JP4773670B2

JP4773670B2 - Elastin-like agent and cosmetics containing the same

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Publication number: JP4773670B2
Application number: JP2002150804A
Authority: JP
Inventors: 茂澤木; 豊大澤; 玉置しのぶ
Original assignee: 共栄化学工業株式会社
Priority date: 2002-05-24
Filing date: 2002-05-24
Publication date: 2011-09-14
Anticipated expiration: 2022-05-24
Also published as: JP2003342150A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、エラスチン様作用剤に関し、詳しくは真皮マトリックス成分のエラスチンに類似した組成・構造からなる蛋白質を含み、エラスチンと同様の皮膚老化防止作用並びに美肌化作用を示す剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の老化は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活性化、ホルモン分泌の低下などの内的要因と、日光（紫外線）暴露により誘発される活性酸素に基づく細胞・組織の損傷或いは炎症の発生などの外的要因が複雑に絡み合って生ずる現象である。
それらのうち内的要因に基づく皮膚の老化は、真皮線維芽細胞の増殖能の低下により、該細胞の産生するコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックス成分の量が減少して皮膚組織が柔軟性や弾力性を失うことや、表皮基底細胞の不活性化により、皮膚表面の角質層のバリア機能、皮脂分泌機能、水分保持機能等が低下することによって生じ、形態的・生理的変化としては、シワ、たるみの発生や肌のかさつき、肌荒れなどとして現れる。
【０００３】
この皮膚の老化を予防或いは改善し、皮膚を若々しくハリのある状態に保持するため、従来より真皮マトリックスの構成成分であるコラーゲンやエラスチンなどの膠原線維や弾性線維を化粧料に配合し、それら成分の減少を補うようにすることが行われており、それら成分はまた水分保持機能をも併せ持つため、これによって皮膚の老化防止、肌荒れ改善に一定の効果が得られている。
【０００４】
この化粧料配合用のコラーゲンやエラスチンとしては、これまで牛や豚などの皮及び靱帯から抽出、採取したものが主として用いられて来ているが、最近人体に対する安全上の観点から、それらほ乳動物から得られる原料を使用することの問題点が指摘されており、ほ乳動物由来のコラーゲン、エラスチンに代替し得る新たな、そして安全性のより高い化粧料配合原料が求められている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、上記の如き従来技術の問題点に鑑み、真皮弾性線維、特にエラスチンに類似した皮膚老化防止作用及び保湿作用を有する成分を、安全性の高い植物に求めるべく、抗エラスチン抗体を用いたELISA法により、種々の植物について、動物エラスチンに組成、構造の似た蛋白質の探索を行った結果、アオサ科アオサ属の海藻及びアブラナ科ブラシカ属の植物中に特異的にそのような蛋白質が存在し、しかも該蛋白質が機能乃至生理活性の面でも動物エラスチンと同様の特性を有することを見出し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
即ち、本発明は、アナアオサ（Ulva pertusa)のエキス蛋白質画分を有効成分とする保湿剤であって、前記蛋白質画分は、ＥＬＩＳＡ法で抗エラスチン抗体と特異的に反応するエラスチン様蛋白質を含み、かつ、エラステーゼ活性阻害作用を有さないことを特徴とするものである。
【０００７】
以下、本発明について詳細に説明する。
エラスチン様作用剤の調製に用いるアオサ科アオサ属の海藻としては、例えばアナアオサ（Ulva pertusa）、ヤブレグサ（Ulva Japonica）、ナガアオサ（Ulva arasaka）、リボンアオサ（Ulva fasciata）などが、又アブラナ科ブラシカ属の植物としては、例えば白芥（Brassica alba）の種子（白芥子）、黄芥（Brassica juncea）の種子（黄芥子）、黒芥（Brassica nigra）の種子（黒芥子）、アブラナ（Brassica ropa）など挙げられる。
それらのうちでも、アオサ科アオサ属の海藻としてはアナアオサが、又アブラナ科ブラシカ属の植物としては白芥子が、それぞれ顕著なエラスチン様作用を示し最も好ましく、本発明に於いてはそれらアナアオサ及び／又は白芥子が使用される。
【０００８】
本発明のエラスチン様作用剤で有効成分として用いるアオサ科アオサ属の海藻及びアブラナ科ブラシカ属の植物のエキスとしては、当該エキス中にエラスチン様蛋白質を含むものであれば特に剤形、製法等に制限はなく、例えばそれら海藻や植物をそのまま乾燥、粉砕して微粉末状としたもの、或いは海藻や植物を適宜の溶媒で抽出して抽出物の形としたものなど、任意の剤形、製法のものが使用できるが、化粧料への配合性、取り扱いの容易さ等の観点からは抽出物が最も好ましい。
又、それら海藻或いは植物のエキスは、いずれか一種を単独で用いても或いは二種以上の混合物として用いてもよく、又二種以上の混合物とする場合は、海藻エキス同士或いは植物エキス同士の組み合わせのほか、海藻エキスと植物エキスを組み合わせるようにしてもよい。
【０００９】
エキスとして抽出物を用いる場合、抽出物の調製は、アオサ科アオサ属の海藻或いはアブラナ科ブラシカ属の植物を、必要ならば予め水洗、乾燥した後、好ましくはさらに細断或いは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法など適宜の手段により抽出溶媒と接触せしめることによって行うことができる。
【００１０】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノールなどの高級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、トリオクタン酸グリセリルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独でもしくは二種以上混合して用いられる。
それら抽出溶媒のうちでも、エラスチン様蛋白質の抽出効率の観点、さらには化粧料への幅広い適用が可能であるという点から、水、低級アルコール類及び多価アルコール類から選ばれた一種又は二種以上の混合溶媒、就中水もしくは水とエチルアルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコールのいずれかとの混合溶媒を用いることが特に好ましい。
【００１１】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水とエチルアルコールとの混合溶媒であれば、重量比（以下同じ）で９５：５〜５０：５０、水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば９０：１０〜５０：５０、又水とプロピレングリコールとの混合溶媒であれば、９５：５〜７０：３０の範囲とすることが好ましい。
【００１２】
抽出物の調製に際して、抽出液のｐＨは５〜１２の範囲に保持されることが好ましく、かかる意味で、必要ならば上記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００１３】
抽出温度、時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類、植物の抽出部位・細切度等によっても異なるが、例えば浸漬法の場合であれば、抽出温度は、一般に０〜８０℃、好ましくは４〜６０℃の範囲であり、又抽出時間は、室温抽出の場合で１時間〜１週間、特に１時間〜２４時間が好適である。
【００１４】
ここに得られる抽出物溶液は、一般にはｐＨを４〜８に調整した上、これをそのままもしくは減圧濃縮等により適宜の濃度として用いてもよく、又場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化してもよい。
【００１５】
以上の如きアオサ科アオサ属の海藻或いはアブラナ科ブラシカ属の植物のエキスを有効成分としてなる本発明のエラスチン様作用剤は、後に試験例に示す通り、ELISA法を用いたエラスチン様蛋白質検出試験に於いて強い陽性を示し、エラスチンに組成、構造の類似した蛋白質を含むことが確認されている。又、作用効果の面でも、エラスチンと同様のすぐれた水分保持機能、保湿効果を有するばかりでなく、それに加えて、マウスを用いた塗布試験に於いて紫外線による皮膚損傷を抑制する効果のあることが示されており、植物由来であることに基づく高い生体安全性と相俟って、本発明のエラスチン様作用剤は、皮膚の老化や肌荒れの予防、改善等を目的とする化粧料用の配合成分として用いて極めて有用である。
【００１６】
