KR20130032624A

KR20130032624A - 녹차 혼합 조성물

Info

Publication number: KR20130032624A
Application number: KR1020110096337A
Authority: KR
Inventors: 이정대; 김영걸; 이진호; 유주; 고광섭; 이민석; 김기옥; 진영준; 고려경; 김수경; 변후돈; 안호근
Original assignee: 주식회사 장원
Priority date: 2011-09-23
Filing date: 2011-09-23
Publication date: 2013-04-02
Also published as: KR101954247B1

Abstract

본 발명은 녹차 조성물; 및 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물을 개시한다.

Description

녹차 혼합 조성물{Complex composition comprising green tea}

본 발명은 우수한 기호도 및 효능을 가지는 녹차 혼합 조성물에 관한 것이다.

녹차는 동백나무과의 카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis)의 싹이나 잎 속에 존재하는 산화 효소를 불활성화시키고 수분을 제거한 것이다. 녹차는 카테킨류, 아미노산, 비타민 C, 베타-카로틴, 식이 섬유 등 유익한 유효 성분들을 다량 포함하고 있다. 그리고 녹차는 항산화, 항노화, 항암, 혈중 콜레스테롤 저하, 중금속 해독, 충치 예방 및 구취 제거 등의 효과를 가진다고 알려져 있다. 하지만 이러한 뛰어난 효과를 가짐에도 불구하고, 녹차 본연의 떫고 쓴 맛 때문에 기호도가 그리 높지 않다. 이에, 기호도가 높으면서도 우수한 효과를 가지는 차 조성물에 대한 요구가 존재한다.

한국특허공개 제10-2010-0124519호(2010.11.29. 공개) 명세서

본 발명에 따른 녹차 혼합 조성물은 녹차 조성물과 함께 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함함으로써, 우수한 혈당 감소 효과 및 염증 완화 또는 개선 효과를 가짐과 동시에, 높은 기호도를 가진다.

본 발명의 일측면은 녹차 조성물; 및 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 녹차 혼합 조성물은 선명하고 진한 색을 나타내고 소비자의 기호도가 높으며, 우수한 혈당 감소 효과 및 염증 완화 또는 개선 효과를 나타낸다.

도 1은 진귤 조성물의 함유 성분을 분석한 그래프이다.
도 2는 진귤 조성물이 염증 세포 생존율 및 NO 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다(##: P<0.01).
도 3은 돌외 조성물의 함유 성분을 분석한 그래프이다.
도 4는 돌외 조성물이 염증 세포 생존율 및 NO 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다(*,#: P<0.05, **,##: P<0.01).
도 5는 녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물의 녹차 혼합 조성물이 염증 세포 생존율 및 NO 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.

본 발명의 일측면은 녹차 조성물; 및 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 녹차 혼합 조성물은 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함함으로써, 기호도가 높고, 녹차 고유의 색이 보다 선명하고 진하다. 또한 α-글루코시다아제(α-glucosidase)의 활성을 억제하여 우수한 혈당 감소 효과를 나타내며, 염증 세포 생존 및 NO 생성을 저해하여 뛰어난 염증 완화 또는 개선 효과를 가진다.

본 발명의 일측면에서, 녹차(green tea) 조성물은 카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis)의 잎 또는 싹을 이용하여 제조한 조성물을 의미한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 감귤속(屬) 식물은 운향과 감귤속에 속하는 식물, 구체적으로 진귤(Citrus sunki Hort . Tanaka), 온주 밀감(C. unshiu), 당유자(C. grandis) 또는 자몽, 더 구체적으로 진귤, 온주 밀감, 당유자 또는 자몽 등 감귤속 식물의 잎 또는 줄기를 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에, 돌외속(屬) 식물은 돌외속에 속하는 식물, 구체적으로 돌외(Gynostemma Pentaphyllum), 더 구체적으로 돌외속 식물의 잎 또는 줄기를 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 꾸지뽕나무속(屬) 식물은 뽕나무과 꾸지뽕나무속에 속하는 식물, 구체적으로 꾸지뽕나무(Cudrania tricuspidata Bureau), 더 구체적으로 꾸지뽕나무속 식물의 잎 또는 줄기를 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 벚나무속(屬) 식물은 장미과 벚나무속에 속하는 식물, 구체적으로 왕벚나무(Prunus yedonensis Matsumura), 더 구체적으로 벚나무속 식물의 잎 또는 줄기를 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 삼백초속(屬) 식물은 삼백초과 삼백초속에 속하는 식물, 구체적으로 삼백초(Saururus Chinensis Baill), 더 구체적으로 삼백초속 식물의 잎 또는 줄기를 포함한다.

