KR101438367B1 - Composition of skin external application containing ginseng fruit extracts - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인삼 열매 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인삼의 지상부 중에서 독특한 성분과 조성을 갖는 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1 억제효과를 나타내고, 동시에 항산화 효과와 DNA 손상보호효과를 통한 피부 노화억제 및 주름개선 효과를 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 멜라닌생성을 억제하고 자외선에 의한 색소침착을 개선하는 효과를 통하여 피부 미백효과를 나타내며, 피부각질형성세포의 분화를 정상유도하고 유지시킴으로써 피부건조증상과 아토피증상을 개선시킬 수가 있었고, 피지분비를 조절하며 항염증효과를 통한 여드름 및 피부 트러블 개선에도 효과적이며, 피부 말초혈액순환 개선을 통하여 혈색을 좋게 하여 피부를 맑고 투명하게 해준다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginseng fruit extract, and more particularly, to a composition for external application for skin containing ginseng fruit extract, which contains, as an active ingredient, ginseng fruit extract having a unique composition and composition from the ground part of ginseng, And at the same time, has an antioxidative effect and a DNA damage protection effect, thereby preventing skin aging and improving wrinkles. In addition, the composition for external application for skin according to the present invention exhibits skin whitening effect by inhibiting melanin formation and improving pigmentation caused by ultraviolet rays, and inducing and maintaining the differentiation of dermal keratinocytes to maintain skin dryness symptoms and atopic symptoms It is also effective in improving acne and skin troubles by controlling sebaceous secretion and anti-inflammatory effect. It improves blood circulation by improving peripheral circulation of skin and makes skin clear and transparent.
인삼 열매, 피부 노화, 주름개선, 미백, 혈색개선, 피부건조, 아토피, 피부 트러블, 피부 외용제 조성물 Ginseng fruit, skin aging, wrinkle improvement, whitening, improvement in color, skin dryness, atopy, skin trouble, skin external composition
Description
본 발명은 인삼 열매 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 인삼의 지상부 중에서 독특한 성분과 조성을 갖는 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부에서 콜라겐생성을 촉진하며, MMP-1 억제효과를 나타내고, 동시에 항산화 효과와 DNA 손상보호효과를 통한 피부 노화억제 및 주름개선 효과를 갖는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 멜라닌생성을 억제하고 자외선에 의한 색소침착을 개선하는 효과를 통하여 피부 미백효과를 나타내며, 피부각질형성세포의 분화를 정상유도하고 유지시킴으로써 피부건조증상과 아토피증상을 개선시킬 수가 있었고, 피지분비를 조절하며 항염증효과를 통한 여드름 및 피부 트러블 개선에도 효과적이며, 피부 말초혈액순환 개선을 통하여 혈색을 좋게 하여 피부를 맑고 투명하게 해준다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing ginseng fruit extract, and more particularly, to a composition for external application for skin containing ginseng fruit extract, which contains, as an active ingredient, ginseng fruit extract having a unique composition and composition from the ground part of ginseng, And at the same time, has an antioxidative effect and a DNA damage protection effect, thereby preventing skin aging and improving wrinkles. In addition, the composition for external application for skin according to the present invention exhibits skin whitening effect by inhibiting melanin formation and improving pigmentation caused by ultraviolet rays, and inducing and maintaining the differentiation of dermal keratinocytes to maintain skin dryness symptoms and atopic symptoms It is also effective in improving acne and skin troubles by controlling sebaceous secretion and anti-inflammatory effect. It improves blood circulation by improving peripheral circulation of skin and makes skin clear and transparent.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오가피과 인삼 속에 속하는 식물로서 한 국, 중국 및 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약이며, 경험적으로 질병을 예방하고 수명을 연장시킬 목적으로 사용되어 왔다. 지금까지 알려진 인삼의 효능 및 효과는 중추신경계에 대한 작용, 항발암 작용, 항암활성, 면역기능 조절작용, 항당뇨 작용, 간기능 항진효능, 심혈관 장해개선, 항동맥경화 작용, 혈압조절 작용, 갱년기 장애 개선, 골다공증에 미치는 효과, 항스트레스 및 항피로 작용, 항산화 활성 및 노화억제 효능 등이 있다(최신고려인삼 '성분 및 효능편', 한국인삼연초연구원, 56-112, 1996).Ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) is a herb that belongs to the genus Ogawa and Ginseng. It has been used for over 2,000 years in Korea, China, and Japan. It has been used empirically to prevent disease and prolong the life span. The efficacy and effect of ginseng which has been known so far can be determined by the action of the central nervous system, the anticarcinogenic action, the anticancer activity, the immune function regulating action, the anti-diabetic action, the hyperfunction of liver function, the improvement of cardiovascular disorder, (Korean Ginseng & Tobacco Research Institute, 56-112, 1996). In addition, it has been reported that the antioxidant activity and antioxidant activity of osteoporosis are improved.
인삼의 대표적 생리활성 성분인 진세노사이드(Ginsenoside)는 인삼의 지상 및 지하부에 고르게 분포되어 있으며, 특히 인삼 근(뿌리), 인삼엽 및 인삼 열매 등 부위에 따라 진세노사이드 함량뿐만 아니라 조성도 다른 것으로 알려져 있다(Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58; 1685-1693, 1999). 특히 인삼 열매는 인삼 근(뿌리)과 다른 진세노사이드의 성분과 그 함량을 바탕으로 항당뇨 효능에 있어서 인삼근 보다 우수한 결과를 나타내는 것으로 보고되었다(Dey L. et al., Phytomedicine, 10; 600-605, 2003).Ginsenoside, which is a representative physiologically active ingredient of ginseng, is distributed evenly on the ground and underground of ginseng. Especially, ginsenoside (root), ginseng leaf and ginseng berries have not only ginsenoside content but also composition (Attele AS et al, Biochem Pharmacol, 58: 1685-1693, 1999). In particular, the fruit of ginseng has been reported to exhibit superior antidiabetic efficacy to ginseng root based on the contents of ginseng roots and other ginsenosides (Dey L. et al., Phytomedicine, 10, 600 -605, 2003).
최근 천연 화장품에 대한 소비자의 관심이 증대되고 동시에 한방 소재를 활용하는 많은 화장품들이 출시되면서 인삼도 화장품의 중요한 피부효능을 가진 식물소재로 연구되고 있으나, 대부분 인삼근을 이용한 추출물 또는 인삼근의 진세노사이드 성분과 인삼다당체를 활용한 것일 뿐 인삼 열매의 성분에 의한 피부 노화억제와 주름개선 효능에 대한 것은 전무한 실정이다.Recently, consumers are interested in natural cosmetics. At the same time, many cosmetics using herbal materials have been launched, and ginseng has been studied as a plant material having important skin effect of cosmetics. However, most of them are ginseng root extract or ginseng root ginsenoside Side component and ginseng polysaccharide are utilized only for the inhibition of skin aging and the wrinkle improving effect due to the ingredient of ginseng fruit.
또한 인삼 열매는 예로부터 인삼보다도 귀하게 여겨지는 것으로서 종자 획득 을 목적으로 선별되어 수확되어 왔다. 인삼 열매는 인삼의 재배기간 중 4년생에 한해서 1회만 채종하게 되며, 3년생에서 채종하면 종자가 너무 작기 때문에 좋은 묘삼을 생산하기가 어렵고 5년생 이상에서 채종하면 종자는 충실하고 좋으나 인삼뿌리의 비대발육을 억제할 뿐만 아니라 조직이 치밀하지 못하여 홍삼을 제조할 때 홍삼품질이 크게 저하될 수 있다. 또 채종횟수를 재배기간 중에 2회 이상으로 채종하면 수량 및 홍삼품질이 크게 저하된다(최신고려인삼 '재배편', 한국인삼연초연구원, 130-131, 1996).The ginseng fruit is considered to be more valuable than ginseng since ancient times and has been harvested for the purpose of obtaining seeds. Ginseng fruit is grown only once in 4 years of ginseng cultivation period. When seeds are cultivated in 3 year olds, it is difficult to produce good seedling ginseng because seeds are too small. If seeds are grown for 5 years or more, seeds are faithful and good, The quality of red ginseng can be greatly reduced when red ginseng is produced because it is not only inhibited development but also is inadequate in the tissue. When the number of seedlings is increased to more than 2 times during the growing period, the yield and the quality of red ginseng deteriorate significantly (Korean Ginseng and Tobacco Research Institute, 130-131, 1996).
미국등록특허 제6,524,626호에서 인삼 열매즙을 동결건조하여 화장료 조성물에 사용하고 있으며, 인삼 열매즙과 다른 천연물을 복합적으로 사용함으로써 이들이 보습과 피부유연효과를 나타낸다고 기재하고 있으나, 이는 본 발명에 의한 인삼 열매 추출물이 나타내는 피부 노화억제 효능 및 주름개선효능으로서의 화장품 용도와는 분명 구분되는 것이다.US Patent No. 6,524,626 discloses that the fruit juice of the ginseng is lyophilized to be used in a cosmetic composition and that the ginseng fruit juice and other natural substances are used in combination to exhibit moisturizing and skin softening effects. It is clearly distinguished from the cosmetic use as an anti-aging effect and an anti-wrinkle effect of the extract.
인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화 를 일으키게 된다.The human skin undergoes changes due to various internal and external factors as it gets older. In other words, internally, secretion of various hormones that regulate metabolism is reduced, the function of immune cells and the activity of cells are lowered, and the biosynthesis of immune proteins and biocompatible proteins necessary for the living body is reduced, and ozone layer destruction As the content of ultraviolet rays reaching the surface of the sunlight increases and environmental pollution is further intensified, free radicals and active noxious oxygen are increased, so that the thickness of the skin decreases, the wrinkles increase, the elasticity decreases Skin color is grayish, skin troubles occur frequently, and spots, freckles and black blots also increase.
노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.As the aging progresses, the content and arrangement of collagen, elastin, hyaluronic acid and glycoprotein, which constitute the skin, are changed or decreased, and oxidative stress due to free radicals and active noxious oxygen is experienced. Cox-2 (cyclooxygenase), an enzyme that produces a proinflammatory cytokine, known to cause inflammation in most cells constituting the skin by aging or ultraviolet rays, And the biosynthesis of Matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades skin tissue, is increased by these inflammatory factors, and nitric oxide (NO) production by iNOS (inducible nitric oxide synthase) Respectively. In other words, decrease of cellular activity due to natural endogenous aging and decrease of biosynthesis of substrate material by microinflammation, increase of stress due to various harmful environment, increase of active oxygen species by sunlight, As the degradation and denaturation are accelerated, the skin substrate is destroyed and thinned, and various symptoms of skin aging appear. Therefore, it is a reality that many researches have been conducted on active ingredients that can prevent and improve such aging phenomena.
사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 가지 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드와 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 중요하다.Several factors are involved in the determination of human skin color. Among them, factors such as the activity of melanocyte making melanin pigment, distribution of blood vessels, thickness of skin, and presence or absence of pigment in and out of human body such as carotenoid and bilirubin Are important.
이중 특히 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소이다. 이 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인 등이 영향을 미친다. Especially, the most important factor is melanin, a melanin pigment produced by the action of various enzymes such as tyrosinase in melanocytes in the human body. The formation of melanin pigment affects genetic factors, hormonal secretion, physiological factors such as stress, and environmental factors such as ultraviolet irradiation.
신체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 태양으로부터 조사되는 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부기관을 보호해주는 동시에 피부 생체 내에 생겨난 자유 라디칼 등을 잡아주는 등 피부 내 단백질과 유전자들을 보호해주는 유용한 역할을 담당한다. The melanin pigment produced in melanocytes of body skin is a phenolic polymer substance having a complex form of black pigment and protein. It protects the subcutaneous skin organs by blocking ultraviolet rays irradiated from the sun, and at the same time, free radicals And protects proteins and genes in the skin.
이와 같이 피부 내, 외부의 스트레스적 자극에 의해 생겨난 멜라닌은 스트레스가 사라져도 피부 각질화를 통해서 외부로 배출되기 전까지는 없어지지 않는 안정한 물질이다. 그러나 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 기미, 주근깨 및 점 등과 같은 과색소 침착증을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 된다. Melanin, which is produced by stress stimuli inside and outside the skin, is a stable substance that does not disappear until the skin is excreted through skin keratinization even if the stress disappears. However, when melanin is produced more than necessary, it induces hypercholesterolemia such as spots, freckles, and dots, resulting in poor cosmetic results.
