이드를 의미한다. 특정 수준의 정제가 요구되지 않는다. 예를 들어, 단리된 폴리펩타이드를 그의 본래 또는 자연 환경으로부터 제거할 수 있다. 숙주 세포에서 발현된 재조합적으로 생성된 폴리펩타이드 및 단백질을, 임의의 적합한 기법에 의해 분리되거나, 분류되거나, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 고유의 또는 재조합 폴리펩타이드처럼, 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로 간주한다.
참조 폴리펩타이드 서열에 관한 "아미노산 서열 일치성 퍼센트(%)"는, 필요한 경우 최대의 서열 일치성 퍼센트를 성취하기 위해서, 및 상기 서열 일치성의 부분으로서 어떠한 보존적인 치환도 고려하지 않고, 서열과 도입 틈을 정렬시킨 후에, 참조 폴리펩타이드 서열 중의 아미노산 잔기들과 일치하는 후보 서열 중의 아미노산 잔기들의 백분율로서 정의된다. 아미노산 서열 일치성 퍼센트를 측정하기 위한 정렬은 당해 분야의 기술 내에 있는 다양한 방식들로, 예를 들어 공개적으로 입수할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALGN 또는 메그얼라인(Megalign)(DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 성취될 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은 서열들을 정렬시키기에 적합한 매개변수들, 예를 들어 비교하는 서열들의 전체길이에 대해 최대의 정렬을 성취하기 위해 필요한 임의의 연산을 결정할 수 있다. 그러나, 본 발명의 목적을 위해서, 아미노산 서열 일치성%를 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성시킨다. 상기 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크 인코포레이티드(Genentech, Inc.)에 의해 저술되었으며, 소스 암호는 미국 저작권 관청(미국 워싱톤 D.C. 20559 소재)에 사용자 문서와 함께 제출되었다(이때 상기 코드는 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다). 상기 ALIGN-2 프로그램은 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코 소재의 제넨테크 인코포레이티드로부터 공개적으로 입수할 수 있거나, 또는 상기 소스 암호로부터 편집될 수 있다. 상기 ALIGN-2 프로그램을, 디지털 UNIX V4.0D를 포함하여, UNIX 실행 시스템상에서 사용하기 위해 편집해야 한다. 모든 서열 비교 매개변수들은 상기 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 변하지 않는다. ALIGN-2를 아미노산 서열 비교를 위해 사용하는 경우에, 주어진 아미노산 서열 A의 주어진 아미노산 서열 B에의, 상기 B와의, 또는 상기 B에 대한 아미노산 서열 일치성%(이는 한편으로 주어진 아미노산 서열 B에, 상기 B와, 또는 상기 B에 대해 일정한 아미노산 서열 일치성%를 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로서 표현될 수 있다)를 하기와 같이 계산한다:
100 x X/Y 분수
상기에서, X는 A 및 B의 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2의 정렬에서 상기 프로그램에 의해 일치성 합치로서 채점되는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B 중 아미노산 잔기의 총수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, A 대 B의 아미노산 서열 일치성%는 B 대 A의 아미노산 서열 일치성%와 동일하지 않음을 알 것이다. 달리 구체적으로 서술되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 아미노산 서열 일치성% 값들은 상기 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 앞의 단락에 개시된 바와 같이 획득된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "효과기 부분"이란 용어는 예를 들어 신호전달 또는 다른 세포 경로를 통해 세포 활성에 영향을 미치는 폴리펩타이드, 예를 들어 단백질 또는 당단백질을 지칭한다. 따라서, 상기 효과기 부분은 신호를 세포막 밖으로부터 전송하여 상기 효과기 부분의 하나 이상의 수용체를 갖는 세포에서의 응답을 조절하는 수용체-매개된 신호전달과 관련될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 효과기 부분은 상기 효과기 부분에 대한 하나 이상의 수용체를 갖는 세포에서 세포독성 응답을 이끌어낼 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 효과기 부분은 상기 효과기 부분에 대한 하나 이상의 수용체를 갖는 세포에서 증식성 응답을 이끌어낼 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 효과기 부분은 상기 효과기 부분에 대한 수용체를 갖는 세포에서 분화를 이끌어낼 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 효과기 부분은 상기 효과기 부분에 대한 수용체를 갖는 세포에서 내인성 세포 단백질의 발현을 변경(즉 상향조절 또는 하향조절)시킬 수 있다. 효과기 부분의 비제한적인 예는 사이토킨, 성장인자, 호르몬, 효소, 기질 및 보조인자를 포함한다. 효과기 부분을 항원 결합 부분, 예를 들어 다양한 형태의 항체와 결합시켜 면역접합체를 형성시킬 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "세포독성제"란 용어는 세포 기능을 억제하거나 방지하고/하거나 세포사 또는 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 비제한적으로 방사성 동위원소(예를 들어 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제 또는 약물(예를 들어 메토트렉세이트, 아드리아미신, 빈카 알칼로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 삽입제); 성장 억제제; 효소 및 그의 단편, 예를 들어 핵산분해 효소; 항생제; 독소, 예를 들어 소분자 독소 또는 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 및 이들의 단편 및/또는 변체; 및 하기에 개시하는 다양한 항종양 또는 항암제를 포함한다.
본 명세서에서 "항체"란 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며 다양한 항체 구조물, 예를 들어 비제한적으로 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이성 항체(예를 들어 이중특이성 항체), 및 목적하는 항원 결합 활성을 나타내는 한 항체 단편을 포함한다.
"완전길이 항체", "완전 항체" 및 "전체 항체"란 용어들은 본 명세서에서 본 발명에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖거나 또는 고유 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는 항체를 지칭하는데 호환적으로 사용된다.
"항체 단편"은 완전 항체가 결합하는 항원에 결합하는 상기 완전 항체의 일부를 포함하는 상기 완전 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 비제한적으로 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 다이아바디, 선형 항체, 단쇄 항체 분자(예를 들어 scFv), 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중특이성 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 "항체 단편"이란 용어는 단일-도메인 항체를 또한 포함한다.
"면역글로불린 분자"란 용어는 천연 항체의 구조를 갖는 단백질을 지칭한다. 예를 들어 IgG 부류의 면역글로불린은, 다이설파이드-결합된 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. N-에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 영역(VH)(또한 가변 중 도메인 또는 중쇄 가변 도메인이라 칭함)에 이어서 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)(또한 중쇄 불변 영역이라 칭한다)을 갖는다. 유사하게, N-에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 영역(VL)(또한 가변 경 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라 칭함)에 이어서 불변 경(CL) 도메인(또한 경쇄 불변 영역이라 칭한다)을 갖는다. 면역글로불린의 중쇄는 α(IgA), δ(IgD), ε(IgE), γ(IgG), 또는 μ(IgM)(이중 일부는 하위부류, 예를 들어 γ1(IgG1), γ2(IgG2), γ3(IgG3), γ4(IgG4), α1(IgA1) 및 α2(IgA2)로 추가로 분류될 수 있다)라 칭하는 5개 부류 중 하나로 할당될 수 있다. 면역글로불린의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 및 람다(λ)라 칭하는 2가지 유형 중 하나로 할당될 수 있다. 면역글로불린은 면역글로불린 힌지 영역을 통해 결합된 2개의 Fab 분자 및 Fc 도메인으로 필수적으로 이루어진다.
"항원 결합 도메인"이란 용어는, 항원의 부분 또는 전부에 특이적으로 결합하고 이에 상보성인 구역을 포함하는 항체의 부분을 지칭한다. 항원 결합 도메인은 예를 들어 하나 이상의 항체 가변 도메인(또한 항체 가변 영역이라 칭한다)에 의해 제공될 수 있다. 바람직하게, 항원 결합 도메인은 항체 경쇄 가변 영역(VL) 및 항체 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다.
"가변 영역" 또는 "가변 도메인"이란 용어는 항원에 대한 항체의 결합과 관련된 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 본래 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조들을 가지며, 이때 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 고가변 영역(HVR)을 포함한다. 예를 들어 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007)]을 참조하시오). 단일의 VH 또는 VL 도메인이면 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-암호화 서열을 사용하는 비-인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 특별히 제외시킨다.
"인간화된" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메릭 항체를 지칭한다. 몇몇 실시태양에서, 인간화된 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기에서 상기 HVR(예를 들어 CDR)의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 항체의 것들에 상응하며, 상기 FR의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 항체의 것들에 상응한다. 인간화된 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 겪은 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "고가변 영역" 또는 "HVR"이란 용어는 서열이 고가변성이고/이거나("상보성 결정 영역" 또는 "CDR") 구조적으로 한정된 고리("고가변 고리")를 형성하고/하거나, 항원-접촉 잔기("항원 접촉부")를 함유하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역들을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH 중 3개(H1, H2, H3) 및 VL 중 3개(L1, L2, L3)를 포함한다. 본 명세서에서 예시적인 HVR은 하기를 포함한다:
(a) 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3)에 존재하는 고가변 고리들(문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917(1987)]);
(b) 아미노산 잔기 24-34 ( L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2), 및 95-102 (H3)에 존재하는 CDR(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]);
(c) 아미노산 잔기 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2), 및 93-101 (H3)에 존재하는 항원 접촉부(문헌[MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)]); 및
(d) (a), (b) 및/또는 (c)의 조합, 예를 들어 HVR 아미노산 잔기 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3), 및 94-102 (H3).
달리 나타내지 않는 한, 가변 도메인 중의 HVR 잔기 및 다른 잔기(예를 들어 FR 잔기)를 본 명세서에서 상기 카밧(Kabat) 등에 따라 넘버링한다.
"프레임워크" 또는 "FR"은 고가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인, 즉 FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 상응하게, 상기 HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH(또는 VL)에서 하기의 순서로 존재한다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
항체의 "부류"는 상기 항체의 중쇄가 갖는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체의 5개의 주요 부류, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하며, 이들 중 다수는 하위부류(아이소타입)들, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 세분될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류들에 상응하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라 칭한다.
본 명세서에서 "Fc 도메인" 또는 "Fc-영역"이란 용어는 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 한정하는데 사용된다. 상기 용어는 고유 서열 Fc-영역 및 변형 Fc-영역을 포함한다. IgG 중쇄의 Fc 영역의 경계는 약간 변할 수도 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc-영역은 대개 Cys226 또는 Pro230으로부터 상기 중쇄의 카복시-말단까지 연장되는 것으로 한정된다. 그러나, 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 상기 중쇄의 C-말단으로부터 하나 이상, 특히 하나 또는 2개의 아미노산의 번역-후 절단을 겪을 수 있다. 따라서 완전길이 중쇄를 암호화하는 특정한 핵산 분자의 발현에 의해 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 완전길이 중쇄를 포함하거나, 또는 상기 완전길이 중쇄의 절단된 변체(또한 본 명세서에서 "절단된 변형 중쇄"라 지칭된다)를 포함할 수 있다. 이는 상기 중쇄의 최종 2개의 C-말단 아미노산이 글리신(G446) 및 리신(K447, 카밧 EU 지수에 따른 넘버링)인 경우일 수 있다. 따라서, 상기 Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447), 또는 C-말단 글리신(Gly446) 및 리신(K447)은 존재할 수도, 존재하지 않을 수도 있다. 본 명세서에서 달리 명시되지 않는 한, 상기 Fc-영역 또는 불변 영역 중 아미노산 잔기들의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991](또한 상기 참조)에 기재된 바와 같은 EU 넘버링 시스템(또한 EU 지수라 칭함)에 따른다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 Fc 도메인의 "서브유닛"은 이량체성 Fc 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩타이드 중 하나, 즉 안정한 자기-회합이 가능한 면역글로불린 중쇄의 C-말단 불변 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 예를 들어, IgG Fc 도메인의 서브유닛은 IgG CH2 및 IgG CH3 불변 도메인을 포함한다.
"이종이량체화를 촉진하는 변형"은 동종이량체를 형성하는 폴리펩타이드와 동일한 폴리펩타이드와의 회합을 감소시키거나 방지하는 펩타이드 주쇄의 조작 또는 상기 폴리펩타이드, 예를 들어 면역글로불린 중쇄의 번역-후 변형이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 이종이량체화를 촉진하는 변형은 특히 이량체 형성에 요구되는 2개의 폴리펩타이드 각각에 대해 수행된 별도의 변형을 포함하며, 여기에서 상기 변형은 상기 두 폴리펩타이드의 회합을 촉진하도록 서로에 대해 상보성이다. 예를 들어, 이종이량체화를 촉진하는 변형은 이량체 형성에 요구되는 폴리펩타이드들 중 하나 또는 2개 모두의 구조 또는 전하를, 각각 이들의 회합을 입체적으로 또는 정전기적으로 유리할 수 있도록 변경시킬 수 있다. 이종이량체화는 2개의 동일하지 않은 폴리펩타이드, 예를 들어 2개의 면역글로불린 중쇄 사이에서 일어나며, 여기에서 상기 각각의 중쇄에 융합된 추가의 면역접합체 성분들(예를 들어 IL-2 폴리펩타이드)은 동일하지 않다. 본 발명에 유용한 면역접합체에서, 상기 이종이량체화를 촉진하는 변형은 면역글로불린 분자의 중쇄(들), 구체적으로 Fc 도메인 중에 있다. 일부 실시태양에서 상기 이종이량체화를 촉진하는 변형은 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 이종이량체화를 촉진하는 변형은 상기 두 면역글로불린 중쇄 각각에 별도의 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다.
유사하게, "Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형"은 동종이량체를 형성하는 Fc 도메인 서브유닛을 포함하는 폴리펩타이드와 동일한 폴리펩타이드와의 회합을 감소시키거나 방지하는 펩타이드 주쇄의 조작 또는 상기 Fc 도메인 서브유닛의 번역-후 변형이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 회합을 촉진하는 변형은 특히 회합에 요구되는 2개의 Fc 도메인 서브유닛(즉 상기 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛) 각각에 대해 수행된 별도의 변형을 포함하며, 여기에서 상기 변형은 상기 두 Fc 도메인 서브유닛의 회합을 촉진하도록 서로에 대해 상보성이다. 예를 들어, 회합을 촉진하는 변형은 상기 Fc 도메인 서브유닛 중 하나 또는 2개 모두의 구조 또는 전하를, 각각 이들의 회합을 입체적으로 또는 정전기적으로 유리할 수 있도록 변경시킬 수 있다. 따라서 (이종)이량체화는 제1 Fc 도메인 서브유닛을 포함하는 폴리펩타이드 및 제2 Fc 도메인 서브유닛(상기 서브유닛 각각에 융합된 추가의 성분들(예를 들어 항원 결합 부분들)이 동일하지 않다는 의미에서 동일하지 않을 수도 있다)을 포함하는 폴리펩타이드 사이에서 일어난다. 일부 실시태양에서 상기 회합을 촉진하는 변형은 상기 Fc 도메인 중의 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 회합을 촉진하는 변형은 상기 Fc 도메인의 각각의 2개 서브유닛에 별도의 아미노산 돌연변이, 구체적으로 아미노산 치환을 포함한다.
"활성화 Fc 수용체"는 항체의 Fc 영역에 의한 관여에 따라서, 수용체-함유 세포를 자극하여 효과기 기능을 수행하는 신호전달 사건을 유도하는 Fc 수용체이다. 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa(CD16a), FcγRI(CD64), FcγRIIa(CD32), 및 FcαRI(CD89)를 포함한다.
"효과기 기능"이란 용어는 항체와 관련하여 사용될 때 항체의 Fc-영역에 기인할 수 있는 생물 활성들을 지칭하며, 상기 활성들은 상기 항체 아이소타입에 따라 변한다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존적인 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC), 항체-의존적인 세포 식균작용(ADCP), 사이토킨 분비, 항원 제공 세포에 의한 면역 복합체-매개된 항원 흡수, 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체)의 하향 조절, 및 B 세포 활성화를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "효과기 세포"란 용어는 효과기 부분, 예를 들어 사이토킨 및/또는 항체의 Fc 영역에의 결합을 통해 표면상에 효과기 부분 수용체, 예를 들어 사이토킨 수용체 및/또는 Fc 수용체를 나타내고 표적 세포, 예를 들어 종양 세포의 파괴에 기여하는 림프구 집단을 지칭한다. 효과기 세포는 예를 들어 세포독성 또는 식균 효과를 매개할 수 있다. 효과기 세포는 비제한적으로 효과기 T 세포, 예를 들어 CD8+ 세포독성 T 세포, CD4+ 헬퍼 T 세포, γδ T 세포, NK 세포, 림포킨-활성화된 살해(LAK) 세포 및 대식세포/단핵세포를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "조작하다, 조작된, 조작"이란 용어는 펩타이드 주쇄의 임의의 조작 또는 천연 또는 재조합 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 번역-후 변형을 포함하는 것으로 간주된다. 조작은 아미노산 서열, 글리코실화 패턴, 또는 개별적인 아미노산의 측쇄 그룹의 변형뿐만 아니라 이들 접근법의 조합을 포함한다. 특히 접두사 "글리코-"가 붙는 "조작"뿐만 아니라 "글리코실화 조작"이란 용어는 세포의 글리코실화 기구의 대사 조작, 예를 들어 세포에서 발현된 당단백질의 변경된 글리코실화를 성취하기 위한 올리고사카라이드 합성 경로의 유전자 조작을 포함한다. 더욱 또한, 글리코실화 조작은 글리코실화에 대한 돌연변이 및 세포 환경의 영향을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 글리코실화 조작은 글리코실트랜스퍼라제 활성의 변경이다. 특정한 실시태양에서, 상기 조작은 변경된 글루코스아미닐트랜스퍼라제 활성 및/또는 퓨코실트랜스퍼라제 활성을 생성시킨다. 글리코실화 조작을 사용하여 "증가된 GnTIII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어 증가된 수준의, β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 조작된 숙주 세포), "증가된 ManII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어 증가된 수준의, α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 조작된 숙주 세포), 또는 "감소된 α(1,6) 퓨코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들어 감소된 수준의 α(1,6) 퓨코실트랜스퍼라제를 발현하도록 조작된 숙주 세포)를 수득할 수 있다.
"숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"이란 용어는 호환적으로 사용되며 상기와 같은 세포의 자손을 포함하여, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이들은 계대의 수와 상관 없이 1차 형질전환된 세포 및 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일할 필요는 없으며, 돌연변이를 함유할 수도 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 선별되거나 선택된 바와 동일한 기능 또는 생물 활성을 갖는 돌연변이 자손은 본 발명에 포함된다. 숙주 세포는 본 발명에 사용된 단백질을 생성시키기 위해 사용될 수 있는 임의의 유형의 세포 시스템이다. 하나의 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 변형된 올리고사카라이드를 갖는 항체의 생산을 허용하도록 조작된다. 몇몇 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 증가된 수준의, β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 조작되었다. 몇몇 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 증가된 수준의, α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 추가로 조작되었다. 숙주 세포는 몇 가지 언급하자면, 배양된 세포, 예를 들어 포유동물 배양된 세포, 예를 들어 CHO 세포, BHK 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, YO 골수종 세포, P3X63 마우스 골수종 세포, PER 세포, PER.C6 세포 또는 하이브리도마 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 및 식물 세포, 및 또한 트랜스제닉 동물, 트랜스제닉 식물 또는 배양된 식물 또는 동물 조직내에 포함되는 세포를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드"란 용어는 N-결합된 올리고사카라이드의 트라이만노실 코어의 β-결합된 만노사이드에 β-1,4 결합 중 N-아세틸글루코스아민(GlcNAc)의 첨가를 촉매화할 수 있는 폴리펩타이드를 지칭한다. 상기는 용량 의존성의 존재 또는 부재하에, 특정한 생물학적 분석에서 측정시, β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(또한 국제 생화학 및 분자 생물학 연합의 명명법 위원회(NC-IUBMB)에 따라, β-1,4-만노실-당단백질 4-베타-N-아세틸글루코스아미닐-트랜스퍼라제(EC 2.4.1.144)로서 공지됨)의 활성과 유사한, 그러나 반드시 동일하지는 않은 효소 활성을 나타내는 융합 폴리펩타이드를 포함한다. 용량 의존성이 존재하는 경우에, 상기는 GnTIII의 용량 의존성과 동일할 필요는 없으며, 오히려 상기 GnTIII에 비해 주어진 활성에서 용량-의존성과 실질적으로 유사하다(즉 상기 후보 폴리펩타이드는 상기 GnTIII에 비해 더 큰 활성 또는 약 25배 이하 적은, 및 바람직하게는 약 10배 이하 적은 활성, 및 가장 바람직하게는 약 3배 이하 적은 활성을 나타낼 것이다). 몇몇 실시태양에서, 상기 GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드는 GnTIII의 촉매 도메인 및 이종 골지 거주 폴리펩타이드의 골지 국소화 도메인을 포함하는 융합 폴리펩타이드이다. 특히, 상기 골지 국소화 도메인은 만노시다제 II 또는 GnTI의 국소화 도메인, 가장 특히는 만노시다제 II의 국소화 도메인이다. 선택적으로, 상기 골지 국소화 도메인은 만노시다제 I의 국소화 도메인, GnTII의 국소화 도메인, 및 α1,6 코어 퓨코실트랜스퍼라제의 국소화 도메인으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 상기와 같은 융합 폴리펩타이드의 생성 및 상기를 사용하여 증가된 효과기 기능을 갖는 항체의 생성 방법들이 WO2004/065540, 미국 가 특허출원 제 60/495,142 호 및 미국 특허 출원 공보 제 2004/0241817 호(이들의 전체 내용은 명백히 본 발명에 참고로 인용된다)에 개시되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "골지 국소화 도메인"이란 용어는 폴리펩타이드를 골지체내의 한 위치에 고정시키는 책임이 있는 골지 거주 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 지칭한다. 일반적으로, 국소화 도메인은 효소의 아미노 말단 "꼬리"를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "ManII 활성을 갖는 폴리펩타이드"란 용어는 N-결합된 올리고사카라이드의 분지된 GlcNAcMan5GlnNAc2 만노스 중간체 중의 말단 1,3- 및 1,6-결합된 α-D-만노스 잔기의 가수분해를 촉매화할 수 있는 폴리펩타이드를 지칭한다. 상기는 골지 α-만노시다제 II(또한 국제 생화학 및 분자 생물학 연합의 명명법 위원회(NC-IUBMB)에 따라, 만노실 올리고사카라이드 1,3-1,6-α-만노시다제 II(EC 3.2.1.114)로서 공지됨)와 유사한, 그러나 반드시 동일하지는 않은 효소 활성을 나타내는 폴리펩타이드를 포함한다.
항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC)은 면역 효과기 세포에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 용해를 유도하는 면역 기전이다. 상기 표적 세포는, Fc 영역을 포함하는 항체 또는 그의 단편이 일반적으로 상기 Fc 영역에 N-말단인 단백질 부분을 통해 특이적으로 결합하는 세포이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "증가된/감소된 ADCC"란 용어는 주어진 시간에, 표적 세포 주위의 매질 중 항체의 주어진 농도에서, 상기 정의된 ADCC의 기전에 의해 용해되는 표적 세포수의 증가/감소, 및/또는 주어진 시간에 주어진 수의 표적 세포의 용해를 상기 ADCC의 기전에 의해 성취하는데 필요한, 상기 표적 세포 주위의 매질 중 항체 농도의 감소/증가로서 정의된다. 상기 ADCC의 증가/감소는 동일한 표준 생성, 정제, 제형화 및 보관 방법(당해 분야의 숙련가들에게 공지됨)을 사용하여 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생산된, 그러나 조작되지 않은 동일한 항체에 의해 매개되는 ADCC에 비례한다. 예를 들어 본 명세서에 기재된 방법에 의해 변경된 패턴의 글리코실화를 갖도록(예를 들어 글리코실트랜스퍼라제, GnTIII, 또는 다른 글리코실트랜스퍼라제를 발현하도록) 조작된 숙주 세포에 의해 생산된 항체에 의해 매개되는 ADCC의 증가는 동일한 유형의 조작되지 않은 숙주 세포에 의해 생산된 동일 항체에 의해 매개되는 ADCC에 비례한다.
"증가된/감소된 항체 의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC)을 갖는 항체"는 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 측정된 바와 같은 증가된/감소된 ADCC를 갖는 항체를 의미한다. 한 가지 승인된 시험관내 ADCC 분석은 하기와 같다:
1) 상기 분석은 항체의 항원-결합 영역에 의해 인식된 표적 항원을 발현하는 것으로 공지된 표적 세포를 사용한다;
2) 상기 분석은 효과기 세포로서, 무작위로 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 단리된, 인간 말초 혈액 단핵세포(PBMC)를 사용한다;
3) 상기 분석은 하기의 프로토콜에 따라 수행된다:
i) 상기 PBMC를 표준 밀도 원심분리 과정을 사용하여 단리하고 RPMI 세포 배양 배지 중에 5 x 106 세포/㎖로 현탁시키고;
ii) 상기 표적 세포를 표준 조직 배양 방법에 의해 증식시키고, 90% 초과의 생육성을 갖는 지수 증식기로부터 수확하고, RPMI 세포 배양 배지에서 세척하고, 100 마이크로-퀴리의 51Cr로 표지하고, 세포 배양 배지로 2회 세척하고, 세포 배양 배지에 105 세포/㎖의 밀도로 재현탁시키고;
iii) 100 마이크로리터의 상기 최종 표적 세포 현탁액을 96-웰 미세적정 플레이트의 각 웰로 옮기고;
iv) 상기 항체를 세포 배양 배지에서 4000 ng/㎖ 내지 0.04 ng/㎖로 연속-희석하고 50 마이크로리터의 상기 생성 항체 용액을 상기 96-웰 미세적정 플레이트 중의 표적 세포에 가하고, 상기 전체 농도 범위를 포함하는 다양한 항체 농도로 3회 중복하여 시험하고;
v) 최대 방출(MR) 대조용을 위해서, 상기 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트 중의 3개의 추가적인 웰에 상기 항체 용액(상기 iv) 대신에 비-이온성 세제(노니뎃(Nonidet), 시그마(Sigma), 미국 세인트루이스 소재)의 2%(V/V) 수용액 50 마이크로리터를 수용하고;
vi) 자발적인 방출(SR) 대조용을 위해서, 상기 표지된 표적 세포를 함유하는 플레이트 중의 3개의 추가적인 웰에 상기 항체 용액(상기 iv) 대신에 RPMI 세포 배양 배지 50 마이크로리터를 수용하고;
vii) 이어서 상기 96-웰 미세적정 플레이트를 50 x g에서 1분 동안 원심분리시키고 4 ℃에서 1시간 동안 배양하고;
viii) 50 마이크로리터의 상기 PBMC 현탁액(상기 i)을 각 웰에 가하여 25:1의 효과기:표적 세포 비를 생성시키고 상기 플레이트를 5% CO2 분위기 하에 37 ℃에서 배양기 중에 4시간 동안 넣고;
ix) 각 웰로부터 무세포 상등액을 수확하고 실험적으로 방출된 방사능(ER)을 감마 카운터를 사용하여 정량분석하고;
x) 비 용해의 백분율을 식 (ER-MR)/(MR-SR) x 100(여기에서 ER은 상기 항체 농도에 대해 정량분석된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, MR은 상기 MR 대조용(상기 v 참조)에 대해 정량분석된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, SR은 상기 SR 대조용(상기 vi 참조)에 대해 정량분석된 평균 방사능(상기 ix 참조)이다)에 따라 각 항체 농도에 대해 계산한다;
4) "증가된/감소된 ADCC"는 상기 시험된 항체 농도 범위내에서 관찰된 비 용해의 최대 백분율의 증가/감소, 및/또는 상기 시험된 항체 농도 범위내에서 관찰된 비 용해의 최대 백분율의 절반을 성취하는데 필요한 항체 농도의 감소/증가로서 정의된다. 상기 ADCC의 증가/감소는, 당해 분야의 숙련가들에게 공지된, 그러나 조작되지 않은, 동일한 표준 생성, 정제, 제형화 및 보관 방법을 사용하여 상기 분석에 의해 측정되고, 동일한 항체에 의해 매개되고, 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생성된 ADCC에 비례한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "면역접합체"란 용어는 적어도 하나의 효과기 부분, 예를 들어 사이토킨, 및 항원 결합 부분, 예를 들어 항체를 포함하는 폴리펩타이드 분자를 지칭한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 면역접합체는 하나 이하의 효과기 부분을 포함한다. 본 발명에 유용한 특정한 면역접합체는 하나 이상의 펩타이드 링커에 의해 결합된 하나의 효과기 부분 및 항체로 필수적으로 이루어진다. 본 발명에 따른 특정한 면역접합체는 융합 단백질이다, 즉 상기 면역접합체의 성분들은 펩타이드 결합에 의해 결합된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "단클론 항체"란 용어는 실질적으로 동종인 항체들의 집단으로부터 획득되는 항체를 지칭한다, 즉 상기 집단을 포함하는 개별적인 항체들은 동일하고/하거나, 상기 단클론 항체의 생성 중 발생할 수 있는 가능한 변체(상기와 같은 변체는 일반적으로 소량으로 존재한다)를 제외하고 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정인자(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 대조적으로, 단클론 항체 제제의 각각의 단클론 항체는 상기 항원상의 단일 결정인자에 대한 것이다. 따라서, "단클론"이라는 수식어구는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 획득된다는 항체의 특징을 가리키며, 임의의 특정한 방법에 의한 상기 항체의 생성을 요구하는 것으로서 해석해서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체를 다양한 기법들, 예를 들어 비제한적으로 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 상기 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 부분을 함유하는 트랜스제닉 동물을 사용하는 방법에 의해 제조할 수 있으며, 상기와 같은 방법 및 단클론 항체의 다른 예시적인 제조 방법들은 본 명세서에 개시되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 항원 결합 부분 등에 관하여 "1차", "2차", "3차" 등의 용어는 각 유형의 부분이 하나 초과하여 존재할 때 식별의 편이성을 위해 사용된다. 이들 용어의 사용은 명백히 진술되지 않는 한 특정한 순서 또는 배향을 부여하고자 하는 것은 아니다.
"다중특이성" 및 "이중특이성"이란 용어는 항원 결합 분자가 적어도 2개의 별개의 항원성 결정인자에 특이적으로 결합할 수 있음을 의미한다. 전형적으로, 이중특이성 항원 결합 분자는 2개의 항원 결합 부위를 포함하며, 이들은 각각 상이한 항원성 결정인자에 특이적이다. 몇몇 실시태양에서 이중특이성 항원 결합 분자는 2개의 항원성 결정인자, 특히 2개의 별개의 세포상에서 발현된 2개의 항원성 결정인자에 동시에 결합할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 "결합가"란 용어는 항원 결합 분자 중의 명시된 수의 항원 결합 부위의 존재를 나타낸다. 이와 같이, "항원에 대한 1가 결합"이란 용어는 항원 결합 분자 중의 항원에 대한 하나(및 하나 이하)의 항원 결합 부위의 존재를 나타낸다.
"항원 결합 부위"는 항원과의 상호작용을 제공하는 항원 결합 분자의 부위, 즉 하나 이상의 아미노산 잔기를 지칭한다. 예를 들어, 항체의 항원 결합 부위는 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. 고유의 면역글로불린 분자는 전형적으로 2개의 항원 결합 부위를 가지며, Fab 분자는 전형적으로 단일 항원 결합 부위를 갖는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "T 세포 활성화 치료제"는 개체에서 T 세포 활성화를 유도할 수 있는 치료제, 특히 개체에서 T-세포 활성화를 유도하도록 설계된 치료제를 지칭한다. T 세포 활성화 치료제의 예는 활성화 T 세포 항원, 예를 들어 CD3, 및 표적 세포 항원, 예를 들어 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 포함한다. 추가의 예는 T 세포 활성화 도메인 및 표적 세포 항원, 예를 들어 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분을 포함하는 키메릭 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "활성화 T 세포 항원"은 항원 결합 분자와 상호작용시 T 세포 활성화를 유도하거나 증대시킬 수 있는, T 림프구, 특히 세포독성 T 림프구에 의해 발현되는 항원성 결정인자를 지칭한다. 구체적으로, 항원 결합 분자와 활성화 T 세포 항원과의 상호작용은 T 세포 수용체 복합체의 신호전달 캐스케이드를 촉발시킴으로써 T 세포 활성화를 유도할 수 있다. 예시적인 활성화 T 세포 항원은 CD3이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "T 세포 활성화"는 증식, 분화, 사이토킨 분비, 세포독성 효과기 분자 방출, 세포독성 활성, 및 활성화 마커의 발현 중에서 선택된, T 림프구, 특히 세포독성 T 림프구의 하나 이상의 세포 응답을 지칭한다. 본 발명에 사용되는 상기 T 세포 활성화 이중특이성 항원 결합 분자 및 T 세포 활성화 치료제는 T 세포 활성화를 유도할 수 있다. T 세포 활성화를 측정하기에 적합한 분석은 본 명세서에 기재된 분야에 공지되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "표적 세포 항원"은 표적 세포, 예를 들어 종양 중의 세포, 예를 들어 암세포 또는 종양 기질의 세포의 표면상에 제공된 항원성 결정인자를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "B-세포 항원"은 B 림프구, 특히 악성 B 림프구(이 경우 상기 항원을 또한 "악성 B-세포 항원"으로서 지칭한다)의 표면상에 제공된 항원성 결정인자를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 "T-세포 항원"은 T 림프구, 특히 세포독성 T 림프구의 표면상에 제공된 항원성 결정인자를 지칭한다.
