JP7416695B2

JP7416695B2 - 増強されたキメラ抗原受容体およびその使用

Info

Publication number: JP7416695B2
Application number: JP2020535520A
Authority: JP
Inventors: マイケルサデレイン，; ユディトフォイヒト，; モハマドハミエ，; ジエスン，; ジョージエー．マンシラ－ソト，
Original assignee: メモリアルスローン－ケタリングキャンサーセンター
Priority date: 2017-12-29
Filing date: 2018-12-31
Publication date: 2024-01-17
Anticipated expiration: 2038-12-31
Also published as: SG11202006050XA; MX2020006834A; US20240166743A1; EP3732191A2; JP2023080187A; AU2018394353A1; CN111886242B; IL275619A; US20200317777A1; WO2019133969A3; WO2019133969A8; WO2019133969A2; EP3732191A4; CA3085606A1; US11932690B2; JP2021509016A; KR20200106051A; CN111886242A; BR112020012039A2

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月２９日に出願された米国仮特許出願第６２／６１２，０３１号の優先権を主張し、その内容はその全体が参照により組み込まれ、それに対して優先権を主張する。

序論
本開示の主題は、がんおよび病原体に対する免疫応答を増強するための方法および組成物を提供する。それは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそれを含む操作された免疫応答性細胞の新規設計に関する。新規ＣＡＲを含む操作された免疫応答性細胞は、抗原指向性であり、機能を損なうことなく延長された持続性を有する。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）療法は、血液悪性疾患に対して大きな臨床的成功を達成した（ＰＭＩＤ：２３５１５０８０）。それは、抗原認識機能とシグナル伝達機能との両方を有する合成受容体に基づくものである（ＰＭＩＤ：２０４６７４６０）。ＣＡＲにおける単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、元のモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖の可変領域に由来するその抗原認識特異性を保持する。一方、ＣＡＲ構築物のシグナル伝達は、元の免疫受容体のシグナル伝達ドメインに大きく依存する。現在、臨床試験中の第２世代のＣＡＲの全てのバージョンが、一方はＣＤ３ζであり、他方はＣＤ２８または４１ＢＢなどの共刺激受容体である、２つの免疫受容体に由来するドメインを含有するため、２つのシグナル伝達能力／モダリティを有する（ＰＭＩＤ：２６１２９８０２）。本質的には、それは別の受容体によって伝達される２つのシグナルを１つの合成受容体中で組み合わせる。おそらく、ＣＡＲにおけるシグナル伝達は、ＣＤ３ζおよびＣＤ２８／４１ＢＢにおけるものと類似する。

ＣＤ３ζは、抗原に結合し、形質膜をわたる結合を細胞内シグナルに変換する多量体Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）複合体の一部である。ＴＣＲαβ（またはＴＣＲγδ）サブユニットは、その特異的な細胞外領域を通じて抗原を認識するが、ＣＤ３ζは主にそのよく保存された３つの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を通じて複合体中でシグナル伝達機能を実行する（ＰＭＩＤ：２０５１６１３３）。その配列相同性に基づいて初めて同定された、ＩＴＡＭは、規定数のアミノ酸によって隔てられた２つの連続的なＹｘｘＬ／Ｉモチーフ（ＹｘｘＬ／Ｉ－Ｘ_６～８－ＹｘｘＬ／Ｉ）からなる（ＰＭＩＤ：２９２７５０１）。ＩＴＡＭは通常、造血細胞中で発現される受容体に見出され、ＴＣＲシグナル伝達の文脈で特によく研究されている。ペプチド－ＭＨＣへのＴＣＲ結合は、ＳｒｃファミリーキナーゼＬｃｋの活性化をもたらし、ＣＤ３ζ中の３つのＩＴＡＭのそれぞれにおける２つのチロシン残基をリン酸化する（ＰＭＩＤ：２５８６１９７８）。次いで、それぞれの二リン酸化されたＩＴＡＭは、Ｓｙｋファミリーキナーゼ、ＺＡＰ－７０の２つのタンデムＳＨ２ドメインに結合する能力を獲得する。この相互作用は、ＺＡＰ－７０をＬｃｋに近接させ、ＬｃｋによるＺＡＰ－７０のリン酸化および活性化をもたらす。活性化されたＺＡＰ－７０は、アダプタータンパク質ＬＡＴおよびＳＬＰ－７６などの、その下流の標的をさらにリン酸化する。リン酸化されたＬＡＴおよびＳＬＰ－７６は、ＰＬＣ－γ、Ｇｒｂ２／Ｓｏｓ、ＧａｄｓならびにＩｔｋ、ＶａｖおよびＮｃｋなどの、多くの他のタンパク質のための足場を提供し、最終的には、カルシウム動員、Ｒａｓ／Ｅｒｋ活性化およびアクチン細胞骨格再配列および究極的には、遺伝子発現の活性化をもたらす（ＰＭＩＤ：２０５１６１３３）。したがって、ＣＤ３ζ中の３つのＩＴＡＭは、ＴＣＲシグナル伝達における唯一のシグナル伝達部分ではないとしても、主要なものである。

他方、ＣＤ２８は、ＩＴＡＭを一切含有しない。その代わりに、その細胞質ドメインは、ＣＤ２８のそのリガンドＣＤ８０／ＣＤ８６への結合時にリン酸化されると、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットおよびＧｒｂ２／Ｇａｄｓに結合することができるＹＭＮＭモチーフを含有する（ＰＭＩＤ：２０５３４７０９）。さらに、ＣＤ２８のプロリンに富む領域は、Ｉｔｋ、Ｔｅｃ、Ｌｃｋ、Ｇｒｂ２／ＶａｖおよびフィラミンＡと相互作用することができる（ＰＭＩＤ：２０５３４７０９）。したがって、ＣＤ３ζおよびＣＤ８０／８６結合により開始されるＣＤ２８シグナル伝達を介した抗原結合により開始されるＴＣＲシグナル伝達は、これらの２つの経路間のクロストークを可能にする、Ｇｒｂ２、Ｖａｖ、Ｇａｄｓ、Ｌｃｋ、Ｉｔｋなどの多くの共通のプレイヤーを共有する。さらに、両経路の活性化は、免疫学的シナプスにおいて形質膜の近くに集合するシグナル伝達複合体中で起こり、２つの経路に由来するシグナル伝達分子を物理的に一緒の空間にする。最後に、ＣＤ２８により誘導されるカルシウムシグナル伝達は、２つの経路の時間的近接性／密接性を反映して、ＴＣＲにより開始される細胞内カルシウム増加の遅くとも数秒後には起こる（ＰＭＩＤ：１８８４８４７２）。

本開示は、目的の抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＣＡＲは、腫瘍抗原または病原体抗原に結合することができる。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の全部または一部を欠き、ＩＴＡＭは、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含む。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、塩基性残基に富む伸長（ｂａｓｉｃ－ｒｉｃｈｓｔｒｅｔｃｈ）（ＢＲＳ）領域の全部または一部をさらに欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３の欠失を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３を欠く。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４５または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１バリアント、ＢＲＳ２バリアント、およびＢＲＳ３バリアントから選択されるＢＲＳバリアントを含み、ＢＲＳバリアントは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む。

ある特定の実施形態では、上に開示された様々なＣＡＲはいずれも、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、またはその組合せを含むヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、配列番号３のアミノ酸４８９～５２７を有するＣＤ１６６ポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、上に開示された様々なＣＡＲのいずれかの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチドまたはその組合せを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号３のアミノ酸５２８～５２７を有するＣＤ１６６ポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、同じ分子に由来する。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８４ポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＣＤ８４ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ１６６ポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３のアミノ酸４８９～５５３を含む。

ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ａポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＣＤ８ａポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ｂポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＣＤ８ｂポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、異なる分子に由来する。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、膜貫通ドメインはＩＣＯＳポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、上に開示された様々なＣＡＲのいずれかの細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。

本開示の主題はまた、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、改変ＣＤ３ζポリペプチドが１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭバリアントを含み、ＩＴＡＭバリアントがＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、ＣＡＲも提供する。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチドまたはその組合せを含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１６６ポリペプチドのヒンジ／スペーサー領域およびＣＤ１６６ポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号３のアミノ酸４８９～５５３を含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号４３のアミノ酸３７４～４８５を有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を有する。

本開示の主題はまた、本明細書に開示されるＣＡＲを含む免疫応答性細胞も提供する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、組換え発現される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ベクターから発現される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、免疫応答性細胞の内因性遺伝子座に配置される。ある特定の実施形態では、内因性遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座またはＴＲＧＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、内因性遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの配置は、ＴＣＲの内因性発現を破壊または無効化する。

本開示の主題はまた、２つまたはそれより多いＣＡＲを含む免疫応答性細胞も提供する。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、ａ）第１の抗原に結合する第１の細胞外抗原結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ；ならびにｂ）第２の抗原に結合する第２の細胞外抗原結合ドメイン、第２の膜貫通ドメイン、および第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含み、第１のＣＡＲは上に開示されたＣＡＲであるか、または第１の細胞内シグナル伝達ドメインは１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含み、１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントはそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、第１のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲは、第２のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、第１および第２のヒンジ／スペーサー領域はそれぞれ独立に、本明細書に開示されるヒンジ／スペーサー領域のいずれかから選択することができる。

ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲは、上に開示されたＣＡＲである。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含み、ＩＴＡＭバリアントは、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、第１のＣＡＲの第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドと同じである改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、第１のＣＡＲの第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドと異なる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＣＤ３ζポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲの第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインと同じである。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲの第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、第２のＣＡＲの第２の細胞内シグナル伝達ドメインと異なる。

ある特定の実施形態では、第１の抗原は、第２の抗原と異なる。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、細胞は、第３の抗原に結合する第３の細胞外抗原結合ドメイン、第３の膜貫通ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第３のＣＡＲをさらに含む。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ヒト胚性幹細胞、およびリンパ系細胞が分化され得る多能性幹細胞からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、マクロファージなどの骨髄性細胞である。ある特定の実施形態では、前記免疫応答性細胞は、自己のものである。ある特定の実施形態では、前記抗原は、腫瘍抗原である。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＣＡＩＸ、ＣＥＡ、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥｐＣＡＭ、ｅｒｂ－Ｂ２、３、４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、葉酸受容体－ａ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ－２、ｈＴＥＲＴ、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、Ｋ－軽鎖、ＫＤＲ、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳ０－１、がん胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＴＡＧ－７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＷＴ－１、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、およびＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２ＡおよびＥＲＢＢからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、前記抗原は、ＣＤ１９である。

本開示の主題は、有効量の本明細書に開示される免疫応答性細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、新生物を処置するためのものである。

本開示の主題は、被験体における腫瘍負荷を低減させる方法であって、被験体に、有効量の本明細書に開示される免疫応答性細胞または医薬組成物を投与することを含む、方法をさらに提供する。本開示の主題はまた、被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、免疫応答性細胞が、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドが１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立にＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、方法も提供する。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントの一方または両方が、２つの機能喪失型変異を含む。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ２バリアントは、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＩＴＡＭ３バリアントは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の機能喪失型変異は、チロシンアミノ酸残基にある。ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、方法は、腫瘍細胞の数を減少させる。ある特定の実施形態では、方法は、腫瘍サイズを減少させる。ある特定の実施形態では、方法は、被験体中の腫瘍を根絶させる。

本開示の主題は、新生物を処置または防止する方法をさらに提供する。ある特定の実施形態では、方法は、被験体に、有効量の本明細書に開示される免疫応答性細胞または医薬組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、免疫応答性細胞は、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントはそれぞれ独立にＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される。

本開示の主題は、新生物の再発を有する被験体を処置する方法であって、被験体が、抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞を受け、抗原認識受容体が４－１ＢＢ共刺激シグナルを含む、方法をさらに提供する。ある特定の実施形態では、方法は、被験体に、有効量の本明細書に開示される免疫応答性細胞または医薬組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、免疫応答性細胞は、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントはそれぞれ独立にＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、新生物または腫瘍は、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、および卵巣がんからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、新生物は、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、ＣＡＲは、ＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、新生物は、ＣＤ１９＋ＡＬＬである。ある特定の実施形態では、新生物は、低い発現レベルの腫瘍特異的抗原を有する腫瘍細胞を含む。

本開示の主題は、抗原特異的免疫応答性細胞を生産するための方法であって、免疫応答性細胞中に、本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸配列を導入することを含む、方法をさらに提供する。ある特定の実施形態では、核酸配列は、ベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。

本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲをコードする単離された核酸（nucleotide acid）をさらに提供する。ある特定の実施形態では、単離された核酸は、配列番号４５および配列番号４７に記載のヌクレオチド配列をさらに含む。

本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲを含む核酸組成物をさらに提供する。ある特定の実施形態では、核酸配列は、ベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。

本開示の主題は、本明細書に開示される核酸組成物を含むベクターをさらに提供する。

本開示の主題は、本明細書に開示されるＣＡＲ、免疫応答性細胞、医薬組成物、核酸組成物またはベクターを含むキットをさらに提供する。ある特定の実施形態では、キットは、新生物、病原体感染、自己免疫障害、または同種異系移植を処置および／または防止するための書面での指示を含む。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の全部または一部を欠き、前記ＩＴＡＭがＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３である、ＣＡＲ。
（項目２）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ２またはその一部を欠く、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く、項目２に記載のＣＡＲ。
（項目４）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ１またはその一部をさらに欠く、項目２に記載のＣＡＲ。
（項目５）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ１またはその一部を欠く、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目６）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く、項目５に記載のＣＡＲ。
（項目７）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部を欠く、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目８）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目９）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む、項目８に記載のＣＡＲ。
（項目１０）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ１またはその一部の欠失をさらに含む、項目８に記載のＣＡＲ。
（項目１１）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ１またはその一部の欠失を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目１２）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部の欠失をさらに含む、項目１１に記載のＣＡＲ。
（項目１３）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目１４）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、前記ＢＲＳ領域がＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である、項目１から１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目１５）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ２またはその一部を欠く、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目１６）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く、項目１５に記載のＣＡＲ。
（項目１７）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く、項目１６に記載のＣＡＲ。
（項目１８）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部を欠く、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目１９）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く、項目１８に記載のＣＡＲ。
（項目２０）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部を欠く、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目２１）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目２２）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３を欠く、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目２３）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ２またはその一部の欠失を含む、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目２４）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む、項目２３に記載のＣＡＲ。
（項目２５）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部の欠失をさらに含む、項目２４に記載のＣＡＲ。
（項目２６）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部の欠失を含む、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目２７）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部の欠失をさらに含む、項目２６に記載のＣＡＲ。
（項目２８）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目２９）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部の欠失を含む、項目１４に記載のＣＡＲ。
（項目３０）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３の欠失を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３１）
配列番号４５または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３２）
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、前記ＢＲＳ領域がＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である、ＣＡＲ。
（項目３３）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ２またはその一部を欠く、項目３２に記載のＣＡＲ。
（項目３４）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く、項目３３に記載のＣＡＲ。
（項目３５）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く、項目３４に記載のＣＡＲ。
（項目３６）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部を欠く、項目３５に記載のＣＡＲ。
（項目３７）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く、項目３６に記載のＣＡＲ。
（項目３８）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ３またはその一部を欠く、項目３７に記載のＣＡＲ。
（項目３９）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く、項目３２に記載のＣＡＲ。
（項目４０）
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１バリアント、ＢＲＳ２バリアント、およびＢＲＳ３バリアントから選択されるＢＲＳバリアントを含み、前記ＢＲＳバリアントが１つまたは複数の機能喪失型変異を含む、ＣＡＲ。
（項目４１）
ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、またはその組合せを含むヒンジ／スペーサー領域をさらに含む、項目１から４０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目４２）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ１６６ポリペプチドを含む、項目４１に記載のＣＡＲ。
（項目４３）
前記ＣＤ１６６ポリペプチドが配列番号３のアミノ酸４８９～５２７を有する、項目４２に記載のＣＡＲ。
（項目４４）
細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立にＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択され、
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、またはその組合せを含む、ＣＡＲ。
（項目４５）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含む、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記ＩＴＡＭ２バリアントが配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有する、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記ＩＴＡＭ３バリアントが配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有する、項目４５または４６に記載の方法。
（項目４８）
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸３７４～４８５を含むかまたはそれからなる、項目４４から４７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目４９）
配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む、項目４４から４８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５０）
前記ＩＴＡＭ２バリアントおよび前記ＩＴＡＭ３バリアントの一方または両方が２つの機能喪失型変異を含む、項目４５から４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記１つまたは複数の機能喪失型変異がチロシンアミノ酸残基にある、項目４４から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、またはその組合せを含む、項目１から５１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５３）
前記膜貫通ドメインがＣＤ１６６ポリペプチドを含む、項目５２に記載のＣＡＲ。
（項目５４）
前記ＣＤ１６６ポリペプチドが配列番号３のアミノ酸５２８～５５３を含む、項目５３に記載のＣＡＲ。
（項目５５）
前記膜貫通ドメインおよび前記ヒンジ／スペーサー領域が、同じ分子に由来する、項目４４から５４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５６）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ２８ポリペプチドを含む、項目４４から５５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５７）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ８４ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ８４ポリペプチドを含む、項目４４から５６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５８）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ１６６ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ１６６ポリペプチドを含む、項目４４から５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目５９）
配列番号３のアミノ酸４８９～５５３を含む、項目５８に記載のＣＡＲ。
（項目６０）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ８ａポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ８ａポリペプチドを含む、項目４４から５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６１）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ８ｂポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ８ｂポリペプチドを含む、項目４４から６０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６２）
前記膜貫通ドメインおよび前記ヒンジ／スペーサー領域が、異なる分子に由来する、項目４４から５４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６３）
前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＩＣＯＳポリペプチドを含む、項目６２に記載のＣＡＲ。
（項目６４）
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、項目１から６３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
（項目６５）
前記共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ２８ポリペプチドを含む、項目６５に記載のＣＡＲ。
（項目６６）
項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む免疫応答性細胞。
（項目６７）
前記ＣＡＲが組換え発現される、項目６６に記載の免疫応答性細胞。
（項目６８）
前記ＣＡＲがベクターから発現される、項目６６または６７に記載の免疫応答性細胞。
（項目６９）
前記ＣＡＲが前記免疫応答性細胞の内因性遺伝子座に配置される、項目６６から６８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目７０）
前記内因性遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座またはＴＲＧＣ遺伝子座である、項目６９に記載の免疫応答性細胞。
（項目７１）
前記内因性遺伝子座がＴＲＡＣ遺伝子座である、項目６９または７０に記載の免疫応答性細胞。
（項目７２）
前記ＣＡＲの配置がＴＣＲの内因性発現を破壊または無効化する、項目６９から７１のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目７３）
Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、骨髄性細胞、ヒト胚性幹細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る多能性幹細胞からなる群より選択される、項目６６から７２のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目７４）
前記免疫応答性細胞が自己のものである、項目６６から７３のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目７５）
前記抗原が腫瘍抗原である、項目６６から７４のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目７６）
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＣＡｌＸ、ＣＥＡ、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥｐＣＡＭ、ｅｒｂ－Ｂ２、３、４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、葉酸受容体－ａ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ－２、ｈＴＥＲＴ、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、Ｋ－軽鎖、ＫＤＲ、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳ０－１、がん胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＴＡＧ－７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＷＴ－１、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、およびＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２ＡおよびＥＲＢＢからなる群より選択される、項目７５に記載の免疫応答性細胞。
（項目７７）
前記抗原がＣＤ１９である、項目７７に記載の免疫応答性細胞。
（項目７８）
有効量の項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目７９）
新生物を処置するためのものである、項目７８に記載の医薬組成物。
（項目８０）
被験体における腫瘍負荷を低減させる方法であって、前記被験体に、有効量の項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目７８もしくは７９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目８１）
被験体における腫瘍負荷を低減させる方法であって、前記被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、前記免疫応答性細胞が、
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、方法。
（項目８２）
腫瘍細胞の数を減少させる、項目８１または８２に記載の方法。
（項目８３）
腫瘍サイズを減少させる、項目８１から８３のいずれか一項に記載の方法。
（項目８４）
前記被験体における腫瘍を根絶させる、項目８１から８４のいずれか一項に記載の方法。
（項目８５）
新生物を処置または防止する方法であって、被験体に、有効量の項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目７８もしくは７９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目８６）
新生物を処置または防止する方法であって、被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、前記免疫応答性細胞が、
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、方法。
（項目８７）
前記新生物または腫瘍が、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、および卵巣がんからなる群より選択される、項目８０から８６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８８）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、前記ＣＡＲがＣＤ１９に結合する、項目８０から８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目８９）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、前記ＣＡＲがＢＣＭＡ、ＡＤＧＲＥ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡまたはその組合せに結合する、項目８０から８７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９０）
新生物の再発を有する被験体を処置する方法であって、前記被験体が、疾患の再発を有し、前記被験体が、残留腫瘍細胞をもたらす処置を受けたか、または前記被験体が、抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞を受け、前記抗原認識受容体が、４－１ＢＢ共刺激シグナルを含み、前記方法が、前記被験体に、有効量の項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目７８もしくは７９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目９１）
新生物の再発を有する被験体を処置する方法であって、前記被験体が、疾患の再発を有し、前記被験体が、残留腫瘍細胞をもたらす処置を受けたか、または前記被験体が、抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞を受け、前記抗原認識受容体が、４－１ＢＢ共刺激シグナルを含み、前記方法が、前記被験体に、有効量の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を投与することを含み、前記免疫応答性細胞が、
細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、方法。
（項目９２）
前記新生物が、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病および非ホジキンリンパ腫からなる群より選択される、項目９０または９１に記載の方法。
（項目９３）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、前記ＣＡＲがＣＤ１９に結合する、項目９０から９２のいずれか一項に記載の方法。
（項目９４）
前記新生物がＣＤ１９＋ＡＬＬである、項目９０から９３に記載の方法。
（項目９５）
前記新生物が、腫瘍細胞の表面上に低密度の腫瘍特異的抗原を有する前記腫瘍細胞を含む、項目９０から９４に記載の方法。
（項目９６）
腫瘍負荷の低減、新生物の処置もしくは防止、および／または新生物の再発を有する被験体の処置における使用のための、項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目７８もしくは７９に記載の医薬組成物。
（項目９７）
腫瘍負荷の低減、新生物の処置もしくは防止、および／または新生物の再発を有する被験体の処置における使用のための、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、ＣＡＲ。
（項目９８）
抗原特異的免疫応答性細胞を生産するための方法であって、免疫応答性細胞に、項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を導入することを含む、方法。
（項目９９）
前記核酸配列がベクター中に含まれる、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
前記ベクターがレトロウイルスベクターである、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする単離された核酸。
（項目１０２）
配列番号４５および配列番号４７に記載のヌクレオチド配列を含む、項目１０１に記載の単離された核酸。
（項目１０３）
項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む核酸組成物。
（項目１０４）
前記核酸配列がベクター中に含まれる、項目１０３に記載の核酸組成物。
（項目１０５）
前記ベクターがレトロウイルスベクターである、項目１０４に記載の核酸組成物。
（項目１０６）
項目１０３から１０５のいずれか一項に記載の核酸組成物を含むベクター。
（項目１０７）
項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ、項目６６から７７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞、項目７８もしくは７９に記載の医薬組成物、項目１０３から１０５のいずれか一項に記載の核酸組成物、または項目１０６に記載のベクターを含むキット。
（項目１０８）
新生物、病原体感染、自己免疫障害、または同種異系移植を処置および／または防止するための書面での指示をさらに含む、項目１０７に記載のキット。
（項目１０９）
ａ）第１の抗原に結合する第１の細胞外抗原結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ；ならびにｂ）第２の抗原に結合する第２の細胞外抗原結合ドメイン、第２の膜貫通ドメイン、および第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む免疫応答性細胞であって、前記第１のＣＡＲが項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲであるか、または前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、免疫応答性細胞。
（項目１１０）
前記第２のＣＡＲが項目１から６５のいずれか一項に記載のＣＡＲである、項目１０９に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１１）
前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含む１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含み、前記１つまたは複数のＩＴＡＭバリアントがそれぞれ独立に、ＩＴＡＭ１バリアント、ＩＴＡＭ２バリアント、およびＩＴＡＭ３バリアントからなる群より選択される、項目１０９に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１２）
前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第１のＣＡＲの前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる前記改変ＣＤ３ζポリペプチドと同じである改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む、項目１０９に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１３）
前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第１のＣＡＲの前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる前記改変ＣＤ３ζポリペプチドと異なる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む、項目１０９に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１４）
前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインが天然ＣＤ３ζポリペプチドを含む、項目１０９に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１５）
前記第１のＣＡＲの前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインと同じである、項目１０９から１１３のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１６）
前記第１のＣＡＲの前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインが、前記第２のＣＡＲの前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインと異なる、項目１０９から１１４のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１７）
前記第１の抗原が前記第２の抗原と異なる、項目１０９から１１６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１８）
前記第１のＣＡＲが第１のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む、項目１０９から１１７のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１１９）
前記第２のＣＡＲが第２のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む、項目１０９から１１８のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２０）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有する、項目１０９から１１９のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２１）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する、項目１０９から１１９のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２２）
第３の抗原に結合する第３の細胞外抗原結合ドメイン、第３の膜貫通ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第３のＣＡＲをさらに含む、項目１０９から１２１のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２３）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、前記第３の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する、項目１２２に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２４）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、前記第３の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する、項目１２２に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２５）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、前記第３の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する、項目１２２に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２６）
前記第１の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、前記第３の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する、項目１２２に記載の免疫応答性細胞。
（項目１２７）
有効量の項目１０９から１２６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目１２８）
腫瘍負荷の低減、新生物の処置もしくは防止、および／または新生物の再発を有する被験体の処置における使用のための、項目１０９から１２６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目１２７に記載の医薬組成物。
（項目１２９）
被験体における腫瘍負荷を低減させる方法であって、前記被験体に、有効量の項目１０９から１２６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目１２７に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目１３０）
前記被験体における腫瘍細胞の数を減少させる、腫瘍サイズを減少させる、および／または腫瘍を根絶させる、項目１２９に記載の方法。
（項目１３１）
新生物を処置または防止する方法であって、被験体に、有効量の項目１０９から１２６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目１２７に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目１３２）
前記新生物または腫瘍が、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、および卵巣がんからなる群より選択される、項目１３１に記載の方法。
（項目１３３）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、ＣＡＲがＣＤ１９に結合する、項目１３１または１３２に記載の方法。
（項目１３４）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、前記ＣＡＲがＢＣＭＡ、ＡＤＧＲＥ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡまたはその組合せに結合する、項目１３１から１３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３５）
新生物の再発を有する被験体を処置する方法であって、前記被験体が、疾患の再発を有し、前記被験体が、残留腫瘍細胞をもたらす処置を受けたか、または前記被験体が、抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞を受け、前記抗原認識受容体が、４－１ＢＢ共刺激シグナルを含み、前記方法が、前記被験体に、有効量の項目１０９から１２６のいずれか一項に記載の免疫応答性細胞または項目１２７に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
（項目１３６）
前記新生物が、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病および非ホジキンリンパ腫からなる群より選択される、項目１３５に記載の方法。
（項目１３７）
前記新生物が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫であり、ＣＡＲがＣＤ１９に結合する、項目１３５または１３６に記載の方法。
（項目１３８）
前記新生物がＣＤ１９＋ＡＬＬである、項目１３５から１３７に記載の方法。
（項目１３９）
前記新生物が、腫瘍細胞の表面上に低密度の腫瘍特異的抗原を有する前記腫瘍細胞を含む、項目１３５から１３８に記載の方法。

以下の詳細な説明は、例として示されるが、本開示の主題を記載の特定の実施形態に限定することを意図せず、添付の図面と共に理解され得る。

図１は、野生型、変異型、および切断型１９２８ζ（１９２８ｚ）ＣＡＲの細胞質領域を示す。Ａ）異なる１９２８ζ（１９２８ｚ）ＣＡＲの細胞質領域。元の１９２８ζ ＣＡＲのζ鎖を変異させて、特有のζシグナル伝達ドメインを有する１９２８ζ ＣＡＲＴ細胞を構築する。ζドメインにおける３つのＩＴＡＭモチーフを、膜近位から遠位方向にＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３と呼ぶ。１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３およびＸ２３ＣＡＲでは、それぞれのＩＴＡＭにおける２つのチロシン残基（Ｙ）が、表記のＩＴＡＭに関して２つのフェニルアラニン残基（Ｆ）に点変異している。Ｄ１２およびＤ２３では、欠失変異を作製して、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ２（Ｄ１２）またはＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３（Ｄ２３）を除去する。Ｂ）元の１９２８ｚ構造と比較して改善された抗腫瘍有効性を有する１９２８ｚＣＡＲの細胞質領域。１ＸＸでは、元の１９２８ζ ＣＡＲのζ鎖が、ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３において点変異しているが（チロシン（Ｔ）からフェニルアラニン（Ｆ）への変換）、アミノ酸の塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ－１、－２、－３）は残っている。Ｄ１２およびＤ２３では、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ２（Ｄ１２）またはＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３（Ｄ２３）が欠失している；Ｄ２３は、１つのＢＲＳ領域（ＢＲＳ－１）を含むが、Ｄ１２にはＢＲＳは存在しない。Ｃ）１９２８ζおよび表記の１９２８ζ変異体のＣＡＲおよびＬＮＧＦＲの発現レベルを示す代表的なフローサイトメトリー分析。ＵＴ：非形質導入Ｔ細胞を対照として使用した。同上。

