JPH11292795A - Ｈｉｖコファクター抑制剤 - Google Patents
Ｈｉｖコファクター抑制剤Info
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- JPH11292795A JPH11292795A JP10125452A JP12545298A JPH11292795A JP H11292795 A JPH11292795 A JP H11292795A JP 10125452 A JP10125452 A JP 10125452A JP 12545298 A JP12545298 A JP 12545298A JP H11292795 A JPH11292795 A JP H11292795A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＨＩＶの感染に対して有効な予防又は治療を
行うことができるＨＩＶコファクター抑制剤を提供す
る。 【解決手段】 ＣＸＣＲ４遺伝子又はＣＣＲ５遺伝子の
塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレ
オチドを含有する。
行うことができるＨＩＶコファクター抑制剤を提供す
る。 【解決手段】 ＣＸＣＲ４遺伝子又はＣＣＲ５遺伝子の
塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレ
オチドを含有する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＨＩＶコファクタ
ー抑制剤に関する。本発明によるＨＩＶコファクター抑
制剤は、抗ＨＩＶ剤として、ＨＩＶ感染予防及び／又は
ＨＩＶ感染治療に用いることができる。
ー抑制剤に関する。本発明によるＨＩＶコファクター抑
制剤は、抗ＨＩＶ剤として、ＨＩＶ感染予防及び／又は
ＨＩＶ感染治療に用いることができる。
【０００２】
【従来の技術】ウイルスは、ＤＮＡ又はＲＮＡのいずれ
かの核酸と少数のタンパク質分子とから構成される粒子
状の微生物であり、それ単独では増殖することができ
ず、ヒト宿主細胞内へ侵入し、宿主の代謝系を使っては
じめて増殖することができる。ウイルスは、一般に、ヒ
ト宿主細胞において、吸着、侵入、アンコーティング、
転写、組み立て、発芽、そして放出という過程をとって
増殖する。このようなウイルスに対する「抗ウイルス
剤」としては、従来から種々の抗生物質が使用されてき
た。例えば、アマンタジンは、インフルエンザウイルス
が細胞に侵入する段階を阻害することによって抗ウイル
ス作用を示し、ヌクレオシド系抗ウイルス剤（例えば、
ａｒａ−Ａ）は、核酸の複製（合成）を阻害することに
よって抗ウイルス作用を示すので、いずれもヒト宿主細
胞に影響を与える点で、望ましい抗ウイルス剤とはいえ
ない。
かの核酸と少数のタンパク質分子とから構成される粒子
状の微生物であり、それ単独では増殖することができ
ず、ヒト宿主細胞内へ侵入し、宿主の代謝系を使っては
じめて増殖することができる。ウイルスは、一般に、ヒ
ト宿主細胞において、吸着、侵入、アンコーティング、
転写、組み立て、発芽、そして放出という過程をとって
増殖する。このようなウイルスに対する「抗ウイルス
剤」としては、従来から種々の抗生物質が使用されてき
た。例えば、アマンタジンは、インフルエンザウイルス
が細胞に侵入する段階を阻害することによって抗ウイル
ス作用を示し、ヌクレオシド系抗ウイルス剤（例えば、
ａｒａ−Ａ）は、核酸の複製（合成）を阻害することに
よって抗ウイルス作用を示すので、いずれもヒト宿主細
胞に影響を与える点で、望ましい抗ウイルス剤とはいえ
ない。
【０００３】ヒト免疫不全ウイルス（以下、ＨＩＶと略
称する）を代表とするウイルスに対する抗ウイルス剤と
しては、ヒト宿主細胞に影響を与えずにウイルスの増殖
を止める作用を有していることが望ましい。しかしなが
ら、ウイルス増殖が宿主細胞内で生じるとき、そのほと
んどが宿主細胞内の代謝や機能に依存している。このた
め、望ましい抗ウイルス剤の開発にあたっては、各々の
ウイルスの増殖に関する基本的知識が集積されなければ
ならない。このような事情により、ヒト宿主細胞に影響
を与えない抗ウイルス剤の開発は、抗生物質の開発に比
べて非常に遅れている。
称する）を代表とするウイルスに対する抗ウイルス剤と
しては、ヒト宿主細胞に影響を与えずにウイルスの増殖
を止める作用を有していることが望ましい。しかしなが
ら、ウイルス増殖が宿主細胞内で生じるとき、そのほと
んどが宿主細胞内の代謝や機能に依存している。このた
め、望ましい抗ウイルス剤の開発にあたっては、各々の
ウイルスの増殖に関する基本的知識が集積されなければ
ならない。このような事情により、ヒト宿主細胞に影響
を与えない抗ウイルス剤の開発は、抗生物質の開発に比
べて非常に遅れている。
【０００４】近年、ＨＩＶ治療薬として、ＨＩＶプロテ
アーゼ阻害剤と、従来のＨＩＶ逆転写酵素阻害剤２種類
とを組み合わせた３剤併用療法によって、血中のウイル
スＲＮＡ濃度を検出限界以下に減少させることに成功し
た。このため、エイズは、発症したら死を待つしかない
と考えられていた不治の病から、治療可能な病気と考え
られつつある。しかしながら、前記の３剤併用療法は、
副作用や長期投与による耐性ウイルス出現の問題などが
解決されていない。
アーゼ阻害剤と、従来のＨＩＶ逆転写酵素阻害剤２種類
とを組み合わせた３剤併用療法によって、血中のウイル
スＲＮＡ濃度を検出限界以下に減少させることに成功し
た。このため、エイズは、発症したら死を待つしかない
と考えられていた不治の病から、治療可能な病気と考え
られつつある。しかしながら、前記の３剤併用療法は、
副作用や長期投与による耐性ウイルス出現の問題などが
解決されていない。
【０００５】ＨＩＶ−１は、それが感染することのでき
る細胞の種類によって、大きく３種類に分類されてい
る。すなわち、ＣＤ４+ Ｔ細胞と培養Ｔ細胞株には感染
することができるがマクロファージには感染することが
できないＴ細胞指向性（Ｔ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−
１；ＣＤ４+ Ｔ細胞とマクロファージには感染すること
ができるが培養Ｔ細胞株には感染することができないマ
クロファージ指向性（Ｍ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−１；
及び、いずれの細胞にも感染することのできる両指向性
（ｄｕａｌ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−１の３種類であ
る。一方、ＨＩＶ−１が発見された１９８３年の翌年
（１９８４年）には、ＨＩＶ−１が標的細胞に侵入する
際に使用するレセプターとしてＣＤ４分子が報告されて
いたが、ＨＩＶ−１の侵入には、ＣＤ４の他に、セカン
ドレセプター（コレセプター又はコファクター）が必要
であることも分かっていた。Ｔ細胞指向性ＨＩＶ−１の
セカンドレセプターがＣＸＣＲ４（ＣＸＣ ｃｈｅｍｏ
ｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４）であることは、１９
９６年にＢｅｒｇｅｒらによって報告された［Ｆｅｎ
ｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，８７
２−９７７（１９９６）］。すなわち、ＨＩＶ−１のレ
セプターであるＣＤ４レセプターを発現させたマウスの
細胞に、ＣＸＣＲ４を発現させると、Ｔ細胞指向性ＨＩ
Ｖ−１は前記細胞に感染したが、マクロファージ指向性
ＨＩＶ−１の感染は成立しなかった。一方、ＣＤ４レセ
プターを発現しない細胞に、ＣＸＣＲ４のみを発現させ
ても、ＨＩＶ−１は感染しなかった。
る細胞の種類によって、大きく３種類に分類されてい
る。すなわち、ＣＤ４+ Ｔ細胞と培養Ｔ細胞株には感染
することができるがマクロファージには感染することが
できないＴ細胞指向性（Ｔ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−
１；ＣＤ４+ Ｔ細胞とマクロファージには感染すること
ができるが培養Ｔ細胞株には感染することができないマ
クロファージ指向性（Ｍ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−１；
及び、いずれの細胞にも感染することのできる両指向性
（ｄｕａｌ−ｔｒｏｐｉｃ）ＨＩＶ−１の３種類であ
る。一方、ＨＩＶ−１が発見された１９８３年の翌年
（１９８４年）には、ＨＩＶ−１が標的細胞に侵入する
際に使用するレセプターとしてＣＤ４分子が報告されて
いたが、ＨＩＶ−１の侵入には、ＣＤ４の他に、セカン
ドレセプター（コレセプター又はコファクター）が必要
であることも分かっていた。Ｔ細胞指向性ＨＩＶ−１の
セカンドレセプターがＣＸＣＲ４（ＣＸＣ ｃｈｅｍｏ
ｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４）であることは、１９
９６年にＢｅｒｇｅｒらによって報告された［Ｆｅｎ
ｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，８７
２−９７７（１９９６）］。すなわち、ＨＩＶ−１のレ
セプターであるＣＤ４レセプターを発現させたマウスの
細胞に、ＣＸＣＲ４を発現させると、Ｔ細胞指向性ＨＩ
Ｖ−１は前記細胞に感染したが、マクロファージ指向性
ＨＩＶ−１の感染は成立しなかった。一方、ＣＤ４レセ
プターを発現しない細胞に、ＣＸＣＲ４のみを発現させ
ても、ＨＩＶ−１は感染しなかった。
【０００６】また、ＣＸＣＲ４の報告の翌月から、マク
ロファージ指向性ＨＩＶ−１のセカンドレセプターにつ
いての論文が相次いで発表された［Ｄｒａｇｉｃ，Ｔ．
ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８１，６６７−６７３
（１９９６）；Ｄｏｒａｎｚ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌ
ｌ，８５，１１４９−１１５８（１９９６）；Ｄｅｎ
ｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８１，６６１
−６６６（１９９６）；Ａｌｋｈａｔｉｂ，Ｇ．ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，１９５５−１９５８
（１９９６）；及びＣｈｏｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅ
ｌｌ，８５，１１３５−１１４８（１９９６）］。
ロファージ指向性ＨＩＶ−１のセカンドレセプターにつ
いての論文が相次いで発表された［Ｄｒａｇｉｃ，Ｔ．
ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８１，６６７−６７３
（１９９６）；Ｄｏｒａｎｚ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌ
ｌ，８５，１１４９−１１５８（１９９６）；Ｄｅｎ
ｇ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８１，６６１
−６６６（１９９６）；Ａｌｋｈａｔｉｂ，Ｇ．ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，１９５５−１９５８
（１９９６）；及びＣｈｏｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅ
ｌｌ，８５，１１３５−１１４８（１９９６）］。
【０００７】これらの報告によれば、マクロファージ指
向性ＨＩＶ−１のセカンドレセプターは、３種のＣＣケ
モカイン〔すなわち、ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅ
ｄ−ｕｐｏｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ
Ｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ
ｄ）、ＭＩＰ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍ
ａｔｒｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）−１α、又はＭＩＰ−
２β〕のレセプターであり、ＣＣＲ５（ＣＣ ｃｈｅｍ
ｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５）が主要なものであ
ることが分かった。
向性ＨＩＶ−１のセカンドレセプターは、３種のＣＣケ
モカイン〔すなわち、ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅ
ｄ−ｕｐｏｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ
Ｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ
ｄ）、ＭＩＰ（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍ
ａｔｒｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）−１α、又はＭＩＰ−
２β〕のレセプターであり、ＣＣＲ５（ＣＣ ｃｈｅｍ
ｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５）が主要なものであ
ることが分かった。
【０００８】以上のように、細胞指向性の異なるＨＩＶ
−１のセカンドレセプターがそれぞれ同定されたことに
より、ＨＩＶ−１の細胞指向性の決定は、各ウイルス株
のセカンドレセプター利用能に依存していることが明ら
かになった。すなわち、ＣＸＣＲ４のみを発現している
培養Ｔ細胞株には、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ−１が感染する
ことができ、ＣＣＲ５のみを発現しているマクロファー
ジ単球には、マクロファージ指向性ＨＩＶ−１が感染可
能で、両方のレセプターを発現しているＣＤ４+Ｔ細胞
にはいずれのウイルスも感染することができる。そし
て、もちろん、両指向性ＨＩＶ−１は、いずれの細胞に
も感染することができる。
−１のセカンドレセプターがそれぞれ同定されたことに
より、ＨＩＶ−１の細胞指向性の決定は、各ウイルス株
のセカンドレセプター利用能に依存していることが明ら
かになった。すなわち、ＣＸＣＲ４のみを発現している
培養Ｔ細胞株には、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ−１が感染する
ことができ、ＣＣＲ５のみを発現しているマクロファー
ジ単球には、マクロファージ指向性ＨＩＶ−１が感染可