"Fab 분자"는 면역글로불린의 중쇄("Fab 중쇄")의 VH 및 CH1 도메인 및 경쇄("Fab 경쇄")의 VL 및 CL 도메인으로 이루어지는 단백질을 지칭한다.
"키메릭 항원 수용체" 또는 "CAR"은 표적 항체의 항원 결합 부분, 예를 들어 단쇄 가변 단편(scFv), 막관통 도메인, 세포내 T-세포 활성화 신호전달 도메인(예를 들어 T-세포 수용체의 CD3 제타 쇄) 및 임의로 하나 이상의 세포내 보조-자극 도메인(예를 들어 CD28, CD27, CD137 (4-1BB), Ox40)을 포함하는 유전자 조작된 수용체 단백질을 의미한다. CAR은 항원 인식, T 세포 활성화, 및 -2세대 CAR의 경우에- T 세포 기능성 및 지속성을 증대시키기 위한 보조자극을 매개한다. 리뷰를 위해서 예를 들어 문헌[Jackson et al., Nat Rev Clin Oncol (2016) 13, 370-383]을 참조하시오.
"B 세포 증식성 질환"은, 환자에서 B 세포의 수가 건강한 개체에서의 B 세포수에 비해 증가하고, 특히 상기 B 세포 수의 증가가 질병의 원인 또는 특징인 질병을 의미한다. "CD20-양성 B 세포 증식성 질환"은 B-세포, 특히 악성 B-세포(정상 B-세포 외에)가 CD20을 발현하는 B 세포 증식성 질환이다. 예시적인 B 세포 증식 질환은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL)뿐만 아니라 일부 유형의 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)을 포함한다.
"융합된"은 성분들(예를 들어 Fab 분자 및 Fc 도메인 서브유닛)이 펩타이드 결합에 의해, 직접적으로 또는 하나 이상의 펩타이드 링커를 통해 결합됨을 의미한다.
"항-약물 항체" 또는 "ADA"는, 치료제에 결합하고 개체에서 치료제의 기능 및 혈청 농도에 영향을 미칠 수 있는 항체를 지칭한다. ADA의 존재는 상기 치료제와 항체간의 면역 복합체의 형성(중화, 비-중화 또는 둘 다)을 통해 상기 치료제의 제거를 증가시키고, 따라서 상기 치료제의 반감기를 감소시킬 수 있다. 더욱 또한, 상기 치료제의 활성 및 유효성은 항체의 상기 치료제에의 결합을 통해 감소될 수 있다(특히 중화 ADA의 경우에). ADA는 또한 알러지성 또는 과민성 반응 및 다른 부작용들과 관련될 수 있다.
작용제의 "유효량"은 작용제가 투여되는 세포 또는 조직에서 생리학적 변화를 생성시키는데 필요한 양을 지칭한다.
작용제, 예를 들어 약학 조성물의 "치료학적 유효량"은 필요한 투여량 및 기간 동안 목적하는 치료학적 또는 예방학적 결과를 성취하기에 유효한 양을 지칭한다. 작용제의 치료학적 유효량은 예를 들어 질병의 부작용을 제거하거나, 감소시키거나, 지연시키거나, 최소화하거나 또는 예방한다.
"치료제"는 치료되는 개체에서 질병의 자연 과정을 변경시키고자 상기 개체에게 투여되고 예방을 위해서 또는 임상적 병리 과정 동안 실행될 수 있는 활성 성분, 예를 들어 약학 조성물을 의미한다. "면역치료제"는 예를 들어 종양에 대한 개체의 면역 응답을 복원시키거나 증대시키고자 개체에게 투여되는 치료제를 지칭한다.
"개별체" 또는 "개체"는 포유동물이다. 포유동물은 비제한적으로 가축(예를 들어 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어 인간 및 비-인간 영장류, 예를 들어 원숭이), 토끼, 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)를 포함한다. 바람직하게 상기 개별체 또는 개체는 인간이다.
"약학 조성물"이란 용어는 제형 중에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 하는 형태로 존재하고 상기 조성물이 투여되는 환자에게 허용 가능하지 않게 독성인 추가적인 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체"는 환자에게 무독성인, 활성 성분 이외의 약학 조성물 중의 성분을 지칭한다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 비제한적으로 완충제, 부형제, 안정제, 또는 보존제를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "치료"(및 "치료하다" 및 "치료하는"과 같은 그의 문법상 어미변화)는 치료 중인 개인에서 질병의 자연적인 과정을 변경시키고자 하는 임상적 중재를 지칭하며, 예방을 위해서 또는 임상적 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 비제한적으로 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 상기 질병의 임의의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 진정 또는 개선된 예후를 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 방법을 사용하여 질병의 발생을 지연시키거나 또는 질병의 진행을 늦춘다.
"패키지 삽입지"란 용어는 치료제 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는, 상기 치료제 제품의 상업적인 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서를 지칭하는데 사용된다.
"CD3"는 달리 나타내지 않는 한 영장류(예를 들어 인간), 비-인간 영장류(예를 들어 키노몰구스 원숭이) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CD3을 지칭한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 CD3뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 CD3를 포함한다. 상기 용어는 또한 CD3의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 하나의 실시태양에서 CD3는 인간 CD3, 특히 인간 CD3의 입실론 서브유닛(CD3ε)이다. 인간 CD3ε의 아미노산 서열을 UniProt(www.uniprot.org) 수납 번호 P07766(버전 144), 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1에 나타낸다. 또한 서열번호 115를 참조하시오. 키노몰구스[마카카 파스시큘라리스(Macaca fascicularis)] CD3ε의 아미노산 서열을 NCBI 진뱅크 BAB71849.1번에 나타낸다. 또한 서열번호 116을 참조하시오.
"CD19"는 B-림프구 항원 CD19(또한 B-림프구 표면 항원 B4 또는 T-세포 표면 항원 Leu-12로서 공지됨)를 지칭하며 달리 나타내지 않는 한 영장류(예를 들어 인간) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CD19를 포함한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 CD19뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 CD19를 포함한다. 상기 용어는 또한 CD19의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 하나의 실시태양에서 CD19는 인간 CD19이다. 예시적인 인간 CD19의 아미노산 서열을 UniProt(www.uniprot.org) 수납 번호 P15391(버전 174), 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_001770.5, 및 서열번호 117에 나타낸다.
"암태아성 항원" 또는 "CEA"(또한 암태아성 항원-관련된 세포 부착 분자 5(CEACAM5)로서 공지됨)는 달리 나타내지 않는 한 영장류(예를 들어 인간), 비-인간 영장류(예를 들어 키노몰구스 원숭이) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CEA를 지칭한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 CEA뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 CEA를 포함한다. 상기 용어는 또한 CEA의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 하나의 실시태양에서 CEA는 인간 CEA이다. 인간 CEA의 아미노산 서열을 UniProt(www.uniprot.org) 수납 번호 P06731, 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004354.2에 나타낸다.
"섬유아세포 활성화 단백질" 또는 "FAP"(또한 세프라제로서 공지됨)는 달리 나타내지 않는 한 영장류(예를 들어 인간), 비-인간 영장류(예를 들어 키노몰구스 원숭이) 및 설치류(예를 들어 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 FAP를 지칭한다. 상기 용어는 "완전길이", 가공되지 않은 FAP뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 FAP를 포함한다. 상기 용어는 또한 FAP의 천연 변체, 예를 들어 이어맞추기 변체 또는 대립유전자 변체를 포함한다. 하나의 실시태양에서 FAP는 인간 FAP이다. 인간 FAP의 아미노산 서열을 UniProt(www.uniprot.org) 수납 번호 Q12884, 또는 NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_004451.2에 나타낸다.
"크로스오버" Fab 분자(또한 "Crossfab"라 칭한다)는 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인이 교환된(즉 서로에 의해 교체된) Fab 분자를 의미한다, 즉 크로스오버 Fab 분자는 경쇄 가변 도메인 VL 및 중쇄 불변 도메인 1 CH1으로 구성된 펩타이드 쇄(VL-CH1, N-에서 C-말단 방향으로), 및 중쇄 가변 도메인 VH 및 경쇄 불변 도메인 CL로 구성된 펩타이드 쇄(VH-CL, N-에서 C-말단 방향으로)를 포함한다. 명확성을 위해서, 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인이 교환된 크로스오버 Fab 분자에서, 상기 중쇄 불변 도메인 1 CH1을 포함하는 펩타이드 쇄를 본 명세서에서 상기 (크로스오버) Fab 분자의 "중쇄"로서 지칭한다. 환언하면, 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 불변 도메인이 교환된 크로스오버 Fab 분자에서, 상기 중쇄 가변 도메인 VH를 포함하는 펩타이드 쇄를 본 명세서에서 상기 (크로스오버) Fab 분자의 "중쇄"로서 지칭한다.
상기에 대조적으로, "통상적인" Fab 분자는 자연적인 포맷, 즉 중쇄 가변 및 불변 도메인들로 구성된 중쇄(VH-CH1, N-에서 C-말단 방향으로), 및 경쇄 가변 및 불변 도메인들로 구성된 경쇄(VL-CL, N-에서 C-말단 방향으로)를 포함하는 Fab 분자를 의미한다.
II형 항-CD20 항체
CD20 분자(또한 인간 B-림프구-제한된 분화 항원 또는 Bp35라 칭한다)는 광범위하게 기재된 악성 및 비-악성 전구-B 및 성숙한 B 림프구의 표면상에서 발현된 소수성 막관통 단백질이다(문헌[Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; 및 문헌[Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; 문헌[Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; 문헌[Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; 문헌[Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]).
CD20은 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)의 90% 이상에 의해 고도로 발현되나(문헌[Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433]) 조혈 줄기세포, 전구-B 세포, 정상적인 혈장 세포, 또는 다른 정상적인 조직상에서는 발견되지 않는다(문헌[Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (1985) 973- 979]).
CD20 결합 방식 및 생물학적 활성이 현저하게 상이한 2가지 상이한 유형의 항-CD20 항체가 존재한다(문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; 및 문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052]). I형 항-CD20 항체는 주로 표적 세포 살해에 보체를 사용하는 반면, II형 항체는 주로 세포사의 직접적인 유도를 통해 작용한다.
I형 및 II형 항-CD20 항체 및 그들의 특성이 예를 들어 문헌[Klein et al., mAbs 5(2013), 22-33]에 리뷰되어 있다. II형 항-CD20 항체는 CD20을 지질 부유물에 국소화하지 않으며, 낮은 CDC 활성을 나타내고, I형 항-CD20 항체에 비해 B 세포에 대해 단지 대략 절반의 결합 활성을 나타내며, 동형성 응집 및 직접적인 세포사를 유도한다. 이와 대조적으로, I형 항체는 CD20을 지질 부유물에 국소화하고, 높은 CDC 활성, B 세포에 대해 완전한 결합 능력, 및 동형성 응집 및 직접적인 세포사의 단지 약한 유도를 나타낸다.
오비누투주맵 및 토시투무맵(CAS 번호 192391-48)은 II형 항-CD20 항체의 예인 반면, 리툭시맵, 오파투무맵, 벨투주맵, 오카라투주맵, 오크렐리주맵, PRO131921 및 우블리툭시맵은 I형 항-CD20 항체의 예이다.
본 발명에 따라, 항-CD20 항체는 II형 항-CD20 항체이다. 본 발명에 따른 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 개체에서 B 세포의 수를 감소시킬 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 Fc 영역, 특히 IgG Fc 영역, 또는 보다 특히 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다. 특히, 상기 II형 항-CD20 항체는 쥐 B-Ly1 항체의 결합 특이성을 갖는 인간화된, IgG-부류 II형 항-CD20 항체이다(문헌[Poppema and Visser, Biotest Bulletin 3, 131-139 (1987)]; 서열번호 2 및 3).
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특히, 상기 II형 항-CD20 항체의 중쇄 가변 영역 프레임워크 영역(FR) FR1, FR2 및 FR3은 VH1_10 인간 생식세포계열 서열에 의해 암호화된 인간 FR 서열이고, 상기 항-CD20 항체의 중쇄 가변 영역 FR4는 JH4 인간 생식세포계열 서열에 의해 암호화된 인간 FR 서열이고, 상기 II형 항-CD20 항체의 경쇄 가변 영역 FR FR1, FR2 및 FR3은 VK_2_40 인간 생식세포계열 서열에 의해 암호화된 인간 FR 서열이고, 상기 항-CD20 항체의 경쇄 가변 영역 FR4는 상기 JK4 인간 생식세포계열 서열에 의해 암호화된 인간 FR 서열이다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다(권장된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453]). 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 오비누투주맵은 GA101에 대한 유의어이다. 상표명은 GAZYVA(등록상표) 또는 GAZYVARO(등록상표)이다. 상기는 모든 선행 버전들(예를 들어 문헌[Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76])을 대체하며, 이전에는 아푸투주맵(권장된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176]; 문헌[Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124])으로서 공지되었다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 토시투모맵이다.
본 발명에 유용한 II형 항-CD20 항체는 상응하는 조작되지 않은 항체에 비해, 증가된 효과기 기능을 갖도록 조작될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 증가된 효과기 기능을 갖도록 조작된 상기 항체는 상응하는 조작되지 않은 항체에 비해 적어도 2배, 적어도 10배 또는 심지어 적어도 100배 증가된 효과기 기능을 갖는다. 상기 증가된 효과기 기능은 비제한적으로 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 증가된 C1q 결합 및 보체 의존적인 세포독성(CDC), 증가된 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC), 증가된 항체-의존적인 세포 식균작용(ADCP), 증가된 사이토킨 분비, 증가된 항원 제공 세포에 의한 면역 복합체-매개된 항원 흡수, 증가된 NK 세포에의 결합, 증가된 대식세포에의 결합, 증가된 단핵세포에의 결합, 증가된 다형핵 세포에의 결합, 증가된 세포사멸을 유도하는 직접적인 신호전달, 증가된 표적-결합된 항체의 가교결합, 증가된 수지상 세포 성숙화, 또는 증가된 T 세포 프라이밍.
하나의 실시태양에서, 상기 증가된 효과기 기능은 증가된 Fc 수용체 결합, 증가된 CDC, 증가된 ADCC, 증가된 ADCP 및 증가된 사이토킨 분비의 그룹 중에서 선택된 하나 이상을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서 상기 증가된 효과기 기능은 증가된 활성화 Fc 수용체에의 결합이다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서 상기 활성화 Fc 수용체에의 결합 친화성은 상응하는 조작되지 않은 항체의 결합 친화성에 비해 적어도 2배, 특히 적어도 10배 증가된다. 구체적인 실시태양에서 상기 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa, FcγRI, 및 FcγRIIa의 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서 상기 활성화 Fc 수용체는 FcγRIIIa, 특히 인간 FcγRIIIa이다. 또 다른 실시태양에서 상기 증가된 효과기 기능은 증가된 ADCC이다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서 상기 ADCC는 상응하는 조작되지 않은 항체에 의해 매개된 ADCC에 비해 적어도 10배, 특히 적어도 100배 증가된다. 더욱 또 다른 실시태양에서 상기 증가된 효과기 기능은 증가된 활성화 Fc 수용체에의 결합 및 증가된 ADCC이다.
증가된 효과기 기능을 당해 분야에 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다. ADCC의 측정에 적합한 분석을 본 명세서에 기재한다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 다른 예들이 미국특허 제 5,500,362 호; 문헌[Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)] 및 문헌[Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)]; 미국특허 제 5,821,337 호; 문헌[Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)]에 기재되어 있다. 한편으로, 비-방사성 분석 방법을 사용할 수도 있다(예를 들어 유식 세포측정을 위한 ACTI(상표) 비-방사성 세포독성 분석(셀테크놀로지 인코포레이티드(CellTechnology, Inc.), 미국 캘리포니아주 마운틴뷰 소재); 및 CytoTox 96(등록상표) 비-방사성 세포독성 분석(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨 소재)). 상기와 같은 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연살해(NK) 세포를 포함한다. 선택적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성을 생체내에서, 예를 들어 문헌[Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)]에 기재된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다. Fc 수용체에의 결합을 예를 들어 ELISA에 의해, 또는 표준 기계류, 예를 들어 BIAcore 장비(GE 헬쓰케어) 및 재조합 발현에 의해 획득될 수 있는 바와 같은 Fc 수용체를 사용하는 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 쉽게 측정할 수 있다. 특정한 실시태양에 따라, 활성화 Fc 수용체에 대한 결합 활성을 25 ℃에서 BIACORE(등록상표) T100 기계(GE 헬쓰케어)를 사용하여 표면 플라스몬 공명에 의해 측정한다. 선택적으로, Fc 수용체에 대한 항체의 결합 친화성을 특정한 Fc 수용체를 발현하는 것으로 공지된 세포주, 예를 들어 FcγIIIa 수용체를 발현하는 NK 세포를 사용하여 평가할 수 있다. C1q 결합 분석을 또한 항체가 C1q에 결합할 수 있는지 및 따라서 CDC 활성을 갖는지의 여부를 결정하기 위해서 수행할 수 있다. 예를 들어 WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조하시오. 보체 활성화를 평가하기 위해서, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J Immunol Methods 202, 163 (1996)]; 문헌[Cragg et al., Blood 101, 1045-1052 (2003)]; 및 문헌[Cragg and Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004)]을 참조하시오).
증가된 효과기 기능은 예를 들어 항체의 Fc 영역의 당공학 또는 항체의 Fc 영역 중 아미노산 돌연변이의 도입으로부터 생성될 수 있다. 하나의 실시태양에서 상기 항-CD20 항체를 상기 Fc 영역 중에 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 도입시킴으로써 조작한다. 구체적인 실시태양에서 상기 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 훨씬 더 구체적인 실시태양에서 상기 아미노산 치환은 상기 Fc 영역의 298, 333, 및/또는 334번 위치에 있다(잔기들의 EU 넘버링). 추가의 적합한 아미노산 돌연변이는 예를 들어 문헌[Shields et al., J Biol Chem 9(2), 6591-6604 (2001)]; 미국특허 제 6,737,056 호; WO 2004/063351 및 WO 2004/099249에 기재되어 있다. 돌연변이 Fc 영역을 당해 분야에 주지된 유전학적 또는 화학적 방법을 사용하여 아미노산 결실, 치환, 삽입 또는 변형에 의해 제조할 수 있다. 유전학적 방법은 암호화 DNA 서열의 부위-특이적 돌연변이유발, PCR, 유전자 합성 등을 포함할 수 있다. 정확한 뉴클레오타이드 변화를 예를 들어 서열분석에 의해 확인할 수 있다.
또 다른 실시태양에서 상기 II형 항-CD20 항체를 상기 Fc 영역에서의 글리코실화의 변형에 의해 조작한다. 구체적인 실시태양에서 상기 II형 항-CD20 항체를, 조작되지 않은 항체에 비해 상기 Fc 영역에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작한다. 항체의 Fc 영역 중의 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드는 증가된 효과기 기능, 특히 증가된 ADCC를 갖는 항체를 생성시킨다.
보다 구체적인 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100%, 바람직하게는 적어도 약 40%가 비-퓨코실화된다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 약 40% 내지 약 80%가 비-퓨코실화된다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 약 40% 내지 약 60%가 비-퓨코실화된다. 상기 비-퓨코실화된 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합체 유형의 것일 수 있다.
또 다른 구체적인 실시태양에서 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 양분된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 보다 구체적인 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100%, 바람직하게는 적어도 약 40%가 양분된다. 하나의 실시태양에서, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 약 40% 내지 약 80%가 양분된다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 약 40% 내지 약 60%가 양분된다. 상기 양분된 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합체 유형의 것일 수 있다.
더욱 또 다른 구체적인 실시태양에서 상기 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 양분된, 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다. 보다 구체적인 실시태양에서, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100%, 바람직하게는 적어도 약 15%, 보다 바람직하게는 적어도 약 25%가 양분되고, 비-퓨코실화된다. 상기 양분되고, 비-퓨코실화된 올리고사카라이드는 하이브리드 또는 복합체 유형의 것일 수 있다.
상기 항체 Fc 영역 중의 올리고사카라이드 구조를 당해 분야에 주지된 방법에 의해, 예를 들어 문헌[Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)] 또는 문헌[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]에 기재된 바와 같은 MALDI TOF 질량 분광분석법에 의해 분석할 수 있다. 비-퓨코실화된 올리고사카라이드의 비율은 Asn297에 부착된 모든 올리고사카라이드(예를 들어 복합체, 하이브리드 및 고 만노스 구조)에 비해, 퓨코스 잔기가 없는 올리고사카리이드의 양이며 MALDI TOF MS에 의해 N-글리코시다제 F 처리된 샘플에서 확인되다. Asn297은 Fc 영역 중 대략 297번 위치(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링)에 위치하는 아스파라진 잔기를 지칭하나; A297은 또한 항체 중 약간의 서열 변화로 인해 297번 위치의 상류 또는 하류 대략 ±3 아미노산에, 즉 294번 내지 300번 위치에 위치할 수도 있다. 상기 양분된, 또는 양분되고 비-퓨코실화된 올리고사카라이드의 비율을 유사하게 측정한다.
하나의 실시태양에서 II형 항-CD20 항체를 숙주 세포 중에 하나 이상의 글리코실트랜스퍼라제의 변경된 활성을 갖는 항체를 생성시킴으로써, 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 변형된 글리코실화를 갖도록 조작한다. 글리코실트랜스퍼라제는 β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII), β(1,4)-갈락토실트랜스퍼라제(GalT), β(1,2)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 I(GnTI), β(1,2)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 II(GnTII) 및 α(1,6)-퓨코실트랜스퍼라제를 포함한다. 구체적인 실시태양에서 II형 항-CD20 항체를 숙주 세포 중에 증가된 β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 항체를 생성시킴으로써, 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작한다. 훨씬 더 구체적인 실시태양에서 상기 숙주 세포는 증가된 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 추가로 갖는다. 본 발명에 유용한 항체를 조작하기 위해 사용될 수 있는 당공학 방법은 문헌[Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)]; 문헌[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]; WO 99/54342(미국특허 제 6,602,684 호; EP 1071700); WO 2004/065540(미국특허 출원 공보 2004/0241817; EP 1587921), WO 03/011878(미국특허 출원 공보 2003/0175884)에 보다 더 상세히 기재되었으며, 이들 각각의 전체 내용은 본 발명에 전체가 참고로 인용된다. 상기 방법을 사용하여 조작된 항체들을 본 명세서에서 GlycoMab라 칭한다.
일반적으로, 본 명세서에서 논의된 세포주를 포함하여 임의의 유형의 배양된 세포주를, 변경된 글리코실화 패턴을 갖는 항-TNC A2 항체의 생성을 위한 세포주의 생성에 사용할 수 있다. 특정한 세포주는 CHO 세포, BHK 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, YO 골수종 세포, P3X63 마우스 골수종 세포, PER 세포, PER.C6 세포 또는 하이브리도마 세포 및 다른 포유동물 세포를 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 숙주 세포는 증가된 수준의, β(1,4)-N-아세틸글루코스아미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 조작되었다. 몇몇 실시태양에서 상기 숙주 세포는 증가된 수준의, α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현하도록 추가로 조작되었다. 구체적인 실시태양에서, 상기 GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드는 GnTIII의 촉매 도메인 및 이종 골지 거주 폴리펩타이드의 골지 국소화 도메인을 포함하는 융합 폴리펩타이드이다. 특히, 상기 골지 국소화 도메인은 만노시다제 II의 골지 국소화 도메인이다. 상기와 같은 융합 폴리펩타이드를 생성시키고 증가된 효과기 기능을 갖는 항체를 생성시키기 위해 상기를 사용하는 방법이 문헌[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)] 및 WO2004/065540(이들의 전체 내용은 명백히 본 발명에 참고로 인용된다)에 개시되어 있다.
본 발명에 유용한 항체의 암호화 서열 및/또는 글리코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 폴리펩타이드의 암호화 서열을 함유하고 생물학적으로 활성인 유전자 산물을 발현하는 숙주 세포를 예를 들어 DNA-DNA 또는 DNA-RNA 하이브리드화; "마커" 유전자 기능의 존재 또는 부재; 숙주 세포에서 각 mRNA 전사물의 발현에 의해 측정된 바와 같은 전사 수준의 평가; 또는 면역분석에 의해 또는 그의 생물학적 활성에 의해 측정된 바와 같은 유전자 산물의 검출에 의해 확인할 수 있으며 - 상기 방법들은 당해 분야에 주지되어 있다. GnTIII 또는 Man II 활성을 예를 들어 각각 GnTIII 또는 ManII의 생합성 생성물에 결합하는 렉틴을 사용함으로써 검출할 수 있다. 상기와 같은 렉틴의 예는 E4-PHA 렉틴이며 이는 분할성 GlcNAc를 함유하는 올리고사카라이드에 우선적으로 결합한다. GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩타이드의 생합성 생성물(즉 특이적인 올리고사카라이드 구조)을 또한 상기 폴리펩타이드를 발현하는 세포에 의해 생산된 당단백질로부터 방출된 올리고사카라이드의 질량 분광분석에 의해 검출할 수 있다. 선택적으로, GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩타이드로 조작된 세포에 의해 생산된 항체에 의해 매개된 증가된 효과기 기능, 예를 들어 증가된 Fc 수용체 결합을 측정하는 기능 분석을 사용할 수 있다.
또 다른 실시태양에서 상기 항-CD20 항체를, 숙주 세포 중에 감소된 α(1,6)-퓨코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 항체를 생성시킴으로써, 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작한다. 감소된 α(1,6)-퓨코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포는 상기 α(1,6)-퓨코실트랜스퍼라제 유전자가 파괴되었거나 또는 달리 불활성화된, 예를 들어 녹아웃된 세포일 수 있다(문헌[Yamane-Ohnuki et al., Biotech Bioeng 87, 614 (2004)]; 문헌[Kanda et al., Biotechnol Bioeng, 94(4), 680-688 (2006)]; 문헌[Niwa et al., J Immunol Methods 306, 151-160 (2006)]을 참조하시오).
탈퓨코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 다른 예는 단백질 퓨코실화에 결함이 있는 Lec13 CHO 세포(문헌[Ripka et al., Arch Biochem Biophys 249, 533-545 (1986)]; 미국특허 출원 US 2003/0157108; 및 WO 2004/056312, 특히 실시예 ll)를 포함한다. 본 발명에 유용한 항체들을 선택적으로 EP 1 176 195 A1, WO 03/084570, WO 03/085119 및 미국특허 출원 공보 2003/0115614, 2004/093621, 2004/110282, 2004/110704, 2004/132140, 미국특허 제 6,946,292 호(쿄와(Kyowa))에 개시된 기법들에 따라, 예를 들어 항체 생산에 사용된 숙주 세포에서 GDP-퓨코스 수송체 단백질의 활성을 감소시키거나 없앰으로써 Fc 영역 중에 감소된 퓨코스 잔기를 갖도록 당조작할 수 있다.
본 발명에 유용한 당조작된 항체를 또한 변형된 당단백질을 생성시키는 발현 시스템, 예를 들어 WO 03/056914 (글리코피 인코포레이티드(GlycoFi, Inc.)) 또는 WO 2004/057002 및 WO 2004/024927(그리노베이션(Greenovation))에 교시된 것들에서 생성시킬 수 있다.
치료제
본 발명은 다양한 치료제, 특히 개체에서 면역원성이고(즉 상기 개체에서 면역 응답을 유도하는 능력을 갖고) 및/또는 상기 개체에서 T-세포를 활성화시키는 치료제와 관련하여 유용하다. 상기와 같은 치료제는 예를 들어 재조합 단백질을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 치료 섭생에서 개체에게 투여될 때 상기 개체에서 ADA의 형성을 유도한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 치료 섭생에서 개체에게 투여될 때 상기 개체에서 사이토킨 방출을 유도한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 치료 섭생에서 개체에게 투여될 때 상기 개체에서 ADA의 형성 및 사이토킨 방출을 유도한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 생물학적 작용제이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드, 특히 재조합 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 상기 개체 중에 자연적으로 존재하지 않고/않거나 상기 개체에서 면역원성인 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 전신 투여된다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 주입, 특히 정맥내 주입에 의해 투여되게 된다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항원 결합 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항체, 항체 단편, Fc 도메인 및 면역접합체의 그룹 중에서 선택된 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항체, 항체 단편, 항원 수용체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 수용체 리간드 또는 그의 수용체-결합 단편의 그룹 중에서 선택된 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 단클론 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 다클론 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 인간 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 인간화된 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 키메릭 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 IgG-부류 항체, 특히 IgG1 하위부류 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 재조합 항체이다.
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제는 항체 단편을 포함한다. 항체 단편은 비제한적으로 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기에 개시되는 다른 단편들을 포함한다. 몇몇 항체 단편의 리뷰를 위해서, 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)]을 참조하시오. scFv 단편의 리뷰를 위해서 예를 들어 문헌[Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315(1994)]; 또한 WO 93/16185; 미국특허 제 5,571,894 호 및 미국특허 제 5,587,458 호를 참조하시오. 구조 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편에 대한 논의에 대해서, 미국특허 제 5,869,046 호를 참조하시오. 하나의 실시태양에서, 상기 항체 단편은 Fab 단편 또는 scFv 단편이다.
다이아바디는 2가 또는 이중특이성일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어 EP 404 097; WO 1993/01161; 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)]; 및 문헌[Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448(1993)]을 참조하시오. 트라이아바디 및 테트라바디가 또한 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134(2003)]에 개시되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 일부 또는 전부 또는 경쇄 가변 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 항체 단편이다. 몇몇 실시태양에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(문헌[Domantis, Inc., Waltham, MA]; 예를 들어 미국특허 제 6,248,516 B1 호를 참조하시오).
항체 단편을 본 명세서에 개시된 바와 같은 다양한 기법들, 예를 들어 비제한적으로 완전 항체의 단백질분해 절단뿐만 아니라 재조합 숙주 세포(예를 들어 에스케리키아 콜라이 또는 파지)에 의한 생산에 의해 제조할 수 있다.
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항체를 포함한다. 몇몇 키메릭 항체들이 예를 들어 미국특허 제 4,816,567 호; 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855(1984)]에 개시되어 있다. 일례로, 키메릭 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들어 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예를 들어 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메릭 항체는 상기 부류 또는 하위부류가 모 항체의 부류 또는 하위부류로부터 변화된 "부류 변환된(switched)" 항체이다. 키메릭 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제는 인간화된 항체를 포함한다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화성은 유지하면서 인간에 대한 면역원성이 감소하도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR, 예를 들어 CDR(또는 그의 부분들)이 비-인간 항체로부터 유래되고 FR(또는 그의 부분들)이 인간 항체 서열로부터 유래되는 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 또한 포함할 것이다. 일부 실시태양에서, 인간화된 항체 중의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화성을 복원하거나 개선시키기 위해서 비-인간 항체(예를 들어 HVR 잔기가 유래되는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화된 항체 및 그의 제조 방법들이 예를 들어 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633(2008)]에 리뷰되어 있으며, 예를 들어 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329(1988)]; 문헌[Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033(1989)]; 미국특허 제 5,821,337 호, 미국특허 제 7,527,791 호, 미국특허 제 6,982,321 호 및 미국특허 제 7,087,409 호; 문헌[Kashmiri et al., Methods 36:25-34(2005)](특이성 결정 영역(SDR) 접목을 개시함); 문헌[Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498(1991)]("재표면화"를 개시함); 문헌[Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60(2005)]("FR 셔플링"을 개시함); 및 문헌[Osbourn et al., Methods 36:61-68(2005)] 및 문헌[Klimka et al., Br. J. Cancer 83:252-260(2000)](FR 셔플링으로의 "유도된 선택" 접근을 개시함)에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 비제한적으로: "최적합" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)]을 참조하시오); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위 그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)]; 및 문헌[Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)]을 참조하시오); 인간 성숙(체세포 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식세포계열 프레임워크 영역(예를 들어 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]을 참조하시오); 및 FR 라이브러리 선별로부터 유래된 프레임워크 영역(예를 들어 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)] 및 문헌[Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)]을 참조하시오)을 포함한다.
