JP4291153B2 - 可溶性サイトケラチンフラグメントの測定による敗血症の検出方法 - Google Patents
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Description
A.Beishuizenら, Advances in Clinical Chemistry, Vol.33, 1999, 55-131 C.Gabayら, The New England Journal of Medicine, Vol.340, No.6, 1999, 448-454 K.Reinhartら, Intensivmedizin, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, New York, 2001, 756-760 M.Assicotら, The Lancet, Vol.341, No.8844, 1993, 515-518
1.CYFRA21−1の測定
商業的アッセイ(B.R.A.H.M.S Diagnostica GmbH社のKRYPTOR-CYFRA 21-1)を用いて、敗血症マーカープロカルシトニン(PCT)に高い値が見られた169人の敗血症患者の血清において、腫瘍マーカーCYFRA21−1の血清濃度を測定した。81%の敗血症血清において、高いCYFRA21−1濃度(1ng/mlより高い)が観察された。コントロールとして用いた50の血清中では、CYFRA21−1濃度は、僅かにたったの2例しか1ng/mlを超えなかった。
TPS測定用の商業的アッセイ(DPC-BIERMANN, Bad NauheimのTPSTM)を用いて、敗血症マーカープロカルシトニン(PCT)に高い値が見られた49人の敗血症患者の血清において、腫瘍マーカーTPSの血清濃度を測定した。90%の敗血症血清において、非常に高いTPS濃度(66U/lより高い)が観察された。一方、21人のコントロールの血清(健康な血液ドナーの血清)の全てが陰性、すなわち66U/lの基準値未満の測定値を有していた。
DE10130985.6に従って可溶性サイトケラチン−1フラグメントsCY1Fの血清濃度を、敗血症マーカープロカルシトニン(PCT)に高い値が見られた20人の敗血症患者の血清において測定した。95%の敗血症血清において、非常に高いsCY1F濃度(3ng/mlより高い)が観察された。敗血症血清中のsCY1Fの調査測定のために、この目的のために特別に開発した競争的蛍光免疫アッセイを用いた。このアッセイでは、サイトケラチン−1フラグメントの部分配列を含むペプチド(DE10130985.6の配列番号3のアミノ酸214から229のもの)に対するヒツジ抗体が用いられている。この抗体を得るために用いられ、かつ、競争剤として用いられた合成ペプチドは、ペプチドPLY17の商品名で商業的に入手可能である(Jerini BioTools GmbH)。これは、本明細書に添付する配列表に示される配列番号1のアミノ酸配列を有する。
1.上記チューブに100μgのサンプル(敗血症血清、コントロール血清、または検量溶液)をピペットで移す;
2.200μlの抗血清(PBSで1:5000に稀釈)をピペットで移す;
3.揺すりながら室温で2時間インキュベートする;
4.チューブから未結合の抗体を洗い流す(1mlのPBSを満たしデカンテーションする:4回);
5.固相に結合した抗体をマーキングするために、300mlのPBS、1%BSA中のアクリジニウムエステルでマーキングしたロバの抗ヒツジ抗体(B.R.A.H.M.S Diagnostica)を添加する;
6.室温で2時間インキュベーションした後に、未結合のマーキング抗体を4と同様に洗浄して取り除く;
7.ルミノメーター(Berthold社)により公知の方法で固相に結合したアクリジニウムエステルを測定する。
Claims (5)
- 敗血症および敗血症様全身性感染症の検出のための方法であって、敗血症を患った、または敗血症の疑いがある患者の生物学的流体における、TPSおよびCYFRA21−1から選択される一以上の可溶性サイトケラチンフラグメントの量を測定し、かつ、可溶性サイトケラチンフラグメントの測定量が、敗血症の存在、予想される経過、重篤度、および/または治療のために開始された処置の成功度を示すことを特徴とする方法。
- 可溶性サイトケラチンフラグメントの測定が、免疫検出アッセイ法によって実施されることを特徴とする、請求項1記載の方法。
- 前記少なくとも一つの可溶性サイトケラチンフラグメントに加えて、同時にさらなる敗血症パラメータのプロカルシトニンが測定されるマルチパラメータ測定法で実施され、かつ、一組の少なくとも二つの測定変数の形態の測定結果が得られ、高精度の敗血症の検出のために評価されることを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
- マルチパラメータ測定法が、チップ技術測定装置または免疫クロマトグラフィー測定装置による同時測定として実施されることを特徴とする、請求項3記載の方法。
- 前記測定装置を用いて得られた複数の測定結果の評価がコンピュータープログラムを用いて実施されることを特徴とする、請求項4記載の方法。
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