본 발명의 일측면에서, 녹차 조성물, 감귤속 식물 조성물, 돌외속 식물 조성물, 꾸지뽕나무속 식물 조성물, 벚나무속 식물 조성물 또는 삼백초속 식물 조성물은 각 식물 자체, 그 가공물 또는 그 추출물을 포함한다. 상기에서 식물 자체는 식물 그대로 뿐만 아니라 식물을 통상의 방법으로 세척한 것을 포함한다. 상기에서 추출물은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 각 식물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다. 구체적으로 추출물은 가공 전 혹은 가공 후 식물에서 추출한 액, 식물을 증열한 후 냉수나 온수를 첨가하여 추출한 액, 식물을 추출한 액을 농축시킨 액 또는 식물에서 추출한 액을 분말 또는 일정한 형태로 가공한 고형 제제를 모두 포함한다.

본 발명의 일측면에서, 녹차 조성물은 덖음차(뜨겁게 달군 팬에 볶아 수분 및 청취를 제거한 차) 조성물 또는 증제차(증기로 쪄서 만든 차) 조성물을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 녹차 조성물은 일반적인 녹차 조성물 제조 방법인 조유(찻잎의 수분을 균일하게 건조시키는 과정), 유념(찻잎의 수분 함량을 균일하게 하고 찻잎 세포 조직을 적당히 파괴하여 잘 우러나게 하는 비비기 과정), 건조, 가향 과정을 거쳐 제조된 조성물을 포함한다.

본 발명의 일측면에서, 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물은 각 식물을 일반적인 차 조성물 제조 방법으로 제조한 조성물을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 식물 조성물은 각 식물을 증제(蒸製), 덖음 및 발효 중 하나 이상으로 처리한 조성물을 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 발효는 약발효(20 내지 30% 발효) 또는 중발효(40 내지 60% 발효)를 포함한다. 상기 발효는 식물의 잎 또는 줄기를 그에 존재하는 산화 효소로 산화시키는 것을 의미하며, 구체적으로 발효는 식물의 잎 또는 줄기를 일광 위조(햇빛에 시들게 하기)하고, 실내 정치(수분 증발을 위한 방치) 및 요청(잎 또는 줄기에 상처를 주는 과정) 과정을 반복함을 통해 이루어질 수 있다. 이 때 실내 정치 시간 및 횟수, 요청의 시간 및 횟수를 증가시킬수록 발효 정도가 높아진다.

본 발명의 일측면에 따른 녹차 혼합 조성물은 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 녹차 조성물 중량을 기준으로 5 내지 70 중량%, 구체적으로는 10 내지 70중량%, 더 구체적으로는 10 내지 50중량%로 포함할 수 있다.

상기 범위로 포함할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다. 구체적으로 식물 조성물을 상기 범위로 포함하는 경우, 녹차 혼합 조성물의 색이 선명해지고 진해짐과 동시에 녹차 혼합 조성물에 대한 기호도가 높아지는 장점이 있다.

본 발명의 일측면은 녹차 조성물, 감귤속 식물 조성물 및 돌외속 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물을 제공한다. 이 경우 녹차 혼합 조성물의 기호도, 수색 및 혈당 감소와 염증 개선 효과가 가장 우수하다. 상기 녹차 혼합 조성물은 감귤속 식물 조성물 및 돌외속 식물 조성물을 5:1 내지 1:5, 구체적으로 3:1 내지 1:3, 더 구체적으로 3:1 내지 1:1로 포함할 수 있다. 상기 범위로 포함할 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.

