JP2022512718A - インテインタンパク質及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、有効な遺伝子療法、詳細にはコード配列(CDS)が5kbより大きい遺伝子の突然変異に起因する疾患に対する遺伝子療法を可能にするコンストラクト、ベクター、関連する宿主細胞及び医薬組成物に関する。
アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターによる遺伝子療法は、ヒトにおいて安全且つ有効である。近年、米国及び欧州の両方で遺伝性代謝疾患及び失明病に対してAAVベースの遺伝子療法製剤が承認された一方、眼科学から血液学まで、筋骨格及び代謝障害までに及ぶ様々な治療領域の疾患に対するAAVベースの遺伝子療法手法についての臨床試験がかつてないほど増えている。
本発明は、遺伝子、詳細にはコード領域が5kbを超える遺伝子の突然変異に起因する疾患に対するAAVベクターによる遺伝子療法を提供する。
a)第1のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第1の部分(CDS1)、
- N-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列であって、CDS1の3’末端に位置する第1のインテインヌクレオチド配列
を含む第1のベクターと;
b)第2のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第2の部分(CDS2)、
- C-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の5’末端に位置する第2のインテインヌクレオチド配列
を含む第2のベクターと
を含み;
第1のベクター及び第2のベクターが細胞に挿入されると、そのコード配列のタンパク質産物は、タンパク質スプライシングによって産生されるか;又は
前記ベクターシステムは、
a’)第1のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第1の部分(CDS1)、
- 第1のN-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列であって、CDS1の3’末端に位置する第1のインテインヌクレオチド配配列
を含む第1のベクターと;
b’)第2のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第2の部分(CDS2)、
- 第1のC-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の5’末端に位置する第2のインテインヌクレオチド配列;
- 第2のN-インテインをコードする第3のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の3’末端に位置する第3のインテインヌクレオチド配列
を含む第2のベクターと;
c’)第3のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第3の部分(CDS3)、
- 第2のC-インテインをコードする第4のインテインヌクレオチド配列であって、CDS3の5’末端に位置する第4のインテインヌクレオチド配列
を含む第3のベクターと
を含み、
第1のインテインヌクレオチド配列は、第3のインテインヌクレオチド配列と異なり、及び第2のインテイン配列は、第4のインテインヌクレオチド配列と異なり、第1のベクター、第2のベクター、第3のベクターが細胞に挿入されると、そのコード配列のタンパク質産物は、タンパク質トランススプライシングによって産生される。
- 第1のインテインヌクレオチド配列は、配列番号1、3、5、7、9、11、13からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 第2のインテインヌクレオチド配列は、配列番号2、4、6、8、10、12、14からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 第3のインテインヌクレオチド配列は、配列番号1、3、5、7、9、11、13からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 第4のインテインヌクレオチド配列は、配列番号2、4、6、8、10、12、14からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードする。
配列内でc-エクステインの1番目のアミノ酸を強調表示する。
スプリットセット1 Cys.1150(太字)
スプリットセット2 Ser.1168(下線)
スプリットセット3 Ser.1090(斜体)
配列内でc-エクステインの1番目のアミノ酸を強調表示する。
スプリットセット1 Cys.1076(太字)
スプリットセット2~3 Ser.1275(下線)
スプリットセット4 Cys.929及びCys.l474(斜体)
スプリットセット5 Ser.453及びCys.1474(二重下線)
a)第1のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- コード配列の5’末端部分(CDS1)であって、前記プロモーターに作動可能に連結され、且つその制御下にある5’末端部分;
- N-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列;及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第1のベクターと;
b)第2のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- C-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列;
- コード配列の3’末端部分(CDS2);及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第2のベクターと
を含むか;又は
a’)第1のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- コード配列の5’末端部分(CDS1’)であって、前記プロモーターに作動可能に連結され、且つその制御下にある5’末端部分;
- 第1のN-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列;及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第1のベクターと;
b’)第2のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- 第1のC-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列;
- コード配列の第2の部分(CDS2’);及び
- 第2のN-インテインをコードする第3のインテインヌクレオチド配列;
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第2のベクターと;
c’)第3のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- 第2のC-インテインをコードする第4のインテインヌクレオチド配列;
- コード配列の第3の部分(CDS3’);及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第3のベクターと
を含む。
図面の簡単な説明
:3xflagタグ;ポリA:ポリアデニル化シグナル。(B)完全長又はAAVインテインCMV-EGFPプラスミドのいずれかをトランスフェクトしたHEK293からのライセートのウエスタンブロット(WB)分析。pEGFP:完全長EGFPプラスミド;pAAV I+II:AAV-EGFP I+IIインテインプラスミド;pAAV I:シングルAAV-EGFP Iインテインプラスミド;pAAV II:シングルAAV-EGFP IIインテインプラスミド;Neg:非トランスフェクト細胞。矢印は、両方とも完全長EGFPタンパク質(EGFP)、EGFPタンパク質のN端側及びC端側半分(それぞれB及びA)及び完全長EGFPタンパク質から切り出された再構成後のインテイン(C)を指す。WBは、n=3の独立した実験の代表例である。(C)シングル、インテイン又はデュアルAAV2/2-CMV-EGFPベクターのいずれかに感染させたHEK293からのライセートのWB分析。WBは、n=5の独立した実験の代表例である。(D)AAV2/8-CMV-EGFPインテインベクターを網膜下注射したC57BL/6Jマウスからの網膜凍結切片。スケールバー:50μm。RPE:網膜色素上皮;OS:外節;ONL:外顆粒層。(E~F)シングル、インテイン又はデュアルAAV2/8-GRK1-EGFPベクターのいずれかを網膜下注射したC57BL/6Jマウス(E)又はラージホワイトブタ(F)のいずれかからの網膜凍結切片。スケールバー:50μm(E);200μm(F)。OS:外節;ONL:外顆粒層。(G)293日間培養した時点におけるAAV2/2-GRK1-EGFP-インテインベクターに感染させた網膜オルガノイドの蛍光分析。スケールバー:100μm。
とAAV IIとの間にあるmNpuのDnaEからのc-インテイン;n-DnaB:ロドサーマス・マリヌス(Rhodothermus marinus)(Rma)のDnaBからのn-インテイン;c-DnaB:AAV IIとAAV IIIとの間にあるRmaのDnaEからのc-インテイン;wpre:ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント。(A~B)ITR:AAV2逆方向末端反復;:3xflagタグ;プロモーター:インビトロ実験についてショートCMV及びインビボ実験についてヒトGタンパク質共役受容体(GRK1)プロモーター;ポリA:シミアンウイルス40ポリアデニル化シグナル(ABCA4について、A)及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル(CEP290について、B)。図中に各セットの分断点のアミノ酸を示す。各AAVベクターの下に予測タンパク質分子量を示す。
