ES2957957T3 - Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos - Google Patents
Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2957957T3 ES2957957T3 ES18162234T ES18162234T ES2957957T3 ES 2957957 T3 ES2957957 T3 ES 2957957T3 ES 18162234 T ES18162234 T ES 18162234T ES 18162234 T ES18162234 T ES 18162234T ES 2957957 T3 ES2957957 T3 ES 2957957T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- protein
- lymphocytes
- interaction
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 288
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 60
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 53
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 16
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims abstract description 163
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims abstract description 163
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims abstract description 101
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 79
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 70
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 70
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 67
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 40
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 71
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 66
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 33
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 22
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 4
- 101000759376 Escherichia phage Mu Tail sheath protein Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 abstract description 10
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 18
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 10
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 5
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 5
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 3
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 3
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 2
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 2
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 2
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101001061851 Homo sapiens V(D)J recombination-activating protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 2
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 2
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 2
- 102000001183 RAG-1 Human genes 0.000 description 2
- 108060006897 RAG1 Proteins 0.000 description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100029591 V(D)J recombination-activating protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- -1 but not limited to Substances 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 208000030767 Autoimmune encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101100015199 Caenorhabditis elegans gly-11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100505076 Caenorhabditis elegans gly-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100067721 Caenorhabditis elegans gly-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100228196 Caenorhabditis elegans gly-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100228200 Caenorhabditis elegans gly-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100228206 Caenorhabditis elegans gly-6 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100228210 Caenorhabditis elegans gly-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100335897 Caenorhabditis elegans gly-9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100505161 Caenorhabditis elegans mel-32 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 206010019755 Hepatitis chronic active Diseases 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 241000976416 Isatis tinctoria subsp. canescens Species 0.000 description 1
- 102100021464 Kinetochore scaffold 1 Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001904 diabetogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000225 effect on diabetes Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 101150089730 gly-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 1
- GSSMIHQEWAQUPM-AOLPDKKJSA-N ovalbumin peptide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CN=CN1 GSSMIHQEWAQUPM-AOLPDKKJSA-N 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
La presente invención proporciona métodos y materiales para tratar y prevenir enfermedades autoinmunitarias. En particular, al descubrimiento de que fragmentos de CD154 (ligando CD40, CD40L) son capaces de interactuar con CD40, interfiriendo así con la capacidad de CD40 para interactuar con CD154, lo cual es importante en la inflamación. La presente invención también se refiere al uso de dichos péptidos para reducir la respuesta inflamatoria, en particular, la respuesta inflamatoria autoinmune; el uso de dichos péptidos cortos para prevenir o revertir enfermedades autoinmunitarias, en particular, diabetes; métodos y materiales para detectar células T que expresan CD40 (células Th40); y kits para reducir la inflamación, tratar enfermedades autoinmunes o detectar células Th40. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos
Campo de la invención
La presente invención se refiere a péptidos que inhiben la interacción de CD40 y CD154, así como al uso de dichos compuestos para modular la actividad de linfocitos T y tratar enfermedades.
Antecedentes
La inflamación se produce normalmente como respuesta a la infección de microorganismos invasores. Dicha respuesta inflamatoria es beneficiosa ya que es un elemento importante para que el sistema inmunitario localice el agente infeccioso para su eliminación. Sin embargo, en caso de autoinmunidad no existe infección, a pesar del hecho de que esté presente una grave inflamación. La inflamación en este caso, conocida como inflamación crónica aséptica, es perjudicial dado que destruye los tejidos normales. Los resultados de dicha inflamación aséptica alteran la vida y, en algunos casos, la ponen en peligro. Por otra parte, al igual que con la inflamación aguda, este proceso está mediado por células inmunitarias, incluyendo linfocitos T.
Una de las principales preocupaciones de la medicina moderna es cómo controlar la inflamación aséptica crónica (ACI por sus siglas en inglés), como pueda ser la que tiene lugar durante las enfermedades autoinmunitarias, y cómo controlar la inflamación aguda derivada de trauma. La inflamación, tanto crónica como aguda, conlleva degeneración tisular y pérdida de la función de órganos importantes con el tiempo. ACI no se limita a una sola enfermedad, sino que contribuye a numerosas enfermedades autoinmunitarias, entre las que se incluyen, pero sin limitarse a ellas, diabetes tipo 1, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, incluyendo los tipos de asma autoinmune, aterosclerosis, vasculitis, hipertensión, tiroiditis incluyendo enfermedades de Hashimoto y Graves, cirrosis biliar primaria, enfermedad de Paget, enfermedad de Addison, síndrome de dificultad respiratoria aguda, lesión pulmonar aguda y ACI asociada a trasplante de órganos.
Los trastornos autoinmunitarios se clasifican en dos tipos: específicos de órgano (dirigido principalmente a un órgano) y no específicos de órgano (muy diseminado por todo el cuerpo). Entre los ejemplos de trastornos autoinmunitarios específicos de órgano se incluyen diabetes tipo 1 dependiente de insulina, que afecta al páncreas; tiroiditis de Hashimoto y enfermedad de Graves, que afectan a la glándula tiroides; anemia perniciosa, que afecta a la sangre; enfermedad de Addison, que afectan a las glándulas suprarrenales; hepatitis crónica activa, que afecta al hígado; miastenia grave que afecta al músculo; y esclerosis múltiple, que afecta al tejido del sistema nervioso. Un ejemplo de trastorno autoinmune no específico de un órgano es la artritis reumatoide. Las enfermedades autoinmunitarias suelen ser crónicas, debilitantes y mortales. Los Institutos Nacionales de la Salud (NlH) estiman que hasta 23.500.000 personas en Norteamérica padecen una enfermedad autoinmunitaria con tendencia a aumentar. Se ha estimado que las enfermedades autoinmunitarias se encuentran entre las diez principales causas de mortalidad entre las mujeres de todos los grupos de edad hasta los 65 años.
La inflamación aguda, tal como se observa durante un traumatismo o septicemia, también está mediada por células inmunitarias. Si bien aún no se han identificado todos los mediadores moleculares de este proceso, se ha relacionado sólidamente un papel prominente de linfocitos T, macrófagos/monocitos, neutrófilos, etc. Por lo tanto, un medio para modular estos tipos de células controlaría necesariamente la respuesta inflamatoria.
Se ha demostrado que un subconjunto único de linfocitos T contribuye al desarrollo de la enfermedad autoinmunitaria. Dichas células se caracterizan fenotípicamente como CD4loCD40+ (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis y J. Wagner, D.H. 2004.European Journal of Immunology34: 1488; Vaitaitis, GM, M. Poulin, RJ Sanderson, K.J. Haskins, y D.H. Wagner Jr. 2003.Cutting Edge, J. Immunol.170: 3455; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins. 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.99: 3782; Wagner, D.H., Jr., E. Newell, R. Sanderson, J.H. Freed, y M.K. Newell. 1999.International Journal of Molecular Medicine4: 231) y se conocen como linfocitos Th40. La expresión de CD40 está asociada normalmente a células presentadoras de antígeno y la mayor parte de la técnica anterior describe que CD40 se expresa en linfocitos B, macrófagos, monocitos, etc. Sin embargo, las proteínas CD40 se expresan también en linfocitos T (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis, y J. Wagner, D.H. 2004.European Journal of Immunology34/1488; Vaitaitis, G.M., M. Poulin, RJ Sanderson, K.J. Haskins y D.H. Wagner Jr., 2003.Cutting Edge, J. Immunol.170-3455; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins. 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU99: 3782; Wagner, DH, Jr., E. Newell, R. Sanderson, J.H. Freed y M.K. Newell. 1999.International Journal of Molecular Medicine4: 231; Bourgeois, C., B. Rocha y C. Tanchot. 2002.Science297: 2060; Fanslow, WC, K.N. Clifford, M. Seaman, M.R. Alderson, M.K. Spriggs, R.J. Armitage y F. Ramsdell. 1994.Journal of Immunology152: 4262; Ramsdell, F., M.S. Seaman, K.N. Clifford y W.C. Fanslow. 1994.Journal of Immunology152: 2190; Grabstein, K.H., C.R. Maliszewski, K. Shanebeck, T.A. Sato, M.K. Spriggs, W.C. Fanslow y R.J. Armitage. 1993.Journal of Immunology150: 3141; Armitage, R.J., C.R. Maliszewski, M.R. Alderson, K.H. Grabstein, M.K. Spriggs y W.C. Fanslow. 1993.Seminars in Immunology5: 401; Cooper, C.J., G.L. Turk, M. Sun, A.G. Farr y P.J. Fink. 2004. J. Immunol 173: 6532). Mientras que los linfocitos Th40 comprenden una proporción del compartimento periférico CD4+ en ratones no autoinmunes, no tratados previamente (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis y J. Wagner, D.H. 2004.European Journal of Immunology34: 1488; Wagner, D.H., Jr., E Newell, R. Sanderson, J.H. Freed y M.K. Newell. 1999.International Journal of Molecular Medicine4: 231), y en seres humanos (Waid. D.M., R.J. Wagner, A. Putnam, G.M. Vaitaitis, N.D. Pennock, D.C. Calverley, P. Gottlieb, y D.H. Wagner, Jr.
2007.Clin Immunol124: 138), dicha proporción se expande drásticamente hasta un 50 % del compartimento CD4+ en ratones propensos a autoinmunidad (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis y J. Wagner. 2004.European Journal of Immunology34: 1488; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins, 2002.Proc Natl Acad Sci EEUU.99: 3782; Wagner, D.H., Jr., E. Newell, R. Sanderson, J.H. Freed y M.K. Newell. 1999.International Journal of Molecular Medicine4:231) y seres humanos (Waid. DM, R.J. Wagner, A. Putnam, G.M. Vaitaitis, ND Pennock, D.C Calverley, P. Gottlieb, y D.H. Wagner, Jr. 2007. Clin Immunol 124: 138). Estos linfocitos T no expresan marcadores de activación temprana y se producen en el fenotipo indiferenciado de ratones no desafiados. En ratones NOD diabéticos, los linfocitos Th40 se producen en niveles exagerados en el bazo, los ganglios linfáticos y el páncreas, incluso antes del inicio de la diabetes (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis y J. Wagner, D.H.
2004.European Journal of Immunology34: 1488; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins, 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.99: 3782). Se observa un número y un porcentaje elevado de estos linfocitos T en la sangre periférica de pacientes con diabetes de tipo 1 cuando se compara con controles no autoinmunitarios y pacientes con diabetes de tipo 2 (Waid. D.M., R.J., Wagner, A. Putnam, G.M. Vaitaitis, N.D. Pennock, D.C. Calverley, P. Gottlieb y D.H. Wagner, Jr. 2007,Clin Inmmunol12:138).
El aumento de linfocitos Th40 observado podría significar que dichos linfocitos T son sensibles al antígeno o que la expresión de CD40 es inducida por activación. Asimismo, varios clones de linfocitos T diabetogénicos son CD40+ (Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins, 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.
