FR3047175A1 - Compositions cosmetiques, dermatologiques comprenant un extrait de vitex negundo enrichi en polyphenols - Google Patents
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Abstract
L'invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, typiquement un extrait racinaire obtenu selon un procédé Plante à Traire®. L'invention concerne également une telle composition pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires, ou encore pour son utilisation dans la prévention ou le traitement du vieillissement cutanée qu'il soit d'origine extrinsèque ou intrinsèque. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait.
Description
La présente invention a trait à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols. La composition selon l'invention est utile avantageusement dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, et dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires.
Vitex Negundo a pour nom commun Muguet bleu ou Troène de Chine, et est appelé nôti à la Réunion, Chinduravam Notchi en tamoul, ou Huang Ping en chinois par exemple. Vitex Negundo est un arbuste originaire d'Inde appartenant à la famille des Verbénacées ou Lamiacées, pouvant atteindre un à deux mètres de haut, présentant de petites fleurs bleues à violettes de trois à cinq millimètres. Les feuilles, qui sont les plus utilisées en médecine traditionnelle, se décomposent en trois ou cinq folioles de forme lancéolée. Cette plante est largement distribuée à travers le monde et on la retrouve en Afghanistan, Pakistan, Sri Lanka, Afrique de l'Est, Madagascar et est cultivée largement en Asie, Europe, Amérique du Nord.
La phytochimie de Vitex Negundo a été décrite par Vishal R. Tandon (Natural Product Radiance 2005, 4(3), 162-165) et Vishwanathan et al (EJBS 2010, 3(1), 30-42), et est résumée dans le tableau ci-dessous.
Des extraits de diverses parties de la plante de Vitex negundo cultivée ou obtenue dans son milieu naturel présentent de multiples propriétés pharmacologiques. Ont été notamment recensés : - des propriétés antalgiques et analgésiques, notamment de l'extrait de feuilles et de racines administré dans le péritoine ; - des propriétés anti-inflammatoires, et notamment anti-arthritiques et antiarthrosiques, des feuilles, racines et graines ; - des effets anti-fongiques d'un extrait éthanolique de feuilles constitué de flavonoïdes (Sathiamoorthy et al, Bioorg Med. Chem. Lett. 2007, 17(1), 239-242) ; - des effets anti-bactériens sur certaines souches bactériennes, de l'huile essentielle et d'extraits éthanoliques ou acétate d'éthyle.
En outre, le Vitex Negundo est utilisé à la Réunion dans le traitement des crises de chikungunya (S. SAVRIAMA- Ethnopharmacologia, n°52, 2014).
Traditionnellement, Vitex Negundo est souvent utilisé en décoction, de feuilles principalement, et plus rarement de racines.
Dans les rites ayurvédiques, la plante de Vitex Negundo est utilisée pour ses propriétés vermifuges et antihelminthiques.
Toutefois, toutes ces utilisations impliquent la destruction de tout ou partie de la plante. Or, de nouveaux règlements visent à contrôler l'accès à la biodiversité et le partage des bénéfices qui en sont issus. En particulier, le Protocole de Nagoya et la norme internationale (ISO 26000) fournissent des lignes directrices considérées comme la référence en matière de développement durable et de responsabilité sociale.
Par ailleurs, les extraits « traditionnels » de Vitex Negundo présentent une composition phytochimique, c'est-à-dire une concentration en principes actifs, et notamment en polyphénols, non optimale pour des applications cosmétiques ou dermatologiques.
Il existe donc un besoin pour de nouvelles compositions cosmétiques et/ou dermatologiques comprenant un extrait de Vitex Negundo optimisé en termes cosmétiques et/ou dermatologiques, qui soit en outre respectueux des principes de développement durable en termes sociaux et environnementaux.
La Demanderesse a découvert que des extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols, obtenus notamment par culture en aéroponie selon une variante de la technologie Plante à Traire® de la société Plant Advanced Technologies (technologie décrite notamment dans la demande internationale WO 01/33942), présentent une composition phytochimique ainsi que des propriétés cosmétiques et dermatologiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que de tels extraits de Vitex negundo sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques.
Ils présentent en effet une teneur d'au moins 5% en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec, plus élevée que des extraits de Vitex Negundo obtenus à partir de plantes cultivées en terre.
Par ailleurs, il a été démontré que Vitex negundo, cultivée dans ces conditions particulières d'aéroponie, avec notamment une solution nutritive adaptée et un éliciteur adapté, ne produit pas les molécules habituellement décrites dans l'art antérieur pour cette plante, notamment les flavonoïdes extrêmement décrits que sont la vitexine et ses dérivés, contrairement aux pieds-mères cultivés dans des conditions habituelles en terre.
La Demanderesse a par ailleurs découvert que ces extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols présentent des propriétés anti-inflammatoires, antioxydantes et anti-pollution. Or, les phénomènes inflammatoires, les attaques radicalaires, les phénomènes amplifiés par la pollution et les expositions UV sont à l'origine des phénomènes de vieillissement chronologiques et actiniques. Les extraits de Vitex Negundo enrichis en polyphénols et les compositions cosmétiques et dermatologiques les comprenant sont donc utiles par exemple en tant que soin anti-âge, notamment contre le vieillissement chronologique et actinique de la peau, des muqueuses ou des phanères.
La présente invention a ainsi pour objet une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié.
La présente invention a également pour objet une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, pour utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, et dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires.
La présente invention a également pour objet un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, comprenant ou consistant en l'administration d'une composition de l'invention. Définitions
Par « extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols » ou « extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols », on entend au sens de la présente invention un extrait de Vitex Negundo comprenant au moins 5 % en poids, par exemple entre 5% et 10%, de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec. Ces pourcentages sont notamment obtenus par un dosage de Folin-Ciocalteu.
Dans un dosage de Folin-Ciocalteu, l'ensemble des composés phénoliques est oxydé par le réactif de Folin-Ciocalteu (disponible dans le commerce). Ce dernier comprend un mélange d'acide phosphotungstique (Η3Ρ\Λ/ι2Ο40) et d'acide phosphomolybdique (H3PM012O40) qui est réduit, lors de l'oxydation des substances phénoliques, en un mélange d'oxydes bleus de tungstène (W8023) et de molybdène (Mo8023). La coloration bleue produite possède une absorption maximale aux environs de 750-760 nm. Elle est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques oxydés. Le phénol de référence utilisé dans cette méthode est l'acide gallique. Les résultats obtenus par ce dosage sont donc exprimés en « % en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec ».
