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KR101666289B1 - 아밀로이드-베타 펩타이드 항체 제형 - Google Patents

아밀로이드-베타 펩타이드 항체 제형 Download PDF

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KR101666289B1
KR101666289B1 KR1020147025086A KR20147025086A KR101666289B1 KR 101666289 B1 KR101666289 B1 KR 101666289B1 KR 1020147025086 A KR1020147025086 A KR 1020147025086A KR 20147025086 A KR20147025086 A KR 20147025086A KR 101666289 B1 KR101666289 B1 KR 101666289B1
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피에르 골드바흐
한스-크리스티안 매흐러
로베르트 뮐러
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 약 4.5 내지 7.0의 pH에서 아베타 항체 약 50mg/ml 내지 200mg/ml; 폴록사머 약 0.01% 내지 0.1%; 완충액 약 5mM 내지 50mM; 안정화제 약 100mM 내지 300mM을 포함하는 약학 제형에 관한 것이다.

Description

아밀로이드-베타 펩타이드 항체 제형{ABETA ANTIBODY FORMULATION}
본 발명은 아밀로이드-베타 펩타이드[아베타(Abeta)]에 대한 항체 분자 및/또는 항체 분자의 혼합물의 약학 제형에 관한 것이다.
단백질 약제 군의 일부로서의 항체 분자는 변성 및 응집, 탈아미드화, 산화 및 가수분해 같은 물리적 및 화학적 열화에 대해 매우 감수성이다. 단백질 안정성은 단백질 자체의 특징, 예를 들어 아미노산 서열에 의해, 및 온도, 용매 pH, 부형제, 계면 또는 전단 속도 같은 외부 영향에 의해 영향을 받는다. 따라서, 제조, 저장 및 투여 동안 열화 반응에 대해 단백질을 보호하기 위한 최적 제형 조건을 한정하는 것이 중요하다. [매닝(Manning, M.C.), 파텔(K. Patel) 등 (1989). "Stability of protein pharmaceuticals." Pharm Res 6(11): 903-18; 젱(Zheng, J. Y.) 및 제니스(L. J. Janis) (2005). "Influence of pH, buffer species, and storage temperature on physicochemical stability of a humanized monoclonal antibody LA298." Int. Pharm.]. 피하 또는 근육내 경로를 통한 항체의 투여는 흔히 요구되는 높은 투여량 및 제한된 투여 부피 때문에 최종 제형중 높은 단백질 농도를 필요로 한다. [샤이어(Shire, S. J.), 샤록(Z. Shahrokh) 등 (2004). "Challenges in the development of high protein concentration formulations." J Pharm Sci 93(6): 1390-402.; 로스코스(Roskos, L. K.), 데이비스(C. G. Davis) 등 (2004). "The clinical pharmacology of therapeutic monoclonal antibodies." Drug Development Research 61(3): 108-120]. 한외여과 공정, 건조 공정(예컨대, 동결건조 또는 분무-건조) 및 침전 공정에 의해 높은 단백질 농도를 대규모로 제조할 수 있다. [샤이어, 샤록 등 (2004). "Challenges in the development of high protein concentration formulations." J Pharm Sci 93(6): 1390-402.].
본 발명의 목적은 아베타 항체 또는 이 항체의 혼합물의 고도로 농축된 안정한 제형을 제공하는 것이며, 이 제형은 항체를 환자에게 피하 투여할 수 있도록 한다.
본 발명의 제형은 눈에 보이는 입자를 형성시키지 않으면서 2 내지 8℃ 및 25℃에서 8개월 동안 저장할 때 우수한 안정성을 보여준다. 흔들기 및 여러 번의 동결-해동 단계를 액체 제형에 가하여 약물 제품의 제조 또는 운송 동안 발생할 수 있는 물리적인 스트레스 조건을 모방하였다.
본 발명의 약학 제형은 항체의 응집 및 입자 형성을 감소시키기 위하여 계면활성제로서 폴록사머를 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "폴록사머"는 바스프(BASF)(미국 뉴저지주 파시파니 소재)에서 상표명 플루로닉(PLURONIC)® F68로 시판중인 폴록사머 188로 알려져 있는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 삼원블록 공중합체를 포함한다. 본 발명의 제형에 사용될 수 있는 다른 폴록사머는 폴록사머 403(플루로닉® P123으로 시판중), 폴록사머 407(플루로닉® P127로 시판중), 폴록사머 402(플루로닉® P122로 시판중), 폴록사머 181(플루로닉® L61로 시판중), 폴록사머 401(플루로닉® L121로 시판중), 폴록사머 185(플루로닉® P65로 시판중), 및 폴록사머 338(플루로닉® F108로 시판중)을 포함한다.
