JPS6110600A - 立体配座的に制限されたチモペンチン様化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な免＃１１ｐｌ　節（ｉｍｍｕｎｏｍｏ
ｄｕｌａｔｏｒｙ）ペプチド、特にベブチドチモベンチ
ンに同様の立体配座的に制限された化合物に関する。

米国特許１４，１９０，６４６号及び第４，２６１．８
８６号は、米国特許＠４，００２，７４０号及び第４，
０７７．９４９号に記述されているチモボイエチン（ｔ
ｂｙ論ｏｐｏｉｅｔｉｎ）として公知の＆［ポリペプチ
ドに類似の種々のベンタペプチｒを開示している。チモ
ポイエチンはＴ細胞の分化を選択的に射像する。シーケ
ンスＨ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＬＩＡＬ−ＴＹＲ−
ＯＨを有する上記ｔｔＳ６４６号特許に開示されるペン
タペプチドはチモポイエチンペンタペプナド又は１チモ
ペンナン（ｔｈｙｗｏｐ−ｅｎｔｉｎ）Ｊとして公知で
ある。これらのペプチドのあるものの生駒学的活性は、
エム・イー・ウニクラ−（Ｍ　−Ｅ　−Ｗｅｋｓｌｅｒ
）ら、ジエイ・イクスプ・メト（Ｊ−Ｅｘｐ−、Ｍｅｄ
）、１４Ｂ：９９Ｇ−１００６（１９７８）に記述され
ている。上記米国特許及び論文１土本明細書に参考文献
として引用される。

米国特許第４，３６Ｌ６７３号及び第４，４２０゜４２
４号も、チモボイエチンに類似の活性を有することが確
かめられた種々のペプチドを開示している。これらの開
示されたペプチドはすべてが線状である。

線状ペプチドとその環状形との藺の機能的関係は、良く
理解されておらず、また確かにいずれの共合にでも予見
できない１例えｇｉ状オクタペプチドであるアンギオテ
ンシン■は高昇圧活性を示すが、−力対応する環状オク
タペプチドは殆どそのような活性を示さない、他の例も
知られている。

溶液中のチモボイユチンのプロトンｎ１１ｒの研究に基
づくと、本発明の環状ペプチドがチモボイエチン様の活
性を有することも子側されな＆％、＊照、例えばエヌ・
アール・クリシュナ（Ｎ−Ｒ−Ｋｒｉｓ−ｈｎａ）ら、
バイオケミストリー（Ｂ　ｉｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙ）、
１９．５５５７（１９８０）。

ある種の酵￥ｉ、耐性の免役調節ペプチドは、本明細書
に＃Ｐ考文献として引用される１９８３年１１月１８日
付けの関連特許Ｉ！第５５３，２８１号に開示されてい
る。

チモポイニチンは、動物の免ｆｉ系に調節効果を示すこ
とが示されており、従って免疫Ｗｉ能における、その欠
損又は過剰として明らかなような欠陥を含む柄入の処置
に有用である。参照例えばアウドヒャ・ティー（Ａｕｄ
ｈｙａ、Ｔ、　）及びゴールドスティン・シー（Ｇ　ｏ
ｌｄｓｔｅｉｎ、　Ｔ　、　）、インド・ジエイ・ペプ
ト・プロティン・レス（Ｉｎｋ、　　Ｊ、　ＰｅｐＬ、
　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　）、２２．５６８−５７
２（１９８３）；ウィツチ（Ａ　１ｕｔｉ）ら、ランセ
ト（Ｌａｎｃｅｔ）　１　。

５５１〜５５５（１９８３）；及びレビンスキー（Ｖ　
ｅｖｉｎｓｋｉ）ら、１ブリマリ−・イミエノデフイシ
エンシー・テ°イジーノーズ（Ｐ　ｒｉｍａｒｙ　　Ｉ
　ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｅｉｅｎｃｙ　Ｄ　１ｓｅａｓｅ
ｓ）”　、ウェッジウッド（Ｗｅｄｇｅｗｏ。

ｄ）、ローゼン（Ｒｏｓｅｎ）、及びポール（Ｐａｕｌ
）編、Ｙ影、２７３〜２７６（１９８３）、これらの論
文及び上述の特許と論文は、本発明に含まれる他の背景
の物質及び生物学的過程に対して参照することができる
。

本発明は、鴬（ことにチモボイエチン様活性を有し、従
って免疫欠陥の処置に重要な利点を提供する立体配座的
に制限された環状ペプチド組成物を提供する。

本発明は、式 〔式中、ＲはＨ１低赦フルキル、ホルミル又は低級フル
カッイルであり； ＷはＬＹＳ％ＰＲＯ，デヒドロ−ＰＲＯ，又はＡＩＢで
あり； ＺはＴＹＲ，ＴＹＲ−ＧＬＹ％Ｐ　ＨＥ　、又はＰＨＥ
−ＧＬＹであり； ＺｌはＴＹＲ又はＰＨＥであり； Ｒ１はＯＨ又はＮＲ”Ｒコであり；そしてＲ２及ＶＲ’
はそれぞれ独立にＨ又は低級アルキルから選択される〕 を有する新規なペプチドに関する。

今回驚くことに、本主題のペプチドはタモボイエチン様
活性を有することが発見された。

ＷがＰＲＯ，デヒドロＰＲＯ１又はＡＩＢである本主題
のペプチドも、上記参考文献の特許顧に開示されている
ように、酵素による分解に驚くほどの耐性を有する。

上述したように、本発明はチモボイエチン様の活性を有
する新規なペプチド、これらのペプチドを含有する治療
用組成物、及びその使用法に関する。

最１広い範囲において、本発明は式 〔式中、Ｒ％Ｗ％Ｚ及びＲ’は上記の通りである〕 を有するペプチド或いはその製薬学的に許容しうる酸又
は塩基付加塩を提供する０式（１）のＡＲＧと２間及び
式（１［）のＬＹＳとＡＳＰ間の線はアミド結合を示す
。

本発明の好適なペプチ°ドはＷがＬＹＳの式（１）のも
のである、更に好適なペプチドは、Ｒが水系、Ｒ′がＯ
Ｈ，ＷがＬＹＳ、ＺがＴＹＲ又はＴＹＲ−ＧＬＹ、及び
ｚ’がＴＹＲである式Ｉ及び■のものである。特に好適
なペプチドは、ンクロー（ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−Ｖ
ＡＬ−ＴＹＲ）、ペプチド１；シクロ−＜ＡＲＧ−ＬＹ
Ｓ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＴＹＲ−ＧＬＹ）、ペプチド２；
及びＨ−ＡＲＧ　　シフｏ−（ＬＹＳ−ＡＳＰ）−ＶＡ
Ｌ−ＴＹＲ−ＯＨ１ペプチド４である。

本明細書で用いる如き１低級アルキル」とは炭素数１〜
６の分岐鎖及び直鎖飽和炭化水素基例えばメチル、エチ
ル、プロピル、インプロピル、ペンチル、゛ヘキシルな
どを含み、一方［低級アルカ１Ｊ Ｉ イルＪとは低級アルキル−０Ｃ−を意味する。

これらのペプチドと塩を生成しうる酸としては、有機酸
例えば塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン
酸、硫酸、燐酸など、そして有機酸例えばぎ酸、酢酸、
プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、ンユ
ウ醗、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、７マル酸、ア
ンスラニル酸、桂皮酸、ナフタレンスルホン鍛、スルフ
ァニル酸すどが言及しうる。

これらのペプチドと塩を生成しうる塩基としては、無機
塩基例えば水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水
酸化カリウムなど、そして有機塩基例えばモノ、ジ及び
）ＩＪフル今ル及Ｖアリールアミン（例えばトリエチル
アミン、ジイソプロピルアミン、メチルアミン、シフチ
ルアミンなど）及び随時置換されたエタノールアミン（
例えばエタノールアミン、ノエタノールアミンなど）が
言及しうる。

本明細書を通して、ペプチド及びその製造に使用される
ある物質のアミン酸成分はｌｆｔ！２な目的のために略
号でボされる。この略号は次の通りである： ＬＬと１　　　　　　　　　　　　覧−１Ｌ−アルギニ
ン　　　　　　　　　ＡＲＧＬ−７スパルチンｗｌ　　
　　　　　ＡＳＰグリシン　　　　　　　　　　　　Ｇ
ＬＹＬ−リシン　　　　　　　　　　　　ＬＹＳａ−メ
チルアラニン　　　　　　　ＡＩＢＬ　−７ｘエルアラ
ニン　　　　　　ＰＨＥＬ−プロリン　　　　　　　　
　　　ＰＲＯデヒドロプロリン　　　　　　デヒドロＰ
ＲＯＬ−チロシン　　　　　　　　　　　ＴＹＲＬ−バ
リン　　　　　　　　　　　　Ｖ　Ａ　Ｌ本発明のペプ
チドは一般に公知の方法に従って製造でかる。簡便には
、ペプチドはノリフイード（Ｍ　ｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）
、ジャクス（ＪＡＣ８）、８５．２１４９〜２１５４（
１９６３）によって最初に記述された固相合成法に従っ
て介威しうる。そのような方法は上述した過去の特許の
あるものにｍ１示されている。他の技術は、例えばエム
・ボタンスズキ−（Ｍ−Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）ら、ペプ
チド・シンセシス（Ｐ　ｅｐｔｉｄｅ　Ｓ　ｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ）、ジ鰭ン・ウィリー・アンド・サンズ（Ｊ　ｏ
ｈｎ　Ｗ　１ｌｅｙ　＆　Ｓ　ｏｎｓ）、第２版、１９
７６、並びに同業者には公知の他の参考文献に見ること
ができる。そのような合成に有用な適当な保ａｉ及び略
号は、上述の単行本、並びにノエイ・エフ・グアリュー
・マクオーミー（Ｊ　−Ｆ・Ｗ−ＭｃＯｍｉｅ＞、プロ
テクテイブ・グループス・イン−オーガニック・ケミス
トリー（Ｐ　ｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧ　ｒｏｕｐｓ　ｉｎ
　ＯｒＢａｎｉｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、プレナム０
プレス（Ｐ　ｌｅｎｕｍ　Ｐ　ｒｅｓｓ）、ニューヨー
ク（ＮｅｗＹｏｒｋ）、１９７３、に見出されるであろ
う。これらの単行本の双方は参考文献として、本明細書
に引用される。ここに使用される普通の保護基は、ｔ−
ブチロ幹シカルボ；ｌしくＢＯＣ）、ベンジル（ＢＺＬ
）、ｔ−７ミｏｄｉジカルボニル（ＡＯＣ）、）シル（
’ｒＯ３）、ｏ−ブロムフェニルメトキシカルボニル（
Ｂ１２）、２，６−シフロルベンノル（１３ＺＬＣ１，
）、及びフェニルメトキシカルボニル（Ｚ、ＸはＣＢＺ
）である。

本発明のペプチドは、先に参照した米国特許及び論文に
記述されているように、チモポイエチンに類似の生物学
的活性を示すことが発見された。

この生物学的活性は、人間のＴｍ胞腺における環状ＧＭ
Ｐ生産の誘導を、ナモボイエチンと比較して測定する分
析法によって示される。この分析において、試験ペプチ
ドらよるｃ−Ｇ　Ｍ　Ｐ生産の誘導は、試験ペプチドが
細胞のチモボイエチン受体部位に結会し且つチモボイエ
ナン様の生物学的活性を誘導する能力を示す。