본 발명의 다른 일측면에 따른 녹차 혼합 조성물은 녹차 조성물 및 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물의 추출물일 수 있다. 상기에서 추출물은 용매 추출물을 포함하며, 용매는 유기 용매, 구체적으로 C₁ 내지 C₅의 알코올, 더 구체적으로 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 및 이소부탄올로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함한다. 용매 추출물은 열수 추출물보다 높은 혈당 감소 효과 및 염증 완화 또는 개선 효과를 가질 수 있다. 상기에서 추출물은 열수 추출물, 구체적으로 90 내지 100℃의 물에 30초 내지 1분 30초 동안 추출한 추출물을 포함한다. 추출 온도 및 시간이 지나치게 긴 경우 쓴 맛과 향이 강해져 오히려 기호도를 떨어뜨릴 수 있고, 추출 온도가 낮은 경우에는 맛과 향이 약해 기호도가 낮으므로, 상기 조건으로 추출하는 것이 바람직할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 녹차 혼합 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 식품 조성물은 기호 식품 또는 건강 식품 조성물을 포함한다.

상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바, 삼각 티백과 같은 티백, 여러 가지 형상의 덩이차 등으로 제형화될 수 있다. 특히, 삼각 티백 또는 덩이차로 제형화되는 경우 조성물의 품질 저하가 일어나지 않으며, 대량 생산이 용이하다는 점에서 바람직할 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 녹차 혼합 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.　 본 발명의 조성물을 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염, 완충제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

상기 경구 투여를 위한 제재로는 정제(錠劑), 환제(丸劑), 과립제(顆粒劑), 연질 및 경질 캅셀제, 산제, 세립제, 분제, 액제, 유탁제(乳濁濟), 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘염 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 비경구 투여를 위한 제제는 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥, 근육, 복강, 피하 등으로 투여될 수 있다.

또한, 상기 유효 성분의 적용량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다.　이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있다. 일반적인 투여량은 0.01mg/kg/일 내지 2000mg/kg/일이 될 수 있고 1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일이 될 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.

본 발명의 일측면은 감귤속 식물, 돌외속 식물, 꾸지뽕나무속 식물, 벚나무속 식물 및 삼백초속 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 증제(蒸製), 덖음 및 발효 중 하나 이상으로 처리하여 식물 조성물을 제조하는 단계; 및 상기 단계에서 제조한 식물 조성물을 녹차 조성물과 혼합하는 단계를 포함하는 녹차 혼합 조성물 제조 방법을 제공한다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 녹차 혼합물 조성물 제조 방법은 상기 혼합하는 단계 이후, 혼합한 조성물을 추출하는 단계를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 추출은 열수 추출 또는 용매 추출을 포함한다. 구체적으로, 열수 추출은 90 내지 100℃의 물에 30초 내지 1분 30초 동안 추출하는 것을 포함하며, 용매 추출은 C₁ 내지 C₅의 알코올로 추출하는 것을 포함한다.

이하, 제조예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 제조예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

[제조예]

한국 제주도에서 자라고 있는 녹차 품종 중 하나인 금곡록의 잎을 채취한 후 당업계의 통상적인 녹차 제조 방법인 조유, 유념, 건조, 가향 과정을 거쳐 녹차 조성물을 제조하였다.

한국 제주도에서 돌외, 진귤, 꾸지뽕나무, 왕벚나무 및 삼백초의 잎과 줄기를 채취하여 당업계에서 통상적인 증제 또는 덖음 방법에 따라 각 식물의 조성물을 제조하였다. 또한 채취한 각 식물의 잎과 줄기를 일반적인 부분 발효차 제조 방법을 응용하여, 일광 위조, 실내 정치, 요청, 살청, 유념, 건조 과정을 통해 약발효(20 내지 30% 발효) 및 중발효(40 내지 60% 발효) 시켰다.

[실험예 1] 녹차 조성물과 식물 조성물의 혼합 조성물의 품질 평가

제조예에서 제조한 녹차 조성물과 각 식물 조성물 1종을 7:3의 비율로 혼합한 조성물을 제조하여, 녹차 조성물 대비 기호도와 수색에 대해 5점 만점을 기준으로 평가하였다. 그 결과는 아래 표와 같다.

