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JP2024533865A - 環状脂質及びその使用方法 - Google Patents

環状脂質及びその使用方法 Download PDF

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JP2024533865A
JP2024533865A JP2024540672A JP2024540672A JP2024533865A JP 2024533865 A JP2024533865 A JP 2024533865A JP 2024540672 A JP2024540672 A JP 2024540672A JP 2024540672 A JP2024540672 A JP 2024540672A JP 2024533865 A JP2024533865 A JP 2024533865A
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ムスサミー ジャヤラマン，
スティーブン スカリー，
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Abstract

本開示は、感染性物質に対して免疫する際に使用するための核酸配列、ポリペプチドまたはペプチドの送達のための最適化システム及び送達ビヒクルの様々な脂質、組成物、及び／または方法を詳述する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月１４日に出願された米国仮特許出願番号６３／２４４，１４６；２０２１年１２月２３日に出願された６３／２９３，２８６；及び２０２２年４月２８日に出願された６３／３３６，００８（これらの各々の内容は、本明細書によってそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）の利益、及び優先権を主張する。
本開示は、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチドの送達のための最適化システムならびに疾患、障害及び／または病態の処置のためのこれらの最適化システムの使用方法に関する。
タンパク質は治療剤のための標準となっているが、多様な疾患及び治療適応症のための治療的モダリティとしての核酸の使用が過去数年にわたって注目を集めている。様々な企業は、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、環状ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＡＳＯ等）がタンパク質ベースの療法と比較してより有効であり得ることを示しているが、治療剤が標的とされる細胞、組織、または器官に局在化されることを確保するために核酸及びタンパク質治療剤の両方のための標的化送達システムが必要とされている。
脂質ナノ粒子等の脂質ベースの送達システムを含む現在の送達システムは、送達されるカーゴを保護することに焦点を置いているが、送達システムのために使用される脂質には焦点を置いておらず、しばしば、カーゴまたは送達システムの局所化送達に焦点を置いていない。改善された脂質ベースの送達システムのニーズが当該技術分野において存在する。
本開示は、送達システムの送達ビヒクルにおいて使用され得る新たな脂質及び例えば、免疫細胞への、核酸及びタンパク質治療剤の局在化送達のための標的化システムをスクリーニングし、開発するための指向性発見プラットフォームを提供する。
本開示の態様では、本明細書では、式（ＣＹ）、（ＣＹ－Ｉ）～（ＣＹ－ＩＸ）のいずれかの１つを有する脂質、もしくはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、もしくは表（Ｉ）における任意の脂質、またはその塩もしくは溶媒和物（以下を参照されたい）（まとめて「本開示の脂質（Ｌｉｐｉｄｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）」と称され、各々は個々に「本開示の脂質（Ｌｉｐｉｄ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅ）」と称される）が提供される。
本開示の態様では、本明細書では、薬学的組成物であって、
ａ）対象となる少なくとも１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び
ｂ）少なくとも１つの脂質を含む送達ビヒクル
を含み、組成物は、対象における免疫反応を誘発させる、薬学的組成物が提供される。
一態様では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである。
一態様では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである。
一態様では、ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。
一態様では、ｓｉＲＮＡは、細胞における対象となる標的の発現を阻害または抑制する。
一態様では、阻害または抑制は、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％及び１００％、または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、９０～９５％、９０～１００％または９５～１００％である。
一態様では、ポリヌクレオチドは、実質的に環状である。
一態様では、ポリヌクレオチドは、ペイロード配列領域に機能可能に連結された内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む。
一態様では、ＩＲＥＳ配列は、ピコルナウイルス相補的ＤＮＡ、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）相補的ＤＮＡ、ポリオウイルス相補的ＤＮＡ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからのアンテナペディア遺伝子に由来する配列を含む。
一態様では、ポリヌクレオチドは、終結要素を含み、終結要素は、少なくとも１つの終止コドンを含む。
一態様では、ポリヌクレオチドは、制御性要素を含む。
一態様では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのマスキング剤を含む。
一態様では、実質的に環状のポリヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写を使用して生成される。
一態様では、ペイロード配列領域は、非コード核酸配列を含む。
一態様では、ペイロード配列領域は、コード核酸配列を含む。
一態様では、コード核酸配列は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、エンテロトキシンＢのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ノーウォークウイルスまたはノロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ロタウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、カンジダ酵母のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、コロナウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、エンテロウイルス７１のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、エプスタイン・バーウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、グラム陰性菌のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、グラム陰性菌は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａである。一態様では、コード核酸配列は、グラム陽性菌のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、グラム陽性菌は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉである。一態様では、グラム陽性菌は、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓである。一態様では、グラム陽性菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌である。一態様では、グラム陽性菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌である。一態様では、コード核酸配列は、肝炎のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ヒトサイトメガロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ヒト免疫不全ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ヒトパピローマウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、インフルエンザのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ジョンカニンガムウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ポックスウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、呼吸器合胞体ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、風疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、水痘帯状疱疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、チクングンヤウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、デングウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、狂犬病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、エボラウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、マールブルグウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、日本脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、セントルイス脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ウエストナイルウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、黄熱病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、ボツリヌス毒素のための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、リシンのための対象となるタンパク質をコードする。一態様では、コード核酸配列は、志賀毒素及び／または志賀様毒素のための対象となるタンパク質をコードする。
一態様では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む。
一態様では、塩基の少なくとも２０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも３０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも４０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも５０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも６０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも７０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも８０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも９０％が修飾されている。一態様では、塩基の少なくとも１００％が修飾されている。一態様では、特定の塩基は、少なくとも１つの修飾を含む。
一態様では、塩基は、アデニンである。一態様では、アデニン塩基の少なくとも２０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも３０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも４０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも５０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも６０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも７０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも８０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも９０％が修飾されている。一態様では、アデニン塩基の少なくとも１００％が修飾されている。
一態様では、塩基は、グアニンである。一態様では、グアニン塩基の少なくとも２０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも３０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも４０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも５０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも６０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも７０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも８０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも９０％が修飾されている。一態様では、グアニン塩基の少なくとも１００％が修飾されている。
一態様では、塩基は、シトシンである。一態様では、シトシン塩基の少なくとも２０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも３０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも４０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも５０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも６０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも７０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも８０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも９０％が修飾されている。一態様では、シトシン塩基の少なくとも１００％が修飾されている。
一態様では、塩基は、ウラシルである。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも２０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも３０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも４０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも５０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも６０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも７０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも８０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも９０％が修飾されている。一態様では、ウラシル塩基の少なくとも１００％が修飾されている。
一態様では、少なくとも１つの修飾は、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオウリジン、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシウリジン、３－メチルウリジン、５－カルボキシメチル－ウリジン、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチルウリジン、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン、１－タウリノメチル－４－チオ－ウリジン、５－メチル－ウリジン、１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、及び４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、５－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン、Ｎ４－アセチルシチジン、５－ホルミルシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、及び４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチルアデノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン、７－メチルアデニン、２－メチルチオ－アデニン、及び２－メトキシ－アデニン、イノシン、１－メチル－イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７－デアザ－グアノシン、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチルイノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチルグアノシン、Ｎ２－メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、またはＮ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシンである。
一態様では、薬学的組成物は、表（Ｉ）における任意の脂質、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－Ｖ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＶＩ）の構造を有する任意の脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのカチオン性脂質を含む。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ１、ＣＹ２、ＣＹ３、ＣＹ９、ＣＹ１０、ＣＹ１１、ＣＹ１２、ＣＹ２２、ＣＹ２３、ＣＹ２４、ＣＹ３０、ＣＹ３１、ＣＹ３２、ＣＹ３３、ＣＹ４３、ＣＹ４４、ＣＹ４５、ＣＹ５０、ＣＹ５１、ＣＹ５２、及びＣＹ５３からなる群から選択される。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ４、ＣＹ５、ＣＹ１６、ＣＹ１７、ＣＹ１８、ＣＹ２５、ＣＹ２６、ＣＹ３７、ＣＹ３８、ＣＹ３９、ＣＹ４６、ＣＹ５６、及びＣＹ５７からなる群から選択される。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ６、ＣＹ１４、ＣＹ２７、ＣＹ３５、ＣＹ４７、及びＣＹ５５からなる群から選択される。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ７、ＣＹ８、ＣＹ１９、ＣＹ２０、ＣＹ２１、ＣＹ２８、ＣＹ２９、ＣＹ４０、ＣＹ４１、ＣＹ４２、ＣＹ４８、ＣＹ４９、ＣＹ５８、ＣＹ５９、及びＣＹ６０からなる群から選択される。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－Ｖ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ）の構造を有する任意の脂質である。
一態様では、薬学的組成物は、追加のカチオン性脂質を含む。
一態様では、薬学的組成物は、中性脂質を含む。
一態様では、薬学的組成物は、アニオン性脂質を含む。
一態様では、薬学的組成物は、ヘルパー脂質を含む。
一態様では、薬学的組成物は、ステルス脂質を含む。
一態様では、脂質及びポリヌクレオチドの重量比は、約１００：１～約１：１である。
一態様では、薬学的組成物は、それを必要とする対象における免疫細胞にカーゴまたはペイロードを送達する。免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＴ制御性細胞であり得る。免疫細胞はまた、例えば、マクロファージまたは樹状細胞であり得る。
一態様では、ワクチン製剤は、薬学的組成物を含む。
一態様では、ワクチンは、式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれかを用いて調製される。
一態様では、本明細書では、感染性物質に対して対象を免疫する方法であって、対象をワクチン製剤または調製物と接触させること及び免疫反応を誘発させることを含む、方法が提供される。
一態様では、感染性物質は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、エンテロトキシンＢ、ノーウォークウイルスまたはノロウイルス、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、ロタウイルス、カンジダ酵母、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＭＥＲＳ－ＣｏＶを含むコロナウイルス、エンテロウイルス７１、エプスタイン・バーウイルス、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａを含むグラム陰性菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌を含むグラム陽性菌、及び肝炎、ヒトサイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、ジョンカニンガムウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ポックスウイルス、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、チクングンヤウイルス、デングウイルス、狂犬病ウイルス、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病、エボラウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、黄熱病ウイルス、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、ボツリヌス毒素、リシン、または志賀毒素及び／または志賀様毒素である。
一態様では、接触させることは、経腸（腸内に）、胃腸、硬膜周囲（硬膜内に）、経口（口経由で）、経皮、脳内（大脳内に）、脳室内（脳室内に）、皮膚上（皮膚への塗布）、皮内（皮膚自体の中に）、皮下（皮膚の下に）、鼻腔内投与（経鼻で）、静脈内（静脈の中に）、静脈内ボーラス、点滴静注、動脈内（動脈の中に）、筋肉内（筋肉の中に）、心臓内（心臓の中に）、骨内注入（骨髄の中に）、髄腔内（脊柱管の中に）、実質内（脳組織の中に）、腹腔内（腹腔の中への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内（経眼で）、海綿体内注入（病的腔の中に）、腔内（陰茎の基部の中に）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布用のインタクトな皮膚を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、経膣、吹送法（吸引）、舌下、唇下、浣腸、点眼（結膜の上に）、点耳、耳介（耳の中または耳を介して）、頬側（頬に向けて）、結膜、皮膚、歯科的（歯（複数可）に）、電気浸透、子宮頸管内、洞内、気管内、体外、血液透析、浸透、間質内、腹腔内、羊膜内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内（軟骨の中に）、尾内（馬尾の中に）、大槽内（小脳延髄大槽の中に）、角膜内（角膜の中に）、歯冠内、冠動脈内（冠動脈の中に）、海綿体内（陰茎の海綿体の拡張可能な空間の中に）、椎間板内（椎間板の中に）、管内（腺管の中に）、十二指腸内（十二指腸の中に）、硬膜内（硬膜の中または下に）、表皮内（表皮に）、食道内（食道に）、胃内（胃の中に）、歯肉内（歯肉の中に）、回腸内（小腸の遠位部分の中に）、病巣内（局在化病巣の中にまたはそれに直接導入される）、管腔内（管の内腔内）、リンパ内（リンパの中に）、髄内（骨の骨髄腔の中に）、髄膜内（髄膜の中に）、心筋内（心筋の中に）、眼内（眼の中に）、卵巣内（卵巣の中に）、心膜内（心膜の中に）、胸膜内（胸膜の中に）、前立腺内（前立腺の中に）、肺内（肺またはその気管支の中に）、洞内（鼻または眼窩周囲の洞の中に）、髄腔内（脊柱の中に）、関節滑液嚢内（関節の滑液腔の中に）、腱内（腱の中に）、精巣内（精巣の中に）、くも膜下腔内（任意レベルの脳脊髄軸の脳脊髄液の中に）、胸腔内（胸部の中に）、管内（器官の細管の中に）、腫瘍内（腫瘍の中に）、鼓室内（中耳の中に）、血管内（血管（複数可）の中に）、脳室内（脳室の中に）、イオントフォレシス（可溶性塩のイオンを身体組織に移動させる電流による）、潅注（傷口または体腔を浸し、または洗い流すこと）、喉頭（喉頭に直接）、経鼻胃（鼻から胃の中に）、密封包帯技術（局所経路投与後、領域を閉塞する包帯によって覆う）、眼（外眼部へ）、口腔咽頭（口腔及び咽頭に直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局在的または全身的効果のための経口または経鼻吸入によって気道の中に）、眼球後方（脳橋の背後または眼球の背後）、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤（胎盤を介してまたは通過して）、経気管（気管の壁を介して）、経鼓膜（鼓室を通過してまたは介して）、尿管（尿管に）、尿道（尿道に）、膣、仙骨麻酔、診断、神経ブロック、胆汁灌流、心臓灌流、フォトフェレーシス、または脊髄である。
本開示の指向性発見プラットフォームの１つの実施形態を図示するダイアグラムである。 線状または環状であり得る本開示のオリジネーターポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 少なくとも１つのバーコード領域（ＢＣ）及び／または逆バーコード領域（ＣＢ）及びペイロード領域（Ｐ）を含み得る本開示の一連のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 同上。 バーコード領域（ＢＣ）または逆バーコード領域（ＣＢ）がペイロード領域（Ｐ）と重複し得る本開示の一連のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 少なくとも１つのタグ及び／または標識を含み得る本開示の一連のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 同上。 少なくとも１つのバーコード領域（ＢＣ）及び／または逆バーコード領域（ＣＢ）及びペイロード領域（Ｐ）を含み得る本開示の一連の環状ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 同上。 同上。 バーコード領域（ＢＣ）または逆バーコード領域（ＣＢ）がペイロード領域（Ｐ）と重複し得る本開示の一連の環状ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 少なくとも１つのタグ及び／または標識を含み得る本開示の一連の環状ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを図示するダイアグラムである。 同上。 本開示の一連の送達ビヒクルを図示するダイアグラムである。
Ｉ．指向性送達システムの序論
核酸療法は、従来の療法と比較した場合に多用途性、より低い免疫反応及びより高い効力を考慮すると、様々な疾患及び治療的適応症を処置する有力な方法として知られるようになっている。例えば、核酸療法には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳を低減するための低分子干渉（ｓｉＲＮＡ）、対象となる標的を生成するための方法としてのｍＲＮＡ、ポリペプチドまたはペプチドの継続的生成を提供し得る、または他のＲＮＡ分子と競合するためのスポンジであり得る環状ＲＮＡ（ｏＲＮＡ）、及び対象となる標的の継続的生成を提供するためのウイルスベクターの使用が含まれる。しかしながら、いくつかの核酸は、不安定であり、容易に分解するので、分解を防止するために及び核酸の細胞内送達を補助するために製剤化される必要がある。
脂質ナノ粒子及びリポソーム等の脂質ベースの送達ビヒクルを含む現在の送達ビヒクルは、カーゴを保護することに焦点を置いているが、ｉｎ ｖｉｖｏでの特定の領域へのカーゴまたは送達ビヒクルの送達を局在化することに注意を向けていない。
本明細書では、特定の標的領域、細胞または組織への局在化送達ための標的化システムを評価するための指向性発見プラットフォームが提供される。図１に示されているように、指向性発見プラットフォームは、ライブラリにおける標的化システムの指向性またはシグネチャプロファイルを決定するために脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）ライブラリ及び／またはＡＡＶのライブラリを評価するために使用され得る。ライブラリは、対象（例えば、非ヒト霊長類、ウサギ、マウス、ラットまたは別の哺乳動物）に投与され、対象の器官及び組織は、スキャン及び／または採取され、分析されて、ライブラリにおけるＬＮＰまたはＡＡＶに含有されるまたは関連付けられた識別子（例えば、バーコード、標識、シグナル及び／またはタグ）の位置が決定され得る。この分析は、ライブラリにおける各ＬＮＰ及びＡＡＶの指向性シグネチャまたはプロファイルを提供する。
オリジネーターコンストラクト構造
指向性発見プラットフォームの標的化システムには、カーゴまたはペイロードをコードするまたは含むオリジネーターコンストラクトが含まれ得る。線状または環状であり得るオリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００の例が図２に提供される。オリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００には、対象となるペイロードまたはカーゴであり、またはそれをコードする少なくとも１つのペイロード領域１０が含まれ得る。オリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００は、１または２つの隣接領域２０を含有し得、隣接領域２０は、ペイロード領域１０に対して５’またはペイロード領域１０に対して３’に位置し得る。いくつかの例では、オリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００は、隣接領域２０を含有しない。オリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００の隣接領域２０には、少なくとも１つの制御性領域３０が含まれ得る。オリジネーターポリヌクレオチドコンストラクト１００の少なくとも１つの隣接領域２０には、少なくとも１つの識別子領域４０が含まれ得る。識別子領域４０は、バーコード、標識、シグナル及び／またはタグであり得るがこれらに限定されない。また、識別子領域４０は、ペイロード領域１０内に位置し得、またはペイロード領域１０及び少なくとも１つの隣接領域２０に位置し得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクトは、約５～約１０，０００個の残基を含む。非限定的な例として、オリジネーターコンストラクトの長さは、５～３０、５～５０、５～１００、５～２５０、５～５００、５～１，０００、５～１，５００、５～３，０００、５～５，０００、５～７，０００、５～１０，０００、３０～５０、３０～１００、３０～２５０、３０～５００、３０～１，０００、３０～１，５００、３０～３，０００、３０～５，０００、３０～７，０００、３０～１０，０００、１００～２５０、１００～５００、１００～１，０００、１００～１，５００、１００～３，０００、１００～５，０００、１００～７，０００、１００～１０，０００、５００～１，０００、５００～１，５００、５００～２，０００、５００～３，０００、５００～５，０００、５００～７，０００、５００～１０，０００、１，０００～１，５００、１，０００～２，０００、１，０００～３，０００、１，０００～５，０００、１，０００～７，０００、１，０００～１０，０００、１，５００～３，０００、１，５００～５，０００、１，５００～７，０００、１，５００～１０，０００、２，０００～３，０００、２，０００～５，０００、２，０００～７，０００、２，０００～１０，０００、３，０００～５，０００、３，０００～７，０００、３，０００～１０，０００、５，０００～７，０００、５，０００～１０，０００、及び７，０００～１０，０００であり得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域の長さは、長さが約５残基を超え、例えば、限定されないが、少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、３，０００、４，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，０００または１０，０００を超える残基またはそれを超える。
いくつかの実施形態では、隣接領域は、独立して、長さが０～１０，０００残基、例えば、限定されないが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、３，０００、４，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、及び１０，０００の範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、制御性領域は、独立して、長さが０～３，０００残基、例えば、限定されないが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００の範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクトは、オリジネーターコンストラクトの３’末端と５’末端との間の相互作用を補助するための分子を生成するために環状化、またはコンカテマー化され得る。
ベンチマークコンストラクト構造
少なくとも１つの識別子（例えば、バーコード、標識、シグナル及び／またはタグ）を含むオリジネーターコンストラクトは、ベンチマークコンストラクトと称される。ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトを通して同じまたは異なり得る１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個またはそれを超える識別子を含み得る。
いくつかの実施形態では、識別子領域は、独立して、長さが１～３，０００残基、例えば、限定されないが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００の範囲であり得る。非限定的な例として、識別子領域は、長さが１～５残基、２～５残基、３～５残基、２～７残基、３～７残基、１～１０残基、２～１０残基、３～１０残基、５～１０残基、７～１０残基、１～１５残基、２～１５残基、３～１５残基、５～１５残基、７～１５残基、１０～１５残基、１２～１５残基、１～２０残基、２～２０残基、３～２０残基、５～２０残基、７～２０残基、１０～２０残基、１２～２０残基、１５～２０残基、１７～２０残基、１～２５残基、２～２５残基、３～２５残基、５～２５残基、７～２５残基、１０～２５残基、１２～２５残基、１５～２５残基、１７～２５残基、２０～２５残基、１～３０残基、２～３０残基、３～３０残基、５～３０残基、７～３０残基、１０～３０残基、１２～３０残基、１５～３０残基、１７～３０残基、２０～３０残基、２５～３０残基、１～３５残基、２～３５残基、３～３５残基、５～３５残基、７～３５残基、１０～３５残基、１２～３５残基、１５～３５残基、１７～３５残基、２０～３５残基、２５～３５残基、３０～３５残基、１～３５残基、２～３５残基、３～３５残基、５～３５残基、７～３５残基、１０～３５残基、１２～３５残基、１５～３５残基、１７～３５残基、２０～３５残基、２５～３５残基、３０～３５残基、１～４０残基、２～４０残基、３～４０残基、５～４０残基、７～４０残基、１０～４０残基、１２～４０残基、１５～４０残基、１７～４０残基、２０～４０残基、２５～４０残基、３０～４０残基、３５～４０残基、１～４５残基、２～４５残基、３～４５残基、５～４５残基、７～４５残基、１０～４５残基、１２～４５残基、１５～４５残基、１７～４５残基、２０～４５残基、２５～４５残基、３０～４５残基、３５～４５残基、４０～４５残基、１～５０残基、２～５０残基、３～５０残基、５～５０残基、７～５０残基、１０～５０残基、１２～５０残基、１５～５０残基、１７～５０残基、２０～５０残基、２５～５０残基、３０～５０残基、３５～５０残基、４０～５０残基、または４５～５０残基であり得る。
線状または環状であり得る少なくとも１つの識別子を有するベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの非限定的な例は、図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃに提供される。少なくとも１つの識別子を有する環状ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの非限定的な例は、図４Ａ、図４Ｂ及び図４Ｃに提供される。図３Ａ、図３Ｂ、図４Ａ及び図４Ｂにおいて、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトには、ペイロード領域（図において「Ｐ」と称される）及び少なくとも１つの識別子領域（図において「ＢＣ」と称される）及び／または逆識別子領域（図において「ＣＢ」と称される）が含まれる。図３Ｃ及び図４Ｃにおいて、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトには、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられたペイロード領域（図において「Ｐ」と称される）及び少なくとも１つの識別子部位が含まれる。
いくつかの実施形態では、ベンチマークコンストラクトにおける識別子領域は、ペイロード領域と重複する。本明細書で使用される場合、「重複する」は、識別子領域の少なくとも１つのヌクレオチドがペイロード領域内に伸長することを意味する。いくつかの態様では、識別子領域は、ペイロード領域と１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、３０ヌクレオチド、３１ヌクレオチド、３２ヌクレオチド、３３ヌクレオチド、３４ヌクレオチド、３５ヌクレオチド、３６ヌクレオチド、３７ヌクレオチド、３８ヌクレオチド、３９ヌクレオチド、４０ヌクレオチド４１ヌクレオチド、４２ヌクレオチド、４３ヌクレオチド、４４ヌクレオチド、４５ヌクレオチド、４６ヌクレオチド、４７ヌクレオチド、４８ヌクレオチド、４９ヌクレオチド、５０ヌクレオチドまたは５０ヌクレオチド超重複する。いくつかの態様では、識別子領域は、ペイロード領域と１～５ヌクレオチド、２～５ヌクレオチド、３～５ヌクレオチド、２～７ヌクレオチド、３～７ヌクレオチド、１～１０ヌクレオチド、２～１０ヌクレオチド、３～１０ヌクレオチド、５～１０ヌクレオチド、７～１０ヌクレオチド、１～１５ヌクレオチド、２～１５ヌクレオチド、３～１５ヌクレオチド、５～１５ヌクレオチド、７～１５ヌクレオチド、１０～１５ヌクレオチド、１２～１５ヌクレオチド、１～２０ヌクレオチド、２～２０ヌクレオチド、３～２０ヌクレオチド、５～２０ヌクレオチド、７～２０ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、１２～２０ヌクレオチド、１５～２０ヌクレオチド、１７～２０ヌクレオチド、１～２５ヌクレオチド、２～２５ヌクレオチド、３～２５ヌクレオチド、５～２５ヌクレオチド、７～２５ヌクレオチド、１０～２５ヌクレオチド、１２～２５ヌクレオチド、１５～２５ヌクレオチド、１７～２５ヌクレオチド、２０～２５ヌクレオチド、１～３０ヌクレオチド、２～３０ヌクレオチド、３～３０ヌクレオチド、５～３０ヌクレオチド、７～３０ヌクレオチド、１０～３０ヌクレオチド、１２～３０ヌクレオチド、１５～３０ヌクレオチド、１７～３０ヌクレオチド、２０～３０ヌクレオチド、２５～３０ヌクレオチド、１～３５ヌクレオチド、２～３５ヌクレオチド、３～３５ヌクレオチド、５～３５ヌクレオチド、７～３５ヌクレオチド、１０～３５ヌクレオチド、１２～３５ヌクレオチド、１５～３５ヌクレオチド、１７～３５ヌクレオチド、２０～３５ヌクレオチド、２５～３５ヌクレオチド、３０～３５ヌクレオチド、１～３５ヌクレオチド、２～３５ヌクレオチド、３～３５ヌクレオチド、５～３５ヌクレオチド、７～３５ヌクレオチド、１０～３５ヌクレオチド、１２～３５ヌクレオチド、１５～３５ヌクレオチド、１７～３５ヌクレオチド、２０～３５ヌクレオチド、２５～３５ヌクレオチド、３０～３５ヌクレオチド、１～４０ヌクレオチド、２～４０ヌクレオチド、３～４０ヌクレオチド、５～４０ヌクレオチド、７～４０ヌクレオチド、１０～４０ヌクレオチド、１２～４０ヌクレオチド、１５～４０ヌクレオチド、１７～４０ヌクレオチド、２０～４０ヌクレオチド、２５～４０ヌクレオチド、３０～４０ヌクレオチド、３５～４０ヌクレオチド、１～４５ヌクレオチド、２～４５ヌクレオチド、３～４５ヌクレオチド、５～４５ヌクレオチド、７～４５ヌクレオチド、１０～４５ヌクレオチド、１２～４５ヌクレオチド、１５～４５ヌクレオチド、１７～４５ヌクレオチド、２０～４５ヌクレオチド、２５～４５ヌクレオチド、３０～４５ヌクレオチド、３５～４５ヌクレオチド、４０～４５ヌクレオチド、１～５０ヌクレオチド、２～５０ヌクレオチド、３～５０ヌクレオチド、５～５０ヌクレオチド、７～５０ヌクレオチド、１０～５０ヌクレオチド、１２～５０ヌクレオチド、１５～５０ヌクレオチド、１７～５０ヌクレオチド、２０～５０ヌクレオチド、２５～５０ヌクレオチド、３０～５０ヌクレオチド、３５～５０ヌクレオチド、４０～５０ヌクレオチド、または４５～５０ヌクレオチド重複する。
いくつかの実施形態では、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、ペイロード領域及び識別子領域を含む。識別子領域は、ペイロード領域に対して５’、ペイロード領域に対して３’に位置し得、または識別子領域は、ペイロード領域の５’末端または３’末端と重複し得る。
いくつかの実施形態では、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、ペイロード領域及び２つの識別子領域を含む。各識別子領域は、独立して、ペイロード領域に対して５’、ペイロード領域に対して３’に位置し得、または識別子領域は、ペイロード領域の５’末端または３’末端と重複し得る。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域はいずれとも、逆であり、ペイロード領域に対して５’に位置する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第１の識別子領域は、逆にされている。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされている。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域はいずれとも、逆であり、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１の識別子領域は、逆にされている。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされている。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、ペイロード領域と重複し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、ペイロード領域と重複する。
非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１の識別子領域は、ペイロード領域と重複する。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、ペイロード領域と重複し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１及び第２の識別子領域の両方は、ペイロード領域と重複する。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、ペイロード領域と重複し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置し、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１及び第２の識別子領域の両方は、ペイロード領域と重複する。
非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、ペイロード領域と重複し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置し、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１及び第２の識別子領域の両方は、ペイロード領域と重複する。
非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、いずれとも逆であり、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第１の識別子領域は、逆にされており、第２の識別子領域は、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して５’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、いずれとも逆であり、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１の識別子領域は、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第１の識別子領域は、逆にされており、ペイロード領域と重複する。非限定的な例として、第１及び第２の識別子領域は、ペイロード領域に対して３’に位置し、第２の識別子領域は、逆にされており、第１のペイロード領域は、ペイロード領域と重複する。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられた同じ部位または異なる部位であり得るベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられた１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個またはそれを超える識別子部位を有し得る。各識別子部位は、独立して、ペイロード領域に対して５’の隣接領域上に、ペイロード領域に対して３’の隣接領域上に位置し得、または識別子部位の位置は、ペイロード領域の５’末端または３’末端及び隣接領域に及び得る。いくつかの態様では、識別子部位の位置には、ペイロード領域の１つ以上のヌクレオチド、例えば、限定されないが、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、１５ヌクレオチド、１６ヌクレオチド、１７ヌクレオチド、１８ヌクレオチド、１９ヌクレオチド、２０ヌクレオチド、２１ヌクレオチド、２２ヌクレオチド、２３ヌクレオチド、２４ヌクレオチド、２５ヌクレオチド、２６ヌクレオチド、２７ヌクレオチド、２８ヌクレオチド、２９ヌクレオチド、３０ヌクレオチド、３１ヌクレオチド、３２ヌクレオチド、３３ヌクレオチド、３４ヌクレオチド、３５ヌクレオチド、３６ヌクレオチド、３７ヌクレオチド、３８ヌクレオチド、３９ヌクレオチド、４０ヌクレオチド４１ヌクレオチド、４２ヌクレオチド、４３ヌクレオチド、４４ヌクレオチド、４５ヌクレオチド、４６ヌクレオチド、４７ヌクレオチド、４８ヌクレオチド、４９ヌクレオチド、５０ヌクレオチドまたは５０ヌクレオチド超が含まれ得る。いくつかの態様では、識別子部位の位置には、ペイロード領域の１つ以上のヌクレオチド、例えば、限定されないが、１～５ヌクレオチド、２～５ヌクレオチド、３～５ヌクレオチド、２～７ヌクレオチド、３～７ヌクレオチド、１～１０ヌクレオチド、２～１０ヌクレオチド、３～１０ヌクレオチド、５～１０ヌクレオチド、７～１０ヌクレオチド、１～１５ヌクレオチド、２～１５ヌクレオチド、３～１５ヌクレオチド、５～１５ヌクレオチド、７～１５ヌクレオチド、１０～１５ヌクレオチド、１２～１５ヌクレオチド、１～２０ヌクレオチド、２～２０ヌクレオチド、３～２０ヌクレオチド、５～２０ヌクレオチド、７～２０ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、１２～２０ヌクレオチド、１５～２０ヌクレオチド、１７～２０ヌクレオチド、１～２５ヌクレオチド、２～２５ヌクレオチド、３～２５ヌクレオチド、５～２５ヌクレオチド、７～２５ヌクレオチド、１０～２５ヌクレオチド、１２～２５ヌクレオチド、１５～２５ヌクレオチド、１７～２５ヌクレオチド、２０～２５ヌクレオチド、１～３０ヌクレオチド、２～３０ヌクレオチド、３～３０ヌクレオチド、５～３０ヌクレオチド、７～３０ヌクレオチド、１０～３０ヌクレオチド、１２～３０ヌクレオチド、１５～３０ヌクレオチド、１７～３０ヌクレオチド、２０～３０ヌクレオチド、２５～３０ヌクレオチド、１～３５ヌクレオチド、２～３５ヌクレオチド、３～３５ヌクレオチド、５～３５ヌクレオチド、７～３５ヌクレオチド、１０～３５ヌクレオチド、１２～３５ヌクレオチド、１５～３５ヌクレオチド、１７～３５ヌクレオチド、２０～３５ヌクレオチド、２５～３５ヌクレオチド、３０～３５ヌクレオチド、１～３５ヌクレオチド、２～３５ヌクレオチド、３～３５ヌクレオチド、５～３５ヌクレオチド、７～３５ヌクレオチド、１０～３５ヌクレオチド、１２～３５ヌクレオチド、１５～３５ヌクレオチド、１７～３５ヌクレオチド、２０～３５ヌクレオチド、２５～３５ヌクレオチド、３０～３５ヌクレオチド、１～４０ヌクレオチド、２～４０ヌクレオチド、３～４０ヌクレオチド、５～４０ヌクレオチド、７～４０ヌクレオチド、１０～４０ヌクレオチド、１２～４０ヌクレオチド、１５～４０ヌクレオチド、１７～４０ヌクレオチド、２０～４０ヌクレオチド、２５～４０ヌクレオチド、３０～４０ヌクレオチド、３５～４０ヌクレオチド、１～４５ヌクレオチド、２～４５ヌクレオチド、３～４５ヌクレオチド、５～４５ヌクレオチド、７～４５ヌクレオチド、１０～４５ヌクレオチド、１２～４５ヌクレオチド、１５～４５ヌクレオチド、１７～４５ヌクレオチド、２０～４５ヌクレオチド、２５～４５ヌクレオチド、３０～４５ヌクレオチド、３５～４５ヌクレオチド、４０～４５ヌクレオチド、１～５０ヌクレオチド、２～５０ヌクレオチド、３～５０ヌクレオチド、５～５０ヌクレオチド、７～５０ヌクレオチド、１０～５０ヌクレオチド、１２～５０ヌクレオチド、１５～５０ヌクレオチド、１７～５０ヌクレオチド、２０～５０ヌクレオチド、２５～５０ヌクレオチド、３０～５０ヌクレオチド、３５～５０ヌクレオチド、４０～５０ヌクレオチド、または４５～５０ヌクレオチドが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、１つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、識別子部位は、５’隣接領域上のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、識別子部位は、３’隣接領域上のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、識別子部位は、ペイロード領域上のベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられ得る。非限定的な例として、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、識別子部位を含み、識別子部位の位置は、ペイロード領域の５’末端及び５’隣接領域に及ぶ。非限定的な例として、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトは、識別子部位を含み、識別子部位の位置は、ペイロード領域の３’末端及び３’隣接領域に及ぶ。
いくつかの実施形態では、２つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。非限定的な例として、第１の識別子部位及び第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位及び第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位及び第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位及び第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位及び第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、５’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ペイロード領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及び、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、３’隣接領域上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置する。
非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置し、第２の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置し、第２の識別子部位は、５’隣接領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位の位置は、５’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置し、第２の識別子部位は、ペイロード領域上に位置する。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの５’末端上に位置し、第２の識別子部位の位置は、３’隣接領域及びペイロード領域に及ぶ。非限定的な例として、第１の識別子部位は、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトの３’末端上に位置し、第２の識別子部位は、３’隣接領域上に位置する。
いくつかの実施形態では、３つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、４つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、５つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、６つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、７つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、８つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、９つの識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
いくつかの実施形態では、１０個の識別子部位が、ベンチマークポリヌクレオチドコンストラクトに関連付けられる。
ＩＩ．カーゴ及びペイロード
本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、カーゴまたはペイロードを含み、それをコードし、またはそれにコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、用語「カーゴ」または「ペイロード」は、細胞または組織へのまたはその中への送達のための送達ビヒクルに包含された１つ以上の分子または構造を指し得る。カーゴの非限定的な例には、核酸、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、リポソーム、標識、タグ、小さな化学的分子、大きな生物学的分子、及びそれらの任意の組み合わせまたはその断片が含まれ得る。オリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトにおいて、カーゴまたはペイロードを含むまたはコードするコンストラクトの領域は、「カーゴ領域」または「ペイロード領域」と称される。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、生物学的に活性な分子、例えば、限定されないが、治療タンパク質であり、またはそれをコードする。本明細書で使用される場合、用語「生物学的に活性」は、生物学的システム、特に生物において活性を有する任意の薬剤の特徴を指す。例えば、生物に投与された場合、その生物に対する生物学的効果を有する薬剤は、生物学的に活性と考えられる。いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、１つ以上の予防的または治療的に活性なタンパク質、ポリペプチド、または他の因子であり、またはそれをコードする。非限定的な例として、カーゴまたはペイロードは、がんにおいて、限定されないが、ＴＲＡＩＬまたは腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等の腫瘍殺傷活性を向上させる薬剤であり、またはそれをコードし得る。別の非限定的な例として、カーゴまたはペイロードは、筋ジストロフィー（例えば、カーゴまたはペイロードは、ジストロフィンであり、またはそれをコードする）、心臓血管疾患（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＳＥＲＣＡ２ａ、ＧＡＴＡ４、Ｔｂｘ５、Ｍｅｆ２Ｃ、Ｈａｎｄ２、Ｍｙｏｃｄ等であり、またはそれをコードする）、神経変性疾患（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＮＴ－３等であり、またはそれをコードする）、慢性疼痛（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＧｌｙＲａｌであり、またはそれをコードする）、エンケファリン、またはグルタミン酸デカルボキシラーゼ（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＧＡＤ６５、ＧＡＤ６７、または別のアイソフォームであり、またはそれをコードする）、肺疾患（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＣＦＴＲであり、またはそれをコードする）、血友病（例えば、カーゴまたはペイロードは、第ＶＩＩＩ因子または第ＩＸ因子であり、またはそれをコードする）、新生物形成（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＰＴＥＮ、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、Ｎｏｔｃｈｌ、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、Ｎｏｔｃｈ４、ＡＫＴ、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＨＩＦ、ＨＩ Ｆｌａ、ＨＩＦ３ａ、Ｍｅｔ、ＨＲＧ、Ｂｃｌ２、ＰＰＡＲアルファ、ＰＰＡＲガンマ、ＷＴ１（ウィルムス腫瘍）、ＦＧＦ受容体ファミリーメンバー（５つのメンバー：１、２、３、４、５）、ＣＤＫＮ２ａ、ＡＰＣ、ＲＢ（網膜芽細胞腫）、ＭＥＮ１、ＶＨＬ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＡＲ（アンドロゲン受容体）、ＴＳＧ１０１、ＩＧＦ、ＩＧＦ受容体、Ｉｇｆ１（４つのバリアント）、Ｉｇｆ２（３つのバリアント）、Ｉｇｆ１受容体、Ｉｇｆ２受容体、Ｂａｘ、Ｂｃｌ２、カスパーゼファミリー（９つのメンバー：１、２、３、４、６、７、８、９、１２）、Ｋｒａｓ、Ａｐｅであり、またはそれをコードする）、加齢黄斑変性症（例えば、カーゴまたはペイロードは、Ａｂｅｒ、Ｃｃｌ２、Ｃｃ２、ｃｐ（セルロプラスミン）、Ｔｉｍｐ３、カテプシンＤ、Ｖｌｄｌｒであり、またはそれをコードする）、統合失調症（例えば、ニューレグリン（Ｎｒｇｌ）、Ｅｒｂ４（ニューレグリンのための受容体）、コンプレキシン－ｌ（Ｃｐｌｘｌ）、Ｔｐｈｌトリプトファンヒドロキシラーゼ、Ｔｐｈ２トリプトファンヒドロキシラーゼ２、ニューレキシン１、ＧＳＫ３、ＧＳＫ３ａ、ＧＳＫ３ｂ、５－ＨＩＴ（Ｓｌｃ６ａ４）、ＣＯＭＴ、ＤＲＤ（Ｄｒｄｌａ）、ＳＬＣ６Ａ３、ＤＡＯＡ、ＤＴＮＢＰＩ、Ｄａｏ（Ｄａｏｌ））、トリヌクレオチド反復障害（例えば、ＨＴＴ（ハンチントンＤｘ）、ＳＢＭＡ／ＳＭＡＸＩ／ＡＲ（ケネディＤｘ）、ＦＸＮ／Ｘ２５（フリードライヒ運動失調症）、ＡＴＸ３（マシャド・ジョセフＤｘ）、ＡＴＸＮＩ及びＡＴＸＮ２（脊髄小脳運動失調）、ＤＭＰＫ（筋強直性ジストロフィー）、アトロフィン－１及びＡｔｎｌ（ＤＲＰＬＡ Ｄｘ）、ＣＢＰ（Ｃｒｅｂ－ＢＰ－全体的不安定性）、ＶＬＤＬＲ（アルツハイマー）、Ａｔｘｎ７、Ａｔｘｎ１０）、脆弱Ｘ症候群（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＦＭＲ２、ＦＸＲＩ、ＦＸＲ２、ｍＧＬＵＲ５であり、またはそれをコードする）、セクレターゼ関連障害（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＡＰＨ－１（アルファ及びベータ）、プレセニリン（Ｐｓｅｎｌ）、ニカストリン（Ｎｃｓｔｎ）、ＰＥＮ－２であり、またはそれをコードする）、ＡＬＳ（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＳＯＤ１、ＡＬＳ２、ＳＴＥＸ、ＦＵＳ、ＴＡＲＤ ＢＰ、ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦ－ａ、ＶＥＧＦ－ｂ、ＶＥＧＦ－ｃ）であり、またはそれをコードする）、自閉症（例えば、カーゴまたはペイロードは、Ｍｅｃｐ２、ＢＺＲＡＰ１、ＭＤＧＡ２、Ｓｅｍａ５Ａ、ニューレキシン１であり、またはそれをコードする）、アルツハイマー病（例えば、カーゴまたはペイロードは、Ｅｌ、チップ、ＵＣＨ、ＵＢＢ、タウ、ＬＲＰ、ＰＩＣＡＬＭ、Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ、ＰＳ１、ＳＯＲＬ１、ＣＲ１、Ｖｌｄｌｒ、Ｕｂａｌ、Ｕｂａ３、ＣＨＩＰ２８（Ａｑｐｌ、アクアポリン１）、Ｕｃｈｌｌ、Ｕｃｈｌ３、ＡＰＰであり、またはそれをコードする）、炎症（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＩＬ－１０、ＩＬ－１（ＩＬ－Ｉａ、ＩＬ－Ｉｂ）、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７（ＩＬ－１７ａ（ＣＴＬＡ８）、ＩＬ－１７ｂ、ＩＬ－１７ｃ、ＩＬ－１７ｄ、ＩＬ－１７１）、１１－２３、Ｃｘ３ｃｒｌ、ｐｔｐｎ２２、ＴＮＦａ、ＩＢＤについてのＮＯＤ２／ＣＡＲＤ１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ）、ＣＴＬＡ４、Ｃｘ３ｃｌｌであり、またはそれをコードする）、パーキンソン病（例えば、ｘ－シヌクレイン、ＤＪ－１、ＬＲＲＫ２、パーキン、ＰＩＮＫ１）、血液及び凝固障害、例えば、貧血、ベアリンパ球症候群、出血障害、血球貪食性リンパ組織球症障害、血友病Ａ、血友病Ｂ、出血性障害、白血球欠損症及び障害、鎌状赤血球貧血、及びサラセミア（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＣＲＡＮ１、ＣＤＡ１、ＲＰＳ１９、ＤＢＡ、ＰＫＬＲ、ＰＫ１、ＮＴ５Ｃ３、ＵＭＰＨ１、ＰＳＮＩ、ＲＨＡＧ、ＲＨ５０Ａ、ＮＲＡＭＰ２、ＳＰＴＢ、ＡＬＡＳ２、ＡＮＨ１、ＡＳＢ、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣ７、ＡＳＡＴ、ＴＡＰＢＰ、ＴＰＳＮ、ＴＡＰ２、ＡＢＣＢ３、ＰＳＦ２、ＲＩＮＧ１１、ＭＨＣ２ＴＡ、Ｃ２ＴＡ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＲＦＸ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２Ｘ１、ＨＦ１、ＣＦＨ、ＨＵＳ、ＭＣＦＤ２、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＣ Ａ、ＦＡ１、ＦＡ、ＦＡ Ａ、ＦＡＡＰ９５、ＦＡＡＰ９０、ＦＬＪ３４０６４、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＣＣ、ＢＲＣＡ２、ＦＡＮＣＤＩ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＤ、ＦＡＣＤ、ＦＡＤ、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＸＲＣＣ９、ＦＡＮＣＧ、ＢＲ１ＰＩ、ＢＡＣＨ１、ＦＡＮＣＪ、ＰＨＦ９、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＫＩＡＡ１５９６、ＰＲＦ１、ＨＰＬＨ２、ＵＮＣ１３Ｄ、ＭＵＮＣ１３－４、ＨＰＬＨ３、ＨＬＨ３、ＦＨＬ３、Ｆ８、ＦＳＣ、ＰＩ、ＡＴＴ、Ｆ５、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＣＡＭＢ、ＬＡＤ、ＥＩＦ２Ｂ１、ＥＩＦ２ＢＡ、ＥＩＦ２Ｂ２、ＥＩＦ２Ｂ３、ＥＩＦ２Ｂ５、ＬＶＷＭ、ＣＡＣＨ、ＣＬＥ、ＥＩＦ２Ｂ４、ＨＢＢ、ＨＢＡ２、ＨＢＢ、ＨＢＤ、ＬＣＲＢ、ＨＢＡ１であり、またはそれをコードする）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫または白血病（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＢＣＬ７Ａ、ＢＣＬ７、ＡＬＩ、ＴＣＬ５、ＳＣＬ、ＴＡＬ２、ＦＬＴ３、ＮＢＳ１、ＮＢＳ、ＺＮＦＮ１ＡＩ、１ＫＩ、ＬＹＦ１、ＨＯＸＤ４、ＨＯＸ４Ｂ、ＢＣＲ、ＣＭＬ、ＰＨＬ、ＡＬＬ、ＡＲＮＴ、ＫＲＡＳ２、ＲＡＳＫ２、ＧＭＰＳ、ＡＦＩＯ、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＬＡＲＧ、ＫＩＡＡ０３８２、ＣＡＬＭ、ＣＬＴＨ、ＣＥＢＰＡ、ＣＥＢＰ、ＣＨＩＣ２、ＢＴＬ、ＦＬＴ３、ＫＩＴ、ＰＢＴ、ＬＰＰ、ＮＰＭＩ、ＮＵＰ２１４、Ｄ９Ｓ４６Ｅ、ＣＡＮ、ＣＡＩＮ、ＲＵＮＸＩ、ＣＢＦＡ２、ＡＭＬ１、ＷＨＳＣ１ＬＩ、ＮＳＤ３、ＦＬＴ３、ＡＦ１Ｑ、ＮＰＭＩ、ＮＵＭＡ１、ＺＮＦ１４５、ＰＬＺＦ、ＰＭＬ、ＭＹＬ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＡＦ１Ｑ、ＣＡＬＭ、ＣＬＴＨ、ＡＲＬ１１、ＡＲＬＴＳ１、Ｐ２ＲＸ７、Ｐ２Ｘ７、ＢＣＲ、ＣＭＬ、ＰＨＬ、ＡＬＬ、ＧＲＡＦ、ＮＦ１、ＶＲＮＦ、ＷＳＳ、ＮＦＮＳ、ＰＴＰＮＩＩ、ＰＴＰ２Ｃ、ＳＨＰ２、ＮＳ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＤ１、ＰＲＡＤ１、ＢＣＬ１、ＴＣＲＡ、ＧＡＴＡ１、ＧＦ１、ＥＲＹＦ１、ＮＦＥ１、ＡＢＬＩ、ＮＱＯ１、ＤＩＡ４、ＮＭＯＲ１、ＮＵＰ２１４、Ｄ９Ｓ４６Ｅ、ＣＡＮ、ＣＡＩＮであり、またはそれをコードする）、炎症及び免疫関連疾患及び障害（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＮＫＡＴ３、ＮＫＢ１、ＡＭＢ１１、Ｋ１Ｒ３ＤＳ１、ＩＦＮＧ、ＣＸＣＬ１２、ＴＮＦＲＳＦ６、ＡＰＴ１、ＦＡＳ、ＣＤ９５、ＡＬＰＳ１Ａ、ＩＬ２ＲＧ、ＳＣＩＤＸ１、ＳＣＩＤＸ、ＩＭＤ４、ＣＣＬ５、ＳＣＹＡ５、Ｄ１７Ｓ１３６Ｅ、ＴＣＰ２２８、ＩＬ１０、ＣＳＩＦ、ＣＭＫＢＲ２、ＣＣＲ２、ＣＭＫＢＲ５、ＣＣＣＫＲ５（ＣＣＲ５）、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＤ、ＨＩＧＭ２、ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０、ＵＮＧ、ＤＧＵ、ＨＩＧＭ４、ＴＮＦＳＦＳ、ＣＤ４０ＬＧ、ＨＩＧＭ１、ＩＧＭ、ＦＯＸＰ３、ＩＰＥＸ、ＡＩＩＤ、ＸＰＩＤ、ＰＩＤＸ、ＴＮＦＲＳＦ１４Ｂ、ＴＡＣＩであり、またはそれをコードする）、炎症（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＩＬ－１０、ＩＬ－１（ＩＬ－ＩＡ、ＩＬ－ＩＢ）、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７（ＩＬ－１７ａ（ＣＴＬＡ８）、ＩＬ－１７ｂ、ＩＬ－１７ｃ、ＩＬ－１７ｄ、ＩＬ－１７１）、１１－２３、Ｃｘ３ｃｒｌ、ｐｔｐｎ２２、ＴＮＦａ、ＩＢＤについてのＮＯＤ２／ＣＡＲＤ１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２（ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ）、ＣＴＬＡ４、Ｃｘ３ｃＩＩ）、ＪＡＫ３、ＪＡＫＬ、ＤＣＬＲＥＩＣ、ＡＲＴＥＭＩＳ、ＳＣＩＤＡ、ＲＡＧ１、ＲＡＧ２、ＡＤＡ、ＰＴＰＲＣ、ＣＤ４５、ＬＣＡ、ＩＬ７Ｒ、ＣＤ３Ｄ、Ｔ３Ｄ、ＩＬ２ＲＧ、ＳＣＩＤＸＩ、ＳＣＩＤＸ、ＩＭＤ４であり、またはそれをコードする）、代謝、肝臓、腎臓及びタンパク質疾患及び障害（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＴＴＲ、ＰＡＬＢ、ＡＰＯＡ１、ＡＰＰ、ＡＡＡ、ＣＶＡＰ、ＡＤＩ、ＧＳＮ、ＦＧＡ、ＬＹＺ、ＴＴＲ、ＰＡＬＢ、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ８、ＣＩＲＨ１Ａ、ＮＡＩＣ、ＴＥＸ２９２、ＫＩＡＡ１９８８、ＣＦＴＲ、ＡＢＣＣ７、ＣＦ、ＭＲＰ７、ＳＬＣ２Ａ２、ＧＬＵＴ２、Ｇ６ＰＣ、Ｇ６ＰＴ、Ｇ６ＰＴ１、ＧＡＡ、ＬＡＭＰ２、ＬＡＭＰＢ、ＡＧＬ、ＧＤＥ、ＧＢＥ１、ＧＹＳ２、ＰＹＧＬ、ＰＦＫＭ、ＴＣＦ１、ＨＮＦ１Ａ、ＭＯＤＹ３、ＳＣＯＤ１、ＳＣＯｌ、ＣＴＮＮＢ１、ＰＤＧＦＲＬ、ＰＤＧＲＬ、ＰＲＬＴＳ、ＡＸ１ＮＩ、ＡＸＩＮ、ＣＴＮＮＢ１、ＴＰ５３、Ｐ５３、ＬＦＳ１、ＩＧＦ２Ｒ、ＭＰＲＩ、ＭＥＴ、ＣＡＳＰ８、ＭＣＨ５、ＵＭＯＤ、ＨＮＦＪ、ＦＪＨＮ、ＭＣＫＤ２、ＡＤＭＣＫＤ２、ＰＡＨ、ＰＫＵ１、ＱＤＰＲ、ＤＨＰＲ、ＰＴＳ、ＦＣＹＴ、ＰＫＨＤ１、ＡＲＰＫＤ、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ４、ＰＫＤＴＳ、ＰＲＫＣＳＨ、Ｇ１９Ｐ１、ＰＣＬＤ、ＳＥＣ６３であり、またはそれをコードする）、筋肉／骨格疾患及び障害（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＤＭＤ、ＢＭＤ、ＭＹＦ６、ＬＭＮＡ、ＬＭＮ１、ＥＭＤ２、ＦＰＬＤ、ＣＭＤＩＡ、ＨＧＰＳ、ＬＧＭＤＩＢ、ＬＭＮＡ、ＬＭＮＩ、ＥＭＤ２、ＦＰＬＤ、ＣＭＤＩＡ、ＦＳＨＭＤ１Ａ、ＦＳＨＤ１Ａ、ＦＫＲＰ、ＭＤＣ１Ｃ、ＬＧＭＤ２Ｉ、ＬＡＭＡ２、ＬＡＭＭ、ＬＡＲＧＥ、ＫＩＡＡ０６０９、ＭＤＣ１Ｄ、ＦＣＭＤ、ＴＴＩＤ、ＭＹＯＴ、ＣＡＰＮ３、ＣＡＮＰ３、ＤＹＳＦ、ＬＧＭＤ２Ｂ、ＳＧＣＧ、ＬＧＭＤ２Ｃ、ＤＭＤＡ１、ＳＣＧ３、ＳＧＣＡ、ＡＤＬ、ＤＡＧ２、ＬＧＭＤ２Ｄ、ＤＭＤＡ２、ＳＧＣＢ、ＬＧＭＤ２Ｅ、ＳＧＣＤ、ＳＧＤ、ＬＧＭＤ２Ｆ、ＣＭＤ１Ｌ、ＴＣＡＰ、ＬＧＭＤ２Ｇ、ＣＭＤ１Ｎ、ＴＲＩＭ３２、ＨＴ２Ａ、ＬＧＭＤ２Ｈ、ＦＫＲＰ、ＭＤＣＩＣ、ＬＧＭＤ２１、ＴＴＮ、ＣＭＤ１Ｇ、ＴＭＤ、ＬＧＭＤ２Ｊ、ＰＯＭＴ１、ＣＡＶ３、ＬＧＭＤ１Ｃ、ＳＥＰＮ１、ＳＥＬＮ、ＲＳＭＤ１、ＰＬＥＣ１、ＰＬＴＮ、ＥＢＳ１、ＬＲＰ５、ＢＭＮＤｌ、ＬＲＰ７、ＬＲ３、ＯＰＰＧ、ＶＢＣＨ２、ＣＬ
ＣＮ７、ＣＬＣ７、ＯＰＴＡ２、ＯＳＴＭＩ、ＧＬ、ＴＣＩＲＧ１、ＴＩＲＣ７、ＯＣ１１６、ＯＰＴＢ１、ＶＡＰＢ、ＶＡＰＣ、ＡＬＳ８、ＳＭＮ１、ＳＭＡ１、ＳＭＡ２、ＳＭＡ３、ＳＭＡ４、ＢＳＣＬ２、ＳＰＧ１７、ＧＡＲＳ、ＳＭＡＤ１、ＣＭＴ２Ｄ、ＨＥＸＢ、ＩＧＨＭＢＰ２、ＳＭＵＢＰ２、ＣＡＴＦ１、ＳＭＡＲＤ１であり、またはそれをコードする）、神経及びニューロン疾患及び障害（例えば、カーゴまたはペイロードは、ＳＯＤ１、ＡＬＳ２、ＳＴＥＸ、ＦＵＳ、ＴＡＲＤＢＰ、ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦ－ａ、ＶＥＧＦ－ｂ、ＶＥＧＦ－ｃ）、ＡＰＰ、ＡＡＡ、ＣＶＡＰ、ＡＤＩ、ＡＰＯＥ、ＡＤ２、ＰＳＥＮ２、ＡＤ４、ＳＴＭ２、ＡＰＢＢ２、ＦＥ６５ＬＩ、ＮＯＳ３、ＰＬＡＵ、ＵＲＫ、ＡＣＥ、ＤＣＰＩ、ＡＣＥＩ、ＭＰＯ、ＰＡＣ１ＰＩ、ＰＡＸＩＰＩＬ、ＰＴＩＰ、Ａ２Ｍ、ＢＬＭＨ、ＢＭＨ、ＰＳＥＮ１、ＡＤ３、Ｍｅｃｐ２、ＢＺＲＡＰ１、ＭＤＧＡ２、Ｓｅｍａ５Ａ、ニューレキシン１、ＧＬＯｌ、ＭＥＣＰ２、ＲＴＴ、ＰＰＭＸ、ＭＲＸ１６、ＭＲＸ７９、ＮＬＧＮ３、ＮＬＧＮ４、ＫＩＡＡ１２６０、ＡＵＴＳＸ２、ＦＭＲ２、ＦＸＲ１、ＦＸＲ２、ｍＧＬＵＲ５、ＨＤ、ＩＴ１５、ＰＲＮＰ、ＰＲＩＰ、ＪＰＨ３、ＪＰ３、ＨＤＬ２、ＴＢＰ、ＳＣＡ１７、ＮＲ４Ａ２、ＮＵＲＲ１、ＮＯＴ、ＴＩＮＵＲ、ＳＮＣＡＩＰ、ＴＢＰ、ＳＣＡ１７、ＳＮＣＡ、ＮＡＣＰ、ＰＡＲＫ１、ＰＡＲＫ４、ＤＪＩ、ＰＡＲＫ７、ＬＲＲＫ２、ＰＡＲＫ８、ＰＩＮＫ１、ＰＡＲＫ６、ＵＣＨＬ１、ＰＡＲＫ５、ＳＮＣＡ、ＮＡＣＰ、ＰＡＲＫｌ、ＰＡＲＫ４、ＰＲＫＮ、ＰＡＲＫ２、ＰＤＪ、ＤＢＨ、ＮＤＵＦＶ２、ＭＥＣＰ２、ＲＴＴ、ＰＰＭＸ、ＭＲＸ１６、ＭＲＸ７９、ＣＤＫＬ５、ＳＴＫ９、ＭＥＣＰ２、ＲＴＴ、ＰＰＭＸ、ＭＲＸ１６、ＭＲＸ７９、ｘ－シヌクレイン、ＤＪ－１、ニューレグリン－ｌ（Ｎｒｇｌ）、Ｅｒｂ４（ニューレグリンについての受容体）、コンプレキシン－ｌ（Ｃｐｌｘｌ）、Ｔｐｈｌトリプトファンヒドロキシラーゼ、Ｔｐｈ２、トリプトファンヒドロキシラーゼ２、ニューレキシン１、ＧＳＫ３、ＧＳＫ３ａ、ＧＳＫ３ｂ、５－ＨＴＴ（Ｓｌｃ６ａ４）、ＣＯＮＴ、ＤＲＤ（Ｄｒｄｌａ）、ＳＬＣ６Ａ、ＤＡＯＡ、ＤＴＮＢＰ１、Ｄａｏ（Ｄａｏｌ）、ＡＰＨ－ｌ（アルファ及びベータ）、プレセニリン（Ｐｓｅｎｌ）、ニカストリン、（Ｎｃｓｔｎ）、ＰＥＮ－２、Ｎｏｓｌ、Ｐａｒｐｌ、Ｎａｔｌ、Ｎａｔ２、ＨＴＴ、ＳＢＭＡ／ＳＭＡＸ１／ＡＲ、ＦＸＮ／Ｘ２５、ＡＴＸ３、ＴＸＮ、ＡＴＸＮ２、ＤＭＰＫ、アトロフィン－１、Ａｔｎｌ、ＣＢＰ、ＶＬＤＬＲ、Ａｔｘｎ７、及びＡｔｘｎｌＯ）、及び眼疾患及び障害（例えば、Ａｂｅｒ、Ｃｃｌ２、Ｃｃ２、ｃｐ（セルロプラスミン）、Ｔｉｍｐ３、カテプシン－Ｄ、Ｖｌｄｌｒ、Ｃｃｒ２、ＣＲＹＡＡ、ＣＲＹＡ１、ＣＲＹＢＢ２、ＣＲＹＢ２、ＰＩＴＸ３、ＢＦＳＰ２、ＣＰ４９、ＣＰ４７、ＣＲＹＡＡ、ＣＲＹＡＩ、ＰＡＸ６、ＡＮ２、ＭＧＤＡ、ＣＲＹＢＡ１、ＣＲＹＢ１、ＣＲＹＧＣ、ＣＲＹＧ３、ＣＣＬ、ＬＩＭ２、ＭＰ１９、ＣＲＹＧＤ、ＣＲＹＧ４、ＢＦＳＰ２、ＣＰ４９、ＣＰ４７、ＨＳＦ４、ＣＴＭ、ＨＳＦ４、ＣＴＭ、ＭＩＰ、ＡＱＰＯ、ＣＲＹＡＢ、ＣＲＹＡ２、ＣＴＰＰ２、ＣＲＹＢＢ１、ＣＲＹＧＤ、ＣＲＹＧ４、ＣＲＹＢＢ２、ＣＲＹＢ２、ＣＲＹＧＣ、ＣＲＹＧ３、ＣＣＬ、ＣＲＹＡＡ、ＣＲＹＡＩ、ＧＪＡ８、ＣＸ５０、ＣＡＥ１、ＧＪＡ３、ＣＸ４６、ＣＺＰ３、ＣＡＥ３、ＣＣＭ１、ＣＡＭ、ＫＲＩＴ１、ＡＰＯＡ１、ＴＧＦＢＩ、ＣＳＤ２、ＣＤＧＧ１、ＣＳＤ、ＢＩＧＨ３、ＣＤＧ２、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＲＯＰ２、Ｍ１ＳＩ、ＶＳＸ１、ＲＩＮＸ、ＰＰＣＤ、ＰＰＤ、ＫＴＣＮ、ＣＯＬ８Ａ２、ＦＥＣＤ、ＰＰＣＤ２、ＰＩＰ５Ｋ３、ＣＦＤ、ＫＥＲＡ、ＣＮＡ２、ＭＹＯＣ、ＴＩＧＲ、ＧＬＣＩＡ、ＪＯ ＡＧ、ＧＰＯＡ、ＯＰＴＮ、ＧＬＣ１Ｅ、ＦＩＰ２、ＨＹＰＬ、ＮＲＰ、ＣＹＰ１ＢＩ、ＧＬＣ３Ａ、ＯＰＡ１、ＮＴＧ、ＮＰＧ、ＣＹＰ１ＢＩ、ＧＬＣ３Ａ、ＣＲＢ１、ＲＰ１２、ＣＲＸ、ＣＯＲＤ２、ＣＲＤ、ＲＰＧＲＩＰＩ、ＬＣＡ６、ＣＯＲＤ９、ＲＰＥ６５、ＲＰ２０、ＡＩＰＬ１、ＬＣＡ４、ＧＵＣＹ２Ｄ、ＧＵＣ２Ｄ、ＬＣＡ１、ＣＯＲＤ６、ＲＤＨ１２、ＬＣＡ３、ＥＬＯＶＬ４、ＡＤＭＤ、ＳＴＧＤ２、ＳＴＧＤ３、ＲＤＳ、ＲＰ７、ＰＲＰＨ２、ＰＲＰＨ、ＡＶＭＤ、ＡＯＦＭＤ、及びＶＭＤ２であり、またはそれをコードする）等の病態の処置に好適な薬剤であり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、細胞の分化に影響を及ぼし得る因子であり、またはそれをコードする。非限定的な例として、Ｏｃｔ４、Ｋｌｆ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、Ｌ－Ｍｙｃ、ドミナントネガティブｐ５３、Ｎａｎｏｇ、Ｇｌｉｓｌ、Ｌｉｎ２８、ＴＦＩＩＤ、ｍｉｒ－３０２／３６７、または他のｍｉＲＮＡのうちの１つ以上の発現は、細胞が誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞となることを引き起こし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、細胞を分化転換するための因子であり、またはそれをコードする。因子の非限定的な例には、心筋細胞のためのＧＡＴＡ４、Ｔｂｘ５、Ｍｅｆ２Ｃ、Ｍｙｏｃｄ、Ｈａｎｄ２、ＳＲＦ、Ｍｅｓｐｌ、ＳＭＡＲＣＤ３；神経細胞のためのＡｓｃｉｉ、Ｎｕｒｒｌ、ＬｍｘｌＡ、Ｂｍ２、Ｍｙｔｌｌ、ＮｅｕｒｏＤｌ、ＦｏｘＡ２；及び肝臓細胞のためのＨｎｆ４ａ、Ｆｏｘａｌ、Ｆｏｘａ２またはＦｏｘａ３のうちの１つ以上が含まれる。
ポリペプチド、タンパク質及びペプチド
本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドであるカーゴまたはペイロードを含み、それをコードし、またはそれにコンジュゲートされ得る。本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」は通常、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸のポリマーを指し、「タンパク質及び「ペプチド」を包含する。本開示のためのポリペプチドには、当該技術分野で知られているすべてのポリペプチド、タンパク質及び／またはペプチドが含まれる。ポリペプチドの非限定的なカテゴリーには、抗原、抗体、抗体断片、サイトカイン、ペプチド、ホルモン、酵素、酸化剤、抗酸化剤、合成ポリペプチド、及びキメラポリペプチドが含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」は通常、約５０アミノ酸以下のより短いポリペプチドを指す。２つのアミノ酸のみを有するペプチドは、「ジペプチド」と称され得る。３つのアミノ酸のみを有するペプチドは、「トリペプチド」と称され得る。ポリペプチドは通常、約４～約５０アミノ酸を有するポリペプチドを指す。ペプチドは、当業者に知られている任意の方法を介して得られ得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、培養下で発現させられ得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、化学的合成（例えば、固相ペプチド合成）を介して得られ得る。
いくつかの実施形態では、本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、加水分解するとアミノ酸及び場合により小さな炭水化物化合物を生成する単純なタンパク質であるカーゴまたはペイロードを含み、それをコードし、またはそれにコンジュゲートされ得る。単純なタンパク質の非限定的な例には、アルブミン、アルブミノイド、グロブリン、グルテリン、ヒストン及びプロタミンが含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、非タンパク質に関連付けられた単純なタンパク質であり得るコンジュゲート化タンパク質であるカーゴまたはペイロードを含み、それをコードし、またはそれにコンジュゲートされ得る。コンジュゲート化タンパク質の非限定的な例には、糖タンパク質、ヘモグロビン、レシトタンパク質（ｌｅｃｉｔｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）、核タンパク質、及びリンタンパク質が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、化学的または物理的手段によって単純なまたはコンジュゲート化タンパク質から誘導されたタンパク質である誘導タンパク質であるカーゴまたはペイロードを含み、それをコードし、またはそれにコンジュゲートされ得る。誘導されたタンパク質の非限定的な例には、変性タンパク質及びペプチドが含まれる。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、未修飾であり得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、修飾され得る。修飾のタイプには、リン酸化、グリコシル化、アセチル化、ユビキチン化／スモ化、メチル化、パルミトイル化、キノン、アミド化、ミリストイル化、ピロリドンカルボン酸、ヒドロキシル化、ホスホパンテテイン、プレニル化、ＧＰＩアンカリング、酸化、ＡＤＰ－リボシル化、硫酸化、Ｓ－ニトロシル化、シトルリン化、ニトロ化、ガンマ－カルボキシグルタミン酸、ホルミル化、ヒプシン、トパキノン（ＴＰＱ）、臭素化、リジントパキノン（ＬＴＱ）、トリプトファントリプトフィルキノン（ＴＴＱ）、ヨード化、及びシステイントリプトフィルキノン（ＣＴＱ）が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの態様では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、その構造、細胞内局在化、及び／または機能に影響を及ぼし得る転写後修飾によって修飾され得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、リン酸化を使用して修飾され得る。セリン、トレオニン、またはチロシン残基のリン酸化、またはホスフェート基の付加は、タンパク質修飾の最も一般的な形態の１つである。タンパク質リン酸化は、細胞内シグナル伝達カスケードにおいてシグナルを微調整する際に重要な役割を果たす。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、標的タンパク質へのユビキチンの共有結合であるユビキチン化を使用して修飾され得る。ユビキチン化媒介タンパク質ターンオーバーは、細胞周期を誘導する際に及びタンパク質分解非依存性細胞内シグナル伝達経路において役割を果たすことが示されている。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、遺伝子発現を制御する際に役割を果たし得るアセチル化及びメチル化を使用して修飾され得る。非限定的な例として、アセチル化及びメチル化は、遺伝子サイレンシングの媒介に影響を有する可能性があるクロマチンドメイン（例えば、ユークロマチン及びヘテロクロマチン）の形成を媒介する可能性がある。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、グリコシル化を使用して修飾され得る。グリコシル化は、多数のグリカン基の１つの結合であり、すべてのタンパク質の約半分において生じ、かつ胚発生、細胞分裂、及びタンパク質構造の制御を含むがこれらに限定されない生物学的プロセスにおいて役割を果たす修飾である。タンパク質グリコシル化の２つの主要なタイプは、Ｎ－グリコシル化及びＯ－グリコシル化である。Ｎ－グリコシル化の場合、グリカンは、アスパラギンに結合され、Ｏ－グリコシル化の場合、グリカンは、セリンまたはトレオニンに結合される。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、タンパク質またはペプチドは、スモ化を使用して修飾され得る。スモ化は、タンパク質へのＳＵＭＯ（小ユビキチン様修飾因子）の付加であり、ユビキチン化と同様の翻訳後修飾である。
抗体
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味で称され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、少なくとも２つのインタクト抗体から形成された二重特異的抗体）、及び所望の生物学的活性を示す（例えば、「機能的である」）限り抗体断片（例えば、ダイアボディ）を含むがこれらに限定されない様々な実施形態を具体的に包含する。抗体は、既知のまたは親抗体配列に由来する少なくとも１つのアミノ酸領域及び非抗体配列に由来する少なくとも１つのアミノ酸領域を含む単量体または多量体ポリペプチドである主にアミノ酸をベースとする分子である。抗体は、１つ以上の修飾（糖部位、蛍光部位、化学的タグ等の付加を含むがこれらに限定されない）を含み得る。本明細書における目的のため、「抗体」は、重及び軽可変ドメインならびにＦｃ領域を含み得る。
カーゴまたはペイロードは、１つ以上の機能的抗体を形成するポリペプチドを含み得、またはコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、当該技術分野で知られている抗体及び／または治療、診断、または研究目的であり得る市販されている抗体を含むがこれらに限定されない任意の抗体として形成または機能するポリペプチドを含み得、またはコードし得る。また、カーゴまたはペイロードは、そのような抗体の断片または抗体、例えば、限定されないが、可変ドメインまたは相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得、またはコードし得る。
本明細書で使用される場合、用語「ネイティブ抗体」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質を指す。抗体重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は知られており、それぞれを構成するセグメントは、よく特性化されており、記載されている（Ｍａｔｓｕｄａ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９８．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１８８（１１）；２１５１－６２及びＬｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，２００４．Ｂｌｏｏｄ．１０３（１２）：４６０２－９（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されている一方で、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で様々である。各重鎖及び軽鎖はまた、規則的に間隔を空けて鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続くいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。本明細書で使用される場合、用語「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に区別されるタイプのうちの１つに割り当てられた任意の脊椎動物種からの抗体の成分を指す。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は、異なるクラスに割り当てられ得る。５つの主要なクラスのインタクト抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。
本明細書で使用される場合、用語「可変ドメイン」は、抗体間で配列が広く異なり、かつその特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用される抗体重鎖及び軽鎖の両方に見られる特定の抗体ドメインを指す。可変ドメインは、超可変領域を含む。本明細書で使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合を担うアミノ酸残基を含む可変ドメイン内の領域を指す。超可変領域内に存在するアミノ酸は、抗体の抗原結合部位の一部となる相補性決定領域（ＣＤＲ）の構造を決定する。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、その標的抗原またはエピトープに相補的な構造を含む抗体の領域を指す。抗原と相互作用しない可変ドメインの他の部分は、フレームワーク（ＦＷ）領域と称される。抗原結合部位（抗原統合部位またはパラトープとしても知られている）は、特定の抗原と相互作用するために必要なアミノ酸残基を含む。抗原結合部位を構成する正確な残基は、典型的には、結合した抗原との共結晶学によって明らかになるが、計算的評価もまた、他の抗体との比較に基づいて使用され得る（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｗｏｏｄｈｅａｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ＰＡ．２０１２．Ｃｈ．３，ｐ．４７－５４（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））。ＣＤＲを構成する残基を決定することには、Ｋａｂａｔ［Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．，１９７０，ＪＥＭ，１３２（２）：２１１－５０及びＪｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８（１）：２１４－８（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）］、Ｃｈｏｔｈｉａ［Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７（１９８９）及びＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３（４）：９２７－４８（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）］、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１：３）及びＨｏｎｅｇｇｅｒ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，Ａ．ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．２００１．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－７０（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる））によって教示されるものを含むがこれらに限定されない付番スキームの使用が含まれ得る。
ＶＨ及びＶＬドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲを有する。ＶＬのＣＤＲは、可変ドメインポリペプチドに沿ってＮ末端からＣ末端へ移動した場合に存在する順序で、本明細書でＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３と称される。ＶＨのＣＤＲは、可変ドメインポリペプチドに沿ってＮ末端からＣ末端へ移動した場合に存在する順序で、本明細書でＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３と称される。ＣＤＲの各々は、抗原結合ドメインにおける多様な三次元構造をもたらす抗体間の配列及び長さが非常に可変であり得るアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を除いて、好ましい標準的構造を有する。いくつかの場合では、ＣＤＲ－Ｈ３は、抗体多様性を評価するために関連する抗体のパネル間で分析され得る。
ＣＤＲ配列を決定する様々な方法は、当該技術分野で知られており、既知の抗体配列に適用され得る。「Ｋａｂａｔに従って付番される」、「Ｋａｂａｔ付番」、「Ｋａｂａｔ定義」、及び「Ｋａｂａｔ表示」とも称されるＫａｂａｔによって記載されるシステムは、抗体の任意の可変ドメインに適用可能な明白な残基付番システムを提供し、各鎖の３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１）（その内容は、それらの全体が参照により組み込まれる）。Ｋａｂａｔ ＣＤＲは、軽鎖可変ドメインにおけるおよそ残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６５（ＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ３）を含む。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の所定の副次的部分が、アミノ酸配列のレベルで優れた多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造を採用することを発見した。（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３（これらの内容の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））。これらのＣＤＲは、「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」、「Ｃｈｏｔｈｉａ付番」、または「Ｃｈｏｔｈｉａに従って付番される」と称され得、軽鎖可変ドメインにおけるおよそ残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６～３２（ＣＤＲ１）、５２～５６（ＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ３）を含む。Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）。「ＭａｃＣａｌｌｕｍに従って付番される」、または「ＭａｃＣａｌｌｕｍ付番」とも称されるＭａｃＣａｌｌｕｍによってされる記載されるシステムは、軽鎖可変ドメインにおけるおよそ残基３０～３６（ＣＤＲ１）、４６～５５（ＣＤＲ２）及び８９～９６（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける３０～３５（ＣＤＲ１）、４７～５８（ＣＤＲ２）及び９３～１０１（ＣＤＲ３）を含む。（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．（（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２－７４５）（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。「ＡｂＭに従って付番する」、または「ＡｂＭ付番」とも称されるＡｂＭによってされる記載されるシステムは、軽鎖可変ドメインにおけるおよそ残基２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）及び８９～９７（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６～３５（ＣＤＲ１）、５０～５８（ＣＤＲ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ３）を含む。可変領域のＩＭＧＴ（ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＳＹＳＴＥＭ）付番も使用され得、これは、ＩＩＭＧＴの方法に従う免疫グロブリン可変重鎖または軽鎖における残基の付番である（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，“Ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ”，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）（その全体が参照により本明細書に参照により組み込まれる）。本明細書で使用される場合、「ＩＭＧＴ配列付番」または「ＩＭＴＧに従って付番される」は、ＩＭＧＴに従う可変領域をコードする配列の付番を指す。重鎖可変ドメインの場合、ＩＭＧＴに従って付番される場合、超可変領域は、ＣＤＲ１についてアミノ酸位置２７～３８、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５６～６５、及びＣＤＲ３についてアミノ酸位置１０５～１１７の範囲である。軽鎖可変ドメインの場合、ＩＭＧＴに従って付番される場合、超可変領域は、ＣＤＲ１についてアミノ酸位置２７～３８、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５６～６５、及びＣＤＲ３についてアミノ酸位置１０５～１１７の範囲である。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、当該技術分野で知られている方法、例えば、限定されないが、免疫及びディスプレイ技術（例えば、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、及びリボソームディスプレイ）、ハイブリドーマ技術、ハイブリドーマまたは他の源から選択される重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡ配列を使用して生成された抗体を含み得、またはコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、任意の天然に存在するまたは合成の抗原を使用して樹立された抗体を含み得、またはコードし得る。本明細書で使用される場合、「抗原」は、生物において免疫反応を誘導するまたは呼び起こす実体である。免疫反応は、外来実体の存在に対する生物の細胞、組織及び／または器官の反応によって特性化される。そのような免疫反応は、典型的には、外来実体、例えば、抗原または抗原の一部分に対する１つ以上の抗体の生物による生成をもたらす。本明細書で使用される場合、「抗原」はまた、ディスプレイライブラリにおける特定の抗体または結合剤に対する結合パートナーを指す。
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一の細胞（またはクローン）の集団から得られた抗体を指す。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の生成中に生じ得る可能性のあるバリアント（そのようなバリアントは通常、少量で存在する）を除き、同一であり及び／または同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対して仕向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して仕向けられる。
修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一の抗体集団から得られる抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されるべきではない。本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、及びそのような抗体の断片が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、１つ以上の非ヒト（例えば、ネズミ）抗体源（複数可）からの最小部分を含み、残部が１つ以上のヒト免疫グロブリン源に由来するキメラ抗体を指す。ほとんど場合、ヒト化抗体は、レシピエントの抗体からの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類の抗体からの超可変領域からの残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、抗体模倣体を含み得、またはコードし得る。本明細書で使用される場合、用語「抗体模倣体」は、抗体の機能または効果を模倣し、かつそれらの分子標的に特異的かつ高親和性で結合する任意の分子を指す。いくつかの実施形態では、抗体模倣体は、タンパク質骨格としてフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｆｎ３）を組み込むように設計されたモノボディであり得る。いくつかの実施形態では、抗体模倣体は、アフィボディ分子、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、センチリン、ＤＡＲＰＩＮ（商標）、フィノマー、クーニッツドメイン、及びドメインペプチドを含むがこれらに限定されない当該技術分野で知られているものであり得る。他の実施形態では、抗体模倣体には、１つ以上の非ペプチド領域が含まれ得る。
抗体断片及びバリアント
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、全長抗体からの抗原結合領域を含む抗体断片を含み得、またはコードし得る。抗体断片の非限定的な例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成された多重特異的抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を生成し、各々が単一の抗原結合部位を有する。また、残基「Ｆｃ」断片も生成され、その名称は、容易に結晶化するその能力を反映する。ペプシン処置は、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋させることが可能なＦ（ａｂ’）２断片を生成する。本開示の化合物及び／または組成物は、これらの断片のうちの１つ以上を含み得る。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、修飾されたＦｃ領域であり得、Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域のための対応する配列と比較した場合、単一のアミノ酸置換を有し得、単一のアミノ酸置換は、野生型Ｆｃ領域のものに対して好ましい特性を有するＦｃ領域を生成する。単一のアミノ酸置換によって改変され得るＦｃ特性の非限定的な例には、ｐＨ条件に対する結合特性または反応が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を形成するために必要とされる抗体上の最小断片を含む抗体断片を指す。これらの領域は、緊密な非共有結合性の会合での１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。Ｆｖ断片は、タンパク質分解切断によって生成され得るが、概ね不安定である。組換え方法は、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を形成するために軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間のフレキシブルリンカーの挿入を介して、または重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの間のジスルフィド架橋の導入を介して、安定なＦｖ断片を生成するために当該技術分野で知られている。
本明細書で使用される場合、用語「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、ＶＨ及びＶＬ抗体ドメインの融合タンパク質であって、これらのドメインが、フレキシブルペプチドリンカーによって単一のポリペプチド鎖へと互いに連結されているものを指す。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプチドリンカーは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイまたは他のディスプレイ方法と併せて利用され、その場合、それらは、表面メンバー（例えば、ファージコートタンパク質）と関連して発現され、所与の抗原に対する高親和性ペプチドの同定において使用され得る。
本明細書で使用される場合、用語「抗体バリアント」は、構造及び／または機能がネイティブまたは開始抗体と似ている（ネイティブ又開始抗体に対して）修飾された抗体または生体分子（例えば、抗体模倣体）を指す。抗体バリアントは、ネイティブ抗体と比較した場合、それらのアミノ酸配列、組成、または構造が改変され得る。抗体バリアントには、改変されたアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＭ）を有する抗体、ヒト化バリアント、最適化されたバリアント、多重特異的抗体バリアント（例えば、二重特異的バリアント）、及び抗体断片が含まれ得るがこれらに限定されない。
多重特異的抗体
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、複数のエピトープを結合させる抗体であり得、またはそれをコードし得る。本明細書で使用される場合、用語「マルチボディ」または「多重特異的抗体」は、２つ以上の可変領域が、異なるエピトープに結合する抗体を指す。エピトープは、同じまたは異なる標的上にあり得る。所定の実施形態では、多重特異的抗体は、同じまたは異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識する「二重特異的抗体」である。
いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、ＢＩＯＡＴＬＡ（登録商標）によって使用される及び国際特許公開ＷＯ２０１１０９７２６（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法によって調製され得る。まず、相同の天然に存在する抗体のライブラリが、当該技術分野で知られている任意の方法（すなわち、哺乳動物細胞表面ディスプレイ）によって生成され、次いで２つ以上の標的抗原に特異的に結合する多重特異的抗体について、ＦＡＣＳＡｒｉａまたは別のスクリーニング方法によってスクリーニングされる。いくつかの実施形態では、同定された多重特異的抗体は、修飾された多重特異的抗体のセットを生成するために、当該技術分野で知られている任意の方法によってさらに進化させられる。これらの修飾された多重特異的抗体は、標的抗原への結合についてスクリーニングされる。いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、最適化されたまたは所望の特徴について進化した修飾された多重特異的抗体をスクリーニングすることによってさらに最適化され得る。
いくつかの実施形態では、多重特異的抗体は、ＢＩＯＡＴＬＡ（登録商標）によって使用され、米国公開番号ＵＳ２０１５０２５２１１９（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法によって調製され得る。１つのアプローチでは、２つの親抗体の可変ドメインであって、親抗体がモノクローナル抗体であるものは、単一の軽鎖が、２つの異なる親抗体の重鎖を機能的に補完することを可能とする手法で当該技術分野で知られている任意の方法を使用して進化させられる。別のアプローチは、第２の標的抗原を認識するために単一の親抗体の重鎖を進化させることを必要とする。第３のアプローチは、第２の標的抗原を認識するように親抗体の軽鎖を進化させることを伴う。ポリペプチド進化のための方法は、国際公開ＷＯ２０１２００９０２６（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、それには、非限定的な例として、包括的位置進化（ＣＰＥ）、コンビナトリアルタンパク質合成（ＣＰＳ）、包括的位置挿入（ＣＰＩ）、包括的位置欠失（ＣＰＤ）、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。米国公開番号ＵＳ２０１５０２５２１１９に記載の多重特異的抗体のＦｃ領域は、ノブ・イン・ホールアプローチ、またはＦｃドメインがヘテロ二量体を形成することを可能とする任意の他の方法を使用して生成され得る。得られる多重特異的抗体は、改善された特徴または特性、例えば、標的抗原に対する結合親和性のためにさらに進化させられ得る。
二重特異的抗体
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、二重特異的抗体であり得、またはそれをコードし得る。本明細書で使用される場合、用語「二重特異的抗体」は、２つの異なる抗原に結合することが可能な抗体を指す。そのような抗体は、典型的には、少なくとも２つの異なる抗体からの領域を含む。そのような抗体は、典型的には、少なくとも２つの異なる抗体からの抗原結合領域を含む。例えば、二重特異的モノクローナル抗体（ＢｓＭＡｂ、ＢｓＡｂ）は、２つの異なるモノクローナル抗体の断片から構成される人工タンパク質であり、よって、ＢｓＡｂは、２つの異なるタイプの抗原にする結合することが可能となる。
いくつかの場合では、カーゴまたはペイロードは、２つの異なる抗ｔａｕ抗体からの抗原結合領域を含む二重特異的抗体であり得、またはそれをコードし得る。例えば、そのような二重特異的抗体は、２つの異なる抗体からの結合領域を含み得る。
二重特異的抗体フレームワークには、Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ，Ｇ．，２０１２．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１２：１２－１８；Ｍａｒｖｉｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２００５．Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ．２６（６）：６４９－５８；及びＳｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，２０１１．ＰＮＡＳ．１０８（２７）：１１１８７－９２（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているもののいずれかが含まれ得る。
「３官能性二重特異的」抗体と呼ばれるＢｓＭＡｂの新たな世代が開発されている。これらは、２つの重鎖及び２つの軽鎖からなり、各々が２つの異なる抗体に由来し、２つのＦａｂ領域（腕部）は、２つの抗原に対して仕向けられ、Ｆｃ領域（足部）は、２つの重鎖を含み、３つ目の結合部位を形成する。
二重特異的抗体の可変ドメインの頂部を形成する２つのパラトープのうち、一方は標的抗原に対して仕向けられ得、他方はＴ－リンパ球抗原様ＣＤ３に対して仕向けられ得る。３官能性抗体の場合、Ｆｃ領域は、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または樹状細胞のようなＦｃ受容体を発現する細胞に追加的に結合し得る。要するに、標的とされる細胞は、免疫系の１つまたは２つの細胞に接続され、それはその後それを破壊する。
二重特異的抗体の他のタイプは、サイトカイン遊離によって引き起こされる所定の問題、例えば、短い半減期、免疫原性及び副作用を克服するように設計されている。それらには、Ｆａｂ領域のみからなる化学的に連結されたＦａｂ、ならびに様々なタイプの二価及び三価一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が含まれる（２つの抗体の可変ドメインを模倣する融合タンパク質）。これらのより新しい形式の最も開発が進んでいるものは、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）及びＦｃ定常領域の代わりにＦｃａｂ抗原結合断片を含有するように操作されたｍＡｂ２の抗体である。
分子遺伝学を使用して、２つのｓｃＦｖは、「タンデムｓｃＦｖ」（ｔａｓｃＦｖ）と呼ばれる、リンカードメインによって分離された単一のポリペプチドへとタンデムで操作され得る。ＴａｓｃＦｖは、不十分な可溶性であり、細菌において生成される場合にリフォールディングを必要とすることが判明しており、またはそれらは、リフォールディング要件を回避するが不十分な収率をもたらし得る哺乳動物細胞培養システムにおいて製造され得る。２つの異なるｓｃＦｖのための遺伝子でのｔａｓｃＦｖの構築は、「二重特異的一本鎖可変断片」（ビス－ｓｃＦｖ）を生成する。商業会社によって２つのみのｔａｓｃＦｖが臨床的に開発されている；その両方は、がん適応症のためのＭｉｃｒｏｍｅｔによる進行中の初期段階の開発下にある二重特異的薬剤であり、「二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）」として記載されている。ブリナツモマブは、第２相にある、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫に対するＴ細胞反応を促進する抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３二重特異的ｔａｓｃＦｖである。ＭＴ１１０は、第１相にある、固形腫瘍に対するＴ細胞反応を促進する抗ＥＰ－ＣＡＭ／抗ＣＤ３二重特異的ｔａｓｃＦｖである。二重特異的四価「ＴａｎｄＡｂ」もまた、Ａｆｆｉｍｅｄによって研究されている。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、単一の抗原結合ドメインを含む抗体であり得、またはそれをコードし得る。これらの分子は極端に小さく、分子量は、フルサイズのｍＡｂで観察されるもののおよそ１０分の１である。さらなる抗体には、軽鎖を欠く、ラクダ及びリャマに見られる重鎖抗体の抗原結合可変重鎖領域（ＶＨＨ）に由来する「ナノボディ」が含まれ得る。
Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ－Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ＣｅｎｔｅｒのＰＣＴ公開ＷＯ２０１４１４４５７３（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）では、二量体化の能力を有しない多重特異的結合剤よりも改善された特性を有する二量体多重特異的結合剤（例えば、抗体成分を含む融合タンパク質）を作製するための多量体化技術が開示及び請求されている。
いくつかの場合では、カーゴまたはペイロードは、四価二重特異的抗体（ＰＣＴ公開ＷＯ２０１４１４４３５７（その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる）で開示及び請求されるＴｅｔＢｉＡｂ）であり得、またはそれをコードし得る。ＴｅｔＢｉＡｂは、抗体のＣ末端に結合された第２の抗原特異性を有するＦａｂ断片の第２の対を特徴とし、よって、２つの抗原特異性の各々について二価である分子を提供する。四価抗体は、その同源の共発現したＦａｂ重鎖と会合するＦａｂ軽鎖に抗体重鎖を共有結合的に連結させることによって、遺伝子操作方法によって生成される。
いくつかの態様では、カーゴまたはペイロードは、米国特許番号５，０９１，５１３（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるような生合成抗体であり得、またはそれをコードし得る。そのような抗体には、生合成抗体結合部位（ＢＡＢＳ）として挙動する領域を構成するアミノ酸の１つ以上の配列が含まれ得る。部位は、１）非共有結合的に関連付けられたまたはジスルフィド結合した合成ＶＨ及びＶＬ二量体、２）ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ一本鎖であって、ＶＨ及びＶＬがポリペプチドリンカーによって結合されているもの、または３）個々のＶＨまたはＶＬドメインを含む。結合ドメインは、連結されたＣＤＲ及びＦＲ領域を含み、これらは別々の免疫グロブリンに由来し得る。生合成抗体にはまた、例えば、酵素、毒素、結合部位、または固定化媒体もしくは放射性原子への結合の部位として機能する他のポリペプチド配列が含まれ得る。生合成抗体を生成するための、抗体のｉｎ ｖｉｖｏ生成によって誘発され得る任意の特異性を有するＢＡＢＳを設計するための、及びそれらのアナログを生成するための方法が開示される。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、米国特許番号８，３９９，６２５で教示されている抗体アクセプターフレームワークを有する抗体であり得、またはそれをコードし得る。そのような抗体アクセプターフレームワークは、対象となる抗体からの特に良好に適した受け入れＣＤＲであり得る。いくつかの場合では、当該技術分野で知られているまたは本明細書に提示される方法に従って開発された抗ｔａｕ抗体からのＣＤＲが使用され得る。
小型化抗体
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、「小型化」抗体であり得、またはそれをコードし得る。ｍＡｂの小型化の最良の例には、Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製の小型モジュール免疫薬（ＳＭＩＰ）がある。一価または二価であり得るこれらの分子は、１つのＶＬ、１つのＶＨ抗原結合ドメイン、及び１つまたは２つの定常「エフェクター」ドメインを含有し、すべてがリンカードメインによって接続されている組換え一本鎖分子である。おそらく、そのような分子は、定常ドメインによって付与される免疫エフェクター機能を維持しながら、断片によって求められる増加した組織または腫瘍浸透性の利点を提供する可能性がある。少なくとも３つの「小型化」ＳＭＩＰが臨床開発に入っている。Ｗｙｅｔｈと協働で開発された抗ＣＤ２０ ＳＭＩＰであるＴＲＵ－０１５は、最も進行している計画であり、関節リウマチ（ＲＡ）について第２相まで進行している。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びＢ細胞リンパ腫におけるより早期の試みは、最終的に中止された。Ｔｒｕｂｉｏｎ ａｎｄ Ｆａｃｅｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙは、第２相に達したプロジェクトである、ＣＬＬ及び他のリンパ新生物の処置のための抗ＣＤ３７ ＳＭＩＰであるＴＲＵ－０１６の開発において協業している。Ｗｙｅｔｈは、ＲＡ、ＳＬＥ、及び場合により多発性硬化症を含む自己免疫疾患の処置のための抗ＣＤ２０ ＳＭＩＰ ＳＢＩ－０８７をライセンスしたが、これらのプロジェクトは、臨床試験の最も早期の段階に留まっている。
ダイアボディ
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、ダイアボディであり得、またはそれをコードし得る。本明細書で使用される場合、用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指す。ダイアボディは、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメインＶＬに接続された重鎖可変ドメインＶＨを含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには過度に短いリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合し、２つの抗原結合部位を生成することを強いられる。
ダイアボディは、機能的二重特異的一本鎖抗体（ｂｓｃＡｂ）である。これらの二価抗原結合分子は、ｓｃＦｖの非共有結合性二量体から構成され、組換え方法を使用して哺乳動物細胞において生成され得る（例えば、Ｍａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９２：７０２１－７０２５，１９９５を参照されたい）。数種のダイアボディが臨床開発に入っている。抗ＣＥＡキメラ抗体ｃＴ８４．６６のヨウ素－１２３標識ダイアボディバージョンは、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ＮＣＴ００６４７１５３）によって資金援助された研究において大腸癌の術前イムノシンチグラフィー検出について評価されている。
ユニボディ
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、ヒンジ領域がＩｇＧ４分子から除去された「ユニボディ」であり得、またはそれをコードし得る。ＩｇＧ４分子は不安定であり、軽－重鎖ヘテロ二量体を互いに交換し得るが、ヒンジ領域の欠失は、重鎖－重鎖の対合を完全に防止し、高い特異性の一価軽／重ヘテロ二量体を残し、その一方でｉｎ ｖｉｖｏでの安定性及び半減期を確保するためのＦｃ領域を保持する。ＩｇＧ４は、ＦｃＲと不十分に相互作用し、一価ユニボディは、細胞内シグナル伝達複合体形成を促進することができないので、この構成は、免疫活性化または発がん成長のリスクを最小化し得る。しかしながら、これらの論点は、臨床よりも実験室的証拠によって概ね支持されている。他の抗体は、縮小された１００ｋＤａの抗体である「小型化」抗体であり得る。
イントラボディ
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、イントラボディであり得、またはそれをコードし得る。用語「イントラボディ」は、それが生成される細胞から分泌されないが、代わりに１つ以上の細胞内タンパク質を標的とする抗体の形態を指す。イントラボディは、細胞内トラフィッキング、転写、翻訳、代謝プロセス、増殖シグナル伝達及び細胞分裂を含むがこれらに限定されない多数の細胞プロセスに影響を及ぼすために使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の方法には、イントラボディベースの療法が含まれ得る。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に開示される可変ドメイン配列及び／またはＣＤＲ配列は、イントラボディベースの療法のための１つ以上のコンストラクトに組み込まれ得る。例えば、イントラボディは、１つ以上の糖化細胞内タンパク質を標的とし得、または１つ以上の糖化細胞内タンパク質と代替的タンパク質との間の相互作用を調節し得る。
２０年超前、細胞内標的に対する細胞内抗体が最初に記載された（Ｂｉｏｃｃａ，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｃａｔｔａｎｅｏ ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１－１０８，１９９０（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる））。哺乳動物細胞の異なる区画におけるイントラボディの細胞内発現は、内因性分子の機能のブロックまたは調節を可能とする（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１－１０８，１９９０；Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１：１７６１６－２１，２００４（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる））。イントラボディは、タンパク質フォールディング、タンパク質－タンパク質、タンパク質－ＤＮＡ、タンパク質－ＲＮＡ相互作用及びタンパク質修飾を改変し得る。それらは、表現型ノックアウトを誘導し、標的抗原への直接的結合によって、その細胞内トラフィッキングを迂回させることによってまたは結合パートナーとのその会合を阻害することによって、中和剤として作用し得る。それらは主に、研究ツールとして用いられており、ヒト疾患、例えば、ウイルス性病状、がん及びミスフォールディング疾患の処置のための治療分子として台頭している。組換え抗体の急成長しているバイオ市場は、療法におけるそれらの使用のために、より低い免疫原性と共に、向上した結合特異性、安定性、及び溶解性を有するイントラボディを提供する。
いくつかの実施形態では、イントラボディは、干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）を上回る利点を有する；例えば、ｉＲＮＡは、複数の非特異的効果を発揮することが示されている一方で、イントラボディは、標的抗原に対する高い特異性及び親和性を有することが示されている。さらに、タンパク質として、イントラボディは、ｉＲＮＡよりもはるかに長い活性半減期を保有する。よって、細胞内標的分子の活性半減期が長い場合、ｉＲＮＡを介した遺伝子サイレンシングは、効果を生み出すのが遅い場合がある一方で、イントラボディ発現の効果は、ほとんど瞬間的であり得る。最後に、特定の標的分子の所定の結合相互作用をブロックする一方で他のものを取っておくようにイントラボディを設計することが可能である。
イントラボディは、しばしば、組換え核酸分子から発現され、かつ細胞内に保持される（例えば、細胞質、小胞体、またはペリプラズムに保持される）ように操作された一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。イントラボディは、例えば、イントラボディが結合するタンパク質の機能を取り除くために、使用され得る。イントラボディの発現はまた、イントラボディを含む核酸発現ベクターにおける誘導性プロモーターの使用を介して制御され得る。イントラボディは、当該技術分野で知られている方法、例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９－７８９３；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５：５９５－６０１；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：５９３２－５９３６；Ｍａｃｉｅｊｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．，１：６６７－６７３；Ｍａｒａｓｃｏ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，１：１－１９；Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ，ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＥＭＢＯ Ｊ．１４：１５４２－５１；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐ．，７：１５１５－１５２５；Ｍａｒａｓｃｏ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４：１１－１５，１９９７；Ｒｏｎｄｏｎ ａｎｄ Ｍａｒａｓｃｏ，１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：２５７－２８３；Ｃｏｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １７：２４４５－５６；Ｐｒｏｂａ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：２４５－２５３；Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １７：２４４５－２４５６；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４３７：８１－６；Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５：６３５－４４；Ｏｈａｇｅ ａｎｄ Ｓｔｅｉｐｅ，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９１：１１１９－１１２８；Ｏｈａｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９１：１１２９－１１３４；Ｗｉｒｔｚ ａｎｄ Ｓｔｅｉｐｅ，１９９９，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．８：２２４５－２２５０；Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：２０７－２２２；Ａｒａｆａｔ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１２５０－６；ｄｅｒ Ｍａｕｒ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４５０７５－８５；Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．９：３０７－１９；及びＷｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３－５ならびにこれらで引用されている参考文献）において開示され、レビューされているものを使用して本開示のウイルスゲノムにおいて使用するために生成され得る。特に、ＣＣＲ５イントラボディは、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８０５－８１０）によって生成されている。一般にＭａｒａｓｃｏ，ＷＡ，１９９８，“Ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ：Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ” Ｓｐｒｉｎｇｅｒ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい；また、ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ “Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” １９９４，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい（これらの各々の内容は、それらの全体が参照によりそれぞれ組み込まれる）。
ドナー抗体からの配列は、イントラボディを樹立するために使用され得る。イントラボディは、しばしば、細胞内で単一のドメイン断片、例えば、単離されたＶＨ及びＶＬドメインとしてまたは一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体として組換え的に発現される。例えば、イントラボディは、しばしば、フレキシブルリンカーポリペプチドによって接続された重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含む一本鎖抗体を形成するために単一のポリペプチドとして発現される。イントラボディは、典型的には、ジスルフィド結合を欠き、それらの特異的結合活性を介して標的遺伝子の発現または活性を調節することが可能である。一本鎖抗体はまた、軽鎖定常領域に接続された一本鎖可変領域断片として発現され得る。
当該技術分野で知られているように、イントラボディは、標的タンパク質が位置する細胞内区画において高濃度での発現を可能とするために、そのＮまたはＣ末端で細胞内トラフィッキングシグナルをコードするように組換えポリヌクレオチドベクター内に操作され得る。例えば、小胞体（ＥＲ）に標的化されたイントラボディは、リーダーペプチド及び、任意に、Ｃ末端ＥＲ保持シグナルを組み込むように操作される。核において活性を発揮することが意図されたイントラボディは、核局在化シグナルを含むように操作される。細胞膜のサイトゾル側にイントラボディを繋ぐために脂質部位がイントラボディに接続される。イントラボディはまた、サイトゾルにおいて機能を発揮するように標的化され得る。例えば、サイトゾルイントラボディは、サイトゾル内の因子を隔離するために使用され、それによりそれらがそれらの天然細胞目的地に輸送されることを防止する。
イントラボディ発現には所定の技術的課題が存在する。特に、細胞内での新しく合成されたイントラボディのタンパク質構造的フォールディング及び構造的安定性は、細胞内環境の還元条件によって影響を受ける。
本開示のイントラボディは、病理学的アイソフォームを含むタンパク質の異なる構造を特異的に認識するそれらの事実上無限の能力の使用のため、及びそれらが凝集の潜在的部位（細胞内及び細胞外部位の両方）に標的とされ得るため、タウオパチー、プリオン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハンチントン病を含むミスフォールディング疾患の処置のための有望な治療剤であり得る。これらの分子は、それらの凝集を防止することによってアミロイド生成性タンパク質に対する中和剤として、及び／またはその潜在的凝集部位からタンパク質を経路変更することによって細胞内トラフィックの分子シャンターとして作用し得る。
マキシボディ
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、ＩｇＧのマキシボディ（Ｆｃ（ＣＨ２－ＣＨ３ドメインのアミノ末端に融合された二価ｓｃＦＶ）であり得、またはそれをコードし得る。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）に形質導入された場合、ＣＡＲの細胞外標的部位によって認識される分子を発現する標的（例えば、腫瘍細胞）に対して免疫細胞を再誘導し得るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり得、またはそれをコードし得る。
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲを模倣する合成受容体を指す。通常、ＣＡＲは、細胞外標的化ドメイン、膜貫通ドメイン／領域及び細胞内シグナル伝達／活性化ドメインから構成される。標準的なＣＡＲ受容体では、成分：細胞外標的化ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達／活性化ドメインは、単一の融合タンパク質として線状に構築されている。細胞外領域は、特定の腫瘍抗原または他の腫瘍細胞－表面分子を認識する標的化ドメイン／部位（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。細胞内領域は、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζのシグナル領域）、及び／または１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）及びＯＸ－４０（ＣＤ１３４）からのものを含有し得る。例えば、「第１世代ＣＡＲ」のみがＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する一方で、Ｔ細胞の持続性及び増殖を高める努力の中で、共刺激細胞内ドメインが加えられ、ＣＤ３ζシグナルドメインに加えて１つの共刺激シグナル伝達ドメインを有する第２世代ＣＡＲ、及びＣＤ３ζシグナルドメインに加えて２つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを有する第３世代ＣＡＲが出現した。ＣＡＲは、Ｔ細胞によって発現する場合、ＣＡＲの細胞外標的化部位によって決定される抗原特異性を有するＴ細胞をもたらす。いくつかの態様では、１つ以上の要素、例えば、ホーミング及び自殺遺伝子が、より有能でより安全なＣＡＲ構造を開発するために加えられる可能性がある（いわゆる第４世代ＣＡＲ）。
いくつかの実施形態では、細胞外標的化ドメインは、ヒンジ（スペースドメインまたはスペーサーとも称される）及び膜貫通領域を介して細胞内シグナル伝達ドメインに接続される。ヒンジは、細胞外標的化ドメインを、細胞膜を横断し、かつ細胞内シグナル伝達ドメインに接続する膜貫通ドメインに接続させる。標的化部位が結合する標的タンパク質のサイズ、ならびに標的化ドメイン自体のサイズ及び親和性により、ＣＡＲ形質導入細胞のがん細胞に対する効力を最適化するためにヒンジを変化させる必要があり得る。標的細胞への標的化部位の認識及び結合により、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞に活性化シグナルをもたらし、これは、１つ以上の細胞内共刺激ドメインからの「第２のシグナル」によってさらに増幅される。ＣＡＲ Ｔ細胞は、活性化されると、標的細胞を破壊し得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２つの部分に分割され得、各部分は、二量化ドメインに連結されており、これにより二量化を誘発するインプットがインタクトな機能性受容体の構築を促進する。Ｗｕ及びＬｉｍは、細胞外ＣＤ１９結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達要素が分離されており、ラパマイシンアナログＡＰ２１９６７の存在下でヘテロ二量化するＦＫＢＰドメイン及びＦＲＢ＊（ＦＫＢＰ－ラパマイシン結合のＴ２０８９Ｌ変異体）ドメインに連結されている分割ＣＡＲを報告した。分割受容体は、ＡＰ２１９６７の存在下で特定の抗原結合と一緒に構築され、Ｔ細胞を活性化する（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１５，６２５（６２５８）：ａａｂ４０７７（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲコンストラクトへのＴｅｔ－Ｏｎ誘導性システムの組み込みを有する誘導性ＣＡＲとして設計され得る。ＣＤ１９ ＣＡＲは、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）の存在下でのみ活性化される。Ｓａｋｅｍｕｒａは、Ｄｏｘの存在下のＴｅｔ－ＣＤ１９ＣＡＲ Ｔ細胞が、従来のＣＤ１９ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、ＣＤ１９＋細胞株に対して同等の細胞傷害性があり、ＣＤ１９刺激時に同等のサイトカイン生成及び増殖を有することを報告した（Ｓａｋｅｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏ．Ｒｅｓ．，２０１６，Ｊｕｎ ２１，Ｅｐｕｂ（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））。二重システムは、形質導入されたＴ細胞におけるＣＡＲ発現のオン及びオフに対してより高い柔軟性を提供する。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、第１世代ＣＡＲ、または第２世代ＣＡＲ、または第３世代ＣＡＲ、または第４世代ＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、細胞外ドメイン、ヒンジ及び膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達領域から構成される完全ＣＡＲコンストラクトであり得、またはそれをコードし得る。他の実施形態では、カーゴまたはペイロードは、細胞外標的化部位、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、１つ以上の共刺激ドメイン、ならびにリーダー配列、ホーミング要素及び安全性スイッチまたはそのような成分の組み合わせを含むがこれらに限定されないＣＡＲ構造及び機能性を改善する他の追加の要素を含む完全ＣＡＲコンストラクトの成分であり得、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、調整可能なＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。可逆的オン・オフスイッチメカニズムは、過剰なＣＡＲ－Ｔ細胞増殖によって引き起こされる急性毒性の管理を可能とする。リガンドで付与されるＣＡＲの制御は、抗原喪失によって誘導される腫瘍エスケープの相殺において有効であり得、慢性的抗原曝露による緊張性シグナル伝達によって引き起こされる機能消耗を回避し、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＡＲ発現細胞の持続性を向上させる。調整可能なＣＡＲは、腫瘍溶解症候群によって引き起こされる組織毒性に対してオンターゲットを制限するためにＣＡＲ発現を下方制御するために利用され得る。抗腫瘍効力の後にＣＡＲの発現を下方制御することは、（１）正常な組織において抗原発現によって引き起こされるオンターゲット腫瘍外毒性；（２）ｉｎ ｖｉｖｏでの抗原非依存的活性化を防止し得る。
