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JP2025501522A - 抗ｏｘ４０抗体及び使用方法 - Google Patents

抗ｏｘ４０抗体及び使用方法 Download PDF

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JP2025501522A
JP2025501522A JP2024536220A JP2024536220A JP2025501522A JP 2025501522 A JP2025501522 A JP 2025501522A JP 2024536220 A JP2024536220 A JP 2024536220A JP 2024536220 A JP2024536220 A JP 2024536220A JP 2025501522 A JP2025501522 A JP 2025501522A
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Abstract

ＯＸ４０に結合する抗体及び抗体誘導体並びにその使用方法を提供する。前記抗体又は抗体誘導体は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体を含む。

Description

(関連出願の相互参照)
本願は、２０２１年１２月１７日に提出された国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３９２７７の優先権を主張し、該出願の内容は全体として引用により本明細書に組み込まれ、その優先権を主張する。
本発明は、ＯＸ４０に結合する抗体及び抗体誘導体並びにその使用方法に関する。
ＯＸ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（Ｔｎｆｒｓｆ４）とＣＤ１３４とも呼ばれ、主にＴ細胞などの免疫細胞により発現される１型膜貫通型糖タンパク質である。ＯＸ４０は、抗アポトーシスタンパク質と細胞周期進行タンパク質の発現を誘導することができ、それによってそれは、活性化誘導細胞死（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ）を阻害し、抗原特異性記憶Ｔ細胞の生存を促進することができる。ＯＸ４０共刺激シグナルはさらに、ＮＦ－ｋＢ経路を活性化して、エフェクターＴ細胞を直接刺激することができる。なお、ＯＸ４０は、頭頸部扁平上皮癌、卵巣癌、胃癌、皮膚扁平上皮癌、乳癌及び結腸直腸癌を含む様々な異なる癌の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で発見された。この前の研究によると、活性化ＯＸ４０及び／又はそのリガンド（ＯＸ４０Ｌ）が抗腫瘍作用を誘導できることが明かになった。そのため、癌を治療するためのＯＸ４０－標的分子及び方法の開発は当分野において必要とされている。
本発明は、高親和性でＯＸ４０に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体及び抗体誘導体を提供し、単一特異性抗ＯＸ４０抗体と、ＯＸ４０及び一つ又は複数の別の標的に結合する多重特異性抗体とを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体を含む。本発明は、本明細書に開示される抗体及び抗体誘導体を調製し使用する方法、及び該抗体と抗体誘導体とを含む医薬組成物をさらに提供し、例えば、癌のような疾患と障害の治療に用いられる。本発明は、ＯＸ４０に結合する新規単一ドメイン抗体の発見に部分的に基づき、それは、腫瘍細胞を標的とし、及び／又は腫瘍細胞に対する免疫応答を増加することによって、改善された抗腫瘍効果を提供することができる。
本発明は、ＯＸ４０に結合する抗体を提供し、前記抗体は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、１ｘ１０－７Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、５ｘ１０－８Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、１ｘ１０－８Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約５ｘ１０－８ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体又はＶＨＨは、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、重鎖可変領域を含む参照抗ＯＸ４０単一ドメイン抗体と交差競合し、前記重鎖可変領域は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｂ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｃ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｄ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｅ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、ｏ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、又は、ｐ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １、６、１１、１６、２１、２６、３１、３６、４１、４６、５１、５６、６１、６６、７１又は７６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、７、１２、１７、２２、２７、３２、３７、４２、４７、５２、５７、６２、６７、７２又は７７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、８、１３、１８、２３、２８、３３、３８、４３、４８、５３、５８、６３、６８、７３又は７８のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域は、ＣＤＲ１ドメインと、ＣＤＲ２ドメインと、ＣＤＲ３ドメインとを含み、ここで、前記ＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ、参照重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインを含み、該参照重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト化フレームワークを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体との共有結合（ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）を強化する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ又はそれらの組み合わせとの共有結合を強化する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、リンカーを介してＦｃ領域に連結される。いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約４から約３０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９７～１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９５ に示すアミノ酸配列を含むヒト ＯＸ４０ ポリペプチドのドメイン ２に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、二価、三価、四価、五価、六価、七価又は八価のものである。いくつかの実施形態において、抗体は、二価のものである。いくつかの実施形態において、抗体は、四価のものである。いくつかの実施形態において、抗体は、六価のものである。
いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、Ｆｃ領域とを含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＶＨＨドメインとＣＬドメインとを含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８１、８３、８５及び８７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２、８４、８６及び８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８５に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、全長免疫グロブリン、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、ＶＨＨ、ＶＨＨ－Ｆｃ融合体、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ又はそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）に含まれ、ここで、該多重特異性抗体は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態において、腫瘍関連抗原は、Ｈｅｒ－２、ＥＧＦＲ、ＰＤＬ１、ｃ－Ｍｅｔ、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）、上皮糖タンパク質（ＥＧＰ２）、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンプロテインキナーゼｅｒｂ－Ｂ２、３、４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－ａ、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＡ（ＣＡ１．９．９）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｂ７Ｈ３、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ＮＧ２Ｄリガンド、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、Ｗｉｌｍｓ腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、１型チロシンプロテインキナーゼ膜貫通型受容体（ＲＯＲ１）、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、ＧＰＣ３及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、免疫チェックポイント調節剤である。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント調節剤は、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、免疫共刺激分子又はＴ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットである。いくつかの実施形態において、免疫共刺激分子は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１ＢＢ及びＣＤ４０及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットは、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
本発明は、治療剤又は標識（ｌａｂｅｌ）に連結される、本明細書に開示される任意の抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態において、治療剤は、細胞毒素又は放射性同位体である。いくつかの実施形態において、標識は、放射性同位体、蛍光色素及び酵素から選択される。
本発明は、本明細書に開示される任意の抗体を含む細胞外抗原結合ドメインを含む抗原認識受容体を提供する。いくつかの実施形態において、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は組換えＴ細胞受容体である。いくつかの実施形態において、抗原認識受容体は、ＣＡＲである。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインに含まれる抗体は、ＶＨＨを含む。
本発明は、本明細書に開示される抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞をさらに提供する。いくつかの実施形態において、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞及び骨髄細胞から選択される。いくつかの実施形態において、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。
本発明は、ａ） 本明細書に開示される任意の抗体、本明細書に開示される任意の免疫コンジュゲート又は本明細書に開示される任意の免疫応答性細胞と、ｂ） 薬学的に許容されるキャリア剤とを含む医薬組成物を提供する。
本発明は、本明細書に開示される任意の抗体をコードする一つ又は複数の核酸、本明細書に開示される任意の核酸を含む一つ又は複数のベクター、及び本明細書に開示される任意の核酸又はベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
本発明は、本明細書に開示される任意の抗体を調製するための方法をさらに提供し、該方法は、本明細書に開示される宿主細胞において該抗体を発現することと、宿主細胞から該抗体を単離することとを含む。
本発明は、被験体の腫瘍負荷を軽減する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、被験体に、有効量の本明細書に開示される抗体、本明細書に開示される免疫コンジュゲート、又は本明細書に開示される医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、該方法は、腫瘍細胞の数を減らす。いくつかの実施形態において、該方法は、腫瘍サイズを小さくする。いくつかの実施形態において、該方法は、被験体の腫瘍を根絶する。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される。
本発明は、癌を治療及び／又は予防するか、又は癌に罹患している被験体の生存期間を延長するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、前記方法は、被験体に、有効量の本明細書に開示される抗体、本明細書に開示される免疫コンジュゲート、又は本明細書に開示される医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される。
本発明は、本明細書に開示される、薬物として用いられる任意の抗体及び／又は医薬組成物をさらに提供する。本発明は、本明細書に開示される、癌を治療するための任意の抗体及び／又は医薬組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す。いくつかの実施形態において、前記癌は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される。
本発明は、本明細書に開示される抗体、本明細書に開示される免疫コンジュゲート、本明細書に開示される医薬組成物、本明細書に開示される核酸、本明細書に開示されるベクター又は本明細書に開示される免疫応答性細胞を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、新生物（ｎｅｏｐｌａｓｍ）を治療及び／又は予防するためのマニュアルをさらに含む。
例示的な抗ＯＸ４０二価抗体の概略図を示した。 ＥＬＩＳＡによって評価されたｃ５Ｅ１０抗体と組換えヒト又はマウスＯＸ４０ ＥＣＤとの結合を示した。 四つのヒト－マウスキメラＯＸ４０ ＥＣＤのエンジニアリング方案を描画し、それぞれ一つのヒトＯＸ４０ ＥＣＤを含み、ここで、四つのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）のうちの一つは、該当するマウスＯＸ４０ ＣＲＤで置換されている。 ＥＬＩＳＡによって評価された異なる抗ＯＸ４０抗体とヒトＯＸ４０ ＥＣＤ又はヒト－マウスキメラＯＸ４０ ＥＣＤとの結合を示した。 フローサイトメトリーによって評価されたヒト化抗ＯＸ４０抗体とヒト又はカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図２Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｂ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｃ）を指定された抗ＯＸ４０二価抗体と共にインキュベートし、そしてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体で染色した。フローサイトメトリーによって蛍光強度を測定した。 フローサイトメトリーによって評価されたヒト化抗ＯＸ４０抗体とヒト又はカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図２Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｂ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｃ）を指定された抗ＯＸ４０二価抗体と共にインキュベートし、そしてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体で染色した。フローサイトメトリーによって蛍光強度を測定した。 フローサイトメトリーによって評価されたヒト化抗ＯＸ４０抗体とヒト又はカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図２Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｂ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図２Ｃ）を指定された抗ＯＸ４０二価抗体と共にインキュベートし、そしてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体で染色した。フローサイトメトリーによって蛍光強度を測定した。 例示的な抗ＯＸ４０四価抗体の概略図を示した。 Ｏｃｔｅｔによって測定された１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体と組換えヒトＯＸ４０－Ｆｃとの結合親和性を示した。 フローサイトメトリーによって評価された抗ＯＸ４０抗体とヒト及びカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図４Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｂ）、親ＯＸ４０陰性ＣＨＯ細胞（図４Ｃ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｄ）を１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体と共にインキュベートし、フローサイトメトリーによってこれらの抗体と細胞との結合を分析した。 フローサイトメトリーによって評価された抗ＯＸ４０抗体とヒト及びカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図４Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｂ）、親ＯＸ４０陰性ＣＨＯ細胞（図４Ｃ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｄ）を１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体と共にインキュベートし、フローサイトメトリーによってこれらの抗体と細胞との結合を分析した。 フローサイトメトリーによって評価された抗ＯＸ４０抗体とヒト及びカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図４Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｂ）、親ＯＸ４０陰性ＣＨＯ細胞（図４Ｃ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｄ）を１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体と共にインキュベートし、フローサイトメトリーによってこれらの抗体と細胞との結合を分析した。 フローサイトメトリーによって評価された抗ＯＸ４０抗体とヒト及びカニクイザルＯＸ４０との全細胞結合を示した。ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（図４Ａ）、ヒトＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｂ）、親ＯＸ４０陰性ＣＨＯ細胞（図４Ｃ）及びカニクイザルＯＸ４０を発現するＣＨＯ細胞（図４Ｄ）を１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体と共にインキュベートし、フローサイトメトリーによってこれらの抗体と細胞との結合を分析した。 抗ＯＸ４０抗体による、ブドウ球菌エンテロ毒素Ｂ（ＳＥＢ）で刺激されたヒト末梢血リンパ球（ＰＢＭＣ）からのＩＬ－２の放出への影響を示した。図５Ａは、ヒトＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞と共培養する場合、１Ｂ３及び２Ｂ７四価抗体がＳＥＢで刺激されたＰＢＭＣのＩＬ－２分泌を増加したことを示した。 図５Ｂは、細胞培養物にヒトＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞が存在しない場合、１Ｂ３及び２Ｂ７四価抗体がＳＥＢで刺激されたＰＢＭＣのＩＬ－２産生に影響がなかったことを示した。 抗ＯＸ４０抗体が活性化Ｔ細胞からのＩＬ－２及びＩＦＮγの放出を誘導することを示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞があるか（図６Ａと６Ｃ）又はない（図６Ｂと６Ｄ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を３日間刺激した。ＴＲ－ＦＲＥＴによって細胞培養上澄み液におけるＩＬ－２（図６Ａと６Ｂ）とＩＦＮγ（図６Ｃと６Ｄ）を評価した。 抗ＯＸ４０抗体が活性化Ｔ細胞からのＩＬ－２及びＩＦＮγの放出を誘導することを示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞があるか（図６Ａと６Ｃ）又はない（図６Ｂと６Ｄ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を３日間刺激した。ＴＲ－ＦＲＥＴによって細胞培養上澄み液におけるＩＬ－２（図６Ａと６Ｂ）とＩＦＮγ（図６Ｃと６Ｄ）を評価した。 抗ＯＸ４０抗体が活性化Ｔ細胞からのＩＬ－２及びＩＦＮγの放出を誘導することを示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞があるか（図６Ａと６Ｃ）又はない（図６Ｂと６Ｄ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を３日間刺激した。ＴＲ－ＦＲＥＴによって細胞培養上澄み液におけるＩＬ－２（図６Ａと６Ｂ）とＩＦＮγ（図６Ｃと６Ｄ）を評価した。 抗ＯＸ４０抗体が活性化Ｔ細胞からのＩＬ－２及びＩＦＮγの放出を誘導することを示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞があるか（図６Ａと６Ｃ）又はない（図６Ｂと６Ｄ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を３日間刺激した。ＴＲ－ＦＲＥＴによって細胞培養上澄み液におけるＩＬ－２（図６Ａと６Ｂ）とＩＦＮγ（図６Ｃと６Ｄ）を評価した。 抗ＯＸ４０抗体によるＴ細胞増殖の促進を示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞が存在するか（図７Ａ）又は存在しない（図７Ｂ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を５日間刺激した。３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール（ＭＴＳ）を加えることで、Ｔ細胞増殖を測定し、発色後にＯＤ４９０を測定した。なお、ヒトＴ細胞を２．５μＭカルボキシフルオレセインイソサクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、そしてマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞を使用し、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つで５日間刺激した。フローサイトメトリーによってＴ細胞増殖（図７Ｃ）をモニタリングし、Ｔ細胞増殖と抗ＯＸ４０抗体の濃度との関係を製図した（図７Ｄ）。 抗ＯＸ４０抗体によるＴ細胞増殖の促進を示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞が存在するか（図７Ａ）又は存在しない（図７Ｂ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を５日間刺激した。３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール（ＭＴＳ）を加えることで、Ｔ細胞増殖を測定し、発色後にＯＤ４９０を測定した。なお、ヒトＴ細胞を２．５μＭカルボキシフルオレセインイソサクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、そしてマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞を使用し、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つで５日間刺激した。フローサイトメトリーによってＴ細胞増殖（図７Ｃ）をモニタリングし、Ｔ細胞増殖と抗ＯＸ４０抗体の濃度との関係を製図した（図７Ｄ）。 抗ＯＸ４０抗体によるＴ細胞増殖の促進を示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞が存在するか（図７Ａ）又は存在しない（図７Ｂ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を５日間刺激した。３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール（ＭＴＳ）を加えることで、Ｔ細胞増殖を測定し、発色後にＯＤ４９０を測定した。なお、ヒトＴ細胞を２．５μＭカルボキシフルオレセインイソサクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、そしてマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞を使用し、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つで５日間刺激した。フローサイトメトリーによってＴ細胞増殖（図７Ｃ）をモニタリングし、Ｔ細胞増殖と抗ＯＸ４０抗体の濃度との関係を製図した（図７Ｄ）。 抗ＯＸ４０抗体によるＴ細胞増殖の促進を示した。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞が存在するか（図７Ａ）又は存在しない（図７Ｂ）場合に、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つでヒトＴ細胞を５日間刺激した。３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール（ＭＴＳ）を加えることで、Ｔ細胞増殖を測定し、発色後にＯＤ４９０を測定した。なお、ヒトＴ細胞を２．５μＭカルボキシフルオレセインイソサクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で標識し、そしてマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞を使用し、抗ＣＤ３ビーズと２Ｂ７四価抗体又はこれら二つの参照抗体の一つで５日間刺激した。フローサイトメトリーによってＴ細胞増殖（図７Ｃ）をモニタリングし、Ｔ細胞増殖と抗ＯＸ４０抗体の濃度との関係を製図した（図７Ｄ）。 抗ＯＸ４０抗体の、ヒトＯＸ４０ノックインＣ５７ＢＬ／６マウスのＭＣ３８結腸腫瘍モデルにおけるインビボ有効性を示した。各マウスに０．５ｘ１０６ ＭＣ３８腫瘍細胞を皮下接種した。腫瘍サイズが約６０ｍｍ３に達した時、マウスは、指定された用量の抗ＯＸ４０抗体を週に二回、３週間にわたり受けた。図８Ａは、２Ｂ７四価抗体による腫瘍増殖の用量依存的な阻害を示した。Ｙ軸は、各群８匹のマウスの平均腫瘍サイズを表し、Ｘ軸は、治療後日数を表す。 図８Ｂは、治療期間中の各群マウスの平均体重を示した。 図８Ｃは、抗ＯＸ４０抗体で治療されたマウスにおける腫瘍増殖曲線を示した。マウスを３ｍｇ／ｋｇの２Ｂ７四価抗体又は参照抗体で週に二回、３週間にわたり治療した。２Ｂ７は、参照抗体に比べてより効果的であった。 図８Ｄは、図８Ｃの各治療群における経時的に変化した個体腫瘍体積を示した。 抗ＯＸ４０抗体の、ヒトＯＸ４０ノックインＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６結腸癌モデルにおけるインビボ有効性を示した。マウスに０．５ｘ１０６ ＣＴ２６腫瘍細胞を皮下注射した。腫瘍サイズが約６５ｍｍ３に達した時、マウスを、指定された用量の２Ｂ７四価抗体又は参照抗体２で週に二回、３週間にわたり腹腔内治療した。図９Ａは、抗ＯＸ４０抗体で治療されたマウスの腫瘍増殖曲線を示した。 図９Ｂは、図９Ａにおける各治療群における各マウスの腫瘍増殖曲線を示した。 図９Ｃは、各治療群における平均体重を示した。 抗ＯＸ４０抗体の、ヒトＯＸ４０ノックインＣ５７ＢＬ／６マウスのＰａｎ０２膵臓腫瘍モデルにおけるインビボ有効性を示した。マウスに３ｘ１０６Ｐａｎ０２腫瘍細胞を皮下注射した。平均腫瘍サイズが９２．６ｍｍ３に達した時、マウスをランダムにグループ分けし、各群１０匹とし、指示された治療を受けた。図１０Ａは、２Ｂ７と参照２抗体との比較を示した。 図１０Ｂは、２Ｂ７による単一治療と各抗ＰＤ１抗体（ＲＭＰ１－１４）による併用療法との比較を示した。 図１０Ｃは、各治療群におけるマウスの平均体重を示した。 図１０Ｄは、各治療群における経時的に変化した個体腫瘍体積を示した。
本発明は、高親和性でＯＸ４０に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体及び抗体誘導体を提供し、単一特異性抗ＯＸ４０抗体と、ＯＸ４０及び一つ又は複数の別の標的に結合する多重特異性抗体とを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体を含む。本発明は、本明細書に開示される抗体及び抗体誘導体並びにこれらの抗体及び抗体誘導体を含む医薬組成物を調製し使用する方法をさらに提供し、例えば、癌のような疾患と障害の治療に用いられる。本発明は、ＯＸ４０に結合する新規単一ドメイン抗体の発見に部分的に基づくものであり、それは、腫瘍細胞を標的とし、及び／又は腫瘍細胞に対する免疫応答を増加することによって、改善された抗腫瘍効果を提供することができる。
制限性のあるものではなく、明確にするために、現在では開示されるテーマの具体的な実施形態は、以下のように分けられる。
１． 定義、
２． 抗体及び抗体誘導体、
３． 使用方法、
４． 薬物製剤、及び
５． 製品。
１．定義
本明細書に記載の「抗体」という用語は、全長抗体及びその任意の抗原結合断片（即ち抗体断片）を含む。「抗体」は、独立した分子又は抗体誘導体の一部であってもよい。例示的な抗体誘導体は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗原認識受容体（例えば、キメラ抗原受容体）、別のタンパク質又は非タンパク質部分を含む抗体コンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート又はポリマーでコーティングされる抗体）及び抗体を含む他の多機能分子を含むが、それらに限らない。
「全長抗体」、「完全抗体」及び「全抗体」は、天然抗体の構造と類似するか又は本明細書により定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。いくつかの実施形態において、全長抗体は、二本の重鎖と二本の軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖と重鎖の可変領域は、抗原結合を担当する。重鎖と軽鎖の可変領域は、それぞれ、「ＶＨ」と「ＶＬ」と呼ばれてもよい。二本の鎖における可変領域は、通常、三つの高度に可変なループを含み、これは、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣ－ＣＤＲ１と、ＬＣ－ＣＤＲ２と、ＬＣ－ＣＤＲ３とを含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１と、ＨＣ－ＣＤＲ２と、ＨＣ－ＣＤＲ３とを含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）と呼ばれる。本明細書に開示される抗体と抗原結合断片のＣＤＲ境界は、周知の慣例、例えば、以下に記載のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＭａｃＣａｌｌｕｍ、ＩＭＧＴ及びＡＨｏの慣例によって定義又は同定されてもよい。重鎖又は軽鎖の三つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるフランキングセグメントの間に挿入され（ＦＲ領域は、ＣＤＲよりも保存性が高く）、高可変ループを支持する足場を形成する。重鎖と軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、複数のエフェクター機能を示す。抗体重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、抗体を分類する。抗体の五つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭであり、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμ重鎖が存在することを特徴とする。いくつかの主要な抗体クラスは、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）又はＩｇＡ２（α２重鎖）に分けられる。いくつかの実施形態において、全長抗体は、グリコシル化したものである。いくつかの実施形態において、全長抗体は、そのＦｃ領域に連結されるグリカンを含む。いくつかの実施形態において、全長抗体は、分岐グリカンを含む。
