JP5049480B2

JP5049480B2 - 美白剤および抗酸化剤ならびに活性酸素除去剤

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Publication number: JP5049480B2
Application number: JP2005286249A
Authority: JP
Inventors: 佳司森村; 敦子土村; 孝彦道▲籏▼; 克介長井; 千尋山崎; 満廣田; 恭尚服部; 秀文真壁
Original assignee: GEOL CHEMICAL CO., LTD.; Shinshu University NUC
Current assignee: GEOL CHEMICAL CO., LTD.; Shinshu University NUC
Priority date: 2004-09-30
Filing date: 2005-09-30
Publication date: 2012-10-17
Anticipated expiration: 2025-09-30
Also published as: JP2006124386A

Description

本発明は、特定のクロマン化合物を含有する美白剤および抗酸化剤ならびに活性酸素除去剤に関するものである。

化粧品や医薬品等に使用する皮膚外用剤、食品添加物、薬品などの素材の多くは、様々な生物が生産する有効成分を利用し開発されてきた。これらの素材の多くは、生物から抽出、精製し得られた化合物をそのまま或いは、その化合物をリード化合物として有機合成された物質が用いられている。現在使用されている様々な皮膚外用剤、食品添加物、医薬品などの素材もこのようにして開発されている。特に美白剤と抗酸化剤、活性酸素除去剤は、医薬、美容面からの関心が高く様々な素材が開発されている。これは、未だ安全性および安定性が高く、かつ高い美白作用、抗酸化作用、活性酸素除去作用を有する化合物が開発されていないことにも起因している。

美白剤としてこれまでに、ハイドロキノン誘導体、コウジ酸、アスコルビン酸およびその誘導体、プラセンタエキス等が開発されてきた。これらの美白剤は、太陽光線によるしみ、そばかすなどの色素沈着の原因となるメラニンの生成の抑制あるいは、既成メラニンの還元、表皮内のメラニンの排泄促進、メラノサイトへの選択毒性等の作用を有する事により、表皮内のメラニン量を減少させる効果を示す。

しかしながら、上述の美白剤はいずれも美白作用が不十分であり、安定性および安全性にも問題がある美白剤も多い。例えば、アスコルビン酸およびその誘導体は安定性が低く、その美白作用も不十分である。ハイドロキノン誘導体およびコウジ酸は人体に対する安全性に問題があり、現在我国ではその使用が制限されている。安定性、安全性に優れ、十分な効果を発揮する美白剤は未だ開発されていない。

抗酸化剤は、物質の酸化を阻害する、還元作用に優れた物質である。この還元作用により他の物質の酸化を防ぐ。また、スーパーオキシドラジカルやヒドキシラジカルのような活性酸素や過酸化脂質などのラジカルを消去する効果も併せ持つ。活性酸素除去剤は、活性酸素を除去する効果を有する物質である。活性酸素や過酸化脂質は生体に対して大きな損傷を与え、炎症や老化、発癌などの原因となる。

抗酸化剤および活性酸素除去剤としてもこれまでにいくつかの種類の化合物が開発されている。人工合成により供給されている抗酸化剤としては、ブチルヒドロキシアンニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）などがあるが、これらは人体に対する安全性に問題がある。一方、天然由来の抗酸化剤または活性酸素除去剤には、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）、α−トコフェロール、アスコルビン酸、β−カロチン、ケルセチンなどがある。これら天然由来の抗酸化剤または活性酸素除去剤は、抗酸化剤として人工的に合成された化合物よりも、抗酸化作用または活性酸素除去作用が弱い場合が多い。ケルセチンは強い効果を有すが、毒性が懸念されている。また、これら既存の天然の抗酸化剤または活性酸素除去剤は、安定性に欠けるため、着色や変色、においの変化の原因となるなどの問題がある場合が多い。そのため、安定性および安全性に優れ、かつ高い抗酸化活性および活性酸素除去活性を有する化合物が望まれる。

安全かつ安定な天然素材由来の美白剤、フリーラジカル消去剤等を、キノコの子実体、培養菌糸体の培養液または抽出物から調製する方法を、本発明者らは、既に開発した（特許文献１）。特許文献１では、高い美白作用、フリーラジカル消去作用を有する抽出物および培養液が開示されているが、そのような効果を有する化合物の精製は、行われていない。様々な物質の夾雑物たる抽出物および培養液から精製した単一の活性物質を美白剤および抗酸化剤として用いることにより、その作用は大きく増強され、夾雑物による刺激も減退する。また、その構造を同定することによって、これら活性を有する化合物を人工的に合成するこが可能となる。従って、これら活性を有する化合物を単離・精製し、構造決定をすることが望まれる。
特願2004-052518

本発明は、美白作用および抗酸化作用、活性酸素除去作用に優れた新規の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を提供することを目的とする。

このような状況を鑑み、本発明者らは新規の美白作用、抗酸化作用、および／または活性酸素除去作用を有する化合物の開発に着手した。その結果、キノコ培養物の抽出物から、以下の構造式に表される化合物からなる群から選択される化合物を含有する、化合物を単離、精製、構造決定し、これら化合物が、優れた美白作用および抗酸化作用、活性酸素除去作用を発揮することを見出し、本発明の完成に至った。

上記化学式において、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、エステル基（−Ｏ−ＣＯ−Ｒ_１０）、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_１１）からなる群から選択され、
Ｒ_１０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｍ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｍ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_１１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｈ）、フェニル基、フェニル基誘導体、および糖類からなる群から選択され、ここでｎ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、ここで糖類は、トリオース、テトロオース、ペントース、およびヘキソースからなる群から選択される単糖、または、該単糖が、それぞれ独立して、２〜５個グルコシド結合したオリゴ糖であり、
Ｒ_３は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｈ）、フェニル基、フェニル基誘導体、糖類、および、アシル基（−ＣＯ−Ｒ_２０）からなる群から選択され、ここでｐ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、ここで糖類は、トリオース、テトロオース、ペントース、およびヘキソースからなる群から選択される単糖、または、該単糖が、それぞれ独立して、２〜５個グルコシド結合したオリゴ糖であり、
Ｒ_２０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｑ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｑ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物；

上記化学式において、Ｒ_４、Ｒ_５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、ハロゲン原子、エステル基（−Ｏ−ＣＯ−Ｒ_３０）、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_３１）からなる群から選択され、
Ｒ_３０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｒ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｒ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_３１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ）、フェニル基、フェニル基誘導体、および糖類からなる群から選択され、ここでｓ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、ここで糖類は、トリオース、テトロオース、ペントース、およびヘキソースからなる群から選択される単糖、または、該単糖が、それぞれ独立して、２〜５個グルコシド結合したオリゴ糖であり、
Ｒ_６はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_４０）、ならびに、アミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_４１）からなる群から選択され、
Ｒ_４０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｔ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｔ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_４１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｕ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｕ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物；

上記化学式において、Ｒ_７は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｖ−Ｈ）、フェニル基、フェニル基誘導体、糖類、および、アシル基（−ＣＯ−Ｒ_５０）からなる群から選択され、ここでｖ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、ここで糖類は、トリオース、テトロオース、ペントース、およびヘキソースからなる群から選択される単糖、または、該単糖が、それぞれ独立して、２〜５個グルコシド結合したオリゴ糖であり、
Ｒ_５０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｗ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｗ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物；ならびに、

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物。

これらの化合物はＪ．Ｙ．Ｇｏｕｊｏｎら（Ｊ．Ｙ．Ｇｏｕｊｏｎ，Ｆ．Ｚａｍｍａｔｉｏ，Ｓ．Ｐａｇｎｏｎｃｅｉｌ，Ｙ．Ｂｏｕｒｓｅｒｅａｕ，Ｂ．Ｋｉｒｓｃｈｌｅｇｅｒ，ＡＮｅｗａｎｄＥｆｆｉｃｉｅｎｔＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＳｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ２−Ｈｙｄｒｏｘｙｌ−２−ｍｅｔｈｙｌ−２Ｈ−Ｃｈｒｏｍｅｎｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ，ＦａｃｕｌｔｅｄｅｓＳｃｉｅｎｃｅｓｅｔｄｅｓＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓｙｎｌｅｔｔ，Ｎｏ．２，３２２−３２４，２００２）によって有機合成されているが、美白作用および抗酸化作用、活性酸素除去作用をはじめ一切の生理作用についての報告はない。また天然物から単離されたという報告もない。