細胞外標的化ドメイン／部位
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外標的部位は、所与の標的分子、例えば、腫瘍細胞上のネオアンチゲンを高い特異性及び親和性で認識し、それに結合する任意の薬剤であり得る。標的部位は、腫瘍細胞上の標的分子に特異的に結合する抗体及びそのバリアント、または腫瘍細胞上の標的分子に結合するその能力に基づいてランダム配列プールから選択されたペプチドアプタマー、または腫瘍細胞上の標的分子に結合し得るバリアントもしくはその断片、またはネイティブＴ細胞受容体（ＴＣＲ）からの抗原認識ドメイン（例えば、ＨＩＶ感染細胞を認識するＣＤ４細胞外ドメイン）、または外来認識成分、例えば、サイトカイン受容体を保有する標的細胞の認識をもたらす連結サイトカイン、または受容体の天然リガンドであり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの標的化ドメインは、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｂｉｓ－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、ユニボディ、ナノボディ、または標的分子、例えば、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）を特異的に認識する抗体に由来する抗原結合領域であり得る。１つの実施形態では、標的化部位は、ｓｃＦｖ抗体である。ｓｃＦｖドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞の表面上に発現し、その後、がん細胞上の標的タンパク質に結合した場合、ＣＡＲ Ｔ細胞をがん細胞の近くに維持し、Ｔ細胞の活性化を誘発することができる。ｓｃＦｖは、慣用の組換えＤＮＡテクノロジー技術を使用して生成され得、本開示において論述される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲコンストラクトの標的化部位は、対象となる標的分子に特異的に結合するペプチドアプタマー等のアプタマーであり得る。ペプチドアプタマーは、対象となる標的分子に結合するその能力に基づいてランダム配列プールから選択され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲコンストラクトの標的化部位は、標的分子の天然リガンド、または標的分子を結合させることが可能なそのバリアント及び／または断片であり得る。いくつかの態様では、ＣＡＲの標的化部位は、標的分子の受容体、例えば、ＣＤ７０受容体としての全長ヒトＣＤ２７であり得、ＣＤ７０陽性悪性腫瘍のための免疫治療剤としてＣＤ２７キメラ受容体を形成するＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインにインフレームで融合され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの標的化部位は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、例えば、腫瘍細胞上で限定して発現するがんネオアンチゲンを認識し得る。
非限定的な例として、本開示のＣＡＲは、５Ｔ４、７０７－ＡＰ、Ａ３３、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）、ＡＫＡＰ－４（Ａキナーゼアンカータンパク質４）、ＡＬＫ、α５β１－インテグリン、アンドロゲン受容体、アネキシンＩＩ、アルファ－アクチニン－４、ＡＲＴ－４、Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ（Ｂ黒色腫抗原）、ＢＣＭＡ、ＢＣＲ－ＡＢＬ融合タンパク質、ベータ－カテニン、ＢＫＴ－抗原、ＢＴＡＡ、ＣＡ－Ｉ（炭酸脱水酵素Ｉ）、ＣＡ５０（がん抗原５０）、ＣＡ１２５、ＣＡ１５－３、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、カルレチニン、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上の細胞傷害性Ｔ－リンパ球認識抗原）、ＣＡＭ４３、ＣＡＰ－１、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７／ｍ、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０／ＣＤ１５４、ＣＤ４１、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ｃｄｃ２７／ｍ、ＣＤＫ４（サイクリン依存性キナーゼ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＳ、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、クロモグラニン、ｃ－Ｍｅｔ、ｃ－Ｍｙｃ、ｃｏａ－１、ＣＳＡｐ、ＣＴ７、ＣＴ１０、シクロフィリンＢ、サイクリンＢ１、細胞質チロシンキナーゼ、サイトケラチン、ＤＡＭ－１０、ＤＡＭ－６、ｄｅｋ－ｃａｎ融合タンパク質、デスミン、ＤＥＰＤＣ１（ＤＥＰドメイン含有１）、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦ－Ｒ（上皮成長因子受容体）、ＥＧＰ－１（上皮糖タンパク質－１）（ＴＲＯＰ－２）、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＦ－２、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＥｐｈＡ２、エプスタイン・バーウイルス抗原、Ｅｒｂ（ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；ＥｒｂＢ４）、ＥＴＡ（上皮腫瘍抗原）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１融合タンパク質、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＧＦ－５、葉酸受容体、ＦＯＳ関連抗原１、フコシルＧＭ１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ（ＧＡＧＥ－１；ＧＡＧＥ－２）、ガレクチン、ＧＤ２（ガングリオシド）、ＧＤ３、ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）、ＧＭ２（がん胎児性抗原－免疫原性－１；ＯＦＡ－Ｉ－１）、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇｐ１００、Ｈ４－ＲＥＴ、ＨＡＧＥ（ヘリカーゼ抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＩＦ（低酸素症誘導因子）、ＨＩＦ－１、ＨＩＦ－２、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＬＡ－Ａｌ ｌ、ＨＭＷＭＡＡ、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ－４０、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０）、ＨＳＴ－２、ＨＴｇｐ－１７５、ｈＴＥＲＴ（またはｈＴＲＴ）、ヒトパピローマウイルス－Ｅ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７及びＥ６、ｉＣＥ（免疫捕捉ＥＩＡ）、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬＫ（インテグリン－連結キナーゼ）、ＩＭＰ３（インスリン様成長因子ＩＩ ｍＲＮＡ結合タンパク質３）、ＩＲＦ４（インターフェロン制御性因子４）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＲＡＢ－ジンクフィンガータンパク質（ＫＩＤ）－３；ＫＩＤ３１、ＫＳＡ（１７－１Ａ）、Ｋ－ｒａｓ、ＬＡＧＥ、ＬＣＫ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（ＬＤＬＲ－フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質）、ＬｅＹ（ルイスＹ）、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＧＥ（チロシナーゼ、黒色腫関連抗原）（ＭＡＧＥ－１；ＭＡＧＥ－３）、メラン－Ａ腫瘍抗原（ＭＡＲＴ）、ＭＡＲＴ－２／Ｓｋｉ、ＭＣ１Ｒ（メラノコルチン１受容体）、ＭＤＭ２、メソテリン、ＭＰＨＯＳＰＨ１、ＭＳＡ（筋肉特異的アクチン）、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳動物標的）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＭ－１（黒色腫関連抗原（変異型）１）、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＮＡ８８－Ａ、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ｎｅｏ－ＰＡＰ、ＮＦ－ＫＢ（核因子－カッパＢ）、ニューロフィラメント、ＮＳＥ（ニューロン特異的エノラーゼ）、ノッチ受容体、ＮｕＭａ、Ｎ－Ｒａｓ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＣＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、オンコスタチンＭ、ＯＳ－９、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３変異体、ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、ｐｌ５（５８）、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ＰＡＧＥ（前立腺関連遺伝子）、ＰＡＰ（前立腺酸ホスファターゼ）、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＤＧＦＲ（血小板由来成長因子受容体）、ピペリジン及びピロリジン利用に関与するシトクロムＰ４５０（ＰＩＰＡ）、Ｐｍｌ－ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＲ－３（プロテイナーゼ３）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的に発現する抗原）、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ（腎臓腫瘍抗原）、Ｒａｆ（Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ及びＣ－Ｒａｆ）、Ｒａｓ、受容体チロシンキナーゼ、ＲＣＡＳ１、ＲＧＳＳ、ＲＯＲ１（受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１）、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ＳＣＰ－１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＳＰ－１７（精液タンパク質１７）、ｓｒｃ－ファミリー、ＳＳＸ（滑膜肉腫Ｘブレークポイント）－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－３、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＴＡＴ－３、ＳＴＡＴ－５、ＳＴＡＴ－６、ＳＴＥＡＤ、ＳＴｎ、スルビビン、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０、ＴＡ－９０（Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＣＳＴＤ１（腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１）、ＴＡＣＳＴＤ２、ＴＡＧ－７２－４、ＴＡＧＥ、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ交互リーディングフレームタンパク質）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合タンパク質、ＴＥＭ１、ＴＥＭ８（エンドシアリンまたはＣＤ２４８）、ＴＧＦβ、ＴＩＥ２、ＴＬＰ、ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子、ＴＮＦ－受容体（ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－β受容体；またはＴＮＦ－γ受容体）、トランスフェリン受容体、ＴＰＳ、ＴＲＰ－１（チロシン関連タンパク質１）、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＴＳＰ－１８０、ＶＥＧＦ受容体、ＷＮＴ、ＷＴ－１（ウィルムス腫瘍抗原）及びＸＡＧＥから選択される腫瘍特異的抗原に結合することが可能な細胞外標的化ドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、標識された抗原に結合することが可能な標的化部位を有する普遍的免疫受容体を含むＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、病原体抗原に結合することが可能な標的化部位を含むＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、非タンパク質分子、例えば、腫瘍関連糖脂質及び炭水化物に結合することが可能な標的化部位を含むＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、未熟単球、未熟樹状細胞、免疫抑制性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及びＭＤＳＣを含む様々な腫瘍間質細胞において発現するタンパク質を含む腫瘍微小環境内の成分に結合することが可能な標的化部位を含むＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、細胞表面接着分子に結合することが可能な標的化部位、自己免疫疾患において現われる炎症性細胞の表面分子、または自己免疫を引き起こすＴＣＲを含むＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。非限定的な例として、本開示の標的化部位は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）を認識するｓｃＦｖ抗体、例えば、ヒトメソテリンを特異的に認識し、それに結合する抗体ＳＳ、ＳＳ１及びＨＮ１のｓｃＦｖ、ＧＤ２の抗体のｓｃＦｖ、ＣＤ１９抗原結合ドメイン、ＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメイン、ヒト抗メソテリンｓｃＦｖ、抗ＣＳ１結合剤、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ抗体、ＧＦＲアルファ４抗原結合断片、抗ＣＬＬ－１（Ｃ型レクチン様分子１）結合ドメイン、ＣＤ３３結合ドメイン、ＧＰＣ３（グリピカン－３）結合ドメイン、ＧＦＲアルファ４（グリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結ＧＤＮＦファミリーα－受容体４細胞－表面受容体）結合ドメイン、ＣＤ１２３結合ドメイン、抗ＲＯＲ１抗体またはその断片、ＧＰＣ－３に特異的なｓｃＦｖ、ＣＳＰＧ４に対するｓｃＦｖ、及び葉酸受容体アルファに対するｓｃＦｖであり得る。
細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲ融合ポリペプチドの細胞内ドメインは、その標的分子に結合した後に、シグナルを免疫エフェクター細胞に伝達し、細胞溶解活性（例えば、サイトカイン分泌）またはヘルパー活性を含む免疫エフェクター細胞の正常なエフェクター機能のうちの少なくとも１つを活性化する。そのため、細胞内ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の「細胞内シグナル伝達ドメイン」を含む。
いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得る。他の態様では、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分がインタクト鎖の代わりに使用され得る。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として知られているシグナル伝達モチーフを含有し得る。ＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例には、ＴＣＲ ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。一例では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインである。
いくつかの実施形態では、細胞内領域は、追加のシグナルを免疫エフェクター細胞に提供する１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。これらの共刺激シグナル伝達ドメインは、シグナル伝達ドメインと組み合わせて、ＣＡＲ操作免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）の増殖、活性化、記憶、持続性、及び腫瘍根絶効率をさらに改善し得る。いくつかの場合では、共刺激シグナル伝達領域は、１つ以上の細胞内シグナル伝達及び／または共刺激分子の１、２、３、または４つの細胞質ドメインを含有する。共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体）、ＬＦＡ－１（リンパ球機能関連抗原－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３を含むがこれらに限定されない共刺激分子の細胞内／細胞質ドメインであり得る。一例では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞質ドメインに由来する。別の例では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）の細胞質ドメインに由来する。別の例では、共刺激シグナル伝達ドメインは、米国特許番号９，１７５，３０８（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に教示されるＧＩＴＲの細胞内ドメインであり得る。
いくつかの実施形態では、細胞内領域は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球性活性化タンパク質（ＳＬＡＭ）、例えば、ＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２Ｆ－１０、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ７、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＬ－１５Ｒａ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＤＡＰ１０、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、キラー免疫グロブリン受容体（ＫＩＲ）、例えば、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＫＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、及びＫＩＲ２ＤＰ１；レクチン関連ＮＫ細胞受容体、例えば、Ｌｙ４９、Ｌｙ４９Ａ、及びＬｙ４９Ｃからなる群から選択されるタンパク質からの機能的シグナル伝達ドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＪＡＫ－ＳＴＡＴに由来するシグナル伝達ドメインを含有し得る。他の実施形態では、本開示の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＤＡＰ－１２（死関連タンパク質１２）に由来するシグナル伝達ドメインを含有し得る（Ｔｏｐｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，１９４：３２０１－３２１２；及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１５，３：８１５－８２６）。ＤＡＰ－１２は、ＮＫ細胞において肝要なシグナル伝達受容体である。ＤＡＰ－１２によって媒介される活性化シグナルは、所定の腫瘍細胞及びウイルス感染細胞に対してＮＫ細胞細胞傷害性反応を誘発させる際に重要な役割を果たす。ＤＡＰ１２の細胞質ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。したがって、ＤＡＰ１２由来シグナル伝達ドメインを含有するＣＡＲは、ＮＫ細胞の養子移入のために使用され得る。
膜貫通ドメイン
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み得る。本明細書で使用される場合、用語「膜貫通ドメイン（ＴＭ）」は、細胞膜に及ぶ長さが約１５残基のアミノ酸配列を広く指す。膜貫通ドメインは、少なくとも２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５アミノ酸残基を含み得、細胞膜に及ぶ。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、天然または合成源のいずれかに由来し得る。ＣＡＲの膜貫通ドメインは、任意の天然膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。例えば、膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、またはＣＤ１５４のアルファ、ベータまたはゼータ鎖に由来し得る（すなわち、その少なくとも膜貫通領域（複数可）を含み得る）。
代替的には、本開示の膜貫通ドメインは、合成であり得る。いくつかの態様では、合成配列は、主に疎水性残基、例えば、ロイシン及びバリンを含み得る。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、及びヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域からなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、任意のヒンジ領域（スペーサーとも呼ばれる）を含み得る。ヒンジ配列は、標的結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れるように移動させて適切な細胞／細胞接触、標的結合及びエフェクター細胞活性化を可能とする細胞外標的化ドメインの柔軟性を容易化する短いアミノ酸の配列である。ヒンジ配列は、標的化部位と膜貫通ドメインとの間に位置し得る。ヒンジ配列は、任意の好適な分子に由来するまたはそれから得られた任意の好適な配列であり得る。ヒンジ配列は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）ヒンジ領域、すなわち、免疫グロブリンのＣＨＩ及びＣＨ２ドメインの間に入る配列、例えば、ＩｇＧ４ Ｆｃヒンジ、野生型配列または誘導体であり得るＣＤ８α ＣＤ４、ＣＤ２８及びＣＤ７等の１型膜タンパク質の細胞外領域のすべてまたは一部に由来し得る。いくつかのヒンジ領域には、免疫グロブリンＣＨ３ドメインまたはＣＨ３ドメイン及びＣＨ２ドメインの両方が含まれる。所定の実施形態では、ヒンジ領域は、未修飾ヒンジに存在するものとは異なるアミノ酸残基で置換された１つ以上のアミノ酸残基、例えば、１、２、３、４または５つの残基を含むＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から修飾され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲのドメインのいずれかの間に１つ以上のリンカーを含み得る。リンカーは、１～３０アミノ酸長であり得る。この点に関して、リンカーは、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０アミノ酸であり得る。他の実施形態では、リンカーは、フレキシブルであり得る。
いくつかの実施形態では、標的化部位、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む成分は、単一の融合ポリペプチドにおいて構築され得る。融合ポリペプチドは、本開示のエフェクターモジュールのペイロードであり得る。
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、種々のＢ細胞悪性腫瘍を標的とするＣＤ１９特異的ＣＡＲならびに肉腫、膠芽腫及び進行型Ｈｅｒ２陽性肺悪性腫瘍を標的とするＨＥＲ２特異的ＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。タンデムＣＡＲ（ＴａｎＣＡＲ）
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２、３、４、またはそれを超える腫瘍特異的抗原を標的とすることができるタンデムキメラ抗原受容体（ＴａｎＣＡＲ）であり得る。いくつかの態様では、ＣＡＲは、腫瘍細胞上の２つの異なるＴＳＡを認識する２つの標的化ドメインを含む二重特異的ＴａｎＣＡＲである。二重特異的ＴａｎＣＡＲは、第１の腫瘍抗原に特異的な標的化ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）及び第２の腫瘍抗原に特異的な標的ドメイン（例えば、抗原認識ドメイン）を含む細胞外領域を含むものとしてさらに定義され得る。他の態様では、ＣＡＲは、タンデム配置で構成された３つ以上の標的化ドメインを含む多重特異的ＴａｎＣＡＲである。ＴａｎＣＡＲにおける標的化ドメイン間のスペースは、長さが約５～約３０アミノ酸、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０アミノ酸であり得る。
分割ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、標的化部位、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ成分は、インタクトな機能性受容体の構築を促進する複数のインプットに依存するように２つ以上の部分に分割され得る。非限定的な例として、分割ＣＡＲは、小分子依存的様式で構築する２つの部分からなる；受容体の一方の部分は、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を特徴とし、他方の部分は、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ζ細胞内ドメインを有する。
他の態様では、ＣＡＲシステムの分割部分は、シグナルを増加させるためにさらに修飾され得る。非限定的な例として、細胞質断片の第２の部分は、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８α膜貫通ドメイン）をコンストラクトに組み込むことによって細胞膜に固定され得る。追加の細胞外ドメイン、例えば、ホモ二量化を媒介する細胞外ドメインがまた、ＣＡＲシステムの第２の部分に付加され得る。これらの修飾は、受容体アウトプット活性、すなわち、Ｔ細胞活性化を増加させ得る。
いくつかの実施形態では、分割ＣＡＲシステムの２つの部分は、ヘテロ二量化小分子の結合により条件付きで相互作用するヘテロ二量化ドメインを含有する。このように、受容体成分は、小分子の存在下で構築されて、インタクトシステムを形成し、これは次いで、抗原係合によって活性化され得る。任意の既知のヘテロ二量化成分が分割ＣＡＲシステムに組み込まれ得る。ジベレリン誘導二量体化システム（ＧＩＤ１－ＧＡＩ）、トリメトプリム－ＳＬＦ誘導ｅｃＤＨＦＲ及びＦＫＢＰ二量体化ならびにＰＰ２Ｃ及びＰＹＬドメインのＡＢＡ（アブシジン酸）誘導二量体化を含むがこれらに限定されない他の小分子依存性ヘテロ二量体化ドメインも使用され得る。分割ＣＡＲシステムの誘導性構築（例えば、リガンド依存性二量化）及び分解（例えば、不安定化ドメイン誘導ＣＡＲ分解）を使用する二重制御は、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞の活性をコントロールするためにより高い柔軟性を提供し得る。
切り替え可能なＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、刺激物（例えば、小分子）に対して一時的にスイッチオンされ得るコントロール可能なＣＡＲである切り替え可能なＣＡＲであり得る。このＣＡＲ設計において、システムは、ＣＡＲにおける細胞膜ドメインからｓｃＦｖドメインを分離するヒンジドメインに直接的に組み込まれる。そのようなシステムは、ＴＣＲのネイティブ構造の複雑性を模倣する、受容体複合体の異なる鎖内での活性化及び共刺激等のＣＡＲの異なる重要な機能を分割し、または組み合わせることが可能である。この組み込みシステムは、刺激物の非存在／存在によってコントロールされるオン／オフ状態間でｓｃＦｖ及び抗原の相互作用を切り替え得る。
可逆的ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、可逆的ＣＡＲシステムであり得る。このＣＡＲ構造では、ＬＩＤドメイン（リガンド誘導分解）がＣＡＲシステムに組み込まれる。そのＣＡＲは、ＬＩＤドメインのリガンドを添加することによって一時的に下方制御され得る。
阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、阻害性ＣＡＲであり得る。阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）は、腫瘍特異性を向上させ、正常な組織毒性を制限するためにネガティブシグナルが使用される二重特異的ＣＡＲ設計を指す。この設計は、活性化受容体の同時係合を伴う場合であってもＴ細胞反応性を制限するために阻害性シグナルドメインと組み合わされた表面抗原認識ドメインを有する第２のＣＡＲを組み込む。この抗原認識ドメインは、Ｔ細胞が第１の標的タンパク質の存在下で活性化され得るが、ｉＣＡＲに結合する第２のタンパク質が存在する場合、Ｔ細胞活性化が阻害されるように、正常組織特異的抗原に対して仕向けられる。
非限定的な例として、ＣＴＬＡ４及びＰＤ１阻害性ドメインに基づく前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）に対するｉＣＡＲは、Ｔ細胞活性化によって誘導されるサイトカイン分泌、細胞傷害性及び増殖を選択的に制限する能力を実証した。
キメラスイッチ受容体
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、負のシグナルを正のシグナルにスイッチし得るキメラスイッチ受容体であり得、またはそれをコードし得る。本明細書で使用される場合、用語「キメラスイッチ受容体」は、第１の細胞外ドメイン及び第２の膜貫通及び細胞内ドメインを含む融合タンパク質であって、第１のドメインには、負のシグナル領域が含まれ、第２のドメインには、正の細胞内シグナル伝達領域が含まれるものを指す。いくつかの態様では、融合タンパク質は、共刺激受容体の膜貫通及び細胞質ドメインに融合されたＴ細胞上の阻害性受容体の細胞外ドメインを含有するキメラスイッチ受容体である。このキメラスイッチ受容体は、Ｔ細胞阻害性シグナルをＴ細胞刺激性シグナルに変換し得る。
非限定的な例として、キメラスイッチ受容体は、ＣＤ２８の膜貫通及び細胞質ドメインに融合されたＰＤ－１の細胞外ドメインを含み得る。いくつかの態様では、他の阻害性受容体、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＫＩＲ及びＢＴＬＡの細胞外ドメインがまた、共刺激受容体、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＴＩＲ及びＩＣＯＳに由来する膜貫通及び細胞質ドメインに融合され得る。
いくつかの実施形態では、キメラスイッチ受容体には、刺激性サイトカイン受容体、例えば、ＩＬ－２Ｒ（ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２Ｒガンマ）及びＩＬ－７Ｒαの細胞内シグナル伝達ドメインに融合された阻害性サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１３受容体α（ＩＬ－１３Ｒα１）、ＩＬ－１０Ｒ、及びＩＬ－４Ｒα）の細胞外サイトカイン結合ドメインを含む組換え受容体が含まれ得る。そのようなキメラサイトカイン受容体の１つの例は、ＩＬ－７Ｒαの細胞内シグナル伝達ドメインに連結されたＩＬ－４Ｒαのサイトカイン結合細胞外ドメインを含有する組換え受容体である。
いくつかの実施形態では、キメラスイッチ受容体は、キメラＴＧＦβ受容体であり得る。キメラＴＧＦβ受容体は、ＴＧＦβ受容体、例えば、ＴＧＦβ受容体１、ＴＧＦβ受容体２、ＴＧＦβ受容体３、または任意の他のＴＧＦβ受容体またはそのバリアントに由来する細胞外ドメイン；及び非ＴＧＦβ受容体細胞内ドメインを含み得る。非ＴＧＦβ受容体細胞内ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ４０、ＣＤ２７、またはそれらの組み合わせに由来する細胞内ドメインまたはその断片であり得る。
活性化条件付きＣＡＲ
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、活性化免疫細胞でのみ発現する活性化条件付きキメラ抗原受容体であり得、またはそれをコードし得る。ＣＡＲの発現は、配列、例えば、ＣＡＲの転写及び／または発現をそのコントロール下で誘導する１つ以上の核酸配列を指す活性化条件付きコントロール領域と連携され得る。そのような活性化条件付きコントロール領域は、免疫エフェクター細胞の活性化中に上方制御される遺伝子のプロモーター、例えば、ＩＬ２プロモーターまたはＮＦＡＴ結合部位であり得る。
特異的プロテオグリカンマーカーを有する腫瘍細胞へのＣＡＲ標的化
いくつかの実施形態では、カーゴまたはペイロードは、特定のタイプのがん細胞を標的とするＣＡＲであり得、またはそれをコードし得る。ヒトがん細胞及び転移は、独自の及びそうでなければ異常なプロテオグリカン、例えば、多糖鎖（例えば、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）、デルマタン硫酸（ＤＳまたはＣＳＢ）、ヘパラン硫酸（ＨＳ）及びヘパリン）を発現し得る。したがって、ＣＡＲは、がん関連プロテオグリカンを認識する結合部位と融合され得る。一例では、ＣＡＲは、プロテオグリカンに結合したコンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）の特定のタイプに高い親和性で結合するＶＡＲ２ＣＳＡポリペプチドと融合され得る（ＶＡＲ２－ＣＡＲ）。ＣＡＲの細胞外ＳｃＦｖ部分は、少なくとも最小のＣＳＡ結合ドメインを含むＶＡＲ２ＣＳＡバリアントで置換され得、コンドロイチン硫酸Ａ（ＣＳＡ）修飾に特異的なＣＡＲを生成する。代替的には、ＣＡＲは、ｓｐｙ－ＣＡＲを生成するために分割タンパク質結合システムに融合され得、ＣＡＲのｓｃＦｖ部分は、ＳｐｙＴａｇ及びＳｐｙ－ｃａｔｃｈｅｒ等の分割タンパク質結合システムの一部分で置換され、がん認識分子（例えば、ｓｃＦｖ及びまたはＶＡＲ２－ＣＳＡ）は、分割タンパク質結合システムを介してＣＡＲに結合される。
核酸
本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、核酸であるペイロード領域（カーゴ領域とも称され得る）を含み得る。用語「核酸」には、その最も広い意味で、ポリヌクレオチドと称され得るヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質が含まれる。例示的な核酸またはポリヌクレオチドには、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ）またはそれらのハイブリッドが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、複数のカーゴまたはペイロードをコードする核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コード核酸配列であり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、非コード核酸配列であり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コード核酸配列及び非コード核酸配列の両方であり、またはそれをコードし得る。
ＤＮＡ
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）は、すべての生物のための遺伝子情報を保有し、二重ヘリックスとして知られている形状を形成するために互いの周りを巻きつく２つの鎖からなる分子である。各鎖は、交互の糖（デオキシリボース）及びホスフェート基から構成される骨格を有する。４つの塩基：アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、及びチミン（Ｔ）のうちの１つが各糖に結合されている。２つの鎖は、アデニンとチミンとの間またはシトシンとグアニンとの間の結合によって一緒に保持される。骨格に沿った塩基の配列は、タンパク質及びＲＮＡ分子を構築するための指示書として機能する。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コードＤＮＡであり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、非コードＤＮＡであり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コードＤＮＡ及び非コードＲＮＡの両方であり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、修飾され得る。修飾のタイプには、メチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、及びスモ化が含まれるがこれらに限定されない。
ベクター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ベクター、例えば、プラスミドまたはウイルスベクターであり、またはそれによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ウイルスベクターであり、またはそれによってコードされる。ウイルスベクターは、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター等であり得るがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターである。
アデノ随伴ウイルス性（ＡＡＶ）ベクター
Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスは、一本鎖ＤＮＡゲノムによって特性化される小さな非エンベロープ型２０面体カプシドウイルスである。Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科ウイルスは、２つのサブファミリー：脊椎動物に感染するＰａｒｖｏｖｉｒｉｎａｅ、及び無脊椎動物に感染するＤｅｎｓｏｖｉｒｉｎａｅからなる。標準的な分子生物学技術を使用して容易に操作されるその比較的単純な構造により、このウイルス科は、生物学的ツールとして有用である。ウイルスのゲノムは、標的細胞、組織、器官、または生物に送達され得る所望のペイロードがロードされ、またはそれを発現または送達するように操作された、機能的組換えウイルス、またはウイルス粒子の構築のための最小の成分を含有するように修飾され得る。
Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科は、ヒト、霊長類、ウシ、イヌ、ウマ、及びヒツジ種を含むがこれらに限定されない脊椎動物宿主における複製が可能なアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むディペンドウイルス属を含む。
ＡＡＶベクターゲノムは、長さがおよそ５，０００ヌクレオチド（ｎｔ）の線状一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）分子である。ＡＡＶベクターゲノムは、ペイロード領域及び少なくとも１つの末端逆位反復（ＩＴＲ）またはＩＴＲ領域を含み得る。ＩＴＲは通常、非構造タンパク質（Ｒｅｐ遺伝子によってコードされる）及び構造タンパク質（カプシド遺伝子またはＣａｐ遺伝子によってコードされる）のためのコードヌクレオチド配列に隣接する。理論に縛られることを望むものではないが、ＡＡＶベクターゲノムは、典型的には、２つのＩＴＲ配列を含む。ＡＡＶベクターゲノムは、エネルギー的に安定な二本鎖領域を形成するｓｓＤＮＡの５’及び３’末端の自己相補的末端１４５ヌクレオチドによって定義される特徴的なＴ形状ヘアピン構造を含む。二本鎖ヘアピン構造は、宿主ウイルス複製細胞の内因性ＤＮＡポリメラーゼ複合体のためのプライマーとして機能することによってＤＮＡ複製のための起点として作用することを含むがこれらに限定されない複数の機能を含む。
コードされる異種ペイロードに加えて、ＡＡＶベクターゲノムは、全体的または部分的に、任意の天然に存在する及び／または組換えＡＡＶ血清型ヌクレオチド配列またはバリアントを含み得る。ＡＡＶバリアントは、通常、物理的及び機能的同等物であり、同様のメカニズムによって複製し、同様のメカニズムによって構築するコンストラクトを生成するために、核酸（ゲノムまたはカプシド）及びアミノ酸レベル（カプシド）で有意な相同性の配列を有し得る。Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．７１：６８２３－３３（１９９７）；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．４５：５５５－６４（１９８３）；Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．７３：１３０９－１３１９（１９９９）；Ｒｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．７２：３０９－３１９（１９９８）；及びＷｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．７４：８６３５－４７（２０００）（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターゲノムは、その中にコードされるコード配列の複製、転写、及び翻訳を提供する少なくとも１つのコントロール要素を含む。適切な宿主細胞においてコード配列が複製、転写、及び／または翻訳されることが可能である限り、コントロール要素のすべてが常に存在することが必要であるわけではない。発現コントロール要素の非限定的な例には、転写開始及び／または終結のための配列、プロモーター及び／またはエンハンサー配列、効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、例えば、スプライシング及びポリアデニル化シグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効力を向上させる配列（例えば、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）、タンパク質安定性を向上させる配列、及び／またはタンパク質プロセシング及び／または分泌を向上させる配列が含まれる。
本開示のＡＡＶベクターゲノムは、組換え的に生成され得、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）親または参照配列に基づき得る。本明細書で使用される場合、「ベクターゲノム」は、本明細書に記載の核酸等の異種分子を輸送し、形質導入し、またはそうでなければその担体として作用する任意の分子または部位である。
一本鎖ＡＡＶベクターゲノム（例えば、ｓｓＡＡＶ）に加えて、本開示はまた、自己相補的ＡＡＶ（ｓｃＡＡＶ）ベクターゲノムを提供する。ｓｃＡＡＶベクターゲノムは、二本鎖ＤＮＡを形成するために一緒にアニーリングするＤＮＡ鎖を含有する。第２の鎖合成をスキップすることにより、ｓｃＡＡＶは、細胞における急速発現が可能となる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターゲノムは、ｓｃＡＡＶである。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターゲノムは、ｓｓＡＡＶである。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターゲノムは、ＡＡＶ粒子の一部であり得、カプシドの血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３ａ、ＡＡＶ３ｂ、ＡＡＶ３－３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ４－４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ６．１．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ７．２、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．１１、ＡＡＶ９．１３、ＡＡＶ９．１６、ＡＡＶ９．２４、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９．６１、ＡＡＶ９．６８、ＡＡＶ９．８４、ＡＡＶ９．９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１６．３、ＡＡＶ２４．１、ＡＡＶ２７．３、ＡＡＶ４２．１２、ＡＡＶ４２－１ｂ、ＡＡＶ４２－２、ＡＡＶ４２－３ａ、ＡＡＶ４２－３ｂ、ＡＡＶ４２－４、ＡＡＶ４２－５ａ、ＡＡＶ４２－５ｂ、ＡＡＶ４２－６ｂ、ＡＡＶ４２－８、ＡＡＶ４２－１０、ＡＡＶ４２－１１、ＡＡＶ４２－１２、ＡＡＶ４２－１３、ＡＡＶ４２－１５、ＡＡＶ４２－ａａ、ＡＡＶ４３－１、ＡＡＶ４３－１２、ＡＡＶ４３－２０、ＡＡＶ４３－２１、ＡＡＶ４３－２３、ＡＡＶ４３－２５、ＡＡＶ４３－５、ＡＡＶ４４．１、ＡＡＶ４４．２、ＡＡＶ４４．５、ＡＡＶ２２３．１、ＡＡＶ２２３．２、ＡＡＶ２２３．４、ＡＡＶ２２３．５、ＡＡＶ２２３．６、ＡＡＶ２２３．７、ＡＡＶ１－７／ｒｈ．４８、ＡＡＶ１－８／ｒｈ．４９、ＡＡＶ２－１５／ｒｈ．６２、ＡＡＶ２－３／ｒｈ．６１、ＡＡＶ２－４／ｒｈ．５０、ＡＡＶ２－５／ｒｈ．５１、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．６、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．９、ＡＡＶ３－９／ｒｈ．５２、ＡＡＶ３－１１／ｒｈ．５３、ＡＡＶ４－８／ｒ１１．６４、ＡＡＶ４－９／ｒｈ．５４、ＡＡＶ４－１９／ｒｈ．５５、ＡＡＶ５－３／ｒｈ．５７、ＡＡＶ５－２２／ｒｈ．５８、ＡＡＶ７．３／ｈｕ．７、ＡＡＶ１６．８／ｈｕ．１０、ＡＡＶ１６．１２／ｈｕ．１１、ＡＡＶ２９．３／ｂｂ．１、ＡＡＶ２９．５／ｂｂ．２、ＡＡＶ１０６．１／ｈｕ．３７、ＡＡＶ１１４．３／ｈｕ．４０、ＡＡＶ１２７．２／ｈｕ．４１、ＡＡＶ１２７．５／ｈｕ．４２、ＡＡＶ１２８．３／ｈｕ．４４、ＡＡＶ１３０．４／ｈｕ．４８、ＡＡＶ１４５．１／ｈｕ．５３、ＡＡＶ１４５．５／ｈｕ．５４、ＡＡＶ１４５．６／ｈｕ．５５、ＡＡＶ１６１．１０／ｈｕ．６０、ＡＡＶ１６１．６／ｈｕ．６１、ＡＡＶ３３．１２／ｈｕ．１７、ＡＡＶ３３．４／ｈｕ．１５、ＡＡＶ３３．８／ｈｕ．１６、ＡＡＶ５２／ｈｕ．１９、ＡＡＶ５２．１／ｈｕ．２０、ＡＡＶ５８．２／ｈｕ．２５、ＡＡＶＡ３．３、ＡＡＶＡ３．４、ＡＡＶＡ３．５、ＡＡＶＡ３．７、ＡＡＶＣ１、ＡＡＶＣ２、ＡＡＶＣ５、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶＦ３、ＡＡＶＦ５、ＡＡＶＨ２、ＡＡＶｒｈ．７２、ＡＡＶｈｕ．８、ＡＡＶｒｈ．６８、ＡＡＶｒｈ．７０、ＡＡＶｐｉ．１、ＡＡＶｐｉ．３、ＡＡＶｐｉ．２、ＡＡＶｒｈ．６０、ＡＡＶｒｈ．４４、ＡＡＶｒｈ．６５、ＡＡＶｒｈ．５５、ＡＡＶｒｈ．４７、ＡＡＶｒｈ．６９、ＡＡＶｒｈ．４５、ＡＡＶｒｈ．５９、ＡＡＶｈｕ．１２、ＡＡＶＨ６、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶＨ－１／ｈｕ．１、ＡＡＶＨ－５／ｈｕ．３、ＡＡＶＬＧ－１０／ｒｈ．４０、ＡＡＶＬＧ－４／ｒｈ．３８、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶＮ７２１－８／ｒｈ．４３、ＡＡＶＣｈ．５、ＡＡＶＣｈ．５Ｒ１、ＡＡＶｃｙ．２、ＡＡＶｃｙ．３、ＡＡＶｃｙ．４、ＡＡＶｃｙ．５、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ１、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ２、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ３、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ４、ＡＡＶｃｙ．６、ＡＡＶｈｕ．１、ＡＡＶｈｕ．２、ＡＡＶｈｕ．３、ＡＡＶｈｕ．４、ＡＡＶｈｕ．５、ＡＡＶｈｕ．６、ＡＡＶｈｕ．７、ＡＡＶｈｕ．９、ＡＡＶｈｕ．１０、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．１３、ＡＡＶｈｕ．１５、ＡＡＶｈｕ．１６、ＡＡＶｈｕ．１７、ＡＡＶｈｕ．１８、ＡＡＶｈｕ．２０、ＡＡＶｈｕ．２１、ＡＡＶｈｕ．２２、ＡＡＶｈｕ．２３．２、ＡＡＶｈｕ．２４、ＡＡＶｈｕ．２５、ＡＡＶｈｕ．２７、ＡＡＶｈｕ．２８、ＡＡＶｈｕ．２９、ＡＡＶｈｕ．２９Ｒ、ＡＡＶｈｕ．３１、ＡＡＶｈｕ．３２、ＡＡＶｈｕ．３４、ＡＡＶｈｕ．３５、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｈｕ．３９、ＡＡＶｈｕ．４０、ＡＡＶｈｕ．４１、ＡＡＶｈｕ．４２、ＡＡＶｈｕ．４３、ＡＡＶｈｕ．４４、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４５、ＡＡＶｈｕ．４６、ＡＡＶｈｕ．４７、ＡＡＶｈｕ．４８、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４９、ＡＡＶｈｕ．５１、ＡＡＶｈｕ．５２、ＡＡＶｈｕ．５４、ＡＡＶｈｕ．５５、ＡＡＶｈｕ．５６、ＡＡＶｈｕ．５７、ＡＡＶｈｕ．５８、ＡＡＶｈｕ．６０、ＡＡＶｈｕ．６１、ＡＡＶｈｕ．６３、ＡＡＶｈｕ．６４、ＡＡＶｈｕ．６６、ＡＡＶｈｕ．６７、ＡＡＶｈｕ．１４／９、ＡＡＶｈｕ．ｔ １９、ＡＡＶｒｈ．２、ＡＡＶｒｈ．２Ｒ、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．８Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．１２、ＡＡＶｒｈ．１３、ＡＡＶｒｈ．１３Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１４、ＡＡＶｒｈ．１７、ＡＡＶｒｈ．１８、ＡＡＶｒｈ．１９、ＡＡＶｒｈ．２０、ＡＡＶｒｈ．２１、ＡＡＶｒｈ．２２、ＡＡＶｒｈ．２３、ＡＡＶｒｈ．２４、ＡＡＶｒｈ．２５、ＡＡＶｒｈ．３１、ＡＡＶｒｈ．３２、ＡＡＶｒｈ．３３、ＡＡＶｒｈ．３４、ＡＡＶｒｈ．３５、ＡＡＶｒｈ．３６、ＡＡＶｒｈ．３７、ＡＡＶｒｈ．３７Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．３８、ＡＡＶｒｈ．３９、ＡＡＶｒｈ．４０、ＡＡＶｒｈ．４６、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｒｈ．４８．１、ＡＡＶｒｈ．４８．１．２、ＡＡＶｒｈ．４８．２、ＡＡＶｒｈ．４９、ＡＡＶｒｈ．５１、ＡＡＶｒｈ．５２、ＡＡＶｒｈ．５３、ＡＡＶｒｈ．５４、ＡＡＶｒｈ．５６、ＡＡＶｒｈ．５７、ＡＡＶｒｈ．５８、ＡＡＶｒｈ．６１、ＡＡＶｒｈ．６４、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ１、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．６７、ＡＡＶｒｈ．７３、ＡＡＶｒｈ．７４、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ａ５８６Ｒ変異体、ＡＡＶｒｈ８Ｒ Ｒ５３３Ａ変異体、ＡＡＡＶ、ＢＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、ウシＡＡＶ、ＡＡＶｈＥ１．１、ＡＡＶｈＥｒ１．５、ＡＡＶｈＥＲ１．１４、ＡＡＶｈＥｒ１．８、ＡＡＶｈＥｒ１．１６、ＡＡＶｈＥｒ１．１８、ＡＡＶｈＥｒ１．３５、ＡＡＶｈＥｒ１．７、ＡＡＶｈＥｒ１．３６、ＡＡＶｈＥｒ２．２９、ＡＡＶｈＥｒ２．４、ＡＡＶｈＥｒ２．１６、ＡＡＶｈＥｒ２．３０、ＡＡＶｈＥｒ２．３１、ＡＡＶｈＥｒ２．３６、ＡＡＶｈＥＲ１．２３、ＡＡＶｈＥｒ３．１、ＡＡＶ２．５Ｔ、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ、ＡＡＶ－ＬＫ０１、ＡＡＶ－ＬＫ０２、ＡＡＶ－ＬＫ０３、ＡＡＶ－ＬＫ０４、ＡＡＶ－ＬＫ０５、ＡＡＶ－ＬＫ０６、ＡＡＶ－ＬＫ０７、ＡＡＶ－ＬＫ０８、ＡＡＶ－ＬＫ０９、ＡＡＶ－ＬＫ１０、ＡＡＶ－ＬＫ１１、ＡＡＶ－ＬＫ１２、ＡＡＶ－ＬＫ１３、ＡＡＶ－ＬＫ１４、ＡＡＶ－ＬＫ１５、ＡＡＶ－ＬＫ１６、ＡＡＶ－ＬＫ１７、ＡＡＶ－ＬＫ１８、ＡＡＶ－ＬＫ１９、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ２、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ４、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ６、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ７、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ８、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ１１、ＡＡＶ－ＰＡＥＣ１２、ＡＡＶ－２－ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ－１０１、ＡＡＶ－８ｈ、ＡＡＶ－８ｂ、ＡＡＶ－ｈ、ＡＡＶ－ｂ、ＡＡＶ ＳＭ １０－２、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－１、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－３、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－７、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－２、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－６、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １０－８、ＡＡＶ Ｓｈｕｆｆｌｅ １００－２、ＡＡＶ ＳＭ １０－１、ＡＡＶ ＳＭ １０－８、ＡＡＶ ＳＭ １００－３、ＡＡＶ ＳＭ １００－１０、ＢＮＰ６１ ＡＡＶ、ＢＮＰ６２ ＡＡＶ、ＢＮＰ６３ ＡＡＶ、ＡＡＶｒｈ．５０、ＡＡＶｒｈ．４３、ＡＡＶｒｈ．６２、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｈｕ．１９、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．５３、ＡＡＶ４－８／ｒｈ．６４、ＡＡＶＬＧ－９／ｈｕ．３９、ＡＡＶ５４．５／ｈｕ．２３、ＡＡＶ５４．２／ｈｕ．２２、ＡＡＶ５４．７／ｈｕ．２４、ＡＡＶ５４．１／ｈｕ．２１、ＡＡＶ５４．４Ｒ／ｈｕ．２７、ＡＡＶ４６．２／ｈｕ．２８、ＡＡＶ４６．６／ｈｕ．２９、ＡＡＶ１２８．１／ｈｕ．４３、真正タイプＡＡＶ（ｔｔＡＡＶ）、ＵＰＥＮＮ ＡＡＶ １０、日本型ＡＡＶ１０血清型、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．１０、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．２、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．５、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．７、ＡＡＶ ＣＢｒ－７．８、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｂ７．４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ２、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ３、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ４、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－ｅ５、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ６、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ７、ＡＡＶ ＣＢｒ－Ｅ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－１、ＡＡＶ ＣＨｔ－２、ＡＡＶ ＣＨｔ－３、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．１０、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．５、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．６、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．７、ＡＡＶ ＣＨｔ－６．８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ１、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ２、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ５、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ６、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ８、ＡＡＶ ＣＨｔ－Ｐ９、ＡＡＶ ＣＫｄ－１、ＡＡＶ ＣＫｄ－１０、ＡＡＶ ＣＫｄ－２、ＡＡＶ ＣＫｄ－３、ＡＡＶ ＣＫｄ－４、ＡＡＶ ＣＫｄ－６、ＡＡＶ ＣＫｄ－７、ＡＡＶ ＣＫｄ－８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ７、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｂ８、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ１、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ２、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ５、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｈ６、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ３、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ４、ＡＡＶ ＣＫｄ－Ｎ９、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ１、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ２、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ３、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ４、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ５、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ６、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ７、ＡＡＶ ＣＬｇ－Ｆ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－１、ＡＡＶ ＣＬｖ１－１、ＡＡＶ Ｃｌｖ１－１０、ＡＡＶ ＣＬｖ１－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－１２、ＡＡＶ ＣＬｖ１－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－１３、ＡＡＶ ＣＬｖ１－４、ＡＡＶ Ｃｌｖ１－７、ＡＡＶ Ｃｌｖ１－８、ＡＡＶ Ｃｌｖ１－９、ＡＡＶ ＣＬｖ－２、ＡＡＶ ＣＬｖ－３、ＡＡＶ ＣＬｖ－４、ＡＡＶ ＣＬｖ－６、ＡＡＶ ＣＬｖ－８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｄ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｅ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｋ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｌ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ１１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｍ９、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ１、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ２、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ３、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ４、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ５、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ６、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ７、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ８、ＡＡＶ ＣＬｖ－Ｒ９、ＡＡＶ ＣＳｐ－１、ＡＡＶ ＣＳｐ－１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－１１、ＡＡＶ ＣＳｐ－２、ＡＡＶ ＣＳｐ－３、ＡＡＶ ＣＳｐ－４、ＡＡＶ ＣＳｐ－６、ＡＡＶ ＣＳｐ－７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．１０、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．２、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．４、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．５、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．６、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．７、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．８、ＡＡＶ ＣＳｐ－８．９、ＡＡＶ ＣＳｐ－９、ＡＡＶ．ｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶ．ＶＲ－３５５、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶＦ１／ＨＳＣ１、ＡＡＶＦ１１／ＨＳＣ１１、ＡＡＶＦ１２／ＨＳＣ１２、ＡＡＶＦ１３／ＨＳＣ１３、ＡＡＶＦ１４／ＨＳＣ１４、ＡＡＶＦ１５／ＨＳＣ１５、ＡＡＶＦ１６／ＨＳＣ１６、
ＡＡＶＦ１７／ＨＳＣ１７、ＡＡＶＦ２／ＨＳＣ２、ＡＡＶＦ３／ＨＳＣ３、ＡＡＶＦ４／ＨＳＣ４、ＡＡＶＦ５／ＨＳＣ５、ＡＡＶＦ６／ＨＳＣ６、ＡＡＶＦ７／ＨＳＣ７、ＡＡＶＦ８／ＨＳＣ８、ＡＡＶＦ９／ＨＳＣ９、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．Ａ、Ｇ２Ｂ－２６、Ｇ２Ｂ－１３、ＴＨ１．１－３２、及び／またはＴＨ１．１－３５ならびにそれらのバリアントであり得るがこれらに限定されない。
末端逆位反復（ＩＴＲ）
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターゲノムは、少なくとも１つのＩＴＲ領域及びペイロード領域を含み得る。いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、２つのＩＴＲを有する。これらの２つのＩＴＲは、５’及び３’末端でペイロード領域に隣接する。ＩＴＲは、複製のための認識部位を含む複製起点として機能する。ＩＴＲは、相補的であり、かつ対称的に配置され得る配列領域を含む。本開示のベクターゲノムに組み込まれたＩＴＲは、天然に存在するポリヌクレオチド配列または組換え的に誘導されたポリヌクレオチド配列を含み得る。
ＩＴＲは、カプシドまたはその誘導体と同じ血清型に由来し得る。ＩＴＲは、カプシドとは異なる血清型のものであり得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、複数のＩＴＲを有する。非限定的な例では、ＡＡＶ粒子は、２つのＩＴＲを含むベクターゲノムを有する。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、互いに同じ血清型のものであり得る。別の実施形態では、ＩＴＲは、異なる血清型のものである。非限定的な例は、カプシドと同じ血清型を有するＩＴＲを含まず、またはその一方または両方を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムのＩＴＲの両方は、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。
独立して、各ＩＴＲは、長さが約１００～約１５０ヌクレオチドであり得る。ＩＴＲは、長さが約１００～１０５ヌクレオチド、長さが１０６～１１０ヌクレオチド、長さが１１１～１１５ヌクレオチド、長さが１１６～１２０ヌクレオチド、長さが１２１～１２５ヌクレオチド、長さが１２６～１３０ヌクレオチド、長さが１３１～１３５ヌクレオチド、長さが１３６～１４０ヌクレオチド、長さが１４１～１４５ヌクレオチドまたは長さが１４６～１５０ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、長さが１４０～１４２ヌクレオチドである。ＩＴＲの長さの非限定的な例は、長さが１０２、１４０、１４１、１４２、１４５ヌクレオチド、及びそれと少なくとも９５％の同一性を有するものである。
プロモーター
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムのペイロード領域は、導入遺伝子標的特異性及び発現を向上させるための少なくとも１つの要素を含む（例えば、Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒａｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｔｏ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１５（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。導入遺伝子標的特異性及び発現を向上させるための要素の非限定的な例には、プロモーター、内因性ｍｉＲＮＡ、転写後制御性要素（ＰＲＥ）、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列及び上流エンハンサー（ＵＳＥ）、ＣＭＶエンハンサー及びイントロンが含まれる。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムのペイロード領域においてコードされるポリペプチド（複数可）の発現を誘導する場合、効率的である。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、標的とされる細胞において発現を誘導する場合、効率的であるとみなされる。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、標的とされる組織において所定期間、ペイロードの発現を誘導する。プロモーターによって誘導される発現は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、３週、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年または１０年を超える期間であり得る。発現は、１～５時間、１～１２時間、１～２日、１～５日、１～２週、１～３週、１～４週、１～２ヶ月、１～４ヶ月、１～６ヶ月、２～６ヶ月、３～６ヶ月、３～９ヶ月、４～８ヶ月、６～１２ヶ月、１～２年、１～５年、２～５年、３～６年、３～８年、４～８年、または５～１０年間であり得る。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、ペイロードの発現を少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、２年、３年４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２１年、２２年、２３年、２４年、２５年、２６年、２７年、２８年、２９年、３０年、３１年、３２年、３３年、３４年、３５年、３６年、３７年、３８年、３９年、４０年、４１年、４２年、４３年、４４年、４５年、４６年、４７年、４８年、４９年、５０年、５５年、６０年、６５年間、または６５年を超えて誘導する。
プロモーターは、天然に存在し、または天然に存在しない場合がある。プロモーターの非限定的な例には、ウイルスプロモーター、植物プロモーター及び哺乳動物プロモーターが含まれる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ヒトプロモーターであり得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、切断型であり得る。
ほとんどの組織において発現を誘導または促進するプロモーターには、ヒト伸長因子１α－サブユニット（ＥＦ１α）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期エンハンサー及び／またはプロモーター、ニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）及びその誘導体ＣＡＧ、βグルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）、またはユビキチンＣ（ＵＢＣ）が含まれるがこれらに限定されない。限定されないが、筋肉特異的プロモーター、Ｂ細胞プロモーター、単球プロモーター、白血球プロモーター、マクロファージプロモーター、膵腺房細胞プロモーター、内皮細胞プロモーター、肺組織プロモーター、星状細胞プロモーター、または発現をニューロン、星状細胞、またはオリゴデンドロサイトに限定するために使用され得る神経系プロモーター等の組織特異的発現要素が、発現を所定の細胞タイプに限定するために使用され得る。
筋肉特異的プロモーターの非限定的な例には、哺乳動物筋肉クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）プロモーター、哺乳動物デスミン（ＤＥＳ）プロモーター、哺乳動物トロポニンＩ（ＴＮＮＩ２）プロモーター、及び哺乳動物骨格アルファ－アクチン（ＡＳＫＡ）プロモーター（例えば、米国特許公開ＵＳ２０１１０２１２５２９（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）が含まれる。
ニューロンのための組織特異的発現要素の非限定的な例には、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、血小板由来成長因子Ｂ－鎖（ＰＤＧＦ－β）、シナプシン（Ｓｙｎ）、メチル－ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）、Ｃａ２＋／カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）、代謝型グルタミン酸受容体２（ｍＧｌｕＲ２）、ニューロフィラメント軽（ＮＦＬ）または重（ＮＦＨ）、β－グロビンミニ遺伝子ｎβ２、プレプロエンケファリン（ＰＰＥ）、エンケファリン（Ｅｎｋ）及び興奮性アミノ酸トランスポーター２（ＥＡＡＴ２）プロモーターが含まれる。星状細胞のための組織特異的発現要素の非限定的な例には、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）及びＥＡＡＴ２プロモーターが含まれる。オリゴデンドロサイトのための組織特異的発現要素の非限定的な例には、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターが含まれる。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、１ｋｂ未満であり得る。プロモーターは、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、または８００を超えるヌクレオチドの長さを有し得る。プロモーターは、２００～３００、２００～４００、２００～５００、２００～６００、２００～７００、２００～８００、３００～４００、３００～５００、３００～６００、３００～７００、３００～８００、４００～５００、４００～６００、４００～７００、４００～８００、５００～６００、５００～７００、５００～８００、６００～７００、６００～８００、または７００～８００の長さを有し得る。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、同じまたは異なる開始または親プロモーターの２つ以上の成分の組み合わせ、例えば、限定されないが、ＣＭＶ及びＣＢＡであり得る。各成分は、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、または８００を超える長さを有し得る。各成分は、２００～３００、２００～４００、２００～５００、２００～６００、２００～７００、２００～８００、３００～４００、３００～５００、３００～６００、３００～７００、３００～８００、４００～５００、４００～６００、４００～７００、４００～８００、５００～６００、５００～７００、５００～８００、６００～７００、６００～８００、または７００～８００の長さを有し得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、３８２ヌクレオチドＣＭＶ－エンハンサー配列及び２６０ヌクレオチドＣＢＡ－プロモーター配列の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、ユビキタスプロモーターを含む。ユビキタスプロモーターの非限定的な例には、ＣＭＶ、ＣＢＡ（誘導体ＣＡＧ、ＣＢｈ等を含む）、ＥＦ－１α、ＰＧＫ、ＵＢＣ、ＧＵＳＢ（ｈＧＢｐ）、及びＵＣＯＥ（ＨＮＲＰＡ２Ｂ１－ＣＢＸ３のプロモーター）が含まれる。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、細胞特異的ではない。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、操作されたプロモーターを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、天然に発現するタンパク質からのプロモーターを含む。
非翻訳領域（ＵＴＲ）
定義により、遺伝子の野生型非翻訳領域（ＵＴＲ）は、転写されるが翻訳されない。通常、５’ＵＴＲは、転写開始部位で開始し、開始コドンで終了し、３’ＵＴＲは、終止コドンの直後に開始し、転写のための終結シグナルまで続く。
特定の標的器官の豊富に発現した遺伝子に典型的に見られる特徴は、安定性及びタンパク質生成を向上させるためにＵＴＲ内に操作され得る。非限定的な例として、肝臓において通常発現するｍＲＮＡ（例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子）からの５’ＵＴＲは、肝細胞株または肝臓における発現を向上させるために本開示のＡＡＶ粒子のベクターゲノムにおいて使用され得る。
理論に縛られることを望むものではないが、野生型５’非翻訳領域（ＵＴＲ）には、翻訳開始において役割を果たす特徴が含まれる。リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始させるプロセスに関与することが一般的に知られているＫｏｚａｋ配列が通常、５’ＵＴＲに含まれる。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（式中、Ｒは、開始コドン（ＡＴＧ）（別の「Ｇ」が続く）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）である）を有する。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムにおける５’ＵＴＲには、Ｋｏｚａｋ配列が含まれる。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムにおける５’ＵＴＲには、Ｋｏｚａｋ配列が含まれない。
理論に縛られることを望むものではないが、野生型３’ＵＴＲは、それに埋め込まれたアデノシン及びウリジンの伸長部を有することが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャは、高いターンオーバー率を有する遺伝子において特に広く見られる。それらの配列特徴及び機能的特性に基づいて、ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）は、３つのクラスに分けられ得る（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））：クラスＩのＡＲＥ、例えば、限定されないが、ｃ－Ｍｙｃ及びＭｙｏＤは、Ｕリッチ領域内でＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散したコピーを含有する。クラスＩＩのＡＲＥ、例えば、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ及びＴＮＦ－ａは、２つ以上の重複するＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を保有する。クラスＩＩＩのＡＲＥ、例えば、限定されないが、ｃ－Ｊｕｎ及びミオゲニンは、あまりよく定義されていない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質は、メッセンジャーを不安定化することが知られている一方で、ＥＬＡＶファミリーのメンバー、中でも特にＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を増加させることが文書化されている。ＨｕＲは、３つすべてのクラスのＡＲＥに結合する。核酸分子の３’ＵＴＲ内にＨｕＲ特異的結合部位を操作することは、ＨｕＲ結合をもたらし、よって、ｉｎ ｖｉｖｏでメッセージの安定化をもたらす。
３’ＵＴＲ ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）の導入、除去または修飾は、ポリヌクレオチドの安定性を調節するために使用され得る。特定のポリヌクレオチド、例えば、ベクターゲノムのペイロード領域を操作する場合、ポリヌクレオチドをより不安定にし、それにより翻訳を縮小し、得られるタンパク質の生成を減少させるためにＡＲＥの１つ以上のコピーが導入され得る。同様に、ＡＲＥは、同定され、細胞内安定性を増加させ、よって、得られるタンパク質の翻訳及び生成を増加させるために除去または変異させられ得る。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムの３’ＵＴＲには、ポリ－Ａテールの鋳型付加のためのオリゴ（ｄＴ）配列が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムには、少なくとも１つのｍｉＲＮＡシード、結合部位または完全配列が含まれ得る。マイクロＲＮＡ（またはｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）は、核酸標的の部位に結合し、核酸分子安定性を低減することによってまたは翻訳を阻害することによってのいずれかで遺伝子発現を下方制御する１９～２５ヌクレオチドの非コードＲＮＡである。マイクロＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟マイクロＲＮＡの位置２～８の領域における配列を含み、この配列は、核酸のｍｉＲＮＡ標的配列と完全なワトソン・クリック相補性を有する。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位、配列、またはシード領域を含む、改変するまたは除去するように操作され得る。
当該技術分野で知られている任意の遺伝子からの任意のＵＴＲは、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムに組み込まれ得る。これらのＵＴＲ、またはその一部分は、それらが選択された遺伝子と同じ配向で配置され得、またはそれらは、配向または位置が改変され得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムにおいて使用されるＵＴＲは、逆にされ、短くされ、長くされ、当該技術分野で知られている１つ以上の他の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを用いて作製され得る。本明細書で使用される場合、用語「改変」は、ＵＴＲに関する場合、参照配列に対して何らかの方法で変更されていることを意味する。例えば、３’または５’ＵＴＲは、上に教示されるように配向または位置の変化によって野生型またはネイティブＵＴＲと比べて改変され得、または追加のヌクレオチドの包含、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの交換または転移によって改変され得る。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムは、野生型ＵＴＲのバリアントではない少なくとも１つの人工ＵＴＲを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子のベクターゲノムは、タンパク質が共通の機能、構造、特徴または特性を共有する転写産物のファミリーから選択されているＵＴＲを含む。
ポリアデニル化配列
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムは、ペイロードコード配列の３’末端と、３’ＩＴＲの５’末端との間に少なくとも１つのポリアデニル化配列を含む。
いくつかの実施形態では、ポリアデニル化（ポリ－Ａ）配列は、長さが非存在から約５００ヌクレオチドまでの範囲であり得る。ポリアデニル化配列は、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、及び５００ヌクレオチドであり得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが５０～１００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが５０～１５０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが５０～１６０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが５０～２００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが６０～１００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが６０～１５０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが６０～１６０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが６０～２００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが７０～１００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが７０～１５０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが７０～１６０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが７０～２００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが８０～１００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが８０～１５０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが８０～１６０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが８０～２００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが９０～１００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが９０～１５０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが９０～１６０ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、長さが９０～２００ヌクレオチドである。
リンカー
ベクターゲノムは、コードまたは非コード領域を分離するように１つ以上のスペーサーまたはリンカー領域で操作され得る。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノムのペイロード領域は、１つ以上のリンカー配列を任意にコードし得る。いくつかの場合では、リンカーは、ペイロード領域によってコードされるポリペプチド（すなわち、発現中の軽及び重抗体鎖）を接続するために使用され得るペプチドリンカーであり得る。いくつかのペプチドリンカーは、重鎖及び軽鎖ドメインを分離するために発現後に切断され、成熟抗体または抗体断片の構築を可能とし得る。リンカー切断は、酵素性であり得る。いくつかの場合では、リンカーは、細胞内または細胞外切断を容易化するための酵素切断部位を含む。いくつかのペイロード領域は、ｍＲＮＡ転写産物からのリンカー配列の翻訳中にポリペプチド合成を遮断するリンカーをコードする。そのようなリンカーは、単一の転写産物からの別々のタンパク質ドメインの翻訳を容易化し得る。いくつかの場合では、２つ以上のリンカーは、ベクターゲノムのペイロード領域によってコードされる。
内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）は、ｍＲＮＡ配列の中央部における翻訳の開始を可能とするヌクレオチド配列（＞５００ヌクレオチド）である（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，２０１１．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）：ｅ１８５５６（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＩＲＥＳ配列の使用は、ＩＲＥＳの前及び後の遺伝子の共発現を確保するが、ＩＲＥＳの後の配列は、ＩＲＥＳ配列に先行する配列よりも低いレベルで転写及び翻訳され得る。
２Ａペプチドは、ウイルス、例えば、足口病ウイルス（Ｆ２Ａ）、ブタテシオウイルス－１（Ｐ２Ａ）、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）、またはウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）に由来する小さな「自己切断性」ペプチド（１８～２２アミノ酸）である。２Ａの指定は特に、２ＡペプチドのＣ末端におけるグリシル－プロリル結合でリボソームスキップをもたらすピコルナウイルスポリタンパク質の領域を指す（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，２０１１．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）：ｅ１８５５６（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。このスキップは、２Ａペプチドとそのすぐ下流のペプチドとの間の切断をもたらす。ＩＲＥＳリンカーとは対照的に、２Ａペプチドは、２Ａペプチドに隣接するタンパク質の化学量論的発現を生成し、それらのより短い長さは、ウイルス性発現ベクターを生成する際に有利であり得る。
いくつかのペイロード領域は、フーリン切断部位を含むリンカーをコードする。フーリンは、塩基性アミノ酸標的配列（Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇ）のすぐ下流のタンパク質を切断するカルシウム依存性セリンエンドプロテアーゼである（Ｔｈｏｍａｓ，Ｇ．，２００２．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３（１０）：７５３－６６（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる））。フーリンは、トランスゴルジネットワークにおいて濃縮されており、そこでそれは、細胞前駆体タンパク質のプロセシングに関与する。フーリンはまた、多数の病原体を活性化する際に役割を果たす。この活性は、本開示のポリペプチドの発現のために利用され得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、カテプシン、マトリックスメタロプロテイナーゼまたはレグマイン切断部位を含む１つ以上のリンカーをコードし得る。そのようなリンカーは、例えば、Ｃｉｚｅａｕ及びＭａｃｄｏｎａｌｄによって国際公開番号ＷＯ２００８０５２３２２（その内容は、それらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。カテプシンは、特定のタンパク質を切断するための独自のメカニズムを有するプロテアーゼのファミリーである。カテプシンＢは、システインプロテアーゼであり、カテプシンＤは、アスパルチルプロテアーゼである。マトリックスメタロプロテイナーゼは、カルシウム依存性及び亜鉛含有エンドペプチダーゼのファミリーである。レグマインは、タンパク質及び小分子基質の（－Ａｓｎ－Ｘａａ－）結合の加水分解を触媒する酵素である。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、切断されないリンカーをコードし得る。そのようなリンカーには、単一アミノ酸配列、例えば、グリシンリッチ配列が含まれ得る。いくつかの場合では、リンカーは、グリシン及びセリン残基を含むフレキシブルペプチドリンカーを含み得る。リンカーは、異なる長さのフレキシブルペプチドリンカー、例えば、ｎｘＧ４Ｓ（式中、ｎ＝１～１０である）を含み得、コードされるリンカーの長さは、５～５０アミノ酸で変わる。非限定的な例では、リンカーは、５ｘＧ４Ｓであり得る。これらのフレキシブルリンカーは、抗体セグメント間にフレキシブルリンカーを提供しながら、二次タンパク質構造に影響を及ぼさない傾向となるように小さく、側鎖を有しない（Ｇｅｏｒｇｅ，Ｒ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００２．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １５（１１）：８７１－９；Ｈｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，１９８８．ＰＮＡＳ ８５：５８７９－８３；及びＳｈａｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９９．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１６２（１１）：６５８９－９５（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる））。さらに、セリン残基の極性は、溶解性を改善し、凝集問題を防止する。
いくつかの実施形態では、本開示のペイロード領域は、小さな非分岐状セリンリッチペプチドリンカー、例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．によって米国特許番号ＵＳ５５２５４９１（その内容は、それらの全体が本明細書に組み込まれる）において記載されているものをコードし得る。セリンリッチリンカーによって連結された本開示のペイロード領域によってコードされるポリペプチドは、増加した溶解性を有する。
いくつかの実施形態では、本開示のペイロード領域は、人工リンカー、例えば、Ｗｈｉｔｌｏｗ及びＦｉｌｐｕｌａによって米国特許番号ＵＳ５８５６４５６に、及びＬａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．によって米国特許番号ＵＳ４９４６７７８（これらの各々の内容は、それらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものをコードし得る。
イントロン
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、発現を向上させるための少なくとも１つの要素、例えば、１つ以上のイントロンまたはその部分を含む。イントロンの非限定的な例には、ＭＶＭ（６７～９７ｂｐ）、Ｆ．ＩＸ切断型イントロン１（３００ｂｐ）、β－グロビンＳＤ／免疫グロブリン重鎖スプライスアクセプター（２５０ｂｐ）、アデノウイルススプライスドナー／イムノグロビンスプライスアクセプター（５００ｂｐ）、ＳＶ４０後期スプライスドナー／スプライスアクセプター（１９Ｓ／１６Ｓ）（１８０ｂｐ）及びハイブリッドアデノウイルススプライスドナー／ＩｇＧスプライスアクセプター（２３０ｂｐ）が含まれる。
いくつかの実施形態では、イントロンまたはイントロン部分は、長さが１００～５００ヌクレオチドであり得る。イントロンは、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０または５００の長さを有し得る。イントロンは、８０～１００、８０～１２０、８０～１４０、８０～１６０、８０～１８０、８０～２００、８０～２５０、８０～３００、８０～３５０、８０～４００、８０～４５０、８０～５００、２００～３００、２００～４００、２００～５００、３００～４００、３００～５００、または４００～５００の長さを有し得る。
レンチウイルスベクター
レンチウイルスベクターは、レトロウイルスの１種であり、それらのウイルスシェルが標的細胞の核のインタクト膜を通過し得るので、分裂及び非分裂細胞の両方に感染し得る。レンチウイルスベクターは、安定な遺伝子操作が救い難いほど無効であると長い間思われていた組織において導入遺伝子を送達する能力を有する。レンチベクターはまた、多様な遺伝性及び後天的障害の遺伝子的処置のための新たな視点を切り開き、それらの臨床的使用のための現実的提案が差し迫っているようである。
ＲＮＡ
リボ核酸（ＲＮＡ）は、窒素塩基及びホスフェート基に結合したリボース糖であるヌクレオチドから構成される分子である。窒素塩基には、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、ウラシル（Ｕ）、及びシトシン（Ｃ）が含まれる。通常、ＲＮＡは大抵、一本鎖形態で存在するが、所定の状況では二本鎖で存在し得る。ＲＮＡの長さ、形態及び構造は、ＲＮＡの目的に応じて多様である。例えば、ＲＮＡの長さは、短い配列（例えば、ｓｉＲＮＡ）から長い配列（例えば、ｌｎｃＲＮＡ）まで様々であり得、線状（例えば、ｍＲＮＡ）または環状（例えば、ｏＲＮＡ）であり得、コード（例えば、ｍＲＮＡ）または非コード（例えば、ｌｎｃＲＮＡ）配列のいずれかであり得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コードＲＮＡであり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、非コードＲＮＡであり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、コードＲＮＡ及び非コードＲＮＡの両方であり、またはそれをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、複数のカーゴまたはペイロードをコードする核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、遺伝子の発現を向上させるための核酸配列を含む。非限定的な例として、核酸配列は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。別の非限定的な例として、核酸配列は、環状ＲＮＡ（ｏＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、遺伝子の発現を低減または阻害するための核酸配列を含む。非限定的な例として、核酸配列は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ｍＲＮＡであり得る。本明細書で使用される場合、用語「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、対象となる標的をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕまたはｅｘ ｖｉｖｏで翻訳されて、対象となるコードされる標的を生成することが可能な任意のポリヌクレオチドを指す。
通常、ｍＲＮＡ分子は、少なくともコード領域、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ及びポリ－Ａテールを含む。いくつかの態様では、１つ以上の構造的及び／または化学的修飾または改変が、ｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫反応を低減し得るＲＮＡに含まれ得る。本明細書で使用される場合、「構造的」特徴または修飾は、２つ以上の連結されたヌクレオチドが、ヌクレオチド自体への有意な化学的修飾に伴わずに、核酸において挿入、欠失、複製、反転、またはランダム化されたものである。構造的修飾を達成するためには化学的結合が必ず切断され、再形成されるので、構造的修飾は、化学的特質のものであり、よって、化学的修飾である。しかしながら、構造的修飾は、異なるヌクレオチド配列をもたらすことになる。例えば、ポリヌクレオチド「ＡＴＣＧ」は、「ＡＴ－５ｍｅＣ－Ｇ」に化学的に修飾され得る。
通常、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトの領域の最短の長さは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、またはデカペプチドをコードするために十分である核酸配列の長さであり得る。別の実施形態では、長さは、２～３０アミノ酸、例えば、５～３０、１０～３０、２～２５、５～２５、１０～２５、または１０～２０アミノ酸のペプチドをコードするために十分であり得る。長さは、少なくとも１１、１２、１３、１４、１５、１７、２０、２５または３０アミノ酸のペプチド、または４０アミノ酸以下、例えば、３５、３０、２５、２０、１７、１５、１４、１３、１２、１１または１０アミノ酸以下であるペプチドをコードするために十分であり得る。
通常、対象となる標的をコードするｍＲＮＡの領域の長さは、長さが約３０ヌクレオチドを超える（例えば、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００、４，０００、５，０００、６，０００、７，０００、８，０００、９，０００、１０，０００、２０，０００、３０，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、７０，０００、８０，０００、９０，０００ヌクレオチドまたは最大で１００，０００ヌクレオチドを含み、またはそれを超える）。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、約３０～約１００，０００ヌクレオチド（例えば、３０～５０、３０～１００、３０～２５０、３０～５００、３０～１，０００、３０～１，５００、３０～３，０００、３０～５，０００、３０～７，０００、３０～１０，０００、３０～２５，０００、３０～５０，０００、３０～７０，０００、１００～２５０、１００～５００、１００～１，０００、１００～１，５００、１００～３，０００、１００～５，０００、１００～７，０００、１００～１０，０００、１００～２５，０００、１００～５０，０００、１００～７０，０００、１００～１００，０００、５００～１，０００、５００～１，５００、５００～２，０００、５００～３，０００、５００～５，０００、５００～７，０００、５００～１０，０００、５００～２５，０００、５００～５０，０００、５００～７０，０００、５００～１００，０００、１，０００～１，５００、１，０００～２，０００、１，０００～３，０００、１，０００～５，０００、１，０００～７，０００、１，０００～１０，０００、１，０００～２５，０００、１，０００～５０，０００、１，０００～７０，０００、１，０００～１００，０００、１，５００～３，０００、１，５００～５，０００、１，５００～７，０００、１，５００～１０，０００、１，５００～２５，０００、１，５００～５０，０００、１，５００～７０，０００、１，５００～１００，０００、２，０００～３，０００、２，０００～５，０００、２，０００～７，０００、２，０００～１０，０００、２，０００～２５，０００、２，０００～５０，０００、２，０００～７０，０００、及び２，０００～１００，０００）が含まれる。
いくつかの実施形態では、対象となる標的をコードする領域またはその領域に隣接する領域は、独立して、長さが１５～１，０００ヌクレオチドの範囲であり得る（例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、及び９００ヌクレオチドを超え、または少なくとも３０、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、及び１，０００ヌクレオチド）。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、長さが非存在～５００ヌクレオチドの範囲であり得るテール配列（例えば、少なくとも６０、７０、８０、９０、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ヌクレオチド）を含む。テール領域がポリＡテールである場合、長さは、ポリＡ結合タンパク質結合の単位で、またはその機能に応じて決定され得る。この実施形態では、ポリＡテールは、ポリＡ結合タンパク質の少なくとも４モノマーを結合させるのに十分に長い。ポリＡ結合タンパク質モノマーは、およそ３８ヌクレオチドの伸長部に結合する。このように、約８０ヌクレオチド及び１６０ヌクレオチドのポリＡテールが機能的であることが観察されている。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、単一のキャップまたはキャップを形成する一連のヌクレオチドを含むキャップ配列を含む。キャップ配列は、長さが１～１０、例えば、２～９、３～８、４～７、１～５、５～１０、または少なくとも２、または１０以下のヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、キャップ配列は、非存在である。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、開始コドンを含む領域を含む。開始コドンを含む領域は、長さが３～４０、例えば、５～３０、１０～２０、１５、または少なくとも４、または３０以下のヌクレオチドの範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、終止コドンを含む領域を含む。終止コドンを含む領域は、長さが３～４０、例えば、５～３０、１０～２０、１５、または少なくとも４、または３０以下のヌクレオチドの範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、制限配列を含む領域を含む。制限配列を含む領域は、長さが３～４０、例えば、５～３０、１０～２０、１５、または少なくとも４、または３０以下のヌクレオチドの範囲であり得る。
非翻訳領域（ＵＴＲ）
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、対象となる標的をコードする領域に隣接する少なくとも１つの非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。ＵＴＲは、転写されるが翻訳されない。
５’ＵＴＲは、転写開始部位で開始し、開始コドンまで続くが、開始コドンを含まず；一方で、３’ＵＴＲは、終止コドンの直後で開始し、転写終結シグナルまで続く。理論に縛られることを望むものではないが、ＵＴＲは、核酸の翻訳及び安定性の観点から制御的役割を有し得る。
天然５’ＵＴＲには通常、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始させるプロセスに関与することが一般的に知られているＫｏｚａｋ配列を含む傾向があるので、翻訳開始において役割を有する特徴が含まれる。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（式中、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）（別の「Ｇ」が続く）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）である）を有する。５’ＵＴＲはまた、伸長因子結合に関与する二次構造を形成することが知られている。
３’ＵＴＲは、それらに埋め込まれたアデノシン及びウリジンの伸長部を有することが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャは、高いターンオーバー率を有する遺伝子において特に広く見られる。それらの配列特徴及び機能的特性に基づいて、ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）は、３つのクラスに分けられ得る（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５）：クラスＩのＡＲＥは、Ｕリッチ領域内でＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散したコピーを含有する。Ｃ－Ｍｙｃ及びＭｙｏＤは、クラスＩのＡＲＥを含有する。クラスＩＩのＡＲＥは、２つ以上の重複するＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を保有する。このタイプのＡＲＥを含有する分子には、ＧＭ－ＣＳＦ及びＴＮＦ－ａが含まれる。クラスＩＩＩのＡＲＥＳは、あまり定義されていない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。ｃ－Ｊｕｎ及びミオゲニンは、このクラスの２つのよく研究された例である。ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質は、メッセンジャーを不安定化することが知られている一方で、ＥＬＡＶファミリーのメンバー、中でも特にＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を増加させることが文書化されている。ＨｕＲは、３つすべてのクラスのＡＲＥに結合する。核酸分子の３’ＵＴＲ内にＨｕＲ特異的結合部位を操作することは、ＨｕＲ結合をもたらし、よって、ｉｎ ｖｉｖｏでメッセージの安定化をもたらす。３’ＵＴＲ ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）の導入、除去または修飾は、ｍＲＮＡの安定性を調節するために使用され得る。例えば、ＡＲＥの１つ以上のコピーは、ｍＲＮＡを安定性がより低いものとし、それにより翻訳を削減し、得られるタンパク質の生成を減少させるために導入され得る。代替的には、ＡＲＥは、細胞内安定性を増加させ、よって、得られるタンパク質の翻訳及び生成を増加させるために同定され、除去または変異させられ得る。
いくつかの実施形態では、標的器官の遺伝子においてしばしば発現する特徴の導入により、ｍＲＮＡの安定性及びタンパク質生成は、特定の器官及び／または組織において向上し得る。非限定的な例として、特徴は、ＵＴＲであり得る。別の例として、特徴は、イントロンまたはイントロン配列の一部分であり得る。
５’キャッピング
ｍＲＮＡの５’キャップ構造は、核外搬出に関与し、ｍＲＮＡ安定性を増加させ、ｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）を結合させ、これは、細胞におけるｍＲＮＡ安定性及び成熟環状ｍＲＮＡ種を形成するためのＣＢＰとポリ（Ａ）結合タンパク質との会合を介する翻訳能力を担う。キャップはさらに、ｍＲＮＡスプライシング中に５’近傍イントロン除去の除去を補助する。
内因性ｍＲＮＡ分子は、５’末端でキャップされ得、末端グアノシンキャップ残基と、ｍＲＮＡ分子の５’末端の転写されたセンスヌクレオチドとの間に５’－ｐｐｐ－５’－トリホスフェート結合を生成する。この５’－グアニレートキャップは次いで、Ｎ７－メチル－グアニレート残基を生成するようにメチル化され得る。ｍＲＮＡの５’末端の末端及び／または非末端の転写されたヌクレオチドのリボース糖はまた、任意に２’－０－メチル化され得る。グアニレートキャップ構造の加水分解及び切断を介する５’－脱キャッピングは、分解のために核酸分子、例えば、ｍＲＮＡ分子を標的とし得る。
ｍＲＮＡに対する修飾は、脱キャッピグを防止し、よって、ｍＲＮＡ半減期を増加させる加水分解可能ではないキャップ構造を生成し得る。キャップ構造の加水分解は、５’－ｐｐｐ－５’ホスホロジエステル結合の切断を必要とするので、キャッピング反応中に修飾ヌクレオチドが使用され得る。例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）からのＶａｃｃｉｎｉａ Ｃａｐｐｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅは、５’－ｐｐｐ－５’キャップにおいてホスホロチオエート結合を生成するために製造業者の指示書に従ってａ－チオ－グアノシンヌクレオチドと共に使用され得る。
ａ－メチル－ホスホネート及びセレノ－ホスフェートヌクレオチド等の追加の修飾グアノシンヌクレオチドが使用され得る。
追加の修飾には、糖環の２’－ヒドロキシル基上のｍＲＮＡの５’末端及び／または５’非末端ヌクレオチドのリボース糖の２’－０－メチル化（上述されている）が含まれるがこれらに限定されない。複数の異なる５’－キャップ構造は、ｍＲＮＡ分子等の核酸分子の５’－キャップを生成するために使用され得る。
本明細書で合成キャップアナログ、化学的キャップ、化学的キャップアナログ、または構造的もしくは機能的キャップアナログとも称されるキャップアナログは、キャップ機能を保持しながらそれらの化学的構造において天然（すなわち、内因性、野生型または生理的）５’－キャップとは異なる。キャップアナログは、化学的（すなわち、非酵素的）または酵素的に合成され、及び／または核酸分子に連結され得る。
例えば、アンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）キャップは、５’－５’－トリホスフェート基によって連結された２つのグアニンを含有し、一方のグアニンは、Ｎ７メチル基ならびに３’－０－メチル基（すなわち、Ｎ７，３’－０－ジメチル－グアノシン－５’－トリホスフェート－５’－グアノシン（ｍ７Ｇ－３’ｍｐｐｐ－Ｇ（３’Ｏ－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ）と同等に指定され得る）を含有する。他方の未修飾のグアニンの３’－０原子は、キャップされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の５’末端ヌクレオチドに連結される。Ｎ７－及び３’－０－メチル化グアニンは、キャップされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の末端部位を提供する。
別の例示的なキャップはｍＣＡＰであり、これはＡＲＣＡに類似しているが、グアノシン上に２’－０－メチル基を有する（すなわち、Ｎ７，２’－０－ジメチル－グアノシン－５’－トリホスフェート－５’－グアノシン、ｍ７Ｇｍ－ｐｐｐ－Ｇ）。
キャップアナログにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応において核酸分子の付随キャッピングが可能となるが、転写産物の最大で２０％は、キャップされないままであり得る。このこと、ならびに内因性細胞転写機構によって生成される核酸の内因性５’－キャップ構造からのキャップアナログの構造的差異は、低減された翻訳能力及び低減された細胞安定性をもたらし得る。
ｍＲＮＡはまた、より確実な５’－キャップ構造を生成するために、酵素を使用して、転写後にキャップされ得る。本明細書で使用される場合、語句「より確実な」は、構造的または機能的のいずれかで、内因性または野生型の特徴を厳密に反映または模倣する特徴を指す。すなわち、「より確実な」特徴は、先行技術の合成特徴またはアナログ等と比較して、または１つ以上の点で対応する内因性、野生型、天然または生理的特徴よりも性能が優れている内因性、野生型、天然または生理的細胞機能及び／または構造をより良好に代表する。より確実な５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当該技術分野で知られている合成５’キャップ構造（または野生型、天然または生理的５’キャップ構造）と比較した場合、キャップ結合タンパク質の向上した結合、増加した半減期、５’エンドヌクレアーゼに対する低減した感受性及び／または低減した５’脱キャッピングを有するものである。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素及び組換え２’－０－メチルトランスフェラーゼ酵素は、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチドとの間の標準的な５’－５’－トリホスフェート結合を生成し得、キャップグアニンは、Ｎ７メチル化を含有し、ｍＲＮＡの５’末端ヌクレオチドは、２’－０－メチルを含有する。そのような構造は、Ｃａｐｌ構造と称される。このキャップは、例えば、当該技術分野で知られている他の５’キャップアナログ構造と比較した場合、より高い翻訳能力及び細胞安定性ならびに細胞性炎症誘発性サイトカインの低減された活性化をもたらす。キャップ構造には、７ｍＧ（５＊）ｐｐｐ（５＊）Ｎ，ｐＮ２ｐ（キャップ０）、７ｍＧ（５＊）ｐｐｐ（５＊）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、及び７ｍＧ（５＊）－ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、５’末端キャップには、内因性キャップまたはキャップアナログが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、５’末端キャップは、グアニンアナログを含み得る。有用なグアニンアナログには、イノシン、Ｎｌ－メチル－グアノシン、２’フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、及び２－アジド－グアノシンが含まれるがこれらに限定されない。
ＩＲＥＳ配列
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有し得る。特徴的ピコルナウイルスＲＮＡとして最初に同定されたＩＲＥＳは、５’キャップ構造の非存在下でタンパク質合成を開始させる際に重要な役割を果たす。ＩＲＥＳは、唯一のリボソーム結合部位として作用し得、またはｍＲＮＡの複数のリボソーム結合部位の１つとして機能し得る。複数の機能的リボソーム結合部位を含有するｍＲＮＡは、リボソームによって独立して翻訳されるいくつかのペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。使用され得るＩＲＥＳ配列の非限定的な例には、限定されないが、ピコルナウイルス（例えば、ＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、古典的ブタ熱ウイルス（ＣＳＦＶ）、ネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）、シミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）からのものが含まれる。
ポリ－Ａテール
ＲＮＡプロセシング中に、アデニンヌクレオチドの長鎖（ポリ－Ａテール）が、安定性を増加させるためにポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡ分子に付加され得る。転写の直後に、転写産物の３’末端が切断されて３’ヒドロキシルを遊離させ得る。次いでポリ－Ａポリメラーゼは、アデニンヌクレオチドの鎖をＲ Ａに付加する。ポリアデニル化と呼ばれるそのプロセスは、所定長さのポリ－Ａテールを付加する。
いくつかの実施形態では、ポリ－Ａテールの長さは、長さが３０ヌクレオチドを超える。別の実施形態では、ポリ－Ａテールは、長さが３５ヌクレオチドを超える（例えば、少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１，１００、１，２００、１，３００、１，４００、１，５００、１，６００、１，７００、１，８００、１，９００、２，０００、２，５００、及び３，０００ヌクレオチドまたはそれを超える）。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、約３０～約３，０００ヌクレオチド（例えば、３０～５０、３０～１００、３０～２５０、３０～５００、３０～７５０、３０～１，０００、３０～１，５００、３０～２，０００、３０～２，５００、５０～１００、５０～２５０、５０～５００、５０～７５０、５０～１，０００、５０～１，５００、５０～２，０００、５０～２，５００、５０～３，０００、１００～５００、１００～７５０、１００～１，０００、１００～１，５００、１００～２，０００、１００～２，５００、１００～３，０００、５００～７５０、５００～１，０００、５００～１，５００、５００～２，０００、５００～２，５００、５００～３，０００、１，０００～１，５００、１，０００～２，０００、１，０００～２，５００、１，０００～３，０００、１，５００～２，０００、１，５００～２，５００、１，５００～３，０００、２，０００～３，０００、２，０００～２，５００、及び２，５００～３，０００）のポリ－Ａテールが含まれる。
いくつかの実施形態では、ポリ－Ａテールは、ｍＲＮＡ全体の長さに対して設計される。この設計は、対象となる標的をコードする領域の長さ、特定の特徴または領域（例えば、隣接領域領域）の長さに基づき、またはｍＲＮＡから発現する最終生成物の長さに基づき得る。
この文脈において、ポリ－Ａテールは、ｍＲＮＡまたはその特徴よりも長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％長い場合がある。ポリ－Ａテールはまた、それが属するｍＲＮＡの画分として設計され得る。この文脈において、ポリ－Ａテールは、コンストラクトの総長さの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％以上またはコンストラクトの総長さからポリ－Ａテールを除いたものであり得る。さらに、ポリ－Ａ結合タンパク質のためのｍＲＮＡの操作された結合部位及びコンジュゲーションは、発現を向上させ得る。
また、複数の異なるｍＲＮＡは、ポリ－Ａテールの３’末端で修飾ヌクレオチドを使用して３’末端を介してＰＡＢＰ（ポリ－Ａ結合タンパク質）に互いに連結され得る。トランスフェクション実験は、関連する細胞株において行われ得、タンパク質生成は、トランスフェクションから１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日目後にＥＬＩＳＡによってアッセイされ得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ポリＡ－Ｇカルテットを含むように設計される。Ｇ－カルテットは、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方においてＧリッチ配列によって形成され得る４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイである。この実施形態では、Ｇ－カルテットは、ポリ－Ａテールの末端に組み込まれる。
終止コドン
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、１つの終止コドンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、２つの終止コドンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、３つの終止コドンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、少なくとも１つの終止コドンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、少なくとも２つの終止コドンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、少なくとも３つの終止コドンが含まれ得る。非限定的な例として、終止コドンは、ＴＧＡ、ＴＡＡ及びＴＡＧから選択され得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡには、終止コドンＴＧＡ及び１つの追加の終止コドンが含まれる。さらなる実施形態では、追加終止コドンは、ＴＡＡであり得る。
環状ＲＮＡ（ｏＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、環状ＲＮＡ（ｏＲＮＡ）である。本明細書で使用される場合、用語「ｏＲＮＡ」または「環状ＲＮＡ」は、互換的に使用され、共有結合または非共有結合を介して環状構造を形成するＲＮＡを指し得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ウサギ、ラット、及びマウス）において非免疫原性であり得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、水産養殖動物（例えば、魚、カニ、エビ、カキ等）、哺乳動物細胞、ペットまたは動物園動物（例えば、ネコ、イヌ、トカゲ、鳥類、ライオン、トラ及びクマ等）からの細胞、牧場または労務動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ニワトリ等）からの細胞、ヒト細胞、培養細胞、初代細胞または細胞株、幹細胞、前駆細胞、分化細胞、胚細胞、がん細胞（例えば、腫瘍形成性、転移）、非腫瘍形成性細胞（例えば、正常細胞）、胎児細胞、胚細胞、成人細胞、分裂細胞、非分裂細胞、またはそれらの任意の組み合わせ細胞において複製することが可能であり得、または複製する。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、少なくとも線状対応物のものの半減期を有する。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、線状対応物のものよりも増加した半減期を有する。いくつかの実施形態では、半減期は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、またはそれを超えて増加する。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、少なくとも約１時間～約３０日、または少なくとも約２時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間（１日）、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、６０日、またはそれより長くまたはその間の任意の時間、細胞における半減期または持続性を有する。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、約１０分～約７日以下、または約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２４時間（１日）、３６時間（１．５日）、４８時間（２日）、６０時間（２．５日）、７２時間（３日）、４日、５日、６日、または７日以下、細胞における半減期または持続性を有する。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、細胞における半減期または持続性を有するが、細胞は分裂性である。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、分裂後の細胞における半減期または持続性を有する。所定の実施形態では、ｏＲＮＡは、約１０分～約３０日超、または少なくとも約１０分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、２４時間（１日）、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、６０日、またはより長くまたはその間の任意の時間、分裂細胞における半減期または持続性を有する。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、細胞機能を、例えば、一時的または長期に調節する。所定の実施形態では、細胞機能は、少なくとも約１時間～約３０日、または少なくとも約２時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間（１日）、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、６０日、またはより長く持続する調節等、安定的に改変される。所定の実施形態では、細胞機能は、例えば、約３０分～約７日、または約３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間（１日）、３６時間（１．５日）、４８時間（２日）、６０時間（２．５日）、７２時間（３日）、４日、５日、６日、または７日以下の間持続する調節等、一時的に改変される。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約１，０００ヌクレオチド、少なくとも約２，０００ヌクレオチド、少なくとも約５，０００ヌクレオチド、少なくとも約６，０００ヌクレオチド、少なくとも約７，０００ヌクレオチド、少なくとも約８，０００ヌクレオチド、少なくとも約９，０００ヌクレオチド、少なくとも約１０，０００ヌクレオチド、少なくとも約１２，０００ヌクレオチド、少なくとも約１４，０００ヌクレオチド、少なくとも約１５，０００ヌクレオチド、少なくとも約１６，０００ヌクレオチド、少なくとも約１７，０００ヌクレオチド、少なくとも約１８，０００ヌクレオチド、少なくとも約１９，０００ヌクレオチド、または少なくとも約２０，０００ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、リボソームへの結合部位を提供するために十分なサイズのものであり得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡの最大サイズは、ＲＮＡをパッケージングし、標的に送達する能力によって制限され得る。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡのサイズは、ポリペプチドをコードするために十分な長さであり、よって、少なくとも２０，０００ヌクレオチド、少なくとも１５，０００ヌクレオチド、少なくとも１０，０００ヌクレオチド、少なくとも７，５００ヌクレオチド、または少なくとも５，０００ヌクレオチド、少なくとも４，０００ヌクレオチド、少なくとも３，０００ヌクレオチド、少なくとも２，０００ヌクレオチド、少なくとも１，０００ヌクレオチド、少なくとも５００ヌクレオチド、少なくとも４００ヌクレオチド、少なくとも３００ヌクレオチド、少なくとも２００ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチドの長さが有用であり得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、本明細書の他の箇所に記載の１つ以上の要素を含む。いくつかの実施形態では、要素は、スペーサー配列またはリンカーによって互いに分離され得る。いくつかの実施形態では、要素は、互いに１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約１５ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約１５０ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約２５０ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約８００ヌクレオチド、約９００ヌクレオチド、約１０００ヌクレオチド、最大で約１ｋｂ、少なくとも約１０００ヌクレオチド分離され得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の要素は、互いに連続しており、例えば、スペーサー要素を欠く。
いくつかの実施形態では、１つ以上の要素は、構造的にフレキシブルである。いくつかの実施形態では、構造的柔軟性は、二次構造を実質的に含まない配列による。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、リボソーム、翻訳、またはローリングサークル翻訳のための結合部位を提供する二次または三次構造を含む。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、特定の配列特徴を含む。例えば、ｏＲＮＡは、特定のヌクレオチド組成物を含み得る。いくつかのそのような実施形態では、ｏＲＮＡには、１つ以上のプリンリッチ領域（アデニンまたはグアノシン）が含まれ得る。いくつかのそのような実施形態では、ｏＲＮＡには、１つ以上のプリンリッチ領域（アデニンまたはグアノシン）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、１つ以上のＡＵリッチ領域または要素（ＡＲＥ）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、１つ以上のアデニンリッチ領域が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、本明細書の他の箇所に記載の１つ以上の修飾を含む。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、１つ以上の発現配列を含み、ｉｎ ｖｉｖｏで対象の細胞において永続的発現のために構成される。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、より遅い時点での細胞における１つ以上の発現配列の発現が、より早い時点と同等またはそれよりも早くなるように構成される。そのような実施形態では、１つ以上の発現配列の発現は、比較的安定なレベルで維持され得、または経時的に増加し得る。発現配列の発現は、長期間比較的に安定であり得る。例えば、いくつかの場合では、細胞における１つ以上の発現配列の発現は、少なくとも７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２３日またはそれを超える日数の期間にわたって、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％減少しない。いくつかの場合では、いくつかの場合では、細胞における１つ以上の発現配列の発現は、少なくとも７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２３日以上の間、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％を超えて変化しないレベルで維持される。
制御性要素
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、制御性要素を含む。本明細書で使用される場合、「制御性要素」は、発現配列の発現を修飾する配列である。制御性要素には、ペイロードまたはカーゴ領域に隣接して位置する配列が含まれ得る。制御性要素は、機能可能にペイロードまたはカーゴ領域に機能可能に連結され得る。
いくつかの実施形態では、制御性要素は、制御性要素が存在しない場合に発現する量と比較した場合、発現するペイロードまたはカーゴの量を増加させ得る。非限定的な例として、１つの制御性要素は、タンデムで結合した複数のペイロードまたはカーゴ配列について発現するペイロードまたはカーゴの量を増加させ得る。
いくつかの実施形態では、制御性要素は、ペイロードまたはカーゴの翻訳を選択的に開始または活性化するための配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、制御性要素は、ｏＲＮＡまたはペイロードまたはカーゴの分解を開始させるための配列を含み得る。分解を開始させるための配列の非限定的な例には、リボスイッチアプタザイム及びｍｉＲＮＡ結合部位が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、制御性要素は、ｏＲＮＡにおけるペイロードまたはカーゴの翻訳を調節し得る。調節は、ペイロードまたはカーゴにおいて増加（エンハンサー）または減少（サプレッサー）を生成し得る。制御性要素は、ペイロードまたはカーゴに隣接して（例えば、ペイロードまたはカーゴの一方の側または両方の側に）位置し得る。
いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、制御性要素として機能する。いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、ＡＵＧ／ＡＴＧコドンを含む。いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、任意の真核生物開始コドン、例えば、限定されないが、ＡＵＧ／ＡＴＧ、ＣＵＧ／ＣＴＧ、ＧＵＧ／ＧＴＧ、ＵＵＧ／ＴＴＧ、ＡＣＧ、ＡＵＣ／ＡＴＣ、ＡＵＵ、ＡＡＧ、ＡＵＡ／ＡＴＡ、またはＡＧＧを含む。いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、Ｋｏｚａｋ配列を含む。いくつかの実施形態では、翻訳は、選択的条件、例えば、ストレス誘導条件下で、代替的翻訳開始配列、例えば、ＡＵＧ／ＡＴＧコドン以外の翻訳開始配列で開始する。非限定的な例として、環状ポリリボヌクレオチドの翻訳は、代替的翻訳開始配列、例えば、ＡＣＧで開始し得る。別の非限定的な例として、環状ポリリボヌクレオチド翻訳は、代替的翻訳開始配列、ＣＵＧ／ＣＴＧで開始し得る。別の非限定的な例として、翻訳は、代替的翻訳開始配列、ＧＵＧ／ＧＴＧで開始し得る。さらに別の非限定的な例として、翻訳は、繰り返しＲＮＡ、例えば、ＣＧＧ、ＧＧＧＧＣＣ、ＣＡＧ、ＣＴＧの短い伸長部を含む代替的翻訳開始配列等のリピート関連非ＡＵＧ（ＲＡＮ）配列で開始し得る。
マスキング剤
翻訳を開始させるコドンに隣接するヌクレオチドのいずれかをマスキングすることは、ｏＲＮＡの翻訳開始の位置、翻訳効率、長さ及び／または構造を改変するために使用され得る。いくつかの実施形態では、マスキングされた開始コドンまたは代替的開始コドンで翻訳開始の可能性を低減するためにコドンをマスキングするためにまたは隠すために、開始コドンまたは代替的開始コドンの近くでマスキング剤が使用され得る。マスキング剤の非限定的な例には、アンチセンスロック核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチド及びエクソンジャンクション複合体（ＥＪＣ）が含まれる。いくつかの実施形態では、マスキング剤は、翻訳が代替的開始コドンで開始する可能性を増加させるためにｏＲＮＡの開始コドンをマスキングするために使用され得る。
翻訳開始配列
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、ポリペプチドまたはペプチドをコードし、翻訳開始配列を含み得る。翻訳開始配列は、開始コドン、非コード開始コドン、Ｋｏｚａｋ配列またはシャイン・ダルガノ配列を含み得るがこれらに限定されない。翻訳開始配列は、ペイロードまたはカーゴに隣接して（例えば、ペイロードまたはカーゴの一方の側または両方の側に）位置し得る。
いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、構造的柔軟性をｏＲＮＡに提供する。いくつかの実施形態では、翻訳開始配列は、ｏＲＮＡの実質的に一本鎖の領域内にある。
ｏＲＮＡには、１つを超える開始コドン、例えば、限定されないが、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５または１５個を超える開始コドンが含まれ得る。翻訳は、第１の開始コドンで開始し得、または第１の開始コドンの下流で開始し得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、第１の開始コドン、例えば、ＡＵＧではないコドンで開始し得る。環状ポリリボヌクレオチドの翻訳は、代替的翻訳開始配列、例えば、限定されないが、ＡＣＧ、ＡＧＧ、ＡＡＧ、ＣＵＧ／ＣＴＧ、ＧＵＧ／ＧＴＧ、ＡＵＡ／ＡＴＡ、ＡＵＵ／ＡＴＴ、ＵＵＧ／ＴＴＧで開始し得る。いくつかの実施形態では、翻訳は、選択的条件、例えば、ストレス誘導条件下で、代替的翻訳開始配列で開始し得る。非限定的な例として、ｏＲＮＡの翻訳は、代替的翻訳開始配列、例えば、ＡＣＧで開始し得る。別の非限定的な例として、ｏＲＮＡ翻訳は、代替的翻訳開始配列、ＣＵＧ／ＣＴＧで開始し得る。さらに別の非限定的な例として、ｏＲＮＡ翻訳は、代替的翻訳開始配列、ＧＴＧ／ＧＵＧで開始し得る。さらに別の非限定的な例として、ｏＲＮＡは、繰り返しＲＮＡ、例えば、ＣＧＧ、ＧＧＧＧＣＣ、ＣＡＧ、ＣＴＧの短い伸長部を含む代替的翻訳開始配列等のリピート関連非ＡＵＧ（ＲＡＮ）配列で翻訳を開始し得る。
ＩＲＥＳ配列
