JP2001524926A

JP2001524926A - オリゴマーの雑多ライブラリーの集合体を合成する方法

Info

Publication number: JP2001524926A
Application number: JP50558793A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ダウアー，ウィリアム; ダブリュ．バーレット，ロナルド; エー．ギャロップ，マーク
Original assignee: アフィマックステクノロジーズナームロゼフェンノートシャップ
Priority date: 1991-09-18
Filing date: 1992-09-16
Publication date: 2001-12-04
Also published as: US5789162A; DK0604552T3; US5770358A; EP0604552A4; DE69217497D1; EP0773227A1; US6140493A; US5708153A; AU2661992A; AU669489B2; ES2097925T3; EP0604552A1; WO1993006121A1; GR3023156T3; CA2118806A1; DE69217497T2; US6165717A; US6143497A; US6416949B1; ATE148889T1

Abstract

(57)【要約】ランダムオリゴマーを合成するための一般的な確率的方法が、所望の特性について合成化合物をスクリーンするのに利用できる。オリゴマー上での同定用標識の利用は所望の特性を有するオリゴマーの同定を助長する。

Description

【発明の詳細な説明】オリゴマーの雑多ライブラリーの集合体を合成する方法発明の分野本発明は一般に粒子をベースとする合成法に特に重点を置く、ランダムオリゴマーを合成するための確率的な方法に関する。本発明はまた合成したオリゴマー配列の同定を助長するための粒子上の同定用標識の利用に関する。本発明の更なる別の観点はレセプター結合性試験における標識化オリゴマーライブラリーの利用に関する。発明の背景分子の構造と活性との関係は生物系の研究において基本的な問題である。構造 −活性の関係は例えば酵素の機能、細胞が互いに連結し合う方法、並びに細胞のコントロール及びフィードバックシステムを理解するうえで重要である。一定の巨大分子が、非常に特異的な三次元空間及び電子分布を有する他の分子と相互作用及び結合することが知られている。かかる特異性を有する任意の大きな分子は、この分子が代謝中間体の加水分解を触媒する酵素であろうと、イオンの膜輸送を仲介する細胞表層タンパク質であろうと、特定の細胞をその隣りの細胞から同定せしめるのに働く糖タンパク質であろうと、血漿中を循環するIgGクラスの抗体であろうと、ゲノムにおけるDNAのオリゴヌクレオチド配列等であろうと、レセプターであると考えられうる。レセプターが選択的に結合する様々な分子はリガンドとして知られている。既知のレセプターとリガンドとの結合親和性を測定するのに数多くのアッセイが有用であるが、しかしかかる実験から獲得できうる情報は有用なリガンドの数及び種類により通常制限される。親和のリガンドは時折り偶然に、又はタンパク質についてのＸ線結晶分析及び組換遺伝子技術を含む分子構造の推測に関する新しい技術の利用により発見される。小さいペプチドは生物学における構造と機能との関係を探究するための典型的なシステムである。ペプチドはアミノ酸のモノマーより成るポリマーである。20 種の天然のアミノ酸がポリマー分子へと縮合したとき、そのポリマーは幅広い様々な三次元形態を形成し、そのそれぞれは特定のアミノ酸配列及び溶解条件に由来する。例えば20種の天然アミノ酸の考えられるペンタペプチドの数は20⁵又は3 20万種のペプチドである。このサイズの分子がレセプター結合試験において有用でありうる傾向は、いくつかの抗体が高い特異性をもって数個の程度のアミノ酸の短い配列を認識するということを示すエピトープ分析試験により裏付されている。更に、アミノ酸の平均分子量は小さなペプチドを数多くの現状有用な薬理学的製品のサイズ範囲に属しめる。むろん、大きなペプチドは数多くの目的のために必要とされ、そしてわずかな数のアミノ酸しか変化していないポリペプチドも構造一活性関係の分析のような目的のために有用でありうる。薬剤の発見は構造一活性関係の研究を頼りとする一種の探究である。ほとんどの場合、現状の薬理学的探究は生物学的に重要なレセプターに対して所望のパターンの特異性を有する新規のリガンドの発見のプロセスとして説明できうる。他の例は農業において利用するための新規化合物、例えば殺虫剤及び除草剤を発見するための探究である。数多くの種々のオリゴマーを作製するための従来の方法は、合理的又はランダムな効率的なスクリーニングにとって満足たるスケールで利用する場合に非常に時間かかる。例えば、固相支持体上でペプチドを合成するのに「メリフィールド」法（Merrifield，J ．Am．Chem．Soc. 85：2149-21 54（1963）、引用することで本明細書に組入れる）が利用されている。メリフィールド法において、アミノ酸は不溶性ポリマーより成る支持体に共有結合してある。α保護型基を有する別のアミノ酸をこの共有結合しているアミノ酸と反応させてジペプチドを形成せしめる。この保護基を除去し、次いでアルファー保護基を有する第三のアミノ酸をこのジペプチドに付加せしめる。この工程を、所望の長さ及び配列のペプチドが得られるまで続ける。メリフィールド法を利用すると、１日に数多くのペプチド配列を、経済的、且つ、実用的に合成することができない。大量のオリゴマー配列を合成するため、他の者はオリゴマーの合成のための一式の反応槽の利用を試みた。例えば自動化された試薬の逐次添加により固相支持体上で線形オリゴマーを合成するためにチューブ状反応系が利用されうる。この方法も経済的に効率的なスクリーニングのために十分に大量のオリゴマーの合成を可能にするに至っていない。複数のオリゴマー配列を製造するための方法も知られ、その方法では、孔のたくさんある（foraminous）容器が既知量の反応性固相支持体を包囲し、その固相支持体のサイズがこの容器の開口部よりも大きくなっている。引用することで本明細書に組入れる米国特許第4,631,211号を参照のこと。この容器は所望の生成分子の配列を合成するために所望の材料と選択的に反応する。当業界に知られる他の方法と同様に、この方法は効率的なスクリーニングのために十分な種類のポリペプチドを合成するには実用的に利用できない。他の技術も述べられている。一ビーズを基礎とする方法が、引用することで本明細書に組入れるPCT特許公開番号92／00091号に記載されている。この方法は標準のマイクロタイタープレートの形式に合う96本のプラスチック製ピンの上でのペプチドの合成を含む。PCT特許公開84／03564号； 86／00991号及び86／06487号を参照のこと（それぞれ引用することで本明細書に組入れる）。残念ながら、これらの技術はある程度有用であるにもかかわらず、かなりの問題が残されている。例えば、これらの方法は経済的に合成、且つ、スクリーンされうる雑多な配列に限られている。他の者はオリゴマーの集合体を製造するための組換方法を開発した。引用することでそれぞれ本明細書に組入れるPCT特許公開番号91／17271及び91／19818を参照のこと。他の重要な開発において、科学者は写真石板技術、化学技術及び生物学技術を組合せて支持体の表面上でオリゴマー及びその化合物の大型集合体を作り上げている。引用することでそれぞれ本明細書に組入れる米国特許第5,143, 854号並びにPCT特許公開番号90／15070及び92／10092を参照のこと。組換及びVLSIPS（商標）の順列組合せ方法において、組換生物もしくはファージにおけるコード配列を決定することによって、又はVLSIPS（商標）チップの上でのオリゴマーの位置によってそれぞれのオリゴマーを固有に固定することができる。しかしながら他の方法において、特定のオリゴマーの同定は確認することが困難である。このような方法において必要なのは各粒子を標識する、効率的、且つ、簡単に利用できる方法である。大きな物体のための標識法が開発されてはいるが（引用することでそれぞれ本明細書に組入れるPCT特許公開番号90／14441 及び87／06383を参照のこと）、かかる方法はオリゴマーの順列組合せライブラリーを必要とし続けている。以上より、雑多な化学配列の集合体を合成するための改良方法及び装置が有利であろうことが認識されうる。発明の概要本発明はランダムオリゴマーのライブラリーを合成するための一般的な確率的方法を提供する。ランダムオリゴマーは固相支持体又は粒子上で合成させるが、しかし可溶性ライブラリーを供するためにこのような支持体から切断させてよい。オリゴマーはモノマー配列より構成され、これらのモノマーは互いと連結してオリゴマー又はポリマーを形成しうる分子セットの任意の構成員、即ち、アミノ酸、カルバメート、スルホン、スルホキシド、ヌクレオシド、炭水化物、尿素、ホスホネート、脂質、エステル、それらの組合せ等である。次にこのライブラリーをスクリーンに付してレセプターに結合するか又はある程度の所望の性質を有する個々のオリゴマーを単離する。好ましい態様において、このライブラリ一中の各オリゴマー配列は唯一のものとなっている。別の好ましい態様において、この固相支持体は非孔質のビーズである。この固相支持体は単独粒子、又は２個以上の連結粒子より構成されうる。本発明の更なる態様はオリゴマーにおけるモノマー配列を同定するための同定用標識の利用に関する。随伴粒子を伴う又は伴わないオリゴマーに直接付加されうる、オリゴマーに付加されたリンカーに付加されうる、オリゴマーを合成する固相支持体に付加されうる、又はオリゴマー保有粒子に付加された第二粒子に付加されうる同定用標識は、どのようにかして所望の情報を保有している任意の認識可能な特色であり、そして１又は複数の固相支持体のレベルにおいて解読可能なものである。この固相支持体は１又は複数のリンカー分子によってオリゴマー及び同定用標識に連結されていてよい。好ましい態様において、この同定用標識はオリゴヌクレオチド、であってよく、好ましくはオリゴマーライブラリーを集成するのに利用されるカップリング条件下で分解しないであろうピリミジン又はピリミジンとプリンの類似体又は任意のタイプのヌクレオシドより成る。このオリゴヌクレオチド同定用標識は、例えばポリメラーゼ連鎖反応により標識の増幅を可能とする５’及び３ ’増幅部位を含みうる（米国特許第4,683,202号及び第4,95,188号を参照のこと；それぞれ引用することで本明細書に組入れる）。オリゴマー合成の各段階について特異的でありうるDNAシーケンシングプライマーも、増幅プライマー部位に加えてこのオリゴヌクレオチド標識の中に含まれうる。この標識は、粒子標識の付加に関連してモノマーの同定を可能とする情報をオリゴヌクレオチド配列の中に含ませるように設計されうる。このオリゴヌクレオチド標識は好ましい態様において約50〜100ヌクレオチドの長さであろう。別の好ましい態様において、この同定用標識は一連の発光性化合物、例えば光退色しうる蛍光又は燐光化合物であってよく、これらの化合物はオリゴマーライブラリーのオリゴマーが合成されるビーズ又は粒子に一体化させる。かかる化合物は当業界に広く知られている。図面の簡単な説明図１は粒子上での順列組合せオリゴマー合成の図示である。図２は同時順列組合せオリゴマー合成と粒子標識化の図示である。図３はビーズの官能化の一方法、ペプチド合成に適合する化学品、及びオリゴヌクレオチド同定用標識の一巡一巡の付加（アミノ官能化ビーズの合成、保護化５’マレイミジルオリゴヌクレオチドの構造、アミノ酸カップリング及びチオール「ハンドル（とっ手）」の導入、ビーズへの段階特異的オリゴヌクレオチド付加、その後のアミノ酸カップリング及びオリゴヌクレオチドの付加、並びにペプチド及びオリゴヌクレオチドの脱保護を含む）が記載してある。図４はオリゴヌクレオチド標識の一例の図示である。図５は平行ペプチド／オリゴヌクレオチド合成のための光不安定性保護基により誘導されたヌクレオシドホスホラミジットを例示する。図６は平行ペプチド／オリゴヌクレオチド合成のための５’−DMT−３’−（Ｏ−アリルＮ，Ｎ’−ジイソプロピルホスホラミジット）ヌクレオシド誘導体を例示する。図７はペプチド及びオリゴヌクレオチドの平行合成のための二価ビーズ材料の調製を例示する。図８はビーズ上でのオリゴヌクレオチド標識化ペプチドの平行集成を例示する。図９は実施例５に記載の実験の図示であり、ここでビーズ上の２集団のオリゴマーは本発明の方法によって調製、標識、混合、選別及び同定している。図10は実施例５に記載の実験におけるFACSによる２集団のビーズの分解を示している。水平軸にわたる値は相対蛍光値（ログスケール）を示す。垂直軸にわたる値はビーズの相対数を示す。非蛍光ラベル化ビーズはピークＡで示されている。蛍光ラベル化ビーズはピークＢで示されている。大きなピーク、対、小さなピークの比は15：1である。図11は実施例５に記載のように、２種のビーズ集団のFACS後の増幅及び選別ビーズ上の標識の増幅により獲得できたPCR生成物とコントロールの臭化エチジウム染色化UV照射アガロースゲルの図である。ゲルＡは選別蛍光ビーズによる結果を示す：レーン１−−2．4×10⁶のコピー数（100ビーズ当量）の95量体標識；レーン２−７ −−１個の蛍光ビーズからのPCR生成物；レーン８−10−−10個の蛍光ビーズからのPCR生成物；レーン11−13−−100個の蛍光ビーズからのPCR生成物；及びレーン14−−1．2×10⁶個の110量体標識のコピー数（100ビーズ当量）。ゲルＢは選別非蛍光ビーズによる結果を示す：レーン１−−1．2×10⁶個の110量体標識のコピー数；レーン２−７−−一個の非蛍光ビーズからのPCR生成物；レーン８−1 0−−10個の非蛍光ビーズからのPCR生成物；レーン11−13−−100個の非蛍光ビーズからのPCR生成物；及びレーン14−−2．4×10⁶個の95量体標識のコピー数。ゲルＣはコントロール反応による結果を示す：レーン１，12−−DNAサイズの標準品；レーン２，３−−標識なしのコントロール反応；レーン４，５−−１ビーズ当量の可溶性95量体／標識；レーン６，７−−10ビーズ当量の可溶性95量体標識；レーン８，９−−１ビーズ当量の可溶性110量体標識；及びレーン10，11− −10ビーズ当量の可溶性110量体標識。特定の態様の説明本発明は大型合成オリゴマーライブラリーを製造するための新規の方法及び装置を提供する。本発明の好ましい態様において、かかるライブラリーの各構成員はそれに対応するオリゴマーの配列の種類を特定するような状況で固有にラベルされている。かかるライブラリーをスクリーニングするための方法及びこれらのライブラリーを製造するのに有用な試薬も提供する。用語本明細書に用ている下記の語は下記の一段の意味を有することを意図する：相補性又は実質的に相補性：これらの語はヌクレオチド又は核酸間、例えば２本の二本鎖DNA分子との間、又はオリゴヌクレオチドプライマーとシーケンス化すべきもしくは増幅すべき一本鎖核酸上のプライマー結合部位との間での塩基対合を意味する。「相補性」ヌクレオチドは当業者によく知られている通り、一般にＡとＴ（又はＡとＵ）、及びＣとＧである。２本の一本鎖のRNA又はDNA分子は、一方の鎖のヌクレオチドが適宜に並んだときに他方の鎖のヌクレオチドと少なくとも約80％以上で対合するときに「実質的に相補性」であると言われている。他方、実質的な相補性は、RNA又はDNA鎖が選択的ハイブリダイゼーション条件のもとで相補核酸とハイブリダイズするであろうときに存在する。典型的には、選択的ハイブリダイゼーションは少なくとも14〜25ヌクレオチドの鎖にわたって少なくとも約55％の相補性があるときに生ずるであろうが、より選択的なハイブリダイゼーションは相補性が65％，75％，90％、そして100％と高まるに従って生ずるであろう。KanehisaのNucleic Acids Res. 12：203（1984）(引用することで本明細書に組入れる)を参照のこと。緊縮ハイブリダイゼーション条件は一般に約１Ｍ以下、例えば500mM以下の塩濃度を含み、そして通常は200mM以下の塩濃度を含むであろう。オリゴマーにとってのハイブリダイゼーション温度は一般に22℃以上、例えば約30℃以上、そして通常は約37℃以上であろう。長めのフラグメントは特異的なハイブリダイゼーションのために高めのハイブリダイゼーション温度を必要としうる。他の要因がハイブリダイゼーションの緊縮性に劇的に影響しうるため（かかる要因には塩基組成、相補鎖の長さ、有機溶媒の存在、及び塩基誤対合の程度が含まれる）、要因の組合せは任意の１要因単独の絶対尺度よりも重要である。エピトープ：抗体として知られるレセプターのサブクラスと相互作用する領域と記述されている抗原分子の領域が「エピトープ」である。同定用標識：「同定用標識」とは、オリゴマーの合成において個々の固相支持体がどのモノマー反応を受けたかを同定することができる手段を提供する物理的な付属物である。この同定用標識は固相支持体がモノマー反応を受けた合成系列における段階も記録する。この同定用標識は任意の認識可能な特色であってよく、それには顕微鏡で識別できる形態、サイズ、色、光学密度等；光の示差吸収もしくは発光；化学的反応性；磁性又は電子的暗号化情報；又は必要な情報を有する任意のその他の固有のマークであり、そして１（又は数個）の固相支持体のレベルにおいて解読できるものである。かかる同定用標識の好ましい例はオリゴヌクレオチド配列である。「同定用標識」は固相支持体を合成に用いたかどうかに関係なく、合成したオリゴマーに直接カップルさせることができる。この後者の態様において、同定用標識はオリゴマー合成のための「支持体」として働く。リガンド：リガンドは特定のレセプターにより認識される分子である。レセプターと結合又は反応する因子を「リガンド」といい、この語は対応のレセプターとの関係においてのみ意味のある定義である。