본 발명은 약 4.5 내지 7.0의 pH에서 아베타 항체 약 50mg/ml 내지 200mg/ml; 폴록사머, 바람직하게는 폴록사머 188 약 0.01% 내지 0.1%; 완충액 약 5mM 내지 50mM; 안정화제 약 100mM 내지 300mM을 포함하는 안정한 액체 약학 항체 제형을 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체 농도는 약 100mg/ml 내지 200mg/ml, 바람직하게는 약 150mg/ml이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 폴록사머는 약 0.02% 내지 0.06%, 바람직하게는 약 0.04%의 농도로 존재한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 완충액은 아세트산나트륨 완충액 또는 히스티딘 완충액, 바람직하게는 히스티딘/히스티딘-HCl 완충액이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 완충액은 약 10 내지 30mM, 바람직하게는 약 20mM의 농도를 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 제형의 pH는 약 5 내지 6, 바람직하게는 약 5.5이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 당 및 아미노산으로부터 선택된다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 트레할로즈 및 아르기닌으로부터 선택된다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 약 100mM 내지 300mM의 농도를 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 트레할로즈이고, 약 150mM 내지 250mM, 바람직하게는 약 200mM의 농도를 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 안정화제는 아르기닌이고, 약 100mM 내지 150mM, 바람직하게는 약 135mM의 농도를 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 단클론성 항체이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체의 중쇄는 서열 식별 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열 식별 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 서열 식별 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체의 경쇄는 서열 식별 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열 식별 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 서열 식별 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체의 VH 도메인은 서열 식별 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, 아베타 항체의 VL 도메인은 서열 식별 번호 3의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체의 중쇄는 서열 식별 번호 10의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 아베타 항체의 경쇄는 서열 식별 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 단클론성 아베타 항체는 일글라이코실화된 아베타 항체와 이글라이코실화된 아베타 항체의 혼합물이며, 이 때 일글라이코실화된 항체는 하나의 항체 결합 부위의 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에 글라이코실화된 아스파라긴(Asn)을 포함하고, 이글라이코실화된 항체는 두 항체 결합 부위의 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에 글라이코실화된 아스파라긴(Asn)을 포함함으로써, 상기 혼합물은 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에서 글라이코실화되지 않은 항체를 5% 미만으로 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 아베타 항체의 피하 투여를 위한 본 발명의 약학 제형의 용도를 제공한다.
용어 "아베타 항체" 및 "아베타에 결합하는 항체"는 항체가 Aβ 펩타이드를 표적화함에 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 하기에 충분한 친화력으로 Aβ 펩타이드와 결합할 수 있는 항체를 가리킨다.
Aβ가 몇 가지 천연 발생 형태를 가짐으로써, 인간 형태가 상기 언급된 Aβ39, Aβ40, Aβ41, Aβ42 및 Aβ43으로 일컬어짐에 주의한다. 가장 우세한 형태인 Aβ42는 다음과 같은 아미노산 서열을 갖는다(N-말단으로부터 출발):
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(서열 식별 번호 1).
Aβ41, Aβ40, Aβ39에서는, 각각 C-말단 아미노산 A, IA 및 VIA가 없다. Aβ43 형태에서는, 추가적인 트레오닌 잔기가 상기 기탁된 서열(서열 식별 번호 1)의 C-말단에 포함된다.