99: 3782). Los linfocitos Th40 primarios purificados de ratones NOD diabéticos y de ratones NOD pre-diabéticos (12 semanas de vida) transfieren con éxito la diabetes de tipo 1 a receptores NOD.scid, lo cual demuestra directamente la patogenicidad de dicho subconjunto de linfocitos T (Waid, D.M., Vaitaitis G.M. y J. Wagner, D.H. 2004.European Journal of Immunology34: 1488; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins. 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.99: 3782). Se ha demostrado que los linfocitos Th40 se infiltran en las células beta de los islotes destruyendo la producción de insulina, lo cual indica la especificidad del antígeno de los islotes (Waid, D.M., G.M. Vaitaitis y J. Wagner, DH 2004.European Journal of Immunology34: 1488; Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins. 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.99: 3782). Se ha demostrado asimismo que se requieren linfocitos Th40 para la transferencia de diabetes. Los linfocitos T periféricos (bazo y ganglio linfático regional) con un empobrecimiento de CD40 y después empobrecimiento de CD25, Treg, no fueron capaces de transferir diabetes a los receptores de Scid. A pesar de la eliminación de Treg, si está ausente el subconjunto autoagresivo linfocitos T CD40+, no tiene lugar la transferencia de la enfermedad.
Si bien los linfocitos Th40 son importantes en el desarrollo de autoinmunidad, otro factor importante es la expresión del Ligando CD40, CD154. El CD154 es inducido temporalmente en linfocitos T activados como respuesta a la estimulación con CD3/TCR (Lederman, S., M. Yellin, A. Krichevsky, J. Belko, J. Lee y L. Chess. 1992.Journal of Experimental Medicine175: 1091). La expresión de CD154 también se ha demostrado en plaquetas, monocitos, basófilos, eosinófilos, células dendríticas, fibroblastos, músculo liso y células endoteliales (Russo, S., B. Bussolati, I. Deambrosis, F. Mariano y G. Camussi, 2003. J Immunol 171: 5489; Stumpf, C., C. Lehner, S. Eskafi, D. Raaz, A. Yilmaz, S. Ropers, A. Schmeisser, J. Ludwig, W.G. Daniel y C.D. Garlichs. 2003.Eur J Heart Fail5: 629; Schonbeck, U., y P. Libby. 2001. Cell Mol Life Sci 58: 4). CD154 es un miembro de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNF) y se ha descrito una forma soluble de CD154 (sCD154) (Russo, S., B. Bussolati, I. Deambrosis, F. Mariano y G. Camussi 2003.J Immunol171: 5489; Stumpf, C, C. Lehner, S. Eskafi, D. Raaz, A. Yilmaz, S. Ropers, A. Schmeisser, J. Ludwig, W.G. Daniel y C.D. Garlichs. 2003.Eur J Heart Fail5: 629; Toubi, E. e Y. Shoenfeld. 2004Autoimmunity37: 457). Por lo tanto, sCD154 puede actuar como una citoquina (Stumpf, C., C. Lehner, S. Eskafi, D. Raaz, A. Yilmaz, S. Ropers, A. Schmeisser, J. Ludwig, W.G. Daniel, y C.D. Garlichs. 2003Eur J Heart Fail5: 629). Aunque CD154 no se ha relacionado genéticamente en estudios TID, sCD154 aparece significativamente elevado en TID y puede desempeñar un papel en el proceso patológico (Varo, N., D. Vicent, P. Libby, R. Nuzzo, A.L. Calle-Pascual, M.R. Bernal, A. Fernández-Cruz, A. Veves, P. Jarolim, J.J. Varo, A. Goldfine, E. Horton, y U. Schonbeck. 2003.Circulation107: 2664; Cipollone, F., F. Chiarelli, G. Davi, C. Ferri, G. Desideri, M. Fazia, A. Lezzi, F. Santilli, B. Pini, C. Cuccurullo, S. Tumini, A. Del Ponte, A. Santucci, F. Cuccurullo y A. Mezzetti. 2005.Diabetologia48: 1216; Devaraj, S., N. Graser, S. Grifen, J. Wang- Polagruto, E. Miguelino, y I. Jialal. 2006.Diabetes55: 774). Se ha establecido la importancia de la interacción CD40 - CD154 en la autoinmunidad (Wagner, D.H., Jr., G. Vaitaitis, R. Sanderson, M. Poulin, C. Dobbs y K. Haskins. 2002.Proc Natl Acad Sci EE.UU.99: 3782; Kobata, T., M. Azuma, H. Yagita y K. Okumura. 2000.Rev. Immunogenet2:74; Homann, D., A. Jahreis, T. Wolfe, A. Hughes, B. Coon, M.J. van Stipdonk, K.R. Prilliman, S.P. Schoenberger y M.G. von Herrath. 2002. Immunity 16: 403; Goodnow, C.C. 2001.Lancet357: 2115; Balasa, B., T. Krahl, G. Patstone, J. Lee, R. Tisch, HO McDevitt, y N. Sarvetnick. 1997.Journal of Immunology159: 4620). El bloqueo de la interacción CD40-CD154 impide la artritis inducida por colágeno (Durie, F.H., R.A. Fava, T.M. Foy, A. Aruffo, J.A. Ledbetter y R.J. Noelle. 1993. Science 281: 1328) encefalitis autoinmune experimental (Howard, L.M. y S.D. Miller. 2004.Autoimmunity37:411), prostatitis (Grossman, M.E., E. Davila y E. Celis. 2001.J Immunother24: 237) y, sobre todo, diabetes tipo 1 en el modelo de ratón NOD (Balasa, B., T. Krahl, G. Patstone, J. Lee, R. Tisch, H.O. McDevitt y N. Sarvetnick, 1997.Journal of Immunology159: 4620). En el modelo de diabetes, fue esencial administrar un anticuerpo para bloquear CD154 a ratones NOD a las 3 semanas de vida; a las 9 semanas, los anticuerpos bloqueadores no tuvieron efecto sobre la prevención de la diabetes (Balasa, B., T. Krahl, G. Patstone, J. Lee, R. Tisch, H.O. McDevitt y N. Sarvetnick, 1997.Journal of Immunology159: 4620).
El trabajo anterior ha demostrado asimismo que el subconjunto de linfocitos Th40 induce la transcripción, traducción y translocación nuclear de RAG1 y RAG2, (Vaitaitis, G.M., M. Poulin, R.J. Sanderson, K.J. Haskins y D.H. Wagner Jr. 2003.Cutting Edge, J. Immunol.170: 3455) cuando CD40 está activado. La activación de CD3 no induce RAG1 o RAG2 en linfocitos T (Vaitaitis, G.M., M. Poulin, R.J. Sanderson, K.J. Haskins y D.H. Wagner Jr., 2003.Cutting Edge, J. Immunol.170:3455). Tras la inducción de RAG1/RAG2, tiene lugar una revisión de TCR mediada por CD40 en los linfocitos T periféricos (Vaitaitis, G.M., M. Poulin, R.J. Sanderson, K.J. Haskin y D.H. Wagner Jr. 2003.Cutting Edge, J. Immunol.170:3455). La inducción de CD40 de la revisión del TCR depende de RAG. Los linfocitos T aislados de un ratón TCR-Tg experimentan revisión de TCR cuando CD40 está activado, pero los linfocitos T del ratón TCR-Tg.RAG-/- no revisan el TCR cuando CD40 está activado (Wagner, D.H., Jr., E. Newell, R. Sanderson, J.H. Freed y M.K. Newell. 1999.International Journal of Molecular Medicine4:231).
Se han propuesto múltiples opciones de tratamiento para abordar y controlar tanto la inflamación crónica como la aguda. Muchos enfoques emplean medicamentos antiinflamatorios no esteroideos (AINE) que atacan a la producción de leucotrienos y prostaglandinas, productos celulares que causan inflamación localizada. Otros enfoques utilizan fármacos inmunosupresores más potentes, como ciclofosfamida, metotrexato y azatioprina, que suprimen la respuesta inmune y detienen la progresión de la enfermedad. Otros tratamientos más implican el uso de anticuerpos monoclonales diseñados para alterar las respuestas inmunes a los propios tejidos, tal como ocurre durante las enfermedades autoinmunes. Sin embargo, todos estos tratamientos suelen tener efectos secundarios graves a largo plazo.
Por lo tanto, existe la necesidad en la técnica de contar con métodos más seguros y eficaces para el tratamiento y la prevención de enfermedades autoinmunes. La presente divulgación aborda esta necesidad mediante la descripción de un nuevo método para el tratamiento de enfermedades autoinmunes.
Sumario
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un péptido que inhibe la interacción de la proteína CD40 con la proteína CD154 de tal manera que se inhibe de la activación de un linfocito T que expresa dicha proteína CD40. El péptido se une a la proteína CD40 en el sitio de unión de CD154, y el péptido tiene una longitud menor de 25 aminoácidos y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 9.
En un segundo aspecto, la presente invención proporciona el péptido del primer aspecto para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria en un paciente.
En algunas realizaciones, el péptido tiene una longitud de 4 a 24 aminoácidos y comprende una secuencia núcleo que consiste en SEQ ID NO: 3. En algunas realizaciones, el péptido inhibe la interacción de CD40 y CD154. En algunas realizaciones, el péptido se une a una proteína CD40 para interferir con la interacción de un linfocito T portador de CD40 con una proteína CD154 de tal manera que se limita la activación del linfocito T portador de CD40. En algunas realizaciones, el péptido interacciona con la proteína CD40 de tal manera que se inhibe el desarrollo de la inflamación en el sistema. En algunas realizaciones, el péptido inhibe la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que altera el perfil de expresión de citoquina de una población de células tratadas con dicho péptido.
En algunas realizaciones, el péptido afecta a la interacción de CD40 con el ligando CD154/gp39/CD40 de tal manera que se modula la inflamación. El péptido puede consistir en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9. En algunas realizaciones, el péptido se une a CD40; opcionalmente, en donde dicho péptido se une a una proteína CD40 con una Kd superior a 106. superior a 106. En algunas realizaciones, el péptido afecta a la interacción de CD40 y CD154. El péptido puede inhibir la unión de CD40 a CD154. El péptido puede unirse a CD40 en el lugar donde CD40 interacciona con CD154. En algunas realizaciones, el péptido afecta a la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que impide la expansión y/o reduce el número de linfocitos Th40. En algunas realizaciones, el péptido afecta a la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que altera el perfil de expresión de citoquina de una población de células tratadas con dicho péptido. El péptido puede péptido puede obtenerse de fuentes naturales o sintetizarse.
En otros aspectos, la presente invención proporciona un métodoin vitropara inhibir la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154 que comprende poner en contacto dicha proteína CD40 con el péptido de acuerdo con la reivindicación 1, inhibiendo de este modo la interacción de dichas proteínas CD40 y CD154.
En otros aspectos, la presente invención proporciona el péptido de la invención para su uso en un método de inhibición o modulación de la inflamación en un paciente, comprendiendo el método poner en contacto una proteína CD40 del paciente con el péptido de tal manera que se inhiba o module la inflamación.
