JPS596890A - 抗腫瘍性物質５１１７およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 に関するものであり，さらに詳しくはグルコサミンを含
有する新規抗腫瘍性物質！；／／７およびフレトトリカ
ム属菌より同化合物を製造する方法を提供するものであ
る。

微生物起源の抗腫瘍性物質は既に数種類知られており１
例えば、サツカロミセス属菌によるペプチドグルコマン
ナンＳＰＧＭ−ＩとＳＰＭ−ＴＩ（特公昭！’ｌ−１−
７ｆ７およびビール酵母による蛋白多糖類（特開昭３３
−７’１７２２グ）などのグルコサミン含有抗腫瘍性物
質、さらにペスタロテイア属菌により産生きれるムコ多
糖類（特開昭ｊ乙−’ｔ９３９３）も知られている。し
かし、樹木寄生かびであるコレトトリカム ）に属する菌がこの種の抗腫瘍性物質を産生ずることは
知られていない。今般本発明者らが同属菌を検討したと
こち．グルコサミンを含有する新規の抗腫瘍性物質を産
生ずることが明らかになり本発明を完成した。

本発明により得られる抗腫瘍性物質ｊ／／７の理化学的
性状は下記のとおりである。

■元素分析　Ｃニゲθグ　〜　グθ乙　％Ｈ　：　　　
乙．３　０〜　　　　　乙．乙　０％Ｎ：　／グ０〜　
　、２．、θθ％ 灰分：　０グＯ　−ユθθ％ ■分子量　　限外瀘過法による平均分子量３Ｑθθθ−
？− 〜／θθθ００。

■融点　　　融点は認められず２５θ°Ｃ付近で分解。

■比旋光度　Ｃ”　ｌ）Ｄ　　−＋２！；、　／　＋　
０７　（　ｃ　ｉ　０　０　、水）■紫外線吸収スペク
トル　　図／参照 ■赤外線吸収スペクトル　　図２参照 ■溶剤に対する溶解性 水に可溶，メタノール、エタノール。

エーテル、アセトンに不溶。

■呈色反応　モーリッシュ反応，フェノール硫酸反応．
アントロン硫酸反応に対して 陽性．酸性加水分解後ニンヒドリン 反応，エルソン・モルガン反応に対 して陽性。

■塩基性．酸性．中性の区別 ７％水溶液でｐＨ約ｉ３である。

［相］物質の色　淡黄色から淡褐色。

上記性状より本抗腫瘍性物質はグルコサミンを含有する
水溶性物質であることが認められる。既知のグルコサミ
ン含有抗腫瘍性物質と本物質を比較すると，比旋光度が
異なっておりかつ本物質が塩基性であるのに対して既知
物質が酸性または、中性を示すことから．本物質は新規
な物質と確認された。

この新規抗腫瘍性物質ｊ／／７はコレトトリカム属菌に
より産生される。コレト１ーリカム属菌としては．例え
ば、本発明者らが分離し，　Ｔｒａｎｓ。

ｍｙｃｏｌ．　Ｓｏｃ．　Ｊａｐａｎ　（日菌報）／７
：、２乙２〜２７／（７９．７乙）の記載よりコレトト
リカムブレオスポリオイブ７．　（ｃｏｌｌｅｔｏｔｒ
ｉｃｈｕｍ　ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉ　−ｏｉｄｅｓ）と
同定したコレトトリカムオイデスｆ／−３２．さらに発
酵研究所より分譲を受けたコレ］・トリカム・ディマチ
ラム（　Ｃ。

ｄｅｍａＬｉｕｍ　）Ｉ　Ｆ　Ｏ乙７θｊが挙げられる
。前者は７９に２．年６月７９日より工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第乙！；９／号として寄託
されている。本発明においてはこれらの例示菌およびそ
の変異菌は当然のこと，コレトトリカム属に属するｊ／
／７産生菌を用いてｊ／／７を産生する方法をすべて包
含する。

−　弘一 本発明の目的物質３１／７の製造は３／／７の産生菌を
好気的条件下に培地に培養し，培養路ｑ後培養物を除蛋
白処理にイ」シたのち分離精製することよりなる。

培地組成，培養条件などは通常の発酵物生産に用いられ
ているものを利用すればよい。培地は同化しうる炭素源
および窒素源を含有し，さらに必要に応じて無機塩類，
ビタミン類，前駆物質を加える。炭素源としては，例え
ば、グルコース、しよ糖，でんぷん、デキストリン、グ
リセリン、糖が 蜜，有機酸など声ぼられ．窒素源としては大豆粉。