また、特開2001-2558では、上記構造とは異なる構造を有するクロマン化合物について開示している。しかし、特開2001-2558には、上記構造の化合物について何ら開示も示唆もしていない。

したがって、本発明は以下を提供する。
（項目１）以下の構造式に表される化合物からなる群から選択される化合物を含有する、美白剤：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物。
（項目２）以下の構造式に表される化合物を含有する、項目１に記載の美白剤：

上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物。
（項目３）以下の構造式に表される化合物からなる群から選択される化合物を含有する、抗酸化剤：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物。
（項目４）以下の構造式に表される化合物を含有する、項目３に記載の抗酸化剤：

上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物。
（項目５）以下の構造式に表される化合物からなる群から選択される化合物を含有する、活性酸素除去剤：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物。
（項目６）以下の構造式に表される化合物を含有する、項目５に記載の活性酸素除去剤：

上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物。
（項目７）以下の構造式に表される化合物からなる群から選択される化合物を含有する、皮膚外用剤：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物。
（項目８）以下の構造式に表される化合物を含有する、項目７に記載の皮膚外用剤：

上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物。
（項目９）ホウロクタケ(Ｄａｅｄａｌｅａｄｉｃｋｉｎｓｉｉ（Ｂｅｒｋ．ｅｘＣｏｏ
ｋｅ）Ｙａｓｕｄａ)の培養菌糸体から、以下：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物からなる群から選択される化合物を調製する方法であって、以下の工程：
ａ）ホウロクタケの子実体または菌糸体、あるいはこれらの培養物を得る工程；
を包含する方法。
（項目１０）項目９に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
ｂ）該濃縮物をヘキサンと水で分配工程；
ｃ）該濃縮物を酢酸エチルと水で分配する工程；および
ｄ）酢酸エチル可溶部をシリカゲルクロマトグラフィーにより分離する工程、
を包含する、方法。
（項目１１）項目９に記載の方法であって、ここで調製される化合物が、以下の式を有し

ここで、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、方法。
（項目１２）以下の構造を有し、＋体の光学活性を有する化合物。

（項目１３）以下の構造を有する化合物。

（項目１４）以下の構造を有する化合物を含有する、抗酸化剤。

（項目１５）以下の構造を有する化合物を含有する、皮膚外用剤。

（項目１６）菌糸体を用いて、チロシナーゼ阻害活性、ＤＰＰＨラジカル消去活性、活性酸素除去活性、美白作用、および抗酸化作用からなる群から選択される活性または作用を有する化合物を生産するための方法であって、
ここで、該方法は、菌糸体を培養する工程を包含し、
ここで、該培地は、
（ａ）（ｉ）ペプトン、ならびに
（ｉｉ）トレハロース、グルコース、およびラクトースからなる群から選択される糖を含むか、または
（ｂ）（iii）ジャガイモ煎汁、ならびに
（iv）グルコース、トレハロース、およびマルトースからなる群から選択される糖を含み、
ここで、該化合物は、以下の構造式に表される化合物：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物、
からなる群から選択される、方法。
（項目１７）前記化合物が、以下の構造式を有する、項目１６に記載の方法：

（項目１８）前記培地において（i）ペプトン、ならびに（ii）トレハロース含む、項目１６に記載の方法。

本発明のチロシナーゼ阻害試験に用いたチロシナーゼは色素沈着の原因となるメラニン合成の律速段階の反応であるチロシンとＤＯＰＡの酸化反応を触媒する。よって、このチロシナーゼ活性を阻害する物質はメラニン合成を阻害し、その結果、美白作用がもたらされる。

本発明の抗酸化作用はＤＰＰＨラジカル消去率測定試験により評価した。ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験に用いた１、１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨと略記する。）は分子内に安定なフリーラジカルを持つ。ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験ではこのフリーラジカルの消去率を吸光度の測定により試験物質の抗酸化作用を測定する。ＤＰＰＨラジカル消去活性を持つ物質は、一重項酸素やヒドロキシラジカル、過酸化脂質のラジカルを除去することが期待できる。これにより抗酸化作用を示す物質は他の物質の酸化を防ぐとともに、炎症や皮膚のシワやタルミなどの老化や細胞の癌化なども防ぐことが期待できる。

本発明の活性酸素除去作用はキサンチンオキシダーゼ法（以下ＸＯＤと略記する。）による活性酸素除去率測定試験から評価した。活性酸素除去活性を示す物質は、生体において発生する活性酸素を除去することで、炎症や細胞の癌化など活性酸素により引き起こされる様々な疾病を予防する。

さらに、本発明に従って、以下：

上記化学式において、Ｒ_８はアルデヒド基、カルボン酸およびその塩、エステル基（−ＣＯＯ−Ｒ_６０）、ならびにアミド基（−ＣＯＮＨ−Ｒ_６１）からなる群から選択され、Ｒ_６０はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｈ）、およびフェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｘ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６１は水素原子、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｈ）、フェニル基、およびフェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｙ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、ハロゲン原子、アルデヒド基、カルボキシル基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基である、化合物；
からなる群から選択される化合物を高濃度に含む画分、あるいはこれらの混合物を１種または２種以上、皮膚外用剤および食品、医薬品に配合することで優れた美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を提供することが出来る。

本発明において、優れた美白作用および抗酸化作用、活性酸素除去作用を有する新規の化合物が提供される。

以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。

（用語の定義）
本明細書において使用される用語「子実体」とは、菌類において胞子を生じる生殖体であって、用語「担胞子体」と互換可能に使用され得る。子嚢菌類および担子菌類では、それぞれ、子嚢果・担子器果のように、菌糸組織からなる種々の形のものをいう。

本明細書において使用される用語「菌糸体」は、用語「菌糸」と互換可能に使用され、糸状菌類の栄養体を構成する基本構造であり、多細胞のものと、多核体のものがある。菌糸は、胞子の発芽管から発達し、先端成長によって伸長する。

本発明に用いる美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤は、有機合成または特定の菌類から抽出および精製することにより得ることができるが、これらの方法に限定されない。

本発明の化合物を有機合成により得る方法を以下に示すが、本発明はこれに限定されない。

（化学合成による方法）
下記の化合物：

において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＣＨ_３、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝Ｃｌ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物、およびＲ_１＝ＯＨ、Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物は、Ｊ．Ｙ．Ｇｏｕｊｏｎらによって非特許文献１で示されている方法により有機合成することで得ることができる。

同様に、下記の化合物

において、Ｒ_７＝Ｈで特定される化合物は、Ｊ．Ｙ．Ｇｏｕｊｏｎら（前出）によって示されている方法により有機合成することで得ることができる。

これらの類縁化合物も同様の方法により有機合成することができる。また、これらの方法により得られた化合物を基に各種反応により、容易に官能基は酸化し、容易に配糖体やアルキル基、アシル基などの官能基がエーテル結合もしくはエステル結合などの結合により結合した多用な化合物に誘導することができる。

本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤は、ホウロクタケ（Ｄａｅｄａｌｅａ
ｄｉｃｋｉｎｓｉｉ（Ｂｅｒｋ．ｅｘＣｏｏｋｅ）Ｙａｓｕｄａ）の菌糸体の培養液から以下に示す方法によっても得ることができるが、本発明はこれに限定されない。

ホウロクタケの菌糸体は、野生もしくは人工栽培の子実体もしくは菌糸体そのもの、もしくは継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体から無菌的に倍地上で培養した菌体を用いることができる。

ホウロクタケの菌体はいずれであっても良い。例えば、日本国内だけでなく、世界各地に自生している菌体の他、世界各地の保存施設において保存されている菌体を用いることもできる。また、ホウロクタケと近縁の菌種であれば同様に用いることもできる。また人工的に栽培された子実体の菌体を用いることもできる。

