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KR20110108398A - 연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 안티-ｉｌ-6 항체 및 종양학, 자가면역 질환 및 염증성 질환의 치료에 있어서의 이들의 용도 - Google Patents

연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 안티-ｉｌ-6 항체 및 종양학, 자가면역 질환 및 염증성 질환의 치료에 있어서의 이들의 용도 Download PDF

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KR20110108398A
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KR
South Korea
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antibody
amino acid
seq
acid sequence
domain
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KR1020117019221A
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마이클 보엔
헤렌 우
윌리엄 달라퀴아
피터 키너
바히자 잘랄
안토니 코일
Original Assignee
메디뮨 엘엘씨
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Publication date
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Abstract

본 발명은 연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 항-IL-6 항체를 제공한다. 본 발명은 또한, 약제학적 조성물, 치료 조성물, 및 IL-6에 결합하고, 비제한적으로, 염증성 질환 및 장애, 자가면역 질환 및 장애 및 종양과 같은 IL-6 매개된 질환 및 장애의 치료 및 예방에 대해 연장된 생체내 반감기를 갖는 치료 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 안티-ＩＬ-6 항체 및 종양학, 자가면역 질환 및 염증성 질환의 치료에 있어서의 이들의 용도 {HUMAN ANTI-IL-6 ANTIBODIES WITH EXTENDED IN VIVO HALF-LIFE AND THEIR USE IN TREATMENT OF ONCOLOGY, AUTOIMMUNE DISEASES AND INFLAMMATORY DISEASES}
우선권 진술
본 출원은 둘 다 이에 의해서 모든 목적으로 온전히 참고로 포함된 2009년 1월 29일자 출원된 미국 특허출원 제61/148,106호 및 2009년 6월 4일자 출원된 미국 특허출원 제61/184,182호를 우선권으로 주장한다.
본 발명은 IL-6의 생물학적 활성을 억제하고, 연장된 생체내 반감기를 갖는 안티-IL-6 항체 분자에 관한 것이다. 안티-IL-6 항체는 염증성 장애, 자가면역 장애, 종양 및 우울증을 포함하는 IL-6과 연관된 장애의 치료에 유용하다.
인터류킨 6 (IL-6)은 생체내에서 IL-6의 주요 공급원을 형성하는 자극된 섬유아세포, 단핵구 및 내피세포를 포함하는 다양한 세포 타입에 의해서 생산된 26 kDa 다면발현성 전염증성 사이토킨이다. T 세포, B 세포, 대식세포, 각질세포, 골아세포 및 몇 가지 다른 세포와 같은 세포는 자극하면 IL-6을 생산할 수 있다. IL-6은 또한, 종양 세포주 및 종양 세포, 예를 들어, 폐암, 전립선암, 골수종, 부신종 및 심장 점액종로부터 유래하는 세포로부터 발현된다 [Kishimoto, T., (1989) Blood 74:1-10; Smith P.C. 등. (2001) Cytokine and Growth factor Reviews 12:33-40]. 비-염증성 조건 하에서, IL-6은 지방조직으로부터 분비된다 [Wallenius 등., (2002) Nat. Med. 8:75].
세포 시그날링을 개시시키기 위해서, IL-6은 낮은 친화성으로 경막 수용체인 IL-6 수용체 알파 (또한, IL-6Rα, IL-6Ra, IL-6R, gp80 또는 CD126으로도 칭함)에 결합하여 컴플렉스 "IL-6:IL-6Ra"를 형성한다. 이 컴플렉스는 gp130 시그날 수용체에 결합하며; IL-6Rα와 gp130은 함께 고친화성 IL-6 결합 부위를 형성하며, IL-6, IL-6Ra 및 gp130 각각의 2 개의 카피로 구성된 헥사머 (hexamer)의 형성을 유도한다 [Somers, W., 등 (1997) 1.9 EMBO J. 16:989-997]. IL-6Ra는 또한 가용성의 분비된 형태로 존재하기 때문에 (sIL-6R 또는 sIL-6Ra), IL-6Ra의 경막 및 세포질 영역은 시그날 형질도입에 필요하지 않다. 가용성 수용체는 IL-6Ra 메시지의 차등적 스플리싱 (differential splicing)에 의해서 또는 단백분해적 쉐딩 (proteolytic shedding)에 의해서 생산된다. sIL-6R은 IL-6과의 리간드-수용체 컴플렉스인 "IL-6:sIL-6Ra"를 형성할 수 있다. 이 컴플렉스는 세포 상의 gp130에 결합함으로써 gp130 양성 세포에서, 비록 이들 세포가 IL-6Ra를 발현하지 않더라도 세포 시그날링을 개시시킬 수 있다. 따라서, sIL-6R은 IL-6에 대해서 반응성인 세포의 레퍼토리 (repertoire)를 확대하는 가능성을 가지며, IL-6-매개된 염증에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다 [Jones, S. A 등. (2001) FASEB J. 15:43-58].
인간 IL-6 리간드의 결정 구조는 설명되어 있다 [Somers, W., 등 (1997) 1.9 EMBO J. 16:989-997]. 인간 IL-6Ra의 세포외 영역의 결정 구조 [Varghese 등. (2002) PNAS USA 99:15959-15964], 및 IL-6/IL-6R/gp130 컴플렉스의 헥사머 구조 [Boulanger 등 (2003) Science 300:2101-2104]도 또한 해명되어 있다. 돌연변이유발 시험과 조합된 이들 구조는 다양한 수용체 성분과의 컴플렉스에서 IL-6의 기능적 활성에 연루되는 IL-6의 표면상의 3 개의 부위를 확인하였다. 부위 1 잔기는 IL-6과 IL-6Ra 사이의 상호작용에 연루된다. 부위 2 잔기는 IL-6과 gp130 사이토킨 결합 영역 사이의 상호작용에 연루된다. IL-6의 부위 3에서의 잔기는 헥사머 컴플렉스에서 두 번째 gp130의 Ig-양 영역과의 상호작용에 연루된다. IL-6 상의 네 번째 부위가 또한 확인되었으며, 여기에서 IL-6은 헥사머 IL-6/IL-6R/gp130 컴플렉스에서 IL-6의 두 번째 분자와 상호작용한다 [Menziani 등 (1997) Proteins: Structure Function and Genetics 29, 528].
다수의 안티-IL-6 리간드 항체가 분리되었다. 이들이 인간 IL-6의 표면상의 상술한 바와 같은 상이한 결합 부위에 결합하는 것을 보여주는 매핑 (mapping) 시험이 수행되었다 [Brakenhoff 등. (1990) J. Immunol. 145:561-568; Wijdenes 등. (1991) Mol Immunol. 28:1183-1191; Brakenhoff 등. (1994) JBC 269:86; Kalai 등. (1996) Eur J Biochem 238 714-723; Kalai 등. (1997) Blood 89:1319-1333].
IL-6의 상승은 다양한 질병 적응증에서 주요 사이토킨으로 연루되었다. 순환 IL-6의 레벨은 류마티스성 관절염, 캐슬만병 (Castleman's disease), 소아 특발성 관절염 및 크론병 (Crohn's Disease)과 같은 질병에서 상승되는 것으로 나타났다 [Nishimoto N, and Kishimoto T. (2004) Curr Op in Pharmacology 4:386-391]. 이것으로 인하여 IL-6은 이들 염증성 적응증에서 병리학을 구동시키는데 연루되었다. 더구나, 흑색종, 신세포암, 카포시 육종 (Kaposi's sarcoma), 난소암, 림프종, 백혈병, 다발성 골수종 및 전립선암을 포함하는 다양한 종양 타입이 IL-6에 의해서 자극되는 것으로 나타났다 [Keller E.T. 등. (1996) Front Biosci. 1:340-57]. 또한, IL6의 증가된 순환 레벨이 몇 가지 암에서 보고되었다. 일부의 암 적응증에서, 상응된 IL-6 레벨은 질병의 예후적 지표로서 사용되었다.
질병에서의 IL-6의 역할로 인하여 다양한 쥐, 키메릭, 인간화 및 인간 안티-IL-6 모노클로날 항체가 잠재적인 치료법으로서 개발되었다 [예를 들어, US5856135, WO2004/020633, US20060257407A1, US7291721]. 키메릭 인간-마우스 안티-IL-6 항체 cCLB8 (CNTO 328로 공지됨)은 대부분의 환자에게서 나타난 질병 안정화에 의해서 다발성 골수종을 갖는 환자를 치료하기 위해서 사용되었다 [van Zaanen 등. (1998) Brit. Journal. Haematology 102:783].
암 및 염증성 질병에서 IL-6 시그날링을 억제하는 양성효과는 인간화된 안티-IL-6Ra 항체 토실리주마브 (Tocilizumab) (또한 hPM-1, MRA 및 악템라 (Actemra)로도 알려짐)의 사용에 의해서 더 강조되었다. 이것은 쥐 안티-IL6Ra 항체 PM-1의 인간화된 변형이다. 이 항체에 의한 환자의 치료는 류마티스성 관절염, 소아 특발성 관절염, 크론병, 골수증식성 장애, 캐슬만병 및 전신성 홍반성 루푸스 (SLE)를 포함하는 다수의 질병에 효과적인 것으로 입증되었다 [Mihara 등. (2005) Expert Opinion on Biological Therapy. 5:683-90].
항체 기본 치료법에서 중요한 문제는 순환계에서의 면역글로불린의 지속성이다. 면역글로불린 청소율은 면역글로불린의 투약량 및 투약 빈도에 직접적으로 영향을 미친다. 증가된 투약량 및 투약 빈도는 환자에게서 역효과를 야기할 수 있으며, 또한 의료 비용을 증가시킬 수 있다. 안티-IL-6 항체 기본 치료법의 약제학적 중요성에 비추어, 증가된 생체내 반감기를 갖는 변형된 고친화성 인간 안티-IL-6 항체를 개발할 필요성이 있다.
발명의 요약
본 발명은 인간 IL-6에 특이적으로 결합하고 연장된 생체내 반감기를 갖는 고친화성 인간 항-IL-6 항체에 관한 것이다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 생체내 반감기는 10일 내지 40일이다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 생체내 반감기는 25일 내지 35일이다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 PCT 공보 No. WO 2008/065378에 기재된 항-IL-6 항체의 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:9의 중쇄 서열 및 SEQ ID NO:10의 경쇄 서열을 포함한다.
본 발명은 또한, 연장된 반감기를 갖는 인간 항-IL-6 항체를 인코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 상기 벡터를 포함하는 세포 및 연장된 반감기를 갖는 인간 항-IL-6 항체의 제조 방법에 관한 것이다.
추가 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 연장된 반감기를 갖는 인간 항-IL-6 항체를 인코딩하는 서열을 포함하는 단리된 핵산, 및 연장된 반감기를 갖는 인간 항-IL-6 항체의 제조 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 인간 항-IL-6 항체의 생성을 야기하는 조건 하에서 상기 핵산을 발현시키는 단계, 및 그 핵산을 회수하는 단계를 포함한다.
추가 측면은 본 발명의 핵산을 함유하거나 그 핵산으로 변형된 숙주세포를 제공한다.
본 발명의 추가 측면은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하는 조성물, 및 IL-6을 결시키고, 억제하고/하거나 중화시키는 방법에서 그 조성물의 용도를 제공하고, 상기 방법은 요법에 의한 인간 또는 동물 몸체의 치료 방법을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 멸균된 액상 제형이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 적어도 100　mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물은 동결건조된 제형이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약제학적 제형이다.
본 발명에 따른 항체는 치료 또는 진단 방법, 예컨대 인간 또는 동물 몸체 (예를 들어, 인간 환자)의 질환 또는 장애의 치료 방법 (예방 치료를 포함할 수 있음)에 사용될 수 있고, 상기 방법은 상기 환자에게 유효량의 본 발명의 결합 멤버를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 치료가능한 상태는, 본 명세서에서 상세히 논의한 바와 같이 IL-6가 역할을 하는 어떤 것이다.
본 발명은 필요한 인간 환자의 혈청에서 IL-6 활성을 중화시키는 방법을 또한 포함하고, 상기 방법은, 인간 환자에게 유효량의 본 발명의 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명은 또한, 염증성 질환 또는 장애, 자가면역 질환 또는 장애, 증식성 질환, IL-6의 이상 발현 및/또는 활성과 연관되거나 그것을 특징으로 하는 질환 또는 장애, IL-6 수용체의 이상 발현 및/또는 활성과 연관되거나 그것을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 또는 그의 하나 이상의 증상을 예방, 관리, 치료 또는 개선하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 필요한 대상체에게 예방적 또는 치료적 유효량의 본 발명의 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 하나의 측면은 IL-6에 특이적으로 결합하는 단리된 변형된 항체에 관한 것이고, 여기서, 상기 변형된 항체는 가변 도메인, 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 상기 가변 도메인 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인을 포함하는 모 항체의 반감기와 비교하여 증가된 반감기를 갖는다. 본 발명의 측면의 하나의 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 야생형 항체의 반감기보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배 또는 적어도 20배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 야생형 항체의 반감기보다 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 20배 더 길다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 야생형 항체의 반감기보다 2배 내지 3배, 2배 내지 5배, 2배 내지 10배, 3배 내지 5배, 또는 3배 내지 10배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 적어도 26일, 적어도 27일, 적어도 28일, 적어도 29일, 적어도 30일, 적어도 35일, 적어도 40일, 적어도 45일 또는 적어도 50일이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 10일, 15일, 20일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 35일, 40일, 45일 또는 50일이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 10일 내지 20일, 10일 내지 30일, 10일 내지 40일, 10일 내지 50일, 20일 내지 30일, 20일 내지 40일, 20일 내지 50일, 25일 내지 30일, 25일 내지 40일, 25일 내지 50일, 30일 내지 40일, 30일 내지 50일 또는 40일 내지 50일이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 포유동물에서 측정된 반감기이다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 반감기는 비-인간 영장류에서 측정된 반감기이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체는 인간 대상체에서 측정된 반감기이다.
본 발명의 또 다른 측면은 IL-6에 특이적으로 결합하는 단리된 변형된 항체에 관한 것이다, 여기서, 상기 변형된 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 상기 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인을 포함하는 야생형 항체의 제거율과 비교하여 감소된 제거율을 갖는다. 본 발명의 측면의 하나의 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 야생형 항체의 제거율보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배 또는 적어도 20배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 야생형 항체의 제거율보다 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 20배 더 길다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 야생형 항체의 제거율보다 2배 내지 3배, 2배 내지 5배, 2배 내지 10배, 3배 내지 5배, 또는 3배 내지 10배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 많아야 1 mL/kg/1일, 많아야 2 mL/kg/1일, 많아야 3 mL/kg/1일, 많아야 4 mL/kg/1일, 많아야 5 mL/kg/1일, 많아야 7 mL/kg/1일, 많아야 10 mL/kg/1일, 많아야 15 mL/kg/1일 또는 많아야 20 mL/kg/1일이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 1 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일, 4 mL/kg/1일, 5 mL/kg/1일, 7 mL/kg/1일, 10 mL/kg/1일, 15 mL/kg/1일 또는 20 mL/kg/1일이다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 1 mL/kg/1일 내지 2 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 3 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 15 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일 또는 5 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 포유동물에서 측정된 제거율이다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체는 비-인간 영장류에서 측정된 제거율이다. 추가 구체예에서, 변형된 항체의 제거율은 인간 대상체에서 측정된 제거율이다. 추가 구체예에서, 아미노산 치환은 M252Y, M252F, M252W, M252T, S254T, T256S, T256R, T256Q, T256E, T256D, T256T, L309P, Q311S, H433R, H433K, H433S, H433I, H433P, H433Q, N434H, N434F, N434Y 및 N436H로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 아미노산 치환의 적어도 하나는 M252Y, S254T, T256E, H433K, N434F 및 N436H로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 변형된 IgG 불변 도메인은 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하고, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 변형된 IgG 불변 도메인은 야생형 IgG 불변 도메인보다 FcRn에 대해 더 높은 친화성을 갖는다. 추가 구체예에서, 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인이다. 추가 구체예에서, 상기 IgG는 IgG1이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기에 기재된 변형된 항체에 관한 것이고, 여기서 상기 가변 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 1에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; SEQ ID NO: 2에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; SEQ ID NO: 3에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; SEQ ID NO: 4에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; SEQ ID NO: 5에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 SEQ ID NO: 6에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3. 하나의 구체예에서, 청구항들 중 임의의 하나의 변형된 항체는 청구항 1 내지 26을 청구하고, 여기서, 상기 가변 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3. 또 다른 구체예에서, 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; 여기서, 상기 VH 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3. 추가 구체예에서, 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 여기서, 상기 VL 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3. 추가 구체예에서, 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7과 동일하거나 SEQ ID NO: 7에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, SEQ ID NO:8과 동일하거나 SEQ ID NO: 8에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 가변 도메인은 SEQ ID NO:7의 VH 도메인 및 SEQ ID NO:8의 VL 도메인을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 변형된 항체를 인코딩하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산에 관한 것이다. 하나의 구체예에서, 핵산은 SEQ ID NO:11-14로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 벡터를 포함하는 단리된 세포에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 변형된 항체를 발현시키는 단리된 세포에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 항체의 생산에 충분한 조건 하에서 단리된 세포를 배양하고, 항체를 배양물로부터 회수하는 것을 포함하는, 변형된 항체의 생산 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 변형된 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면, 유효량의 상기 변형된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 필요한 인간의 혈청에서 유리 IL-6의 적어도 90%를 중화시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 인간에게 유효량의 상기 변형된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 필요한 인간의 혈청에서 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90%를 억제하는 방법에 관한 것이다..
본 발명의 또 다른 측면은 인간에게 유효량의 변형된 항체를 투여하는 것을 포함하는, 필요한 인간의 활액(synovial fluid)에서 유리 IL-6의 적어도 90%를 중화시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 인간에게 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 필요한 인간의 활액에서 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90%를 억제하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 활액 염증을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 자가면역 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 악성 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 염증성 질환 또는 장애의 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면 필요한 인간에게 치료적 유효량의 상기 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간의 전신 홍반성 루푸스, 류마티스성 관절염 또는 염증성 장질환의 치료 방법에 관한 것이다. 하나의 구체예에서, 제40항 내지 제49항 중 어느 하나의 항의 방법, 여기서, 상기 치료적 유효량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 변형된 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 치료적 유효량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 변형된 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 치료적 유효량의 변형된 항체는 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여된다. 추가 구체예에서, 치료적 유효량의 변형된 항체는 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 또 다른 구체예에서, 환자는 변형된 항체의 단일 부하 복용량으로 투여된 후, 변형된 항체의 적어도 하나의 유지 복용량으로 투여된다. 추가 구체예에서, 부하 복용량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 변형된 항체를 포함한다. 추가 구체예에서, 부하 복용량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 변형된 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 유지 복용량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 변형된 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 유지 복용량은 단일 또는 분할 복용량으로 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 변형된 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 유지 복용량은 1주, 2주, 3주, 4주, 8주, 또는 12주 투여된 후, 부하 복용량으로 투여된다. 또 다른 구체예에서, 적어도 2 유지 복용량은 환자에게 투여되고, 유지 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여된다. 또 다른 구체예에서, 변형된 항체의 부하 복용량은 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 또 다른 구체예에서, 유지 복용량은 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 추가 구체예에서, 치료적 유효량의 변형된 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 항체를 포함하는 멸균의 안정한 수성 제형에 관한 것이다.. 본 발명의 측면의 하나의 구체예에서, 상기 항체는 동결건조되이 않았다. 또 다른 구체예에서, 항체는 동결건조되었다. 또 다른 구체예에서, 상기 변형된 항체의 농도는 적어도 약 5　mg/ml, 적어도 약 10　mg/ml, 적어도 약 15　mg/ml, 적어도 약 20　mg/ml, 적어도 약 50　mg/ml, 적어도 약 100 mg/ml, 적어도 약 120　mg/ml, 적어도 약 150　mg/ml, 적어도 약 160　mg/ml, 적어도 약 180　mg/ml, 적어도 약 200　mg/ml, 적어도 약 250 mg/ml, 또는 적어도 약 300　mg/ml이다. 추가 구체예에서, 제형은 적어도 약 하나의 완충 성분을 추가로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 제형은 적어도 하나의 부형제를 추가로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 완충 성분은 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 완충 성분은 그 농도가 약 1　mM 내지 약 200　mM, 약 1　mM 내지 약 50　mM, 또는 약 5　mM 내지 약 20　mM이다. 또 다른 구체예에서, 완충 성분은 그 농도가 약 10　mM, 약 15　mM, 약 20　mM 또는 약 25 mM이다. 추가 구체예에서, 부형제는 당류이다. 또 다른 구체예에서, 당류는 이당류이다. 또 다른 구체예에서, 이당류는 트레할로오스 또는 수크로오스이다. 추가 구체예에서, 이당류는 그 농도가 약 1% 내지 약 40%, 약 2% 내지 약 20%, 또는 약 2% 내지 약 10%이다. 추가 구체예에서, 이당류는 그 농도가 약 2%, 약 4% 또는 약 8%이다. 또 다른 구체예에서, 부형제는 염이다. 또 다른 구체예에서, 염은 염화나트륨이다. 추가 구체예에서, 염화나트륨은 그 농도가 약 50　mM 내지 약 200 mM이다. 또 다른 구체예에서, 염화나트륨은 그 농도가 약 70　mM, 약 75　mM, 약 80　mM, 약 100　mM, 약 120　mM, 또는 약 150 mM이다. 추가 구체예에서, 부형제는 표면활성제이다. 추가 구체예에서, 표면활성제는 폴리소르베이트이다. 추가 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트　20 또는 폴리소르베이트　80이다. 추가 구체예에서, 표면활성제는 그 농도가 약 0.001% 내지 약 2%. 또 다른 구체예에서, 표면활성제는 그 농도가 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.04% 또는 약 0.08%이다. 추가 구체예에서, 부형제는 아미노산이다. 또 다른 구체예에서, 아미노산은 글리신, 히스티딘 또는 아르기닌로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 아미노산은 그 농도가 약 10 mM 내지 약 400 mM이다. 또 다른 구체예에서, 아미노산은 그 농도가 약 25 mM, 약 50 mM, 약 100 mM, 약 150 mM, 약 200 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 또는 약 400 mM이다. 추가 구체예에서, 제형은 pH 약 5.5 내지 약 6.5를 갖는다. 또 다른 구체예에서, 상기 제형은 pH 약 6.0을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 제형은 등장용액이다. 또 다른 구체예에서, 제형은 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시 안정하다. 또 다른 구체예에서, 제형은 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시 안정하다. 또 다른 구체예에서, 제형은 5℃에서 적어도 약 12개월 동안 보관시 안정하다. 또 다른 구체예에서, 항체는 l적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 20%를 잃는다. 추가 구체예에서, 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 20%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 20%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 10%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 제64항 내지 제93항 중 어느 하나의 항의 제형, 여기서, 상기 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 10%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 10%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 4주 동안 40℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 5%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 5%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 상기 제형의 보관 동안에 그 IL-6 결합 활성의 많아야 5%를 잃는다. 또 다른 구체예에서, 항체는 응집, 또는 단편화되기 쉽다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 2% 미만은 HPSEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 4주 동안 40℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 3개월 동안 5℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 상기 항체의 약 5% 미만은 SEC로 측정시, 적어도 약 12개월 동안 5℃에서 보관시 응집물을 형성한다. 또 다른 구체예에서, 제형은 주사가능 제형이다. 또 다른 구체예에서, 제형은 정맥내, 피하, 또는 근육내 투여에 적합하다. 또 다른 구체예에서, 제형은 에어로졸 투여에 적합하다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 상기 항체 제형을 적합한 용기 내에 포함하는, 인간에 대한 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 복용 형태에 관한 것이다. 하나의 구체예에서, 항체 제형은 정맥내로, 피하로, 또는 근육내로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 상기 항체 제형을 포함하는, 인간에 대한 에어로졸 투여에 적합한 약제학적 단일 복용 형태에 관한 것이다. 본 발명의 측면의 하나의 구체예에서, 항체 제형은 비강내로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 상기 제형을 함유하는 밀폐 용기에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 상기 제형을 함유하는 1회용(pre-filled) 주사기에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 상기 제형을 포함하는 키트에 관한 것이다.
본 발명의 이들 및 다른 측면은 이하에 상세히 기재된다.
용어
여기에서는, 본 발명에서 사용된 경우에 "및/또는"은 2 개의 명시된 특징 또는 성분이 각각 다른 것이 있거나 없이 구체적으로 개시된 것으로 명시된 것임을 지적하는 것이 편리하다. 예를 들어, "A 및/또는 B"는 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각의 구체적인 개시가 마치 이들 각각이 본 발명에 개별적으로 기술된 것처럼 명시된 것이다.
IL-6 및 IL-6 수용체
IL-6은 인터류킨 6이다. IL-6은 또한 본 발명에서 "항원"으로 언급될 수도 있다.
인간 IL-6의 전체 길이 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 15이다. 이 서열은 생체내에서 절단되어 N-말단 리더 (leader) 펩타이드를 제거하여 성숙 IL-6을 생산한다. 성숙 인간 IL-6은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 16을 갖는다. 성숙 서열은 본 발명에 기술된 바와 같은 치료학적 및 생체내 진단적 적용을 위한 표적 항원인 생체내 순환 IL-6을 나타낸다. 따라서, 본 발명에서 언급된 IL-6은 문맥에 의해서 다른 식으로 나타내지 않는 한은 통상적으로 성숙 인간 IL-6이다.
IL-6은 예를 들어, 본 발명에 기술된 바와 같은 시험방법에서 사용하기 위하여 HIS FLAG와 같은 검출가능한 라벨에 컨주게이트될 수 있다. 예를 들어, HIS FLAG 서열에 컨주게이트된 IL-6을 포함하는 융합 단백질이 사용될 수 있다.
IL-6 수용체 a인 IL-6Ra는 인터류킨 6에 대한 수용체이다. IL-6Ra는 또한 IL-6Rα, IL-6Ra, IL-6R 및 CD126으로 공지되어 있다. IL-6Ra는 생체내에서 경막 형태로 및 가용성 형태로 존재한다. IL-6Ra에 대한 언급은 문맥에 의해서 다른 식으로 나타내지 않는 한은 경막 IL-6Ra 및/또는 가용성 IL-6Ra일 수 있다.
본 발명에서 언급된 IL-6 수용체는 다른 식으로 나타내지 않는 한은, 통상적으로 인간 IL-6 수용체이다. 인간 가용성 IL-6Ra (sIL-6Ra, sIL-6R)의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 17이다. 인간 경막 IL-6Ra의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 18이다.
IL-6은 IL-6Ra에 결합하여 컴플렉스 IL-6:IL-6Ra를 형성한다. 이 컴플렉스는 가용성 (sIL-6Ra에 의해서)이거나 막 결합될 수 있다 (경막 IL-6Ra에 의해서). IL-6Ra가 가용성 형태인 경우에, 컴플렉스는 IL-6:sIL-6Ra로 지정된다. IL-6:IL-6Ra에 대한 언급은, 문맥에 의해서 다른 식으로 나타내지 않는 한은 경막 IL-6Ra와 또는 가용성 IL-6Ra와 컴플렉스를 형성한 IL-6을 포함할 수 있다.
gp130
gp130은 IL-6:IL-6Ra 컴플렉스에 대한 수용체이다. gp130의 클로닝 및 특정화는 문헌 [Hibi 등, Cell 63:1149-1157 (1990)]에 보고되어 있다. 인간 gp130의 서열은 SEQ ID NO: 19로 명시된다.
결합 성분
이것은 분자의 쌍 중의 또 다른 하나에 결합하는 하나의 성분을 설명한다. 결합쌍의 성분은 천연적으로 유도되거나, 전체적으로 또는 부분적으로 합성에 의해서 생산될 수 있다. 분자의 쌍 중의 하나의 성분은 분자의 쌍의 다른 구성원의 특정한 공간적 및 극성 조직화에 결합하며, 따라서 그에 대해서 상보적인 그의 표면상의 영역, 또는 공동을 갖는다. 결합쌍의 타입의 예는 항원-항체, 비오틴-아비딘, 호르몬-호르몬 수용체, 수용체-리간드, 효소-기질이다. 본 발명은 항원-항체 타입 반응과 관련된다.
결합 성분은 통상적으로 항원-결합 부위를 갖는 분자를 포함한다. 예를 들어, 결합 성분은 항체 분자, 또는 항원-결합 부위를 포함하는 비-항체 단백질일 수 있다
항원 결합 부위는 피브로넥틴 또는 사이토크롬 B 등과 같은 비-항체 단백질 스캐폴드 상에서의 CDRs의 정렬에 의해서 [Haan & Maggos (2004) BioCentury, 12(5): A1-A6; Koide 등. (1998) Journal of Molecular Biology, 284: 1141-1151; Nygren 등. (1997) Curr. Op. Structural Biology, 7: 463-469], 또는 단백질 스캐폴드 내의 루프의 아미노산 잔기를 랜덤화시키거나 돌연변이시켜 원하는 표적에 대한 결합 특이성을 부여함으로써 제공될 수 있다. 단백질 내의 신규한 결합 부위를 조작하기 위한 스캐폴드는 나이그렌 (Nygren) 등에 의해서 상세히 검토되었다 [Nygren 등. (1997) Curr. Op. Structural Biology, 7: 463-469]. 항체 모사체에 대한 단백질 스캐폴드는 본 발명에 온전히 참고로 포함된 WO/0034784에 기술되어 있으며, 여기에서 발명자들은 적어도 하나의 랜덤화된 루프를 갖는 피브로넥틴 타입 III 영역을 포함하는 단백질 (항체 모사체)을 기술하였다. 하나 또는 그 이상의CDRs, 예를 들어, HCDRs의 세트를 그래프트시키는데 적합한 스캐폴드는 면역글로불린 유전자 슈퍼패밀리의 어떤 영역 성분에 의해서라도 제공될 수 있다. 스캐폴드는 인간 또는 비-인간 단백질일 수 있다. 비-항체 단백질 스캐폴드의 이점은 이것이 적어도 일부의 항체 분자보다 더 작고/작거나 제조하기 더 쉬운 스캐폴드 분자 내의 항원-결합 부위를 제공할 수 있다는 점이다. 결합 성분의 작은 크기는 세포에 들어가거나, 조직 내로 깊게 침투하거나 표적을 다른 구조 내에 도달시키거나, 표적 항원의 단백질 공동 내에 결합하는 능력과 같은 유용한 생리학적 특성을 부여할 수 있다. 비-항체 단백질 스캐폴드 내의 항원 결합 부위의 사용은 웨스 (Wess)에 의해서 검토되었다 [Wess, L. (2004) In: BioCentury, The Bernstein Report on BioBusiness, 12(42), A1-A7]. 전형적인 것은 안정한 골격 및 하나 또는 그 이상의 가변성 루프를 갖는 단백질이며, 여기에서 루프 또는 루프들의 아미노산 서열은 특이적으로 또는 무작위적으로 돌연변이되어 표적 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 발생시킨다. 이러한 단백질에는 스타필로코커스 아우레우스 (S. aureus)로부터의 단백질 A의 IgG-결합 영역, 트랜스페린, 테트라넥틴, 피브로넥틴 (예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 영역), 리포칼린뿐만 아니라 감마-결정성 및 그 밖의 다른 아필린 (Affilin™) 스캐폴드 (Scil 단백질)가 포함된다. 그 밖의 다른 접근방법의 예로는 분자내 디설파이드 결합을 갖는 작은 단백질인 사이클로타이드를 기본으로 하는 합성 "마이크로바디 (Microbodies)", 마이크로단백질 (버사바디 (Versabodies™), Amunix) 및 안키린 반복 단백질 (DARPins, Molecular Partners)이 포함된다.
항체 서열 및/또는 항원-결합 부위에 더하여, 본 발명에 따르는 결합 성분은, 예를 들어, 접혀진 영역과 같이 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 형성하거나, 분자에 항원에 결합하는 능력에 더하여 또 다른 기능적 특징을 부여하는 다른 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 검출가능한 라벨을 보유할 수 있거나, 독소 또는 표적화 부분 또는 효소에 (예를 들어, 펩티딜 결합 또는 링커를 통해서) 컨주게이트될 수 있다. 예를 들어, 결합 성분은 촉매적 부위 (예를 들어, 효소 영역 내에)뿐만 아니라 항원 결합 부위를 포함할 수 있으며, 여기에서 항원 결합 부위는 항원에 결합하고, 따라서 촉매적 부위를 항원에 대해서 표적화한다. 촉매적 부위는 예를 들어, 절단에 의해서 항원의 생리학적 기능을 억제할 수 있다.
언급한 바와 같이, CDRs는 비-항체 스캐폴드에 의해서 보유될 수 있지만, 본 발명의 CDR 또는 CDRs의 세트를 보유하는 구조는 일반적으로 항체 중쇄 또는 경쇄 서열 또는 그의 상당한 부분일 수 있으며, 여기에서 CDR 또는 CDRs의 세트는 재정렬된 면역글로불린 유전자에 의해서 코드화된 천연적으로 존재하는 VH 및 VL 항체 가변 영역의 CDR 또는 CDRs의 세트에 상응하는 위치에 위치한다. 면역글로불린 가변 영역의 구조 및 위치는 카밧 (Kabat) 등의 문헌 [Kabat, E. A. 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest. 4th Edition. US Department of Health and Human Services. (1987)] 및 이들의 업데이트를 참고로 하여 결정될 수 있다. 다수의 학문적 및 상업적 온라인 자원은 이 데이터베이스에 의문을 갖는 경우에 이용할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Martin, A.C.R., Accessing the Kabat Antibody Sequence Database by Computer PROTEINS: Structure, Function and Genetics, 25 (1996), 130-133] 및 현재 bioinf.org.uk/abs/simkab.html의 월드 와이드 웹 (world wide web) 주소에서의 연관된 온라인 자료를 참고로 한다.
CDR 부분 또는 CDR이란 카밧 등 [Kabat, E.A. 등. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition. US Department of Health and Human Services, Public Service, NIH, Washington or later editions] 또는 코티아 (Chothia) 및 레스크 (Lesk) [J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)]에 의해서 정의된 바와 같은 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 고가변성 부분을 나타내고자 하는 것이다. 항체는 전형적으로 3 개의 중쇄 CDRs 및 3 개의 경쇄 CDRs를 함유한다. 용어 CDR 또는 CDRs는 여기에서 경우에 따라, 항원 또는 이것을 인식하는 에피토프에 대한 항체의 친화성에 의해서 결합을 책임지는 아미노산 잔기의 대부분을 함유하는, 이들 부분 중의 하나 또는 이들 부분 중의 몇 개 또는 전체까지를 나타내기 위해서 사용된다.
6 개의 짧은 CDR 서열 중에서, 중쇄의 제3 CDR (HCDR3)은 더 큰 크기 가변성 (이것을 일으키는 유전자의 정렬 기전에 기인한 더 큰 다양성)을 갖는다. 이것은 2 개의 아미노산 정도로 짧을 수 있지만, 알려진 가장 긴 크기는 26이다. CDR 길이는 또한, 특정한 기본적 골격에 의해서 수용될 수 있는 길이에 따라서 달라질 수 있다. 기능적으로, HCDR3은 항체의 특이성의 결정에 부분적으로 역할을 한다 [Segal 등., (1974) PNAS, 71:4298-4302; Amit 등., (1986) Science, 233:747-753; Chothia 등., (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917; Chothia 등., (1989) Nature, 342:877-883; Caton 등., (1990) J. Immunol., 144:1965-1968; Sharon 등., (1990) PNAS, 87:4814-4817; Sharon 등., (1990) J. Immunol., 144:4863-4869; Kabat 등., (1991) J. Immunol., 147:1709-1719; Holliger & Hudson, Nature Biotechnology 23(9):1126-1136 2005].
HCDR1은 카밧 잔기 31-35로 구성된 5 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
HCDR2는 카밧 잔기 50-65로 구성된 17 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
HCDR3은 임의로 카밧 잔기 100D를 포함하는, 카밧 잔기 95-102로 구성된 11 또는 12 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
LCDR1은 카밧 잔기 24-34로 구성된 11 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
LCDR2 카밧 잔기 50-56으로 구성된 7 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
LCDR3은 임의로 카밧 잔기 95를 포함하는, 카밧 잔기 89-97로 구성된 8 또는 9 개의 아미노산 길이를 가질 수 있다.
항체 분자
이것은 천연물이든 부분적으로 또는 완전히 합성적으로 생산된 것이든 면역글로불린을 기술한다. 이 용어는 또한, 항체 항원-결합 부위를 포함하는 모든 폴리펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 여기에서, 본 발명은 천연 형태인 항체를 말하는 것이 아니며, 즉 이들은 그들의 천연적 환경에 존재하지 않지만, 이들은 천연 공급원으로부터 정제에 의해서 분리 또는 수득되거나, 그 밖에 유전자 재조합에 의해서 또는 화학적 합성에 의해서 수득될 수 있었으며, 그 후에 이들은 추후에 기술하는 바와 같은 비천연 아미노산을 함유할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 항체 항원-결합 부위를 포함하는 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, scFv, Fv, dAb 및 Fd와 같은 분자를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 예를 들어, Fab2, Fab3, 다아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 미니바디를 포함하는 하나 또는 그 이상의 항체 항원-결합 부위를 포함하는 다양한 다른 항체 분자가 조작되었다. 항체 분자 및 이들의 구성 및 사용 방법은 문헌 [Holliger & Hudson, Nature Biotechnology 23(9):1126-1136 (2005)]에 기술되어 있다.
표적 항원에 결합하는 다른 항체 또는 키메릭 분자를 생산하기 위한 모노클로날 항체 및 다른 항체 및 재조합 DNA 기술을 채택할 수 있다. 이러한 기술은 상이한 면역글로불린의 불변 부분, 또는 불변 부분과 골격 부분에 항체의 면역글로불린 가변 부분을 코드화한 DNA 또는 CDRs를 도입시키는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, EP-A-184187, GB 2188638A 또는 EP-A-239400, 및 대량의 후속 문헌을 참고로 한다. 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 다른 세포를 생산된 항체의 결합 특이성을 변화시킬 수 있거나 없는 유전자 돌연변이 또는 다른 변화를 겪을 수 있다.
항체는 다수의 방식으로 변형될 수 있기 때문에, 용어 "항체 분자"는 항원에 대한 필요한 특이성 및/또는 결합을 갖는 항체 항원-결합 부위를 갖는 모든 결합 성분 또는 물질을 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 이 용어는 천연이든 전부 또는 부분적으로 합성된 것이든지 항체 항원-결합 부위를 포함하는 모든 폴리펩타이드를 포함하는 항체 단편 및 유도체를 포함한다. 따라서, 또 다른 폴리펩타이드 (예를 들어, 또 다른 종으로부터 유도되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속함)에 융합된 항체 항원-결합 부위 또는 등가물을 포함하는 키메릭 분자가 포함된다. 키메릭 항체의 클로닝 및 발현은 EP-A-0120694 및 EP-A-0125023, 및 대량의 후속 문헌에 기술되어 있다.
항체 조작의 기술분야에서 이용할 수 있는 추가의 기술은 인간 및 인간화된 항체를 분리시킬 있도록 하였다. 예를 들어, 인간 하이브리도마는 콘터만과 두벨 (Kontermann & Dubel) [Kontermann, R & Dubel, S, Antibody Engineering, Springer-Verlag New York, LLC; 2001, ISBN: 3540413545]에 의해서 기술된 바와 같이 만들어질 수 있다. 결합 성분을 생성시키는 또 다른 정립된 기술인 파지 디스플레이 (phage display)는 콘터만과 두벨의 문헌 [Kontermann, R & Dubel, S, Antibody Engineering, Springer-Verlag New York, LLC; 2001, ISBN: 3540413545] 및 WO92/01047 (이하에 더 거론됨), 및 미국 특허 US5969108, US5565332, US5733743, US5858657, US5871907, US5872215, US5885793, US5962255, US6140471, US6172197, US6225447, US6291650, US6492160, US6521404와 같은 다수의 문헌에 상세하게 기술되었다.
유전자 이식 마우스, 예를 들어, 마우스 면역 시스템의 다른 성분들은 온전하게 남기면서 마우스 항체 유전자가 불활성화되고, 기능적으로 인간 항체 유전자에 의해서 대체된 마우스가 인간 항체를 분리시키기 위해서 사용되었다 [Mendez, M. 등. (1997) Nature Genet, 15(2): 146-156]. 인간화된 항체는 예를 들어, WO91/09967, US 5,585,089, EP592106, US 565,332 및 WO93/17105에 기술된 것과 같은 본 기술분야에서 공지된 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 또한, WO2004/006955는 비-인간 항체의 가변 부분의 CDR 서열에 대한 정준 (canonical) CDR 구조 타입을 인간 항체 서열의 라이브러리, 예를 들어, 배선 항체 유전자 절편으로부터의 상응하는 CDRs에 대한 정준 CDR 구조 타입과 비교함으로써 인간 항체 유전자로부터의 가변 부분 골격 서열을 선택하는 것을 기초로 하여 항체를 인간화시키는 방법을 기술한다. 비-인간 CDRs와 유사한 정준 CDR 구조 타입을 갖는 인간 항체 가변 부분은 인간 골격 서열을 선택하기 위한 성분 인간 항체 서열의 서브세트를 형성한다. 서브세트 성분은 인간 및 비-인간 CDR 서열 사이의 아미노산 유사성에 의해서 더 등급을 매길 수 있다. WO2004/006955의 방법에서는, 상위 등급의 인간 서열을 선택하여 기능적으로 인간 CDR 서열을 선택된 서브세트 성분 인간 골격을 사용하여 비-인간 CDR 대응물로 대체시킴으로써 비-인간 항체와 인간 항체 사이의 골격 서열을 비교할 필요가 없이 고친화성 및 낮은 면역원성을 갖는 인간화된 항체를 제공하는 키메릭 항체를 구성하기 위한 골격 서열을 제공하기 위해서 선택된다. 상기 방법에 따라 제조된 키메릭 항체도 또한 개시된다.
합성 항체 분자는 예를 들어, 나피크 (Knappik) 등 [Knappik 등. (2000) J. Mol. Biol. 296, 57-86] 또는 크렙스 (Krebs) 등 [Krebs 등. (2001) J. Immunological Methods 254 67-84]에 의해서 기술된 바와 같이, 적합한 발현 벡터 내에서 합성 및 조립된 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 생성된 유전자로부터의 발현에 의해서 생성될 수 있다.
전체 항체의 단편은 결합 항원의 기능을 수행할 수 있는 것으로 나타났다. 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 영역으로 구성된 Fab 단편; (ii) VH 및 CH1 영역으로 구성된 Fd 단편; (iii) 단일 항체의 VL 및 VH 영역으로 구성된 Fv 단편; (iv) VH 또는 VL 영역으로 구성된 dAb 단편 [Ward, E. S. 등., (1989) Nature 341, 544-546; McCafferty 등 (1990) Nature, 348, 552-554; Holt 등 (2003) Trends in Biotechnology 21, 484-490]; (v) 분리된 CDR 부분; (vi) 2 개의 연결된 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (vii) VH 영역과 VL 영역이, 2 개의 영역을 결합시켜 항원 결합 부위를 형성하도록 하는 펩타이드 링커에 의해서 연결된 단일쇄 Fv 분자 (scFv) [Bird 등, (1988) Science, 242, 423-426; Huston 등, (1988) PNAS USA, 85, 5879-5883]; (viii) 이중특이성 단일쇄 Fv 다이머 [PCT/US92/09965] 및 (ix) 유전자 융합에 의해서 구성된 다가 또는 다중특이성 단편인 "디아바디" [WO94/13804; Holliger, P. 등, (1993) PNAS USA 90 6444-6448]이다. Fv, scFv 또는 디아바디 분자는 VH 및 VL 영역을 연결시키는 디설파이드 브릿지의 통합에 의해서 안정화될 수 있다 [Reiter, Y. 등, (1996) Nature Biotech, 14, 1239-1245]. CH3 영역에 접합된 scFv를 포함하는 미니바디가 또한 제조될 수 있다 [Hu, S. 등, (1996) Cancer Res., 56, 3055-3061]. 결합 단편의 다른 예는 중쇄 CH1 영역의 카복실 말단에서의, 항체 힌지 부분으로부터의 하나 또는 그 이상의 시스테인을 포함하는 몇 개의 잔기의 첨가에 의해서 Fab 단편과 상이한 Fab', 및 불변 영역의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 그룹을 갖는 Fab' 단편인 Fab'-SH이다.
퀴 (Qui) 등 [Qui 등., (2007) Nat. Biotechnol. 25:921-929]은 골격 부분에 의해서 연결된 단지 2 개의 CDRs를 함유하는 항체 분자를 기술하였다. VH 또는 VL 영역으로부터의 CDR3은 다른 영역의 CDR1 또는 CDR2 루프에 연결되었다. 연결은 선택된 CDR1 또는 CDR2의 C 말단을 통해서 FR 부분을 거쳐 CDR3의 N 말단에 대해 이루어졌다. 퀴 (Qui) 등은 최소의 소수성 패치 (patches)를 갖는 FR 부분을 선택하였디. 시험한 항체에 대한 최상의 조합은 VH FR2에 의해서 VH CDR3에 연결된 VL CDR1 (VHCDR1-VHFR2-VLCDR3)인 것으로 확인되었다. 약 3 kDa의 분자량에서 이들 항체 분자는 전체 면역글로불린 (약 150 kDa) 또는 scFv (약 28 kDa)에 비해 개선된 조직 침투의 관점에서 이점을 제공한다.
본 발명의 항체 단편은 모 항체 분자 또는 항체 분자 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 22 및 23 중의 어떤 것으로부터라도 출발하여 효소, 예를 들어, 펩신 또는 파파인에 의한 분해와 같은 방법에 의해서 및/또는 화학적 환원에 의한 디설파이드 브릿지의 절단에 의해서 수득될 수 있다. 또 다른 방식으로, 본 발명에 포함된 항체 단편은 마찬가지로 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 유전자 재조합의 기술에 의해서, 또는 추가로 예를 들어, 회사 Applied Biosystems에 의해서 공급된 것 등과 같은 자동 펩타이드 합성기를 이용한 펩타이드 합성에 의해서, 또는 핵산 합성 및 발현에 의해서 수득될 수 있다.
본 발명에 따르는 기능적 항체 단편은 화학적 변형에 의해서, 특히 페질화 (PEGylation)에 의해서, 알부민 또는 그의 단편에 대한 융합에 의한 리포좀 내의 통합에 의해서 그의 반감기가 증가된 모든 기능적 단편을 포함한다.
dAb (영역 항체)는 항체의 작은 모노머성 항원-결합 단편, 즉 항체 중쇄 또는 경쇄의 가변 부분이다 [Holt 등 (2003) Trends in Biotechnology 21, 484-490]. VH dAbs는 천연적으로는 카멜리드 (camelids) (예를 들어, 낙타, 라마)에 존재하며, 카멜리드를 표적 항원으로 면역시키고, 항원-특이적 B 세포를 분리시키고, 개개의 B 세포로부터 dAb 유전자를 직접 클로닝함으로써 생산될 수 있다. dAbs는 또한 세포 배양물에서 생산될 수 있다. 이들의 작은 크기, 우수한 용해도 및 온도 안정성은 이들을 선택 및 친화성 성숙 (maturation)에 특히 생리학적으로 유용하며 적합하도록 만든다. 카멜리드 VH dAbs는 명칭 "나노바디 (nanobodies™)"로서 치료학적 용도로 개발되고 있다. 본 발명의 결합 성분은 실질적으로 본 발명에 설명된 바와 같은 VH 또는 VL 영역을 포함하는 dAb, 또는 본 발명에 설명된 바와 같은 CDRs의 세트를 포함하는 VH 또는 VL 영역일 수 있다.