コーン・スチープ・リカー、肉エキス、酵母エキス、綿
実粉．ペプトン、小麦胚芽．硫酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウムなどが例示され，こレラはそれぞれ単独でま
たは組合せて用いられる。無機塩としては，炭酸カルシ
ウム、塩化ナトリウム。

塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化コバルト。

各種リン酸塩が例示され．必要に応じて培地に添加する
。

培養は液体培養が好ましく．大量生産を行う場合は深部
通気培養がよい。培養温度は約２θ〜グθ°Ｃで行うと
よく、特に約２ｊ〜３．２°Ｃが好ましい。

培養時間は発酵の規模により左右されるが、約７２時間
から／θ日日間う。

培養終了後培養物から目的物質を分離採取する方法は１
通常の発酵生産物から糖質類を分離採取する際に用いる
方法を応用すればよい。すなわち。

濾過や遠心分離法などにより培養炉液または分離液を得
、この炉液または分離液を硫安分画、有機溶媒処理、蛋
白分解酵素処理などの方法で除蛋白および分画する。つ
いで、各種イオン交換樹脂やその他の活性吸着剤を用い
た吸脱着またはクロマトグラフィー、種々の有機溶媒を
用いた抽出または再沈澱法あるいは適当な緩衝液での塩
析等を用いて精製を行い、目的物質３／／７を得る。分
離方法の一例を示すと、培養物を／２θ’０　、３０分
加熱後菌体を瀘去し、Ｐ液を減圧濃縮したのち除蛋白処
理し、粗製のｊ／／７を得る。本島をさらに蛋白分解酵
素で除蛋白しついで透析すると、精製された抗腫瘍性物
質ｊ／／７が得られる。ｊ／／７７− が水溶性の糖類であることを考慮しながら上記のように
公知の分離精製方法を用いると、　！；／　／７を容易
に分離採取することができる。

ｊ／／７は前記のように抗腫瘍性を有している。

その−例として、以下にエーリッヒ力ルシノーマ（Ｅｈ
ｒ　ｌ　ｉｃｈ　ｃａｒｅ　ｉｎｏｍａ　）を皮下接種
したマウスにおけるｊ／／７の生体内抗腫瘍効果を示す
。

実験動物はＤＳ系マウスの雄性、ｊ退会のものを用いる
。エーリッヒ力ルシノーマはマウス腹腔内に腹水型で継
代し、接種後７白目の腹水を採取し、これを他のマウス
／匹に対し７０６個のガン細胞の割でマウス背部皮下に
移植した。

移植後２を時間後に生理食塩水溶液とした。５’／／７
の第１回目投与をマウス腹腔内に行ない、以後同様にし
て７日１回ｌθ日間投与を行ない、／／日日目腫瘍を摘
出し、生理食塩水のみ投与した対照群とその重量を比較
した。なお、マウスは３匹を／ｒｎ（対照群は７匹を７
群）とした。

ここにおいて、エーリッヒ力ルシノーマに対する腫瘍阻
止率は次式を用いて計算されたものである。

τ−子 腫瘍阻止率＝−＝ニー×／θθ τ：対照群の平均腫瘍重量 〒：治療群の平均腫瘍重量 実施例２で得られる抗腫瘍性物質および市販の抗腫傷薬
クレスチンを、／回当たりｊθ〜ｊθＯ〜／ｋｑスツ／
θ回、エーリッヒ力ルシノーマヲ移植したマウスの腹腔
内に投与したときの腫瘍阻止率は下表のようになり９本
発明の物質は市販の抗腫傷薬よりすぐれた抗腫瘍作用を
示している。

、ｆ／　／７は上記のように抗腫瘍性を有しており。

医薬または動物薬として有用な化合物である。同物質は
経口的にまたは非経口的に大または動物にｇ− 投１ゴされる。汎用されている賦形剤、安定化剤。

保存剤、湿潤剤、界面活性剤、矯味剤、芳香剤などを用
いて、粉剤１錠剤、顆粒剤、カプセル剤などとしてもよ
いし、さらに適当な溶剤、基剤、溶解補助剤を加えて注
射剤、塗布剤、半割などとすることができる。ｊ／／７
の投与量は治療目的や患者の性別１年齢、病歴などによ
り大きく異なるが、一般にはクレスチンの約ｌ／／θか
ら同量程度。