En otros aspectos, la presente invención proporciona péptidos de la para su uso en un método de (i) modulación de la inflamación en un paciente, que comprende administrar el péptido al paciente; o (ii) tratar una enfermedad autoinmunitaria en un paciente que necesite dicho tratamiento, que comprende administrar el péptido al paciente; o iii) revertir la diabetes en un animal, que comprende administrar el péptido al animal.
En otros aspectos, la presente invención proporciona el péptido de la invención para su uso en un método de reducción del número de linfocitos Th40 en un paciente.
En otros aspectos, la presente invención proporciona un métodoin vitrode detección de linfocitos T autoagresivos, comprendiendo dicho método poner en contacto una población de linfocitos T con el péptido de la invención.
En otros aspectos, la presente invención proporciona un método para identificar a un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria, comprendiendo dicho método (a) poner en contacto la porción de linfocitos T de una muestra, que se haya obtenido de un paciente, con un péptido de la invención; y (b) determinar el número de células que son CD40+ en la población de linfocitos T, en donde si el porcentaje de linfocitos T CD40+ en la población de linfocitos T es superior al 25 %, dicho paciente está en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria.
En otros aspectos, la presente invención proporciona un método para identificar un compuesto que inhiba la unión de una proteína CD40 a una proteína CD154, comprendiendo dicho método: (a) poner en contacto el péptido de acuerdo con la reivindicación 8 con un linfocito Th40; (b) lavar dichos linfocitos Th40 para eliminar el péptido no unido y la molécula no unida; y (c) detectar la presencia de dicho péptido en dichos linfocitos Th40, en donde la ausencia de dicho péptido en dichos linfocitos Th40 indica que dicho compuesto es capaz de inhibir la unión de una proteína CD40 de una proteína CD154.
Asimismo, en el presente documento se describe un nuevo método para modular la inflamación y, en particular, la inflamación que se produce como resultado de una enfermedad autoinmunitaria. Dicho método se basa en el conocimiento de que la interacción entre el ligando de CD40 (proteína CD154) y la proteína CD40 expresada en linfocitos T (linfocitos Th40) es importante en el desarrollo de la enfermedad autoinmunitaria, así como en la aclaración de los restos críticos en CD40 y CD154 que son importantes para dicha interacción. La presente divulgación se refiere al bloqueo de la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154 mediante el uso de péptidos pequeños que interactúan con la proteína CD40 en un sitio en el que se uniría normalmente la proteína CD154. Se describe asimismo el uso de dichos péptidos para reducir el nivel de linfocitos Th40, reduciendo así la gravedad de la enfermedad, así como nuevos métodos para detectar linfocitos Th40.
En el presente documento se describe un péptido que interactúa con una proteína CD40 de tal manera que modula la inflamación. Los péptidos preferentes son aquellos que tienen una longitud menor de 25 aminoácidos y que se unen a una proteína CD40, inhibiendo así su interacción con una proteína CD154. Los péptidos preferentes son aquellos que comprenden una porción del sitio de unión a CD40 de una proteína CD154.
Asimismo, en el presente documento se describe un método para inhibir la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154, comprendiendo dicho método poner en contacto la proteína CD40 con un péptido que interactúa con la proteína CD40. Los péptidos preferentes interactúan con la proteína CD40 en el sitio de unión a CD154. Preferentemente, dichos péptidos tienen una longitud menor de 20 aminoácidos. Son incluso más preferentes los péptidos que consisten en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO 3-10.
Asimismo, en el presente documento se describe un método para modular la inflamación en un animal o un cultivo de células, comprendiendo dicho método administrar a dicho animal, o a dichas células, un péptido que interactúa con una proteína CD40 de tal manera que modula la inflamación. Los péptidos preferentes son aquellos que interactúan con la proteína CD40 en el sitio de unión a CD154, modulando así la inflamación. Los péptidos preferentes modulan la inflamación reduciendo el nivel de linfocitos Th40 a no más del 25 % de la población total de linfocitos T. Dichos métodos pueden utilizarse para tratar enfermedades autoinmunitarias como la diabetes.
En el presente documento se describe un medio para detectar linfocitos T autoagresivos, comprendiendo el método poner en contacto una población de linfocitos T con un péptido que se une a la proteína CD40 y detectar el péptido unido a CD-40.
Asimismo, en el presente documento se describe un método para identificar a un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria, comprendiendo el método la obtención de una muestra que contiene linfocitos T de un paciente para su ensayo, la puesta en contacto de la muestra con un péptido que se une a la proteína CD40, la detección del péptido unido a CD-40 y la determinación del nivel de linfocitos Th40 a partir de la cantidad de CD40 unido, en el que un nivel de linfocitos Th40 superior al 25 % de la población total de linfocitos T, indica que el paciente está en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria.
Breve descripción de las figuras
Fig. 1 Efecto de diversos péptidos de CD154 en el desarrollo de diabetes en ratones NOD
Fig. 2 Efecto de un péptido de 15 meros de CD154 en la relación con CD4/CD8 en ratones NOD
Fig. 3 Reversión de la diabetes en ratones NOD utilizando un péptido de 15 meros de CD154
Fig. 4 Detección de linfocitos Th40 usando un péptido de 15 meros de CD154
Fig. 5 Exploración de linfocitos B mediante el uso de un péptido de 15 meros de CD154
Fig. 6 Comparación de los niveles de linfocitos Th40 en ratones diabéticos y no diabéticos
Fig. 7. Efecto del tratamiento con el péptido de 15 meros sobre la granulación de insulina del páncreas
Fig. 8. Efecto de mutaciones en el péptido de 15 meros sobre la capacidad del péptido de 15 meros para inhibir el desarrollo de diabetes en ratones NOD.
Descripción detallada
La presente invención se basa en el descubrimiento de que un subconjunto único de linfocitos T, que expresan proteína CD40 y, por lo tanto, se hace referencia a ellos como linfocitos Th40, contribuye a la inflamación autoinmune. Por otra parte, la implicación de los linfocitos Th40 en el proceso autoinmune depende de la interacción entre la proteína CD40 expresada en la superficie del linfocito T y la proteína CD154. La interacción entre CD40 y CD154 tiene como resultado la entrega de señales de activación entre las células y la posterior activación del linfocito Th40. Dicha activación tiene como resultado la propagación del linfocito Th40 y un aumento de la inflamación (por ejemplo, un aumento en el número de células inmunitarias y moléculas inmuno-reguladoras, presentes en el sistema). En consecuencia, la inhibición de la interacción CD40/CD154 puede modular la actividad de los linfocitos Th40 y, en virtud de ello, afectar a la inflamación. En el presente documento se divulgan péptidos que modifican la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154, modulando así la inflamación. En particular, la presente invención se refiere a péptidos que modifican la interacción entre la proteína CD40 expresada en la superficie de un linfocito T y una proteína CD154, modificando así la actividad de linfocitos T y modulando la inflamación para tratar enfermedades autoinmunes. Asimismo, en el presente documento, se divulga el uso de tales péptidos para detectar linfocitos Th40.
Antes de describir mejor la presente invención, debe entenderse que la invención no se limita de forma estricta a las realizaciones descritas en particular, ya que, naturalmente, pueden variar. Asimismo, ha de entenderse que la terminología utilizada en el presente documento tiene como único fin describir realizaciones particulares sin pretender limitarla, ya que el alcance de la presente invención quedará limitado únicamente por las reivindicaciones.
Debe señalarse que, tal como se utilizan en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "uno(a)" y "el/la", incluyen las referencias en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Debe entenderse asimismo que, tal como se utiliza en el presente documento, el término "una" entidad se refiere a una o más de dichas entidades. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico se refiere a una o más moléculas de ácido nucleico. Siendo así, los términos y expresiones "un", "uno(a)", "uno(a) o más" y "al menos uno(a)" pueden utilizarse indistintamente. De forma similar, las expresiones "que comprende", "que incluye" y "que tiene", pueden emplearse indistintamente.
A menos que se definan de otra forma, todos los términos técnicos y científicos empleados en el presente documento tienen el mismo significado que entienden habitualmente las personas especializadas en la materia en la que se encuadra la presente invención. Si bien, en la puesta en práctica y en los ensayos de la presente invención, es posible utilizar cualquier método o material similar o equivalente de los descritos en el presente documento, se describen a continuación, los métodos y materiales preferentes. Todas las publicaciones mencionadas en el presente documento divulgan y describen los métodos y/o materiales en conexión con los cuales se citan las publicaciones. Las publicaciones tratadas en el presente documento se proporcionan únicamente por su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. En el presente documento, no debe interpretarse nada como una admisión de que la presente invención no tiene derecho a antedatar dicha publicación en virtud de la invención anterior. Asimismo, las fechas de publicación proporcionadas pueden ser diferentes de las fechas de publicación reales, lo cual es posible que tenga que ser confirmado independientemente.
Se podrá apreciar que también se puede proporcionar ciertas características, que se describen dentro del contexto de realizaciones por separado, para mayor claridad, en combinación en una única realización. Por el contrario, varias características de la invención descritas en el contexto de una única realización, para mayor brevedad, también pueden proporcionarse por separado o en cualquier sub-combinación adecuada. Todas las combinaciones de las realizaciones quedan específicamente abarcadas en la presente divulgación y se divulgan en el presente documento como si todas y cada una de dichas combinaciones se divulgara individual y explícitamente en el presente documento. Asimismo, todas las sub-combinaciones quedan también abarcadas específicamente y se divulgan en el presente documento como si todas y cada una de dichas sub-combinaciones se divulgaran individual y explícitamente en el presente documento.
Asimismo, tal como se utiliza en el presente documento, el término animal se refiere a un vertebrado, preferentemente un mamífero, más preferentemente un ser humano. Entre los mamíferos adecuados en los que se aplican los métodos de la presente divulgación se incluyen, pero sin limitarse a ellos, animales de granja, animales de competición, mascotas, primates, ratones, ratas, caballos, perros, gatos y seres humanos. Pueden utilizarse indistintamente los términos animal, sujeto o paciente.
En el presente documento se divulga un péptido que interactúa con una proteína CD40 de tal manera que modula la inflamación. Tal como se utiliza en el presente documento, los términos interactuar, interacción y similares significan que dos moléculas alcanzan una proximidad física suficiente como para provocar una modulación de la inflamación. Un tipo de interacción es una interacción de unión. En dicha interacción, el péptido se asocia con CD40 para formar un complejo. Un ejemplo de formación de complejo es la asociación de un antígeno con un anticuerpo. La unión de un péptido con una proteína CD40 puede ser reversible (por ejemplo, interacciones de unión no covalente) o no reversible (por ejemplo, interacciones de unión covalente). Por otra parte, una interacción reversible puede ser fuerte o débil, determinándose la fuerza de la interacción por las fuerzas (p. ej., cargas iónicas, unión de hidrógeno, interacciones de van der Walls, etc.) ejercidas por cada proteína sobre la otra proteína en el complejo. Los factores que afectan a la fuerza de una interacción entre dos moléculas son conocidas entre las personas especializadas en la materia. Una medida útil de la fuerza de unión entre dos moléculas, como pueda ser un péptido y una proteína, es la constante de disociación (Kd). Los péptidos preferentes divulgados en el presente documento son aquellos que se unen a una proteína CD40 con una Kd de no más de aproximadamente 1 x 10-6 M, aproximadamente 1 x 10-7M o aproximadamente 1 x 8M. Los péptidos particularmente preferentes son aquellos que tienen una Kd de menos de aproximadamente 1 x 10 -9 M. Se desvelan péptidos que se unen a una proteína CD40 con una Kd de menos de 100 nM, de menos de 50 nM, de menos de 25 nM, de menos de 10 nM, de menos de 5 nM, de menos de 3 nM, de menos de 2 nM o de menos de 1 nM. Los métodos para medir y analizar interacciones de unión entre un péptido y una proteína CD40 son conocidos entre las personas especializadas en la materia.