이중특이성 또는 이기능성 항체는, 2 개의 상이한 가변 부분이 동일한 분자 내에서 조합된 모노클로날 항체의 제2 세대를 형성한다 [Holliger and Bohlen (1999) Cancer & Metastasis Rev. 18: 411-419]. 이들의 용도는 새로운 효과기 기능을 보충하고, 종양 세포의 표면상의 몇 개의 분자를 표적화하는 그들의 능력으로 인하여 진단적 분야 및 치료학적 분야 둘 다에서 입증되었다. 이중특이성 항체를 사용하고자 하는 경우에, 이들은 다양한 방식 [Holliger, P. and Winter G. (1993) Curr. Op. Biotech. 4, 446-449]으로 제조될 수 있는, 예를 들어, 화학적으로 또는 하이브리드 하이브리도마로부터 제조될 수 있는 통상적인 이중특이성 항체일 수 있거나, 상기 언급된 이중특이성 항체 단편 중의 어떤 것이라도 될 수 있다. 이들 항체는 화학적 방법 [Glennie M J 등. (1987) J. Immunol. 139, 2367-2375; Repp R. 등. (1995) J. Hematother. 4: 415-21] 또는 체세포 방법 [Staerz U. D. and Bevan M. J. (1986) PNAS USA 83: 1453-7; Suresh M. R. 등. (1986) Method Enzymol. 121: 210-228]에 의해서 수득될 수 있지만, 마찬가지로 및 선택적으로, 헤테로다이머화하도록 강요되며, 따라서 원하는 항체의 정제 과정을 촉진시키는 유전자 조작기술에 의해서 수득될 수 있다 [Merchand 등. (1998) Nature Biotech. 16:677-681]. 이중특이성 항체의 예로는 상이한 특이성을 갖는 2 개의 항체의 결합 영역이 사용되고, 짧은 유연성 펩타이드를 거쳐서 직접 연결될 수 있는 BiTETM 기술의 항체가 포함된다. 이것은 짧은 단일 폴리펩타이드 쇄 상에서 2 개의 항체를 조합한다. 디아바디 및 scFv는 Fc 부분이 없이, 단지 가변 영역을 사용하고, 잠재적으로는 항-이디오타입 반응의 영향을 감소시킴으로써 구성될 수 있다.
이중특이성 항체는 전체 IgG로서, 이중특이성 Fab'2로서, Fab'PEG로서, 디아바디로서, 또는 추가로 이중특이성 scFv로서 구성될 수 있다. 또한, 2 개의 이중특이성 항체는 본 기술분야에서 공지된 일상적 방법을 사용하여 연결되어 4가 항체를 형성할 수 있다.
이중특이성 전체 항체와는 대조적으로 이중특이성 디아바디는 또한, 이. 콜라이 (E. coli) 내에서 쉽게 구성 및 발현될 수 있기 때문에, 특히 유용할 수 있다. 적절한 결합 특이성의 디아바디 (및 항체 단편과 같은 다수의 다른 폴리펩타이드)는 라이브러리로부터 파지 디스플레이 [WO94/13804]를 사용하여 쉽게 선택될 수 있다. 디아바디의 하나의 팔 (arm)이 예를 들어, IL-6에 대해 지시된 특이성을 가지고 일정하게 유지된다면, 라이브러리는 다른 팔이 변화되고, 적절한 특이성의 항체가 선택되는 라이브러리가 제조될 수 있다. 이중특이성 전체 항체는 리지웨이 (Ridgeway) 등 [Ridgeway, J. B. B. 등 (1996) Protein Eng., 9, 616-621]에 의해서 기술된 바와 같은 대체 조작방법에 의해서 제조될 수 있다.
IL-6에 대한 항체를 수득하기 위해서 다양한 방법이 본 기술분야에서 이용될 수 있다. 항체는 특히 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 표준 방법에 따라 수득될 수 있는 인간, 쥐, 키메릭 또는 인간화된 기원의 모노클로날 항체일 수 있다.
일반적으로, 특히 쥐 기원의 모노클로날 항체 또는 이들의 기능적 단편의 제조를 위해서는 특히 매뉴얼 "항체 (Antibodies)" [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor N.Y., pp. 726, 1988]에 기술된 기술, 또는 쾰러 (Kohler)와 밀스타인 (Milstein) [Kohler and Milstein (1975) Nature, 256:495-497]에 의해서 기술된 하이브리도마로부터의 제조 기술을 참고로 할 수 있다.
모노클로날 항체는 예를 들어, IL-6에 대해서 면역화된 동물의 B 세포, 또는 상기 모노클로날 항체에 의해서 인식되는 에피토프를 함유하는 그의 단편 중의 하나로부터 수득될 수 있다. 적합한 단편 및 이들을 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드는 본 발명에 기술되어 있으며, 동물을 면역시켜 IL-6에 대한 항체를 생성시키기 위해서 사용될 수 있다. 상기 IL-6, 또는 그의 단편 중의 하나는 특히, IL-6 또는 그의 단편을 코드화한 cDNA 서열 내에 함유된 핵산 서열로 출발하는 유전자 재조합에 의해서, 또는 IL-6 및/또는 그의 단편의 펩타이드 서열 내에 포함된 아미노산의 서열로부터 출발하는 펩타이드 합성에 의해서 통상적인 작업방법에 따라 생산될 수 있다.
모노클로날 항체는 예를 들어, IL-6 또는 상기 모노클로날 항체에 의해서 인식되는 에피토프를 함유하는 그의 단편 중의 하나가 미리 고정화되어 있는 친화성 칼럼 상에서 정제될 수 있다. 더욱 특히, 모노클로날 항체는 단백질 A 및/또는 G 상에서의 크로마토그래피에 의해서 정제될 수 있으며, 이어서 본질적으로 잔류하는 단백질 오염물뿐만 아니라 DNA 및 LPS를 제거하기 위한 목적으로 이온-교환 크로마토그래피가 수행될 수 있거나 없으며, 이어서 다이머 또는 다른 멀티머의 존재에 기인한 잠재적 응집체를 제거하기 위하여 세파로즈 겔 상에서의 배제 크로마토그래피 (exclusion chromatography)가 수행될 수 있거나 없다. 하나의 구체예에서, 이들 기술 전체가 동시에 또는 연속적으로 사용될 수 있다.
항원-결합 부위
이것은 표적 항원의 전부 또는 일부에 결합하거나 그에 대해서 상보적인 분자의 일부분을 나타낸다. 항체 분자에서, 이것은 항체 항원-결합 부위로 불리며, 표적 항원의 전부 또는 일부에 결합하거나 그에 대해서 상보적인 항체의 일부분을 포함한다. 항원이 큰 경우에, 항체는 단지 항체의 특정 부분에만 결합할 수 있으며, 이 부분을 에피토프라 칭한다. 항체 항원-결합 부위는 하나 또는 그 이상의 항체 가변 영역에 의해서 제공될 수 있다. 항체 항원-결합 부위는 항체 경쇄 가변 부분 (VL) 및 항체 중쇄 가변 부분 (VH)을 포함할 수 있다.
WO2006/072620는 면역글로불린 영역의 베타 스트랜드 사이에 걸쳐진 구조적 (비-CDR) 루프 내에서 항원 결합 부위를 조작하는 것을 기술한다. 항원 결합 부위는 CDRs의 천연적 위치로부터 떨어진 항체 분자의 부분에서, 예를 들어, VH 또는 VL 영역의 골격 부분에서, 또는 항체 불변 영역, 예를 들어, CH1 및/또는 CH3에서 조작될 수 있다. 구조적 부분에서 조작된 항원 결합 부위는 VH 및 VL 영역의 CDRs의 세트에 의해서 형성된 항원 결합 부위 이외에 추가적이거나 그에 대신할 수 있다. 다수의 항원 결합 부위가 항체 분자 내에 존재하는 경우에, 이들은 동일한 항원 (IL-6)에 결합함으로써 결합 성분의 결합가 (valency)를 증가시킬 수 있다. 대신으로, 다수의 항원 결합 부위는 상이한 항원 (IL-6 및 하나 또는 그 이상의 또 다른 항원)에 결합할 수 있으며, 이것을 사용하여 효과기 기능을 추가하거나, 반감기를 연장시키거나, 항체 분자의 생체내 송달을 개선시킬 수 있다.
분리된 ( Isolated )
이것은 본 발명의 결합 성분 또는 이러한 결합 성분을 코드화한 핵산이 일반적으로 본 발명에 따라서 존재할 수 있는 상태를 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따르는 결합 성분, VH 및/또는 VL 영역, 및 코드화 핵산 분자 및 벡터는 예를 들어, 그들의 천연 환경으로부터 분리되고/되거나 정제되어 실질적으로 순수하거나 균질한 형태로, 또는 핵산의 경우에는 필요한 기능을 갖는 폴리펩타이드를 코드화한 서열이 아닌 다른 기원의 핵산 또는 유전자를 갖지 않거나 실질적으로 갖지 않는 형태로 제공될 수 있다. 분리된 성분 및 분리된 핵산은 이들의 천연 환경, 또는 제조가 시험관내 또는 생체내에서 실행된 재조합 DNA 기술에 의한 것인 경우에, 이들이 제조된 환경 (예를 들어, 세포 배양)에서 이들과 함께 발견되는 다른 폴리펩타이드 또는 핵산과 같은, 이들이 천연적으로 결합되어 있는 물질을 함유하지 않거나, 실질적으로 함유하지 않을 수 있다. 성분 및 핵산은 희석제 또는 보조제와 함께 제제화될 수 있지만, 실제적인 목적으로 분리될 수 있다 - 예를 들어, 성분은 면역시험에서 사용하기 위한 미량역가 플레이트를 코팅하기 위해서 사용되는 경우에는, 통상적으로 젤라틴 또는 다른 담체와 혼합될 수 있거나, 진단 또는 치료에서 사용되는 경우에는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 혼합될 수 있다. 결합 성분은 천연적으로, 또는 이종 진핵세포 (예를 들어, CHO 또는 NS0 (ECACC 85110503) 세포)의 시스템에 의해서 글리코실화될 수 있거나, 이들은 (예를 들어, 원핵세포 내에서의 발현에 의해서 생산되는 경우에) 비글리코실화될 수 있다.
안티-IL-6 항체 분자를 함유하는 불균질 제제도 또한 본 발명의 일부분을 형성한다. 예를 들어, 이러한 제제는 전체-길이 중쇄 및 C-말단 리신을 결여한 중쇄를 갖고, 다양한 정도의 글리코실화를 갖고/갖거나 피로글루탐산 잔기를 형성하는 N-말단 글루탐산의 폐환과 같은 유도체화된 아미노산을 갖는 항체의 혼합물일 수 있다.
본 발명에서 사용된 것으로서, 문구 "실질적으로 설명된 바와 같은"은 본 발명에 기술된 결합 성분의 VH 또는 VL 영역의 적절한 CDRs의 특징(들)이 그의 서열이 본 발명에 설명된 명시된 부분과 동일하거나 매우 유사할 수 있음을 의미한다. 본 발명에 기술된 것으로서, 하나 또는 그 이상의 가변 영역의 명시된 부분(들)에 관한 문구 "매우 유사한"은 1 내지 약 5 개, 예를 들어, 1 내지 3 개, 또는 1 또는 2 개, 또는 3 또는 4 개를 포함한 1 내지 4 개의 아미노산 치환이 CDR 및/또는 VH 또는 VL 영역 내에서 이루어질 수 있는 것으로 생각된다.
도 1: 항체 18이 아닌 항체 18E의 Fc 부분은 YTE 에피토프를 포함한다. Fc 부분에서 YTE 에피토프의 존재는 ELISA 시험에서 안티-YTE 포획 (capture) 항체를 사용함으로써 검출되었다. 항체 18 및 항체 18E에 대한 ELISA 적정곡선을 나타낸다.
도 2: 항체 18, 항체 18E, IL-6 항체 A (AB A) 및 IL-6 항체 B (AB B)에 의한 IL-6 결합은 ELISA 시험을 사용하여 모니터링되었다. 이. 콜라이 유도된 재조합 IL-6이 포획시약을 사용되었다. 항체 18 및 항체 18E는 실질적으로 동일한 IL-6 결합 활성을 나타내었다. 항체 18 및 항체 18E에 대해서 검출된 EC50은 각각 6.1 pM 및 6.5 pM이었다.
도 3: 항체 18 및 항체 18E는 실질적으로 동일한 효능으로 IL-6 유도된 TF-1 세포 증식을 억제한다. IC50 값은 항체 18, 항체 18E, IL-6 항체 A (AB A) 및 IL-6 항체 B (AB B)에 대해서 결정되었다. 항체 농도의 함수로서 최대 억제율 (%) 곡선을 나타낸다. 항체 18 및 항체 18E에 대해서 검출된 IC50은 각각 4.5 pM 및 5.2 pM이었다.
도 4: 항체 18 및 항체 18E는 실질적으로 동일한 효능으로 인간 활액 섬유아세포로부터의 내인성 IL-6 유도된 VEGF 방출을 억제한다. IC50 값은 항체 18, 항체 18E, IL-6 항체 A (AB A) 및 IL-6 항체 B (AB B)에 대해서 결정되었다. 항체 농도의 함수로서 최대 억제율 (%) 곡선을 나타낸다. 항체 18 및 항체 18E에 대해서 검출된 IC50은 각각 1.3 pM 및 1.2 pM이었다.
도 5: 항체 18 및 항체 18E의 약력학적 프로필. 5 ㎎/㎏의 항체 18 또는 항체 18E의 단일 용량을 시노몰구스 원숭이 (cynomolgous monkeys)에게 피하 또는 정맥내로 투여하였다. 항체 투여 후에 검출된 혈장 항체 레벨은 시간의 함수로서 나타낸다. 항체 18의 반감기는 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 8.5일 및 9.1일이다. 항체 18E의 반감기는 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 28.4일 및 28.8일이다.
도 6: 항체 18 및 항체 18E의 약력학적 및 약동학적 프로필. 5 ㎎/㎏의 항체 18 또는 항체 18E 항체를 시노몰구스 원숭이에게 피하로 투여하였다. 항체 투여 후에 검출된 혈장 항체 레벨 및 혈장 총 IL-6 레벨은 시간의 함수로서 나타낸다. 기호 (symbols)는 실험적 PK 및 PD 데이터를 나타내고, 점선은 PK 및 PD 데이터에 대해서 동시에 적합한 PKPD 모델이다. 항체 18 및 항체 18E의 추정된 반감기는 각각 9.1일 및 28.8일이다. 항체 18 및 항체 18E의 추정되는 청소율은 각각 13.1 ㎖/일/㎏ 및 2.8 ㎖/일/㎏이다.
도 7: 다양한 용량의 항체 18E를 피하 투여한 후에 RA 환자 혈장에서 유리 IL-6 레벨의 시뮬레이션 (simulation). 시뮬레이션은 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 매 8 주일마다 100 ㎎의 항체 18E의 피하 투여에 의해서, 또는 매 4 주일마다 50 ㎎의 항체 18E의 피하 투여에 의해서 달성되었음을 예측한다. 매 12 주일마다 100 ㎎의 항체 18E의 피하 투여는 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제를 달성하지 못하는 것으로 예측된다.
도 8: 항체 18 또는 항체 18E의 피하 투여 후에 RA 환자 혈장에서 유리 IL-6 레벨의 시뮬레이션. 시뮬레이션은 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 200 ㎎의 항체 18E의 단일 부하 복용량을 투여하고, 이어서 매 9 주일마다 한번 100 ㎎의 항체 18E의 유지 복용량을 제공함으로써 달성되었음을 예측한다. 시뮬레이션은 추가로, 매 8 주일마다 500 ㎎의 항체 18의 투여가 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제를 달성하지 못하였음을 예측한다.
도 9: 다양한 용량의 항체 18 또는 항체 18E의 피하 투여 후에 RA 환자 혈장에서 유리 IL-6 레벨의 시뮬레이션. 시뮬레이션은 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 100 ㎎의 항체 18E의 단일 피하 부하 복용량을 투여하고, 이어서 50 ㎎의 항체 18E의 월 1 회 피하 유지 복용량을 투여함으로써 달성되었음을 예측한다. 시뮬레이션은 추가로, IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 100 ㎎의 항체 18의 격주 피하 용량을 투여함으로써 달성되었지만, 100 ㎎의 항체 18의 월 1 회 피하 용량을 투여함으로써는 달성되지 못하였음을 예측한다.
도 10: 다양한 용량의 항체 18 또는 항체 18E의 피하 투여 후에 RA 환자 혈장에서 유리 IL-6 레벨의 시뮬레이션. 시뮬레이션은 IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 200 ㎎의 항체 18E의 단일 피하 부하 복용량을 투여하고, 이어서 매 4 주일 또는 8 주일마다 100 ㎎의 항체 18E의 피하 유지 복용량을 투여함으로써 달성되었음을 예측한다. 시뮬레이션은 추가로, IL-6 매개된 시그날링의 지속적인 적어도 90% 억제가 매 4 주일 또는 8 주일마다 100 ㎎의 항체 18을 투여함으로써는 달성될 수 없음을 예측한다.
도 11: 마우스 FCA 꼬리 모델에서 46℃에서의 가열에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 효과를 나타낸다.
도 12: 마우스 FCA 꼬리 모델에서 기계적 압력에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 효과를 나타낸다.
도 13: 마우스 FCA 24 시간 모델에서 가열에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 효과를 나타낸다.
도 14: 마우스 FCA 48 시간 모델에서 가열에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 용량-관련된 효과를 나타낸다.
도 15: FCA 마우스 24 시간 모델에서 기계적 압력에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 용량-관련된 효과를 나타낸다.
도 16: 마우스 FCA 48 시간 모델에서 기계적 압력에 대한 과민반응에 대한 mAab406의 용량-관련된 효과를 나타낸다.
도 17: 마우스 FCA 꼬리 모델에서 48 시간째에 가열에 대한 과민반응에 대한 소분자 나프록센의 효과를 나타낸다.
도 18: 마우스 FCA 꼬리 모델에서 48 시간째에 기계적 압력에 대한 과민반응에 대한 소분자 나프록센의 효과를 나타낸다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 산출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법을 사용하여, 항-IL-6 모항체는 변형되어 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 산출할 수 있다. 인간 IL-6 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 항-IL-6 항체는 본 발명의 방법을 실시하기 위해서 사용될 수 있다. 하나의 구체예에서, PCT 공보 No. WO 2008/065378에 개시된 항-IL-6 항체는 본 발명의 방법을 실시하게 위하여 변형되거나 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체 18 (이하, 항체 18 또는 Ab 18)로서 PCT 공보 No. WO 2008/065378에 나타낸 항-IL-6 항체는 본 발명의 방법을 실시하게 위하여 변형되거나 사용될 수 있다.
본 발명은 항-IL-6 항체에게 연장된 생체내 반감기를 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체보다 더 긴 연장된 생체내 반감기를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 항체 18보다 더 긴 연장된 생체내 반감기를 갖는다.
본 발명은 항-IL-6 항체에게 연장된 생체내 반감기를 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 포유동물에서 측정된 반감기이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 비-인간 영장류 (예를 들어, 비제한적으로 필리핀 원숭이(cynomolgus monkey) 또는 짧은꼬리원숭이(macaque))에서 측정된 반감기이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 인간 대상체에서 측정된 반감기이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배 또는 적어도 20배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 20배 더 길다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 2배 내지 3배, 2배 내지 5배, 2배 내지 10배, 3배 내지 5배, 또는 3배 내지 10배 더 길다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배 또는 적어도 약 20배 더 길다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 약 2배, 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 10배 또는 약 20배 더 길다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 반감기보다 약 2배 내지 약 3배, 약 2배 내지 약 5배, 약 2배 내지 약 10배, 약 3배 내지 약 5배, 또는 약 3배 내지 약 10배 더 길다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 적어도 10일, 적어도 15일, 적어도 20일, 적어도 25일, 적어도 26일, 적어도 27일, 적어도 28일, 적어도 29일, 적어도 30일, 적어도 35일, 적어도 40일, 적어도 45일 또는 적어도 50일이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 10일, 15일, 20일, 25일, 28일, 29일, 30일, 35일, 40일, 45일 또는 50일이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 10일 내지 20일, 10일 내지 30일, 10일 내지 40일, 10일 내지 50일, 20일 내지 30일, 20일 내지 40일, 20일 내지 50일, 25일 내지 30일, 25일 내지 40일, 25일 내지 50일, 30일 내지 40일, 30일 내지 50일 또는 40일 내지 50일이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 적어도 약 20일, 적어도 25 약일, 적어도 약 26일, 적어도 약 27일, 적어도 약 28일, 적어도 29 약일, 적어도 약 30일, 적어도 약 35일, 적어도 약 40일, 적어도 약 45일 또는 적어도 약 50일이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 약 10일, 약 15일, 약 20일, 약 25일, 약 28일, 약 29일, 약 30일, 약 35일, 약 40일, 약 45일 또는 약 50일이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 반감기는 약 10일 내지 약 20일, 약 10일 내지 약 30일, 약 10일 내지 약 40일, 10일 내지 약 50일, 약 20일 내지 약 30일, 약 20일 내지 약 40일, 약 20일 내지 약 50일, 약 25일 내지 약 30일, 약 25일 내지 약 40일, 약 25일 내지 약 50일, 약 30일 내지 약 40일, 약 30일 내지 약 50일 또는 약 40일 내지 약 50일이다.
본 발명은 또한, 항-IL-6 항체에게 감소된 제거율을 제공한다. 본 명세서에 사용된 용어 제거율은, 의약 물질, 즉 항-IL-6 항체가 단위 시간당 완전히 제거되는 혈청의 용량을 반영하는 것을 의미한다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 모 항-IL-6 항체의 제거율과 비교하여 감소된 제거율을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 항체 18와 비교하여 감소된 제거율을 갖는다.
본 발명은 항-IL-6 항체에게 감소된 제거율을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 포유동물에서 측정된 제거율이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 비-인간 영장류 (예를 들어, 비제한적으로 필리핀 원숭이 또는 짧은꼬리원숭이)에서 측정된 제거율이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 인간 대상체에서 측정된 제거율이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배 또는 적어도 20배 더 낮다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 2배, 3배, 4배, 5배, 10배 또는 20배 더 낮다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 2배 내지 3배, 2배 내지 5배, 2배 내지 10배, 3배 내지 5배, 또는 3배 내지 10배 더 낮다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 10배 또는 적어도 약 20배 더 낮다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 약 2배, 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 10배 또는 약 20배 더 낮다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 동일한 가변 도메인 및 야생형 불변 도메인을 갖는 항체의 제거율보다 약 2배 내지 약 3배, 약 2배 내지 약 5배, 약 2배 내지 약 10배, 약 3배 내지 약 5배, 또는 약 3배 내지 약 10배 더 낮다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 많아야 1 mL/kg/1일, 많아야 2 mL/kg/1일, 많아야 3 mL/kg/1일, 많아야 4 mL/kg/1일, 많아야 5 mL/kg/1일, 많아야 7 mL/kg/1일, 많아야 10 mL/kg/1일, 많아야 15 mL/kg/1일 또는 많아야 20 mL/kg/1일이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 1 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일, 4 mL/kg/1일, 5 mL/kg/1일, 7 mL/kg/1일, 10 mL/kg/1일, 15 mL/kg/1일 또는 20 mL/kg/1일이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 1 mL/kg/1일 내지 2 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 3 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일, 1 mL/kg/1일 내지 15 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 2 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일 내지 5 mL/kg/1일, 3 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일 또는 5 mL/kg/1일 내지 10 mL/kg/1일이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 많아야 약 1 mL/kg/1일, 많아야 약 2 mL/kg/1일, 많아야 약 3 mL/kg/1일, 많아야 약 4 mL/kg/1일, 많아야 약 5 mL/kg/1일, 많아야 약 7 mL/kg/1일, 많아야 약 10 mL/kg/1일, 많아야 약 15 mL/kg/1일 또는 많아야 약 20 mL/kg/1일이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 약 1 mL/kg/1일, 약 2 mL/kg/1일, 약 3 mL/kg/1일, 약 4 mL/kg/1일, 약 5 mL/kg/1일, 약 7 mL/kg/1일, 약 10 mL/kg/1일, 약 15 mL/kg/1일 또는 약 20 mL/kg/1일이다. 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 제거율은 약 1 mL/kg/1일 내지 약 2 mL/kg/1일, 약 1 mL/kg/1일 내지 약 3 mL/kg/1일, 약 1 mL/kg/1일 내지 약 5 mL/kg/1일, 약 1 mL/kg/1일 내지 약 10 mL/kg/1일, 약 1 mL/kg/1일 내지 약 15 mL/kg/1일, 약 2 mL/kg/1일 내지 약 5 mL/kg/1일, 약 2 mL/kg/1일 내지 약 10 mL/kg/1일, 약 3 mL/kg/1일 내지 약 5 mL/kg/1일, 약 3 mL/kg/1일 내지 약 10 mL/kg/1일 또는 약 5 mL/kg/1일 내지 약 10 mL/kg/1일이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 Fc 리간드 단백질에 대해 변경된 친화도를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 FcRn에 대해 변경된 친화도를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, FcRn는 마우스, 인간 또는 영장류 (예를 들어, 필리핀원숭이(cynomolgus)) FcRn 단백질일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 Fc 리간드 단백질에 대해 증가된 친화도를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 FcRn에 대해 증가된 친화도를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, FcRn는 마우스, 인간 또는 영장류 (예를 들어, 필리핀원숭이(cynomolgus)) FcRn 단백질일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 변이체 Fc 영역을 포함하고, Fc 리간드 단백질에 대한 그 영역의 결합 친화도는 pH 의존적이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 FcRn에 대한 pH 의존적 결합 친화도를 갖는 변이체 Fc 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, FcRn는 마우스, 인간 또는 영장류 (예를 들어, 필리핀원숭이) FcRn 단백질일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함한다. 다양한 구체예에서, 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인일 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 야생형 인간 IgG1 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG1 불변 도메인을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, M252F, M252W, M252T, S254T, T256S, T256R, T256Q, T256E, T256D, T256T, L309P, Q311S, H433R, H433K, H433S, H433I, H433P, H433Q, N434H, N434F, N434Y 및 N436H로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, S254T, T256E, H433K, N434F 및 N436H로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, S254T, 및 T256E로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다. 다양한 구체예에서, 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인일 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하는 인간 IgG1 불변 도메인을 포함하고, 여기서, 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 항체 18의 CDR 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 모두 6개를 포함한다 (참조, PCT 공보 No. WO 2008/065378).
카밧에 따라 정의된 항체 18의 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 대한 아미노산 서열은 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, 및 SEQ ID NO:3으로 각각 확인된다. 카밧에 따라 정의된 항체 18의 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 대한 아미노산 서열은 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, 및 SEQ ID NO:6으로 각각 확인된다.
카밧 넘버링은 하기의 세미나 성과를 기초로 한다: Kabat 등. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Publication No. 91-3242, the National Institutes of Health, National Technical Information Service (이하, "Kabat")에 의해 3개의 볼륨 세트로 공개. 카밧은 수많은 종의 항체 아이소타입으로부터 면역글로불린 사슬의 다중 서열 정렬을 제공한다. 정렬된 서열은 단일 넘버링 시스템, 카밧 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다. 카밧 서열은 1991년 공개 이래로 업데이트되었고, 전자 서열 데이타베이스로서 이용가능하다 (최근의 다운가능 버젼 1997). 임의의 면역글로불린 서열은 카밧 참조 서열로 정렬을 수행하여 카밧에 따라 넘버링될 수 있다. 따라서, 카밧 넘버링 시스템은 면역글로불린 사슬을 넘버링하기 위한 일정한 시스템을 제공한. 달리 지적하지 않으면, 본 명세서에 기재된 모든 면역글로불린 아미노산 서열은 카밧 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다. 유사하게, 본 명세서에 기재도니 모든 단일 아미노산 위치는 카밧 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다.
어떤 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, 및 SEQ ID NO:3로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역, VH를 포함할 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, 및 SEQ ID NO:6로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나의 CDR을 포함하는경쇄 가변 영역, VL을 포함할 수 있다. 어떤 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 SEQ ID NO:8의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하고, SEQ ID NO:7의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 추가로 포함한다.
본 발명은 인간 IL-6에 결합하는 항체를 포함하고, 이 항체는 인간 IL-6에 결합할 수 있는 본 명세서의 VH 도메인, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL 도메인, VL CDR1, VL CDR2, 또는 VL CDR3의 유도체를 포함한다. 당업자에게 공지된 표준 기술은, 예를 들어, 아미노산 치환을 산출하기 위해 일상적으로 사용되는 부위 지향된 돌연변이생성 및 PCR 매개된 돌연변이생성을 포함하는, 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 중 돌연변이 (예를 들어, 부가, 결실, 및/또는 치환)을 도입하기 위해 사용될 수 있다. 하나의 구체예에서, VH 및/또는 VL CDR 유도체는 항체 18 항-IL-6 항체의 최초 VH 및/또는 VL CDR에 대해서 25개 미만 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 2개 미만의 아미노산, 또는 1개 미만의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, VH 및/또는 VL CDR 유도체는 하나 이상의 예측된 비필수 아미노산 잔기 (즉, 항체가 인간 IL-6에 특이적으로 결합하는 것이 중요하지 않는 아미노산 잔기)에서 만들어진 보존적 아미노산 치환 (예를 들어, 상기의 것)을 가질 수 있다. 돌연변이는 또한, 예컨대 포화 돌연변이생성에 의해 VH 및/또는 VL CDR 코딩 서열의 전부 또는 일부에 무작위로 도입될 수 있고, 수득한 돌연변이체는 생물학적 활성에 대해 스크리닝되어 활성을 유지하는 돌연변이체를 확인할 수 있다. 돌연변이생성 다음에, 인코딩된 항체는 발현될수 있고, 항체의 활성은 측정될 수 있다.
본 발명은 또한, 인간 IL-6에 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체 또는 항체 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하고, 여기서 상기 CDR은 항체 18의 하나 이상의 CDR의 아미노산 서열과 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 2개의 아미노산 서열의 동일성 %는, 비제한적으로, BLAST 단백질 서치를 포함하는 당업자에게 공지된 방법으로 측정될 수 있다.
본 발명은 또한, 인간 IL-6에 결합하는 항체을 포함하고, 상기 항체 또는 항체 단편은 VH 및/또는 VL 도메인을 포함하고, 여기서, 상기 VH 및/또는 VL 도메인은 항체 18의 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열과 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 2개의 아미노산 서열의 동일성 %는, 비제한적으로, BLAST 단백질 서치를 포함하는 당업자에게 공지된 방법으로 측정될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 항체 18에 필적한 친화도로 인간 IL-6로 결합할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체는 항체 18과 동일한 IL-6의 에피토프에 특이적으로 결합한다..
하나의 구체예에서, 항-IL-6 항체는 IL-6 결합에 대해 항체 18과 특이적으로 경쟁한다. 경쟁 검정은, 비제한적으로 ELISA 검정 또는 방사선면역검정을 포함하는 본 기술분야에 공지된 임의의 결합 검정을 사용하여 수행될 수 있다.
본 발명은 또한, 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 또한, 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대한, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 엄격한 또는 덜 엄격한 혼성화 조건 하에서 혼성화되는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL 6 항체를 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 VH 도메인을 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO:11의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 VL 도메인을 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 12의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 중쇄를 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 13의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체의 경쇄를 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 14의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예는 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 벡터는 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서, 상기 뉴클레오티드 서열은 최적화된 뉴클레오티드 서열이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 벡터는 SEQ ID NO:11-14의 뉴클레오티드 서열의 임의의 하나를 포함한다. 추가의 특정 구체예에서, 본 발명의 벡터는 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서, 상기 뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO:11-14로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명은 또한, 벡터를 포함하는 단리된 세포에 관한 것이고, 여기서, 상기 벡터는 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 단리된 세포는 SEQ ID NO:11-14로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 발명의 항-IL-6 항체는 상기 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 인간 아이소타입의 항체를 포함한다.
본 발명은 또한, SEQ ID NO:1-10의 아미노산 서열의 임의의 것을 포함하는 항-IL-6 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체는 인간 IL-6 항원에 대한 결합 고친화도를 가질 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체는 적어도 2×105 M-1s-1, 적어도 5×105 M-1s-1, 적어도 106 M-1s-1, 적어도 5×106 M-1s-1, 적어도 107 M-1s-1, 적어도 5×107 M-1s-1, 또는 적어도 108 M-1s-1의 해리속도상수 또는 kon 속도 (항체 (Ab) + 항원 (Ag)kon → Ab-Ag)을 가질 수 있다.
또 다른 구체예에서, 항-IL-6 항체는 5×10-1 s-1 미만, 10-1 s-1 미만, 5×10-2 s-1 미만, 10-2 s-1 미만, 5×10-3 s-1 미만, 10-3 s-1 미만, 5×10-4 s-1 미만, 또는 10-4 s-1 미만의 koff 속도 ((Ab-Ag)k off → 항체 (Ab) + 항원 (Ag))를 가질 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 5×10-5 s-1 미만, 10-5 s-1 미만, 5×10-6 s-1 미만, 10-6 s-1 미만, 5×10-7 s 1 미만, 10-7 s-1 미만, 5×10-8 s-1 미만, 10-8 s-1 미만, 5×10-9 s-1 미만, 10-9 s-1, 또는 10-10 s-1 미만의 koff를 갖는다.
또 다른 구체예에서, 항-IL-6 항체는 적어도 102 M-1, 적어도 5×102 M-1, 적어도 l03 M-1, 적어도 5×103 M-1, 적어도 104 M-1, 적어도 5×104 M-1, 적어도 105 M-1, 적어도 5×105 M-1, 적어도 106 M-1, 적어도 5×106 M-1, 적어도 107 M-1, 적어도 5×107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 5×108 M-1, 적어도 l09 M-1, 적어도 5×l09 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 5×1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 5×1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 5×1012 M-1, 적어도 1013 M-1, 적어도 5×l013 M-1, 적어도 1014 M-1, 적어도 5×1014 M-1, 적어도 l015 M-1, 또는 적어도 5×l015 M-1의 친화도 상수 또는 Ka (kon/koff)를 가질 수 있다. 또 다른 구체예에서, 항-IL-6 항체는 5×10-2 M 미만, 10-2 M 미만, 5×10-3 M 미만, l0-3 M 미만, 5×10-4 M 미만, 10-4 M 미만, 5×10-5 M 미만, 10-5 M 미만, 5×10-6 M 미만, 10-6 M 미만, 5×10-7 M 미만, 10-7 M 미만, 5×10-8 M 미만, 10-8 M 미만, 5×10-9 M 미만, l0-9 M 미만, 5×10-10 M 미만, 10-10 M 미만, 5×10-11 M 미만, 10-11 M 미만, 5×10-12 M 미만, 10-12 M 미만, 5×10-13 M 미만, l0-12 M 미만, 5×10-14 M 미만, 10-14 M 미만, 5×10-155 M, 또는 l0-15 M 미만의 해리상수 또는 Kd (koff/kon)를 가질 수 있다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 항체는 IL-6에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 3000 pM 미만, 2500 pM 미만, 2000 pM 미만, 1500 pM 미만, 1000 pM 미만, 750 pM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 200 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 75 pM의 해리상수 (Kd)를 가질 수 있고, 이 상수는 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법을 사용하여 평가된다 (예를 들어, BIAcore 검정, ELISA) (Biacore International AB, Uppsala, Sweden). 특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 항체는 인간 IL-6 항원에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 25 내지 3400 pM, 25 내지 3000 pM, 25 내지 2500 pM, 25 내지 2000 pM, 25 내지 1500 pM, 25 내지 1000 pM, 25 내지 750 pM, 25 내지 500 pM, 25 내지 250 pM, 25 내지 100 pM, 25 내지 75 pM, 25 내지 50 pM의 해리상수 (Kd)를 가질 수 있고, 이 상수는 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법을 사용하여 평가된다 (예를 들어, BIAcore 검정, ELISA). 또 다른 구체예에서, 항-IL-6 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용된 항체는 IL-6에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 500 pM, 100 pM, 75 pM 또는 50 pM의 해리상수 (Kd)를 가질 수 있고, 이 상수는 본 명세서에 기재되거나 당업자에 공지된 방법을 사용하여 평가된다 (예를 들어, BIAcore 검정, ELISA).
본 발명은 또한, 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 또한, 연장된 생체내 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대해, 예를 들어, 본 명세서에 정의된 바와 같이, 엄격한 또는 덜 엄격한 혼성화 조건 하에서 혼성화한 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
엄격한 혼성화 조건은 비제한적으로, 약 45℃에서 6X 염화나트륨/나트륨 시트레이트 (SSC)에서 필터 결합된 DNA에 대한 혼성화, 그 다음, 약 50-65℃에서 0.2X SSC/0.1% SDS에서 하나 이상의 세정, 아주 엄격한 조건, 예컨대 약 45℃에서 6X SSC에서 필터 결합된 DNA에 대한 혼성화, 그 다음, 약 60℃에서 0.1X SSC/0.2% SDS에서 하나 이상의 세정, 또는 당업자에게 공지된 임의의 다른 엄격한 혼성화 조건을 포함한다 (참조, 예를 들어, Ausubel, F.M. 등., eds. 1989 Current Protocols in Molecular Biology, vol. 1, Green Publishing Associates, Inc. 및 John Wiley 및 Sons, Inc., NY at pages 6.3.1 to 6.3.6 및 2.10.3).
폴리뉴클레오티드는 얻을 수 있고, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열은본 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 측정된다. 예를 들어, 항체의 뉴클레오티드 서열은 공지되어 있으면, 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드로부터 조합될 수 있고(예를 들어, Kutmeier 등., BioTechniques 17:242 (1994)에 기재되어 있음), 이는, 간단히, 항체를 인코딩하는 서열의 부분을 함유하는 올리고뉴클레오티드를 중첩하고, 어널링(annealing)하고, 이들 올리고뉴클레오티드를 결찰시키는 합성, 그 다음, PCR에 의한 결찰된 올리고뉴클레오티드의 증폭을 포함한다.
항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한, 적합한 공급원으로부터의 핵산으로부터 산출될 수 있다. 특정 항체를 인코딩하는 핵산을 함유하는 클론이 이용가능하지 않지만, 항체 분자의 서열이 공지되어 있으면, 면역글로불린을 인코딩하는 핵산은 화학적으로 합성될 수 있거나, 서열의 3' 및 5' 말단으로 혼성화가능한 합성 프라이머를 사용하는 PCR 증폭에 의해, 또는 예를 들어, 항체를 인코딩하는 cDNA 라이브러리로부터의 cDNA 클론을 동정하기 위한 특정 유전자 서열에 대해 특이적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 클로닝에 의해 적합한 공급원 (예를 들어, 항체 cDNA 라이브러리, 또는 항체를 발현시키기 위해 선택된 하이브리도마 세포와 같은 항체를 발현시키는 임의의 조직 또는 세포로부터 단리된 핵산, 바람직하게는 polyA+RNA로부터 산출된 cDNA 라이브러리)로부터 얻는다. 그 다음, PCR에 의해 산출된 증폭된 핵산은 본 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제가능 클로닝 벡터로 클로닝될 수 있다.
IL-6은 수많은 질환 및 상태와 관련되어 있었다. 이 질환 및 상태는 비제한적으로 염증, 통증 및 암을 포함한다. 본 명세서에 기재된 본 항-IL-6 항체는, 바람직하게는, 예를 들어, IL-6를 중화시키고, 몸체에서 IL-6 수준을 감소시키고 IL-6 신호전달에 대항할 수 있다. 그러한 것으로써, 본 항-IL-6 항체는 바람직하게는 이들 상태 및 질환을 치료하기 위해 약물로서 작용할 수 있다.
본 발명은 또한, 연장된 기단 동안에 대상체의 IL-6 활성을 효과적으로 중화시키는 항체를 제공한다. 특정 작용 메카니즘에 구속되지 않고, 본 발명의 항-IL-6 항체는 IL-6에 결합하여 중화시키고, 이로써 IL-6이 IL-6 매개된 신호 전달(signal transduction)에 필요한 단백질 상호작용에 참여하지 못하게 한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 유리 (즉, 항-IL-6 항체에 결합되지 않은) IL-6의 혈청 농도를 감소시킬 수 있다. 생체액(예를 들어, 혈청) 내의 유리 IL-6 수준은 정량적 생물검종, 예를 들어, 비제한적으로 하기에 기재된 생물검정을 사용하여 측정될 수 있다: Papadopoulos et. al, Journal of Clinical Laboratory Analysis 9:234-37 (1995). 요약하면, 생물검정은 특정 하이브리도마 세포 (예를 들어, B9 하이브리도마 세포)의 IL-6 유도된 증식을 측정한다. 유리 IL-6의 농도는 샌드위치(sandwich) 면역검정으로 또한 측정될 수 있다. 요약하면, 혈청 내의 유리 IL-6은 항-IL-6 포획 항체에 의해 포획된다. 이러한 포획 항체는 단지 항체 18E 및 가용성 IL-6 수용체의 부재에서 IL-6에 결합한다. 포획된 IL-6은 포획 항체와 경쟁하지 않는 검출 항체에 의해 검출되고, 루테늄 또는 HRP으로 표지된다. 측정된 전기화학발광 또는 비색 신호(colorimetric signal)는 혈청 내의 유리 IL-6의 농도에 비례한다. 혈청 내의 유리 IL-6 농도는 표준 곡선을 기초로 계산된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 유리 (즉, 항-IL-6 항체에 결합되지 않은) IL-6의 혈청 농도를 감소시킬 수 있다. 본 발명의 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 유리 IL-6 수준의 감소은 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속할 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 50 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 4주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 특정 구체예에서, 100 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 8주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 특정 구체예에서, 200 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 12주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 대상체에서 혈청 IL-6를 중화시킬 수 있다. 본 발명의 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 혈청 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 혈청 IL-6 중화는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속할 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100%의 혈청 IL-6의 중화를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 50 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 4주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성한다. 특정 구체예에서, 100 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 8주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성한다. 특정 구체예에서, 200 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 12주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 대상체에서 IL-6 매개된 신호전달을 억제할 수 있다. 본 발명의 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 억제를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 억제는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 억제의 지속된, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100%를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 50 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 4주 투여는 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성한다. 특정 구체예에서, 100 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 8주 투여는 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성한다. 특정 구체예에서, 200 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 12주 투여는 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 대상체의 활액 세포 성장을 감소시킬 수 있다. 본 발명의 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 대상체의 활액 세포 성장의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 대상체의 활액 세포 성장의 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 대상체의 활액 세포 성장의 감소, 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100%를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 50 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 4주 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서, 지속된 적어도 90% 대상체의 활액 세포 성장의 감소. 특정 구체예에서, 100 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 8주 투여는 대상체의 활액 세포 성장의, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 특정 구체예에서, 200 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 12주 투여는 대상체의 활액 세포 성장의, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 항체는 대상체의 활액 염증을 감소시킬 수 있다. 본 발명의 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 대상체의 활액 염증의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 대상체의 활액 염증의 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 대상체의 활액 염증의, 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 50 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 4주 투여는 대상체의 활액 염증의, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 특정 구체예에서, 100 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 8주 투여는 대상체의 활액 염증의, 지속된 적어도 90% 감소를 달성한다. 특정 구체예에서, 200 mg 복용량의 본 발명의 항-IL-6 항체의 매 12주 투여는 지속된 적어도 90% 대상체의 활액 염증의 감소를 달성한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
본 발명은 또한, 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키고, 대상체의 혈청 IL-6을 중화시키고, 대상체의 IL-6를 중화시키고, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달을 억제하고, 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키고, 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방을 제공한다.
하나의 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도 (즉, 항-IL-6 항체에 의해 결합되지 않음)를 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 유리 IL-6 수준의 감소은 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 유리 IL-6의 혈청 농도에서의 적어도 90% 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속한다.
하나의 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100%까지 감소시킬 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 지속 감소를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 유리 IL-6의 혈청 농도에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 지속 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 90%까지 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도를 감소시키는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 적어도 90% 감소된 유리 IL-6의 혈청 농도를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 유지된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 유리 IL-6의 혈청 농도에서 유지된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6을 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 혈청 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 혈청 IL-6의 중화는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다, 여기서, 상기 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속된다.
하나의 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6을 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 혈청 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6 중화를 유지하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 혈청 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속 중화를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 혈청 IL-6의 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 혈청 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6을 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. IL-6의 중화 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 IL-6의 적어도 90% 중화는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속된다.
하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6을 중화시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6 중화를 유지하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 중화를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6의 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 중화를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 약 90%를 중화시키는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 적어도 90% 중화를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6의 지속된 적어도 90% 중화를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달을 억제하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 억제를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. IL-6 매개된 신호전달의 억제는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속된다.
하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달을 억제하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 억제를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 억제를 유지하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 억제를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 지속된 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 억제를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 억제를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 약 90%를 억제하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90% 억제를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 IL-6 매개된 신호전달의 지속된 적어도 90% 억제를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 활액 세포 성장에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다 . 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 활액 세포 성장의 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 활액 세포 성장의 적어도 90% 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동일 지속한다.
하나의 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 세포 성장에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장의 감소를 유지하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 세포 성장에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장의 지속 감소를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 세포 성장에서, 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 세포 성장을 감소시키는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 세포 성장에서 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 유효 복용량의 투여는 활액 염증에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 활액 염증의 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg 항-IL-6 항체의 유효 복용량을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 활액 염증의 적어도 90% 감소는 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 15일, 또는 적어도 약 20일 동안 지속할 수 있다.
하나의 구체예에서, 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 염증에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 활액 염증에서 감소를 유지하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 염증에서 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 유지할 수 있다. 하나의 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속 감소를 달성하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량의 투여는 활액 염증에서, 지속된 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 감소를 달성할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회 또는 매 12주 1회 투여될 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 적어도 약 90%까지 대상체의 활액 염증을 감소시키는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 적어도 90% 감소를 유지하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구체예에서, 대상체의 활액 염증의 지속된 적어도 90% 감소를 달성하는 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 대상체는 인간 또는 비-인간 영장류일 수 있다.
본 발명의 추가 측면은 본 발명의 결합 멤버를 함유하는 조성물, 및 요법에 의한 인간 또는 동물 몸체의 치료 방법을 포함하는, IL-6을 결합, 억제 및/또는 중화시키는 방법에서의 그 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 결합 멤버는 치료 또는 진단 방법, 예컨대 인간 또는 동물 몸체 (예를 들어, 인간 환자)의 질환 또는 장애의 치료 방법 (예방 치료를 포함할 수 있음)에 사용될 수 있고, 상기 방법은 상기 환자에게 유효량의 본 발명의 결합 멤버를 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 치료가능한 상태는, 본 명세서에서 상세힌 논의한 바와 같이 IL-6가 역할을 하는 어떤 것이다.
하나의 구체예에서, 필요한 인간을 치료하는 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 치료적 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터(Reiter) 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 치료적 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 치료적 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간의 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 치료적 유효 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료적 유효 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 치료적 유효 복용량은 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 치료적 유효 복용량은 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg의 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함한다.