能で、両方のレセプターを発現しているＣＤ４+Ｔ細胞
にはいずれのウイルスも感染することができる。そし
て、もちろん、両指向性ＨＩＶ−１は、いずれの細胞に
も感染することができる。
【０００９】この結果、エイズ治療のアプローチとして
は、以下の３つの方法が検討されている。１番目は、低
分子アンタゴニストを用いる方法である。実際に、低分
子ではないが、ＲＡＮＴＥＳのアナログ（アンタゴニス
ト）がマクロファージ指向性ＨＩＶ−１の感染を特異的
に抑制するという報告がなされている。２番目は、低分
子アゴニストとＨＩＶ−１との競合を利用することに加
え、低分子アゴニストによるケモカインレセプターのダ
ウンレギュレーションを利用する方法がある。しかしな
がら、この方法は、応用研究のレベルには達していな
い。３番目は、セカンドレセプターのリガンドであるケ
モカインそのものを利用する方法であるが、強い毒性が
心配される。このように、ＲＡＮＴＥＳのアナログによ
り、ある程度のＨＩＶ−１感染予防を期待することはで
きるが、真の意味での効果的な治療法とはいえないのが
現状である。
は、以下の３つの方法が検討されている。１番目は、低
分子アンタゴニストを用いる方法である。実際に、低分
子ではないが、ＲＡＮＴＥＳのアナログ（アンタゴニス
ト）がマクロファージ指向性ＨＩＶ−１の感染を特異的
に抑制するという報告がなされている。２番目は、低分
子アゴニストとＨＩＶ−１との競合を利用することに加
え、低分子アゴニストによるケモカインレセプターのダ
ウンレギュレーションを利用する方法がある。しかしな
がら、この方法は、応用研究のレベルには達していな
い。３番目は、セカンドレセプターのリガンドであるケ
モカインそのものを利用する方法であるが、強い毒性が
心配される。このように、ＲＡＮＴＥＳのアナログによ
り、ある程度のＨＩＶ−１感染予防を期待することはで
きるが、真の意味での効果的な治療法とはいえないのが
現状である。
【００１０】一方、変異が激しいＨＩＶの抗ウイルス剤
としては、遺伝子を標的とするアンチセンス法が有効で
ある。アンチセンス法とは、標的遺伝子に対して相補的
な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを用いて、標的
遺伝子の転写、スプライシング、及び／又はタンパク質
への翻訳を阻害して、ウイルスタンパク質の発現を特異
的に抑制する技術である。こうしたアンチセンス法の開
発で最も重要な課題の１つは、標的部位の選択である。
なお、細胞指向性の異なるＨＩＶ−１のセカンドレセプ
ターがそれぞれ同定されたとはいっても、ＨＩＶ−１の
細胞指向性が完全に解明されたわけではない。例えば、
マクロファージに感染することのできない初期ＨＩＶ−
１単離株（ｐｒｉｍａｒｙ ＨＩＶ−１ ｉｓｏｌａｔ
ｅ）でもＣＣＲ５を人為的に発現した細胞には感染する
ことができ、マクロファージ上にもＣＸＣＲ４が発現し
ているという報告もあり、細胞指向性を決定する要因
は、更に複雑なものであるとも考えられている。従っ
て、セカンドレセプターを標的遺伝子とするアンチセン
ス法によって、ＨＩＶの感染予防又は治療に有効な手段
が提供されるか否かは、勿論、容易に想定することので
きるものではない。更に、セカンドレセプターをコード
する遺伝子から、有効な標的領域を選択することは決し
て容易なことではない。
としては、遺伝子を標的とするアンチセンス法が有効で
ある。アンチセンス法とは、標的遺伝子に対して相補的
な塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを用いて、標的
遺伝子の転写、スプライシング、及び／又はタンパク質
への翻訳を阻害して、ウイルスタンパク質の発現を特異
的に抑制する技術である。こうしたアンチセンス法の開
発で最も重要な課題の１つは、標的部位の選択である。
なお、細胞指向性の異なるＨＩＶ−１のセカンドレセプ
ターがそれぞれ同定されたとはいっても、ＨＩＶ−１の
細胞指向性が完全に解明されたわけではない。例えば、
マクロファージに感染することのできない初期ＨＩＶ−
１単離株（ｐｒｉｍａｒｙ ＨＩＶ−１ ｉｓｏｌａｔ
ｅ）でもＣＣＲ５を人為的に発現した細胞には感染する
ことができ、マクロファージ上にもＣＸＣＲ４が発現し
ているという報告もあり、細胞指向性を決定する要因
は、更に複雑なものであるとも考えられている。従っ
て、セカンドレセプターを標的遺伝子とするアンチセン
ス法によって、ＨＩＶの感染予防又は治療に有効な手段
が提供されるか否かは、勿論、容易に想定することので
きるものではない。更に、セカンドレセプターをコード
する遺伝子から、有効な標的領域を選択することは決し
て容易なことではない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、ＨＩＶに
対して有効なアンチセンス法を開発することを課題とし
て鋭意研究を行った結果、マクロファージ指向性ＨＩＶ
のセカンドレセプターであるＣＣＲ５遺伝子の特定標的
領域、又はＴ細胞指向性ＨＩＶのセカンドレセプターで
あるＣＸＣＲ４遺伝子の特定標的領域に対するアンチセ
ンスオリゴヌレオチドが、ＨＩＶの感染を阻害すること
を見出した。本発明はこのような知見に基づくものであ
る。
対して有効なアンチセンス法を開発することを課題とし
て鋭意研究を行った結果、マクロファージ指向性ＨＩＶ
のセカンドレセプターであるＣＣＲ５遺伝子の特定標的
領域、又はＴ細胞指向性ＨＩＶのセカンドレセプターで
あるＣＸＣＲ４遺伝子の特定標的領域に対するアンチセ
ンスオリゴヌレオチドが、ＨＩＶの感染を阻害すること
を見出した。本発明はこのような知見に基づくものであ
る。
【００１２】
【課題を解決するための手段】従って、本発明は、ＣＸ
ＣＲ４遺伝子又はＣＣＲ５遺伝子の塩基配列に対して相
補的な塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを含有するこ
とを特徴とする、ＨＩＶコファクター抑制剤に関する。
ＣＲ４遺伝子又はＣＣＲ５遺伝子の塩基配列に対して相
補的な塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを含有するこ
とを特徴とする、ＨＩＶコファクター抑制剤に関する。
【００１３】本明細書において、「ＨＩＶ」とは、ヒト
免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉ
ｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）を意味し、ＨＩＶ−１及び
その変異体を含む。また、本明細書において、「ＨＩＶ
コファクター」とは、ＨＩＶのセカンドレセプター（す
なわち、コレセプター）を意味し、ＣＸＣＲ４（ＣＸＣ
ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４）及びＣ
ＣＲ５（ＣＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ
５）を含む。ＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５は、７回膜貫通型
のＧタンパク質共役レセプターという一群のケモカイン
レセプターファミリーに属するレセプターであって、Ｃ
ＸＣＲ４は、Ｔ細胞指向性ＨＩＶのセカンドレセプター
であり、ＣＣＲ５は、マクロファージ指向性ＨＩＶのセ
カンドレセプターである。更に、本明細書において、
「遺伝子」とは、ｍＲＮＡに転写される領域、すなわ
ち、転写開始点からターミネーターまでの領域を意味す
る。
免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉ
ｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）を意味し、ＨＩＶ−１及び
その変異体を含む。また、本明細書において、「ＨＩＶ
コファクター」とは、ＨＩＶのセカンドレセプター（す
なわち、コレセプター）を意味し、ＣＸＣＲ４（ＣＸＣ
ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４）及びＣ
ＣＲ５（ＣＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ
５）を含む。ＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５は、７回膜貫通型
のＧタンパク質共役レセプターという一群のケモカイン
レセプターファミリーに属するレセプターであって、Ｃ
ＸＣＲ４は、Ｔ細胞指向性ＨＩＶのセカンドレセプター
であり、ＣＣＲ５は、マクロファージ指向性ＨＩＶのセ
カンドレセプターである。更に、本明細書において、
「遺伝子」とは、ｍＲＮＡに転写される領域、すなわ
ち、転写開始点からターミネーターまでの領域を意味す
る。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明のＨＩＶコファクター抑制
剤において用いるオリゴヌクレオチドは、ＣＸＣＲ４遺
伝子又はＣＣ−ＣＣＲ５遺伝子の全領域、すなわち、転
写開始点からターミネーターまでの領域を標的領域と
し、その標的領域の塩基配列に対して相補的な塩基配列
を含む。前記標的領域としては、ＣＸＣＲ４遺伝子又は
ＣＣ−ＣＣＲ５遺伝子の全領域の内、５’側の領域が好
ましく、転写開始点〜全領域の１／２までの領域がより
好ましく、翻訳開始コドンＡＴＧを含有する領域である
ことが特に好ましい。
剤において用いるオリゴヌクレオチドは、ＣＸＣＲ４遺
伝子又はＣＣ−ＣＣＲ５遺伝子の全領域、すなわち、転
写開始点からターミネーターまでの領域を標的領域と
し、その標的領域の塩基配列に対して相補的な塩基配列
を含む。前記標的領域としては、ＣＸＣＲ４遺伝子又は
ＣＣ−ＣＣＲ５遺伝子の全領域の内、５’側の領域が好
ましく、転写開始点〜全領域の１／２までの領域がより
好ましく、翻訳開始コドンＡＴＧを含有する領域である
ことが特に好ましい。
【００１５】本発明のＨＩＶコファクター抑制剤におい
て用いるオリゴヌクレオチドの塩基数は、特に限定され
ないが、前記の標的領域に特異的にハイブリダイズ可能
な塩基数以上であることが好ましく、細胞膜や核膜を通
過することができる塩基数以下であることが好ましい。
前記の標的領域に特異的にハイブリダイズ可能な塩基数
は、好ましくは１５塩基以上、より好ましくは２０塩基
以上である。また、膜透過性を保証するためには、好ま
しくは３０塩基以下、より好ましくは２８塩基以下であ
る。従って、本発明で用いるオリゴヌクレオチドは、好
ましくは１５〜３０塩基、より好ましくは１５〜２８塩
基からなる。本発明で用いるオリゴヌクレオチドには、
その標的領域（例えば、ｍＲＮＡ）と特異的に結合して
二重鎖を形成することができる限り、標的領域に相補的
な塩基配列を連続して含む必要はなく、非相補的塩基１
又はそれ以上が、１又はそれ以上の箇所で欠失、挿入及
び／又は置換されていてもよい。しかし、標的領域に相
補的な塩基配列を連続して含むオリゴヌクレオチドが好
ましい。
て用いるオリゴヌクレオチドの塩基数は、特に限定され
ないが、前記の標的領域に特異的にハイブリダイズ可能
な塩基数以上であることが好ましく、細胞膜や核膜を通
過することができる塩基数以下であることが好ましい。
前記の標的領域に特異的にハイブリダイズ可能な塩基数
は、好ましくは１５塩基以上、より好ましくは２０塩基
以上である。また、膜透過性を保証するためには、好ま
しくは３０塩基以下、より好ましくは２８塩基以下であ
る。従って、本発明で用いるオリゴヌクレオチドは、好
ましくは１５〜３０塩基、より好ましくは１５〜２８塩
基からなる。本発明で用いるオリゴヌクレオチドには、
その標的領域（例えば、ｍＲＮＡ）と特異的に結合して
二重鎖を形成することができる限り、標的領域に相補的
な塩基配列を連続して含む必要はなく、非相補的塩基１
又はそれ以上が、１又はそれ以上の箇所で欠失、挿入及
び／又は置換されていてもよい。しかし、標的領域に相
補的な塩基配列を連続して含むオリゴヌクレオチドが好
ましい。
【００１６】本発明で用いるオリゴヌクレオチドの具体
的な塩基配列は、標的とするＨＩＶの型に応じて適宜決
定することができる。例えば、マクロファージ指向性Ｈ
ＩＶに対しては、ＣＣＲ５遺伝子の塩基配列を基に、あ
るいは、Ｔ細胞指向性ＨＩＶに対しては、ＣＸＣＲ４遺
伝子の塩基配列を基に、安定な二重鎖形成の観点から標
的塩基配列と塩基数を決定し、公知の方法でアンチセン
スオリゴヌクレオチドを合成することができる。
的な塩基配列は、標的とするＨＩＶの型に応じて適宜決
定することができる。例えば、マクロファージ指向性Ｈ
ＩＶに対しては、ＣＣＲ５遺伝子の塩基配列を基に、あ
るいは、Ｔ細胞指向性ＨＩＶに対しては、ＣＸＣＲ４遺
伝子の塩基配列を基に、安定な二重鎖形成の観点から標
的塩基配列と塩基数を決定し、公知の方法でアンチセン
スオリゴヌクレオチドを合成することができる。
【００１７】本発明のＨＩＶコファクター抑制剤におい
て用いるオリゴヌクレオチドにおいて、各ヌクレオシド
間のインターヌクレオチド結合は、それぞれ独立にリン
酸ジエステル結合、又は修飾リン酸ジエステル結合であ
る。修飾リン酸ジエステル結合としては、例えば、リン
酸ジエステル結合の非架橋酸素原子２個の内の酸素原子
１個をメチル基に置換したメチルホスホネート結合、リ
ン酸ジエステル結合の非架橋酸素原子２個の内の酸素原
子１個をアミノ基若くは置換アミノ基に置換したホスホ
ロアミダイト結合、又はリン酸ジエステル結合の非架橋
酸素原子２個の内の酸素原子１個を硫黄原子に置換した
ホスホロチオエート型結合などを挙げることができ、そ
れらの１種又はそれ以上を、ヌクレオシド間の結合の１
箇所又はそれ以上の箇所に導入することができる。本発
明において用いるオリゴヌクレオチドとしては、配列特
異的結合性、簡便な調製法、及び合成コストなどの点か
らは、リン酸ジエステル結合体であることが好ましく、
二重鎖安定性、抗ヌクレアーゼ耐性、細胞膜透過性、及
び低細胞毒性と適度な代謝性などの点からは、修飾され
たリン酸ジエステル結合体であることが好ましい。生体
内での安定性が良いことから、ホスホロチオエート型結
合であることが特に好ましい。
て用いるオリゴヌクレオチドにおいて、各ヌクレオシド
間のインターヌクレオチド結合は、それぞれ独立にリン
酸ジエステル結合、又は修飾リン酸ジエステル結合であ
る。修飾リン酸ジエステル結合としては、例えば、リン
酸ジエステル結合の非架橋酸素原子２個の内の酸素原子
１個をメチル基に置換したメチルホスホネート結合、リ
ン酸ジエステル結合の非架橋酸素原子２個の内の酸素原
子１個をアミノ基若くは置換アミノ基に置換したホスホ
ロアミダイト結合、又はリン酸ジエステル結合の非架橋
酸素原子２個の内の酸素原子１個を硫黄原子に置換した
ホスホロチオエート型結合などを挙げることができ、そ
れらの１種又はそれ以上を、ヌクレオシド間の結合の１
箇所又はそれ以上の箇所に導入することができる。本発
