FR2822238A1 - Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives - Google Patents
Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives Download PDFInfo
- Publication number
- FR2822238A1 FR2822238A1 FR0103592A FR0103592A FR2822238A1 FR 2822238 A1 FR2822238 A1 FR 2822238A1 FR 0103592 A FR0103592 A FR 0103592A FR 0103592 A FR0103592 A FR 0103592A FR 2822238 A1 FR2822238 A1 FR 2822238A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sep
- antigens
- tyr
- aze
- cys
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
L'invention concerne une méthode pour la détection et le suivi des maladies neurodégénératives, qui consiste à détecter la présence d'anticorps d'isotypie A et/ ou M dirigés contre les antigènes associés à ces maladies. L'invention concerne également une trousse pour la mise en oeuvre de cette méthode.
Description
<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention a pour objet une méthode et une trousse pour le suivi des maladies neurodégénératives.
L'invention trouve notamment application dans le domaine médical et dans le domaine immunologique.
Malgré les immenses progrès médicaux de ces cinquante dernières années, un certain nombre de maladies, anciennement connues ou d'apparition récente, restent à proprement parler incurables, malgré un coût important pour la Santé Publique. Citons en particulier les affections neuro-dégénératives, comme la maladie de Parkinson, la Sclérose en Plaques (SEP), la Sclérose Latérale Amyotrophique (SLA), la maladie d'Alzheimer, les maladies autoimmunes, les hépatites, les rhumatismes dégénératifs et inflammatoires dont la polyarthrite rhumatoïde (PR).
Dans ces maladies, le diagnostic nosologique est posé, certains mécanismes et étapes du processus lésionnel sont connus, des traitements symptomatiques sont opposés, souvent très chers, mais les résultats ne sont pas à la hauteur des espérances.
La Sclérose en Plaques est une pathologie démyélinisante multiloculaire du système nerveux central affectant la substance blanche du cerveau et de la moelle épinière, très lourdement invalidante, d'évolution insidieuse et imprévisible.
En France, la SEP touche 1 individu sur 1000 en pleine maturité (40 à 60 cas pour 100 000 habitants), soit 50 000 français, et il faut compter 2000 nouveaux cas chaque année. Dans le monde, on recense 2 millions de cas.
La maladie débute chez l'adulte jeune, entre 15 et 50 ans (20 et 40 ans surtout). Son incidence est deux fois plus grande chez la femme que chez l'homme.
La SEP comprend trois grandes formes cliniques distinctes : rémittente, progressive et rémittente progressive.
<Desc/Clms Page number 2>
La Sclérose Latérale Amyotrophique (SLA) ou Maladie de Charcot est une affection neurologique d'évolution rapide, d'étiologie inconnue. Elle est caractérisée par une atteinte dégénérative des motoneurones du cerveau, du tronc cérébral et de la corne antérieure de la moelle épinière, tandis que les neurones sensitifs ne sont pas touchés et que les fonctions intellectuelles restent intactes, laissant les patients pleinement conscients de la progression de leur maladie et de
la détérioration de leurs capacités fonctionnelles.
la détérioration de leurs capacités fonctionnelles.
La prévalence de la SLA est égale à celle de la SEP. Elle est 5 fois supérieure à celle de la maladie de Huntington. Chaque année, meurent plus de malades atteints de SLA que de SEP ou de maladie de Huntington.
La SLA survient le plus souvent entre 45 et 70 ans, atteignant 1, 5 à 2 fois plus les hommes que les femmes. Elle concerne des sujets de plus en plus jeunes : il existe des cas à début précoce avant 40 ans.
Son incidence, c'est-à-dire le nombre de nouveaux cas chaque année, a tendance à augmenter dans le monde pour une raison inconnue. En France, il y aurait 5 à 10 000 personnes atteintes, et il apparaît environ 1100 nouveaux cas chaque année.
L'évolution de cette maladie est dramatique, toujours mortelle.
Elle se fait vers une aggravation progressive, avec installation d'un état grabataire et d'une insuffisance respiratoire par atteinte de la musculature intercostale et diaphragmatique, menant rapidement au décès (en 3 à 5 ans).
La SLA comprend une hétérogénéité clinique évolutive qui laisse à penser à une hétérogénéité biologique.
La polyarthrite rhumatoïde (PR), anciennement appelée polyarthrite chronique évolutive, est une maladie inflammatoire polyarticulaire chronique responsable de dégâts ostéocartilagineux
<Desc/Clms Page number 3>
entraînant une impotence fonctionnelle douloureuse par déformation et ankylose.
C'est donc une maladie potentiellement sévère qui cause un handicap important chez plus de la moitié des patients, 10 ans après le début des symptômes, et réduit de plusieurs années leur espérance de vie.
Sa prévalence en France serait d'environ 1 % : c'est le rhumatisme inflammatoire chronique le plus fréquent. Il touche 7000 nouveaux individus par an, atteignant plus souvent la femme encore jeune.
La Spondylarthrite (SPR) est une affection rhumatismale chronique se manifestant par une atteinte au niveau lombo-sacré entraînant une ankylose progressive. Cette affection immunologique et inflammatoire est liée à une surexpression de l'antigène d'histocompatibilité B27 (retrouvé dans 90% des cas).
L'importance de ces maladies tant au niveau du nombre de personnes touchées qu'au niveau de coût pour la santé publique, n'est donc pas négligeable.
A ce jour, il n'existe pas de test biologique pour évaluer le stade et/ou prévoir l'évolution de ces maladies. Seul un examen clinique, éventuellement complété par des examens complémentaires, permet de poser le diagnostic de ces maladies.
Il existe donc un réel besoin de pouvoir disposer d'un test diagnostique évolutif spécifique, susceptible de pallier aux insuffisances de la clinique.
Le Demandeur a mis en évidence que l'occurrence des maladies neurodégénératives était associée à des modifications antigéniques, intégrées par les cellules immunocompétentes, se traduisant par la production d'anticorps circulants d'isotypie A et/ou M. Ces anticorps sont dirigés contre les antigènes indiqués dans le Tableau 1 ci-après, montrant les modifications antigéniques et les facteurs bactériens participant à la chronicité de ces maladies :
<Desc/Clms Page number 4>
Tableau 1
<tb>
<tb> Antigènes <SEP> Origine <SEP> Isotypie <SEP> de
<tb> l'anticorps
<tb> Acides <SEP> gras <SEP> (acides <SEP> palmitique, <SEP> composés <SEP> endogènes
<tb> oléique, <SEP> myristique) <SEP> liés <SEP> par <SEP> liaison <SEP> amide
<tb> Farnésyl <SEP> Cystéine <SEP> M
<tb> Phosphatidylinositol
<tb> Acétylcholine
<tb> Acide <SEP> Azélaïque <SEP> composé <SEP> endogène
<tb> modifié <SEP> (liaison <SEP> M
<tb> amide)
<tb> Résidu <SEP> produit <SEP> très <SEP> réactif <SEP> sur
<tb> Malondialdéhyde <SEP> des <SEP> constituants <SEP> M
<tb> endogènes
<tb> NO-Cystéine <SEP> constituants <SEP> endogènes
<tb> NO-Tyrosine <SEP> modifiés <SEP> Par <SEP> #NO <SEP> et
<tb> NO-Tryptophane <SEP> EOR <SEP> (espèces <SEP> M
<tb> NO-Histidine <SEP> oxygénées <SEP> réactives)
<tb> NO2-Tyrosine
<tb> NO-Phénylalanine
<tb> NO-Arginine
<tb> NO-Asparagine
<tb> NO-Méthionine
<tb> NO-Créatine
<tb> NO-Serum <SEP> Albumin <SEP> Bovine
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 3 <SEP> (lag3) <SEP> Hafnia <SEP> alvei <SEP> Aou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 5 <SEP> (Ig5) <SEP> Pseudomonas <SEP> Aou <SEP> M
<tb> aeruginosa
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 12 <SEP> (Ig12) <SEP> Morganella <SEP> morganii <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 13 <SEP> (Ig <SEP> 13) <SEP> Proteus <SEP> mirabilis <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 16 <SEP> (Ig <SEP> 16) <SEP> Pseudomonas <SEP> putida <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 17 <SEP> (lg17) <SEP> Citrobacter <SEP> diversus <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 19 <SEP> (Ig <SEP> 19) <SEP> Klebsiella <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> pneumoniae
<tb>
<tb> Antigènes <SEP> Origine <SEP> Isotypie <SEP> de
<tb> l'anticorps
<tb> Acides <SEP> gras <SEP> (acides <SEP> palmitique, <SEP> composés <SEP> endogènes
<tb> oléique, <SEP> myristique) <SEP> liés <SEP> par <SEP> liaison <SEP> amide
<tb> Farnésyl <SEP> Cystéine <SEP> M
<tb> Phosphatidylinositol
<tb> Acétylcholine
<tb> Acide <SEP> Azélaïque <SEP> composé <SEP> endogène
<tb> modifié <SEP> (liaison <SEP> M
<tb> amide)
<tb> Résidu <SEP> produit <SEP> très <SEP> réactif <SEP> sur
<tb> Malondialdéhyde <SEP> des <SEP> constituants <SEP> M
<tb> endogènes
<tb> NO-Cystéine <SEP> constituants <SEP> endogènes
<tb> NO-Tyrosine <SEP> modifiés <SEP> Par <SEP> #NO <SEP> et
<tb> NO-Tryptophane <SEP> EOR <SEP> (espèces <SEP> M
<tb> NO-Histidine <SEP> oxygénées <SEP> réactives)
<tb> NO2-Tyrosine
<tb> NO-Phénylalanine
<tb> NO-Arginine
<tb> NO-Asparagine
<tb> NO-Méthionine
<tb> NO-Créatine
<tb> NO-Serum <SEP> Albumin <SEP> Bovine
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 3 <SEP> (lag3) <SEP> Hafnia <SEP> alvei <SEP> Aou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 5 <SEP> (Ig5) <SEP> Pseudomonas <SEP> Aou <SEP> M
<tb> aeruginosa
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 12 <SEP> (Ig12) <SEP> Morganella <SEP> morganii <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 13 <SEP> (Ig <SEP> 13) <SEP> Proteus <SEP> mirabilis <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 16 <SEP> (Ig <SEP> 16) <SEP> Pseudomonas <SEP> putida <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 17 <SEP> (lg17) <SEP> Citrobacter <SEP> diversus <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> antigènes <SEP> bactériens <SEP> 19 <SEP> (Ig <SEP> 19) <SEP> Klebsiella <SEP> A <SEP> ou <SEP> M
<tb> pneumoniae
<tb>
<Desc/Clms Page number 5>
La détection de ces anticorps peut donc rentrer dans le cadre d'un diagnostic général des maladies neurodégénératives, et dans le suivi de ces maladies.