Tal como se utiliza en el presente documento, modular la inflamación significa cambiar el nivel de linfocitos Th40 presente en un animal, o en un cultivo de linfocitos T. Tal como se utilizan en el presente documento, los términos nivel, número, recuento y concentración pueden emplearse indistintamente. La modulación de la inflamación puede significar un aumento o una disminución en el número de linfocitos Th40 presente en el entorno inflamatorio. En consecuencia, es posible hacer referencia a la modulación como positiva o negativa. La modulación positiva (también conocida como regulación al alza) de la inflamación, se refiere a un aumento del número de linfocitos Th40 en el entorno inflamatorio. La modulación negativa (también conocida como regulación a la baja) de la inflamación se refiere a una reducción en el número de linfocitos Th40 presentes en el entorno inflamatorio. Un péptido preferente es aquel que regula a la baja la inflamación, reduciendo así el número de linfocitos Th40 presentes en el entorno inflamatorio. La modulación positiva y negativa de la inflamación puede derivar o no en un cambio del tipo y la cantidad de moléculas inmuno-reguladoras presentes en el entorno inflamatorio.
Las personas especializadas en la materia apreciarán que tanto un sistema de cultivo de células como el sistema inmunitario de un animal comprenden niveles basales de células inmunitarias y moléculas inmuno-reguladoras. Las expresiones nivel basal y nivel normal pueden emplearse indistintamente. Con respecto al sistema inmunitario de un animal, tal como se utiliza en el presente documento, el nivel basal de un tipo de célula inmunitaria (por ejemplo, linfocito Th40) o una molécula inmuno-reguladora, se refiere al número promedio de ese tipo de célula, o molécula inmuno-reguladora, presente en una población de individuos considerados sanos (es decir, sin enfermedad metabólica, autoinmune ni infecciosa). Con respecto a un sistema de cultivo celular, tal como se utiliza en el presente documento, el nivel basal de un tipo de célula inmunitaria, o una molécula inmuno-reguladora, se refiere al nivel promedio de ese tipo de célula, o molécula inmuno-reguladora, presente en una población de células que no está activada. Las personas especializadas en la materia podrán determinar si se activa un linfocito T o una población de dichas células. Por ejemplo, la expresión de las proteínas CD69, CD25 y/o CD154 mediante una célula indica que la célula ha sido activada.
El nivel basal de una célula o molécula puede ser una cantidad específica (p. ej., una concentración) o puede abarcar un intervalo de cantidades. Los niveles basales, o intervalos, de células inmunitarias y moléculas inmunoreguladoras son conocidos entre las personas especializadas en la materia. Por ejemplo, en un individuo sano, el nivel normal de linfocitos T CD4+ presentes en la sangre humana es de 500-1500 células/ml. La variabilidad de esta medición puede derivarse de las diferencias en el método utilizado para determinar el recuento de células. Asimismo, es posible registrar también los niveles normales de células como un porcentaje de una población total de células. Por ejemplo, en un individuo sano, los linfocitos Th40 constituyen menos del 25 % de la población total de linfocitos T. Por lo tanto, tal como se emplea en el presente documento, el término inflamación se refiere a un entorno inflamatorio en el que los linfocitos Th40 constituyen más de aproximadamente 25 %, más de aproximadamente 30 %, más de aproximadamente 35 %, más de aproximadamente 40 %, más de aproximadamente 45 %, más de aproximadamente 50 %, más de aproximadamente 55 %, más de aproximadamente 60 %, más de aproximadamente 65 %, más de aproximadamente 70 %, más de aproximadamente 75 % o más de aproximadamente 80 % de la población total de linfocitos T. Por otra parte, un péptido preferente es aquel que reduce el nivel de linfocitos Th40 a menos de aproximadamente 50 %, menos de aproximadamente 45 %, menos de aproximadamente 40 %, menos de aproximadamente 35 %, menos de aproximadamente 30 %, menos de aproximadamente el 27 %, o igual a aproximadamente el 25 % de la población total de linfocitos T. Los métodos para medir diferentes tipos de linfocitos T en la población de linfocitos T son conocidos entre las personas especializadas en la materia. Asimismo, en el presente documento se divulga un nuevo método para detectar linfocitos Th40 utilizando los péptidos de la presente divulgación.
Tal como se emplea en el presente documento, la expresión entorno inflamatorio se refiere a la población células inmunitarias global y moléculas inmuno-reguladoras relacionadas, que están presentes en un cultivo de células, o en el cuerpo de un animal. Siendo así, la expresión entorno inflamatorio abarca los tipos, y/o las cantidades relativas de células inmunitarias y moléculas inmuno-reguladoras (por ejemplo, citoquinas) presentes en un cultivo de células, o en un animal, que participan en la modificación de una reacción inflamatoria. Entre los ejemplos de células que abarca dicha expresión entorno inflamatorio se incluyen, sin limitación, linfocitos T, neutrófilos, macrófagos, granulocitos y similares. El entorno inflamatorio se refiere a las células y moléculas que median la inflamación tanto aguda como crónica. Las personas especializadas en la materia apreciarán que el entorno inflamatorio hace referencia al sistema al que se administran los péptidos de la divulgación. En una realización, el sistema es un sistema de cultivo celular. En una realización, el sistema es un animal completo.
Un péptido preferente de la divulgación es aquel que interactúa selectivamente con una proteína CD40 en solución, según se determina aplicando un ensayo, como por ejemplo un ensayo inmunoabsorbente, o sobre la superficie de un linfocito T. Tal como se emplea en el presente documento, los términos selectivamente, selectivo, específico y similares indican que el péptido tiene una afinidad mayor para una proteína CD40 que para las proteínas no relacionadas con la proteína CD40. Más específicamente, los términos selectivamente, selectivo, específico y similares indican que la afinidad del péptido por CD40 es estadística y significativamente mayor que su afinidad para un control negativo (por ejemplo, una proteína no relacionada como albúmina) medida aplicando un ensayo convencional (p.ej., ELISA). Las técnicas adecuadas para someter a ensayo la capacidad de un péptido de interactuar selectivamente con una proteína CD40 son conocidas entre las personas especializadas en la materia. Dichos ensayos pueden ser ensayosin vitrooin vivo.Entre los ejemplos de ensayos útiles se incluyen, pero sin limitarse a ellos, inmunoensayo ligado a enzimas, inmunoensayo ligado a enzimas competitivo, radioinmunoensayo, inmunoensayo de fluorescencia, ensayo de quimioluminiscencia, ensayo de flujo lateral, ensayo de flujo continuo, ensayo de aglutinación, un ensayo de partículas (p. ej., mediante el uso de partículas como, por ejemplo, pero sin limitarse a ellas, partículas magnéticas o polímeros plásticos, como perlas de látex o poliestireno), ensayo de inmunoprecipitación, ensayo de inmunotransferencia (p.ej., transferencia de Western), ensayo de fosforescencia, ensayo de flujo continuo, ensayo de cromatografía, ensayo basado en electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), ensayo de resonancia de plasmón superficial, ensayo espectrofotométrico, ensayo de partículas, ensayo sensorial electrónico y ensayo de citometría de flujo. Los métodos para realizar dicho ensayos son perfectamente conocidos entre las personas especializadas en la materia. En una realización, puede realizarse un ensayo usando células en cultivo, o puede realizarse en un animal completo. Los ensayos pueden diseñarse para proporcionar resultados cualitativos, cuantitativos o semicuantitativos, dependiendo de cómo se utilicen y del tipo de resultado deseado.
En el presente documento, se divulgan péptidos que interactúan con una proteína CD40 como para modificar la interacción de la proteína CD40 con una proteína CD154, modulando así la inflamación. El efecto del péptido en la interacción CD40/CD154 puede ser positivo o puede ser negativo. Por ejemplo, el péptido puede interactuar con la proteína CD40 de tal manera que aumente la fuerza de la interacción entre la proteína CD40 y una proteína CD154. Alternativamente, el péptido puede interactuar con la proteína CD40 de manera que disminuye la fuerza de la interacción entre la proteína CD40 y una proteína CD154. Los métodos para medir la fuerza de unión entre el péptido y una proteína CD40 son conocidos entre las personas especializadas en la materia. Un péptido preferente de la presente invención es aquel que reduce la fuerza de la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154. Los péptidos preferentes de la presente invención reducen la fuerza de unión entre una proteína CD40 y una proteína CD154 en al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos 80 %, al menos 90 % o al menos 95 %. Un péptido particularmente preferente es aquel que inhibe completamente la unión de CD40 a CD154. La inhibición completa de la unión entre CD40 y CD154 significa que, cuando se aproxima un péptido de la presente invención a una proteína CD40 y una proteína CD154 en condiciones que normalmente permitirían la interacción entre CD40 y CD154, no se produce dicha interacción ni se estimulan las señales de activación en la célula que expresa CD40. En consecuencia, no tiene lugar la modulación de la inflamación mediada por CD40/CD154. En una realización, el péptido interactúa con la proteína CD40 de tal manera que reduce el nivel de inflamación en el sistema. En una realización, el péptido interactúa con la proteína CD40 de tal manera que inhibe el desarrollo de inflamación en el sistema.
Si bien los péptidos de la presente invención pueden interactuar con cualquier sitio en la proteína CD40, los péptidos preferentes de la presente invención interactúan con la proteína CD40 en un emplazamiento que se solapa con el sitio de unión a CD154. En una realización, un péptido de la presente invención interactúa con la proteína CD40 en el sitio de unión a CD514. Un ejemplo de dicho péptido es un antagonista competitivo del ligando CD40. Tal como se emplea en el presente documento, los péptidos que interfieren con la unión de una proteína CD154 a una proteína CD40, o que la inhiben, se conocen como péptidos interferentes pequeños (SIP). Tal como se emplea en el presente documento, un péptido interferente pequeño es un péptido que, a través de propiedades fisio-químicas, interfiere con la interacción entre una proteína<c>D40 y una proteína CD154, impidiendo así la entrega de las señales de activación a la célula portadora de CD40, limitando de este modo la activación de la célula portadora de CD40 y, en consecuencia, la inflamación. Tal como se ha demostrado en el presente documento, las consecuencias de dicha interferencia son la prevención de la activación y propagación de linfocitos T, así como la prevención o reducción de la inflamación.