図２Ａ～２Ｂは、新規ＣＡＲの設計または対照１９２８ζ（１９２８ｚ）ＣＡＲを含むＴ細胞の治療効力を示す。１９２８ζ（１９２８ｚ）ＣＡＲＴ細胞の治療効力は、ＣＡＲ構築物におけるＣＤ３ζ鎖の変異によって改善する。０．０５×１０^６個のＣＡＲＴ細胞によって処置したＮＡＬＭ－６を有するマウスの腫瘍負荷（平均ラジアンス）（ｎ＝９～１０、２つの独立した実験からプールしたデータ）。Ａ）元のＣＡＲ位置で非改変ＣＤ３ζ、ＩＴＡＭ３（ＸＸ３）、ＩＴＡＭ２（Ｘ２Ｘ）、またはＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３（Ｘ２３）の組合せ、および残りのＩＴＡＭモチーフの変異を有する１９２８ζ変異体のｉｎｖｉｖｏ応答。Ｂ）第１の位置（Ｄ１２に関してＩＴＡＭ３およびＤ２３に関してＩＴＡＭ１）での１つの単一の非変異ＣＤ３ζ配列、および残りのζ鎖ドメインの欠失からなる１９２８ζ変異体によって処置したＮＡＬＭ－６マウスの腫瘍負荷。同上。

図３Ａ～３Ｂは、１９２８ζ（１９２８ｚ）対照または新規ＣＡＲ構築物を発現するＣＡＲＴ細胞の同じ用量による処置後の生存を示す。Ｎａｌｍ－６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞によって処置した。Ａ）およびＢ）１９２８ｚＷＴおよび１９２８ｚ変異体ＸＸ３、Ｘ２３およびＸ２Ｘ（Ａ）または１９２８ｚ変異体Ｄ１２、Ｄ２３および１ＸＸ（Ｂ）の１回用量のｉｎｖｉｖｏ有効性を比較するマウスのカプラン－マイヤー生存分析。ｎ＝１０匹のマウスを表す、２つの独立した実験からプールしたデータ。対照は、無処置マウス（ｎ＝３）を指す。^＊ｐ＜０．０５（ログランクマンテル－コックス検定）。

図４は、腫瘍を有するマウスにおけるＣＡＲＴ細胞の計数を示す。ＮＡＬＭ－６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲＴ細胞（ｎ＝１０／群、２つの独立した実験からプールしたデータ）によって処置し、注入の１７日後に安楽死させた；骨髄ＣＡＲＴ細胞およびＮＡＬＭ－６細胞をＦＡＣＳによって分析および計数した。データは全て、平均値±ＳＤである。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１（対応のないスチューデントのｔ検定）。

図５Ａ～５Ｃは、Ｔ細胞分化の分析を示す。ＣＡＲ注入の１０日後のマウスの骨髄におけるＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞の表現型（データは、平均値±ＳＥＭであり、各々のバーはｎ＝５のマウスを表す）。Ａ）１９２８ζ ＷＴと比較した、表記の１９２８ζ変異体に関するＣＡＲＴ細胞上のＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡ発現のパーセンテージ。Ｂ）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞におけるセントラルメモリー（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）およびＣ）エフェクター細胞（ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ４５ＲＡ＋）のパーセンテージ。データを１９２８ζ ＷＴと比較する。^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１（対応のないスチューデントのｔ検定）。同上。

図６は、Ｔ細胞投与の１０日および１７日後のマウスの骨髄におけるセントラルメモリーＣＤ４＋ＣＡＲＴ細胞（Tells）（ＣＡＲ＋ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）およびＩＬ７Ｒ発現ＣＤ４＋ＣＡＲＴ細胞の細胞数の分析を示す（データは平均値±ＳＥＭであり、各々のバーは、ｎ＝５匹のマウスを表す）。^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１（対応のないスチューデントのｔ検定）。

図７は、Ｔ細胞消耗の分析を示す。ＮＡＬＭ－６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲＴ細胞によって処置し（ｎ＝９～１０匹／群；２つの独立した実験からプールしたデータ）、ＣＡＲ注入の１０日後に安楽死させた；骨髄のＣＡＲＴ細胞をＦＡＣＳによって分析した。消耗マーカーを発現するＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞のパーセンテージを、ＣＡＲ注入の１０日後にＦＡＣＳによって定量した。データは、平均値±ＳＥＭであり、各々の点は、１匹のマウスを表す。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１（対応のないスチューデントのｔ検定）。

図８は、ＣＡＲＴ細胞の効力のｉｎｖｉｔｒｏ機能試験を示す。Ａ）標的としてＥＬ４－ＣＤ１９を使用して４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイによって決定した細胞傷害活性（３連で実施したｎ＝２の独立した実験、データは平均値±ＳＥＭである）。Ｂ）およびＣ）標的としてのホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬ）発現ＮＡＬＭ－６による１８時間の生物発光アッセイを使用する細胞傷害活性。データは、平均値±ＳＥＭ（３連で実施したｎ＝５の独立した実験）である。放射線照射３Ｔ３－ＣＤ１９におけるエフェクター細胞の増大の１週間後に実験を実施した。

図９は、ＣＡＲＴ細胞のｉｎｖｉｔｒｏサイトカインプロファイルを示す。３Ｔ３－ＣＤ１９による２回目の刺激の１８時間後に細胞内サイトカイン染色によって決定した単一陽性（Ａ）および二重陽性Ｔｈ１サイトカインの陽性発現を有するＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞のパーセンテージ（データは平均値±ＳＥＭであり、１９２８ζ ＷＴと比較する、対応のあるスチューデントのｔ検定、ｎ＝３～５の独立した実験）。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１。同上。

図１０は、異なるヒンジ（Ｈ）および膜貫通ドメイン（ＴＭ）を有する１ＸＸＣＡＲの略図を示す。フローサイトメトリープロファイルは、ヤギＩｇＧ抗マウスＩｇＧ（Ｆ（ａｂ’）２）断片および抗ＬＮＧＦＲをそれぞれ使用するＣＡＲおよびＬＮＧＦＲ発現を示す。ＣＤ２８／ＣＤ２８Ｈ／ＴＭ領域を含有する１９２８ｚ－ＬＮＧＦＲＣＡＲを対照として使用する。同上。

図１１は、１０^６個の細胞／ｍｌのＣＡＲＴ細胞から開始して毎週刺激した場合の累積ＣＡＲＴ細胞計数を示す。矢印は、刺激時点を示す。データは、平均値±ＳＥＭである。ｎ＝３。

図１２は、ＣＡＲＴ細胞のｉｎｖｉｔｒｏ細胞傷害を示す。ＣＡＲＴ細胞の細胞傷害活性を、３回目の刺激の終了時（Ｄ２１）に４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイを使用して測定する。Ｔ細胞およびＥＬ－４－ＣＤ１９＋標的細胞を異なるエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）で使用した。データは、平均値±ＳＥＭである。データは、４つの独立した実験の代表である。

図１３は、ＮＯＤ．ＣｇＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスを使用する異なるＨ／ＴＭＣＡＲＴ細胞のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍効力を示す。上のパネル、腫瘍負荷を、生物発光シグナルの毎週の定量によって追跡する。ＣＡＲ構築物を、各処置に関して示す。下のパネル、同じ実験のマウスの無腫瘍生存(tumor free survival)のカプラン－マイヤー分析。ログランク（マンテル－コックス）検定を、生存比較のために使用する。ｎ＝７匹のマウス／群。

図１４は、新規ＣＡＲ構築物の例示的な脱免疫化戦略を示す。Ｊ１およびＪ２：ＷＴ接合部からの改変なし。Ｊ３：ＣＤ２８の最後のアミノ酸であるＳｅｒ（Ｓ）のＬｙｓ（Ｋ）との置換。Ｊ：接合部；Ｘ：点変異。

図１５は、ＣＡＲＴ細胞によって処置したマウスの様々な生存曲線を示す。ＮＳＧマウスの尾静脈に、５×１０^５個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰＮＡＬＭ６細胞（プレＢＡＬＬ細胞株）を注射し、４日後に、２×１０^５個の１９ＢＢｚＣＡＲＴ細胞を注射した。最初のＴ細胞注射（腫瘍進行を遅らせるのみである非有効用量）の１０日後、マウスに１９ＢＢｚＣＡＲＴ細胞またはあるいは１９２８ｚもしくは（５×１０^５個／マウス）のいずれかを再度注射した。矢印はＣＡＲＴ細胞の注入時間を示す。上のパネル、腫瘍負荷を、生物発光シグナルの毎週の定量によって追跡する。下のパネル、同じ実験のマウスの無腫瘍生存のカプラン－マイヤー分析。ログランク（マンテル－コックス）検定を、生存比較のために使用する。ｎ＝７匹のマウス／群。

図１６Ａ～１６Ｅは、１９２８ζ ｉＴＡＭが、ＣＡＲＴ細胞の効力を示差的に調節することを示す。Ａ）野生型および変異型１９２８ζ ＣＡＲの細胞質領域。１９２８ζ ＣＡＲのζ鎖を、その３つのζシグナル伝達ドメインの１つまたは２つで変異させて、これを膜近位から膜遠位方向にＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３と呼ぶ。１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３、およびＸ２３ＣＡＲでは、それぞれのＩＴＡＭにおける２つのチロシン（Ｙ）が、表記のＩＴＡＭに関して２つのフェニルアラニン（Ｆ）に点変異している。Ｂ）Ａ）に示した構築物に関するＣＡＲおよびＬＮＧＦＲの発現レベルを示すフローサイトメトリー分析。データは、類似の結果を有する少なくとも５つの独立した実験の代表である。非形質導入Ｔ（ＵＴ）細胞を対照として使用した。Ｃ）～Ｅ）Ｎａｌｍ６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲ＋Ｔ細胞によって処置した。Ｃ）マウスの腫瘍負荷（平均ラジアンス）を示し、野生型１９２８ζ、１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３、およびＸ２３（ｎ＝１０匹のマウス／群、結果を、２つの独立した実験からプールした）のｉｎｖｉｖｏ有効性を比較する。対照は、無処置マウス（ｎ＝６）を指す。Ｄ）注入の１７日後での、マウス骨髄におけるＣＡＲＴ細胞数（結果を２つの独立した実験からプールした、ｎ＝１０匹のマウス／群）。Ｅ）Ｔ_ＣＭおよびＴ_ＥＦＦ細胞のパーセンテージによって実証した、ＣＡＲ注入の１０日後のマウスの骨髄におけるＣＡＲＴ細胞の表現型。２つの独立した実験の代表的な結果を示す（ｎ＝５匹のマウス／群）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍである。Ｄ）およびＥ）では、Ｐ値を、両側のマン－ホイットニーＵ検定によって決定した。同上。同上。同上。同上。

図１７Ａ～１７Ｅは、１９２８ζ ＣＡＲ内のｉＴＡＭ位置が抗腫瘍有効性を決定することを示す。Ａ）ＣＤ３ζ鎖の欠失を有する１９２８ζ ＣＡＲの細胞質ドメイン。Ｄ１２では、欠失変異はＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ２を除去するが、Ｄ２３では、ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３が除去される。Ｂ）表記の構築物に関するＣＡＲおよびＬＮＧＦＲの発現レベルを示すフローサイトメトリー分析。データは類似の結果を有する少なくとも５つの独立した実験の代表である。ＵＴ、非形質導入Ｔ細胞を対照として使用した。Ｃ）～Ｅ）Ｎａｌｍ６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲ＋Ｔ細胞によって処置した。Ｃ）野生型１９２８ζ、Ｄ１２、またはＤ２３によって処置したマウスの腫瘍負荷（平均ラジアンス）（野生型１９２８ζおよびＤ２３：ｎ＝１０；Ｄ１２：ｎ＝９、２つの独立した実験からプールしたデータ）。Ｄ）注入の１７日後での、マウス骨髄におけるＣＡＲＴ細胞数（結果を２つの独立した実験からプールした、ｎ＝１０匹のマウス／群）。Ｅ）Ｔ_ＣＭおよびＴ_ＥＦＦ細胞のパーセンテージによって実証された、ＣＡＲ注入の１０日後のマウスの骨髄におけるＣＡＲＴ細胞の表現型（２つの独立した実験からプールしたデータ、ｎ＝１０匹のマウス／群）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍである。Ｄ）およびＥ）では、Ｐ値を、両側のマン－ホイットニーＵ検定によって決定した。同上。同上。同上。

図１８Ａ～１８Ｈは、ＴＲＡＣ－１ＸＸが、Ｔ細胞消耗を減少させることによっておよび有効なリコール応答を有する長命なメモリーＴ細胞へと発生させることによって、Ｔ細胞の効力を増強させることを示す。Ａ）～Ｄ）、Ｎａｌｍ６を有するマウスを１×１０^５個または５×１０^５個のＴＲＡＣ－ＣＡＲＴ細胞によって処置した。Ａ）ＴＲＡＣ－１９２８ζと比較した、１×１０^５個のＴＲＡＣ－１ＸＸまたはＴＲＡＣ－ＸＸ３によって処置したマウスのカプラン－マイヤー生存分析（ＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－ＸＸ３：ｎ＝５匹のマウス／群；ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝７）。対照は、無処置マウス（ｎ＝３）を指す。Ｐ値を、片側のログランクマンテル－コックス検定によって決定した。Ｂ）５×１０^５個（ｎ＝５匹のマウス／群）または１×１０^５個（ＴＲＡＣ－１９２８ζ：ｎ＝１０匹のマウス、ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝５匹のマウス）のＴＲＡＣ－ＣＡＲＴ細胞によって処置したマウスのカプラン－マイヤー生存分析。Ｐ値を、片側のログランクマンテル－コックス検定によって決定した。Ｃ）およびＤ）細胞数（Ｃ）および骨髄ＣＡＲＴ細胞上の消耗マーカーＰＤ１＋ＴＩＭ３＋ＬＡＧ３＋の発現（Ｄ）を、ＴＲＡＣ－１ＸＸおよびＴＲＡＣ－ＸＸ３に関して決定し、ＴＲＡＣ－１９２８ζと比較した。データは、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．として示し、各々の記号は、個々のマウスを指す（ｎ＝５匹のマウス／群）。Ｐ値を、両側のマン－ホイットニーＵ検定によって決定した。Ｅ）～Ｈ）Ｎａｌｍ６を有するマウスを、５×１０^５個のＴＲＡＣ編集ナイーブＴ細胞によって処置し、矢印で示すようにＮａｌｍ６細胞（ｎ＝５匹のマウス／群）を再チャレンジした。対照の場合、腫瘍のさらなる再チャレンジは行わなかった（ＴＲＡＣ－１９２８ζ：ｎ＝６匹のマウス；ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝７匹のマウス）。Ｅ）腫瘍の再チャレンジ後のＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－１ＸＸのｉｎｖｉｖｏ有効性をさらなる再チャレンジなしと比較したマウスの腫瘍負荷（平均ラジアンス）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍである。両側の対応のないスチューデントのｔ検定を、ＣＡＲ投与後５９日目での腫瘍負荷の統計分析のために使用した（ＴＲＡＣ－１９２８ζ：ｎ＝４；ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝５）。Ｆ）およびＧ）ＣＡＲ投与後６３日目の処置マウスの骨髄における総ＣＡＲＴ細胞（Ｆ）、Ｔ_ＣＭ、Ｔ_ＥＦＦ、およびＩＬ７Ｒ＋ＣＡＲＴ細胞（Ｇ）の数（再チャレンジあり：ＴＲＡＣ－１９２８ζ：ｎ＝４匹のマウス、ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝５匹のマウス；再チャレンジなし：ｎ＝５匹のマウス／群）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍである；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を、統計分析のために使用した。Ｈ）骨髄ＣＡＲＴ細胞上の消耗マーカーＰＤ１＋ＴＩＭ３＋ＬＡＧ３＋の発現。データは全て平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。Ｐ値を、両側の対応のないスチューデントのｔ検定によって決定した。同上。同上。

図１９Ａ～１９Ｈは、１９２８ζ ＣＡＲにおけるＣＤ３ζ ＩＴＡＭ変異が、特有の転写シグネチャーを確立することを示す。ＣＤ１９＋標的細胞による刺激の２４時間後のＣＤ８＋ＴＲＡＣ－１９２８ζ、ＴＲＡＣ－１ＸＸ、およびＴＲＡＣ－ＸＸ３ＣＡＲＴ細胞（最初に選別されたナイーブＴ細胞）の遺伝子発現プロファイル。Ａ）ＭＳｉｇＤＢＣ７遺伝子オントロジーセットを使用してＧＳＥＡによって決定した場合の１９２８ζと１ＸＸとの比較および１９２８ζとＸＸ３との比較（ｎ＝３回の反復／群）における有意にアップレギュレートまたはダウンレギュレートされた遺伝子セットの正規化濃縮スコア。全ての経路に関して、偽発見率（ＦＤＲ）ｑ≦０．０２であった。ＧＳＥデータセットを括弧内に示す。ｓｔｉｍ、刺激した。Ｂ）選別したエフェクターとナイーブ／メモリーＴ細胞との間で示差的に発現された遺伝子（ＦＤＲｑ＜０．０５）（左）（ｎ＝６回の反復／群）、およびＣＡＲＴ細胞に関して同じ遺伝子の発現プロファイルを実証するヒートマップ（ｎ＝３回の反復／群）。ＴＦ、転写因子。Ｃ）ＧＳＥＡ解析によって同定された、ＴＲＡＣ－１９２８ζとＴＲＡＣ－ＸＸ３、ＴＲＡＣ－１９２８ζとＴＲＡＣ－１ＸＸ、およびＴＲＡＣ－１ＸＸとＴＲＡＣ－ＸＸ３とを比較する表現型および機能的Ｔ細胞特色に関連して有意に濃縮された遺伝子セットの正規化濃縮スコア（ＦＤＲｑ≦０．０３）（ｎ＝３回の反復／群）。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ、ヤーヌスキナーゼシグナル伝達転写活性化因子。Ｄ）エフェクターおよびメモリー関連Ｔ細胞属性に及ぼす１９２８ζ ＣＡＲＴ細胞における定義されたＣＤ３ｚＩＴＡＭ変異の影響。１ＸＸＣＡＲＴ細胞は、バランスのとれたエフェクターおよびメモリー形質を示す。同上。同上。同上。同上。同上。

図２０Ａ～２０Ｅは、ｉｎｖｉｔｒｏでのＴ細胞機能、Ｔ細胞分化、およびｉｎｖｉｖｏでの抗腫瘍活性に及ぼすＩＴＡＭ変異１９２８ζ ＣＡＲの影響を示す。Ａ）放射線照射３Ｔ３－ＣＤ１９上でのエフェクター細胞の増大の１週間後に４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイによって決定した細胞傷害活性（データは、３連で実施したｎ＝２の独立した実験の平均値として示す）。Ｂ）ＣＤ１９＋標的細胞によって毎週刺激した場合の表記のＣＡＲＴ細胞の累積細胞計数（ｎ＝３の独立した実験）。全てのデータは、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。Ｐ値を、両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって計算した。Ｃ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲ＋Ｔ細胞によって処置した。野生型１９２８ζまたは表記の１９２８ζ変異体のｉｎｖｉｖｏ有効性を比較するカプラン－マイヤー生存分析（ｎ＝１０匹のマウス、２つの独立した実験からプールしたデータ）。対照（Ｃｔｌ）は、無処置マウス（ｎ＝６）を指す。Ｐ値を、片側のログランクマンテル－コックス検定によって決定した。Ｄ）ＣＤ１９＋標的細胞による２回目の刺激の４８時間後のセントラルメモリー（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）およびエフェクターメモリー（ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ４５ＲＡ－）ＣＤ４＋ＣＡＲＴ細胞のパーセンテージによって実証したＣＡＲＴ細胞の表現型。両側の対応のあるスチューデントのｔ検定を実施し、データは、ｎ＝４の独立した実験の平均値±ｓ．ｅ．ｍ．を表す。Ｅ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲＴ細胞によって処置し、注入の１０日後に安楽死させた；骨髄ＣＡＲＴ細胞をＦＡＣＳによって分析した。ＣＡＲ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞に関してゲートを設定し、ＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡ発現によって決定した表記のＣＡＲＴ細胞の表現型の代表的なフローサイトメトリー分析。類似の結果を有する少なくともｎ＝２の独立した実験における５匹のマウス／群の代表。同上。

図２１Ａ～２１Ｃは、野生型１９２８ζと比較した１９２８ζ変異体におけるエフェクター機能の分析を示す。Ａ）標的としてのＦＦＬ発現ＮＡＬＭ６細胞による１８時間の生物発光アッセイを使用した野生型１９２８ζと比較した１９２８ζ変異体の細胞傷害活性。実験は、ＣＤ１９＋標的細胞上でのエフェクター細胞の増大の１週間後に実施した。データは、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である（３連で実施したｎ＝４の独立した実験）。３連のものの平均値に関する両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって計算した、^＊Ｐ＜０．０５（２^１：Ｐ＝０．０２７３、２^－１：Ｐ＝０．０３８７、２^－２：Ｐ＝０．０１２５）、^＊＊Ｐ＝０．００１８。Ｂ）およびＣ）ＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞上のグランザイムＢ（ＧｒＢ）発現（ｎ＝４の独立した実験）（Ｂ）、ならびにＣＤ１９発現標的細胞による２回目の刺激時のＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞のサイトカイン分泌（Ｃ）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である（ＩＦＮγおよびＩＬ２、ｎ＝４；ＴＮＦα、ｎ＝５の独立した実験）。非刺激（Ｕｎｓｔｉｍ．）野生型１９２８ζ細胞を対照として使用した。１９２８ζと比較した有意差を両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって決定した。同上。

図２２Ａ～２２Ｄは、Ｔ細胞機能および治療効力に及ぼす１９２８ζ ＣＡＲ内のＩＴＡＭ位置の影響を示す。Ａ）放射線照射３Ｔ３－ＣＤ１９上でのエフェクター細胞の増大の１週間後に４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイによって決定した細胞傷害活性（データは、３連で実施したｎ＝２の独立した実験の平均値である）。Ｂ）ＣＤ１９＋標的細胞によって毎週刺激した場合の表記のＣＡＲＴ細胞の累積細胞計数（ｎ＝３の独立した実験）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である；Ｐ値を、両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって計算した。Ｃ）標的としてのＦＦＬ発現ＮＡＬＭ６細胞による１８時間の生物発光アッセイによって決定した野生型１９２８ζと比較したＤ１２およびＤ２３の細胞傷害活性。ＣＤ１９＋標的細胞上でエフェクター細胞を増大させた１週間後に実験を実施した。データは平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である（３連で実施したｎ＝４の独立した実験）。Ｐ値を、３連のものの平均値に関する両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって計算し、Ｄ１２／Ｄ２３と野生型１９２８ζとの間で全てのＥ／Ｔ比に関して有意差を示さなかった（Ｐ＞０．０５）。Ｄ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、５×１０^４個のＣＡＲＴ細胞によって処置した。野生型１９２８ζまたは表記の１９２８ζ変異体によって処置したマウス（ｎ＝１０匹のマウス／群）のカプラン－マイヤー生存分析。対照は、無処置マウス（ｎ＝６）を指す。Ｐ値を、片側のログランクマンテル－コックス検定によって計算した。

図２３Ａ～２３Ｂは、ｉｎｖｉｔｒｏでのエフェクター機能に及ぼす１９２８ζ ＣＡＲ内のｉＴＡＭ位置の影響を示す。Ａ）ＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞上のグランザイムＢ（ＧｒＢ）発現（ｎ＝５の独立した実験）。Ｂ）ＣＤ１９発現標的細胞による２回目の刺激時のＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞のサイトカイン分泌。非刺激野生型１９２８ζ細胞を対照として使用した。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である（ＩＦＮγおよびＩＬ２、ｎ＝４；ＴＮＦα、ｎ＝５の独立した実験）。各個々の記号は１つの試料を示す。１９２８ζと比較した有意差を、両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって決定した。同上。

図２４Ａ～２４Ｆは、ＴＲＡＣコード１９２８ζ変異体のＴ細胞分化およびエフェクター機能を示す。ＮＡＬＭ６を有するマウスを１×１０^５個のＣＡＲＴ細胞によって処置し、注入の１７日後に安楽死させた。骨髄および脾臓のＣＡＲＴ細胞を、ＦＡＣＳによって分析および計数した。Ａ）ＣＡＲ遺伝子のＴＲＡＣ遺伝子座への組み込みの４日後のＣＡＲ発現のヒストグラムおよびフローサイトメトリー分析。類似の結果を有する４つの独立した実験の代表。Ｂ）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞の細胞数、Ｃ）ＣＤ８＋Ｔ_ＣＭ（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）のパーセンテージおよび骨髄ＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞上のＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡ発現のフローサイトメトリー分析（１つの独立した実験のｎ＝５匹のマウス／群の代表）。Ｄ）マウスの骨髄におけるＣＡＲ＋ＩＬ７Ｒ＋の腫瘍細胞に対する比およびＩＬ７Ｒ＋ＣＡＲＴ細胞の例示的なフローサイトメトリー分析。Ｅ）マウスの脾臓におけるＣＡＲＴ細胞の計数。Ｂ）、Ｃ）、Ｄ）およびＥ）では、データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、両側のマン－ホイットニー分析を実施した。ｎ＝５匹のマウス／群。Ｆ）ＴＲＡＣ－１ＸＸ、ＴＲＡＣ－ＸＸ３および野生型ＴＲＡＣ－１９２８ζの細胞傷害活性（標的としてＦＦＬを発現するＮＡＬＭ６による１８時間の生物発光アッセイ）。形質導入の４日後、毎週のＣＤ１９抗原刺激による増大の１週間および３週間後に実験を実施した。記号は、３連のものの平均値を示す（１人の代表的なドナー）。同上。同上。

図２５Ａ～２５Ｇは、野生型ＴＲＡＣ－１９２８ζと比較したＴＲＡＣ－１９２８ζ変異体のｉｎｖｉｖｏＴ細胞消耗を示す。Ａ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、１×１０^５個のＣＡＲＴ細胞によって処置し、注入の１７日後に安楽死させた。ＣＡＲ＋Ｔ細胞上の消耗マーカー発現のＦＡＣＳ分析、１つの独立した実験におけるｎ＝５匹のマウス／群の代表。Ｂ）～Ｇ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、１×１０^５個のＴＲＡＣ編集ナイーブＴ細胞によって処置した。ＣＡＲ投与の１６日（ＢおよびＣ）および３６日（ＥおよびＧ）後、骨髄および脾臓のＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－１ＸＸ細胞を、ｅｘｖｉｖｏでのＮＡＬＭ６またはＰＭＡ／イオノマイシン（Ｉｏｎｏ）による刺激に曝露した。発現のパーセンテージおよびフローサイトメトリー分析によって実証したＣＡＲＴ細胞上のサイトカインおよびグランザイムＢ（ＧｒＢ）／ＣＤ１０７ａ発現、２つの独立した実験におけるｎ＝３匹のマウス（Ｂ）およびｎ＝３回の反復（Ｇ）の代表。ＮＡＬＭ６との１０時間の同時培養後のＣＡＲＴ細胞上の消耗マーカーＰＤ１＋ＬＡＧ３＋の発現（Ｄ）およびＴＲＡＣ－１ＸＸの細胞傷害活性（３６日目）（Ｆ）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．であり、ｎ＝３匹のマウス／群である。同上。同上。同上。同上。同上。同上。

図２６Ａ～２６Ｇは、野生型ＴＲＡＣ－１９２８ζと比較したＴＲＡＣ－１ＸＸにおけるＴ細胞メモリー形成を示す。ＮＡＬＭ６を有するマウスを、１×１０^５個または５×１０^５個のＴＲＡＣ編集ナイーブＴ細胞によって処置した。Ａ）～Ｃ）１×１０^５個のＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－１ＸＸの投与の１６および３６日後に、ＣＡＲを骨髄および脾臓から単離した。Ａ）～Ｂ）ＣＡＲＴ細胞（Ａ）、セントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ：ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）、エフェクター（Ｔ_ＥＦＦ：ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ４５ＲＡ＋）およびＩＬ７Ｒ発現骨髄ＣＡＲＴ細胞（Ｂ）の細胞数。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である。ｎ＝３匹のマウス／群。Ｃ）１つの独立した実験における３６日目でのＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－１ＸＸ骨髄ＣＡＲＴ細胞上のＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡ発現の代表的なフローサイトメトリー分析（ｎ＝３匹のマウス／群）。Ｄ）～Ｇ）ＮＡＬＭ６を有するマウスを、５×１０^５個のＴＲＡＣ編集ナイーブＴ細胞によって処置し、ＮＡＬＭ６細胞を再チャレンジしたか（ｎ＝５匹のマウス／群）または腫瘍のさらなる再チャレンジを実施しなかった（ＴＲＡＣ－１９２８ζ、ｎ＝６匹のマウス；ＴＲＡＣ－１ＸＸ、ｎ＝７匹のマウス）。Ｄ）～Ｅ）ＣＡＲ投与の６３日後での処置したマウスの脾臓における総ＣＡＲＴ細胞（Ｄ）、Ｔ_ＣＭ、Ｔ_ＥＦＦおよびＩＬ７Ｒ＋ＣＡＲＴ細胞（Ｅ）の細胞数（再チャレンジあり：ＴＲＡＣ－１９２８ζ、ｎ＝４匹のマウス；ＴＲＡＣ－１ＸＸ、ｎ＝５匹のマウス。再チャレンジなし、ｎ＝５匹のマウス／群）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である；両側の対応のないスチューデントのｔ検定を統計分析のために使用した。Ｆ）ＣＡＲ注入の６３日後でのＴＲＡＣ－１９２８ζおよびＴＲＡＣ－１ＸＸＣＡＲＴ細胞上のＩＬ７Ｒ、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＤ４５ＲＡ発現のＦＡＣＳ分析（１つの独立した実験において少なくともｎ＝３匹のマウス／群の代表）。Ｇ）脾臓に由来するＣＡＲＴ細胞上の消耗マーカーＰＤ１＋ＴＩＭ３＋ＬＡＧ３＋の発現（再チャレンジあり：ＴＲＡＣ－１９２８ζ、ｎ＝４匹のマウス；ＴＲＡＣ－１ＸＸ：ｎ＝５匹のマウス、再チャレンジなし、ｎ＝５匹のマウス／群）。データは全て、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．である；Ｐ値を、両側の対応のないスチューデントのｔ検定によって決定した。同上。同上。同上。同上。同上。