明において用いるオリゴヌクレオチドとしては、配列特
異的結合性、簡便な調製法、及び合成コストなどの点か
らは、リン酸ジエステル結合体であることが好ましく、
二重鎖安定性、抗ヌクレアーゼ耐性、細胞膜透過性、及
び低細胞毒性と適度な代謝性などの点からは、修飾され
たリン酸ジエステル結合体であることが好ましい。生体
内での安定性が良いことから、ホスホロチオエート型結
合であることが特に好ましい。
【００１８】本発明において用いるオリゴヌクレオチド
では、標的遺伝子、すなわち、ＨＩＶのセカンドレセプ
ターであるＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４の各遺伝子の塩基配
列を構成するそれぞれの塩基、すなわち、Ａ（アデニ
ン）、Ｇ（グアニン）、Ｃ（シトシン）、及びＴ（チミ
ン）に相補的な塩基として、それぞれ、Ｔ（チミン）又
はＵ（ウラシル）、Ｃ、Ｇ、及びＡを使用することがで
きる。本発明において用いるオリゴヌクレオチドがＲＮ
Ａである場合には、ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４遺伝子の塩
基配列を構成するＡに相補的な塩基として、Ｕを使用す
る。
では、標的遺伝子、すなわち、ＨＩＶのセカンドレセプ
ターであるＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４の各遺伝子の塩基配
列を構成するそれぞれの塩基、すなわち、Ａ（アデニ
ン）、Ｇ（グアニン）、Ｃ（シトシン）、及びＴ（チミ
ン）に相補的な塩基として、それぞれ、Ｔ（チミン）又
はＵ（ウラシル）、Ｃ、Ｇ、及びＡを使用することがで
きる。本発明において用いるオリゴヌクレオチドがＲＮ
Ａである場合には、ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４遺伝子の塩
基配列を構成するＡに相補的な塩基として、Ｕを使用す
る。
【００１９】本発明において用いるオリゴヌクレオチド
は、標的領域と特異的に結合して二重鎖を形成すること
ができる限り、デオキシヌクレオシド、リボヌクレオシ
ド、及び／又はそれらの修飾ヌクレオシド、例えば、
２’−Ｏ−修飾リボヌクレオシドから形成することがで
きる。修飾リボヌクレオシドとしては、標的となる塩基
配列との結合力の強さの点から、２’−Ｏ−メチルリボ
ヌクレオシドが好ましい。従って、本発明において用い
るオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオシド及び／又は
修飾リボヌクレオシドからなるオリゴリボヌクレオチド
（ＲＮＡ）、デオキシリボヌクレオシドのみからなるオ
リゴデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、あるいはリ
ボヌクレオシド（及び／又は修飾リボヌクレオシド）と
デオキシリボヌクレオシドとの両方からなるキメラオリ
ゴリボ／デオキシリボヌクレオチド（ＲＮＡ／ＤＮＡ）
であることができる。
は、標的領域と特異的に結合して二重鎖を形成すること
ができる限り、デオキシヌクレオシド、リボヌクレオシ
ド、及び／又はそれらの修飾ヌクレオシド、例えば、
２’−Ｏ−修飾リボヌクレオシドから形成することがで
きる。修飾リボヌクレオシドとしては、標的となる塩基
配列との結合力の強さの点から、２’−Ｏ−メチルリボ
ヌクレオシドが好ましい。従って、本発明において用い
るオリゴヌクレオチドは、リボヌクレオシド及び／又は
修飾リボヌクレオシドからなるオリゴリボヌクレオチド
（ＲＮＡ）、デオキシリボヌクレオシドのみからなるオ
リゴデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）、あるいはリ
ボヌクレオシド（及び／又は修飾リボヌクレオシド）と
デオキシリボヌクレオシドとの両方からなるキメラオリ
ゴリボ／デオキシリボヌクレオチド（ＲＮＡ／ＤＮＡ）
であることができる。
【００２０】本発明において用いるオリゴヌクレオチド
としては、具体的には、例えば、以下のオリゴヌクレオ
チドを挙げることができる。すなわち、ＣＣＲ５遺伝子
の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオリゴヌク
レオチドとしては、配列表の配列番号１〜配列番号６３
の配列で表わされる塩基配列を有し、全てのインターヌ
クレオチド結合がリン酸ジエステル結合であるオリゴヌ
クレオチド；又は配列表の配列番号１〜配列番号６３の
配列で表わされる塩基配列と同一の塩基配列を有し、イ
ンターヌクレオチド結合の１箇所若しくはそれ以上（好
ましくは全部）がホスホロチオエート型結合であるオリ
ゴヌクレオチドを挙げることができる。また、ＣＸＣＲ
４遺伝子の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオ
リゴヌクレオチドとしては、配列表の配列番号６４〜配
列番号１１９の配列で表わされる塩基配列を有し、全て
のインターヌクレオチド結合がリン酸ジエステル結合で
あるオリゴヌクレオチド；又は配列表の配列番号６４〜
配列番号１１９の配列で表わされる塩基配列と同一の塩
基配列を有し、インターヌクレオチド結合の１箇所若し
くはそれ以上（好ましくは全部）がホスホロチオエート
型結合であるオリゴヌクレオチドを挙げることができ
る。これらすべてのオリゴヌクレオチドは、それぞれ、
ＨＩＶ（特にＨＩＶ−１）に対して有効である。
としては、具体的には、例えば、以下のオリゴヌクレオ
チドを挙げることができる。すなわち、ＣＣＲ５遺伝子
の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオリゴヌク
レオチドとしては、配列表の配列番号１〜配列番号６３
の配列で表わされる塩基配列を有し、全てのインターヌ
クレオチド結合がリン酸ジエステル結合であるオリゴヌ
クレオチド；又は配列表の配列番号１〜配列番号６３の
配列で表わされる塩基配列と同一の塩基配列を有し、イ
ンターヌクレオチド結合の１箇所若しくはそれ以上（好
ましくは全部）がホスホロチオエート型結合であるオリ
ゴヌクレオチドを挙げることができる。また、ＣＸＣＲ
４遺伝子の塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオ
リゴヌクレオチドとしては、配列表の配列番号６４〜配
列番号１１９の配列で表わされる塩基配列を有し、全て
のインターヌクレオチド結合がリン酸ジエステル結合で
あるオリゴヌクレオチド；又は配列表の配列番号６４〜
配列番号１１９の配列で表わされる塩基配列と同一の塩
基配列を有し、インターヌクレオチド結合の１箇所若し
くはそれ以上（好ましくは全部）がホスホロチオエート
型結合であるオリゴヌクレオチドを挙げることができ
る。これらすべてのオリゴヌクレオチドは、それぞれ、
ＨＩＶ（特にＨＩＶ−１）に対して有効である。
【００２１】本発明において用いるオリゴヌクレオチド
は、公知の方法で合成することができる。２’−Ｏ−メ
チルリボヌクレオチド又はホスホロチオエート結合を導
入する部位を除いては、例えば、通常のホスホジエステ
ル法又はホスホトリエステル法、例えば、Ｈ−ホスホネ
ート法、又はホスホロアミダイト法によるＤＮＡ／ＲＮ
Ａ自動合成機を利用して合成することができる。
は、公知の方法で合成することができる。２’−Ｏ−メ
チルリボヌクレオチド又はホスホロチオエート結合を導
入する部位を除いては、例えば、通常のホスホジエステ
ル法又はホスホトリエステル法、例えば、Ｈ−ホスホネ
ート法、又はホスホロアミダイト法によるＤＮＡ／ＲＮ
Ａ自動合成機を利用して合成することができる。
【００２２】２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドを有す
るオリゴヌクレオチドは、例えば、５’−ジメトキシト
リエチル−２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド−３’−
〔（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ル）〕−ホスホロアミダイトユニットを用いて、ホスホ
ロアミダイト法によるＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機を利用
して合成することができる。ホスホロチオエート結合を
有するオリゴヌクレオチドは、例えば、通常のポリヌク
レオチド合成に用いる酸化剤である水／ヨウ素／ピリジ
ン溶液の代わりに、１５％のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テト
ラエチルチオラムジスルフィド／アセトニトリル溶液を
用いて合成することができる。
るオリゴヌクレオチドは、例えば、５’−ジメトキシト
リエチル−２’−Ｏ−メチルリボヌクレオシド−３’−
〔（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ル）〕−ホスホロアミダイトユニットを用いて、ホスホ
ロアミダイト法によるＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機を利用
して合成することができる。ホスホロチオエート結合を
有するオリゴヌクレオチドは、例えば、通常のポリヌク
レオチド合成に用いる酸化剤である水／ヨウ素／ピリジ
ン溶液の代わりに、１５％のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テト
ラエチルチオラムジスルフィド／アセトニトリル溶液を
用いて合成することができる。
【００２３】本発明において用いることのできるリポソ
ームは、血中で安定なものであれば特に制限されない。
ここで、「血中で安定」とは、本発明のＨＩＶコファク
ター抑制剤を動物に投与した場合に、オリゴヌクレオチ
ドが動物細胞に移送されるまで、その移送能力を失わな
いことである。そして、この安定性は、例えば、本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤と動物血清とを２４〜７２
時間接触させ、２７℃でインキュベートした後に動物細
胞を加えるか、ＨＩＶコファクター抑制剤と動物血清と
動物細胞との三者を同様にインキュベートしたものにつ
いて、当該動物細胞へのオリゴヌクレオチドの取り込み
能力を調べることにより知ることができる。本発明で用
いることのできるリポソームは、例えば、脂質系ポリマ
ー（例えば、リン脂質、糖脂質又はコレステロールなど
の脂質分子）又はアミノ酸性ポリマーから調製されるリ
ポソームであり、一枚膜リポソーム又は多重膜リポソー
ムのいずれも有効である。また、本発明では、脂質系ポ
リマー又はアミノ酸性ポリマーと、ウイルスエンベロー
プタンパク質（特にはＨＩＶエンベロープタンパク質）
又はその断片との複合体からなる公知の膜融合型リポソ
ームを用いることもできる。
ームは、血中で安定なものであれば特に制限されない。
ここで、「血中で安定」とは、本発明のＨＩＶコファク
ター抑制剤を動物に投与した場合に、オリゴヌクレオチ
ドが動物細胞に移送されるまで、その移送能力を失わな
いことである。そして、この安定性は、例えば、本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤と動物血清とを２４〜７２
時間接触させ、２７℃でインキュベートした後に動物細
胞を加えるか、ＨＩＶコファクター抑制剤と動物血清と
動物細胞との三者を同様にインキュベートしたものにつ
いて、当該動物細胞へのオリゴヌクレオチドの取り込み
能力を調べることにより知ることができる。本発明で用
いることのできるリポソームは、例えば、脂質系ポリマ
ー（例えば、リン脂質、糖脂質又はコレステロールなど
の脂質分子）又はアミノ酸性ポリマーから調製されるリ
ポソームであり、一枚膜リポソーム又は多重膜リポソー
ムのいずれも有効である。また、本発明では、脂質系ポ
リマー又はアミノ酸性ポリマーと、ウイルスエンベロー
プタンパク質（特にはＨＩＶエンベロープタンパク質）
又はその断片との複合体からなる公知の膜融合型リポソ
ームを用いることもできる。
【００２４】リポソームを調製することのできるリン脂
質としては、一般的に、例えば、グリセロリン脂質（ホ
スファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、
又はカルジオピン）、あるいはスフィンゴリン脂質（ス
フィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミ
ン、又はセラミドホスホリルグリセロール）を挙げるこ
とができる。また、リポソームを調製することのできる
糖脂質としては、例えば、グリセロ糖脂質（ジガラクト
シルジグリセリド、又はセミノリピド）、あるいはスフ
ィンゴ糖脂質（ガラクトシルセラミド、又はラクトシル
セラミド）を挙げることができる。リポソームを調製す
ることのできるアミノ酸性ポリマーとしては、例えば、
ポリ−Ｌ−リジン又はポリ−Ｌ−（リジン／セリン）を
挙げることができる。
質としては、一般的に、例えば、グリセロリン脂質（ホ
スファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスフ
ァチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、
又はカルジオピン）、あるいはスフィンゴリン脂質（ス
フィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミ
ン、又はセラミドホスホリルグリセロール）を挙げるこ
とができる。また、リポソームを調製することのできる
糖脂質としては、例えば、グリセロ糖脂質（ジガラクト
シルジグリセリド、又はセミノリピド）、あるいはスフ
ィンゴ糖脂質（ガラクトシルセラミド、又はラクトシル
セラミド）を挙げることができる。リポソームを調製す
ることのできるアミノ酸性ポリマーとしては、例えば、
ポリ−Ｌ−リジン又はポリ−Ｌ−（リジン／セリン）を
挙げることができる。
【００２５】本発明では、市販のリポソームを用いるこ
ともできる。本発明で利用することのできる市販品とし
ては、例えば、Ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ〔Ｎ−（α−
トリメチルアンモニオアセチル）ドデシル−Ｄ−グルタ
メイトクロリシド、Ｌ−α−フォスファチジルエタノー
ルアミンジオレイル、Ｌ−α−フォスファチジルコリン
ジラウリールの１：２：３の組成からなる〕とＨＭＧ−
１，２との混合物（和光純薬社）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチ
ル）−２，３−ジオレオイルオキシ−１，４−ブタンジ
アンモニウムヨージドとＬ−ジオレオイルホスファチジ
ルエタノールアミンとの混合物から形成されるリポソー
ム（Ｔｆｘ−１０；プロメガ社）、Ｌ−α−ジパルミト
イルホスファチジルコリンとコレステロールとステアリ