오늘날 동양권의 여성들은 백옥같이 하얗고 깨끗한 피부를 선호하며 이를 미의 중요한 기준으로 삼고 있기 때문에 과색소 침착에 대한 치료 및 미용상 문제를 해결하고자 하는 요구가 늘어나게 되었다. Today, oriental women prefer white, clean skin like white whites, and this is an important criterion of beauty, so there has been a growing demand for treatment and cosmetic problems for hyperpigmentation.
이와 같은 요구에 부응하여 종전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 또는 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용하여 왔으나, 이들의 불충분한 미백효과, 피 부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합 시 나타나는 제형 및 안정성의 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.In response to such demands, substances having ascorbic acid, kojic acid, arbutin, hydroquinone, glutathione, derivatives thereof, or tyrosinase inhibiting activity have been conventionally used in cosmetics or pharmaceuticals, Its use is restricted due to its whitening effect, the safety of the skin, the formulation of the cosmetic composition and stability.
피부(skin) 중에서 최외각에 위치한 표피(epidermis)의 가장 중요한 기능은, 외부로부터의 다양한 자극(화학물질, 대기오염물질, 건조한 환경, 자외선 등의 물리 및 화학적 자극인자)에 대한 방어와 피부를 통한 체내 수분의 과도한 발산을 막는 보호기능이며, 이러한 보호기능은 각질형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되어 있을 때만 그 기능을 유지할 수 있다. 표피 중에서도 가장 바깥에 존재하는 각질층(Stratum corneum, horney layer)은 각질형성세포로부터 형성되며, 분화가 완결된 각질 세포와 그를 둘러싼 지질층으로 구성되어 있다(J. Invest. Dermatol. 1983; 80: 44-49). 각질세포는 표피 최하층에서 지속적으로 증식(proliferation)하는 기저세포(basal cell)가 단계적으로 형태 및 기능상의 변화를 거치며, 피부 표면까지 상승한 특징적인 세포이며, 일정 기간이 경과하면 오래된 각질세포는 피부에서 탈락되고 새로운 각질세포가 그 기능을 대신하게 되는데, 이러한 반복적인 일련의 변화 과정을 「표피 세포의 분화」 또는 「각화(keratinization)」라고 부른다. 각화과정 중에 각질형성세포는 천연보습인자(Natural Moisturizing Factor; NMF)와 세포간 지방질(세라마이드, 콜레스테롤, 지방산)을 생성하면서 각질층을 형성하여, 각질층이 견고함과 유연성을 가지게 하여 피부장벽(skin barrier)으로서의 기능을 보유하게 한다. The most important function of the epidermis in the outermost skin is to protect against external stimuli (chemical, air pollutants, dry environment, physical and chemical stimulants such as ultraviolet rays) This protective function can maintain its function only when the stratum corneum composed of keratinocytes is normally formed. The stratum corneum (horney layer), which is the outermost part of the epidermis, is formed from keratinocytes and consists of keratinocytes with complete differentiation and a surrounding lipid layer (J. Invest. Dermatol. 1983; 80: 49). The keratinocyte is a characteristic cell in which basal cells continuously proliferating in the lowest epidermis undergo a stepwise change in morphology and function and are elevated to the surface of the skin. After a certain period of time, And the new keratinocyte replaces its function. This repetitive sequence of changes is called "epidermal cell differentiation" or "keratinization". During keratinization, keratinocytes form the stratum corneum while producing natural moisturizing factors (NMF) and intercellular lipids (ceramides, cholesterol, fatty acids), which make the stratum corneum firm and flexible, As shown in Fig.
그러나, 이러한 각질층은 과도한 세안이나, 목욕 등의 생활 습관적 요인, 건조한 대기, 오염물질 등의 환경적인 요인 및 아토피성 피부나 노인성 피부 같은 내 인성 질환 등으로 인해 쉽게 그 기능이 손실될 수 있으며, 실제적으로 현대에 들어서 더욱 늘어난 여러 요인들로 인해 최근에는 건조피부증상 및 이로 인한 제반 장해를 호소하는 사람들이 점점 증가하고 있는 추세이다. 따라서, 적절한 피부수분을 유지하기 위하여 외부로부터 수분을 공급하거나, 체내로부터의 수분 손실을 방지하기 위한 연구가 많이 진행되어 왔으며, 실제로 수분보유능력이 있는 여러 종류의 보습제(moisturizer)가 개발되어 주로 화장품 영역에서 많이 사용되고 있다. However, such a stratum corneum can easily lose its function due to excessive skin cleansing, lifestyle factors such as bathing, environmental factors such as dry air and pollutants, and endogenous diseases such as atopic skin and senile skin, Due to the increasing number of factors that have taken place in the modern age, there has been an increasing tendency in recent years to appeal to people with dry skin symptoms and disorders. Therefore, in order to maintain proper skin moisture, studies have been conducted to supply moisture from the outside or to prevent water loss from the body, and a variety of moisturizers having moisture retention ability have been developed, It is widely used in the area.
그러나, 생활환경 중에 인간에 대한 위해 요인이 점점 증가하고, 노령인구가 급격히 늘어나면서, 각질층의 생성-탈락속도(turnover rate)가 늦어지고, 각질형성세포의 지질합성능력이 저하되거나, 표피에서 정상적인 세포의 분열, 성숙 및 분화가 원활하지 않음으로써, 각질층의 보습인자와 지질의 양이 감소되어 정상적인 각질층의 기능을 유지하지 못하는 상태, 즉 피부장벽기능이 와해된 상태의 피부를 갖고 있는 인간들이 점점 증가하는 추세에 있다. However, as the risk factors for humans increase in the living environment and the aging population rapidly increases, the turnover rate of the stratum corneum is delayed, the lipid synthesis ability of the keratinocytes decreases, The cells are not smoothly divided, maturated and differentiated, and the amount of moisturizing factors and lipids in the stratum corneum is decreased, so that the normal stratum corneum does not maintain its function. Namely, .
이러한 비정상적인 표피세포의 분열, 분화로 인해 피부는 피부건조증, 아토피 및 건선 등의 다양한 피부 질환을 유발하게 되며, 이러한 제 질환들은 자체로 수분 보유 기능만을 갖는 통상적인 보습제 만으로는 그 증상을 약간 완화시킬 수는 있으나, 근본적인 치유를 기대하기는 어려운 실정이다.Due to the abnormal division and differentiation of the epidermal cells, the skin causes various skin diseases such as dry skin, atopy and psoriasis. Such a disease can slightly alleviate the symptoms only by a conventional moisturizing agent having only moisture holding function , But it is difficult to expect fundamental healing.
일반적으로 두피 및 얼굴을 포함한 피부에서 피지는 피부의 보습 유지나 미생물의 침입을 막는 역할을 담당하지만, 피지가 과잉으로 분비되면 탈모가 촉진되고 여드름이 악화되며 여드름에 의한 모공 확대가 촉진되고 지루성 피부염이 발생하는 등 여러 가지 질환이 유발된다.In general, sebaceous glands in the skin, including the scalp and face, play a role in preventing moisturization and microbial invasion of the skin. However, excessive secretion of sebum promotes hair loss, worsens acne, promotes enlargement of pores caused by acne, And many other diseases are caused.
이러한 피지의 과분비는 여러 원인에 의해서 발생하는데 그 중에서도 가장 중요한 것은 피지선의 활성에 있어 피지 분비를 촉진하는데 관여하는 호르몬 가운데 하나인 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone : DHT)의 양에 의해서 피지선 세포가 활성화되어 피지가 과분비되는 것이다. 즉, 탈모에 있어서는 세포내에서 테스토스테론(testosterone : T)이 5-알파-리덕타아제 타입 2(5-α-reductase type 2)에 의해서 남성 호르몬 중에 하나인 디하이드로테스토스테론으로 전환됨과 동시에 세포질 내에 있는 수용체 단백질(receptor)과 결합하여 액내로 들어가 탈모를 유발하지만 피부나 피지선에서는 테스토스테론이 5-알파-리덕타아제 타입 1(5-α-reductase type 1)에 의해서 디하이드로테스토스테론으로 전환되어 피지선 세포를 활성화하여 분화가 촉진됨으로써 피지선내의 피지(sebum)를 과분비하여 여드름을 유발하게 된다(J. Invest Dermatol 105:209-214 Diane etc).The hypersecretion of sebaceous glands is caused by various causes, and the most important one is the activation of sebaceous glands by the amount of dihydrotestosterone (DHT), which is one of the hormones involved in promoting sebaceous secretion in the activity of sebaceous glands, Is overdone. That is, testosterone (T) is converted into dihydrotestosterone, one of the male hormones, by 5-alpha-reductase type 2 in cells in the hair loss, (5-α-reductase type 1) in the skin or the sebaceous glands. The testosterone is converted to dihydrotestosterone by the action of 5-α-reductase type 1, (J. Invest Dermatol 105: 209-214 Diane et al.).
단순한 피지의 과분비외에 발생되는 피부 트러블인 여드름, 탈모 등은 피부의 미세한 염증 반응에 의해서 더욱 악화된다. 여드름의 발생 과정을 살펴보면 과도한 피지가 모낭에 축적되어서 여드름균이 활성화되고 염증이 유발된다.Acne and hair loss, which are skin troubles other than simple sebum hypersecretion, are further exacerbated by the minute inflammatory reaction of the skin. If you look at the development of acne, excess sebum accumulates in the hair follicle, activating acne bacteria and causing inflammation.
뛰어난 항산화 효과와 함께 항염증 효과를 가지고 있어서 세포 염증 반응의 프로스타글란딘 생성, 특히 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 생성을 억제하고 iNOS에 의한 전염증인자인 NO(nitric oxide)의 생성을 억제하여 피지 과분비에 따른 여드름과 같은 피부 트러블을 완화시킬 수 있다.It has antioxidant effect with excellent antioxidant effect, inhibiting the production of prostaglandin, especially prostaglandin E2 (PGE2) in cell inflammation reaction, inhibiting the production of nitric oxide (NO) by iNOS, It is possible to alleviate the skin troubles.
그러나, 이와 같이 피부에 안전한 천연 소재로서 피지 분비를 근본적인 원인을 통해서 감소시키고, 동시에 염증작용을 완화해 주는 원료는 많지 않은 실정이 다.However, as a skin-safe natural material, there are not many raw materials that can reduce sebum secretion through fundamental causes, and at the same time, relieve inflammation.
이에, 본 발명자들은 인삼의 지상부인 인삼 열매를 이용하여 피부 효능을 갖는 화장품을 연구하던 중 인삼 열매 추출물이 일반적인 인삼 및 홍삼과는 다른 성분과 조성으로 인한 피부효능이 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the inventors of the present invention found that when extracts of ginseng fruit were investigated for cosmetics having skin effect using the ginseng fruit which is above the ginseng fruits, they found skin effects due to ingredients and compositions different from general ginseng and red ginseng, It was completed.
따라서, 본 발명의 목적은 인삼 열매로부터 항산화 효과, 콜라겐 생성촉진 및 MMP-1 억제 효과를 갖는 인삼 열매 추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 함유하는 피부 노화억제 및 주름개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for inhibiting skin aging and improving external appearance of skin, which comprises extracting ginseng fruit having an antioxidative effect, promoting collagen production and inhibiting MMP-1 from ginseng fruit and containing the extract as an active ingredient .
또한 본 발명의 목적은 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 멜라닌생성억제 및 색소침착 개선을 통한 피부 미백용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a skin external composition for skin whitening by inhibiting melanin formation and improving pigmentation by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient.
또 본 발명의 목적은 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 표피 각질형성세포의 정상적인 분화를 유도하고 유지시키는 피부보습효과와 아토피증상 개선 효과를 가지는 피부보습용 또는 아토피증상 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a composition for external application for skin moisturizing or atopic symptom improvement which has skin moisturizing effect and atopic symptom improving effect for inducing and maintaining normal differentiation of epidermal keratinocytes by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient .
또한 본 발명의 목적은 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피지 조절 효과 및 항염증 효과, 즉 염증인자의 생성을 억제하여 여드름을 비롯한 피부 트러블을 개선시킬 수 있는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide an anti-inflammatory external composition for anti-inflammation which can improve sebum control effect and anti-inflammatory effect, that is, inhibition of inflammatory factors, thereby improving skin troubles including acne by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient .
또 본 발명의 목적은 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피부의 모세혈관을 확장시키고 혈행 촉진 효과를 나타내며 피부를 맑고 투명하게 해주는 피부 혈색 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a composition for external application for skin for improving skin color, which contains the ginseng fruit extract as an active ingredient, thereby expanding capillary blood vessels of skin and exhibiting blood circulation promoting effect and making skin clear and transparent.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 유효성분으로서 인삼 열매 추출물을 함유하는 피부 노화 억제 및 주름개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above-mentioned object, the present invention provides a composition for inhibiting skin aging and improving wrinkles containing an extract of ginseng fruit as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 멜라닌생성 억제 및 색소침착 개선을 통한 피부 미백 효과를 나타내는 피부 미백용 피부 외용제 조성물을 제공한다.Also, the present invention provides a composition for external skin application for skin whitening, which contains the ginseng fruit extract as an active ingredient and exhibits skin whitening effect through inhibition of melanin formation and improvement of pigmentation.
또한 본 발명에서는 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 표피 각질형성세포의 정상적분화와 유지를 통한 피부보습효과와 아토피증상 개선 효과를 나타내는 피부 보습용 또는 아토피증상 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for external application for skin moisturizing or atopic symptom improvement which exhibits skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect through normal differentiation and maintenance of epidermal keratinocytes by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient.
또한 본 발명에서는 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 피지조절효과와 염증반응 조절을 통한 여드름 및 피부 트러블 개선 효과를 갖는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for external application for anti-inflammation having anti-inflammatory effect by controlling sebum and controlling inflammation reaction by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient, thereby improving acne and skin troubles.
또한 본 발명에서는 상기 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 말초혈액순환을 촉진하여 피부 혈행을 개선시킴으로써 혈색을 좋게 하는 피부 혈색 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for external application for skin improvement of the skin which improves blood color by promoting peripheral blood circulation by containing the ginseng fruit extract as an active ingredient to improve skin blood circulation.
본 발명에서는 인삼의 지상부 중에서 인삼근과 차별적 성분과 조성을 갖는 인삼 열매 추출물을 유효성분으로 함유시킴으로써 피부 노화억제, 피부 주름 개선 효과, 피부 미백 효과, 피부 보습 및 아토피증상 개선 효과, 여드름 및 피부 트러블 개선 효과 및 피부 혈색 개선의 효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공할 수 있었다.In the present invention, by containing ginseng root and ginseng fruit extract having different composition and composition among ginseng root as an active ingredient, it is possible to prevent skin aging, improve skin wrinkle, skin whitening effect, skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect, acne and skin trouble And an effect of improving skin color can be provided.
본 발명에 있어서, 상기 인삼 열매 추출물은 피부 외용제 조성물의 형태에 따라 조성물 총 중량에 대하여 0.001~50 중량%로 혼합될 수 있다. 인삼 열매 추출물은 0.001중량% 이상 혼합되는 것이 효과를 고려하였을 때 바람직하고, 50 중량 % 이하를 혼합하는 것이 피부 외용제의 제형화를 고려하였을 때 바람직한 수치이다. In the present invention, the ginseng fruit extract may be mixed in an amount of 0.001 to 50% by weight based on the total weight of the composition, depending on the form of the composition for external application for skin. The ginseng fruit extract is preferable when it is mixed with 0.001 wt% or more of the ginseng fruit extract, and it is a preferable value when 50 wt% or less of the ginseng fruit extract is considered when formulating the external preparation for skin.
본 발명에 의한 인삼 열매 추출물은 종자를 분리하여 제거한 인삼 열매의 과육과 과피를 일광건조 또는 열풍건조한 후 물 또는 에탄올로 추출하여 제조한 것이다. The ginseng fruit extract according to the present invention is prepared by extracting the flesh and the skin of ginseng fruit which have been separated from seeds by sunlight drying or hot air drying and extracting with water or ethanol.
본 발명에 따른 화장품의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구, 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.The cosmetic form according to the invention contains a cosmetically or dermatologically acceptable medium or base. It may be in any form suitable for topical application, for example as a solution, a gel, a solid, a paste anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing the oil phase in water, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, a microgranule, In the form of a non-ionic follicle dispersing agent, or in the form of creams, skins, lotions, powders, ointments, sprays or conical sticks. These compositions may be prepared according to conventional methods in the art. The composition according to the invention may also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
본 발명의 화장품은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.The cosmetic composition of the present invention can be used in the form of a cosmetic or dermatological composition comprising a lipid, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, , Cosmetics such as fillers, sequestering agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or any other ingredient commonly used in cosmetics May contain adjuvants conventionally used in the field of dermatology. Such adjuvants are introduced in amounts commonly used in the cosmetics or dermatological fields.
본 발명의 인삼 열매 추출물을 포함하는 피부 외용제는 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.The external preparation for skin including the extract of fruit ginseng according to the present invention is not particularly limited in its formulation, and examples thereof include softening agents, convergent lotion, nutritional lotion, nutritional cream, massage cream, essence, eye cream, eye essence, Cream, cleansing foam, cleansing water, pack, powder, body lotion, body cream, body oil and body essence.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실험예 및 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the constitution and effects of the present invention will be described in more detail with reference to examples and test examples. However, these examples and examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited by the following examples.
[실시예 1] 인삼 열매 추출물 제조[Example 1] Preparation of ginseng fruit extract
1) 인삼 열매 전처리: 생(生)인삼 열매를 수확하여 종자를 분리하여 제거한 후 인삼 열매의 과육과 과피를 일광건조 또는 열풍건조를 통하여 인삼 열매 건조원료를 제조하였다.1) Ginseng fruit pretreatment: The raw ginseng fruit was harvested and the seeds were separated and removed. Then, the ginseng fruit and the peel were dried in daylight or hot air to prepare ginseng fruit raw material.
2) 인삼 열매 추출물 제조: 인삼 열매 건조물 1kg에 물 3L를 가하여 환류 추출한 다음 여과한 후 40~45℃에서 감압농축하여 인삼 열매 추출물 300g을 얻었다.2) Preparation of ginseng fruit extract: 1 kg of dried ginseng fruit was refluxed by adding 3 L of water, and then filtered and concentrated under reduced pressure at 40 to 45 ° C. to obtain 300 g of ginseng fruit extract.
[비교예 1] 인삼근 추출물 제조[Comparative Example 1] Production of ginseng muscle root extract
상기 실시예 1에서 인삼 열매 대신에 인삼근(뿌리)을 사용한 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였다.Example 1 was prepared in the same manner as in Example 1, except that ginseng root (root) was used instead of ginseng fruit.
[시험예 1] 인삼 열매 추출물의 성분비교[Test Example 1] Comparison of components of ginseng fruit extract
<인삼 열매와 인삼근의 진세노사이드(인삼사포닌) 성분분석><Analysis of Ginsenoside (Ginseng Saponin) Components of Ginseng Fruit and Ginseng Root>
실시예 1 및 비교예 1에서 각각 인삼 열매와 인삼근 추출물을 제조한 다음 이들 추출물에 에테르(ether)를 처리하여 지용성 성분을 제거한 후 부탄올(BuOH)로 조사포닌을 추출, 농축하여 HPLC를 통한 진세노사이드 성분분석을 실시하였으며, 그 결과를 도 1 및 표 1에 나타내었다.Ginseng root extract and ginseng root extract were prepared in Example 1 and Comparative Example 1, respectively. Then, the extract was treated with ether to remove fat-soluble components, then crude saponin was extracted with butanol (BuOH) Senoside component analysis was carried out, and the results are shown in FIG. 1 and Table 1.
(건조중량)Crude saponin content
(Dry weight)
실시예 1에서 제조한 인삼 열매 추출물은 조사포닌 함량에 있어서 비교예 1에서 제조한 인삼근 추출물의 약 2배 함량을 가지고 있었으며, 진세노사이드를 PD(Protopanaxadiol)계-"진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc 및 Rd" 및 PT(Protopanaxatriol)계-"진세노사이드 Re, Rg1 및 Rg2"의 비율로 구분하였을 때 각각 0.73과 3.23으로 그 조성에 있어서 인삼 열매와 인삼근은 뚜렷한 차이 및 특징을 나타내었다.The ginseng fruit extract prepared in Example 1 had about twice the crude ginsenoside content of the ginseng root extract prepared in Comparative Example 1, and the ginsenoside was divided into PD (protopanaxadiol) -ginsenoside Rb1, Rb2 , Rc and Rd "and PT (Protopanaxatriol) system -" Ginsenoside Re, Rg1 and Rg2 ", the ginseng fruit and ginseng root showed distinct differences and characteristics in the composition of 0.73 and 3.23 respectively .
<인삼 열매 추출물의 미네랄 성분분석><Mineral composition analysis of ginseng fruit extract>
실시예 1에서 제조한 인삼 열매 추출물이 인삼과는 다른 '과실'로서의 특징을 가짐을 구분하기 위하여 비타민을 비롯한 미네랄 성분 분석을 실시하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.In order to distinguish the ginseng fruit extract prepared in Example 1 from the ginseng, the minerals including vitamins were analyzed. The results are shown in Table 2 below.
이상과 같이 본 발명에서 사용하는 인삼 열매의 성분적 특성은 인삼근 보다 많은 인삼사포닌을 함유함과 동시에 사포닌 조성의 성질이 정반대이고, 또한 인삼근과 달리 열매로서 비타민과 미네랄 16 종의 함량이 풍부함을 확인할 수 있었으며, 이를 바탕으로 피부효능에 대한 하기 실험들을 진행하였다.As described above, the constituent characteristics of the ginseng fruit used in the present invention is that the ginseng saponin is contained in a larger amount than that of the ginseng root, and the saponin composition properties are opposite to each other. Also, unlike the ginseng root, the content of 16 kinds of vitamins and minerals is rich , And based on this, the following experiments on skin efficacy were conducted.
[시험예 2] 피부 노화 억제 및 주름 개선 효과[Test Example 2] Effect of suppressing skin aging and improving wrinkles
1) 인삼 열매 추출물의 항산화 효과1) Antioxidative effect of ginseng fruit extract
자외선(UV) 조사에 의하여 세포에서 발생하는 활성산소(ROS; Reactive oxygen species)를 제거하는 능력을 비교하는 실험을 통하여 항산화 효과를 조사하였다. 양성대조군으로서 일반적으로 항산화 효과를 비교하는데 사용하는 트롤록스(trolox)를 사용하였으며, 이를 백삼 및 홍삼 추출물과도 비교하였다(도 2). 또한 시험물질을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.Antioxidant effect was investigated by comparing the ability to remove reactive oxygen species (ROS) from cells by ultraviolet (UV) irradiation. As a positive control, trolox, which is generally used to compare antioxidative effects, was used and compared with white and red ginseng extracts (FIG. 2). In addition, the test group was not used as a control group.
도 2의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 인간 HaCaT 각질형성세포 단층 배양 시스템(human HaCaT keratinocytes monolayer culture system)에서 대조군에 비하여 UV에 의해 생성된 활성 산소를 유의적으로 소거하는 효과를 나타내었다. 이는 항산화 물질의 활성지표로 사용되는 트롤록스와 유사한 정도의 우수한 활성이며, 유의적인 소거 활성이 없는 백삼, 홍삼 추출물과 대조되는 결과이다. 즉, 본 발명의 실시예 1에 의한 인삼 열매 추출물은 피부 노화의 원인이 되는 활성 산소를 유의적으로 소거함으로써 주름 생성, 탄력 저하 및 색소 침착 등을 예방하는 효과를 가질 수 있음을 확인하였다.2, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention significantly inhibited the active oxygen generated by UV in the human HaCaT keratinocyte monolayer culture system (human HaCaT keratinocytes monolayer culture system) . This is an excellent activity similar to that of trolox used as an activity index of antioxidants, and is in contrast to white ginseng and red ginseng extracts which have no significant scavenging activity. That is, it was confirmed that the extract of the ginseng fruit according to Example 1 of the present invention has the effect of preventing wrinkle formation, elasticity degradation, pigmentation, and the like by significantly erasing active oxygen which is a cause of skin aging.