本ペプチドの生物学的活性は、これらのペプチドの、チ
モポイエチンの活性部位に対する細胞膜受体への結合に
よっても示される。

本発明の製造に先立って、チモベンチン様活性を有する
そのような環状ペプチドを製造しうるであろうとは完全
に予想されなかった。上述したｎｍｒの研究の参考文献
は、Ｌ−アルギンのグアニジ７基及びＬ−アスパルチン
酸のβ−カルボキシレート基の闇の強い相互作用が、溶
液中のチモペンチンに刻する文体配座的安定化因子であ
り且つ生４＆Ｉ字的活性と関連することが示唆されたと
いうことを−殻に示している１本主題の化合物は、その
立体配座的に＆ＩＪ限それた性質のために、チモベンチ
ンによって示される好適な溶液での立体配座な想定する
ことができず、従ってこの相互作用を示すことがで外な
い、それ故にクリシェナの参考文献に基づくと、本主題
の化合物が、！＄失クりシ１すの場合におけるように、
チモペンチン様活性を示すとは予想されないであろう、
これ２二対して、クリシュナの参考文献に萩づく、Ｈ−
ＡＲＧ−ＬＹＳ二 が予想されるが、これは不活性であることがわかった。

本主題のペプチドは、その免疫１８節特性が故に、人間
及び動物の治療学的処置に有用である。その理由は、そ
れらがへモざイエチン１Ｉｌｔａにおける「Ｉンボボイ
エチン（Ｉｙｓｐｈｏｐｏｉｅｔｉｃ）幹細胞の、身体
の免疫応答を改善しうる胸腺由来のｍ胞（Ｔｍ胞）への
分化を誘導する能力を有するからである。結果として、
本主題のペプチドは多くの治療学的用途を有すると巧え
られる。

主に本化合物は胸腺の指示した機能のあるものを行う能
力を有するから、それらは種々の胸腺のｖｉ記及び免疫
の分野における適用性を有する。１つそのような用途は
、ノジ靜−ジ（ＤｉＧｅｏｒＨｅ）症候群、即ち胸腺の
先天的な不存在による状態の処置である１本主題のペプ
チドの、ツノラージ４を候群に悩む者への投与はこの欠
損を兜服する。免疫学的技術に島達する者は、適当な投
与法（好ましくは非経口）を容易に決定することがでさ
、またノノターノ症候群の処置に対する本主題のペプチ
ドの有効賃を決定することがでトる１本ペプチドはチモ
ベ／チンよりも能力があるから、ｆ末法のペプチドより
も治療上有用である。

更にペプチドは、細胞免疫の治療学的刺激を増大させ又
はその助けとなり、従って慢性感染例えば薗又はミコプ
ラズマ感染、帥炎、ハシセン病、急性及び慢性及びウィ
ルス感染などの処置に有用であるという息で、身体の総
合的免疫を補助することに有用であると考えられる。

本主題の化合物は、細胞免疫が問題である、特に上述の
ジジＢ−ノ症候群におけるように免疫欠損の存在するよ
うないずれかの分野において有用であると一般に考えら
れる。即ち、均衡のとれていないＴ細胞とＢ細胞のため
に抗体の生産が過剰である場合、本ペプチドはＴ細胞の
生産を刺激することによってこの状態を正すことができ
る。かくしてそれらは損′ＷＩされた抗体が生産される
ある種の自己免疫病、例えば狼倚紅斑柄、リューマチ性
関節炎における治療学的用途が期待される。

本化合物は、その最も広い用途において、対象の人間又
は動物の免疫系を、その調節の必要に応じて調節するの
に有用である０本明細書で用いる如外、１窮節Ｊとは、
本化合物が免疫系を異常な病気の状態から正常な均衡の
とれた状態へ戻させるということを意味する。この調節
は免疫学的欠損（例えばノジ璽−ジ症候群）の補正に大
きな用途が見出だされるけれど、過剰な免疫学的活性の
状ｆｉ（例えば自己免疫病）の補正にも適用でトる。そ
れ故に本発明は、本化合物の１つを免疫調節的有効量で
投与することを含んでなる対象の免疫系を１４節の必要
に応じて調節するための方法、並びにこれらの方法を実
施するための製薬学的組成物を含む。

本発明は、対象（人間又は動＃）の相対的又は絶対的Ｔ
＃ｌ胞欠損に由来する状態を処置する際に、そのような
状態をもつ対象に治療学的有効量の式（１）又は（ＩＩ
）のペプチドを投与することを含んでなる上記の処置す
る方法を提供する。また本発明は、対象の胸腺の相対的
又は絶対的欠損に由来する状態の処置に際して、該対象
に治療学的有効量の式（１）又は（■）ｋペプチドを投
与することを含んでなる上記の処置をする方法を提供す
る１本明細書に用いる如き「治療学的有効量」とは、そ
れぞれＴＩ胞欠損或いは胸腺欠損に由来する状態を処置
するのに有効な短を意味する。更に本発明は、対象のリ
ンパ球幹細胞を誘導して胸腺に由来するリンパ球の特性
を発現させるために、効果的な誘導量の式（１）又は（
Ｉｔ）のペプチドを投与することを含んでなる該リンパ
球幹細胞の誘導法を提供する。

本発明の製薬学的組成物を製造するためＫＦｉ、式（１
）又＃−ｔ（６）のペプチド或いはその塩基又は酸付加
塩を活性成分として、通常の製桑学的混合法に従って製
薬学的担体と良く温合する。この担体は投与に望ましい
調製形、例えば舌下、直腸、８：Ａ１経口又は非経口に
依存して種々の形態をとることができる。経口投与形の
組成物を調製する場合には、普通の製薬学的媒体のいず
れか、例えば水、油、アルコール、風昧斉１、保存剤１
、着合剤などがε口液体ｖＩ４製剤（例えば懸濁液剤、
エリキサ−剤、及び溶液剤）の場合に、・或いヒ担体例
えば殿粉、糖、希釈剤、顆粒剤、状滑剤、結合剤及び崩
壊剤などが経口固体調製剤（例えば粉末剤、カプセル剤
及び錠剤）の場合に使用される。徐放形も使用できる。

錠剤及びカプセル１ｉ＋１Ｆｉ、その投与が容易なため
に、最も有利な経ロ投薬キ位形であり、この場合には固
体の！Ａ薬学的担体が明らかに使用される。所望により
錠剤は枠型的な技術により、糖で被へされていても、腸
溶性物質で被へ宴れていてもよい。

非経口用調製剤の場合、担体は普通無菌水を含んでなる
が、例えば溶解性を助けるために陵いは保存の目的で他
の成分も包含させうる。注射用懸濁液体も製造でき、こ
の場合適当な液体担体、懸濁剤が使用できる。

本ペプチドは一般に約１μｆ／体重ゆ以上の量で非経口
的に投与する場合に活性がある。ジジョージ症候群の処
置に対しては、ペプチドを約０．１〜約１０巧／体重ゆ
で非経口投与することができる。一般に同一範囲の投薬
量は、免疫欠損を処置すべき言及した他の症気又は状態
の処置に使用できる。それよシ多量（例えば約１０〜１
０００η／体重に９）は過剰力免疫活性を抑制するのに
有用でおる。

次の実施例は、本発明を例示するが、本発明を特に制限
することを意図しない。実施例及び明細書を通して部は
断らない限９重量によるものであシ、各実施例の表題の
ペプチドは式に続く括弧内の数で言及され；これらの数
は続〈実施例において各ペプチドを言及するために使用
される。

実施例１ ル（６０＊／）中（４−メトキシ）フェナシルブロマイ
ド（五７６Ｆ、１６ミリモル）及びＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｚｌ）（５，５７ｆ、１５ミリモル）の溶液に弗化カリ
ウム（２，Ｏｆ、３５ミリモル）を添加し、この混合物
を室温で３６時間攪拌した。固体を濾過によって除去し
た。酢酸エチル（１５０ｄ）及びＥ、０　（１５０ｔ／
）をＦ液に添加した。有機相を除去し、水性相を酢酸エ
チルｌＸ３０ｍ）で再抽出した。併せた有機相を水（２
ｘ１ｓｏ＊）。

飽和炭酸水素す）　ＩＪウム（３×１５０＃！／）及び
水（３Ｘ１５０ｗｊ）で洗浄し、硫酸す）　ＩＪウムで
乾燥した。乾燥剤をＶ別し、溶媒を減圧下に除去し７た
。得られる油を石油エーテルでそしゃくした。

この結果の固体を戸別し、減圧下に乾燥して５を７、Ｔ
Ｃ１（９８，８％）得た、融点１０２〜１０５℃。

分析、ＣＨＨｍｍ”１　Ｈｌ　０に対する計算値：Ｃ，
６７，０２：Ｈ，６，５６；＃、２．６１゜実験値： Ｃ，６６，９７ｉＨ，６，１７；Ａ７，２．６１゜実施
例２ （Ｂｚｌ）ＯＭＰ　（７，２Ｆ　、　　１４　ミ！Ｊ−
Ｔ−ル）　ヲ４ＮＥＣＬ　／ジオキサン１００１に添加
し、室温で４５分間攪拌した。溶液を蒸発乾固させ、白
色固体４．９６Ｆ（８５，７％）を得た。

分析：　Ｃ，、Ｈ，６Ｎｏ、　Ｃｌ　・２１ｆ、Ｏ：計
３Ｉ値：Ｃ，６４，４４：Ｉ１．６．４Ｂ、Ｎ、３．０
１゜実験値：Ｃ，６４，６１；Ｈ，５７４：Ｎ、Ｓ、２
０゜実施例３ を備えた３ツロフラスコ２５０１中において、Ｂｏｃ−
、バリン−０Ｈ（２，６ｆ、１２ミリモル）及びＮ−メ
チルモルフォリンＩ　４．１　Ｆ　、、　１０．８ミリ
モル）を酢酸エチル（２０＊／）に溶解し、−１５℃ま
で冷却した。次いで湿度を一２０〜１５℃に維持し汝か
らクロルギ酸イソブチル（１，Ｓ　Ｗ　＋１α８ミリそ
ル）を１０分間に亘って滴々に添加した。この温厩で２
０分間攪拌を続けた。次いで酢酸エチル（２０ｍ／）及
びＤＭＦ　（２０ゴ）中６（４，２１Ｐ、１０ミリモル
）及びＮ−メチルモルフォリン（１，０９Ｆ、１０．８
ミリモル）の予冷した溶液を１０分間に亘って添加した
。この反応混合物を一１０℃で５時間攪拌し、冷を庫に
夜通し置いた。固体を戸別し、Ｐ液を水（３×）、飽和
炭酸水素ナトリウム（３ｘ）、水（３×）、１Ｎ塩酸（
５×）及び水（３×）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。乾燥剤を濾過によって除去し、溶媒を減圧下
に除去して、７の４、Ｔｆ（９１％）を白色の固体とし
て得た。融点１５０〜１５３℃。

分析：　Ｃｓ５Ｈａ＊ＮｔＯａに対する計算値：Ｃｒ６
７．９４：Ｈ＋６．Ｂ４ＨＮ、４．５２゜実験値： Ｃ，６７，５７；Ｈ，６，ＢＯ：Ｎ、４．４０゜実施例
４ ＨＣＩ／ジオキサ７　１５０ｄＫＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｔｖ
ｒ（Ｂｚｌ）−ＯＭＦ　（１０，７ｆ　、２０ミリモル
）を添加した。混合物を室温で１時間攪拌した。溶媒を
減圧下に除去し、残渣をジエチルエーテルでそしゃくし
た。固体を濾過し及び溶媒を減圧下に除去し、８０９．
０１Ｐ（７１６５１６’）を白色の固体として得た。