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｏＲＮＡは、真核生物リボソームに係合することが可能な内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）要素を含む。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳ要素は、少なくとも約５ヌクレオチド、少なくとも約８ヌクレオチド、少なくとも約９ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約２５０ヌクレオチド、少なくとも約３５０ヌクレオチド、または少なくとも約５００ヌクレオチドである。１つの実施形態では、ＩＲＥＳ要素は、生物、ウイルス、哺乳動物、及びショウジョウバエを含むがこれらに限定されないＤＮＡに由来する。そのようなウイルスＤＮＡは、ピコルナウイルス相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）ｃＤＮＡ及びポリオウイルスｃＤＮＡに由来し得るがこれらに限定されない。１つの実施形態では、ＩＲＥＳ要素の由来となったショウジョウバエＤＮＡには、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからのアンテナペディア遺伝子が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳ要素は、ウイルスに少なくとも部分的に由来し、例えば、それは、ウイルスＩＲＥＳ要素、例えば、ＡＢＰＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＡＥＶ、ＡＬＰＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＢＱＣＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＢＶＤＶ１＿１－３８５、ＢＶＤＶ１＿２９－３９１、ＣｒＰＶ＿５ＮＣＲ、ＣｒＰＶ＿ＩＧＲ、ｃｒＴＭＶ＿ＩＲＥＳｃｐ、ｃｒＴＭＶ＿ＩＲＥＳｍｐ７５、ｃｒＴＭＶ＿ＩＲＥＳｍｐ２２８、ｃｒＴＭＶ＿ＩＲＥＳｃｐ、ｃｒＴＭＶ＿ＩＲＥＳｃｐ、ＣＳＦＶ、ＣＶＢ３、ＤＣＶ＿ＩＧＲ、ＥＭＣＶ－Ｒ、ＥｏＰＶ＿５ＮＴＲ、ＥＲＡＶ ２４５－９６１、ＥＲＢＶ １６２－９２０、ＥＶ７１＿１－７４８、ＦｅＬＶ－Ｎｏｔｃｈ２、ＦＭＤＶ＿ｔｙｐｅ＿Ｃ、ＧＢＶ－Ａ、ＧＢＶ－Ｂ、ＧＢＶ－Ｃ、ｇｙｐｓｙ＿ｅｎｖ、ｇｙｐｓｙＤ５、ｇｙｐｓｙＤ２、ＨＡＶ＿ＨＭ１７５、ＨＣＶ＿ｔｙｐｅ＿１ａ、ＨｉＰＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＨＩＶ－１、ＨｏＣＶ１＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＨＲＶ－２、ＩＡＰＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ｉｄｅｆｉｘ、ＫＢＶ＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＬＩＮＥ－１＿ＯＲＦ１＿－１０１＿～＿－１、ＬＩＮＥ－１＿ＯＲＦ１－３０２＿～＿－２０２、ＬＩＮＥ－１＿ＯＲＦ２－１３８＿～＿－８６、ＬＩＮＥ－１＿ＯＲＦ１＿－４４～＿－１、ＰＳＩＶ＿ＩＧＲ、ＰＶ＿ｔｙｐｅ１＿Ｍａｈｏｎｅｙ、ＰＶ＿ｔｙｐｅ３＿Ｌｅｏｎ、ＲＥＶ－Ａ、ＲｈＰＶ＿５ＮＣＲ、ＲｈＰＶ＿ＩＧＲ、ＳＩＮＶ１＿ＩＧＲｐｒｅｄ、ＳＶ４０＿６６１－８３０、ＴＭＥＶ、ＴＭＶ＿ＵＩ＿ＩＲＥＳｍｐ２２８、ＴＲＶ＿５ＮＴＲ、ＴｒＶ＿ＩＧＲ、またはＴＳＶ＿ＩＧＲに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳ要素は、細胞ＩＲＥＳ、例えば、ＡＭＬ１／ＲＵＮＸ１、Ａｎｔｐ－Ｄ、Ａｎｔｐ－ＤＥ、Ａｎｔｐ－ＣＤＥ、Ａｐａｆ－１、Ａｐａｆ－１、ＡＱＰ４、ＡＴ１Ｒ＿ｖａｒ１、ＡＴ１Ｒ＿ｖａｒ２、ＡＴ１Ｒ＿ｖａｒ３、ＡＴ１Ｒ＿ｖａｒ４、ＢＡＧ１＿ｐ３６デルタ２３６ ｎｔ、ＢＡＧ１＿ｐ３６、ＢＣＬ２、ＢｉＰ＿－２２２＿－３、ｃ－ＩＡＰ１＿２８５－１３９９、ｃ－ＩＡＰ１＿１３１３－１４６２、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ、Ｃａｔ－１２２４、ＣＣＮＤ１、ＤＡＰＳ、ｅＩＦ４Ｇ、ｅＩＦ４ＧＩ－ｅｘｔ、ｅＩＦ４ＧＩＩ、ｅＩＦ４ＧＩＩ－ｌｏｎｇ、ＥＬＧ１、ＥＬＨ、ＦＧＦ１Ａ、ＦＭＲ１、Ｇｔｘ－１３３－１４１、Ｇｔｘ－１－１６６、Ｇｔｘ－１－１２０、Ｇｔｘ－１－１９６、ｈａｉｒｌｅｓｓ、ＨＡＰ４、ＨＩＦ１ａ、ｈＳＮＭ１、Ｈｓｐ１０１、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ９０、ＩＧＦ２＿ｌｅａｄｅｒ２、Ｋｖ１．４＿１．２、Ｌ－ｍｙｃ、ＬａｍＢ１＿－３３５＿－１、ＬＥＦ１、ＭＮＴ＿７５－２６７、ＭＮＴ＿３６－１６０、ＭＴＧ８ａ、ＭＹＢ、ＭＹＴ２＿９９７－１１５２、ｎ－ＭＹＣ、ＮＤＳＴ１、ＮＤＳＴ２、ＮＤＳＴ３、ＮＤＳＴ４Ｌ、ＮＤＳＴ４Ｓ、ＮＲＦ＿－６５３＿－１７、ＮｔＨＳＦ１、ＯＤＣ１、ｐ２７ｋｉｐ１、０３＿１２８－２６９、ＰＤＧＦ２／ｃ－ｓｉｓ、Ｐｉｍ－１、ＰＩＴＳＬＲＥ＿ｐ５８、Ｒｂｍ３、ｒｅａｐｅｒ、Ｓｃａｍｐｅｒ、ＴＦＩＩＤ、ＴＩＦ４６３１、Ｕｂｘ＿１－９６６、Ｕｂｘ＿３７３－９６１、ＵＮＲ、Ｕｒｅ２、ＵｔｒＡ、ＶＥＧＦ－Ａ－１３３－１、ＸＩＡＰ＿５－４６４、ＸＩＡＰ＿３０５－４６６、またはＹＡＰ１に少なくとも部分的に由来する。
終結要素
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、１つ以上のカーゴまたはペイロード配列（発現配列とも称される）が含まれ、各カーゴまたはペイロード配列は、終結要素を有するまたは有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、１つ以上のカーゴまたはペイロード配列を含み、配列は、ｏＲＮＡが連続的に翻訳されるように終結要素を欠く。終結要素の排除により、リボソームが失速または脱落しないので、コードされるペプチドまたはポリペプチドのローリングサークル翻訳または連続的発現がもたらされ得る。そのような実施形態では、ローリングサークル翻訳は、各カーゴまたはペイロード配列を介して連続的発現を発現する。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡにおける１つ以上のカーゴまたはペイロード配列は、終結要素を含む。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡにおけるカーゴまたはペイロード配列のすべてが、終結要素を含むわけではない。そのような例では、カーゴまたはペイロードは、リボソームが終結要素に遭遇し、翻訳を終結させる場合、リボソームから離れ得る。いくつかの実施形態では、翻訳は終結されるが、リボソームの少なくとも１つの領域は、ｏＲＮＡと接触したままである。
ローリングサークル翻訳
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡの翻訳が開始されると、ｏＲＮＡに結合したリボソームは、ｏＲＮＡの翻訳の少なくとも１つのラウンドを終了させる前にｏＲＮＡから離れない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｏＲＮＡは、ローリングサークル翻訳に適する。いくつかの実施形態では、ローリングサークル翻訳中に、ｏＲＮＡの翻訳が開始されると、ｏＲＮＡに結合したリボソームは、ｏＲＮＡの翻訳の少なくとも２ラウンド、少なくとも３ラウンド、少なくとも４ラウンド、少なくとも５ラウンド、少なくとも６ラウンド、少なくとも７ラウンド、少なくとも８ラウンド、少なくとも９ラウンド、少なくとも１０ラウンド、少なくとも１１ラウンド、少なくとも１２ラウンド、少なくとも１３ラウンド、少なくとも１４ラウンド、少なくとも１５ラウンド、少なくとも２０ラウンド、少なくとも３０ラウンド、少なくとも４０ラウンド、少なくとも５０ラウンド、少なくとも６０ラウンド、少なくとも７０ラウンド、少なくとも８０ラウンド、少なくとも９０ラウンド、少なくとも１００ラウンド、少なくとも１５０ラウンド、少なくとも２００ラウンド、少なくとも２５０ラウンド、少なくとも５００ラウンド、少なくとも１０００ラウンド、少なくとも１５００ラウンド、少なくとも２０００ラウンド、少なくとも５０００ラウンド、少なくとも１００００ラウンド、少なくとも１０の５乗ラウンド、または少なくとも１０の６乗ラウンドを終了させる前にｏＲＮＡから離れない。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡのローリングサークル翻訳は、ｏＲＮＡの翻訳の複数のラウンドから翻訳されるポリペプチドの生成をもたらす。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、スタッガー要素を含み、ｏＲＮＡのローリングサークル翻訳は、ｏＲＮＡの１ラウンドの翻訳または１ラウンド未満の翻訳から生成されるポリペプチド生成物の生成をもたらす。
環状化
１つの実施形態では、線状ＲＮＡは、環状化、またはコンカテマー化され得る。いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡは、製剤化及び／または送達の前にｉｎ ｖｉｔｒｏで環状化され得る。いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡは、細胞内で環状化され得る。
いくつかの実施形態では、環状化またはコンカテマー化のメカニズムは、少なくとも３つの異なる経路：１）化学的、２）酵素的、及び３）リボザイム触媒化を介して生じ得る。新しく形成された５’－／３’－結合は、分子内または分子間であり得る。
第１の経路では、核酸の５’末端及び３’末端は、互いに近づいた場合、分子の５’末端と３’末端との間に新たな共有結合を形成する化学的反応性基を含有する。５’末端は、ＮＨＳ－エステル反応性基を含有し得、３’末端は、３’－アミノ末端化ヌクレオチドを含有し得、これにより有機溶媒中で合成ｍＲＮＡ分子の３’末端上の３’アミノ末端化ヌクレオチドは、５’－ＮＨＳ－エステル部位上で求核攻撃を受け、新たな５’／３’－アミド結合を形成することになる。
第２の経路では、Ｔ４ ＲＮＡリガーゼは、５’－リン酸化核酸分子を核酸の３’－ヒドロキシル基に酵素的に連結させ、新たなホスホロジエステル結合を形成するために使用され得る。例となる反応では、核酸分子の＾ｇは、１～１０単位のＴ４ ＲＮＡリガーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）と製造業者のプロトコルに従って３７℃で１時間インキュベートされる。ライゲーション反応は、酵素的ライゲーション反応を補助するために並列で５’及び３’領域の両方と塩基対合することが可能な分割オリゴヌクレオチドの存在下で生じ得る。
第３の経路では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写中に、得られる核酸分子が、核酸分子の５’末端を核酸分子の３’末端にライゲーションすることが可能な活性リボザイム配列を含有し得るように、ｃＤＮＡ鋳型の５’または３’末端のいずれかは、リガーゼリボザイム配列をコードする。リガーゼリボザイムは、グループＩイントロン、グループＩイントロン、肝炎デルタウイルス、ヘアピンリボザイムに由来し得、またはＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）によって選択され得る。リボザイムリガーゼ反応は、０～３７℃の温度で１～２４時間行われ得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、線状ＲＮＡの環状化を介して作製される。
細胞外環状化
いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡは、ｏＲＮＡを形成するために化学的方法を使用して環状化、またはコンカテマー化される。いくつかの化学的方法では、核酸（例えば、線状ＲＮＡ）の５’末端及び３’末端には、互いに近づいた場合、分子の５’末端と３’末端との間に新たな共有結合を形成し得る化学的反応性基が含まれる。５’末端は、ＮＨＳ－エステル反応性基を含有し得、３’末端は、３’－アミノ末端化ヌクレオチドを含有し得、これにより有機溶媒中で線状ＲＮＡの３’末端上の３’アミノ末端化ヌクレオチドは、５’－ＮＨＳ－エステル部位上で求核攻撃を受け、新たな５’／３’－アミド結合を形成することになる。
１つの実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼは、新たなホスホロジエステル結合を形成する核酸（例えば、線状核酸）の３’－ヒドロキシル基に５’－リン酸化核酸分子（例えば、線状ＲＮＡ）を酵素的に連結させるために使用され得る。例示的な反応では、線状ＲＮＡは、製造業者のプロトコルに従って１～１０単位のＴ４ ＲＮＡリガーゼと３７Ｃで１時間インキュベートされる。ライゲーション反応は、酵素的ライゲーション反応を補助するために並列で５’及び３’領域の両方と塩基対合することが可能な線状核酸の存在下で生じ得る。１つの実施形態では、ライゲーションは、スプリントライゲーションであり、その場合、一本鎖ＲＮＡのような一本鎖ポリヌクレオチド（スプリント）が、線状ＲＮＡの両方の末端とハイブリダイズすることで２つの末端が一本鎖スプリントとのハイブリダイゼーションにより並置され得るように設計され得る。よって、スプリントリガーゼは、線状ＲＮＡの並列の２つの末端のライゲーションを触媒し得、ｏＲＮＡを生成する。
１つの実施形態では、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼは、ｏＲＮＡの合成において使用され得る。非限定的な例として、リガーゼは、ｃｉｒｃリガーゼまたは環状リガーゼであり得る。
１つの実施形態では、線状ＲＮＡの５’または３’末端のいずれかは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写中に、得られる線状ＲＮＡが、線状ＲＮＡの５’末端を線状ＲＮＡの３’末端にライゲーションすることが可能な活性リボザイム配列を含むようにリガーゼリボザイム配列をコードし得る。リガーゼリボザイムは、グループＩイントロン、肝炎デルタウイルス、ヘアピンリボザイムに由来し得、またはＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）によって選択され得る。
１つの実施形態では、線状ＲＮＡは、少なくとも１つの非核酸部位を使用することによって環状化またはコンカテマー化され得る。１つの態様では、少なくとも１つの非核酸部位は、線状ＲＮＡを環状化または連結するために、線状ＲＮＡの５’末端の近く及び／または３’末端の近くの領域または特徴と反応し得る。別の態様では、少なくとも１つの非核酸部位は、線状ＲＮＡの５’末端及び／または３’末端にまたはその近くに配置または連結され得る。企図される非核酸部位は、同種または異種であり得る。非限定的な例として、非核酸部位は、結合、例えば、疎水性連結、イオン性連結、生分解性連結及び／または切断可能な連結であり得る。別の非限定的な例として、非核酸部位は、ライゲーション部位である。さらに別の非限定的な例として、非核酸部位は、オリゴヌクレオチドまたはペプチド部位、例えば、本明細書に記載されるアプタマーまたは非核酸リンカーであり得る。
１つの実施形態では、線状ＲＮＡは、線状ＲＮＡの５’及び３’末端で、その近くでまたはそれに連結された原子、分子表面間の引力を引き起こす非核酸部位により環状化またはコンカテマー化され得る。非限定的な例として、１つ以上の線状ＲＮＡは、分子間力または分子内力によって環状化またはコンカテマー化され得る。分子間力の非限定的な例には、双極子－双極子力、双極子－誘導双極子力、誘導双極子－誘導双極子力、ファンデルワールス力、及びロンドン分散力が含まれる。分子内力の非限定的な例には、共有結合、金属結合、イオン結合、共鳴結合、アグノスティック結合、双極性結合、コンジュゲーション、ハイパコンジュゲーション及び反結合が含まれる。
１つの実施形態では、線状ＲＮＡは、５’末端の近く及び３’末端の近くにリボザイムＲＮＡ配列を含み得る。リボザイムＲＮＡ配列は、配列がリボザイムの残部に曝露された場合、ペプチドに共有結合的に連結し得る。１つの態様では、５’末端及び３’末端の近くでリボザイムＲＮＡ配列に共有結合的に連結されたペプチドは、互いに会合して、線状ＲＮＡが環状化またはコンカテマー化することを引き起こし得る。別の態様では、５’末端及び３’末端の近くでリボザイムＲＮＡ配列に共有結合的に連結されたペプチドは、当該技術分野で知られている様々な方法、例えば、限定されないが、タンパク質ライゲーションを使用するライゲーションに供された後に、線状ＲＮＡが環状化またはコンカテマー化することを引き起こし得る。
いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡには、例えば、５’トリホスフェートをＲＮＡ５’ピロホスホヒドロラーゼ（ＲｐｐＨ）またはＡＴＰジホスホヒドロラーゼ（アピラーゼ）と接触させることによって、５’モノホスフェートに変換された核酸の５’トリホスフェートが含まれ得る。代替的には、線状ＲＮＡの５’トリホスフェートを５’モノホスフェートに変換することは、（ａ）線状ＲＮＡの５’ヌクレオチドをホスファターゼ（例えば、南極ホスファターゼ、エビアルカリホスファターゼ、または子牛腸ホスファターゼ）と接触させて３つすべてのホスフェートを除去すること；及び（ｂ）工程（ａ）後の５’ヌクレオチドを、単一のホスフェートを付加するキナーゼ（例えば、ポリヌクレオチドキナーゼ）と接触させることを含む２工程反応において生じ得る。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ＷＯ２０１７２２２９１１及びＷＯ２０１６１９７１２１（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法を使用して環状化され得る。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、例えば、非哺乳動物外因性イントロンのバックスプライシングまたは線状ＲＮＡの５’及び３’末端のスプリントライゲーションライゲーションによって環状化され得る。１つの実施形態では、環状ＲＮＡは、環状とすべき標的ＲＮＡをコードする組換え核酸から生成される。非限定的な例として、方法は、ａ）環状とされる標的ＲＮＡをコードする組換え核酸を生成することであって、組換え核酸は、５’から３’の順序で、ｉ）３’スプライス部位を含む外因性イントロンの３’部分、ｉｉ）標的ＲＮＡをコードする核酸配列、及びｉｉｉ）５’スプライス部位を含む外因性イントロンの５’部分を含む、生成すること；ｂ）転写を実施することであって、これによりＲＮＡが組換え核酸から生成される、実施すること；及びｃ）ＲＮＡのスプライシングを実施することであって、これによりＲＮＡが環状化してｏＲＮＡを生成する、実施することを含む。
理論に縛られることを望むものではないが、外因性イントロンを用いて生成された環状ＲＮＡは、「非自己」として免疫系によって認識され、自然免疫反応を誘発させる。一方、内因性イントロンを用いて生成された環状ＲＮＡは、「自己」として免疫系によって認識され、外来ＲＮＡを含むエクソンを保有する場合であっても、通常は自然免疫反応を引き起こさない。
したがって、環状ＲＮＡは、所望により免疫学的自己／非自己の区別をコントロールするために、内因性または外因性イントロンのいずれかを用いて生成され得る。多様な生物及びウイルスからの多数のイントロン配列が知られており、それには、タンパク質、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、またはトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）をコードする遺伝子に由来する配列が含まれる。
環状ＲＮＡは、多数の方法で線状ＲＮＡから生成され得る。いくつかの実施形態では、環状ＲＮＡは、上流３’スプライス部位（スプライスアクセプター）への下流５’スプライス部位（スプライスドナー）のバックスプライシングによって線状ＲＮＡから生成される。環状ＲＮＡは、任意の非哺乳動物スプライシング方法によってこの手法で生成され得る。例えば、自己スプライシンググループＩイントロン、自己スプライシンググループＩＩイントロン、スプライセオソームイントロン、及びｔＲＮＡイントロンを含む様々なタイプのイントロンを含有する線状ＲＮＡが環状化され得る。特に、グループＩ及びグループＩＩイントロンは、それらの自己触媒的リボザイム活性により自己スプライシングを受けるそれらの能力により、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで環状ＲＮＡの生成のために容易に使用され得るという利点を有する。
いくつかの実施形態では、環状ＲＮＡは、ＲＮＡの５’及び３’末端の化学的または酵素的ライゲーションによって線状ＲＮＡからｉｎ ｖｉｔｒｏで生成され得る。化学的ライゲーションは、例えば、ホスホジエステル結合形成を可能とするためにヌクレオチドホスホモノエステル基の活性化のためのシアノゲンブロミド（ＢｒＣＮ）またはエチル－３－（３’－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を使用して実施され得る。例えば、Ｓｏｋｏｌｏｖａ（１９８８）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２３２：１５３－１５５；Ｄｏｌｉｎｎａｙａ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：３０６７－３０７２；Ｆｅｄｏｒｏｖａ（１９９６）Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ １５：１ １３７－１ １４７（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。代替的には、酵素的ライゲーションは、ＲＮＡを環状化するために使用され得る。使用され得る例示的なリガーゼには、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｔ４ Ｄｎｌ）、Ｔ４ ＲＮＡリガーゼ１（Ｔ４ Ｒｎｌ １）、及びＴ４ ＲＮＡリガーゼ２（Ｔ４ Ｒｎｌ ２）が含まれる。
いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡの２つの末端とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドスプリントを使用するスプリントライゲーションは、線状ＲＮＡの末端を一緒にライゲーションさせるために使用され得る。ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかであり得るスプリントのハイブリダイゼーションは、ライゲーションのためにＲＮＡ末端の５’－ホスフェート及び３’－ＯＨを配向させる。その後のライゲーションは、上述したように、化学的または酵素的技術のいずれかを使用して実施され得る。酵素的ライゲーションは、例えば、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（ＤＮＡスプリントが必要とされる）、Ｔ４ ＲＮＡリガーゼ１（ＲＮＡスプリントが必要とされる）またはＴ４ ＲＮＡリガーゼ２（ＤＮＡまたはＲＮＡスプリント）を用いて実施され得る。例えば、ＢｒＣＮまたはＥＤＣとの化学的ライゲーションは、いくつかの場合では、ハイブリダイズしたスプリント－ＲＮＡ複合体の構造が酵素活性と干渉する場合、酵素的ライゲーションよりも効率的である。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡは、ポリペプチドをコードするＲＮＡ配列に機能可能に連結された内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含み得る。ＩＲＥＳの包含は、環状ＲＮＡからの１つ以上のオープンリーディングフレームの翻訳を可能とする。ＩＲＥＳ要素は、真核生物リボソーム翻訳開始複合体を引き寄せ、翻訳開始を促進する。例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９１）１９：４４８５－４４９０；Ｇｕｒｔｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．（１９９６）２２９：２９５－２９８；Ｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）２０：１０２－１１０；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）２１ ：３９９－４０２；及びＭｏｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９７ ２２ １５０－１６１）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される環状化方法の環状化効率は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または１００％である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される環状化方法の環状化効率は、少なくとも約４０％である。
スプライシング要素
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、少なくとも１つのスプライシング要素が含まれる。スプライシング要素は、ｏＲＮＡのスプライシングを媒介し得る完全なスプライシング要素であり得、またはスプライシング要素は、完了したスプライシング事象からの残留スプライシング要素であり得る。例えば、いくつかの場合では、線状ＲＮＡのスプライシング要素は、線状ＲＮＡの環状化をもたらすスプライシング事象を媒介し得、それにより得られるｏＲＮＡは、そのようなスプライシング媒介環状化事象からの残留スプライシング要素を含む。いくつかの場合では、残留スプライシング要素は、任意のスプライシングを媒介することができない。他の場合では、残留スプライシング要素は、所定の状況下でスプライシングを依然として媒介し得る。いくつかの実施形態では、スプライシング要素は、少なくとも１つの発現配列に隣接する。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、各発現配列に隣接するスプライシング要素が含まれる。いくつかの実施形態では、スプライシング要素は、各発現配列の一方または両方の側にあり、発現生成物、例えば、ペプチド（複数可）及びまたはポリペプチド（複数可）の分離をもたらす。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、複製された場合、スプライシングされた末端が一緒に接続される内部スプライシング要素が含まれる。いくつかの例は、スプライス部位配列及び短い逆リピート（３０～４０ｎｔ）、例えば、ＡｌｕＳｑ２、ＡｌｕＪｒ、及びＡｌｕＳｚ、隣接イントロンにおける逆配列、隣接イントロンにおけるＡｌｕ要素、ならびに隣接エクソンを有するバックスプライス部位の２００ｂｐ前（上流）または後（下流）の配列等のバックスプライス事象の近くの（ｓｕｐｔａｂｌｅ４濃縮モチーフ）シス－配列要素に見られるモチーフを有する小型イントロン（＜１００ｎｔ）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、内部スプライシング要素として本明細書の他の箇所に記載の少なくとも１つの繰り返しヌクレオチド配列が含まれる。そのような実施形態では、繰り返しヌクレオチド配列には、イントロンのＡｌｕファミリーからの繰り返し配列が含まれ得る。例えば、米国特許番号１１，０５８，７０６を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、ｏＲＮＡの頭尾ジャンクションに隣接する標準的スプライス部位が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、２つの３ヌクレオチドバルジが隣接する４塩基対ステムを含むバルジ－ヘリックス－バルジモチーフが含まれ得る。バルジ領域における部位で切断が生じ、末端５’－ヒドロキシル基及び２’、３’－環状ホスフェートを有する特徴的断片を生成する。環状化は、３’、５’－ホスホジエステル架橋を形成する同じ分子の２’、３’－環状ホスフェートへの５’－ＯＨ基の求核攻撃によって進行する。
いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、自己ライゲーションを媒介する配列が含まれ得る。自己ライゲーションを媒介し得る配列の非限定的な例には、自己環状化イントロン、例えば、５’及び３’スライスジャンクション、または自己環状化触媒イントロン、例えば、グループＩ、グループＩＩまたはグループＩＩＩイントロンが含まれる。グループＩのイントロン自己スプライシング配列の非限定的な例には、Ｔ４バクテリオファージ遺伝子ｔｄに由来する自己スプライシング順列変化イントロン－エクソン配列、及びテトラヒメナの介在配列（ＩＶＳ）ｒＲＮＡが含まれ得る。
他の環状化方法
いくつかの実施形態では、線状ＲＮＡには、個々のイントロン内または隣接イントロンにわたって繰り返しまたは非繰り返し核酸配列のいずれかを含む相補的配列が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、繰り返し核酸配列が含まれる。いくつかの実施形態では、繰り返しヌクレオチド配列には、ポリＣＡまたはポリＵＧ配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ｏＲＮＡには、ｏＲＮＡの別のセグメントにおける相補的繰り返し核酸配列にハイブリダイズする少なくとも１つの繰り返し核酸配列が含まれ、ハイブリダイズされたセグメントは、内部二重鎖を形成する。いくつかの実施形態では、単一のｏＲＮＡを生成するようにハイブリダイズする２つの別々のｏＲＮＡからの繰り返し核酸配列及び相補的繰り返し核酸配列、ハイブリダイズされたセグメントは、内部二重鎖を形成する。いくつかの実施形態では、相補的配列は、線状ＲＮＡの５’及び３’末端で見られる。いくつかの実施形態では、相補的配列には、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、またはそれを超える対合ヌクレオチドが含まれる。
いくつかの実施形態では、環状化の化学的方法が、ｏＲＮＡを生成するために使用され得る。そのような方法には、クリックケミストリー（例えば、アルキン及びアジドベースの方法、またはクリック可能な塩基）、オレフィンメタセシス、ホスホルアミデートライゲーション、ヘミアミナール－イミン架橋、塩基修飾、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、環状化の酵素的方法が、ｏＲＮＡを生成するために使用され得る。いくつかの実施形態では、ライゲーション酵素、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼが、ｏＲＮＡもしくは相補体の鋳型、ｏＲＮＡの相補鎖、またはｏＲＮＡを生成するために使用され得る。
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、ペイロード領域は、遺伝子の発現を低減または阻害するために使用され得るＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）配列であり、またはそれをコードし得る。ＲＮＡｉ（転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）、キュエリング、または共抑制としても知られている）は、ＲＮＡ分子が、配列特異的様式で、典型的には特定のｍＲＮＡ分子の破壊を引き起こすことによって、遺伝子発現を低減または阻害する転写後遺伝子サイレンシングプロセスである。ＲＮＡｉの活性成分は、典型的には、１５～３０ヌクレオチド（例えば、１９～２５、１９～２４または１９～２１ヌクレオチド）及び２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含有し、かつ標的遺伝子の核酸配列とマッチする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれる短い／小さな二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。これらの短いＲＮＡ種は、より大きなｄｓＲＮＡのＤｉｃｅｒ媒介切断によってｉｎ ｖｉｖｏで天然に生成され得、それらは、哺乳動物細胞において機能的である。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）と称される天然に発現する小さなＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡの発現を制御することによって遺伝子サイレンシングを誘発させる。ｍｉＲＮＡ含有ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）は、シード領域と呼ばれるｍｉＲＮＡの５’領域におけるヌクレオチド２～７との完全な配列相補性、及びその３’領域との他の塩基対を呈するｍＲＮＡを標的とする。遺伝子発現のｍｉＲＮＡ媒介下方制御は、標的ｍＲＮＡの切断、標的ｍＲＮＡの翻訳阻害、またはｍＲＮＡ減衰阻害によって引き起こされ得る。ｍｉＲＮＡ標的化配列は通常、標的ｍＲＮＡの３’－ＵＴＲに位置する。単一のｍｉＲＮＡは、様々な遺伝子からの１００種を超える転写産物を標的とし得、１つのｍＲＮＡは、異なるｍｉＲＮＡによって標的とされ得る。
特定のｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはｄｓＲＮＡが設計され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成され、ＲＮＡｉプロセスを活性化するために細胞に導入され得る。２１ヌクレオチドｓｉＲＮＡ二本鎖（低分子干渉ＲＮＡと称される）は、哺乳動物細胞において免疫反応を誘導することなく強力かつ特異的な遺伝子ノックダウンを達成することが可能であったことが先に示されている。今では、ｓｉＲＮＡによる転写後遺伝子サイレンシングは、哺乳動物細胞における遺伝子分析のための強力なツールとして早くも台頭しており、新規治療剤を生成する潜在性を有する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたｓｉＲＮＡ配列は、ＲＮＡｉを活性化するために細胞に導入され得る。外因性ｓｉＲＮＡ二本鎖は、細胞に導入された場合、内因性ｄｓＲＮＡと同様に、ｓｉＲＮＡ二本鎖の２つの鎖のうちの一方（すなわち、アンチセンス鎖）と相補的なＲＮＡ配列と相互作用する多単位複合体であるＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を形成するように構築され得る。プロセス中に、ｓｉＲＮＡのセンス鎖（またはパッセンジャー鎖）は、複合体から失われるのに対し、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖（またはガイド鎖）は、その相補的ＲＮＡとマッチされる。特に、ｓｉＲＮＡを含有するＲＩＳＣ複合体の標的は、完全な配列相補性を提示するｍＲＮＡである。次いで、ｓｉＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシングが、標的を切断、放出及び分解することによって生じる。
標的ｍＲＮＡと相同なセンス鎖及び標的ｍＲＮＡと相補的なアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡ二本鎖は、一本鎖（ｓｓ）－ｓｉＲＮＡ（例えば、アンチセンス鎖ＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド）の使用と比較して、標的ＲＮＡ破壊のための効率の観点からはるかに多くの利点を提供する。多くの場合、対応する二本鎖の有効な遺伝子サイレンシング効力を達成するために、より高いｓｓ－ｓｉＲＮＡの濃度を必要とする。
ｓｉＲＮＡ二本鎖の設計及び配列
ｓｉＲＮＡを設計するためのいくつかのガイドラインが当該技術分野において提案されている。これらのガイドラインは通常、サイレンシングされる遺伝子における領域を標的とする１９ヌクレオチドの二本鎖領域、対称的な２～３ヌクレオチドの３’オーバーハング、５’－ホスフェート及び３’－ヒドロキシル基を生成することを推奨している。ｓｉＲＮＡ配列の好ましさを支配し得る他の規則には、（ｉ）アンチセンス鎖の５’末端におけるＡ／Ｕ；（ｉｉ）センス鎖の５’末端におけるＧ／Ｃ；（ｉｉｉ）アンチセンス鎖の５’末端の１／３における少なくとも５つのＡ／Ｕ残基；及び（ｉｖ）長さが９ヌクレオチドよりも多い任意のＧＣ伸長部の非存在が含まれるがこれらに限定されない。そのような考慮事項に従って、標的遺伝子の特定の配列と共に、哺乳動物標的遺伝子発現を抑制するために必須の非常に有効なｓｉＲＮＡコンストラクトが容易に設計され得る。
いくつかの実施形態では、特定の遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡコンストラクト（例えば、ｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされたｄｓＲＮＡ）が設計される。そのようなｓｉＲＮＡコンストラクトは、遺伝子発現及びタンパク質生成を特異的に抑制し得る。いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、細胞における遺伝子バリアント、すなわち、患者において同定された、または様々な疾患及び／または障害の原因である変異した転写産物を選択的に「ノックアウト」するために設計及び使用される。いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、細胞における遺伝子のバリアントを選択的に「ノックダウン」するために設計及び使用される。他の態様では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、遺伝子の野生型及び変異バージョンの両方を阻害または抑制することができる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、センス鎖及び相補的アンチセンス鎖を含み、両方の鎖は、互いにハイブリダイズされて二本鎖構造を形成する。アンチセンス鎖は、標的特異的ＲＮＡｉを誘導するためにｍＲＮＡ配列に対して十分な相補性を有し、すなわち、ｓｉＲＮＡ配列は、ＲＮＡｉ機構またはプロセスによって標的ｍＲＮＡの破壊を誘発させるために十分な配列を有する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、センス鎖及び相補的アンチセンス鎖を含み、両方の鎖が二本鎖構造を形成するために互いにハイブリダイズされ、ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーションの開始部位は、ｍＲＮＡ配列上のヌクレオチド１００～１０，０００の間である。非限定的な例として、開始部位は、ｍＲＮＡ配列上のヌクレオチド１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～３００、３００～３５０、３５０～４００、４００～４５０、４５０～５００、５００～５５０、５５０～６００、６００～６５０、６５０～７００、７００～７０、７５０～８００、８００～８５０、８５０～９００、９００～９５０、９５０～１０００、１０００～１０５０、１０５０～１１００、１１００～１１５０、１１５０～１２００、１２００～１２５０、１２５０～１３００、１３００～１３５０、１３５０～１４００、１４００～１４５０、１４５０～１５００、１５００～１５５０、１５５０～１６００、１６００～１６５０、１６５０～１７００、１７００～１７５０、１７５０～１８００、１８００～１８５０、１８５０～１９００、１９００～１９５０、１９５０～２０００、２０００～２０５０、２０５０～２１００、２１００～２１５０、２１５０～２２００、２２００～２２５０、２２５０～２３００、２３００～２３５０、２３５０～２４００、２４００～２４５０、２４５０～２５００、２５００～２５５０、２５５０～２６００、２６００～２６５０、２６５０～２７００、２７００～２７５０、２７５０～２８００、２８００～２８５０、２８５０～２９００、２９００～２９５０、２９５０～３０００、３０００～３０５０、３０５０～３１００、３１００～３１５０、３１５０～３２００、３２００～３２５０、３２５０～３３００、３３００～３３５０、３３５０～３４００、３４００～３４５０、３４５０～３５００、３５００～３５５０、３５５０～３６００、３６００～３６５０、３６５０～３７００、３７００～３７５０、３７５０～３８００、３８００～３８５０、３８５０～３９００、３９００～３９５０、３９５０～４０００、４０００～４０５０、４０５０～４１００、４１００～４１５０、４１５０～４２００、４２００～４２５０、４２５０～４３００、４３００～４３５０、４３５０～４４００、４４００～４４５０、４４５０～４５００、４５００～４５５０、４５５０～４６００、４６００～４６５０、４６５０～４７００、４７００～４７５０、４７５０～４８００、４８００～４８５０、４８５０～４９００、４９００～４９５０、４９５０～５０００、５０００～５０５０、５０５０～５１００、５１００～５１５０、５１５０～５２００、５２００～５２５０、５２５０～５３００、５３００～５３５０、５３５０～５４００、５４００～５４５０、５４５０～５５００、５５００～５５５０、５５５０～５６００、５６００～５６５０、５６５０～５７００、５７００～５７５０、５７５０～５８００、５８００～５８５０、５８５０～５９００、５９００～５９５０、５９５０～６０００、６０００～６０５０、６０５０～６１００、６１００～６１５０、６１５０～６２００、６２００～６２５０、６２５０～６３００、６３００～６３５０、６３５０～６４００、６４００～６４５０、６４５０～６５００、６５００～６５５０、６５５０～６６００、６６００～６６５０、６６５０～６７００、６７００～６７５０、６７５０～６８００、６８００～６８５０、６８５０～６９００、６９００～６９５０、６９５０～７０００、７０００～７０５０、７０５０～７１００、７１００～７１５０、７１５０～７２００、７２００～７２５０、７２５０～７３００、７３００～７３５０、７３５０～７４００、７４００～７４５０、７４５０～７５００、７５００～７５５０、７５５０～７６００、７６００～７６５０、７６５０～７７００、７７００～７７５０、７７５０～７８００、７８００～７８５０、７８５０～７９００、７９００～７９５０、７９５０～８０００、８０００～８０５０、８０５０～８１００、８１００～８１５０、８１５０～８２００、８２００～８２５０、８２５０～８３００、８３００～８３５０、８３５０～８４００、８４００～８４５０、８４５０～８５００、８５００～８５５０、８５５０～８６００、８６００～８６５０、８６５０～８７００、８７００～８７５０、８７５０～８８００、８８００～８８５０、８８５０～８９００、８９００～８９５０、８９５０～９０００、９０００～９０５０、９０５０～９１００、９１００～９１５０、９１５０～９２００、９２００～９２５０、９２５０～９３００、９３００～９３５０、９３５０～９４００、９４００～９４５０、９４５０～９５００、９５００～９５５０、９５５０～９６００、９６００～９６５０、９６５０～９７００、９７００～９７５０、９７５０～９８００、９８００～９８５０、９８５０～９９００、９９００～９９５０、９９５０～１００００であり得る。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖及び標的ｍＲＮＡ配列は、１００％相補的である。アンチセンス鎖は、ｍＲＮＡ配列の標的の任意の部分に相補的であり得る。
他の実施形態では、アンチセンス鎖及び標的ｍＲＮＡ配列は、少なくとも１つのミスマッチを含む。非限定的な例として、アンチセンス鎖及び標的ｍＲＮＡ配列は、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～９９％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～９９％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～９９％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～９９％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～９９％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～９９％、８０～９０％、８０～９５％、８０～９９％、９０～９５％、９０～９９％または９５～９９％を有する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、約１０～５０またはそれを超えるヌクレオチドの長さを有し、すなわち、各鎖は、１０～５０ヌクレオチド（またはヌクレオチドアナログ）を含む。好ましくは、ｓｉＲＮＡ配列は、各鎖において約１５～３０、例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチドの長さを有し、鎖の一方は、標的領域と十分に相補的である。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、約１９～２５、１９～２４または１９～２１ヌクレオチドの長さを有する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、約１９ヌクレオチド～約２５ヌクレオチド、及び３’末端で２つのオーバーハングヌクレオチドを含む合成ＲＮＡ二本鎖であり得る。いくつかの態様では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、未修飾ＲＮＡ分子であり得る。他の態様では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド、例えば、塩基、糖または骨格修飾を含有し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ配列は、細胞への送達のためのプラスミドベクター、ウイルスベクターまたは他の核酸発現ベクターにおいてコードされ得る。ＤＮＡ発現プラスミドは、細胞においてｓｉＲＮＡ二本鎖またはｄｓＲＮＡを安定的に発現させ、標的遺伝子発現の長期阻害を達成するために使用され得る。１つの態様では、ｓｉＲＮＡ二本鎖のセンス及びアンチセンス鎖は、典型的には、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）と称されるステムループ構造の発現をもたらす短いスペーサー配列によって連結される。ヘアピンは、Ｄｉｃｅｒによって認識及び切断され、よって、成熟ｓｉＲＮＡコンストラクトを生成する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ二本鎖のセンス及びアンチセンス鎖は、短いスペーサー配列によって連結され得、これは追加の隣接配列に任意に連結され得、一次マイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）と称される隣接アーム－ステム－ループ構造の発現をもたらす。ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡは、Ｄｒｏｓｈａ及びＤｉｃｅｒによって認識及び切断され得、よって、成熟ｓｉＲＮＡコンストラクトを生成する。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、標的ｍＲＮＡを抑制（または分解）する。したがって、ｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、細胞における遺伝子発現を実質的に阻害するために使用され得る。いくつかの態様では、遺伝子発現の阻害は、少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％及び１００％、または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、９０～９５％、９０～１００％または９５～１００％の阻害を指す。したがって、標的とされる遺伝子のタンパク質生成物は、少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％及び１００％、または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、９０～９５％、９０～１００％または９５～１００％阻害され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、ガイド鎖に位置する標的のためのｍｉＲＮＡシードマッチを含む。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、パッセンジャー鎖に位置する標的のためのｍｉＲＮＡシードマッチを含む。さらに別の実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、ガイドまたはパッセンジャー鎖に位置する標的のためのシードマッチを含まない。
いくつかの実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、ガイド鎖のための有意な全長オフターゲットをほとんど有しない場合がある。別の実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、パッセンジャー鎖のための有意な全長オフターゲット効果をほとんど有しない場合がある。遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％未満、１～５％、２～６％、３～７％、４～８％、５～９％、５～１０％、６～１０％、５～１５％、５～２０％、５～２５％ ５～３０％、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１５～３０％、１５～４０％、１５～４５％、２０～４０％、２０～５０％、２５～５０％、３０～４０％、３０～５０％、３５～５０％、４０～５０％、４５～５０％のパッセンジャー鎖のための全長オフターゲット効果を有し得る。さらに別の実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、ガイド鎖またはパッセンジャー鎖のための有意な全長オフターゲットをほとんど有しない場合がある。遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％未満、１～５％、２～６％、３～７％、４～８％、５～９％、５～１０％、６～１０％、５～１５％、５～２０％、５～２５％、５～３０％、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１５～３０％、１５～４０％、１５～４５％、２０～４０％、２０～５０％、２５～５０％、３０～４０％、３０～５０％、３５～５０％、４０～５０％、４５～５０％のガイドまたはパッセンジャー鎖のための全長オフターゲット効果を有し得る。
いくつかの実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはコードされるｄｓＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで高い活性を有し得る。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで低い活性を有し得る。さらに別の実施形態では、遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ二本鎖またはｄｓＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで高いガイド鎖活性及び低いパッセンジャー鎖活性を有し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで高いガイド鎖活性及び低いパッセンジャー鎖活性を有する。ガイド鎖よる標的ノックダウン（ＫＤ）は、少なくとも４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、９９．５％または１００％であり得る。ガイド鎖よる標的ノックダウンは、４０～５０％、４５～５０％、５０～５５％、５０～６０％、６０～６５％、６０～７０％、６０～７５％、６０～８０％、６０～８５％、６０～９０％、６０～９５％、６０～９９％、６０～９９．５％、６０～１００％、６５～７０％、６５～７５％、６５～８０％、６５～８５％、６５～９０％、６５～９５％、６５～９９％、６５～９９．５％、６５～１００％、７０～７５％、７０～８０％、７０～８５％、７０～９０％、７０～９５％、７０～９９％、７０－９９．５％、７０～１００％、７５～８０％、７５～８５％、７５～９０％、７５～９５％、７５～９９％、７５～９９．５％、７５～１００％、８０～８５％、８０～９０％、８０～９５％、８０～９９％、８０～９９．５％、８０～１００％、８５～９０％、８５～９５％、８５～９９％、８５～９９．５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～９９％、９０～９９．５％、９０～１００％、９５～９９％、９５～９９．５％、９５～１００％、９９～９９．５％、９９～１００％または９９．５～１００％であり得る。非限定的な例として、ガイド鎖よる標的ノックダウン（ＫＤ）は、７０％を超える。非限定的な例として、ガイド鎖よる標的ノックダウン（ＫＤ）は、６０％を超える。
いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１；１、２：１０、２：９、２：８、２：７、２：６、２：５、２：４、２：３、２：２、２：１、３：１０、３：９、３：８、３：７、３：６、３：５、３：４、３：３、３：２、３：１、４：１０、４：９、４：８、４：７、４：６、４：５、４：４、４：３、４：２、４：１、５：１０、５：９、５：８、５：７、５：６、５：５、５：４、５：３、５：２、５：１、６：１０、６：９、６：８、６：７、６：６、６：５、６：４、６：３、６：２、６：１、７：１０、７：９、７：８、７：７、７：６、７：５、７：４、７：３、７：２、７：１、８：１０、８：９、８：８、８：７、８：６、８：５、８：４、８：３、８：２、８：１、９：１０、９：９、９：８、９：７、９：６、９：５、９：４、９：３、９：２、９：１、１０：１０、１０：９、１０：８、１０：７、１０：６、１０：５、１０：４、１０：３、１０：２、１０：１、１：９９、５：９５、１０：９０、１５：８５、２０：８０、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５５、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８５：１５、９０：１０、９５：５、または９９：１であり得る。ガイド対パッセンジャー比は、ｐｒｉ－マイクロＲＮＡの細胞内プロセシングの後のガイド鎖対パッセンジャー鎖の比を指す。例えば、８０：２０のガイド対パッセンジャー比は、前駆体からプロセシングされた２個のパッセンジャー鎖毎に８個のガイド鎖を有するであろう。非限定的な例として、ガイド対パッセンジャー鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで８：２である。非限定的な例として、ガイド対パッセンジャー鎖比は、ｉｎ ｖｉｖｏで８：２である。非限定的な例として、ガイド対パッセンジャー鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで９：１である。非限定的な例として、ガイド対パッセンジャー鎖比は、ｉｎ ｖｉｖｏで９：１である。
いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、１を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、２を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、５を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、１０を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、２０を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、５０を超える。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、少なくとも３：１である。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、少なくとも５：１である。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、少なくとも１０：１である。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、少なくとも２０：１である。いくつかの実施形態では、発現するガイド対パッセンジャー（Ｇ：Ｐ）（アンチセンス対センスとも称される）鎖比は、少なくとも５０：１である。
いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１；１、２：１０、２：９、２：８、２：７、２：６、２：５、２：４、２：３、２：２、２：１、３：１０、３：９、３：８、３：７、３：６、３：５、３：４、３：３、３：２、３：１、４：１０、４：９、４：８、４：７、４：６、４：５、４：４、４：３、４：２、４：１、５：１０、５：９、５：８、５：７、５：６、５：５、５：４、５：３、５：２、５：１、６：１０、６：９、６：８、６：７、６：６、６：５、６：４、６：３、６：２、６：１、７：１０、７：９、７：８、７：７、７：６、７：５、７：４、７：３、７：２、７：１、８：１０、８：９、８：８、８：７、８：６、８：５、８：４、８：３、８：２、８：１、９：１０、９：９、９：８、９：７、９：６、９：５、９：４、９：３、９：２、９：１、１０：１０、１０：９、１０：８、１０：７、１０：６、１０：５、１０：４、１０：３、１０：２、１０：１、１：９９、５：９５、１０：９０、１５：８５、２０：８０、２５：７５、３０：７０、３５：６５、４０：６０、４５：５５、５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８５：１５、９０：１０、９５：５、または９９：１である。ガイドに対するパッセンジャーの比は、ガイド鎖の切除後のガイド鎖に対するパッセンジャー鎖の比を指す。例えば、８０：２０のパッセンジャー対ガイド比は、前駆体からプロセシングされた２個のガイド鎖毎に８個のパッセンジャー鎖を有するであろう。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで８０：２０である。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｖｏで８０：２０である。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで８：２である。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｖｏで８：２である。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで９：１である。非限定的な例として、パッセンジャー対ガイド鎖比は、ｉｎ ｖｉｖｏで９：１である。
いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、１を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、２を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、５を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、１０を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、２０を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、５０を超える。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、少なくとも３：１である。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、少なくとも５：１である。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、少なくとも１０：１である。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、少なくとも２０：１である。いくつかの実施形態では、発現するパッセンジャー対ガイド（Ｐ：Ｇ）（センス対アンチセンスとも称される）鎖比は、少なくとも５０：１である。
いくつかの実施形態では、パッセンジャー－ガイド鎖二本鎖は、ｐｒｉ－またはｐｒｅ－マイクロＲＮＡが、当該技術分野で知られている及び本明細書に記載されている方法によって、プロセシングが測定された場合に２倍を超えるガイド対パッセンジャー鎖比を実証する場合、有効であると考えられる。非限定的な例として、ｐｒｉ－またはｐｒｅ－マイクロＲＮＡは、プロセシングが測定される場合、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍超、または２～５倍、２～１０倍、２～１５倍、３～５倍、３～１０倍、３～１５倍、４～５倍、４～１０倍、４～１５倍、５～１０倍、５～１５倍、６～１０倍、６～１５倍、７～１０倍、７～１５倍、８～１０倍、８～１５倍、９～１０倍、９～１５倍、１０～１５倍、１１～１５倍、１２～１５倍、１３～１５倍、または１４～１５倍のガイド対パッセンジャー鎖比を実証する。
いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡをコードするベクターゲノムは、コンストラクトの全長の少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９％を超える配列を含む。非限定的な例として、ベクターゲノムは、コンストラクトの全長配列の少なくとも８０％である配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、配列上の少なくとも１つのエクソンを標的とすることによって野生型または変異体遺伝子をサイレンシングするために使用され得る。
ｓｉＲＮＡ修飾
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、前駆体またはＤＮＡとして送達されない場合、限定されないが、ｉｎ ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡの安定性を増加させること等、ＲＮＡ分子のいくつかの特徴を調節するために化学的に修飾され得る。化学的に修飾されたｓｉＲＮＡコンストラクトは、ヒト治療用途において使用され得、ｓｉＲＮＡコンストラクトのＲＮＡｉ活性を損なうことなく改善される。非限定的な例として、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の３’及び５’末端の両方で修飾されたｓｉＲＮＡコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、センス鎖のみにあり得る。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、アンチセンス鎖のみにあり得る。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方にあり得る。
いくつかの実施形態では、化学的に修飾されたヌクレオチドは、アンチセンス鎖が標的ｍＲＮＡ配列と対合する能力に影響を及ぼさない。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）骨格
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）骨格コンストラクトも含むポリヌクレオチド配列においてコードされ得る。本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）骨格コンストラクト」は、後続分子を設計または作製する配列または構造的基礎を形成するフレームワークまたは開始分子である。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、少なくとも１つの５’隣接領域を含む。非限定的な例として、５’隣接領域は、任意の長さのものであり得、かつ全体的または部分的に野生型マイクロＲＮＡ配列に由来し得、または完全に人工配列であり得る５’隣接配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、少なくとも１つの３’隣接領域を含む。非限定的な例として、３’隣接領域は、任意の長さのものであり得、かつ全体的または部分的に野生型マイクロＲＮＡ配列に由来し得、または完全に人工配列であり得る３’隣接配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、少なくとも１つのループモチーフ領域を含む。非限定的な例として、ループモチーフ領域は、任意の長さのものであり得る配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、５’隣接領域、ループモチーフ領域及び／または３’隣接領域を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのペイロード（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたは本明細書に記載の他のＲＮＡｉ）は、少なくとも１つのｍｉＲ骨格コンストラクトも含み得るポリヌクレオチドによってコードされ得る。ｍｉＲ骨格コンストラクトは、任意の長さのものであり得、かつ全体的または部分的に野生型マイクロＲＮＡ配列に由来し得、または完全に人工であり得る５’隣接配列を含み得る。３’隣接配列は、サイズ及び起源が５’隣接配列及び／または３’隣接配列を反映し得る。隣接配列のいずれかは、非存在であり得る。３’隣接配列は、１つ以上のＣＮＮＣモチーフ（「Ｎ」は、任意のヌクレオチドを表す）を任意に含有し得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトを含むまたはコードするポリヌクレオチドのステムループ構造の５’アームは、センス配列をコードする配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトを含むまたはコードするポリヌクレオチドのステムループの３’アームは、アンチセンス配列をコードする配列を含む。アンチセンス配列は、いくつかの例では、最も５’末端で「Ｇ」ヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、センス配列は、３’アーム上に存在し得るのに対し、アンチセンス配列は、ｍｉＲ骨格コンストラクトを含む、またはコードするポリヌクレオチドのステムループ構造のステムの５’アーム上に存在する。
いくつかの実施形態では、センス及びアンチセンス配列は、それらの長さの実質的部分にわたって完全に相補的であり得る。他の実施形態では、センス配列及びアンチセンス配列は、独立して、鎖の長さの少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、または９９％にわたって少なくとも７０、８０、９０、９５または９９％相補的であり得る。
センス配列の同一性もアンチセンス配列の相同性も標的配列と１００％相補的である必要はない。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのステムループ構造のセンス及びアンチセンス配列を分離することは、ループ配列（ループモチーフ、リンカーまたはリンカーモチーフとしても知られている）である。ループ配列は、４～３０ヌクレオチド、４～２０ヌクレオチド、４～１５ヌクレオチド、５～１５ヌクレオチド、６～１２ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、１０ヌクレオチド、１１ヌクレオチド、１２ヌクレオチド、１３ヌクレオチド、１４ヌクレオチド、及び／または１５ヌクレオチドの任意の長さのものであり得る。
いくつかの実施形態では、ループ配列は、少なくとも１つのＵＧＵＧモチーフをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＵＧＵＧモチーフをコードする核酸配列は、ループ配列の５’末端に位置する。
いくつかの実施形態では、１つ以上のモジュール（例えば、５’隣接領域、ループモチーフ領域、３’隣接領域、センス配列、アンチセンス配列）を互いに分離するためにスペーサー領域がポリヌクレオチドに存在し得る。１つ以上のそのようなスペーサー領域が存在し得る。
いくつかの実施形態では、８～２０、すなわち、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ヌクレオチドのスペーサー領域が、センス配列と隣接領域配列との間に存在し得る。
いくつかの実施形態では、スペーサー領域の長さは、１３ヌクレオチドであり、センス配列の５’末端と隣接配列の３’末端との間に位置する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列のおよそ１つのらせん形を形成するために十分な長さである。
いくつかの実施形態では、８～２０、すなわち、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ヌクレオチドのスペーサー領域が、アンチセンス配列と隣接配列との間に存在し得る。
いくつかの実施形態では、スペーサー配列は、１０～１３、すなわち、１０、１１、１２または１３ヌクレオチドであり、アンチセンス配列の３’末端と隣接配列の５’末端と間に位置する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列のおよそ１つのらせん形を形成するために十分な長さである。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、５’から３’方向で、５’隣接配列、５’アーム、ループモチーフ、３’アーム及び３’隣接配列を含む。非限定的な例として、５’アームは、センス配列を含み得、３’アームは、アンチセンス配列を含む。別の非限定的な例では、５’アームは、アンチセンス配列を含み、３’アームは、センス配列を含む。
いくつかの実施形態では、５’アーム、ペイロード（例えば、センス及び／またはアンチセンス配列）、ループモチーフ及び／または３’アーム配列は、改変され得る（例えば、１つ以上のヌクレオチドを置換する、ヌクレオチドを付加する及び／またはヌクレオチドを欠失させる）。改変は、コンストラクトの機能の有益な変化を引き起こし得る（例えば、標的配列のノックダウンを増加させる、コンストラクトの分解を低減する、オフターゲット効果を低減する、ペイロードの効率を増加させる、及びペイロードの分解を低減する）。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのｍｉＲ骨格コンストラクトは、ガイド鎖の切除率がパッセンジャー鎖の切除率よりも高くなるように整列させられる。ガイドまたはパッセンジャー鎖の切除率は、独立して、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９％を超え得る。非限定的な例として、ガイド鎖の切除率は、少なくとも８０％である。別の非限定的な例として、ガイド鎖の切除率は、少なくとも９０％である。
いくつかの実施形態では、ガイド鎖の切除率は、パッセンジャー鎖の切除率よりも高い。１つの態様では、ガイド鎖の切除率は、パッセンジャー鎖よりも少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９％超えて高い場合がある。
いくつかの実施形態では、ガイド鎖の切除の効率％は、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または９９％を超える。非限定的な例として、ガイド鎖の切除の効率は、８０％よりも高い。
いくつかの実施形態では、ガイド鎖の切除の効率は、ｍｉＲ骨格コンストラクトからのパッセンジャー鎖の切除よりも高い。ガイド鎖の切除は、ｍｉＲ骨格コンストラクトからのパッセンジャー鎖の切除よりも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍または１０倍を超えて効率的であり得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、二重機能標的化ポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される場合、「二重機能標的化」ポリヌクレオチドは、ガイド及びパッセンジャー鎖の両方が同じ標的をノックダウンし、またはガイド及びパッセンジャー鎖が異なる標的をノックダウンするポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドのｍｉＲ骨格コンストラクトは、５’隣接領域、ループモチーフ領域及び３’隣接領域を含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下の特性：ループバリアント、シードミスマッチ／バルジ／揺らぎバリアント、ステムミスマッチ、ループバリアント及びバッサルステムミスマッチバリアント、シードミスマッチ及びベーサルステムミスマッチバリアント、ステムミスマッチ及びベーサルステムミスマッチバリアント、シード揺らぎ及びベーサルステム揺らぎバリアント、またはステム配列バリアントのうちの少なくとも１つを使用して設計される。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトは、天然ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格であり得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトの選択は、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡにおけるポリヌクレオチドを比較する方法によって決定される。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲ骨格コンストラクトの選択は、天然ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ及び合成ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡにおけるポリヌクレオチドを比較する方法によって決定される。
トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）
トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）は、ｍＲＮＡをタンパク質に翻訳するＲＮＡ分子である。ｔＲＮＡには、３’アクセプター部位、５’末端ホスフェート、Ｄアーム、Ｔアーム、及びアンチコドンアームを含むクローバー型構造が含まれる。ｔＲＮＡの主要な目的は、タンパク質を合成するために遊離ｔＲＮＡ上に適切なアミノ酸をロードする酵素であるアミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素の助けを借りてリボソーム複合体にその３’アクセプター部位上のアミノ酸を運搬することである。アミノ酸がｔＲＮＡに結合すると、ｔＲＮＡは、アミノアシル－ｔＲＮＡとみなされる。ｔＲＮＡ上のアミノ酸のタイプは、ｍＲＮＡコドンに依存性である。ｔＲＮＡのアンチコドンアームは、ｍＲＮＡコドンと相補的であり、どのアミノ酸を運搬するかを指示するアンチコドンの部位である。ｔＲＮＡはまた、シトクロムｃスカベンジャーとして作用することによってアポトーシスの制御において役割を有することが知られている。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ｔＲＮＡを含み、またはそれをコードする。
リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）
リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）は、リボソームを形成するＲＮＡである。リボソームは、タンパク質合成に必須であり、大及び小リボソームサブユニットを含有する。原核生物において、小３０Ｓ及び大５０Ｓリボソームサブユニットは、７０Ｓリボソームを構成する。真核生物において、４０Ｓ及び６０Ｓサブユニットは、８０Ｓリボソームを形成する。アミノアシル－ｔＲＮＡを結合させ、アミノ酸を一緒に連結してポリペプチドを生成するために、リボソームは、３つの部位：出口部位（Ｅ）、ペプチジル部位（Ｐ）、及びアクセプター部位（Ａ）を含有する。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ｒＲＮＡを含み、またはそれをコードする。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）
マイクロＲＮＡ（またはｍｉＲＮＡ）は、核酸分子の３’ＵＴＲに結合し、核酸分子安定性を低減することによってまたは翻訳を阻害することによってのいずれかで遺伝子発現を下方制御する１９～２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、１つ以上のマイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ配列、またはマイクロＲＮＡシードを含み得る。
マイクロＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟マイクロＲＮＡの位置２～８の領域における配列を含み、この配列は、ｍｉＲＮＡ標的配列と完全なワトソン・クリック相補性を有する。マイクロＲＮＡシードは、成熟マイクロＲＮＡの位置２～８または２～７を含み得る。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡシードは、７ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２～８）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補的部位は、マイクロＲＮＡ位置１に対向するアデニン（Ａ）と隣接している。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡシードは、６ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２～７）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補的部位は、マイクロＲＮＡ位置１に対向するアデニン（Ａ）に隣接している。マイクロＲＮＡシードの塩基は、標的配列と完全な相補性を有する。マイクロＲＮＡ標的配列をｍＲＮＡの３’ＵＴＲに操作することによって、対象となるマイクロＲＮＡが利用可能であることを条件として、分解または低減された翻訳のために分子を標的化し得る。このプロセスは、核酸分子送達によりオフターゲット効果の危険を低減するであろう。
本明細書で使用される場合、用語「マイクロＲＮＡ部位」は、マイクロＲＮＡ標的部位もしくはマイクロＲＮＡ認識部位、またはマイクロＲＮＡが結合または会合する任意のヌクレオチド配列を指す。「結合」は、従来のワトソン・クリックハイブリダイゼーション規則に従い得、またはマイクロＲＮＡとマイクロＲＮＡ部位におけるまたはそれに隣接する標的配列との任意の安定な会合を反映し得ることが理解されるべきである。
マイクロＲＮＡがｍＲＮＡを制御し、それによりタンパク質発現を制御することが知られている組織の非限定的な例には、肝臓（ｍｉＲ－１２２）、筋肉（ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２７）、脂肪組織（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ－ｌｄ、ｍｉＲ－１４９）、腎臓（ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１２６）が含まれるがこれらに限定されない。マイクロＲＮＡはまた、複雑な生物学的プロセス、例えば、血管新生を制御し得る（ｍｉＲ－１３２）。
例えば、核酸分子がｍＲＮＡであり、肝臓に送達されることは意図されていないが、そこに行き着く場合、そのときは肝臓において豊富なマイクロＲＮＡであるｍｉＲ－１２２は、ｍｉＲ－１２２の１つのまたは複数の標的部位がｍＲＮＡの３’ＵＴＲ内に操作される場合、対象となる遺伝子の発現を阻害し得る。異なるマイクロＲＮＡのための１つまたは複数の結合部位の導入は、ｍＲＮＡの寿命、安定性、及びタンパク質翻訳をさらに減少させるために操作され得る。
逆に、マイクロＲＮＡ結合部位は、特定の組織においてタンパク質発現を増加させるためにそれらが天然に存在する配列から操作排除（すなわち、除去）され得る。例えば、ｍｉＲ－１２２結合部位は、肝臓におけるタンパク質発現を改善するために除去され得る。複数の組織における発現の制御は、１つのまたはいくつかのマイクロＲＮＡ結合部位の導入または除去を介して達成され得る。
長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）
長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）は、タンパク質をコードしないが、広範囲の生物学的プロセスに影響を及ぼす制御性ＲＮＡ分子である。ｌｎｃＲＮＡ指定は通常、約２００ヌクレオチドよりも長い非コード転写産物に制限され得る。長さの指定は、ｌｎｃＲＮＡを、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）等の小さな制御性ＲＮＡと区別する。脊椎動物では、ｌｎｃＲＮＡ種の数は、タンパク質コード種の数を大幅に超えると考えられる。また、ｌｎｃＲＮＡは、無脊椎動物と比較して脊椎動物において観察される生物学的複雑性を誘導すると考えられている。この複雑性の証拠は、脊椎動物生物の多くの細胞区画、例えば、適応免疫系のＴリンパ球区画で見られる。ｌｎｃＲＮＡの発現及び機能の差は、ヒト疾患に対する主要な寄与因子であり得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ｌｎｃＲＮＡを含む。
ＲＮＡ修飾
いくつかの態様では、オリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトは、１つ以上の修飾されたヌクレオチド、例えば、限定されないが、糖修飾されたヌクレオチド、核酸塩基修飾及び／または骨格修飾を含有し得る。いくつかの態様では、オリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトは、組み合わされた修飾、例えば、組み合わされた核酸塩基及び骨格修飾を含有し得る。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、糖修飾されたヌクレオチドであり得る。糖修飾されたヌクレオチドには、２’－フルオロ、２’－アミノ及び２’－チオ修飾されたリボヌクレオチド、例えば、２’－フルオロ修飾されたリボヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない。修飾されたヌクレオチドは、糖部位、及びリボシルではない糖またはそのアナログを有するヌクレオチドで修飾され得る。例えば、糖部位は、マンノース、アラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース、及び他の糖、複素環、または炭素環であり得、またはそれらに基づき得る。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、核酸塩基修飾ヌクレオチドであり得る。
いくつかの実施形態では、修飾されたヌクレオチドは、骨格修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトは、骨格上に他の修飾をさらに含み得る。正常な「骨格」は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子における繰り返しの交互の糖－ホスフェート配列を指す。デオキシリボース／リボース糖は、「ホスホジエステル」結合／リンカー（ＰＯ結合）としても知られているエステル結合において３’－ヒドロキシル基及び５’－ヒドロキシル基の両方でホスフェート基に接続される。ＰＯ骨格は、「ホスホロチオエート骨格（ＰＳ結合）」として修飾され得る。いくつかの場合では、天然ホスホジエステル結合は、アミド結合によって置き換えらえ得るが、２つの糖単位の間の４つの原子は維持される。そのようなアミド修飾は、オリゴヌクレオチドの固相合成を容易化し、ｓｉＲＮＡ相補体と形成された二本鎖の熱力学的安定性を増加させ得る。
修飾された塩基は、１つ以上の原子または基の置き換えまたは付加によって修飾されたヌクレオチド塩基、例えば、限定されないが、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、キサンチン、イノシン、及びキューオシンを指す。核酸塩基部位上の修飾のいくつかの例には、アルキル化、ハロゲン化、チオール化、アミノ化、アミド化、またはアセチル化塩基が個々にまたは組み合わせて含まれるがこれらに限定されない。より具体的な例には、例えば、５－プロピニルウリジン、５－プロピニルシチジン、６－メチルアデニン、６－メチルグアニン、Ｎ，Ｎ，－ジメチルアデニン、２－プロピルアデニン、２－プロピルグアニン、２－アミノアデニン、１－メチルイノシン、３－メチルウリジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン及び５位で修飾を有する他のヌクレオチド、５－（２－アミノ）プロピルウリジン、５－ハロシチジン、５－ハロウリジン、４－アセチルシチジン、１－メチルアデノシン、２－メチルアデノシン、３－メチルシチジン、６－メチルウリジン、２－メチルグアノシン、７－メチルグアノシン、２，２－ジメチルグアノシン、５－メチルアミノエチルウリジン、５－メチルオキシウリジン、デアザヌクレオチド、例えば、７－デアザ－アデノシン、６－アゾウリジン、６－アゾシチジン、６－アゾチミジン、５－メチル－２－チオウリジン、他のチオ塩基、例えば、２－チオウリジン及び４－チオウリジン及び２－チオシチジン、ジヒドロウリジン、シュードウリジン、キューオシン、アルカエオシン、ナフチル及び置換ナフチル基、任意のＯ－及びＮ－アルキル化プリン及びピリミジン、例えば、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、ウリジン５－オキシ酢酸、ピリジン－４－オン、ピリジン－２－オン、フェニル及び修飾されたフェニル基、例えば、アミノフェノールまたは２，４，６－トリメトキシベンゼン、Ｇ－クランプヌクレオチドとして作用する修飾されたシトシン、８置換アデニン及びグアニン、５置換ウラシル及びチミン、アザピリミジン、カルボキシヒドロキシアルキルヌクレオチド、カルボキシアルキルアミノアルキルヌクレオチド、及びアルキルカルボニルアルキル化ヌクレオチドが含まれる。
オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトには、参照配列、特に、親ＲＮＡに対して１つ以上の置換、挿入及び／または付加、欠失、及び共有結合性修飾が含まれ得、本開示の範囲に含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトには、１つ以上の転写後修飾（例えば、キャッピング、切断、ポリアデニル化、スプライシング、ポリ－Ａ配列、メチル化、アシル化、リン酸化、リジン及びアルギニン残基のメチル化、アセチル化、ならびにチオール基及びチロシン残基のニトロシル化等）が含まれる。１つ以上の転写後修飾は、ＲＮＡにおいて同定されている数百の異なるヌクレオシド修飾のいずれか等の任意の転写後修飾であり得る（Ｒｏｚｅｎｓｋｉ，Ｊ，Ｃｒａｉｎ，Ｐ，ａｎｄ ＭｃＣｌｏｓｋｅｙ，Ｊ．（１９９９）．Ｔｈｅ ＲＮＡ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｄａｔａｂａｓｅ：１９９９ ｕｐｄａｔｅ．Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：１９６－１９７）。いくつかの実施形態では、第１の単離された核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトは、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオウリジン、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシウリジン、３－メチルウリジン、５－カルボキシメチル－ウリジン、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチルウリジン、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン、１－タウリノメチル－４－チオ－ウリジン、５－メチル－ウリジン、１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、及び４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン、Ｎ４－アセチルシチジン、５－ホルミルシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、及び４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチルアデノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン、７－メチルアデニン、２－メチルチオ－アデニン、及び２－メトキシ－アデニンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、イノシン、１－メチル－イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７－デアザ－グアノシン、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチルイノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチルグアノシン、Ｎ２－メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、及びＮ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトには、例えば、糖、核酸塩基、またはヌクレオシド間連結（例えば、連結しているホスフェート／ホスホジエステル結合／ホスホジエステル骨格）に対する任意の有用な修飾が含まれ得る。ピリミジン核酸塩基の１つ以上の原子は、任意に置換されたアミノ、任意に置換されたチオール、任意に置換されたアルキル（例えば、メチルまたはエチル）、またはハロ（例えば、クロロまたはフルオロ）で置き換えられ、または置換され得る。所定の実施形態では、修飾（例えば、１つ以上の修飾）は、糖及びヌクレオシド間結合の各々に存在する。修飾は、リボ核酸（ＲＮＡ）からデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ）またはそれらのハイブリッド）への修飾であり得る。追加の修飾は、本明細書に記載されている。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトには、翻訳効率を増加させるために少なくとも１つのＮ（６）メチルアデノシン（ｍ６Ａ）修飾が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｎ（６）メチルアデノシン（ｍ６Ａ）修飾は、オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトの免疫原性を低減し得る。
いくつかの実施形態では、修飾には、化学的または細胞性誘導修飾が含まれ得る。例えば、細胞内ＲＮＡ修飾のいくつかの非限定的な例は、Ｎａｔ．Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２０１７，１８：２０２－２１０からの“ＲＮＡ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｇｕｉｄｅ ＲＮＡ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ”においてＬｅｗｉｓ及びＰａｎによって記載されている。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡに対する化学的修飾は、免疫回避を向上させ得る。ＲＮＡは、当該技術分野においてよく確立されている方法、例えば、“Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，” Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（本明細書によって参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものによって合成及び／または修飾され得る。修飾には、例えば、末端修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化（一、二及び三）、コンジュゲーション、逆結合等）、３’末端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結等）、塩基修飾（例えば、安定化塩基、不安定化塩基、またはパートナーの伸長レパートリーと塩基対合する塩基での置き換え）、塩基の除去（塩基脱落ヌクレオチド）、またはコンジュゲート化塩基が含まれる。修飾されたリボヌクレオチド塩基にはまた、５－メチルシチジン及びシュードウリジンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、塩基修飾は、ＲＮＡのいくつかの機能的効果を指定するために発現、免疫反応、安定性、細胞内局在化を調節し得る。いくつかの実施形態では、修飾には、双直交ヌクレオチド、例えば、非天然塩基が含まれる。例えば、Ｋｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ），２０１７，５３：１２３０９，ＤＯＩ：１０．１０３９／ｃ７ｃｃ０６６６１ａ（参照により本明細書に組み込まれるである）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＲＮＡの糖修飾（例えば、２’位または４’位）または糖の置き換えは、骨格修飾と同様に、ホスホジエステル結合の修飾または置き換えが含まれ得る。修飾の具体的な例には、ホスホジエステル結合の修飾または置き換えを含む、ヌクレオシド間修飾等の修飾された骨格または非天然ヌクレオシド間連結が含まれる。修飾された骨格を有するＲＮＡには、とりわけ、骨格においてリン原子を有しないものが含まれる。本出願の目的のため、及び時に当該技術分野で言及されるように、それらのヌクレオシド間骨格においてリン原子を有しない修飾されたＲＮＡもまた、オリゴヌクレオシドとみなされ得る。特定の実施形態では、ＲＮＡには、そのヌクレオシド間骨格においてリン原子を有するリボヌクレオチドが含まれるであろう。
修飾されたＲＮＡ骨格には、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホネート、例えば、３’－アルキレンホスホネート及びキラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート、例えば、３’－アミノホスホルアミデート及びアミノアルキルホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、及び通常の３’－５’結合を有するボラノホスフェート、これらの２－５’結合アナログ、ならびに逆転した極性を有するもの（ヌクレオシド単位の隣接対が、３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’に連結されている）が含まれ得る。様々な塩、混合塩及び遊離酸形態も含まれる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、負または正に荷電している場合がある。
修飾されたヌクレオチドは、ヌクレオシド間結合（例えば、ホスフェート骨格）上で修飾され得る。本明細書では、ポリヌクレオチド骨格の文脈において、語句「ホスフェート」及び「ホスホジエステル」は、互換的に使用される。骨格ホスフェート基は、酸素原子の１つ以上を異なる置換基に置き換えることによって修飾され得る。さらに、修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドには、未修飾ホスフェート部位の、本明細書に記載される別のヌクレオシド間結合での大規模置き換えが含まれ得る。修飾されたホスフェート基の例には、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、水素ホスホネート、ホスホルアミデート、ホスホロジアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、及びホスホトリエステルが含まれるがこれらに限定されない。ホスホロジチオエートは、両方の非連結酸素が硫黄によって置き換えられている。ホスフェートリンカーはまた、窒素（架橋ホスホルアミデート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、及び炭素（架橋メチレン－ホスホネート）での連結酸素の置き換えによって修飾され得る。
ａ－チオ置換ホスフェート部位は、非天然ホスホロチオエート骨格結合を介してＲＮＡ及びＤＮＡポリマーに安定性を付与するために提供される。ホスホロチオエートＤＮＡ及びＲＮＡは、細胞環境において増加したヌクレアーゼ耐性及びその後のより長い半減期を有する。ＲＮＡに連結されたホスホロチオエートは、細胞自然免疫分子のより弱い結合／活性化を介して自然免疫反応を低減することが予期される。
特定の実施形態では、修飾されたヌクレオシドには、アルファ－チオ－ヌクレオシド（例えば、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－アデノシン、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－シチジン（ａ－チオ－シチジン）、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－グアノシン、５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－ウリジン、または５’－Ｏ－（１－チオホスフェート）－シュードウリジン）が含まれる。
リン原子を含有しないヌクレオシド間結合を含む、本開示に従って用いられ得る他のヌクレオシド間連結は、本明細書に記載されている。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡには、１つ以上の細胞傷害性ヌクレオシドが含まれ得る。例えば、細胞傷害性ヌクレオシドは、２官能性修飾等、ＲＮＡに組み込まれ得る。細胞傷害性ヌクレオシドには、アデノシンアラビノシド、５－アザシチジン、４’－チオ－アラシチジン、シクロペンテニルシトシン、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、シトシンアラビノシド、１－（２－Ｃ－シアノ－２－デオキシ－ベータ－Ｄ－アラビノ－ペントフラノシル）－シトシン、デシタビン、５－フルオロウラシル、フルダラビン、フロクスウリジン、ゲムシタビン、テガフール及びウラシルの組み合わせ、テガフール（（ＲＳ）－５－フルオロ－１－（テトラヒドロフラン－２－イル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン）、トロキサシタビン、テザシタビン、２’－デオキシ－２’－メチリデンシチジン（ＤＭＤＣ）、及び６－メルカプトプリンが含まれ得るがこれらに限定されない。追加の例には、フルダラビンホスフェート、Ｎ４－ベヘノイル－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシルシトシン、Ｎ４－オクタデシル－１－ベータ－Ｄ－アラビノフラノシルシトシン、Ｎ４－パルミトイル－１－（２－Ｃ－シアノ－２－デオキシ－ベータ－Ｄ－アラビノ－ペントフラノシル）シトシン、及びＰ－４０５５（シタラビン５’－エライジン酸エステル）が含まれる。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ配列は、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、グアノシン、シチジン、ウリジン）、ヌクレオシドアナログ（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニン、及び２－チオシチジン）、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）、インターカレート塩基、修飾された糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）、及び／または修飾されたホスフェート基（例えば、ホスホロチオエート及び５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合）を含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）、または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）。１つの実施形態では、ＲＮＡ配列は、組み込まれたシュードウリジン（ｙ）を含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）、または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）。別の実施形態では、ＲＮＡ配列は、５－メチルシトシン（ｍ５Ｃ）を含み（ｉｎｃｌｕｄｅ）、または含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）。
ＲＮＡは、分子の長さ全体に沿って均一に修飾されている場合があり、されていない場合がある。例えば、ヌクレオチドの１つ以上またはすべてのタイプ（例えば、天然に存在するヌクレオチド、プリンまたはピリミジン、またはＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃ、Ｉ、ｐＵの任意の１つ以上またはすべて）は、ＲＮＡにおいて、またはその所与の既定の配列領域において均一に修飾されている場合があり、されていない場合がある。いくつかの実施形態では、ＲＮＡには、シュードウリジンが含まれる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡには、イノシンが含まれ、これは、ウイルスＲＮＡに対して内因性としてＲＮＡを特性化する免疫系を補助し得る。イノシンの組み込みはまた、改善されたＲＮＡ安定性／低減された分解を媒介し得る。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡにおける（またはその所与の配列領域における）すべてのヌクレオチドが修飾されている。いくつかの実施形態では、修飾には、発現を増加させ得るｍ６Ａ、免疫反応を減弱させ得るイノシン、ＲＮＡ安定性、または翻訳リードスルー（スタッガー要素）を増加させ得るシュードウリジン、安定性を増加させ得るｍ５Ｃ、及び細胞内転座（例えば、核局在化）を補助する２，２，７－トリメチルグアノシンが含まれ得る。
異なる糖修飾、ヌクレオチド修飾、及び／またはヌクレオシド間結合（例えば、骨格構造）は、ＲＮＡにおける様々な位置で存在し得る。当業者は、ＲＮＡの機能が実質的に減少しないようにヌクレオチドアナログまたは他の修飾（複数可）が、ＲＮＡの任意の位置（複数可）に位置し得ることを理解するであろう。修飾はまた、非コード領域修飾であり得る。ＲＮＡには、約１％～約１００％の修飾ヌクレオチド（ヌクレオチド含有量全体に関する、またはヌクレオチドの１つ以上のタイプ、すなわち、Ａ、Ｇ、ＵまたはＣのうちの任意の１つ以上に関する）または任意の介在割合（例えば、１％～２０％＞、１％～２５％、１％～５０％、１％～６０％、１％～７０％、１％～８０％、１％～９０％、１％～９５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～９５％、１０％～１００％、２０％～２５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～９５％、２０％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～９５％、５０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～９５％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～９５％、８０％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、及び９５％～１００％）が含まれ得る。
コドン最適化
オリジネーターコンストラクト及び／またはベンチマークコンストラクトのヌクレオチド配列は、コドン最適化され得る。コドン最適化方法は、当該技術分野で知られており、いくつかの目標の１つ以上を達成する試みにおいて有用であり得る。これらの目標には、標的生物と宿主生物におけるコドン頻度を一致させて適切なフォールディングを確保し、ＧＣ含有量にバイアスをかけてｍＲＮＡ安定性を増加させ、または二次構造を低減し、遺伝子構築または発現を損い得るタンデムリピートコドンまたは塩基ランを最小化し、転写及び翻訳コントロール領域をカスタマイズし、タンパク質トラフィッキング配列を挿入または除去し、コードされたタンパク質の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加し、タンパク質ドメインを付加、除去またはシャッフルし、制限酵素部位を挿入または欠失させ、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾し、翻訳速度を調整してタンパク質の様々なドメインが適切にフォールディングすること、またはｍＲＮＡ内の問題のある二次構造を低減または排除することを可能とすることが含まれる。コドン最適化ツール、アルゴリズム及びサービスは、当該技術分野で知られており、非限定的な例には、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ ＣＡ）及び／または私有の方法からのサービスが含まれる。いくつかの実施形態では、ＯＲＦ配列は、最適化アルゴリズムを使用して最適化される。
ＩＩＩ．脂質
本開示は、低い毒性、関連する組織における低い持続した脂質レベルと共に、様々な組織への局所的送達のための高い有効性を実証するイオン化可能な脂質を提供する。イオン化可能な脂質は、カチオン性脂質であり得る。
式（ＣＹ）
本開示は、式（ＣＹ）の化合物
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、－ＯＡｃ、Ｒ１ａ、
からなる群から選択され；
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
Ｘ２’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
Ｘ３は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
Ｘ３’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルまたは任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
からなる群から選択され；
「＊」でマークされた結合は、Ｘ４またはＸ５に結合されており；
各Ｚ２は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたＣ１－Ｃ８アルキルであり；
各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、及び－（ＣＨ２）ｐＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択され；
Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｑＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）からなる群から選択され；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨであり；
各Ａは、独立して、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルであり；
各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
ｐは、０、１、２、３、４、５、６、及び７からなる群から選択され；
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、及び７からなる群から選択される）を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示には、式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、（ＣＹ－ＩＶ）、または（ＣＹ－Ｖ）の化合物：
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ２’、Ｘ３、Ｘ３’、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、Ｙ２、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書で定義されている）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示には、式（ＣＹ－ＶＩ）または（ＣＹ－ＶＩＩ）の化合物：
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書で定義されている）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示には、式（ＣＹ－ＶＩＩＩ）または（ＣＹ－ＩＸ）の化合物：
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書で定義されている）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示には、式（ＣＹ－ＩＶ－ａ）、（ＣＹ－ＩＶ－ｂ）、または（ＣＹ－ＩＶ－ｃ）の化合物
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書で定義されている）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示には、式（ＣＹ－ＩＶ－ｄ）、（ＣＹ－ＩＶ－ｅ）、または（ＣＹ－ＩＶ－ｆ）の化合物
またはその薬学的に許容可能な塩
（式中、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書で定義されている）が含まれる。
Ｒ１
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、－ＯＨ、－ＯＡｃ、Ｒ１ａ、
からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、－ＯＨまたは－ＯＡｃである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、－ＯＡｃである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｒ１ａである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、イミダゾリルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、
である。
Ｒ２
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、及び－（ＣＨ２）ｐＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ８－Ｃ１７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ８－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１１－Ｃ１３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１４－Ｃ１６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ９アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１２アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ５－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ７－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、任意に置換されたＣ１２－Ｃ１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－（ＣＨ２）ｐＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－（ＣＨ２）２ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－（ＣＨ２）３ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２は、－（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２は、
からなる群から選択される。
Ｒ３
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、及び－（ＣＨ２）ｑＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ８－Ｃ１７アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ８－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１１－Ｃ１３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１４－Ｃ１６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ９アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１１アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１２アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ５－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ７－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意に置換されたＣ１２－Ｃ１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－（ＣＨ２）ｑＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－（ＣＨ２）２ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－（ＣＨ２）３ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。いくつかの実施形態では、Ｒ３は、－（ＣＨ２）４ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、
からなる群から選択される。
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９
いくつかの実施形態では、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ４－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、独立して、任意に置換されたＣ５－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ６は、－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ４－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ５－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、任意に置換された任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ４－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ５－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ８は、－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ４－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ５－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ９－Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は、－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨである。
いくつかの実施形態では、各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である。いくつかの実施形態では、各ｍは、０である。いくつかの実施形態では、各ｍは、１である。いくつかの実施形態では、各ｍは、２である。いくつかの実施形態では、各ｍは、３である。いくつかの実施形態では、各ｍは、４である。いくつかの実施形態では、各ｍは、５である。いくつかの実施形態では、各ｍは、６である。いくつかの実施形態では、各ｍは、７である。いくつかの実施形態では、各ｍは、８である。いくつかの実施形態では、各ｍは、９である。いくつかの実施形態では、各ｍは、１０である。いくつかの実施形態では、各ｍは、１１である。いくつかの実施形態では、各ｍは、１２である。
いくつかの実施形態では、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である。いくつかの実施形態では、各ｎは、０である。いくつかの実施形態では、各ｎは、１である。いくつかの実施形態では、各ｎは、２である。いくつかの実施形態では、各ｎは、３である。いくつかの実施形態では、各ｎは、４である。いくつかの実施形態では、各ｎは、５である。いくつかの実施形態では、各ｎは、６である。いくつかの実施形態では、各ｎは、７である。いくつかの実施形態では、各ｎは、８である。いくつかの実施形態では、各ｎは、９である。いくつかの実施形態では、各ｎは、１０である。いくつかの実施形態では、各ｎは、１１である。いくつかの実施形態では、各ｎは、１２である。
いくつかの実施形態では、各Ａは、独立して、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルである。いくつかの実施形態では、各Ａは、シクロプロピレニルである。
Ｘ１
いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ５アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ３アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ２アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ３アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ５アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換されたＣ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換された－（ＣＨ２）２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換された－（ＣＨ２）３－である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換された－（ＣＨ２）４－である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換された－（ＣＨ２）５－である。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、任意に置換された－（ＣＨ２）６－である。
Ｘ２
いくつかの実施形態では、Ｘ２は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、－ＣＨ２ＣＨ２－である。
Ｘ２’
いくつかの実施形態では、Ｘ２’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２’は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｘ２’は、－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ２’は、－ＣＨ２ＣＨ２－である。
Ｘ３
いくつかの実施形態では、Ｘ３は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、－ＣＨ２ＣＨ２－である。
Ｘ３’
いくつかの実施形態では、Ｘ３’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３’は、結合である。いくつかの実施形態では、Ｘ３’は、－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ３’は、－ＣＨ２ＣＨ２－である。
Ｘ４
いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニル及び任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１０アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ８アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ３－Ｃ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ３アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ５アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換されたＣ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換された－（ＣＨ２）２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換された－（ＣＨ２）３－である。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換された－（ＣＨ２）４－である。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換された－（ＣＨ２）５－である。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、任意に置換された－（ＣＨ２）６－である。
Ｘ５
いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニル及び任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１０アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ８アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ３－Ｃ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ３アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ４アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ５アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換されたＣ６アルキレニルである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換された－（ＣＨ２）２－である。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換された－（ＣＨ２）３－である。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換された－（ＣＨ２）４－である。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換された－（ＣＨ２）５－である。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、任意に置換された－（ＣＨ２）６－である。
Ｙ１
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
である。
Ｙ２
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ２は、
である。
式（ＣＹ－Ｉ’）
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり；
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルまたは任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
「＊」でマークされた結合は、Ｘ４またはＸ５に結合されており；
各Ｚ２は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたＣ１－Ｃ８アルキルであり；
各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）であり；
Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）であり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨであり；
Ａは、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルであり；
各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造（式中、Ｒ１は、－ＯＨ、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造（式中、Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造（式中、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｉ’）の構造（式中、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である）を有する。
式（ＣＹ－Ｉ’）の構造を有する脂質の非限定的な例には、化合物ＣＹ１、ＣＹ２、ＣＹ３、ＣＹ９、ＣＹ１０、ＣＹ１１、ＣＹ１２、ＣＹ２２、ＣＹ２３、ＣＹ２４、ＣＹ３０、ＣＹ３１、ＣＹ３２、ＣＹ３３、ＣＹ４３、ＣＹ４４、ＣＹ４５、ＣＹ５０、ＣＹ５１、ＣＹ５２、及びＣＹ５３が含まれる。
式（ＣＹ－ＩＩ’）
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、式（ＣＹ－Ｉ’）に関連して定義されるとおりである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、Ｒ１は、－ＯＨ、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造（式中、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である）を有する。
式（ＣＹ－ＩＩ’）の構造を有する脂質の非限定的な例には、化合物ＣＹ４、ＣＹ５、ＣＹ１６、ＣＹ１７、ＣＹ１８、ＣＹ２５、ＣＹ２６、ＣＹ３７、ＣＹ３８、ＣＹ３９、ＣＹ４６、ＣＹ５６、及びＣＹ５７が含まれる。
式（ＣＹ－ＩＩＩ’）
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、式（ＣＹ－Ｉ’）に関連して定義されるとおりである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造（式中、Ｒ１は、－ＯＨ、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造（式中、Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造（式中、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造（式中、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である）を有する。
式（ＣＹ－ＩＩＩ’）の構造を有する脂質の非限定的な例には、化合物ＣＹ６、ＣＹ１４、ＣＹ２７、ＣＹ３５、ＣＹ４７、及びＣＹ５５が含まれる。
式（ＣＹ－ＩＶ）
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、式（ＣＹ－Ｉ’）に関連して定義されるとおりである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、

であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造（式中、Ｒ１は、－ＯＨ、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造（式中、Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造（式中、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造（式中、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である）を有する。
式（ＣＹ－ＩＶ’）の構造を有する脂質の非限定的な例には、化合物ＣＹ７、ＣＹ８、ＣＹ１９、ＣＹ２０、ＣＹ２１、ＣＹ２８、ＣＹ２９、ＣＹ４０、ＣＹ４１、ＣＹ４２、ＣＹ４８、ＣＹ４９、ＣＹ５８、ＣＹ５９、及びＣＹ６０が含まれる。
式（ＣＹ－Ｖ’）
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｖ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｘ６及びＸ７は、独立して、－ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、式（ＣＹ－Ｉ’）に関連して定義されるとおりである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｖ’）の構造（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｖ’）の構造（式中、Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｖ’）の構造（式中、Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－Ｖ’）の構造（式中、Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である）を有する。
式（ＣＹ－Ｖ’）の構造を有する脂質の非限定的な例には、化合物ＣＹ１３、ＣＹ１５、ＣＹ３４、ＣＹ３６、及びＣＹ５４が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造：
またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、式（ＣＹ－Ｉ’）に関連して定義されるとおりである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１は、－ＯＨである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｘ１は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｘ２は、－ＣＨ２ＣＨ２－である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｘ４は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｘ５は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｙ１は、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｙ２は、
である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、各Ｚ３は、－ＣＨ２ＣＨ２－である）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ６は、Ｃ５－Ｃ１４アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ７は、Ｃ５－Ｃ１４アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ６は、Ｃ６－Ｃ１４アルケニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ７は、Ｃ６－Ｃ１４アルケニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ８は、Ｃ５－Ｃ１６アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ９は、Ｃ５－Ｃ１４アルキルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ８は、Ｃ６－Ｃ１４アルケニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、式（ＣＹ－ＶＩ’）の構造、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ９は、Ｃ６－Ｃ１４アルケニルである）を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、複素環式コア（式中、ヘテロ原子は、窒素である）を含む。いくつかの実施形態では、複素環式コアは、ピロリジンまたはその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、複素環式コアは、ピペリジンまたはその誘導体を含む。いくつかの実施形態では、本開示の脂質は、以下の表（Ｉ）における任意の脂質またはその薬学的に許容可能な塩から選択される：
ＩＶ．送達ビヒクル及びトラッキングシステム
本明細書に記載のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、送達ビヒクル中で製剤化され得る。送達ビヒクルの非限定的な例には、脂質ナノ粒子、非脂質ナノ粒子、エクソソーム、リポソーム、ミセル、ウイルス粒子、及びポリマー送達技術が含まれる。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、表（Ｉ）における少なくとも１つの脂質を含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、表（Ｉ）における少なくとも２つの脂質を含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、表（Ｉ）における少なくとも３つの脂質を含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、表（Ｉ）における少なくとも４つの脂質を含む。
送達ビヒクルにおける表（Ｉ）における脂質（複数可）の総重量パーセンテージは、約１０％～約９５％、例えば、約１０％～約２０％、約２１％～約３０％、約３１％～約４０％、約４１％～約５０％、約５１％～約６０％、約６１％～約７０％、約７１％～約８０％、約８１％～約９０％、または約９１％～約９５％である。
送達ビヒクルにおける表（Ｉ）における脂質（複数可）の総モルパーセンテージは、約１０％～約９５％、例えば、約１０％～約２０％、約２１％～約３０％、約３１％～約４０％、約４１％～約５０％、約５１％～約６０％、約６１％～約７０％、約７１％～約８０％、約８１％～約９０％、または約９１％～約９５％である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルにおける少なくとも１つの脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルにおける少なくとも２つの脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルにおける少なくとも３つの脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルにおける少なくとも４つの脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する。
送達ビヒクルにおける式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する脂質（複数可）の総重量パーセンテージは、１０％～９５％、例えば、約１０％～約２０％、約２１％～約３０％、約３１％～約４０％、約４１％～約５０％、約５１％～約６０％、約６１％～約７０％、約７１％～約８０％、約８１％～約９０％、または約９１％～約９５％である。
送達ビヒクルにおける式（ＣＹ－Ｉ）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、または（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する脂質（複数可）の総モルパーセンテージは、１０％～９５％、例えば、約１０％～約２０％、約２１％～約３０％、約３１％～約４０％、約４１％～約５０％、約５１％～約６０％、約６１％～約７０％、約７１％～約８０％、約８１％～約９０％、または約９１％～約９５％である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つの追加の脂質をさらに含む。非限定的な例には、追加のカチオン性脂質、中性脂質、アニオン性脂質、ヘルパー脂質、ステルス脂質、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質が含まれる。
「ヘルパー脂質」は、トランスフェクション、例えば、ペイロード及びカーゴを含む送達ビヒクルのトランスフェクションを向上させる脂質である。ヘルパー脂質がトランスフェクションを向上させるメカニズムには、粒子安定性を向上させること及び／または膜融合性を向上させることが含まれ得る。ヘルパー脂質には、ステロイド及びアルキルレゾルシノールが含まれる。本開示において使用するために好適なヘルパー脂質には、コレステロール、５－ヘプタデシルレゾルシノール、及びコレステロールヘミスクシネートが含まれるがこれらに限定されない。
「ステルス脂質」は、送達ビヒクルがｉｎ ｖｉｖｏで（例えば、血液に）存在し得る時間の長さを延長させる脂質である。本開示の脂質組成物において使用するために好適なステルス脂質には、脂質部位に連結された親水性頭部基を有するステルス脂質が含まれるがこれらに限定されない。
本開示の送達ビヒクルにおいて使用するために好適なカチオン性脂質の非限定的な例には、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２－ジオレオイルカルバミル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２－ジリネオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ－Ｃｈｏｉ、ジオレオイルオキシ－Ｎ－［２－スペルミンカルボキサミド）エチル｝－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２－ジミリスチルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２－［５’－（コレスト－５－エン－３［ベータ］－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９’，１２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）及びＮ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）が含まれるがこれらに限定されない。
