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ES2882186T3 - Inhibidores de JAK que contienen una amida heterocíclica de 4 miembros - Google Patents

Inhibidores de JAK que contienen una amida heterocíclica de 4 miembros Download PDF

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ES2882186T3
ES2882186T3 ES18711796T ES18711796T ES2882186T3 ES 2882186 T3 ES2882186 T3 ES 2882186T3 ES 18711796 T ES18711796 T ES 18711796T ES 18711796 T ES18711796 T ES 18711796T ES 2882186 T3 ES2882186 T3 ES 2882186T3
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ES
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compound
pharmaceutically acceptable
ethyl
lung
compounds
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Active
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ES18711796T
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English (en)
Inventor
Paul R Fatheree
Gary E L Brandt
Cameron Smith
Steven D E Sullivan
Orden Lori Jean Van
Melanie A Kleinschek
Glenn D Crater
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Theravance Biopharma R&D IP LLC
Original Assignee
Theravance Biopharma R&D IP LLC
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** en donde: R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6, y X es -C(O)R2 en donde R2 es -NR13R14, en donde R13 y R14 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 4 miembros, en donde el heterociclilo está opcionalmente sustituido con -NR5R6 y R7, R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 5 o 6 miembros que incluye opcionalmente un átomo de oxígeno, R7 es alquilo C1-3, opcionalmente sustituido con un heterociclilo de 5 o 6 miembros que contiene un átomo de nitrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de JAK que contienen una amida heterocíclica de 4 miembros
Antecedentes de la invención
Campo de la invención
La invención se refiere a compuestos útiles como inhibidores de cinasas JAK. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, a métodos de uso de dichos compuestos para tratar enfermedades respiratorias y a procesos e intermedios útiles para preparar dichos compuestos.
Estado de la técnica
El asma es una enfermedad crónica de las vías respiratorias para la que no hay prevención ni cura. La enfermedad se caracteriza por inflamación, fibrosis, hiperreactividad y remodelación de las vías respiratorias, todo lo cual contribuye a la limitación del flujo de aire. Se calcula que 300 millones de personas en todo el mundo padecen asma y se estima que el número de personas con asma aumentará en más de 100 millones para 2025. En los Estados Unidos, el asma afecta aproximadamente al 6 % al 8 % de la población, convirtiéndola en una de las enfermedades crónicas más comunes del país. Aunque la mayoría de los pacientes pueden conseguir controlar los síntomas del asma con el uso de corticoesteroides inhalados que pueden combinarse con un modificador de leucotrienos y/o un agonista beta de acción prolongada, sigue existiendo un subconjunto de pacientes con asma grave cuya enfermedad no se controla mediante terapias convencionales. El asma persistente grave se define como la enfermedad que permanece incontrolada con dosis elevadas de corticoides inhalados. Se calcula que los asmáticos graves representan aproximadamente el 5 % de todos los enfermos de asma, tienen un riesgo alto de morbilidad y mortalidad y son responsables de una parte desproporcionada de la utilización de recursos sanitarios entre los asmáticos. Sigue existiendo la necesidad de encontrar terapias novedosas para tratar a estos pacientes.
Las citocinas son moléculas de señalización intercelular que incluyen quimiocinas, interferones, interleucinas, linfocinas y factor de necrosis tumoral. Las citocinas son fundamentales para el crecimiento celular normal y la inmunorregulación, pero también impulsan enfermedades inmunomediadas y contribuyen al crecimiento de células malignas. Se ha implicado a los niveles elevados de muchas citocinas en la patología de la inflamación por asma. Por ejemplo, las terapias basadas en anticuerpos dirigidos a las interleucinas (IL) 5 y 13 han demostrado proporcionar beneficios clínicos en subconjuntos de pacientes con asma grave. Entre las citocinas implicadas en la inflamación por asma, muchas actúan a través de vías de señalización dependientes de la familia Janus de tirosina cinasas (JAK), que señalizan a través de la familia Transductor de Señales y Activador de Transcripción (STAT) de factores de transcripción. Las citocinas implicadas en la inflamación por asma que señalizan a través de la vía JAK-STAT incluyen IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-13, IL-23, IL-31, IL-27, linfopoyetina del estroma tímico (TSLP), interferón-y (IFNy) y factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF).
La familia JAK comprende cuatro miembros, JAK1, JAK2, JAK3 y tirosina cinasa 2 (TYK2). La unión de una citocina un receptor de citocinas dependiente de JAK induce la dimerización del receptor que da como resultado la fosforilación de los restos de tirosina en la cinasa JAK, efectuando la activación de JAK. Las JAK fosforiladas, a su vez, se unen a diversas proteínas STAT y las fosforilan, estas proteínas se dimerizan, se internalizan en el núcleo celular y modulan directamente la transcripción génica, conduciendo, entre otros efectos, a los efectos corriente abajo asociados a las enfermedades inflamatorias. Las JAK por lo general se asocian a receptores de citocinas en pares como homodímeros o heterodímeros. Se asocian citocinas específicas a emparejamientos JAK específicos. Cada uno de los cuatro miembros de la familia JAK está implicado en la señalización de al menos una de las citocinas asociadas a la inflamación por asma. Por consiguiente, un inhibidor químico con panactividad contra todos los miembros de la familia JAK podría modular una amplia gama de vías proinflamatorias que contribuyen al asma grave.
Sin embargo, el amplio efecto antiinflamatorio de dichos inhibidores podría suprimir la función normal de las células inmunitarias, conduciendo potencialmente a un mayor riesgo de infección. Se ha observado evidencia de un mayor riesgo de infección con el inhibidor de JAK tofacitinib, que se administra por vía oral para el tratamiento de la artritis reumatoide. En el asma, la inflamación se localiza en las vías respiratorias. La inflamación de las vías respiratorias es característica de otras enfermedades respiratorias además del asma. La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis quística (FQ), la neumonitis, las enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), la lesión pulmonar aguda, el síndrome de dificultad respiratoria aguda, la bronquitis, el enfisema, la bronquiolitis obliterante y la sarcoidosis son también enfermedades del tracto respiratorio en las que se cree que la fisiopatología está relacionada con las citocinas de señalización JAK. La administración local de un inhibidor de JAK en los pulmones por inhalación ofrece el potencial de ser terapéuticamente eficaz mediante la entrega de un potente agente anticitocinas directamente en el sitio de acción, limitando la exposición sistémica y, por tanto, limitando el potencial de inmunosupresión sistémica adversa. Sigue existiendo la necesidad de un potente inhibidor de JAK adecuado para la administración local en los pulmones para el tratamiento de enfermedades respiratorias.