Un péptido útil para poner en práctica los métodos divulgados en el presente documento debería ser de un tamaño suficiente para interactuar con la proteína CD40 como para modular la inflamación. Las personas especializadas en la materia deducirán que, preferentemente, los péptidos son cortos, ya que son más fáciles y menos caros de producir. Los péptidos preferentes son aquellos que tienen una longitud menor de 20 aminoácidos. Un péptido preferente es aquel que tiene una longitud de 6, 13 o 15 aminoácidos. En una realización, el péptido consiste en un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. A continuación, se muestran en la Tabla 1 las secuencias de dichos péptidos.
Tabla 1.
Se ha demostrado que la interacción de una proteína CD40 y de una proteína CD154, tiene lugar en regiones concretas dentro de cada proteína. Los autores de la invención han demostrado ahora que, sorprendentemente, un péptido que comprende únicamente una porción corta de la región CD154 que interactúa con CD40, es capaz de unirse a una proteína CD40, modulando así la inflamación. Por lo tanto, una realización de la presente divulgación es un péptido que comprende al menos una porción de la secuencia de aminoácidos de una proteína CD154 de manera que el péptido interactúa con la proteína CD40 como para modular la inflamación. En una realización, la interacción del péptido con la proteína CD40 tiene como resultado la modulación negativa de la inflamación. En un aspecto, el péptido comprende al menos una porción de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. En un aspecto preferente, el péptido es lo más corto posible, pero comprende suficiente proteína CD154 para permitir la interacción con una proteína CD40 como para modular la inflamación. En una realización, un péptido de la presente divulgación comprende 6, 13 o 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, e interactúa con CD40 de tal manera que modula la inflamación. Un péptido preferente comprende una secuencia núcleo que consiste en lisinaglicina-tirosina-tirosina (KGYY, SEQ ID NO: 3), que corresponde a los aminoácidos 142-145 de la SEQ ID NO: 1 y aminoácidos 143-146 de la SEQ ID NO: 2. Los péptidos útiles pueden comprender regiones adicionales de secuencia de la SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 2 que son adyacentes a la secuencia núcleo, siempre y cuando el péptido sea capaz de modular la inflamación. En una realización de la presente divulgación, un péptido comprende al menos una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10, siempre y cuando el péptido interactúe con la proteína CD40 como para modificar la inflamación. En una realización, un péptido consiste en una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10.
Si bien los péptidos pueden consistir completamente en secuencias que son responsables de la interacción del péptido con una proteína CD40, pueden contener adicionalmente secuencias de aminoácidos que no interactúan con una proteína CD40, pero que tienen otras funciones útiles. A la secuencia que interactúa con CD40 se la puede añadir cualquier secuencia de aminoácidos adicional útil, siempre y cuando las secuencias adicionales no tengan un efecto indeseado sobre la capacidad de la secuencia que interactúa con CD40 para interactuar con una proteína CD40. Por ejemplo, además de la secuencia de aminoácidos responsable de la interacción con una proteína CD40, un péptido puede contener secuencias de aminoácidos que son útiles para visualizar o purificar el péptido. Dichas secuencias actúan como marcadores (p. ej., enzimas) o etiquetas (sitios de unión de anticuerpos). Entre los ejemplos de dichos marcadores y etiquetas se incluyen, pero sin limitarse solo a ellos, B-galactosidasa, luciferasa, glutatión-s-transferasa, tiorredoxina, etiquetas de HIS, etiquetas de biotina y etiquetas fluorescentes. Los expertos en la materia conocerán otras secuencias útiles para marcar y etiquetar proteínas.
Igualmente, los péptidos de la presente invención pueden modificarse, siempre y cuando dicha modificación no afecte significativamente a la capacidad del péptido para modular la inflamación. Dichas modificaciones pueden realizarse, por ejemplo, para aumentar la estabilidad, la solubilidad o la capacidad de absorción de la proteína. Entre los ejemplos de dichas modificaciones, se incluyen, pero sin limitarse a ellos, pegilación, glicosilación y modificación química del péptido.
Los péptidos de la presente invención pueden obtenerse de la naturaleza (por ejemplo, obtenerse de plantas, animales o microorganismos) o pueden producirse en un laboratorio (por ejemplo, por síntesis o recombinación). Los péptidos preferentes son aquellos que se sintetizan. Se incluyen asimismo péptidos que son combinaciones de moléculas naturales y sintéticas. Los expertos en la materia conocen métodos generales para producir y aislar péptidos recombinantes o sintéticos. Debe observarse que, tal como se utiliza en el presente documento, una molécula aislada o biológicamente pura es aquella que se ha extraído de su medio natural. Siendo así, las expresiones aislado, biológicamente puro, y similares, no reflejan necesariamente el grado en que la proteína ha sido purificada.
Tal como se ha descrito en el presente documento, la interacción entre la proteína CD40 y la proteína CD154 es necesaria para la participación de los linfocitos Th40 en la inflamación autoinmune. En consecuencia, la inhibición de la interacción entre una proteína CD40 y CD154 utilizando péptidos de la presente invención es un método útil para modificar la inflamación autoinmune. En el presente documento, se describe un método para reducir la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154 que comprende introducir en un entorno que contiene una proteína CD40 y una proteína CD154 un péptido que interactúa con la proteína CD40, de tal manera que reduce la interacción entre la proteína CD40 y la proteína CD154. En un aspecto, el péptido reduce la interacción entre la proteína CD40 y la proteína CD154 en al menos 5 %, al menos 10 %, al menos 20 %, al menos 30 %, al menos 40 %, al menos 50 %, al menos 60 %, al menos 70 %, al menos 80 %, al menos 90 % o al menos 95 %. En una realización, el péptido reduce la interacción entre la proteína CD40 y la proteína CD154 en un factor de al menos 10, al menos 100, al menos 1.000, al menos 10.000. Los métodos de medición de la fuerza de la interacción entre la proteína CD40 y la proteína CD154 han sido descritos anteriormente y son conocidos entre las personas especializadas en la materia.
Asimismo, en el presente documento se divulga un método para modular la inflamación que comprende poner en contacto una proteína CD40 con un péptido que interactúa con la proteína CDE40 de tal manera que modula la inflamación. En un aspecto, la interacción entre el péptido y la proteína CD40 aumenta el número de linfocitos Th40 en al menos un 5 %, al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 % o al menos un 95 %. En una realización, la interacción entre el péptido y la proteína CD40 aumenta el número de linfocitos Th40 en un factor de al menos 10, al menos 100, al menos 1.000, al menos 10.000. Se divulga también un método para reducir la inflamación en un paciente, comprendiendo dicho método administrar al paciente un péptido de la divulgación. En una realización, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ IDnO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. En una realización, el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. En una realización preferente, la interacción del péptido con la proteína CD40 disminuye el número de linfocitos Th40 en al menos 5 %, al menos 10 %, al menos 20 %, al menos 30 %, al menos 40 %, al menos 50 %, al menos 60 %, al menos 70 %, al menos 80 %, al menos 90 % o al menos 95 %. En otra realización, la interacción del péptido con la proteína CD40 disminuye el número de linfocitos Th40 en un factor de al menos 10, al menos 100, al menos 1.000, al menos 10.000. En una realización preferente, se reduce el nivel de linfocitos Th40 de modo que los linfocitos Th40 comprenden no más de aproximadamente 20 %, aproximadamente 25 %, aproximadamente 30 %, aproximadamente 35%o aproximadamente 40%de la población total de linfocitos T.
Los péptidos y métodos, tal como se divulgan en el presente documento, son adecuados para su uso en un cultivo celular, así como para tratar a un paciente. Tal como se utiliza en el presente documento, el término paciente se refiere a cualquier animal que necesita dicho tratamiento. El animal puede ser un ser humano o un animal no humano. Un animal preferente para su tratamiento es un mamífero. Puede administrarse un péptido o aplicarse de por sí, o como composiciones farmacéuticas. Es posible administrar un péptido de la presente invención, o una composición farmacéutica del mismo, a un paciente a través de diversas rutas, entre las que se incluyen, sin limitarse a ellas, inyección (p.ej., intravenosa, intramuscular, subcutánea, intratecal, intraperitoneal), inhalación, administración oral (p.ej., en una píldora, comprimido, cápsula, polvo, jarabe, solución, suspensión, película fina, dispersión o emulsión), transdérmica, transmucosa, pulmonar, bucal, intranasal, sublingual, intracerebral, intravaginal, rectal o tópica o a través de cualquier otro método adecuado conocido entre las personas especializadas en la materia.
A través de técnicas clínicas convencionales conocidas en la técnica puede determinarse la cantidad de un péptido de la presente invención y/o una composición farmacéutica del mismo eficaz. Dicha cantidad depende, entre otros factores, del paciente en tratamiento, incluyendo el peso, la edad y el estado del paciente, el efecto esperado del compuesto, la forma de administración y el criterio del médico tratante.
Es posible administrar un péptido de la presente invención, o una composición farmacéutica del mismo, en solitario o en combinación con otro u otros agentes farmacéuticos, incluyendo otros compuestos. La composición farmacéutica concreta depende del modo de administración deseado, como saben las personas especializadas en la materia.
Dado que los autores de la invención han descubierto que los linfocitos Th40 están íntimamente relacionados con el desarrollo de enfermedades autoinmunitarias, los péptidos y métodos divulgados en el presente documento pueden utilizarse para modificar la inflamación derivada de dichas enfermedades. Por lo tanto, se divulga en el presente documento un método para tratar enfermedad autoinmunitaria en un paciente que necesita dicho tratamiento, comprendiendo dicho método administrar a un paciente un péptido que interactúa con la proteína CD40, reduciendo así la inflamación. En una realización, el péptido interactúa con la proteína CD40 de tal manera que afecta a la interacción entre CD40 y CD154, reduciendo así la inflamación. En una realización preferente, la interacción del péptido con la proteína CD40 reduce el número de linfocitos Th40 en un paciente a un nivel igual al observado en sujetos que no tienen enfermedad autoinmunitaria. La presente invención es adecuada para tratar a cualquier paciente que tenga una enfermedad autoinmunitaria cuyo desarrollo dependa de los linfocitos Th40. Más concretamente, los péptidos de la presente invención son adecuados para reducir el nivel de linfocitos Th40 en dichos pacientes. En una realización preferente, un péptido de la presente invención reduce el nivel de linfocitos Th40 en un paciente que padece una enfermedad autoinmunitaria en aproximadamente el 25 % como máximo de la población total de linfocitos T. Entre los ejemplos de dicha enfermedad incluyen, pero sin limitarse a ellas, asma, diabetes tipo 1 ; esclerosis múltiple; lupus eritematoso sistémico; artritis reumatoide; enfermedad de Crohn; enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) incluyendo tipos de asma autoinmune; aterosclerosis; vasculitis; hipertensión; tiroiditis incluyendo las enfermedades de Hashimoto y Graves; cirrosis biliar primaria; enfermedad de Paget; La enfermedad de Addison; síndrome de dificultad respiratoria aguda, lesión pulmonar aguda; ACI asociado a trasplante de órganos; hipertensión, etc.