本開示の送達ビヒクルにおいて使用するために好適な中性脂質の非限定的な例には、多様な中性、非荷電または双性イオン性脂質が含まれる。本開示において使用するために好適な中性リン脂質の例には、５－ヘプタデシルベンゼン－１，３－ジオール（レゾルシノール）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウリロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１－ミリストイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１－パルミトイル－２－ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１，２－ジアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１－ステアロイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２－ジエイコセノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リソホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジリノレオイルホスファチジルコリンジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、リソホスファチジルエタノールアミン及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
本開示の送達ビヒクルにおいて使用するために好適なアニオン性脂質の非限定的な例には、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ－ドデカノイルホスファチジルエタノロアミン、Ｎ－スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－グルタリルホスファチジルエタノールアミンコレステロールヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）、及びリシルホスファチジルグリセロールが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクル（脂質のすべてを含む）及びペイロードの重量比は、約１００：１～約１：１、例えば、約１００：１～約９０：１、約８９：１～約８０：１、約７９：１～約７０：１、約６９：１～約６０：１、約５９：１～約５０：１、約４９：１～約４０：１、約３９：１～約３０：１、約２９：１～約２０：１、約１９：１～約１０：１、及び約９：１～約１：１である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。カーゴまたはペイロードは、本明細書に記載の任意のＤＮＡ、ＲＮＡまたはポリペプチであり得る。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、コードＲＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、非コードＲＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ｏＲＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ｍＲＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡ化合物は、機能的ＲＮＡを含み、ＲＮＡは、細胞、組織、器官及び／または生物における少なくとも１つの変化をもたらす。前記状態の変化には、ポリペプチドの発現レベルを改変すること、核酸の翻訳レベルを改変すること、核酸の発現レベルを改変すること、細胞、組織、器官及び／または生物に存在するポリペプチドの量を改変すること、細胞、組織、器官及び／または生物の遺伝子配列を変化させること、核酸を標的ゲノムに加えること、標的ゲノムから核酸を引き抜くこと、細胞、組織、器官及び／または生物における生理的活性を改変することまたはそれらの任意の組み合わせが含まれ得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＤＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＤＮＡである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＤＮＡは、同じＤＮＡまたは異なるＤＮＡであり得る。非限定的な例として、ＤＮＡは、同じである。非限定的な例として、ＤＮＡは、異なる。非限定的な例として、ＤＮＡは、異なるが、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、ＤＮＡは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＤＮＡである３つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＤＮＡは、同じＤＮＡまたは異なるＤＮＡであり得る。非限定的な例として、ＤＮＡは、同じである。非限定的な例として、ＤＮＡは、異なる。非限定的な例として、２つのＤＮＡは、同じであり、１つは、異なる。非限定的な例として、第１のＤＮＡは、第２及び第３のＤＮＡとは異なる。非限定的な例として、第１のＤＮＡ、第２のＤＮＡ及び第３のＤＮＡはすべて、異なる。非限定的な例として、第１のＤＮＡは、第２及び第３のＤＮＡとは異なるが、それらはすべて、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、第１のＤＮＡは、第２及び第３のＤＮＡとは異なるが、第２及び第３のＤＮＡは、同じペイロードまたはカーゴをコードする。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ポリペプチドである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ポリペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ポリペプチドは、同じポリペプチドまたは異なるポリペプチドであり得る。非限定的な例として、ポリペプチドは、同じである。非限定的な例として、ポリペプチドは、異なる。非限定的な例として、ポリペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ポリペプチドである３つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ポリペプチドは、同じポリペプチドまたは異なるポリペプチドであり得る。非限定的な例として、ポリペプチドは、同じである。非限定的な例として、ポリペプチドは、異なる。非限定的な例として、２つのポリペプチドは、同じであり、１つは、異なる。非限定的な例として、第１のポリペプチドは、第２及び第３のポリペプチドとは異なる。非限定的な例として、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び第３のポリペプチドはすべて、異なる。非限定的な例として、第１のポリペプチドは、第２及び第３のポリペプチドとは異なるが、それらはすべて、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、第１のポリペプチドは、第２及び第３のポリペプチドとは異なるが、第２及び第３のポリペプチドは、同じペイロードまたはカーゴをコードする。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ペプチドである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ペプチドは、同じペプチドまたは異なるペプチドであり得る。非限定的な例として、ペプチドは、同じである。非限定的な例として、ペプチドは、異なる。非限定的な例として、ペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ペプチドである３つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ペプチドは、同じペプチドまたは異なるペプチドであり得る。非限定的な例として、ペプチドは、同じである。非限定的な例として、ペプチドは、異なる。非限定的な例として、２つのペプチドは、同じであり、１つは、異なる。非限定的な例として、第１のペプチドは、第２及び第３のペプチドとは異なる。非限定的な例として、第１のペプチド、第２のペプチド及び第３のペプチドはすべて、異なる。非限定的な例として、第１のペプチドは、第２及び第３のペプチドとは異なるが、それらはすべて、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、第１のペプチドは、第２及び第３のペプチドとは異なるが、第２及び第３のペプチドは、同じペイロードまたはカーゴをコードする。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＲＮＡである少なくとも１つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＲＮＡである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＲＮＡは、同じＲＮＡまたは異なるＲＮＡであり得る。非限定的な例として、ＲＮＡは、同じである。非限定的な例として、ＲＮＡは、異なる。非限定的な例として、ＲＮＡは、異なるが、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、ＲＮＡは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＲＮＡである３つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＲＮＡは、同じＲＮＡまたは異なるＲＮＡであり得る。非限定的な例として、ＲＮＡは、同じである。非限定的な例として、ＲＮＡは、異なる。非限定的な例として、２つのＲＮＡは、同じであり、１つは、異なる。非限定的な例として、第１のＲＮＡは、第２及び第３のＲＮＡとは異なる。非限定的な例として、第１のＲＮＡ、第２のＲＮＡ及び第３のＲＮＡはすべて、異なる。非限定的な例として、第１のＲＮＡは、第２及び第３のＲＮＡとは異なるが、それらはすべて、同じペイロードまたはカーゴをコードする。非限定的な例として、第１のＲＮＡは、第２及び第３のＲＮＡとは異なるが、第２及び第３のＲＮＡは、同じペイロードまたはカーゴをコードする。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、１つがＲＮＡであり、１つがＤＮＡである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＲＮＡ及びＤＮＡは、同じペプチドまたはポリペプチドをコードし得、または異なるペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＲＮＡ及びＤＮＡは、同じペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＲＮＡ及びＤＮＡは、異なるペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＲＮＡ及びＤＮＡは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、１つがＲＮＡであり、１つがペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＲＮＡは、ペプチドカーゴ／ペイロードと同じペプチドをコードし得、ＲＮＡは、異なるペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＲＮＡは、同じペプチドをコードする。非限定的な例として、ＲＮＡは、異なるペプチドをコードする。非限定的な例として、ＲＮＡ及びペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、１つがＲＮＡであり、１つがポリペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＲＮＡは、ポリペプチドカーゴ／ペイロードとして同じポリペプチドをコードし得、ＲＮＡは、異なるポリペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＲＮＡは、同じポリペプチドをコードする。非限定的な例として、ＲＮＡは、異なるポリペプチドをコードする。非限定的な例として、ＲＮＡ及びポリペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、１つがＤＮＡであり、１つがペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＤＮＡは、ペプチドカーゴ／ペイロードと同じペプチドをコードし得、ＤＮＡは、異なるペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＤＮＡは、同じペプチドをコードする。非限定的な例として、ＤＮＡは、異なるペプチドをコードする。非限定的な例として、ＤＮＡ及びペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、１つがＤＮＡであり、１つがポリペプチドである２つのカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含む。ＤＮＡは、ポリペプチドカーゴ／ペイロードとして同じポリペプチドをコードし得、ＤＮＡは、異なるポリペプチドをコードし得る。非限定的な例として、ＤＮＡは、同じポリペプチドをコードする。非限定的な例として、ＤＮＡは、異なるポリペプチドをコードする。非限定的な例として、ＤＮＡ及びポリペプチドは、機能的ポリペプチド（例えば、抗体）を生成するために当該技術分野で知られている天然システムまたは合成方法を使用して一緒となり得るより大きなペイロードまたはカーゴの異なるピース（例えば、抗体の重鎖または軽鎖）である。
送達ビヒクル
ナノ粒子
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ナノ粒子である。用語「ナノ粒子」は、本明細書で使用される場合、サイズが１０～１０００ｎｍの範囲の任意の粒子を指す。ナノ粒子は、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、または１０００ｎｍであり得る。
脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であり得る。通常、ＬＮＰは、非ＬＮＰ環境に露出した親水性外部表面を有する外部脂質層、水性（ベシクル様）または非水性（ミセル様）であり得る内部空間、及び少なくとも１つの疎水性膜間空間を保有する小さな固体または半固体粒子として特性化され得る。ＬＮＰ膜は、層状または非層状であり得、１、２、３、４、５個またはそれを超える層を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、それらの内部空間内に、膜間空間内に、それらの外部表面上に、またはそれらの任意の組み合わせにカーゴまたはペイロードを含み得る。
本明細書において有用なＬＮＰは、当該技術分野で知られており、通常は、コレステロール（安定性を補助し、膜融合を促進する）、リン脂質（構造をＬＮＰ二重層に提供し、また、エンドソーム脱出を補助し得る）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導体（ＬＮＰ凝集を低減し、免疫細胞によって非特異的エンドサイトーシスからのＬＮＰを「遮断」する）、及びイオン化可能な脂質（負に荷電したＲＮＡを複合体化し、エンドソーム脱出を向上させる）を含み、これらがＬＮＰ形成組成物を形成する。
ＬＮＰの成分は、所望の標的、カーゴ、サイズ等に基づいて選択され得る。非限定的な例として、先行研究は、低分子量ポリアミン及び脂質から作製されたポリマー性ナノ粒子が、高い効率で核酸を内皮細胞に送達し得ることを示している。（Ｄａｈｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｓｉＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｕｓｉｎｇ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ，Ｎａｔ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４ Ａｕｇ；９（８）：６４８－６５５（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクトは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの粒子活性修飾剤、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、及び少なくとも１つのステロールを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つの非カチオン性脂質、及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質及び少なくとも１つの非カチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質及び少なくとも１つのステロールを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質及び少なくとも１つのステロールを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロール及び少なくとも１つの粒子活性修飾剤を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ステロールを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、粒子活性修飾剤を含み得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、少なくとも１つのイオン化可能なカチオン性脂質、少なくとも１つのアミノ脂質、少なくとも１つの飽和カチオン性脂質、少なくとも１つの不飽和カチオン性脂質、少なくとも１つの双性イオン性脂質、少なくとも１つの多価カチオン性脂質、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を本質的に欠き得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質の量を含有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、限定されないが、１，３－ビス－（１，２－ビス－テトラデシルオキシ－プロピル－３－ジメチルエトキシアンモニウムブロミド）－プロパン－２－オール（（Ｒ）－ＰＬＣ－２）、２－（ジノニルアミノ）エタン－１－オール（１７－１０）、２－（ジドデシルアミノ）エタン－１－オール（１７－１１）、３－（ジドデシルアミノ）プロパン－１－オール（１７－１２）、４－（ジドデシルアミノ）ブタン－１－オール（１７－１３）、２－（ヘキシル（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（１７－２）、２－（ノニル（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（１７－３）、２－（ドデシル（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（１７－４）、２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）（テトラデシル）アミノ）エタン－１－オール（１７－５）、２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）（オクタデシル）アミノ）エタン－１－オール（１７－６）、２－（ジテトラデシルアミノ）エタン－１－オール（１７－７）、２－（ジ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（１７－８）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－（２－メトキシエチル）－Ｎ－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（１７－９）、Ｎ－ノニル－Ｎ－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）ノナン－１－アミン（１９－１）、Ｎ－ドデシル－Ｎ－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）ドデカン－１－アミン（１９－２）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）－Ｎ－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（１９－３）、Ｎ－ドデシル－Ｎ－（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル）ドデカン－１－アミン中間体１：２－（ジドデシルアミノ）エタン－１－オール（１９－４）、Ｎ－ドデシル－Ｎ－（２－（４－（４－メトキシベンジル）ピペラジン－１－イル）エチル）ドデカン－１－アミン（１９－５）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－（２－（４－ドデシルピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（１９－６）、（３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン）（１－Ｂｌ １）、Ｎ－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）－Ｎ－ドデシルグリシン（２０－１）、ジノニル８，８’－（（２－（ドデシル（２－ヒドロキシエチル）アミノ）エチル）アザネジル）ジオクタノエート（２０－１０）、３－（（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）プロパン－１－オール（２０－１１）、２－（（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）（テトラデシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１２）、２－（（２－（ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１３）、２－（（２－（ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１４）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ヘキシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１５）、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１６）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１７）、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１８）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（２０－１９）、ペンチル６－（ドデシル（２－（ドデシル（２－ヒドロキシエチル）アミノ）エチル）アミノ）ヘキサノエート（２０－２）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－２０）、３－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）プロパン－１－オール（２０－２１）、４－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）ブタン－１－オール（２０－２２）、（Ｚ）－２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデス－６－エン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（２０－２３）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（テトラデシル）アミノ）エタン－１－オール（２０－２４）、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（２０－２５）、ペンチル６－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサノエート（２０－３）、ジペンチル６，６’－（（２－（ドデシル（２－ヒドロキシエチル）アミノ）エチル）アザネジル）ジヘキサノエート（２０－４）、ジヘプチル６，６’－（（２－（（６－（ヘプチルオキシ）－６－オキソヘキシル）（２ヒドロキシエチル）アミノ）エチル）アザネジル）ジヘキサノエート（２０－５）、ペンチル６－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）ヘキサノエート（２０－６）、ヘプチル６－（ドデシル（２－（ドデシル（２－ヒドロキシエチル）アミノ）エチル）アミノ）ヘキサノエート（２０－７）、ノニル８－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（２０－８）、ヘプタデカン－９－イル８－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（２０－９）、１－（２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）シクロプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルメタンアミン（２１－１）、３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）シクロブチル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（２１－２）、３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）シクロペンチル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート（２１－３）、３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）シクロペンチル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（２１－４）、１－（２，３－ジ（（８Ｚ，１１Ｚ）－ヘプタデカ－８，１１－ジエン－１－イル）シクロプロピル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルメタンアミン（２１－６）、不明（７５－０１６Ｂ）、ポリ｛４－（（２－（ジメチルアミノ）エチル）チオ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－オン｝－ｒ－ポリ｛４－（オクチルチオ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－オン｝（Ａ７）、（３ａＲ５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨ－シクロペンタｄ１，３ジオキソール－５－アミン（ＡＬＮ１００）、（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨシクロペンタ［ｄ］［ｌ，３］ジオキソール－５－アミン（ＡＬＮ１００１）、（（３ａＲ，５ｓ，６ａＳ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，２－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）テトラヒドロ－３ａＨ－シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－アミン））（ＡＬＮＹ－１００）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（アミノ脂質６）、ベンザミπジπ－ジアルキル－カルボン酸（ＢＡＤＡＣＡ）、Ｎ，Ｎ－ジヒドロキシエチルメチル－Ｎ－２－（コレステリルオキシカルボニルアミノ）エチルアンモニウムブロミド（ＢＨＥＭ－Ｃｈｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ビス－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－コレステリルオキシカルボニルアミノ－エチル）アンモニウムブロミド（ＢＨＥＭ－Ｃｈｏｌ１）、２－｛４－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］ブトキシ｝－ｉＶ？Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９！１２－ジエン－ｌ－イルオキシ］プロパン－１－アミン（ブチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２ＪＲ）－２－｛４－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］ブトキシ｝－Λｒ＾ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９！１２－ジエン－ｌ－イルオキシｊプロパン－１－アミン（ブチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、（２５）－２－｛４－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］ブトキシ｝－ｉＶｙ／Ｖ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イルオキシ］プロパン－１－アミン（ブチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））、１，１’－（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチルアザネジイル）ジドデカン－２－オール（Ｃ１２－２００）、１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザネジル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、コレステリル－スクシニルシラン（Ｃ２）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）（カチオン性脂質Ａ２）、９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート（カチオン性脂質Ａ３）、ｌ－（３－コレステリル）－オキシカルボニル－アミノメチルイミダゾール（ＣＨＩＭ）、［（２－モルホリン－４－イル－エチルカルバモイル）メチル］－カルバミン酸コレステリルエステル（Ｃｈｏｌ－Ｃ３Ｎ－Ｍｏ２）、［（２－モルホリン－４－イル－エチルカルバモイル）－エチル］－カルバミン酸コレステリルエステルＣｈｏｌ－ＤＭＣ３Ｎ－Ｍｏ２［ｌ－メチル－２－（２－モルホリン－４－イル－エチルカルバモイル）－プロピル］－カルバミン酸コレステリルエステル（Ｃｈｏｌ－Ｃ４Ｎ－Ｍｏ２）、ｌ，１７－ビス（２－オクチルシクロプロピル）ヘプタデカン－９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＣＬ）、ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）－ブタノエート（ＣＬ０１）、コレステリル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート（ＣＬ０６）、コレステリル２－（ジメチルアミノ）アセテート（ＣＬ０８）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）プロパン－１－アミン（ＣＬ－１）、Ｎ－メチル－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）－Ｎ－（２－（（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）エチル）エタン－１－アミン（ＣＬ－１１）、（３Ｒ，４Ｒ）－３，４－ビス（（（Ｚ）－ヘキサデス－９－エン－１－イル）オキシ）－１－メチルピロリジン（化合物ＣＬ－１２）（ＣＬ－１２）、２－（ジメチルアミノ）－Ｎ－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル）アセトアミド（ＣＬ－１３）、３－（ジメチルアミノ）プロパン－１，２－ジイル（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）（ＣＬ－１４）、（９Ｚ，１２Ｚ）－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミン（ＣＬ－１５）、７－ヒドロキシ
７－（４－（（１－メチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ブチル）トリデカン－１，１３－ジイルジドデカノエート（ＣＬ１５Ｂ６）、７－ヒドロキシ７－（４－（（１－メチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ブチル）トリデカン－１，１３－ジイルジテトラデカノエート（ＣＬ１５Ｃ６）、７－ヒドロキシ７－（４－（（１－メチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ブチル）トリデカン－１，１３－ジイルジパルミテート（ＣＬ１５Ｄ６）、７－ヒドロキシ７－（４－（（１－メチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ブチル）トリデカン－１，１３－ジイルジオレエート（ＣＬ１５Ｈ６）、ビス（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）エチル）アミン（ＣＬ－１６）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－メチル－Ｎ－（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）エチル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（ＣＬ－１７）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－（３－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）プロピル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（ＣＬ－１８）、（１－メチルピペリジン－３－イル）メチルジ（（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イル）カルバメート（ＣＬ－１９）、Ｎ－メチル－Ｎ，Ｎ－ビス（２－（（Ｚ）－ヘキサデス－９－エニルオキシ）エチル）アミン（ＣＬ－２）、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－４－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）ドコサ－３，１３，１６－トリエン－１－アミン（ＣＬ－２０）、（Ｓ）－２－アミノ－３－ヒドロキシ－Ｎ，Ｎ－ビス（２－（（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）オキシ）エチル）プロパンアミド（ＣＬ－２１）、Ｃ２：Ｎ，Ｎ－ジヘキサデシル－Ｎ’－（３－トリエトキシシリルプロピル）スクシンアミド（ＣＬ３）、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３，４－ビス（（（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イル）オキシ）メチル）ピロリジン（ＣＬ－３）、ｔｒａｎｓ－１－メチルピロリジン－３，４－ジイル）ビス（メチレン）（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）（ＣＬ－４）、７－（４－（ジイソプロピルアミノ）ブチル）－７－ヒドロキシトリデカン－１，１３－ジイルジテトラデカノエート（ＣＬ４Ｃ６）、７－（４－（ジイソプロピルアミノ）ブチル）－７－ヒドロキシトリデカン－１，１３－ジイルジパルミテート（ＣＬ４Ｄ６）、１１－（４－（ジイソプロピルアミノ）ブチル）－１１－ヒドロキシヘニコサン－１，２１－ジイルジオレエート（ＣＬ４Ｈ１０）、７－（４－（ジイソプロピルアミノ）ブチル）－７－ヒドロキシトリデカン－１，１３－ジイルジオレエート（ＣＬ４Ｈ６）、９－（４－（ジイソプロピルアミノ）ブチル）－７－ヒドロキシヘプタデカン－１，１７－ジイルジオレエート（ＣＬ４Ｈ８）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＣＬ－５）、２－（ジメチルアミノ）－Ｎ－（２－（（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）オキシ）エチル）－Ｎ－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アセトアミド（ＣＬ－５３）、３－（（２－（（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）オキシ）エチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）プロパン－１－Ａｌｌ（ＣＬ－５４）、１－メチル－３，３－ビス（（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）メチル）アゼチジン（ＣＬ－５５）、１－メチル－３，３－ビス（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）エチル）アゼチジン（ＣＬ－５６）、１－メチル－３，３－ビス（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）プロピル）アゼチジン（ＣＬ－５７）、２－（３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アゼチジン－１－イル）エタン－１－オール（ＣＬ－５８）、２－（３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アゼチジン－１－イル）プロパン－１－オール（ＣＬ－５９）、３－（ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）プロパン－１－ｏ（ＣＬ－６）、３－（ジメチルアミノ）プロピル３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アゼチジン－１－カルボキシレート（ＣＬ－６０）、２－（ジ（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）アミノ）エタン－１－オール（ＣＬ－６１）、３－（ジ（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）アミノ）プロパン－１－オール（ＣＬ－６２）、（１１Ｚ，１４Ｚ）－２－（（ジメチルアミノ）メチル）－２－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）イコサ－１１，１４－ジエン－１－オール（ＣＬ－６３）、（１１Ｚ，１４Ｚ）－２－（ジメチルアミノ）－２－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）イコサ－１１，１４－ジエン－１－オール（ＣＬ－６４）、３－（ジメチルアミノ）－２，２－ビス（（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）メチル）プロパン－１－オール（ＣＬ－６５）、（９Ｚ，１２Ｚ）－Ｎ－（２－（（（Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イル）オキシ）エチル）オクタデカ－９，１２－ジエン－１－アミン（ＣＬ－７）、１－メチル－３，３－ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アゼチジン（ＣＬ－８）、Ｎ，２－ジメチル－１，３－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）オキシ）プロパン－２－アミン（ＣＬ－９）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－５－エン－３Ｂ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、２－［５’－（コレスト－５－エン－３－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチ－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９’，１２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、ｌ＾－ジアラキドニルオキシ－＾ＴＶ－ジメチ＾－プロピル－Ｓ－アミン（ＤＡｒａＤＭＡ）、０，０’－ジテトラデカノイル－Ｎ－（α－トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロリド（ＤＣ－６－１４）、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ｌ，２－ジドコサヘキサエニルオキシ－（７Ｖ，Ｎ－ジメチル）－プロピル－３－アミン（ＤＤｏｃＤＭＡ）、Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－４，５－ビス（ドデシルチオ）ペンタンアミド（ＤＥＤＰＡ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスト－５－エン－３β－オキシペント－３－オキサ－ａｎ－５－オキシ）－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＤＥＧ－ＣＬｉｎＤＭＡ）、１，６－ジレオイルトリエチレンテトラミド（ジオ－ＴＥＴＡ）、Ｎｌ，Ｎ１９－ビス（（Ｓ，２３Ｅ，２５Ｅ，２７Ｅ，２９Ｅ）－１６－（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロ－ヘクス－ｌ－エン－ｌ－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエナミド）－２４，２８－ジメチル－１５，２２－ジオキソ－３０－（２，６，６－トリメチルシクロヘクス－ｌ－エン－ｌ－イル）－４，７，１０－トリオキサ－１４，２１－ジアザトリアコンタ－２３，２５，２７，２９－テトラエン－ｌ－イル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキサノナデカン－１，１９－ジアミド（ｄｉＶＡ－ＰＥＧ－ｄｉＶＡ）、ＤｉＬｉｎ－Ｎ－メチルピペラジン（ＤＬ－０３３）、ＤｉＬｉｎ－Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシン（ＤＬ－０３６）、ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシン（ＤＬ－０４８）、３－（（１，３－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＤＬＡＰＡ）、１，２－ジリノレニルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－ジリノレオイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＣＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ１）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、ジリノレオイル－４－アミノ酪酸（ＤＬｉｎＦＡＢ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコント－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、ｌ，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎＭＰＺ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、ジリノレイルオキシ３－ピペリジノプロピルアミン（ＤＬｉｎＰｉｐ）、１．２ジリノレイルオキシ３－（３’－ヒドロキシピペリジノ）－プロピルアミン（ＤＬｉｎＰｉｐ－３ＯＨ）、１，２ジリノレイルオキシ３－（４’－ヒドロキシピペリジノ）－プロピルアミン（ＤＬｉｎＰｉｐ－４ＯＨ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－ヒドロキシプロパン（ＤＬｉｎＰＯ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、ｌ，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＴＡＰ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、ｌ，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＴＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパンクロリド塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、３－（（１，３－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ．１５Ｚ）－オクタデカ－９，１２，１５－トリエノイル）オキシ）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＤＬＬＡＰＡ）、１，２ジリノレイルオキシ３－（Ｎ，ＮジメチＤ－プロピルアメ（ＤＬｍＤＥＡ）、ｌ，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、ｌ，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－グリセロール（ＤＬＰＧ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、Ｎ－［ｌ－（２，３－ジミリスチルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、１，２－ジミリスチルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ１）、ｌ，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプ
ロパン（ＤＭＴＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ＤＯＡＰ）、３－（（１，３－ビス（オレオイルオキシ）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＤＯＡＰＡ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジオレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－ジオレオイルカルバミル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ，Ｎ－ジヒドロキシエチルΝ，Ν－ジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＥＡＣ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ジオレイルオキシプロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、ジオレオイル－４－アミノ酪酸（ＤＯＦＡＢ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯ
ＧＳ）、１，２－ジオレオイル－３－メチル－（メトキシカルボニル－エチル）アンモニウム－プロパン（ＤＯＭＣＡＰ）、１，２－ジオレオイル－３－Ｎ－ピロリジン－プロパン（ＤＯＰ５Ｐ）、１，２－ジオレオイル－３－Ｎ－ピリジニウム－プロパン、ブロミド塩（ＤＯＰ６Ｐ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシブチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ－ＨＢ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシプロピルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ－ＨＰ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシペンチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ－Ｈｐｅ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミン－カルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，３－ジオレオイルオキシ－２－（６－カルボキシ－スペルミル）－プロピルアミド（ＤＯＳＰＥＲ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ１）、Ｎ－［５’－（２’，３’－ジオレオイル）ウリジン］－Ν’，Ν’，Ν’－トリメチルアンモニウムトシレート（ＤＯＴＡＵ）、１－［２－（９（Ｚ）－オクタデセノイルオキシ）エチル］－２－（８（Ｚ）－ヘプタデセニル－３－（２－ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、ジオレイルホスファチジルウリジンホスファチジルコリン（ＤＯＵＰＣ）、１，２－ジフブタニルオキシ－Ｗ．Ｎ－ジメミル）－ブチル－４－アメ（ＤＰａｎ－Ｃ２－ＤＭＡ）、ｌ，２－ジフィタニルオキシ－３－（ｉＶ，７Ｖ－ジメチル）－プロピルアミン（ＤＰａｎＤＭＡ）、２，３－ビス（ドデシルチオ）プロピル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート（ＤＰＤＥＣ）、ジパルミトイル－４－アミノ酪酸（ＤＰＦＡＢ）、１，２－ジパルミチルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＰＲＩＥ）、１，２－ジパルミトイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）、１－［２－（ヘキサデカノイルオキシ）エチル］－２－ペンタデシル－３－（２－ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＰＴＩＭ）、３－（（１，３－ビス（ステアロイルオキシ）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＤＳＡＰＡ）、ジステアリルジメチルアンモニウム（ＤＳＤＭＡ）、１，２－ジステアルルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ１）、１，２－ジステリルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＳＲＩＥ）、ｌ，２－ジステロイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、ジテトラデシルトリメチルアンモニウム（ＤＴＤＴＭＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＥＤＯＰＣ）、Ｎ２－［Ｎ２，Ｎ５－ビス（３－アミノプロピル）－Ｌ－オルミチル］－Ｎ，Ｎ－ジオクタデシル－Ｌ－グルタミンテトラヒドロトリフルオロアセテート（ＧＣ３３）、コレスト－５－エン－３－オール（３Ｐ）－，３－［（３－アミノプロピル）［４－［（３－アミノプロピル）アミノ］ブチル］カルバメート］（ＧＬ６７）、グリセリルモノ－オレエート（ＧＭＯ）、グアニジノ－ジアルキル－カルボン酸（ＧＵＡＤＡＣＡ）、２－（ビス（２－（テトラデカノイルオキシ）エチル）アミノ）－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－オキソエタン－アミニウムブロミド（ＨＥＤＣ）、２，２’－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアザネジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ジテトラデカノエート（ＨＥＤＣ－ＢＯＣ－ＴＮ）、１－（２－（（（３Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イルジスルファニル）エチル）グアニジン（ＨＧＴ４００２）、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イル）テトラコサ－ｌ５，１８－ジエン－ｌ－アミン（ＨＧＴ５０００）、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－６－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イル）テトラコサ－４，１５，１８－トリエン－ｌ－アミン（ＨＧＴ５００１）、ヒスタミニル－コレステロールヘミスクシナト（ＨｉｓＣｈｏｌ）、ヒスチジニルコレステロールヘミスクシネート（Ｈｉｓｔ－Ｃｈｏｌ）、ＨｙｄｒｏＳｏｙＰＣ（ＨＳＰＣ）、イミダゾールコレステロールエステル（ＩＣＥ）、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、Ｎ，Ｎ－ジ－ｎ－ルクトラデシル、Ｎ－メチル－Ｎ－（２－グアニジニル）クチルアンモニウム（脂質１）、Ｎ，Ｎ－ジ－ｎ－オクタデシル、Ｎ－メチル－Ｎ－（２－グアニジニル）クチルアンモニウムクロリド（脂質２）、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノエート（脂質Ａ）、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート（脂質Ａ１）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［ｌ，３］－ジオキソラン（脂質Ａ２）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－ｌ，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，ｌ－ジイル）ビス（デカノエート）（脂質Ｂ）、２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－ｌ，３－ジイル９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）（脂質Ｃ）、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－（オクタノイルオキシ）トリデシル３－オクチルウンデカノエート（脂質Ｄ）、（６Ｚ，１６Ｚ）－１２－（（Ｚ）－デス－４－エン－１－イル）ドコサ－６，１６－ジエン－１１－イル５－（ジメチルアミノ）ペンタノエート（脂質Ｉ）、ジオクタデシル－（２－ヒドロキシ１－３－プロピルアミノ）アミノポリリジン（脂質Ｔ）、（３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン（ＭＣ３エーテル）、米国仮出願番号６１／３８４，０５０に記載（ＭＣ３チオエステル）、（４－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルブタン－１－アミン（ＭＣ４エーテル）、３－（（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）エチル）アミノ）プロパン酸（ＭＬＡＰＡ）、３－（（２－（（（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ）－オクタデカ－９，１２，１５－トリエノイル）オキシ）エスブンアミノ）プロパン酸（ＭＬＬＡＰＡ）、モノミコリルグリセロール（ＭＭＧ）、３－（（２－（オレオイルオキシ）エチル）アミノ）プロパン酸（ＭＯＡＰＡ）、４－（２－アミノエチル）－モルホリノ－コレステロールヘミスクシナト（ＭｏＣｈｏｌ）、１，２－ジオレオイル－３－Ｎ－モルホリン－プロパン（ＭｏＤＯ）、メチルピリジイル－ジアルキル－カルボン酸（ＭＰＤＡＣＡ）、モノパルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、３－（（２－（ステアロイルオキシ）エチル）アミノ）プロパン酸（ＭＳＡＰＡ）、Ｎ１－［２－（（ｌＳ）－１－［（３－アミノプロピル）アミノ］－４－［ジ（３－アミノ－プロピル）アミノ］ブチルカルボキサミド）エチル］－３，４－ジ［オレイルオキシ］－ベンズアミド（ＭＶＬ５）、２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ｌ，３－ビス－（ｌ，２－ビス－テトラデシルオキシ－プロピル－３－ジメミルエトキシアンモニウムブロミド）－プロパン－２－オール（ＰＣＬ－２）、パルミトイイ－オイエオイル－ノル－アルギニン（ＰＯＮＡ）、ステアリルアミン（ＳＴＡ）、２－（（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール）（合成例１（Ａ））、３－（（ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－テトラデス－９－エノエート）（合成例１（Ｂ））、３－ヒドロキシ－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－テトラデス－９－エノエート）（合成例１（Ｃ））、３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－テトラデス－９－エノエート）（合成例１（Ｄ））、３－（５－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ペンタン－２－イル）－６－（５－（（２－ヒドロキシドデシル）（２－ヒドロキシウンデシル）アミノ）ペンタン－２－イル）－ｌ，４－ジオキサン－２，５
－ジオン）（標的２４）、トレハロース６’６’－ジベヘネート（ＴＤＢ）、１，１’－（２－（４－（２－（（２－（ビス（２ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチルアザネジイル）ジドデカン－２－オール（Ｔｅｃｈ Ｇ１）、３－（（１，３－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）－２－（（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイル）オキシ）メチル）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＴＬＡＰＡ）、（ｌ－（２，３－リノレイルオキシプロポキシ）－２－（リノレイルオキシ）－（７Ｖ，Λ／－ジメチル）－プロピル－３－アミン）（ＴＬｉｎＤＭＡ）、３－（（１，３－ビス（（（９Ｚ．１２Ｚ．１５Ｚ）－オクタデカ－９．１２．１５－トリエノイル）オキシ）－２－（（（（９Ｚ．１２Ｚ．１５Ｅ）－オクタデカ－９，１２，１５－トリエノイル）オキシ）メチル）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＴＬＬＡＰＡ）、Ｎ－（α－トリメチルアンモニオアセチル）－ジドデシル－Ｄ－グルタメートクロリド（ＴＭＡＧ）、３－（（１，３－ビス（（（Ｚ）－オクタデス－９－エノイル）オキシ）－２－（（（（Ｚ）－オクタデス－９－エノイル）オキシ）メチル）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＴＯＡＰＡ）、３－（（１，３－ビス（ステアロイルオキシ）－２－（（ステアロイルオキシ）メチル）プロパン－２－イル）アミノ）プロパン酸（ＴＳＡＰＡ）、１，Ｎ１９－ビス（（１６Ｅ，１８Ｅ，２０Ｅ，２２Ｅ）－１７，２１－ジメチル－１５－オキソ－２３－（２，６，６－トリメチルシクロヘキス－１－エン－１－イル）－４，７，１０－トリオキサ－１４－アザトリコサ－１６，１８，２０，２２－テトラエン－１－イル）－４，７，１０，１３，１６－ペンタオキサノナデカン－１，１９－ジアミド（ＶＡ－ＰＥＧ－ＶＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＸＴＣ）、非特許文献１１に開示（ＹＳＫ０５）、１，２－ジ－γ－リノレニルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（γ－ＤＬｅｎＤＭＡ）、ａ－Ｄ－トコフェロールヘミスクシノイル、（９Ｚ，９，Ｚ，１２Ｚ，１２，Ｚ）－２－（（２－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、２－（（（１３Ｚ，１６Ｚ）－４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ－１３，１６－ジエノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（（（１３Ｚ，１６Ｚ）－４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ－１３，１６－ジエノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（（４－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（（４－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（デカノエート）、２－（（４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（デカノエート）、２－（１０－ドデシル－３－エチル－８，１４－ジオキソ－７，９，１３－トリオキサ－３－アザイコサン－２０－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）－２－（（オクタノイルオキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル（９Ｚ，９’Ｚ）ビス－テトラデス－９－エノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（１－（シクロプロピルメチル）ピペリジン－４－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（２－（（（１－イソプロピルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）メチル）－１，４－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、２－（（４－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジドデカノエート、２－（（４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジドデカノエート、２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジドデカノエート、２－（（４－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジテトラデカノエート、２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジテトラデカノエート、２－（（４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジテトラデカノエート、（Ｚ）－２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジオレエート、（９Ｚ，９，Ｚ，１２Ｚ，１２，Ｚ，１５Ｚ，１５，Ｚ）－２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２，１５－トリエノエート）、（９Ｚ，９，Ｚ，１２Ｚ，１２，Ｚ）－２－（（４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９，Ｚ，１２Ｚ，１２，Ｚ）－２－（（４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－５－オキソ－５－（３－（（３－ペンチルオクタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（３－ペンチルオクタノイル）オキシ）メチル）プロポキシ）ペンタン－１－アミニウムヨウ化物３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（３－ペンチルオクタノイル）オキシ）メチル）プロピル３－ペンチルオクタノエート、３－ジメチルアミノプロピルカーボネート（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタコサ－１９，２２－ジエン－１１－イル、２－（（（Ｎ，Ｎ－ジメチル－β－アラニル）オキシ］メチル｝－２－［（オクタノイルオキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル（９Ｚ，９’Ｚ）ビス－テトラデス－９－エノエート、Ο’Ｉ，Ｏ１－（２－（７－ドデシル－１４－メチル－３，９－ジオキソ－２，４，８，１０－テトラオキサ－１４－アザペンタデシル）プロパン－１，３－ジイル）８－ジメチルジオクタンジオエート、８－ジメチルΟ’Ｉ，０１－（２－（（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル）ジオクタンジオエート、１－（３－（（６，６－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノイル）オキシ）－２－（（（１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）メチル）プロピル）８－メチルオクタンジオエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－７－オクチルペンタデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－７－オクチルペンタデシルオクタノエート、１－（３－（（６，６－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノイル）オキシ）－２－（（（１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）メチル）プロピル）１０－オクチルデカンジオエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－５－オクチルトリデシルデカノエート、１－（１６－（（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）メチル）－９－ドデシル－２－メチル－７，１３－ジオキソ－６，８，１２，１４－テトラオキサ－２－アザヘプタデカン－１７－イル）８－メチルオクタンジオエート、３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデス－９，１２－ジエノエート、３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（３－ペンチルオクタノイル）オキシ）メチル）プロピル３－ペンチルオクタノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（３－（ジエチルアミノ）プロパノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（２－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）－１，４－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、１－（３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロピル）８－メチルオクタンジオエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（パルミトイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピロリジン－３－カルボキシレート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（テトラデカノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピロリジン－３－カルボキシレート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－（オクタノイルオキシ）トリデシル９－ペンチルテトラデカノエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（ドデカノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピロリジン－３－カルボキシレート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－ヒドロキシトリデシル９－ペンチルテトラデカノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－（オクタノイルオキシ）トリデシル７－ヘキシルトリデカノエート、２－（５－（３－（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）－２－（（テトラデカノイルオキシ）メチル）プロポキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－（オクタノイルオキシ）トリデシル５－ヘプチルドデカノエート、２－（５－（３－（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）－２－（（パルミトイルオキシ）メチル）プロポキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－ヒドロキシトリデシル５－ヘプチルドデカノエート、２－（（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート）、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－１３－（オクタノイルオキシ）トリデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－オクタデス－９－エノエート、２－（１０－ドデシル－３－エチル－８，１４－ジオキソ－７，９，１３－トリオキサ－３－アザノナデカン－１９－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、（（２－（（（１－メチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）メチル）－１，４－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、２－（（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイ
ルビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）、（９Ｚ，１２Ｚ）－２－（（（１１Ｚ，１４Ｚ）－２－（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）イコサ－１１，１４－ジエン－１－イル）オキシ）エチルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、２－（（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）、（１３Ｚ，１６Ｚ）－４－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルヘプタデカン－９－イルスクシネート、２，２－ビス（ヘプチルオキシ）エチル３－（（３－エチル－１０－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）－８，１５－ジオキソ－７，９，１４－トリオキサ－３－アザヘプタデカン－１７－イル）ジスルファニル）プロパノエート、２－（（（１－メチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタ、１－（３－（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル）１０－オクチルデカンジオエート、（１３Ｚ，１６Ｚ）－４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イル２，２－ビス（ヘプチルオキシ）アセテート、（１３Ｚ，１６Ｚ）－４－（（（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イル２，２－ビス（ヘプチルオキシ）アセテート、酢酸（２０，２３Ｒ）－２－メチル－９－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル］－７－オキソ－６，８，１１－トリオキサ－２－アザノナコサ－２０－エン－２３－イル３－（ジメチルアミノ）プロピルカーボネート（１１Ｚ，１４Ｚ）－１－｛［（９Ｚ，１２Ｒ）－１２－ヒドロキシオクタデス－９－エン－１－イル］、（１２Ｚ，１５Ｚ）－１－（（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）カルボニル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－３－イル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジメチルアミノ）プロピル）カルバモイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イル９－ペンチルテトラデカノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１，２，２，６，６－ペンタメチルピペリジン－４－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イル７－ヘキシルトリデカノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－メチルピペリジン－４－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イル５－ヘプチルドデカノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－エチルピペリジン－４－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イル３－オクチルウンデカノエート、ギ酸塩、３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－ヘキサデス－９－エノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－メチルアゼチジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、２－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデシル４，４－ビス（（２－エチルヘキシル）オキシ）ブタノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－メチルピペリジン－４－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（ジメチルアミノ）プロピルトリアコンタン－１１－イルカルボネートトリアコンタン－１１－オール、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ピロリジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル４－（（ジエチルアミノ）メチル）ベンゾエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル３－（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゾエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピペリジン－３－カルボキシレート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピペリジン－４－カルボキシレート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボキシレート、３－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－ヘキサデス－９－エノエート、２－（１０－ドデシル－３－エチル－８，１４－ジオキソ－７，９，１３－トリオキサ－３－アザヘキサデカン－１６－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（４－（ピペリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル４－メチルモルホリン－２－カルボキシレート、（２Ｒ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピロリジン－２－カルボキシレート、（２Ｓ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－メチルピロリジン－２－カルボキシレート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－（シクロプロピルメチル）ピペリジン－４－カルボキシレート、３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）プロピル１－イソプロピルピペリジン－４－カルボキシレート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノイル）オキシ）－２－（（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、４－（ジメチルアミノ）ブチルカルボネート（６Ｚ，９Ｚ，２６Ｚ，２９Ｚ）－ペンタトリアコンタ－６，９，２６，２９－テトラエン－１８－イル、３－（（６－（ジメチルアミノ）ヘキサノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－テトラデス－９－エノエート、２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニルオキシ）ベンジル３－（ジメチルアミノ）プロピルカーボネート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（４－（ピロリジン－１－イル）ブタノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル５－ヘプチルドデカノエート、酢酸（７Ｒ，９Ｚ）－１８－（｛［３－（ジメチルアミノ）プロピルオキシ］カルボニル｝オキシ）オクタコサ－９－エン－７－イル、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル９－ペンチルテトラデカノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）－２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル７－ヘキシルトリデス－６－エノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（２，２－ビス（ヘプチルオキシ）アセトキシ）－２－（（（（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル３－オクチルウンデス－２－エノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（５－ヘプチルドデカノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニ
ル）オキシ）ペンタデシル３オクチルウンデカノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（９－ペンチルテトラデカノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、二酢酸（７Ｒ，９Ｚ，２６Ｚ，２９Ｒ）－１８－（｛［３－（ジメチルアミノ）プロポキシ］カルボニル｝オキシ）ペンタトリアコンタ－９，２６－ジエン－７，２９－ジイル、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）オクタノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（７－ヘキシルトリデカノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）オクタノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（３－オクチルウンデカノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）オクタノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８－ジブトキシオクタノエート、３－（（５－（ジメチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）－２，２－ビス（（（９Ｚ）－テトラデス－９－エノイルオキシ）メチル）プロピル（９Ｚ）－テトラデス－９－エノエート、３－（ジメチルアミノ）プロピルカーボネート（６Ｚ，９Ｚ，２６Ｚ，２９Ｚ）－ペンタトリアコントウル－６，９，２６，２９－テトラエン－１８－イル、２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロパノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８－ビス（オクチルオキシ）オクタノエート、３－（ジメチルアミノ）プロピルオクタコサン－１１－イルカルボネート、２，４－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニルオキシ）ベンジル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（２－ヘプチルウンデカノイル）オキシ）メチル）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（（２－エチルヘキシル）オキシ）ヘキサノエート、２－（（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（２－ヘプチルウンデカノエート）、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（ヘキシルオキシ）ヘキサノエート、４－メチル－２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、４－（ジメチルアミノ）ブチル４－メチル－２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニルオキシ）ベンジルカルボネート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンダデシル４，４－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ブタノエート、２－（１２－ドデシル－３－エチル－８，１４－ジオキソ－７，９，１３－トリオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－オキソ－５－（（３－（（（３－（ピペリジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）オキシ）ペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、３－（ジメチルアミノ）プロピル４－メチル－２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジルカルボネート、３－（（（３－（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ブタノエート、２－（１１－ドデシル－３－エチル－９，１５－ジオキソ－８，１０，１４－トリオキサ－３－アザノナデカン－１９－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（１０－ドデシル－３－エチル－８，１５－ジオキソ－７，９，１４－トリオキサ－３－アザノナデカン－１９－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（（（１－メチルピペリジン－４－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（（（１－エチルピペリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（（（（Ｒ）－１－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（（（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－オキソ－５－（（４－（（（Ｓ）－ピロリジン－２－カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）ペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（５－（（４－（（１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）－５－オキソペンチル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、４，４－ビス（オクチルオキシ）ブチル（３－（ジエチルアミノ）プロピル）ペンタデカン－１，３－ジイルジカルボネート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ブタノエート、（（２－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）－１，４－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、４，４－ビス（オクチルオキシ）ブチル５－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘプタデカノエート、６－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）－４－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキシルオクタノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－イル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）トリデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ウンデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル５－（４，６－ジヘプチル－１，３－ジオキサン－２－イル）ペンタノエート、３－（（５－（ジエチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、１－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン－３－イル１，４－ジメチルピペリジン－４－カルボキシレート、３－（（３－（１－メチルピペリジン－４－イル）プロパノイル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、１－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン－３－イル１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボキシレート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４－ビス（（２－エチルヘキシル）オキシ）ブタノエート、２－（（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（８－（オクタノイルオキシ）オクタノエート）、（（２－（（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）－１，４－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（２Ｒ）－１－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン－３－イルピロリジン－２－カルボキシレート、（２Ｓ）－１－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン－３－イル１－メチルピロリジン－２－カルボキシレート、（２Ｒ）－１－（（６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン－３－イル１－メチルピロリジン－２－カルボキシレート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（（３－エチルペンチル）オキシ）ヘキサノート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（（２－プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノエート、３－（（（２－（ジエチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－モルホリノプロプロキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（（１－メチルピペリジン－４－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート、２－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）－２－（（ドデカノイルオキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル（９Ｚ，９’Ｚ）ビス－テトラデス－９－エノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、３－（（（４－（ジエチルアミノ）ブトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノート、３－（（（３－（ピペラジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－ピペリジン－１－イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６．６－ビス（オクチルオキシ）ヘキサノエート、３－（（（３－（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（９－ドデシル－２－メチル－７，１２－ジオキソ－６，８，１３－トリオキサ－２－アザテトラデカン－１４－イル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，１２Ｚ）－１０－ドデシル－３－エチル－１４－（２－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）エチル）－８，１３－ジオキソ－７，９－ジオ
キサ－３，１４－ジアザヘキサデカン－１６－イルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、２－（（２－（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデカノイル）オキシ）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（９－ドデシル－２－メチル－７，１３－ジオキソ－６，８，１２－トリオキサ－２－アザノナデカン－１９－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、２－（（デカノイルオキシ）メチル）－２－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイル（９Ｚ，９’Ｚ）ビス－テトラデス－９－エノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（３－モルホリノプロパノイル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、３－（ジメチルアミノ）プロピルカーボネート（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル、２，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、２－（１０－ドデシル－３－エチル－８，１４－ジオキソ－７，９，１３－トリオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル）プロパン－１，３－ジイルジオクタノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－２－（（（１，３－ジメチルピロリジン－３－カルボニル）オキシ）メチル）プロパン－１，３－ジイルビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）ベンゼン－１，２，３－トリイル）トリス（オキシ））トリス（デカン１０，１－ジイル）トリオクタノエート、０’，０－（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（プロパン－３，１－ジイル））９－ジオクチルジノナンジオエート、（９Ｚ，１２Ｚ）－３－（３－（（ジメチルアミノ）メチル）－５－（３－（（３－オクチルウンデカノイル）オキシ）プロポキシ）フェノキシ）プロピルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（プロパン－３，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（Ｒ）－４－（３－（（Ｒ）－３，４－ビス（オクタノイルオキシ）ブトキシ）－５－（（ジメチルアミノ）メチル）フェノキシ）ブタン－１，２－ジイルジオクタノエート、（Ｓ）－４－（３－（（Ｓ）－３，４－ビス（オクタノイルオキシ）ブトキシ）－５－（（ジメチルアミノ）メチル）フェノキシ）ブタン－１，２－ジイルジオクタノエート、（Ｒ）－４－（３－（（Ｓ）－３，４－ビス（オクタノイルオキシ）ブトキシ）－５－（（ジメチルアミノ）メチル）フェノキシ）ブタン－１，２－ジイルジオクタノエート、４，４’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン１，２－ジイル）テトラオクタノエート、ジドデシル６，６’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ジヘキサノエート、ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）５，５’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ジペンタノエート、（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ビス（オキシ））ビス（６－オキソヘキサン－６，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（８－（オクタノイルオキシ）オクタノエート）、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（１０－（オクタノイルオキシ）デカノエート）、（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ビス（オキシ））ビス（６－オキソヘキサン－６，１－ジイル）ジオクタノエート、（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ビス（オキシ））ビス（８－オキソオクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ビス（オキシ））ビス（４－オキソブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、０’，０－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））８－ジノニルジオクタンジオエート、０，０’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ビス（１０－（オクタノイルオキシ）デシル）ジスクシネート、０，０’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）ジスクシネート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（５－（（（（３－（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，１２Ｚ）－４－（３－（（ジメチルアミノ）メチル）－５－（４－（オレオイルオキシ）ブトキシ）フェノキシ）ブチルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ，１５Ｚ，１５’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２，１５－トリエノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ジテトラデカノエート、（Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ジオレエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ジドデカノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（（（５－（（ジエチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、ジデシル８，８’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ジオクタノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（プロパン－３，１－ジイル）ビス（３－オクチルウンデカノエート）、（９Ｚ．９’Ｚ．１２Ｚ．１２’Ｚ）－（（５－（（ジエチルアミノ）メスブン－２－メチル－１．３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ジドデカノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（９Ｚ．９’Ｚ．１２Ｚ．１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メスブン－２－メチル－１．３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（８Ｚ，８’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ヘキサン－ビス（ドデス－８－エノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（（３－ヒドロキシアゼチジン－１－イル）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ジオクタノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（９Ｚ．９’Ｚ．１２Ｚ．１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メスブン－１．３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（デカン－１０，１－ジイル）ジヘキサノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（デカン－１０，１－ジイル）ジオクタノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ジオクタノエート、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ジヘキサノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（プロパン－３，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ジトリデカノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（２，６－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ピリジン－４－イル）メチル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）メチル）－１，３－フェニレンビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、１－（３，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）フェニル）－Ｎ，Ｎジメチルメタンアミン、３，５－ビス（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）ベンジル３－（ジメチルアミノ）プロパノエート、１－（３，５－ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブトキシ）フェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルメタンアミン、（（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（プロパン－３，２，１－トリイル）テトラオクタノエート、（（５－（（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（（５－（（（３－（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（オクタン－８，１－ジイル）ビス（デカノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（３－モルホリノプロピル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（３－（ジメチルアミノ）プロピル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（３－（ピペリジン－１－イル）プロピル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（５
－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（９－ペンチルテトラデカノエート）、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（７－ヘキシルトリデカノエート）、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（５－ヘプチルドデカノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（３－オクチルウンデカノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（５－ヘプチルドデカノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（９－ペンチルテトラデカノエート）、（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（７－ヘキシルトリデカノエート）、（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－（（５－（ピロリジン－１－イルメチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン４，１－ジイル）ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（メチレン））ビス（プロパン－３，２，１－トリイル）テトラオクタノエート、（（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（オキシ））ビス（ブタン－４，１－ジイル））ビス（プロパン－３，２，１－トリイル）テトラオクタノエート、（９Ｚ．１２Ｚ）－４－（３－（（ジメチルアミノ）メスブン－５－（４－（（３－オクチルウンデカノイル）オキシ）ブトキシ）フェノキシ）ブチルオクタデカ－９，１２－ジエノエート、ビス（１，３－ビス（オクタノイルオキシ）プロパン－２－イル）０，０’－（（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン））ジスクシネート、（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（メチレン）ビス（６－（（（ノニルオキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサノエート）、２－（３－（４－（５－（（ジメチルアミノ）メチル）－２－メチル－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ９，１２－ジエン－１－イルオキシ）フェノキシ）ブトキシ）－３－オキソプロピル）プロパン－１，３－ジイルジヘキサノエート、３－（（ジメチルアミノ）メチル）－５－（（（８－（オクタノイルオキシ）オクタノイル）オキシ）メチル）ベンジル３－オクチルウンデカノエート、（（５－（（ジエチルアミノ）メチル）ベンゼン－１，２，３－トリイル）トリス（オキシ））トリス（デカン－１０，１－ジイル）トリオクタノエート、１－（３，５－ビス（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イルオキシ）フェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルメタンアミン、Ｎ’－メチル－Ｎ’，Ｎ”．Ｎ”－トリス（（２Ｅ．６Ｅ）－３．７．１１－トリメチルドデカ－２．６．１０－トリエン－１－ブンプロパン－１，３－ジアミン、ｌ，１７－ビス（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）ヘプタデカン－９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、エチル（７Ｚ）－１７－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘキサコス－７－エノエート、（Ｚ）－メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（オクタデス－９－エン－１－イルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、２－（ジドデシルアミノ）－１－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ドデシルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、３－（（３－（１－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペリジン－４－イル）プロピル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、３－（（３－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－１－イル）－３－オキソプロピル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（４－（３－（ジノニルアミノ）プロピル）ピペリジン－１－イル）プロパン－１－オン、ペンチル４－（（３－（１－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペリジン－４－イル）プロピル）（ノニル）アミノ）ブタノ、ペンチル４－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、ペンチル４－（（（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）メチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、ペンチル４－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、ペンチル４－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、２－（ジドデシルアミノ）－１－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（３－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン、ジペンチル４，４’－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）アザネジル）ジブチレート、ペンチル４－（ノニル（２－（４－（Ｎ－ノニル－Ｎ－（２－（ノニル（４－オキソ－４－（ペン１イルオキシ）ブリル）アミノ）エチル）グリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）アミノ）ブタノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（３－（（ジノニルアミノ）メチル）ピロリジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）－１－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（３－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピロリジン－１－イル）エタン－１－オン、ペンチル４－（（３－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－１－イル）－３－オキソプロピル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、３－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、ブチル５－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ペンタノエート、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、プロピル６－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ヘキサノエート、エチル７－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ヘプタノエート、メチル８－（（２－（１－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、ブチル５－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ペンタノエート、プロピル６－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ヘキサノエート、エチル７－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ヘプタノエート、３－（ジノニルアミノ）－１－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（４－（ジテトラデシルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（ジノニルアミノ）－１－（４－（２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エチル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（ジノニルアミノ）－ｌ－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ドデシルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン、メチル８－（（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（２－（（８－メトキシ－８－オキソオクチル）（ノニル）アミノ）エチル）アミノ）オクタノエート、メチル８－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）アミノ）オクタノエート、メチル８－（（２－（（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）エチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、ペンチル４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、メチル８－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）－１－（５－（ジノニルグリシル）－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－イル）エタン－１－オン３、２－（ジノニルアミノ）－１－（５－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－イル）エタン－１－オン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）－Ｎ２－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イル）－Ｎ２－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、２－（ジノニルアミノ）－ｌ－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）エタン－ｌ－オン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリドデシル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリノニル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリヘキシル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデ
シルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデシルエタン－１，２－ジアミン、２－（ジドデシルアミノ）－ｌ－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－１－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリドデシル－Ｎ２－（２－（４－（２－（ドデシル（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジ（（Ｚ）－ドデス－６－エン－ｌ－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ＾トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、（Ｚ）－Ｎ１－（２－（４－（２－（ドデス－６－エン－ｌ－イル（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジオクチルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジヘキシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリノニルエタン－１，２－ジアミン、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）－ｌ－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エタン－ｌ－オン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリノニルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリノニルエタン－１，２－ジアミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリヘキシルエタン－１，２－ジアミン、ジメチル１２，１２’－（（２－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）アザネジル）ジドデカノエート、メチル１２－（（２－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）（ドデシル）アミノ）ドデカノエート、ジペンチル６，６’－（（２－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）アザネジル）ジヘキサノエート、ペンチル６－（（２－（４－（２－（（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）（テトラデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）（ドデシル）アミノ）ヘキサノエート、ペンチル６－（（２－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）（ドデシル）アミノ）ヘキサノエート、２－（ジドデシルアミノ）－ｌ－（４－（Ｎ－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）－Ｎ－ドデシルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（ジドデシルアミノ）－１－（４－（Ｎ－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、２－（ジドデシルアミノ）－Ｎ－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ－ドデシルアセトアミド、（（２－（（３，Ｓ’，４Ｒ）－３，４－ジヒドロキシピロリジン－ｌ－イル）アセチル）アザネジル）ビス（エタン－２，１－ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、２－アミノ－Ｎ，Ｎ－ジヘキサデシル－３－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）プロパンアミド、（２－アミノ－Ｎ，Ｎ－ジヘキサデシル－３－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）プロパンアミド、メチル（９Ｚ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘプタコス－９－エノエート、メチル８－（２－｛９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル（９Ｚ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタコス－９－エノエート、エチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、エチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、ジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イル）３－（（（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）アミノ）ペンタネジオエート、ヘプチル６－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ヘキサノエート、エチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］ノナデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、ペンチル８－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート、エチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］イコシル｝シクロプロピル）オクタノエート、エチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）プロピルデカノエート、ヘプチル６－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）ヘキサノエート、エチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、ペンチル８－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート、エチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ノニルオキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）ヘプタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタコス－９－エノエート、（２Ｒ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ドデカン－２－アミン、（１５Ζ，１８Ζ）－Ν，Ν－ジメチルテトラコダ－１５，１８－ジエン－５－アミン、エチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）プロピルデカノエート、エチル４－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］イコシル｝シクロプロピル）ブタノエート、エチル８－（２－｛７－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、３－（（３－（ｌ－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペリジン－４－イル）プロピル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、エチル６－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタデシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、３－（（３－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－ｌ－イル）－３－オキソプロピル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、エチル６－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（４－（３－（ジノニルアミノ）プロピル）ピペリジン－１－イル）プロパン－１－オン、ペンチル４－（（３－（ｌ－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペリジン－４－イル）プロピル）（ノニル）アミノ）ブタ＾、エチル６－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、ペンチル４－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、エチル６－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタデシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、ペンチル４－（（（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）メチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、エチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタコス－９－エノエート、ペンチル４－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、エチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－９－エノエート、（（２－（（３，Ｓ’，４Ｒ）－３，４－ジヒドロキシピロリジン－ｌ－イル）アセチル）アザネジル）ビス（エタン－２，ｌ－ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）－ビス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）、ペンチル４－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、エチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］ノナコス－９－エノエート、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘプチルオキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－２１－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）オクタコス－９－エノエート、２－（ジドデシルアミノ）－１－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－、（２Ｓ）－Ｎ．Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ノナン－２－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－１０－アミン、エチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］トリアコント－９－エノエート、エチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタコス－９－エノエート、エチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサコス－９－エノエート、エチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタコス－９－エノエート、エチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－９－エノエート、エチル（５Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサコス－５－エノエート、エチル（９Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサコス－９－エノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（３－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペリジン－
ｌ－イル）エタン－ｌ－オン、エチル（７Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］トリコス－７－エノエート、ジペンチル４，４’－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）アザネジル）ジブチレート、ペンチル４－（ノニル（２－（４－（Ｎ－ノニル－Ｎ－（２－（ノニル（４－オキソ－４－（ペンチルオキシ）ブチル）アミノ）エチル）グリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）アミノ）ブタノエート、エチル（７Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］テトラコス－７－エノエート、エチル（７Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタコス－７－エノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（３－（（ジノニルアミノ）メチル）ピロリジン－１－イル）エタン－１－オン、ｔｒａｎｓ－３－［（３｝７－ジメチルオクチル）オキシ］－１－メチル－４～［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９５１２－ジエン－１－イルオキシｊピロリジン、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘキシルオキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－２１－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ノナコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）ノナコス－９－エノエート、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］トリデカン－２－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－７－アミン、エチル（７Ｚ）－１７－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサコス－７－エノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（３－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピロリジン－１－イル）エタン－１－オン、メチル６－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］イコシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル１０－（２－｛７－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）デカノエート、メチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］ノナデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛ｌｌ－［（ジメチルアミノ）メチル］イコシル｝シクロプロピル）オクタノエート、ペンチル４－（（３－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－ｌ－イル）－３－オキソプロピル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、メチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、メチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－（（２－オクチルシクロプロピル）メトキシ）－６－オキソヘキシル）オキシ）プロポキシ）オクタノエート、ブチル５－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ペンタノエート、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３－［（１２Ｚ）－オクタデス－１２－エン－１－イルオキシ］－４－（オクチルオキシ）ピロリジン、メチル（９Ｚ）－２１－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝トリアコント－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）トリアコント－９－エノエート、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－１－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン工程１：メチルＮ－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシネート、１－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－３－（ビス（ヘキサデシルオキシ）メトキシ）－５－（５－メチル－２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）テトラヒドロフメタンスルホネート、（Ｚ）－メチル１６－（３－（デシルオキシ）－２－（ジメチルアミノ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、（２Ｓ）－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ノナン－２－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－６－アミン、プロピル６－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ヘキサノエート、メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－（（２－オクチルシクロプロピル）メトキシ）－６－オキソヘキシル）オキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、メチル（７Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－７－エノエート、メチル（ＨＺ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－ｌｌ－エノエート、エチル７－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）ヘプタノエート、（２－オクチルシクロプロピル）メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（５－メトキシ－５－オキソペンチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル８－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタコス－９－エノエート、（２－オクチルシクロプロピル）メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（４－メトキシ－４－オキソブトキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－９－エノエート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）プロピルヘキサノエート、（Ｚ）－メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－オキソ－６－（ウンデス－２－エン－ｌ－イルオキシ）ヘキシル）オキシ）プロポキシ）オクタノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］ノナコス－９－エノエート、ブチル５－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ペンタノエート、（Ｚ）－メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－オキソ－６－（ウンデス－２－エン－ｌ－イルオキシ）ヘキシル）オキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、プロピル６－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［（ジメチルアミノ）メチル］トリアコント－９－エノエート、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－１－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（５－メトキシ－５－オキソペンチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ペンタコス－９－エノエート、エチル７－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ヘプタノエート、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－１－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（４－メトキシ－４－オキソブトキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－（（２－オクチルシクロプロピル）メトキシ）－６－オキソヘキシル）オキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘキサコス－９－エノエート、３－（ジノニルアミノ）－ｌ－（４－（３－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）プロパノイル）ピペラジン－１－イル）プロパン－１－オン、メチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］ヘプタコス－９－エノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（４－（ジテトラデシルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン、（Ｚ）－メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－オキソ－６－（ウンデス－２－エン－ｌ－イルオキシ）ヘキシル）オキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（６－メトキシ－６－オキソヘキシル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）オクタノエート、メチル８－（２－｛９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、２－（ジノニルアミノ）－ｌ－（４－（２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エチル）ピペリジン－１－イル）エタン－１－オン、ｔｒａｎｓ－ｌ－メチル－３－［（９Ｚ）－オクタデス－９－エン－ｌ－イルオキシ］－４－（オクチルオキシ）ピロリジン、メチル（９Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ペンタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ペンタコス－９－エノエート、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ノニルオキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、（２Ｓ）－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］デカン－２－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘニコサ－１２，１５－ジエン－４－アミン、メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（６－メトキシ－６－オキソヘキシル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、メチル（９Ｚ）－１９－［（ジメチルアミノ）メチル］オクタコス－９－エノエート、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）－ｌ－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペリジン－ｌ－イル）エタン－ｌ－オン、メチル８－（（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（２－（（８－メトキシ－８－オキソオクチル）（ノニル）アミノ）エチル）アミノ）オクタノエート、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（５－メトキシ－５－オキソペンチル）オキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、エチル８－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）ヘプタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、メチル８－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）アミノ）オクタノエート、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（４－メトキシ－４－オキソブトキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、エチル８－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）オクタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、メチル８－（（２－（（２－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）エチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、エチル８－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）ノナデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－メトキシ－８－オキソオクチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、ペンチル４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、エチル８－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）イコシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（７－メトキシ－