De préférence, l'« extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols » ou l'« extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols » est enrichi en dérivés d'acide dicaféoylquinique (DCQ), notamment les acides 3,5- Di-Caffoyl-Quinique (3,5-DCQ) et 4,5- Di-Caffoyl-Quinique (4,5-DCQ).
Par "acide dicaféoylquinique" (pouvant être abrégé en « DCQ » dans la présente description), on entend un diester composé d'une molécule d'acide quinique dont deux des quatre fonctions alcools ont été estérifiées par l'acide caféique. Les acides dicaféoylquiniques sont donc des acides de formule générale (I) :
(I) dans laquelle deux quelconques des radicaux R2, R3, R4 et R5 représentent un groupement caféyl, les deux autres représentant un atome d'hydrogène.
Par « groupement caféyl », on entend un radical de formule générale (II), issu de l'acide caféique : (II)
Les différents isomères de DCQ sont donc des acides de formule générale (I), avec R2, R3, R4 et R5 tels que définis dans le tableau ci-dessous.
Dans la présente invention, on entend par « partie » d'une plante toute partie constitutive d'une plante telle que les racines, la tige, les feuilles, le fruit, la peau, les graines ou le noyau. Dans le cadre de l'invention, on entend par « culture des plantes en aéroponie », un mode de culture hors sol pour lequel les racines des plantes ne sont en contact ni avec un milieu solide, ni même avec un milieu liquide : elles sont alimentées par un brouillard nutritif obtenu par brumisation (via un brumisateur) de la solution nutritive dans un milieu fermé, tel que décrit par exemple dans la demande internationale WO 01/33942.
Par « exsudation racinaire », on entend la récupération des métabolites contenus dans les racines des plantes au moyen d'un liquide mis en contact par percolation, aspersion ou immersion avec les racines, encore accrochées à la plante vivante ou fraîchement coupées (depuis moins de 24 heures, et de préférence le plus tôt possible après coupage, idéalement juste après coupage). En particulier, l'exsudation racinaire peut être effectuée grâce à une
étape de macération des racines des plantes, fraîchement coupées et/ou encore accrochées à la plante vivante, dans un solvant approprié et pendant une durée appropriée.
Dans la présente invention, on entend désigner par « cosmétiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition cosmétique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation cosmétique, notamment humaine.
Dans la présente invention, on entend désigner par « dermatologiquement acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition dermatologique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation dermatologique, notamment humaine.
Description détaillée
La présente invention concerne en premier lieu une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié, notamment dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable. L'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols des compositions de l'invention se présente de préférence sous forme liquide. Toutefois, les teneurs des divers constituants (notamment les polyphénols, et plus particulièrement les DCQ) de l'extrait sont exprimées par rapport au poids de l'extrait « sec ». Cet extrait « sec » est typiquement obtenu par évaporation du solvant à l'étuve à 105°C, jusqu'à obtention d'un extrait à poids constant. L'extrait « sec » ainsi obtenu est donc essentiellement dépourvu de substances volatiles, notamment les solvants et en particulier l'eau. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols est avantageusement obtenu par un procédé faisant intervenir la technologie Plante à Traire® de la société Plant Advanced Technologies (technologie décrite notamment dans la demande internationale WO 01/33942) qui permet de réaliser des extractions successives à partir des racines de la plante (traite) sans la détruire. Dans ce cadre, les plantes sont cultivées en aéroponie et sont alimentées par pulvérisation racinaire d'une solution de sels essentiels, nutritifs (Azote - N, Phosphore - P, Potassium - K), précisément mise au point en termes de proportions et de concentration, afin d'obtenir un développement racinaire maximum, sans altérer la survie de la plante. La plante est ponctuellement stressée et/ou élicitée par des substances appropriées, permettant une meilleure production des molécules identifiées comme d'intérêt, ici les polyphénols, et notamment les DCQ, notamment le 4,5-DCQ.
Les extraits de Vitex Negundo riches en polyphénols des compositions de l'invention sont obtenus selon un procédé comprenant les étapes successives suivantes : a) culture de Vitex negundo en aéroponie ; b) de préférence, stimulation des racines des plantes ; c) extraction par exsudation racinaire des plantes ; d) isomérisation des acides dicaféoylquinique obtenus en acide 4,5-dicaféoylquinique, et e) purification et concentration de l'extrait ainsi obtenu par filtrations successives, en particulier par nanofiltration et/ou filtration stérilisante. L'homme du métier, à l'aide de ses connaissances générales, sait comment adapter les proportions et concentrations des différents sels minéraux pour optimiser le développement racinaire et la concentration des molécules d'intérêt. Les concentrations en sels minéraux des solutions nutritives sont avantageusement comprises dans une gamme d'électroconductivité allant de 0,2 à l,6mS. L'étape a) est avantageusement effectuée pendant une durée comprise entre 1 semaine et huit semaines. L'étape b) de stimulation permet d'augmenter de manière significative la teneur des métabolites dans les racines et ainsi favoriser le flux comprenant les métabolites sortant des racines vers le solvant choisi pour la macération et ce, sans perte totale de la viabilité de la plante afin qu'elle puisse être réutilisée. En d'autres termes, l'étape de stimulation de la plante permet de favoriser la teneur et la sécrétion des molécules d'intérêt.
Avantageusement, l'étape b) de stimulation est réalisée par pulvérisation de la plante avec une solution d'éliciteurs choisie parmi les dérivés d'acide jasmonique, les générateurs d'éthylène, les chitines, les chitosanes et leurs mélanges. En outre, l'étape b) est avantageusement effectuée pendant une durée comprise entre 1 jour et deux semaines. L'étape b) peut être effectuée de manière simultanée ou après l'étape a). Dans le cas où l'étape b) est effectuée de manière simultanée à l'étape a) (dans ce cas, de préférence à la fin de l'étape a), plus longue), la solution de stimulation peut être introduite dans la solution nutritive.