菌糸体の培養に用いる培地は、ポテトデキストロース寒天培地、ポテトスクロース寒天培地、ペプトンデキストロース寒天培地、等の寒天培地の他、ポテトデキストロース培地、ポテトスクロース培地、ペプトンデキストロース培地、等の液体培地の他、菌類の培養に使用できる培地であれば、いずれであっても良い。菌糸体の培養方法、培養条件なども特に限定されないが、２０〜３０℃で１０〜４０日間、静地培養もしくは通気培養、振盪培養等により培養することで十分成長した菌糸体を用いることが望ましい。

野生の子実体または人工栽培された子実体から菌糸体を誘導する場合は、子実体の内部の組織または子実体の胞子から無菌的に上記の培地上で培養することで菌糸体に誘導することができる。また、既に単離され、継代培養、凍結、凍結乾燥、乾燥等の手段により保存されている菌体であればそのまま上記の培地上で培養することができる。

ホウロクタケの菌糸体の培養液または抽出液、菌糸体そのものから、抽出または各種クロマトクロマトグラフィーにより分離、精製することにより、本発明の化合物を得ることができる。ホウロクタケ菌糸体から本発明の化合物を精製または単離する方法は、特に限定されない。いかなる方法においてもホウロクタケの菌糸体から抽出、精製することにより得られた化合物および本発明の化合物を高濃度に含む精製画分を美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤として使用することができる。
上述により得られた化合物を基に各種反応により、容易に官能基は酸化し、容易に配糖体やアルキル基、アシル基などの官能基がエーテル結合もしくはエステル結合などの結合により結合した多用な化合物に誘導することができる。

本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤は、皮膚外用剤および食品、医薬品として使用することが出来る。皮膚外用剤および食品、医薬品の形状は特に問わない。その投与方法に応じて如何なる形状をも選択することができる。例えば、液状、ゲル状、クリーム状、顆粒状、固体、エアロゾルのような気体などの形態で使用できる。本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を皮膚外用剤として使用する場合、化粧水、クリーム、ゲル、軟膏、乳液、美容液、パック、洗顔料、クレンジング剤、ヘアケア剤、石鹸、浴用剤、シャンプー、リンス、リップスティック、口紅、ファンデーション等の化粧品や医薬部外品、医薬品に配合することができる。

本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を配合した皮膚外用剤は、油脂類、ロウ類、炭化水素類、シリコーン類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、増粘剤、粉末等の化粧品の基材の他、医薬品および医薬部外品の有効成分、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、香料、酸化防止剤、天然由来エキス等も必要に応じて配合することができる。

本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を医薬品として用いる場合、薬学的に受容可能なキャリア型（例えば、滅菌キャリア）と組み合わせて処方され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈液、被包材、または任意の型の処方補助剤をいう。

本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤は、個々の固体、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の因子を考慮に入れ、医療実施基準（ＧＭＰ＝ｇｏｏｄｍｅｄｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅ）を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とする「有効量」は。このような考慮を行って決定される。

治療剤を、経口的、直腸内、非経口的、槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔スプレーとして投与し得る。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。

以下に実施例等により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

（実施例１：ホウロクタケの子実体から菌糸体の培養）
日本国内において自生する野生の担子菌類であるタコウキン科のホウロクタケの子実体から内部の組織を無菌的に切り出した。この組織をペプトンデキストロース寒天培地に移し、２５℃で２０日間培養した。２０日後、成長した菌糸体を新しい寒天培地に継代培養した。この操作を２度繰り返し、ホウロクタケの菌糸体を分離した。得られた菌糸体をペプトンデキストロース液体培地に移植し、４０日間、２５℃で静置培養した。４０日後、培養液と菌糸体をろ紙を用いてろ別した。得られた培養液を減圧濃縮することで水を除き、ホウロクタケ培養菌糸体の培養液の濃縮物を得た。以下にペプトンデキストロース寒天培地とペプトンデキストロース液体培地の組成を示す。

（ペプトンデキストロース寒天培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：２０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
粉末寒天：２０ｇ
（ペプトンデキストロース液体培地の組成）
ポリペプトン：５ｇ
グルコース：３０ｇ
酵母エキス：２ｇ
硫酸マグネシウム七水和物：０．５ｇ
リン酸二水素カリウム：１ｇ
（実施例２：ホウロクタケ菌糸体の培養液から活性物質の精製）
ホウロクタケ菌糸体の培養液の濃縮物（乾燥重量：１９．５ｇ）をヘキサンと水で分配後、酢酸エチルと水で分配することで、ホウロクタケ菌糸体の培養液の濃縮物をヘキサン可溶部（０．１ｇ）、酢酸エチル可溶部（２．８ｇ）、水可溶部（１６．６ｇ）に分離した。強いＤＰＰＨラジカル消去活性の認められた酢酸エチル可溶部を１０％ずつ酢酸エチルの配合量を増加させる酢酸エチル／ヘキサンステップワイズ法によるシリカゲルクロマトグラフィーにより１２画分に分離した。得られた画分の内、５０％酢酸エチル／ヘキサン画分（０．２８ｇ）から２％〜６％アセトン／クロロホルムによるシリカゲルクロマトグラフィーと１４％アセトン／ベンゼンによるシリカゲルクロマトグラフィーにより二度精製することで、以下の化１１のＲ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物（８３ｍｇ）を単離した（化合物Ａ）。単離された化合物は、光学活性を有し、旋光度測定において、[α]^２９ _Ｄ＋１５．４°の旋光度を示したことから、＋体の光学活性を有することが明らかとなった。

（実施例３：スペクトルデータの測定）
化合物Ａの構造を、質量分析（ＭＳ）、旋光度、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）、紫外吸収スペクトル（ＵＶ）、核磁器共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ、二次元ＮＭＲ（ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ））を詳細に検討することで決定した。本発明の化合物Ａの構造は化１１に示すようなクロマン骨格を持つ化合物であった。参考までに、化１１のＲ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈで特定される化合物Ａの性状および各種スペクトルデータを以下に示す。
（スペクトルデータ）
性状：黄色樹脂状物質
質量分析：１９１．０７１２[Ｍ^＋−Ｈ]（計算値１９１．０７０８：Ｃ_１１Ｈ_１１Ｏ_３）旋光度：[α]^２９ _Ｄ＋１５．４°（ｃ１．４９，ＥｔＯＨ）
紫外線吸収スペクトル：２６３ｎｍ、ε：２．６×１０^３、λ：３３３ｎｍ、ε：２．４×１０^３
赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３３８９、２９２８、２３６０、２３４２、１４９０、１４５９、１２２７、１０５１、８１６、７６４、７１１
核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、５００．１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ６．６７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ）、δ６．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ、Ｊ＝８．６Ｈｚ）、δ６．５０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．９Ｈｚ）、δ６．３８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．９Ｈｚ）、δ５．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．９Ｈｚ）、δ３．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ）、δ３．５９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ）、δ１．３５（１Ｈ、ｓ）
核磁気共鳴スペクトル（^１３Ｃ−ＮＭＲ、１２５．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）：δ１４９．８（Ｃ）、δ１４６．８（Ｃ）、δ１２８．０（ＣＨ）、δ１２４．７（ＣＨ）、δ１２１．７（Ｃ）、δ１１６．８（ＣＨ）、δ１１５．８（ＣＨ）、δ１１３．２（ＣＨ）、δ７９．０（Ｃ）、δ６８．５（ＣＨ_２）、δ２２．３（ＣＨ_３）
（実施例４：化合物の化学合成）
本発明の化合物Ａおよびそれに類似する物質のラセミ体を以下のように合成する。

（置換２−ヒドロキシメチル−２−メチル−２Ｈ−クロマン（１）の合成スキーム）
置換２−ヒドロキシメチル−２−メチル−２Ｈ−クロマン（１）は、Ｇｏｕｊｏｎ，Ｊ．Ｙ．ら、Ｓｙｎｌｅｔｔ２００２，Ｎｏ．２，３２２に記載されるように、市販のサリチルアルデヒド（２）を出発物質として使用してエポキシド（５）を合成し、このエポキシド（５）を６−エキソ様式で環化（求核的エポキシド開環反応）させ、分子内脱水反応させることによって、合成される（スキーム１）。