従って、本発明はまた、このエラスチン様作用剤を含有し、皮膚の老化防止や保湿、肌荒れの改善に有効な化粧料を提供するものでもある。
本発明のエラスチン様作用剤を含む化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、美容液、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダーなどのメイクアップ化粧料、ヘアーシャンプー、ヘアーリンス、ヘアートリートメント、コンディショナー、染毛料、整髪料などの頭髪化粧料、浴剤などが挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００１７】
本発明の化粧料に於けるエラスチン様作用剤の配合量は、該作用剤の剤形、化粧料の種類、適用部位等によっても異なるが、例えば作用剤として抽出物を用いる場合であれば、固形分配合量で、基礎化粧料については、一般に0.01〜10重量％、好ましくは0.1〜１重量％の範囲、メイクアップ化粧料ついては、一般に0.01〜5重量％、好ましくは0.1〜0.5重量％の範囲、又頭髪化粧料については、一般に0.01〜20重量％、好ましくは0.1〜5重量％の範囲とするのがよい。
【００１８】
本発明の化粧料には、上記のエラスチン様作用剤のほかに、通常化粧料に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１９】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００２０】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
又、乳化剤乃至乳化助剤として、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米等を配合することもできる。
【００２１】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、乳酸菌醗酵米、ヒアルロン酸及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、ビャッキュウ抽出物、魚介類由来コラーゲン及びその誘導体、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２２】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２３】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、樹皮乾留物等がある。
【００２４】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、シルクパウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００２５】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００２６】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体、ビャッキュウ抽出物、イネ抽出物等がある。
【００２７】
生理活性成分としては、例えば美白成分として、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、アルブチン及びその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物、米糠抽出物の加水分解物、白芥子加水分解抽出物、ムラサキシキブ抽出物、コンブ等の海藻の抽出物、アマモ等の海草の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、皮膚老化防止・肌荒れ改善成分として、動物又は魚由来のコラーゲン、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米抽出物加水分解物、米糠抽出物加水分解物、米醗酵エキス、ミツイシコンブ抽出物、ソウハクヒエキス等がある。
【００２８】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド（５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）などのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類等が、レゾルシノール誘導体としては、例えば４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、ビタミンＥ誘導体としては、例えばビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００２９】
次に、実施例、処方例（化粧料の実施例)及び試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて重量部を、又％はすべて重量％を意味する。
【００３０】
実施例１．エラスチン様作用剤の調製(1)
アナアオサを水洗、乾燥後細切したもの70ｇに精製水1000ｇを混合し、20℃で24時間抽出を行った後ろ過し、緑褐色透明のアナアオサ抽出物溶液700ｇを得た（固形分濃度7.0％）。
【００３１】
実施例２．エラスチン様作用剤の調製(2)
アナアオサを水洗、乾燥後細切したもの70ｇに、30％１，３−ブチレングリコール水溶液1000ｇを混合し、20℃で24時間抽出を行った後ろ過し、緑褐色透明のアナアオサ抽出物溶液600ｇを得た（固形分濃度5.2％）。
【００３２】
実施例３．エラスチン様作用剤の調製(3)
アナアオサを水洗、乾燥後細切したもの70ｇに、20％エタノール水溶液1000ｇを混合し、20℃で24時間抽出を行った後ろ過し、緑褐色透明のアナアオサ抽出物溶液700ｇを得た（固形分濃度5.0％）。
【００３３】
実施例４．エラスチン様作用剤の調製(4)
実施例１と同様にして得られたアナアオサ抽出物溶液1000ｇを凍結乾燥し粉砕してアナアオサ抽出物末70ｇを得た。
【００３４】
実施例５．エラスチン様作用剤の調製(5)
アナアオサを水洗、乾燥後粉砕機で粉砕し、ここに得られた粉砕物を200メッシュの篩で篩別してアナアオサ微粉末を調製した。
【００３５】
実施例６．エラスチン様作用剤の調製(6)
ヤブレグサを水洗、乾燥後細切したもの70ｇに精製水1000ｇを混合し、20℃で24時間抽出を行った後ろ過し、緑褐色透明のヤブレグサ抽出物溶液720ｇを得た（固形分濃度6.1％）。
【００３６】
実施例７．エラスチン様作用剤の調製(7)
白芥子の粉砕物50ｇに精製水1000ｇを混合し、30℃で６時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の白芥子抽出物溶液820ｇを得た（固形分濃度0.96％）。
【００３７】
実施例８．エラスチン様作用剤の調製(8)
白芥子の粉砕物50ｇに、３０％１，３−ブチレングリコール水溶液1000ｇを混合し、30℃で６時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の白芥子抽出物溶液800ｇを得た（固形分濃度0.94％）。
【００３８】
実施例９．エラスチン様作用剤の調製(9)
黄芥子の粉砕物50ｇに精製水1000ｇを混合し、40℃で２時間抽出を行った後ろ過し、淡黄色透明の黄芥子抽出物溶液850ｇを得た（固形分濃度0.94％）。
【００３９】
実施例10．エラスチン様作用剤の調製(10)
実施例７と同様にして得られた白芥子抽出物溶液1000ｇを凍結乾燥し粉砕して白芥子抽出物末9.5ｇを得た。
【００４０】
試験例１．エラスチン様蛋白質の確認試験
実施例で得られた抽出物溶液について、ELISA法によりエラスチン様蛋白質の確認試験を行った。
［試料］
(1) 実施例１で得られた抽出物溶液
(2) 実施例７で得られた抽出物溶液
【００４１】
［試験方法］
試料溶液又は標準液として適当な濃度に希釈したウシ由来エラスチン溶液を９６穴エライザプレート（Iwaki製）のウェルに入れ、３７℃で２時間放置した後溶液を除去した。次に、ウェルをよく洗浄し、これに試薬溶液を添加して３７℃で１又は２時間放置した後、試薬溶液を除去することからなる一連の操作を、試薬溶液として１％ＢＳＡ（放置時間：１時間）、適当な濃度に希釈した抗エラスチン抗体溶液（放置時間：２時間）及びペルオキシダーゼを結合させた抗IgG抗体を適当な濃度に希釈した溶液（放置時間：２時間）を用いて順次行った。この操作を終わった後ウェルをよく洗浄し、これに４−クロロ−１−ナフトールと過酸化水素を含む溶液を加えて３７℃で２０分間放置し、415nmの吸光度を測定した。
ウシ由来エラスチン溶液を用いて得られた吸光度とエラスチン濃度との関係から各試料溶液のエラスチン様蛋白質含量を算出した。
【００４２】
［結果］
結果を表１に示す。なお、本発明のアオサ科アオサ属の海藻及びアブラナ科ブラシカ属の植物以外の海藻或いは植物、例えばヒトエグサなどの緑藻類、アサクサノリなどの紅藻類、コンブなどの褐藻類、アンズなどのバラ科植物、カミツレなどのキク科植物、イネなどのイネ科植物、マグワなどのクワ科植物、さらには各種生薬類、米、米糠等のエキスについても同様の試験を行ったが、いずれの場合も抗エラスチン抗体と反応するエラスチン様蛋白質の存在は認められなかった。
【００４３】
【表１】