Las citocinas de señalización de JAK también desempeñan una función importante en la activación de linfocitos T, un subtipo de células inmunitarias que es fundamental para muchos procesos inmunitarios. La activación patológica de linfocitos T es fundamental en la etiología de múltiples enfermedades respiratorias. Los linfocitos T autorreactivos desempeñan una función en la neumonía organizativa por bronquiolitis obliterante (también denominada SOC). Al igual que en el caso del SOC, la etiología de los rechazos de trasplantes de pulmón está relacionada con una activación aberrante de los linfocitos T del receptor por el pulmón del donante trasplantado. Los rechazos de trasplantes de pulmón pueden producirse de forma temprana como la Disfunción Primaria del Injerto (DPI), la neumonía organizativa (NO), el rechazo agudo (RA) o la bronquiolitis linfocítica (BL), o pueden aparecer años después del trasplante de pulmón como la Disfunción Crónica del Aloinjerto Pulmonar (DCAP). La DCAP se conocía anteriormente como bronquiolitis obliterante (BO), pero ahora se considera un síndrome que puede tener diferentes manifestaciones patológicas, incluyendo la BO, la DCAP restrictiva (DCAPr o SAR) y la disfunción neutrofílica del aloinjerto. La disfunción crónica del aloinjerto pulmonar (DCAP) es un reto importante en el tratamiento a largo plazo de los receptores de trasplantes de pulmón, ya que provoca que el pulmón trasplantado pierda progresivamente su funcionalidad (Gauthier et al., Curr Transplant Rep., 2016, 3(3), 185-191). La DCAP responde mal al tratamiento y, por tanto, sigue existiendo la necesidad de encontrar compuestos eficaces capaces de prevenir o tratar esta enfermedad. Varias citocinas dependientes de JAK, tales como IFNy e IL-5, se regulan positivamente en la DCAP y el rechazo de trasplante de pulmón (Berastegui et al., Clin Transplant. 2017, 31, e12898). Además, niveles elevados de quimiocinas CXCR3 en los pulmones, tales como CXCL9 y CXCL10, que se encuentran corriente abajo en la señalización de IFN dependiente de JAK, están relacionados con resultados peores en pacientes de trasplante de pulmón (Shino et al., PLOS One, 2017, 12 (7), e0180281). La inhibición sistémica de Ja K ha demostrado ser eficaz en el rechazo de trasplante de riñón (Vicenti et al., American Journal of Transplantation, 2012, 12, 2446-56). Por tanto, los inhibidores de JAK tienen el potencial de ser eficaces en el tratamiento o la prevención del rechazo de trasplante de pulmón y de la DCAP. Eventos de activación de linfocitos T similares a los descritos como base del rechazo de trasplante de pulmón también se consideran el principal impulsor de la enfermedad de injerto contra hospedador (EICH) pulmonar que puede producirse después de los trasplantes de células madre hematopoyéticas. Análogamente al DCAP, la EICh pulmonar es una afección crónica y progresiva con resultados extremadamente malos y no hay tratamientos aprobados actualmente. Un estudio de sondeo multicéntrico retrospectivo de 95 pacientes con EICH aguda o crónica refractaria a esteroides que recibieron el inhibidor sistémico de JAK ruxolitinib como terapia de rescate demostró una respuesta completa o parcial a ruxolitinib en la mayoría de los pacientes, incluyendo aquellos con EICH pulmonar (Zeiser et al., Leukemia, 2015, 29, 10, 2062-68). Dado que la inhibición sistémica de la JAK se asocia a efectos adversos graves y a un índice terapéutico reducido, sigue existiendo la necesidad de un inhibidor de JAK no sistémico e inhalado dirigido al pulmón para prevenir y/o tratar el rechazo de trasplante de pulmón o la EICH pulmonar.
La solicitud internacional de patente WO 2013/014567 desvela derivados de 6-fenil-1H-indazol como inhibidores de la cinasa Janus (JAK) y Peter Jones et al (2017) desvela el diseño y la síntesis del inhibidor de la cinasa Janus, PF-06263276 (J. Med. Chem 60(2), 767-786).
Sumario de la invención
En un aspecto, la invención proporciona compuestos novedosos que tienen actividad como inhibidores de las cinasas JAK.
En consecuencia, la invención proporciona un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
en donde:
R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6, y X es -C(O)R2
en donde
R2 es -NR13R14, en donde
R13 y R14 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 4 miembros, en donde el heterociclilo está opcionalmente sustituido con -NR5R6 y R7,
R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 5 o 6 miembros que incluye opcionalmente un átomo de oxígeno,
R7 es alquilo C1-3, opcionalmente sustituido con un heterociclilo de 5 o 6 miembros que contiene un átomo de nitrógeno,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Como se usa en lo sucesivo en el presente documento, la expresión "compuesto de fórmula (I)" significa un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; es decir, esta expresión significa un compuesto de fórmula (I) en forma de base libre o en forma de una sal farmacéuticamente aceptable a menos que se indique lo contrario.
La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La invención también proporciona un método para tratar enfermedades respiratorias, en particular, asma, en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o de una composición farmacéutica de la invención. En aspectos separados y distintos, la invención también proporciona procesos de síntesis e intermedios que se describen en el presente documento, que son útiles para preparar compuestos de la invención.