「リガンド」なる語は、課題の物質がレセプターと結合又はそうでなければ相互作用できる限り、任意の特定の分子サイズ又はその他の構造もしくは組成的特徴を包括していない。また、「リガンド」はレセプターが結合する天然リガンドとして、又は作動因子もしくは拮抗因子として働きうる機能的な類似体のいづれかとして働きうる。本発明により調べることのできるリガンドには、限定することなく、細胞膜レセプターにとっての作動因子及び拮抗因子、毒素及び毒液、ウィルスエピトープ、ホルモン、糖類、補助因子、ペプチド、酵素基質、補助因子、薬剤（例えば鎮静剤、ステロイド等）並びにタンパク質が含まれる。モノマー：「モノマー」は結合し合ってオリゴマー又はポリマーを形成しうる分子セットの任意の構成員である。本発明において有用なモノマーのセットには、限定することなく、ペプチドの合成の例に関して、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸又は合成アミノ酸のセットが含まれる。本明細書で用いる「モノマー」とはオリゴマーの合成のための塩基のセットの任意の構成員である。例えば、Ｌ−アミノ酸の二量体はポリペプチドの合成のための400種の「モノマー」の塩基セットを形成する。モノマーの種々の塩基セットがポリマー合成おける連続工程において利用できうる。オリゴマー又はポリマー：本発明の「オリゴマー」又は「ポリマー」はモノマーサブユニットの化学的又は酵素的付加より形成される。かかるオリゴマーには例えば核酸、多糖類、リン脂質及びアルファー、ベーターもしくはオメガ−アミノ酸のいづれかを有するペプチド、ヘテロポリマー、ポリウレタン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリウレア、ポリアミド、ポリエチレンイミン、ポリアリールエンスルフィド、ポリシロキサン、ポリイミド、ポリアセテート又はその他のポリマーの線状、環状及び枝分れポリマーが含まれ、それは本開示内容を参照することで当業者に容易に理解されるであろう。ペプチド：「ペプチド」はモノマーがアミド結合を介して互いに連結し合っているアルファーアミノ酸であるオリゴマーである。本明細書に関して、アミノ酸はＬ−光学異性体又はＤ−光学異性体でありうることが理解されうる。ペプチドは２個以上の長さのアミノ酸であるが、しかしより通常には５〜10個以上の長さアミノ酸であり、そして20個以上の長さのアミノ酸であることさえもできるが、しかしながら20個以上の長さのアミノ酸は「ポリペプチド」と呼ばれることの方が多いであろう。アミノ酸に関する標準一文字略語を用いた（例えばプロリンについてはＰ）。これらの略語は引用することで本明細書の組入れる Stryer，Biochemistry，第３版（1988）に含まれている。オリゴヌクレオチド：オリゴヌクレオチドは一本鎖のDNA又はRNA分子であり、典型的には合成手法により作られる。本発明に用いるオリゴヌクレオチドは通常 50〜150のヌクレオチドの長さ、好ましくは80〜120のヌクレオチドの長さであるが、一定の状況において様々な長さのオリゴヌクレオチドが適切でありうる。例えば、本発明の一態様において、オリゴヌクレオチド標識及びこの標識により同定されるポリマーは平行して合成する。この態様において、オリゴヌクレオチド標識はオリゴマーの合成に利用されるモノマーーモノマー付加段階と同様にしてヌクレオチド−ヌクレオチドを作製することができる。更に、非常に短い、即ち、２〜10個のヌクレオチドのオリゴヌクレオチドを、存在しているオリゴヌクレオチド標識を伸長させてモノマーカップリング段階を同定するのに利用することができる。適切なオリゴヌクレオチドはBeaucageとCarruthers，Tetr ．Lett．22 ：1859-1862（1981）に記載のホスホラミジット法により、又はMatteucciらJ ．A m．Chem．Soc ．103：3185（1981）に従うトリエステル法により（共に引用することで本明細書に組入れる）、又は例えば市販の自動オリゴヌクレオチド合成装置を利用するその他の方法によって製造されうる。作動連結：核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれたときに「作動連結」している。例えば、プロモーター又はエンハンサーは、プロモーターが配列の転写を起こさせるならコード配列に「作動連結」している。一般に、作動連結とはDNA配列が連なっていること、そして２つのタンパク質コード領域を連結させる必要があるときは、連なり、且つ、解読枠にあることを意味する。レセプター：「レセプター」は一定のリガンドに対して親和性を有する分子である。レセプターは天然又は人工分子でありうる。また、レセプターは変化していない天然のもしくは単離された状態において、又はその他の物質との凝集体として利用されうる。レセプターは結合構成員に、直接的又は特異的な結合性物質を介して、共有的又は非共有的に付加されうる。本発明の方法において利用できるレセプターの例には限定することなく、抗体、細胞膜レセプター、モノクローナル抗体、特定の抗原決定基（例えばウィルス、細胞、又はその他の物質）と反応する抗血清、ポリヌクレオチド、核酸、レクチン、多糖類、細胞、細胞膜及び小器官が含まれる。レセプターは当業界において時折り「抗−リガンド」と呼ばれることがある。本明細書の中で「レセプター」なる語を用いているとき、意味の違いはない。「リガンド−レセプターペアー」は複合体を形成するように２つの巨大分子が分子認識を通じて結合しているときに形成される。本発明により調べることのできるレセプターのその他の例には下記のものが限定することなく含まれる：微生物レセプター：微生物レセプターに結合するリガンド、例えば微生物の生存に必須の特定の輸送タンパク質又は酵素の決定は、新たなクラス又はタイプの抗生物質を発見するうえで有用である。特に有用なのは日和見菌類、原生動物及び現状使用されている抗生物質に耐性な細菌に対する抗生物質であろう。酵素：例えば、神経伝達物質を分解する原因となる酵素のような任意の酵素の結合部位がレセプターである。一定の酵素に結合し、これにより様々な神経伝達物質を分解する酵素の作用を調節するリガンドの決定は、神経伝達障害の処置に使用できる薬剤の開発に有用である。抗体：例えば、本発明は課題の抗原のエピトープに結合する抗体分子上のリガンド結合性部位を調べるうえで有用でありうる。抗原エピトープを擬態する配列の決定はワクチンの開発を導くか、又は関連の診断試薬もしくは例えば自己免疫障害の治療処置のうえで有用な化合物（例えば「自己」抗体の結合を阻止することにより）の開発を導くことがある。核酸：本発明の細胞性タンパク質（「トランス作用因子」）に対する結合部位として作用する核酸の配列を調査するうえで有用でありうる。かかる配列には例えばエンハンサー又はプロモーター配列が含まれうる。触媒性ポリペプチド：１又は複数の反応体の１又は複数の生成物への変換を包括する化学反応を促進することができるポリマー、好ましくはポリペプチドが「触媒性ポリペプチド」である。かかるポリペプチドには一般に、少なくとも１種の反応体又は反応中間体に特異的な結合性部位、及び結合性部位に機能的に近位している活性部位を含み、この機能は結合している反応体を化学改質できる。触媒性ポリペプチドはLernerら、Science 252：659（1991）(引用することで本明細書に組入れる)に記載されている。ホルモンレセプター：例えば、「ホルモンレセプター」にはインスリン及び成長ホルモンにとってのレセプターが含まれる。高い親和力でホルモンレセプターに結合するリガンドの決定は、例えば糖尿病の症状を緩和するために糖尿病の者が受けなければならない日常の注射にとって代わる経口代替物、及び他のケースにおいて、死体から又は組換DNA技術によってのみ獲得できるヒト成長ホルモンにとって代わる代替物の開発において有用である。その他の例には血管収縮性ホルモンレセプターが含まれる；このようなレセプターに結合するリガンドの決定は血圧を調節する薬剤の開発を導くことがある。アヘンレセプター：脳におけるアヘンレセプターに結合するリガンドの決定は、モルヒネ及び関連の薬剤にとって代わる常習性の低い代替物の開発において有用である。基体又は固相支持体：「基体又は固相支持体」は硬質又は半硬質表層を有する材料である。かかる材料は小さいビーズ、ペレット、ディスク又はその他の常用の形態をとっていることが好ましいが、その他の形態も利用できうる。ある態様においては、基体の少なくとも片面が実質的に平らになっている。大雑把な球形が好ましい。合成：化合物は、インビトロ化学又は酵素合成により作ったときは「合成」である。本発明の合成ライブラリーは、例えば細菌、酵母又はその他の生存宿主の中で増殖されうるウィルス又はプラスミドベクターと対照的である。Ｉ．大型合成オリゴマーライブラリーを製造するための方法ランダムオリゴマー合成の一般的な方法を本発明により提供する。この方法は組換系に有用な莫大な数の化合物を作るのに、及び化学合成法に有用なモノマーセットの雑多性を利用するのに利用できうる。本発明の方法により、10¹²種のオリゴマーまで容易に製造することができ、従来の方法に比べて劇的な向上が得られうる。本発明はオリゴマー同定の軽快な手段も提供する。この一般的方法は、大型で多様性の高い集合体又はライブラリーを製造することを含んで成り、かかるライブラリーのそれぞれの構成員は単一のオリゴマー配列（例えばペプチド）を含んで成る。この配列は可溶性であるか、又は固相支持体に結合していてよい。固相支持体に結合しているとき、このオリゴマーは通常リンカーにより付加されている。このリンカーは付加の前に、各末端において適当な官能基、即ち、支持体への付加のために適する一つの基とオリゴマーへの付加のために適する他の基を有する。かかる集合体は例えば長さＸのオリゴマーへと集成されたｎ個のオリゴマーの全ての組合せを含み、ｎ^xの種々の化合物がもたらされる。この集合体はまた例えば１又は少数の位置のみにおいて異なるモノマー単位を有し、他の全ての位置において同一の配列を有するオリゴマーも含みうる。この一般的な方法はモノマー単位の化学及び／又は酵素的集成によってオリゴマーをランダムな順列組合せ（確率的）状態で合成することを包括する。合成オリゴマーライブラリーは複数の固相支持体それぞれの上に単独のオリゴマー配列を合成することにより製造できる。このオリゴマー配列は種々の固相支持体に関して異なっている。このオリゴマー配列は（ａ）複数の反応槽にわたって確率的な手法で支持体を配分する；（ｂ）各反応槽中の支持体を第一モノマーに暴露させる；（ｃ）支持体をプールする；（ｄ）複数の反応槽にわたって確率的な手法で支持体を分配する；（ｅ）各反応槽中の支持体を第二モノマーに暴露させる；そして（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の工程を少なくとも１回から20回路まで繰り返す工程を含んで成る方法で合成される。一般に、各反応槽に実質的に同数の固相支持体を配分する。本発明の一態様において、モノマーは一連のアミノ酸から選ばれ、そして得られるオリゴマーはペプチドである。特定の方法の例として、長さが３個の残基であり、３種のモノマー：Ａ，Ｂ及びＣのモノマーセットより集成されたペプチドの合成を考えることができる。第１モノマーはビーズの３種のアリコートとカップルさせ（異なるモノマーそれぞれが、異なるアリコートの中に入っている）、そして次に全ての反応に由来するビーズをプールする（図１参照）。このプールはここでほぼ同数の３種の異なるタイプの固相支持体を含み、それぞれのタイプは第一残基の位置において特徴付けられる。このプールを混合し、次いでＡ，Ｂ又はＣをモノマーとして含む別々のモノマー反応チューブ又は槽に再分注する。第二残基がカップルされる。この反応により、各チューブはここで位置１において３種の異なるモノマーを、そして位置２において特定の第二反応チューブそれぞれに含まれているモノマーを有するビーズを有する。全ての反応体を再びプールし、９通りの可能な二量体のいづれかをそれぞれが抱えるビーズの混合物を作る。この連続的な合成及び混合方法は、可能な反応系路全てを経たビーズをもたらし、そしてビーズの集合体は３個のアミノ酸の三量体全て（３³＝27）を示す。従って、Ａ，Ｂ及びＣの三量体の完全なセットが構築される。容易に理解できる通り、十分に大量の合成ビーズの利用は、このセットがこのランダムな順列組合せ合成系に採用される様々なモノマーの組合せを完全に代表することを保障するのに役立つ。あらゆるタイプのモノマーからオリゴマーを集成するこの方法は一定のモノマー単位又は構成単位のセットにとっての適切なカップリング化学品の利用を必要とする。段階的に互いへと付加されうる構成単位の任意のセットはモノマーセットとして働きうる。この付加は化学的、酵素的もしくはその他の手段により、又はこれらの手段の任意の組合せにより仲介されうる。得られるオリゴマーは線状、環状、枝分れ、又は当業者に明らかであろう様々なその他の形状を帯びていてよい。ポリペプチドの固相状態合成のための技術が例えばMerrifield前掲に記載されている。ペプチドカップリング化学品は引用することで本明細書に組入れるThe Peptides 第１巻(Gross，E．とJ．Meienhofer，Academic Press，Orlando(19 79))にも記載されている。オリゴマーを合成するため、大量の固相支持体の集合体をいくつかの反応槽にわたって配分する。各反応体において、種々のモノマーを成長していくオリゴマー鎖にカップルさせる。このモノマーは化学カップリングのために適宜活性化されうる又は酵素カップリングのために適宜許容されうる任意のタイプでありうる。反応体は別々の反応槽の中に含まれていてよいため、オリゴマーを集成するのに同種のモノマーと別のカップリング化学品とを利用することができる（The Pe ptides 前掲を参照のこと）。一定のモノマーセットについてはカップリング時間は長くてよい。このため、好ましい取り合わせにおいてモノマー反応が平行で実施される。各カップリング段階の後、オリゴマーのラリブラリーが合成される固相支持体を、次のカップリング段階のための個別の槽に再配分する前にプール及び混合する。このシャフリング工程は数多くのオリゴマー配列の組合せを有する固相支持体を供する。各合成段階が高いカップリング効率を有するなら、固相支持体上の実質的に全てのオリゴマーが同一の配列を有する。この配列は合成終了時に、任意の一定の固相支持体についての合成経路（モノマー反応のタイプ及び順序）により決定される。オリゴマーの最大の長さは典型的には約20個以下、通常は３〜８個の残基の長さであるが、あるケースにおいては10〜12個の残基の長さが好ましい。当業者に知られる保護基を見かけ上のカップリングの防止のために利用されうる（The Peptides第３巻、Gross，E．とJ．Meienhofer，Academic Press，Orlando（1981）編を参照のこと；引用することで本明細書に組入れる）。この完全にランダムな手法の改良も可能である。例えば、モノマーセットは順々に増やす又は減らしてよい；又はもしカップリング化学が有効なら、モノマーセットを次の段階に関して完全に取り換えてよい（例えば、第一段階においてアミノ酸、別の段階においてヌクレオチド、別の段階において炭水化物）（全て引用することで本明細書に組入れるGaitのOligonucleotide Synthesis ：A Practical Approach IRLP ress，O xford（1984）；FriesenとDanishefskyのJ ．Amer．Chem．Soc．111：6656（1989 ）；及びPaulsenのAngew ．Chem．Int．Ed．Engl．25：212(1986)を参照のこと）。ペプチド合成のためのモノマー単位には例えば、単独のアミノ酸もしくは大きめのペプチド単位、又はその両者が含まれうる。一変異法は、合成の一定の段階における種々のモノマーセットにわたって分配すべき固相支持体上の様々な配列のいくつかのプールを作ることにある。この手法により、関係する又は無関係の配列を有する種々の長さのオリゴマーを作ることができ、そして他の残基を変えながら一定の位置において一定のモノマーを固定し、一定の残基又は領域が雑多性を供するように変更されているオリゴマーフレームワークを構築することができる。本発明のオリゴマーライブラリーの化学的又は酵素的合成は一般に固相支持体上で行う。本明細書で用いる「固相支持体」なる語は、オリゴマー合成、そして一定の態様においては標識の付加及び／又は合成のために適する部位を有する粒子を包括している。本発明の合成オリゴマーライブラリーの製造において様々な固相支持体が有用である。固相支持体は例えばペプチド及び核酸、並びに前記したその他のオリゴマーの固相合成のために一般に有用であり、従って当業者によく知られている。十分な固相支持及び有効なカップリングにより、所望するなら一定のオリゴマーの完全なセットを作ることができる。一般に、固相支持体のサイズは１nm〜10 0μｍの範囲にあるが、しかし１mmのサイズに至るより大きめの固相支持体を利用することができる。固相支持体の適切のサイズは（１）オリゴマー合成部位の数及び所望するならば同定用標識付加部位の数；（２）合成すべき種々の化合物の数（及びスクリーニングのために必要な各オリゴマーを抱えている固相支持体の数）；並びに（３）利用すべき特定のスクリ−ニング手法（例えば蛍光活性化セルソーター（FACS）〕に及ぼす固相支持体のサイズの影響に依存する。特別な例として、直径１μｍの固相支持体が利用できうる。各反応が約0．2ml の固相支持体を含み、そしてオリゴマーが50のモノマーのセットから合成（50通りの平行反応）されたものであるなら、全部で10mlの固相支持体、又は約10¹³個の固相支持体が必要であろう。これら50種のモノマーから六量体を作ることを要望するなら、1．5×10¹⁰通りの可能な配列があり、従って各特定の配列は約10¹³ 個の固相支持体上で表示されるであろう。各ビーズの予測の容量は、一般に利用されるペプチド合成樹脂の容量に基づき、ビーズ当り約0．1pgのペプチドである。この予測より、各固相支持体は約100モル又は10⁸のオリゴマー鎖を有するであろう。