하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 연장된 반감기를 갖는 항-IL-6 항체의 1회 초과 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 하나의 구체예에서, 단일 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 단일 복용량은 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 단일 복용량은 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 각각의 1회 초과 복용량은 동일량의 항-IL-6 항체를 포함한다. 하나의 구체예에서, 초기 부하 복용량은, 그 다음에, 유지 복용량이 뒤따른다. 하나의 구체예에서, 초기 부하 복용량은 유지 복용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 초과의 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 부하 복용량은 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 본 명세서에 기재된 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 부하 복용량은 약 0.1-5 mg/kg, 약 0.1-2 mg/kg, 약 0.1-1 mg/kg, 약 0.3-2 mg/kg, 약 0.3-1 mg/kg, 약 0.5-2 mg/kg, 또는 약 0.5-1 mg/kg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 부하 복용량은 약 20-500 mg, 약 20-200 mg, 약 20-100 mg, 약 50-500 mg, 약 50-200 mg, 또는 약 50-100 mg 항-IL-6 항체를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 시간 간격 분리 투여량은 일정하다. 항-IL-6 항체 복용량은 1주 1회, 매 2주 1회, 매 3주 1회, 매 4주 1회, 매 8주 1회, 매 12주 1회, 매 16주 1회 또는 매 6개월 1회. 항-IL-6 항체는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용, 예를 들어 비제한적으로, 피하 또는 정맥내 주사를 통해 투여될 수 있다.
하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 치료가 필요한 인간의 치료 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염, 혈청인자음성 척추관절증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터 질환 포함), 건선 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 것을 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 100 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 50 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 4주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 200 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 100 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 8주 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 구체예에서, 인간의 류마티스성 관절염, 염증성 장질환 또는 SLE의 치료 방법은 (a) 400 mg 부하 복용량의 항-IL-6 항체를 투여하는 단계 및 (b) 200 mg 복용량의 항-IL-6 항체를 매 12주 투여하는 단계를 포함한다.
안티-IL-6 항체
본 발명에 따르는 결합 성분은 높은 효력으로 IL-6을 중화시키는 것으로 나타났다. 중화는 IL-6의 생물학적 활성의 억제를 의미한다. 본 발명의 결합 성분은 IL-6의 하나 또는 그 이상의 활성을 중화시킬 수 있다. 억제된 생물학적 활성은 전형적으로 하나 또는 그 이상의 그의 결합 파트너에 대한 IL-6 결합이다. 예를 들어, 억제된 생물학적 활성은 경막 및/또는 가용성 IL-6Rα에 대한 IL-6의 결합일 수 있다. 이것은 여기에서 간략하게 기술되고 이하에서 더욱 상세하게 기술되는 다음의 시험방법에서 입증될 수 있다: TF-1 시험은, TF-1 세포가 가용성 IL-6Ra를 생산하는 것으로 보이지 않기 때문에, 본 발명에 따르는 결합 성분이 막 IL-6Ra에 대한 IL-6 결합을 억제하는 것을 나타낸다. 따라서, 그것으로서 본 발명의 결합 성분은 막 수용체에 대한 IL-6 결합을 억제한다. 활액 섬유아세포 시험에서, sIL-6Ra는 이것이 작용하도록 하기 위해서 이 시험에 첨가하는 것이 필요하기 때문에, 본 발명에 따르는 결합 성분은 가용성 IL-6Ra에 대한 IL-6 결합을 억제한다. 첨가된 IL-1베타는 내인성 IL-6의 생산을 유도하며, 이것은 본 발명의 결합 성분에 의해서 억제되는 경우에 VEGF 생산을 방지한다.
본 발명에 따라, 인간 또는 비-인간 영장류, 예를 들어, 시노몰구스 IL-6의 IL-6Rα에 대한 결합이 억제될 수 있으며, 예를 들어, 결합 성분은 성숙 인간 IL-6의 IL-6Rα에 대한 결합을 억제할 수 있다.
생물학적 활성의 억제는 부분적이거나 전체적일 수 있다. 결합 성분은 IL-6 생물학적 활성을 결합 성분의 부재 하에서의 활성의 100%, 또는 적어도 95%, 적어도 90%, 적어도 85%, 적어도 80%, 적어도 75%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50%까지 억제할 수 있다.
결합 성분의 중화 효력이 결정될 수 있다. 효력은 통상적으로, 다른 식으로 언급되지 않는 한, nM의 IC50 값으로 표현된다. 기능적 시험에서, IC50은 생물학적 활성을 그의 최대치의 50%까지 감소시키는 결합 성분의 농도이다. 리간드-결합 시험에서, IC50은 리간드-수용체 컴플렉스의 형성을 최대 특이적 결합 레벨의 50%까지 감소시키는 농도이다. IC50은 최대 생물학적 반응의 %를 결합 성분 농도의 로그값의 함수로서 도시하고, 데이터에 시그모이드 함수를 적용시키는 프리즘 (Prism; GraphPad) 또는 오리진 (Origin; Origin Labs)과 같은 소프트웨어 프로그램을 사용하여 IC50 값을 생성시킴으로써 계산될 수 있다. 효력은 숙련된 전문가에게 공지된 하나 또는 그 이상의 시험방법을 사용하고/거나 본 발명에 기술되거나 언급된 바와 같이 결정되거나 측정될 수 있다.
본 발명에 기술된 시험방법, 예를 들어, TF-1 증식시험 또는 이하에 기술된 다른 세포-기본 시험에서 결합 성분에 의한 IL-6 활성의 중화는 결합 성분이 IL-6을 결합 및 중화시키는 것을 나타낸다. IL-6에 대한 결합 성분의 결합을 결정하기 위해서 사용될 수 있는 다른 방법에는 ELISA, 웨스턴 블럿팅 (Western blotting), 면역침강, 친화성 크로마토그래피 및 생화학적 시험방법이 포함된다.
본 발명에 기술된 결합 성분은 본 발명의 실시예 1.7 및 2.7에 보고된 것으로서, 내인성 인간 IL-6에 대한 반응으로서의 인간 활액 섬유아세포로부터의 VEGF 방출의 억제에 대한 시험에서 나타난 바와 같이, 내인성 인간 IL-6을 결합시키고, 그의 생물학적 효과를 중화시키는 것으로 입증되었다. 이 시험방법에서, 류마티스성 관절염 환자로부터의 활액 섬유아세포는 IL-1β 및 가용성 IL-6Rα에 의한 자극에 대한 반응으로 IL-6을 생산함으로써 VEGF의 IL-6 유도된 분비를 초래한다. 따라서, 인간 활액 섬유아세포에 의해서 생산된 IL-6은 내인성 인간 IL-6을 나타낸다. 내인성 IL-6은 인간에게서 의학적 치료를 위한 분자 표적이며, 따라서 내인성 IL-6의 중화는 결합 성분의 치료학적 잠재력의 중요한 지표이다. 상기 시험은 류마티스성 관절염 환자로부터 수득된 활액 섬유아세포를 사용하여 수행되었기 때문에, 그 결과는 특히 류마티스성 관절염을 치료하기 위한 결합 성분의 용도에 관련된다. VEGF 방출시험에서 시험한 최적화된 항체 분자의 중화 효력은 공지의 안티 Il-6 항체 CNTO-328의 효력을 능가하였다.
본 발명에 따르는 결합 성분은 0.6 pM 인간 IL-1β 및 2.4 nM 가용성 인간 IL-6Rα로 자극된 인간 활액 섬유아세포로부터의 VEGF 방출의 억제에 대한 시험에서 50 nM 미만, 예를 들어, 5 nM 미만, 예를 들어, 1 nM 미만의 IC50을 가질 수 있다.
내인성 IL-6은 글리코실화 및 비글리코실화된 형태의 혼합물인 것으로 알려져 있다. 내인성 IL-6에 대한 본 발명의 결합 성분의 결합은 활액 섬유아세포 시험에서 입증되었는데, 이는 이 시험이 인간 활액 섬유아세포로부터의 IL-6, 즉 내인성 IL-6을 이용하기 때문이다.
본 발명의 결합 성분은 TF-1 세포의 IL-6 유도된 증식을 억제할 수 있다. TF-1은 적백혈병이 있는 환자로부터 정착된 인간 전골수양 세포주이다 [Kitamura 등 1989]. TF-1 세포주는 생존 및 증식을 위해서 성장인자의 존재를 필요로 한다. TF-1 세포가 반응할 수 있는 개별적인 성장인자에는 IL-6, GM-CSF 및 온코스타틴 M이 포함된다. 본 발명의 결합 성분은 20 pM 인간 IL-6에 대해 반응으로서의 TF-1 세포의 증식의 억제에 대한 시험에서 100 nM 미만, 예를 들어, 20 nM, 10 nM 또는 1 nM 미만, 예를 들어, 100 pM, 70 pM, 50 pM, 40 pM, 30 pM, 20 pM 또는 10 pM 미만의 IC50을 가질 수 있다. 본 발명에 기술된 바와 같이 (참조: 실시예 1.5), 모 IgG "CAN022D10"은 TF-1 증식시험에서 약 93 nM의 IC50을 갖는 것으로 나타났으며, 본 발명자들은 이어서 실시예 2.2, 2.5 및 2.6 (각각 표 3, 4 및 5)에 나타낸 바와 같이 실질적으로 증가된 효력 (일반적으로 100 pM 미만의 IC50)을 갖는 CAN022D10의 최적화된 변이체를 생성시켰다. 특히, 최적화된 클론 중의 일부에 대한 IC50 값은 5 pM 또는 그 미만 정도로 낮은 것으로 측정되었으며, 예를 들어, 배선화된 IgG 항체 7, 항체 17 및 항체 18이 이들 항체의 극단적으로 높은 중화 효력을 나타낸다.
본 발명의 결합 성분은 B9 세포의 IL-6 유도된 증식을 억제할 수 있다. B9 세포는 IL-6에 대한 그들의 특이적 반응을 기초로 하여 선택된 쥐 B-세포 하이브리도마 세포주 B13.29의 서브-클론이다. B9 세포는 생존 및 증식을 위해서 IL-6을 필요로 하며, 매우 낮은 농도의 IL-6에 대해서 반응한다. 이에 의해, IL-6 항체의 존재 하에서의 이들 세포의 증식이 평가될 수 있으며, 항체의 친화성이 결정될 수 있다. 본 발명에서 실시예 2.10은 항체 18이 IL-6에 대해 반응으로서의 B9 세포 증식을 억제하였으며, 이 시험에서 높은 친화성을 나타내었음을 나타낸다.
류마티스성 관절염에서 자가-항체 생산은 대부분이 IgM 클래스의 생산이다. SKW6.4는 인간 림프아구양 B 세포주를 분비하는 클론성 IgM이다. IL-6에 의해서 자극하면, 이들 세포는 IgM을 분비하며, 따라서 이 시험은 류마티스성 관절염에 대해서 적절한 것으로 인식되었다. SKW6.4 세포는 IL-6에 대해 반응으로서의 IgM 분비의 억제를 측정함으로써 IL-6을 중화시키기는 결합 성분의 효력을 결정하는 시험에서 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 100 pM 인간 IL-6에 대한 반응으로서의 IgM 분비의 억제에 대한 SKW6.4 세포 시험에서 10 pM 미만, 예를 들어, 5 pM 미만의 IC50을 가질 수 있다. 항체 18은 이 시험에서 IL-6의 효과를 중화시키는 것으로 나타났다 - 실시예 2.11 (표 9) 참조.
본 발명은 인간 IL-6에 대한 고친화성 결합 성분을 제공한다. 시노몰구스 원숭이로부터의 IL-6에 대한 고친화성이 또한 입증되었다. 본 발명의 결합 성분은 1 nM 이하, 예를 들어, 100 pM, 50 pM, 30 pM 또는 10 pM 이하의 KD로 인간 IL-6 및/또는 시노몰구스 IL-6에 결합할 수 있다. KD는 표면 플라즈몬 공명, 예를 들어, 비아코어 (BIAcore®)에 의해서 결정될 수 있다. 친화성의 비아코어 (BIAcore®) 측정은 본 발명에서 실시예 2.9에 기술되어 있다. 놀랍게도, 항체 7 및 18의 친화성은 비아코어 기구를 사용하여 측정할 수 있는 한계를 넘어서는 것으로 확인되었으며, 이것은 10 pM 이하의 KD 값을 나타낸다.
본 발명의 다른 곳에서 기술된 바와 같이, 표면 플라즈몬 공명은 액체상의 피분석물을 지지체에 부착된 리간드 상에 통과시키고, 피분석물과 리간드 사이의 결합을 측정하는 것을 포함한다. 표면 플라즈몬 공명은 예를 들어, IL-6을 지지체에 부착된 결합 성분 상에 유체상으로 통과시킴으로써 수행될 수 있다. 표면 플라즈몬 공명 데이터는 일가 피분석물 데이터 모델에 적합하였다. 친화성 상수 Kd는 일가 피분석물 데이터 모델을 사용한 표면 플라즈몬 공명에 의해서 측정된 바와 같은 속도상수 kd/ka의 비로부터 계산될 수 있다.
IL-6에 대한 결합 성분의 친화성은 대신으로, 예를 들어, 인간 IL-6의 다양한 농도에 대한 반응으로서의 TF-1 세포 증식의 억제에 대한 시험을 기초로 하는 쉴드 분석 (Schild analysis)에 의해서 계산될 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 쉴드 분석에 의해서 계산된 것으로서 10 pM 미만, 예를 들어, 1 pM 미만의 친화성을 가질 수 있다. 본 발명에서 실시예 2.10에 보고된 바와 같이, 인간 IL-6에 대한 항체 18의 친화성은 쉴드 분석을 사용하여 0.4 pM인 것으로 계산되었다.
본 발명의 결합 성분은 임의로, 다음 중의 하나 또는 그 이상, 또는 전부와 교차-반응하지 않을 수 있다: 백혈병 억제인자 (LIF), 섬모 신경영양성 인자 (CNTF), IL-11 또는 온코스타틴 M.
본 발명의 결합 성분은 임의로 랫트 IL-6, 마우스 IL-6 및/또는 개 IL-6와 교차-반응하지 않을 수 있다.
다른 단백질 또는 비-인간 IL-6에 결합하는 결합 성분의 교차-반응성은 예를 들어, 실시예 1.6에 기술된 것으로서 델피아 (DELFIA®) 에피토프 경쟁시험과 같은, 지지체 상에 고정화된 결합 성분에 대한 인간 IL-6 결합의 억제에 대한 시간 분해 형광시험에서 시험할 수 있다. 예를 들어, LIF, CNTF, IL-11, 온코스타틴 M, 랫트 IL-6 및 마우스 IL-6 중의 어떤 것 또는 전부는 억제를 나타내지 않거나 50% 미만의 억제를 나타낼 수 있거나, 지지체 상에 고정화된 결합 성분에 대한 표지된 인간 IL-6 결합의 억제에 대한 시간 분해 형광시험에서 0.5 mM보다 크거나 1 mM보다 큰 IC50을 가질 수 있다. 예를 들어, LIF, CNTF, IL-11, 온코스타틴 M, 랫트 IL-6 및 마우스 IL-6 중의 어떤 것 또는 전부는 억제를 나타내지 않을 수 있거나, 교차-반응성을 시험하는 시간 분해 형광시험에서 비표지된 인간 IL-6의 경우에 비해서 적어도 10- 또는 100-배 더 큰 IC50을 가질 수 있다. 이 시험방법에서, 표지된 야생형 성숙 인간 IL-6은 결합 성분과의 그의 상호작용의 Kd의 최종 농도로 사용된다.
본 발명의 결합 성분은 시노몰구스 IL-6과 교차-반응할 수 있다. 교차-반응성은 상술한 시간 분해 형광시험에서, 지지체 상에 고정된 결합 성분에 대한 표지된 인간 IL-6 결합의 억제로서 결정될 수 있다. 예를 들어, 시노몰구스 IL-6은 이러한 시간 분해 형광시험에서 5 nM 미만, 예를 들어, 2.5 nM 미만, 예를 들어, 약 1 nM의 IC50을 가질 수 있다. 시노몰구스 IL-6은 이 시험에서 비표지된 인간 IL-6의 IC50과는 10 배 미만으로 상이한, 예를 들어, 5-배 미만으로 상이한 IC50을 가질 수 있다.
하나의 구체예에서, 안티-IL-6 항체는 인간과 시노몰구스 원숭이 IL-6 서열 사이에서는 보존되며, 인간 서열과 비교하여 마우스, 랫트 및 개 IL-6 서열에서는 상이된 IL-6 상의 에피토프에 결합한다.
하나의 구체예에서, 결합 성분은 IL-6Rα와 상호작용하는 부분인 IL-6의 "부위 (site) 1" 부분에 결합한다. 따라서, 본 발명의 결합 성분은 IL-6Rα에 대한 IL-6 결합을 경쟁적으로 억제함으로써 IL-6Rα를 통해서 매개되는 IL-6의 생물학적 효과를 중화시킬 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 Phe102 및/또는 Ser204에서 인간 IL-6을 결합시킬 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 또한, Arg207에서 인간 IL-6을 결합시킬 수 있다. 임의로, 결합 성분은 Phe102 및/또는 Ser 204를 결합시키는 것 이외에도 IL-6 분자 내의 측면 잔기 (flanking residues) 또는 구조적으로 이웃하는 잔기를 결합시킬 수 있다. 협약에 의해서, 잔기 넘버링 (numbering)은 전체 길이 인간 IL-6 (SEQ ID NO: 15)에 상응한다. 그러나, 결합은 성숙 인간 IL-6을 사용하여 결정될 수 있다. IL-6 잔기에 대한 결합은 이하에 설명되는 바와 같이 부위 지시된 돌연변이유발에 의해서 결정되는 바와 같다.
구조와 활성을 관련시키기 위한 단백질의 단일 아미노산 및 부분의 돌연변이유발은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려져 있으며, 항체에 결합하는 단백질의 부분을 정의하기 위해서 사용되어 왔다 [Lu 등., (2005) Biochemistry 44:11106-14]. 돌연변이체 인간 IL-6에 대한 결합 및/또는 그의 중화를 사용하여 결합 성분이 Phe102, Ser204 및/또는 Arg207를 결합시키는지 여부를 평가할 수 있다. 야생형과 비교하여 돌연변이체 IL-6의 결합 또는 중화의 부재 또는 상당히 감소한 결합 또는 중화는 결합 성분이 돌연변이된 잔기를 결합시킨다는 것을 시사한다.
IL-6 내의 잔기에 대한 결합은 지지체 상에 고정화된 결합 성분에 대한 표지된 야생형 인간 IL-6 결합의 억제에 대한 시간 분해 형광시험에서, 선택된 잔기에서 돌연변이된 IL-6을 사용하여 결정될 수 있으며, 여기에서 표지된 야생형 성숙 인간 IL-6은 결합 성분과 그의 상호작용의 Kd와 동등한 최종 농도로 존재한다. 돌연변이체 IL-6이 결합 성분에 대한 표지된 야생형 IL-6의 결합을 억제하지 않거나, 돌연변이체 IL-6이 비표지된 야생형 IL-6의 경우보다 더 큰 IC50을 갖는다면 (예를 들어, 10-배 이상 또는 100-배 이상), 이것은 돌연변이된 잔기가 결합 성분에 의해서 결합된 것을 시사한다.
본 발명의 결합 성분은 임의로, 잔기 Phe102, Ser204 및/또는 Arg207에서 돌연변이, 예를 들어, 돌연변이 Phe102Glu, Ser204Glu, Ser204Tyr 및/또는 Arg207Glu를 갖는 돌연변이체 인간 IL-6을 결합시키지 않고/않거나 중화시키지 않을 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 항체 분자, 예를 들어, 인간 항체 분자를 포함할 수 있다. 결합 성분은 통상적으로 항체 VH 및/또는 VL 영역을 포함한다. 결의 VH 및 VL 영역은 또한, 본 발명의 일부분으로서 제공된다. 각각의 VH 및 VL 영역 내에는 상보적 결정 부분 ("CDRs") 및 골격 부분 ("FRs")이 존재한다. VH 영역은 HCDRs의 세트를 포함하며, VL 영역은 LCDRs의 세트를 포함한다. 항체 분자는 VH CDR1, CDR2 및 CDR3 및 골격을 포함하는 항체 VH 영역을 포함한다. 이것은 대신으로, 또는 또한 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 및 골격을 포함하는 항체 VL 영역을 포함할 수 있다. VH 또는 VL 영역 골격은 다음의 구조로 CDRs가 산재된 4 개의 골격 부분, 즉 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4.
본 발명에 따르는 항체 VH 및 VL 영역 및 CDRs의 예는 본 발명의 일부분을 형성하는 서열 목록에 열거된 바와 같다. 추가의 CDRs는 PCT 공개 제WO 2008/065378호에 개시되어 있다. 본 발명 및 PCT 공개 제WO 2008/065378호에 기술된 모든 VH 및 VL 서열, CDR 서열, CDRs의 세트 및 HCDRs의 세트 및 LCDRs의 세트는 본 발명의 관점 및 구체예를 나타낸다. 본 발명에 기술된 것으로서, "CDRs의 세트"는 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함한다. 따라서, HCDRs의 세트는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDRs의 세트는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 다른 식으로 언급되지 않는 한, "CDRs의 세트"는 HCDRs 및 LCDRs를 나타낸다. 전형적으로, 본 발명의 결합 성분은 모노클로날 항체 항체이다.
본 발명의 결합 성분은 이하에 더 거론되는 바와 같이, 통상적으로 하나 또는 그 이상의 CDRs, 예를 들어, 비-항체 단백질 스캐폴드 내의 CDRs의 세트에 의해서 제공되는 비-항체 분자 내의 항원-결합 부위를 포함할 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따르는 결합 성분은 IL-6의 생물학적 활성을 변조시키고, 중화시킬 수 있다. 본 발명에 기술된 바와 같이, 본 발명의 IL-6-결합 성분은 중화 효력에 대해서 최적화될 수 있다. 일반적으로, 효력 최적화는 선택된 결합 성분의 서열 (통상적으로는 항체의 가변 영역 서열)을 돌연변이시켜 결합 성분의 라이브러리를 생성시키는 것을 포함하며, 이것은 그 후에 효력에 대해서 시험하고, 더 강력한 결합 성분이 선택된다. 따라서, 선택된 "효력-최적화된" 결합 성분은 라이브러리가 생성된 결합 성분보다 더 큰 효력을 갖는 경향이 있다. 그럼에도 불구하고, 고효력 결합 성분은 또한, 최적화가 없이 수득될 수도 있으며, 예를 들어, 고효력 결합 성분은 초기 스크린, 예를 들어, 생화학적 중화시험으로부터 직접 수득될 수 있다. "효력 최적화된" 결합 성분은 IL-6의 특정한 활성 또는 하류 기능의 중화에 대한 최적화된 효력을 갖는 결합 성분을 나타낸다. 시험방법 및 효력은 본 발명의 다른 부분에서 더 상세하게 기술된다. 본 발명은 효력-최적화 및 비-최적화된 결합 성분 둘 다뿐만 아니라 선택된 결합 성분으로부터 효력 최적화시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 숙련된 전문가가 고효력을 갖는 결합 성분을 생성시키도록 한다.
추가의 관점에서, 본 발명은 항원을 결합시킬 수 있는 하나 또는 그 이상의 결합 성분을 수득하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따르는 결합 성분의 라이브러리와 상기 항원이 접촉하도록 유도하고, 상기 항원을 결합시킬 수 있는 라이브러리의 하나 또는 그 이상의 결합 성분을 선택하는 것을 포함한다.
상기 라이브러리는 입자 또는 분자 컴플렉스, 예를 들어, 효모, 박테리아 또는 박테리오파지 (예를 들어, T7) 입자, 바이러스, 세포 또는 공유적, 리보좀성 또는 그 밖의 다른 시험관내 디스플레이 시스템과 같은 복제가능한 유전자 패키지 상에 디스플레이될 수 있으며, 여기에서 각각의 입자 또는 분자 컴플렉스는 그 위에 디스플레이된 항체 VH 가변 영역, 및 임의로, 존재하는 경우에는, 또한 디스플레이된 VL 영역을 코드화한 핵산을 함유한다. 파지 디스플레이는 WO92/01047, 및 예를 들어, 미국 특허 US5969108, US5565332, US5733743, US5858657, US5871907, US5872215, US5885793, US5962255, US6140471, US6172197, US6225447, US6291650, US6492160 및 US6521404에 기술되어 있으며, 이들의 각각은 본 발명에 온전히 참고로 포함된다.
항원을 결합시킬 수 있고, 박테리오파지 또는 다른 라이브러리 입자 또는 분자 컴플렉스 상에 디스플레이된 결합 성분을 선택한 후에, 상기 선택된 결합 성분을 디스플레이하는 박테리오파지 또는 다른 입자 또는 분자 컴플렉스로부터 핵산을 채취할 수 있다. 이러한 핵산은 상기의 선택된 결합 성분을 디스플레이하는 박테리오파지 또는 다른 입자 또는 분자 컴플렉스로부터 채취된 핵산의 서열을 갖는 핵산으로부터의 발현에 의한 결합 성분 또는 항체 VH 또는 VL 가변 영역의 후속 생산에 사용될 수 있다.
본 발명의 결합 성분에서 사용될 수 있는 본 발명의 VH 및 VL 영역 및 CDRs의 변이체 (그에 대한 아미노산 서열이 본 발명에 설명된 것을 포함)는 서열 변화 또는 돌연변이, 및 바람직한 특징을 갖는 항원 결합 성분에 대한 스크리닝의 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 바람직한 특징의 예로는 다음이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다:
ㆍ 항원에 대해서 특이적인 공지의 항체에 비해 항원에 대해 증가된 결합 친화성
ㆍ 활성이 공지되어 있다면, 항원에 대해서 특이적인 공지의 항체에 비해 항원 활성의 증가된 중화
ㆍ 특정의 몰비에서 항원에 대한 공지의 항체 또는 리간드와의 명시된 경쟁적 능력
ㆍ 컴플렉스를 면역침전시키는 능력
ㆍ 명시된 에피토프에 결합하는 능력
o 선형 에피토프, 예를 들어, 본 발명에 기술된 바와 같은 펩타이드-결합 스캔, 예를 들어, 선형 및/또는 속박된 구조로 스크리닝된 펩타이드를 사용하여 확인된 펩타이드 서열
o 비-연속적 잔기에 의해서 형성된 구조적 에피토프
ㆍ IL-6 또는 하류 분자의 새로운 생물학적 활성을 변조시키는 능력.
이러한 방법은 또한 본 발명에 제공된다.
본 발명에 기술된 항체 분자의 변이체는 본 발명에서 생산 및 사용될 수 있다. 다변량 데이터 분석기술을 구조/특성-활성 관계에 적용하는데 있어서의 컴퓨터 화학의 리드에 따라서 [Wold, 등. Multivariate data analysis in chemistry. Chemometrics - Mathematics and Statistics in Chemistry (Ed.: B. Kowalski), D. Reidel Publishing Company, Dordrecht, Holland, 1984 (ISBN 90-277-1846-6)], 항체의 정량적 활성-특성 관계는 통계학적 회귀, 패턴 인식 및 분류와 같은 잘 알려진 수학적 기술을 사용하여 추론될 수 있다 [Norman 등. Applied Regression Analysis. Wiley-Interscience; 3rd edition (April 1998) ISBN: 0471170828; Kandel, Abraham & Backer, Eric. Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis. Prentice Hall PTR, (May 11, 1995), ISBN: 0133418847; Krzanowski, Wojtek. Principles of Multivariate Analysis: A User's Perspective (Oxford Statistical Science Series, No 22 (Paper)). Oxford University Press; (December 2000), ISBN: 0198507089; Witten, Ian H. & Frank, Eibe. Data Mining: Practical Machine Learning Tools and Techniques with Java Implementations. Morgan Kaufmann; (October 11, 1999), ISBN: 1558605525; Denison David G. T. (Editor), Christopher C. Holmes, Bani K. Mallick, Adrian F. M. Smith. Bayesian Methods for Nonlinear Classification and Regression (Wiley Series in Probability and Statistics). John Wiley & Sons; (July 2002), ISBN: 0471490369; Ghose, Arup K. & Viswanadhan, Vellarkad N. Combinatorial Library Design and Evaluation Principles, Software, Tools, and Applications in Drug Discovery. ISBN: 0-8247-0487-8]. 항체의 특성은 항체 서열, 기능적 및 삼차원적 구조의 실험적 및 이론적 모델 (예를 들어, 가능할 것 같은 접촉 잔기 또는 계산된 물리화학적 특성의 분석)로부터 추론될 수 있으며, 이들 특성은 단독으로 및 조합하여 고려될 수 있다.
VH 영역 및 VL 영역으로 구성된 항체 항원-결합 부위는 전형적으로, 폴리펩타이드의 6 개의 루프에 의해서 형성된다: 경쇄 가변 영역 (VL)으로부터 3 개 및 중쇄 가변 영역 (VH)으로부터 3 개. 공지된 원자 구조의 항체의 분석은 항체 결합 부위의 서열 및 삼차원 구조 사이의 관계를 해명하였다 [Chothia C. 등. (1992) J. Molecular Biology 227, 799-817; Al-Lazikani, 등. (1997) J. Molecular Biology 273(4), 927-948]. 이들 관계는 VH 영역의 세 번째 부분 (루프)을 제외한 결합 부위 루프가 적은 수의 주쇄 구조 중의 하나를 갖는다는 것을 나타낸다: 정준 구조 (canonical structures). 특정한 루프에 의해서 형성된 정준 구조는 그의 크기 및 루프 및 골격 부분 둘 다 내의 주요 부위에서의 그의 존재에 의해서 결정되는 것으로 나타났다 [Chothia C. 등. (1992) J. Molecular Biology 227, 799-817; Al-Lazikani, 등. (1997) J. Molecular Biology 273(4), 927-948].
서열-구조 관계의 이 시험은 그의 CDR 루프의 삼차원 구조를 유지하는데 중요하며, 따라서 결합 특이성을 유지하는, 공지된 서열이지만 미지의 삼차원 구조인 항체 내의 이들 잔기를 예측하기 위해서 사용될 수 있다. 이들 예측은 선도물질 최적화 실험으로부터의 결과에 대한 예측의 비교에 의해서 뒷받침될 수 있다. 구조적 접근방법에서는, WAM [Whitelegg, N.R.u. & Rees, A.R (2000). Prot. Eng., 12, 815-824]과 같은 자유롭게 이용할 수 있거나 상업적인 어떤 패키지라도 사용하여 항체 분자의 모델이 생성될 수 있다 [Chothia, 등. (1986) Science, 223,755-758]. 그 후, 인사이트 (Insight) II (Accelrys, Inc.) 또는 딥뷰 (Deep View) [Guex, N. and Peitsch, M.C. (1997) Electrophoresis 18, 2714-2723]와 같은 단백질 가시화 및 분석 소프트웨어 패키지를 사용하여 CDR 내의 각각의 위치에서 가능한 치환을 평가할 수 있다. 그 후, 이 정보를 사용하여 활성에 대해 최소 또는 유익한 영향을 미칠 것 같은 치환을 만들 수 있다.
CDRs, 항체 VH 또는 VL 영역 및 결합 성분의 아미노산 서열 내에서 치환을 만드는데 필요한 기술은 일반적으로 본 기술분야에서 이용할 수 있다. 변이체 서열은 활성에 대해서 최소 또는 유익한 영향을 갖는 것으로 예상될 수 있거나 없는 치환에 의해서 만들어질 수 있으며, IL-6을 결합 및/또는 중화시키는 능력 및/또는 어떤 다른 바람직한 특성에 대해서 시험할 수 있다.
그의 서열이 본 발명에 구체적으로 개시된 VH 및 VL 영역 중의 어떤 것의 가변 영역 아미노산 서열 변이체가 거론된 바와 같이 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
본 발명의 VL 영역의 변이체 및 이들을 포함하는 결합 성분 또는 항체 분자는 아르기닌이 카밧 잔기 108에서 존재하지 않는 VL 영역, 예를 들어, 카밧 잔기 108이 상이한 잔기이거나 결실된 경우를 포함한다. 예를 들어, 불변 영역을 결여하는 항체 분자, 예를 들어, scFv와 같은 항체 분자는 VL 영역 서열, 또는 카밧 잔기 108에서의 아르기닌이 아르기닌 이외의 아미노산 잔기, 또는 결실된 본 발명에 기술된 바와 같은 그의 변이체를 갖는 VL영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가의 관점은 첨부된 서열 목록에 나타낸 항체 18의 VH 영역과 적어도 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VH 영역을 포함하고/하거나 첨부된 서열 목록에 나타낸 항체 18의 VL 영역과 적어도 60, 70, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는 VL 영역을 포함하는 항체 분자이다. 2 개의 아미노산 서열의 동일성 %를 계산하기 위해서 사용될 수 있는 알고리즘에는 예를 들어, 디폴트 파라메터 (default parameters)를 사용하는, BLAST [Altschul 등. (1990) J. Mol. Biol. 215: 405-410], FASTA [Pearson and Lipman　(1988) PNAS USA 85: 2444-2448], 또는 스미스-워터맨 (Smith-Waterman) 알고리즘 [Smith and Waterman (1981) J. Mol Biol. 147: 195-197]이 포함된다.
특정한 변이체는 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열 변화 (아미노산 잔기의 부가, 결실, 치환 및/또는 삽입)를 포함할 수 있다.
변화는 하나 또는 그 이상의 골격 부분 및/또는 하나 또는 그 이상의 CDRs에서 이루어질 수 있다. 변화는 통상적으로 기능의 상실을 야기하지 않으며, 따라서 이렇게 변화된 아미노산 서열을 포함하는 결합 성분은 IL-6을 결합 및/또는 중화시키는 능력을 유지할 수 있다. 이것은 예를 들어, 본 발명에 기술된 시험방법에서 측정된 바와 같이, 변화가 이루어지지 않은 결합 성분과 동일한 정량적 결합 및/또는 중화 능력을 유지할 수 있다. 이렇게 변화된 아미노산 서열을 포함하는 결합 성분은 IL-6을 결합 및/또는 중화시키는 개선된 능력을 가질 수 있다.
변화는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 비-천연적으로 존재하거나 비-표준인 아미노산으로 대체시키거나, 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 비-천연적으로 존재하거나 비-표준인 형태로 변형시키거나, 하나 또는 그 이상의 비-천연적으로 존재하거나 비-표준인 아미노산을 서열 내에 삽입하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 서열 내에서 변화의 수 및 위치의 예는 본 발명의 다른 곳에 기술된다. 천연적으로 존재하는 아미노산은 그들의 표준 단일-문자 코드에 의해서 G, A, V, L, I, M, P, F, W, S, T, N, Q, Y, C, K, R, H, D, E로 확인되는 20 개의 "표준" l-아미노산을 포함한다. 비-표준 아미노산은 폴리펩타이드 골격 내로 혼입될 수 있는 어떤 다른 잔기 또는 기존의 아미노산 잔기의 변형의 결과를 포함한다. 비-표준 아미노산은 천연적으로 존재하거나 비-천연적으로 존재할 수 있다. 4-하이드록시프롤린, 5-하이드록시리신, 3-메틸히스티딘, N-아세틸세린 등과 같은 몇 개의 천연적으로 존재하는 비-표준 아미노산은 본 기술분야에서 공지되어 있다 [Voet & Voet, Biochemistry, 2nd Edition, (Wiley) 1995]. 그들의 N-알파 위치에서 유도체화된 이들 아미노산 잔기는 단지 아미노산 서열의 N-말단에만 위치할 수 있을 것이다. 통상적으로, 본 발명에서 아미노산은 l-아미노산이지만, 이것은 d-아미노산일 수도 있다. 따라서, 변화는 l-아미노산을 d-아미노산으로 변형시키거나 대체시키는 것을 포함할 수 있다. 아미노산의 메틸화, 아세틸화 및/또는 포스포릴화된 형태도 또한 공지되어 있으며, 본 발명에서 아미노산은 이러한 변형의 대상이 될 수 있다.
본 발명의 항체 영역 및 결합 성분 내의 아미노산 서열은 상술한 비-천연 또는 비-표준 아미노산을 포함할 수 있다. 비-천연 아미노산 (예를 들어, d-아미노산)은 합성 중에, 또는 아미노산의 합성 후에 "원래"의 아미노산의 변형 또는 대체에 의해서 아미노산 서열 내로 혼입될 수 있다.
비-천연 및/또는 비-천연적으로 존재하는 아미노산의 사용은 구조적 및 기능적 다양성을 증가시키며, 따라서 본 발명의 결합 성분에서 원하는 IL-6-결합 및 중화 특성을 달성하는 잠재력을 증가시킬 수 있다. 추가로, d-아미노산 및 유사체는 동물, 예를 들어, 인간에게 투여한 후에 l-아미노산을 갖는 폴리펩타이드의 생체내 분해로 인하여, 표준 l-아미노산에 비해 상이한 약력학적 프로필을 갖는 것으로 나타났으며, 이것은 d-아미노산이 생체내 적용 시에 일부의 경우에 유익함을 의미한다.
본 발명의 CDR-유래 서열을 갖는 신규한 VH 또는 VL 부분은 전체 가변 영역 내에서 돌연변이를 생성시키는 하나 또는 그 이상의 선택된 VH 및/또는 VL 유전자의 랜덤 돌연변이유발을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 기술은 오류-유발 (error-prone) PCR을 사용한 그람 (Gram) 등에 의해서 기술되었다 [Gram 등., (1992) PNAS USA, 89:3576-3580]. 일부의 구체예에서는, 하나 또는 두 개의 아미노산 치환이 전체 가변 영역 또는 CDRs의 세트 내에서 만들어질 수 있다.
사용될 수 있는 또 다른 방법은 VH 또는 VL 유전자의 CDR 부분에 대한 돌연변이유발을 지시하는 것이다. 이러한 기술은 바르바스 (Barbas) 등 [Barbas 등., (1994) PNAS USA, 91:3809-3813] 및 쉬어 (Schier) 등 [Schier 등., (1996) J. Mol. Biol. 263:551-567]에 의해서 기술되었다.
상술한 기술은 모두 본 기술분야에서 그 자체로서 공지되어 있으며, 숙련된 전문가는 본 기술분야에서 일상적인 방법을 사용하여 본 발명의 결합 성분을 제공하기 위해서 이러한 기술을 사용할 수 있을 것이다.
본 발명의 추가의 관점은 IL-6에 대한 항체 항원-결합 부위를 수득하는 방법을 제공하며, 상기의 방법은 본 발명에 설명된 VH 영역의 아미노산 서열 내에서의 하나 또는 그 이상의 아미노산의 부가, 결실, 치환 또는 삽입을 이용하여 VH 영역의 아미노산 서열 변이체인 VH 영역을 제공하고, 임의로 이렇게 제공된 VH 영역을 하나 또는 그 이상의 VL 영역과 조합하고, VH 영역 또는 VH/VL 조합 또는 조합들을 시험하여 임의로 하나 또는 그 이상의 바람직한 특성, 예를 들어, IL-6 활성을 중화시키는 능력을 갖는, IL-6에 대한 결합 성분 또는 항체 항원-결합 부위를 확인하는 단계를 포함한다. 상기의 VL 영역은 실질적으로 본 발명에 설명된 바와 같은 아미노산 서열을 가질 수 있다. 본 발명에 기술된 VL 영역의 하나 또는 그 이상의 서열 변이체가 하나 또는 그 이상의 VH 영역과 조합된 유사한 방법이 이용될 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 실질적으로 본 발명에 설명된 바와 같은 CDR 아미노산 서열은 인간 항체 가변 영역 내의 CDR 또는 그의 실질적인 부분으로 보유될 수 있다. 실질적으로 본 발명에 설명된 바와 같은 HCDR3 서열은 본 발명의 구체예를 나타내며, 이들 각각은 인간 중쇄 가변 영역 내의 HCDR3 또는 그의 실질적인 부분으로 보유될 수 있다.
본 발명에서 사용된 가변 영역은 어떤 배선 또는 재정렬된 인간 가변 영역으로부터라도 수득되거나 유도될 수 있거나, 공지의 인간 가변 영역의 공통 또는 실제 서열을 기초로 하는 합성 가변 영역일 수 있다. 가변 영역은 비-인간 항체로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 CDR 서열 (예를 들어, CDR3)은 재조합 DNA 기술을 사용하여 CDR (예를 들어, CDR3)이 결여된 가변 영역의 레퍼토리 (repertoire) 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 마크 (Marks) 등 [Marks 등 (1992) Bio/Technology 10:779-783]은 CDR3 항체 가변 영역의 레퍼토리를 생산하는 방법을 기술하였으며, 여기에서는 가변 영역 구역의 5' 종단 (end)으로 유도되거나 그에 인접한 공통 프라이머를 인간 VH 유전자의 제3 골격 부분에 대한 공통 프라이머와 함께 사용하여 CDR3이 결여된 VH 가변 영역의 레퍼토리를 제공한다. 마크 등은 또한, 이 레퍼토리가 어떻게 특정의 항체의 CDR3과 조합될 수 있는지를 기술하였다. 유사한 기술을 사용하여, 본 발명의 CDR3-유래 서열은 CDR3이 결여된 VH 또는 VL 영역의 레퍼토리에 의해서 셔플링될 (shuffled) 수 있으며, 셔플링된 완전 VH 또는 VL 영역을 동족성 (cognate) VL 또는 VH 영역과 조합하여 본 발명의 결합 성분을 제공하였다. 그 후, 레퍼토리는 적합한 결합 성분이 선택될 수 있도록, 본 발명에 온전히 참고로 포함된 WO92/01047, 및 문헌 [Kay, Winter & McCafferty (Kay, B.K., Winter, J., and McCafferty, J. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, San Diego: Academic Press)]을 포함한 대량의 후속 문헌의 파지 디스플레이 시스템과 같은 적합한 숙주 시스템 내에 디스플레이될 수 있다. 레퍼토리는 104 개 이상의 개별적인 성분, 예를 들어, 적어도 105, 적어도 106, 적어도 107, 적어도 108, 적어도 109 또는 적어도 1010 개의 성분 또는 그 이상으로부터의 어떤 것으로부터라도 구성될 수 있다. 다른 적합한 숙주 시스템에는 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이, T7 디스플레이, 바이러스 디스플레이, 세포 디스플레이, 리보좀 디스플레이 및 공유결합 디스플레이 (covalent display)가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
IL-6 항원에 대한 결합 성분을 제조하는 방법이 제공되며, 여기에서 이 방법은 하기 단계를 포함한다:
(a) 대체될 CDR3를 포함하거나 CDR3 코드화 부분이 결여된 VH 영역을 코드화한 핵산의 출발 레퍼토리를 제공하고;
(b) 실질적으로 VH CDR3에 대해서 본 발명에 설명된 바와 같은 아미노산 서열을 코드화한 공여체 핵산과 상기 레퍼토리를, 상기 공여체 핵산이 레퍼토리 내의 CDR3 부분 내에 삽입되도록 조합하여 VH 영역을 코드화한 핵산의 생성물 레퍼토리를 제공하고;
(c) 상기 생성물 레퍼토리의 핵산을 발현시키고;
(d) IL-6에 대한 결합 성분을 선택하고;
(e) 상기 결합 성분 또는 이것을 코드화한 핵산을 회수하는 단계.
또한, 본 발명의 VL CDR3를 대체될 CDR3를 포함하거나 CDR3 코드화 부분이 결여된 VL 영역을 코드화한 핵산의 레퍼토리와 조합하는 유사한 방법이 사용될 수 있다.
마찬가지로, 하나 또는 그 이상, 또는 3 개 모두의 CDRs가 VH 또는 VL 영역의 레퍼토리 내로 그래프트될 수 있으며, 이것은 이어서 IL-6에 대한 결합 성분 또는 결합 성분들에 대해서 스크리닝된다.
마찬가지로, 본 발명에 기술된 다른 VH 및 VL 영역, CDRs의 세트 및 HCDRs의 세트 및/또는 LCDRs의 세트가 사용될 수 있다.
면역글로불린 가변 영역의 실질적인 부분은 적어도 3 개의 CDR 부분과 함께 그들의 개입성 골격 부분을 포함할 수 있다. 상기의 부분은 또한, 제1 및 제4 골격 부분 중의 어느 하나 또는 둘 다의 적어도 약 50%를 포함할 수 있으며, 상기의 50%는 제1 골격 부분의 C-말단 50% 및 제4 골격 부분의 N-말단 50%이다. 가변 영역의 실질적인 부분의 N-말단 또는 C-말단 종단에서의 추가의 잔기는 천연적으로 존재하는 가변 영역 부분과 통상적으로 결합되지 않는 것일 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 기술에 의해서 제조된 본 발명의 결합 성분의 구성은 클로닝 또는 다른 조작 단계를 촉진시키기 위해서 도입된 링커에 의해서 코드화된 N- 또는 C-말단 잔기의 도입을 제공할 수 있다. 다른 조작 단계에는 본 발명의 다른 부분에서 더 상세히 기술된 바와 같이, 항체 불변 부분, 다른 가변 영역 (예를 들어, 디아바디의 생산 시에) 또는 검출가능한/기능적 라벨을 포함하는 추가의 단백질 서열에 본 발명의 가변 영역을 접합시키기 위한 링커의 도입이 포함된다.
본 발명의 일부의 관점에서 결합 성분은 한 쌍의 VH 및 VL 영역을 포함하지만, VH 또는 VL 영역 서열 중의 어느 하나를 기초로 하는 단일 결합 영역이 본 발명의 추가의 관점을 형성한다. 단일 면역글로불린 영역, 특히 VH 영역은 특이적 방식으로 표적 항원을 결합시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 상기의 dAbs에 대한 설명을 참고로 한다.
단일 결합 영역 중의 어느 하나의 경우에는, 이들 영역을 사용하여 IL-6을 결합시킬 수 있는 2-영역 결합 성분을 형성할 수 있는 상보적 영역에 대해서 스크리닝할 수 있다. 이것은 본 발명에 온전히 참고로 포함된 WO92/01047에 기술된 바와 같은 소위 계층적 이중 조합적 접근방법 (hierarchical dual combinatorial approach)을 사용한 파지 디스플레이 스크리닝 방법에 의해서 달성될 수 있으며, 여기에서는 H 또는 L 쇄 클론을 함유하는 개개 콜로니를 사용하여 다른 쇄 (L 또는 H)를 코드화한 클론의 완전한 라이브러리를 감염시키고, 생성된 2-쇄 결합 성분을 상기 문헌에 기술된 것과 같은 파지 디스플레이 기술에 따라서 선택한다. 이 기술은 또한 마크 (Marks) 등의 동일 문헌 [Marks 등 (1992) Bio/Technology 10:779-783]에 기술되어 있다.
본 발명의 결합 성분은 항체 불변 부분 또는 그의 일부분, 예를 들어, 인간 항체 불변 부분 또는 그의 일부분을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, VL 영역은 그의 C-말단 종단에서 인간 Cκ 또는 Cλ 쇄를 포함하는 항체 경쇄 불변 영역에 부착될 수 있다. 마찬가지로, VH 영역을 기초로 하는 결합 성분은 그의 C-말단 종단에서 어떤 항체 이소타입, 예를 들어, IgG, IgA, IgE 및 IgM 및 이소타입 서브-클래스 중의 어떤 것, 특히 IgG1 및 IgG4로부터 유도된 면역글로불린 중쇄의 전부 또는 일부 (예를 들어, CH1 영역)에 부착될 수 있다. IgG1이 그의 효과기 기능 및 제조의 용이성으로 인하여 유리하다. 이들 특성을 가지며, 가변 부분을 안정화하는 어떤 합성 또는 다른 불변 부분 변이체라도 또한 본 발명에 유용할 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 검출가능하거나 기능적인 라벨 (label)로 표지될 수 있다. 따라서, 결합 성분 또는 항체 분자는 검출가능하고/하거나 정량화할 수 있는 시그날을 수득하기 위하여 면역컨주게이트의 형태로 존재할 수 있다. 면역컨주게이트는 검출가능하거나 기능적인 라벨과 컨주게이트된 본 발명의 항체 분자를 포함할 수 있다. 라벨은 형광체, 방사성라벨, 효소, 화학발광체 또는 광감작제를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다), 시그날을 생산하거나 생산하도록 유도될 수 있는 어떤 분자라도 될 수 있다. 따라서, 결합은 형광 또는 발광, 방사성, 효소 활성 또는 광선 흡수를 검출함으로써 검출 및/또는 측정될 수 있다.