７－オキソヘプチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、メチル８－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）オクタノエート、エチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ペンタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（５－メトキシ－５－オキソペンチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１１，２０，２３－トリエン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ペンタデカン－８－アミン、エチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘキサデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）－ｌ－（５－（ジノニルグリシル）－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－イル）エタン－１－オン３、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（４－メトキシ－４－オキソブトキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、メチル６－（２－（８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－メトキシ－６－オキソヘキシル）オキシ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、エチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘプタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、２－（ジノニルアミノ）－ｌ－（５－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）－２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－２－イル）エタン－ｌ－オン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－デシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタデカン－６－アミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イル）－Ｎ２－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、エチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）オクタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、１－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヘプチルシクロプロピル］－Ν，Ν－ジメチルオクタデカン－９－アミン、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（６－メトキシ－６－オキソヘキシル）オキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－ｌ－イル）－Ｎ２－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）エタン－ｌ，２－ジアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－｛７－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝ドデカン－１－アミン、メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）オクタノエート、エチル４－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）イコシル］シクロプロピル｝ブタノエート、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３－［（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）オキシ］－４－オクチルオキシ－ピロリジン、メチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ヘキサコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘキサコス－９－エノエート、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘプチルオキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、（２Ｒ）－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ドデカン－２－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルドコサ－１３，１６－ジエン－５－アミン、Ν，Ν－ジメチル－１－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン－５－アミン、メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、エチル８－｛２－［７－（ジメチルアミノ）ヘキサデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、２－（ジドデシルアミノ）－Ｎ－ドデシル－Ｎ－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）アセトアミド、Ν，Ν－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン－８－アミン、Ｎ１－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデシルエタン－ｌ，２－ジアミン、メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、エチル６－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ペンタデシル］シクロプロピル｝ヘキサノエート、Ν，Ν－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、ＮＮ１，Ｎ２－トリドデシル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）エタン－ｌ，２－ジアミン、メチル５－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ペンタノエート、エチル６－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘキサデシル］シクロプロピル｝ヘキサノエート、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘニコサン－１０－アミン、ＮＮＮ２－トリノニル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）エタン－ｌ，２－ジアミン、メチル４－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－（（２－ペンチルシクロプロピル）メチル）シクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ブタノエート、エチル６－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘプタデシル］シクロプロピル｝ヘキサノエート、Ν，Ν－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリヘキシル－Ｎ２－（２－（ピペラジン－ｌ－イル）エチル）エタン－ｌ，２－ジアミン、メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イルオキシ）プロポキシ）オクタノエート、エチル６－｛２－［９－（ジメチルアミノ）オクタデシル］シクロプロピル｝ヘキサノエート、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－ｌ－イル）エタン－１，２－ジアミン、メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、エチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）ヘプタコス－９－エノエート、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヘキシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナデカン－１０－アミン、１－メチル１８－［（２Ｚ）－ノン－２－エン－１－イル］９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタデカンジオエート、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－ｌ－イル）エタン－ｌ，２－ジアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン－８－アミン、メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、エチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）オクタコス－９－エノエート、ジメチル（９Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタコス－９－エンジオエート、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデシルエタン－１，２－ジアミン、メチル５－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，ｌ２－ジエン－ｌ－イルオキシ）プロポキシ）ペンタノエート、エチル８－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝－１５－（２－オクチルシクロプロピル）ペンタデカノエート、エチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）ノナコス－９－エノエート、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニルドコサ－１３，１６－ジエン－１－アミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリテトラデシルエタン－１，２－ジアミン、メチル９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝－１６－（２－オクチルシクロプロピル）ヘキサデカノエート、メチル４－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ）プロポキシ）ブタノエート、エチル（９Ｚ）－２１－（ジメチルアミノ）トリアコント－９－エノエート、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン、メチル８－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－オクチルシクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）オクタノエート、エチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ペンタコス－９－エノエート、エチル（１８Ｚ，２１Ｚ）－８－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタコサ－１８，２１－ジエノエート、（１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコス－１６－エン－８－アミン、メチル（９Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ヘプタコス－９－エノエート、２－（ジドデシルアミノ）－ｌ－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エタン－ｌ－オン、（Ｚ）－メチル１６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘキシルオキシ）プロポキシ）ヘキサデス－７－エノエート、（２Ｓ）－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ドデカン－２－アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ～１６，１９－ジエン－８－アミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジノニルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２＾Ｖ２－トリテトラデシルエタン－ｌ，２－ジアミン、メチル７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－オクチルシクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ヘプタノエート、メチル（１９Ｚ，２２Ｚ）－９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタコサ－１９，２２－ジエノエート、エチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ヘキサコス－９－エノエート、（２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコント－２２－エン－１０－アミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジ（（Ｚ）－オクタデス－９－エン－ｌ－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－！＾＾－トリドデシルエタン－１，２－ジアミン、メチル５－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－オクチルシクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ペンタノエート、エチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）ヘプタコス－９－エノエート、（２－ブチルシクロプロピル）メチル１２－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘニコサノエート、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコス－２０－エン－１０－アミン、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２－トリドデシル－Ｎ２－（２－（４－（２－（ドデシル（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－－イル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）エタン－１，２－ジアミン、メチル４－（２－（ジメチルアミノ）－３－（（８－（２－オクチルシクロプロピル）オクチル）オキシ）プロポキシ）ブタノエート、エチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）オクタコス－９－エノエート、（２－オクチルシクロプロピル）メチル８－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタデカノエート、（２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリトリアコント－２４－エン－１０－アミン、Ｎ１－（２－（４－（２－（ジテトラデシルアミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）－Ｎ１，Ｎ２，Ｎ２－トリドデシルエタン－１
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リシネート２－ヒドロキシエチルジノニルグリシネート、メチル８－［２－（ｌｌ－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝イコシル）シクロプロピル］オクタノエート、メチル８－｛２－［ｌｌ－（ジメチルアミノ）イコシル］シクロプロピル｝オクタノエ
ート、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－ｌ－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ノニルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、（２Ｒ，１２Ｚ，１５Ｚ）－１－（ヘキサデシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘニコサ－１２，１５－ジエン－２－アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２，２５－ジエン－１０－アミン、ｌ，ｌ－（ピペラジン－ｌ，４－ジイル）ビス（４－（ジデシルアミノ）ブタン－ｌ－オン）フェルト－ブチル４－（ジデシルアミノブタノエート、ヘプチル５－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－５－オキソペンタノエート５－（ヘプトｌオキシ）－５－オキソペンタノイカシド、ヘプチル５－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－５－オキソペンタノエート５－（ヘプトｌオキシ）－５－オキソペンタノイック、（Ｚ）－４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）ブト－２－エン－１－ｙ１ノナノエート（Ｚ）－４－ヒドロキシブト－２－エン－ｌ－イルノナノエート、（Ｚ）－３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデス－９－エン－１－イル）アミノ）プロピルデカノエート（Ｚ）－テトラデス－９－エン－ｌ－イルメタンスルホネート、メチル８－［２－（９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ペンタデシル）シクロプロピル］オクタノエート、メチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ペンタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－ｌ－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘプチルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、（２Ｒ，１２Ｚ，１５Ｚ）－１－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘニコサ－１２，１５－ジエン－２－アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－６－アミン、メチル８－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジ（（Ｚ）－ノン－３－エン－ｌ－イル）アミノ）エチル）－Ｎ－（（Ｚ）－ノン－３－エン－ｌ－イル）グリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）オクタノエートフェルト－ブチル４－（ノニルグリシル）ピペラジン－１－カルボキシレート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）プロピル（Ｚ）－デス－３－エノエート（Ｚ）－デス－３－エン－ｌ－オール、２－（（２－（ジ（（Ｚ）－ノン－３－エン－ｌ－イル）アミノ）エチル）（（Ｚ）－ノン－３－エン－ｌ－イル）アミノ）－ｌ－（４－（ジノニルグリシル）ピペラジン－１－イル）エタン－１－オン（Ｚ）－１－ブロモノン－４－エン、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－オキソエチル）（ドデシル）アミノ）プロピルオクタノエートトト－ブチルドデシルグリシネート、Ｓ－ペンチル４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ブタンチオエート、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－＾イル）エチル）（ノニル）アミノ）プロピル３－メチルヘキサノエートフェルト－ブチル４－（２－（（３－（（３－メチルヘキサノイル）オキシ）プロピル）（ノニル）アミノ）エチル）ピペリジン－ｌ－、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（ノニル）アミノ）－２－メチルプロピルヘキサノエート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－オキソエチル）（ノニル）アミノ）プロピル３－メチルヘキサノエート、３－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－オキソエチル）（ノニル）アミノ）－２－メチルプロピルヘキサノエート、メチル８－［２－（９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘキサデシル）シクロプロピル］オクタノエート、メチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘキサデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－ｌ－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（ヘキシルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、（２Ｒ，１２Ｚ，１５Ｚ）－１－（デシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘニコサ－ｌ２，１５－ジエン－２－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－７－アミン、２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エチル１－（ジノニルグリシル）ピペリジン－４－カルボキシレート、ｌ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）４－（２－（（２－（ジノニルアミノ）エチル）（ノニル）アミノ）エチル）シクロヘキサン－１，４－ジカルボキシレート２－（ジノニルアミノ）エタン－１－オール、メチル１２－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ドデカノエートフェルト－ブチル３－（２－（（１２－メトキシ－１２－オキソドデシル）（テトラデシル）アミノ）エチル）ピロリジン－ｌ－カルボキシレート、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）プロピルデカノエートテル／－ブチル３－（２－（（３－（デカノイルオキシ）プロピル）（テトラデシル）アミノ）エチル）ピロリジン－ｌ－カルボキシレート、“ヘプチル６－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ヘキサノエートトト－ブチル３－（２－（（６－（ヘプチルオキシ）－６－オキソヘキシル）（テトラデシル）アミノ）エチル）ピロリジン－１－カルボキシレート、”、ペンチル８－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート／エル／－ブチル３－（２－（テトラデシルアミノ）エチル）ピロリジン－ｌ－カルボキシレート、メチル１２－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ドデカノエート－ブチル３－（２－（（１２－メトキシ－１２－オキソドデシル）（テトラデシル）アミノ）エチル）ピペリジン－ｌ－カルボキシレート、３－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）プロピルデカノエート、ヘプチル６－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ヘキサノエート、ペンチル８－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－３－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート、ペンチル６－（（２－（４－（２－（（２－（ジドデシルアミノ）エチル）（ドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－ｌ－イル）エチル）（ドデシル）アミノ）ヘキサノエート工程１：ペンチル６－ブロモヘキサノエート、メチル８－［２－（９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝ヘプタデシル）シクロプロピル］オクタノエート、メチル８－｛２－［９－（ジメチルアミノ）ヘプタデシル］シクロプロピル｝オクタノエート、（２Ｓ，１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（オクチルオキシ）ヘニコサ－１２，１５－ジエン－２－アミン、（２－オクチルシクロプロピル）メチル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（オクチルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－８－アミン、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３，４－ビス（（（Ｚ）－ヘキサデス－９－エノイルオキシ）メチル）ピロリジン、（Ｚ）－ノン－２－エン－ｌ－イル４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）ブタノエート、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３，４－ビス（（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエノイルオキシ）メチル）ピロリジン、メチル１２－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）－２－オキソエチル）（テトラデシル）アミノ）ドデカノエート、エチル（７Ｚ）－１７－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘキサコス－７－エノエート、ｔｒａｎｓ－１－メチル－３，４－ビス（（（Ｚ）－オクタデカ－９－エノイルオキシ）メチル）ピロリジン、メチル６－（２－｛］１１－＾２－（ジメチルアミノ）エチル］イコシル｝シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル１２－（（２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチル）（テトラデシル）アミノ）ドデカノエート、メチル１０－（２－Ｖ－＾２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）デカノエート、メチル８－（２－｛１１１－；２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペリジン－４－イル）エチルジノニルグリシネートフェルト－ブチル４－（２－（（ジノニルグリシル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート、メチル８－（２－｛ｌＬｌ－；２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛ｌ１１－”２－（ジメチルアミノ）エチル］ノナデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、ｌ，－（ピペラジン－ｌ，４－ジイル）ビス（２－（ジノニルアミノ）エタン－ｌ－オン）、メチル８－［２－｛］１１－＾２－（ジメチルアミノ）エチル］イコシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル８－（２－｛９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ペンタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル（７Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタコス－７－エノエート、メチル（７Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）オクタコス－７－エノエート、ｃｉｓ－１－メチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－４－（オクチルオキシ）ピロリジン、２－（ジドデシルアミノ）－ｌ－（４－（Ｎ－（２－（ジドデシルアミノ）エチル）－Ｎ－ドデシルグリシル）ピペラジン－ｌ－イル）エタン－１－オン、（Ｚ）－ウンデス－２－エン－ｌ－イル６－（２－（ジメチルアミノ）－３－（オクチルオキシ）プロポキシ）ヘキサノエート、（２ＳＮ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］デカン－２－アミン（化合物１１）、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメイヒルオクタコサ－１９，２２－ジエン－９－アミン、メチル８－（２－｛９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘキサデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、５－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ペンチルメチルカルボネート、メチル８－（２－｛９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘプタデシル｝シクロプロピル）オクタノエート、メチル（７Ｚ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタコス－７－エノエート、（Ｚ）－ペント－２－エン－ｌ－イル４－（（２－（４－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピペラジン－ｌ
－イル）－２－オキソエチル）（ノニル）アミノ）ブタノエート、メチル（１ｌＺ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタコス－ｌ１－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘプタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［２－（ジメチルアミノ）エチル］オクタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－２１－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ノナコス－９－エノエート、２－（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）エチルジノニルグリシネート、メチル（９Ｚ）－２１－［２－（ジメチルアミノ）エチル］トリアコント－９－エノエート、（ｌ－（Ｎ－（２－（ジノニルアミノ）エチル）－Ｎ－ノニルグリシル）ピロリジン－３－イル）メチルジノニルグリシネート、メチル（９Ｚ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ペンタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－１９－［２－（ジメチルアミノ）エチル］ヘキサコス－９－エノエート、メチル６－（２－（８－（３－（デシルオキシ）－２－（ジメチルアミノ）プロポキシ）オクチル）シクロプロピル）ヘキサノエート、メチル（１ｌＺ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタコス－ｌ１－エノエート、メチル（１ｌＺ）－１９－（ジメチルアミノ）オクタコス－ｌ１－エノエート、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ドデカン－２－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－４－アミン、メチルジ（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエニル）アミン、メチル（９Ｚ）－１９－｛［４－（ジメチルアミノ）ブタノイル］オキシ｝オクタコス－９－エノエート、メチル（９Ｚ）－１９－（ジメチルアミノ）オクタコス－９－エノエート、（Ｚ）－メチル１７－（２－（ジメチルアミノ）－３－（オクチルオキシ）プロポキシ）ヘプタデス－８－エノエート、（３Ｒ，４Ｒ）－３，４－ビス（（Ｚ）－ヘキサデス－９－エニルオキシ）－１－メチルピロリジン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］ウンデカン－２－アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）－ノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－ｌ－アミン、３－（（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミン、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート）、（６Ｚ，１６Ｚ）－１２－（（Ｚ）－デス－４－エニル）ドコサ－６，１６－ジエン－ｌ１－イル５－（ジメチルアミノ）ペンタノエート、（６Ｚ，１６Ｚ）－１２－（（Ｚ）－デス－４－エニル）ドコサ－６，１６－ジエン－ｌ１－イル５－（ジメチルアミノ）ペンタノアト、（６Ｚ，１６Ｚ）－１２－（（Ｚ）－デス－４－エニル）ドコサ－６，１６－ジエン－１１－イル５－（ジメチルアミノ）ペンタノエート、Ｌ－アルギニン－アルファ－（２，３－ジラウリルオキシ）プロピルアミド、Ｌ－リジン－アルファ－（２，３－ジラウリルオキシ）プロピルアミド、２，３－ジオレイルオキシプロピルアミン、２，３－ジステアリルオキシプロピルアミン、２，３－ジラウリルオキシプロピルアミン、ジリノレイルメチル４－（ジメチルアミノ）プロピルエーテル）、ジリノレイルメチル４－（ジメチルアミノ）ブチルエーテル）、及び２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［ｌ，３］－ジオキソランのうちの少なくとも１つから選択され得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの非カチオン性脂質は、少なくとも１つのリン脂質、少なくとも１つの融合性脂質、少なくとも１つのアニオン性脂質、少なくとも１つのヘルパー脂質、少なくとも１つの中性脂質、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を本質的に欠き得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質の量を含有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの非カチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、ＤＳＰＣ（１つの尾部当たり３つの不飽和二重結合を有する）（１８：３ ＰＣ）、アシルカルノシン（ＡＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、Ｎ－オレオイル－ＳＰＭ（Ｃ１８：ｌ）、Ｎ－リグノセリルＳＰＭ（Ｃ２４：０）、Ｎ－ネルバシルＣ（Ｃ２４：ｌ）、カルバモイル］コレステロール（Ｃｅｔ－Ｐ）、コレステロールヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）、コレステロールヘミドデカンジカルボン酸（Ｃｈｏｌ－Ｃ１２）、１２－コレステリルオキシカルボニルアミノドデカン酸（Ｃｈｏｌ－Ｃ１３Ｎ）、コレステロールヘミオキサレート（Ｃｈｏｌ－Ｃ２）、コレステロールヘミマロネート（Ｃｈｏｌ－Ｃ３）、Ｎ－（コレステリル－オキシカルボニル）グリシン（Ｃｈｏｌ－Ｃ３Ｎ）、コレステロールヘミグルタレート（Ｃｈｏｌ－Ｃ５）、コレステロールヘミアジペート（Ｃｈｏｌ－Ｃ６）、コレステロールヘミピメレート（Ｃｈｏｌ－Ｃ７）、コレステロールヘミスベレート（Ｃｈｏｌ－Ｃ８）、カルジオリピド（ＣＬ）、ｌ，２－ビス（トリコサ－１０，１２－ジイノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＣ８－９ＰＣ）、ジセチルホスフェート（ＤＣＰ）、ジヘキサデシルホスフェート（ＤＣＰ１）、１，２－ジパルミトイグリセロール－３－ヘミスクシネート（ＤＧＳｕｃｃ）、短鎖ビス－ｎ－ヘプタデカノイルホスファチジルコリン（ＤＨＰＣ）、ジヘキサデコイルホスホエタノールアミン（ＤＨＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、ｌ，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ＰＥ（ＤＬＰＥ）、ジミリストイルグリセロールヘミスクシネート（ＤＭＧＳ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジオレイルオキシベンジルアルコール（ＤＯＢＡ）、１，２－ジオレオイルグリセリル－３－ヘミスクシネート（ＤＯＧＨＥＭＳ）、Ｎ－［２～（２－｛２－［２－（２，３－ビス－オクタデス－９－エニルオキシ－プロポキシ）－エトキシ］－エトキシ｝
－エトキシ）－エチル］－３－（３，４，５－１リヒドロキシ－６－ヒドロキシメチル－１エトラヒドロ－ピラン－２－イルスルファニル）－プロピオンアミド（ＤＯＧＰ４αＭａｎ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－（ホスホ－Ｌ－セリン）（ＤＯＰＳ）、アセル－融合性リン脂質（ＤＰｈＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジステアロイルホスホエタノールアミンイミダゾール（ＤＳＰＥＩ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、エッグホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、Ｎ－ヒスチジニルコレステロールカルバメート（ＨＣＣｈｏｌ）、ヒスタミンジステアロイルグリセロール（ＨＤＳＧ）、Ｎ－ヒスチジニルコレステロールヘミスクシネート（ＨｉｓｔＣｈｏｌ）、１，２－ジパルミトイルグリセロール－ヘミスクシネート－Ｎα－ヒスチジニル－ヘミスクシネート（ＨｉｓｔＳｕｃｃＤＧ）、Ｎ－（５’－ヒドロキシ－３’－オキシペンチル）－１０－１２－ペンタコサジイナミド（ｈ－Ｐｅｇｉ－ＰＣＤＡ）、２－［ｌ－ヘキシルオキシエチル］－２－デビニルピロフェオホルビド－ａ（ＨＰＰＨ）、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイルグリセロール－Ｏα－ヒスチジニル－Ｎα－ヘミスクシネート（ＩｓｏｈｉｓｔｓｕｃｃＤＧ）、マンノシアライズドジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＭａｎＤＯＧ）、ｌ，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［４－（ｐ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－カルボキサミド］（ＭＣＣ－ＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＭＨＰＣ）、チオール反応性マレイミド頭部基脂質、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチラミド（ＭＰＢ－ＰＥ）、ネルボン酸（ＮＡ）、コール酸ナトリウム（ＮａＣｈｏｌ）、ｌ，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホエタノールアミン－Ｎ－ドデカノイル（ＮＣ１２－ＤＯＰＥ）、ＷＯ２００８０４２９７３Ａ２における合成例によって定義される（ＮＤ９８）、「式１のＮ－グルタリルホスファチジルエタノールアミン（複数可）」（ＮＧ－ＰＥ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミド（ＮＨＳ－「ｘ」）、「式１に包含されるＮ～（コ）－ジカルボン酸誘導体化ホスファチジルエタノールアミン」（ＮωＰＥ－「ｘ」）、オレイン酸（ＯＡ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン脂質（ＰＥ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とコンジュゲートされたＰＥ脂質のうちの少なくとも１つから選択され得るがこれらに限定されない。ＰＥＧ－ＰＥの１つの例は、ポリエチレングリコール－ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン脂質（ＰＥＧ－ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、部分的水素化大豆ホスファチジルクロリン（ＰＨＳＰＣ）、ホスファチジルイノシトール脂質（ＰＩ）、ホスホチジルイノシトール－４－ホスフェート（ＰＩＰ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、パルミトイルオレイオルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、リッサミンローダミンＢ－ホスファチジルエタノールアミン脂質（Ｒｈ－ＰＥ）、リン脂質の精製された大豆由来混合物（ＳＩＯＯ）、ホスファチジルコリン（ＳＭ）、１８－１－トランスＰＥ，１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、スフィ
ンゴミエリン（ＳＰＭ）、アルファ．アルファ’－トラハロース６，６’－ジベヘネート（ＴＤＢ）、ｌ，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホホエタノールアミン（トランスＤＯＰＥ）、（（２３Ｓ，５Ｒ）－３－（ビス（ヘキサデシルオキシ）メトキシ）－５－（５－メチル－２，４－ジオキソ－３，４－ジヒドロピリミジン－１（２Ｈ）－イル）テトラヒドロフラン－２－イル）メチルメチルホスフェート、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、及びジオレイルホスファチジルエタノールアミンであり得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質または脂質様物質を含む。非限定的な例として、イオン化可能な脂質は、Ｃ１２－２００、ＣＫＫ－Ｅ１２、５Ａ２－ＳＣ８、ＢＡＭＥＡ－０１６Ｂ、または７Ｃ１であり得る。他のイオン化可能な脂質は、当該技術分野で知られており、本明細書において有用である。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、リン脂質を含む。非限定的な例として、リン脂質（ヘルパー）は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、ＤＯＴＡＰ、またはＤＯＴＭＡであり得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＰＥＧ誘導体を含む。非限定的な例として、ＰＥＧ誘導体は、脂質固定であり得、例えば、ＰＥＧは、Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、Ｃ１４－ＰＥＧ１０００、Ｃ１４－ＰＥＧ３０００、Ｃ１４－ＰＥＧ５０００、Ｃ１２－ＰＥＧ１０００、Ｃ１２－ＰＥＧ２０００、Ｃ１２－ＰＥＧ３０００、Ｃ１２－ＰＥＧ５０００、Ｃ１６－ＰＥＧ１０００、Ｃ１６－ＰＥＧ２０００、Ｃ１６－ＰＥＧ３０００、Ｃ１６－ＰＥＧ５０００、Ｃ１８－ＰＥＧ１０００、Ｃ１８－ＰＥＧ２０００、Ｃ１８－ＰＥＧ３０００、またはＣ１８－ＰＥＧ５０００である。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのステロールは、少なくとも１つのコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを本質的に欠き得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールの量を含有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの粒子活性修飾剤は、粒子の凝集を低減した少なくとも１つの成分、対象における循環からのＬＮＰの消失を減少させる少なくとも１つの成分、少なくとも粘液層を横断するＬＮＰの能力を増加させる成分、ＬＮＰの投与に対する対象の免疫反応を減少させる少なくとも１つの成分、ＬＮＰの膜流動性を修飾する少なくとも１つの成分、ＬＮＰの安定性に寄与する少なくとも１つの成分、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を本質的に欠き得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤の量を含有しない場合がある。
いくつかの実施形態では、粒子活性修飾剤は、ポリマーを含み得る。いくつかの実施形態では、粒子活性修飾剤を含むポリマーは、少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、少なくとも１つのポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリ（２－オキサゾリン）（ＰＯＺ）、少なくとも１つのポリアミド（ＡＴＴＡ）、少なくとも１つのカチオン性ポリマー、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリマー部位（例えば、ＰＥＧ）の平均分子量は、５００～２０，０００ダルトンであり得る。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は、約５００～２０，０００、１，０００～２０，０００、１，５００～２０，０００、２，０００～２０，０００、２，５００～２０，０００、３，０００～２０，０００、３，５００～２０，０００、４，０００～２０，０００、４，５００～２０，０００、５，０００～２０，０００、５，５００～２０，０００、６，０００～２０，０００、６，５００～２０，０００、７，０００～２０，０００、７，５００～２０，０００、８，０００～２０，０００、８，５００～２０，０００、９，０００～２０，０００、９，５００～２０，０００、１０，０００～２０，０００、１０，５００～２０，０００、１１，０００～２０，０００、１１，５００～２０，０００、１２，０００～２０，０００、１２，５００～２０，０００、１３，０００～２０，０００、１３，５００～２０，０００、１４，０００～２０，０００、１４，５００～２０，０００、１５，０００～２０，０００、１５，５００～２０，０００、１６，０００～２０，０００、１６，５００～２０，０００、１７，０００～２０，０００、１７，５００～２０，０００、１８，０００～２０，０００、１８，５００～２０，０００、１９，０００～２０，０００、１９，５００～２０，０００、５００～１９，５００、１，０００～１９，５００、１，５００～１９，５００、２，０００～１９，５００、２，５００～１９，５００、３，０００～１９，５００、３，５００～１９，５００、４，０００～１９，５００、４，５００～１９，５００、５，０００～１９，５００、５，５００～１９，５００、６，０００～１９，５００、６，５００～１９，５００、７，０００～１９，５００、７，５００～１９，５００、８，０００～１９，５００、８，５００～１９，５００、９，０００～１９，５００、９，５００～１９，５００、１０，０００～１９，５００、１０，５００～１９，５００、１１，０００～１９，５００、１１，５００～１９，５００、１２，０００～１９，５００、１２，５００～１９，５００、１３，０００～１９，５００、１３，５００～１９，５００、１４，０００～１９，５００、１４，５００～１９，５００、１５，０００～１９，５００、１５，５００～１９，５００、１６，０００～１９，５００、１６，５００～１９，５００、１７，０００～１９，５００、１７，５００～１９，５００、１８，０００～１９，５００、１８，５００～１９，５００、１９，０００～１９，５００、１，５００～１９，０００、２，０００～１９，０００、２，５００～１９，０００、３，０００～１９，０００、３，５００～１９，０００、４，０００～１９，０００、４，５００～１９，０００、５，０００～１９，０００、５，５００～１９，０００、６，０００～１９，０００、６，５００～１９，０００、７，０００～１９，０００、７，５００～１９，０００、８，０００～１９，０００、８，５００～１９，０００、９，０００～１９，０００、９，５００～１９，０００、１０，０００～１９，０００、１０，５００～１９，０００、１１，０００～１９，０００、１１，５００～１９，０００、１２，０００～１９，０００、１２，５００～１９，０００、１３，０００～１９，０００、１３，５００～１９，０００、１４，０００～１９，０００、１４，５００～１９，０００、１５，０００～１９，０００、１５，５００～１９，０００、１６，０００～１９，０００、１６，５００～１９，０００、１７，０００～１９，０００、１７，５００～１９，０００、１８，０００～１９，０００、１８，５００～１９，０００、１，５００～１８，５００、２，０００～１８，５００、２，５００～１８，５００、３，０００～１８，５００、３，５００～１８，５００、４，０００～１８，５００、４，５００～１８，５００、５，０００～１８，５００、５，５００～１８，５００、６，０００～１８，５００、６，５００～１８，５００、７，０００～１８，５００、７，５００～１８，５００、８，０００～１８，５００、８，５００～１８，５００、９，０００～１８，５００、９，５００～１８，５００、１０，０００～１８，５００、１０，５００～１８，５００、１１，０００～１８，５００、１１，５００～１８，５００、１２，０００～１８，５００、１２，５００～１８，５００、１３，０００～１８，５００、１３，５００～１８，５００、１４，０００～１８，５００、１４，５００～１８，５００、１５，０００～１８，５００、１５，５００～１８，５００、１６，０００～１８，５００、１６，５００～１８，５００、１７，０００～１８，５００、１７，５００～１８，５００、１８，０００～１８，５００、１，５００～１８，０００、２，０００～１８，０００、２，５００～１８，０００、３，０００～１８，０００、３，５００～１８，０００、４，０００～１８，０００、４，５００～１８，０００、５，０００～１８，０００、５，５００～１８，０００、６，０００～１８，０００、６，５００～１８，０００、７，０００～１８，０００、７，５００～１８，０００、８，０００～１８，０００、８，５００～１８，０００、９，０００～１８，０００、９，５００～１８，０００、１０，０００～１８，０００、１０，５００～１８，０００、１１，０００～１８，０００、１１，５００～１８，０００、１２，０００～１８，０００、１２，５００～１８，０００、１３，０００～１８，０００、１３，５００～１８，０００、１４，０００～１８，０００、１４，５００～１８，０００、１５，０００～１８，０００、１５，５００～１８，０００、１６，０００～１８，０００、１６，５００～１８，０００、１７，０００～１８，０００、１７，５００～１８，０００、１，５００～１７，５００、２，０００～１７，５００、２，５００～１７，５００、３，０００～１７，５００、３，５００～１７，５００、４，０００～１７，５００、４，５００～１７，５００、５，０００～１７，５００、５，５００～１７，５００、６，０００～１７，５００、６，５００～１７，５００、７，０００～１７，５００、７，５００～１７，５００、８，０００～１７，５００、８，５００～１７，５００、９，０００～１７，５００、９，５００～１７，５００、１０，０００～１７，５００、１０，５００～１７，５００、１１，０００～１７，５００、１１，５００～１７，５００、１２，０００～１７，５００、１２，５００～１７，５００、１３，０００～１７，５００、１３，５００～１７，５００、１４，０００～１７，５００、１４，５００～１７，５００、１５，０００～１７，５００、１５，５００～１７，５００、１６，０００～１７，５００、１６，５００～１７，５００、１７，０００～１７，５００、１，５００～１７，０００、２，０００～１７，０００、２，５００～１７，０００、３，０００～１７，０００、３，５００～１７，０００、４，０００～１７，０００、４，５００～１７，０００、５，０００～１７，０００、５，５００～１７，０００、６，０００～１７，０００、６，５００～１７，０００、７，０００～１７，０００、７，５００～１７，０００、８，０００～１７，０００、８，５００～１７，０００、９，０００～１７，０００、９，５００～１７，０００、１０，０００～１７，０００、１０，５００～１７，０００、１１，０００～１７，０００、１１，５００～１７，０００、１２，０００～１７，０００、１２，５００～１７，０００、１３，０００～１７，０００、１３，５００～１７，０００、１４，０００～１７，０００、１４，５００～１７，０００、１５，０００～１７，０００、１５，５００～１７，０００、１６，０００～１７，０００、１６，５００～１７，０００、１，５００～１６，５００、２，０００～１６，５００、２，５００～１６，５００、３，０００～１６，５００、３，５００～１６，５００、４，０００～１６，５００、４，５００～１６，５００、５，０００～１６，５００、５，５００～１６，５００、６，０００～１６，５００、６，５００～１６，５００、７，０００～１６，５００、７，５００～１６，５００、８，０００～１６，５００、８，５００～１６，５００、９，０００～１６，５００、９，５００～１６，５００、１０，０００～１６，５００、１０，５００～１６，５００、１１，０００～１６，５００、１１，５００～１６，５００、１２，０００～１６，５００、１２，５００～１６，５００、１３，０００～１６，５００、１３，５００～１６，５００、１４，０００～１６，５００、１４，５００～１６，５００、１５，０００～１６，５００、１５，５００～１６，５００、１６，０００～１６，５００、１，５００～１６，０００、２，０００～１６，０００、２，５００～１６，０００、３，０００～１６，０００、３，５００～１６，０００、４，０００～１６，０００、４，５００～１６，０００、５，０００～１６，０００、５，５００～１６，０００、６，０００～１６，０００、６，５００～１６，０００、７，０００～１６，０００、７，５００～１６，０００、８，０００～１６，０００、８，５００～１６，０００、９，０００～１６，０００、９，５００～１６，０００、１０，０００～１６，０００、１０，５００～１６，０００、１１，０００～１６，０００、１１，５００～１６，０００、１２，０００～１６，０００、１２，５００～１６，０００、１３，０００～１６，０００、１３，５００～１６，０００、１４，０００～１６，０００、１４，５００～１６，０００、１５，０００～１６，０００、１５，５００～１６，０００、１，５００～１５，５００、２，０００～１５，５００、２，５００～１５，５００、３，０００～１５，５００、３，５００～１５，５００、４，０００～１５，５００、４，５００～１５，５００、５，０００～１５，５００、５，５００～１５，５００、６，０００～１５，５００、６，５００～１５，５００、７，０００～１５，５００、７，５００～１５，５００、８，０００～１５，５００、８，５００～１５，５００、９，０００～１５，５００、９，５００～１５，５００、１０，０００～１５，５００、１０，５００～１５，５００、１１，０００～１５，５００、１１，５００～１５，５００、１２，０００～１５，５００、１２，５００～１５，５００、１３，０００～１５，５００、１３，５００～１５，５００、１４，０００～１５，５００、１４，５００～１５，５００、１５，０００～１５，５００、１，５００～１５，０００、２，０００～１５，０００、２，５００～１５，０００、３，０００～１５，０００、３，５００～１５，０００、４，０００～１５，０００、４，５００～１５，０００、５，０００～１５，０００、５，５００～１５，０００、６，０００～１５，０００、６，５００～１５，０００、７，０００～１５，０００、７，５００～１５，０００、８，０００～１５，０００、８，５００～１５，０００、９，０００～１５，０００、９，５００～１５，０００、１０，０００～１５，０００、１０，５００～１５，０００、１１，０００～１５，０００、１１，５００～１５，０００、１２，０００～１５，０００、１２，５００～１５，０００、１３，０００～１５，０００、１３，５００～１５，０００、１４，０００～１５，０００、１４，５００～１５，０００、１，５００～１４，５００、２，０００～１４，５００、２，５００～１４，５００、３，０００～１４，５００、３，５００～１４，５００、４，０００～１４，５００、４，５００～１４，５００、５，０００～１４，５００、５，５００～１４，５００、６，０００～１４，５００、６，５００～１４，５００、７，０００～１４，５００、７，５００～１４，５００、８，０００～１４，５００、８，５００～１４，５００、９，０００～１４，５００、９，５００～１４，５００、１０，０００～１４，５００、１０，５００～１４，５００、１１，０
００～１４，５００、１１，５００～１４，５００、１２，０００～１４，５００、１２，５００～１４，５００、１３，０００～１４，５００、１３，５００～１４，５００、１４，０００～１４，５００、１，５００～１４，０００、２，０００～１４，０００、２，５００～１４，０００、３，０００～１４，０００、３，５００～１４，０００、４，０００～１４，０００、４，５００～１４，０００、５，０００～１４，０００、５，５００～１４，０００、６，０００～１４，０００、６，５００～１４，０００、７，０００～１４，０００、７，５００～１４，０００、８，０００～１４，０００、８，５００～１４，０００、９，０００～１４，０００、９，５００～１４，０００、１０，０００～１４，０００、１０，５００～１４，０００、１１，０００～１４，０００、１１，５００～１４，０００、１２，０００～１４，０００、１２，５００～１４，０００、１３，０００～１４，０００、１３，５００～１４，０００、１，５００～１３，５００、２，０００～１３，５００、２，５００～１３，５００、３，０００～１３，５００、３，５００～１３，５００、４，０００～１３，５００、４，５００～１３，５００、５，０００～１３，５００、５，５００～１３，５００、６，０００～１３，５００、６，５００～１３，５００、７，０００～１３，５００、７，５００～１３，５００、８，０００～１３，５００、８，５００～１３，５００、９，０００～１３，５００、９，５００～１３，５００、１０，０００～１３，５００、１０，５００～１３，５００、１１，０００～１３，５００、１１，５００～１３，５００、１２，０００～１３，５００、１２，５００～１３，５００、１３，０００～１３，５００、１，５００～１３，０００、２，０００～１３，０００、２，５００～１３，０００、３，０００～１３，０００、３，５００～１３，０００、４，０００～１３，０００、４，５００～１３，０００、５，０００～１３，０００、５，５００～１３，０００、６，０００～１３，０００、６，５００～１３，０００、７，０００～１３，０００、７，５００～１３，０００、８，０００～１３，０００、８，５００～１３，０００、９，０００～１３，０００、９，５００～１３，０００、１０，０００～１３，０００、１０，５００～１３，０００、１１，０００～１３，０００、１１，５００～１３，０００、１２，０００～１３，０００、１２，５００～１３，０００、１，５００～１２，５００、２，０００～１２，５００、２，５００～１２，５００、３，０００～１２，５００、３，５００～１２，５００、４，０００～１２，５００、４，５００～１２，５００、５，０００～１２，５００、５，５００～１２，５００、６，０００～１２，５００、６，５００～１２，５００、７，０００～１２，５００、７，５００～１２，５００、８，０００～１２，５００、８，５００～１２，５００、９，０００～１２，５００、９，５００～１２，５００、１０，０００～１２，５００、１０，５００～１２，５００、１１，０００～１２，５００、１１，５００～１２，５００、１２，０００～１２，５００、１，５００～１２，０００、２，０００～１２，０００、２，５００～１２，０００、３，０００～１２，０００、３，５００～１２，０００、４，０００～１２，０００、４，５００～１２，０００、５，０００～１２，０００、５，５００～１２，０００、６，０００～１２，０００、６，５００～１２，０００、７，０００～１２，０００、７，５００～１２，０００、８，０００～１２，０００、８，５００～１２，０００、９，０００～１２，０００、９，５００～１２，０００、１０，０００～１２，０００、１０，５００～１２，０００、１１，０００～１２，０００、１１，５００～１２，０００、１，５００～１１，５００、２，０００～１１，５００、２，５００～１１，５００、３，０００～１１，５００、３，５００～１１，５００、４，０００～１１，５００、４，５００～１１，５００、５，０００～１１，５００、５，５００～１１，５００、６，０００～１１，５００、６，５００～１１，５００、７，０００～１１，５００、７，５００～１１，５００、８，０００～１１，５００、８，５００～１１，５００、９，０００～１１，５００、９，５００～１１，５００、１０，０００～１１，５００、１０，５００～１１，５００、１１，０００～１１，５００、１，５００～１１，０００、２，０００～１１，０００、２，５００～１１，０００、３，０００～１１，０００、３，５００～１１，０００、４，０００～１１，０００、４，５００～１１，０００、５，０００～１１，０００、５，５００～１１，０００、６，０００～１１，０００、６，５００～１１，０００、７，０００～１１，０００、７，５００～１１，０００、８，０００～１１，０００、８，５００～１１，０００、９，０００～１１，０００、９，５００～１１，０００、１０，０００～１１，０００、１０，５００～１１，０００、１，５００～１０，５００、２，０００～１０，５００、２，５００～１０，５００、３，０００～１０，５００、３，５００～１０，５００、４，０００～１０，５００、４，５００～１０，５００、５，０００～１０，５００、５，５００～１０，５００、６，０００～１０，５００、６，５００～１０，５００、７，０００～１０，５００、７，５００～１０，５００、８，０００～１０，５００、８，５００～１０，５００、９，０００～１０，５００、９，５００～１０，５００、１０，０００～１０，５００、１，５００～１０，０００、２，０００～１０，０００、２，５００～１０，０００、３，０００～１０，０００、３，５００～１０，０００、４，０００～１０，０００、４，５００～１０，０００、５，０００～１０，０００、５，５００～１０，０００、６，０００～１０，０００、６，５００～１０，０００、７，０００～１０，０００、７，５００～１０，０００、８，０００～１０，０００、８，５００～１０，０００、９，０００～１０，０００、９，５００～１０，０００、１，５００～９，５００、２，０００～９，５００、２，５００～９，５００、３，０００～９，５００、３，５００～９，５００、４，０００～９，５００、４，５００～９，５００、５，０００～９，５００、５，５００～９，５００、６，０００～９，５００、６，５００～９，５００、７，０００～９，５００、７，５００～９，５００、８，０００～９，５００、８，５００～９，５００、９，０００～９，５００、１，５００～９，０００、２，０００～９，０００、２，５００～９，０００、３，０００～９，０００、３，５００～９，０００、４，０００～９，０００、４，５００～９，０００、５，０００～９，０００、５，５００～９，０００、６，０００～９，０００、６，５００～９，０００、７，０００～９，０００、７，５００～９，０００、８，０００～９，０００、８，５００～９，０００、１，５００～８，５００、２，０００～８，５００、２，５００～８，５００、３，０００～８，５００、３，５００～８，５００、４，０００～８，５００、４，５００～８，５００、５，０００～８，５００、５，５００～８，５００、６，０００～８，５００、６，５００～８，５００、７，０００～８，５００、７，５００～８，５００、８，０００～８，５００、１，５００～８，０００、２，０００～８，０００、２，５００～８，０００、３，０００～８，０００、３，５００～８，０００、４，０００～８，０００、４，５００～８，０００、５，０００～８，０００、５，５００～８，０００、６，０００～８，０００、６，５００～８，０００、７，０００～８，０００、７，５００～８，０００、１，５００～７，５００、２，０００～７，５００、２，５００～７，５００、３，０００～７，５００、３，５００～７，５００、４，０００～７，５００、４，５００～７，５００、５，０００～７，５００、５，５００～７，５００、６，０００～７，５００、６，５００～７，５００、７，０００～７，５００、１，５００～７，０００、２，０００～７，０００、２，５００～７，０００、３，０００～７，０００、３，５００～７，０００、４，０００～７，０００、４，５００～７，０００、５，０００～７，０００、５，５００～７，０００、６，０００～７，０００、６，５００～７，０００、１，５００～６，５００、２，０００～６，５００、２，５００～６，５００、３，０００～６，５００、３，５００～６，５００、４，０００～６，５００、４，５００～６，５００、５，０００～６，５００、５，５００～６，５００、６，０００～６，５００、１，５００～６，０００、２，０００～６，０００、２，５００～６，０００、３，０００～６，０００、３，５００～６，０００、４，０００～６，０００、４，５００～６，０００、５，０００～６，０００、５，５００～６，０００、１，５００～５，５００、２，０００～５，５００、２，５００～５，５００、３，０００～５，５００、３，５００～５，５００、４，０００～５，５００、４，５００～５，５００、５，０００～５，５００、１，５００～５，０００、２，０００～５，０００、２，５００～５，０００、３，０００～５，０００、３，５００～５，０００、４，０００～５，０００、４，５００～５，０００、１，５００～４，５００、２，０００～４，５００、２，５００～４，５００、３，０００～４，５００、３，５００～４，５００、４，０００～４，５００、１，５００～４，０００、２，０００～４，０００、２，５００～４，０００、３，０００～４，０００、３，５００～４，０００、１，５００～３，５００、２，０００～３，５００、２，５００～３，５００、３，０００～３，５００、１，５００～３，０００、２，０００～３，０００、２，５００～３，０００、１，５００～２，５００、２，０００～２，５００、及び１，５００～２，０００ダルトンであり得る。
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、少なくとも１つの脂質にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ポリマーにコンジュゲートされた脂質は、少なくとも１つの中性脂質、少なくとも１つのリン脂質、少なくとも１つのアニオン性脂質、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのコレステロール、少なくとも１つのコレステロール誘導体、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、ポリマーにコンジュゲートされた脂質は、先に列挙されたカチオン性、非カチオン性、またはステロール脂質のうちの少なくとも１つから選択され得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＰＥＧ－脂質コンジュゲートは、Ｓｉｇｌｅｃ－１Ｌ－ＰＥＧ－ＤＳＰＥ、Ｒ）－２，３－ビス（オクタデシルオキシ）プロピル－１－（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート、ＰＥＧ－Ｓ－ＤＳＧ、ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＰＥ、ＰＥＧ－ＰＡＡ、ＰＥＧ－ＯＨ ＤＳＰＥ Ｃ１８、ＰＥＧ－ＤＳＰＥ、ＰＥＧ－ＤＳＧ、ＰＥＧ－ＤＰＧ、ＰＥＧ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ Ｎａ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＧ２０００、ＰＥＧ－ＤＭＧ Ｃ１４、ＰＥＧ－ＤＭＧ ２０００、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＡ、ＰＥＧ－セラミドＣ１６、ＰＥＧ－Ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＯＧ、ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ、ＰＥＧ－ｃＤＭＡ、ＰＥＧＡ、ＰＥＧ７５０－Ｃ－ＤＭＡ、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ、ＰＥＧ２ｋ－Ｃ１１、ＰＥＧ２０００－ＰＥ、ＰＥＧ２０００Ｐ、ＰＥＧ２０００－ＤＳＰＥ、ＰＥＧ２０００－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ、ＰＥＧ２０００－Ｃ－ＤＭＡ、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ（２ｋ）－ＤＭＧ、ＰＥＧ ＤＳＰＥ Ｃ１８、ＰＥＧ ＤＭＰＥ Ｃ１４、ＰＥＧ ＤＬＰＥ Ｃ１２、ＰＥＧ Ｃｌｉｃｋ ＤＭＧ Ｃ１４、ＰＥＧクリックＣ１２、ＰＥＧクリックＣ１０、Ｎ（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール－２０００）－ｌ，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ３－ホスホエタノールアミン、Ｍｙｒｊ５２、ｍＰＥＧ－ＰＬＡ、ＭＰＥＧ－ＤＳＰＥ、ｍＰＥＧ３０００－ＤＭＰＥ、ＭＰＥＧ－２０００－ＤＳＰＥ、ＭＰＥＧ２０００－ＤＳＰＥ、ｍＰＥＧ２０００－ＤＰＰＥ、ｍＰＥＧ２０００－ＤＭＰＥ、ｍＰＥＧ２０００－ＤＭＧ、ｍＤＰＰＥ－ＰＥＧ２０００、ｌ，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ＰＥＧ２０００、ＨＰＥＧ－２Ｋ－ＬＩＰＤ、葉酸ＰＥＧ－ＤＳＰＥ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧＭＡ ５００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧＭＡ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ６０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ５０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２Ｋ－ＮＡＧ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２ｋ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００マレイミド、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ、ＤＳＧ－ＰＥＧＭＡ、ＤＳＧ－ＰＥＧ５０００、ＤＰＰＥ－ＰＥＧ－２Ｋ、ＤＰＰＥ－ＰＥＧ、ＤＰＰＥ－ｍＰＥＧ２０００、ＤＰＰＥ－ｍＰＥＧ、ＤＰＧ－ＰＥＧＭＡ、ＤＯＰＥ－ＰＥＧ２０００、ＤＭＰＥ－ＰＥＧＭＡ、ＤＭＰＥ－ＰＥＧ２０００、ＤＭＰＥ－Ｐｅｇ、ＤＭＰＥ－ｍＰＥＧ２０００、ＤＭＧ－ＰＥＧＭＡ、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、ＤＭＧ－ＰＥＧ、ジステアロイル－グリセロール－ポリエチレングリコール、Ｃｌ８ＰＥＧ７５０、ＣＩ８ＰＥＧ５０００、ＣＩ８ＰＥＧ３０００、ＣＩ８ＰＥＧ２０００、ＣＩ６ＰＥＧ２０００、ＣＩ４ＰＥＧ２０００、Ｃ１８－ＰＥＧ５０００、Ｃ１８ＰＥＧ、Ｃ１６ＰＥＧ、Ｃ１６ ｍＰＥＧ（ポリエチレングリコール）２０００セラミド、Ｃ１４－ＰＥＧ－ＤＳＰＥ２００、Ｃ１４－ＰＥＧ２０００、Ｃ１４ＰＥＧ２０００、Ｃ１４－ＰＥＧ ２０００、Ｃ１４－ＰＥＧ、Ｃ１４ＰＥＧ、１４：０－ＰＥＧ２ＫＰＥ、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－ＰＥＧ２０００、（Ｒ）－２，３－ビス（オクタデシルオキシ）プロピル－１－（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）プロピルカルバメート、（ＰＥＧ）－Ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－Ｃ－ＤＭＡ、及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ－Ｘのうちの少なくとも１つから選択され得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本開示の脂質、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本開示の脂質、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を約４８．５：１０：４０：１．５のモル比でそれぞれ含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本開示の脂質、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を約４８．５：１０：３９：２．５のモル比でそれぞれ含む。
ＬＮＰ成分の量及び比は、所望の形態、構造、機能、カーゴ、標的、またはそれらの任意の組み合わせに依存して任意の量によって様々であり得る。各成分の量は、様々な実施形態では、示された成分によって占められるすべての脂質または脂質コンジュゲート成分の総モル質量のパーセント（ｍｏｌ％）として表され得る。各成分の量は、様々な実施形態では、モル質量に基づく各成分の相対比（モル比）として表され得る。各成分の量は、様々な実施形態では、構築前のＬＮＰを製剤化するために使用される各成分の重量（ｍｇまたは当量）として表され得る。各成分の量は、様々な実施形態では、当該技術分野で知られている任意の他の方法によって表され得る。成分量の１つの表記（「単位」）で与えられる任意の製剤は、成分量の異なる単位で表される任意の製剤を包含することを明示的に意味し、それらの表記は、同じ単位に変換された場合に効果的に同等である。いくつかの実施形態では、「有効に同等」は、互いに約１０％以内の２つ以上の値を意味する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約０．１～１００ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約２０～６０ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約５０～８５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約２０ｍｏｌ％未満の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約６０ｍｏｌ％または約８５ｍｏｌ％を超える量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約９５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、カチオン性脂質を約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、及び５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、及び９５ｍｏｌ％以上の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約２０～３０ｍｏｌ％、２０～３５ｍｏｌ％、２０～４０ｍｏｌ％、２０～４５ｍｏｌ％、２０～５０ｍｏｌ％、２０～５５ｍｏｌ％、２０～６０ｍｏｌ％、２０～６５ｍｏｌ％、２０～７０ｍｏｌ％、２０～７５ｍｏｌ％、２０～８０ｍｏｌ％、２０～８５ｍｏｌ％、２０～９０ｍｏｌ％、２５～３５ｍｏｌ％、２５～４０ｍｏｌ％、２５～４５ｍｏｌ％、２５～５０ｍｏｌ％、２５～５５ｍｏｌ％、２５～６０ｍｏｌ％、２５～６５ｍｏｌ％、２５～７０ｍｏｌ％、２５～７５ｍｏｌ％、２５～８０ｍｏｌ％、２５～８５ｍｏｌ％、２５～９０ｍｏｌ％、３０～４０ｍｏｌ％、３０～４５ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、３０～５５ｍｏｌ％、３０～６０ｍｏｌ％、３０～６５ｍｏｌ％、３０～７０ｍｏｌ％、３０～７５ｍｏｌ％、３０～８０ｍｏｌ％、３０～８５ｍｏｌ％、３０～９０ｍｏｌ％、３５～４０ｍｏｌ％、３５～４５ｍｏｌ％、３５～５０ｍｏｌ％、３５～５５ｍｏｌ％、３５～６０ｍｏｌ％、３５～６５ｍｏｌ％、３５～７０ｍｏｌ％、３５～７５ｍｏｌ％、３５～８０ｍｏｌ％、３５～８５ｍｏｌ％、３５～９０ｍｏｌ％、４０～４５ｍｏｌ％、４０～５０ｍｏｌ％、４０～５５ｍｏｌ％、４０～６０ｍｏｌ％、４０～６５ｍｏｌ％、４０～７０ｍｏｌ％、４０～７５ｍｏｌ％、４０～８０ｍｏｌ％、４０～８５ｍｏｌ％、４０～９０ｍｏｌ％、４５～５５ｍｏｌ％、４５～６０ｍｏｌ％、４５～６５ｍｏｌ％、４５～７０ｍｏｌ％、４５～７５ｍｏｌ％、４５～８０ｍｏｌ％、４５～８５ｍｏｌ％、４５～９０ｍｏｌ％、５０～６０ｍｏｌ％、５０～６５ｍｏｌ％、５０～７０ｍｏｌ％、５０～７５ｍｏｌ％、５０～８０ｍｏｌ％、５０～８５ｍｏｌ％、５０～９０ｍｏｌ％、５５～６５ｍｏｌ％、５５～７０ｍｏｌ％、５５～７５ｍｏｌ％、５５～８０ｍｏｌ％、５５～８５ｍｏｌ％、５５～９０ｍｏｌ％、６０～７０ｍｏｌ％、６０～７５ｍｏｌ％、６０～８０ｍｏｌ％、６０～８５ｍｏｌ％、６０～９０ｍｏｌ％、６５～７５ｍｏｌ％、６５～８０ｍｏｌ％、６５～８５ｍｏｌ％、６５～９０ｍｏｌ％、７０～８０ｍｏｌ％、７０～８５ｍｏｌ％、７０～９０ｍｏｌ％、７５～８５ｍｏｌ％、７５～９０ｍｏｌ％、８０～９０ｍｏｌ％または８５～９５ｍｏｌ％の量で含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約０．１～１００ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約５～３５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのカチオン性脂質を約５～２５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約５ｍｏｌ％未満の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約２５ｍｏｌ％または約３５ｍｏｌ％を超える量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約９５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、及び５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、及び９５ｍｏｌ％以上の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの非カチオン性脂質を約５～１５ｍｏｌ％、５～２５ｍｏｌ％、５～３５ｍｏｌ％、５～４５ｍｏｌ％、５～５５ｍｏｌ％、１０～２０ｍｏｌ％、１０～３０ｍｏｌ％、１０～４０ｍｏｌ％、１０～５０ｍｏｌ％、１５～２５ｍｏｌ％、１５～３５ｍｏｌ％、１５～４５ｍｏｌ％、２０～３０ｍｏｌ％、２０～４０ｍｏｌ％、２０～５０ｍｏｌ％、２５～３５ｍｏｌ％、２５～４５ｍｏｌ％、３０～４０ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、及び３５～４５ｍｏｌ％の量で含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約０．１～１００ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約２０～４５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約２５～５５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約２０ｍｏｌ％未満の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約４５ｍｏｌ％または約５５ｍｏｌ％を超える量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約９５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、及び５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、及び９５ｍｏｌ％以上の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つのステロールを約１０～２０ｍｏｌ％、１０～３０ｍｏｌ％、１０～４０ｍｏｌ％、１０～５０ｍｏｌ％、１０～６０ｍｏｌ％、１５～２５ｍｏｌ％、１５～３５ｍｏｌ％、１５～４５ｍｏｌ％、１５～５５ｍｏｌ％、１５～６５ｍｏｌ％、２０～３０ｍｏｌ％、２０～４０ｍｏｌ％、２０～５０ｍｏｌ％、２０～６０ｍｏｌ％、２５～３５ｍｏｌ％、２５～４５ｍｏｌ％、２５～５５ｍｏｌ％、２５～６５ｍｏｌ％、３０～４０ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、３０～６０ｍｏｌ％、３５～４５ｍｏｌ％、３５～５５ｍｏｌ％、３５～６５ｍｏｌ％、４０～５０ｍｏｌ％、４０～６０ｍｏｌ％、４５～５５ｍｏｌ％、４５～６５ｍｏｌ％、５０～６０ｍｏｌ％、及び５５～６５ｍｏｌ％の量で含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約０．１～１００ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約０．５～１５ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約１５～４０ｍｏｌ％の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約０．１ｍｏｌ％未満の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約１５ｍｏｌ％または約４０ｍｏｌ％を超える量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約９５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、及び５ｍｏｌ％以下の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、及び９５ｍｏｌ％以上の量で含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも１つの粒子活性修飾剤を約０．１～１ｍｏｌ％、０．１～２ｍｏｌ％、０．１～３ｍｏｌ％、０．１～４ｍｏｌ％、０．１～５ｍｏｌ％、０．１～６ｍｏｌ％、０．１～７ｍｏｌ％、０．１～８ｍｏｌ％、０．１～９ｍｏｌ％、０．１～１０ｍｏｌ％、０．１～１５ｍｏｌ％、０．１～２０ｍｏｌ％、０．１～２５ｍｏｌ％、１～２ｍｏｌ％、１～３ｍｏｌ％、１～４ｍｏｌ％、１～５ｍｏｌ％、１～６ｍｏｌ％、１～７ｍｏｌ％、１～８ｍｏｌ％、１～９ｍｏｌ％、１～１０ｍｏｌ％、１～１５ｍｏｌ％、１～２０ｍｏｌ％、１～２５ｍｏｌ％、２～３ｍｏｌ％、２～４ｍｏｌ％、２～５ｍｏｌ％、２～６ｍｏｌ％、２～７ｍｏｌ％、２～８ｍｏｌ％、２～９ｍｏｌ％、２～１０ｍｏｌ％、２～１５ｍｏｌ％、２～２５ｍｏｌ％、３～４ｍｏｌ％、３～５ｍｏｌ％、３～６ｍｏｌ％、３～７ｍｏｌ％、３～８ｍｏｌ％、３～９ｍｏｌ％、３～１０ｍｏｌ％、３～１５ｍｏｌ％、３～２０ｍｏｌ％、３～２５ｍｏｌ％、４～５ｍｏｌ％、４～６ｍｏｌ％、４～７ｍｏｌ％、４～８ｍｏｌ％、４～９ｍｏｌ％、４～１０ｍｏｌ％、４～１５ｍｏｌ％、４～２０ｍｏｌ％、４～２５ｍｏｌ％、５～１０ｍｏｌ％、５～１５ｍｏｌ％、５～２０ｍｏｌ％、５～２５ｍｏｌ％、１０～１５ｍｏｌ％、１０～２０ｍｏｌ％、１０～２５ｍｏｌ％、１５～２０ｍｏｌ％、１５～２５ｍｏｌ％、及び２０～２５ｍｏｌ％の量で含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約３０～６０ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約０～３０ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約１８．５～４８．５ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約３５～５５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約５～２５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約３０～４０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約３５～４５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約２５～３５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約２０～３０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約４５～６５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約５～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約２５～４０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約４０～６０ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約５～１５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約３５～４５ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～３ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約３０～６０ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約０～３０ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約１５～５０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．０１～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約１０～７５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約０．５～５０ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約５～６０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．１～２０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約５０～６５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約３～１５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約３０～４０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～２ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約５０～８５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約３～１５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約３０～４０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～２ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約２５～７５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約０．１～１５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約５～５０ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～２０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約５０～６５ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約５～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約２５～３５ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約５～１０ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約２０～６０ｍｏｌ％の少なくとも１つのカチオン性脂質、約５～２５ｍｏｌ％の少なくとも１つの非カチオン性脂質（例えば、リン脂質）、約２５～５５ｍｏｌ％の少なくとも１つのステロール（例えば、コレステロール）、及び約０．５～１５ｍｏｌ％の少なくとも１つの粒子活性修飾剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、それらの形状によって特性化され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本質的に球状である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本質的に棒形状（すなわち、シリンダー状）である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本質的にディスク形状である。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、それらのサイズによって特性化され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰのサイズは、単にその直径として本明細書において言及される、その最も大きな環状断面の直径として定義され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、３０ｎｍ～約１５０ｎｍの直径を有し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、４０～１５０ｎｍ、５０～１５０ｎｍ、６０～１５０ｎｍ、約７０～１５０ｎｍ、または８０～１５０ｎｍ、９０～１５０ｎｍ、１００～ｎｍ、１１０～１５０ｎｍ、１２０～１５０ｎｍ、１３０～１５０ｎｍ、１４０～１５０ｎｍ、３０～３０～１４０ｍｏｌ％、４０～１４０ｍｏｌ％、５０～１４０ｍｏｌ％、６０～１４０ｍｏｌ％、７０～１４０ｍｏｌ％、８０～１４０ｍｏｌ％、９０～１４０ｍｏｌ％、１００～１４０ｍｏｌ％、１１０～１４０ｍｏｌ％、１２０～１４０ｍｏｌ％、１３０～１４０ｍｏｌ％、１４０～１４０ｍｏｌ％、３０～１４０ｍｏｌ％、４０～１３０ｍｏｌ％、５０～１３０ｍｏｌ％、６０～１３０ｍｏｌ％、７０～１３０ｍｏｌ％、８０～１３０ｍｏｌ％、９０～１３０ｍｏｌ％、１００～１３０ｍｏｌ％、１１０～１３０ｍｏｌ％、１２０～１３０ｍｏｌ％、３０～１２０ｍｏｌ％、４０～１２０ｍｏｌ％、５０～１２０ｍｏｌ％、６０～１２０ｍｏｌ％、７０～１２０ｍｏｌ％、８０～１２０ｍｏｌ％、９０～１２０ｍｏｌ％、１００～１２０ｍｏｌ％、１１０～１２０ｍｏｌ％、３０～１１０ｍｏｌ％、４０～１１０ｍｏｌ％、５０～１１０ｍｏｌ％、６０～１１０ｍｏｌ％、７０～１１０ｍｏｌ％、８０～１１０ｍｏｌ％、９０～１１０ｍｏｌ％、１００～１１０ｍｏｌ％、３０～１００ｍｏｌ％、４０～１００ｍｏｌ％、５０～１００ｍｏｌ％、６０～１００ｍｏｌ％、７０～１００ｍｏｌ％、８０～１００ｍｏｌ％、９０～１００ｍｏｌ％、３０～９０ｍｏｌ％、４０～９０ｍｏｌ％、５０～９０ｍｏｌ％、６０～９０ｍｏｌ％、７０～９０ｍｏｌ％、８０～９０ｍｏｌ％、３０～８０ｍｏｌ％、４０～８０ｍｏｌ％、５０～８０ｍｏｌ％、６０～８０ｍｏｌ％、７０～８０ｍｏｌ％、３０～７０ｍｏｌ％、４０～７０ｍｏｌ％、５０～７０ｍｏｌ％、６０～７０ｍｏｌ％、３０～６０ｍｏｌ％、４０～６０ｍｏｌ％、５０～６０ｍｏｌ％、３０～５０ｍｏｌ％、４０～５０ｍｏｌ％、及び３０～４０ｍｏｌ％の範囲の直径を有し得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰの集団、例えば、同じ製剤に起因するものは、集団における粒子のサイズ、形状、または質量の均一性を測定することによって特性化され得る。均一性は、いくつかの実施形態では、集団の多分散指数（ＰＩ）として表され得る。いくつかの実施形態では、均一性は、いくつかの実施形態では、集団の差違（Ｄ）として表され得る。用語「多分散指数」及び「差違」は、同等であることが本明細書で理解され、互換的に使用され得る。いくつかの実施形態では、所与の製剤に起因するＬＮＰの集団は、約０．１～１のＰＩを有する。いくつかの実施形態では、所与の製剤に起因するＬＮＰの集団は、約１未満、約０．５未満、約０．４未満、約０．３未満、約０．２未満、約０．１未満のＰＩを有する。いくつかの実施形態では、所与の製剤に起因するＬＮＰの集団は、約０．１～１、０．１～０．８、０．１～０．６、０．１～０．４、０．１～０．２、０．２～１、０．２～０．８、０．２～０．６、０．２～０．４、０．４～１、０．４～０．８、０．４～０．６、０．６～１、０．６～０．８、及び０．８～１のＰＩを有する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本開示のオリジネーターコンストラクト及びベンチマークコンストラクト等のカーゴを十分にまたは部分的に封入し得る。いくつかの実施形態では、最終製剤に存在するカーゴの本質的に０％は、ＬＮＰの外側の環境に露出している（すなわち、カーゴは、完全に封入されている。いくつかの実施形態では、カーゴは、ＬＮＰに関連付けられているが、ＬＮＰの外側の環境に少なくとも部分的に露出している。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＬＮＰの外側の環境に露出していないカーゴの％、例えば、封入効率によって特性化され得る。明確性のため、約１００％の封入効率は、カーゴの本質的にすべてがＬＮＰによって十分に封入されているＬＮＰ製剤を指すのに対し、約０％の封入率は、カーゴがＬＮＰの外部表面に結合しているＬＮＰのように、カーゴの実質的にいずれもがＬＮＰに封入されていないＬＮＰを指す。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約１００％未満、約９５％未満、約８５％未満、約８０％未満、約７５％未満、約７０％未満、約６５％未満、約６０％未満、約５５％未満、約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または５％未満の封入効率を有し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約９０～１００％、８０～１００％、７０～１００％、６０～１００％、５０～１００％、４０～１００％、３０～１００％、２０～１００％、１０～１００％、８０～９０％、７０～９０％、６０～９０％、５０～９０％、４０～９０％、３０～９０％、２０～９０％、１０～９０％、７０～８０％、６０～８０％、５０～８０％、４０～８０％、３０～８０％、２０～８０％、１０～８０％、６０～７０％、５０～７０％、４０～７０％、３０～７０％、２０～７０％、１０～７０％、４０～５０％、３０～５０％、２０～５０％、１０～５０％、３０～４０％、２０～４０％、１０～４０％、２０～３０％、１０～３０％、及び１０～２０％の封入効率を有し得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰには、図５に示されているように少なくとも１つの識別子部位が含まれ得る。識別子部位の非限定的な例には、グリカン、抗体、ペプチド、小分子、及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、脂質ベースのナノ粒子の脂質膜に組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、ナノ粒子の外部表面に提示され得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、ナノ粒子の脂質成分にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、ナノ粒子のポリマー成分にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、少なくとも１つの標的化剤、ナノ粒子膜、及びナノ粒子の内側または外側の水性環境間で疎水性及び親水性相互作用を介してナノ粒子に固定され得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、ナノ粒子膜のペプチド／タンパク質成分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの標的化剤は、ナノ粒子膜の成分にコンジュゲートされた好適なリンカー部位にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、力及び結合の任意の組み合わせは、ナノ粒子に関連付けられている標的化剤をもたらし得る。
本明細書に記載のＬＮＰは、当該技術分野で知られている技術を使用して形成され得る。非限定的な例として、脂質を含有する有機溶液が、マイクロ流体チャネルにおいてオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを含有する酸性水溶液と一緒に混合され、標的化システム（送達ビヒクル及びベンチマークコンストラクト）の形成をもたらす。
いくつかの実施形態では、各ＬＮＰ製剤には、独自に識別可能なヌクレオチド識別子配列（例えば、バーコード）を有するベンチマークコンストラクトが含まれる。独自の識別子配列は、所望の結果を生み出す特定のＬＮＰを識別する能力を提供する。ＬＮＰ製剤はまた、ＬＮＰを生成するために使用されるＬＮＰ形成組成物が異なり得る。例えば、ＬＮＰ形成組成物は、イオン化可能な脂質のモル量及び／または構造、ヘルパー脂質のモル量及び／または構造、ＰＥＧのモル量／または構造、及び／またはコレステロールのモル量が様々であり得る。追加的に、または代替的に、ＬＮＰ製剤は、生物学的に活性な分子のためのコード配列が異なるベンチマークコンストラクトを含み得る。追加的に、または代替的に、ＬＮＰ製剤は、核酸配列になされた修飾が異なるベンチマークコンストラクトを含み得る。
いくつかの実施形態では、脂質組成物は、製剤における成分脂質のそれぞれのモル比に従って記載される。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約８０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約２０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、トランスファービヒクルバッチのイオン化可能な脂質ｍｏｌ％は、標的ｍｏｌ％の±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％、±５％、または±２．５％となる。いくつかの実施形態では、ロット間のトランスファービヒクル変動は、１５％未満、１０％未満または５％未満となる。
いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約２ｍｏｌ％～約４５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約３ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約４ｍｏｌ％～約３５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約５ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、トランスファービヒクルバッチのヘルパー脂質ｍｏｌ％は、標的ｍｏｌ％の±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％、±５％、または±２．５％となる。
いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約８０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約２０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、トランスファービヒクルバッチの構造脂質ｍｏｌ％は、標的ｍｏｌ％の±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％、±５％、または±２．５％である。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質のｍｏｌ％は、約０．１ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質のｍｏｌ％は、約０．２ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質のｍｏｌ％は、約０．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質のｍｏｌ％は、約１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質のｍｏｌ％は、約１．５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、トランスファービヒクルバッチのＰＥＧ修飾脂質ｍｏｌ％は、標的ｍｏｌ％の±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％、±５％、または±２．５％となる。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＷＯ２０２１１１３７７７（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の脂質ナノ粒子のいずれかであり得る。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、ＷＯ２０２１１１３７７７（その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）におけるイオン化可能な脂質（例えば、アミン脂質）、ＰＥＧ脂質、非カチオン性（ヘルパー）脂質、または構造脂質のいずれかを含む脂質ナノ粒子である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、国際公開番号ＷＯ２０１１１２７２５５またはＷ０２００８１０３２７６（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって調製され得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、国際公開番号Ｗ０２０１９１３１７７０（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているとおりであり得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、国際公開番号ＷＯ２０２０２３７２２７（これらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって調製され得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、国際公開番号ＷＯ２０２０２３７２２７（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているとおりであり得る。
非脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、非脂質ベースのナノ粒子である。非脂質ベースのナノ粒子には、ケイ素ベースのナノ粒子（すなわち、多孔性ケイ素ナノ粒子）、金ナノ粒子、ポリペプチドベースのナノ粒子、ヌクレオチドベースのナノ粒子、及び炭素ベースのナノ粒子が含まれるがこれらに限定されない。
エクソソーム
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのエクソソームを含む。本明細書で使用される場合、「エクソソーム」は、エンドサイトーシス起源を有する小さな膜結合ベシクルを指す。理論に縛られることを望むものではなく、エクソソームは通常、細胞膜への多小胞体の融合後に宿主／前駆細胞から細胞外環境に放出される。このように、エクソソームは、設計された成分及びカーゴに加えて、前駆膜の成分を含む傾向がある。エクソソーム膜は通常、層状であり、水性のナノ粒子間空間を有する脂質の二重層から構成される。
いくつかの実施形態では、エクソソームには、図５に示されているように少なくとも１つの識別子部位が含まれ得る。識別子部位の非限定的な例には、グリカン、抗体、ペプチド、小分子、及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
リポソーム
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのリポソームを含む。本明細書で使用される場合、「リポソーム」は、通常は祖先／宿主細胞に由来しない水性内部ナノ粒子空間を取り囲む少なくとも１つの脂質二重層膜を含む小さなベシクルである。リポソームは、狭い水性空間によって分離された一連の同心二重層を含む潜在的に直径が数百ナノメートルの（大型）多層状ベシクル（ＭＬＶ）、潜在的に直径が５０ｎｍよりも小さな小型単細胞ベシクル（ＳＵＶ）、潜在的に直径が５０～５００ｎｍの大型単層状ベシクル（ＬＵＶ）であり得る。いくつかの実施形態では、リポソームは、主にそれらの製造方法が異なる、脂質ナノ粒子と同じ成分及び同じ成分量のあらゆるものを含み得る。
ミセル
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのミセルを含む。本明細書で使用される場合、「ミセル」は、水性粒子内空間を有する小さな粒子を指す。理論に縛られることを望むものではなく、ミセルの内部粒子空間は、任意の追加の脂質－頭部基ではなく、ミセル膜及び可能性のある関連するカーゴを含む脂質の疎水性テールによって占有される。いくつかの実施形態では、ミセルは、主にそれらの製造方法が異なる、脂質ナノ粒子と同じ成分のあらゆるものを含み得る。
いくつかの実施形態では、ミセルには、図５に示されているように少なくとも１つの識別子部位が含まれ得る。識別子部位の非限定的な例には、グリカン、抗体、ペプチド、小分子、及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
ウイルス粒子
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのウイルス様粒子を含む。本明細書で使用される場合、「ウイルス様粒子」は、主にカーゴ部位がロードされ得るウイルスに由来するタンパク質カプシド、シース、シェル、またはコート（すべてが本明細書で互換的に使用される）のベシクルを指す。通常、ウイルス様粒子は、非感染性であり、ウイルスカプシドタンパク質配列を発現するように細胞機構を使用して合成され得、これは次いで自己構築し、関連付けられたカーゴ部位を組み込むが、発現関連細胞機構を伴わずにカプシド及びカーゴ成分を提供し、それらが自己構築することを可能とすることによってウイルス様粒子を形成することが可能である。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、限定されないが、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、及びバクテリオファージ等のウイルスの種の少なくとも１つに由来し得る。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、アデノ随伴ウイルス、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＰＶ、またはそれらの任意の組み合わせに由来し得る。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＡＡＶ粒子であり、ＡＡＶ粒子には、図５に示されているように少なくとも１つの識別子部位が含まれ得る。識別子部位の非限定的な例には、グリカン、抗体、ペプチド、小分子、及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
ポリマー送達技術
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、少なくとも１つのポリマー送達剤を含み得る。本明細書で使用される場合、「ポリマー送達剤」は、様々な結合基を介してカーゴ部位にコンジュゲートされた可溶性ポリマーを含む非凝集送達剤を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー送達剤は、本明細書に記載のポリマーのいずれかを含み得る。
トラッキングシステム
本明細書に開示される指向性発見プラットフォームは、投与後に送達ビヒクル及び／またはベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードの定量を可能とするために、識別子配列及び部位（「バーコード」とも称される）を含む多様なトラッキングシステムを利用し得る。
いくつかの実施形態では、トラッキングシステムは、単一の識別子配列または部位である。識別子配列または部位は、送達ビヒクル、ベンチマークコンストラクト、カーゴもしくはペイロード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、プロモーター領域またはテール領域に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクト内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、５’ＵＴＲ内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、３’ＵＴＲ内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、プロモーター領域内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ペイロード領域内または上に位置し得る。非限定的な例として、識別子配列または部位は、テール領域内または上に位置し得る。
いくつかの実施形態では、トラッキングシステムは、送達ビヒクルのための第１の識別子配列または部位及びベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードのための第２の識別子配列または部位を有する識別子配列または部位のセットである。第１及び第２の識別子配列または部位は、同じまたは異なり得る。追加のベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードが送達ビヒクルに存在する場合、そのときは各ベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードは、それ自体の識別子配列または部位を有し得、またはそれは、第２の識別子配列または部位と同じであり得る。
いくつかの実施形態では、指向性発見プラットフォームは、複数のトラッキングシステムを含み、各トラッキングシステムは、異なる分解レベルで送達ビヒクル及び／またはベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードを検出することを可能とする。
いくつかの実施形態では、トラッキングシステムは、少なくとも１つのバーコード配列を含む。本明細書で使用される場合、「バーコード」または「バーコード配列」は、当該技術分野で知られている方法を使用して検出され得る任意の配列であり、細胞、組織、器官及び／または生物における配列または投与されている任意の配列とは区別される。バーコード配列は、送達ビヒクル及び／またはベンチマークコンストラクト、カーゴ及びペイロードに含まれ、または結合され得る。非限定的な例として、送達ビヒクルは、バーコード配列を含む。非限定的な例として、カーゴまたはペイロードは、バーコード配列を含む。非限定的な例として、ベンチマークコンストラクトは、バーコード配列を含む。
いくつかの実施形態では、標的化システムにおける識別子配列または部位の位置は、ランダムである。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、カーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクト及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル、ベンチマークコンストラクト、及びカーゴまたはペイロードにある。
いくつかの実施形態では、標的化システムにおける識別子配列または部位の位置は、事前決定される。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、カーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクト及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル、ベンチマークコンストラクト、及びカーゴまたはペイロードにある。
いくつかの実施形態では、標的化システムにおける識別子配列または部位の位置は、逆にされている。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクルにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、カーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びベンチマークコンストラクトにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、ベンチマークコンストラクト及びカーゴまたはペイロードにある。非限定的な例として、識別子配列または部位は、送達ビヒクル、ベンチマークコンストラクト、及びカーゴまたはペイロードにある。
いくつかの実施形態では、識別子配列は、ディープシーケンシング中に複製を回避するように機能するランダムに生成された配列である。いくつかの実施形態では、識別子配列は、ヌクレオチドまたはアミノ酸の繰り返し配列である。いくつかの実施形態では、識別子配列は、限定されないが、カーゴまたはペイロード等のより大きな配列の断片である。識別子配列は、合成技術を使用して利用可能な任意の長さに設計され得る（Ｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，ＡｍｐＵＭＩ：ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｕｎｉｑｕｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ ｆｏｒ ｄｅｅｐ ａｍｐｌｉｃｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ３４，Ｉｓｓｕｅ １３，０１ Ｊｕｌｙ ２０１８，Ｐａｇｅｓ ｉ２０２－ｉ２１０（その内容は、本明細書その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、識別子配列は、２～１０００ヌクレオチドの長さを有する。例えば、識別子配列は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００ヌクレオチドまたは１０００ヌクレオチド超の長さを有し得る。識別子配列は、２～５、２～１０、２～１５、２～２０、２～３０、２～５０、２～７０、２～９０、２～１００、２～２５０、２～３００、２～３５０、２～４００、２～４５０、２～５００、２～５５０、２～６００、２～６５０、２～７００、２～７５０、２～８００、２～８５０、２～９００、２～９５０、２～１０００、５～１０、５～１５、５～２０、５～３０、５～５０、５～７０、５～９０、５～１００、５～２５０、５～３００、５～３５０、５～４００、５～４５０、５～５００、５～５５０、５～６００、５～６５０、５～７００、５～７５０、５～８００、５～８５０、５～９００、５～９５０、５～１０００、１０～３０、１０～５０、１０～７０、１０～９０、１０～１００、１０～２５０、１０～３００、１０～３５０、１０～４００、１０～４５０、１０～５００、１０～５５０、１０～６００、１０～６５０、１０～７００、１０～７５０、１０～８００、１０～８５０、１０～９００、１０～９５０、１０～１０００、２０～３０、２０～５０、２０～７０、２０～９０、２０～１００、２０～２５０、２０～３００、２０～３５０、２０～４００、２０～４５０、２０～５００、２０～５５０、２０～６００、２０～６５０、２０～７００、２０～７５０、２０～８００、２０～８５０、２０～９００、２０～９５０、２０～１０００、３０～５０、３０～７０、３０～９０、３０～１００、３０～２５０、３０～３００、３０～３５０、３０～４００、３０～４５０、３０～５００、３０～５５０、３０～６００、３０～６５０、３０～７００、３０～７５０、３０～８００、３０～８５０、３０～９００、３０～９５０、３０～１０００、４０～５０、４０～７０、４０～９０、４０～１００、４０～２５０、４０～３００、４０～３５０、４０～４００、４０～４５０、４０～５００、４０～５５０、４０～６００、４０～６５０、４０～７００、４０～７５０、４０～８００、４０～８５０、４０～９００、４０～９５０、４０～１０００、５０～７０、５０～９０、５０～１００、５０～２５０、５０～３００、５０～３５０、５０～４００、５０～４５０、５０～５００、５０～５５０、５０～６００、５０～６５０、５０～７００、５０～７５０、５０～８００、５０～８５０、５０～９００、５０～９５０、５０～１０００、６０～７０、６０～９０、６０～１００、６０～２５０、６０～３００、６０～３５０、６０～４００、６０～４５０、６０～５００、６０～５５０、６０～６００、６０～６５０、６０～７００、６０～７５０、６０～８００、６０～８５０、６０～９００、６０～９５０、６０～１０００、７０～９０、７０～１００、７０～２５０、７０～３００、７０～３５０、７０～４００、７０～４５０、７０～５００、７０～５５０、７０～６００、７０～６５０、７０～７００、７０～７５０、７０～８００、７０～８５０、７０～９００、７０～９５０、７０～１０００、８０～９０、８０～１００、８０～２５０、８０～３００、８０～３５０、８０～４００、８０～４５０、８０～５００、８０～５５０、８０～６００、８０～６５０、８０～７００、８０～７５０、８０～８００、８０～８５０、８０～９００、８０～９５０、８０～１０００、９０～１００、９０～２５０、９０～３００、９０～３５０、９０～４００、９０～４５０、９０～５００、９０～５５０、９０～６００、９０～６５０、９０～７００、９０～７５０、９０～８００、９０～８５０、９０～９００、９０～９５０、９０～１０００、１００～２５０、１００～３００、１００～３５０、１００～４００、１００～４５０、１００～５００、１００～５５０、１００～６００、１００～６５０、１００～７００、１００～７５０、１００～８００、１００～８５０、１００～９００、１００～９５０、１００～１０００、１５０～２５０、１５０～３００、１５０～３５０、１５０～４００、１５０～４５０、１５０～５００、１５０～５５０、１５０～６００、１５０～６５０、１５０～７００、１５０～７５０、１５０～８００、１５０～８５０、１５０～９００、１５０～９５０、１５０～１０００、２００～２５０、２００～３００、２００～３５０、２００～４００、２００～４５０、２００～５００、２００～５５０、２００～６００、２００～６５０、２００～７００、２００～７５０、２００～８００、２００～８５０、２００～９００、２００～９５０、２００～１０００、２５０～３００、２５０～３５０、２５０～４００、２５０～４５０、２５０～５００、２５０～５５０、２５０～６００、２５０～６５０、２５０～７００、２５０～７５０、２５０～８００、２５０～８５０、２５０～９００、２５０～９５０、２５０～１０００、３００～３５０、３００～４００、３００～４５０、３００～５００、３００～５５０、３００～６００、３００～６５０、３００～７００、３００～７５０、３００～８００、３００～８５０、３００～９００、３００～９５０、３００～１０００、３５０～４００、３５０～４５０、３５０～５００、３５０～５５０、３５０～６００、３５０～６５０、３５０～７００、３５０～７５０、３５０～８００、３５０～８５０、３５０～９００、３５０～９５０、３５０～１０００、４００～４５０、４００～５００、４００～５５０、４００～６００、４００～６５０、４００～７００、４００～７５０、４００～８００、４００～８５０、４００～９００、４００～９５０、４００～１０００、４５０～５００、４５０～５５０、４５０～６００、４５０～６５０、４５０～７００、４５０～７５０、４５０～８００、４５０～８５０、４５０～９００、４５０～９５０、４５０～１０００、５００～５５０、５００～６００、５００～６５０、５００～７００、５００～７５０、５００～８００、５００～８５０、５００～９００、５００～９５０、５００～１０００、５５０～６００、５５０～６５０、５５０～７００、５５０～７５０、５５０～８００、５５０～８５０、５５０～９００、５５０～９５０、５５０～１０００、６００～６５０、６００～７００、６００～７５０、６００～８００、６００～８５０、６００～９００、６００～９５０、６００～１０００、６５０～７００、６５０～７５０、６５０～８００、６５０～８５０、６５０～９００、６５０～９５０、６５０～１０００、７００～７５０、７００～８００、７００～８５０、７００～９００、７００～９５０、７００～１０００、７５０～８００、７５０～８５０、７５０～９００、７５０～９５０、７５０～１０００、８００～８５０、８００～９００、８００～９５０、８００～１０００、８５０～９００、８５０～９５０、８５０～１０００、９００～９５０、９００～１０００、９５０～１０００または１０００を超えるヌクレオチドの長さを有し得る。
いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、投与の直後に検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、投与の後の不定量の時間、検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、投与後１日、２日、３日、４日、５日、６日または７日を超える間、検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、約１～２４時間、検出可能であるシグナルを生成し得る。非限定的な例として、シグナルは、約１～６、１～１２、１～１８、６～１２、６～１８、６～２４、または１８～２４時間、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４時間、検出可能であり得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、約１～６０分、例えば、限定されないが、１～５、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１０～２０、１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～６０、２０～３０、２０～４０、２０～５０、２０～６０、３０～４０、３０～５０、３０～６０、４０～５０、４０～６０、または５０～６０分、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０分の間、検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、投与後１分未満の間、検出可能であるシグナルを生成し得る。
いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、対象の身体外から検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、非侵襲的画像技術を介して、例えば、対象の器官または組織の外側であるが、対象の身体内で検出可能なシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、巨視的レベルで検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、顕微鏡的レベルで検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、ナノスケールレベルで検出可能であるシグナルを生成し得る。いくつかの実施形態では、識別子配列または部位は、標的細胞が採取され、非限定的な例として、質量分析計、電気泳動、フローサイトメトリー、またはディープシーケンシングを介して、アッセイされた後にのみ検出可能であるシグナルを生成し得る。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、識別子部位を含み、または識別子部位に機能可能に連結される。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、免疫細胞抗原に結合する識別子部位を含み、またはそれに機能可能に連結される。非限定的な例として、免疫細胞抗原は、Ｔ細胞抗原、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ４、ベータ７インテグリン、ベータ２インテグリン、及びＣ１ｑであり得る。非限定的な例として、免疫細胞抗原は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージまたは好中球であり得る。非限定的な例として、免疫細胞抗原は、マクロファージ抗原、例えば、マンノース受容体、ＣＤ２０６及びＣ１ｑであり得る。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、免疫細胞上の外酵素に結合する小分子である識別子部位を含み、またはそれに機能可能に連結される。外酵素は、ＣＤ３８、ＣＤ７３、アデノシン２ａ受容体及びアデノシン２ｂ受容体であり得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、小分子、例えば、限定されないが、マンノース、レクチン、アシビシン、ビオチン、またはジゴキシゲニンである識別子部位を含み、またはそれに機能可能に連結される。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、ナノボディ、ペプチド、ペプチドベースのマクロサイクル、ミニボディ、小分子リガンド（例えば、葉酸、アルギニルグリシルアスパラギン酸（ＲＧＤ）、またはフェノール可溶性モジュリンアルファ１ペプチド（ＰＳＭＡ１））、重鎖可変領域、軽鎖可変領域またはその断片である識別子部位を含み、またはそれに機能可能に連結される。
トラッキングシステム：蛍光
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、蛍光によって検出可能な識別子配列または部位を含む。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクルにおける少なくとも１つの蛍光色素の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの蛍光色素は、フルオレセイン、ＴＡＭＲＡ（カルボキシテトラメチルローダミン）、Ｃｙ色素、テキサスレッド、ＨＥＸ、ＪＯＥ、オレゴングリーン、ローダミン６Ｇ、クマリン、ピレン、及びＤｉＯＣ６（３，３’－ジヘキシルオキサカルボシアニンヨウ化物）から選択され得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクル内の、またはそれに関連付けられた少なくとも１つの蛍光タンパク質の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの蛍光タンパク質は、ベンチマークコンストラクトにおいてコードされ、またはベンチマークコンストラクトは、蛍光タンパク質を含む。蛍光タンパク質の非限定的な例には、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、Ｓｉｒｉｕｓ、励起可能な青色蛍光タンパク質（ＥＢＦＰ２）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、励起可能な緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）、励起可能な黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ）、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＰｌｕｍ、ＮＩＲ、ｉＲＦＰ、ＥｏｓＦＰ、ＰａｍＣｈｅｒｒｙ、Ｄｒｏｎｐａ、Ｄｒｅｉｋｌａｎｇ、ａｓＦＰ５９５、ｍＭａｐｌｅ、ｍＧｅｏ、ｍＥｏｓ２、Ｄｅｎｄｒａ２、ｐｓＣＦＰ２、及び２，３，５，６－テトラカルバゾール－４－シアノ－ピリジン（ＣＰｙ）が含まれる。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクルまたはベンチマークコンストラクトに関連付けられた少なくとも１つの蛍光ナノ粒子の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、蛍光ナノ粒子は、炭素ドット、グラフェン量子ドット、金ナノロッド、ポリマーベースのナノ粒子、凝集誘起発光ドット、コンジュゲートされたポリマーナノ粒子（ＣＰ－ドット）、金ナノスフィア、金ナノシェル、金ナノケージ、及びＡＩＥフェロモンであり得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの蛍光脂質の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、蛍光脂質は、ＤｉＲ、ＤｉＤ、ＤｉＯ、及びＤｉＩ、リン脂質のＤｉシリーズの他のメンバー、Ｂｏｄｉｐｙ、及びＦＬ－スフィンゴミエリンであり得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクル内の、またはそれに関連付けられた少なくとも１つのルシフェラーゼの包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのルシフェラーゼタンパク質は、ベンチマークコンストラクトにおいてコードされ、またはベンチマークコンストラクトは、ルシフェラーゼを含む。使用され得るルシフェラーゼのタイプの非限定的な例には、ウミシイタケルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼ、Ｎａｎｏｌｕｃルシフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、及びコメツキムシルシフェラーゼが含まれる。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれるβ－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのβ－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）タンパク質は、ベンチマークコンストラクトにおいてコードされ、またはベンチマークコンストラクトは、β－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）を含む。
いくつかの実施形態では、蛍光は、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのクエンチャー分子の包含を介して達成される。いくつかの実施形態では、蛍光は、ベンチマークコンストラクトに関連付けられたまたはそれによってコードされる少なくとも１つのクエンチャー分子の包含を介して達成される。クエンチャー分子の非限定的な例には、ジメチルアミノフェニルアゾ安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、ＱＳＹ７、Ｃｕ（ＩＩ）イオン、Ｄａｂｃｙｌ、ＱＳＹ３５、ＢＨＱ－０、Ｅｃｌｉｐｓｅ、ＢＨＱ－１、ＱＳＹ９、ＢＨＱ－２、ＥｌｌｅＱｕｅｎｃｈｅｒ、Ｉｏｗａ Ｂｌａｃｋ、ＱＳＹ２１、及びＢＨＱ－３が含まれる。
トラッキングシステム：フルオロフォア及び放射性ホスフェート