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제는 인간 항체를 포함한다. 인간 항체를 당해 분야에 공지된 다양한 기법을 사용하여 생성시킬 수 있다. 인간 항체는 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-374(2001)] 및 문헌[Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459(2008)]에 일반적으로 기재되어 있다.
인간 항체를, 항원 공격에 응답하여 완전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 완전 항체를 생성하도록 변형시킨 트랜스제닉 동물에게 투여함으로써 제조할 수 있다. 상기와 같은 동물은 전형적으로는 인간 면역글로불린 유전자좌의 일부 또는 전부를 함유하며, 상기 자리는 내인성 면역글로불린 유전자좌로 대체되거나 또는 염색체외에 존재하거나 또는 상기 동물의 염색체내로 무작위로 삽입된다. 상기와 같은 트랜스제닉 마우스에서, 상기 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되었다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하기 위한 방법의 리뷰에 대해서, 문헌[Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125(2005)]을 참조하시오. 또한 예를 들어 제노마우스(XENOMOUSE)(상표) 기술을 개시하는 미국특허 제 6,075,181 호 및 미국특허 제 6,150,584 호; 휴맵(HUMAB)(등록상표) 기술을 개시하는 미국특허 제 5,770,429 호; 케이엠 마우스(K-M MOUSE)(등록상표) 기술을 개시하는 미국특허 제 7,041,870 호; 및 벨로시마우스(VELOCIMOUSE)(등록상표) 기술을 개시하는 미국 특허 출원 공보 US 2007/0061900을 참조하시오. 상기와 같은 동물들로부터 생성된 완전 항체로부터의 인간 가변 영역들을 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해 추가로 변형시킬 수도 있다.
인간 항체를 또한 하이브리도마-기재 방법에 의해 제조할 수 있다. 인간 단클론 항체의 생성을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 개시되었다(예를 들어 문헌[Kozbor J. Immunol. 133:3001(1984)]; 문헌[Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987]; 및 문헌[Boerner et al., J. Immunol. 147:86(1991)]을 참조하시오). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체가 또한 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:3557-3562(2006)]에 개시되어 있다. 추가의 방법은 예를 들어 미국특허 제 7,189,826 호(하이브리도마 세포주로부터 단클론 인간 IgM 항체의 생성을 개시한다) 및 문헌[Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268(2006)](인간-인간 하이브리도마를 개시한다)에 개시된 것들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트라이오마(Trioma) 기술)이 또한 문헌[Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology 20(3):927-937(2005)] 및 문헌[Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91(2005)]에 개시되어 있다.
인간 항체를 또한, 인간-유래된 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생성시킬 수 있다. 이어서 상기와 같은 가변 도메인 서열을 목적하는 인간 불변 도메인과 병용할 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기법을 하기에 개시한다.
상기 치료제 중에 포함된 항체를 목적하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 선별함으로써 단리할 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성시키고 상기와 같은 라이브러리를 목적하는 결합 특성을 갖는 항체들에 대해 선별하는 다양한 방법들이 당해 분야에 공지되어 있다. 상기와 같은 방법들은 예를 들어 문헌[Hoogenboom et al. Methods in Molecular Biology 178:1-37](O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에 리뷰되어 있으며 예를 들어 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554]; 문헌[Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)]; 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)]; 문헌[Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175](Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); 문헌[Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)]; 문헌[Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)]; 문헌[Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)]; 및 문헌[Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 개시되어 있다.
몇몇 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리를 폴리머라제 쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝하고 파지 라이브러리에 무작위로 재조합시키고, 이어서 상기 라이브러리를 문헌[Winter et al., Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455(1994)]에 개시된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 선별할 수 있다. 파지는 전형적으로 단쇄 Fv(scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 항체 단편을 표시한다. 면역된 출처로부터의 라이브러리들은 하이브리도마 제작의 필요 없이 면역원에 대한 고-친화성 항체를 제공한다. 한편으로, 미경험 레퍼토리를 문헌[Griffiths et al., EMBO J. 12:725-734(1993)]에 개시된 바와 같이 클로닝하여(예를 들어 인간으로부터) 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기-항원에 대한 단일 출처의 항체를 제공할 수 있다. 최종적으로, 미경험 라이브러리를 또한, 줄기세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도로 가변성인 CDR3 영역을 암호화하고 시험관내에서 재배열을 수행함으로써 합성적으로 제조할 수 있다(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227:381-388(1992)]에 개시되어 있다). 인간 항체 파지 라이브러리를 개시하는 특허 공보들은 예를 들어 미국특허 제 5,750,373 호, 및 미국특허 공보 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본 발명에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제는 다중특이성 항체, 예를 들어 이중특이성 항체이다. 다중특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 단클론 항체이다. 몇몇 실시태양에서, 상기 결합 특이성은 상이한 항원들에 대한 것이다. 몇몇 실시태양에서, 상기 결합 특이성은 동일한 항원상의 상이한 에피토프에 대한 것이다. 이중특이성 항체를 또한 항원을 발현하는 세포에 세포독성제를 국소화시키기 위해 사용할 수 있다. 이중특이성 항체를 완전 길이 항체 또는 항체 단편으로서 제조할 수 있다.
다중특이성 항체의 제조 기법은 비제한적으로 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 동시-발현(문헌[Milstein and Cuello, Nature 305: 537(1983)], WO 93/08829, 및 문헌[Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655(1991)]을 참조하시오), 및 "구멍에 손잡이" 공학(예를 들어 미국특허 제 5,731,168 호를 참조하시오)을 포함한다. 다중특이성 항체를 또한, 항체 Fc-이종이량체성 분자의 제조를 위해 정전기적 스티어링(steering) 효과를 조작하고(WO 2009/089004 A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교결합시키고(예를 들어 미국특허 제 4,676,980 호, 및 문헌[Brennan et al., Science, 229:81(1985)]을 참조하시오); 류신 지퍼를 사용하여 이중특이성 항체를 생성시키고(예를 들어 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553(1992)]을 참조하시오); 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 "다이아바디" 기술을 사용하고(예를 들어 문헌[Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)]을 참조하시오); 단쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용하고(예를 들어 문헌[Gruber et al., J. Immunol. 152:5368(1994)]을 참조하시오); 예를 들어 문헌[Tutt et al., J. Immunol. 147:60(1991)]에 개시된 바와 같이 삼중특이성 항체를 제조함으로써 제조할 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 포함하여, 3개 이상의 기능성 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본 발명에 포함된다(예를 들어 US　2006/0025576A1을 참조하시오).
본 명세서에서 항체 또는 단편은 또한 2개의 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다(예를 들어 US 2008/0069820을 참조하시오).
"Crossmab" 항체가 또한 본 발명에 포함된다(예를 들어 WO2009080251, WO2009080252, WO2009080253, WO2009080254를 참조하시오).
이중특이성 항체 단편의 제조를 위한 또 다른 기법은 "이중특이성 T 세포 관여인자" 또는 BiTE(등록상표) 접근법이다(예를 들어 WO2004/106381, WO2005/061547, WO2007/042261, 및 WO2008/119567을 참조하시오). 상기 접근법은 단일 폴리펩타이드상에 배열된 2개의 항체 가변 도메인을 사용한다. 예를 들어, 단일 폴리펩타이드 쇄는 2개의 단쇄 Fv(scFv) 단편을 포함하며, 상기 단편은 각각 2개 도메인간의 분자내 회합을 허용하기에 충분한 길이의 폴리펩타이드 링커에 의해 분리된 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인을 갖는다. 상기 단일 폴리펩타이드는 상기 두 scFv 단편 사이에 폴리펩타이드 이격자 서열을 추가로 포함한다. 각각의 scFv는 상이한 에피토프를 인식하며, 이들 에피토프는 상이한 세포 유형들에 대해 특이적일 수 있고, 따라서 2개의 상이한 세포 유형의 세포들은 각각의 scFv가 그의 동족 에피토프와 맞물릴 때 가까워지거나 또는 구속된다. 이러한 접근법의 한 가지 특정한 실시태양은 표적 세포, 예를 들어 악성 또는 종양 세포에 의해 발현된 세포-표면 항원을 인식하는 또 다른 scFv에 결합된, 면역세포에 의해 발현된 세포-표면 항원을 인식하는 scFv, 예를 들어 T 세포상의 CD3 폴리펩타이드를 포함한다.
상기 이중특이성 T 세포 관여인자는 단일 폴리펩타이드이므로, 당해 분야에 공지된 임의의 원핵생물 또는 진핵생물 세포 발현 시스템, 예를 들어 CHO 세포주를 사용하여 발현시킬 수 있다. 그러나, 특정한 정제 기법들(예를 들어 EP1691833을 참조하시오)이 다른 다량체성 종들(단량체의 의도된 활성 외의 생물학적 활성을 가질 수 있다)로부터 단량체성 이중특이성 T 세포 관여인자를 분리시키는데 필요할 수 있다. 하나의 예시적인 정제 설계에서, 분비된 폴리펩타이드를 함유하는 용액을 먼저 금속 친화성 크로마토그래피에 가하고, 폴리펩타이드를 이미다졸 농도의 구배로 용출시킨다. 상기 용출물에 음이온 교환 크로마토그래피를 수행하여 추가로 정제시키고, 폴리펩타이드를 염화 나트륨 농도의 구배를 사용하여 용출시킨다. 최종적으로, 상기 용출물에 크기 배제 크로마토그래피를 수행하여 다량체성 종으로부터 단량체를 분리시킨다.
2 초과의 결합가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어 삼중특이성 항체를 제조할 수 있다(문헌[Tuft et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)].
몇몇 실시태양에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체를 당해 분야에 공지되고 쉽게 입수할 수 있는 추가적인 비단백질성 부분을 함유하도록 추가로 변형시킬 수 있다. 상기 항체의 유도체화에 적합한 부분은 비제한적으로 수용성 중합체를 포함한다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 비제한적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-다이옥솔란, 폴리-1,3,6-트라이옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올(예를 들어 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 그의 수 중 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 상기 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있으며 분지되거나 분지되지 않을 수도 있다. 상기 항체에 부착된 중합체들의 수는 변할 수 있으며, 하나보다 많은 중합체가 부착되는 경우, 이들 중합체는 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 상기 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형을 비제한적으로, 개선시키고자 하는 상기 항체의 특정한 성질, 상기 항체 유도체를 한정된 조건하에서 치료법에 사용할 것인지의 여부 등을 포함한 고려사항을 기준으로 결정할 수 있다.
상기 치료제는 또한 하나 이상의 세포독성제, 예를 들어 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어 단백질 독소, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소에 접합된 항체를 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항체가 하나 이상의 약물, 예를 들어 비제한적으로 메이탄시노이드(미국특허 제　5,208,020 호, 미국특허 제 5,416,064 호 및 EP 0 425 235 B1를 참조하시오); 아우리스타틴, 예를 들어 모노메틸아우리스타틴 약물 부분 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(미국특허 제 5,635,483 호 및 미국특허 제 5,780,588 호, 및 미국특허 제 7,498,298 호); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 그의 유도체(미국특허 제 5,712,374 호, 미국특허 제 5,714,586 호, 미국특허 제 5,739,116 호, 미국특허 제 5,767,285 호, 미국특허 제 5,770,701 호, 미국특허 제 5,770,710 호, 미국특허 제 5,773,001 호, 및 미국특허 제 5,877,296 호; 문헌[Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342(1993)]; 및 문헌[Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928(1998)]을 참조하시오); 안트라사이클린, 예를 들어 다우노마이신 또는 독소루비신(문헌[Kratz et al., Curr. Med. Chem. 13:477-523(2006)]; 문헌[Jeffrey et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 16:358-362(2006)]; 문헌[Torgov et al., Bioconjug. Chem. 16:717-721(2005)]; 문헌[Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834(2000)]; 문헌[Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532(2002)]; 문헌[King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343(2002)]; 및 미국특허 제 6,630,579 호를 참조하시오); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산, 예를 들어 도세탁셀, 패클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀; 트라이코테센; 및 CC1065를 포함하는 약물에 접합된 항체-약물 접합체(ADC)를 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료제는 효소 활성 독소 또는 그의 단편, 예를 들어 비제한적으로 디프테리아-A 쇄, 디프테리아 독소의 비-결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사로부터), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알류라이테스 포르디이 단백질, 다이안틴 단백질, 피토라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사포나리아 오피시날리스 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트라이코테센에 접합된 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 상기 치료제는 방사성 원자에 접합되어 방사성접합체를 형성하는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다. 다양한 방사성 동위원소들을 방사성접합체의 생성에 이용할 수 있다. 예를 들어 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212, 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 상기 방사성접합체가 검출에 사용되는 경우 상기 접합체는 섬광조영술 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들어 Tc99m 또는 I123, 또는 핵자기 공명(NMR) 영상화(또한 자기공명 영상화, mri로서 공지됨)용 스핀 표지, 예를 들어 다시 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
항체 및 세포독성제의 접합체를 다양한 이중기능성 단백질 커플링제, 예를 들어 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜다이티오)프로피오네이트(SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스터의 이중작용성 유도체(예를 들어 다이메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스터(예를 들어 다이숙신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예를 들어 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예를 들어 비스(p-아지도벤조일) 헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예를 들어 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소시아네이트(예를 들어 톨루엔 2,6-다이아이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들어 1,5-다이플루오로-2,4-다이나이트로벤젠)을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소를 문헌[Vitetta et al., Science 238:1098(1987)]에 개시된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-아이소티오시아네이토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민 펜타아세트산(MX-DTPA)은 상기 항체에의 방사성핵종의 접합을 위한 예시적인 킬레이트화제이다. WO 94/11026을 참조하시오. 상기 링커는 세포 중의 세포독성 약물의 방출을 촉진하는 "절단성 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-민감성 링커, 광불안정성 링커, 다이메틸 링커 또는 다이설파이드-함유 링커(문헌[Chari et al., Cancer Res. 52:127-131(1992)]; 미국특허 제 5,208,020 호)를 사용할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 단클론 항체, 예를 들어 비제한적으로 알렘투주맵(LEMTRADA(등록상표)), 베바시주맵(AVASTIN(등록상표)), 세툭시맵(ERBITUX(등록상표)), 파니투무맵(VECTIBIX(등록상표)), 페르투주맵(OMNITARG(등록상표), 2C4), 트라스투주맵(HERCEPTIN(등록상표)), 토시투모맵(Bexxar(등록상표)), 아브식시맵(REOPRO(등록상표)), 아달리무맵(HUMIRA(등록상표)), 아폴리주맵, 아셀리주맵, 아틀리주맵, 바피뉴주맵, 바실릭시맵(SIMULECT(등록상표)), 바비툭시맵, 벨리무맵(BENLYSTA(등록상표)), 브리앙키누맵, 카나키누맵(ILARIS(등록상표)), 세델리주맵, 세르톨리주맵 페골(CIMZIA(등록상표)), 시드푸시투주맵, 시드투주맵, 식수투무맵, 클라자키주맵, 크레네주맵, 다클리주맵(ZENAPAX(등록상표)), 달로투주맵, 데노수맵(PROLIA(등록상표), XGEVA(등록상표)), 에쿨리주맵(SOLIRIS(등록상표)), 에팔리주맵, 에프라투주맵, 에를리주맵, 펠비주맵, 폰톨리주맵, 골리무맵(SIMPONI(등록상표)), 이필리무맵, 임가투주맵, 인플릭시맵(REMICADE(등록상표)), 라베투주맵, 레브리키주맵, 렉사투무맵, 린투주맵, 루카투무맵, 룰리주맵 페골, 룸레투주맵, 마파투무맵, 마투주맵, 메폴리주맵, 모가물리주맵, 모타비주맵, 모토비주맵, 무로노맵, 나탈리주맵(TYSABRI(등록상표)), 네시투무맵(PORTRAZZA(등록상표)), 니모투주맵(THERACIM(등록상표)), 놀로비주맵, 누마비주맵, 올로키주맵, 오말리주맵(XOLAIR(등록상표)), 오나르투주맵(또한 MetMAb로서 공지됨), 팔리비주맵(SYNAGIS(등록상표)), 파스콜리주맵, 페크푸시투주맵, 페크투주맵, 펨브롤리주맵(KEYTRUDA(등록상표)), 펙셀리주맵, 프릴릭시맵, 랄리비주맵, 라니비주맵(LUCENTIS(등록상표)), 레슬리비주맵, 레슬리주맵, 레시비주맵, 로바투무맵, 론탈리주맵, 로벨리주맵, 루플리주맵, 사릴루맵, 세쿠키누맵, 세리반투맵, 시팔리무맵, 시브로투주맵, 실툭시맵(SYLVANT(등록상표)) 시플리주맵, 손투주맵, 타도시주맵, 탈리주맵, 테피바주맵, 토실리주맵(ACTEMRA(등록상표)), 토랄리주맵, 투쿠시투주맵, 우마비주맵, 우르톡사주맵, 유스테키누맵(STELARA(등록상표)), 베돌리주맵(ENTYVIO(등록상표)), 비실리주맵, 자놀리무맵, 잘루투무맵을 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 암의 치료에 지시된 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 자가면역 질병의 치료에 지시된 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 면역요법제이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 암의 치료에 지시된다. 일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 암은 B-세포 증식성 질환이다. 하나의 실시태양에서, 상기 암은 CD20-양성-B-세포 증식성 질환이다. 하나의 실시태양에서, 상기 암은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 면역요법제이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 면역억제제이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 자가면역 질병의 치료에 지시된다.
이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 활성화 보조-자극 분자를 촉진하거나 또는 음성 보조-자극 분자를 억제시킴으로써 T 세포 자극을 증대시키는 것은 종양 세포사를 촉진하여 암을 치료하거나 또는 암의 진행을 지연시킬 수 있는 것으로 생각된다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 활성화 보조-자극 분자에 대한 작용물질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 활성화 보조-자극 분자는 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, 또는 CD127을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 활성화 보조-자극 분자에 대한 작용물질은 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, 또는 CD127에 결합하는 작용물질 항체이다. 일부 실태양에서, 상기 치료제는 GITR을 표적화하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 GITR을 표적화하는 항체는 TRX518이다. 일부에서 상기 치료제는 억제성 보조-자극 분자에 대한 길항물질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 억제성 보조-자극 분자는 CTLA-4(또한 CD152로서 공지됨), PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO, TIGIT, MICA/B, 또는 아르기나제를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 억제성 보조-자극 분자에 대한 길항물질은 CTLA-4, PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, B7-H3, B7-H4, IDO, TIGIT, MICA/B, 또는 아르기나제에 결합하는 길항물질 항체이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항-PD-1 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서 상기 항-PD-1 항체는 MDX-1106(니볼루맵), MK-3475(펨브롤리주맵, 이전에는 람브롤리주맵으로서 공지됨), CT-011(피딜리주맵)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. MDX-1106(또한 MDX-1106-04로서 공지됨), ONO-4538, BMS-936558, 또는 니볼루맵은 WO2006/121168에 기재된 항-PD-1 항체이다. MK-3475(또한 펨브롤리주맵 또는 (이전에는)람브롤리주맵으로서 공지됨)는 WO2009/114335에 기재된 항-PD-1 항체이다. CT-011(또한 hBAT, hBAT-1 또는 피딜리주맵으로서 공지됨)은 WO2009/101 611에 기재된 항-PD-1 항체이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 면역부착소(예를 들어 불변 영역(예를 들어 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역부착소)를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 AMP-224(또한 B7-DCIg로서 공지됨)(WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재된 PD-L2-Fc 융합 용해성 수용체)를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항-PD-L1 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서 상기 항-PD-L1 항체는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MDX-1105, 및 MEDI4736으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 항체 YW243.55.S70은 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-L1 항체이다. MDX-1105(또한 BMS-936559로서 공지됨)는 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 항체이다. MEDI4736은 WO2011/066389 및 US2013/034559에 기재된 항-PD-L1 단클론 항체이다. 하나의 실시태양에서, 상기 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맵이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CTLA-4(또한 CD152로서 공지됨)에 대한 길항물질, 예를 들어 차단 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이필리무맵(또한 MDX-010, MDX-101, 또는 YERVOY(등록상표)로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 트레멜리무맵(또한 티실리무맵 또는 CP-675,206으로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 B7-H3(또한 CD276으로서 공지됨)에 대한 항체, 예를 들어 차단 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 MGA271을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 TGF 베타에 대한 길항물질, 예를 들어 메텔리무맵(또한 CAT-192로서 공지됨), 프레솔리무맵(또한 GC1008로서 공지됨) 또는 LY2157299를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD137(또한 TNFRSF9, 4-1BB, 또는 ILA로서 공지됨)에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 우렐루맵(또한 BMS-663513으로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD137(또한 TNFRSF9, 4-1BB, 또는 ILA로서 공지됨)의 리간드, 예를 들어 4-1BBL을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD40에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CP-870893을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 OX40(또한 CD134로서 공지됨)에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항-OX40 항체(예를 들어 AgonOX)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 OX40의 리간드, 예를 들어 OX40L을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD27에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CDX-1127을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포(예를 들어 세포독성 T 세포 또는 CTL)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 우성-음성 TGF 베타 수용체, 예를 들어 우성-음성 TGF 베타 II형 수용체를 포함하는 T 세포를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항체-약물 접합체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 항체-약물 접합체는 메르탄신 또는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항-NaPi2b 항체-MMAE 접합체(또한 DNIB0600A 또는 RG7599로서 공지됨)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 트라스투주맵 엠탄신(또한 T-DM1, 아도-트라스투주맵 엠탄신, 또는 KADCYLA(등록상표)로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 DMUC5754A를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 엔도텔린 B 수용체(EDNBR)를 표적화하는 항체-약물 접합체, 예를 들어 MMAE와 접합된 EDNBR에 대한 항체(또한 DEDN6526A로서 공지됨)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 젬투주맵 오조가미신(MYLOTARG(등록상표))을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이노투주맵 오조가미신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 비바투주맵 메르탄신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 칸투주맵 메르탄신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 칸투주맵 라브탄신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 브렌툭시맵 베도틴(ADECTRIS(등록상표))을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 피나투주맵 베도틴을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 폴라투주맵 베도틴을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 글렘바투무맵 베도틴을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 로르보투주맵 메르탄신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 타카투주맵 테트락세탄을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 반도르투주맵 베도틴(DSTP3086S)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이브리투모맵 티욱세탄(ZEVALIN(등록상표))을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 안지오포이에틴 2(또한 Ang2로서 공지됨)에 대한 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 MEDI3617을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CSF-1R(또한 M-CSFR 또는 CD115로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IMC-CS4(LY3022855)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 에마크투주맵을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 인터페론, 예를 들어 인터페론 알파 또는 인터페론 감마를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 로페론-A(또한 재조합 인터페론 알파-2a로서 공지됨)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 GM-CSF(또한 재조합 인간 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자, rhu GM-CSF, 사르그라모스팀, 또는 LEUKIN E(등록상표)로서 공지됨)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 알데슬류킨(PROLEUKIN(등록상표))을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IL-12를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IL-10을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IL-2 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 투코투주맵 셀모류킨을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 달류킨을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 텔류킨을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IL-10 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 데카빌을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 TNF 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 피브로문을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이중특이성 항체, 예를 들어 비제한적으로 둘리고투주맵, MM-111, MM141, TF2, ABT-981, ABT-122, LY3164530, SAR156597, GSK2434735, 오조랄리주맵, ALX-0761, ALX-0061, ALX-0141, ACE910을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 T 세포 및 표적 세포, 예를 들어 종양 세포에 결합할 수 있는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 T 세포 상의 CD3 및 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이중특이성 T 세포 관여인자(BiTE(등록상표))를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD19에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 블리나투모맵(BLINCYTO(등록상표))을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 AFM11이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 EpCAM에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 카투막소맵(REVOMAB(등록상표))이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 솔리토맵(AMG 110, MT110)이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 Her2에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 에르투막소맵이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 PSMA에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 BAY2010112(AMG212, MT112)이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CEA에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 MEDI565(AMG211, MT111)이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD33에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 AMG330이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD123에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 MGD006이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 XmAb(등록상표) 14045이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD38에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 gpA33에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 MGD007이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD20에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 XmAb(등록상표) 13676이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 REGN1979이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 FBTA05(림포문)이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD16A에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 AFM13이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 DR5 및 FAP에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 Ang2 및 VEGF에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 바누시주맵이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 Fc 도메인을 포함하는 융합 단백질을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 재조합 수용체 또는 그의 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 수용체는 T 세포 수용체이다. 일부 실시태양에서, 상기 수용체는 TNF 수용체이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 에타너셉트(ENBREL(등록상표))를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 수용체는 VEGF 수용체이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 ziv-아플리버셉트(ZALTRAP(등록상표))를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 아플리버셉트(EYLEA(등록상표))를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 수용체는 IL-1 수용체이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 릴로나셉트(ARCALYST(등록상표))를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 IMCgp100을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 인자 IX-Fc 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 인자 VIII-Fc 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CTLA-4-Fc 융합 단백질, 예를 들어 벨라타셉트, 아바타셉트(ORENCIA(등록상표))를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 로미플로스틴을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 재조합 수용체 리간드, 예를 들어 TNF 수용체 리간드를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 본 명세서에서 명명된 작용제, 예를 들어 항체의 유전학적, 바이오시밀러 또는 필적하지 않는 생물학적 버전을 포함할 수도 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 오비누투주맵을 포함하지 않는다.
T 세포 활성화 치료제
하기는 본 발명, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 특정 태양이 유용할 수 있는 T 세포 활성화 치료제를 추가로 상세히 기재한다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 항체 H2C(PCT 공보 WO2008/119567), 항체 V9(문헌[Rodrigues et al., Int J Cancer Suppl 7, 45-50 (1992)] 및 미국특허 제 6,054,297 호), 항체 FN18(문헌[Nooij et al., Eur J Immunol 19, 981-984 (1986)]), 항체 SP34(문헌[Pessano et al., EMBO J 4, 337-340 (1985)]), 항체 OKT3(문헌[Kung et al., Science 206, 347-349 (1979)]), 항체 WT31(문헌[Spits et al., J Immunol 135, 1922 (1985)]), 항체 UCHT1(문헌[Burns et al., J Immunol 129, 1451-1457 (1982)]), 항체 7D6(문헌[Coulie et al., Eur J Immunol 21, 1703-1709 (1991)]) 또는 항체 Leu-4이거나 또는 이들과 결합에 대해 경쟁할 수 있는 항체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 또한 WO 2005/040220, WO 2005/118635, WO 2007/042261, WO 2008/119567, WO 2008/119565, WO 2012/162067, WO 2013/158856, WO 2013/188693, WO 2013/186613, WO 2014/110601, WO 2014/145806, WO 2014/191113, WO 2014/047231, WO 2015/095392, WO 2015/181098, WO 2015/001085, WO 2015/104346, WO 2015/172800, WO 2016/020444, 또는 WO 2016/014974에 기재된 바와 같이 CD3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 B-세포 항원, 특히 악성 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 리툭시맵, 오크렐리주맵, 오파투무맵, 오카라투주맵, 벨투주맵 및 우블리툭시맵 중에서 선택된 항체를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 다중특이성 항체, 특히 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 T 세포 및 표적 세포, 예를 들어 종양 세포에 결합할 수 있는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 표적 세포는 B-세포, 특히 악성 B-세포이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 T 세포상의 CD3 및 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 B-세포 항원, 특히 악성 B-세포 항원이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 이중특이성 T 세포 관여인자(BiTE(등록상표))를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD20에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 XmAb(등록상표) 13676이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 REGN1979이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 FBTA05(림포문)이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD19에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 블리나투모맵(BLINCYTO(등록상표))이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 AFM11이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 MGD011(JNJ-64052781)이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD38에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 XmAb(등록상표) 13551, XmAb(등록상표) 15426, 또는 XmAb(등록상표) 14702이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 BCMA에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 BI836909이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD33에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 AMG330이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3 및 CD123에 대한 이중특이성 항체를 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 MGD006이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 XmAb(등록상표) 14045이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 JNJ-63709178이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 재조합 수용체 또는 그의 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 수용체는 T 세포 수용체(TCR)이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR)를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포(예를 들어 세포독성 T 세포 또는 CTL)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 재조합 T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 B-세포 항원, 특히 악성 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 특히 CD20 또는 CD19에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD19에 대한 CAR, 또는 CD19에 대한 CAR을 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 KTE-C19, CTL019, JCAR-014, JCAR-015, JCAR-017, BPX-401, UCART19를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD22에 대한 CAR, 또는 CD22에 대한 CAR을 발현하는 T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 JCAR-018 또는 UCART22를 포함할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 T 세포 활성화 보조-자극 분자에 대한 작용물질을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, T 세포 활성화 보조-자극 분자는 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, 또는 CD127을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 T 세포 활성화 보조-자극 분자에 대한 작용물질은 CD40, CD226, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, 또는 CD127에 결합하는 작용물질 항체이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 GITR을 표적화하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 GITR을 표적화하는 항체는 TRX518이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD137(또한 TNFRSF9, 4-1BB 또는 ILA로서 공지됨)에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 우렐루맵(또한 BMS-663513으로서 공지됨)을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD137(또한 TNFRSF9, 4-1BB 또는 ILA로서 공지됨)의 리간드, 예를 들어 4-1BBL을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD40에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CP-870893을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 OX40(또한 CD134로서 공지됨)에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 항-OX40 항체(예를 들어 AgonOX)를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 OX40의 리간드, 예를 들어 OX40L을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD27에 대한 작용물질, 예를 들어 활성화 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CDX-1127을 포함할 수 있다.
특정한 치료제들
(i) 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소
하기에 기재된 치료제들은 본 발명에, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에 특히 유용하다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 20의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 136의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 137의 HCDR2, 및 서열번호 138의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 139의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 140의 LCDR2 및 서열번호 141의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 142의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 143의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 142의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 143의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 IgG 부류의 항체, 특히 인간 IgG1 부류의 항체이다. 하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 항체 단편, 특히 Fab 분자 또는 scFv 분자, 보다 특히 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, CEA에 특이적으로 결합하는 항체는 인간화된 항체이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 섬유아세포 활성화 단백질(FAP)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 25의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 26의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 IgG 부류의 항체, 특히 인간 IgG1 부류의 항체이다. 하나의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 항체 단편, 특히 Fab 분자 또는 scFv 분자, 보다 특히 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, FAP에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 항체이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3, 특히 CD3 입실론에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 38의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 IgG 부류의 항체, 특히 인간 IgG1 부류의 항체이다. 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 항체 단편, 특히 Fab 분자 또는 scFv 분자, 보다 특히 Fab 분자이다. 특정한 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 크로스오버 Fab 분자이며, 여기에서 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인은 교환된다(즉 서로 교체된다). 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간화된 항체이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 사이토킨은 GM-CSF, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β, TGF-β, TNF-α, 및 TNF-β로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서, 상기 사이토킨은 IL-2, 특히 인간 IL-2이다. 야생형 인간 IL-2의 서열을 서열번호 12에 나타낸다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 야생형 IL-2에 비해 IL-2 수용체의 α-서브유닛에 대해 감소된 결합 친화성을 갖는 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드를 포함한다. β- 및 γ-서브유닛(또한 각각 CD122 및 CD132로서 공지됨)과 함께, 상기 α-서브유닛(또한 CD25로서 공지됨)은 이종삼량체성 고-친화성 IL-2 수용체를 형성하는 반면, 오직 상기 β- 및 γ-서브유닛만으로 이루어지는 이량체성 수용체는 중간-친화성 IL-2 수용체라 지칭된다. IL-2 수용체의 α-서브유닛에 대해 감소된 결합을 갖는 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 야생형 IL-2 폴리펩타이드에 비해 조절성 T(Treg) 세포에서 IL-2 신호전달을 유도하는 감소된 능력을 가지며, T 세포에서 보다 적은 활성화-유도된 세포사(AICD)를 유도하고, 생체내에서 감소된 독성 프로파일을 갖는다(예를 들어 WO 2012/107417(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오).
보다 구체적인 실시태양에서, 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 인간 IL-2의 42, 45 및 72 잔기에 상응하는 위치에 3개의 아미노산 치환을 포함한다. 훨씬 더 구체적인 실시태양에서, 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 대한 넘버링)를 포함하는 인간 IL-2 폴리펩타이드이다. 하나의 실시태양에서 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 인간 IL-2의 3번 위치에 상응하는 위치에 IL-2의 O-글리코실화 부위가 제거된 아미노산 돌연변이를 추가로 포함한다. 하나의 실시태양에서 인간 IL-2의 잔기 3에 상응하는 위치에서 IL-2의 O-글리코실화 부위가 제거된 상기 아미노산 돌연변이는 T3A, T3G, T3Q, T3E, T3N, T3D, T3R, T3K, 및 T3P의 그룹 중에서 선택된 아미노산 치환이다. 특히, 상기 추가적인 아미노산 돌연변이는 쓰레오닌 잔기를 알라닌 잔기에 의해 교체시키는 아미노산 치환이다. 본 발명에 유용한 특정한 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 인간 IL-2의 3, 42, 45 및 72 잔기에 상응하는 위치에 4개의 아미노산 치환을 포함한다. 구체적인 아미노산 치환은 T3A, F42A, Y45A 및 L72G이다. 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 CD25에 대해 검출 가능한 결합이 없고, T 세포에서 세포사멸을 유도하는 능력이 감소되고, Treg 세포에서 IL-2 신호전달을 유도하는 능력이 감소되고, 생체내에서 감소된 독성 프로파일을 나타낸다(예를 들어 WO 2012/107417(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오). 그러나, 상기는 효과기 세포에서 IL-2 신호전달을 활성화시키고, 효과기 세포의 증식을 유도하고, NK세포에 의해 2차 사이토킨으로서 IFN-γ를 생성시키는 능력을 유지한다.