【００４４】
試験例２．水分保持機能（保湿作用）
本発明のエラスチン様作用剤の保湿作用を、代表的な保湿剤であるヒアルロン酸と比較した。
［試料］
(1)実施例２の抽出物溶液を３０％１，３−ブチレングリコール水溶液で希釈して固形分濃度を1.6％とした液（本発明試料）
(2)ヒアルロン酸を３０％１，３−ブチレングリコール水溶液に溶解して固形分濃度を0.2％とした溶液（比較試料）
【００４５】
［試験方法］
健常な成人男女５名を被験者とし、その左右の前腕内側部に1.5cm×1.5cmの塗布部をそれぞれ２ヶ所設定した。左右前腕のいずれか一方の塗布部２ヶ所に、本発明試料と対照として３０％１，３−ブチレングリコール水溶液を、又他方の２ヶ所に比較試料と対照として３０％１，３−ブチレングリコール水溶液を、１日１回３週間にわたって塗布した。
その間、１週間毎にインピーダンスメーター［SKICON-200、アイ・ビー・エス（IBS）社製］を用いて、塗布部の表皮角層水分量を測定した。
【００４６】
［結果］
結果を表２に示す。なお、表皮角質層水分量は試料塗布部のコンダクタンス（μＳ）を以て示した。
【表２】

【００４７】
表２に示す通り、本発明試料を塗布した試験部位は、塗布期間の経過と共に、対照部位（１，３−ブチレングリコール水溶液塗布部位）に比べて有意に表皮角層水分量が上昇している。しかもその効果はヒアルロン酸よりも強く、本発明のエラスチン様作用剤がすぐれた保湿効果を有し、肌に潤いを与えるものであることが判る。
【００４８】
試験例３．紫外線損傷抑制作用
［試料］
(1)後記処方例６のローション（本発明ローション）
(2)後記処方例６に於いて、実施例３の抽出物溶液の代わりに精製水を用いて得られたローション（比較ローション）
【００４９】
［試験方法］
ヌードマウス（BALB/C AJcl-nu）６匹を３匹ずつ２群に分け、一方の群のマウスの背部に本発明ローションを、又他方の群のマウスの背部に比較ローションをそれぞれ一日２回朝夕塗布すると共に、塗布部にUV-A(1.5mW/cm₂)を一日１回、朝の塗布前に照射した。又対照として、背部に比較試料を塗布するが、紫外線照射は行わないマウス（３匹）も設定した。
ローションの塗布と紫外線照射を２ヶ月間続けた後、塗布部の皮膚の切片を作製し、ワンギーソン染色を行い、光学顕微鏡で観察した。
紫外線照射による皮膚損傷の度合いは、真皮層の厚さ（各群３匹の平均値）の減少を指標として評価した。
【００５０】
［結果］
結果を表３に示す。なお、表３の数値は、試験終了後の各群３匹の背部塗布部の真皮層の厚さの平均値を、紫外線未照射のマウス（対照）群のそれを100として相対値で示したものである。
【表３】

【００５１】
表３に示した通り、比較ローションを塗布したマウスの皮膚は、紫外線照射によりダメージを受けて真皮層に薄化現象が生じているが、これに対して、本発明のエラスチン様作用剤を含むローションを塗布したマウスの皮膚は、紫外線によるダメージが抑制され、紫外線未照射（対照）のマウスのそれと同様の健常な状態に維持されている。
この結果から、本発明のエラスチン様作用剤が、紫外線暴露によるシワの発生などの皮膚の光老化を抑制する効果をも有するものであることが判る。
【００５２】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して均質なクリームを得た。
【００５３】
処方例２．クリーム
処方例１のＣ成分中、実施例２のエラスチン様作用剤に代えて実施例８のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例１と同様にして均質なクリームを得た。
【００５４】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して均質な乳液を得た。
【００５５】

全ての原料を合わせ攪拌混合して溶解し、透明の化粧水を得た。
【００５６】

精製水にヒアルロン酸を溶解させた後、残りの原料を順次加えて攪拌溶解させ、透明のエッセンスを得た。
【００５７】

全ての原料を合わせ攪拌混合して溶解し、ローションを得た。
【００５８】
処方例７．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例２のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００５９】
処方例８．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例３のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００６０】
処方例９．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例５のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００６１】
処方例10．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例６のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００６２】
処方例11．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例７のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００６３】
処方例12．乳液
処方例３のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例９のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例３と同様にして均質な乳液を得た。
【００６４】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して均質な乳液を得た。
【００６５】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して均質な乳液を得た。
【００６６】
処方例15．乳液
処方例14のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．２部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム３．０部を用いるほかは処方例14と同様にして均質な乳液を得た。
【００６７】
処方例16．乳液
処方例14のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．２部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム３．０部を用いるほかは処方例14と同様にして均質な乳液を得た。
【００６８】
処方例17．乳液
処方例14のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．２部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例14と同様にして均質な乳液を得た。
【００６９】
処方例18．乳液
処方例14のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．２部に代えて米糠抽出物加水分解物（株式会社テクノーブル製、商品名「グレイスノウ＊雪＊ＨＰ」、固形分濃度3.5％）５．０部を用いるほかは処方例14と同様にして均質な乳液を得た。
【００７０】
処方例19．乳液
処方例14のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．２部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸１．０部を用いるほかは処方例14と同様にして均質な乳液を得た。
【００７１】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して均質な乳液を得た。
【００７２】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００rpm）で２分間ホモジナイズを行った。
これを４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却した。
【００７３】
処方例22. ヘアートリートメント
処方例21のＣ成分中、実施例１のエラスチン様作用剤に代えて実施例７のエラスチン様作用剤を用いるほかは処方例21と同様にしてヘアートリートメントを得た。
【００７４】

Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを４０℃以下まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却した。
【００７５】

Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを４０℃以下まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却した。
【００７６】

Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて４０℃以下まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却した。
【００７７】

Ａ成分を８０℃に加温して均一に溶解し、４０℃以下まで冷却した後、Ｂ成分を加え、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却した。
【００７８】

Ａ成分を８０℃に加温して均一に溶解し、４０℃以下まで冷却した後、Ｂ成分を加え、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却した。
【００７９】
試験例4．パネル試験
本発明のエラスチン様作用剤を含むクリームについて、パネルテストにより皮膚に対する効果を調べた。
［試料］
(1)処方例１のクリーム（本発明例）
(2)処方例１に於いて、実施例２のエラスチン様作用剤の代わりに精製水を用いて得られたクリーム（比較例）
【００８０】
［試験方法］
無作為に抽出した年齢１８〜５０歳の女性２０名を被験者として、それぞれ左右の頬部に、本発明例又は比較例のクリームを１日２回（朝、晩）、1ヵ月間塗布してもらった後、小じわ及び肌のはり、艶に対する改善効果を、以下の評価基準に基づいて評価した。
【００８１】
［評価基準］
Ａ：明らかに改善された
Ｂ：かなり改善された
C：僅かに改善された
D：変わらない
E：かえって悪くなった
【００８２】
［結果］
結果を表４に示す。なお、表４のＡ〜Ｅの各評価欄の数字は、被験者20名中当該評価を行った被験者の割合（％）を示す。
【００８３】
【表４】