제법	녹차+꾸지뽕		녹차+삼백초		녹차+진귤		녹차+돌외		녹차+왕벚나무
제법	기호도	수색	기호도	수색	기호도	수색	기호도	수색	기호도	수색
증제	++++	++	+	+	+++++	+++++	+++++	+++++	+++	+++
덖음	++++	+	+	+	+++++	+++	+++	+	+	+
약발효	++++	+	+	+	+++++	+	+++	+	++	+
중발효	++++	+	+	+	+++++	+	+++++	+	+++	+

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 증제 방법으로 제조한 진귤 또는 돌외 조성물과 녹차 조성물을 혼합한 경우, 높은 기호도를 나타내며, 또한 녹차 고유의 색인 녹색이 보다 선명하고 진하였다. 이하, 녹차 조성물 및 진귤 또는 돌외 조성물을 포함하는 조성물을 중심으로 살펴본다.

[실험예 2] 식물 조성물의 혼합 비율에 따른 품질 평가

제조예의 녹차 조성물과 녹차 조성물 중량 대비 각각 10 내지 70 중량%의 증제 방법으로 제조한 진귤 또는 돌외 조성물을 혼합한 조성물을 제조하였다. 또한 녹차 조성물과 진귤과 돌외 조성물을 1:1로 포함하는 식물 조성물을 녹차 조성물 중량 대비 10 내지 70 중량%로 혼합한 조성물을 제조하였다. 그리고 녹차 조성물과 진귤과 돌외 조성물을 3:1로 포함하는 조성물을 녹차 조성물 중량 대비 10 내지 50 중량%로 혼합한 조성물을 제조하였다. 상기 조성물들에 대해 녹차 단독 조성물을 대조군으로 하여 기호도를 평가하였다. 그 결과는 아래 표와 같다.

	대조군	10%	20%	30%	40%	50%	60%	70%
녹차+진귤	8	9±0.71	10.2±0.83	13.4±0.55	11.6±1.14	10±0.70	7.8±1.3	7.4±0.89
녹차+돌외	8	10.8±0.84	10.0±0.45	8.0±0.71	5±1.58	4.6±1.34	3.4±0.55	3.0±0.7
녹차+(진귤: 돌외=1:1)	8	11.7±0.95	13.4±0.97	10.2±1.34	5.6±0.84	5.1±0.74	4.2±0.79	3±0.88
녹차+(진귤: 돌외=3:1)	8	11.1±0.99	12.0±1.15	13.8±0.79	10.6±1.07	8.2±1.03	-	-

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 진귤 조성물과 돌외 조성물이 각각 녹차 조성물과 단독으로 혼합될 때보다 양자가 함께 녹차 조성물에 혼합될 때 기호도가 높았다. 특히, 진귤과 돌외 조성물이 1:1로 혼합되는 경우에는 그 혼합 조성물이 녹차 조성물 중량 대비 20 중량%로 혼합될 때, 그리고 진귤 조성물과 돌외 조성물이 3:1로 혼합되는 경우에는 그 혼합 조성물이 녹차 조성물 중량 대비 30 중량%로 혼합될 때, 각각의 기호도가 가장 우수하였다.

[실험예 3] 진귤 조성물의 생리 활성 평가

(1) 함유 성분 평가

증제 또는 덖음 방법으로 진귤 조성물을 제조하고, 그 함유 성분을 분석하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에서 볼 수 있듯이, 진귤 조성물에는 노빌레틴, 탄제레틴과 같은 폴리메톡시플라본(polymethoxylflavone)이 함유되어 있으며, 주요 성분으로 디오스민(Diosmin) > 클로로겐산(Chlorogenic acid) > 탄제레틴(Tangeretin) > 노빌레틴(Nobiletin) > 루틴(Rutin)이 함유되어 있다.

(2) 고혈당 억제 효과 평가

이스트 α-글루코시다아제(Yeast α-glucosidase)(0.1 U/mL, 시그마)를 소듐 포스페이트 버퍼(pH 6.8)에 준비하였다. 기질인 p-니트로페닐-α-D-글루코피라노사이드(p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside)(PNPG, 시그마)는 효소를 녹인 것과 같은 버퍼에 1 mM 농도로 희석하였다. 증제 또는 덖음 방법으로 제조한 진귤 조성물과 α-글루코시다아제를 섞어 37℃에서 5분간 반응시켰다. 반응 후 405 nm에서 흡광도를 측정하였고, PNPG는 1 mM의 농도로 첨가하여 시간에 따른 증가량을 측정하였다. 기질을 넣기 전 측정한 값과 넣은 후 증가하는 값을 측정하여 그 차이를 계산하고, 50% 감소시키는 시료의 농도(IC₅₀)로 결과를 표시하였다. 대조군은 α-글루코시다아제의 우수한 저해제로 알려진 아카보스(Acarbose)(100 mg/mL, 글루코바이)를 사용하였으며 모든 실험은 3회 반복을 수행하였다. 결과는 아래 표와 같다.