本明細書に使用されるように、抗体の「抗原結合部分」、「抗体断片」及び「抗体部分」という用語は、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の一つ又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行され得ることが示された。抗体断片の例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線形抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖとｓｃＦｖ－Ｆｃ）、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、ＶＨＨ－Ｆｃ、ナノ抗体、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、もしくは抗原に結合する抗体の任意の他の断片又はそれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限らない。「ＶＨＨ」は、ラクダ科動物から単離された単一ドメイン抗体を指す。いくつかの実施形態において、ＶＨＨは、ラクダ科動物重鎖抗体の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨＨのサイズは、約２５ｋＤａを超えない。いくつかの実施形態において、ＶＨＨのサイズは、約２０ｋＤａを超えない。いくつかの実施形態において、ＶＨＨのサイズは、約１５ｋＤａを超えない。
参照抗体と「結合について交差競合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、競合アッセイにおいて、参照抗体は、抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する。Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）において、例示的な競合アッセイが記述されている。
「Ｆｖ」は、最小抗体断片であり、それは、完全な抗原認識部位と、抗原結合部位とを含む。該断片は、密に、非共有結合した一つの重鎖可変領域と一つの軽鎖可変領域の二量体からなる。この二つのドメインの折り畳みから、六つの高可変ループ（重鎖と軽鎖のそれぞれの３つのループ）が放出され、該高可変ループは、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗原に対する抗体の結合特異性を付与する。しかしながら、完全な結合部位よりも低い親和性で行われる場合があっても、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異性を有する三つのＣＤＲのみを含む半分のＦｖ）でさえ、抗原を認識し、結合することができる。
「一本鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略され、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨとＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、該ポリペプチドリンカーは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの概要については、Ｐｌuｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ． １１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ． ２６９－３１５ （１９９４）を参照されたい。
本明細書の目的のために、「受容体ヒトフレームワーク」又は「ヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒト共有フレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒト共有フレームワークに「由来」する受容体ヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、又は、アミノ酸配列変化を含んでもよい。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、又は２個以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬ受容体ヒトフレームワークとＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒト共有フレームワーク配列とは、配列の方面では一致している。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との非共有結合的相互作用の総和の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書に使用されるように、「結合親和性」は、内部結合親和性を指し、それは、結合ペア（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、通常、解離定数（ＫＤ）で表されてもよい。親和性は、当分野の既知の通常の方法（本明細書に記載のものを含む）で測定されてもよい。以下、結合親和性を測定するための特定の説明と例示的な実施形態を記述する。
「親和性が成熟した」抗体は、このような改変を有しない親抗体に比べて、一つ又は複数のＣＤＲ又は高可変領域（ＨＶＲ）において一つ又は複数の改変を有する抗体を指し、この改変は、抗原に対する抗体の改善した親和性を提供する。
「抗ＯＸ４０抗体」と「ＯＸ４０に結合する抗体」という用語は、ＯＸ４０を標的とする診断剤及び／又は治療剤として使用することができるように、十分な親和性でＯＸ４０に結合することができる抗体を指す。一実施形態において、抗ＯＸ４０抗体と、無関係な、非ＯＸ４０タンパク質との結合の程度は、該抗体とＯＸ４０との結合の約１０％よりも小さく、例えば、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０に結合する抗体は、＜約１μＭ、＜約１００ｎＭ、＜約１０ｎＭ、＜約１ｎＭ、＜約０．１ｎＭ、＜約０．０１ｎＭ又は＜約０．００１ｎＭ （例えば、１０－８Ｍ又はより小さく、例えば、１０－８Ｍから１０－１２Ｍ、例えば１０－９Ｍから１０－１０Ｍ）という解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、異なる種からのＯＸ４０に保存されたＯＸ４０エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、タンパク質のＥＣＤにおけるＯＸ４０上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、タンパク質のドメイン２（ＣＲＤ２）におけるＯＸ４０上のエピトープに結合する。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来するが、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるキメラ抗体は、マウス重鎖可変領域と、ヒトＦｃ領域とを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるキメラ抗体は、ラクダ科動物重鎖可変領域と、ヒトＦｃ領域とを含む。
本明細書に使用されるように、「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の可変領域内の不連続な抗原結合部位を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５２： ６６０９－６６１６ （１９７７）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ” （１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６： ９０１－９１７ （１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２７３： ９２７－９４８ （１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２： ７３２－７４５ （１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５： ３８３２－３８３９ （２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ． Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７： ５５－７７ （２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌuｃｋｔｈｕｎ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，３０９： ６５７－６７０ （２００１）に記述されており、ここで、該定義は、相互比較の時、アミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。しかしながら、いずれか一つの定義を応用して抗体又は移植した抗体又はその変異体を指すＣＤＲは、本明細書で定義されて使用される用語の範囲内であることが意図される。上記各参照文献に定義されているＣＤＲをカバーするアミノ酸残基は、下記表１に入れられて比較に用いられる。ＣＤＲ予測アルゴリズムとインターフェースは、当分野の既知のものであり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５： ３８３２－３８３９ （２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ． ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８： Ｄ３０１－Ｄ３０７ （２０１０）、及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ． ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３： Ｄ４３２－Ｄ４３８ （２０１５）を含む。本節において引用される参照文献の内容は、全体として引用により本明細書に組み込まれ、本願に用いられ、且つ本明細書の一つ又は複数の請求項に含まれる可能性がある。
Figure 2025501522000001
 １残基番号付けは、Ｋａｂａｔらの命名法（同上）に従う。
２残基番号付けは、Ｃｈｏｔｈｉａらの命名法（同上）に従う。
３残基番号付けは、ＭａｃＣａｌｌｕｍらの命名法（同上）に従う。
４残基番号付けは、Ｌｅｆｒａｎｃらの命名法（同上）に従う。
５残基番号付けは、ＨｏｎｅｇｇｅｒとＰｌuｃｋｔｈｕｎの命名法（同上）に従う。
表現「例えば、Ｋａｂａｔにおける可変領域残基番号付け」又は「例えば、Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」及びその変異体は、上記Ｋａｂａｔらの抗体アセンブラの重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変領域のＦＲ又はＣＤＲの短縮又は挿入に対応するより少なく又は別のアミノ酸を含んでもよい。例えば、重鎖可変領域は、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含んでもよい。所与の抗体の残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同性領域における整列によって確定することができる。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体のＣＤＲをカバーするアミノ酸残基は、上記ＬｅｆｒａｎｃらのＩＭＧＴ命名法に基づいて定義される。いくつかの実施形態において、全長抗体のＣＤＲをカバーするアミノ酸残基は、上記ＫａｂａｔらのＫａｂａｔ命名法に基づいて定義される。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン重鎖、例えば、Ｆｃ領域における残基番号付けは、上記Ｋａｂａｔらに記載のＥＵインデックスの番号付けである。「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けである。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、本明細書で定義されるＣＤＲ残基以外のそれらの可変ドメイン残基を指す。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＣＤＲ／ＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的に二つの可変ドメインを含み、ここで、ＨＶＲ／ＣＤＲの全て又は基本的に全ては、非ヒト抗体のものに対応し、且つＦＲの全て又は基本的に全ては、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体（例えば、非ヒト抗体）の「ヒト化形式」は、ヒト化した抗体を指す。
「ヒト抗体」は、アミノ酸配列を有する抗体であり、該アミノ酸配列は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応し、及び／又は、本明細書に開示されるヒト抗体の調製のための任意の技術によって調製された。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に排除する。当分野の既知の種々の技術（ファージディスプレイライブラリーを含む）を用いてヒト抗体を産生してもよい。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１ （１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１ （１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製にも使用可能であるものは、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ，ｐ． ７７ （１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５ （１９９１）に記述されている方法である。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋとｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５： ３６８－７４ （２００１）を参照されたい。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答する時にそのような抗体を生成するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効になったトランスジェニック動物、例えば、免疫した異種移植マウス（ｘｅｎｏｍｉｃｅ）に抗原を投与することによって調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術に関わる米国特許第６，０７５，１８１号と第６，１５０，５８４号を参照されたい）。さらに、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されるヒト抗体に関わるＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２ （２００６）を参照されたい。
「本明細書によって同定されるポリペプチドと抗体配列に関わるアミノ酸配列同一性パーセント（％）」又は「相同性」は、配列の整列（配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮する）の後、候補配列における、比較されるポリペプチドにおけるアミノ酸残基と同じであるアミノ酸残基のパーセントと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを確定するという目的のために、当分野の技術における種々の方法で整列を実現させることができ、例えば、公衆に取得可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアを用いる。当業者は、比較される配列の全長範囲内に最大整列を実現させる任意のアルゴリズムを含み、測定整列に用いられる適当なパラメータを確定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを用いて、アミノ酸配列同一性％の値を生成する（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４）。
「相同」は、二つのポリペプチド間又は二つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。二つの比較配列の一つの位置が同じ塩基又はアミノ酸モノマーサブユニットによって占有される時、例えば、二つのＤＮＡ分子のそれぞれの一つの位置がアデニンによって占有される時、この分子は、この位置で相同である。二つの配列間の相同性パーセントは、二つの配列が共有するマッチするか又は相同な位置の数を比較される位置の数で割って１００を掛けた関数である。例えば、二つの配列における１０個の位置のうちの６個は、マッチするか又は相同なものであれば、二つの配列は、６０％相同である。例えば、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を有する。通常、二つの配列が最大相同性を与えるように整列される時に、比較が行われる。
任意の哺乳動物種の抗体（例えば、免疫グロブリン）の「軽鎖」は、いずれも、その定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、二つの明らかに異なるタイプのうちの一つとして指定することができ、それぞれｋａｐｐａ（「κ」）とｌａｍｂｄａ（「λ」）と呼ばれる。
「定常ドメイン」という用語は、免疫グロブリン分子の一部を指し、それは、免疫グロブリンの別の部分、即ち可変ドメインに対して、保存性がより高いアミノ酸配列を有し、該アミノ酸配列は抗原結合部位を含む。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（ＣＨと総称される）と、軽鎖のＣＬドメインとを含む。
いくつかの実施形態において、「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５（ＥＵ番号付けシステム）まで延びる。
いくつかの実施形態において、「ヒンジ領域」は、通常、ＩｇＧにおける、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０に対応する領域と定義される（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６ （１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間のＳ－Ｓ結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによってＩｇＧ１配列と整列させることができる。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）の「ＣＨ２ドメイン」は、通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０まで延びる。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密にペアリングしていないため、ユニークである。代わりに、二つのＮ連結した分岐炭水化物鎖が、完全な天然ＩｇＧ分子の二つのＣＨ２ドメインの間に挿入される。推測によれば、炭水化物は、ドメイン－ドメインペアリングした代替物を提供し、ＣＨ２ドメインの安定化に寄与することができる。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５）。
いくつかの実施形態において、「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、ＣＨ２ドメインとＦｃ領域のＣ末端との間の残基（即ち、約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端まで）を含み、通常、ＩｇＧのアミノ酸残基４４６又は４４７にある。
本明細書における「Ｆｃ領域」又は「断片結晶可能領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するためのものであり、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域、又はその二量体を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６ からそのカルボキシル基末端まで延びる。いくつかの実施形態において、ヒト ＩｇＧ Ｆｃ領域は、Ｐｒｏ２３１からそのカルボキシル基末端まで延びる。いくつかの実施形態において、ヒト ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＣＨ２ ドメインと、ＣＨ３ ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域のＣ－末端リジン（欧州連合番号付けシステムによると、残基４４７である）は、例えば、抗体の生産又は精製中、又は抗体の重鎖をコードする核酸に対して組換えてエンジニアリングを行うことによって除去され得る。いくつかの実施形態において、完全抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基を除去した抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、又はＫ４４７残基を付帯するか又は付帯しない抗体混合物の抗体集団を含んでもよい。本明細書に記載の抗体に適用される天然配列Ｆｃ領域は、ヒト ＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３及び ＩｇＧ４の Ｆｃ領域を含む。
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好ましいＦｃＲは、天然ヒトＦｃＲである。なお、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むＦｃＲであり、対立遺伝子変異体及びこれらの受容体のスプライス形式を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）とＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、それらは、類似するアミノ酸配列を有し、主な区別は、その細胞質ドメインにある。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインにおいて、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインにおいて、免疫受容体チロシンに基づく阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｍ． Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５：２０３－２３４ （１９９７）を参照されたい。ＦｃＲの概要は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９： ４５７－９２ （１９９１）、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４： ２５－３４ （１９９４）、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ． １２６： ３３０－４１ （１９９５）に記載されている。本明細書の「ＦｃＲ」という用語は、他のＦｃＲをカバーし、将来同定されるＦｃＲを含む。
本明細書に使用される「エピトープ」という用語は、抗体又は抗体誘導体が結合する抗原上の特定の原子又はアミノ酸基を指す。二つの抗体又は抗原結合部分は、抗原に対して競合的結合を有すれば、それらは、抗原内の同じエピトープに結合できる。
本明細書に使用される「特異的に結合」、「特異的に認識」及び「……に対して特異性を有する」という用語は、測定と再現が可能である相互作用を指し、例えば、標的と抗体又は抗体部分との結合であり、これは、ヘテロ分子（生体分子を含む）集団が存在する時の標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープであってもよい）を特異的に認識する抗体又は抗体部分は、該標的に結合する抗体又は抗体部分であり、その親和性、アビディティ、レディー及び／又は持続時間は、他の標的との結合よりも長い。いくつかの実施形態において、抗体と関係のない標的との結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される抗体と標的との結合の程度よりも約１０％小さい。いくつかの実施形態において、標的に特異的に結合する抗体の有する解離定数（ＫＤ）≦１０－５Ｍ、≦１０－６Ｍ、≦１０－７Ｍ、≦１０－８Ｍ、≦１０－９Ｍ、≦１０－１０Ｍ、≦１０－１１Ｍ、又は≦１０－１２Ｍである。いくつかの実施形態において、抗体は、異なる種からのタンパク質の中で保存されているタンパク質のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、特異的結合は、排他的結合を含んでもよいが、これに限定しない。抗体又は抗原結合ドメインの結合特異性は、当分野の既知の方法で実験によって確定されてもよい。このような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ検定とペプチド走査を含むが、それらに限らない。
「単離した」抗体（又はコンストラクト）は、その生産環境の成分（例えば、天然又は組換え）から同定、単離及び／又は回収された抗体である。いくつかの実施形態において、単離したポリペプチドは、生産環境において全ての他の成分に会合しないか又は基本的に会合しない。
本明細書に記載のコンストラクト、抗体又はその抗原結合断片をコードする「単離した」核酸分子は、その生産環境において、通常、それに関連する少なくとも一つの汚染物核酸分子から同定されて単離された核酸分子である。いくつかの実施形態において、単離した核酸は、生産環境に関連する全ての成分に会合しないか又は基本的に会合しない。本明細書に記載のポリペプチドと抗体をコードする単離した核酸分子の形式は、天然に存在する形式又はバックグラウンドと異なる。そのため、単離した核酸分子は、細胞に天然に存在する、本明細書に記載のポリペプチドと抗体をコードする核酸と異なる。単離した核酸は、該核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、該核酸分子は、染色体外又はその天然染色体位置と異なる染色体位置に存在する。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物において、操作可能に連結されたコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に適用される制御配列は、プロモーター、任意選択的なオペロン配列及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
核酸が別の核酸配列と機能的関係にある場合、核酸は「操作可能に連結されている」。例えば、プレ配列又は分泌リーダー配列のＤＮＡが、ポリペプチド分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、該プレ配列又は分泌リーダー配列のＤＮＡは、該ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結され、プロモーター又はエンハンサーがコード配列の転写に影響を与える場合、該プロモーター又はエンハンサーは、該配列に操作可能に連結され、又はリボソーム結合部位が、翻訳を促進するために位置決めされている場合、該リボソーム結合部位は、コード配列に操作可能に連結される。通常、「操作可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、且つ分泌リーダー配列の場合には連続しており、リーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、必ずしも連続的である必要はない。便利な制限部位で連結を行うことで、連結を実現させる。このような部位が存在しなければ、通常の実践に基づいて、合成したオリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを用いる。
本明細書に使用されるように、「ベクター」という用語は、それに連結される別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。該用語は、自己複製核酸構造とするベクター、及びそれが導入された宿主細胞ゲノムに組み込まれたベクターを含む。いくつかのベクターは、それに操作可能に連結される核酸の発現を指導することができる。このようなベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼ばれる。
本明細書に使用されるように、「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」という用語は、外来核酸を宿主細胞に転移又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」細胞は、外来核酸を用いて、トランスフェクト、形質転換又は形質導入した細胞であり、該細胞は、初代被験体細胞及びその子孫を含む。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換使用可能であり、外来核酸を導入した細胞を指し、このような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」と、「形質転換細胞」とを含み、それは、初代形質転換細胞及びそれから派生した子孫を含むが、継代回数とは無関係である。子孫の核酸含有量は親細胞と完全に同じではない可能性があり、且つ突然変異を含む可能性がある。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択された機能又は生物学的活性と同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異子孫が本明細書に含まれる。
「被験体」、「個体」及び「患者」という用語は、本明細書において、互換使用可能であり、哺乳動物を指し、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類動物又は霊長類動物を含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、被験体はヒトである。
薬剤の「有効量」は、必要な用量と期間内に、必要な治療又は予防効果を効果的に達する量を指す。該特定の用量は、選択された特定の薬剤、その後の投与方案（他の化合物と組み合わせるか否かに関わらず）、投与時間、イメージングした組織、及びそれを付帯する物理的送達システムのうちの一つ又は複数に応じて変わってもよい。
本願の物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療有効量」は、例えば、個体の疾患状態、年齢、性別と体重、及び該物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストが個体において所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変わってもよい。治療有効量はさらに、該物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの任意の毒性又は有害作用のいずれもが治療上の有益な効果によって打ち消される量である。治療有効量は、一回又は複数回の投与で送達することができる。
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するのに必要な用量及び期間での有効量を指す。典型的には、必須ではなく、予防の用量は、疾患の前又は初期に被験体において使用されるため、そのような予防有効量は、治療有効量よりも小さい。
本明細書に使用されるように、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益又は所望の結果（臨床結果を含む）を得るための方法である。本願の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、疾患によって引き起こされる一つ又は複数の症状を軽減すること、疾患の程度を減少させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を予防又は遅延させること）、疾患の伝播（例えば、移転）を予防又は遅延させること、疾患の再現を予防又は遅延させること、疾患の進行を遅延又は緩めること、疾患状態を改善すること、疾患の軽減（一部又は全て）を提供すること、疾患の治療に必要な一つ又は複数の他の薬物の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を増加又は改善すること、体重を増加させること及び／又は生存期間を延長することのうちの一つ又は複数を含むが、それらに限らない。「治療」は、癌の病理的結果（例えば、腫瘍体積）を減少させることをさらにカバーする。本願の方法は、これらの治療の方面のうちのいずれか一つ又は複数を考慮する。「治療」は、治療される疾患が治癒されることを必ずしも意味しない。
理解すべきこととして、本明細書に記載の本願の実施形態は、「実施形態からなる」及び／又は「基本的に実施形態からなる」を含む。