この10年間、何百件もの臨床試験で疾患の治療に遺伝子療法が適用されてきた。遺伝子をヒト細胞に送達するため、様々なツールが開発されており;その中でも、遺伝子操作されたウイルスは、アデノ随伴ウイルスを含め、現在、なかでも最も普及している遺伝子送達ツールである。大部分のシステムは、目的遺伝子を収容する能力を有するベクター並びにベクターを含有する感染性ウイルス粒子の生成を可能にするためのウイルス構造タンパク質及び酵素を提供し得るヘルパー細胞を含む。アデノ随伴ウイルスは、ヌクレオチド及びアミノ酸配列、ゲノム構造、病原性及び宿主域に違いがあるウイルスファミリーである。この多様性により、様々な治療適用を開発するため様々な生物学的特性のウイルスを使用する機会がもたらされる。任意の送達ツールと同様に、遺伝子療法の適用を成功させるには、アデノ随伴ウイルスベースのシステムの効率、特定の組織又は細胞型を標的化する能力、目的遺伝子の発現及び安全性が重要である。近年、これらの研究分野には多大な労力が注がれてきた。遺伝子発現を改変し、送達を標的化し、ウイルス力価を改善し、且つ安全性を高めるため、アデノ随伴ウイルスベースのベクター及びヘルパー細胞に様々な改良が行われている。本発明は、それが単一のアデノ随伴ウイルスベースのベクターのカーゴ限界を超えるサイズの目的遺伝子を効率的に送達するように機能する点でこの設計プロセスの改善に相当する。ウイルスは論理上の遺伝子送達ツールである。ウイルスは細胞内で複製し、そのため細胞に侵入し、細胞機構を用いてその遺伝子を発現する機構が進化している。ウイルスベースの遺伝子送達の概念は、ウイルスを操作することにより、それが目的遺伝子を発現できるようにするというものである。具体的な適用及びウイルスの種類に応じて、ほとんどのウイルスベクターが、宿主において野生型ウイルスのように自在に複製するその能力を妨げる突然変異を含む。遺伝子送達用のウイルスベクターを作成するため、幾つかの異なるファミリーのウイルスが修飾されている。そうしたウイルスとしては、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ピコルナウイルス及びアルファウイルスが挙げられる。本発明は、好ましくはアデノ随伴ウイルスを用いる。従って、ウイルスベースの遺伝子送達用ベクターとしては、限定なしに、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、シュードタイプAAVベクター、ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクターが挙げられる。
AAVゲノムは、プラス鎖又はマイナス鎖のいずれかの一本鎖デオキシリボ核酸(ssDNA)で作られ、約4.7キロベース長である。このゲノムは、DNA鎖の両端にある逆方向末端反復(ITR)並びに2つのオープンリーディングフレーム(ORF):rep及びcapを含む。前者は、AAVライフサイクルに必要なRepタンパク質をコードする4つのオーバーラップ遺伝子で構成され、後者は、共に相互作用して正二十面体様対称のカプシドを形成するカプシドタンパク質:VP1、VP2及びVP3のオーバーラップヌクレオチド配列を含む。
逆方向末端反復(ITR)配列は、各145塩基を含む。これらは、AAVゲノムの効率的な増殖に必要であることが示されたその対称性からそのように名付けられた。これらの配列のもう1つの特性は、ヘアピンを形成するその能力であり、これは、プライマーゼ非依存的なDNA第2鎖合成を可能にする、いわゆる自己プライミングに寄与する。ITRは、宿主細胞ゲノム(ヒトの19番染色体)へのAAV DNAの組み込み及びそれからのレスキューの両方並びに完全にアセンブルされたデオキシリボヌクレアーゼ耐性AAV粒子の生成と併せたAAV DNAの効率的なキャプシド形成に必要であることも示された。
現在までのところ、数十個の異なるAAV変異体(血清型)が同定され、分類されている(60)。公知の血清型は全て、複数の多様な組織型の細胞を感染させることができる。組織特異性はカプシド血清型によって決まり、療法におけるその使用には、その向性範囲を変えるためのAAVベクターのシュードタイピングが重要になるものと思われる。シュードタイプ化したAAVベクターは、1つのAAV血清型のゲノムを第二のAAV血清型のカプシド内に含むものであり;例えば、AAV2/8ベクターは、AAV8カプシドとAAV2ゲノムとを含む(61)。このようなベクターはキメラベクターとしても知られる。
血清型2型(AAV2)は、これまでに最も広範な調査がなされているものである。AAV2は、天然で骨格筋、ニューロン、血管平滑筋細胞及び肝細胞に向性を示す。AAV2については、3つの細胞受容体:ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)、avβ5インテグリン及び線維芽細胞成長因子受容体1(FGFR-1)が記載されている。最初のものは一次受容体として機能する一方、後者2つは共受容体活性を有し、AAVが受容体介在性エンドサイトーシスによって細胞に侵入するのを可能にする。これらの研究結果については、Qiu, Handa, et al.により議論されている。HSPGは一次受容体として機能し、しかし、これは、細胞外マトリックスに多量にあるため、AAV粒子が掃去され、感染効率が損なわれ得る。
AAV2が様々なAAVベースの研究に最もよく用いられる血清型であるが、遺伝子送達ベクターとしては他の血清型がより有効であり得ることが示されている。例えば、AAV6は、気道上皮細胞を感染させるのにはるかに良好であるように見え、AAV7は、極めて高いマウス骨格筋細胞の形質導入率を(AAV1及びAAV5と同様に)示し、AAV8は肝細胞及び光受容体の形質導入に優れており、AAV1及び5は血管内皮細胞への遺伝子送達に極めて効率的であることが示された。脳では、ほとんどのAAV血清型がニューロン向性を示す一方、AAV5は、星状膠細胞も形質導入する。AAV1とAAV2とのハイブリッドであるAAV6は、AAV2より低い免疫原性も示す。
本発明は、遺伝子療法によって個体を治療するための医薬組成物も提供し、ここで、本組成物は、1つ以上の送達可能な治療用及び/又は診断用トランス遺伝子又はそれによって産生される若しくはそれから入手されるウイルス粒子を含む本発明のベクター/コンストラクト又は宿主細胞の治療有効量を含む。本医薬組成物は、ヒト又は動物への使用向けであり得る。典型的には、医師が個々の対象に最も好適となり得る実際の投薬量を決定することになり、それは、特定の個体の年齢、体重及び反応によって異なることになる。本組成物は、任意選択で、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤又はアジュバントを含み得る。医薬担体、賦形剤又は希釈剤の選択は、意図される投与経路及び標準的な薬学実践の点で選択することができる。本医薬組成物は、担体、賦形剤又は希釈剤として -又はそれに加えて -、任意の好適な1つ又は複数の結合剤、1つ又は複数の滑沢剤、1つ又は複数の懸濁剤、1つ又は複数のコーティング剤、1つ又は複数の可溶化剤及び標的部位へのウイルスの侵入を助け得る又は増加させ得る他の担体薬剤(例えば脂質送達システムなど)を含み得る。適切な場合、本医薬組成物は、吸入による投与、坐薬若しくはペッサリーの形態での投与、ローション、溶液、クリーム、軟膏若しくは散布剤の形態での局所投与、皮膚パッチの使用による投与、デンプン若しくはラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態での経口投与又は単剤若しくは賦形剤との混和剤のいずれかでのカプセル若しくは膣座薬での投与又は香味剤若しくは着色剤を含有するエリキシル剤、溶液若しくは懸濁液の形態での投与の任意の1つ以上によって投与することができ;好ましくは、本医薬組成物は、例えば、海綿体内、静脈内、筋肉内又は皮下に非経口的に注射することができる。非経口投与については、本組成物は滅菌水溶液の形態で使用することが最良であり得、これは、他の物質、例えば溶液を血液と等張にするのに十分な塩類又は単糖類を含有し得る。頬側又は舌下投与については、本組成物は錠剤又はトローチ剤の形態で投与され得、これは、従来の方式で製剤化することができる。
一実施形態において、本発明は、少なくともベクターシステムと、薬学的に適合性のあるポリマーとからなる薬物送達装置を含む。例えば、本組成物が前記ポリマーに配合されるか、又はそれにコーティングされる。本組成物はポリマーに化学的に結合するか、又は物理的に混入されるかのいずれかである。ポリマーは疎水性又は親水性のいずれかである。ポリマー装置は複数の物理的構成を含む。ポリマー装置の例示的な物理的形態としては、限定はされないが、フィルム、スキャフォールド、チャンバ、スフェア、マイクロスフェア、ステント又は他の構造体が挙げられる。ポリマー装置は内表面と外表面とを有する。本装置は1つ以上の内部チャンバを有する。これらのチャンバが1つ以上の組成物を収容する。本装置は1つ以上の化学的に区別可能なモノマーのポリマーを含有する。装置のサブユニット又はモノマーはインビトロ又はインビボで重合する。
AAVベクターの構築は、当業者に公知の手順に従い及びそうした技法を用いて行うことができる。アデノ随伴ウイルスベクター構築及び療法における使用の理論及び実践は、幾つかの科学文献及び特許文献に例示されている(以下の参考文献一覧が本明細書において参照により援用される:Flotte TR. Adeno-associated virus-based gene therapy for inherited disorders. Pediatr Res. 2005 Dec;58(6):1143-7;Goncalves MA. Adeno-associated virus: from defective virus to effective vector, Virol J. 2005 May 6;2:43;Surace EM, Auricchio A. Adeno-associated viral vectors for retinal gene transfer. Prog Retin Eye Res. 2003 Nov;22(6):705-19;Mandel RJ, Manfredsson FP, Foust KD, Rising A, Reimsnider S, Nash K, Burger C. Recombinant adeno-associated viral vectors as therapeutic agents to treat neurological disorders. Mol Ther. 2006 Mar;13(3):463-83)。