ルアミンとの混合物（５２：４０：８）から形成され、
正電荷を有するリポソーム（コートソームＥＬ−Ｃ−０
１；日本油脂社）、又はＬ−α−ジパルミトイルホスフ
ァチジルコリンとコレステロールとＬ−α−ジパルミト
イルホスファチジルグリセロールとの混合物（５４：４
０：６）から形成され、弱負電荷を有するリポソーム
（コートソームＥＬ−Ｎ−０１；日本油脂社）等を挙げ
ることができる。リポソームは極性部の電荷の状態によ
り、中性リポソーム、負荷電リポソーム、陽荷電リポソ
ーム、ｐＨ感受性リポソームなどがあるが、負荷電リポ
ソーム、又は陽荷電リポソームが好ましい。
ともできる。本発明で利用することのできる市販品とし
ては、例えば、Ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ〔Ｎ−（α−
トリメチルアンモニオアセチル）ドデシル−Ｄ−グルタ
メイトクロリシド、Ｌ−α−フォスファチジルエタノー
ルアミンジオレイル、Ｌ−α−フォスファチジルコリン
ジラウリールの１：２：３の組成からなる〕とＨＭＧ−
１，２との混合物（和光純薬社）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’
−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチ
ル）−２，３−ジオレオイルオキシ−１，４−ブタンジ
アンモニウムヨージドとＬ−ジオレオイルホスファチジ
ルエタノールアミンとの混合物から形成されるリポソー
ム（Ｔｆｘ−１０；プロメガ社）、Ｌ−α−ジパルミト
イルホスファチジルコリンとコレステロールとステアリ
ルアミンとの混合物（５２：４０：８）から形成され、
正電荷を有するリポソーム（コートソームＥＬ−Ｃ−０
１；日本油脂社）、又はＬ−α−ジパルミトイルホスフ
ァチジルコリンとコレステロールとＬ−α−ジパルミト
イルホスファチジルグリセロールとの混合物（５４：４
０：６）から形成され、弱負電荷を有するリポソーム
（コートソームＥＬ−Ｎ−０１；日本油脂社）等を挙げ
ることができる。リポソームは極性部の電荷の状態によ
り、中性リポソーム、負荷電リポソーム、陽荷電リポソ
ーム、ｐＨ感受性リポソームなどがあるが、負荷電リポ
ソーム、又は陽荷電リポソームが好ましい。
【００２６】本発明において特に好ましいリポソームと
しては、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’
−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジオレオイ
ルオキシ−１，４−ブタンジアンモニウヨージドとＬ−
ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンとの混合
物から形成されるリポソーム（Ｔｆｘ−１０）、又は、
Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンとコレス
テロールとステアリルアミン又はＬ−α−ジパルミトイ
ルホスファチジルグリセロールとの混合物から形成され
るリポソーム、特に、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファ
チジルコリンとコレステロールとステアリルアミンとの
混合物（５２：４０：８）から形成され、正電荷を有す
るリポソーム（コートソームＥＬ−Ｃ−０１）、又はＬ
−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンとコレステ
ロールとＬ−α−ジパルミトイルホスファチジルグリセ
ロールとの混合物（５４：４０：６）から形成され、弱
負電荷を有するリポソーム（コートソームＥＬ−Ｎ−０
１）を挙げることができる。
しては、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’
−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジオレオイ
ルオキシ−１，４−ブタンジアンモニウヨージドとＬ−
ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンとの混合
物から形成されるリポソーム（Ｔｆｘ−１０）、又は、
Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンとコレス
テロールとステアリルアミン又はＬ−α−ジパルミトイ
ルホスファチジルグリセロールとの混合物から形成され
るリポソーム、特に、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファ
チジルコリンとコレステロールとステアリルアミンとの
混合物（５２：４０：８）から形成され、正電荷を有す
るリポソーム（コートソームＥＬ−Ｃ−０１）、又はＬ
−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンとコレステ
ロールとＬ−α−ジパルミトイルホスファチジルグリセ
ロールとの混合物（５４：４０：６）から形成され、弱
負電荷を有するリポソーム（コートソームＥＬ−Ｎ−０
１）を挙げることができる。
【００２７】本発明によるＨＩＶコファクター抑制剤に
おいて、前記のオリゴヌクレオチドと血中で安定なリポ
ソームとを同時に含有する場合には、前記オリゴヌクレ
オチドと血中で安定なリポソームとが同時に含有されて
いれば、それらの存在形態は特に限定されるものではな
い。例えば、前記のオリゴヌクレオチドとリポソームと
の混合物若しくは複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ）、リポソー
ムによるオリゴヌクレオチドの包埋体若しくはカプセル
化物等の形態であることができる。前記の複合体は、例
えば、オリゴヌクレオチドとリポソームとを静電気的な
結合を利用して複合体とする方法、すなわちリポフェク
ション法と呼ばれる方法で、両者を試験管の中でゆっく
り混ぜ、室温程度で約１５分間放置することによって調
製することができる。前記の包埋体は、例えば、オリゴ
ヌクレオチドをリポソーム内に封入した形とする方法で
調製することができる。すなわち、ホスファチジルセリ
ン等の脂質類を用いて、ボルテックスミキサー等で多重
層のリポソームを調製し、次に超音波処理して一枚膜の
リポソームを調製する。得られた一枚膜リポソームにオ
リゴヌクレオチドを加え、軽くボルテックスミキサー等
にかけた後、約３７℃で約１０分間インキュベートする
か、あるいは凍結乾燥して再水和することによって調製
することができる。前記のカプセル化物も公知の方法に
よって調製することができる。
おいて、前記のオリゴヌクレオチドと血中で安定なリポ
ソームとを同時に含有する場合には、前記オリゴヌクレ
オチドと血中で安定なリポソームとが同時に含有されて
いれば、それらの存在形態は特に限定されるものではな
い。例えば、前記のオリゴヌクレオチドとリポソームと
の混合物若しくは複合体（ｃｏｍｐｌｅｘ）、リポソー
ムによるオリゴヌクレオチドの包埋体若しくはカプセル
化物等の形態であることができる。前記の複合体は、例
えば、オリゴヌクレオチドとリポソームとを静電気的な
結合を利用して複合体とする方法、すなわちリポフェク
ション法と呼ばれる方法で、両者を試験管の中でゆっく
り混ぜ、室温程度で約１５分間放置することによって調
製することができる。前記の包埋体は、例えば、オリゴ
ヌクレオチドをリポソーム内に封入した形とする方法で
調製することができる。すなわち、ホスファチジルセリ
ン等の脂質類を用いて、ボルテックスミキサー等で多重
層のリポソームを調製し、次に超音波処理して一枚膜の
リポソームを調製する。得られた一枚膜リポソームにオ
リゴヌクレオチドを加え、軽くボルテックスミキサー等
にかけた後、約３７℃で約１０分間インキュベートする
か、あるいは凍結乾燥して再水和することによって調製
することができる。前記のカプセル化物も公知の方法に
よって調製することができる。
【００２８】本発明において用いることのできるベクタ
ーとしては、例えば、公知の遺伝子治療用ベクターを挙
げることができる。公知の遺伝子治療用ベクターについ
ては、例えば、高久史磨監修の実験医学（増刊号）第１
２巻、第１５号「遺伝子治療の最前線」（１９９４年）
に記載されており、例えば、レトロウイルスベクター、
アデノウイルスベクター、アデノ随伴（ａｓｓｏｃｉａ
ｔｅｄ）ウイルス、ヘルペスウイルスベクター、ワクシ
ニアウイルスベクター、ポックスウイルス、又は細菌プ
ラスミドを挙げることができる。標的細胞への特異性の
点で、あるいは、高効率に細胞に導入することができる
点で、非増殖性レトロウイルスベクター又は非増殖性ア
デノウイルスベクターを用いることが好ましい。
ーとしては、例えば、公知の遺伝子治療用ベクターを挙
げることができる。公知の遺伝子治療用ベクターについ
ては、例えば、高久史磨監修の実験医学（増刊号）第１
２巻、第１５号「遺伝子治療の最前線」（１９９４年）
に記載されており、例えば、レトロウイルスベクター、
アデノウイルスベクター、アデノ随伴（ａｓｓｏｃｉａ
ｔｅｄ）ウイルス、ヘルペスウイルスベクター、ワクシ
ニアウイルスベクター、ポックスウイルス、又は細菌プ
ラスミドを挙げることができる。標的細胞への特異性の
点で、あるいは、高効率に細胞に導入することができる
点で、非増殖性レトロウイルスベクター又は非増殖性ア
デノウイルスベクターを用いることが好ましい。
【００２９】本発明のＨＩＶコファクター抑制剤は、経
口、非経口又は局所的な経路のいずれかにより投与する
ことができる。投与量は、治療対象動物（哺乳類、特に
はヒト）の種及びその薬剤に対する個体の応答性、並び
に選択される製剤の剤形及び投与時間や間隔などに依存
して変化するが、一般には、約５００ｍｇから約５００
０ｇ／日の範囲の用量で投与することができる。本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤は、前記のオリゴヌクレオ
チド、血中で安定なリポソーム、及び／又は前記オリゴ
ヌクレオチドを含むベクター以外に、場合により医薬的
に許容することのできる公知の担体若しくは希釈剤との
組合せで、経口、非経口又は局所的な経路のいずれかに
より、単回又は複数回で投与することができる。本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤は、種々の異なる剤形、例
えば、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、ハ
ードキャンディー、粉末剤、スプレー剤、クリーム剤、
軟膏剤、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローシ
ョン剤、軟膏剤、水性懸濁剤、注射用溶液剤、エリキシ
ル剤、又はシロップ剤などにすることができる。
口、非経口又は局所的な経路のいずれかにより投与する
ことができる。投与量は、治療対象動物（哺乳類、特に
はヒト）の種及びその薬剤に対する個体の応答性、並び
に選択される製剤の剤形及び投与時間や間隔などに依存
して変化するが、一般には、約５００ｍｇから約５００
０ｇ／日の範囲の用量で投与することができる。本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤は、前記のオリゴヌクレオ
チド、血中で安定なリポソーム、及び／又は前記オリゴ
ヌクレオチドを含むベクター以外に、場合により医薬的
に許容することのできる公知の担体若しくは希釈剤との
組合せで、経口、非経口又は局所的な経路のいずれかに
より、単回又は複数回で投与することができる。本発明
のＨＩＶコファクター抑制剤は、種々の異なる剤形、例
えば、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、ハ
ードキャンディー、粉末剤、スプレー剤、クリーム剤、
軟膏剤、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローシ
ョン剤、軟膏剤、水性懸濁剤、注射用溶液剤、エリキシ
ル剤、又はシロップ剤などにすることができる。
【００３０】
【作用】本発明のＨＩＶコファクター抑制剤による作用
は、以下の推論に限定されるものではないが、例えば、
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが感染細胞内に細
胞導入剤などの細胞膜透過性亢進の助け（例えば、リポ
ソーム又はベクター）を借りて到達すると、ＣＸＣＲ４
又はＣＣ−ＣＣＲ５のｍＲＮＡとアンチセンスオリゴヌ
クレオチドとが結合することにより、ＨＩＶのセカンド
レセプターであるＣＸＣＲ４又はＣＣ−ＣＣＲ５の発現
を抑制し、その結果、ＨＩＶの感染を阻害するものと考
えられる。従って、前記アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを細胞導入剤と組み合わせて、例えば、静脈内へ単回
又は連続投与することによって、ＨＩＶに対して抗ウイ
ルス効果を相乗的に高めることもできる。
は、以下の推論に限定されるものではないが、例えば、
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが感染細胞内に細
胞導入剤などの細胞膜透過性亢進の助け（例えば、リポ
ソーム又はベクター）を借りて到達すると、ＣＸＣＲ４
又はＣＣ−ＣＣＲ５のｍＲＮＡとアンチセンスオリゴヌ
クレオチドとが結合することにより、ＨＩＶのセカンド
レセプターであるＣＸＣＲ４又はＣＣ−ＣＣＲ５の発現
を抑制し、その結果、ＨＩＶの感染を阻害するものと考
えられる。従って、前記アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを細胞導入剤と組み合わせて、例えば、静脈内へ単回
又は連続投与することによって、ＨＩＶに対して抗ウイ
ルス効果を相乗的に高めることもできる。
【００３１】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。
【実施例１】《アンチセンスオリゴヌクレオチドの設
計》以下の実施例で使用するために、（１）ＣＣＲ５遺
伝子の塩基配列に対して相補的な塩基配列を有し、全て
のインターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型結
合であるアンチセンスオリゴヌクレオチド６３種類［以
下、「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリゴ
ヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６３」と称する］；及び
（２）ＣＸＣＲ４遺伝子の塩基配列に対して相補的な塩
基配列を有し、全てのインターヌクレオチド結合がホス
ホロチオエート型結合であるアンチセンスオリゴヌクレ
オチド５６種類［以下、「オリゴヌクレオチドＡＳ
