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KR100846676B1 - 효소적 방법에 의한 광학활성 2-할로-2-(엔-치환된페닐)아세트산 에스테르와 2-할로-2-(엔-치환된페닐)아세트산의 제조 방법 - Google Patents

효소적 방법에 의한 광학활성 2-할로-2-(엔-치환된페닐)아세트산 에스테르와 2-할로-2-(엔-치환된페닐)아세트산의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르(2-halo-2-(n-substituted phenyl)acetic acid ester)로부터 주요 키랄 중간체로 사용되는 일반식(2)로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 일반식(3)으로 표시되는 산(2-halo-2-(n-substituted phenyl)acetic acid)을 제조하는 방법에 관한 것이다. 좀 더 상세하게는 수용액상 또는 용매를 포함하는 수용액상에서 반응물인 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르를 가수분해 효소 또는 이를 포함하는 균주를 사용하여 입체선택적으로 가수분해하여 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 기존에 보고된 바 없는 새로운 공정으로 광학순도가 높고 생성물의 제조 및 분리가 용이하여 실제 공정에 유용할 것으로 판단된다.
[반응식 1]
Figure 712008000110011-pat00001
(상기 화합물에서 치환체 X1 은 할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이고 치환체 X2는 n=2, 3 또는 4의 n-할로겐 원자(F, Cl, Br, I), n-OH, n-OCH3, n-CH3 이다. 치환체 R은 탄소수 1 내지 8의 알킬기 또는 탄소수 2 내지 8의 알케닐기, 벤질기로부터 선택되어진다.)
2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르, 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산, 리파제, 광학활성, 가수분해 반응, 2-브로모-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르, 2-클로로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르, 2-브로모-2-(n-치환된 페닐)아세트산, 2-클로로-2-(n-치환된 페닐)아세트산

Description

효소적 방법에 의한 광학활성 2-할로-2-(엔-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 2-할로-2-(엔-치환된 페닐)아세트산의 제조 방법{The method of making optically active 2-halo-2-(n-substituted phenyl)acetic acid esters and 2-halo-2-(n-substituted phenyl)acetic acids by enzymatic method}
본 발명은 효소 또는 미생물에 의한 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 이의 산의 제조 방법에 관한 것이다. 좀 더 상세하게는 가수분해 효소 또는 가수분해 효소 생산능을 갖는 미생물을 이용하여 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르를 일반식(2)로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 일반식(3)으로 표시되는 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산으로 가수분해 하는 방법에 관한 것이다.
Figure 112006029761027-pat00002
(상기 화합물에서 치환체 X1 은 할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이고 치환체 X2는 n=2, 3또는 4의 n-할로겐 원자(F, Cl, Br, I), n-OH, n-OCH3, n-CH3 이다. 치환체 R은 치환되거나 치환되지 않은 탄소수 1 내지 8의 알킬기 또는 탄소수 2 내지 8의 알케닐기, 벤질기로부터 선택되어진다.)
상기에서 언급한 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르는 활용범위가 넓은 주요 키랄 의약중간체로서 진통제(analgesic, J. Med. Chem., 1981, 24, 481-490)와 혈압조절제로 쓰이는 비펩타이드 안지오텐신 Ⅱ-수용기 길항제(non-peptide angiotensin Ⅱ-receptor antagonist)의 합성에 쓰이는 것으로 알려져있다(J. Med. Chem., 1993, 36, 3738-3742; J. Med. Chem., 1993, 36, 4239-4249).
본 발명에서 다루고자 하는 물질과 비슷한 광학활성 2-할로-2-페닐아세트산의 경우 라세믹 화합물을 부탄올이 포함된 유기용매상에서 리파제로 알코올 반응하여 제조하는 경우가 보고된 바 있다. 2-브로모-2-페닐아세트산 또는 2-클로로-2-페 닐아세트산을 기질로 하여 전환율이 각각 20 %, 8 % 일 때 광학활성 99 ee%의 (R)-2-브로모-2-페닐아세트산과 (R)-2-클로로-2-페닐아세트산을 제조할 수 있으나 전환율이 낮을 뿐 아니라 반응시간이 길다(J. Am. Chem. Soc., 1985, 107, 7072-7076).
