JP2886550B2 - 発酵法による５’―イノシン酸の製造法 - Google Patents
発酵法による５’―イノシン酸の製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、発酵法による５′−イノシン酸の製造法に
関する。５′−イノシン酸は調味料などとして広く用い
られ、食品工業分野で有用な物質である。
関する。５′−イノシン酸は調味料などとして広く用い
られ、食品工業分野で有用な物質である。
従来の技術 従来、５′−イノシン酸を発酵生産する方法として
は、コリネバクテリウム属に属する微生物を0.1〜0.01
％のＬ−プロリンを含む培地で培養する方法〔アプライ
ド ミクロバイオロジー（Applied Microbiology）16 9
81〜987（1968）〕、糖類より直接５′−イノシン酸を
発酵生産する方法としてコリネバクテリウム属に属し、
アデニン要求性を有し、発酵培地の加圧蒸煮殺菌の影響
を受けない菌株を取得、培養し培地中に５′−イノシン
酸を生成蓄積させる方法（特公昭58−46319）、コリネ
バクテリウム属に属し、アデニン要求性を有し、アデニ
ン又はリファンピシンに耐性を有する変異株を培養し、
培地中に５′−イノシン酸を生成蓄積させる方法（特開
昭56−160999）などが知られている。
は、コリネバクテリウム属に属する微生物を0.1〜0.01
％のＬ−プロリンを含む培地で培養する方法〔アプライ
ド ミクロバイオロジー（Applied Microbiology）16 9
81〜987（1968）〕、糖類より直接５′−イノシン酸を
発酵生産する方法としてコリネバクテリウム属に属し、
アデニン要求性を有し、発酵培地の加圧蒸煮殺菌の影響
を受けない菌株を取得、培養し培地中に５′−イノシン
酸を生成蓄積させる方法（特公昭58−46319）、コリネ
バクテリウム属に属し、アデニン要求性を有し、アデニ
ン又はリファンピシンに耐性を有する変異株を培養し、
培地中に５′−イノシン酸を生成蓄積させる方法（特開
昭56−160999）などが知られている。
また、５′−イノシン酸生産能を有する微生物を0.2
〜5.0％のＬ−プロリンおよび／またはその類縁化合物
を含む培地で培養する方法が本出願人により開示されて
いる。（特願平１−55835） なお、本明細書中では従来ブレビバクテリウム・アン
モニアゲネスと命名されている菌株をコリネバクテリウ
ム・アンモニアゲネスに変更して記載する。本菌株種名
の変更はインターナショナル・ジャーナル・オブ・シス
テマティック・バクテリオロジー（International Jour
nal of Systematic Bacteriology,442〜443、10月、198
7年）に基づくものとする。
〜5.0％のＬ−プロリンおよび／またはその類縁化合物
を含む培地で培養する方法が本出願人により開示されて
いる。（特願平１−55835） なお、本明細書中では従来ブレビバクテリウム・アン
モニアゲネスと命名されている菌株をコリネバクテリウ
ム・アンモニアゲネスに変更して記載する。本菌株種名
の変更はインターナショナル・ジャーナル・オブ・シス
テマティック・バクテリオロジー（International Jour
nal of Systematic Bacteriology,442〜443、10月、198
7年）に基づくものとする。
発明が解決しようとする課題 本発明の目的は、調味料として広く用いられている
５′−イノシン酸を直接発酵法により工業的に安価に効
率よく製造する方法を提供することにある。
５′−イノシン酸を直接発酵法により工業的に安価に効
率よく製造する方法を提供することにある。
課題を解決するための手段 本発明によれば、コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−
プロリン拮抗物質、たとえば3,4−デヒドロ−D,L−プロ
リン、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸およびＬ−チア
ゾリジン−４−カルボン酸などに耐性を有し、かつ５′
−イノシン酸生産能を有する微生物を培地に培養するこ
とにより、培養物中に５′−イノシン酸を生成蓄積さ
せ、該培養物から５′−イノシン酸を採取することがで
きる。
プロリン拮抗物質、たとえば3,4−デヒドロ−D,L−プロ
リン、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸およびＬ−チア
ゾリジン−４−カルボン酸などに耐性を有し、かつ５′
−イノシン酸生産能を有する微生物を培地に培養するこ
とにより、培養物中に５′−イノシン酸を生成蓄積さ
せ、該培養物から５′−イノシン酸を採取することがで