（ｓ）−６４」〜「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１
１９」と称する］を設計した。
計》以下の実施例で使用するために、（１）ＣＣＲ５遺
伝子の塩基配列に対して相補的な塩基配列を有し、全て
のインターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型結
合であるアンチセンスオリゴヌクレオチド６３種類［以
下、「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリゴ
ヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６３」と称する］；及び
（２）ＣＸＣＲ４遺伝子の塩基配列に対して相補的な塩
基配列を有し、全てのインターヌクレオチド結合がホス
ホロチオエート型結合であるアンチセンスオリゴヌクレ
オチド５６種類［以下、「オリゴヌクレオチドＡＳ
（ｓ）−６４」〜「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１
１９」と称する］を設計した。
【００３２】また、比較用オリゴヌクレオチドとして、
（３）ＣＣＲ５遺伝子の一部の塩基配列を有し、全ての
インターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型結合
であるセンスオリゴヌクレオチド１種類［以下、「オリ
ゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）」と称する］；及び（４）全
てのインターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型
結合であり、ＣＣＲ５遺伝子に対するスクランブルオリ
ゴヌクレオチド１種類［以下、「オリゴヌクレオチドＳ
Ｃ（ｓ）」と称する］を設計した。なお、本明細書中に
おいて、或る遺伝子（例えば、ＣＣＲ５遺伝子）に対す
る「スクランブルオリゴヌクレオチド」とは、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチド又はセンスオリゴヌクレオチド
との効果を比較するために合成したオリゴヌクレオチド
であり、その比較対象となるアンチセンスオリゴヌクレ
オチド又はセンスオリゴヌクレオチドを構成する各塩基
（Ａ、Ｇ、Ｃ、及びＴ）の塩基数と同じ数の塩基からな
り、しかも、前記遺伝子（例えば、ＣＣＲ５遺伝子）の
どの部分とも二重鎖を形成しないように設計した塩基配
列を有するものを意味する。
（３）ＣＣＲ５遺伝子の一部の塩基配列を有し、全ての
インターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型結合
であるセンスオリゴヌクレオチド１種類［以下、「オリ
ゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）」と称する］；及び（４）全
てのインターヌクレオチド結合がホスホロチオエート型
結合であり、ＣＣＲ５遺伝子に対するスクランブルオリ
ゴヌクレオチド１種類［以下、「オリゴヌクレオチドＳ
Ｃ（ｓ）」と称する］を設計した。なお、本明細書中に
おいて、或る遺伝子（例えば、ＣＣＲ５遺伝子）に対す
る「スクランブルオリゴヌクレオチド」とは、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチド又はセンスオリゴヌクレオチド
との効果を比較するために合成したオリゴヌクレオチド
であり、その比較対象となるアンチセンスオリゴヌクレ
オチド又はセンスオリゴヌクレオチドを構成する各塩基
（Ａ、Ｇ、Ｃ、及びＴ）の塩基数と同じ数の塩基からな
り、しかも、前記遺伝子（例えば、ＣＣＲ５遺伝子）の
どの部分とも二重鎖を形成しないように設計した塩基配
列を有するものを意味する。
【００３３】本実施例で設計した前記の各オリゴヌクレ
オチドの名称において、「ＡＳ」はアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドであることを意味し、「ＳＥ」はセンスオ
リゴヌクレオチドであることを意味し、「ＳＣ」はスク
ランブルオリゴヌクレオチドであることを意味する。ま
た、「（ｓ）」は、全てのインターヌクレオチド結合が
ホスホロチオエート型結合であること（以下、ホスホロ
チオエート型と称することがある）を意味する。
オチドの名称において、「ＡＳ」はアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドであることを意味し、「ＳＥ」はセンスオ
リゴヌクレオチドであることを意味し、「ＳＣ」はスク
ランブルオリゴヌクレオチドであることを意味する。ま
た、「（ｓ）」は、全てのインターヌクレオチド結合が
ホスホロチオエート型結合であること（以下、ホスホロ
チオエート型と称することがある）を意味する。
【００３４】ホスホロチオエート型オリゴヌクレオチド
である「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリ
ゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６３」、「オリゴヌクレオ
チドＳＥ（ｓ）」、及び「オリゴヌクレオチドＳＣ
（ｓ）」の塩基配列を図１及び図２に、そして、ホスホ
ロチオエート型オリゴヌクレオチドである「オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−６４」〜「オリゴヌクレオチドＡ
Ｓ（ｓ）−１１９」の塩基配列を図３及び図４にそれぞ
れ示す。図１〜図４に示す各オリゴヌクレオチドの配列
中、「Ａ」、「Ｇ」、「Ｃ」、及び「Ｔ」は、それぞれ
アデニン、グアニン、シトシン、及びチミンを表わす。
である「オリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリ
ゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６３」、「オリゴヌクレオ
チドＳＥ（ｓ）」、及び「オリゴヌクレオチドＳＣ
（ｓ）」の塩基配列を図１及び図２に、そして、ホスホ
ロチオエート型オリゴヌクレオチドである「オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−６４」〜「オリゴヌクレオチドＡ
Ｓ（ｓ）−１１９」の塩基配列を図３及び図４にそれぞ
れ示す。図１〜図４に示す各オリゴヌクレオチドの配列
中、「Ａ」、「Ｇ」、「Ｃ」、及び「Ｔ」は、それぞれ
アデニン、グアニン、シトシン、及びチミンを表わす。
【００３５】
【実施例２】《オリゴヌクレオチドの合成》実施例１で
設計したオリゴヌクレオチドを、以下に示す手順に従っ
て、ＤＮＡ自動合成機（モデル３９２：アプライドバイ
オシステムズ社）により、ホスホロチオエート型オリゴ
ヌクレオチド用プログラムを用いて合成した。すなわ
ち、１μｍｏｌスケールの固相カラム（英国クルアケム
社）とＤＮＡ合成試薬（英国クルアケム社）とを用い
て、ホスホロアミダイト法により合成し、以下、常法に
従って、カラムより脱保護した〔Ａ．Ｃｈｏｌｌｅｔ及
びＥ．Ｈ．Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，１５２９（１９８５）〕。得
られたオリゴヌクレオチドの１／５００量（約４μｇ）
を、７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルを用
いて電気泳動した。電気泳動は、１５０Ｖの一定電圧で
１．５時間行った。電気泳動終了後、メチレンブルー染
色を行い、それぞれの合成オリゴヌクレオチドが目的鎖
長であることを確認した。
設計したオリゴヌクレオチドを、以下に示す手順に従っ
て、ＤＮＡ自動合成機（モデル３９２：アプライドバイ
オシステムズ社）により、ホスホロチオエート型オリゴ
ヌクレオチド用プログラムを用いて合成した。すなわ
ち、１μｍｏｌスケールの固相カラム（英国クルアケム
社）とＤＮＡ合成試薬（英国クルアケム社）とを用い
て、ホスホロアミダイト法により合成し、以下、常法に
従って、カラムより脱保護した〔Ａ．Ｃｈｏｌｌｅｔ及
びＥ．Ｈ．Ｋａｗａｓｈｉｍａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，１５２９（１９８５）〕。得
られたオリゴヌクレオチドの１／５００量（約４μｇ）
を、７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルを用
いて電気泳動した。電気泳動は、１５０Ｖの一定電圧で
１．５時間行った。電気泳動終了後、メチレンブルー染
色を行い、それぞれの合成オリゴヌクレオチドが目的鎖
長であることを確認した。
【００３６】目的の鎖長であることが確認されたそれぞ
れのオリゴヌクレオチドに関して、得られたオリゴヌク
レオチドの１／５から１／２量（約１．２ｍｇ）を、再
び７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲル電気泳
動（切り出し精製用）に供した。電気泳動は、２００Ｖ
の一定電圧で６時間実施した。電気泳動終了後、ゲル板
から剥がし、ラップフィルムで包んだ後、紫外線を照射
し、目的鎖長のバンドに印をつけた。消毒済みカッター
ナイフにより、印の内側のゲルを切り出し、１．５ｍｌ
のサンプルチューブに集めた。切り出したゲルに対し
て、１ｍＭ−ＥＤＴＡを含む１０ｍＭ−Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．５）緩衝液０．４ｍｌを加え、３７℃で数
時間振動させ、ゲル片から溶液へのＤＮＡの抽出を行っ
た。ＤＮＡ抽出液を回収し、フェノール／クロロフォル
ム抽出を行ない、更にエタノール沈殿の操作を行うこと
でアクリルアミド除去及びＤＮＡ精製を行った。それぞ
れの収量は、０．３〜０．６ｍｇであった。得られたオ
リゴヌクレオチド（約０．５μｇ）の精製度は、７Ｍ尿
素を含むポリアクリルアミドで電気泳動して確認した。
れのオリゴヌクレオチドに関して、得られたオリゴヌク
レオチドの１／５から１／２量（約１．２ｍｇ）を、再
び７Ｍ尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲル電気泳
動（切り出し精製用）に供した。電気泳動は、２００Ｖ
の一定電圧で６時間実施した。電気泳動終了後、ゲル板
から剥がし、ラップフィルムで包んだ後、紫外線を照射
し、目的鎖長のバンドに印をつけた。消毒済みカッター
ナイフにより、印の内側のゲルを切り出し、１．５ｍｌ
のサンプルチューブに集めた。切り出したゲルに対し
て、１ｍＭ−ＥＤＴＡを含む１０ｍＭ−Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．５）緩衝液０．４ｍｌを加え、３７℃で数
時間振動させ、ゲル片から溶液へのＤＮＡの抽出を行っ
た。ＤＮＡ抽出液を回収し、フェノール／クロロフォル
ム抽出を行ない、更にエタノール沈殿の操作を行うこと
でアクリルアミド除去及びＤＮＡ精製を行った。それぞ
れの収量は、０．３〜０．６ｍｇであった。得られたオ
リゴヌクレオチド（約０．５μｇ）の精製度は、７Ｍ尿
素を含むポリアクリルアミドで電気泳動して確認した。
【００３７】
【実施例３】《マクロファージ指向性ＨＩＶの感染予防
における評価試験》本実施例では、マクロファージ指向
性ＨＩＶ感染に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
の予防効果を評価することを目的として、以下の試験を
行った。ＨＩＶを感染させる細胞として、ＣＤ４レセプ
ター及びＣＣＲ５の両方を発現するＣＯＳ細胞（以下、
Ａ４１細胞と称する）を用いた。また培地には、１０％
血清（Ｆｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ；ＪＲＨ Ｂ
ＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ６Ｈ２１６２）、５００μｇ／ｍ
ｌ−Ｇ４１８サルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）（ＧＥＮ
ＥＴＩＣＩＮ；ギブコ Ｌｏｔ Ｎｏ．７７Ｋ７５６
６）、及び２００μｇ／ｍｌハイグロマイシンＢ（ベー
リンガーマンハイム；Ｌｏｔ Ｎｏ．８４３５５５）を
含むＤＭＥＭ培地（以下、培養用培地と称する）を用い
た。
における評価試験》本実施例では、マクロファージ指向
性ＨＩＶ感染に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
の予防効果を評価することを目的として、以下の試験を
行った。ＨＩＶを感染させる細胞として、ＣＤ４レセプ
ター及びＣＣＲ５の両方を発現するＣＯＳ細胞（以下、
Ａ４１細胞と称する）を用いた。また培地には、１０％
血清（Ｆｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ；ＪＲＨ Ｂ
ＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ６Ｈ２１６２）、５００μｇ／ｍ
ｌ−Ｇ４１８サルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）（ＧＥＮ
ＥＴＩＣＩＮ；ギブコ Ｌｏｔ Ｎｏ．７７Ｋ７５６
６）、及び２００μｇ／ｍｌハイグロマイシンＢ（ベー
リンガーマンハイム；Ｌｏｔ Ｎｏ．８４３５５５）を
含むＤＭＥＭ培地（以下、培養用培地と称する）を用い
た。
【００３８】まず、１０万個／ｍｌに調整したＡ４１細
胞へ、前記培養用培地を使って種々の濃度に調整した各
種オリゴヌクレオチドを加えた。前記オリゴヌクレオチ
ドとしては、前記実施例２で合成した「オリゴヌクレオ
チドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリゴヌクレオチドＡＳ
（ｓ）−６３」、「オリゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）」、
及び「オリゴヌクレオチドＳＣ（ｓ）」を使用した。５
日間の細胞培養後に、Ａ４１細胞を１０万個／ｍｌに再
調整し、更に２４時間培養した。ｍ．ｏ．ｉ．が０．０
１となるように、マクロファージ指向性ＨＩＶ感染細胞
株ＪＲ−ＣＳＦ株２００μｌをＡ４１細胞へ加え、２４
時間培養した。ＤＭＥＭ培地でウイルスを洗浄した後
に、ウイルス感染させたＡ４１細胞を８日間培養した。
そして、培養した細胞上清をｐ２４のＥＬＩＳＡキット
（第一化学ＨＩＶ−ｐ２４キット；第一化学薬品工業Ｌ
ｏｔ Ｎｏ．ＤＩＣ−２４０８０５）により測定し、そ
の結果より各オリゴヌクレオチドの効果を算出した。
胞へ、前記培養用培地を使って種々の濃度に調整した各
種オリゴヌクレオチドを加えた。前記オリゴヌクレオチ