エポキシド（５）の調製は、スキーム２に概説される。サリチルアルデヒド（２）を、ＴＨＦ中において、過剰の塩化２−メチルプロペニルマグネシウム（３）で処理することによって、対応するホモアリルアルコール（４）が、良好〜優れた収率で得られる（スキーム２）。

エポキシド（５）を調製するために、ホモアリルアルコール（４）に対して、ＣＨ_２Ｃｌ_２中のｍ−ＣＰＢＡを用いる標準的なエポキシド化反応が行われる。この反応は、０℃で４時間実施される。シリカ上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、対応するエポキシド（５）を得る。化合物（５）が不安定性な場合、化合物（２）のフェノール基をＴＢＳ基により保護する（Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐ．Ｊ．ＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇＧｒｏｕｐｓ；ＧｅｏｒｇＴｈｉｅｍｅＶｅｒｌａｇ：ＮｅｗＹｏｒｋＮＹ，１９９４）ことによって、スキーム２のアリルメタル化反応およびエポキシド化反応は、首尾良く進行する。ＴＢＡＦを用いる化合物（５）のＯ−シリル脱保護（Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐ．上記）によって、定量的収率で対応するフェノールエポキシド（５）が得られる。これらのエポキシドは、さらなる精製無しで、すぐに、次の工程で使用され得る。

エポキシド（５）の環化の工程（スキーム３）において、エポキシド（５）を、０℃でＴＨＦ中のＡｌＣｌ_３（２当量）と反応させると、二環式化合物（７）が得られ得る。ナフタレン誘導体の場合、エポキシド（５）は、このような条件下で、クロマン（１）を与え得る。エポキシド（５）はまた、室温で、ＣＨ_２Ｃｌ_２中の触媒量のショウノウスルホン酸（２０ｍｏｌ％）を使用すると、二環式化合物（７）に変換され得る。４ｍｏｌ％のｐ−ＴＳＡの存在下で、１６時間、ベンゼン中において、二環式化合物（７）を加熱還流すると、クロマン（１）が優れた収率で得られる。２時間、４ｍｏｌ％のＣＳＡとともにベンゼンを還流させて、エポキシド（５）を処理すると、直接、クロマンメタノール（１）が優れた収率で得られ得る
これらの結果は、非常に安定なベンジルカルボカチオンの形成によって説明され得る。このカルボカチオンは、反応条件に依存して、化合物（１）または（７）のいずれかを導き得る（スキーム４）。

２−官能基化クロマンの調製は、出発物質として市販のサリチルアルデヒド（２）から、容易に作製できる。このアプローチにより、種々の置換クロマンを形成することができる。

（実際の合成）
（アルデヒドのアリルメタル化）
塩化メタリルマグネシウム（３）（０．６Ｍ、６．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、−２０℃で、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のアルデヒド（２）（２．１ｍｍｏｌ）を滴下する。添加後、この混合物を１時間室温で撹拌し、ＮＨ_４Ｃｌの水溶液でクエンチする。水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮する。粗生成物を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ混合物）によって精製する。

（ホモアリルアルコールのエポキシ化）
ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５ｍＬ）中のホモアリルアルコール（４）（２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）中のｍ−ＣＰＢＡ（１．２ｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加し、そしてこの混合物をこの温度で４時間撹拌する。濾過後、この溶液を濃縮し、次いで、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈する。ＮａＨＣＯ_３（２０％、３×２０ｍＬ）水溶液およびブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮する。残渣を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ混合物）によって精製する。

（エポキシドの環化）
方法Ａ：０℃で、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のエポキシド（５）（２．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＡｌＣｌ_３（５．１５ｍｍｏｌ）で処理する。１時間後、ＮＨ_４Ｃｌの水溶液（１０ｍＬ）を添加し、水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮する。残渣を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ混合物）によって精製して、二環式化合物（７）を得る。

ＴｓＯＨ・Ｈ_２Ｏ（７５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を含むベンゼン（２０ｍＬ）中の二環式化合物（７）（２ｍｍｏｌ）の溶液を、１６時間還流する。冷却後、溶液を、ＮａＨＣＯ_３水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮する。粗生成物を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ混合物）によって精製して、クロマンメタノール（１）を得る。

方法Ｂ：ベンゼン（１０ｍｌ）中のエポキシド５（２．５７ｍｍｏｌ）およびＣＳＡ（２３．９ｍｇ、４ｍｏｌ％）の溶液を、２時間還流する。冷却後、この溶液を、ＮａＨＣＯ_３水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ_４）し、そして濃縮する。粗生成物を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ混合物）によって精製して、クロマンメタノール（１）を得る。

（合成されたクロマン化合物のラセミ体からの光学活性物質の分離）
実施例２において単離された化合物は、光学活性を有する化合物である。これに対して、上記記載の方法によって生成される化合物は、ラセミ体である。ラセミ体からの光学活性体の分離は、一般的には、キラルカラムなどを用いて行われている。

そこで、
カラム：ダイセル化学工業(株) ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＡＳ−ＲＨ、
移動相：５０％アセトニトリル/水、
流速：０．５ｍｇ/ｍｌ、
検出器：ＵＶ３３３ｎｍ、
カラム温度：２５℃、
ループ：２０μｌ、および
サンプル投入：０．５ｍｌ/分にて５μｌ
という条件を用いて、化学合成されたクロマン化合物ラセミ体からの光学活性物質の分離を試みた。しかし、上記条件では、キラルカラムからのピークが分離できず、そのため、光学活性物質を単離することができなかった。

従って、天然に存在するようなクロマン化合物光学活性体を得るためには、天然の供給源を用いるか、または、新たな光学選択的な合成方法を用いることが必要である。

また、従来は、本発明のクロマン化合物を単離するための菌糸体などの生物由来の供給源が見出されていなかったため、光学活性を有する本発明のクロマン化合物およびその誘導体を、単離および／または合成することは、不可能であった。

ラセミ体の化合物には光学活性を有する化合物と全く逆の光学活性の化合物を半量含むことから、ラセミ体は化学活性を有する天然物よりも活性は低下する可能性があるだけでなく、ラセミ体に含まれる天然には存在しない逆の光学異性体が生体に対して思わぬ毒性を示す可能性もある。

（実施例５：チロシナーゼ阻害試験）
化合物Ａについて美白作用を調べるため、チロシナーゼ阻害試験を実施した。チロシナーゼ阻害試験は以下の試験方法により実施した。化合物Ａのチロシナーゼ阻害活性は、強いチロシナーゼ阻害作用を示す市販の美白剤のアルブチン、および本発明の化合物と同じクロマン骨格を持つ化合物の市販のトロロックスと比較した。参考までにトロロックスの分子構造を以下に示す。
トロロックスの分子構造

（試験方法）
１．リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）に、最終添加量がチロシナーゼ４０Ｕ／ｍｌ、Ｌ−チロシン１ｍＭになるように溶解し、試験物質はＤＭＳＯに溶解後、混合した。
２．３７℃で６０分間インキュベートした。
３．４７５ｎｍの吸光度の値を次式に代入して、チロシナーゼ活性阻害率を算出した。
チロシナーゼ活性阻害率＝１００×{（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）}／（Ａ−Ｂ）
この式において、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは以下を意味する。
Ａ：コントロール（試験物質無添加）の反応６０分後の吸光度の値。
Ｂ：コントロール（試験物質無添加）の反応前の吸光度の値。
Ｃ：試験物質添加試料の反応６０分後の吸光度の値。
Ｄ：試験物質添加試料の反応前の吸光度の値。

表１に、化合物Ａとアルブチン、トロロックスの添加量毎のチロシナーゼ阻害活性を示す。

化合物Ａは０．４ｍＭ、０．２ｍＭ、０．１ｍＭ、０．０４ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭという少量の添加量で、コントロールとしての市販の美白剤であるアルブチンよりも高いチロシナーゼ阻害活性を示した。また、本発明の化合物と同じクロマン骨格を持つトロロックスは全くチロシナーゼ阻害作用を有しない。このことから、本発明の化合物のチロシナーゼ阻害活性は本発明の化合物に共通する分子構造に由来しているが、その共通構造としては、クロマン骨格のみでは不十分であることが示される。