Les plantes ainsi cultivées sont ensuite soumises à une étape c) d'extraction par exsudation racinaire dans des conditions déterminées en termes de solvant d'extraction, pH et durée d'extraction, afin d'obtenir un extrait riche en molécules d'intérêts, c'est-à-dire en polyphénols, notamment en acides dicaféoylquiniques. Cette étape c) permet la récupération des métabolites (DCQ) libérés par les racines des plantes au moyen d'un liquide mis en contact par percolation ou immersion avec les racines.
Avantageusement, l'étape c) d'exsudation racinaire est effectuée par macération des racines pendant une durée comprise entre 30 minutes à 96 heures, notamment entre 12 heures et 72 heures, plus particulièrement entre 24 heures et 48 heures. La durée d'exsudation racinaire est choisie de manière à favoriser l'extraction d'une forte teneur en composés d'intérêt tout en altérant pas la survie de la plante et sans mener à l'épuisement des ressources. L'extraction est avantageusement réalisée à pH acide. L'étape d) d'isomérisation est réalisée selon des techniques connues de l'homme du métier, notamment par réajustement successifs de pH de l'extrait (extraction à pH acide, réajustement à pH basique par une solution de base forte et réajustement final à pH acide par l'ajout d'un acide fort). L'étape d) permet d'obtenir un extrait de Vitex Negundo caractérisé en ce que la majorité des acides dicaféoylquiniques qu'il comprend sont sous la forme de l'isomère 4,5-0-dicaféylquinique.
Enfin, l'extrait obtenu à la suite de l'étape d) est soumis à une dernière étape e) de purification et concentration par filtrations successives, en particulier par nanofiltration et/ou filtration stérilisante. Cette étape permet d'obtenir l'extrait final de Vitex Negundo riche en polyphénols, notamment en DCQ. L'extrait ainsi obtenu pourra se présenter sous forme liquide ou solide. L'extrait sous forme solide est avantageusement obtenu par séchage de l'extrait liquide, selon les méthodes connues de l'Homme de l'art, telles l'atomisation ou la lyophilisation par exemple avec, ou sans support telle la maltodextrine. L'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols des compositions de l'invention comprennent avantageusement au moins 5%, par exemple entre 5% et 10%, en particulier au moins 6 %, plus particulièrement au moins 7 %, en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec.
Autrement dit, l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols de la présente invention comprend avantageusement au moins 7% en poids de polyphénols, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total de l'extrait sec dudit extrait (avant ajout éventuel d'un support de séchage) ou 1.3 mg de polyphénols par mL d'extrait liquide et plus spécifiquement au moins 5% en poids de DCQ totaux soit 1.1 mg de DCQ par mL d'extrait liquide.
Parmi les polyphénols présents dans cet extrait, les DCQ sont particulièrement intéressants. Ainsi, dans une variante avantageuse de l'invention, l'extrait selon l'invention peut se caractériser par sa teneur en DCQ, et plus particulièrement un mélange de ses différents isomères, comprenant majoritairement le 4, 5 -DCQ. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols comprend ainsi avantageusement au moins 1,5 % en particulier au moins 2,5 %, plus particulièrement au moins 4 %, notamment au moins 5%, de préférence au moins 6 %, en poids des acides dicaféoylquiniques, par rapport au poids total de l'extrait sec. Lesdits acides dicaféoylquiniques sont notamment les isomères d'acide 3,4-dicaféoylquinique (3,4-DCQ), 3,5-dicaféoylquinique (3,5-DCQ) et 4,5-dicaféoylquinique (4,5-DCQ). De préférence, dans l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, au moins 40 % en poids des acides dicaféoylquiniques sont sous la forme de l'isomère 4,5-dicaféoylquinique, par rapport au poids total d'acides dicaféoylquiniques. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols obtenu par le procédé ci-dessus présente la particularité de contenir une très faible quantité de flavonoïdes, usuellement présents en grande quantité dans les extraits de Vitex Negundo de l'art antérieur. Notamment, la plante Vitex Negundo cultivée dans les conditions énoncées ci-dessus synthétise et sécrète une très faible quantité des flavonoïdes tels que la vitexine et ses dérivés.
Ainsi, avantageusement, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols comprend moins de 0,5% en poids, de préférence moins de 0,2 % en particulier moins de 0,1 %, plus particulièrement moins de 0,05 %, notamment moins de 0,01 %, en poids de flavonoïdes, par rapport au poids total de l'extrait sec.
Selon une variante avantageuse de l'invention, la composition cosmétique ou dermatologique contient 0,001 à 10 %, typiquement 0,01 à 5 %, en poids d'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols par rapport au poids total de la composition. Dans ces compositions, l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols est de préférence sous forme liquide.
En fonction du type d'administration souhaitée, la composition et/ou les composés actifs selon l'invention peuvent en outre comprendre au moins un excipient dermatologiquement acceptable, ou un excipient cosmétiquement acceptable. Selon la première variante, on utilise un excipient adapté pour une administration par voie topique externe, notamment sur la peau, les phanères et/ou les muqueuses, en particulier les peaux, les phanères et/ou les muqueuses sensibles ou agressées par l'environnement, par exemple par les UV ou la pollution.
La composition sera avantageusement sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique, incluant notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.
La composition selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant dermatologique ou cosmétique connu de l'homme du métier, choisi par exemple parmi les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc.
La composition peut en outre comprendre au moins un autre composé actif en plus de l'extrait de Vitex Negundo riche en polyphénols. L'invention a également trait à une composition selon l'invention pour utilisation pour prévenir et/ou traiter : - des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, - des troubles vasculaires, et/ou - les troubles liés à l'âge.
En particulier, la composition selon l'invention est destinée à la prévention et/ou au traitement des réactions inflammatoires, des réactions d'oxydation, des désordres liés à des attaques radicalaires liées ou non à la pollution, des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
En particulier, les compositions de l'invention sont utiles en tant que soin anti-âge, notamment contre le vieillissement chronologique et actinique de la peau, des muqueuses ou des phanères.