용어 "일글라이코실화된 아베타 항체"는 개별적인 항체 분자의 하나의 (VH)-영역의 서열 식별 번호 2의 52 위치에 N-글라이코실화를 포함하는 항체 분자에 관련된 것이다. 용어 "이글라이코실화된 아베타 항체"는 중쇄의 두 가변 영역상의 서열 식별 번호 2의 52 위치에서 N-글라이코실화된 항체 분자를 정의한다. 두 중쇄 (VH)-도메인에 N-글라이코실화가 없는 항체 분자는 "글라이코실화되지 않은 항체"로 불린다. 일글라이코실화된 항체, 이글라이코실화된 항체 및 글라이코실화되지 않은 항체는 동일한 아미노산 서열 또는 상이한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일글라이코실화된 항체 및 이글라이코실화된 항체는 본원에서 "글라이코실화된 항체 동형단백질"로 일컬어진다. 하나 이상의 항원 결합 부위가 중쇄(VH)의 가변 영역에 글라이코실화를 포함함을 특징으로 하는 정제된 항체 분자는 이글라이코실화된 항체 및 글라이코실화되지 않은 항체로부터 선택되는 동형단백질을 갖지 않거나 또는 이들 동형단백질이 매우 낮은 한도로만 결합된 일글라이코실화된 항체, 즉 "정제된 일글라이코실화된 항체"이다. 본 발명과 관련하여 이글라이코실화된 항체는 일글라이코실화된 항체 및 글라이코실화되지 않은 항체로부터 선택되는 동형단백질을 갖지 않거나 또는 이들 동형단백질과 매우 낮은 한도로만 결합된, 즉, "정제된 이글라이코실화된 항체"이다.
용어 "항체"는 전체 항체 및 항체 분절을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는 항체 구조체의 다양한 형태를 포괄한다. 본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 본 발명의 따른 특징적인 특성이 유지되는 한 다른 유전공학적으로 조작된 항체이다.
"항체 분절"은 전체 길이 항체의 일부, 바람직하게는 그의 가변 도메인, 또는 그의 적어도 항원 결합 부위를 포함한다. 항체 분절의 예는 2가 항체 절편(diabody), 단일 쇄 항체 분자, 및 항체 분절로부터 형성되는 다가 특이성 항체를 포함한다. scFv 항체는 예를 들어 휴스턴(Houston, J.S.)의 문헌[Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96]에 기재되어 있다. 또한, 항체 분절은 VH 도메인의 특징을 갖는(즉, VL 도메인과 함께 기능성 항원 결합 부위에 조합됨으로써 특성을 제공할 수 있는) 또는 Aβ 항체에 결합하는 VL 도메인의 특징을 갖는(즉, VH 도메인과 함께 기능성 항원 결합 부위에 조합됨으로써 특성을 제공할 수 있는) 단일 쇄 폴리펩타이드를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "단클론성 항체" 또는 "단클론성 항체 조성물"은 단일 아미노산 조성의 항체 분자의 제제를 일컫는다.
용어 "키메라 항체"는 통상 재조합 DNA 기법에 의해 제조되는, 하나의 공급원 또는 종으로부터의 가변 영역(즉, 결합 영역) 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래되는 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 항체를 말한다. 쥐의 가변 영역과 인간의 불변 영역을 포함하는 키메라 항체가 바람직하다. 본 발명에 포괄되는 "키메라 항체"의 다른 바람직한 형태는 특히 Clq 결합 및/또는 Fc 수용체(FcR) 결합과 관련하여 본 발명에 따른 특성을 생성시키기 위하여 불변 영역을 원래 항체로부터 변형 또는 변화시킨 것이다. 이러한 키메라 항체는 또한 "클래스 전환(class-switched) 항체"로도 일컬어진다. 키메라 항체는 면역 글로불린 가변 영역을 코딩하는 DNA 분절 및 면역 글로불린 불변 영역을 코딩하는 DNA 분절을 포함하는 발현된 면역 글로불린 유전자의 생성물이다. 키메라 항체를 생성시키는 방법은 통상적인 재조합 DNA를 포함하고, 유전자 형질감염 기법은 당 업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 모리슨(Morrison, S.L.) 등의 문헌[Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855]; 미국 특허 제 5,202,238 호 및 제 5,204,244 호를 참조한다.
용어 "인간화된 항체"는 골격 또는 "상보성 결정 영역"(CDR)이 모 면역 글로불린과 비교하여 상이한 특이성의 면역 글로불린의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 말한다. 바람직한 실시양태에서는, 쥐의 CDR을 인간 항체의 골격 영역 내로 그라프팅시켜 "인간화된 항체"를 제조한다. 예를 들어, 리치만(Riechmann, L.) 등의 문헌[Nature 332 (1988) 323-327] 및 노이버거(Neuberger, M.S.) 등의 문헌[Nature 314 (1985) 268-270]을 참조한다. 특히 바람직한 CDR은 키메라 항체에 대해 상기 표시된 항원을 인식하는 서열을 나타내는 것에 상응한다. 본 발명에 의해 포괄되는 "인간화된 항체"의 다른 형태는 특히 Clq 결합 및/또는 Fc 수용체(FcR) 결합과 관련하여 본 발명에 따른 특성을 생성시키기 위하여 불변 영역이 원래 항체로부터 추가로 변형 또는 변화된 것이다.