ドとしては、前記実施例２で合成した「オリゴヌクレオ
チドＡＳ（ｓ）−１」〜「オリゴヌクレオチドＡＳ
（ｓ）−６３」、「オリゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）」、
及び「オリゴヌクレオチドＳＣ（ｓ）」を使用した。５
日間の細胞培養後に、Ａ４１細胞を１０万個／ｍｌに再
調整し、更に２４時間培養した。ｍ．ｏ．ｉ．が０．０
１となるように、マクロファージ指向性ＨＩＶ感染細胞
株ＪＲ−ＣＳＦ株２００μｌをＡ４１細胞へ加え、２４
時間培養した。ＤＭＥＭ培地でウイルスを洗浄した後
に、ウイルス感染させたＡ４１細胞を８日間培養した。
そして、培養した細胞上清をｐ２４のＥＬＩＳＡキット
（第一化学ＨＩＶ−ｐ２４キット；第一化学薬品工業Ｌ
ｏｔ Ｎｏ．ＤＩＣ−２４０８０５）により測定し、そ
の結果より各オリゴヌクレオチドの効果を算出した。
【００３９】本発明の有効成分であるオリゴヌクレオチ
ドＡＳ（ｓ）−１の結果を、比較用オリゴヌクレオチド
であるオリゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）の結果と併せて、
図５に示す。なお、図５に示すコントロールは、オリゴ
ヌクレオチド無添加（すなわち、アンチセンスオリゴヌ
クレオチド、センスオリゴヌクレオチド、及びスクラン
ブルオリゴヌクレオチドのいずれも無添加）の場合の結
果を示す。ホスホロチオエート型のセンスオリゴヌクレ
オチド［ＳＥ（ｓ）］が、ウイルス感染をほとんど抑制
しなかったのに対して、ホスホロチオエート型のアンチ
センスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−１］は、低濃
度（１μＭ）においてもウイルス感染の抑制効果を示
し、５μＭの濃度ではウイルス感染を９０％以上抑制し
た。その他のホスホロチオエート型のアンチセンスオリ
ゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−２〜ＡＳ（ｓ）−６３］
においても、同様のウイルス感染抑制効果を示したが、
ＡＳ（ｓ）−３７〜ＡＳ（ｓ）−６３に比べ、ＡＳ
（ｓ）−１〜ＡＳ（ｓ）−３６の方が、抑制効果が高く
なる傾向が観察され、その中でも、ＡＳ（ｓ）−１〜Ａ
Ｓ（ｓ）−１８の抑制効果が一層高くなる傾向が観察さ
れた。
ドＡＳ（ｓ）−１の結果を、比較用オリゴヌクレオチド
であるオリゴヌクレオチドＳＥ（ｓ）の結果と併せて、
図５に示す。なお、図５に示すコントロールは、オリゴ
ヌクレオチド無添加（すなわち、アンチセンスオリゴヌ
クレオチド、センスオリゴヌクレオチド、及びスクラン
ブルオリゴヌクレオチドのいずれも無添加）の場合の結
果を示す。ホスホロチオエート型のセンスオリゴヌクレ
オチド［ＳＥ（ｓ）］が、ウイルス感染をほとんど抑制
しなかったのに対して、ホスホロチオエート型のアンチ
センスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−１］は、低濃
度（１μＭ）においてもウイルス感染の抑制効果を示
し、５μＭの濃度ではウイルス感染を９０％以上抑制し
た。その他のホスホロチオエート型のアンチセンスオリ
ゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−２〜ＡＳ（ｓ）−６３］
においても、同様のウイルス感染抑制効果を示したが、
ＡＳ（ｓ）−３７〜ＡＳ（ｓ）−６３に比べ、ＡＳ
（ｓ）−１〜ＡＳ（ｓ）−３６の方が、抑制効果が高く
なる傾向が観察され、その中でも、ＡＳ（ｓ）−１〜Ａ
Ｓ（ｓ）−１８の抑制効果が一層高くなる傾向が観察さ
れた。
【００４０】
【実施例４】《マクロファージ指向性ＨＩＶの感染治療
における評価試験》本実施例では、マクロファージ指向
性ＨＩＶ感染に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
の治療効果を評価することを目的として、以下の試験を
行った。まず、ｍ．ｏ．ｉ．が０．０１となるように調
整したマクロファージ指向性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−Ｃ
ＳＦ株を、１０万個／ｍｌに調整したＡ４１細胞へ添加
した後に、２４時間培養した。培養用培地で過剰のウイ
ルスを洗浄した後に、ウイルスを感染させたＡ４１細胞
に対して、培養用培地を使って種々の濃度に調整した各
種オリゴヌクレオチドを加えた。前記オリゴヌクレオチ
ドとしては、実施例３で使用した各種オリゴヌクレオチ
ドを使用した。オリゴヌクレオチド添加から３日後及び
６日後に、Ａ４１細胞を１０万個／ｍｌに再調整し、培
養を続けた。オリゴヌクレオチド添加から８日後に、細
胞上清を集め、前記実施例３と同様にしてＥＬＩＳＡ測
定を行った。
における評価試験》本実施例では、マクロファージ指向
性ＨＩＶ感染に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド
の治療効果を評価することを目的として、以下の試験を
行った。まず、ｍ．ｏ．ｉ．が０．０１となるように調
整したマクロファージ指向性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−Ｃ
ＳＦ株を、１０万個／ｍｌに調整したＡ４１細胞へ添加
した後に、２４時間培養した。培養用培地で過剰のウイ
ルスを洗浄した後に、ウイルスを感染させたＡ４１細胞
に対して、培養用培地を使って種々の濃度に調整した各
種オリゴヌクレオチドを加えた。前記オリゴヌクレオチ
ドとしては、実施例３で使用した各種オリゴヌクレオチ
ドを使用した。オリゴヌクレオチド添加から３日後及び
６日後に、Ａ４１細胞を１０万個／ｍｌに再調整し、培
養を続けた。オリゴヌクレオチド添加から８日後に、細
胞上清を集め、前記実施例３と同様にしてＥＬＩＳＡ測
定を行った。
【００４１】本発明の有効成分であるオリゴヌクレオチ
ドＡＳ（ｓ）−１の結果を図６に示す。なお、図６に示
すコントロールは、オリゴヌクレオチド無添加（すなわ
ち、アンチセンスオリゴヌクレオチド、センスオリゴヌ
クレオチド、及びスクランブルオリゴヌクレオチドのい
ずれも無添加）の場合の結果を示す。ホスホロチオエー
ト型のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、低濃度（１
μＭ）でも約５０％強のウイルス感染を抑制した。その
他のホスホロチオエート型のアンチセンスオリゴヌクレ
オチド［ＡＳ（ｓ）−２〜ＡＳ（ｓ）−６３］において
も、同様のウイルス感染抑制効果を示したが、ＡＳ
（ｓ）−３７〜ＡＳ（ｓ）−６３に比べ、ＡＳ（ｓ）−
１〜ＡＳ（ｓ）−３６の方が、抑制効果が高くなる傾向
が観察され、その中でも、ＡＳ（ｓ）−１〜ＡＳ（ｓ）
−１８の抑制効果が一層高くなる傾向が観察された。
ドＡＳ（ｓ）−１の結果を図６に示す。なお、図６に示
すコントロールは、オリゴヌクレオチド無添加（すなわ
ち、アンチセンスオリゴヌクレオチド、センスオリゴヌ
クレオチド、及びスクランブルオリゴヌクレオチドのい
ずれも無添加）の場合の結果を示す。ホスホロチオエー
ト型のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、低濃度（１
μＭ）でも約５０％強のウイルス感染を抑制した。その
他のホスホロチオエート型のアンチセンスオリゴヌクレ
オチド［ＡＳ（ｓ）−２〜ＡＳ（ｓ）−６３］において
も、同様のウイルス感染抑制効果を示したが、ＡＳ
（ｓ）−３７〜ＡＳ（ｓ）−６３に比べ、ＡＳ（ｓ）−
１〜ＡＳ（ｓ）−３６の方が、抑制効果が高くなる傾向
が観察され、その中でも、ＡＳ（ｓ）−１〜ＡＳ（ｓ）
−１８の抑制効果が一層高くなる傾向が観察された。
【００４２】
【実施例５】《Ｔ細胞指向性ＨＩＶの感染予防における
評価試験》本実施例では、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ感染に対
するアンチセンスオリゴヌクレオチドの予防効果を評価
することを目的として、以下の試験を行った。すなわ
ち、ＨＩＶを感染させる細胞として、実施例３に記載の
Ａ２２細胞の代わりに、ＣＤ４レセプター及びＣＸＣＲ
４の両方を発現するＣＯＳ細胞を用いたこと；ＨＩＶ感
染細胞株として、実施例３に記載のマクロファージ指向
性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−ＣＳＦ株の代わりに、Ｔ細胞
指向性ＨＩＶ感染細胞株ＮＬ４−３株を用いたこと；そ
して、オリゴヌクレオチドとして、前記実施例２で合成
したオリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６４〜オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−１１９を使用したこと以外は、実
施例３に記載の手順を繰り返した。ホスホロチオエート
型のアンチセンスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−６
４〜ＡＳ（ｓ）−１１９］は、ウイルス感染において充
分な抑制効果を示したが、ＡＳ（ｓ）−８５〜ＡＳ
（ｓ）−１１９に比べ、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）
−８４の方が、抑制効果が高くなる傾向が観察され、そ
の中でも、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）−６８の抑制
効果が一層高くなる傾向が観察された。
評価試験》本実施例では、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ感染に対
するアンチセンスオリゴヌクレオチドの予防効果を評価
することを目的として、以下の試験を行った。すなわ
ち、ＨＩＶを感染させる細胞として、実施例３に記載の
Ａ２２細胞の代わりに、ＣＤ４レセプター及びＣＸＣＲ
４の両方を発現するＣＯＳ細胞を用いたこと；ＨＩＶ感
染細胞株として、実施例３に記載のマクロファージ指向
性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−ＣＳＦ株の代わりに、Ｔ細胞
指向性ＨＩＶ感染細胞株ＮＬ４−３株を用いたこと；そ
して、オリゴヌクレオチドとして、前記実施例２で合成
したオリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６４〜オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−１１９を使用したこと以外は、実
施例３に記載の手順を繰り返した。ホスホロチオエート
型のアンチセンスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−６
４〜ＡＳ（ｓ）−１１９］は、ウイルス感染において充
分な抑制効果を示したが、ＡＳ（ｓ）−８５〜ＡＳ
（ｓ）−１１９に比べ、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）
−８４の方が、抑制効果が高くなる傾向が観察され、そ
の中でも、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）−６８の抑制
効果が一層高くなる傾向が観察された。
【００４３】
【実施例６】《Ｔ細胞指向性ＨＩＶの感染治療における
評価試験》本実施例では、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ感染に対
するアンチセンスオリゴヌクレオチドの治療効果を評価
することを目的として、以下の試験を行った。すなわ
ち、ＨＩＶを感染させる細胞として、実施例４に記載の
Ａ２２細胞の代わりに、ＣＤ４レセプター及びＣＸＣＲ
４の両方を発現するＣＯＳ細胞を用いたこと；ＨＩＶ感
染細胞株として、実施例４に記載のマクロファージ指向
性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−ＣＳＦ株の代わりに、Ｔ細胞
指向性ＨＩＶ感染細胞株ＮＬ４−３株を用いたこと；そ
して、オリゴヌクレオチドとして、前記実施例２で合成
したオリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６４〜オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−１１９を使用したこと以外は、実
施例４に記載の手順を繰り返した。ホスホロチオエート
型のアンチセンスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−６
４〜ＡＳ（ｓ）−１１９］は、ウイルス感染において充
分な抑制効果を示したが、ＡＳ（ｓ）−８５〜ＡＳ
（ｓ）−１１９に比べ、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）
−８４の方が、抑制効果が高くなる傾向が観察され、そ
の中でも、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）−６８の抑制
効果が一層高くなる傾向が観察された。
評価試験》本実施例では、Ｔ細胞指向性ＨＩＶ感染に対
するアンチセンスオリゴヌクレオチドの治療効果を評価
することを目的として、以下の試験を行った。すなわ
ち、ＨＩＶを感染させる細胞として、実施例４に記載の
Ａ２２細胞の代わりに、ＣＤ４レセプター及びＣＸＣＲ
４の両方を発現するＣＯＳ細胞を用いたこと；ＨＩＶ感
染細胞株として、実施例４に記載のマクロファージ指向
性ＨＩＶ感染細胞株ＪＲ−ＣＳＦ株の代わりに、Ｔ細胞
指向性ＨＩＶ感染細胞株ＮＬ４−３株を用いたこと；そ
して、オリゴヌクレオチドとして、前記実施例２で合成
したオリゴヌクレオチドＡＳ（ｓ）−６４〜オリゴヌク
レオチドＡＳ（ｓ）−１１９を使用したこと以外は、実
施例４に記載の手順を繰り返した。ホスホロチオエート
型のアンチセンスオリゴヌクレオチド［ＡＳ（ｓ）−６
４〜ＡＳ（ｓ）−１１９］は、ウイルス感染において充
分な抑制効果を示したが、ＡＳ（ｓ）−８５〜ＡＳ
（ｓ）−１１９に比べ、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）
−８４の方が、抑制効果が高くなる傾向が観察され、そ
の中でも、ＡＳ（ｓ）−６４〜ＡＳ（ｓ）−６８の抑制
効果が一層高くなる傾向が観察された。
【００４４】
【発明の効果】本発明のＨＩＶコファクター抑制剤は、
特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることに
より、ＨＩＶの感染に対して有効な予防又は治療を行う
ことができる。また、ＨＩＶは、病気の進行に従って、
その細胞指向性が変化し、感染初期では主としてマクロ
ファージ指向性ＨＩＶが、感染末期では主としてＴ細胞
指向性ＨＩＶが患者から検出される。発明のＨＩＶコフ
ァクター抑制剤によれば、２種類のＨＩＶコファクター
（ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４）の発現をそれぞれ別々に抑
制することができるので、感染の段階に応じた、より適
切な治療を行なうことが可能である。
特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることに
より、ＨＩＶの感染に対して有効な予防又は治療を行う
ことができる。また、ＨＩＶは、病気の進行に従って、
その細胞指向性が変化し、感染初期では主としてマクロ
ファージ指向性ＨＩＶが、感染末期では主としてＴ細胞
指向性ＨＩＶが患者から検出される。発明のＨＩＶコフ
ァクター抑制剤によれば、２種類のＨＩＶコファクター
（ＣＣＲ５及びＣＸＣＲ４）の発現をそれぞれ別々に抑
制することができるので、感染の段階に応じた、より適
切な治療を行なうことが可能である。
【００４５】
【００４６】 配列番号：１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GATAATGGAT CTTGTTCCCA 20
【００４７】 配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GATTGGACTT GACACTTGTA 20
【００４８】 配列番号：３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TAATAATTGA TGTCATAGGA 20
【００４９】 配列番号：４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GGCAGGGCTC CGATGTATAA 20
【００５０】 配列番号：５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTTCACATTG ATTTTTTGGC 20
【００５１】 配列番号：６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGGCGGGCTG CGATTTGCTT 20
【００５２】 配列番号：７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GAGTGAGCGG AGGCAGGAGG 20
【００５３】 配列番号：８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAAAGATGAA CACCAGTGAG 20
【００５４】 配列番号：９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CATGTTGCCC ACAAAACCAA 20
【００５５】 配列番号：１０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGGATGAGGA TGACCAGCAT 20
【００５６】 配列番号：１１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGGAAAACGT CAAATAGTCC 20
【００５７】 配列番号：１２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAGTCAGTAC GAGAAGTCGG 20
【００５８】 配列番号：１３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGGTTGAGCA GGTAGATGTC 20
【００５９】 配列番号：１４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACAGGTCAGA GATGGCCAGG 20
【００６０】 配列番号：１５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GGGGACAGTA AGAAGGAAAA 20
【００６１】 配列番号：１６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GCATAGTGAG CCCAGAAGGG 20
【００６２】 配列番号：１７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGTCCCAGTG GGCGGCAGCA 20
【００６３】 配列番号：１８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACACATTGTA TTTCCAAAGT 20
【００６４】 配列番号：１９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGCCCTGTCA AGAGTTGACA 20
【００６５】 配列番号：２０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGAAGCCTAT AAAATAGAGA 20
【００６６】 配列番号：２１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GAAGAAGATT CCAGAGAAGA 20
【００６７】 配列番号：２２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATTGTCAGGA GGTAGATGAA 20
【００６８】 配列番号：２３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAGCCAGGTA CCTATCGATT 20
【００６９】 配列番号：２４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CACAGCATGG ACGACAGTCA 20
【００７０】 配列番号：２５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTGGATTTTA AAGCAAACAC 20
【００７１】 配列番号：２６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCCCAAAGGT GACCGTCCTG 20
【００７２】 配列番号：２７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GATCACACTT GTCACCACCC 20
【００７３】 配列番号：２８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACAGCCACCA CCGAAGTGAT 20
【００７４】 配列番号：２９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTGGGAGAGG AGACGCAAAC 20
【００７５】 配列番号：３０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCTGGTAAAG ATGTATCCTG 20
【００７６】 配列番号：３１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGACCTTCTT TTTGAGATCT 20
【００７７】 配列番号：３２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGCTGCAGGT GTAATGAAGA 20
【００７８】 配列番号：３３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACTGTATGGA AAATGAGAGC 20
【００７９】 配列番号：３４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTCCAGAATT GATACTGACT 20
【００８０】 配列番号：３５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTAATGTCTG GAAATTCTTC 20
【００８１】 配列番号：３６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCCCAAGATG ACTATCTTTA 20
【００８２】 配列番号：３７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGCAGCGGCA GGACCAGCCC 20
【００８３】 配列番号：３８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGCAGATGAC CATGACAAGC 20
【００８４】 配列番号：３９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTTTAGGATT CCCGAGTAGA 20
【００８５】 配列番号：４０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGACACCGAA GCAGAGTTTT 20
【００８６】 配列番号：４１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GCCTCTTCTT CTCATTTCGA 20
【００８７】 配列番号：４２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AAGCCTCACA GCCCTGTGCC 20
【００８８】 配列番号：４３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AATCATGATG GTGAAGATAA 20
【００８９】 配列番号：４４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGAAGAGAAA ATAAACAATC 20
【００９０】 配列番号：４５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AATGTTGTAG GGAGCCCAGA 20
【００９１】 配列番号：４６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GTGTTCAGGA GAAGGACAAT 20
【００９２】 配列番号：４７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCAAAGAATT CCTGGAAGGT 20
【００９３】 配列番号：４８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCAACCTGT TAGAGCTACT 20
【００９４】 配列番号：４９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCAACCTGT TAGAGCTACT 20
【００９５】 配列番号：５０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCACCTGCAT AGCTTGGTCC 20
【００９６】 配列番号：５１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CATCCCAAGA GTCACTGTCA 20
【００９７】 配列番号：５２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTGATGCAGC AGTGCGTCAT 20
【００９８】 配列番号：５３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AGGCATAGAT GATGGGGTTG 20
【００９９】 配列番号：５４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GAACTTCTCC CCGACAAAGG 20
【０１００】 配列番号：５５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACTAAGAGGT ACTTTCTGAA 20
【０１０１】 配列番号：５６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TGTGCTTTTG GAAGAAGACT 20
【０１０２】 配列番号：５７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GAAGCGTTTG GCAATGTGCT 20
【０１０３】 配列番号：５８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AAAATAGAAC AGCATTTGCA 20
【０１０４】 配列番号：５９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGGGAGCCTC TTGCTGGAAA 20
【０１０５】 配列番号：６０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AACTGAGCTT GCTCGCTCGG 20
【０１０６】 配列番号：６１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCAGTGGATC GGGTGTAAAC 20
【０１０７】 配列番号：６２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAGATATTTC CTGCTCCCCA 20
【０１０８】 配列番号：６３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCGTGTCAC AAGCCCACAG 20
【０１０９】 配列番号：６４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATGGAGGGGA TCAGTATATA 20
【０１１０】 配列番号：６５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATACACTTCA GATAACTACA 20
【０１１１】 配列番号：６６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACACCGAGGA AATGGGCTCA 20
【０１１２】 配列番号：６７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCAGGGGACT ATGACTCCAT 20
【０１１３】 配列番号：６８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CATGAAGGAA CCCTGTTTCC 20