インテインとは、タンパク質スプライシングとして知られる過程で自らを切り出して残りの部分(エクステイン)をペプチド結合でつなぎ合わせることが可能なタンパク質中のセグメントである。このようなセグメントは、内側のタンパク質配列について「インテイン」及び外側のタンパク質配列について「エクステイン」と呼ばれ、ここで、上流のエクステインは、「N-エクステイン」と称され、下流のエクステインは、「C-エクステイン」と呼ばれる。タンパク質スプライシング過程の産物は、2つの安定タンパク質:成熟タンパク質及びインテインである。
及びNpu(ノストック・パンクチフォルメ(Nostoc punctiforme))DnaEとシネコシスティス属種(Synechocystis sp.)PCC6803 C-インテインとのアラインメント:
を参照されたい。
調節されたタンパク質分解は、誤って折り畳まれた、凝集した又はその他異常なタンパク質から細胞を保護し、また、インビボで短命となるように進化したタンパク質のレベルも制御し、大部分がユビキチン(Ub)-プロテアソームシステム(UPS)及びオートファジー-リソソーム経路(分子シャペロンが両システムの一部である)によって媒介される。分解シグナルは、タンパク質分解経路の標的となるタンパク質の特徴であり、その結果タンパク質は半減期が減少することになる。詳細には、N-デグロン及びC-デグロンは、細胞タンパク質のそれぞれN末端及びC末端残基をその主な決定因子とする分解シグナルである。N-デグロン及びC-デグロンは様々な程度の隣接配列モチーフを含み、またポリユビキチン化部位として機能する内部リジン残基も含む。
本発明のコード配列は、哺乳類細胞、好ましくは哺乳類網膜細胞、特に光受容細胞又は肝細胞、筋細胞、心臓細胞、神経細胞、腎細胞、内皮細胞においてその発現を調節することが可能な、任意選択でイントロン配列が後に続くプロモーター配列に作動可能に連結され得る。例示的プロモーターとしては、光受容体特異的ヒトGタンパク質共役受容体キナーゼ1(GRK1)、光受容体間レチノイド結合タンパク質プロモーター(IRBP)、ロドプシンプロモーター(RHO)、卵黄様黄斑ジストロフィー2プロモーター(VMD2)、ロドプシンキナーゼプロモーター(RK)を含めた光受容体特異的プロモーター;MCK、MYODIを含めた筋肉特異的プロモーター;サイロキシン結合グロブリン(TBG)、ハイブリッド肝特異的プロモーター(HLP)(67)を含めた肝特異的プロモーター;hSYN1、CaMKIIaを含めたニューロン特異的プロモーター;Ksp-カドヘリン16、NKCC2を含めた腎臓特異的プロモーターなど、転写プロモーター活性を保持しているその断片及び変異体を含め、限定なしに、遍在性、人工的又は組織特異的プロモーターが挙げられる。本発明に係る遍在性プロモーターは、例えば、遍在性サイトメガロウイルス(CMV)(32)及びショートCMV(33)プロモーターである。
p915_pAAV2.1-TBG-5’EGFPインテイン(配列番号33)
5’ITR:破線下線(配列の5’側始端の配列A)
TBGプロモーター:太字(配列B)
5’EGFP:下線(配列C)
N-インテインNpu DnaE:二重下線(配列D)
3xflag:斜体(配列E)
WPRE:斜体下線(配列F)
Bgh ポリA:太字下線(配列G)
3’ITR:破線下線(配列の3’末端の配列H)
5’ITR(配列A)
TBGプロモーター(配列B)
C-インテインNpu DnaE(配列I)配列番号34
3’EGFP(配列L)配列番号35
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)配列番号36
5’EGFP(配列C)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
C-インテインNpu DnaE(配列I)
3’EGFP(配列L)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1プロモーター(配列N)配列番号37
5’EGFP(配列C)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1プロモーター(配列N)
C-インテインNpu DnaE(配列I)
3’EGFP(配列L)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
5’EGFP(配列C)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
ecDHFR(配列O)配列番号38
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
5’EGFP(配列C)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
ミニecDHFR(配列P)配列番号39
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
5’EGFP(配列C)
N-インテイン RmaDnaB(配列Q)配列番号40
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
C-インテインRma DnaB(配列R)配列番号41
3’EGFP(配列L)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
5’EGFP(配列C)
N-インテインmDnaE(配列S)配列番号42
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMVプロモーター(配列M)
C-インテインmDnaE(配列T)配列番号43
3’EGFP(配列L)
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
p1005 pAAV2.1-CMV260-5’CEP290インテイン(セット1)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)配列番号44
5’CEP290:配列番号45
N-インテインDnaE(配列D)
3xflag(配列E)
shポリA(配列V)配列番号46
aattcaataaaagatctttattttcattagatctgtgtgttggttttttgtgtgcggcc
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
3’CEP290:配列番号47
C-インテインDnaE(配列I)
3xflag(配列E)
shポリA(配列V)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’CEP290:配列番号48
3xflag(配列E)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
3’CEP290:配列番号49
3xflag(配列E)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’CEP290:配列番号50
3xflag(配列E)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
3’CEP290:配列番号51
3xflag(配列E)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’CEP290:配列番号52
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
C-インテインDnaE(配列I)
CEP290本体:配列番号53
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
C-インテインRma DnaB(配列R)
3’CEP290:配列番号54
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’CEP290:配列番号55
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
C-インテインmDnaE(配列T)
CEP290本体:配列番号56
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1プロモーター(配列N)
5’CEP290:配列番号57
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1プロモーター(配列N)
C-インテインmDnaE(配列T)
CEP290本体:配列番号58
3xflag(配列E)
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1プロモーター(配列N)
C-インテインRma DnaB(配列R)
3’CEP290:配列番号59
WPRE(配列F)
BghポリA(配列G)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1:太字
5’ABCA4:下線
N-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1:太字
3’ABCA4:下線
C-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
5’ABCA4:下線
N-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
3’ABCA4:下線