La invención también proporciona un compuesto de la invención como se describe en el presente documento para su uso en terapia médica, así como el uso de un compuesto de la invención en la fabricación de una formulación o medicamento para tratar enfermedades respiratorias en un mamífero.
Descripción detallada de la invención
Entre otros aspectos, la invención proporciona inhibidores de cinasas JAK de fórmula (I), sales farmacéuticamente aceptables de los mismos e intermedios para la preparación de los mismos. Los siguientes sustituyentes y valores tienen por objeto proporcionar ejemplos representativos de diversos aspectos de la presente invención. Estos valores representativos tienen por objeto definir adicionalmente dichos aspectos y no tienen por objeto excluir otros valores o limitar el alcance de la invención.
En un aspecto específico, R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6.
En otro aspecto específico, R1 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-3. En otro aspecto específico más, R1 es alquilo C1-3.
Los valores específicos de R1 incluyen, pero sin limitación, metilo, etilo, n-propilo e isopropilo.
En un aspecto específico, R1 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-3 y X es -C(O)R2 en donde R2 es
Figure imgf000004_0001
en donde R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados juntos forman -(CH2)4-5- y R7 es hidrógeno o alquilo C1-3.
En otro aspecto específico, R1 se selecciona entre hidrógeno y alquilo C1-3 y X es -C(O)R2 en donde R2 es
Figure imgf000004_0002
en donde R5 y R6 son ambos metilo o R5 y R6 tomados juntos forman -(CH2)s-; y R7 es hidrógeno o metilo.
En otro aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000005_0001
en donde:
R1 es alquilo C1-3;
R2 es
Figure imgf000005_0002
en donde
R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados juntos forman -(CH2)4-5-, R7 es hidrógeno o alquilo C1-3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto específico, R1 es alquilo C1-3; R2 es
Figure imgf000005_0003
en donde
R5 y R6 son ambos metilo o R5 y R6 tomados juntos forman -(CH2)5-, y R7 es hidrógeno o metilo.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto seleccionado entre los siguientes compuestos:
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
(S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto seleccionado entre los siguientes compuestos:
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona y
(S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona.
En otro aspecto más, la invención proporciona (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona de fórmula
Figure imgf000006_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto de fórmula
Figure imgf000006_0002
En un aspecto, la invención proporciona los compuestos de los Ejemplos 2, 4, 8 y la Tabla 1 a continuación.
Las estructuras químicas se nombran en el presente documento de acuerdo con las convenciones de la IUPAC implementadas en el software ChemDraw (PerkinElmer, Inc., Cambridge, MA). Por ejemplo, el compuesto:
Figure imgf000006_0003
se designa como (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona.
Además, la porción imidazo del resto tetrahidroimidazopiridina en la estructura de fórmula (I) existe en formas tautoméricas, ilustradas a continuación para un fragmento del compuesto del Ejemplo 1
Figure imgf000006_0004
De acuerdo con la convención de la IUPAC, estas representaciones dan lugar a una numeración diferente de los átomos de la porción imidazol: 2-(1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-lH-imidazo[4,5-c]piridina (estructura A) frente a 2-(1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina (estructura B). Se comprenderá que aunque las estructuras se muestran o nombran, en una forma particular, la invención también incluye el tautómero de las mismas.
Los compuestos de la invención pueden contener uno o más centros quirales y, por tanto, dichos compuestos (e intermedios de los mismos) pueden existir en forma de mezclas racémicas; estereoisómeros puros (es decir, enantiómeros o diastereómeros); mezclas enriquecidas en estereoisómeros y similares. Los compuestos quirales que se muestran o se nombran en el presente documento sin una estereoquímica definida en un centro quiral tienen por objeto incluir cualquiera o todas las posibles variaciones de estereoisómeros en el estereocentro sin definir a menos que se indique lo contrario. La representación o nombramiento de un estereoisómero particular significa que el estereocentro indicado tiene la estereoquímica designada con la comprensión de que también puede haber presentes cantidades menores de otros estereoisómeros a menos que se indique lo contrario, a condición de que la utilidad del compuesto representado o nombrado no se elimine por la presencia de otro estereoisómero.
Los compuestos de fórmula (I) también contienen varios grupos básicos (por ejemplo, grupos amino) y, por tanto, dichos compuestos pueden existir en forma de la base libre o en diversas formas de sal, tal como una forma de sal monoprotonada, una forma de sal diprotonada, una forma de sal triprotonada o mezclas de las mismas. Todas estas formas se incluyen dentro del alcance de la presente invención, a menos que se indique lo contrario.
La presente invención también incluye compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente, es decir, compuestos de fórmula (I) donde se ha reemplazado uno o más átomos o se ha enriquecido con un átomo que tiene el mismo número atómico pero una masa atómica diferente de la masa atómica que predomina en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en un compuesto de fórmula (I) incluyen, pero sin limitación, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O y 18O. Son de particular interés compuestos de fórmula (I) enriquecidos en tritio o carbono-14, compuestos que pueden usarse, por ejemplo, en estudios de distribución de tejidos. También son de particular interés compuestos de fórmula (I) enriquecidos en deuterio, especialmente en un sitio de metabolismo, cuyos compuestos se espera que tengan una mayor estabilidad metabólica. Adicionalmente son de particular interés compuestos de fórmula (I) enriquecidos en un isótopo emisor de positrones, tales como 11C, 15O y 13N, compuestos que pueden usarse, por ejemplo, en estudios de Tomografía por Emisión de Positrones (TEP).
Definiciones
Cuando se describe la presente invención incluyendo sus diversos aspectos y realizaciones, los siguientes términos y expresiones tienen los siguientes significados, a menos que se indique lo contrario.
El término "alquilo" significa un grupo hidrocarbonado saturado monovalente que puede ser lineal o ramificado o combinaciones del mismo. A menos que se defina lo contrario, dichos grupos alquilo contienen normalmente de 1 a 10 átomos de carbono. Los grupos alquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, metilo (Me), etilo (Et), npropilo (n-Pr) o (nPr), isopropilo (i-Pr) o (iPr), n-butilo (n-Bu) o (nBu), sec-butilo, isobutilo, tere-butilo (t-Bu) o (tBu), npentilo, n-hexilo, 2,2-dimetilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2-etilbutilo, 2,2-dimetilpentilo, 2-propilpentilo y similares.