きる。
以下に本発明を詳細に説明する。
用いられる微生物としては、コリネバクテリウム属に
属し、Ｌ−プロリン拮抗物質に耐性を有し、かつ５′−
イノシン酸生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い。Ｌ−プロリン拮抗物質に耐性を有する微生物とは、
親株が生育阻害を示す濃度のＬ−プロリン拮抗物質を含
む培地でも生育することのできる変異株のことをいう。
属し、Ｌ−プロリン拮抗物質に耐性を有し、かつ５′−
イノシン酸生産能を有する微生物であればいずれでもよ
い。Ｌ−プロリン拮抗物質に耐性を有する微生物とは、
親株が生育阻害を示す濃度のＬ−プロリン拮抗物質を含
む培地でも生育することのできる変異株のことをいう。
本発明においてＬ−プロリン拮抗物質とは、最少培地
寒天平板中にＬ−プロリン拮抗物質を添加しコリネバク
テリウム属に属する５′−イノシン酸生産菌を培養した
とき、該生産菌の生育を阻害するが、この阻害がＬ−プ
ロリンが存在することにより解除されるような化合物を
いう。Ｌ−プロリン拮抗物質としては、たとえば3,4−
デヒドロ−D,L−プロリン、Ｌ−アゼチジン−２−カル
ボン酸、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸などがあげ
られる。培地に添加されるＬ−プロリン拮抗物質の量と
しては、１〜15g/が適当である。
寒天平板中にＬ−プロリン拮抗物質を添加しコリネバク
テリウム属に属する５′−イノシン酸生産菌を培養した
とき、該生産菌の生育を阻害するが、この阻害がＬ−プ
ロリンが存在することにより解除されるような化合物を
いう。Ｌ−プロリン拮抗物質としては、たとえば3,4−
デヒドロ−D,L−プロリン、Ｌ−アゼチジン−２−カル
ボン酸、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸などがあげ
られる。培地に添加されるＬ−プロリン拮抗物質の量と
しては、１〜15g/が適当である。
上記したような変異株は、コリネバクテリウム属に属
する５′−イノシン酸生産菌にＬ−プロリン拮抗物質耐
性を付与したり、コリネバクテリウム属に属しＬ−プロ
リン拮抗物質耐性を有している菌株に５′−イノシン酸
生産能を付与したりすることにより得ることができる。
する５′−イノシン酸生産菌にＬ−プロリン拮抗物質耐
性を付与したり、コリネバクテリウム属に属しＬ−プロ
リン拮抗物質耐性を有している菌株に５′−イノシン酸
生産能を付与したりすることにより得ることができる。
本発明の変異株は、コリネバクテリウム・アンモニア
ゲネス（Corynebacterium Ammoniagenes）KY13184（FER
M P−3790）（以下、KY13184株という）を親株として、
これにＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン、紫外線、Ｘ線など通常の変異処理を施すことによ
り得られる。
ゲネス（Corynebacterium Ammoniagenes）KY13184（FER
M P−3790）（以下、KY13184株という）を親株として、
これにＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン、紫外線、Ｘ線など通常の変異処理を施すことによ
り得られる。
以下に本発明で用いられる変異株の具体的取得方法を
示す。
示す。
親株としてKY13184株を用い、該菌株をＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン100μg/mlで30
℃、30分処理した後、親株が生育阻害を示す濃度（3mg/
ml）の3,4−デヒドロ−D,L−プロリンを含む最少培地寒
天平板（グルコース20g/、塩化アンモニウム2g/、K
H2PO4 0.1g/、K2HPO4 0.3g/、MgCl2・2H2O 0.3g/
、FeSO4・7H2O 10mg/、MnSO4・４〜6H2O 1mg/、Z
nSO4・7H2O 1mg/、CuSO4・5H2O 0.2mg/、CaCl2・2H
2O 10mg/、Ｌ−システイン40mg/、Ｌ−アスパラギ
ン0.5g/、サイアミン塩酸塩10mg/、パントテン酸カ
ルシウム20mg/、ビオチン60μg/、ニコチン酸3g/
、アデニン20mg/、グアニン20mg/、寒天20g/、
pH7.2）上に塗布した。30℃で７〜10日間培養後、生育
してくる変異株のうち、親株より５′−イノシン酸の生
産能が優れている菌株を選んだ。そのうちとくに優れて
いる一株をコリネバクテリウム・アンモニアゲネスＨ−
7464（以下、Ｈ−7464株という。）と命名した。