本明細書に使用されるように、「約（ａｂｏｕｔ）」又は「大体（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって確定される特定値が許容される誤差範囲内にあることを意味し、これは、該値がどのように測定又は確定されるかによって部分的に決まり、即ち、測定システムによって制限される。いくつかの実施形態において、「約」は、当分野の実践によれば、３つ又は３つを超える標準差内にあることを意味してもよい。いくつかの実施形態において、「約」は、所定値の多くとも２０％（例えば、多くとも１０％、多くとも５％又は多くとも１％）の範囲を表すことができる。いくつかの実施形態において、特に、生物学的システムと方法に対して、該用語は、ある値のオーダー内、例えば、５倍内又は２倍内にあることを意味してもよい。
本明細書に使用されるように、「調節」という用語は、正の方向又は負の方向に変化させることを指す。例示的な調節は、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％又は約１００％の変化を含む。
本明細書に使用されるように、「増加」という用語は、正の方向に少なくとも約５％変化させることを指す。変化は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、約１００％又はより多くてもよい。
本明細書に使用されるように、「減少」という用語は、負の方向に少なくとも約５％変化させることを指す。変化は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％又はひいては約１００％であってもよい。
本明細に用いられる「約Ｘ～Ｙ」という用語は、「約Ｘから約Ｙ」と同じ意味を有する。
本明細書と添付される請求項に用いられる時、単数形「一つ／種（ａ）」、「又は（ｏｒ）」及び「該（ｔｈｅ）」は、文脈が他の状況を明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。
「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域によるそれらの生物学的活性を指し、これは、抗体のアイソタイプによって変わる。抗体エフェクター機能の例として、Ｃ１ｑ結合と補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞によって媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御及びＢ細胞活性化が挙げられる。
「免疫コンジュゲート」は、一つ又は複数の異種分子（細胞傷害性剤を含むが、それに限らない）にコンジュゲートされた抗体を指す。
「薬物製剤」という用語は、それに含まれる活性成分の生物学的活性形式が有効であることを許容し、且つ製剤が投与される被験体に対して許容されない毒性を有する他の成分を含まないという形式の製剤である。
本明細書に使用されるように、「薬学的に許容されるキャリア剤」は、薬物製剤における活性成分以外の被験体に対して無毒である成分を指す。薬学的に許容されるキャリア剤は、緩衝剤、賦形剤、安定剤又は防腐剤を含むが、それらに限らない。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指し、それは、抗体と抗原との結合に関与する。いくつかの実施形態において、天然抗体の重鎖と軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨとＶＬである）は、通常、類似する構造を有し、各ドメインは、四つの保存的フレームワーク領域（ＦＲ）と三つのＣＤＲを含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ． Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６１ｅｄ．，Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１ （２００７）を参照されたい）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分である。なお、ＶＨ又はＶＬドメインを用いて、抗原に結合する抗体から、特定の抗原に結合する抗体を単離させて、相補型ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０：８８０－８８７ （１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８ （１９９１）を参照されたい。
本明細書に使用されるように、「抗原認識受容体」という用語は、抗原へのその結合に応答して免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することができる受容体を指す。抗原認識受容体の非限定的な例としては、天然及び修飾されたＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）とキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）とが挙げられる。
本明細書に使用されるように、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとを含む分子を指し、該細胞外抗原結合ドメインは、免疫応答性細胞を活性化又は刺激することができる細胞内シグナル伝達ドメインと融合する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、抗体又は抗体断片、例えば、ＶＨＨ又はｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、抗体（例えば、ＶＨＨ又はｓｃＦｖ）は、膜貫通ドメインと融合し、該膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインと融合する。いくつかの実施形態において、抗原に対して高い結合親和性又はアビディティを有するＣＡＲを選択する。
「免疫応答性細胞」は、免疫応答において機能する細胞、又はその祖先もしくは子孫を指す。
「ＯＸ４０」、「ＯＸ４０タンパク質」又は「ＯＸ４０ポリペプチド」は、任意の脊椎動物（哺乳動物、例えば、霊長類動物（例えば、ヒト及びカニクイザル）を含む）に由来する任意のＯＸ４０ポリペプチド、又はその任意の断片を指し、且つ多くとも一個、多くとも二個、多くとも三個、多くとも四個、多くとも五個、多くとも六個、多くとも七個、多くとも八個、多くとも九個又は多くとも十個のアミノ酸置換、付加及び／又は欠失を任意選択的に含んでもよい。該用語は、全長、プロセシングされていないＯＸ４０及び細胞内でのプロセシングによって産生された任意の形式のＯＸ４０を含む。該用語は、天然に存在するＯＸ４０変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ポリペプチドは、以下のＮＣＢＩ参照番号を有する配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は少なくとも約１００％の相同性又は同一性を有するアミノ酸配列を含むか又は有する。ＮＰ＿００３３１８．１、ＸＰ＿０１６８５７７２１．１、ＸＰ＿０１１５４０３７８．１、ＸＰ＿０１６８５７７２０．１、ＸＰ＿０１１５４０３７７．１、ＸＰ＿０１１５４０３７６．１又はＸＰ＿０１１５４０３７９．１ （本明細書の相同性は、標準ソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ又はＦＡＳＴＡを用いて確定され得る）。いくつかの実施形態において、ＯＸ４０ポリペプチドが含むが又は有するアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３の全体又は連続部分である。
「ＯＸ４０のＥＣＤ」という用語は、ＯＸ４０の細胞外ドメインを指す。いくつかの実施形態において、ＥＣＤは、ＯＸ４０のＥＣＤのドメイン２（ＣＲＤ２）である。いくつかの実施形態において、ＥＣＤは、ＯＸ４０のＥＣＤのドメイン４（ＣＲＤ４）である。いくつかの実施形態において、例示的なＯＸ４０ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤＮＯ：９４に示すアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの実施形態において、例示的なＯＸ４０ポリペプチドのＥＣＤのドメイン２（ＣＲＤ２）は、ＳＥＱ ＩＤＮＯ：９５に示すアミノ酸配列を含んでもよい。いくつかの実施形態において、例示的なＯＸ４０ポリペプチドのＥＣＤのドメイン４（ＣＲＤ４）は、ＳＥＱ ＩＤＮＯ：９６に示すアミノ酸配列を含んでもよい。
２．抗体及び抗体誘導体
本発明は、抗体及び抗体誘導体を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体の発見に部分的に基づき、それは、抗腫瘍治療に用いることができ、ここで、該抗体は、ＯＸ４０媒介性シグナル経路を選択的に活性化することによって、免疫細胞を、腫瘍細胞に対して有益な抗腫瘍効果を果たすように誘導する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体は、アゴニスト抗体であり、それは、ＯＸ４０媒介性シグナル経路を強化する。いくつかの実施形態において、該抗 ＯＸ４０ 抗体は、ＯＸ４０ タンパク質を発現する免疫細胞の抗腫瘍免疫応答を強化する。いくつかの実施形態において、該抗 ＯＸ４０ 抗体は、単一ドメイン抗体、例えば、ラクダ科動物抗体又は ＶＨＨ 抗体を含む。いくつかの実施形態において、同じ力価を有するＩｇＧ、Ｆａｂ及び／又はｓｃＦｖ形式の従来の抗体に比べて、抗 ＯＸ４０ 抗体は、サイズがより小さいため、改善した組織浸潤能力を有する。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体（キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体を含む）であってもよく、又はそれを含んでもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体は、ヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、受容体（ａｃｃｅｐｔｏｒ）ヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒト共有フレームワークを含む。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片であってもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、全長抗体、例えば、完全なＩｇＧ１抗体、又は本明細書において定義される他の抗体タイプ又はアイソタイプである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体誘導体は、本願（例えば、本明細書に詳細に記述された第２．１～２．１２節）に記載の任意の特徴が単独に又は組み合わせの形式で組み込まれてもよい。
本発明の抗体及び抗体誘導体は、例えば、新生物（ｎｅｏｐｌａｓｍ）又は癌の診断又は治療に用いることができる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体を用いることでその増殖を阻害することができる新生物と癌は、通常、免疫療法に応答する新生物と癌を含む。いくつかの実施形態において、前記新生物と癌は、乳癌（例えば、乳腺細胞癌）、卵巣癌（例えば、卵巣細胞癌）及び腎臓細胞癌（ＲＣＣ）を含む。本発明の方法で治療できる他の癌の例として、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、前立腺癌、結腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、脳腫瘍、慢性又は急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む） 、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫、リンパ球性リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫） 、鼻咽癌、頭又は頸癌、皮膚癌又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、直腸癌、肛門領域癌、胃腫瘍、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外膣癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、乳癌（ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ ｇｌａｎｄ） 、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、乳癌骨盤癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ ｐｅｌｖｉｓ） 、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、腫瘍血管生成、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮様癌、扁平上皮癌、石綿によって誘導される癌（例えば、中皮腫）を含む環境によって誘導される癌、及び前記癌の組み合わせが挙げられる。
２．１例示的な単一特異性抗体及び多重特異性抗体
２．１．１例示的な抗ＯＸ４０抗体
本発明は、ＯＸ４０タンパク質に結合する、単離された抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０のＥＣＤに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０のＥＣＤのドメイン２（ＣＲＤ２）及び／又はドメイン４（ＣＲＤ４）に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０のＥＣＤのドメイン２（ＣＲＤ２）結合に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０のＥＣＤのドメイン４（ＣＲＤ４）に結合する。いくつかの実施形態において、ＥＣＤは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥＣＤのドメイン２（ＣＲＤ２）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＥＣＤのドメイン４（ＣＲＤ４）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、本明細書に記載の抗ＯＸ４０抗体（例えば１Ｂ３又は２Ｂ７）と同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０媒介性シグナル経路のアゴニストとしてもよい。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０タンパク質依存性シグナル経路を強化することができる。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、シグナル経路の活性を少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９９％又は約９９．９％増加させることができる。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体を用いた治療は、被験体において、抗腫瘍効果を示し、それにより腫瘍増殖を減少させ、及び／又は、被験体の生存期間を延長する。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、免疫細胞（例えば、ＯＸ４０を発現するＴ細胞及び／又はＮＫ細胞）の、腫瘍細胞に対する免疫応答及び／又は抗腫瘍作用を増加させる。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）を含む抗ＯＸ４０抗体は、同じ力価の全長抗体に比べて、小さい分子サイズを有し、その理由は、全長抗体のＦａｂドメインに比べて、単一ドメイン抗体のサイズが小さいことであり、それは、同じ力価の全長抗体に比べて、例えば、腫瘍部位でより優れた組織浸潤を引き起こすことができる。いくつかの実施形態において、同じ力価の全長抗ＯＸ４０抗体を用いた治療に比べて、抗ＯＸ４０抗体を用いた治療は、優れた抗腫瘍効果を示す。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＯＸ４０に結合する単一ドメイン抗体を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、Ｆｃ領域に連結される。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、Ｆｃ領域に連結されない。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－７Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－８Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約５ｘ１０－９Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－９Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１１Ｍから約１ｘ１０－７ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－７ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－８ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１１Ｍから約１ｘ１０－９ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約２ｘ１０－１０Ｍから約５ｘ１０－９ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－９Ｍから約５ｘ１０－８ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－９ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、二価、三価、四価、五価、六価、七価又は八価のものである。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、二価のものである。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、四価のものである。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、六価のものである。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＶＨＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、Ｆｃ領域とを含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＶＨＨドメインとＣＬドメインとを含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照単一ドメイン抗体と交差競合し、該参照単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １、６、１１、１６、２１、２６、３１、３６、４１、４６、５１、５６、６１、６６、７１又は７６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、７、１２、１７、２２、２７、３２、３７、４２、４７、５２、５７、６２、６７、７２又は７７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、８、１３、１８、２３、２８、３３、３８、４３、４８、５３、５８、６３、６８、７３又は７８のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態において、前記単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、ＣＤＲ１ドメインと、ＣＤＲ２ドメインと、ＣＤＲ３ドメインとを含み、ここで、前記ＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ、参照重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインを含み、該参照重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０及び８１～９２選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０及び８１～９２選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、８３、８５及び８７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、８４、８６及び８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８５に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域に含まれるいずれか一つのアミノ酸配列は、多くとも約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約７個、約８個、約９個又は約１０個のアミノ酸置換、欠失及び／又は付加を含んでもよい。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換は、保存的置換である。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト化フレームワークを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化フレームワークは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４又は７９に示す重鎖可変領域配列のフレームワーク配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、Ｆｃ領域を含まない。いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、Ｆｃ領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、第２．７．３節に記述された一つ又は複数のアミノ酸修飾、置換又は突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、リンカーを介してＦｃ領域に連結される。いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約４から約３０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約４から約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９７～１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、全長免疫グロブリン、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、ＶＨＨ、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ＶＨＨ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ又はそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、抗体誘導体としての大きな分子に含まれる。いくつかの実施形態において、抗体誘導体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体であり、ここで、多重特異性抗体は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、腫瘍関連抗原である。いくつかの実施形態において、腫瘍関連抗原は、Ｈｅｒ－２、ＥＧＦＲ、ＰＤ－Ｌ１、ＭＳＬＮ、ｃ－Ｍｅｔ、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４７、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）、上皮糖タンパク質（ＥＧＰ２）、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンプロテインキナーゼｅｒｂ－Ｂ２、３、４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－ａ、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＡ（ＣＡ１．９．９）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ＮＧ２Ｄリガンド、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、Ｗｉｌｍｓ腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、１型チロシンプロテインキナーゼ膜貫通型受容体（ＲＯＲ１）、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、ＧＰＣ３及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、免疫チェックポイント調節剤である。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント調節剤は、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、抗体誘導体又は多重特異性抗体と第２の抗原との結合は、免疫チェックポイント調節剤を阻害する。いくつかの実施形態において、第２の抗原は、免疫共刺激分子又はＴ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットである。いくつかの実施形態において、免疫共刺激分子は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、ＯＸ４０及びＣＤ４０及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、抗体誘導体又は多重特異性抗体と第２の抗原との結合は、免疫共刺激分子を活性化する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットは、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体誘導体又は多重特異性抗体と第２の抗原との結合は、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３複合体を活性化する。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、リンカーを介して第２の抗原結合部分に連結される。いくつかの実施形態において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約４から約３０個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、約４から約１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９７～１４０から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＯＸ４０抗体は、治療剤又は標識にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、標識は、放射性同位体、蛍光色素及び酵素から選択される。
２．２抗体の親和性
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体は、その標的抗原に対して高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－７Ｍ又はより小さいＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－８Ｍ又はより小さいＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５ｘ１０－９Ｍ又はより小さいＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－９Ｍ又はより小さいＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１０Ｍ又はより小さいＫＤで標的に結合する。
いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１１Ｍから約１ｘ１０－７ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－７ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－８ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１１Ｍから約１ｘ１０－９ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約２ｘ１０－１０Ｍから約５ｘ１０－９ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－９Ｍから約５ｘ１０－８ＭのＫＤで標的に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約１ｘ１０－９ＭのＫＤで標的に結合する。
抗体又は抗体誘導体のＫＤは、当分野の既知の方法で測定されてもよい。このような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、Ｏｃｔｅｔ－ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）検定とペプチド走査を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いてＫＤを測定してもよい。例えば、固定化抗原ＣＭＳチップを用いて約１０個の応答単位（ＲＵ） で、２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ社、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して測定を行うが、それに限らない。いくつかの実施形態において、サプライヤーのマニュアルに応じて、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）とＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いてカルボキシメチル化デキスバイオセンサチップ（ＣＭＳ、Ｂｉａｃｏｒｅ社）を活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈し、そして５μｌ／分間の流速で注射して、約１０個の応答単位（ＲＵ）のカップリングタンパク質を実現する。抗原を注入した後、１Ｍエタノールアミンを注入して、未反応基をブロッキングする。動力学的測定を行うために、Ｆａｂの二倍の連続希釈液（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で約２５μｌ／ｍｉｎの流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳに注入する。単純な一対一のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合と解離センサグラムを同時にフィッティングすることで会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率として計算してもよい。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２９３：８６５－８８１ （１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイにより測定される結合率が１０６Ｍ－ｌ ｓ－１を超えると、会合速度は、蛍光消光技術で確定されてもよく、該技術は、増加した抗原濃度の存在下で、２５℃で２０ｎＭ抗－抗原抗体（Ｆａｂ形式） の、ＰＢＳ、ｐＨ ７．２における蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は減少を測定し、前記抗原濃度は、分光器、例えば、パスカット構成の分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌吸収プールを有する８０００シーリズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）により測定される。
２．３抗体断片
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、抗原結合断片又は抗体断片を含む。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨＨ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片及び本明細書に記述された他の断片を含むが、それらに限らない。いくつかの抗体断片の概要については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９： １２９－１３４ （２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概要については、例えばＰｌｕｃｋｔｈｔｉｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ． １１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ． ２６９－３１５ （１９９４）を参照されたく、ＷＯ ９３／１６１８５、及び米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号を参照してもよい。救済受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂとＦ（ａｂ）２断片に関する検討については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ダイアボディであってもよい。ダイアボディは、二つの抗原結合位点を有する抗体断片であり、それは、二価又は二重特異性のものであってもよい。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９：１２９－１３４ （２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０： ６４４４－６４４８ （１９９３）を参照されたい。トリアボディとテトラボディもＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９： １２９－１３４ （２００３）に記述されている。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体を含んでもよい。単一ドメイン抗体は、抗体の全て又は一部の重鎖可変領域又は全て又は一部の軽鎖可変領域を含む抗体断片である。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１を参照されたい）である。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ＶＨＨである。いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト化したものである。