상기 실시태양들 중 어느 하나에 따른 IL-2 또는 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 추가의 장점들, 예를 들어 증가된 발현 또는 안정성을 제공하는 추가적인 돌연변이를 포함할 수 있다. 예를 들어, 125번 위치의 시스테인은 미국특허 제 4,518,584 호에 기재된 바와 같이 중성 아미노산, 예를 들어 세린, 알라닌, 쓰레오닌 또는 발린으로 교체되어, 각각 C125S IL-2, C125A IL-2, C125T IL-2 또는 C125V IL-2를 생성시킬 수 있다. 상기 중에 기재된 바와 같이, 또한 IL-2의 N-말단 알라닌 잔기를 결실시켜 des-A1 C125S 또는 des-A1 C125A와 같은 돌연변이체를 생성시킬 수 있다. 선택적으로 또는 공동으로, 상기 IL-2 돌연변이체는 야생형 인간 IL-2의 104번 위치에 통상적으로 존재하는 메티오닌이 알라닌과 같은 중성 아미노산에 의해 교체된 돌연변이를 포함할 수 있다(미국특허 제 5,206,344 호를 참조하시오). 상기 생성되는 돌연변이체, 예를 들어 des-A1 M104A IL-2, des-A1 M104A C125S IL-2, M104A IL-2, M104A C125A IL-2, des-A1 M104A C125A IL-2, 또는 M104A C125S IL-2(이들 및 다른 돌연변이체들을 미국특허 제 5,116,943 호 및 문헌[Weiger et al., Eur J Biochem 180, 295-300 (1989)]에서 찾을 수 있다)를 본 명세서에 기재된 특정한 IL-2 돌연변이와 함께 사용할 수 있다.
따라서, 몇몇 실시태양에서 상기 IL-2 또는 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 인간 IL-2의 125 잔기에 상응하는 위치에 추가적인 아미노산 돌연변이를 포함한다. 하나의 실시태양에서 상기 추가적인 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환 C125A이다. 몇몇 실시태양에서 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 필수적으로 완전길이 IL-2 분자, 특히 인간 완전길이 IL-2 분자이다. 하나의 실시태양에서, 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 12의 서열과 적어도 80%, 적어도 85% 또는 적어도 90% 일치하는 폴리펩타이드 서열을 포함한다.
구체적인 실시태양에서 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드는 서열번호 13의 폴리펩타이드 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다. 특정한 면역접합체는 WO 2012/107417 및 WO 2012/146628(각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 CEA에 특이적으로 결합하는 항체, 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 완전길이 항체이다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CEA에 특이적으로 결합하고 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 IgG1 하위부류의 항체; 및
(ii) 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 대한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드
를 포함하는 면역접합체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 FAP에 특이적으로 결합하는 항체, 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 완전길이 항체이다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) FAP에 특이적으로 결합하고 서열번호 25의 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 26의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 IgG1 하위부류의 항체; 및
(ii) 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 대한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드
를 포함하는 면역접합체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 하나 이하의 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드를 임의로 링커 펩타이드를 통해 상기 항체 중쇄 중 하나의 카복시-말단 아미노산에 융합시킨다. 적합한, 비-면역원성 링커 펩타이드는 예를 들어 (G4S)n, (SG4)n 또는 G4(SG4)n 링커 펩타이드를 포함하며, 여기에서 n은 일반적으로 1 내지 10, 전형적으로 2 내지 4의 수이다. 하나의 실시태양에서, 상기 링커 펩타이드는 (G4S)3이다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 서열번호 22의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 23의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 24의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 서열번호 22의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 23의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 24의 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 세르구투주맵 아무날류킨이다(문헌[WHO Drug Information (International Nonproprietary Names for Pharmaceutical Substances), Recommended INN: List　75, 2016, pre-publication copy"](내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오).
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 서열번호 27의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 28의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 29의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 면역접합체는 서열번호 27의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 28의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 29의 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 이중특이성 항체를 포함한다. 특정한 이중특이성 항체는 PCT 공보 WO 2013/026833 및 WO 2014/131712 및 PCT 출원 PCT/EP2016/073171(각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 CEA에 특이적으로 결합하는 항체, 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 CD3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항체, 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 CEA에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 제1 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자이고, 상기 제2 및 제1 항체는 각각 통상적인 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 항체 포맷을 가질 수 있으며 본 명세서에 기재된 항원 결합 부분을 포함할 수 있다. 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 영역 및/또는 항원 결합 부분 중의 변형 을 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고, 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제1 항원 결합 부분(여기에서 상기 제1 항원 결합 부분은 크로스오버 Fab 분자이고, 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 또는 불변 영역, 특히 불변 영역이 교환된다);
(ii) CEA에 특이적으로 결합하고, 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 및 제3 항원 결합 부분(여기에서 상기 제2 및 제3 항원 결합 부분은 각각 Fab 분자, 특히 통상적인 Fab 분자이다);
(iii) 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함하며, 여기에서
상기 제2 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 항원 결합 부분의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제1 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부분은 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 부분은 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항원 결합 부분 및 Fc 영역은 펩타이드 링커, 특히 서열번호 42 및 서열번호 43에서와 같은 펩타이드 링커에 의해 서로에 융합된다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 40의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 41의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 42의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 43의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 40의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 41의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 42의 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및 서열번호 43의 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. (CEA TCB)
하나의 실시태양에서 상기 치료학적 항체는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고, 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제1 항원 결합 부분(여기에서 상기 제1 항원 결합 부분은 크로스오버 Fab 분자이고, 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 또는 불변 영역, 특히 가변 영역이 교환된다);
(ii) CEA에 특이적으로 결합하고, 서열번호 136의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 137의 HCDR2, 및 서열번호 138의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 139의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 140의 LCDR2 및 서열번호 141의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 및 제3 항원 결합 부분(여기에서 상기 제2 및 제3 항원 결합 부분은 각각 Fab 분자, 특히 통상적인 Fab 분자이다);
(iii) 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함하며, 여기에서
상기 제2 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 항원 결합 부분의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제1 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 항원 결합 부분은 상기 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부분은 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 부분은 서열번호 142의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 143의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 항원 결합 부분 및 Fc 영역은 펩타이드 링커, 특히 서열번호 145 및 서열번호 146에서와 같은 펩타이드 링커에 의해 서로에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 (ii) 하의 제2 및 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고, 123번 위치의 아미노산은 리신(K) 또는 아르기닌(R), 특히 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되며, 상기 (ii) 하의 제2 및 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환된다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 144의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 145의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 146의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 147의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 144의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 145의 서열을 포함하는 폴리펩타이드, 서열번호 146의 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및 서열번호 147의 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.
(ii) 사이토킨 방출의 감소
하기에 기재된 치료제는 본 발명에, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에 특히 유리하다.
개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 태양은 개체에서 T-세포를 활성화하는, 즉 상기 개체에서 T-세포 활성화를 유도하는 능력을 갖는 치료제(T 세포 활성화 치료제)와 관련하여 특히 유용하다. 상기와 같은 치료제는 예를 들어 T-세포 항원에 대한(특히 T-세포 항원을 활성화하는) 항체, 또는 키메릭 항원 수용체(CAR) 또는 재조합 T-세포 수용체(TCR)로 변형된 T-세포를 포함한다. 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 태양은 B-세포 표적화된 T-세포 활성화 치료제와 관련하여 특히 유용하다.
일부 실시태양에서, 상기 치료제는 CD3, 특히 CD3 입실론에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 38의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 120의 중쇄 HVR1(H1-HVR), 서열번호 121의 H2-HVR, 및 서열번호 122의 H3-HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 123의 경쇄 HVR1(L1-HVR), 서열번호 124의 L2-HVR 및 서열번호 125의 L3-HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 126의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 127의 서열에 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 추가의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 126의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 127의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 완전길이 항체이다. 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 IgG 부류의 항체, 특히 인간 IgG1 부류의 항체이다. 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 항체 단편, 특히 Fab 분자 또는 scFv 분자, 보다 특히 Fab 분자이다. 특정한 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 크로스오버 Fab 분자이며, 여기에서 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 불변 도메인은 교환된다(즉 서로 교체된다). 하나의 실시태양에서, CD3에 특이적으로 결합하는 항체는 인간화된 항체이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는 다중특이성 항체, 특히 이중특이성 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 다중특이성 항체는 (i) 활성화 T 세포 항원 및 (ii) B 세포 항원에 특이적으로 결합한다. 특정한 이중특이성 항체는 PCT 공보 WO 2016/020309 및 PCT 출원 PCT/EP2016/073041, 뿐만 아니라 PCT 공보 WO 2015/095392(각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 CD3 및 CD20에 특이적으로 결합한다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부분, 및 CD20에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 부분을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 제1 항원 결합 부분은 크로스오버 Fab 분자이고, 상기 제2 및 제1 항원 결합 부분은 각각 통상적인 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 항체 포맷을 가질 수 있으며 본 명세서에 기재된 항원 결합 부분을 포함할 수 있다. 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 영역 및/또는 항원 결합 부분 중의 변형을 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열; 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 치료제는
a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자;
b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제 2 Fab 분자로, 여기에서 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH가 서로에 의해 교체되고;
c) 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자; 및
d) 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함하며; 여기에서
(i) 상기 제1 항원은 CD20이고 상기 제2 항원은 CD3, 특히 CD3 입실론이며;
(ii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 4의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 5의 중쇄 CDR2, 서열번호 6의 중쇄 CDR3, 서열번호 7의 경쇄 CDR1, 서열번호 8의 경쇄 CDR2 및 서열번호 9의 경쇄 CDR3을 포함하고; 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 32의 중쇄 CDR1, 서열번호 33의 중쇄 CDR2, 서열번호 34의 중쇄 CDR3, 서열번호 35의 경쇄 CDR1, 서열번호 36의 경쇄 CDR2 및 서열번호 37의 경쇄 CDR3을 포함하며;
(iii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고, 123번 위치의 아미노산은 리신(K) 또는 아르기닌(R), 특히 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되며, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되며;
(iv) 상기 a)하의 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 b)하의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 b)하의 제2 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단들에서 상기 d)하의 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 10의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 10의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
더욱 추가의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 44의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 45의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 46의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 47의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드를 포함한다. 추가의 특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 44의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 45의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 46의 폴리펩타이드 서열, 및 서열번호 47의 폴리펩타이드 서열을 포함한다. (CD20XCD3 bsAB).
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 120의 중쇄 HVR 1(H1-HVR) 1, 서열번호 121의 H2-HVR, 및 서열번호 122의 H3-HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 123의 경쇄 HVR 1(L1-HVR), 서열번호 124의 L2-HVR 및 서열번호 125의 L3-HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 128의 중쇄 HVR 1(H1-HVR) 1, 서열번호 129의 H2-HVR, 및 서열번호 130의 H3-HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 131의 경쇄 HVR 1(L1-HVR), 서열번호 132의 L2-HVR 및 서열번호 133의 L3-HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 126의 중쇄 가변 영역 서열; 및 서열번호 127의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하고 서열번호 134의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 135의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원 결합 부분, 및 CD19에 특이적으로 결합하는 제2 및 제3 항원 결합 부분을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 제1 항원 결합 부분은 크로스오버 Fab 분자이고, 상기 제2 및 제1 항원 결합 분자는 각각 통상적인 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 상기 이중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 영역 및/또는 항원 결합 부분 중의 변형을 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고, 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
(ii) CD19에 특이적으로 결합하고, 서열번호 48의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 49의 HCDR2, 및 서열번호 50의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 51의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 52의 LCDR2 및 서열번호 53의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD19에 특이적으로 결합하고 서열번호 54의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 55의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 치료제는
a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자;
b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제 2 Fab 분자로, 여기에서 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH가 서로에 의해 교체되고;
c) 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자; 및
d) 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함하며; 여기에서
(i) 상기 제1 항원은 CD19이고 상기 제2 항원은 CD3, 특히 CD3 입실론이며;
(ii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 48의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 49의 중쇄 CDR2, 서열번호 50의 중쇄 CDR3, 서열번호 51의 경쇄 CDR1, 서열번호 52의 경쇄 CDR2 및 서열번호 53의 경쇄 CDR3을 포함하고; 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 32의 중쇄 CDR1, 서열번호 33의 중쇄 CDR2, 서열번호 34의 중쇄 CDR3, 서열번호 35의 경쇄 CDR1, 서열번호 36의 경쇄 CDR2 및 서열번호 37의 경쇄 CDR3을 포함하며;
(iii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고, 123번 위치의 아미노산은 리신(K) 또는 아르기닌(R), 특히 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되며, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되며;
(iv) 상기 a)하의 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 b)하의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 b)하의 제2 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단들에서 상기 d)하의 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 54의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 55의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 54의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 55의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 47의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 56의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 57의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 58의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드를 포함한다. 추가의 특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 47의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 56의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 57의 폴리펩타이드 서열, 및 서열번호 58의 폴리펩타이드 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD19에 특이적으로 결합하고, 서열번호 59의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 60의 HCDR2, 및 서열번호 61의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 62의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 63의 LCDR2 및 서열번호 64의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제는
(i) CD3에 특이적으로 결합하고 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분; 및
(ii) CD19에 특이적으로 결합하고 서열번호 65의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 66의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원 결합 부분
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 치료제는
a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자;
b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제 2 Fab 분자로, 여기에서 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH가 서로에 의해 교체되고;
c) 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자; 및
d) 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인
을 포함하는 이중특이성 항체를 포함하며; 여기에서
(i) 상기 제1 항원은 CD19이고 상기 제2 항원은 CD3, 특히 CD3 입실론이며;
(ii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 59의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 60의 중쇄 CDR2, 서열번호 61의 중쇄 CDR3, 서열번호 62의 경쇄 CDR1, 서열번호 63의 경쇄 CDR2 및 서열번호 64의 경쇄 CDR3을 포함하고; 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 32의 중쇄 CDR1, 서열번호 33의 중쇄 CDR2, 서열번호 34의 중쇄 CDR3, 서열번호 35의 경쇄 CDR1, 서열번호 36의 경쇄 CDR2 및 서열번호 37의 경쇄 CDR3을 포함하며;
(iii) 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고, 123번 위치의 아미노산은 리신(K) 또는 아르기닌(R), 특히 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되며, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되며;
(iv) 상기 a)하의 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 b)하의 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 b)하의 제2 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단들에서 상기 d)하의 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합된다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 65의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 66의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자 및 상기 c)하의 제3 Fab 분자는 각각 서열번호 65의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 66의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
더욱 추가의 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 47의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 148의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 서열번호 149의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드, 및 서열번호 150의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 폴리펩타이드를 포함한다. 추가의 특정한 실시태양에서, 상기 이중특이성 항체는 서열번호 47의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 148의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 149의 폴리펩타이드 서열, 및 서열번호 150의 폴리펩타이드 서열을 포함한다.
항체 포맷
치료제 중에 포함된 항체, 특히 다중특이성 항체의 성분들을 다양한 배열로 서로 융합시킬 수 있다. 예시적인 배열을 도 6에 묘사한다.
특정한 실시태양에서, 상기 항체 중에 포함된 항원 결합 부분은 Fab 분자이다. 상기와 같은 실시태양에서, 제1, 제2, 제3 등의 항원 결합 부분을 본 명세서에서 각각 제1, 제2, 제3 등의 Fab 분자라 칭할 수 있다. 더욱 또한, 특정한 실시태양에서, 상기 항체는 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성되는 Fc 도메인을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6G 및 6K에 도식적으로 묘사된다. 임의로, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 서로 추가로 융합될 수도 있다.
또 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제 1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 구체적인 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 및 제2 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6A 및 6D에 도식적으로 묘사된다. 상기 제1 및 제2 Fab 분자는 직접 또는 펩타이드 링커를 통해 상기 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 특정한 실시태양에서 상기 제1 및 제2 Fab 분자는 각각 면역글로불린 힌지 영역을 통해 상기 Fc 도메인에 융합된다. 구체적인 실시태양에서, 상기 면역글로불린 힌지 영역은, 특히 상기 Fc 도메인이 IgG1 Fc 도메인인 경우, 인간 IgG1 힌지 영역이다.
다른 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1 및 제2 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6H 및 6L에 도식적으로 묘사된다. 임의로, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 서로에 추가로 융합될 수도 있다.
상기 Fab 분자는 직접 또는 하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 2 내지 20 아미노산을 포함하는 펩타이드 링커를 통해 Fc 도메인에 또는 서로에 융합될 수 있다. 펩타이드 링커는 당해 분야에 공지되어 있으며 본 명세서에 기재되어 있다. 적합하게, 비-면역원성 펩타이드 링커는 예를 들어 (G4S)n, (SG4)n, (G4S)n 또는 G4(SG4)n 펩타이드 링커를 포함한다. "n"은 일반적으로 1 내지 10, 전형적으로 2 내지 4의 정수이다. 하나의 실시태양에서 상기 펩타이드 링커는 적어도 5 아미노산의 길이, 하나의 실시태양에서 5 내지 100의 길이, 추가의 실시태양에서 10 내지 50 아미노산의 길이를 갖는다. 하나의 실시태양에서 상기 펩타이드 링커는 (GxS)n 또는 (GxS)nGm 이며, 이때 G=글리신, S=세린, 및 (x=3, n= 3, 4, 5 또는 6, 및 m=0, 1, 2 또는 3) 또는 (x=4, n=2, 3, 4 또는 5 및 m= 0, 1, 2 또는 3)이고, 하나의 실시태양에서 x=4 및 n=2 또는 3이고, 추가의 실시태양에서 X=4 및 n=2이다. 하나의 실시태양에서 상기 펩타이드 링커는 (G4S)2이다. 상기 제1 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄들을 서로 융합시키기에 특히 적합한 펩타이드 링커는 (G4S)2이다. 상기 제1 및 제2 Fab 단편의 Fab 중쇄들을 결합시키기에 적합한 예시적인 펩타이드 링커는 서열 (D)-(G4S)2(서열번호 118 및 119)를 포함한다. 또 다른 적합한 상기와 같은 링커는 서열 (G4S)4를 포함한다. 추가로, 링커들은 면역글로불린 힌지 영역(의 일부)을 포함할 수 있다. 특히 Fab 분자가 Fc 도메인 서브유닛의 N-말단에 융합되는 경우, 상기는 추가적인 펩타이드 링커와 함께 또는 상기 링커 없이 면역글로불린 힌지 영역 또는 그의 일부를 통해 융합될 수 있다.
표적 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단일 항원 결합 부분(예를 들어 Fab 분자)을 갖는 항체(예를 들어 도 6A, D, G, H, K, L에 도시된 바와 같은)가 특히, 상기 표적 세포 항원의 내면화가 고 친화성 항원 결합 부분의 결합에 이어서 예상되는 경우에 유용하다. 상기와 같은 경우에, 상기 표적 세포 항원에 특이적인 하나 초과의 항원 결합 부분의 존재가 상기 표적 세포 항원의 내면화를 증대시킬 수 있으며, 이에 의해 그의 유용성을 감소시킬 수 있다.
그러나, 다수의 다른 경우에, 예를 들어 표적 부위에 대한 표적화를 최적화하거나 또는 표적 세포 항원의 가교결합을 허용하기 위해서 표적 세포 항원에 특이적인 2개 이상의 항원 결합 부분(예를 들어 Fab 분자)을 포함하는 항체(도 6B, 6C, 6E, 6F, 6I, 6J, 6M 또는 6N에 도시된 예들을 참조하시오)를 갖는 것이 유리할 것이다.
따라서, 특정한 실시태양에서, 상기 항체는 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함한다. 상기 제1 항원은 바람직하게는 표적 세포 항원이다. 하나의 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적인 Fab 분자이다. 하나의 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 제1 Fab 분자와 동일하다(즉 상기 제1 및 제3 Fab 분자는 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하고 동일한 도메인들의 배열(즉 통상적인 또는 크로스오버)을 갖는다). 특정한 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 특이적으로 결합하고, 상기 제1 및 제3 Fab 분자는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
선택적인 실시태양에서, 상기 항체는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함한다. 이들 실시태양에서, 상기 제2 항원은 바람직하게는 표적 세포 항원이다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 크로스오버 Fab 분자(Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CL 및 CH1이 서로에 의해 교환/교체되는 Fab 분자)이다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 제2 Fab 분자와 동일하다(즉 상기 제2 및 제3 Fab 분자는 동일한 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하고 동일한 도메인들의 배열(즉 통상적인 또는 크로스오버)을 갖는다). 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 특이적으로 결합하고, 상기 제2 및 제3 Fab 분자는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합한다.
하나의 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 또는 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다.
특정한 실시태양에서, 상기 제2 및 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합되고, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6B 및 6E(상기 제3 Fab 분자가 통상적인 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제1 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양) 및 도 6I 및 6M(상기 제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제2 Fab 분자와 일치하는 선택적인 실시태양)에 도식적으로 묘사된다. 상기 제2 및 제3 Fab 분자는 직접 또는 펩타이드 링커를 통해 상기 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 특정한 실시태양에서 상기 제2 및 제3 Fab 분자는 각각 면역글로불린 힌지 영역을 통해 상기 Fc 도메인에 융합된다. 구체적인 실시태양에서, 상기 면역글로불린 힌지 영역은, 특히 상기 Fc 도메인이 IgG1 Fc 도메인인 경우에, 인간 IgG1 힌지 영역이다. 임의로, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 서로에 추가로 융합될 수도 있다.
또 다른 실시태양에서, 상기 제1 및 제3 Fab 분자는 각각 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 서브유닛들 중 하나의 N-말단에 융합되고, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 구체적인 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6C 및 6F(상기 제3 Fab 분자가 통상적인 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제1 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양) 및 도 6J 및 6N(상기 제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제2 Fab 분자와 일치하는 선택적인 실시태양)에 도식적으로 묘사된다. 상기 제1 및 제3 Fab 분자는 직접 또는 펩타이드 링커를 통해 상기 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 특정한 실시태양에서 상기 제1 및 제3 Fab 분자는 각각 면역글로불린 힌지 영역을 통해 상기 Fc 도메인에 융합된다. 구체적인 실시태양에서, 상기 면역글로불린 힌지 영역은, 특히 상기 Fc 도메인이 IgG1 Fc 도메인인 경우에, 인간 IgG1 힌지 영역이다. 임의로, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 서로에 추가로 융합될 수도 있다.
Fab 분자가 Fab 중쇄의 C-말단에서 면역글로불린 힌지 영역을 통해 상기 Fc 도메인의 각각의 서브유닛의 N-말단에 융합되는 항체의 배열에서, 2개의 Fab 분자, 힌지 영역 및 Fc 도메인은 면역글로불린 분자를 필수적으로 형성한다. 특정한 실시태양에서, 상기 면역글로불린 분자는 IgG 부류 면역글로불린이다. 훨씬 더 특정한 실시태양에서 상기 면역글로불린은 IgG1 하위부류 면역글로불린이다. 또 다른 실시태양에서 상기 면역글로불린은 IgG4 하위부류 면역글로불린이다. 추가의 특정한 실시태양에서 상기 면역글로불린은 인간 면역글로불린이다. 다른 실시태양에서 상기 면역글로불린은 키메릭 면역글로불린 또는 인간화된 면역글로불린이다.
상기 항체들 중 일부에서, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 및 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 임의로 펩타이드 링커를 통해 서로에 융합된다. 상기 제1 및 제2 Fab 분자의 배열에 따라, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄는 그의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄의 N-말단에 융합되거나, 또는 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄는 그의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄의 N-말단에 융합될 수 있다. 상기 제1 및 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄들의 융합은 합치되지 않은 Fab 중쇄 및 경쇄의 잘못짝짓기를 추가로 감소시키며, 또한 상기 항체들 중 일부의 발현에 필요한 플라스미드의 수를 감소시킨다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)-CH2-CH3(-CH4)), 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 몇몇 실시태양에서 상기 폴리펩타이드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)-CH2-CH3(-CH4)), 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 몇몇 실시태양에서 상기 폴리펩타이드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시태양에서, 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 항체는 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역이 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다.
이들 실시태양의 일부에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 크로스오버 Fab 경쇄 폴리펩타이드(여기에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유한다)(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 이들 실시태양의 다른 경우에서 상기 항체는 적합한 대로, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)-VL(1)-CL(1)), 또는 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1)-VH(2)-CL(2))를 추가로 포함한다.
이들 실시태양에 따른 항체는 (i) Fc 도메인 서브유닛 폴리펩타이드(CH2-CH3(-CH4)), 또는 (ii) 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(3)-CH1(3)-CH2-CH3(-CH4)) 및 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함할 수 있다. 몇몇 실시태양에서 상기 폴리펩타이드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시태양에서, 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 항체는, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하며, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역이 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드를 포함한다(VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2)-CH2-CH3(-CH4))를 포함한다.
이들 실시태양의 일부에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 크로스오버 Fab 경쇄 폴리펩타이드(여기에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유한다)(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 이들 실시태양의 다른 경우에서 상기 항체는 적합한 대로, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)-VL(1)-CL(1)), 또는 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1)-VH(2)-CL(2))를 추가로 포함한다.
이들 실시태양에 따른 항체는 (i) Fc 도메인 서브유닛 폴리펩타이드(CH2-CH3(-CH4)), 또는 (ii) 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 Fc 도메인 서브유닛과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(3)-CH1(3)-CH2-CH3(-CH4)) 및 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함할 수 있다. 몇몇 실시태양에서 상기 폴리펩타이드는 예를 들어 다이설파이드 결합에 의해 공유 결합된다.
일부 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 Fc 도메인을 포함하지 않는다. 몇몇 실시태양에서, 상기 항체는 상기 제1 및 제2 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6O 및 6S에 도식적으로 묘사된다.
다른 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 Fc 도메인을 포함하지 않는다. 몇몇 실시태양에서, 상기 항체는 상기 제1 및 제2 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6P 및 6T에 도식적으로 묘사된다.
일부 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하며, 여기에서 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적인 Fab 분자이다. 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CL 및 CH1이 서로에 의해 교환/교체되는 Fab 분자이다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6Q 및 6U(상기 제3 Fab 분자가 통상적인 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제1 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양)에 도식적으로 묘사된다.
일부 실시태양에서, 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하며, 여기에서 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체되는 Fab 분자이다. 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적인 Fab 분자이다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제1 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6W 및 6Y(상기 제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제2 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양)에 도식적으로 묘사된다.
일부 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하며, 여기에서 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적인 Fab 분자이다. 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체되는 Fab 분자이다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 N-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 C-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6R 및 6V(상기 제3 Fab 분자가 통상적인 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제1 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양)에 도식적으로 묘사된다.
일부 실시태양에서, 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 항체는 제3 Fab 분자를 추가로 포함하며, 여기에서 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체되는 Fab 분자이다. 다른 상기와 같은 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 통상적인 Fab 분자이다. 몇몇 상기와 같은 실시태양에서, 상기 항체는 제1, 제2 및 제3 Fab 분자, 및 임의로 하나 이상의 펩타이드 링커로 필수적으로 이루어지며, 여기에서 상기 제2 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합되고, 상기 제3 Fab 분자는 Fab 중쇄의 C-말단에서 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄의 N-말단에 융합된다. 상기와 같은 배열은 도 6X 및 6Z(상기 제3 Fab 분자가 크로스오버 Fab 분자이고 바람직하게는 상기 제1 Fab 분자와 일치하는 특정한 실시태양)에 도식적으로 묘사된다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다)(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다)(VH(3)-CH1(3)-VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다)(VH(3)-CH1(3)-VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1)-VH(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1)-VH(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다)(VH(1)-CH1(1)-VL(2)-CH1(2)-VL(3)-CH1(3))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄가 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다)(VH(1)-CH1(1)-VH(2)-CL(2)-VH(3)-CL(3))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(3)-CH1(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제3 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 가변 영역은 경쇄 가변 영역에 의해 교체된다), 차례로 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(3)-CH1(3)-VL(2)-CH1(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(2)-CL(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(3)-CL(3))를 추가로 포함한다.
몇몇 실시태양에서 상기 항체는, 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제3 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 가변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고, 차례로 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하고(즉 상기 제2 Fab 분자는 크로스오버 Fab 중쇄를 포함하고, 여기에서 상기 중쇄 불변 영역은 경쇄 불변 영역에 의해 교체된다), 차례로 제1 Fab 분자의 Fab 중쇄와 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VH(3)-CL(3)-VH(2)-CL(2)-VH(1)-CH1(1))를 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는, 상기 제2 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 상기 제2 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(2)-CH1(2)) 및 상기 제1 Fab 분자의 Fab 경쇄 폴리펩타이드(VL(1)-CL(1))를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 항체는 제3 Fab 분자의 Fab 경쇄 가변 영역이 제3 Fab 분자의 Fab 중쇄 불변 영역과 카복시-말단 펩타이드 결합을 공유하는 폴리펩타이드(VL(3)-CH1(3))를 추가로 포함한다.
상기 실시태양들 중 어느 하나에 따라, 상기 항체의 성분들(예를 들어 Fab 분자, Fc 도메인)을 직접 또는 본 명세서에 기재되거나 당해 분야에 공지된 다양한 링커, 특히 하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 2 내지 20 아미노산을 포함하는 펩타이드 링커를 통해 융합시킬 수 있다. 적합한, 비-면역원성 펩타이드 링커는 예를 들어 (G4S)n, (SG4)n, (G4S)n 또는 G4(SG4)n 펩타이드 링커를 포함하며, 여기에서 n은 일반적으로 1 내지 10, 전형적으로 2 내지 4의 정수이다.
Fc 도메인
상기 치료제 중에 포함된 항체, 예를 들어 이중특이성 항체 또는 면역접합체는 항체 분자의 중쇄 도메인을 포함하는 한 쌍의 폴리펩타이 쇄로 이루어지는 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 도메인은 이량체이며, 이들의 각 서브유닛은 CH2 및 CH3 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛은 서로 안정한 회합이 가능하다.
하나의 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 IgG Fc 도메인이다. 특정한 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인이다. 또 다른 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인이다. 보다 구체적인 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 S228번 위치(카밧 넘버링)에 아미노산 치환, 특히 아미노산 치환 S228P를 포함하는 IgG4 Fc 도메인이다. 상기 아미노산 치환은 IgG4 항체의 생체내 Fab 가지 교환을 감소시킨다(문헌[Stubenrauch et al., Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010)]을 참조하시오). 추가의 특정한 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 인간이다. 인간 IgG1 Fc 영역의 예시적인 서열을 서열번호 30에 제공한다.
(i) 이종이량체화를 촉진하는 Fc 도메인 변형
상기 치료제 중에 포함된 항체, 특히 이중특이성 항체 또는 면역접합체는 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 하나 또는 다른 하나에 융합된 상이한 성분들(예를 들어 항원 결합 도메인, 사이토킨)을 포함할 수 있으며, 따라서 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛은 2개의 일치하지 않는 폴리펩타이드 쇄 중에 포함된다. 이들 폴리펩타이드의 재조합 동시-발현 및 후속적인 이량체화는 상기 2개 폴리펩타이드의 다수의 가능한 조합들을 도출한다. 재조합 생성에서 상기와 같은 항체의 수율 및 순도를 개선시키기 위해서, 상기 항체의 Fc 도메인에 목적하는 폴리펩타이드의 회합을 촉진하는 변형을 도입시키는 것이 유리할 것이다.
따라서, 특정한 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 상기 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형을 포함한다. 인간 IgG Fc 도메인의 2개 서브유닛간의 가장 광범위한 단백질-단백질 상호작용의 부위는 상기 Fc 도메인의 CH3 도메인 중에 있다. 따라서, 하나의 실시태양에서 상기 변형은 상기 Fc 도메인의 CH3 도메인 중에 있다.