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン100μg/mlで30
℃、30分処理した後、親株が生育阻害を示す濃度（3mg/
ml）の3,4−デヒドロ−D,L−プロリンを含む最少培地寒
天平板（グルコース20g/、塩化アンモニウム2g/、K
H2PO4 0.1g/、K2HPO4 0.3g/、MgCl2・2H2O 0.3g/
、FeSO4・7H2O 10mg/、MnSO4・４〜6H2O 1mg/、Z
nSO4・7H2O 1mg/、CuSO4・5H2O 0.2mg/、CaCl2・2H
2O 10mg/、Ｌ−システイン40mg/、Ｌ−アスパラギ
ン0.5g/、サイアミン塩酸塩10mg/、パントテン酸カ
ルシウム20mg/、ビオチン60μg/、ニコチン酸3g/
、アデニン20mg/、グアニン20mg/、寒天20g/、
pH7.2）上に塗布した。30℃で７〜10日間培養後、生育
してくる変異株のうち、親株より５′−イノシン酸の生
産能が優れている菌株を選んだ。そのうちとくに優れて
いる一株をコリネバクテリウム・アンモニアゲネスＨ−
7464（以下、Ｈ−7464株という。）と命名した。
また、3,4−デヒドロ−D,L−プロリンの代わりにＬ−
アゼチジン２−カルボン酸を用いる以外は上記と同様の
方法をおこなって、得られた菌株のうち、とくに生産性
の優れた一株をコリネバクテリウム・アンモニアゲネス
Ｈ−7465（以下、Ｈ−7465株という。）と命名した。
アゼチジン２−カルボン酸を用いる以外は上記と同様の
方法をおこなって、得られた菌株のうち、とくに生産性
の優れた一株をコリネバクテリウム・アンモニアゲネス
Ｈ−7465（以下、Ｈ−7465株という。）と命名した。
Ｈ−7464株およびＨ−7465株は、ブダペスト条約にに
基づいて、平成元年５月18日付で工業技術院微生物工業
技術研究所にそれぞれ微工研条寄第2425号（FERM BP−2
425）および第2426号（FERM BP−2426）として寄託され
ている。
基づいて、平成元年５月18日付で工業技術院微生物工業
技術研究所にそれぞれ微工研条寄第2425号（FERM BP−2
425）および第2426号（FERM BP−2426）として寄託され
ている。
KY13184株、Ｈ−7464株およびＨ−7465株を、それぞ
れＬ−プロリン拮抗物質を含む最少培地寒天平板上で30
℃で10日間培養したときの生育度を第１表に示す。
れＬ−プロリン拮抗物質を含む最少培地寒天平板上で30
℃で10日間培養したときの生育度を第１表に示す。
本発明で用いられる微生物の培養に際しては、一般に
核酸の発酵生産に用いられる培地が使用される。微生物
が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子など
を含有する培地であれば、合成培地、天然培地などいか
なる培地でも使用できる。
核酸の発酵生産に用いられる培地が使用される。微生物
が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子など
を含有する培地であれば、合成培地、天然培地などいか
なる培地でも使用できる。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、シュク
ロースあるいは糖蜜、澱粉などの加水分解物のほか、酢
酸、フマール酸、クエン酸などの各種有機酸、エタノー
ル、グリセロールなどのアルコール類などが使用でき
る。
ロースあるいは糖蜜、澱粉などの加水分解物のほか、酢
酸、フマール酸、クエン酸などの各種有機酸、エタノー
ル、グリセロールなどのアルコール類などが使用でき
る。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
などの各種無機塩類やフマール酸アンモニウムなどの有
機酸のアンモニウム塩、エチルアミンなどのアミン類、
尿素などの含窒素化合物、ならびにペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、コーン・スティープ・リカー、カゼイ
ン加水分解物、大豆粕またはその加水分解物、アミン酸
発酵、核酸発酵などの各種発酵菌体およびその消化物な
どが用いられる。
酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウム
などの各種無機塩類やフマール酸アンモニウムなどの有
機酸のアンモニウム塩、エチルアミンなどのアミン類、
尿素などの含窒素化合物、ならびにペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、コーン・スティープ・リカー、カゼイ
ン加水分解物、大豆粕またはその加水分解物、アミン酸