C-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’ABCA4(セット1から)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
ecDHFR(配列O)
WPRE(配列F)
SV40ポリA(配列W)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260(配列U)
5’ABCA4(セット1から)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
ミニecDHFR(配列P)
WPRE(配列F)
SV40ポリA(配列W)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1(配列N)
5’ABCA4(セット1から)
N-インテインNpu DnaE(配列D)
3xflag(配列E)
ecDHFR(配列O)
WPRE(配列F)
SV40ポリA(配列W)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
GRK1:太字
5’ABCA4:下線
N-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
ミニecDHFR:太い下線
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
5’ABCA4:下線
N-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
3’ABCA4:下線
C-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
5’ABCA4:下線
N-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
CMV260:太字
3’ABCA4:下線
C-インテインNpu DnaE:二重下線
3xflag:斜体
SV40:太字下線
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
HLPプロモーター(配列J)配列番号70
3xflag(配列E)
shポリA(配列V)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
HLPプロモーター(配列J)
F8シグナル配列(配列K)
C-インテインNpu DnaE(配列I)
3’F8:配列番号73
shポリA(配列V)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
HLPプロモーター(配列J)
F8シグナル配列(配列K)
5’F8(セット2):配列番号74
3xflag(配列E)
shポリA(配列V)
3’ITR(配列H)
5’ITR(配列A)
HLPプロモーター(配列J)
F8シグナル配列(配列K)
C-インテインNpu DnaE(配列I)
3’F8:配列番号75
shポリA(配列V)
3’ITR(配列H)
AAVベクタープラスミドの作成
AAVベクターの作製に使用したプラスミドは、AAV血清型2型のITRを含むpAAV2.1(36)又はpZac(37)のいずれかのプラスミドから得た。AAVインテインプラスミドは図1A及び図S5に詳述するとおり設計した。EGFPタンパク質はアミノ酸(a.a.)C71で分断した。ABCA4タンパク質は大型細胞質ドメインCD1(34、35)中のa.a.C1150(セット1)、a.a.S1168(セット2)及びa.a.C1090(セット3)で分断した。a.a.C1150(セット1)及びS1168(セット2)は、既知のABCA4機能に関連しない領域内にあるが、C1090は、a.a.929からa.a.1148にわたるABCA4ヌクレオチド結合ドメインに含まれる。全てのCEP290分断点がコイルドコイルドメインに入っている(36):CEP290を2つのポリペプチドに分断したとき、これはa.a.C1076(セット1)又はS1275(セット2~3)のいずれかに現れ、それを3つのポリペプチドに分断したとき、これはa.a.C929及びC1474(セット4)又はa.a.S453及びC1474(セット5)のいずれかにあった。
TIGEM AAV Vector Coreにより、既述のとおり(14、41)のHEK293細胞の三重トランスフェクションによってAAVベクターが作製された。AAVベクターがインテイン配列を含むか否かの間でベクター収率に差は認められなかった。
HEK293細胞を維持し、既述のとおり(14)のリン酸カルシウム法(6ウェルプレートフォーマットで1μgの各プラスミド/ウェル)を用いてトランスフェクトした。図S9に説明する実験については、完全長遺伝子をコードするプラスミドの量は、1μgのAAVインテインプラスミドに含まれるのと同じ数の分子に対応する量を使用した。必要に応じてスクランブルプラスミドを加えることにより、各ウェルにおけるトランスフェクトしたDNAの総量を同じに保った。
(42)に記載される方法を用いて皮膚生検から培養した線維芽細胞からヒト人工多能性幹細胞(iPSC)を誘導した。STGD1細胞株は、(43)にも記載されるABCA4化合物ヘテロ接合変異体c.4892T>C及びc.4539+2001G>A又は化合物ヘテロ接合変異体c.[2919-?_3328+?del;4462T>C]及びc.5196+1137G>Aのいずれかを担持する。c.[2919-?_3328+?del;4462T>C]は2つのバリエーションからなるアレルである。c.2919-?3328+?delは、エクソン20、21及び22の欠失並びにイントロン19及び22の未知のセグメントを構成する。この欠失は、c.4462T>Cとシス配置で見られた。iPSCは、マトリゲル(品番354277、Corning(登録商標)Matrigel(登録商標)hESC適格マトリックス;Corning、NY)をコートした6ウェルプレートにmTeSR(商標)培地(品番85850;Stem cell technologies)を入れて維持した。細胞は約80%コンフルエンスで、0.5mM EDTA(品番AM9260G;Ambion)を2~6分間使用して継代した。網膜分化は、以前記載されたプロトコル(44、45)の組み合わせに基づいた。簡潔に言えば、iPSCをRevitaCell Supplement(品番A-2644501;Gibco、ThermoFisher)及び1%マトリゲルが入ったV字底96ウェルプレートに播いて(9,000細胞/ウェル)、凝集体の形成を誘導した。次に、(46)に報告されるとおり、凝集体を培養して3D網膜オルガノイドを作成した。
試料(HEK293細胞、網膜及び網膜オルガノイド)をRIPA緩衝液に溶解させてEGFP、ABCA4及びCEP290タンパク質を抽出した。溶解緩衝液には、プロテアーゼ阻害薬(完全プロテアーゼ阻害薬カクテル錠;Roche、Basel, Switzerland)及び1mMフェニルメチルスルホニルを補足した。溶解後、ABCA4試料は、2M尿素を補足した1×レムリ試料緩衝液中37℃で15分間変性させた。EGFP及びCEP290試料は、1×レムリ試料緩衝液中99℃で5分間変性させた。ライセートを12%(EGFP試料について)又は6%(ABCA4及びCEP290試料について)のいずれかのSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。免疫ブロッティングに使用した抗体は以下のとおりである:EGFP、ABCA4及びCEP290タンパク質の検出用の抗3xflag(1:1000、A8592;Sigma-Aldrich、Saint Louis, MO, USA);ABCA4の検出用の抗ABCA4(1:500、LS-C87292;LifeSpan BioSciences, Inc.、Seattle, USA);抗フィラミンA(1:1000、品番4762;Cell Signaling Technology、Danvers, MA, USA);フィラミンAの検出用の抗β-アクチン(1:1000、NB600-501;Novus Biological LLC、Littleton, CO, USA)、β-アクチンをインビトロ実験のローディング対照として使用した;インビボ実験のローディング対照として使用したジスフェリンの検出用の抗ジスフェリン(1:500、ジスフェリン、クローンHam1/7B6、MONX10795;Tebu-bio、Le Perray-en-Yveline, France)。ウエスタンブロットによって検出されたEGFP、ABCA4及びCEP290バンドの定量化は、ImageJソフトウェア(http://rsbweb.nih.gov/ij/においてフリーダウンロード可能である)を使用して実施した。
1.5~6×1010個のウイルス粒子(GCとして測定した)からDNAを抽出した。パッケージングされなかったゲノムを消化するため、ベクター溶液を、50mMトリス、pH7.5及び1mM MgCl2を含有する300μlの総容積中30μlのDNアーゼ(Roche)と共に37℃で2時間インキュベートした。次にDNアーゼを50mM EDTAで不活性化し、続いてプロテイナーゼK及び2.5%N-ラウリルサルコシル溶液と共に50℃で1時間インキュベートしてカプシドを溶解させた。DNAをフェノールクロロホルムで2回抽出し、2容量のエタノール100%及び10%酢酸ナトリウム(3M)及び1?のグリコーゲン(20?g)で沈殿させた。アルカリアガロースゲル電気泳動を以前に記載のとおり実施した(Sambrook, J., and Russell, D.W. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York, USA. 999 pp)。pF8-V3をSmalで二重消化することによりマーカーを生じさせると、5102bpのバンドが生じた。HLPプロモーターに特異的なプローブを使用した。
9部の血液を後眼窩採血により1部の緩衝クエン酸三ナトリウム0.109M(BD、Franklin Lakes, NJ, USA)の中に採取した。試料を13000rpmで15分間遠心することにより血漿を単離した。