이종이량체화를 실행하기 위한 상기 Fc 도메인의 CH3 도메인에서의 변형에 대해 다수의 접근법들이 존재하며, 이들은 예를 들어 WO　96/27011, WO　98/050431, EP　1870459, WO　2007/110205, WO　2007/147901, WO　2009/089004, WO　2010/129304, WO　2011/90754, WO　2011/143545, WO　2012058768, WO　2013157954, WO　2013096291에 충분히 기재되어 있다. 전형적으로, 모든 상기와 같은 접근법들에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인 및 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인을 모두, 각각의 CH3 도메인(또는 상기를 포함하는 중쇄)이 자신과 더 이상 동종이량체화할 수 없고 상보적으로 조작된 다른 CH3 도메인과 강제로 이종이량체화하도록(따라서 상기 제1 및 제2 CH3 도메인이 이종이량체화하고 상기 2개의 제1 또는 2개의 제2 CH3 도메인들간에 동종이량체화는 형성되지 않도록) 상보적인 방식으로 조작한다. 개선된 중쇄 이종이량체화를 위한 이들 상이한 접근법들을, 경쇄 잘못짝짓기 및 벤스 존스-유형 부 생성물을 감소시키는 중-경쇄 변형(예를 들어 Fab 가지에서 가변 또는 불변 영역 교환/교체 또는 CH1/CL 접촉면에 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산 치환의 도입)과 함께, 상이한 대안으로서 고려한다.
구체적인 실시태양에서 상기 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 상기 변형은 소위 "구멍에 손잡이" 변형이며, 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 중 하나에 "손잡이" 변형을 포함하고 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛의 다른 하나에 "구멍" 변형을 포함한다.
상기 구멍에 손잡이 기술은 예를 들어 미국특허 제 5,731,168 호; 미국특허 제 7,695,936 호; 문헌[Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621 (1996)] 및 문헌[Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)]에 기재되어 있다. 일반적으로, 상기 방법은 돌기가 이종이량체 형성을 촉진하고 동종이량체 형성을 방해하도록 공동 중에 위치할 수 있게 제1 폴리펩타이드의 접촉면에 상기 돌기("손잡이")를 도입시키고 제2 폴리펩타이드의 접촉면에 상응하는 공동("구멍")을 도입시킴을 수반한다. 돌기는 상기 제1 폴리펩타이드의 접촉면으로부터 작은 아미노산 측쇄를 보다 큰 측쇄(예를 들어 타이로신 또는 트립토판)로 교체시킴으로써 구성된다. 상기 돌기와 동일하거나 유사한 크기의 보상의 공동을, 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것(예를 들어 알라닌 또는 쓰레오닌)으로 교체시킴으로써 상기 제2 폴리펩타이드의 접촉면에 생성시킨다.
따라서, 특정한 실시태양에서, 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기를 보다 큰 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기로 교체시키고, 이에 의해 상기 제1 서브유닛의 CH3 도메인내에 상기 제2 서브유닛의 CH3 도메인내의 공동에 위치할 수 있는 돌기를 생성시키고 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 잔기를 보다 작은 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기로 교체시키고, 이에 의해 상기 제2 서브유닛의 CH3 도메인내에 상기 제1 서브유닛의 CH3 도메인내의 돌기가 위치할 수 있는 공동을 생성시킨다.
바람직하게 상기 보다 큰 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기는 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 타이로신(Y) 및 트립토판(W)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
바람직하게 상기 보다 작은 측쇄 부피를 갖는 아미노산 잔기는 알라닌(A), 세린(S), 쓰레오닌(T) 및 발린(V)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
상기 돌기 및 공동을, 예를 들어 부위-특이적인 돌연변이유발에 의해서 또는 펩타이드 합성에 의해서 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 변경시킴으로써 만들 수 있다.
구체적인 실시태양에서, 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛("손잡이" 서브유닛)의 CH3 도메인에서 366번 위치의 쓰레오닌 잔기를 트립토판 잔기로 교체시키고(T366W), 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛("구멍" 서브유닛)의 CH3 도메인에서 407번 위치의 타이로신 잔기를 발린 잔기로 교체시킨다(Y407V). 하나의 실시태양에서, 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛에서 추가로 366번 위치의 쓰레오닌 잔기를 세린 잔기로 교체시키고(T366S), 368번 위치의 류신 잔기를 알라닌 잔기로 교체시킨다(L368A)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링).
더욱 추가의 실시태양에서, 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛에서 추가로 354번 위치의 세린 잔기를 시스테인 잔기로 교체시키거나(S354C), 또는 356번 위치의 글루탐산 잔기를 시스테인 잔기로 교체시키고(E356C), 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛에서 추가로 349번 위치의 타이로신 잔기를 시스테인 잔기로 교체시킨다(Y349C)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링). 이들 두 시스테인 잔기의 도입은 상기 Fc 도메인의 2개 서브유닛 사이에 다이설파이드 가교를 형성시켜 상기 이량체를 추가로 안정화시킨다(문헌[Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001)]).
특정한 실시태양에서, 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛은 아미노산 치환 S354C 및 T366W를 포함하고, 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛은 아미노산 치환 Y349C, T366S, L368A 및 Y407V(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
특정한 실시태양에서 본 명세서에 기재된 면역접합체 중의 돌연변이 IL-2 폴리펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 이중특이성 항체 중의 CD3 항원 결합 부분을 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛("손잡이" 변형을 포함하는)에 융합시킨다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 상기 Fc 도메인의 손잡이-함유 서브유닛에 대한 상기 IL-2 폴리펩타이드 또는 CD3 항원 결합 부분의 융합은 각각 2개의 IL-2 폴리펩타이드를 포함하는 면역접합체 또는 2개의 CD3 항원 결합 부분을 포함하는 이중특이성 항체의 생성(2개의 손잡이-함유 폴리펩타이드의 입체 충돌)을 (추가로) 최소화할 것이다.
상기 이종이량체화를 실행시키기 위한 CH3-변형의 다른 기법들은 본 발명에 따른 대안으로서 간주되며 예를 들어 WO　96/27011, WO　98/050431, EP　1870459, WO　2007/110205, WO　2007/147901, WO　2009/089004, WO　2010/129304, WO　2011/90754, WO　2011/143545, WO　2012/058768, WO　2013/157954, WO　2013/096291에 기재되어 있다.
하나의 실시태양에서 EP 1870459 A1에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다. 상기 접근법은 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 사이의 CH3/CH3 도메인 접촉면 중의 특정한 아미노산 위치에 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산의 도입을 기본으로 한다. 하나의 바람직한 실시태양은 아미노산 돌연변이 R409D; 상기 2개의 CH3 도메인(상기 Fc 도메인의) 중 하나에서 K370E 및 아미노산 돌연변이 D399K; 상기 Fc 도메인의 CH3 도메인 중 다른 하나에서 E357K(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)이다.
또 다른 실시태양에서 상기 항체는 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 T366W 및 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 T366S, L368A, Y407V, 및 추가로 아미노산 돌연변이 R409D; 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 K370E 및 아미노산 돌연변이 D399K; 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 E357K(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
또 다른 실시태양에서 상기 항체는 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 S354C, T366W 및 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 Y349C, T366S, L368A, Y407V를 포함하거나, 또는 상기 항체는 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 Y349C, T366W 및 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 아미노산 돌연변이 S354C, T366S, L368A, Y407V, 및 추가로 아미노산 돌연변이 R409D; 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛의 CH3 도메인에서 K370E 및 아미노산 돌연변이 D399K; 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛의 CH3 도메인에서 E357K(모두 카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
하나의 실시태양에서 WO 2013/157953에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다. 하나의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366K를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351D(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제1 CH3 도메인은 추가의 아미노산 돌연변이 L351K를 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제2 CH3 도메인은 Y349E, Y349D 및 L368E 중에서 선택된 추가의 아미노산 돌연변이(바람직하게는 L368E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
하나의 실시태양에서 WO 2012/058768에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다. 하나의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351Y, Y407A를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366A, K409F를 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제2 CH3 도메인은 T411, D399, S400, F405, N390, 또는 K392번 위치의 추가의 아미노산 돌연변이, 예를 들어 a) T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, T411E 또는 T411W, b) D399R, D399W, D399Y 또는 D399K, c) S400E, S400D, S400R, 또는 S400K, d) F405I, F405M, F405T, F405S, F405V 또는 F405W, e) N390R, N390K 또는 N390D, f) K392V, K392M, K392R, K392L, K392F 또는 K392E(카밧 EU 지수에 따른 넘버링) 중에서 선택된 돌연변이를 포함한다. 추가의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 L351Y, Y407V를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366V, K409F를 포함한다. 추가의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407A를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366A, K409F를 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 K392E, T411E, D399R 및 S400R(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)을 추가로 포함한다.
하나의 실시태양에서 WO 2011/143545에 기재된 이종이량체화 접근법을, 예를 들어 368 및 409(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 위치에서 아미노산 변형과 함께 선택적으로 사용한다.
하나의 실시태양에서 상술한 구멍에 손잡이 기술을 또한 사용하는 WO 2011/090762에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다. 하나의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366W를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407A를 포함한다. 하나의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 T366Y를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 Y407T를 포함한다(카밧 EU 지수에 따른 넘버링).
하나의 실시태양에서 상기 항체 또는 그의 Fc 도메인은 IgG2 하위부류의 것이고 WO 2010/129304에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다.
선택적인 실시태양에서 상기 Fc 도메인의 제1 및 제2 서브유닛의 회합을 촉진하는 변형은 예를 들어 PCT 공보 WO 2009/089004에 기재된 바와 같은 정전기적 스티어링 효과를 매개하는 변형을 포함한다. 일반적으로, 상기 방법은 동종이량체 형성이 정전기적으로 불리하지만 이종이량체화는 정전기적으로 유리하도록 하전된 아미노산 잔기에 의해 상기 2개의 Fc 도메인 서브유닛의 접촉면에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 교체시킴을 수반한다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 음으로 하전된 아미노산에 의한 K392 또는 N392의 아미노산 치환(예를 들어 글루탐산(E), 또는 아스파트산(D), 바람직하게는 K392D 또는 N392D)을 포함하고, 제2 CH3 도메인은 양으로 하전된 아미노산에 의한 D399, E356, D356 또는 E357의 아미노산 치환(예를 들어 리신(K) 또는 아르기닌(R), 바람직하게는 D399K, E356K, D356K, 또는 E357K, 및 보다 바람직하게는 D399K 및 E356K)을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제1 CH3 도메인은 음으로 하전된 아미노산에 의한 K409 또는 R409의 아미노산 치환(예를 들어 글루탐산(E), 또는 아스파트산(D)), 바람직하게는 K409D 또는 R409D)을 추가로 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 제1 CH3 도메인은 음으로 하전된 아미노산(예를 들어 글루탐산(E), 또는 아스파트산(D)에 의한 K439 및/또는 K370의 아미노산 치환을 추가로 또는 선택적으로 포함한다(모두 카밧 EU 지수에 따른 넘버링).
더욱 추가의 실시태양에서 WO 2007/147901에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용한다. 하나의 실시태양에서 제1 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 K253E, D282K 및 K322D를 포함하고 제2 CH3 도메인은 아미노산 돌연변이 D239K, E240K 및 K292D(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
더욱 또 다른 실시태양에서 WO 2007/110205에 기재된 이종이량체화 접근법을 선택적으로 사용할 수 있다.
하나의 실시태양에서 상기 Fc 도메인의 제1 서브유닛은 아미노산 치환 K392D 및 K409D를 포함하고, 상기 Fc 도메인의 제2 서브유닛은 아미노산 치환 D356K 및 D399K(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다.
(ii) Fc 수용체 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 Fc 도메인 변형
상기 Fc 도메인은 항체, 예를 들어 이중특이성 항체 또는 면역접합체에, 표적 조직 중 양호한 축적에 기여하는 긴 혈청 반감기를 포함한 유리한 약동학적 성질 및 유리한 조직-혈액 분배비를 부여한다. 그러나 상기는 동시에 바람직한 항원-함유 세포보다는 Fc 수용체를 발현하는 세포에 대한 상기 항체의 바람직하지 못한 표적화를 유도할 수도 있다. 더욱이, Fc 수용체 신호전달 경로의 공-활성화는 사이토킨 방출을 유도하고, 이는 상기 항체가 가질 수도 있는 다른 면역자극 성질 및 상기 항체의 긴 반감기와 함께, 전신 투여시 사이토킨 수용체의 과도한 활성화 및 심한 부작용을 생성시킨다.
따라서, 특정한 실시태양에서 상기 치료제 중에 포함된 항체, 특히 이중특이성 항체 또는 면역접합체의 Fc 도메인은 고유 IgG1 Fc 도메인에 비해, Fc 수용체의 감소된 결합 친화성 및/또는 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서 상기 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)은 고유 IgG1 Fc 도메인(또는 고유 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)에 비해 Fc 수용체에 대해 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만 및 가장 바람직하게는 5% 미만의 결합 친화성, 및/또는 고유 IgG1 Fc 도메인(또는 고유 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)에 비해 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 보다 바람직하게는 10% 미만 및 가장 바람직하게는 5% 미만의 효과기 기능을 나타낸다. 하나의 실시태양에서, 상기 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)은 Fc 수용체에 대해 실질적으로 결합하지 않고/않거나 효과기 기능을 유도하지 않는다. 특정한 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 인간 Fc 수용체이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 활성화 Fc 수용체이다. 특이적인 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 활성화 인간 Fcγ 수용체, 보다 구체적으로 인간 FcγRIIIa, FcγRI 또는 FcγRIIa, 가장 구체적으로 인간 FcγRIIIa이다. 하나의 실시태양에서 상기 효과기 기능은 CDC, ADCC, ADCP 및 사이토킨 분비의 그룹 중에서 선택된 하나 이상이다. 특정한 실시태양에서 상기 효과기 기능은 ADCC이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 고유 IgG1 Fc 도메인 도메인에 비해, 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 실질적으로 유사한 결합 친화성을 나타낸다. FcRn에의 실질적으로 유사한 결합은 상기 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)이 FcRn에 대해 약 70% 초과, 특히 약 80% 초과, 보다 특히 약 90% 초과의 고유 IgG1 Fc 도메인(또는 고유 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)의 결합 친화성을 나타낼 때 성취된다.
몇몇 실시태양에서 상기 Fc 도메인을, 조작되지 않은 Fc 도메인에 비해 Fc 수용체에 대해 감소된 결합 친화성 및/또는 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작한다. 특정한 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 Fc 수용체에 대한 상기 Fc 도메인의 결합 친화성 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다. 전형적으로, 동일한 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 상기 Fc 도메인의 2개의 서브유닛 각각에 존재한다. 하나의 실시태양에서 상기 아미노산 돌연변이는 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화성을 감소시킨다. 하나의 실시태양에서 상기 아미노산 돌연변이는 Fc 수용체에 대한 상기 Fc 도메인의 결합 친화성을 적어도 2배, 적어도 5배, 또는 적어도 10배까지 감소시킨다. 상기 Fc 수용체에 대한 상기 Fc 도메인의 결합 친화성을 감소시키는 하나 초과의 아미노산 돌연변이가 존재하는 실시태양에서, 이들 아미노산 돌연변이의 조합은 Fc 수용체에 대한 상기 Fc 도메인의 결합 친화성을 적어도 10배, 적어도 20배, 또는 심지어 적어도 50배까지 감소시킬 수 있다. 하나의 실시태양에서 조작된 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체는, 조작되지 않은 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자에 비해 20% 미만, 특히 10% 미만, 보다 특히 5% 미만의 Fc 수용체에 대한 결합 친화성을 나타낸다. 특정한 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 인간 Fc 수용체이다. 일부 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 활성화 Fc 수용체이다. 구체적인 실시태양에서 상기 Fc 수용체는 활성화 인간 Fcγ 수용체, 보다 구체적으로 인간 FcγRIIIa, FcγRI 또는 FcγRIIa, 가장 구체적으로 인간 FcγRIIIa이다. 바람직하게 이들 수용체 각각에 대한 결합이 감소된다. 일부 실시태양에서 보체 성분에 대한 결합 친화성, 구체적으로 C1q에 대한 결합 친화성이 또한 감소된다. 하나의 실시태양에서 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합 친화성은 감소되지 않는다. FcRn에의 실질적으로 유사한 결합, 즉 상기 수용체에의 상기 Fc 도메인의 결합 친화성의 보존은 상기 Fc 도메인(또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자, 예를 들어 항체)이, 상기 Fc 도메인의 조작되지 않은 형태(또는 상기 Fc 도메인의 조작되지 않은 형태를 포함하는 상응하는 분자)의 FcRn에의 결합 친화성의 약 70% 초과를 나타낼 때 성취된다. 상기 Fc 도메인, 또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)는 상기와 같은 친화성의 약 80% 초과 및 심지어 약 90% 초과를 나타낼 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 조작되지 않은 Fc 도메인에 비해 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작된다. 상기 감소된 효과기 기능은 비제한적으로 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 감소된 보체 의존적인 세포독성(CDC), 감소된 항체-의존적인 세포-매개된 세포독성(ADCC), 감소된 항체-의존적인 세포 식균작용(ADCP), 감소된 사이토킨 분비, 감소된 항원 제공 세포에 의한 면역 복합체-매개된 항원 흡수, 감소된 NK 세포에의 결합, 감소된 대식세포에의 결합, 감소된 단핵세포에의 결합, 감소된 다형핵 세포에의 결합, 감소된 세포사멸을 유도하는 직접적인 신호전달, 표적-결합된 항체의 감소된 가교결합, 감소된 수지상 세포 성숙화, 또는 감소된 T 세포 프라이밍. 하나의 실시태양에서, 상기 감소된 효과기 기능은 감소된 CDC, 감소된 ADCC, 감소된 ADCP 및 감소된 사이토킨 분비의 그룹 중에서 선택된 하나 이상이다. 특정한 실시태양에서 상기 감소된 효과기 기능은 감소된 ADCC이다. 하나의 실시태양에서 상기 감소된 ADCC는 조작되지 않은 Fc 도메인(또는 조작되지 않은 Fc 도메인을 포함하는 상응하는 분자)에 의해 유도된 ADCC의 20% 미만이다.
하나의 실시태양에서 Fc 수용체에 대한 Fc 도메인의 결합 친화성 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 E233, L234, L235, N297, P331 및 P329(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)의 그룹 중에서 선택된 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 보다 구체적인 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 L234, L235 및 P329(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)의 그룹 중에서 선택된 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A 및 L235A(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인, 특히 인간 IgG1 Fc 도메인이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 P329번 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 보다 구체적인 실시태양에서 상기 아미노산 치환은 P329A 또는 P329G, 특히 P329G(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 P329번 위치에 아미노산 치환 및 E233, L234, L235, N297 및 P331(카밧 EU 지수에 따른 넘버링) 중에서 선택된 위치에 추가의 아미노산 치환을 포함한다. 보다 구체적인 실시태양에서 상기 추가의 아미노산 치환은 E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D 또는 P331S이다. 특정한 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 P329, L234 및 L235(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)번 위치에 아미노산 치환을 포함한다. 보다 특정한 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 아미노산 돌연변이 L234A, L235A 및 P329G("P329G LALA")를 포함한다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 Fc 도메인은 IgG1 Fc 도메인, 특히 인간 IgG1 Fc 도메인이다. 상기 아미노산 치환의 "P329G LALA" 조합은 PCT 공보 WO 2012/130831(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재된 바와 같이, 인간 IgG1 Fc 도메인의 Fcγ 수용체(뿐만 아니라 보체) 결합을 완전히 없앤다. WO 2012/130831은 또한 상기와 같은 돌연변이 Fc 도메인의 제조 방법 및 Fc 수용체 결합 또는 효과기 기능과 같은 그의 성질의 측정 방법을 기재한다.
IgG4 항체는 IgG1 항체에 비해 Fc 수용체에 대해 감소된 결합 친화성 및 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 따라서, 일부 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인, 특히 인간 IgG4 Fc 도메인이다. 하나의 실시태양에서 상기 IgG4 Fc 도메인은 S228번 위치에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 S228P(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 하나의 실시태양에서 Fc 수용체에 대한 그의 결합 친화성 및/또는 그의 효과기 기능을 추가로 감소시키기 위해서, 상기 IgG4 Fc 도메인은 L235번 위치에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 L235E(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 또 다른 실시태양에서 상기 IgG4 Fc 도메인은 P329번 위치에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 P329G(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 IgG4 Fc 도메인은 S228, L235 및P329번 위치에서 아미노산 치환, 구체적으로 아미노산 치환 S228P, L235E 및 P329G(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함한다. 상기와 같은 IgG4 Fc 도메인 돌연변이 및 그들의 Fcγ 수용체 결합 성질은 PCT 공보 WO 2012/130831(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.
특정한 실시태양에서 고유 IgG1 Fc 도메인에 비해 Fc 수용체에 대해 감소된 결합 친화성 및/또는 감소된 효과기 기능을 나타내는 Fc 도메인은 아미노산 치환 L234A, L235A 및 임의로 P329G를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인, 또는 아미노산 치환 S228P, L235E 및 임의로 P329G(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)를 포함하는 인간 IgG4 Fc 도메인이다.
몇몇 실시태양에서 상기 Fc 도메인의 N-글리코실화가 제거되었다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서 상기 Fc 도메인은 N297번 위치에 아미노산 돌연변이, 특히 아스파라진이 알라닌(N297A) 또는 아스파트산(N297D) 또는 글리신(N297G)에 의해 교체된 아미노산 치환을 포함한다(카밧 EU 지수에 따른 넘버링).
본 명세서에서 상기에 기재되고 PCT 공보 WO 2012/130831에 기재된 Fc 도메인 외에, 감소된 Fc 수용체 결합 및/또는 효과기 기능을 갖는 Fc 도메인은 Fc 도메인 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것들을 포함한다(미국특허 제 6,737,056 호)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링). 상기와 같은 Fc 돌연변이체는 265, 269, 270, 297 및 327번 아미노산 위치 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체(265 및 297 잔기의 알라닌으로의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체 포함)를 포함한다(미국특허 제 7,332,581 호).
돌연변이 Fc 도메인을 당해 분야에 주지된 유전학적 또는 화학적 방법을 사용하여 아미노산 결실, 치환, 삽입 또는 변형에 의해 제조할 수 있다. 유전학적 방법은 암호화 DNA 서열의 부위-특이적인 돌연변이유발, PCR, 유전자 합성 등을 포함한다. 정확한 뉴클레오타이드 변화를 예를 들어 서열분석에 의해 확인할 수 있다.
Fc 수용체에의 결합을 예를 들어 ELISA에 의해, 또는 BIAcore 장비(GE 헬쓰케어)와 같은 표준 기계류를 사용하는 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 용이하게 측정할 수 있으며, Fc 수용체를 재조합 발현에 의해 수득할 수 있다. 선택적으로, Fc 수용체에 대한 Fc 도메인 또는 Fc 도메인을 포함하는 분자의 결합 친화성을 특정 Fc 수용체를 발현하는 것으로 공지된 세포주, 예를 들어 FcγIIIa 수용체를 발현하는 인간 NK 세포를 사용하여 평가할 수 있다.
Fc 도메인, 또는 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)의 효과기 기능을 당해 분야에 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다. ADCC를 측정하기에 적합한 분석을 본 명세서에 기재한다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 다른 예들이 미국특허 제 5,500,362 호; 문헌[Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)] 및 문헌[Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)]; 미국특허 제 5,821,337 호; 문헌[Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)]에 기재되어 있다. 선택적으로, 비-방사성 분석 방법을 사용할 수도 있다(예를 들어 ACTI(상표) 유식 세포측정용 비-방사성 세포독성 분석(셀테크놀로지 인코포레이티드(CellTechnology, Inc.) 미국 캘리포니아주 마운틴뷰 소재); 및 CytoTox 96(등록상표) 비-방사성 세포독성 분석(프로메가(Promega), 미국 위시콘신주 매디슨 소재)). 상기와 같은 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연살해(NK) 세포를 포함한다. 한편으로, 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성을 생체내에서, 예를 들어 문헌[Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가할 수 있다.
일부 실시태양에서, 보체 성분, 구체적으로 C1q에 대한 Fc 도메인의 결합을 감소시킨다. 따라서, 상기 Fc 도메인이 감소된 효과기 기능을 갖도록 조작하는 일부 실시태양에서, 상기 감소된 효과기 기능은 감소된 CDC를 포함한다. C1q 결합 분석을 상기 Fc 도메인, 또는 상기 Fc 도메인을 포함하는 분자(예를 들어 항체)가 C1q에 결합할 수 있는지 및 따라서 CDC 활성을 갖는지의 여부를 측정하기 위해서 수행할 수 있다. 예를 들어 WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조하시오. 보체 활성화를 평가하기 위해서, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J Immunol Methods 202, 163 (1996)]; 문헌[Cragg et al., Blood 101, 1045-1052 (2003)]; 및 문헌[Cragg and Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004)]을 참조하시오).
항원 결합 부분
상기 치료제 중에 포함된 항체는 이중특이성일 수 있다, 즉 상기는 2개의 별개의 항원성 결정인자에 특이적으로 결합할 수 있는 적어도 2개의 항원 결합 부분을 포함한다. 특정한 실시태양에 따라, 상기 항원 결합 부분은 Fab 분자(즉 각각 가변 및 불변 도메인을 포함하는, 중쇄 및 경쇄로 구성된 항원 결합 도메인)이다. 하나의 실시태양에서 상기 Fab 분자는 인간이다. 또 다른 실시태양에서 상기 Fab 분자는 인간화된다. 더욱 또 다른 실시태양에서 상기 Fab 분자는 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 항원 결합 부분의 적어도 하나는 크로스오버 Fab 분자이다. 상기와 같은 변형은 상이한 Fab 분자로부터 중쇄 및 경쇄의 잘못짝짓기를 감소시키며, 이에 의해 재조합 생성시 항체의 수율 및 순도를 개선시킨다. 상기 항체에 유용한 특정한 크로스오버 Fab 분자에서, 상기 Fab 경쇄 및 Fab 중쇄(각각 VL 및 VH)의 가변 도메인이 교환된다. 그러나 상기 도메인 교환의 경우에조차, 상기 항체의 제조는 잘못짝짓기된 중쇄 및 경쇄간의 소위 벤스 존스-유형 상호작용(문헌[Schaefer et al, PNAS, 108 (2011) 11187-11191])으로 인해 특정한 부산물을 포함할 수도 있다. 상이한 Fab 분자로부터의 중쇄 및 경쇄의 잘못짝짓기를 추가로 감소시키고 따라서 목적하는 항체의 순도 및 수율을 증가시키기 위해서, 반대 전하를 갖는 하전된 아미노산을 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 Fab 분자(들) 또는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 Fab 분자의 CH1 및 CL 도메인 중의 특정한 아미노산 위치에 도입시킬 수 있다. 전하 변형은 상기 항체 중에 포함된 통상적인 Fab 분자(들)(예를 들어 도 6A-C, G-J에 도시된 바와 같은)에서, 또는 상기 항체 중에 포함된 VH/VL 크로오버 Fab 분자(들)(예를 들어 도 6D-F, K-N에 도시된 바와 같은)에서 이루어진다. 특정한 실시태양에서, 상기 전하 변형은 상기 항체 중에 포함된 통상적인 Fab 분자(들)(특정한 실시태양에서 표적 세포 항원에 특이적으로 결합한다)에서 이루어진다.
본 발명에 따른 특정한 실시태양에서, 상기 항체는 표적 세포 항원, 특히 종양 세포 항원 및 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에 동시에 결합할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 표적 세포 항원 및 활성화 T 세포 항원에 대한 동시 결합에 의해 T 세포 및 표적 세포를 가교결합시킬 수 있다. 훨씬 더 특정한 실시태양에서, 상기와 같은 동시 결합은 표적 세포, 특히 종양 세포의 용해를 생성시킨다. 하나의 실시태양에서, 상기와 같은 동시 결합은 상기 T 세포의 활성화를 생성시킨다. 다른 실시태양에서, 상기와 같은 동시 결합은 증식, 분화, 사이토킨 분비, 세포독성 효과기 분자 방출, 세포독성 활성 및 활성화 마커의 발현의 그룹 중에서 선택된 T 림프구, 특히 세포독성 T 림프구의 세포 응답을 생성시킨다. 하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원에의 동시 결합 없이 상기 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3에의 상기 항체의 결합은 T 세포 활성화를 생성시키지 않는다.
하나의 실시태양에서, 상기 항체는 T 세포의 세포독성 활성을 표적 세포로 재-배향시킬 수 있다. 특정한 실시태양에서, 상기 재-배향은 상기 표적 세포에 의한 MHC-매개된 펩타이드 항원 제공 및/또는 상기 T 세포의 특이성과 독립적이다.
특히, 본 발명의 실시태양들 중 어느 하나에 따른 T 세포는 세포독성 T 세포이다. 일부 실시태양에서 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포, 특히 CD8+ T 세포이다.
(i) 활성화 T 세포 항원 결합 부분
일부 실시태양에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체, 특히 이중특이성 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자(또한 본 명세서에서 "활성화 T 세포 항원 결합 부분, 또는 활성화 T 세포 항원 결합 Fab 분자"라 칭한다)를 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 항체는 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 하나 이하의 항원 결합 부분을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 상기 활성화 T 세포 항원에 대한 1가 결합을 제공한다.
특정한 실시태양에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자는 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체된 Fab 분자이다. 상기와 같은 실시태양에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 바람직하게는 통상적인 Fab 분자이다. 항체 중에 포함된 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는, 하나 초과의 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자가 존재하는 실시태양에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분은 바람직하게는 크로스오버 Fab 분자이고 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분은 통상적인 Fab 분자이다.
선택적인 실시태양에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분은 통상적인 Fab 분자이다. 상기와 같은 실시태양에서 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체된 Fab 분자이다.
하나의 실시태양에서, 상기 활성화 T 세포 항원은 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
특정한 실시태양에서, 상기 활성화 T 세포 항원은 CD3, 특히 인간 CD3(서열번호 115) 또는 키노몰구스 CD3(서열번호 116), 가장 특히는 인간 CD3이다. 특정한 실시태양에서 상기 활성화 T 세포 항원 결합 부분은 인간 및 키노몰구스 CD3에 대해 교차-반응성이다(즉 이들에 특이적으로 결합한다). 일부 실시태양에서, 상기 활성화 T 세포 항원은 CD3의 입실론 서브유닛(CD3 입실론)이다.
일부 실시태양에서, 상기 활성화 T 세포 항원 결합 부분은 CD3, 특히 CD3 입실론에 특이적으로 결합하며, 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37의 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 경쇄 CDR을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 32의 중쇄 CDR1, 서열번호 33의 중쇄 CDR2, 서열번호 34의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 35의 경쇄 CDR1, 서열번호 36의 경쇄 CDR2, 서열번호 37의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 38에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 활성화 T 세포 항원 결합 부분은 CD3, 특히 CD3 입실론에 특이적으로 결합하며, 서열번호 120, 서열번호 121 및 서열번호 122로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 중쇄 HVR 및 서열번호 123, 서열번호 124, 서열번호 125의 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 경쇄 HVR을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 120의 중쇄 HVR1(H1-HVR), 서열번호 121의 H2-HVR, 및 서열번호 122의 H3-HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 123의 경쇄 HVR 1(L1-HVR), 서열번호 124의 L2-HVR, 및 서열번호 125의 L3-HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 126에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 127에 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 실시태양에서 상기 CD3 결합 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 126의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 127의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
(ii) 표적 세포 항원 결합 부분
일부 실시태양에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체, 특히 이중특이성 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자를 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 2개의 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자를 포함한다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 이들 항원 결합 부분은 각각 동일한 항원성 결정인자에 특이적으로 결합한다. 훨씬 더 특정한 실시태양에서, 이들 항원 결합 부분은 모두 동일하다, 즉 이들은 본 명세서에 기재된 바와 같은 CH1 및 CL 도메인 중에 동일한 아미노산 치환(존재하는 경우)을 포함하여 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 포함한다. 하나의 실시태양에서 상기 항체는 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 2개 이하의 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자를 포함한다.
특정한 실시태양에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 통상적인 Fab 분자이다. 상기와 같은 실시태양에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체된 Fab 분자이다.
선택적인 실시태양에서, 표적 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 본 명세서에 기재된 바와 같은 크로스오버 Fab 분자, 즉 상기 Fab 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 VH 및 VL 또는 불변 도메인 CH1 및 CL이 서로에 의해 교환/교체된 Fab 분자이다. 상기와 같은 실시태양에서, 활성화 T 세포 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분(들)은 통상적인 Fab 분자이다.
상기 표적 세포 항원 결합 부분은 상기 항체를 표적 부위, 예를 들어 상기 표적 세포 항원을 발현하는 특정한 유형의 종양 세포로 향하게 할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 CEA, 특히 인간 CEA이다.
하나의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 14의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 15의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 16의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 17의 경쇄 CDR1, 서열번호 18의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 19의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 20의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 21의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 136의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 137의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 138의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 139의 경쇄 CDR1, 서열번호 140의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 141의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 142의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 143의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CEA에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 142의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 143의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 B-세포 항원, 특히 악성 B-세포 항원이다. 하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 세포 표면 항원이다. 하나의 실시태양에서 상기 표적 세포 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 CD20, 특히 인간 CD20이다.