発酵、核酸発酵などの各種発酵菌体およびその消化物な
どが用いられる。
無機物としては、燐酸第一カリウム、燐酸第二カリウ
ム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
ム、燐酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシ
ウムなどが用いられる。
そのほか、ビオチン、サイアミン、ニコチン酸、β−
アナリンなどのビタミン類やグルタミン酸などのアミノ
酸類を添加することがある。
アナリンなどのビタミン類やグルタミン酸などのアミノ
酸類を添加することがある。
培養は、振盪、深部撹拌などの好気的条件下、温度20
〜40℃、好ましくは25〜38℃で、pH5〜９、好ましくは
中性付近に保持しておこなわれ、通常２〜７日間で完了
する。培地のpHは炭酸カルシウム、無機または有機の
酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩衝液などによって
調整される。
〜40℃、好ましくは25〜38℃で、pH5〜９、好ましくは
中性付近に保持しておこなわれ、通常２〜７日間で完了
する。培地のpHは炭酸カルシウム、無機または有機の
酸、アルカリ溶液、アンモニア、pH緩衝液などによって
調整される。
培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を除去し、
イオン交換処理法、吸着法、抽出法、沈殿法などを併用
することにより、培養液から５′−イノシン酸を採取す
ることができる。
イオン交換処理法、吸着法、抽出法、沈殿法などを併用
することにより、培養液から５′−イノシン酸を採取す
ることができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１ KY13184株、Ｈ−7464株およびＨ−7465株をそれぞれ
２容三角フラスコ中の下記組成からなる種培地300ml
に植菌し、30℃で24時間培養した。
２容三角フラスコ中の下記組成からなる種培地300ml
に植菌し、30℃で24時間培養した。
種培地組成：グルコース20g/、ペプトン10g/、肉
エキス10g/、酵母エキス5g/、NaCl 3g/、ビオチ
ン20μg/、アデニン100mg/、グアニン100mg/（pH
7.2、NaOHまたはH2SO4で調整、120℃で10分間加圧蒸煮
殺菌） 得られた３つの種培養液300mlをそれぞれ５容培養
槽中の下記組成からなる生産培地３に植菌し、30℃で
96時間培養（回転数600rpm、通気量30/min）した。培
養中のpHは、アンモニア水で6.8前後に調整した。
エキス10g/、酵母エキス5g/、NaCl 3g/、ビオチ
ン20μg/、アデニン100mg/、グアニン100mg/（pH
7.2、NaOHまたはH2SO4で調整、120℃で10分間加圧蒸煮
殺菌） 得られた３つの種培養液300mlをそれぞれ５容培養
槽中の下記組成からなる生産培地３に植菌し、30℃で
96時間培養（回転数600rpm、通気量30/min）した。培
養中のpHは、アンモニア水で6.8前後に調整した。
生産培地組成：グルコース150g/、KH2PO4 10g/、
K2HPO4 10g/、MgSO4・7H2O 10g/、CaCl2・2H2O 0.1
g/、ZnSO4・7H2O 5mg/、FeSO4・7H2O 20mg/、MnC
l2・4H2O 5mg/、ビオチン30μm/、パントテン酸カ
ルシウム10mg/、ビタミンB1 5mg/、ニコチン酸5mg/
、アデニン100mg/、グアニン100mg/、コーン・ス
ティープ・リカー20g/、尿素2g/（別途加圧蒸煮殺
菌120℃、５分間）（pH7.2、NaOHまたはH2SO4で調整、1
20℃、10分間加圧蒸煮殺菌）その結果、KY13184株、Ｈ
−7464株およびＨ−7465株の培養液中の５′−イノシン
酸生成量はそれぞれ26.3g/、28.7g/および28.9g/
であった。
K2HPO4 10g/、MgSO4・7H2O 10g/、CaCl2・2H2O 0.1
g/、ZnSO4・7H2O 5mg/、FeSO4・7H2O 20mg/、MnC
l2・4H2O 5mg/、ビオチン30μm/、パントテン酸カ
ルシウム10mg/、ビタミンB1 5mg/、ニコチン酸5mg/
、アデニン100mg/、グアニン100mg/、コーン・ス
ティープ・リカー20g/、尿素2g/（別途加圧蒸煮殺
菌120℃、５分間）（pH7.2、NaOHまたはH2SO4で調整、1
20℃、10分間加圧蒸煮殺菌）その結果、KY13184株、Ｈ
−7464株およびＨ−7465株の培養液中の５′−イノシン
酸生成量はそれぞれ26.3g/、28.7g/および28.9g/