洗浄効率を高めるためには、一般のペプチド合成樹脂ほど多孔性でない固相支持体が好ましい。これらの支持体は低い密度で成長鎖を有するであろうか、しかし数桁程度の容量の低下があったとしても、効率的なスクリーングのために十分なオリゴマー密度が供されうる。多孔性の低い支持体では、スクリーニング工程の際に、より高い割合のオリゴマーがレセプターへの結合のために接近可能となるであろう。また、多孔性の低い支持体は一反応から次への標識のキャリーオーバーを少なくし、それ故主たる（適切な）標識の測定の精度を高める。かかる固相支持体は任意の形態であってよいが、しかしながらそれらは大雑把に球形であることが好ましいであろう。この支持体はサイズ、形態又は組成において均一である必要はない；しかしながら、この支持体は通常、且つ、好ましくは均一であろう。一定の態様において、サイズが非常に均一である支持体が特に好ましい。しかしながら別の態様において、固相支持体の２種以上の明らかに異なる集団を一定の目的のために使用することができる。固相支持体は数多くの材料より構成されていてよく、主として任意の一定数の化学反応性基を付加する誘導化のための容量並びにオリゴマー合成及び標識付加の化学品との適合性に限定される。適切な支持材料にはガラス、ラテックス、重架橋ポリスチレンもしくは類似のポリマー、金又はその他のコロイド状金属粒子、及び当業界に知られるその他の材料が含まれる。ことわりのない限り、かかる固相支持体が誘導化されうる化学反応性基は関連のオリゴマーの固相合成のために一般に利用されているものであり、それ故当業者によく知られている。本発明の固相支持体は生きた細胞、ウィルス、又はクローニングベクター、例えばファージベクターもしくはプラスミドを含まない。 II．標識化合成オリゴマーライブラリーを製造するための方法本発明の好ましい態様において、該ライブラリーを構成するオリゴマーは各オリゴマーの配列を報告するように簡単に解読されうる同定用標識に付加されてもいる。この同定用標識はオリゴマーに、又はこのオリゴマーが付加されている固相支持体のいづれかに付加されていてよい。この付加は好ましくは、付加の前に各端に適切な官能基、即ち、支持体への付加のために適する一つの基と同定用標識への付加のために適する他の基を有するリンカーによるのが好ましい。他方、この同定用標識はオリゴマーの中に一体化されているモノマーに付加されているか、又はオリゴマーを固相支持体を結合させる同じリンカーに直接付加されていてよい。この後者の態様において、このリンカーは、付加される前に、同定用標識の付加のために適する第三の官能基を有している。同定用標識を含む合成オリゴマーライブラリーは多数の固相支持体それぞれの上に１本のオリゴマー配列及びこのオリゴマー配列を同定せしめる１又は複数の同定用標識を合成することによって製造される。この標識化合成オリゴマーライブラリーは（ａ）複数の反応槽にわたって支持体を配分する；（ｂ）各反応槽中の支持体を第一オリゴマーモノマー及び第一同定用標識モノマーに暴露させる；（ｃ）この支持体をプールする；（ｄ）複数の反応槽にわたってこの支持体を配分する；そして（ｅ）この支持体を第二オリゴマーモノマー及び第二同定用標識モノマーに暴露させる工程を含んで成る方法で合成される。前記した通り、本発明を固相支持体のない態様で実施することもできる；その態様においては、標識は合成すべきオリゴマーに直接付加されている。いづれの方法の段階も、一般に１又は数回繰り返すが、しかし通常は20回以下で繰り返す。該固相支持体はオリゴマーモノマー及び同定用標識に同時に、又は順に暴露（又はカップル化）させてよい。いづれの状況においても、支持体をプールし、そして第二オリゴマーモノマー及び第二同定用標識に暴露させる。前述した通り、この段階を一般に１〜約20回繰り返す。本明細書記載の発明は主にアミノ酸配列を含む分子の製造についてであるが、しかし本発明は当業界者に理解されうる通り、その他のオリゴマー及び成分−成分状況において合成できる任意の化合物のセットの製造に容易に適用できうる。別の態様においては、ライブラリーの全ての構成員を合成するために同一の固相支持体を利用するが、その構成員はスクリーニングに付する前に固相体から分離させておく。この態様において、標識化オリゴマーの合成は非常に大量なスケールの固定化ポリマー合成（VLSIPS〔商標〕）技術を利用して成し遂げられうる。米国特許第5,143,854号及びPCT特許公開第92／10092号（それぞれ引用することで本明細書に組入れる）を参照のこと。一連のオリゴヌクレオチドをVLSIPS（商標）チップの上で合成させるわけであるが、各オリゴヌクレオチドはジスルフィドのような切断性基によってこのチップに結合している。ある態様において、各オリゴヌクレオチド標識は自由端にてアミン基を有し、そしてピリミジン又はピリミジン及びプリンの類似体塩基のみを含む。更に、各オリゴヌクレオチドは増幅のための部位、即ち、 PCRプライマー部位及び任意的にシーケンシングプライマー部位を含む。各オリゴヌクレオチドの短い区画が、標識すべきオリゴマーのモノマー配列を固有にコードする。次に、例えばペプチドを、任意的に各ペプチドが標識に結合されるように、各オリゴヌクレオチド上の自由末端アミン基から合成する。オリゴヌクレオチド−ペプチドの完全な集合体をこのチップから切り離して可溶性標識化オリゴマーライブラリーを作り上げる。しかしながらより好ましくは、オリゴマーライブラリーをビーズ又は粒子上で構築する。ビーズの官能化の一方法を、ペプチド合成に適合する化学品及びオリゴヌクレオチド同定用標識の順々付加と共に図3．1−3．6に示す。ガラスビーズをアミノプロピルトリエトキシシランを用いて誘導化し、そしてベーターアラニンスペーサー基を活性エステル法によって複合させる。オリゴヌクレオチド標識は任意的に精製、ハイブリダイゼーション、増幅又は検出を助長するためにビオチン基を含みうる（Pierce lmmuno Technology Catalog and Handbook，1991を参照のこと；引用することで本明細書に組入れる）。市販のFmoc保護化アミノ酸及び標準のBOPカップリング化学品がペプチド合成のために利用される（The Pep tides ，前掲を参照のこと）。ペプチド合成において用いられるカップリング及び脱保護試薬に耐性な保護化ポリピリミジン（例えばＮ⁴−Ｂ_z−Ｃとしてシチジン保護）並びに／又はプリン類似体含有オリゴヌクレオチドを、マスクされたチオール基（このマスクは標識する前に選択的に除去されうる）を有するシステイン残基と同程度の低い頻度（即ち、0．1％）にて、成長するペプチド鎖の中に一体化されるマスクされていないチオール基に、マレイミド化学を利用して付加する。本発明の他の態様において、保護化ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを必要としないことがある。しかしながら、ペプチド合成中のオリゴヌクレオチド標識の完全性を維持するためには、合成すべき標識又はオリゴマーの分解を回避するよう保護基及び／又は合成ヌクレオチドの様々な組合せを利用することが必要でありうる。一般に、ポリピリミジンオリゴヌクレオチド標識は典型的なペプチド合成条件のもとで比較的安定であるが、しかしポリピリミジンヌクレオチド標識はPCRによる増幅にいくぶんやっかいでありうる。プリン塩基、又はペプチドカップリング（及び脱保護）条件に耐える能力について試験された類似体を標識の中に一体化せしめて所望の増幅効率を得ることが必要でありうる。本発明の目的のため、該標識は任意的に10〜90％、より好ましくは35〜50％、そして最も好ましくは33〜35％のプリン又はプリン類似体を含みうる。このオリゴヌクレオチドは任意的に標識のベーターシアノエチル基よりも優れた塩基安定性を有するリン酸保護基（例えばＯ −メチルリン酸）を含みうり、これはピペリジン分解に感化され易いであろう。かかるケースにおいて、ペプチド及びオリゴヌクレオチドの脱保護はトリフェノール、トリフルオロ酢酸及びエタノール性エチレンジアミンによる55℃での連続処理によって行われうる。別の態様において、アミノ酸のために光不安定性アルファーアミノ保護基を塩基不安定性側鎖保護基と一緒に利用し、そしてオリゴヌクレオチド標識のために標準のベーターシアノエチル保護基を利用する。別の態様において、改質又は合成プリン及びピリミジンの両者を含むオリゴヌクレオチドを、常用のFmoc／^tBu保護アミノ酸を用いてペプチドを平行に合成することがある。この方法においては、リン酸の酸素及びヌクレオシド塩基の環外アミンそれぞれの保護を供するためにＯ−アリル及びＮ−アリルオキシカルボニル基を利用することもできる（Hayakawaら、J ．Amer．Chem．Soc．112：1691-16 96（1990）を参照のこと；引用することで本明細書に組入れる）。燐の酸化のために温和な酸化体^tBuOOHを使用することにより、アミノ酸のメチオニン、トリプトファン及びヒスチジンの酸化を最少限とすることができる（引用することで本明細書に組入れるHayakawaら、Tetr ．Lett．27：4191-4194（1986）を参照のこと）。ホスホラミジット活性剤としてのピリジニウム塩酸塩／イミダゾールの利用はペプチド又はオリゴヌクレオチド上の窒素での低レベルの見せかけの反応を犠牲にして選択的５’−Ｏ−ホスフィレーションをもたらす。（引用することで本明細書に組入れるGryaznovとLetsinger，Nucleic Acids Research 20：1879- 1882（1992）を参照のこと）。強酸(例えばTFA)に対するプリンヌクレオチドの不安定さは、プリンヌクレオシド類似体、７−デアザ−２’−デオキシアデノシン及び７−デアザ−２’−デオキシグアノシンのホスホラミジットの利用により回避される（引用することで両方とも本明細書に組入れる、Barrら、BioTechniq ues 4 ：428-432(1986)及びScheit Nucleotide Analogs ：Synthesis and Biologi cal Function頁 64−65（John Wiley and Sons，New York、を参照のこと）。完全に集成したペプチド及びオリゴヌクレオチド鎖を、まずこの生成物をDMF 中の30％のピペリジンで処理してアミノ末端Fmoc基を除去することによって脱保護に付する。次に、アリル系保護基を、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム−クロロホルム複合体、トリフェニルホスフィン、及びｎ−ブチルアミン／ギ酸を含むTHFを用いて除去し、次いでTHF洗浄、水性ナトリウムＮ，Ｎ−ジエチルジチオカルバメート洗浄、そして水洗浄に付する。最後に、酸不安定性アミノ酸保護基を95：５のTFA/水で処理することにより除去する。その他の方法は、オリゴヌクレオチドとペプチドの平行集成の際に有効な直交保護も供する。これらの方法はリン酸基、並びにデオキシシチジン、７−デアザ −デオキシアデノシン及び７−デアザ−デオキシグアノシンの環外アミン上での、５’−０−脱トリチル化に用いられる３％のトリクロロ酢酸に耐性である十分に強健な酸不安定性保護基の利用；これらの基への光化学除去性保護基の利用；更にはかかる酸及び光不安定性基の組合せを含む（リン酸のための光不安定性保護基については、引用することで本明細書に組入れるBaldwinら、Tetr ．Lett．4 6 ：6879-6884（1990）を参照のこと；図５も参照のこと）。 III．任意のオリゴマーの配列の同定本発明はライブラリーにおける任意のオリゴマーの組成及び配列を同定するための方法を提供する。各オリゴマーが経た合成経路を追うことにより、任意のオリゴマーのモノマー配列を推定することができる。本法はライブラリー中の各オリゴマーを規定するモノマー反応及び対応の段階数を指標する、オリゴマーに同定用標識を組合せしめることを包括する。一連の合成段階（及び同定用標識の付加）の後、このオリゴマーの配列を決定するためにオリゴマーと一体化した同定様標識を「解読」する。例えば、各ビーズに顕微鏡で認知できるアルファベットと数字の標識を付加させることができる（図２参照のこと）：「A1」はビーズが段階１でＡ−モノマー反応に参加したことを意味し、「C2」はビーズが段階２でＣ−モノマー反応に参加したことを意味し、そして「B3」は段階３でＢ−モノマーが参加したことを意味し、以下同様である。３段階合成の終了時に、ビーズは３個の標識、例えばA1，C2及びB3が付加され、ビーズ上のペプチド配列がACBであることを示唆する。この手法は、種々のモノマーの生成物の数及び合成段階の回数（本例においては９図）とほぼ同じ数の異なる同定用標識を必要とする。同定用標識の数は、シンボルが段階順、Ａ，Ａ−Ｃ，Ａ−Ｃ−Ｂで互いに結合していくなら減らすことができる。この場合、モノマーと同じ数の同定用標識のみが必要とされる。同定用標識はペプチドと全く同じように作り、これによりどのモノマーをどの付加段階で付加したかの記録が保存される。従って、同定用標識は個々のライブラリー構成員又は固相支持体が受けた各モノマー反応を同定せしめ、そして各モノマーが付加された合成系列における段階を記録せしめる。この標識はモノマー付加反応の前、最中又は後に、同定様標識のタイプ、付加の態様及びオリゴマー合成の化学品に好都合、且つ、適応するように付加されうる。同定用標識は特定のモノマー付加工程を受けた固相支持体が物理的に一緒になっているときに付加され、従って次のプール工程の前に基として標識する。むろんあるケースにおいて、オリゴマーのうちのわずかな数のモノマー単位しか変更されていないとき、ペプチドにおいて数個のアミノ酸のみを変えることを要望するときと同様に、オリゴマー間で変更されているモノマーのみを同定することが必要とされるであろう。例えば、長さ６〜12個のアミノ酸のペプチドにおいて３〜６個のアミノ酸だけ変えることを要望する、又は長さがアミノ酸50個までのポリペプチドにおいて５個ぐらいの少ない数のアミノ酸を変更することを要望する場合がある。各ペプチドの配列は各固相支持体に、各配列の中で異なるアミノ酸のみを特定する同定用標識を施すことにより固有に同定でき、これは当業者に容易に明らかとなるであろう。かかるケースにおいて、全ての固相支持体は共通のモノマー単位の付加のために同一の反応槽の中に残っており、そして異なるモノマー単位の付加のために種々の反応槽に配分される。該同定用標識は様々なメカニズムを介して、即ち、結合性分子を介して直接的に、又はこのオリゴマーが合成されている固相支持体を介して一体化されうる。この後者の態様において、標識を別の固相支持体に、即ち、オリゴマーが合成されている固相支持体に次に結合させるものに付加させておくこともできる。 IV．同定用標識のタイプ該同定用標識は任意の認識可能な特色、即ち、例えば、顕微鏡で識別できる形態、色、光学密度等；光の示差的吸収性もしくは放射性；化学反応性；磁気的もしくは電子的暗号型であるが；又はその他の方法で所望の情報により個別にマークされた特色であり、そして１（又は数個）の固相支持体のレベルにおいて解読されうるものである。ある態様において、ライブラリーにおける各ビーズ又はその他の固相支持体は様々な蛍光物質、又はその他の発光型分子を含み、そのスペクトル特性は変化でき、それ故情報の保存に利用できる。かかる態様において、ビーズは様々な蛍光物質を含み、それぞれは選択的に光退色されることができ、それ故蛍光又は減縮蛍光を発することができなくなっている。各カップリング工程中、ビーズは１又は複数のタイプの蛍光物質を光退色させる（又はさせない）ために照射に付する（又は付さず）、それ故合成されたオリゴマーにおけるモノマーの同定が記録される。引用することで本明細書に組入れるScience 255：1213（1992年３月６日）を参照のこと。顕微鏡で同定できる標識を、認知できる種々のサイズ、形、又は色、又はバーコードでラベルされた小さなビーズとして構築することができる。この標識は「装置測定可能」なルミネッセンス又は放活活性ラベルでありうる。この同定用標識は暗号化可能な分子構造であってもよい。この情報は分子のサイズ（例えばポリマーの長さ）又は組成で暗号化されうる。この後者の標識のタイプの最良の例は核酸配列、即ち、天然又は改質塩基から集成したRNA又はDNAである。合成オリゴデオキシリボヌクレオチドは極めて好ましい情報保有同定用標識である。オリゴヌクレオチドは天然の高密度情報保存媒体である。モノマータイプの同定及び付加の段階は短いオリゴヌクレオチド配列において容易に暗号化され、そして例えば各ペプチドビーズに付加される。１個のビーズを例えばレセプター結合のためにスクリーニングにより単離したとき、付加されたオリゴヌクレオチドは例えばPCRのような方法により（引用することで本明細書に組入れるPCR Pro tocols ：A Guide to Methods and Applkations ．（Innis，M.，Gelfand，D.，Sn insky，J．とWhite，T．のAcademic Press，San Diego 1990）を参照のこと）、又はその他の核酸増幅技術、例えばリガーゼ連鎖反応及び自己持続型配列レプリケーション系のような方法により増幅できる。増幅生成物は容易にシーケンス化できるか、又はそうでなければビーズ上のペプチドの種類を解読するために同定されうる。この目的のため、配列特異的プローブハイブリダイゼーションによるシーケンシングを含む様々なシーケンシング法のいづれかを利用することができる。他方、情報はオリゴヌクレオチドの配列ではなく、又はそれに加えて、長さで暗号化されうる。オリゴマーへの特定のモノマーそれぞれの付加を表わすのにオリゴヌクレオチドの長さのみを利用するとき、オリゴマーの種類は、前記したようにオリゴヌクレオチドを増幅させ、そしてポリアクリルアミドゲル電気泳動又はキャピラリー電気泳動を含む様々なサイズ選別技術のいづれかを介してラベルを同定することによって解読できる。同定用標識としてオリゴヌクレオチドを利用するのにいくつかの方法がある。このオリゴヌクレオチドは対応のオリゴマー（例えばペプチド）合成工程の前、最中又は後に塩基毎に集成できうる。