（実施例６：ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験）
化合物Ａの抗酸化作用を調べるため、ＤＰＰＨラジカル消去率を測定した。化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去率は、強い抗酸化剤として市販されているケルセチンと比較した。

（試験方法）
１．ＤＰＰＨをエタノールに溶解し０．１ｍｍｏｌに調整した。
２．５０％エタノール水溶液に溶解した試験物質をトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した。
３．１、２の溶液を１対１で混合し２０分間、２５℃で暗所において反応させた。
４．５１７ｎｍの吸光度の値を次式に代入して、ＤＰＰＨラジカル消去率を算出した。

ＤＰＰＨラジカル消去率＝１００×（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）
この式においてＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは以下を意味する。
Ａ：試験物質添加試料の反応後の吸光度の値。
Ｂ：試験物質添加試料のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。
Ｃ：コントロール（試験物質無添加）の反応後の吸光度の値。
Ｄ：コントロール（試験物質無添加）のＤＰＰＨの代わりにエタノールを添加した時の吸光度の値。

表２に、化合物Ａとケルセチンの添加量毎のＤＰＰＨラジカル消去率を示す。

化合物Ａは０．１ｍＭ、０．０４ｍＭ、０．０２ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．００４ｍＭ、０．００２ｍＭという極少量の添加濃度でコントロールよりも高いＤＰＰＨラジカル消去率を示した。また、化合物ＡのＤＰＰＨラジカル消去率はケルセチンの消去率に劣るが、少量の添加量で十分にＤＰＰＨ由来のラジカルを消去する。本発明の化合物は、毒性がないと考えられているキノコであるホウロクタケ由来であるため安全であることが推測される。従って、毒性が懸念されるケルセチンと同程度に高いラジカル消去効果を有する本発明の化合物は、その安全性のために、化粧品、食品などへの応用において非常に有用であると考えられる。

（実施例７：活性酸素除去率測定試験）
化合物Ａの活性酸素除去作用を調べるため、活性酸素除去率を測定した。化合物Ａの活性酸素除去率を、ケルセチンと比較した。

（試験方法）
１．リン酸カリウム−ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．２）に０．５ｍＭになるようにＥＤＴＡ・２Ｎａを溶解した。
２．ヒポキサンチンを０．５ｍＭになるように１Ｎの水酸化ナトリウムに溶解した後、１Ｎの塩酸でｐＨ８．２に中和した。
３．５０ｍＭのＮ−１−ナフチルエチレンジアミン２塩酸塩と５Ｍのスルファニル酸の混液に酢酸１２５ｍｌ加えた後、蒸留水を加え、全量５００ｍｌになるように調整した。
４．１の溶液と２の溶液、１０ｍＭヒドロキシルアミン・ＨＣｌ溶液、蒸留水を２：２：１：１で混合した。
５．ＤＭＳＯに溶解した試験物質と２００ｍＵ／ｍｌのキサンチンオキシダーゼ水溶液、４の混合液、を１：１：３で混合し、３７℃で３０分間反応した。
６．５の反応直後、５の混合液に３の溶液を１：２で混合し、1時間室温で放置した後、
５４０ｎｍの吸光度を測定した。
７．５４０ｎｍの吸光度を次式に代入して活性酸素消去率を算出した。

活性酸素除去率＝１００×{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}
この式においてＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄは以下を意味する。
Ａ：試験物質添加試料の反応後の吸光度の値。
Ｂ：試験物質添加試料のキサンチンオキシダーゼ水溶液の代わりに蒸留水を添加した時の吸光度の値。
Ｃ：コントロール（試験物質無添加）の反応後の吸光度の値。
Ｄ：コントロール（試験物質無添加）のキサンチンオキシダーゼ水溶液の代わりに蒸留水を添加した時の吸光度の値。

化合物Ａは１ｍＭ、０．２ｍＭ、０．０４ｍＭという少量の添加量でケルセチンと同等以上の強い活性酸素除去率を示した。この結果は、本発明の化合物が高い活性酸素除去活性を有することを示す。

（実施例８：モニタリングテスト）
本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤をモニタリングテストにより評価するため、本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を配合した化粧クリーム（クリームＡ）とコントロールとして本発明の美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤のみ無添加の化粧クリーム（クリームＢ）を製造した。以下にクリームＡとクリームＢの成分と製法を示す。
（クリームＡの調整）
（Ａ）親油型モノステアリン酸グリセリル１．０（重量％）
（Ｂ）セタノール８．５（重量％）
（Ｃ）モノステアリン酸ソルビタン１．５（重量％）
（Ｄ）ポリオキシエチレン（１５）セチルエーテル１．５（重量％）
（Ｅ）流動パラフィン６．５（重量％）
（Ｆ）スクワラン１．０（重量％）
（Ｇ）メチルポリシロキサン１．０（重量％）
（Ｈ）１，３−ブチレングリコール１０（重量％）
（Ｉ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）０．２（重量％）
（Ｊ）エタノール５．０（重量％）
（Ｋ）化合物Ａ０．０２（重量％）
（Ｌ）上記の残部として、全量１００％になるように精製水を添加した。

（製法）
１．（Ａ）〜（Ｇ）と、（Ｈ）、（Ｉ）、（Ｌ）を別々に加熱調整し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌した。
２．５０℃で（Ｊ）に（Ｋ）を溶解し、添加した。
３．３０℃まで冷却した。
（クリームＢの調整）
（Ａ）親油型モノステアリン酸グリセリル１．０（重量％）
（Ｂ）セタノール８．５（重量％）
（Ｃ）モノステアリン酸ソルビタン１．５（重量％）
（Ｄ）ポリオキシエチレン（１５）セチルエーテル１．５（重量％）
（Ｅ）流動パラフィン６．５（重量％）
（Ｆ）スクワラン１．０（重量％）
（Ｇ）メチルポリシロキサン１．０（重量％）
（Ｈ）１，３−ブチレングリコール１０（重量％）
（Ｉ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）０．２（重量％）
（Ｊ）エタノール５．０（重量％）
（Ｋ）上記の残部として、全量１００％になるように精製水を添加した。

（製法）
１．（Ａ）〜（Ｇ）と、（Ｈ）、（Ｉ）、（Ｋ）を別々に加熱調整し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌した。
２．５０℃で（Ｊ）を添加した。
３．３０℃まで冷却した。
前記の方法で製造したクリームＡとクリームＢについてモニタリングテストを実施した。方法（１）２０〜５０歳のモニター２０名（女１６名、男４名）に、２ヶ月間、朝と夜２回、顔面への使用を依頼した。（２）２ヶ月後、次の評価基準に従ってアンケートの結果を集計し、クリームＡとクリームＢのアンケート結果を比較した。

[美白作用の評価基準] ＋＋＋：シミや日焼け後の色素沈着の改善に非常に有効。＋＋：シミや日焼け後の色素沈着の改善に有効。＋：シミや日焼け後の色素沈着の改善にやや有効。±：シミや日焼け後の色素沈着の改善に無効。

[抗酸化作用および活性酸素除去作用の評価基準] ＋＋＋：シワやタルミなどの老化改善に非常に有効。＋＋：シワやタルミなどの老化改善に有効。＋：シワやタルミなどの老化改善にやや有効。±：シワやタルミなどの老化改善に無効。
表４にクリームＡとクリームＢのモニタリングテストの結果を示す。