적합한 라벨에는 설명을 위해서, 그러나 제한은 없이 다음의 물질들이 포함된다:
- 알칼리성 포스파타제, 글루코즈-6-포스페이트 데하이드로게나제 ("G6PDH"), 알파-D-갈락토시다제, 글루코즈 옥시다제, 글루코즈 아밀라제, 카보닉 안하이드라제, 아세틸콜린에스테라제, 리소자임, 말레이트 데하이드로게나제 및 퍼옥시다제, 예를 들어, 호스래디쉬 퍼옥시다제와 같은 효소;
- 염료;
- 플루오레세인 및 그의 유도체, 형광색소, 로다민 화합물 및 유도체, GFP ("녹색 형광성 단백질"에 대한 GFP), 단실, 움벨리페론, 피코에리트린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데히드, 및 플루오레사민과 같은 형광성 라벨 또는 형광체; 란타니드 크립테이트 및 킬레이트, 예를 들어, 유로피움 (Europium) 등 (Perkin Elmer and Cis Biointernational)과 같은 형광단;
- 이소루미놀, 루미놀 및 디옥세탄과 같은 화학발광성 라벨 또는 화학발광체;
- 루시퍼라제 및 루시페린과 같은 생물-발광성 라벨;
- 증감제;
- 조효소;
- 효소 기질;
- 브롬77, 탄소14, 코발트57, 불소8, 갈륨67, 갈륨68, 수소3 (트리튬), 인듐111, 인듐113m, 요오드123m, 요오드125, 요오드126, 요오드131, 요오드133, 수은107, 수은203, 인32, 레늄99m, 레늄101, 레늄105, 루테늄95, 루테늄97, 루테늄103, 루테늄105, 스칸듐47, 셀레늄75, 황35, 테크네튬99, 테크네튬99m, 텔루륨121m, 텔루륨122m, 텔루륨125m, 툴륨165, 툴륨167, 툴륨168, 이트륨199 및 본 발명에 언급된 그 밖의 다른 방사성라벨을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 방사성라벨;
- 염료, 촉매 또는 다른 검출가능한 그룹으로 더 표지될 수 있는 라텍스 또는 탄소 입자와 같은 입자; 금속 졸; 미소결정; 리포좀; 세포 등;
- 비오틴, 디옥시게닌 또는 5-브로모데옥시유리딘과 같은 분자;
- 예를 들어, 슈도모나스 (Pseudomonas) 내독소 (PE 또는 그의 세포독성 단편 또는 돌연변이체), 디프테리아 독소 또는 그의 세포독성 단편 또는 돌연변이체, 보툴리눔 독소 A, B, C, D, E 또는 F, 리신 또는 그의 세포독성 단편, 예를 들어, 리신 A, 애브린 또는 그의 세포독성 단편, 사포린 또는 그의 세포독성 단편, 포크위드 (pokeweed) 항바이러스 독소 또는 그의 세포독성 단편 및 브리오딘 1 또는 그의 세포독성 단편과 같은 독소 부위.
적합한 효소 및 조효소는 각각이 본 발명에 온전히 참고로 포함된 US4275149 (Litman, 등.) 및 US4318980 (Boguslaski, 등.)에 기술되어 있다. 적합한 형광체 및 화학발광체는 본 발명에 온전히 참고로 포함된 US4275149 (Litman, 등.)에 기술되어 있다. 라벨은 추가로 특이적 동족성 검출가능한 부위에 대한 결합을 통해서 검출될 수 있는 비오틴과 같은 화학적 부위, 예를 들어, 표지된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 더 포함한다. 검출가능한 라벨은 본 기술분야에서 공지된 통상적인 화학을 사용하여 본 발명의 항체에 부착될 수 있다.
면역컨주게이트 또는 그들의 기능적 단편은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 방법에 의해서 제조될 수 있다. 이들은 직접, 또는 글루타르알데히드와 같은 폴리알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 디에틸렌-트리아민펜타아세트산 (DPTA)과 같은 연결 그룹 또는 스페이서 그룹의 개입에 의해서, 또는 치료학적 컨주게이트를 위해서 상기 언급된 것과 같은 커플링제의 존재 하에서 효소에 또는 형광성 라벨에 커플링될 수 있다. 플루오레세인 타입의 라벨을 함유하는 컨주게이트는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해서 제조될 수 있다.
치료학적 방사성 동위원소를 직접, 또는 상기 언급된 EDTA, DTPA와 같은 킬레이트화제를 통해서 항체에 커플링시키기 위한 기존의 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 방법이 진단에 사용될 수 있는 방사성 원소에 대해서 사용될 수 있다. 이것은 마찬가지로, 클로라민 T 방법 [Hunter W. M. and Greenwood F. C. (1962) Nature 194:495]에 의해서 나트륨125로, 또는 그 밖에 크록포드 (Crockford) 등의 기술 [US4424200; 본 발명에 온전히 참고로 포함된다]에 의해서 테그네튬99m으로 표지를 수행할 수 있거나, 또는 나토위치 (Hnatowich) [US4479930; 본 발명에 온전히 참고로 포함된다]에 의해서 기술된 바와 같이 DTPA를 통해서 부착될 수 있다.
라벨이 외부 수단에 의해서, 예를 들어, 육안검사, 전자기 방사선, 열, 및 화학 시약에 의해서 검출가능한 시그날을 생산할 수 있는 다수의 방법이 있다. 라벨은 또한, 본 발명의 항체를 결합시키는 또 다른 결합 성분에, 또는 지지체에 결합될 수 있다.
라벨은 직접적으로 시그날을 생산할 수 있으며, 따라서 시그날을 생산하기 위해서 추가의 성분은 필요하지 않다. 다수의 유기 분자, 예를 들어, 형광체는 자외선 및 가시광선을 흡수할 수 있고, 여기에서 광선 흡수는 에너지를 이들 분자에 전이시켜 이들을 여기된 에너지 상태로 상승시킨다. 그 후, 이 흡수된 에너지는 제2 파장에서 광선의 방출에 의해서 소산된다. 이러한 제2 파장 방출은 또한 에너지를 표지된 수용기 분자에 전이시킬 수 있으며, 생성된 에너지는 광선의 방출, 예를 들어, 형광 공명 에너지 전이 (FRET)에 의해서 수용기 분자로부터 소산되었다. 직접적으로 시그날을 생산하는 다른 라벨에는 방사성 동위원소 및 염료가 포함된다.
대신으로, 라벨은 시그날을 생산하기 위한 다른 성분을 필요로 할 수 있으며, 따라서 시그날 생산 시스템은 기질, 조효소, 인핸서 (enhancers), 추가의 효소, 효소적 생성물과 반응하는 물질, 촉매, 활성화제, 보조인자, 억제제, 스캐빈저 (scavengers), 금속 이온, 및 시그날 생성 물질의 결합에 필요한 특이적 결합 물질을 포함할 수 있는, 측정가능한 시그날을 생산하는데 필요한 모든 성분을 포함할 수 있다. 적합한 시그날 생산 시스템의 상세한 설명은 본 발명에 온전히 참고로 포함된 US5185243 (Ullman, 등.)에 발견될 수 있다.
본 발명은 본 발명에 제공된 것으로서의 결합 성분을 IL-6에 결합시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 언급된 바와 같이, 이러한 결합은 예를 들어, 결합 성분 또는 결합 성분을 코드화한 핵산을 투여한 후에 생체내에서 일어날 수 있거나, 이것은 시험관내에서, 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블럿팅, 면역세포화학, 면역침강, 친화성 크로마토그래피, 및 생화학적 또는 TF-1 세포 증식시험과 같은 세포-기본 시험에서 일어날 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따르는 결합 성분을 예를 들어, 바이오센서 (biosensor) 시스템에서 사용함으로써 직접적으로 항원의 레벨을 측정하는 것을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 (i) 상기 결합 성분을 IL-6에 노출시키고, (ii) IL-6에 대한 상기 결합 성분의 결합을 검출하는 것을 포함하여 IL-6에 대한 결합을 검출 및/또는 측정하는 방법을 포함하며, 여기에서 결합은 본 발명에 기술된 어떤 방법 또는 검출가능한 라벨을 사용하여서라도 검출된다. 이것 및 본 발명에 기술된 모든 다른 결합 검출방법은 예를 들어, 검출가능한 라벨을 시각적으로 관찰함으로써 상기 방법을 수행하는 전문가에 의해서 직접적으로 해석될 수 있다. 대신으로, 이 방법 또는 본 발명에 기술된 모든 다른 결합 검출방법은 자가방사능사진 (autoradiograph), 사진, 컴퓨터 프린트 출력물, 유동세포분석 리포트, 그래프, 차트, 결과물을 함유하는 시험관 또는 용기 또는 웰, 또는 상기 방법의 결과의 어떤 다른 시각적 또는 물리적 표현의 형태로 리포트를 제공할 수 있다.
IL-6에 대한 결합 성분의 결합의 양이 결정될 수 있다. 정량분석은 진단적 관심이 있을 수 있는 시험 샘플 내의 항원의 양에 관련될 수 있다. IL-6 결합에 대한 스크리닝 및/또는 그의 정량분석은 예를 들어, 본 발명에 언급된 질병 또는 장애 및/또는 이상 IL-6 발현 및/또는 활성을 수반하는 모든 다른 질병 또는 장애에 관해서 환자를 스크리닝하는데 유용할 수 있다.
본 발명의 진단적 방법은 (i) 대상체로부터 조직 또는 유체 샘플을 수득하고, (ii) 상기 조직 또는 유체 샘플을 본 발명의 하나 또는 그 이상의 결합 성분에 노출시키고; (iii) 결합된 IL-6를 대조군 샘플과 비교하여 검출하는 것을 포함할 수 있으며, 여기에서 대조군에 비교한 것으로서 IL-6 결합의 양의 증가는 IL-6 발현 또는 활성의 이상 레벨을 나타낼 수 있다. 시험되는 조직 또는 유체 샘플은 혈액, 혈청, 소변, 생검 물질, 종양, 또는 이상 IL-6 레벨을 함유하는 것으로 의심되는 모든 조직을 포함한다. 이상 IL-6 레벨 또는 활성에 대해서 양성으로 시험한 대상체는 또한 본 발명에서 이후에 기술되는 치료방법으로부터 혜택을 받을 수 있다.
본 기술분야에서 숙련된 전문가는 본 발명에 기술된 방법을 고려하여, 그들의 선호도 및 일반적인 지식에 따라 항원에 대한 결합 성분의 결합을 결정하는 적합한 모드를 선택할 수 있다.
샘플 내의 결합 성분의 반응성은 어떤 적절한 수단에 의해서라도 결정될 수 있다. 방사성면역측정법 (RIA)이 하나의 가능성이다. 방사성 표지된 항원을 비표지된 항원 (시험 샘플)과 혼합시키고, 결합 성분에 결합하도록 한다. 결합된 항원을 비결합된 항원으로부터 물리적으로 분리시키고, 결합 성분에 결합된 방사성 항원의 양을 결정한다. 시험 샘플 내에 항원이 많을수록 더 적은 방사성 항원이 결합 성분에 결합할 것이다. 경쟁적 결합시험은 또한, 리포터 분자에 연결된 항원 또는 유사체를 사용하여 비-방사성 항원과 함께 사용될 수 있다. 리포터 분자는 스펙트럼적으로 분리된 흡수 또는 방출 특징을 갖는 형광색소, 인광체 (phosphor) 또는 레이저 염료일 수 있다. 적합한 형광색소에는 플루오레세인, 로다민, 피코에리트린 및 텍사스 레드 (Texas Red), 및 란타니드 킬레이트 또는 크립테이트가 포함된다. 적합한 색원체 염료에는 디아미노벤지딘이 포함된다.
다른 리포터에는 착색되거나 자기성 또는 상자성인 라텍스 비드와 같은 거대분자 콜로이드성 입자 또는 미립자 물질, 및 시각적으로 관찰되거나 전자적으로 검출되거나 다른 식으로 기록되는 검출가능한 시그날을 직접 또는 간접적으로 야기할 수 있는 생물학적 또는 화학적 활성제가 포함된다. 이들 분자는 예를 들어, 발색시키거나 색상을 변화시키거나, 또는 전기적 특정의 변화를 야기하는 반응을 촉진시키는 효소일 수 있다. 이들은 에너지 상태 사이의 전자 전이가 특징적인 스펙트럼 흡수 또는 방출을 야기하도록 분자적으로 여기할 수 있다. 이들은 바이오센서와 함께 사용되는 화학적 물체를 포함할 수 있다. 비오틴/아비딘 또는 비오틴/스트렙타비딘 및 알칼리성 포스파타제 검출 시스템이 사용될 수 있다.
개개의 결합 성분-리포터 컨주게이트에 의해서 생성된 시그날을 사용하여 샘플 (표준 및 시험) 내의 적절한 결합 성분의 정량화할 수 있는 절대 또는 상대 데이터를 추론할 수 있다.
본 발명의 어떤 관점 또는 구체예에라도 따르는 결합 성분을 포함하는 키트가 또한 본 발명의 관점으로서 제공된다. 키트에서, 결합 성분은 예를 들어, 이하에 더 기술되는 바와 같이 샘플 내에서의 그의 반응성이 결정될 수 있도록 표지될 수 있다. 또한, 결합 성분은 고체 지지체에 부착되거나 부착되지 않을 수 있다. 키트의 성분은 일반적으로 멸균되며, 밀봉된 바이알 또는 다른 용기 내에 존재한다. 키트는 결합 성분이 유용한 진단적 분석 또는 다른 방법에서 사용될 수 있다. 키트는 방법, 예를 들어, 본 발명에 따르는 방법에서의 성분들의 사용에 관한 설명서를 함유할 수 있다. 이러한 방법을 수행하는 것을 도와주거나 수행할 수 있도록 하는 보조물질들이 본 발명의 키트 내에 포함될 수 있다. 보조물질에는 제1 결합 성분에 결합하며, 검출가능한 라벨 (예를 들어, 형광성 라벨, 방사성 동위원소 또는 효소)에 컨주게이트된 제2의 상이한 결합 성분이 포함된다. 항체-기본 키트는 또한, 면역침강을 수행하기 위한 비드를 포함할 수 있다. 키트의 각각의 성분은 일반적으로, 그 자신에게 적합한 용기 내에 존재한다. 따라서, 이들 키트는 일반적으로 각각의 결합 성분에 적합한 별개의 용기를 포함한다. 또한, 키트는 시험방법 및 시험의 수행으로 인하여 제공된 데이터를 해석하고 분석하는 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한, 경쟁시험에서 항원 레벨을 측정하기 위한 상기한 바와 같은 결합 성분의 용도, 즉 경쟁시험에서 본 발명에 의해서 제공되는 바와 같은 결합 성분을 사용함으로써 샘플 내의 항원의 레벨을 측정하는 방법을 제공한다. 이것은 비결합 항원으로부터 결합된 것을 물리적으로 분리하는 것이 필요하지 않은 경우일 수 있다. 물리적 또는 광학적 변화가 결합 상에서 나타나도록 결합 성분을 리포터 분자에 연결시키는 것이 하나의 가능성이다. 리포터 분자는 정량화할 수 있는 검출가능한 시그날을 직접 또는 간접적으로 생성시킬 수 있다. 리포터 분자의 연결은 직접 또는 간접적이거나, 예를 들어, 펩타이드 결합을 통해서 공유적이거나 비-공유적일 수 있다. 펩타이드 결합을 통한 연결은 항체 및 리포터 분자를 코드화한 유전자 융합의 재조합 발현의 결과로서 나타날 수 있다.
다양한 관점 및 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합에 관해서 예를 들어, IgG1 형식인 본 발명에서 정의된 어떤 결합 성분과라도, 예를 들어, 항체 18과 경쟁하는 결합 성분까지 확대된다. 결합 성분들 사이의 경쟁은, 예를 들어, 하나의 결합 성분을 다른 비태깅된 결합 성분(들)의 존재 하에서 검출될 수 있는 특정의 리포터 분자로 태깅하여 동일한 에피토프 또는 중복성 에피토프를 결합시키는 결합 성분의 확인을 가능하게 함으로써, 시험관내에서 쉽게 시험할 수 있다. 경쟁은 예를 들어, ELISA를 사용하여 결정될 수 있으며, 여기에서는 IL-6을 플레이트에 고정시키고, 제1의 태깅되거나 표지된 결합 성분을 하나 또는 그 이상의 다른 비태깅되거나 비표지된 결합 성분과 함께 플레이트에 첨가한다. 태깅된 결합 성분과 경쟁하는 비태깅된 결합 성분의 존재는 태깅된 결합 성분에 의해서 방출된 시그날의 감소에 의해서 관찰된다.
예를 들어, 본 발명은 (i) IL-6을 지지체에 고정시키고, (ii) 상기 고정된 IL-6을 본 발명에 따르는 적어도 하나의 태깅되거나 표지된 결합 성분 및 하나 또는 그 이상의 비태깅되거나 비표지된 시험 결합 화합물과 동시에 또는 단계적 방식으로 접촉시키고, (iii) 태깅된 결합 성분으로부터 결합된 태그의 양의 감소를 관찰함으로써 새로운 IL-6 결합 화합물을 확인하는 것을 포함하여, IL-6 결합 화합물을 확인하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은 다중 웰 (multiwell) 또는 어레이 (arrary) 형식을 사용하여 고-처리량 방식으로 수행될 수 있다. 이러한 시험방법은 또한 용액상으로 수행될 수도 있다. 예를 들어, 본 발명에 온전히 참고로 포함된 U.S. 5,814,468을 참고로 한다. 상술한 바와 같이, 결합의 검출은 예를 들어, 검출가능한 라벨을 시각적으로 관찰하거나, 그의 존재의 감소에 의해서 방법을 수행한 전문가에 의해 직접적으로 해석될 수 있다. 대신으로, 본 발명의 결합 방법은 자가방사능사진, 사진, 컴퓨터 프린트 출력물, 유동세포분석 리포트, 그래프, 차트, 결과물을 함유하는 시험관 또는 용기 또는 웰, 또는 상기 방법의 결과의 어떤 다른 시각적 또는 물리적 표현의 형태로 리포트를 제공할 수 있다.
경쟁시험은 또한 에피토프 지도작성에서 사용될 수 있다. 하나의 경우에, 에피토프 지도작성을 사용하여 임의로, 최적화된 중화 및/또는 변조 특징을 가질 수 있는 IL-6 결합 성분에 의해서 결합된 에피토프를 확인할 수 있다. 이러한 에피토프는 선형이거나 입체배좌성 (conformational)일 수 있다. 입체배좌성 에피토프는 IL-6의 적어도 2 개의 상이한 단편을 포함할 수 있으며, 여기에서 상기 단편은 IL-6이 그의 3차 또는 4차 구조로 접혀서 IL-6 결합 성분과 같은 IL-6의 억제제에 의해서 인식되는 입체배좌성 에피토프를 형성하는 경우에 서로 인접하게 위치한다. 경쟁에 대한 시험에서는, 항원의 펩타이드 단편, 특히 본질적으로 관심이 있는 에피토프를 포함하거나, 그러한 에피토프로 구성된 펩타이드가 사용될 수 있다. 에피토프 서열과 함께 어느 하나의 종단에서 하나 또는 그 이상의 아미노산을 갖는 펩타이드가 사용될 수 있다. 본 발명에 따르는 결합 성분은 항원에 대한 이들의 결합이 소정의 서열을 갖거나 포함하는 펩타이드에 의해서 억제되도록 하는 것일 수 있다.
본 발명은 추가로, 본 발명의 결합 성분을 코드화한 분리된 핵산을 제공한다. 핵산은 DNA 및/또는 RNA를 포함할 수 있다. 하나의 경우에, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 본 발명의 CDR 또는 CDRs의 세트 또는 VH 영역 또는 VL 영역 또는 항체 항원-결합 부위 또는 항체 분자, 예를 들어, scFv 또는 IgG1에 대해 코드화된 핵산을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기한 바와 같은 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 플라스미드, 벡터, 전사 또는 발현 카세트 형태의 구조물을 제공한다.
본 발명은 또한, 하나 또는 그 이상의 상기한 바와 같은 구조물을 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 어떤 CDR 또는 CDRs의 세트 또는 VH 영역 또는 VL 영역 또는 항체 항원-결합 부위 또는 항체 분자, 예를 들어, 제공된 바와 같은 scFv 또는 IgG1을 코드화한 핵산은 그 자체가, 그에 대한 코드화 핵산으로부터 발현시키는 것을 포함하는, 코드화된 생성물의 생산방법과 마찬가지로 본 발명의 관점을 형성한다. 발현은 편리하게는, 핵산을 함유하는 재조합 숙주 세포를 적절한 조건 하에서 배양함으로써 달성될 수 있다. 발현에 의한 생산 후에, VH 또는 VL 영역, 또는 결합 성분은 어떤 적합한 기술이라도 사용하여 분리 및/또는 정제한 다음에, 적절한 경우에 사용될 수 있다.
본 발명에 따르는 핵산은 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있으며, 전체적으로 또는 부분적으로 합성될 수 있다. 본 발명에 설명된 바와 같은 뉴클레오타이드 서열에 대한 언급은 명시된 서열을 갖는 DNA 분자를 포함하며, 문맥이 다른 식으로 언급되지 요구하지 않는 한, U가 T로 치환된 명시된 서열을 갖는 RNA 분자를 포함한다.
또한 추가의 관점은 코드화 핵산으로부터 발현을 야기하는 것을 포함하는, 항체 VH 가변 영역의 생산 방법을 제공한다. 이러한 방법은 숙주 세포를 상기 항체 VH 가변 영역의 생산을 위한 조건 하에서 배양하는 것을 포함할 수 있다.
VL 가변 영역, 및 VH 및/또는 VL 영역을 포함하는 결합 성분을 생산하는 유사한 방법은 본 발명의 추가의 관점으로서 제공된다.
생산방법은 생성물의 분리 및/또는 정제 단계를 포함할 수 있다. 생산방법은 생성물을 약제학적으로 허용되는 부형제와 같은 적어도 하나의 추가의 성분을 포함하는 조성물로 제제화하는 단계를 포함할 수 있다.
다양한 상이한 숙주 세포 내에서 폴리펩타이드를 클로닝 및 발현시키기 위한 시스템은 잘 알려져 있다. 적합한 숙주 세포에는 박테리아, 포유동물 세포, 식물 세포, 사상 진균, 효모 및 바큘로바이러스 시스템 및 유전자이식 식물 및 동물이 포함된다. 원핵세포 내에서 항체 및 항체 단편의 발현은 본 기술분야에서 잘 정립되어 있다. 검토를 위해서는, 예를 들어, 플럭툰 (Pluckthun)의 문헌 [Pluckthun, A. (1991) Bio/Technology 9: 545-551]을 참고로 한다. 통상적인 박테리아 숙주는 이. 콜라이 (E. coli)이다.
배양물 내의 진핵세포에서의 발현은 또한, 결합 성분의 생산을 위한 옵션으로서 본 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 이용될 수 있다 [Chadd HE and Chamow SM (2001) Current Opinion in Biotechnology 12: 188-194; Andersen DC and Krummen L (2002) Current Opinion in Biotechnology 13: 117; Larrick JW and Thomas DW (2001) Current Opinion in Biotechnology 12:411-418]. 이종 폴리펩타이드의 발현을 위해서 본 기술분야에서 이용할 수 있는 포유동물 세포주에는 차이니즈 햄스터 난소 (Chinese hamster ovary; CHO) 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 (baby hamster) 신장 세포, NS0 마우스 흑색종 세포, YB2/0 랫트 골수종 세포, 인간 배아 신장 세포, 인간 배아 망막 세포 및 그 밖의 다수가 포함된다.
적절한 것으로서 프로모터 서열, 종결인자 서열, 폴리아데닐화 서열, 인핸서 서열, 마커 유전자 및 그 밖의 다른 서열을 포함하는 적절한 조절 서열을 함유하는 적합한 벡터가 선택되거나 구성될 수 있다. 벡터는 적절한 것으로서 플라스미드, 예를 들어, 파지미드 (phagemid), 또는 바이러스, 예를 들어, '파지일 수 있다 [Sambrook and Russell, Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 3rd edition, 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press]. 예를 들어, 핵산 구조물의 제조, 돌연변이유발, 서열결정, 세포 내로 DNA의 도입 및 유전자 발현, 및 단백질의 분석에 있어서 핵산을 조작하기 위한 다수의 공지된 기술 및 프로토콜은 아우수벨 (Ausubel) 등에 의해서 상세하게 기술되었다 [Ausubel 등. eds., Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 4th edition 1999].
본 발명의 추가의 관점은 본 발명에 기술된 바와 같은 핵산을 함유하는 숙주 세포를 제공한다. 이러한 숙주 세포는 시험관내에 존재할 수 있거나 배양물 중의 존재할 수 있다. 이러한 숙주 세포는 생체내에 존재할 수 있다. 숙주 세포의 생체내 존재는 본 발명의 결합 성분의 "인트라바디 (intra-bodies)" 또는 세포내 항체로서의 세포내 발현을 가능하게 할 수 있다. 인트라바디는 유전자 요법을 위해서 사용될 수 있다.
또한 추가의 관점은 본 발명의 핵산을 숙주 세포 내로 도입시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 상기의 도입은 어떤 이용가능한 기술이라도 사용할 수 있다. 진핵세포의 경우에, 적합한 기술은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란, 전기천공, 리포좀-매개된 형질감염 및 레트로바이러스 또는 다른 바이러스, 예를 들어, 백시니아, 또는 곤충세포의 경우에는 바큘로바이러스를 사용한 형질도입을 포함할 수 있다. 핵산을 숙주 세포, 특히 진핵세포에 도입시키는 것은 바이러스 또는 플라스미드 기본 시스템을 사용할 수 있다. 플라스미드 시스템은 에피좀성으로 유지될 수 있거나, 숙주 세포 내에 또는 인공 염색체 내로 혼입될 수 있다. 혼입은 단일 또는 다수의 유전자좌에서 하나 또는 그 이상의 카피 (copies)의 랜덤 또는 표적화된 통합에 의한 것일 수 있다. 박테리아 세포의 경우에, 적합한 기술은 염화칼슘 형질전환, 전기천공 및 박테리오파지를 사용한 형질감염을 포함할 수 있다.
상기의 도입에 이어서 예를 들어, 숙주 세포를 유전자의 발현을 위한 조건 하에서 배양함으로써, 핵산으로부터 발현을 야기시키거나 발현이 이루어지도록 할 수 있다. 발현된 생성물의 정제는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 방법에 의해서 달성될 수 있다.
본 발명의 핵산은 숙주 세포의 게놈 (예를 들어, 염색체) 내로 통합될 수 있다. 통합은 표준 기술에 따라서, 게놈과의 재조합을 촉진시키는 서열의 봉입에 의해서 촉진될 수 있다.
본 발명은 또한, 상기한 바와 같은 결합 성분 또는 폴리펩타이드를 발현시키기 위해서 발현 시스템에서 상기 언급한 바와 같은 구조물을 사용하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 곳에서 거론된 바와 같은 다양한 장애에 있어서 IL-6이 연루되는데 대한 증거가 있다. 따라서, 본 발명의 결합 성분은 IL-6과 연관된 장애의 진단 또는 치료 방법에서 사용될 수 있다. 이러한 장애는 예를 들어, 류마티스성 관절염, 골관절염, 악액질, 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD), 소아 특발성 관절염, 천식, 전신 홍반성 루프스, 염증성 장질환, 크론병 또는 아테롬성경화증과 같은 염증성 및/또는 자가면역 장애일 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 또한 종양 및/또는 암과 같은 장애를 치료하기 위해서 사용될 수도 있다. 더구나, 본 발명의 결합 성분은 본 발명에 열거된 질병 및 상태에 기인하거나 그와 연관된 통증을 치료 및/또는 예방하기 위해서 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 또한, 환자, 동물, 기관, 조직 또는 세포에서 다음의 질병을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 적어도 하나의 IL-6 관련된 질병을 진단 또는 치료하는 방법에서 사용될 수 있다: 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)을 포함하는 폐쇄성 기도 질환; 기관지, 알레르기, 내인성, 외인성 및 진에 천식과 같은 천식, 특히 만성 또는 난치성 천식 (예를 들어, 후기 천식 및 기도 과민성); 기관지염; 건락성 비염, 비후성 비염, 화농성 비염, 건조성 비염 및 약물성 비염을 포함하는 급성-, 알레르기성-, 위축성 비염 및 만성 비염; 크루프성 (croupous), 섬유소성 및 가막성 비염 및 선병성 비염을 포함하는 막성 비염; 신경성 비염 (고초열) 및 혈관운동성 비염, 부비동염, 특발성 폐섬유증 (IPF)을 포함하는 계절성 비염; 유육종증, 농부 폐 및 관련된 질환, 성인 호흡곤란 증후군, 과민성 폐렴, 폐섬유증 및 특발성 간질성 폐렴; 류마티스성 관절염, 소아 만성 관절염, 전신 발생형 소아 관절염, 혈청음성 척추관절병증 (강직성 척추염, 건선성 관절염 및 라이터병 (Reiter's disease), 베체트병 (Behcet's disease), 쇼그렌 (Siogren) 증후군 및 전신성 경화증, 통풍, 골다공증 및 골관절염; 건선, 아토피 피부염, 접촉 피부염 및 그 밖의 다른 습진성 피부질환, 알레르기 접촉 피부염, 지루성 피부염, 편평태선, 경피증, 천포창, 수포성 유천포창, 수포성 표피박리증, 담마진, 혈관부종, 맥관염, 홍반, 피부 호산구증가증, 포도막염, 원형탈모증, 알레르기성 결막염 및 춘계 결막염; (위장관) 위궤양, 셀리악병 (Coeliac disease), 직장염, 호산구성 위장염, 비만세포증, 염증성 장질환, 크론병, 궤양성 대장염, 항인지질 증후군)), 장으로부터 떨어져서 영향을 미치는 식품-관련된 알레르기, 예를 들어, 편두통, 비염 및 습진; 악액질, 다발성 경화증, 아테롬성경화증, 후천성 면역결핍 증후군 (AIDS), 사구체간질 증식성 사구체신염, 신증후군, 신장염, 사구체신염, 급성 신부전, 혈액투석, 요독증, 국재화되거나 원판상인 홍반성 루푸스, 전신성 홍반성 루푸스, 캐슬만병 (Castleman's Disease), 하시모토 (Hashimoto) 갑상선염, 중증근무력증, 타입 I 당뇨병, 타입 B 인슐린-저항성 당뇨병, 겸상 적혈구 빈혈, 홍채모양체염/포도막염/시신경염, 신장 증후군, 호산구성 근막염, 고 IgE 증후군, 전신성 맥관염/베게너 (wegener) 육아종증, 고환염/정관복원수술, 나종성라, 알콜 유도된 간염, 세자리 (sezary) 증후군 및 특발성 혈소판감소성 자반병; 수술-후 유착, 신장증, 전신성 염증반응 증후군, 패혈증 증후군, 그람 양성 패혈증, 그람 음성 패혈증, 배양 음성 패혈증, 진균성 패혈증, 호중구감소성 발열, 급성 췌장염, 요로성 패혈증, 그레이브스 (Graves)병, 레이노드 (Raynaud)병, 항체-매개된 세포독성, 타입 III 과민성, POEMS 증후군 (다발신경병증, 장기종대, 내분비병증, 모노클로날 항체 감마글로불린장애, 및 피부 변화 증후군), 혼합된 결합조직 질환, 특발성 애디슨 (Addison)병, 진성 당뇨병, 만성 활동성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 백반증, MI-후 (심장절개) 증후군, 타입 IV 과민성, 세포내 유기체에 기인한 육아종, 윌슨 (Wilson)병, 혈색소증, 알파-I-항트립신 결핍, 당뇨병성 망막증, 하시모토 갑상선염, 시상하부-뇌하수체-부신 축 평가, 갑상선염, 뇌척수염, 신생아 만성 폐질환, 가족성 식혈세포성 림프조직구증식증, 탈모증, 방사선요법 (예를 들어, 무력증, 빈혈, 악액질 등을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다), 만성 살리실레이트 중독, 수면 무호흡증, 비만, 심부전, 및 수막염구균혈증; 예를 들어, 신장, 심장, 간, 폐, 췌장, 골수, 뼈, 소장, 피부, 연골 및 각막 이식 후의 급성 및 만성 증상; 및 만성 이식편대 숙주 질환; 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 백혈병, T-세포, B-세포, 또는 FAB ALL, 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 모양세포성 백혈병, 골수이형성 증후군 (MDS), 모든 림프종, 호지킨 (Hodgkin)병, 비-호지킨 림프종, 모든 악성 림프종, 버킷 (Burkitt) 림프종, 다발성 골수종, 카포시 (Kaposi) 육종, 신세포암, 결장직장암, 전립선암, 췌장암, 비인두암, 악성 조직구증, 방종양성 증후군/악성종양의 고칼슘혈증, 고체 종양, 선암, 육종, 악성 흑색종, 혈관종, 전이성 질환, 암 관련된 골흡수, 암 관련된 골 통증; 암 전이의 억제; 암 악액질의 개선; 낭포성 섬유증, 졸중, 심장, 뇌, 말초 사지 및 그 밖의 다른 기관에서의 재관류 손상; 화상, 외상/출혈, 이온화 방사선 노출, 만성 피부 궤양; 생식기관 질환 (예를 들어, 배란, 월경 및 착상의 장애, 출산예정일-전 출산, 임신중독증, 자궁내막증); 급성 또는 만성 박테리아 감염, 박테리아, 바이러스 및 진균 감염을 포함하는 급성 및 만성 기생충 또는 전염성 과정, HIV 감염/HIV 신경병증, 수막염, 간염 (A, B 또는 C, 또는 다른 바이러스성 간염 등), 감염성 관절염, 복막염, 폐렴, 후두개염, 이. 콜라이 0157:h7, 용혈성 요독 증후군/혈전성 혈소판감소성 자반병, 말라리아, 뎅기 출혈열, 리슈만편모충증 (leishmaniasis), 나병, 독성 쇼크 증후군, 연쇄상구균 근염, 가스 괴저병, 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 아비움 인트라셀룰라레 (Mycobacterium avium intracellulare), 폐포자충 폐렴 (Pneumocystis carinii pneumonia), 골반 염증성 질환, 고환염/부고환염, 레지오넬라 (legionella), 라임병 (Lyme disease), 인플루엔자 A, 엡스타인-바르 (epstein-barr) 바이러스, 바이탈-연관된 헤마파고사이틱 증후군 (vital-associated hemaphagocytic syndrome), 바이러스성 뇌염/무균성 수막염, 우울증 등. 따라서, 본 발명은 필요한 환자에게 유효량의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 결합 성분을 단독으로, 또는 본 기술분야에서 공지되거나 본 발명에 기술된 또 다른 적절한 약제와의 병용 치료학적 레지멘으로 투여하는 것을 포함하여, IL-6 관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
하나의 구체예에서, IL-6 관련된 장애는 본 발명에서는 또한 주요 우울장애로 불리는 우울증이다. 주요 우울장애 (또하 임상 우울증, 주요 우울증, 단극성 우울증, 또는 단극성 장애로 공지되거나, 본 발명에서 언급됨)는 낮은 자긍심 및 저조한 기분, 및 통상적으로 즐거운 활동에 대한 관심 또는 즐거움의 상실을 모두 포함하는 것을 특징으로 하는 정신장애이다. 용어 "주요 우울장애"는 이 증상군을 정신장애의 진단 및 통계 매뉴얼 (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-III)) 분류의 1980년 버전에서의 정신장애로 지정하기 위해서 미국심리학회 (American Psychiatric Association)에 의해서 선택되었으며, 그 이후로 광범하게 사용되었다. 일반적인 용어인 우울증은 종종 상기의 장애를 나타내기 위해서 사용되지만, 이것은 또한 심리학적 우울증의 다른 타입을 언급하기 위해서 사용될 수도 있기 때문에, 더 정확한 용어가 상기 장애에 대해서 임상 및 연구 용도로 바람직하다. 주요 우울증은 그 사람의 가족, 일 또는 학교생활, 수면 및 식습관 및 일반적 건강에 불리한 영향을 미치는 무력화 상태이다.
우울증은 전신적 염증을 수반하는 질병과 고도로 동반성이다. 전신적 염증은 염증의 높아진 혈장 바이오-마커 (bio-marker)로 반영되는 것으로서 다수의 우울증 환자에게서 관찰된다. 추가로, 활성화된 사이토킨 시그날링 경로는 우울증 환자의 혈액 및 CSF에서 검출될 수 있다. 더구나, 사이토킨 (IFN-a, IL-2)은 정신과적 질병의 병력이 없는 의학적으로 병에 걸린 환자에게서 주요 우울장애의 증상을 유도할 수 있다. 따라서, 본 발명은 필요한 환자에게 유효량의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 결합 성분을 단독으로, 또는 본 발명에 기술되거나, 본 기술분야에서 공지된 또 다른 적절한 의약, 예를 들어, 세르트랄린, 에스시탈로프램, 플루옥세틴, 파록세틴 및 시탈로프램과 같은 선택적 세로토닌 재흡수 억제제 (SSRIs)와 같은 항우울제와 함께 병용 치료학적 레지멘으로 투여하는 것을 포함하여 우울증을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 결합 성분은 또한 진통제 특성을 갖는다. 이에 의해서, 이들은 본 발명에 열거된 질병과 연관된 통증뿐만 아니라 창상, 의학적 절차, 수술, 손상, 외상 등으로부터 야기하거나 그와 연관된 만성 및 급성 통증을 치료 및/또는 예방하기 위한 진통제로서 적절하다. 예를 들어, 결합 성분은 진통제, 진통제 수술-후 진통제로서 사용될 수 있다. 이들은 또한 강직성 척추염, 염증성 요통, 신경병성 통증, 통증성 신경종, 섬유근육통, 두통, 예를 들어, 만성 두통 및 편두통, 췌장염, 척수신경 압박 증후군 및 비-악성 골격 통증, 염증성 골관절염 통증, 류마티스성 관절염 통증, 암 통증, 예를 들어, 골암 통증으로부터 야기되거나 그와 연관된 통증을 치료 또는 예방하기 위하여 사용될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 또한, COPD, 경피증, 전신성 홍반성 루푸스, POEMs뿐만 아니라 특발성 폐고혈압과 같은 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 몇 가지 질병과 연관된 폐고혈압을 치료하기 위해서 사용될 수 있다. 상승된 IL-6 레벨은 다수의 이들 상태와 연관된 폐고혈압이 있는 환자에게서 보고되었다 [Savale, L. 등 Respir. Res. (2009) 10, 6 및 여기에서의 참고문헌; Steiner, M.K. 등 Circ. Res. (2009) 104(2) 236-244 및 여기에서의 참고문헌]. 저산소증에 노출된 IL-6-결핍성 마우스는 저산소증에 노출된 WT 마우스에 비해서 감소된 우심실 수축기 혈압 및 감소된 우심실 비대를 나타낸다 [Savale, L. 등 Respir. Res. (2009) 10, 6 및 여기에서의 참고문헌]. 또한, IL-6-과발현성 유전자이식 마우스는 비-유전자이식 대조군과 비교하는 경우에, 저산소성 조건 하에서 증가된 우심실 비대 및 증가된 우심실 수축기 혈압을 나타내며 [Steiner, M.K. 등 Circ. Res. (2009) 104(2) 236-244 and references therein], 외인성으로 투여된 IL-6은 만성 저산소증에 노출된 마우스에서 폐고혈압의 발생을 악화시킨다 [Golembeski, S.M. 등 Chest (2005) 128(6 Suppl) 572S-573S].
또한, 안정한 COPD를 갖는 환자는 건강한 대조군에 비해서 IL-6의 증가된 혈청 레벨을 갖는 것으로 관찰되었다 [Yanbaeva, D.G. 등 BMC Med Genet (2009) 10, 23; Savale, L. 등 Am. J. Respir. Crit Care Med. (2009) 179(7), 566-571; Eickhoff, P. 등 Am. J.Respir. Crit Care Med. (2008) 178(12) 1211-1218]. 증가된 IL-6 레벨은 COPD 환자에게서 손상된 간 기능과 연관되었다 [R.E. 등 Chest (2008) 133(1) 19-25; Thorleifesson , S.J. 등 Respir.Med. (2009) 103(10) 1548-1553]. 몇 가지 연구는 또한, 악화의 해소시에 측정된 IL-6 레벨 또는 안정한 COPD 환자에게서 측정된 IL-6 레벨과 비교하는 경우에 COPD 악화의 발현시에 객담 및/또는 혈청에서 IL-6의 증가된 레벨을 보고하였다 [Valipour, A. 등 Clinical Science (2008) 115(7), 225-232; Groenewegen, K.H. 등 Respir. Med. (2007) 101(11) 2409-2415; Perera, W.R. 등 Eur. Respir. J. (2007) 29(3), 527-534]. 증가된 IL-6 레벨은 또한 더 빈번한 악화제 (exacerbators)와 연관되었다 [Bhowmik, A. 등 Thorax (2000) 55(2) 114-120]. 안티-IL-6 항체에 의한 마우스 처리 또는 IL-6 결핍성 마우스는 특정의 동물 모델, 예를 들어, 오존 유도된 폐 염증 및 블레오마이신 유도된 폐 염증 및 섬유증에서 감소된 폐 염증을 나타낸다 [Saito, F. 등 Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. (2008) 38(5) 566-571; Lang, J.E. 등 Am. J.Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. (2008) 294(5) L1013-L1020; Johnston, R.A. 등 Am. J.Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. (2005) 288(2) L390-L397]. 더 큰 IL-6 레벨은 또한, COPD의 특정한 동반-질환, 예를 들어, 폐고혈압과 연관되었다 [Chaouat, A. 등 Chest (2009) 136(3) 678-687; Eddahibi, S. 등 Proceedings of the American Thoracic Society (2006) 3(6), 475-476].
특정의 다른 장애에서의 IL-6의 연루에 대한 증거는 잘 이해되고 있다. 본 발명 및 PCT 공개 제WO 2008/065378호에 제시된 데이터는 또한, 본 발명의 결합 성분이 장애의 예방적 치료 및 중증도의 감소를 포함한 이러한 장애의 치료를 위해서 사용될 수 있음을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 상기 장애의 적어도 하나의 증상의 중등도가 감소되도록, 필요한 환자에게 유효량의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 결합 성분을 단독으로, 또는 본 기술분야에서 공지되거나 본 발명에 기술된 또 다른 적절한 의약과의 병용 치료학적 레지멘으로 투여하는 것을 포함하여, 본 발명에서 언급된 모든 장애의 적어도 하나의 증상을 치료하거나 중등도를 감소시키는 방법을 제공한다.
따라서, 본 발명의 결합 성분은 IL-6 및/또는 IL-6Ra 발현 및/또는 활성, 특히 이상 발현/활성을 수반하는 질병 또는 장애의 치료에 있어서 치료학적 약제로서 유용하다. 치료의 방법은 유효량의 본 발명의 결합 성분을 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기에서 IL-6 및/또는 IL-6Ra의 이상 발현 및/또는 활성은 감소된다. 치료의 방법은 (i) 이상 IL-6:IL-6Ra 레벨 또는 활성을 나타내는 환자를, 예를 들어, 상술한 진단방법을 사용하여 확인하고, (ii) 상기 환자에게 유효량의 본 발명의 결합 성분을 투여하는 것을 포함할 수 있으며, 여기에서는 IL-6Ra 및/또는 IL-6의 이상 발현 및/또는 활성이 감소한다. 본 발명에 따르는 유효량은 질병 또는 장애를 반드시 치유하지는 않지만 치료할 특정의 질병 또는 장애의 적어도 하나의 증상의 중증도를 감소 또는 약화시키도록 IL-6 및/또는 IL-6Ra의 이상 발현 및/또는 활성을 감소시키는 양이다.
본 발명은 또한, 상기한 IL-6의 적어도 하나의 효과가 상쇄되도록 유효량의 하나 또는 그 이상의 본 발명의 결합 성분과 접촉시키거나, 그를 투여하는 것을 포함하여, IL-6의 적어도 하나의 효과를 상쇄시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에 의해서 상쇄될 수 있는 IL-6의 효과에는 gp130에 대한 IL-6 결합, 및 이러한 결합의 결과로서 일어나는 하류 효과가 포함된다.
따라서, 본 발명의 추가의 관점은 제공된 바와 같은 결합 성분의 투여를 포함하는 치료 방법, 이러한 결합 성분을 포함하는 약제학적 조성물, 및 투여를 위한 의약의 제조에 있어서의, 예를 들어, 결합 성분과 약제학적으로 허용되는 부형제를 제제화하는 것을 포함하여 의약 또는 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 있어서의 이러한 결합 성분의 용도를 제공한다. 약제학적으로 허용되는 부형제는 이차 반응을 유발함이 없이 약제학적 조성물 내로 도입시키며, 예를 들어, 활성 화합물(들)의 투여를 용이하게 하거나, 체내에서의 그의 수명 및/또는 그의 효능을 증가시키거나, 용액 내에서의 그의 용해도를 증가시키거나, 또는 추가로 그의 보존을 개선시키도록 하는 화합물 또는 화합물의 조합물일 수 있다. 이들 약제학적으로 허용되는 비히클은 잘 알려져 있으며, 선택된 활성 화합물(들)의 성질 및 투여의 모드의 상관관계에 따라 본 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 조정될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 통상적으로, 결합 성분 이외에도 적어도 하나의 성분을 포함할 수 있는 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따르며, 본 발명에 따라서 사용하기 위한 약제학적 조성물은 활성 성분 이외에도 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려져 있는 그 밖의 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 비-독성이어야 하며, 활성 성분의 효능을 저해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 이하에 거론되는 바와 같은 경구, 흡입, 기관내, 국소, 방광내 또는 주사일 수 있는 투여의 경로에 따라 좌우될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 항체를 포함하는 멸균된 안정한 약제학적 제제에 관한 것이다.
본 발명은 본 발명의 항체를 안정화시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로, 본 발명의 항체를 포함하는 살균된 안정한 제제를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 기술된 본 발명의 항체의 모든 제제는 총체적으로 "본 발명의 제제", "본 발명의 액체 제제", "본 발명의 고농도의 안정한 액체 제제", "본 발명의 항체 액체 제제", "본 발명의 재구성된 액체 제제" 또는 "본 발명의 항체 제제"로 불린다.
본 발명에서 사용된 것으로서 문구 "약제학적으로 허용되는"은 연방정부 또는 주정부의 규제기관에 의해서 승인되거나, 미국 약전, 유럽 약전 또는 그 밖의 다른 일반적으로 인정되는 약전에서 동물, 더욱 특히는 인간에게서의 사용을 위해서 열거된 것을 의미한다.