塩基毎の合成の一ケースにおいて、各段階のための標識は単独のヌクレオチドであるか、又はたいてい非常に少ない数のヌクレオチド（即ち、２〜５個）である。この手法は、オリゴマーと平行して成長するオリゴヌクレオチド鎖の線状配列における段階の順序を保存する。平行合成段階（例えばオリゴヌクレオチドとペプチド）の化学的調和性を維持するため、標準の合成化学を改質させることができる。塩基一塩基集成の一変異態様はブロック−ブロック手法である；５〜10個又はそれより多くの塩基のヌクレオチドの暗号化セット（「コドン」）を保護化活性型ブロックとして付加することである。各ブロックはモノマー型情報を眉し、そして付加の順序はモノマー付加反応の順序を表わす。他方、このブロックはオリゴマーの合成段階数及びモノマーのタイプの情報を暗号化しうる。各段階において、増幅プライマー部位、モノマー特異的情報及び反応順の情報を含む、10から50から150塩基の長さの保護化（又は未保護型）オリゴヌクレオチドを付加させることもできる。一連のｎ回のオリゴマー合成工程の終了時には、各オリゴマー配列に一体化されたｎ種の異なるオリゴヌクレオチド同定用標識の暗号セットができるであろう。リガンド活性を有するオリゴマーを同定した後、一体化したオリゴヌクレオチドをPCRにより増幅させ、次いでオリゴマーの種類を解読するためにシーケンス化に付する。Ｖ．オリゴマーへの同定用標識の連結該同定用標識を、オリゴマーの合成を可能とし、且つ、オリゴヌクレオチド同定用標識の付加又は合成を可能とするように官能化された合成支持体の表面上の化学反応性基（例えばマスクされていないチオール又はアミン）に付加させてよい。この標識はほんの一部のオリゴマー鎖に一体化されているモノマーに；又は少数のオリゴマー鎖上のキャップとして；又は固相支持体にオリゴマー鎖を連結せしめるリンカー上の反応性部位に付加させてよい。一態様において、該固相支持体は２種類の異なる又は「直交」型の保護基を用いて保護される化学反応性基を有するであろう。従って固相支持体を第一脱保護剤又は活性剤に暴露させ、例えばオリゴマー合成部位として寄与する化学反応性基からこの第１タイプの保護基を除去せしめる。第一モノマーとの反応の後、次にこの固相支持体を、第２タイプの保護基を除去する第二活性剤に暴露して、例えば同定用標識の付加部位として寄与する化学反応性基を暴露させる。この活性剤の一方又は両方とも、この支持体と接触している溶液の中にあってよい。別の態様において、オリゴマーと固相支持体とを連結するリンカーは第２タイプの保護基により保護されている化学反応性基を有しうる。第１モノマーとの反応の後、このリンカー及び「成長中」のオリゴマーを保有する固相支持体は、この第２タイプの保護基を除去する第２活性に暴露させて、同定用標識を固相支持体に直接付加させるのでなく、リンカーに直接付加させる部位を暴露させる。活性剤又は脱保護剤を、多数の異なる構成員を有する合成ペプチドライブラリーを製造する方法に組込むとき、各構成員は種々の単独のペプチド配列に付加されている固相支持体及び前記ペプチド配列を同定するオリゴヌクレオチド同定用標識を含んで成り、この方法はａ）複数の反応槽にわたって固相支持体を配分する；ｂ）この固相支持体を各反応槽中の溶液と反応させ、次いで順に（１）この固相支持体から第１タイプの保護基を除去する第１活性剤；（２）第１アミノ酸又はペプチド（このアミノ酸又はペプチドを前記固相支持体に、前記第１タイプの保護基が除去されている部位においてカップルさせるため）；（３）この固相支持体から第２タイプの保護基を除去するための第２活性剤；及び（４）第１ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド標識（この標識を前記第２タイプの保護基が除去されている部位にカップルさせるため）で処理する；ｃ）固相支持体をプールする；ｄ）プールした固相支持体を複数の反応槽にわたって配合する；そしてｅ）段階（ｂ）を繰り返して第２アミノ酸又はペプチドと第２ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド標識を前記固相支持体にカップルさせる；ことを含んで成る。前述した通り、本発明は固相支持体のない態様において実施することもでき、従って標識を合成すべきオリゴマーに直接（又はリンカーを介して）付加させる。ライブラリーのサイズ及び組成はカップリング段階の数及び合成の際に用いたモノマーにより決定されるであろう。当業者は、いづれの態様においても標識又はモノマーのいづれをもまずカップルさせてよいことを標識しているであろう。別の可能な態様は、２個の固相支持体、例えば物理的に互いに連結し、一方がオリゴマーのための合成部位（又はリンカー）を有し、そして他方が同定用標識のための付加部位（又はリンカー）を有するビーズの利用である。この取り合わせはオリゴマー及び同定標識の個別の「ゾーン」への分離を可能とし、そして付加のための広範囲にわたる種々の化学反応性基及び化学品の使用を可能とする。この固相支持体は別々に誘導化して、そして全て又はほとんど全ての合成固相支持体が標識付加固相支持体を伴って有することになる条件のもとで連結させる。この固相支持体の様々なサイズ、例えば複数の（又は多数の）小型の標識付加ビーズが連結している大型合成ビーズでありうる。ある態様において、この第１固相支持体は少なくとも１個の付加アミノ酸を有し、そして第２固相支持体は少なくとも１個の付加ヌクレオチドを有するであろう。２個のビーズを連結させる態様はオリゴマー合成の化学品により拘束される。ビーズを連結せしめる最も自明な手段は各種の固相支持体上の主要化学反応性基と相互作用するヘテロ二価架橋剤（かかる試薬の例は、Immuno Technology Cata log and Handbook 頁E10-E18(1991)を参照のこと）を伴う。 VI．同定用標識の情報の暗号化オリゴヌクレオチド同定用標識に用いる塩基の選択はオリゴマー合成化学品により指示される。例えば、ペプチドを脱保護せしめる強酸の使用は核酸を脱プリン化せしめるであろう。従って、ペプチド成分のために標準の化学品を用いるとき、ピリミジンＣ及びＴを二重コードで用いることができる。それ故、好ましい態様において、同定用標識はオリゴピリミジン配列であろう。別の態様において、プリンヌクレオチドの強酸に対する不安定さはプリンヌクレオシド類似体、例えば７−デアザ−２’−デオキシアデノシン及び７−デアザ −２’−デオキシグアノシンの利用を通じて解消されうる（Barrら、BioTechniq ues 4 ：428-432(1986)及びScheit Nucleotide Analogs ：Synthesis and Biologi cal Function 頁64−65（John Wiley and Sons，New York）(両者とも引用することで本明細書に組込む)を参照のこと）。これら又はその他の類似体の利用は二進コード化系と異なり四進コード系又はその他の利用を可能とするであろう。オリゴヌクレオチド同定用標識からの情報検索は様々な暗号化法を通じて可能であり、そのうちの２通りを下記する。第１において、オリゴマー配列情報はオリゴヌクレオチドの長さにおいてある程度暗号化される。オリゴマー合成における一定の段階において付加された種々のモノマーそれぞれ固有の長さのオリゴヌクレオチド標識により表わされうる。このオリゴヌクレオチドはオリゴマー合成における一定の段階数に固有な増幅部位、例えばPCRプライミング配列を固有に含んでいる。配列における任意の一定の位置でのオリゴマー組成の決定は従って、合成における段階に特徴的なPCRプライミング配列を用いる標識の増幅、及び当業者に周知の技術、例えばゲル又はキャピラリー電気泳動（標準品として標識用オリゴヌクレオチドを使用）を利用する増幅生成物のサイズ選別を包括する。この態様はリード配列に関係する化合物のライブラリーの作製を所望する際に特に有用である。アナログ化すべき部位を合成する段階中にのみ標識を必要とする。長さに加えて、オリゴマー配列情報はオリゴヌクレオチド標識を含んで成る塩基配列においてコード化されることもできる。このタイプの暗号化は異なるオリゴヌクレオチド標識を各カップリング段階にて付加せしめる態様においてのみでなく、オリゴヌクレオチド標識を各カップリング段階にて伸長せしめる態様においても有用である。例えば、図４に示す通り、約100個の塩基に至る（又はそれより若干長い）オリゴヌクレオチドの利用が可能であり、それぞれは下記のような７つの領域を有する。領域１は３’−PCRプライマー部位（20〜25塩基）である。この部位はPCRによる増幅を誘発するために別のPCR部位（オリゴヌクレオチドの５’末端にて）と一緒に用いる。その他の増幅法も利用できる。領域２は「段階特異的」DNAシーケンシングプライマー部位（15〜20塩基）である。この部位は合成系列における特定の順番の段階に特異的である。特定の段階において全てのビーズに付加した全てのオリゴヌクレオチドは共通してこの配列を有するであろう。各順番の段階はこの段階を示す特異性の高いプライマー部位を有するであろう。領域３はスペーサー（20〜30塩基）である。様々な長さ、しかしながら好ましくは20〜30塩基の長さのスペーサーセグメントは、モノマーの暗号化又は同定領域を通じて良好な「解読」を供するようにシーケンシングプライマー部位から十分に離れたコード領域に位置する。領域４はモノマー同定用標識である（８塩基）。この鎖における各塩基は１ビットの二進コードであり、ここで例えばＴ＝０そしてＣ＝１である。段階特異的同定用標識の各セットは８塩基より成り、８つの位置それぞれにおいて１（Ｃ）又は０（Ｔ）である。これらは、種々の位置での「オン」又は「オフ」に設定されたスイッチと考えられうる。各モノマーのタイプは１〜８つのこれらの「スイッチ」の複合により暗号化される。領域５は段階番号情報領域（４塩基と、領域の差別化のためのいづれかの側上の２塩基）である。この短い鎖の中の４ビットは段階番号を暗号化する。これはシーケンシングプライマーにとっては余計であるが、適切なプライマーが利用されたか、又正しい段階が解読されたかを確認するのに利用できる。領域６はモノマー同定用領域（８塩基）の反復である。この領域は領域４と同一の情報を有しており、そしてモノマーの種類を確認するために用いられる。この第２モノマー暗号化領域を設けることは、良好なシーケンシング「解読」が獲得できるであろう確率も高める。領域７は５’PCRプライマー部位（20〜25塩基）である。この部位は配列の増幅のための第２PCRプライマーのアニーリングのための部位を担う。これらの７つの特徴を有する（そのうちのいくつかは任意的である）オリゴヌクレオチドの長さは一般に75〜125の塩基であろう。８ビット方式は256種のモノマーのタイプを暗号化できる。段階数は手持ちのオリゴヌクレオチドの段階特異的セットの数（１セット当り８）により決定されうる。10セット（80オリゴ）では、10単位の長さに至るオリゴマーへと集成される256種までのモノマーを暗号化できる（それ故、256¹⁰＝1．2×10²⁴のオリゴマー配列までの暗号化能力を供する）。コード化同定用標識は、各モノマーが特定の二進値を示すように利用できうる（例えばAla＝00000001，Gly＝00000110等）。適切なオリゴヌクレオチドを正しい二進コードを供するように組合せる。 VII．同定用標識情報の回収及び解読特定のビーズをレセプタースクリーニング実験において単離するとき、このビーズは：限界希釈、マイクロマニピュレーション、又は好ましくは蛍光活性化セルソーティング（FACS）を含む数多くの手段により個々に分けられうるか、本発明に関しては、FACSがより正確な「蛍光活性化オリゴマー又は固相支持体ソーティング」である（Methods in Cell Bidogy，第33巻（Darzynkiewicz，Z．とCris sman，H．A．編，Academic Press）；及びDanglとHerzenberg，J ．Immunol．Met hods 52 ：1−14（1982）（共に引用することで本明細書に組入れる）を参照のこと）。所望のビーズが単離できたら、ビーズ上のオリゴマーの配列を確認するために標識を同定する必要がある。標識同定を助長するには、様々な選択がある。例えば、標識をビーズから、もしこの標識がオリゴヌクレオチドならシーケンシング又はハイブリダイゼーションにより直接読み取ることができる。標識同定を助長するためにオリゴヌクレオチドを増幅することもできる。一個の固相支持体又はオリゴマーにより保有されるオリゴヌクレオチド同定用標識はインビボでクローニングにより、又はインビトロで例えばPCRにより増幅できる。検出限界が100分子の桁であるなら、ビーズ上に各オリゴヌクレオチド標識の少なくとも100以上のコピーが必要とされるであろう。標識のコピーは任意の様々な方法（いくつかの方法を以下に記載してある）によって一本鎖オリゴヌクレオチド、二本鎖核酸、又は一本鎖及び二本鎖核酸の混合物のいづれかとして作られ、そして増幅材料をシーケンス化する。各モノマー付加段階において個別のオリゴヌクレオチド標識を付加する本発明の態様において（各工程で存在している標識を伸長するのとは異なる）、全ての標識を一度に増幅し、その後増幅材料をオリゴマー合成段階（各タイプの標識のための種々のシーケンシングプライマーを用いて）と同じ数の個々のシーケンシング反応へと分ける。この態様において、各標識が他の標識と独立して増幅されうるように適当なプラマイー配列の選択によってデザインすることもできうる。シーケンシング反応を実施し、次いで標準のシーケンシング用ゲル上で流し、そして得られる配列情報で示されるコードからオリゴマー配列を推定する。他の手法は一般のPCRプライマー及びシーケンシングプライマー（シーケンシングプライマーはPCRプライマー部位と完全に又は部分的に重複していることさえある）を用い、そしてビーズ由来のオリゴヌクレオチドにおける各段階特異的配列に相補的なオリゴヌクレオチドに対するハイブリダイゼーションによって段階を同定することである。１セットのシーケンシング反応を１個のビーズに由来する増幅化オリゴヌクレオチド全てに基づいて行い、そして反応生成物をゲル上の１組のレーンに流す。次にこの反応生成物を適当なハイブリダイゼーション膜に転写し、そして一段階に特異的なプローブにハイブリダイズさせる（引用することで本明細書に組入れるManiatisら、 Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY（1982）を参照のこと）。得られる信号の検出の後、プローブを膜から洗い出し、そして別の段階に特異的なプローブをハイブリダイズさせる。引用することで本明細書に組入れる EPO公開第237,362及びPCT公開第89／11548号に記載の手順を利用することもできうる。平行ハイブリダイゼーションは逐次ハイブリダイゼーションに代わる方法である。このシーケンシング反応をペプチド合成段階数と同じ数のアリコートへと分け、そしてそれぞれをシーケンシング用ゲル上の別々の組のレーンに流す。その反応生成物を適当な膜に転写した後、その膜を個別の組のレーンこどに切る。各組のレーンを次に複数の段階特異的オリゴヌクレオチドプローブのうちの１つとハイブリダイズさせる（引用することで本明細書に組込む「Uniplex DNA sequen cing」と「Multiplex DNA sequencing」Plex Luminescent Kits Product Catalo g を参照のこと）。前述した通り、１個の合成固相支持体（又は標識を保有する付加ビーズ、又は「ウェル」の中の溶液）は各オリゴヌクレオチド標識の数百のみのコピーを含んで成りうる。これらの標識は例えばPCR又はその他の当業者に公知の手段によって増幅されて正確にシーケンス化すべき十分なDNAを供することができる。オリゴマーを解読する能力は有用なオリゴヌクレオチド同定用標識の数、有用な標識より達せられうる増幅のレベル及びDNAを増幅せしめるシーケンシングの精度に依存する。最も一般的に利用されるインビトロDNA増幅法はPCRである。その他の増幅法には例えば、核酸配列をベースとする増幅（引用することで本明細書に組入れるCo mpton，Nature 350：91-92(1991)）、及び増幅化アンチセンスRNA(引用することで本明細書に組入れるVan Gelderら、Proc ．Nat．Acad．Sci．USA 85：7652-765 6(1988))、及び自己持続型配列レプリケーション系（引用することで本明細書に組入れるGautelliら、Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 87：1874-1878を参照のこと）が含まれる。オリゴヌクレオチド同定用標識のPCR増幅を利用すると、「PCR生成物の夾雑」に遭遇することがあり、これはあるPCR反応の生成物が、同一のPCRプライマー結合部位を有する別の標識を増幅するためにデザインされたその後のPCR反応混合物に夾雑してしまうことに原因する。この問題は、その生成配列の中に不安定さを導入し、そして先の反応からキャリーオーバーされた潜在的な夾雑物を破壊するようにその後の反応体を処理することにより防げうる。PECI and Life Technd ogiesにより市販のキットが販売されているこの手法の具体例は生成物にdUMPを導入することにある。新たなPCR反応物それぞれをウラシル−Ｎ−グリコシダーゼで処理することは、存在している全てのdU−含有DNAを分解し、夾雑物の増幅を阻止する。dUを含まない（dUのみ）鋳型DNAは影響されない。むろん、増幅を始める前にグリコシダーゼを除去又は不活性化させる。ペプチド合成のための前述のいくつかの標識はピリミジンしか含まない異常な特徴を有している。ウラシルグリコシダーゼ手法（引用することで本明細書に組入れるPerkin Elmer Cetus Instruments（PECI） Catalog，Almeda(1991)）が、Ｔ（又はＵ）を含む生成された鎖の半分にしか有効でないことを意味する。dUMPを相補性プリンのみの鎖に導入することはできない；しかしながら、プリン鎖は酸性脱プリン化及び骨格のアルカリ媒介分裂に対して感受性である。