본 발명과 관련된 화합물에 대한 제조 방법으로는 2-브로모-토릴아세트산 에스테르를 옥탄올상에서 리파제를 사용하여 트랜스에스테르반응하여 (S)-2-브로모-토릴아세트산 에스테르를 제조한 경우가 있다(Tetrahedron:Asymmetry, 2004, 15, 3539-3543). Y. lipolytica와 R. miehei 유래 리파제를 사용하여 (S)-옥틸 에스테르, B. cepacia 유래 리파제로부터는 (R)-옥틸 에스테르를 제조하였으나 이 방법으로 얻을 수 있는 최대 광학순도는 93 ee%에 그치고, 반응 후 생성물의 분리가 어렵다.
광학활성 2-할로-2-(n-할로페닐)아세트산 에스테르와 이의 산의 제조와 관련된 종래 기술은 광학활성 아랄킬아민(aralkylamine)와 라세믹 2-할로-(n-할로페닐)아세트산을 반응하여 광학활성 2-할로-(n-할로페닐)아세트산과 그 유도체를 제조한 경우만 보고되고 있다(일본특허 0204791).
이에 본 발명자들은 기존의 보고된 제조 방법 대신에 반응이 간단하며, 생성물의 회수가 쉬운 공정을 개발하고자 하였다. 뿐만아니라 기존에 보고된 방법들의 경우 광학순도가 낮은 단점을 갖기 때문에, 상기 제조 방법들의 반응물질과는 다른 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르를 출발물질로하여 광학순도가 높은 키 랄 의약중간체를 제조하고자 하였다. 본 발명에 의한 제조 방법은 가수분해 효소 또는 이를 포함하는 균주를 이용하여 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르를 가수분해 반응하여 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산을 제조하는 방법으로 현재까지 보고된 바가 없다. 또한 본 발명에 의해 제조되는 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르 및 그의 산은 분리 및 회수가 쉽기 때문에 실제 공정에 유리하게 이용될 수 있다.
이하 본 발명을 좀 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다. 전술한 바와 같이 본 발명은 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르로부터 가수분해 효소 또는 이를 포함하는 균주를 이용하여 입체선택적으로 가수분해하여 일반식(2)로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르와 일반식(3)으로 표시되는 이의 산을 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한 반응을 통해 얻어진 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르는 수산화 나트륨 등을 사용하여 가수분해하면 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산으로 전환할 수 있다.
본 발명에 사용되는 기질은 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르, 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르, 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
Figure 112006029761027-pat00003
1a : X1 = Br, X2 = 2-Cl, R = CH3
1b : X1 = Br, X2 = 2-Cl, R = CH2CH3
1c : X1 = Br, X2 = 2-Cl, R = CH2CH2CH2CH3
1d : X1 = Cl, X2 = 2-Cl, R = CH3
1e : X1 = Cl, X2 = 2-Cl, R = CH2CH3
1f : X1 = Cl, X2 = 2-Cl, R = CH2CH2CH2CH3
1g : X1 = Br, X2 = 4-Cl, R = CH3
1h : X1 = Br, X2 = 4-Cl, R = CH2CH3
상기 화합물에서 치환체 X1 은 할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이고 치환체 X2는 n=2, 3또는 4의 n-할로겐 원자(F, Cl, Br, I), n-OH, n-OCH3, n-CH3 이다. 치환체 R은 탄소수 1 내지 8의 알킬기 또는 탄소수 2 내지 8의 알케닐기, 벤질기로부터 선택되어진다.
본 발명에 사용되는 효소는 CAL A, CAL B(노보자임사), AY, AYS, F-AP15, M(아마노사) 또는 이들 가수분해 효소를 포함하는 균주가 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 반응에 사용되는 반응물 및 생성물들은 다음과 같은 조건에서 분석하였다.
라세믹 2-브로모 에스테르와 2-클로로 에스테르는 각각 BP-1(SGE 사) 와 HP-FFAP(Agilent 사)가 장착된 기체크로마토그래피(도남인스트루먼트사, 모델 DS6200)를 이용하여 분석하였다. 100 ℃에서 5 분간 가열 후 220 ℃까지 분당 20 ℃씩 올려주고, 220 ℃에서 10 분간 유지하였으며, 담체로는 헬륨기체를 사용하였고 컬럼 헤드 압력을 6 psi로 유지하면서 220 ℃에서 FID를 사용하여 검출하였다.
