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FR2908771A1 - Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine - Google Patents

Chitine-glucane d'extrait fongique de granulometrie fine Download PDF

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FR2908771A1 FR0654998A FR0654998A FR2908771A1 FR 2908771 A1 FR2908771 A1 FR 2908771A1 FR 0654998 A FR0654998 A FR 0654998A FR 0654998 A FR0654998 A FR 0654998A FR 2908771 A1 FR2908771 A1 FR 2908771A1
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Kitozyme SA
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Abstract

La présente invention conceme un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques.La présente invention fournit notamment une composition comprenant un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques pour la préparation de compositions cosmétiques, notamment dermatologique ou dermocosmétique.En particulier la présente invention concerne une composition cosmétique pour effectuer un soin d'usinage ou du corps comme hydrater, raffermir ou lisser la peau, et exercer un effet anti-vieillissement, y compris anti-rides.

Description

L'invention concerne un copolymère chitine-glucane sous forme de poudre de
granulométrie fine et contrôlée, en particulier de très fine granulométrie, utilisable notamment dans le domaine de la cosmétique, et particulièrement l'utilisation d'un copolymère entre la chitine et des beta- glucanes pour prévenir ou réduire les signes du vieillissement cutané. L'invention concerne également un tel polymère sous forme de matériaux poreux, notamment pour son utilisation en ingénierie tissulaire. Etat de l'art Il est connu que certains polysaccharides exercent une action hydratante pour les couches supérieures de l'épiderme, ou même permettent de prévenir ou d'atténuer certains des signes du vieillissement cutané. En particulier, les ingrédients à base de beta-glucanes, le schizophyllane, le xyloglucane, l'acide hyaluronique, les galactomannanes, la chitine sont fréquemment employés dans les produits de soin cosmétiques. Ces polysaccharides se distinguent des ingrédients de type alphahydroxyacide, qui agissent en désquamant l'épiderme, ce qui favorise un renouvellement cellulaire rapide mais peut altérer les couches inférieures de i 'épiderme. La plupart des ingrédients anti-âge agissent sur le 1-nouvellement des cellules de la peau ou du collagène. Or un mécanisme 2908771 2 Parmi les polysaccharides à effet anti-âge , les beta-glucanes, issus de levures, de champignons, de céréales, ou de plantes, sont une famille de polysaccharides purs constitués d'unités D-glucose, liées entre elles par des liaisons de type bêta, les carbones étant liés variant selon 5 l'espèce dont ils sont extraits, avec une structure plus ou moins branchée : bêta(1,3)(1,6) pour les beta-glucanes issus de la levure Saccharomyces cerevis/ae; bêta(1,3) pour la chaîne principale (branchée en position bêta(1,6) par des chaînes courtes) du schizophyllane, issu du champignon Schizoph y/lm commune bêta(1,4) pour les beta-glucanes issus de 10 céréales comme l'avoine, l'orge, le blé bêta(1,4) pour la chaîne principale (branchée en position bêta(1,6) par des chaînes courtes) pour le xyloglucane issu de plantes. La solubilité en milieu aqueux des betaglucanes dépend de leur structure, de la longueur des chaînes macromoléculaires et de l'organisation tri-dimensionnelle des chaînes. 15 Les beta-glucanes sont appréciés en cosmétique pour leurs effets (qui diffèrent selon la molécule considérée) revitalisant, anti-inflammatoire, protecteur contre les radiations UV, apaisant, immunostimulant, anti-âge, anti-ride, anti-acné, etc, qui conduisent à une amélioration des symptômes du vieillissement cutané ou de l'acné. Les 20 beta-glucanes recherchés en cosmétique sont généralement hydrosolubles pour pouvoir être incorporés dans la phase aqueuse des émulsions, ce qui limite le choix terme de molécules utilisahles en cosméhnI le Fn effet, c,i_,hl.- nt et a 2908771 D'autre part, des usages cosmétiques des dérivés hydrosolubles de la chitine (carboxyméthylchitine et chitosane principalement) sont connus, par exemple dans des crèmes de soin, comme agent filmogène, hydratant, améliorant l'aspect des peaux sujettes à la cellulite par exemple, ou 5 également pour la préparation de microsphères. Cependant, la chitine à usage cosmétique et ses dérivés sont industriellement obtenus à partir de carapaces de crustacés û crevette, crabe û, les crustacés étant un des principaux responsables d'allergies. Des cas d'allergies à des crèmes contenant des dérivés de chitine ont d'ailleurs été publiés (Cleenewerck 10 MB, Martin P, Laurent D. Allergic contact dermatitis due to a moisturizing body cream with chitin. Contact Dermatitis 31, 196, 1994 ; Pereira F, Pereira C, Lacerda MH. Contact dermatitis due to a cream containing chitin and a carbitol. Contact Dermatitis 38, 290, 1998). 15 A la connaissance des inventeurs, la chitine (le polymère constitué des unités N-acétyl-D-glucosamine) obtenue au départ des carapaces de crustacés ou au départ d'algues microscopiques n'est pas connue comme pouvant prévenir ou réduire les effets du vieillissement cutané. Le chitosane, qui est le polymère dérivé de la chitine, portant des charges 20 cationiques, constitué des unités D-glucosamine/N-acétyl-D-glucosamine, ses dérivés (succinamide) et ses sels (par exempte lactate, ascorbate, 5tvcélate succinate) sont utilisés en cos leurs propriétés 2908771 4 polysaccharides liés entre eux de manière covalente dans un réseau tridimensionnel dénommé chitineglucane . Or ce copolymère chitine-glucane peut être avantageusement produit de manière hautement pure et économiquement rentable par un 5 procédé en étapes successives, comme décrit dans le brevet EP1483299B1 (US 2005/130273 Al ou WO 03068824 Al). On obtient une poudre fine, blanche, non odorante, dont la teneur en copolymère chitine-glucane est supérieure à 90%. Cette poudre n'est soluble dans aucun solvant, ni aqueux, ni organique, ce qui a priori compromet son usage en 10 cosmétique. Différentes applications sont décrites dans les demandes de brevets FR 05 07066 et FR 06 51415. Des usages médicaux de compositions à base d'extraits fongiques contenant la chitine et les beta-glucanes ont été décrits auparavant, en particulier comme actifs cicatrisants de plaies. Cependant ces différentes 15 utilisations, par exemple sous forme de pansements, ne sont a priori pas adaptées pour une formulation cosmétique. Buts de l'invention L'invention a pour but principal de résoudre le nouveau problème 20 technique consistant en la fourniture d'un copolymère chitine-glucane présentant une forme adaptée é une utilisation cosmétique, et en narticalier en de mncoÇmitique n dermatologie, et/ou adaptée à une 2908771 La présente invention a notamment pour but de fournir une composition dermocosmétique pour réaliser un soin du corps et/ou du visage, comme un soin hydratant, raffermissant, protecteur, ou anti-rides. La présente invention a également pour but de résoudre les 5 problèmes techniques mentionnés ci-dessus en fournissant une substance d'origine naturelle qui présente innocuité, tolérance cutanée et oculaire, une très bonne hypoallergénicité, tout en étant aisément disponible en grand volume, et à un coût compatible avec l'usage comme ingrédient cosmétique. 10 La présente invention a également pour but d'optimiser une composition de complément alimentaire favorisant la biodisponibilité et les effets sur la santé du copolymère chitine-glucane. La présente invention a également pour but de fournir une poudre de chitine-glucane permettant d'ajuster et d'optimiser ses propriétés 15 physico-chimiques et biologiques selon l'application envisagée, comme composition dermocosmétique et dermatologique, composition de complément alimentaire, composition d'aliment fonctionnel, auxiliaire de technologie pour le traitement des boissons, composition pour des dispositifs médicaux comme par exemple des produits cicatrisants. 20 L'invention a également pour but de fournir une substance naturelle (l'origine non animale, d'excellente pureté, bien caractérisée, obtenue par un procédé (l prnril in, nui narantit reproductibilite et traçabl!itA. La p but ance able E 2908771 6 parfaitement homogène et dont les qualités sensorielles (viscosité, texture, toucher) sont excellentes. L'invention a pour but de proposer un actif cosmétique permettant de prévenir ou de réduire les effets du vieillissement cutané, d'hydrater la 5 peau de manière durable, de la tonifier, et/ou de la raffermir, de lui rendre un aspect homogène et lisse, de diminuer l'état squameux, de la protéger contre les agressions extérieures comme la sécheresse et/ou pollution par les métaux lourds, de lui permettre de restaurer sa fonction barrière. L'invention a pour but de proposer également un ingrédient cosmétique 10 ayant un pouvoir de rétention d'eau et un pouvoir viscosifiant important. L'invention a également pour but de fournir un matériau poreux utilisable en l'ingénierie tissulaire. L'invention a également pour but de fournir des substances dérivées du copolymère chitine-glucane, obtenues par modification 15 chimique ou enzymatique selon les voies de synthèse connues pour les polysaccharides, notamment par couplage de substances actives, par couplage de substances modulant le comportement, par oxydation, ou par hydrolyse, dans le but de moduler les propriétés physico-chimiques (comme la solubilité) et les performances du copolymère chitine-glucane. 