α-글루코시다아제 저해 활성 IC₅₀ (μg/mL)
증제	>500
덖음	>500
아카보스	159.49 ± 16.54

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 진귤의 α-글루코시다아제에 대한 뚜렷한 억제 효과는 나타나지 않았다.

(3) 염증 세포 생존율 측정 및 NO 생성 억제 효과 평가

1) 염증 세포 생존율 측정(MTT assay)

시료가 LPS를 자극시켜 염증을 유발한 RAW 264.7 세포(KCLB No.40071)의 생존율에 미치는 영향을 3-(4,5-디메틸티아졸)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드(MTT)법에 의하여 측정하였다. 구체적으로, 세포 배양 후 배양액을 제거한 다음 MTT 용액 500 ㎍/ml을 첨가하고 3시간 동안 배양하였다. 배지를 제거하고, 디메틸설폭사이드(DMSO, 시그마) 300 ㎕를 가하여 MTT의 환원에 의해 생성된 포르마잔 침전물을 용해시킨 후 마이크로 플레이트 리더로 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료 농도에 대한 흡광도 값을 구하였으며, 대조군의 흡광도 값과 비교하여 세포 생존율(%)을 계산하였다.

2) NO 생성량 측정

생성된 NO의 양은 그리스(Griess) 시약을 이용하여 세포 배양액 중에 존재하는 니트라이트(nitrite)의 형태로 측정하였다. 세포 배양 상등액 100 ㎕와 그리스 시약 100 ㎕를 혼합하여 96-웰 플레이트에서 10분 동안 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 생성된 NO의 양은 소듐 니트라이드(NaNO₂)를 기준으로 비교하였다.

증제 또는 덖음 방법으로 제조한 진귤 조성물에 대한 염증 세포 생존율 측정 결과와 NO 생성량 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에서 볼 수 있듯이, 진귤 조성물은 125 ㎍/ml 이상의 농도에서 농도 의존적으로 염증 세포 생존을 억제하는 효과를 나타내었다. 또한 진귤 조성물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였다. 이를 통해 진귤 조성물은 염증 완화 또는 개선 효과를 가짐을 알 수 있다.

[실험예 4] 돌외 조성물의 생리 활성 평가

(1) 함유 성분 평가

증제 또는 덖음 방법으로 돌외 조성물을 제조하고, 그 함유 성분을 분석하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 도 3에서 볼 수 있듯이, 돌외 조성물에는 루틴(Rutin), 디오스민(Diosmin)과 같은 성분이 함유되어 있었다.

(2) 고혈당 억제 효과 평가

증제 또는 덖음 방법으로 제조한 돌외 조성물에 대해 실험예 3-(2)와 실질적으로 동일한 방법으로 고혈당 억제 효과를 평가하고, 그 결과를 아래 표에 나타내었다.

α-글루코시다아제 저해 활성 IC₅₀ (μg/mL)
증제	380.93 ± 13.38
덖음	>500
아카보스	159.49 ± 16.54

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 돌외의 α-글루코시다아제에 대한 뚜렷한 억제 효과는 나타나지 않았다.

(3) 염증 세포 생존율 측정 및 NO 생성 억제 효과 평가

증제 또는 덖음 방법으로 제조한 돌외 조성물에 대해 실험예 3-(3)과 실질적으로 동일한 방법으로 염증 세포 생존율 및 NO 생성 억제 효과를 평가하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 도 4에서 볼 수 있듯이, 돌외 조성물은 62.5 ㎍/ml 이상의 농도에서 농도 의존적으로 염증 세포 생존을 억제하는 효과를 나타내었다. 또한 돌외 조성물은 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였다. 특히 덖음 방법으로 제조한 돌외 조성물이 증제 방법으로 제조한 돌외 조성물에 비해 그 효과가 높았다. 이를 통해 돌외 조성물은 염증 완화 또는 개선 효과를 가짐을 알 수 있다.