図２７Ａ～２７Ｃは、ＴＲＡＣコード１９２８ζ変異体および選別した対照Ｔ細胞の転写プロファイルを示す。Ａ）ＣＤ１９標的細胞による刺激後のＣＤ８＋ＴＲＡＣ－１ＸＸ、ＴＲＡＣ－ＸＸ３およびＴＲＡＣ－１９２８ζの（左）および選別した対照Ｔ細胞サブセット（右）：Ｔ_Ｎ、Ｔ_ＳＣＭおよびＴ_ＥＦＦの全転写プロファイルの主成分分析（ＰＣＡ）。各ＣＡＲ構築物に関して技術的に３連でおよび各対照サブセットに関して６回の反復で実験を実施した。Ｂ）代表的なＧＳＥＡ濃縮プロット（ＧＳＥ１０２３９）は、１９２８ζと１ＸＸとの比較において、および１９２８ζとＸＸ３との比較においてエフェクター関連遺伝子と比較したメモリー遺伝子およびエフェクター関連遺伝子と比較したナイーブ遺伝子のダウンレギュレーションを実証する（ｎ＝３匹のマウス／群）。Ｃ）選別した対照Ｔ細胞サブセット（Ｔ_ＥＦＦ、Ｔ_ＳＣＭおよびＴ_Ｎ）の示差遺伝子発現と比較した、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉら（左）によって記載されるＣＤ８Ｔ細胞サブセットにおける９００個の示差的に発現された遺伝子のヒートマップ。同上。同上。

図２８Ａ～２８Ｄは、Ｔ細胞分化状態およびエフェクタープロファイルに及ぼすＴＲＡＣ－１９２８ζにおけるＣＤ３ζ ＩＴＡＭ変異の影響を示す。Ａ）ＧＳＥ４１８６７に由来するナイーブまたはメモリーＣＤ８Ｔ細胞と比較して消耗したＣＤ８Ｔ細胞においてアップレギュレートされた上位２００個の遺伝子のシグネチャーのＧＳＥＡは、ＴＲＡＣ－１９２８ζとＴＲＡＣ－１ＸＸまたはＴＲＡＣ－ＸＸ３との比較、および選別した対照Ｔ_ＥＦＦとＴ_ＮおよびＴ_ＳＣＭとの比較における消耗シグネチャーの濃縮を実証する。各ＣＡＲ構築物に関して技術的に３連で、および各対照サブセットに関して６回の反復で実験を実施した。Ｂ）１９２８ζとＸＸ３との比較、１ＸＸとＸＸ３との比較、および１９２８ζと１ＸＸとの比較における炎症、サイトカイン、およびケモカインシグナル伝達に関連する有意に濃縮された遺伝子セットを実証する遺伝子オントロジー分析（ｎ＝３）。ナイーブＴ細胞のＴＲＡＣ遺伝子座にＣＡＲ遺伝子を組み込み、ＣＤ１９＋標的細胞によって刺激後の転写分析を実施した。結果を、－ｌｏｇ_１０（補正Ｐ値）として有意順に示す。Ｐ値を、片側のフィッシャーの正確確率検定によって決定し、ベンジャミニ－ホッホベルグ法を使用して複数の仮説試験を補正した。Ｃ）炎症、サイトカイン、およびケモカイン活性に関連するＣＡＲ構築物間で選択された示差的に発現された遺伝子のヒートマップ。Ｄ）ＣＤ１９抗原による刺激後のＣＤ８＋ＣＡＲＴ細胞におけるＴ細胞分化状態のフローサイトメトリー分析（類似の結果を有するｎ＝２の独立した実験の代表）。同上。同上。同上。同上。同上。

図２９Ａ～２９Ｂは、処置したマウスの骨髄から得たＣＡＲＴ細胞を分析するためのゲート設定戦略を示す。Ａ）～Ｂ）ＣＡＲ注入の１７日後のＴＲＡＣ－１ＸＸ（Ｂ）と比較したＴＲＡＣ－１９２８ζ（Ａ）の代表的なフローサイトメトリー分析。ゲート設定の配置は、ＦＭＯ対照に基づいた。同上。

本開示の主題は、改変ＣＤ３ζ鎖を含む新しいＣＡＲ設計、および前記ＣＡＲを含む遺伝子改変された免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＣＴＬ細胞）を含む細胞を提供する。本開示の主題はまた、標的抗原に対する免疫応答を誘導および／もしくは増強するため、ならびに／または抗原特異的免疫応答の増加が望ましい新生物もしくは他の疾患／障害を処置および／もしくは防止するためにそのような細胞を使用する方法も提供する。本開示の主題は、少なくとも部分的には、本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞が、従来のＣＡＲを含む対照細胞と比較して改善された治療効力（例えば、細胞消耗の減少）を示したという発見に基づく。

１．定義
別段の定義のない限り、本明細書で使用する全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。以下の参考文献は、本開示の主題において使用される多くの用語の一般的定義を当業者に提供する：Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(2nd ed. 1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed.,1988)；The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), SpringerVerlag (1991)；およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の特定のない限り、以下のものに帰する意味を有する。

本明細書で使用される場合、用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される特定の値に関する許容される誤差の範囲内であることを意味し、その値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定系の限界に一部依存するであろう。例えば、「約」は、当技術分野における実務あたり、３標準偏差以内または３を超える標準偏差以内を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の２０％まで、例えば、１０％まで、５％まで、または１％までの範囲を意味してもよい。あるいは、特に生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、ある値の１桁の範囲内、例えば、５倍以内または２倍以内を意味してもよい。

「免疫応答性細胞を活性化する」とは、免疫応答の開始をもたらす細胞中でのシグナル伝達の誘導またはタンパク質の変化を意味する。例えば、ＣＤ３鎖が、リガンド結合および免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）に応答してクラスター化する場合、シグナル伝達カスケードが産生される。ある特定の実施形態では、内因性ＴＣＲまたは外因性ＣＡＲが抗原に結合する場合、結合した受容体（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζなど）の近くで多くの分子のクラスター化を含む免疫学的シナプスの形成が起こる。膜結合型シグナル伝達分子のこのクラスター化により、ＣＤ３鎖内に含有されるＩＴＡＭモチーフはリン酸化されるようになる。このリン酸化は次に、Ｔ細胞活性化経路を開始させ、最終的にはＮＦ－κＢおよびＡＰ－１などの転写因子を活性化する。これらの転写因子は、Ｔ細胞の全体的な遺伝子発現を誘導して、マスター調節性Ｔ細胞タンパク質の増殖および発現のためのＩＬ－２産生を増加させ、Ｔ細胞媒介性免疫応答を開始させる。

「免疫応答性細胞を刺激する」とは、ロバストかつ持続的な免疫応答をもたらすシグナルを意味する。様々な実施形態では、これは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化後に起こるか、または限定されるものではないが、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０／Ｍｙ８８、ＮＫＧＤ２およびＩＣＯＳを含む受容体を介して同時に媒介される。複数の刺激シグナルを受け取ることが、ロバストかつ長期間のＴ細胞媒介性免疫応答を開始させるのに重要であり得る。Ｔ細胞は、急速に阻害され、抗原に対して非応答性になり得る。これらの共刺激シグナルの効果は変化してもよいが、それらは一般的には、完全かつ持続的な根絶のために抗原にロバストに応答する、長期に生存し、増殖し、抗アポトーシス性のＴ細胞を生成するために遺伝子発現の増加をもたらす。

本明細書で使用される用語「抗原認識受容体」とは、抗原へのその結合に応答して免疫または免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することができる受容体を指す。抗原認識受容体の非限定例としては、天然または内因性のＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、およびキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）が挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、無傷抗体分子だけでなく、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味する。そのような断片もまた当技術分野で周知であり、ｉｎｖｉｔｒｏとｉｎｖｉｖｏの両方で通常用いられる。したがって、本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、無傷免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性断片Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦａｂも意味する。Ｆ（ａｂ’）_２、および無傷抗体のＦｃ断片を欠くＦａｂ断片は、循環からより急速に消失し、無傷抗体の低い非特異的組織結合を有してもよい（Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983)）。本明細書で使用される場合、抗体は、天然抗体全体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、および非定型抗体を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＶ_Ｈと省略）および重鎖定常（Ｃ_Ｈ）領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＶ_Ｌと省略）および軽鎖定常Ｃ_Ｌ領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Ｌから構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域を、より保存された、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。それぞれのＶ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序で配置された３個のＣＤＲと４個のＦＲとをから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列と定義される。例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4thU. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health(1987)を参照されたい。一般に、抗体は、３つの重鎖および３つの軽鎖ＣＤＲまたは可変領域中のＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗体の、抗原またはエピトープへの結合のための接触残基の大部分を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して説明される（Kabat,E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, FifthEdition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242）。

本明細書で使用される場合、用語「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、Ｖ_Ｈ：：Ｖ_Ｌヘテロ二量体を形成するように共有結合的に連結された免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質である。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、直接連結されるか、またはＶ_ＨのＮ末端を、Ｖ_ＬのＣ末端と接続する、もしくはＶ_ＨのＣ末端を、Ｖ_ＬのＮ末端と接続する、ペプチドをコードするリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって連結される。リンカーは通常、可撓性のためにグリシンに富み、可溶性のためにセリンまたはトレオニンに富む。定常領域の除去およびリンカーの導入にも拘わらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体を、Huston, et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988)によって記載されたＶ_ＨおよびＶ_Ｌをコードする配列を含む核酸から発現させることができる。また、米国特許第５，０９１，５１３号、第５，１３２，４０５号および第４，９５６，７７８号；ならびに米国特許出願公開第２００５０１９６７５４号および第２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニストｓｃＦｖが記載されている（例えば、Zhaoet al., Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6):455-51；Peter et al., J CachexiaSarcopenia Muscle 2012 August 12；Shieh et al., J Imunol2009 183(4):2277-85；Giomarelliet al., Thromb Haemost 2007 97(6):955-63；Fife eta., J Clin Invst 2006116(8):2252-61；Brocks et al., Immunotechnology 1997 3(3):173-84；Moosmayer etal., Ther Immunol 1995 2(10:31-40)を参照されたい）。刺激活性を有するアゴニストｓｃＦｖが記載されている（例えば、Peteret al., J Bioi Chern 2003 25278(38):36740-7；Xie et al., Nat Biotech 199715(8):768-71；Ledbetter et al., Crit Rev Immunol1997 17(5-6):427-55；Ho et al.,BioChim Biophys Acta 2003 1638(3):257-66を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、結合強度の尺度を意味する。親和性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の立体化学的適合の近さ、それらの間の接触領域のサイズ、ならびに／または荷電した基および疎水性の基の分布に依存してもよい。本明細書で使用される場合、用語「親和性」はまた、可逆性複合体の形成後の抗原－抗体結合の強度を指す「アビディティ」も含む。抗原に対する抗体の親和性を算出するための方法は、当技術分野で公知であり、限定されるものではないが、様々な抗原結合実験、例えば、機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）が挙げられる。

本明細書で使用される用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、免疫応答性細胞を活性化または刺激することができる細胞内シグナル伝達ドメインに融合された細胞外抗原結合ドメイン、および膜貫通ドメインを含む分子を指す。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖを、抗体の可変重鎖および軽鎖領域を融合することから誘導することができる。あるいは、またはさらに、ｓｃＦｖは、Ｆａｂ’に由来してもよい（抗体に由来する代わりに、例えば、Ｆａｂライブラリーから得られる）。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖを膜貫通ドメインに融合した後、細胞内シグナル伝達ドメインに融合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に対する高い結合親和性またはアビディティを有するように選択される。

本明細書で使用される場合、用語「核酸分子」は、目的のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。そのような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％相同または同一である必要はないが、実質的な同一性を示してもよい。内因性配列に対して「実質的な同一性」または「実質的な相同性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリダイズすることができる。「ハイブリダイズする」とは、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）、またはその一部との間で二本鎖分子を形成する対を意味する。（例えば、Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399；Kimmel,A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507を参照されたい）。

例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび７５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、例えば、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび５０ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび２５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであろう。低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得られるが、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、例えば、少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られる。ストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含むであろう。ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの含有または排除などの、変化する追加のパラメーターは、当業者には周知である。必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることによって、様々なレベルのストリンジェンシーが達成される。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および１％ＳＤＳ中、３０℃で行われる。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭＮａＣｌ、５０ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、３５％ホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中、３７℃で行われる。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭＮａＣｌ、２５ｍＭクエン酸三ナトリウム、１％ＳＤＳ、５０％ホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌｓｓＤＮＡ中、４２℃で行われる。これらの条件に対する有用な変形形態は、当業者には容易に明らかとなるであろう。

多くの適用について、ハイブリダイゼーション後の洗浄ステップも、ストリンジェンシーが変化するであろう。洗浄ストリンジェンシー条件を、塩濃度によっておよび温度によって定義することができる。上述のように、洗浄ストリンジェンシーを、塩濃度を低下させることによって、または温度を上昇させることによって増加させることができる。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび３ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、例えば、約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび１．５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであってよい。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含むであろう。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、２５℃で行われる。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、４２℃で行われる。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭＮａＣｌ、１．５ｍＭクエン酸三ナトリウム、および０．１％ＳＤＳ中、６８℃で行われる。これらの条件に対する追加の変形形態は、当業者には容易に明らかとなるであろう。ハイブリダイゼーション技術は、当業者には周知であり、例えば、Benton and Davis (Science 196:180, 1977)；Grunstein and Rogness(Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72:3961, 1975)；Ausubel et al. (Current Protocolsin Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001)；Berger and Kimmel(Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York)；およびSambrooket al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor LaboratoryPress, New Yorkに記載されている。

「実質的に同一」または「実質的に相同」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか１つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか１つ）に対して少なくとも約５０％の相同性または同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。ある特定の実施形態では、そのような配列は、比較のために使用されるアミノ酸または核酸の配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一である。

配列同一性を、配列分析ソフトウェア（例えば、ＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅｏｆｔｈｅＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ、１７１０ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用することによって測定することができる。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／または他の改変に対して相同性の程度を割り当てることによって、同一の、または類似する配列を一致させる。保存的置換は、典型的には、以下の群：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン内の置換を含む。同一性の程度を決定するための例示的な手法では、ＢＬＡＳＴプログラムを、密接に関連する配列を示すｅ－３～ｅ－１００の確率スコアと共に使用することができる。

「アナログ」とは、参照ポリペプチドまたは核酸分子の機能を有する構造的に関連するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。

本明細書で使用される用語「リガンド」とは、受容体に結合する分子を指す。ある特定の実施形態では、リガンドは、別の細胞上の受容体に結合し、細胞間認識および／または相互作用を可能にする。

本明細書で使用される用語「構成的発現」または「構成的に発現される」とは、あらゆる生理的条件下での発現または発現されることを指す。

「疾患」とは、細胞、組織、または臓器の正常な機能を損傷または妨害する任意の状態、疾患または障害、例えば、新生物、および細胞の病原体感染を意味する。

「有効量」とは、治療効果を有するのに十分な量を意味する。ある特定の実施形態では、「有効量」は、新生物の継続的な増殖、成長、または転移（例えば、侵入、または遊走）を停止、改善または阻害するのに十分な量である。

「寛容を強制すること」とは、移植された臓器または組織を標的とする自己反応性細胞または免疫応答性細胞の活性を防止することを意味する。

「内因性」とは、細胞または組織中で通常発現される核酸分子またはポリペプチドを意味する。

「外因性」とは、細胞中に内因性に存在しない核酸分子またはポリペプチドを意味する。したがって、用語「外因性」は、外来の、異種の、過剰発現される核酸分子およびポリペプチドなどの、細胞中で発現される任意の組換え核酸分子またはポリペプチドを包含する。「外因性」核酸とは、天然の野生型細胞中には存在しない核酸を意味し；例えば、外因性核酸は、配列によって、位置／場所によって、またはその両方によって内因性対応物と異なっていてもよい。明確性のために、外因性核酸は、その天然の内因性対応物と比較して同じか、または異なる配列を有してもよく；それを、遺伝子操作によって、細胞自体またはその前駆細胞に導入することができ、必要に応じて、非天然プロモーターまたは分泌配列などの、代替的な制御配列に連結してもよい。

「異種核酸分子またはポリペプチド」とは、細胞または細胞から得られた試料中に通常は存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡもしくはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを意味する。この核酸は、別の生物に由来してもよいか、またはそれは例えば、細胞もしくは試料中で通常は発現されないｍＲＮＡ分子であってもよい。

「免疫応答性細胞」は、免疫応答において機能する細胞、またはその前駆細胞もしくは子孫を意味する。

「モジュレートする」とは、正または負に変更することを意味する。例示的なモジュレーションとしては、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、または約１００％の変化が挙げられる。

「増加」とは、少なくとも約５％正に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、約１００％またはそれより高くてもよい。

「減少」とは、少なくとも約５％負に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、またはさらには約１００％であってもよい。

「単離された細胞」とは、細胞に天然に付随する分子および／または細胞成分から分離された細胞を意味する。

用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」とは、その天然状態で見出されるような通常はそれに伴う成分を変化する程度で含まない材料を指す。「単離する」は、元の供給源またはその周囲のものからの分離の程度を示す。「精製する」は、単離よりも高い分離の程度を示す。「精製された」または「生物学的に純粋な」タンパク質は、不純物がタンパク質の生物学的特性に実質的に影響しない、または他の有害な結果を引き起こさないように十分に、他の材料を含まない。すなわち、核酸またはペプチドは、それが組換えＤＮＡ技術によって生産される場合には細胞材料、ウイルス材料、もしくは培養培地、または化学的に合成される場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない場合、精製されている。純度および均一性は、典型的には、分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。用語「精製された」は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲル中で本質的には１つのバンドを生じることを示してもよい。改変、例えば、リン酸化またはグリコシル化にかけることができるタンパク質については、異なる改変は、別々に精製することができる、異なる単離されたタンパク質を生じてもよい。

本明細書で使用される用語「抗原結合ドメイン」とは、細胞上に存在する特定の抗原決定基または抗原決定基のセットに特異的に結合することができるドメインを指す。

本明細書で使用される場合、「リンカー」は、２つまたはそれより多いポリペプチドまたは核酸を、それらが互いに接続されるように共有結合的に結合させる官能基（例えば、化学物質またはポリペプチド）を意味するべきである。本明細書で使用される場合、「ペプチドリンカー」とは、２つのタンパク質を一緒にカップリングさせる（例えば、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインをカップリングさせる）ために使用される１つまたは複数のアミノ酸を指す。ある特定の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号６６）に記載の配列を含む。

「新生物」とは、細胞または組織の病理学的増殖および他の組織または臓器へのその後の遊走または侵入を特徴とする疾患を意味する。新生物増殖は、典型的には、制御されず、進行性であり、正常細胞の複製を惹起しない、またはその停止を引き起こす条件下で起こる。新生物は、限定されるものではないが、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群より選択される臓器、またはその組織もしくは細胞型を含む、様々な細胞型、組織、または臓器に影響し得る。新生物は、肉腫、癌腫、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などのがんを含む。

「受容体」とは、１つまたは複数のリガンドに選択的に結合する細胞膜上に存在するポリペプチド、またはその一部を意味する。

「認識する」とは、標的に選択的に結合することを意味する。腫瘍を認識するＴ細胞は、腫瘍抗原に結合する受容体（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲ）を発現することができる。

「参照」または「対照」とは、比較の基準を意味する。例えば、ＣＡＲおよびｓｃＦｖを発現する細胞によるｓｃＦｖ－抗原結合のレベルを、ＣＡＲのみを発現する対応する細胞中でのｓｃＦｖ－抗原結合のレベルと比較することができる。

「分泌される」とは、小胞体、ゴルジ体を通る分泌経路によって、および細胞形質膜で一過的に融合する小胞として細胞から放出され、タンパク質を細胞の外部に放出するポリペプチドを意味する。

「シグナル配列」または「リーダー配列」とは、分泌経路へのその進入を指令する新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（例えば、５、１０、１５、２０、２５または３０アミノ酸）を意味する。例示的なリーダー配列としては、限定されるものではないが、ＩＬ－２シグナル配列：ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号６７）（ヒト）、ＭＹＳＭＱＬＡＳＣＶＴＬＴＬＶＬＬＶＮＳ（配列番号６８）（マウス）；カッパリーダー配列：ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号６９）（ヒト）、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号７０）（マウス）；ＣＤ８リーダー配列：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号７１）（ヒト）；トランケートされたヒトＣＤ８シグナルペプチド：ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡ（配列番号７２）（ヒト）；アルブミンシグナル配列：ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＳＳＡＹＳ（配列番号７３）（ヒト）；およびプロラクチンシグナル配列：ＭＤＳＫＧＳＳＱＫＧＳＲＬＬＬＬＬＶＶＳＮＬＬＬＣＱＧＶＶＳ（配列番号７４）（ヒト）が挙げられる。ある特定の実施形態では、リーダー配列は、ＩｇＧシグナルペプチドまたはＧＭ－ＣＳＦシグナルペプチドであってもよい。「可溶性」とは、水性環境中で自由に拡散し得る（例えば、膜に結合していない）ポリペプチドを意味する。

「特異的に結合する」とは、目的の生体分子（例えば、ポリペプチド）を認識し、これに結合するが、試料、例えば、本開示のポリペプチドを天然に含む生体試料中の他の分子を実質的に認識せず、これに結合しないポリペプチドまたはその断片を意味する。

本明細書で使用される用語「腫瘍抗原」とは、正常な、または非ＩＳ新生物細胞と比較して腫瘍細胞上でユニークに、または示差的に発現される抗原（例えば、ポリペプチド）を指す。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＡＲを介して免疫応答を活性化もしくは誘導することができる（例えば、ＣＤ１９、ＭＵＣ－１６）または受容体－リガンド結合を介して免疫応答を抑制することができる（例えば、ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１／Ｌ２、Ｂ７．１／２）腫瘍によって発現される任意のポリペプチドを含む。

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、米国特許法においてそれらに帰する広い意味を有することが意図され、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味してもよい。

本明細書で使用される場合、「処置」とは、処置される個体または細胞の疾患経過を変更する試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の経過中に実施することができる。処置の治療効果としては、限定されるものではないが、疾患の発症または再発の防止、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の縮小、転移の防止、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。疾患または障害の進行を防止することによって、処置は、罹患した、もしくは診断された被験体または障害を有することが疑われる被験体における障害に起因する悪化を防止することができるだけでなく、処置は、障害のリスクがある、または障害を有することが疑われる被験体における障害または障害の症状の開始を防止することもできる。

本明細書における「個体」または「被験体」は、ヒトまたは非ヒト動物、例えば、哺乳動物などの脊椎動物である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、ヒト、霊長類、家畜、競技用動物（ｓｐｏｒｔａｎｉｍａｌ）、齧歯類およびペットが挙げられる。非ヒト動物被験体の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスターおよびモルモットなどの齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、ならびに類人猿およびサルなどの非ヒト霊長類が挙げられる。用語「免疫無防備状態の」は、本明細書で使用される場合、免疫不全である被験体を指す。この被験体は、健康な免疫系を有する人物において疾患を通常は引き起こさないが、不十分に機能するまたは抑制された免疫系を有する人々を冒すことができる生物に起因する感染である、日和見感染に対して非常に脆弱である。

本開示の主題の他の態様は、以下の開示に記載され、本開示の主題の範囲内にある。

２．キメラ抗原受容体
本開示は、目的の抗原に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＣＡＲは、腫瘍抗原または病原体抗原に結合することができる。

２．１．抗原
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、腫瘍抗原に結合する。任意の腫瘍抗原（抗原性ペプチド）を、本明細書に記載の腫瘍関連実施形態において使用することができる。抗原の供給源としては、限定されるものではないが、がんタンパク質が挙げられる。抗原を、ペプチドとして、または無傷タンパク質もしくはその一部として発現させることができる。無傷タンパク質またはその一部は、天然であっても、または変異誘発されていてもよい。腫瘍抗原の非限定例としては、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に感染した細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、上皮糖タンパク質－２（ＥＧＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシンタンパク質キナーゼｅｒｂーＢ２、３、４（ｅｒｂ－Ｂ２、３、４）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－α、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ＬｅｗｉｓＹ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、黒色腫抗原ファミリーＡ、１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ムチン１（ＭＵＣ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん精巣抗原ＮＹ－ＥＳ０－１、がん胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、およびウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、ＢＣＭＡ、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２ＡおよびＥＲＢＢが挙げられる。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９ポリペプチドは、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメインに結合する。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、例えば、免疫無防備状態の被験体における、病原体感染または他の感染症の処置および／または防止における使用のために、病原体抗原に結合する。病原体の非限定例としては、疾患を引き起こし得るウイルス、細菌、真菌、寄生生物および原生動物が挙げられる。

ウイルスの非限定的な例としては、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ＨＩＶ－１（ＨＤＴＶ－ＩＩＩ、ＬＡＶＥまたはＨＴＬＶ－ＩＩＩ／ＬＡＶとも称される）またはＨＩＶ－ＩＩＩ、およびＨＩＶ－ＬＰなどの他の単離菌など、ヒト免疫不全ウイルス）；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を引き起こす株）、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス）、Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラウイルス）、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器多核体ウイルス）、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ハンタンウイルス、ブニヤ（bunga）ウイルス、フレボウイルスおよびナイロ（Naira）ウイルス）、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ（出血熱ウイルス）、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウイルス、オルビウイルス（orbiviurses）およびロタウイルス）、Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス）、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａ（パルボウイルス）、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（大部分のアデノウイルス）、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、およびＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アフリカブタ熱ウイルス）、ならびに未分類ウイルス（例えば、デルタ肝炎の病原因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、非Ａ、非Ｂ型肝炎の病原因子（クラス１＝内部的に伝染、クラス２＝非経口的に伝染（すなわち、Ｃ型肝炎）、ノーウォークおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）が挙げられる。

細菌の非限定的な例としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられる。感染性細菌の具体例としては、これらに限定されないが、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｓ、Ｂｏｒｅｌｉａｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｓｐｓ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓａｇａｌａｃｔｉａｅ（B群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（緑色連鎖球菌（viridans）群）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（嫌気性ｓｐｓ．）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓａｎｔｒａｃｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｓｐ．、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、ＲｉｃｋｅｔｔｓｉａおよびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｉｓｒａｅｌｌｉが挙げられる。

ある特定の実施形態では、病原体抗原は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に存在するウイルス抗原、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に存在するウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に存在するウイルス抗原、またはインフルエンザウイルスに存在するウイルス抗原である。

２．２．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
ＣＡＲは、目的の特異性を免疫エフェクター細胞に移植または付与する操作された受容体である。ＣＡＲを使用して、レトロウイルスベクターによって容易になったそのコード配列の移入と共に、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に移植することができる。

３世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」のＣＡＲは、典型的には、細胞質／細胞内シグナル伝達ドメインに融合された、膜貫通ドメインに融合された、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から構成される。「第１世代」のＣＡＲは、ｄｅｎｏｖｏで抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介性抗原提示とは無関係に、単一の融合分子中のそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介してＣＤ４^＋とＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第２世代」のＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０／Ｍｙ８８およびＮＫＧＤ２）に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを、ＣＡＲの細胞質尾部に付加して、Ｔ細胞にさらなるシグナルを提供する。「第２世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、第２世代のＣＡＲである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログとして具体化される）は、約２×１０^－７Ｍまたはそれ未満の解離定数（Ｋ_ｄ）で抗原に結合する。ある特定の実施形態では、Ｋ_ｄは、約２×１０^－７Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－７Ｍもしくはそれ未満、約９×１０^－８Ｍもしくはそれ未満、約１×１０^－８Ｍもしくはそれ未満、約９×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約５×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約４×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約３×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、約２×１０^－９Ｍもしくはそれ未満、または約１×１０^－９Ｍもしくはそれ未満である。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約３×１０^－９Ｍまたはそれ未満である。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－９Ｍ～約３×１０^－７Ｍである。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１．５×１０^－９Ｍ～約３×１０^－７Ｍである。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１．５×１０^－９Ｍ～約２．７×１０^－７Ｍである。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－４Ｍ～約１×１０^－６Ｍである。ある特定の非限定的な実施形態では、Ｋ_ｄは、約１×１０^－１３Ｍ～約１×１０^－１５Ｍである。

細胞外抗原結合ドメインの結合（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログ中での）を、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、増殖阻害）、またはウェスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイはそれぞれ、一般的には、目的の複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体、またはｓｃＦｖ）を用いることによって、特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖを放射標識し、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるWeintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh TrainingCourse on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986を参照されたい）。放射性アイソトープを、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用などの手段によって、またはオートラジオグラフィーによって検出することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーを用いて標識される。蛍光マーカーの非限定例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、およびｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）が挙げられる。

２．２．１．ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、マウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、必要に応じて架橋されるＦａｂである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）_２である。ある特定の実施形態では、前記分子はいずれも、細胞外抗原結合ドメインを形成する異種配列との融合タンパク質中に含まれていてもよい。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、抗原－Ｆｃ融合タンパク質を含むｓｃＦｖファージライブラリーをスクリーニングすることによって同定される。ｓｃＦｖは、ヒトＶＬおよび／またはＶＨ遺伝子を担持するマウスから誘導することができる。また、ｓｃＦｖは、ラクダ科重鎖（例えば、ラクダ、ラマなどに由来するＶＨＨ）または細胞表面受容体のための部分天然リガンドで置換することもできる。ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、例えば、本明細書に開示されるものである。ある特定の実施形態では、抗原は、病原体抗原、例えば、本明細書に開示されるものである。

ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、マウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９ポリペプチドに結合するマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含み、ヒトＣＤ１９ポリペプチド（例えば、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含むヒトＣＤ１９ポリペプチド）に特異的に結合するマウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、配列番号８４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８５に記載される。ある特定の実施形態では、マウスｓｃＦｖは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。ある特定の実施形態では、マウスｓｃＦｖは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。ある特定の実施形態では、マウスｓｃＦｖは、必要に応じて、Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間の、（ｉｉｉ）リンカー配列、例えば、リンカーペプチドと共に、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈおよび配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、配列番号６６に記載の配列を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも９０％、または少なくとも約９５％）相同であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８３と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌとを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８３に記載のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌとを含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１またはその保存的改変、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２またはその保存的改変、および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３またはその保存的改変を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２、および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１またはその保存的改変、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２またはその保存的改変、および配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３またはその保存的改変を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７６に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１またはその保存的改変、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２またはその保存的改変、配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３またはその保存的改変、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１またはその保存的改変、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２またはその保存的改変、および配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３またはその保存的改変を含む。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７６に記載の配列を有するアミノ酸を含むＶ_ＨＣＤＲ１、配列番号７７に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２、配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２、および配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３を含む。

本明細書で使用される場合、用語「保存的配列改変」とは、アミノ酸配列を含む本開示のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン）の結合特性に有意に影響も変更もしないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加および欠失を含んでもよい。改変を、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発などの、当技術分野で公知の標準的な技術によって本開示のＣＡＲのヒトｓｃＦｖ中に導入することができる。アミノ酸を、電荷および極性などのその物理化学的特性に従って群に分類することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じ群内のアミノ酸で置き換えられるものである。例えば、アミノ酸を電荷によって分類することができる：正に荷電したアミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジンを含み、負に荷電したアミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸を含み、中性荷電アミノ酸は、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンを含む。さらに、アミノ酸を、極性によって分類することができる：極性アミノ酸は、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンを含み；非極性アミノ酸は、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含む。したがって、ＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸を、同じ群に由来する他のアミノ酸残基と置き換え、変更された抗体を、本明細書に記載の機能アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上の（ｃ）から（ｌ）に記載の機能）について試験することができる。ある特定の実施形態では、特定の配列またはＣＤＲ領域内の１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下の残基が変更される。

特定の配列（例えば、配列番号８２および配列番号８３）に対する少なくとも約８０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％（例えば、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％）の相同性または同一性を有するＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌアミノ酸配列は、特定の配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有してもよいが、標的抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、特定の配列（例えば、配列番号８２および配列番号８３）において置換、挿入および／または欠失される。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、細胞外抗原結合ドメインのＣＤＲの外部の領域中（例えば、ＦＲ中）に存在する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、その配列（配列番号８２および配列番号８３）の翻訳後改変を含む、配列番号８２および配列番号８３からなる群より選択されるＶ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ配列を含む。

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントと等価である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある、ギャップの数、およびそれぞれのギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一の位置の数の関数（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定を、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントを、ＰＡＭ１２０残基重み付け表、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988)）を使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントを、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（J.Mol. Biol. 48:444-453 (1970)）を使用して決定することができる。

さらに、またはあるいは、本開示の主題のアミノ酸配列を、例えば、関連する配列を同定するために、公共データベースに対する検索を実行するための「クエリー配列」としてさらに使用することができる。そのような検索を、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実行して、本明細書に開示される特定の配列（例えば、ｓｃＦｖｍ９０３、ｍ９０４、ｍ９０５、ｍ９０６、およびｍ９００の重鎖および軽鎖可変領域配列）と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較のためのギャップ付きアラインメントを得るために、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴを、Altschulet al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402に記載のように使用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。

２．２．２．ＣＡＲの膜貫通ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性をもたらす。抗原認識後、受容体クラスターおよびシグナルが細胞に伝達される。本開示の主題によれば、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答と関連するタンパク質の基づくものではない）、またはその組合せの天然または改変膜貫通ドメインを含んでもよい。

ＣＤ８
ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供されるようなＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１３９３４５．１（配列番号８６）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴもしくはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定することができる）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有する、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２３５アミノ酸長である、配列番号８６の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号８６のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２３５のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８６のアミノ酸１３７～２０９のアミノ酸配列を含むか、または有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメインを含む。

ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供されるようなＮＣＢＩ参照番号：ＡＡＡ９２５３３．１（配列番号８７）（本明細書における相同性は、ＢＬＡＳＴもしくはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定することができる）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有する、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、または少なくとも約７０、または少なくとも約１００、または少なくとも約２００、および最大で２４７アミノ酸長である配列番号８７の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号８７のアミノ酸１～２４７、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～２１９、または２００～２４７のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、配列番号８７のアミノ酸１５１～２１９のアミノ酸配列を含むか、または有するＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメインを含む。

ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供される、配列番号８８に記載のアミノ酸配列を含むか、または有する：
STTTKPVLRTPSPVHPTGTSQPQRPEDCRPRGSVKGTGLDFACDIYIWAPLAGICVALLLSLIITLICY［配列番号８８］

本開示の主題によれば、「ＣＤ８核酸分子」とは、ＣＤ８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。

ある特定の実施形態では、配列番号８８に記載のアミノ酸配列を有するＣＤ８ポリペプチドをコードするＣＤ８核酸分子は、以下に提供される、配列番号８９に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ２８
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ１０７４７またはＮＰ＿００６１３０（配列番号９０）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号９０の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９０のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９０のアミノ酸１５３～１７９のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号９０は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ２８核酸分子」とは、ＣＤ２８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号９０のアミノ酸１５３～１７９を有するＣＤ２８ポリペプチドをコードするＣＤ２８核酸分子は、以下に提供される、配列番号９１に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号９２もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号９２は、以下に提供される：

配列番号９２のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号９３に記載される。

ＣＤ８４
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８４ポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＣＤ８４ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１７１８０８．１（配列番号１）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ８４ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号１の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８４ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８４ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２２６～２５０のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号１は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ８４核酸分子」とは、ＣＤ８４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸２２６～２５０を有するＣＤ８４ポリペプチドをコードするＣＤ８４核酸分子は、以下に提供される、配列番号２に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ１６６
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ１６６ポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＣＤ１６６ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１６１８．２（配列番号３）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ１６６ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号３の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５２８～５５３のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５２８～５４９のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号３は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ１６６核酸分子」とは、ＣＤ１６６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号３のアミノ酸５２８～５５３を有するＣＤ１６６ポリペプチドをコードするＣＤ１６６核酸分子は、以下に提供される、配列番号４に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ８ａ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＣＤ８ａポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００１１３９３４５．１（配列番号５）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ８ａポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号５の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ａポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ａポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸１８３～２０７のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号５は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ８ａ核酸分子」とは、ＣＤ８ａポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号５のアミノ酸１８３～２０７を有するＣＤ８ａポリペプチドをコードするＣＤ８ａ核酸分子は、以下に提供される、配列番号６に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ８ｂ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ｂポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＣＤ８ｂポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿７４２０９９．１（配列番号７）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ８ｂポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号７の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ｂポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＤ８ｂポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸１７１～１９５のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号７は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ８ｂ核酸分子」とは、ＣＤ８ｂポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号７のアミノ酸１７１～１９５を有するＣＤ８ｂポリペプチドをコードするＣＤ８ｂ核酸分子は、以下に提供される、配列番号８に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＩＣＯＳ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＩＣＯＳポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３６２２４．１（配列番号９）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号９の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸１４１～１６５のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号９は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＩＣＯＳ核酸分子」とは、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号９のアミノ酸１４１～１６５を有するＩＣＯＳポリペプチドをコードするＩＣＯＳ核酸分子は、以下に提供される、配列番号１０に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＴＬＡ－４
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿００５２０５．２（配列番号１１）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号１１の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸１６２～１８６のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号１１は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＴＬＡ－４核酸分子」とは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号１１のアミノ酸１６２～１８６を有するＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするＣＴＬＡ－４核酸分子は、以下に提供される、配列番号１２に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＩＣＡＭ－１
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドの天然または改変膜貫通ドメインを含む。ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０００１９２．２（配列番号１３）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号１３の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインに含まれるＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸４８１～５０７のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号１３は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＩＣＡＭ－１核酸分子」とは、ＩＣＡＭ－１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、配列番号１３のアミノ酸４８１～５０７を有するＩＣＡＭ－１ポリペプチドをコードするＩＣＡＭ－１核酸分子は、以下に提供される、配列番号１４に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

２．２．３．ヒンジ／スペーサー領域
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲはまた、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するヒンジ／スペーサー領域を含んでもよい。ヒンジ／スペーサー領域は、抗原認識を容易にするために抗原結合ドメインを異なる向きに方向付けるのに十分な可撓性を有してもよい。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ８４ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答と関連するタンパク質の基づくものではない）、またはその組合せの天然または改変ヒンジ領域を含んでもよい。ヒンジ／スペーサー領域は、ＩｇＧ１に由来するヒンジ領域、または免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域およびＣＤ３の部分、ＣＤ２８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号９０の一部）、ＣＤ８ポリペプチドの一部（例えば、配列番号８６の一部、もしくは配列番号８７の一部）、それらと少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一である前記のいずれかの変形形態、または合成スペーサー配列であってもよい。

ＣＤ２８
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＤ２８ポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９０のアミノ酸１１４～１５２のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号９０のアミノ酸１１４～１５２を有するＣＤ２８ポリペプチドをコードするＣＤ２８核酸分子は、以下に提供される、配列番号１５に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP［配列番号１５］

ＣＤ８４
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＤ８４ポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ８４ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸１８７～２２５のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸１８７～２２５を有するＣＤ８４ポリペプチドをコードするＣＤ８４核酸分子は、以下に提供される、配列番号１６に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ１６６
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＤ１６６ポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸４８９～５２７を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号３のアミノ酸４８９～５２７を有するＣＤ１６６ポリペプチドをコードするＣＤ１６６核酸分子は、以下に提供される、配列番号１７に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸４８４～５２７を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５０６～５２７を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸５１７～５２７を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号１０９または配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域および膜貫通ドメインに含まれるＣＤ１６６ポリペプチドは、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６または１１７に記載のアミノ酸配列を含むか、または有する。

ＣＤ８ａ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＤ８ａポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ８ａポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸１３７～１８２を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号５のアミノ酸１３７～１８２を有するＣＤ８ａポリペプチドをコードするＣＤ８ａ核酸分子は、以下に提供される、配列番号１８に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＤ８ｂ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＤ８ｂポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＤ８ｂポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸１３２～１７０を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号７のアミノ酸１３２～１７０を有するＣＤ８ｂポリペプチドをコードするＣＤ８ｂ核酸分子は、以下に提供される、配列番号１９に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＩＣＯＳ
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＩＣＯＳポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸１０２～１４０を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号９のアミノ酸１０２～１４０を有するＩＣＯＳポリペプチドをコードするＩＣＯＳ核酸分子は、以下に提供される、配列番号２０に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＣＴＬＡ－４
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＣＴＬＡ－４ポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＣＴＬＡ－４ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸１２３～１６１を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号１１のアミノ酸１２３～１６１を有するＣＴＬＡ－４ポリペプチドをコードするＣＴＬＡ－４核酸分子は、以下に提供される、配列番号２１に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ＩＣＡＭ－１
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、本明細書に記載のＩＣＡＭ－１ポリペプチドの天然または改変ヒンジ領域を含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域に含まれるＩＣＡＭ－１ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸４４２～４８０を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、配列番号１３のアミノ酸４４２～４８０を有するＩＣＡＭ－１ポリペプチドをコードするＩＣＡＭ－１核酸分子は、以下に提供される、配列番号２２に記載の配列を有する核酸を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ヒンジ／スペーサー領域を含む。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインとの間に配置される。ある特定の実施形態では、ヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答と関連するタンパク質の基づくものではない）、またはその組合せを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＣＤ１６６ポリペプチド、ＣＤ８ａポリペプチド、ＣＤ８ｂポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＩＣＡＭ－１ポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＣＤ２７ポリペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、合成ポリペプチド（免疫応答と関連するタンパク質の基づくものではない）、またはその組合せを含む。

ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、同じ分子に由来する。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域は、異なる分子に由来する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ２８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８４ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８４ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ１６６ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ１６６ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ａポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８ａポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ８ｂポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ８ｂポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域はＣＤ２８ポリペプチドを含み、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＩＣＯＳポリペプチドを含む。

２．２．４．ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞（例えば、リンパ系の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化または刺激することができるＣＤ３ζポリペプチドを含む。野生型（「天然」）ＣＤ３ζは、３個の免疫受容活性化チロシンモチーフ（「ＩＴＡＭ」）（例えば、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３）、３個の塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域（ＢＲＳ１、ＢＲＳ２およびＢＲＳ３）を含み、抗原が結合した後、活性化シグナルを細胞（例えば、リンパ系の細胞、例えば、Ｔ細胞）に伝達する。天然ＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインは、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要な伝達物質である。本明細書における実施形態において使用される場合、ＣＤ３ζは、天然ＣＤ３ζではなく、改変ＣＤ３ζである。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿９３２１７０（配列番号９４）を有する配列またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含むか、または有する。非限定的なある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、または少なくとも１００、または少なくとも１１０、または少なくとも１１３、および最大で１６３アミノ酸長である、配列番号９４の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号９４のアミノ酸１～５０、５０～１００、１００～１５０、５０～１６４、５５～１６４、または１５０～１６４のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号９４のアミノ酸５２～１６４のアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号９４は、以下に提供される：

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチドを含む。改変ヒトＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号９５もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号９５は、以下に提供される：

配列番号９５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号９６に記載される。

免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つ、２つまたは３つのＩＴＡＭを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む天然ＩＴＡＭ１を含む。
QNQLYNELNLGRREEYDVLDKR［配列番号２３］

配列番号２３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号２４に記載される。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを有する。ある特定の実施形態では、機能喪失型変異は、ＩＴＡＭ１中のチロシン残基の変異を含む。ある特定の実施形態では、２つの機能喪失型変異からなるＩＴＡＭ１バリアントは、以下に提供される配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。
QNQLFNELNLGRREEFDVLDKR［配列番号２５］

配列番号２５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号２６に記載される。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、以下に提供される配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む天然ＩＴＡＭ２を含む。
QEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK［配列番号２７］

配列番号２７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号２８に記載される。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントを有する。ある特定の実施形態では、機能喪失型変異は、ＩＴＡＭ２中のチロシン残基の変異を含む。ある特定の実施形態では、２つの機能喪失型変異からなるＩＴＡＭ２バリアントは、以下に提供される配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。
QEGLFNELQKDKMAEAFSEIGMK［配列番号２９］

配列番号２９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３０に記載される。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、以下に提供される配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む天然ＩＴＡＭ３を含む。
HDGLYQGLSTATKDTYDALHMQ［配列番号３１］

配列番号１３１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３２に記載される。
cacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcag［配列番号３２］

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを有する。ある特定の実施形態では、機能喪失型変異は、ＩＴＡＭ３中のチロシン残基の変異を含む。ある特定の実施形態では、２つの機能喪失型変異からなるＩＴＡＭ３バリアントは、以下に提供される配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。
HDGLFQGLSTATKDTFDALHMQ［配列番号３３］

配列番号３３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３４に記載される。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つもしくは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、１つもしくは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、１つもしくは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアント、またはその組合せを含むか、または本質的にそれからなる、またはそれからなる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントおよび１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントおよび２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ２バリアントおよび配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１ＸＸ」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントおよび１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、天然ＩＴＡＭ２、および２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ１バリアント、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ２および配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「Ｘ２Ｘ」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントおよび１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、および天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ１バリアント、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ２バリアントおよび配列番号３１に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「ＸＸ３」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアント、天然ＩＴＡＭ２、および天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ１バリアント、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ２および配列番号３１に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「Ｘ２３」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、および１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、および２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ１バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ１、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ２および配列番号３３に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１２Ｘ」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭ１、１つまたは複数の（例えば、２つの）機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、および天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭ１、２つの機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアント、および天然ＩＴＡＭ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ１、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有するＩＴＡＭ２バリアントおよび配列番号３１に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む（例えば、「１Ｘ３」と命名される構築物）。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは２つのＩＴＡＭの欠失を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ２の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ１もＩＴＡＭ２も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ３を含み、ＩＴＡＭ１（天然または改変）もＩＴＡＭ２（天然または改変）も含まない（例えば、Ｄ１２）。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアントを含み、ＩＴＡＭ２もＩＴＡＭ３も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ１を含み、ＩＴＡＭ２（天然または改変）もＩＴＡＭ３（天然または改変）も含まない（例えば、Ｄ２３）。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１およびＩＴＡＭ３の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアントを含み、ＩＴＡＭ１もＩＴＡＭ３も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を有する天然ＩＴＡＭ２を含み、ＩＴＡＭ１（天然または改変）もＩＴＡＭ３（天然または改変）も含まない（例えば、Ｄ１３）。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアント、および天然ＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ１（天然または改変）を含まない。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアント、および天然ＩＴＡＭ３またはＩＴＡＭ３バリアントを含み、ＩＴＡＭ２（天然または改変）を含まない。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３の欠失を含み、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ１バリアント、および天然ＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ２バリアントを含み、ＩＴＡＭ３（天然または改変）を含まない。

塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１、２つまたは３つのＢＲＳ領域（すなわち、ＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３）を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ＢＲＳ領域は、天然ＢＲＳまたは改変ＢＲＳ（例えば、ＢＲＳバリアント）であってもよい。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、以下に提供される配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む天然ＢＲＳ１を含む。
KRRGR［配列番号３５］

配列番号３５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３６に記載される。
aagagacgtggccgg［配列番号３６］

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＢＲＳ１バリアントを含む。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む天然ＢＲＳ２を含む。
KPRRK［配列番号３７］

配列番号３７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３８に記載される。
aagccgagaaggaag［配列番号３８］

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＢＲＳ２バリアントを含む。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む天然ＢＲＳ３を含む。
KGERRRGK［配列番号３９］

配列番号３９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４０に記載される。
aaaggcgagcgccggaggggcaag［配列番号４０］

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＢＲＳ３バリアントを含む。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、３つ全てのＢＲＳ領域、すなわち、ＢＲＳ１領域、ＢＲＳ２領域、およびＢＲＳ３領域を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、および天然ＢＲＳ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する天然ＢＲＳ１、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する天然ＢＲＳ２、および配列番号３９に記載のアミノ酸配列を有する天然ＢＲＳ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド、例えば、構築物１ＸＸに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、３つ全部ではないが、１つまたは２つのＢＲＳ領域を含む改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１領域およびＢＲＳ２領域を含み、ＢＲＳ３領域を含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１領域およびＢＲＳ３領域を含み、ＢＲＳ２領域を含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２領域およびＢＲＳ３領域を含み、ＢＲＳ１領域を含まない。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１領域を含み、ＢＲＳ２領域もＢＲＳ３領域も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する天然ＢＲＳ１を含み、ＢＲＳ２領域もＢＲＳ３領域も含まない、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは構築物Ｄ２３に含まれる。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２領域を含み、ＢＲＳ１領域もＢＲＳ３領域も含まない。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３領域を含み、ＢＲＳ１領域もＢＲＳ２領域も含まない。

ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ領域（天然または改変ＢＲＳ１、ＢＲＳ２またはＢＲＳ３）を含まない、例えば、３つ全てのＢＲＳが欠失している、例えば、改変ＣＤ３ζポリペプチドは構築物Ｄ１２に含まれる。

ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドが免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）の全部または一部を欠き、ＩＴＡＭはＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、およびＩＴＡＭ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ２またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部をさらに欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＢＲＳ１またはその一部、ＢＲＳ２またはその一部、およびＢＲＳ３またはその一部を欠く。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３を欠く。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４５または配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）領域の全部または一部を欠き、ＢＲＳ領域はＢＲＳ１、ＢＲＳ２、およびＢＲＳ３である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドがＢＲＳ１バリアント、ＢＲＳ２バリアント、およびＢＲＳ３バリアントから選択されるＢＲＳバリアントを含み、ＢＲＳバリアントは１つまたは複数の機能喪失型変異を含む。

共刺激シグナル伝達領域
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、最適なリンパ球活性化を提供することができる少なくとも１つの共刺激分子を含む。

本明細書で使用される場合、「共刺激分子」とは、抗原に対するリンパ球の効率的な応答にとって必要とされる抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子を指す。少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、ＣＤ２７ペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチドまたはその組合せを含んでもよい。共刺激分子は、その受容体への結合時に、共刺激応答、すなわち、抗原がそのＣＡＲ分子に結合するときに提供される刺激をもたらす細胞内応答を生成する細胞表面上に発現されるタンパク質である共刺激リガンドに結合することができる。共刺激リガンドとしては、限定されるものではないが、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、および４－１ＢＢＬが挙げられる。一例として、４－１ＢＢリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、ＣＡＲシグナルと共に、ＣＡＲ^＋Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する細胞内シグナルを提供するために４－１ＢＢ（「ＣＤ１３７」としても知られる）に結合し得る。４－１ＢＢ、ＩＣＯＳまたはＤＡＰ－１０を含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４４６，１９０号に開示されている。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ１０７４７またはＮＰ＿００６１３０（配列番号９０）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２２０アミノ酸長である、配列番号９０の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９０のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号９０のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有するＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

ある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３１６６８．３（配列番号９７）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有する、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大で２１８アミノ酸長である、配列番号９７の連続する部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいは、またはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸１～２１８、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１７８～２１８、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域は、配列番号９７のアミノ酸１７８～２１８を含むか、または有するＣＤ２８ポリペプチドを含む。
配列番号９７は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＣＤ２８核酸分子」とは、ＣＤ２８ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域（例えば、配列番号９７のアミノ酸１７８～２１８）に含まれるＣＤ２８ポリペプチドをコードするＣＤ２８核酸分子は、以下に提供される配列番号９８に記載のヌクレオチド配列を含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８のマウス細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ２８のマウス細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号９９もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号９９は、以下に提供される：

配列番号９９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１００に記載される。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８のヒト細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ２８のヒト細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０１もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号１０１は、以下に提供される：

配列番号７０のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１０２に記載される。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の脱免疫化ヒト細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ２８の脱免疫化ヒト細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０８もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号１０８は、以下に提供される：

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激分子を含む共刺激シグナル伝達領域、例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達領域またはＣＤ２８およびＯＸ４０の共刺激シグナル伝達領域を含む。

４－１ＢＢは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドとして作用し、刺激活性を有してもよい。４－１ＢＢポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ４１２７３もしくはＮＰ＿００１５５２（配列番号１０３）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
配列番号１０３は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「４－１ＢＢ核酸分子」とは、４－１ＢＢポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。４－１ＢＢの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０４もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。配列番号１０４は、以下に提供される：

配列番号１０４のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１０５に記載される。

ＯＸ４０ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：Ｐ４３４８９もしくはＮＰ＿００３３１８（配列番号１０６）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
配列番号１０６は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＯＸ４０核酸分子」とは、ＯＸ４０ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。

ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ＿０３６２２４（配列番号６５）を有する配列もしくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列を含むか、もしくは有してもよい、ならびに／または必要に応じて、１個まで、もしくは２個まで、もしくは３個までの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。
配列番号６５は、以下に提供される：

本開示の主題によれば、「ＩＣＯＳ核酸分子」とは、ＩＣＯＳポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。

ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ヒト細胞中で核酸配列を発現させるための、誘導性プロモーターをさらに含む。ＣＡＲ遺伝子の発現における使用のためのプロモーターは、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターなどの構成的プロモーターであってもよい。

ある特定の実施形態では、異なるタンパク質に由来するＣＡＲのドメイン／モチーフ／領域間の変異部位および／または連結部は、脱免疫化される。異なるＣＡＲ部分間の連結部の免疫原性を、ＮｅｔＭＨＣ４．０サーバーを使用して予測することができる。次の部分に由来する少なくとも１個のアミノ酸を含有するそれぞれのペプチドについて、全ての対立遺伝子に関する、ＨＬＡＡ、ＢおよびＣに対する結合親和性を予測することができる。それぞれのペプチドの免疫原性のスコアを、それぞれのペプチドに割り当てることができる。免疫原性スコアを、式：免疫原性スコア＝［（５０－結合親和性）^＊ＨＬＡ頻度］_ｎを使用して算出することができる。ｎはそれぞれのペプチドに関する予測の数である。

１９２８ｚＷＴ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、天然ＩＴＡＭ３、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、および天然ＢＲＳ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９２８ｚＷＴ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９２８ｚＷＴ）は、以下に提供される配列番号４１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号４１は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号４１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４２に記載される。

１ＸＸ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ１、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１ＸＸ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１ＸＸ）は、以下に提供される配列番号４３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号４３は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号４３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４４に記載される。

Ｄ１２構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ３を含み、ＩＴＡＭ１（天然または改変）も、ＩＴＡＭ２（天然または改変）も、ＢＲＳ１（天然または改変）も、ＢＲＳ２（天然または改変）も、ＢＲＳ３（天然または改変）も含まない。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「Ｄ１２」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、Ｄ１２）は、以下に提供される配列番号４５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同であるアミノ酸配列を含む。配列番号４５は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号４５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４６に記載される。

Ｄ２３構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、ＩＴＡＭ１、ＢＲＳ１ならびにＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２およびＢＲＳ３の欠失を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１および天然ＢＲＳ１を含み、ＩＴＡＭ２（天然または改変）も、ＩＴＡＭ３（天然または改変）も、ＢＲＳ２（天然または改変）も、ＢＲＳ３（天然または改変）も含まない。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「Ｄ２３」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、Ｄ２３）は、以下に提供される配列番号４７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号４７は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号４７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４８に記載される。

ＸＸ３構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ３、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ１バリアント、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ２バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「ＸＸ３」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、ＸＸ３）は、以下に提供される配列番号４９に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同であるアミノ酸配列を含む。配列番号４９は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号４９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号５０に記載される。

Ｘ２３構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ２、天然ＩＴＡＭ３、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ１バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「Ｘ２３」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、Ｘ２３）は、以下に提供される配列番号５１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同であるアミノ酸配列を含む。配列番号５１は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号５１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号５２に記載される。

Ｘ２Ｘ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ２、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ１バリアント、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「Ｘ２Ｘ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、Ｘ２Ｘ）は、以下に提供される配列番号５３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号５３は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号５３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号５４に記載される。

１２Ｘ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１２Ｘ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１２Ｘ）は、以下に提供される配列番号５５に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号５５は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号５５のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号５６に記載される。

Ｄ３構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、ＢＲＳ１、ＢＲＳ２、ならびにＩＴＡＭ３およびＢＲＳ３の一部の欠失を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、天然ＢＲＳ１および天然ＢＲＳ２を含み、ＩＴＡＭ３（天然または改変）も、天然ＢＲＳ３も含まない。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「Ｄ３」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、Ｄ３）は、以下に提供される配列番号５７に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号５７は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号５７のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号５８に記載される。

１９－１６６－２８ｚ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ１６６ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ１、天然ＩＴＡＭ２、天然ＩＴＡＭ３、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、および天然ＢＲＳ３を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９－１６６－２８ｚ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９－１６６－２８ｚ）は、以下に提供される配列番号５９に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号５９は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号５９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号６０に記載される。

１９－１６６－２８ｚ１ＸＸ構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ１６６ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、天然ＩＴＡＭ１、天然ＢＲＳ１、天然ＢＲＳ２、天然ＢＲＳ３、２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ２バリアント、および２つの機能喪失型変異を有するＩＴＡＭ３バリアントを含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９－１６６－２８ｚ１ＸＸ」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９－１６６－２８ｚ１ＸＸ）は、以下に提供される配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号６１は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号６１のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号６２に記載される。

１９－１６６－２８ｚＤ２３構築物
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＣＤ１９ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ１９ポリペプチド）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ１６６ポリペプチドに由来する膜貫通ドメインおよびヒンジ／スペーサー領域、ＩＴＡＭ１、ＢＲＳ１ならびにＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３、ＢＲＳ２およびＢＲＳ３の欠失を含む改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、改変ヒトＣＤ３ζポリペプチド）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８ポリペプチド）を含む共刺激シグナル伝達領域を含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、天然ＩＴＡＭ１および天然ＢＲＳ１を含み、ＩＴＡＭ２（天然または改変）も、ＩＴＡＭ３（天然または改変）も、ＢＲＳ２（天然または改変）も、ＢＲＳ３（天然または改変）も含まない。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９－１６６－２８ｚＤ２３」と命名される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９－１６６－２８ｚＤ２３）は、以下に提供される配列番号６３に記載のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号６３は、アミノ酸１～１８にＣＤ８リーダー配列を含み、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合することができる。

配列番号６３のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号６４に記載される。

３．免疫応答性細胞
本開示の主題は、本明細書に開示される１つまたは複数のＣＡＲを含む免疫応答性細胞を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、免疫応答性細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、内因性遺伝子座（例えば、ＴＲＡＣ）から発現される。

ある特定の実施形態では、１つまたは複数の本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して改善された治療効力を示す。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して類似する細胞溶解効果を示す。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して、被験体に投与した場合に増大した細胞蓄積を示す。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して、被験体に投与した場合に減少した細胞消耗を示す。免疫応答性細胞消耗マーカーとしては、限定されるものではないが、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、およびＰＤ１が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して、被験体に投与した場合により高い集団（contingent）のメモリー免疫細胞を維持する。メモリー免疫細胞マーカーとしては、限定されるものではないが、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ４５ＲＡが挙げられる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の本開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、対照細胞と比較して類似するレベルのサイトカインを分泌する。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞により分泌されるサイトカインとしては、限定されるものではないが、ＴＮＦα、ＩＦＮγおよびＩＬ２が挙げられる。ある特定の実施形態では、対照細胞は、改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含み、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、全て天然のＩＴＡＭ１～３および全て天然のＢＲＳ１～３を含む。