하나의 실시태양에서, 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 4의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 5의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 6의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 7의 경쇄 CDR1, 서열번호 8의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 9의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 10의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 11의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 128의 중쇄 HVR1(H1-HVR), 서열번호 129의 H2-HVR, 및 서열번호 130의 H3-HVR을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 131의 경쇄 HVR1(L1-HVR), 서열번호 132의 L2-HVR, 및 서열번호 133의 L3-HVR을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 134의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 135의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CD20에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 134의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 135의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 표적 세포 항원은 CD19, 특히 인간 CD19이다.
하나의 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 48의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 49의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 50의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 51의 경쇄 CDR1, 서열번호 52의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 53의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 54의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 55의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 54의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 59의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 60의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 61의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 62의 경쇄 CDR1, 서열번호 63의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 64의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 추가의 실시태양에서 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 65의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 66의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는 서열번호 65의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는
(i) 서열번호 67의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 68의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 69의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 70의 경쇄 CDR1, 서열번호 71의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 72의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(ii) 서열번호 75의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 76의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 77의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 78의 경쇄 CDR1, 서열번호 79의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 80의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(iii) 서열번호 83의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 84의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 85의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 86의 경쇄 CDR1, 서열번호 87의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 88의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(iv) 서열번호 91의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 92의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 93의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 94의 경쇄 CDR1, 서열번호 95의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 96의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
(v) 서열번호 99의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 100의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 101의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 102의 경쇄 CDR1, 서열번호 103의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 104의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
(vi) 서열번호 107의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR) 1, 서열번호 108의 중쇄CDR2, 및 서열번호 109의 중쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 110의 경쇄 CDR1, 서열번호 111의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 112의 경쇄 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함한다.
추가의 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는
(i) 서열번호 73의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 74의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역;
(ii) 서열번호 81의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 82의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역;
(iii) 서열번호 89의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 90의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역;
(iv) 서열번호 97의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 98의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역;
(v) 서열번호 105의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 106의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역; 또는
(vi) 서열번호 113의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 114의 서열에 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일치하는 경쇄 가변 영역
을 포함한다.
더욱 추가의 실시태양에서, 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부분, 특히 Fab 분자는
(i) 서열번호 73의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 서열;
(ii) 서열번호 81의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 서열;
(iii) 서열번호 89의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 90의 경쇄 가변 영역 서열;
(iv) 서열번호 97의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 98의 경쇄 가변 영역 서열;
(v) 서열번호 105의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 106의 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(vi) 서열번호 113의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 114의 경쇄 가변 영역 서열
을 포함한다.
전하 변형
상기 치료제 중에 포함된 항체, 특히 다중특이성 항체는 상기 중에 포함된 Fab 분자에, 경쇄와 합치되지 않는 중쇄의 잘못짝짓기(벤스-존스 유형 부산물)[결합 가지 중 하나(또는 2개 초과의 항원-결합 Fab 분자를 포함하는 분자의 경우, 그 이상)에서 VH/VL 교환을 갖는 Fab-기재 이중-/다중특이성 항원 결합 분자의 생성에서 발생할 수 있다]를 감소시키기에 특히 효율적인 아미노산 치환을 포함할 수 있다(또한 PCT 공보 WO 2015/150447, 특히 상기 중의 실시예(내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)을 참조하시오).
따라서, 특정한 실시태양에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는
(a) 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 Fab 분자
(b) 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 Fab 분자(여기에서 상기 Fab 경쇄
및 Fab 중쇄의 가변 도메인 VL 및 VH는 서로에 의해 교체된다)
를 포함하고, 여기에서 상기 제1 항원은 활성화 T 세포 항원이고 상기 제2 항원은 표적 세포 항원이거나, 또는 상기 제1 항원은 표적 세포 항원이고 상기 제2 항원은 활성화 T 세포 항원이며; 여기에서
i) a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 양으로 하전된 아미노산에 의해 치환되고(카밧에 따른 넘버링), a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산 또는 213번 위치의 아미노산은 음으로 하전된 아미노산에 의해 치환되거나(카밧 EU 지수에 따른 넘버링); 또는
ii) b)하의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 양으로 하전된 아미노산에 의해 치환되고(카밧에 따른 넘버링), b)하의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산 또는 213번 위치의 아미노산은 음으로 하전된 아미노산에 의해 치환된다(카밧 EU 지수에 따른 넘버링).
상기 항체는 i) 및 ii)하에 언급된 변형을 모두 포함하지는 않는다. 상기 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 CH1은 서로에 의해 교체되지 않는다(즉 교환되지 않고 남아있다).
상기 항체의 하나의 실시태양에서, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K), 아르기닌(R) 또는 히스티딘(H)(카밧에 따른 넘버링)에 의해(하나의 바람직한 실시태양에서 독립적으로 리신(K) 또는 아르기닌(R)에 의해) 치환되고, b)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산 또는 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E) 또는 아스파트산(D)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 독립적으로 치환된다.
추가의 실시태양에서, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K), 아르기닌(R) 또는 히스티딘(H)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고, b)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E) 또는 아스파트산(D)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 독립적으로 치환된다.
특정한 실시태양에서, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K), 아르기닌(R) 또는 히스티딘(H)(카밧에 따른 넘버링)에 의해(하나의 바람직한 실시태양에서 독립적으로 리신(K) 또는 아르기닌(R)에 의해) 치환되고 123번 위치의 아미노산은 리신(K), 아르기닌(R) 또는 히스티딘(H)(카밧에 따른 넘버링)에 의해(하나의 바람직한 실시태양에서 독립적으로 리신(K) 또는 아르기닌(R)에 의해) 치환되고, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E) 또는 아스파트산(D)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 독립적으로 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E) 또는 아스파트산(D)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 독립적으로 치환된다.
보다 특정한 실시태양에서, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 123번 위치의 아미노산은 리신(K) 또는 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 치환되며, b)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환된다.
훨씬 더 특정한 실시태양에서, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL에서 124번 위치의 아미노산은 리신(K)(카밧에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 123번 위치의 아미노산은 아르기닌(R)(카밧에 따른 넘버링)에 치환되며, a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CH1에서 147번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환되고 213번 위치의 아미노산은 글루탐산(E)(카밧 EU 지수에 따른 넘버링)에 의해 치환된다.
특정한 실시태양에서, 상기 a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL은 카파 아이소타입의 것이다.
선택적으로, 상기 실시태양들에 따른 아미노산 치환은 상기 a)하의 제1 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1 대신에 b)하의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서 이루어질 수 있다. 특정한 상기와 같은 실시태양에서, 상기 b)하의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL은 카파 아이소타입의 것이다.
상기 항체는 상기 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제3 Fab 분자를 추가로 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 제3 Fab 분자는 a)하의 제1 Fab 분자와 일치한다. 이들 실시태양에서, 상기 실시태양에 따른 아미노산 치환은 상기 제1 Fab 분자 및 제3 Fab 분자 각각의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서 이루어질 것이다. 선택적으로, 상기 실시태양에 따른 아미노산 치환은 b)하의 제2 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서 이루어질 수 있으나, 상기 제1 Fab 분자 및 제3 Fab 분자의 불변 도메인 CL 및 불변 도메인 CH1에서는 이루어지지 않을 수도 있다.
특정한 실시태양에서, 상기 항체는 안정한 회합이 가능한 제1 및 제2 서브유닛으로 구성된 Fc 도메인을 추가로 포함한다.
치료 섭생
본 발명에 따라, 상기 II형 항-CD20 항체 및 치료제를, 상기 II형 항-CD20 항체가 상기 치료제 전에 투여되고 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 상기 치료제가 투여되는 시간까지, 치료된 개체에서 B 세포수의 감소를 유효하게 유도하는 한, 다양한 경로(예를 들어 투여 경로, 투여량 및/또는 타이밍에 관하여)로 투여할 수 있다.
이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 상기 치료제 투여전에 개체에서 B 세포수의 감소는 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키거나 예방할 것이고 따라서 상기 치료제의 효능 상실 및/또는 ADA와 관련된 상기 개체에서의 부작용을 감소시키거나 예방할 것이며, 및/또는 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키거나 예방할 것이고 따라서 상기 치료제의 투여와 관련된 상기 개체에서의 부작용(예를 들어 IRR)을 감소시키거나 예방할 것이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다. 하나의 실시태양에서, ADA의 형성은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배 감소된다. 하나의 실시태양에서, 상기 ADA의 형성이 필수적으로 예방된다. 하나의 실시태양에서, 상기 ADA의 형성의 감소 또는 예방은 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월 이상이다. 하나의 실시태양에서, 상기 ADA의 감소 또는 예방은 상기 치료제 투여후 약 2개월이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 ADA 역가는 상기 치료제 투여전 개체에서의 ADA 역가를 초과하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 ADA 역가는 상기 치료제 투여전 개체에서의 ADA 역가를 1.1배 초과, 1.2배 초과, 1.5배 초과, 2배 초과, 3배 초과, 4배 초과, 5배 초과, 또는 10배 초과까지 초과하지는 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 ADA 역가는 상기 치료제 투여전 개체에서의 ADA 역가에 비해 1.1배 미만, 1.2배 미만, 1.5배 미만, 2배 미만, 3배 미만, 4배 미만, 5배 미만, 또는 10배 미만으로 증가한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 ADA 역가는 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월 이상에서의 ADA 역가이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 ADA 역가는 상기 치료제 투여후 약 2개월째의 ADA 역가이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후에, 특히 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월 이상에서, 상기 개체에서 ADA를 필수적으로 검출할 수 없다.
ADA를 당해 분야에 공지된 방법에 의해 검출할 수 있다(예를 들어 문헌[Mire-Sluis et al., J Immunol Methods (2004) 289, 1-16]; 문헌[Nencini et al., Drug Dev Res (2014), 75 Suppl 1, S4-6]; 문헌[Schouwenburg et al., Nat Rev Rheumatol (2015) 9, 164-172]을 참조하시오). ADA를 검출하는 예시적인 방법은 샌드위치 ELISA로, 여기에서 치료제(예를 들어 항체)를 분석 플레이트에 코팅하고, 치료된 개체의 혈청에 노출시키고, ADA의 존재를 표지된 치료제에 의해 검출한다. ADA를 검출하는 또 다른 예시적인 방법은 상기 치료된 개체의 혈청으로부터의 면역글로불린이 단백질(예를 들어 단백질 A 세파로스)상에 응집되고 상기 ADA의 존재를 표지된 치료제에 의해 검출하는 항원 결합 시험이다.
ADA를 예를 들어 상기 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 검출할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 개체에서 ADA 역가(예를 들어 상기 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 측정시)는 상기 치료제 투여후, 특히 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 12개월 이상에서 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 100, 약 200 또는 약 500, 또는 약 1000의 역가(즉 분석 컷 포인트 이상의 분석 신호를 제공하는 상기 샘플의 최고로 가능한 희석)를 초과하지 않는다.
일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 치료제의 효능을 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 개체의 전체 생존을 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 개체의 무진행 생존기간을 증가시킨다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 치료제의 투여와 관련된 상기 개체에서의 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다. 하나의 실시태양에서, 사이토킨 방출을 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배 감소시킨다. 하나의 실시태양에서, 사이토킨 방출이 필수적으로 예방된다. 하나의 실시태양에서, 상기 사이토킨 방출의 감소 또는 예방은 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간이다. 하나의 실시태양에서, 상기 사이토킨 방출의 감소 또는 예방은 상기 치료제 투여후 처음 24시간 이내이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 사이토킨 농도(예를 들어 상기 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 측정시)는 상기 치료제 투여전 개체에서의 사이토킨 농도를 초과하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 사이토킨 농도는 상기 치료제 투여전 개체에서의 사이토킨 농도를 1.1배 초과, 1.2배 초과, 1.5배 초과, 2배 초과, 3배 초과, 4배 초과, 5배 초과, 10배 초과, 20배 초과, 50배 초과, 또는 100배 초과까지 초과하지는 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 사이토킨 농도는 상기 치료제 투여전 개체에서의 사이토킨 농도에 비해 1.1배 미만, 1.2배 미만, 1.5배 미만, 2배 미만, 3배 미만, 4배 미만, 5배 미만, 10배 미만, 20배 미만, 50배 미만, 또는 100배 미만으로 증가한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 사이토킨 농도는 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간째의 사이토킨 농도이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후 개체에서 사이토킨 농도는 상기 치료제 투여후 처음 24시간 이내의 사이토킨 농도이다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제 투여후에, 특히 상기 치료제 투여후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간째에, 상기 개체에서 사이토킨 농도의 증가를 필수적으로 검출할 수 없다.
사이토킨을 당해 분야에 공지된 방법들, 예를 들어 ELISA, FACS 또는 루미넥스(Luminex)(등록상표) 분석에 의해 검출할 수 있다.
사이토킨을 예를 들어 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 검출할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 사이토킨 농도는 상기 개체의 혈액이다.
일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페론 감마(IFN-γ), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-2(IL-2) 및 인터류킨-8(IL-8)로 이루어지는 그룹, 특히 TNF-α, IFN-γ 및 IL-6로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 사이토킨(들)이다. 일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 TNF-α이다. 일부 실시태양에서 상기 사이토킨은 IFN-γ이다. 일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 IL-6이다. 일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 IL-10이다. 일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 IL-2이다. 일부 실시태양에서, 상기 사이토킨은 IL-8이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 치료제의 안전성을 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 개체에서 부작용을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 치료제의 혈청 반감기를 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에 비해 상기 치료제의 독성을 감소시킨다.
본 발명에 따라, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B 세포수 감소에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 기간은 3일 내지 21일, 5일 내지 20일, 7일 내지 21일, 7일 내지 14일, 5일 내지 15일, 7일 내지 15일, 8일 내지 15일, 10일 내지 20일, 10일 내지 15일, 11일 내지 14일, 또는 12일 내지 13일이다. 하나의 실시태양에서, 상기 기간은 7일 내지 14일이다. 특정한 실시태양에서, 상기 기간은 10일 내지 15일이다. 하나의 실시태양에서, 상기 기간은 8일 내지 15일이다. 하나의 실시태양에서, 상기 기간은 5일 내지 10일이다. 특정한 실시태양에서, 상기 기간은 7일이다.
하나의 실시태양에서, 상기 기간은 약 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일, 약 15일, 약 16일, 약 17일, 약 18일, 약 19일, 약 20일, 약 21일, 약 22일, 약 23일, 약 24일, 약 25일, 약 26일, 약 27일, 약 28일, 약 29일, 또는 약 30일이다.
하나의 실시태양에서, 상기 기간은 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 7일, 적어도 8일, 적어도 9일, 적어도 10일, 적어도 11일, 적어도 12일, 적어도 13일, 적어도 14일, 또는 적어도 15일이다. 특정한 실시태양에서 상기 기간은 적어도 5일이다. 추가의 특정한 실시태양에서, 상기 기간은 적어도 7일이다.
하나의 실시태양에서, 상기 기간은 II형 항-CD20 항체의 최종 투여 내지 상기 치료제의 (수회인 경우, 첫 번째) 투여 사이이다. 하나의 실시태양에서, 상기 기간 동안 상기 치료제의 투여는 없다.
특정한 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소는 상기 개체의 혈액 중에서 이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 말초 혈액 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 정상 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 악성 및 정상 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 악성 B 세포이다.
일부 실시태양에서, 상기 B 세포의 감소는 상기 개체의 조직 중에서 이다. 하나의 실시태양에서, 상기 조직은 종양이다. 하나의 실시태양에서, 상기 조직은 림프절이다. 하나의 실시태양에서, 상기 조직은 비장이다. 하나의 실시태양에서, 상기 조직은 비장의 변연부이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 림프절 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 비장 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 비장 변연부 B 세포이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포는 CD20-양성 B 세포, 즉 표면상에서 CD20을 발현하는 B 세포이다.
하나의 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소는 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%의 감소이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소는 B 세포의 완전한 제거이다. 특정한 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소는 상기 개체의 (말초)혈액 중 B 세포수의 적어도 90%, 특히 적어도 95%의 감소이다. 하나의 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소는 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체의 투여(수회인 경우, 첫 번째)전 상기 개체의 B 세포수에 비해 감소이다.
상기 개체 중의 B 세포수를, 환자 혈액 또는 조직 중 B 세포를 정량분석하기에 적합한 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 B 세포 마커, 예를 들어 CD20, CD19 및/또는 PAX5에 대한 항체를 사용하는 유식 세포측정, 면역조직화학 또는 면역형광 방법에 의해 측정할 수 있다.
상기 B 세포의 수를 또한 간접적으로, 환자 혈액 또는 조직 중 B-세포 마커의 단백질 또는 mRNA 수준의 정량분석에 의해 측정할 수 있다. 특정 단백질 수준의 측정에 적합한 당해 분야에 공지된 방법은 면역분석 방법, 예를 들어 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA), 또는 웨스턴 블럿을 포함하며, mRNA 수준의 측정 방법은 예를 들어 정량적인 RT-PCR 또는 미세배열 기술을 포함한다.
모든 상기 언급된 방법 및 기술들은 당해 분야에 주지되어 있으며 표준 교과서, 예를 들어 문헌[Lottspeich, Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag, 1998] 또는 문헌[Sambrook and Russell (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A., 2001]으로부터 추론될 수 있다.
몇몇 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소를 상기 개체의 혈액 중(예를 들어 상기 개체로부터 채취한 혈액 샘플 중) B 세포의 정량분석에 의해 측정한다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, B 세포를 유식 세포측정 분석에 의해 정량분석한다. 유식 세포측정 방법(FACS)은 혈액 또는 조직 샘플 중 세포의 정량분석에 대해 당해 분야에 주지되어 있다. 특히, 상기 방법들은 혈액 또는 조직 샘플(예를 들어 혈액 샘플, 또는 조직 생검(의 부분)) 중 한정된 총 세포수 중에서 특정 항원(예를 들어 CD20 및/또는 CD19)을 발현하는 세포수를 측정할 수 있게 한다. 하나의 실시태양에서, B 세포를 항-CD19 항체 및/또는 항-CD20 항체를 사용하여 유식 세포측정 분석에 의해 정량분석한다.
다른 실시태양에서, 상기 B 세포수의 감소를 상기 개인의 조직, 예를 들어 종양(예를 들어 상기 개체로부터 채취한 조직 생검) 중 B 세포의 정량분석에 의해 측정한다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, B 세포를 면역조직화학 또는 면역형광 분석에 의해 정량분석한다. 하나의 실시태양에서, B 세포를 항-CD19 항체, 항-CD20 항체 및/또는 항-PAX5 항체를 사용하여 면역조직화학 분석에 의해 정량분석한다.
본 발명의 방법을 사용되는 치료제(들)에 따라 다양한 질병의 치료에 적용할 수 있다.
몇몇 실시태양에서 상기 치료되는 질병은 증식성 질환, 특히 암이다. 암의 비제한적인 예는 방광암, 뇌암, 두경부암, 췌장암, 폐암, 유방암, 난소암, 자궁암, 경부암, 자궁내막암, 식도암, 결장암, 결장직장암, 직장암, 위암, 전립선암, 혈액암, 피부암, 편평세포암종, 골암, 및 신장암을 포함한다. 본 발명의 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 세포 증식 질환은 비제한적으로 복부, 뼈, 유방, 소화계, 간, 췌장, 복막, 내분비선(부신, 부갑상선, 뇌하수체, 고환, 난소, 흉선, 갑상선), 눈, 두경부, 신경계(중추 및 말초), 림프계, 골반, 피부, 연조직, 비장, 흉부 영역 및 비뇨생식계에 위치하는 신생물을 포함한다. 또한 전암성 상태 또는 병변 및 암 전이가 포함된다. 몇몇 실시태양에서 상기 암은 신세포암, 피부암, 폐암, 결장직장암, 유방암, 뇌암, 두경부암으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 고형 종양이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 치료제의 표적, 예를 들어 항체를 발현한다. 하나의 실시태양에서, 상기 암은 CEA를 발현한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 암은 FAP를 발현한다.
일부 실시태양에서, 상기 치료되는 질병은 염증 질환이다. 일부 실시태양에서, 상기 치료되는 질병은 자가면역 질병(즉 개인 자신의 조직으로부터 발생하고 상기 조직에 대한 비-악성 질병 또는 질환)이다. 자가면역 질병 또는 질환의 예는 비제한적으로 염증 반응, 예를 들어 건선 및 피부염(예를 들어 아토피성 피부염)을 포함한 염증성 피부병; 염증성 장 질병과 관련된 응답(예를 들어 크론병 및 궤양성 대장염); 피부염; 알러지성 상태, 예를 들어 습진 및 천식; 류머티스성 관절염; 전신 홍반성 루푸스(SLE)(비제한적으로 루푸스 신염, 피부 루푸스 포함); 당뇨병(예를 들어 1형 당뇨병 또는 인슐린 의존성 당뇨병); 다발성 경화증 및 소아 발병 당뇨병을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 이식편 거부 또는 이식편대 숙주병이다.
일부 실시태양에서, 상기 치료되는 질병은 감염성 질병, 예를 들어 바이러스 감염 또는 세균 감염이다. 다른 실시태양에서, 상기 치료되는 질병은 신경학적 질환이다. 더욱 추가의 실시태양에서, 상기 치료되는 질병은 대사 질환이다.
개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 방법들은 B-세포 증식성 질환, 특히 CD20-양성 B-세포 질환(이때 (CD20-양성) B-세포가 다량으로 존재한다(즉 증가된 수의 B-세포가 건강한 개체에 비해 상기 질환을 앓고 있는 개체에서 존재한다))의 치료에 특히 유용하다.
따라서, 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD20-양성 B-세포 질환이다.
하나의 실시태양에서, 상기 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 또는 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 및 변연부 림프종(MZL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된다.
특정한 실시태양에서, 상기 질병은 NHL, 특히 재발/무반응성(r/r) NHL이다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 DLBCL이다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 FL이다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 MCL이다. 하나의 실시태양에서, 상기 질병은 MZL이다.
숙련가는 다수의 경우에 상기 치료제가 치유를 제공하지 않고 단지 부분적인 이득만을 제공할 수 있음을 쉽게 인식한다. 일부 실시태양에서, 약간의 이득을 갖는 생리학적 변화도 또한 치료학적으로 이로운 것으로 간주된다. 따라서, 일부 실시태양에서, 생리학적 변화를 제공하는 치료제의 양을 "유효량" 또는 "치료 유효량"으로 간주한다.
치료가 필요한 개체, 환자 또는 개인은 전형적으로 포유동물, 보다 구체적으로 인간이다. 몇몇 실시태양에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 개체는 국소적으로 진행된 및/또는 전이성 고형 종양을 앓고 있으며 표준 치유 요법을 진행했었거나 또는 상기에 허용되지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 종양은 CEA-발현 종양이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 종양은 FAP-발현 종양이다. 종양에서 CEA 및/또는 FAP의 발현을 예를 들어 상기 개체로부터 채취한 종양 생검의 면역조직화학 분석에 의해 측정할 수 있다.
다른 실시태양에서, 특히 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출의 감소에 관한 본 발명의 관련 태양에서, 상기 개체는 B-세포 증식성 질환, 특히 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 또는 호지킨 림프종(HL)을 앓고 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 개체는 재발/무반응성(r/r) NHL을 앓고 있다.
II형 항-CD20 항체의 투여
본 발명에 따라, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여 및 상기 치료제의 투여 사이의 기간 및 상기 II형 항-CD20 항체의 용량을 상기 치료제 투여전 상기 개체에서 B 세포수를 유효하게 감소시키기 위해 선택한다.
상기 II형 항-CD20 항체를 임의의 적합한 수단, 예를 들어 비경구, 폐내 및 비내, 및 국소 치료를 원하는 경우, 병변내 투여에 의해 투여할 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 부분적으로 투여가 짧은지 또는 만성적인지에 따라, 임의의 적합한 경로, 예를 들어 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사에 의할 수 있다. 본 발명에서는 비제한적으로 다양한 시점들에 걸친 단일 또는 수회 투여, 일시 투여, 및 펄스 주입을 포함한 다양한 투여 스케줄이 고려된다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체를 비경구, 특히 정맥내로, 예를 들어 정맥내 주입에 의해 투여한다.
상기 II형 항-CD20 항체를 양호한 의학적 실행과 일관되는 방식으로 제형화하고, 복용시키고, 투여할 수 있다. 이와 관련하여 고려되는 인자들은 치료되는 특정 질환, 치료되는 특정 포유동물, 개인 환자의 임상적 조건, 질환의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의료 종사자에게 공지된 다른 인자들을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 단일 투여이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 2개 이상의 별도의 투여이다. 하나의 실시태양에서, 상기 2개 이상의 별도의 투여는 2 연속일 이상이다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제의 투여 전 또는 후에 상기 II형 항-CD20 항체의 추가의 투여는 없다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 단일 투여, 또는 2 연속일의 2회 투여이며, 상기 II형 항-CD20 항체의 추가의 투여는 없다. 하나의 실시태양에서, 상기 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 최종 투여 내지 상기 치료제의 (수회인 경우, 첫 번째) 투여 사이이다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 개체에서 B 세포의 감소에 유효한 상기 II형 항-CD20 항체의 용량이다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 용량은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여사이의 기간내에 상기 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 유효하다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여 및 상기 치료제의 투여 사이의 기간 및 상기 II형 항-CD20 항체의 투여된 용량은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B 세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 약 2 g의 II형 항-CD20 항체의 용량이다. 약 2g의 II형 항-CD20 항체의 용량을 약 2 g의 단일 용량으로서 또는 수회 투여, 예를 들어 각각 약 1 g의 2회 투여 또는 예를 들어 100 ㎎, 900 ㎎ 및 1000 ㎎의 3회 투여로서 상기 개체에게 투여할 수 있다. 하나의 실시태양에서 약 2 g의 II형 항-CD20 항체의 1회 투여를 상기 개체에게 수행한다. 또 다른 실시태양에서, 각각 약 1 g의 II형 항-CD20 항체의 2회 투여를 2 연속일로 상기 개체에게 수행한다. 더욱 또 다른 실시태양에서 (i) 약 100 ㎎의 II형 항-CD20 항체, (ii) 약 900 ㎎의 II형 항-CD20 항체, 및 (iii) 약 1000 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 3회 투여((i) 내지 (iii))를 3 연속일로 상기 개체에게 수행한다. 하나의 실시태양에서 약 1 g의 II형 항-CD20 항체의 2회 투여를, 상기 치료제의 투여 10일 내지 15일 전에, 2 연속일로 상기 개체에게 수행한다. 하나의 실시태양에서 약 2 g의 II형 항-CD20 항체의 1회 투여를 상기 치료제의 투여 10일 내지 15일 전에 상기 개체에게 수행한다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 추가의 투여를 상기 개체에게 수행하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제의 투여를 상기 II형 항-CD20 항체의 투여전에 상기 개체에게 수행하지 않는다(적어도 동일한 치료 과정내에서는 아니다).
하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여는 약 1000 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 용량이다. 약 1000 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 용량을 약 1000 ㎎의 단일 용량으로서 또는 수회 투여, 예를 들어 각각 약 500 ㎎의 2회 투여로서 상기 개체에게 투여할 수 있다. 특정한 실시태양에서 약 1000 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 1회 투여를 상기 개체에게 수행한다. 또 다른 실시태양에서 약 500 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 2회 투여를 2 연속일로 상기 개체에게 수행한다. 하나의 실시태양에서, 약 1000 ㎎의 II형 항-CD20 항체의 1회 투여를 상기 치료제의 투여 7일 전에 상기 개체에게 수행한다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 추가의 투여를 상기 개체에게 수행하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제의 투여를 상기 II형 항-CD20 항체의 투여전에 상기 개체에게 수행하지 않는다(적어도 동일한 치료 과정내에서는 아니다).
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 앞서 전투약의 투여를 추가로 포함한다. 실시태양에서 상기 전투약은 코르티코스테로이드(예를 들어 프레드니솔론, 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론), 파라세타몰/아세트아미노펜, 및/또는 항-히스타민제(예를 들어 다이펜하이드라민)를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 전투약을 상기 II형 항-CD20 항체의 투여 적어도 60분 전에 투여한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 치료제의 투여에 앞서 상기 II형 항-CD20 항체(및 임의로 상술한 전투약) 외에 면역억제제의 투여를 포함하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 치료제의 투여에 앞서 메토트렉세이트, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린, 레플루노미드, 사이클로스포린, 타크로리무스/FK506, 마이코페놀레이트 모페닐 및 마이코페놀레이트 나트륨의 그룹 중에서 선택된 작용제의 투여를 포함하지 않는다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료 섭생은 상기 치료제의 투여에 앞서 상기 II형 항-CD20 항체 외에 추가의 항체의 투여를 포함하지 않는다.
치료제의 투여
상기 치료제를 비경구, 폐내 및 비내, 및 국소 치료를 원하는 경우, 병변내 투여를 포함한 임의의 적합한 수단에 의해 투여할 수 있다. 본 발명의 방법은 그러나 비경구, 특히 정맥내, 주입에 의해 투여되는 치료제와 관련하여 특히 유용하다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는, 부분적으로 상기 투여가 짧은지 또는 만성적인지에 따라 임의의 적합한 수단, 예를 들어 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사에 의할 수 있다. 비제한적으로 다양한 시점에 걸친 단일 또는 수회 투여, 일시주사 투여 및 펄스 주입을 포함한 다양한 투여 스케줄이 본 발명에서 고려된다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제를 비경구로, 특히 정맥내로 투여한다. 특정한 실시태양에서, 상기 치료제를 정맥내 주입에 의해 투여한다.
상기 치료제를 양호한 의학적 실행과 일치하는 방식으로 제형화하고, 복용시키고, 투여할 것이다. 이와 관련하여 고려되는 인자는 치료되는 특정 질환, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 질환의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의료 종사자에게 공지된 다른 인자들을 포함한다. 상기 치료제를 문제의 질환을 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 작용제와, 필요하지는 않지만, 임의로 제형화한다. 상기와 같은 다른 작용제의 유효량은 상기 제형 중에 존재하는 치료제의 양, 질환 또는 치료의 유형, 및 상기에 논의된 다른 인자들에 따라 변한다. 이들은 본 발명에 개시된 바와 동일한 투여량으로 및 투여 경로에 따라, 또는 본 발명에 개시된 투여량의 대략 1 내지 99%, 또는 실험적으로/임상적으로 적합한 것으로 결정된 임의의 투여량으로 및 임의의 경로에 의해 일반적으로 사용된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해서, 상기 치료제의 적합한 투여량(단독으로 또는 하나 이상의 다른 추가적인 치료제와 함께 사용될 때)은 치료되는 질병의 유형, 치료제의 유형, 상기 질병의 중증도 및 과정, 상기 항체가 예방 또는 치료 목적으로 사용되는지의 여부, 선행 치료법, 환자의 임상 병력 및 상기 치료제에 대한 응답, 및 주치의의 판단에 따라 변할 것이다. 상기 치료제를 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여한다. 상기 질병의 유형 및 중증도에 따라, 약 1 ㎍/㎏ 내지 15 ㎎/㎏(예를 들어 0.1 ㎎/㎏ 내지 10 ㎎/㎏)의 치료제가, 예를 들어 1회 이상의 분리 투여에 의한 것이든 또는 연속 주입에 의한 것이든 간에, 상기 개체에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 임의의 전형적인 1일 투여량은 상기 언급한 인자들에 따라 약 1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 수일 이상에 걸쳐 반복된 투여를 위해서, 상기 조건에 따라, 상기 치료를 일반적으로는 질병 증상의 목적하는 억제가 발생할 때까지 지속할 수 있다. 상기 치료제의 하나의 예시적인 투여량은 약 0.05 ㎎/㎏ 내지 약 10 ㎎/㎏의 범위일 것이다. 따라서, 약 0.5 ㎎/㎏, 2.0 ㎎/㎏, 4.0 ㎎/㎏ 또는 10 ㎎/㎏(또는 이들의 임의의 조합)의 1회 이상의 용량을 상기 개체에게 투여할 수 있다. 상기와 같은 용량을 간헐적으로, 예를 들어 매주, 2주마다 또는 3주마다(예를 들어 상기 개체가 약 2 내지 약 20회, 또는 예를 들어 약 6회 용량의 상기 치료제를 수용하도록) 투여할 수 있다. 초기의 보다 높은 부하 용량에 이어서 하나 이상의 보다 낮은 용량, 또는 초기의 보다 낮은 용량에 이어서 하나 이상의 보다 높은 용량을 투여할 수도 있다. 예시적인 복용 섭생은 약 10 ㎎의 초기 용량에 이어서 약 20 ㎎의 주당 2회 용량의 치료제를 투여함을 포함한다. 그러나, 다른 복용 섭생이 유용할 수도 있다. 상기 치료법의 진행을 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터한다.