Un tel procédé de détection de ces anticorps dans un fluide biologique peut comprendre les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, Ach, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO-His, NO2-Tyr, NO-Phe, NO-Arg, NO-Asn, NO-Met, NO-Cr, NO-SAB, Ig3, lag5, g12, g13Jg16, Ig17Jg19 et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
Comme cela est indiqué dans le Tableau 1, lorsqu'on détecte la présence d'un anticorps dirigé contre un antigène bactérien"Ig", cet anticorps peut être d'isotypie A et/ou d'isotypie M.
Les antigènes non-bactériens autre que la sérum albumin bovine éventuellement nitrosylée sont avantageusement conjugués.
Par"antigène conjugué"on entend au sens de la présente invention un antigène (tel que Pal, FarCys, NO-Cys, etc.) couplé à une molécule porteuse, de préférence la sérum albumin bovine, soit directement soit par l'intermédiaire de glutaraldéhyde ou d'anhydride glutarique. Un tel couplage est réalisé de manière bien connue de l'homme du métier, par exemple comme décrit dans Boullerne et al., 1995, 1996 ; Geffard et al., 1998.
Les antigènes bactériens sont obtenus par sonication de cultures des bactéries indiquées dans le Tableau 1.
Le fluide biologique peut être, en particulier : un sérum, un plasma, du sang total, de !'urins, un liquide cérébrospinal.
Le procédé mis en oeuvre peut être avantageusement du type "sandwich".
<Desc/Clms Page number 6>
Les complexes éventuellement formés peuvent être mis en évidence à l'aide d'un anticorps anti-immunoglobuline A ou M humaine, couplé à un marqueur, par exemple un marqueur fluorescent, le système biotine/streptavidine, un élément (radio) isotopique ou une enzyme.
Le procédé conforme à l'invention est avantageusement mis en oeuvre à l'aide d'un support solide convenable.
Comme support solide, on peut utiliser tout dispositif adapté à la manipulation de suspensions cellulaires et préférentiellement des tubes, des supports magnétiques particulaires ou des plaques rigides ou souples de microtitration en polyéthylène, polystyrène, chlorure de polyvinyle ou nitrocellulose comportant des micropuits.
Lorsqu'on utilise une plaque de microtitration préactivée ayant des terminaisons NH2, il n'est pas nécessaire de"coupler"les antigènes à une molécule porteuse.
L'expression"un anticorps couplé à un élément (radio) isotopique"signifie que l'anticorps porte, soit sur un élément propre de sa structure, par exemple les résidus de tyrosine constitutifs, soit sur un radical approprié qui lui a été fixé, un isotope radioactif permettant de le doser par comptage de la radioactivité qui lui est associée.
Lorsque l'anticorps est couplé à une enzyme celle-ci, associée à l'emploi de réactifs appropriés, permet une mesure quantitative de cet anticorps.
Le substrat et les réactifs sont choisis de sorte que le produit final de la réaction ou de la séquence des réactions provoquées par l'enzyme et mettant en oeuvre ces substances soit : - ou bien une substance colorée ou fluorescente qui diffuse dans le milieu liquide environnant les cellules et qui fait l'objet de la
<Desc/Clms Page number 7>
mesure finale spectrophotométrique ou fluorimétrique, respectivement, - ou bien une substance colorée insoluble qui se dépose sur les cellules et les parois sur lesquelles elles sont fixées et qui peut faire l'objet, soit d'une mesure photométrique par réflexion, soit d'une évaluation à l'oeil éventuellement par rapport à une gamme de teintes étalonnées.
Lorsque l'on utilise un élément radio-isotopique, comme par exemple l'iode 125, la radioactivité associée à l'échantillon est comptée dans un compteur gamma selon toute modalité appropriée.
Lorsque l'on utilise une enzyme, l'apparition d'un produit coloré ou fluorescent est obtenue en ajoutant au support solide une solution contenant le substrat de l'enzyme et un ou plusieurs réactifs auxiliaires permettant d'obtenir finalement comme produit de réaction, soit un produit coloré soluble dans le milieu, soit un produit coloré insoluble, soit un produit fluorescent soluble, comme cela a été expliqué précédemment. On mesure ensuite le signal lumineux provenant des échantillons ainsi traités, à l'aide de l'appareillage adapté à chaque cas : photomètre en transmission ou en réflexion ou fluorimètre respectivement. Lorsque le support solide est une plaque de microtitration, la lecture du signal lumineux peut être effectuée séquentiellement dans tous les puits d'une même plaque par l'emploi de lecteurs automatisés d'usage courant dans les laboratoires de biologie.
On peut utiliser comme enzyme la phosphatase alcaline, dont les substrats préférentiels sont le paranitrophénylphosphate pour une lecture finale spectrophotométrique ou le méthyl-4- umbelliférylphosphate pour une lecture fluorométrique ou le bromo- 5-chloro-4-indolyl-3-phosphate pour obtenir un produit de réaction coloré insoluble. On peut de même utiliser comme enzyme la ss-
<Desc/Clms Page number 8>
galactosidase dont les substrats préférentiels seront alors l'orthon itrophényl-ss-D-galactopyranoside.
Préférentiellement, on peut coupler, de manière conventionnelle, les anticorps anti-kg à la peroxydase. Les réactifs utilisés pour révéler la peroxydase conjuguée aux anticorps anti-kg contiennent de l'eau oxygénée, substrat de l'enzyme, et un chromogène approprié par exemple de l'orthophénylènediamine, la diamino-3, 3' benzidine ou la TMB (3, 3', 5, 5'-tétraméthylbenzidine) pour obtenir un produit final de réaction insoluble, ou bien l'acide
parahydroxyphénylpropionique pour obtenir un produit de réaction fluorescent soluble dans le milieu. La réaction colorimétrique est arrêtée avec de l'acide sulfurique.
parahydroxyphénylpropionique pour obtenir un produit de réaction fluorescent soluble dans le milieu. La réaction colorimétrique est arrêtée avec de l'acide sulfurique.
Un autre mode préférentiel de réalisation de l'invention est l'utilisation d'anticorps anti-immunoglobuline couplés à t'acétykhotinestérase.
L'acétylcholinestérase est couplée à l'anticorps en utilisant préférentiellement un procédé dérivé de celui décrit dans le brevet français ? 2 550 799 ou un procédé qui comporte schématiquement la préparation de fragments de l'anticorps par une technique connue, la modification de l'enzyme par réaction avec un agent hétérobifonctionnel approprié et enfin le couplage des produits ainsi obtenus.
La révélation de l'activité enzymatique est réalisée de préférence selon la technique bien connue qui emploie l'acétylthiocholine comme substrat de l'enzyme et le réactif d'Ellman, ou acide dithio-5, 5' nitro-2 benzoïque comme chromogène, selon toute variante adaptée au cas examiné, par exemple celle décrite dans Anal. Chem. 57 (1985) 1170- 1173.
Les chromogènes cités sont utilisés tels quels ou sous forme de sels soluble dans l'eau.
<Desc/Clms Page number 9>
L'invention a également pour objet une trousse pour la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus. Cette trousse comprend avantageusement : - chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, Ach, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO-His, NO2-Tyr, NO-Phe, NO- Arg, NO-Asn, NO-Met, NO-Cr, NO-SAB, Ig3, Ig5, Ig12, Ig13, Ig16, Ig17 et ! g19 ; - éventuellement au moins un anticorps anti-immunoglobuline humaine, d'isotypie A et/ou M tel que défini précédemment.
Cette trousse peut également comprendre un support solide convenable.
Ce test permet notamment : - d'établir un diagnostic précoce de la maladie, en particulier chez les personnes à risque, et donc de ne pas prendre de retard dans le traitement de la maladie ; - de suivre l'évolution de la maladie, et donc de pouvoir adapter le traitement en conséquence.
La détection des anticorps dirigés contre les antigènes suivants : Pl, Ach, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO2-Tyr, NO-Asn, NO-Met, Ig5 (anticorps d'isotypie A), ! g12 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), Ig13 (anticorps d'isotypie A), Ig16 (anticorps d'isotypie A), tag17 (anticorps d'isotypie M) et g19 (anticorps d'isotypie A), permet en particulier d'établir le diagnostic de la SEP. La quantification des anticorps dirigés contre les antigènes suivants : NO2-Tyr, NO-Tyr, Ach et Ig16 (anticorps d'isotypie A), permet de discriminer les formes particulières de la SEP (progressive, rémittente, rémittente progressive).
De même, la détection des anticorps dirigés contre les antigènes suivants : Ole, Pl, MAD, Aze, NO-Cys, FarCys, Ig3 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), Ig5 (anticorps d'isotypie A), Ig12 (anticorps d'isotypie
<Desc/Clms Page number 10>
A et d'isotypie M), Ig13 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), g16 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), Ig17 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), permet d'établir le diagnostic de la SLA et, en fonction du titre en anticorps, de différencier les 3 classes de cette maladie.