Avantageusement, la composition selon l'invention peut être utilisé(e) pour la prévention et/ou le traitement des réactions, troubles ou pathologies : - de la peau, notamment la rosacée ou érythrocouperose, la peau sensible, la peau réactive, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée, la peau avec rougeur, l'érythème cutané, la peau âgée ou photoâgée, la peau photosensibilisée, la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), la peau relâchée ; - des muqueuses, telles que les gencives et parodontes pouvant présenter des gingivites (gencives sensibles des nouveaux nés, problèmes d'hygiène, dus au tabagisme ou autres), des parodontopathies, ou des muqueuses génitales pouvant présenter des irritations des sphères génitales mâles ou femelles externes ou internes, et/ou - troubles liés à des réactions inflammatoires et radicalaires provoqués par des expositions aux UV, et/ou à des polluants ou réactions intrinsèques et engendrant ainsi un vieillissement accéléré, des troubles de la barrière, vasculaires, des rougeurs ....
La composition selon l'invention est également particulièrement utile dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires, en particulier pour la protection des vaisseaux sanguins et/ou pour agir sur la circulation sanguine, notamment la microcirculation sanguine. Le trouble vasculaire est typiquement choisi parmi: la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés. Notamment, la composition selon l'invention est utile dans la prévention et/ou le traitement des rougeurs et des couperoses, ainsi que dans la prévention et/ou le traitement du vieillissement cutané lié à des causes intrinsèques ou extrinsèques.
La composition selon l'invention est donc avantageusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement de la dilatation (chronique) des capillaires sous-cutanés qui peut se produire dans les conditions telles que la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit, en particulier dans la prévention du vieillissement, et du vieillissement photo-induit.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit cicatrisant, dans la prévention et/ou le traitement des troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée.
On entend par troubles liés à la cicatrisation et à l'organisation cutanée, les troubles résultant des processus de cicatrisation et d'organisation cutanée de la peau telles qu'une peau relâchée, des vergetures, des dartres, des gerçures, des crevasses en particulier au niveau des seins.
En particulier, la composition selon l'invention est utilisé(e) en tant que produit hydratant, intervenant dans la prévention et/ou le traitement des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s).
On entend par troubles de la barrière de la peau, des phanères et/ou des muqueuses les troubles intervenant au niveau de la couche extérieure de l'épiderme.
On entend par troubles de l'homéostasie de la peau, des phanères et/ou des muqueuses les troubles résultant des processus de renouvellement et d'équilibre des cellules telles que le psoriasis, la dermite du siège, la dermatite atopique, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée et la peau photosensibilisée.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée dans le traitement et/ou la prévention des inflammations dues aux rayons de toutes sortes, en particulier des coups de soleil.
La composition selon l'invention est également avantageusement utilisée en tant que produit dépigmentant, notamment dans le traitement de la peau pigmentée (mélasma, pigmentation post-inflammatoire...), ou pour réduire les tâches de vieillesse par exemple. L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, comprenant ou consistant en l'administration, de préférence par voie topique, d'une composition selon la présente invention.
En particulier, l'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau, en vue d'en prévenir le vieillissement, comprenant ou consistant en l'application sur la peau d'une composition selon la présente invention.
Avantageusement, dans le procédé de soin cosmétique de l'invention, la composition de l'invention est utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit, ou encore en tant que produit hydratant.
Les modes d'administration, les posologies et les formes galéniques optimales des composés et compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement dermatologique et/ou cosmétique adapté à un patient, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau.
Les exemples qui suivent sont donnés à titre purement illustratif, et ne sauraient en aucun cas limiter la portée de la présente invention.
EXEMPLES I. Préparation d'un extrait de Vitex Neaundo enrichi en polyphénols de l'invention
Un extrait polyphénolique de Vitex negundo enrichi en polyphénols, notamment en DCQ, est obtenu selon le procédé suivant : a) Culture de Vitex Negundo en aéroponie selon le procédé breveté PAT avec une solution nutritive définie (de composition N/P/K 15/10/30 à une électroconductivité comprise entre 0,2 et l,6mS) ; b) Stimulation de la plante pendant une durée d'une semaine avec un éliciteur tel que décrit ci-dessus ; c) Extraction des molécules d'intérêt par macération des racines de la plante dans un mélange Propylène glycol/eau 70/30, pendant une durée de deux fois 48 heures à température ambiante et à un pH de 1,6 ; à la fin de l'extraction, la concentration en propylène glycol est ré-ajustée à 60% ; d) La solution obtenue subit des étapes d'ajustements successifs du pH pour aboutir à un pH final de 3,5 ; e) L'extrait est purifié (élimination des sels par nanofiltration) et concentré par filtrations successives dont nanofiltration et filtration stérilisante. L'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes (% sur Extrait Sec, obtenu par évaporation du solvant à l'étuve ventilée à 105°C jusqu'à obtention d'un extrait à poids constant): • Extrait sec : 1.8% (m/m)
• Teneur en polyphénols totaux (équivalent acide gallique) : 9.5% / ES
• Teneur en dérivés Di-Cafféoyl Quinique totaux (HPLC) : 6.5% /ES
• Teneur en 4, 5-DCQ (HPLC): 3.3%/ES • Teneur en cendres : 14.5%.
Comparaison avec un extrait de Vitex negundo « classique »
Un extrait de racines sèches et de feuilles sèches issues d'un plant de Vitex negundo cultivé en terre selon les techniques classiques (appelé « extrait non PAT »), mais dans le même environnement (serre), est obtenu selon les modalités suivantes : a) Les racines ou les feuilles sèches de Vitex negundo sont broyées b) Les matières premières obtenues sont extraites séparément à température ambiante dans un mélange glycérol/eau 70/30 à pH 1.6, c) L'extrait est purifié par filtrations.
Cet extrait est comparé à un extrait de Vitex negundo (appelé « extrait PAT ») obtenu selon le procédé ci-dessus comprenant les étapes a, b, c et e, mais ne comprenant pas l'étape (d) d'isomérisation.