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、フルオロフォアまたは放射性ホスフェートである識別子配列または部位を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのフルオロフォアの包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのフルオロフォアの包含を含む。フルオロフォアの非限定的な例には、量子ドット及び有機小分子が含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの量子ドットの包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つの量子ドットの包含を含む。量子ドットの非限定的な例には、ＣｄＳｅ／ＺｎＳ、ＣｄＴｅ／ＺｎＳ、ＣｄＴｅ／ＣｄＳｅ、ＣｄＳｅ／ＺｎＴｅ、ＣｄＳｅ／ＣｄＴｅ／ＺｎＳｅ、ｎＡｓ／ＺｎＳｅ、ＩｎＡｓ／ＣｄＳｅ、ＩｎＡｓ／ＩｎＰ、Ｃｕ：ＩｎＰ／ＺｎＳｅ、ＩｎＡｓｘＰ１－ｘ／ＩｎＰ／ＺｎＳｅ、ＣｄＳ／ＣｄＳｅ、ＺｎＳｅ／ＣｄＳｅ、ＺｎＳｅ／ＩｎＰ／ＺｎＳ、ＺｎＳｅ／ＩｎＰ／ＺｎＳ、ＣｄＴｅ／ＺｎＳｅ、ＱＤ５８５、及びＱＤ６５５が含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの有機小分子の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つの有機小分子の包含を含む。有機小分子の非限定的な例には、クマリン、ナフタルイミド、フルオレセイン及びローダミン誘導体、ＢＯＤＩＰＹ、シアニン、キサンテン、オキサジン、オリゴチオフェン、及びフタロシアニン誘導体（ＰｃＤｅｒ）のクラスが含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの有機小分子は、７－ジアルキル－アミノ－４－トリフルオロメチルクマリン、ローダミンＢ、クマリン３１４、ルシファーイエローＣＨ、フルオレセイン、ローダミン１２３、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ ＮＨＳエステル、Ｃｙ５、ローダミン６Ｇ、ケイ素－ローダミン（ＳｉＲ）、Ｃｙ３、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｃｙ２、ＡＴＴＯ６５５、ＡＴＴＯ６８０、ＡＴＴＯ７００、ニトロベンゾキサジアゾール（ＮＢＤ）、１，６－ジフェニル－１，３，５－ヘキサトリエン（ＤＰＨ）、ＡＢＢＥＲＩＯＲ（商標）、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（商標）、ＡＴＴＯ（商標）、ＤＹＬＩＧＨＴ ＦＬＵＯＲ（商標）、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ ６４７（商標）、及びＴＯＰＦＬＵＯＲ（商標）から選択され得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの画像化造影剤の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つの画像化造影剤の包含を含む。画像化造影剤の非限定的な例には、ガドリニウムベースの小分子、ガドリニウム封入リポソーム、マンガンベースの小分子、及び酸化鉄ナノ粒子が含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの放射性標識の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つの放射性標識の包含を含む。放射性標識の非限定的な例には、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、１３Ｎ、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、７２Ａｓ、１２４Ｉ、７４Ａｓ、フッ素－１８、ガリウム－６８、窒素－１３、銅－６４、臭素－７６、ヨウ素－１２５、ヒ素－７４、炭素－１１、ヨウ素－１３１、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９８Ａｕ、及び２２５Ａｃが含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのビオチンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのジゴキシゲニンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのジニトロフェニル（ＤＮＰ）の包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのフルオレセインの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのフコースの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのアミンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのテキサスレッド（登録商標）の包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのビオチンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのジゴキシゲニンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのジニトロフェニル（ＤＮＰ）の包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのフルオレセインの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのフコースの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのアミンの包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのテキサスレッド（登録商標）の包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つのレポーター配列またはタンパク質の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つのレポーター配列またはタンパク質の包含を含む。レポーター配列またはタンパク質の非限定的な例には、ｅＧＦＰ、ルシフェラーゼ、遺伝子編集体（例えば、ｃａｓ９編集、ＤＮＡリードアウト）、ｏｘ－４０、ベータ６インテグリン、ＣＤ４５、ＨＡタグを有する表面マーカー、ＴＥＶプロテアーゼ部位を有するまたは有しないフラッグタグ、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられたまたはそれに含まれる少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられた、それにコードされるまたはそれに含まれる少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。機能的配列またはタンパク質の非限定的な例には、蛍光タンパク質、表面タンパク質、Ｃｒｅ－リコンビナーゼ、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳシステム、エピトープタグ（例えば、ＨＡ、ＦＬＡＧ等）を有する表面タンパク質またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられ、またはそれに含まれ得るプロテアーゼ切断部位（例えば、ＴＥＶ）を含む少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられ、それにコードされ、またはそれに含まれ得るプロテアーゼ切断部位（例えば、ＴＥＶ）を含む少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、送達ビヒクルに関連付けられ、またはそれに含まれ得る親和性タグ（例えば、３ｘＨＡ、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ）を含む少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのトラッキングシステムは、ベンチマークコンストラクトに関連付けられ、それにコードされ、またはそれに含まれ得る親和性タグ（例えば、３ｘＨＡ、ＦＬＡＧ、Ｈｉｓ）を含む少なくとも１つの機能的配列またはタンパク質の包含を含む。
Ｖ．薬学的組成物及び投与経路
薬学的組成物及び製剤
オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、（１）安定性を増加させる；（２）細胞トランスフェクションまたは形質導入を増加させる；（３）ペイロードの持続または遅延した発現を可能とする；（４）生体内分布を改変する（例えば、ウイルス粒子を特定の組織または細胞タイプに標的化する）；（５）コードされるタンパク質の翻訳を増加させる；（６）コードされるタンパク質の放出プロファイルを改変する；及び／または（７）カーゴ及び／またはペイロードの制御可能な発現を可能とするための１つ以上の賦形剤を使用して製剤化され得る。
製剤には、限定されないが、生理食塩水、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、ペプチド、タンパク質、ウイルスベクター（例えば、対象への移行または移植用）でトランスフェクションされた細胞及びそれらの組み合わせが含まれ得る。
本明細書に記載の薬学的組成物の製剤は、薬理学の技術分野で知られているまたは後に開発される任意の方法によって調製され得る。本明細書で使用される場合、用語「薬学的組成物」は、少なくとも１つの活性成分及び任意に１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物を指す。
通常、そのような調製方法には、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の付随成分に関連付ける工程が含まれる。本明細書で使用される場合、語句「活性成分」は通常、本明細書に記載されるペイロード領域またはカーゴまたはペイロードを有するオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトのいずれかを指す。
本明細書に記載のオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムならびに薬学的組成物の製剤は、薬理学の技術分野で知られているまたは後に開発される任意の方法によって調製され得る。通常、そのような調製方法には、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の付随成分に関連付け、次いで、必要に応じて及び／または所望により、生成物を所望の単一または複数の用量単位に分割、成形及び／または包装する工程が含まれる。
本開示による薬学的組成物は、バルクで、単回単位用量として、及び／または複数の単回単位用量として調製され、包装され、及び／または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、既定の量の活性成分を含む薬学的組成物の個別の量を指す。活性成分の量は、通常、対象に投与されるであろう活性成分の投薬量、及び／または、例えば、そのような投薬量の２分の１または３分の１等のそのような投薬量の好都合な分数と同等である。
いくつかの実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋であり得る。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトのための使用のために及び獣医学的使用のために承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている場合がある。いくつかの実施形態では、賦形剤は、薬学的グレードのものであり得る。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たし得る。
本開示による薬学的組成物における活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／または任意の追加の成分の相対量は、処置されている対象の同一性、サイズ、及び／または状態に応じて、及びさらに組成物が投与される経路に応じて様々であり得る。例えば、組成物は、０．１％～９９％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。例として、組成物は、０．１％～１００％、例えば、０．５～５０％、１～３０％、５～８０％、または少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
１つの態様では、本開示は、本明細書に開示される治療的ペイロードの送達のための送達システムをさらに提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療的ペイロードの送達のための好適な送達システムは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰは、イオン化可能な脂質、構造脂質、ＰＥＧ化脂質（別名ＰＥＧ脂質）、及びリン脂質を含む。代替的実施形態では、ＬＮＰは、イオン化可能な脂質、構造脂質、ＰＥＧ化脂質（別名ＰＥＧ脂質）、及び双性イオン性アミノ酸脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、前述した脂質成分のいずれかに加えて、５番目の脂質をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本開示の活性剤の１つ以上の要素を封入する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＬＮＰの外側表面に共有結合的または非共有結合的に結合した標的化部位をさらに含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、特定の器官システムの細胞に結合する、またはそうでなければその細胞による取り込みを容易化する標的化部位である。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、少なくとも約２０ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、または９０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、または１６０ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約１００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約９０ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約８０ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約６０～１００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、約７５～８０ｎｍの直径を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子組成物は、製剤における成分脂質のそれぞれのモル比に従って記載される。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約８０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約２０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％であり得る。非限定的な例として、イオン化可能な脂質のｍｏｌ％は、約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。
いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約２ｍｏｌ％～約４５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約３ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約４ｍｏｌ％～約３５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約５ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、リン脂質のｍｏｌ％は、約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％であり得る。
いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％～約８０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約２０ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質のｍｏｌ％は、約０．１ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質のｍｏｌ％は、約０．２ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質のｍｏｌ％は、約０．５ｍｏｌ％～約３ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質のｍｏｌ％は、約１ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質のｍｏｌ％は、約１．５ｍｏｌ％であり得る。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子には、イオン化可能な脂質、リン脂質、ＰＥＧ脂質、及び構造脂質が含まれる。所定の実施形態では、ナノ粒子組成物の脂質成分には、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれ、但し、総ｍｏｌ％は、１００％を超えない。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物の脂質成分には、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれる。特定の実施形態では、脂質成分には、約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれる。別の特定の実施形態では、脂質成分には、約４０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約２０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれる。別の特定の実施形態では、脂質成分には、約４８．５ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約４０ｍｏｌ％の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれる。別の特定の実施形態では、脂質成分には、約４８．５ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３９ｍｏｌ％の構造脂質、及び約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質が含まれる。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣであり得る。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧであり得、及び／または構造脂質は、コレステロールであり得る。ナノ粒子組成物における活性剤の量は、ナノ粒子組成物のサイズ、組成、所望の標的及び／または適用、または他の特性ならびに活性剤の特性に依存し得る。例えば、ナノ粒子組成物において有用な活性剤の量は、活性剤のサイズ、配列、及び他の特徴に依存し得る。ナノ粒子組成物における活性剤及び他の要素（例えば、脂質）の相対量はまた、様々であり得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物における脂質成分の酵素に対するｗｔ／ｗｔ比は、約５：１～約６０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１であり得る。ナノ粒子組成物における酵素の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外－可視分光法）を使用して測定され得る。
いくつかの実施形態では、本開示の活性剤を含むナノ粒子組成物は、特定のＥ：Ｐ比を提供するように製剤化される。組成物のＥ：Ｐ比は、ＲＮＡ活性剤におけるホスフェート基の数に対する１つ以上の脂質における窒素原子のモル比を指す。通常、より低いＥ：Ｐ比が好ましい。１つ以上の酵素、脂質、及びその量は、約２：１～約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１のＥ：Ｐ比を提供するように選択され得る。所定の実施形態では、Ｅ：Ｐ比は、約２：１～約８：１であり得る。他の実施形態では、Ｅ：Ｐ比は、約５：１～約８：１である。例えば、Ｅ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であり得る。
ナノ粒子組成物の特徴は、その成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含むナノ粒子組成物は、異なる構造脂質を含むナノ粒子組成物とは異なる特徴を有し得る。同様に、ナノ粒子組成物の特徴は、その成分の絶対または相対量に依存し得る。例えば、より高いモル分率のリン脂質を含むナノ粒子組成物は、より低いモル分率のリン脂質を含むナノ粒子組成物とは異なる特徴を有し得る。特徴はまた、ナノ粒子組成物の調製の方法及び条件に応じて様々であり得る。ナノ粒子組成物は、多様な方法によって特性化され得る。例えば、顕微鏡検査（例えば、透過電子顕微鏡検査または走査電子顕微鏡検査）は、ナノ粒子組成物の形態及びサイズ分布を調べるために使用され得る。動的光散乱または電位差測定（例えば、電位差滴定）は、ゼータ電位を測定するために使用され得る。動的光散乱はまた、粒子サイズを決定するために利用され得る。ナノ粒子組成物の複数の特徴、例えば、粒子サイズ、多分散指数、及びゼータ電位を測定するためにＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）等の機器も使用され得る。
ナノ粒子組成物の平均サイズは、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定される、１０ｓのｎｍ～１００ｓのｎｍであり得る。例えば、平均サイズは、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであり得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物の平均サイズは、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍ～約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約６０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。所定の実施形態では、ナノ粒子組成物の平均サイズは、約７０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。特定の実施形態では、平均サイズは、約８０ｎｍであり得る。他の実施形態では、平均サイズは、約１００ｎｍであり得る。
ナノ粒子組成物は、相対的に均質であり得る。多分散指数は、ナノ粒子組成物の均一性、例えば、ナノ粒子組成物の粒子サイズ分布を示すために使用され得る。低い（例えば、０．３未満の）多分散指数は通常、狭い粒子サイズ分布を示す。ナノ粒子組成物は、約０～約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５の多分散指数を有し得る。
ナノ粒子組成物のゼータ電位は、組成物の動電学的潜在性を示すために使用され得る。例えば、ゼータ電位は、ナノ粒子組成物の表面電荷を表し得る。より高く荷電した種は、細胞、組織、及び身体における他の要素と不要に相互作用し得るので、比較的低い電荷（正または負）を有するナノ粒子組成物が通常所望である。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物のゼータ電位は、約－１０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－１０ｍＶ～約０ｍＶ、約－１０ｍＶ～約－５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約－５ｍＶ～約＋５ｍＶ、約－５ｍＶ～約０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ～約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ～約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ～約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ～約＋１０ｍＶであり得る。
ペイロードの封入の効率は、提供される初期量と比べて、調製の後のナノ粒子組成物に封入されたまたはそうでなければ関連付けられたペイロードの量を表す。封入効率は、望ましくは高い（例えば、１００％に近い）。封入効率は、例えば、ナノ粒子組成物を１つ以上の有機溶媒または洗浄剤で分解する前または後にナノ粒子組成物を含有する溶液におけるペイロードの量を比較することによって測定され得る。蛍光は、溶液中の遊離ペイロードの量を測定するために使用され得る。本明細書に記載のナノ粒子組成物のため、治療剤及び／または予防剤の封入効率は、少なくとも５０％、例えば５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、封入効率は、少なくとも８０％であり得る。所定の実施形態では、封入効率は、少なくとも９０％であり得る。
脂質及びそれらの調製方法は、例えば、米国特許番号８，５６９，２５６、５，９６５，５４２及び米国特許公開番号２０１６／０１９９４８５、２０１６／０００９６３７、２０１５／０２７３０６８、２０１５／０２６５７０８、２０１５／０２０３４４６、２０１５／０００５３６３、２０１４／０３０８３０４、２０１４／０２００２５７、２０１３／０８６３７３、２０１３／０３３８２１０、２０１３／０３２３２６９、２０１３／０２４５１０７、２０１３／０１９５９２０、２０１３／０１２３３３８、２０１３／００２２６４９、２０１３／００１７２２３、２０１２／０２９５８３２、２０１２／０１８３５８１、２０１２／０１７２４１１、２０１２／００２７８０３、２０１２／００５８１８８、２０１１／０３１１５８３、２０１１／０３１１５８２、２０１１／０２６２５２７、２０１１／０２１６６２２、２０１１／０１１７１２５、２０１１／００９１５２５、２０１１／００７６３３５、２０１１／００６００３２、２０１０／０１３０５８８、２００７／００４２０３１、２００６／０２４００９３、２００６／００８３７８０、２００６／０００８９１０、２００５／０１７５６８２、２００５／０１７０５４、２００５／０１１８２５３、２００５／００６４５９５、２００４／０１４２０２５、２００７／００４２０３１、１９９９／００９０７６及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／３９７４１、ＷＯ２０１７／１１７５２８、ＷＯ２０１７／００４１４３、ＷＯ２０１７／０７５５３１、ＷＯ２０１５／１９９９５２、ＷＯ２０１４／００８３３４、ＷＯ２０１３／０８６３７３、ＷＯ２０１３／０８６３２２、ＷＯ２０１３／０１６０５８、ＷＯ２０１３／０８６３７３、ＷＯ２０１１／１４１７０５、及びＷＯ２００１／０７５４８ならびにＳｅｍｐｌｅ ｅｔ．ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２８，１７２－１７６（これらの完全な開示は、すべての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
ナノ粒子組成物には、薬学的組成物において有用な任意の物質が含まれ得る。例えば、ナノ粒子組成物には、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤または付随成分、例えば、限定されないが、１つ以上の溶媒、分散媒体、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、顆粒化助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体ビヒクル、結合剤、表面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油、防腐剤、及び他の種が含まれ得る。賦形剤、例えば、ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味剤、及び芳香剤もまた、含まれ得る。薬学的に許容可能な賦形剤は、当該技術分野でよく知られている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．，２００６を参照されたい）。
賦形剤及び希釈剤
賦形剤には、本明細書で使用される場合、所望の特定の投薬形態に適するような、あらゆる溶媒、分散媒体、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、防腐剤等が含まれるがこれらに限定されない。薬学的組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物を調製するための技術は、当該技術分野で知られている（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。従来の賦形剤媒体の使用は、任意の従来の賦形剤が、例えば、任意の望ましくない生物学的効果を生成することまたはそうでなければ薬学的組成物の任意の他の成分（複数可）と有害な様式で相互作用することによって、物質またはその誘導体と不適合性である場合がない限り、本開示の範囲内で企図され得る。
例示的な希釈剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンデンプン、粉末化糖等、及び／またはそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
イオン化可能な脂質
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＬＮＰは、イオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、２つ以上のイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、本明細書に開示される任意のイオン化可能な脂質、またはそれらの任意の組み合わせである。
構造脂質
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、構造脂質を含む。構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、フコステロール、ベータシトステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、コール酸、シトスタノール、リトコール酸、トマチン、ウルソル酸、アルファ－トコフェロール、ビタミンＤ３、ビタミンＤ２、カルシポトリオール、ボツリン、ルペオール、オレアノール酸、ベータ－シトステロール－アセテート及びそれらの混合物からなる群から選択され得るがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、Ｐａｔｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．，１１，９８３（２０２０）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）によって開示されるコレステロールアナログである。いくつかの実施形態では、構造脂質には、コレステロール及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾン）、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態では、構造脂質は、国際特許出願ＷＯ２０１９１５２５５７Ａ１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールアナログである。コレステロールアナログを使用することは、Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ－ｏｃｃｕｒｉｎｇ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｄｕｃｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｓｈａｐｅ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍＲＮＡ，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２０２０）（参照により本明細書に組み込まれるである）に記載されているようにエンドソーム脱出を向上させ得る。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、フィトステロールである。フィトステロールを使用することは、Ｈｅｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｎｇ ｅｎｄｏｓｏｍａｌ ｅｓｃａｐｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｔｈａｔ ｂｏｏｓｔ ｍＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０２０）（参照により本明細書に組み込まれるである）に記載されているようにエンドソーム脱出を向上させ得る。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、向上したエンドソーム放出のための植物ステロール模倣体を含有する。
ＰＥＧ化脂質
ＰＥＧ化脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本明細書で上述したように、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本明細書で上述したように、式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、本明細書で上述したように、表（Ｉ）に示される化合物を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、追加のＰＥＧ化脂質またはＰＥＧ修飾脂質を含む。ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる非限定的な群から選択され得る。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＵＳ２０１９／０２４０３５４；ＵＳ２０１０／０１３０５８８；ＵＳ２０２１／００８７１３５；ＷＯ２０２１／２０４１７９；ＵＳ２０２１／０１２８４８８；ＵＳ２０２０／０１２１８０９；ＵＳ２０１７／０１１９９０４；ＵＳ２０１３／０１０８６８５；ＵＳ２０１３／０１９５９２０；ＵＳ２０１５／０００５３６３；ＵＳ２０１４／０３０８３０４；ＵＳ２０１３／００５３５７２；ＷＯ２０１９／２３２０９５Ａ１；ＷＯ２０２１／０７７０６７；ＷＯ２０１９／１５２５５７；ＵＳ２０１５／０２０３４４６；ＵＳ２０１７／０２１０６９７；ＵＳ２０１４／０２００２５７；またはＷＯ２０１９／０８９８２８Ａ１（これらの各々は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）のうちの１つに開示されるＰＥＧ化脂質を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＰＥＧ化脂質の代わりにＰＥＧ化脂質代用物を含む。ＰＥＧ化脂質を企図する本明細書に開示されるすべての実施形態は、ＰＥＧ化脂質代用物にも適用されることが理解されるべきである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ポリサルコシン－脂質コンジュゲート、例えば、ＵＳ２０２２／０００１０２５Ａ１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものを含む。
リン脂質
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰは、リン脂質を含む。組成物及び方法において有用なリン脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１．２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ナトリウム（Ｓ）－２－アンモニオ－３－（（（（Ｒ）－２－（オレオイルオキシ）－３－（ステアロイルオキシ）プロポキシ）オキシドホスホリル）オキシ）プロパノエート（Ｌ－α－ホスファチジルセリン；脳ＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－（ホスホ－Ｌ－セリン）（ＤＯＰＳ）、アセル－融合性リン脂質（ＤＰｈＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジステアロイルホスホエタノールアミンイミダゾール（ＤＳＰＥＩ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（１８：１ ＰＡ；ＤＯＰＡ）、アンモニウムビス（（Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－（オレオイルオキシ）プロピル）ホスフェート（１８：１ ＤＭＰ；ＬＢＰＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ミオ－イノシトール）（ＤＯＰＩ；１８：１ ＰＩ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０ ＰＳ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：２ ＰＳ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１６：０－１８：１ ＰＳ；ＰＯＰＳ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０－１８：１ ＰＳ）、１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０－１８：２ ＰＳ）、１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＳ）、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＳ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰには、ＤＳＰＣが含まれる。所定の実施形態では、ＬＮＰには、ＤＯＰＥが含まれる。いくつかの実施形態では、ＬＮＰには、ＤＳＰＣ及びＤＯＰＥの両方が含まれる。
いくつかの実施形態では、リン脂質テールは、Ｕ．Ｓ．２０２１／０１２１４１１（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようにエンドソーム脱出を促進するために修飾され得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＵＳ２０１９／０２４０３５４；ＵＳ２０１０／０１３０５８８；ＵＳ２０２１／００８７１３５；ＷＯ２０２１／２０４１７９；ＵＳ２０２１／０１２８４８８；ＵＳ２０２０／０１２１８０９；ＵＳ２０１７／０１１９９０４；ＵＳ２０１３／０１０８６８５；ＵＳ２０１３／０１９５９２０；ＵＳ２０１５／０００５３６３；ＵＳ２０１４／０３０８３０４；ＵＳ２０１３／００５３５７２；ＷＯ２０１９／２３２０９５Ａ１；ＷＯ２０２１／０７７０６７；ＷＯ２０１９／１５２５５７；ＵＳ２０１７／０２１０６９７；またはＷＯ２０１９／０８９８２８Ａ１（これらの各々は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）のうちの１つに開示されるリン脂質を含む。
いくつかの実施形態では、ＵＳ２０２０／０１２１８０９に開示されるリン脂質は、以下の構造：
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、分岐状または直鎖、飽和または不飽和炭素鎖（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル）を有する。
標的化部位
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、標的化部位をさらに含む。標的化部位は、抗体またはその断片であり得る。標的化部位は、標的抗原に結合することが可能であり得る。
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脂質ナノ粒子に機能可能に接続された標的化部位を含む。いくつかの実施形態では、標的化部位は、標的抗原に結合することが可能である。いくつかの実施形態では、標的抗原は、標的器官において発現する。いくつかの実施形態では、標的抗原は、肝臓よりも標的器官において多く発現する。
いくつかの実施形態では、標的化部位は、ＷＯ２０１６１８９５３２Ａ１（参照により本明細書に組み込まれるである）に記載される抗体である。例えば、いくつかの実施形態では、標的化粒子は、特定の抗ＣＤ３８モノクローナル抗体（ｍＡｂ）にコンジュゲートされ、これにより、他のサブタイプの白血球よりも高い割合でＢ細胞リンパ球悪性腫瘍（例えば、ＭＣＬ）への粒子内に封入されたｓｉＲＮＡの特異的送達が可能となる。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、標的化部位、例えば、抗体とコンジュゲート／結合／関連付けられた場合、標的化され得る。
双性イオン性アミノ脂質
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、双性イオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、双性イオン性脂質を含むＬＮＰは、リン脂質を含まない。
双性イオン性アミノ脂質は、米国特許出願２０２１０１２１４１１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるようにｍＲＮＡを細胞内にロードし、安定化し、放出するためにリン脂質を伴わずにＬＮＰへ自己構築することができることが示されている。双性イオン性、イオン化可能なカチオン性及び永続的にカチオン性のヘルパー脂質は、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｄｅｓｔａｂｌｉｚｉｎｇ ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｏｒｇａｎ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍＲＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ ｇｅｎｅ ｅｄｉｔｉｎｇ，Ｎａｔ Ｍａｔｅｒ．（２０２１）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように脾臓、肝臓及び肺における組織選択的ｍＲＮＡ送達及びＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９遺伝子編集を可能とする。
双性イオン性脂質は、Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｏｎｉｚａｂｌｅ Ｌｙｓｉｎｅ－Ｂａｓｅｄ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｓｉＲＮＡ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．（２０１３）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようにカチオン性アミン及びアニオン性カルボキシレートを含有する頭部基を有し得る。リジンα－アミンでアミド結合を介して長鎖ジアルキルアミンに連結されたリジン頭部基を含有するイオン化可能なリジンベースの脂質は、Ｗａｌｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｏｎｉｚａｂｌｅ Ｌｙｓｉｎｅ－Ｂａｓｅｄ Ｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ ｓｉＲＮＡ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．（２０１３）に記載されているように免疫原性を低減し得る。
追加の脂質成分
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰ組成物は、ＬＮＰの指向性に影響を及ぼすことが可能な１つ以上の追加の脂質成分をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＤＡＢ、ＥＰＣ、１４ＰＡ、１８ＢＭＰ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＴＡＰ、及びＣ１２－２００から選択される少なくとも１つの脂質をさらに含む（Ｃｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０２０ Ａｐｒｉｌ；１５（４）：３１３－３２０．；Ｄｉｌｌａｒｄ，ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２０２１ Ｖｏｌ．１１８ Ｎｏ．５２を参照されたい）。
ポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示のＬＮＰは、活性剤を含有する。いくつかの実施形態では、活性剤は、ポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ポリヌクレオチドを標的器官に送達することが可能である。ポリヌクレオチドには、その用語のその最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖であり、またはそれに組み込まれ得る任意の化合物及び／または物質が含まれる。本開示に従って使用するための例示的なポリヌクレオチドには、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、メッセンジャーｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含むリボ核酸（ＲＮＡ）、それらのハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重ヘリックス形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、ベクター等のうちの１つ以上が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に記載の組成物及び方法において有用なＲＮＡには、ショーティマー（ｓｈｏｒｔｉｍｅｒ）、アンタゴミア（ａｎｔａｇｏｍｉｒ）、アンチセンス、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択され得るこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、環状ＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、タンパク質をコードする。ポリヌクレオチドは、任意の天然に存在するまたは天然に存在しないまたはそうでなければ修飾されたポリペプチドを含む、対象となる任意のポリペプチドをコードし得る。ポリペプチドは、任意のサイズのものであり得、任意の二次構造または活性を有し得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、細胞において発現した場合に治療効果を有し得る。
他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡである。ｓｉＲＮＡは、対象となる遺伝子の発現を選択的にノックダウンまたは下方制御することが可能であり得る。例えば、ｓｉＲＮＡは、それを必要とする対象へのｓｉＲＮＡを含むナノ粒子組成物の投与により、特定の疾患、障害、または病態に関連する遺伝子をサイレンシングするために選択され得る。ｓｉＲＮＡは、対象となる遺伝子またはタンパク質をコードするｍＲＮＡ配列に相補的な配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、免疫調節性ｓｉＲＮＡであり得る。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｓｈＲＮＡまたはそれをコードするベクターもしくはプラスミドである。ｓｈＲＮＡは、核への適切なコンストラクトの送達により標的細胞内で生成され得る。ｓｈＲＮＡに関するコンストラクト及びメカニズムは、関連する技術分野においてよく知られている。
ポリヌクレオチドには、対象となるポリペプチドをコードする連結されたヌクレオシドの第１の領域（例えば、コード領域）、第１の領域の５’末端（例えば、５’－ＵＴＲ）に位置する第１の隣接領域、第１の領域の３’末端（例えば、３’－ＵＴＲ）に位置する第２の隣接領域、少なくとも１つの５’キャップ領域、及び３’安定化領域が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドには、ポリ－Ａ領域またはＫｏｚａｋ配列（例えば、５’－ＵＴＲに）がさらに含まれる。いくつかの場合では、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドから切除されることが可能な１つ以上のイントロンヌクレオチド配列を含有し得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）には、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルが含まれ得る。核酸の領域のいずれか１つには、１つ以上の代替的成分（例えば、代替的ヌクレオシド）が含まれ得る。例えば、３’安定化領域は、代替的ヌクレオシド、例えば、Ｌ－ヌクレオシド、逆チミジン、または２’－Ｏ－メチルヌクレオシド及び／またはコード領域、５’－ＵＴＲ、３’－ＵＴＲを含有し得、またはキャップ領域には、代替的ヌクレオシド、例えば、５置換ウリジン（例えば、５－メトキシウリジン）、１置換シュードウリジン（例えば、１－メチルシュードウリジンまたは１－エチル－シュードウリジン）、及び／または５置換シチジン（例えば、５－メチル－シチジン）が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、天然に存在するヌクレオシドのみを含有する。
いくつかの場合では、ポリヌクレオチドは、長さが３０ヌクレオチドを超える。別の実施形態では、ポリヌクレオチド分子は、長さが３５ヌクレオチドを超える。別の実施形態では、長さは、少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５０００ヌクレオチド、または５０００ヌクレオチドを超える。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子、式、組成物またはそれに関連する方法は、ＷＯ２００２／０９８４４３、ＷＯ２００３／０５１４０１、ＷＯ２００８／０５２７７０、ＷＯ２００９／１２７２３０、ＷＯ２００６／１２２８２８、ＷＯ２００８／０８３９４９、ＷＯ２０１０／０８８９２７、ＷＯ２０１０／０３７５３９、ＷＯ２００４／００４７４３、ＷＯ２００５／０１６３７６、ＷＯ２００６／０２４５１８、ＷＯ２００７／０９５，９７６、ＷＯ２００８／０１４９７９、ＷＯ２００８／０７７５９２、ＷＯ２００９／０３０４８１、ＷＯ２００９／０９５２２６、ＷＯ２０１１／０６９５８６、ＷＯ２０１１／０２６６４１、ＷＯ２０１１／１４４３５８、ＷＯ２０１２／０１９７８０、ＷＯ２０１２／０１３３２６、ＷＯ２０１２／０８９３３８、ＷＯ２０１２／１１３５１３、ＷＯ２０１２／１１６８１１、ＷＯ２０１２／１１６８１０、ＷＯ２０１３／１１３５０２、ＷＯ２０１３／１１３５０１、ＷＯ２０１３／１１３７３６、ＷＯ２０１３／１４３６９８、ＷＯ２０１３／１４３６９９、ＷＯ２０１３／１４３７００、ＷＯ２０１３／１２０６２６、ＷＯ２０１３／１２０６２７、ＷＯ２０１３／１２０６２８、ＷＯ２０１３／１２０６２９、ＷＯ２０１３／１７４４０９、ＷＯ２０１４／１２７９１７、ＷＯ２０１５／０２４６６９、ＷＯ２０１５／０２４６６８、ＷＯ２０１５／０２４６６７、ＷＯ２０１５／０２４６６５、ＷＯ２０１５／０２４６６６、ＷＯ２０１５／０２４６６４、ＷＯ２０１５／１０１４１５、ＷＯ２０１５／１０１４１４、ＷＯ２０１５／０２４６６７、ＷＯ２０１５／０６２７３８、ＷＯ２０１５／１０１４１６（これらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているような特徴を含む１つ以上のポリヌクレオチドを含む。
ポリヌクレオチド、例えば、環状ＲＮＡは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有し得る。ＩＲＥＳは、唯一のリボソーム結合部位として作用し得、またはｍＲＮＡの複数のリボソーム結合部位の１つとして機能し得る。複数の機能的リボソーム結合部位を含有するポリヌクレオチドは、リボソームによって独立して翻訳されるいくつかのペプチドまたはポリペプチドをコードし得る（例えば、多シストロン性ｍＲＮＡ）。ポリヌクレオチドがＩＲＥＳと共に提供される場合、第２の翻訳可能な領域がさらに任意に提供される。本開示に従って使用され得るＩＲＥＳ配列の例には、限定されないが、ピコルナウイルス（例えば、ＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、古典的ブタ熱ウイルス（ＣＳＦＶ）、ネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）、シミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）からのものが含まれる。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上のマイクロＲＮＡ結合部位を含む。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、非標的器官においてマイクロＲＮＡによって認識される。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、肝臓においてマイクロＲＮＡによって認識される。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、肝臓細胞においてマイクロＲＮＡによって認識される。
不活性成分
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤は、少なくとも１つの不活性成分を含み得る。本明細書で使用される場合、用語「不活性成分」は、製剤に含まれる薬学的組成物の活性成分の活性に寄与しない１つ以上の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、本開示の製剤において使用され得る不活性成分のすべてが米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されている場合があり、そのいずれも承認されていない場合があり、またはその一部が承認されている場合がある。
いくつかの実施形態では本明細書に開示される製剤には、カチオンまたはアニオンが含まれ得る。製剤には、金属カチオン、例えば、限定されないが、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｎ２＋、Ｍｇ２＋、及びそれらの組み合わせが含まれる。非限定的な例として、製剤には、金属カチオンを有するポリマー及び複合体が含まれ得る。
本開示の製剤にはまた、１つ以上の薬学的に許容可能な塩が含まれ得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な塩」は、開示される化合物の誘導体であって、親化合物が、既存の酸または塩基部位をその塩形態に変換すること（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させること）によって修飾されているものを指す。薬学的に許容可能な塩の例には、アミン等の塩基性残基の鉱酸または有機酸塩；カルボン酸等の酸性残基のアルカリまたは有機塩等が含まれるがこれらに限定されない。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギネン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が含まれる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等、ならびに非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム、及びアミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンを含むがこれらに限定されない）等が含まれる。本開示の薬学的に許容可能な塩には、例えば、非毒性の無機または有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性塩が含まれる。
溶媒和物は、有機溶媒、水、またはそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化、または沈殿によって調製され得る。好適な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一、二、及び三水和物）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２－（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２－ピロリドン、安息香酸ベンジル等である。水が溶媒である場合、溶媒和物は、「水和物」と称される。
投与経路
本明細書に記載のオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、治療的に有効なアウトカムをもたらす任意の送達経路によって投与され得る。これらには、経腸（腸内に）、胃腸、硬膜周囲（硬膜内に）、経口（口経由で）、経皮、脳内（大脳内に）、脳室内（脳室内に）、皮膚上（皮膚への塗布）、皮内（皮膚自体の中に）、皮下（皮膚の下に）、鼻腔内投与（経鼻で）、静脈内（静脈の中に）、静脈内ボーラス、点滴静注、動脈内（動脈の中に）、筋肉内（筋肉の中に）、心臓内（心臓の中に）、骨内注入（骨髄の中に）、髄腔内（脊柱管の中に）、実質内（脳組織の中に）、腹腔内（腹腔の中への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内（経眼で）、海綿体内注入（病的腔の中に）、腔内（陰茎の基部の中に）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布用のインタクトな皮膚を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、経膣、吹送法（吸引）、舌下、唇下、浣腸、点眼（結膜の上に）、点耳、耳介（耳の中または耳を介して）、頬側（頬に向けて）、結膜、皮膚、歯科的（歯（複数可）に）、電気浸透、子宮頸管内、洞内、気管内、体外、血液透析、浸透、間質内、腹腔内、羊膜内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内（軟骨の中に）、尾内（馬尾の中に）、大槽内（小脳延髄大槽の中に）、角膜内（角膜の中に）、歯冠内、冠動脈内（冠動脈の中に）、海綿体内（陰茎の海綿体の拡張可能な空間の中に）、椎間板内（椎間板の中に）、管内（腺管の中に）、十二指腸内（十二指腸の中に）、硬膜内（硬膜の中または下に）、表皮内（表皮に）、食道内（食道に）、胃内（胃の中に）、歯肉内（歯肉の中に）、回腸内（小腸の遠位部分の中に）、病巣内（局在化病巣の中にまたはそれに直接導入される）、管腔内（管の内腔内）、リンパ内（リンパの中に）、髄内（骨の骨髄腔の中に）、髄膜内（髄膜の中に）、心筋内（心筋の中に）、眼内（眼の中に）、卵巣内（卵巣の中に）、心膜内（心膜の中に）、胸膜内（胸膜の中に）、前立腺内（前立腺の中に）、肺内（肺またはその気管支の中に）、洞内（鼻または眼窩周囲の洞の中に）、髄腔内（脊柱の中に）、関節滑液嚢内（関節の滑液腔の中に）、腱内（腱の中に）、精巣内（精巣の中に）、くも膜下腔内（任意レベルの脳脊髄軸の脳脊髄液の中に）、胸腔内（胸部の中に）、管内（器官の細管の中に）、腫瘍内（腫瘍の中に）、鼓室内（中耳の中に）、血管内（血管（複数可）の中に）、脳室内（脳室の中に）、イオントフォレシス（可溶性塩のイオンを身体組織に移動させる電流による）、潅注（傷口または体腔を浸し、または洗い流すこと）、喉頭（喉頭に直接）、経鼻胃（鼻から胃の中に）、密封包帯技術（局所経路投与後、領域を閉塞する包帯によって覆う）、眼（外眼部へ）、口腔咽頭（口腔及び咽頭に直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局在的または全身的効果のための経口または経鼻吸入によって気道の中に）、眼球後方（脳橋の背後または眼球の背後）、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤（胎盤を介してまたは通過して）、経気管（気管の壁を介して）、経鼓膜（鼓室を通過してまたは介して）、尿管（尿管に）、尿道（尿道に）、膣、仙骨麻酔、診断、神経ブロック、胆汁灌流、心臓灌流、フォトフェレーシス、及び脊髄が含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、組成物は、それらを血液脳関門、血管障壁、または他の上皮障壁を通過させることを可能とする方法で投与され得る。オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、液体溶液または懸濁液として、液体溶液中の液体溶液または懸濁液に好適な固体形態としてのいずれかの任意の好適な形態で投与され得る。オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、任意の適切な及び薬学的に許容可能な賦形剤を用いて製剤化され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、単一の経路投与を介して対象に送達され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、複数部位の経路投与を介して対象に送達され得る。対象は、２、３、４、５、または５を超える部位で投与され得る。
いくつかの実施形態では、対象は、ボーラス注入を使用してオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムが投与され得る。
いくつかの実施形態では、対象は、数分、数時間、または数日の期間にわたって持続送達を使用してオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムが投与され得る。注入速度は、対象、分布、製剤または別の送達パラメータに応じて変更され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、筋肉内送達経路によって送達され得る。筋肉内投与の非限定的な例には、静脈内注射または皮下注射が含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、経口投与によって送達され得る。経口送達の非限定的な例には、消化管投与及び口腔内投与が含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、眼内送達経路によって送達され得る。眼内送達の非限定的な例には、硝子体内注射が含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、鼻腔内送達経路によって送達され得る。鼻腔内送達の非限定的な例には、点鼻または鼻スプレーが含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、末梢注射によって対象に投与され得る。末梢注射の非限定的な例には、腹腔内、筋肉内、静脈内、結膜、または関節注射が含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、脳脊髄液への注射によって送達され得る。脳脊髄液への送達の非限定的な例には、髄腔内及び脳室内投与が含まれる。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、全身性送達によって送達され得る。非限定的な例として、全身性送達は、血管内投与によるものであり得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、頭蓋内送達によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、実質内投与によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、筋肉内投与によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、対象に投与され、対象の筋肉を形質導入する。非限定的な例として、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、筋肉内投与によって投与される。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、静脈内投与によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、皮下投与によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、局所投与によって対象に投与され得る。
いくつかの実施形態では、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、複数の投与経路によって送達され得る。
本明細書に記載のオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、及び標的化システムは、１つ以上のオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、標的化システム、または治療剤または部位と併せて共投与され得る。
ＶＩ．送達のための標的領域、組織または細胞
核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、本明細書に記載の方法及び標的化送達システムを使用して特定の標的領域、組織または細胞に局在化され得る。
腫瘍
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、腫瘍に局在化され得る。腫瘍は、良性腫瘍または悪性腫瘍であり得る。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、結合組織腫瘍、例えば、限定されないが、成人線維組織、胚（粘液腫状）線維組織、脂肪組織、軟骨、骨、及び脊索に位置する。非限定的な例として、腫瘍は、成人線維組織に位置する線維腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、成人線維組織に位置する線維肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胚線維組織に位置する粘液腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胚線維組織に位置する粘液肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、脂肪組織に位置する脂肪腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、脂肪組織に位置する脂肪肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、軟骨に位置する軟骨腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、軟骨に位置する軟骨肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、骨に位置する骨腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、骨に位置する骨肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、脊索に位置する脊索腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、結合組織に位置する線維性組織球腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、結合組織に位置する悪性線維性組織球腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、内皮及び／または中皮腫瘍組織、例えば、限定されないが、血管、リンパ管及び中皮に局在化される。非限定的な例として、腫瘍は、血管に位置する血管腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、血管に位置する血管周囲細胞腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、血管に位置する血管肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、血管に位置する脈管肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ管に位置するリンパ管腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ管に位置するリンパ管肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、中皮に位置する中皮腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、血液及びリンパ細胞組織、例えば、限定されないが、造血細胞及びリンパ組織に局在化される。非限定的な例として、腫瘍は、造血細胞に位置する前白血病と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、造血細胞に位置する骨髄増殖性障害と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、造血細胞に位置する白血病と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ組織に位置する形質細胞増加症と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ組織に位置する形質細胞腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ組織に位置する多発性骨髄腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ組織に位置するホジキンリンパ腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、リンパ組織に位置する非ホジキンリンパ腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、筋肉組織、例えば、限定されないが、平滑筋及び横紋筋に局在化される。非限定的な例として、腫瘍は、平滑筋に位置する平滑筋腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、平滑筋に位置する平滑筋肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、横紋筋に位置する横紋筋腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、横紋筋に位置する横紋筋肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、上皮組織、例えば、限定されないが、重層扁平組織、腺上皮組織（例えば、肝臓、腎臓、胆管）、移行上皮組織、胎盤及び精巣へ位置する。非限定的な例として、腫瘍は、重層扁平に位置するパピローマと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、重層扁平に位置する脂漏性角化症と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、重層扁平組織に位置する扁平上皮癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、重層扁平組織に位置する類表皮癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、腺上皮組織に位置する腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、肝臓腺上皮組織に位置する肝臓腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、腎臓腺上皮組織に位置する尿細管腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胆管腺上皮組織に位置する胆管腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、腺上皮組織に位置する腺癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、肝臓腺上皮組織に位置する肝癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、肝臓腺上皮組織に位置する肝細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、腎臓腺上皮組織に位置する腎細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、腎臓腺上皮組織に位置する副腎腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胆管腺上皮組織に位置する胆管癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、移行上皮組織に位置する移行細胞パピローマと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、移行上皮組織に位置する移行細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胎盤に位置する胞状奇胎と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胎盤に位置する絨毛癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、精巣に位置する精上皮腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、精巣に位置する胚細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、神経組織、例えば、限定されないが、グリア細胞、神経細胞、髄膜、及び神経鞘へ位置する。非限定的な例として、腫瘍は、グリア細胞に位置する神経膠腫（グレードＩ～ＩＩＩ）と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、グリア細胞に位置する未分化神経膠腫（グレードＩ～ＩＩＩ）と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、グリア細胞に位置する多形性膠芽腫（グレードＩＶ）と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経細胞に位置する神経節細胞腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経細胞に位置する神経芽細胞腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経細胞に位置する髄芽腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、髄膜組織に位置する髄膜腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、髄膜組織に位置する悪性髄膜腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する神経鞘腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する神経鞘腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する神経線維腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する悪性髄膜腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する悪性神経鞘腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、神経鞘に位置する神経線維肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、アミン前駆体取り込み及び脱炭酸（ＡＰＵＤ）システム、例えば、限定されないが、下垂体組織、副甲状腺組織、甲状腺組織、気管支組織、副腎髄質組織、膵臓組織、胃及び腸、頸動脈小体ならびに化学受容体システム組織へ位置する。ＡＰＵＤシステムは、内分泌機能を有し、かつ多様な小さなアミンまたはポリペプチドホルモンを分泌する一連の細胞である。非限定的な例として、腫瘍は、下垂体組織に位置する好塩基性腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、下垂体組織に位置する好酸性腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、下垂体組織に位置する嫌色素性腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、副甲状腺に位置する副甲状腺腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、副甲状腺に位置する副甲状腺がんと呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、甲状腺組織（Ｃ細胞）に位置するｃ細胞過形成と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、甲状腺組織（Ｃ細胞）に位置する甲状腺の髄様癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、気管支内膜（クルチッキー細胞）に位置する気管支カルチノイドと呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、気管支内膜（クルチッキー細胞）に位置する燕麦細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、副腎髄質に位置する褐色細胞腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、副腎髄質に位置する悪性褐色細胞腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、膵臓に位置する膵島細胞腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、膵臓に位置するインスリノーマと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、膵臓に位置するガストリノーマと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、膵臓に位置する膵島細胞癌と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胃及び腸に位置するカルチノイドと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、胃及び腸に位置する悪性カルチノイドと呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、頸動脈小体及び化学受容体システムに位置するケモデクトーマと呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、頸動脈小体及び化学受容体システムに位置する傍神経節腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、頸動脈小体及び化学受容体システムに位置する悪性カルチノイドと呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、頸動脈小体及び化学受容体システムに位置する悪性傍神経節腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、神経堤由来細胞、例えば、限定されないが、色素生成細胞（例えば、皮膚及び眼）、末梢神経系のシュワン細胞、及び扁平上皮におけるメルケル細胞に位置する。非限定的な例として、腫瘍は、色素生成細胞、例えば、皮膚及び眼に位置する母斑と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、色素生成細胞、例えば、皮膚及び眼に位置する黒色腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、末梢神経系のシュワン細胞に位置する神経鞘腫（ｓｃｈｗａｎｎｏｍａ）または神経鞘腫（ｎｅｕｒｉｌｅｍｍｏｍａ）と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、末梢神経系のシュワン細胞に位置する悪性神経鞘腫と呼ばれる悪性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、扁平上皮におけるメルケル細胞に位置するメルケル細胞新生物と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、乳房組織に位置する。非限定的な例として、腫瘍は、線維腺腫と呼ばれる良性腫瘍である。非限定的な例として、腫瘍は、葉状嚢肉腫と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、腎原基組織に位置する。非限定的な例として、腫瘍は、ウィルムス腫瘍と呼ばれる悪性腫瘍である。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、卵巣組織に位置する。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、精巣組織に位置する。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、胚細胞腫瘍組織に位置する。胚細胞腫瘍の非限定的な例には、精上皮腫、未分化胚細胞腫、絨毛癌、胚性癌、内胚葉洞腫瘍、及び奇形癌が含まれる。
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、結合組織ストローマに位置する。これらの腫瘍の非限定的な例は、セルトリ・ライディッヒ細胞腫瘍、男化腫瘍、粒状包膜細胞腫瘍、門細胞腫瘍、脂質細胞腫瘍である。
器官
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、器官に局在化され得る。器官の非限定的な例には、肛門管、動脈、上行結腸、膀胱、骨髄、脳、気管支、細気管支、尿道球腺、毛細血管、盲腸、小脳、大脳半球、大脳、子宮頸部、脈絡叢、陰核、脳神経、下行結腸、間脳、十二指腸、耳、腸神経系、精巣上体、食道、外性器、卵管、胆嚢、神経節、味覚、消化管関連リンパ組織、心臓、回腸、内性器、間質、空腸、関節、腎臓、大腸、喉頭、靱帯、肝臓、肺、リンパ節、リンパ管、乳腺、延髄、腸間膜、中脳、口、呼吸筋、鼻腔、神経、嗅覚、卵巣、膵臓、耳下腺、陰茎、咽頭、胎盤、橋、前立腺、直腸、唾液腺、陰嚢、精嚢、Ｓ状結腸、骨格、皮膚、小腸、脊髄神経、脾臓、胃、皮下組織、舌下腺、顎下腺、歯、腱、精巣、脳幹、脊髄、脳室系、胸腺、舌、扁桃腺、気管、横行結腸、尿管、尿道、子宮、膣、精管、静脈、及び外陰が含まれる。
組織
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、組織に局在化され得る。副腎髄質、成人線維組織、血管、骨、乳房、気管支内膜、頸動脈小体、軟骨、結合組織、胚（粘液腫様）線維組織、上皮系、上皮、脂肪、腺上皮（肝臓、腎臓、胆管）、生殖腺、造血細胞、リンパ管、リンパ組織、髄膜、中皮、筋肉、神経鞘、神経系、脊索、卵巣、膵臓、副甲状腺、下垂体、胎盤、腎原基、平滑筋、胃及び腸、重層扁平、横紋筋、ストローマ、精巣、甲状腺、及び移行上皮の非限定的な例。非限定的な例として、組織は、結合組織である。
細胞
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、特定の細胞タイプに局在化され得る。細胞の非限定的な例には、脂肪細胞、アドレナリン作動性神経細胞、アルファ細胞、アマクリン細胞、エナメル芽細胞、前水晶体上皮細胞、脳下垂体前葉／中葉細胞、アポクリン汗腺細胞、星状細胞、コルチ器官の聴覚内有毛細胞、コルチ器官の聴覚外有毛細胞、ｂ細胞、バルトリン腺細胞、角膜、舌、口、鼻腔、遠位肛門管、遠位尿道、及び遠位膣の基底細胞（幹細胞）、嗅覚上皮の基底細胞、かご細胞、好塩基性顆粒球及び前駆体、ベータ細胞、ベッツ細胞、骨髄網状組織線維芽細胞、コルチ器官のボーダー細胞、境界細胞、ボーマン腺細胞、褐色脂肪細胞、ブルンナー腺細胞、尿道球腺細胞、房状細胞、ｃ細胞、カハール・レチウス細胞、心筋細胞、心筋細胞、カートホイール細胞、グルココルチコイドを生成する束状帯の細胞、鉱質コルチコイドを生成する球状帯の細胞、アンドロゲンを生成する網状帯の細胞、副腎皮質の細胞、セメント芽細胞、腺房中心細胞、耳における耳道腺細胞、シャンデリア細胞、頸動脈小体細胞の化学受容体グロムス細胞、主細胞、コリン作動性ニューロン、クロム親和性細胞、クラブ細胞、冷感一次感覚ニューロン、結合組織マクロファージ（すべてのタイプ）、角膜線維芽細胞（角膜実質細胞）、プロゲステロンを分泌する破裂性卵胞の黄体細胞、皮質毛幹細胞、コルチコトロープ、クリスタリン含有レンズ線維細胞、表皮毛幹細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ｄ細胞、デルタ細胞、樹状細胞、二重ブーケ細胞、導管細胞、エクリン汗腺明細胞、エクリン汗腺暗細胞、輸出管細胞、弾性軟骨細胞、内皮細胞、腸グリア細胞、エンテロクロマフィン細胞、エンテロクロマフィン様細胞、腸内分泌細胞、好酸性顆粒球及び前駆体、上衣細胞、表皮基底細胞、表皮ランゲルハンス細胞、精巣上体基底細胞、精巣上体主細胞、上皮細網細胞、イプシロン細胞、赤血球、線維軟骨細胞、フォークニューロン、腺窩細胞、ｇ細胞、胆嚢上皮細胞、胚細胞、リトレ細胞の腺、まぶたにおけるモル細胞の腺、グリア細胞、ゴルジ細胞、性腺間質細胞、ゴナドトロープ、顆粒細胞、顆粒膜細胞、顆粒膜黄体細胞、グリッド細胞、方向細胞、及び造血幹細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞タイプは、がん細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞タイプは、非がん細胞を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞タイプは、がんタイプ及び非がんタイプの両方を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの細胞タイプのがん状態は、不明である。
生理的システム
いくつかの実施形態では、核酸配列、ポリペプチドまたはペプチド及びその製剤の送達は、生理的システムに局在化され得る。生理的システムの非限定的な例には聴覚、心臓血管、中枢神経系、化学受容体系、循環、消化、内分泌、排泄、外分泌腺、生殖器、外皮、リンパ、筋肉、筋骨格、神経系、末梢神経系、腎臓、生殖、呼吸、泌尿器、及び視覚系が含まれる。
ＶＩＩ．検出及び分析の方法
標的化システム（例えば、候補標的化システム及び検証された標的化システム）を含む指向性発見プラットフォームの検出は、使用されるトラッキングシステムに基づいて選択され得る多様な技術（すなわち、検出技術または分析技術（これらの両方は、本明細書で互換的に使用される））を介して行われ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムは、核画像化技術を利用して検出される。核画像化技術は、本明細書で使用される場合、対象または外部源から放射されたエーテルである放射性発光を利用する任意の画像化、検出、カウント、またはソーティング技術を包含することを意味する。限定されないが、核画像化技術には、Ｘ線、機能的磁気共鳴映像法（ｆＭＲＩ）及び核磁気共鳴画像化を含む磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）、陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、吸収画像化、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。これらのアプローチの一般的原理及び手順は、当該技術分野で知られており、Ｐｅｒｅｚ－Ｍｅｄｉｎａ，ｅｔ．ａｌ．，Ｎｕｃｌｅａｒ ｉｍａｇｉｎｇ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇ ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ １５４－１５５（２０２０）１２３－１４１（その内容は、核画像化技術に関してそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、対象における本明細書に記載の標的化システムの検出は、ＭＲＩ技術を利用して実施され得る。このアプローチは、知られているまたは発見された任意の方法によって行われ得る。理論に縛られることを望むものではないが、ＭＲＩは、所定の核種スピン特徴の検出を利用する。いくつかの実施形態では、ＭＲＩは、ＭＲＩ造影剤、例えば、ガドリニウムベースの小分子、マンガンベースの小分子、酸化鉄ナノ粒子、１９Ｆベースの化合物、及びそれらの任意の組み合わせを含む本明細書に記載の標的化システムと共に非侵襲的検出技術として使用され得る。ＭＲＩ技術は、例として、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象の特定の器官及び組織における標的化システム、ならびに経時的なそれらの分布の変化の検出を可能とし得る。
いくつかの実施形態では、対象における本明細書に記載の標的化システムの検出は、ＣＴ技術を利用して実施され得る。このアプローチは、知られているまたは発見された任意の方法によって行われ得る。理論に縛られることを望むものではないが、ＣＴは、Ｘ線光子と物質との相互作用を利用し、ＣＴは、ＣＴ造影剤、例えば、金高比重リポタンパク質ナノ粒子（Ａｕ－ＨＤＬ）を含む標的化システムと共に非侵襲的検出技術として使用され得る。ＣＴ技術は、例として、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象の特定の器官及び組織における標的化システム、ならびに経時的なそれらの分布の変化の検出を可能とし得る。
いくつかの実施形態では、対象における本明細書に記載の標的化システムの検出は、ＰＥＴ技術を利用して実施され得る。このアプローチは、知られているまたは発見された任意の方法によって行われ得る。理論に縛られることを望むものではないが、ＰＥＴは、外因的に投与された放射線学的物質、すなわち、放射性トレーサーからの光子放出の検出を利用する。原理的に、ＰＥＴスキャナーは、陽電子－電子対消滅（同時計数事象）後に反対方向に放射される２つの光子を検出する。ＰＥＴは、適切な放射性標識、例えば、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、１３Ｎ、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、７２Ａｓ、１２４Ｉ、７４Ａｓ、フッ素－１８、ガリウム－６８、窒素－１３、銅－６４、臭素－７６、ヨウ素－１２５、ヒ素－７４、炭素－１１、ヨウ素－１３１、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９８Ａｕ、及び２２５Ａｃのいずれかを含む標的化システムと共に侵襲的または非侵襲的検出技術として使用され得る。これらの標識は、構造的要素、カーゴ成分、またはその両方のいずれかにコンジュゲートされ得る。ＰＥＴスキャンは、経時的なそれらの分布の変化を含む、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象上、または対象の切除されたサンプル上のいずれかの標的化システムの分布を検出するために実施され得る。ＰＥＴ技術は、器官／組織レベルから細胞タイプレベルまで対象における標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかのＰＥＴ技術は、細胞内レベルでの標的化システムの検出を可能とし得る。
いくつかの実施形態では、対象における本明細書に記載の標的化システムの検出は、ＳＰＥＣＴ技術を利用して実施され得る。このアプローチは、知られているまたは発見された任意の方法によって行われ得る。理論に縛られることを望むものではないが、ＳＰＥＣＴは、外因的に投与された放射線学的物質、すなわち、放射性トレーサーからの光子放出の検出を利用する。主に、ＳＰＥＣＴスキャナーは、核状態遷移に関連するＸ線及びガンマ光子を検出する。ＳＰＥＣＴは、適切な放射性標識、例えば、１１１Ｉｎ、９９ｍＴｃ、１３Ｎ、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、７２Ａｓ、１２４Ｉ、７４Ａｓ、フッ素－１８、ガリウム－６８、窒素－１３、銅－６４、臭素－７６、ヨウ素－１２５、ヒ素－７４、炭素－１１、ヨウ素－１３１、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１９８Ａｕ、及び２２５Ａｃのいずれかを含む標的化システムと共に侵襲的または非侵襲的検出技術として使用され得る。これらの標識は、構造的要素、カーゴ成分、またはその両方のいずれかにコンジュゲートされ得る。ＳＰＥＣＴスキャンは、経時的なそれらの分布の変化を含む、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象上、または対象の切除されたサンプル上のいずれかの標的化システムの分布を検出するために実施され得る。ＳＰＥＣＴ技術は、器官／組織レベルから細胞タイプレベルまでの対象における標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかのＳＰＥＣＴ技術は、細胞内レベルでの標的化システムの検出を可能とし得る。
いくつかの実施形態では、複数の核画像化技術が、単一のトラッキングシステムを含む標的化システムと共に使用され得る。いくつかの実施形態では、複数の核画像化技術は、複数のトラッキングシステムを含む標的化システムを用いて使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムは、光学的画像化技術を利用して検出される。光学的画像化技術は、本明細書で使用される場合、対象または外部源から放射されたエーテルである光子の光放射及び特別な特性を利用する任意の画像化、検出、カウント、またはソーティング技術を包含することを意味する。限定されないが、光学的画像化技術には、可視光学顕微鏡検査、ラマン分光法、蛍光顕微鏡検査、生物発光画像化（ＢＬＩ）、光断層撮影、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。これらのアプローチの一般的原理及び手順は、当該技術分野で知られており、Ｄｒｕｍｍｅｎ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ － Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｎｇ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１２，１７，１４０６７－１４０９０，Ｂｏｕｔｏｒｉｎｅ，ｅｔ．ａｌ．，Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ｆｏｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｉｘｅｄ ａｎｄ Ｌｉｖｅ Ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１３，１８，１５３５７－１５３９７、及びＪｕｓｋｏｗｉａｋ，Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ－ｂａｓｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）３９９：３１５７－３１７６（これらの内容は、光学的画像化技術に関してそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、対象における本明細書に記載の標的化システムの検出は、可視蛍光顕微鏡検査技術を利用して実施され得る。蛍光顕微鏡検査技術には、限定されないが共焦点蛍光顕微鏡検査、蛍光反射率画像化、蛍光分子トモグラフィー画像化、及びフェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を含む当該技術分野で知られている広範囲の技術が含まれる。通常、すべての蛍光顕微鏡検査技術は、内因的に存在するまたは外因的に投与された蛍光化合物、すなわち、光または他の電磁波放射線を吸収し、より長い波長で再発光する化合物から放射された光の検出を利用する。蛍光顕微鏡検査技術は、適切な蛍光化合物を含む少なくとも１つのトラッキングシステムを含む標的化システムと共に、侵略的または非侵略的検出技術のいずれかとして使用され得る。限定されないが、そのような蛍光化合物には、緑色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、Ｓｉｒｉｕｓ、ＥＢＦＰ２、ＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、ＥＧＦＰ、ＥＹＦＰ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＰｌｕｍ、ＮＩＲ、ｉＲＦＰ、ＥｏｓＦＰ、ＰａｍＣｈｅｒｒｙ、Ｄｒｏｎｐａ、Ｄｒｅｉｋｌａｎｇ、ａｓＦＰ５９５、ｍＭａｐｌｅ、ｍＧｅｏ、ｍＥｏｓ２、Ｄｅｎｄｒａ２、ｐｓＣＦＰ２、２，３，５，６－テトラカルバゾール－４－シアノ－ピリジン（ＣＰｙ）、蛍光ナノ粒子、または蛍光脂質、フルオレセイン、ＴＡＭＲＡ、Ｃｙ色素、テキサスレッド、ＨＥＸ、ＪＯＥ、オレゴングリーン、ローダミン６Ｇ、クマリン、ピレン、ＤｉＯＣ６（３，３’－ジヘキシルオキサカルボシアニンヨウ化物）、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。いくつかの実施形態では、蛍光顕微鏡検査での検出のための標的化システムは、限定されないが、量子ドット、クマリン、ナフタルイミド、フルオレセイン、ＢＯＤＩＰＹ、シアニン、キサンテン、オキサジン、オリゴチオフェン、及びフタロシアニン誘導体（ＰｃＤｅｒ）を含み得る少なくとも１つのフルオロフォアを含む。これらの蛍光化合物は、標的化システムの構造に組み込まれ、カーゴまたはペイロードとしてロードされ、カーゴまたはペイロードの生成物として発現され、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。蛍光顕微鏡検査技術は、経時的なそれらの分布の変化を含む、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象上、または対象の切除されたサンプル上のいずれかの標的化システムの分布を検出するために実施され得る。蛍光顕微鏡検査技術は、器官／組織レベルから細胞タイプレベルまでの対象における標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかの蛍光顕微鏡検査技術は、細胞内レベルでの標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかの実施形態では、蛍光顕微鏡検査技術は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を利用して投与後に細胞のサンプルをソートするために使用され得る。
いくつかの実施形態では、対象における標的化システムの検出は、生物発光画像化（ＢＬＩ）技術を利用して実施され得る。このアプローチは、知られているまたは発見された任意の方法によって行われ得る。理論に縛られることを望むものではないが、ＢＬＩ画像化は、生理的条件下で化学的反応の生成物として光を放射する外因的に供給された化合物を利用する。これらの発光は、光及び蛍光顕微鏡検査の様々な技術を介して検出され得る。いくつかの実施形態では、ＢＬＩ技術は、生物発光化合物を含む標的化システムと併せて使用され得る。そのような化合物は、ナノ粒子内にまたは送達後の発現のためのカーゴまたはペイロードとして組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、生物発光化合物には、ウミシイタケルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼ、Ｎａｎｏｌｕｃルシフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、コメツキムシルシフェラーゼ、またはそれらの任意の組み合わせを含むルシフェラーゼが含まれ得るがこれらに限定されない。ＢＬＩ技術は、経時的なそれらの分布の変化を含む、ｉｎ ｖｉｖｏでの対象上、または対象の切除されたサンプル上のいずれかの指向性発見プラットフォームの分布を検出するために実施され得る。ＢＬＩは、器官／組織レベルから細胞タイプレベルまでの対象における標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかのＢＬＩ技術は、細胞内レベルでの標的化システムの検出を可能とし得る。いくつかの実施形態では、ＢＬＩ技術には、ｉｎ ｖｉｖｏ画像化システム（ＩＶＩＳ）で異なる器官からのルシフェラーゼ発現を定量することが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムの検出は、ヌクレオチドシーケンシング技術を利用して実施され得る。ヌクレオチドシーケンシング技術は、サンプルにおける識別子（例えば、バーコード）配列等のヌクレオチドの既知の配列の存在を検出するために使用され得る。標的化システムを検出するために使用され得るヌクレオチドシーケンシング技術の非限定的な例には、ハイスループットシーケンシング、ＰＣＲ、ディープシーケンシング、及びそれらの任意の組み合わせが含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムの検出は、既知のペプチド配列またはタンパク質（すなわち、レポーター配列）をコードする機能的ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、またはｏＲＮＡ）を含むトラッキングシステムの生成物を検出することによって実施され得る。いくつかの実施形態では、機能的ポリヌクレオチドは、独自の非機能的ポリペプチド配列（すなわち、ペプチドまたはタンパク質）をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列は、β－ガラクトシダーゼ（β－ｇａｌ）配列を含み得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列は、ｅＧＦＰ、ルシフェラーゼ、遺伝子編集体（例えば、ｃａｓ９編集、ＤＮＡリードアウト）、ｏｘ－４０、ベータ６インテグリン、ＣＤ４５、（３ｘ）－ＨＡタグを有する表面マーカー、ＴＥＶプロテアーゼ部位（を有するまたは有しない）（３ｘ）－フラッグタグ、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列は、ルシフェラーゼまたは蛍光化合物配列を含み得る。いくつかの実施形態では、機能的配列の発現、及び転じて、標的化システムの存在は、先行開示された任意の技術によって実施され得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列を含むトラッキングシステムの生成物を検出することは、発現の生成物を検出するために知られているまたは発見された任意の方法を使用して実施され得る。そのような技術には、液体／ガスクロマトグラフィー、質量分析、光分光法（吸光度）、ゲル電気泳動、定量的酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロッティング、ドットブロッティング、ノーザンブロッティング、タンパク質免疫染色、タンパク質免疫沈降、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムの検出は、特別に設計されたトラッキングシステムとマッチするように選択された検出システムを利用することによって実施され得る。非限定的な例として、本明細書に記載の標的化システムは、電子顕微鏡検査、熱画像化、超音波画像化、光音響画像化、ｌａｂアッセイ、及びそれらの任意の組み合わせによって検出され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化システムの検出は、セルソーティング方法によって認識される成分を含むトラッキングシステムナノ粒子と組み合わされた、磁性ビーズ、フローサイトメトリー、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳでのペプチドの切断、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、またはそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されないセルソーティング技術を利用することによって実施され得る。
いくつかの実施形態では、検出技術は、１つの製剤またはカーゴのみを一度に分析し得る。いくつかの実施形態では、検出技術は、複数の製剤またはカーゴを一度に分析し得る。いくつかの実施形態では、検出技術は、約１個の製剤、２個の製剤、３個の製剤、４個の製剤、５個の製剤、６個の製剤、７個の製剤、８個の製剤、９個の製剤、１０個の製剤、１１個の製剤、１２個の製剤、１３個の製剤、１４個の製剤、１５個の製剤、１６個の製剤、１７個の製剤、１８個の製剤、１９個の製剤、２０個の製剤、２１個の製剤、２２個の製剤、２３個の製剤、２４個の製剤、２５個の製剤、またはそれを超える製剤を一度に分析し得る。いくつかの実施形態では、検出技術は、約１～１００個の製剤を分析し得る。非限定的な例として、検出技術は、約１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１～７０、１～８０、または１～９０個の製剤を分析し得る。いくつかの実施形態では、検出技術は、一度に１００個を超える製剤を分析し得る。
いくつかの実施形態では、標的化システムのライブラリが分析され得る。非限定的な例として、標的化システムは、同じ製剤及び異なる識別子配列または部位を有し得る。別の非限定的な例として、標的化システムは、同じ製剤及び同じ識別子配列または部位を有し得る。別の非限定的な例として、標的化システムは、異なる製剤及び同じ識別子配列または部位を有し得る。別の非限定的な例として、標的化システムは、異なる製剤及び異なる識別子配列または部位を有し得る。
いくつかの実施形態では、標的化システムのライブラリは、分析のための１つの識別子配列または部位を有し得る。
いくつかの実施形態では、標的化システムのライブラリは、分析のための少なくとも２つの識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２～１０個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２～１００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２～５００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための１００～５００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２～１０００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２～２５００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための１０００～２５００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための１０００～５０００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための２５００～５０００個の識別子配列または部位を有し得る。ライブラリは、分析のための４０００～５０００個の識別子配列または部位を有し得る。
いくつかの実施形態では、標的化システムのライブラリは、ナノ粒子送達ビヒクルにおいて製剤化された少なくとも１つのオリジネーターコンストラクトまたはベンチマークコンストラクトを有し得る。ライブラリは、１～１００００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～１０個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～１００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～５００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１００～５００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～１０００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１００～５００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１０００～５０００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、２５００～５０００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～５０００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、１～１００００個のナノ粒子を有し得る。ライブラリは、５０００～１００００個のナノ粒子を有し得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、脂質ナノ粒子であり得る。
ＶＩＩＩ．使用方法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、疾患、障害及び病態を診断、予防、処置及び／または管理するための治療剤として、または診断剤として使用され得る。治療剤は、個別化医療、イムノオンコロジー、がん、ワクチン、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ）において使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、診断目的のためにまたは診断ツールとして使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の送達システムは、食中毒、胃腸炎、感染性疾患、放置された局所疾患、熱帯病、ベクター媒介疾患、毒素曝露を処置するために使用され得る。
薬学的組成物は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１２１３５８０５（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように送達され得る。
本開示は、薬学的組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。薬学的組成物は、疾患、障害、及び／または病態を予防、処置、診断、または画像化するために有効であり得る任意の投与量及び任意の投与経路を使用して対象に投与され得る。必要とされる正確な量は、限定されないが、対象の種、年齢、及び全般的状態、疾患の重症度、特定の組成物、その投与様式、その活性様式等の要因に応じて対象毎に様々となる。薬学的組成物は、動物、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、飼いならされた動物、ネコ、イヌ、サル、マウス、ラット等）に投与され得る。薬学的組成物のペイロードは、ポリヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、その薬学的、予防的、診断的、または画像化組成物は、ヒトに投与される。
いくつかの実施形態では、活性剤は、局在的、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、脳室内、経皮、皮間、直腸、膣内、腹腔内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／または液滴による）、粘膜、鼻、口腔内、腸内、硝子体、腫瘍内、舌下；気管内滴下、気管支滴下、及び／または吸入によって；経口スプレー、鼻スプレー、及び／またはエアロゾルとして、及び／または門脈カテーテルを介して、を含むがこれらに限定されない多様な経路のうちの１つ以上によって投与される。
いくつかの実施形態では、活性剤は、全身性静脈内注射によって投与される。
いくつかの実施形態では、活性剤は、静脈内に及び／または経口で投与される。
特定の実施形態では、活性剤は、活性剤が血液脳関門、血管障壁、または他の上皮障壁を通過することを可能とする方法で投与され得る。
注射用調製物、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁剤を使用して既知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口で許容可能な希釈剤及び／または溶媒中の滅菌注射用溶液、懸濁液、及び／またはエマルション、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液であり得る。用いられ得る許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。滅菌固定油が、溶媒または懸濁媒体として従来から用いられる。この目的のため、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無菌性固定油が用いられ得る。脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射剤の調製において使用され得る。
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを介する濾過によって、及び／または使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解または分散され得る滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって滅菌され得る。
薬学的組成物の局在的、局所及び／または経皮投与のための投薬形態には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤及び／またはパッチが含まれ得る。また、本開示は、身体への化合物のコントロールされた送達を提供する付加された利点をしばしば有する経皮パッチの使用を企図する。そのような投薬形態は、例えば、適切な培地に化合物を溶解及び／または分配することによって調製され得る。代替的にまたは追加的に、速度は、速度コントロール膜を提供すること及び／または化合物をポリマーマトリックス及び／またはゲルに分散させることのいずれかによってコントロールされ得る。
局所投与に好適な製剤には、液体及び／または半液体調製物、例えば、塗布剤、ローション、水中油及び／または油中水エマルション、例えば、クリーム、軟膏及び／またはペースト、及び／または溶液及び／または懸濁液が含まれるがこれらに限定されない。局所に投与可能な製剤は、例えば、約１％～約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒における活性成分の溶解限度と同じくらい高い場合があり得る。局所投与のための製剤は、本明細書に記載の追加の成分の１つ以上をさらに含み得る。
薬学的組成物は、眼投与に好適な製剤で調製、包装、及び／または販売され得る。そのような製剤は、例えば、水性または油性液体賦形剤中の活性成分の０．１／１．０％（ｗ／ｗ）の溶液及び／または懸濁液を含む、点眼剤の形態であり得る。そのような点眼剤は、緩衝剤、塩、及び／または本明細書に記載の任意の追加の成分のうちの１つ以上の他をさらに含み得る。有用である他の眼に投与可能な製剤には、微結晶形態及び／またはリポソーム調製物で活性成分を含むものが含まれる。点耳剤及び／または点眼剤は、本開示の範囲内にあるものとして企図される。
通常、最も適切な投与経路は、送達される活性剤の特質（例えば、消化管、血流等の環境におけるその安定性）、患者の状態（例えば、患者が特定の投与経路に耐えることができるかどうか）等を含む多様な要素に依存する。本開示は、薬物送達の科学における可能性のある進歩を考慮した任意の適切な経路による活性剤の送達を包含する。
所定の実施形態では、本開示による薬学的組成物は、所望の治療的、診断的または予防的効果を得るために、１日当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）を１日１回以上送達するために十分な投薬量レベルで投与され得る。所望の投薬量は、１日３回、１日２回、１日１回、隔日、３日毎、毎週、２週毎、３週毎、または４週毎に送達され得る。所定の実施形態では、所望の投薬量は、複数回の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、またはそれを超える投与）を使用して送達され得る。複数回の投与が用いられる場合、分割投薬レジメン、例えば、本明細書に記載のものが使用され得る。
本開示によれば、分割用量レジメンでの活性剤の投与は、哺乳動物対象においてより高いレベルのタンパク質を生成し得る。本明細書で使用される場合、「分割用量」は、単回単位用量または全１日用量の、２つ以上の用量への分割である。本明細書で使用される場合、「単回単位用量」は、１つの用量で／１回／単一経路／単一接触点で、すなわち、単一投与事象で投与される任意の治療剤の用量である。本明細書で使用される場合、「全１日用量」は、２４時間の期間で与えられるまたは処方される量である。それは、単回単位用量として投与され得る。１つの実施形態では、本開示の活性剤は、分割用量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、活性剤は、緩衝液のみでまたは本明細書に記載の製剤で製剤化される。
本開示のＬＮＰは、１つ以上の他の治療剤、予防剤、診断剤、または造影剤と組み合わせて使用または投与され得る。「と組み合わせて」は、薬剤が同時に投与されなければならない及び／または一緒に送達するために製剤化されなければならないことを意味することは意図されていないが、これらの送達方法は、本開示の範囲内である。薬学的組成物は、１つ以上の他の所望の治療剤または医学的処置と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。通常、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／または時間スケジュールで投与される。いくつかの実施形態では、本開示は、それらのバイオアベイラビリティを改善する、それらの代謝を低減及び／または修飾する、それらの排泄を阻害する、及び／または身体内のそれらの分布を修飾する場合がある薬剤と組み合わせた薬学的、予防的、診断的、または画像化組成物の送達を包含する。
組み合わせて利用される治療的、予防的、診断的、または画像化活性剤は、単一の薬学的組成物で一緒に投与され、または異なる薬学的組成物で別々に投与され得ることがさらに理解されるであろう。通常、組み合わせて利用される薬剤は、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予期される。いくつかの実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、個々に利用されるものよりも低くなる。１つの実施形態では、組み合わせは、それぞれまたは一緒に、本明細書に記載の分割投薬レジメンに従って投与され得る。
組み合わせレジメンにおいて用いるための療法（治療剤または処置）の特定の組み合わせは、所望の治療剤及び／または処置及び達成される所望の治療効果の適合性を考慮する。用いられる療法は、同じ障害について所望の効果を達成し得（例えば、本開示に従ってがんを処置するために有用な薬学的組成物は、化学療法剤と同時に投与され得る）、またはそれらは、異なる効果（例えば、任意の有害作用のコントロール）を達成し得ることも理解される。
本明細書に開示されるＬＮＰを含有する薬学的組成物は、筋肉内、経動脈的、眼球内、膣、直腸、腹腔内、静脈内、鼻腔内、皮下、内視鏡的、経皮的、筋肉内、脳室内、皮内、髄腔内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／または液滴による）、粘膜、鼻、腸、腫瘍内、気管内滴下、気管支滴下、及び／または吸入による；鼻スプレー及び／またはエアロゾル、及び／または門脈カテーテルを介する投与のために製剤化される。
薬学的組成物はまた、直接浸漬または浴入れ、カテーテルを介するもの、ゲル、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／または液滴によるもの、薬学的組成物で被覆または含浸されたファブリックまたは生分解性物質等の基材を使用することによるもの等を含むがこれらに限定されない当該技術分野におけるいくつかの方法のいずれかで器官または組織への直接送達のために製剤化され得る。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、延長放出のために製剤化され得る。特定の実施形態では、活性剤及び／またはその薬学的、予防的、診断的、または画像化組成物は、活性剤が血液脳関門、血管障壁、または他の上皮障壁を通過することを可能とする方法で投与され得る。
本開示のいくつかの態様では、本開示の活性剤は、標的組織内にまたはその近くに空間的に保持される。薬学的組成物、特に薬学的組成物の活性剤成分（複数可）が標的組織において実質的に保持される（薬学的組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％超が標的組織において保持されることを意味する）ような条件下で標的組織（１つ以上の標的細胞を含有する）を薬学的組成物と接触させることによって哺乳動物対象の標的組織に薬学的組成物を提供する方法が提供される。有利には、保持は、１つ以上の標的細胞に進入する薬学的組成物に存在する活性剤の成分の量を測定することによって決定される。例えば、対象に投与された活性剤の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％超は、投与後の所定期間で細胞内に存在する。
本開示の態様は、薬学的組成物が標的組織または器官において実質的に保持されるような条件下で標的組織（１つ以上の標的細胞を含有する）または器官（１つ以上の標的細胞を含有する）を薬学的組成物と接触させることによって、薬学的組成物を哺乳動物対象の標的組織または器官に提供する方法を対象とする。薬学的組成物は、有効量の活性剤を含有する。
筋肉内及び／または皮下に投与され得る薬学的組成物には、ポリマー、コポリマー、及びゲルが含まれ得るがこれらに限定されない。ポリマー、コポリマー及び／またはゲルは、限定されないが、分子量、粒子サイズ、ペイロード及び／またはモノマーの比等の要素を調整することによって放出動態を修飾するためにさらに調整され得る。非限定的な例として、筋肉内及び／または皮下に投与される製剤には、コポリマー、例えば、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）が含まれ得る。
本明細書に記載の薬学的組成物の局在化送達は、例えば、限定されないが、局所送達、眼送達、経皮送達等の方法によって投与され得る。薬学的組成物はまた、例えば、限定されないが、対象の身体が処置中に環境に開放されている場合、局在化送達に通常利用可能ではない身体の一部に局所投与され得る。薬学的組成物はさらに、身体部分を薬学的組成物で浴入れ、浸漬及び／または包囲することによって送達され得る。
しかしながら、本開示は、薬物送達の科学における可能性のある進歩を考慮した任意の適切な経路による、本明細書に開示される活性剤、及び／またはその薬学的、予防的、診断的、または画像化組成物の送達を包含する。
細胞においてポリペプチドを生成する方法
本開示は、哺乳動物細胞において対象となるポリペプチドを生成する方法を提供する。ポリペプチドを生成する方法は、細胞を、対象となるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰを含む本開示の製剤と接触させることを伴う。細胞を脂質ナノ粒子と接触させることにより、ｍＲＮＡは、細胞に取り込まれ、翻訳されて、対象となるポリペプチドを生成し得る。
通常、哺乳動物細胞を、対象となるポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰと接触させる工程は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ｅｘ ｖｉｖｏで、培養下で、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで実施され得る。細胞と接触させられる脂質ナノ粒子の量、及び／またはその中のｍＲＮＡの量は、接触させられる細胞または組織のタイプ、投与の手段、脂質ナノ粒子及びその中のｍＲＮＡの生理化学的特徴（例えば、サイズ、電荷、及び化学的組成）、及び他の因子に依存し得る。通常、脂質ナノ粒子の有効量は、細胞における効率的なポリペプチド生成を可能とするであろう。効率のための測定基準には、ポリペプチド翻訳（ポリペプチド発現によって示される）、ｍＲＮＡ分解のレベル、及び免疫反応インディケーターが含まれ得る。
ｍＲＮＡを含むＬＮＰを細胞と接触させる工程は、トランスフェクションを伴い、または引き起こし得る。ＬＮＰの脂質成分に含むリン脂質は、例えば、細胞膜又細胞内膜と相互作用及び／または融合することによって、トランスフェクションを容易化し、及び／またはトランスフェクション効率を増加させ得る。トランスフェクションは、細胞内のｍＲＮＡの翻訳を可能とし得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、治療的に使用され得る。例えば、ＬＮＰに含まれるｍＲＮＡは、（例えば、翻訳可能な領域において）治療的ポリペプチドをコードし、細胞との接触及び／または細胞への進入（例えば、トランスフェクション）により治療的ポリペプチドを生成し得る。他の実施形態では、ＬＮＰに含まれるｍＲＮＡは、対象の免疫を改善または増加させ得るポリペプチドをコードし得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、顆粒球－コロニー刺激因子またはトラスツズマブをコードし得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰに含まれるｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子と接触させられる細胞において実質的に非存在であり得る１つ以上のポリペプチドを置き換え得る組換えポリペプチドをコードし得る。１つ以上の実質的に非存在のポリペプチドは、コード遺伝子またはその制御経路の遺伝子変異に起因して欠いている場合がある。代替的には、ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内の、細胞の表面上の、または細胞から分泌された内因性タンパク質の活性をアンタゴナイズし得る。アンタゴナイズ組換えポリペプチドは、変異によって引き起こされる改変された活性または局在化等の内因性タンパク質の活性によって引き起こされる有害な作用に対抗するために所望であり得る。別の代替手段では、ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内の、細胞の表面上の、または細胞から分泌された生物学的部位の活性を間接的または直接的にアンタゴナイズし得る。アンタゴナイズされる生物学的部位には、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、及び小分子毒素が含まれ得るがこれらに限定されない。ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内、例えば、特定の区画、例えば、核内の局在化のために操作され得、または細胞からの分泌または細胞の細胞膜への転移のために操作され得る。
いくつかの実施形態では、細胞をｍＲＮＡを含むＬＮＰと接触させることは、外因性核酸に対する細胞の自然免疫反応を低減し得る。細胞は、翻訳可能な領域を含む第１の外因性ｍＲＮＡの第１の量を含む第１の脂質ナノ粒子と接触させられ得、第１の外因性ｍＲＮＡに対する細胞の自然免疫反応のレベルが決定され得る。その後、細胞は、第１の外因性ｍＲＮＡを含む第２の量を含む第２の組成物と接触させられ得、第２の量は、第１の量と比較して第１の外因性ｍＲＮＡの量が少ない。代替的には、第２の組成物には、第１の外因性ｍＲＮＡとは異なる第２の外因性ｍＲＮＡの第１の量が含まれ得る。細胞を第１及び第２の組成物と接触させる工程は、１回以上繰り返され得る。また、細胞におけるポリペプチ生成（例えば、翻訳）の効率が任意に決定され得、細胞は、標的タンパク質生成効率が達成されるまで第１及び／または第２の組成物と繰り返し再接触させられ得る。
治療剤を細胞及び器官に送達する方法
本明細書では、疾患または障害を処置する方法であって、方法は、それを必要とする対象に本開示の薬学的組成物、例えば、本明細書に記載のＬＮＰを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法が提供される。
本開示は、活性剤及び／または予防剤、例えば、核酸を哺乳動物細胞または器官に送達する方法を提供する。細胞への治療剤及び／または予防剤の送達は、治療剤及び／または予防剤、例えば、核酸を含むＬＮＰを含む本開示の製剤を対象に投与することを伴い、組成物の投与は、細胞を組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質、細胞傷害剤、放射性イオン、化学療法剤、または核酸（ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ等）は、細胞または器官に送達され得る。治療剤及び／または予防剤がｍＲＮＡである例では、細胞を脂質ナノ粒子と接触させることにより、翻訳可能なｍＲＮＡは、対象となるポリペプチドを生成するために細胞において翻訳され得る。しかしながら、実質的に翻訳可能ではないｍＲＮＡもまた、細胞に送達され得る。実質的に非翻訳可能なｍＲＮＡは、ワクチンとして有用であり得、及び／または細胞において他の種の発現を低減するために細胞の翻訳成分を隔離し得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、特定のタイプまたはクラスの細胞（例えば、特定の器官またはそのシステムの細胞）を標的とし得る。いくつかの実施形態では、対象となる治療剤及び／または予防剤を含むＬＮＰは、哺乳動物肝臓、腎臓、脾臓、大腿、または肺に特異的に送達され得る。特定のクラスの細胞、器官、またはそのシステムもしくはグループへの「特異的送達」は、例えば、哺乳動物へのＬＮＰの投与により、他の目的地と比べてより高い割合の治療剤及び／または予防剤を含む脂質ナノ粒子が対象となる目的地（例えば、組織）に送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、特異的送達は、別の目的地（例えば、脾臓）と比較した場合、標的とされる目的地（例えば、対象となる組織、例えば、肝臓）の組織１ｇ当たり治療剤及び／または予防剤の量の２倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍を超える増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、対象となる組織は、肝臓、腎臓、肺、脾臓、大腿、血管における血管内皮（例えば、冠動脈内または大腿内）または腎臓、及び腫瘍組織（例えば、腫瘍内注射を介する）からなる群から選択される。
標的化または特異的送達の別の例として、タンパク質－結合パートナー（例えば、抗体またはその機能的断片、骨格タンパク質、またはペプチド）または細胞表面上の受容体をコードするｍＲＮＡがＬＮＰに含まれ得る。ｍＲＮＡは、脂質、炭水化物、または他の生物学的部位の合成及び細胞外局在化を誘導するために追加的にまたは代わりに使用され得る。代替的には、ＬＮＰの他の治療剤及び／または予防剤または要素（例えば、脂質またはリガンド）は、ＬＮＰが受容体を含む標的細胞集団とより容易に相互作用し得るように、特定の受容体（例えば、低密度リポタンパク質受容体）に対するそれらの親和性に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態では、リガンドには、特異的結合対のメンバー、抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、シングルドメイン抗体、ラクダ科動物化抗体及びその断片、ヒト化抗体及びその断片、及びその多価バージョン；単一または二重特異的抗体を含む多価結合試薬、例えば、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ｓｃＦｖタンデム、ダイアボディ、トリボディ、またはテトラボディ；ならびにアプタマー、受容体、及び融合タンパク質が含まれ得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、リガンドは、細胞標的化特異性の調整を可能とし得る表面結合抗体であり得る。これは、高度に特異的な抗体が所望の標的化部位のための対象となるエピトープに対して樹立され得るので、特に有用である。いくつかの実施形態では、複数の抗体が細胞の表面上に発現し、各抗体は、所望の標的に対する異なる特異性を有し得る。そのようなアプローチは、標的化相互作用のアビディティ及び特異性を増加させ得る。
リガンドは、例えば、細胞の所望の局在化または機能に基づいて、生物学的分野における当業者によって、選択され得る。いくつかの実施形態では、エストロゲン受容体リガンド、例えば、タモキシフェンは、細胞表面上の増加した数のエストロゲン受容体を有するエストロゲン依存性乳癌細胞に細胞を標的化し得る。リガンド／受容体相互作用の他の非限定的な例には、ＣＣＲ１（例えば、関節リウマチ、及び／または多発性硬化症における炎症性関節組織または脳の処置のため）、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８（例えば、リンパ節組織への標的化）、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０（例えば、腸組織に標的化するため）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ１０（例えば、皮膚への標的化のため）、ＣＸＣＲ４（例えば、向上した移動のため）、ＨＣＥＬＬ（例えば、炎症及び炎症性障害、骨髄の処置のため）、アルファ４ベータ７（例えば、腸粘膜標的化のため）、及びＶＬＡ－４ＮＣＡＭ－１（例えば、内皮への標的化）が含まれる。通常、標的化（例えば、がん転移）に関与する任意の受容体は、本明細書に記載の方法及び組成物において使用するために利用され得る。
標的とされる細胞には、肝細胞、上皮細胞、造血細胞、上皮細胞、内皮細胞、肺細胞、骨細胞、幹細胞、間葉細胞、神経細胞、心臓細胞、脂肪細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、骨格筋細胞、ベータ細胞、下垂体細胞、滑膜表層細胞、卵巣細胞、精巣細胞、線維芽細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、網状赤血球、白血球、顆粒球、及び腫瘍細胞が含まれ得るがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、肝細胞を標的とし得る。アポリポタンパク質、例えば、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）は、身体において中性またはほぼ中性の脂質含有脂質ナノ粒子と会合することが示されており、肝細胞の表面上に見られる低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）等の受容体と会合することが知られている。よって、対象に投与される中性またはほぼ中性の電荷を有する脂質成分を含むＬＮＰは、対象の身体においてａｐｏＥを獲得し得、その後、標的化様式でＬＤＬＲを含む肝細胞に治療剤及び／または予防剤（例えば、ＲＮＡ）を送達し得る。
疾患及び障害を処置する方法
脂質ナノ粒子は、疾患、障害、または病態を処置するために有用である。特に、そのような組成物は、欠けているまたは異常なタンパク質またはポリペプチド活性によって特性化される疾患、障害、または病態の処置において有用である。いくつかの実施形態では、欠けているまたは異常なポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰを含む本開示の製剤は、細胞に投与または送達され得る。その後のｍＲＮＡの翻訳は、ポリペプチドを生成し得、それにより、ポリペプチドによって引き起こされる活性の非存在または異常な活性によって引き起こされる問題を低減または排除する。翻訳は急速に生じ得るので、方法及び組成物は、急性疾患、障害、または病態、例えば、敗血症、脳卒中、及び心筋梗塞の処置において有用であり得る。ＬＮＰに含まれる治療剤及び／または予防剤はまた、所与の種の転写率を改変することが可能で得、それにより遺伝子発現に影響を及ぼす。
組成物が投与され得る機能障害性または異常なタンパク質またはポリペプチド活性によって特性化される疾患、障害、及び／または病態には、希少疾患、感染性疾患（ワクチン及び治療剤の両方として）、がん及び増殖性疾患、遺伝子疾患（例えば、嚢胞性線維症）、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心臓及び腎臓血管疾患、ならびに代謝疾患が含まれるがこれらに限定されない。複数の疾患、障害、及び／または病態は、タンパク質活性の欠如（または適切なタンパク質機能が生じないように実質的に減弱される）によって特性化され得る。そのようなタンパク質は、存在しない場合があり、またはそれらは、本質的に非機能的であり得る。機能障害性タンパク質の特定の例は、嚢胞性線維症を引き起こすＣＦＴＲタンパク質の機能障害性タンパク質バリアントを生成する嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のミスセンス変異バリアントである。本開示は、ＲＮＡならびに本明細書に開示されるＰＥＧ化脂質化合物、リン脂質（任意に不飽和）、任意に第２のＰＥＧ化脂質、及び構造脂質を含む脂質成分を含むＬＮＰを投与することによって対象におけるそのような疾患、障害、及び／または病態を処置するための方法であって、ＲＮＡは、対象の細胞に存在する異常なタンパク質活性をアンタゴナイズする、またはそうでなければ克服するポリペプチドをコードするｍＲＮＡであり得る、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子は、抗原タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗原タンパク質をコードするｍＲＮＡまたはｃｉｒｃＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１～５４から選択されるタンパク質、または配列番号１～５４から選択されるタンパク質と約６０％の配列同一性、約７０％の配列同一性、約８０％の配列同一性、約９０％の配列同一性、または約９５％の配列同一性を有する配列をコードする。
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出された配列表を含有する。配列表ＸＭＬは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年９月１３日に作成された前記ＸＭＬファイルは、ＲＥＧ００６＿ＳＬと名付けられており、サイズが９７，５６３バイトである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子は、疾患または障害を処置する方法において有用である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、食中毒または胃腸炎である。いくつかの実施形態では、食中毒は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ菌、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、エンテロトキシンＢ、ノーウォークウイルス／ノロウイルス、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｒｏｌｉ、及びロタウイルスからなる群から選択される病原体によって引き起こされる。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、感染性疾患である。いくつかの実施形態では、感染性物質は、カンジダ酵母、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、エンテロウイルス７１、エプスタイン・バーウイルス、グラム陰性菌（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、グラム陽性菌（例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ Ｔｅｔａｎｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌）、肝炎ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ＨＩＶ、ＨＰＶ、インフルエンザウイルス、ＪＣＶ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ポックスウイルス、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｏｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、水痘帯状疱疹ウイルス、チクングンヤウイルス、デングウイルス、狂犬病ウイルス、ｔｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、エボラウイルス、ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、及び黄熱病ウイルスからなる群から選択される物質での感染症の結果である。予防的適用