Cuando se prevé un número específico de átomos de carbono para un término particular, el número de átomos de carbono se muestra precediendo al término. Por ejemplo, la expresión "alquilo C1-3" significa un grupo alquilo que tiene de 1 a 3 átomos de carbono en donde los átomos de carbono están en cualquier configuración químicamente aceptable, incluyendo configuraciones lineales o ramificadas.
El término "cicloalquilo" significa un grupo carbocíclico saturado monovalente que puede ser monocíclico o multicíclico. A menos que se defina lo contrario, dichos grupos cicloalquilo normalmente contienen de 3 a 10 átomos de carbono. Los grupos cicloalquilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, ciclopropilo (cPr), ciclobutilo (cBu), ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, adamantilo y similares.
El término "heterociclilo", "heterociclo", "heterocíclico" o "anillo heterocíclico" significa un grupo no aromático cíclico monovalente saturado o parcialmente insaturado, que tiene de 3 a 10 átomos totales en el anillo, en donde el anillo contiene de 2 a 9 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos en el anillo seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterocíclicos pueden ser monocíclicos o multicíclicos (es decir, condensados o unidos). Los grupos heterociclilo representativos incluyen, a modo de ejemplo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, imidazolidinilo, morfolinilo, tiomorfolilo, indolin-3-ilo, 2-imidazolinilo, tetrahidropiranilo, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-2-ilo, quinuclidinilo, 7-azanorbornanilo, nortropanilo y similares, donde el punto de unión está en cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible en el anillo. Cuando el contexto hace evidente el punto de unión del grupo heterocíclico, dichos grupos pueden denominarse como alternativa especies no valentes, es decir, pirrolidina, piperidina, piperazina, imidazol, tetrahidropirano, etc.
El término "halo" significa fluoro, cloro, bromo o yodo.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento cuando se administra a un paciente que necesite tratamiento.
El término "tratar" o "tratamiento" significa prevenir, mejorar o suprimir la afección médica, enfermedad o trastorno que se está tratando (por ejemplo, una enfermedad respiratoria) en un paciente (en particular un ser humano); o aliviar los síntomas de la afección médica, enfermedad o trastorno.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal que es aceptable para la administración a un paciente o un mamífero, tal como un ser humano (por ejemplo, sales que tienen una seguridad aceptable en mamíferos para una pauta de dosificación dada). Las sales farmacéuticamente aceptables representativas incluyen las sales de los ácidos acético, ascórbico, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, etanosulfónico, edisílico, fumárico, gentísico, glucónico, glucurónico, glutámico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónicos, láctico, lactobiónico, maleico, málico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, naftaleno-1,5-disulfónico, naftaleno-2,6-disulfónico, nicotínico, nítrico, orótico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, ptoluenosulfónico y xinafoico, y similares.
La expresión "sal del mismo" significa un compuesto formado cuando el hidrógeno de un ácido se reemplaza por un catión, tal como un catión metálico o un catión orgánico y similares. Por ejemplo, el catión puede ser una forma protonada de un compuesto de fórmula (I), es decir, una forma en la que uno o más grupos amino han sido protonados por un ácido. Normalmente, la sal es una sal farmacéuticamente aceptable, aunque esto no es necesario para sales de compuestos intermedios que no están destinadas a la administración al paciente.
La expresión "grupo protector de amino" significa un grupo protector adecuado para prevenir reacciones no deseadas en un nitrógeno de amino. Los grupos protectores de amino representativos incluyen, pero sin limitación, formilo; grupos acilo, por ejemplo, grupos alcanoílo, tales como acetilo y tri-fluoroacetilo; grupos alcoxicarbonilo, tales como ferc-butoxicarbonilo (Boc); grupos arilmetoxicarbonilo, tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc); grupos arilmetilo, tales como bencilo (Bn), tritilo (Tr) y 1,1-di-(4'-metoxifenil)metilo; grupos sililo, tales como trimetilsililo (TMS), ferc-butildimetilsililo (TBDMS), [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM); y similares.
La expresión "grupo protector de hidroxi" significa un grupo protector adecuado para evitar reacciones no deseadas en un grupo hidroxi. Los grupos protectores de hidroxi representativos incluyen, pero sin limitación, grupos alquilo, tales como metilo, etilo y ferc-butilo; grupos acilo, por ejemplo, grupos alcanoílo, tales como acetilo; grupos arilmetilo, tales como bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) y difenilmetilo (benzhidrilo, DPM); grupos sililo, tales como trimetilsililo (TMS) y ferc-butildimetilsililo (TBS); y similares.
Se describen numerosos grupos protectores y su introducción y retirada, en T. W. Greene y P.G.M. Wuts, Profecfing Groups in Organic Synfhesis, Tercera Edición, Wiley, Nueva York General Synfhefic Procedures
Los compuestos de la presente invención, e intermedios de los mismos, pueden prepararse de acuerdo con los siguientes métodos y procedimientos generales que usan materiales de partida y reactivos disponibles en el mercado o preparados habitualmente. Los sustituyentes y variables (por ejemplo, R1, R2, etc.) utilizados en los siguientes esquemas tienen los mismos significados que los que se definen en otra parte del presente documento, a menos que se indique lo contrario. Adicionalmente, los compuestos que tienen un átomo ácido o básico o un grupo funcional pueden usarse o pueden producirse en forma de una sal a menos que se indique lo contrario (en algunos casos, el uso de una sal en una reacción particular requerirá la conversión de la sal en una forma no de sal, por ejemplo, una base libre, usando procedimientos habituales antes de realizar la reacción).
