KR20160035230A

KR20160035230A - 만성폐쇄성폐질환 진단용 마커 조성물

Info

Publication number: KR20160035230A
Application number: KR1020140126539A
Authority: KR
Inventors: 오연목; 이세원; 김유선; 김우진
Original assignee: 재단법인 아산사회복지재단
Priority date: 2014-09-23
Filing date: 2014-09-23
Publication date: 2016-03-31
Also published as: KR101657051B1

Abstract

본 발명은 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN) 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환 (chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 진단 키트 및 상기 조성물을 이용한 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법에 관한 것이다. 본 발명의 마커 유전자인 SKIL은 만성폐쇄성폐질환 환자에서 정상인에 비해 현저하게 발현이 증가하기 때문에, 만성폐쇄성폐질환의 발병 유무를 정확하고 빠르게 진단하는데 유용하게 이용될 수 있다.

Description

만성폐쇄성폐질환 진단용 마커 조성물 {Marker composition for diagnosis of chronic obstructive pulmonary disease}

본 발명은 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN) 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 조성물, 상기 조성물을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 진단 키트, 상기 마커를 이용한 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법에 관한 것이다.

만성폐쇄성폐질환(Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)은 유해한 입자나 가스의 흡입에 의해 폐에 비정상적인 염증 반응이 일어나면서 이로 인해 점차 기류 제한이 진행되어 폐 기능이 저하되고 호흡곤란을 유발하게 되는 호흡기 질환이다. 폐기종, 만성 기관지염 등이 이에 속한다.

만성폐쇄성폐질환은 전세계적으로 5대 사망원인이며 2020 년에는 4대 사망원인에 이를 것으로 추정된다. 우리나라에서도 유병률이 7.9%에 이르며, 1년간 만성폐쇄성폐질환으로 인한 국민건강보험 지출이 600억 원에 이르러 보건학적으로나 경제적으로 중요한 질환이다. 만성폐쇄성폐질환은 지속적으로 진행하는 병으로 다른 만성 질환처럼 조기 진단과 예방이 중요할 것으로 보인다. 대표적인 만성 질환인 고혈압과 당뇨의 경우 혈압 및 혈당과 같은 명확한 진단기준이 있고, 관리를 할 경우 합병증과 사망률을 낮춘다는 연구결과들이 있어 조기 진단에 대한 활발한 노력이 있다. 그러나 만성폐쇄성폐질환에 대해서는 조기 진단에 대해서 논쟁이 많고, 우리나라에서는 특별한 지침도 마련되어 있지 않다.

이렇듯 만성폐쇄성폐질환은 예방 가능하고 치료 가능한 질병이며, 적절한 진단과 그에 따른 치료가 매우 중요하나, 만성폐쇄성폐질환을 진단하기 위한 바이오 마커에 대해서는 연구가 미미한 실정이다.

또한, SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN) 유전자에 의해 코딩되는 단백질은 TGFβ를 통해 세포 성장 및 분화를 조절하는 SMAD 경로의 구성 요소로 알려져 있으나, SKIL 유전자와 만성폐쇄성폐질환과의 관계에 대해서는 밝혀진 바가 거의 없다.

이에 본 발명자들은 만성폐쇄성폐질환(Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)을 진단하기 위한 마커를 개발하고자 연구를 계속한 결과, 만성폐쇄성폐질환 환자에서 정상인에 비해 현저하게 발현이 증가하는 유전자인 SKIL을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN)을 포함하는 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 바이오마커 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적은 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 진단 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 마커를 이용하여 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN)을 포함하는 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환 진단용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 진단 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 마커를 이용하여 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.

본 발명의 마커 유전자 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN)은 만성폐쇄성폐질환 환자에서 정상인에 비해 현저하게 발현이 증가하기 때문에, 만성폐쇄성폐질환의 발병 유무를 정확하고 빠르게 진단하는데 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 정상인의 폐조직, 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)의 일종인 만성 폐쇄성 기관지염(Chronic obstructive bronchitis) 및 폐기종(Emphysema) 환자의 폐조직, 및 만성폐쇄성폐질환(COPD)이 아닌 폐질환의 일종인 기관지확장증(Bronchietasis) 환자의 폐조직에서의 SKIL 단백질의 발현 정도를 나타낸 도이다.
도 2는 정상인 및 만성폐쇄성폐질환 환자의 혈장 내 SKIL 단백질의 발현 정도를 나타낸 도이다.