광학활성 2-할로-2-할로페닐아세트산 에스테르는 키랄 컬럼 OJ-H가 장착된 HPLC(Lab Aliance사, 모델 201)을 사용하여 분석하였다. 헥산과 이소프로파놀을 90:10의 비율로 혼합하여 분당 0.7 ml로 흘려주었고, UV 흡광도는 220 nm로 하여 분석하였다.
이에 실시예를 통하여 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명하지만, 하기 예에 본 발명의 범주가 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산의 제조
2-클로로벤즈알데히드 10 g과 브로모포름 6.8 ml을 1,2-디메톡시 에탄 7 ml에 희석한 후, -5 ℃온도에서 준비된 물 18.7 ml과 수산화 칼륨 8 g, 1,2-디메톡시 에탄 7 ml이 혼합액에 천천히 적하하였다. 3 시간 동안 -5 ℃에서 교반한 후 물 70 ml을 첨가하여 천천히 온도 10 ℃까지 올리고 10 ℃에서 10 시간 교반하였다. 반응물은 디클로로메탄을 이용해서 추출한 뒤, 수층을 염산을 이용하여 산성화 시킨 후 이소프로필 에스테르로 추출하여 감압증류하고 톨루엔으로 재결정하여 7.76 g(수율 40 %)을 얻었다.
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 5.94(s, 1H), 7.32(m, 2H), 7.39(m, 1H), 7.77(m, 1H), 10.94(br, 1H)
실시예 2. 라세믹 2-브로모-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르(1a, 1b, 1c)의 제조
실시예 1에서 제조한 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산을 황산이 포함된 메탄올에 넣고 70 ℃에서 3 시간 반응하였다. 중화 후 유기층으로 추출한 뒤 감압증류를 통해 용매를 제거하고 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르를 얻었다. 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르와 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 부틸 에스테르는 메탄올 대신 각각 에탄올과 부탄올을 사용하여 상기의 조건하에서 제조하였다. 이에 따라 제조된 생성물은 핵자기공명(Burker사, 모델 DRX300)으로 확인하였으며 분석 결과는 다음과 같다.
2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르(1a) :
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ(ppm) = 3.82(s 1H), 5.92(s, 1H), 7.31(m, 2H), 7.39(m,1H), 7.77(dd, 1H)
2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르(1b) :
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ(ppm) = 1.13(t, 3H), 4.27(m, 2H), 5.90(s, 1H), 7.31(m, 2H), 7.40(dd, 1H), 7.78(dd, 1H)
2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 부틸 에스테르(1c) :
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ(ppm) = 0.92(t, 3H), 1.27(m, 2H), 1.64(m, 2H), 4.21m, 2H), 5.91(m, 1H), 7.30(m, 2H), 7.39(dd, 1H), 7.79(dd, 1H)
실시예 3. 라세믹 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르(1d, 1e, 1f)의 제조
2-클로로만델릭산 3 g을 메탄올 40 ml에 녹여서 황산 88 ㎕를 넣고 80 ℃에서 3 시간 가열, 교반하였다. 용매를 제거하고 에틸 아세테이트와 물을 첨가한 후 수산화 나트륨을 넣어 중화시키고 추출한 후 감압증류하였다. 이로부터 얻어진 생성물에 설포닐클로라이드 2.1 ml을 넣고 65 ℃로 가열 교반 12 시간한 후 용매를 제거하고 에틸 아세테이트와 물을 넣어 3회 세척하여 주면 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르를 제조할 수 있다. 또한 상기에서 사용한 메탄올 대신 에탄올과 부탄올을 사용하여 각각 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르(수율 96 %)와 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 부틸 에스테르를 제조할 수 있다.
2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르(1d):
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 3.79(s, 1H), 5.88(s, 1H), 7.31(m,2H), 7.40(m,1H), 7.63(m, 1H)
2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르(1e):
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 1.26(t, 3H, J=14.1 Hz), 4.25(m, 1H), 5.86(s, 1H), 7.32(m, 2H), 7.40(m, 1H), 7.63(m, 1H)
2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 부틸 에스테르(1f) :
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 0.88(t, 3H, J=14.4 Hz), 1.31(m, 2H), 1.61(m, 2H), 4.19(t, 2H, J=13.5 Hz), 5.87(s, 1H), 7.32(m, 2H), 7.40(m, 1H), 7.63(m, 1H)
실시예 4. 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산의 제조
실시예 1에서 반응물로 사용한 2-클로로벤즈알데히드 대신에 4-클로로벤즈알데히드를 사용하여 같은 조건하에서 합성한 후 실리카겔 크로마토그래피를 거쳐 5.7 g(수율 32 %)의 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산을 제조하였다.