본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식계 면역 글로불린 서열로부터 유도되는 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하고자 한다. 인간 항체는 당 업계에 널리 공지되어 있다[반 디크(van Dijk, M.A.) 및 반 드 빈켈(van de Winkel, J.G.), Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374]. 면역화될 때 내생성 면역 글로불린 생성의 부재하에 인간 항체의 전체 범위 또는 선택 범위를 생성시킬 수 있는 형질 전환된 동물(예컨대, 마우스)에서도 인간 항체가 생성될 수 있다. 이러한 생식계 돌연변이 마우스에서의 인간 생식계 면역 글로불린 유전자 어레이의 전달은 항원 침입시 인간 항체를 생성시킨다[예를 들어, 야코보비츠(Jakobovits, A.) 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; 야코보비츠 등, Nature 362 (1993) 255-258; 브러기만(Bruggemann, M.) 등, Year Immunol. 7 (1993) 33-40을 참조한다]. 파지 디스플레이 라이브러리에서도 인간 항체를 생성시킬 수 있다[후겐붐(Hoogenboom, H.R.) 및 윈터(Winter, G.), J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388; 막스(Marks, J.D.) 등, J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597]. 콜(Cole) 등 및 뵈너(Boerner) 등의 기법도 인간 단클론성 항체의 제조에 이용될 수 있다[콜 등, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); 및 뵈너 등, J. Immunol. 147 (1991) 86-95]. 본 발명에 따른 키메라 항체 및 인간화된 항체에 대해 이미 언급한 바와 같이, 본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 또한 예를 들어 "클래스 전환", 즉 Fc 부분의 변화 또는 돌연변이(예를 들어, IgG1에서 IgG4 및/또는 IgG1/IgG4 돌연변이로)에 의해, 특히 Clq 결합 및/또는 FcR 결합과 관련하여, 본 발명에 따른 특성을 생성시키기 위하여 불연 영역에서 변형되는 이러한 항체를 포함한다.
용어 "항원 결정 부위"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 폴리펩타이드 결정 인자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결정 부위는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설폰일 같은 분자의 화학적 활성 표면 기를 포함하고, 특정 실시양태에서는 특이적인 3차원의 구조적 특징 및/또는 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 항원 결정 부위는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다.
본원에 사용되는 "가변 도메인"(경쇄의 가변 도메인(VL), 중쇄의 가변 도메인(VH))은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관련되는 경쇄 도메인과 중쇄 도메인의 각각의 쌍을 가리킨다. 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인은 동일한 일반적인 구조를 갖고, 각 도메인은 3개의 "과가변(hypervariable) 영역"(또는 상보성 결정 영역, CDR)에 의해 연결되는 4개의 골격(FR) 영역(이들의 서열은 광범위하게 보호됨)을 포함한다. 골격 영역은 β-시트 형태를 채택하고, CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄에서 CDR은 골격 영역에 의해 이들의 3차원 구조 내에 유지되고, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화력에서 특히 중요한 역할을 하며, 따라서 본 발명의 추가적인 목적을 제공한다.
본원에 사용되는 용어 "항체의 항원-결합 부위"는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 가리킨다. 항체의 항원-결합 부위는 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "골격" 또는 "FR" 영역은 본원에서 정의된 과가변 영역 잔기 외의 가변 도메인 영역이다. 그러므로, 항체의 경쇄 및 중질쇄 가변 도메인은 N-말단에서 C-말단으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 특히, 중쇄의 CDR3은 대부분의 항원 결합에 기여하고 항체의 특성을 한정하는 영역이다. CDR 및 FR 영역은 카밧(Kabat) 등의 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판, 메릴랜드주 베데스다 소재의 국립보건원 공중위생국 (1991)]의 표준 정의에 따라 결정된다.