2) 단 세포 겔 전기영동(Single cell gel electrophoresis; SCGE, Comet assay)에 의한 DNA 산화적 손상에 대한 억제 활성2) Inhibitory activity against DNA oxidative damage by single cell gel electrophoresis (SCGE, Comet assay)
사람의 정상 섬유아세포를 24hr 배양한 후 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 비타민 E를 각각 농도별로 처리하고, 12hr 후에 양성대조군인 H2O2(최종농도 10-3M)를 처리한 다음 전기영동법으로 염색한 결과를 형광현미경으로 관찰하였다. 이때 이미지 분석기(image analyzer)인 KOMET 3.1(Kinetic Imaging, England)를 사용하여 25개의 각 세포에서 DNA 절단의 결과로 나타난 테일(tail)의 길이(um)를 분석하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.After the human fibroblasts were cultured for 24 hours, the ginseng fruit extract of Example 1 and vitamin E were treated for each concentration. After 12 hours, the positive control group, H 2 O 2 (final concentration: 10-3M) The result of the staining was observed with a fluorescence microscope. At this time, the length (um) of the tail as a result of DNA cleavage in each of 25 cells was analyzed using an image analyzer, KOMET 3.1 (Kinetic Imaging, England) Respectively.
상기 표 3의 결과에서, 세포 겔 전기영동에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 유의성 있는 산화적 DNA 손상 억제 활성을 나타내었으며, 이로 인해 본 발명에 의한 인삼 열매 추출물이 히드록실 라디칼(.OH)에 의한 DNA 싱글 스트랜드 브레이크(single strand break)를 억제하는 DNA 산화적 손상억제제로서 작용함을 확인할 수 있었다.In the results of Table 3, the ginseng fruit extract of Example 1 by cell gel electrophoresis showed a significant oxidative DNA damage inhibitory activity, and thus the ginseng fruit extract according to the present invention showed hydroxyl radical (.OH) , Which is a DNA oxidative damage inhibitor that suppresses DNA single strand break caused by DNA damage.
3) I형 프로콜라겐 분석(Type I Procollagen assay)3) Type I procollagen assay (Type I Procollagen assay)
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 실시예 1의 인삼 열매 추출물 1ppm 및 10ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 3일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 I형 프로콜라겐(type I procollagen)의 양을 정량하였다. 그 결과는 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 포함하지 않은 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군으로 TGF-b를 사용하였다. 또한 인삼근 추출물로서 백삼 및 홍삼 추출물과도 비교하였다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 and then replaced with a medium containing 1 ppm and 10 ppm of the ginseng fruit extract of Example 1. On the third day of culture, the cells were harvested and the amount of type I procollagen produced by ELISA was quantitated. The result was calculated by comparing the value obtained with the control group not including the ginseng fruit extract of Example 1 as 100, and TGF-b was used as a positive control group. Ginseng root extract was also compared with white ginseng extract and red ginseng extract.
인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템(Normal human fibroblast monolayer culture system)에서 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 대조군에 비하여 I형 프로콜라겐 생성을 뚜렷하게 촉진시키는 효과를 나타내었다. 즉, 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 인체 피부의 노화에 의해 발생하는 콜라겐 생성량 감소 현상을 억제할 수 있었고, 주름 개선 효과를 나타내었다(도 3). In the normal human fibroblast monolayer culture system, the ginseng fruit extract of Example 1 markedly promoted the formation of type I procollagen as compared with the control. That is, the ginseng fruit extract of Example 1 suppressed the reduction of collagen production caused by aging of human skin, and showed an effect of improving wrinkles (FIG. 3).
4) MMP-1 발현 억제 분석4) MMP-1 expression inhibition assay
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 40mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물 1ppm 및 10ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) ELISA 방법으로 생성된 MMP-1(matrix metalloproteinase I)의 양을 정량하였다. 그 결과는 시험물질을 포함하지 않는 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 양성대조군은 TGF-b를 사용하였다. 또한 인삼근 추출물로서 백삼 및 홍삼 추출물과도 비교하였다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , irradiated with 40 mJ / cm 2 of ultraviolet B, and then replaced with a medium containing 1 ppm and 10 ppm of the ginseng fruit extract of Example 1. On the second day of culture, the cells were harvested and the amount of MMP-1 (matrix metalloproteinase I) produced by ELISA was quantitated. The result was calculated by comparing the value measured with the ultraviolet control group containing no test substance as 100, and TGF-b was used as the positive control group. Ginseng root extract was also compared with white ginseng extract and red ginseng extract.
인간 정상 섬유아세포 단층 배양 시스템에서 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 UVB 40mJ/㎠에 의해서 유도되는 MMP-1의 발현을 유의적으로 억제하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 내적 노화 또는 외적 환경요인에 의하여 발생하는 피부조직 분해효소인 MMP-1의 생합성을 저해하여 피부 노화를 억제하고 주름개선에 효과가 있음을 확인하였다(도 4).In the human normal fibroblast monolayer culture system, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention significantly inhibited the expression of MMP-1 induced by
5) 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2(COX-2)의 생합성 억제 효과5) Effect of inhibiting biosynthesis of cyclooxygenase-2 (COX-2) by ultraviolet light
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선A를 15J/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물 및 비교예 1의 인삼근 추출물을 각각 0.1pp, 1ppm 및 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 시험물질을 함유하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 농도계(densitometer)로 측정한 값과의 비교치로 산출하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and irradiated with UVA A at 15 J / cm 2. Then, the extracts of ginseng fruit of Example 1 and ginseng root extract of Comparative Example 1 were applied at 0.1 pp, 1 ppm and 10 ppm Containing medium. On the second day of culture, cells were harvested and the amount of cyclooxygenase-2 (COX-2) produced using the Westren blot method was quantitated. The results are shown in Table 4 below. The results are shown in Table 4 below. [Table 4] < EMI ID = 16.1 >
실시예 1
Example 1
비교예 1
Comparative Example 1
상기 표 4의 결과로부터, 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 자외선에 의한 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켰으며, COX-2의 산물인 프로스타글란딘 E2(PGE2)에 의한 피부조직분해를 방지하는 것을 확인할 수 있었다. From the results shown in Table 4, the ginseng fruit extract of Example 1 reduced the biosynthesis of cyclooxygenase-2 by ultraviolet light in a concentration-dependent manner, and the skin tissue degradation by prostaglandin E2 (PGE2), the product of COX- . ≪ / RTI >
6) 자외선에 의한 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성 억제 효과6) Inhibitory effect of UV-induced tumor necrosis factor alpha (TNF-α) on biosynthesis
인체 각질형성세포를 105개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 자외선 B를 30mJ/㎠로 조사한 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물 및 비교예 1의 인삼근 추출물을 각각 0.1pp, 1ppm 및 10ppm 포함한 배지로 교체하였다. 배양 6-24시간 후 세포를 수확해서(harvest) ELISA(Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF-α)의 양을 정량하였으며, 시험물질을 처리하지 않은 자외선 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치로 산출한 결과를 하기 표 5에 나타내었다.Human keratinocytes were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and irradiated with ultraviolet ray B at 30 mJ / cm 2. Then, the extracts of ginseng fruit of Example 1 and ginseng root extract of Comparative Example 1 were applied at 0.1 pp, 10 ppm. Cells were harvested 6-24 hours after culture and the amount of tumor necrosis factor alpha (TNF-a) produced was quantitated using ELISA (Pharmingen 555212) method, The results are shown in Table 5 below.
상기 표 5의 결과로부터, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 자외선에 의한 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 종양괴사인자알파의 생합성으로 인해 발생할 수 있는 피부 노화를 미연에 방지할 수 있음을 확인하였다. From the results shown in the above Table 5, it can be seen that the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention can be produced by the biosynthesis of tumor necrosis factor alpha by reducing the biosynthesis of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) It was confirmed that skin aging can be prevented in advance.
7) 인체 피부를 대상으로 한 피부 주름 개선 효과7) Skin wrinkle improvement effect on human skin
30-50세의 안면주름이 있는 시험대상자 40명에 대하여, 하기 표 6에 기재된 조성을 갖는 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 함유한 실시예 2 및 함유하지 않은 비교예 2의 영양크림을 제조한 후 이들의 피부 주름 개선 효과를 비교평가하였다(단위: 중량%).For the 40 subjects who had facial wrinkles of 30-50 years of age, the nutritional creams of Example 2 containing the ginseng fruit extract of Example 1 and the composition of Comparative Example 2 not containing the extract of Example 1 having the composition shown in the following Table 6 were prepared The skin wrinkle-improving effect was compared and evaluated (unit: wt%).
(Estasan: Uniqema(제조사))Caprylic / capric triglyceride
(Estasan: Uniqema (manufacturer))
피검자의 안면 좌부에는 실시예 2를, 우부에는 비교예 2를 3개월간 사용하였다. 크림 사용 이전의 안면 양쪽부의 피부 상태를 측정해 놓은 다음 크림 사용 3개월 후 동일 부위를 재측정하여 피부 주름의 변화를 측정하였다. 24℃, 상대습도 40%의 항온항습실에서 눈꼬리 부위의 주름을 레플리카(replica)로 떠서 비시오메타 시스템(Visiometer system; C+K사)으로 피부 주름을 측정하였다. 피부 주름의 변화량은 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.Example 2 was used for the face side of the subject, and Comparative Example 2 was used for the right side for 3 months. The skin condition of both sides of the facial area before the use of the cream was measured, and then the same part was remeasured 3 months after using the cream to measure the change of the skin wrinkles. The skin wrinkles were measured with a Visiometer system (C + K company) by removing the wrinkles of the eye tail region with a replica in a constant temperature and humidity chamber at 24 ° C and a relative humidity of 40%. The amount of change in the skin wrinkles was calculated according to the following formula (1).
상기 수학식 1에서, "Tdi"는 D90에서의 측정부위 값이며, "Tdo"는 D0에서의 측정부위 값이다.In the equation (1), "Tdi" is the measured site value at D90 and "Tdo" is the measured site value at D0.
상기 수학식 1에 따라 계산한 결과, 비교예 2를 사용한 부위의 피부 주름은 6.5±4%(평균±표준편차)의 감소치를 나타낸 반면, 실시예 2를 사용한 부위의 피부 주름은 39±11%의 감소치를 보여 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타내었다.As a result of calculation according to the above formula (1), skin wrinkles at the site using Comparative Example 2 showed a decrease of 6.5 ± 4% (mean ± standard deviation), while skin wrinkles at the site using Example 2 were 39 ± 11% Of the total wrinkles.
8) 인체에서 피부 탄력 개선 효과8) Skin elasticity improvement effect in human body
상기 표 6의 조성으로 제조한 실시예 2 및 비교예 2의 피부 탄력 개선 효과를 측정하였다. 30세 이상의 여성 40명을 대상으로 2개 조로 나누어, 각 조에 상기 실시예 2 및 비교예 2의 영양크림을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포한 후 피부 탄력 측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부 탄력을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다. 표 7의 결과 값은 피부 탄력 측정기의 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 의미한다.The skin elasticity improving effect of Example 2 and Comparative Example 2 prepared in the composition of Table 6 was measured. The nutritional creams of Example 2 and Comparative Example 2 were applied to the face for 2 weeks each day for 12 weeks in each group. The skin elasticity meter (Cutometer SEM 575, C + K Electronic Co., Germany). The results are shown in Table 7 below. The results shown in Table 7 indicate the viscoelasticity of the skin elasticity measuring device.
상기 표 7의 결과에서 보여지는 바와 같이, 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 함유된 실시예 2의 영양크림을 사용한 경우 150% 가량 피부 탄력 증진 효과를 나타내었다.As shown in the results of Table 7, when the nutritional cream of Example 2 containing the ginseng fruit extract of Example 1 was used, skin elasticity was improved by about 150%.
[시험예 3] 피부 미백 효과[Test Example 3] Skin whitening effect
1) 쥐의 색소세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과1) Inhibitory effect of melanin on melanin production in rat
실시예 1의 인삼 열매 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과를 알아보기 위하여 쥐의 색소세포를 이용하였다.To investigate the melanin inhibitory effect of the ginseng fruit extract of Example 1, mouse pigment cells were used.
