KR101479818B1 - Method for manufacturing debris derived from lactic acid bacteria - Google Patents
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Abstract
본 발명은 유산균 파쇄물의 제조방법에 관한 것으로서, 특히 파쇄 횟수에 따라 활성을 나타내는 유산균 파쇄물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 유산균 파쇄물이 항염증 활성을 갖는 최적의 파쇄 조건을 제공할 수 있으며, 염증을 억제하는 목적으로 한 정장제, 발효식품 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.The present invention relates to a method for producing a lactic acid bacterium, and more particularly, to a method for producing a lactic acid bacterium exhibiting activity according to the number of times of breakage.
The present invention can provide an optimal disruption condition having an antiinflammatory activity and can be used as a dressing agent, a fermented food, or a health functional food for the purpose of suppressing inflammation.
Description
본 발명은 유산균 파쇄물의 제조방법에 관한 것으로서, 특히 파쇄 횟수에 따라 활성을 나타내는 유산균 파쇄물의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a lactic acid bacterium, and more particularly, to a method for producing a lactic acid bacterium exhibiting activity according to the number of times of breakage.
염증반응은 생체의 세포나 조직에 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습으로 인한 손상을 수복 재생하기 위한 생체방어 반응과정으로서 국소의 혈관, 체액의 각종 조직세포 및 면역세포 등이 작용한다. 정상적으로 외부 침입균에 의하여 유도되는 염증반응은 생체를 보호하기 위한 방어 시스템인 반면, 비정상적으로 과도한 염증반응이 유도되면 다양한 질환들이 나타나게 되는데, 이러한 질환들을 염증질환이라 한다. 상기 염증질환은 외부 자극에 의하여 활성화된 표적세포로부터 분비되는 다양한 염증 매개물질이 염증을 증폭 및 지속시켜 인체의 생명을 위협하는 질환으로서 급성염증, 류마티스 관절염과 같은 관절 내에서의 만성염증 질환 등이 있다. 이러한 염증질환을 유도하는 핵심적인 염증 매개물질은 프로스타글란딘류(Prostaglandins), 수산화 지방산류(Hydroxyfatty acids) 등이며, 이들은 사이클로옥시게나제(Cyclooxygenase, COX) 및 리폭시게나제(Lipoxygenase)에 의하여 전구체인 아라키돈산(Arachidonic acid)으로부터 생성된다.Inflammation reaction is a biological defense reaction process for repairing and regenerating damage caused by invasion that brings about a fundamental change in a cell or tissue of a living body, and acts as local blood vessels, various tissue cells of body fluids, and immune cells. Normally, the inflammatory reaction induced by external invading bacteria is a defense system to protect the living body. However, when abnormally excessive inflammatory reaction is induced, various diseases appear. These diseases are called inflammatory diseases. The inflammatory disease is a disease in which various inflammatory mediators secreted from target cells activated by external stimuli amplify and maintain the inflammation and threaten the life of the human body. Such diseases include acute inflammation, chronic inflammatory diseases in joints such as rheumatoid arthritis have. Prostaglandins, hydroxyfatty acids, etc. are the key inflammatory mediators that induce such inflammatory diseases. They are caused by cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase, which are precursors of arachidonic acid (Arachidonic acid).