細胞を100mmプレートに播き(1×107細胞/プレート)、リン酸カルシウム法を用いてAAV-EGFP又はABCA4インテインプラスミドのいずれかを懸濁液中でトランスフェクトした(20μgの各プラスミド/プレート)。トランスフェクション後72時間で細胞を回収し、抗flag M2磁気ビーズ(M8823;Sigma-Aldrich)を製造者の指示に従い使用してEGFP及びABCA4の両方のタンパク質を免疫沈降させた。4M尿素を補足した試料緩衝液中において37℃で15分間インキュベートすることにより、ビーズからタンパク質を溶出させた。次に12%(EGFPについて)又は6%(ABCA4について)SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動にタンパク質をロードした。クマシーブルーで染色した後に切り出した26本及び30本のタンパク質バンド(AAV-EGFP及びABCA4インテインプラスミドをそれぞれ独立に2回及び3回トランスフェクトしたHEK293細胞から)を使用してタンパク質シーケンシングを行った(Creative proteomics、Shirley, NY)。簡潔に言えば、3つのゲルスライドを以下の酵素:トリプシン、キモトリプシン、Glu-C、Arg-C、Asp-N及びLys-Nの各々による消化に使用した。加えてペプシンを使用してABCA4を消化した。得られたペプチドを、ナノスケール液体クロマトグラフィー結合タンデム型マススペクトロメトリー(ナノLC-MS/MS)分析を用いて同定し、定量化した。入手されたマススペクトロメトリーデータをPEAKS STUDIO 8.5を用いて分析した。本発明者らは、EGFP及びABCA4の両方のタンパク質について100%のタンパク質シーケンスカバレッジを達成した。
動物はTIGEM動物施設(Naples)で飼育し、12時間の明/暗サイクル下に維持した。C57BL/6JマウスはEnvigo(Italy)から購入した。
本研究は、視覚と眼科学研究協会会議(Association for Research in Vision and Ophthalmology)の眼科学と視覚研究における動物の使用に関する声明(Statement for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research)及びイタリア保健省の動物処置規則に従い行った。マウスに関する全ての処置は、イタリア保健省;公衆衛生・動物衛生・栄養食品安全局(Department of Public Health, Animal Health, Nutrition and Food Safety)から2015年3月6日付けで承認された。
組織切片、網膜オルガノイドにおけるEGFP発現を評価するため、既述のとおりC57BL/6Jマウス及びラージホワイトブタの両方からの眼を固定し、切片化した。DAPIを含むVectashield(Vector Lab Inc.、Peterborough, UK)でマウントしたEGFP陽性凍結切片を共焦点LSM-700顕微鏡(Carl Zeiss、Oberkochen, Germany)下で適切な励起及び検出セッティングを用いて分析し、40倍の倍率で取得した。赤緑色盲の有病率から、赤色と緑色とが一緒に存在することを避けるため、図14では元の画像の色を変更した。
ABCA4又はCEP290 AAVインテインプラスミドのいずれかをトランスフェクトしたHeLa細胞をトランスフェクション後24時間で4%PFAに10分間固定した。細胞をブロッキング緩衝液(0.05%サポニン、0.5%BSA、50mM NH4Cl、PBS中0.02%NaN3、pH7.2)で30分間ブロッキングし、次に以下のとおりインキュベートした:
- 抗FLAG M2抗体(F1804、Sigma-Aldrich)と共に1時間インキュベートしてABCA4タンパク質を検出した;抗VAP-B抗体[Antonella De Matteis lab((47)で作製された]と共にインキュベートして、小胞体を染色し、且つTGN46(AHP-499、Serotech)と共にインキュベートしてトランスゴルジ網を染色した。PBSで洗浄後、細胞を二次抗体と共に30分間インキュベートした:それぞれ抗FLAG、抗VAP-B及び抗TGN46抗体に対するヤギ抗マウスAlexa Fluor 568;ヤギ抗ウサギAlexa Fluor 488、ロバ抗ヒツジAlexa Fluor 633。
- 抗FLAG抗体(F7425、Sigma-Aldrich)と共に一晩インキュベートしてCEP290タンパク質を検出し、且つ抗アセチル化チューブリン抗体(T6793、Sigma-Aldrich)と共にインキュベートして微小管を染色した。PBSで洗浄後、細胞を適切な二次抗体と共に1時間インキュベートした:それぞれ抗FLAG及び抗アセチル化チューブリン抗体に対するヤギ抗ウサギAlexa Fluor 594及びロバ抗マウスAlexa Fluor 488。
抗ヒト錐体アレスチン(CAR)(50、51)(1:10000、「Luminaire founders」hCAR;Cheryl M. Craft博士、ドヘニー眼研究所(Doheny Eye Institute)、Los Angeles, CA, USAからの供与);抗オプシン、赤/緑(1:200、AB5405;Merck Millipore、Darmstadt, Germania);抗リカバリン(1:500、AB5585;Merck Millipore);抗CRX(A-9、1:250、sc377138;Santa Cruz Biotechnology、Dallas, Texas, USA);抗ロドプシン(1D4、1:200、ab5417、Abeam、Cambridge, MA, USA)。
電子顕微鏡(EM)分析のため、AAV網膜下注射後3ヵ月の時点でAbca4-/-マウスを一晩暗順応させて、次に眼を摘出した。眼を0.1M PHEM緩衝液pH6.9中0.2%グルタルアルデヒド(GA)-2%PFAに18時間固定し、次に0.1M PHEM緩衝液でリンスした。次に眼を光学顕微鏡下で解剖して眼杯の耳側注入領域を選択した。続いて眼杯のこの部分を、2.3Mスクロースを注入した12%ゼラチンに包埋した。凍結切片(60nm)を液体窒素に凍結し、Leica Ultramicrotome EM FC7(Leica Microsystems)を用いて切り出した。様々な実験群に帰されるデータ属性のバイアスを回避するため、網膜色素上皮においてリポフスチン顆粒が占める面積の測定は、遺伝子型/治療群を知らされていない操作者がiTEMソフトウェア(Olympus SYS、Hamburg, Germany)を用いて実施した。各視野における各リポフスチン顆粒の面積は、少なくとも20枚の異なる画像(25μm2面積)でiTEMソフトウェアの「フリーハンド多角形」ツールを用いて測定した。
機能的及び形態学的分析を既述のとおり実施した(14)。
電荷結合素子NikonD1Hデジタルカメラ(Topcon Biomedical Systems、Oakland, NJ)に接続したTRC-50IX網膜カメラを使用して、暗条件でrd16マウスからの瞳孔対光反応を記録した。マウスに10ルクスの光刺激を約10秒間当て、IMAGEnetソフトウェア(Topcon Biomedical Systems)を使用して各眼につき1枚の写真を取得した。眼毎に瞳孔径を眼の直径(耳側から鼻側まで)で正規化した。
一元配置ANOVA検定(パラメトリック検定)又はクラスカル・ワリス順位和検定(ノンパラメトリック検定)を実施して、独立変数の2つ以上の群間で従属変数に関して統計的に有意な差があるかどうかを決定した。P値は以下のとおりである:EGFPタンパク質定量化のためのELISAアッセイ、インビトロでの定量化(p クラスカル・ワリス=0.006036)、マウス網膜における定量化(p ANOVA=0.00585)及びブタ網膜における定量化(p クラスカル・ワリス=0.009005);図5A(p ANOVA=0.00585);図5B(p クラスカル・ワリス=5.547E-5);図5C(p ANOVA=5.81E-10);ERG分析(a波振幅及びb波振幅の両方について分析した全ての輝度で、p ANOVA又はp クラスカル・ワリス>0.05);図S14のOCT分析(ABCA4についてp ANOVA=0.52及びCEP290についてp ANOVA=0.965)。群平均値間の多重対比較で決定した群間の統計的に有意な差は以下である:EGFPタンパク質定量化のためのELISAアッセイ、インビトロでの定量化(シングルAAV対デュアルAAV=0.012;AAVインテイン対デュアルAAV=0.012;シングルAAV対AAVインテイン=0.222)、マウス網膜における定量化(シングルAAV対デュアルAAV=0.0044;AAVインテイン対デュアルAAV=0.3754;シングルAAV対AAVインテイン=0.0561)及びブタ網膜における定量化(シングルAAV対デュアルAAV=0.012;AAVインテイン対デュアルAAV=0.012;シングルAAV対AAVインテイン=0.841);図5A:+/+対-/-AAVインテイン=0.4530;+/+対-/-=0.0002;図5B:野生型対rd16 AAVインテイン=0.00131;図5C:野生型対rd16 AAVインテイン1E-07;野生型対rd16 neg<1E-06。
本発明者らは、網膜におけるインテイン媒介性タンパク質トランススプライシングの効率を試験した;ノストック・パンクチフォルメ(Nostoc punctiforme)[Npu 図1A]由来のDnaEスプリットインテインのN端側及びC端側半分にそれぞれ融合したレポーターEGFPタンパク質のN端側又はC端側半分のいずれかをそれぞれコードする2つのAAVベクターを作成した。EGFPタンパク質はアミノ酸(a.a.)C71で分断した。各AAVベクターに適切な調節エレメント(即ちプロモーター及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル(bGHpA)及び三重flagタグ(3xflag)を含めることにより、両方の半分部分並びに完全長の再構成されたEGFPタンパク質の検出を可能にした(図1A)。