゛　分析二〇、。Ｈ＆４ＮｆｉＥＣ１に対する計算値：
Ｃ，６６，８４；Ｈ，１，５５，Ｎ、５Ａ９゜実験ｔ： Ｃ，ｂ５．５５；Ｈ，６，４２：Ｎ、４．６１゜実施例
５ Ｂｏｃ−ＧＬｙ−ＯＭＦ（９）。　アセトニトリル（１
２０ｍ）中弗化カリウム（ｓ、ｏｓｒ、８ｏミリモル）
、（４−メトキシ７エナシル）７Ｐロマイト責９．４　
ｆ　、　４０ミリモル）及びＢｏｃグリシン（５，６？
、３０ミリモル）の懸濁液を室温で３６時間攪拌した。

固体物質を濾過によって除去した。

ろ液に酢酸エチル（１５０ｍ）及び水（１５０Ｍ）を添
加した。水性層を除去し、酢酸エチル（３×３０１１／
＞で抽出した。−緒にした有機相を水（２×１５０１）
、飽和炭酸水素ナトリウム（３×１５０＊）及び水（３
Ｘ１５０ｍ）で洗浄し、無水（ｉｉｌＣ酸ナトリウムで
乾燥した。乾燥剤を炉別し、Ｆ液を減圧下に蒸発乾固し
て油を得た。これは石油エーテルの添加時に固化して９
０１１．９５１（９２４％）を与えた。融点７５〜７７
°。

分析　Ｃ，、Ｈ□Ｏ，Ｈに対する計算値：Ｃ，５９，４
５：Ｈ，６，５５；Ｎ、４３５゜実験値： Ｃ，５９−０！ｉ　；Ｈ，＆４７　：Ａ’、４２０゜実
施例６ ０ＭＰＣ９，９ｔ、５１ミリモル）を、ジオキサン中４
．５Ｎ　ＨＣＩ　　１００ｍＫ添加し、室温で１．５時
間攪拌した。得られた固体を炉別し、エーテルで良く洗
浄し、減圧下に乾燥して１０の７．８　？（９＆８９％
）を得た。

分析Ｃ１，Ｈ，４０，Ｃｌに対する計算値：Ｃ，５ＣＬ
８８７．Ｂ、５．４３　ｉ＃、５．３９゜実験値： Ｃ、５１，０９；Ｊ７．５．４１　　；Ｎ、　５．５７
゜実施例７ 燥管を備えた２５０−の５ツロフラスコにおいて、Ｂｏ
ｘ−Ｔｙｒ　（Ｂｚｌ）（１２，３ｆ　、　　３３ミリ
モル）及びＮ−メチルモルフォリン（３，４ｍ／、５３
ミリモル）を酢酸エチル（６０ｔｉ／）に溶解し、−１
５゜まで冷却した。クロルぎ酸イソブチル（４，２１１
／。

３３ミリモル）を１０分間に亘って滴々に添加し、温度
を−２０〜−１５℃に維持した。更に２０分間攪拌した
後、酢酸エチル中ＨＣ１Ｇｌｙ−ＯＭＰ（７，８？　、
　３０　ミＩＪモル）及びＮ−メチルモルフォリン（五
４嘗７．１５３ミリモル）の予冷した溶液を１０分間に
亘って簡々に添加した。反応物を一１０℃で５時間そし
て４℃で夜通し攪拌した。

固体を炉別し、有機相を水（３×）、飽和現記水素ナト
リウム（３Ｘ’ｌ、水（５×）、１Ｎ塩酸（３Ｘ）及び
水（３×）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。乾燥剤を炉別し、Ｆｔを減圧下に除去して１
１を白色の固体とじて得た。１１．４Ｏｆ（８９，９６
％）、融点１１９〜１２２℃。

分析Ｃ５ｔｌｌｓｓＮ＊ｏｓに対する計算値：Ｃ，６６
，６５１Ｈ１６，２９ｉＡ’＋　４．９９゜実験値： Ｃ，６６，７９；Ｈ，６，３０、Ｎ、４．８５゜実施例
８ −Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｙ−ＯＭＰ　（１１）（１４
ｔ　。

２５ミリモル）を、ジオキサン中ａ、５ＮＨｃ１１００
ｍ／に添加し、室温で１．５時間攪拌した。エーテルを
添加して固体を沈給させ、これを炉別し、エーテルで洗
浄し、減圧下に乾燥して１２の１２．３３ｆ（９０，５
９６）を得た。

分析　Ｃ，、Ｈ□Ｎ、Ｏ，ＨＣＩ　： 計算値：Ｃ，５９，５０；Ｈ，５，３６，Ｎ。

５１４゜ 実験値：Ｃ，６１，３２、Ｈ，５５７；Ａ’。

５１１゜ 実施例９ Ｂｏｃ−Ｖａｔ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＧＬｙ−ＯＭＰ１
１３）。

Ｂｏｃ−バリン（ｔ７８ｓ’、２２ミリそル）及びＮ−
メチルモルフォリン（２，２３Ｓ’、２２ミｌＪモル）
を酢酸エチル２０献に溶解し、−１５°に冷却した。ク
ロルぎ酸／、°ツブチル（五Ｄ（１，２２ミリモル）を
添加し、得られた混合物を−１５〜−２０°で２０分間
攪拌した。この最初の溶液に、ジメチルホルムアミド（
４ｏ＊）中１２（１１，５？、２１ミリモル）及びＮ−
メチルモルフォリン（３，１４Ｆ　、　５１ミリモル）
の予冷（−５°）した溶液を１０分間に亘って添加した
。攪拌を−１５〜−２０°で５時間続けた。固体を戸別
した。クロロホルムを添加し、溶液を水（３ｘ）、飽和
炭酸水系ナトリウム（３Ｘ）、水（５×）で洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を戸別し、溶媒を
減圧下に除去することにより１３の１３．１８Ｆ（９７
％）を白色の固体として得た。融点１６８〜１７０ｃ′ 分析”！’ＦＨ４１ＮＳ　’Ｉに対する計算値：Ｃ，６
５，７６、Ｈ，６，７１：Ｎ、６．２２゜実験値： Ｃ，６５，２５：Ｈ，６，６９；Ｎ、６．２７゜実施例
１０ ＨＣＩ　Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｔｌ）−Ｇｌｙ−ＯＭＰ（
１４）。

Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｅｅｌ）−Ｇｌｙ−ＯＭＰ＜
１５）（１２ｆ、１２ミリモル）を、４ＮＨＣ１／ジオ
キサン８０〆に添加し、得られた混合物を室温で１＋時
間攪拌した。ジエチルエーテルを添加し、固体を戸別し
、エーテルで洗浄し、減圧下に乾燥して１４を白色の固
体（６，７２ｆ、６五１６％）として得た。

分析Ｃ１，Ｈ４，Ｎ、０６ＨＣＩ　： 計算値：　Ｃ、６ＡＩ　？　、Ｈ，７，５６；Ｎ。

７．１３゜ 実験値：（’、　６０．８６　、Ｈ，６，１０ｉＡ’＋
＆５４゜ 実施例１１ ラム（２，０３Ｆ、３５ミリモル］を、アセトニトリル
（６（１ｗｅ）中（４−メトキシ）フェナシルブロマイ
ド（五７６ｆ、１６ミリモル）及びＢｏｃ−Ａｌｐ（Ｏ
ＢＺＩ）（４，４５？　、１５ミリモル）の溶液に添加
し、室温で３６時間攪拌した。固体を炉別した。Ｆ液に
は酢酸エチル（１５０ｍ／）及び水（１５０ｄ）を添加
した。相を分離させ、水性相を酢酸エチル（３Ｘ３０ｍ
）で再抽出した。併せた有機相を水（２Ｘ１５０ｍ／）
、飽和炭酸水素ナトリウム（３ｘ１５ｏ−）、水（３Ｘ
１５０ｇｄ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した
。乾燥剤を戸別し、溶媒を減圧下に除去して１５０３２
．９５Ｆ（９７％）を白色の固体として得た。

融点９５〜９６℃。

分析Ｃ□Ｂ、、ＮＯ，に対する計３Ｎ値：ｃ、６五６８
　：Ｈ，６，１９；＃、　２．９７゜実験値： Ｃ，６五１１　：Ｈ，６，１５、Ｎ、　２−８７゜実施
例１２ ン中４ＮＨＣ１２５０ｖｌＫＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）−ＯＭＰ（１５）（３２９５Ｆ　、６９ミリモル）を
添加した。反応物を室温で１．５時間攪拌した。得られ
た固体を炉別し、エチルアセテートで洗浄し、減圧下に
乾燥して１６０２７．９０　ｆ　（９８％）を得た。

分析　Ｃ３゜Ｈ！！ＮＯ６Ｃ１５Ｈ，０：計算値：Ｃ，
５２，０１；Ｈ，６，１１；Ｎ。

五〇３゜ 実験値：Ｃ，５２１３；Ｈ，４，１８ＢＡ’。

２．８７゜ 実施例１Ｓ Ｂｏｃ−Ｚ−リジ：／（４１１ｆ、１α８ミリモル）及
びＮ−メチルモルフォリン（１，１ｆ、１α８ミリ毫ル
）を酢酸エチル２０−に溶解し、−１５６に冷却した。

クロルぎ酸インブチル（１，４８Ｆ。

１０．８ミリモル）を１０分間に亘って添加し、得られ
た混合物を−２０〜−１５℃で２０分間攪拌した。次い
で酢酸エチル（２０ｍ）及びジメチルホルムアミド（２
０ｍ）中１６（４，Ｏｆ、９．８ミリモル）及びＮ−メ
チルモルフォリン（１，０９ｆ。

１０．８ミｌＪモル）の予冷した溶液を１０分間に亘っ
て添加した。この反応混合物を−２０〜−１５゜で５時
間攪拌した。固体を濾過によって除去し、Ｆ液を水（３
Ｘ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３×）、水（３×）、
１Ｎ塩Ｗｌ（３×）、水（５×）で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。乾燥剤を戸別し、溶媒を減圧下に
除去して１７の４、Ｔ４ｆ（６６％）を白色の固体とし
て得た。融点５５〜５７°。

分析Ｃ５゜Ｈ４？Ｎ、ＯＩＩに対する計算値：ｃ、６五
８４　；Ｈ，６，４６；Ｎ、５７５゜実験値： Ｃ，６５，６５、Ｈ，６，５１ＢＮ、５．４７゜実施例
１４ Ｂｏｃ−Ｌｙｅ（Ｚ）−Ａｓｐ（ＯＢｔｌ）−０ＭＰ（
１７）（４４，Ｏｆ、６０ミリモル）を、ジオキサｙ中
４．５ＮＩｆＣ１１５０１に添加し、室温で１．５時間
攪拌した。生成物をエーテルの添加で沈殿させ、戸別し
、エーテルで洗浄し、減圧下に乾燥して１８の５６．５
ｆ（９０％）を得た。

分析　Ｃ，４Ｈ□Ｎ、　Ｏ，ＥＣｌ　：計算値：Ｃ，６
０，９４ｉＨ，６，０２ｉＡ’。

６．２７゜ 実験値”、Ｃ，５９，９７ｊＨ，５，９Ｂ、Ｎ。

と０６゜ 実施例１５ ｔｌ）−０ＭＦ（１Ｂ）（５，３＋ｆ　、８ミリモル）
を、少量のソメチルホルムア≦ドを含む塩化メチレンに
溶解した。混合物を冷却した。ジイソプロピルエチルア
ミン（１，０３Ｆ、８ミリモル）を添加し、反応混合物
を１５分間攪拌した。、４ｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　（
５，２９、１２ミリモル）を少量のツメチルホルムアミ
ドを含む塩化メチレンに溶解し、これを最初の溶液に添
加し、次いで１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水利物
ＨＯＢｔ　（１，６５’　。