Les valeurs de dosages obtenues par HPLC sont les suivantes (%, concentration des molécules d'intérêt /extrait sec de l'extrait total obtenu) :
On constate que l'extrait PAT ne contient pas de flavonoïdes. Mais de manière spécifique, il contient une concentration beaucoup plus importante de polyphénols, notamment de dérivés hydroxycinnamiques. II. Activités Biologiques
Dans les tests qui suivent (sauf concernant les tests sur Expiant de peau au point 11.4), un extrait liquide de Vitex Negundo de l'invention, obtenu selon le procédé de l'Exemple 1 (procédé comprenant l'étape d) d'isomérisation) est utilisé. Celui-ci est éventuellement testé pour différentes dilutions. Les extraits de Vitex Negundo de l'invention sont alors caractérisés par leur concentration par rapport à la concentration de l'extrait initial, la concentration étant exprimée en en % d'extrait sec correspondant introduit. 11.1. Screening préliminaire d'activité sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélanisés
Les activités biologiques potentielles de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols ont été recherchées par un test de modulation d'expression de gènes sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélanisés. Ainsi, l'expression de 95 gènes d'intérêts majeurs en physiologie cutanée et cosmétique a été étudiée par PCR-array sur des fibroblastes et des épidermes reconstruits mélanisés. a. Matériel et Méthodes : L'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols (0,01%, matière sèche) a été ajouté dans le milieu de culture des fibroblastes ou des épidermes humains mélanisés reconstitués pendant 6h et 24h.
L'expression des marqueurs sélectionnés a été évaluée par RT-PCR quantitative (carte microfluidique). La variation d'expression des marqueurs étudiés par rapport au témoin a été exprimée en expression relative (RQ, RQ>1 : augmentation, RQ<1 : diminution). b. Résultats
Les résultats les plus significatifs sont présentés dans le tableau ci-dessous et tendent à montrer que l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols, en faisant varier l'expression génique de certains marqueurs, semblent avoir un intérêt particulier dans les activités suivantes :
La cicatrisation et le renforcement de la matrice dermique : 71 Urokinase type activateur de plasminogène (« plasminogen activator ») (PLAU) : joue un rôle dans la migration des kératinocytes durant le processus de ré-épithélialisation lors de la cicatrisation cutanée ; 71 Dermatopontine (DPT) : constituant de la matrice dermique, joue un rôle dans l'adhésion des fibroblastes et active la fibrillogenèse des collagènes ; ^1 Protéine CYR61 : joue un rôle dans le remodelage de la matrice dermique en réduisant la production de composant de la matrice dermique, en activant les métalloprotéinases et en activant l'expression de cytokines pro-inflammatoires.
Les défenses anti-microbiennes, anti-oxydantes et anti-inflammatoires : 71 Hème oxygénase 1 (HMOX1) : impliquée dans la dégradation de Thème, rôle protecteur contre le stress oxydant ; 71 Lactotransferrine (LTF) : présente une activité anti-microbienne de par sa capacité à se lier au fer, stimule la ré-épithélialisation, la prolifération des kératinocytes et fibroblastes et active la synthèse de composants de la matrice extracellulaire ; ^1 Prostaglandine G/H synthase 2 (PTGS2) : enzyme qui catalyse la synthèse de la prostaglandine, marqueur impliqué dans l'activation de l'inflammation.
La jonction dermo-épidermique : 71 Collagène 7 alpha 1 (COL7A1) : composant de la jonction dermo-épidermique, forme des fibrilles permettant l'accrochage de la lame basale au derme. 71 Laminine sous-unité (« subunit ») beta-3 (LAMB3) : constituant de la lame basale qui permet l'accrochage de la lame basale à l'épiderme.
Le processus de desquamation : 71 Kallikréine 5 (KLK5) : impliquée dans la maturation de la couche cornée.
Variations de l'expression de gènes d'intérêt dans des fibroblastes et épidermes reconstruits.
//.2. Matrice dermique a. Introduction
Afin d'étudier le potentiel de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols sur la matrice dermique et son vieillissement, son effet sur le niveau d'expression génique de marqueurs de la matrice extracellulaire (MEC) a été évalué. L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux. L' effet de l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols a aussi été évalué sur des fibroblastes en fonction de l'âge en utilisant des cellules issus d'un donneur de 28 ans, d'un donneur de 54 ans et sur des fibroblastes issus du donneur de 28 ans, rendus sénescents in vitro par réplications successives. b. Matériels et méthodes
Des fibroblastes humains normaux ont été traités pendant 24h et 48h par l'extrait de Vitex negundo enrichi en polyphénols à 0,005% et 0,01%. En parallèle, un témoin (cellules contrôles) a été réalisé en traitant des fibroblastes par du monopropylène glycol (solvant d'extraction). L'expression génique des marqueurs sélectionnés a été analysée par RT-PCR quantitative en temps réel.
Les résultats ont été analysés statistiquement par un test de Student :
ns p>0,05 : non significatif, * 0,01< p<0,05 : significatif, ** 0,001< p<0,01 : très significatif, ***p<0,001 : hautement significatif.
Le niveau d'expression génique a été exprimé en quantité relative (QR) et l'effet du traitement par rapport aux cellules contrôles en pourcentage d'augmentation, c. Résultats c.l. Fibroblastes « jeunes » L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur de 28 ans utilisés aux points 11.4 et 11.5. Les résultats présentés ci-dessous correspondent à une durée de traitement de 48h.
Expression génique de marqueurs de la matrice dermique par des fibroblastes « jeunes » Résultats exprimés en quantité relative
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté significativement l'expression génique de l'élastine, la fibrilline, la décorine et le collagène VII. Toutes ces protéines sont des protéines structurelles de la matrice dermique. L'élastine et la fibrilline sont des marqueurs impliqués dans l'élasticité du derme. La décorine contrôle le bon assemblage du réseau de collagène. Le collagène VII est un marqueur présent dans la jonction dermo-épidermique et permet le bon ancrage de la matrice à l'épiderme. En augmentant ces marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer au maintien d'une bonne structure du derme. c.2. Fibroblastes « âgés » L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur de 54 ans utilisés aux points 11.4 et 11.5. Les résultats présentés ci-dessous correspondent à une durée de traitement de 24h.