３．１２つまたはそれより多いＣＡＲを含む免疫応答性細胞
ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、２つまたはそれより多いＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲのうちの少なくとも１つは、本明細書に開示されるＣＡＲである。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、２つのＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、３つのＣＡＲを含む。

ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、ａ）第１の抗原に結合する第１の細胞外抗原結合ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、本明細書に開示される１つの改変ＣＤ３ζポリペプチド）を含む第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ；ならびにｂ）第２の抗原に結合する第２の細胞外抗原結合ドメイン、第２の膜貫通ドメイン、および第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、第１のＣＡＲは、第１のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、第２のＣＡＲは、第２のヒンジ／スペーサー領域をさらに含む。

ある特定の実施形態では、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、改変ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、本明細書に開示される１つの改変ＣＤ３ζポリペプチド）を含む。ある特定の実施形態では、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、第２の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドと同じである。ある特定の実施形態では、第２の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインに含まれる改変ＣＤ３ζポリペプチドと異なる。ある特定の実施形態では、改変ＣＤ３ζポリペプチドは、１つの天然ＩＴＡＭを含むＣＤ３ζポリペプチド、２つの天然ＩＴＡＭを含むＣＤ３ζポリペプチド、３つの天然ＩＴＡＭを含むＣＤ３ζポリペプチド、本明細書に開示される１つのＩＴＡＭバリアントを含むＣＤ３ζポリペプチド、本明細書に開示される２つのＩＴＡＭバリアントを含むＣＤ３ζポリペプチド、１つの天然ＢＲＳ領域を含むＣＤ３ζポリペプチド、２つの天然ＢＲＳ領域を含むＣＤ３ζポリペプチド、３つの天然ＢＲＳ領域を含むＣＤ３ζポリペプチド、ＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３および／またはその任意の部分の全部または一部を欠くＣＤ３ζポリペプチド、ならびにその任意の組合せからなる群より選択される。

ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞に含まれる２つまたはそれより多いＣＡＲは、異なる（例えば、第１のＣＡＲは、第２のＣＡＲと異なる）。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞に含まれる２つまたはそれより多いＣＡＲは、同じである（例えば、第１のＣＡＲは、第２のＣＡＲと同じである）。

ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲは、異なる抗原に結合する（例えば、第１の抗原は、第２の抗原と異なる）。

ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達ドメインを含む（例えば、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、第２の細胞内シグナル伝達ドメインと異なる）。ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲは、同じ細胞内シグナル伝達ドメインを含む（例えば、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、第２の細胞内シグナル伝達ドメインと同じである）。

ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、異なる共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、ＣＤ２７ペプチド、ＣＤ４０／Ｍｙ８８ペプチド、ＮＫＧＤ２ペプチド、およびその組合せからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、２つまたはそれより多いＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ共刺激シグナル伝達領域を含む。

ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、２つ、３つまたはそれより多い本開示のＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それぞれ独立に、１９２８ζ、１９ζ、１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３、Ｘ２３、１２Ｘ、Ｄ３、Ｄ１２およびＤ２３の細胞内シグナル伝達ドメインからなる群より選択される。

細胞に含まれるＣＡＲの選択は、それぞれのＣＡＲによって産生される活性化シグナルの強度を決定することができるため、ＣＡＲが標的とする抗原の密度、全てのＩＴＡＭの合計、それぞれのＩＴＡＭ間の距離、ＣＡＲの膜貫通ドメイン、および／またはＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインに依存してもよい。

ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、第１のＣＡＲが第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２のＣＡＲが第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、２つのＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、第１および第２の細胞内シグナル伝達ドメインはそれぞれ、１９２８ζ、１９ζ、１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３、１２Ｘ、Ｘ２３、Ｄ３、Ｄ１２およびＤ２３の細胞内シグナル伝達ドメインからなる群より選択される。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、第２の細胞内シグナル伝達ドメインと同じである。ある特定の実施形態では、第１および第２の細胞内シグナル伝達ドメインはそれぞれ、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＤ２３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｄ２３の細胞内シグナル伝達ドメインおよびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＸ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＤ１２の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよび１２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＤ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｘ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインおよびＸ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインおよび第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、１９２８ｚの細胞内シグナル伝達ドメインおよび１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインである。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、２つのＣＡＲに含まれる天然ＩＴＡＭの合計は、約５以下、約４以下、約３以下、または約２以下である。

ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、第１のＣＡＲが第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２のＣＡＲが第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第３のＣＡＲが第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、３つのＣＡＲを含む。ある特定の実施形態では、第１、第２および第３の細胞内シグナル伝達ドメインはそれぞれ独立に、１９２８ζ、１９ζ、１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３、Ｘ２３、１２Ｘ、Ｄ３、Ｄ１２およびＤ２３の細胞内シグナル伝達ドメインからなる群より選択される。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｄ２３の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｄ２３の細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｄ２３の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｄ２３の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸＸ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、および１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｘ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＤ１２の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＤ２３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、および１２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、１ＸＸの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＤ３の細胞内シグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメイン、第２の細胞内シグナル伝達ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｘ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｘ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＸ２Ｘの細胞内シグナル伝達ドメインである。

ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ２またはその一部の欠失およびＩＴＡＭ３またはその一部の欠失を含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。ある特定の実施形態では、第１の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第２の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有し、第３の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ１バリアントおよびＩＴＡＭ２バリアントを含むか、または有する。

ある特定の実施形態では、３つのＣＡＲに含まれる天然ＩＴＡＭの合計は、約５以下、約４以下、約３以下である。

ある特定の実施形態では、ＣＡＲの標的は、互いに異なる。

３．１免疫応答性細胞の型
本開示の主題の免疫応答性細胞は、リンパ系の細胞であってよい。Ｂ、Ｔおよびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むリンパ系は、抗体生成、細胞性免疫系の調節、血液中の外来作用物質の検出、宿主にとって外来の細胞の検出などを可能にする。リンパ系の免疫応答性細胞の非限定的な例には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、胚性幹細胞および多能性幹細胞が含まれる（例えば、リンパ系細胞を分化させることができるもの）。Ｔ細胞は、胸腺で成熟し、主に細胞媒介性免疫の役割を担うリンパ球であってよい。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。本開示の主題のＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または、幹様メモリーＴ細胞）および２つのタイプのエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、Ｔ_ＥＭ細胞およびＴ_ＥＭＲＡ細胞を含む）、調節性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連の不変Ｔ細胞およびγδＴ細胞を限定されずに含む、任意のタイプのＴ細胞であってよい。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。患者自身のＴ細胞は、ＣＡＲの導入を通して特異的抗原を標的にするように遺伝子改変することができる。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞であってよい。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部であり、先天性免疫応答の間に作用するリンパ球であってよい。ＮＫ細胞は、標的細胞に対するそれらの細胞傷害作用を実行するために、事前の活性化を必要としない。

本開示の主題のヒトリンパ球のタイプには、限定されずに、末梢ドナーリンパ球、例えば、Sadelain,M., et al. 2003 Nat Rev Cancer 3:35-45（ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Morgan,R.A., et al. 2006 Science 314:126-129（αおよびβヘテロ二量体を含む完全長腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Panelli,M.C., et al. 2000 J Immunol 164:495-504；Panelli, M.C., et al. 2000 J Immunol164:4382-4392（腫瘍生検における腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に由来するリンパ球培養を開示する）、およびDupont, J., et al. 2005Cancer Res 65:5417-5427；Papanicolaou, G.A., et al. 2003 Blood 102:2498-2505（人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）またはパルス処理樹状細胞を用いた選択的にｉｎｖｉｔｒｏ増大させた抗原特異的末梢血白血球を開示する）に開示されるものが含まれる。免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自己、非自己（例えば、同種異系）であってよく、または操作された前駆細胞もしくは幹細胞からｉｎｖｉｔｒｏで誘導することができる。

本開示の免疫応答性細胞は、腫瘍微小環境をモジュレートすることが可能である。腫瘍は、免疫認識および排除からそれ自身を保護するための悪性細胞による一連の機構を含む、宿主免疫応答に敵対する微小環境を有する。この「敵対的な腫瘍微小環境」は、浸潤調節ＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ＴＧＦ－βを含む免疫抑制サイトカインを含む様々な免疫抑制因子、および、活性化Ｔ細胞（ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１）によって発現される免疫抑制受容体を標的にするリガンドの発現を含む。免疫抑制のこれらの機構は、寛容の維持および不適当な免疫応答の抑制において役割を果たすが、腫瘍微小環境の中では、これらの機構は有効な抗腫瘍免疫応答を妨げる。まとめると、これらの免疫抑制因子は、標的化腫瘍細胞との遭遇の際に養子的に導入されるＣＡＲ改変Ｔ細胞の顕著なアナジーまたはアポトーシスを誘導することができる。

ＣＴＬの精製されていない供給源は、当技術分野で公知の任意のもの、例えば、骨髄、胎児、新生児または成人または他の造血細胞供給源、例えば、胎児の肝臓、末梢血またはさい帯血であってよい。細胞を分離するために、様々な技術を用いることができる。例えば、負の選択方法は、最初に非ＣＴＬを除去することができる。正と負の両方の選択のための、特定の細胞系統および／または分化のステージに関連したマーカーを同定するために、ｍＡｂは特に有用である。

比較的粗い分離によって、大きな割合の最終分化細胞を最初に除去することができる。例えば、磁気ビーズ分離を最初に使用して多数の無関係な細胞を除去することができる。ある特定の実施形態では、全造血細胞の少なくとも約８０％、通常少なくとも７０％が細胞単離の前に除去される。

分離の手順には、限定されずに、密度勾配遠心分離；再凝固（resetting）；細胞密度を改変する粒子とのカップリング；抗体でコーティングされた磁気ビーズによる磁気分離；親和性クロマトグラフィー；補体および細胞毒素を限定されずに含む、ｍＡｂに連結されるかもしくはそれと併用される細胞傷害剤；ならびに、固体マトリックス、例えばプレート、チップに付着した抗体によるパニング、エラトリエーションまたは任意の他の便利な技術が含まれる。

分離および分析の技術には、限定されずにフローサイトメトリーが含まれ、それは様々な程度の洗練度、例えば、複数のカラーチャネル、低角度および鈍角の光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルを有することができる。

ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）などの死細胞に関連した色素を用いることによって、細胞を死細胞に対して選択することができる。ある特定の実施形態では、２％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）もしくは０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む培地、または任意の他の好適な、例えば、無菌の、等張性の培地で細胞は収集される。

４．ベクター
免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の遺伝子改変は、組換えＤＮＡ構築物によって実質的に均一な細胞組成物を形質導入することによって達成することができる。ある特定の実施形態では、細胞へのＤＮＡ構築物の導入のために、レトロウイルスベクター（ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルスのいずれか）が用いられる。例えば、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドをレトロウイルスベクターにクローニングすることができ、その内因性のプロモーターから、レトロウイルスの末端反復配列から、または目的の標的細胞型に特異的であるプロモーターから発現を引き起こすことができる。非ウイルスベクターを、同様に使用することができる。

最初に免疫応答性細胞を、ＣＡＲを含むように遺伝子改変する場合、レトロウイルスベクターを一般的に形質導入のために使用するが、他の任意の適したウイルスベクターまたは非ウイルス送達系を使用することができる。ＣＡＲは、単一の多シストロン発現カセットにおいて、単一のベクターの複数の発現カセットにおいて、または複数のベクターにおいて補助分子（例えば、サイトカイン）と共に構築することができる。ポリシストロニック発現カセットを作製するエレメントの例には、様々なウイルスおよび非ウイルスの配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－１ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩＩＲＥＳ、ＮＦ－κＢＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ＩＲＥＳ、ｐ５３ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳ、および脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）、および切断可能リンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡおよびＦ２Ａペプチド）が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書で開示される任意のベクターまたはＣＡＲは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号１０７）のアミノ酸配列を含むＰ２Ａペプチドを含み得る。キャプシドタンパク質がヒト細胞に感染するために機能的である場合には、レトロウイルスベクターと適切なパッケージング系の組合せもまた適している。ＰＡ１２（Miller, et al.(1985)Mol. Cell. Biol. 5:431-437）；ＰＡ３１７（Miller, etal.(1986)Mol. Cell. Biol. 6:2895-2902）；およびＣＲＩＰ（Danos, et al. (1988) Proc. Natl.Acad. Sci. USA 85:6460-6464）が挙げられるがこれらに限定されない様々な両栄養性ウイルス産生細胞株が公知である。非両栄養性粒子、例えばＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープによってシュードタイプ化した粒子、および当技術分野で公知の他の任意の粒子もまた適している。

形質導入の可能な方法には、例えば、Bregni, et al. (1992)Blood 80:1418-1422の方法による産生細胞との細胞の直接の共培養、または、例えば、Xu, et al. (1994) Exp. Hemat.22:223-230；およびHughes, et al. (1992) J. Clin. Invest. 89:1817の方法による、ウイルス上清だけとのもしくは適当な増殖因子およびポリカチオンを伴うまたは伴わない濃縮ベクターストックとの培養が含まれる。

免疫応答性細胞を改変するために、他の形質導入ウイルスベクターを使用することができる。ある特定の実施形態では、選択されるベクターは、高効率の感染と安定した組入れおよび発現を示す（例えば、Cayouette et al., Human Gene Therapy 8:423-430, 1997；Kido et al.,Current Eye Research 15:833-844, 1996；Bloomer et al., Journal of Virology71:6641-6649, 1997；Naldini et al., Science 272:263-267, 1996およびMiyoshi et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:10319, 1997を参照）。使用することができる他のウイルスベクターには、例えば、アデノウイルス、レンチウイルスおよびアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルスまたはヘルペスウイルス、例えばエプスタインバーウイルスが含まれる（例えば、Miller,Human Gene Therapy 15-14, 1990；Friedman, Science 244:1275-1281, 1989；Eglitis etal., BioTechniques 6:608-614, 1988；Tolstoshev et al., Current Opinion inBiotechnology 1:55-61, 1990；Sharp, The Lancet 337:1277-1278, 1991；Cornetta etal., Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-322, 1987；Anderson,Science 226:401-409, 1984；Moen, Blood Cells 17:407-416, 1991；Miller et al., Biotechnology7:980-990, 1989；LeGal La Salle et al., Science 259:988-990, 1993およびJohnson,Chest 107:77S- 83S, 1995のベクターも参照）。レトロウイルスのベクターは特によく開発され、臨床場面で使用されている（Rosenberget al., N. Engl. J. Med 323:370, 1990；Anderson et al.、米国特許第５，３９９，３４６号）。

免疫応答性細胞の遺伝子改変のために、非ウイルスアプローチを用いることもできる。例えば、リポフェクションの存在下で核酸を投与することによって（Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84:7413, 1987；Ono etal., Neuroscience Letters 17:259, 1990；Brigham et al., Am. J. Med. Sci.298:278, 1989；Staubinger et al., Methods in Enzymology 101:512, 1983）、アシアロオロソムコイド－ポリリシンコンジュゲーション（Wuet al., Journal of Biological Chemistry 263:14621, 1988；Wu et al., Journal ofBiological Chemistry 264:16985, 1989）、または外科的条件下のマイクロインジェクション（Wolff et al.,Science 247:1465, 1990）によって、核酸分子を免疫応答性細胞に導入することができる。遺伝子導入のための他の非ウイルス手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔法およびプロトプラスト融合を使用したｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクションが含まれる。細胞へのＤＮＡの送達のために、リポソームも潜在的に有益であり得る。被験体の罹患組織への正常な遺伝子の移植は、培養可能な細胞型（例えば、自己または異種初代細胞またはその後代）に正常な核酸をｅｘｖｉｖｏで導入することによって達成することもでき、その後、細胞（または、その後代）は、標的化組織に注射されるか、全身的に注射される。組換え受容体は、トランスポザーゼまたは標的化ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して誘導するか得ることもできる。ＲＮＡ電気穿孔法によって、一時的な発現を得ることができる。

クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核細胞で発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集のために利用される場合、このシステムはＣａｓ９（そのガイドとしてｃｒＲＮＡを利用してＤＮＡを改変することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ、Ｃａｓ９と活性複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般的にヘアピンループの形態）に結合する領域とともにそれを宿主ＤＮＡの正しい部分に誘導するためにＣａｓ９によって使用されるＲＮＡを含有する）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡに結合してＣａｓ９と活性複合体を形成する）、およびＤＮＡ修復鋳型（特異的ＤＮＡ配列の挿入を可能にする細胞修復プロセスを誘導するＤＮＡ）の必要に応じた部分を含む。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、標的細胞をトランスフェクトするために、プラスミドをしばしば用いる。ｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９が細胞の中の標的ＤＮＡを同定し、それに直接的に結合するために使用する配列であるので、各適用のために設計する必要がある。ＣＡＲ発現カセットを有する修復鋳型もまた、切断のいずれかの側の配列と重複し、挿入配列をコードしなければならないので、各適用のために設計する必要がある。複数のｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを一緒にパッケージして、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成することができる。細胞にトランスフェクトさせるために、このｓｇＲＮＡをＣａｓ９遺伝子と一緒に連結させ、プラスミドにすることができる。

ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は人工制限酵素であり、それは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合性ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される。ジンクフィンガードメインは、ジンクフィンガーヌクレアーゼがゲノムの中の所望の配列を標的にすることを可能にする特異的ＤＮＡ配列を標的にするように操作することができる。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合性ドメインは、複数の個々のジンクフィンガー反復配列を一般的に含有し、複数の塩基対を各々認識することができる。新しいジンクフィンガードメインを生成する最も一般的な方法は、公知の特異性のより小さいジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。ＺＦＮにおける最も一般的な切断ドメインは、タイプＩＩ制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩからの非特異的切断ドメインである。内因性相同組換え（ＨＲ）機構およびＣＡＲ発現カセットを有する相同性ＤＮＡ鋳型を使用して、ＣＡＲ発現カセットをゲノムに挿入するためにＺＦＮを使用することができる。標的化配列がＺＦＮによって切断される場合、ＨＲ機構は損傷染色体と相同性ＤＮＡ鋳型の間の相同性を検索し、次に、染色体の２つの切断末端の間の鋳型の配列をコピーし、それによって相同性ＤＮＡ鋳型をゲノムに組み入れる。

転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＤＮＡの特異的配列を切断するように操作することができる制限酵素である。ＴＡＬＥＮシステムは、ＺＦＮとほとんど同じ原理で作動する。それらは、転写活性化因子様エフェクターＤＮＡ結合性ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特異的ヌクレオチドのために強力な認識を有する２つの可変位置を有する３３～３４アミノ酸の反復モチーフで構成される。これらのＴＡＬＥのアレイをアセンブルすることによって、所望のＤＮＡ配列に結合し、それによってゲノムの特異的位置で切断するようにヌクレアーゼを誘導するように、ＴＡＬＥＤＮＡ結合性ドメインを操作することができる。ポリヌクレオチド療法で使用するためのｃＤＮＡ発現は、任意の好適なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）またはメタロチオネインプロモーター）から誘導することができ、任意の適当な哺乳動物の調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節することができる。例えば、所望により、核酸の発現を誘導するために、特異的細胞型において遺伝子発現を優先的に誘導することが公知のエンハンサーを使用することができる。使用されるエンハンサーには、限定されずに、組織または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものを含めることができる。あるいは、ゲノムクローンが治療構築物として使用される場合、同族の調節配列によって、または、所望により、上記のプロモーターまたは調節エレメントのいずれかを含む、異種供給源に由来する調節配列によって調節を媒介することができる。

結果として生じる細胞は未改変の細胞のためのものと類似した条件の下で成長させることができ、それによって、改変された細胞を様々な目的のために増大させ、使用することができる。

５．ゲノム編集方法
任意の標的化ゲノム編集方法を使用して、本開示のＣＡＲを、本開示の免疫応答性細胞の１つまたは複数の内因性遺伝子座に配置することができる。ある特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムを使用して、本開示のＣＡＲを、本開示の免疫応答性細胞の１つまたは複数の内因性遺伝子座に送達する。ある特定の実施形態では、ジンクフィンガーヌクレアーゼを使用して、本開示のＣＡＲを、本開示の免疫応答性細胞の１つまたは複数の内因性遺伝子座に送達する。ある特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮシステムを使用して、本開示のＣＡＲを、本開示の免疫応答性細胞の１つまたは複数の内因性遺伝子座に送達する。

ゲノム編集剤／システムを送達するための方法は、必要性によって異なってもよい。ある特定の実施形態では、選択されるゲノム編集方法の構成成分は、１つまたは複数のプラスミドの中のＤＮＡ構築物として送達される。ある特定の実施形態では、構成成分は、ウイルスベクターを通して送達される。一般的な送達方法には、限定されずに、電気穿孔法、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インパレフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、静水圧、連続的注入、超音波処理、マグネトフェクション、アデノ随伴ウイルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質シュードタイプ化、複製能のあるベクターのシスおよびトランス作用性エレメント、単純ヘルペスウイルス、および化学的ビヒクル（例えば、オリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム（ｐｏｌｙｍｅｒｓｏｍｅ）、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子および細胞透過性ペプチド）が含まれる。

本開示のＣＡＲの配置は、任意の内因性遺伝子座で行うことができる。ある特定の実施形態では、内因性遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、またはＴＲＧＣ遺伝子座である、ある特定の実施形態では、内因性遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの配置は、ＴＣＲの内因性の発現を破壊するかまたは無効化する。

６．ポリペプチドおよびアナログ
免疫応答性細胞において発現された場合に、その抗新生物活性を増強するように改変された、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ８４、ＣＤ１６６、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＩＣＯＳ、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ２７、ＭＹ８８、ＮＫＧＤ２、およびＣＴＬＡ－４ポリペプチドまたはその断片もまた、本開示の主題に含まれる。本開示の主題は、配列において変化を生じることによってアミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法を提供する。そのような変化は、ある特定の変異、欠失、挿入、または翻訳後改変を含み得る。本開示の主題は、本明細書に開示の任意の天然に存在するポリペプチド（ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ４０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ４０／Ｍｙ８８、ＮＫＧＤ２、ＣＤ８４、ＣＤ１６６、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＩＣＯＳ、ＩＣＡＭ－１、およびＣＴＬＡ－４を含むがこれらに限定されない）のアナログをさらに含む。アナログは、本明細書に開示の天然に存在するポリペプチドとはアミノ酸配列の差によって、翻訳後改変によって、またはその両方によって異なり得る。アナログは、本開示の主題の天然に存在するアミノ酸配列の全てまたは一部と少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれより高い相同性を示すことができる。配列比較の長さは、少なくとも５、１０、１５もしくは２０アミノ酸残基、例えば、少なくとも２５、５０、もしくは７５アミノ酸残基であり、または１００アミノ酸残基より長い。この場合も、同一性の程度を決定する例示的なアプローチにおいて、ＢＬＡＳＴプログラムを、近縁の配列を示すｅ^－３からｅ^－１００の間の確率スコアで使用してもよい。改変は、ポリペプチドのｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏ化学誘導体化、例えばアセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化を含み、そのような改変は、ポリペプチド合成もしくはプロセシングの間に、または単離された改変酵素による処置後に起こり得る。アナログはまた、一次配列の変化によって天然に存在するポリペプチドとは異なり得る。これらには、天然および誘導型の両方の遺伝子バリアント（例えば、放射線照射もしくはエタンメチルスルフェートに対する曝露によるランダム変異誘発に起因する、またはSambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning:A LaboratoryManual (2d ed.), CSH Press, 1989、もしくはAusubel et al.、前記に記載される部位特異的変異誘発による）が含まれる。Ｌアミノ酸以外の残基、例えばＤアミノ酸または天然に存在しないもしくは合成アミノ酸、例えばβもしくはγアミノ酸を含有する、環化ペプチド、分子、およびアナログも含まれる。

完全長のポリペプチドに加えて、本開示の主題はまた、本明細書に開示のポリペプチドまたはペプチドドメインのいずれか１つの断片も提供する。本明細書で使用される場合、用語「断片」は、少なくとも５、１０、１３、または１５アミノ酸を意味する。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも２０連続アミノ酸、少なくとも３０連続アミノ酸、または少なくとも５０連続アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも６０～８０、１００、２００、３００、またはそれより多くの連続アミノ酸を含む。断片は、当業者に公知の方法によって生成することができるか、または通常のタンパク質プロセシングに起因し得る（例えば、生物活性にとって必要ではないアミノ酸の新生ポリペプチドからの除去、または選択的ｍＲＮＡスプライシングもしくは選択的タンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）。

非タンパク質アナログは、本明細書に開示のタンパク質の機能的活性を模倣するように設計された化学構造を有する。そのようなアナログは、元のポリペプチドの生理的活性を超えてもよい。アナログの設計方法は当技術分野で周知であり、アナログの合成は、得られたアナログが、免疫応答性細胞において発現された場合に元のポリペプチドの抗新生物活性を増加させるように化学構造を改変することによって、そのような方法に従って実施することができる。これらの化学的改変は、代替のＲ基を置換すること、および基準ポリペプチドの特定の炭素原子の飽和の程度を変化させることを含むがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、タンパク質アナログは、ｉｎｖｉｖｏでの分解に対して比較的抵抗性であり、投与した場合、より持続的な治療効果をもたらす。機能的活性を測定するためのアッセイは、以下の実施例に記載されるアッセイを含むがこれらに限定されない。

７．投与
本開示の免疫応答性細胞を含む組成物は、抗原への免疫応答を誘導および／もしくは強化するために、ならびに／または新生物、病原体感染もしくは感染性疾患を処置および／もしくは予防するために、被験体に全身的にまたは直接的に提供することができる。ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞またはそれを含む組成物は、目的の臓器（例えば、新生物によって冒された臓器）に直接的に注射される。あるいは、本開示の免疫応答性細胞またはそれを含む組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって目的の臓器に間接的に提供される。Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＴＬ細胞のｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎｖｉｖｏでの生成を増加させるために、細胞または組成物の投与の前、間または後に、増大および分化剤を提供することができる。

本開示の免疫応答性細胞は、任意の生理的に許容されるビヒクルの中で、通常は血管内に投与することができるが、細胞が再生および分化のための適当な部位を見出すことができる骨または他の便利な部位（例えば、胸腺）にそれらを導入することもできる。通常、少なくとも約１×１０^５個の細胞が投与され、最終的に約１×１０^１０個またはそれより多くまで到達する。本開示の免疫応答性細胞は、精製された細胞集団を含むことができる。当業者は、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）などの様々な周知の方法を使用して、集団の中の本開示の免疫応答性細胞の百分率を容易に決定することができる。本開示の免疫応答性細胞を含む集団における純度の好適な範囲は、約５０％～約５５％、約５％～約６０％および約６５％～約７０％である。ある特定の実施形態では、純度は、約７０％～約７５％、約７５％～約８０％、または約８０％～約８５％である。ある特定の実施形態では、純度は、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％および約９５％～約１００％である。投薬量は、当業者が容易に調整することができる（例えば、純度の減少は、投薬量の増加を必要とすることがある）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入することができる。

本開示の組成物は、本開示の免疫応答性細胞またはそれらの前駆細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であってよい。投与は、自家または異種であってよい。例えば、免疫応答性細胞または前駆細胞は、１人の被験体から得ることができ、同じ被験体または異なる、適合する被験体に投与することができる。末梢血由来の（例えば、ｉｎｖｉｖｏ、ｅｘｖｉｖｏまたはｉｎｖｉｔｒｏ由来の）免疫応答性細胞またはそれらの後代は、カテーテル投与、全身性注射、局所注射、静脈内注射または非経口投与を含む局所注射を通して投与することができる。本開示の主題の治療組成物（例えば、本開示の免疫応答性細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、それは、単位投薬量注射形態（液剤、懸濁剤、乳剤）に製剤化することができる。

８．製剤
本開示の免疫応答性細胞を含む組成物は、選択されるｐＨに緩衝することができる、無菌の液体調製物、例えば、等張性の水溶液、懸濁物、乳剤、分散物または粘性組成物として都合よく提供することができる。液体調製物は、ゲル剤、他の粘性組成物および固体組成物より調製するのが通常容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するのに若干より便利である。他方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適当な粘度範囲内で製剤化することができる。液体または粘性組成物は担体を含むことができ、それは、例えば水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）および好適なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であってよい。

無菌の注射可能な溶液は、所望されるように様々な量の他の成分と一緒に必要な量の適当な溶媒に遺伝子改変免疫応答性細胞を組み込むことによって調製することができる。そのような組成物は、好適な担体、希釈剤または賦形剤、例えば無菌水、生理的食塩水、グルコース、デキストロースなどと混合してもよい。組成物は、凍結乾燥されてもよい。組成物は、所望の投与経路および調製物によって、湿潤、分散または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または増粘添加剤、保存剤、矯味矯臭剤、着色剤などの補助物質を含有することができる。過度の実験無しで好適な調製物を調製するために、標準のテキスト、例えば、参照により本明細書に組み込まれる"REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17th edition, 1985を参照することができる。

抗微生物保存剤、抗酸化剤、キレート化剤および緩衝液を含む、組成物の安定性および無菌性を強化する様々な添加剤を加えることができる。微生物活動の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にすることができる。注射用医薬形態の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらすことができる。しかし、本開示の主題により、使用されるいかなるビヒクル、希釈剤または添加剤も、遺伝子改変免疫応答性細胞またはそれらの前駆細胞と適合しなければならないだろう。

組成物は等張性であってよく、すなわち、それらは血液および涙液と同じ浸透圧を有することができる。組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウムまたは他の薬学的に許容される薬剤、例えばデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールまたは他の無機もしくは有機の溶質を使用して達成することができる。塩化ナトリウムは、特にナトリウムイオンを含有する緩衝液のためのものであり得る。