그런데, 서구화된 식생활 및 운동부족, 환경오염 등에 의하여 현대인에게 다양한 급성 및 만성 염증 질환이 점차 증가하는 추세에 있다. 이러한 여러 가지 염증성 질환에 대한 치료로써 항생제 및 소염제가 사용되고 있으며 다양한 약제 부작용 등이 점차 문제가 되고 있다. 염증 치료를 위하여, 여러 가지 항염증 물질이 개발되었으며, 현재까지 보고된 항염증성 물질들은 급성염증에서 손상된 조직세포, 염증에 관여하는 세포에서 활성화되는 프로스타글란딘의 생합성을 억제하는 물질들이다. 이와 같은 물질들은 급성염증에 대해서는 치료효과를 가지고 있지만 류마티스 관절염 같은 만성염증에 대해서는 1차적인 염증 현상만을 완화할 뿐이며, 면역학적 치료효과는 기대할 수 없으며 또한 심혈관계를 비롯한 다양한 부작용을 가지고 있다.However, various acute and chronic inflammatory diseases are gradually increasing in modern people due to westernized diet, lack of exercise and environmental pollution. Antibiotics and antiinflammatories are being used as treatments for these various inflammatory diseases, and various drug side effects are becoming increasingly problematic. Several antiinflammatory agents have been developed for the treatment of inflammation. The antiinflammatory substances reported so far are substances that inhibit the biosynthesis of prostaglandins activated in damaged tissue cells and inflammatory cells in acute inflammation. These substances have a therapeutic effect on acute inflammation, but only chronic inflammation such as rheumatoid arthritis is relieved only by primary inflammation, immunological therapeutic effect is not expected, and there are various side effects including cardiovascular.
한편, 유산균은 포도당 혹은 유당과 같은 당류를 분해하여 유산을 만드는 박테리아로, 세균 중에서 가장 오래전부터 인간에게 유용하게 이용되고 있는 균으로서, 특히, 발효 유제품에서 보편적으로 이용되어 왔다. 유산균은 영양소의 흡수를 개선하고, 유당불내성(lactose intolerance)을 완화시키며, 장의 운동성을 개선하고 항암효과를 갖는다고 보고된 바 있다. 그리고 일부 유산균들이 항염증 활성을 나타내는데, 유산균의 파쇄물 크기에 따른 항염증 활성에 대해서는 아직까지 보고된 바는 없다.On the other hand, lactic acid bacteria are bacteria that decompose saccharides such as glucose or lactose to make lactic acid. These bacteria have been used for humans for the longest time among bacteria, and have been widely used in fermented dairy products. Lactic acid bacteria have been reported to improve nutrient absorption, alleviate lactose intolerance, improve intestinal motility and have anti-cancer effects. In addition, some lactic acid bacteria exhibit anti-inflammatory activity. However, anti-inflammatory activity of lactic acid bacteria according to the size of lysate has not been reported yet.
이에 본 발명자들은 파쇄횟수 등 파쇄조건에 따라 유산균 파쇄물의 항염증 활성이 상이함을 발견하고 본 발명을 완성하게 이르렀다.Therefore, the inventors of the present invention found that the anti-inflammatory activity of the lactic acid bacterium was different depending on the crushing condition such as the number of crushing times, and thus completed the present invention.
따라서, 본 발명은 항염증 활성을 갖게 되는 유산균 파쇄물의 제조방법을 제공하고자 한다.Accordingly, the present invention provides a method for producing a lactic acid bacterial lysate having anti-inflammatory activity.
본 발명은 유산균을 4~9회 파쇄하여 유산균 파쇄물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a lactic acid bacterium by crushing
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 유산균 파쇄물에 관한 것이다.The present invention also relates to a lactic acid bacterial rupture produced by the above method.
본 발명은 유산균 파쇄물이 항염증 활성을 갖는 최적의 파쇄 조건을 제공할 수 있으며, 염증을 억제하는 목적으로 한 정장제, 발효식품 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.The present invention can provide an optimal disruption condition having an antiinflammatory activity and can be used as a dressing agent, a fermented food, or a health functional food for the purpose of suppressing inflammation.
도 1은 미립화 유산균 제조 조건에 따른 활성 검사에 관한 것이다.
도 2는 미립화 유산균 제조 기준 설정에 관한 것이다.
도 3은 미립화 유산균 조건별 피크 분석에 관한 것이다.
도 4는 Pre K8MF에서는 나타나지 않고 K8MF-20에서 나타나는 피크와 균체파쇄물 시료에서 나타나는 동일한 피크 확인한 것이다.