본 발명의 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함하는 액체 제제의 맥락에서 본 발명에서 사용된 용어 "안정성" 및 "안정한"은 주어진 생산, 제조, 수송 및 보관 조건 하에서 제제 내의 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 응집, 분해 또는 단편화에 대한 저항성을 나타낸다. 본 발명의 "안정한" 제제는 주어진 생산, 제조, 수송 및 보관 조건 하에서 생물학적 활성을 유지한다. 상기 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 안정성은 기준 제제와 비교하여 HPSEC, 역상 크로마토그래피, 정적 광산란 (SLS), 푸리에 (Fourier) 변환 적외선 분광법 (FTIR), 원편광 이색성 (CD), 요소 언폴딩 (unfolding) 기술, 내인성 트립토판 형광, 시차주사열량법 및/또는 ANS 결합기술에 의해서 측정된 것으로서 응집, 분해 또는 단편화의 정도에 의해서 평가될 수 있다. 예를 들어, 기준 제제는 히스티딘, pH 6.0-6.5 내의 10 ㎎/㎖의 항체 (그의 항체 단편을 포함), 및 임의로 하나 또는 그 이상의 부형제로 구성되며, HPSEC에 의해서 통상적으로 단일의 모노머 피크 (예를 들어, ≥ 97% 면적)를 제공하는, -70℃에서 동결된 기준 표준물일 수 있다. 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함하는 제제의 전반적인 안정성은 예를 들어, 분리된 항원 분자를 사용하는 방사선면역측정법 및 ELISA를 포함하는 다양한 면역학적 시험방법에 의해서 평가될 수 있다.
본 발명에서 사용된 것으로서 문구 "응집의 낮은 레벨 내지 검출불가능한 레벨"은 고성능 크기 배제 크로마토그래피 (HPSEC) 또는 정적 광산란 (SLS) 기술에 의해서 측정된 것으로서 단백질의 중량을 기준으로 약 5% 이하, 약 4% 이하, 약 3% 이하, 약 2% 이하, 약 1% 이하, 및 약 0.5% 이하의 응집을 함유하는 샘플을 나타낸다.
본 발명에서 사용된 것으로서 문구 "단편화의 낮은 레벨 내지 검출불가능한 레벨"은 예를 들어, 비-분해된 항체 또는 비-분해된 그의 단편을 나타내는 것으로서 HPSEC 또는 역상 크로마토그래피에 의해서 결정된 바와 같은 단일 파크로, 또는 환원형 모세관 겔 전기영동 (rCGE)에 의해서 2 개의 피크 (예를 들어, 중쇄 및 경쇄) (또는 존재하는 서브유니트만큼 많은 피크)로 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 98% 또는 약 99% 이상의 총단백질을 함유하며, 각각에서 총단백질의 약 5% 이상, 약 4% 이상, 약 3% 이상, 약 2% 이상, 약 1% 이상, 또는 약 0.5% 이상을 갖는 다른 단일 피크를 함유하지 않는 샘플을 나타낸다. 본 발명에서 사용된 것으로서 용어 "환원형 모세관 겔 전기영동"은 항체에서 디설파이드 결합을 환원시키는데 충분한 환원조건 하에서의 모세관 겔 전기영동을 나타낸다.
본 발명은 본 발명의 항체의 안정한 고농도 제제에 관한 것이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 액체 제제이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 동결건조 제제이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 제제는 재구성된 액체 제제이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 안정한 액체 제제이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 액체 제제는 수성 제제이다. 특정한 구체예에서, 본 발명의 액체 제제는 수성 담체가 증류수인 수성 제제이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 멸균된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 균질하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 등장성이다.
본 발명은 관심이 있는 단일 항체 (그의 항체 단편을 포함), 예를 들어, IL-6에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안정한 액체 제제를 포함한다. 본 발명은 또한, 관심이 있는 2 개 또는 그 이상의 항체 (그의 항체 단편을 포함), 예를 들어, IL-6 폴리펩타이드(들)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 안정한 액체 제제를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1 mg/ml, 적어도 약 5 mg/ml, 적어도 약 10 mg/ml, 적어도 약 20 mg/ml, 적어도 약 30 mg/ml, 적어도 약 40 mg/ml, 적어도 약 50 mg/ml, 적어도 약 60 mg/ml, 적어도 약 70 mg/ml, 적어도 약 80 mg/ml, 적어도 약 90 mg/ml, 적어도 약 100 mg/ml, 적어도 약 110 mg/ml, 적어도 약 120 mg/ml, 적어도 약 130 mg/ml, 적어도 약 140 mg/ml, 적어도 약 150 mg/ml, 적어도 약 160 mg/ml, 적어도 약 170 mg/ml, 적어도 약 180 mg/ml, 적어도 약 190 mg/ml, 적어도 약 200 mg/ml, 적어도 약 250 mg/ml, 또는 적어도 약 300 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 100 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 125 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 130 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 150 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 90 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mg/ml 내지 약 25 mg/ml, 약 1 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 75 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 100 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 125 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 150 mg/ml 내지 약 200 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 75 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 100 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 125 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 125 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 125 mg/ml, 약 75 mg/ml 내지 약 125 mg/ml, 약 100 mg/ml 내지 약 125 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 75 mg/ml 내지 약 100 mg/ml, 약 25 mg/ml 내지 약 75 mg/ml, 약 50 mg/ml 내지 약 75 mg/ml, 또는 약 25 mg/ml 내지 약 50 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 90 mg/ml 내지 약 110 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 100 mg/ml 내지 약 210 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 약 20 mg/ml, 약 30 mg/ml, 약 40 mg/ml, 약 50 mg/ml, 약 60 mg/ml, 약 70 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 110 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 130 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 160 mg/ml, 약 170 mg/ml, 약 180 mg/ml, 약 190 mg/ml, 약 200 mg/ml, 약 250 mg/ml, 또는 약 300 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 100 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 125 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 130 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 150 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 200 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1 mg/ml, 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 20 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 60 mg/ml, 적어도 70 mg/ml, 적어도 80 mg/ml, 적어도 90 mg/ml, 적어도 100 mg/ml, 적어도 110 mg/ml, 적어도 120 mg/ml, 적어도 130 mg/ml, 적어도 140 mg/ml, 적어도 150 mg/ml, 적어도 160 mg/ml, 적어도 170 mg/ml, 적어도 180 mg/ml, 적어도 190 mg/ml, 적어도 200 mg/ml, 적어도 250 mg/ml, 또는 적어도 300 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 100 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 125 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 150 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 175 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 200 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mg/ml 내지 25 mg/ml, 1 mg/ml 내지 200 mg/ml, 25 mg/ml 내지 200 mg/ml, 50 mg/ml 내지 200 mg/ml, 75 mg/ml 내지 200 mg/ml, 100 mg/ml 내지 200 mg/ml, 125 mg/ml 내지 200 mg/ml, 150 mg/ml 내지 200 mg/ml, 25 mg/ml 내지 150 mg/ml, 50 mg/ml 내지 150 mg/ml, 75 mg/ml 내지 150 mg/ml, 100 mg/ml 내지 150 mg/ml, 125 mg/ml 내지 150 mg/ml, 25 mg/ml 내지 125 mg/ml, 50 mg/ml 내지 125 mg/ml, 75 mg/ml 내지 125 mg/ml, 100 mg/ml 내지 125 mg/ml, 25 mg/ml 내지 100 mg/ml, 50 mg/ml 내지 100 mg/ml, 75 mg/ml 내지 100 mg/ml, 25 mg/ml 내지 75 mg/ml, 50 mg/ml 내지 75 mg/ml, 또는 25 mg/ml 내지 50 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 90 mg/ml 내지 110 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 100 mg/ml 내지 210 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 110 mg/ml, 120 mg/ml, 130 mg/ml, 140 mg/ml, 150 mg/ml, 160 mg/ml, 170 mg/ml, 180 mg/ml, 190 mg/ml, 200 mg/ml, 250 mg/ml, 또는 300 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 100 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 125 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 150 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 175 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 200 mg/ml의 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
임의로, 본 발명의 제형은 통상적인 부형제 및/또는 첨가제 예컨대 완충제, 당류, 염 및 표면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 임의로 또는 대안으로, 본 발명의 제형은 통상적인 부형제 및/또는 첨가제, 예컨대, 비제한적으로, 가용화제, 희석제, 결합제, 안정화제, 염, 친지질성 용매, 아미노산, 킬레이트화제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
어떤 구체예에서, 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 다른 구체예에서, 당류 부형제는 트레할로오스, 수크로오스, 만니톨, 말토오스 및 라피노오스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 표면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 80, 및 Pluronic F68로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 구체예에서, 염은 NaCl, KCl, MgCl2, 및 CaCl2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
임의로, 본 발명의 제형는 다른 통상적인 보조 성분, 예컨대, 비제한적으로, 적합한 부형제, 폴리올, 가용화제, 희석제, 결합제, 안정화제, 친지질성 용매, 킬레이트화제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 제형은 개선된 pH 조절을 제공하기 위해 pH 조절제 또는 완충제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 약 3.0 내지 약 9.0, 약 4.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 8.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 6.5, 약 5.5 내지 약 8.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 또는 약 5.5 내지 약 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 약 3.0, 약 3.5, 약 4.0, 약 4.5, 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 약 6.8, 약 6.9, 약 7.0, 약 7.5, 약 8.0, 약 8.5, 또는 약 9.0를 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 약 6.0을 갖는다.
본 발명의 제형은 개선된 pH 조절을 제공하기 위해 pH 조절제 또는 완충제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 3.0 내지 9.0, 4.0 내지 8.0, 5.0 내지 8.0, 5.0 내지 7.0, 5.0 내지 6.5, 5.5 내지 8.0, 5.5 내지 7.0, 또는 5.5 내지 6.5를 갖는다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 또는 9.0을 갖는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 pH 6.0을 갖는다. 당업자는, 제형의 pH가 제형에 사용될 특정 항체 (이의 항체 단편 포함)의 등전점(isoelectric point)과 일반적으로 같지 않아야 한다는 것을 이해하고 있다.
전형적으로, 완충제는 유기 또는 무기 산 또는 염기로부터 제조된 염이다. 대표적인 완충제는 비제한적으로 하기를 포함한다: 유기 산 염, 예컨대 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 카본산, 타르타르산, 석신산, 아세트산, 또는 프탈산의 염; 트리스(Tris), 트로메타민 히드로클로라이드, 또는 포스페이트 버퍼(buffer). 또한, 아미노산 성분은 또한 완충력으로 기능할 수 있다. 완충제로서 본 발명의 제형에 이용될 수 있는 대표적인 아미노산 성분은 비제한적으로, 글리신 및 히스티딘을 포함한다. 어떤 구체예에서, 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 완충제는 히스티딘이다. 또 다른 특정 구체예에서, 완충제는 시트레이트이다. 완충제의 순도는 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 적어도 99.5%이어야 한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 히스티딘 문맥에서의 용어 "순도"는 예를 들어 하기에 기재된 바와 같이, 본 기술분야에 이해되는 바와 같이 히스티딘의 화학 순도를 의미한다: The Merck Index, 13th ed., O'Neil 등. ed. (Merck & Co., 2001).
완충제는 원하는 이온 강도 및 필요한 완충력에 따라, 농도 약 1 mM 내지 약 200 mM 또는 임의 범위 또는 값으로 전형적으로 사용된다. 비경구 제형에 사용되는 종래의 완충제의 통상적인 농도는 하기에서 발견될 수 있다: Pharmaceutical Dosage Form: Parenteral Medications, Volume 1, 2nd Edition, Chapter 5, p. 194, De Luca and Boylan, "Formulation of Small Volume Parenterals", Table 5: Commonly used additives in Parenteral Products. 하나의 구체예에서, 완충제는 그 농도가 약 1 mM, 또는 약 5 mM, 또는 약 10 mM, 또는 약 15 mM, 또는 약 20 mM, 또는 약 25 mM, 또는 약 30 mM, 또는 약 35 mM, 또는 약 40 mM, 또는 약 45 mM, 또는 약 50 mM, 또는 약 60 mM, 또는 약 70 mM, 또는 약 80 mM, 또는 약 90 mM, 또는 약 100 mM이다. 하나의 구체예에서, 완충제는 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 특정 구체예에서, 완충제는 그 농도가 약 5 mM 내지 약 50 mM이다. 또 다른 특정 구체예에서, 완충제는 그 농도가 5 mM 내지 20 mM이다.
추가 구체예에서, 완충제는 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 하나의 구체예에서, 완충제는 그 농도가 1 mM, 또는 5 mM, 또는 10 mM, 또는 15 mM, 또는 20 mM, 또는 25 mM, 또는 30 mM, 또는 35 mM, 또는 40 mM, 또는 45 mM, 또는 50 mM, 또는 60 mM, 또는 70 mM, 또는 80 mM, 또는 90 mM, 또는 100 mM이다. 특정 구체예에서, 완충제는 그 농도가 5 mM 및 50 mM이다. 또 다른 특정 구체예에서, 완충제는 그 농도가 5 mM 내지 20 mM이다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 완충제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 상기 완충제는 히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 글리신, 및 아세테이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 완충제로서 히스티딘을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1 mM, 적어도 약 5 mM, 적어도 약 10 mM, 적어도 약 20 mM, 적어도 약 30 mM, 적어도 약 40 mM, 적어도 약 50 mM, 적어도 약 75 mM, 적어도 약 100 mM, 적어도 약 150 mM, 또는 적어도 약 200 mM 히스티딘을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1 mM 내지 약 200 mM, 약 1 mM 내지 약 150 mM, 약 1 mM 내지 약 100 mM, 약 1 mM 내지 약 75 mM, 약 10 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 150 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 10 mM 내지 약 75 mM, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 40 mM, 약 10 mM 내지 약 30 mM, 약 20 mM 내지 약 75 mM, 약 20 mM 내지 약 50 mM, 약 20 mM 내지 약 40 mM, 또는 약 20 mM 내지 약 30 mM 히스티딘을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명은 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 60 mM, 약 70 mM, 약 80 mM, 약 90 mM, 약 100 mM, 약 150 mM, 또는 약 200 mM 히스티딘을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM 히스티딘을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1 mM, 적어도 5 mM, 적어도 10 mM, 적어도 20 mM, 적어도 30 mM, 적어도 40 mM, 적어도 50 mM, 적어도 75 mM, 적어도 100 mM, 적어도 150 mM, 또는 적어도 200 mM 히스티딘을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 1 mM 내지 200 mM, 1 mM 내지 150 mM, 1 mM 내지 100 mM, 1 mM 및 75 mM, 10 mM 내지 200 mM, 10 mM 내지 150 mM, 10 mM 내지 100 mM, 10 mM 및 75 mM, 10 mM 및 50 mM, 10 mM 및 40 mM, 10 mM 내지 30 mM, 20 mM 및 75 mM, 20 mM 및 50 mM, 20 mM 및 40 mM, 또는 20 mM 내지 30 mM 히스티딘을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명은 1 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, 100 mM, 150 mM, 또는 200 mM 히스티딘을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM 히스티딘을 포함한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 카보히드레이트 부형제를 포함한다. 카보히드레이트 부형제는, 예를 들어, 점도향상제, 안정화제, 부피확장제, 가용화제, 및/또는 등으로서 작용할 수 있다. 카보히드레이트 부형제는 통상 약 1% 내지 약 99중량% 또는 부피%로 존재한다. 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 20%로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 15%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 5%, 또는 약 1% 내지 약 20%, 또는 약 5% 내지 약 15%, 또는 약 8% 내지 약 10%, 또는 약 10% 내지 약 15%, 또는 약 15% 내지 약 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 20%, 또는 5% 내지 15%, 또는 8% 내지 10%, 또는 10% 내지 15%, 또는 15% 내지 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 0.1% 내지 약 5%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 5% 내지 약 10%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 약 15% 내지 약 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 1%, 또는 1.5%, 또는 2%, 또는 2.5%, 또는 3%, 또는 4%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20%로 존재한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 카보히드레이트 부형제를 포함한다. 카보히드레이트 부형제는, 예를 들어, 점도향상제, 안정화제, 부피확장제, 가용화제, 및/또는 등으로서 작용할 수 있다. 카보히드레이트 부형제는 일반적으로 1% 내지 99중량% 또는 부피%로 존재한다. 하나의 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 20%로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 15%로 존재한다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 5%, 또는 1% 내지 20%, 또는 5% 내지 15%, 또는 8% 내지 10%, 또는 10% 내지 15%, 또는 15% 내지 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 20%, 또는 5% 내지 15%, 또는 8% 내지 10%, 또는 10% 내지 15%, 또는 15% 내지 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 0.1% 내지 5%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 5% 내지 10%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 15% 내지 20%로 존재한다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 1%, 또는 1.5%, 또는 2%, 또는 2.5%, 또는 3%, 또는 4%, 또는 5%, 또는 10%, 또는 15%, 또는 20%로 존재한다.
본 발명의 제형에 사용하기에 적합한 카보히드레이트 부형제는 하기를 포함한다" 예를 들어, 단당류 예컨대 프룩토오스, 말토오스, 갈락토오스, 글루코오스, D-만노오스, 소르보오스 등; 이당류, 예컨대 락토오스, 수크로오스, 트레할로오스, 셀로비오스 등; 다당류, 예컨대 라피노오스, 말레지토오스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등; 및 알디톨, 예컨대 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨 소르비톨 (글루시톨) 등. 하나의 구체예에서, 본 발명에 사용하기 위한 카보히드레이트 부형제는 수크로오스, 트레할로오스, 락토오스, 만니톨, 및 라피노오스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 트레할로오스이다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 만니톨이다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 수크로오스이다. 또 다른 특정 구체예에서, 카보히드레이트 부형제는 라피노오스이다. 카보히드레이트 부형제의 순도는 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 또는 적어도 99.5%이어야 한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 4%, 적어도 약 8%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 트레할로오스를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1% 내지 약 40%, 약 1% 내지 약 30%, 약 1% 내지 약 20%, 약 2% 내지 약 40%, 약 2% 내지 약 30%, 약 2% 내지 약 20%, 약 4% 내지 약 40%, 약 4% 내지 약 30%, 또는 약 4% 내지 약 20% 트레할로오스를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 1%, 약 2%, 약 4%, 약 8%, 약 20%, 약 30%, 또는 약 40% 트레할로오스를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 4% 트레할로오스를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 1%, 적어도 2%, 적어도 4%, 적어도 8%, 적어도 20%, 적어도 30%, 또는 적어도 40% 트레할로오스를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 1% 내지 40%, 1% 내지 30%, 1% 내지 20%, 2% 내지 40%, 2% 내지 30%, 2% 내지 20%, 4% 내지 40%, 4% 내지 30%, 또는 4% 내지 20% 트레할로오스를 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 1%, 2%, 4%, 8%, 20%, 30%, 또는 40% 트레할로오스를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 부형제를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 당(sugar), 염, 표면활성제, 아미노산, 폴리올, 킬레이트화제, 에멀젼화제 및 보존제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 부형제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 염을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 NaCl, KCl, CaCl2, 및 MgCl2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 염을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 NaCl을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 10 mM, 적어도 약 25 mM, 적어도 약 50 mM, 적어도 약 75 mM, 적어도 약 80 mM, 적어도 약 100 mM, 적어도 약 125 mM, 적어도 약 150 mM, 적어도 약 175 mM이다. 적어도 약 200 mM, 또는 적어도 약 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 약 10 mM 내지 약 300 mM, 약 10 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 175 mM, 약 10 mM 내지 약 150 mM, 약 25 mM 내지 약 300 mM, 약 25 mM 내지 약 200 mM, 약 25 mM 내지 약 175 mM, 약 25 mM 내지 약 150 mM, 약 50 mM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 200 mM, 약 50 mM 내지 약 175 mM, 약 50 mM 내지 약 150 mM, 약 75 mM 내지 약 300 mM, 약 75 mM 내지 약 200 mM, 약 75 mM 내지 약 175 mM, 약 75 mM 내지 약 150 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 175 mM, 또는 약 100 mM 내지 약 150 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 10 mM을 포함한다. 약 25 mM, 약 50 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 100 mM, 약 125 mM, 약 150 mM, 약 175 mM, 약 200 mM, 또는 약 300 mM 염화나트륨을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 10 mM, 적어도 25 mM, 적어도 50 mM, 적어도 75 mM, 적어도 80 mM, 적어도 100 mM, 적어도 125 mM, 적어도 150 mM, 적어도 175 mM이다. 적어도 200 mM, 또는 적어도 300 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 10 mM 내지 300 mM, 10 mM 내지 200 mM, 10 mM 내지 175 mM, 10 mM 내지 150 mM, 25 mM 내지 300 mM, 25 mM 내지 200 mM, 25 mM 내지 175 mM, 25 mM 내지 150 mM, 50 mM 내지 300 mM, 50 mM 내지 200 mM, 50 mM 내지 175 mM, 50 mM 내지 150 mM, 75 mM 내지 300 mM, 75 mM 내지 200 mM, 75 mM 내지 175 mM, 75 mM 내지 150 mM, 100 mM 내지 300 mM, 100 mM 내지 200 mM, 100 mM 내지 175 mM, 또는 100 mM 내지 150 mM 염화나트륨을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 10 mM이다. 25 mM, 50 mM, 75 mM, 80 mM, 100 mM, 125 mM, 150 mM, 175 mM, 200 mM, 또는 300 mM 염화나트륨을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 아미노산을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 아미노산 염을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 리신, 아르기닌, 및 히스티딘으로 이루어진 아미노산을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 25 mM의 아미노산, 적어도 약 50 mM의 아미노산, 적어도 약 100 mM의 아미노산, 적어도 약 150 mM의 아미노산, 적어도 약 200 mM의 아미노산, 적어도 약 250 mM의 아미노산, 적어도 약 300 mM의 아미노산, 적어도 약 350 mM의 아미노산, 또는 적어도 약 400 mM의 아미노산을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25 mM 내지 약 250 mM, 약 25 mM 내지 약 300 mM, 약 25 mM 내지 약 350 mM, 약 25 mM 내지 약 400 mM, 약 50 mM 내지 약 250 mM, 약 50 mM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 350 mM, 약 50 mM 내지 약 400 mM, 약 100 mM 내지 약 250 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 400 mM, 약 150 mM 내지 약 250 mM, 약 150 mM 내지 약 300 mM, 또는 약 150 mM 내지 약 400 mM의 아미노산을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25 mM, 약 50 mM, 약 100 mM, 약 150 mM, 약 200 mM, 약 250 mM, 약 300 mM, 약 350 mM, 또는 약 400 mM의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 25 mM의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 50 mM의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 75 mM의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 100 mM의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 200 mM의 아미노산을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 0.1, 약 0.5, 약 0.75, 약 1, 약 5, 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 100, 약 200, 또는 약 300으로 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 1.5, 약 1.7, 약 1.8, 약 1.9, 약 2, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9, 약 3, 약 3.1, 약 3.2, 약 3.3, 약 3.4, 약 3.5, 또는 약 4로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.1로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.2로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.4로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.5로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.6로 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 트레할로오스 및 아미노산을 몰비 약 2.7로 포함한다.
본 발명의 제형은 표면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "표면활성제"는 양친매성 구조를 갖는 유기 물질을 의미하고; 즉, 용해도 경향, 전형적으로 오일용해성 탄화수소 사슬 및 수용성 이온성 그룹에 대항하는 그룹으로 구성된다. 표면활성제는 표면 활성 부분의 전하에 따라, 음이온성, 양이온성, 및 비이온성 표면활성제로 분류될 수 있다. 표면활성제는 다양한 약제학적 조성물 및 생물학적 물질의 제조를 위한 습윤제, 에멀젼화제, 가용화제 및 분산제로서 종종 사용된다. 약제학적으로 허용가능한 표면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 (예를 들어, 폴리소르베이트 20 또는 80); 폴록사머 (예를 들어, 폴록사머 188); 트리톤(Triton); 나트륨 옥틸 글리코시드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도프로필-베타인 (예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스트아미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일-, 또는 디나트륨 메틸 올레일-타우레이트; 및 MONAQUATM 시리즈 (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.), 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌 및 프로필렌 글리콜의 코폴리머 (예를 들어, Pluronics, PF68 등)가 응집을 감소시키기 위해 본 발명의 제형에 임의로 첨가될 수 있다. 표면활성제, 펌프 또는 플라스틱 용기가 사용되어 제형을 투여한다면, 특히 유용하다. 약제학적으로 허용가능한 표면활성제의 존재는 단백질이 응집하는 경향을 완화시킨다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 그 농도 범위는 약 0.001% 내지 약 1%, 또는 약 0.001% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.1%이다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 그 농도는 0.001%, 또는 0.002%, 또는 0.003%, 또는 0.004%, 또는 0.005%, 또는 0.006%, 또는 0.007%, 또는 0.008%, 또는 0.009%, 또는 0.01%, 또는 0.015%, 또는 0.02%이다. 또 다른 특정 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트-80이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 그 농도 범위는 0.001% 내지 1%, 또는 0.001% 내지 0.1%, 또는 0.01% 내지 0.1%이다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트를 포함하고, 그 농도는 0.001%, 또는 0.002%, 또는 0.003%, 또는 0.004%, 또는 0.005%, 또는 0.006%, 또는 0.007%, 또는 0.008%, 또는 0.009%, 또는 0.01%, 또는 0.015%, 또는 0.02%이다. 또 다른 특정 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트-80이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 표면활성제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 또는 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 폴리소르베이트 80을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 약 0.001%, 적어도 약 0.002%, 적어도 약 0.005%, 적어도 약 0.01%, 적어도 약 0.02%, 적어도 약 0.05%, 적어도 약 0. 1%, 적어도 약 0.2%, 또는 적어도 약 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.001% 내지 약 0.5%, 약 0.001% 내지 약 0.2%, 약 0.001% 내지 약 0.1%, 약 0.001% 내지 약 0.05%, 약 0.002% 내지 약 0.5%, 약 0.002% 내지 약 0.2%, 약 0.002% 내지 약 0.1%, 약 0.002% 내지 약 0.05%, 약 0.005% 내지 약 0.5%, 약 0.005% 내지 약 0.2%, 약 0.005% 내지 약 0.1%, 약 0.005% 내지 약 0.05%, 약 0.01% 내지 약 0.5%, 약 0.01% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.001%, 약 0.002%, 약 0.005%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.05%, 약 0.1%, 약 0.2%, 및 약 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.04% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 약 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 적어도 0.001%, 적어도 0.002%, 적어도 0.005%, 적어도 0.01%, 적어도 0.02%, 적어도 0.05%, 적어도 0. 1%, 적어도 0.2%, 또는 적어도 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.001% 내지 0.5%, 0.001% 내지 0.2%, 0.001% 내지 0.1%, 0.001% 내지 0.05%, 0.002% 내지 0.5%, 0.002% 내지 0.2%, 0.002% 내지 0.1%, 0.002% 내지 0.05%, 0.005% 내지 0.5%, 0.005% 내지 0.2%, 0.005% 내지 0.1%, 0.005% 내지 0.05%, 0.01% 내지 0.5%, 0.01% 내지 0.2%, 0.01% 내지 0.1%, 또는 0.01% 내지 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.001%, 0.002%, 0.005%, 0.01%, 0.02%, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 및 0.5% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.04% 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 0.05% 폴리소르베이트 80을 포함한다.
임의로, 본 발명의 제제는 희석제, 결합제, 안정화제, 친유성 용매, 보존제, 보조제 등을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 다른 통상적인 부형제 및/또는 첨가제를 더 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 부형제 및/또는 첨가제는 본 발명의 제제에서 사용될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 킬레이트화제 (예를 들어, EDTA, DTPA 또는 EGTA, 단 이들로 제한되지는 않는다)와 같은 통상적으로 사용되는 부형제/첨가제는 임의로, 응집을 감소시키기 위해서 본 발명의 제제에 첨가될 수 있다. 이들 첨가제는 펌프 또는 플라스틱 용기가 제제의 투여를 위해서 사용되는 경우에 특히 유용하다.
페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질 알콜, 페닐메큐릭 니트라이트, 페녹시에탄올, 포름알데히드, 클로로부탄올, 염화마그네슘 (예를 들어, 헥사하이드레이트, 단, 이것으로 제한되지는 않는다), 알킬파라벤 (메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 나트륨 데하이드로아세테이트 및 티메로살, 또는 이들의 혼합물과 같은 보존제는 임의로, 약 0.001% 내지 약 5% 사이 또는 그 안의 어떤 범위 또는 값과 같은 어떤 적합한 농도로라도 본 발명의 제제에 첨가될 수 있다. 본 발명의 제제에서 사용된 보존제의 농도는 미생물 효과를 수득하기에 충분한 농도이다. 이러한 농도는 선택된 보존제에 따라 달라지며, 숙련된 전문가에 의해서 쉽게 결정된다.
본 발명의 제제에서 이용될 수 있는, 그 밖의 다른 고려되는 부형제/첨가제는 예를 들어, 방향제, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 대전방지제, 인지질 또는 지방산과 같은 지질, 콜레스테롤과 같은 스테로이드, 혈청 알부민 (혈청 알부민 (HSA), 재조합 인간 알부민 (rHA))과 같은 단백질 부형제, 젤라틴, 카제인, 나트륨과 같은 염-형성 반대이온 등을 포함한다. 본 발명의 제제에서 사용하기에 적합한 이들 및 추가의 공지된 약제학적 부형제 및/또는 첨가제는 본 기술분야에서 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 ["Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005); 및 "Physician's Desk Reference", 60th ed., Medical Economics, Montvale, N.J. (2005)]에 열거되어 있다. 본 기술분야에서 잘 알려져 있거나 본 발명에 기술된 바와 같은 Fc 변이체 단백질의 투여의 모드, 용해도 및/또는 안정성에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체는 일상적으로 선택될 수 있다.
본 발명의 제제는 인간 혈액과 등장성일 수 있다는 것은, 즉 본 발명의 제제는 본질적으로 인간 혈액과 동일한 삼투압을 갖는다는 것은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 이해될 수 있을 것이다. 이러한 등장성 제제는 일반적으로, 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 삼투압을 가질 수 있다. 등장성은 예를 들어, 증기압 또는 얼음-동결형 삼투압계 (ice-freezing type osmometer)를 사용함으로써 측정될 수 있다. 제제의 장성 (tonicity)은 장성 변형제를 사용함으로써 조정된다. "장성 변형제"는 제제에 첨가하여 제제의 등장성을 제공할 수 있는 이들 약제학적으로 허용되는 불활성 물질이다. 본 발명에 적합한 장성 변형제에는 사카라이드, 염류 및 아미노산이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 100 mOSm 내지 약 1200 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 1000 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 800 mOSm, 또는 약 200 mOSm 내지 약 600 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 500 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 400 mOSm, 또는 약 250 mOSm 내지 약 350 mOSm의 삼투압을 갖는다.
특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 100 mOSm 내지 1200 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 1000 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 800 mOSm, 또는 200 mOSm 내지 600 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 500 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 400 mOSm, 또는 250 mOSm 내지 350 mOSm의 삼투압을 갖는다.
본 발명의 제제의 다양한 성분들 중의 어느 하나 또는 어떤 조합물의 농도는 최종 제제의 바람직한 장성을 달성하도록 조정된다. 예를 들어, 항체에 대한 탄수화물 부형제의 비는 본 기술분야에서 공지된 방법에 따라 조정될 수 있다 [예를 들어, 미국 특허 제6,685,940호]. 특정의 구체예에서, 항체에 대한 탄수화물 부형제의 몰비는 약 1 몰의 항체에 대해서 약 100 몰 내지 약 1000 몰의 탄수화물 부형제, 또는 약 1 몰의 항체에 대해서 약 200 몰 내지 약 6000 몰의 탄수화물 부형제, 또는 약 1 몰의 항체에 대해서 약 100 몰 내지 약 510 몰의 탄수화물 부형제, 또는 약 1 몰의 항체에 대해서 약 100 몰 내지 약 600 몰의 탄수화물 부형제일 수 있다.
본 발명의 제제의 다양한 성분들 중의 어느 하나 또는 어떤 조합물의 농도는 최종 제제의 바람직한 장성을 달성하도록 조정된다. 예를 들어, 항체에 대한 탄수화물 부형제의 비는 본 기술분야에서 공지된 방법에 따라 조정될 수 있다 [예를 들어, 미국 특허 제6,685,940호]. 특정의 구체예에서, 항체에 대한 탄수화물 부형제의 몰비는 1 몰의 항체에 대해서 100 몰 내지 1000 몰의 탄수화물 부형제, 또는 1 몰의 항체에 대해서 200 몰 내지 6000 몰의 탄수화물 부형제, 또는 1 몰의 항체에 대해서 100 몰 내지 510 몰의 탄수화물 부형제, 또는 1 몰의 항체에 대해서 100 몰 내지 600 몰의 탄수화물 부형제일 수 있다.
최종 제제의 바람직한 등장성은 또한, 제제의 염 농도를 조정함으로써 달성될 수 있다. 약제학적으로 허용되며, 장성 변형제로서 본 발명에 적합한 염류에는 염화나트륨, 나트륨 석시네이트, 황산나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 황산마그네슘, 및 염화칼슘이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 NaCl, MgCl2, 및/또는 CaCl2를 포함한다. 하나의 구체예에서, NaCl의 농도는 약 75 mM 내지 약 150 mM이다. 또 다른 구체예에서, MgCl2의 농도는 약 1 mM 내지 약 100 mM이다. 약제학적으로 허용되며, 장성 변형제로서 본 발명에 적합한 아미노산에는 프롤린, 알라닌, L-아르기닌, 아스파라긴, L-아스파르트산, 글리신, 세린, 리신 및 히스티딘이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 내독소 및/또는 관련된 발열성 물질을 실질적으로 함유하지 않는 무-발열성 물질 제제이다. 내독소는 미생물 내부에 속박되고, 미생물이 파괴되거나 사망한 경우에만 방출되는 독소를 포함한다. 발열성 물질은 또한, 박테리아 및 그 밖의 다른 미생물의 외막으로부터의 발열 유도성, 열안정성 물질 (당단백질)을 포함한다. 이들 물질은 둘 다 인간에게 투여되는 경우에 발열, 저혈압 및 쇼크를 야기할 수 있다. 잠재적인 유해한 효과로 인하여, 작은 양의 내독소조차도 정맥내로 투여된 약제학적 약물 용액으로부터 반드시 제거되어야 한다. 미국식품의약국 ("FDA")은 정맥내 약물 적용을 위해서 단일의 1 시간 기간에 걸쳐서 체중 킬로그램당, 용량당 5 내독소 유니트 (EU)의 상한선을 설정하였다 [The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1):223 (2000)]. 항체를 사용한 경우일 수 있는 것으로서 치료학적 단백질이 체중 킬로그램당 수백 또는 수천 밀리그램의 양으로 투여되는 경우에, 미량의 유해하며 위험한 내독소조차도 반드시 제거되어야 한다. 특정의 특정한 구체예에서, 조성물 내의 내독소 및 발열성 물질의 레벨은 10 EU/㎎ 미만, 또는 5 EU/㎎ 미만, 또는 1 EU/㎎ 미만, 또는 0.1 EU/㎎ 미만, 또는 0.01 EU/㎎ 미만, 또는 0.001 EU/㎎ 미만이다.
생체내 투여를 위해서 사용되는 경우에, 본 발명의 제제는 멸균되어야 한다. 본 발명의 제제는 멸균 여과, 방사선 등을 포함하는 다양한 멸균방법에 의해서 멸균될 수 있다. 하나의 구체예에서, 항체 제제는 전멸균된 0.22-미크론 필터를 사용하여 필터-멸균된다. 주사용 멸균 조성물은 문헌 ["Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, (2005)]에 기술된 바와 같이 통상적인 약제학적 관례에 따라 제제화될 수 있다. 본 발명에 기술된 것과 같은 항체를 포함하는 제제는 통상적으로, 동결건조된 형태로, 또는 용액으로 보관될 수 있다. 항체를 포함하는 멸균 조성물은 멸균 접근 포트 (sterile access port)를 갖는 용기, 예를 들어, 피하 주사 바늘로 관통시킬 수 있는 스토퍼와 같은 제제의 복구를 허용하는 어댑터 (adapter)를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알 내에 보관될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 전-충전된 시린지로서 제공된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 동결건조 제제이다. 용어 "동결건조된" 또는 "동결-건조된"은 동결건조와 같은 건조 과정에 적용된 물질의 상태를 포함하며, 여기에서는 적어도 50%의 수분이 제거된다.
문구 "팽화제 (bulking agent)"는 약제학적으로 허용되며, 리오 케이크 (lyo cake)에 대해 부피를 부가하는 화합물을 포함한다. 본 기술분야에서 공지된 팽화제에는 예를 들어, 덱스트로즈, 리보즈, 프럭토즈 등과 같은 단당류, 만니톨, 이노시톨 및 소르비톨과 같은 알콜 당류, 트레할로즈, 슈크로즈 및 락토즈를 포함하는 디사카라이드, 전분, 덱스트란, 키토산, 히알우로네이트, 단백질 (예를 들어, 젤라틴 및 혈청 알부민), 글리코겐과 같은 천연적으로 존재하는 폴리머, 및 합성 모노머 및 폴리머를 포함하는 탄수화물이 포함된다.
"동결보호제 (lyoprotectant)"는 관심이 있는 단백질과 조합하면 동결건조 및 후속 보관 시에 단백질의 화학적 및/또는 물리적 불안정성을 상당히 방지하거나 감소시키는 분자이다. 동결보호제는 당류 및 그들의 상응하는 당 알콜; 모노나트륨 글루타메이트 또는 히스티딘과 같은 아미노산; 베타인과 같은 메틸아민; 황산마그네슘과 같은 이액성 (lyotropic) 염류; 3가 또는 더 고분자량 당 알콜과 같은 폴리올, 예를 들어, 글리세린, 덱스트란, 에리트리톨, 글리세롤, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만니톨; 프로필렌 글리콜; 폴리에틸렌 글리콜; 플루로닉스 (Pluronics™); 및 이들의 조합물을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 동결보호제의 추가의 예로는 글리세린 및 젤라틴, 및 당류인 멜리비오즈, 멜레지토즈, 라피노즈, 만노트리오즈 및 스타키오즈가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 환원성 당류의 예로는 글루코즈, 말토즈, 락토즈, 말툴로즈, 이소-말툴로즈 및 락툴로즈가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 비-환원성 당류의 예로는 당 알콜 및 다른 직쇄 폴리알콜로부터 선택된 폴리하이드록시 화합물의 비-환원성 글리코사이드가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 당 알콜의 예로는 모노글리코사이드, 락토즈, 말토즈, 락툴로즈 및 말툴로즈와 같은 디사카라이드의 환원에 의해서 수득된 화합물이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 글리코사이드성 측쇄 그룹은 글루코사이드성이거나 갈락토사이드성일 수 있다. 당 알콜의 추가의 예로는 글루시톨, 말티톨, 락티톨 및 이소-말툴로즈가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 특정의 구체예에서는, 트레할로즈 또는 슈크로즈가 동결보호제로서 사용된다.
동결보호제는 동결보호량의 동결보호제의 존재 하에서 단백질을 동결건조시킨 후에 단백질이 동결건조 및 보관 시에 그의 물리적 및 화학적 안정성 및 보전성 (integrity)을 유지하는 것을 의미하는 "동결보호량"으로 전-동결건조되 제제에 첨가된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제의 동결보호제 (예를 들어, 트레할로즈)와 안티-IL-6 항체 분자의 몰비는 적어도 약 10, 적어도 약 50, 적어도 약 100, 적어도 약 200, 또는 적어도 약 300이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제의 동결보호제 (예를 들어, 트레할로즈)와 안티-IL-6 항체의 몰비는 약 1이거나, 약 2이거나, 약 5이거나, 약 10, 약 50, 약 100, 약 200, 또는 약 300이다.
"재구성된" 제제는 항체가 재구성된 제제에 분산되도록 동결건조 항체 제제를 희석제 내에 용해시킴으로써 제조된 것이다. 재구성된 제제는 관심이 있는 단백질로 치료할 환자에게 투여 (예를 들어, 비경구 투여)하는데 적합하며, 본 발명의 특정의 구체예에서는 정맥내 투여하는데 적합한 것일 수 있다.
본 발명에서 관심이 있는 "희석제"는 약제학적으로 허용되며 (인간에게 투여하는데 안전하며 비-독성임), 동결건조 후에 재구성된 제제와 같은 액체 제제의 제조에 유용한 것이다. 일부의 구체예에서, 희석제에는 멸균수, 주사용 정균수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어, 포스페이트-완충된 식염수), 멸균 식염용액, 링거 용액 또는 덱스트로즈 용액이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 대체 구체예에서, 희석제는 염류 및/또는 완충제의 수용액을 포함할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서는 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%가 상기 바이알을 분당 400 진동 (shakes)의 속도로 4 시간 동안 진탕한 후에 바이알로부터 회수될 수 있으며, 상기 바이알은 그의 용적의 절반까지 상기 제제로 충전된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 제제를 3 회의 동결/해동 사이클에 적용한 후에 바이알로부터 회수될 수 있으며, 여기에서 상기 바이알은 그의 용적의 절반까지 상기 제제로 충전된다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 상기 제제로부터 생성된 동결건조 케이크를 재구성함으로써 회수될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 상기 바이알을 분당 400 진동의 속도로 4 시간 동안 진탕한 후에 바이알로부터 회수될 수 있으며, 상기 바이알은 그의 용적의 절반까지 상기 제제로 충전된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 제제를 3 회의 동결/해동 사이클에 적용한 후에 바이알로부터 회수될 수 있으며, 여기에서 상기 바이알은 그의 용적의 절반까지 상기 제제로 충전된다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 IL-6 항체를 포함하는 동결건조 제제이며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 상기 제제로부터 생성된 동결건조 케이크를 재구성함으로써 회수될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 적어도 약 1 주일, 적어도 약 2 주일, 적어도 약 3 주일, 적어도 약 4 주일, 적어도 약 5 주일 또는 적어도 약 6 주일 동안 약 40℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 또는 적어도 약 6 개월 동안 약 40℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 또는 적어도 약 12 개월 동안 약 5℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 적어도 약 1 년, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 또는 적어도 약 5 년 동안 약 5℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 약 1 주일, 약 2 주일, 약 3 주일, 약 4 주일, 약 5 주일 또는 약 6 주일 동안 약 40℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 약 40℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 또는 약 12 개월 동안 약 5℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 동결건조 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체 분자를 포함하며, 여기에서 상기 항체의 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%는 약 1 년, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년, 또는 약 5 년 동안 약 5℃에서 보관시에 상기 동결건조 제제를 재구성함으로써 회수된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 재구성된 제제이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 본 발명에 기술된 동결건조 제제로부터 제조된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 전-동결건조 액체 제제와 동일한 농도로 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 전-동결건조 액체 제제보다 더 고농도로 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 전-동결건조 액체 제제보다 약 2 배, 약 3 배, 약 4 배, 약 5 배, 약 6 배, 약 7 배, 약 8 배, 약 9 배, 약 10 배, 약 15 배, 약 20 배, 약 30 배, 약 40 배 더 고농도의 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서,, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 전-동결건조 액체 제제보다 더 저농도로 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 전-동결건조 액체 제제보다 약 2 배, 약 3 배, 약 4 배, 약 5 배, 약 6 배, 약 7 배, 약 8 배, 약 9 배, 약 10 배, 약 15 배, 약 20 배, 약 30 배, 약 40 배 더 저농도의 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 수성 제제이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 액체 제제는 수성 담체가 증류수인 수성 제제이다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 멸균된다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 균질하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 등장성이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 보관성이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 고장성이다.
특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 입자 멀티사이저 (particle multisizer)에 의해서 결정된 것으로서 직경 2-4 ㎛의 약 3.4 E +5 입자/㎖ 미만, 직경 4-10 ㎛의 약 4.0 E +4 입자/㎖ 미만, 직경 10-20 ㎛의 약 4.2 E +3 입자/㎖ 미만, 직경 20-30 ㎛의 약 5.0 E +2 입자/㎖ 미만, 직경 30-40 ㎛의 약 7.5 E +1 입자/㎖ 미만, 및 직경 40-60 ㎛의 약 9.4 입자/㎖ 미만의 입자 프로필을 포함한다 (또는 응집체 분획으로 구성된다). 특정의 구체예에서, 본 발명의 재구성된 제제는 40 ㎛보다 크거나, 또는 30 ㎛보다 큰 검출가능한 입자를 함유하지 않는다.
특정의 구체예에서, 약 1 시간, 약 2 시간, 약 3 시간, 약 4 시간, 약 5 시간, 약 6 시간, 약 7 시간, 약 8 시간, 약 9 시간, 약 12 시간, 약 15 시간, 약 18 시간, 또는 약 24 시간 동안 보관한 후에 본 발명의 재구성된 액체 제제는 입자 멀티사이저에 의해서 결정된 것으로서 직경 2-4 ㎛의 약 3.4 E +5 입자/㎖ 미만, 직경 4-10 ㎛의 약 4.0 E +4 입자/㎖ 미만, 직경 10-20 ㎛의 약 4.2 E +3 입자/㎖ 미만, 직경 20-30 ㎛의 약 5.0 E +2 입자/㎖ 미만, 직경 30-40 ㎛의 약 7.5 E +1 입자/㎖ 미만, 및 직경 40-60 ㎛의 약 9.4 입자/㎖ 미만의 입자 프로필을 포함한다 (또는 응집체 분획으로 구성된다). 특정의 구체예에서, 본 발명의 액체 제제는 40 ㎛보다 크거나, 또는 30 ㎛보다 큰 검출가능한 입자를 함유하지 않는다.
특정의 구체예에서, 약제학적 조성물은 다음을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다:
(a) pH 6.0에서 100 ㎎/㎖의 항체, 25 mM 히스티딘, 1.6 mM 글리신으로 구성된 멸균 액체 제제;
(b) pH 6.0에서 100 ㎎/㎖의 항체 및 25 mM 히스티딘으로 구성된 멸균 액체 제제;
(c) pH 6.0에서 5 ㎎/㎖의 항체, 20 mM 시트르산, 100 mM NACl, 1.5% 만니톨, 50 l DTPA, 및 0.02% PS80으로 구성된 멸균 액체 제제;
(d) pH 6.0에서 100 ㎎/㎖의 항체, 25 mM 히스티딘, 8% 트레할로즈, 및 0.02% PS80로 구성된 멸균 액체 제제;
(e) pH 6.0에서 20 ㎎/㎖의 항체, 10 mM His, 2.35% (w/v) 리신-HCl, 및 0.02% PS-80 (w/v)으로 구성된 멸균 액체 제제;
(f) pH 6.0에서 5 ㎎/㎖의 항체, 10 mM 나트륨 시트레이트 완충액, NaCl (0.15 M) 및 트윈 80 (0.02%)으로 구성된 멸균 액체 제제;
(g) pH 6.0에서 100 ㎎/㎖의 항체, 10 mM 히스티딘 및 150 mM NaCl로 구성된 멸균 액체 제제.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 안정화시킨다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체의 응집을 방지한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 본 발명의 안티-IL-6 항체의 단편화를 방지한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 주일, 적어도 약 2 주일, 적어도 약 3 주일, 또는 적어도 약 4 주일 동안 약 40℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 또는 적어도 약 6 개월 동안 약 40℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 주일, 적어도 약 2 주일, 적어도 약 3 주일, 또는 적어도 약 4 주일 동안 약 25℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 또는 적어도 약 6 개월 동안 약 25℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 개월, 적어도 약 2 개월, 적어도 약 3 개월, 적어도 약 4 개월, 적어도 약 5 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 7 개월, 적어도 약 8 개월, 적어도 약 9 개월, 적어도 약 10 개월, 적어도 약 11 개월, 또는 적어도 약 12 개월 동안 약 5℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 적어도 약 1 년, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 적어도 약 5 년, 적어도 약 6 년, 적어도 약 7 년, 적어도 약 8 년, 적어도 약 9 년, 적어도 약 10 년, 적어도 약 11 년, 또는 적어도 약 12 년 동안 약 5℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 주일, 약 2 주일, 약 3 주일, 또는 약 4 주일 동안 약 40℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 약 40℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 주일, 약 2 주일, 약 3 주일, 또는 약 4 주일 동안 약 25℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월 동안 약 25℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 또는 약 12 개월 동안 약 5℃에서 보관시에 안정하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 약 1 년, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년, 약 5 년, 약 6 년, 약 7 년, 약 8 년, 약 9 년, 약 10 년, 약 11 년, 또는 약 12 년 동안 약 5℃에서 보관시에 안정하다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관시에 안정하다.