１２ミリモル）を添加した。２０分間攪拌した後、ジシ
クロへキシルカルボジイミド（ｚ５ｆ、１２ミリそル）
を添加し、この反応混合物を夜通し攪拌し、温度を室温
まで上昇せしめた。固体を炉別し、溶媒を減圧下に除去
して黄色の油を得た。この油を酢酸エチルに溶解し、水
（３Ｘ１００ｇＩｔ＞で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。乾燥剤を炉別し、溶媒を減圧下に除去し、残
渣を得た。

これは固化して、１９の７４５Ｆ（８７％）を灰色がか
った固体として与えた。融点６０〜６３１′。

分析ＣＮ”ＮＮ９０１４　Ｓに対する計算値：Ｃ，６Ｄ
、Ｄ４：Ｈ，６，５６：Ｎ、９．２５゜実数値： Ｃ，５９，６０７，Ｈ，６，，６１，Ｎ、９、Ｔ５゜実
施例１６ （２Ｄ）。　Ａｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｎ）−Ｌｙｓ　（
Ｚ＞−Ａｘｐ（ＯＢｚｌ　）　−０ＭＦ　　（６，１８
ｔ　　、　　５、Ｔ５　　ミ　リモル）を８５％水性酢
１１（２００ｍ）に溶解した。

Ｚｆｌ末（２０ｔ）を４時間に亘って一部ずつ添加した
。反応混合物を室温で２時間攪拌した。固体を濾過によ
って除去し、Ｆ液に水を添加した。

ｐＨを２ＮＩＩＣ１で２．５に調節した。この溶液を酢
酸エチル／テトラヒドロフラン（６５：Ａｓ。

３Ｘ５００ｍ／）で抽出した。−緒にした有機相を水（
３Ｘ４００ｍ／）で洗浄し、無水硫酸す）　Ｉ）ラムで
乾燥した。乾燥剤を戸別し、Ｆ液を減圧下に蒸発乾固さ
せた。弗渣を酢酸エチル（３０ｍ／）に溶解し、ジエチ
ルエーテル８００−に攪拌しなから滴々に添加した。４
°まで夜通し冷却後、固体を炉別し、減圧下ｆｆ　Ｐｔ
　Ｏｓで乾燥し、２０の４．４ｔ（８３％）を得た；Ｒ
１０，８（Ａ）　、融点８４〜８７℃。

分析　Ｃ４ａＨｕＮｑ　ＯＩＩＳ　−Ｈｔ　’　：計算
値；Ｃ２５直９４；Ｅ、１ｈ６２；Ｎ。

１α５６゜ 実験値：Ｃ，５６，７０；Ｈ，６，４５：Ｎ。

１α６９゜ 実施例１７ ＨＣＩＶａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＡｆＦ（８）（２
Ｅ’ｔ、４．５ミリモル）をＣツメチルホルムアミド（
４（１＋／）に溶解し、゛氷浴中で冷却した。ジイソプ
ロピルエチルアミン（０，９５ｍ　、　５．５ミリモ゛
ル）を滴々に添加し、次いでＡｏｃ−Ａτｇ（Ｔｏｓ）
−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ａｓｐ＜０Ｂｚｌ）＜２０）（４，４
ｆ。

４８ミリモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（
０，７Ｆ、５ミリモル）及びジシクロへキシルカルボジ
イミド（１，０５？、５ミリモル）を添加した。反応混
合物を０℃で１時間攪拌し、室温で３時間攪拌した。固
体を炉別し、溶媒を減圧下に除去した。残渣をクロロホ
ルムに溶解し、０．５Ｎ塩酸（３Ｘ２００ｄ）、飽和炭
酸水素ナトリウム（３Ｘ２００ｍ）、水（２００ｍ／）
で洗浄し、無水硫酸す）　Ｉ）ラムで乾燥した。乾燥剤
を炉別し、Ｆ液を減圧下に蒸発させた。残渣をジメチル
ホルムアミド／クロロホルム（３０ｄ、１：１）に溶解
し、ジエチルエーテル８００ｄに滴々に添加した。４℃
まで夜通し冷却した後、固体を炉別し、減圧下にｐｔｏ
ｓで乾燥し、２１の６．５２Ｆ（９５％）を得た５Ｒｆ
ＣＬ９　（Ｂ）。アミノ酸分析：Ａ８’Ｐ＋　　１．１
１　　；Ｖｃｔｌ　、　１．０７　、Ｔｔｒ　ｌ　Ｄ、
９［１１Ｌｙｓ、０．９３及びＡｒｒｉ＊０．９９゜実
施例１８ Ａｏｃ−Ａｒｇ　（ｒｏｍ）−Ｌｙｅ　（Ｚ）−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−０ＭＦ　（
６，５９Ｂ４．６ミリモル）を８５％水性酢酸（３００
凱０に溶解した。Ｚ？Ｉ末（２４Ｍ）を２４時間に亘っ
て一部ずつ添加した。水（６０ｏｇｄ）を添加し、反応
混合物を冷却した。混合物を室温で２日間そして４℃で
夜通し攪拌した。固体を炉別し、ジエチルエーテルで良
く洗浄した。固体をジメチルホルムアミド（５０ｍ）中
に懸ｆｆ１（３Ｘ）させ、Ｆチした。−緒にしたジメチ
ルホルムアミド抽出物を減圧下に５０−まで濃縮し、ジ
エチルエーテル（１０００謂ｇ）に滴々に添加した。沈
殿をＦチし、エーテルで洗浄し、減圧下に乾燥し、２２
の５．６５ｆ（９６％）１に得た：Ｒｆ　０．８５　（
Ｂ　）　；　ｐｍｒ＜ＤＭＳＯ−ｄ、）：　Ｆ−メト礎
シフエナシルデロトンの不存在。

実施例１９ Ａｏｃ−Ａｒｇげｏｓ）−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ａｓｐ（Ｏ
Ｂｚｌ）−Ｖａｔ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）（２２）（ｉ５ｆ
　、２、Ｔ７ミリモル）１に４ＮＨｃｌ／ジオキサン（
２００ｓｄ）で１時間処理した。溶媒を減圧下に除去し
、残渣をジメチルホルムアミド（２０ｓ□に溶解した。

この溶液を攪拌しながらエーテル（７００ｄ）中に滴々
に添加し、混合物を４℃に夜通し冷却した。

固体を炉別し、減圧下にＰ、０．で乾燥し、２３の五３
９（ＩＤＣ％）を得た；Ｒｆｒｌ、７　（ｊ９）　；ｐ
ｍｒ　（ＤＭＥ　Ｏ−ｄ６）　：　Ａ　ｏ　ｃ基に対す
る’／りｆｌｌｖが消失。この物質を更にｎ製しないで
使用した。

実施例２０ Ａｒｇ　（Ｔｏ　ｓ　）−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ａｓｐ　（
ＯＢｔ　ｌ　）　−Ｖａｌ−Ｔｙｒ　（Ｂｇ　ｌ　）　
（五２ｔ＊２、Ｔミリモル）をジメチルホルムアミド（
１５００ｍ）に溶解し、溶液のｐＨをジイソプロピルエ
チルアミンで７．５に調節した。反応混合物を一２５℃
まで冷却し、そしてソフェニルホスホリルアソド（０７
５１１ｄ）を攪拌しなから滴々に添加した。溶液を４℃
で７日間攪拌し、一方ｐＨを１５に維持した。溶媒を減
圧下に除去し、炒渣を水でそしゃくした。固体を炉別し
、減圧下にｐ、　ｏ、で乾燥し、粗２４の３９を得た。

こす１を更に精製し力いで使用した；Ｒｆ［１８５（Ｂ
）。

実施例２１ （１）。粗シフｏ−（Ａｒｇ（Ｔｏｍ）−Ｌｙｅ（Ｚ）
−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｖａｌ−Ｔｖｒ（Ｂｔｌ）〕（
１ｆ　）を、アニソール２戯を含有するＨ　Ｆ　２０　
ｄで０℃下に１時間開裂させた。イデチド／樹脂混合物
をエーテル（３Ｘ２０ｍ／）で洗浄した。遊＊：０イプ
チドを５ＨＯＡｃ／Ｈ，０（５Ｘ２０ｄ）で抽出し、凍
緒乾燥した。得られた粗物質を、１１ＭＮＨ４０Ａｃ。

ｐＨ５、で予じめ平衡化させたセファデツクス（５ｅｐ
ｈａｄｅｚ　）ＳＰＣ−２５カラム　（６０ｍＸ２．５
α）に適用した。このカラムを、８５ｍ／時の流速下に
平衡緩衝液で流出させ、１３ＩＩＩ！ずつ画分を集めた
。２ノ後に、緩衝液をα２　Ｍ　Ｎ１ｆ４０Ａ　ｅ。

ＰＨ６，５で置き換えた。両分２０１〜２１９を集め、
凍結乾燥して生成物７５■を得た。Ｒｆ。

０．３（Ｃ）；アミノ酸分析：酸加水分解：Ａｒｇ。

１０３　；　Ｌｔｔｓｅ　１．０２　：Ａｓｐ＋　１．
０３　：Ｖａｔ。

０．９９　ＨＴｙｒ、０．９２　；　　ロイシンアミノ
ペデチダーセ：□イゲｇ及びＬｙｅ痕跡ｎ（（１，７）
ｉＦＡＢ／ＭＳ：ＭＥ　　６６２：ＨＰＬＣ”、Ｃ，、
−μポンダバク（Ｂｏｎｄａｐａｋ　）カラム、１０％
メタノール／９０％０．０２ＭＫＨ，ｐ０４、Ｔ４　Ｈ
３，５，２−７分、２１４ｎｍＸ流出時間４０．６７分
。

実施例２２ （２５）。ＨＣＩＶａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｙ−
ｏｙｐ（１ａ）（３，１ｔ　、５ミリそル）をジメチル
ホルムアミド（４（１＋／）に溶解し、水浴で冷却した
。ソイソプロビルエチルアミン（α９５−１５．５ミリ
モル）を攪拌したがら滴々に添加し、次いでＡｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏａ）−Ａｓｐ（ＯＢｔｌ）−Ｖａｌ　（２０
）　（４，５５ｆ　、　５ミリ−ｆニル）、１−にニト
ロキシベンゾトリアゾールハイドレート（０，７７ｒ、
５．５ミリ七ル）及びソシクロへキシルカルボソイミド
（１，０３Ｆ、５ミリモル）を添加した。

この反応混合物を室温で３日間攪拌した。固体を戸別し
、溶媒を減圧下に除去した。残渣をクロロホルムに溶解
し、０．５Ｎ塩酸（３Ｘ２００ｄ）、飽和炭酸水素ナト
リウム゛（５Ｘ２００−）、水（２００ｗ＋ｅ）で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を戸別し、
ろ液を減圧下に蒸発させた。残渣をツメチルホルムアミ
ド／クロロホルム（３０ｍ、１：１）に溶解し、ジエチ
ルエーテル８００ｍ／に滴々に添加し７た。４℃まで夜
通し冷却したり、固体を戸別し、減圧下にＰ２０１で乾
燥し、４．５１Ｆ（６２％）を得た；Ｒｆα８５　（Ｂ
）。

アミノ酸分析：Ｊｓｐ、１．０７ＨＧｌｙ、０．９６；
Ｆ　ａ　ｌ　Ｈ１，Ｄ　９　；　７’　ｉ／　ｒ　ＨＱ
、　９１　ＨＬ　’１／　’　＊　０．８７；Ａｒｙｉ
ｉＯｏ 実施例２５ Ａｏｃ−Ａｒｇ　（ｒｏｍ）−Ｌｙｓ　にｌ）−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−Ｖａｔ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｙ−Ｏ
ＭＰ（２５）（４，５Ｆ、五〇７ミリモル）を、８５％
水性酢酸中において３日間Ｚｎ末（２５Ｆ）で還元した
。水（６Ｄ　０１１／）を添加し、反応混合物を４℃に
夜通し冷却した。固体を炉別し、ジエチルエーテルで洗
浄した。固体をジメチルホルムアミド（５０ｍ□にスラ
リー（３×）とし、濾過した。