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、疾患を予防するためにまたは疾患の進行を安定化するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、将来の疾患または障害を予防するための予防剤として使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、疾患または障害のさらなる進行を停止させるために使用され得る。
ワクチン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ワクチンとして、及び／またはワクチンのものと同様の様式で使用され得る。本明細書で使用される場合、「ワクチン」は、特定の疾患または感染性物質に対する免疫を改善する生物学的調製物である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、治療的領域、例えば、限定されないが、心臓血管、ＣＮＳ、皮膚科学、内分泌学、腫瘍学、免疫学、呼吸、及び抗感染症剤のためのワクチンとして、及び／またはそのワクチンのものと同様の様式で使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、食中毒を診断、予防、処置及び／または管理するためのワクチンとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、胃腸炎を診断、予防、処置及び／または管理するためのワクチンとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、インフルエンザを診断、予防、処置及び／または管理するためのワクチンとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ＨＩＶを診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、コロナウイルスを診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ＣＯＶＩＤ－１９を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ポリオを診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、破傷風を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、Ａ型肝炎を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、Ｂ型肝炎を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、Ｃ型肝炎を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、風疹を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得るとして使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、Ｈｉｂ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型）を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、麻疹を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ Ｃｏｕｇｈ））を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、肺炎球菌疾患を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ロタウイルスを診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、おたふく風邪を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、水痘を診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ジフテリアを診断、予防、処置及び／または管理するための予防剤として使用され得る。
避妊剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、避妊剤として、及び／または避妊剤のものと同様の様式で使用され得る。本明細書で使用される場合、用語、「避妊剤」は、妊娠を予防するために使用され得る任意の薬剤または方法として定義され得る。
いくつかの実施形態では、避妊剤は、短期または長期で使用され得る。
いくつかの実施形態では、避妊剤は、可逆的または永続的であり得る。
診断
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、前述した疾患または障害のいずれかのための診断目的のためにまたは診断ツールとして使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、疾患診断のためのバイオマーカーを検出するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、診断画像化目的、例えば、ＭＲＩ、ＰＥＴ、ＣＴまたは超音波のために使用され得る。
研究
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、前述した疾患または障害のいずれかのための診断目的のためにまたは研究ツールとして使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、研究のためのバイオマーカーを検出するために使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、任意の研究実験、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ実験において使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、培養細胞において使用され得る。培養細胞は、当業者に知られている任意の起源に由来し得、非限定的な例として、安定な細胞株、動物モデルまたはヒト患者または対照対象に由来し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、動物モデル（すなわち、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、非ヒト霊長類、モルモット、フェレット、ｃ－ｅｌｅｇａｎｓ、ショウジョウバエ、ゼブラフィッシュ、または当該技術分野で知られている研究目的のために使用される任意の他の動物）においてｉｎ ｖｉｖｏ実験において使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、ヒト研究実験またはヒト臨床試験において使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の指向性送達システムは、幹細胞及び／または細胞分化において使用され得る。
ＩＸ．列挙される実施形態
本開示の実施形態では、本明細書では、薬学的組成物であって、
ａ）対象となる少なくとも１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び
ｂ）少なくとも１つの脂質を含む送達ビヒクル
を含み、組成物は、対象における免疫反応を誘発させる、薬学的組成物が提供される。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである。
一実施形態では、ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。
一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、細胞における対象となる標的の発現を阻害または抑制する。
一実施形態では、阻害または抑制は、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％及び１００％、または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、９０～９５％、９０～１００％または９５～１００％である。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、実質的に環状である。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、ペイロード配列領域に機能可能に連結された内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む。
一実施形態では、ＩＲＥＳ配列は、ピコルナウイルス相補的ＤＮＡ、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）相補的ＤＮＡ、ポリオウイルス相補的ＤＮＡ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからのアンテナペディア遺伝子に由来する配列を含む。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、終結要素を含み、終結要素は、少なくとも１つの終止コドンを含む。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、制御性要素を含む。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのマスキング剤を含む。
一実施形態では、実質的に環状のポリヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写を使用して生成される。
一実施形態では、ペイロード配列領域は、非コード核酸配列を含む。
一実施形態では、ペイロード配列領域は、コード核酸配列を含む。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、エンテロトキシンＢのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ノーウォークウイルスまたはノロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ロタウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、カンジダ酵母のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、コロナウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、エンテロウイルス７１のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、エプスタイン・バーウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、グラム陰性菌のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、グラム陰性菌は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａである。
一実施形態では、コード核酸配列は、グラム陽性菌のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、グラム陽性菌は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉである。
一実施形態では、グラム陽性菌は、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓである。
一実施形態では、グラム陽性菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌である。
一実施形態では、グラム陽性菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌である。
一実施形態では、コード核酸配列は、肝炎のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ヒトサイトメガロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ヒト免疫不全ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ヒトパピローマウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、インフルエンザのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ジョンカニンガムウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ポックスウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、呼吸器合胞体ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、風疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、水痘帯状疱疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、チクングンヤウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、デングウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、狂犬病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、エボラウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、マールブルグウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、日本脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、セントルイス脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ウエストナイルウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、黄熱病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、ボツリヌス毒素のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、リシンのための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、コード核酸配列は、志賀毒素及び／または志賀様毒素のための対象となるタンパク質をコードする。
一実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む。
一実施形態では、少なくとも１つの修飾は、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオウリジン、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシウリジン、３－メチルウリジン、５－カルボキシメチル－ウリジン、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチルウリジン、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン、１－タウリノメチル－４－チオ－ウリジン、５－メチル－ウリジン、１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、及び４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、５－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン、Ｎ４－アセチルシチジン、５－ホルミルシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、及び４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、２－アミノプリン、２、６－ジアミノプリン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチルアデノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン、７－メチルアデニン、２－メチルチオ－アデニン、及び２－メトキシ－アデニン、イノシン、１－メチル－イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７－デアザ－グアノシン、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチルイノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチルグアノシン、Ｎ２－メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、またはＮ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシンである。
一実施形態では、薬学的組成物は、表（Ｉ）における任意の脂質、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのカチオン性脂質を含む。
一実施形態では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質である。
一実施形態では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ１、ＣＹ２、ＣＹ３、ＣＹ９、ＣＹ１０、ＣＹ１１、ＣＹ１２、ＣＹ２２、ＣＹ２３、ＣＹ２４、ＣＹ３０、ＣＹ３１、ＣＹ３２、ＣＹ３３、ＣＹ４３、ＣＹ４４、ＣＹ４５、ＣＹ５０、ＣＹ５１、ＣＹ５２、及びＣＹ５３からなる群から選択される。
一実施形態では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質である。
一実施形態では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ４、ＣＹ５、ＣＹ１６、ＣＹ１７、ＣＹ１８、ＣＹ２５、ＣＹ２６、ＣＹ３７、ＣＹ３８、ＣＹ３９、ＣＹ４６、ＣＹ５６、及びＣＹ５７からなる群から選択される。
一実施形態では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質である。
一実施形態では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ６、ＣＹ１４、ＣＹ２７、ＣＹ３５、ＣＹ４７、及びＣＹ５５からなる群から選択される。
一実施形態では、カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質である。
一実施形態では、カチオン性脂質は、化合物ＣＹ７、ＣＹ８、ＣＹ１９、ＣＹ２０、ＣＹ２１、ＣＹ２８、ＣＹ２９、ＣＹ４０、ＣＹ４１、ＣＹ４２、ＣＹ４８、ＣＹ４９、ＣＹ５８、ＣＹ５９、及びＣＹ６０からなる群から選択される。
一実施形態では、薬学的組成物は、追加のカチオン性脂質を含む。
一実施形態では、薬学的組成物は、中性脂質を含む。
一実施形態では、薬学的組成物は、アニオン性脂質を含む。
一実施形態では、薬学的組成物は、ヘルパー脂質を含む。
一実施形態では、薬学的組成物は、ステルス脂質を含む。
一実施形態では、脂質及びポリヌクレオチドの重量比は、１００：１～１：１である。
一実施形態では、本明細書に開示される薬学的組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、例えば、Ｔ制御性細胞を優先的に標的とする。例えば、開示される薬学的組成物は、肝細胞よりも優先的に免疫細胞を標的とし得る。例示的な非限定的な免疫細胞には、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、またはＣＤ８＋ＣＤ４＋細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、開示される薬学的組成物は、ペプチド、タンパク質、またはアプタマーベースの標的化リガンドを必要とすることなくカーゴまたはペイロードを免疫細胞に送達する。例えば、ＷＯ２０２１／０２１６３４を参照されたい。
一実施形態では、本明細書に開示される薬学的組成物は、標的化リガンドの非存在下で哺乳動物の肝臓免疫細胞、脾臓Ｔ細胞、または肺内皮細胞に送達される。特定のクラスまたはタイプの細胞への特異的送達は、より高い割合の薬学的組成物が、標的タイプまたはクラスの細胞に送達されることを示す。例えば、特異的送達は、標的とされる目的地の組織１ｇ当たりカーゴまたはペイロードの量の２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍を超える増加をもたらし得る。
一実施形態では、ワクチン製剤は、薬学的組成物を含む。
一実施形態では、ワクチンは、式（Ｉ）～（ＶＩ）のいずれかを用いて調製される。
一実施形態では、本明細書では、感染性物質に対して対象を免疫する方法であって、対象をワクチン製剤または調製物と接触させること及び免疫反応を誘発させることを含む、方法が提供される。
一実施形態では、感染性物質は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、エンテロトキシンＢ、ノーウォークウイルスまたはノロウイルス、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、ロタウイルス、カンジダ酵母、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＭＥＲＳ－ＣｏＶを含むコロナウイルス、エンテロウイルス７１、エプスタイン・バーウイルス、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａを含むグラム陰性菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌を含むグラム陽性菌、及び肝炎、ヒトサイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、ジョンカニンガムウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ポックスウイルス、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、チクングンヤウイルス、デングウイルス、狂犬病ウイルス、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病、エボラウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、黄熱病ウイルス、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、ボツリヌス毒素、リシン、または志賀毒素及び／または志賀様毒素である。
本開示には、以下の列挙される実施形態が含まれる。
１．薬学的組成物であって、
ａ）対象となる少なくとも１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び
ｂ）少なくとも１つの脂質を含む送達ビヒクル
を含み、前記組成物は、対象における免疫反応を誘発させる、前記薬学的組成物。
２．前記ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである、実施形態１に記載の薬学的組成物。
３．前記ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである、実施形態１に記載の薬学的組成物。
４．前記ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、実施形態３に記載の薬学的組成物。
５．前記ｓｉＲＮＡは、細胞における対象となる標的の発現を阻害または抑制する、実施形態４に記載の薬学的組成物。
６．前記阻害または抑制は、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％及び１００％、または少なくとも２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～９５％、２０～１００％、３０～４０％、３０～５０％、３０～６０％、３０～７０％、３０～８０％、３０～９０％、３０～９５％、３０～１００％、４０～５０％、４０～６０％、４０～７０％、４０～８０％、４０～９０％、４０～９５％、４０～１００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～９５％、５０～１００％、６０～７０％、６０～８０％、６０～９０％、６０～９５％、６０～１００％、７０～８０％、７０～９０％、７０～９５％、７０～１００％、８０～９０％、８０～９５％、８０～１００％、９０～９５％、９０～１００％または９５～１００％である、実施形態５に記載の薬学的組成物。
７．前記ポリヌクレオチドは、実質的に環状である、実施形態２または３に記載の薬学的組成物。
８．前記ポリヌクレオチドは、ペイロード配列領域に機能可能に連結された内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む、実施形態７に記載の薬学的組成物。
９．前記ＩＲＥＳ配列は、ピコルナウイルス相補的ＤＮＡ、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）相補的ＤＮＡ、ポリオウイルス相補的ＤＮＡ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒからのアンテナペディア遺伝子に由来する配列を含む、実施形態８に記載の薬学的組成物。
１０．前記ポリヌクレオチドは、終結要素を含み、前記終結要素は、少なくとも１つの終止コドンを含む、実施形態７に記載の薬学的組成物。
１１．前記ポリヌクレオチドは、制御性要素を含む、実施形態７に記載の薬学的組成物。
１２．前記ポリヌクレオチドは、少なくとも１つのマスキング剤を含む、実施形態７～１１のいずれかに記載の薬学的組成物。
１３．前記実質的に環状のポリヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写を使用して生成される、実施形態７～１２のいずれかに記載の薬学的組成物。
１４．前記ペイロード配列領域は、非コード核酸配列を含む、実施形態７～１４のいずれかに記載の薬学的組成物。
１５．前記ペイロード配列領域は、コード核酸配列を含む、実施形態７～１３のいずれかに記載の薬学的組成物。
１６．前記コード核酸配列は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
１７．前記コード核酸配列は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
１８．前記コード核酸配列は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
１９．前記コード核酸配列は、エンテロトキシンＢのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２０．前記コード核酸配列は、ノーウォークウイルスまたはノロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２１．前記コード核酸配列は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２２．前記コード核酸配列は、ロタウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２３．前記コード核酸配列は、カンジダ酵母のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２４．前記コード核酸配列は、コロナウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２５．前記コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２６．前記コード核酸配列は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２７．前記コード核酸配列は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２８．前記コード核酸配列は、エンテロウイルス７１のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
２９．前記コード核酸配列は、エプスタイン・バーウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
３０．前記コード核酸配列は、グラム陰性菌のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
３１．前記グラム陰性菌は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａである、実施形態３０に記載の薬学的組成物。
３２．前記コード核酸配列は、グラム陽性菌のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
３３．前記グラム陽性菌は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉである、実施形態３２に記載の薬学的組成物。
３４．前記グラム陽性菌は、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓである、実施形態３２に記載の薬学的組成物。
３５．前記グラム陽性菌は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌である、実施形態３２に記載の薬学的組成物。
３６．前記グラム陽性菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌である、実施形態３２に記載の薬学的組成物。
３７．前記コード核酸配列は、肝炎のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
３８．前記コード核酸配列は、ヒトサイトメガロウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
３９．前記コード核酸配列は、ヒト免疫不全ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４０．前記コード核酸配列は、ヒトパピローマウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４１．前記コード核酸配列は、インフルエンザのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４２．前記コード核酸配列は、ジョンカニンガムウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４３．前記コード核酸配列は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４４．前記コード核酸配列は、ポックスウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４５．前記コード核酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４６．前記コード核酸配列は、呼吸器合胞体ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４７．前記コード核酸配列は、風疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４８．前記コード核酸配列は、水痘帯状疱疹ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
４９．前記コード核酸配列は、チクングンヤウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５０．前記コード核酸配列は、デングウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５１．前記コード核酸配列は、狂犬病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５２．前記コード核酸配列は、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５３．前記コード核酸配列は、エボラウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５４．前記コード核酸配列は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５５．前記コード核酸配列は、マールブルグウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５６．前記コード核酸配列は、日本脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５７．前記コード核酸配列は、セントルイス脳炎ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５８．前記コード核酸配列は、ウエストナイルウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
５９．前記コード核酸配列は、黄熱病ウイルスのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
６０．前記コード核酸配列は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
６１．前記コード核酸配列は、ボツリヌス毒素のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
６２．前記コード核酸配列は、リシンのための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
６３．前記コード核酸配列は、志賀毒素及び／または志賀様毒素のための対象となるタンパク質をコードする、実施形態１５に記載の薬学的組成物。
６４．前記ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む、実施形態３～６３のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
６５．塩基の少なくとも２０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
６６．塩基の少なくとも３０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
６７．塩基の少なくとも４０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
６８．塩基の少なくとも５０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
６９．塩基の少なくとも６０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７０．塩基の少なくとも７０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７１．塩基の少なくとも８０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７２．塩基の少なくとも９０％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７３．塩基の少なくとも１００％が修飾されている、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７４．特定の塩基が少なくとも１つの修飾を含む、実施形態６４に記載の薬学的組成物。
７５．前記塩基は、アデニンである、実施形態７４に記載の薬学的組成物。
７６．前記アデニン塩基の少なくとも２０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
７７．前記アデニン塩基の少なくとも３０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
７８．前記アデニン塩基の少なくとも４０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
７９．前記アデニン塩基の少なくとも５０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８０．前記アデニン塩基の少なくとも６０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８１．前記アデニン塩基の少なくとも７０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８２．前記アデニン塩基の少なくとも８０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８３．前記アデニン塩基の少なくとも９０％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８４．前記アデニン塩基の少なくとも１００％が修飾されている、実施形態７５に記載の薬学的組成物。
８５．前記塩基は、グアニンである、実施形態７４に記載の薬学的組成物。
８６．前記グアニン塩基の少なくとも２０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
８７．前記グアニン塩基の少なくとも３０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
８８．前記グアニン塩基の少なくとも４０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
８９．前記グアニン塩基の少なくとも５０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９０．前記グアニン塩基の少なくとも６０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９１．前記グアニン塩基の少なくとも７０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９２．前記グアニン塩基の少なくとも８０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９３．前記グアニン塩基の少なくとも９０％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９４．前記グアニン塩基の少なくとも１００％が修飾されている、実施形態８５に記載の薬学的組成物。
９５．前記塩基は、シトシンである、実施形態７４に記載の薬学的組成物。
９６．前記シトシン塩基の少なくとも２０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
９７．前記シトシン塩基の少なくとも３０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
９８．前記シトシン塩基の少なくとも４０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
９９．前記シトシン塩基の少なくとも５０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１００．前記シトシン塩基の少なくとも６０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１０１．前記シトシン塩基の少なくとも７０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１０２．前記シトシン塩基の少なくとも８０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１０３．前記シトシン塩基の少なくとも９０％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１０４．前記シトシン塩基の少なくとも１００％が修飾されている、実施形態９５に記載の薬学的組成物。
１０５．前記塩基は、ウラシルである、実施形態７４に記載の薬学的組成物。
１０６．前記ウラシル塩基の少なくとも２０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１０７．前記ウラシル塩基の少なくとも３０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１０８．前記ウラシル塩基の少なくとも４０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１０９．前記ウラシル塩基の少なくとも５０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１０．前記ウラシル塩基の少なくとも６０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１１．前記ウラシル塩基の少なくとも７０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１２．前記ウラシル塩基の少なくとも８０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１３．前記ウラシル塩基の少なくとも９０％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１４．前記ウラシル塩基の少なくとも１００％が修飾されている、実施形態１０５に記載の薬学的組成物。
１１５．前記少なくとも１つの修飾は、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオウリジン、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシウリジン、３－メチルウリジン、５－カルボキシメチル－ウリジン、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチルウリジン、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン、１－タウリノメチル－４－チオ－ウリジン、５－メチル－ウリジン、１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、及び４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、５－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン、Ｎ４－アセチルシチジン、５－ホルミルシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、及び４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、２－アミノプリン、２、６－ジアミノプリン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチルアデノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン、７－メチルアデニン、２－メチルチオ－アデニン、及び２－メトキシ－アデニン、イノシン、１－メチル－イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７－デアザ－グアノシン、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチルイノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチルグアノシン、Ｎ２－メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、またはＮ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシンである、実施形態６４～１１４のいずれかに記載の薬学的組成物。
１１６．表（Ｉ）における任意の脂質、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのカチオン性脂質をさらに含む、実施形態１に記載の薬学的組成物。
１１７．前記カチオン性脂質は、式（ＣＹ－Ｉ）の構造を有する任意の脂質である、実施形態１１６に記載の薬学的組成物。
１１８．前記カチオン性脂質は、化合物ＣＹ１、ＣＹ２、ＣＹ３、ＣＹ９、ＣＹ１０、ＣＹ１１、ＣＹ１２、ＣＹ２２、ＣＹ２３、ＣＹ２４、ＣＹ３０、ＣＹ３１、ＣＹ３２、ＣＹ３３、ＣＹ４３、ＣＹ４４、ＣＹ４５、ＣＹ５０、ＣＹ５１、ＣＹ５２、及びＣＹ５３からなる群から選択される、実施形態１１７に記載の薬学的組成物。
１１９．前記カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩ）の構造を有する任意の脂質である、実施形態１１６に記載の薬学的組成物。
１２０．前記カチオン性脂質は、化合物ＣＹ４、ＣＹ５、ＣＹ１６、ＣＹ１７、ＣＹ１８、ＣＹ２５、ＣＹ２６、ＣＹ３７、ＣＹ３８、ＣＹ３９、ＣＹ４６、ＣＹ５６、及びＣＹ５７からなる群から選択される、実施形態１１９に記載の薬学的組成物。
１２１．前記カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造を有する任意の脂質である、実施形態１１６に記載の薬学的組成物。
１２２．前記カチオン性脂質は、化合物ＣＹ６、ＣＹ１４、ＣＹ２７、ＣＹ３５、ＣＹ４７、及びＣＹ５５からなる群から選択される、実施形態１２１に記載の薬学的組成物。
１２３．前記カチオン性脂質は、式（ＣＹ－ＩＶ）の構造を有する任意の脂質である、実施形態１１６に記載の薬学的組成物。
１２４．前記カチオン性脂質は、化合物ＣＹ７、ＣＹ８、ＣＹ１９、ＣＹ２０、ＣＹ２１、ＣＹ２８、ＣＹ２９、ＣＹ４０、ＣＹ４１、ＣＹ４２、ＣＹ４８、ＣＹ４９、ＣＹ５８、ＣＹ５９、及びＣＹ６０からなる群から選択される、実施形態１２３に記載の薬学的組成物。
１２５．追加のカチオン性脂質をさらに含む、実施形態１１６～１２４のいずれかに記載の薬学的組成物。
１２６．中性脂質をさらに含む、実施形態１１６～１２５のいずれかに記載の薬学的組成物。
１２７．アニオン性脂質をさらに含む、実施形態１１６～１２６のいずれかに記載の薬学的組成物。
１２８．ヘルパー脂質をさらに含む、実施形態１１６～１２７のいずれかに記載の薬学的組成物。
１２９．ステルス脂質をさらに含む、実施形態１１６～１２８のいずれかに記載の薬学的組成物。
１３０．前記脂質及び前記ポリヌクレオチドの重量比は、約１００：１～約１：１である、実施形態１１６～１２９のいずれかに記載の薬学的組成物。
１３１．実施形態１～１３０のいずれかに記載の薬学的組成物を含むワクチン製剤。
１３２．実施形態１１６～１３０のいずれかに記載の薬学的組成物を含むワクチン調製物。
１３３．感染性物質に対して対象を免疫する方法であって、
ａ）対象を実施形態１３１に記載のワクチン製剤または実施形態１３２のワクチン調製物と接触させること、及び
ｂ）免疫反応を誘発させることを含む、前記方法。
１３４．前記感染性物質は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、エンテロトキシンＢ、ノーウォークウイルスまたはノロウイルス、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、ロタウイルス、カンジダ酵母、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＭＥＲＳ－ＣｏＶを含むコロナウイルス、エンテロウイルス７１、エプスタイン・バーウイルス、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａを含むグラム陰性菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌を含むグラム陽性菌、及び肝炎、ヒトサイトメガロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、ジョンカニンガムウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、ポックスウイルス、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、チクングンヤウイルス、デングウイルス、狂犬病ウイルス、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ及び／またはシャーガス病、エボラウイルス、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ウエストナイルウイルス、黄熱病ウイルス、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、ボツリヌス毒素、リシン、または志賀毒素及び／または志賀様毒素である、実施形態１３３に記載の方法。
１３５．前記接触させることは、経腸（腸内に）、胃腸、硬膜周囲（硬膜内に）、経口（口経由で）、経皮、脳内（大脳内に）、脳室内（脳室内に）、皮膚上（皮膚への塗布）、皮内（皮膚自体の中に）、皮下（皮膚の下に）、鼻腔内投与（経鼻で）、静脈内（静脈の中に）、静脈内ボーラス、点滴静注、動脈内（動脈の中に）、筋肉内（筋肉の中に）、心臓内（心臓の中に）、骨内注入（骨髄の中に）、髄腔内（脊柱管の中に）、実質内（脳組織の中に）、腹腔内（腹腔の中への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内（経眼で）、海綿体内注入（病的腔の中に）、腔内（陰茎の基部の中に）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布用のインタクトな皮膚を介した拡散）、経粘膜（粘膜を介した拡散）、経膣、吹送法（吸引）、舌下、唇下、浣腸、点眼（結膜の上に）、点耳、耳介（耳の中または耳を介して）、頬側（頬に向けて）、結膜、皮膚、歯科的（歯（複数可）に）、電気浸透、子宮頸管内、洞内、気管内、体外、血液透析、浸透、間質内、腹腔内、羊膜内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内（軟骨の中に）、尾内（馬尾の中に）、大槽内（小脳延髄大槽の中に）、角膜内（角膜の中に）、歯冠内、冠動脈内（冠動脈の中に）、海綿体内（陰茎の海綿体の拡張可能な空間の中に）、椎間板内（椎間板の中に）、管内（腺管の中に）、十二指腸内（十二指腸の中に）、硬膜内（硬膜の中または下に）、表皮内（表皮に）、食道内（食道に）、胃内（胃の中に）、歯肉内（歯肉の中に）、回腸内（小腸の遠位部分の中に）、病巣内（局在化病巣の中にまたはそれに直接導入される）、管腔内（管の内腔内）、リンパ内（リンパの中に）、髄内（骨の骨髄腔の中に）、髄膜内（髄膜の中に）、心筋内（心筋の中に）、眼内（眼の中に）、卵巣内（卵巣の中に）、心膜内（心膜の中に）、胸膜内（胸膜の中に）、前立腺内（前立腺の中に）、肺内（肺またはその気管支の中に）、洞内（鼻または眼窩周囲の洞の中に）、髄腔内（脊柱の中に）、関節滑液嚢内（関節の滑液腔の中に）、腱内（腱の中に）、精巣内（精巣の中に）、くも膜下腔内（任意レベルの脳脊髄軸の脳脊髄液の中に）、胸腔内（胸部の中に）、管内（器官の細管の中に）、腫瘍内（腫瘍の中に）、鼓室内（中耳の中に）、血管内（血管（複数可）の中に）、脳室内（脳室の中に）、イオントフォレシス（可溶性塩のイオンを身体組織に移動させる電流による）、潅注（傷口または体腔を浸し、または洗い流すこと）、喉頭（喉頭に直接）、経鼻胃（鼻から胃の中に）、密封包帯技術（局所経路投与後、領域を閉塞する包帯によって覆う）、眼（外眼部へ）、口腔咽頭（口腔及び咽頭に直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局在的または全身的効果のための経口または経鼻吸入によって気道の中に）、眼球後方（脳橋の背後または眼球の背後）、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所、経胎盤（胎盤を介してまたは通過して）、経気管（気管の壁を介して）、経鼓膜（鼓室を通過してまたは介して）、尿管（尿管に）、尿道（尿道に）、膣、仙骨麻酔、診断、神経ブロック、胆汁灌流、心臓灌流、フォトフェレーシス、または脊髄である、実施形態１３３に記載の方法。
１３６．対象となる少なくとも１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、それを必要とする対象の免疫細胞に送達する方法であって、前記方法は、実施形態１～１３０のいずれか１つに記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
１３７．前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、実施形態１３６に記載の方法。
１３８．前記Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態１３７に記載の方法。
１３９．前記Ｔ細胞は、Ｔ制御性細胞である、実施形態１３７に記載の方法。
１４０．前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、実施形態１３７に記載の方法。
１４１．前記免疫細胞は、マクロファージ、樹状細胞、または肝臓免疫細胞である、実施形態１３６に記載の方法。
Ｘ．定義
用語「化合物」または「構造」は、本明細書で使用される場合、示される構造のすべての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むことを意味する。
本明細書に記載の化合物または構造は、非対称であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）。別途示されない限り、すべての立体異性体、例えば、エナンチオマー及びジアステレオマーが意図される。非対称的に置換された炭素原子を含有する本開示の化合物は、光学活性またはラセミ形態で単離され得る。光学的に活性な出発物質から光学的に活性な形態を調製する手法に関する方法は、当該技術分野において知られており、ラセミ混合物の分割によるもの、または立体選択的合成によるもの等である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合等の多くの幾何異性体も本明細書に記載の化合物に存在し得、すべてのそのような安定な異性体は、本開示において企図される。本開示の化合物のシス及びトランス幾何異性体が記載され、異性体の混合物としてまたは分離された異性体形態として単離され得る。
本開示の化合物または構造にはまた、互変異性形態が含まれる。互変異性形態は、単結合と隣接二重結合との交換及びプロトンの付随移動に起因する。互変異性形態には、同じ実験式及び全電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトトロピー互変異性体が含まれる。例示的なプロトトロピー互変異性体には、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、アミド－イミド酸対、エナミン－イミン対、ならびにプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占有し得る環状形態、例えば、１Ｈ－及び３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－、２Ｈ－及び４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－及び２Ｈ－イソインドール、ならびに１Ｈ－及び２Ｈ－ピラゾールが含まれる。互変異性形態は、平衡であり得、または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定され得る。
本開示の化合物または構造にはまた、中間体または最終化合物において存在する原子の同位体のすべてが含まれる。「同位体」は、同じ原子番号を有するが、核における異なる中性子数に起因して異なる質量数を有する原子を指す。例えば、水素の同位体には、トリチウム及び重水素が含まれる。
本開示の化合物または構造及び塩は、慣用の方法によって溶媒和物及び水和物を形成するために溶媒または水分子と組み合わせて調製され得る。
用語「アルキル」は、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキルで置換されたシクロアルキル基、及びシクロアルキルで置換されたアルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルを指す。
いくつかの実施形態では、直鎖または分岐鎖アルキルは、その骨格において３０個以下（例えば、直鎖の場合Ｃ１－Ｃ３０、分岐鎖の場合Ｃ３－Ｃ３０）、２０個以下、１２個以下、または７個以下の炭素原子を有する。同様に、いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、それらの環構造において３～１０個の炭素原子を有し、例えば、環構造において５、６または７個の炭素を有する。明細書、実施例、及び特許請求の範囲全体を通して使用される用語「アルキル」（または「低級アルキル」）は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の両方を含むことが意図され、その後者は、炭化水素骨格の１つ以上の炭素上の水素を置き換える１つ以上の置換基を有するアルキル部位を指す。そのような置換基には、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部位が含まれるがこれらに限定されない。
別途炭素の数が指定されない限り、「低級アルキル」は、本明細書で使用される場合、上で定義されるとおりのアルキル基であるが、その骨格構造において１～１０個の炭素、または１～６個の炭素原子を有するものを意味する。同様に、「低級アルケニル」及び「低級アルキニル」は、同様の鎖長を有する。いくつかの実施形態では、アルキル基は、低級アルキルである。いくつかの実施形態では、本明細書でアルキルと指定される置換基は、低級アルキルである。
用語「アルキレニル」は、本明細書で使用される場合、直鎖または分岐鎖アルキル基の二価ラジカルを指す。１つの実施形態では、アルキレニルは、Ｃ１－１２アルキルの二価形態、すなわち、Ｃ１－Ｃ１２アルキレニルである。１つの実施形態では、アルキレニルは、Ｃ２－６アルキルの二価形態、すなわち、Ｃ１－Ｃ１０アルキレニルである。１つの実施形態では、アルキレニルは、Ｃ２－１４アルキルの二価形態、すなわち、Ｃ１－Ｃ８アルキレニルである。１つの実施形態では、アルキレニルは、非置換Ｃ１－６アルキルの二価形態、すなわち、Ｃ１－Ｃ６アルキレニルである。別の実施形態では、アルキレニルは、非置換Ｃ１－４アルキルの二価形態、すなわち、Ｃ１－Ｃ４アルキレニルである。非限定的な例示的なアルキレニル基には、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＣＨ２（ＣＨ２）２ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ２）３ＣＨ２－、及び－ＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＨ２－が含まれる。
用語「シクロアルキレニル」は、本明細書で使用される場合、シクロアルキル基の二価ラジカルを指す。１つの実施形態では、シクロアルキレニルは、Ｃ３－８シクロアルキルの二価形態、すなわち、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルである。非限定的な例示的なシクロアルキレニル基には、
が含まれる。
炭化水素鎖上で置換された部位は、適切な場合、それら自体が置換され得ることが当業者によって理解される。例えば、置換されたアルキル置換基には、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、アミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホネート及びホスフィネートを含む）、スルホニル（スルフェート、スルホンアミド、スルファモイル及びスルホネートを含む）、及びシリル基、ならびにエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレート、及びエステルを含む）、－ＣＦ３、－ＣＮ等が含まれ得る。シクロアルキルは、同じ様式で置換され得る。
用語「ヘテロアルキル」は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのヘテロ原子を含有する直鎖または分岐鎖、または環状炭素を含有するラジカル、またはそれらの組み合わせを指す。好適なヘテロ原子には、Ｏ、Ｎ、Ｓｉ、Ｐ、Ｓｅ、Ｂ、及びＳが含まれるがこれらに限定されず、リン及び硫黄原子は、任意に酸化されており、窒素ヘテロ原子は、任意に四級化されている。ヘテロアルキルは、アルキル基について上で定義されるように置換され得る。
用語「アルキルチオ」は、上で定義されるとおりのアルキル基であって、それに結合した硫黄ラジカルを有するものを指す。いくつかの実施形態では、「アルキルチオ」部位は、－Ｓ－アルキル、－Ｓ－アルケニル、及び－Ｓ－アルキニルのうちの１つによって表される。代表的なアルキルチオ基には、メチルチオ、及びエチルチオが含まれる。用語「アルキルチオ」はまた、シクロアルキル基、アルケン及びシクロアルケン基、及びアルキン基を包含する。「アリールチオ」は、アリールまたはヘテロアリール基を指す。アルキルチオ基は、アルキル基について上で定義されるように置換され得る。
用語「アルケニル」及び「アルキニル」は、上述したアルキルと長さ及び可能性のある置換が類似するが、少なくとも１つの二重または三重結合をそれぞれ含有する不飽和脂肪族基を指す。１つの実施形態では、アルケニルは、１つの二重結合を含有する。別の実施形態では、アルケニルは、２つの二重結合を含有する。別の実施形態では、アルケニルは、３つの二重結合を含有する。
用語「アルケニレニル」は、本明細書で使用される場合、アルケニル基の二価ラジカルを指す。１つの実施形態では、アルケニレニルは、Ｃ２－１２アルケニル、すなわち、Ｃ２－Ｃ１２アルケニレニルの二価形態である。１つの実施形態では、アルケニレニルは、Ｃ２－６アルケニル、すなわち、Ｃ２－Ｃ１０アルケニレニルの二価形態である。１つの実施形態では、アルケニレニルは、Ｃ２－１４アルケニル、すなわち、Ｃ２－Ｃ８アルケニレニルの二価形態である。１つの実施形態では、アルキレニルは、非置換Ｃ２－６アルケニル、すなわち、Ｃ２－Ｃ６アルケニレニルの二価形態である。別の実施形態では、アルキレニルは、非置換Ｃ２－４アルキル、すなわち、Ｃ２－Ｃ４アルケニレニルの二価形態である。非限定的な例示的なアルケニレニル基には、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２－、及び－ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２－が含まれる。
用語「アルコキシル」または「アルコキシ」は、本明細書で使用される場合、上で定義されるとおりのアルキル基であって、それに結合した酸素ラジカルを有するものを指す。代表的なアルコキシル基には、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、及びｔｅｒｔ－ブトキシが含まれる。「エーテル」は、酸素によって共有結合的に連結された２つの炭化水素である。したがって、アルキルの置換基であって、そのアルキルをエーテルにするものは、－Ｏ－アルキル、－Ｏ－アルケニル、及び－Ｏ－アルキニルのうちの１つによって表され得るように、アルコキシルであり、またはそれに似ている。アロキシは、－Ｏ－アリールまたはＯ－ヘテロアリールによって表され得、アリール及びヘテロアリールは、下で定義されるとおりである。アルコキシ及びアロキシ基は、アルキルについて上述したように置換され得る。
用語「アミン」及び「アミノ」は、当該技術分野で認識されており、非置換及び置換アミンの両方、例えば、一般式：
（式中、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ’１０は、それぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、－（ＣＨ２）ｍ－Ｒ８を表し、またはＲ９及びＲ１０は、それらが結合したＮ原子と一緒に、環構造において４～８個の原子を有する完全な複素環を形成し；Ｒ８は、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環または多環を表し；ｍは、ゼロまたは１～８の範囲の整数である）によって表され得る部位を指す。いくつかの実施形態では、Ｒ９またはＲ１０の一方のみがカルボニルであり得、例えば、Ｒ９、Ｒ１０及び窒素は一緒にイミドを形成しない。さらに他の実施形態では、用語「アミン」は、アミド、例えば、Ｒ９及びＲ１０の一方がカルボニルを表すものを包含しない。追加の実施形態では、Ｒ９及びＲ１０（及び任意にＲ’１０）は、それぞれ独立して、水素、アルキルもしくはシクロアルキル、アルケニルもしくはシクロアルケニル、またはアルキニルを表す。よって、用語「アルキルアミン」は、本明細書で使用される場合、上で定義されるとおりのアミン基であって、それに結合した置換（アルキルについて上述されている）または非置換アルキルを有するものを意味し、すなわち、Ｒ９及びＲ１０のうちの少なくとも１つは、アルキル基である。
用語「アミド」は、アミノで置換されたカルボニルとして当該技術分野で認識されており、それには、一般式：
（式中、Ｒ９及びＲ１０は、上で定義されるとおりである）によって表され得る部位が含まれる。
「アリール」は、本明細書で使用される場合、Ｃ５－Ｃ１０員芳香族、複素環式、縮合芳香族、縮合複素環式、二芳香族、または二複素環環系を指す。広く定義される「アリール」には、本明細書で使用される場合、０～４個のヘテロ原子を含み得る５、６、７、８、９、及び１０員単環芳香族基、例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン及びピリミジン等が含まれる。環構造においてヘテロ原子を有するそれらのアリール基はまた、「アリール複素環」または「ヘテロ芳香族」と称され得る。芳香族環は、１つ以上の環位置でハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ（または四級化アミノ）、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部位、－ＣＦ３、－ＣＮ；及びそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない１つ以上の置換基で置換され得る。
用語「アリール」にはまた、２つ以上の炭素が２つの隣接環（すなわち、「縮合環」）に共通している２つ以上の環式環を有する多環式環系であって、環の少なくとも１つが芳香族であり、例えば、他の環式環（複数可）がシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール及び／またはヘテロシクリルであり得るものが含まれる。複素環式環の例には、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨ－カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ－１，５，２－ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３－ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ－インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ－インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，２，５－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキシインドリル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４－ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ－ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ－キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリル、６Ｈ－１，２，５－チアジアジニル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，２，５－チアジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、チアントレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル及びキサンテニルが含まれるがこれらに限定されない。環の１つ以上は、「アリール」について上で定義されるように置換され得る。
用語「アラルキル」は、本明細書で使用される場合、アリール基（例えば、芳香族またはヘテロ芳香族基）で置換されたアルキル基を指す。
用語「炭素環」は、本明細書で使用される場合、環の各原子が炭素である芳香族または非芳香族環を指す。
「複素環」または「複素環式」は、本明細書で使用される場合、炭素及び１～４個のヘテロ原子（各々が、非過酸化物酸素、硫黄、及びＮ（Ｙ）（式中、Ｙは、非存在であり、またはＨ、Ｏ、（Ｃ１－Ｃ１０）アルキル、フェニルまたはベンジルである）からなる群から選択される）からなる３～１０個の環原子、例えば、５～６個の環原子を含有し、任意に１～３個の二重結合を含有し、任意に１つ以上の置換基で置換されている単環式または二環式環の環炭素または窒素を介して結合した環状ラジカルを指す。複素環式環の例には、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨ－カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ－１，５，２－ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３－ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ－インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ－インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，２，５－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキセパニル、オキセタニル、オキシインドリル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４－ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ－ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ－キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリル、６Ｈ－１，２，５－チアジアジニル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，２，５－チアジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、チアントレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル及びキサンテニルが含まれるがこれらに限定されない。複素環式基は、アルキル及びアリールについて上で定義されるとおり１つ以上の位置で１つ以上の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族またはヘテロ芳香族部位、－ＣＦ３、及び－ＣＮで任意に置換され得る。
用語「カルボニル」は、当該技術分野で認識されており、それには、一般式：
（式中、Ｘは、結合であり、または酸素または硫黄を表し、Ｒ１１は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、またはアルキニルを表し、Ｒ’１１は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、またはアルキニルを表す）によって表され得るような部位が含まれる。Ｘが酸素であり、Ｒ１１またはＲ’１１が水素ではない場合、式は、「エステル」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ１１が上で定義されるとおりである場合、部位は、本明細書でカルボキシル基と称され、特にＲ１１が水素である場合、式は、「カルボン酸」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ’１１が水素である場合、式は、「ホルメート」を表す。通常、上記式の酸素原子が硫黄によって置き換えられた場合、式は、「チオカルボニル」基を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ１１またはＲ’１１が水素ではない場合、式は、「チオエステル」を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ１１が水素である場合、式は、「チオカルボン酸」を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ’１１が水素である場合、式は、「チオホルメート」を表す。一方、Ｘが結合であり、Ｒ１１が水素ではない場合、上記式は、「ケトン」基を表す。Ｘが水素であり、Ｒ１１が水素である場合、上記式は、「アルデヒド」基を表す。
用語「ヘテロ原子」は、本明細書で使用される場合、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。ヘテロ原子の例は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄及びセレンである。他の有用なヘテロ原子には、ケイ素及びヒ素が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「ニトロ」は、－ＮＯ２を意味する；用語「ハロゲン」は、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉを指定する；用語「スルフヒドリル」は、－ＳＨを意味する；用語「ヒドロキシル」は、－ＯＨを意味する；用語「スルホニル」は、－ＳＯ２－を意味する。
用語「置換された」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の化合物のすべての許容可能な置換基を指す。最も広い意味で、許容可能な置換基には、有機化合物の非環状及び環状、分岐状及び非分岐状、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基が含まれる。例示的な置換基には、ハロゲン、ヒドロキシル基、または任意の数の炭素原子、例えば、１～１４個の炭素原子を含有する任意の他の有機グループが含まれるがこれらに限定されず、任意に線状、分岐状、または環状の構造的形式の１つ以上のヘテロ原子、例えば、酸素、硫黄、または窒素グループが含まれる。代表的な置換基には、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、フェニル、置換されたフェニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、ハロ、ヒドロキシル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、フェノキシ、置換されたフェノキシ、アロキシ、置換されたアロキシ、アルキルチオ、置換されたアルキルチオ、フェニルチオ、置換されたフェニルチオ、アリールチオ、置換されたアリールチオ、シアノ、イソシアノ、置換されたイソシアノ、カルボニル、置換されたカルボニル、カルボキシル、置換されたカルボキシル、アミノ、置換されたアミノ、アミド、置換されたアミド、スルホニル、置換されたスルホニル、スルホン酸、ホスホリル、置換されたホスホリル、ホスホニル、置換されたホスホニル、ポリアリール、置換されたポリアリール、Ｃ３－Ｃ２０環式、置換されたＣ３－Ｃ２０環式、複素環式、置換された複素環式、アミノ酸、ペプチド、及びポリペプチド基が含まれる。
本明細書に記載されるように、本開示の化合物は、「任意に置換された」部位を含有し得る。通常、用語「置換された」は、用語「任意に」が先行しているか否かにかかわらず、指定された部位の１つ以上の水素が、好適な置換基で置き換えられていることを意味する。別途示されない限り、「任意に置換された」基は、基の各々の置換可能な位置で好適な置換基を有し得、任意の所与の構造における複数の位置が、特定の基から選択される複数の置換基で置換され得る場合、置換基は、すべての位置で同じまたは異なり得る。本開示によって想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定なまたは化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものである。用語「安定な」は、本明細書で使用される場合、それらの生成、検出、ならびに、所定の実施形態では、それらの回収、精製、及び本明細書に開示される目的の１つ以上のための使用を可能とするための条件に供された場合、実質的に改変されない化合物を指す。
「任意に置換された」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価置換基は、独立して、ハロゲン；－（ＣＨ２）０－４Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４ＯＲ゜；－Ｏ（ＣＨ２）０－４Ｒ゜、－Ｏ－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ゜；－（ＣＨ２）０－４ＣＨ（ＯＲ゜）２；－（ＣＨ２）０－４ＳＲ゜；Ｒ゜で置換され得る－（ＣＨ２）０－４Ｐｈ；Ｒ゜で置換され得る－（ＣＨ２）０－４Ｏ（ＣＨ２）０－１Ｐｈ；Ｒ゜で置換され得る－ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ゜で置換され得る－（ＣＨ２）０－４Ｏ（ＣＨ２）０－１－ピリジル；－ＮＯ２；－ＣＮ；－Ｎ３；－（ＣＨ２）０－４Ｎ（Ｒ゜）２；－（ＣＨ２）０－４Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｓ）Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）ＮＲ゜ ２；－Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｓ）ＮＲ゜ ２；－（ＣＨ２）０－４Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）ＯＲ゜；－Ｎ（Ｒ゜）Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｎ（Ｒ゜）Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）ＮＲ゜ ２；－Ｎ（Ｒ゜）Ｎ（Ｒ゜）Ｃ（Ｏ）ＯＲ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｃ（Ｓ）Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）ＯＲ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）ＳＲ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ゜ ３；－（ＣＨ２）０－４ＯＣ（Ｏ）Ｒ゜；－ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０－４ＳＲ゜、ＳＣ（Ｓ）ＳＲ゜；－（ＣＨ２）０－４ＳＣ（Ｏ）Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｃ（Ｏ）ＮＲ゜ ２；－Ｃ（Ｓ）ＮＲ゜ ２；－Ｃ（Ｓ）ＳＲ゜；－ＳＣ（Ｓ）ＳＲ゜、－（ＣＨ２）０－４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ゜ ２；－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ゜）Ｒ゜；－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｃ（ＮＯＲ゜）Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４ＳＳＲ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｓ（Ｏ）２Ｒ゜；－（ＣＨ２）０－４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ゜；－（ＣＨ２）０－４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ゜；－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ゜ ２；－（ＣＨ２）０－４Ｓ（Ｏ）Ｒ゜；－Ｎ（Ｒ゜）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ゜ ２；－Ｎ（Ｒ゜）Ｓ（Ｏ）２Ｒ゜；－Ｎ（ＯＲ゜）Ｒ゜；－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ゜ ２；－Ｐ（Ｏ）２Ｒ゜；－Ｐ（Ｏ）Ｒ゜ ２；－ＯＰ（Ｏ）Ｒ゜ ２；－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ゜）２；ＳｉＲ゜ ３；－（Ｃ１－４直鎖または分岐状アルキレン）Ｏ－Ｎ（Ｒ゜）２；または－（Ｃ１－４直鎖または分岐状アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｎ（Ｒ゜）２（式中、各Ｒ゜は、下で定義されるように置換され得、独立して、水素、Ｃ１－６脂肪族、－ＣＨ２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ２）０－１Ｐｈ、－ＣＨ２－（５～６員ヘテロアリール環）、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環であり、または、上の定義にかかわらず、Ｒ゜の２つの独立した存在は、それらの介在原子（複数可）と一緒になって、下で定義されるように置換され得る、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する３～１２員飽和、部分的に不飽和、またはアリール一または二環式環を形成する）である。
Ｒ゜（またはＲ゜の２つの独立した存在がそれらの介在原子と一緒になることによって形成された環）上の好適な一価置換基は、独立して、ハロゲン、－（ＣＨ２）０－２Ｒ●、－（ハロＲ●）、－（ＣＨ２）０－２ＯＨ、－（ＣＨ２）０－２ＯＲ●、－（ＣＨ２）０－２ＣＨ（ＯＲ●）２；－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｎ３、－（ＣＨ２）０－２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、－（ＣＨ２）０－２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－（ＣＨ２）０－２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－（ＣＨ２）０－２ＳＲ●、－（ＣＨ２）０－２ＳＨ、－（ＣＨ２）０－２ＮＨ２、－（ＣＨ２）０－２ＮＨＲ●、－（ＣＨ２）０－２ＮＲ● ２、－ＮＯ２、－ＳｉＲ● ３、－ＯＳｉＲ● ３、－Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、－（Ｃ１－４直鎖または分岐状アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または－ＳＳＲ●（式中、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１－４脂肪族、－ＣＨ２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ２）０－１Ｐｈ、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環から選択される）である。Ｒ゜の飽和炭素原子上の好適な二価置換基には、＝Ｏ及び＝Ｓが含まれる。
「任意に置換された」基の飽和炭素原子上の好適な二価置換には、以下：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、－Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２－３Ｏ－、または－Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２－３Ｓ－（式中、Ｒ＊の各々の独立した存在は、水素、下で定義されるように置換され得るＣ１－６脂肪族、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する非置換５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環から選択される）が含まれる。「任意に置換された」基の近接の置換可能な炭素に結合した好適な二価置換基には、－Ｏ（ＣＲ＊２）２－３Ｏ－（式中、Ｒ＊の各々の独立した存在は、水素、下で定義されるように置換され得るＣ１－６脂肪族、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する非置換５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環から選択される）が含まれる。
Ｒ＊の脂肪族基の好適な置換基には、ハロゲン、－Ｒ●、－（ハロＲ●）、－ＯＨ、－ＯＲ●、－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－ＮＨ２、－ＮＨＲ●、－ＮＲ● ２、または－ＮＯ２（式中、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１－４脂肪族、－ＣＨ２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ２）０－１Ｐｈ、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環である）が含まれる。
「任意に置換された」基の置換可能な窒素上の好適な置換基には、－Ｒ†、－ＮＲ† ２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ†、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、－Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ† ２、－Ｃ（Ｓ）ＮＲ† ２、－Ｃ（ＮＨ）ＮＲ† ２、または－Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†（式中、各Ｒ†は、独立して、水素、下で定義されるように置換され得るＣ１－６脂肪族、非置換－ＯＰｈ、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する非置換５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環であり、または、上の定義にかかわらず、Ｒ†の２つの独立した存在は、それらの介在原子（複数可）と一緒になって、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する非置換３～１２員飽和、部分的に不飽和、またはアリール一または二環式環を形成する）が含まれる。
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、－Ｒ●、－（ハロＲ●）、－ＯＨ、－ＯＲ●、－Ｏ（ハロＲ●）、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、－ＮＨ２、－ＮＨＲ●、－ＮＲ● ２、または－ＮＯ２（式中、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみで置換されており、独立して、Ｃ１－４脂肪族、－ＣＨ２Ｐｈ、－Ｏ（ＣＨ２）０－１Ｐｈ、または窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０～４個のヘテロ原子を有する５～６員飽和、部分的に不飽和、またはアリール環である）である。
窒素等のヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす、本明細書に記載の有機化合物の水素置換基及び／または任意の許容可能な置換基を有し得る。「置換」または「置換された」には、そのような置換が、置換原子及び置換基の許容原子価に従っていること、及びその置換が、安定な化合物、すなわち、例えば、転位、環状化、または脱離による変換を自発的に受けない化合物をもたらすという暗黙の但し書きが含まれると理解される。
広い態様では、許容可能な置換基には、有機化合物の非環状及び環状、分岐状及び非分岐状、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族置換基が含まれる。例示的な置換基には、例えば、本明細書に記載のものが含まれる。許容可能な置換基は、適切な有機化合物について１つ以上であり、同じまたは異なり得る。窒素等のヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす、本明細書に記載の有機化合物の水素置換基及び／または任意の許容可能な置換基を有し得る。
様々な実施形態では、置換基は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、ホスフェート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミド、及びチオケトンから選択され、これらの各々は、１つ以上の好適な置換基で任意に置換される。いくつかの実施形態では、置換基は、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ケトン、ホスフェート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミド、及びチオケトンから選択され、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルバメート、カルボキシ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ケトン、ホスフェート、スルフィド、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、スルホンアミド、及びチオケトンの各々は、１つ以上の好適な置換基でさらに置換され得る。
置換基の例には、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホネート、ホスフィネート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、チオケトン、エステル、ヘテロシクリル、－ＣＮ、アリール、アリールオキシ、パーハロアルコキシ、アラルコキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアラルコキシ、アジド、アルキルチオ、オキソ、アシルアルキル、カルボキシエステル、カルボキサミド、アシルオキシ、アミノアルキル、アルキルアミノアリール、アルキルアリール、アルキルアミノアルキル、アルコキシアリール、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アルキルスルホニル、カルボキサミドアルキルアリール、カルボキサミドアリール、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノアルキルカルボキシ、アミノカルボキサミドアルキル、シアノ、アルコキシアルキル、パーハロアルキル、アリールアルキルオキシアルキル等が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、置換基は、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、及びニトロから選択される。
抗体：本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味で称され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、少なくとも２つのインタクト抗体から形成された二重特異的抗体）、及び所望の生物学的活性を示す（例えば、「機能的である」）限り抗体断片（例えば、ダイアボディ）を含むがこれらに限定されない様々な実施形態を具体的に包含する。抗体は、主としてアミノ酸ベースの分子であるが、１つ以上の修飾（糖部位、蛍光部位、化学的タグ等の付加を含むがこれらに限定されない）も含み得る。抗体またはその断片の非限定的な例には、ＶＨ及びＶＬドメイン、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子、多重特異的抗体、二重特異的抗体、イントラボディ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、コドン最適化抗体、タンデムｓｃＦｖ抗体、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー、ｍＡｂ２抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、四価二重特異的抗体、生合成抗体、ネイティブ抗体、小型化抗体、ユニボディ、マキシボディ、老化細胞に対する抗体、コンフォーマーに対する抗体、疾患特異的エピトープに対する抗体、または先天的防御分子に対する抗体が含まれる。
関連付けられた：本明細書で使用される場合、用語「に関連付けられた」、「コンジュゲートされた」、「連結された」、「結合した」、及び「繋がれた」は、２つ以上の部位に関して使用される場合、部位が、直接的にまたは連結剤として機能する１つ以上の追加の部位を介して、互いに物理的に関連付けられ、または接続されることで、構造が使用される条件、例えば、生理的条件下で部位が物理的に関連付けられたままになるように十分に安定した構造が形成されることを意味する。「関連付け」は、厳密には、直接的な共有化学結合を介するものである必要はない。それはまた、イオンもしくは水素結合または「関連付けられた」実体が物理的に関連付けられたままになるように十分に安定したハイブリダイゼーションベースの接続性を示唆し得る。
カーゴ：本明細書で使用される場合、用語「カーゴ」または「ペイロード」は、細胞または組織へのまたはその中への送達のための送達ビヒクルに包含された１つ以上の分子または構造を指し得る。カーゴの非限定的な例には、核酸、ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、リポソーム、標識、タグ、小さな化学的分子、大きな生物学的分子、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、少なくとも１つの抗原特異的標的化領域（ＡＳＴＲ）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む人工キメラタンパク質であって、抗原特異的標的化領域が全長抗体またはその断片であるものを含むものを指す。標的抗原と高い親和性で結合することが可能な任意の分子は、ＣＡＲのＡＳＴＲにおいて使用され得る。ＣＡＲは、細胞外スペーサードメイン及び／または共刺激ドメインを任意に有し得る。ＣＡＲはまた、ＣＡＲを保有する細胞傷害性細胞を生成するために使用され得る。
環状ＲＮＡ：本明細書で使用される場合、用語「環状ＲＮＡ」または「ｃｉｒｃＲＮＡ」は、共有結合または非共有結合を介して環状構造を形成するＲＮＡを指す。
共投与される：本明細書で使用される場合、用語「共投与される」または「共投与すること」は、オリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、標的化システムまたは他の治療剤もしくは部位の効果が向上するように十分に近い時間内にオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクトまたは標的化システムを１つ以上の追加のオリジネーターコンストラクト、ベンチマークコンストラクト、標的化システムまたは他の治療剤もしくは部位と共に投与することを意味する。
相補的及び実質的に相補的：本明細書で使用される場合、用語「相補的」は、ポリヌクレオチドが互いに塩基対を形成する能力を指す。塩基対は、典型的には、逆平行ポリヌクレオチド鎖におけるヌクレオチド単位間の水素結合によって形成される。相補的ポリヌクレオチド鎖は、ワトソン・クリック様式（例えば、Ａ対Ｔ、Ａ対Ｕ、Ｃ対Ｇ）、または二本鎖の形成を可能とする任意の他の様式で塩基対を形成し得る。当業者が知っているように、ＤＮＡとは対照的にＲＮＡを使用する場合、チミンではなくウラシルがアデノシンと相補的とみなされる塩基である。しかしながら、Ｕが本開示の文脈において示される場合、別途記述されない限り、Ｔを置換する能力が暗示される。完全な相補性または１００％の相補性は、１つのポリヌクレオチド鎖の各ヌクレオチド単位が、第２のポリヌクレオチド鎖のヌクレオチド単位と水素結合を形成し得る状況を指す。完全に満たない相補性は、２つの鎖のいくつかの、しかしすべてではないヌクレオチド単位が互いに水素結合を形成し得る状況を指す。例えば、２つの２０ｍｅｒについて、各鎖上の２つの塩基対のみが互いに水素結合を形成し得る場合、ポリヌクレオチド鎖は、１０％の相補性を示す。同じ例では、各鎖上の１８個の塩基対が互いに水素結合を形成し得る場合、ポリヌクレオチド鎖は、９０％の相補性を示す。本明細書で使用される場合、用語「実質的に相補的」は、ｓｉＲＮＡが、所望の標的ｍＲＮＡを結合するために、及び標的ｍＲＮＡのＲＮＡサイレンシングを誘発させるために十分な配列（例えば、アンチセンス鎖中）を有することを意味する。
送達：本明細書で使用される場合、「送達」は、化合物、物質、実体、部位、カーゴまたはペイロードを送達する作用または様式を指す。
ＤＮＡ及びＲＮＡ：本明細書で使用される場合、用語「ＲＮＡ」または「ＲＮＡ分子」または「リボ核酸分子」は、リボヌクレオチドのポリマーを指す；用語「ＤＮＡ」または「ＤＮＡ分子」または「デオキシリボ核酸分子」は、デオキシリボヌクレオチドのポリマーを指す。ＤＮＡ及びＲＮＡは、例えば、ＤＮＡ複製及びＤＮＡの転写によって、それぞれ天然に合成され得；または化学的に合成され得る。ＤＮＡ及びＲＮＡは、一本鎖（すなわち、それぞれｓｓＲＮＡまたはｓｓＤＮＡ）または多重鎖（例えば、二本鎖、すなわち、それぞれｄｓＲＮＡ及びｄｓＤＮＡ）であり得る。用語「ｍＲＮＡ」または「メッセンジャーＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、１つ以上のポリペプチド鎖のアミノ酸配列をコードする一本鎖ＲＮＡを指す。
封入する：本明細書で使用される場合、用語「封入する」は、包囲する、取り囲むまたは包み込むことを意味する。
コードする：本明細書で使用される場合、用語「コードする」は、ポリマー性マクロ分子における情報が、第１の分子とは異なる第２の分子の生成を誘導するために使用される任意のプロセスを広く指す。第２の分子は、第１の分子の化学的特質とは異なる化学的構造を有し得る。
遺伝子の発現を向上させる：本明細書で使用される場合、語句「アドバック」または「遺伝子の発現を向上させる」は、遺伝子の発現生成物の量の増加を引き起こすことを意味する。発現生成物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）または遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドであり得る。典型的には、ｍＲＮＡのレベルの増加は、それから翻訳されたポリペプチドのレベルの増加をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたはタンパク質を測定するための標準的な技術を使用して決定され得る。
エクソソーム：本明細書で使用される場合、「エクソソーム」は、哺乳動物細胞によって分泌されるベシクルまたはＲＮＡ分解に関与する複合体である。
製剤：本明細書で使用される場合、「製剤」には、少なくとも１つの化合物、物質、実体、部位、カーゴまたはペイロード及び送達剤が含まれる。
断片：「断片」は、本明細書で使用される場合、一部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することによって得られるポリペプチドを含み得る。
相同性：本明細書で使用される場合、用語「相同性」は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間の全体的関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一または類似する場合、互いに「相同」するとみなされる。用語「相同」は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。本開示に従って、２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの伸長部について少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらに９９％である場合、相同とみなされる。いくつかの実施形態では、相同なポリヌクレオチド配列は、少なくとも４～５個の独自に指定されたアミノ酸の伸長部をコードする能力によって特性化される。長さが６０ヌクレオチド未満のポリヌクレオチド配列について、相同性は、少なくとも４～５個の独自に指定されたアミノ酸の伸長部をコードする能力によって決定される。本開示に従って、２つのタンパク質配列は、タンパク質が少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの伸長部について少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である場合、相同とみなされる。
不活性成分：本明細書で使用される場合、用語「不活性成分」は、製剤に含まれる薬学的組成物の活性成分の活性に寄与しない１つ以上の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、本開示の製剤において使用され得る不活性成分のすべてが米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されている場合があり、そのいずれも承認されていない場合があり、またはその一部が承認されている場合がある。
ＩＲＥＳ：本明細書で使用される場合、用語「内部リボソーム進入部位」または「ＩＲＥＳ」は、正常なＲＮＡキャップ構造の非存在下でポリペプチドの翻訳を開始させることが可能である、サイズが１０ヌクレオチド～１，０００ヌクレオチドまたはそれを超える範囲のＲＮＡ配列または構造的要素を指す。
同一性：本明細書で使用される場合、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間の全体的関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一率の計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列をアライメントすることによって実施され得る（例えば、最適なアライメントのために第１及び第２の核酸配列の一方または両方にギャップが導入され得、非同一配列は比較目的のために無視され得る）。所定の実施形態では、比較目的のためにアライメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチドが比較される。第１の配列における位置が第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドによって占められている場合、そのときは分子は、その位置で同一である。２つの配列間の同一率は、ギャップの数を考慮して、配列によって共有される同一位置の数、及び２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要がある各ギャップの長さの関数である。２つの配列間の配列の比較及び同一率の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一率は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１（これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法等の方法を使用して決定され得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一率は、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、１２のギャップ長ペナルティ及び４のギャップペナルティを使用してＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１－１７）のアルゴリズムを使用して決定され得る。２つのヌクレオチド配列間の同一率は、代替的に、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用してＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを使用して決定され得る。配列間の同一率を決定するために一般的に用いられる方法には、Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものが含まれるがこれらに限定されない。同一性を決定するための技術は、公共に利用可能なコンピュータプログラムにおいて体系化されている。２つの配列間の相同性を決定するための例示的なコンピュータソフトウェアには、ＧＣＧプログラムパッケージ、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１），３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５，４０３（１９９０））が含まれるがこれらに限定されない。
遺伝子の発現を阻害する：本明細書で使用される場合、語句「ノックダウン」または「遺伝子の発現を阻害する」は、遺伝子の発現生成物の量の低減を引き起こすことを意味する。発現生成物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）または遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドであり得る。典型的には、ｍＲＮＡのレベルの低減は、それから翻訳されたポリペプチドのレベルの低減をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたはタンパク質を測定するための標準的な技術を使用して決定され得る。
イオン化可能な脂質：本明細書で使用される場合、「イオン化可能な脂質」は、選択されたｐＨで正味の正電荷を保有する多数の脂質種のいずれかを指す。
脂質ナノ粒子：本明細書で使用される場合、「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、１つ以上の脂質（例えば、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ修飾脂質）を含む送達ビヒクル指す。
リポソーム：本明細書で使用される場合、「リポソーム」は通常、１つ以上の球状二重層または二重層で配置された脂質（例えば、両親媒性脂質）から構成されるベシクルを指す。
修飾された：本明細書で使用される場合、「修飾された」は、分子の変化した状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的を含む多くの方法で修飾され得る。
非カチオン性脂質：本明細書で使用される場合、「非カチオン性脂質」は、任意の中性、双性イオン性またはアニオン性脂質を指す。
ペプチド：本明細書で使用される場合、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長である。
薬学的組成物：本明細書で使用される場合、用語「薬学的組成物」は、少なくとも１つの活性成分及び任意に１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物を指す。
ＰＥＧ：本明細書で使用される場合、「ＰＥＧ」は、任意のポリエチレングリコールまたは他のポリアルキレンエーテルポリマーを意味する。
スペーサー：本明細書で使用される場合、用語「スペーサー」は、配列における２つの他の要素を分離する１残基～数百または数千の残基の範囲のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの領域を指す。スペーサーの配列は、定義され、またはランダムであり得る。スペーサー配列は、典型的には非コードであるが、コード配列であり得る。
ステロール：本明細書で使用される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドの副次群である。
構造脂質：本明細書で使用される場合、「構造脂質」は、ステロール及びステロール部位を含有する脂質を指す。
転写：本明細書で使用される場合、用語「転写」は、鋳型としてＤＮＡ分子を使用するＲＮＡポリメラーゼによるＲＮＡ分子の形成または合成を指す。
翻訳：本明細書で使用される場合、用語「翻訳」は、ＲＮＡ鋳型に基づくリボソームによるポリペプチド分子の形成を指す。
処置する及び予防する：本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「予防する」及びそれからステミングする言葉は、１００％のまたは完全な処置または予防を必ずしも意味するわけではない。むしろ、当業者が潜在的利益または治療効果を有すると認識する処置または予防の様々な程度が存在する。また、「予防」は、疾患、症状またはその病態の発症を遅延させることを包含し得る。
未修飾：本明細書で使用される場合、「未修飾」は、いかなる変化の前の任意の物質、化合物または分子を指す。未修飾は、生体分子の野生型またはネイティブ形態を指し得るが、常にそうであるわけではない。分子は、一連の修飾を受け得、これにより各修飾された分子は、後の修飾のための「未修飾」出発分子として機能し得る。
ベクター：本明細書で使用される場合、「ベクター」は、異種分子を輸送し、形質導入し、またはそうでなければその担体として作用する任意の分子または部位である。本開示のベクターは、組換え的に生成され得、ウイルスの親または参照配列に基づき得、及び／またはウイルスの親または参照配列を含み得る。そのような親または参照ウイルス配列は、ベクターを操作するための元の、第２の、第３のまたはその後の配列として機能し得る。非限定的な例では、そのような親または参照ウイルス配列は、以下の配列のうちの任意の１つ以上を含み得る：ポリペプチドまたは多重ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列であって、配列が野生型であり、または野生型から修飾され得、配列がタンパク質、タンパク質ドメイン、またはタンパク質の１つ以上のサブユニットの全長または部分配列をコードし得る、ポリヌクレオチド配列；調節性または制御性核酸を含むポリヌクレオチドであって、配列が野生型であり、または野生型から修飾され得る、ポリヌクレオチド；及び野生型配列から修飾される場合があり、またはされない場合がある導入遺伝子。これらのウイルス配列は、１つ以上のコドン（核酸レベルで）またはアミノ酸（ポリペプチドレベルで）の「ドナー」配列または１つ以上のコドン（核酸レベルで）またはアミノ酸（ポリペプチドレベルで）の「アクセプター」配列のいずれかとして機能し得る。本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の付随する説明に示される。本明細書に記載のものと同様または同等の任意の物質及び方法が本開示の実施または試験において使用され得るが、好ましい物質及び方法をこれより記載する。本開示の他の特徴、目的及び利点は、明細書から明らかになる。明細書において、単数形には、文脈が別途明らかに示さない限り、複数形も含まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾がある場合、本明細書が優先する。
ＸＩ．特定の実施形態
実施形態１．式（ＣＹ－Ｉ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである）。
実施形態２．式（ＣＹ－ＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである）。
実施形態３．式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである）。
実施形態４．式（ＣＹ－ＩＶ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである）。
実施形態５．式（ＣＹ－Ｉ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）。
実施形態６．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態５に記載の化合物。
実施形態７．式（ＣＹ－ＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）。
実施形態８．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態７に記載の化合物。
実施形態９．式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）。
実施形態１０．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態９に記載の化合物。
実施形態１１．式（ＣＹ－ＩＶ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）。
実施形態１２．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態１１に記載の化合物。
実施形態１３．式（ＣＹ－Ｖ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｘ６及びＸ７は、独立して、－ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである）。
実施形態１４．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態１３に記載の化合物。
実施形態１５．式（ＣＹ－Ｉ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり；
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルまたは任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
「＊」でマークされた結合は、Ｘ４またはＸ５に結合されており；
各Ｚ２は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたＣ１－Ｃ８アルキルであり；
各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニル、または－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）であり；
Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニル、または－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）であり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨであり；
Ａは、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルであり；
各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である）。
実施形態１６．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態１５に記載の化合物。
実施形態１７．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態１６に記載の化合物。
実施形態１８．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態１６または１７に記載の化合物。
実施形態１９．Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である、実施形態１６または１７に記載の化合物。
実施形態２０．Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、実施形態１５、１８、または１９のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態２１．Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、実施形態１５または１８～２０のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態２２．式（ＣＹ－ＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、実施形態１５の式（ＣＹ－Ｉ）に関連して定義されるとおりである）。
実施形態２３．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態２２に記載の化合物。
実施形態２４．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態２２または２３に記載の化合物。
実施形態２５．Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である、実施形態２２または２３に記載の化合物。
実施形態２６．Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、実施形態２２、２４または２５のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態２７．Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、実施形態２２または２４～２６のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態２８．式（ＣＹ－ＩＩＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、実施形態１５における式（ＣＹ－Ｉ）に関連して定義されるとおりである）。
実施形態２９．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態２８に記載の化合物。
実施形態３０．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態２８または２９に記載の化合物。
実施形態３１．Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である、実施形態２８または３０に記載の化合物。
実施形態３２．Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、実施形態２８、３０、または３１のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態３３．Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、実施形態２８または３０～３２のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態３４．式（ＣＹ－ＩＶ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、実施形態１５の式（ＣＹ－Ｉ）に関連して定義されるとおりである）。
実施形態３５．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態３４に記載の化合物。
実施形態３６．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態３４または３５に記載の化合物。
実施形態３７．Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である、実施形態３４または３６に記載の化合物。
実施形態３８．Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、実施形態３４、３６、または３７のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態３９．Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、実施形態３４または３６～３８のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態４０．式（ＣＹ－Ｖ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｘ６及びＸ７は、独立して、－ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２－；及びＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、実施形態１５の式（ＣＹ－Ｉ）に関連して定義されるとおりである）。
実施形態４１．
Ｒ１は、－ＯＨ、Ｒ１ａ、
であり、
Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルであり；
Ｙ１及びＹ２は、独立して、
であり；
Ｒ２及びＲ３は、独立して、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１ａは、
であり；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルである、実施形態４０に記載の化合物。
実施形態４２．Ｒ１は、－ＯＨ、
である、実施形態４０または４１に記載の化合物。
実施形態４３．Ｙ１及びＹ２は、独立して、
である、実施形態４０または４１に記載の化合物。
実施形態４４．Ｒ２は、－ＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、実施形態４０、４２、または４３のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態４５．Ｒ３は、－ＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、実施形態４０または４２～４４のいずれか１つに記載の化合物。
実施形態４６．式（ＣＹ－ＶＩ）の構造：
を有する化合物、またはその薬学的に許容可能な塩（式中、Ｒ１、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ４、Ｘ５、Ｙ１、及びＹ２は、実施形態１５の式（ＣＹ－Ｉ）に関連して定義されるとおりである）。
実施形態４７．Ｒ１は、－ＯＨである、実施形態４６に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態４８．Ｘ１は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである、実施形態４６または４７に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態４９．Ｘ２は、－ＣＨ２ＣＨ２－である、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５０．Ｘ４は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである、実施形態４６～４９のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５１．Ｘ５は、Ｃ２－Ｃ６アルキレニルである、実施形態４６～５０のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５２．Ｙ１は、
である、実施形態４６～４１のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５３．Ｙ２は、
である、実施形態４６～５２のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５４．各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルである、実施形態４６～５３のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５５．各Ｚ３は、－ＣＨ２ＣＨ２－である、実施形態４６～５４のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５６．Ｒ６は、Ｃ５－Ｃ１４アルキルである、実施形態４６～５５のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５７．Ｒ７は、Ｃ６－Ｃ１４アルキルである、実施形態４６～５６のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５８．Ｒ６は、Ｃ５－Ｃ１４アルケニルである、実施形態４６～５５または５７いずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態５９．Ｒ７は、Ｃ６－Ｃ１４アルケニルである、実施形態４６～５６または５８いずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態６０．Ｒ８は、Ｃ５－Ｃ１６アルキルである、実施形態４６～５９のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態６１．Ｒ９は、Ｃ６－Ｃ１４アルキルである、実施形態４６～６０のいずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態６２．Ｒ８は、Ｃ５－Ｃ１６アルケニルである、実施形態４６～５９または６１いずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
実施形態６３．Ｒ９は、Ｃ６－Ｃ１４アルキルである、実施形態４６～６０または６２いずれか１つに記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
本開示は、以下の非限定的な例によってさらに説明される。
ＸＩＩ．実施例
脂質を作製する方法
本開示の脂質は、任意の好都合な方法論を使用して調製され得る。合理的なアプローチでは、脂質は、それらの個々の成分から構築される。成分は、当該技術分野で知られているように、官能基を介して互いに共有結合的に結合され得、そのような官能基は、成分上に存在し、または１つ以上の工程、例えば、酸化反応、還元反応、切断反応等を使用して成分上に導入され得る。脂質を生成するために成分を互いに共有結合的に結合させる際に使用され得る官能基：ヒドロキシ、スルフヒドリル、アミノ等。必要及び／または所望の場合、成分上の所定の部位は、当該技術分野で知られているようにブロック基を使用して保護され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）（１９９１）を参照されたい。
代替的には、脂質は、潜在的脂質の大規模ライブラリを生成するために既知のコンビナトリアル方法を使用して生成され得、これは次いで、所望の機能性を有する脂質の同定のためにスクリーニングされ得る。
送達ビヒクルを作製する方法
本開示のＬＮＰ等の送達ビヒクルは、任意の好都合な方法論を使用して調製され得る。１つの非限定的な例では、ＬＮＰは、等しい体積のアルコールに溶解した脂質を、クエン酸緩衝液に溶解したオリゴヌクレオチドペイロードと衝突ジェットプロセスによって混合することによって形成される。
脂質溶液は、本開示のカチオン性脂質化合物、ヘルパー脂質、中性脂質及びＰＥＧ化脂質を含有する。ペイロードの総脂質に対する比は、およそ１：２０（ｗｔ／ｗｔ）である。ＬＮＰは、等しい体積のエタノール中の脂質溶液を、クエン酸緩衝液に溶解されたオリゴヌクレオチドペイロードと混合デバイスを介して衝突ジェットプロセスによって混合することによって形成される。混合されたＬＮＰ溶液は、希釈工程の前に室温で０～２４時間保持される。
溶液は、次いで濃縮され、膜を使用して限外濾過または透析プロセスによって好適な緩衝液でダイアフィルトレーションされ得る。最終生成物は、滅菌濾過され、４℃で保存される。
候補ＬＮＰ標的化システムの評価
候補標的化システムが、製剤における少なくとも１つの識別子配列または部位及び核酸コンストラクトにおける少なくとも１つの識別子配列及び／またはペイロードを含む候補標的化システムのライブラリが調製される。
候補標的化システム生成
カチオン性脂質成分が少なくとも１つの識別子配列または部位で標識された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤の集団が生成される。生成されるＬＮＰ製剤には、（ａ）成分がすべての製剤について同じであり、成分のモル比がすべてのＬＮＰ製剤について同じである、（ｂ）成分がすべての製剤について同じであるが、成分のモル比がすべてのＬＮＰ製剤について異なる、または（ｃ）成分がＬＮＰ製剤について異なるＬＮＰが含まれ得る。異なるＬＮＰ製剤の各々には、投与後に標的化システムをトラッキングするために異なる識別子配列または部位が含まれ得る。少なくとも１つの識別子配列またはペイロード（例えば、レポーター遺伝子）を含む核酸コンストラクトが生成され、対象に投与される候補標的化システムを生成するためにＬＮＰの集団で製剤化される。
候補標的化システムのスクリーニング及び検証
候補標的化システムは次いで、既定の用量及び投薬間隔で対象に投与される。投与後、対象全体または対象の領域は、ＬＮＰ形成及び／またはベンチマークコンストラクトのペイロードの位置を決定するためにスクリーニングされる。対象は、６４Ｃｕ放射性標識を利用する陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）及びコンピューター断層撮影法（ＣＴ）を含む当該技術分野で知られている様々な方法によってスキャンされ得る。ＬＮＰ形成及び／またはペイロードの局在化は、６４Ｃｕの最高濃度を有する領域についてのＰＥＴ画像の視覚検査によって決定され、ＰＥＴ結果の解剖学的位置は、ＣＴスキャンの結果を使用して確認される。スキャンは、局在化が経時的に変化するかどうかを決定するために繰り返され得る。
所望の時点で、サンプルは、分布のより高分解のスクリーニングのために上で実施された動物全体局在化スクリーニングにおいてＬＮＰ及び／またはペイロードの局在化を示す対象の領域から取得される。
次いでサンプルは、セルソーターに同梱された指示書に従って蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）のために調製され得る。これらの細胞の集団は次いで、ペイロード及び／または識別子配列の存在及び同一性を決定するためにディープシーケンシングのために調製され得る。
ＬＮＰライブラリのスクリーニングからのこれらの結果は、対象に投与されたＬＮＰ製剤及び核酸コンストラクトの指向性を提供する。
例示的なイオン化可能な脂質の合成
選択中間体の合成
エチル３－ペンチルオクト－２－エノエート（Ｌ１－２）の合成
無水ＴＨＦ（３３ｍＬ）中のトリエチルホホノアセテート（２６．３ｇ、１１８ｍｍｏｌ）の溶液にＴＨＦ（１１８ｍＬ、１１８ｍｍｏｌ）中の１Ｍ ＮａＨＭＤＳを－１０～－１５℃で窒素雰囲気下で滴下して添加した。添加の完了後、混合物を－１０～－１５℃で３０分間、次いで０℃で１時間撹拌した。この混合物に６－ウンデカノン（１０．０ｇ、５９ｍｍｏｌ）を０℃で落下させ、反応混合物を室温に温め、一晩撹拌した。次いで混合物を４５℃に温め、２４時間撹拌した。水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（８ｍＬ）を添加し、ＴＨＦを蒸発させた。残渣をＥｔ２Ｏ（８０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）と混合し、得られた相を分離した。水相をＥｔ２Ｏ（８０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機相をＨ２Ｏ（１００ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～４％酢酸エチルのグラジエント）によって精製してエチル３－ペンチルオクト－２－エノエートＬ１－２を無色の油として生成した（１１．６ｇ、８２％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．６０ （ｓ， １Ｈ）， ４．１３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．５２－１．１９ （ｍ， １５Ｈ）， ０．８９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ２４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
エチル３－ペンチルオクタノエート（Ｌ１－３）の合成
ＥｔＯＡｃ（９０ｍＬ）中のＬ１－２（１１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）を添加した。得られた混合物を水素バルーン下で１日間撹拌した。次いで混合物をセライトを通して濾過した。セライトをＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で濯いだ。組み合わせた濾液を蒸発させてエチル３－ペンチルオクタノエートＬ１－３を薄黄色の油（９．０ｇ、８３％）として得た。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．１０ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８２ （ｓ， １Ｈ）， １．４０－１．１２ （ｍ， １９Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ６Ｈ）。
３－ペンチルオクタン－１－オール（Ｌ１－４）の合成
水素化アルミニウムリチウム（２８ｍＬ、５６ｍｍｏｌ）の２．０ＭのＴＨＦ溶液に０℃で窒素雰囲気下でＴＨＦ（３３ｍＬ）中のＬ１－３（７．０ｇ、２９ｍｍｏｌ）の溶液を徐々に添加した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温で一晩撹拌した。氷水浴冷却を用いて、反応物を飽和水性Ｎａ２ＳＯ４溶液を添加することによってクエンチして乳状溶液を得た。有機相を分離し、水相をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ×２）で抽出した。組み合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～１５％酢酸エチルのグラジエント）によって精製して３－ペンチルオクタン－１－オールＬ１－４をわずかに黄色の油として生成した（４．０ｇ、７０％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） ３．６５ （ｔ， Ｊ ＝４．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．７ Ｈｚ， ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４６－１．１２ （ｍ， １７Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ６Ｈ）。
４，４－ビス（３，７－ジメチルオクチル）オキシ）ブタンニトリル（Ｌ４Ｌ－２）の合成［手順Ａ］
１００ｍＬの丸底フラスコに、４，４－ジメトキシブタンニトリル（３．０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）、アルコール（１１．０ｇ、６９．７ｍｍｏｌ）及びピリジニウムｐ－トルエンスルホネート（０．２９ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１２０℃で４時間撹拌し、室温に冷却した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加し、得られた相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～１０％酢酸エチルのグラジエント）によって精製してＬ４Ｌ－２を無色の油として生成した（６．６ｇ、７４％）；１ＨＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ４．５０－４．５３ （ｔ， １Ｈ）， ３．５８－３．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４１ － ３．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３９ － ２．４４ （ｔ， ２Ｈ）， １．９２－１．９４ （ｑ， ２Ｈ）， １．５０－１．５５ （ｍ， ６Ｈ）， １．３８－１．４２ （ｍ， ２Ｈ）， １．１１ － １．１４ （ｍ， １４Ｈ） ０．８８－０．８４ （ｔ， １８Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３８１。
４，４－ビス（（３，７－ジメチルオクチル）オキシ）ブタン酸（Ｌ４Ｌ－３）の合成［手順Ｂ］
エタノール（５０ｍＬ）中のＬ４Ｌ－２（８．２ｇ、２１ｍｍｏｌ）の溶液を含有する１００ｍＬの丸底フラスコに水（５０ｍＬ）中のＫＯＨ（３．６ｇ、６４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。添加の完了後、混合物を１２０℃で２０時間撹拌した。揮発性物質を除去し、反応ｐＨを５に調整した。ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６０ｍＬ）を添加し、得られた相を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物をＨ２Ｏ（６０ｍＬ×２）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮によりＬ４Ｌ－３（６．４ｇ、７４％）が提供され、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。１ＨＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ４．５４ （ｔ， １Ｈ）， ３．６０－３．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４５－ ３．４９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３９ － ２．４４ （ｔ， ２Ｈ）， １．９２ － １．９４ （ｍ， ２Ｈ）， １．５０ － １．９５ （ｍ， ６Ｈ）， １．２６ － １．５５ （ｍ， ８Ｈ）， １．１１ － １．１４ （ｍ， ６Ｈ）。０．８４ － ０．８８ （ｄ， １８Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－３９９。
選択化合物の合成
実施例１．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピロリジン－３，４－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ４３）の合成
２，３，３ａ，４，７，７ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－イソインドール（Ｌ１９－２）の合成