AAVインテインベクターからのEGFPタンパク質の再構成を確認するため、HEK293細胞をAAV2/2-CMV-EGFP DnaEインテイン又は同じ発現カセットを含むシングル及びデュアルAAVベクターのいずれかに感染させた。感染多重度(m.o.i)、5×104ゲノムコピー(GC)/細胞の各ベクター、これはつまり、デュアルベクターが完全なDNA又はタンパク質組換えを起こすと仮定して3つのシステム間で同程度の用量であることを意味する。EGFP量を精密に定量化するため、感染後72時間で細胞ライセートを回収した。EGFP発現をWB及び酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)の両方により評価した:図1Cに示されるとおり、AAVインテインベクターで達成されたEGFP発現は、シングルAAVで実現したもののおよそ半分であり(シングルAAV=0.735±0.2ng EGFP/μgライセート総量、n=5つの独立した実験;AAVインテイン=0.403±0.04ng EGFP/μgライセート総量、n=5つの独立した実験)及びデュアルAAVベクターで達成されたものと比べて10倍高かった(デュアルAAV=0.046±0.01ng EGFP/μgライセート総量、n=5つの独立した実験)。更に、切り出されたインテインと比べた完全長EGFPの強度をWBにより定量化した;その相対的な存在量は1:0.2であることが分かった(n=6つの独立した実験、図13A)。
AAVインテイン媒介性トランススプライシングが網膜において完全長タンパク質発現を再構成するかどうかを調べるため、4週齢C57BL/6JマウスにAAV2/8-CMV-EGFP DNA Eインテインベクター(各ベクターの用量/眼:5.8×109GC)を網膜下注射した。1ヵ月後に眼を摘出し、顕微鏡分析により分析した。全ての眼で網膜色素上皮及び最も重要なことに光受容体にEGFP蛍光が検出された(図1D)。光受容体におけるAAVインテインからのトランス遺伝子発現をシングル及びデュアルAAVと比較するため、光受容体特異的ヒトGタンパク質共役受容体キナーゼ1(GRK1)プロモーターの制御下でEGFPをコードするAAV2/8ベクターを4週齢C57BL/6Jマウスに網膜下注射した(各ベクターの用量/眼:5×109GC)。注射後1ヵ月で眼を摘出し、蛍光顕微鏡法、ELISA又はWBのいずれかにより分析した。
ヒト網膜を代表する更なる前臨床モデルとして、本発明者らは、ヒト人工多能性幹細胞(iPSC)から3D網膜オルガノイドを作成した((49、50)。6ヵ月齢オルガノイド(図14A)は、図14Bに示されるとおり成熟光受容体マーカーによって染色される細胞を含んだ;図14Cに蛍光分析により示されるとおり、光受容体特異的プロモーターを含むAAV2ベクター、即ちAAV2/2 CMV EGFP及びAAV2/2 IRBP DsRedベクターによってこれらのオルガノイドを形質導入することに成功した。光学顕微鏡法(図14D)及び電子顕微鏡法(図14E~図14F)では、光受容体外節の芽体の存在が見られる。AAV-GRK1-EGFPインテインベクター(各ベクターの用量/オルガノイド:1×1012GC)と共に30日間インキュベートした9ヵ月齢3Dヒト網膜オルガノイドはEGFP蛍光を示す(図1G)。網膜オルガノイドライセートのWB分析(図15)により、バンド強度定量化(n=4個のオルガノイド)後に完全長EGFP発現が切り出されたインテインと比べて約5倍多いことが確認される。
タンパク質トランススプライシングを大型治療用タンパク質の再構成機構として開発できるかどうかを試験するため、本発明者らはAAV-ABCA4及び-CEP290インテインベクターを開発した。
本発明者らは、インビトロ並びにマウス及びブタ網膜の両方でAAVインテイン媒介性大型タンパク質再構成の効率をデュアルAAVベクターと比較した。ABCA4(セット1)又はCEP290(セット5)のいずれかをコードするAAV2/2デュアル又はインテインベクターのいずれかをHEK293細胞に感染させて(m.o.i:5×104GC/細胞の各ベクター)、72時間後に細胞ライセートをWBにより分析した。図3A及び図3Bに示されるとおり、AAV-ABCA4及び-CEP290インテインベクターは両方とも、大型タンパク質再構成をデュアルAAVベクターよりも高い効率で媒介した。予想どおり、完全長タンパク質に加えて、シングルAAVインテインベクター(ABCA4及びCEP290の両方の場合)に由来するか、又はAAV IIとAAV IIIとの間で起こるトランススプライシング(CEP290の場合)に由来するかのいずれかの、より短いポリペプチドが観察された(図3A及び図3B)。
AAVインテインベクターで達成される光受容体の形質導入が治療上意味のあるものであり得るかどうかを決定するため、STGD1(Abca4-/-)及びLCA10(rd16)のマウスモデルの網膜でそれらのベクターを試験した。
AAVインテインを注射した野生型マウスに明らかな毒性徴候は認められなかったが、本発明者らは、切り出されたインテインの中に埋め込まれると融合タンパク質の急速なユビキチン化及び続くプロテアソーム破壊につながるデグロンをトランススプライシングシステムに含めることについて評価した(図6)。記載されているデグロンの大部分はN端又はC端位置で機能性であり(即ちCL1、SMN、CIITA、ODC)、これらのデグロンは、単一の宿主タンパク質の分解につながり、従ってタンパク質トランススプライシング(PTS)反応に関与する必要のあるポリペプチドを取り去ることになるため、N-インテイン又はC-インテインに融合することができない。従って本発明者らは、N位置又は内部位置でのみ機能的活性を付与する3つのアミノ酸突然変異R12Y、Y100I及びG67Sを含む突然変異型の大腸菌(E. coli)由来ジヒドロ葉酸レダクターゼ(ecDHFR)(69)を選択した。
肝臓におけるインテイン媒介性タンパク質トランススプライシングの効率を試験するため、ノストック・パンクチフォルメ(Nostoc punctiforme)由来のDnaEスプリットインテインのN端側半分及びC端側半分に融合したレポーターEGFPタンパク質のN端側半分又はC端側半分のいずれかをそれぞれコードする2つのAAVベクターを作成した。
血友病Aで突然変異するF8遺伝子は、その野生型コンホメーションでは大き過ぎる(約7kb)ためシングルAAVによっては送達できない。そのため、AAV遺伝子療法のコンテクストでは、この遺伝子のBドメイン欠失型(BDD)コンホメーションのみが採用されている。最近では、BDD-F8及びショート肝特異的プロモーターとポリAシグナルとの両方を含む5kb発現カセットがAAV5にパッケージングされており、マウス及びカニクイザル(70)並びにHemA患者(71)において治療レベルのFVIIIをもたらすことが示されている。しかしながら、このベクターのゲノムは、ややオーバーサイズであり、異種トランケート型ゲノムのライブラリとしてAAVカプシドにパッケージングされ、それが標的細胞で再構成されると有効な形質導入が生じる。オーバーサイズAAVベクターの効率は普通サイズと比較して低く、異種トランケート型ゲノムを有するかかる産物の品質は、商業化に向けたその更なる開発の妨げとなり得る。
1.M. M. Sohocki, et al. Hum. Mutat. 17, 42-51 (2001).
2.T. Dryja, in The Online Metabolic & Molecular Bases of Inherited Diseases C. Scriver, A. Beaudet, W. Sly, D. Valle, Eds. (McGraw-Hill, New York, NY, 2001), vol 4, pp. 5903-5933.
3.FDA approves hereditary blindness gene therapy. Nat Biotechnol 36, 6 (2018).
4.I. Trapani, A. Auricchio, Trends Mol Med, (2018).
5.A. Auricchio, A. J. Smith, R. R. Ali, Hum Gene Ther 28, 982-987 (2017).
6.I. Trapani et al., EMBO Mol Med 6, 194-211 (2014).
7.R. Allikmets, Nat. Genet. 17, 122 (1997).
8.J. M. Millan, et al. J. Ophthalmol. 2011, 417217 (2011).
9.T. Hasson, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 92, 9815-9819 (1995).
10.X. Liu, et al. Cell. Motil. Cytoskeleton 37, 240-252 (1997).
11.D. Gibbs, et al. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51,1130-1135 (2010).
12.D. Duan, Y. Yue, J. F. Engelhardt, Mol Ther 4, 383-391 (2001).
13.Z. Yan, Y. et al., Proc Natl Acad Sci U S A 97, 6716-6721 (2000).
14.A. Maddalena et al., Mol Ther 26, 524-541 (2018).
15.P. Colella et al., Gene Ther 21, 450-456 (2014).
16.O. Novikova, N. Topilina, M. Belfort, J Biol Chem 289, 14490-14497 (2014).
17.K. V. Mills, M. A. Johnson, F. B. Perler, J Biol Chem 289, 14498-14505 (2014).
18.N. H. Shah, et al., J Am Chem Soc 135, 5839-5847 (2013).
19.Y. Li, Biotechnol Lett 37, 2121-2137 (2015).
20.N. H. Shah, T. W. Muir, Chem Sci 5, 446-461 (2014).
21.C. Schmelas, D. Grimm, Biotechnol J 13, el700432 (2018).