먼저, C57BL/6 마우스 유래의 쥐 색소세포(Mel-Ab cell)(Dooley, T.P. et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200)를 DMEM(Dulbeccos modified Eagles media)에 10% 우태반 혈청, 100nM 2-O-테트라데카노일포르볼(tetradecanoyphorbol)-13-아세테이트 및 1nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다. 배양한 Mel-Ab세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24공 평판배양기에 105 세포/공(cells/well)의 농도로 세포를 배양한 다음 이틀째부터 3일 연속으로 1ppm 및 10ppm의 인삼 열매 추출물을 가하여 배양하였다. 이 때, 홍삼 추출물과 하이드로퀴논은 양성대조군으로 사용하였다. 그 다음 배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후, 1N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400nm에서 흡광도를 측정한 다음, 하기 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다(Dooley의 방법). First, 10% fetal bovine serum, 100 nM (100 nM) of Dulbecco's modified Eagles media was injected into DMEM (Dooley, TP et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200) 2-O-tetradecanoyphorbol-13-acetate and 1 nM cholera toxin at 37 ° C and 5% CO 2 . Cells were cultured in a 24-well plate incubator at a concentration of 10 5 cells / well (cells / well). Then, the cells were incubated for 3 consecutive days with 1 ppm and 10 ppm of ginseng Fruit extract was added and cultured. At this time, red ginseng extract and hydroquinone were used as positive control. Then, the culture solution was removed, washed with PBS, and the cells were dissolved with 1 N sodium hydroxide. The absorbance at 400 nm was measured, and the inhibition rate of melanin production was calculated according to the following formula (2) (Dooley's method).
상기 표 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 홍삼 추출물 보다 우수한 멜라닌 생성 억제율을 보였고, 하이드로 퀴논과는 유사한 정도의 멜라닌 생성 억제율을 보이는 것을 확인하였다. 이를 통해 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 우수한 미백 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다. As shown in Table 8, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention showed a better melanin production inhibitory rate than the red ginseng extract and showed a similar degree of inhibition of melanin production to hydroquinone. Thus, it was confirmed that the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention exhibited excellent whitening effect.
2) 인체 피부에 대한 미백 효과2) Whitening effect on human skin
실시예 1의 인삼 열매 추출물의 인체 피부에 대한 미백 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to examine the whitening effect of the ginseng fruit extract of Example 1 on human skin.
먼저, 건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5㎝의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5~2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다.First, 12 healthy boys were exposed to a 1.5 cm diameter opaque tape at the upper part of the subject's body, and then they were exposed to ultraviolet rays (UVB) of about 1.5 to 2 times the minimum erythema dose of each subject. To induce blackening of the skin.
상기 자외선 조사 후 시험물질인 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 하이드로퀴논을 각각 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10 주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타 사)로 측정하였다. The ginseng fruit extract of Example 1, which is the test substance after irradiation with ultraviolet rays, and hydroquinone were each applied, and one state was observed for 10 weeks without applying anything. The color of skin was measured with a colorimeter CR2002 (Minolta Co., Japan) every 1 week.
그 다음 상기 각 시험물질의 도포 개시시점과 도포 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 3에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 한편, 미백 효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L*의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5정도 이상이면 미백 효과가 있다고 판정할 수 있다. Then, the difference (ΔL *) between the start time of application of the respective test materials and the completion time of the application of the test materials was calculated according to the following equation (3). On the other hand, the whitening effect is judged by comparison of DELTA L * between the sample application site and the control site. When the DELTA L * value is 2, the whitening of the deposited pigment is noticeable. .
상기 표 9에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 하이드로 퀴논과 유사한 정도의 피부색 밝기 정도를 보임을 확인하였다. 이는 상기 인삼 열매 추출물이 자외선에 의해 생성된 색소 침착을 개선하여 피부색을 밝게 해주기 때문이다.As shown in Table 9, it was confirmed that the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention showed a degree of skin color brightness similar to that of hydroquinone. This is because the ginseng fruit extract improves pigmentation caused by ultraviolet light and brightens skin color.
[시험예 4] 피부 보습 및 아토피 증상 개선 효과[Test Example 4] Skin moisturizing effect and atopic symptom improvement effect
1) 인간 각질형성세포의 분화유도1) induction of differentiation of human keratinocytes
각질형성세포 및 인간피부세포주(HaCaT)의 분화시 생성되는 CE(Cornified Envelop)의 양을 측정하여 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물의 세포분화 촉진 효과를 알아보았다. The amount of CE (cornified envelope) produced upon differentiation of keratinocyte and human skin cell line (HaCaT) was measured to investigate the promoting effect of ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention on cell differentiation.
일차 배양한 인간의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣어 바닥에 부착시킨 후, 하기 표 10에 기재된 시험물질들을 농도별로 배양액에 첨가하고, 세포가 바닥 면적의 70~80% 정도 자랄 때까지 5일간 배양하였다. 이 세포를 수확(cell harvest)하여 PBS(phosphate buffered saline)로 세척한 다음, 2% SDS(Sodium Dodecyl Sulfate)와 20mM 농도의 DTT(Dithiothreitol)를 함유한 10mM 농도의 트리스-염산 완충액(Tris-HCl, pH 7.4) 1ml를 가하여 소니케이션(sonication), 보일링(boiling), 원심분리한 침전물을 다시 PBS 1ml에 현탁시켜 340nm에서의 흡광도를 측정하였다. 이와 별도로 상기 소니케이션 후의 용액 일부를 취하여 단백질 함량을 측정하여, 세포분화 정도의 평가 시 기준으로 삼았다. 저칼슘(0.03mM) 처리군과 고칼슘(1.2 mM) 처리군을 각각 음성/양성 대조군으로 하고, 저칼슘 농도에 시험물질을 첨가하여 실시한 시험 결과를 하기 표 10에 나타내었다. The primary cultured human keratinocytes were placed in a culture flask and adhered to the bottom. The test substances described in the following Table 10 were added to the culture medium by concentration and the cells were cultured for 5 days until the cells reached 70-80% Lt; / RTI > The cells were harvested and washed with PBS (phosphate buffered saline). Then, the cells were washed with 10 mM Tris-HCl buffer (Tris-HCl buffer containing 2% SDS (sodium dodecyl sulfate) and 20 mM DTT (Dithiothreitol) , pH 7.4), sonication, boiling, and centrifugation were suspended again in 1 ml of PBS, and the absorbance at 340 nm was measured. Separately, a part of the solution after the sonication was taken to measure the protein content, and was used as a standard for evaluation of the degree of cell differentiation. The test results are shown in Table 10 below, in which low calcium (0.03 mM) and high calcium (1.2 mM) treatment groups were used as negative / positive control groups and low calcium concentration test substances were added.
상기 표 10의 결과를 통하여 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 각질형성세포에서 분화를 촉진하는 것을 확인할 수 있었다.From the results of Table 10, it can be confirmed that the extract of ginseng extract of Example 1 according to the present invention promotes differentiation in keratinocytes.
2) 인간 피부세포주의 트랜스 글루타미네이즈(transglutaminase)의 발현 효과2) Expression of transglutaminase in human skin cell line
인간의 피부세포주를 96공 평판배양기에 각 공당 5×104개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 부착시킨 피부세포주에 시험물질을 처리한 후, 2일이 지난 다음, 배지를 제거하고, -20℃ 냉장고에 보관하였다. 동결-해동(Freeze-thawing)을 2회 반복하여 물질 처리한 세포를 파괴시킨 후, -20℃ 에 보관한 아세톤:에탄올(1:1, v/v)을 처리하여 4℃에서 30분간 방치하여 세포를 고정시켰다. 그 후, 실온에 방치하여 유기용매가 증발되게 하고, 블록킹(1% 소혈청알부민), 트랜스글루타미네이즈 항체(primary antibody), HRP 안티-마우스 항체(secondary)를 수행하였으며, 발색은 OPD(o-phennyldiamine)를 첨가하여 수행하였다. 발현량은 490nm에서 흡광도를 측정하였고, 보정은 630nm에서 백그라운드(background)를 측정하여 수행하였다. 저칼슘(0.03mM) 처리군과 고칼슘(1.2 mM) 처리군을 각각 음성/양성 대조군으로 하고, 저칼슘 농도에 시험물질을 첨가하여 실시한 결과를 하기 표 11에 나타내었다.Human skin cell lines were plated in a 96 well plate incubator at 5 x 10 4 per well for 24 h. After the adhered skin cell line was treated with the test substance, after 2 days, the medium was removed and stored in a -20 ° C refrigerator. Cells treated with the substance were treated with acetone: ethanol (1: 1, v / v) stored at -20 ° C for 30 minutes at 4 ° C, followed by freezing-thawing twice Cells were fixed. (1% bovine serum albumin), transglutaminase antibody and HRP anti-mouse antibody (secondary antibody) were performed. The color development was performed using OPD (o -phennyldiamine). Absorbance was measured at 490 nm and calibration was performed by measuring the background at 630 nm. The results are shown in Table 11 below. The results are shown in Table 11 below. The results are shown in Table 11 below.
대조군
Control group
실시예 1
Example 1
상기 표 11의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 대조군에 비해 두 배 정도의 증가 양상을 보였고, 대조군보다도 많은 양이 발현됨을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 트랜스글루타미네이즈의 발현을 향상시키는 것을 알 수 있었다. From the results of Table 11, it can be seen that the extract of Ginseng Extract of Example 1 according to the present invention showed an increase of about twice as much as that of the control group, and the amount thereof was higher than that of the control group. Thus, it can be seen that the extract of ginseng fruit of Example 1 according to the present invention improves the expression of transglutaminase.
3) 인간 피부에서 표피지질(총 세라마이드) 생성량 증가 효과3) Increased production of epidermal lipid (total ceramide) in human skin
실시예 1의 인삼 열매 추출물이 실제 인간 피부에서의 지질 합성 증가에 미치는 효과를 평가하기 위하여, Carbopol ETD 2020 0.5%, TEA 0.45%, 시험물질 5%, 및 탈이온화된 물로 100을 맞추어 사용하였다. 12명의 성인 남, 녀를 대상으로 팔뚝에 50ml 폴리프로필렌 코르니컬 튜브(polypropylene cornical tube)의 직경만큼의 영역을 표시한 후 매일 2회씩 대조군들과 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 20μl씩 도포하면서 피검자를 2군으로 나누어 3일째와 11일째 생성 지질량을 하기와 같은 방법으로 지질을 추출하여 분석하였다. 팔뚝을 수돗물을 이용하여 씻은 다음 스카치 810 매직테입(Scotch 810 Magic tape)으로 1회 테입 스트립핑(tape stripping)한 후 자른 50ml 폴리프로필렌 코르니컬 튜브를 저장소(reservoir)로 사용하여 1ml의 사이클로핵산/에탄올(cyclohexane/ethanol)(4:1)을 첨가한 다음 약 1분간 섞어 준 뒤 이를 새로운 튜브에 옮기고 다시 1ml의 사이클로헥산/에탄올(1:1)을 위와 같은 방법으로 처리한 후 튜브에 모았다. 이 후 이를 50℃에서 질소 가스를 이용하여 건조시킨 다음 500μl의 클로로포름/메탄올(2:1)에 녹인 후 각 시험물질들을 CAMAG사의 자동화 TLC 샘플러-4(Automated TLC sampler-4)를 이용하여 실리카겔 TLC(Thin Layer chromatography) 판에 점적하고, AMD(Automated Multiple Development)를 이용하여 하기 표 12와 같은 조성비의 전개 용매로 전개하였다. Carbopol ETD 2020 0.5%, TEA 0.45%,
(cm)Solvent migration distance
(cm)
TLC 판을 전개시킨 후 TLC 스캐너-II(CAMAG 사: densitometer)를 이용하여 570nm 파장에서 각 밴드(band)의 크기를 측정하였다. 비처치군의 세라마이드 생성량을 100%로 환산한 각 처치군의 세라마이드 생성량은 하기 표 13에 나타내었다. After developing the TLC plate, the size of each band was measured at a wavelength of 570 nm using a TLC scanner-II (CAMAG: densitometer). The amount of ceramide produced in each treatment group in which the amount of ceramide produced in the non-treated group was converted to 100% is shown in Table 13 below.