【００８４】
表４の結果から、本発明のエラスチン様作用剤を含むクリームは、肌の老化に伴う小じわを改善し、肌のはり、艶を回復させる効果を示すことが明らかとなった。
【発明の効果】
本発明のエラスチン様作用剤は、動物エラスチンと同様のすぐれた保湿作用とさらに紫外線による皮膚損傷の防御作用を有すると共に、植物由来であるが故に生体安全性にもすぐれており、皮膚の老化や肌荒れの予防・改善を目的とする化粧料の配合成分として用いて有用である。
従って本発明によれば、さらに、上記のエラスチン様作用剤を配合してなり、皮膚の老化防止、肌荒れの予防・改善に有効でかつ安全性の高い化粧料が提供される。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention provides elastin-like action To the agent In particular, it contains a protein with a composition and structure similar to elastin, a dermal matrix component, and exhibits the same skin aging prevention and skin beautification effects as elastin. To the agent Related.
[0002]
[Prior art]
Skin aging is caused by internal factors such as inactivation of cell growth / differentiation associated with aging, decreased hormone secretion, and damage to cells / tissues or inflammation based on active oxygen induced by exposure to sunlight (ultraviolet rays). This is a phenomenon that occurs when external factors such as occurrence occur in a complex manner.
Of these, skin aging based on internal factors reduces the amount of extracellular matrix components such as collagen, elastin, and hyaluronic acid produced by the decrease in the proliferation ability of dermal fibroblasts. As a result of loss of flexibility and elasticity, or inactivation of epidermal basal cells, the keratinous layer's barrier function, sebum secretion function, water retention function, etc. on the skin surface decrease, resulting in morphological and physiological changes. Appears as wrinkles, sagging, rough skin, and rough skin.
[0003]
In order to prevent or improve this aging of the skin and keep the skin in a youthful and firm state, collagen fibers and elastic fibers such as collagen and elastin, which are constituents of the dermal matrix, are blended in cosmetics. In order to compensate for the decrease in these components, these components also have a moisture retention function, and this has a certain effect in preventing skin aging and improving rough skin.
[0004]
As collagen and elastin for blending cosmetics, those extracted and collected from skins and ligaments such as cattle and pigs have been mainly used so far. However, these mammals have recently been used from the viewpoint of safety to the human body. The use of raw materials obtained from the above has been pointed out, and there is a need for new and higher safety cosmetic ingredients that can replace mammalian collagen and elastin.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
In view of the problems of the prior art as described above, the present inventors have developed anti-elastin antibodies in order to obtain highly safe plants for dermal elastic fibers, in particular, components having a skin aging preventing action and a moisturizing action similar to elastin. As a result of searching for proteins having a composition and structure similar to those of animal elastin for various plants by the ELISA method using Asahi spp. The present invention was completed by finding that a protein exists and that the protein has the same characteristics as animal elastin in terms of function and physiological activity.
[Means for Solving the Problems]
[0006]
That is, the present invention relates to an extract of Ulva pertusa. A moisturizing agent comprising a protein fraction as an active ingredient, wherein the protein fraction contains an elastin-like protein that specifically reacts with an anti-elastin antibody by an ELISA method and has no inhibitory action on elastase activity. Features and To do.
[0007]
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
D Examples of seaweeds of the genus Aosa, which are used in the preparation of a rustin-like agent, include Anavaosa (Ulva pertusa), Japonica (Ulva Japonica), Nagaaosa (Ulva arasaka), Rivaaosa (Ulva fasciata), etc. Examples of plants include, for example, seeds of white birch (Brassica alba), seeds of Brassica juncea (Yellow eggplants), seeds of Blackica (Brassica nigra), rape (Brassica ropa), etc. Can be mentioned.
Among them, Anaaaosa is the most preferred seaweed of the family Aosa, and white lion is the most preferred as a plant of Brassica. In the present invention, such aanosa and / or white lion are used. .
[0008]
As an extract of the plant of the genus Aosaceae used as an active ingredient in the elastin-like agent of the present invention, the extract of the plant belonging to the genus Brassicaceae belongs to the dosage form, production method and the like as long as the extract contains an elastin-like protein. There are no restrictions, for example, those seaweeds and plants that are dried and pulverized as they are into a fine powder form, or those obtained by extracting seaweeds and plants with an appropriate solvent into the form of an extract. The extract can be used, but the extract is most preferable from the viewpoints of blendability in cosmetics and ease of handling.
In addition, these seaweed or plant extracts may be used alone or as a mixture of two or more. When two or more mixtures are used, seaweed extracts or plant extracts may be used together. In addition to the combination, a seaweed extract and a plant extract may be combined.
[0009]
In the case of using an extract as an extract, preparation of the extract is carried out by immersing after a seaweed of Brassica family Aosa or a plant of Brassica family Brassica, if necessary after washing with water and drying, further chopping or grinding. It can be carried out by contacting with an extraction solvent by an appropriate means such as a method or a countercurrent extraction method.
[0010]
As an extraction solvent, water; lower alcohols such as methanol, ethanol, and propanol; higher alcohols such as oleyl alcohol, stearyl alcohol, and octyldodecanol; many solvents such as ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, and glycerin Monohydric alcohols; esters such as ethyl acetate, butyl acetate, methyl propionate and glyceryl trioctanoate; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; ethers such as ethyl ether and isopropyl ether; carbonization such as n-hexane, toluene and chloroform Examples thereof include hydrogen-based solvents, which are used alone or in combination of two or more.
Among these extraction solvents, one or two kinds selected from water, lower alcohols and polyhydric alcohols from the viewpoint of elastin-like protein extraction efficiency and further wide application to cosmetics. It is particularly preferable to use the above mixed solvent, especially water or a mixed solvent of water and any of ethyl alcohol, 1,3-butylene glycol, and propylene glycol.
[0011]
In the case of using a mixed solvent, for example, if the mixed solvent is water and ethyl alcohol, the mixed solvent of 95: 5 to 50:50 by weight ratio (hereinafter the same), water and 1,3-butylene glycol is used. If it is, it will be 90: 10-50: 50, and if it is a mixed solvent of water and propylene glycol, it is preferable to set it as the range of 95: 5-70: 30.
[0012]
During the preparation of the extract, the pH of the extract is preferably maintained in the range of 5 to 12. In this sense, if necessary, the extraction solvent may be alkaline, such as sodium hydroxide, sodium carbonate, potassium hydroxide, etc. An adjusting agent or an acidic adjusting agent such as citric acid, hydrochloric acid, phosphoric acid or sulfuric acid may be blended to adjust the pH to a desired level.
[0013]
Extraction conditions such as extraction temperature and time vary depending on the type of solvent used, the extraction site of the plant and the degree of shredding, but for example, in the case of the immersion method, the extraction temperature is generally 0 to 80 ° C. In the case of room temperature extraction, the extraction time is preferably 1 hour to 1 week, particularly 1 hour to 24 hours.
[0014]
In general, the extract solution obtained here may be adjusted to a pH of 4 to 8 and used as it is or as an appropriate concentration by concentration under reduced pressure, etc. In some cases, a spray drying method or a freeze drying method may be used. It may be pulverized according to a conventional method.
[0015]
The elastin-like agent of the present invention comprising as an active ingredient an extract of the seaweed of the genus Aosaceae or the plant of the Brassicaceae family as described above is used in an elastin-like protein detection test using the ELISA method as shown in a test example later. It was confirmed that elastin contains a protein having a similar composition and structure. In addition, in terms of action and effect, it not only has excellent moisture retention function and moisturizing effect similar to elastin, but also has the effect of suppressing skin damage caused by ultraviolet rays in application tests using mice. The elastin-like agent of the present invention, combined with high biosafety based on being derived from a plant, is used for cosmetics for the purpose of preventing and improving skin aging and rough skin. It is extremely useful when used as a blending component.
[0016]
Therefore, the present invention also provides a cosmetic containing this elastin-like agent and effective in preventing skin aging, moisturizing and improving rough skin.
Cosmetics containing the elastin-like agent of the present invention include, for example, basic cosmetics such as emulsions, creams, lotions, essences, serums, packs, face wash, makeup such as lipsticks, foundations, liquid foundations and makeup press powders. Hair cosmetics such as up cosmetics, hair shampoos, hair rinses, hair treatments, conditioners, hair dyes, hair styling agents, bathing agents, etc. are included, but of course not limited thereto.
[0017]
The blending amount of the elastin-like agent in the cosmetic of the present invention varies depending on the dosage form of the agent, the type of cosmetic, the application site, etc., for example, when an extract is used as the agent, The amount of solid content is generally 0.01 to 10% by weight, preferably 0.1 to 1% by weight for basic cosmetics, and generally 0.01 to 5% by weight, preferably 0.1 to 0.5% by weight for makeup cosmetics. The range and the hair cosmetic composition are generally 0.01 to 20% by weight, preferably 0.1 to 5% by weight.
[0018]
In addition to the above-mentioned elastin-like agent, the cosmetics of the present invention include components usually used in cosmetics, such as oil components, surfactants, moisturizers, thickeners, antiseptic / disinfectants, powder components, An ultraviolet absorber, an antioxidant, a pigment, a fragrance, a physiologically active ingredient, and the like can be appropriately blended as necessary.
[0019]
Here, examples of the oil component include olive oil, jojoba oil, castor oil, soybean oil, rice oil, rice germ oil, palm oil, palm oil, cacao oil, meadow foam oil, sheer butter, tea tree oil, plant-derived squalane. Plant-derived oils and fats; animal-derived oils and fats such as mink oil and turtle oil; waxes such as beeswax, carnauba wax, rice wax and lanolin; hydrocarbons such as liquid paraffin, petrolatum, paraffin wax and squalane; myristin Fatty acids such as acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, isostearic acid; higher alcohols such as lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol; isopropyl myristate, isopropyl palmitate, butyl oleate, 2-ethylhexyl glyceride, higher fatty acid Ok Rudodeshiru synthetic esters such as (stearic acid octyldodecyl) and synthetic triglycerides, and the like.