La détection des anticorps dirigés contre les antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Phe, Ig3 (anticorps
d'isotypie A et d'isotypie M), g5 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), Ig12 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie Mt Ig 13 (anticorps d'isotypie M) et ! g19 (anticorps d'isotypie A), permet d'établir le diagnostic de la PR.
d'isotypie A et d'isotypie M), g5 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie M), Ig12 (anticorps d'isotypie A et d'isotypie Mt Ig 13 (anticorps d'isotypie M) et ! g19 (anticorps d'isotypie A), permet d'établir le diagnostic de la PR.
Dans la description et les revendications, on utilise les abréviations suivantes :
SAB : sérum albumine bovine
G : résidu de glutaraldéhyde
AG : résidu d'anhydride glutarique
PBS : tampon phosphate salé
OPD : ortho-phénylènediamine H202 : eau oxygénée
H2SO4: acide sulfurique PI : phosphatidylinositol CaCI2 : chlorure de calcium
NaCI : chlorure de sodium
DO : densité optique
SAH : sérum albumine humaine
SAH-EA : sérum albumine humaine sur laquelle est accrochée de l'éthylènediamine
Ig : immunoglobuline
Ach : acéty ! chotine
Ole : acide oléique Pa ! : acide palmitique
SAB : sérum albumine bovine
G : résidu de glutaraldéhyde
AG : résidu d'anhydride glutarique
PBS : tampon phosphate salé
OPD : ortho-phénylènediamine H202 : eau oxygénée
H2SO4: acide sulfurique PI : phosphatidylinositol CaCI2 : chlorure de calcium
NaCI : chlorure de sodium
DO : densité optique
SAH : sérum albumine humaine
SAH-EA : sérum albumine humaine sur laquelle est accrochée de l'éthylènediamine
Ig : immunoglobuline
Ach : acéty ! chotine
Ole : acide oléique Pa ! : acide palmitique
<Desc/Clms Page number 11>
Myr : acide myristique FarCys : Farnésyl cystéine
MDA : malondialdéhyde (néo-épitope résultant de la lipoperoxydation)
(avec R = protéine) NO-Cys : NO-cystéine (néoépitope dû à la nitrosylation de la cystéine)
NO-Trp : NO-tryptophane (néoépitope dû à la nitrosylation du tryptophane)
NO-Asn : NO-asparagine (néoépitope dû à la nitrosylation de l'asparagine)
MDA : malondialdéhyde (néo-épitope résultant de la lipoperoxydation)
(avec R = protéine) NO-Cys : NO-cystéine (néoépitope dû à la nitrosylation de la cystéine)
NO-Trp : NO-tryptophane (néoépitope dû à la nitrosylation du tryptophane)
NO-Asn : NO-asparagine (néoépitope dû à la nitrosylation de l'asparagine)
<Desc/Clms Page number 12>
NO-Tyr : NO-tyrosine (néoépitope dû à la nitrosylation de la tyrosine)
NO2-Tyr : NO2-tyrosine (néoépitope dû à la formation de peroxynitrite : NO+0)
NO-His : NO-histidine (néoépitope dû à la nitrosylation de !'histidin)
NO-Phe : NO-phénylalanine (néoépitope dû à la nitrosylation de la phénylalanine)
NO-Met : NO-méthionine (néoépitope dû à la nitrosylation de la méthionine)
NO2-Tyr : NO2-tyrosine (néoépitope dû à la formation de peroxynitrite : NO+0)
NO-His : NO-histidine (néoépitope dû à la nitrosylation de !'histidin)
NO-Phe : NO-phénylalanine (néoépitope dû à la nitrosylation de la phénylalanine)
NO-Met : NO-méthionine (néoépitope dû à la nitrosylation de la méthionine)
<Desc/Clms Page number 13>
NO-Arg : NO-arginine (néoépitope dû à la nitrosylation de l'arginine)
NO-Cr : NO-créatine (néoépitope dû à la nitrosylation de la créatine)
NO-Cr : NO-créatine (néoépitope dû à la nitrosylation de la créatine)
L'invention sera mieux comprise à l'aide des sections et exemples ci-après, donnés à titre purement illustratif.
SECTION 1 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-NO-CYSTEINE On utilise une plaque de microtitration ! viaxisorp (R) commercia ! isée par la Société MERCK-EUROLAB (POLYLABO), comportant 96 puits. On place par puits 10 ug/ml de solution de conjugué NO-Cystéine-G-SAB (préparé selon la méthode décrite dans Boullerne et al., 1995,1996 et Geffard et al., 1998) dans du tampon carbonate à pH 9,6 (blancs de réaction : SAB-G), pendant une nuit à + 4 C sous agitation, en évitant l'exposition de la plaque à la lumière. On verse ensuite dans les puits
du tampon PBS contenant du Tween (B), 10% glycerol et 1 g/) de SAB, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
du tampon PBS contenant du Tween (B), 10% glycerol et 1 g/) de SAB, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/1000e dans du tampon PBS contenant du Tween@, 10 % glycérol et 1 g/l de SAB-G, et on incube pendant 2 heures à 37 C.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000e, dans du tampon PBS contenant du Tween (B) et 1 gll de SAB, d'anticorps anti- IgM humaines (commercialisé par Sanofi Pasteur sous la référence
<Desc/Clms Page number 14>
75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C.
On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween (b.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 10 u # de H2 (substrat de l'enzyme) et 0,5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 ul d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy, témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 2 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-PHOSPHATIDYLINOSITOL On utilise une plaque de microtitration Maxisorp#. On place par puits 20 g/ml de solution de coating (Faiderbe et al., 1990 ; Brochet et al., 1991), préparée à partir de 20 ml de tampon phosphate 10-2M + CaCI2 10-3M, pH 7, saturée en chloroforme, auquel on a ajouté 40 u ! de la solution mère de phosphatidylinositol (commercialisé par SIGMA, référence P-5766) avec une seringue Hamilton et 100 l d'un mélange hexane/chloroforme (84/16) pour faire passer le Pl en solution (blancs de réaction : SAB). On passe les puits au vortex jusqu'à l'obtention d'un précipité blanc, puis on laisse la plaque une nuit à 37 C sous agitation, on la sèche à l'étuve pendant au moins 30 mn, et on rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, obtenu de la manière suivante : la veille du dosage, on prépare une pré-dilution du sérum (1/10e) dans du tampon PBS contenant 27 g/l de NaCl et on agite à 4 C pendant la nuit. On centrifuge ensuite 15 mn à 10 000 tr/mn. A partir du surnageant, on dilue au 1/50e (dilution finale au 1/500e dans du tampon PBS salé contenant 10 % de glycérol et 1 g/l de SAH-EA).
<Desc/Clms Page number 15>
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000, dans du tampon PBS contenant du Tween@ et 1 g/1 de SAB, d'anticorps antiIgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 20 u de du dz et 1 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 u ! d'HSO 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 3 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-ACETYLCHOLINE On utilise une plaque de microtitration Maxisorp. On place par puits 10 ug/m ! de solution de conjugué Choline-AG-SAB (préparé selon la méthode décrite dans Souan et al., 1986) dans du tampon carbonate à pH 9, 6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant du Tween@, 10% glycérol et 1 g/ ! de SAB-AG, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/1000e dans du tampon PBS contenant du Tween@ et 1 g/i de SAB-AG, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/10 OVO", dans du tampon PBS contenant du Tween@ et 1 g/ ! de SAB, d'anticorps antiIgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la
<Desc/Clms Page number 16>
peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@. On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 10 ul de H et 0,5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 u) d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 4 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-ACIDE AZELAIQUE On utilise une plaque de microtitration Maxisorp. On place par puits
10 ug/ml de solution de conjugué Aze-SAB (préparé selon la méthode décrite dans Daverat et al., 1989) dans du tampon carbonate à pH 9, 6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant du Tweeng, 10% glycérol et 1 g/1 de SAH-EA, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
10 ug/ml de solution de conjugué Aze-SAB (préparé selon la méthode décrite dans Daverat et al., 1989) dans du tampon carbonate à pH 9, 6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant du Tweeng, 10% glycérol et 1 g/1 de SAH-EA, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/500e dans du tampon PBS contenant du Tween#, 10 % glycérol et 1 g/l de SAH-EA, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/10 000e, dans du tampon PBS contenant du Tween (R) et 1 g/I de SAB, d'anticorps anti- IgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate
<Desc/Clms Page number 17>
phosphate, on ajoute 10 u de H, O, et 0, 5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 pt d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante :
Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 5 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-FARNESOL-CYSTEINE On utilise une plaque de microtitration Maxisorp#. On place par puits 20 g/ml de solution de conjugué FarCys-SAB (préparé par activation de FarCys au chloroformiate d'éthyle puis couplage à la SAB selon la technique indiquée pour les acides gras dans la Section 7 ci-après) dans du tampon carbonate à pH 9,6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On rince trois fois au PBS. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant 27 g/l de NaCl et
2 g/t de SAB délipidée, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
2 g/t de SAB délipidée, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/250e dans du tampon PBS contenant 27 g/l de NaCl et 2 g/l de SAB délipidée, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000e, dans du
tampon PBS contenant du Tween (B) et 1 g/l de SAB, d'anticorps antiIgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween (B). On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 20 ul de H et 1 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 ul d'H2SO, 4N, et on lit la DO à 492 nm.
tampon PBS contenant du Tween (B) et 1 g/l de SAB, d'anticorps antiIgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween (B). On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 20 ul de H et 1 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 ul d'H2SO, 4N, et on lit la DO à 492 nm.