용어 "안정화제"는 제조, 저장 및 적용 동안 활성 약학 성분 및/또는 제형을 화학적 및/또는 물리적 열화로부터 보호하는 약학적으로 허용가능한 부형제를 나타낸다. 단백질 약제의 화학적 및 물리적 열화 경로는 클러랜드(Cleland, J. L.), 포웰(M. F. Powell) 등의 문헌[(1993). "The development of stable protein formulations: a close look at protein aggregation, deamidation, and oxidation." Crit Rev Ther Drug Carrier Syst 10(4): 307-77], 왕(Wang, W.)의 문헌[(1999). "Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals." Int J Pharm 185(2):129-88], 왕의 문헌[(2000). "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int J Pharm 203(1-2): 1-60] 및 치(Chi, E. Y.), 크리쉬난(S. Krishnan) 등의 문헌[(2003). "Physical stability of proteins in aqueous solution: mechanism and driving forces in nonnative protein aggregation." Pharm Res 20(9): 1325-36]에 개괄되어 있다. 안정화제는 당, 아미노산, 폴리올, 계면활성제, 산화방지제, 보존제, 사이클로덱스트린; 폴리에틸렌글라이콜, 예를 들어 PEG 3000, 3350, 4000, 6000; 알부민, 예컨대 인간 혈청 알부민(HSA), 소 혈청 알부민(BSA); 염, 예를 들어 염화나트륨, 염화마그네슘, 염화칼슘; 킬레이트화제, 예컨대 이후 정의되는 EDTA를 포함하지만, 이들로 국한되지는 않는다. 본원에서 앞서 언급된 바와 같이, 안정화제는 약 10 내지 약 500mM, 바람직하게는 약 10 내지 약 300mM, 더욱 바람직하게는 약 100mM 내지 약 300mM의 양으로 제형에 존재할 수 있다.
"안정한 액체 약학 항체 제형"은 냉장 온도(2 내지 8℃)에서 12개월 이상, 특히 2년 이상, 더욱 특히 3년 이상 동안 유의한 변화가 관찰되지 않는 액체 항체 제형이다. 안정성의 기준은 다음과 같다: 크기 배제 크로마토그래피(SEC-HPLC)에 의해 측정할 때 항체 단량체중 10% 이하, 특히 5% 이하가 열화된다. 또한, 용액은 육안 분석에 의해 무색 또는 투명 내지 약간 유백색이다. 제형의 단백질 농도는 +/-10% 이하의 변화를 갖는다. 10% 이하, 특히 5% 이하의 응집이 형성된다. UV 분광법, 크기 배제 크로마토그래피(SEC-HPLC), 이온-교환 크로마토그래피(IE-HPLC), 비탁법 및 육안 검사 같은 당 업계에 공지되어 있는 방법에 의해 안정성을 측정한다.
재조합 방법 및 조성물
예를 들어 미국 특허 제 4,816,567 호에 기재되어 있는 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 항체를 생성시킬 수 있다. 하나의 실시양태에서는, 본원에 기재된 티-[[PRO]] 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 제공한다. 이러한 핵산은 항체(예컨대, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL을 구성하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 구성하는 아미노산 서열을 코딩할 수 있다. 다른 실시양태에서는, 이러한 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다. 다른 실시양태에서는, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 하나의 이러한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 구성하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 구성하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 구성하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제 1 벡터 및 항체의 VH를 구성하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제 2 벡터를 포함한다(예를 들어, 이들로 형질 전환된다). 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵세포, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프 세포(예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 하나의 실시양태에서는, 항-[[PRO]] 항체를 제조하는 방법이 제공되는데, 이 방법은 상기 제공되는 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건하에서 배양하고, 임의적으로는 숙주 세포(또는 숙주 세포 배지)로부터 항체를 회수함을 포함한다.
항-아베타 항체의 재조합 생성을 위하여, 예컨대 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고 추가적인 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 하나 이상의 벡터 내로 삽입한다. 이러한 핵산은 종래의 절차를 이용하여(예컨대, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리되고 서열이 결정될 수 있다.