[실험예 5] 녹차 혼합 조성물의 생리 활성 평가

(1) 녹차 혼합 조성물의 제조

녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물을 분쇄기로 갈아서 70% 에탄올로 10배 침적하고 실온에서 24시간 교반하여 추출하였다. 추출한 시료를 감압 여과하여 잔사를 분리한 후 여액만을 동일하게 취하여 40℃에서 회전 농축기를 이용하여 농축하고 동결 건조시켰다. 동결 건조를 마친 에탄올 추출물은 냉장 보관하였다. 수득한 녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물의 용매 추출물을 실시예 1로 하였다.

또한 녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물을 90～100℃ 증류수에 10배 침적하여 1분간 추출하였다. 이후 추출한 시료는 감압 여과하여 잔사를 분리하였고, 이후 과정은 용매 추출물 제조 방법과 실질적으로 동일한 방법을 사용하여 녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물의 열수 추출물을 수득하고, 이를 실시예 2로 하였다. 이하, 이에 대한 생리 활성을 평가하였다.

(2) 고혈당 억제 효과 평가

실험예 3-(2)와 실질적으로 동일한 방법으로 녹차 조성물, 실시예 1 및 실시예 2의 조성물에 대해 고혈당 억제 효과를 평가하고, 그 결과를 아래 표에 나타내었다.

시료	α-글루코시다아제 저해 활성 IC₅₀ (μg/mL)
녹차	1.1 ± 0.01
실시예1	1.69 ± 0.02
실시예2	6.5 ± 0.06
아카보스	171.32 ± 14.82

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 실시예 1과 2 모두 우수한 α-글루코시다아제 억제 효과를 나타내었으며, 그 중에서 용매 추출물인 실시예 1의 α-글루코시다아제 억제 효과가 더 우수하였다. 이는 진귤 조성물 및 돌외 조성물이 포함되어도 녹차 조성물의 우수한 α-글루코시다아제 억제 효과가 유지됨을 의미한다.

(3) 염증 세포 생존율 측정 및 NO 생성 억제 효과 평가

실험예 3-(3)과 실질적으로 동일한 방법으로 녹차 조성물, 실시예 1 및 실시예 2의 조성물에 대해 염증 세포 생존율 및 NO 생성 억제 효과를 평가하고, 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에서 볼 수 있듯이, 모든 시료들은 그 농도가 증가할수록 염증 세포 생존율을 감소시키는 경향을 보였다. 그 중 실시예 1의 용매 추출물은 250 ㎕/mL 이상에서부터 급격하게 염증 세포 생존율을 감소시켰고, 500 ㎕/mL의 농도인 경우 염증 세포 생존율이 40% 이하였다. 즉, 본 발명에 따른 조성물은 우수한 염증 세포 저해 효과를 가진다. 또한, 모든 시료가 농도 의존적으로 NO 형성을 억제하였으며, 특히 실시예 1의 용매 추출물이 가장 우수한 NO 형성 억제를 나타내었다.

상기 결과를 토대로 본 발명에 따른 조성물은 우수한 혈당 억제 효과 및 염증 완화 또는 개선 효과를 가짐을 알 수 있다.

[실험예 6] 최적 음용 조건 선정

녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물의 녹차 혼합 조성물 1.5g에 각각 70 내지 80℃, 80 내지 90℃, 90 내지 100℃의 열수를 넣고 1분, 2분, 3분 동안 추출시킨 후 기호도에 대해 15점 만점을 기준으로 10명의 평가를 받았다. 각 경우에 대한 평균 점수를 아래 표에 나타내었다.

용출 시간	용출 온도
용출 시간	70~80℃	80~90℃	90~100℃
1분	11.3±0.82	12.1±0.88	13.2±0.79
2분	12.6±0.51	11.1±0.88	9.8±1.03
3분	11±0.67	9.7±0.67	8.8±0.63

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 본 발명에 따른 녹차 혼합 조성물은 90 내지 100℃에서 1분 동안 추출시킨 경우 그 기호도가 가장 높았다.

[실험예 7] 바람직한 제형 선정

바람직한 제형을 선정하기 위해, 녹차 조성물, 진귤 조성물 및 돌외 조성물의 녹차 혼합 조성물을 6가지 제형으로 제조한 후, 그 적합성을 검토하였다.