도 5는 균체파쇄물 시료 6번과 균체파쇄물 성분을 포함하는 1,2,3 시료에서 지표성분 분석을 수행한 것이다.
도 6은 두 가지 지표성분(Retention time 23.72와 24.86)의 질량분석 스펙트럼에 관한 것이다.
도 7은 MS 분석을 통한 지표성분의 분자량 및 MS/MS 분석수행에 관한 것이다.
도 8은 파쇄물 내 활성성분 구조에 관한 것이다.
도 9는 파쇄 횟수에 따른 hTNF-alpha 저해율에 관한 것이다.Fig. 1 relates to an activity test according to the conditions for producing the aerobic microbes.
Fig. 2 relates to setting the standards for producing aerated lactic acid bacteria.
Fig. 3 relates to peak analysis according to the atomized lactic acid bacteria condition.
Fig. 4 shows the same peaks observed in the K8MF-20 peak and the cell disruption sample, not in the Pre K8MF.
FIG. 5 is a graph showing the results of the surface component analysis in the samples of the cell lysate No. 6 and the lysate samples containing the cell lysate component.
Figure 6 relates to a mass spectrometry spectrum of two indicator components (Retention time 23.72 and 24.86).
Figure 7 relates to the molecular weight and MS / MS analysis of the surface constituents via MS analysis.
Figure 8 relates to the active ingredient structure in the lysate.
Figure 9 relates to the hTNF-alpha inhibition rate according to the number of shredding.
본 발명은 유산균을 4~9회 파쇄하여 유산균 파쇄물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a lactic acid bacterium by crushing
상기 유산균은 락토바실러스 델브루에키 아종 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueki ssp. bulgaricus; Lbul), 스트렙토코코스 서모필러스(Streptococcus thermophillus; Sthe), 락토코코스 락티스 아종 크레모리스(Lactococus lactis ssp. cremoris; Lcre), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei; Lcas), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus; Laci), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum; Blon), 락토코코스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis ssp. lactis; Llac), 비피도박테리움 아돌레센티스(Bifidobacterium adolescentis; Bado), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum; Lpla), 루코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroid; Leuco) 및 페디오코코스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus; Pedio)로 구성된 그룹으로부터 하나 이상 선택될 수 있다. Lactobacillus delbrueckus bulgaricus (Lbul), Streptococcus thermophillus (Sthe), Lactococus lactis ssp. Cremoris (Lcre), Lactobacillus spp. Lactobacillus casei (Lcas), Lactobacillus acidophilus (Laci), Bifidobacterium longum (Blon), Lactococcus lactis ssp. Lactis ), Bifidobacterium adolescentis (Bado), Lactobacillus plantarum (Lpla), Leuconostoc mesenteroid (Leuco) and Pediococcus pentosaceus ; Pedio). ≪ / RTI >
본 발명에 의한 유산균 파쇄물은 이에 제한되는 것은 아니나, (a) 유산균을 배양하고 배양액으로부터 유산균을 회수하는 단계; (b) 상기 회수된 유산균을 완충용액 또는 증류수에 현탁하는 단계; 및 (c) 상기 현탁된 유산균을 파쇄하는 단계로 제조될 수 있다. (A) culturing the lactic acid bacterium and recovering the lactic acid bacteria from the culture broth; (b) suspending the recovered lactic acid bacteria in a buffer solution or distilled water; And (c) disrupting the suspended lactic acid bacteria.
상기 (c) 단계에서의 유산균의 파쇄는 4~9회, 10000~13000psi의 압력, 3~10°C온도에서 파쇄할 수 있다.The disruption of the lactic acid bacteria in the step (c) may be performed at a pressure of 10000 to 13000 psi and a temperature of 3 to 10 ° C for 4 to 9 times.