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 글라이코실화 및 Fc 실행기(effector) 기능이 필요하지 않은 경우 세균에서 생성될 수 있다. 세균에서의 항체 분절 및 폴리펩타이드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 제 5,648,237 호, 제 5,789,199 호, 및 제 5,840,523 호를 참조한다. {또한, 에스케리치아 콜리(E. coli)에서의 항체 분절의 발현을 기재하는 찰튼(Charlton)의 문헌[ Methods in Molecular Biology, 제248권 (B.K.C. Lo 편집, Humana Press, 뉴저지주 토토와, 2003)]도 참조한다.} 발현 후, 항체를 가용성 분획중 세균 세포 페이스트로부터 단리할 수 있고 추가로 정제할 수 있다.
원핵 생물에 덧붙여, 글라이코실화 경로가 "인간화"되어 부분적으로 또는 완전히 인간의 글라이코실화 패턴을 갖는 항체를 생성시키는 곰팡이 또는 효모 균주를 비롯한 곰팡이 또는 효모 같은 진핵 생물도 항체-코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 전그로스(Gerngross)의 문헌[Nat . Biotech . 22:1409-1414 (2004)] 및 리(Li) 등의 문헌[Nat . Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
글라이코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 생물체(무척추동물 및 척추동물)로부터도 유래된다. 무척추 세포의 예는 식물 및 곤충 세포이다. 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질 감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 다수의 바큘로바이러스(baculovirus) 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양액을 숙주로서 또한 사용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,959,177 호, 제 6,040,498 호, 제 6,420,548 호, 제 7,125,978 호 및 제 6,417,429 호[형질 전환 식물에서 항체를 생성시키기 위한 플랜티바디즈(PLANTIBODIES)™ 기법을 기재함]를 참조한다.
척추동물 세포도 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장시키는데 적합화된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주세포주의 다른 예는 SV40(COS-7)에 의해 형질 전환된 원숭이 신장 CV1 세포주; 인간 배아 신장 세포주{예를 들어 그라함(Graham) 등의 문헌[J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재되어 있는 293 또는 293 세포들}; 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리(sertoli) 세포{예컨대, 매더(Mather)의 문헌[Biol . Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재되어 있는 TM4 세포}; 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 그린 원숭이(green monkey) 신장 세포(VERO-76); 인간 경부 암종 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK); 버팔로 래트(buffalo rat) 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유선 종양(MMT 060562); 예를 들어 매더 등의 문헌[Annals N.Y. Acad . Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재되어 있는 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포[울럽(Urlaub) 등, Proc . Natl . Acad. Sci . USA 77:4216 (1980)]를 비롯한 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 개관에 대해서는, 예를 들어 야자키(Yazaki) 및 우(Wu)의 문헌[Methods in Molecular Biology, 제248권 (B.K.C. Lo 편집, Humana Press, 뉴저지주 토토와), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
실시예
본 발명에 따른 피하 투여용 액체 약물 제형을 다음과 같이 개발하였다.
실시예 1: 액체 제형의 제조
150mg/ml의 단백질 농도로 하기 아베타 액체 제형을 제조하였다:
Figure 112014085166162-pct00001
WO 2007/068429 호에 기재된 바와 같이 제조 및 수득된 아베타 항체를 약 5.5의 pH에서 10mM 히스티딘 완충액중에 약 50 내지 60mg/mL의 농도로 제공하였다. 이 실시예에 사용된 아베타 항체는 본원의 서열 목록(서열 식별 번호 2 내지 11)에 명시된 CDR, VH 도메인, VL 도메인, 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
액체 제형의 제조를 위해, 아베타를 예정된 완충액 조성을 함유하는 정용 여과 완충액에 대해 완충액 교환하고, 약 200mg/mL의 항체 농도까지 한외여과에 의해 농축시켰다. 한외여과 작업을 종료한 후, 부형제(예를 들어, 트레할로즈)를 모 용액으로서 항체 용액에 첨가하였다. 이어, 계면활성제를 50 내지 125배 모 용액으로서 첨가하였다. 마지막으로, 단백질 농도를 완충액으로 약 150mg/mL의 최종 아베타 농도까지 조정하였다.