<Desc/Clms Page number 18>
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 6 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-DA On utilise une plaque de microtitration Maxisorp@. On place par puits 80 ug/m) de solution de conjugué MDA-SAB (préparé selon la méthode décrite dans Amara et al., 1995) dans du tampon carbonate à pH 9, 6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant du Tween (D, 10% glycéroi et 5 g/ ! de SAB, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1 h à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/1000e dans du tampon PBS contenant du Tween@ et 5 g/ ! de SAB, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince trois fois au PBS.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000e, dans du tampon PBS contenant du Tween (B) et 5 g/ ! de SAB, d'anticorps antiIgM humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C. On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween@.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 10 ! JI de H202 et 0, 5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 ul d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
<Desc/Clms Page number 19>
SECTION 7 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-ACIDE GRAS On utilise une plaque de microtitration Maxisorp (R). On place par puits 50 ug/m ! de solution de conjugué Ole-BSA, Pal-BSA ou Myr-BSA (préparés selon la méthode décrite dans Maneta et al., 1987 ; Amara et al., 1994 a et b, Constans et al., 1995 ; Boullerne et al., 1996) dans du tampon carbonate contenant du CaC l2 10-3M, pH 9,6 (blancs de réaction : SAB délipidée), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On rince trois fois au PBS contenant du CaCI2 10-3M.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/1000e dans du tampon PBS contenant du CaCl2 10-3M et 1 g/l de SAB délipidée, et on incube
pendant 2 heures à 37 C. On rince trois fois au PBS contenant du CaCI2 10'M.
pendant 2 heures à 37 C. On rince trois fois au PBS contenant du CaCI2 10'M.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000e, dans du tampon PBS contenant contenant du CaCI2 10-3M et 1 g/i de SAB délipidée, d'anticorps anti-im humaines (SANOFI-PASTEUR, référence 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C.
On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tweeng.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 10 l de H2O2 et 0,5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la réaction avec 50 l d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante :
Titre en anticorps = (DO sérum - DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
Titre en anticorps = (DO sérum - DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins.
SECTION 8 : DOSAGE DES ANTICORPS ANTI-ANTIGENS BACTERIENS On utilise une plaque de microtitration Maxisorp. On place par puits 34 g/ml de Iysat d'antigène bactérien, obtenu par sonication d'une culture de la bactérie correspondante (cf. Tableau 1), dans du tampon
<Desc/Clms Page number 20>
carbonate à pH 9, 6 (blancs de réaction : SAB), pendant une nuit à + 4 C sous agitation. On verse ensuite dans les puits du tampon PBS contenant 5 g/1 de SAB, afin de saturer la surface des puits en protéine, ce qui obtenu après 1h à 37 C. On rince trois fois au PBS contenant du Tween@.
On ajoute ensuite le sérum à doser, dilué au 1/500e dans du tampon PBS contenant du Tween (S) et 2,5 g/l de SAB, et on incube pendant 2 heures à 37 C. On rince trois fois au PBS contenant du Tween@.
On ajoute enfin dans les puits une solution au 1/5000e, dans du tampon PBS contenant du Tween et 2,5 g/I de SAB, d'anticorps anti- IgA ou anti-IgM humaines (SANOFI-PASTEUR, références 75041 et 75061) marqués à la peroxydase, et on incube pendant 1 heure à 37 C.
On rince la plaque trois fois au PBS contenant du Tween#.
On vide les puits par retournement de la plaque. On ajoute dans chaque puits du réactif de révélation (pour 20 ml de tampon citrate phosphate, on ajoute 10 l de H2O2 et 0,5 ml d'OPD à 4 %) et on laisse la coloration se faire à l'obscurité pendant 10 mn. On arrête la
réaction avec 50 u) d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
réaction avec 50 u) d'H2SO4 4N, et on lit la DO à 492 nm.
Les résultats sont ensuite exprimés par rapport à une population de témoins de la façon suivante : Titre en anticorps = (DO sérum-DOmoy. témoins)/DOmoy. témoins. EXEMPLE 1 : QUANTIFICATION D'ANTICORPS CIRCULANTS DANS LA SEP Le Tableau 1 ci-après rassemble les résultats des tests immunoenzymatiques effectués sur un grand nombre de sujets selon la méthode décrite dans les sections qui précèdent.
<Desc/Clms Page number 21>
Tableau 1
<tb>
<tb> conjugué <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP/Témoinp
<tb> Pal <SEP> 755/238 <SEP> 0, <SEP> 0095
<tb> Myr <SEP> 730/234 <SEP> 0, <SEP> 0302
<tb> Ole <SEP> 1399/226 <SEP> 0,0115
<tb> FarCys <SEP> 718/235 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Aze <SEP> 1459/232 <SEP> < 0,0001
<tb> NOCys <SEP> 1314/234 <SEP> < 0,0001
<tb> NOTyr <SEP> 279/135 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NO2Tyr <SEP> 251/126 <SEP> 0, <SEP> 0067
<tb> NOTrp <SEP> 288/148 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOMet <SEP> 218/101 <SEP> 0, <SEP> 0022
<tb> NOHis <SEP> 266/147 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOPhe <SEP> 243/116 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOAsn <SEP> 180/101 <SEP> 0, <SEP> 0092
<tb> NOArg <SEP> 177/81 <SEP> 0, <SEP> 0033
<tb> NOSAB <SEP> 264/135 <SEP> 0, <SEP> 6784
<tb> NOCr <SEP> 108/46 <SEP> 0, <SEP> 0718
<tb> MDA <SEP> 670/206 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ach <SEP> 731/229 <SEP> 0, <SEP> 0001
<tb> Pl <SEP> 1387/209 <SEP> < 0,0001
<tb> Ig3 <SEP> * <SEP> 658/219 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ig5 <SEP> * <SEP> 670/222 <SEP> < 0, <SEP> 0010
<tb> I <SEP> 670/218 <SEP> 0, <SEP> 0040
<tb> Ig5 <SEP> * <SEP> 670/222 <SEP> 0, <SEP> 0524
<tb> # <SEP> 670/221 <SEP> 0, <SEP> 2023
<tb> # <SEP> 670/222 <SEP> 0, <SEP> 9243
<tb> # <SEP> 299/95 <SEP> 0, <SEP> 9785
<tb> # <SEP> 657/226 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> # <SEP> 669/222 <SEP> 0, <SEP> 0009
<tb> # <SEP> 669/225 <SEP> 0, <SEP> 0909
<tb> # <SEP> 669/223 <SEP> 0, <SEP> 9913
<tb> # <SEP> 669/220 <SEP> 0, <SEP> 1731
<tb> # <SEP> 668/222 <SEP> 0, <SEP> 0133
<tb> # <SEP> 299/97 <SEP> 0, <SEP> 7493
<tb>
* anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<tb> conjugué <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP/Témoinp
<tb> Pal <SEP> 755/238 <SEP> 0, <SEP> 0095
<tb> Myr <SEP> 730/234 <SEP> 0, <SEP> 0302
<tb> Ole <SEP> 1399/226 <SEP> 0,0115
<tb> FarCys <SEP> 718/235 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Aze <SEP> 1459/232 <SEP> < 0,0001
<tb> NOCys <SEP> 1314/234 <SEP> < 0,0001
<tb> NOTyr <SEP> 279/135 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NO2Tyr <SEP> 251/126 <SEP> 0, <SEP> 0067
<tb> NOTrp <SEP> 288/148 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOMet <SEP> 218/101 <SEP> 0, <SEP> 0022
<tb> NOHis <SEP> 266/147 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOPhe <SEP> 243/116 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOAsn <SEP> 180/101 <SEP> 0, <SEP> 0092
<tb> NOArg <SEP> 177/81 <SEP> 0, <SEP> 0033
<tb> NOSAB <SEP> 264/135 <SEP> 0, <SEP> 6784
<tb> NOCr <SEP> 108/46 <SEP> 0, <SEP> 0718
<tb> MDA <SEP> 670/206 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ach <SEP> 731/229 <SEP> 0, <SEP> 0001
<tb> Pl <SEP> 1387/209 <SEP> < 0,0001
<tb> Ig3 <SEP> * <SEP> 658/219 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ig5 <SEP> * <SEP> 670/222 <SEP> < 0, <SEP> 0010
<tb> I <SEP> 670/218 <SEP> 0, <SEP> 0040
<tb> Ig5 <SEP> * <SEP> 670/222 <SEP> 0, <SEP> 0524
<tb> # <SEP> 670/221 <SEP> 0, <SEP> 2023
<tb> # <SEP> 670/222 <SEP> 0, <SEP> 9243
<tb> # <SEP> 299/95 <SEP> 0, <SEP> 9785
<tb> # <SEP> 657/226 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> # <SEP> 669/222 <SEP> 0, <SEP> 0009
<tb> # <SEP> 669/225 <SEP> 0, <SEP> 0909
<tb> # <SEP> 669/223 <SEP> 0, <SEP> 9913
<tb> # <SEP> 669/220 <SEP> 0, <SEP> 1731
<tb> # <SEP> 668/222 <SEP> 0, <SEP> 0133
<tb> # <SEP> 299/97 <SEP> 0, <SEP> 7493
<tb>
* anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<Desc/Clms Page number 22>
Une réponse anticorps statistiquement significative a été trouvée en faveur de la SEP pour 23 conjugués sur 33.
A titre d'exemple, la spécificité de la réponse anti-NO-Cys vis-à-vis de la SEP a été confrontée à celle des affections neurodégénératives contrôles dans lesquelles des processus radicalaires ont été trouvés impliqués : Sclérose Latérale Amyotrophique, épilepsies et maladie de Parkinson. Les résultats ont montré une différence significative de cette réponse entre les différentes pathologies en faveur de la SEP.
Le Tableau 2 ci-dessous montre la relation entre les différentes formes de SEP (P : progressive ; R : rémittente ; RP : rémittente progressive ; TEM : témoins) à partir de 16 conjugués significatifs.