본 발명은 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함하는 안정한 제제를 제공한다. 상기 항체의 안정성은 기준 항체를 포함하는 기준 제제와 비교하여 HPSEC, 역상 크로마토그래피, 정적 광산란 (SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법 (FTIR), 원편광 이색성 (CD), 요소 언폴딩 기술, 내인성 트립토판 형광, 시차주사열량법 및/또는 ANS 결합기술에 의해서 측정된 것으로서 응집, 분해 또는 단편화의 정도에 의해서 평가될 수 있다. 예를 들어, 기준 제제는 75 mM NaCl 및 4% 트레할로즈를 함유하는 10 mM 히스티딘 (pH 6.0) 중의 10 ㎎/㎖의 기준 항체 (그의 항체 단편을 포함) (예를 들어, 16C4 가변 부분 및 컴플렉스 N-글리코사이드-연결된 당쇄 (여기에서, 푸코즈는 당쇄의 환원성 종단에서 N-아세틸글루코사민에 결합되지 않는다)를 갖는 Fc 부분을 포함하는 항체, 단 이들로 제한되지는 않는다)로 구성된 -70℃에서 동결된 기준 표준물일 수 있으며, 여기에서 기준 제제는 HPSEC에 의해서 규칙적으로 단일 모노머 피크 (예를 들어, ≥95% 면적)을 제공한다. 특정의 구체예에서, 기준 제제는 그의 안정성을 시험한 제제와 동일하며; 기준 제제는 기준 제제를 그의 원래의 조건에서 보존하기 위해서 안정성 시험 중에 -70℃에서 동결하여 보관될 수 있다. 예를 들어, 40℃에서 보관된 제제에서 IL-6 항원 결합 활성의 어떤 상실이라도 평가하기 위한 기준 표준물은 30일 동안 -70℃에서 보관한 동일한 제제일 수 있다. 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함하는 제제의 전반적인 안정성은 또한, 예를 들어, 분리된 항원 분자를 사용한 방사선면역측정법 및 ELISA을 포함한 다양한 면역학적 시험방법에 의해서 평가될 수 있다. 또한, 항체를 포함하는 제제의 안정성은 또한, 항체의 기능적 특징을 측정하기 위해서 고안된 다양한 시험방법, 예를 들어, 항원 결합 친화성, 시험관내 ADCC 활성, 생체내 고갈 활성, 시험관내 CDC 활성을 측정하도록 고안된 시험방법, 억제 시험방법, 세포 증식 시험방법 등을 사용하여 평가될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 w약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관되었다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 IL-6 결합 활성을 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 그 결합 활성은 참조 항체의 IL-6 결합 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%이고, 여기서, 상기 제형은 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관되었다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 제형의 보관 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "많아야" 및 "이하"는 동일한 의미를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체는 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 제형의 보관 동안에 IL-6 결합 활성의 많아야 50%, 많아야 40%, 많아야 30%, 많아야 20%, 많아야 10%, 많아야 5%, 또는 많아야 1%를 잃는다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고,
여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시 응집물을 형성한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 HPSEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시 응집물을 형성한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시 단편화된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함하고, 여기서, 상기 항체의 1% 미만, 2% 미만, 3% 미만, 4% 미만, 5% 미만, 7% 미만 또는 10% 미만은 RP-HPLC 또는 SEC로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시 단편화된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 또는 적어도 약 4주 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 또는 적어도 약 6개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 12개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년, 적어도 약 6년, 적어도 약 7년, 적어도 약 8년, 적어도 약 9년, 적어도 약 10년, 적어도 약 11년, 또는 적어도 약 12년 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 40℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 25℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 동안 보관시 맑고 무색이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제형은 육안 검사로 측정된 바와 같이, 약 5℃에서 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 6년, 약 7년, 약 8년, 약 9년, 약 10년, 약 11년, 또는 약 12년 동안 보관시 맑고 무색이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 항-IL-6 항체를 포함한다.
어떤 구체예에서, 본 발명의 제형은 보관시, 예를 들어, 연장된 기간 (예를 들어, 비제한적으로 1주, 1개월, 6개월, 1년, 2년, 3년 또는 5년) 동안에 실온 또는 4℃에서, 또는 기간 (예컨대, 비제한적으로 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 또는 6개월) 동안 고온, 예컨대 38℃-42℃에서 개선된 응집 프로파일을 유지한다. 어떤 구체예에서, 제형은, 빛에 노출되거나, 10%까지, 또는 20%까지, 또는 30%까지, 또는 40%까지, 또는 50%까지, 또는 60%까지, 또는 70%까지, 또는 80%까지, 또는 90%까지, 또는 100%까지의 상대습도를 비제한적으로 포함하는 다양한 습도 조건에서 어두운 곳에서 보관되는 동안에 보관시 개선된 응집 프로파일을 유지한다. 본 기술분야에서, 용어 "실온" 조건은 일반적으로 빛에의 노출과 함께 10% 내지 60%의 상대습도에서 약 20℃의 온도를 의미하는 것으로 이해된다. 유사하게, 약 10% 미만의 상대습도에서의 온도 약 2℃ 내지 약 8℃는 집단적으로 "4℃" 또는 "5℃"를 의미하고, 약 60%의 상대습도에서의 온도 약 23℃ 내지 약 27℃는 집단적으로 "25℃"를 의미하고, 약 75%의 상대습도에서의 온도 약 38℃ 내지 약 42℃는 집단적으로 "40℃"를 의미한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 제형은 1회용 주사기에 보관된다.
특정의 구체예에서, 적어도 1 개월 동안 4℃에서 보관한 후에 본 발명의 제제는 입자 멀티사이저에 의해서 결정된 것으로서 직경 2-4 ㎛의 약 3.4 E +5 입자/㎖ 미만, 직경 4-10 ㎛의 약 4.0 E +4 입자/㎖ 미만, 직경 10-20 ㎛의 약 4.2 E +3 입자/㎖ 미만, 직경 20-30 ㎛의 약 5.0 E +2 입자/㎖ 미만, 직경 30-40 ㎛의 약 7.5 E +1 입자/㎖ 미만, 및 직경 40-60 ㎛의 약 9.4 입자/㎖ 미만의 입자 프로필을 포함한다 (또는 응집체 분획으로 구성된다). 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 40 ㎛보다 크거나, 또는 30 ㎛보다 큰 검출가능한 입자를 함유하지 않는다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관된다.
크기 배제 크로마토그래피 (SEC), 고성능 크기 배제 크로마토그래피 (HPSEC), 정적 광산란 (SLS), 푸리에 변환 적외선 분광법 (FTIR), 원편광 이색성 (CD), 요소 유도된 단백질 언폴딩 기술, 내인성 트립토판 형광, 시차주사열량법, 및 1-아닐리노-8-나프탈렌설폰산 (ANS) 단백질 결합기술을 포함하여 (단, 이들로 제한되지는 않는다), 응집의 정도, 및/또는 단백질 제제 (예를 들어, 본 발명의 항체 제제) 내에 존재하는 응집체의 타입 및/또는 크기를 결정하는데 유용한 다수의 방법이 본 기술분야에서 공지되어 있다. 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)는 분자를 적절한 수지로 충전된 칼럼 상에 통과시킴으로써 분자를 그들의 크기를 기초로 하여 분리시키기 위해서 수행될 수 있으며, 더 큰 분자 (예를 들어, 응집체)는 더 작은 분자 (예를 들어, 모노머)에 앞서서 용출될 수 있다. 분자는 일반적으로, 290 ㎚에서의 UV 흡광도에 의해서 검출되며, 추가의 특정화를 위해서 수집될 수 있다. 고압 액체 크로마토그래피 칼럼이 종종 SEC 분석을 위해서 이용된다 (HP-SEC). 특정의 SEC 방법은 이하의 "실시예" 표제의 항목에서 상세히 설명된다. 대신으로, 분석용 초원심분리 (AUC)가 이용될 수 있다. AUC는 액체 샘플 내의 거대분자의 침강계수 (스베드베리 (Svedberg)로 보고됨, S)를 결정하는 직교 기술 (orthogonal technique)이다. SEC와 마찬가지로 AUC는 모노머로부터 항체 단편/응집체를 분리 및 검출할 수 있으며, 분자 질량에 대한 정보를 더 제공할 수 있다. 제제 내에서 단백질 응집은 또한, 코울터 계수기 (coulter counter)를 사용한 입자수 분석에 의해서, 또는 탁도계를 사용한 탁도 측정에 의해서 특정화될 수 있다. 탁도는 용액 내의 입자가 빛을 산란하는 양의 척도이며, 따라서 단백질 응집의 일반적인 지표로서 사용될 수 있다. 또한, 비-환원성 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (PAGE) 또는 모세관 겔 전기영동 (CGE)을 사용하여 본 발명의 제제 내의 항체 또는 그의 단편의 응집 및/또는 단편화 상태를 특정화할 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 비경구 투여용이다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 주사용 제제이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 정맥내, 근육내, 동맥내, 초내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 신경주위, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입에 적합하다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 정맥내, 피하 또는 근육내 투여를 위한 것이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 피하 주사를 위한 것으로서 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 정맥내 주사를 위한 것으로서 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에서 보관된다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 정맥내 투여를 위한 것이며, 여기에서 상기 제제는 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 60 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 40 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖ 내지 약 60 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 10 ㎎/㎖ 내지 약 40 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 60 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 40 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖ 내지 약 60 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖ 내지 약 50 ㎎/㎖, 또는 약 30 ㎎/㎖ 내지 약 40 ㎎/㎖의 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 신경주위 또는 초내 투여를 위한 것이며, 여기에서 상기 제제는 약 0.01 ㎍/㎖ 내지 약 50 ㎍/㎖, 약 0.05 ㎍/㎖ 내지 약 45 mg/㎖, 약 0.1 ㎍/㎖ 내지 약 30 ㎍/㎖, 약 0.15 ㎍/㎖ 내지 약 25 ㎍/㎖, 약 0.2 ㎍/㎖ 내지 약 20 ㎍/㎖, 약 0.25 ㎍/㎖ 내지 약 17.5 ㎍/㎖, 약 0.5 ㎍/㎖ 내지 약 15 ㎍/㎖, 약 0.75 ㎍/㎖ 내지 약 12.5 ㎍/㎖, 약 0.6 ㎍/㎖ 내지 약 10 ㎍/㎖, 약 1.0 ㎍/㎖ 내지 약 8 ㎍/㎖, 약 1.25 ㎍/㎖ 내지 약 7.5 ㎍/㎖, 또는 약 1.5 ㎍/㎖ 내지 약 6 ㎍/㎖의 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 피하 투여를 위한 것이며, 여기에서 상기 제제는 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 150 ㎎/㎖, 약 1 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖ 내지 약 150 ㎎/㎖, 약 25 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 150 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 약 75 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖, 약 75 ㎎/㎖ 내지 약 150 ㎎/㎖ 또는 약 75 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에 제공된다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 에어로졸 투여를 위한 것이다.
본 발명은 또한, 적합한 용기 내에 본 발명의 제제의 안티-IL-6 항체를 포함하는, 인간에게 비경구 투여하기에 적합한 약제학적 단위 투약형을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 투약형은 본 발명의 제제의 정맥내, 피하 또는 근육내 송달된 안티-IL-6 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 투약형은 본 발명의 제제의 에어로졸 송달된 안티-IL-6 항체를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 투약형은 본 발명의 제제의 피하로 송달된 안티-IL-6 항체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 투약형은 본 발명의 제제의 에어로졸 송달된 안티-IL-6 항체를 포함한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제학적 단위 투약형은 본 발명의 제제의 비내 투여된 안티-IL-6 항체를 포함한다. 하나의 구체예에서, 적합한 용기는 전-충전된 시린지이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 제제는 밀봉된 용기 내에 제공된다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에 제공된다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 연장된 생체내 반감기를 갖는 본 발명의 안티-IL-6 항체를 포함한다.
본 발명은 추가로, 본 발명의 제제의 안티-IL-6 항체를 포함하는 키트를 제공한다. 본 발명은 본 발명의 액체 제제 또는 동결건조 제제로 충전된 하나 또는 그 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩 (pack) 또는 키트를 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 액체 제제로 충전된 용기는 전-충전된 시린지이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 이종 단백질, 이종 폴리펩타이드, 이종 펩타이드, 거대 분자, 소분자, 마커 서열, 진단 또는 검출가능한 성분, 치료학적 부위, 약물 부위, 방사성 금속 이온, 제2 항체, 및 고체 지지체를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 또 다른 부위에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 컨주게이트된 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함한다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 제제는 멸균 액체로서 단일 용량 바이알로 제제화된다. 본 발명의 제제는 1.2 ㎖의 표적 용적을 갖는 3 ㏄ USP 타입 I 보로실리케이트 호박색 바이알 (West Pharmaceutical Serices - Part No. 6800-0675) 내에 제공될 수 있다. 임의로, 약제학적 또는 생물학적 생성물의 제조, 용도 또는 판매를 규제하는 정부기관에 의해서 규정된 형태의 통지서가 이러한 용기(들)과 연관될 수 있으며, 상기의 통지서는 기관에 의한 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 승인을 나타낸다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제제는 전-충전된 시린지 내에 제공될 수 있다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 액체 제제로 충전된 용기는 전-충전된 시린지이다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 모든 전-충전된 시린지가 본 발명의 액체 제제와 함께 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 전-충전된 시린지는 예를 들어, PCT 공개 WO05032627, WO08094984, WO9945985, WO03077976, 미국 특허 US6792743, US5607400, US5893842, US7081107, US7041087, US5989227, US6807797, US6142976, US5899889, 미국 특허공개 US20070161961A1, US20050075611A1, US20070092487A1, US20040267194A1, US20060129108A1 (단, 이들로 제한되지는 않는다)에 기술되어 있다. 전-충전된 시린지는 다양한 재료로 만들어질 수 있다. 하나의 구체예에서, 전-충전된 시린지는 유리 시린지이다. 또 다른 구체예에서, 전-충전된 시린지는 플라스틱 시린지이다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 시린지를 제조하기 위해서 사용된 재료의 성질 및/또는 품질이 시린지 내에 보관된 단백질 제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있음을 이해한다. 예를 들어, 시린지 챔버의 내부 표면상 에 침착된 실리콘 기본 윤활제는 단백질 제제에서 입자 형성에 영향을 미칠 수 있는 것으로 이해된다. 하나의 구체예에서, 전-충전된 시린지는 실리콘 기본 윤활제를 포함한다. 하나의 구체예에서, 전-충전된 시린지는 실리콘 상에서 베이킹한 것을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 전-충전된 시린지는 실리콘 기본 윤활제를 함유하지 않는다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 또한, 시린지 배럴 (barrel), 시린지 팁 캡 (tip cap), 플런저 (plunger) 또는 스토퍼 (stopper)로부터 제제 내로 침출되는 소량의 오염성 요소는 또한 제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있다는 것을 이해한다. 예를 들어, 제조 과정 중에 도입된 텅스텐은 제제 안정성에 불리한 영향을 미칠 수 있는 것으로 이해된다. 하나의 구체예에서, 전-충전된 시린지는 500 ppb 이상의 레벨로 텅스텐을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 전-충전된 시린지는 저-텅스텐 시린지이다. 또 다른 구체예에서, 전-충전된 시린지는 약 500 ppb 내지 약 10 ppb, 약 400 ppb 내지 약 10 ppb, 약 300 ppb 내지 약 10 ppb, 약 200 ppb 내지 약 10 ppb, 약 100 ppb 내지 약 10 ppb, 약 50 ppb 내지 약 10 ppb, 약 25 ppb 내지 약 10 ppb의 레벨로 텅스텐을 포함할 수 있다.
제조 물품
본 발명은 또한, 완성된 포장 및 표지된 약제학적 생성물을 포함한다. 이 제조 물품은 용접 밀봉된 유리 바이알, 전-충전된 시린지 또는 그 밖의 다른 용기와 같은 적절한 베셀 (vessel) 또는 용기 내에 적절한 단위 투약형을 포함한다. 하나의 구체예에서, 단위 투약형은 비경구 투여에 적합한 안티-IL-6 항체를 포함하는 멸균된 무-미립체 용액이다. 또 다른 구체예에서, 단위 투약형은 재구성에 적합한 안티-IL-6 항체를 포함하는 멸균된 동결건조 분말로서 제공된다.
하나의 구체예에서, 단위 투약형은 정맥내, 근육내, 비내, 경구, 국소 또는 피하 송달하는데 적합하다. 따라서, 본 발명은 각각의 송달 경로에 적합한 멸균 용액을 포함한다. 본 발명은 추가로, 재구성에 적합한 멸균된 동결건조 분말을 포함한다.
모든 약제학적 생성물과 함께 사용된 것으로서, 포장 재료 및 용기는 보관 및 수송 중에 생성물의 안정성을 보호하도록 고안된다. 또한, 본 발명의 생성물은 문제가 되는 질병 또는 장애를 어떻게 적절하게 예방 또는 치료하는지에 대해서 의사, 기술자 또는 환자에게 알려주는 사용 또는 그 밖의 다른 정보자료에 대한 설명서를 포함한다. 즉, 제조 물품은 실제 용량, 모니터링 절차 및 그 밖의 다른 모니터링 정보를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 투약 레지멘을 나타내거나 제안하는 설명수단을 포함한다.
특히, 본 발명은 상자, 병, 튜브, 바이알, 용기, 전-충전된 시린지, 분무기 (sprayer), 취입기 (insufflator), 정맥내 (i.v.) 백, 봉투 등과 같은 포장 재료; 및 상기 포장 재료 내에 함유된 약제학적 약제의 적어도 하나의 단위 투약형을 포함하는 제조 물품을 제공하며, 여기에서 상기 약제학적 약제는 항체를 함유하는 액체 제제를 포함한다. 포장 재료는 상기 항체를 질병 또는 장애와 연관된 하나 또는 그 이상의 증상을 예방 치료 및/또는 관리하기 위해서 어떻게 사용될 수 있는지를 나타내는 설명수단을 포함한다.
예를 들어, 단일 영역 항체 분자 (예를 들어, "나노바디 (nanobodies™)") 등과 같은 경구 투여용 약제학적 조성물이 또한 본 발명에서 예상된다. 이러한 경구용 제제는 정제, 캅셀제, 분말, 액체 또는 반고체 형태일 수 있다. 정제는 젤라틴과 같은 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성 오일과 같은 액체 담체를 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로즈 또는 다른 사카라이드 용액 또는 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜이 포함될 수 있다.
정맥내 주사 또는 고통의 부위에서의 주사의 경우에, 활성 성분은 발열성 물질이 없으며, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 약제학적으로 허용되는 수용액의 형태로 존재할 수 있다. 본 기술분야에서 적절한 기술을 갖는 전문가는 예를 들어, 염화나트륨 주사, 링거 주사, 락테이트화 링거 주사와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르빈산 및 메티오닌과 같은 항산화제; 보존제 (예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3'-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코즈, 만노즈 또는 덱스트린을 포함하는 모노사카라이드, 디사카라이드 및 그 밖의 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트화제; 슈크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대이온; 금속 컴플렉스 (예를 들어, Zn-단백질 컴플렉스); 및/또는 트윈 (TWEEN™), 플루로닉스 (PLURONICS™) 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)과 같은 비-이온성 계면활성제를 포함하는 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제가 필요에 따라 사용될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 분자의 생화학적 특성 및 송달의 경로에 따라 액체, 반고체 또는 고체 형태로 제제화될 수 있다. 제제는 부형제, 또는 부형제의 조합물, 예를 들어, 당류, 아미노산 및 계면활성제를 포함할 수 있다. 액체 제제는 광범한 항체 농도 및 pH를 포함할 수 있다. 고체 제제는 예를 들어, 동결건조, 분무 건조, 또는 초임계 유체 기술에 의한 건조에 의해서 생산될 수 있다. 결합 성분의 제제는 의도한 송달의 경로에 따라 좌우될 수 있다: 예를 들어, 폐 송달을 위한 제제는 흡입하면 심부 폐 내로 침투를 보장하는 물리적 특성을 갖는 입자로 구성될 수 있으며; 국소용 제제 (예를 들어, 반흔, 예를 들어, 피부 반흔의 치료용)는 약물이 작용 부위에서 체류하는 시간을 연장시키는 점도 변형제를 포함할 수 있다. 결합 성분은 이식제, 경피용 패치 및 마이크로캅셀화된 송달 시스템을 포함하는 조절 방출용 제제와 같이 빠른 방출로부터 결합 성분을 보호할 수 있는 담체를 사용하여 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산과 같은 생물분해성, 생체적합성 폴리머가 사용될 수 있다. 이러한 제제를 제조하는 다수의 방법은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지되어 있다 [Robinson, J. R. ed., (1978) Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc., New York].
치료제는 경구적으로 (예를 들어, 단일 영역 항체 분자 (예를 들어, "나노바디 (nanobodies™)"), 주사에 의해서 (예를 들어, 피하, 관절내, 정맥내, 복강내, 동맥내 또는 근육내로), 기관내 흡입에 의해서, 방광내 경로에 의해서 (방광 내로 점적주입), 또는 국소적으로 (예를 들어, 안내, 비내, 직장내, 창상 내로, 피부상에) 제공될 수 있다. 치료제는 특히 결합 성분의 용량을 감소시키면서 펄스 주입 (pulse infusion)함으로써 투여될 수 있다. 투여의 경로는 치료의 물리화학적 특징에 의해서, 질병에 대한 특별한 고려사항에 의해서, 또는 효능을 최적화하거나 부작용을 최소화시키기 위한 필요조건에 의해서 결정될 수 있다. 하나의 특정한 투여의 경로는 정맥내이다. 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 또 다른 경로는 피하이다. 치료는 임상에서의 사용으로 제한되지 않는 것으로 예상된다. 따라서, 무침 장치 (needle-free device)를 사용한 피하 주사가 또한 유리하다.
조성물은 단독으로, 또는 다른 치료와 함께, 치료할 상태에 따라서 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 추가의 의약적 성분과 함께 병용요법의 일부분으로서 사용될 수 있다. 병용 치료, 특히 본 발명의 결합 성분과 하나 또는 그 이상의 다른 약물의 조합을 사용하여 상당한 상승적 효과를 제공할 수 있다. 본 발명의 결합 성분은 본 발명에 열거된 상태 중의 하나 또는 그 이상을 치료하기 위해서 또 다른 치료학적 약제 또는 약제들과 동시에, 순차적으로, 또는 조합된 제제로서 투여될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 화학민감제 (chemosensitiser)로 사용함으로써 이것은 세포독성제의 치료학적 효과를 증가시킬 수 있고, 따라서 하나 또는 그 이상의 세포독성제와 조합하여 동시에 또는 순차적으로 투여하기 위해서 제공될 수 있다. 결합 성분은 또한, 방사선 민감제로서 사용함으로써 이것은 방사선의 효능을 개선시킬 수 있고, 따라서 방사선과 조합하여 동시에 또는 순차적으로 투여하기 위해서 제공될 수 있다.
본 발명에 따르는 결합 성분은 다음의 약제 중의 하나 또는 그 이상과 조합하여 또는 이들을 첨가하여 제공될 수 있다:
- 사이토킨 또는 사이토킨 기능의 아고니스트 또는 길항제 (예를 들어, SOCS 시스템의 변조물질과 같은 사이토킨 시그날링 경로 상에서 작용하는 약제), 예를 들어, 알파-, 베타- 및/또는 감마-인터페론; 인슐린-양 성장인자 타입 I (IGF-1), 그의 수용체 및 연관된 결합 단백질; 인터류킨 (IL), 예를 들어, IL-1 내지 -33 중의 하나 또는 그 이상, 및/또는 인터류킨 길항제 또는 억제제, 예를 들어, 아나킨라; 인터류킨 패밀리 구성원의 수용체의 억제제 또는 이러한 수용체의 특정의 서브유니트의 억제제, 종양 괴사인자 알파 (TNF-α) 억제제, 예를 들어, 안티-TNF 모노클로날 항체 (예를 들어, 인플릭시마브, 아달리무마브 및/또는 CDP-870) 및/또는 TNF 수용체 길항제, 예를 들어, 면역글로불린 분자 (예를 들어, 에타너셉트) 및/또는 저분자량 약제, 예를 들어, 펜톡시필린;
- B 세포의 변조물질, 예를 들어, B-림프구 (예를 들어, CD20 (리툭시마브) 또는 MRA-aILl6R) 또는 T-림프구 (예를 들어, CTLA4-Ig, HuMax Il-15 또는 아바타셉트 (Abatacept))를 표적화한 모노클로날 항체;
- 파골활성을 억제하는 변조물질, 예를 들어, RANKL에 대한 항체;
- 케모킨 또는 케모킨 수용체 기능의 변조물질, 예를 들어, CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 및 CCR11 (C-C 패밀리의 경우); CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 및 CXCR5 및 CXCR6 (C-X-C 패밀리의 경우) 및 C-X3-C 패밀리의 경우는 CX3CR1의 길항제;
- 매트릭스 메탈로프로테아제 (MMPs), 즉 스트로멜리신, 콜라게나제 및 젤라티나제뿐만 아니라 아그리카나제 중의 하나 또는 그 이상, 특히 콜라게나제-1 (MMP-1), 콜라게나제-2 (MMP-8), 콜라게나제-3 (MMP-13), 스트로멜리신-1 (MMP-3), 스트로멜리신-2 (MMP-10) 및/또는 스트로멜리신-3 (MMP-11) 및/또는 MMP-9 및/또는 MMP-12의 억제제, 예를 들어, 독시사이클린과 같은 약제;
- 류코트리엔 생합성 억제제, 5-리폭시게나제 (5-LO) 억제제 또는 5-리폭시게나제 활성화 단백질 (FLAP) 길항제, 예를 들어, 질류톤; ABT-761; 펜류톤; 테폭살린; Abbott-79175; Abbott-85761; N-(5-치환된)-티오펜-2-알킬설폰아미드; 2,6-디-tert-부틸페놀하이드라존; Zeneca ZD-2138과 같은 메톡시테트라하이드로피란; 화합물 SB-210661; L-739,010과 같은 피리디닐-치환된 2-시아노나프탈렌 화합물; L-746,530과 같은 2-시아노퀴놀린 화합물; MK-591, MK-886 및/또는 BAY x 1005와 같은 인돌 및/또는 퀴놀린 화합물;
- L-651,392와 같은 페노티아진-3-1s; CGS-25019c와 같은 아미디노 화합물; 온타졸라스트 (ontazolast)와 같은 벤즈옥살라민; BIIL 284/260과 같은 벤젠카복스이미드아미드; 및 자피르루카스트, 아브루카스트, 몬테루카스트, 플란루카스트, 베를루카스트 (MK-679), RG-12525, Ro-245913, 이라루카스트 (CGP 45715A) 및 BAY x 7195와 같은 화합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 류코트리엔 (LT) B4, LTC4, LTD4, 및 LTE4에 대한 수용체 길항제;
- 메틸크산타닌과 같은 포스포디에스테라제 (PDE) 억제제, 예를 들어, 테오필린 및/또는 아미노필린; 및/또는 선택적 PDE 이소효소 (isoenzyme) 억제제, 예를 들어, PDE4 억제제 및/또는 이소형태 PDE4D의 억제제 및/또는 PDE5의 억제제;
- 히스타민 타입 1 수용체 길항제, 예를 들어, 세티리진, 로라타딘, 데스로라타딘, 펙소페나딘, 아크리바스틴, 테르페나딘, 아스테미졸, 아젤라스틴, 레보카바스틴, 클로르페니라민, 프로메타진, 사이클리진 및/또는 미졸라스틴 (일반적으로 경구적으로, 국소적으로 또는 비경구적으로 적용됨);
- 양자 펌프 억제제 (예를 들어, 오메프라졸) 또는 위보호성 히스타민 타입 2 수용체 길항제;
- 히스타민 타입 4 수용체의 길항제;
- 알파-1/알파-2 아드레날린 수용체 아고니스트 혈관수축제 교감신경흥분제, 예를 들어, 프로필헥세드린, 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 에페드린, 슈도에페드린, 나파졸린 하이드로클로라이드, 옥시메타졸린 하이드로클로라이드, 테트라하이드로졸린 하이드로클로라이드, 크실로메타졸린 하이드로클로라이드, 트라마졸린 하이드로클로라이드 및 에틸노르에피네프린 하이드로클로라이드;
- 항콜린작용제, 예를 들어, 무스카린성 수용체 (M1, M2, 및 M3) 길항제, 예를 들어, 아트로핀, 히오신, 글리코피롤레이트, 이프라트로피움 브로마이드, 티오트로피움 브로마이드, 옥시트로피움 브로마이드, 피렌제핀 및 텔렌제핀;
- 베타-아드레날린 수용체 아고니스트 (베타 수용체 서브타입 1-4를 포함), 예를 들어, 이소프레날린, 살부타몰, 포르모테롤, 살메테롤, 터부탈린, 오르시프레날린, 비톨테롤 메실레이트 및/또는 퍼부테롤, 예를 들어, 그의 키랄 에난티오머;
- 크로몬, 예를 들어, 나트륨 크로모글리케이트 및/또는 네도크로밀 나트륨;
- 글루코코르티코이드, 예를 들어, 플루니솔리드, 트리암시놀론 아세토나이드, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소나이드, 플루티카손 프로피오네이트, 시클레소나이드, 및/또는 모메타손 푸로에이트;
- PPAR과 같은 핵 호르몬 수용체를 변조시키는 약제;
- 면역글로불린 (Ig) 또는 Ig 제제 또는 Ig 기능을 변조시키는 길항제 또는 항체, 예를 들어, 안티-IgE (예를 들어, 오말리주마브);
- 그 밖의 다른 전신적 또는 국소적으로 적용된 소염제, 예를 들어, 탈리도마이드 또는 그의 유도체, 레티노이드, 디트라놀 및/또는 칼시포트리올;
- 아미노살리실레이트와 설파피리딘의 조합물, 예를 들어, 설파살라진, 메살라진, 발살라지드, 및 올살라진; 및 면역조절제, 예를 들어, 티오퓨린; 및 코르티코스테로이드, 예를 들어, 부데소나이드;
- 항균제, 예를 들어, 페니실린 유도체, 테트라사이클린, 마크롤라이드, 베타-락탐, 플루오로퀴놀론, 메트로니다졸 및/또는 흡입된 아미노글리코사이드; 및/또는 항바이러스제, 예를 들어, 아사이클로비르, 팜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 시도포비르; 아만타딘, 리만타딘; 리바비린; 자나마비르 및/또는 오셀타마비르; 프로테아제 억제제, 예를 들어, 인디나비르, 넬피나비르, 리토나비르 및/또는 사퀴나비르; 뉴클레오사이드 역전사효소 억제제, 예를 들어, 디다노신, 라미부딘, 스타부딘, 잘시타빈, 지도부딘; 비-뉴클레오사이드 역전사효소 억제제, 예를 들어, 네비라핀, 에파비렌즈;
- 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 안지오텐신-전환효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제와 같은 심혈관용 약제; 지질 저하제, 예를 들어, 스타틴 및/또는 피브레이트; 혈구 형태학의 변조물질, 예를 들어, 펜톡시필린; 혈전용해제 및/또는 항응고제, 예를 들어, 혈소판 응집 억제제;
- CNS 약제, 예를 들어, 항우울제 (예를 들어, 세르트랄린), 항파킨슨 약물 (예를 들어, 데프레닐, L-도파, 로피니롤, 프라미펙솔; MAOB 억제제, 예를 들어, 셀레긴 및 라사질린; comP 억제제, 예를 들어, 타스마르; A-2 억제제, 도파민 재흡수 억제제, NMDA 길항제, 니코틴 아고니스트, 도파민 아고니스트 및/또는 뉴론성 산화질소 신타제의 억제제) 및 항-알츠하이머 약물, 예를 들어, 도네페질, 리바스티그민, 타크린, COX-2 억제제, 프로펜토필린 또는 메트리포네이트;
- 급성 및 만성 통증의 치료를 위한 약제, 예를 들어, 중추 또는 말초-작용성 진통제, 예를 들어, 아편양 유사체 또는 유도체, 카바마제핀, 페니토인, 나트륨 발프로에이트, 아미트리프틸린 또는 다른 항우울제, 파라세타몰, 또는 비-스테로이드성 소염제;
- 비경구적으로 또는 국소적으로 적용된 (흡입 포함) 국소 마취제, 예를 들어, 리그노카인 또는 그의 유사체;
- 항골다공증제, 예를 들어, 랄록시펜과 같은 호르몬제, 또는 알렌드로네이트와 같은 비포스포네이트;
- (i) 트립타제 억제제; (ii) 혈소판 활성화 인자 (PAF) 길항제; (iii) 인터류킨 전환효소 (ICE) 억제제; (iv) IMPDH 억제제; (v) VLA-4 길항제를 포함하는 부착분자 억제제; (vi) 카텝신; (vii) 키나제 억제제, 예를 들어, 티로신 키나제 (예를 들어, Btk, Itk, Jak3 MAP, 억제제의 예로는 게피티니브 (Gefitinib), 이마티니브 (Imatinib) 메실레이트가 포함될 수 있다), 세린/트레오닌 키나제 (예를 들어, p38, JNK, 단백질 키나제 A, B 및 C 및 IKK와 같은 MAP 키나제의 억제제), 또는 세포주기 조절에 연루되는 키나제 (예를 들어, 사이클린 의존성 키나제)의 억제제; (viii) 글루코즈-6 포스페이트 데하이드로게나제 억제제; (ix) 키닌-B1- 및/또는 B2-수용체 길항제; (x) 항통풍제, 예를 들어, 콜히친; (xi) 크산틴 옥시다제 억제제, 예를 들어, 알로퓨리놀; (xii) 요산 배설제, 예를 들어, 프로베네시드, 설핀피라존, 및/또는 벤즈브로마론; (xiii) 성장 호르몬 분비촉진제; (xiv) 변형성장인자 (TGFβ); (xv) 혈소판 유도된 성장인자 (PDGF); (xvi) 섬유아세포 성장인자, 예를 들어, 염기성 섬유아세포 성장인자 (bFGF); (xvii) 과립구 대식세포 콜로니 자극인자 (GM-CSF); (xviii) 캡사이신 크림; (xix) 타키키닌 NK1 및/또는 NK3 수용체 길항제, 예를 들어,NKP-608C, SB-233412 (탈네탄트) 및/또는 D-4418; (xx) 엘라스타제 억제제, 예를 들어, UT-77 및/또는 ZD-0892; (xxi) TNF-알파 전환효소 억제제 (TACE); (xxii) 유도된 산화질소 신타제 (iNOS) 억제제, 또는 (xxiii) TH2 세포 상에서 발현된 화학주성인자 수용체-동종성 분자 (예를 들어, CRTH2 길항제); (xxiv) P38의 억제제, (xxv) 톨 (Toll)-유사 수용체 (TLR)의 기능을 변조시키는 약제, 및 (xxvi) 퓨린성 수용체의 활성을 변조시키는 약제, 예를 들어, P2X7; (xxvii) 전사인자 활성화의 억제제, 예를 들어, NFkB, API, 및/또는 STATS.
억제제는 특이적일 수 있거나, 혼합된 억제제, 예를 들어, 상기 언급된 분자 (예를 들어, 수용체) 또는 분자 클래스 중의 하나 이상을 표적화한 억제제일 수 있다.
결합 성분은 또한 화학요법제 또는 또 다른 티로신 키나제 억제제와 함께 공동-투여하거나 면역컨주게이트의 형태로 사용될 수 있다. 상기 항체의 단편은 또한, 재조합 기전 또는 생화학적 커플링한 다음에 상술한 하체의 특이성을 IL-6이 연관된 활성에 연루된 다른 분자를 인식할 수 있는 다른 항체의 특이성과 연합시킴으로써 수득된 이중특이성 항체로 사용될 수 있다.
염증성 질환의 치료를 위해서, 본 발명의 결합 성분은 국소적으로 또는 전신적으로 적용된 비-선택적 사이클로-옥시게나제 (COX)-1/COX-2 억제제 (예를 들어, 피록시캄, 디클로페낙, 나프록센, 플루르비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜과 같은 프로피온산, 메페남산과 같은 페나메이트, 인도메타신, 술린닥, 아자프로파존, 페닐부타존과 같은 피라졸론, 아스피린과 같은 살리실레이트); 선택적 COX-2 억제제 (예를 들어, 멜록시캄, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루마로콕시브, 파레콕시브 및 에토리콕시브); 사이클로-옥시게나제 억제성 산화질소 공여체 (CINODs); 글루코코르티코스테로이드 (국소, 경구, 근육내, 정맥내 또는 관절내 경로로 투여됨); 메토트렉세이트, 레플루노미드; 하이드록시클로로퀸, d-페니실라민, 아루아노핀 또는 그 밖의 다른 비경구용 또는 경구용 금 제제; 진통제; 디아세레인; 히알우론산 유도체와 같은 관절내 요법; 및 글루코사민과 같은 영양소 보충물을 포함하는 비-스테로이드성 소염제 (이하에서는 NSAIDs)와 같은 하나 또는 그 이상의 약제와 조합될 수 있다.
본 발명의 결합 성분은 또한, 암의 치료를 위한 기존의 치료학적 약제와 함께 사용될 수도 있다. 조합하여 사용되는 적합한 약제에는 다음이 포함된다:
(i) 의학적 종양학에서 사용되는 것으로서 항증식성/항신생물성 약물 및 이들의 조합물, 예를 들어, 글리벡 (Gleevec) (이마티니브 메실레이트), 알킬화제 (예를 들어, 시스-플라틴, 카르보플라틴, 사이클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부설판 및 니트로소우레아); 항대사물질 (예를 들어, 항엽산제, 예를 들어, 5-플루오로우라실 및 테가푸르와 같은 플루오로피리미딘, 랄티트렉시드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노사이드, 하이드록시우레아, 젬시타빈 및 파클리탁셀); 항종양 항생물질 (예를 들어, 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신과 같은 안트라사이클린); 항유사분열제 (예를 들어, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드 및 탁솔 및 탁소테레와 같은 탁소이드); 및 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 에토포사이드 및 테니포사이드와 같은 에피포도필로톡신, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);
(ii) 세포증식억제제, 예를 들어, 항에스트로겐 (예를 들어, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요독시펜), 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (예를 들어, 풀베스트란트), 항안드로겐 (예를 들어, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 사이프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 아고니스트 (예를 들어, 고세렐린, 류프로렐린 및 부세렐린), 프로게스테론 (예를 들어, 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제 (예를 들어, 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑세메스테인), 및 피나스테라이드와 같은 5α-리덕타제의 억제제;
(iii) 암세포 침습을 억제하는 약제 (예를 들어, 마리마스타트와 같은 메탈로프로테이나제 억제제 및 유로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체 기능의 억제제);
(iv) 성장인자 기능의 억제제, 예를 들어, 이러한 억제제는 성장인자 항체, 성장인자 수용체 항체 (예를 들어, 안티-erbb2 항체 트라스투주마브 및 안티-erbb1 항체 세툭시마브 [C225]), 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 티로신 키나제 억제제 및 세린/트레오닌 키나제 억제제, 예를 들어, 표피성장인자 패밀리의 억제제 (예를 들어, EGFR 패밀리 티로신 키나제 억제제, 예를 들어, N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민 (게피티니브, AZD1839), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민 (에를로티니브, OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민 (CI 1033)), 예를 들어, 혈소판 유도된 성장인자 패밀리의 억제제, 및 예를 들어, 간세포 성장인자 패밀리의 억제제;
(v) 혈관 내피성장인자의 효과를 억제하는 것 (예를 들어, 항-혈관 내피세포 성장인자 항체 베바시주마브, 각각이 본 발명에 온전히 포함된 국제특허출원 WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 및 WO 98/13354에 기술된 것과 같은 화합물) 및 다른 기전에 의해서 작용하는 화합물 (예를 들어, 리노마이드, 인테그린 αγβ3 기능의 억제제 및 안지오스타틴)과 같은 항혈관형성제;
(vi) 혈관 손상제, 예를 들어, 콤브레타스타틴 A4 및 국제특허출원 WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 및 WO 02/08213 (이들은 각각 본 발명에 온전히 포함된다)에 기술된 화합물;
(vii) 안티센스 요법, 예를 들어, 안티-ras 안티센스인 ISIS 2503과 같이 상기 열거된 표적에 대해 지시된 것;
(viii) 예를 들어, 이상 p53 또는 이상 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 이상 유전자를 대체시키기 위한 접근방법, 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용하는 것과 같은 GDEPT (유전자 지시된 효소 프로드럭 요법) 접근방법 및 다중-약물 내성 유전자 요법과 같이 화학요법 또는 방사선요법에 대한 환자 내성을 증가시키는 접근방법을 포함하는 유전자 요법 접근방법; 및
(ix) 예를 들어, 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구 대식세포 콜로니 자극인자와 같은 사이토킨에 의한 형질감염과 같은 환자 종양세포의 면역원성을 증가시키는 생체외 및 생체내 접근방법, T-세포 아네르기 (anergy)를 감소시키는 접근방법, 사이토킨-형질감염된 수상돌기세포와 같은 형질감염된 면역세포를 사용한 접근방법, 사이토킨-형질감염된 종양 세포주를 사용한 접근방법 및 항-이디오타입 항체를 사용한 접근방법을 포함하는 면역요법적 접근방법.
본 발명의 결합 성분 및 하나 또는 그 이상의 상기한 추가의 의학적 성분이 의약의 제조에 사용될 수 있다. 의약은 개체에 대한 독립적이거나 조합된 투여를 위한 것일 수 있으며, 따라서 결합 성분 및 추가의 성분을 조합된 제제로서 또는 별개의 제제로서 포함할 수 있다. 별개의 제제는 독립적인 순차적 투여 또는 동시 투여를 용이하게 하도록 사용될 수 있으며, 상이한 경로에 의한 성분의 투여, 예를 들어, 경구 및 비경구 투여를 가능하게 한다.
본 발명에 따르면, 제공된 조성물은 포유동물에게 투여될 수 있다. 투여는 통상적으로 "치료학적 유효량"으로 이루어지며, 이것은 환자에게 유익함을 나타내기에 충분한 것이다. 이러한 유익함은 적어도 하나의 증상의 적어도 개선일 수 있다. 투여되는 실제량, 및 투여의 속도 및 시간-과정은 치료되는 것의 성질 및 중증도, 치료되는 특정한 포유동물, 개별적인 환자의 임상적 조건, 장애의 원인, 조성물의 송달 부위, 결합 성분의 타입, 투여의 방법, 투여의 스케줄 및 일반 개업의에게 알려진 그 밖의 다른 인자에 따라 좌우될 수 있다. 치료의 처방, 예를 들어, 투약량 등의 결정은 일반 개업의 및 다른 의사의 책임의 범위 내에 있으며, 증상의 중증도 및/또는 치료할 질병의 진행에 따라 좌우될 수 있다. 항체의 적절한 용량은 본 기술분야에서 잘 알려져 있다 [Ledermann J.A. 등. (1991) Int. J. Cancer 47: 659-664; Bagshawe K.D. 등. (1991) Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4: 915-922]. 투여되는 의약의 타입에 적절한 것으로서 본 발명에서, 또는 문헌 [Physician's Desk Reference (2003)]에 나타낸 특정의 투약량이 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 성분의 치료학적 유효량 또는 적합한 용량은 그의 시험관내 활성 및 동물 모델에서의 생체내 활성을 비교함으로써 결정될 수 있다. 마우스 및 다른 시험 동물에서의 효과적인 투약량으로부터 인간에 대해서 추론하는 방법은 공지되어 있다. 정확한 용량은 항체가 진단용인지, 예방용인지, 치료용인지 여부, 치료할 영역의 크기 및 위치, 항체 (예를 들어, 전체 항체, 단편 또는 디아바디)의 정확한 성질, 및 모든 검출가능한 라벨 또는 항체에 부착된 다른 분자의 성질을 포함하는 다수의 인자에 따라 좌우될 수 있다. 전형적인 항체 용량은 전신적 적용을 위해서는 100 ㎍ 내지 1 g, 및 국소 적용을 위해서는 1 ㎍ 내지 1 ㎎의 범위일 수 있다. 초기의 더 큰 부하 복용량에 이어서 하나 또는 그 이상의 더 작은 용량이 투여될 수 있다. 전형적으로, 항체는 전체 항체, 예를 들어, IgG1 이소타입일 수 있다. 이것은 성인 환자의 효과적인 치료를 위한 용량이며, 이것은 소아 및 유아의 경우에는 비례적으로 조정될 수 있고, 또한 다른 항체 형태의 경우에는 분자량에 비례하여 조정될 수 있다. 치료는 의사의 재량에 따라 매일, 주 2 회, 1 주일 또는 1 개월 간격으로 반복될 수 있다. 치료는 피하 투여의 경우에는 2 내지 4 주일마다, 및 정맥내 투여의 경우에는 4 내지 8 주일마다 이루어질 수 있다. 치료는 주기적일 수 있으며, 투여간의 주기는 약 2 주일 또는 그 이상, 예를 들어, 약 3 주일 또는 그 이상, 약 4 주일 도는 그 이상, 또는 대략 1 개월에 1 회이다. 치료는 수술 전 및/또는 후에 제공될 수 있고/있거나 수술 치료의 해부학적 부위에서 직접 투여되거나 적용될 수 있다.
본 발명의 IL-6 결합 성분은 sIL-6Ra에 대한 항체에 비해서 투약량 및 투여 필요조건의 관점에서 이점을 제공할 수 있다. 본 발명의 다른 부분에서 언급한 바와 같이, IL-6의 순환 레벨은 질병에서 sIL-6Ra의 순환 레벨보다 상당히 더 낮다. 따라서, 안티-IL-6R 결합 성분과는 반대로 IL-6 결합 성분의 사용은 환자에 대한 각각의 용량을 위해서 제조되는 약물의 양이 더 작을 수 있다는 상당한 이점을 갖는다. 또한, 안티-IL6 치료제의 용량이 더 작다면, 여기에서는 저용량이 피하 주사뿐만 아니라 정맥내 (i.v.) 주사를 용이하게 한다는 상당한 이점이 있을 수 있다. 피하 투약은 용량당 필요한 결합 성분, 예를 들어, 항체 분자의 양에 의해서 제한될 수 있다는 것은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려져 있다. 이것은 피하 주사가 피부의 한 부위에 주사될 수 있는 용적에 의해서 제한되기 때문이다. 1.2 ㎖ 또는 그 미만의 피하 주사 용적이 전형적으로 이용된다. 이것은 50 ㎎/㎖보다 큰 농도에서 피하 주사하기 위해서 결합 성분을 제제화하는 것을 더욱더 어렵게 할 수 있기 때문에, 이 경로를 통한 100 ㎎ 이상의 용량은 통상적으로 수회 주사를 필요로 하며, 환자를 더 불쾌하게 한다.