組成物の粘度は、所望により、薬学的に許容される増粘剤を使用して選択されるレベルに維持することができる。例えば、メチルセルロースは容易におよび経済的に入手可能であり、作業が容易である。他の好適な増粘剤には、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが含まれる。増粘剤の濃度は、選択される薬剤に依存してよい。重要な点は、選択される粘度を達成する量を使用することである。明らかに、好適な担体および他の添加剤の選択は、正確な投与経路および特定の剤形、例えば液体剤形の性質（例えば、組成物が、溶液、懸濁物、ゲルまたは別の液体形態、例えば時限放出形態もしくは液体充填形態に製剤化されるかどうか）に依存する。

投与される細胞の量は、処置される被験体に関して変化する。一実施形態では、約１０^４～約１０^１０個、約１０^５～約１０^９個、または約１０^６～約１０^８個の本開示の免疫応答性細胞がヒト被験体に投与される。より有効な細胞は、さらに少数で投与され得る。ある特定の実施形態では、少なくとも約１×１０^８個、約２×１０^８個、約３×１０^８個、約４×１０^８個、または約５×１０^８個の本開示の免疫応答性細胞が、ヒト被験体に投与される。ある特定の実施形態では、約１×１０^７～５×１０^８個の本開示の免疫応答性細胞が、ヒト被験体に投与される。有効用量と見なされる量の正確な決定は、特定の被験体のサイズ、年齢、性別、体重、および状態を含む、各々の被験体に関して個別の要因に基づき得る。投薬量は、本開示および当技術分野での知識から当業者が容易に確認することができる。

当業者は、組成物中のおよび方法において投与される、細胞ならびに必要に応じた添加剤、媒体、および／または担体の量を容易に決定することができる。典型的には、任意の添加剤（活性な細胞および／または作用剤に加えて）は、リン酸緩衝食塩水中に０．００１～５０％（重量）溶液の量で存在し、活性成分は、マイクログラムからミリグラムのオーダーで、例えば約０．０００１～約５重量％、約０．０００１～約１重量％、約０．０００１～約０．０５重量％、または約０．００１～約２０重量％、約０．０１～約１０重量％、または約０．０５～約５重量％で存在する。動物またはヒトに投与される任意の組成物に関して、以下を決定することができる：適した動物モデル、例えばマウスなどの齧歯類における致死用量（ＬＤ）およびＬＤ５０の決定などによる毒性；適切な応答を誘発する組成物の投薬量、その中の構成要素の濃度、および組成物の投与時期。そのような決定は、当業者の知識、本開示、および本明細書に引用した文書により、過度の実験を必要としない。および連続投与の時間は、過度の実験を行うことなく確認することができる。

９．処置方法
本開示の主題は、それを必要とする被験体における免疫応答を誘導および／または増加させるための方法を提供する。本開示の免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、被験体における新生物を処置および／または予防するために使用することができる。本開示の免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、新生物に罹患している被験体の生存を延長させるために使用することができる。本開示の免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、被験体、例えば免疫無防備状態のヒト被験体における病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または予防するためにも使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞を使用して、疾患の再発を有する被験体を処置することができ、被験体は、残留腫瘍細胞をもたらす処置を受けた。ある特定の実施形態では、残留腫瘍細胞は、腫瘍細胞の表面上に低密度の標的分子を有する。ある特定の実施形態では、細胞表面上に低密度を有する標的分子は、約１００００分子／細胞未満、約８０００分子／細胞未満、約６０００分子／細胞未満、約４０００分子／細胞未満、約２０００分子／細胞未満、約１０００分子／細胞未満、約５００分子／細胞未満、約２００分子／細胞未満、または約１００分子／細胞未満を有する。ある特定の実施形態では、細胞表面上に低密度を有する標的分子は、約４０００～約２０００分子／細胞の間、または約２０００～約１０００分子／細胞の間を有する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示のＣＡＲを含む免疫応答性細胞は、疾患の再発を有する被験体を処置するために使用することができ、被験体は、４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ（例えば、４－１ＢＢｚＣＡＲ）を含む免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を受けた。ある特定の実施形態では、腫瘍細胞は、腫瘍細胞の表面上に低密度の腫瘍特異的抗原を有する。ある特定の実施形態では、疾患は、ＣＤ１９^＋ＡＬＬである。ある特定の実施形態では、腫瘍細胞は、腫瘍細胞上に低密度のＣＤ１９を有する。そのような方法は、所望の効果、既存の状態の軽減または再発の防止を達成するために有効な量の本開示の免疫応答性細胞、またはそれを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む。処置の場合、投与される量は、所望の効果を生じるために有効な量である。有効量は、１つまたは一連の投与で提供することができる。有効量は、ボーラスまたは連続かん流によって提供することができる。

「有効量」（または、「治療有効量」）は、処置により有益または所望の臨床結果を達成するのに十分な量である。有効量は、１または複数の用量で被験体に投与することができる。処置に関して、有効量は、疾患を緩和、好転、安定化、逆転もしくはその進行を減速させるか、またはさもなければ疾患の病理学的帰結を低減するのに十分な量である。有効量は医師によって一般的に症例ごとに決定され、当業者の技術の範囲内である。有効量を達成するために適当な投薬量を決定する場合、いくつかの因子が一般的に考慮される。これらの因子には、被験体の年齢、性別および体重、処置されている状態、状態の重症度ならびに投与される免疫応答性細胞の形態および有効濃度が含まれる。

抗原特異的Ｔ細胞を使用した養子免疫療法のために、約１０^６～１０^１０（例えば、約１０^９）の範囲内の細胞用量が一般的に注入される。宿主への本開示の細胞の投与およびそれに続く分化の際に、特異的抗原に対して特異的に向けられるＴ細胞が誘導される。免疫応答性細胞は、静脈内、皮下、節内（intranodal）、腫瘍内、髄腔内、胸膜腔内、腹腔内、および胸腺に直接を限定されずに含む、当技術分野で公知の任意の方法によって投与することができる。

本開示の主題は、被験体において新生物を処置および／または予防する方法を提供する。本方法は、有効量の本開示の免疫応答性細胞またはそれを含む組成物を、新生物を有する被験体に投与することを含むことができる。

新生物の非限定的な例には、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫および骨髄腫）、卵巣がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸管がん、肝がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫、咽喉がん、黒色腫、神経芽細胞腫、腺癌、神経膠腫、軟部組織肉腫および様々な癌腫（前立腺および小細胞肺がんを含む）が含まれる。好適な癌腫には、星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、希突起膠細胞腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、軟骨肉腫、骨原性肉腫、膵管腺癌、小および大細胞肺腺癌、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、扁平上皮癌、気管支肺胞癌、上皮腺癌およびその肝転移、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、肝細胞癌、胆管癌、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、結腸癌、基底細胞癌、汗腺癌、乳頭状癌、脂腺癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、希突起膠細胞腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、および重鎖病、管および小葉の腺癌などの乳房腫瘍、子宮頸管の扁平上皮および腺癌、子宮および卵巣の上皮癌、前立腺腺癌、膀胱の移行性扁平上皮癌、ＢおよびＴ細胞リンパ腫（結節性およびびまん性）プラズマ細胞腫、急性および慢性白血病、悪性黒色腫、軟部組織肉腫および平滑筋肉腫を限定されずに含む、腫瘍学の分野で公知の任意のものがさらに含まれる。ある特定の実施形態では、新生物は、血液がん（例えば白血病、リンパ腫および骨髄腫）、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸管がん、肝がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫および咽喉がんからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞およびそれを含む組成物は、従来の治療的介入に適していない、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫および骨髄腫）または卵巣がんを処置および／または予防するために使用することができる。

被験体は、進行した形態の疾患を有し得、その場合、処置の目的は疾患進行の軽減もしくは逆転、および／または副作用の好転を含むことができる。被験体は、既に処置されている状態の病歴を有することができ、その場合、治療目的は再発リスクの減少または遅延を一般的に含む。

療法のための好適なヒト被験体は、臨床上の判定基準によって区別することができる２つの処置群を一般的に含む。「進行疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する被験体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有するものである。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍質量に基づいて検出することができるものである（例えば、触診、ＣＡＴスキャン、ソノグラフ、乳房Ｘ線像またはＸ線；陽性の生化学的または組織病理マーカーはそれ自体でこの集団を同定するには不十分である）。被験体の状態を緩和する目的で抗腫瘍応答を導き出すために、医薬組成物がこれらの被験体に投与される。理想的には、腫瘍質量の低減がその結果として起こるが、あらゆる臨床上の改善が利益を構成する。臨床上の改善には、腫瘍の進行のリスクもしくは速度の減少または病理学的帰結における低減が含まれる。

好適な被験体の第２の群は、「アジュバント群」として当技術分野で公知である。これらは、新生物の病歴を有しているが、別のモードの療法に応答性である個体である。前の療法は、外科的切除、放射線療法および伝統的化学療法を限定されずに含むことができた。その結果、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有しない。しかし、彼らは、元の腫瘍部位の近くの、または転移による疾患の進行のリスクがあることが疑われている。この群は、高リスクおよび低リスク個体にさらに細分化することができる。細分化は、初期の処置の前後に観察される特徴に基づいて行われる。これらの特徴は臨床分野で公知であり、各異なる新生物のために適切に規定される。高リスクサブグループで一般的な特徴は、腫瘍が隣接組織に侵入したか、またはリンパ節の関与を示すものである。

別の群は新生物への遺伝的素因を有するが、新生物の証明された臨床徴候がまだない。例えば、乳がんに関連した遺伝子変異の試験で陽性であるがまだ妊娠年齢である女性は、予防手術を実行することが好適になるまで、新生物の発生を防止するための予防的処置において、本明細書に記載される免疫応答性細胞の１つまたは複数を受けることを望み得る。

さらに、本開示の主題は、被験体、例えば免疫無防備状態の被験体において、病原体感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生虫感染または原虫感染）を処置および／または予防する方法を提供する。本方法は、有効量の本開示の免疫応答性細胞またはそれを含む組成物を、病原体感染を有する被験体に投与することを含むことができる。処置に感受性である例示的なウイルス感染には、限定されずに、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびインフルエンザウイルス感染が含まれる。

免疫学的合併症（「悪性のＴ細胞トランスフォーメーション」として公知）、例えば移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）のリスクを避けるか最小にするために、または、健康組織が腫瘍細胞と同じ標的抗原を発現し、ＧｖＨＤと類似の転帰につながる場合、さらなる改変を本開示の免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入することができる。この問題への潜在的解決方法は、本開示の免疫応答性細胞に自殺遺伝子を組み入れることである。好適な自殺遺伝子には、限定されずに、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導可能なカスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ－９）およびトランケーションされたヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが含まれる。ある特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによって、Ｔ細胞排除を可能にする。ＥＧＦＲｔは、本開示のＣＡＲの上流に共有結合することができる。本開示のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターの中に、自殺遺伝子が含まれてもよい。このように、悪性Ｔ細胞トランスフォーメーション（例えば、ＧＶＨＤ）の間の、自殺遺伝子を活性化するように設計されたプロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ－９を活性化することができるプロドラッグ（例えばＡＰ１９０３））の投与は、自殺遺伝子活性化ＣＡＲ発現Ｔ細胞においてアポトーシスを誘発する。本開示のＣＡＲへの自殺遺伝子の組込みは、大半のＣＡＲＴ細胞を非常に短時間で排除する能力によって安全性のさらなるレベルを与える。自殺遺伝子を組み込んだ本開示の免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲＴ細胞注入後の所与の時点で先制して排除することができるか、または毒性の最も初期の徴候で根絶させることができる。

１０．キット
本開示の主題は、免疫応答を誘導および／もしくは強化するための、ならびに／または被験体において新生物もしくは病原体感染を処置および／もしくは予防するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、キットは、有効量の本開示の免疫応答性細胞またはそれを含む医薬組成物を含む。ある特定の実施形態では、キットは、無菌の容器を含み、そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、小袋、ブリスターパックまたは当技術分野で公知の他の好適な容器の形態であってよい。そのような容器は、プラスチック、ガラス、積層紙、金属箔または医薬の保持のために好適な他の材料で作製することができる。ある特定の非制限的な実施形態では、キットは、必要に応じて１つまたは複数のベクターに含まれ得る、発現可能な形態で、目的の抗原に対する本開示のＣＡＲをコードする単離核酸分子を含む。

所望により、免疫応答性細胞および／または核酸分子は、新生物または病原体または免疫障害を有するかそれを起こすリスクがある被験体に、細胞または核酸分子を投与するための指示と一緒に提供される。指示は、新生物または病原体感染の処置および／または予防のための組成物の使用に関する情報を一般的に含む。ある特定の実施形態では、指示は、以下の少なくとも１つを含む：治療剤の説明；新生物、病原体感染もしくは免疫障害もしくはその症状の処置もしくは予防のための投薬量計画および投与；注意；警告；適応症；禁忌（counter-indication）；過量投与情報；有害反応；動物薬理学；臨床試験；ならびに／または参考文献。指示は、容器（存在する場合）の上に直接的に、または容器に貼付される表示として、または容器の中にもしくはそれと一緒に供給される別個のシート、パンフレット、カードもしくはフォルダとして印刷することができる。

本開示の実施は、特に示していない限り、十分に当業者の技能範囲内である分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の通常の技術を使用する。そのような技術は、"Molecular Cloning:A Laboratory Manual", second edition(Sambrook, 1989)；"Oligonucleotide Synthesis" (Gait, 1984)；"AnimalCell Culture" (Freshney, 1987)；"Methods in Enzymology""Handbook of Experimental Immunology" (Weir, 1996)；"GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells" (Miller and Calos, 1987)；"CurrentProtocols in Molecular Biology" (Ausubel, 1987)；"PCR: The PolymeraseChain Reaction", (Mullis, 1994)；"Current Protocols inImmunology" (Coligan, 1991）などの文献に十分に説明されている。これらの技術は、本明細書に開示のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの産生に応用可能であり、そのため、本開示の主題の作製および実施において考慮され得る。特定の実施形態に関して特に有用な技術を、続くセクションで考察する。

以下の実施例は、本開示の細胞および組成物を作製および使用する方法に関する完全な開示および説明を当業者に提供するために述べられており、本発明者らが本発明であると見なす範囲を限定することを意図しない。

（実施例１）
緒言
ＣＤ３ζおよびＴＣＲ複合体における複数のＩＴＡＭは、ＴＣＲシグナルを増幅することが提唱されている（ＰＭＩＤ：２０５１６１３３）。その間に、ＣＤ２８は、ＴＣＲシグナル伝達に関する定量的サポートを提供する（ＰＭＩＤ：１４６４７４７６）。したがって、シグナル伝達ドメインの数およびタイプがＴＣＲシグナル伝達において重要である。ヒトＴ細胞では、ＣＤ２８およびＴＣＲ／ＣＤ３ζは、約６×１０^４および約２×１０^４分子／細胞で発現される（ＰＭＩＤ：１４６４７４７６）。したがって、ＣＤ２８の３つの分子は、３つのＩＴＡＭを有するＴＣＲ／ＣＤ３ζの１分子のシグナル伝達サポートを提供することができる。しかし、第二世代ＣＡＲ１９２８ｚは、融合したＣＤ２８およびＣＤ３ζ細胞質ドメインの設計を有し、それらの化学量論比を１に固定する。殺滅および増殖能力が優れていることから、１９２８ｚＣＡＲは、ｉｎｖｉｔｒｏ、マウスモデルおよび患者においてＣＤ１９を有する細胞の迅速な排除を可能にする。しかし、臨床試験におけるいくつかの問題を克服するためには、現行の１９２８ｚＣＡＲの改善が必要である。１つの問題は、大量の同期したＴ細胞活性化および大量のサイトカインの放出によって特徴付けられるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。ＣＲＳの機構はなおもわかりにくいが、１９２８ｚＣＡＲＴ細胞の過剰なシグナル伝達に関連し得る。別の問題は、ＣＡＲＴ細胞の消耗および持続である。１９２８ｚＣＡＲＴ細胞は、注入の数週間後または数ヶ月後に、少数で存在する、および／または消耗マーカー、例えばＰＤ－１を発現する機能障害状態で存在することが見出され、これは再発の一部の症例を説明し得る。消耗は、１９２８ｚＣＡＲの設計による固有の特性に起因し得る過剰な活性化に連鎖する、という仮説が立てられている（ＰＭＩＤ：２６３３１３４５）。

１９２８ｚＣＡＲシグナル伝達をＴＣＲシグナル伝達と比較すると、２つの細胞質ドメインの融合によるいくつかの主要な差が明白となる。第１に、ＣＡＲでは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインとシス側に存在するが、ＣＤ２８は、シナプスに動員され、ＣＤ３ζとトランス側に同時局在する。第２に、ＣＤ２８の活性化は、ＣＡＲにおけるＣＤ３ζ活性化と同時であるが、ＣＤ２８の共刺激は、ＴＣＲライゲーションの数秒後である。第３に、３つのＣＤ２８分子が１つのＴＣＲを補助するが、比率はＣＡＲにおいて１：１である。最初の２つの差は、現行のＣＡＲの設計下では容易に改変されないが、第３の差は、共刺激シグナルと活性化シグナルとのバランスを保つことによって対処することができ、これは現在の過剰刺激の問題を解決するために役立ち得る。ＣＤ２８／ＣＤ３ζ比は、融合体の設計により、直接変更することができないが、ＣＤ３ζにおけるＩＴＡＭの数は、ＴＣＲシグナル伝達の比を模倣するように変異させることができる。ＣＤ３ζにおける３つのＩＴＡＭは、その一次アミノ酸配列、ならびに形質膜と比較したその位置が異なり（すなわち、膜の近位から遠位へとＩＴＡＭ１、ＩＴＡＭ２、ＩＴＡＭ３）、したがって、Ｌｃｋによってリン酸化されるその能力またはリン酸化時のＺＡＰ７０に対する結合能が異なる（ＰＭＩＤ：２３５５５２３４）。第２の位置で１つのみのＩＴＡＭを有するＣＤ２８に基づくＥｒｂＢ２ＣＡＲに関する以前の試験は、ｉｎｖｉｔｒｏでのアポトーシスの低減を示したが（ＰＭＩＤ：１９８４３９４０）、さらなるＣＡＲ特徴付けおよびｉｎｖｉｖｏ試験が、なおも不足していた。したがって、特に、Ｔ細胞の持続、分化、消耗、および抗腫瘍活性に及ぼすその影響を含む、上記の問題に関してその機能性を評価するために、規定のＩＴＡＭの数および位置を導入する、１９２８ｚＣＡＲ設計に基づく新規ＣＡＲＳを設計した。１９２８ｚＣＡＲの状況においてＣＤ２８シグナル伝達にカップリングした各々のＩＴＡＭが、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでＣＡＲ機能全体にどのように影響を及ぼすかを分析した。ＣＤ２８にカップリングしたＩＴＡＭ１は、ＣＤ２８にカップリングしたＩＴＡＭ２またはＩＴＡＭ３より良好であったのみならず、より重要なことにｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍有効性に関して元の１９２８ｚＣＡＲより良好であり、臨床適用の優れた候補となる。試験は全て、ヒト末梢血Ｔ細胞において実施した。

結果
１９２８ζ ＣＡＲにおけるＣＤ３ζ ＩＴＡＭドメインは、定性的に示差的なＣＡＲＴ細胞機能を発揮する
第１のステップは、第２世代１９２８ｚ－ＣＡＲ構築物における各々のＣＤ３ζ ＩＴＡＭが、定性的に特有の機能に寄与するか否か、または個々のＩＴＡＭが重複する機能的な冗長特性を示すか否かを探索することであった。１９２８ｚＣＡＲの機能に対する各々の個々のＩＴＡＭの寄与を評価するために、１つのみの単一の機能的ＩＴＡＭドメインを有する１９２８ｚＣＡＲを生成した（１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、およびＸＸ３、図１Ａを参照されたい）。残りの２つのＩＴＡＭのシグナル伝達は、２つのチロシン（Ｙ）をフェニルアラニン（Ｆ）に変換する点変異の挿入によって破壊され、このように下流のシグナル伝達経路の完全な活性化のためのＺＡＰ７０のリン酸化および連続的な動員を無効化する。Ｔ細胞は、異なる構築物の間で同等の形質導入率でＳＦＧレトロウイルスベクターを使用して有効に形質導入された（図１Ｂ）。

生成した１９２８ｚ変異体の治療能を比較するために、最適以下のＣＡＲＴ細胞用量である５×１０^４個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞を、既に記載されたプレＢ急性リンパ芽球性白血病ＮＡＬＭ－６マウスモデルに投与し、処置に対する有効性を１９２８ｚ野生型（１９２８ｚＷＴ）マウスと比較した（図２）。

関連する機能的ＩＴＡＭに関連して、腫瘍根絶およびマウスの生存に段階的差が見出された：その元の１９２８ｚＣＡＲ位置における非改変ＩＴＡＭ１（１ＸＸ）またはＩＴＡＭ２（Ｘ２Ｘ）は、元の１９２８ｚ野生型（ＷＴ）と同様に３つの機能的ＩＴＡＭと比較して改善された抗腫瘍活性を示した。これに対し、機能障害ＩＴＡＭ１および２と組み合わせた唯一の機能的ＩＴＡＭとしてのＩＴＡＭ３（ＸＸ３）は、不良な成績であり、腫瘍の根絶は減少し、マウスの生存は低減した（図３）。

したがって、１９２８ｚＣＡＲにおける個々のＩＴＡＭは、第２世代１９２８ｚ構造において元の位置を維持する場合、定性的に示差的な機能を発揮した。腫瘍根絶の有効性は、機能的ＩＴＡＭの各々の位置がさらに遠位となるにつれて徐々に減少し：１ＸＸは、一貫して迅速な腫瘍根絶を示し、長期間の完全寛解を達成したが、Ｘ２Ｘによる処置は、腫瘍進行を遅らせ、１９２８ｚＷＴより優れていたが、最終的に再発が起こった。最も遠位の位置にその非変異（天然）ＩＴＡＭを有するＸＸ３は、腫瘍の制御を達成せず、急速な腫瘍進行および生存率の低減をもたらした（図３）。結論すると、第２および第３のＩＴＡＭ位置に１つまたは２つのＩＴＡＭを有する１９２８ｚＣＡＲ（ＸＸ３、Ｘ２Ｘ、Ｘ２３）は、１９２８ｚ野生型より活性が弱く、または治療的に活性（ｉｎｖｉｖｏ）でもなかった。

正しい位置での１つの単一の機能的ＣＤ３ζ ＩＴＡＭは、強力な抗腫瘍活性にとって十分である
対処すべき次の問題は、ＩＴＡＭ１よりＺＡＰ７０に対して低い親和性を有すると想像される遠位位置での２つの機能的ＩＴＡＭの組合せ－ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３（Ｘ２３、図１Ａ）が共に、その関連する単一のＩＴＡＭ１９２８ζ変異体（Ｘ２Ｘ／ＸＸ３）の効力を改善できるか否かであった。ｉｎｖｉｖｏ解析から、Ｘ２３によって処置したマウスの遠位腫瘍クリアランスおよび生存は、ＸＸ３によって処置したマウスの転帰と同等であることが明らかとなった（図２および３）。これに対し、第１の（１ＸＸ）または第２の（Ｘ２Ｘ）位置のいずれかで１つのみの単一の機能的ＩＴＡＭを有する１９２８ｚ変異体ＣＡＲは、腫瘍負荷および生存の経過に反映されるように、２つ（Ｘ２３）または３つ（ＷＴ）の機能的ＩＴＡＭを有する１９２８ｚＣＡＲより優れていることが認められた。１ＸＸは、最も強力な１９２８ｚ変異体であることが一貫して証明され、非常に低い処置用量であっても迅速かつ持続可能な腫瘍の根絶を達成した。結果は、このように、１つの単一のＩＴＡＭが効率的な殺滅にとって十分であることを示すが、ＣＤ３ζ内のどのＩＴＡＭが機能的であるかに応じてＣＡＲＴ細胞の治療効力に有意差があることも明らかにする。

次に、ＸＸ３におけるＣＡＲ機能の低減が、その天然の位置と比較して第２世代ＣＡＲの状況においてＩＴＡＭ３の個々の特異性に起因するか、またはＩＴＡＭ３のより遠位の位置に関連するかを分析した。したがって、１９２８－ＣＡＲの状況において２つのＩＴＡＭの直接比較を可能にする、正確に同じ近位のＣＡＲ位置にＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ３を有し（Ｄ１２およびＤ２３）、残りのＣＤ３ζ鎖の欠失を有する１９２８ｚ変異体ＣＡＲを生成した（図１）。結果は、より近位の位置（Ｄ１２）におけるＩＴＡＭ３が、迅速かつ効率的な長期間の腫瘍クリアランスにとって十分であり（図２および３）、Ｄ２３と同等の結果を示すことを実証した。同じＩＴＡＭ（ＩＴＡＭ３）を共有するにもかかわらず、Ｄ１２は、明らかにＸＸ３より優れており、有効な抗腫瘍効力を達成した。このように、Ｄ１２とＸＸ３との間の治療効力の有意差は、第２世代ＣＡＲ内のＩＴＡＭ位置の影響を実証する。結論すると、第１のＩＴＡＭ位置に単一のＩＴＡＭ（１ＸＸおよびＤ２３におけるＩＴＡＭ１、またはＤ１２におけるＩＴＡＭ３）を有する１９２８ｚＣＡＲは、１９２８ｚ野生型より治療的に活性であった（ｉｎｖｉｖｏ）。

Ｄ２３および１ＸＸは、唯一の機能的ＩＴＡＭとしてＩＴＡＭ１を共通に有するが、１ＸＸは、Ｄ２３と比較して改善された機能的特性を示し、より高いＴ細胞増殖および好ましいＴ細胞表現型をもたらした（図４および５）。これは、膜の会合を媒介し、シグナル伝達をモジュレートすることが以前に示されている、ＣＤ３ζ鎖内の塩基性残基に富む伸長（ＢＲＳ）が、１９２８ｚＣＡＲの機能的特性に起因し得ることを支持する（図１Ｂ）。

したがって、１ＸＸＣＡＲの構造に追加の変異を挿入し、それによってＢＲＳ－２および－３（＝１ＸＸＢＲＳ_{ｎｅｇａｔｉｖｅ}）のシグナル伝達を破壊した。１ＸＸＢＲＳ_{ｎｅｇａｔｉｖｅ}が、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで低減された増殖および殺滅機能を示したことから、ＢＲＳ領域は、１ＸＸの機能にとって必須であることが実証された。したがって、本発明者らは、１ＸＸにおけるＢＲＳ領域の機能的重要性を実証する。

ＣＤ３ζ ＩＴＡＭ変異は、１９２８ζ ＣＡＲにおけるＴ細胞増殖の増強を許容し、Ｔ細胞の分化および消耗を制限する
ｉｎｖｉｖｏ試験により、１つの機能的ＩＴＡＭおよび２つの変異ＩＴＡＭ領域を有する全てのＣＡＲ群に関してＣＡＲＴ細胞蓄積の増強が明らかとなった：ＸＸ３、Ｘ２Ｘおよび１ＸＸの細胞数は、１９２８ｚＷＴと比較して１７日後に腫瘍部位で有意により高いＴ細胞蓄積を達成した（図４）。単一のＩＴＡＭ（ＸＸ３、Ｘ２Ｘ、１ＸＸ）を含有する変異体１９２８ｚＣＡＲを発現するＴ細胞は、ｉｎｖｉｖｏで野生型２８ｚＣＡＲを発現するＴ細胞より高レベルで蓄積した。２つまたはそれより多くのＩＴＡＭを含有するＣＡＲ（１９２８ｚおよびＸ２３）は、単一のＩＴＡＭＣＡＲ（ＸＸ３、Ｘ２Ｘ、１ＸＸ、Ｄ２３、およびＤ１２）を発現するＴ細胞と比較して蓄積の減少を示した。

より高いＴ細胞蓄積は、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞におけるセントラルメモリー（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＡ－）（Ｔ_ＣＭ）およびエフェクター（ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ４５ＲＡ＋）（Ｔ_ＥＦＦ）細胞のパーセンテージに反映されるように、より少ないＴ細胞分化に関連した：１ＸＸは、１９２８ｚＷＴと比較して、改善されたｉｎｖｉｖｏ増殖能に関連するＴ細胞表現型であるＴ_ＣＭの有意により高いパーセンテージを示し、最終分化Ｔ_ＥＦＦの有意により低いパーセンテージを示した（図５）。その上、１ＸＸは、処置したマウスの骨髄においてＣＡＲ注入後１７日目に、有意に多数のＴ_ＣＭ細胞およびメモリー関連マーカーＩＬ１７Ｒを発現するＴ細胞を示した。さらに、両方のＴ細胞集団が、ＣＡＲ投与後１０日目から１７日目まで有意な増加を示した（図６）。全体として、１ＸＸは、最大の画分のメモリーＴ細胞を誘発し、Ｄ２３は、長期のｉｎｖｉｔｒｏアッセイにおいて次善のものであった。分化の遅延およびＩＬ７Ｒ発現ＣＡＲＴ細胞の増加もまた、抗原に対する繰り返し曝露によってｉｎｖｉｔｒｏで観察された（データは示していない）。

さらに、１９２８ｚ変異体は、抗腫瘍活性の減少に関連する阻害性分子ＰＤ１、ＴＩＭ３およびＬＡＧ３の同時発現によって決定した場合、Ｔ細胞消耗の程度が異なった。１つの単一の機能的ＩＴＡＭおよび２つの他のＩＴＡＭの欠失を有する１９２８ｚ変異体群（Ｄ１２およびＤ２３）は、消耗マーカーの有意に低い発現を示した（図７）。