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 5.24(s, 1H), 7.35-7.98(m, 4H)
실시예 5. 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르의 제조
실시예 4에서 제조한 라세믹 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산을 황산이 포함된 메탄올에 넣고 70 ℃에서 3 시간 반응하고 중화 후 유기층으로 추출하여 라세믹 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르를 얻었다. 라세믹 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르는 메탄올 대신 에탄올을 사용하여 같은 방법으로 제조하였다.
2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 메틸 에스테르(1g)
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 3.79)s, 3H), 5.32(s, 1H), 7.34(m, 2H), 7.49(m, 2H)
2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 에틸 에스테르(1h)
1H-NMR(300MHz) δ(ppm) = 1.27(t, 3H), 4.24(m, 2H), 5.30(s, 1H), 7.34(m, 2H), 7.48(m, 2H)
실시예 6-13. 가수 분해 반응에 의한 광학활성 2-브로모-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르의 제조
0.1 M 인산완충용액(potassium phosphate buffer, pH 7.0) 5 ml이 들어있는 바이알에 실시예 2의 방법으로 생성된 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르를 1 %(w/v)가 되도록 첨가하고 표 1에 기재된 효소 1 %(w/v)를 사용하여 30 ℃에서 반응을 수행하였다. 일정 시간 반응 후 아세트산 에틸로 추출하여 생성물을 상기 분석방법에 따라 분석하였고 그 결과를 표 1에 나타내었다.
실시예 기질 리파제 효소 반응시간(hr) 전환율(%) 에스테르 광학순도(ee%)
6 1a CAL A 9.5 86.0 >99
7 1b AY 87 89.6 >99
8 1b AYS 87 73.9 96.2
9 1b CAL A 48 96.1 >99
10 1b F-AP15 24 75.1 >99
11 1c AY 48 62.8 >99
12 1c AYS 72 84.3 >99
13 1c F-AP15 11 81.2 99.2
실시예 14-21. 가수 분해 반응에 의한 광학활성 2-클로로-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르의 제조
실시예 6에서 반응물로 사용된 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르 대신에 실시예 3의 방법으로 합성한 2-클로로-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르(1d, 1e, 1f)를 사용하여 반응하였고 그 결과는 다음과 같다.
실시예 기질 리파제 효소 반응시간(hr) 전환율(%) 에스테르 광학순도(ee%)
14 1d F-AP15 45 75.7 >99
15 1d M 48 89.5 >99
16 1e F-AP15 40 62.6 >99
17 1e M 30 79.7 >99
18 1f AY 35 73.8 >99
19 1f AYS 35 71.7 >99
20 1f F-AP15 48 79.1 >99
21 1f M 21.5 93.4 >99
실시예 22-30. 가수분해 반응에 의한 광학활성 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르의 제조
실시예 6에서 반응물로 사용된 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르 대신에 실시예 5의 방법으로 합성한 2-브로모-2-(4-클로로페닐) 아세트산 알킬 에스테르(1g, 1h)를 사용하여 반응하였고 그 결과는 다음과 같다.
실시예 기질 리파제 효소 반응시간(hr) 전환율(%) 에스테르 광학순도(ee%)
22 1g AY 3 60.0 >99
23 1g AYS 3 72.6 >99
24 1g CAL A 12 86.8 >99
25 1g F-AP15 9 89.0 >99
26 1g M 6 94.0 >99
27 1h AY 6.5 72.2 >99
28 1h AYS 3 59.6 >99
29 1h F-AP15 6.5 75.8 >99
30 1h M 5 88.5 >99
상기 실시예에서 알 수 있는 것과 같이, 본 발명에 따른 가수분해 반응은 반 응이 용이하고, 높은 광학순도의 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산과 이의 에스테르를 제조할 수 있다. 또한 반응 후 각각의 광학활성 에스테르와 이의 광학활성 산의 회수가 용이하여 산업적으로 대량생산에 적절한 제조 공정이다.