抗体断片は、様々な技術によって調製されてもよく、これらの技術は、本明細書に記載のように、完全抗体のタンパク質分解消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による産生を含むが、それらに限らない。
２．４ キメラとヒト化抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、キメラ抗体である。いくつかのキメラ抗体は、例えば米国第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５ （１９８４）に記述されている。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウスに由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、「クラス転換」抗体であり、ここで、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから改変した。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ヒト化抗体であってもよい。通常、非ヒト抗体に対してヒト化を行い、ヒトに対する免疫原性を減少させると共に、親非ヒト抗体の特異性と親和性を残す。一般的には、ヒト化抗体は、一つ又は複数の可変ドメインを含み、ここで、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）は、非ヒト抗体に由来し、一つ又は複数のフレームワーク（ＦＲ）（又はその任意の部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基に由来する抗体）からの該当する残基によって置換され、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善する。
ヒト化抗体及びその調製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９－１６３３ （２００８）に記述されており、そしてさらに例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９ （１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３ （１９８９）、米国特許第 ５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４ （２００５） （ＳＤＲ （ａ－ＣＤＲ）移植が記述されている）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２８：４８９－４９８ （１９９１） （「リサーフェシング」が記述されている）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０ （２００５） （「ＦＲシャッフリング」が記述されている）、及びＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８ （２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０ （２０００）（ＦＲシャッフリングの「ガイド選択」方法が記述されている）に記述されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域は、「最適フィッティング」方法で選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２２９６ （１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブクラスのヒト抗体の共有配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，８９：４２８５ （１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３ （１９９３）を参照されたい）、ヒトの成熟した （体細胞突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９－１６３３ （２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリーのスクリーニングにより得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７２：１０６７８－１０６８４ （１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１：２２６１１－２２６１８ （１９９６）を参照されたい）を含むが、それらに限らない。
２．５ ヒト抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体（例えば、ヒトドメイン抗体又はヒトＤＡｂ）であってもよい。ヒト抗体は、当分野の既知の様々な異なる技術を用いて産生されてもよい。ヒト抗体は全体的にｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５： ３６８－７４ （２００１）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０：４５０－４５９ （２００８）及びＣｈｅｎ，Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４７（４）：９１２－２１ （２０１０）に記述されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（又はＤＡｂ）を産生できるトランスジェニックマウス又はラットは、当分野の既知のものである。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１及びＷＯ ２００４０４９７９４を参照されたい。
抗原攻撃に応答して、完全ヒト抗体又はヒト可変領域を有する完全抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって、ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂｓ）を調製することができる。このような動物は、通常、全て又は一部のヒト免疫グロブリン遺伝子座を含み、それらが内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換しており、又は、染色体外に存在し、又は動物の染色体にランダムに組み込まれる。このようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を取得する方法の概説について、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２３：１１１７－１１２５ （２００５）を参照されたい。さらに、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術が記述されている米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術が記述されている米国特許Ｎｏ．５，７７０，４２９、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術が記述されている米国特許第７，０４１，８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術が記述されている米国特許出願公開番号ＵＳ２００７／００６１９００を参照されたい。このような動物によって産生された完全抗体のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域に結合することによって、さらに修飾されてもよい。
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂｓ）は、ハイブリドーマに基づく方法で調製されてもよい。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫とマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株は記述されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３： ３００１ （１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ． ５１－６３ （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７： ８６ （１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって産生されたヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２ （２００６）にも記述されている。別の方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からモノクローナルヒトＩｇＭ抗体を産生することが記述されている）とＮｉ，現代免疫学，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマが記述されている）に記述されている方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７ （２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１ （２００５）にも記述されている。
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、ヒトファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することで産生されてもよい。そして、このような可変ドメイン配列を必要なヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術に関する記述は、以下のとおりである。
２．６ ライブラリーによって派生される抗体
組み合わせライブラリーにおいて、所望の活性又は複数の活性を有する抗体をスクリーニングすることで、本発明の抗体を単離することができる。例えば、当分野において、ファージディスプレイライブラリーを産生し、このようなライブラリーにおいて必要な結合特性を有する抗体をスクリーニングするための複数の方法が知られている。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７ （Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１） に記述されており、さらにＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２： ６２４－６２８ （１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２２： ５８１－５９７ （１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５ （Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３８（２）： ２９９－３１０ （２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３４０（５）： １０７３－１０９３ （２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０１（３４）： １２４６７－１２４７２ （２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）： １１９－１３２（２００４）に記述されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築するための方法は、既に米国特許第７３７１８４９号に記述されている。
いくつかのファージディスプレイ方法において、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、ＶＨ及びＶＬ遺伝子ライブラリーをそれぞれクローニングし、ファージライブラリーにおいて、ランダムに組換えを行い、そしてＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２： ４３３－４５５ （１９９４）における記述に従って抗原結合ファージをスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片をｓｃＦｖ断片又はＦａｂ断片としてディスプレイする。免疫源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することなく、免疫原に対する高親和性抗体を提供することができる。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２： ７２５－７３４ （１９９３）に記載のように、ナイーブライブラリーを、いかなる免疫も必要とすることなく（例えば、ヒトから）クローニングして、広範囲の非自己及び自己抗原に対する単一の抗体源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２２７： ３８１－３８８ （１９９２）に記載のように、幹細胞から再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いて高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を完了することによって、ナイーブライブラリーを合成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許刊行物は、例えば、米国特許第 ５，７５０，３７３号及び米国特許公開番号２００５／００７９５７４、２００５／０１１９４５５、２００５／０２６６０００、２００７／０１１７１２６、２００７／０１６０５９８、２００７／０２３７７６４、２００７／０２９２９３６及び２００９／０００２３６０を含む。
ヒト抗体ライブラリーから単離した抗体又は抗体断片は、本明細書のヒト抗体又はヒト抗体断片と見なされる。
２．７ 抗体変異体
本発明は、開示される抗体のアミノ酸配列変異体をさらに提供する。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性の改善を必要とする可能性がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入するか又はペプチド合成を行うことで調製されてもよい。このような修飾は、抗体のアミノ酸配列内の残基の削除及び／又は挿入及び／又は置換を含むが、それらに限らない。削除、挿入及び置換の任意の組み合わせを行うことで、最終的なコンストラクトを得ることができ、その条件は、最終的な（即ち、修飾した）抗体が必要な特性、例えば、抗原結合を有することである。
２．７．１置換、挿入及び欠失変異体
いくつかの実施形態において、一つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体を提供する。置換変異誘発の目的部位は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）とＦＲとを含む。表２における「好ましい置換」というテーマの下に保存的置換が示される。表２における「例示的な置換」というテーマの下では、より実質的な変化が提供され、以下のように、アミノ酸側鎖クラスを参照しながら、さらに記述される。アミノ酸置換は、関心のある抗体に導入され、生成物をスクリーニングして所望の活性（例えば、保存／改善した抗原結合、低下した免疫原性、又は改善したＡＤＣＣ又はＣＤＣ）を得ることができる。
Figure 2025501522000002
アミノ酸は、よく見られる鎖側の特性に応じてグループ分けすることができる。（１）疎水性のもの：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、（２）中性親水性のもの：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、（３）酸性のもの：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、（４）アルカリ性のもの：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、及び（６）芳香族性のもの：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。いくつかの実施形態において、非保存的置換は、これらのクラスにおける一つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。
いくつかの実施形態において、置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の一つ又は複数の高可変領域残基の置換に係る。通常、更なる研究に用いられる、得られた変異体を選択し、親抗体に対して、いくつかの生物学的特性（例えば、増加した親和性、低下した免疫原性）で修飾（例えば、改善）し、及び／又は、親抗体のいくつかの生物学的特性を基本的に保持する。例示的な置換変異体は、親和性が成熟した抗体であり、該抗体は、生成しやく、例えばファージディスプレイに基づく、親和性が成熟した技術（例えば、本明細書に開示されるもの）を用いる。簡単に言えば、一つ又は複数のＨＶＲ（又はＣＤＲ）残基に対して突然変異を行うとともに、変異体抗体をファージにディスプレイし、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）に対してスクリーニングを行う。
ＨＶＲ（又はＣＤＲ）において、改変（例えば、置換）を行い、例えば、抗体親和性を改善することができる。このような改変は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）「ホットポイント」、即ち、体細胞成熟過程に高頻度で突然変異したコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２０７：１７９－１９６ （２００８）を参照されたい）、及び／又はＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬの結合親和性をテストすることができる。二次ライブラリーからの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７ （Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１）に記述されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のうちのいずれか一つによって、多様性を、成熟のために選択された可変遺伝子に導入する。そして、二次ライブラリーを産生する。そして、ライブラリーをスクリーニングし、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）配向方法に関し、ここで、若干のＨＶＲ（又はＣＤＲ）残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を使用して、抗原結合に関与するＨＶＲ （又はＣＤＲ）残基を特異的に同定することができる。特に、ＣＤＲ－Ｈ３とＣＤＲ－Ｌ３は、常に標的となる。
いくつかの実施形態において、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を基本的に低下させない限り、置換、挿入又は欠失は、一つ又は複数のＨＶＲ（又はＣＤＲ）内に発生してもよい。例えば、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）において、結合親和性を基本的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書による保存的置換）を行ってもよい。このような改変は、ＨＶＲ（又はＣＤＲ）「ホットポイント」又はＣＤＲ外にある可能性がある。以上に提供される変異体ＶＨＨ配列のいくつかの実施形態において、各ＨＶＲ（又はＣＤＲ）は、改変されてないものであるか、又は、一つ、二つ又は三つを超えないアミノ酸置換を含むものである。
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載のように、標的変異誘発を行うことができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。このような方法において、ターゲット残基の残基又は残基群（例えば、荷電残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ）を同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）を用いて置換を行うことで、抗体と抗原の相互作用が影響を受けるか否かを確定する。アミノ酸の位置に別の置換を導入することで、初期置換に対する機能的感受性を実証することができる。代替的に又は付加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造は、抗体と抗原との接触点を同定するためのものである。このような接触残基と隣接残基は、置換候補として標的化又は排除されてもよい。変異体は、所望の属性を含むか否かを確定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列の挿入は、長さが一つの残基から百個又はより多くの残基を含むポリペプチドの範囲内にあるアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合と、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入とを含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ－又はＣ－末端と、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）又はポリペプチドとの融合を含む。
２．７．２グリコシル化変異体
いくつかの実施形態において、コンストラクトのグリコシル化の程度を増加又は減少させるために、抗体を改変する。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、アミノ酸配列を改変して一つ又は複数のグリコシル化部位を産生又は除去することで、容易に実現可能である。
抗体にＦｃ領域（例えば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ）が含まれる場合、それに連結される炭水化物は、改変可能である。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、通常、分岐型バイ接触角オリゴ糖を含み、それは、通常、Ｎ－結合によって、Ｆｃ領域ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に連結される。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ． ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２ （１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースとシアル酸、及びバイ接触角オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含んでもよい。いくつかの実施形態において、抗体におけるオリゴ糖に対して修飾を行って、いくつかの改善した特性を有する抗体変異体を産生することができる。
いくつかの実施形態において、抗体は、炭水化物構造を有し、該炭水化物構造は、（直接又は間接に）Ｆｃ領域に付着したフコースを欠く。例えば、このような抗体におけるフコースの含有量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％であってもよい。フコースの量は、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法により測定されたＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体化、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７糖鎖におけるフコースの平均量を計算することにより確定され、例えば、ＷＯ ２００８／０７７５４６に記載のとおりである。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域中の約２９７（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号）に位置するアスパラギン残基を指し、しかしながら、抗体における微小な配列変化のため、Ａｓｎ２９７は、位置２９７の上流又は下流約±３個のアミノ酸、即ち位置２９４と３００との間に位置してもよい。このようなフコシル化変異体は、改善したＡＤＣＣ機能を有してもよい。例えば、米国特許公開番号ＵＳ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損型」抗体変異体に関わる刊行物の例として、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ ２０００／６１７３９、ＷＯ ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ ２００３／０８５１１９、ＷＯ ２００３／０８４５７０、ＷＯ ２００５／０３５５８６、ＷＯ ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３６：１２３９－１２４９ （２００４）、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４ （２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例として、タンパク質フコシル化作用欠損型Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２４９：５３３－５４５ （１９８６）、米国特許出願番号ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ ２００４／０５６３１２ Ａ１，Ａｄａｍｓら）、及びノックアウト細胞株、例えば、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４ （２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８ （２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、抗体は、二等分されるオリゴ糖を有し、例えば、ここで、抗体のＦｃ領域に付着したバイ接触角オリゴ糖は、ＧｌｃＮＡｃにより二等分される。このような抗体変異体は、減少したフコシル化及び／又は改善したＡＤＣＣ機能を有してもよい。このような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ ２００３／０１１８７８ （Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記述されている。オリゴ糖においてＦｃ領域に連結される少なくとも一つのガラクトース残基を有する抗体変異体をさらに提供する。このような抗体変異体は、改善したＣＤＣ機能を有してもよい。このような抗体変異体は、例えば、ＷＯ １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記述されている。
２．７．３ Ｆｃ領域変異体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体誘導体のＦｃ領域は、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよく、該配列は、一つ又は複数のアミノ酸位置でのアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む。いくつかの実施形態において、一つ又は複数のアミノ酸修飾を抗体部分のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はＶＨＨ－Ｆｃ）に導入することによって、Ｆｃ領域変異体を生成することができる。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、いくつかの（全てではない）エフェクター機能を有し、このような機能により、該領域は、応用に適する望ましい候補となり、これらの応用において、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、いくつかのエフェクター機能（例えば、補体とＡＤＣＣ）は、必要でないか又は有害である。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを実施することによって、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行うことにより、抗体がＦｃγＲ結合能力を有しない（従ってＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持できることを保証することができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単核細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９：４５７－４９２ （１９９１）に纏められている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ． ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３ （１９８６）及び Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２ （１９８５）を参照されたい）、第５，８２１，３３７号 （Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６６：１３５１－１３６１ （１９８７）を参照されたい）に記述されている。代替的に、非放射性アッセイ方法（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩを参照されたい）を採用してもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とを含む。代替的に又は付加的に、インビボで（例えば動物モデルにおいて）関心のある分子のＡＤＣＣ活性を評価してもよく、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９５：６５２－６５６ （１９９８）に開示されているとおりである。Ｃ１ｑ結合アッセイを行うことにより、抗体がＣ１ｑに結合できず、且つそのためＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、ＷＯ ２００６／０２９８７９とＷＯ ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑとＣ３ｃのＥＬＩＳＡへの結合を参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３ （１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ． ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２ （２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ． ａｎｄ Ｍ．Ｊ． Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３ （２００４）を参照されたい）。当分野の既知の方法で、ＦｃＲｎ結合とインビボクリアランス／半減期アッセイを行ってもよい（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ． ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８（１２）：１７５９－１７６９ （２００６）を参照されたい）。
低下したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの一つ又は複数の置換を有するそれらの抗体（米国特許第６，７３７，０５６号）を含む。このようなＦｃ突然変異体は、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの二つ又はより多くの置換を有するＦｃ突然変異体を含み、残基２６５及び２９７がアラニンによって置換されるいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む。