Un ejemplo de una enfermedad que es particularmente susceptible de tratamiento mediante el uso de un péptido de la presente invención es la diabetes. En la diabetes, está alterada la producción de insulina, o respuesta del cuerpo a ella. En consecuencia, las células no pueden utilizar la glucosa en la sangre y los niveles de dicho azúcar se elevan. Los ratones se consideran diabéticos cuando su nivel de glucosa en sangre es superior a 250 mg/dl durante tres días consecutivos. En los seres humanos, un nivel de glucosa en sangre normal y promedio es de 60-110 mg/dl. Sin embargo, los diabéticos tienen niveles de glucosa en sangre de al menos 130 mg/dl, y generalmente mucho más altos. Por tanto, en el presente documento, se divulga un método para prevenir la diabetes en un individuo en riesgo de desarrollar diabetes, comprendiendo dicho método administrar al individuo un péptido de la presente invención. Dicho riesgo puede derivar de factores familiares (por ejemplo, herencia) o de otros factores, como el estado físico del individuo. Los métodos de evaluación de riesgos son conocidos entre las personas especializadas en la materia. En una realización, se administra el péptido en el momento en que el nivel de glucosa en sangre del individuo es de aproximadamente 60 mg/dl a aproximadamente 110 mg/dl. En una realización, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID<n>O: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10, siempre y cuando el péptido pueda regular negativamente la inflamación. En una realización, el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10.
Los autores de la invención han demostrado también que, sorprendentemente, el péptido de la presente invención puede utilizarse para revertir el proceso patológico en individuos que ya presentan signos de diabetes. Por lo tanto, en el presente documento, se divulga un método para revertir la diabetes que comprende administrar a un paciente diagnosticado con diabetes, un péptido de la presente invención. En una realización, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10, siempre y cuando el péptido puede regular negativamente la inflamación. En una realización, el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión “revertir la diabetes” significa reducir el nivel de glucosa en sangre de un individuo diabético a un nivel comparable al observado en un individuo no diabético. Como se ha señalado, el nivel de glucosa en sangre de un sujeto no diabético es de aproximadamente 60 mg/dl a aproximadamente 110 mg/dl. Por lo tanto, en el presente documento, se divulga un método para reducir el nivel de glucosa en sangre en un paciente diagnosticado con diabetes a menos de 110 mg/dl, y preferentemente entre 60 mg/dl y 110 mg/dl.
Tal como se ha descrito, los péptidos de la presente invención se unen selectivamente a una célula que expresa CD40. En consecuencia, los péptidos de la presente invención pueden utilizarse para identificar linfocitos Th40. Por lo tanto, una realización de la divulgación es un método para detectar Th40, comprendiendo dicho método poner en contacto una población de linfocitos T con un péptido de la presente invención. En una realización preferente, se marca el péptido con un marcador detectable, como, por ejemplo, luciferasa o fosfatasa alcalina. Dicha detección se puede realizar aplicando técnicas de ensayo conocidas entre las personas especializadas en la materia. En general, un ensayo para detectar linfocitos Th40 empleando un péptido de la presente invención comprende (a) obtener una muestra de células; (b) poner en contacto un péptido de la presente invención con dichas células en condiciones adecuadas para permitir la unión del péptido a los linfocitos Th40, si están presentes; (c) lavar dichas células empleando condiciones que interrumpen las interacciones no específicas, y que eliminan el péptido sin unir; y (d) detectar el péptido unido a las células. La detección del péptido unido se puede lograr directa o indirectamente. Por ejemplo, puede conseguirse una detección directa utilizando un péptido marcado con un marcador detectable, tal como se divulga en el presente documento. Después de la etapa de lavado indicada, se exploran las células simplemente en cuanto a la presencia de marcador detectable. La presencia de marcador detectable en la muestra de células indica la presencia de linfocitos Th40. Alternativamente, la detección indirecta implica el uso de una segunda molécula, como pueda ser un anticuerpo, que se une al péptido. En un ensayo de detección indirecta, tras la etapa de lavado indicada, se añade a la muestra de células una molécula de detección que se une al péptido. La molécula de detección está marcada con un marcador detectable. Después de lavar la molécula de detección no unida, se exploran las células en cuanto a la presencia de marcador detectable. La presencia de marcador detectable en la muestra de células indica la presencia de linfocitos Th40. Debe entenderse que los ensayos descritos en el presente documento sirven como ejemplos de ensayos útiles, pudiéndose emplear otras técnicas de ensayo. Las personas especializadas en la materia conocerán técnicas de ensayo adecuadas, y también se describen en, por ejemplo, Cloning Molecular: A Laboratory Manual, Sambrook, J., Fritsch, EF, y Maniatis, T, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2a Edición (diciembre de 1989).
La tecnología de ensayo descrita también puede emplearse para identificar otras moléculas que modifican la interacción entre una proteína CD40 con una proteína CD514. Entre los ejemplos de dichas moléculas se incluyen, pero sin limitarse a ellas, proteínas, péptidos y moléculas pequeñas. Por ejemplo, se pueden diseñar ensayos que determinen la capacidad de las moléculas para competir con un péptido de la presente invención por la unión a un linfocito Th40. Por ejemplo, se puede mezclar un péptido marcado con un marcador detectable con una molécula de ensayo y una población de células conocida por contener linfocitos Th40, en condiciones que permitan la unión del péptido con los linfocitos Th40. Tras un período de incubación apropiado, se lavan las células para eliminar el péptido sin unir y se exploran las células en cuanto a la presencia de un marcador detectable. Alternativamente, el péptido marcado podría unirse a linfocitos Th40 primero y, después de una etapa de lavado para eliminar el péptido sin unir, podría añadirse la molécula de ensayo a las células con contenido de péptido unido. Tras un período de incubación y una etapa de lavado para eliminar la molécula sin unir, o péptido liberado, se exploran las células en cuanto a la presencia de un marcador detectable. En cualquier caso, la ausencia del marcador detectable en la muestra de células indica que la molécula de ensayo puede competir con el péptido por la unión a los linfocitos Th40, mientras que la presencia del marcador detectable indicaría que la molécula de ensayo no inhibe la unión del péptido a Th40 células. La inhibición de la unión no tiene por qué ser del 100%, ya que dicho ensayo también sería útil para identificar moléculas que inhiben parcialmente la unión del péptido con los linfocitos Th40. Las personas especializadas en la materia entenderán que dichos ensayos implicarían el uso de controles positivos (p.ej., péptido sin marcar) y controles negativos (p.ej. proteína/molécula conocida por no unirse a linfocitos Th40).
Dado que los mayores niveles de linfocitos Th40 están asociados al desarrollo de enfermedad autoinmunitaria, las directrices divulgadas en el presente documento pueden servir para identificar pacientes en riesgo de desarrollar enfermedad autoinmunitaria. Por lo tanto, en el presente documento, se divulga un método para identificar a un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria. En una realización, se identifican los pacientes en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria obteniendo una muestra de un paciente para su análisis, poniendo en contacto la porción de linfocitos T de dicha muestra con un péptido de la presente invención y determinando el nivel de linfocitos Th40 presente en la muestra, en la que un nivel de linfocitos Th40 superior a aproximadamente 25 % de la población total de linfocitos T, indica que el paciente está en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria. En una realización, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQiD NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10, siempre y cuando el péptido se una a la proteína CD40. En una realización, el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ iD No: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. En una realización preferente, el péptido está marcado con un marcador detectable adecuado como, por ejemplo, luciferasa o fosfatasa alcalina.
Se divulgan también kits útiles para poner en práctica los métodos divulgados en el presente documento. Una realización es un kit para modular la inflamación en un animal o en células en cultivo, comprendiendo dicho kit un péptido que interactúa con una proteína CD40 de tal manera que modula la inflamación. En una realización, el péptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID<n>O: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10, siempre y cuando el péptido pueda regular negativamente la inflamación. En una realización, el péptido consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 y SEQ ID NO: 10. Otra realización es un kit para determinar el nivel de linfocitos Th40, comprendiendo dicho kit un péptido que interactúa con una proteína CD40 y medios para detectar el péptido unido a CD40. Los kits también pueden contener reactivos y componentes asociados, como, por ejemplo, pero sin limitarse a ellos, tampones, etiquetas, envases, inserciones, tubos, viales, jeringas y similares.
Los ejemplos que se exponen a continuación tienen un fin ilustrativo no pretendiéndose limitar el alcance de la presente invención.
Ejemplos
Ejemplo 1
En este ejemplo se demuestra el efecto de diversos fragmentos peptídicos de CD154 en las relaciones CD4/CD8 y el desarrollo de diabetes en ratones NOD.
Se diseñaron los péptidos basándose en la secuencia de aminoácidos de la proteína CD154 de ratón (SEQ ID NO: 1) de la base de datos SwissPro. Se realizó el pedido de los péptidos en New England Peptide. Se suspendieron los péptidos liofilizados en solución salina estéril a 1 mg/ml. A continuación, se inyectaron 100 |jg de un péptido en particular en la vena caudal de ratones NOD de 8-9 semanas de vida. Los ratones de control recibieron 100 ul de solución salina estéril. Esto es bastante antes del inicio de la diabetes, pero después de que haya comenzado el daño a los islotes pancreáticos. Tres días después de la inyección inicial, se inyectaron otros 100 ug de péptido (o 100 ul de solución salina en el caso de los ratones de control) en la vena caudal. Los ratones fueron inyectados con péptido (o solución salina) semanalmente. A las 10 semanas de vida, se llevó un seguimiento de los ratones en cuanto a la diabetes, según lo indicó un nivel de glucosa en sangre superior a 250 mg/dl durante tres días consecutivos. En la Figura 1 se presentan los resultados de este estudio. Durante este tiempo, también se extrajo sangre de la vena caudal, o mediante punción venal submandibular, y se determinó el nivel de células CD4+ y CD8+ por citometría de flujo utilizando anticuerpos para la proteína CD4 y la proteína CD8. Los resultados de este análisis se muestran en la Figura 2.
Los resultados demuestran que el tratamiento con un péptido no relacionado con la proteína CD154 no redujo el desarrollo de diabetes en ratones NOD. En cambios, el tratamiento de ratones con un péptido de 15 meros derivado de proteína CD154 evitó el inicio de la diabetes. Asimismo, tanto los péptidos de 6 meros como los de 10 meros derivados de proteína CD154, tuvieron efectos significativos sobre el desarrollo de la diabetes. Además, los datos demuestran que el péptido de 15 meros no comprometió el sistema inmunitario como resultado, según lo determinó la relación c D4/Cd8.
Ejemplo 2
En este ejemplo se demuestra el efecto del péptido de 15 meros sobre la hiperglucemia en ratones NOD recién diabéticos.
Por vía intravenosa se inyectaron 100 ug del péptido de 15 meros en seis ratones a los que se había administrado el péptido de 6 meros del Ejemplo 1 y que posteriormente desarrollaron diabetes. Después, se administró a estos ratones inyecciones semanales del péptido de 15 meros en la vena caudal y se controló el nivel de glucosa en sangre dos veces a la semana. Se administró el péptido de 15 meros durante un total de diez semanas y una vez transcurridas, se detuvo el tratamiento. En la Figura 3, se muestran los resultados de este estudio.