これらの処理の組合せは生成物の夾雑についての問題を大いに小さくすることができる。キャリーオーバー夾雑を防ぐ他の手法には、オリゴヌクレオチド標識への制限部位の導入（ポリピリミジン標識のためにはEar Ｉが利用できうる）、及び標識で夾雑されたと予測される反応物の増幅の前に対応の制限酵素で消化することを包括する。この方法は増幅すべき標識が酵素によって切断されないであろうとき（一本鎖オリゴヌクレオチド標識の場合はこれが一般的である）にのみ有効である。増幅化DNAのシーケンシングのためには、一本鎖鋳型を作製することが通常所望される。この作製はいくつかの手段のいづれかによって成し遂げられうる。かかる手段の一つは非対称性PCRであり、この方法ではある鎖を他のものより10〜1 00倍のレベルへと増幅させるために過剰量のいづれかのプライマーを用いている（例えば、引用することで本明細書に組入れる米国特許第5,066,584号を参照のこと）。一本鎖の鋳型を供するその他の手段はいづれかのプライマーをビオチニル化し、次いで得られる鎖を固定化ストレプトアビジンへの吸着によって精製又は取り出すことによる（引用することで本明細書に組入れるPierce Immunotechn ology Catalog and Handbook ，1991）。更なる別の手法は、RNAポリメラーゼプロモーターからRNA転写体（一方の鎖のみを表わす）の作製、及び逆転写酵素によるこの転写体のシーケンシングを包括する（引用することで本明細書に組入れるSommerら、第25章、PCR Protcols ：A Guide to Methods and Applications前掲）。標識がピリミジンヌクレオチドのみから成るとき、全てのプリン鎖を酸／塩基処理によって削除してシーケンシングのためのピリミジン鎖のみを残すことができる。各段階特異的オリゴヌクレオチドのための個別のシーケンシングプライマーの利用は、各段階特異的プライマーのための個別の常用のシーケンシング反応を必要とする。示差的にラベルされたプライマーを用いることは、単独の固相支持体から同定用標識を単独の反応においてシーケンス化すること、及びゲル上で一組のレーン（２レーン）において流すことを可能とする。この目的に適切な認識可能な蛍光物質でラベルされた市販のプライマーがある(引用することで本明細書に組入れるABI Catalog)。現在市販されている一連のケミルミネッセンスも利用できうる（引用することで本明細書に組入れるBronsteinら、BioTechniques 8： 310-314(1990)）。本発明に用いることのできうるDNAシーケンシング酵素には、Taq DNAポリメラーゼ、Ｅ．コリ(E．coli)ポリメラーゼＩ（又はクレノウフラグメント）、T7ポリメラーゼ、シーケナーゼ（商標）及びシーケナーゼII（商標）（改良型T7 DNA ポリメラーゼ）、Bst DNAポリメラーゼ及び逆転写酵素（AMV，MMLV，RSV等由来；引用することで本明細書に組入れるUSB Enzymes for DNA Sequencing，U．S． Biochemical Corp．1991，Cleveland OHを参照のこと）が含まれうる。オリゴヌクレオチド標識の配列は高精度DNAハイブリダイゼーション技術により同定されもする。従って、オリゴヌクレオチドによる非常に大量スケールの固定化ポリマー合成が有用でありうる（引用することで本明細書に組込むPCT特許公開第92／10587号及び第92／10588号を参照のこと）。 VIII．合成オリゴマーライブラリーによるレセプターのスクリーニング本発明の標識化オリゴマーライブラリーは広範囲にわたる用途を有するであろう。例えば、これらのライブラリーはタンパク質に結合するペプチド及び核酸配列の決定、配列特異性結合薬剤の発見、抗体により標識されるエピトープの同定、並びに臨床及び診断用途のための様々な薬剤の評価、更にはそれらの組合せにおいて利用できうる。例えば約５個のアミノ酸ほど短いペプチドがレセプター結合の研究において有用でありうる。小型ビーズ上に表示される合成オリゴマーはレセプターへの結合能力についてスクリーンされうる。このレセプターは合成オリゴマーのライブラリーと接触して、レセプターとこのレセプターに結合できるオリゴマーとの結合構成員を形成できる。この結合構成員を次に同定できうる。例えば、レセプターはイムノグロブリンでありうる。表層上にリガンドを表示している個々のビーズの選別のための技術は、細胞表層抗原又はレセプターを発現する哺乳動物細胞のクローニングのためのFACS法に似かよっている。従って、ビーズを選択及び選別する方法はセルソーティングの当業者に容易に理解されるであろう。例えば、レセプターを蛍光標識でラベルし、次いでオリゴマーを表示しているビーズの混合物とインキュベートすることができる。未結合又は非特異的結合レセプターを洗い出した後、ビーズを選別し、そして高い蛍光を示す個々のビーズを同定、且つ、物理的に単離するためにFACS を用いることができうる。他方、アフィニティー吸収着技術を本発明のライブラリーに関連して用いることができる。ビーズの混合物をレセプターが固定化されている表層に暴露することができる（引用することで本明細書に組入れるPCT特許公開第91／07087号を参照のこと）。未結合のビーズを除去するために洗浄に付した後、オリゴマー／レセプター相互作用の傾向を低める条件（例えば低pH）を利用して表層に結合したビーズを溶離させることができる。アフィニティー吸着の工程は所望するなら溶離させたビーズで繰り返してよい。最後に、個々のビーズを例えば限界希釈、FACS、又は細胞を小さな起常磁性ビーズに複合されているレセプターとインキュベートし、次いでレセプターにとってのリガンドを発現する細胞を強力磁石を用いて抜き出すことに類似する方法（引用することで本明細書に組入れるMiltenyiら、Cytometry 11：231-238（1990）を参照のこと）によって物理的に分ける。磁気選択細胞はFACSを用いて更に分析及び選別できうる。放射性ヌクレオチドもレセプターのラベルに寄与しうる。他方、本発明は、様々なスクリーニング法に用いることのできる可溶性標識化オリゴマーのライブラリーを作製するのに用いることができる。例えば、該オリゴマー配列はオリゴマー配列を暗号化する同定用標識を有するビーズ上で合成できる。微小ビーズを、シリコン又はその他の適当な表面で「ナノ集成」（nanofa bricated）されている個々の区画又はウェルの中に入れる。そのオリゴマーはビーズから切断され、そしてビーズ及び付加された同定用標識と一緒にその区画の中に含まれ続ける。一態様において、その底面をレセプターでコートし、そして結合バッファー及びそのレセプターに対する蛍光ラベルされた既知のリガンドの添加の後に、このレセプターに対する新たなリガンドについての溶液相競合アッセイが有効に得られる。レセプターに対する蛍光ラベルリガンドの結合は固定化レセプターの単層の焦点イメージにより評価される。レセプター表層の上に弱い蛍光を有するウェルは、放出されたオリゴマーがラベルリガンドと競合していることを示唆する。競合を示すウェル中のビーズ又は標識を回収し、そしてこのオリゴヌクレオチド標識を増幅させ、そしてそのオリゴマーの配列を明らかにするためにシーケンスに付する。ビーズは、それをウェル当り平均して１ビーズをもたらすのに十分な容量の添加バッファーに分注することによってウェルの中に入れる。一態様において、ビーズの溶液をウェルの上方のリザーバーに入れ、次いでビーズをウェルの中に沈み入るようにさせる。ビーズからのオリゴマーの切断は化学的又は熱的システムを用いて成し遂げられうるが、しかし光分解システムが好ましい。陽性ウェルからの同定用標識化ビーズの回収は個々のビーズを奪取するマイクロマニプレーターによって行われうる。しかしながら、好ましい態様は蛍光標識で予めラベルされているビーズの利用を包括する。適切な波長のレーザーを次に陽性ウェルの中にのみある滞在ビーズを退色させるために用いる。次に全てのビーズを一まとめに取り出してFACSにより選別し、退色陽性物を同定する。一体化した標識を次に増幅し、そして解読する。本アッセイの変異方法において、オリゴマーと標識を、次に固相支持体に結合させる共通のリンカーに付加させて合成することができる。ビーズをウェルの中に入れた後、ビーズからリンカーを切断させて溶液中の標識化オリゴマーを生成することができる。固定化レセプター、例えばビーズに結合したレセプター又はウェルの表面に固定化したレセプターは、オリゴマー及び蛍光ラベルリガンドとの競合アッセイでスクリーンできる。ビーズを回収する代りに、固定化レセプターを保有するビーズを回収し、そしてFACSを利用してビーズを選別して陽性体（ラベル化リガンドとのライブラリーオリゴマーの競合により蛍光の消失したもの）を同定するか、又はレセプターでコートされたウェル表層から発せられる蛍光を決定することができる。次に一体化した同定用標識を増幅して解読することができる。本手法の第３の変異方法において、前述した通りでの固相支持体からの連結オリゴマー及び標識の切断、もしくは前述のVLSIPS（商標）法による合成により製造したか、又は固相支持体なしで溶液中で合成した可溶性標識化オリゴマーを固定化レセプターとインキュベートする。洗浄工程の後、結合し、標識されているオリゴマーを例えば酸処理によってレセプターから切り放す。結合オリゴマーの標識を増幅させ、そして解読する。 IX．オリゴマー合成及び標識のための自動化装置いくつかのモノマーセット（例えばアミノ酸）のカップリング段階は長めのインキュベーション時間を必要とし、そして平行においての数多くのモノマー付加の実施のためのシステムが所望される。これは50〜100の平行反応（チャンネル）を可能とする自動化装置で成し遂げられうる。かかる装置の合成固相支持体の反応混合物又はスラリーをプログラム可能な制御のもとで、プール、混合及び再分注する様々なチャンネルに分注することができる。利用すべき多種多様なモノマー及び標識の数（一態様において10段合成のため 80個までの）に対する数多くのリザバーに伴い、ペプチド合成装置は一般に同数の鉛管が必要とされる。標識分注能力は単純な情報の適当な標識混合物への変換及びこの混合物の分注を実行に移すであろう。必要ならば特別な混合物として、モノマー構成単位も分注してよい。反応物の撹拌、温度及び時間の制御を施してよい。適切に設計された装置はアッセイ目的のために100種までの特異的なペプチド1〜50mg（粗製）を生産することのできる多重チャンネルペプチド合成装置としても働きうる。引用することで本明細書に組入れるPCT特許公開91／17823号を参照のこと。実施例１．４種の蛍光標識化ペンタペプチドのガラスビーズ上での合成Ａ．ガラスビーズの誘導化直径３〜１０μｍの約0．5ｇのシリカビーズ(Polyscience)を10％の水性HNO₃ を還流させながら20分洗った。このビーズをペレット化し、そして蒸留水（5X）及びメタノール（3X）で洗い、そして125℃で12時間乾かした。ビーズをアセトン中の５％のアミノプロピルトリエトキシシランの溶液で10時間ボルテックスに付し、ペレット化し、そしてアセトン（2X）、エタノール（5X）次いで塩化メチレン（2X）で洗い、そして125℃で45分乾かした。ビーズをジイソプロピルエチルアミン（17μｌ，100μmole）を含むドライDMF(１ml)に懸濁し、そして蒸留水（1．5ml）中のFmoc−ｂ−アラニン、ペンタフルオロフェニルエステル（200mg ，420μmole，Peninsula Labs）の溶液を加えた。11時間ボルテックス処理した後、これらのビーズをペレット化し、次いでDMF(3X)及び塩化メチレン（2X）で洗った。ビーズを0.05molの４−ジメチルアミノピリジンを含むDMF中の10％の無水酢酸の溶液で処理して全ての未誘導化アミノプロピル基をキャップし、その後 DMF(2X)及び塩化メチレン（2X）で洗った。ビーズをDMF中の20％のピペリジンの溶液でボルテックスに付し、そしてFmoc−ピペリジン付加物の遊離を302nm(^e302 ＝7800M^-1cm^-1)での上清液の吸収スペクトルのモニターにより定量した。10μモルのアミノ基／ビーズのｇの程度の置換の推定がこれにより得られた。最後に、ビーズをエタノール（5X）及び塩化メチレン（2X）で洗い、その後85℃で12時間乾かした。Ｂ．Boc-Gly-L-Phe-L-Leu-OHの製造グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシン（552mg，1．5mmol，Bachem ）を蒸留水（10ml）及び１ＭのNaOH（1．5ml）を含む溶液に溶かした。この溶液を氷浴の中で冷やし、そしてｐ−ジオキサン（12ml）中のジー第三ブチルピロカーボネート（337mg，1．5mmol）の溶液で処理した。白色沈殿物が直ちに形成されたが、室温で４時間撹拌した後に再溶解した。この溶液を真空で乾くまで濃縮し、その残渣を水（５ml）に取り込み、そしてpHを１ＭのKHSO₄の添加により2．5に合わせた。この水性懸濁物をE_tOAc(2X，15ml)で抽出し、有機層を分け、そしてMgSO₄で乾かした。真空で溶媒を除去した後、その残渣をヘキサンで砕いて白色固形物としてのBoc-Gly-L-Phe-Leu-OHを得た（収量＝642mg，98％）。Ｃ．Gly-L-Phe-L-Leuビーズの製造 Boc-Gly-L-Phe-L-Leu-OH（44mg，0．1mmol）、ベンゾトリアゾール−１−イルホキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（44 mg，0．1mmol）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（14mg，0.104mmo l）をドライDMF(１ml)に溶かした。次にジイソプロピルエチルアミン（20μｌ， 0.115mmol）を加え、そしてこの溶液0.65mlをアミノ誘導化ガラスビーズ80mgを含むマイクロ遠心チューブに直ちに移した。シールしたチューブを3．5時間ボルテックスに付し、そしてこのビーズをペレット化し、そしてDMF(3X)及び塩化メチレン（2X）で洗った。次にこのビーズを塩化メチレン中の50％のトリフルオロ酢酸の溶液で30分脱保護に付し、塩化メチレン（2X）、エタノール（2X）次いで塩化メチレン（2X）で洗い、そして55℃で１時間乾かした。Ｄ．Gly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズ（SEQ ID NO：10）の調製 Fmoc−グリシンペンタフルオロフェニルエステル（46mg，0．1mmol）をジイソプロピルエチルアミン（17μｌ，0．1mmol）を含むドライDMFに溶かした。約0.6 5mlのこの溶液をマイクロ遠心チューブ中の20mgのGly-L-Phe-L-Leuビーズに加え、そしてこのビーズを３時間ボルテックスに付した。このビーズをペレット化し、そしてDMF(4X)、次いで塩化メチレン（2X）で洗った。脱保護をDMF中の20％のピペリジン溶液での3 0分間の処理で行った。このビーズをDMF(2X)、エタノール（2X）及び塩化メチレン（2X）で洗い、そして60℃で４時間乾かした。Ｅ．L-Pro-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの調製（SEQ ID NO：11） Fmoc−Ｌ−プロリンペンタフルオロフェニルエステル（50mg，0．1mmol）をジイソプロピルエチルアミン（17μｌ，0．1mmol）を含むドライDMF(１ml)に溶かした。この溶液約0.65mlをマイクロ遠心チューブ中の20mgのGly-Ｌ-Phe-L-Leuビーズに加え、そしてこのビーズを３時間ボルテックスに付した。このビーズをペレット化し、そしてDMF(4X)、次いで塩化メチレン（2X）で洗った。脱保護をDMF 中の20％のピペリジン溶液中での30分間の処理により行った。このビーズをDMF( 2X)、エタノール（2X）、次いで塩化メチレン（2X）で洗い、そして60℃で４時間乾かした。Ｆ．Gly-Gly-L-Phe-L-Pheビーズのフルオロセイン染色約5．4mgのGly-Gly-L-Phe-L-Pheビーズを450μｌの水性硼酸バッファー（pH8 ．5）に懸濁し、そして10μＭのフルオロセインイソチオシアネート(FHC)溶液54 μｌを加えた。1．5時間にわたるボルテックス処理の後、このビーズをバッファー（5X）、エタノール（2X）、次いで塩化メチレン（2X）で洗った。FACS分析は、有効なアミノ基の約10％がFITCで滴定されたことを示唆した。Ｇ．L-Pro-Gly-L-Phe-L-Leu及びFITCラベル化Gly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの混合物へのＬ−チロシンとビオチンの同時カップル化５mgのFITCラベル化Gly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズ及び５mgのL-Pro-Gly-L-Phe-L -Leuビーズを一本のチューブの中で混ぜ合わせ、塩化メチレン中の0．1mMのジイソプロピルエチルアミンの溶液と一緒にボルテックスに付し、そしてその懸濁物を２等分した。このビーズをペレット化し、そして一方にドライDMF(１ml)中のFmoc−Ｏ−第三ブチル−Ｌ−チロシンペンタフルオロフェニルエステル(59mg，95μmol)、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドビオチン（1．7mg，５μmol）及びジイソプロピルエチルアミン(17μｌ，100μm ol)を含む溶液を加えた。３時間ボルテックスに付した後、ビーズを蒸留水（2X ）、エタノール（2X）、塩化メチレン（2X）及びDMF(1X)で洗った。Fmoc脱保護はDMF中の20％のピペリジン溶液での30分間の処理により行い、そして第三ブチル側鎖保護基は塩化メチレン中の25％のトリフルオロ酢酸での30分間の処理により除去した。