상기 표 13에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 인삼 열매 추출물 처치 3일 후에 음성대조군(무처리군/비히클) 대비 약 5 내지 8% 정도의 증가 상태를 보였고 양성대조군(글리세린) 보다는 6% 정도의 증가를 보였다. 그리고 11일 후에는 지질 생성능이 음성대조군에 비해 약 16% 정도, 양성대조군에 비해 22% 정도 우수한 것으로 나타났다. 이는 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물에 의한 세라마이드 증가를 입증하는 것이다. As shown in Table 13, the ginseng fruit extract of Example 1 showed an increase of about 5 to 8% compared with the negative control group (control group / vehicle) 3 days after the treatment, and about 6% of the control group (glycerin) Respectively. After 11 days, the lipid productivity was about 16% higher than the negative control and 22% higher than the positive control. This demonstrates the increase of ceramide by the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention.
4) 인체에서의 피부 보습력 증가 4) Increase skin moisture in human body
피부 건조증을 나타내는 50-60대의 성인 남녀 50명을 2개조로 나누어, 각 조에 실시예 2와 비교예 2를 매일 2회씩 4주간 안면에 도포하였다. 도포 개시 전과, 도포 후 1주, 2주, 4주 경과한 시점 및 도포를 중지한 2주 경과(총 6주 경과) 후에 항온, 항습 조건(24℃, 상대습도 40%)에서 코니오미터로 피부 수분량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 14에 나타내었다. 시험결과는 시험개시 직전에 측정한 코니오미터 값을 기준으로 하여 일정기간 처치한 후의 측정값의 증가분을 백분율로 표시한 것이다. Fifty female adults and 50 female adults representing skin dryness were divided into two groups, and each group was applied to the face of Example 2 and Comparative Example 2 twice daily for 4 weeks. (24 ° C, relative humidity: 40%) after one week, two weeks, and four weeks after application and before two weeks (six weeks after completion of application) Skin moisture was measured and the results are shown in Table 14 below. The test result is a percentage of the increment of the measured value after a certain period of treatment based on the coneometer value measured just before the start of the test.
코니오미터는 표피의 전기전도도 값을 측정하여 피부에 존재하는 수분량을 측정하는 피부 수분 측정기이다. 상기 표 14에서 보여지는 바와 같이, 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 함유된 실시예 2의 물질을 도포한 군에서는 비교예 2를 도포한 대조군에 비해서 피부수분량이 더 증가되었다. 또한, 실시예 2의 영양크림의 도포를 중지한 2주 후(총 6주 경과)에 피부수분을 측정한 수치가 1~2주 경과 후의 수치와 유사하게 나타나, 실시예 2를 도포하지 않아도 일정 기간 동안 본 발명에 의한 인삼 열매 추출물의 도포에 의한 피부 수분이 지속적으로 유지됨을 알 수 있었다. Connio meter is a skin moisture analyzer that measures the amount of water present in the skin by measuring the electrical conductivity of the skin. As shown in Table 14, in the group to which the substance of Example 2 containing the extract of ginseng extract of Example 1 was applied, the skin moisture amount was further increased as compared with the control group to which Comparative Example 2 was applied. In addition, the values of the skin moisture measured 2 weeks after the application of the nutritional cream of Example 2 were stopped (total of 6 weeks) were similar to those after 1 to 2 weeks, It was found that the skin moisture by the application of the ginseng fruit extract according to the present invention was continuously maintained during the period.
5) 아토피성 피부염 개선 효과5) Improvement of atopic dermatitis
아토피 증상 개선 효과를 다음과 같이 측정하였다. 아토피 증상(가려움, 진무름 또는 심한 건조증)으로 진단받았거나, 육안관찰로 아토피 유사 증상을 보이는 10~50대 사이의 50명을 대상으로 하여 2그룹으로 나누고, 각각 실시예 2와 비교예 2를 제공하여, 아토피 증상을 보이는 부위에 매일 2회씩 12주 동안 도포하게 하였다. 효능 평가는 12주 처치 후 설문 조사를 통해 개선 정도를 본인이 주관적으로 판단하게 하였다. 설문에서는 아토피성 피부염의 증상을 "가려움", "건조함", "각질발생", "비듬", "홍반", "부어오름", "피부 균열" 및 "진물과 습진" 등으로 나누고 상기 증상이 있는 경우 각각의 증상에 대하여 개선 정도를 평가한 후에 이를 평균하여 아토피 증상 개선 효과를 개인별로 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 15에 나타내었다.The effect of improving atopic symptoms was measured as follows. Fifty patients between the ages of 10 and 50 who were diagnosed with atopic symptoms (itch, eruption or severe dryness) or who had atopy-like symptoms by visual observation were divided into two groups, and Example 2 and Comparative Example 2 were provided And applied to the area showing atopic symptoms twice a day for 12 weeks. The efficacy evaluation was conducted after 12 weeks' treatment, and the degree of improvement was judged subjective by the questionnaire. In the questionnaire, symptoms of atopic dermatitis were divided into "itching", "dryness", "keratinization", "dandruff", "erythema", "swelling", "skin crack" The degree of improvement of each symptom was evaluated and then the average of the scores was evaluated to evaluate the improvement effect of atopic symptoms. The results are shown in Table 15 below.
표 15에서 나타난 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 함유된 제형을 도포한 처치군이 대조군보다 전반적으로 아토피 증상이 더 개선되었음을 알 수 있다. As shown in Table 15, it can be seen that the group treated with the formulation containing the extract of Ginseng extract of Example 1 according to the present invention showed more improvement in atopic symptoms overall than the control group.
[시험예 5] 여드름 및 피부 트러블 완화[Test Example 5] Acne and skin troubles were alleviated
1) 피지 조절 효과: 5-알파-리덕타아제 활성 억제 효과1) sebum control effect: 5-alpha-reductase inhibitory effect
성숙한 SD(Sproque-Dawley) 웅성 랫트(생후 7-8주)를 디에틸에테르로 치사시킨 후, 복부 전립선을 떼내어 결합조직을 제거하고 완충액(0.32M 수크로오스, 0.1mm 디티오트레이톨(dithiothreitol) 및 20mM 아세트산 나트륨)을 첨가하여 잘게 자른 다음, 분쇄기로 현탁화하였다. 현탁액은 원심분리하여 상층액을 취해 5-알파-리덕타아제를 부분 정제하고, 이 효소의 활성도 억제 실험을 수행하였다. Mature SD (Sproque-Dawley) male rats (7-8 weeks old) were sacrificed with diethyl ether, the abdomen prostate was removed, the connective tissue was removed and a buffer (0.32M sucrose, 0.1 mM dithiothreitol, And 20 mM sodium acetate), and the mixture was finely pulverized and suspended in a pulverizer. The suspension was centrifuged, and the supernatant was taken to partially refine 5-alpha-reductase, and the activity of the enzyme was inhibited.
위에서 얻은 상층액의 일부를 취하여 0.2M 일염기산과 0.2M 이염기산이 들어 있는 완충액에 넣은 후, 동위원소인 3H가 붙어있는 기질(테스토스테론)과 함께 반응시켜 생성물인 디하이드로테스토스테론의 생성량을 측정하였다. A portion of the supernatant obtained above is placed in a buffer containing 0.2 M base acid and 0.2 M dibasic acid, and then reacted with a substrate (testosterone) with an isotope, 3 H, to measure the amount of product dihydrootestosterone Respectively.
반응용액은 1mM 디티오트레이톨, 40mM 나트륨 포스페이트(pH 6.5), 50μM NADPH, [1,2,6,7-3H] 테스토스테론/테스토스테론(2.2×109몰) 및 효소 현탁액(0.8㎎) 단백질을 565㎕ 포함하였다.The reaction solution contained 1 mM dithiothreitol, 40 mM sodium phosphate (pH 6.5), 50 μM NADPH, [1,2,6,7- 3 H] testosterone / testosterone (2.2 × 109 mol) and enzyme suspension .
실시예 1의 인삼 열매 추출물을 10% 에탄올에 녹여 한 반응당 100㎍/10% 에탄올 10㎕ 상태로 가하고, 대조군으로는 동일한 부피의 용매를, 양성대조군으로는 리보플라빈을 사용하였다. The ginseng fruit extract of Example 1 was dissolved in 10% ethanol and added to 10 μl of 100 μg / 10% ethanol per reaction. Riboflavin was used as a control group in the same volume and riboflavin was used as a positive control.
반응은 효소 현탁액을 부가하는 것과 동시에 시작하여 37℃에서 30분간 진행시킨 후, 1㎖의 에틸아세테이트를 가하여 추출하였으며, 100㎕의 에틸아세테이트상을 실리카 플라스틱 시트 카이젤겔 60 에프 254(Silica plastic sheet kieselgel 60 F254)상에서, 전개용매계는 아세테이트-사이클로헥산(1:1)으로 전개하였다.The reaction was started at the same time as adding the enzyme suspension and proceeded at 37 DEG C for 30 minutes and then extracted with 1 mL of ethyl acetate. 100 mu l of the ethyl acetate phase was applied onto a silica plastic sheet kieselgel 60 FEP 254 60 F254), the developing solvent system was developed with acetate-cyclohexane (1: 1).
플라스틱 시트를 공기 건조한 후, 동위원소의 양을 측정하기 위해 바스 시스템을 사용하였는데, 건조된 플라스틱 시트와 엑스레이 필름을 함께 바스 카세트에 넣어 1주일 후에 필름에 남아있는 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론의 동위원소 양을 측정하였으며, 각각의 저해율에 대한 결과를 하기 표 16에 나타내었다.After the plastic sheet was air-dried, the bath system was used to measure the amount of isotope. The dried plastic sheet and x-ray film were put in a cassette together with the isotope amounts of testosterone and dihydrotestosterone remaining on the film after one week And the results for each inhibition rate are shown in Table 16 below.
(2) DHT : 디하이드로테스토스테론 영역에서 나타난 3H 레디오 액티버티
(3) 전환율 : DHT 영역의 레디오 액티버티/전체 레디오 액티버티
(4) 저해율 : 100 x (대조군의 전환율-시료의 전환율)/대조군의 전환율(1) T: 3H radioactivity in the testosterone area
(2) DHT: 3H radioactivity in the dihydrotestosterone region
(3) Conversion rate: Radio activity in the DHT area / Total radio activity
(4) Inhibition rate: 100 x (Conversion rate of control group - Conversion rate of sample) / Conversion rate of control group
상기 표 16으로부터, 인삼 열매 추출물은 5-알파 리덕타아제 억제 효과가 있음을 알 수 있었다. From Table 16, it can be seen that the ginseng fruit extract has an inhibitory effect on 5-alpha reductase.
2) 지질합성(lipogenesis) 억제 효과2) Inhibitory effect on lipogenesis
지질 합성에 필요한 탄소 원소의 소비(uptake) 정도를 정량하여 지질합성 저해 정도를 평가하는 방법으로 피지선에서의 지질 합성 정도를 평가하였다. The extent of lipid synthesis in the sebaceous glands was evaluated by assessing the extent of uptake of carbon elements required for lipid synthesis and assessing the degree of lipid synthesis inhibition.
즉, 피지선이 많은 햄스터 귀 조직을 생검(biopsy)하여 C14이 라벨된 배지에서 6시간 동안 방사능 측정기로 대조군과 시험물질들을 비교 정량하여 저해 정도를 평가하였다. 시험물질들은 햄스터 오른쪽 귀 조직을 이용, 배지에 시험물질 용액 0.01%를 가하여 사용하였고, 대조군은 햄스터 왼쪽 귀 조직을 이용, 배지에 생리 식염수 0.01%를 가하여 사용하였으며, 그 결과를 하기 표 17에 나타내었다. In other words, the amount of inhibition was evaluated by biopsy of hamster ear tissues having a large number of sebaceous glands, and comparing and quantifying the test substance with the control group using a radioactivity measuring device for 6 hours on a C14 labeled medium. Test substances were used by adding 0.01% test substance solution to the medium using the right ear tissue of the hamster, and 0.01% physiological saline was added to the medium using the hamster left ear tissue as a control group. The results are shown in the following Table 17 .