En este estudio se demuestra que la inyección del péptido de 15 meros en ratones ya diabéticos puede revertir la hiperglucemia. Asimismo se demuestra que el cese del tratamiento tiene como resultado una hiperglucemia en curso de 7 semanas.
Ejemplo 3
En este estudio se demuestra la capacidad del péptido de 15 meros de unirse a linfocitos Th40 y linfocitos B.
Se aisló el total de linfocitos de ratones NOD de 9 semanas de vida. Los linfocitos se incubaron con anti-CD, anti-CD8 y un péptido de 15 meros marcado con FITC y después se analizaron por citometría de flujo. Se sometieron a selección las células en cuanto a CD4 (se incluyeron las poblaciones de CD4hi y CD41o) y CD4 frente al péptido de 15 meros. Los resultados de este análisis se muestran en la Figura 4.
Se aislaron los linfocitos B de los bazos de ratones NOD. Se purificaron las células MHC-II+ clasificadas desde el total de linfocitos. Se tiñeron las células con el péptido de 15 meros marcado con FITC, anti-CD40, y marcadores de linfocitos B CD19 y CD21. Se sometieron a selección células MHC-II+ en cuanto a CD19+ y CD21 y después se midió el péptido de 15 meros frente al anticuerpo Cd40. Los resultados de este estudio se muestran en la Figura 5. En este estudio, se demuestra que una sustancial mayoría, el 90 % de los linfocitos T CD40+, también se unen al péptido de 15 meros, lo que demuestra que el péptido de 15 meros es muy específico para las células CD40+. Se demuestra asimismo que mientras el 90 % de los linfocitos B eran CD40 positivos, solo el 8 % de los linfocitos B se unieron al péptido de 15 meros.
Ejemplo 4
En este ejemplo se demuestra el nivel de células CD40 positivas en la sangre de sujetos diabéticos tipo I y sujetos no diabéticos (control).
Se obtuvo 1 ml de sangre completa de cada individuo y se incubó con péptido de 15 meros conjugado con biotina. A continuación, se expusieron las células a peroxidasa de rábano picante rusticano (HRP)- avidina, se lavaron y se determinó la absorbancia a 405 nm con un espectrofotómetro. Los resultados de este estudio se muestran en la Figura 6.
En este estudio se demuestra que glóbulos de pacientes que tienen diabetes tipo I, presentaron una mayor actividad de unión a péptidos de 15 meros que las células de controles no diabéticos.
Ejemplo 5
En este ejemplo se demuestra el nivel de granulación de insulina observado en el páncreas de ratones NOD tratados con el péptido de 15 meros o un péptido de ovoalbúmina.
Al inicio de la diabetes, se inyectaron a seis ratones NOD 100 μg/ml del péptido de 15 meros (SEQ ID NO: 9), lo que tuvo como resultado la reversión de la hiperglucemia en un 80 % de los receptores. Seis semanas después de la reversión de la hiperglucemia, se sacrificó a los ratones y se les extrajo el páncreas para su análisis. Se fijó el páncreas, se seccionó y después se tiñó usando una tinción de aldehído/fuschsina que permite la detección de gránulos de insulina. Se puntuó la granulación del tejido de la siguiente manera: 4 = completamente granulado; 3 = 75 % de islotes granulados; 2 = 50 % de islotes granulados y peri-insulitis; 1 = 25 % de islotes granulados; 0 = no se detectaron gránulos de insulina. En la Figura 7, se muestran los resultados de este análisis.
Este análisis demuestra que el péptido de 15 meros conservó gránulos de insulina en la mayoría de los ratones y se mejoró significativamente en ratones diabéticos con reversión mediante el péptido en comparación con ratones diabéticos que recibieron un péptido no pertinente.
Ejemplo 6
En este ejemplo se demuestra el efecto de las mutaciones en el péptido de 15 meros en su capacidad para prevenir el inicio de diabetes.
Se diseñaron y produjeron péptidos tal como se describe en el Ejemplo 1. Se produjeron variantes de péptidos de modo que en cada variante, una glicina estaba sustituida por un aminoácido correspondiente a un aminoácido en las posiciones 1-9 de SEQ ID NO: 9, como sigue:
Gly 1 G-L-Q-W-A-K-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 11)
Gly 2 V-G-Q-W-A-K-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 12)
Gly 3 V-L-G-W-A-K-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 13)
Gly 4 V-L-Q-G-A-K-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 14)
Gly-5 V-L-Q-W-G-K-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 15)
Gly-6 V-L-Q-W-A-G-K-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 16)
Gly-7 V-L-Q-W-A-K-G-G-Y-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 17)
Gly-9 V-L-Q-W-A-K-K-G-G-Y-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 18)
Gly-10 V-L-Q-W-A-K-K-G-Y-G-T-M-K-S-N (SEQ ID NO: 19)
Gly-11 V-L-Q-W-A-K-K-G-Y-Y-G-M-K-S-N (SEQ ID NO: 20)
Gly-12 V-L-Q-W-A-K-K-G-Y-Y-T-G-K-S-N (SEQ ID NO: 21)
Se colocaron los ratones NOD en grupos de 10 y se inyectó a los ratones de cada grupo IV, semanalmente, 50 μg de péptido de tipo silvestre (WT; leyenda) o uno de los péptido variantes (en PBD, pH 7,2) enumerados. Se llevó un seguimiento del desarrollo de la diabetes midiendo los niveles de glucosa en sangre semanalmente. Se consideró que los ratones eran "diabéticos" cuando la glucosa en sangre fue de 250 mg/dl o más en 2 lecturas consecutivas. Las inyecciones comenzaron a las 6 semanas de vida = pre-diabetes.
En este ejemplo se demuestra que la sustitución de una glicina en cualquiera de las posiciones 1-7 o 9-12 reduce la capacidad del péptido de 15 meros de inhibir el desarrollo de diabetes. También muestra que dichas mutaciones no eliminan por completo la capacidad del péptido de 15 meros mutado para inhibir el desarrollo de la diabetes.
Claims (21)
1. Un péptido que inhibe la interacción de la proteína CD40 con la proteína CD154 de tal manera que se inhibe de la activación de un linfocito T que expresa dicha proteína CD40, en donde dicho péptido se une a la proteína CD40 en el sitio de unión de CD154, en donde dicho péptido tiene una longitud menor de 25 aminoácidos y comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 9.
2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, que afecta a la interacción de CD40 con el ligando CD154/gp39/CD40 de tal manera que se modula la inflamación.
3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho péptido consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9.
4. El péptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde dicho péptido se une a CD40, opcionalmente en donde dicho péptido se une a una proteína CD40 con una Kd mayor de 106
5. El péptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde dicho péptido afecta a la interacción de CD40 y CD154; opcionalmente en donde dicho péptido inhibe la unión de CD40 a CD154; opcionalmente además, en donde dicho péptido se une a CD40 en el sitio donde CD40 interacciona con CD154.
6. El péptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde dicho péptido afecta a la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que impide la expansión y/o reduce el número de linfocitos Th40.
7. El péptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde dicho péptido afecta a la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que altera el perfil de expresión de citoquina de una población de células tratadas con dicho péptido.
8. El péptido de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde dicho péptido se obtiene de fuentes naturales o se sintetiza.
9. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria en un paciente.
10. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho péptido tiene una longitud de 6 a 24 aminoácidos y comprende una secuencia núcleo de SEQ ID NO: 4.
11. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho péptido inhibe la interacción de CD40 y CD154.
12. El péptido para uso según la reivindicación 9, en donde dicho péptido se une a una proteína CD40 para interferir con la interacción de un linfocito T portador de CD40 con una proteína CD154 de tal manera que se limita la activación del linfocito T portador de CD40.
13. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho péptido interacciona con la proteína CD40 de tal manera que inhibe el desarrollo de la inflamación en el sistema.
14. El péptido para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho péptido inhibe la interacción de CD40 con CD154 de tal manera que altera el perfil de expresión de citoquina de una población de células tratadas con dicho péptido.
15. Un métodoin vitropara inhibir la interacción entre una proteína CD40 y una proteína CD154, que comprende poner en contacto dicha proteína CD40 con el péptido de acuerdo con la reivindicación 1, inhibiendo así la interacción de dichas proteínas CD40 y CD154.
16. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en un método de inhibición o modulación de la inflamación en un paciente, comprendiendo el método poner en contacto una proteína CD40 en el paciente con el péptido de tal manera que se inhiba o module la inflamación.
17. El péptido de acuerdo con la reivindicación 2, para su uso en un método de:
modulación de la inflamación en un paciente, que comprende la administración del péptido al paciente; o tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria en un paciente que necesita dicho tratamiento, que comprende la administración del péptido al paciente; o
la reversión de la diabetes en un animal que comprende la administración del péptido al animal.
18. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en un método de reducción del número de linfocitos Th40 en un paciente.
19. Un métodoin vitropara detectar linfocitos T autoagresivos, comprendiendo dicho método poner en contacto una población de linfocitos T con el péptido de acuerdo con la reivindicación 1.
20. Un método para identificar a un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria, comprendiendo dicho método (a) poner en contacto la porción de linfocitos T de una muestra, que ha sido obtenida de un paciente, con un péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8; y (b) determinar el número de células que son CD40+ en la población de linfocitos T, en donde si el porcentaje de linfocitos T CD40+ en la población de linfocitos T es superior al 25%, dicho paciente está en riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmunitaria.