Aunque puede mostrarse o describirse una realización particular de la presente invención en los siguientes procedimientos, los expertos en la materia reconocerán que también pueden prepararse otras realizaciones o aspectos de la presente invención usando dichos procedimientos o mediante el uso de otros métodos, reactivos y materiales de partida conocidos por los expertos en la materia. En particular, se apreciará que los compuestos de la invención pueden prepararse mediante una diversidad de vías de proceso en las que los reactivos se combinan en diferentes órdenes para proporcionar diferentes intermedios en la vía para producir productos finales.
Un método general de preparación de compuestos finales de la invención en el que la variable X se define como -C(O)R2 y R1 es alquilo C1-3 utiliza un intermedio clave 1 y una amina de fórmula 2 como se ilustra en general en el Esquema 1 y, en particular, para un ejemplo en el que R2 se define como
para ejemplificar específicamente un producto final de amida representativo de fórmula (II).
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Para preparar compuestos de amida de fórmula (II), el ácido carboxílico de fórmula 1 se hace reaccionar con la amina 2 de acuerdo con las condiciones típicas de formación de enlaces amida. Normalmente, el ácido carboxílico 1 se pone en contacto con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 4 equivalentes de amina 2 en presencia de un exceso de base. Como se muestra en los ejemplos a continuación, la reacción de formación de enlaces amida puede utilizar agentes de acoplamiento, tales como hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazoM-il)uronio (HATU) u otros agentes de acoplamiento de amidas conocidos en la técnica. La reacción se realiza normalmente a temperatura ambiente durante entre aproximadamente 2 y aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se complete sustancialmente.
El ácido carboxílico de fórmula 1 puede prepararse como se ilustra en el Esquema 2
Figure imgf000010_0001
donde Gp1 representa un grupo protector de hidroxi y Gp2, Gp3 y Gp4 representan grupos protectores de amino diferentes. Como se describe en los ejemplos a continuación, una elección útil de grupos protectores es bencilo o metilo como Gp1, tetrahidropiranilo (THP) como Gp2, ferc-butoxicarbonilo (Boc) o bencilo como Gp3 y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM) como Gp4. La primera etapa del Esquema 2 es el acoplamiento de Stille catalizado por paladio del intermedio 3 con el intermedio 4 donde el intermedio de fenil-indazol 3 tiene el resto trimetilestanilo y el compañero de reacción 4 está sustituido con yodo. La reacción se realiza normalmente a temperatura elevada, por ejemplo, a entre aproximadamente 80 °C y aproximadamente 180 °C durante entre aproximadamente 10 y aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se complete sustancialmente.
Cuando se usa bencilo como Gp1, en la siguiente etapa, el éster metílico del intermedio 5 se convierte en un éster bencílico en el intermedio 6 por reacción de 5 con alcohol bencílico. Ambos grupos protectores bencilo se retiran convenientemente por hidrogenación catalizada por paladio para proporcionar el intermedio 7 que puede desprotegerse totalmente por reacción con ácido, normalmente ácido clorhídrico. En una última etapa, el sustituyente R1 se añade por alquilación reductora del intermedio 8 con un reactivo R1a donde R1a es un aldehído o una cetona definidos de manera que tras la reducción, se produce R1. Por ejemplo, para añadir un sustituyente metilo R1, se usa formaldehído como reactivo R1a, para añadir un resto isopropilo como sustituyente R1, se usa acetona como reactivo R1a. La reacción normalmente se realiza en presencia de un agente reductor tal como cianoborohidruro de sodio o triacetoxiborohidruro de sodio o similares a temperatura ambiente durante un período de aproximadamente 10 a aproximadamente 24 horas o hasta que la reacción se complete sustancialmente.
Los intermedios 3 y 4 pueden prepararse a partir de materiales de partida comerciales o de preparación fácil, como se describe en detalle a continuación. En particular, un proceso para preparar el intermedio 3 en el que Gp1 es bencilo y Gp2 es THP usa el acoplamiento de Suzuki-Miyaura del compuesto 9 con el compuesto 10 seguido de reacciones convencionales para añadir el grupo trimetilestanilo.
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El intermedio 4 puede prepararse a partir del compuesto 11, que está disponible en el mercado en formas racémicas y estereoespecíficas y también puede prepararse a partir de histidina.
En consecuencia, en un aspecto del método, la invención proporciona un proceso de preparación de un compuesto de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el proceso hacer reaccionar un compuesto de fórmula 1 con un compuesto de fórmula 2, como se ilustra en el Esquema 1 para proporcionar un compuesto de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto adicional del método, la invención proporciona un proceso de preparación de un compuesto de fórmula 1, comprendiendo el proceso hacer reaccionar un compuesto de fórmula 8 con R1a en presencia de un agente reductor, en donde R1a es un aldehído o una cetona definidos de manera que tras la alquilación reductora el sustituyente R1, en donde R1 es alquilo C1-3, se une al compuesto de fórmula 8 para proporcionar el compuesto de fórmula 1.
En un aspecto del método adicional, la invención proporciona un proceso de preparación de un compuesto de fórmula 8, comprendiendo el proceso desproteger un compuesto de fórmula 7.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto de fórmula 1 y compuestos de fórmula 7 y 8, útiles para preparar un compuesto de fórmula 1.
Composiciones farmacéuticas
Los compuestos de la invención y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se usan normalmente en forma de una composición o formulación farmacéutica. Dichas composiciones farmacéuticas pueden administrarse ventajosamente a un paciente por inhalación. Además, las composiciones farmacéuticas pueden administrarse por cualquier vía aceptable de administración, incluyendo, pero sin limitación, los modos de administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo la transdérmica) y parenteral.
En consecuencia, en uno de sus aspectos de composiciones, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de fórmula (I), donde, como se ha definido anteriormente, "compuesto de fórmula (I)" significa un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Opcionalmente, dichas composiciones farmacéuticas pueden contener otros agentes terapéuticos y/o de formulación si se desea. Cuando se analizan composiciones y usos de las mismas, el "compuesto de la invención" también puede denominarse en el presente documento el "agente activo". Como se usa en el presente documento, la expresión "compuesto de la invención" tiene por objeto incluir todos los compuestos abarcados por la fórmula (I) así como las especies realizadas en la fórmula (II) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos
Las composiciones farmacéuticas de la invención normalmente contienen una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. Los expertos en la materia reconocerán, sin embargo, que una composición farmacéutica puede contener más de una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, composiciones a granel, o menos de una cantidad terapéuticamente eficaz, es decir, dosis unitarias individuales diseñadas para la administración múltiple para conseguir una cantidad terapéuticamente eficaz.