더 저용량을 갖는 안티-IL-6 치료제는 또한, 전신적 sIL-6Ra가 더 고농도로 존재하기 때문에 이에 비해 모든 전신적 IL-6을 억제하기 위해서 더 작은 "부하" 용량을 필요로 할 수 있다.
추가로, 유익한 점은 IL-6 수용체보다 IL-6을 표적화하는 것과 연관될 수 있으며, 이것은 IL-6Ra에 대한 결합 성분과 비교하여 본 발명의 결합 성분의 추가의 이점을 나타낸다.
예를 들어, IL-6의 순환 레벨이 질병에서 sIL-6Ra의 순환 레벨보다 상당히 더 낮다는 것을 보여주는 문헌 보고가 있다 [Desgeorges 등. (1997) J. Rheumatol 24:1510; Yokota 등. (2005) Arth & Rheum 52(3): 818-25]. sIL-6R의 레벨은 IL-6 레벨보다 상당히 더 크기 때문에, sIL-6Ra를 중화시키기 위해서는 IL-6을 중화시키는데 필요한 안티-IL-6 결합 성분의 양에 비해서 더 많은 안티-sIL-6R 결합 성분이 필요할 수 있다. 따라서, 안티-수용체 결합 성분이 사용된 경우에 비해서 더 저용량의 안티-리간드 결합 성분이 필요할 수 있다.
IL-6 수용체가 아닌 IL-6 리간드를 표적화하는 것은 질병 시의 IL-6의 레벨을 감소시킬 수 있지만, 감염 중에는 여전히 IL-6 레벨이 증가하도록 하며, 여기에서 IL-6은 면역반응의 일부로서 상향-조절된다.
카와노 (Kawano) 등 [Nature (1988) 332:83]은 IL-6이 강력한 성장인자였음을 나타내었으며, 환자로부터 신선하게 분리된 골수종 세포는 IL-6을 생산하고 그의 수용체를 발현함을 나타내었다. 더구나, 안티-IL-6 항체는 골수종 세포의 시험관내 성장을 억제한다. 이것은 자가분비 루프 (autocrine loop)가 인간 골수종의 종양발생에서 작용한다는 직접적인 증거이다. 상기 시험에 이어서, 반자넨 (Van Zaanen) 등 [J. Clin.Invest. (1996) 98:1441-1448]은 다발성 골수종 환자에게서 IL-6의 생산이 안티-IL-6 리간드 항체로 처리한 경우에 감소함을 입증하였다.
다수의 추가의 시험은 IL-6이 다른 세포 타입, 예를 들어, 평활근 세포 (SMC) [Klouche 등., (1999) J. Immunol. 163(8) 4583-9], U373-MG 성상교종 세포 [Oh 등., (2001) J. Immunol. 166: 2695-704], 3T3 지방세포 [Fasshauer 등., (2003) Horm. Metab. Res. 35(3) 147-52], 뉴론 [Marz 등., (1998) Proc. Natl. Acad. Sci USA 95(6) 3251-6], 내피세포 [Modur 등., (1997) J. Clin. Invest. 100(1) 2752-6] 및 카포시 (Kaposi) 육종 세포 [Murakami-Morl 등., (1996) Cell Growth Differ. 7(12) 1697-703]에서 자가분비 피드백 루프 내에 포함되는 것을 나타낸다. 따라서, 질병 시에 안티-IL6 결합 성분을 사용한 IL-6의 억제는 IL-6의 기초 질병 생산의 감소를 초래할 수 있다.
또한, 안티-IL-6 결합 성분은 치료할 질병의 병리학에 포함된 세포의 표면상의 수용체를 점유하기 위해서 조직 내로 침투하는 것이 필요한 IL-6 수용체에 대한 결합 성분과는 반대로 전신 순환 내의 IL-6에 결합한다.
IL-6에 대한 결합 성분은 전신 순환 중의 IL-6과 평형을 형성할 수 있으며, 이것은 관절로부터 활성 IL-6을 제거하고, 결합 성분과의 불활성 컴플렉스를 형성하는 순수한 효과를 갖는 장벽, 예를 들어, 활액을 가로질러서 구배를 야기하는 효과를 갖는다. 그 결과는, IL-6R 결합 성분에 비해서 IL-6 결합 성분이 더 빠른 발현을 가질 수 있고, 투약 레지멘이 상이할 수 있으며 잠재적으로 더 쉽게 최적화할 수 있다는 것이다.
IL-6 시그날링은 IL-6R에 대한 IL-6 결합 및 그 컴플렉스의 gp130에 대한 결합에 의해서 매개된다. IL-6 및 IL-6Ra 결합이 나노몰 친화성 (약 5 nM)으로 이루어지고, IL6:IL6R 컴플렉스 및 gp130 결합은 피코몰 친화성으로 이루어진다는 것을 고려하면, IL-6을 표적으로 하는 결합 성분은 IL-6 결합에 대한 더 적은 양의 경쟁에 직면하며, 따라서 더 큰 비율의 IL-6 시그날링을 억제할 수 있다. 이것은 또한 가용성 IL-6Ra을 표적으로 하며, IL-6:IL-6Ra 컴플렉스 형성을 방지하는 결합 성분에 대해서 적용할 수 있지만, 그 후에 IL-6Ra가 입체적 속박으로 인하여 막 결합된다면, 안티-IL-6Ra는 막 상에 존재하는 IL-6Ra를 결합시키고 억제하기가 더 어려울 수 있다.
본 발명은 대상체에게 유효량의 본 발명의 조성물을 투여함으로써 장애, 예를 들어, IL-6의 이상 발현 및/또는 활성과 연관되거나 그를 특징으로 하는 장애, IL-6 수용체의 이상 발현 및/또는 활성과 연관된 장애, 자가면역 장애, 염증성 장애, 증식성 장애, 감염, 또는 이들의 하나 또는 그 이상의 증상을 예방, 치료 및/또는 관리하는 방법을 제공한다. 다양한 송달 시스템이 공지되어 있으며, 본 발명의 조성물 또는 예방적 또는 치료학적 약제를 투여하기 위해서 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물 또는 치료제 (예를 들어, 예방적 또는 치료학적 약제)를 투여하는 방법은 비경구 투여 (예를 들어, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 신경주위 및 피하), 경막외 투여, 국소 투여, 및 점막 투여 (예를 들어, 비내 및 경구 경로, 단 이들로 제한되지는 않는다)를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 근육내, 정맥내 또는 피하로 투여된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 피하로 투여된다. 제제는 어떤 편리한 경로에 의해서라도, 예를 들어, 주입 또는 일시 주사 (bolus injection)에 의해서, 상피 또는 점액피부 라이닝 (예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해서 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성 약제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적이거나 국소적일 수 있다.
본 발명은 또한, 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 양을 나타내는 앰플 또는 샤세 (sachet)와 같은 용접 밀봉된 용기 내에 포장된 본 발명의 조성물을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 양 및 농도를 나타내는 용접 밀봉된 용기 내에 존재한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 용접 밀봉된 용기 내에 제공되며, 약 1 ㎖, 약 2 ㎖, 약 3 ㎖, 약 4 ㎖, 약 5 ㎖, 약 6 ㎖, 약 7 ㎖, 약 8 ㎖, 약 9 ㎖, 약 10 ㎖, 약 15 ㎖, 또는 약 20 ㎖의 양으로 약 10 ㎎/㎖, 약 15 ㎎/㎖, 약 20 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖, 약 40 ㎎/㎖, 약 50 ㎎/㎖, 약 60 ㎎/㎖, 약 70 ㎎/㎖, 약 80 ㎎/㎖, 약 90 ㎎/㎖, 약 100 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖, 약 175 ㎎/㎖, 약 200 ㎎/㎖, 약 250 ㎎/㎖, 또는 약 300 ㎎/㎖의 특이적으로 IL-6에 결합하는 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함한다. 본 발명의 특정의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 용접 밀봉된 용기 내에 제공되며, 정맥 주사를 위해서는 적어도 약 15 ㎎/㎖, 적어도 약 20 ㎎/㎖, 적어도 약 25 ㎎/㎖, 적어도 약 50 ㎎/㎖, 적어도 약 100 ㎎/㎖, 적어도 약 150 ㎎/㎖, 적어도 약 175 ㎎/㎖, 적어도 약 200 ㎎/㎖, 적어도 약 250 ㎎/㎖, 또는 적어도 약 300 ㎎/㎖의 특이적으로 IL-6에 결합하는 항체 (그의 항체 단편을 포함) (예를 들어, 항체 18E, 단 이것으로 제한되지는 않는다), 및 반복 피하 투여를 위해서는 적어도 약 15 ㎎/㎖, 적어도 약 20 ㎎/㎖, 적어도 약 50 ㎎/㎖, 적어도 약 80 ㎎/㎖, 적어도 약 100 ㎎/㎖, 적어도 약 150 ㎎/㎖, 적어도 약 175 ㎎/㎖, 적어도 약 200 ㎎/㎖, 적어도 약 250 ㎎/㎖, 또는 적어도 약 300 ㎎/㎖의 특이적으로 IL-6에 결합하는 항체 (예를 들어, 항체 18E, 단 이것으로 제한되지는 않는다)를 포함한다.
IL-6의 이상 발현 및/또는 활성과 연관되거나 그를 특징으로 하는 질병 또는 장애, IL-6 수용체 또는 그의 하나 또는 그 이상의 서브유니트의 이상 발현 및/또는 활성과 연관되거나 그를 특징으로 하는 질병 또는 장애, 자가면역 질환, 이식 거부반응, 이식편대숙주 질환, 또는 이들의 하나 또는 그 이상의 증상의 예방, 치료 및/또는 관리에 효과적일 수 있는 본 발명의 조성물의 양은 본 기술분야에서 잘 알려져 있거나 본 발명에 기술된 표준 임상기술에 의해서 결정될 수 있다. 조성물에서 사용될 정확한 용량은 또한, 투여의 경로, 및 염증성 장애 또는 자가면역 장애의 중등도에 따라 결정될 수 있으며, 의사의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 추론될 수 있다.
본 발명에 포함된 항체의 조성물의 경우에, 환자에게 투여된 투약량은 킬로그램 (㎏)으로 나타낸 환자의 체중과 ㎎/㎏으로 나타낸 투여될 용량을 곱한 값을 사용하여 계산될 수 있다. 그 후, 제공될 필요한 용적 (㎖로)은 필요한 ㎎ 용량을 항체 제제의 농도로 나누어 줌으로써 결정된다. 최종적으로 계산된 필요한 용적은 본 발명의 항체 제제를 투여하기 위해서 필요한 만큼 많은 바이알의 내용물을 시린지(들) 내로 모아줌으로써 수득될 수 있다. 최종적으로 계산된 필요한 용적은 약물을 투여하기 위해서 필요한 만큼 많은 바이알의 내용물을 시린지(들) 내로 모아줌으로써 수득될 수 있다. 항체 제제의 2.0 ㎖의 최대 용적이 부위당 주사될 수 있다. 용량 (㎖로)은 다음의 수학식을 사용하여 계산될 수 있다: 용량 (㎖) = [지원자 체중] (㎏) × [용량] ㎎/㎏ ÷ 100 ㎎/㎖의 항체 제제. 본 발명의 항체는 인체 내에서 연장된 반감기를 갖는다. 따라서, 더 낮은 투약량의 본 발명의 항체 및 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다. 또한, 본 발명의 조성물의 투약량, 용적 및 투여의 빈도는 조성물 내의 항체의 농도를 증가시키고, 항체의 친화성 및/또는 화합력을 증가시킴으로써 감소될 수 있다.
특정의 구체예에서, 환자에게 투여된 투약량은 킬로그램 (㎏)으로 나타낸 환자의 체중과 ㎎/㎏으로 나타낸 투여될 용량을 곱한 값을 사용하여 계산될 수 있다. 그 후, 제공될 필요한 용적 (㎖로)은 필요한 ㎎ 용량을 제제 내의 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 농도 (100 ㎎/㎖)로 나누어 줌으로써 결정된다. 최종적으로 계산된 필요한 용적은 약물을 투여하기 위해서 필요한 만큼 많은 바이알의 내용물을 시린지(들) 내로 모아줌으로써 수득될 수 있다. 제제 내의 항체 (그의 항체 단편을 포함)의 2.0 ㎖의 최대 용적이 부위당 주사될 수 있다.
특정의 구체예에서는, 조성물 내의 IL-6에 특이적으로 결합하는 항체 (그의 항체 단편을 포함) (예를 들어, 항체 18E, 단 이것으로 제한되지는 않는다)를 0.1 내지 20 ㎎/㎏/주, 1 내지 15 ㎎/㎏/주, 2 내지 8 ㎎/주, 3 내지 7 ㎎/㎏/주, 또는 4 내지 6 ㎎/㎏/주로 염증성 장애 또는 자가면역 장애를 갖는 대상체에게 투여한다. 또 다른 구체예에서, 대상체는 본 발명의 조성물의 예방적 또는 치료학적 유효량의 하나 또는 그 이상의 용량을 투여하며, 여기에서 예방적 또는 치료학적 유효량은 각각의 용량에 대해서 동일하지 않다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 조성물은 IL-6에 대해서 특이적인 항체의 혈장 농도를 IL-6 활성을 지속적으로 차단하는 바람직한 레벨 (예를 들어, 약 0.1 내지 약 100 ㎍/㎖)로 유지하는 투약 레지멘으로 투여된다. 특정의 구체예에서, 항체의 혈장 농도는 약 0.2 ㎍/㎖, 약 0.5 ㎍/㎖, 약 1 ㎍/㎖, 약 2 ㎍/㎖, 약 3 ㎍/㎖, 약 4 ㎍/㎖, 약 5 ㎍/㎖, 약 6 ㎍/㎖, 약 7 ㎍/㎖, 약 8 ㎍/㎖, 약 9 ㎍/㎖, 약 10 ㎍/㎖, 약 15 ㎍/㎖, 약 20 ㎍/㎖, 약 25 ㎍/㎖, 약 30 ㎍/㎖, 약 35 ㎍/㎖, 약 40 ㎍/㎖, 약 45 ㎍/㎖ 또는 약 50 ㎍/㎖에서 유지된다. 대상체에서 바람직한 혈장 농도는 질병 또는 장애의 성질, 질병 또는 장애의 중증도 및 대상체의 상태를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 몇 가지 인자에 따라서 달라질 수 있다. 이러한 투약 레지멘은 만성 질병 또는 장애의 예방, 치료 및/또는 관리에 특히 유익하다.
특정의 구체예에서, IL-6에 대해서 특이적인 컨주게이트된 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 포함하는 본 발명의 조성물은 간헐적으로 투여된다. 본 발명에서 사용된 것으로서, "컨주게이트된 항체 또는 항체 단편"은 이종 펩타이드, 폴리펩타이드, 또 다른 항체 (그의 항체 단편을 포함), 마커 서열, 진단제, 폴리머, 알부민, 및 고체 지지체를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 또 다른 부위에 컨주게이트되거나 융합된 항체 (그의 항체 단편을 포함)를 나타낸다.
또 다른 구체예에서, 인간 대상체에게는 본 발명의 조성물 내의, IL-6에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, 항체 18E, 단, 이것으로 제한되지 않는다)의 예방적 또는 치료학적 유효량의 하나 또는 그 이상의 용량을 투여하며, 여기에서 상기 대상체에게 투여된 본 발명의 조성물 내의 항체의 예방적 또는 치료학적 유효량의 용량은 치료 진행에 따라 예를 들어, 약 0.01 ㎍/㎏, 약 0.02 ㎍/㎏, 약 0.04 ㎍/㎏, 약 0.05 ㎍/㎏, 약 0.06 ㎍/㎏, 약 0.08 ㎍/㎏, 약 0.1 ㎍/㎏, 약 0.2 ㎍/㎏, 약 0.25 ㎍/㎏, 약 0.5 ㎍/㎏, 약 0.75 ㎍/㎏, 약 1 ㎍/㎏, 약 1.5 ㎍/㎏, 약 2 ㎍/㎏, 약 4 ㎍/㎏, 약 5 ㎍/㎏, 약 10 ㎍/㎏, 약 15 ㎍/㎏, 약 20 ㎍/㎏, 약 25 ㎍/㎏, 약 30 ㎍/㎏, 약 35 ㎍/㎏, 약 40 ㎍/㎏, 약 45 ㎍/㎏, 약 50 ㎍/㎏, 약 55 ㎍/㎏, 약 60 ㎍/㎏, 약 65 ㎍/㎏, 약 70 ㎍/㎏, 약 75 ㎍/㎏, 약 80 ㎍/㎏, 약 85 ㎍/㎏, 약 90 ㎍/㎏, 약 95 ㎍/㎏, 약 100 ㎍/㎏, 또는 약 125 ㎍/㎏ 만큼 증가된다.
또 다른 구체예에서, 대상체 (예를 들어, 인간)에게는 본 발명의 조성물 내의, IL-6에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, 항체 18E, 단, 이것으로 제한되지 않는다)의 예방적 또는 치료학적 유효량의 하나 또는 그 이상의 용량을 투여하며, 여기에서 상기 대상체에게 투여된 본 발명의 조성물 내의 항체의 예방적 또는 치료학적 유효량의 용량은 치료 진행에 따라 예를 들어, 약 0.01 ㎍/㎏, 약 0.02 ㎍/㎏, 약 0.04 ㎍/㎏, 약 0.05 ㎍/㎏, 약 0.06 ㎍/㎏, 약 0.08 ㎍/㎏, 약 0.1 ㎍/㎏, 약 0.2 ㎍/㎏, 약 0.25 ㎍/㎏, 약 0.5 ㎍/㎏, 약 0.75 ㎍/㎏, 약 1 ㎍/㎏, 약 1.5 ㎍/㎏, 약 2 ㎍/㎏, 약 4 ㎍/㎏, 약 5 ㎍/㎏, 약 10 ㎍/㎏, 약 15 ㎍/㎏, 약 20 ㎍/㎏, 약 25 ㎍/㎏, 약 30 ㎍/㎏, 약 35 ㎍/㎏, 약 40 ㎍/㎏, 약 45 ㎍/㎏, 약 50 ㎍/㎏, 약 55 ㎍/㎏, 약 60 ㎍/㎏, 약 65 ㎍/㎏, 약 70 ㎍/㎏, 약 75 ㎍/㎏, 약 80 ㎍/㎏, 약 85 ㎍/㎏, 약 90 ㎍/㎏, 약 95 ㎍/㎏, 약 100 ㎍/㎏, 또는 약 125 ㎍/㎏ 만큼 증가된다.
항체 반감기
특정의 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 안티-IL-6 항체의 반감기는 적어도 약 10일이다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 안티-IL-6 항체의 평균 반감기는 적어도 약 20 내지 40일, 25 내지 40일, 26 내지 40일, 20 내지 30일, 25 내지 30일, 26 내지 30일, 또는 26 내지 29일이다. 또한 추가의 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 안티-ICOS 항체의 반감기는 약 50일까지일 수 있다. 특정의 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체의 반감기는 본 기술분야에서 공지된 방법에 의해서 연장될 수 있다. 이러한 연장은 다시 항체 조성물의 투약의 양 및/또는 빈도를 감소시킬 수 있다. 개선된 생체내 반감기를 갖는 항체 및 이들을 제조하는 방법은 미국 특허 제6,277,375호; 및 국제공개 제WO 98/23289 및 WO 97/3461호에 기술되어 있다.
생체내에서 안티-IL-6 항체의 혈청 순환은 또한, 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 PEG의 부위-특이적 컨주게이션을 통해서, 또는 리실 잔기 상에 존재하는 입실론-아미노 그룹을 통해서 다기능성 링커가 있거나 없이 항체에 고분자량 폴리에틸렌글리콜 (PEG)과 같은 불활성 폴리머 분자를 부착시킴으로써 연장될 수 있다. 생물학적 활성의 최소 상실을 제공하는 선형 또는 측쇄 폴리머 유도체화가 사용될 수 있다. 컨주게이션의 정도는 항체에 대한 PEG 분자의 적절한 컨주게이션을 보장하기 위해서 SDS-PAGE 및 질량 분광법에 의해 밀접하게 모니터링될 수 있다. 미반응 PEG는 크기-배제에 의해서, 또는 이온-교환 크로마토그래피에 의해서 항체-PEG 컨주게이트로부터 분리시킬 수 있다. PEG 유도체화된 항체는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어, 본 발명에 기술된 면역측정법에 의해서 결합 활성에 대해서뿐만 아니라 생체내 효능에 대해서 시험할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체는 항체를 생체내에서 더 안정하게 만들거나 생체내에서 더 긴 반감기를 갖도록 하기 위해서 알부민에 컨주게이트될 수 있다. 상기 기술은 본 기술분야에서, 예 잘 알려져 있다 [참조: 예를 들어, 모두 본 발명에 참고로 포함된 국제공개 제WO 93/15199, WO 93/15200, 및 WO 01/77137호; 및 유럽 특허 제EP 413, 622호].
추가로, 항체에 대해서 증가된 생체내 반감기를 제공하는 변이체 Fc 부분이 기술되었다 [참조: 미국 특허공개 제US2003/0190311 A1호]. 본 발명의 조성물 및 방법과 함께 연장된 생체내 반감기를 갖는 Fc 변이체의 사용이 고려된다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 안티-IL-6 항체는 증가된 생체내 반감기를 갖는 변이체 Fc 부분을 포함한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 안티-IL-6 항체는 잔기 252, 254, 및 256으로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나의 치환을 포함하는 변이체 Fc 부분을 포함한다 (여기에서, 아미노산 잔기 위치는 EU 협약에 따라 결정된다). 특정의 구체예에서, 본 발명의 안티-IL-6 항체는 잔기 M252Y, S254T, 및 T256E로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 변이체 Fc 부분을 포함한다 (여기에서, 아미노산 잔기 위치는 EU 협약에 따라 결정된다). 추가의 구체예에서, 본 발명의 안티-IL-6 항체는 위치 252에서 Y, 위치 254에서 T, 및 위치 256에서 E로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함하는 변이체 Fc 부분을 포함한다 (여기에서, 아미노산 잔기 위치는 EU 협약에 따라 결정된다).
Fc 변이체
본 발명은 변이체 Fc 부분을 포함하는 안티-IL-6 항체를 제공한다. 이것은 비-천연적으로 존재하는 Fc 부분, 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 비-천연적으로 전재하는 아미노산 잔기를 포함하는 Fc 부분이다. 또한, 아미노산 결실, 부가 및/또는 변형을 포함하는 Fc 부분이 본 발명의 변이체 Fc 부분에 포함된다.
본 발명에서 사용된 것으로서 Fc 부분은 제1 불변 부분 면역글로불린 영역을 제외한 항체의 불변 부분을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 것으로 이해될 수 있다. 따라서, Fc는 IgA, IgD, 및 IgG의 마지막 2 개의 불변 부분 면역글로불린 영역, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3 개의 불변 부분 면역글로불린 영역, 및 이들 영역에 대한 유연성 힌지 (hinge) N-말단을 나타낸다. IgA 및 IgM의 경우에, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우에, Fc는 면역글로불린 영역 C감마2 및 C감마3 (Cγ2 및 Cγ3) 및 C감마1 (Cγ1)과 C감마2 (Cγ2) 사이의 힌지를 포함한다. Fc 부분의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 부분은 통상적으로 그의 카복실-말단쪽으로 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 정의되며, 여기에서 넘버링은 카밧 (Kabat) 등 [1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, VA]에 의한 EU 인덱스에 따른다. "카밧에 의해 설명된 바와 같은 EU 인덱스"는 상기한 카밧 등에 의해 기술된 바와 같은 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 나타낸다. Fc는 분리 상태의 이 부분, 또는 항체, 항체 단편 또는 Fc 융합 단백질의 맥락에서의 이 부분을 나타낼 수 있다. Fc 변이체 단백질은 Fc의 비-천연적으로 존재하는 변이체인 변이체 Fc 부분을 포함하는 단백질을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 항체, Fc 융합물, 또는 Fc 부분을 포함하는 모든 단백질 또는 단백질 영역일 수 있다. 주: 다형현상은 카밧 270, 272, 312, 315, 356, 및 358을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 다수의 Fc 위치에서 관찰되었으며, 따라서 제시된 서열과 선행기술에서의 서열 사이에서 약간의 차이가 존재할 수 있다.
본 발명은 비교가능한 분자 (예를 들어, 야생형 Fc 부분을 갖는 것을 제외하고는 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질)에 비해 Fc 리간드 (예를 들어, Fc 수용체, C1q)에 대해 변화된 결합 특성을 갖는 Fc 변이체 단백질을 포함한다. 결합 특성의 예로는 결합 특이성, 평형 해리 상수 (KD), 해리 및 결합속도 (각각 koff 및 kon), 결합 친화성 및/또는 화합력이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 일반적으로, 낮은 KD를 갖는 결합 분자 (예를 들어, 항체와 같은 Fc 변이체 단백질)이 높은 KD를 갖는 결합 분자보다 바람직할 수 있는 것으로 이해된다. 그러나, 일부의 경우에 kon 또는 koff의 값이 KD의 값보다 더 적절할 수 있다. 본 기술분야에서 숙련된 전문가는 어떤 동역학적 파라메터 (kinetic parameter)가 소정의 항체 적용에 가장 중요한지를 결정할 수 있다.
Fc 영역의 그의 리간드에 대한 친화성 및 결합 특성은 Fc-FcγR 상호작용, 즉 FcγR에 대한 Fc 분자의 특이적 결합을 결정하기 위하여 본 기술분야에서 공지된, 평형방법 (예를 들어, 효소-결합된 면역흡착시험 (ELISA), 또는 방사성 면역측정법 (RIA)), 또는 동역학적 방법 (예를 들어, 비아코어 (BIACORE®) 분석), 및 간접 결합시험, 경쟁적 억제시험, 형광성 공명 에너지 전이 (FRET), 겔 전기영동 및 크로마토그래피 (예를 들어, 겔 여과)와 같은 그 밖의 다른 방법을 포함한 다양한 시험관내 시험방법 (생화학 또는 면역학 기본 시험방법)에 의해서 결정될 수 있다. 이들 및 그 밖의 다른 방법은 시험하는 성분 중의 하나 또는 그 이상에서 라벨을 이용할 수 있고/있거나, 색원성, 형광성, 발광성 또는 동위원소성 라벨을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 다양한 검출방법을 사용할 수 있다. 결합 친화성 및 동역학에 대한 상세한 설명은 항체-면역원 상호작용에 초점을 맞춘 문헌 [Paul, W.E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)]에서 찾을 수 있다.
하나의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 비해서 하나 또는 그 이상의 Fc 리간드에 대해 증진된 결합을 갖는다. 또 다른 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 리간드에 대해서 비교가능한 분자의 경우보다 적어도 2 배, 또는 적어도 3 배, 또는 적어도 5 배, 또는 적어도 7 배, 또는 적어도 10 배, 또는 적어도 20 배, 또는 적어도 30 배, 또는 적어도 40 배, 또는 적어도 50 배, 또는 적어도 60 배, 또는 적어도 70 배, 또는 적어도 80 배, 또는 적어도 90 배, 또는 적어도 100 배, 또는 적어도 200 배 더 큰 친화성을 갖는다. 특정의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체에 대해 증진된 결합을 갖는다. 특정의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 Fc 수용체 FcRn에 대해 증진된 결합을 갖는다.
Fc 부분을 포함하는 단백질의 혈청 반감기는 FcRn에 대한 Fc 부분의 결합 친화성을 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 하나의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 비해 증진된 혈청 반감기를 갖는다.
하나의 구체예에서, 본 발명은 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 Fc 영역은 카밧에서 나타나 있는 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 251, 252, 254, 255, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 279, 280, 284, 292, 296, 297, 298, 299, 305, 313, 316, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 333, 334, 339, 341, 343, 370, 373, 378, 392, 416, 419, 421, 440 및 443으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 당업자에 공지된 추가 및/또는 대안적인 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어, U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752; WO 04/074455; WO 04/099249; WO 04/063351; WO 05/070963; WO 05/040217, WO 05/092925 및 WO 06/020114).
특정 구체예에서, 본 발명은 Fc 변이체 단백질 조성물을 제공하고, 여기서, 상기 Fc 영역은 카밧에서 나타나 있는 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같이, 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241 L, 241Y, 241E, 241 R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 305I, 313F, 316D, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440Y 및 434W로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 비천연 아미노산 잔기를 포함하고, Fc 영역은 당업자에 공지된 추가 및/또는 대안적인 위치에서 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (참고, 예를 들어,U.S. 특허 5,624,821; 6,277,375; 6,737,056; PCT 특허공보 WO 01/58957; WO 02/06919; WO 04/016750; WO 04/029207; WO 04/035752 및 WO 05/040217).
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Fc 부분이 카밧에 의해서 설명된 EU 인덱스에 따라 넘버링된 것으로서 239, 330 및 332로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 위치에서 적어도 하나의 비-천연적으로 존재하는 아미노산을 포함하는 Fc 변이체 단백질 조성물을 제공한다. 특정의 구체예에서, 본 발명은 Fc 부분이 카밧에 의해서 설명된 EU 인덱스에 따라 넘버링된 것으로서 239D, 330L 및 332E로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 비-천연적으로 존재하는 아미노산을 포함하는 Fc 변이체 단백질 제제를 제공한다. 임의로, Fc 부분은 카밧에 의해서 설명된 EU 인덱스에 따라 넘버링된 것으로서 252, 254, 및 256으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 위치에서 추가의 비-천연적으로 존재하는 아미노산을 더 포함할 수 있다. 특정의 구체예에서, 본 발명은 카밧에 의해서 설명된 EU 인덱스에 따라 넘버링된 것으로서 239D, 330L 및 332E로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 비-천연적으로 존재하는 아미노산, 및 카밧에 의해서 설명된 EU 인덱스에 따라 넘버링된 것으로서 252Y, 254T 및 256E로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 위치에서 적어도 하나의 비-천연적으로 존재하는 아미노산을 포함하는 Fc 변이체 단백질 제제를 제공한다.
하나의 구체예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 문헌 [Ghetie 등., 1997, Nat Biotech. 15:637-40; Duncan 등, 1988, Nature 332:563-564; Lund 등., 1991, J. Immunol 147:2657-2662; Lund 등, 1992, Mol Immunol 29:53-59; Alegre 등, 1994, Transplantation 57:1537-1543; Hutchins 등., 1995, Proc Natl. Acad Sci U S A 92:11980-11984; Jefferis 등, 1995, Immunol Lett. 44:111-117; Lund 등., 1995, Faseb J 9:115-119; Jefferis 등, 1996, Immunol Lett 54:101-104; Lund 등, 1996, J Immunol 157:4963-4969; Armour 등., 1999, Eur J Immunol 29:2613-2624; Idusogie 등, 2000, J Immunol 164:4178-4184; Reddy 등, 2000, J Immunol 164:1925-1933; Xu 등., 2000, Cell Immunol 200:16-26; Idusogie 등, 2001, J Immunol 166:2571-2575; Shields 등., 2001, J Biol Chem 276:6591-6604; Jefferis 등, 2002, Immunol Lett 82:57-65; Presta 등., 2002, Biochem Soc Trans 30:487-490; 미국 특허 제5,624,821; 5,885,573; 5,677,425; 6,165,745; 6,277,375; 5,869,046; 6,121,022; 5,624,821; 5,648,260; 6,528,624; 6,194,551; 6,737,056; 6,821,505; 6,277,375호; 미국 특허공개 제2004/0002587호 및 PCT 공개 제WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351호]에 기술된 것과 같은 다른 공지의 Fc 변이체와 조합될 수 있다. 또한, 결실, 부가 및/또는 변형을 포함하는 Fc 부분도 본 발명에 포함된다. Fc 영역의 또 다른 변형/치환/부가/결실은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 쉽게 명백할 것이다.
비-천연적으로 존재하는 Fc 부분을 생성시키는 방법은 본 기술분야에서 공지되어 있다. 예를 들어, 아미노산 치환 및/또는 결실이 부위-지시된 돌연변이유발 [Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492 (1985)], PCR 돌연변이유발 [Higuchi, in "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications", Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990)], 및 카세트 (cassette) 돌연변이유발 [Wells 등., Gene 34:315-323 (1985)]을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 돌연변이유발 방법에 의해서 생성될 수 있다. 바람직하게는, 부위-지시된 돌연변이유발은 중복-연장 (overlap-extension) PCR 방법 [Higuchi, in "PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification", Stockton Press, New York, pp. 61-70 (1989)]에 의해서 수행된다. 중복-연장 PCR [Higuchi, ibid.]의 기술은 또한, 표적 서열 (출발 DNA) 내에 어떤 원하는 돌연변이(들)를 도입시키기 위해서 사용될 수 있다. 예를 들어, 중복-연장 방법에서 PCR의 제1 라운드 (round)는 표적 서열을 외부 프라이머 (프라이머 1) 및 내부 돌연변이유발 프라이머 (프라이머 3)에 의해서, 및 별도로 제2 외부 프라이머 (프라이머 4) 및 내부 프라이머 (프라이머 2)에 의해서 증폭시키고, 2 개의 PCR 절편 (절편 A 및 B)을 수득하는 것을 포함한다. 내부 돌연변이유발 프라이머 (프라이머 3)는 원하는 돌연변이(들)를 명시한 표적 서열에 대한 미스매치 (mismatches)를 함유하도록 고안된다. PCR의 제2 라운드에서는, PCR의 제1 라운드의 생성물 (절편 A 및 B)를 2 개의 외부 프라이머 (프라이머 1 및 4)를 사용한 PCR에 의해서 증폭시킨다. 생성된 전체-길이 PCR 절편 (절편 C)을 제한효소로 분해시키고, 생성된 제한 단편을 적절한 벡터 내에 클로닝시킨다. 돌연변이유발의 제1 단계로서, 출발 DNA (예를 들어, Fc 융합 단백질, 항체, 또는 간단하게는 Fc 부분을 코드화함)는 돌연변이유발 벡터 내에 작동적으로 클로닝시킨다. 프라이머는 원하는 아미노산 치환을 반영하도록 디자인된다. 변이체 Fc 부분의 생성에 유용한 다른 방법은 본 기술분야에서 공지되어 있다 [참조: 예를 들어, 미국 특허 제5,624,821; 5,885,573; 5,677,425; 6,165,745; 6,277,375; 5,869,046; 6,121,022; 5,624,821; 5,648,260; 6,528,624; 6,194,551; 6,737,056; 6,821,505; 6,277,375호; 미국 특허공개 제2004/0002587호 및 PCT 공개 제WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351호].
일부의 구체예에서, Fc 변이체 단백질은 하나 또는 그 이상의 조작된 단백당 형태 (glycoforms), 즉 Fc 부분을 포함하는 분자에 공유적으로 부착된 탄수화물 조성물을 포함한다. 조작된 단백당 형태는 효과기 기능을 증진시키거나 감소시키는 것을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 다양한 목적에 유용할 수 있다. 조작된 단백당 형태는 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지된 어떤 방법이라도 사용하여, 예를 들어, 조작되거나 변이체인 발현 스트레인을 사용하거나, 하나 또는 그 이상의 효소, 예를 들어, DI N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTI11)과 공동-발현시키거나, 다양한 유기체, 또는 다양한 유기체로부터의 세포주 내에서 Fc 부분을 포함하는 분자를 발현시키거나, 또는 Fc 부분을 포함하는 분자가 발현된 후에 탄수화물(들)을 변형시킴으로써 생성될 수 있다. 조작된 단백당 형태를 생성시키는 방법은 본 기술분야에서 공지되어 있으며, 문헌 [Umana 등, 1999, Nat. Biotechnol 17:176-180; Davies 등., 20017 Biotechnol Bioeng 74:288-294; Shields 등, 2002, J Biol Chem 277:26733-26740; Shinkawa 등., 2003, J Biol Chem 278:3466-3473; 미국 특허 제6,602,684호; 미국 특허출원 제10/277,370호; 미국 특허출원 제10/113,929호; PCT WO 00/61739A1; PCT WO 01/292246A1; PCT WO 02/311140A1; PCT WO 02/30954A1]에 기술된 것; 포틸리전트 (Potillegent™) 기술 (Biowa, Inc. Princeton, N.J.); GlycoMAb™ 글리코실화 조작기술 (GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다 [참조: 예를 들어, WO 00061739; EA01229125; US 20030115614; Okazaki 등., 2004, JMB, 336: 1239-49].
실시예
본 발명은 이제 이하의 실시예를 참고로 하여 기술된다. 이들 실시예는 단지 설명을 목적으로 제공되며, 본 발명은 어떤 식으로든 이들 실시예로 제한되는 것으로 이해되지는 않으며, 오히려 본 발명에 제공된 교시의 결과로서 명백하게 되는 모든 변형을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
실시예 1. 안티-IL-6 항체 분리
본 발명에 기술된 본 발명을 실시하기 위해서 사용될 수 있는 항체 18 및 다른 안티-IL-6 항체의 분리의 상세한 설명은 PCT 공개 제WO 2008/065378호에 제공되어 있다. 간략하면, 항체 18에 대한 전구체를 표적으로서 재조합인간 IL-6을 사용한 파지 디스플레이 라이브러리 스크린을 통해서 분리시켰다. 전구체를 친화성 최적화에 적용하여 몇 개의 고친화성 인간 안티-IL-6 항체를 생성시켰다. 이들 항체의 특정화는 PCT 공개 제WO 2008/065378호에 기술되어 있다. 항체 18은 IL-6R에 대한 IL-6 결합을 차단할 수 있다. 항체 18은 인간 및 시노몰구스 IL-6에 결합하지만, 쥐, 랫트 또는 개로부터 유도된 IL-6에 결합하지 않는다. 항체 18은 비아코어 (BIAcore) 시험의 10 pM 검출 레벨보다 더 높은 친화성을 가지고 인간 IL-6에 결합한다. 인간 IL-6에 대한 항체 18의 친화성은 TF-1 세포 증식시험을 사용하여 0.40 pM (95% CI 0.12 pM-0.69 pM)인 것으로 추정된다.
실시예 2. 증가된 반감기를 갖는 안티-IL-6 항체
2.1. M252Y, S254T 및 T256E 치환을 갖는 Fc 부분을 포함하는 변이체 안티-IL-6 IgG1 항체의 생성
항체 18을 코드화한 발현 벡터는 Fc 부분에 M252Y, S254T 및 T256E 치환을 도입시키는 표준 실험실 방법을 사용하여 변형시켰다. M252Y, S254T 및 T256E 치환을 포함하는 변형된 항체 18은 이하에서 항체 18E 또는 18E로 칭한다.
안티-IL6 항체의 중쇄 및 경쇄를 코드화한 폴리뉴클레오타이드는 핵산 서열 최적화에 적용될 수 있다. 서열 최적화 과정의 최종 목표는 최고의 가능한 효율로 전사 및 해독된 코드화 부분을 생성시키는 것이다. 서열 최적화는 (i) 코돈 사용 최적화, (ii) G/C 함량 적응화, (iii) 내부 스플리싱 부위 및 조기 폴리아데닐화 부위의 제거, (iv) 안정한 RNA 이차 구조의 붕괴, (v) 직접 반복 서열의 제거, (vi) 숙주 세포 전사물에 의해 안정한 dsRNA를 형성할 수 있는 서열의 제거, (vii) 숙주 세포 마이크로 RNAs에 의해서 표적화된 서열의 제거, 및 (viii) RNA 안정화 및 RNA 전위 시그날의 도입의 조합에 의해서 달성된다. 상세한 서열 최적화 방법은 문헌 [WO2004059556A2, WO2006015789A2, Bradel-Tretheway 등., J. Virol. Methods 111:145-56 (2003), Valencik & McDonald, Transgenic Res. 3:269-75 (2001)]에 기술되어 있다. 대신으로, 서열은 상업적 공급자 (예를 들어, GENEART Inc.)에 의해서 최적화될 수 있다.
항체 18E의 VH, VL, 중쇄 및 경쇄를 코드화한 뉴클레오타이드 서열은 본 발명에 기술된 방법에 따라 최적화되었다. 18E의 VH, Vl, 중쇄 및 경쇄를 코드화한 최적화된 뉴클레오타이드 서열은 각각 SEQ ID NOs:11-14로 개시된다.
항체 18E는 전체 길이 18E 항체의 코드화 부분을 포함하는 발현 벡터에 의해서 안정적으로 형질감염된 CHO-K1 세포의 풀 (pool)에서 발현되었다. 항체 18E는 표준 실험실 기술을 사용하여 상등액으로부터 정제되었다.
2.2. M252Y, S254T 및 T256E 치환을 갖는 Fc 부분을 포함하는 변이체 안티-IL-6 IgG1 항체의 시험관내 특정화
항체 18E는 M252Y, S254T 및 T256E 치환을 갖는 Fc 부분을 포함한다. 항체 18E의 Fc 부분에 M252Y, S254T 및 T256E 치환의 존재는 ELISA 시험을 사용하여 확인되었다. 상기 시험은 포획 시약으로서, M252Y, S254T 및 T256E 치환을 포함하는 Fc 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하지만, 상응하는 야생형 Fc 폴리펩타이드에는 결합하지 않는 2 개의 모노클로날 항체를 이용하였다. ELISA 시험은 표준 프로토콜에 따라서 수행되었다. 치환 특이적 모노클로날 항체 중의 하나에 의해서 수득된 ELISA 적정곡선은 도 1에 나타낸다. 항체 18이 아닌 항체 18E는 ELISA 시험에서 M252Y, S254T 및 T256E Fc 부분 치환에 대해서 특이적인 항체에 의해서 포획되었다. 따라서, 항체 18은 M252Y, S254T 및 T256E 치환을 갖는 Fc 부분을 포함한다.
M252Y, S254T 및 T256E 치환을 포함하는 Fc 폴리펩타이드는 야생형 Fc 폴리펩타이드의 경우에 비해, FcRn에 대해 pH 6에서 증가된 결합 친화성을 갖는다. 정제된 항체 18 및 항체 18E의 FcRn 결합 친화성은 비아코어 시험을 사용하여 결정되었다. 시험은 표준 프로토콜에 따라 수행되었다. 항체 18E는 pH 6에서 항체 18의 경우보다 상당히 더 큰 친화성으로 인간 및 시노 FcRn 둘 다에 결합한다. 비아코어에 의해서 결정된 것으로서 Kd 값은 표 1에 나타낸다.
[표 1]
항체 18 및 18E의 FcRn 결합친화성
Figure pct00001
항체 18 및 18E는 실질적으로 동등한 친화성으로 IL-6에 결합한다. 항체 18 및 18E의 IL-6 결합 친화성은 ELISA 시험에 의해서 확인되었다. 이. 콜라이 발현된 재조합 인간 IL-6 제제 (rhuIL-6)가 포획 시약으로서 사용되었다. ELISA 시험은 표준 프로토콜에 따라 수행되었다. 항체 18 및 18E 이외에도, 2 개의 경쟁자 안티-IL-6 항체 (AB A 및 AB B)가 또한 양성 대조군으로서 시험에 포함되었다. 수득된 데이터의 예는 도 2에 나타낸다. 항체 18 및 18E에 대한 EC50 값은 각각 6.1 pM 및 6.5 pM이었다.
항체 18 및 18E는 실질적으로 동일한 효능으로 IL-6 유도된 TF-1 세포 증식을 억제한다. IL-6 유도된 TF-1 세포 증식시험은 실질적으로 본 발명에 기술된 바와 같이 수행되었다. 항체 18 및 18E 이외에도, 2 개의 경쟁자 안티-IL-6 항체 (AB A 및 AB B)가 또한, 양성 대조군으로서 시험에 포함되었다. 대표적인 데이터는 도 3에 나타낸다. 항체 18 및 18E에 대해서 계산된 IC50은 각각 4.5 pM 및 5.2 pM이었다.
항체 18 및 18E는 실질적으로 동일한 효능으로, 인간 활액 섬유아세포로부터의 내인성 IL-6 유도된 VEGF 방출을 억제한다. 상기 시험은 실질적으로 본 발명에 기술된 바와 같이 수행되었다. 항체 18 및 18E 이외에도, 2 개의 경쟁자 안티-IL-6 항체 (AB A 및 AB B)가 또한 양성 대조군으로 시험에 포함되었다. 대표적인 데이터는 도 4에 나타낸다. 항체 18 및 18E에 대해서 계산된 IC50은 각각 1.3 pM 및 1.2 pM이었다.
2.3. M252Y, S254T 및 T256E 치환을 갖는 Fc 부분을 포함하는 변이체 안티-IL-6 IgG1 항체의 생체내 특정화
시노몰구스 원숭이에서의 단일 용량 약력학적 약동학적 시험을 수행하여 항체 18 및 18E의 혈청 반감기 및 청소율을 결정하였다. 시험 디자인은 표 2에 개략적으로 나타낸다.
[표 2]
단일 용량 약력학적 실험을 위한 시험 디자인
Figure pct00002
시노몰구스 원숭이 혈장에서 항체 18 또는 항체 18E의 정량을 위한 IL-6 항원 포획 PK 시험 (ECL): MA2400 96 웰 플레이트 (MSD)를 2-8℃에서 밤새 2.5 g/㎖ 재조합 인간 IL-6 (R&D Systems)으로 코팅하고, 0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS로 세척하고, 실온에서 1-2 시간 동안 I-차단 완충액 (Block Buffer) (Tropix)으로 차단하였다. 항체 18 및 항체 18E 표준 곡선, 품질 조절 (QC) 및 시험 샘플 희석액은 1% 시노몰구스 원숭이 혈장 내에서 제조하여, 실온에서 1 시간 동안 차단된 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 상기한 바와 같이 세척하고, 추가로 1 시간 동안 1 ㎍/㎖ MSD-TAG (루테늄)-표지된-양 안티-인간 IgG (H+L) 원숭이 흡착 검출 항체 (The Binding Site)와 함께 배양하였다. 미결합된 검출 항체를 세척하여 제거하고, 150 ㎕의 1X 판독 완충액 (Read Buffer) T (MSD)를 플레이트 웰에 첨가하였다. 플레이트를 즉시 MSD 섹터 이메이저 (Sector Imager) 2400으로 판독하고, 각각의 플레이트 상에서 QC 및 시험 샘플 희석액 내의 항체 18 및 항체 18E 농도는 해당 플레이트에 대한 표준 곡선을 사용하여 정량하였다. 모든 분석은 표준 곡선 농도 대 ECL 시그날을 소프트맥스 프로 (Softmax Pro) GxP 소프트웨어 (Molecular Devices)에서의 로그-로그 곡선 맞춤 (Log-Log curve fit)으로 도시함으로써 수행되었다. 항체 18 및 항체 18E 정량화 둘 다를 위한 시험 범위는 100% 혈장 내에서 10,000 내지 13.7 ng/㎖ (10 내지 0.0137 ㎍/㎖)이다.
PK 데이터 분석: 비-구획성 독력학적 분석 (non-compartmental toxicokinetic analysis)은 메드이뮨 (MedImmune) 표준 운전 절차에 따라 윈논린 프로페셔널 (WinNonlin Professional; version 5.2, Pharsight Corp., Mountain View, CA)을 사용하여 모든 동물로부터의 개개 PK 데이터에 대해 수행되었다.