例えば、経口投与の場合成人−日量は約０２〜３ｇであ
る。

次に本発明にかかる／／Ｓ７の製造例を示すが。

これら実施例はなんら本発明を限定するものでな゛　い
。

実施例／ グルコースとθ％、ポリペプトン０３％、酵母エキスθ
ｇ％、リン酸／カリウム０７％、硫酸マグネシウム０θ
ｊ％を含む液体培養基（ｐＨ６，３）／θθｔｅｌを坂
ロフラスコに分注し、／、２／”Ｃで２θ分間蒸発滅菌
する。これに予め同様の培養基に２ｆ０Ｃでｊ日間培養
しておいたコレトトリカム・グレオスボリオイデスｇ／
−！；２（ＦＥＲＭ　Ｐ−乙ｊ９／）の種培養液／ｍｌ
を接種し、／ケθｒ、　ｌ’Ｌ　ｍ、の回転振盪機で２
．、！ｒ″Ｃ，７日間培養する。培養液／、２本分を合
して７２０°Ｃで３０分間熱処理してヌツチェ沖過によ
り菌体を除去し、培養Ｐ液を１ｕｌｌ得る。

この培養ン戸液を減圧濃縮して２００ｍ１とする。

θ９飽和の硫安で除タンパク操作をし、上澄液を透析し
、凍結乾燥して粗抗腫瘍性物質θ乙θｆを得る。

実施例ユ 実施例／で得られた粗抗腫瘍性物質０乙θ！をｐＩ（ざ
θのリン酸緩衝液、！；０ｔｎｌに溶解し、２．ｔ’Ｃ
で２グ時間蛋白分解酵素（プロナーゼｐ、科研化学製）
で処理し、透析および濾過による不溶分除去後凍結乾燥
して抗腫瘍性物質５／／７を０３３１１得る。

実施例３ 実施例／と同様の組成からなる液体培養基（ｐＨＡ、、
！；）１００肩ｔを坂ロフラスコに分注し、７２７°Ｃ
で２θ分間蒸気滅菌する。これに予め同様の培養基に２
ｇ６Ｃでｊ日間培養しておいたコレトトリカム・デイマ
チウムＩＦＯ乙７０３のｍ培養液ｔｍｌを接種し、／り
θｒ、　Ｐ　ｍ、の回転振盪機で、２ｆ”Ｃ。

７日間培養する。培養液／θ本分を合して／、２θ°Ｃ
で３θ分間熱処理してヌツチェ瀘過により菌体を除去し
、培養Ｐ液７θθｍｌを得る。

この培養Ｐ液を減圧濃縮してざθｍｌとし、ざ０％エタ
ノールの沈澱部を水ユθθｍｌに溶解して透析し、ｐＨ
をざ０に調整後２５’Ｏで、２．り時間プロナーゼ処理
し、透析および濾過による不溶分を除去後凍結乾燥して
抗腫瘍性物質３；／／７をθ３ｊｇ得る。

【図面の簡単な説明】

図１は３１　／７の水溶液による紫外線吸収スペクトル
を示［）２図２はｊ／／７の臭化カリウム錠による赤外
線吸収スペクトルを示す。 特許出願人　　塩野義製薬株式会社

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性状を有する抗腫瘍性物質３／　
   ／７゜■元素分析　Ｃ：１Ｉ０１／−−４Ｚθ６　％Ｈ
   ：　　　６．３　θ〜　　　　６．６０％Ｎ：　　１１
   １．０〜　　ユＯＯ％ 灰分：θｔｔｏ−、：ｚｏｏ％ ■分子量　限外濾過法による平均分子量３０，０００〜
   １００，００００ ■融点　　融点は認められず２５０°Ｃ付近で分解。 ■比旋光度　〔α〕：′°’＝＋２！、、／±０７（Ｃ
   １００，水）■紫外線吸収スペクトル　　図１参照 ■赤外線吸収スペクトル　　図２参照 ■溶剤に対する溶解性 水に可溶、メタノール、エタノール。 エーテル、アセトンに不溶。 ■呈色反応　モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応、
   アントロン硫酸反応に対し て陽性、酸性加水分解後ニンヒドリ ン反応、エルラン０モルガン反応に 対して陽性。 ■塩基性、酸性、中性の区別 ７％水溶液でｐＨ約にｊである。 ［相］物質の色　淡黄色から淡褐色
2. （２）コレトトリカム属に属する抗腫瘍性物質５／／７
   産生菌を培地に培養し、得られる培養物からｊ／／７を
   採取することを特徴とする抗腫瘍性物質！；／／７の製
   造法。
3. （３）抗腫瘍性物質３１／７を含有することを特徴とす
   る医療用組成物。