<Desc/Clms Page number 23>
Tableau 2
<tb>
<tb> conjugué <SEP> n <SEP> : <SEP> SEPP/TEM <SEP> p <SEP> 1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP <SEP> R/TEM <SEP> p <SEP> 1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP <SEP> RP/TEM <SEP> p1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEPP/R/RP <SEP> p2
<tb> Aze <SEP> 259/232 <SEP> 0,0032 <SEP> 164/232 <SEP> 0,0046 <SEP> 111/232 <SEP> 0, <SEP> 4149 <SEP> 259/164/111 <SEP> 0,0343
<tb> NOCys <SEP> 240/234 <SEP> 0,0078 <SEP> 152/234 <SEP> < 0,0001 <SEP> 111/234 <SEP> 0,0073 <SEP> 240/152/111 <SEP> 0,0046
<tb> NOTyr <SEP> 36/135 <SEP> 0,0762 <SEP> 53/135 <SEP> < 0,0001 <SEP> 40/135 <SEP> < 0,0001 <SEP> 36/53/40 <SEP> 0,0494
<tb> NO2Tyr <SEP> 39/126 <SEP> 0,3829 <SEP> 59/126 <SEP> 0,0096 <SEP> 40/126 <SEP> 0,0311 <SEP> 39/59/40 <SEP> 0,0409
<tb> NOTrp <SEP> 38/148 <SEP> 0,5177 <SEP> 54/148 <SEP> < 0,0001 <SEP> 39/148 <SEP> 0,0899 <SEP> 38/54/39 <SEP> 0,0006
<tb> NOMet <SEP> 36/101 <SEP> 0,8718 <SEP> 49/101 <SEP> 0,0005 <SEP> 39/101 <SEP> 0,9574 <SEP> 36/49/39 <SEP> 0,0393
<tb> NOAsn <SEP> 25/101 <SEP> 0,5167 <SEP> 49/101 <SEP> 0,0065 <SEP> 34/101 <SEP> 0,6982 <SEP> 25/49/34 <SEP> 0,0380
<tb> Ach <SEP> 117/229 <SEP> 0,5938 <SEP> 112/229 <SEP> < 0,0001 <SEP> 71/229 <SEP> 0,1375 <SEP> 117/112/71 <SEP> < 0,0001
<tb> pl <SEP> 253/209 <SEP> < 0,0001 <SEP> 161/209 <SEP> < 0,0001 <SEP> 109/209 <SEP> 0,1040 <SEP> 253/161/109 <SEP> 0,0117
<tb> in12* <SEP> 110/221 <SEP> 0,1162 <SEP> 107/221 <SEP> 0,0412 <SEP> 68/221 <SEP> 0, <SEP> 4858 <SEP> 110/107/68 <SEP> 0,0290
<tb> Ig17* <SEP> 110/222 <SEP> 0,0002 <SEP> 107/222 <SEP> 0, <SEP> 4582 <SEP> 68/222 <SEP> 0,2827 <SEP> 110/107/68 <SEP> 0,0123
<tb> log5** <SEP> 109/222 <SEP> 0,0549 <SEP> 107/222 <SEP> 0,9743 <SEP> 68/222 <SEP> 0,0016 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0406
<tb> in16** <SEP> 109/225 <SEP> 0,2218 <SEP> 107/225 <SEP> 0,0067 <SEP> 68/225 <SEP> 0,2997 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0491
<tb> Ig12** <SEP> 109/223 <SEP> 0,1433 <SEP> 107/223 <SEP> 0,0312 <SEP> 68/223 <SEP> 0,2231 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0185
<tb> Ig13** <SEP> 109/220 <SEP> 0,6407 <SEP> 107/220 <SEP> 0,0001 <SEP> 68/220 <SEP> 0,1543 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0124
<tb> tag19** <SEP> 50/97 <SEP> 0, <SEP> 2028 <SEP> 73/97 <SEP> 0, <SEP> 0173 <SEP> 42/97 <SEP> 0, <SEP> 8779 <SEP> 50/73/42 <SEP> 0, <SEP> 0151
<tb>
1 test de Mann-Whitney 2 test de Kruskal-Wallis * anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<tb> conjugué <SEP> n <SEP> : <SEP> SEPP/TEM <SEP> p <SEP> 1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP <SEP> R/TEM <SEP> p <SEP> 1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEP <SEP> RP/TEM <SEP> p1 <SEP> n <SEP> : <SEP> SEPP/R/RP <SEP> p2
<tb> Aze <SEP> 259/232 <SEP> 0,0032 <SEP> 164/232 <SEP> 0,0046 <SEP> 111/232 <SEP> 0, <SEP> 4149 <SEP> 259/164/111 <SEP> 0,0343
<tb> NOCys <SEP> 240/234 <SEP> 0,0078 <SEP> 152/234 <SEP> < 0,0001 <SEP> 111/234 <SEP> 0,0073 <SEP> 240/152/111 <SEP> 0,0046
<tb> NOTyr <SEP> 36/135 <SEP> 0,0762 <SEP> 53/135 <SEP> < 0,0001 <SEP> 40/135 <SEP> < 0,0001 <SEP> 36/53/40 <SEP> 0,0494
<tb> NO2Tyr <SEP> 39/126 <SEP> 0,3829 <SEP> 59/126 <SEP> 0,0096 <SEP> 40/126 <SEP> 0,0311 <SEP> 39/59/40 <SEP> 0,0409
<tb> NOTrp <SEP> 38/148 <SEP> 0,5177 <SEP> 54/148 <SEP> < 0,0001 <SEP> 39/148 <SEP> 0,0899 <SEP> 38/54/39 <SEP> 0,0006
<tb> NOMet <SEP> 36/101 <SEP> 0,8718 <SEP> 49/101 <SEP> 0,0005 <SEP> 39/101 <SEP> 0,9574 <SEP> 36/49/39 <SEP> 0,0393
<tb> NOAsn <SEP> 25/101 <SEP> 0,5167 <SEP> 49/101 <SEP> 0,0065 <SEP> 34/101 <SEP> 0,6982 <SEP> 25/49/34 <SEP> 0,0380
<tb> Ach <SEP> 117/229 <SEP> 0,5938 <SEP> 112/229 <SEP> < 0,0001 <SEP> 71/229 <SEP> 0,1375 <SEP> 117/112/71 <SEP> < 0,0001
<tb> pl <SEP> 253/209 <SEP> < 0,0001 <SEP> 161/209 <SEP> < 0,0001 <SEP> 109/209 <SEP> 0,1040 <SEP> 253/161/109 <SEP> 0,0117
<tb> in12* <SEP> 110/221 <SEP> 0,1162 <SEP> 107/221 <SEP> 0,0412 <SEP> 68/221 <SEP> 0, <SEP> 4858 <SEP> 110/107/68 <SEP> 0,0290
<tb> Ig17* <SEP> 110/222 <SEP> 0,0002 <SEP> 107/222 <SEP> 0, <SEP> 4582 <SEP> 68/222 <SEP> 0,2827 <SEP> 110/107/68 <SEP> 0,0123
<tb> log5** <SEP> 109/222 <SEP> 0,0549 <SEP> 107/222 <SEP> 0,9743 <SEP> 68/222 <SEP> 0,0016 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0406
<tb> in16** <SEP> 109/225 <SEP> 0,2218 <SEP> 107/225 <SEP> 0,0067 <SEP> 68/225 <SEP> 0,2997 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0491
<tb> Ig12** <SEP> 109/223 <SEP> 0,1433 <SEP> 107/223 <SEP> 0,0312 <SEP> 68/223 <SEP> 0,2231 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0185
<tb> Ig13** <SEP> 109/220 <SEP> 0,6407 <SEP> 107/220 <SEP> 0,0001 <SEP> 68/220 <SEP> 0,1543 <SEP> 109/107/68 <SEP> 0,0124
<tb> tag19** <SEP> 50/97 <SEP> 0, <SEP> 2028 <SEP> 73/97 <SEP> 0, <SEP> 0173 <SEP> 42/97 <SEP> 0, <SEP> 8779 <SEP> 50/73/42 <SEP> 0, <SEP> 0151
<tb>
1 test de Mann-Whitney 2 test de Kruskal-Wallis * anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<Desc/Clms Page number 24>
La figure 1 montre la répartition des données pour chaque forme de SEP et les témoins. antigène NO2Tyr NOTrp Ach ! 1 p 2 0,0409 0,0006 < 0,0001 0,0491 n SEP P 39 38 117 109 n SEP R 59 54 112 107 n SEP RP 40 39 71 68 n Témoin 126 148 229 225 (1 anticorps d'isotypie A ; 2 test de Kruskal-Wallis)
Chaque conjugué discrimine, de manière particulière, les formes cliniques de SEP :
Les anticorps anti-N02-Tyr sont particulièrement pertinents pour discriminer les formes progressive et rémittente-progressive (p de Mann-Whitney entre ces deux échantillons = 0,0167).
Chaque conjugué discrimine, de manière particulière, les formes cliniques de SEP :
Les anticorps anti-N02-Tyr sont particulièrement pertinents pour discriminer les formes progressive et rémittente-progressive (p de Mann-Whitney entre ces deux échantillons = 0,0167).
On note des valeurs faibles pour les SEP progressives.
Les anticorps anti-NO-Trp sont de bons indicateurs pour discriminer les formes progressive et rémittente (p de Mann-Whitney < 0,0001).
Les anticorps anti-Ach sont pertinents pour discriminer la forme rémittente des deux autres formes (p de Mann-Whitney < 0,0001).
Les anticorps anti-lg16 d'isotypie A sont pertinents pour discriminer les formes progressive et rémittente (p de Mann-Whitney < 0, 01).
Ces anticorps circulants permettent de discriminer les formes de SEP et surtout le passage d'une forme évolutive à une autre (forme rémittente/forme progressive). Cette évolution n'est identifiable par aucune autre approche clinique ou exploratoire actuellement.