한편, 표 17에서 저해율은 하기 수학식 4에 따라 계산한 것이고, 그 값은 4 마리의 햄스터에 대한 평균값이다.On the other hand, in Table 17, the inhibition rate is calculated according to the following equation (4), and the value is an average value for four hamsters.
상기 표 17의 결과로부터, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물이 지질 생합성 억제 효과가 있음을 알 수 있다. From the results shown in Table 17, it can be seen that the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention has an effect of inhibiting lipid biosynthesis.
3) 면포 감소 효과3) Effect of Cotton Reduction
면포 감소 효과를 확인하기 위하여 본 발명에 사용된 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 1,3-부틸렌글리콜에 용해시켜 1% 용액이 되도록 한 후, 토끼 임상실험용 시험물질로 사용하였다. The ginseng fruit extract of Example 1 used in the present invention was dissolved in 1,3-butylene glycol so as to be a 1% solution and used as a test substance for rabbit clinical experiment in order to confirm the cottonseed reduction effect.
흰 토끼의 귀에 면포 유발 물질인 50% 올레인산/파라핀오일 0.2㎖를 오전에 도포하여 면봉으로 문질러 주었다. 하루 두 번 오전(50% 올레인산/파라핀오일), 오후(물질)에 도포하며 총 실험 기간인 한달 동안 도포하였다. 면포는 약 10일 전후부터 발생되는데, 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 0.2㎖씩 오후에 도포해 준 결과 2주 후부터는 점차적으로 면포의 수 및 크기가 감소하였다.In the ear of a white rabbit, 0.2 ml of 50% oleic acid / paraffin oil, which is a skin inducing substance, was applied to the ear and rubbed with a cotton swab. Twice daily (50% oleic / paraffinic oil) and in the afternoon (substance) and applied for one month, the total duration of the experiment. The cottonseed occurs from about 10 days afterwards. As a result of applying 0.2 ml of the ginseng fruit extract of Example 1 in the afternoon, the number and size of the cottonseed gradually decreased after 2 weeks.
각 조직을 생검하여 각질을 벗겨낸 다음, 면포 크기를 현미경 하에서 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 18에 나타내었다.Each tissue was biopsied and the keratin was peeled off and the size of the cotton was measured under a microscope. The results are shown in Table 18 below.
상기 표 18의 결과로부터, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물로 처리한 토끼의 면포가 현저히 감소되었다는 것을 알 수 있었다. 즉, 실시예 1의 인삼 열매 추출물에 의해 피지감소가 나타났고, 결과적으로 피부 과각질화를 감소시켜 면포가 감소되었음을 추정할 수 있다.From the results of Table 18, it can be seen that the rabbit skin treated with the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention was significantly reduced. That is, it was estimated that the sebum extract was reduced by the ginseng fruit extract of Example 1, and as a result, the skin and keratinization were reduced, and the skin texture was reduced.
4) 피지 분비 억제 효과4) Effect of suppressing sebum secretion
지성피부 완화 효과를 측정하기 위해서 20-45세의 여성층으로 지성피부를 가진 20명에게 이마 부분에 10명은 실시예 2(인삼 열매 추출물 함유)를, 다른 10명에게는 비교예 2를 아침, 저녁으로 1일 2회 도포하여 사용하게 한 후에 1주, 2주, 3주 및 4주 후에 피부 유분 측정기(Sebumeter SM810)를 이용하여 피부의 피지 분비량을 측정하였다. 실험은 20℃, 상대습도 20%에서 이루어졌으며 측정 결과는 표 19에 나타내었다. 결과는 피검자 10명의 평균값으로 나타내었다. 지성 피부인 경우 측정값이 220 이상이고, 정상피부의 경우 100 내지 220 사이이다.In order to measure the oily skin mitigation effect, 20 women aged 20-45 years, 20 men with oily skin, 10 men and 2 women in the forehead region, After 2, 3, and 4 weeks of application, the skin sebum secretion amount was measured using a skin moisture analyzer (Sebumeter SM810). Experiments were carried out at 20 ° C and 20% relative humidity. The measurement results are shown in Table 19. The results were expressed as the average value of 10 subjects. In the case of oily skin, the measurement value is 220 or more, and in the case of normal skin, it is between 100 and 220.
상기 표 19의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 함유하는 실시예 2의 영양크림이 과다한 피지 분비를 억제하는 효과를 나타내어 피지 조절 효과가 있음을 확인할 수 있었다.From the results shown in Table 19, it was confirmed that the nutritional cream of Example 2 containing the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention had an effect of suppressing excessive sebum secretion and had sebum control effect.
5) 항염증 효과: 프로스타글란딘 E2(PGE2) 생성 억제 효과5) Anti-inflammatory effect: Inhibitory effect of prostaglandin E2 (PGE2) production
본 발명에 의한 인삼 열매 추출물의 프로스타글란딘 E2 생성 억제 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험하였다(참고문헌: Jeffrey, K. H., Anglea, S. W., Zoe, S., and Rhia C. M. Intracellular Measurement of Prostaglandin E2: Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28).In order to examine the inhibitory effect of the ginseng fruit extract according to the present invention on the production of prostaglandin E2, the following experiment was carried out (Reference: Jeffrey, KH, Anglea, SW, Zoe, S., and Rhia CM Intracellular Measurement of Prostaglandin E2: Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28).
먼저, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포를 CO2 배양기에서 24시간 동안 배양한 다음, FBS(fetal bovine serum)가 포함되지 않은 배지로 교체하여 2 시간 동안 배양한 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물에 증류수를 혼합하여 각각 1㎍/mL, 10 ㎍/mL 및 100 ㎍/mL의 농도로 준비하여 처리한 다음, 37℃, 5 %(v/v)의 CO2 배양기에서 2 시간 동안 배양하였다. First, the fibroblasts isolated from the human epidermal tissue were cultured in a CO 2 incubator for 24 hours, then replaced with a medium containing no FBS (fetal bovine serum), and cultured for 2 hours. Then, The extracts were mixed at a concentration of 1 μg / mL, 10 μg / mL and 100 μg / mL, respectively, and then cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C. and 5% (v / v) for 2 hours .
그 다음, 프로스타글란딘 E2 자극원으로 칼슘 이오노포어 A23187(Calcium ionophore A23187)과 아라키돈산을 50㎛의 농도로 5 분간 처리한 후, 세포를 용혈시키고 ELISA 판독기 450 nm에서 흡광도를 측정하여 프로스타글란딘 E2를 정량하였으며, 그 결과를 하기 표 20에 나타내었다. 이때, 하기 표 20에 기재된 억제율은 아라키돈산 처리시 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 처리하지 않은 피부 섬유아세포와 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 처리한 섬유아세포의 프로스타글란딘 E2 생성량의 차이를 기준으로 계산하였으며, 5 회 반복하여 평균값을 구하였다.Then, calcium iodate A23187 (Calcium ionophore A23187) and arachidonic acid were treated for 50 minutes as a prostaglandin E2 stimulating agent for 5 minutes, and the cells were hemolyzed and the absorbance was measured at 450 nm in an ELISA reader to quantitate prostaglandin E2 The results are shown in Table 20 below. The inhibition rates shown in Table 20 below were calculated based on the difference in the amounts of prostaglandin E2 produced in the fibroblasts treated with the ginseng fruit extract of Example 1 and the ginseng fruit extract treated with the ginseng extract of Example 1 The mean value was obtained by repeating 5 times.
(㎍/mL)density
(쨉 g / mL)
아라키돈산 + 실시예 1
Arachidonic acid + Example 1
상기 표 20의 결과에서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 자극원에 의한 프로스타글란딘 E2 생성을 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다.From the results of Table 20, it can be confirmed that the extract of ginseng fruit of Example 1 according to the present invention can inhibit the production of prostaglandin E2 by a stimulus source.
6) 항염증 효과: LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 사이클로옥시게나제-2(COX-2)의 생합성 억제 효과6) Anti-inflammatory effect: inhibition of biosynthesis of cyclooxygenase-2 (COX-2) induced by Lipopolysaccharide (LPS)
인체 섬유아세포를 105 개의 농도로 12공 평판배양기에서 배양한 다음 LPS 처리 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 1ppm, 10ppm 및 100ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확해서(harvest) 웨스턴 블랏(Westren blot) 방법을 사용하여 생성된 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2)의 양을 정량하였다. 대조군을 100으로 하여 농도계(densitometer)로 측정한 값과의 비교치를 하기 표 21에 나타내었다. 이때 대조군은 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 처리하지 않고 배양한 미처리군이다.Human fibroblasts were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and after the LPS treatment, the ginseng fruit extract of Example 1 was replaced with a medium containing 1 ppm, 10 ppm and 100 ppm. On the second day of culture, cells were harvested and the amount of cyclooxygenase-2 (COX-2) produced using the Westren blot method was quantitated. The comparison with the value measured with a densitometer with the control group as 100 is shown in Table 21 below. The control group was an untreated group in which the ginseng fruit extract of Example 1 was cultured without treatment.
상기 표 21의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 염증반응 유발인자인 LPS로 유도된 사이클로옥시게나제-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 염증반응을 억제함으로써 피부 트러블을 완화시킬 수 있는 효능을 나타내었다.As can be seen from the results of Table 21, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention inhibited the inflammatory reaction by reducing the biosynthesis of cyclooxygenase-2 induced by LPS, which is an inflammatory reaction inducer, And showed efficacy to alleviate skin troubles.
7) 항염증 효과: LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성 억제 효과7) Anti-inflammatory effect: Inhibition effect of LPS (Lipopolysaccharide) -induced tumor necrosis factor alpha (TNF-α)
인체 각질형성세포를 105개의 농도로 12공 평판배양기에 배양하였고, LPS를 처리한 후, 실시예 1의 인삼 열매 추출물 1pp, 10ppm 및 100ppm을 포함한 배지로 교체하였다. 6-24시간 배양한 다음 세포를 수확해서(harvest) ELISA(Pharmingen 555212) 방법을 사용하여 생성된 종양괴사인자알파(TNF-α)의 양을 정량하였다. 대조군을 100으로 하여 측정한 값과의 비교치를 표 22에 나타내었다. 이때 대조군은 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 처리하지 않고 배양한 미처리군이다.Human keratinocytes were cultured in a 12-well plate incubator at a concentration of 10 5 , and after the treatment with LPS, the medium containing 1 ppm, 10 ppm and 100 ppm of the ginseng fruit extract of Example 1 was replaced. After incubation for 6-24 hours, the cells were harvested and the amount of tumor necrosis factor alpha (TNF-a) produced was quantitated using the ELISA (Pharmingen 555212) method. The comparison with the value measured with the control group as 100 is shown in Table 22. < tb >< TABLE > The control group was an untreated group in which the ginseng fruit extract of Example 1 was cultured without treatment.
실시예 1
Example 1
상기 표 22의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 염증유발인자 LPS에 의한 종양괴사인자알파(TNF-α)의 생합성을 농도 의존적으로 감소시켜 이로 인해 발생할 수 있는 염증반응을 억제하여 피부 트러블 개선에 기여할 수 있었다.As can be seen from the results of Table 22, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention decreases the biosynthesis of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) by inflammation inducing factor LPS in a concentration-dependent manner, It was possible to suppress the inflammatory reaction and to contribute to the improvement of skin troubles.
8) 대식세포(Macrophage)에 대하여 LPS로 유도시킨 NO(산화질소) 억제 효과8) NO (nitric oxide) inhibition effect induced by LPS on macrophages
본 발명에 의한 인삼 열매 추출물의 항염증 효과를 알아보기 위하여 대식세포(Macrophage)에 대하여 LPS로 유도시킨 NO(산화질소) 억제 실험을 진행하였다. In order to examine the anti-inflammatory effect of the ginseng fruit extract according to the present invention, LPS-induced NO (nitric oxide) inhibition experiments were performed on macrophages.