21. Un método para identificar un compuesto que inhiba la unión de una proteína CD40 a una proteína CD154, comprendiendo dicho método:
(a) poner en contacto el péptido de acuerdo con la reivindicación 8, con un linfocito Th40 y un compuesto de ensayo en condiciones que permitan la unión del péptido al linfocito Th40;
(b) lavar dichos linfocitos Th40 para eliminar el péptido no unido y la molécula no unida; y
(c) detectar la presencia de dicho péptido en dichos linfocitos Th40,
en donde la ausencia de dicho péptido de dichos linfocitos Th40 indica que dicho compuesto es capaz de inhibir la unión de una proteína CD40 de una proteína CD154.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US39469910P | 2010-10-19 | 2010-10-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2957957T3 true ES2957957T3 (es) | 2024-01-30 |
Family
ID=45975857
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES18162234T Active ES2957957T3 (es) | 2010-10-19 | 2011-10-19 | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos |
| ES11835055.2T Active ES2677844T3 (es) | 2010-10-19 | 2011-10-19 | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES11835055.2T Active ES2677844T3 (es) | 2010-10-19 | 2011-10-19 | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9562088B2 (es) |
| EP (3) | EP4265267A3 (es) |
| ES (2) | ES2957957T3 (es) |
| WO (1) | WO2012054584A2 (es) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190263888A1 (en) * | 2010-10-19 | 2019-08-29 | Op-T Llc | Therapeutic peptides and methods for treating autoimmune related disease |
| ES2957957T3 (es) | 2010-10-19 | 2024-01-30 | Op T Llc | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos |
| KR101416071B1 (ko) * | 2012-11-07 | 2014-07-08 | 서울대학교산학협력단 | 인공간섭 펩티드를 이용한 표적 전사인자 비활성화 방법 및 이의 용도 |
| EP3123176A4 (en) * | 2014-03-23 | 2018-04-25 | The Regents of the University of Colorado | Diagnosis of multiple sclerosis in human and animal subjects |
| WO2015154056A1 (en) * | 2014-04-04 | 2015-10-08 | Minnie Sarwal | Methods and compositions for the prediction and treatment of focal segmental glomerulosclerosis |
| WO2019094581A1 (en) | 2017-11-10 | 2019-05-16 | Op-T Llc | Methods for preventing, modulating and/or reducing cardiovascular disease |
| WO2019136307A1 (en) * | 2018-01-05 | 2019-07-11 | Op-T Llc | Therapeutic peptides and methods for treating autoimmune related disease |
| CA3090322A1 (en) | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Diabetes-Free, Inc. | Improved antagonistic anti-human cd40 monoclonal antibodies |
| WO2020102454A1 (en) | 2018-11-13 | 2020-05-22 | Regents Of The University Of Minnesota | Cd40 targeted peptides and uses thereof |
| US11793854B2 (en) * | 2019-03-21 | 2023-10-24 | Op-T Llc | Methods for reducing symptoms of multiple sclerosis using a six-amino acid long peptide that inhibits CD40-CD150 interaction |
| EP3996731A4 (en) * | 2019-07-12 | 2023-07-12 | Op-T Llc | PEPTIDES AND METHODS OF TREATING DISEASES |
| EP4135742A2 (en) | 2020-04-17 | 2023-02-22 | Op-T Llc | Bioactive peptides and methods of use thereof |
| US20220031632A1 (en) * | 2020-05-14 | 2022-02-03 | Op-T Llc | Nanoparticle compositions and uses thereof |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5962406A (en) * | 1991-10-25 | 1999-10-05 | Immunex Corporation | Recombinant soluble CD40 ligand polypeptide and pharmaceutical composition containing the same |
| AU6435898A (en) | 1997-02-21 | 1998-09-09 | Saigene Corporation | Compositions and methods for determining predisposition to insulin dependent diabetes mellitus |
| CA2223225A1 (en) * | 1997-11-28 | 1999-05-28 | Canadian Red Cross Society | Method for inhibiting in vivo immune response |
| CA2327504A1 (en) | 1998-04-29 | 1999-11-04 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | Cd40-interacting and traf-interacting proteins |
| EP1435979A4 (en) | 2001-09-18 | 2008-01-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | METHODS OF TREATING MULTIPLE SCLEROSIS |
| GB0128583D0 (en) | 2001-11-28 | 2002-01-23 | Rsr Ltd | Detection of autoantibodies indicative of diabetes |
| US7495090B2 (en) | 2002-05-23 | 2009-02-24 | The Regents Of The University Of California | Nucleic acids encoding chimeric CD154 polypeptides |
| FR2840307B1 (fr) * | 2002-05-30 | 2006-07-07 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles molecules multimeriques, leur procede de preparation, et leur utilisation pour la preparation de medicaments |
| CA2542984A1 (en) * | 2003-07-07 | 2005-01-27 | David H. Wagner | Methods for predicting development of auto-immune diseases and treatment of same |
| US7449200B2 (en) | 2006-04-17 | 2008-11-11 | Gp Medical, Inc. | Nanoparticles for protein/peptide delivery and delivery means |
| KR20080046135A (ko) | 2005-05-20 | 2008-05-26 | 제넨테크, 인크. | 자가면역 질환 대상체로부터의 생물학적 샘플의 예비처리 |
| EP2517727A3 (en) | 2005-09-29 | 2013-10-30 | Caprion Proteomics USA, LLC | Biomarkers for multiple sclerosis and methods of use thereof |
| EP1991693A4 (en) | 2006-02-07 | 2012-08-15 | Aegera Therapeutics Inc | METHOD FOR DIFFERENTIATION BETWEEN SUBTYPES OF MULTIPLE SCLEROSIS |
| WO2010011860A1 (en) | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Diabetomics, Llc | Methods for detecting pre-diabetes and diabetes |
| AU2009315230A1 (en) | 2008-11-12 | 2010-05-20 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Diagnosis of multiple sclerosis |
| CN103068399A (zh) | 2010-06-30 | 2013-04-24 | 卡姆普根有限公司 | 用于治疗多发性硬化、类风湿性关节炎以及其他自身免疫病症的c1orf32 |
| US20170232062A1 (en) | 2010-06-30 | 2017-08-17 | Compugen Ltd. | Polypeptides and uses thereof as a drug for treatment of multiple sclerosis, rheumatoid arthritis and other autoimmune disorders |
| ES2957957T3 (es) | 2010-10-19 | 2024-01-30 | Op T Llc | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos |
| US20190263888A1 (en) | 2010-10-19 | 2019-08-29 | Op-T Llc | Therapeutic peptides and methods for treating autoimmune related disease |
| DE102010042853A1 (de) | 2010-10-25 | 2012-04-26 | Robert Bosch Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Ansteuerung eines Injektors in einer Kraftstoffeinspritzanlage einer Brennkraftmaschine |
| CL2010001174A1 (es) | 2010-10-26 | 2011-03-11 | Univ Pontificia Catolica Chile | Uso de espironolactona, sus polimorfos, hidratos o solvatos para preparar un medicamento util para prevenir y/o tratar la esclerosis muiltiple. |
| NZ713461A (en) | 2011-04-15 | 2017-02-24 | Compugen Ltd | Polypeptides and polynucleotides, and uses thereof for treatment of immune related disorders and cancer |
| EP2707013B1 (en) | 2011-05-04 | 2019-03-20 | Cellular Technology, Ltd | Cns antigen-specific b cell, t cell and antibody assays and their uses in diagnosis and treatment of multiple sclerosis |
| CA2836855C (en) | 2011-06-30 | 2020-07-14 | Compugen Ltd. | Polypeptides and uses thereof for treatment of autoimmune disorders and infection |
| AU2014302082B2 (en) | 2013-06-28 | 2019-08-08 | Baylor Research Institute | Dendritic cell ASGPR targeting immunotherapeutics for multiple sclerosis |
| EP3123176A4 (en) | 2014-03-23 | 2018-04-25 | The Regents of the University of Colorado | Diagnosis of multiple sclerosis in human and animal subjects |
| WO2016040571A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of treating autoimmune disease using a domain antibody directed against cd40l |
| KR101810778B1 (ko) | 2015-06-23 | 2017-12-20 | 서울대학교산학협력단 | Cd154 결합 폴리펩타이드 및 그 용도 |
| WO2019136307A1 (en) | 2018-01-05 | 2019-07-11 | Op-T Llc | Therapeutic peptides and methods for treating autoimmune related disease |
| US20200072837A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-03-05 | Op-T Llc | Methods for preventing, modulating and/or reducing cardiovascular disease |
| US11793854B2 (en) | 2019-03-21 | 2023-10-24 | Op-T Llc | Methods for reducing symptoms of multiple sclerosis using a six-amino acid long peptide that inhibits CD40-CD150 interaction |
| WO2020210726A1 (en) | 2019-04-12 | 2020-10-15 | Op-T Llc | Diagnosis and treatment of autoimmune diseases |
| EP3996731A4 (en) | 2019-07-12 | 2023-07-12 | Op-T Llc | PEPTIDES AND METHODS OF TREATING DISEASES |
-
2011
- 2011-10-19 ES ES18162234T patent/ES2957957T3/es active Active
- 2011-10-19 ES ES11835055.2T patent/ES2677844T3/es active Active
- 2011-10-19 EP EP23181309.8A patent/EP4265267A3/en active Pending
- 2011-10-19 EP EP11835055.2A patent/EP2629797B1/en active Active
- 2011-10-19 EP EP18162234.1A patent/EP3421487B1/en active Active
- 2011-10-19 US US13/880,387 patent/US9562088B2/en active Active
- 2011-10-19 WO PCT/US2011/056860 patent/WO2012054584A2/en active Application Filing
-
2017
- 2017-02-03 US US15/423,822 patent/US11130795B2/en active Active
-
2021
- 2021-08-12 US US17/400,880 patent/US20220106381A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3421487A3 (en) | 2019-03-27 |
| US9562088B2 (en) | 2017-02-07 |
| US20170355747A1 (en) | 2017-12-14 |
| US11130795B2 (en) | 2021-09-28 |
| EP2629797A4 (en) | 2014-04-30 |
| WO2012054584A2 (en) | 2012-04-26 |
| ES2677844T3 (es) | 2018-08-07 |
| US20220106381A1 (en) | 2022-04-07 |
| EP3421487A2 (en) | 2019-01-02 |
| EP2629797A2 (en) | 2013-08-28 |
| WO2012054584A3 (en) | 2012-08-02 |
| EP4265267A3 (en) | 2024-01-17 |
| US20130236495A1 (en) | 2013-09-12 |
| EP4265267A2 (en) | 2023-10-25 |
| EP3421487B1 (en) | 2023-06-28 |
| EP2629797B1 (en) | 2018-05-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2957957T3 (es) | Péptidos para modular la actividad de linfocitos T y usos de los mismos | |
| US20240374686A1 (en) | Peptides and methods for treating diseases | |
| ES2983571T3 (es) | Terapias dirigidas a CD47 para el tratamiento de enfermedades infecciosas | |
| US5556754A (en) | Methods for assessing the ability of a candidate drug to suppress MHC class I expression | |
| JP7511242B2 (ja) | 自己免疫関連疾患を治療するための治療用ペプチドおよび方法 | |
| JP2019112404A (ja) | 癌モデル及び関連方法 | |
| US20210332104A1 (en) | Therapeutic peptides and methods for treating autoimmune related disease | |
| US20240115651A1 (en) | Peptides for treating disease and reducing symptoms related to multiple sclerosis | |
| US20180318386A1 (en) | Peptides and methods of treating endometriosis using the same | |
| US20200072837A1 (en) | Methods for preventing, modulating and/or reducing cardiovascular disease | |
| US20190194290A1 (en) | Methods for preventing, modulating and/or reducing cardiovascular disease | |
| US20230016187A1 (en) | Trem-1 inhibitors for the treatment of vaso-occlusions and tissue injuries in patients suffering from sickle cell disease | |
| US12226450B2 (en) | Peptides and methods for treating disease | |
| EP3706799A1 (en) | Methods for preventing, modulating and/or reducing cardiovascular disease | |
| AU2006247631A1 (en) | Treatment of inflammatory bowel disease (IBD) with anti-angiogenic compounds | |
| Zhang et al. | Vam6 upregulated by lactic acid inhibits anti-tumor effects of intratumoral iNKT cells via modulating AMPK/mTOR pathways | |
| Nandedkar | Autoantigens and Insulin Receptor in Type 1 Diabetes |