<Desc/Clms Page number 25>
EXEMPLE 2 : QUANTIFICATION D'ANTICORPS CIRCULANTS DANS LA SLA
Les Figures 2 à 4 mettent en évidence les 3 classes de SLA : la classe 1, constituée par 39% des sérums testés (118 au total), est caractérisée par des valeurs fortes pour les antigènes suivants : FarCys, Ig3, Ig5, Ig16, Ig12, Ig13 et dans une moindre mesure g17 (pour toutes ces Ig, les anticorps détectés sont d'isotypie A)-cf. Figure 2 ; la classe 2, constituée par 34 % des sérums testés, est caractérisée par des valeurs faibles pour l'ensemble des 21 antigènes (avec les médianes < 0 pour 19 d'entre eux). Seuls FarCys et Pl s'élèvent au même niveau que les témoins-cf. Figure 3 ; ja lasse 3, constituée par 27 % des sérums testés, est caractérisée par des valeurs élevées surtout pour les marqueurs suivants : Ole, Aze, MDA, Pl, NOCys, Ig3, Ig16, Ig12, Ig13, Ig17 (pour toutes ces Ig, les anticorps détectés sont d'isotypie M) et dans une moindre mesure Ig5 (pour cette Ig, l'anticorps détecté est d'isotypie A)cf. Figure 4.
Les Figures 2 à 4 mettent en évidence les 3 classes de SLA : la classe 1, constituée par 39% des sérums testés (118 au total), est caractérisée par des valeurs fortes pour les antigènes suivants : FarCys, Ig3, Ig5, Ig16, Ig12, Ig13 et dans une moindre mesure g17 (pour toutes ces Ig, les anticorps détectés sont d'isotypie A)-cf. Figure 2 ; la classe 2, constituée par 34 % des sérums testés, est caractérisée par des valeurs faibles pour l'ensemble des 21 antigènes (avec les médianes < 0 pour 19 d'entre eux). Seuls FarCys et Pl s'élèvent au même niveau que les témoins-cf. Figure 3 ; ja lasse 3, constituée par 27 % des sérums testés, est caractérisée par des valeurs élevées surtout pour les marqueurs suivants : Ole, Aze, MDA, Pl, NOCys, Ig3, Ig16, Ig12, Ig13, Ig17 (pour toutes ces Ig, les anticorps détectés sont d'isotypie M) et dans une moindre mesure Ig5 (pour cette Ig, l'anticorps détecté est d'isotypie A)cf. Figure 4.
Ces profils biologiques sont à rattacher à des types évolutifs différents de la SLA.
De plus, 80% des patients testés restent dans le même groupe d'origine au cours de l'évolution clinique de leur maladie.
EXEMPLE 3 : QUANTIFICATION DES ANTICORPS CIRCULANTS DANS LA PR
Dans la PR (tous stades et évolutions confondus), les anticorps significatifs sont les anticorps dirigés contre les acides gras, l'acide azélaïque, le farnésyl-cystéine, le malondialdéhyde, le phosphatidylinositol, NO-cystéine, NO-phénylalanine et les immunoglobulines Ig3 (anticorps d'isotypie A et M), Ig5 (anticorps
Dans la PR (tous stades et évolutions confondus), les anticorps significatifs sont les anticorps dirigés contre les acides gras, l'acide azélaïque, le farnésyl-cystéine, le malondialdéhyde, le phosphatidylinositol, NO-cystéine, NO-phénylalanine et les immunoglobulines Ig3 (anticorps d'isotypie A et M), Ig5 (anticorps
<Desc/Clms Page number 26>
d'isotypie A et M), ! g12 (anticorps d'isotypie A et M), ! g13 (anticorps d'isotypie M), ! g17 (anticorps d'isotypie M) et g19 (anticorps d'isotypie A), comme le montre le Tableau 3 ci-après :
<Desc/Clms Page number 27>
Tableau 3
<tb>
<tb> Conjugué <SEP> n <SEP> TEM <SEP> n <SEP> PR <SEP> p
<tb> Pal <SEP> 238 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> Myr <SEP> 234 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ole <SEP> 226 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> FarCys <SEP> 235 <SEP> 250 <SEP> 0,0005
<tb> Aze <SEP> 232 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> MDA <SEP> 206 <SEP> 239 <SEP> < 0,0001
<tb> Ach <SEP> 229 <SEP> 251 <SEP> 0,9593
<tb> Pl <SEP> 209 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> NOCys <SEP> 234 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOTyr <SEP> 135 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 1471
<tb> NO2Tyr <SEP> 126 <SEP> 98 <SEP> 0, <SEP> 7411
<tb> NOTrp <SEP> 148 <SEP> 88 <SEP> 0, <SEP> 2906
<tb> NOMet <SEP> 101840, <SEP> 2822
<tb> NOHis <SEP> 147 <SEP> 100 <SEP> 0,6778
<tb> NOPhe <SEP> 116 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 0376
<tb> NOAsn <SEP> 101 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 7968
<tb> NOArg <SEP> 81 <SEP> 86 <SEP> 0,8052
<tb> NOSAB <SEP> 135 <SEP> 100 <SEP> NS
<tb> NOCr <SEP> 46 <SEP> 77 <SEP> 0, <SEP> 2909
<tb> Ig3* <SEP> 219 <SEP> 248 <SEP> < 0,0001
<tb> Ig5* <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0, <SEP> 0002
<tb> Ig16* <SEP> 218 <SEP> 251 <SEP> 0,0772
<tb> dgl2* <SEP> 221 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> dgl3* <SEP> 221 <SEP> 251 <SEP> 0,0003
<tb> dgl7* <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0, <SEP> 0005
<tb> # <SEP> 95 <SEP> 133 <SEP> 0,8907
<tb> Ig3** <SEP> 226 <SEP> 248 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ig5** <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0,0009
<tb> Ig16** <SEP> 225 <SEP> 251 <SEP> 0,2308
<tb> Ig12** <SEP> 223 <SEP> 251 <SEP> 0,0140
<tb> Ig13** <SEP> 220 <SEP> 251 <SEP> 0,0967
<tb> Ig17** <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0,2993
<tb> Ig19** <SEP> 97 <SEP> 133 <SEP> 0,0363
<tb>
* anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<tb> Conjugué <SEP> n <SEP> TEM <SEP> n <SEP> PR <SEP> p
<tb> Pal <SEP> 238 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> Myr <SEP> 234 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ole <SEP> 226 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> FarCys <SEP> 235 <SEP> 250 <SEP> 0,0005
<tb> Aze <SEP> 232 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> MDA <SEP> 206 <SEP> 239 <SEP> < 0,0001
<tb> Ach <SEP> 229 <SEP> 251 <SEP> 0,9593
<tb> Pl <SEP> 209 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> NOCys <SEP> 234 <SEP> 251 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> NOTyr <SEP> 135 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 1471
<tb> NO2Tyr <SEP> 126 <SEP> 98 <SEP> 0, <SEP> 7411
<tb> NOTrp <SEP> 148 <SEP> 88 <SEP> 0, <SEP> 2906
<tb> NOMet <SEP> 101840, <SEP> 2822
<tb> NOHis <SEP> 147 <SEP> 100 <SEP> 0,6778
<tb> NOPhe <SEP> 116 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 0376
<tb> NOAsn <SEP> 101 <SEP> 86 <SEP> 0, <SEP> 7968
<tb> NOArg <SEP> 81 <SEP> 86 <SEP> 0,8052
<tb> NOSAB <SEP> 135 <SEP> 100 <SEP> NS
<tb> NOCr <SEP> 46 <SEP> 77 <SEP> 0, <SEP> 2909
<tb> Ig3* <SEP> 219 <SEP> 248 <SEP> < 0,0001
<tb> Ig5* <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0, <SEP> 0002
<tb> Ig16* <SEP> 218 <SEP> 251 <SEP> 0,0772
<tb> dgl2* <SEP> 221 <SEP> 251 <SEP> < 0,0001
<tb> dgl3* <SEP> 221 <SEP> 251 <SEP> 0,0003
<tb> dgl7* <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0, <SEP> 0005
<tb> # <SEP> 95 <SEP> 133 <SEP> 0,8907
<tb> Ig3** <SEP> 226 <SEP> 248 <SEP> < 0, <SEP> 0001
<tb> Ig5** <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0,0009
<tb> Ig16** <SEP> 225 <SEP> 251 <SEP> 0,2308
<tb> Ig12** <SEP> 223 <SEP> 251 <SEP> 0,0140
<tb> Ig13** <SEP> 220 <SEP> 251 <SEP> 0,0967
<tb> Ig17** <SEP> 222 <SEP> 251 <SEP> 0,2993
<tb> Ig19** <SEP> 97 <SEP> 133 <SEP> 0,0363
<tb>
* anticorps d'isotypie M ** anticorps d'isotypie A
<Desc/Clms Page number 28>
ll apparaît donc que les titres en anticorps circulants d'isotypie M sont une aide au suivi des malades atteints de PR.
<Desc/Clms Page number 29>
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
'AMARA A., CHAUGIER C. and GEFFARD M. Autoantibodies directed against conjugated fatty acids in sera of HIV-1 infected patients. AIDS, (1994 a) 8, 711-713.
'AMARA A., CHAUGIER C., RAGNAUD J.-M. and GEFFARD M. Circulating autoantibodies directed against conjugated fatty acids in sera of HIV-1 infected patients. Clinical and Experimental Immunology, (1994 b) 96, 379-383.
'AMARA A., CONSTANS J., CHAUGIER C., SEBBAN A., DUBOURG L, PEUCHANT E., PELLEGRIN J. L, LENG B., CONRI C. and GEFFARD M.
Autoantibodies to malondialdehyde-modified epitope in connective tissue diseases and vasculitides. Clinical and Exp. Immunol., (1995) 101, 1-6.