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는 1x1010 CFUs/ml 의 bacteria를 수집한 뒤 Microfludizer 를 통해 13000psi의 압력에서 파쇄하였다.More specifically, in an embodiment of the present invention, 1 x 10 < 10 > CFUs / ml of bacteria were collected and disrupted at a pressure of 13000 psi through a microfludizer.
본 발명에서 유산균의 파쇄 횟수를 4~9회 하는 경우 항염증 활성이 75%이상이 되는 효능을 발휘할 수 있다. 즉, 4~9회의 파쇄의 정도에 따라 면역활성이 증가할 수 있으며, 상기 면역 활성은 과도면역반응의 억제 활성 일 수 있다. 이는 면역세포인 THP-1에서 LPS에 의한 과도 면역작용(hTNF-alpha의 발현 증가)을 억제하는 효능이 파쇄의 횟수 증가에 따라 증가함을 의미한다. 즉, 직접적으로 증가하는 hTNF-alpha의 발현을 감소시킬 수 있다(도 9).In the present invention, when the number of disruptions of the lactic acid bacteria is 4 to 9 times, the anti-inflammatory activity can be exhibited to be 75% or more. That is, the immune activity may be increased depending on the degree of crushing 4 to 9 times, and the immunological activity may be an inhibitory activity of the transient immune response. This means that the effect of suppressing transient immunity (increase of hTNF-alpha expression) by LPS in the immune cell, THP-1, increases with increasing frequency of disruption. That is, it can decrease the expression of hTNF-alpha which directly increases (Fig. 9).
본 발명에서 4회 파쇄 후 파쇄물에 수용성 활성성분이 존재할 수 있으며, 이 성분이 항염증 활성과 연관된 성분으로 LTA 유래 당지질일 수 있다. 즉, 파쇄물 제조시 LTA 유래 당지질이 존재할 수 있다.In the present invention, a water-soluble active ingredient may be present in the crushed product after 4 times of crushing, and this ingredient may be a glycolipid derived from LTA as a component associated with anti-inflammatory activity. That is, glycolipids derived from LTA may be present in the manufacture of crushed products.
본 발명에서 파쇄횟수를 4회 미만으로 하는 경우 과도면역반응의 억제 활성이 거의 없는 문제점이 있으며, 파쇄횟수를 9회 초과하는 경우 과도면역반응의 억제 활성의 정도가 감소하고, 이는 활성 성분이 너무 작게 파쇄되어 증가된 면역활성이 다시 감소하게 되기 때문이다(도 9). 즉, 파쇄횟수를 4~9회 하는 경우 파쇄를 진행함으로써, 수용성 활성 성분이 더 많이 나오게 되고, 그로 인해 면역적 활성이 증가할 수 있다.In the present invention, when the number of shredding is less than 4, there is a problem that the activity of suppressing the transient immune response is low. When the number of shredding is more than 9 times, the degree of inhibiting activity of the transient immune response is decreased, So that the immunosuppressive activity is decreased again (Fig. 9). That is, when the number of shredding is 4 to 9 times, by progressing the disruption, more water-soluble active ingredients are produced, thereby increasing immunological activity.
본 발명에서 유산균의 파쇄 횟수를 4~9회 하는 경우 미립화된 유산균 파쇄물의 크기는 550~800nm일 수 있다.
In the present invention, when the number of times of lysis of the lactic acid bacteria is 4 to 9 times, the size of the lysed lactic acid bacteria may be 550 to 800 nm.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 유산균 파쇄물에 관한 것이다. 상기 유산균 파쇄물은 항염증 활성을 갖을 수 있다. 상기 함염증 활성이란 과도면역반응의 억제 활성으로서, 면역세포인 THP-1에서 LPS에 의한 과도 면역작용(hTNF-alpha의 발현 증가)을 억제하는 효능일 수 있다. 이런 파쇄의 횟수 증가(4~9회)에 따라 증가할 수 있다(직접적으로 증가하는 hTNF-alpha의 발현을 감소시킬 수 있다).The present invention also relates to a lactic acid bacterial rupture produced by the above method. The lactic acid bacterium can have anti-inflammatory activity. The anti-inflammatory activity may be an effect of inhibiting transient immune function (increase of hTNF-alpha expression) by LPS in the immune cell, THP-1, as an inhibitory activity of transient immune response. It can be increased by increasing the frequency of this breakdown (4 to 9 times) (it can reduce the expression of hTNF-alpha directly).