本発明の美白剤および抗酸化剤を配合したクリームＡは本発明の美白剤および抗酸化剤の無添加のクリームＢよりも美白作用、抗酸化作用について良好な結果が得られた。よって、本発明の美白剤および抗酸化剤は人の肌においても有効な効果を示すことを証明した。次に、クリーム以外に汎用されている剤型で、本発明の化合物の汎用性を調べた。
（実施例９：化合物Ａを含む乳液処方物の調整）
乳液を以下の成分と製法を用いて処方した。
（Ａ）ステアリン酸２．０（重量％）
（Ｂ）セチルアルコール１．５（重量％）
（Ｃ）ワセリン４．０（重量％）
（Ｄ）スクワラン５・０（重量％）
（Ｅ）グリセロールトリ−２−エチルヘキサン酸エステル２．０（重量％）
（Ｆ）ソルビタンモノオレイン酸エステル２．０（重量％）
（Ｇ）グリセリン９．０（重量％）
（Ｈ）水酸化カリウム０．１（重量％）
（Ｉ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）０．１〜０．５（重量％）
（Ｊ）香料０．００１〜０．１（重量％）
（Ｋ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエンン）０・０５〜０．１５（重量％）
（Ｌ）エタノール５．０（重量％）
（Ｍ）化合物Ａ０．０１（重量％）
（Ｎ）上記の残部として、精製水を添加した。
（製法）
１．（Ａ）〜（Ｆ）、（Ｏ）に溶解した（Ｇ）〜（Ｋ）を別々に加熱調整し、８０℃で混合し、ホモミキサーで攪拌し、その後、５０℃まで冷却した。
２．（Ｌ）に（Ｍ）を溶解した。
３．上記１の溶液と２の溶液を混合し、３０℃まで冷却した。

（実施例１０：化合物Ａを含む化粧水の調整）
化粧水を以下の成分と製法を用いて処方した。
（Ａ）ＰＯＥ（２０）オレイルアルコール０．５（重量％）
（Ｂ）グリセリン１０（重量％）
（Ｃ）メチルセルロース０．２（重量％）
（Ｄ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）０．１〜０．５（重量％）
（Ｅ）香料０．００１〜０．１（重量％）
（Ｆ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン）０．０５〜０．１５（重量％）
（Ｇ）エタノール５．０（重量％）
（Ｈ）化合物Ａ０．０１５（重量％）
（Ｉ）上記の残部として、精製水を添加した。

（製法）
上記（Ａ）〜（Ｉ）までを均一に攪拌し、加熱溶解した。

（実施例１１：化合物Ａを含むパック剤の調整）
パック剤を以下の成分と製法を用いて処方した。
（Ａ）グリセリン１２（重量％）
（Ｂ）モンモリロナイト１０（重量％）
（Ｃ）酸化チタン８（重量％）
（Ｄ）カオリン１０（重量％）
（Ｅ）防腐剤（パラオキシ安息香酸エステル）０．１〜０．５（重量％）
（Ｆ）香料０．００１〜０．１（重量％）
（Ｇ）酸化防止剤（ジブチルヒドロキシトルエン）０．０５〜０．１５（重量％）
（Ｈ）エタノール５（重量％）
（Ｉ）化合物Ａ０．０２（重量％）
（Ｊ）上記の残部として、精製水を添加した。
（製法）
上記（Ａ）〜（Ｊ）を均一に溶解した。
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明はこの実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきことが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することが理解できる。

（実施例１２：実施例２において単離されたクロマン化合物（化合物Ａ）からの誘導体の合成）
実施例２において単離された化合物Ａからベンジル誘導体およびメチル誘導体を合成し、その誘導体が実施例２で単離されたクロマン化合物（化合物Ａ）と同様の活性を有することを確認した。

（ベンジル誘導体の合成手順）
１００ｍｌのナス型フラスコに化合物Ａ（６９．７ｍｇ、３６．３ｍｍｏｌ）を取り、乾燥アセトン（３０ｍｌ）に溶解した。スターラーで撹拌しながら炭酸カルシウム（４００ｍｇ）と、ベンジルブロミド（５２μｌ、４３．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で一時間還流した後に、ＴＬＣ分析で反応の進行を確認した。反応の進行が遅かったので、さらに炭酸水素カルシウム（６００ｍｇ）とベンジルブロミド（２０８μｌ）を加え、室温で五時間還流した後に、ＴＬＣ分析で反応の進行を確認した。反応液をろ過し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＷａｋｏＣ３００、１０ｇ、２０〜２５％アセトン／ヘキサン）にて精製を行い、以下の構造を有するベンジル誘導体（２−ヒドロキシメチル−２−メチル−６−Ｏ−ベンジル−３−クロメン）１３１．７ｍｇを得た。

（ベンジル誘導体のスペクトルデータ）
ベンジル誘導体（２−ヒドロキシメチル−２−メチル−６−Ｏ−ベンジル−３−クロメン）のスペクトルデータは、以下のとおりである：
核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、５００．１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，１Ｈ），６．６４（ｄ，１Ｈ），６．４２（ｄ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｄ，１Ｈ），３．５８（ｄ，１Ｈ）、１．３５（ｓ，３Ｈ）
核磁気共鳴スペクトル（^１３ＣＮＭＲ、１２５．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：１５３．３（Ｃ），１４６．５（Ｃ），１３７．３（Ｃ×２），１２８．６（ＣＨ×２），１２８．５（ＣＨ），１２７．９（ＣＨ），１２７．５（ＣＨ），１２４．８（ＣＨ），１２１．６（Ｃ），１１６．７（ＣＨ），１１５．６（ＣＨ），１１３．１（ＣＨ），７９．０（Ｃ），７０．８（ＣＨ_２），６８．６（ＣＨ_２），２２．３（ＣＨ_３）。

（メチル誘導体の合成手順）
１００ｍｌナス型フラスコに化合物Ａ（５６．１ｍｇ、２９．１ｍｍｏｌ）を取り、乾燥アセトン（２０ｍｌ）に溶解した。スターラーで撹拌しながら炭酸カルシウム（２００ｍｇ）と、ジメチル硫酸（１７μｌ、１７．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で一時間還流した後に、ＴＬＣ分析で反応の進行を確認した。反応の進行が遅かったので、さらに炭酸カルシウム（３００ｍｇ）とジメチル硫酸（３４ｍｌ）を加え、室温で一晩還流した後に、ＴＬＣで反応の進行を確認した。完全に反応が進行していなかったので、炭酸カルシウム（２００ｍｇ）とジメチル硫酸（３４ｍｌ）を加え、室温で二時間還流した後に、ＴＬＣ分析で反応の進行を確認した。反応液をろ過し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＷａｋｏＣ３００、４ｇ、２０％アセトン／クロロホルム）にて精製を行い、さらに炭酸水素ナトリウム水溶液／酢酸エチルにて分配し、酢酸エチル可溶部をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＷａｋｏＣ３００、６ｇ、２０％アセトン／ヘキサン）にて再度精製を行い、以下の構造を有するメチル誘導体（２−ヒドロキシメチル−２−メチル−６−メトキシ−３−クロメン）４９．１ｍｇを得た。

（メチル誘導体のスペクトルデータ）
メチル誘導体（２−ヒドロキシメチル−２−メチル−６−メトキシ−３−クロメン）のスペクトルデータは、以下のとおりである：
核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、５００．１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：６．７２（ｄ，１Ｈ），６．６７（ｄｄ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ），６．４２（ｄ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｄ，１Ｈ），３．５９（ｄ，１Ｈ），１．３５（ｓ，３Ｈ），
核磁気共鳴スペクトル（^１３ＣＮＭＲ、１２５．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：１５４．１（Ｃ），１４６．２（Ｃ），１２７．９（ＣＨ），１２４．９（ＣＨ），１２１．６（Ｃ），１１６．７（ＣＨ），１１４．５（ＣＨ），１１１．９（ＣＨ），７９．０（Ｃ），６８．５（ＣＨ_２），５５．８（ＣＨ_３），２２．３（ＣＨ_３）。

（実施例１３：ベンジル誘導体およびメチル誘導体の活性測定）
化合物Ａのベンジル誘導体およびメチル誘導体についてＤＰＰＨラジカル消去試験とチロシナーゼ阻害試験を実施した。

（ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験）
実施例６と同様の方法を用いて、実施例２において単離された化合物Ａのベンジル誘導体およびメチル誘導体についてＤＰＰＨラジカル消去試験を行った。
その試験結果を、化合物Ａ、および、強いＤＰＰＨラジカル消去活性を有することが公知であるケルセチンおよびトロロックスの試験結果と比較した。

ケルセチンの構造は、以下のとおりである：

トロロックスの構造は、以下のとおりである。

上記実験の結果を、表５に示す。

以上の結果から、ベンジル誘導体およびメチル誘導体は、化合物Ａより低いものの、ＤＰＰＨラジカル消去活性を有したことが示された。その活性は、０．１ｍＭの添加量では、それぞれ、３％と５％のＤＰＰＨラジカル消去率であり、化合物Ａよりもかなり低かった。