하나의 실시태양에서, 상기 치료제의 투여는 단일 투여이다. 몇몇 실시태양에서, 상기 치료제의 투여는 2회 이상의 투여이다. 하나의 상기와 같은 실시태양에서, 상기 치료제를 매주, 2주마다 또는 3주마다, 특히 2주마다 투여한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제를 치료 유효량으로 투여한다. 하나의 실시태양에서 상기 치료제를 10 ㎎ 내지 20 ㎎의 용량으로 투여한다. 하나의 실시태양에서 상기 치료제의 투여는 약 10 ㎎ 치료제 용량의 초기 투여, 및 약 20 ㎎ 치료제 용량의 하나 이상의 후속 투여를 포함한다. 하나의 실시태양에서 상기 치료제를 약 50 ㎍/㎏, 약 100 ㎍/㎏, 약 200 ㎍/㎏, 약 300 ㎍/㎏, 약 400 ㎍/㎏, 약 500 ㎍/㎏, 약 600 ㎍/㎏, 약 700 ㎍/㎏, 약 800 ㎍/㎏, 약 900 ㎍/㎏, 또는 약 1000 ㎍/㎏의 용량으로 투여한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제를 상기 II형 항-CD20 항체의 투여가 없는 상응하는 치료 섭생에서 상기 치료제의 용량보다 더 높은 용량으로 투여한다. 하나의 실시태양에서 상기 치료제의 투여는 상기 치료제의 제1 용량의 초기 투여 및 상기 치료제의 제2 용량의 하나 이상의 후속 투여를 포함하며, 여기에서 상기 제2 용량이 상기 제1 용량보다 높다. 하나의 실시태양에서 상기 치료제의 투여는 상기 치료제의 제1 용량의 초기 투여 및 상기 치료제의 제2 용량의 하나 이상의 후속 투여를 포함하며, 여기에서 상기 제1 용량이 상기 제2 용량 이상이다.
하나의 실시태양에서 본 발명에 따른 치료 섭생에서 상기 치료제의 투여는 개체에게 상기 치료제의 제1 투여(적어도 동일한 치료 과정 이내)이다. 하나의 실시태양에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 앞서 상기 개체에게 상기 치료제의 투여를 수행하지 않는다.
본 발명에서, 상기 치료제는 치료법에서 단독으로 또는 다른 작용제와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 치료제를 적어도 하나의 추가적인 치료제와 함께 투여할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 추가적인 치료제는 면역요법제이다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료제는 상기 치료제와 관련하여 본 명세서에 기재된 바와 같은 작용제를 포함한다. 본 발명은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여 없이 치료 섭생에 사용될 때 개체에서 ADA의 형성 또는 사이토킨 방출을 유도할 수도 있는 다수의 치료제들의 조합과 관련하여 특히 유용하다. 상기와 같은 조합은 본 명세서에 기재된 바와 같은 다양한 치료제들을 포함할 수 있으며, 예를 들어 암 치료(암 면역요법)를 위한 하나 이상의 면역요법제를 특별히 포함할 수 있다.
상기에 나타낸 상기와 같은 병용 요법은 병용 투여(2개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형 중에 포함되는 경우), 및 별도의 투여(이 경우에 상기 치료제의 투여를 추가적인 치료제 또는 작용제의 투여에 앞서, 상기 투여와 동시에, 및/또는 상기 투여에 이어서 수행할 수 있다)를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 치료제의 투여 및 추가적인 치료제의 투여는 서로 약 1개월 이내에, 또는 약 1, 2 또는 3주 이내에, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6일 이내에 일어난다.
제조 물품
본 발명의 또 다른 태양에서, 질병의 치료, 예방 및/또는 진단, 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-약물 항체(ADA)의 형성의 감소 및/또는 사이토킨 방출의 감소에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품, 예를 들어 키트를 제공한다. 상기 제조 물품은 용기 및 상기 용기 상의 또는 상기 용기와 결합된 표지 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 주머니 등을 포함한다. 상기 용기는 다양한 물질들, 예를 들어 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 상기 용기는 조성물을 단독으로, 또는 상태의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 또 다른 조성물과 함께 유지하거나, 또는 ADA의 형성 및/또는 사이토킨 방출의 감소에 유효한 조성물을 유지하며 멸균 출입구를 가질 수 있다(예를 들어 상기 용기는 정맥내 용액 주머니 또는 피하주사 바늘에 의해 관통될 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있다). 상기 조성물 중의 적어도 하나의 활성제는 본 명세서에 보고된 바와 같은 II형 항-CD20 항체 또는 치료제이다. 상기 표지 또는 패키지 삽입물은 상기 조성물이 선택 상태의 치료 및/또는 ADA의 형성 및/또는 사이토킨 방출의 감소에 사용됨을 가리킨다. 더욱이, 상기 제조 물품은 (a) 조성물이 함유된 제1 용기(여기에서 상기 조성물은 본 명세서에 보고된 바와 같은 II형 항-CD20 항체를 포함한다); 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기(여기에서 상기 조성물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 치료제를 포함한다)를 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 실시태양에서 제조 물품은 상기 조성물을 사용하여 특정 상태를 치료하고/하거나 ADA의 형성 및/또는 사이토킨 방출을 감소시킬 수 있음을 가리키는 패키지 삽입지를 추가로 포함할 수 있다. 선택적으로, 또는 추가로, 상기 제조 물품은 약학적으로 허용 가능한 완충제, 예를 들어 주사용 정균수(BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 물품은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직할 수 있는 다른 물질, 예를 들어 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 추가로 포함할 수도 있다.
실시태양
하기에서 본 발명의 실시태양들 중 일부를 나열한다.
1. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법으로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
2. 실시태양 1의 방법에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
3. 개체에게 치료제 투여 전에 II형 항-CD20 항체를 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키는 방법.
4. 실시태양 3의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
5. 실시태양 1 내지 4 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
6. 실시태양 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
7. 실시태양 1 내지 6 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
8. 실시태양 1 내지 7 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
9. 실시태양 1 내지 8 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
10. 실시태양 1 내지 9 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
11. 실시태양 1 내지 10 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
12. 실시태양 1 내지 11 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
13. 실시태양 12의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
14. 실시태양 13의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
15. 실시태양 13 또는 14의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
16. 실시태양 12의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
17. 실시태양 16의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
18. 실시태양 16 또는 17의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
19. 실시태양 1 내지 18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
20. 실시태양 19의 방법에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
21. 실시태양 19 또는 20의 방법에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
22. 실시태양 1 내지 21 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
23. 실시태양 22의 방법에서, 상기 면역접합체는 실시태양 13 내지 15 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 20 또는 21에 정의된 바와 같은 사이토킨을 포함한다.
24. 실시태양 1 내지 23 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
25. 실시태양 1 내지 18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 실시태양 13 내지 15 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 16 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
26. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
27. 실시태양 26의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
28. II형 항-CD20 항체를 치료제의 투여에 앞서 개체에게 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체.
29. 실시태양 28의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
30. 실시태양 26 내지 29 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
31. 실시태양 26 내지 30 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
32. 실시태양 26 내지 31 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
33. 실시태양 26 내지 32 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
34. 실시태양 26 내지 33 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
35. 실시태양 26 내지 34 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
36. 실시태양 26 내지 35 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
37. 실시태양 26 내지 36 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
38. 실시태양 37의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
39. 실시태양 38의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
40. 실시태양 38 또는 39의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
41. 실시태양 37의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
42. 실시태양 41의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
43. 실시태양 41 또는 42의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
44. 실시태양 26 내지 43 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
45. 실시태양 44의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
46. 실시태양 44 또는 45의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
47. 실시태양 26 내지 46 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
48. 실시태양 47의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 면역접합체는 실시태양 38 내지 40 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 45 또는 46에 정의된 바와 같은 사이토킨을 포함한다.
49. 실시태양 26 내지 48 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
50. 실시태양 1 내지 43 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 실시태양 38 내지 40 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 41 내지 43 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
51. 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키기 위한 약제의 제조에서 II형 항-CD20 항체의 용도로, 상기 약제는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 사용되도록 되어 있으며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
52. 개체에서 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서 치료제의 용도로, 상기 치료는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
53. 실시태양 51 또는 52의 용도에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
54. 실시태양 51 내지 53 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
55. 실시태양 51 내지 54 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
56. 실시태양 51 내지 55 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
57. 실시태양 51 내지 56 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
58. 실시태양 51 내지 57 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
59. 실시태양 51 내지 58 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
60. 실시태양 51 내지 59 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
61. 실시태양 51 내지 60 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
62. 실시태양 61의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
63. 실시태양 62의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
64. 실시태양 62 또는 63의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
65. 실시태양 61의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
66. 실시태양 65의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
67. 실시태양 65 또는 66의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
68. 실시태양 51 내지 67 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
69. 실시태양 68의 용도에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
70. 실시태양 68 또는 69의 용도에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
71. 실시태양 51 내지 70 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
72. 실시태양 71의 용도에서, 상기 면역접합체는 실시태양 62 내지 64 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 69 또는 70에 정의된 바와 같은 사이토킨을 포함한다.
73. 실시태양 51 내지 72 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
74. 실시태양 51 내지 67 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 실시태양 62 내지 64 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 65 내지 67 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
75. 개체에서 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키기 위한 키트로, II형 항-CD20 항체 조성물 및
(iii) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(iv) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 II형 항-CD20 항체 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
76. 치료제 조성물을 추가로 포함하는 실시태양 75의 키트.
77. 개체에서 질병을 치료하기 위한 키트로, 치료제 조성물 및
(iii) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(iv) 상기 개체에게 치료제 조성물을 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 치료제 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
78. II형 항-CD20 항체 조성물을 추가로 포함하는 실시태양 77의 키트.
79. 실시태양 75 내지 78 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료 섭생은 상기 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
80. 실시태양 75 내지 79 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
81. 실시태양 75 내지 80 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
82. 실시태양 75 내지 81 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
83. 실시태양 75 내지 82 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
84. 실시태양 75 내지 83 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
85. 실시태양 75 내지 84 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
86. 실시태양 75 내지 85 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
87. 실시태양 75 내지 86 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
88. 실시태양 87의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
89. 실시태양 88의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
90. 실시태양 88 또는 89의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
91. 실시태양 87의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
92. 실시태양 91의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
93. 실시태양 91 또는 92의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
94. 실시태양 75 내지 93 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
95. 실시태양 94의 키트에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
96. 실시태양 94 또는 95의 키트에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
97. 실시태양 75 내지 96 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
98. 실시태양 97의 키트에서, 상기 면역접합체는 실시태양 88 내지 90 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 95 또는 96에 정의된 바와 같은 사이토킨을 포함한다.
99. 실시태양 75 내지 98 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
100. 실시태양 75 내지 93 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 실시태양 88 내지 90 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 91 내지 93 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
101. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 치료제로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
102. 실시태양 101의 치료제에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 치료제의 투여에 응답하여 상기 개체에서 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시킨다.
103. 실시태양 101 또는 102의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
104. 실시태양 101 내지 103 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
105. 실시태양 101 내지 104 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
106. 실시태양 101 내지 105 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
107. 실시태양 101 내지 106 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
108. 실시태양 101 내지 107 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
109. 실시태양 101 내지 108 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 폴리펩타이드를 포함한다.
110. 실시태양 101 내지 109 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 항체를 포함한다.
111. 실시태양 110의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합한다.
112. 실시태양 111의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
113. 실시태양 110 또는 111의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
114. 실시태양 110의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
115. 실시태양 114의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
116. 실시태양 114 또는 115의 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
117. 실시태양 101 내지 116 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 사이토킨을 포함한다.
118. 실시태양 116의 치료제에서, 상기 사이토킨은 인터류킨-2(IL-2)이다.
119. 실시태양 117 또는 118의 치료제에서, 상기 사이토킨은 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드이다.
120. 실시태양 101 내지 119 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 면역접합체를 포함한다.
121. 실시태양 120의 치료제에서, 상기 면역접합체는 실시태양 111 내지 113 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 118 또는 119에 정의된 바와 같은 사이토킨을 포함한다.
122. 실시태양 101 내지 121 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 세르구투주맵 아무날류킨(CEA-IL2v)을 포함한다.
123. 실시태양 101 내지 119 중 어느 하나의 치료제에서, 상기 치료제는 실시태양 111 내지 113 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 실시태양 114 내지 116 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함한다.
하기에서, 본 발명의 추가의 실시태양들을 나열한다.
1. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법으로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
2. 실시태양 1의 방법에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 치료제의 투여와 관련된 개체에서 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다.
3. 개체에게 치료제 투여 전에 II형 항-CD20 항체를 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키는 방법.
4. 실시태양 3의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
5. 실시태양 1 내지 4 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
6. 실시태양 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
7. 실시태양 1 내지 6 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
8. 실시태양 1 내지 7 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
9. 실시태양 1 내지 8 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
10. 실시태양 1 내지 9 중 어느 하나의 방법에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
11. 실시태양 1 내지 10 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 항체, 특히 다중특이성 항체를 포함한다.
12. 실시태양 11의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
13. 실시태양 11 또는 12의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
14. 실시태양 11 내지 13 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
15. 실시태양 1 내지 14 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 B-세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합한다.
16. 실시태양 15의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
17. 실시태양 15 또는 16의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
18. 실시태양 1 내지 17 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (i) 실시태양 12 내지 14 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 (ii) 실시태양 15 내지 17 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체이다.
19. 실시태양 1 내지 18 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
20. 실시태양 1 내지 10 중 어느 하나의 방법에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR), 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
21. 실시태양 1 내지 20 중 어느 하나의 방법에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD2-양성 B-세포 질환이고/이거나, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 질병이다.
22. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
23. 실시태양 22의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 치료제의 투여와 관련된 개체에서 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다.
24. II형 항-CD20 항체를 치료제의 투여에 앞서 개체에게 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체.
25. 실시태양 24의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
26. 실시태양 22 내지 25 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
27. 실시태양 22 내지 26 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
28. 실시태양 22 내지 27 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
29. 실시태양 22 내지 28 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
30. 실시태양 22 내지 29 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
31. 실시태양 22 내지 30 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
32. 실시태양 22 내지 31 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 항체, 특히 다중특이성 항체를 포함한다.
33. 실시태양 32의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
34. 실시태양 32 또는 33의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
35. 실시태양 32 내지 34 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
36. 실시태양 32 내지 35 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 B-세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합한다.
37. 실시태양 36의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
38. 실시태양 36 또는 37의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
39. 실시태양 22 내지 38 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (i) 실시태양 33 내지 35 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 (ii) 실시태양 36 내지 38 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체이다.
40. 실시태양 22 내지 39 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
41. 실시태양 22 내지 31 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR), 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
42. 실시태양 22 내지 41 중 어느 하나의 II형 항-CD20 항체에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD2-양성 B-세포 질환이고/이거나, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 질병이다.
43. 개체에서 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 약제의 제조에서 II형 항-CD20 항체의 용도로, 상기 약제는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 사용되도록 되어 있으며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
44. 개체에서 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서 T-세포 활성화 치료제의 용도로, 상기 치료는
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
45. 실시태양 43 또는 44의 용도에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다.
46. 실시태양 43 내지 45 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
47. 실시태양 43 내지 46 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
48. 실시태양 43 내지 47 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
49. 실시태양 43 내지 48 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
50. 실시태양 43 내지 49 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
51. 실시태양 43 내지 51 중 어느 하나의 용도에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
52. 실시태양 43 내지 51 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 항체, 특히 다중특이성 항체를 포함한다.
53. 실시태양 51의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
54. 실시태양 52 또는 53의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (a) 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
55. 실시태양 52 내지 54 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
56. 실시태양 52 내지 55 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 B-세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합한다.
57. 실시태양 56의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
58. 실시태양 56 또는 57의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
59. 실시태양 43 내지 58 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (i) 실시태양 53 내지 55 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 (ii) 실시태양 56 내지 58 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체이다.
60. 실시태양 43 내지 59 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
61. 실시태양 43 내지 51 중 어느 하나의 용도에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR), 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
62. 실시태양 43 내지 61 중 어느 하나의 용도에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD2-양성 B-세포 질환이고/이거나, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 질병이다.
63. 개체에서 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키기 위한 키트로, II형 항-CD20 항체 조성물 및
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 II형 항-CD20 항체 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
64. T-세포 활성화 치료제 조성물을 추가로 포함하는 실시태양 63의 키트.
65. 개체에서 질병을 치료하기 위한 키트로, T-세포 활성화 치료제 조성물 및
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제 조성물을 투여함
을 포함하는 치료 섭생에 상기 치료제 조성물을 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지를 포함하고, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
66. II형 항-CD20 항체 조성물을 추가로 포함하는 실시태양 65의 키트.
67. 실시태양 63 내지 66 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료 섭생은 상기 II형 항-CD20 항체 조성물의 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다.
68. 실시태양 63 내지 67 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
69. 실시태양 63 내지 68 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
70. 실시태양 63 내지 69 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
71. 실시태양 63 내지 70 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
72. 실시태양 63 내지 71 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
73. 실시태양 63 내지 72 중 어느 하나의 키트에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
74. 실시태양 63 내지 73 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 항체, 특히 다중특이성 항체를 포함한다.
75. 실시태양 74의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
76. 실시태양 74 또는 75의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
77. 실시태양 74 내지 76 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
78. 실시태양 74 내지 77 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 B-세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합한다.
79. 실시태양 78의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
80. 실시태양 78 또는 79의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
81. 실시태양 78 내지 80 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (i) 실시태양 75 내지 77 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 (ii) 실시태양 78 내지 80 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체이다.
82. 실시태양 63 내지 81 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
83. 실시태양 63 내지 73 중 어느 하나의 키트에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR), 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
84. 실시태양 63 내지 83 중 어느 하나의 키트에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD2-양성 B-세포 질환이고/이거나, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 질병이다.
85. 개체에서 질병을 치료하기 위한 방법에 사용하기 위한 T-세포 활성화 치료제로, 상기 방법은
(i) 상기 개체에게 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
(ii) 상기 개체에게 T-세포 활성화 치료제를 투여함
을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 여기에서 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간은 상기 CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분하다.
86. 실시태양 85의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료 섭생은 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 상기 개체에서 상기 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시킨다.
87. 실시태양 85 또는 86의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
88. 실시태양 85 내지 87 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
89. 실시태양 85 내지 88 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이다.
90. 실시태양 85 내지 89 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 조작되지 않은 항체에 비해 Fc 영역 중에 증가된 비율의 비-퓨코실화된 올리고사카라이드를 갖도록 조작된다.
91. 실시태양 85 내지 90 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 적어도 약 40%는 비-퓨코실화된다.
92. 실시태양 85 내지 91 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 II형 항-CD20 항체는 오비누투주맵이다.
93. 실시태양 85 내지 92 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제는 항체, 특히 다중특이성 항체를 포함한다.
94. 실시태양 93의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 활성화 T 세포 항원, 특히 CD3, CD28, CD137(또한 4-1BB로서 공지됨), CD40, CD226, OX40, GITR, CD27, HVEM, 및 CD127로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD3, 가장 특히 CD3ε에 특이적으로 결합한다.
95. 실시태양 93 또는 94의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
96. 실시태양 93 내지 95 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
97. 실시태양 93 내지 96 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 B-세포 항원, 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 항원, 보다 특히 CD20 또는 CD19, 가장 특히 CD20에 특이적으로 결합한다.
98. 실시태양 97의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
99. 실시태양 97 또는 98의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
100. 실시태양 85 내지 99 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제 중에 포함된 항체는 (i) 실시태양 94 내지 96 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 및 (ii) 실시태양 97 내지 99 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체를 포함하는 이중특이성 항체이다.
101. 실시태양 85 내지 100 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제는 CD20XCD3 bsAB를 포함한다.
102. 실시태양 85 내지 92 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 치료제는 키메릭 항원 수용체(CAR), 특히 B-세포 항원에 특이적으로 결합하는 CAR, 보다 특히 CD20, CD19, CD22, ROR-1, CD37 및 CD5의 그룹 중에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함한다.
103. 실시태양 85 내지 102 중 어느 하나의 T-세포 활성화 치료제에서, 상기 질병은 B 세포 증식성 질환, 특히 CD2-양성 B-세포 질환이고/이거나, 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DCBCL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(MZL), 다발성 골수종(MM) 및 호지킨 림프종(HL)으로 이루어지는 그룹 중에서 선택되는 질병이다.
실시예
하기는 본 발명의 방법 및 조성물의 실시예이다. 상기에 제공된 일반적인 설명이 제공되는 경우 다양한 다른 실시태양들을 실행할 수 있는 것으로 생각된다.
실시예 1
오비누투주맵(그러나 리툭시맵 또는 비히클은 아닌)에 의한 선행 처리는 키노몰구스 원숭이에서 파상풍 변성독소 특이적 드노보 IgG 항체 응답의 감쇠를 생성시킨다
오비누투주맵 또는 리툭시맵에 의한 B-세포 고갈이 외래 항원에 대한 체액 면역 응답에 미치는 기능상 영향을 평가하기 위해서, 키노몰구스 원숭이를, 상기 동물이 이전에 결코 경험하지 못했던 새로운 항원(파상풍 변성독소에 대한 드노보 응답) 또는 상기 동물이 CD20 항체 투여에 앞서 이미 접했던 면역원(홍역/풍진에 대한 기억 회상 응답)에 의한 추가 면역 재공격으로 처리 후 면역 공격하였다.
동물들에게 -14일 및 -7일째에 리툭시맵 또는 오비누투주맵 30 ㎎/㎏ 용량 또는 비히클을 i.v. 주입에 의해 투여하였다. 파상풍 변성독소에 의한 면역화를 0일째에 수행하였다. 모든 그룹으로부터 미경험 동물들은 0일째에 대략 0.1 IU/㎖의 기준선 항-파상풍 변성독소 IgG 크기를 가졌다. 7일째에, 비히클 처리된 동물 및 리툭시맵 처리된 동물은 대략 1.0 IU/㎖까지 증가된, 확고한 체액 항-파상풍 변성독소 IgG 응답에 올라선 반면, 오비누투주맵 처리된 동물은 감쇠된 응답을 보였으며, 0.1 IU/㎖의 배경 신호와 균등한 응답을 생성시켰다. 21일까지, 비히클 처리된 및 리툭시맵 처리된 동물에서 혈청학적 역가는 계속해서 2.5 IU/㎖의 피크 수준까지 상승하였다(도 1). 상기 오비누투주맵 처리된 동물은 0.5 IU/㎖로의 약간의 역가의 증가를 나타내기 시작하였으며, 상기 수준은 비히클 및 리툭시맵 처리된 그룹의 수준보다 현저하게 아래에 있다. 상기 혈청 IgG 응답은 모든 그룹에서 51일 및 68일까지 약해졌으며, 비히클에서 대략 1.5 IU/㎖, 리툭시맵에서 1.3 IU/㎖에 도달하였고 오비누투주맵 처리된 동물에서는 0.2 IU/㎖로 복귀하였다.
이러한 결과는 오비누투주맵에 의한 선행 처리(리툭시맵은 아님)가 키노몰구스 원숭이에서 파상풍 변성독소 특이적 드노보 IgG 항체 응답의 감쇠를 생성시킴을 가리킨다.
홍역/풍진 추가 백신화에 의한 재-공격의 면역화에 응답하는 홍역 특이적 IgG 항체 생성에 의한 기억 회상 응답을 조사하기 위해서 측정 가능한 기준선 양성 항-홍역 역가를 갖는 동물들을 선택하였다. 동물들에게 -14일 및 -7일째에 리툭시맵 또는 오비누투주맵 30 ㎎/㎏ 용량 또는 비히클을 i.v. 주입에 의해 투여하였다. 홍역/풍진 백신화에 의한 면역 재-공격을 0일째에 수행하였다. 기준선 -14일째 판독에 대한 광학 밀도 OD450 ㎚ 판독시의 변화 배수를 측정한 결과, 3개의 그룹 모두에서 21일, 51일 및 68일째에 항-홍역 역가의 측정 가능한 증가가 생성되었으며, 이때 상기 3개의 상이한 처리 그룹들 간에 홍역에 대한 상기 IgG 응답에 유의수준의 차이는 발견되지 않았다(도 2). 결론은 기억 회상 응답이 항-CD20 고갈 요법과 관계없이 완전하게 남아있었다는 것이다. 오비누투주맵 또는 리툭시맵의 투여는 선행 백신화의 결과로서 확립된 기준선 역가와 함께 홍역/풍진 백신화에 대한 추가 면역화에 대한 기억 회상 응답에 측정 가능한 영향을 미치지 않았다.
종합해보면, 이러한 결과는 오비누투주맵에 의한 선행 처리가 드노보 항체 응답의 강한 억제를 유도하였으나, 보호성 체액 기억 응답은 완전하게 남아있음을 나타내었다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 드노보 체액 항체 응답을 차단하는 능력이 가능하게는, 오비누투주맵에 의해 나타난 증가된 정도의 내인성 B-세포 고갈, 및/또는 활성화된, CD20 발현 B 세포를 고갈시키는 오비누투주맵의 증대된 능력에 기인할 수 있다.
실시예 2
국소적으로 진행된 및/또는 전이된 고형 종양을 갖는 환자에서, RO6895882(세르구투주맵 아무날류킨, CEA-IL2v)에 의한 요법에 선행하여 오비누투주맵에 의한 사전치료의 가능성, 안전성 및 약역학적 효과를 평가하기 위한 다기관, 무작위, 개방-표지 임상 1상 연구
방법
사전치료로서 오비누투주맵이 제공되거나 제공되지 않은, RO6895882의 개방-표지, 다기관, 무작위 임상 1b상 부-연구를 수행한다.
본 부-연구의 주목적은 오비누투주맵에 의한 사전치료가 RO6895882로 후속 치료된 환자에서 ADA의 형성을 예방하는지를 측정하는 것이다.
상기 시험은 표준 치유 요법을 진행했거나 또는 상기에 허용성이지 않은 국소적으로 진행된 및/또는 전이된 CEA-양성 고형 종양을 갖는 환자를 등록시킨다. 오비누투주맵 및 RO6895882를 정맥내(IV) 투여한다.
14명의 환자를 오비누투주맵 사전치료 부문으로 무작위 분류하고 5명의 환자는 오비누투주맵 사전치료 없는 대조용 부문으로 무작위 분류하였다. 상기 오비누투주맵 사전치료 환자는 2 g의 오비누투주맵을 수용하였으며, 2 연속일(2 x 1000 ㎎)로, 1주기 1일(C1D1) RO6895882 투여 전 -13일 및 -12일째(+/-2일)에 투여되었다. 전-투약은 각각의 오비누투주맵 투여 전에 제공되었다. C1D1에서 모든 환자는 고정되고 정확한 10 ㎎ 용량의 RO6895882를 수용하였다. 후속 주기에서 모든 환자는 20 ㎎의 RO6895882를 수용하였으며, 최소 2시간에 걸쳐 IV 주입으로 주2회(q2W) 투여되었다. 대조용 부문(오비누투주맵 사전치료 없이)의 환자는 오비누투주맵 사전치료 부문의 환자와 동일하게 C1D1에서 출발하여 RO6895882 투여를 수용하였다.
혈액 샘플을 B 림프구수의 모니터를 위해 치료기간 전 및 치료기간 동안 수집하였다. B 세포수를 유식 세포측정 및 CD19에 대한 염색을 사용하여 획득하였다. ADA 측정용 혈액 샘플을 기준선 및 그 후 상기 RO6895882 투여 후 2주마다 수득하였다.
모든 환자는 기준선 및 치료-중 종양 생검을 받았다. 상기 오비누투주맵 사전치료된 환자의 경우 기준선 생검을 무작위화 후, 오비누투주맵 투여 전에 받았다. 대조용 환자는 1주기 1일 RO6895882 투여에 앞서 종양 생검을 받았다. 오비누투주맵으로 사전치료된 첫 번째 5명의 환자로부터의 치료-중 종양 생검을, RO6895882 치료 시작전에 조직 B 세포 고갈을 확인하기 위해서 RO6895882 투여에 앞서 1주기 1일(+0/-1 일)에 수집하였다. 남은 오비누투주맵 사전-치료된 환자로부터, 반복된 종양 생검을 4주기 1일째 네 번째 RO6895882 투여에 앞서, 3주기 14일(+/-2 일)에 수집하였다. 상기 생검 조직의 한 부분을 B 림프구 검출을 위해 유식 세포측정 및 CD19 염색에 의해 분석하였다. 두 번째 부분은 포르말린 고정시키고 파라핀 포매하고 CD20 및 PAX5 염색을 사용하여 B 림프구에 대해 분석하였다.
본 연구의 주목적은 4주기째에 ADA 역가를 갖는 환자 비율의 감소에 대한 오비누투주맵에 의한 사전-치료 효과를 평가하고 RO6895882 처리에 앞서 오비누투주맵 투여의 안전성 및 내약성을 평가하기 위한 것이었다.
본 연구의 2차 목적은 상기 RO6895882 ADA(4주기째)의 특성화 및 오비누투주맵 사전-치료로부터 생성되는 조직(종양 및 피부) 및 말초 혈액 중 B-세포 고갈의 특성화를 포함하였다.
결과
RO6895882(세르구투주맵 아무날류킨, CEA-IL2v)를 연구 BP28920 EIH 연구(ClinicalTrials.gov identifier: NCT02004106)에서 시험하였다. 2016년 11월 현재, 연구 BP28920으로부터의 임시 결과는 74명의 환자 중 59명(80%)에서 항-CEA-IL2v 항체가 검출되었음을 보인다. 상기 59명의 ADA-양성 환자 중에서, 58명(98%)은 지속적인 면역 응답을 보인 반면 1명(1.6%)은 일시적인 면역 응답을 보였다. 상기 ADA 응답의 강도 범위는 낮은 역가에서부터 높은 역가까지(10 - 196.830)이며, 59명의 지속적인 ADA-양성 사례 중 32명(54%)은 높은 ADA 역가(>100)를 나타낸다. 면역 응답의 첫 번째 개시는 5일째 정도로 일찍, 즉 1차 용량 96h 후, RO6895882(세르구투주맵 아무날류킨, CEA-IL2v)의 1회 용량 후에 관찰되었다. 기존의 ADA 환자는 확인되지 않았으며 모든 ADA는 치료 유발되었다. 59명의 환자 중 5명(8%)에서, 높은 ADA 역가(>100) 외에, 노출의 상실이 관찰되었다. 과민성 반응 또는 과민성을 암시하는 징후 및 증상도, ADA-매개된 부작용의 증거도, RO6895882를 수용한 상기 108명의 환자에서 보고되지 않았다.
상술한 임상적인 부-연구는 항-약물 항체(ADA)의 발생을 감쇠시키기 위해 RO6895882(세르구투주맵 아무날류킨, CEA-IL2v)의 투여에 대한 사전-치료로서 제공된 오비누투주맵(가지바(Gazyva)(등록상표))의 잠재성을 탐구하기 위해 개시되었다. 상기 연구는 종결되었다.
14명의 오비누투주맵 치료된 환자 중 14명이 2주기 1일째(처음 RO6895882 투여후 2주째) 및 전체 연기 기간 전체를 통해 RO6895882에 대한 ADA 없이 남아있었다. 가장 긴 치료-중 추적조사 기간은 10 치료 주기, 즉 20주 이하였다. 오비누투주맵으로 사전-치료되지 않은 5명의 대조용 환자 중 4명은 RO6895882의 1회 투여 후 10 내지 270의 역가로 ADA가 발생하였다.
오비누투주맵 사전-치료의 안전성 프로파일은 국소적으로 진행된 및/또는 전이된 고형 종양이 있는 환자에서 허용 가능하였다. 오비누투주맵/CEA-IL2v 치료를 수용한 환자들은 상기 CEA-IL2v 단독요법에 비해 예상치 못한 AE를 경험하지 않았다. 부작용으로 인한 치명적인 결과는 보고되지 않았다.
말초 혈액의 유식 세포측정 분석은 오비누투주맵 치료후 B 세포의 완전한 고갈을 가리켰다. RO6895882에 의한 치료의 출발(C1D1) 전에, 수집된 혈액 샘플에서 B 세포를 검출할 수 없었다(도 3).