20 Résumé de l'Invention Afin résoudre les problèmes ter partis _ nés ci-Hessi iq 2908771 7 Les inventeurs ont cependant découvert de manière surprenante que l'on pouvait résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus en utilisant une poudre de granulométrie très fine et contrôlée d'un copolymère chitine-glucane. Cette solution est tout à fait surprenante dans 5 la mesure où l'homme du métier s'attendrait à ce que les particules finement broyée de ce copolymère soient également insolubles et qu'elle se présenteraient de la même manière que les beta-glucanes non solubles, c'est-à-dire sous forme de particules dures et irritantes pour la peau. 10 Les inventeurs ont pu de manière surprenante d'une part préparer des suspensions stables de chitine-glucane, en particulier dans l'eau sans additif, et d'autre part, préparer des émulsions stables contenant notamment des concentrations élevées en chitine-glucane. En particulier l'invention concerne un polysaccharide d'origine 15 fongique comprenant majoritairement un copolymère chitine-glucane, ledit polysaccharide ayant une granulométrie fine. L'invention concerne également une poudre finement broyée d'un extrait fongique comprenant au moins un copolymère chitine-glucane finement broyé. 20 Avantageusement, les particules de granulométrie fine ont au moins 70% en poids des particules une taille inférieure à 500 microns (pm), et de préférence inférieure à 355 microns (pm). Encore de préférence moins 50%, de rréfér-! des particules ont une ta ! iférieure à 2908771 Un mode de réalisation permet d'obtenir au moins 50% en poids des particules d'une taille inférieure à 65 mesh (environ 149 pm), et de préférence inférieure à 100 mesh (environ 230 pm). La granulométrie est avantageusement contrôlée en choisissant, 5 notamment après tamisage ou classification, une fraction de taille particulière en fonction des besoins. Avantageusement, le copolymère de chitine-glucane comprend un rapport entre les unités N-acétyl-D-glucosamine de la chitine et les unités D-glucose des beta-glucanes compris entre 95:5 et 15:85. 10 Avantageusement, le polysaccharide d'origine fongique comprend plus de 70 % de copolymère chitine-glucane en masse par rapport à la masse totale de l'extrait d'origine fongique, de préférence supérieure à 85 %. Avantageusement, les enchaînements entre les unités D-glucose 15 sont majoritairement de type bêta(1,3). De préférence l'extrait fongique est issus du mycelium d'un champignon du type Ascomycète, et en particulier de Aspergillus niger , et/ou d'un champignon Basidiomycète, et en particulier Lentinula edodes (shiitake) et/ou Agaric-us bisporus 20 Avantageusement, au moins 85 % de la partie chitine du copolymère crut ne-glucane sont des unités N-acétyl-D-glucosamine, et qu'au plus tID % sont des unités D-glucosamine. 2908771 9 Avantageusement, la composition est une composition cosmétique, en particulier dermocosmétique ou dermatologique. De préférence le polysaccharide de l'extrait fongique de granulométrie fine est utilisé à une concentration comprise entre 0,01 et 5 10%, et de préférence entre 0,05 et 5%, en poids de la composition totale. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition telle que définie ci-dessus pour exercer un soin cosmétique, de préférence dermocosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce que le soin est 10 choisi parmi le groupe consistant en un soin du corps ou du visage, pour améliorer, notamment de manière durable et significative l'hydratation de la peau, augmenter le pouvoir de rétention de l'eau de la peau notamment à long terme, améliorer la fonction barrière de la peau, améliorer la protection de la peau et/ou les activités de défense de la peau, 15 notamment contre les agressions extérieures telles que les rayonnements, la sécheresse, la pollution, notamment par les métaux lourds, les radicaux libres, améliorer l'aspect de la peau, améliorer l'homogénéité de la peau, notamment en la rendant plus lisse, plus homogène, plus douce, plus saine, améliorer fa fermeté et la tonicité de la peau, et favoriser 20 l'accrochage de l'épiderme au derme. L'invention concerne également une composition telle que définie ci-dessus pour citmtnuer la profondeur les es ou ralentir ou prévenir 2908771 10 du système immunitaire, hypoglycémique, notamment dans le cas de diabète, et un effet de prévention et/ou de traitement, et/ou de lutte contre une pathologie choisie parmi le groupe consistant en la dyslipidémie, l'athérosclérose, l'obésité, d'une maladie liée à l'obésité, une 5 maladie cardiovasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et l'hyperuricémie. De préférence dans cette composition de complément alimentaire, le copolymère de l'extrait fongique de granulométrie fine est utilisé comme principe actif. 10 L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif au moins un copolymère ou un extrait d'origine fongique, tel que défini précédemment. L'invention concerne notamment l'utilisation en l'ingénierie tissulaire d'un matériau poreux obtenu à partir du polysaccharide ou extrait 15 d'origine fongique selon la présente invention, et concerne donc également matériau poreux obtenu à partir du polysaccharide ou extrait d'origine fongique selon la présente invention. Ce matériau poreux peut être obtenu notamment par lyophilisation. L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un 20 polysaccharide ou un extrait d'origine fongique, tel que défini précédemment comme excipient d'une composition, notamment d'une composition cosmétique, de préférence dermatologique ou 25 2908771 11 b) des étapes, simultanées, ou séparées indépendamment de leur ordre, de filtration, de séchage, de broyage, et de classification des particules, au départ du chitine-glucane sec ou solvaté, permettant d'obtenir une poudre de chitine-glucane de granulométrie dont au moins 70% en poids des 5 particules des particules obtenues ont une taille inférieure à 500 microns (pm), et de préférence inférieure à 355 microns (pm). De préférence l'étape b) du procédé de préparation de l'extrait fongique de granulométrie permet d'obtenir au moins 50%, de préférence 60%, et encore de préférence 70%, en poids des particules totales 10 obtenues, ayant une taille inférieure à 250 microns, de préférence inférieure à 125 pm. On peut ainsi à l'étape b) mettre en oeuvre une étape simultanée de filtration, de séchage, et de broyage, puis une étape séparée de classification. 15 L'invention concerne également le dispositif que nous appareillage pour mettre en oeuvre le procédé selon la présente invention. Description détaillée de l'invention 20 Les compositions selon l'invention permettent d'obtenir des formulations avec un toucher agréable et doux, ce qui est très avantageux dans le domaine de la cosmétique notamment. i po,- 1J:F 2908771 12 La solution proposée par les inventeurs est d'autant plus avantageuse dans la mesure où un copolymère chitine-glucane purifié issu de sources fongiques, notamment mais pas exclusivement, de type Ascomycète est disponible en grande quantité en tant que sous-produit 5 industriel. Il est notamment préféré d'utiliser comme source fongique le mycelium d'Aspergillus nier. Selon l'invention, le copolymère chitine-glucane extrait du mycelium de champignons de type Ascomycète peut être formulé aisément, bien 10 que non hydrosoluble, notamment sous forme d'une composition cosmétique. Les inventeurs ont découvert de manière surprenante que quand le composé chitine-glucane issu des sources de champignons se présente sous la forme d'une poudre de granulométrie fine, il est tout à fait adapté 15 à la préparation d'une composition permettant de résoudre les problèmes techniques mentionnés ci-dessus. La poudre de chitine-glucane avantageusement obtenue selon le procédé décrit dans la demande de brevet PCT W003/068824, ou dans la demande de brevet français FR 0507066 est préparée de manière à 20 obtenir une granulométrie fine et contrôlée notamment par des procédés de filtration, de broyage, de séchage et/ou de classification des particules. Lorsqu'une granulométrie fine est recherchée, on sélectionne un procédé 25 2908771 13 De préférence, on met en oeuvre un procédé de préparation de la poudre de chitine-glucane de manière à obtenir majoritairement des particules ayant une taille inférieure à 250 microns, Avantageusement, les particules selon la présente invention sont 5 constituées essentiellement de particules ayant une taille inférieure à 125 pm, voire 90 pm, et notamment sont obtenue après classification pour obtenir une distribution étroite. Il est possible de mettre en oeuvre le procédé de préparation de la poudre par l'une quelconque des techniques connues de l'homme du 10 métier. Il est avantageux de sélectionner une technique permettant de contrôler au mieux la granulométrie et de manière bien définie. Par granulométrie on entend la forme, plus ou moins sphérique, la taille et la distribution de taille des particules de la poudre de chitineglucane. Ce paramètre qui caractérise l'ingrédient en poudre influence 15 d'une part la manière dont on peut le formuler, c'est-à-dire l'incorporer dans une composition solide ou liquide comme une matrice alimentaire, une crème cosmétique, un liquide alimentaire ou cosmétique, un dispositif médical ou pharmaceutique. Selon la granulométrie obtenue, et notamment selon l'aspect ou la forme finale désirée, la composition 20 obtenue sera plus ou moins homogène. La granulométrie et la distribution de taille des particules sont caractérisées par les techniques classiques telles r3ue a diffnrton. de ,-iu 1 r `,te ', wa 2908771 14 homogène contenant le copolymère chitine-glucane. Cela permet notamment d'incorporer ce copolymère après formation d'une émulsion, même à une concentration élevée (par exemple 2%), et atteindre une texture parfaitement homogène et dont les qualités sensorielles (viscosité, 5 texture, toucher) sont excellentes. On utilise donc avantageusement les la fraction des particules ayant la taille la plus faible. Lorsque la taille des particules est plus importante, l'ingrédient n'apporte plus ces qualités sensorielles, le produit forme des grains palpables à l'étalement de la crème, et/ou la formulation n'est pas stable 10 dans le temps, ce qui n'est pas désiré dans le cas d'une composition topique, et notamment dans une crème de soin. Avantageusement, une poudre de granulométrie fine et contrôlée peut être utilisée pour la préparation d'aliments dits fonctionnels, comme des biscuits, pâtes, confiseries, barres diététiques, pains, boissons, 15 beurres, margarines, etc... Avantageusement, la poudre de granulométrie fine peut être mise en oeuvre sous la forme d'une dispersion aqueuse, et entrer dans la composition de dispositifs médicaux comme des systèmes cicatrisant et/ou hémostatiques. De manière surprenante, le chitine-glucane de 20 granulométrie fine peut être mise en oeuvre sous la forme d'un matériau poreux cohésif, présentant une bonne stabilité mécanique, et de porosité supérieure à 80%, de préférence supérieure à 90%, par des techniques Jnnees hornree eetie 2908771 15 obtenus est fonction des paramètres de formulation, notamment de la granulométrie du chitine-glucane, de la composition du mélange, de la concentration de la dispersion de départ, ainsi que des paramètres de mise en oeuvre de la dispersion. 