Normalmente, dichas composiciones farmacéuticas contendrán de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 95 % en peso del agente activo; incluyendo, por ejemplo, de aproximadamente el 0,05 a aproximadamente el 30 % en peso; y de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 10 % en peso del agente activo.
Puede usarse cualquier vehículo o excipiente convencional en las composiciones farmacéuticas de la invención. La elección de un vehículo o excipiente particular, o combinaciones de vehículos o excipientes, dependerá del modo de administración que se use para tratar a un paciente o tipo de afección médica o patología particular. En este sentido, la preparación de una composición farmacéutica adecuada para un modo particular de administración está bien dentro del alcance de los expertos en las técnicas farmacéuticas. Adicionalmente, los vehículos o excipientes utilizados en las composiciones farmacéuticas de la presente invención están disponibles en el mercado. A modo de ilustración adicional, se describen técnicas de formulación convencionales en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); y H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a- edición, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Los ejemplos representativos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, los siguientes: azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa, tal como celulosa microcristalina y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes, tales como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes tamponantes, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua apirógena; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico; soluciones de tampón de fosfato; y otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en composiciones farmacéuticas.
Las composiciones farmacéuticas se preparan normalmente mezclando o combinando completa e íntimamente el agente activo con un vehículo farmacéuticamente aceptable y uno o más ingredientes opcionales. Después, la mezcla resultante combinada uniformemente puede conformarse o cargarse en comprimidos, cápsulas, píldoras y similares, usando procedimientos y equipos convencionales.
En un aspecto, la composición farmacéutica es adecuada para la administración por inhalación. Las composiciones farmacéuticas para la administración por inhalación se presentan normalmente en forma de un aerosol o un polvo. Dichas composiciones se administran generalmente usando dispositivos de entrega de tipo inhalador, tales como un inhalador de polvo seco (IPS), un inhalador de dosis medida (IDM), un inhalador nebulizador o un dispositivo de entrega similar.
En una realización particular, la composición farmacéutica se administra por inhalación usando un inhalador de polvo seco. Dichos inhaladores de polvo seco normalmente administran la composición farmacéutica en forma de un polvo de flujo libre que se dispersa en la corriente de aire del paciente durante la inspiración. Con el fin de conseguir una composición de polvo de flujo libre, el agente terapéutico normalmente se formula con un excipiente adecuado, tal como lactosa, almidón, manitol, dextrosa, ácido poliláctico (PLA), polilactida-co-glicolida (PLGA) o combinaciones de los mismos. Normalmente, el agente terapéutico se microniza y se combina con un vehículo adecuado para formar una composición adecuada para la inhalación.
Una composición farmacéutica representativa para su uso en un inhalador de polvo seco comprende lactosa y un compuesto de la invención en forma micronizada. Una composición de polvo seco de este tipo puede fabricarse, por ejemplo, combinando lactosa molida en seco con el agente terapéutico y después mezclando en seco los componentes. Después, la composición normalmente se carga en un dispensador de polvo seco o en cartuchos o cápsulas de inhalación para su uso con un dispositivo de entrega de polvo seco.
En la técnica se describen dispositivos de entrega de tipo inhalador de polvo seco adecuados para administrar agentes terapéuticos por inhalación y hay disponibles en el mercado ejemplos de dichos dispositivos. Por ejemplo, los dispositivos o productos de entrega de tipo inhalador de polvo seco representativos incluyen Aeolizer (Novartis); Airmax (IVAX); ClickHaler (Innovata Biomed); Diskhaler (GlaxoSmithKline); Diskus/Accuhaler (GlaxoSmithKline); Ellipta (GlaxoSmithKline); Easyhaler (Orion Pharma); Eclipse (Aventis); FlowCaps (Hovione); Handihaler (Boehringer Ingelheim); Pulvinal (Chiesi); Rotahaler (GlaxoSmithKline); SkyeHaler/Certihaler (SkyePharma); Twisthaler (Schering-Plough); Turbuhaler (AstraZeneca); Ultrahaler (Aventis); y similares.
En otra realización particular, la composición farmacéutica se administra por inhalación usando un inhalador de dosis medida. Dichos inhaladores de dosis medida normalmente descargan una cantidad medida de un agente terapéutico usando un gas propulsor comprimido. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas administradas usando un inhalador de dosis medida normalmente comprenden una solución o suspensión del agente terapéutico en un propulsor licuado. Puede emplearse cualquier propulsor licuado adecuado incluyendo hidrofluoroalcanos (HFA), tales como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134a) y 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano, (HFA 227); y clorofluorocarbonos, tales como CCl3 F. En una realización particular, el propulsor es hidrofluoroalcano. En algunas realizaciones, la formulación de hidrofluoroalcano contiene un cosolvente, tal como etanol o pentano, y/o un tensioactivo, tal como trioleato de sorbitano, ácido oleico, lecitina y glicerina.
Una composición farmacéutica representativa para su uso en un inhalador de dosis medida comprende de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 5 % en peso de un compuesto de la invención; de aproximadamente el 0 % a aproximadamente el 20 % en peso de etanol; y de aproximadamente el 0 % a aproximadamente el 5 % en peso de tensioactivo; siendo el resto un propulsor de HFA. Dichas composiciones se preparan normalmente añadiendo hidrofluoroalcano refrigerado o presurizado a un recipiente adecuado que contiene el agente terapéutico, etanol (si está presente) y el tensioactivo (si está presente). Para preparar una suspensión, el agente terapéutico se microniza y después se combina con el propulsor. Después, la composición se carga en un bote de aerosol, que normalmente forma una porción de un dispositivo inhalador de dosis medida.