본 발명의 일실시예에서 상기 활성을 갖는 성분의 구조를 규명해 보기 위해 MS 분석을 통한 지표성분의 분자량 및 MS/MS 분석수행을 해보았다. 질량분석을 통해 지표성분의 분자량은 1080.4 과 1094.5로 확인되었으며, MS/MS 분석을 통해서 6 탄당을 포함하는 당지질(glycolipid)으로 LTA의 종류로 확인되었다(도 8 참조).In one embodiment of the present invention, molecular mass and MS / MS analysis of the surface components were performed by MS analysis in order to clarify the structure of the active component. Mass spectrometry revealed molecular weights of 1080.4 and 1094.5, respectively, and MS / MS analysis confirmed glycolipids containing 6-carbon sugars as LTA species (see FIG. 8).
본 발명에서 상기 유산균 파쇄물은 항염증 활성을 갖는 바, 염증성 질환의 예방 및 치료에 유용할 수 있다.In the present invention, the above-mentioned lactic acid bacterium has anti-inflammatory activity, and thus may be useful for the prevention and treatment of inflammatory diseases.
상기 염증성 질환은 알레르기성 질환, 만성 염증성 질환, 급성 염증성 질환 등을 포함하며, 보다 상세하게는 알레르기성 질환, 염증성 장질환, 전신성 홍반성 낭창, 염증성 콜라겐 혈관 질환, 사구체신염, 염증성 피부 질환, 유육종증, 망막염, 위염, 간염, 장염, 췌장염 및 신장염으로 이루어진 군으로부터 어느 하나일 수 있다. The inflammatory diseases include allergic diseases, chronic inflammatory diseases, acute inflammatory diseases, and the like, and more particularly to allergic diseases, inflammatory bowel diseases, systemic lupus erythematosus, inflammatory collagen vascular diseases, glomerulonephritis, inflammatory skin diseases, , Retinitis, gastritis, hepatitis, enteritis, pancreatitis and nephritis.
또한, 상기 알레르기성 질환은 과민증, 알레르기성 비염, 천식, 알레르기성 결막염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염 및 두드러기로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
In addition, the allergic disease may be any one selected from the group consisting of hypersensitivity, allergic rhinitis, asthma, allergic conjunctivitis, allergic dermatitis, atopic dermatitis, contact dermatitis and urticaria.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. However, the following examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. Embodiments of the present invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.
<< 실시예Example >>
1.조건별 유산균 1. Lactic acid bacteria by condition 파쇄물의Crushed 제조 Produce
MRS 배지(Difco) 3L에 락토바실러스 플랜타륨(Lactobacillus plantarum)을 접종하여 37℃에서 18시간 동안 배양하였다. 배양 후 8000rpm, 4℃로 원심분리(Vision, Korea)하여 유산균을 회수하였고, 증류수로 3회 세척한 후 동결 건조시켜 보관하였다. 상기에서 분리하여 동결 건조시킨 유산균을 증류수에 10mg/ml농도로 현탁하여, 유산균의 세포수를 1x1010 CFUs/ml로 맞추었다. 현탁한 세포를 Microfludizer 를 이용하여 파쇄 횟수를 1~13회, 13000psi의 압력으로 8°C 로 파쇄하여 유산균 파쇄물을 제조하였다.