5 Pour la préparation de produits dermocosmétiques et dermatologiques, le chitine-glucane de granulométrie fine, avec des particules de taille étant de préférence inférieure à 125 pm, possède avantageusement une bonne affinité à la fois avec des composantes présents en phase aqueuse et en phase huileuse, ce qui favorise le 10 procédé d'incorporation. La poudre de chitine-glucane de granulométrie fine peut être produite industriellement selon divers procédés, en fonction de la granulométrie visée, soit au départ du chitine-glucane en poudre sèche, soit au départ du chitine-glucane solvaté en milieu aqueux ou organique, 15 ou encore au départ du chitine-glucane incorporé dans un milieu plus complexe comme une émulsion huile dans eau ou eau dans huile. Les inventeurs entendent par procédés de préparation de poudre de granulométrie fine tous les procédés solide-liquide et solide-solide de filtration, de séchage, de broyage, d'homogénéisation, de réduction de 20 taille des particules, et de classification des particules, appliqués aux solides, aux solides solvatés, et aux milieux complexes solvatés tels que les émulsions, les suspensions colloïdales, etc. (- ho[ FJ 2908771 16 fragmentation pour obtenir des poudres de granulométrie fine et contrôlée peuvent être appliqués sur le produit totalement ou partiellement séché, ou sur le produit solvaté, comme par exemple les procédés de broyage à fléaux, à marteaux, à galets, à couteaux, à lames, à disque, à contre-jet 5 d'air, et les procédés de désintégration, par exemple aux ultrasons et de micronisation. Les différents procédés industriels de séparation des poudres peuvent être employés pour diminuer la largeur de la distribution de taille ou sélectionner une taille spécifique, comme par exemple avec des équipements de tamisage et de classification dynamique et statique. 10 Ainsi, la présente invention concerne un procédé pour obtenir une poudre de chitine-glucane d'origine fongique insoluble dans l'eau ou un solvant organique, ayant une granulométrie fine, pour préparer les particules du copolymère chitine-glucane stables dans une solution aqueuse ou organique notamment pour préparer une suspension ou 15 émulsion. L'étape permettant d'obtenir la poudre de granulométrie fine est réalisée avant ou après la préparation de l'émulsion ou de la suspension. Cette suspension ou émulsion contient des substances généralement utilisées dans le domaine la cosmétique et permettent 20 avantageusement la formulation d'une composition cosmétique. Des compositions cosmétiques contiennent généralement de 0,01 à 10% en poids des compositions selon h présente invention, notamment pport ::s-r,z)en sien ,01 sä. 2908771 17 La présente invention concerne en particulier un polysaccharide d'origine fongique comprenant un polymère comprenant des chaînes bêtaglucane, lesdites chaînes de bêta-glucane consistant essentiellement d'enchaînements d'unités D-glucose via des liaisons en position (1,3), et 5 de préférence comprenant au moins 80% en masse de chaînes bêtaglucane dont l'enchaînement de D-glucose est en position (1,3) par rapport au pourcentage de la masse total de bêta-glucane, notamment pour la fabrication d'une formulation cosmétique. Un copolymère chitine-glucane peut être avantageusement obtenu 10 selon le procédé décrit dans la demande de brevet PCT W003/068824, et la demande de brevet français FR 0507066 déposée par KitoZyme S.A. le 4 juillet 2005. Ce procédé est décrit en particulier dans la demande FR 0507066 pages 18, ligne 14 et suivantes. On utilise de préférence Aspergillus nier comme source fongique dans ce procédé. 15 L'enchaînement des unités D-glucose et la proportion entre les chaînes alpha(1,6)-chitine et beta-glucanes dépendent du champignon et de la souche. Par exemple, il a été montré par les inventeurs qu'un mycelium d'Aspergillus niger contient le copolymère chitine-glucane avec un rapport massique entre chitine et bêta-glucane entre 30:70 et 60:40, 20 avec un enchaînement des unités D-glucose principalement du type Péta( Le cop lv ère se présente généralement sous Forme d'une itur 2908771 18 La présente invention concerne un extrait, avantageusement purifié, de source fongique, et préférentiellement du mycellum de champignons de type Ascomycète comme d'Aspergillus piger. Les hydrolysats des extraits purifiés, c'est-à-dire les copolymères de chitine et 5 bêta-glucane de masse moléculaire inférieure, font également partie de l'invention. La disponibilité et la qualité en particulier d'Aspergillus r2/ger, qui est un co-produit de la production industrielle d'acide citrique à destination de l'industrie alimentaire et pharmaceutique, en font une matière première de 10 choix pour les usages en cosmétique. D'autres sources fongiques contenant les polysaccharides chitine et bêta-glucane peuvent également être exploitées, comme par exemple les Basidiomycètes, notamment les champignons Lentinula edodes (shiitake) et Agaricus bisporus. Les inventeurs entendent par polysaccharides d'origine 15 fongique les extraits purifiés de parois cellulaires de champignons composés majoritairement de polysaccharides de chitine et de bêtaglucane, sous forme de copolymères, et leurs dérivés. Les extraits purifiés comprennent une teneur de préférence en chitine-glucane supérieure à 70% en masse par rapport à la masse totale de l'extrait, de préférence 20 supérieur à 80%, de préférence supérieure à 85% et encore de préférence supérieure à 90%. s inventeurs entendent par chitine-glurane un ronolymère pur E !Hal plg ~cn 2908771 19 Il est généralement admis que les polysaccharides des parois cellulaires des champignons sont séparés en deux groupes selon leur solubilité en milieu alcalin, et que le squelette des parois cellulaires est insoluble. Il est également connu que la fraction insoluble est constituée 5 de polymères de chitine et de bêta-glucane, en proportions variables selon les espèces, que les unités bêta-glucane sont liées par des enchaînement de structure variable, et que la liaison entre les chaînons chitine et bêtaglucane est stable comme montré par exemple par Siestma Wessels pour Saccharomyces cerevLsiae (Zygomycete), Neurospora crassa 10 (Ascomycete), Aspergillus nidulans (Ascomycete) et Coprinus cinereus (Basidiomycete) [Siestma 3H & Wessels 3G. (1981) Solubility of (1,3)-beta-D-(1,6)-beta-D-glucane in fungal walls : importance of presumed linkage between glucan and chitin. (1981) Gen. Microbiol. 125 :209]. Il est connu que les chaînons chitine et bêta-glucane de la fraction insoluble 15 d'Aspergillus niger sont liés entre eux de manière covalente, comme cité par exemple par Stagg CM et Feather MS [Biochim. Biophys. (1973) Acta 320:64]. Des méthodes de détermination de la nature du lien covalent entre les chaînons chitine et bêta-glucane ont été décrites par exemple par Fontaine et al. pour Aspergillus fumigatus [Fontaine T, Simenel C, 20 Dubreucq G, Adam 0, Delepierre M, Lemoine J, Vorgias CE, Diaquin M Latgé 3P. (2000) Molecular organization of the alkali-insoluble fraction of Asperrii/us furn/gatus cell mall, J. Bk). Chem. 275:275941, et par K.P11er et 2908771 20 de ceux-ci. Ladite source de champignons doit être choisie de manière à permettre l'extraction d'un polysaccharide tel que défini ci-dessus et ci-après. Il existe des sources de champignons qui comprennent des bêtaglucanes, mais ces unités sont solubles dans l'eau notamment, ou ne 5 comprennent pas ou peu de chaînes de structure chitine, et ne permettent donc pas d'obtenir le polysaccharide de la présente invention. La présente invention couvre l'ensemble des champignons qui permettent d'obtenir le polymère chitine-glucane défini dans la présente demande. Le rapport entre la chitine et le bêta-glucane est compris entre 95:5 10 et 5:95, de préférence entre 70:30 et 10:90 (m/m). La partie chitine du copolymère chitine-glucane est composée de préférence d'au moins 85% d'unités N-acétyl-D-glucosamine et d'au plus 15% d'unitésD-glucosamine, préférentiellement d'au moins 90% d'unités N-acétyl-D-glucosamine et d'au plus 10% d'unités D-glucosamine. 15 L'invention concerne en particulier une suspension comprenant un solvant et au moins un copolymère de granulométrie fine selon la présente invention. Cette suspension est réalisée selon les méthodes classiques. L'invention concerne également une émulsion comprenant le 20 copolymère de granulométrie fine selon la présente invention. Cette émulsion est réalisée selon les méthodes classiques, avec soit l'eau soit l'huile comme phase continue. Aviln La qe useme'-s)olym a-g1 2908771 21 Les composés selon la présente invention sont préparés notamment sous forme de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, de préférence sous forme topique. De ce fait, pour ces compositions, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le 5 groupe consistant en les conservateurs, les antioxydants, les stabilisants, les conditionneurs, les hydratants, les émollients, les émulsifiants, les tensioactifs, les épaississants, les agents matifiant, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums, et les filtres solaires. Ces excipients 10 sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de lanoline, les phospholipides, les stabilisants à base de sucrase, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les triglycérides, les insaponifiables, les silicones et ses dérivés, les 15 hydrolysais de protéines, les esters lipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides, les glycines, et les parabens. Comme huiles utilisables dans la composition de l'invention, on peut citer par exemple: les huiles hydrocarbonées d'origine animale, telles que le perhydrosqualène; les huiles hydrocarbonées d'origine végétale, telles 20 que les triglycérides liquides d'acides gras comportant de 4 à 10 atomes de carbone comme les triglycérides des acides heptanoïque ou octanoïque ou encore, par exemple les huiles de tournesol, de maïs, de soja, de C ii "." S!r :eSal 2908771 22 gras; les huiles fluorées partiellement hydrocarbonées et/ou siliconées; les huiles de silicone comme les polyméthylsiloxanes (PDMS) volatiles ou non à chaîne siliconée linéaire ou cyclique, liquides ou pâteux à température ambiante, notamment les cyclopolydiméthylsiloxanes (cyclométhicones); 5 les silicones phénylées; et leurs mélanges. Différents excipients sont illustrés dans les exemples de formulations, Les autres corps gras pouvant être présents dans la phase huileuse sont par exemple les acides gras comportant de 8 à 30 atomes de carbone, comme l'acide stéarique, l'acide laurique, l'acide palmitique et 10 l'acide oléique; les cires comme la lanoline, la cire d'abeille, les cires de paraffine, ou les cires micro-cristallines, les cires synthétiques les résines de silicone; et les élastomères de silicone. Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse ou 15 huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile- dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée ; une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en 20 aérosol ; une ampoule ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade . une mousse ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet, notamment sous ,=r e 2908771 23 pathologie choisie parmi le groupe consistant en la dyslipidémie, l'athérosclérose, l'obésité, une maladie liée à l'obésité, une maladie cardio-vasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et l'hyperuricémie. Le contrôle de la granulométrie de la poudre de chitine-glucane, notamment 5 l'obtention d'une poudre de granulométrie fine, permet avantageusement une meilleure biodisponibilité du produit. L'invention concerne également une composition pharmaceutique ou de complément alimentaire comprenant à titre de principe actif au moins un polysaccharide ou un extrait d'origine fongique, tel que défini 10 précédemment La présente invention concerne également une méthode de traitement, de prévention, ou de lutte contre une pathologie, notamment celle mentionnée ci-dessus, comprenant l'administration par voie orale d'une quantité efficace un sujet en ayant besoin d'une composition 15 comprenant au moins un polysaccharide tel que défini dans la description ci-dessus et ci-après. La présente invention concerne également une méthode pour diminuer la masse ou prévenir ou lutter contre la prise de masse d'un être humain ou un animal, et de préférence un mammifère. Cette méthode 20 concerne notamment un soin esthétique. La présente invention concerne également une méthode de soin ro.métIque, notamment du corps ou du visage ces soins son ISenn insi 2908771 24 utilise avantageusement en cosmétique ou en pharmaceutique une quantité efficace comprise entre 0,01 et 10% du polysaccharide d'origine fongique selon la présente invention en poids de la composition totale, De préférence on utilise 0,05 à 5%, et encore de préférence de 0,1 à 2% en 5 poids de la composition totale. Par application topique, une à deux applications par jour est avantageuse. On utilise une quantité efficace généralement comprise entre 0,001 et 100% en poids du produit selon la présente invention par rapport au poids total de la composition à administrer sous forme de complément 10 alimentaire. Si les produits sont administrés sous forme de gélules, granules, ou comprimés, ils peuvent être utilisés purs ou à toute autre concentration, accompagnés d'autres composants actifs ou d'excipients. S'ils sont incorporés dans des aliments, la concentration en produit est inférieure à 15%, et de préférence inférieure à 10%. Il est avantageux 15 d'administrer entre 1 et 30 g du par jour par personne produit selon l'invention en fonction du poids de la personne. Sur les figures : 20 La figure 1 représente les conditions d'enregistrement du spectre de resoriance magnétique nucléaire du carbone 13 (13C-RMN) en phase solide d'l copnl\/mère de chitine-gîucane. polym 2908771 25 La figure 4 représente une photographie par microscopie électronique à balayage des particules selon la présente invention (lot L32), après séchage par un procédé d'atomisation (grossissement x 750). La figure 5 représente un graphique de profilométrie optique, 5 portant la hauteur des sillons (Rz) en fonction de la distance sur la peau, obtenus après 16 semaines sur 1 sujet (avant-bras gauche : crème T1,5 à base de chitine-glucane ; avant-bras droit : crème TO placébo). Les graphiques montrent que les microreliefs sont significativement atténués (valeur moyenne Rz 7.0 pm avec chitine-glucane versus 9.6 pm avec le 10 placébo) et que la peau est plus tendue. La figure 6 représente deux photographies par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux de chitine-glucane. La figure 7 représente une photographie par microscopie électronique à balayage d'un matériau poreux mixte de chitine-glucane et 15 de chitosane (chitine-glucan/chitosane 10:90, m/m) en coupe longitudinale. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la 20 description explicative qui fait référence à des exemples qui sont donnés seulement à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée rie l'inventî oie- r-H ,r -ist 2908771 26 D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. 5 EXEMPLES Le procédé d'obtention des copolymères chitine-glucane obtenus ci-dessous est décrit dans les demandes de brevets WO 03/068824 et FR 10 05.07066. EXEMPLE 1- Préparation d'un copolymère chitine-glucane à partir du mycelium d'Aspergillus niger 15 Une masse de 50 kg (poids sec) de mycelium d'Aspergillus ni'ger humide est mise en suspension dans une solution d'acide chlorhydrique 0.5 N, puis filtrée. La matière solide est ensuite mise en suspension dans une solution d'hydroxyde de sodium 1 N, puis filtrée. La matière solide est lavée 4 fois à l'eau, puis filtré à l'aide d'un filtre-presse et séchée à l'aide 20 dans un sécheur conique (conical dryer). Elle est ensuite mise en suspension dans l'éthanol, puis filtrée et séchée On obtient environ 15 kg de chitin-glucane (lot t25 , rées ble d 2908771 27 déterminée à partir de l'aire des quatre bandes de résonance suivantes : 104 ppm (carbone 1 de la chitine et du bêta-glucane), 23 ppm (carbone CH3 de la chitine), 55 ppm (carbone 2 de la chitine) et 61 ppm (carbone 6 de la chitine et du bêta-glucane), en prenant comme référence la chitine pure. Par exemple, on peut effectuer le calcul selon la Formule 1, où est l'aire des signaux des carbones, et où [ 'CG indique la valeur du rapport pour le chitine-glucane analysé et [ k pour la chitine de référence. CI est le carbone 1 de la chitine et du bêta-glucane et C2 est le carbone 2 de la chitine. [1' (C2)'CG Le rapport massique chitine/glucane des 8 lots de chitine-glucane du tableau 1 est en moyenne de 39:61 2 (m/m). La proportion d'unités D-glucosamine (NGIc), exprimée en Io molaire de la partie chitine, peut être estimée à partir du spectre RMN, 15 comme décrit par Heux et al. [Heux L, Brugnerotto J, Desbrières J, Versali MF & Rinaudo M. (2000) Solid state NMR for determination of the degree of acetylation of chitin and chitosan. Biomacromolecules 1:746]. La proportion d'unités D-glucosamine est déterminée par titrage potentiométrique par l'hydroxyde de sodium, en suspension dans un excès 20 d'acide chlorhydrique lu chi Ilucane (lot L26' et les d erre a hogènE e le [ I' (C1) [ I' (C1) 10 Glucane (mol%) I C2) C 1 00 mol%) = (formule 1) I(C1) 25 2908771 28 Tableau 1- Caractéristiques moléculaires et composition de différents lots de copolymère chitine-glucane L25 L26 27 2 29 0 L31 Rapport NGIc Cendres Protéine . Métaux chitine-glucane (titrage) Lapide lourds mol% o PPm) 41:59 4* 0 4,2 0,5 <LQ** 36:64 5 0 0,4 4,6 0 42:58 7 0 5 0 < LQ 39:61 7 0 ,5 2,5 2,1 Q 40:60 6 0 7 0, Q 37:63 1 0 1, 9 j 1, ,2 8,7 40:60 4 0 2,5 4,3 *écart-type sur le résultat de 4 calculs du rapport chitine-glucane ; **L /imite de sensibilité de la méthode d'analyse par Ion Coupled Plasma (53 ppm) Tableau 2- Qualité microbiologique dfun lot de chitine-glucane (L26) Nombre de germes/g Germes totaux aérobies < 20 cfu/g mesophiles Spores aérobies 10 cfu/g Levures et moisissures < 20 cfu/g Agents pathogènes ,PL c 18dy Eschernteob(7.n-2ru, Abse fri, 2908771 29 Tableau 3-Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane (L25) Proportion Diamètre Proportion Gamme de cumulée (pm) non cumulée taille (pm) %, m/m) C lo, m/m) 100% Inférieur à 1000 pm 710-1000 87% Inférieur à 710 pm 20% 500-710 67% Inférieur à 500 pm 16% 355-500 51% Inférieur à 355 pm 14% 250-355 37% Inférieur à 250 pm 11% 180-250 26% Inférieur à 180 pm 13% 125-180 14% Inférieur à 125 pm 11% 90-125 3% Inférieur à 90 pm 3% 0-90 5 On comprend de ce tableau que la distribution de taille des particules obtenues selon le procédé de l'exemple 1 est très large. EXEMPLE 2-Préparation de poudre de chitine-glucane de granulométrie 10 variable par broyage Pour réduire la granulométrie de manière contrôlée et variable, 15 kg de chitine-glucane obtenus selon l'exemple 1 (lot L25) sont broyés dans un broyeur â marteaux (Fitzmill mode! D, Fitzpatrick) équipé de [-litres de différentes géométrie et raille pie tamis de 20 2908771 30 Tableau 3-Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane obtenu par broyage à l'aide de différents types de tamis Lot de Tamis de Distribution % chitine-glucane broyage (pm) (m1m) L25D 100 mesh 500-1000 19% 250-500 2 200-250 100-200 2 <100 27% 25A 65 mesh 500-1000 25% 250-500 41% 100-250
25 <100 7% L25C 40 mesh 250-500 44% 200-250 14% 0-200 29% <100 a L256 20 mesh 500-1000 25% 250-500 40% 200-250 10% 100-200 7% 100 7% comprenc rableaL )tient ICPMPrI PC oar 2908771 31 métallisation au platine (figure 4). La longueur et la largeur des particules est calculée après analyse d'une centaine de particules par échantillon (tableau 2).