이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN)을 포함하는 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 만성폐쇄성폐질환의 발병 여부 또는 발병 가능성 여부를 확인하는 것이다.

본 발명의 만성폐쇄성폐질환의 종류에는 만성폐쇄성기관지염(Chronic obstructive bronchitis), 만성세기관지염(Chronic bronchiolitis) 및 폐기종(Emphysema) 등이 포함된다.

본 발명에서 "마커"란 만성폐쇄성폐질환을 진단할 수 있는 물질로, 만성폐쇄성폐질환과 관련된 폴리펩타이드, 핵산 (예: mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다. 본 발명의 목적상, 마커는 SKIL로 만성폐쇄성폐질환 환자에서 현저하게 발현이 증가하는 유전자이다.

또한, 본 발명은 SKIL(SKI like oncogene, Gene ID: 6498) 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 “mRNA 발현 수준 측정”이란 만성폐쇄성폐질환을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 만성폐쇄성폐질환 관련 유전자 SKIL의 mRNA 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, mRNA의 양을 측정하여 이루어진다. 이를 위한 분석 방법으로는 예를 들어, 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 유전자의 mRNA 수준을 측정하는 제제는 바람직하게는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브이다.

본 발명에서 "안티센스"는 안티센스 올리고머가 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해 RNA 내의 표적 서열과 혼성화되어, 표적서열 내에서, 전형적으로 mRNA와 RNA:올리고머 헤테로이중체의 형성을 허용하는, 뉴클레오티드염기의 서열 및 서브 유닛간 백본을 갖는 올리고머를 지칭한다. 올리고머는 표적 서열에 대한 정확한 서열 상보성 또는 근사 상보성을 가질 수 있다. 이 안티센스 올리고머는 mRNA의 번역을 차단 또는 저해하고 mRNA의 스플라이스 변이체를 생산하는 mRNA의 프로세싱 과정을 변화시킬 수 있다.

본 발명에서 "프라이머"는 짧은 자유 3말단 수산화기를 가지는 핵산 서열로 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍을 형성할 수 있고 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성이 개시할 수 있다.

본 발명에서 "프로브"란 mRNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며 표지(Labelling)되어 있어서 특정 mRNA의 존재 유무를 확인 할 수 있다. 프로브는 올리고 뉴클레오티드 프로브, 단쇄 DNA(single stranded DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double stranded DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다. 적당한 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.

본 발명의 만성폐쇄성폐질환 관련 유전자인 SKIL의 핵산 서열이 유전자 은행에 등록되어 있으므로 당업자는 상기 서열을 바탕으로 이들 유전자의 특정 영역을 특이적으로 증폭하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 디자인할 수 있다.

본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 또는 프로브는 포스포르 아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오티드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오티드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미 데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.

본 발명에서 “단백질 발현 수준 측정”이란 만성폐쇄성폐질환을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 만성폐쇄성폐질환 관련 유전자인 SKIL로부터 발현된 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 단백질의 양을 측정하여 이루어진다. 이를 위한 분석 방법으로는 웨스턴 블랏, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 단백질 발현 수준을 측정하는 제제는 바람직하게는 항체이다.

본 발명에서, “항체”란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 마커 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다.

본 발명의 마커는 만성폐쇄성폐질환 환자에서 정상인에 비해 현저하게 발현이 증가하기 때문에, 만성폐쇄성폐질환의 발병 유무를 정확하고 빠르게 진단하는데 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 키트는 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 확인함으로써 만성폐쇄성폐질환의 진단을 할 수 있다. 본 발명의 키트에는 만성폐쇄성폐질환 진단을 위한 프라이머, 프로브, 항체 등 뿐만 아니라 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액, 또는 장치가 더 포함될 수 있으며, 바람직하게는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트, DNA 칩 키트, 단백질 칩 키트의 형태일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