ペレット化したビーズを塩化メチレン（2X）、エタノール（2X）、次いでTBS(1X)で洗った。Ｈ．ビオチニル化L-Tyr-(Gly/L-Pro)-Gly-L-Phe-L-Leuビーズ（SEQ ID NO：12及びSEQ ID NO：13の混合物）のＲ−フィコエリスリン染色上記の（Ｇ）由来のビオチニル化Ｌ−チロシンビーズをTBS(0．5ml)に懸濁し、そして10μｌのＲ−フィコエリスリン−アビジンコンジュゲート（Molecular Probes）で30分間処理した。ペレット化ビーズをTBS(5X)で洗った。Ｉ．L-Pro-Gly-L-Phe-L-Leu及びFITCラベル化Gly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの混合物（SEQ ID NO：15とSEQ ID NO：14の混合物）へのＬ−プロリンとビオチンの同時カップル化 L-Pro-Gly-L-Phe-L-LeuとFITCラベル化Gly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの５mgの混合物を、ドライDMF(１ml)中のFmoc−Ｌ−プロリンペンタフルオロフェニルエステル(48mg，95μmol)、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドビオチン(1．7mg，５μmol) 及びジイソプロピルエチルアミン(17μｌ，100μmol)を含む溶液を処理した。３時間ボルテックス処理に付した後、ビーズをDMF(2X)、エタノール（2X）、塩化メチレン（2X）、次いでDMF(1X)で洗った。Fmoc脱保護はDMF中の20％のピペリジン溶液での30分の処理により行い、次いでコントロールとして、これらのビーズを塩化メチレン中の25％のトリフルオロ酢酸で30分処理した。ペレット化ビーズを塩化メチレン(2X)、エタノール（2X）次いでTBS(1X)で洗った。Ｊ．ビオチニル化L-Pro-(Gly/L-Pro)-Gly-L-Phe-L-Leuビーズのトリ−カラー(Tr i-Color)染色上記の（ｉ）由来のビオチニル化Ｌ−プロリンビーズをTBS(0．5ml)に懸濁し、そして20μｌのトリ−カラー：ストレプトアビジンコンジュゲート(Caltag La bs)で30分間処理した。ペレット化ビーズをTBS(5X)で洗った。Ｋ．モノクローナル抗体3E7に対するペプチドリガンドを含むビーズの選別モノクローナル抗体3E7をオピオイドペプチドベーターエンドルフィンに対して発生せしめた。MAb 3E7の結合特異性は化学的に合成したペプチドによる溶液アッセイによりよく特徴付けられている。ここで考慮しているペプチドの平衡結合定数（Kd）は下記の通りである：YGGFLは6．6nMであり、そしてYPGFL，PPGFL 及びPGGFLはそれぞれ＞１mMである；従って、ペプチドYGGFLのみこの抗体に対する感知できる親和性を有している。 YGGFL，YPGFL，PGGFL及びPPGFLのいづれか及び対応の標識（前記参照）を含むビーズの混合物を、コロイド状超常磁性マイクロビーズ（Miltenyi Biotec、西ドイツ）に予め複合させておいたモノクローナル抗体3E7を含むリン酸緩衝食塩水(PBS)に加えた。４℃で16時間のインキュベーションの後、3E7抗体に結合したビーズを強力磁石を用いて選別した。選別したビーズを次にフローサイトメトリーにより分析した。選別したビーズの分析は、それらがフルオロセインとＲ −フィコエリスリンの両方を含むことを示し、ペプチドYGGFLを表示しているビーズのみが3E7抗体により選別されたことを示唆している。実施例２：オリゴヌクレオチド同定物で標識した４個のペンタペプチドのガラスビーズ上での合成Ａ．同定用オリゴヌクレオチド（Ｉ）−（IV）の合成オリゴヌクレオチド同定用標識（Ｉ）−（IV）は下記に示す配列を有する。５ ’及び３’PCRプライマーに相補性の領域に下線を付した。段階特異的シーケンシングプライマーに相補性の領域を小文字で示す。本実施例には２段階ある。モノマーコード領域は太文字で示す：この場合、CT₇はGlyをコードし、TCT₆はL-Pr oをコードし、そしてTTCT₅はL-Tyrをコードしている。従って、オリゴ（Ｉ）− （IV）はそれぞれ２位においてGly、２位においてL-Pro、１位においてTyr、そして１位においてL-Proをコードする。ここで：B¹＝p-マレイミド-C₆H₄-(CH₂)₃-C(O)NH-(CH₂)₆-O-PO₂-O-、そしてB²＝C H₂-CH[(CH₂)₄-NH-ビオチン]-CH₂-O-PO₂-O-である。オリゴ（Ｉ）−（IV）を市販の（Sigma）DMT-O-Meホスホラミジットを用いABI PCR-メート（mate）合成装置で合成した。シチジンのＮ⁴−アミノ基をベンゾイル誘導体として保護した。５’末端（B1）及び末端から２番目の（B2）ホスホラミジットはそれぞれ各オリゴヌクレオチドについてＮ−MMT−Ｃ₆−アミノモディファイヤー(Clonetech)及びビオチンホスホラミジット(Glen Research)である。完全に保護されたＯ−メチルホスホトリエステルオリゴマーを、濃NH₄OHでの25 ℃で１時間の処理の助けを伴ってCPGから切断せしめた。この粗生成物をモノマーアビジン−アガロースカラム（Pierce）上でのアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、そしてその全長物質を２mMのビオチンで溶離させた。５’− MMT基を80％の酢酸での25℃での１時間の処理により除去し、次いでその溶液を乾くまでエバポレートした。その生成物をPBS,pH8．0に溶かし、次いでDMF中の5 0倍過剰量のスクシニミジル４−（p-マレイミドフェニル）ブチレート（Pierce ）で処理した。修飾された保護オリゴヌクレオチドをRP-HPLCにより脱塩し、凍結乾燥し、そして窒素のもとで保存した。 PCR及びシーケンシングのために用いたプライマーは通常通りに調製したものであり、そして下記に示す：Ｂ．同定用オリゴ（Ｉ）を保有するGly-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの調製５mgのGly-L-Phe-L-Leuビーズを、ドライDMF(１ml)中のFmoc-Gly-OH(99.95μm ol)、Fmoc-Cys(Npys)-OH(0.05μmol，Calbiochem)、ベンゾトリアゾール−１− イルオキシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(100μmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(100μmol)及びジイソプロピルエチルアミン(150μmol)を含む溶液で２時間処理した。このビーズをDM F(2X)、次いでメタノール（2X）で洗い、その後メタノール中の10mMのDTT溶液で 30分処理してシステイン残基を脱保護した。これらのビーズを氷冷メタノール（ 2X）です早く洗い、ペレット化し、次いでメタノール中の0．1mMのオリゴ（Ｉ）の溶液100μｌと20分反応させた。メタノール（2X）、次いでDMF(2X)で洗った後、ビーズをDMF中の20％のピペリジンで20分脱保護した。最後に、このビーズをD MF(2X)、メタノール（2X）、次いで塩化メチレン（2X）で洗い、そして45℃で１時間乾かした。Ｃ．同定用オリゴ（II）を保有するL-Pro-Gly-L-Phe-L-Leuビーズの調製５mgのGly-L-Phe-L-Leuビーズを、Fmoc-Gly-OH及びオリゴ（Ｉ）をそれぞれFm oc-L-Pro-OH及びオリゴ（II）に置き換えて上記の（ｂ）のように処理した。Ｄ．同定用オリゴ（III及びＩ／II）を保有する(OtBu)-L-Tyr-(Gly/L-Pro)-Gly −L-Phe-L-Leuビーズの調製（ｂ）及び（ｃ）に由来するビーズをプールし、次いで二等分した。一方を、 Fmoc(OtBu)-L-Tyr-OH及びオリゴ（III）に適宜置き換えて（ｂ）の通りに処理した。Ｅ．同定用オリゴ（IV及びＩ／II）を保有するL-Pro-(Gly/L-Pro)-Gly-L-Phe-L- Leuビーズの調製第２のプールを、Fmoc-L-Pro-OH及びオリゴ（IV）に適宜置き換えて前記の通りに処理した。Ｆ．ペプチドライブラリーの再構成及び脱保護（ｄ）及び（ｅ）に由来するビーズをプールし、そしてリン酸基、アミノ酸側鎖基及びヌクレオチド環外アミノ保護基を下記の通りに除去した。チオフェノール：トリエチルアミン：ｐ−ジオキサンの１：２：２の混合物で１時間処理し、続いてメタノール（2X）、次いで塩化メチレン（2X）でビーズを洗い、その後ビーズを95：５のトリフルオロ酢酸：エタンジチオールで５分処理した。メタノール（3X）で洗った後、ビーズを１：１のエチレンジアミン：エタノールで55℃で１時間処理し、次いでまずエタノール（2X）、次いでPBS(2X)で洗った。ビーズの集合体はライブラリーを構成し、そしてほぼ等量の４種の固定化ペプチド、YG GFL，YPGFL，PGGFL及びPPGFLを含んでいる。更に、各ビーズは、このビーズ上の第１及び第２アミノ酸の両方の同定を暗号化する２種の異なる113bpのオリゴヌクレオチド配列を有している。Ｇ．オリゴヌクレオチド同定用標識のPCR増幅個別の0．5mlのポリプロピレンチューブへのアフィニティー精製ビーズへのFA C分類の後、0．1μｇのサケ精子DNA（キャリヤーとして）を含むTBS 25μｌを各チューブに2XのPCR増幅用バッファー（PECI）25μｌと一緒に加えた。2Xのバッファーは100mMのKCl，20mMのトリス−Cl，pH8．4，20℃；６mMのMgCl₂；0．4mM のdNTP；１μＭの５’PCRプライマー；１μＭの３’PCRプライマー；及び100単位／mlのTaq DNAポリメラーゼを含む。バッファーの添加後、このサンプルに50μｌの鉱物油をかぶせ、次いで自動サーマルサイクラーに移した。サーマルサイクラーの中で、サンプルを95℃で２分間熱変性させ、次いで95℃／30秒、60℃／１分、72℃／１分の３段階に35回サイクル付し、この段階の後に更に５分72℃でインキュベートし、次いでチューブをさまし、そしてストレプトアビジンビーズ上での処理の用意がされるまで15℃で保存した。この混合物を95℃に熱して鎖を変性させ、次いでストレプトアビジンコート化ビーズの添加によりビオチニル化プリン鎖及び過剰の３’PCRプライマーを除去した。このチューブを12Krpmで５分遠心した。その上清液を下記のシーケンシング反応に用いた。Ｈ．PCR増幅オリゴヌクレオチド標識のシーケンシング個別のビーズ単離体由来の増幅オリゴヌクレオチドを段階＃１−特異的又は段階＃２−特異的シーケンシングプライマーのいづれかを伴う１組の反応（鎖停止剤としてddA又はddGを使用）においてシーケンス化した。２本のシーケンシングレーンの各セットについての鋳型とプライマーをアニールさせるため、単一のアニーリング及びそれに続くラベル化反応を、8．5μｌのシーケンシングプライマー（濃度＝0.25pmol／μｌ）、1．5μｌのシーケナーゼ（商標）5Xシーケンシング用バッファー（200mMのトリスHCl，pH7．5；100mMのM gCl₂；及び250mMのNaCl）、及び上記の増幅上清液由来の鋳型DNA 10μｌを合わせることにより実施した。サンプルを65℃で２分熱し、次いで室温へとゆっくり冷やした（約10分かけて）。ラベル化反応は下記の通りに実施した。シーケナーゼ（商標）（ｖ2．0）をTE （10mMのトリスHCl，pH7．5；及び１mMのEDTA）で１：20に希釈し、次いで２：3 ．5の比の希釈酵素、対、ラベリング混合物を含むラベリングカクテル（即ち、４：２：１の150nMの dGTP、0．1Ｍのジチオスレイトール、アルファー³⁵Ｓ−dATPの混合物、＞1000Ci ／mmol）を用意した。このカクテル約5．5μｌを10μｌのアニール化鋳型／プライマー（（ｉ）由来）と25℃で５分インキュベートした。停止反応は下記の通りに実施した。６μｌのラベリング反応混合物を５μｌの適宜のddXTP停止反応混合物（即ち、80μＭのdGTD，80μＭのdATP，50mMのNaCl 及び８μＭのddGTP又は８μＭのddATP）それぞれに加えた。37℃で５分のインキュベーションの後、各停止反応物に約８μｌの停止溶液（95％のホルムアミド、 20mMのEDTA，0.05％のブロモフェノールブルー及び0.05％のキシレンシアノール）を加えた。シーケンス用ゲルは６％の総アクリルアミド（19：１のアクリルアミド／ビス）、0.09Ｍのトリスベース、0.09Ｍの硼酸、１mMのEDTA及び７Ｍの尿素を含んで成る。このゲルは25％の過硫酸アンモニウムを上記のゲルのml当り1．9μｌ及び ml当り0.72μｌのTEMEDを加えることによって重合させた。このゲルを少なくとも１時間重合させ、次いでサンプル添加の前に少なくとも20分間予備泳動させておいた。ゲルプレートは泳動の前及び最中に40〜50℃に維持しておいた。添加の前に反応物を85〜95℃で２分間熱し、次いでゲルをブロモフェノールブルー染料がゲルの底に達するまで泳動させた。課題の配列はブロモフェノールとキシレンシアノールマーカーの間で泳動した。ビーズに付加されたオリゴマーにおけるモノマーの配列を同定するのに必要な情報はDNA配列情報の中に含まれている。実施例３：カルボキシルビーズ上でのペプチド及びオリゴヌクレオチド標識の平行合成Ａ．ホスホラミジット（Ｉ）−（IV）の合成（１）Ｎ⁶−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシアデノシン：（２）Ｎ⁴−（アリルオキシ）カルボニル−２’−デオキシ−シチジン；（３）Ｎ²−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシグアノシン；及び（４）チミジン（図６参照のこと）の５’−DMT誘導体の３’−（アリルＮ，Ｎ’ジイソプロピル−ホスホラミジット）をHayakawaらの手順（引用することで本明細書に組入れるJ ．Amer．Chem．Soc．112：1691-1696(1990)）に従って調製した。Ｂ．ジアミンリンカーによるカルボキシルビーズの誘導化ペプチドとオリゴヌクレオチドとの平行合成のための二価ビーズ材料の調製を図７に示している。径４．５μｍのポリスチレン／ポリジビニルベンゼン／ポリメチルメタクリレート／COOHビーズ(Bangs'Laboratories）の３つの50mgのアリコートをそれぞれ個別のマイクロ遠心チューブに入れ、そして下記の通りに処理した。まず、ビーズを0．1Ｎの水性HCl(３ml)で処理し、次いでボルテックスに付して15分間撹拌した。次にこのビーズをマイクロ遠心機でペレット化し、上清液をデカントし、そして残っているビーズペレットを水（１mlで3X）、次いでジメチルホルムアミド（DMF，3X１ml）で順に洗った（ボルテックスし、ペレット化し、次いでデカントすることにより：この工程を「洗浄」と呼ぶ）。化合物２−（1H−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（HBTU，38mg，0.10mmol）、１− ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBT，15mg，0.10mmol）及びDMF(0．5ml)又はジクロロメタン（0．5ml）をビーズペレットに加えた。ジイソプロピルエチルアミン（DIEA，54μｌ，0.30mm ol）を加え、そしてこの懸濁物を１分間ポルテックスに付した。化合物４，９− ジオキサ−１，12−ドデカンジアミン（20μｌ，0.10mmol）を次に加え、ビーズをペレット化し、そして上清液をデカントした。このペレットを９：１のDMF/水（1．0ml）で処理し、そして15分間ボルテックスに付した。次にビーズをペレット化し、上清液をデカントし、そしてビーズをDMF(3X1．0ml)で洗った。Ｃ．ペプチド及びオリゴヌクレオチド合成リンカーの付加 100mgのビーズをHBTU（0．1mmol），H0Bt（0．1mmol）及びDIEA（0．1mmol）の存在下において、９：１のCH₂Cl₂：DMF(1．0ml)の中で、４−Fmoc−アミノ酪酸（0．1mmol）及び４−ｐ，ｐ’−ジメトキシトリチル(DMT)−ヒドロキシ酪酸( 0．1μmol)の混合物で処理した。30分間のボルテックス処理の後、この反応混合物をDMF（1．0ml）で希釈し、ビーズをペレット化、そして上清液をデカントした。このビーズをDMF(3X1．0ml)で洗った。このカップリング手順を新鮮な試薬で繰り返し、そしてビーズを上記の通りペレット化、そして洗った。Ｄ．ヒドロキシリンカー上での３’PCRプライミング部位の作製ビーズ上でのオリゴヌクレオチド−標識化ペプチドの平行集成を図８に示す。 20〜25ヌクレオチドのPCRプライミング部位を下記の通りに集成した。用いる全ての試薬は無水であり、そして反応はドライアルゴンのもとで行うことに注意する。約10mgのビーズを保護化ホスホラミジットをカップル化させるために８段反応順列にかけた。その反応段階は、（１）ビーズをアセトニトリル（MeCN）で0 ．5分洗う；（２）DMT基をCH₂Cl₂中の３％のトリクロロ酢酸により1．5分にわたり除去する；（３）ビーズをMeCNで３分洗う；（４）ビーズを、0．5Ｍの（４−ニトロフェニル）テトラゾール又は0．5Ｍのピリジニウム塩酸塩のいづれかと1．0Ｍのイミダゾールとを含むMeCN中の0．1Ｍのホスホラミジット（Ｉ，II，III又はIV）で２分処理する；（５）ビーズをMeCNで0．5 分洗う；（６）ビーズを５％のDMAPを含むAc₂０／２，６−ルチジン／THF（１：１：８)の混合物でキャップする；（７）ビーズをCH₂Cl₂中のＩＭの^tBuOHで0．8 分かけて酸化する；次いで（８）ビーズをMeCNで0．5分洗う；である。段階（１）〜（８）を１回から25回繰り返して、25ヌクレオチドまでのPCRプライミング部位を集成する。Ｅ．アミノリンカーへの第１アミノ酸のカップリングペプチドとヌクレオチドのカップリングは図８に示す通り交互であってよい。