3 L of MRS medium (Difco) was inoculated with Lactobacillus plantarum and cultured at 37 캜 for 18 hours. After culturing, the lactic acid bacteria were recovered by centrifugation at 8000 rpm, 4 ° C (Vision, Korea), washed three times with distilled water, and stored by freeze drying. The lyophilized bacteria isolated from the above and freeze-dried were suspended in distilled water at a concentration of 10 mg / ml, and the number of lactic acid bacteria cells was adjusted to 1 × 10 10 CFUs / ml. Suspended cells were disrupted at 8 ° C with a Microfludizer at a pressure of 13000 psi for 1 to 13 times of shredding to produce a lactic acid bacterium.
2.유산균 2. Lactic acid bacteria 파쇄물별Breakdown 활성 측정 Active measurement
Monocyte 인 THP-1 cell(면역세포)을 2×105cells/ml로 seeding한 뒤 4시간 동안 안정화를 거쳤다. 유산균 파쇄물 시료를 처리한 뒤 24시간 배양한 후 LPS를 500ng/ml 후처리 하고, 4시간 배양한 뒤, 상등액을 수집하였다. 이 상등액으로 hTNF-alpha 의 발현 정도를 sandwich ELISA(R&D Cat MAB610, BAF210)를 통해 확인하였다.
Monocyte THP-1 cells (immune cells) were seeded at 2 × 10 5 cells / ml and stabilized for 4 hours. Lactobacillus disrupter samples were treated and cultured for 24 hours. LPS was treated after 500ng / ml and cultured for 4 hours, and the supernatant was collected. The expression level of hTNF-alpha in this supernatant was confirmed by sandwich ELISA (R & D Cat MAB610, BAF210).
3.3. 파쇄물Crush 내 활성성분 선정 및 활성성분 구조 규명 및 측정법 Selection of Active Ingredients and Identification and Measurement of Active Ingredients
실시예 1에서 제조된 유산균 파쇄물의 주요 활성성분의 구조를 규명하기 위해서 LC-MS/MS분석법을 이용하여 분석하였다. LC-MS/MS 분석조건은 이동상으로 0.1% 포름산이 포함된 아세토니트릴과 물을 이용하여 0.3 ml/min의 속도로 UPLC를 수행하면서, Thermo사의 고분해능 질량분석기(LTQ-Orbitrap XL)와 HESI-II 이온화 소스를 사용하여 수행하였다.The LC-MS / MS analysis was used to analyze the structures of the major active components of the lactic acid bacteria prepared in Example 1. The HPLC-MS / MS analysis was carried out using a Thermo high-resolution mass spectrometer (LTQ-Orbitrap XL) and HESI-II (Invitrogen) using a mobile phase HPLC using acetonitrile containing 0.1% formic acid and water at a rate of 0.3 ml / Ionization source.
유산균 파쇄물의 LC-MS/MS 분석을 통하여 미립화 조건별로 증가되는 피크들을 23-25분대에서 확인하였다(도 3). 이 성분들은 파쇄 횟수에 비례하여 증가하는 경향을 나타내었고, 동시에 활성이 증가되어 이들 성분이 활성성분임을 확인하였다(도 1, 2). 도 4는 Pre K8MF에서는 나타나지 않고 K8MF-20에서 나타나는 피크와 균체파쇄물 시료에서 나타나는 동일한 피크 확인하여 지표성분으로 선정한 것이다. 활성성분 피크는 유산균을 파쇄하기 전에는 나타나지 않았고, 최종 유산균 파쇄물에서도 동일하게 확인되었다(도 4). 도 5는 균체파쇄물 시료 6번과 균체파쇄물 성분을 포함하는 1,2,3 시료에서 지표성분 분석 수행한 것으로 1,3번 시료에서는 확실히 지표성분이 확인되나 2번 시료에서는 지표성분의 피크가 매우 약하게 확인되었다. 즉, 옥수수전분이나 말토덱스트린에서는 나타나지 않고, 유산균 파쇄물과 유산균 파쇄물이 포함된 시료에서만 선택적으로 나타남을 확인하였다(도 5).The LC-MS / MS analysis of the lactic acid bacterium showed that the peaks were increased in the range of 23-25 minutes according to the atomization conditions (FIG. 3). These components showed a tendency to increase in proportion to the number of shredding, and at the same time, activity was increased, confirming that these components were active components (FIGS. 1 and 2). FIG. 4 shows that the same peaks appearing in the K8MF-20 peak and the cell lysate sample are not shown in Pre K8MF but are selected as the index components. The peak of the active ingredient was not observed before the lactic acid bacteria were disrupted, and the same was confirmed in the final lactic acid bacterial disruption (FIG. 4). FIG. 5 shows the result of the surface component analysis of the sample of the cell lysate No. 6 and the sample of the lysine of the cell lysate. The sample of the sample No. 1 clearly showed the surface component, It was weakly identified. In other words, it was confirmed that only corn starch and maltodextrin did not show up, but only the samples containing lactic acid bacterium and lactic acid bacterium were selectively observed (FIG. 5).