22.L. Villiger et al., Nat Med 24, 1519-1525 (2018).
23.F. Zhu et al, Sci China Life, 2010;
24.F. Zhu et al Sci China Life, 2013
25.Li at al., Hum Gene Ther, 2008
26 P. Subramanyam et al., Proc Natl Acad Sci, 2013
27.H. Iwai, S. Zuger, J. Jin, P. H. Tam, FEBS Lett 580, 1853-1858 (2006).
28.J. Zettler, V. Schutz, H. D. Mootz, FEBS Lett 583, 909-914 (2009).
29.J. Li, W. Sun, B. Wang, X. Xiao, X. Q. Liu, Hum Gene Ther 19, 958-964 (2008).
30.S. W. Lockless, T. W. Muir, Proc Natl Acad Sci U S A 106, 10999-11004 (2009).
31.Stevens et al., J Am Chem Soc. 2016 Feb. 24; 138(7):2162-5
32.S. J. Reich, et al. Hum. Gene. Ther. 14, 37-44 (2003)
33.N. Esumi, et al. J. Biol. Chem. 279, 19064-19073 (2004).
34.Y. Tsybovsky, K. Palczewski, Protein Expr Purif 97, 50-60 (2014).
35.S. Bungert, L. L. Molday, R. S. Molday, J Biol Chem 276, 23539-23546 (2001).
36.T. G. Drivas, E. L. Holzbaur, J. Bennett, J Clin Invest 123, 4525-4539 (2013).
37.G. Gao et al., Hum Gene Ther 11, 2079-2091 (2000).
38.L. P. Pellissier et al., Mol Ther Methods Clin Dev 1,14009 (2014).
39.L. P. Pellissier et al., Mol Ther Methods Clin Dev 1,14009 (2014).
40.S. C. Khani et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 48, 3954-3961 (2007).
41.M. Doria, A. Ferrara, A. Auricchio, Hum Gene Ther Methods 24, 392-398 (2013).
42.R. Sangermano et al., Ophthalmology 123, 1375-1385 (2016)
43.R. Sangermano et al., Ophthalmology 123, 1375-1385 (2016).
44.T. Nakano et al., ell Stem Cell 10, 771-785 (2012).
45.X. Zhong et al., Nat Commun 5, 4047 (2014).
46.X. Zhong et al., Nat Commun 5, 4047 (2014).
47.M. Jansen et al., Traffic 12, 218-231 (2011).
48.C. Mussolino et al., Gene Ther 18, 637-645 (2011).
49.T. Nakano et al., Cell Stem Cell 10, 771-785 (2012).
50.X. Zhong et al., Nat Commun 5, 4047 (2014).
51.M. Cheriyan, S. H. Chan, F. Perler, J Mol Biol 426, 4018-4029 (2014).
52.J. E. Donello, J. E. Loeb, T. J. Hope, J Virol 72, 5085-5092 (1998).
53.N. Zhang et al., Hum Mol Genet 24, 3220-3237 (2015).
54.H. Sun, P. M. Smallwood, J. Nathans, Nat Genet 26, 242-246 (2000).
55.T. G. Drivas, E. L. Holzbaur, J. Bennett, J Clin Invest 123, 4525-4539 (2013)
56.N. L. Mata et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 42, 1685-1690 (2001).
57.J. Weng et al., Cell 98, 13-23 (1999).
58.Smith AJ et al., Gene Ther. 2012 Feb;19(2):154-61.
59.Liu XQ et al., Proc Natl Acad Sci USA. 1997 Jul 22;94(15):7851-6
60.Srivastava A, Curr Opin Virol. 2016 Dec;21:75-80.
61.Auricchio et al. (2001) Hum. Mol. Genet. 10(26):3075-81
62.Dalkara D et al., Sci Transl Med. 2013 Jun 12;5(189):189ra76.
63.Petrs-Silva H et al., Mol Ther. 2011 Feb;19(2):293-301.
64.Klimczak RR et al., PLoS One. 2009 Oct 14;4(10):e7467.
65.Hickey DG et al. Gene Ther. 2017 Dec;24(12):787-800.
66.Perler, F. B. (2002). InBase, the Intein Database. Nucleic Acids Res. 30, 383-384
67.McIntosh J (2013).Blood 20 Feb 2013, 121(17):3335-3344
68.Levitt N, (1989). Genes Dev. 1989 Jul;3(7):1019-25
69.Iwamoto M et al, Chem Biol. 2010 September 24; 17(9): 981-988.
70.Bunting, S., et al., Gene Therapy with BMN 270 Results in Therapeutic Levels of FVIII in Mice and Primates and Normalization of Bleeding in Hemophilic Mice. Mol Ther, 2018. 26(2): p. 496-509.
71.Rangarajan, S., et al., AAV5-Factor VIII Gene Transfer in Severe Hemophilia A. N Engl J Med, 2017. 377(26): p. 2519-2530.
Claims (23)
- 細胞においてコード配列を発現するためのベクターシステムであって、前記コード配列は、第1の部分(CDS1)及び第2の部分(CDS2)並びに任意選択で第3の部分(CDS3)からなり、前記ベクターシステムは、
a)第1のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第1の部分(CDS1)、
- N-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列であって、CDS1の3’末端に位置する第1のインテインヌクレオチド配列
を含む第1のベクターと;
b)第2のベクターであって
- 前記コード配列の前記第2の部分(CDS2)、
- C-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の5’末端に位置する第2のインテインヌクレオチド配列
を含む第2のベクターと
を含み;
前記第1のベクター及び前記第2のベクターが細胞に挿入されると、前記コード配列のタンパク質産物は、タンパク質スプライシングによって産生されるか;又は
前記ベクターシステムは、
a’)第1のベクターであって
- 前記コード配列の前記第1の部分(CDS1)、
- 第1のN-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列であって、CDS1の3’末端に位置する第1のインテインヌクレオチド配列
を含む第1のベクターと;
b’)第2のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第2の部分(CDS2)、
- 第1のC-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の5’末端に位置する第2のインテインヌクレオチド配列;
- 第2のN-インテインをコードする第3のインテインヌクレオチド配列であって、CDS2の3’末端に位置する第3のインテインヌクレオチド配列
を含む第2のベクターと;
c’)第3のベクターであって、
- 前記コード配列の前記第3の部分(CDS3)、
- 第2のC-インテインをコードする第4のインテインヌクレオチド配列であって、CDS3の5’末端に位置する第4のインテインヌクレオチド配列
を含む第3のベクターと
を含み、
前記第1のインテインヌクレオチド配列は、前記第3のインテインヌクレオチド配列と異なり、及び前記第2のインテイン配列は、前記第4のインテインヌクレオチド配列と異なり、前記第1のベクター、前記第2のベクター、前記第3のベクターが細胞に挿入されると、前記コード配列のタンパク質産物は、タンパク質スプライシングによって産生される、ベクターシステム。 - 前記第1のインテイン、前記第2のインテイン、前記第3のインテイン及び前記第4のインテインは、スプリットインテインをコードし、好ましくは、前記スプリットインテインは、150アミノ酸の最大長さを有し、より好ましくは、前記スプリットインテインは、DnaE又はDnaBインテインである、請求項1に記載のベクターシステム。
- - 前記第1のインテインヌクレオチド配列は、配列番号1、3、5、7、9、11、13からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 前記第2のインテインヌクレオチド配列は、配列番号2、4、6、8、10、12、14からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 前記第3のインテインヌクレオチド配列は、配列番号1、3、5、7、9、11、13からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードし;