[0020]
Examples of the surfactant include polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene Nonionic surfactants such as oxyethylene sorbitol fatty acid esters; fatty acid salts, alkyl sulfates, alkylbenzene sulfonates, polyoxyethylene alkyl ether sulfates, polyoxyethylene fatty amine sulfates, polyoxyethylene alkyl phenyl ether sulfates, Polyoxyethylene alkyl ether phosphates, α-sulfonated fatty acid alkyl ester salts, polyoxyethylene alkyl phenyl ether phosphates, Quaternary ammonium salt, primary to tertiary fatty amine salt, trialkylbenzylammonium salt, alkylpyridinium salt, 2-alkyl-1-alkyl-1-hydroxyethylimidazolinium salt, N N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine, N, N, N-trialkyl-N-, N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine Amphoteric surfactants such as alkylene ammoniocarboxybetaine and N-acylamidopropyl-N ′, N′-dimethyl-N′-β-hydroxypropylammoniosulfobetaine can be used.
As emulsifiers or emulsification aids, stevia derivatives such as enzyme-treated stevia, lecithin and its derivatives, lactic acid bacteria fermented rice and the like can also be blended.
[0021]
Examples of humectants include glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, polyethylene glycol, sorbitol, xylitol, sodium pyrrolidone carboxylate, and sugars such as trehalose, lactic acid bacteria fermented rice, hyaluronic acid and Derivatives thereof, NMF related substances, lactic acid, urea, higher fatty acid octyldodecyl, beech extract, collagen derived from seafood and derivatives thereof, various amino acids and derivatives thereof.
[0022]
Examples of thickeners include, for example, brown algae such as alginic acid, agar, carrageenan, fucoidan, green algae or red algae-derived components, beech extract, pectin, locust bean gum, polysaccharides such as aloe polysaccharide, xanthan gum, tragacanth gum, guar gum, etc. Synthetic polymers such as gums, cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, acrylic acid / methacrylic acid copolymer; hyaluronic acid and its derivatives, polyglutamic acid and its derivatives, etc. Is mentioned.
[0023]
Examples of the antiseptic / bactericidal agent include urea; paraoxybenzoates such as methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and butyl paraoxybenzoate; phenoxyethanol, dichlorophene, hexachlorophene, chlorhexidine hydrochloride, benzaza chloride Luconium, salicylic acid, ethanol, undecylenic acid, phenols, jamal (imidazoneil urea), 1,2-pentanediol, bark dry matter, and the like.
[0024]
Examples of the powder component include sericite, titanium oxide, talc, kaolin, bentonite, zinc oxide, magnesium carbonate, magnesium oxide, zirconium oxide, barium sulfate, silicic anhydride, mica, nylon powder, silk powder, cereals (rice, Wheat, corn, millet, etc.) and beans (soybeans, red beans, etc.) powder.
[0025]
Examples of the ultraviolet absorber include ethyl paraaminobenzoate, ethylhexyl paradimethylaminobenzoate, amyl salicylate and derivatives thereof, 2-ethylhexyl paramethoxycinnamate, octyl cinnamate, oxybenzone, 2,4-dihydroxybenzophenone, 2-hydroxy-4 -Methoxybenzophenone-5-sulfonate, 4-tertiarybutyl-4-methoxybenzoylmethane, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole, urocanic acid, ethyl urocanate, aloe extract, etc. .
[0026]
Antioxidants include, for example, butylhydroxyanisole, butylhydroxytoluene, propyl gallate, vitamin E and its derivatives, beech extract, rice extract and the like.
[0027]
Examples of physiologically active ingredients include whitening ingredients such as t-cycloamino acid derivatives, kojic acid and its derivatives, ascorbic acid and its derivatives, arbutin and its derivatives, ellagic acid and its derivatives, resorcinol derivatives, Sakuhakuhi extract, yukinoshita extract , Rice bran extract, rice bran extract hydrolyzate, white coconut hydrolyzate extract, murasakikibu extract, seaweed extract such as kombu, seaweed extract such as sea cucumber, linoleic acid and its derivatives or processed products (for example, Liposomal linoleic acid, etc.), 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives, etc. are skin aging prevention / skin roughening components, such as collagen derived from animals or fish, nicotinic acid and its derivatives, glycyrrhizic acid and its derivatives (dipotassium salt, etc.) , T-cycloamino acid derivatives, vitamin A and its derivatives Herbal extracts such as vitamin E and its derivatives, allantoin, α-hydroxy acids, diisopropylamine dichloroacetate, γ-amino-β-hydroxybutyric acid, gentian extract, licorice extract, pearl barley extract, chamomile extract, carrot extract, aloe extract, There are rice extract hydrolyzate, rice bran extract hydrolyzate, rice fermented extract, honey beet extract, Sohakuhi extract and the like.
[0028]
Examples of the kojic acid derivatives include kojic acid esters such as kojic acid monobutyrate, kojic acid monocaprate, kojic acid monopalmitate, kojic acid dibutyrate, kojic acid ethers, kojic acid sugar derivatives such as kojic acid glucoside, etc. However, as the ascorbic acid derivatives, for example, L-ascorbic acid-2-phosphate sodium, L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium, L-ascorbic acid-2-sulfate sodium, L-ascorbic acid-2 -Ascorbic acid ester salts such as magnesium sulfate, L-ascorbic acid-2-glucoside (2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid), L-ascorbic acid-5-glucoside (5-O-α) -D-glucopyranosyl-L-ascorbine Acid) ascorbic acid sugar derivatives, acylated 6-positions of these ascorbic acid sugar derivatives (acyl groups are hexanoyl, octanoyl, decanoyl, etc.), L-ascorbic acid tetraisopalmitate, L-ascorbic acid tetra Examples of L-ascorbic acid tetrafatty acid esters such as lauric acid ester include resorcinol derivatives such as 4-n-butylresorcinol and 4-isoamylresorcinol, and examples of 2,5-dihydroxybenzoic acid derivatives include 2, 5-diacetoxybenzoic acid, 2-acetoxy-5-hydroxybenzoic acid, 2-hydroxy-5-propionyloxybenzoic acid and the like are nicotinic acid derivatives such as nicotinic acid amide and benzyl nicotinate as vitamin E derivatives. For example Glutamic E nicotinate, vitamin E linoleate and the like, as the α- hydroxy acids such as lactic acid, malic acid, succinic acid, citric acid, α- hydroxy octanoic acid.
[0029]
Next, the present invention will be described more specifically with reference to examples, formulation examples (cosmetic examples), and test examples, but the present invention is not limited thereto. In the following, all parts are parts by weight, and all% are% by weight.
[0030]
Example 1. Preparation of elastin-like agent (1)
70 g of anaaaosa washed with water, dried and mixed with 1000 g of purified water, extracted at 20 ° C. for 24 hours and then filtered to obtain 700 g of a green-brown transparent anaaaosa extract solution (solid content concentration 7.0%) ).
[0031]
Example 2 Preparation of elastin-like agent (2)
70 g of anaaaosa washed with water, dried and mixed with 1000 g of 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution, extracted at 20 ° C. for 24 hours, filtered, and filtered to obtain 600 g of a green-brown transparent anaaaosa extract solution. Obtained (solid content concentration 5.2%).
[0032]
Example 3 Preparation of elastin-like agent (3)
70 g of anaaaosa washed with water, dried and chopped, mixed with 1000 g of 20% aqueous ethanol solution, extracted at 20 ° C. for 24 hours and filtered to obtain 700 g of a green-brown transparent anaaaosa extract solution (solid content) Concentration 5.0%).
[0033]
Example 4 Preparation of elastin-like agent (4)
1000 g of Anaanaosa extract solution obtained in the same manner as in Example 1 was freeze-dried and pulverized to obtain 70 g of Anaaaosa extract powder.
[0034]
Example 5 FIG. Preparation of elastin-like agent (5)
Anaaaosa was washed with water, dried, and then pulverized by a pulverizer. The pulverized product obtained here was sieved with a 200-mesh sieve to prepare an anaoaosa fine powder.
[0035]
Example 6 Preparation of elastin-like agent (6)
Purified water (1000 g) was mixed with 70 g of brilliant washed with water, dried and shredded, extracted at 20 ° C. for 24 hours, and then filtered to obtain 720 g of a green-brown transparent mistletoe extract solution (solid content concentration 6.1% ).
[0036]
Example 7 Preparation of elastin-like agent (7)
Purified water (1000 g) was mixed with 50 g of white coconut pulverized product, extracted at 30 ° C. for 6 hours, and then filtered to obtain 820 g of a pale yellow transparent white coconut extract solution (solid content concentration 0.96%).
[0037]
Example 8 FIG. Preparation of elastin-like agent (8)
50 g of white coconut pulverized product was mixed with 1000 g of 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution, extracted at 30 ° C. for 6 hours and then filtered to obtain 800 g of a pale yellow transparent white coconut extract solution (solid) Minor concentration 0.94%).
[0038]
Example 9 Preparation of elastin-like agent (9)
Purified water (1000 g) was mixed with 50 g of coconut pulverized product, followed by extraction at 40 ° C. for 2 hours, followed by filtration to obtain 850 g of a pale yellow transparent coconut extract solution (solid content concentration: 0.94%).
[0039]
Example 10 Preparation of elastin-like agent (10)
1000 g of the white coconut extract solution obtained in the same manner as in Example 7 was freeze-dried and pulverized to obtain 9.5 g of white coconut extract powder.
[0040]
Test Example 1 Confirmation test for elastin-like protein
About the extract solution obtained in the Example, the confirmation test of the elastin-like protein was performed by ELISA method.
[sample]
(1) Extract solution obtained in Example 1
(2) Extract solution obtained in Example 7
[0041]
[Test method]
A bovine-derived elastin solution diluted to an appropriate concentration as a sample solution or standard solution was placed in a well of a 96-well Eliza plate (manufactured by Iwaki) and allowed to stand at 37 ° C. for 2 hours, and then the solution was removed. Next, the well was washed well, the reagent solution was added thereto, left at 37 ° C. for 1 or 2 hours, and then the reagent solution was removed. As a reagent solution, 1% BSA (leaving time) : 1 hour), an anti-elastin antibody solution diluted to an appropriate concentration (standing time: 2 hours) and a solution in which an anti-IgG antibody bound with peroxidase is diluted to an appropriate concentration (standing time: 2 hours) went. After this operation was completed, the wells were thoroughly washed, and a solution containing 4-chloro-1-naphthol and hydrogen peroxide was added thereto and left at 37 ° C. for 20 minutes, and the absorbance at 415 nm was measured.
The elastin-like protein content of each sample solution was calculated from the relationship between the absorbance obtained using the bovine-derived elastin solution and the elastin concentration.
[0042]
[result]
The results are shown in Table 1. In addition, seaweeds or plants other than plants of the genus Aosaceae and Brassicaceae Brassica of the present invention, for example, green algae such as human rush, red algae such as Asakusa nori, brown algae such as kombu, rose family such as apricot, chamomile The same tests were conducted on asteraceae plants such as rice, cereals such as rice, mulberry plants such as mug, and various herbal medicines, rice, rice bran and other extracts. The presence of reacting elastin-like protein was not observed.
[0043]
[Table 1]