도 6은 두 가지 지표성분 (Retention time 23.72와 24.86)의 질량분석 스펙트럼에 관한 것으로, 주요 활성성분의 구조분석을 위해 질량분석 스펙트럼 분석을 수행하였으며, 분석결과 포름산 결합형태의 분자량인 m/z 1125.4 ([M-H+CH2O2]-)피크와 m/z 1139.3 ([M-H+CH2O2]-)피크가 각각 측정되었다(도 6). 도 7은 MS 분석을 통한 이들 피크의 자세한 구조를 확인하기 위해서 지표성분의 분자량 및 MS/MS 분석수행을 한 것으로서, 질량분석을 통해 지표성분의 분자량은 1080.4 과 1094.5로 확인하였다. 즉, 6 탄당을 포함하는 당지질 (glycolipid)으로 LTA의 종류로 확인되었다(도 7). 이 LTA의 구조는 질량분석 결과 도 8과 같이 제시하였다.Fig. 6 is a mass spectrometry spectrum of two index components (retention times 23.72 and 24.86). Mass spectrum spectral analysis was performed to analyze the structure of the main active components. As a result, the molecular weight of formic acid bond type m / z 1125.4 ([M-H + CH 2 O 2 ] - ) peak and m / z 1139.3 ([M-H + CH 2 O 2 ] - ) peak were measured respectively (FIG. FIG. 7 shows the molecular weight and MS / MS analysis of the surface components in order to confirm the detailed structure of these peaks through MS analysis. From the mass analysis, the molecular weights of the surface components were confirmed to be 1080.4 and 1094.5. That is, a glycolipid containing 6-carbohydrate was confirmed as a kind of LTA (Fig. 7). The structure of this LTA is shown in Fig.
Claims (6)
상기 (c) 단계는 유산균을 4~9회 파쇄하는 것을 특징으로 하는,
항염증 활성 증가를 위해 크기 550~800nm의 미립화 입자를 포함하는 유산균 파쇄물을 제조하는 방법.(a) culturing the lactic acid bacteria and recovering the lactic acid bacteria from the culture solution; (b) suspending the recovered lactic acid bacteria in a buffer solution or distilled water; And (c) disrupting the suspended lactic acid bacteria,
Wherein the step (c) comprises pulverizing the lactic acid bacteria four to nine times.
A method for producing a lactic acid bacterial lysate comprising an atomized particle of size 550 to 800 nm for increased anti-inflammatory activity.
2. The method of claim 1, wherein step (c) further comprises producing a lysate at a pressure of 10000-13000 psi at a temperature of 3-10 < 0 > C.
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| US20050084486A1 (en) * | 1999-06-09 | 2005-04-21 | Vsl Phamaceuticals, Inc. | Composition comprising alkaline sphingomyelinase for use as a dietetic preparation, food supplement or pharmaceutical product |
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