구체적인 일례로서, 본 발명에서 상기 마커 유전자들의 mRNA 발현 수준을 측정하기 위한 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일수 있다. RT-PCR 키트는 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액, 데옥시뉴클레오티드(dNTPs), Taq-중합 효소 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제, DEPC-물(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 키트는 마이크로어레이를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. 마이크로어레이 키트는, 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA가 프로브로 부착되어 있는 기판을 포함하고 기판은 정량 대조구 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA를 포함할 수 있으며, 본 발명의 마커를 이용하여 당업계에서 통상적으로 사용되는 제조 방법에 의하여 용이하게 제조될 수 있다. 마이크로어레이를 제작하기 위해서, 상기 탐색된 마커를 탐침 DNA 분자로 이용하여 DNA 칩의 기판상에 고정화시키기 위해 파이조일렉트릭(piezoelectric) 방식을 이용한 마이크로피펫팅(micropipetting)법 또는 핀(pin) 형태의 스폿터(spotter)를 이용한 방법 등을 사용하는 것이 바람직하나 이에 제한되지 않는다. 상기 마이크로어레이 칩의 기판은 아미노-실란(amino-silane), 폴리-L-라이신(poly-Llysine) 및 알데히드(aldehyde)로 이루어진 군에서 선택되는 활성기가 코팅된 것이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 기판은 슬라이드 글래스, 플라스틱, 금속, 실리콘, 나일론 막 및 니트로셀룰로스 막(nitrocellulose membrane)으로 이루어진 군에서 선택되는 것이 바람직하나 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표식 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은

(a) 생물학적 시료로부터 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및

(b) 상기 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 정상 대조구 시료에서 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준과 비교하는 단계;를 포함하는 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.

본 발명에서 “생물학적 시료”는 개체로부터 분리된 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇨, 객담, 림프액, 세포 등을 포함하며, 바람직하게는 폐조직이나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 mRNA 발현 수준을 측정하는 방법은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 단백질의 발현 수준을 측정하는 방법은 웨스턴 블랏, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 마커 유전자 SKIL은 만성폐쇄성폐질환 환자에서 정상인에 비해 현저하게 발현이 증가하기 때문에, 정상 대조구 시료와의 비교를 통해, 만성폐쇄성폐질환의 발병 유무를 정확하고 빠르게 진단할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. RNA 시퀀싱을 이용한 만성폐쇄성폐질환 (COPD) 환자의 폐조직 내 SKIL 유전자 발현 정도 측정

1-1. mRNA 샘플의 준비

아산병원 (서울, 대한민국)의 만성폐쇄성폐질환(COPD) 환자 100명 및 정상인 (대조구) 100명의 폐 조직으로부터 종래 공지된 방법에 따라 mRNA를 수득하였다.

1-2. RNA 시퀀싱

상기 1-1.에서 수득한 샘플로부터 종래 공지된 방법에 따라 RNA 시퀀싱 (QIAGEN, RNA-Seq Experiment)을 수행한 후, 분석을 통하여 통계적으로 유의하게 정상인의 폐조직에 비하여 차별발현하는 유전자를 확인하였다.

만성폐쇄성질화 환자의 폐 조직에서는 대조군인 정상인의 폐 조직에 비해 SKIL 유전자가 약 163% 발현이 증가하였음을 확인하였고, 이 결과는 통계적으로 유의하다(p=8.95E-11). 이상의 결과를 통해 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하여, 만성폐쇄성폐질환을 진단할 수 있음을 알 수 있다.

실시예 2. 면역조직화학법을 이용한 만성폐쇄성폐질환 (COPD) 환자의 폐조직 내 SKIL 단백질 발현 여부 확인

만성폐쇄성폐질환(COPD) 환자의 폐조직에서 특이적으로 SKIL 단백질의 발현이 증가하는지를 확인하기 위하여 정상인의 폐조직, 만성폐쇄성폐질환(COPD)의 일종인 만성 폐쇄성 기관지염(Chronic obstructive bronchitis) 및 폐기종(Emphysema) 환자의 폐조직, 만성폐쇄성폐질환(COPD)이 아닌 폐질환의 일종인 기관지확장증(Bronchietasis) 환자의 폐조직에 대하여 면역조직화학법을 수행하였다.