5 Tableau 4- Dimensions des fractions de chitine-glucane broyé (lot L25) observées par SEM Gamme de taille 1 Longueur Largeur (Pm) Pm) (Pm) < 50 54 11 37 9 90-100 134 26 80 20 100-200 207 66 113 33 200-250 358 85 190 58 250-500 514 118 329 88 500-1000 1029 245 683 132 On comprend de ce tableau que la technique de broyage à marteau produit des particules non sphériques, ovoïdes, comme le révèle 10 l'observation par microscopie électronique à balayage de la figure 4. La fraction 100-200 dam du lot L25 est le produit est utilisé pour préparer la crème test (référence T1,5) de l'exemple 6. EXEMPLE 3- Préparation de poudres de chitine-glucane de granulométrie 15 fine et contrôlée obtenue par atomisation de chitine-glucane solvatée Pour obtenir une r)o e de htine-glucane de avec des particu ed,izuie -'parée 2908771 32 représente les particules observées par microscopie électronique à balayage. Tableau 5- Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane (L25) après séchage par atomisation Proportion Diamètre (pm) (cumulée) of 96% Inférieur à 250 pm 93% Inférieur à 180 pm 73% Inférieur à 125 pm 35% Inférieur à 90 pm On comprend de ce résultat que la technique d'atomisation du chitine-glucane solvaté permet d'obtenir majoritairement une taille de particules fine et homogène, 73% des particules ayant un diamètre 10 inférieur à 125 pm. EXEMPLE 4- Préparation de poudres de chitine-glucane de granulométrie fine et contrôlée obtenue par séchage de chitine-glucane solvaté dans un filtre Nütsche Pour obtenir une poudre de chitine-glucane fine, une pâte contenant 50 kg de chitine-glucane solvaté dans l'éthanol est séchée dans ---, filtre lütcche ,?ne température pendant 12 heures On 15 2908771 33 Tableau 6- Distribution de taille d'un lot de chitine-glucane après séchage (lot L16) Proportion Diamètre (Nm) (cumulée) % 75% Inférieur à 355 pm 70% Inférieur à 250 pm G7% Inférieur à 180 pm 60% Inférieur à 125 pm 30% Inférieur à 90 pm On comprend de ce résultat que la technique de séchage du 5 chitine-glucane par filtre NOtsche à partir du chitine-glucane solvaté dans l'éthanol permet d'obtenir majoritairement une taille de particules fine et homogène, avec 60% des particules ayant un diamètre inférieur à 125 pm. On fractionne par tamisage la poudre obtenue pour en sélectionner 10 les particules de taille inférieure à 90 pm. Cette fraction est utilisée pour la préparation des formulations des exemples 14 à 20. La microphotographie de la figure 5b représente les particules de la fraction inférieure à 90 pm observées par microscopie électronique à balayage. La taille moyenne déterminée par analyse d'image est de 43 18 pm. La masse volumique 15 tapée de la fraction de taille inférieure à 90 pm, déterminée selon la méthode de la Pharmacopée Européenne 2.915, est de 0.61 g/cm3. F,XEM j;.-ineigiQçane_(destinées 0 2908771 34 glucane en concentration variable de 0 à 2,5% (tableau 1). Une formule placébo (référence CO) a été préparée dans les mêmes conditions sans chitine-glucane. Tableau 7- Composition des crèmes cosmétiques simples à base de chitine-glucane à une concentration de X% (références CX) Ingrédients INCI Concentration (%) l Eau (QS ad Aqua qsp 100%) Simulgel EPG Sodium acrylate/acryloyldimethyl 3% taurate copolymer, Polyisobutene, Caprylyl capryl glucoside Nexbase 2006 Hydrogenated 10% FG polydecene Chitine-glucane Chitin, Beta-glucan I (poudre, L31) ! X% X=0 ou 0,5 ou 1,0 ou 1,5 ou 2,0 ou 2,5% I Phenochem Phenoxyethanol (60%), 0,3 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Isobutylparaben Disodium EDT!` DIsoçlîn n LDT- 0,~} 2908771 35 EXEMPLE 6- Crème de jour à base de chitine-glucane, destinées à l'étude des propriétés sur volontaires âgés 5 Tableau 8- Composition des crèmes test placébo (référence TO) et à base de chitine-glucane (lot L25) à une concentration de 1,5% (référence Tl 5) Pha- Ingrédient INCI 1 Fonction Con- se centra tion (%) A Eau Aqua qs Fucogel Biosaccharidegum- Hydratant 5 1000PP 1 Glycérine Glycerin Stabilisant à 2 froid Rice NS Toucher 1 Neocare Cetearyl glucoside Emulsifiant 0,2 CG90 Keltrol T Xanthan gum Prévention du 0,1 crémage Veegum HS Mua, Magnesium Prévention du i 20 5% solution aluminium silicate crémage Euxyl K300 Phenoxyethanol, Conservateur 0,8 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Butylparaben - i,Rilr\/1 Arl'iA( Ai ais! lent 2908771 36 Antiox_cos Soja glycine, Antioxidant 0,5 Tocopherol, ascorbyl palmitate, Lecithin Huile de Buxus chinensis Emollient 4 jojoba Huile de Borago officinalis i Emollient 5 bourrache Huile de noix Macadamia Emollient 5 de ternifolia macadamia Neoderm Cetearyl Améliore 1 CSO e hylhexanoate l'applicabilité Neoderm Cetearyl Améliore 1 CSN isononanoate l'applicabilité Neoderm Pentaerythrithyl Effet 1,5 PTC Tetracaprylate/Cap texturant rate Velvesil DM Dimethicone, Toucher 4 Cetearyl dimethicone cross ol mer SF1256 Cyclopentasiloxane Prévient le 1 Cyclohexasiloxane blanchiment de la peau à l'application C Chitine-Chitine, Beta- Actif X glucane (L25 glucan X 0 fraction 100(référe 200 pm) nce To) or 1,5 Coc 2908771 37 Procédure de préparation de la crème test (référence T1,5) Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 80 C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 75 C. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé avec un mixeur, puis laissé à refroidir. Les ingrédients C et S sont enfin ajoutés à 40 C. Tableau 9- Caractéristiques des crèmes TO et T1,5 Référence de la crème TO T1,5 pH ND 5-7 Viscosité (mPa.$) 18000 19000 Densité ND 1000 10 EXEMPLE 7-Influence de la granulométrie du chitine-glucane sur la préparation et les caractéristiques sensorielles de crèmes cosmétiques à base de chitine-glucane contenant du chitine-glucane de granulométrie variable 15 Des crèmes de jour contenant différents lots de chitine-glucane de granulométrie variable, à la concentration L5%, ont été préparées selon le même protocole que celui de l'exemple 6 : un lot non broyé non tamisé (L25), et les 3 lots L25 b-oyés et fractionnés l'exemple 2. La facilité eue tIqI ie'-, i, PrIUE 20 2908771 38 Tableau 10 - Caractéristiques des crèmes préparées avec les poudres de chitine-glucane (L25) de différentes granulométries Les aspects sensoriels (visuel et toucher) sont classés de 1 à 5, le score 5 correspondant aux meilleures impressions sensorielles. La facilité de formulation est classée de 0 à 5, le score 1 correspondant à la plus grande facilité de formulation. Taille des N/A non 200-250 100-200 0-90 particules (placébo broyées Pm Pm pm de chitine- non glucane tamisées Facilité de 4 2 formulation Sensoriel : 4 2 aspect visuel Sensorie : 2 2 toucher Viscosité 18000 19000 19000 20000 29000 (mPa.$) On comprend aisément de ce tableau que plus la taille des particules est 10 ire !,~s t ra He -l'incorpoer le litre illicene dar- 5e rèrne ures sont les impressions sensoriE toit ra 15 2908771 39 EXEMPLE 11- Etude de la tolérance cutanée et du pouvoir hydratant d'une crème contenant le chitine-glucane en concentration variable Protocole- Une série de 4 crèmes de type émulsion huile dans 5 eau, contenant une concentration en chitine-glucane de 03 à 2%, dont la composition est donnée à l'exemple 5, a été testée par application sur l'avant-bras de 13 volontaires, âgés de 46 ans en moyenne (de 32 à 61 ans), dont la peau est sensible au niveau de ce site. Les crèmes sont comparées à une crème placébo sans chitine-glucane (référence CO). Les 10 produits ont été appliqués 2 fois par jour sur des zones délimitées sur chaque avant-bras (3 zones de 6,25 cm2). Trois types de mesures biométrologiques ont été effectué toutes les 2 semaines pendant 6 semaines afin de rechercher la tolérance et l'efficacité des produits. L'examen clinique initial n'a rien révélé d'anormal 15 chez aucun des sujets. Les évaluations ont été réalisées le matin, en respectant un intervalle d'au moins 10 heures après la dernière application des produits. Mesures biométrologiques- Un éventuel érythème, signe d'irritation, a été recherché par cornéométrie, par la mesure du paramètre 20 a* donné par la colorimétrie en réflectance évaluée selon les normes CIE L*a*b* (Chroma Meter CR200 Minolta). Une altération éventuelle de la fonction barrière a été recherchée par la mesure de la perte insensible en 'PTE) iRet-P R 2908771 40 sèche et perméable à l'eau, laissant fuir sans la capturer l'équivalent de la PIE. Statistiques- A chaque temps d'évaluation, la comparaison inter-produit a été réalisée par le test non paramétrique de Friedman suivi du 5 test de Dunn. Pour chaque produit, la comparaison au cours du temps a été réalisée selon les mêmes modalités, Pour chaque paramètre, des différences significatives entre les valeurs obtenues aux différents temps ont été recherchées par le test apparié non paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn.