Expression génique de marqueurs de la matrice dermique par des fibroblastes « âgés » Résultats exprimés en quantité relative
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté significativement l'expression génique du collagène III, décorine, dermatopontine, collagène IV et a diminué significativement le marqueur MMPI. Toutes ces protéines participent à l'élaboration de la matrice dermique. Comme décrit ci-dessus, la décorine contrôle le bon assemblage du réseau de collagène et le collagène IV comme le collagène VII est un marqueur présent dans la jonction dermo-épidermique qui permet le bon ancrage de la matrice à l'épiderme. La MMPI, quant à elle, est une enzyme qui catalyse la dégradation des collagènes. En inhibant la MMPI et en augmentant les autres marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi favoriser la synthèse et la bonne structure de la matrice dermique. c.3. Fibroblastes « sénescents » L'étude a été réalisée sur des fibroblastes dermiques normaux humains issus d'un donneur âgé de 28 ans. Les fibroblastes ont été vieillis in vitro par réplications successives. La sénescence a été vérifiée par l'évaluation de marqueurs de sénescence (augmentation du marqueur Beta-galactosidase, augmentation du marqueur génique p21 (+145%)). Les résultats présentés ci-dessous correspondent à une durée de traitement de 24h.
Expression génique de marqueurs de la matrice dermique par des fibroblastes « sénescents » Résultats exprimés en quantité relative
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a augmenté l'expression génique de la décorine, du collagène VII et de la sirtuine 1. Les deux premiers marqueurs sont impliqués dans
la structure de la matrice dermique et son bon accrochage à la lame basale. La sirtuine 1 est un marqueur de longévité qui retarde la sénescence cellulaire. En augmentant ces marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer à maintenir une bonne structure de la matrice dermique et à ralentir la sénescence cellulaire. d. Conclusions
Un effet positif de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols sur la matrice dermique a été mis en évidence sur des fibroblastes « jeunes », « âgés » et « sénescents ». L'extrait de Vitex Negundo semble ainsi contribuer au maintien d'une bonne structure de la matrice dermique et ainsi contribuer à protéger la peau du vieillissement cutané. 11.3. Action antioxydante et anti-inflammatoire a. Evaluation de l'effet anti-oxydant de l'extrait de Vitex Negundo L'évaluation de l'effet anti-oxydant de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols se fait grâce à l'incorporation de DCFH-DA (2',7'-Dichlorofluorescin diacetate) dans des kératinocytes en culture. Cette molécule est un marqueur non fluorescent à l'état non oxydé. En condition oxydante (ici stress induit par le peroxyde d'hydrogène, H202), le DCFH-DA va être dégradé en DCF, molécule qui va émettre de la fluorescence. La fluorescence ainsi mesurée sera proportionnelle à la quantité d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) produites par la cellule en présence de H202 et/ou actif. a.l. Matériels et méthode
Des kératinocytes humains normaux ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux concentrations de 0,0005% ; 0,001% et 0,005% (p/v), et de monopropylène glycol à 0,016%, 0,03% et 0,16% (témoins correspondants aux concentrations en solvant contenues dans les concentrations en extrait de Vitex Negundo étudiées), de Quercétine à 10μΜ ou de Vitamine C à 500μΜ (ces deux dernières molécules servant de référence anti-oxydante).
Les cellules sont ensuite traitées lh en présence de DCFH-DA à 0,5mM. L'oxydation est induite par ajout de H202 à 100μΜ pendant 20min. Un deuxième traitement par les produits testés est effectué simultanément au stress H202 (aux mêmes concentrations que le pré-traitement).
Enfin, une mesure de la densité de fluorescence (DFU) correspondant à la quantité d'ERO est réalisée à l'aide d'un lecteur microplaque.
Parallèlement, le nombre de cellules biologiquement actives a été déterminé par un test au Rouge Neutre. La quantité d'ERO (espèces réactives de l'oxygène) mesurée pour chaque condition a été normalisée par rapport au nombre de cellules vivantes déterminé par le test au rouge neutre.
Le caractère significatif des résultats a été vérifié par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tuckey (logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). a.2. Résultats
Production d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) dans des kératinocytes traités par le peroxyde d'hydrogène (H202) *** p<0,001 ; ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
Une augmentation de la production des ERO a été observée après traitement par l'H202 validant ainsi le modèle. La Quercétine et la Vitamine C ont significativement diminué la production des ERO suite au traitement par H202. L'effet anti-oxydant de ces deux références a bien été validé sur le modèle. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux trois concentrations a significativement diminué la production des ERO induits par un stress H202. a.3. Conclusion
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a démontré un fort effet anti-oxydant face un stress induit par H202. b. Evaluation de l'effet anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo La réponse inflammatoire est la réponse normale, immédiate et transitoire de l'organisme vis à vis de toute agression de l'environnement. Cependant, dans certaines conditions pathologiques ou physiologiques, cette réaction inflammatoire peut être exacerbée et, mal contrôlée, peut conduire à des dommages tissulaires. Au niveau de la peau, le kératinocyte est l'une des premières cellules participant à l'initiation de la réaction inflammatoire en réponse à une agression de l'environnement.
Le kératinocyte « agressé » va alors relarguer : - des cytokines primaires (ILla, Ιίΐβ ou TNFa) ou secondaire (IL8) qui vont induire une cascade de réactions impliquant le système immunitaire. - des prostaglandines (PGE), qui font partie de la famille des prostanoïds. La voie de synthèse des prostaglandines qui aboutit à la synthèse de la PGE2 et d'autres PGEs est induite par des stimuli inflammatoires. L'activité anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été évaluée sur un modèle d'inflammation induite sur kératinocytes par un traitement au PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate). Le relargage des cytokines lnterleukin-1 beta (Ιίΐβ) et Prostaglandine E2 (PGE2) a été analysé. b.l. Matériels et méthode
Des kératinocytes humaines normaux ont été pré-traités pendant 24h par l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols aux concentrations de 0,0005% et 0,001%, de monopropylène glycol à 0,015% et 0,03% (témoin solvant), de dexaméthasone à Ο,ΙμΜ et d'indométacine à Ο,ΙμΜ (ces deux dernières références servant de référence anti-inflammatoire pour les cytokines et prostaglandines respectivement). L'inflammation a ensuite été induite par ajout de PMA à 10pg/mL pendant une nuit.
Un dosage de Ιίΐβ et PGE2 a ensuite été réalisé dans les surnageants de culture cellulaire. Parallèlement, le nombre de cellules biologiquement actives a été déterminé par un test au Rouge Neutre. La quantité de cytokine dosée pour chaque condition a été normalisée par rapport au nombre de cellules vivantes déterminé par le test au rouge neutre.