アミノ酸（又はペプチド）をカップル化させるには、まずFmoc基をビーズから、 DMF中の30％のピペリジンによる60分の処理によって除去する。このビーズをDMF で３回洗う。次にこのビーズを９：１のCH₂Cl₂：DMF中の適宜のアミノ酸（0．1 Ｍ）、HBTU（0．1Ｍ）、HOBt（0．1Ｍ）及びDIEA（0．1Ｍ）を含む溶液で30分処理する。次にこのカップリングを新鮮な試薬で更に30分繰り返し、そしてビーズをDMF(3X)、次いでMeCN（3X）で洗う。Ｆ．第１オリゴヌクレオチド「コドン」の構築第１アミノ酸の種類を示す約３〜５個のヌクレオチドのコドンを次に、上記の手順（ｄ）における８段カップリングサイクルを利用してオリゴヌクレオチド鎖の５’末端において作製した。Ｇ．次のアミノ酸のカップリング及び「コドン」の構築（ｅ）と（ｆ）の手順を、所望のペプチド及びオリゴヌクレオチドコード領域が完成するまで適宜のアミノ酸及びヌクレオチドの構成単位を利用して繰り返した。Ｈ．５’PCRプライミング部位の構築手順（ｄ）の８段カップリングサイクルを、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端上に20〜25個のヌクレオチドのPCRプライミング部位を作製するために用いた。Ｉ．オリゴヌクレオチド及びペプチド鎖の脱保護完成したペプチド及びオリゴヌクレオチド鎖を下記の通りに脱保護した。アミノ末端Fmoc基をDMF中の30％のピペリジンで処理して除去し、次いでTHF(3X)で洗った。アリル系保護基を除去するため、ビーズを、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム−クロロホルム複合物（0.02Ｍ）、トリフェニルホスフィン（0．2Ｍ）、及び１：１のｎ−ブチルアミン／ギ酸（1．2M）を含むTHF溶液で50 ℃で30分処理し、次いでペレート化したビーズをTHFで洗った。このビーズを0． 1Ｍの水性のナトリウムＮ，Ｎ−ジエチルジチオカルバメート、次いで水で洗って微量のパラジウムを除去した。アミノ酸保護基は95：５のTFA/水による30分の処理で除去した。「掃去」剤、例えば１，２−エタンジオール及びチオアニソールもこの酸性脱保護媒質の中に含まれていてよい（例えばそれぞれ２容量％で）。最後に、完全に脱保護したビーズを水性バッファーで洗い、そして生物レセプターとの相互作用のための準備がなされた。実施例４：ライブラリーの調製及びスクリーニング本実施例において、アミン誘導化ビーズの２集団を、各ビーズの集団の固有の特徴の塩基配列を有するオリゴヌクレオチドでラベルした。長さ95塩基のオリゴヌクレオチド（95量体）でラベルした集団を次にペプチドYGGFLにカップル化させた。長さ110塩基のオリゴヌクレオチド（110量体）でラベルした集団体をフェニルアラニン（Ｆ）にカップルさせた。次にこれらのビーズを、各YGGFL/95量体ビーズに対して20個のＦ／110量体ビーズの率で混合し、次いで高親和力でペプチドYGGFLに結合する蛍光ラベル抗体3E7で染色した。個々の蛍光染色ビーズをPCRチューブの中に直接FACSによって選別することがでうる。PCRの後、６個の蛍光染色ビーズのうち５個か長さ95ｂの増幅DNAのフラグメントをもたらした。残りの１個ビーズのPCRはおそらくはプライマーの二量体である小さなDNAフラグメントをもたらした。この実験において用いたオリゴヌクレオチドは２種の標識、２種のPCRプライマー及び１種のシーケンシングプライマーである。同じPCR及びシーケンシングプライマーを２種の標識について利用した。２種の標識は配列及び長さにおいて異なる。標識の両方は塩基、７−デアザＡ，Ｃ及びＴより成る。 95量体標識は次の配列を有する： 110量体標識は次の配列を有する：各標的に関して、下線を付した配列は標識プライマー結合性部位を表わす：センスプライマーは５’末端にあり、そしてアンチセンスプライマーは３’末端にある。また、各標的に関して、小文字の配列はシーケンシング用プライマー結合性部位を表わす。Ａ．ビーズの調製ビーズはBang's Laboratories(979 Keystone Way，Carmel，IN 46032)から購入したものであり、そしてカルボキシル化ポリスチレンより成る（平均径4．5μ ｍ）。これらのビーズを下記の方法によりジアミン誘導に付した。ビーズ（200mg）を１ＮのHCl 1．0mlで処理し、そして15分ボルテックスに付した。このビーズをペレット化し、デカントし、そして各洗浄当り1．0mlの水で３回（3X）、次いで各洗浄当り1．0mlのDMFで3X洗った。洗ったペレットに２−( 1H−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU：38mg，0．1mmole)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(HOBT；15mg，0．1mmole)、500μｌの塩化メチレン及び54 μｌのジイソプロピルエチルアミン(DIEA：0．3mmole)を加えた。２分間ボルテックス処理した後、20μｌのジアミン（４，９−ジオキサ−１，12−ドデカンジアミン；94μmole）を加えた。30分間のボルテックス処理の後、1．0mlのDMFを加え、そしてこのビーズを遠心によりペレット化した。上清液を除去し、そして DMF中の10％の水1．0mlを加えた。このビーズを更に15分間ボルテックスに付し、そして最後に各洗浄当り1．0mlのDMFで3X洗った。Ｂ．オリゴヌクレオチド付加２種の異なる標的オリゴヌクレオチド、即ち、95量体と110量体をこの実験において用いた。これらのオリゴヌクレオチドは塩基、シチジン、チミジン及び７ −デアザアデノシンより成る。これらのオリゴヌクレオチドは５’末端(５’− アミノモディファイヤ−Ｃ−12，Glen Research)上の第１アミノ基で合成した。凍結乾燥したオリゴヌクレオチド(600pmole)を0．5ＭのNa−リン酸塩、pH7．7５ μｌに溶かし、そしてこの溶液を0．2Ｍのジスクシニミジルスベレート(DSS)10 μｌで処理した。この反応を10分間進め、次いで85μｌの氷冷水を加えた。未処理のDSSを遠心により除いた。その上清液を水で平衡にしたG25スピンカラムに通した。その溶離液を直ちに凍結し、そして凍結乾燥してオリゴヌクレオチドの５’−Ｎ−ヒドロキシスクシンアミドエステルを単離した。活性化オリゴヌクレオチドを、0．1mg／mlの音波処理サケ精子DNAを含む0．1 ＭのNa−リン酸塩、pH7．5 50μｌに溶かした。この溶液を10mgのジアミン誘導化ビーズに加えた。３hrのボルテックス処理の後、ビーズを0．1ＭのNa−リン酸塩pH7．5により各洗浄当り0．4mlで2X洗い、次いで0．1ＮのNaOH 0．４mlで2X 洗った。最後に、このビーズをpH7．5のバッファー0．4mlで3X洗った。Ｃ．ペプチド付加 Boc-YGGFL又はBoc-Phe(Boc＝ｔ−ブトキシ−カルボニルアミン保護基；0．1mm ole)にHBTU(0．1mmole)、HOBT(0．1mmole)、塩化メチレン中の10％のDMF 1．0ml 及びDIEA(0．3mmole)を加えた。固形物を溶解させるためにボルテックス処理した後、３mgのオリゴヌクレオチドラベル化ビーズに0．4mlのペプチド溶液を加えた。Boc-YGGFLを含む溶液を95量体でラベルしたビーズに加え、そしてBoc-Pheを含む溶液を110量体でラベルしたビーズに加えた。反応混合物を30分ボルテックスに付し、次いでDMFで希釈し、遠心し、デカントし、そしてビーズのペレットをTHF 1．0mlで3X洗った。Boc保護基はビーズを95％のトリフルオロ酢酸0．4ml で10分処理することによって除去した。脱保護反応物を次にTHFで希釈し、遠心し、次いでデカントし、そしてビーズを各洗浄当り1．0mlのDMFで3X洗った。最後に、ビーズを各洗浄当り0．1ＭのNa−リン酸塩、pH7．50．5mlで３回洗い、そしてスラリーとして保存した（10mg／ml）。Ｄ．混合、染色及び選別 95量体及びYGGFLとカップルしたビーズを、110量体及びＦとカップルしたビーズと、１：20の比率で混合した。即ち、0．1mgの95量体／YGGFLビーズ（２百万個のビーズ）を2．0mgの110量体／ Pheビーズ（４千万個のビーズ）と混合した。この混合物をブロッキングバッファー（PBS，１％のBSA及び0.05％のツイーン 20）に懸濁し、そして室温で１hrインキュベートした。次にこのビーズを遠心によりペレット化し、次いでペプチドYGGFLに結合するFITC−ラベル化モノクローナル抗体3E7の溶液に再懸濁させた（１μg／ml)。この懸濁物を氷の上に0．5hr インキュベートし、次いで遠心してビーズペレットを単離した。このビーズを、蛍光活性化セルソーティング（FACS）装置(Becton Dickinson FACSORT Plus）への搬送のためにPBSに再懸濁させた。蛍光ラベル化抗体に結合したビーズをその獲得した蛍光により同定し、そして蛍光ビーズをPCRチューブに選別することによって単離した。１，10又は100個の蛍光ビーズを各PCRチューブに選別した。類似の方法において、非蛍光ビーズもPCRチューブに選別した。Ｅ．選別ビーズの増幅ビーズを含む各PCRチューブに25μｌのPCRバッファー（20mMのトリス−HCl，p H8．7；10mMのKCl：10mMの(NH₄)₂SO₄；２mMのMgCl₂；0．1％のトリトンＸ−100 ；0．14mg／mlのBSA；200μｍのdATP；200μｍのdGTP；200μｍのdCTP；200μｍのdTTP；２μｍのプライマ＃１；２μｍのプライマー＃２；及び0．5単位のPfu DNAポリメラーゼ）を加えた。反応物を95℃で0．5分、55℃で１分及び72℃で１分の40サイクルに付した。ゲル添加用色素（２μｌ）を各PCR 10μｌに加え、そしてサンプルを２％の低融点アガロースゲルに泳動させた。DNAフラグメントを臭化エチジウムで染色してUV光に暴露することによって識別化させた。１個の蛍光ビーズを含む６本のチューブのうちの５本が、長さ95塩基対のDNAフラグメントをもたらし、これらのビーズがＦではなくYGGFLにカップルされていることが確証された。10個又は 100個の蛍光ビーズを含むチューブも95量体DNAフラグメントをもたらした。逆に、１，10又は100個の非蛍光ビーズを含むチューブはどれも95量体フラグメントをもたらさなかった。しかしながら、非蛍光ビーズの標識の増幅に由来する110bpより小さい異常な増幅生成物があった。このような異常な生成物は、本実施例における未保護のオリゴヌクレオチド（自由な環外アミンをＦアミノ酸にカップルしてしまうことがある）の利用を介して、標識が異常な増幅に付されたからであるかもしれない。この問題は95量体標識に同程度で及ぶことはなく、なぜならYGGFLはＦよりも環外アミンへの反応性が低いからである。実施例５：ライブラリーの合成及びスクリーニング本実施例は図９に図解してある。簡単に述べると、アミン誘導化ビーズ（実施例４に記載の通りに調製）の一集団をグリシンにカップル化させる。次にこの集団を２等分し、次いで各部を、このビーズのサブ集団を個別に同定せしめるであろう固有のオリゴヌクレオチドでラベルする。長さ95の塩基のオリゴヌクレオチド（実施例４に記載の95量体）でラベルしたサブ集団を次にペプチドYGGFLにカップル化させる。長さ110の塩基のオリゴヌクレオチド（実施例４に記載の110量体）でラベルしたビーズの集団をペプチドFL FL F(SEQ ID NO:16)にカップル化させた。次にこのビーズをYGGFL/95量体ビーズ当たり20個のFL FL F/110量体ビーズの比率（即ち１：20）で混合し、そして高親和力でペプチド配列YGGFLに結合する蛍光ラベル化抗体(3E7)で染色した。個の蛍光染色ビーズ及び未染色ビーズをPCRチューブの中に直接選別した。PCRにより、全ての蛍光染色ビーズは長さ 95塩基対の増幅DNAのフラグメントをもたらし、そして未染色ビーズは長さ110塩基対のフラグメントをもたらした。Ａ．ペプチドカップリング工程＃１ Fmoc-Gly(Fmoc＝９−フルオレニルメトキシカルボニルアミン保護基；0．1mmo le)に、HBTU(0．1mmole)、HOBT(0．1mmole)、塩化メチレン中の10％のDMF 1．0m l及びDIEA(0．3mmole)を加えた。固形物を溶解するためにボルテックス処理した後、50mgのジアミン誘導化ビーズに活性化アミノ酸を加えた。この反応混合物を 30分ボルテックスに付し、次いでDMFで希釈し、遠心し、デカントし、そしてビーズペレットを1．0mlのDMFで２回洗った。カップリング反応を繰り返した。ビーズを次にDMF中の30％のピペリジン1．0mlと１hr．ボルテックスに付しながら処理して、グリシンアミノ基を脱保護した。Ｂ．オリゴヌクレオチドのラベル２種の異なる標的オリゴヌクレオチド、即ち、実施例４に記載の95量体と110 量体をこの実験において用いた。このビーズサンプルの半分（25mg）は95量体でラベルし、そして残りの半分は110量体でラベルした。これらのオリゴヌクレオチドは２’−デオキシ−シチジン、チミジン及び２’−デオキシ−７−デアザアデノシンより成る。これらのオリゴヌクレオチドは５’末端（MMT-C12-アミノモディファイヤーClonetech Laboratories，Inc.）上の第１アミノ基で合成した。凍結乾燥したオリゴヌクレオチド(1．5 nmole)を0．5ＭのNa−リン酸塩、pH7．7 ５μｌに溶かし、そしてこの溶液を0．2Ｍのジスクシニミジルスベレート(DSS )20μｌで処理した。この反応を10分間進め、次いで70μｌの氷冷水を加えた。未処理のDSSを遠心により除いた。その上清液を水で平衡にしたG25スピンカラムに通した。その溶離液を直ちに凍結し、そして凍結乾燥してオリゴヌクレオチドの５’−Ｎ−ヒドロキシスクシンアミドエステルを単離した。この活性化オリゴヌクレオチドを、0．1mg／mlの音波処理サケ精子DNAを含む0．1ＭのNa−リン酸塩、pH7．5 100μｌに溶かした。この溶液を25mgのグリシンカップル化ビーズに加えた。３hrのボルテックス処理の後、ビーズを0．1ＭのNa−リン酸塩pH7．5により各洗浄当り0．4mlで2X洗い、次いで0．1ＮのNaOH 0．4mlで2X洗った。最後に、このビーズをpH7．5のバッファー0．4mlで3X洗った。Ｃ．ペプチドカップリング段階＃２ Boc-YGGFL又はBoc-FLFLF(Boc＝ｔ−ブトキシ−カルボニルアミン保護基；0.02 mmole)にHBTU(0.02mmole)、HOBT(0.02mmole)、塩化メチレン中の10％のDMF 0.19 0ml及びDIEA(0.06mmole)を加えた。固形物を溶解させるためにボルテックス処理した後、この溶液を塩化メチレン中の10％のDMFに10倍に希釈した。この溶液のアリコート（0.345ml）をグリシンカップル化、且つ、オリゴヌクレオチドラベル化ビーズに加えた。Boc-YGGFLを含む溶液を95量体でラベルしたビーズに加え、そしてBoc-FLFLFを含む溶液を110量体でラベルしたビーズに加えた。反応混合物を30分ボルテックスに付し、次いでDMFで希釈し、遠心し、デカントし、そしてビーズのペレットをTHF 1．0mlで3X洗った。Boc保護基はビーズを95％のトリフルオロ酢酸0．4mlで10分処理することによって除去した。脱保護反応物を次に THFで希釈し、遠心し、次いでデカントし、そしてビーズを1．0mlのDMFで3X洗った。最後に、ビーズを0．1ＭのNa−リン酸塩、pH7．5 0．5mlで３回洗い、そしてスラリーとして保存した（10mg／ml）。Ｄ．混合、染色及び選別 110量体及びFLFLFとカップルしたビーズを、95量体及びYGGFLとカップルしたビーズと、20：１の比率で混合した。即ち、0．1mgの95量体／YGGFLビーズ（２百万個のビーズ）を2．0mgの110量体／FLFLFビーズ（４千万個のビーズ）と混合した。この混合物をブロッキングバッファー（PBS，１％のBSA及び0.05％のツイーン 20）に懸濁し、そして室温で１hrインキュベートした。次にこのビーズを遠心によりペレット化し、次いでペプチド配列YGGFLを認識するFITC−ラベル化モノクローナル抗体(3E7)の溶液に再懸濁させた（１μg／ml）。この懸濁物を氷の上に 0．5hrインキュベートし、次いで遠心してビーズペレットを単離した。このビーズを、蛍光活性化セルソーティング（FACS）装置（Becton Dickinson FACSORT Plus）への搬送のためにPBSに再懸濁させた。蛍光ラベル化抗体に結合したビーズをその獲得した蛍光により同定し（図10参照のこと）、そして蛍光又は非蛍光ビーズのいづれかの均質サンプルをPCRチューブに選別することによって単離した。１，10又は100個の各タイプのビーズを各PCRチューブに選別した。Ｅ．選別ビーズのPCR ビーズを含む各PCRチューブに25μｌのPCRバッファー(20mMのトリス−HCl，pH 8．7；10mMのKCl：10mMの(NH₄)₂SO₄；２mMのMgCl₂；0．1％のトリトンＸ−100； 0.14mg／mlのBSA；200μｍのdATP；200μｍのdGTP；200μｍのdCTP；200μｍのd TTP；２μｍの各プライマ（実施例４に記載）；及び0．5単位のPfu DNAポリメラーゼ）を加えた。反応物を95℃で0．5分、55℃で１分及び72℃で１分の40サイクルに付した。ゲル添加用色素（２μｌ）を各PCR 10μｌに加え、そしてサンプルを２％の低融点アガロースゲルに泳動させた。DNAフラグメントを臭化エチジウムで染色してUV光に暴露することによって識別化させた。ビーズ１個のサンプル６本、ビーズ10個のサンプル３本及びビーズ100個のサンプル３本が、蛍光及び非蛍光集団の両方より増幅された。蛍光集団に由来するビーズサンプルは全て長さ95塩基対のDNAフラグメントのみを生成し、そして非蛍光集団に由来するサンプルは全て長さ110塩基対のフラグメントのみを生成した（図11参照のこと）。