ＸＸ３は、腫瘍部位でのＣＡＲの数に関して１９２８ｚＷＴを超えており（図４）、Ｔ_ＣＭの高いパーセンテージを示したが、これらの細胞は腫瘍進行を防止することができなかった。ＸＸ３処置マウスは、初回処置応答を実証したが、その後まもなく再発した。ｉｎｖｉｔｒｏでの機能分析は、ＸＸ３における殺滅活性の低減ならびにＴｈ１サイトカインおよびグランザイムＢ（ＧｒＢ）分泌の減少を実証した（図８および９）。図８は、標準的なｉｎｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイにおいて、減少した細胞溶解活性を示すＸＸ３を除き、全てのＣＡＲが腫瘍細胞を同様に溶解することを示す。全ての構築物が、初回Ｔ細胞形質導入後に類似かつ強力な細胞傷害活性を示したが、繰り返しＡｇ曝露によるＣＡＲの増大後では差が認められた（図８）。図９は、標準的なｉｎｖｉｔｒｏサイトカインアッセイが、ｉｎｖｉｖｏ機能的特徴と相関しないが、１ＸＸおよびＤ２３は望ましいプロファイル（ＩＬ２および抗腫瘍サイトカイン、例えばＩＦＮｇおよびＴＮＦａ）を示すことを示す。

これらの知見は、ＸＸ３においてエフェクター機能と増殖機能とがカップリングしないことを示しており、ＣＡＲＴ細胞の増大および持続が有効な腫瘍根絶にとって十分ではなかったことを示している。これに対し、１９２８ｚＷＴは、高い細胞傷害活性を発揮したが、エフェクター細胞への早期の分化を獲得し、阻害性分子のアップレギュレーションを増加させ、１９２８ｚＣＡＲの消耗および持続の低減をもたらした。

結論
第２世代１９２８ｚＣＡＲにおけるＣＤ３ζ活性化とＣＤ２８共刺激の組合せによる機能的冗長性およびシグナル伝達の増加は、早期のＴ細胞分化および消耗をもたらし、このように、抗腫瘍活性を減少させ得る。したがって、ＣＡＲ機能に関する単一のＩＴＡＭの寄与を分析した。ＣＤ３ζ鎖内のＩＴＡＭの位置、親和性、および数は、１９２８ｚＣＡＲＴ細胞の機能的特性に示差的に影響を及ぼした。全体として、単一のＩＴＡＭを含有する１９２８ｚＣＡＲは、優れたＴ細胞蓄積、メモリー形成、および消耗の減少を方向付けるが（図４～７）、最高の治療（抗腫瘍）活性を提供するためには、単一のＩＴＡＭを第１の位置に配置しなければならない（図２～３）。１ＸＸは、エフェクターおよびメモリー細胞の両方の最も都合がよい特性を含み、それによって活性化と分化のバランスを保った。１ＸＸは、ＣＤ３ζシグナル伝達とＣＤ２８共刺激の組合せの強い活性化を調節し、適切な細胞内シグナルへの強度を微調整し、このようにしてＣＡＲ媒介シグナル伝達をモジュレートし、次いで優れた長期腫瘍根絶をもたらす。

（実施例２ＣＡＲの代替のヒンジ／スペーサー領域および膜貫通ドメイン）
代替のヒンジ／スペーサー領域および膜貫通ドメインを、ＣＡＲ構築物において試験した。異なるヒンジ（Ｈ）および膜貫通ドメイン（ＴＭ）を有する１ＸＸＣＡＲの略図を図１０に示す。試験した全てのヒンジおよび膜貫通ドメインは、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）に属し、細胞－表面ホモ二量体を形成することができる。全ての構築物を、ＣＡＲおよびＬＮＧＦＲをコードするＰ２Ａバイシストロニックオンコレトロウイルスベクター（ＳＦＧ）にクローニングした。フローサイトメトリープロファイルは、ヤギＩｇＧ抗マウスＩｇＧ（Ｆ（ａｂ’）２）断片および抗ＬＮＧＦＲをそれぞれ使用したＣＡＲおよびＬＮＧＦＲ発現を示す。Ｔ細胞を、健康なドナーのＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）から得て、活性化の４８時間後に安定に形質導入し、複数の時点でＣＡＲ発現に関して分析した。ＣＤ２８／ＣＤ２８Ｈ／ＴＭ領域を含有する１９２８ｚ－ＬＮＧＦＲＣＡＲを、対照として使用した。

ＣＤ２８／ＣＤ２８（Ｈ／ＴＭ）を、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）、ＣＴＬＡ－４／ＣＴＬＡ－４（Ｈ／ＴＭ）、またはＩＣＡＭ－１／ＩＣＡＭ－１（Ｈ／ＴＭ）ヒンジに置き換えると、ＣＡＲの細胞－表面発現を無効化した。しかし、ＣＤ２８ヒンジをＩＣＯＳ膜貫通（ＣＤ２８／ＩＣＯＳ；Ｈ／ＴＭ）に融合すると、ＣＡＲ発現は回復した。しかし、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４（Ｈ／ＴＭ）構成では、ＣＡＲ発現はレスキューされなかった。これらの知見は、効率的なＣＡＲ発現を可能にするＨ／ＴＭの組合せを発見することが自明ではないことを示した。結論すると、ＣＤ８４／ＣＤ８４、ＣＤ１６６／ＣＤ１６６、ＣＤ８ａ／ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ／ＣＤ８ｂまたはＣＤ２８／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）領域のいずれかを保有する１ＸＸＣＡＲは、Ｔ細胞表面で同様に発現されたが、そのうちの３つ、ＣＤ１６６－２８ｚ、ＣＤ８ａ－２８ｚ、ＣＤ８ｂ－２８ｚは、ＣＤ２８と二量体を形成することができない。

１０^６個の細胞／ｍｌのＣＡＲＴ細胞から開始して毎週刺激した場合の累積的なＣＡＲＴ細胞計数を、図１１に示す。ＣＤ１９に毎週曝露することによって誘導したＣＡＲＴ細胞増殖を、２１日間ｉｎｖｉｔｒｏで最初に評価した。ＣＡＲＴ細胞を、いかなる外因性のサイトカインも添加せずに放射線照射ＣＤ１９^＋ＮＩＨ３Ｔ３と共に同時培養した。各週に、１０^６個の細胞／ｍｌのＣＡＲ^＋Ｔ細胞を、放射線照射および新鮮なＣＤ１９^＋ＮＩＨ３Ｔ３に添加した。ＣＤ２８／ＣＤ２８（Ｈ／ＴＭ）を有する１９２８ｚ－１ＸＸ－ＬＮＧＦＲＣＡＲを参照として使用した。１９－ＣＤ１６６－２８ｚのｉｎｖｉｔｒｏでの増殖は、１９２８ｚ野生型と類似であった。

ＣＡＲＴ細胞表面検出に基づいてデータを構築した。ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）、ＣＴＬＡ－４／ＣＴＬＡ－４（Ｈ／ＴＭ）、ＩＣＡＭ－１／ＩＣＡＭ－１（またはＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４（Ｈ：ＴＭ）を有するＣＡＲを形質導入したＴ細胞は、ＣＤ１９＋ＮＩＨ３Ｔ３細胞との同時培養後、蓄積することができなかった。ＣＤ８４／ＣＤ８４およびＣＤ８ｂ／ＣＤ８ｂ（Ｈ／ＴＭ）を有するＣＡＲＴ細胞は、２ラウンドの刺激後蓄積することができた。しかし、これらの細胞は、第３ラウンドの刺激後ではその蓄積能を失った。ＣＤ１６６（Ｈ／ＴＭ）、ＣＤ８ａ（Ｈ／ＴＭ）ドメイン、およびＣＤ２８／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）を有するＣＡＲＴ細胞は、対照１９２８Ｚ－１ＸＸＣＡＲＴ細胞と同程度に有効に蓄積する。

ＣＡＲＴ細胞の細胞傷害活性を、３回目の刺激（Ｄ２１）の終了時、４時間の^５１Ｃｒ放出アッセイを使用して測定し、その結果を図１２に示す。Ｔ細胞およびＥＬ－４－ＣＤ１９＋標的細胞を、異なるエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ）で使用した。ＥＬ－４－ＰＳＭＡ細胞を対照として使用した。全ての十分に発現されたＨ／ＴＭＣＤ２８／ＣＤ３ｚバリアントのｉｎｖｉｔｒｏ細胞傷害能は、予想されたように類似であった。ＣＤ１６６（Ｈ／ＴＭ）、ＣＤ８ａ（Ｈ／ＴＭ）ドメインおよびＣＤ２８／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）を有するＣＡＲＴ細胞の細胞傷害能は、ＣＤ２８／ＣＤ２８（Ｈ／ＴＭ）を有するＣＡＲＴ細胞と同等であった。

ＮＯＤ．ＣｇＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（免疫欠損ＮＳＧ）マウスを使用した異なるＨ／ＴＭＣＡＲＴ細胞のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍効力を図１３に示す。マウスの尾静脈に、５×１０^５個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰＮＡＬＭ６細胞（プレＢＡＬＬ細胞株）を注射し、４日後に２×１０^５個のＣＡＲＴ細胞を注射した。腫瘍負荷を、生物発光シグナルの毎週の定量によって追跡した。ｉｎｖｉｖｏ試験のために選択した全ての構築物、ＣＤ１６６／ＣＤ１６６（Ｈ／ＴＭ）、ＣＤ８ａ／ＣＤ８ａ（Ｈ／ＴＭ）、およびＣＤ２８／ＩＣＯＳ（Ｈ／ＴＭ）が、腫瘍細胞を完全に根絶することができた。対照群、１９２８ｚＣＡＲＴ細胞と比較していかなる条件に関しても、腫瘍負荷または生存に関する有意差は観察されなかった。

（実施例３脱免疫化戦略）
ヒト配列の近位またはその変異は、ネオ抗原を作製するリスクを有する。したがって、１ＸＸにおける新規ＣＤ１６６接合部および変異を脱免疫化した。異なるＣＡＲ部分の間の接合部の免疫原性を、ＮｅｔＭＨＣ４．０サーバーを使用して予測した。全体で２６個のアミノ酸（最初の部分から１３個のアミノ酸、および第２の部分から１３個のアミノ酸）を選択した。隣の部分からの少なくとも１つのアミノ酸を含有する各々の生成したペプチド（１４、１３、１２、１１、１０、９、および８マー）に関して、全ての対立遺伝子のＨＬＡＡ、ＢおよびＣに対する結合親和性を予測した。各ペプチドの免疫原性のスコアを、各ペプチドに割り当てた。免疫原性スコアを、免疫原性スコアの式＝［（５０－結合親和性）^＊ＨＬＡ頻度］ｎを使用して計算した。５０ｎｍを、強い結合親和性のカットオフとして使用した。白人集団におけるＨＬＡ頻度を使用した。ｎ＝各ペプチドに関する予測の数。全集団における１％未満のＨＬＡ頻度を除外した。接合部の脱免疫化に関して、接合部を形成する両方のアミノ酸のシャッフリングまたは接合部の両側のアミノ酸の欠失を試験した。免疫原性の予測に関する以前に記載された戦略を、各々の新規生成ペプチドのために使用した。最小の免疫原性スコアを有する接合部を使用して、脱免疫化ＣＡＲを構築した。例示的な脱免疫化戦略を図１４に示す。

（実施例４４－１ＢＢｚＣＡＲＴ細胞による処置後のＣＤ１９ｌｏｗＡＬＬの再発のレスキュー）
緒言
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用する養子免疫療法は、白血病およびリンパ腫の処置において顕著な臨床結果を示し、広範囲のがんに対して原則として適用可能な有望な免疫療法である。２つの有望なＣＡＲ設計が臨床に導入されて成功しており、１つは共刺激構成要素としてＣＤ２８の細胞質ドメインを利用し、他方は４－１ＢＢの細胞質ドメインを使用する。両方の例において、Ｔ細胞活性化は、ＣＤ３ゼータ鎖の融合した細胞質ドメインを通して開始される。両方の設計が、顕著な結果を達成したが、臨床転帰は、これらのＣＡＲ構造の短所によって制限される。ＣＤ２８に基づくＣＡＲを発現するＴ細胞は強力であるが、短命であり、一方４－１ＢＢに基づくＣＡＲを発現するＴ細胞は長命であるが、低レベルの標的抗原を発現する腫瘍細胞の抗原エスケープを可能にする。このように、機能を損なうことなくＴ細胞の持続を延長する新規ＣＡＲ設計が必要である。

結果
本開示のＣＤ２８ｚＣＡＲＴ細胞は、４－１ＢＢｚＣＡＲＴ細胞による処置後のＣＤ１９ｌｏｗＡＬＬの再発をレスキューすることができる。これは、安定にＣＤ１９陰性である細胞を除き、４－１ＢＢｚＣＡＲＴ細胞による処置後に起こる多くの再発に関する主要なレスキュー経路であり得る。

ＮＳＧマウスの尾静脈に５×１０^５個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰＮＡＬＭ６細胞（プレＢＡＬＬ細胞株）を注射し、４日後に２×１０^５個の１９ＢＢｚＣＡＲＴ細胞を注射した。最初のＴ細胞注射（腫瘍進行を遅らせるのみである非有効用量）の１０日後、マウスに再度１９ＢＢｚＣＡＲＴ細胞またはあるいは１９２８ｚもしくは（５×１０^５個／マウス）を注射した。様々な生存曲線を図１５に示す。１９２８ｚに基づくＣＡＲＴ細胞の新たな注射（２回目の注射）のみが、ＮＡＬＭ－６によって処置したマウスを再発からレスキューすることができた。生存率の有意な増加は、新たな１９ＢＢｚＣＡＲＴ細胞の注射後に観察されなかった。

結論すると、ＣＤ２８ｚＣＡＲＴ細胞は、４－１ＢＢｚＣＡＲＴ細胞の機能不全をレスキューすることができる。上記の実施例を考慮すると、本明細書に開示の改変ＣＤ２８ｚＣＡＲＴ細胞、例えば１ＸＸ、Ｄ２３およびＤ１２ＣＡＲＴ細胞（ＣＤ１６６ヒンジ／ＴＭドメインなどの様々なヒンジ／ＴＭドメインを有する）は、４－１ＢＢｚＣＡＲＴ細胞の機能不全のレスキューにおいて１９２８ｚＣＡＲＴ細胞よりさらに有効であり得る。

（実施例５）
本実施例は、実施例１のある特定の態様の更新されたさらなる調査である。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、増強された抗腫瘍特性を獲得するためにＴ細胞を標的として再プログラムする合成受容体である^１。ＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達モチーフ^２を含むＣＤ１９特異的ＣＡＲは、難治性白血病^３－５およびリンパ腫^６を有する患者において顕著な応答を誘導し、米国食品医薬品局によって最近承認された^７。これらのＣＡＲは、それらがＴ細胞に与える持続が限定的であるにもかかわらず^{３－６，８}、強力な腫瘍排除を媒介する^４，８高性能エフェクター機能をプログラムする。その効力を損ねることなく機能の持続を拡張すれば、現行のＣＡＲ療法を改善するはずである。強いＴ細胞活性化は消耗を促進するが^９，１０、これはＣＤ２８およびＣＤ３ζシグナル伝達の冗長性^{１１，１２}および第２世代ＣＡＲ^２の構造によって付与される空間時間的拘束によって強調され得る。このように、ＣＤ２８に基づくＣＡＲの活性化能を較正すると、Ｔ細胞の機能および分化を示差的に再プログラムするという仮説を立てた。本明細書では、単一の免疫受容活性化チロシンモチーフをコードするＣＡＲが、Ｔ細胞を、エフェクターおよびメモリープログラムのバランスを保つことによって異なる運命へと方向付け、それによって増強された治療プロファイルを有するＣＡＲ設計を生じる。

３つの全てのＣＤ３免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）^{１１，１３}を組み込んだキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の設計におけるＣＤ２８およびＣＤ３シグナル伝達の冗長性は、逆効果のＴ細胞の分化および消耗^９，１０を促進し得るという仮説を立てた。したがって、ＩＴＡＭ活性を、そのリン酸化および下流のシグナル伝達を妨げるように^{１４－１７}チロシン残基を変異させることによって較正した。１９２８ｚ操作Ｔ細胞の機能、分化、および治療効力に対する３つのＣＤ３ＩＴＡＭの各々の寄与を調べるために、１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、およびＸＸ３と呼ばれる単一のＩＴＡＭを含有する１９２８ｚ変異体を生成した（図１６Ａ）。Ｘ２３と呼ばれる１つの追加の変異体では、２つの遠位のＩＴＡＭ（ＩＴＡＭ２およびＩＴＡＭ３）が保持され、その両方がＩＴＡＭ１と比較してチロシンタンパク質キナーゼＺＡＰ－７０に対して低い結合親和性を示すことが示されている^{１３，１８}。全ての変異体ＣＡＲは、レトロウイルスを形質導入したヒト末梢血Ｔ細胞において同様に発現され（図１６Ｂ）；それらは、４時間のクロム－５１（^５１Ｃｒ）放出アッセイにおいて区別できない細胞傷害およびＣＤ１９抗原による３回の毎週刺激に応答した増殖を方向付けることが見出された（図２０Ａ～２０Ｂ）。

注目すべきことに、これらの変異体ＣＡＲを発現するＣＡＲＴ細胞の治療有効性は、十分に確立されたプレＢ急性リンパ芽球性白血病Ｎａｌｍ６マウスモデル^{８，１９，２０}において特異的に異なった。Ｔ細胞効力をよりよく比較するために、ＣＡＲＴ細胞の用量を、ＣＡＲストレス試験^８において既に記載されたように、故意に低下させた。親１９２８と比較すると、ＸＸ３は、抗腫瘍有効性の顕著な減少を示し、腫瘍負荷の一過性の低減を達成したに過ぎなかったが、１ＸＸは１９２８ｚを超え、全てのマウスにおいて長期間の寛解を誘導した（図１６Ｃおよび図２０Ｃ）。Ｘ２ＸおよびＸ２３による処置は、１９２８と比較して生存率を有意に変化させなかった（１９２８とＸ２Ｘとの比較：Ｐ＝０．６９４２；１９２８とＸ２３との比較：Ｐ＝０．１０８５）。

このように、１つ（１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、ＸＸ３）、２つ（Ｘ２３）、または３つ（１９２８ｚ）の機能的ＩＴＡＭの存在は、短期間のｉｎｖｉｔｒｏ機能を顕著に変化させなかったが、単一のＩＴＡＭを含有するＣＡＲは、三重および二重ＩＴＡＭ含有ＣＡＲよりｉｎｖｉｖｏで優れていた。腫瘍根絶の有効性は、機能的ＩＴＡＭの遠位への配置が増加するにつれて徐々に減少した。１ＸＸＣＡＲは、一貫して迅速な腫瘍根絶を示し、最低のＴ細胞用量で持続可能かつ完全な寛解を達成した唯一のＣＡＲ設計であった。Ｘ２Ｘによる処置は、野生型１９２８ｚと比較して腫瘍進行をわずかに遅らせたが、最終的に再発が起こった。ＸＸ３ＣＡＲは、いかなる腫瘍制御も達成せず、急速な腫瘍進行および有意な生存の低減をもたらした（図１６Ｃおよび図２０Ｃ）。

抗腫瘍有効性のこれらの主要な差の機能的根拠を調べるために、これらのＣＡＲによって付与された応答を、より深く調べた。低いエフェクター：標的比での長時間の（１８時間）細胞傷害アッセイにおいて、ＸＸ３は、１９２８ｚおよび他の変異体より活性が低いことが証明された（図２１Ａ）。ＸＸ３のエフェクター機能の減少は、ＣＤ１９^＋標的による刺激後のグランザイムＢ（ＧｒＢ）発現の低減（図２１Ｂ）、ならびに単機能型および多機能型１型ヘルパーＴ細胞（Ｔ_Ｈ１）サイトカイン分泌の減少（図２１Ｃ）によってさらに裏付けられた。単一のＩＴＡＭ（ＩＴＡＭ１、２、または３のいずれか）を含めることは、ＣＤ６２Ｌ／ＣＤ４５ＲＡ発現によって決定した場合にＴ細胞の分化を制限し、ＣＤ１９^＋標的によるｉｎｖｉｔｒｏでの繰り返し刺激に応答して、セントラルメモリーＣＡＲＴ細胞画分の増加およびエフェクター細胞の割合の低減をもたらした（図２０Ｄ）。

２つの不活性なＣＤ３ＩＴＡＭドメインを有するＣＡＲＴ細胞が、持続の増加（図１６Ｄ）およびＴ細胞分化の遅延（図１６Ｅ）を示したことから、これらの知見を、ｉｎｖｉｖｏに拡大した。１ＸＸ、Ｘ２Ｘ、およびＸＸ３ＣＡＲＴ細胞は全て、ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ４５ＲＡ^－セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）のより高いパーセンテージおよび最終分化ＣＤ６２Ｌ^－ＣＤ４５ＲＡ^＋エフェクター細胞（Ｔ_ＥＦＦ）画分の減少（図１６Ｅおよび図２０Ｅ）を実証した。ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋ＣＡＲＴ細胞におけるエフェクター分化の減弱は、腫瘍部位での両方のＴ細胞サブセットの蓄積の増加に関連し（図１６Ｄ）、ＣＤ２８に基づく第２世代ＣＡＲ内でＣＤ３シグナル伝達を低減させる利益を確立した。

次に、ＸＸ３のより弱い効力がＩＴＡＭ３に固有であるか、またはその遠位位置によるものであるかを調べた。したがって、同じ近位ＣＡＲ位置でＩＴＡＭ１またはＩＴＡＭ３のいずれかを有し、残りのＣＤ３ζ鎖が欠失した１９２８ζ変異体ＣＡＲを生成した（Ｄ１２およびＤ２３、図１７Ａ～１７Ｂ）。ｉｎｖｉｔｒｏ試験により、４時間および１８時間アッセイにおいて、全ての構築物の間で等しい効力の細胞溶解活性、減少しないサイトカインおよびＧｒＢ分泌、ならびにＤ１２、Ｄ２３、および１９２８ζの間での同等の増殖能が実証された（図２１および２２）。しかし、Ｄ１２およびＤ２３はいずれもｉｎｖｉｖｏで１９２８ζより優れており、完全な腫瘍の根絶を達成した（図１７Ｃおよび図２２Ｄ）。両方のＣＡＲ構築物は、Ｔ細胞分化を中等度に減少させ、１９２８ζと比較して腫瘍部位でのより高いＣＡＲＴ細胞蓄積を促進した（図１７Ｄ～１７Ｅ）。これらの知見は、ＩＴＡＭの投薬量および１９２８ζ ＣＡＲ内での位置の重要性を示している。単一の機能的ＩＴＡＭは、強力な抗腫瘍有効性にとって十分であり、三重ＩＴＡＭ含有野生型ＣＤ３ζ鎖によって与えられる有効性より優れている。さらに、ＩＴＡＭ３によって付与される治療効力は、そのそれぞれの天然の位置（ＸＸ３と１ＸＸとの比較）でのＩＴＡＭ１の治療効力より劣るが、同じ近位位置（Ｄ１２とＤ２３との比較）では同等である。同じＩＴＡＭ配列を共有するにもかかわらず、Ｄ１２は、ＸＸ３と比較して優れた腫瘍根絶を達成し、第２世代ＣＡＲにおけるＩＴＡＭ位置の重要性を実証する。

わずかに異なるＣＡＲ発現レベルから生じる潜在的交絡作用を除外するために、ＣＡＲ相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、ＴＲＡＣ遺伝子座に標的化し^１９、それによって内因性のＴ細胞受容体（ＴＣＲ；図２４Ａ）を同時に除去しながら、トランスジーン調節およびコピー数を正規化した。これらの条件下では、１ＸＸＣＡＲＴ細胞は再度、１９２８ｚまたはＸＸ３を発現する細胞より優れていた（図３ａ）。ＴＲＡＣ－１ＸＸＴ細胞は、２１日以内に完全寛解を達成したが、ＴＲＡＣ－ＸＸ３Ｔ細胞は、腫瘍進行を遅らせたに過ぎず、腫瘍制御を達成することができなかった（図１８Ａ）。ＣＡＲ注入の１７日後に回収したＣＡＲＴ細胞および腫瘍細胞の分析により、ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋サブセットの両方において、ＴＲＡＣ－１９２８ｚと比較して、ＴＲＡＣ－１ＸＸおよびＴＲＡＣ－ＸＸ３ＣＡＲＴ細胞の高い蓄積が示された（図１８Ｃならびに図２４Ｂおよび２４Ｅ）。ＣＡＲＴ細胞持続の増加は、高いパーセンテージのＴ_ＣＭおよびインターロイキン－７受容体（ＩＬ７Ｒ）^＋ＣＡＲＴ細胞計数に関連し（図２４Ｃおよび２４Ｄ）、１９２８０変異体におけるＴ細胞分化の遅延の知見を強化した。レトロウイルス操作Ｔ細胞と同様に、ＴＲＡＣ－ＸＸ３Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ－１９２８ｚおよびＴＲＡＣ－１ＸＸ細胞とは対照的に経時的にその細胞溶解能を失った（図２４Ｆ）。消耗マーカーの発現は、ＴＲＡＣ－１９２８ｚと比較して１９２８ｚ変異体では低減され、ＴＲＡＣ－１９２８ｚの機能的消耗は、処置したマウスからのＣＡＲの単離後およびＮａｌｍ６細胞にｅｘｖｉｖｏで再曝露後のＴ_Ｈ１サイトカイン分泌の低減およびＧｒＢ／ＣＤ１０７ａ発現の低減によって確認された（図１８Ｄおよび図２５）。ＴＲＡＣ－１ＸＸは、高い細胞溶解機能および複数のサイトカインを同時産生する能力を保持したが、ＴＲＡＣ－１９２８ｚは消耗マーカーの発現の増加に関連して次第にＴ_Ｈ１サイトカインの分泌不能を示した。

２つの異なるＴ細胞用量（５×１０^５個および１×１０^５個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞）の投与後の長期間の追跡調査は、ＴＲＡＣ－１ＸＸの治療的優位性を明らかに示した。腫瘍関連死が６０日未満（５×１０^５個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞による処置）または４０日未満（１×１０^５個のＣＡＲ^＋Ｔ細胞による処置）で起こったが、ＴＲＡＣ－１ＸＸによって処置したマウスは全て、観察期間を通して完全な腫瘍の根絶および生存の増強を示した（図１８Ｂおよび図２９）。

１ＸＸが非常に機能的で長命なメモリー細胞へと発生させる増強された能力は、選別したナイーブＴ細胞をｉｎｖｉｖｏ治療のために使用した場合にさらに実証された。ＴＲＡＣ－１ＸＸは、Ｔ_ＣＭおよびＩＬ７Ｒ発現細胞の集団の経時的な増加を示し（図２６Ａ～２６Ｃ）、非常に強力なＣＡＲＴ細胞の持続の増強に関連した。重要なことに、ＴＲＡＣ－１ＸＸＣＡＲは、有効なリコール応答を誘発することが可能であり、腫瘍の再チャレンジ後に完全な腫瘍制御を達成することが可能であった（図１８Ｅ）。持続的な１ＸＸＣＡＲＴ細胞は、増加した数のＴＣＭ、ＴＥＦＦ、およびＩＬ７Ｒ^＋ＣＡＲを含んだ（図１８Ｆおよび１８Ｇならびに図２６Ｄ～２６Ｆ）。これに対し、ＴＲＡＣ－１９２８ｚは、メモリー形成を伴わないＣＡＲＴ細胞持続の低減および腫瘍再チャレンジを制御できないことを伴う消耗表現型をより容易に獲得した（図３ｈおよび拡張データ図７ｇ）。

これらの異なる表現型および機能的パターンをさらに特徴付けるために、１９２８ｚ、１ＸＸ、およびＸＸ３のゲノムワイドな転写プロファイルを、ＴＲＡＣ編集ナイーブＴ細胞のＣＤ１９抗原刺激後に比較した。主成分分析は、そのＣＤ３ｚ変異に応じたＣＡＲＴ細胞の別個のクラスター化を実証した（図２７Ａ）。機能的試験と一貫して、Ｔ細胞の機能、分化、および消耗に関連するトランスクリプトームプロファイルに大きい差が認められた。遺伝子セット濃縮解析（ＧＳＥＡ）により、ＸＸ３および１ＸＸの両方と比較して、１９２８ｚにおいてナイーブ／メモリー関連遺伝子のダウンレギュレーション、ならびにＴ細胞活性化およびエフェクター関連遺伝子の濃縮が明らかとなった（図１９Ａおよび図２７Ｂ）。予想されたように、１９２８ｚＣＡＲＴ細胞は、Ｔ細胞分化、消耗、およびアポトーシス遺伝子発現プロファイルの最大のアップレギュレーションを示した（図１９Ｂおよび１９Ｃならびに図２８Ａ）。遺伝子オントロジーおよびＧＳＥＡ解析により、ＸＸ３と比較した１９２８ｚにおいて、およびＸＸ３と比較した１ＸＸにおいて、炎症、サイトカイン、およびケモカイン活性に関連する遺伝子セットの有意なアップレギュレーションが同定された（図１９Ｃならびに図２８Ｂおよび２８Ｃ）。これらの遺伝子セットはまた、程度は低いものの１ＸＸと比較して１９２８ｚにおいても濃縮され、１９２８ｚおよびＸＸ３と比較して１ＸＸが中間状態であることと一貫した（図１９Ｂおよび１９Ｃならびに図２８Ｂおよび２８Ｃ）。ＴＲＡＣ編集ＣＡＲＴ細胞を、非遺伝子改変ＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットのエフェクターおよびメモリー特色と比較するために、ナイーブ（Ｔ_Ｎ）、幹細胞メモリー（Ｔ_ＳＣＭ、２つまたはそれより多く）、およびＴ_ＥＦＦを、休止時の末梢血単核細胞から選別した。なぜなら、それらの特徴的な転写プロファイルが以前に決定されているからである^２１（図２７Ｃ）。エフェクターＴ細胞とナイーブ／メモリーＴ細胞運命との比較に関連する示差的に発現された遺伝子（補正Ｐ＜０．０５）は、これらのＣＡＲ構築物を区別した（図１９Ｂ）。興味深いことに、ＴＲＡＣ－１ＸＸ細胞は、ＴＲＡＣ－１９２８ｚおよびＴＲＡＣ－ＸＸ３Ｔ細胞（これらはそれぞれ、Ｔ_ＥＦＦおよびＴ_Ｎ細胞に対してより類似した）よりＴＳＣＭに対して類似性を示した（図１９Ｂ）。