−範にしたＰ液を減圧下に５０ｓｅｔで濃縮し、ジエチ
ルエーテル（１００［ＩＭ！、）に滴々に添加した。

沈砂を戸別し、減圧下に乾燥して２６の五７７ｆ（９３
％）を得た。ｐｍｒ　（ＤＭＥ　Ｏ−ｄ、）はｐ−メト
キシフェナシルプロトンの不存在を示した。

実施例２４ ｚＬ）−Ｖａｔ−Ｔｙｒ（Ｂｔｌ）−Ｇｌｖ（２７）。

Ａｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｎ）−Ｌｙｓ　（Ｚ）−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）Ｇｌｙ（２６）
（五５ｔ、２．６５ミ’）−Ｅニル’）ｔ４ＮＥｃｌ／
）オキサン（２００ｍｇ）で１時間処理した。溶媒を減
圧下に除去し、残渣をジメチルホルムアミド（・３０−
）に溶解し、ジエチルエーテル（８００ｄ）に攪拌しな
から滴々に添加した。混合物を４１１に夜通し冷却した
。得られた固体を戸別し、減圧下にＦｔ　Ｏｓで乾燥し
、五３０Ｆ（１００％）を得た；ＲｆＣｌ、８　１’（
Ｂ１　　；　ｐ情デ　（ＤＭＳＯ−ｄ、）はＡｏｃ基に
対するシグナルを示さなかった。

実施例２５ ｙｌａ　−（Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−Ｌｙｅ　（Ｚ）−Ａ
ｓｐ　（ＯＢｚ４ＭＣＬ　　Ａｒｇ　　ＣＴｏｓ）−Ｌ
ｙｅ　　（Ｚ）−Ａｍｐ　　（ＯＢｇｔ）−ＶａＬ−Ｔ
ｙｒ　（ｊ３ｇｔ）　−Ｇｌｖ　（２７）　（Ａ２ｇ、
　２．５７ミリモル）をジメチルホルムアミド（１３０
０Ｔａｔ）に溶解し、Ｗｊ−液のｐＨをシイラブルピル
エチルアミンで７．５に調節した。この反応混合物を一
２５℃まで冷却し、ジフェニルホスホリルアジド（ａ７
２−）を攪拌しながらゆっくり添加した。混合物を時折
９攪拌しながら７日間４℃に保った。この期間中溶液の
ｐＨを７５に保った。浴謀を減圧下に除去し、残渣を水
でそしゃくした。固体を戸別し、減圧下に乾燥して生成
物２８ｇを得た：Ｒｆ０．８７（７３）。

実施例２６ ４　粗シフｏ　−（Ａｒｇσｏ’ｇ）−Ｌｙａ（Ｚ）−
Ａａｐ（ＯＢｚρ−ＶａＬ−Ｔｙｒ　（Ｂｇｚ）−Ｇｔ
ｙ：ｌ　（Ｉｇ）’ｌｃ、０℃下に１時間ＨＦ／アニン
ール（２０−１９：１）で開裂させた。このペプチド樹
脂混合物をジエチルエーテル（５×２０ｍｔ）で洗浄し
た。ペプチドを５チ水性酢酸（３Ｘ２０ａｔ）で抽出し
、凍結乾燥した。この粗物質を、流速８５−７時におい
て、［１２Ｍ　ＮＨ，ＯＡｃ、ｐＨ５，２５、で平衡化
させたセファデックス５ＰＣ−２５カラム（６０ｃｍ　
Ｘ　２．５　ｔｙｔｒ　）でのりｏ　−ｒ　）　ｆラフ
イーに供し、１０１ＩＩＩ！ずつ画分を集めた。画分１
５０〜１５５を集め、凍結乾燥して物質４０Ｑを得た５
Ｒ７（Ｌ３２ＥＣ）ｔ７ｉノ酸分析：酸加水分解：Ａｒ
ｇ、１゜０２ＨＬｙａ、α９８　ｉＡ’ｊ　７．　　ｉ
、０８　ｇ　Ｆａ　Ｊ。

１．０５　ＨＴｌｌｒＳＱ、９５　ＨＧＬｙ、（Ｌ９５
　：カルボキシペプチダーゼＡ加水分解：Ｔｙｒ及びＧ
ｌｖの痕跡量（く３％）　　；ＦＡＢ／ＭＥ　　ＭＨ＝
７１９ｇＨＰＬＣ：Ｃ，１μボンダ／々り、２ゴ／分、
２１４？Ｌ毒、１０９６メタノール１０．０２ＭＫＨ，
ｐＯ，、ｐＨ五５、保持時間６　Ｃｌ３６分。

実施例２７ （２９）　、　ＦＭＯＣ−ＧＬｓ　（０−ｔ　−Ｅｘ）
　　（４，２５ｔＪ、１０ミリモル）を酢酸エチル（２
５ｍｇ）に溶解し、１０〜１５℃まで冷却した。クロル
ぎ酸イソブチル（１，５ｍｇ、　　１１　ミリモル）を
攪拌しながらゆっくり添加した。別のフラスコにおいて
、ＴｓＯＨＴｙｒ　ＣＢｚｌＪ　−０ＢｚＬ　　Ｃ５，
Ｓ　ｆＪ、　　１０ミリモル）をジメチルホルムアミド
（２５ｍ／）に溶解し、−１５℃まで冷却した。Ｎ−メ
チルモルフォリン（１，２ｍ、１１ミリ峰ル）を攪拌し
ながら嫡々に添加した。両方の冷却し九溶液を一緒にし
、室温で５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残液
を酢酸エチル（２Ｄ　Ｏａｄ）に浴解し、［１０５Ｎ−
塩酸（３Ｘ５Ｄａｄ）、水（５０ｓｄ）、飽和炭酸水素
ナトリウム溶液（３Ｘ５０ｍ）及び水（５０ｓｄ）で洗
浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。この乾燥剤を戸
別し、溶媒を減圧下に除去した。残渣を酢酸エチル／石
油エーテルから再結晶して２９の＆１８ｇ　（８０チ）
を得九。融点７２〜７６℃。

分析Ｃａ　ｑ　Ｈａ　ｑ　Ｎ２０ｎ　Ｋ対する計算値：
ｃ、　７五ｓ　１ＨＨｚ　ｂ、　１６　：　Ａ’　、五
６４゜＊Ｗｌｋ：Ｃ，７五ｒＪ９　；Ｈ，６，３９、Ｎ
、５．４５゜実施例２８ −　　Ｃ４，４５９，１０ミリモル）を酢酸エチル（３
０ｄ）に溶解し、−１５℃まで冷却した。この溶液にク
ロルぎ酸イソブチル（１，５ｍ４．１１ミリモル）を添
加し、続いてＮ−メチルモルフォリン（１，２ｄ、１１
ミリモル）を添加した。ＦＭＯＣ−Ｇｔｕ＜０−１−Ｂ
ｕ）−Ｔｙｒ　（ＢｇＬ）−０ＢｚＬ（２９）（６１゜
７８ミリモル）をジメチルホルムアミド（１００ｍｌ／
）中１０嗟ピペリジンで１時間処理した。溶媒を減圧下
に除去し、残液をジメチルホルムアミド（３０ｍ）に浴
解し、これを最初のｆｇｔに一１５℃で添加した。この
反応混合物を足温で夜通し攪拌した。固体を炉別し、減
圧下に乾燥した。残渣を酢酸エチル（１５０ｄ）に浴解
し、不溶性の物質を戸別した。有機浴液を１０５Ｎ塩酸
（３×４０献）、水（４０ｍ）で洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。乾燥剤を戸別し、Ｆｇ、を減圧下に
π発させた。！！Ｉ汲を酢酸エチル／石油エーテルから
結晶化させて３０の５．５ｇ　（７２％）を得た。

融点９６〜９９℃。

分析Ｃ□ＨＳ＠　Ｎ８０Ｇに対する 計算値：Ｃ，７１，４７、Ｈ，６，１０；Ｎ、　　４．
３１゜実験値ＩＣ，７１，１２；Ｈ，１ＬＯ６；Ａ’ｓ
　４．６４゜実施例２９ ａ　（Ｂｏｂ）　（２，３４（Ｉｓ　５ミリモル）を酢
酸エチル（２０ｍｇ）に溶解し、−１５℃まで冷却した
。クロルぎ酸イソブチル（０，７５ｍ、５．５ミリモル
）をこの溶液に添加し、次いでＮ−メチルモルフォリン
（［１６ｇ、５．５ミリ七ル）を添加した。別のフラス
＝＋において、ＦＭＯＣ−Ａｓｐ　（ＯＢｚ４−Ｇｌｗ
（０−１−Ｂｘ）−Ｔｙｒ　（Ｂｚｔ）−０ＢｚＬ　（
！Ａ、９５　Ｑ。

４．０５ミリモル）をジメチルホルムアミド（１００Ｗ
Ｉｔ）中１０％のピペリジンで１時間処理した。

溶媒を減圧下に除去し、残液をジメチルホルムアミド（
２５ｍ）に耐解し、これを最初の溶液に−１５“Ｃで添
加した。この混合物を室温で夜通し攪拌した。固体を戸
別し、残渣を酢酸エチル（２００ｄ）に溶解した。不溶
性物質を戸別し、ｐ液を［ＬＯ５７Ｖ塩酸（３Ｘ５［１
ｍ）及び水（４０ｍ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。乾燥剤を戸別し、Ｆ液を減圧下に蒸発乾固さ
せた。残液を酢酸エチル／ジエチルエーテルから結晶化
させて３１の５４５ｇ　（７ｏ％）を得た。融点１４５
〜１４９℃。

分析Ｃ＊＊Ｅ、ｅＮ　５、Ｔ５に対する計算値：　Ｃ，
６＆０２１Ｌ　　６．５４　ｉＮｓ　　５、Ｔ５゜実験
値：Ｃ，６８，１４；Ｈ，６，７４、Ｎ、　　５、Ｔ４
゜アミノ酸分析’　ＡＭ”ｌ）ｚ　１．０５：Ｇｌｗ、
　１．０２；Ｔｙｒ。

０．８７　；　Ｌ　ｙ　ＪＮ　１．Ｑ　５゜実施例５０ ｐ　（ＯＢｚｌ）　−ＧＬｓ　Ｃ０１Ｂｕ）　−Ｔｙｒ
　（Ｂｚｌ）　−０ＢｘＬ（３１）（３，４ａ、　’２
、Ｔ９ミリモル）をジオキサン（５０ｍ／）〒４Ｎ垣酸
で１時間処理した。溶媒を減圧下に除去し、残渣をエー
テル（２００ｍ）でそしゃくした。得られた固体を濾過
によって集め、白色の性成物を得た。この物質を酢酸エ
テル／メタノール／ジエチルエーテルから再結晶し、減
圧下にＰｔ（ｈで乾燥し、生成物（５２）２．Ｂ１０を
得た。このｐｍｒはＢｏｃ及びｔ−Ｂｘ基の不存在を示
した。

実施例６１ ＦＭＯＣ−シクロ　ＣＬｙｓ−Ａｓｐ　（ＯＢｚＬ）−
Ｇｊｓ）−−Ａａｐ’　Ｃ０Ｂｚｌ）　−ＧＬｕ−Ｔｙ
ｒ　（Ｂｇｊ）　−０Ｂｔｌ　（３２）（１，４５ｙ、
　　１．２７ミリ七Ａ／）をジメチルホルムアミド（６
００ａｄ）に溶解した。この溶液のｐＥをジインプロピ
ルエチルアミンで７．５に調節した。