（チロシナーゼ阻害試験）
実施例５と同様の方法を用いて、実施例２において単離されたクロマン化合物とそのベンジル誘導体およびメチル誘導体についてチロシナーゼ阻害試験を行った。また、強いＤＰＰＨラジカル消去活性を有することが公知であるトロロックス、および強いチロシナーゼ阻害活性を有することが公知であるアルブチンを比較対象に用いた。アルブチンの構造は、以下のとおりである：

上記実験の結果を、表６に示す。

ベンジル誘導体およびメチル誘導体は０．４ｍＭの添加量では１７％と７％のチロシナーゼ阻害率を示した。しかし、ＤＰＰＨラジカル消去試験の時と同じように化合物Ａと比較すると、その活性は低下している。

（実施例１４：さらなるクロマン化合物の単離）
本明細書に開示される単離方法を用いて、実施例２において単離された化合物Ａ以外のクロマン化合物の単離を行った。

（６−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−３−クロメンの単離（化合物Ｂ））
ホウロクタケの培養濾液（５０ｇ）を酢酸エチルと水で分配することにより、酢酸エチル可溶部（５ｇ）と水可溶部に分離した。酢酸エチル可溶部を、０〜７０％まで、１０％すつ酢酸エチルの配合量を増加させる、酢酸エチル／ヘキサンステップワイズ法によるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより９画分に分離した。得られた画分のうち３０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部（２１．３ｍｇ）を用いて、２０％の酢酸エチル／ヘキサンによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い１０画分を得た。さらに６０％メタノール／水によるＯＤＳ高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により再度分離することで、６−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−３−クロメン３．２ｍｇを単離した。その構造を以下に示す：

単離した化合物Ｂのスペクトルデータは、以下のとおりである；
質量分析（ＭＳ）：１７６．０８３９[Ｍ^＋]（計算値１７６．０８３７）
核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、５００．１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：６．６５（ｄ，１Ｈ），６．５７（ｄｄ，１Ｈ），６．４８（ｄ，１Ｈ），６．２４（ｄ，１Ｈ），５．６３（ｄ，１Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ）
核磁気共鳴スペクトル（^１３ＣＮＭＲ、１２５．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：１４９．４（Ｃ），１４６．８（Ｃ），１３１．９（ＣＨ），１２２．１５（ＣＨ），１２２．１３（Ｃ），１１６．９（ＣＨ），１１５．４（ＣＨ），１１２．８（ＣＨ），７５．８（Ｃ），２７．６（ＣＨ_３），２７．６（ＣＨ_３）。

（６−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−５−メトキシ−３−クロメンの単離（化合物Ｃ））
酢酸エチル可溶部を酢酸エチル／ヘキサンステップワイズ法によるシリカゲルクロマトグラフィーにより９画分に分離した画分のうち、５０％酢酸エチル／ヘキサン溶出部（８５２．８ｍｇ）を用いて、２０％の酢酸エチル／ヘキサンによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行うことで得られた画分（１９．１ｍｇ）をさらに２０％のアセトン／クロロホルムによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い５画分を得た。得られた画分（６．１ｍｇ、４．３ｍｇ）をそれぞれ４０％メタノール／水によるＯＤＳ高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により再度分離することで、６−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−５−メトキシ−３−クロメンを２．６ｍｇ単離した。

単離した化合物Ｃのスペクトルデータは、以下のとおりである；
質量分析（ＭＳ）：２２２．０８９０[Ｍ^＋]（計算値２２２．０８９２）
核磁気共鳴スペクトル（^１Ｈ−ＮＭＲ、５００．１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：６．６９（ｄ，１Ｈ），６．７３（ｄ，１Ｈ），６．５１（ｄ，１Ｈ），５．６８（ｄ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｄ，１Ｈ），３．６０（ｄ，１Ｈ），１．３４（ｓ，３Ｈ）
核磁気共鳴スペクトル（^１３ＣＮＭＲ、１２５．８ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）δ：１４５．９（Ｃ），１４２．９（Ｃ），１４２．７（Ｃ），１２７．８（ＣＨ），１１９．２（ＣＨ），１１５．２（ＣＨ），１１４．６（Ｃ），１１２．３（ＣＨ），７８．６（Ｃ），６８．４（ＣＨ_２），６２．３（ＣＨ_３），２２．０（ＣＨ_３）。

（実施例１５：化合物Ａおよび化合物Ｂの活性測定）
化合物Ｂおよび化合物ＣについてＤＰＰＨラジカル消去試験を実施した。

（ＤＰＰＨラジカル消去試験）
実施例６と同様の方法を用いて、化合物Ｂ、および、化合物ＣについてＤＰＰＨラジカル消去試験を行った。その試験結果を、化合物Ａ、および、強いＤＰＰＨラジカル消去活性を有することが公知であるケルセチンおよびトロロックスの試験結果と比較した。
上記の試験結果を、表７に示す。

以上の結果から、化合物Ｂ、および、化合物Ｃは強いＤＰＰＨラジカル消去活性を有したことが示されたが、その活性は化合物Ａよりも少し劣る。

（実施例１６：菌糸体培養条件の検討）
ホウロクタケの菌糸体から、実施例２に記載の化合物Ａを、より効率的に産生させるための条件を検討した。

（１．材料および方法）
ホウロクタケの菌糸体としては、実施例１に記載の方法で分離した菌糸体を用いた。

（ｉ）以下の培地組成の液体培地１６種を作成し、それぞれの液体培地に菌糸体を移植し、４０日間、２５℃で静置培養した。
使用培地１：ペプトン（５ｇ）、グルコース（３０ｇ）、酵母エキス（２ｇ）、硫酸マグネシウム七水和物（０．５ｇ）、リン酸二水素カリウム（１ｇ）、純水（１０００ｍｌ）
使用培地２：使用培地１でグルコースをスクロースに変更
使用培地３：使用培地１でグルコースをフルクトースに変更
使用培地４：使用培地１でグルコースをトレハロースに変更
使用培地５：使用培地１でグルコースをマルトースに変更
使用培地６：使用培地１でグルコースをガラクトースに変更
使用培地７：使用培地１でグルコースをラクトースに変更
使用培地８：使用培地１でグルコースをキシロースに変更
使用培地９：ジャガイモ煎汁（１０００ｍｌ）、グルコース（３０ｇ）
使用培地１０：使用培地９でグルコースをスクロースに変更
使用培地１１：使用培地９でグルコースをフルクトースに変更
使用培地１２：使用培地９でグルコースをトレハロースに変更
使用培地１３：使用培地９でグルコースをマルトースに変更
使用培地１４：使用培地９でグルコースをガラクトースに変更
使用培地１５：使用培地９でグルコースをラクトースに変更
使用培地１６：使用培地９でグルコースをキシロースに変更。

（ｉｉ）４０日間培養した後、ろ過し得られた培養ろ液を減圧濃縮し、所定の濃度に調整し、実施例５および６に記載の方法を用いて、チロシナーゼ阻害試験およびＤＰＰＨラジカル消去試験を、実施した。

（ｉｉｉ）得られた培養ろ液についてＨＰＬＣ分析を行い、それぞれの培地で培養した後の実施例２に記載の化合物Ａの含有量を比較した。

（２．結果）
（ｉ）ＤＰＰＨラジカル消去試験
ＤＰＰＨラジカル消去試験は使用培地１〜１６を用いて培養し得られた培養ろ液の濃縮物を５０％エタノール水溶液に溶解した後、最終濃度が０．２ｍｇ/ｍｌになるように添加した。ＤＰＰＨラジカル消去率測定試験の結果を、以下の表８に示す：

（ｉｉ）チロシナーゼ阻害試験結果
チロシナーゼ阻害試験は使用培地１〜１６を用いて培養し得られた培養ろ液の濃縮物をＤＭＳＯに溶解した後、最終濃度が０．４ｍｇ/ｍｌになるように添加した。チロシナーゼ阻害試験の結果を、以下の表９に示す：