0.22㎛ 저 단백 결합 필터를 통해 모든 제형을 멸균 여과하고, ETFE(에틸렌과 테트라플루오로에틸렌의 공중합체)-코팅된 고무 스토퍼(stopper) 및 알루크림프(alucrimp) 뚜껑으로 폐쇄되는 멸균 6mL들이 유리 바이알 내로 무균 충전시켰다. 충전 부피는 약 2.4mL였다. 이들 제형을 상이한 기후 조건(5℃, 25℃ 및 40℃)에서 상이한 시간 동안 저장하고, 흔듦으로써(5℃ 및 25℃에서 200분마다 1회씩 흔드는 빈도로 1주일간) 또한 동결-해동 스트레스 방법(-80℃/+5℃에서 5회의 사이클)에 의해 스트레스를 주었다. 스트레스 시험에 가하기 전후에 또한 저장 후에 하기 분석 방법에 의해 샘플을 분석하였다:
● UV 분광법
● 크기 배제 크로마토그래피(SEC)
● 이온 교환 크로마토그래피(IEC)
● 용액의 투명성 및 유백색
● 육안 검사
240nm 내지 400nm의 파장 범위에서 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) λ35 UV 분광광도계 상에서 단백질 함량의 결정을 위해 이용되는 UV 분광법을 수행하였다. 순수한(neat) 단백질 샘플을 상응하는 제형 완충액으로 약 0.5mg/mL로 희석시켰다. 하기 수학식 1에 따라 단백질 농도를 계산하였다:
Figure 112014085166162-pct00002
280nm에서의 UV 광 흡광도를 320nm에서의 광 산란에 대해 보정하고 희석 계수(이는 순수한 샘플 및 희석 완충액의 칭량된 질량 및 농도로부터 결정되었음)로 곱하였다. 큐벳의 경로 길이(d)와 흡광 계수(ε)의 곱으로 분자를 나누었다.
크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 이용하여 제형의 가용성 고분자량 물질(응집체) 및 저분자량 가수분해 생성물(LMW)을 검출하였다. 워터스(Waters) W2487 이중 흡광도 검출기를 갖고 토소하스(TosoHaas) TSK-겔 G3000SWXL 칼럼이 설치된 워터스 얼라이언스(Waters Alliance) 2695 HPLC 기기 상에서 방법을 수행하였다. 이동상으로서 0.2M K2HPO4/0.25M KCl, pH 7.0을 사용하여 등용매 용리 프로파일에 의해 온전한 단량체, 응집체 및 가수분해 생성물을 분리하고, 280nm의 파장에서 검출하였다.
이온 교환 크로마토그래피(IEC)를 수행하여 제형중 아베타의 순 함량을 변화시키는 화학적 열화 생성물을 검출하였다. 방법은 워터스 W2487 이중 흡광도 검출기를 갖고 모노(Mono) S TM 5/50GL 칼럼(아머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences))이 설치된(검출 파장 280nm) 워터스 얼라이언스 2695 HPLC 기기를 이용하였다. 1.0mL/분의 유속을 갖는 50mM 말론산/말론에이트(pH 5.3) 및 이동상 A중 1M 아세트산나트륨(pH 5.3)을 이동상 A 및 B로서 각각 사용하였다.
구배 프로그램:
Figure 112014085166162-pct00003
투명성 및 유백색 정도를 비탁법에 의해 포르마진 혼탁 단위(Formazine Turbidity Unit; FTU)로서 측정하였다. 순수한 샘플을 11mm 직경의 투명한 유리관에 옮겨넣고 하치(HACH) 2100AN 탁도계에 넣었다.
세이드네이더(Seidenader) V90-T 육안 검사 기기를 사용함으로써 눈에 보이는 입자의 존재에 대해 샘플을 검사하였다.
본 발명에 따른 액체 아베타 약물 제형의 조성 및 안정성 데이터
Figure 112014085166162-pct00004
Figure 112014085166162-pct00005
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Figure 112014085166162-pct00012
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Figure 112014085166162-pct00018
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상기 제공된 안정성 데이터는 폴리솔베이트 20 및 폴리솔베이트 80을 함유하는 제형이 5℃, 25℃ 또는 40℃에서 8개월 동안 저장한 후 눈에 보이는 입자를 생성시킴을 보여준다. 반면, 폴록사머를 함유하는 제형은 5℃, 25℃ 및 40℃에서 8개월 동안 저장한 후 눈에 보이는 입자를 실제로 함유하지 않는다. 그러므로, 폴록사머는 아베타 항체 제형에서 눈에 보이는 입자의 형성을 방지할 수 있다.