０℃に冷却されたＴＨＦ（２００ｍＬ）中の３ａ，４，７，７ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－イソインドール－１，３（２Ｈ）－ジオンＬ１９－１（１０ｇ、６６．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（８２．５ｍＬ、１６５ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。反応混合物を室温に温め、１２時間撹拌した。ＴＬＣによって観察される出発物の消費後、反応混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦ／水（４０ｍＬ、ｖ／ｖ９：１）と、それに続くＮａＯＨ（４０ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）の１５％水溶液で２時間にわたってクエンチした。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、セライトを通して濾過し、続いてＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で洗浄した。収集された濾液を減圧下で濃縮してＬ１９－２（５．８ｇ、７１％）を茶色の液体として提供し、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。ＣＩＭＳ ｍ／ｚ １２４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ－ブチル１，３，３ａ，４，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－カルボキシレート（Ｌ１９－３）の合成
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の粗製Ｌ１９－２（５．８ｇ、４７．１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に窒素下で冷却した。トリエチルアミン（９．８ｍＬ、７０．６ｍｍｏｌ）及びジ－ｔｅｒｔ－ブチルデカルボネート（１１．４ｇ、５２．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。水及びＤＣＭを添加し、水性相をＤＣＭで抽出した。有機抽出物を飽和水性重炭酸ナトリウムで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮によりＬ１９－３が無色の油として（７．５ｇ、７１％）提供された。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．６２ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４２－３．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１７－３．０３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３０－２．１６ （ｍ， ４Ｈ）， １．９１－１．８５ （ｍ， ２Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）。
ｔｅｒｔ－ブチル３，４－ビス（２－オキソエチル）ピロリジン－１－カルボキシレート（Ｌ１９－４）の合成
Ｌ１９－３（３．０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解し、溶液を－７８℃に冷却した。オゾンを溶液の色が青色に変わるまでバブリングした。次いで反応物をジメチルスルフィドでクエンチし、窒素下で３０分間撹拌した。減圧下での溶媒の除去により粗物質が得られ、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（２．３１ｇ、６７％）。
ジエチル４，４’－（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３，４－ジイル）（２Ｅ，２’Ｅ）－ビス（ブト－２－エノエート）（Ｌ１９－５）の合成
窒素下で－１５℃に冷却されたＴＨＦ（６０ｍＬ）中のトリエチルホスホノアセテート（１１．２ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）の溶液に１Ｍ ＮａＨＭＤＳ（１０．１ｍＬ、５０．１ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。添加の完了後、混合物を同じ温度で３０分間、次いで０℃で６０分間撹拌した。得られた混合物を粗製Ｌ１９－４（３．２ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）に０℃で徐々に添加した。反応混合物を室温にし、一晩撹拌した。反応物を水性塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～３５％酢酸エチルのグラジエント）によって精製してＬ１９－５を無色の油として生成した（１．０１ｇ、２０％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ６．９１－６．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８８－５．８３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２２－４．１４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４３－３．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１８－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３６－２．１１ （ｍ， ６Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．２８ （ｔ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ２９６．１［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋。
ジエチル４，４’－（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３，４－ジイル）ジブチレート（Ｌ１９－６）の合成
酢酸エチル（２０ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－５（０．５８ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐ／Ｃ（０．２ｇ）を添加した。混合物を室温で水素バルーン下で１２時間撹拌し、セライトのパッドを通して濾過した。酢酸エチルで洗浄した後、濾液を濃縮し、粗製物をさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（０．５７ｇ、９７％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．１５－４．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４０－３．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１５－３．０１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２９ （ｔ， ４Ｈ）， ２．０９－２．０３ （ｍ， ２Ｈ）， １．６５－１．５２ （ｍ， ６Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．２４ （ｔ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ３００．２［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋。
ジエチル４，４’－（ピロリジン－３，４－ジイル）ジブチレートＴＦＡ塩（Ｌ１９－７）の合成
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－６（０．５７ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（５ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１２時間撹拌した。揮発性成分を減圧下で除去し、粗生成物をさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（０．５７ｇ、ＴＦＡ塩）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．１５－４．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３７－３．１０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３５－２．３０ （ｍ， ７Ｈ）， １．６１－１．４３ （ｍ， ７Ｈ）， １．２４ （ｔ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ３００．２［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋。
ジエチル４，４’－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピロリジン－３，４－ジイル）ジブチレート（Ｌ１９－８）の合成
窒素下のＣＰＭＥ（５ｍＬ）及びＡＣＮ（５ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－７（４６０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及びベンジル４－ブロモブチルエーテル（４１１ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）の溶液にＫ２ＣＯ３（８５０ｍｇ、６．１ｍｍｏｌ）及びＫＩ（２５５ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で１８時間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をセライトを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄し、溶媒を真空下で除去して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのＳｉＯ２：ジクロロメタン中の０～１０％のメタノールのグラジエント）によって精製して化合物Ｌ１９－８を無色の油として得た（０．４１ｇ、５７％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３０－７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０９－４．０４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６０－３．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１３－３．０６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２９ （ｔ， ４Ｈ）， １．７５－１．３３ （ｍ， １４Ｈ）， １．２２ （ｔ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ４６２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
４，４’－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピロリジン－３，４－ジイル）ビス（ブタン－１－オール）（Ｌ１９－９）の合成
０℃に冷却されたＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－８（０．４ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）の溶液にＴＨＦ中の１Ｍ水素化アルミニウムリチウム（１．１ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。反応混合物を室温にし、１２時間撹拌した。ＴＬＣによって観察される出発物質の消費後、反応混合物を０℃に冷却し、ＴＨＦで希釈し、１５％ＮａＯＨ溶液でクエンチした。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、セライトを通して濾過し、続いて酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮して粗生成物（０．２１ｇ、６２％）を得、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ３７８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピロリジン－３，４－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ１９－１０）の合成
ジクロロメタン（６ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－９（２００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＡＰ（６５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（０．６０９ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）を添加し、続いて酸Ｌ１２－１（０．１３５ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、真空下で蒸発させた。残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、ブライン（８０ｍＬ×３）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を蒸発させ、粗製物をカラムクロマトグラフィー（４０ｇのＳｉＯ２：ジクロロメタン中の０～１０％メタノールのグラジエント）によって精製して化合物Ｌ１９－１０を無色の油として得た。（０．４１ｇ、５７％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．２６ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０４ （ｔ， ４Ｈ）， ３．４８ （ｔ， ２Ｈ）， ２．９１ （ｓ， ２Ｈ）， ２．３３－２．２４ （ｍ， ４Ｈ）， １．８８－１．２３ （ｍ， ６８Ｈ）， ０．８５ （ｔ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ８５４．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピロリジン－３，４－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ４３）の合成
酢酸エチル（３ｍＬ）中の化合物Ｌ１９－１０（１２５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐ（ＯＨ）２／Ｃ（５０ｍｇ）を添加した。反応混合物を水素バルーン下で室温で６時間撹拌した。混合物をセライトのパッドを介して濾過し、濾液を濃縮し、粗製物をカラムクロマトグラフィー（１２ｇのＳｉＯ２：ジクロロメタン中の０～１０％メタノールのグラジエント）によって精製して化合物ＣＹ４３を無色の油として得た（４３ｍｇ、３８％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．０５ （ｔ， ４Ｈ）， ３．６４ （ｔ， ２Ｈ）， ３．３０ （ｓ， １Ｈ）， ２．９１ （ｓ， ２Ｈ）， ２．３３－２．２４ （ｍ， ４Ｈ）， １．８７－１．２３ （ｍ， ６８Ｈ）， ０．８５ （ｔ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ ８６４．７［Ｍ＋Ｈ］＋。分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．７分、純度：９７．６６％；ＵＰＬＣカラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｃ４、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１４．０分、純度：８８．５４％。
実施例２．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ６１）の合成
９－ベンジル－２，４－ジオキソ－３，９－ジアザスピロ［５．５］ウンデカン－１，５－ジカルボニトリル（Ｌ２０－２’）の合成
氷冷されたメタノール（１２０ｍＬ）中の７Ｍアンモニアに１－ベンジル－４－ピペリドン（４０ｇ、２１２ｍｍｏｌ）を添加し、続いてエチルシアノアセテート（４５ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を冷蔵庫内で－２℃で５日間放置した。沈殿物を濾過し、低温メタノールで洗浄した。一晩のオーブン乾燥によりＬ２０－２’がオフホワイト色の固体として提供された（２３ｇ、３０％）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３２３。
ジエチル２，２’－（１－ベンジルピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（Ｌ２０－２）の合成
Ｌ２０－２’（５．０ｇ、１．６ｍｍｏｌ）、水（５．１ｍＬ）及び濃硫酸（６ｍＬ）の混合物を１００℃で４８時間加熱した。室温に冷却した後、エタノール（６０ｍＬ）を混合物に添加し、それを濃縮した。手順を４回繰り返した。次いでエタノール（４０ｍＬ）を粗生成物に添加し、溶液を還流下で３日間加熱した。氷冷後、Ｎａ２ＣＯ３（６ｇ）及び水を添加し、混合物を濃縮した。酢酸エチルを添加し、溶液を水及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製してＬ２０－２を淡黄色の油として生成した（１．８５ｇ、８２％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３２－７．２１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．１１ （ｑ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ２．５６ （ｓ， ４Ｈ）， ２．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．６８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．２４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３４８。
２，２’－（１－ベンジルピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）（Ｌ２２－１）の合成
ＴＨＦ中の２．０Ｍ水素化アルミニウムリチウムの氷冷溶液（５．０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）に無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中のＬ２０－２（１．８５ｇ、５．３ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で徐々に添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。氷水浴冷却しながら、水（０．３８ｍＬ）、１５％水性水酸化ナトリウム溶液（０．３８ｍＬ）及び水（１．１５ｍＬ）を連続的に添加した。セライトを介した濾過及び濃縮によりＬ２２－１が油として生成され、これはオフホワイト色の固体に徐々に固形化した（１．３２ｇ、９４％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３９－７．１８ （ｍ， ５Ｈ）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ２．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．６７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．５０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［ＭＨ＋］２６４。
（１－ベンジルピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２２－２）の合成
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のＬ２２－１（１．３２ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液にＬ１２－１（３．４ｇ、１３ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＭＡＰ（０．６１ｇ、５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（３．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で４８時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、水（２５ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製してＬ２２－２を油として得、これは白色の固体に徐々に固形化した（２．６ｇ、７０％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３１－７．１９ （ｍ， ５Ｈ）， ４．１２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ２．４９－２．２２ （ｍ， ６Ｈ）， １．７３－１．１２ （ｍ， ５６Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７４０。
ピペリジン－４，４－ジイルビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２２－３）の合成
２－プロパノール（６０ｍＬ）中のＬ２２－２（２．６ｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５ｇ）及びＥｔＯＡｃ中の１Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を添加した。得られた混合物を水素バルーン下で撹拌し、油浴において８０℃で２０時間加熱した。反応混合物をセライトを通して濾過した。セライトを２－プロパノール、ジクロロメタン及びＥｔＯＡｃで濯いだ。組み合わせた濾液を蒸発させてＬ２２－３を薄黄色の油として得た（２．２ｇ、９５％）；４．２０－４．００ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４９－２．９０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３５－２．１５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５－０．９０ （ｍ， ５６Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６５０。
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２２－４）の合成
ジクロロエタン（６０ｍＬ）中のＬ２２－３（１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）及び４－ベンジルオキシブタナール（０．８ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の溶液にナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．５ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を添加し、続いて酢酸（０．１６ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で２日間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）、水（２５ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～１００％酢酸エチルのグラジエント）によって濾過してＬ２２－４をわずかに黄色の油として得た（０．９ｇ、４８％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３５－７．２１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４９－２．２０ （ｍ， ８Ｈ）， １．７５－１．１２ （ｍ， ６０Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８１２。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ６１）の合成
ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中のＬ２２－４（０．９ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）及びＥｔＯＡｃ中の１Ｍ ＨＣｌ（８ｍＬ）を添加した。得られた混合物を水素バルーン下で一晩撹拌した。次いでそれをセライトを通して濾過した。セライトをＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で濯いだ。濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製して化合物ＣＹ６１を薄黄色の油として生成した（１３０ｍｇ、１６％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．１２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５５－２．２０ （ｍ， ８Ｈ）， １．７５－１．１２ （ｍ， ６０Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７２２．６；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．２分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｃ４、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１２．１分、純度：９９．２１％。アセチル化生成物ＣＹ６２（５５０ｍｇ）をまた、わずかに黄色の油として単離した。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ｐｐｍ ４．１３ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．０６ （ｑ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４６－２．２１ （ｍ， ８Ｈ）， ２．０３ （ｓ， ３Ｈ）， １．７２－１．１５ （ｍ， ６０Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７６４．６；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．３分、純度：９９．８３％；ＵＰＬＣカラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｃ４、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント、Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．７分、純度：９７．５７％。
実施例３．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ５７）の合成

ｔｅｒｔ－ブチル３，５－ビス（４－（ベンジルオキシ）ブト－１－エン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート（Ｌ２１－３）の合成
無水トルエン（８ｍＬ）中のＬ２１－１（５００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のドライアイス－アセトン浴冷却された溶液にトルエン（３．４ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）中の１．０Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウムを窒素雰囲気下で添加した。得られた混合物を－７２℃で２時間撹拌した。ベンジルオキシプロピリデントリフェニルホスホランの事前冷却された（－７２℃）溶液（カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．１ｇ、９．３ｍｍｏｌ）を０℃の無水トルエン（８ｍＬ）中の（３－ベンジルオキシプロピル）トリフェニルホスホニウムブロミドＬ２１－２（４．８６ｇ、９．６ｍｍｏｌ）の溶液に添加することによって得られた「ウィッティヒ試薬」）の約半分を室温で２時間撹拌した。反応混合物を室温に温め、１６時間撹拌した。ウィッティヒ試薬の溶液の残部を添加し、反応物を室温でさらに１６時間撹拌した。次いで反応物を水（１５ｍＬ）を添加することによってクエンチし、酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を水（２５ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：酢酸エチル／ヘキサン０～１００）によって精製してＬ２１－３を無色の油として生成した（２５０ｍｇ、３０％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３９－７．１８ （ｍ， １０Ｈ）， ５．５５－５．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５１ （ｓ， ４Ｈ）， ３．９９ （ｓ， ｂｒ， ４Ｈ）， ３．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．５８－２．２３ （ｍ， ６Ｈ）， １．７７－１．６８ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）， １．０９－０．９６ （ｍ， １Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋４０５．７。
ｔｅｒｔ－ブチル３，５－ビス（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（Ｌ２１－４）の合成
メタノール（１２ｍＬ）中のＬ２１－３（４７０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の混合物を水素バルーン下で室温で２０時間撹拌した。反応混合物をセライトを通して濾過した。セライトをメタノールで洗浄した。組み合わせた濾液を蒸発させてＬ２１－４を薄黄色の油として得た（３００ｍｇ、９８％）；４．２０－３．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．２５－２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９３－１．８２ （ｍ， １Ｈ）， １．７０－１．０５ （ｍ， ２３Ｈ）， ０．６９－０．５３ （ｍ， １Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋２３０。
（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－３，５－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２１－５）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＬ２１－４（３００ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の溶液にＬ１２－１（５８０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（１１０ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（７００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で２０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製してＬ２１－５を無色の油として生成した（６００ｍｇ、８２％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．２０－３．９５ （ｍ， ４Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．３９－２．２２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２１－２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１－１．８０ （ｍ， １Ｈ）， １．６８－１．１１ （ｍ， ６９Ｈ）， ０．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １２Ｈ） ０．６９－０．５３ （ｍ， １Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋７０６．７。
ピペリジン－３，５－ジイルビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２１－６）の合成
ジクロロメタン（３ｍＬ）中のＬ２１－５（４５０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（３ｍＬ）を０℃で添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌した。揮発性成分を減圧下で除去し、粗製Ｌ２１－６（４５０ｍｇ）をさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４９－２．８０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５１－２．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０２－１．０１ （ｍ， ６１Ｈ）， ０．６９－０．５３ （ｍ， １３Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７０６．７。
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（Ｌ２１－７）の合成
１，２－ジクロロエタン（１５ｍＬ）中のＬ２１－６（４５０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及び４－ベンジルオキシブタナール（１９８ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液にナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３５４ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を添加し、続いて酢酸（３６μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で２０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウム溶液を泡が生成しなくなるまで徐々に添加した。得られた２つの相を分離し、水性相をＤＣＭ（２０×２ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製してＬ２１－７をわずかに黄色の油として生成した（３４０ｍｇ、７１％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３５－７．２１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５－２．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５０－２．１０ （ｍ， ６Ｈ）， １．８１－１．７０ （ｍ， １Ｈ）， １．６５－１．１５ （ｍ， ６６Ｈ）， ０．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １２Ｈ）， ０．５５－０．４２ （ｍ， １Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８６８。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）（化合物ＣＹ５７）の合成
ＥｔＯＡｃ（１２ｍＬ）中のＬ２１－７（３４０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１２０ｍｇ）の混合物を水素バルーン下で７０時間撹拌した。次いでそれをセライトを通して濾過した。セライトをＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で濯いだ。濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製して化合物ＣＹ５７を薄黄色の油として生成した（１７１ｍｇ、５６％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．０４ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５－２．９２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６１－２．２２ （ｍ， ６Ｈ）， １．８５－１．７５ （ｍ， １Ｈ）， １．７６－１．１２ （ｍ， ６６Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １２Ｈ）， ０．５５－０．４２ （ｍ， １Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７７８．７；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．６分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ Ｃ４、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．３分、純度：９７．０５％。
実施例４．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６３）の合成
ジエチル２，２’－（ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（Ｌ２７－１）の合成
室温のエタノール（１０７ｍｌ）中のＬ２０－２（５．４ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）の溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（１．１ｇ）で窒素雰囲気下で処置した。反応混合物を脱気し、Ｈ２ガス（３ｘ）でフラッシュし、次いでＨ２（１気圧、Ｈ２－バルーン）の雰囲気下で室温で激しく撹拌した。２４時間後、反応混合物をセライトを通して濾過し、濾液を真空中で濃縮して粗生成物Ｌ２７－１（４ｇ）を得、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２５７．１６。
ジエチル２，２’－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（Ｌ２７－２の合成
１，２－ジクロロエタン（１８０ｍＬ）中のＬ２７－１（４ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）及び４－（ベンジルオキシ）ブタナール（５．５ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）の混合物にＮａ（ＯＡｃ）３ＢＨ（９．９ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）及び酢酸（１ｍＬ）を添加した。反応混合物を真空／Ｎ２サイクル（３ｘ）に供し、室温で１８時間撹拌した。反応物を０℃で飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）を徐々に添加することによってクエンチした。水性相を酢酸エチル（１００ｍＬ、３ｘ）を使用して抽出し、組み合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過と、それに続く濃縮により粗物質が提供され、これをＤＣＭに溶解した。シリカゲル（４０ｇ）及びトリエチルアミン（４０ｍＬ）を粗物質に添加し、１０～１５分間振盪し、溶媒を真空下で除去した。残渣を空のフラッシュカートリッジに搭載し、これを次いで８０ｇのフラッシュシリカカラムが搭載されたフラッシュ精製システムに取り付け、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン中の０～１０％酢酸エチル（１０％トリエチルアミン））によって精製してエチルＬ２７－２をわずかに黄色の油として生成した（３．７ｇ、５７％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３１－７．３０ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０９－４．０４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４７－３．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５２－２．３１ （ｍ， １０Ｈ）， １．６８－１．５７（ｍ， ８Ｈ）， １．２２ （ｔ， ６Ｈ）；ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋４２０．３。
２，２’－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）（Ｌ２７－３）の合成
ＴＨＦ（１４ｍＬ）中のＬ２７－２（０．７５ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴（０℃）において冷却し、これにＴＨＦ中の２Ｍ ＬｉＡｌＨ４（３．５６ｍＬ、７．１４ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。氷浴を除去し、反応混合物を１８時間室温で撹拌した。混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、氷浴中で冷却し、水（１０ｍＬ）、２０％ＮａＯＨ（１０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）で慎重にクエンチした。３０分間撹拌した後、水性相を２０ｍＬのＤＣＭ（３ｘ）で抽出し、次いで組み合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮してＬ２７－３（０．５４ｇ、９１％の収率）を白色の固体として得た。ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３３６．３。
４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタン酸（Ｌ４－３（Ｔ９））の合成
化合物Ｌ４Ｌ合成に記載の手順Ｂに従って調製した。化合物Ｌ４－３（Ｔ９）を淡黄色の油として単離して１１．８ｇ（９８％）を生成した。１ＨＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ： ４．５３－４．５６ （ｔ， １Ｈ）， ３．５７－３．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４０－３．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３９－２．４１ （ｔ， ２Ｈ）， １．９０－１．９５ （ｍ， ２Ｈ）， １．５４－１．５６ （Ｍ， ４Ｈ）， １．２６ （ｂｓ， ２８Ｈ）， ０．８５－０．８７ （ｔ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－３７１。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）（Ｌ２７－４）の合成［手順Ｅ］
Ｌ４－３（Ｔ９）（１ｇ、２．９ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）、ＥＤＣ（１．０１ｇ、５．２８ｍｍｏｌ、４ｅｑ）、ＤＭＡＰ（１６１ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）及びＬ２７－３（４４０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を含有する２５０ｍＬの丸底フラスコに無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応の完了の後、約３０ｇのフラッシュシリカを添加し、内容物をよく撹拌して均一な混合物を得た。溶媒をこの混合物から真空下で除去した。残渣を空のフラッシュカートリッジに搭載し、これを次いでフラッシュシリカカラムが搭載されたフラッシュ精製システムに取り付け、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ヘキサン（１０％トリエチルアミン）／酢酸エチル０～２０％）によって精製して化合物Ｌ２７－４（０．９４ｇ、７３％）をわずかに黄色の油として得た。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．３１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４８－４．４７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１０－４．０８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５６－３．３７ （ｍ， １０Ｈ）， ２．３７－２．３２ （ｍ， １０Ｈ）， １．９０－１．８０（ｍ， ２０Ｈ）， １．３１－１．１０（ｍ， ４０Ｈ）， ０．８４ （ｔ， １２Ｈ）；ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋９８８．８。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（オクチルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６３）の合成［手順Ｆ］
Ｌ２７－４（５６０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ（１８６ｍｇ）を含有する２５０ｍＬの丸底フラスコに酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加し、次いで反応混合物を真空／Ｎ２サイクル（３ｘ）に供し、続いて真空／Ｈ２の別のサイクル（３ｘ）に供した。反応混合物を１気圧のＨ２（水素バルーン）下に置き、一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、次いでセライトを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄し、次いで溶媒を真空下で乾燥するまで除去して粗生成物を薄茶色の油ＣＹ６３として得た（１３２ｍｇ、２６％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．４８ （ｔ， ４Ｈ）， ４．１２－４．０７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５５－３．３９ （ｍ， １０Ｈ）， ２．４６－２．３１ （ｍ， １０Ｈ）， １．９０－１．８８（ｍ， ４Ｈ）， １．６６－１．５１（ｍ， ２０Ｈ）， １．３０－１．００（ｍ， ４０Ｈ）， ０．８６ （ｔ， １２Ｈ）；ＡＰＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８９８．８；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．６分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．８分、純度：＞９９％。
実施例５．ヘプタデカン－９－イル２－（１－（４－ヒドロキシブチル）－４－（２－オキソ－２－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アセテート（化合物ＣＹ６９）の合成

２，２’－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）二酢酸（Ｌ２８Ａ－１）の合成
ＴＨＦ（１５ｍＬ）及びメタノール（２．５ｍＬ）中のジエステルＬ２７－２（０．９ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液に水（５ｍＬ）中のＬｉＯＨ（０．３６ｇ、６．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を室温で２０時間撹拌した。氷水浴において冷却した後、反応混合物のｐＨを４に調整した。揮発性成分を減圧下で除去し、残渣を凍結乾燥させてオフホワイト色の固体を得、これを逆カラムクロマトグラフィー（アセトニトリル／水０～１００）によって精製してＬ２８Ａ－１をオフホワイト色の発泡固体として生成した（０．６２ｇ、８０％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３９－７．１８ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４７ （ｓ， ２Ｈ）， ３．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９０－２．５６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．４３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０５－１．５６ （ｍ， ８Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－３６１．５。
９－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）－３－オキサ－９－アザスピロ［５．５］ウンデカン－２，４－ジオン（Ｌ２８Ａ－２）の合成
窒素雰囲気下の０℃の無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）及びピリジン（２ｍＬ）中のＬ２８Ａ－１（０．５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液に無水ＤＭＦ（１滴）及び塩化オキサリル（０．１５ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を添加した。添加の完了後、混合物を室温で１８時間撹拌した。さらに塩化オキサリル（０．１５ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、無水トルエンと共蒸発させてＬ２８Ａ－２を薄黄色の油として得た（０．４８ｇ、９９％）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３４６．２。
２－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）－４－（２－オキソ－２－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）酢酸（Ｌ２８Ａ－３）の合成
０℃のＤＣＭ（１５ｍＬ）及びピリジン（２ｍＬ）中のＬ２８Ａ－２（４８０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液にＬ１－４（８００ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で１８時間撹拌した。さらにＬ１－４（１６０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を５０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、粗物質をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：５％トリエチルアミンを有するメタノール／ＤＣＭ０～３０％）によって精製してＬ２８Ａ－３を薄黄色の固体として生成した（３３０ｍｇ、４４％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．４１－７．１５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４６ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８９－２．３６ （ｍ， １０Ｈ）， １．９７－１．１５ （ｍ， ２９Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋５４６．４。
ヘプタデカン－９－イル２－（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）－４－（２－オキソ－２－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アセテート（Ｌ２８Ａ－４）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＬ２８Ａ－３（３２０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の溶液にヘプタデカン－９－オール（Ｌ２－１）（２２５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（３８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（２２５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で窒素雰囲気下で１８時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過及び濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製してＬ２８Ａ－４を無色の油として生成した（３０５ｍｇ、６６％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３８－７．２１ （ｍ， ５Ｈ）， ４．８４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６０－２．２８ （ｍ， １０Ｈ）， １．７６－１．１５ （ｍ， ５５Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋７８４．８。
ヘプタデカン－９－イル２－（１－（４－ヒドロキシブチル）－４－（２－オキソ－２－（（３－ペンチルオクチル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アセテート（化合物ＣＹ６９）の合成
ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）中のＬ２８Ａ－４（３００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（１５０ｍｇ）の混合物を水素バルーン下で８０時間撹拌した。次いで混合物をセライトを通して濾過した。セライトをＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で濯いだ。濾液の濃縮により粗物質が提供され、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：溶離剤中に１％トリエチルアミンを有する酢酸エチル／ヘキサン０～１００％）によって精製して化合物ＣＹ６９を薄黄色の油として生成した（２４１ｍｇ、９１％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．８４ （ｍ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７１－２．３５ （ｍ， １０Ｈ）， １．８２－１．４３ （ｍ， １５Ｈ）， １．３６－１．１５ （ｍ， ４０Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６９４．６；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１０．６分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．４分、純度：＞９９％。
実施例６．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ノニルウンデカノエート）（ＣＹ６５）の合成
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ノニルウンデカノエート）（Ｌ４９－４）の合成
化合物Ｌ２７合成に記載の手順Ｅに従って調製した。化合物Ｌ４９－１を無色の油として単離した（５８０ｍｇ、４３％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．２６ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｔ， ４Ｈ）， ３．４６ （ｔ， ２Ｈ）， ２．４５－２．２４ （ｍ， ７Ｈ）， １．７０－１．３７ （ｍ， １９Ｈ）， １．２９－１．１５ （ｍ， ５８Ｈ）， ０．８６ （ｔ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋９２５．５６。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（２－ノニルウンデカノエート）（ＣＹ６５）の合成
化合物ＣＹ６３合成に記載の手順Ｆに従って調製した。化合物ＣＹ６５を無色の油として単離した（０．５２ｇ、９７％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．１１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５６ （ｔ， ２Ｈ）， ２．５５－２４１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２７－２．２１ （ｍ， ２Ｈ）， １．６８－１．５７ （ｍ， １６Ｈ）， １．２８－１．１５ （ｍ， ５４Ｈ）， ０．８６ （ｔ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋８３４．１。分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１２．１分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１５．４分、純度：＞９８．１％。
実施例７．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－３，５－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６６）の合成
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－３，５－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（Ｌ５０－１）の合成
化合物ＣＹ６３合成に記載の手順Ｅに従って調製した。化合物Ｌ５０－１（０．５５ｇ、４４％）を無色の油として単離した。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．３２ （ｍ， ５Ｈ）， ４．４９－４．４７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１２－４．１０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５６－３．３７ （ｍ， １０Ｈ）， ２．３８－２．３３ （ｍ， １０Ｈ）， ２．０４－１．８９ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６－１．５０ （ｍ， ２０Ｈ）， １．４０－０．９９ （ｍ， ４８Ｈ）， ０．８７ （ｔ， １２Ｈ）；ＡＰＣＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１０４５．０。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－３，５－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６６）の合成
化合物ＣＹ６３合成に記載の手順Ｆに従って調製した。化合物ＣＹ６６（０．２ｇ、４４％）を無色の油として単離した。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．４７ （ｔ， ４Ｈ）， ４．１３－４．１０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５６－３．４０ （ｍ， １０Ｈ）， ２．５７－２．３９ （ｍ， １０Ｈ）， １．９１－１．８９ （ｍ， ４Ｈ）， １．６７－１．５２ （ｍ， ２６Ｈ）， １．３７－１．００ （ｍ， ４８Ｈ）， ０．８７ （ｔ， １２Ｈ）；ＡＰＣＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋９５４．７；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１１．６分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．８分、純度：＞９９％。
実施例８．（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（デシルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６７）の合成
（１－（４－（ベンジルオキシ）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（デシルオキシ）ブタノエート）（Ｌ５１－１）の合成
化合物ＣＹ６３合成に記載の手順Ｅに従って調製した。Ｌ５１－１（１．１６ｇ、８８％）、無色の油、１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．３３－７．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．５１－４．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．６２－３．３３ （ｍ， １０Ｈ）， ２．４５－２．２６ （ｍ， １０Ｈ）， １．９７－１．８５ （ｍ， ４Ｈ）， １．７３－１．４１ （ｍ， １８Ｈ）， １．４０－１．１５ （ｍ， ５８Ｈ）， ０．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １２Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１１００．８。
（１－（４－ヒドロキシブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（デシルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ６７）の合成
化合物ＣＹ６３合成に記載の手順Ｆに従って調製した。化合物ＣＹ６７（６１５ｍｇ、５８％）、無色の油、１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．６１－３．３２ （ｍ， １０Ｈ）， ２．６５－２．３０ （ｍ， １０Ｈ）， １．９８－１．８５ （ｍ， ４Ｈ）， １．７６－１．１５ （ｍ， ７６Ｈ）， ０．９１－０．８０ （ｍ， １２Ｈ）；ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１０１０．８；分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝１２．４分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で６０％から１００％、流速：０．５ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１６．０分、純度：９８％。
実施例９．（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ７１）の合成
４－ブロモブタナール（Ｌ５７－２）の合成
ＤＣＭ（７５ｍＬ）中のピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）（１２．１４ｇ、５６．５５ｍｍｏｌ）の溶液にＤＣＭ（２５ｍＬ）中の４－ブロモブタン－１－オール（５．７７ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）を１０分にわたって添加した（溶媒還流を防止するために間欠的冷却が必要とされた）。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いでジエチルエーテルで希釈した。上部エーテル相をフラスコからデカントし、セライトを通して濾過し、セライトケーキをエーテルで洗浄した。組み合わせたエーテル相を減圧下で蒸発させて粗製４－ブロモブタナールＬ５７－２を得、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（４．５ｇ、粗製）；１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ３．７４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１８ （ｍ， ２Ｈ）， １．８４ （ｓ， ２Ｈ）。
４－ブロモ－１，１－ジメトキシブタン（Ｌ５７－３）の合成
４－ブロモブタナールＬ５７－２（４．５ｇ、粗製）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、次いでエーテル中の２Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）を次いで添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。揮発性成分を減圧下で蒸発させて４－ブロモ－１，１－ジメトキシブタンＬ５７－３を淡黄色の油として生成した（３．９ｇ、粗製）；１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ３．４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３２ （ｓ， ６Ｈ）， １．９１ （ｍ， ２Ｈ）， １．７５ （ｍ， ２Ｈ）。
１－（４，４－ジメトキシブチル）－１Ｈ－イミダゾール（Ｌ５７－４）の合成
５～１０℃の無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のイミダゾール（１．４８ｇ、２１．７６ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＨ（９４８ｍｇ、２３．７４ｍｍｏｌ、鉱油中に６０％）を撹拌しながら部分ずつ添加した。次いで得られた混合物を室温で２時間撹拌した。懸濁液にＴＨＦ（１０ｍＬ）中の４－ブロモ－１，１－ジメトキシブタンＬ５７－３（３．９ｇ、１９．７９ｍｍｏｌ）を１５分の時間にわたって滴下して添加し、反応物を室温で３時間さらに撹拌して均一な混合物を達成した。反応混合物を６０℃で一晩加熱し、室温に冷却し、濾過した。ＴＨＦを減圧下で除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ中の０～５％のＭｅＯＨのグラジエント）によって精製して１－（４，４－ジメトキシブチル）－１Ｈ－イミダゾールＬ５７－４を生成した（８５０ｍｇ、１２％（３工程で））。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．９ （ｓ， １Ｈ）， ４．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．４９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２９ （ｓ， ６Ｈ）， １．８４ （ｍ， ２Ｈ）， １．５８ （ｍ， ２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１８５。
１－（４－オキソブチル）－１Ｈ－イミダゾール－１－イウムクロリド（Ｌ５７－５）の合成
ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の１－（４，４－ジメトキシブチル）－１Ｈ－イミダゾールＬ５７－４（１．０５ｇ、５．７ｍｍｏｌ）の溶液に１．５Ｎ ＨＣｌ（５．０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＨＦを蒸発させ、水層をＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄して不純物を除去した。水性層を減圧下で蒸発させ、続いてアセトニトリル（２×１０ｍＬ）及びトルエン（２×１０ｍＬ）と共蒸発させ、高真空下で２４時間乾燥させて１－（４－オキソブチル）－１Ｈ－イミダゾール－１－イウムクロリドＬ５７－５を薄黄色のゴム状固体として生成し、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（１．０ｇ、粗製）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－Ｄ６） δ ９．６３ （ｓ， １Ｈ）， ９．２１ （ｓ， １Ｈ）， ７．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７ （ｓ， １Ｈ）， ４．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３４－３．６２ （ｍ， ２Ｈ） ２．０５ （ｍ， ２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１３９。
ジエチル２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（Ｌ５７－６）の合成
ＤＭＦ（５ｍＬ）及びＤＣＥ（５ｍＬ）の混合物中のジエチル２，２’－（ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（８５０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＦ（５ｍＬ）中の１－（４－オキソブチル）－１Ｈ－イミダゾール－１－イウムクロリドＬ５７－５（１．０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＮａ（ＯＡｃ）３ＢＨ（２．２２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（２４０μＬ、４．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で窒素下で１８時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、反応の完了を確認した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。水性層をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ中の０～６％ＭｅＯＨのグラジエント）によって精製してジエチル２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテートＬ５７－６を生成した（６００ｍｇ、４５％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ４．０８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５３ （ｓ， ４Ｈ）， ２．３６ （ｍ， ６Ｈ）， １．７８ （ｍ， ２Ｈ）， １．６７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５ （ｍ， ２Ｈ）， １．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３８０。
２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）（Ｌ５７－７）の合成
０℃の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテートＬ５７－６（６００ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液に窒素下で無水ＴＨＦ中のＬｉＡｌＨ４の溶液（２．０Ｍ、１．６ｍＬ、３．１６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、Ｎａ２ＳＯ４．１０Ｈ２Ｏをすべてのガス発生が停止するまで徐々に添加した。セライトを通して濾過した後、セライトケーキをＴＨＦで洗浄した。組み合わせた濾液を減圧下で濃縮して２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）Ｌ５７－７を無色の粘性の液体として得、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した（４４０ｍｇ、粗製）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０２ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ３．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．３３ （ｍ， ６Ｈ）， １．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．６５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７５ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．５５ （ｍ， ２Ｈ）， １．４７ （ｍ， ４Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２９６。
（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ７１）の合成
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタン酸（１．２１ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＡＰ（３６３ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（１．２５ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、ＤＣＭ（５ｍＬ）中の２，２’－（１－（４－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ブチル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）Ｌ５７－７（４４０ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。生成物の形成をＬＣＭＳによって確認した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、次いで水及びブラインで洗浄した。ＤＣＭ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ及び１％ＮＨ４ＯＨ中の０～５％ＭｅＯＨのグラジエント）によって精製して化合物ＣＹ７１を無色の油として生成した（４０４ｍｇ、２６％（２工程後））。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ４．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５３ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３５ （ｍ， １０Ｈ）， １．８９ （ｍ， ４Ｈ）， １．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．６６ （ｍ， ２Ｈ）， １．５４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２５ （ｍ， ４８Ｈ）， ０．８７ （ｍ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋：１００４．１。分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝８．５分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．７分、純度：＞９９％。
実施例１０．（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ７０）の合成
１－（３，３－ジメトキシプロピル）－１Ｈ－イミダゾール（Ｌ６４－２）の合成
無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中のイミダゾール（２．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液にＮａＨ（１．３１ｇ、３２．７８ｍｍｏｌ、鉱油中に６０％）を撹拌しながら部分ずつ添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。形成された懸濁液にＴＨＦ（１５ｍＬ）中の３－ブロモ－１，１－ジメトキシプロパン（５．０ｇ、２７．３２ｍｍｏｌ）を１０分の時間にわたって滴下して添加し、３時間さらに撹拌して均一な混合物を達成した。反応混合物を６０℃で一晩加熱し、次いで室温に冷却し、濾過した。ＴＨＦを減圧下で除去した。ＤＣＭを添加し、続いて活性炭及び無水Ｎａ２ＳＯ４を添加し、２時間撹拌し、セライトで濾過した。ＤＣＭを減圧下で除去して粗生成物を薄い黄色がかった液体として得、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨのグラジエント）によって精製して１－（３，３－ジメトキシプロピル）－１Ｈ－イミダゾールＬ６４－２を生成した（３．６４ｇ、７８％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．９ （ｓ， １Ｈ）， ４．２４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．４９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．０５ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８４ Ｈｚ， ４Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１７１．１。
３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロパナール塩酸塩（Ｌ６４－－３）の合成
ＴＨＦ（１５．０ｍＬ）中の化合物１－（３，３－ジメトキシプロピル）－１Ｈ－イミダゾールＬ６４－２（３．０ ｇ１７．６４ｍｍｏｌ）の溶液に１．５Ｎ ＨＣｌ（１５．０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＨＦを蒸発させ、水層をＤＣＭ及びＥｔＯＡｃで洗浄して不純物を除去した。水性層を減圧下で蒸発させ、続いてアセトニトリル（２×１０ｍＬ）及びトルエン（２×１０ｍＬ）で共蒸発させ、高真空下で２４時間乾燥させて３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロパナール塩酸塩Ｌ６４－３を薄黄色のゴム状の固体として生成し（２．７ｇ）、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－Ｄ６） δ： ９．６７ （ｓ， １Ｈ）， ９．１４ （ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ７．６６ （ｓ， １Ｈ）， ４．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋１２５．２。
ジエチル２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（Ｌ６４－４）の合成
ＤＣＥ（１０ｍＬ）中のジエチル２，２’－（ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテート（５５５ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）の溶液に３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロパナール塩酸塩Ｌ６４－３（７３０ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＮａ（ＯＡｃ）３ＢＨ（１．４５ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（１５６ｍＬ、２．７３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で窒素下で１８時間撹拌し、次いで５０℃で加熱し、２時間撹拌した。反応の完了をＬＣＭＳによって確認した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。水性層をＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ中の０～６％ＭｅＯＨのグラジエント）によって精製してジエチル２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテートＬ６４－４を生成した（４４０ｍｇ、５２％）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ： ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ４．０９ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．５４ （ｓ， ４Ｈ） ２．４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．９２ （ｍ， ２Ｈ）， １．６９ （ｍ， ４Ｈ）， １．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ６Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋３６６．２。
２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）（Ｌ６４－５）の合成
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のジエチル２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ジアセテートＬ６４－４（４３０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液にＴＨＦ中の２．０Ｍ ＬｉＡｌＨ４の溶液（１．２ｍＬ、２．３５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、Ｎａ２ＳＯ４．１０Ｈ２Ｏをすべてのガス発生が停止するまで徐々に添加した。セライトを通して濾過した後、セライトケーキをＴＨＦで洗浄した。すべての濾液を減圧下で濃縮して２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）Ｌ６４－５を無色の粘性の液体（３７５ｍｇ、粗製）として得、これをさらなる精製をせずに次の工程のために使用した。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．６４ （ｓ， １Ｈ）， ７．１２ （ｓ， １Ｈ）， ６．９１ （ｓ， １Ｈ）， ４．０５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．４５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．９ （ｍ， ２Ｈ）， １．５６ （ｍ， ８Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２８２．２。
（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－２，１－ジイル）ビス（４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタノエート）（ＣＹ７０）の合成
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の４，４－ビス（ノニルオキシ）ブタン酸（Ｌ４－３（Ｔ９））（３７５ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の溶液にＤＭＡＰ（３２０ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（１．２ｇ、６．２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、ＤＣＭ（５ｍＬ）中の２，２’－（１－（３－（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）プロピル）ピペリジン－４，４－ジイル）ビス（エタン－１－オール）Ｌ６４－５を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いでＤＣＭで希釈し、水及びブラインで洗浄した。ＤＣＭ層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＤＣＭ及び１％ＮＨ４ＯＨ中の０～５％ＭｅＯＨのグラジエント）によって精製して化合物ＣＹ７０を無色の油として生成した（４４５ｍｇ、２５％（２工程後））。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ７．０４ （ｓ， １Ｈ）， ６．８９ （ｓ， １Ｈ）， ４．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３６ （ｍ， ８Ｈ）， ２．２５ （ｍ， ２Ｈ）， １．９２ （ｍ， ６Ｈ）， １．６７ （ｍ， ２Ｈ）， １．５２ （ｍ， １０Ｈ）， １．２５ （ｍ， ５０Ｈ）， ０．８７ （ｍ， １２Ｈ）；ＣＩＭＳ ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋９９０．１。分析ＨＰＬＣカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＥＬＳＤ、ｔＲ＝８．３分、純度：＞９９％；ＵＰＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）ＣＳＨＴＭ、Ｃ１８、１．７μｍ、３．０×１５０ｍｍ、（部品番号１８６００５３０２）、移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸を有するアセトニトリル、移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸を有する水、使用グラジエント：Ｂ中のＡ、１５分で５％から９５％、流速：１ｍＬ／分、カラム温度：２０±２℃、検出器：ＣＡＤ、ｔＲ＝１３．４分、純度：＞９９％。
脂質ナノ粒子の調製－一般的手順
本開示の代表的な脂質、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００）を４８．５：１０：４０：１．５（ＩＭ投与）または４８．５：１０：３９：２．５（ＩＶ投与）のモル比で１０．８ｍＭの総脂質濃度で純粋エタノールに溶解した。例えば、Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１８：ｅ２０２０４０１１１８（２０２１）を参照されたい。次いで脂質溶液を、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体システムを使用することによってｍＲＮＡ（０．１０ｍｇ／ｍＬ０）を含有する酸性酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）またはクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）と混合した。ｍＲＮＡ溶液及び脂質溶液をそれぞれ１２ｍＬ／分の総流速で３：１の比のｍＲＮＡ溶液対脂質溶液でＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体デバイスに注入し、デバイスは、２つの成分の急速混合をもたらし、よって、ＬＮＰの自己構築をもたらした。製剤をさらにＰＢＳ（ｐＨ７．４）または２０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）（８％スクロース溶液を有する）に対して透析カセットにおいて一晩４℃で透析した。製剤の粒子サイズをＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｕｌｔｒａ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。ＲＮＡ封入効率をＲｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイによって特性化した。
実施例１１．ＬＮＰ製剤Ａ
イオン化可能な脂質、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＰＥＧ２Ｋ－ＤＭＧを４８．５：１０：３９：２．５のｍｏｌ％比で１０．８ｍＭの総脂質濃度で純粋エタノールに溶解した。０．１０ｍｇ／ｍＬのｍＲＮＡ溶液を、ヒトエリスロポエチン（ｈＥＰＯ）及びホタルルシフェラーゼ（ｆＬｕｃ）（１：２の比）をコードするｍＲＮＡを含有する酸性緩衝液（ｐＨ４．０～５．０）を使用して調製した。ヌクレオチド及び脂質溶液を３：１の体積比でＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体システムを使用して１２ｍＬ／分の総流速で混合し、ＬＮＰの急速混合及び自己アセンブリをもたらした。製剤をさらにＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して一晩４℃でさらに透析し、遠心濾過を使用して濃縮し、濾過した（０．２μｍの細孔サイズ）。製剤の粒子サイズ及び多分散指数（ＰＤＩ）をＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｕｌｔｒａ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。ＲＮＡ封入効率（ＥＥ％）をＲｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイによって決定した。
緩衝液Ａ：２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０；緩衝液Ｂ：５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ４．０
実施例１２．ＬＮＰ製剤Ｂ
イオン化可能な脂質、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＰＥＧ２Ｋ－ＤＳＰＥを４８．５：１０：４０：１．５のｍｏｌ％比で１０．８ｍＭの総脂質濃度で純粋エタノールに溶解した。０．１０ｍｇ／ｍＬのｍＲＮＡ溶液を、ホタルルシフェラーゼ（ｆＬｕｃ）をコードするｍＲＮＡを含有する酸性緩衝液（ｐＨ４．０～５．０）を使用して調製した。ヌクレオチド及び脂質溶液を３：１の体積比でＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体システムを使用して１２ｍＬ／分の総流速で混合し、ＬＮＰの急速混合及び自己アセンブリをもたらした。製剤をさらにＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対して一晩４℃でさらに透析し、遠心濾過を使用して濃縮し、濾過した（０．２μｍの細孔サイズ）。製剤の粒子サイズ及び多分散指数（ＰＤＩ）をＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｕｌｔｒａ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。ＲＮＡ封入効率（ＥＥ％）をＲｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイによって決定した。
緩衝液Ａ：２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０；緩衝液Ｂ：５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ４．０
実施例１３．ＬＮＰ製剤Ｃ
イオン化可能な脂質、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＰＥＧ２Ｋ－ＤＭＧを４８．５：１０：４０：１．５のｍｏｌ％比（本開示のイオン化可能な脂質を含む製剤）または５０：１０：３８．５：１．５のｍｏｌ％比（ＳＭ１０２製剤）で１０．８ｍＭの総脂質濃度で純粋エタノールに溶解した。表ＸＣに示されるように、ＣＯＶＩＤスパイクタンパク質をコードする環状ＲＮＡ（ｏＲＮＡ）または線状ｍＲＮＡを含有する酸性緩衝液（ｐＨ４．０～５．０）を使用して０．１０ｍｇ／ｍＬのＲＮＡ溶液を調製した。ヌクレオチド及び脂質溶液を３：１の体積比でＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体システムを使用して１２ｍＬ／分の総流速で混合し、ＬＮＰの急速混合及び自己アセンブリをもたらした。製剤をさらに冷凍緩衝液に対して一晩４℃でさらに透析し、遠心濾過を使用して濃縮し、濾過した（０．２μｍの細孔サイズ）。次いで製剤を－８０℃で使用されるまで保存した。製剤の粒子サイズ及び多分散指数（ＰＤＩ）をＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｕｌｔｒａ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定した。ＲＮＡ封入効率（ＥＥ％）をＲｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイによって決定した。
緩衝液Ａ：２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０；緩衝液Ｂ：５０ｍＭクエン酸塩、ｐＨ４．０
実施例１４．ｈＥＰＯ及びｆＬＵＣ ｉｎ ｖｉｖｏレポーターアッセイ
Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮＣｒｌ（雌、６～８週）にＬＮＰ（０．１ｍｇ／ｋｇのＥＰＯ及び０．２ｍｇ／ｋｇのＬｕｃで製剤化された、実施例１１を参照されたい）を静脈内注射によって投与した。血漿サンプルをｈＥＰＯ分析のために投薬から５、２３及び４７時間後に採取した。Ｄ－ルシフェリン溶液の注射（１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射（ＩＰ））後にマウスの生物発光画像化（ＢＬＩ）をＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩ ＬＴシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して投薬から６、２４及び４８時間後に取得し、決定した。ｈＥＰＯ濃度をＥＬＩＳＡキット（ＤＥＰ００，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して測定した。個々のマウス血漿ｈＥＰＯまたは全身ＢＬＩデータのｈＥＰＯの最大濃度またはＢＬＩシグナル（Ｃｍａｘ）及び濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ）を、ノンコンパートメント解析（ＮＣＡ）プログラム（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）、バージョン８．３．４［Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ，ＵＳＡ）］）を使用して計算した。
表Ｙは、試験された各製剤について、実験を通して全体及び内部標準に対するものの両方の、投薬から５時間後のｈＥＰＯ濃度及び４８時間にわたるＡＵＣを報告している。表Ｙはまた、試験された各製剤について、投薬から６時間後に測定されたルシフェラーゼ生物発光画像化測定及び４８時間の期間にわたるＡＵＣを報告している。
データ凡例：
ｈＥＰＯ Ｃ５ｈｒ（ＩＵ／μＬ）：＋＝＜１０ＩＵ／μＬ；１０ＩＵ／μＬ≦＋＋＜１００ＩＵ／μＬ；１００≦＋＋＋＜１，０００ＩＵ／μＬ
ｈＥＰＯ ＡＵＣ（ｈｒ＊ＩＵ／μＬ）：＋＝＜１０ｈｒ＊ＩＵ／μＬ；１０ｈｒ＊ＩＵ／μＬ≦＋＋＜１００ｈｒ＊ＩＵ／μＬ；１００ｈｒ＊ＩＵ／μＬ≦＋＋＋＜１，０００ｈｒ＊ＩＵ／μＬ；１，０００ｈｒ＊ＩＵ／μＬ≦＋＋＋＋＜１０，０００ｈｒ＊ＩＵ／μＬ
ＡＵＣ比対標準：＊＝＜０．１；０．１≦＊＊＜０．５；０．５≦＊＊＊＜１．０；１．０≦＊＊＊＊＜１．５；１．５≦＊＊＊＊＊＜２．０；＊＊＊＊＊＊≧２．０
ルシフェラーゼＢＬＩ Ｃ６ｈｒ（光子／秒）：＃＝＜１億ｐ／ｓ；１億ｐ／ｓ≦＃＃＜１０億ｐ／ｓ；１０億ｐ／ｓ≦＃＃＃＜１００億ｐ／ｓ；１００億ｐ／ｓ≦＃＃＃＃＜１０００億ｐ／ｓ；１０００億ｐ／ｓ≦＃＃＃＃＃＜１兆ｐ／ｓ
ルシフェラーゼＢＬＩ ＡＵＣ４８ｈｒ（ｈｒ＊光子／秒）：＄＜１００億ｈｒ＊ｐ／ｓ；１００億ｈｒ＊ｐ／ｓ≦＄＄＜１０００億ｈｒ＊ｐ／ｓ；１０００億ｈｒ＊ｐ／ｓ≦＄＄＄＜１兆ｈｒ＊ｐ／ｓ；１兆ｈｒ＊ｐ／ｓ≦＄＄＄＄＜１０兆ｈｒ＊ｐ／ｓ
実施例１５．ｉｎ ｖｉｖｏ器官指向性アッセイ
Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮＣｒｌ（雌、６～８週）に、ＬＮＰ製剤（０．２ｍｇ／ｋｇのＬｕｃ ｍＲＮＡで製剤化、実施例１２を参照されたい）をＩＶ注射によって投薬した。ＬＮＰ投薬から６時間後、マウスにＤ－ルシフェリン溶液（１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内（ＩＰ））を注射した。Ｄ－ルシフェリン投薬から１０分後、マウスを屠殺して、器官（肝臓、脾臓、肺、心臓、腎臓）を採取した。各投薬群からの器官の生物発光画像化を、ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩＩ ＬＴシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して同時に取得した。
各々の個々のマウスからのすべての器官の生物発光の合計を総フラックス（光子／秒）として合計した。各々の個々の器官の生物発光のパーセンテージを計算してＬＮＰ製剤の器官指向性を決定した。
ルシフェラーゼＢＬＩ Ｃ６ｈｒ（光子／秒）：＃＝＜１億ｐ／ｓ；１億ｐ／ｓ≦＃＃＜１０億ｐ／ｓ
実施例１６．スパイクタンパク質をコードするＲＮＡに対するｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞反応－ネズミ
投薬プロトコル
ＬＮＰ製剤を実施例１３に記載されているように調製した。各製剤を、０及び２１日目に０．５ｍＬの総体積中の０．０２ｍｇ／ｍｌのＣＯＶＩＤスパイクタンパク質をコードするｏＲＮＡまたは線状ｍＲＮＡを用いて５匹のＢＡＬＢ／ｃマウスに筋肉内に注射した。投薬前に、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、注射中に動きが生じないように鎮静するまで０．４～０．８リットル／分の流速でイソフルランが事前充填されたチャンバー内に置いた。注射部位を両方の投薬後に刺激についてモニターした。３５日目にすべてのマウスをＣＯ２吸入によって人道的に安楽死させ、脾臓を収集し、処理まで浸潤氷上で保存した。この研究におけるすべてのｉｎ ｖｉｖｏ実験を、承認された動物ケアガイドライン下で実施した。
分析
脾臓を採取し、７０μｍフィルター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ １３０－０９８－４６２）を使用して濾過によって単一細胞懸濁液に手動で解離し、２ｍＭ ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ １５５７５－０２０）及び０．５％ＢＳＡ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ １３０－０９１－３７６）を含有する１×ＰＢＳ（Ｆｉｓｈｅｒ １００１００４９）で洗浄した。赤血球をＡＣＫ Ｌｙｓｉｓｇ Ｂｕｆｆｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ１０４９２０１）を使用して溶解し、１×ＰＢＳ＋２ｍＭ ＥＤＴＡ＋０．５％ＢＳＡで２回洗浄した。最終洗浄後、細胞を１×ＰＢＳに再懸濁し、カウントした（ＶｉＣｅｌｌ ＸＲ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ７３１１９６）。細胞を、適切な濃度で１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＴＰ－０５０１２２）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ １５－１４０－１２２）を含有するＣＴＬ Ｔｅｓｔ Ｐｌｕｓ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．ＣＴＬＴＰ－００５）に再懸濁し、下流機能性アッセイのために播種した。
ＥＬＩＳｐｏｔ分析を、マウスＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔＰＬＵＳ Ｋｉｔ（Ｍａｂｔｅｃｈ ３３２１－４ＨＳＴ－１０）を使用して製造業者のプロトコルに従って実施した。簡潔には、プレートを１×ＰＢＳで洗浄し、１０％ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３８４００－０１）を含有するＲＰＭＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ７２４００－０４７）で１時間３７℃ブロッキングした。ブロッキング後、細胞を、ＤＭＳＯ及びペプチド刺激ウェルについては２００，０００細胞／ウェルまたはＰＭＡ／イオノマイシン処置については２５，０００細胞／ウェルで播種した。細胞を１％ＤＭＳＯ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｄ１２３４５）、７．５μｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に及ぶＳ１またはＳ２ペプチドプール（ＪＰＴ ＰＭ－ＷＣＰＶ－Ｓ－１）、または１×ＰＭＡ／イオノマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ００－４９７０－９３）のいずれかと三連でインキュベートした。プレートを一晩３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベート後、プレートを洗浄し、１μｇ／ｍＬの検出抗体を２時間室温で添加した。洗浄を繰り返し、１×ストレプトアビジン－ＨＲＰを添加し、１時間室温でインキュベートした。最後に、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質を添加し、スポット展開のために暗所でインキュベートし、次いで水道水を使用して洗浄除去した。プレートを乾燥させ、ＥＬＩＳｐｏｔ分析器（ＺｅｌｌＮｅｔ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ）によってカウントした。
細胞内染色（ＩＣＳ）のため、１ウェル当たり５，０００，０００細胞を９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３７９９）に播種し、上述したものと同じＥＬＩＳｐｏｔ条件を使用して刺激し、３７Ｃで５％ＣＯ２で合計で５．５時間インキュベートした。Ｇｏｌｇｉ Ｐｌｕｇ（ＢＤ５５５０２９）を刺激の最後の４．５時間すべてのウェルに添加した。インキュベート後、以下の表に列挙される表面または細胞内抗体を使用してフローサイトメトリーについて細胞を染色した。簡潔には、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌ３４９６６）で２０分間室温で染色した。次いで細胞を細胞染色緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ４２０２０１）で２回洗浄し、Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ １５６６０４）と５分間４℃でインキュベートし、続いて３０分間４℃で表面抗体染色した。その後、細胞を細胞染色緩衝液で２回洗浄し、４℃で３０分間ＩＣ固定緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ８８－８８２４－００）で固定し、１×透過処理緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ８８－８８２４－００）で透過処理し、細胞内染色を一晩４℃で実施した。その後、細胞を１×透過処理緩衝液で２回洗浄し、１×ＰＢＳに再懸濁し、ハイスループットオートサンプラー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＣｙｔＫｉｃｋ）を備えるサイトメーター（青（３）／赤（３）／紫（４）／黄色（４）のレーザー構成を用いるＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａｔｔｕｎｅ ＮＸＴ）で取得した。ＵｌｔｒａＣｏｍｐ ｅＢｅａｄｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ０１－３３３３－４１）及びＡｒＣ Ａｍｉｎｅ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ Ｂｅａｄ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ１０３４６）を使用して補正を実施した。
結果
ＬＮＰ製剤Ｆ－１６が投薬されたマウスは、Ｍｏｄｅｒｎａ ＳＭ１０２ ＬＮＰ製剤Ｆ－１６及びＦ－１７と同等のスパイク特異的多機能性ＣＤ４ Ｔ細胞反応を実証した。
実施例１７．スパイクタンパク質をコードするＲＮＡに対するｉｎ ｖｉｖｏ Ｔ細胞反応－非ヒト霊長類
投薬プロトコル
ＬＮＰ製剤を実施例１３に記載されているように調製した。各製剤を、１日目に１回及び２２日目に１回、１００μｇの用量レベルで筋肉内注射を介して３匹の非ナイーブカニクイザルに注射した。すべてのＮＨＰを用量投与のために一時的に拘束し、鎮静させなかった。投薬前に、投薬部位を剃毛し、臨床的観察のために必要に応じてマークした。各用量を区画された領域内でシリンジ／針を使用して投与した。サンプルを臨床病理パラメータ、薬物動態分析及び免疫原性分析のための研究を通して収集した。
分析
凍結保存されたＰＢＭＣを３７℃の水浴において解凍し、細胞を１０％ＦＢＳ［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３８４００－０１］及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ １５－１４０－１２２］を含有する完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ［ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ７２４００－０４７］を含有する円錐チューブに移した。細胞を遠心分離し、５０Ｕ／ｍＬベンゾナーゼ（ＥＭＤ ７０６６４－１０ＫＵＮ）を含有する完全ＲＰＭＩに再懸濁し、１５分間３７℃でインキュベートした。細胞を遠心分離し、完全ＲＰＭＩに再懸濁し、３時間静置した。細胞を遠心分離し、１×ＧｌｕｔａＭＡＸ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＴＰ－０５０１２２）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含有するＣＴＬ Ｔｅｓｔ Ｐｌｕｓ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．ＣＴＬＴＰ－００５）に再懸濁し、カウントした（ＶｉＣｅｌｌ ＸＲ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ７３１１９６）。濃度を調整し、細胞を下流機能性アッセイのために播種した。
ＥＬＩＳｐｏｔ分析を、サルＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔＰＬＵＳ Ｋｉｔ（Ｍａｂｔｅｃｈ ３４２１Ｍ－４ＨＳＴ－１０）を使用して製造業者のプロトコルに従って実施した。簡潔には、プレートを１×ＰＢＳで洗浄し、１０％ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ３８４００－０１）を含有するＲＰＭＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ７２４００－０４７）で１時間３７℃ブロッキングした。ブロッキング後、細胞を三連で播種し、以下の条件下で刺激した：ペプチドなし（１％ＤＭＳＯ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｄ１２３４５））、０．５μｇ／ｍＬのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に及ぶＳ１＋Ｓ２ペプチドプール（ＪＰＴ ＰＭ－ＷＣＰＶ－Ｓ－１）、及び１×ＰＭＡ／イオノマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ００－４９７０－９３）。２００，０００細胞／ウェルをＤＭＳＯ及びペプチドプール刺激について播種し、各群からのプールされたサンプルからの１０，０００／ウェルをＰＭＡ／イオノマイシン刺激について播種した。
プレートを一晩３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベート後、プレートを洗浄し、１μｇ／ｍＬの検出抗体を２時間室温で添加した。洗浄を繰り返し、１×ストレプトアビジン－ＨＲＰを添加し、１時間室温でインキュベートした。最後に、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質を添加し、スポット展開のために暗所でインキュベートし、次いで水道水を使用して洗浄除去した。プレートを乾燥させ、ＥＬＩＳｐｏｔ分析器（ＺｅｌｌＮｅｔ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ）を使用してカウントした。
細胞内染色（ＩＣＳ）について、各動物からの１ウェル当たりおよそ２，０００，０００細胞を９６ウェル丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３７９９）に播種し、上述した同じＥＬＩＳｐｏｔ条件を使用して刺激した。１時間の刺激後、Ｇｏｌｇｉ Ｐｌｕｇ（ＢＤ５５５０２９）をすべてのウェルに添加し、一晩３７℃で５％ＣＯ２でプレートインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーのために染色した。簡潔には、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌ３４９６６）で２０分間室温で染色した。次いで細胞を細胞染色緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ４２０２０１）で２回洗浄し、Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ １５６６０４）と５分間４℃でインキュベートし、続いて３０分間４℃で表面抗体染色した。表面染色後、次いで細胞を細胞染色緩衝液で２回洗浄し、４℃で３０分間ＩＣ固定緩衝液中で固定し、（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ８８－８８２４－００）１×透過処理緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ８８－８８２４－００）中で透過処理した。細胞内染色を１時間４℃で実施した。その後、細胞を１×透過処理緩衝液で２回洗浄し、１×ＰＢＳに再懸濁し、ハイスループットオートサンプラー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＣｙｔＫｉｃｋ）を備えるサイトメーター（青（３）／赤（３）／紫（４）／黄色（４）のレーザー構成を用いるＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａｔｔｕｎｅ ＮＸＴ）で取得した。ＵｌｔｒａＣｏｍｐ ｅＢｅａｄｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ０１－３３３３－４１）及びＡｒＣ Ａｍｉｎｅ Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｅｎｓａｔｉｏｎ Ｂｅａｄ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ１０３４６）を使用して補正を実施した。
結果
ＬＮＰ製剤Ｆ－１６が投薬されたＮＨＰは、ＩＣＳアッセイによって決定される場合、Ｍｏｄｅｒｎａ ＳＭ１０２ ＬＮＰ製剤よりも高いまたはそれと同等のスパイク特異的多機能性ＣＤ４ Ｔ細胞反応を実証した。３６日目で、製剤Ｆ－１６は、対照製剤Ｆ－１７と比較した場合、約１０倍高いスパイク特異的Ｔ細胞反応、及び対照製剤Ｆ－１８と同様の反応を実証した。３６日目で、Ｆ－１６が投薬されたＮＨＰからのＴ細胞はまた、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを介して決定された場合、Ｆ－１７によって誘導されたものよりも３倍高く、Ｆ－１８製剤と同等の増加したスパイク特異的ＩＦＮγ分泌Ｔ細胞を実証した。
ＸＩＩＩ．均等物及び範囲
当業者は、慣用的なものを超えない実験を使用して、本明細書に記載の開示による特定の実施形態に対する多くの均等物を認識し、または確認することができるであろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に示されるとおりである。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」等の冠詞は、逆に示されない限りまたは別途文脈から明らかでない限り、１つまたは複数を意味し得る。群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含む請求項または記載は、逆に示されない限りまたは別途文脈から明らかでない限り、群のメンバーの１つ、複数、またはすべてが、所与の生成物またはプロセスに存在する、用いられる、またはそうでなければ関連する場合に満たされると考えられる。本開示には、群の正確に１つのメンバーが所与の生成物またはプロセスに存在する、用いられる、またはそうでなければ関連する実施形態が含まれる。本開示には、群のメンバーの複数、または全体が所与の生成物またはプロセスに存在する、用いられる、またはそうでなければ関連する実施形態が含まれる。
また、用語「含む」は、オープンであることが意図されており、追加の要素または工程の包含を許可するが、必要としないことが留意される。用語「含む」が本明細書で使用される場合、用語「からなる」は、故に包含され、開示される。
用語「約」は、本明細書で使用される場合、所与の値または範囲の１０％以内を意味する。よって、「約１０」は、９～１１を意味する。
範囲が与えられる場合、端点は含まれる。さらに、別途示されない限りまたは別途文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、文脈が別途明らかに示していない限り、範囲の下限の単位の１０分の１まで、本開示の異なる実施形態において記述された範囲内の任意の特定の値または副次的範囲を想定し得ることを理解されたい。
また、先行技術に入る本開示の任意の特定の実施形態は、請求項の１つ以上から明白に除外され得ることが理解されるべきである。そのような実施形態は、当業者に知られているとみなされるので、それらは、除外が本明細書で明白に示されていない場合であっても除外され得る。本開示の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、任意の抗生物質、治療剤または活性成分；任意の生成方法；任意の使用方法等）は、先行技術の存在に関連するかどうかにかかわらず、任意の理由のため、任意の１つ以上の請求項から除外され得る。
使用されている用語は、限定ではなく説明の用語であること、及びそのより広い態様における本開示の真の範囲及び趣旨から逸脱することなく添付の特許請求の範囲の範囲内で変更がなされ得ることが理解されるべきである。
本開示は、いくつかの記載された実施形態に関して、ある程度の長さである程度の特定性をもって説明されているが、任意のそのような特定物もしくは実施形態または任意の特定の実施形態に限定されるべきことは意図されていないが、先行技術に鑑みてそのような特許請求の範囲の最も広い可能な解釈を提供し、そのため、本開示の意図された範囲を効果的に包含するように添付の特許請求の範囲を参照して解釈されたい。

Claims (84)

  1. 式（ＣＹ）の化合物
    またはその薬学的に許容可能な塩
    （式中、
    Ｒ１は、－ＯＨ、－ＯＡｃ、Ｒ１ａ、
    からなる群から選択され；
    Ｚ１は、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキルであり；
    Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり；
    Ｘ２は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
    Ｘ２’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
    Ｘ３は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
    Ｘ３’は、結合、－ＣＨ２－及び－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択され；
    Ｘ４及びＸ５は、独立して、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルキレニルまたは任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニレニルであり；
    Ｙ１及びＹ２は、独立して、
    からなる群から選択され；
    「＊」でマークされた結合は、Ｘ４またはＸ５に結合されており；
    各Ｚ２は、独立して、Ｈまたは任意に置換されたＣ１－Ｃ８アルキルであり；
    各Ｚ３は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ６アルキレニルであり；
    Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、及び－（ＣＨ２）ｐＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択され；
    Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｑＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）からなる群から選択され；
    Ｒ１ａは、
    であり；
    Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、及びＲ２ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
    Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、及びＲ３ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
    Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、及びＲ４ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
    Ｒ５ａ、Ｒ５ｂ、及びＲ５ｃは、独立して、水素及びＣ１－Ｃ６アルキルであり；
    Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は、独立して、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキル、任意に置換されたＣ２－Ｃ１４アルケニル、または－（ＣＨ２）ｍ－Ａ－（ＣＨ２）ｎＨであり；
    各Ａは、独立して、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキレニルであり；
    各ｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
    各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり；
    ｐは、０、１、２、３、４、５、６、及び７からなる群から選択され；
    ｑは、０、１、２、３、４、５、６、及び７からなる群から選択される）。
  2. 前記化合物は、式（ＣＹ－Ｉ’）、（ＣＹ－ＩＩ）、（ＣＹ－ＩＩＩ）、（ＣＹ－ＩＶ）、または（ＣＹ－Ｖ）：
    のもの、またはその薬学的に許容可能な塩
    （式中、
    Ｘ２及びＸ３は、独立して、結合、－ＣＨ２－、または－ＣＨ２ＣＨ２－であり；
    Ｘ６及びＸ７は、独立して、－ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２－である）
    である、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ１は、－ＯＨ、
    からなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
  4. Ｒ１は、－ＯＨである、請求項１または２に記載の化合物。
  5. Ｙ１及びＹ２は、独立して、
    である、請求項１～４のいずれかに記載の化合物。
  6. 前記化合物は、式（ＣＹ－ＶＩ）または（ＣＹ－ＶＩＩ）：
    のもの、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１～５のいずれかに記載の化合物。
  7. 前記化合物は、式（ＣＹ－ＶＩＩＩ）または（ＣＹ－ＩＸ）：
    のもの、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１～５のいずれかに記載の化合物。
  8. 前記化合物は、式（ＣＹ－ＩＶ－ａ）、（ＣＹ－ＩＶ－ｂ）、または（ＣＹ－ＩＶ－ｃ）
    のもの、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１～５のいずれかに記載の化合物。
  9. 前記化合物は、式（ＣＹ－ＩＶ－ｄ）、（ＣＹ－ＩＶ－ｅ）、または（ＣＹ－ＩＶ－ｆ）
    のもの、またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１～５のいずれかに記載の化合物。
  10. Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１０アルキレニルであり、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ１０アルキレニルである、請求項１～９のいずれかに記載の化合物。
  11. Ｘ４は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルであり、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２－Ｃ６アルキレニルである、請求項１～９のいずれかに記載の化合物。
  12. Ｘ４は、任意に置換されたＣ２アルキレニルであり、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２アルキレニルである、請求項１１に記載の化合物。
  13. Ｘ４は、任意に置換されたＣ２アルキレニルであり、Ｘ５は、任意に置換されたＣ２アルキレニルである、請求項１１に記載の化合物。
  14. Ｘ１は、任意に置換されたＣ２－Ｃ４アルキレニルである、請求項１～１３のいずれかに記載の化合物。
  15. Ｘ１は、任意に置換されたＣ２アルキレニルである、請求項１～１３のいずれかに記載の化合物。
  16. Ｒ２は、－（ＣＨ２）ｐＣＨ（ＯＲ６）（ＯＲ７）である、請求項１～１５のいずれかに記載の化合物。
  17. ｐは、０、１、及び２からなる群から選択される、請求項１６に記載の化合物。
  18. ｐは、０である、請求項１６に記載の化合物。
  19. Ｒ３は、－（ＣＨ２）ｑＣＨ（ＯＲ８）（ＯＲ９）である、請求項１～１８のいずれかに記載の化合物。
  20. ｑは、０、１、及び２からなる群から選択される、請求項１９に記載の化合物。
  21. ｑは、０である、請求項１９に記載の化合物。
  22. Ｒ２は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである、請求項１～１５または１９～２１のいずれかに記載の化合物。
  23. Ｒ２は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ２０アルキルである、請求項２２に記載の化合物。
  24. Ｒ２は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ１５アルキルである、請求項２２に記載の化合物。
  25. Ｒ２は、任意に置換されたＣ１５－Ｃ２０アルキルである、請求項２２に記載の化合物。
  26. Ｒ３は、任意に置換されたＣ４－Ｃ２０アルキルである、請求項１～１８のいずれかに記載の化合物。
  27. Ｒ３は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ２０アルキルである、請求項２６に記載の化合物。
  28. Ｒ３は、任意に置換されたＣ１０－Ｃ１５アルキルである、請求項２６に記載の化合物。
  29. Ｒ３は、任意に置換されたＣ１５－Ｃ２０アルキルである、請求項２６に記載の化合物。
  30. Ｒ６は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルであり；
    Ｒ７は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルであり；
    Ｒ８は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルであり；
    Ｒ９は、任意に置換されたＣ１－Ｃ１４アルキルである、
    請求項１～２１のいずれかに記載の化合物。
  31. Ｒ６は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ７は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ８は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ９は、任意に置換されたＣ３－Ｃ１０アルキルである、
    請求項３０のいずれかに記載の化合物。
  32. Ｒ６は、任意に置換されたＣ６－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ７は、任意に置換されたＣ６－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ８は、任意に置換されたＣ６－Ｃ１０アルキルであり；
    Ｒ９は、任意に置換されたＣ６－Ｃ１０アルキルである、
    請求項３０のいずれかに記載の化合物。
  33. Ｒ２は、
    からなる群から選択される、請求項１～１５のいずれかに記載の化合物。
  34. Ｒ３は、
    からなる群から選択される、請求項１～１５または３３のいずれかに記載の化合物。
  35. からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
  36. 薬学的組成物であって、
    ａ）ポリヌクレオチド、及び
    ｂ）請求項１～３５のいずれかに記載の化合物を含む送達ビヒクル
    を含む、前記薬学的組成物。
  37. 前記ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである、請求項３６に記載の薬学的組成物。
  38. 前記ポリヌクレオチドは、ＲＮＡである、請求項３７に記載の薬学的組成物。
  39. 前記ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である、請求項３８に記載の薬学的組成物。
  40. 前記ｓｉＲＮＡは、細胞における対象となる標的の発現を阻害または抑制する、請求項３９に記載の薬学的組成物。
  41. 前記ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾を含む、請求項３６～３９のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
  42. 追加のカチオン性脂質をさらに含む、請求項３６～４１のいずれかに記載の薬学的組成物。
  43. 中性脂質をさらに含む、請求項３６～４２のいずれかに記載の薬学的組成物。
  44. アニオン性脂質をさらに含む、請求項３６～４３のいずれかに記載の薬学的組成物。
  45. ヘルパー脂質をさらに含む、請求項３６～４４のいずれかに記載の薬学的組成物。
  46. ステルス脂質をさらに含む、請求項３６～４５のいずれかに記載の薬学的組成物。
  47. 前記脂質及び前記ポリヌクレオチドの重量比は、約１００：１～約１：１である、請求項３６～４６のいずれかに記載の薬学的組成物。
  48. 請求項３６～４７のいずれかに記載の薬学的組成物を含むワクチン製剤。
  49. 請求項３６～４７のいずれかに記載の薬学的組成物を含むワクチン調製物。
  50. 感染性物質に対して対象を免疫する方法であって、
    ｃ）対象を請求項４８に記載のワクチン製剤または請求項４９のワクチン調製物と接触させること、及び
    ｄ）免疫反応を誘発させること
    を含む、前記方法。
  51. 対象となる少なくとも１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを、それを必要とする対象の免疫細胞に送達する方法であって、前記方法は、請求項３６～４７のいずれか１項に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することをむ、前記方法。
  52. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記Ｔ細胞は、Ｔ制御性細胞である、請求項５２に記載の方法。
  55. 前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項５２に記載の方法。
  56. 前記免疫細胞は、マクロファージ、樹状細胞、または肝臓免疫細胞である、請求項５１に記載の方法。
  57. 請求項１～３５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
  58. （ａ）ＰＥＧ－脂質；
    （ｂ）構造脂質；及び
    （ｃ）イオン化可能ではない脂質及び／または双性イオン性脂質
    をさらに含む、請求項５７に記載のＬＮＰ。
  59. 前記イオン化可能な脂質は、イオン化可能なアミノ脂質を含む、請求項５８に記載のＬＮＰ。
  60. 前記ＰＥＧ－脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥからなる群から選択される、請求項５８～５９のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  61. 前記構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、ウルソル酸、アルファ－トコフェロールからなる群から選択される、請求項５８～６０のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  62. 前記非イオン化可能な脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１．２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテル ＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイルｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ナトリウム（Ｓ）－２－アンモニオ－３－（（（（Ｒ）－２－（オレオイルオキシ）－３－（ステアロイルオキシ）プロポキシ）オキシドホスホリル）オキシ）プロパノエート（Ｌ－α－ホスファチジルセリン；脳ＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－（ホスホ－Ｌ－セリン）（ＤＯＰＳ）、アセル－融合性リン脂質（ＤＰｈＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジステアロイルホスホエタノールアミンイミダゾール（ＤＳＰＥＩ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、卵黄ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスフェート（１８：１ ＰＡ；ＤＯＰＡ）、アンモニウムビス（（Ｓ）－２－ヒドロキシ－３－（オレオイルオキシ）プロピル）ホスフェート（１８：１ ＤＭＰ；ＬＢＰＡ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ミオ－イノシトール）（ＤＯＰＩ；１８：１ ＰＩ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０ ＰＳ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：２ ＰＳ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１６：０－１８：１ ＰＳ；ＰＯＰＳ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０－１８：１ ＰＳ）、１－ステアロイル－２－リノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０－１８：２ ＰＳ）、１－オレオイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：１ Ｌｙｓｏ ＰＳ）、１－ステアロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（１８：０ Ｌｙｓｏ ＰＳ）、及びスフィンゴミエリンからなる群から選択されるリン脂質である、請求項５８～６１のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  63. 標的化部位をさらに含む、請求項５８～６２のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  64. 前記標的化部位は、抗体またはその断片である、請求項６３に記載のＬＮＰ。
  65. 活性剤をさらに含む、請求項５８～６４のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  66. 前記活性剤は、核酸である、請求項６５に記載のＬＮＰ。
  67. 前記核酸は、リボ核酸である、請求項６６に記載のＬＮＰ。
  68. 前記リボ核酸は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ－基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及び長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのリボ核酸である、請求項６７に記載のＬＮＰ。
  69. 前記核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または環状ＲＮＡである、請求項６６に記載のＬＮＰ。
  70. 前記ｍＲＮＡには、がん抗原をコードするオープンリーディングフレームが含まれる、請求項６９に記載のＬＮＰ。
  71. 前記ｍＲＮＡには、免疫チェックポイント調節剤をコードするオープンリーディングフレームが含まれる、請求項６９に記載のＬＮＰ。
  72. 前記ｍＲＮＡには、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造からなる群から選択される少なくとも１つのモチーフが含まれる、請求項６９～７１のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  73. 前記核酸は、配列番号１～５４から選択されるタンパク質をコードするポリヌクレオチドである、請求項６６に記載のＬＮＰ。
  74. 前記核酸は、ゲノム編集技術に好適である、請求項６６に記載のＬＮＰ。
  75. 前記ゲノム編集技術は、クラスター化規則的間隔ショートパリンドロミックリピート（ＣＲＩＳＰＲ）または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、請求項７４に記載のＬＮＰ。
  76. 前記核酸は、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、及びＤＮＡ修復鋳型からなる群から選択されるゲノム編集技術に好適な少なくとも１つの核酸である、請求項６６に記載のＬＮＰ。
  77. 前記ｍＲＮＡは、長さが少なくとも３０ヌクレオチドである、請求項６９のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  78. 前記ｍＲＮＡは、長さが少なくとも３００ヌクレオチドである、請求項６９のいずれか１項に記載のＬＮＰ。
  79. 請求項５７～７８のいずれか１項に記載のＬＮＰ、及び薬学的に許容可能な担体を含む薬学的組成物。
  80. 静脈内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項７９に記載の薬学的組成物。
  81. 静脈内投与のために製剤化されている、請求項８０に記載の薬学的組成物。
  82. 核酸を細胞に送達するための方法であって、前記細胞を請求項５７～７８のいずれか１項に記載のＬＮＰまたは請求項７９～８２のいずれかに記載の薬学的組成物と接触させることを含む、前記方法。
  83. 機能的タンパク質の欠乏によって特性化される疾患を処置するための方法であって、前記方法は、前記疾患を有する対象に、請求項８２のいずれか１項に記載のＬＮＰを含むＬＮＰ製剤を投与することを含み、前記ｍＲＮＡは、前記機能的タンパク質または前記機能的タンパク質と同じ生物学的活性を有するタンパク質をコードする、前記方法。
  84. ポリペプチドの過剰発現によって特性化される疾患を処置するための方法であって、前記疾患を有する対象に、請求項５７～７８のいずれか１項に記載のＬＮＰ及びｓｉＲＮＡを含むＬＮＰ製剤を投与することを含み、前記ｓｉＲＮＡは、前記過剰発現したポリペプチドの発現を標的とする、前記方法。
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