오비누투주맵 사전-치료 환자로부터의 종양 생검 샘플을 B 세포의 빈도에 대해 유식 세포측정 및 면역조직화학(IHC) 모두에 의해 분석하였다. 유식 세포측정 분석(도 4)은 B 림프구상에서 발현된 표면 단백질, CD19에 대해 양성 염색되는 세포의 수 및 비율의 큰 감소를 보였다. 상기 대응되는 종양 생검 샘플의 상이한 부분의 IHC 분석은 B 세포상에서 발현된 제2 항원, CD20에 대해 양성 염색되는 세포의 감소를 검출하였다(도 5A 및 B). CD20 염색의 감소가 항-CD20 염색과 경쟁할 수도 있는 오비누투주맵에 의해 야기되는 것을 배제하기 위해서, 상기 결과를, 또한 강하게 감소된 PAX5, B 세포 특이성 전사 인자에 의한 염색에 의해 확인하였다(도 5C 및 D). 종합해보면, 이러한 결과는 종양 및 인접한 정상 조직 중 B 세포의 유효한 감소를 가리킨다.
결론적으로, 상기 부-연구로부터의 상기 데이터는 오비누투주맵이 ADA의 경감에 효능이 있음을 강하게 암시한다.
실시예 3
CEA TCB에 의한 치료법에 앞서 오비누투주맵에 의한 사전-치료의 가능성, 안전성 및 약역학적 효과의 임상 평가
CEA TCB(ClinicalTrials.gov identifier: NCT02324257)에 의한 진행 중인 I상 임상 시험은, 표준 치료가 진행되었고 치유 기준(SOC)에 허용되지 않으며, 및/또는 SOC에 따르지 않는, 국소적으로 진행된 및/또는 전이된 CEA-양성 고형 종양이 있는 환자들을 등록시켰다.
환자들의 평행 코호트를 개방하여 오비누투주맵으로 사전치료할 환자들을 등록시킨다. 이들 코호트의 주목적은 오비누투주맵에 의한 사전치료가 CEA TCB로 후속 치료되는 환자들에서 ADA의 형성을 예방하는지를 측정하는 것이다. 오비누투주맵 및 CEA TCB를 정맥내(IV) 투여한다. 상기 오비누투주맵 사전치료 코호트의 환자들은 2000 ㎎의 오비누투주맵을 1주기 1일(C1D1)의 CEA TCB 투여전에, -13일째에 2000 ㎎의 오비누투주맵 IV 또는 2 연속일로 -13일 및 -12일째(±2일)에 1000 ㎎의 오비누투주맵으로 수용한다. 진통제, 항-히스타민제 및 코르티코스테로이드를 포함한 전-투약을 각각의 오비누투주맵 투여에 앞서 제공한다. C1D1에서, 모든 환자는 정확한 용량(상기 진행 중인 임상 시험에서 정의된 바와 같이, 할당된 용량 코호트에 따라)의 CEA TCB를 최소 120-분 IV 주입에 걸쳐 수용한다. 후속 주기에서, 모든 환자는, C2D1에서 최소 90-분 IV 주입 및 C3D1 이후 매주(QW) 최소 60-분 IV 주입에 걸쳐 투여되는 동일한 용량의 CEA TCB를 수용한다. 오비누투주맵 사전치료를 수용하지 않은 환자들은 상기 오비누투주맵 사전치료 코호트 환자들과 동일하게 C1D1에서 출발하여 CEA TCB 투여를 수용한다. 혈액 샘플을 B 림프구수의 모니터를 위해 상기 치료기간 전 및 치료기간 동안 수집한다. B 세포수를 유식 세포측정 및 CD19에 대한 염색을 사용하여 획득한다. CEA TCB의 혈청 수준을 평가하고 ADA를 측정하기 위한 PK용 혈액 샘플을 기준선 및 그 후 CEA TCB 투여의 각 주기에서 수득한다. 오비누투주맵 사전치료를 수용하는 환자들의 상기 코호트의 주목적은 8주째에 CEA TCB에 대한 양성 항-약물 항체(ADA)를 갖는 환자의 비율을 감소시키고/시키거나 CEA TCB에 대한 ADA의 시작 시간을 지연시키는데 있어서 오비누투주맵 사전치료의 효과, 및 CEA TCB에 의한 치료에 앞서 오비누투주맵의 투여의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 상기 연구는 또한 CEA TCB에 대한 ADA의 특성화를 관찰할 것이며; 또한 오비누투주맵 사전치료로부터 생성되는 조직(종양 생검을 기준선 및 CEA TCB에 의한 C1D1 후 7주째에 착수한다) 및 말초 혈액 중 B-세포 고갈의 조사 및 특성화를 포함한다.
임시 결과
CEA TCB는 EIH 연구(ClinicalTrials.gov identifier: NCT02324257)에서 시험 중에 있다. 2016년 10월 27일 현재(ADA 데이터 컷오프), 연구 BP29541로부터의 임시 결과는, 일시적인 양의 역가를 갖는 2명의 환자(한 명은 2주기1일에 30의 역가를 가졌으나 이어서 24주기까지 음성으로 되었으며 또 다른 한 명은 3주기1일에 270 및 4주기1일에 90의 역가를 가졌으나 이어서 8주기까지 음성으로 되었다)를 제외하고 77명의 환자 중 40명(52%)에서 항-CEA TCB 항체가 검출되었음을 보인다(이들 환자 중 누구도 오비누투주맵 사전치료를 받지 않았다). 이들 2명의 환자를 제외하고, 상기 38명의 다른 ADA-양성 환자들은 모두 지속적인 면역 응답을 보였다. ADA 응답 강도의 범위는 낮은 역가에서부터 높은 역가까지였다(10 - 21870). 38명의 지속적인 ADA-양성 사례 중 17명(45%)은 보통의 ADA 역가(≤810)를 보인 반면, 28명의 지속적인 ADA-양성 사례 중 21명(55%)은 높은 ADA 역가(>810)를 보였다. 면역 응답의 첫 번째 시작은 8일째에(C2D1 사전-용량) 1회 용량의 CEA TCB 후에 관찰되었으나, 3명의 환자는 1주기1일 사전-용량에서 양성 역가를 가졌다. 기존에 ADA를 갖는 3명의 환자가 확인되었으며 다른 모든 환자들에서 ADA는 치료-유발되었다. 지속적인 면역 응답을 갖는 38명의 환자 중 24명(63%)에서, 상기 지속된 ADA 응답은 노출의 완전한 상실(3주기1일로부터 13주기1일의 범위(PK 데이터 컷오프: 2016년 11월 7일))과 상관있었다. 지금까지 과민성 반응 또는 과민성을 암시하는 징후 및 증상이나, ADA-매개된 부작용의 증거가, CEA TCB를 수용한 상기 77명의 환자에서 보고되지 않았다. 오비누투주맵 사전치료를 수용한 환자들의 평행 코호트에 대한 상술한 임상 연구를 개시하여 항-약물 항체(ADA)의 발생을 감쇠시키기 위한 CEA TCB의 투여에 대한 사전-치료로서 제공된 오비누투주맵(가지바(Gazyva)(등록상표)/가지바로(Gazyvaro)(등록상표))의 잠재성을 조사하였다. 상기 연구는 진행 중이다. 상기 임시 데이터에 따르면, 2016년 10월 27일의 임상 컷오프 데이터(ADA 데이터 컷오프) 현재, 지금까지 ADA 데이터를 입수할 수 있는 12명의 오비누투주맵 사전 치료된 환자(상기 환자들 중 2명은 그 사이 임상적으로 악화되었기 때문에 오비누투주맵만을 수용하였고 어떠한 CEA TCB 주입도 수용하지 않았다)는 하기의 시점들에서 CEA TCB에 대한 ADA 없이 남아있었다: 1명의 환자 C1까지, 1명의 환자 C3까지, 1명의 환자 C4까지, 1명의 환자 C6까지, 1명의 환자 C8까지, 1명의 환자 C10까지, 2명의 환자 C12까지, 1명의 환자 C16까지, 1명의 환자 C25까지.
오비누투주맵으로 사전 치료되지 않은 65명의 환자 중 8명은 1회 용량의 CEA TCB 후에 10 내지 810의 역가로 ADA가 발생하였다. 예비 안전성 분석을 근거로, 상기 오비누투주맵 사전치료의 안전성 프로파일은 국소적으로 진행된 및/또는 전이된 고형 종양을 갖는 환자에서 허용 가능하였다. 매주 용량의 CEA TCB를 수용하기 전에 오비누투주맵 사전치료를 수용한 환자는 오비누투주맵 사전치료를 수용하지 않은 환자들에 비해 예상밖의 부작용(AE)을 경험하지 않았다. 말초 혈액의 유식 세포측정 분석은 오비누투주맵 치료후 B 세포의 완전한 고갈을 나타내었다. CEA TCB(C1D1)에 의한 치료의 출발 전, 상기 수집된 혈액 샘플에서 B 세포를 검출할 수 없었다. 오비누투주맵 사전치료 환자로부터의 종양 생검 샘플을 오비누투주맵 사전치료를 수용하기 전 기준선 및 7주기1일의 치료 중에 채취하였다. 상기 분석은 여전히 진행 중이다.
실시예 4
완전히 인간화된 마우스에서 CD20XCD3 bsAB ± 오비누투주맵 전처리(Gpt)에 의해 매개된 항-종양 활성 및 사이토킨 방출의 평가
우리는 Gpt가 완전히 인간화된 NOG 마우스에서 CD20XCD3 bsAB의 1차 투여와 관련된 사이토킨 방출을 예방할 수 있는지의 여부를 조사하였다.
모든 처리 옵션(오비누투주맵, CD20XCD3 bsAB 및 Gpt + CD20XCD3 bsAB)은 이미 1차 요법 투여 24시간 후에 효율적인 말초 혈액 B-세포 고갈을 유도하였다(도 7A). T 세포수는 CD20XCD3 bsAB의 1차 투여후 24시간째에 말초 혈액에서 일시적인 감소를 나타내었으나, 오비누투주맵 또는 Gpt + CD20XCD3 bsAB 후에는 아니었다(도 7B). 따라서, CD20XCD3 bsAB에 앞서 투여시 오비누투주맵의 단일 투여는 상기 말초 혈액에서 CD20XCD3 bsAB-매개된 T 세포 감소를 없앤다.
상이한 실험 그룹들에서 처리된 마우스의 혈액 중에 방출된 사이토킨의 분석은 CD20XCD3 bsAB 처리가 혈액 중에서 다수의 사이토킨의 일시적인 상승을 유도하며, 상기 1차 투여후 24시간째에 피크이고 72시간까지 기준선 수준에 가깝게 회복됨을 나타내었다(도 8). MIP-1b, IL-5, IL-10, MCP-1은 IFNγ, TNFα 및 IL-6(도시 안 됨)에 대해 유사한 성향을 보인다. Gpt는 상기 1차 CD20XCD3 bsAB 주사와 관련된 말초 혈액에서 사이토킨 방출을 강하게 감소시켰다(표 2).
[표 2]
Figure pct00004
CD20XCD3 bsAB의 항-종양 활성은 오비누투주맵에 의한 전처리에 의해 영향을 받지 않았다(도 9). 오비누투주맵 치료는 단독요법으로서 강한 항-종양 활성을 나타냈지만, 상기 종양 및 마우스 모델에서 CD20XCD3 bsAB에 비해 보다 느린 동역학을 갖는다.
따라서 상기 데이터는 Gpt가 상기 1차 CD20XCD3 bsAB 주사와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키지만, 종양 세포상의 동일한 항원을 표적화함에도 불구하고, CD20XCD3 bsAB의 항-종양 활성은 Gpt에 의해 여향을 받지 않음을 가리킨다.
실시예 5
키노몰구스 원숭이에서 오비누투주맵 전처리 연구
수컷 키노몰구스 원숭이에서 역학적 연구(비-GLP)를 수행하여 0.1, 0.3 및 1 ㎎/㎏ 용량의 CD20XCD3 bsAB에의 응답에 대한 오비누투주맵의 전처리 효과를 조사하였다(표 3). 상기 연구에서 6마리의 미경험 키노몰구스 수컷 원숭이/그룹(그룹 1의 경우 4마리)은 IV 용량의 대조용 항목 1(그룹 1 및 2) 또는 오비누투주맵(50 ㎎/㎏, 그룹 3, 4, 5)에 이어서 4일 후에 대조용 항목 2(그룹 1), CD20XCD3 bsAB, 0.1 ㎎/㎏(그룹 2, 그룹 3), CD20XCD3 bsAB, 0.3 ㎎/㎏(그룹 4) 또는 CD20XCD3 bsAB, 1 ㎎/㎏(그룹 5)에 의한 처리를 수용하였다. 오비누투주맵과 CD20XCD3 bsAB 투여간에 4일이면 오비누투주맵에 의한 말초 혈액, 림프절 및 비장에서의 B 세포 고갈을 허용하기에 충분한 것으로 간주되었다. 12일째에, 그룹 1로부터 2마리 동물, 및 그룹 2 내지 5로부터 4마리 동물을 해부하였다(종점 해부). 각 그룹으로부터 2마리의 동물을 8-주 회복 기간 동안 유지시켰다.
[표 3]
Figure pct00005
하기의 데이터를 상기 연구로부터 입수할 수 있다:
·오비누투주맵에 의한 전처리(50 ㎎/㎏, Gpt)에 이어서, CD20XCD3 bsAB의 투여가 최고 시험 용량인 1 ㎎/㎏까지 허용되었다. CD20XCD3 bsAB 단독에 대해 관찰된 임상 징후(구토, 웅크린 자세 및 과소활동)가 모든 용량의 CD20XCD3 bsAB에서 Gpt에 의해 현저하게 감소되었다.
·CD20XCD3 bsAB 투여 단독은 B 림프구의 감소 및 T-림프구(CD4+ 및 CD8+) 부분집합 및 NK 세포의 활성화 및 확대를 생성시켰다. 대조적으로, CD20XCD3 bsAB 투여에 앞서 오비누투주맵의 투여는 CD20XCD3 bsAB 단독으로 처리된 동물들에 대해서 존재하는 변화에 비해, B-림프구 고갈뿐만 아니라, CD20XCD3 bsAB 투여후 림프구 및 단핵세포 집단의 일시적인 감소의 감소뿐만 아니라 T-세포 활성화 마커 상향조절 및 확대의 감소에 의해 입증되는 바와 같이 T-림프구 활성화의 후속의 감쇠를 생성시켰다.
·0.1 ㎎/㎏ CD20XCD3 bsAB 처리-후 4시간째에 IFNγ, IL-8, TNFα, IL-2 및 IL-6의 방출이 상기 Gpt 그룹에서 현저하게 감소되었다. 유사하게, 낮은 수준의 사이토킨 방출이 Gpt 그룹 중 보다 높은 용량의 CD20XCD3 bsAB에서 주목되었다(도 10).
CD20XCD3 bsAB-관련된 조직병리학적 발견은 림프 기관으로 제한되었다(예를 들어 CD20-양성 세포에 특이적으로 영향을 미치는 감소된 세포질이 비장의 림프 여포에서 존재하였다). 상기 CD20-양성 세포 감소는 8주 무처리 기간 후에 거의 완전하게 역전되었다. 0.1 ㎎/㎏의 CD20XCD3 bsAB로 처리된 원숭이에서 및 Gpt에 이어서 0.1, 0.3 또는 1 ㎎/㎏의 CD20XCD3 bsAB 투여된 동물에서 뇌, 척수 및 궁둥신경을 포함하여 다른 조직병리학적 변화는 존재하지 않았다.
실시예 6
r/r NHL을 갖는 환자에서 오비누투주맵 사전치료와 함께 CD20XCD3 bsAB의 안전성, 내약성 및 약동학의 임상적 평가
I상 용량-점증 연구를 수행할 것이며, 이의 주목적은 재발/무반응성(r/r) NHL을 갖는 환자에서 오비누투주맵 사전치료와 함께 CD20XCD3 bsAB 안전성, 내약성 및 약동학의 평가를 포함한다.
상기 연구는 B 세포에서 CD20을 발현할 것으로 예상되는 종양을 갖는 r/r NHL 환자를 등록시킬 것이다. CLL 환자는 등록되지 않을 것이다. 환자들은 적어도 하나의 선행 치료 섭생 후에 재발되었거나 또는 상기 섭생 응답에 실패했을 것으로 예상된다.
오비누투주맵 및 CD20XCD3 bsAB를 정맥내로(IV) 투여할 것이다.
오비누투주맵 및 CD20XCD3 bsAB의 투여에 앞서, 코르티코스테로이드(예를 들어 20 ㎎ IV 덱사메타손, 80 ㎎ IV 메틸프레드니손, 또는 균등물)에 의한 전투약이 항-히스타민제 및 아세트아미노펜과 함께 투여될 것이다. 다른 사건들, 예를 들어 종양 용해 증후군에 대한 예방학적 수단이 또한 필요에 따라 권장되거나 또는 지시될 것이다.
CD20XCD3 bsAB가, 1차 CD20XCD3 bsAB 용량(1주기/1일)에 7일 먼저(주기1/-7일) 단일 용량의 오비누투주맵(1000 ㎎; IV)에 의한 사전 치료에 이어서, 단일 약제로서 1주기/1일(C1/D1)에 정맥내(IV) 주입에 의해 개시될 것이다. 예상되는 CD20XCD3 bsAB의 출발 용량은 5 마이크로그램(정확한 투여)이 될 것이다. 모든 투여 주기는 14일(Q2W) 길이이며, 이때 오직 1주기에서만 하나의 추가적인 용량이 제공된다. 따라서, 상기 투여 설계는 주기1에서 1일 및 8일째(C1/D1; C1/D8)에 CD20XCD3 bsAB의 투여에 이어서, 총 12 치료 주기(24주) 동안 또는 허용될 수 없는 독성 또는 진행이 발생할 때까지 모든 후속 주기에서 오직 1일(Q2W)에만 투여하는 것이다.
혈액 샘플을 적합한 시점들에서 수집하여 혈중 일련의 PD 마커뿐만 아니라 CD20XCD3 bsAB의 관련된 PK 성질을 측정하고, 예를 들어 Gpt 및 CD20XCD3 bsAB 용량 개시에 따른 B-세포 고갈의 크기 및 동역학, T-세포 표현형을 평가하고, 선택된 시점들에서 Gpt 및 CD20XCD3 bsAB의 투여에 따른 용해성 매개인자 방출(사이토킨 및 케모킨)을 평가할 것이다.
실시예 7
점진적 증가 투여(SUD) 및 오비누투주맵 전처리(Gpt)의 항-종양 활성의 비교
본 실시예에 나타내는 바와 같이, Gpt는 말초 조직 중 T-세포 재분배 및 항-종양 활성에 대해서 점진적 증가 투여(SUD)보다 우수한 접근법이다.
완전히 인간화된 NOG 암컷 마우스(타코닉(Taconic))를 사내 생성시켰다. 주령은 실험 출발시 20주였다. 모든 마우스에게 0연구일에 1.5x106의 WSU-DLCL2 세포(인간 미만성 거대 B 세포 림프종)를 s.c. 주사하였다. 종양 세포 투여 7일 후에(7일째), 마우스에게 표 4에 나타낸 바와 같은 1차 처리를 i.v. 투여하였다. 표 4에 나타낸 바와 같은 2차 처리는 14일째에 투여하였다.
9주의 CD20XCD3 bsAB 처리에 이어서, 연구 종결시(69일째) 무종양 마우스의 수는 처리가 3개의 단일 분획화된 용량의 CD20XCD3 bsAB(SUD) 중 어느 하나가 선행될 때보다 오비누투주맵이 선행될 때(Gpt) 더 높았다(도 11, 표 4).
[표 4]
Figure pct00006
우수한 항-종양 효능 외에, 1차 (전)처리에 이어서 7일째에(14 연구일에 해당함), 혈관주위 CD3 양성 T 세포의 증가가 CD20XCD3 bsAB-처리된 마우스(전체 용량 또는 상기 전체 용량의 분획)의 폐에서 관찰되었으나, 오비누투주맵(10 ㎎/㎏)-처리된 마우스에서는 관찰되지 않았다(도 12 A-D). 2차 처리 24시간 후(15 연구일)에 상응하는 나중의 시점에서 상기 분석에 대해서 상기 결과는 참이었다(도 12 E-H).
본 실험을 위해서, 마우스를 생성시키고 상술한 바와 같이 종양 세포를 주사하였다. 종양 세포 투여 7일 후에, 마우스에게 표 5A에 나타낸 바와 같은 처리를 i.v. 투여하였다.
4마리의 동물/그룹을 단일 용량의 CD20XCD3 bsAB, 오비누투주맵 또는 비히클 수용후 7일째에 죽였다. 남은 4마리 동물/그룹을 표 5B에 나타낸 바와 같이, 14일째에 상기 2차 처리 수용후 24시간째에 죽였다. 대조용은 비히클 완충제를 수용하였다.
폐, 간 및 신장을 해부시 수집하고 일련의 절편들을 확립된 프로토콜에 따라 인간 CD3에 대해 면역조직화학(IHC)으로 염색하였다. CD3에 대해 면역조직화학적으로 염색된 절편들을 0점(상기 조각에서 CD3 양성세포가 없거나 드물다)에서부터 3점(혈관/도관을 둘러싸는 다수의 CD3 양성 세포)까지의 점수를 사용하여 면허가 있는 수의병리학자에 의해 맹검 평가하였다.
폐 절편으로부터의 전형적인 결과를 도 12, 표 5에 나타낸다.
혈관주위 CD3 양성 T 세포의 용량 의존적인 증가가 단일 용량의 ≥0.05 ㎎/㎏ CD20XCD3 bsAB(전체 용량 또는 상기 전체 용량의 분획) 투여 7일 후에 마우스의 폐에서 관찰되었으나, 오비누투주맵-처리된 마우스에서는 관찰되지 않았다(도 12 A-D, 표 5A).
[표 5A]
Figure pct00007
혈관주위 T 세포의 증가가 또한 단일 또는 반복된 용량의 CD20XCD3 bsAB 24시간 후에 마우스에서 관찰되었으나, 오비누투주맵으로 처리된 마우스에서는 관찰되지 않았다(도 12 E-H, 표 5B).
[표 5B]
Figure pct00008
처리후 24시간째에 죽인, 단일 용량의 0.5 ㎎/㎏의 CD20XCD3 bsAB를 수용한 동물에서, CD3 양성 T 세포의 변연화 및 유착이 폐 혈관에서 존재하였으며(도 13), 이는 혈관주위 공간내로의 이행과 함께 T 세포의 조기 활성화를 암시한다.
결론적으로, 전체 용량 또는 상기 전체 용량의 분획의 CD20XCD3 bsAB에 의한 단일 또는 반복 처리는, 폐에서 혈관주위 분포, 간에서 혈관주위/도관주위 분포 및 신장에서 사구체(간 및 신장 데이터는 도시 안 됨)에서의 분포와 함께 대조용에 비해 CD3 양성 T 세포의 증가를 생성시켰다. 이러한 변화는 오비누투주맵으로 전처리된 동물에서는 발생하지 않았다.
실시예 8
Gpt 존재 또는 부재하에 키노몰구스 원숭이에서의 CD20XCD3 bsAB 노출의 비교
본 실시예에서, Gpt는 CD20XCD3 bsAB 노출을 증가시키는 것으로 나타난다. 키노몰구스 원숭이에게 오비누투주맵 전처리(Gpt)(50 ㎎/㎏, CD20XCD3 bsAB 투여 4일 전)가 있거나 없이 100 내지 1000 ㎍/㎏ CD20XCD3 bsAB의 단일 IV 용량을 투여하였다.
오비누투주맵(50 ㎎/㎏)에 의한 CD20+ B 세포의 고갈로부터 생성되는 증가된 노출이 Gpt가 있거나 없이 100 ㎍/㎏ CD20XCD3 bsAB의 단일 용량에 따른 CD20XCD3 bsAB 혈청 수준에 의해 나타났다(도 14). Gpt에 따른 CD20XCD3 bsAB의 제거가 Gpt 없는 그룹에서 관찰된 제거의 약 1/4까지 현저하게 감소되었다(표 6). CD20XCD3 bsAB 투여시까지, B 세포가 기준선 수준의 약 1 내지 5%까지 Gpt에 의해 감소되었다. 상기 제거의 감소는 Gpt-유발된 B-세포 고갈 및 B-세포 결합으로부터 생성되는 표적-매개된 제거의 감소와 일치한다. Gpt에 이어서, 제거 및 중심 분배 부피(Vc)는 상기 연구된 용량 범위에서 용량과 무관하였으며, 제거값은 대략 90 ㎖/일/㎏이고 Vc 값은 대략 40 ㎖/㎏이었으며, 이는 상기 혈청 부피와 유사하다.
[표 6]
Figure pct00009
실시예 9
CAR-T 세포에 의한 입양 T 세포요법 후 사이토킨 방출을 피하기 위한 오비누투주맵 사전-치료
사이토킨 방출 증후군(CRS)은 CD20 또는 CD22에 대한 CAR-T 세포뿐만 아니라 CD19 CAR-T 세포에 의한 치료에 따른 매우 흔한 현상으로, 치명적인 부작용을 생성시킬 수 있다. CRS를 피하거나 감소시키기 위한 전략들은 CAR-T 요법의 다양한 태양들에 집중하고 있다(문헌[Xu and Tang, Cancer Letters (2014) 343, 172-178]에 리뷰되어 있다).
우리는 오비누투주맵 사전-치료를 사용하는 말초 및 악성 B 세포의 고갈에 의해, B 세포 증식성 질환에서 CAR-T 세포에 의한 치료에 따른 CRS를 피하는 신규의 접근법을 제시한다.
상기 목적을 위해서 B-세포 증식성 질환(예를 들어 NHL)을 갖는 환자들을 오비누투주맵 사전-치료 부문 및 오비누투주맵 사전-치료가 없는 대조용으로 무작위 분류한다. 상기 오비누투주맵 사전-치료 부문의 환자들은 CD19, CD20 또는 CD22 CAR-T 세포의 투여전 -7일째(+/-2일)에 투여되는, 1 g의 오비누투주맵을 수용한다.
환자들에게, 사용되는 특정한 CAR-T 세포, 치료되는 환자 및 질병에 적합한 용량으로 CAR 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 자기유래 T 세포를 주입한다(예를 들어 문헌[Maude et al., N Engl J Med (2014) 371,1507-1517]에 기재된 바와 같이 체중 킬로그램당 0.76x106 내지 20.6x106 CAR-T 세포; 문헌[Grupp et al., New Engl J Med (2013) 368, 1509-1518]에 기재된 바와 같이 체중 킬로그램당 1.4x106 내지 1.2x107 CAR-T 세포; 또는 문헌[Porter et al., Sci Transl Med (2015) 7, 303ra139]에 기재된 바와 같이 0.14x108 내지 11x108 CAR-T 세포). 환자들을 반응, 독성 효과, 및 순환하는 CAR-T 세포의 확대 및 지속성에 대해 모니터한다.
전-투약을 각각의 오비누투주맵 투여에 앞서 제공한다. 혈액 샘플을 B 림프구수의 모니터를 위해 상기 치료기간 전 및 치료기간 동안 수집한다. B 세포수를 유식세포측정 및 CD19에 대한 염색을 사용하여 획득한다. 또한, CRS의 발생률을 IL-6을 포함한 사이토킨을 측정함으로써 선별한다.
상기 발명을 이해의 명확성을 위해서 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 기재하였지만, 명세서 및 실시예를 본 발명의 범위를 제한하는 것으로서 해석해서는 안 된다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 내용은 전체가 본 발명에 명백히 인용된다.
SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Type II Anti-CD20 Antibody for Reducing Formation of Anti-drug Antibodies <130> P33257 <140> PCT/EP2016/079800 <141> 2016-12-06 <150> EP15198715.3 <151> 2015-12-09 <150> EP16172739.1 <151> 2016-06-02 <150> EP16193151.4 <151> 2016-10-10 <160> 150 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 297 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro 1 5 10 15 Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg 20 25 30 Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile 50 55 60 Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile 65 70 75 80 Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile 85 90 95 Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu 100 105 110 Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile 115 120 125 Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile 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Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro <210> 149 <211> 674 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD19 VH-CH1(EE)-CD3 VL-CH1-Fc(knob, P329G LALA) <400> 149 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ile Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Ser Lys Tyr Thr Glu Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Pro Gln Leu Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 225 230 235 240 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 245 250 255 Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 260 265 270 Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 275 280 285 Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 290 295 300 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu 305 310 315 320 Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 325 330 335 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 340 345 350 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 355 360 365 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 370 375 380 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 385 390 395 400 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 405 410 415 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 420 425 430 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 435 440 445 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala 450 455 460 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 465 470 475 480 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 485 490 495 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 500 505 510 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 515 520 525 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 530 535 540 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro 545 550 555 560 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 565 570 575 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 580 585 590 Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 595 600 605 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 610 615 620 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 625 630 635 640 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 645 650 655 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 660 665 670 Ser Pro <210> 150 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD19 VL-CL(RK) <400> 150 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Glu Thr Ser 20 25 30 Thr Gly Thr Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu 85 90 95 Leu Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg 115 120 125 Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (23)

  1. 개체에서 질병 치료 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체로서, 상기 방법이
    (i) 상기 개체에게 상기 II형 항-CD20 항체를 투여하고, 연속적으로 일정 기간 후에
    (ii) 상기 개체에게 치료제를 투여함
    을 포함하는 치료 섭생을 포함하며, 상기 II형 항-CD20 항체의 투여와 상기 치료제의 투여 사이의 기간이 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 상기 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분한, II형 항-CD20 항체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    치료 섭생이 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 개체에서 치료제의 투여에 응답하는 항-약물 항체(ADA)의 형성을 유효하게 감소시키는 II형 항-CD20 항체.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    치료 섭생이 II형 항-CD20 항체 투여 없이 상응하는 치료 섭생에 비해, 개체에서 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 유효하게 감소시키는 II형 항-CD20 항체.
  4. 제 3 항에 있어서,
    치료제가 T 세포 활성화 치료제인 II형 항-CD20 항체.
  5. 개체에게 치료제 투여 전에 II형 항-CD20 항체를 투여함을 포함하는, (i) 상기 개체에서 상기 치료제에 대한 항-약물 항체(ADA)의 형성을 감소시키고/시키거나 (ii) 상기 개체에서 상기 치료제, 특히 T-세포 활성화 치료제의 투여와 관련된 사이토킨 방출을 감소시키는 방법에 사용하기 위한 II형 항-CD20 항체.
  6. 제 5 항에 있어서,
    II형 항-CD20 항체의 투여와 치료제의 투여 사이의 기간이 상기 II형 항-CD20 항체의 투여에 응답하여 개체에서 B-세포의 수를 감소시키기에 충분한 II형 항-CD20 항체.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 IgG 항체, 특히 IgG1 항체이고, 상기 항-CD20 항체의 Fc 영역 중의 N-결합된 올리고사카라이드의 약 40% 이상이 비-퓨코실화되는 II형 항-CD20 항체.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 오비누투주맵인 II형 항-CD20 항체.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 폴리펩타이드를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 항체를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  13. 제 12 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가 암태아성 항원(CEA)에 특이적으로 결합하는 II형 항-CD20 항체.
  14. 제 13 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가
    (i) 서열번호 14의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 15의 HCDR2, 및 서열번호 16의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 17의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 18의 LCDR2 및 서열번호 19의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (ii) 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 21의 경쇄 가변 영역 서열
    을 포함하는
    II형 항-CD20 항체.
  15. 제 12 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가 CD3, 특히 CD3ε에 특이적으로 결합하는 II형 항-CD20 항체.
  16. 제 15 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가
    (i) 서열번호 32의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 33의 HCDR2, 및 서열번호 34의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 35의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 36의 LCDR2 및 서열번호 37의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (ii) 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 39의 경쇄 가변 영역 서열
    을 포함하는
    II형 항-CD20 항체.
  17. 제 12 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가 CD20에 특이적으로 결합하는 II형 항-CD20 항체.
  18. 제 15 항에 있어서,
    치료제 중에 포함된 항체가
    (i) 서열번호 4의 중쇄 CDR(HCDR) 1, 서열번호 5의 HCDR2, 및 서열번호 6의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 7의 경쇄 CDR(LCDR) 1, 서열번호 8의 LCDR2 및 서열번호 9의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (ii) 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 서열 및 서열번호 11의 경쇄 가변 영역 서열
    을 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 사이토킨, 특히 인터류킨-2를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  20. 제 19 항에 있어서,
    사이토킨이 아미노산 치환 F42A, Y45A 및 L72G(인간 IL-2 서열 서열번호 12에 관한 넘버링)를 포함하는 돌연변이 인간 IL-2 폴리펩타이드인 II형 항-CD20 항체.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 제 14 항에서 정의된 항체 및 제 20 항에서 정의된 사이토킨을 포함하는 면역접합체를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  22. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 제 14 항에서 정의된 항체 및 제 16 항에서 정의된 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
  23. 제 1 항 내지 제 12 항 및 제 16 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료제가 제 16 항에서 정의된 항체 및 제 20 항에서 정의된 항체를 포함하는 이중특이성 항체를 포함하는 II형 항-CD20 항체.
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