10 Résultats-Les valeurs de a*, PIE et RWA30, mesurées au moins 10 heures après application des 5 crèmes aux temps 0, 2, 4, et 6 semaines sont consignées dans le tableau 1. Jusqu'à la concentration maximale de chitine-glucan de 2.0% étudiée, aucun signe d'érythème, d'irritation ou d'altération de la barrière cutanée n'a été observé pendant 15 toute la période de 6 semaines, comme démontré par les valeurs de a* et de PIE qui n'augmentent pas. Il a au contraire été mis en évidence que le taux d'accumulation en eau à la surface cornéenne sous occlusion (RWA30) est significativement plus faible après application des crèmes à base de chitine-glucane, ce qui indique une meilleure capacité de la peau 20 à retenir l'eau à la surface. Cet effet est observé dès la deuxième semaine application pour les concentrations de 13 et 2.0%, et dès la quatrième semaine pour les concentrations de 03 et 1.0%, comme représenté à la 2908771 41 Tableau 12-Résultats de colorimétrie en réflectance (a*), perte insensible en eau (PIE) et dynamique de l'imprégnation en eau (RWA30, rate of water accumulation sur 30 secondes) Temps Référence a* PIE RWA30 semaine) de la g/m2/hr crème Semaine CO 5.36+0.60 5.52+0.72 1.05+0.48 o (placébo) CO35 5.39+0.62 5.50+0.60 0.49 C ,O 5.39+0.60 5.49+0.70 1.15 0.46 C1,5 5.42 0.55 5.41 0.66 1.14 0.50 C2,0 5.38 0.56 5.49 0.62 1.16 0.49 Semaine CO 5.4 0.5 5.45+0.66 0.96 0.481 2 (placébo) CO35 5.4 0. 5 5.42 0.69 1.01 0.53 C1,0 5.4+0.4 1 5.42+0.63 0.88+0.46 C1,5 5.3+0.5 1 5.36+0.56 0.74 0.47 2 1 C2,0 5.1 0.4 2 5.25+0.60 0.65 0.42 2 Semaine CO 5.47+0.49 It 5.65+1.05 0.91+0.42 1 4 (placébo) CO35 5.49+0.41 5.58+0.86 0.83+0.46 C1,O ').5, .70 039 24 03J I.62 0.36 20 0, 0.38 2908771 42 Semaine CO 5.42 0.67 1 5.48 0.76 1 0.83 0.36 1 6 (placébo) CO35 9 0.55 5.47 0.68 0.76 0,42 C1,0 0.54 0.71 0.68 0.35 C .32 0.53 4.98 1.4 0.56 0. C2,0 .18 0.49 5.21 0.49 0.46 0.4343 2 1,2 les valeurs portant un chiffre différent en exposant sont significativement différentes (p<0.02) l'une de l'autre, au sein d'une série de mesure au même temps. EXEMPLE 9- Etude des effets de l'application quotidienne d'une crème de four à base de chitine-glucane de concentration 1,5% pendant 4 mois sur les paramètres biométriques de la peau de sujets âgés 10 Cet exemple illustre les effets de la crème décrite à l'exemple 6, qui contient 1,5% de chitine-glucane (référence T1,5) sur différentes caractéristiques de la peau, en particulier dans le cadre du vieillissement cutané, la crème et son placébo étant appliqués sur l'avant-bras de sujets 15 âgés pendant une période de 4 mois. La crème placébo étant une formulation elle-même déjà très hydratante, l'étude met bien les effets du chitine-glucane broyé e~ évides ace, Protocole- L'étude a porté sur 20 volontaires masculins, ha 2908771 43 paramétrique de Friedman, suivi du test de Dunn. Pour chaque produit, la comparaison au cours du temps a été réalisée selon les mêmes modalités. Pour chaque paramètre, les différences significatives entre les valeurs obtenues aux différents temps ont été recherchées par le test apparié non 5 paramétrique de Friedman suivi du test de Dunn (valeur p). Résultats-1-Évaluation de la structure de la surface de la peau rêche par squamométrie X- La squamométrie X consiste à prélever la surface de la couche cornée par un disque transparent auto-adhésif appliqué 10 pendant une dizaine de secondes sous une pression de 110 g/cm2 assurée par un dynamomètre. Le prélèvement de couche cornée est coloré par une solution de bleu de toluidine et de fuschine basique. La couleur définie par le Chroma C* mesuré en colorimétrie par réflectance (Chroma Meter Minolta) évalue l'état de xérose. Une peau normale , lisse et bien 15 hydratée, a un indice squamométrique C* d'environ 5 à 7. Plus la valeur est élevée, plus la couche cornée est épaisse, et la peau rugueuse et sèche. A l'initiation de l'étude (MO), les deux sites devant recevoir les formulations à tester avaient des valeurs d'indice de squamométrie 20 équivalentes. Les valeurs du Chroma C* obtenues ensuite sont celles du tableau 1. Pour la formulation TO, une diminution significative a été observée après un mois (MI) de traitement p 0,05), ainsi que les mois Df, était présente df Ferrriulatiori r1 5 améliorationi 25 2908771 44 Tableau 13- Indice squamométrique (Chroma C*) indiquant l'état squameux de la peau Temps C* C* Comparaison (mois) Crème T115 Placébo TO inter-produit MO 11,95 2.26 11,82 2.27 NS MI 8,79 2.3 10,49 2.59 p<0,001 M2 7,3 2.6 9,81 3.56 p<0,0001 M3 6,62 2.2 9,54 3.21 p<0,0001 M4 5,8 1.8 I 9,22 3.46 p<0,0001 Comparaison inter-temps (p) Placébo TO M1 M2 M3 M4 MO p<0,05 p<0,001 p<0,001 p<0,001 M1 NS NS NS M2 NS NS 1 M3 NS Crème T1,5 MI M2 M3 M4 MO NS p<0,001 p<0,001 p<0,001 MI NS p<0,01 p<0,001 M2 NS NS NS _ s non icai !ment entes MO sigr 3nt 0 mois, etc. 2. Evaluation de hétérogénéité de la couleur de la peau par ultraviolet light enhanced visualisation (ULEV) 2908771 45 détachement, et caractérise la cohésion des cornéocytes de la couche cornée. La mesure est exprimée en pourcentage de la surface cutanée affectée par le processus. Lorsque la peau est lisse et la couche cornée cohésive, le pourcentage ULEV est faible, de l'ordre de 5-6%.
5 Lors de l'inclusion dans l'étude (MO), et après un mois de traitement (MI), le pourcentage de la surface cutanée affectée par le processus de désquamation était similaires sur les deux sites traités, environ 8-9%. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du tableau 2. La formulation placébo TO a apporté une amélioration significative (p < 0,001) dès le premier 10 mois, et celle-ci a persisté pendant le reste de l'étude pour atteindre une valeur de 7,4% à 4 mois. La formulation T1,5 a également apporté une amélioration significative qui s'est manifestée dès le premier mois (p < 0,01) et qui s'est renforcée les mois suivants (p < 0,001). Cela s'est manifesté par des améliorations entre le premier et le quatrième mois (p 15 < 0,01) et entre le deuxième et le quatrième mois (p < 0,05). La comparaison entre les deux site traités démontre la supériorité de la formulation T1,5 au deuxième mois (p < 0,01) ainsi qu'aux troisième et quatrième mois (p < 0,001) par rapport à la crème placébo. Tableau 14 Pourcentage de la surface cutanée affectée par le 20 processus dedésquamation (mesuré par ULEV ultraviolet Iight enhanced visualisation , Visioscan) Temps % 0/0 T Comparaison eq-ne 1acebrI ' terproduit mois; 8,85 2.29 8,82 ; 4 2908771 Comparaison inter-temps (p NS : valeurs non significativement différentes MO signifiant 0 mois, etc. 3. Evaluation du relief de la peau par profilométrie optique- Le relief de la peau a été observé par profilométrie optique de manière 5 non invasive (caméra Hitachi), et les graphes de profilométrie sont analysés pour calculer la profondeur moyenne de la rugosité de la peau Rz (pm). A l'entrée dans l'étude (MO), aucune différence dans la valeur R2 n'était présente entre les deux sites. Les valeurs de profondeur moyenne 10 obtenues ensuite sont celles du tableau 3. La formulation TO a réduit significativement (p<0,01) !a valeur R7 à l'issue du quatrième mois -'_ Placébo TO 2 M4 MO p<0.001 p<0.001 p<0.001 p<0,001 NS NS NS M2 NS NS NS Crème T 2 M4 p<0.01 p<0,001 p<0,001 p<0,0 NS NS p<0,01 NS p<0,05 NS 46 utem nificativ( 0,0 15 2908771 47 avérée être la plus efficace dès le premier mois (p< 0,01), ainsi que les mois suivants (p< 0,001). La figure 6 présente les graphiques de profilométrie obtenue sur les deux avant-bras d'un sujet après 16 semaines d'application de la crème T1,5 et de la crème TO. Tableau 15- Profondeur moyenne de la rugosité de la peau Rz (pm), par profilométrie optique Temps Rz (pm) Rz (pm) Comparaison (mois) Crème Tl 5 Placébo TO interproduit MO 8,85 2.29 8,82 2.26 NS MI 7,95 2.04 8,57 2.04 p<0,01 M2 6,23 2.18 7,83 2.67 p<0,001 M3 6,06 2.12 8,24 2.88 p<0,001. M4 5,11 1.6 7,38 2.03 p<0,0001 Comparaison inter-temps (p) Placébo TO MI M2 M3 M4 MO NS NS NS p<0,01 MI NS NS NS M2 NS NS M3 ~15 2 etc. 2908771 48 4. Evaluation de la tonicité/élasticité de la peau par la mesure de la vitesse de propagation intracutanée d'un train d'ondes ultrasonores- Le temps de propagation d'une onde ultrasonore 5 dans la peau (RRTM, resonance running tune measurement, valeur arbitraire) est mesuré entre deux lamelles apposées sur la peau, par un Reviscometer. Le RRTM est un bon indicateur de la tension intrinsèque et de la tonicité de la peau, car plus la peau est tonique et tendue, moins la peau forme des plis en relief, et plus vite l'onde ultrasonore se propage.
10 Ainsi, plus le RRTM est court, plus les parties constitutives de la peau sont tendues. Le RRTM est également influencée par l'état de la couche cornée, sa cohésion, il est d'autant plus court que la couche cornée est normalisée. Les valeurs RRTM sont similaires entre les deux sites au départ de 15 l'étude et après un mois de l'essai. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du tableau 4. La formulation TO n'a entraîné aucune modification de la valeur RRTM au cours du traitement. La formulation T1,5 a induit une réduction significative de RRTM après trois mois (p < 0,01) et quatre mois (p < 0,001), ainsi qu'entre le premier et, respectivement le deuxième mois 20 (p < 0,01) et les troisième et quatrième mois (p < 0,001). Par rapport à la formule placebo, la crème T1,5 s'est avérée significativement plus perforrnante abrès deux et trois mois (p < 0,01), ainsi qu'après quatre ni` (P 2908771 49 Tableau 16- Vitesse de propagation d'une onde ultrasonore dans la peau (unité arbitraire RRTM, Reviscometer) Temps Crème T1,5 Placébo TO 1 Comparaison (mois) inter-produit o 326 64 327 61 NS 329 58 329 54 NS 2 306 68 329 60 p<0,01 302 60 322 52 p<0,01 4 291 59 322 56 p<0,0001 Comparaison inter-temps (p) placébo TO M2 4 O NS NS NS NS NS NS NS 2 NS NS NS crème T M2 4 MO NS NS p<0,01 p<0,001 p<0,01 p<0,001 p<0,001 M2 NS NS M3 NS NS : valeurs non significativement différentes ; M0 signifiant 0 mois, etc. ion de de a roucn on.;;. dar la mesure de capacitance i ata ee est é\. 2908771 50 cornée. Une peau bien hydratée présente une capacitance de 65, une peau très sèche de 30 à 40, Les valeurs de capacitance sont similaires sur les deux sites à l'initiation de l'étude. Les valeurs obtenues ensuite sont celles du 5 tableau 5. La formulation placébo TO a permis d'accroître la capacitance de manière significative après un mois (p < 0,05) et après quatre mois (p < 0,001). Dans les temps intermédiaires de deux et trois mois, aucun effet de l'application des crèmes n'est observé sur la mesure de capacitance. La formulation T1,5 permet un accroissement significatif de 10 la capacitance après un mois (p < 0,05), ainsi qu'après 2 et 4 mois (p < 0,001). Une augmentation significative (p < 0,05) de la capacitance est aussi observée entre le premier et le quatrième mois. La crème T1,5 est significativement plus performante que la crème placébo après un mois (p < 0,05), et encore plus significativement performante à 2 et 4 (p 15 < 0,001). Tableau 17- Hydratation de la couche cornée par détermination de la capacitance électrique de la peau (Corneometer) Temps CrèmeT1 Placebo TO Comparaison (mois) 1 ,5 inter-produit MO 57,7 4. 0 54,8 3.1 n MI 61 3 3.0 57,3 13.1 p<0,05 M2 62 9 2.7 ,- 1 p<0,001 3 :18 M4 2908771 Comparaison inter-temps (p) PlacéboTO 1 2 3 4 MO p<0,05 NS NS Ip<0,001 Ml NS NS NS M2 NS NS M3 NS Crème T1,5 1 2 3 4 MO p<0,05 p<0,001 p<0,001 p<0,001 M1 NS NS p<0,05 M2 NS NS M3 NS NS : valeurs non significativement différentes MO signifiant 0 mois, etc. Conclusions- Les cinq paramètres biométrologiques indiquent tous 5 la supériorité de la crème à base de chitine-glucane (T0,5) par rapport à la crème placébo (TO) contenant les mêmes ingrédients excepté le chitineglucane. La peau âgée devient plus lisse, moins squameuse, plus hydratée, plus ferme et moins xérotique. Les résultats indiquent que la crème à base de chitine-glucane exerce un ensemble d'actions qui permet 10 à la peau de retrouver son élasticité, et par là de paraître plus lisse, avec moins de relief, plus radieuse, permettant de le qualifier d'ingrédient anti-âge. Les résultats sont en partie expliqués par un effet hydratant importante f 9 )ionpé comme indieuél par les Lest ria '-or ?dors le e ' de pacita, 51 15 2908771 52 EXEMPLE 10- Etude de la tolérance par cornéoxénométrie sur couche cornée in vitro de crèmes simples à base de chitine-glucane en concentration variable 5 Protocole- Des biopsies de surface au cyanoacrylate ont été prélevées au niveau des avant-bras de 15 volontaires sains pour prélever la couche cornée. Les crèmes contenant le chitine-glucane en concentration variable de 0 à 2% sont celles de l'exemple 5 (de 0,5 à 2,5%). Elles ont été diluée par de l'eau à 50:50 (v/v) afin de pouvoir 10 garantir un contact intime entre les produits et la couche cornée. Les solutions ont été déposées pendant 2 heures sur les prélèvements de couche cornée. A l'issue de ce contact, les échantillons ont été abondamment rincés à l'eau. Après séchage, ils ont été colorés pendant 1 min par une solution alcoolique de fuschine basique et de bleu de 15 toluidine. Après rinçage à l'eau et séchage, la couleur de chaque échantillon a été mesurée par colorimétrie en réflectance pour le mode L* et Chroma C*. La différence en L* et C* correspond à l'indice colorimétrique de douceur (ICD). Un ICD supérieur à 40 indique un produit très doux pour la peau.