混合物を一２５℃まで冷却し、ジフェニルホスホリルア
ジン（ＣＬ３ａｄ）を攪拌しなからゆりくシ添加し、得
られた混合物を４℃で７日間攪拌した。

溶媒を減圧下に除去し、残渣をＮ−メチルピロリドン／
水から結晶化して３３のα７１ｇを得た；Ｒｆα８２（
Ｄ）。

実施例３２ シフｏ　−（Ｌｙｓ−Ａｍｐ　（ＯＢｚｌ）−ＧＬｕ）
−Ｔｙｒｓｐ　Ｃ０Ｂｔｌ）　−Ｇｌｗ）　−Ｔｙｒ　
（Ｂｚｌ）　−０Ｂｚｌ　（３３）（［Ｌ７１ｇ）を、
１０％ピペリジン／ジメチルホルムアミド（２０ｍ）で
１時間処理した。溶媒を減圧下に除去し、残液をエーテ
ルでそしゃくした。

固体を戸遇し、減圧下に乾燥し、３４の０．４７０を白
色の同体として得た；ＲｆＱ、４６　　ＣＤ）Ｉアミノ
酸分析：　Ｌｖｓ、　１．０６　＋Ａａｐ、　１．０１
　：Ｇｌｗ、　１．０２；Ｔｔｒｓ　ｃＬ９０゜ 実施例３３ Ｌｘ）−Ｔｙｒ　Ｃ０Ｂｚｌ）（３５）、’／り”　−
ＣＬｖａ−ＡｍＰ　Ｃ０Ｂｚｌ）　−Ｇｌｕ）　−Ｔｙ
ｒ　（Ｂｚｌ）　−０Ｂｚｌ　（５４）（４７０ａｐ、
（１５ミリモル）をジメチルホルムアミド（５ｄ）に溶
解した。トリーＺ−フルギニン（５７６■、１ミリモル
）、ジシクロへキシルカルボジイミド（２０６〜、１ミ
リモル）、及び１−ヒドロキシペンズトリアゾール水和
物（１５３〜、１ミリ七ル）を、それぞれジメチルホル
ムアミド（５−）に溶解し、これを最初の溶液に添加し
、この反応混合物を夜通し攪拌した。ジメチルホルムア
ミド（３０ｍ）及びメタノ−＃（２０ｍ）を反応混合物
に添加し、混合物を、すべての固体が溶液になるまで暖
めた。溶液を夜通し４℃まで冷却した。得られた固体を
炉別し、酢酸エチル（（２Ｘ１０ゴ）及びジエチルエー
テル（２Ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、減圧下に乾燥して３５
の４８６ダを灰色がかった固体として得た。これを更に
精製しないで使用した。

実施例５４ されたペンタペプチド、Ｚ−Ａｒｇ　（ｇ　、　ｇ）−
シクロＣＬｙａ−Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ）−Ｔ
ｙｒ　（Ｂｚｌ）−０Ｂｚｌ　（３５）　　（３４０ｇ
）及びｐｄ黒（５００ｍｐ）をフラスコ中に入れた。メ
タノール中ぎ酸（５チ、４０−）を窒素雰囲気下に嫡々
に添加した。反応混合物を４８時間攪拌した。触媒を戸
別し、メタノール（３ｘ３０＊）及び水（２０ｍ）で洗
浄した。この併せたＦ液を減圧下に蒸発させた。残渣を
＃５０　ｍ）に溶解し、凍結乾燥した。この凍結乾燥し
た試料（１８５９）を七ファデックス５ＰＣ−２５カラ
Ａ　（６０ｃｍＸ　２０　（Ｗ）上に置き、０゜０５　
Ｍ　　ＮＨ４０Ａｃ　、　　ｐ　Ｈ４，７５で流出させ
た。流速は８０ｄ／時であシ、１０ｍずつ画分を集めた
。

４０の画分の後、緩衝液を０．０５　Ｍ　　ＨＥ４０Ａ
　ｃ。

ｐＨ１ｂ９８に変えた。両分８０〜１００を集め、凍結
乾燥した。残渣を、セファデックスＧ−１０カラム（１
００ｃｍＸ　２．５ｍ）で水によシ流出させて脱塩した
。この流速は２５ｄ／時であシ、９＃Ｉ／ずつ画分を集
めた。画分゛２４〜３０を集め、凍結乾燥して主成物１
２５ダを得た：Ｒｆ０．２２　（Ｅ）＋ＦＡＥ／ＪＩ５
二ＭＨ６９２＋アミノ酸分析：酸加水分解’　”Ｑｚ　
１．０１　ＨＬｙａ、０．９９　；Ａｓ　Ｐ％　１．０
０　ＨＶａ　ｌ。

１．０２Ｈｒｙｒ、０．９８　Ｉロイ’／７７　ミ／　
ぺｆｆダ−−１／：ＡｒＱ、　１．０４　；Ａ８ｐＳ　
Ｑ、９６　；、ｒｙｒ、　１．００゜ＨＰＬＣ：Ｃ１ａ
−ｐボンダバク、１９６水性燐酸中５％アセトニトリル
、ｐＨ２，９，２ｍ　／分、２１４ｎｍ、保持時間６゜
３８分。

実施例３５ アスパルチン酸−α−ベンジルエステル−β−ｔ２０ｍ
ｇ）中ＢｏＣ−Ａｓｐ−ＯＢｚｌ　　（２，６０ｇＮ　
　８ミリモル）の溶液に過塩素酸（７０チ、１．２５１
７＞を添加した。この溶液を２３℃で４日間攪拌した。

混合物を酢酸エチル（１００ｍＺ）で希釈し、飽和炭酸
水素ナトリウム　（１７５ｍ）をゆっくり添加した。泡
立ちが静まるにつれて溶液がｐ　Ｈ７，５に達するまで
固体の炭酸水素ナトリウムを添加した。

水性相を分離し、酢酸エチルで数回抽出した。有機相を
一緒にし、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。

乾燥剤を戸別し、溶媒を減圧下に除去して３６の１．６
ｇ　（７１チ）を半置体として得た。

実施例３６ ＦＭＯＣ−Ｌｙｘ　（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ　（０−１−Ｂ
ｗ）−０ＢｚＬ（３７）。ジメチルホルムアミド及び酢
酸エチル（（５０ｍ、　１　：　１）中ＦＭＯＣ−Ｌｙ
ｅ（ＢｏＣ）　　（１１，０７ｇ、２五７ミリモル）の
溶液に、Ｎ−メチルモルフオリンＣ２，０４ＵＳ２．５
７ミ’）モル）全添加した。混合物を−２０〜−２５℃
に冷ｐＡｕ九。

クロルぎ酸イソブチル（Ａ２３ｇ、２五７ミリモル）及
び反応混合物を３０分間攪拌した。これに、ジメチルホ
ルムアミド及び酢酸エチル（１：　１）中Ａｓｐ−（０
−ｔ−Ｂｓｔ）　０Ｂｚｌ　（３６）　（６，５ｃｔ、
　２２゜６ミリモル）の溶液を添加した。混合物を一２
０℃で３０分間攪拌した後、冷却を止め、溶液を呈色へ
もって行った。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、炭酸
水素ナトリウムの飽和溶液中に注いだ。

水性相を酢酸エチル（７５ｍ）で３回抽出した。

有機相を一緒にし、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した
。有機相を分離し、無水硫酸す）　ＩＪウムで乾燥した
。゛溶媒を減圧下に除去して粗住成物１ａ６ｇを得た。

この物質を、クロロホルム中５チア七トンを用いるシリ
カグルでのクロマトグラフィーにかけて３７の五２ｒｔ
Ｃ７６チ）を得た。これを更にＩ＃徴づけないで使用し
７た。

実施例３７ ジメチルホルムアミド（５０ｗｔ）中ＦＭＯＣ−Ｌｙｅ
ＣＢｏｃ）−Ａｓｐ　（０−１−Ｂｕ）−０Ｂ寥１（３
７）（５，０ｇ。

６９Ｍ）の溶液に１０チｐｄ／Ｃ（５００Ｉ９）を添加
した。この混合物を５Ｑｐｓｉｌ！、で５時間水素化し
た。固体を戸別し、溶媒を減圧下に除去した。この物質
をシリカグルでのクロマトグラフィーにかけ０アセトモ ７４／Ｉ’ｍで流出させて４０の４．３ｇ　（９８％）
を得た。これを更に特徴づけないで使用した。

実施例３８ ＭｏＣ−Ｌｙｓ　（ＢｏＣ）　−Ａｓｐ　（０−ｔ−Ｂ
ｔｂ）　（４，２ｃｔ−６６ミリモル）の溶液にＮ−メ
チルモルフォリンＣＤ、６６５ｇ、６．６ミリモル）を
添加した。この溶液を−１５〜−２０”Ｃまで６却した
。この溶液ニクロルぎ酸インブチル（Ｑ、８９９ｇ、６
．６ミリ七ル）を添加した。この混合物を１０分間攪拌
し、ジメチルホルムアミド及び酢酸エチルの１：１溶液
２０ゴに溶解しｆｒ−ＨＣＩ　　Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＢ
ｚｌＣ２−６８ｇｓ　６．６ミリモｙ）（Ｄ溶液ｔＮ−
１ｆｋ七ルフオリン（０，６６５０Ｘ６．６ミリモル）
で中和した。この混合物を一２０℃で１時間攪拌し、温
度を室温まで上昇させた。ａ合物を酢酸エチル（２００
ｍ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムの醍液で２回、
そして飽和塩化ナトリウムの溶液で１回洗浄した。この
有機相を無水硫酸す）　ＩＪウムで乾燥した。乾燥剤を
戸別し、溶媒を減圧下に除去したヵ残渣を酢酸エチルか
ら結晶化させ、４１の４．９８９（７６チ）ｒ得た。

分析ＣＢ　ＳＲ６Ｇ　’Ｉ　Ｏ□に対する計算値ＩＣ，
６６，５８：Ｈ，７，ＣＮ　；Ｎ、７．０６゜実験値：
Ｃ，６６，１１：Ｈ，７，５４ｉｊＶ、　６、Ｔ７゜実
施例３９ （４２）、ジオキサン（４Ｄｗｔ）中４．５ＮＨＣ１の
浴液をＦＭＯＣ−Ｌｙｔｔ　（ＢｏＣ）　−Ａｓｐ　（
０−１−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＢｚｌ（４１）、
（４，５ｇ、４５ミリモル）に添加し、室温で３時間攪
拌した。専媒を減圧下に除去して４２の１００％を白色
の固体として得た。これを更に′ｎ！製しないで使用し
た。

実施例４０ ＦＭＯＣ−シフｏ−ＣＬｙｓ−Ａｓｐ）−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ−ＯＢｚｌ（４３）。ジメチルホルムアミド（１００
０＊）中ＦＭＯＣ−Ｌｙｅ　　（Ｉ９’（：ｌ）　　二
Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＢｚｌ（４，０ｇ、４．８
ミリモル）及びジフェニルホスホリルアジン（１，５Ｊ
ＩＸ　５、Ｔミリモル）の溶液に、トリエチルアミン（
数滴）を室温で添加して、ｐＨを７２に調節した。この
混合物を一１５℃で２日間放置した。溶媒を減圧下に除
去し、生成物を水でそしゃくすることによって沈殿させ
た。濾過及び乾燥後、４３の五８ｇを分離した。この物
質を更に特徴づけないで、まｆｃｆｆ製しないで使用し
た。