向上又は低下したＦｃＲとの結合性を有するいくつかの抗体変異体が記述されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ ２００４／０５６３１２及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ９（２）： ６５９１－６６０４ （２００１）を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、残基のＥＵ番号に基づく一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、エフェクター機能を修飾する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｆ２３４Ａ及び／又はＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、位置２９７での置換、例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ又はＮ２９７Ｇを含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞によって媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を修飾する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞によって媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低下する突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞によって媒介される細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を強化する突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ及びＩ３３２Ｅの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３及び／又は３３４での置換、例えば、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａを含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩａ及び／又はＦｃγＲＩＩｂ）との共有結合を改変する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体との共有結合を強化する一つ又は複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ又はそれらの組み合わせとの共有結合を強化する突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ノブホール構造（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）突然変異を含み、これにより二本の異なる抗体鎖は、ヘテロ二量体を形成し、多重特異性抗体を産生する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される多重特異性抗体に含まれるノブホール構造突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｔ３６６Ｗ、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ３５４Ｃ及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、ホールチェーン（ｈｏｌｅ ｃｈａｉｎ）におけるＴ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａとノブチェーン（ｋｎｏｂ ｃｈａｉｎ）におけるＴ３６６Ｗのノブホール構造突然変異を含む。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、ホールチェーンにおけるＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７ＶとノブチェーンにおけるＴ３６６Ｗのノブホール構造突然変異を含む。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、ホールチェーンにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７ＶとノブチェーンにおけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗのノブホール構造突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、改変はＦｃ領域において行われ、それは、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の改変（即ち、向上又は低下）を引き起こし、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ１９９９／５１６４２及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４： ４１７８－４１８４ （２０００）に記載のとおりである。
いくつかの実施形態において、抗体（例えば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ又はＶＨＨ－Ｆｃ）変異体は、変異体Ｆｃ領域を含み、それは、半衰期を改変し、及び／又は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改変する一つ又は複数のアミノ酸置換を含む。ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）には、延長した半減期を有し且つ新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との結合性が改善した抗体が記述されており、それは、母体ＩｇＧの胎児への転移を担当する（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １１７：５８７ （１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２４：２４９ （１９９４）。それらの抗体には、一つ又は複数の置換を有するＦｃ領域が含まれ、それは、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改変する。このようなＦｃ変異体は、一つ又は複数のＦｃ領域残基において、置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するＦｃ変異体を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅの突然変異を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０ （１９８８）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ２０１８，９（１）：６３－７３、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号及び ＷＯ １９９４／２９３５１に記述されているＦｃ領域変異体を含む。
２．７．４ システインエンジニアリング抗体変異体
いくつかの実施形態において、システインエンジニアリング抗体部分、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」の産生を必要とする可能性があり、ここで、抗体の一つ又は複数の残基は、システイン残基によって置換される。いくつかの実施形態において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。システイン残基を用いてこれらの残基を置換することで、反応性チオール基は、抗体のアクセス可能な部位に位置決めされ、そして抗体を他の部分、例えば薬物部分又はリンカー－薬物部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを産生するために用いられてもよく、例えば本発明にさらに記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号）のうちの任意の一つ又は複数の残基は、システインによって置換されてもよい。システインエンジニアリング抗体部分は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記述されている方式で生成されてもよい。
２．８ 抗体誘導体
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、当分野に知られており且つ容易に得られる他のタンパク質又は非タンパク質部分を含む抗体誘導体にさらに修飾されてもよい。抗体誘導体化に適した非タンパク質部分は、水溶性ポリマーを含むが、それに限らない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ１，３－ジオキソラン、ポリ１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、デキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール及びそれらの混合物が挙げられるが、それらに限らない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のために調製において優位性を有する可能性がある。該ポリマーは、任意の分子量を有してもよく、且つ分岐状又は非分岐状であってもよい。抗体に連結されるポリマーの数は、異なる可能性があり、且つ連結されるポリマーが一種よりも多いと、それらは、同じ又は異なる分子であってもよい。一般的には、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、複数の考慮に基づいて決定されてもよく、これらの考慮は、改善されるべき抗体の特定の性質又は機能、抗体誘導体を限定された条件下で診断に使用するかどうかなどを含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、抗体は、一つ又は複数の生物活性タンパク質、ポリペプチド又はその断片を含む抗体誘導体にさらに修飾されてもよい。本明細書で互換的に使用される「生物活性の」又は「生物学的活性を有する」は、特定の機能を果たすためにインビボで示される生物学的活性を指し、例えば、特定の生物分子（例えば、タンパク質、ＤＮＡなど）に結合し、そして、このような生物分子の活性を促進又は阻害することを意味する可能性がある。いくつかの実施形態において、生物活性タンパク質又はその断片は、活性薬物物質として患者に投与されるタンパク質及びポリペプチドと、疾患又は病症の予防又は治療、及び診断のために使用されるタンパク質及びポリペプチド（例えば、診断テスト又はインビトロアッセイに使用される酵素）と、疾患を予防するために患者に投与されるタンパク質及びポリペプチド（例えば、ワクチン）とを含む。
２．９ 生産方法
当分野における任意の利用可能な又は既知の技術を用いて本明細書に開示される抗体と抗体誘導体を産生することができる。例えば、米国特許第 ４，８１６，５６７号に記載のように、例えば、組換え方法及び組成物を用いて抗体と抗体誘導体を産生することができるが、それに限らない。抗体と抗体誘導体を産生する詳細な手順は、以下の例に詳しく記述される。
本発明のテーマは、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体をコードする単離した核酸をさらに提供する。例えば、単離した核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列、例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖をコードすることができる。
いくつかの実施形態において、核酸は、一つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）に存在してもよい。本明細書に使用されるように、「ベクター」という用語は、それに連結される別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。一つのタイプのベクターは、「プラスミド」であり、それは、別のＤＮＡセグメントをそれに連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターは、ウィルスベクターであり、ここで、別のＤＮＡセグメントをウィルスゲノムに連結することができる。いくつかのベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律複製可能である（例えば、細菌複製始点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入された後、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、且つそれにより宿主ゲノムと共に複製する。また、いくつかのベクター発現ベクターは、それらが操作可能に連結された遺伝子の発現を指導することができる。一般的には、組換えＤＮＡ技術に用いられる発現ベクターは、常に、プラスミド（ベクター）形式である。しかしながら、開示されるテーマは、等価な機能を有する他の発現ベクター、例えば、ウィルスベクター（例えば、複製欠損レトロウィルス、アデノウィルス及びアデノ随伴ウィルス）を含むことが意図される。
本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体の異なる部分は、単一のポリシストロン性発現カセット、単一のベクターの複数の発現カセット、又は複数のベクターにおいて構築されてもよい。ポリシストロニック発現カセットを生成するエレメントの例として、様々なウイルス及び非ウイルス性内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－ｌ ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦ ＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩ ＩＲＥＳ、ＮＦ－ｋＢ ＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ ＩＲＥＳ、ｐ５３ ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、口蹄疫ウイルスＩＲＥＳ、ピコルナニルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳ及び脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）、及び切断可能なリンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ及びＦ２Ａペプチド）が挙げられるが、それらに限らない。レトロウィルスベクターと適切なパッケージング糸との組み合わせも好適であり、ここで、カプシドタンパク質はヒト細胞に感染する機能を有する。様々な両親媒性ウイルスを産生する細胞株は、知られており、ＰＡ１２ （Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ５：４３１－４３７）、ＰＡ３１７ （Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ ａｌ． （１９８６） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６：２８９５－２９０２）、及びＣＲＩＰ （Ｄａｎｏｓ，ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４）を含むが、それらに限らない。非両親媒性粒子も好適であり、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４又はＧＡＬＶエンベロープ及び当分野における任意の他の既知のシュードタイプ化粒子を用いる。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体誘導体をコードする核酸及び／又は核酸を含む一つ又は複数のベクターを宿主細胞に導入することができる。いくつかの実施形態において、当分野の既知の任意の方法で、核酸を細胞に導入することができ、これらの方法は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、核酸配列を含むウィルス又はファージベクターによる感染、細胞融合、染色体によって媒介される遺伝子転移、微小細胞によって媒介される遺伝子転移、スフェロプラスト融合などを含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、例えば、核酸を含むベクターによって形質転換された宿主細胞を含んでもよく、前記核酸は、単一ドメイン抗体及び／又は単一ドメイン抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、例えば、（１） 該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は （２） 該抗体のＶＬのアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターで形質転換された宿主細胞を含んでもよい。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球（例えば、ＹＯ、ＮＳＯ、Ｓｐ２０細胞）である。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を調製する方法は、抗体又は抗体誘導体発現に適する条件で、宿主細胞（ここに抗体又は抗体誘導体をコードする核酸が導入されている）を培養することと、宿主細胞及び／又は宿主細胞培地から抗体又は抗体誘導体を任意選択に回収することとを含んでもよい。いくつかの実施形態において、クロマトグラフィー技術により、宿主細胞から抗体又は抗体誘導体を回収する。
本発明の抗体又は抗体誘導体を組換え産生するために、例えば、上述した抗体又は抗体誘導体をコードする核酸を単離させ、一つ又は複数のベクターに挿入して、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／又は発現に用いることができる。従来の手順（例えば、抗体又は抗体誘導体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を用いて、これらの核酸を容易に単離してシーケンシングすることができる。抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のための適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核又は真核細胞を含む。例えば、特に、フコシル化とＦｃエフェクター機能を必要としない時、細菌において抗体又は抗体誘導体を産生してもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現について、例えば、米国特許第５，６４８，２３７、第５，７８９，１９９及び第５，８４０，５２３号を参照されたい。（さらに、大腸菌における抗体断片の発現が記述されているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ． ２４８ （Ｂ．Ｋ．Ｃ． Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、ｐｐ． ２４５－２５４を参照されたい）。発現後、抗体又は抗体誘導体は、可溶性画分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）で細菌細胞ペーストから単離し、さらに精製されてもよい。
原核生物に加えて、真核微生物（例えば、糸状菌又は酵母）も、抗体をコードするベクターに適したクローニング又は発現宿主であり、それは、グリコシル化経路が「ヒト化」された真菌株と酵母株を含み、それによって部分的又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体又は抗体誘導体を産生する。Ｇｅｍｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２２：１４０９－１４１４ （２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２４：２１ ０－２１５ （２００６）を参照されたい。グリコシル化抗体を発現するための適切な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）に由来するものであってもよい。無脊椎動物細胞の例として、植物と昆虫細胞が挙げられる。多くのバキュロウィルス株が同定されており、これらは、特にツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態において、植物細胞培養物は、宿主細胞として用いられてもよい。例えば、米国特許第 ５，９５９，１７７、第６，０４０，４９８号、Ｎｏ． ６，４２０，５４８、７，１２５，９７８及び６，４１７，４２９（トランスジェニック植物において抗体を生産するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術が記述されている）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、脊椎動物細胞は、宿主細胞として用いられてもよい。例えば、懸濁成長に適した哺乳動物細胞株が有用であり得るが、それらに限らない。有用な哺乳動物宿主細胞株の非制限的例は、ＳＹ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胎児腎臓株（２９３又は２９３細胞、例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒａｌ． ３６：５９ （１９７７））に記述されている）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ（ｓｅｒｔｏｌｉ）細胞（ＴＭ４細胞、例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ． ２３：２４３－２５１ （１９８０）に記述されている）、ザル腎臓細胞（ＣＶ １）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ ｒａｔ）肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ ０２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ． Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ３８３：４４－６８ （１９８２）に記述されているＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含み、ＤＨＦＫ ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：４２ Ｉ６ （１９８０））と、骨髄腫細胞株（例えば、ＹＯ、ＮＳＯ及びＳｐ２／０）とを含む。抗体又は抗体誘導体の産生に適したいくつかの哺乳動物宿主細胞株に関する概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ． ２４８ （Ｂ．Ｋ．Ｃ． Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ． ２５５－２６８ （２００３）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、二重特異性及び／又は多重特異性抗体を調製するための技術は、同じ特異性を有する二つの免疫グロブリン重鎖軽鎖ペアを組換えて発現することであって、そのうちの一方又は両方の重鎖又は軽鎖が異なる特異性を有する抗原結合部分（例えば、単一ドメイン抗体、例えば、ＶＨＨ）に融合することと、異なる特異性を有する二つの免疫グロブリン重鎖軽鎖ペアの組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉ ｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５： ５３７ （１９８３）、ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ １０： ３６５５ （ｌ９９１）を参照されたい）と、「ノブホール構造」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８を参照されたい）とを含むが、それらに限らない。二重特異性抗体は、静電ステアリング効果のエンジニアリングによって調製されてもよく、それにより抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を調製し（ＷＯ ２００９／０８９００４Ａ１）、二つ以上の抗体又は断片を架橋させ（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２２９： ８１ （１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体を産生し（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）： １５４７－１５５３ （１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を用いて、二重特異性抗体断片を調製し（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８ （１９９３）を参照されたい）、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用し（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８ （１９９４）を参照されたい）、三重特異性抗体を調製し、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７： ６０ （１９９１）に記載のとおりである。
本発明の二重特異性と多重特異性分子は、化学技術（例えば、Ｋｒａｎｚ （１９８１） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７８：５８０７を参照されたい）、「ｐｏｌｙｄｏｍａ」技術（例えば、米国特許第４，４７４，８９３号）又は組換えＤＮＡ技術により調製されてもよい。さらに、当分野の既知の方法及び本明細書に記載の方法により、構成結合特異性、例えば、第１のエピトープと第２のエピトープ結合特異性をコンジュゲートすることによって、現在では開示されるテーマの二重特異性と多重特異性分子を調製してもよい。例えば、二重特異性と多重特異性分子の各結合特異性は、組換え融合タンパク質技術によって一緒に調製されるか、又は別々に調製され、次いで互いにコンジュゲートされてもよいが、これに限らない。結合特異性がタンパク質又はペプチドである場合、共有結合は、様々なカップリング剤又は架橋剤を使用して行われ得る。架橋剤の非限定的な例としては、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ （１９８４） Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６０：１６８６、Ｌｉｕ （１９８５） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：８６４８を参照されたい）。他の方法は、Ｐａｕｌｕｓ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ． Ｍｉｔｔ． （１９８５） Ｎｏ． ７８，１１８－１３２、Ｂｒｅｎｎａｎ （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３）、Ｇｌｅｎｎｉｅ （１９８７） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３９： ２３６７－２３７５）に記載のものを含む。結合特異性が抗体（例えば、二つのヒト化抗体）である場合、それらは、二本の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のメルカプト結合によりコンジュゲートされてもよい。いくつかの実施形態において、コンジュゲートの前に、ヒンジ領域は、奇数個（例えば、一個）のメルカプト残基を含むように修飾されてもよい。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体の二つの結合特異性は、同一のベクターにおいてコードされ、同一の宿主細胞において発現と組み立てられてもよい。二重特異性と多重特異性分子がＭＡｂ ｘ ＭＡｂ、ＭＡｂ ｘ Ｆａｂ、Ｆａｂ ｘ Ｆ（ａｂ’）２又はリガンド ｘ Ｆａｂ融合タンパク質である場合、該方法は、特に有用である。いくつかの実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、一本鎖分子、例えば、一本鎖二重特異性抗体、一つの一本鎖抗体と結合決定クラスタとを含む一本鎖二重特異性分子、又は二つの結合決定クラスタを含む一本鎖二重特異性分子であってもよい。二重特異性と多重特異性分子は、一本鎖分子であってもよく、又は、少なくとも二つの一本鎖分子を含んでもよい。二重特異性分子及び多重特異性分子を調製する方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、米国特許第５，４５５，０３０号、米国特許第４，８８１，１７５号、米国特許第５，１３２，４０５号、米国特許第５，０９１，５１３号、米国特許第５，４７６，７８６号、米国特許第５，０１３，６５３号、米国特許第５，２５８，４９８号、及び米国特許第５，４８２，８５８号に記述されている。本明細書は、三つ又はより多くの機能的抗原結合部位（例えばエピトープ結合部位）を有するエンジニアリング抗体をさらに含み、「タコ抗体」（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）を含む。
いくつかの実施形態において、動物系は、本発明の抗体又は抗体誘導体の産生に用いることができる。ハイブリドーマを調製するための動物系は、マウス系である。
マウスにおいて、ハイブリドーマの産生は、非常に完備な手順の確立である。融合のための免疫された脾細胞を単離するための免疫方案と技術は、当分野において既知のものである。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）及び融合手順も既知のものである（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄＬａｎｅ（１９８８），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。
２．１０アッセイ
本明細書による本発明の抗体と抗体誘導体について、当分野の既知のものと本明細書による複数のアッセイにより、その物理／化学的性質及び／又は生物学的活性に対して、同定、スクリーニング又は特徴付けを行うことができる。
いくつかの実施形態において、既知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）又はウエスタンブロットアッセイ）によって、本発明の抗体又は抗体誘導体の抗原結合活性をテストすることができる。これらのアッセイのそれぞれは、通常、目的複合体に対して特異性を有する、標識された試薬（例えば、抗体）により、特別な意味を有するタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、例えば、抗体又は抗体誘導体を認識してそれに特異的に結合する酵素結合抗体又は抗体断片により、抗体又は抗体誘導体を検出することができる。代替的に、複数の他の免疫アッセイのうちのいずれか一つにより、抗体又は抗体誘導体を検出してもよい。例えば、該抗体又は抗体誘導体に対して放射性標識を行い、且つ放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）において使用してもよい（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９８６年３月を参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、Ｇｅｉｇｅｒカウンター又はシンチレーションカウンターを用いるか又はオートラジオグラフィーのような手段によって、放射性同位体を検出することができる。
いくつかの実施形態において、競合アッセイは、ＯＸ４０への結合について、本発明の抗体と競合する抗体又は抗体誘導体の同定に用いられてもよい。いくつかの実施形態において、このよう競合抗体は、本明細書に開示される抗体に結合する同じエピトープ（例えば、線形又は立体構造エピトープ）に結合する。Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６） 「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ． ６６ （Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）において、抗体に結合するエピトープを位置決めする詳細な例示的な方法が提供されている。
競合アッセイの非限定的な例では、ＯＸ４０に結合する第１の標識抗体又は抗体誘導体と第２の非標識抗体とを含む溶液において、固定したＯＸ４０をインキュベートし、ＯＸ４０への結合について第１の抗体と競合する第２の非標識抗体の能力をテストすることができる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上澄み液に存在してもよい。対照として、固定したＯＸ４０を、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない溶液においてインキュベートする。第１の抗体とＯＸ４０との結合が許容される条件でインキュベートした後、過剰の未結合抗体を除去し、固定したＯＸ４０に関わる標識の量を測定する。対照サンプルに比べて、テストサンプルにおいて、固定したＯＸ４０に関わる標識の量が大幅に減少すると、第２の抗体は、ＯＸ４０への結合について第１の抗体と競合していることを表す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８８） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
本発明は、生物学的活性を有する抗体又はその抗体誘導体を同定するためのアッセイを提供する。生物学的活性は、例えば、免疫細胞又は免疫活性化レポーター遺伝子（例えば、ＮＦＡＴレポーター遺伝子又はＮＦ－κＢレポーター遺伝子）の活性化を含んでもよい。インビボ及び／又はインビボでこのような生物学的活性を有する抗体をさらに提供する。
２．１１ 免疫コンジュゲート