상기 면역조직화학법을 수행하기 위하여 시판중인 조직 어레이 슬라이드(tissue array slide, Pantomics, LUD481)을 구입한 후, 파라핀 조직 슬라이드에 SKIL 유전자에 대한 항체(1:50, abcam)를 이용하여 면역조직화학법을 수행하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성폐질환(COPD)의 일종인 만성 폐쇄성 기관지염(Chronic obstructive bronchitis) 및 폐기종(Emphysema) 환자의 폐조직에서는 정상인의 폐조직에 비하여 SKIL 유전자의 발현이 증가하였으나, 만성폐쇄성폐질환(COPD)이 아닌 폐질환의 일종인 기관지확장증(Bronchietasis) 환자의 폐조직에서는 정상인의 폐조직에 비하여 SKIL 유전자의 발현이 증가하지 않았음을 확인하였다. 이상의 결과를 통해 상기 유전자의 단백질 발현 수준을 측정하여, 만성폐쇄성폐질환을 진단할 수 있음을 알 수 있다.

실시예 3. ELISA 방법을 이용한 만성폐쇄성폐질환 (COPD) 환자의 혈장 내 SKIL 단백질양 측정

만성폐쇄성폐질환(COPD) 환자의 혈장에서 특이적으로 SKIL 단백질의 발현이 증가하는지를 확인하기 위하여 정상인의 혈장 및 만성폐쇄성폐질환(COPD) 환자의 혈장에 대하여 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 방법을 수행하였다.

상기 ELISA 방법을 수행하기 위하여 SKIL에 대한 ELISA 키트(Cloud-clone corp., SEM234Hu)를 구입하였다. 상기 ELISA 키트를 이용하여 아산병원 (서울, 대한민국)의 정상인 20명 및 만성폐쇄성폐질환 (COPD) 환자 20명으로부터 수득한 혈장에 대하여 혈장 내 SKIL 단백질의 양을 측정하였다. 이 때 혈장은 상기 ELISA 키트에서 제공하는 버퍼로 8분의 1의 농도로 희석하여 사용하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 만성폐쇄성폐질환(COPD) 환자의 혈장에서 정상인의 혈장에 비해 혈장 내 SKIL 단백질의 양이 유의하게 증가되었음을 확인하였다. 이상의 결과를 통해 상기 유전자의 혈액 내 단백질 발현 수준을 측정하여, 만성폐쇄성폐질환을 진단할 수 있음을 알 수 있다.

Claims

SKIL(SKI like oncogene, Ski-Like Protein, SNO, Ski-Related Oncogene SnoN, SnoA, Ski-Related Oncogene, SnoI, Ski-Related Protein, SnoN)을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 (chronic obstructive pulmonary disease, COPD) 진단용 바이오마커 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 만성폐쇄성폐질환은 만성 폐쇄성 기관지염(Chronic obstructive bronchitis), 만성 세기관지염(Chronic bronchiolitis) 또는 폐기종(Emphysema)을 포함하는 것을 특징으로 하는, 바이오마커 조성물.
SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 만성폐쇄성폐질환 진단용 조성물.
제3항에 있어서, 상기 유전자의 mRNA의 발현 수준을 측정하는 제제는 SKIL 유전자에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환 진단용 조성물.
제3항에 있어서, 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 SKIL 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환 진단용 조성물.
제3항 내지 제5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 만성폐쇄성폐질환 진단 키트.
제6항에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트, DNA 키트 또는 단백질 칩 키트인 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환 진단 키트.
(a) 생물학적 시료로부터 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준을 정상 대조구 시료에서 SKIL 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질의 발현 수준과 비교하는 단계;를 포함하는 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법.
제8항에 있어서, 상기 (a) 단계에서 생물학적 시료는 개체로부터 분리된 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 뇨, 객담, 림프액 및 세포로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 시료인 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법.
제8항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 mRNA 발현 수준을 측정하는 방법은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Realtime RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법인 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법.
제8항에 있어서, 상기 (b) 단계에서 단백질의 발현 수준을 측정하는 방법은 웨스턴 블랏, ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택된 1개 이상의 방법인 것을 특징으로 하는, 만성폐쇄성폐질환의 진단을 위한 정보 제공 방법.