Ｔ－ｂｅｔ（およびＴ－ｂｅｔ：Ｅｏｍｅｓ比）、ＰＲドメインジンクフィンガータンパク質１（ＰＲＤＭ１）、およびＤＮＡ結合タンパク質阻害剤ＩＤ－２（参考文献２２～２４）などのエフェクター分化の重要な調節因子のアップレギュレーションは、ナイーブ／メモリー関連マーカー（例えば、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、およびＩＬ７Ｒ^２１）の同時喪失と共に、１９２８ｚについて認められたエフェクター状態の急速な獲得を裏付けた（図１９Ｂならびに図２８Ｃおよび２８Ｄ）。これに対し、１ＸＸにおける調整されたシグナル伝達強度によって、Ｔ細胞分化の減速、ならびに重要なメモリー関連転写因子、例えば転写因子７（ＴＣＦ７）、Ｂ－細胞リンパ腫６タンパク質（ＢＣＬ６）、リンパ系エンハンサー結合因子１（ＬＥＦ１）、およびクルッペル様因子２（ＫＬＦ２）^{２３－２６}の発現の保存（図１９Ｂ）がもたらされ、これはＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＩＴＧＢ７、およびＳ１ＰＲ１（参考文献^{２７，２８}）などのＫＬＦ２に調節される遺伝子のアップレギュレーションにさらに反映された（図１９Ｂおよび図２８Ｄ）。１ＸＸＴ細胞のみが、より分化していないＴ細胞状態へと向かう部分的シフトを実証したが、ＸＸ３は、Ｔ細胞分化およびエフェクター機能に関するマスター転写因子をコードする遺伝子の系統的抑制と共に、高レベルのナイーブ／メモリー関連遺伝子を明らかにした（図１９Ｂ～１９Ｄ）。これらの知見は、異なるＴ細胞運命を付与するためのＩＴＡＭ投薬量および位置の重要な役割を強調する。それらは、細胞運命をシグナル伝達の強度の制御下に置くメモリー形成モデル^{２４，２９}をさらに支持する。

最近の報告は、より分化していないＴ細胞サブセットおよびメモリー特色が、養子移入したＴ細胞の抗腫瘍効力および持続の増加に関連するという考えを支持している^{３０，３１}。結果はこれらの知見を拡大して、Ｔ細胞分化状態を、ＣＡＲＴ細胞のＣＤ３ｚ鎖における変異によって内因性に制御することができることを実証する。ＣＤ２８およびＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ内で１：１の化学量論に拘束され^２、その天然の空間時間的関係とは異なる^１１。ＣＤ３ζ変異に関するこれまでの試験は、ｉｎｖｉｔｒｏでの比較^{３２－３４}に限定され、これは重要な帰結がｉｎｖｉｖｏで明らかとなったこととは対照的に主要な効果を明らかにしなかった（図１６）。ｉｎｖｉｖｏ試験は、Ｔ細胞分化とエフェクター機能の獲得のバランスを保つことが、一定のゲノム遺伝子座から発現された異なるシグナル伝達モチーフの比較に基づいてＣＡＲＴ細胞の治療効力を最適化するために必須であることを実証している（図１８および１９）。この実験の設定は、定量的なＣＡＲおよびＴＣＲ比較^１９にとって最適であると考えられた。

要約すると、１ＸＸは、メモリープログラムのシャットオフを行うことなく強いエフェクター機能を誘導し、ストレス試験条件で１９２８ζより優れていた。さらに、ＸＸ３を通してのＴ細胞活性化能の低減により、非常に持続的なＴ細胞が得られたが、エフェクター機能の誘発が不十分であったために平凡な抗腫瘍活性をもたらした。注目すべきことに、１ＸＸにおける改変ＩＴＡＭ構成は、非常に機能的なＣＡＲの持続にとって都合がよく、長命なメモリー細胞の複製能と有効な抗腫瘍機能の獲得とのバランスを保つ。１ＸＸＣＡＲ設計を利用する臨床試験の準備が進行中である。

方法
細胞株および培養条件。Ｎａｌｍ６細胞に、ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬｕｃ）－緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように形質導入し、マウス胸腺腫ＥＬ４細胞およびＮＩＨ／３Ｔ３細胞に、既に記載されたように^８，２０ヒトＣＤ１９を発現するように形質導入した。細胞を、ＭｙｃｏＡｌｅｒｔマイコプラズマ検出キット（Ｌｏｎｚａ）を使用してＭｙｃｏｐｌａｓｍａに関して定期的に検査して、陰性であることが見出された。

ヒトＴ細胞の単離および増大。匿名の健康なドナーからのバフィーコートを、ＮｅｗＹｏｒｋ血液センター（施設内倫理委員会の適用対象外）から購入し、末梢血を健康なボランティアから得た。血液試料は全て、必要な倫理および安全性手順に従って取り扱った。レトロウイルスベクターによって実施する実験では、末梢血単核細胞を密度勾配遠心分離によって単離し、フィトヘマグルチニン（２μｇｍｌ^－１）によって活性化するか、または遺伝子標的化実験では、Ｔ細胞を、汎Ｔ細胞単離キット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して精製し、既に記載されたように^１９ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔ細胞ＡｃｔｉｖａｔｏｒＤｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって刺激し、５％ヒト血清（ＧｅｍｉｎｉＢｉｏ－Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、５ｎｇｍｌ^－１インターロイキン－７（ＩＬ７）、および５ｎｇｍｌ^－１ＩＬ１５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を補充したＸ－ＶＩＶＯ１５無血清造血細胞培地（Ｌｏｎｚａ）において培養した。培地を２日毎に交換し、細胞を１０^６個の細胞／ｍｌで播種した。

一部の実験では、ナイーブ（ＴＣＲ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ９５^－）、ＴＳＣＭ（ＴＣＲ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ９５^＋）、およびＴ_ＥＦＦ細胞（ＴＣＲ^＋ＣＤ６２Ｌ^－ＣＣＲ７^－ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ９５^＋）を、フローサイトメトリーによって選別した。次に、ＣＡＲｃＤＮＡを選別したナイーブＴ細胞のＴＲＡＣ遺伝子座に標的化した後、ｉｎｖｉｔｒｏで培養し、後に記載するＴＣＲ陰性の精製を行った。遺伝子標的化を実施した７日後、Ｔ細胞をさらなる分析のために３Ｔ３－ＣＤ１９によって２４時間刺激したか、または腫瘍を有するマウスに注射した。

Ｔ細胞の遺伝子改変。ＳＦＧγレトロウイルスベクターをコードするプラスミド^３５を、既に記載されているように^２０標準的な分子生物学技術を使用して調製した。形質導入したｇｐｇ２９線維芽細胞（Ｈ２９）に由来する水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質Ｇ（ＶＳＶ－Ｇ）シュードタイプ化レトロウイルス上清を使用して、安定なレトロウイルス産生細胞株^３６を構築した。

ＳＦＧ－１９２８ζの合成は、既に記載されている^{２，２０，３７}；これは、ヒトＣＤ１９に特異的な一本鎖可変断片を含み、その前にＣＤ８ａリーダーペプチドを含み、その後にＣＤ２８ヒンジ－膜貫通細胞内領域、および切断型低親和性神経成長因子受容体（ＬＮＧＦＲ）の同時発現を誘導するためにＰ２Ａ配列に連結されたＣＤ３ζまたはＩＴＡＭ－変異／欠失ＣＤ３ζ細胞内ドメインを含む。標準的な分子生物学技術を使用して、１９２８ζ変異体を構築した。ＣＤ３ζ鎖のＩＴＡＭ内のチロシンからフェニルアラニンへの点変異を導入して、１つまたは２つの機能的ＩＴＡＭを有する１９２８ζ ＣＡＲを生成した。欠失変異の場合、膜近位ＩＴＡＭ配列（ＩＴＡＭ１）を保持するか、または膜遠位ＩＴＡＭ（ＩＴＡＭ３）配列と置換し、残りのＣＤ３ζドメインを欠失させた。Ｔ細胞活性化開始の４８時間後、Ｔ細胞に、既に記載されているように、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎコーティングプレート（Ｔａｋａｒａ）上での遠心分離によってレトロウイルス上清を形質導入した。形質導入効率を４日後にフローサイトメトリーによって決定し、ＣＡＲを、腫瘍を有するマウスに注射したか、またはｉｎｖｉｔｒｏ実験のために使用した。

遺伝子標的化実験は、既に記載されているように^１９実施した。簡単に説明すると、ＴＲＡ遺伝子^１９の定常鎖の第１のエクソンを標的とする改変ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）およびＣａｓ９メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を、ＴｒｉＬｉｎｋＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓが合成した。ｐＡＡＶ－ＴＲＡＣ－１９２８ζは、ｐＡＡＶ－ＧＦＰ骨格（ＣｅｌｌＢｉｏｌａｂｓ）に基づいてクローニングした。ｐＡＡＶ－ＴＲＡＣ－１９２８ζは、先に記載したように、ｇＲＮＡ標的化配列に隣接する１．９ｋｂのゲノムＴＲＡＣ、ＴＲＡＣの第１のエクソンとインフレームの自己切断Ｐ２Ａペプチド、その後に１９２８ζまたは１９２８ζ変異体ＣＡＲを含有する。ＣＡＲｃＤＮＡの後にウシ成長ホルモンポリＡシグナルが続く。

ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを、Ｔ細胞活性化の開始の４８時間後に磁気によって除去した。Ｔ細胞を、ＡｇｉｌｅＰｕｌｓｅＭＡＸシステム（ＢＴＸ）を使用してＣａｓ９ｍＲＮＡおよびｇＲＮＡのエレクトロトランスファーによってトランスフェクトし、組換えＡＡＶ６ドナーベクター（ＳｉｇｎａＧｅｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）を、既に記載されたように^１９、電気穿孔後培養物に添加した。ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を得るために、ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を、磁気ビオチン抗ＴＣＲαβ、抗ビオチンマイクロビーズ、およびＬＳカラム（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して培養物から除去した。

細胞傷害アッセイ。ＣＡＲを形質導入したＴ細胞の細胞傷害を、標準的な^５１Ｃｒ放出アッセイおよびルシフェラーゼに基づくアッセイによって決定した。^５１Ｃｒ放出アッセイの場合、ＣＤ１９を発現するＥＬ４を既に記載されたように^３８標的細胞として使用した。ルシフェラーゼに基づくアッセイの場合、ＦＦＬｕｃ－ＧＦＰを発現するＮａｌｍ６を標的細胞とした。エフェクターおよび腫瘍標的細胞を、黒色壁の９６ウェルプレートを使用して、Ｎａｌｍ６培地中に全体積１００μｌ／ウェルで５×１０^４個の標的細胞によって、表記のエフェクター／標的比で、３連で同時培養した。標的細胞のみを、同じ細胞密度で播種し、最大ルシフェラーゼ発現（相対光単位（ＲＬＵ））を決定した；１８時間後、１００μｌのルシフェラーゼ基質（Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ；Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに直接添加した。発光を、発光プレートリーダーにおいて検出した。溶解は、（１－（ＲＬＵｓａｍｐｌｅ）／（ＲＬＵｍａｘ））×１００として決定した。

抗原刺激および増殖アッセイ。形質導入の４日後、ＣＡＲＴ細胞を、放射線照射コンフルエントＣＤ１９^＋ＮＩＨ／３Ｔ３と共に１０^６個のＣＡＲ^＋細胞／ｍｌで２４ウェル組織培養プレートにおいて同時培養した。新しい培地での同一の刺激を毎週実施した。総細胞を計数し、ＣＡＲ発現をフローサイトメトリーによって毎週決定した。次に、ＣＡＲＴ細胞を同じ条件下で再度刺激した。

マウス全身腫瘍モデル。６～１２週齢のＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ－２Ｒγヌル雄性マウス（ＴｈｅＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）を、ＭｅｍｏｒｉａｌＳｌｏａｎＫｅｔｔｅｒｉｎｇＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅｒ（ＭＳＫＣＣ）施設内動物飼育使用委員会によって承認されたプロトコールの下で使用した。全ての関連する動物使用ガイドラインおよび倫理規制に従った。マウスに、０．５×１０^６個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰＮＡＬＭ６細胞を尾静脈注射によって接種した後、５×１０^４個、１×１０^５個、または５×１０^５個のＣＡＲＴ細胞を４日後に注射した。腫瘍再チャレンジ実験を、表記の時点で７～１０日間隔で０．５×１０^６個、１×１０^６個、または２×１０^６個のＦＦＬｕｃ－ＧＦＰＮａｌｍ６細胞の静脈内投与によって実施した。Ｎａｌｍ６は、非常に均一な腫瘍負荷を生じ、処置前に除外したマウスはなかった。無作為化も盲検法も使用しなかった。生物発光イメージングを、ＩＶＩＳイメージングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して実施し、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を、イメージングデータセットを獲得するために使用した。腫瘍負荷を、既に記載されたように^３９評価した。

ＲＮＡ抽出、トランスクリプトームシーケンシングおよびＲＮＡ－ｓｅｑ分析。選別したナイーブＴ細胞の遺伝子標的化を実施した７日後に、ＴＲＡＣ－１９２８ζ、ＴＲＡＣ－ＸＸ３、およびＴＲＡＣ－１ＸＸを、放射線照射３Ｔ３－ＣＤ１９によって２４時間刺激した後、ＣＤ８^＋細胞の磁気選択（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を行った。洗浄したＴ細胞を、２５０μｌのＰＢＳに再懸濁させ、７５０μｌのＴＲＩｚｏｌＬＳ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中に入れた。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、製造元によって提供された指示に従って抽出した。ＡｇｉｌｅｎｔＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用するＲｉｂｏＧｒｅｅｎＲＮＡの定量および品質管理の後、５００ｎｇの総ＲＮＡにポリＡ選択を行い、ＴｒｕＳｅｑＲＮＡライブラリーを、製造元（ＴｒｕＳｅｑＳｔｒａｎｄｅｄｍＲＮＡＬＴＫｉｔ；Ｉｌｌｕｍｉｎａ）によって提供された指示に従って８サイクルのＰＣＲを行って調製した。試料を、バーコード化し、ＨｉＳｅｑ４０００（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）においてＨｉＳｅｑ３０００／４０００ＳＢＳＫｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して５０塩基対（ｂｐ）／５０ｂｐペアエンドランで実行した、試料あたり、平均で３０６０万個のペアリードを生成した。最大で、リボソームリードは、生成した総リードの４．６９％を表し；ｍＲＮＡ塩基のパーセンテージは平均６９．３％であった。

出力ＦＡＳＴＱデータを、ＳＴＡＲＲＮＡ－ｓｅｑアライナー（バージョン２．５．０ａ；２パス法）^４０を使用して標的ゲノムにマッピングし、スプライス接合部を超えてリードを分析した。第１のマッピングパスは、Ｅｎｓｅｍｂｌｅ（https://www.ensembl.org/index.html）からの公知のアノテーションされた接合部のリストを使用する。次に、第１のパスの間に見出された接合部を公知の接合部に添加して、第２のマッピングパスを、ＲｅｍｏｖｅＮｏｎｃａｎｏｎｉｃａｌｆｌａｇを使用して実行する。マッピング後、出力ＳＡＭファイル（ＳＡＭｔｏｏｌｓ、バージョン０．１．１９）を、ＰＩＣＡＲＤツール（バージョン１．１２４；https://broadinstitute.github.io/picard/）を使用して処理し、リード群およびＡｄｄＯｒＲｅｐｌａｃｅＲｅａｄＧｒｏｕｐｓを追加し、これはさらにファイルを選別して、圧縮したＢＡＭフォーマットに変換する。次に、発現計数行列を、ＨＴＳｅｑ（バージョン０．５．３；https://htseq.readthedocs.io/en/release_0.10.0/）およびいくつかの可能性がある遺伝子モデルデータベースの１つを使用してマッピングしたリードから計算した。Ｒ（バージョン３．２．０）パッケージＤＥＳｅｑ（https://www.huber.embl.de/users/anders/DESeq/）を使用して、完全なデータセットを正規化し、かつ試料群の間の示差発現を解析した。

Ｔ細胞サブセット（Ｔ_Ｎ、Ｔ_ＣＭ、Ｔ_ＳＣＭ、Ｔ_ＥＦＦ細胞）間の示差的に発現された遺伝子を、Gattinoni et al.^２１から検索した。ＧＳＥＡを、ＢｒｏａｄＩｎｓｔｉｔｕｔｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｉｇｎａｔｕｒｅＤａｔａｂａｓｅ（http://www.broadinstitute.org/gsea/msigdb/）からの精選経路遺伝子セットについてｌｏｇ_２（変化倍率）を使用して生成した予めランク付けしたファイルを使用して実施した。実証された遺伝子シグネチャーは、免疫学的シグネチャーＣ７、Ｒｅａｃｔｏｍｅ、ＫＥＧＧおよび遺伝子オントロジー（ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓ）遺伝子セットに由来する。ＧＳＥ４１８６７を、消耗ＣＤ８Ｔ細胞とナイーブ／メモリーＣＤ８Ｔ細胞との比較のＧＳＥＡのために使用し、メモリーおよびナイーブ細胞と比較して、消耗したＣＤ８Ｔ細胞（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス感染後３０日目）においてアップレギュレートされた２００個の遺伝子のシグネチャーを精選した。実験条件の間で、補正Ｐ値＜０．０５および絶対ｌｏｇ_２（変化倍率）＞１によって示差的に発現されたと同定された遺伝子を、ＲｐａｃｋａｇｅｅｎｒｉｃｈＲ（http://amp.pharm.mssm.edu/Enrichr/）を使用する遺伝子オントロジー解析のために使用した。

抗体および細胞内染色。以下のフルオロフォアコンジュゲート抗体を使用した。ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから：ＡＰＣ－Ｃｙ７マウス抗ヒトＣＤ８；ＡＰＣ－Ｃｙ７マウス抗ヒトＣＤ４５；ＢＵＶ３９５マウス抗ヒトＣＤ４；ＰＥマウス抗ヒトＣＤ４；ＢＢ５１５マウス抗ヒトＣＤ４；ＢＶ４２１マウス抗ヒトＣＤ６２Ｌ；ＢＶ６５０マウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡ；ＢＶ４２１マウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡ；ＢＶ４８０マウス抗ヒトＣＤ２７９（ＰＤ－１）；ＢＶ６５０マウス抗ヒトＣＤ２７９（ＰＤ－１）；ＢＵＶ７３７マウス抗ヒトＣＤ１９；ＢＶ４２１マウス抗ヒトＴＩＭ３（ＣＤ３６６）；ＢＢ５１５マウス抗ヒトＣＤ９５；ＡＰＣ－Ｈ７マウス抗ヒトＣＤ２７；ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２７１（ＬＮＧＦＲ）。ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから：ＡＰＣ抗ヒトＣＤ８ａ；ＡＰＣ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ６２Ｌ；ＦＩＴＣ抗ヒトＣＤ４５ＲＡ；ＢｒｉｌｌｉａｎＶｉｏｌｅｔ７８５抗ヒトＣＤ３６６（Ｔｉｍ－３）；ＰＥ抗ヒトＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒα）；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８抗ヒトＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒα）；ＰｅｒＣＰ／Ｃｙａｎｉｎｅ５．５抗ヒトＣＤ１９７（ＣＣＲ７）；ＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ６５０抗ヒトＣＤ２８。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから：ＣＤ８ａモノクローナル抗体（ＲＰＡ－Ｔ８）、ＰＥ－Ｃｙａｎｉｎｅ７；ＣＤ２２３（ＬＡＧ－３）モノクローナル抗体（３ＤＳ２２３Ｈ）ＰｅｒＣＰ－ｅＦｌｕｏｒ７１０；ＣＤ２２３（ＬＡＧ－３）モノクローナル抗体（３ＤＳ２２３Ｈ）、ＡＰＣ；ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴＣＲアルファ／ベータモノクローナル抗体（ＩＰ２６）、ＰＥ－Ｃｙａｎｉｎｅ７。ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃから：ヒトモノクローナル抗ＴＣＲα／β－ＰＥ。７－ＡＡＤ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＬＩＶＥ／ＤＥＡＤＦｉｘａｂｌｅＶｉｏｌｅｔ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を生存度色素として使用した。

ＣＡＲ染色に関して、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅＦ（ａｂ’）_２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）_２断片特異的抗体を使用した（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）。細胞計数に関して、ＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔＡｂｓｏｌｕｔｅＣｏｕｎｔｉｎｇＢｅａｄを、製造元（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の指示に従って添加した。ｉｎｖｉｖｏ実験の場合、Ｆｃ受容体を、ＦｃＲブロッキング試薬、マウス（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用してブロックした。

細胞内サイトカイン分泌アッセイに関して、Ｔ細胞を、ＧｏｌｇｉＰｌｕｇタンパク質輸送阻害剤（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で３Ｔ３－ＣＤ１９またはＮａｌｍ６と共に最後の４時間同時培養した。ＣＤ１０７ａ染色の場合、ＢｒｉｌｌｉａｎｔＶｉｏｌｅｔ６５０抗ヒトＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ－１）抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を同時培養物に添加した。ｅｘｖｉｖｏサイトカイン分析の場合、ＣＡＲＴ細胞を、処置したマウスの骨髄および脾臓から得て、マウス細胞枯渇キット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して精製した。試料を生物学的に３連（ｄ１６）で処理するか、またはプールして（１９２８ζ処置マウスにおける低い細胞計数のため）技術的に３連（ｄ３６）で実施した。ホルボルミリステートアセテート（ＰＭＡ）／イオノマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による刺激を、陽性対照として実施した。その後、Ｔ細胞を洗浄し、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ固定／透過処理溶液キット（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して製造元の指示に従って細胞表面マーカーに関して染色し、固定して、透過処理した。細胞内サイトカイン染色は、ＢＶ４２１ラット抗ヒトＩＬ２、ＢＶ６５０マウス抗ヒトＴＮＦ、ＢＵＶ３９５マウス抗ヒトＴＮＦ、ＢＵＶ３９５マウス抗ヒトＩＦＮ－γ、またはＦＩＴＣマウス抗ヒトＩＦＮ－γ（全て、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、およびＡＰＣまたはＰＥグランザイムＢモノクローナル抗体（ＧＢ１２、いずれもＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって実施した。

フローサイトメトリーは、ＬＳＲＩＩまたはＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ機器（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で実施し、ＦＡＣＳＡｒｉａソーター（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を細胞選別のために使用した。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアｖ．１０．１（ＦｌｏｗＪｏＬＬＣ）によって分析した。

統計分析。全ての統計分析は、Ｐｒｉｓｍ７（ＧｒａｐｈＰａｄ）ソフトウェアを使用して実施した。試料サイズを予め決定するために統計学的方法を使用しなかった。２つの群の間の統計学的比較は、対応のないデータに関して両側のパラメトリックもしくはノンパラメトリック（マン－ホイットニーＵ検定）ｔ検定、またはマッチした試料に関して両側の対応のあるスチューデントのｔ検定によって決定した。ｉｎｖｉｖｏ実験の場合、全生存を、カプラン－マイヤー曲線によって表し、ログランク検定を使用して群の間の生存の差を比較した。Ｐ値＜０．０５は、統計学的に有意であると考えられた。各々の図で使用した統計検定を、対応する図の説明文に説明する。

要約書の報告。研究設計に関するさらなる情報は、この論文にリンクされたＮａｔｕｒｅＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏｒｔｉｎｇＳｕｍｍａｒｙにおいて利用可能である。

データの利用可能性
ＲＮＡ－ｓｅｑデータは、ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＯｍｎｉｂｕｓに寄託されており、受託番号ＧＳＥ１２１２２６によって利用可能である。原稿における図面の生データは、対応する著者に要請することによって利用可能である。

本開示の主題の実施形態
前述の説明から、本開示の主題に、様々な使用および条件にそれを採用するために、変形および改変を行ってもよいことは明らかである。そのような実施形態もまた、以下の特許請求の範囲内である。

本明細書の変数の任意の定義における要素の一覧の列挙は、任意の単一の要素としてのまたは記載の要素の組合せ（または小組合せ）としてのその変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態としてのまたは他の任意の実施形態もしくはその一部との組合せとしてのその実施形態を含む。

本明細書において言及した全ての特許および刊行物は、各々の独立した特許および刊行物が参照により本明細書に組み込まれることが具体的に個々に示されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれている。

Claims

ａ）被験体における腫瘍負荷を低減させる、ｂ）被験体における腫瘍を処置および／または予防する、あるいはｃ）腫瘍の再発を有する被験体を処置することにおける使用のための、免疫応答性細胞を含む組成物またはそれを含む医薬組成物であって、前記免疫応答性細胞が、
細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ／スペーサー領域、膜貫通ドメイン、および改変ＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが、１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ２バリアントおよび１つまたは複数の機能喪失型変異を含むＩＴＡＭ３バリアントを含み、
（ａ）前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ２８ポリペプチドを含む；
（ｂ）前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ１６６ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ１６６ポリペプチドを含む；
（ｃ）前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ８αポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＣＤ８αポリペプチドを含む；または
（ｄ）前記ヒンジ／スペーサー領域がＣＤ２８ポリペプチドを含み、前記膜貫通ドメインがＩＣＯＳポリペプチドを含む、組成物。
前記ＩＴＡＭ２バリアントおよび前記ＩＴＡＭ３バリアントがともに、２つの機能喪失型変異を含む、請求項１に記載の使用のための組成物。
前記機能喪失型変異がともに、チロシンアミノ酸残基におけるものである、請求項２に記載の使用のための組成物。
前記ＩＴＡＭ２バリアントが配列番号２９に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記ＩＴＡＭ３バリアントが配列番号３３に記載のアミノ酸配列からなる、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記改変ＣＤ３ζポリペプチドが配列番号４３のアミノ酸３７４～４８５を含むまたはからなる、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記膜貫通ドメインがＣＤ１６６ポリペプチドを含み、前記ＣＡＲがさらに、ＣＤ１６６ポリペプチドを含むヒンジ／スペーサー領域を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
ａ）前記膜貫通ドメインが配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含む；または
ｂ）前記ＣＡＲが配列番号３のアミノ酸４８９～５５３を含む、
請求項７に記載の使用のための組成物。
前記細胞内シグナル伝達ドメインがさらに、共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ２８ポリペプチドを含む、請求項９に記載の使用のための組成物。
前記細胞外抗原結合ドメインが抗原に結合する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記抗原が、ＣＤ１９、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＣＡＩＸ、ＣＥＡ、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥｐＣＡＭ、ｅｒｂ－Ｂ２、ｅｒｂ－Ｂ３、ｅｒｂ－Ｂ４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン受容体、葉酸受容体－ａ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ－２、ｈＴＥＲＴ、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、Ｋ－軽鎖、ＫＤＲ、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、ＭＡＧＥ－Ａ１、メソテリン、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、がん胎児抗原（ｈ５Ｔ４）、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＴＡＧ－７２、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＷＴ－１、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＣＣＲ４、ＣＤ５、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＩＭ－３、インテグリンＢ７、ＩＣＡＭ－１、ＣＤ７０、Ｔｉｍ３、ＣＬＥＣ１２ＡおよびＥＲＢＢから選択される腫瘍抗原である、請求項１１に記載の使用のための組成物。
ａ）前記細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄性細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る多能性幹細胞、からなる群より選択される；
ｂ）前記細胞が、Ｔ細胞である；
ｃ）前記細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞から選択されるＴ細胞である；
ｄ）前記細胞が、ヒト多能性幹細胞である；または
ｅ）前記細胞が、ヒト胚性幹細胞である、
請求項１から１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
第２の抗原に結合する第２の細胞外抗原結合ドメイン、第２の膜貫通ドメイン、および第２の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをさらに含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
第３の抗原に結合する第３の細胞外抗原結合ドメイン、第３の膜貫通ドメイン、および第３の細胞内シグナル伝達ドメインを含む第３のＣＡＲをさらに含む、請求項１４に記載の使用のための組成物。
ａ）前記第２の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含む；および／または
ｂ）前記第３の細胞内シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ２バリアントおよびＩＴＡＭ３バリアントを含む、
請求項１４または１５に記載の使用のための組成物。
前記被験体が、残留腫瘍細胞をもたらす処置を受けたか、または、前記被験体が、４－１ＢＢ共刺激シグナルを含む抗原認識受容体を含む免疫応答性細胞を受けた、請求項１から１６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
前記腫瘍が、血液がん、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、および卵巣がんから選択される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
ａ）前記ＣＡＲがＣＤ１９に結合し、前記腫瘍が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫である；
ｂ）前記ＣＡＲがＣＤ１９に結合し、前記腫瘍がＣＤ１９^＋ＡＬＬである；
ｃ）前記ＣＡＲがＣＤ１９に結合し、前記腫瘍が、腫瘍細胞の表面上に低密度の腫瘍特異的抗原を有する腫瘍細胞を含む；または
ｄ）前記ＣＡＲがＢＣＭＡ、ＡＤＧＲＥ２、ＭＳＬＮ、ＰＳＭＡまたはその組合せに結合し、前記腫瘍が、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫である、
請求項１８に記載の使用のための組成物。