本発明のテーマは、免疫コンジュゲートをさらに提供し、それは、一つ又は複数の検出プローブ及び／又は細胞傷害性剤（例えば、化学治療剤又は薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はそれらの断片））、又は放射性同位体にコンジュゲートする、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を含む。例えば、開示されるテーマの抗体又は抗原結合部分は、一つ又は複数の他の結合分子、例えば、別の抗体、抗体断片、ペプチド又は結合模倣体に機能的に連結されてもよい（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合又は他の方式による）。
いくつかの実施形態において、免疫コンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、ここで、抗体は、一つ又は複数の薬物にコンジュゲートし、メイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、５，４１６，０６４及び欧州特許ＥＰ ０４２５２３５を参照されたい）、アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、例えば、モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥとＤＦ（ＭＭＡＥとＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号、第５，７８０，５８８号、及び第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）又はその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、第５，７１４，５８６号、第５，７３９，１１６号、第５，７６７，２８５号、第５，７７０，７０１号、第５，７７０，７１０号、第５，７７３，００１号及び第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３：３３３６－３３４２ （１９９３）、及びＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８：２９２５－２９２８ （１９９８）を参照されたい）、アントラサイクリン、例えばドノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）又はドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ． １３：４７７－５２３ （２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２ （２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ． １６：７１７－７２１ （２００５）、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９７：８２９－８３４ （２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２ （２００２）、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４５：４３３６－４３４３ （２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、タキサン、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル及びオルタキセル、トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）、及びＣＣ１０６５を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、免疫コンジュゲートは酵素活性毒素又はその断片にコンジュゲートする本明細書に記載の抗体を含み、前記酵素活性毒素又はその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、α－スウェリン、アブリン、ジアンチン、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａ）（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、ジャトロシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートして、放射性コンジュゲートを形成する本明細書に記載の抗体を含む。複数の放射性同位体は、放射性コンジュゲートの生産に用いられてもよい。非限定的な例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性コンジュゲートが検出に用いられる時、これは、シンチレーション研究に使用される放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍ又は１１２３、又は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージングとも呼ばれ、ＭＲＩ）に使用されるスピン標識、例えば、ヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでもよい。
様々な二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジンジメルカプト）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノスルファン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ジスアゾ化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、二重窒素誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリレン２，６－ジイソシアネート）、及びビス活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン））を使用して、抗体と細胞傷害性剤のコンジュゲートを調製することができる。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８： １０９８ （１９８７）に記述されているようにリシン免疫毒素を調製することができる。炭素４－標識化ｌ－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン－五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドと抗体をコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。ＷＯ ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞における細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカーを用いることができる（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５２：１２７－１ ３１ （１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）。
本明細書の免疫コンジュゲート又はＡＤＣは、架橋剤を用いて調製されるこのようなコンジュゲートを明確にカバーするが、それらに限らず、市販されているＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ビニルスルホン）（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａからのもの）を含むが、それらに限らない。
２．１２抗原認識受容体
本発明のテーマは、本明細書に開示される抗体又は抗体断片を含む抗原認識受容体をさらに提供する。抗原認識受容体は、抗原へのその結合に応答して、免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化、刺激又は阻害することができる受容体である。抗原認識受容体の非限定的な例としては、天然及び組換えＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）又は阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）が挙げられる。抗原認識受容体の設計と使用方法は、当分野において周知のものであり、且つ文献、例えば、国際公開ＷＯ ２０１８／０２７１５５、ＷＯ ２０１９／０９９４８３、ＷＯ ２０１９／１５７４５４、ＷＯ ２０１９／１３３９６９、ＷＯ ２０１９／０９９９９３、ＷＯ ２０１５／１４２３１４、ＷＯ ２０１８／０２７１９７及びＷＯ ２０１４０５５６６８に記述されている。
いくつかの実施形態において、本発明のテーマは、本明細書に開示される抗体、抗体断片又は多重特異性抗体を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＣＡＲは、エンジニアリングされた受容体であり、それは目的特異性を免疫エフェクター細胞に移植又は付与することができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に移植することに用いることができ、ベクターによりそのコード配列のトランスファーを促進する。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、「第１世代」ＣＡＲであり、それは、通常、膜貫通ドメインと融合する細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦａｖ又はＶＨＨ）で構成され、該膜貫通ドメインは、細胞質／細胞内シグナル伝達ドメインと融合する。「第１世代」ＣＡＲは、ＨＬＡ媒介性抗原提示にかかわらず、デノボ抗原認識を提供し、単一融合分子におけるそれらのＣＤ３ｚ鎖シグナル伝達ドメインによって免疫応答性細胞（例えば、ＣＤ４＋とＣＤ８＋ Ｔ細胞）の活性化を引き起こすことができる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、「第２世代」ＣＡＲであり、それは、免疫応答性細胞に追加のシグナルを提供するために、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、０Ｘ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０／Ｍｙ８８及びＮＫＧＤ２）からＣＡＲの細胞質尾部領域までの細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含み、これにより、「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ｚ）の両方を提供するものを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、「第３世代」ＣＡＲであり、それは、複数の共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８と４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ｚ）とを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、第２世代ＣＡＲである。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ここで、前記細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間のヒンジ／間隔領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、細胞外抗原結合ドメインは、本明細書に開示される抗体、抗体断片又は多重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体、抗体断片又は多重特異性抗体は、ＶＨＨ、Ｆａｂ又はｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、本明細書に開示される多重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態において、本発明のテーマは、本明細書に開示される抗体又は抗体断片を含む組換えＴＣＲを提供する。天然ＴＣＲは、ジスルフィド結合により連結されるヘテロ二量体タンパク質を含むタンパク質複合体であり、該ヘテロ二量体タンパク質は、ＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現される二本の可変鎖で構成される。天然ＴＣＲは、Ｔ細胞表面に存在し、抗原を、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合するペプチドとして認識する役割を果たす。いくつかの実施形態において、天然ＴＣＲは、α鎖とβ鎖（それぞれＴＲＡとＴＲＢ遺伝子によってコードされる）を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、γ鎖とδ鎖（それぞれＴＲＧとＴＲＤ遺伝子によってコードされる）を含む。α鎖、β鎖、γ鎖及びδ鎖は、それぞれ、可変（Ｖ）領域と定常（Ｃ）領域の二つの細胞外ドメインを含む。定常領域は、細胞膜に近く、その後に膜貫通領域と短い細胞質尾部領域が続く。可変領域は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。各可変領域は、三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε及びＣＤ３ζとの受容体複合体を含む。ＴＣＲ複合体がその抗原及びＭＨＣ（ペプチド／ＭＨＣ）に結合する場合、ＴＣＲ複合体を発現するＴ細胞は活性化される。
いくつかの実施形態において、組換えＴＣＲは、非天然ＴＣＲである。いくつかの実施形態において、組換えＴＣＲは、組換えα鎖及び／又は組換えｂ鎖を含み、ここで、組換えα鎖及び／又は組換えｂ鎖の可変領域の一部又は全体は、本明細書に開示される抗体又は抗体断片に置換される。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体断片は、ＶＨＨ、ＶＨ、ＶＬ、Ｆａｂ又はｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体断片は、ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態において、組換えＴＣＲは、ＭＨＣ／ＨＬＡ－非依存性の方式で、目的抗原に結合する。いくつかの非限定的な実施形態において、抗原の結合は、組換えＴＣＲを含む免疫応答性細胞を活性化することができる。
本発明のテーマは、免疫応答性細胞を提供し、それは、（ａ） 本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗原認識受容体は、免疫応答性細胞を活性化することができる。本発明のテーマの免疫応答性細胞は、リンパ系の細胞であってもよい。Ｂ、Ｔ及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むリンパ系は、抗体の産生、細胞免疫系の調節、血液における外来物（ａｇｅｎｔ）の検出、宿主外来性細胞の検出などを提供する。リンパ系の免疫応答性細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、胚性幹細胞及び多能性幹細胞（例えば、それからリンパ球が分化し得るもの）が挙げられる。Ｔ細胞は、胸腺で成熟し、主に細胞媒介性免疫を担うリンパ球であってもよい。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本発明のテーマのＴ細胞は、任意のタイプのＴ細胞であってもよく、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞（中枢記憶Ｔ細胞、幹細胞様記憶Ｔ細胞（ｓｔｅｍ－ｃｅｌｌ－ｌｉｋｅ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ／ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ））及び二つのタイプのエフェクター記憶Ｔ細胞、例えば、ＴＥＭ細胞及びＴＥＭＲＡ細胞、制御性Ｔ細胞（阻害Ｔ細胞とも呼ばれる）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連不変Ｔ細胞及びｇｄ Ｔ細胞を含むが、それらに限らない。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ又はキラーＴ細胞）は、感染された体細胞又は腫瘍細胞の死を誘導することができるＴリンパ球サブセットである。患者自体のＴ細胞は、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）を導入することにより、遺伝子修飾を行って特定の抗原を標的とすることができる。いくつかの実施形態において、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部とし、先天性免疫応答の間に機能するリンパ球であってもよい。ＮＫ細胞は、標的細胞に対して細胞傷害性作用を果たすために前もって活性化される必要はない。本発明のテーマのヒトリンパ球のタイプは、末梢ドナーリンパ球を含むが、それに限らず、例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ３：３５－４５ （遺伝子修飾してＣＡＲを発現する末梢ドナーリンパ球が開示される）、Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．，ｅｔ ａｌ． ２００６ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４： １２６－１２９ （遺伝子修飾してａとｂヘテロ二量体を含む全長腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現する末梢ドナーリンパ球が開示される）、Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４： ４９５－５０４、Ｐａｎｅｌｌｉ，Ｍ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４３８２－４３９２ （腫瘍生検における腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に由来するリンパ球培養物が開示される）及び Ｄｕｐｏｎｔ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ． ２００５ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６５：５４１７－５４２７；Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｇ．Ａ．，ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｂｌｏｏｄ １０２：２４９８－２５０５ （人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）又はパルス状樹状細胞を使用して抗原特異性末梢血白血球を選択的にインビトロで増幅させることが開示される）に開示されるものである。いくつかの実施形態において、免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自己由来、非自己由来（例えば、同種異体）、又はインビトロで、エンジニアリングされた前駆細胞もしくは幹細胞から派生したものであってもよい。
３．使用方法
本発明のテーマは、開示される抗体と抗体誘導体を使用する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、本発明の抗体又は抗体誘導体の治療的用途に関する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、本発明の抗体又は抗体誘導体の診断的用途に関する。
３．１治療方法
本発明は、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を疾患と障害の治療又は免疫応答の強化に用いる方法と用途を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体、抗体誘導体又は該抗体、抗体誘導体を含む医薬組成物を被験体（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト））に投与して、疾患と障害を治療するか又は免疫応答を強化することができる。いくつかの実施形態において、これらの疾患及び障害は、免疫チェックポイント阻害及び／又は異常なＯＸ４０活性に関する。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体により治療可能な疾患と障害は、新生物（例えば、癌）を含むが、それに限らない。
いくつかの実施形態において、本発明は、薬物の調製に用いられる本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体（又はその断片）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、癌の治療のための薬物の調製に用いられる本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体（又はその断片）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、被験体の癌の治療に用いられる本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体（又はその断片）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、被験体の癌の治療に用いられる本明細書による抗体又は抗体誘導体（又はその断片）を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、癌は、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫及び骨髄腫）、卵巣癌、乳癌、膀胱癌、脳癌、結腸癌、腸癌、肝臓癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、胃腫瘍、神経膠芽腫、喉頭癌、黒色腫、神経芽細胞腫、腺癌、神経膠腫、軟部組織肉腫及び様々な癌（前立腺癌と小細胞肺癌を含む）であってもよい。適用する癌は、腫瘍学の分野において任意の既知の癌をさらに含み、これは、星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、乏突起膠腫、上衣細胞腫、髄芽腫、原発性神経外胚葉腫瘍（ＰＮＥＴ）、軟骨肉腫、骨原性肉腫、膵管腺癌、小細胞と大細胞肺腺癌、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、扁平上皮癌、気管支肺胞癌、上皮腺癌、及びそれらの肝転移、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、肝臓癌、胆管癌、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、結腸癌、基底細胞癌、汗腺腫、乳頭状癌、皮脂腺癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎臓細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎仔癌、Ｗｉｌｍｓ腫瘍、精巣腫瘍、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽腫、神経芽腫、白血病、多発性骨髄腫、Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍマクログロブリン血症、乳房腫瘍（例えば、導管腺癌と小葉腺癌）、子宮頸部扁平上皮癌と腺癌、子宮上皮癌と卵巣上皮癌、前立腺腺癌、膀胱移行性扁平上皮癌、ＢとＴリンパ腫（結節性及び分散性）、形質細胞腫、急性と慢性白血病、悪性黒色腫、軟部組織肉腫、及び平滑筋肉腫を含むが、それらに限らない。
いくつかの実施形態において、癌は、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌、ＴＮＢＣ）、胃癌、胆管癌、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、非ホジキンリンパ腫原発性縦隔Ｂ－細胞リンパ腫（ＮＨＬ ＰＭＢＣＬ）、中皮腫、卵巣癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌）、食道癌、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌又は甲状腺癌であってもよい。
いくつかの実施形態において、治療されるべき被験体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非霊長類動物、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトである。いくつかの実施形態において、被験体は、癌に罹患していることが疑われるか、又は癌に罹患しているリスクがあるか、又は異常なＯＸ４０発現若しくは活性を有する癌又は任意の他の疾患と診断されている。
異常なＯＸ４０活性を示す多くの癌又は任意の他の疾患の診断方法及びこれらの疾患の臨床的説明は、当分野の既知のものである。このような方法は、例えば、免疫組織化学、ＰＣＲ、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含むが、それらに限らない。異常なＯＸ４０活性又は発現の診断方法に関する他の詳細は、例えば、Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ． ２２（１）： １２８－１３３、Ｌｏｐｅｚ－Ｒｉｏｓ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ． ６６（５）： ３８１－３８５、Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ ６６（２）： ７９－８９、及びＧｕｈａ ｅｔ ａｌ． （２０１３） ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（６）： ｅ６７７８２に記述されている。
例えば、静脈内、筋肉内又は皮下を含む任意の適切な経路によって投与してもよい。いくつかの実施形態において、本明細書による抗体又は抗体誘導体（又はその断片）及び／又は組成物は、第２、第３又は第４の薬剤（例えば、抗腫瘍薬、増殖阻害剤、細胞傷害性剤又は化学治療剤を含む）と併用投与されて、異常なＯＸ４０活性に関する疾患又は障害を治療することができる。このような薬剤は、例えば、ドセタキセル、ゲフィチニブ、ＦＯＬＦＩＲＩ（イリノテカン、５－フルオロウラシル、及びフォリン酸）、イリノテカン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ抗体）、ＦＯＬＦＯＸ－４、注入フルオロウラシル、フォリン酸とオキサリプラチン、アルファルチニブ、ゲムシタビン、カペシタビン、ペメトレキセド、テカルチニブ、エベロリムス、ＣｐＧ－ＯＤＮ、ラパマイシン、レナリドマイド、ベロフィニル、エンドスタチン、ラパチニブ、ＰＸ－８６６、Ｉｍｐｒｉｍｅ ＰＧＧ、及びイリノチニブを含む。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体（又はその断片）を別の薬剤にコンジュゲートする。
いくつかの実施形態において、本明細書による抗体又は抗体誘導体（又はその断片）及び／又は組成物は、一つ又は複数の他の療法（例えば、放射線療法、手術、化学療法及び／又は標的療法）と併用投与する。いくつかの実施形態において、本明細書による抗体、抗体誘導体（又はその断片）及び／又は組成物は、放射線療法と併用投与する。いくつかの実施形態において、本明細書による抗体、抗体誘導体（又はその断片）及び／又は組成物は、放射線療法と併用されて、本明細書に開示される新生物又は癌の治療に用いる。
治療されるべき適応症及び当業者に周知の投与に関連する要因に応じて、本明細書による抗体又は抗体誘導体は、毒性と副作用を最小限に抑えながら、該適応症を治療するのに有効な用量で投与される。癌の治療において、典型的な用量は、例えば、０．００１から１０００μｇの範囲内であってもよく、しかしながら、該例示的な範囲より低いか又は高い用量は本発明の範囲内である。一日の用量は、総体重の約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、総体重の約０．１μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇ又は総体重の約１μｇ／ｋｇから約１００μｇ／ｋｇであってもよい。上述したように、治療される患者を定期的に評価することで、治療又は予防効果をモニタリングすることができる。数日以上の繰り返し投与については、症状に応じて、所望の疾患症状の抑制が起こるまで繰り返し治療を行う。しかしながら、他の用量方案は、有用である可能性があり、且つ本発明の範囲内にある。所望の用量は、組成物の単回ボーラス投与、組成物の複数回ボーラス投与、又は組成物の連続注入による投与によって送達されてもよい。
本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を含む医薬組成物は、１日１回、２回、３回又は４回投与されてもよい。組成物は、毎日の投与よりも低い頻度、例えば、毎週６回、毎週５回、毎週４回、毎週３回、毎週２回、毎週１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、毎月１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、又は６ヶ月毎に１回、投与されてもよい。組成物は、例えば、インプラントに徐放性製剤で投与されてもよく、該インプラントは、ある期間にわたって使用するために該組成物を徐々に放出し、且つ該組成物をより低い頻度、例えば、毎月１回、２－６ヶ月毎に１回、毎年１回、又はさらに単回投与することを許容する。徐放性装置（例えば、ペレット（ｐｅｌｌｅｔ）、ナノ粒子、マイクロ粒子、ナノスフェア、ミクロスフェアなど）は、注射又は種々の位置に外科的に埋め込むことで投与されてもよい。
例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ縮小、進行時間、生存期間、無進行生存期間、全体の反応率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって、癌の治療を評価してもよいが、それらに限らない。例えば、放射線イメージングによって反応を測定することを含む、治療効果を確定する方法を用いることができる。
いくつかの実施形態において、治療効果を腫瘍増殖阻害パーセント（％ ＴＧＩ）として測定し、等式１００－（Ｔ／Ｃ ｘ １００）を使用して計算され、ここで、Ｔは、治療される腫瘍の平均相対的腫瘍体積であり、Ｃは、未治療の腫瘍の平均相対的腫瘍体積である。いくつかの実施形態において、％ＴＧＩは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％）、約９４％）、約９５％であってもよく、又は９５％よりも多くてもよい。
３．２診断とイメージング方法
標識された抗体又は抗体誘導体は、ＯＸ４０の発現、異常な発現及び／又は活性に関わる疾患及び／又は障害を検出、診断又はモニタリングするように、診断に使用されてもよい。例えば、本明細書による抗体と抗体誘導体は、インサイチュ、インビボ、エクスビボ、及びインビトロ診断アッセイ又はイメージングアッセイに用いられてもよい。ＯＸ４０ポリペプチド発現を検出するための方法は、（ａ） 一つ又は複数の抗体又は抗体誘導体を用いて、個体の細胞（例えば、組織）又は体液におけるポリペプチドの発現を測定することと、（ｂ） 該遺伝子発現レベルと標準的遺伝子発現レベルを比較することであって、標準的な発現レベルに比べて、測定される遺伝子発現レベルの増加又は減少が異常な発現を指示することとを含む。
本発明による別の実施形態は、動物（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）において、ＯＸ４０の発現又は異常な発現に関わる疾患又は障害を診断する方法を含む。該方法は、哺乳動物におけるＯＸ４０分子を検出することを含む。いくつかの実施形態において、診断は、（ａ） 哺乳動物に有効量の標識された抗体又は抗体誘導体を投与することと、（ｂ） 標識された抗体又は抗体誘導体が、被験体のＯＸ４０分子を発現する部位に優先的に濃縮する（且つ結合していない、標識された分子をバックグラウンドレベルまで除去する）ことを可能にするために、投与後に、しばらくの間待つことと、（ｃ） バックグラウンドレベルを確定することと、（ｄ） バックグラウンドレベルにより高い標識された分子の検出が、被験体がＯＸ４０の発現又は異常な発現に関わる特定の疾患又は障害に罹患していることを示すように、被験体における標識された分子を検出することとを含む。バックグラウンドレベルは、異なる方法で確定されてもよく、これらの方法は、検出された標識分子の量をこの前に一つの具体的なシステムに対して確定された標準値と比較することを含む。
本明細書による抗体と抗体誘導体は、当業者に周知の古典的免疫組織学方法を用いて生物サンプルにおけるタンパク質レベルを測定することに用いられてもよい（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １０１：９７６－９８５ （１９８５）、Ｊａｌｋａｎｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． １０５：３０８７－３０９６ （１９８７）を参照されたい）。タンパク質遺伝子発現の検出に有用な、抗体に基づく他の方法は、免疫アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）と放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）を含む。適切な抗体アッセイ標識は、当分野において既知のものであり、且つ酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）、放射性同位体、例えば、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、ルミノール、及び蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン及びビオチン）を含む。