10% 농도의 혈청을 첨가한 배지에서 5% CO2 조건 하에 대식세포(Raw 264.7 cell)를 배양하였다. 96공 평판배양기에서 2×105개의 농도로 자라게 하고, LPS(1 ug/ml)로 자극한 후 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 홍삼 추출물을 각각 처리하여 37℃에서 1시간 동안 보관한 후 NO 생성 정도를 측정하여 LPS로 유도시킨 NO 저해하는 효과를 비교하였다. NO 생성량의 측정은 Griess 반응법(Minghetti, L. et al., 1991, Glia 19. 152-160)을 이용하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.Macrophages (Raw 264.7 cells) were cultured in 5% CO 2 medium supplemented with 10% serum. 96 after the ball cultivated in the plate culture medium to 2 × 10 5 different concentrations, and each process and then stimulated with LPS (1 ug / ml) Example 1 of the ginseng fruit extract and ginseng extract retained for 1 hour at 37 ℃ NO The degree of production was measured and the effect of inhibiting NO induced by LPS was compared. The NO production amount was measured by the Griess reaction method (Minghetti, L. et al., 1991, Glia 19. 152-160), and the results are shown in FIG.
도 5의 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 염증유발인자(Cytokine)로서의 NO 생성을 효과적으로 억제하였으며, 그 효과가 홍삼 추출물보다 월등히 우수하였다. 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 염증반응 조절을 통한 피부 트러블에 의한 상처를 치유하고 주름 생성을 억제하는 효과에 기여할 것으로 기대된다.As shown in the results of FIG. 5, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention effectively inhibited NO production as an inflammatory factor (cytokine), and its effect was much better than that of red ginseng extract. Therefore, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention is expected to contribute to the effect of healing wounds due to skin troubles through the control of inflammation and inhibiting wrinkle formation.
9) 여드름 및 피부 트러블 개선 효과9) Acne and skin trouble improvement effect
실험에 참여한 인원은 평소 여드름을 비롯한 피부 트러블이 심한 여성 10명으로, 항온항습실에서 얼굴을 비누로 수세한 후 30분간 적응시키고, 여드름 개수 및 염증이 동반된 개수를 비교하여 피부 트러블 정도를 측정하였다.The subjects were 10 women with severe skin troubles including acne. The subjects were soaked in soap for 30 minutes in the temperature and humidity chamber, and the skin trouble was measured by comparing the number of acne and inflammation .
상기 피시험자들에게 실시예 2 및 비교예 2의 영양크림을 각각 4주일 동안 사용하게 한 다음 여드름 및 피부 트러블 정도를 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 23에 나타내었다.The subjects were allowed to use the nutritional creams of Example 2 and Comparative Example 2 for 4 weeks, respectively, and the degree of acne and skin troubles were compared. The results are shown in Table 23 below.
(5명)Example 1
(5 people)
(5명)Comparative Example 1
(5 people)
상기 표 23의 결과에서 보여지는 바와 같이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물을 포함한 실시예 2를 4주간 도포한 결과 기존 여드름 개수의 감소 및 염증 동반 트러블의 개선 효과가 나타났다.As shown in the results of Table 23, when Example 2 containing the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention was applied for 4 weeks, reduction in the number of existing acnes and improvement of inflammatory accompanying trouble were shown.
[시험예 6] 피부 혈색 개선 효과[Test Example 6] Skin color fastness improving effect
1) 인삼 열매 추출물의 HUVEC(Human umbilical vein endothelial cell)에서의 NO 생성능1) NO production in human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) of ginseng fruit extract
사람의 혈관내피세포에는 eNOS(endothelial nitric oxide synthase)가 존재하며, 그 활성이 증가하는 것으로 NO(산화질소)를 생성시켜 혈관을 확장시키고, 혈행을 촉진하는 역할을 하게 된다. 사람의 혈관내피세포를 배양한 후 인삼 열매 추출물(도 6)과 일반홍삼 추출물(도 7)을 배지에 처리하여 생성되는 NO의 양을 비교하였다. 즉, 혈관내피세포는 젤라틴 코팅된 24공 평판배양기에서 2.5×104 cells/well의 밀도로 부착시킨 다음 성장배지에서 12시간 동안 배양하였다. 혈관내피세포는 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 홍삼 추출물을 처리한 군, 무처리군을 12시간 동안 전처리하였다. 내피세포는 37℃에서 FBS가 없는 M199 배지에 10μmol/L DAF-FM 다이아세테이트(diacetate; Molecular Probe, OR)로 30분 동안 처리하였다. 혈관내피세포는 FBS가 없는 M199 배지로 3번 씻어준 후, 평행판 플로우 챔버(parallel plate flow chamber)에 넣고 수은 램프(mercury lamp)로부터 분리된 빛으로 자극하였다. 자극(Excitation) 파장은 488nm이고, NO가 결합된 DAF는 515 nm에서 형광을 나타낸다. 사진은 공초점 레이저 현미경(Atto Bioscience, USA)으로 찍었고, 형광의 밝기는 이미지-프로 플러스 v4.5 소프트웨어(Media Cybernetics, San Diego, CA, USA)로 분석하여 무처리군 대비 형광의 강도로서 NO 생성 정도를 비교하였다.Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is present in the vascular endothelial cells of humans and its activity is increased to produce NO (nitric oxide) to expand blood vessels and promote blood circulation. After culturing human vascular endothelial cells, the amount of NO produced by treating ginseng fruit extract (FIG. 6) and common red ginseng extract (FIG. 7) on the medium was compared. In other words, vascular endothelial cells were attached at a density of 2.5 × 10 4 cells / well in a gelatin-coated 24-well plate incubator, and then cultured in a growth medium for 12 hours. The endothelial cells of the vascular endothelium were pretreated for 12 hours with the group treated with the ginseng fruit extract and red ginseng extract of Example 1 according to the present invention and the group without treatment. Endothelial cells were treated with 10 μmol / L DAF-FM diacetate (Molecular Probe, OR) in M199 medium without FBS for 30 min at 37 ° C. The vascular endothelial cells were washed three times with M199 medium without FBS, and then placed in a parallel plate flow chamber and stimulated with light separated from a mercury lamp. The excitation wavelength is 488 nm, and NO-coupled DAF exhibits fluorescence at 515 nm. The fluorescence intensity was measured with a confocal laser microscope (Atto Bioscience, USA), and the brightness of the fluorescence was analyzed with Image-Pro Plus v4.5 software (Media Cybernetics, San Diego, CA, USA) Respectively.
도 6 및 도 7의 결과에서 볼 수 있듯이, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 무처리군 대비 500~1300%의 NO 생성 정도를 나타내었고, 일반홍삼 추출물은 100~200%의 NO 생성 정도를 나타내었다(동일한 농도비교 50~100ug/ml). 따라서, 본 발명에 의한 실시예 1의 인삼 열매 추출물은 홍삼 추출물에 비하여 월등히 우수한 혈관내피세포에서의 NO 생성능을 나타내었다. 실시예 1의 인삼 열매 추출물의 위와 같은 뛰어난 NO(산화질소) 생성능은 결국 모세혈관을 확장시키고 혈액순환을 촉진시킴으로써 피부에 영양분을 원활하게 공급하고 피부 노화를 억제시키며, 피부의 혈색을 개선시킬 수 있는 효능에 기여하게 된다.6 and 7, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention showed a NO production rate of 500 to 1300% compared to that of the non-treated group, and the extract of general red ginseng showed 100 to 200% NO (50 to 100 ug / ml of the same concentration). Thus, the ginseng fruit extract of Example 1 according to the present invention showed superior NO production ability in vascular endothelial cells as compared with the red ginseng extract. The excellent NO (nitric oxide) production ability of the ginseng fruit extract of Example 1 can expand the capillary blood vessels and promote blood circulation, thereby smoothly supplying nutrients to the skin, suppressing skin aging, and improving skin color Contributing to the efficacy.
2) 인체 피부(얼굴)의 혈색 개선 효과 2) Improvement of color of human skin (face)
본 발명의 인삼 열매 추출물을 함유하는 조성물에 대하여 피부에서의 혈액순환 촉진 효과를 평가하기 위하여, LDPI(Laser Doppler Perfusion Imager)를 이용하여 피부에서의 혈액순환 정도를 측정하였다. LDPI는 피부에서의 혈액순환을 측정하는 기기로 널리 알려져 있고 현재도 사용되고 있는 기기로서, 피부의 모세혈관에서 혈액의 속도 및 양뿐만 아니라 소동맥과 소정맥에서의 흐름까지 측정해 낼 수 있는 매우 민감한 기기이다.In order to evaluate the effect of accelerating the blood circulation in the skin of the composition containing the fruit extract of the present invention, the degree of blood circulation in the skin was measured using LDPI (Laser Doppler Perfusion Imager). LDPI is a widely used and widely used device for measuring blood circulation in the skin. It is a highly sensitive device that can measure not only the velocity and quantity of blood in the capillaries of the skin but also the flow in the small arteries and the parenchyma .
항온항습실에서 얼굴을 비누로 수세한 후 30분간 적응시키고, LDPI와 피부온도 측정기구인 IR(Infrad) 카메라를 이용하여 초기값을 측정하였다. 실험에 참여한 인원은 평소 손발이 차가운 여성 20명으로, LDPI로 이마 아래 부분의 초기 혈류량을 측정하였고, IR 카메라를 이용하여 이마, 눈밑 및 뺨의 피부 온도 초기값을 측정하였다. The face was soaked with soap and allowed to adjust for 30 minutes. The initial value was measured using an IR (Infrad) camera with LDPI and a skin temperature measuring instrument. The initial blood flow in the lower part of the forehead was measured by LDPI and the initial temperature of the forehead, under the eyes and cheeks was measured using an IR camera.
실시예 2를 1주일 동안 피시험자들에게 사용하게 한 후 혈류량과 피부 온도를 초기 측정값과 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 24 및 표 25에 나타내었다.The blood flow and skin temperature were compared with initial measurements after using Example 2 for a week, and the results are shown in Tables 24 and 25 below.
상기와 같이, 본 발명에 의한 인삼 열매 추출물을 함유한 실시예 2를 사용한 결과, 피시험자들의 얼굴에서 말초혈액순환 개선 효과로 인하여 혈색이 개선되는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 궁극적으로 본 발명에 의한 인삼 열매 추출물을 함유하는 경우 피부의 영양분을 효과적으로 전달하고 피부 노화를 억제하며 지연시키는데 기여할 수 있음을 시사한다.As described above, as a result of using the Example 2 containing the extract of the ginseng fruit according to the present invention, it was confirmed that the blood color was improved due to the peripheral blood circulation improving effect on the faces of the subjects, This suggests that when the fruit extract contains the nutrients of the skin, it can contribute to inhibiting and delaying the aging of the skin.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)[Formulation Example 1] Softening lotion (skin lotion)
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)[Formulation Example 2] Nutritional lotion (Milk lotion)
[제형예 3] 마사지크림[Formulation Example 3] Massage cream
[제형예 4] 팩[Formulation Example 4] Pack
도 1은 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 비교예 1의 인삼 추출물의 진세노사이드 성분을 분석한 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing ginsenoside components of the ginseng fruit extract of Example 1 and the ginseng extract of Comparative Example 1. FIG.
도 2는 시험물질의 활성산소 제거 활성을 보여주는 그래프이다.Fig. 2 is a graph showing the active oxygen scavenging activity of the test substance.
도 3은 실시예 1의 인삼 열매 추출물의 콜라겐 생성량을 측정한 그래프이다.FIG. 3 is a graph showing the amount of collagen produced in the ginseng fruit extract of Example 1. FIG.
도 4는 실시예 1의 인삼 열매 추출물의 MMP-1 생합성 저해 효과를 측정한 그래프이다.4 is a graph showing the inhibitory effect of MMP-1 on the biosynthesis of ginseng fruit extract of Example 1. Fig.
도 5는 실시예 1의 인삼 열매 추출물과 홍삼 추출물의 일산화질소 저해 효과를 비교한 그래프이다.FIG. 5 is a graph comparing the nitrogen monoxide inhibitory effects of the ginseng fruit extract and the red ginseng extract of Example 1. FIG.
도 6은 실시예 1의 인삼 열매 추출물에 의한 NO 생성량을 보여주는 그래프이다.6 is a graph showing the amount of NO produced by the ginseng fruit extract of Example 1. Fig.
도 7은 홍삼 추출물에 의한 NO 생성량을 보여주는 그래프이다.FIG. 7 is a graph showing the amount of NO produced by red ginseng extract. FIG.
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