【手続補正書】【提出日】平成１１年７月２７日（１９９９．７．２７）【補正内容】請求の範囲１．複数の異なる構成員を含んで成る合成オリゴマーライブラリーであって、各構成員が前記オリゴマーにおけるモノマー配列を同定する１又は複数の同定用標識に連結したモノマーの配列より成るオリゴマーを含んで成るライブラリー。２．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が固相支持体を含んで成る、請求項１に記載のライブラリー。３．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が、前記同定用標識と前記固相支持体との間のリンカー及び前記固相支持体と前記オリゴマーとの間のリンカーを含んで成る、請求項２に記載のライブラリー。４．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が、前記オリゴマーと前記同定用標識との間のリンカーを含んで成る、請求項１に記載のライブラリー。５．前記オリゴマーと前記同定用標識との連結が、前記オリゴマーと前記同定用標識とを結合させるリンカーを含んで成り、そのリンカーに前記固相支持体も結合している請求項２に記載のライブラリー。６．前記リンカーが、第２ビーズに連結した第１ビーズを含んで成り、ここで前記オリゴマーがこの第１ビーズに付加されており、そして前記同定用標識がこの第２ビーズに付加されている、請求項１に記載のライブラリー。７．前記同定用標識が前記オリゴマーに付加されている、請求項１に記載のライブラリー。８．約10⁶種の異なる構成員を有する、請求項１に記載のライブラリー。９．前記オリゴマーがペプチドである、請求項１に記載のライブラリー。 10．前記同定用標識がフルオレセントマーカーである、請求項１に記載のライブラリー。 11．前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載のライブラリー。 12．i）前記ライブラリーが約10⁶以上の構成員を有し； ii）前記オリゴマーがペプチドであり；そして iii）前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである；請求項２に記載のライブラリー。 13．複数の固相支持体それぞれの上に一種のオリゴマー配列を合成することにより製造される合成オリゴマー配列であって、前記オリゴマー配列が別の固相支持体では異なっており、下記の段階：ａ）複数の反応槽に前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１モノマーに暴露させる；ｃ）前記支持体をプールする；ｄ）前記支持体を複数の反応槽に配分する；ｅ）各反応槽中の前記支持体を第２モノマーに暴露させる；次いでｆ）段階ａ）からｅ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法により合成されるライブラリー。 14．複数の固体支持体それぞれの上に一種のオリゴマー配列及び前記オリゴマー配列を同定する１又は複数の同定用標識を合成することにより製造される標識化合成オリゴマーライブラリーであって、前記オリゴマー配列及び同定用標識を下記の段階：ａ）複数の反応槽に前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１オリゴマーモノマー及び第１同定用標識に暴露させる；ｃ）前記支持体をプールする；ｄ）前記支持体を複数の反応槽に配分する；ｅ）前記支持体を第２オリゴマーモノマー及び第２同定用標識に暴露させる；次いでｆ）段階ａ）からｅ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法により合成されるライブラリー。 15．前記オリゴマー配列がペプチドであり、そして前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである、請求項14に記載のライブラリー。 16．前記同定用標識がプリン類似体塩基を含んで成る、請求項15に記載のライブラリー。 17．前記オリゴマーがオリゴマー合成の終了の後に固相支持体から切り離されたものである、請求項14に記載のライブラリー。 18．複数の異なる構成員を含んで成る標識化合成オリゴマーライブラリーであって、各構成員が一種のオリゴマー配列及び前記オリゴマー配列を同定する１又は複数の同定用標識の付加されている固相支持体を占めているものを製造する方法であって、下記の段階：ａ）複数の反応槽に前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１オリゴマーモノマーと反応させる；ｃ）各反応槽中の前記支持体を第１同定用標識と反応させる；ｄ）前記支持体をプールする；ｅ）前記のプールした支持体を複数の反応槽に配分する；ｆ）各反応槽中の前記のプールした支持体を第２オリゴマーモノマーと反応させる；ｇ）各反応槽中の前記のプールした支持体を第２同定用標識と反応させる；次いでｈ）段階ａ）からｇ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法。 19．各反応槽中の前記固相支持体をまず前記同定用標識と反応させ、次いで前記オリゴマーモノマーと反応させる請求項18に記載の方法。 20．第２粒子に付加されている第１粒子を含んで成り、前記第１粒子がオリゴマーに連結されており、そして前記第２粒子がオリゴヌクレオチドに連結されており、そしてここで前記オリゴマーがオリゴヌクレオチド以外のものである、固相支持体。 21．オリゴマーライブラリーの合成におけるオリゴマー配列のモノマー付加の各段階を記録する方法であって、各モノマーの付加と一緒に同定用標識を付加し、そして少なくとも２サイクルのモノマー及び標識の付加を実施し、これによって、前記オリゴマー配列を同定する一式の同定用標識を作ることを含んで成る方法。 22．前記同定用標識モノマーがフルオレセントマーカーである請求項21に記載の方法。 23．前記同定用標識モノマーがヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドである請求項21に記載の方法。 24．前記オリゴマーモノマーがアミノ酸、ペプチド又はそれらの組合せである、請求項23に記載の方法。 25．前記同定用標識配列を増幅して増幅同定用標識を作り、そして前記増幅同定用標識をシーケンシングする段階を更に含んで成る請求項24に記載の方法。 26．第１同定用標識の付加の後、次の同定用標識を先在の標識の末端に付加させる、請求項21に記載の方法。 27．固相支持体上にペプチド及びオリゴヌクレオチドを合成する方法であって、ａ）第１タイプの保護基によりブロックされた第１タイプの活性部位及び第２タイプの保護基によりブロックされた第２タイプの活性部位を含む二価の固相支持体を調製し；ｂ）前記固相支持体を活性剤と反応させて前記の第１タイプの保護基を除去し、これにより前記の第１タイプの活性部位を暴露させ；ｃ）前記の第１タイプの活性部位にオリゴヌクレオチドモノマー又はオリゴヌクレオチドをカップル化させ；ｄ）前記固相支持体を活性剤と反応させて前記の第２タイプの保護基を除去し、これにより前記の第２タイプの活性部位を暴露させ；ｅ）前記の第２タイプの活性部位にペプチドモノマー又はペプチドをカップル化させ；次いでｆ）ｂ）からｅ）の段階を１〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法。 28．前記二価の固相支持体が、ポリスチレン／ポリジビニルベンゼン／ポリメチルメタクリレートCOOHビーズを含んで成る、請求項27に記載の方法。 29．前記の二価の固相支持体がアミン活性部位及びヒドロキシル活性部位を含んで成る、請求項27に記載の方法。 30．前記の二価の固相支持体が、（ａ）ポリスチレン／ポリジビニルベンゼン／ポリメチルメタクリレートCOOH ビーズを４，９−ジオキサ−１，12−ドデカンジアミンリンカーで誘導し；（ｂ）前記ビーズをHBTU，HOBt及びDIEAの存在下において４−Fmoc−アミノ酪酸及び４−ｐ，ｐ’−ジメトキシトリチル−ヒドロキシ酪酸で処理すること；により製造される方法。 31．前記オリゴヌクレオチドを、（ａ）Ｎ⁶−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシアデノシン；（ｂ）Ｎ⁴−（アリルオキシ）カルボニル−２’−デオキシシチジン；（ｃ）Ｎ²−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシグアノシン；及び（ｄ）チミジンの５’−DMT誘導体の３’−（アリルＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−ホスホラミジットを用いて集成する、請求項27に記載の方法。 32．前記オリゴヌクレオチドを、前記ヌクレオチド上に光化学除去性保護基を用いて集成する請求項27に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０８Ｆ 8/00 Ｃ０８Ｆ 8/00 Ｃ０８Ｇ 85/00 Ｃ０８Ｇ 85/00 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者ギャロップ，マークエー. アメリカ合衆国，カルフォルニア 94303, イーストパロアルト，＃９，ウッドランドアベニュ 1735

Claims

【特許請求の範囲】１．複数の異なる構成員を含んで成る合成オリゴマーライブラリーであって、各構成員が前記オリゴマーにおけるモノマー配列を同定する１又は複数の同定用標識に連結したモノマーの配列より成るライブラリー。２．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が固相支持体より成る、請求項１に記載のライブラリー。３．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が、前記同定用標識と前記固相支持体との間のリンカー及び前記固相支持体と前記オリゴマーとの間のリンカーより成る、請求項２に記載のライブラリー。４．前記オリゴマーと前記同定用標識との前記の連結が、前記オリゴマーと前記同定用標識との間のリンカーより成る、請求項１に記載のライブラリー。５．前記オリゴマーと前記同定用標識との連結が、前記オリゴマーと前記同定用標識とを結合させるリンカーより成り、そのリンカーに前記固相支持体も結合している請求項２に記載のライブラリー。６．前記リンカーが、第２ビーズに連結した第１ビーズを含んで成り、ここで前記オリゴマーがこの第１ビーズに付加されており、そして前記同定用標識がこの第２ビーズに付加されている、請求項１に記載のライブラリー。７．前記同定用標識が前記オリゴマーに付加されている、請求項１に記載のライブラリー。８．約10⁶種の異なる構成員を有する、請求項１に記載のライブラリー。９．前記オリゴマーがペプチドである、請求項１に記載のライブラリー。 10．前記同定用標識がフルオレセントマーカーである、請求項１に記載のライブラリー。 11．前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載のライブラリー。 12．i）前記ライブラリーが約10⁶以上の構成員を有し； ii）前記オリゴマーがペプチドであり；そして iii）前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである；請求項２に記載のライブラリー。 13．複数の固相支持体それぞれの上に一種のオリゴマー配列を合成することにより製造される合成オリゴマー配列であって、前記オリゴマー配列が別の固相支持体では異なっており、下記の段階：ａ）複数の反応槽にわたって前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１モノマーに暴露させる；ｃ）前記支持体をプールする；ｄ）前記支持体を複数の反応槽にわたって配分する；ｅ）各反応槽中の前記支持体を第２モノマーに暴露させる；次いでｆ）段階ａ）からｅ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法により合成されるライブラリー。 14．複数の固体支持体それぞれの上に一種のオリゴマー配列及び前記オリゴマー配列を同定する１又は複数の同定用標識を合成することにより製造されるオリゴマー配列であって、前記オリゴマー配列及び同定用標識を下記の段階：ａ）複数の反応槽にわたって前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１オリゴマーモノマー及び第１同定用標識に暴露させる；ｃ）前記支持体をプールする；ｄ）前記支持体を複数の反応槽にわたって配分する；ｅ）各反応槽中の前記支持体を第２オリゴマーモノマー及び第２同定用標識に暴露させる；次いでｆ）段階ａ）からｅ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法により合成されるライブラリー。 15．前記オリゴマー配列がペプチドであり、そして前記同定用標識がオリゴヌクレオチドである、請求項14に記載のライブラリー。 16．前記同定用標識がプリン類似体塩基を含んで成る、請求項15に記載のライブラリー。 17．前記オリゴマーがオリゴマー合成の終了の後に固相支持体から切り離されたものである、請求項14に記載のライブラリー。 18．複数の異なる構成員を含んで成る標識化合成オリゴマーライブラリーであって、各構成員が一種のオリゴマー配列及び誤オリゴマー配列を同定する１又は複数の同定用標識に付加されている固相支持体を含んで成るものを製造する方法であって、下記の段階：ａ）複数の反応槽にわたって前記支持体を配分する；ｂ）各反応槽中の前記支持体を第１オリゴマーモノマーと反応させる；ｃ）各反応槽中の前記支持体を第１同定用標識と反応させる；ｄ）前記支持体をプールする；ｅ）前記のプールした支持体を複数の反応槽にわたって配分する；ｆ）各反応槽中の前記のプールした支持体を第２オリゴマーモノマーと反応させる；ｇ）各反応槽中の前記のプールした支持体を第２同定用標識と反応させる；次いでｈ）段階ａ）からｇ）を少なくとも１回〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法。 19．各反応槽中の前記固相支持体をまず前記同定用標識と反応させ、次いで前記オリゴマーモノマーと反応させる請求項18に記載の方法。 20．第２粒子に付加されている第１粒子を含んで成り、前記第１粒子がオリゴマーに連結されており、そして前記第２粒子がオリゴヌクレオチドに連結されており、そしてここで前記オリゴマーがオリゴヌクレオチド以外のものである、固相支持体。 21．オリゴマーライブラリーの合成におけるオリゴマ配列のモノマー付加の各段階を記録する方法であって、各モノマーの付加と一緒に同定用標識を付加し、そして少なくとも２サイクルのモノマー及び標識の付加を実施し、これによって、前記オリゴマー配列を同定する一式の同定用標識を作ることを含んで成る方法。 22．前記同定用標識モノマーがフルオレセントマーカーである請求項21に記載の方法。 23．前記同定用標識モノマーがヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドである請求項21に記載の方法。 24．前記オリゴマーモノマーがアミノ酸、ペプチド又はそれらの組合せである、請求項23に記載の方法。 25．前記同定用標識配列を増幅して増幅同定用標識を作り、そして前記増幅同定用標識をシーケンシングする段階を更に含んで成る請求項24に記載の方法。 26．第１同定用標識の付加の後、次の同定用標識を末端から２番目の標識の末端に付加させる、請求項21に記載の方法。 27．固相支持体上にペプチド及びオリゴヌクレオチドを合成する方法であって、ａ）第１タイプの保護基によりブロックされた第１タイプの活性部位及び第２タイプの保護基によりブロックされた第２タイプの活性部位を含む二価の固相支持体を調製し；ｂ）前記固相支持体を活性剤と反応させて前記の第１タイプの保護基を除去し、これにより前記の第１タイプの活性部位を暴露させ；ｃ）前記の第１タイプの活性部位にオリゴヌクレオチドモノマー又はオリゴヌクレオチドをカップル化させ；ｄ）前記固相支持体を活性剤と反応させて前記の第２タイプの保護基を除去し、これにより前記の第２タイプの活性部位を暴露させ；ｅ）前記の第２タイプの活性部位にペプチドモノマー又はペプチドをカップル化させ；次いでｆ）ｂ）からｅ）の段階を１〜20回繰り返す；ことを含んで成る方法。 28．前記固相支持体が、ポリスチレン／ポリジビニルベンゼン／ポリメチルメタクリレートCOOHビーズである、請求項27に記載の方法。 29．前記の二価の固相支持体がアミン活性部位及びヒドロキシル活性部位を含む、請求項27に記載の方法。 30．前記の二価の固相支持体が、（ａ）ポリスチレン／ポリジビニルベンゼン／ポリメチルメタクリレートCOOH ビーズを４，９−ジオキサ−１，12−ドデカンジアミンリンカーで誘導し；（ｂ）前記ビーズをHBTU，HOBt及びDIEAの存在下において４−Fmoc−アミノ酪酸及び４−ｐ，ｐ’−ジメトキシトリチル−ヒドロキシ酪酸で処理すること；により製造される方法。 31．前記オリゴヌクレオチドを、（ａ）Ｎ⁶−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシアデノシン；（ｂ）Ｎ⁴−（アリルオキシ）カルボニル−２’−デオキシシチジン；（ｃ）Ｎ²−（アリルオキシ）カルボニル−７−デアザ−２’−デオキシグアノシン；及び（ｄ）チミジンの５’−DMT誘導体の３’−（アリルＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−ホスホラミジットを用いて集成する、請求項27に記載の方法。 32．前記オリゴヌクレオチドを、前記ヌクレオチド上に光化学除去性保護基を用いて集成する請求項27に記載の方法。