当分野の既知の技術は、本明細による標識された抗体（又はその断片）に応用可能である。このような技術は、二官能性コンジュゲート（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号、第５，７１４，６３１号、第５，６９６，２３９号、第５，６５２，３６１号、第５，５０５，９３１号、第５，４８９，４２５号、第５，４３５，９９０号、第５，４２８，１３９号、第５，３４２，６０４号、第５，２７４，１１９号、第４，９９４，５６０号、及第５，８０８，００３号を参照されたい）を使用することを含むが、それらに限らない。
代替的に、又は付加的に、細胞における、ＯＸ４０ポリペプチドをコードする核酸又はｍＲＮＡのレベルを測定してもよく、例えば、ＯＸ４０をコードする核酸又はその相補的配列に対応する、核酸に基づくプローブを用いる蛍光インサイツハイブリダイゼーション、（ＦＩＳＨ、１９９８年１０月に開示されたＷＯ １９９８／４５４７９を参照されたい）、ＤＮＡブロット法、ＲＮＡブロット法又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術、例えば、リアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）によって測定してもよい。生体液（例えば、血清）における脱落した抗原を測定することによってＯＸ４０の過剰発現を研究することもでき、例えば、抗体に基づくアッセイを用いる（さらに、例えば、１９９０年６月１２日に開示された米国特許第４，９３３，２９４号、１９９１年４月１８日に開示されたＷＯ ９１／０５２６４、１９９５年３月２８日に開示された米国特許第５，４０１，６３８号、及びＳｉａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １３２：７３－８０ （１９９０）を参照されたい）。上記アッセイに加えて、当業者は、様々なインビボとエクスビボアッセイを得ることができる。例えば、哺乳動物体内の細胞を抗体に曝露し、該抗体として、検出可能な標識（例えば、放射性同位体）で任意選択的に標識され、且つ、例えば、放射性の外部走査、又は、以前に抗体に曝露された哺乳動物から採取されたサンプル（例えば、生検又は他の生物学的サンプル）の分析によって、抗体と細胞との結合を評価することができる。
４．薬物製剤
本発明のテーマは、本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体及び薬学的に許容されるキャリア剤を含む薬物製剤をさらに提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本発明のテーマの複数（例えば、二つ又はより多く）の抗体及び／又は抗体誘導体の組み合わせを含んでもよい。
いくつかの実施形態において、開示される薬物製剤は、所望の純度を有する抗体又は抗体誘導体を、一つ又は複数の任意選択的な薬学的に許容されるキャリア剤と組み合わせて調製されてもよく（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ． Ｅｄ （１９８０））、凍結乾燥製剤又は水溶液の形式を呈する。例えば、凍結抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記述されているが、それに限らない。いくつかの実施形態において、水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号とＷＯ ２００６／０４４９０８に記載のものを含んでもよく、後者の製剤は、ヒスチジン－酢酸塩緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約８０％よりも大きく、約９０％よりも大きく、約９１％よりも大きく、約９２％よりも大きく、約９３％よりも大きく、約９４％よりも大きく、９５％よりも大きく、約９６％よりも大きく、約９７％よりも大きく、約９８％よりも大きく、約９９％よりも大きく、約９９．１％よりも大きく、約９９．２％よりも大きく、約９９．３％よりも大きく、約９９．４％よりも大きく、約９９．５％よりも大きく、約９９．６％よりも大きく、約９９．７％よりも大きく、約９９．８％よりも大きく、又は、約９９．９％よりも大きい純度を有してもよい。
薬学的に許容されるキャリア剤は、通常、用いられる用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒であり、且つ、緩衝液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸）、アスコルビン酸とメチオニン酸とを含む酸化防止剤、防腐剤（例えば、ベンジルジメチルオクタデシルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化フェネチルアンモニウム、フェノール、ブタノール又はベンジルアルコール、アルキルパラベン（例えば、メチル又はプロピルパラベン）、カテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（約１０個の残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質、ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシンのようなアミノ酸、単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、ショ糖、マンニトール、トレハロース、又はソルビトールのような糖、ナトリウムのような塩化されたカウンターイオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含むが、それらに限らない。本明細書における例示的な薬学的に許容されるキャリア剤は、間葉系薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）をさらに含む。米国特許第２００５／０２６０１８６と２００６／０１０４９６８号において、ｒＨｕＰＨ２０を含むいくつかの例示的なｓＨＡＳＥＧＰと使用方法が記述されている。いくつかの実施形態において、ｓＨＡＳＥＧＰは、一つ又は複数の別のグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせられる。
キャリア剤は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄投与又は表皮投与（例えば、注射又は注入による）に適してもよい。投与経路に応じて、活性化合物（例えば、本明細書に開示される抗ＯＸ４０抗体又は多重特異性抗体）を、酸及び該化合物を不活性化し得る他の自然条件の影響から該化合物を保護するために、材料でコーティングしてもよい。
本発明の医薬組成物は、併用治療に用いられてもよく、即ち、他の薬剤と併用投与されてもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物は、一つよりも多い活性成分をさらに含んでもよく、これは、治療される特定の適応症に対して必須なものであり、例えば、相補活性を有し且つ互いに不利な影響を発生しないものである。いくつかの実施形態において、薬物製剤は、第１の治療剤によって治療される同じ疾患を治療するための第２の活性成分を含んでもよい。このような活性成分は、所望の目的に有効な量で適宜組み合わせられて存在する。例えば、本発明の製剤は、一つよりも多い活性成分をさらに含んでもよいが、それらに限らず、これは、治療される特定の適応症に対して必須なものであり、好ましくは、相補活性を有し且つ互いに不利な影響を発生しないものである。例えば、同じ疾患を治療するための第２の治療剤をさらに提供することが望まれる可能性がある。このような活性成分は、所望の目的に有効な量で適宜組み合わせられて存在する。
本発明の組成物は、当分野の既知の様々な方法で投与されてもよい。投与経路及び／又は方式は、必要な結果によって決まる。これらの活性化合物は、迅速な放出から化合物を保護するキャリア剤、例えば、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤を用いて調製することができる。生分解性と生体適合性を有するポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸を用いてもよい。このような製剤を調製する多くの方法は、例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８に記述されている。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、米国食品医薬品局の良好な生産規範（ＧＭＰ））条件で生産される。
本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を含む徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例として、抗体又は抗体誘導体の固体疎水性ポリマーを含有する半透過性マトリックスが挙げられ、該マトリックスは、成形品（例えば、フィルム又はマイクロカプセル）の形式である。いくつかの実施形態において、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又は粗エマルジョンにおけるヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセルとポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに、活性成分を包埋することができる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ． Ｅｄ． （１９８０）に開示されている。
いくつかの投与経路によって本発明の抗体又は抗体誘導体を投与するために、該化合物を、その不活性化を防止する材料でコーティングするか、又は該化合物と共に投与することを必要とする可能性がある。例えば、適切なキャリア剤（例えば、リポソーム）又は希釈剤において、化合物を被験体に投与してもよい。薬学的に許容される希釈剤は、生理食塩水と緩衝水溶液を含む。リポソームは、水中油中水型ＣＧＦエマルジョン及び従来のリポソーム（Ｓｔｒｅｊａｎ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ７：２７）を含む。
薬学的に許容されるキャリア剤は、無菌水溶液又は分散液及び無菌注射可能溶液又は分散液の一時的な調製のための無菌粉末を含む。このような媒体及び薬剤を薬学的活性のために使用する物質は、当分野において既知のものである。
任意の従来の媒体又は薬剤が活性化合物に対して適合性を有しない場合を除いて、それを本発明の医薬組成物に用いることを考慮してもよい。補足的な活性化合物を組成物にドープしてもよい。
治療用組成物は、通常、無菌で、基本的に等張性を有し、且つ生産及び貯蔵条件で安定したものでなければならない。該組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序構造として調合されてもよい。該キャリア剤は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であってもよい。適切な流動性は、（例えば）コーティング（例えば、レシチン）の使用によって維持されてもよく、分散液の場合には所望の粒子サイズの維持によって維持され、且つ界面活性剤の使用によって、維持される。多くの場合、組成物に等張剤、例えば、糖、ポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、又は塩化ナトリウムが含まれることが好ましい。例えば、モノステアレート及びゼラチンのような吸収遅延薬剤を組成物に含有させることによって、これらの注射用組成物の長期吸収を実現させることができる。
無菌注射溶液は、所望の量の一つ又は複数の本明細書に開示される抗体又は抗体誘導体を、必要に応じて、適切な溶媒と上に列挙した成分の一つ又は複数との組み合わせと共にドープし、次いで、滅菌精密ろ過（例えば、無菌濾過膜による濾過）を行うことによって調製されてもよい。通常、分散液は、活性化合物を無菌媒体にドープすることによって調製され、該無菌媒体は、基本分散媒及び以上に列挙したものからの他の所望の成分を含む。無菌注射可能溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥と凍結乾燥（凍乾）であり、該方法は、その前の無菌濾過溶液から、活性成分と任意の他の所望の成分の粉末を産生する。
当分野の既知の医療装置を用いて治療性組成物を投与することもできる。例えば、本発明の治療組成物は、針のない皮下注射装置、例えば、米国特許第５，３９９，１６３、５，３８３，８５１、５，３１２，３３５、５，０６４，４１３、４，９４１，８８０、４，７９０，８２４又は４，５９６，５５６号に開示されている装置と共に投与されてもよい。本発明に用いることができるインプラントとモジュールの例として、制御された速度で薬物を分配するための植え込み型マイクロ輸液ポンプを開示した米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を通して薬物を投与するための治療装置を開示した米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示した米国特許第４，４４７，２３３号、連続的な薬物送達のための可変流量の植え込み可能な注入機器を開示した米国特許第４，４４７，２２４号、マルチコンパートメントを有する浸透性薬物送達システムを開示した米国特許第４，４３９，１９６号、及び浸透性薬物送達システムを開示した米国特許第４，４７５，１９６号が挙げられる。多くのこのようなインプラント、送達システム及びモジュールが知られている。
治療用組成物について、本発明の製剤は、経口、経鼻、局所（頬側と舌下を含む）、直腸、膣内及び／又は非経口投与に適したそれらの製剤を含む。これらの製剤は、単位剤形で好都合に存在してもよく、且つ薬学分野で既知の任意の方法によって調製されてもよい。単一剤形を生成するためにキャリア剤材料と組み合わせることができる抗体又は抗体誘導体の量は、治療される被験体と特定の投与方式に応じて変わる。単一剤形を生成するためにキャリア剤材料と組み合わせることができる抗体又は抗体誘導体の量は、通常、治療効果をもたらす組成物の量である。通常、該量は、パーセンテージで、約０．０１％から約９９％、約０．１％から約７０％、又は約１％から約３０％の活性成分である。
本発明の組成物の局所投与又は経皮投与のための剤形としては、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液、パッチ剤及び吸入剤が挙げられる。活性化合物を、無菌条件で、薬学的に許容されるキャリア剤及び必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液又は推進剤と混合してもよい。
「非経口投与」及び「非経口による投与」という語句は、通常、注射による、経腸投与と局所投与以外の投与モードを指し、且つ静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、真皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射と注入を含むが、それらに限らない。
これらの医薬組成物は、補助剤、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤をさらに含んでもよい。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順によって、及び様々な抗菌剤と抗真菌剤、例えば、パラベン（ｐａｒａｂｅｎ）、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含むことによって確保され得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどをこれらの組成物に含ませることも望ましい場合がある。さらに、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムとゼラチンを含むことによって、注射可能な薬物形式の持続的な吸収を引き起こすことができる。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体又は抗体誘導体を薬物としてヒト及び動物に投与する場合、それらは、単独で、又は薬学に許容されるキャリア剤と組み合わせて、医薬組成物として投与することができ、該医薬組成物は、例えば、約０．０１％から約９９．５％（又は約０．１％から約９０％）の抗体又は抗体誘導体を含む。
５．製品
現在開示されるテーマは、上記障害の治療、予防及び／又は診断に用いられる材料を含む製品をさらに提供する。
いくつかの実施形態において、製品は、容器と、容器上の又は容器に関連するラベル又は包装インサートとを含む。好適な容器の非限定的な例としては、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、様々な材料（例えば、ガラス又はプラスチック）により形成されてもよい。容器は、（それ自体、又は別の組成物との組み合わせで）疾患を治療、予防、及び／又は診断するのに有効な組成物を収容し、そして無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。
いくつかの実施形態において、組成物における少なくとも一つの活性剤は、本発明の抗体又は抗体誘導体である。ラベル又は包装インサートは、組成物が選択された病症の治療に使用されることを指示することができる。
いくつかの実施形態において、該製品は、（ａ） 本発明の抗体又は抗体誘導体を含む組成物が入れられた第１の容器と、（ｂ）他の細胞傷害性又は治療剤を含む組成物が入れられた第２の容器とを含んでもよい。いくつかの実施形態において、製品は、組成物が特定の病症の治療に使用され得ることを指示する包装インサートをさらに含んでもよい。
代替的に又は付加追加的に、製品は、別の容器、例えば、第２又は第３の容器をさらに含んでもよく、それは、薬学的に許容される緩衝剤、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含むが、それらに限らない。該製品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
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以下の実施例は、本発明のテーマに関する説明だけであり、いかなる方式で限定のためのものと見なされるべきではない。
実施例１ 抗ＯＸ４０ ＶＨＨ抗体の免疫、生成及び認識
Ｈｉｓタグ（ＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓ）又はヒトＩｇＧ１－Ｆｃ（ＯＸ４０－ＥＣＤ－Ｆｃ）にコンジュゲートする組換えヒトＯＸ４０細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質は、社内（ｉｎ－ｈｏｕｓｅ）で調製され、標準的な手順に従ってラマ（ｌｌａｍａ）の免疫に用いられた。ＥＬＩＳＡ法で血清抗体力価を測定し、四回の免疫（一回目にＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓを使用し、三回目にＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｆｃを使用し）を行ったあト、抗体力価は、１：１００，０００以上に達した。そして、全血を収集し、ＰＢＭＣ単離に用いた。精製したＰＢＭＣから総ＲＮＡを抽出し、逆転写してｃＤＮＡを生成し、標準的な手順に従ってＰＣＲによりさらに増幅を行った。ＶＨＨ抗体遺伝子断片は、ＰＣＲにより増幅され、ゲルで精製され、ファージミドベクターｐＡＤＬ－２３ｃ （Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ ＃ＰＤ０１１１）にサブクローニングされ、ＴＧ１電気穿孔受容細胞（Ｌｕｃｉｇｅｎ）に形質転換された。形質転換したＴＧ１細胞を２ｘＹＴ培地で培養し、ヘルパーファージを加え、一晩共培養し、標的ＶＨＨをディスプレイするファージを産生した。培養上澄み液におけるファージを遠心分離により収穫し、ストレプトアビジンにカップリングしたＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ２８０ （ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ＃１１２０５Ｄ）を用いて三回のパニングを行い、一回目ではビオチン化したヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｆｃでコーティングし、二回目及び三回目ではビオチン化したヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓでコーティングした。ヒトＯＸ４０結合剤をディスプレイするファージは溶出され、ＳＳ３２０細胞の感染に用いられた。コロニーをピッキングし、ＩＰＴＧ含有２ｘＹＴ培地において培養して、ＶＨＨ抗体を分泌した。ヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｆｃ又はヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓプレコーティングプレートを使用し、ＥＬＩＳＡによりＶＨＨ抗体を含有する上澄み液をスクリーニングした。先行する（ｔｏｐ）のヒトＯＸ４０結合タンパク質を選択し、シーケンシングし、それは、５Ｅ１０を含み、そのＣＤＲ及びＶＨＨ配列は、配列表（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～５）に示すとおりであった。
ラマＶＨＨクローン５Ｅ１０とヒトＩｇＧ１ Ｆｃとを融合させ、キメラ二価抗体（ｃ５Ｅ１０）を形成し、図１Ａ及び配列表に示すとおりであった。該タンパク質をＥｘｐｉＣＨＯ細胞において発現させ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。ＥＬＩＳＡにより、二価ｃ５Ｅ１０とヒト及びマウスＯＸ４０との結合親和性を測定した。簡単に言えば、１μｇ／ｍｌ Ｆｃと融合したヒト又はマウスＯＸ４０ ＥＣＤを９６ウェル高結合プレートでコーティングし、４℃で一晩過ごした。ＰＢＳにおける３％ ＢＳＡでブロッキングした後、５倍の連続希釈ビオチン標識ｃ５Ｅ１０を加え、ＲＴで１時間インキュベートした。ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０で５回洗浄した後、ＨＲＰコンジュゲートしたアビジン及びそれに続くＴＭＢ基質により、結合したｃ５Ｅ１０を検出した。図１Ｂに示すように、ｃ５Ｅ１０は、ヒトＯＸ４０に用量依存的に結合したが、マウスＯＸ４０に結合しなかった。
ＯＸ４０ ＥＣＤは、四つのシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）を含み、そのリガンドの結合を許容し、それにより受容体の凝集と下流シグナルの活性化を引き起こした。ｃ５Ｅ１０がマウスＯＸ４０に結合しないため、ヒト－マウスＯＸ４０キメラを調製し、ここで、各ヒトＯＸ４０ ＣＲＤはいずれもマウスＯＸ４０対応物で置換され、図１Ｃに示すように、それは、ｃ５Ｅ１０結合ＯＸ４０ ＣＲＤドメインの認識に用いられた。ヒトＯＸ４０ ＥＣＤ又はヒト－マウスキメラＥＣＤとヒトＩｇＧ１ Ｆｃとを融合させ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティークロマトグラフィーにより、該融合タンパク質を精製した。１μｇ／ｍｌ Ｆｃ融合ヒトＯＸ４０ ＥＣＤ又はヒト－マウスＯＸ４０キメラＥＣＤを９６ウェル高結合プレートでコーティングし、４℃で一晩過ごし、以上に記載のＥＬＩＳＡにより、ビオチン標識ＯＸ４０抗体とこれらのタンパク質との結合を測定した。ヒトＣＲＤ２の置き換えは、ｃ５Ｅ１０とヒトＯＸ４０との結合をほぼ完全に除去し（図１Ｄ）、ｃ５Ｅ１０がヒトＯＸ４０ ＣＲＤ２に結合することを示した。抗ＯＸ４０抗体ＰＦ－８６００及びＭＥＤＩ０５６２は、対照として用いられた。ＰＦ－８６００は、米国特許第７，９６０，５１５号に開示された配列に基づいて社内で合成された。ＭＥＤＩ０５６２は、米国公開番号２０１６／０１３７７４０Ａ１に開示された配列に基づいて社内で合成された。図１Ｄに示すように、ＰＦ－８６００類似体がｍＤ１キメラに結合しなかったことは、ＰＦ－８６００類似体がヒトＯＸ４０ ＣＲＤ１に結合することを示し、ＭＥＤＩ０５６２類似体とｍＤ３との結合が急激に低下したことは、ＭＥＤＩ０５６２類似体がヒトＯＸ４０ ＣＲＤ３に結合することを示した。
ｃ５Ｅ１０、ＰＦ－８６００類似体とＭＥＤＩ０５６２類似体の結合エピトープを比較するために、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＡＨＣ）バイオセンサを用いてＯｃｔｅｔ競合結合分析を行い、まず、一つの抗体をロードし、そして表３に示される別の抗体をロードした。表３に示すように、ｃ５Ｅ１０は、ＰＦ－８６００類似体又はＭＥＤＩ０５６２類似体と競合せず、これは、それらが異なるＯＸ４０ ＣＲＤに結合した事実と一致した。
Figure 2025501522000018
実施例２． 抗ＯＸ４０ ＶＨＨ抗体のヒト化及び親和性成熟
ラマ５Ｅ１０配列を用いてＩｇＢｌａｓｔ分析を行って、データベースにおけるヒト生殖系列遺伝子を検索した。ラマ５Ｅ１０のＣＤＲを、最適にマッチしたヒト生殖系列ＩＧＨＶ３－２３に移植し、フレームワーク２内で突然変異Ｖ３７Ｆ及びＷ４７Ｆを復帰させることで、ヒト化を実現し、その理由は、これら二つのＰｈｅ（Ｆ）がラマ標識残基であることであった。親和性成熟のために、ＮＮＫベースのプライマーを設計して高度に可変なＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３をコードした。ＰＣＲアセンブリを用いて、部位飽和変異誘発を含むライブラリーを調製し、それをファージミドベクターｐＡＤＬ－２３ｃにクローニングした。ライブラリーＤＮＡをＴＧ１細胞に形質転換し、クローン配列を検査してランダムな品質を確保した。未加熱又は熱処理したファージとヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓでコーティングしたビーズをインキュベートして二回のパニングを行った後、溶出したファージでＳＳ３３０細胞を感染し、コロニーをピッキングし、ＩＰＴＧを含む２ｘＹＴ培地で培養した。ヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｆｃ又はヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｈｉｓプレコーティングプレートを使用し、ＥＬＩＳＡにより上澄み液におけるＶＨＨ抗体とヒトＯＸ４０との結合を測定した。最初の１５個のクローンとそれらのＣＤＲ及びＶＨＨ配列は、配列表に（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６～８０）に示された。
これら１５個のクローンの二価抗体は、ＶＨＨとヒトＩｇＧ１ Ｆｃとを融合させることで調製され、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞で発現し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラムにより精製された。ヒトＯＸ４０でトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ細胞（ヒトＯＸ４０／Ｊｕｒｋａｔ） （図２Ａ）、ヒトＯＸ４０でトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（ヒトＯＸ４０／ＣＨＯ） （図２Ｂ）及びカニクイザルＯＸ４０でトランスフェクトしたＣＨＯ細胞（カニクイザルＯＸ４０／ＣＨＯ） （図２Ｃ）を使用して、フローサイトメトリーによりＶＨＨ－Ｆｃ二価抗体とヒト又はカニクイザルＯＸ４０との結合親和性を評価した。指示濃度を有するこれらの抗体と細胞を氷の上でＦＡＣＳ緩衝液（３％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）において３０ｍｉｎインキュベートし、そしてＦＡＣＳ緩衝液を用いて遊離抗体を洗い落とした。Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ４８８にカップリングした抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（１：５００） （Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃｇ断片特異性、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｓ）と細胞を氷の上でさらに３０ｍｉｎインキュベートした。細胞を洗浄して遊離抗体を除去し、そしてＣｙｔｏＦｌｅｘ （Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いてＦＡＣＳ分析を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ３パラメータ論理方程式で結合親和性を計算した。図２Ａ～２Ｃに示すように、これらのクローンは、ヒトＯＸ４０を発現する細胞とカニクイザルＯＸ４０を発現する細胞の両者に結合した。
実施例３． 抗ＯＸ４０抗体のインビトロ特徴付け
抗ＯＸ４０四価抗体を構築し、ここで、クローン１Ｂ３又はクローン２Ｂ７ ＶＨＨ配列でヒトＩｇＧ１重鎖と軽鎖可変領域を置き換え、そしてＶＨＨとＩｇＧ１のＣＨ１又はＣＬとの間にＧＳリンカーを挿入した。四価抗体の構造は、図３Ａに示すとおりであった。四価抗体は、瞬時トランスフェクトしたＥｘｐｉＣＨＯ細胞により産生し、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａアフィニティーカラムにより精製された。バイオセンサ上に固定されたヒトＯＸ４０ ＥＣＤ－Ｆｃを使用し、Ｏｃｔｅｔ結合試験により１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体とヒトＯＸ４０との結合動力学と親和性を測定した。１Ｂ３及び２Ｂ７二価及び四価抗体の平衡解離定数（ＫＤ） を計算した（表４）。二価及び四価抗体は、いずれもヒトＯＸ４０に対して高い結合親和性を示した。
Figure 2025501522000019
上記手順で、ヒトＯＸ４０／Ｊｕｒｋａｔ細胞及びヒトＯＸ４０／ＣＨＯ細胞を使用して、フローサイトメトリーにより抗ＯＸ４０抗体の結合親和性をさらに評価した。図４Ａ及び４Ｂに示すように、二価抗体及び四価抗体は、いずれも、ヒトＯＸ４０を発現するＪｕｒｋａｔ及びＣＨＯ細胞に対して、顕著に高い結合親和性を示した。図４Ｃに示すように、四価抗体が、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞に結合しなかったことは、抗体がトランスフェクト細胞上で発現したヒトＯＸ４０と特異的に相互作用することを示した。カニクイザルＯＸ４０／ＣＨＯ細胞を使用して、ＦＡＣＳ分析によりカニクイザルＯＸ４０に対する抗体の交差反応性を評価した。ヒトＯＸ４０に比べて、１Ｂ３及び２Ｂ７抗体はいずれも、類似した親和性でカニクイザルＯＸ４０に結合した（図４Ｄ）。
ブドウ球菌エンテロ毒素Ｂ（ＳＥＢ）でヒト末梢血リンパ球（ＰＢＭＣ）を刺激することで、抗ＯＸ４０抗体（１Ｂ３－ｔｅｔｒａ及び２Ｂ７－ｔｅｔｒａ）の共刺激活性を評価した。ＦｃγＲＩＩＢ架橋のないアッセイにおいて、１００ｎｇ／ｍｌ ＳＥＢ （Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｃａｔ． ＢＴ２０２ｒｅｄ）でヒトＰＢＭＣを刺激し、１：５勾配希釈した１Ｂ３－ｔｅｔｒａ又は２Ｂ７－ｔｅｔｒａを３７℃で、５％ＣＯ２インキュベータにおいて２日間インキュベートした。ＦｃγＲＩＩＢ結合による架橋のアッセイにおいて、１０，０００個のＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレートに接種して一晩過ごした。翌日、ヒトＰＢＭＣを加え、１Ｂ３－ｔｅｔｒａ又は２Ｂ７－ｔｅｔｒａの存在下で、１００ｎｇ／ｍｌ ＳＥＢで２日間刺激した。ヒトＩＬ－２ ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ｃａｔ． ＴＲＦ１２２１）を使用して培養物上澄み液におけるＩＬ－２に対して定量を行った。図５Ａに示すように、ＰＢＭＣとＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３が共培養される場合、１Ｂ３－ｔｅｔｒａ及び２Ｂ７－ｔｅｔｒａは、ＩＬ－２の発現を用量依存的に増加した。ＦｃγＲＩＩＢで架橋されていないと、抗ＯＸ４０抗体は、ＳＥＢで活性化されたＰＢＭＣにおけるＩＬ－２の放出を向上させることができなかった（図５Ｂ）。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体が、阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢにより媒介される架橋を必要とせずにＯＸ４０シグナルを活性化でき、ＦｃγＲＩＩＢ発現の高くない末梢組織においてＯＸ４０シグナルを活性化することによって、末梢毒性を引き起こすことができるため、結果として抗ＯＸ４０抗体の臨床安全性が示唆された。
Ｔ細胞の活性化と増殖に対する２Ｂ７－ｔｅｔｒａのアゴニスト作用を更に研究し、二つの参照抗ＯＸ４０抗体と比較した。参照１は、ＩＢＩ－１０１に基づいて社内で合成されたものであり、その配列は、ＵＳ２０２００１４０５６２Ａ１に開示された。参照２は、ＢＧ４４５－３に基づいて社内で合成されたものであり、その配列は、ＷＯ ２０１９２２３７３３Ａ１に開示された。マイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３ （１０，０００個の細胞／ウェル）が存在するか又は存在しない場合に、精製したＴ細胞（０．１ｘ１０６ Ｔ細胞／ウェル）を、指定されたＯＸ４０抗体及び抗ＣＤ３ビーズ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ｃａｔ． １１１５１Ｄ）（ビーズ：Ｔ細胞の割合＝１：１） で３日間刺激した。ヒトＩＬ－２及びＩＦＮγ （ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ｃａｔ． ＴＲＦ１２１７） ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＴＲ－ＦＲＥＴ検出キットを採用して培養上澄みにおけるＩＬ－２とＩＦＮγを測定した。Ｔ細胞とＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３が共培養される場合、２Ｂ７－ｔｅｔｒａ及び参照抗体がＴ細胞を共刺激できることは、ＩＬ－２及びＩＦＮγ分泌の濃度依存的増加により実証された（図６Ａ及び６Ｃ）。ＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３が存在しない場合に、これらの抗ＯＸ４０抗体は、抗ＣＤ３で刺激されたＴ細胞からのＩＬ－２又はＩＦＮ－γ放出を強化できなかった（図６Ｂ及び６Ｄ）。