수득된 결과는 도 5 및 6에 나타낸다. 도 5는 단일 5 ㎎/㎖ 항체 용량의 피하 또는 정맥내 투여 후에 시간의 경과에 따른 항체 18 및 18E의 혈청 농도를 나타낸다. 항체 18 및 18E는 둘 다 선형 PK 프로필을 나타내었다. 항체 18의 혈청 반감기는 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 8.5일 및 9.1일이다. 항체 18E의 혈청 반감기는 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 28.4일 및 28.8일이다. 항체 18의 청소율은 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 12.1 ㎖/일/㎏ 및 13.1 ㎖/일/㎏이다. 항체 18E의 청소율은 정맥내 및 피하 투여 후에 각각 약 2.8 ㎖/일/㎏ 및 3.0 ㎖/일/㎏이다. 피하로 투여된 항체 18 및 18E의 생체이용율은 각각 94% 및 96%였다.
도 6은 단일 5 ㎎/㎏ 항체 용량의 피하 투여 후에 시간의 경과에 따른 항체 18 및 18E의 혈청 농도를 나타낸다. 도 6은 또한, 항체 18 또는 18E의 단일 5 ㎎/㎏ 용량의 피하 투여 후에 동물에게서 검출된 총 혈청 IL-6 농도를 나타낸다. IL-6의 총 레벨은 기준선 이상 약 3 로그로 증가하였다. 총 IL-6의 더 큰 축적이 항체 18E에 의해서 관찰되었다. 총 IL-6 레벨의 감소는 대략 PK의 감소에 필적하였다.
2.4. 피하 투여된 안티-IL-6 항체에 의한 혈장 유리 IL-6의 중화율 %의 모델링
유리 IL-6 농도는 건강한 동물에게서는 기준선에서 매우 낮다. 따라서, 유리 IL-6 레벨을 측정함으로써 안티-IL-6 항체 투여 후의 표적 중화율 %을 직접 평가하는 것은 어려웠다. 본 발명자들은 PD 마커로서 총 IL-6을 사용하여 항체 PK와 비교한 유리 IL-6 중화의 동력학을 예측하는 SAAM II 소프트웨어 패키지 내의 PK/PD 모델을 개발하였다. PK/PD 모델은 항체, 유리 IL-6, IL-6과 항체의 컴플렉스, 가용성 수용체, 및 IL-6과 가용성 수용체의 컴플렉스의 동력학을 설명한다. 개발된 모델은 원숭이 시험으로부터 생성된 항체의 PK 및 총 IL-6 동력학을 적절하게 설명하였으며, 이것은 표준 알로메트릭 스케일링 추정 (standard allometric scaling assumption)을 사용하여 상이한 투약 레지멘 후의 인간 RA 환자에게서의 PK/PD 시간 프로필을 시뮬레이션하기 위해서 사용되었다. 인간 혈장 유리 IL-6 레벨의 90% 억제 레벨은 류마티스성 관절염 환자에게서 검출된 혈청 유리 IL-6 농도를 기초로 하여 평가되었다 [Uson et. al., J. of Rheumatology (1997) 24(11)2069-75].
PD 모델링의 결과는 도 7-10 및 표 3에 나타낸다. 상기 모델은 유리 IL-6 (즉, sIL-6R 또는 IL-6R에 결합되지 않은 것)의 지속적인 적어도 90% 억제가 다음의 투약 레지멘 중의 어느 하나에 따라 항체 18E를 투여함으로써 달성될 수 있다는 것을 예측한다:
ㆍ 매 8 주일마다 sc로 송달된 100 ㎎의 항체 18E;
ㆍ 매 4 주일마다 sc로 송달된 50 ㎎의 항체 18E;
ㆍ sc로 송달된 200 ㎎의 항체 18E의 단일 부하 복용량에 이어서 매 8 주일마다 sc로 송달된 100 ㎎의 항체 18E; 및
ㆍ sc로 송달된 100 ㎎의 항체 18E의 단일 부하 복용량에 이어서 매 4 주일마다 sc로 송달된 50 ㎎의 항체 18E.
상기 모델은 추가로, 유리 혈청 IL-6의 지속적 억제의 유사한 레벨은 더 빈번하고/하거나 더 큰 용량의 항체 18를 필요로 할 수 있음을 예측한다. 예를 들어, 유리 IL-6 (즉, sIL-6R 또는 IL-6R에 결합되지 않은 것)의 지속적인 적어도 90% 억제는 매 2 주일마다 100 ㎎의 항체 18을 피하로 투여함으로써 달성될 수 있다.
[표 3]
혈장 유리 IL-6 중화 모델로부터의 결과의 요약
Figure pct00003
이들 결과는 생체내 IL-6의 전신적 효과를 억제하는 안티-IL-6 항체의 능력을 입증한다. 본 발명의 특별한 구체예가 설명을 목적으로 상기에 기술되어 있는 반면에, 세부사항의 다수의 변형이 첨부된 특허청구범위에 기술된 발명을 벗어남이 없이 만들어질 수 있다는 것은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 이해될 것이다.
실시예 3. 마우스 FCA 유도된 염증성 통증 모델에서의 효능
mAb406 (안티 마우스 IL-6, 모노클로날 항체 IgG1로부터 정제됨, 클론 MP5-20F3, 로트 AHV100904A, R&D Systems)은 마우스 꼬리 (꼬리의 원위 첨단부로부터 3 ㎝)에서 프로인트 완전 보조액 (Freund complete adjuvant; "FCA") (20 마이크로리터)의 국소 피하 투여에 의해서 유도된 염증성 통증을 반전시키는 그의 능력에 대해서 시험하였다. 이 물질은 시간의 경과를 수반하고 투여 후 24 시간 내지 48 시간에 플라토 (plateau)에 도달하는 국소적 염증반응을 점진적으로 발생시킨다. 생성된 염증은 꼬리의 열 또는 기계적 자극에 대해서 과민반응을 야기한다. 열 통각과민은 열자극 (온수, 46℃)으로부터 꼬리의 움츠림 잠복기 (withdrawal latency)를 기록함으로써 평가되는 반면에, 기계적 통각과민은 아날게시메터 (analgesymeter; Randall Selitto apparatus)에 의해서 발생된 꾸준하게 증가하는 압력으로부터 꼬리의 움츠림 역치에 의해서 평가된다. IgG1 이소타입 대조군 (mAb005, 랫트 모노클로날 IgG1로부터 정제됨, 클론 43414, 로트 CAN04904A, R&D Systems으로부터 구입) 및 mAb406는 FCA 처리한 지 6 시간 후에 복강내로 (ip) 투여하였다. 염증성 반응이 잘 개시된 것을 시사하는 증거에는 증가한 사이토킨 레벨, 산화질소 생산 및 온화한 유해 자극에 대한 과민반응이 포함된다. 초기 시험은 mAb406의 단일 용량 (20 ㎎/㎏)을 평가하였다. 이 용량은 열 통각과민 시험에서 24 및 49 시간 둘 다에 50%의 E-max (참조: 도 11) 및 24 및 48 시간에 기계적 통각과민의 40% 반전을 제공하였다 (참조: 도 12). 이들 동물에서 IL-6의 전신적 혈장 레벨의 시험관내 프로파일링은 모든 IL-6이 중화되었음을 나타내었다. 이어서, 다양한 용량의 mAb406 (및 고용량의 IgG1 대조군)을 평가하여 통증 억제 및 통각과민의 반전에 관한 효능 및 IL-6 중화를 특정화하였다. 동일한 실험 패러다임을 사용하여 1 내지 20 ㎎/㎏, ip 용량을 24 시간 및 48 시간 둘 다에서의 열 및 기계적 통각과민 둘 다에 대해서 시험하였다. 도 13은 열 통각과민이 24 시간째에 안티-IL-6 처리에 의해서 용량-의존적으로 반전되었음을 나타내며, 유사한 결과가 48 시간째에 수득되었다 (참조: 도 14). 이 두 번째 시험에서 E-max는 64% 반전이었으며, 이것은 상기 수득된 반전과 유사하지만 약간 더 크다. 도 15 및 도 16은 각각 24 시간 및 48 시간째의 기계적 통각과민에 대한 결과를 나타낸다. 다시, 48시간째에 91%의 E-max에 도달하는 용량-의존적 반전이 관찰되었으며, 이것은 첫 번째 시험에서 수득된 반전보다 더 크다. 부작용은 어떤 시험 용량에서도, 및 어떤 시험에서도 관찰되지 않았다. 전반적으로, mAb406에 의한 생체내 효능은 동일한 모델에서 벤지마킹 (benchmarking) 소분자 화합물 나프록센과 동등하거나 그보다 더 컸다 (열에 대한 과민반응에서의 나프록센에 관해서는 도 17 및 기계적 압력에 대한 과민반응에 대한 나프록센에 관해서는 도 18을 참조).
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 마치 각각의 개개 간행물, 특허 또는 특허출원이 본 발명에 참고로 포함된 것으로 개별적으로 나타낸 것처럼 동일한 정도까지 본 발명에서 명세서에 참고로 포함된다.
재료 및 방법
정제된 scFv 및 IgG에 의한 TF-1 세포의 IL-6 유도된 증식의 억제
TF-1 세포는 R&D Systems으로부터의 기증품이었으며, 제공된 프로토콜에 따라 유지되었다. 시험 배지는 5% 태자소혈청 (JRH) 및 1% 나트륨 피루베이트 (Sigma)를 함유하는 글루타맥스 (GLUTAMAX) I (Invitrogen)과 함께 RPMI-1640으로 이루어졌다. 각각의 시험 전에, TF-1 세포를 300xg에서 5 분 동안 원심분리함으로써 펠릿화하고, 배지를 흡인하여 제거하고, 세포를 시험 배지에 재-현탁시켰다. 이 과정을 시험 배지 내에 5x105 세포/㎖의 최종 농도로 재-현탁된 세포를 사용하여 2 회 반복하였다. 세포를 96 웰 시험 플레이트 내에 100 ㎕/웰로 플레이팅하였다. 플레이트를 24 시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 배양하여 GM-CSF의 세포를 아사시켰다. 정제된 scFv 또는 IgG의 시험 용액 (이중으로)을 시험 배지 중에서 원하는 농도로 희석하였다. IL-6에 대한 것이 아닌 부적절한 항체가 음성 대조군으로 사용되었다. 재조합 박테리아 유도된 인간 (R&D) 및 시노몰구스 (사내용) IL-6을, 100 ㎖/웰의 총 용적으로 적절한 시험 항체와 혼합시키는 경우에 20 pM (인간 IL-6) 또는 100 pM (시노몰구스)의 최종 농도로 첨가하였다. 시험에서 사용된 IL-6의 농도는 최종 시험 농도가 최대 증식반응의 약 80%를 제공하는 용량으로 선택되었다. 모든 샘플은 실온에서 30 분 동안 배양하였다. 그 후, 100 ㎖의 IL-6과 항체 혼합물을 100 ㎖의 세포에 첨가하여 200 ㎖/웰의 총 시험 용적을 제공하였다. 플레이트를 37℃ 및 5% CO2에서 24 시간 동안 배양하였다. 20 ㎖의 트리튬화 티미딘 (5 mCi/㎖)을 각각의 시험 포인트에 첨가하고, 플레이트를 추가로 24 시간 동안 다시 배양기에 복귀시켰다. 세포를 세포 수확기 (cell harvester)를 사용하여 유리 섬유 필터 플레이트 (Perkin Elmer) 상에서 수확하였다. 티미딘 혼입은 패카드 톱카운트 (Packard TopCount) 마이크로플레이트 액체 섬광 계수기를 사용하여 결정하였다. 그 후, 데이터를 그래프패드 프리즘 (Graphpad Prism) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
인간 활액 섬유아세포로부터의 내인성 IL-6 유도된 VEGF 방출의 정제된 IgG에 의한 억제
전관절 대체술 (total joint replacement surgery)로부터의 류마티스성 관절염 무릎의 샘플을 항생제를 함유하는 DMEM 내에서 수득하였다. 배지 내에 담근 활막을 관절로부터 절제하고, 미세하게 다졌다. 활액 조직을 10% FCS로 보충된 배지로 세척하였다. 세포 현탁액을 37℃의 CO2 배양기 내에서 2 시간 동안 콜라게나제 용액 중에서 배양하였다. 분해된 활액세포 현탁액을 10 ㎖ 피펫을 통해서 반복해서 흡인함으로써 붕괴시키고, 세포를 여과하고, 5 분 동안 실온에서 400 g로 원심분리하였다. 세포를 10% FCS를 함유하는 DMEM에 재현탁시키고, 세포 여과기 (cell strainer)를 통과시키고, ㎖당 1 x 106 세포로 조정하고, 225-㎠ 세포 배양 플라스크 (3001, CoStar Corning Inc.) 내에서 37℃의 CO2 배양기 내에서 배양하였다. 부착시킨 후에, 대부분의 배지를 버리고, 신선한 배지로 대체시키고, 장기간 배양을 위해서 다시 배양기에 복귀시켰다. 세포는 주일-기준으로 검사하였으며, 3 번 중의 1 번의 계대 비율로 트립신 처리함으로써 합류점 (confluence)에서 계대시켰다.
합류점에서 섬유아세포 (P3-5)는 플라스크당 10 ㎖의 0.1% 트립신-EDTA 용액 (25300-054, Gibco Life Sciences)과 함께 37℃에서 5 내지 10 분 동안 배양함으로써 플라스크로부터 제거하였다. 10% FCS가 보충된 동등한 용적의 DMEM-기본 배양 배지를 세포에 첨가한 다음에, 이것을 RT에서 5 분 동안 330 g에서 원심분리시킴으로써 펠릿화하였다. 10% FCS가 보충된 DMEM-기본 배양 배지를 사용한 한 번의 세척 단계 후에, 세포 현탁액 (1 x105 세포/㎖)을 1.5×104 세포/웰로 멸균 96 웰 세포 배양 클러스터 편평 바닥 폴리스티렌 플레이트 (3598, Corning CoStar)의 웰에 첨가하였다 (150 ㎕/웰). 10% FCS가 보충된 DMEM-기본 배양 배지의 추가의 첨가물을 각각의 웰에 첨가하여 웰당 250 ㎕의 총 용적을 제공하였다. 세포를 37℃에서 밤새 배양하여 부착 및 정지가 이루어지도록 하였다.
96-웰 플레이트를 검사하여 세포가 합류하고, 우수한 상태 (예를 들어, 무-오염물)로 존재하였음을 확실히 하였다. 그 후, 배지를 웰로부터 흡인하고, 10% FCS가 보충된 100 ㎖의 DMEM-기본 배양 배지를 즉시 첨가하였다. 여기에, 샘플 IgG를 함유하거나 배지 단독인 10% FCS가 보충된 50 ㎖의 DMEM-기본 배양 배지를 웰에 첨가하였다 (시험에서 5 중의 1을 희석함).
이어서 재조합 인간 가용성 (rhs)IL-6Rα (500 ng/㎖; 12　nM) 및 rhIL-1β (50 pg/㎖; 2.95 pM, 시험에서 5 중의 1을 희석함)를 함유하는 10% FCS가 보충된 DMEM-기본 배양 배지를 웰당 50 ㎕로 첨가하였다.
별도의 웰에서, rh-IL-6 (0, 100 ng/㎖; 21.5　nM), sIL-6Rα (500 ng/㎖; 12　nM), rhIL-1β (50 pg/㎖; 2.95 pM), 또는 배지 단독을 함유하는 10% FCS가 보충된 50 ㎕의 DMEM-기본 배양 배지를 첨가하였다 (시험에서 5 중의 1을 희석함). 각각의 웰에서 최종 용적은 250 ㎕였다.
플레이트를 37℃에서 48 시간 동안 배양하였다. 배양은 플레이트 포맷에서 기술된 바와 같이 이중으로 또는 삼중으로 수행되었다. 플레이트를 RT에서 5 분 동안 330 g로 원심분리하고, 상등액 배지를 제거하여 미량역가 편평 바닥 플레이트 (611F96, Sterilin) 내에서 -40℃로 보관하였다.
VEGF는 제조자의 지시에 따라 ELISA (DY293B, R&D Systems)를 사용하여 측정되었다. 간략하면, ELISA 플레이트를 4℃에서 밤새 마우스 안티-인간 VEGF 항체로 코팅하고, 1% BSA/PBS로 차단하였다. 플레이트를 0.05% 트윈 20/PBS로 세척하고, 인간 활액 유도된 섬유아세포의 배양 상등액 및 비오티닐화된 염소 안티-인간 VEGF 항체와 함께 실온에서 밤새 배양하였다. 세척 후에, VEGF는 스트렙타비딘 호스래디쉬 퍼옥시다제를 사용하여 검출하였다. 플레이트를 1:1 H2O2:테트라메틸벤지딘을 사용하여 전개시켰다. 반응을 2 M H2SO4로 정지시키고, 광학 밀도를 540 ㎚에서 설정된 보정 파장을 사용하여 450 ㎚에서 결정하였다.
총 혈장 IL-6 레벨의 측정
총 IL-6은 제조자의 추천에 따라 밀리플렉스 (Milliplex™) MAP 키트 (MPXHCYTO60K)를 사용하여 측정한다. 모든 필요한 시약은 시험 키트 내에 제공된다. 간략하면, 시험 필터 플레이트를 200 ㎕의 시험 완충액으로 수화시키고, 액체를 진공에 의해서 제거한다. 다음 시약 각각을 플레이트에 25 ㎕/웰로 첨가한다: (a) 시험 완충액, (b) 혈장 샘플, 표준물 또는 QC, 및 (c) 시험 매트릭스 내의 안티-IL-6 포획 항체와 컨주게이트된 비드. 최종 시험 용적은 75 ㎕이고, 최종 시험 매트릭스는 25%의 IL-6 고갈된 표준 시노 (cyno) EDTA 혈장 내의 133.3 ㎍/㎖의 약물 후보물질 (항체 18 또는 항체　18E)이다. 플레이트를 밀봉하고, 4℃에서 밤새 배양한다. 세척 완충액으로 2 회 세척한 후에, 25 ㎕/웰의 비오티닐화된 안티-IL6 검출 항체를 첨가한다. 30 분 배양 후에, 25 ㎕/웰의 SA-PE를 웰에 첨가하고, 플레이트를 추가로 30 분 동안 배양한다. 플레이트를 2 회 세척하고, 비드를 150 ㎕/웰의 루미넥스 쉬스 플루이드 (Luminex Sheath Fluid)로 재현탁시킨다. 비드와 결합한 형광 강도를 루미넥스20 플레이트 판독기 (Luminex200 Plate reader)에 의해서 측정한다. 포획 및 검출 안티-IL-6 항체는 둘 다 항체 18 또는 항체　18E의 존재 하에서 IL-6에 결합할 수 있기 때문에, 형광 강도는 샘플 내의 총 IL-6 농도에 비례한다. IL-6의 농도는 비드뷰 소프트웨어 (BeadView Software; Upstate Cell Signaling Solutions)를 사용하여 도시된 표준 곡선으로부터 추론된다. IL-6에 대한 검출 범위는 100% 시노 혈장 내에서 1.8 pg/㎖ 내지 5769 pg/㎖이다.
상기 어디에서든지 인용된 것을 포함한 본 명세서의 어디에서든지 인용된 모든 문헌은 본 발명에 모든 목적으로 온전히 참고로 포함된다.
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
SEQUENCE LISTING <110> Bowen, Michael Wu, Herren Dall'Acqua, William Kiener, Peter Jallal, Bahija Coyle, Anthony <120> Human Anti-IL-6 Antibodies with Extended In Vivo Half-Life and Their Use in Treatment of Oncology, Autoimmune Diseases and Inflammatory Diseases <130> IS310PCT <140> PCT/US10/22478 <141> 2010-01-29 <150> US 61/148,106 <151> 2009-01-29 <150> US 61/184,182 <151> 2009-06-04 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab 18 VH CDR1 <400> 1 Ser Asn Tyr Met Ile 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VH CDR2 <400> 2 Asp Leu Tyr Tyr Tyr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VH CDR3 <400> 3 Trp Ala Asp Asp His Pro Pro Trp Ile Asp Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VL CDR1 <400> 4 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VL CDR2 <400> 5 Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VL CDR3 <400> 6 Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 1 5 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VH <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Leu Tyr Tyr Tyr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Asp Asp His Pro Pro Trp Ile Asp Leu Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18 VL <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18E HC <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Asp Leu Tyr Tyr Tyr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Asp Asp His Pro Pro Trp Ile Asp Leu Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile 245 250 255 Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 10 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ab 18E LC <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Trp Leu Gly Gly Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 11 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Ab 18 optimized VH <400> 11 gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgcggctg 60 tcctgcgccg cctccggctt caccatctcc tccaactaca tgatttgggt ccgccaggca 120 cctggcaagg ggctcgagtg ggtgtccgac ctgtactact acgccggcga cacctactac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcaccatg tccagggaca tctccaagaa caccgtgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagatgggcc 300 gacgaccacc ctccttggat cgacctgtgg ggcaggggca ccctggtcac cgtcagctcc 360 <210> 12 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Ab 18 optimized VL <400> 12 gacatccaga tgacccagtc cccctccacc ctgtccgcca gcgtcggcga cagagtgacc 60 atcacctgcc gggcctccca gggcatctcc agctggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaaggtgct gatctacaag gccagcaccc tggagtccgg cgtgccttcc 180 cggttctccg gctccggcag cggcaccgag ttcaccctga ccatctcctc cctgcagcct 240 gacgacttcg ccacctacta ctgccagcag tcctggctgg gcggctcctt cggccagggc 300 accaagctgg agatcaag 318 <210> 13 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Ab 18E optimized HC <400> 13 gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgcggctg 60 tcctgcgccg cctccggctt caccatctcc tccaactaca tgatttgggt ccgccaggca 120 cctggcaagg ggctcgagtg ggtgtccgac ctgtactact acgccggcga cacctactac 180 gctgactccg tgaagggccg gttcaccatg tccagggaca tctccaagaa caccgtgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagatgggcc 300 gacgaccacc ctccttggat cgacctgtgg ggcaggggca ccctggtcac cgtcagctcc 360 gcctccacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag cacctccggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgaaccggt gaccgtgtcc 480 tggaacagcg gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgaca gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccctgagct gctgggcgga 720 cctagcgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgtacatcac cagggagccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ctgaggtgaa gttcaattgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac 900 agcacctaca gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gaatacaagt gcaaggtctc caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgaaaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagcctcg ggagccccag gtgtacaccc tgccccctag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gtccaggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgtc ccccggcaag 1350 <210> 14 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Ab 18E optimized LC <400> 14 gacatccaga tgacccagtc cccctccacc ctgtccgcca gcgtcggcga cagagtgacc 60 atcacctgcc gggcctccca gggcatctcc agctggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaaggtgct gatctacaag gccagcaccc tggagtccgg cgtgccttcc 180 cggttctccg gctccggcag cggcaccgag ttcaccctga ccatctcctc cctgcagcct 240 gacgacttcg ccacctacta ctgccagcag tcctggctgg gcggctcctt cggccagggc 300 accaagctgg agatcaagcg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccccccagc 360 gacgagcagc tgaagagcgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgcgaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa cagccaggag 480 agcgtcaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600 tccagccccg tgaccaagag cttcaacagg ggcgagtgc 639 <210> 15 <211> 212 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro 20 25 30 Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln Pro Leu Thr 35 40 45 Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu Asp Gly Ile 50 55 60 Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met Cys Glu Ser 65 70 75 80 Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro Lys Met Ala 85 90 95 Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu 100 105 110 Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr 115 120 125 Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln 130 135 140 Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn 145 150 155 160 Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu 165 170 175 Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His 180 185 190 Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala 195 200 205 Leu Arg Gln Met 210 <210> 16 <211> 183 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Val Pro Pro Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln 1 5 10 15 Pro Leu Thr Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu 20 25 30 Asp Gly Ile Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met 35 40 45 Cys Glu Ser Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro 50 55 60 Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu 65 70 75 80 Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr 85 90 95 Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg 100 105 110 Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys 115 120 125 Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala 130 135 140 Ser Leu Leu Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met 145 150 155 160 Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Leu Arg Ala Leu Arg Gln Met 180 <210> 17 <211> 358 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Met Leu Ala Val Gly Cys Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Ala Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ala Leu Ala Pro Arg Arg Cys Pro Ala Gln Glu Val Ala Arg 20 25 30 Gly Val Leu Thr Ser Leu Pro Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Cys Pro 35 40 45 Gly Val Glu Pro Glu Asp Asn Ala Thr Val His Trp Val Leu Arg Lys 50 55 60 Pro Ala Ala Gly Ser His Pro Ser Arg Trp Ala Gly Met Gly Arg Arg 65 70 75 80 Leu Leu Leu Arg Ser Val Gln Leu His Asp Ser Gly Asn Tyr Ser Cys 85 90 95 Tyr Arg Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Val His Leu Leu Val Asp Val 100 105 110 Pro Pro Glu Glu Pro Gln Leu Ser Cys Phe Arg Lys Ser Pro Leu Ser 115 120 125 Asn Val Val Cys Glu Trp Gly Pro Arg Ser Thr Pro Ser Leu Thr Thr 130 135 140 Lys Ala Val Leu Leu Val Arg Lys Phe Gln Asn Ser Pro Ala Glu Asp 145 150 155 160 Phe Gln Glu Pro Cys Gln Tyr Ser Gln Glu Ser Gln Lys Phe Ser Cys 165 170 175 Gln Leu Ala Val Pro Glu Gly Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Val Ser Met 180 185 190 Cys Val Ala Ser Ser Val Gly Ser Lys Phe Ser Lys Thr Gln Thr Phe 195 200 205 Gln Gly Cys Gly Ile Leu Gln Pro Asp Pro Pro Ala Asn Ile Thr Val 210 215 220 Thr Ala Val Ala Arg Asn Pro Arg Trp Leu Ser Val Thr Trp Gln Asp 225 230 235 240 Pro His Ser Trp Asn Ser Ser Phe Tyr Arg Leu Arg Phe Glu Leu Arg 245 250 255 Tyr Arg Ala Glu Arg Ser Lys Thr Phe Thr Thr Trp Met Val Lys Asp 260 265 270 Leu Gln His His Cys Val Ile His Asp Ala Trp Ser Gly Leu Arg His 275 280 285 Val Val Gln Leu Arg Ala Gln Glu Glu Phe Gly Gln Gly Glu Trp Ser 290 295 300 Glu Trp Ser Pro Glu Ala Met Gly Thr Pro Trp Thr Glu Ser Arg Ser 305 310 315 320 Pro Pro Ala Glu Asn Glu Val Ser Thr Pro Met Gln Ala Leu Thr Thr 325 330 335 Asn Lys Asp Asp Asp Asn Ile Leu Phe Arg Asp Ser Ala Asn Ala Thr 340 345 350 Ser Leu Pro Val Gln Asp 355 <210> 18 <211> 468 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Leu Ala Val Gly Cys Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Ala Pro 1 5 10 15 Gly Ala Ala Leu Ala Pro Arg Arg Cys Pro Ala Gln Glu Val Ala Arg 20 25 30 Gly Val Leu Thr Ser Leu Pro Gly Asp Ser Val Thr Leu Thr Cys Pro 35 40 45 Gly Val Glu Pro Glu Asp Asn Ala Thr Val His Trp Val Leu Arg Lys 50 55 60 Pro Ala Ala Gly Ser His Pro Ser Arg Trp Ala Gly Met Gly Arg Arg 65 70 75 80 Leu Leu Leu Arg Ser Val Gln Leu His Asp Ser Gly Asn Tyr Ser Cys 85 90 95 Tyr Arg Ala Gly Arg Pro Ala Gly Thr Val His Leu Leu Val Asp Val 100 105 110 Pro Pro Glu Glu Pro Gln Leu Ser Cys Phe Arg Lys Ser Pro Leu Ser 115 120 125 Asn Val Val Cys Glu Trp Gly Pro Arg Ser Thr Pro Ser Leu Thr Thr 130 135 140 Lys Ala Val Leu Leu Val Arg Lys Phe Gln Asn Ser Pro Ala Glu Asp 145 150 155 160 Phe Gln Glu Pro Cys Gln Tyr Ser Gln Glu Ser Gln Lys Phe Ser Cys 165 170 175 Gln Leu Ala Val Pro Glu Gly Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Val Ser Met 180 185 190 Cys Val Ala Ser Ser Val Gly Ser Lys Phe Ser Lys Thr Gln Thr Phe 195 200 205 Gln Gly Cys Gly Ile Leu Gln Pro Asp Pro Pro Ala Asn Ile Thr Val 210 215 220 Thr Ala Val Ala Arg Asn Pro Arg Trp Leu Ser Val Thr Trp Gln Asp 225 230 235 240 Pro His Ser Trp Asn Ser Ser Phe Tyr Arg Leu Arg Phe Glu Leu Arg 245 250 255 Tyr Arg Ala Glu Arg Ser Lys Thr Phe Thr Thr Trp Met Val Lys Asp 260 265 270 Leu Gln His His Cys Val Ile His Asp Ala Trp Ser Gly Leu Arg His 275 280 285 Val Val Gln Leu Arg Ala Gln Glu Glu Phe Gly Gln Gly Glu Trp Ser 290 295 300 Glu Trp Ser Pro Glu Ala Met Gly Thr Pro Trp Thr Glu Ser Arg Ser 305 310 315 320 Pro Pro Ala Glu Asn Glu Val Ser Thr Pro Met Gln Ala Leu Thr Thr 325 330 335 Asn Lys Asp Asp Asp Asn Ile Leu Phe Arg Asp Ser Ala Asn Ala Thr 340 345 350 Ser Leu Pro Val Gln Asp Ser Ser Ser Val Pro Leu Pro Thr Phe Leu 355 360 365 Val Ala Gly Gly Ser Leu Ala Phe Gly Thr Leu Leu Cys Ile Ala Ile 370 375 380 Val Leu Arg Phe Lys Lys Thr Trp Lys Leu Arg Ala Leu Lys Glu Gly 385 390 395 400 Lys Thr Ser Met His Pro Pro Tyr Ser Leu Gly Gln Leu Val Pro Glu 405 410 415 Arg Pro Arg Pro Thr Pro Val Leu Val Pro Leu Ile Ser Pro Pro Val 420 425 430 Ser Pro Ser Ser Leu Gly Ser Asp Asn Thr Ser Ser His Asn Arg Pro 435 440 445 Asp Ala Arg Asp Pro Arg Ser Pro Tyr Asp Ile Ser Asn Thr Asp Tyr 450 455 460 Phe Phe Pro Arg 465 <210> 19 <211> 918 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu 1 5 10 15 Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser 20 25 30 Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys 35 40 45 Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr 50 55 60 Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr 65 70 75 80 Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser 85 90 95 Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu 100 105 110 Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys 115 120 125 Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys 130 135 140 Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu 145 150 155 160 Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg 165 170 175 Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val 180 185 190 Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr 195 200 205 Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro 210 215 220 Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu 225 230 235 240 Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys 245 250 255 Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile 260 265 270 Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp 275 280 285 Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu 290 295 300 Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile 305 310 315 320 Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile 325 330 335 Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val 355 360 365 Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala 370 375 380 Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 385 390 395 400 Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile 405 410 415 Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala 420 425 430 Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu 435 440 445 Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala 450 455 460 Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr 465 470 475 480 Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val 485 490 495 Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala 500 505 510 Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys 515 520 525 Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val 530 535 540 Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr 545 550 555 560 Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu 565 570 575 Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met 580 585 590 Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe 595 600 605 Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro 610 615 620 Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys 625 630 635 640 Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro 645 650 655 Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro 660 665 670 Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe 675 680 685 Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe 690 695 700 Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn 705 710 715 720 Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser 725 730 735 Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn 740 745 750 Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg 755 760 765 His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln 770 775 780 Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp 785 790 795 800 His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys 805 810 815 Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu 820 825 830 Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu 835 840 845 Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln 850 855 860 Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly 865 870 875 880 Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala 885 890 895 Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln 900 905 910 Gly Gly Tyr Met Pro Gln 915

Claims (58)

  1. IL-6에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서,
    상기 항체는 가변 도메인, 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 상기 항체는 상기 가변 도메인 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인을 포함하는 항체의 반감기와 비교하여 증가된 반감기를 갖는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, M252F, M252W, M252T, S254T, T256S, T256R, T256Q, T256E, T256D, T256T, L309P, Q311S, H433R, H433K, H433S, H433I, H433P, H433Q, N434H, N434F, N434Y 및 N436H; 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧(Kabat)에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 항체.
  3. 제2항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, S254T, T256E, H433K, N434F 및 N436H; 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 야생형 IgG 불변 도메인보다 FcRn에 대해 더 높은 친화성을 갖는 항체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인인 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 IgG는 IgG1인 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 가변 도메인은 하기를 포함하는 항체:
    (a) SEQ ID NO: 1에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
  9. 제8항에 있어서, 상기 가변 도메인은 하기를 포함하는 항체:
    (a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
  10. 제1항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; 여기서, 상기 VH 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 항체:
    a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
    b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및
    c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3.
  11. 제1항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VL 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 항체:
    (a) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및
    (c) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3.
  12. 제1항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7과 동일하거나 SEQ ID NO: 7에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, SEQ ID NO:8과 동일하거나 SEQ ID NO: 8에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체.
  13. 제1항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7의 VH 도메인 및 SEQ ID NO: 8의 VL 도메인을 포함하는 항체.
  14. 제12항의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 암호화하는 단리된 핵산.
  15. 제14항에 있어서, SEQ ID NOs: 11, 12, 13 및 14로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
  16. 제14항의 핵산을 포함하는 벡터.
  17. 제16항의 벡터를 포함하는 단리된 세포.
  18. 제17항의 항체를 발현시키는 단리된 세포주.
  19. 제1항의 항체를 약제학적으로 허용가능한 담체 내에 포함하는 약제학적 조성물.
  20. 필요한 인간에게, 치료적 유효량의 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함하는 인간의 통증의 치료 및/또는 예방 방법으로서,
    상기 항-IL-6 항체는 하기를 포함하는 가변 도메인을 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 1에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR 3.
  21. 제20항에 있어서, 상기 가변 도메인은 하기를 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
  22. 제20항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; 상기 VH 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 방법:
    a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
    b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및
    c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3.
  23. 제20항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VL 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및
    (c) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3.
  24. 제20항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7과 동일하거나 SEQ ID NO: 7에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, SEQ ID NO: 8과 동일하거나 SEQ ID NO: 8에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 방법.
  25. 제20항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7의 VH 도메인 및 SEQ ID NO: 8의 VL 도메인을 포함하는 방법.
  26. 제20항에 있어서, 상기 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 상기 항체는 상기 가변 도메인 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인을 포함하는 항체의 반감기와 비교하여 증가된 반감기를 갖는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, M252F, M252W, M252T, S254T, T256S, T256R, T256Q, T256E, T256D, T256T, L309P, Q311S, H433R, H433K, H433S, H433I, H433P, H433Q, N434H, N434F, N434Y 및 N436H; 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, S254T, T256E, H433K, N434F 및 N436H; 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 항체.
  30. 제26항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 야생형 IgG 불변 도메인보다 FcRn에 대해 더 높은 친화성을 갖는 방법.
  31. 제26항에 있어서, 상기 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인인 방법.
  32. 제26항에 있어서, IgG는 IgG1인 방법.
  33. 제20항에 있어서, 상기 통증은 염증성 및/또는 자가면역 장애와 연관되거나 그의 결과인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 염증성 및/또는 자가면역 장애는 류마티스성 관절염, 골관절염, 악액질(cachexia), 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD), 소아 특발성 관절염, 천식, 전신 홍반성 루푸스, 염증성 장질환, 크론 질환, 궤양성 대장염 및 죽상경화증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 염증성 및/또는 자가면역 장애는 전신 홍반성 루푸스, 골관절염 또는 류마티스성 관절염인 방법.
  36. 제20항에 있어서, 상기 통증은 상승된 IL-6 수준과 연관된 상태와 연관되거나 그 상태의 결과인 방법.
  37. 제20항에 있어서, 상기 통증은 강직성 척추염, 염증성 허리 통증, 신경병증, 통풍, 신경종, 섬유근육통, 급성 및/또는 만성 두통, 편두통, 췌장염, 척추신경 압박, 비-악성 골격 통증 또는 암과 연관되거나 그의 결과인 방법.
  38. 제20항에 있어서, 상기 통증은 상처, 내과적 처치, 수술, 부상 또는 외상성 신경증과 연관되거나 그의 결과인 방법.
  39. 제20항에 있어서, 상기 항체는 상처, 내과적 처치, 수술, 부상 또는 외상성 신경증을 입기 전에 인간에 투여되는 방법.
  40. 제20항에 있어서, 혈청에서 유리 IL-6의 적어도 90%는 중화되어 있는 방법.
  41. 제20항에 있어서, 감염된 조직 중 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90%는 표적 조직에서 억제되는 방법.
  42. 필요한 인간에게, 치료적 유효량의 항-IL-6 항체를 투여하는 것을 포함하는 인간의 우울증의 치료 또는 예방 방법으로서,
    상기 항-IL-6 항체는 하기를 포함하는 가변 도메인을 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 1에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6에 대한 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환과 동일하거나 그 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR 3.
  43. 제42항에 있어서, 상기 가변 도메인은 하기를 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;
    (c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;
    (d) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;
    (e) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및
    (f) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
  44. 제42항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VH 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; 상기 VH 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 방법:
    a) SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
    b) SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및
    c) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3.
  45. 제42항에 있어서, 상기 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인 및 3개의 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하고, 상기 VL 도메인의 3개의 CDR은 하기를 포함하는 방법:
    (a) SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
    (b) SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및
    (c) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3.
  46. 제42항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7과 동일하거나 SEQ ID NO: 7에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함하고, SEQ ID NO:8과 동일하거나 SEQ ID NO: 8에 대한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 가변 도메인은 SEQ ID NO: 7의 VH 도메인 및 SEQ ID NO: 8의 VL 도메인을 포함하는 방법.
  48. 제42항에 있어서, 상기 항체는 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 대한 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 IgG 불변 도메인을 포함하고, 상기 항체는 상기 가변 도메인 및 야생형 인간 IgG 불변 도메인을 포함하는 항체의 반감기와 비교하여 증가된 반감기를 갖는 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, M252F, M252W, M252T, S254T, T256S, T256R, T256Q, T256E, T256D, T256T, L309P, Q311S, H433R, H433K, H433S, H433I, H433P, H433Q, N434H, N434F, N434Y 및 N436H 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 적어도 하나의 아미노산 치환은 M252Y, S254T, T256E, H433K, N434F 및 N436H 또는 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 방법.
  51. 제49항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 M252Y, S254T, 및 T256E 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 잔기는 카밧에서와 같이 EU 인덱스에 따라 넘버링되는 방법.
  52. 제48항에 있어서, 상기 변형된 IgG 불변 도메인은 야생형 IgG 불변 도메인보다 FcRn에 대해 더 높은 친화성을 갖는 방법.
  53. 제48항에 있어서, 상기 인간 IgG 불변 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 불변 도메인인 방법.
  54. 제48항에 있어서, IgG는 IgG1인 방법.
  55. 제42항에 있어서, 혈청에서 유리 IL-6의 적어도 90%는 중화되어 방법.
  56. 제42항에 있어서, 뇌 중 IL-6 매개된 신호전달의 적어도 90%가 억제되는 방법.
  57. 제42항에 있어서, 상기 우울증은 주요 우울 장애인 방법.
  58. 제42항에 있어서, 상기 항체는 항-우울제와 병용하여 투여되는 방법.
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Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200831528A (en) 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
KR20110108398A (ko) * 2009-01-29 2011-10-05 메디뮨 엘엘씨 연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 안티-ｉｌ-6 항체 및 종양학, 자가면역 질환 및 염증성 질환의 치료에 있어서의 이들의 용도
US9265834B2 (en) 2009-03-05 2016-02-23 Ablynx N.V. Stable formulations of polypeptides and uses thereof
US10005830B2 (en) 2009-03-05 2018-06-26 Ablynx N.V. Antigen binding dimer-complexes, methods of making/avoiding and uses thereof
DK2473528T3 (en) * 2009-09-03 2015-03-02 Ablynx Nv Stable formulations of polypeptides and uses thereof
JP6173911B2 (ja) 2010-09-10 2017-08-09 メディミューン リミテド 抗体誘導体
WO2012083370A1 (en) * 2010-12-22 2012-06-28 Cephalon Australia Pty Ltd Modified antibody with improved half-life
SI3489255T1 (sl) 2011-02-10 2021-11-30 Roche Glycart Ag Mutantni polipeptidi interlevkina-2
MX342810B (es) 2011-03-03 2016-10-13 Apexigen Inc Anticuerpos del receptor anti-interleucina-6 (anti-il-6) y sus metodos de uso.
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
RU2014117505A (ru) 2011-09-30 2015-11-10 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антигенсвязывающая молекула для ускорения удаления антигенов
WO2013047729A1 (ja) 2011-09-30 2013-04-04 中外製薬株式会社 標的抗原に対する免疫応答を誘導する抗原結合分子
JP6322411B2 (ja) 2011-09-30 2018-05-09 中外製薬株式会社 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子
TWI682939B (zh) 2012-02-24 2020-01-21 日商中外製藥股份有限公司 經ＦｃγＲＩＩＢ促進抗原消失之抗原結合分子
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
WO2014066167A1 (en) 2012-10-22 2014-05-01 Fountain Biopharma Inc. Antibodies to interleukin-6 and uses thereof
JP2015536934A (ja) * 2012-10-25 2015-12-24 メディミューン，エルエルシー 安定した低粘度の抗体製剤
US10772940B1 (en) * 2012-12-11 2020-09-15 University Of Kentucky Research Foundation Cocaine hydrolase-FC fusion proteins for cocaine and methods for utilizing the same
US20160185847A1 (en) * 2012-12-17 2016-06-30 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Use of monoclonal antibodies for the treatment of inflammation and bacterial infections
FR2999431B1 (fr) * 2012-12-17 2016-03-18 Lfb Biotechnologies Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes
BR112016009460B1 (pt) * 2013-10-31 2020-09-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Método para detectar a presença de anticorpos neutralizantes
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
EP3632931A1 (en) 2014-11-07 2020-04-08 Sesen Bio, Inc. Improved il-6 antibodies
CA2991637C (en) 2015-07-31 2022-07-05 Medimmune Limited Methods for treating hepcidin-mediated disorders
WO2017147293A1 (en) * 2016-02-23 2017-08-31 Eleven Biotherapeutics, Inc. Il-6 antagonist formulations and uses thereof
AU2017248280A1 (en) * 2016-04-07 2018-10-25 Janssen Biotech, Inc. Treatment of depression using agents that block binding of IL-6 to IL-6 receptor
EP3576790A4 (en) 2017-02-01 2020-12-23 Yale University TREATMENT OF DIURETIC RESISTANCE
US20190241650A1 (en) * 2018-01-05 2019-08-08 Corvidia Therapeutics, Inc. Methods for treating il-6 mediated inflammation without immunosuppression
MX2021000889A (es) 2018-07-24 2021-04-28 Medimmune Llc Anticuerpo dirigido contra el factor de agregación a (clfa) de s. aureus.
KR20210080411A (ko) 2018-10-09 2021-06-30 메디뮨 엘엘씨 스타필로코커스 오레우스(staphylococcus aureus) 류코톡신에 대한 항체
EP3864041A2 (en) 2018-10-09 2021-08-18 Medimmune, LLC Combinations of anti-staphylococcus aureus antibodies
US20220127338A1 (en) 2019-03-13 2022-04-28 Medimmune, Llc Decreasing staphylococcus aureus infections in colonized patients
WO2020223565A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Corvidia Therapeutics, Inc. Anti-il-6 antibody formulation
CN111057152B (zh) * 2019-12-11 2022-03-11 中国人民解放军第四军医大学 一种抗人IL-6Ra单克隆抗体及其应用
AU2020418554A1 (en) * 2019-12-31 2022-08-25 Peptinov Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of post-surgical pain
WO2021186398A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Medimmune Limited Anti-klebsiella pneumoniae antibodies and uses thereof
CR20220646A (es) 2020-05-17 2023-10-23 Astrazeneca Uk Ltd Anticuerpos contra el sars-cov-2 y métodos de selección y uso de los mismos
AR122933A1 (es) 2020-07-10 2022-10-19 Novo Nordisk As Métodos para tratar la enfermedad cardiovascular
AU2021325339A1 (en) 2020-08-10 2023-04-06 Astrazeneca Uk Limited SARS-CoV-2 antibodies for treatment and prevention of COVID-19
TW202342095A (zh) 2021-11-05 2023-11-01 英商阿斯特捷利康英國股份有限公司 用於治療和預防ｃｏｖｉｄ—１９之組成物
TW202342510A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 英商Ｒｑ生物科技有限公司 抗體
WO2023209177A1 (en) 2022-04-29 2023-11-02 Astrazeneca Uk Limited Sars-cov-2 antibodies and methods of using the same
WO2024073718A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-04 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Low dose il-6 formulations and methods of use thereof

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999047170A1 (fr) * 1998-03-17 1999-09-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents prophylactiques ou therapeutiques pour affections intestinales inflammatoires renfermant, comme ingredient actif, des antagonistes de il-6
DK1355919T3 (da) * 2000-12-12 2011-03-14 Medimmune Llc Molekyler med længere halveringstider, sammensætninger og anvendelser deraf
US7658921B2 (en) * 2000-12-12 2010-02-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
DK1562968T3 (da) * 2001-11-14 2013-10-28 Janssen Biotech Inc Anti-il-6-antistoffer, sammensætninger, fremgangsmåder og anvendelser
DK1517921T3 (da) * 2002-06-28 2006-10-09 Domantis Ltd Immunglobulin-enkeltvariable antigen-bindende domæner og dobbeltspecifikke konstruktioner deraf
KR101208291B1 (ko) * 2003-04-04 2012-12-05 노파르티스 아게 고농도 항체 및 단백질 제형
CA2585891A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-11 Medimmune, Inc. Methods of preventing and treating rsv infections and related conditions
JO3058B1 (ar) * 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
ES2523666T3 (es) * 2005-05-31 2014-11-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos IgG1 con la parte Fc mutada para el aumento de unión al receptor FcRn y usos de los mismos
WO2007005612A2 (en) * 2005-07-01 2007-01-11 Medimmune, Inc. An integrated approach for generating multidomain protein therapeutics
EP1988922A4 (en) * 2006-02-03 2010-06-02 Medimmune Llc PROTEIN FORMULATIONS
AU2007224631A1 (en) * 2006-03-13 2007-09-20 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against IL-6 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with IL-6-mediated signalling
TW200831528A (en) * 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
JP5419709B2 (ja) * 2007-01-09 2014-02-19 ワイス・エルエルシー 抗ｉｌ−１３抗体製剤およびその使用
US20080279851A1 (en) * 2007-05-07 2008-11-13 Medlmmune, Llc Anti-icos antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
HUE032563T2 (en) * 2007-05-21 2017-09-28 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and their use
WO2009002521A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
CA2688667A1 (en) * 2007-06-26 2008-12-31 Medimmune, Llc Methods of treating rsv infections and related conditions
KR20110108398A (ko) * 2009-01-29 2011-10-05 메디뮨 엘엘씨 연장된 생체내 반감기를 갖는 인간 안티-ｉｌ-6 항체 및 종양학, 자가면역 질환 및 염증성 질환의 치료에 있어서의 이들의 용도

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