[0044]
Test Example 2 Moisture retention function (humidity retention)
The moisturizing action of the elastin-like agent of the present invention was compared with hyaluronic acid which is a typical moisturizing agent.
[sample]
(1) Liquid obtained by diluting the extract solution of Example 2 with 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution to make the solid content concentration 1.6% (sample of the present invention)
(2) A solution in which hyaluronic acid is dissolved in 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution to a solid content concentration of 0.2% (comparative sample)
[0045]
[Test method]
Five healthy males and females were used as subjects, and two 1.5 cm × 1.5 cm application portions were set on the inner side of the left and right forearms, respectively. 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution as a sample of the present invention and a control at two application portions of either the left or right forearm, and 30% 1,3-butylene glycol aqueous solution as a comparison sample and a control at the other two locations Was applied once a day for 3 weeks.
During that time, the moisture content of the epidermis was measured every week using an impedance meter [SKICON-200, manufactured by IBS (IBS) Co., Ltd.].
[0046]
[result]
The results are shown in Table 2. The water content of the epidermal stratum corneum is indicated by the conductance (μS) of the sample application part.
[Table 2]

[0047]
As shown in Table 2, in the test site where the sample of the present invention was applied, the water content of the epidermal horny layer significantly increased as the application period progressed compared to the control site (1,3-butylene glycol aqueous solution application site). . Moreover, the effect is stronger than that of hyaluronic acid, and it can be seen that the elastin-like agent of the present invention has an excellent moisturizing effect and moisturizes the skin.
[0048]
Test Example 3 UV damage control
[sample]
(1) Lotion of prescription example 6 (present invention lotion)
(2) A lotion (comparative lotion) obtained by using purified water instead of the extract solution of Example 3 in Formulation Example 6 below.
[0049]
[Test method]
Nude mice (BALB / C AJcl-nu) were divided into 2 groups of 6 mice, and the lotion of the present invention was placed on the back of one group of mice, and the comparison lotion on the back of the other group of mice. In addition to applying in the morning and evening, UV-A (1.5mW / cm ₂ ) Once a day before morning application. In addition, as a control, mice (3 mice) were also set, in which a comparative sample was applied to the back but no ultraviolet irradiation was performed.
After application of lotion and ultraviolet irradiation were continued for 2 months, a section of the skin of the applied part was prepared, stained with One Gieson, and observed with an optical microscope.
The degree of skin damage due to ultraviolet irradiation was evaluated using the decrease in the thickness of the dermis layer (average value of 3 animals in each group) as an index.
[0050]
[result]
The results are shown in Table 3. In addition, the numerical value of Table 3 showed the average value of the thickness of the dermis layer of the back application | coating part of 3 animals | groups after completion | finish of a test as a relative value by setting it to 100 of the mouse | mouth (control | contrast) group not irradiated with ultraviolet rays. Is.
[Table 3]

[0051]
As shown in Table 3, the skin of the mouse to which the comparative lotion was applied was damaged by ultraviolet irradiation, resulting in a thinning phenomenon in the dermis layer. On the other hand, it contains the elastin-like agent of the present invention. The skin of the mouse | mouth which apply | coated the lotion is suppressed by the ultraviolet-ray damage, and is maintaining the healthy state similar to that of the mouse | mouth which is not irradiated with an ultraviolet-ray (control).
From this result, it can be seen that the elastin-like agent of the present invention also has an effect of suppressing skin photoaging such as generation of wrinkles by exposure to ultraviolet rays.
[0052]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, and obtained the homogeneous cream.
[0053]
Formulation Example 2 cream
A homogenous cream was obtained in the same manner as in Formulation Example 1 except that the elastin-like agent of Example 8 was used instead of the elastin-like agent of Example 2 in Component C of Formulation Example 1.
[0054]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, and obtained the homogeneous emulsion.
[0055]