！！！施例４１ ２０％　ＣＶ／Ｖ）　　ビーリジン／ジメチルホルムア
ミ　ド　（３０ｍ／）　　中ＦＭＯＣ−シクｏシフＣＬ
ｙｓ−Ａｓｐ）−Ｖａｔ−Ｔｙｒ−ＯＢｚｌ　　（４３
）　　（五６ｇ、４４ミリモル）Ｏ浴液を室温で５時間
攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、生成物をジメチルホ
ルムアミド（１５ｄ）に２回溶解し且つ溶媒を減圧下に
除去してすべての痕跡量のピペリジンを除き、４４の２
．６２ｇを得九。この物質を、更に特徴づけないで又は
精製しないで使用した。

実施例４２ ド　　（１０ｄ）　　　中Ｚ−ＡｒｃｔＣＨＣ１）　　
　（１，６６ａ、　　　４゜８ミリモル）及びＮ−メチ
ルモルフォリン（α４８６　ａｚ　４．８ミリモル）の
溶液に、クロルぎ酸イソブチル（α６５６ｇ、４．８ミ
リそル）を添加した。この混合物を３０分間攪拌した。

反応混合物に、ジメチルホルムアミド（４０ｍ）中シク
ロ−Ｃｌｓｔａ−Ａｓｐ）　−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＢｚ
ｌ　（４４）（１６２ｆＪｚ４．４ミリ七ル）の溶液を
滴々に添加した。

混合物を一２０℃で１時間攪拌し、次いで温度を室温ま
で上昇せしめた。この混合物を水（２００ｄ）に添加し
た。生成物が白色の固体として沈殿した。この固体を戸
別し、エーテルで洗浄し、乾燥して４５の五９５ｇを得
た。この物質を更に特徴づけないで又はｆｆ＄ｌ！Ｌな
いで使用し九。

実施例４３ ９０％酢酸（３０ｍｇ）中Ｚ−Ａｒｇ　（ＩＩｃＩ）　
−’／クロＣＬｙｓ−Ａｓｐ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＢ
ｚｌＣ五Ｏｇ、ｉ４ミリモル）の浴液に、１０チＰｄ／
Ｃ（３００ダ）を添加した。この混合物を５０ｐｓｉＨ
２で７２時間水素化した。この反応混合物を濾過し、炉
液を凍結乾燥した。粗物質を０．０１　Ｍ　　ＮＨ，Ｏ
Ａｃに、５＞Ｒ５，００で溶解し、セファデックス５ｐ
ｃ−２５を充填した２、５　Ｘ　９０ｃｒａのカラムに
かけ、１０１＃　　ＮＨ４０Ａｃ、ｐＨ５，ｏＯから０
．２ＭＮＨ４０Ａ　ｃ、　ｐ　Ｈヘグラジエントで流出
させ、４の１２０ダを得た。Ｒ１α１４　　（Ａ）ｇＰ
Ｏ５Ｆ、Ａ、Ｂ、ＭＨｍ’６６２１ＮＥＧＦ、Ａ、Ｂ、
ＭＨ−ＭＷ６６０：　　アミノ酸分析：　Ａｒｒｔ　（
１，００）　、Ｌｙｓ（０，６８）　、　Ａｓｐ　（α
６０）　、Ｖａｌ　（１，０２）　、Ｔｙｒ（１，０１
）　、６５４ペプチド。ロイシンアミノペプチダーゼ、
Ａｒｒｔ　（１，００）　、Ｌｕｘ　（０，０２）　、
Ａｓｐ（０，０４）　、Ｖａｔ　（１，０５）　、Ｔｙ
ｒ　（１，０！ｌ）。

実施例４４ 環状ＧＮＰ分析 この分析は、試験ペプチドが完全なＯＥＭＩＩａｌ胞の
細胞膜受体に結合し且つ環状ＧＭｐの生産を選択的に刺
激する、チモボイエチンと同様の能力を測定する。

ＣＥＭ細胞系を、アメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクション（Ａｍｅｒｉｃａ？ＬＴｙｐｅ　　Ｃｕ−Ｃ
ｕ−１ｔ　　Ｃｏ１）ａｃｔｉｏｎ）から得、１０チの
熱で不活性化した胎生の血清、１０チの熱で不活性化し
た馬の血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、及び５０　ｇ　
／　ｍｌのｒンタｉイシンで補充したＲＰＭＩ−１６４
０媒体中において、５％ｃＯｔを含有する市況雰囲気中
５７℃下に、３〜４Ｘ１０’細胞／−の最終密度まで培
養した。この濃度において、細胞は生長曲線の初期静止
相にあり、トリパン・ブルー　（ｔｒｙｐａｎ　　ｂｌ
ｓｔａ）の排除により９０チ以上が生きていると判断さ
れた。細胞を４日間生長させ、収穫した。収穫後、細胞
をＰＢＳ中で３回洗浄し、Ａ１２Ｘ１０’細胞／ＭＩｔ
ノ濃度でＲＰＭｌ−１６４０媒体に再懸濁させた。細胞
を３７℃で６０分間平衡化させた後、種々の濃度の試験
ペプチドを媒体２５μを対細胞１ｄの容量で添加した。

添加する試験化合物の最初の濃度は媒体中に試験ペプチ
ドの所望の最終濃度が達成されるように選択した。試験
ペプチドを細胞懸濁液とすぐに混合した。培養を振とり
水浴中３７℃で４〜５分間進行させ、次いで氷冷したト
リクロル酢酸（１０％、１ｄ）の添加によって停止させ
た。

次いでＴＣＡ中の細胞を均一にし、超音波処理して環状
ヌクレオチドを遊離させた。得られた懸濁液を４℃で２
０分間３０ＤＯｐの遠心分離にかけ、得られた沈＆　ｔ
　ｌ　Ｉ　Ｎ　　ＮａＯＨに＠解し、更に５０分間遠心
分離にかけた。その後蛋白質含量をカドマン（Ｃａｄｍ
ａπ）ら、アナル・ビオヘム（Ａ？Ｌａ１．　Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、）、９６．２１〜２３（１９７９）の方法で決
定した。ＴＣＡを、水を飽和したジエチルエーテル５１
で４回抽出することによって上置み画分から除去した。

鮫後Ｏ抽出後、５０℃の水浴中で１０分間加熱すること
によって残存する痕跡量のエーテルを除去した。この抽
出した上泄画分を凍結乾燥した後、これを５ＱｍＭ酢酸
塩緩衝液、ｐＨ６，２、中で再構成させ、分析キット＃
Ａ？Ｘ−１３３、ニューイングランド・ヌクレア（Ｎｅ
ｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）　、ボストン（
Ｂｏｘｔｏｔ＞）　、ＭＡ０２１１３、を用いることに
よ１３１状ヌクレオチドの放射性免疫分析をした。

放射性でｍｍした環状ＧＮＰに対する通常の競争的放射
性免疫分析を行なって、試験ペプチドの各濃度によって
誘導された環状ＧＮＰの量を決定した。ペプチド１．２
及び４はこの分析においてデモペンチン様活性を示し、
−万ペプチド３は不活性であった。

実施例４５ 受体分析 本分析は、試験ペプチドが標識されたチモボ・１エチン
と競争して、ＯＥＭ細胞からの蛋白質を分離されたチそ
ボイエチン細胞の表面受体に結合させる能力を測定する
。

＠ＬＣＥＭ細胞系統をアメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクションかう得り。３−ニトロ−２−ピリジンス
ルホニルクロライド及び２−ピリジンチオール１−オキ
シドは、東京三洋研究所のマツダ・レイ（Ｒｅｉｎαｔ
ｓｕｄａ）博士から提供された。ｌ’Ｍｒ−１６４０、
胎生血清及びＬ−グルタミンはギブコ（Ｇｉｂｃｏ）か
ら、ゲンタマイシンはシｘ　リｙ　／　（Ｓｃｈｅｒｉ
ｎｇ）から及びレクチンの結合したアガロースビーズは
ベクター・ラボラトリーズ（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ）から入手した。セファデックスはファ
ーマシア―ファイン・ケミカルズ（ｐｈａｒｍｔｔｃｉ
ａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から購入した。

すべて他の化学品は通常の市販源から購入し、ゝ・試薬
級のものであった。ウサギの抗チ七ボイエチン抗体及び
ユビキチンは次の公知の方法で作った。

用いる略号は次の通りである：ｐＢＳ、ホスフェート緩
衝の食塩水；ＴＣＡ、トリクロル酢酸；ＳＤＳ、　　ド
デシル硫酸ナトリウム；ＣｏｎＡ、コンカナビクンＡ；
Ｔｐ、チモボイエチン；ｐＥＧ。

ポリエチレングリコール＋ＢＳＡ、牛の血清アルブミン
ｒ１．Ｐ、、腹腔内ＨｐＭＳＦ、フェニルメチルスルホ
ニルフルオリド；ＦＴｓ、ファクツー／Ｉ／＠チミク・
セリフ（ｆａｃｔｇｕｒ　ｔｈｙｍｉｑｕｇ８ｅτ１ｑ
ｕｅ）　ｔ　ＣＲＦ、コルチコトロピン遊離因子１ＡＣ
ＴＨ，アドレノコルチコトロピンホルモン１Ｈｅｐｅｓ
、、　Ｎ　−２−ヒドロキシエチルピベ２ジンＮ−２−
エタンスルホン酸。

膜の糖蛋白の製造　ＣＥＨの人間のリンパ球細胞系統を
、１０チの熱で不活性化した胎生の血清、２ｔｎＭのＬ
−グルタミン及び５０μｃｔ／ｍのゲンタマイシンで補
充し九ＲＰＭＩ−１６４０中において、５ｔ４ｃｏｔを
含有する市況雰囲気中３７℃下に、３〜４Ｘ１Ｇ’細胞
／−の最終密度まで培養した。この濃度において、細胞
は生長曲線の初期静止相に１７．　　）リパン・ブルー
の排除により９０チ以上が生きていると判断された。

膜の糖蛋白はヘト（Ｈｇｄｏ）ら、ビオヘム（Ｂ＜０−
ｃｈｅｍ）、主」、３３８５〜３３９３　（１９８１）
の技術の改変によって製造した。細胞をＰＢＳで１回洗
浄し、４０チスクローズ、ｓｏｍＭヘベス、１％ＥＤＴ
Ａ、０．ｌ５ｏ−７ｘｆ：ｙｘ＋：ＩＪ：ｙ、及び１ｍ
　Ｍ　　ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｆ　（メタノール中）、ｐ　Ｈ７
，８に懸濁させ、ガラス製ホモゲナイザー中で室温下に
均一にした。次いで全懸濁液を、カップ・ホーン型付属
品（Ｗ−２２５Ｒ型）を有する細胞破壊超音波機による
超音波に３５℃で１０分間供した。

このａｍ液をソーパル（ａｏｖｃＬＬ）　Ｇ　Ｌ　Ｃ−
３遠心分離機において、４℃で１０分間６００Ｘｇの遠
心分離に供し、上澄液をソーパル５Ｂ遠心分離機におい
て、４℃で３分間２Ｑ、ＯＯＯＸｇの再遠心分離に供し
た。このペレットから遠られた粗膜画分をへペア５ｍｕ
ＸＭｇＳ０４１０ｍＭ、及びｐＨ５Ｆ　１ｍＭＸｐＨ７
，８中に、５岬／ｄの最終蛋白質濃度で懸濁させた。こ
の懸濁液を１チ）　ＩＪ　）ンＸ−１００（最終濃度）
及び０．１　＊　ｂｒｉｊ−９６（ポリオキシエチレン
ｌＯ、オレイルエーテル）（最終濃度）の存在下に２５
℃で２時間攪拌することによって蛋白質の可溶化を行な
った。この懸濁液を４℃で２時間２００．０００　Ｘ　
ｇの遠心分離にかけ、上置液を一７０℃で貯蔵した。可
溶性の蛋白質濃度を、カドナン（Ｃａｄｎａｎ）らの技
術に従い、ＢＳＡを標準物として用い且つ緩＠液を対照
とすることにより測定した。