Le caractère significatif des résultats a été vérifié par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tuckey (logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). b.2. Résultats
Dosage de Ιίΐβ dans des kératinocytes traités par du PMA à 10pg/ml * p<0,05; **p<0,01 ; ***p<0,001 et ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
Le PMA à 10pg/ml a significativement augmenté le relargage de ILip dans les surnageants de kératinocytes donc le PMA a bien induit une inflammation. La Dexaméthasone à Ο,ΙμΜ, en prétraitement 24h, a diminué le relargage de PGE2. L'effet anti-inflammatoire de cette référence a donc bien été validé. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, en prétraitement 24h aux deux concentrations, a diminué significativement le relargage de ILip et donc a montré une action anti-inflammatoire face au PMA.
Dosage de PGE2 dans des kératinocytes traités par du PMA à 10pg/ml * p<0,05; **p<0,01 ; ***p<0,001 et ns = non significatif - ANOVA à un facteur suivie d'un test de Tukey
Le PMA à 10pg/ml a significativement augmenté le relargage de la PGE2 dans les surnageants de kératinocytes donc le PMA a bien induit une inflammation. L'Indométacyne et la Dexaméthasone à Ο,ΙμΜ, en prétraitement 24h, ont significativement diminué le relargage de PGE2. L'effet anti-inflammatoire de ces deux références a donc bien été validé. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols, en prétraitement 24h aux deux concentrations, a diminué significativement le relargage de PGE2 et donc a montré une action anti-inflammatoire face au PMA. b.3. Conclusion L'effet anti-inflammatoire de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été mis en évidence grâce à son action sur le relargage de l'interleukin-1 beta et de la prostaglandine E2 en condition inflammatoire. 11.4. Effet anti-âge sur expiant de peau
Lors du vieillissement cutané, une altération du derme est couramment décrite. Suite aux résultats de l'étude de l'expression génique de la matrice dermique dans des fibroblastes (augmentation de l'élastine, fibrilline, collagène VII et décorine en autres), le potentiel effet anti-âge de l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a été évalué sur un modèle d'explant de peau. a. Formulation de l'extrait de Vitex Negundo
Pour ce test, l'extrait de Vitex Negundo (liquide) a été utilisé dans une composition de crème comprenant 0.08% ou 2% en poids dudit extrait par rapport au poids total de la crème. b. Matériels et méthode
Des expiants de peau issus d'un donneur âgé de 46 ans ont été traités en topique ou non (NT : expiant contrôle) par les crèmes comprenant 0.8% et 2% d'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols . Une application par jour pendant 5 jours a été réalisée. Les expiants ont ensuite été fixés et inclus en paraffine pour une analyse par immunofluorescence.
La quantification de la fluorescence a été réalisée à l'aide du logiciel Image J. En moyenne, dix images par expiant ont été prises.
c. Résultats
Expression protéique de marqueurs de la matrice dermique et du marqueur Klotho dans des expiants traités par Vitex Negundo (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 ; ns = non significatif)
d. Conclusions
La formulation à 2% d'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a significativement augmenté l'expression de l'élastine, du collagène VII et de Klotho. L'élastine est un composant primordial de la matrice extracellulaire dermique. Cette protéine contribue en grande partie à l'élasticité du derme. Le collagène VII, quant à lui, est un marqueur de la jonction dermo-épidermique. Cette dernière sert d'ancrage du derme à l'épiderme et permet ainsi le maintien de la structure générale de la peau.
La protéine Klotho est une protéine impliquée dans le processus de vieillissement et serait en lien avec la longévité. Son augmentation irait en faveur d'une induction de la longévité et donc retarderait le vieillissement cutané.
En stimulant ces différents marqueurs, l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a donc démontré un effet anti-âge sur le modèle d'explant.
11.5. Protection contre les dommages ADN
De nombreux facteurs intrinsèques et extrinsèques comme les espèces réactives de l'oxygène (ERO) ou les ultraviolets (UV) induisent des dommages de l'ADN pouvant aboutir à des dégâts cellulaires importants, accélérant ainsi le vieillissement cutané. Il existe des mécanismes capables de réparer ces dommages induits sur l'ADN. Cependant, au cours du vieillissement, une diminution des mécanismes de réparation de l'ADN a été observée. La capacité de l'extrait de Vitex Negundo à induire l'activation de ces mécanismes a été étudiée sur des fibroblastes normaux humains. a. Matériels et méthodes
Des fibroblastes humains normaux ont été traités pendant 48h par l'extrait de Vitex Negundo à 0,001% et 0,01% (p/v). En parallèle, un témoin solvant d'extraction a été réalisé en traitant des fibroblastes par du monopropylène glycol (cellules contrôles). L'étude a été réalisée sur des
fibroblastes humains normaux. Après 48h de traitement, les cellules sont trypsinées et congelées. A partir de ces culots cellulaires, des extraits nucléaires sont préparés et un dosage des protéines est effectué.