Claims (6)

  1. 하기 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산 에스테르를 캔디다 앤타르크티카(Candida antarctica), 캔디다 루고사(Candida rugosa), 뮤코 자바니쿠스(Mucor javanicus), 또는 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)로부터 선택되는 미생물 유래의 리파제, 또는 캔디다 앤타르크티카, 캔디다 루고사, 뮤코 자바니쿠스, 또는 리조푸스 오리자에로부터 선택되는 리파제 생성능을 갖는 미생물을 이용하여 가수분해시키는 것을 특징으로하는 일반식(2)로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산 에스테르와 일반식(3)으로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산의 제조방법.
    [반응식 1]
    Figure 112008018536229-pat00008
    (상기 화합물에서 치환체 X1은 할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이고 치환체 X2는 n=2, 3 또는 4의 n-할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이다. 치환체 R은 탄소수 1 내지 8의 알킬기 또는 탄소수 2 내지 8의 알케닐기, 벤질기로부터 선택되어진다.)
  2. 청구항 제1항의 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산 에스테르를 캔디다 앤타르크티카(Candida antarctica), 캔디다 루고사(Candida rugosa), 또는 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)로부터 선택되는 미생물 유래의 리파제, 또는 캔디다 앤타르크티카, 캔디다 루고사, 뮤코 자바니쿠스, 또는 리조푸스 오리자에로부터 선택되는 리파제 생성능을 갖는 미생물을 이용하여 가수분해시키는 것을 특징으로하는 일반식(2)로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산 에스테르와 일반식(3)으로 표시되는 광학활성 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산의 제조방법. (상기 화합물에서 치환체 X1 은 할로겐 원자(F, Cl, Br, I)이고 치환체 X2는 n=2, 3또는 4의 n-OH, n-OCH3 또는 n-CH3 이다. 치환체 R은 탄소수 1 내지 8의 알킬기 또는 탄소수 2 내지 8의 알케닐기, 벤질기로부터 선택되어진다.)
  3. 청구항 제1항의 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르에서 치환체 X1이 Br이고 X2가 2-Cl인 라세믹 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르로부터 캔디다 앤타르크티카(Candida antarctica), 캔디다 루고사(Candida rugosa), 뮤코 자바니쿠스(Mucor javanicus), 또는 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)로부터 선택되는 미생물 유래의 리파제, 또는 캔디다 앤타르크티카, 캔디다 루고사, 뮤코 자바니쿠스, 또는 리조푸스 오리자에로부터 선택되는 리파제 생성능을 갖는 미생물을 이용하여 가수분해 반응하여 광학활성 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르와 광학활성 2-브로모-2-(2-클로로페닐)아세트산의 제조방법.
  4. 청구항 제1항의 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐)아세트산 에스테르에서 치환체 X1이 Cl이고 X2가 2-Cl인 라세믹 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르로부터 캔디다 앤타르크티카(Candida antarctica), 캔디다 루고사(Candida rugosa), 뮤코 자바니쿠스(Mucor javanicus), 또는 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)로부터 선택되는 미생물 유래의 리파제, 또는 캔디다 앤타르크티카, 캔디다 루고사, 뮤코 자바니쿠스, 또는 리조푸스 오리자에로부터 선택되는 리파제 생성능을 갖는 미생물을 이용하여 가수분해 반응하여 광학활성 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르와 광학활성 2-클로로-2-(2-클로로페닐)아세트산의 제조방법.
  5. 청구항 제1항의 [반응식 1]에서 일반식(1)로 표시되는 라세믹 2-할로-2-(n-치환된 페닐) 아세트산 에스테르에서 치환체 X1이 Br이고 X2가 4-Cl인 라세믹 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르로부터 캔디다 앤타르크티카(Candida antarctica), 캔디다 루고사(Candida rugosa), 뮤코 자바니쿠스(Mucor javanicus), 또는 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae)로부터 선택되는 미생물 유래의 리파제, 또는 캔디다 앤타르크티카, 캔디다 루고사, 뮤코 자바니쿠스, 또는 리조푸스 오리자에로부터 선택되는 리파제 생성능을 갖는 미생물을 이용하여 가수분해 반응하여 광학활성 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산 알킬 에스테르와 광학활성 2-브로모-2-(4-클로로페닐)아세트산의 제조방법.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,
    사용되는 효소는 리파제, 에스테라제, 프로테아제 또는 이를 포함하는 균주를 이용함을 특징으로 하는 제조방법.
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