（ｉｉｉ）ＨＰＬＣ分析
（方法）
使用培地１〜１６の培地を調整し、４０日間、ホウロクタケの菌糸体をこれらの培地で培養した後の培養ろ液を減圧濃縮して移動相に溶解し１ｍｇ／ｍｌに調整した。これらの培養ろ液のＨＰＬＣ分析の保持時間と吸光度の値を、化合物Ａ（１ｍｇ／ｍｌ）のＨＰＬＣ分析の保持時間と吸光度を比較することにより、それぞれの培地１ｌにホウロクタケの菌糸体を４０日間静置培養したときに得られる培養濾液の濃縮物中の相対的な化合物Ａの含有率（％）、および、それぞれの培地１ｌにホウロクタケの菌糸体を４０日間静置培養したときに得られる化合物Ａの生産量（ｍｇ）を算出した。

（分析条件）
（１）カラム：ＯＤＳカラム、内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、粒子経５μｍ
（２）移動相：６０％メタノール／水
（３）流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
（４）検出器：ＵＶ３３３ｎｍ
（５）温度：３０℃
（６）ループ：２０μｌ
（７）サンプル：１ｍｇ／ｍｌにて５μｌ投入
（結果）
上記の結果を、以下の表１０に示す：

使用培地１〜１６約１Ｌ用いてホウロクタケの菌糸体を培養した場合、いずれの培地を用いた場合も８．８ｍｇ〜１３２．６ｍｇの量の実施例２に記載の化合物Ａが生産された。ホウロクタケ菌糸体を使用培地４を用いて培養することにより実施例２に記載の化合物Ａの生産量が増大し（濃縮物中に１．３８１％含有するまで）、使用培地４を約１Ｌ用いて得られる化合物の収量は１３２．６ｍｇであった。これらの結果から、使用培地４を用いてホウロクタケの菌糸体を培養することによって、最も効率的に実施例２に記載の化合物Ａが生産されることが明らかになった。

これらの結果から、菌糸体を用いて本発明のクロマン化合物を生産する場合は、ペプトンとトレハロースとの組合せ、ペプトンとグルコースとの組合せ、およびペプトンとラクトースとの組合せ、ならびに、ジャガイモ煎汁とグルコースとの組み合わせ、ジャガイモ煎汁とトレハロースとの組み合わせ、ジャガイモ煎汁とマルトースとの組み合わせが好ましく、ペプトンとトレハロースとの組合せが最も好ましいことが明らかとなった。

ホウロクタケ培養菌糸体が生産するクロマン骨格を持つ化合物を美白剤および抗酸化剤として用いることで、優れた効果を有する美白剤および抗酸化剤、活性酸素除去剤を調整することができる。

Claims

（１）以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_１１）からなる群から選択され、
Ｒ_１１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｎ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_３は水素原子、および、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｈ）からなる群から選択され、ここでｐ＝１〜３０である、化合物；
（２）以下の構造式に表される化合物であって
上記化学式において、Ｒ_４、Ｒ_５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_３１）からなる群から選択され、
Ｒ_３１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｓ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６はカルボン酸およびその塩からなる群から選択される、化合物；あるいは、
（３）上記（１）の化合物および（２）の化合物の両方
を有効成分とする美白剤。
以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物
を有効成分とする、請求項１に記載の美白剤。
（１）以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_１１）からなる群から選択され、
Ｒ_１１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｎ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_３は水素原子、および、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｈ）からなる群から選択され、ここでｐ＝１〜３０である、化合物；
（２）以下の構造式に表される化合物であって
上記化学式において、Ｒ_４、Ｒ_５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_３１）からなる群から選択され、
Ｒ_３１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｓ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６はカルボン酸およびその塩からなる群から選択される、化合物；あるいは、
（３）上記（１）の化合物および（２）の化合物の両方
を有効成分とする、抗酸化剤。
以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物
を有効成分とする、請求項３に記載の抗酸化剤。
（１）以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_１１）からなる群から選択され、
Ｒ_１１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｎ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_３は水素原子、および、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｈ）からなる群から選択され、ここでｐ＝１〜３０である、化合物；
（２）以下の構造式に表される化合物であって
上記化学式において、Ｒ_４、Ｒ_５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_３１）からなる群から選択され、
Ｒ_３１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｓ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６はカルボン酸およびその塩からなる群から選択される、化合物；あるいは、
（３）上記（１）の化合物および（２）の化合物の両方
を有効成分とする、活性酸素除去剤。
以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物
を有効成分とする、請求項５に記載の活性酸素除去剤。
（１）以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_１１）からなる群から選択され、
Ｒ_１１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｎ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_３は水素原子、および、アルキル基（−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｈ）からなる群から選択され、ここでｐ＝１〜３０である、化合物；
（２）以下の構造式に表される化合物であって
上記化学式において、Ｒ_４、Ｒ_５は、それぞれ独立して、水素原子、水酸基、およびエーテル基（−Ｏ−Ｒ_３１）からなる群から選択され、
Ｒ_３１はアルキル基（−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ）、フェニル基、および、フェニル基誘導体からなる群から選択され、ここでｓ＝１〜３０であり、ここでフェニル基誘導体はフェニル基の１〜５個の水素原子が、それぞれ独立して、水酸基、メトキシ（−ＯＣＨ_３）、メチル基（−ＣＨ_３）、エチル基およびエトキシ基（−ＯＣＨ_２ＣＨ_３）からなる群から選択される官能基で置換されたフェニル基であり、
Ｒ_６はカルボン酸およびその塩からなる群から選択される、化合物；あるいは、
（３）上記（１）の化合物および（２）の化合物の両方
を有効成分とする、皮膚外用剤。
以下の構造式に表される化合物であって：
上記化学式において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝ＯＨ、Ｒ_３＝Ｈである、化合物
を有効成分とする、請求項７に記載の皮膚外用剤。
ホウロクタケ(Ｄａｅｄａｌｅａｄｉｃｋｉｎｓｉｉ（Ｂｅｒｋ．ｅｘＣｏｏｋ
ｅ）Ｙａｓｕｄａ)の培養菌糸体から、以下：

で示される化合物；

で示される化合物；および、

で示される化合物からなる群から選択される化合物を含む画分を調製する方法であって、以下の工程：
ａ）ホウロクタケの子実体または菌糸体、あるいはこれらの培養物を得る工程；
を包含する方法。
請求項９に記載の方法であって、さらに、以下の工程：
ｂ）該濃縮物をヘキサンと水で分配工程；
ｃ）該濃縮物を酢酸エチルと水で分配する工程；および
ｄ）酢酸エチル可溶部をシリカゲルクロマトグラフィーにより分離する工程、
を包含する、方法。
請求項９に記載の方法であって、ここで調製される化合物が、

で示される化合物である、方法。
以下：
で示される化合物。
以下：
で示される化合物を有効成分とする、抗酸化剤。
以下：
で示される化合物を有効成分とする、皮膚外用剤。
ホウロクタケ(Ｄａｅｄａｌｅａｄｉｃｋｉｎｓｉｉ（Ｂｅｒｋ．ｅｘＣｏｏｋ
ｅ）Ｙａｓｕｄａ)の菌糸体を用いて、チロシナーゼ阻害活性、ＤＰＰＨラジカル消去
活性、活性酸素除去活性、美白作用、および抗酸化作用からなる群から選択される活性または作用を有する化合物を生産するための方法であって、
ここで、該方法は、菌糸体を培養する工程を包含し、
ここで、該培地は、
（ａ）（ｉ）ペプトン、ならびに
（ｉｉ）トレハロース、グルコース、およびラクトースからなる群から選択される糖を含むか、または
（ｂ）（iii）ジャガイモ煎汁、ならびに
（iv）グルコース、トレハロース、およびマルトースからなる群から選択される糖を含み、
ここで、該化合物は、以下：

で示される化合物；

で示される化合物；および、

で示される化合物からなる群から選択される化合物である、方法。
前記化合物が、以下：
で示される化合物である、請求項１５に記載の方法。
前記培地において（i）ペプトン、ならびに（ii）トレハロース含む、請求項１５に記
載の方法。