Les extraits sont ensuite déposés sur une puce fonctionnalisée par des plasmides comportant des séries de lésions de l'ADN spécifiques : -8oxoG (p8oxoG) - bases alkylées (pEtheno) - glycols (pGlycols) - sites abasiques (pAbas) - photoproduits (dimères de pyrimidine et photoproduits 6-4) (pCPD-64) - adduits du Cisplatine (pCisP) - adduits du benzo[a]pyrène (pBPDE)
Les enzymes de réparation de l'ADN, contenues dans les extraits, excisent les lésions (ou le fragment d'ADN entourant les lésions) et incorporent un marqueur (dNTP-biotine) lors de la resynthèse d'ADN. La biotine incorporée est révélée par de la Streptavidine couplée à un fluorochrome, le Cy-5. Le signal fluorescent est quantifié à l'aide d'un scanner. Il est proportionnel aux capacités d'Excision/Resynthèse de chaque extrait vis-à-vis de chacune des lésions. Ce test permet de caractériser les systèmes de Réparation par Excision de Bases (BER), de Réparation par Excision de Nucléotides (NER), et de réparation des adduits inter-brins (ICLR). b. Résultats
Evaluation des voies de la réparation dans des fibroblastes traités par Vitex Negundo
c. Conclusion
L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols favorise les voies de réparation de l'ADN de la 8-oxo-2'-désoxyguanosine (p8oxoG), des sites abasiques (pAbas), des adduits de benzo[a]pyrène (pBPDE) et des bases alkylées (pEtheno). Il semble ainsi contribuer à diminuer le vieillissement prématuré de la peau induit par les dommages ADN non réparés. 11.6. Activation de l'innervation dans des co-cultures kératinoytes âgés /neurones L'épiderme est constitué de nombreuses terminaisons nerveuses libres provenant de neurones sensitifs issus des ganglions rachidiens situés le long de la moelle épinière. Ces neurones possèdent des axones qui transmettent des informations telles que le toucher, la chaleur, la douleur par exemple. La densité d'innervation varie au cours du vieillissement. Ainsi, l'innervation d'une zone donnée est moins importante chez une personne âgée que pour un jeune adulte. Ce phénomène entraîne une diminution de la capacité de l'individu à appréhender son environnement. Une des propriétés des neurones sensitifs est leur capacité à pouvoir ré-innerver des zones de la peau qui auraient perdu partiellement cette densité de terminaisons libres. Les kératinocytes libèrent des facteurs de croissance permettant aux neurones d'émettre des terminaisons libres jusqu'aux couches les plus externes de l'épiderme. Le but de cette étude a été d'évaluer le potentiel de l'extrait de Vitex Negundo sur le tropisme des neurones sensitifs et sur leur capacité à émettre des prolongements en présence de kératinocytes âgés. a. Matériels et méthodes
Les neurones sensitifs sont dérivés de cellules hiPS obtenues à partir de fibroblastes humains. Les hiPS ont été ensemencées en co-culture avec des kératinocytes issus d'un donneur de 33 ans et d'un donneur de 59 ans. Les co-cultures ont été traitées par l'extrait de Vitex Negundo à différentes concentrations (0,003% / 0,001% / 0,0005%/ 0,0001% / 0,00005% / 0,00001%, (p/v)), par du monopropylène glycol à 0,1% (témoin solvant d'extraction) et du Nerve Growth Factor (NGF) à 50ng/mL servant de référence positive pour l'élongation des dendrites.
Après 6 jours de co-culture, les cellules ont été fixées par une solution de paraformaldéhyde à 2% puis marquées par un anticorps anti-3-tubuline. Le marquage a été observé à l'aide d'un microscope à fluorescence et 20 images ont été acquises par co-culture. La longueur des prolongements des neurones sensitifs a été mesurée et normalisée par le nombre de corps cellulaires marqués. L'ensemble des statistiques ont été faites à l'aide du test t et du test ANOVA (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001). b. Résultats
Evaluation de la longueur des neurites de neurones sensitifs dans des co-cultures de neurones/kératinocytes traitées par Vitex Negundo enrichi en polyphénols (* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001 ; ns = non significatif). Comparaison du donneur de 33 ans versus donneur de 59 ans
La longueur tota e des neurites ainsi que la longueur des neurites par cellule sont significativement diminuées dans les co-cultures avec les kératinocytes âgés de 59 ans en comparaison aux kératinocytes âgés de 33 ans.
Evaluation de la longueur des dendrites dans des co-cultures neurones/kératinocytes âgés de 59 ans suite au traitement par l'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols
Le NGF à 50 ng/mL a augmenté significativement la longueur totale des neurites ainsi que la longueur des neurites par cellule. Ce résultat valide le modèle. L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols a induit significativement l'augmentation de la longueur totale des neurites ainsi que la longueur des neurites par cellule dans des cocultures de neurones sensitifs humains/kératinocytes âgés, c. Conclusion L'extrait de Vitex Negundo enrichi en polyphénols semble ainsi contribuer à empêcher le déclin du réseau de neurones sensitifs dans la peau observé au cours du vieillissement cutané et semble ainsi protéger la peau d'une perte de sensations apparaissant avec l'âge.
III. Compositions cosmétiques et dermatologiques pour application par voie topique
Plusieurs compositions pour application par voie topique sont présentées ci-dessous. L'extrait PAT de Vitex negundo (VN) de l'exemple 1, peut être incorporé à divers produits cosmétiques, tels que des eaux nettoyantes, des émulsions huile dans eau, des émulsions eau dans huile, des huiles, des laits, des lotions, des shampooings, des produits moussants et sprays, dont les compositions sont présentées ci-dessous à titre d'exemples.
EMULSION ANTI-AGE
LOTION CAPILLAIRE FORTIFIANTE
STICK PHOTOPROTECTEUR - ANTI-AGE
Claims (11)
- REVENDICATIONS1. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant en tant que principe actif un extrait de Vitex Negundo, ledit extrait comprenant au moins 5% en poids de polyphénols, exprimé en équivalent d'acide gallique, par rapport au poids total de l'extrait sec, et le cas échéant un excipient approprié, notamment dermatologiquement ou cosmétiquement acceptable.
- 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de Vitex Negundo comprend au moins 1,5 % en poids des acides dicaféoylquiniques, par rapport au poids total de l'extrait sec.
- 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que, dans l'extrait de Vitex Negundo, au moins 40 % en poids des acides dicaféoylquiniques sont sous la forme de l'isomère 4,5-dicaféoylquinique, par rapport au poids total d'acides dicaféoylquiniques.
- 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'extrait de Vitex Negundo comprend moins de 0,5 % en poids de flavonoïdes, par rapport au poids total de l'extrait sec.
- 5. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant 0,001 à 10% en poids, avantageusement 0,01 à 5% en poids, dudit extrait de Vitex Negundo, de préférence sous forme liquide, par rapport au poids total de la composition.
- 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique, incluant notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe.
- 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation pour prévenir et/ou traiter : - des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses et/ou des phanères, - les peaux sensibles, et/ou - le vieillissement cutané d'origine intrinsèque ou extrinsèque.
- 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, pour utilisation dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires.
- 9. Composition pour utilisation selon la revendication 8, caractérisé en ce que le trouble vasculaire est choisi parmi: la couperose, les érythèmes cutanés, la rosacée, le prurit, la peau et/ou les muqueuses réactives, avec des rougeurs, en particulier dues à une dilatation des capillaires sous-cutanés.
- 10. Procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, comprenant l'administration, de préférence topique, d'une composition cosmétique telle que définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
- 11. Procédé de soin cosmétique selon la revendication 10, caractérisé en ce que la composition est utilisée en tant que produit anti-âge chronologique ou photo-induit.
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