En la técnica se describen dispositivos inhaladores de dosis medida adecuados para administrar agentes terapéuticos por inhalación y hay disponibles en el mercado ejemplos de dichos dispositivos. Por ejemplo, los dispositivos o productos de tipo inhalador de dosis medida representativos incluyen el sistema inhalador AeroBid (Forest Pharmaceuticals); aerosol de inhalación Atrovent (Boehringer Ingelheim); Flovent (GlaxoSmithKline); inhalador Maxair (3M); inhalador Proventil (Schering); aerosol de inhalación Serevent (GlaxoSmithKline); y similares. En otro aspecto particular, la composición farmacéutica se administra por inhalación usando un inhalador nebulizador. Dichos dispositivos nebulizadores normalmente producen una corriente de aire de alta velocidad que provoca que la composición farmacéutica se pulverice en forma de niebla que se transporta dentro del tracto respiratorio del paciente. En consecuencia, cuando se formula para su uso en un inhalador nebulizador, el agente terapéutico puede disolverse en un vehículo adecuado para formar una solución. Como alternativa, el agente terapéutico puede micronizarse o nanomolerse y combinarse con un vehículo adecuado para formar una suspensión.
Una composición farmacéutica representativa para su uso en un inhalador nebulizador comprende una solución o suspensión que comprende de aproximadamente 0,05 pg/ml a aproximadamente 20 mg/ml de un compuesto de la invención y excipientes compatibles con formulaciones nebulizadas. En una realización, la solución tiene un pH de aproximadamente 3 a aproximadamente 8.
En la técnica se describen dispositivos nebulizadores adecuados para administrar agentes terapéuticos por inhalación y hay disponibles en el mercado ejemplos de dichos dispositivos. Por ejemplo, los dispositivos o productos nebulizadores representativos incluyen el inhalador Respimat Softmist (Boehringer Ingelheim); el sistema de entrega pulmonar AERx (Aradigm Corp.); el nebulizador reutilizable PARI LC Plus (Pari GmbH); y similares. En otro aspecto más, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden prepararse como alternativa en una forma farmacéutica destinada a la administración oral. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral pueden estar en forma de cápsulas, comprimidos, píldoras, pastillas para chupar, sellos, grageas, polvos, gránulos; o como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o agua en aceite; o como un elixir o jarabe; y similares; que contienen cada uno una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como principio activo.
Cuando se destinan a la administración oral en una forma farmacéutica sólida, las composiciones farmacéuticas de la invención comprenderán normalmente el agente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico. Opcionalmente o como alternativa, dichas formas farmacéuticas sólidas también pueden comprender: cargas o diluyentes, aglutinantes, humectantes, agentes retardantes de la disolución, aceleradores de la absorción, agentes humectantes, absorbentes, lubricantes, agentes colorantes y agentes tamponantes. También puede haber presentes agentes de liberación, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes en las composiciones farmacéuticas de la invención.
Las formulaciones alternativas también pueden incluir formulaciones de liberación controlada, formas farmacéuticas líquidas para la administración oral, parches transdérmicos y formulaciones parenterales. Se describen excipientes convencionales y métodos de preparación de dichas formulaciones alternativas, por ejemplo, en la referencia de Remington, citada anteriormente.
Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran composiciones farmacéuticas representativas de la presente invención. Composición de polvo seco
Un compuesto micronizado de fórmula (I) (1 g) se combina con lactosa molida (25 g). Después, esta mezcla combinada se carga en blísteres individuales de un envase blíster pelable en una cantidad suficiente para proporcionar entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 4 mg del compuesto de fórmula I por dosis. El contenido de los blísteres se administra usando un inhalador de polvo seco.
Composición de polvo seco
Un compuesto micronizado de fórmula (I) (1 g) se combina con lactosa molida (20 g) para formar una composición a granel que tiene una relación de peso de compuesto con respecto a lactosa molida de 1:20. La composición combinada se envasa en un dispositivo de inhalación de polvo seco capaz de entregar entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 4 mg del compuesto de fórmula I por dosis.
Composición de inhalador de dosis medida
Un compuesto micronizado de fórmula (I) (10 g) se dispersa en una solución preparada disolviendo lecitina (0,2 g) en agua desmineralizada (200 ml). La suspensión resultante se seca por pulverización y después se microniza para formar una composición micronizada que comprende partículas que tienen un diámetro medio inferior a aproximadamente 1,5 pm. Después, la composición micronizada se carga en cartuchos de inhalador de dosis medida que contienen 1,1,1,2-tetrafluoroetano presurizado en una cantidad suficiente para proporcionar de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 4 mg del compuesto de fórmula I por dosis cuando se administra mediante el inhalador de dosis medida.
Composición del nebulizador
Un compuesto de fórmula (I) (25 mg) se disuelve en una solución que contiene 1,5-2,5 equivalentes de ácido clorhídrico, seguido de la adición de hidróxido de sodio para ajustar el pH de 3,5 a 5,5 y de un 3 % en peso de glicerol. La solución se agita bien hasta que se disuelven todos los componentes. La solución se administra usando un dispositivo nebulizador que proporciona de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 4 mg del compuesto de fórmula I por dosis.
Utilidad
Los inhibidores de JAK de la invención se han diseñado para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y fibróticas del tracto respiratorio. En particular, los compuestos se han diseñado para permitir la entrega de un potente agente anticitocinas directamente en el sitio de acción de enfermedades respiratorias en el pulmón, limitando al mismo tiempo la exposición sistémica.
Se ha mostrado que los compuestos de la invención son inhibidores potentes de la familia de enzimas JAK: JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2. Además, los compuestos han demostrado una inhibición potente de las citocinas proinflamatorias y profibróticas sin presentar citotoxicidad en ensayos celulares. Se ha reconocido que el efecto antiinflamatorio amplio de los inhibidores de JAK podría suprimir la función normal de las células inmunitarias, conduciendo potencialmente a un mayor riesgo de infección. Por tanto, los presentes compuestos se han optimizado para limitar la absorción desde el pulmón al plasma, minimizando de este modo el riesgo de inmunosupresión.