'BOULLERNE A., PETRY K. G., MEYNARD M. and GEFFARD M. Indirect evidence for NO involvement in multiple sclerosis by characterization of circulating antibodies directed against conjugated Snitrosocysteine. J. of Neuroimmunol., (1995) 60. 117-124. o BOULLERNE A. I., PETRY K. G. and GEFFARD M. Circulating antibodies directed against conjugated fatty acids in sera of patients with mutiple sclerosis. J. of Neuroimmunol., (1996) 65. 75-81.
'BROCHET B., FAIDERBE S., AUDHUY S., GOSSET I., GEFFARD M. and ORGOGOZO J. M. Antibodies against phosphatidylinositol in multiple sclerosis. Current Concepts in Multiple Sclerosis-Proceedings of the 6th congress of the ECTRIMS. (Wiethölter M., Dichgans J.), MERTIN J.,
<Desc/Clms Page number 30>
Eds Excerpta Medica, Amsterdam, (1991) 97-102. e CONSTANS J., CONRI C., PELLEGRIN J. L., SERGEANT C., SIMONOFF M., PEUCHANT E., DUBOURG L., THOMAS M. J., PELLEGRIN I., BROSSARD G., BARBEAU P., AMARA A., GEFFARD M., CLERC M., FLEURY H. et LENG B. Stress oxydatif et infection à VIH : un concept à préciser et une voie thérapeutique à explorer. Annales de Médecine Interne, (1995) 146, 514-520. e DAVERAT P., GEFFARD M. and ORGOGOZO J. M. Identification and characterization of anti-conjugated azelaic acid antibodies in multiple sclerosis. J. of Neuroimmunology, (1989), 22, 129-134.
'FAIDERBE S., CHAGNAUD J. L., WAFFLART J. and GEFFARD M.
Autoanticorps dirigés contre un phospholipide membranaire dans les sérums de malades porteurs de tumeurs malignes. CRAS, (1990) 310, 49-52. e GEFFARD M., BODET D., CLAUDEPIERRE P., METZGER J. M. et SIBILIA J. Anticorps sériques circulants dirigés contre des antigènes modifiés par le NO dans les affections neurologiques et rhumatismales.
Immunoanal. Biol. Spéc., (1998) 209-217.
'MANETA-PEYRET L., DAVERAT P., GEFFARD M., CASSAGNE C. and ORGOGOZO J. M. Natura) série anti-fatty acid antibodies in multiple sclerosis. Neurosc. Letters, (1987) 80, 235-239. e SOUAN M. L., GEFFARD M., LEBRUN-GRANDIE P. and ORGOGOZO J. M. Detection of anti-acetylcholine antibodies in myasthenic patients.
Neurosc. Letters, (1986) 64, 23-28.
Claims (15)
1. Procédé de détection des anticorps associés à l'occurrence ou l'évolution d'une maladie neurodégénérative dans un fluide biologique, qui comprend les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, Ach, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO-His, NO2-Tyr, NO-Phe, NO-Arg, NO-Asn, NO-Met, NO-Cr, NO-SAB, Ig3, Ig5, Ig12, Ig13, Ig16, Ig17, Ig19, et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
2. Procédé de détection des anticorps associés à l'occurrence ou l'évolution d'une maladie neurodégénérative dans un fluide biologique, qui comprend les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants : Pl, Ach, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO2-Tyr, NO-Asn, NO-Met, Ig5, Ig12, Ig13, Ig16, Ig17 et dgl9, et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
3. Procédé de détection des anticorps associés à l'occurrence ou l'évolution d'une maladie neurodégénérative dans un fluide biologique, qui comprend les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants :
<Desc/Clms Page number 32>
Ole, Pl, MAD, Aze, NO-Cys, FarCys, log3, ig5, Ig12, fig13, Ig16 et dgl7, et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
4. Procédé de détection des anticorps associés à l'occurrence ou l'évolution d'une maladie neurodégénérative dans un fluide biologique, qui comprend les étapes suivantes : - mise en contact dudit fluide avec chacun des antigènes suivants :
Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Phe, log3, log5, Ig12, Ig13, Ig17 et Ig19, et - mise en évidence des complexes éventuellement formés entre lesdits antigènes et les anticorps correspondants.
5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel les antigènes non-bactériens autres que NO-SAB sont couplés à une molécule porteuse, de préférence la sérum albumin bovine.
6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel le complexe éventuellement formé est mis en évidence à l'aide d'un anticorps anti-immunoglobuline humaine d'isotypie M ou, le cas échéant, d'isotypie A, ledit anticorps étant marqué de préférence par une enzyme.
7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel l'enzyme est la peroxydase.
<Desc/Clms Page number 33>
8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, qui est mis en oeuvre à l'aide d'un support solide, de préférence une plaque de microtitration.
9. Procédé selon la revendication 1, dans lequel la maladie dégénérative est la sclérose en plaques, la sclérose latérale amyotrophique, la maladie de Parkinson, la polyarthrite rhumatoïde ou la spondylarthrite.
10. Trousse pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, qui comprend chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, Ach, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO-His, NO2-Tyr, Ig3, Ig5, Ig12, Ig13, Ig16, Ig17 et dgl9.
11. Trousse pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 2, qui comprend chacun des antigènes suivants : Pl, Ach, Aze, NO-Cys, NO-Tyr, NO-Trp, NO2-Tyr, NO-Asn, NO-Met, Ig5,
dgl2, dgl3, ! g16, Ig17 et Ig19.
12. Trousse pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 3, qui comprend chacun des antigènes suivants : Ole, Pl, MAD, Aze, NO-Cys, FarCys, Ig3, Ig5, dgl2, dgl3, Ig16 et fig17.
13. Trousse pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 4, qui comprend chacun des antigènes suivants : Pal, Ole, Myr, Pl, MAD, FarCys, Aze, NO-Cys, NO-Phe, lag3, log5, dgl2, dgl3, Ig17ettg19.
<Desc/Clms Page number 34>
14. Trousse selon l'une des revendications 10 à 13, dans laquelle les antigènes non-bactériens autres que NO-SAB sont couplés à une molécule porteuse, de préférence la sérum albumin bovine.
15. Trousse selon l'une des revendications 10 à 14, qui comprend également au moins un anticorps anti-immunoglobuline humaine d'isotypie M et/ou au moins un anticorps antiimmunoglobulin humaine d'isotypie A.
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0103592A FR2822238B1 (fr) | 2001-03-16 | 2001-03-16 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
| CA002441170A CA2441170A1 (fr) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
| PCT/FR2002/000927 WO2002075274A2 (fr) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
| CNA028066081A CN1511258A (zh) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | 神经退行性疾病的监控方法和所用试剂盒 |
| EP02713027A EP1399743A2 (fr) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
| JP2002573641A JP2004530871A (ja) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | 神経変性疾患の管理のための方法及びキット |
| US10/471,788 US7195881B2 (en) | 2001-03-16 | 2002-03-15 | Method and kit for following neurodegenerative diseases |
| NO20034080A NO20034080L (no) | 2001-03-16 | 2003-09-15 | Fremgangsmåte og sett for deteksjon av neurodegenerative sykdommer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0103592A FR2822238B1 (fr) | 2001-03-16 | 2001-03-16 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2822238A1 true FR2822238A1 (fr) | 2002-09-20 |
| FR2822238B1 FR2822238B1 (fr) | 2003-08-29 |
Family
ID=8861210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR0103592A Expired - Fee Related FR2822238B1 (fr) | 2001-03-16 | 2001-03-16 | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7195881B2 (fr) |
| EP (1) | EP1399743A2 (fr) |
| JP (1) | JP2004530871A (fr) |
| CN (1) | CN1511258A (fr) |
| CA (1) | CA2441170A1 (fr) |
| FR (1) | FR2822238B1 (fr) |
| NO (1) | NO20034080L (fr) |
| WO (1) | WO2002075274A2 (fr) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7195881B2 (en) | 2001-03-16 | 2007-03-27 | Gemac | Method and kit for following neurodegenerative diseases |
| FR3094493A1 (fr) * | 2019-04-01 | 2020-10-02 | Polyneuros | Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique auto-immune par dosage immunologique |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| US9557325B2 (en) * | 2003-06-09 | 2017-01-31 | Redox-Reactive Reagents Llc | Method of altering the binding specificity of proteins by oxidation-reduction reactions |
| BRPI0411103B1 (pt) * | 2003-06-09 | 2019-01-15 | A Mcintyre John | método, e, método de obtenção e isolamento de um autoanticorpo de um fluido biológico contendo anticorpo ou de um extrato de fluido biológico contendo anticorpo |
| US7892751B2 (en) * | 2003-06-09 | 2011-02-22 | Redox-Reactive Reagents Llc | Method of detecting or diagnosing of a neurodegenerative disease or condition |
| WO2005009291A2 (fr) | 2003-07-23 | 2005-02-03 | Synapse Biomedical, Inc. | Systeme et procede de conditionnement d'un diaphragme de patient |
| US8338648B2 (en) * | 2004-06-12 | 2012-12-25 | Signum Biosciences, Inc. | Topical compositions and methods for epithelial-related conditions |
| US9050005B2 (en) | 2005-08-25 | 2015-06-09 | Synapse Biomedical, Inc. | Method and apparatus for transgastric neurostimulation |