抗ＯＸ４０抗体によるＴ細胞増殖への影響を評価するために、精製したＴ細胞とマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３を共培養し、抗ＣＤ３ビーズ及び抗ＯＸ４０抗体で５日間刺激した。そして各ウェルに２０μｌ ３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－５－（３－カルボキシメトキシフェニル）－２－（４－スルホフェニル）－２Ｈ－テトラゾール （ＭＴＳ，Ｐｒｏｍｅｇａ，ｃａｔ． Ｇ３５８０）を加え、且つ発色後にＯＤ４９０を測定した。図７Ａ及び７Ｂに示すように、ＨＥＫ２９３上で発現したＦｃγＲＩＩＢにより架橋する場合、２Ｂ７－ｔｅｔｒａ及び参照抗体は、Ｔ細胞増殖を促進し（図７Ａ）、そしてＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３がＴ細胞と共培養されない場合、これらの抗体は、不活性化したものであった（図７Ｂ）。
ＭＴＳアッセイに加えて、カルボキシフルオレセインイソサクシンイミドエステル（ＣＦＳＥ）で標識されたＴ細胞とマイトマイシンＣで処理されたＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３を共培養し、抗ＣＤ３ビーズ及び抗ＯＸ４０抗体で５日間刺激した。そしてＦＡＣＳ分析の前に、Ｓｙｔｏｘ Ｒｅｄを用いて細胞を染色して生細胞と死細胞を区別した。図７Ｃは、Ｓｙｔｏｘ Ｒｅｄ陰性ゲートにおける生細胞の集団を示し、ここで、ＣＦＳＥ陰性細胞は、ＦｃγＲＩＩＢ／ＨＥＫ２９３細胞であり、高いＣＦＳＥを含有する細胞は、未増殖の休止Ｔ細胞であり、希釈したＣＦＳＥレベルを含有する細胞は、増殖したＴ細胞であった。結果によると、ＯＸ４０抗体がＴ細胞増殖を促進するとともに、ＣＦＳＥ希釈した増殖Ｔ細胞が増加し、休止Ｔ細胞が減少したことを示した。以下の式で増殖したＴ細胞のパーセントをさらに計算した。増殖したＴ細胞／（増殖したＴ細胞＋非増殖のＴ細胞）＊１００。そして図７Ｄに示した。結果によると、２Ｂ７－ｔｅｔｒａ及び参照抗体が用量依存的な方式でＴ細胞増殖を誘導し、ＭＴＳアッセイにおいて観察した状況と類似していることを示した。
実施例４． ＭＣ３８結腸腫瘍モデルにおける抗ＯＸ４０抗体のインビボ特徴付け
ＭＣ３８腫瘍モデルにおいて、抗ＯＸ４０抗体の抗腫瘍効果を評価した。マウスＭＣ３８結腸腫瘍細胞をヒトＯＸ４０ノックイン Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＵＳＡ）に皮下埋め込みした。腫瘍サイズが約６０ｍｍ３に達した時、マウスを各群８匹にランダムに分け、２Ｂ７－ｔｅｔｒａを週に二回、３週間にわたり腹腔内投与した。腫瘍体積（ＴＶ）は、以下の式で計算した。Ｖ＝０．５＊（ａ＊ｂ２）。ここで、ａとｂはそれぞれ腫瘍の長径と短径である。腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）は、以下の式で計算した。ＴＧＩ＝［１－（Ｔｔ－Ｔ０）／（Ｃｔ－Ｃ０）］×１００％。ここで、Ｔ０とＴｔは、抗体治療群における時間０とｔでの平均ＴＶであり、Ｃ０とＣｔは、溶媒群における時間０とｔでの平均ＴＶである。２Ｂ７は、ＭＣ３８腫瘍増殖に対して用量依存的な阻害作用を示し、治療後１５日目、１ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇの２Ｂ７による腫瘍増殖の阻害は、それぞれ１９．５％と６１．０％であった （図８Ａ）。各群間のマウス体重差が極めて小さく（図８Ｂ）、そして治療中に毒性現象が観察されなかった。
２Ｂ７と上記参照１及び参照２の抗腫瘍活性を比較するために、さらにマウスに各抗体３ｍｇ／ｋｇを週に二回、３週間にわたり腹腔内注射した。図８Ｃに示すように、研究の全過程において、二つの参照抗体に比べて、２Ｂ７は、より効果的な抗腫瘍作用を示した。治療後１７日目、２Ｂ７、参照１及び参照２のＴＧＩは、それぞれ４８．８％、４１．７％及び３５．３％であった。図８Ｄは、各群における経時的に変化した個体腫瘍の体積を示した。
実施例５． ＣＴ２６結腸癌モデルにおける抗ＯＸ４０抗体のインビボ特徴付け
ヒトＯＸ４０ノックインＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸癌モデルを確立し、抗ＯＸ４０抗体（Ｃｒｏｗｎｂｉｏ，Ｔａｉｃａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）の抗腫瘍活性の分析に用いた。ＣＴ２６腫瘍サイズが約６５ｍｍ３に達した時、マウスをランダムにグループ分けし、各群８匹のマウスとし、２Ｂ７－ｔｅｔｒａ及び参照２抗体を週に二回腹腔内注射して治療を行った図９Ａに示すように、溶媒群に比べて、２Ｂ７は、３ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇの場合に、用量依存的な抗腫瘍作用を示した。なお、同じ３ｍｇ／ｋｇの用量の場合、参照２に比べて、２Ｂ７は、より強い抗腫瘍作用を示した。具体的には、治療後１８日目、溶媒対照群における平均腫瘍サイズが２３９３．１ｍｍ３に達したが、２Ｂ７－ｔｅｔｒａ ３ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇ群における平均腫瘍体積がそれぞれ１３２１．７と８２５．５ｍｍ３であり、これは、ＴＧＩがそれぞれ４６．０％と６７．３％であることを表した。３ｍｇ／ｋｇ参照２を受けたマウスにおいて、１８日目の平均腫瘍体積とＴＧＩは、１９５５．２ｍｍ３、１８．８％であった。各群の経時的に変化した個体腫瘍体積は、図９Ｂに示すとおりであった。２Ｂ７と参照２治療群におけるマウス平均体重が溶媒群と有意差を示しておらず（図９Ｃ）、該研究において２Ｂ７と参照２が良好な耐性を有することを示した。
実施例６． Ｐａｎ０２膵臓腫瘍モデルにおける抗ＯＸ４０抗体のインビボ特徴付け
ＭＣ３８とＣＴ２６腫瘍モデルに比べて、Ｐａｎ０２膵臓腫瘍モデルのエフェクターＴ細胞が明かに少なく、浸潤Ｔ細胞が阻害され、通常、チェックポイント阻害剤にはあまり敏感ではなかった。Ｐａｎ０２腫瘍モデルにおいて、２Ｂ７－ｔｅｔｒａを単独で使用するか又はマウスＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４と併用した抗腫瘍活性を研究した。Ｐａｎ０２細胞株をヒトＯＸ４０ノックインＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下埋め込みした（Ｃｒｏｗｎｂｉｏ，Ｔａｉｃａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）。腫瘍サイズが９２．６ｍｍ３に達した時、マウスをランダムにグループ分けし、各群１０匹とし、１又は５ｍｇ／ｋｇ ２Ｂ７、又は５ｍｇ／ｋｇ参照２抗体を３日ごとに一回腹腔内投与した。図１０Ａに示すように、５ｍｇ／ｋｇの２Ｂ７は、統計学的には、５ｍｇ／ｋｇの参照２よりも効果的であった（ｐ＝０．０１４）。３８日目に、１ｍｇ／ｋｇの２Ｂ７、５ｍｇ／ｋｇの２Ｂ７及び５ｍｇ／ｋｇの参照２のＴＧＩは、それぞれ６４．７％、７８．１％及び５５．５％であった。
報告によると、いくつかのマウスモデルにおいて、抗ＯＸ４０抗体と抗ＰＤ１抗体を順次投与することは、単一の抗体による治療及び抗ＯＸ４０と抗ＰＤ１抗体の同時投与よりも効果的であった。抗ＯＸ４０と抗ＰＤ１による併用治療の順序とタイミングがＰａｎ０２腫瘍モデルにおいて非常に重要であるかどうかを確定するために、上記研究はさらに、（１）マウスに５ｍｇ／ｋｇ ２Ｂ７と２ｍｇ／ｋｇ ＲＭＰ１－１４を３日ごとに一回、計１２回同時投与した併用治療群と、（２）マウスに、０、３、６、１８、２１及び２４日目に、５ｍｇ／ｋｇ ２Ｂ７を投与し、９、１２、１５、２７、３０及び３３日目に、２ｍｇ／ｋｇ ＲＭＰ１－１４を投与した併用治療群と、（３）マウスに、０、３、６、１８、２１及び２４日目に、２ｍｇ／ｋｇ ＲＭＰ１－１４を投与し、９、１２、１５、２７、３０及び３３日目に、５ｍｇ／ｋｇ ２Ｂ７を投与した併用治療群をさらに含んだ。図１０Ｂに示すように、単独の抗ＰＤ１抗体ＲＭＰ１－１４は、Ｐａｎ０２腫瘍モデルにおいて無効であり、２ｍｇ／ｋｇ ＲＭＰ１－１４は、３８日目のＴＧＩが２３．２％であった。マウスに２Ｂ７を投与し、その後ＲＭＰ１－１４の投与を遅延させた場合、同時投与による治療よりも良好な抗腫瘍活性を示し、そしてＲＭＰ１－１４を先に投与し、その後２Ｂ７の投与を遅延させた場合、併用方案のうち、活性が最も小さかった（図１０Ｂ）。３８日目に、同期投与による治療、ＲＭＰ１－１４と遅延した２Ｂ７による併用治療、２Ｂ７と遅延したＲＭＰ１－１４による併用治療のＴＧＩは、それぞれ６８．０％、３０．４％及び６９．８％であった。予想外に、５ｍｇ／ｋｇ ２Ｂ７を単独で使用した場合、すべての併用療法よりも高いＴＧＩ （７８．１％）を示した。これらの群におけるマウス体重には有意差がなかった（図１０Ｃ）。各治療群の経時的に変化した個体腫瘍体積は、図１０Ｄに示すとおりであった。
図示及び特許請求された様々な実施形態に加えて、開示されたテーマは、本明細書によって開示されて特許請求された特徴の他の組み合わせを有する他の実施形態をさらに対象とする。そのため、本明細書で提示される特定の特徴は、開示されるテーマが本明細書に開示される特徴の任意の適切な組み合わせを含むように、開示されるテーマの範囲内で他の方法で互いに組み合わせられてもよい。開示されたテーマの具体的な実施形態の上記の説明は、例示及び説明の目的で提供されている。上記の説明は、網羅的であること、又は開示されたテーマを開示されたそれらの実施形態に限定することを意図していない。
開示されたテーマの精神又は範囲から逸脱することなく、開示されたテーマの構成と方法に対する様々な修正と変更を行うことができることは、当業者には明らかであろう。そのため、開示されたテーマは、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内にある修正と変更を含むことが意図される。
様々な刊行物、特許、及び特許出願が、本明細書に援用され、その内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (115)

  1. ＯＸ４０に結合する抗体であって、１ｘ１０－７Ｍ又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する単一ドメインを含む、ＯＸ４０に結合する抗体。
  2. 前記単一ドメイン抗体は、５ｘ１０－８Ｍ 又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記単一ドメイン抗体は、１ｘ１０－８Ｍ 又はより小さいＫＤでＯＸ４０に結合する、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. 前記単一ドメイン抗体は、約１ｘ１０－１０Ｍから約５ｘ１０－８ＭのＫＤでＯＸ４０に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
  5. 前記単一ドメイン抗体は、ＶＨＨを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
  6. 前記単一ドメイン抗体又は前記ＶＨＨは、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
  7. 前記単一ドメイン抗体は、ＯＸ４０への結合について、参照抗ＯＸ４０単一ドメイン抗体と交差競合し、参照抗ＯＸ４０単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
    ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｍ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｎ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
    ｏ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、又は、
    ｐ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
  8. 前記単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
    ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、６、１１、１６、２１、２６、３１、３６、４１、４６、５１、５６、６１、６６、７１又は７６のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
    ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、７、１２、１７、２２、２７、３２、３７、４２、４７、５２、５７、６２、６７、７２又は７７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、
    ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、８、１３、１８、２３、２８、３３、３８、４３、４８、５３、５８、６３、６８、７３又は７８のうちのいずれか一つのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の、多くとも約３つのアミノ酸置換を含む変異体を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
  9. 前記単一ドメイン抗体は、重鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域は、ＣＤＲ１ドメインと、ＣＤＲ２ドメインと、ＣＤＲ３ドメインとを含み、ここで、前記ＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインは、それぞれ、参照重鎖可変領域に含まれるＣＤＲ１ドメイン、ＣＤＲ２ドメイン及びＣＤＲ３ドメインを含み、該参照重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  11. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  12. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  13. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  14. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  15. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  16. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  17. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  18. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  19. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  20. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  21. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  22. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  23. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  24. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  25. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体。
  26. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、９、１４、１９、２４、２９、３４、３９、４４、４９、５４、５９、６４、６９、７４及び７９から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体。
  27. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  28. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  29. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  30. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  31. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  32. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  33. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  34. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  35. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  36. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  37. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  38. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  39. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  40. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  41. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７４に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  42. 前記単一ドメイン抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
  43. 前記単一ドメイン抗体は、ヒト化フレームワークを含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の抗体。
  44. 前記単一ドメイン抗体は、Ｆｃ領域を含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の抗体。
  45. 前記Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域を含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体。
  46. 前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭのＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載の抗体。
  47. 前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＦｃ領域から選択されるＦｃ領域を含む、請求項１～４６のいずれか一項に記載の抗体。
  48. 前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の抗体。
  49. 前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体との共有結合を強化する一つ又は複数の突然変異を含む、請求項４８に記載の抗体。
  50. 前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ又はそれらの組み合わせとの共有結合を強化する一つ又は複数の突然変異を含む、請求項４９に記載の抗体。
  51. 前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む、請求項４８又は４９に記載の抗体。
  52. 前記ＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆの突然変異を含む、請求項４８又は４９に記載の抗体。
  53. 前記重鎖可変領域は、リンカーを介してＦｃ領域に連結される、請求項１～５２のいずれか一項に記載の抗体。
  54. 前記リンカーは、ペプチドリンカーである、請求項５３に記載の抗体。
  55. 前記ペプチドリンカーは、約４から約３０個のアミノ酸を含む、請求項５４に記載の抗体。
  56. 前記ペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７～１４０から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５４又は５５に記載の抗体。
  57. アゴニスト抗体である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の抗体。
  58. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９５に示すアミノ酸配列を含むヒト ＯＸ４０ ポリペプチドのドメイン ２に結合する、請求項１～５７のいずれか一項に記載の抗体。
  59. 前記抗体は、二価、三価、四価、五価、六価、七価又は八価のものである、請求項１～５８のいずれか一項に記載の抗体。
  60. 前記抗体は、二価のものである、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体。
  61. 前記抗体は、四価のものである、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体。
  62. 前記抗体は、六価のものである、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体。
  63. 前記抗体は、ＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む重鎖を含む、請求項１～６２のいずれか一項に記載の抗体。
  64. 前記抗体は、ＶＨＨドメインと、ＣＨ１ドメインと、Ｆｃ領域とを含む重鎖を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載の抗体。
  65. 前記抗体は、ＶＨＨドメインとＣＬドメインとを含む軽鎖を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の抗体。
  66. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、８３、８５及び８７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～６５のいずれか一項に記載の抗体。
  67. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２、８４、８６及び８８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～６６のいずれか一項に記載の抗体。
  68. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  69. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  70. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８５に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  71. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  72. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８１に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８４に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  73. 前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の抗体。
  74. 前記抗体は、全長免疫グロブリン、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合が安定したＦｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、ＶＨＨ、ＶＨＨ－Ｆｃ融合体、Ｆｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～７３のいずれか一項に記載の抗体。
  75. 前記抗体は、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）に含まれ、ここで、前記多重特異性抗体は、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗体部分を含む、請求項１～７４のいずれか一項に記載の抗体。
  76. 前記第２の抗原は、腫瘍関連抗原である、請求項７５に記載の抗体。
  77. 前記腫瘍関連抗原は、Ｈｅｒ－２、ＥＧＦＲ、ＰＤＬ１、ｃ－Ｍｅｔ、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）、上皮糖タンパク質（ＥＧＰ２）、栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンプロテインキナーゼｅｒｂ－Ｂ２、３、４、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－ａ、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＡ（ＣＡ１．９．９）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｂ７Ｈ３、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ＮＧ２Ｄリガンド、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、Ｗｉｌｍｓ腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、１型チロシンプロテインキナーゼ膜貫通型受容体（ＲＯＲ１）、ＰＶＲ、ＰＶＲＬ２、ＧＰＣ３及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項７６に記載の抗体。
  78. 前記第２の抗原は、免疫チェックポイント調節剤である、請求項７５に記載の抗体。
  79. 前記免疫チェックポイント調節剤は、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＢＴＬＡ及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項７８に記載の抗体。
  80. 前記第２の抗原は、免疫共刺激分子又はＴ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットである、請求項７５に記載の抗体。
  81. 前記免疫共刺激分子は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、４－１ＢＢ及びＣＤ４０及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８０に記載の抗体。
  82. 前記Ｔ細胞受容体／ＣＤ３複合体のサブユニットは、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８０に記載の抗体。
  83. 治療剤又は標識に連結される、請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体を含む、免疫コンジュゲート。
  84. 前記治療剤は、細胞毒素又は放射性同位体である、請求項８３に記載の免疫コンジュゲート。
  85. 前記標識は、放射性同位体、蛍光色素及び酵素から選択される、請求項８４に記載の免疫コンジュゲート。
  86. 請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体を含む細胞外抗原結合ドメインを含む、抗原認識受容体。
  87. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は組換えＴ細胞受容体である、請求項８６に記載の抗原認識受容体。
  88. ＣＡＲである、請求項８６又は８７に記載の抗原認識受容体。
  89. 前記の、細胞外抗原結合ドメインに含まれる抗体は、ＶＨＨを含む、請求項８６～８８のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。
  90. 請求項８６～８９のいずれか一項に記載の抗原認識受容体を含む、免疫応答性細胞。
  91. 前記免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞及び骨髄細胞から選択される、請求項９０に記載の免疫応答性細胞。
  92. 前記免疫応答性細胞はＴ細胞である、請求項９１に記載の免疫応答性細胞。
  93. 医薬組成物であって、ａ）請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、請求項９０～９２のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞と、ｂ）薬学的に許容されるキャリア剤とを含む、医薬組成物。
  94. 請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体をコードする、一つ又は複数の核酸。
  95. 請求項９４に記載の核酸を含む、一つ又は複数のベクター。
  96. 請求項９４に記載の核酸又は請求項９５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  97. 請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体を調製する方法であって、請求項９６に記載の宿主細胞において該抗体を発現することと、宿主細胞から該抗体を単離することとを含む、方法。
  98. 被験体の腫瘍負荷を軽減する方法であって、被験体に、有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項９３に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  99. 前記方法は、腫瘍細胞の数を減らす、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記方法は、腫瘍サイズを小さくする、請求項９８又は９９に記載の方法。
  101. 前記方法は、被験体における腫瘍を根絶する、請求項９８～１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記腫瘍は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す、請求項９８～１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 前記腫瘍は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される、請求項９８～１０２のいずれか一項に記載の方法。
  104. 癌を治療及び／又は予防する方法であって、該被験体に、有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項９３に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  105. 癌に罹患している被験体の生存期間を延長する方法であって、被験体に、有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項９３に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  106. 前記癌は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す、請求項１０４又は１０５に記載の方法。
  107. 前記癌は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１０４～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 薬物として用いられる、請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体。
  109. 癌を治療するために用いられる、請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体。
  110. 薬物として用いられる、請求項９３に記載の医薬組成物。
  111. 癌を治療するために用いられる、請求項９３に記載の医薬組成物。
  112. 前記癌は、高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を示す、請求項１０９に記載の抗体又は請求項１１１に記載の医薬組成物。
  113. 前記癌は、中皮腫、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、結腸癌、胸膜腫瘍、神経膠芽腫、食道癌、胃癌、滑膜肉腫、胸腺癌、子宮内膜癌、胃腫瘍、胆管癌、頭頸部癌、血液癌及びそれらの組み合わせから選択される、請求項１０９に記載の抗体又は請求項１１１に記載の医薬組成物。
  114. キットであって、請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の免疫コンジュゲート、請求項９３に記載の医薬組成物、請求項９４に記載の一つ又は複数の核酸、請求項９５に記載の一つ又は複数のベクター、又は請求項９０～９２のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞を含む、キット。
  115. 腫瘍を治療及び／又は予防するためのマニュアルをさらに含む、請求項１１４に記載のキット。
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