All the raw materials were combined, stirred and dissolved to obtain a transparent lotion.
[0056]

After hyaluronic acid was dissolved in purified water, the remaining raw materials were sequentially added and dissolved by stirring to obtain a transparent essence.
[0057]

All the raw materials were combined and mixed by stirring and dissolved to obtain a lotion.
[0058]
Formulation Example 7 Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3 except that the elastin-like agent of Example 2 was used in place of the elastin-like agent of Example 1 in Component C of Formulation Example 3.
[0059]
Formulation Example 8 Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3 except that the elastin-like agent of Example 3 was used in place of the elastin-like agent of Example 1 in Component C of Formulation Example 3.
[0060]
Formulation Example 9 Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3, except that the elastin-like agent of Example 5 was used instead of the elastin-like agent of Example 1 in the component C of Formulation Example 3.
[0061]
Formulation Example 10. Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3 except that the elastin-like agent of Example 6 was used instead of the elastin-like agent of Example 1 in Component C of Formulation Example 3.
[0062]
Formulation Example 11. Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3 except that the elastin-like agent of Example 7 was used instead of the elastin-like agent of Example 1 in the C component of Formulation Example 3.
[0063]
Formulation Example 12. Latex
A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 3, except that the elastin-like agent of Example 9 was used instead of the elastin-like agent of Example 1 in the C component of Formulation Example 3.
[0064]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, and obtained the homogeneous emulsion.
[0065]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, and obtained the homogeneous emulsion.
[0066]
Formulation Example 15. Latex
Other than using 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 3.0 parts of L-ascorbic acid-2-phosphate in component B of formulation example 14 instead of 2.0 parts of potassium hydroxide A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 14.
[0067]
Formulation Example 16. Latex
Other than using 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 0.2 part of potassium hydroxide in B component of Formulation Example 14, 3.0 parts of sodium L-ascorbic acid-2-phosphate is used. A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 14.
[0068]
Formulation Example 17. Latex
Homogeneous emulsion as in Formulation Example 14 except that 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 0.2 part of potassium hydroxide are used in the B component of Formulation Example 14 instead of 2.0 parts of potassium hydroxide. Got.
[0069]
Formulation Example 18. Latex
In the B component of Formulation Example 14, instead of 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 0.2 part of potassium hydroxide, a rice bran extract hydrolyzate (trade name “Gracenow * manufactured by Technoble Co., Ltd.) A homogeneous emulsion was obtained in the same manner as in Formulation Example 14, except that 5.0 parts of “Snow * HP”, solid concentration 3.5%) was used.
[0070]
Formulation Example 19. Latex
Formulation Example 14 except that, in Component B of Formulation Example 14, 1.0 part of γ-amino-β-hydroxybutyric acid is used instead of 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 0.2 part of potassium hydroxide. In the same manner, a homogeneous emulsion was obtained.
[0071]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, and obtained the homogeneous emulsion.
[0072]

After each component A and component B were heated to 80 ° C. or higher, the component B was added to the component A and stirred, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes.
After cooling this to 40 degrees C or less, C component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less.
[0073]
Formulation Example 22. Hair Treatment
A hair treatment was obtained in the same manner as in Formulation Example 21, except that the elastin-like agent of Example 7 was used instead of the elastin-like agent of Example 1 in the component C of Formulation Example 21.
[0074]

Component C was mixed and pulverized with a pulverizer. The component B was mixed, and the pulverized component C was added thereto and uniformly dispersed in a colloid mill. The components A and B and C dispersed uniformly were each heated to 80 ° C., and then the components A were added to the components B and C while stirring, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes. After cooling this to 40 degrees C or less, D component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, stirring further.
[0075]

Component C was mixed and pulverized with a pulverizer. The component B was mixed, and the pulverized component C was added thereto and uniformly dispersed in a colloid mill. The components A and B and C dispersed uniformly were each heated to 80 ° C., and then the components A were added to the components B and C while stirring, and further homogenized with Hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes. After cooling this to 40 degrees C or less, D component was added and stirred and mixed, and also it cooled to 30 degrees C or less, stirring further.
[0076]

After each component A and component B are heated to 80 ° C. and uniformly dissolved, component B is added to component A, and stirring is continued until it is cooled to 40 ° C. or lower. It cooled to 30 degrees C or less, stirring.
[0077]

The component A was heated to 80 ° C. and dissolved uniformly. After cooling to 40 ° C. or lower, the component B was added, and the mixture was further cooled to 30 ° C. or lower with stirring.
[0078]

The component A was heated to 80 ° C. and dissolved uniformly. After cooling to 40 ° C. or lower, the component B was added, and the mixture was further cooled to 30 ° C. or lower with stirring.
[0079]
Test Example 4. Panel test
About the cream containing the elastin-like agent of this invention, the effect with respect to skin was investigated by the panel test.
[sample]
(1) Cream of Formulation Example 1 (Invention Example)
(2) Cream obtained by using purified water instead of the elastin-like agent of Example 2 in Comparative Example 1 (Comparative Example)
[0080]
[Test method]
Twenty randomly selected women aged 18 to 50 years were used as subjects, and the cream of the present invention or comparative example was applied to the left and right cheeks twice a day (morning and evening) for 1 month. After having received, the improvement effect with respect to fine wrinkles, skin tension, and gloss was evaluated based on the following evaluation criteria.
[0081]
[Evaluation criteria]
A: Clearly improved
B: Remarkably improved
C: Slightly improved
D: unchanged
E: It got worse
[0082]
[result]
The results are shown in Table 4. In addition, the number of each evaluation column of AE of Table 4 shows the ratio (%) of the test subject who performed the said evaluation among 20 test subjects.
[0083]
[Table 4]

[0084]
From the results shown in Table 4, it was revealed that the cream containing the elastin-like agent of the present invention has the effect of improving fine lines associated with aging of the skin and restoring the skin's elasticity and gloss.
【The invention's effect】
The elastin-like agent of the present invention has an excellent moisturizing action similar to animal elastin and a protective action against skin damage caused by ultraviolet rays, and is also excellent in biological safety because it is derived from plants, It is useful as a component of cosmetics for the purpose of preventing and improving rough skin.
Therefore, according to the present invention, there is further provided a cosmetic that is formulated with the above-mentioned elastin-like agent and that is effective in preventing skin aging and preventing or improving rough skin, and is highly safe.

Claims

Ulva pertusa The protein fraction that is part in extract (Ulva pertusa) a humectant comprising as an active ingredient
The moisturizing agent, wherein the protein fraction contains an elastin-like protein that specifically reacts with an anti-elastin antibody by ELISA, and has no elastase activity inhibitory action .