【０１１４】 配列番号：６９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCGTGAAGA AAATGCTAAT 20
【０１１５】 配列番号：７０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AATTTCAATA AAATCTTCCT 20
【０１１６】 配列番号：７１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCTGCCCACC ATCTACTCCA 20
【０１１７】 配列番号：７２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCATCATCTT CTTAACTGGC 20
【０１１８】 配列番号：７３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GGCATTGTGG GCAATGGATT 20
【０１１９】 配列番号：７４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATTGGTCATC CTGGTCATGG 20
【０１２０】 配列番号：７５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TGGGTTACCA GAAGAAACTG 20
【０１２１】 配列番号：７６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTGAGAAGCA TGACGGACAA 20
【０１２２】 配列番号：７７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAAGTACAGG CTGCACCTGT 20
【０１２３】 配列番号：７８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TGTCAGTGGC CGACCTCCTC 20
【０１２４】 配列番号：７９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTCTTTGTCA TCACGCTTCC 20
【０１２５】 配列番号：８０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCCTTCTGG GCAGTTGATG 20
【０１２６】 配列番号：８１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATGCCGTGGC AAACTGGTAC 20
【０１２７】 配列番号：８２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TACTTTGGGA ACTTCCTATG 20
【０１２８】 配列番号：８３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ATGCAAGGCA GTCCATGTCA 20
【０１２９】 配列番号：８４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCATCTACAC AGTCAACCTC 20
【０１３０】 配列番号：８５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTCTACAGCA GTGTCCTCAT 20
【０１３１】 配列番号：８６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CATCCTGGCC TTCATCAGTC 20
【０１３２】 配列番号：８７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GTCTGGACCG CTACCTGGCC 20
【０１３３】 配列番号：８８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GCCATCGTCC ACGCCACCAA 20
【０１３４】 配列番号：８９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CAACAGTCAG AGGCCAAGGA 20
【０１３５】 配列番号：９０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GGAAGCTGTT GGCTGAAAAG 20
【０１３６】 配列番号：９１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 AAGGTGGTCT ATGTTGGCGT 20
【０１３７】 配列番号：９２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGTCTGGATC CCTGCCCTCC 20
【０１３８】 配列番号：９３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCTGCTGAC TATTCCCGAC 20
【０１３９】 配列番号：９４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GACTTCATCT TTGCCAACGT 20
【０１４０】 配列番号：９５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGTCAGTGAG GCAGATGACA 20
【０１４１】 配列番号：９６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 ACAGATATAT CTGTGACCGC 20
【０１４２】 配列番号：９７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGCTTCTACC CCAATGACTT 20
【０１４３】 配列番号：９８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTTGTTGGCT GCCTTACTAC 20
【０１４４】 配列番号：９９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TACATTGGGA TCAGCATCGA 20
【０１４５】 配列番号：１００ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CGACTCCTTC ATCCTCCTGG 20
【０１４６】 配列番号：１０１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TGGAAATCAT CAAGCAAGGG 20
【０１４７】 配列番号：１０２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GGGTGTGAGT TTGAGAACAC 20
【０１４８】 配列番号：１０３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CACTGTGCAC AAGTGGATTT 20
【０１４９】 配列番号：１０４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTTCCATCAC CGAGGCCCTA 20
【０１５０】 配列番号：１０５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTAGCTTTCT TCCACTGTTG 20
【０１５１】 配列番号：１０６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTGTCTGAAC CCCATCCTCT 20
【０１５２】 配列番号：１０７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCTATGCTTT CCTTGGAGCC 20
【０１５３】 配列番号：１０８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GCCAAATTTA AAACCTCTGC 20
【０１５４】 配列番号：１０９ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TGCCCAGCAC GCACTCACCT 20
【０１５５】 配列番号：１１０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CCTCTGTGAG CAGAGGGTCC 20
【０１５６】 配列番号：１１１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCAGCCTCA AGATCCTCTC 20
【０１５７】 配列番号：１１２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTCCAAAGGA AAGCGAGGTG 20
【０１５８】 配列番号：１１３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GTGGACATTC ATCTGTTTCC 20
【０１５９】 配列番号：１１４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCACTGAGT CTGAGTCTTC 20
【０１６０】 配列番号：１１５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TTCAGCCTCA AGATCCTCTC 20
【０１６１】 配列番号：１１６ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 CTCCAAAGGA AAGCGAGGTG 20
【０１６２】 配列番号：１１７ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 GTGGACATTC ATCTGTTTCC 20
【０１６３】 配列番号：１１８ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 配列 TCCACTGAGT CTGAGTCTTC 20
【０１６４】 配列番号：１１９ 配列の長さ：２２ 配列の型：核酸 配列 TTCAAGTTTT CACTCCAGCT AA 22
【図１】実施例１で設計した、ＣＣＲ５遺伝子の塩基配
列に対して相補的な塩基配列を有するアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの塩基配列、並びにそれに対応するセン
スオリゴヌクレオチドの塩基配列及びスクランブルオリ
ゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
列に対して相補的な塩基配列を有するアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの塩基配列、並びにそれに対応するセン
スオリゴヌクレオチドの塩基配列及びスクランブルオリ
ゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
【図２】実施例１で設計した、ＣＣＲ５遺伝子の塩基配
列に対して相補的な塩基配列を有する別のアンチセンス
オリゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
列に対して相補的な塩基配列を有する別のアンチセンス
オリゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
【図３】実施例１で設計した、ＣＸＣＲ４遺伝子の塩基
配列に対して相補的な塩基配列を有するアンチセンスオ
リゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
配列に対して相補的な塩基配列を有するアンチセンスオ
リゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
【図４】実施例１で設計した、ＣＸＣＲ４遺伝子の塩基
配列に対して相補的な塩基配列を有する別のアンチセン
スオリゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
配列に対して相補的な塩基配列を有する別のアンチセン
スオリゴヌクレオチドの塩基配列を示す説明図である。
【図５】ＨＩＶ感染予防効果の評価を目的とした実施例
３で行ったＥＬＩＳＡ測定の結果を示すグラフである。
３で行ったＥＬＩＳＡ測定の結果を示すグラフである。
【図６】ＨＩＶ感染治療効果の評価を目的とした実施例
４で行ったＥＬＩＳＡ測定の結果を示すグラフである。
４で行ったＥＬＩＳＡ測定の結果を示すグラフである。
フロントページの続き (72)発明者 和田 晃 千葉県佐倉市上座787−43
Claims (8)
- 【請求項１】 ＣＸＣＲ４遺伝子又はＣＣＲ５遺伝子の
塩基配列に対して相補的な塩基配列を含むオリゴヌクレ
オチドを含有することを特徴とする、ＨＩＶコファクタ
ー抑制剤。 - 【請求項２】 前記のオリゴヌクレオチドが、配列表の
配列番号１〜配列番号１１９の配列で表わされる塩基配
列を有するオリゴヌクレオチドである、請求項２に記載
のＨＩＶコファクター抑制剤。 - 【請求項３】 前記のオリゴヌクレオチドの少なくとも
１つのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエー
ト型結合である、請求項１又は２に記載のＨＩＶコファ
クター抑制剤。 - 【請求項４】 血中で安定なリポソームを更に含有す
る、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＨＩＶコファ
クター抑制剤。 - 【請求項５】 前記リポソームが、脂質系ポリマー又は
アミノ酸性ポリマーから形成されるリポソームである、
請求項４に記載のＨＩＶコファクター抑制剤。 - 【請求項６】 前記リポソームが、脂質系ポリマー又は
アミノ酸性ポリマーと、ウイルスエンベロープタンパク
質又はその断片との複合体からなる膜融合型である、請
求項５に記載のＨＩＶコファクター抑制剤。 - 【請求項７】 請求項１〜３のいずれか一項に記載のオ
リゴヌクレオチドを含むべクターを含有することを特徴
とする、ＨＩＶコファクター抑制剤。 - 【請求項８】 前記ベクターが非増殖性アデノウイルス
べクター又は非増殖性レトロウイルスベクターである、
請求項７に記載のＨＩＶコファクター抑制剤。
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| JP10125452A JPH11292795A (ja) | 1998-04-02 | 1998-04-02 | Ｈｉｖコファクター抑制剤 |
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