受体蛋白質の精製のために、小麦胚芽のアグルｆ＝７又
Ｆｉ＋）シヌス・コミュニス・アグルチニン−Ｉ　（ｒ
ｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｗｔｓｉｓ　ａｇｇＬｕｔｉｎ
ｉｎ−１）を用いた。すべてのレクチンビーズを、対応
する単糖類禁止剤（３００ｓＪ／）と−緒に４℃で貯蔵
した。

各精製に対しては、レクチン−アガロース２１を直径１
ｃｍ０カラムに充填し、真空下にα１５ＭＮａＣＬ、５
０ｍＭヘペス、０．１％）リドンＸ−１及び０．０１　
＊５ＤＳＳ　ｐＨ７，８の２５１で洗渉した。

このカラムを０．１５＃　　ＮａＣ１，５０ｍＭヘヘス
及び０．１’％）！ｊ）ｙＸ−１００，ｐＨ７，８）の
２００ゴで洗浄し、次いでｌ　ＯｍＭ　　ＭｇＳＯ４を
含有するこの緩衝液で最終に洗浄した。すべての緩衝液
系にＰＭＳ　Ｆ　（１？ＦＬ＆）を添加した。可溶化さ
れた膜蛋白（〜１０岬）を個々のカラムを通して５回循
環した。次いでこのカラムをＱ、１５Ｊｆ　　ＮａＣ１
，５０ｍＭヘペス、１０　ｍ　Ｍ　ＭｇＳＯ４及び０．
１チドリトンＸ−１００、ｐＨ７，８，１００ゴで４℃
下に洗浄した。個々のカラムの流出には、３Ｔｎｔの洗
浄緩衝液中４００ｍＭの濃度において、単糖類禁止剤を
用いた；小麦胚芽のアグルチニンに対してＮ−アセチル
グルコサミン及びリシヌス・コミュニス・アグルチニン
ー１に対してβ−メチルＤ−ガラクトシド。単糖類をカ
ラムに適用し、これを３０〜４０分間停止させて平衡化
させ、次いで更に流出させた。蛋白質流出物をｓｏｍＭ
ヘペス、１０ｍｕＭｇＳＯ４、及び０．１チドリトンｘ
−１００、ｐ　Ｈ７，８、ｏｓｏｏ＊に対して４℃で透
析した。

放射性標識したチモボイエチンの製造−チモボイエチン
を０．２Ｍ炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウム緩衝液
、ｐＨ９８に溶解して反応性アミン基を得た。このチモ
ボイエチン溶液に、ジオキサン中３−ニトロー２−ピリ
ジンスルホニルクロライド（１０：１モル）を添加し、
２０℃で５時間攪拌した。水の添加後、不溶性物質を遠
心分離した。

保護されたペプチドを、セファデックスＧ−２３でのク
ロマトグラフィーにより、続いてボストープロリ：ｙ　
（ｐｏｓｔ−ｐｒｏｌｉｎｅ）開裂酵素での消化でＮＨ
，末端の保護されたプロリンを除去することにより、精
製した。メチル３，５−ジ〔Ｉ”Ｉ〕ヨードヒドロキシ
ベンズイミデート（４０００Ｃｉ／ｍｕ）をメタノール
中３．５　ｍ　Ｃｉ　７’ｍｔの濃度で得、これを蒸発
乾固した。このヨード化イミドエステル（１，４常Ｊｆ
）を、ウッド（Ｆｏ　ｏ　ｄ　）ら、アナル・ビオヘム
、６９，３３９〜３４９　（１９７５）の方法を次のよ
うに改変して、チモボイエチン（５μｇ　、　０．ｇ　
？ＬＡｆ　）と反応させた。反応を、０．１６Ｍボレー
ト緩衝液、ｐＨ９，１の５００μｌ中において、４℃で
２４時間行なった。この反応を２Ｍクエン酸塩燐酸塩緩
衝液、ｐＨ５，５の５００μｌの添加により４℃で停止
させた。試料を、ピロリン酸ナトリウム溶液中、４℃で
のビオゲルＰ−１０によるクロマトグラフィー（１５滴
／画分）にかけ、遊離のヨウ素を分離した。

ヨード化ペプチドを水に溶解し、２−ピリジンチオール
１−オキシド（ｌＯ：１モル）で室温下に５時間処理し
、保論基を除去した。この保護基を除去した標識された
ペプチドをビオゲルＰ−１０のカラムで精製した。次い
で３つの放射性の活性ピークを得た。この最初の２つの
ピークはウサギの抗チモボイエチン抗体に関して免疫活
性であった。続いて最初のピークを、５０ｍＭトリス緩
衝液、ｐＨ７，０で平衡化させたＤＥＡＥ−セファデッ
クスＡ−２５のｌＸ６０ｃ＋ｘカラムに適用した。ヨー
ド化混合物を、この緩衝液により、平衡濃度からＬＯＭ
までイオン強度を増大させる線状グラジェントで流出さ
せた。各面分の放射性を、ＬＫＢ１２８０ウルトラ（Ｕ
ｌｔｒａ）ガンマ分光機で決定した。

各精製スキームからのピーク放射性を有する画分を、過
剰な抗チモポイエチン抗体との結合に対して分析した。

ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５カラムのピークＩ（
画分３５〜４５）からの画分は、最高の特異的活性を示
し、続く放射性受体分析に用いた。

ヨード化チモポイエチン、神経筋肉分析〔ゴー＃　）”
　ｙ、　ｆイン（Ｇｏｌｄａｔｅｉｎ）、ネーチャー、
２４７゜１１〜１４（１９７４））での効果及びＯＥＭ
細胞による環状ＧＮＰの合成に及ぼす影響を評価するこ
とによって決定されるように生物学的活性を保持した。

結合分析　１２Ｊｉ’のヘベス、１．２９のＡｆ　Ｑ　
Ｓ　Ｏ４及び１、２１！のＢＳＡをガラス器蒸留水１０
００真ｌに添加することによって分析緩衝液をｖ４製し
た。原標準溶液を分析緩衝液を用いて作り、１週間使用
した。そして標準溶液１００β１１受体蛋白質（１５０
〜２００μＦ、／＋／）２ｓμ！、１！５１−７　ｐ（
８０，０００Ｃｐｍ）　　２５Ａｌ、　　　１　　タロ
　ト　リ　ト　ンＸ−１００の２０βノを添加し、容量
を分析緩衝液で２００μ！１でにすることにより、１２
Ｘ７５襲のガラス製試験管中で分析を行なった。４℃で
１８時間培養した後、ＰＢＳ、ｐＨ７，ｓ　６中人間の
ＩｇＧ（１，５Ｗ／ｍ）２００μ／及び３５チｐＥＧ−
８０００の２００μｌを添加し、混合し、そして氷上で
３０分間培養した。試験管の内容物を遠心分離Ｋかけ、
残渣をＰＢＳＸｐＨ７，３中１０％ＰＥＧで洗浄し、Ｌ
ＫＢ−ガンマ計数管で放射性を測定した。

１η／１の非放射性チモボイエチンの存在下における沈
殿の放射性は非特異的結合を表わすものとした。ＴＣＡ
を上澄（最終濃度５嗟）に添加し、沈殿しうる放射性を
測定した。すべての時間において、これは９５チを超え
、同位体からの遊離の？７２７の最小の放出を示した。

競争実験　上記結合分析法に従い　１１５Ｉ−ＴｐのＺ
３Ｘ１０−”Ｊ／を受体蛋白質４μＩ及び試験ペプチド
、更に同一濃度のチモポイエチン３７〜４５ノナペプチ
ド（Ｈ−ＶＡＬ−ＧＬＵ−ＬＦＵ−ＴＹＲ−ＬＥＵ−Ｇ
ＬＮ−５ＥＲ−ＬＥＵ−ＴＮＲ−ＯＨ）と−緒に培養し
た。この培養を１２時間継続し、次いで遊離の及び結合
した１１５Ｉ−７１を上述のように決定した。このノナ
ペプチドを用いて、受体蛋白質上の隣る受体部位を遮へ
いした。

この隣る部位が遮へいされていないならば、例えチモベ
ンチン受体部位が試験ペプチドで遮へいされているとし
ても、おる標識されたＴＰはこの部位を通して受体蛋白
質に結合することができる。

そのような結合は、試験ペプチドの活性と関連せず、ま
た（ＴＰ３７〜４５ノナペプチドで遮へいされていない
ならば）不正確な結果をもたらすであろう。

次の本発明の代表的な化合物は、平衡濃度において、チ
モポイエチン自己置換によって引き起こされるものの少
くとも５０チの置換を誘導し木：シフ＊−（Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ）、ペプチド１、 シフ＊−（Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ
−ＧＬｙ）、ペプチド２、及び ｉ　−Ｊ　ｒ　ｇ　−’／りｔ”−（Ｌｙｓ−Ａｓｐ）
−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＯＨ，ペプチド４゜ ペプチド３１Ｈ−Ａｒｇ−シクロ−（Ｌｙｓ−Ａｓｐ−
Ｇｌｙ）−ＴｙデーＯＨは検知しうる置換を誘導しなか
った。

比較のために、他のペプチド例えばインシュリン、グル
カゴン、生長ホルモン、ンマトスクチン、β−エンドル
フィン、ＦＴＳ、ＡＣＴＨ，ＣＲＦ。

及びユビキチンは、検知しうる置換を誘導しなかった。

上記実施例は、例示の目的で提示され、本発明の範囲を
制限するものではない。その範囲は特許請求の範囲に示
されている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 又は ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ＲはＨ、低級アルキル、ホルミル又は低級アル
   カノイルであり； ＷはＬＹＳ、ＰＲＯ、デヒドロ−ＰＲＯ、又はＡＩＢで
   あり； ＺはＴＹＲ、ＴＹＲ−ＧＬＹ、ＰＨＥ、又はＰＨＥ−Ｇ
   ＬＹであり； Ｚ′はＴＹＲ又はＰＨＥであり； Ｒ″はＯＨ又はＮＲ＾２Ｒ＾３であり；そしてＲ″及び
   Ｒ＾３はそれぞれ独立にＨ又は低級アルキルから選択さ
   れる〕 のペプチド。 ２、▲数式、化学式、表等があります▼ である特許請求の範囲第１項記載のペプチド。 ３、▲数式、化学式、表等があります▼である特許請求
   の範囲第１項記載のペプチド。 ４、式シクロ−（ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−Ｔ
   ＹＲ）のペプチド又はその製薬学的に許容しうる酸又は
   塩基の付加塩。 ５、式シクロ−（ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−Ｔ
   ＹＲ−ＧＬＹ）のペプチド又はその製薬学的に許容しう
   る酸又は塩基の付加塩。 ６、式Ｈ−ＡＲＧ−シクロ−（ＬＹＳ−ＡＳＰ）−ＶＡ
   Ｌ−ＴＹＲ−のペプチド又はその製薬学的に許容しうる
   酸又は塩基の付加塩。 ７、Ｔ細胞を誘導する効果的な量の特許請求の範囲第１
   項記載のペプチドを製薬学的に許容しうる担体を混合し
   て含んでなる製薬学的組成物。 ８、相対的又は絶対的にＴ細胞の不足する状態の対象に
   、治療学的に有効量の特許請求の範囲第１項記載のペプ
   チドを投与することからなるそのような状態の処置法。 ９、効果的に誘導する量の特許請求の範囲第１項記載の
   ペプチドを対象に投与することを含んでなる、胸腺に由
   来するリンパ球の特性を発現させるために対象のリンパ
   球の幹細胞を誘導する方法。