- 前記第4のインテインヌクレオチド配列は、配列番号2、4、6、8、10、12、14からなる群から選択されるインテイン又はその変異体、若しくはその断片、若しくはその相同体をコードする、請求項1又は2に記載のベクターシステム。 - 前記第1のベクター、前記第2のベクター及び前記第3のベクターは、前記コード配列の前記第1の部分(CDS1)、又は前記コード配列の前記第2の部分(CDS2)、又は前記コード配列の前記第3の部分(CDS3)の5’末端部分に作動可能に連結されたプロモーター配列を更に含む、請求項1~3のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記第1のベクター、前記第2のベクター及び前記第3のベクターは、5’末端反復(5’-TR)ヌクレオチド配列と、3’末端反復(3’-TR)ヌクレオチド配列とを更に含み、好ましくは、前記5’-TRは、5’逆方向末端反復(5’-ITR)ヌクレオチド配列であり、及び前記3’-TRは、3’逆方向末端反復(3’-ITR)ヌクレオチド配列である、請求項1~4のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記第1のベクター、前記第2のベクター及び前記第3のベクターは、ポリアデニル化シグナルヌクレオチド配列を更に含み、及び/又は前記第1のベクター、若しくは前記第2のベクター、若しくは前記第3のベクターの少なくとも1つは、分解シグナルをコードするヌクレオチド配列を更に含む、請求項1~5のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記分解シグナルは、CL1、PB29、SMN、CIITA、ODc、ecDHFR又はその断片からなる群から選択される、請求項6に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、前記コードされるタンパク質産物の構造ドメイン又は機能ドメイン内に入らない求核性アミノ酸からなる位置で前記第1の部分、前記第2の部分及び任意選択で前記第3の部分に分断され、前記求核性アミノ酸は、セリン、スレオニン又はシステインから選択される、請求項1~7のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記第1のベクター、前記第2のベクター及び前記第3のベクターの少なくとも1つは、前記コード配列に作動可能に連結された少なくとも1つのエンハンサー又は調節ヌクレオチド配列を更に含む、請求項1~8のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、病的状態又は障害を修正することが可能なタンパク質をコードし、好ましくは、前記障害は、網膜変性症、代謝障害、血液障害、神経変性障害、難聴、チャネロパチー、肺疾患、ミオパチー、心疾患である、請求項1~9のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、病的状態又は障害を修正することが可能なタンパク質をコードし、好ましくは、前記障害は、網膜変性症であり、好ましくは、前記網膜変性症は、遺伝性であり、好ましくは、前記病態又は疾患は、網膜色素変性症(RP)、レーベル先天黒内障(LCA)、スタルガルト病(STGD)、アッシャー病(USH)、アルストレーム症候群、先天性停止性夜盲(CSNB)、黄斑ジストロフィー、オカルト黄斑ジストロフィー、ABCA4遺伝子の突然変異によって引き起こされる疾患からなる群から選択される、請求項1~10のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病A、ウィルソン病、フェニルケトン尿症、ジスフェルリン異常症、レット症候群、多発性嚢胞腎疾患、ニーマン・ピック病C型、ハンチントン病を修正することが可能なタンパク質をコードする、請求項1~10のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、ABCA4、MYO7A、CEP290、CDH23、EYS、PCDH15、CACNA1、SNRNP200、RP1、PRPF8、RP1L1、ALMS1、USH2A、GPR98、HMCN1からなる群から選択される遺伝子のコード配列である、請求項1~11のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記コード配列は、DMD、CFTR、F8、ATP7B、PAH、DYSF、MECP2、PKD、NPC1、HTTからなる群から選択される遺伝子のコード配列である、請求項1~12のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- a)第1のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- コード配列の5’末端部分(CDS1)であって、前記プロモーターに作動可能に連結され、且つその制御下にある5’末端部分;
- N-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列;及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第1のベクターと;
b)第2のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- C-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列;
- 前記コード配列の3’末端部分(CDS2);及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第2のベクターと
を含むか;又は
a’)第1のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- コード配列の5’末端部分(CDS1’)であって、前記プロモーターに作動可能に連結され、且つその制御下にある5’末端部分;
- 第1のN-インテインをコードする第1のインテインヌクレオチド配列;及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第1のベクターと;
b’)第2のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- 第1のC-インテインをコードする第2のインテインヌクレオチド配列;
- 前記コード配列の第2の部分(CDS2’);及び
- 第2のN-インテインをコードする第3のインテインヌクレオチド配列;
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第2のベクターと;
c’)第3のベクターであって、5’-3’方向に、
- 5’逆方向末端反復(5’-ITR)配列;
- プロモーター配列;
- 第2のC-インテインをコードする第4のインテインヌクレオチド配列;
- 前記コード配列の第3の部分(CDS3’);及び
- 3’逆方向末端反復(3’-ITR)配列
を含む第3のベクターと
を含む、請求項1~14のいずれか一項に記載のベクターシステム。 - 前記コード配列は、前記ABCA4遺伝子をコードし、好ましくは、前記コード配列は、前記ABCA4タンパク質のaa Cys1150、Ser1168、Ser1090に対応するヌクレオチドで分断され、及びスプリットインテインは、前記分断点において挿入されるか、又は前記コード配列は、前記CEP290遺伝子をコードし、好ましくは、前記コード配列は、前記CEP290タンパク質のaa Cys1076;Ser1275に対応するヌクレオチドで分断され、好ましくは、前記CEP290遺伝子をコードする前記コード配列は、前記CEP290タンパク質のaa Cys 929及び1474;Ser 453及びCys 1474に対応するヌクレオチド配列で分断され、及び2つのスプリットインテインは、前記分断点において挿入される、請求項1~15のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 前記第1、第2及び第3のベクターは、独立に、ウイルスベクター、好ましくはアデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターであり、好ましくは、前記第1、第2及び第3のアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターは、同じ又は異なるAAV血清型から選択され、好ましくは、前記血清型は、血清型2型、血清型8型、血清型5型、血清型7型又は血清型9型、血清型7m8型、血清型sh10型;血清型2(quad Y-F)型から選択される、請求項1~16のいずれか一項に記載のベクターシステム。
- 請求項1~17のいずれか一項に記載のベクターシステムで形質転換された宿主細胞。
- 医学的使用のための、請求項1~17のいずれか一項に記載のベクターシステム又は請求項18に記載の宿主細胞。
- 遺伝子療法における使用のための、好ましくは網膜変性症、代謝障害、血液障害、神経変性障害、難聴、チャネロパチー、肺疾患、ミオパチー、心疾患によって特徴付けられる病態又は疾患の治療及び/又は予防における使用のための、請求項1~19のいずれか一項に記載のベクターシステム又は請求項18に記載の宿主細胞。
- 前記網膜変性症は、遺伝性であり、好ましくは、前記病態又は疾患は、網膜色素変性症(RP)、レーベル先天黒内障(LCA)、スタルガルト病(STGD)、アッシャー病(USH)、アルストレーム症候群、先天性停止性夜盲(CSNB)、黄斑ジストロフィー、オカルト黄斑ジストロフィー、ABCA4遺伝子の突然変異によって引き起こされる疾患からなる群から選択される、請求項20に記載の使用のためのベクターシステム又は宿主細胞。
- デュシェンヌ型筋ジストロフィー、嚢胞性線維症、血友病A、ウィルソン病、フェニルケトン尿症、ジスフェルリン異常症、レット症候群、多発性嚢胞腎疾患、ニーマン・ピック病C型、ハンチントン病の予防及び/又は治療における使用のための、請求項20に記載の使用のためのベクターシステム又は宿主細胞。
- 請求項1~17のいずれか一項に記載のベクターシステム又は請求項18に記載の宿主細胞と、薬学的に許容可能な媒体とを含む医薬組成物。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001029243A1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-04-26 | Dalhousie University | Method and vector for producing and transferring trans-spliced peptides |
WO2013045632A1 (en) * | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Era Biotech, S.A. | Split inteins and uses thereof |
WO2017132580A2 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | The Trustees Of Princeton University | Split inteins with exceptional splicing activity |
WO2017216560A1 (en) * | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Oxford University Innovation Limited | Dual overlapping adeno-associated viral vector system for expressing abc4a |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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US10494645B2 (en) * | 2013-04-18 | 2019-12-03 | Fondazione Telethon | Effective delivery of large genes by dual AAV vectors |
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WO2001029243A1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-04-26 | Dalhousie University | Method and vector for producing and transferring trans-spliced peptides |
WO2013045632A1 (en) * | 2011-09-28 | 2013-04-04 | Era Biotech, S.A. | Split inteins and uses thereof |
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WO2017132580A2 (en) * | 2016-01-29 | 2017-08-03 | The Trustees Of Princeton University | Split inteins with exceptional splicing activity |
WO2017216560A1 (en) * | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Oxford University Innovation Limited | Dual overlapping adeno-associated viral vector system for expressing abc4a |
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