	제형화 방법	제형 특징	적합성 검토
제형 1	체별 -> 혼합	둥글게 말린 모양 입자는 균일하지 않음.	부적합
제형 2	80mesh 이상 마쇄-> 반죽-> 성형틀로 성형-> 건조	둥근 엽전 모양	부적합
제형 3	100mesh 이상 마쇄-> 반죽-> 환형으로 성형 -> 건조	둥근환 모양, 대량 생산은 어려움.	부적합
제형 4	400mesh 이상 마쇄	색감이 좋지 않음.	부적합
제형 5	2mesh～50mesh로 마쇄	삼각 포장지에 넣어 유통 가능	적합
제형 6	증열-> 성형틀로 성형-> 건조	하루방 모양 등의 덩이차	바람직

제형 1의 경우 녹차와 진귤 및 돌외의 색깔과 입도가 맞지 않아 적합하지 않았으며, 제형 2의 경우 분쇄된 입자에 적정 수분을 넣고 반죽하여 성형하는 것이기 때문에 자동화 공정으로 제조하기 어려울 것으로 판단되었다. 제형 3의 경우 건조시 환 표면의 균열이 생겼다. 가루 녹차 제조 방법을 사용한 제형 4의 경우 진귤 및 돌외에 의해 전체 조성물의 색도가 낮아져 적합하지 않다고 판단되었다. 제형 5는 적정 크기로 분쇄 후 삼각 티백에 넣을 경우 현대인이 시간 및 장소에 구애 받지 않고 간편하게 음용할 수 있다는 장점을 가지며 녹차 조성물과 진귤 및 돌외 조성물 간의 이질감이 없어 적합하다고 판단되었다. 제형 6은 여러 가지 성형틀을 이용하여 다양한 형상의 덩이차로 제조한 것으로, 자동화 공정으로도 제조 가능하므로 가장 바람직하다고 판단되었다.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 보다 상세하게 설명하나, 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하고, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 기호 음료의 제조

녹차 혼합 조성물................1000 ㎎

구연산..........................1000 ㎎

올리고당........................100 g

타우린..........................1 g

정제수를 가하여 전체............900 ㎖

통상의 기호 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분들을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한다. 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득한 후 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 기호 음료 조성물 제조에 사용한다.

[제형예 2] 분말제의 제조

녹차 혼합 조성물..................100 mg

유당..............................100 mg

상기의 성분들을 혼합 및 분쇄하고 백에 충진하여 분말제를 제조한다.

Claims

녹차 조성물; 및
감귤속(屬) 식물, 돌외속(屬) 식물, 꾸지뽕나무속(屬) 식물, 벚나무속(屬) 식물 및 삼백초속(屬) 식물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물.
제 1 항에 있어서,
식물 조성물은 각 식물을 증제(蒸製), 덖음 및 발효 중 하나 이상으로 처리한 조성물인 녹차 혼합 조성물.
제 1 항에 있어서,
식물 조성물이 녹차 조성물 중량을 기준으로 5 내지 70 중량%로 포함된 녹차 혼합 조성물.
제 1 항에 있어서,
감귤속 식물은 진귤을 포함하고, 돌외속 식물은 돌외를 포함하며, 꾸지뽕나무속 식물은 꾸지뽕나무를 포함하고, 벚나무속 식물은 왕벚나무를 포함하며, 삼백초속 식물은 삼백초를 포함하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
조성물은 녹차 조성물, 감귤속 식물 조성물 및 돌외속 식물 조성물을 포함하는 녹차 혼합 조성물.
제 5 항에 있어서,
감귤속 식물 조성물 및 돌외속 식물 조성물이 5:1 내지 1:5의 중량비로 포함된 녹차 혼합 조성물.
제 1 항에 있어서,
녹차 혼합 조성물은 C₁ 내지 C₅의 알코올 추출물인 녹차 혼합 조성물.
제 1 항에 있어서,
녹차 혼합 조성물은 열수 추출물인 녹차 혼합 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
녹차 혼합 조성물은 혈당 감소용 조성물인 녹차 혼합 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
녹차 혼합 조성물은 염증 완화 또는 개선용 조성물인 녹차 혼합 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
녹차 혼합 조성물은 식품 조성물인 녹차 혼합 조성물.