본원에 개시된 아미노산 서열
Figure 112014085166162-pct00020
<110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Abeta Antibody formulation <130> 27381 WO <140> PCT/EP2013/054313 <141> 2013-03-05 <150> EP 12158602.8 <151> 2012-03-08 <160> 11 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Abeta 42 peptide <400> 1 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 1 5 10 15 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile 20 25 30 Gly Leu Met Val Gly Gly Trp Ile Ala 35 40 <210> 2 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH domain Abeta Antibody <400> 2 Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr 100 105 110 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL domain Abeta Antibody <400> 3 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR1 Abeta Antibody <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR2 Abeta Antibody <400> 5 Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR3 Abeta Antibody <400> 6 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR1 Abeta Antibody <400> 7 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR2 Abeta Antibody <400> 8 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR3 Abeta Antibody <400> 9 Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile 1 5 <210> 10 <211> 459 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain Abeta Antibody <400> 10 Gln Val Glu Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asn Ala Ser Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala 50 55 60 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 65 70 75 80 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr 100 105 110 Val Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 130 135 140 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 145 150 155 160 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 165 170 175 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 195 200 205 Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 210 215 220 Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 225 230 235 240 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 245 250 255 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 260 265 270 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 275 280 285 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 290 295 300 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 305 310 315 320 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 325 330 335 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 340 345 350 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 355 360 365 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 370 375 380 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 385 390 395 400 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 405 410 415 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 420 425 430 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 435 440 445 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 11 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain Abeta Antibody <400> 11 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (26)

  1. 4.5 내지 7.0의 pH에서 아베타 항체 50mg/ml 내지 200mg/ml; 폴록사머 188 0.01% 내지 0.1%; 완충액 5mM 내지 50mM; 안정화제 100mM 내지 300mM을 포함하는 안정한 액체 약학 항체 제형으로서,
    상기 완충액이 아세트산나트륨 완충액 또는 히스티딘 완충액이고,
    상기 안정화제가 트레할로즈 및 아르기닌으로부터 선택되고,
    상기 아베타 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하는 단클론성 항체이되, 상기 아베타 항체의 중쇄가, 서열 식별 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열 식별 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 서열 식별 번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 상기 아베타 항체의 경쇄가, 서열 식별 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열 식별 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 서열 식별 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는, 제형.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 아베타 항체 농도가 100mg/ml 내지 200mg/ml인 제형
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 폴록사머 188이 0.02% 내지 0.06%의 농도로 존재하는 제형.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 완충액이 히스티딘/히스티딘-HCl 완충액인 제형.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 완충액이 10 내지 30mM의 농도를 갖는 제형.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 제형의 pH가 5 내지 6인 제형.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 안정화제가 트레할로즈이고, 150mM 내지 250mM의 농도를 갖는 제형.
  11. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 안정화제가 아르기닌이고, 100mM 내지 150mM의 농도를 갖는 제형.
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 아베타 항체의 VH 도메인이 서열 식별 번호 2의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아베타 항체의 VL 도메인이 서열 식별 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 제형.
  16. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 아베타 항체의 중쇄가 서열 식별 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 제형.
  17. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 아베타 항체의 경쇄가 서열 식별 번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 제형.
  18. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 단클론성 아베타 항체가 일글라이코실화된(mono-glycosylated) 아베타 항체와 이글라이코실화된(double-glycosylated) 아베타 항체의 혼합물이며, 이 때 상기 일글라이코실화된 항체가 하나의 항체 결합 부위의 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에 글라이코실화된 아스파라긴(Asn)을 포함하고, 상기 이글라이코실화된 항체가 두 항체 결합 부위의 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에 글라이코실화된 아스파라긴(Asn)을 포함함으로써, 상기 혼합물이 VH 도메인의 서열 식별 번호 2의 52 위치에서 글라이코실화되지 않은 항체를 5% 미만으로 포함하는 제형.
  19. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    아베타 항체를 피하 투여하기 위한 제형.
  20. 삭제
  21. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 아베타 항체 농도가 150mg/ml인 제형.
  22. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 폴록사머 188이 0.04%의 농도로 존재하는 제형.
  23. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 완충액이 20mM의 농도를 갖는 제형.
  24. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 제형의 pH가 5.5인 제형.
  25. 제 10 항에 있어서,
    상기 트레할로즈가 200mM의 농도를 갖는 제형.
  26. 제 11 항에 있어서,
    상기 아르기닌이 135mM의 농도를 갖는 제형.
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