であった。
Ｈ−7464株の培養終了液から菌体を除去して得られた
上清液１を塩酸でpH1.4とし、ダイヤイオンSK＃１
（Ｈ型、三菱化成社製）の樹脂塔に通塔後ただちに蒸留
水を通塔し溶出液を得た。その後樹脂塔を水洗し、水洗
初期の流水液中５′−イノシン酸を含む画分を既に得ら
れている溶出液と合併し、水酸化ナトリウムでpH7.2に
調整した。これをロータリーエバポレーターで減圧濃縮
することにより、20.1gの５′−イノシン酸ナトリウム
塩の粗結晶を得た。
上清液１を塩酸でpH1.4とし、ダイヤイオンSK＃１
（Ｈ型、三菱化成社製）の樹脂塔に通塔後ただちに蒸留
水を通塔し溶出液を得た。その後樹脂塔を水洗し、水洗
初期の流水液中５′−イノシン酸を含む画分を既に得ら
れている溶出液と合併し、水酸化ナトリウムでpH7.2に
調整した。これをロータリーエバポレーターで減圧濃縮
することにより、20.1gの５′−イノシン酸ナトリウム
塩の粗結晶を得た。
発明の効果 本発明によれば、５′−イノシン酸を工業的に安価に
効率よく製造することができる。
効率よく製造することができる。
Claims (2)
- 【請求項１】コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−プロリ
ン拮抗物質に耐性を有し、かつ５′−イノシン酸生産能
を有する微生物を培地に培養し、培養物中に５′−イノ
シン酸を生成蓄積させ、該培養物より５′−イノシン酸
を採取することを特徴とする発酵法による５′−イノシ
ン酸の製造法。 - 【請求項２】Ｌ−プロリン拮抗物質が、3,4−デヒドロ
−D,L−プロリン、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸お
よびＬ−チアゾリジン−４−カルボン酸からなる群から
選ばれる物質である請求項（１）記載の発酵法による
５′−イノシン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1133830A JP2886550B2 (ja) | 1989-05-26 | 1989-05-26 | 発酵法による５’―イノシン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1133830A JP2886550B2 (ja) | 1989-05-26 | 1989-05-26 | 発酵法による５’―イノシン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02312594A JPH02312594A (ja) | 1990-12-27 |
| JP2886550B2 true JP2886550B2 (ja) | 1999-04-26 |
Family
ID=15114041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1133830A Expired - Fee Related JP2886550B2 (ja) | 1989-05-26 | 1989-05-26 | 発酵法による５’―イノシン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2886550B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024123110A1 (ko) * | 2022-12-08 | 2024-06-13 | 씨제이제일제당 (주) | 퓨린 뉴클레오티드를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101956510B1 (ko) * | 2018-07-27 | 2019-03-08 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 5'-이노신산 디하이드로게나아제 및 이를 이용한 5'-이노신산 제조방법 |
-
1989
- 1989-05-26 JP JP1133830A patent/JP2886550B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024123110A1 (ko) * | 2022-12-08 | 2024-06-13 | 씨제이제일제당 (주) | 퓨린 뉴클레오티드를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02312594A (ja) | 1990-12-27 |
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