20 Résultats- Les valeurs d'ICD calculées pour les 5 crèmes sont consignées dans le tableau 1. Supérieures à 70 quelle que soit la concentration en chitine-glucane dans la formule appliquée, elles reflètent r =Hel Ife 2908771 53 Tableau 18- Indice colorimétrique de douceur (ICD = L*-C*) de la couche cornée après 2 heures de contact avec les solutions contenant les crèmes à base de chitine-glucane diluées par 2 N=15 Référence CO CO,5 C110 C1,5 C2,0 ICD moyen 78,6 79,3 74,0 78,4 77,6 Ecart-type 6,7 4, 8 5,4 I 7,1 ICD médiane 75,0 80,8 75,0 80,0 78, 5 EXEMPLE 11- Evaluation clinique du potentiel irritant et sensibilisant du chitine-glucane L'évaluation clinique du potentiel sensibilisant et de l'hypoallergénicité du chitine-glucane est effectuée selon le protocole de 10 Maibach-Marzulli, sur 50 volontaires à peau normale (37 2 ans), pendant 6 semaines. Une pâte de concentration 10% est préparée en dispersant le chitine-glucane (L25) dans l'eau. La pâte est appliquée sur la peau à l'aide d'un patch occlusif de type Finn Chamber . Les signes éventuels d'érythème, d'cedème, de sécheresse et l'apparition de vésicules 15 sont observés, pour caractériser le potentiel irritant (phase d'induction) et le potentiel sensibilisant du produit (phase de challenge). Au vu de l'ensemble des observations, le eh!1-in a ne est er,ide mme -,ço-,1113ai lypoallergén 2908771 54 EXEMPLE 12- Irritation primaire cutanée du chitine-glucane, étude in vivo sur volontaires L'évaluation de l'irritation primaire du chitine-glucane sur la peau 5 est réalisée en appliquant le chitine-glucane (L25) sous la forme d'une pâte aqueuse à 10% (comme dans l'exemple 11), appliqué sur la peau dans un patch occlusif de type Finn Chamber , pendant 24 heures. L'étude est réalisée sur 10 sujets. Les observations visant à détecter les signes d'érythème, d'cedème et les modifications de la structure de la 10 peau sont effectuées 30 minutes et 24 heures après le détachement du patche, sous contrôle dermatologique. L'ensemble des résultats de l'étude indique que le chitine-glucane (dispersé à 10% dans l'eau) peut être classé non irritant pour la peau.
15 EXEMPLE 13- Irritation oculaire du chitine-glucane (in vitro, méthode HET-CAMA L'évaluation de l'irritation oculaire du chitine-glucane (L25) est effectuée par le test du HET-CAM sur la membrane chorioallantoïdienne 20 d'oeufs de poule embryonnés (hen's egg test chorio-allantoic membrane), selon Luepke et al. [Fd Chem Toxic 23, 287, 1985], reconnu officiellement comme alternative à l'expérimentation animale (30 du 26/12/1996) 2908771 55 EXEMPLE 14- Formulation d'un soin de jour On peut par exemple préparer un soin de jour contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite à l'exemple 6. EXEMPLE 15-Formulation d'un lait de soin pour le corps Deux formules de lait de soin pour le corps, sans chitine-glucane 10 (a) et avec chitine-glucane (b), sont décrites ci-dessous. a b A Eau Aqua 49.5 48 Euxyl K300 Phenoxyethanol, Conservateur 1 1 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Isobutylparaben Solution Aqua, Stabilisant, 20 20 Carbopol Acrylates/C10-30 épaississant ETD2020 2% Alkyl Acrylate Crosspolymer Solution Aqua, Minimiser la 10 10 Walocel HM400 Hydroxypropyl rupture à 2 k Methylcellulose l'application B Pemulen TR-2 Acrylates/C10-30 Stabilisant 0.3 0.3 Alkyl Acrylate Crosspolyriier ; orbita ;a nt jan égétal gétale 2 2908771 56 tetracaprylate, Tetracaprate SF1256 Cyclopentasi!oxane, Silicones volatils 2 2 Cyclohexasiloxa ne Parfum Perfume 0.1 0.1 C Chitine-glucane Chitin, Beta-glucan Restructurant, 0 1. 5 (L16, <90 pm) raffermissant D Hydroxyde de Sodium hydroxyde Ajuster le pH à Qs soude 4.8-5.4 Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés. Les ingrédients de la phase B sont mélangés. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé pendant 10 minutes à 400 tr/min. La poudre C est ajoutée au mélange B/A et le mélange est homogénéisé à 400 tr/min pendant 1 heure. Le pH est ajusté entre 4.8 et 5.4 avec la phase D.
2908771 57 EXEMPLE 16Formulation d'une crème raffermissante pour le buste On peut par exemple préparer une crème raffermissante pour le 5 buste contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous. Ingrédients INCI Fonction % A Eau Aqua 37.55 EUXYL K300 Phenoxyethanol, Conservateurs 0.9 Méthylparaben, Butylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Isobutylparaben Glycérine Glycerin Stabilisant 3 RICE NS Dimethylimidazolidinone Toucher 2 Rice Starck Veegum HS 5% Magnesium aluminium Stabilisant 10 silicate Keltrol T Xanthan gum 0.15 C1216 Sucrose Laurate Co-émulsifiant 0.2 B SF1256 Cyclopentasiloxane, Silicones 9 Cyclohexasiloxane volatils Beurre de Butyrospermum Parkii Traitement 12 karité Beurre d'olive Olea Eurapaea Traitement 10 Neoderm IPP Isopropyl Palmitate Etaiement 6 Neoderm PTC Pentaerythrityl Effet 1.5 tetracaprylate/caprate amortissant ) R ( _ ,cifIA, ea rate Oryza Sa iv: _ îbil nulin 2908771 58 Chitine-g ucane Chitin, Be a-g ucan Agent 1.5 (L16, fraction raffermissant <90 pm) Caroblend 99.95% (PPG-15 Stea Colorant 0.2 (0.05% Ether), 0.05% Caroquest (Carotenoids, MCT) Caprylic/Capric Triglyceride) Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 80oc, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 85 C. La phase B est ajoutée à la phase A, et le mélange est homogénéisé pendant 5 minutes à 5 10000 tours/minute, puis laissé à refroidir à 40 C. Les ingrédients des phases C et D sont ajoutés dans l'émulsion sous agitation.