| ES2527661T3 (es) | 2005-11-30 | 2015-01-28 | Abbvie Inc. | Método de exploración, proceso para purificar oligómeros Abeta no difundibles, anticuerpos selectivos contra dichos oligómeros Abeta no difundibles y un proceso para fabricar dichos anticuerpos |
| ES2453941T5 (es) | 2005-11-30 | 2017-05-31 | Abbvie Inc. | Anticuerpos monoclonales contra la proteína beta amiloide y usos de los mismos |
| EP1996284A2 (fr) * | 2006-03-09 | 2008-12-03 | Synapse Biomedical, Inc. | Système d'assistance ventilatoire et procédé servant à améliorer la fonction respiratoire |
| US20080097153A1 (en) * | 2006-08-24 | 2008-04-24 | Ignagni Anthony R | Method and apparatus for grasping an abdominal wall |
| US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
| WO2008098001A2 (fr) * | 2007-02-05 | 2008-08-14 | Synapse Biomedical, Inc. | Électrode intramusculaire amovible |
| WO2008104386A2 (fr) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Méthode de traitement d'amyloïdoses |
| WO2008144578A1 (fr) * | 2007-05-17 | 2008-11-27 | Synapse Biomedical, Inc. | Dispositifs et procédés pour évaluer l'électromyogramme d'un point moteur en tant que biomarqueur |
| US8478412B2 (en) * | 2007-10-30 | 2013-07-02 | Synapse Biomedical, Inc. | Method of improving sleep disordered breathing |
| US8428726B2 (en) | 2007-10-30 | 2013-04-23 | Synapse Biomedical, Inc. | Device and method of neuromodulation to effect a functionally restorative adaption of the neuromuscular system |
| CN102933601B (zh) | 2010-04-15 | 2016-06-08 | Abbvie公司 | β淀粉样蛋白结合蛋白 |
| EP3533803B1 (fr) | 2010-08-14 | 2021-10-27 | AbbVie Inc. | Anticorps anti-bêta-amyloïde |
| RU2693627C2 (ru) * | 2017-11-03 | 2019-07-03 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" | Комбинации эдаравона для лечения ишемических повреждений мозга |
| US11471683B2 (en) | 2019-01-29 | 2022-10-18 | Synapse Biomedical, Inc. | Systems and methods for treating sleep apnea using neuromodulation |
| FR3094492A1 (fr) * | 2019-04-01 | 2020-10-02 | Polyneuros | Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique dégénérative par dosage immunologique |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0621479A1 (fr) * | 1993-04-23 | 1994-10-26 | Anda Biologicals S.A. | Procédé de détection et/ou de quantification de différentes classes d'immunoglobulines specifiques d'une pathologie comportant une réponse auto-immunitaire |
| FR2762602A1 (fr) * | 1997-04-28 | 1998-10-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Moyens pour la detection precoce de pathologies auto-immunes inflammatoires |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2550799B1 (fr) * | 1983-08-17 | 1986-02-21 | Commissariat Energie Atomique | Compose marque par une enzyme, son procede de preparation et son utilisation en enzymoimmunologie |
| FR2822238B1 (fr) | 2001-03-16 | 2003-08-29 | Gemac | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives |
-
2001
- 2001-03-16 FR FR0103592A patent/FR2822238B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-03-15 WO PCT/FR2002/000927 patent/WO2002075274A2/fr active Application Filing
- 2002-03-15 JP JP2002573641A patent/JP2004530871A/ja active Pending
- 2002-03-15 US US10/471,788 patent/US7195881B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-03-15 EP EP02713027A patent/EP1399743A2/fr not_active Withdrawn
- 2002-03-15 CA CA002441170A patent/CA2441170A1/fr not_active Abandoned
- 2002-03-15 CN CNA028066081A patent/CN1511258A/zh active Pending
-
2003
- 2003-09-15 NO NO20034080A patent/NO20034080L/no not_active Application Discontinuation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0621479A1 (fr) * | 1993-04-23 | 1994-10-26 | Anda Biologicals S.A. | Procédé de détection et/ou de quantification de différentes classes d'immunoglobulines specifiques d'une pathologie comportant une réponse auto-immunitaire |
| FR2762602A1 (fr) * | 1997-04-28 | 1998-10-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Moyens pour la detection precoce de pathologies auto-immunes inflammatoires |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BOULLERNE ANNE I ET AL: "Circulating antibodies directed against conjugated fatty acids in sera of patients with multiple sclerosis.", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY, vol. 65, no. 1, 1996, pages 75 - 81, XP002052449, ISSN: 0165-5728 * |
| BOULLERNE ANNE I ET AL: "Indirect evidence for nitric oxide involvement in multiple sclerosis by characterization of circulating antibodies directed against conjugated S-nitrosocysteine.", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY, vol. 60, no. 1-2, 1995, pages 117 - 124, XP002052448, ISSN: 0165-5728 * |
| DAVERAT P ET AL: "IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF ANTI-CONJUGATED AZELAIC ACID ANTIBODIES IN MULTIPLE SCLEROSIS", JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY, vol. 22, no. 2, 1989, pages 129 - 134, XP008000510, ISSN: 0165-5728 * |
| MANETA-PEYRET L ET AL: "MEMBRANE LABELING OF THE CORTEX OF AGING RATS BY ANTI-FATTY-ACID ANTIBODIES", NEUROSCIENCE LETTERS, vol. 69, no. 2, 1986, pages 121 - 125, XP008000512, ISSN: 0304-3940 * |
| MANETA-PEYRET L ET AL: "NATURAL SERIC ANTI-FATTY ACID ANTIBODIES IN MULTIPLE SCLEROSIS", NEUROSCIENCE LETTERS, vol. 80, no. 2, 1987, pages 235 - 239, XP008000511, ISSN: 0304-3940 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7195881B2 (en) | 2001-03-16 | 2007-03-27 | Gemac | Method and kit for following neurodegenerative diseases |
| FR3094493A1 (fr) * | 2019-04-01 | 2020-10-02 | Polyneuros | Procédé de détection ou de suivi de l’évolution d’une maladie chronique auto-immune par dosage immunologique |
| WO2020201329A1 (fr) * | 2019-04-01 | 2020-10-08 | Polyneuros | Procede de detection ou de suivi de l'evolution d'une maladie chronique auto-immune par dosage immunologique |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20034080L (no) | 2003-11-14 |
| JP2004530871A (ja) | 2004-10-07 |
| WO2002075274A2 (fr) | 2002-09-26 |
| CA2441170A1 (fr) | 2002-09-26 |
| NO20034080D0 (no) | 2003-09-15 |
| CN1511258A (zh) | 2004-07-07 |
| FR2822238B1 (fr) | 2003-08-29 |
| US7195881B2 (en) | 2007-03-27 |
| WO2002075274A3 (fr) | 2003-12-11 |
| EP1399743A2 (fr) | 2004-03-24 |
| US20040082015A1 (en) | 2004-04-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FR2822238A1 (fr) | Methode et trousse pour le suivi des maladies neurodegeneratives | |
| JP6449247B2 (ja) | 移植拒絶反応、神経変性疾患又はうつ病と特に関連する潜在的炎症のインビトロ早期検出方法 | |
| CN107907690A (zh) | 一种超敏c反应蛋白检测试剂盒及其使用方法 | |
| EP1907861B1 (fr) | Procédé de détection des fpca utilisant un agent d'agrégation des fpca et un agent de capture des agrégats formés | |
| WO2003031971A1 (fr) | Reactif pour detecter un facteur de risque de la maladie d'alzheimer, necessaire de detection a cet effet, et procede de detection du facteur de risque de la maladie d'alzheimer au moyen de ce necessaire | |
| JP3032290B2 (ja) | 脱髄性神経障害特に多発性硬化症の診断手段 | |
| EP0311492B1 (fr) | Trousse et méthode de dosage immunométrique applicables à des cellules entières | |
| US20070154885A1 (en) | Process for detecting PrP using a macrocyclic adjuvant ligand | |
| WO2016175406A1 (fr) | Procédé de diagnostic du syndrome de sjögren à l'aide du test de réactions anticorps, spécifique du syndrome de sjögren | |
| JP2008519284A (ja) | タンパク質−ヒドロキシアパタイト複合体に関する方法および組成物、ならびにカルシウム結合タンパク質−ヒドロキシアパタイト複合体に対する抗体の検出のための新規インビトロ試験を含む免疫系を試験および調節することにおけるそれらの適用 | |
| WO2019095403A1 (fr) | KIT Aβ, PROCÉDÉ DE DÉTECTION ET UTILISATION | |
| RU2244933C2 (ru) | Антигенная композиция и способ обнаружения присутствия treponema pallidum у человека | |
| WO1998005965A1 (fr) | Methode d'identification de cellules eucaryotes par fixation desdites cellules sur un support et support pour mettre en oeuvre ladite methode | |
| AU2439600A (en) | Urinary trypsin inhibitor to diagnose aids | |
| Ranjan et al. | Immunochemical detection of glycated beta-and gamma-crystallins in lens and their circulating autoantibodies (IgG) in streptozocin induced diabetic rat | |
| EP0495971B1 (fr) | Determination des thrombopenies | |
| CA2148268A1 (fr) | Methode d'immunodosage specifique de la glutathion peroxydase plasmatique humaine | |
| BE1006974A3 (fr) | Procede de detection et/ou de quantification de differentes classes d'immunoglobulines specifiques d'une pathologie comportant une reponse auto-immunitaire. | |
| EP0980525A1 (fr) | Methodes pour la detection de pathologies auto-immunes | |
| EP0122833B1 (fr) | Procédé de dosage en phase hétérogène de substances biologiques antigéniques, mettant en oeuvre des conjugués hybrides d'anticorps et réactifs pour sa mise en oeuvre | |
| JPH02264864A (ja) | Ｇｓａ―２結合性蛋白質の免疫学的測定試薬及びそれを用いた免疫学測定用キット | |
| FR2667945A1 (fr) | Moyens et methodes pour le diagnostic in vitro de la sclerose en plaques et autres neuropathies demyelinisantes. | |
| EP1096258B1 (fr) | Dosage de protéines telles que les immunoglobulines de type E (IgE) dans des sécrétions nasales | |
| JP2530205B2 (ja) | リケツチア抗体の検定法 | |
| JPH0694708A (ja) | 抗グルタミン酸デカルボキシラーゼ抗体の検出方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20091130 |