2908771 59 EXEMPLE 17- Formulation d'un ait de soin pour bébé On peut par exemple préparer un lait de soin pour bébé contenant de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous. Ingrédients INCI Fonction % A Beurre de karité Butyrospermum parkii Beurre végétal 15 Beurre d'olive Olea europaea Beurre végétal 10 Zenebicream Octyl dodecanol, Emollient 5 Beeswax Huile d'amande Prunus amygdales Huile végétale 15 douce dulcis Neoderm PTC Pentaerytrityl Effet texturant 4 tetracaprylate, Tetraca rate Vaseline Petrolatum Cire occlusive 1 Sabonal 01618 Cetearyl alcohol Stabilisant, 2 50/50 perception sensorielle Stéarate de Sorbitan Stearate Emulsifiant 2 sorbitane Inutec SPI Inulin lauryl carbamate Stabilise 1 l'émulsion Oxyde de zinc Zinc oxide Anti-irritant 4 B Eau Aqua 11,35 Keltrol T Xanthan Gum Epaississant 0,05 Neocare SC15 Sucrose cocoate Co-emulsifiant 0,4 Corn PO4 Distarch phosphate Hydratant 4 C Inutec H25 Inulin Conditionne la 23,5 peau D Parfum Perfume 0,2 E Chitine- uc;Dne hitin., B Renforce !'effet 1,5 it Id tége la 5 10 2908771 60 Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 750C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 80 C. La phase A est ajoutée à la phase B, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 rpm, puis laissé à refroidir à 40 C. Les ingrédients des phases C et D sont ajoutés dans l'émulsion sous agitation, puis le mélange est homogénéisé pendant 1 minute à 10000 tours/minute. La poudre de chitine-glucane (E) est ajoutée et l'ensemble est agité pendant 60 minutes (pour une quantité finale de 200 g). EXEMPLE 18- Formulation d'une crème pour les mains On peut par exemple préparer une crème pour les mains contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous. Ingrédients INCI Fonction lo A Eau Aqua Qs Glycérine Glycerin Stabilité à 3 froid Euxyl K300 Phenoxyethanol, Conservateur 0.8 Ethylparaben, Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Isobutylparaben Keltrol T Xanthan gum Anti-crémage 0.1 Neocare Olive Olive oit hydrolyzed wheat Emulsifiant 4 protein, Cetearyl alcohol, Glyceryl oleate, Glyceryl stearate, Potassium - -ant Diméthic e 2908771 61 Beurre de karité Butyrospermum parkii Beurre végétal SF1214 Cyclopentasiloxane, Résine de Dimethicone silicone Neoderm PTC Pentaerythrityl Effet capric/caprylate amortissant Neoderm TCC Capric/caprylic triglyceride Huile neutre Huile d'abricot Prunus armeniaca Huile végétale Sabonal 01618 Cetearvl alcohol Stabilisant 50/50 Chitine-glucane Chitin, Beta-glucan Agent L5 (L16, fraction protecteur e <90 pm) régénérant Panthénol Panthenol Régénérant Parfum Perfume Parfum 0.2 Protocole- Les ingrédients de la phase A sont mélangés à 65 C, puis les ingrédients de la phase B sont mélangés à 65 C. La phase A est ajoutée à la phase B, et le mélange est homogénéisé pendant 3 minutes à 10000 tours/minute, puis laissé à refroidir à 40 C. Les ingrédients C sont ajoutés dans l'émulsion, et le mélange est refroidit, puis mélanger au moins 30 minutes.
2908771 62 EXEMPLE 19- Formulation d'une lotion anti-acné On peut par exemple préparer une lotion anti-acné contenant 1,5% de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous. Ingrédients INCI Fonction % A Neoderm ISN Isononyl isononanoate Perception 5 sensorielle Neoderm 105 Isodecyl neopentanoate Améliore 5 l'étalement Neoderm AB C12-15 Alkyl benzoate Toucher sec 5 Huile de jojoba Simmondsia chinensis Huile végétale 1 Inutec SPI Inulin lauryl carbamate Stabilise 0,2 l'émulsion Huile d'arbre à thé Melaleuca Alternifolia Huile essentielle 2 Pemulen TR2 Acrylates/C10-30 Alkyl Emulsifiant 0,3 Acrylate Crosspolymer B Eau Aqua 46,1 Euxyl K300 Phenoxyethanol, Conservateur 0,9 Methylparaban, Butylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Isobutylparaben Carbopol EDT 2020 Acrylates/C10-30 Alkyl Epaississant 20 2% Acrylate Crosspolymer Walocel HM4000 2% Hydroxypropyl Epaississant 10 methylcellulose Chitine- glucane Chitin, Beta-glucan Purifiant 1,5 (L16, fraction< 90 pm Corn PLI, ,-1 phosph tant Procédure 2908771 63 On peut par exemple préparer un soin anti-psoriasis contenant de chitine-glucane selon la formulation décrite ci-dessous. Ingrédients INCI Fonction % A Water Aqua 38,2 Avicel PC 591 Microcrystalline Epaississant, 1 Cellulose, Cellulose stabilisant Gum Chitine-glucane Chitin, Beta-glucan Actif anti-psoriasis 1,5 (L16, fraction X90 pm) B Neocare P3C Polyglyceryl-3 Solvant anti-bacterial 1 Ça date solvent Centapowder Centella asiatica Régule la 0,1 prolifération cellulaire Parfum Perfume 0,2 C Huile de Borago officinalis Huile végétale 30 bourrache Huile de rose Rosa moschata Huile végétale 20 Huile de Macadamia ternifolia Huile végétale 5 macadamia Sabonal 01618 Cetearyl alcohol Stabilisant, 2 50/50 perception sensorielle Inutec SPI Inulin lauryl Stabilise l'émulsion 1,2 carbamate Procédure- Les ingrédients de la phase A sont mélangés. Les ingrédients de la phase C sont mélangés, et la phase C est portée à 75 C. La phase C est ajoutée à la phase A sous agitation, et le mélange est homogénéisé pendant minutes à 10000 tours/minute, puis .-frnidi à e elangé nae e 3ér Denda _ ninute 2908771 64 EXEMPLE 21- Mise en oeuvre du chitine-glucane sous forme d'un matériau poreux 5 On prépare une pâte de chitine-glucane en homogénéisant 100 g d'une poudre de chitine-glucane de granulométrie fine (L25, fraction<90pm) avec 900 g d'eau, pendant au moins 1 heure. La pâte est congelée à -18 C, puis lyophilisée. On obtient un matériau poreux, cohésif, avec une bonne tenue mécanique. L'observation par microscopie 10 électronique à balayage (figure 7) révèle une structure très aérée isotrope et fibrillaire. EXEMPLE 22- Mise en oeuvre du chitine-glucane et du chitosane sous forme d'un matériau poreux mixte 15 On prépare une solution de chitosane à 2% dans l'acide acétique à 1%. On y disperse une poudre de chitine-glucane de granulométrie fine (L16, fraction<90 dam), et on homogénéise pendant 2 minutes. La dispersion est congelée à -18 C, puis lyophilisée. On obtient un matériau 20 poreux, cohésif, avec une bonne tenue mécanique. L'observation par microscopie électronique à balayage (figure 8, coupe longitudinale) révèle une structure poreuse non fibrillaire, interconnectée, les pores présentant uni`' rrIr irientaticni

Claims (4)

REVENDICATIONS
1. Polysaccharide d'origine fongique comprenant majoritairement un copolymère chitine-glucane, ledit polysaccharide étant sous forme de particules micrométriques dont au moins 70% en poids des particules ont une taille inférieure à 500 microns (pm), et de préférence inférieure à 355 microns (pm).
2. Polysaccharides, selon la revendication caractérisé en ce que le copolymère de chitine-glucane comprend un rapport entre les unités N-acétyl-D-glucosamine de la chitine et les unité D-glucose des betaglucanes compris entre 95:5 et 15:85.
3. Extrait fongique comprenant au moins un copolymère chitine-glucane sous forme de particules micrométriques dont au moins 70% des particules en poids ont une taille inférieure à 500 microns (pm), et de préférence inférieure à 355 microns (pm).
4. Extrait fongique, selon la revendication 3, caractérisé en ce que le polysaccharide d'origine fongique comprend plus de 70 % de copolymère chitine-glucane en masse par rapport à la masse totale de l'extrait d'origine fongique, de préférence supérieure à 85 ('lc) Ktrait fongique, s(- ndicat actérisé 65 2908771 66 6. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que l'extrait fongique est un hydrolysat du copolymère chitine-glucane. 7. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que le rapport entre la chitine et les bêta-glucanes est compris entre 95:5 et 15:85 (m/m), 8. Extrait fongique, selon l'une quelconque des revendications 3 à 7, 10 caractérisé en ce que les particules micrométriques ont au moins 50% en poids des particules ont une taille inférieure à 250 microns (pm), de préférence inférieure à 150 microns (pm). 9. Composition comprenant un polysaccharide tel que défini à la 15 revendication 1 ou 2 ou un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 3 à 8. 10. Composition, selon la revendication 9, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique, en particulier 20 dermocosmétique ou dermatologique. 11. Composition, selon la revendication 9 ou 10, caractérisée en ce que le polysaccharide ou xtrait fongique est_ une concentration 0,01 )'/o, et de pl ncE et 5%, po 2908771 67 ou 2 ou au moins un extrait fongique tel que défini à l'une quelconque des revendications 3 à 8. 13. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque 5 des revendications 9 à 12, pour exercer un soin cosmétique, de préférence dermocosmétique ou dermatologique, caractérisée en ce que le soin est choisi parmi le groupe consistant en un soin du corps ou du visage, pour améliorer, notamment de manière durable et significative l'hydratation de la peau, augmenter le pouvoir de rétention de l'eau de la peau notamment 10 à long terme, améliorer la fonction barrière de la peau, améliorer la protection de la peau et/ou les activités de défense de la peau, notamment contre les agressions extérieures telles que les rayonnements, la sécheresse, la pollution, notamment par les métaux lourds, les radicaux libres, améliorer l'aspect de la peau, améliorer l'homogénéité de la peau, 15 notamment en la rendant plus lisse, plus homogène, plus douce, plus saine, améliorer la fermeté et la tonicité de la peau, et favoriser l'accrochage de l'épiderme au derme 14. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque 20 des revendications 9 à 12, pour diminuer les rides ou ralentir ou prévenir l'apparition des rides. UfiPatlOrI 'U composition t ~e que définie se l""ne quelconque me composition de c mentE 2908771 68 l'athérosclérose, l'obésité, d'une maladie liée à l'obésité, une maladie cardiovasculaire, le syndrome métabolique, le diabète, et l'hyperuricémie. 16. Composition de complément alimentaire comprenant à titre de principe actif au moins un polysaccharide tel que défini à la revendication 1 ou 2, ou un extrait d'origine fongique, tel que défini à l'une quelconque des revendications 3 à 8. 17. Composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif au 10 moins un polysaccharide tel que défini à la revendication 1 ou 2, ou un extrait d'origine fongique, tel que défini à l'une quelconque des revendications 3 à 8. 18. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une quelconque 15 des revendications 9 à 12, comme excipient d'une composition, notamment d'une composition cosmétique, de préférence dermatologique de dermocosmétique. 19. Procédé de préparation d'un extrait fongique comprenant : 20 a) l'extraction et la purification d'un copolymère chitine-glucane à partit- d'une biomasse fongique, ledit copolymère de cet extrait fongique étant insoluble dans l'eau ou un solvant organique, étapes.. ire ltanées, -)u éparées Mpen(jarrirrien _ rie 25
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