Como se describe a continuación en la sección experimental, la absorción y la distribución de los compuestos típicos se ha perfilado en ensayos preclínicos. Los compuestos seleccionados sometidos a ensayo en ratones mostraron, al mismo tiempo, una concentración alta en el tejido pulmonar y absorción baja en el plasma. Los compuestos sometidos a ensayo en ratón presentaron una exposición en el pulmón de uno a dos órdenes de magnitud superior a la exposición en el plasma. Los compuestos también presentaron una retención significativa en el pulmón de ratón, como se demuestra por una semivida pulmonar superior a aproximadamente 5 horas. De forma importante, se ha demostrado que la concentración de compuesto de ensayo en el pulmón de ratón se correlaciona con un efecto farmacodinámico previsto de inhibición de enzimas JAK. Se ha demostrado que los compuestos de la invención inhiben un efecto de la citocina proinflamatoria IL-13 en el tejido pulmonar de ratón. Específicamente, los compuestos han demostrado una inhibición dependiente de la dosis y de la concentración de la fosforilación de STAT6 inducida por IL-13 en el tejido pulmonar, lo que proporciona pruebas de la participación local de la diana JAK pulmonar in vivo. Este efecto se ha observado cuando se administra la citocina proinflamatoria IL-13 4 horas después de la administración del compuesto de ensayo, proporcionando más pruebas de la retención significativa en el pulmón.
Se ha demostrado que los compuestos sometidos a ensayo presentan tanto una actividad inhibidora potente a nivel celular como una retención significativa en el tejido pulmonar. Una investigación exhaustiva de los presentes inventores ha determinado que, si bien es posible identificar compuestos que son potentes a nivel celular o compuestos que muestran una retención significativa en el pulmón, es mucho más difícil descubrir compuestos que presenten ambas características deseables al mismo tiempo.
La actividad antiinflamatoria de los inhibidores de JAK se ha demostrado sólidamente en modelos preclínicos de asma (Malaviya et al., Int Immunopharmacol, 2010, 10, 829, -836; Matsunaga et al., Biochem and Biophys Res Commun, 2011, 404, 261-267; Kudlacz et al., Eur J Pharmacol, 2008, 582, 154-161.) En consecuencia, se espera que los compuestos de la invención sean útiles para el tratamiento de trastornos respiratorios inflamatorios, en particular, el asma. La inflamación y la fibrosis del pulmón son características de otras enfermedades respiratorias además del asma, tales como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis quística (FQ), neumonitis, enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), lesión pulmonar aguda, síndrome de dificultad respiratoria aguda, bronquitis, enfisema, bronquiolitis obliterante y sarcoidosis. Por tanto, también se espera que los presentes compuestos sean útiles para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, neumonitis, enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), lesión pulmonar aguda, síndrome de dificultad respiratoria aguda, bronquitis, enfisema, bronquiolitis obliterante y sarcoidosis.
Los compuestos de la divulgación han demostrado la inhibición de la activación de linfocitos T humanos, la inhibición de citocinas asociadas a la inflamación y la actividad sobre eosinófilos humanos y en modelos de eosinofilia pulmonar en roedores. Por tanto, los compuestos de la divulgación son probablemente útiles para el tratamiento de determinadas enfermedades respiratorias específicas.
La inflamación eosinofílica de las vías respiratorias es un rasgo característico de las enfermedades denominadas colectivamente enfermedades pulmonares eosinofílicas (Cottin et al., Clin. Chest. Med., 2016, 37(3), 535-56). Las enfermedades eosinofílicas se han asociado a la señalización de IL-4, IL-13 e IL-5. Las enfermedades pulmonares eosinofílicas incluyen infecciones (especialmente helmínticas), neumonitis inducida por fármacos (inducida, por ejemplo, por fármacos terapéuticos tales como antibióticos, fenitoína o 1 -triptófano), neumonitis inducida por hongos (por ejemplo, aspergilosis broncopulmonar alérgica), neumonitis por hipersensibilidad y granulomatosis eosinofílica con poliangeítis (antes conocida como síndrome de Churg-Strauss). Las enfermedades pulmonares eosinofílicas de etiología desconocida incluyen la neumonía eosinofílica aguda idiopática, neumonía eosinofílica crónica idiopática, síndrome hipereosinofílico y síndrome de Loffler. Se ha demostrado que los compuestos de la divulgación reducen significativamente la eosinofilia pulmonar en el modelo de vías respiratorias en roedores e inhiben potentemente la señalización de IL-13, IL-4 y IL-2 en ensayos celulares. Además, se ha demostrado que el compuesto del ejemplo 2 inhibe potentemente la supervivencia de los eosinófilos humanos mediada por IL-5.
Un polimorfismo en el gen de la IL-6 se ha asociado a niveles elevados de IL-6 y un mayor riesgo de desarrollar hipertensión arterial pulmonar (HAP) (Fang et al., J Am Soc Hypertens., 2017, 11(3), 171-177). Corroborando la función de la IL-6 en la HAP, la inhibición de la cadena del receptor de IL-6 gp130 mejoró la enfermedad en un modelo en rata de HAP (Huang et al., Can J Cardiol., 2016, 32(11), 1356.e1-1356.e10). Se ha demostrado que el compuesto del ejemplo 2 inhibe la señalización de IL-6.
Se han implicado citocinas tales como IFNy, IL-12 e IL-6 en una gama de enfermedades pulmonares no alérgicas, tales como la sarcoidosis y la linfangioleiomiomatosis (El-Hashemite et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2005, 33, 227-230 y El-Hashemite et al., Cancer Res., 2004, 64, 3436-3443). También se ha demostrado que el compuesto del ejemplo 2 inhibe la señalización de IL-6 e IFNy.
Las bronquiectasias y las enfermedades pulmonares infiltrantes son enfermedades asociadas a la inflamación neutrofílica crónica. Se ha demostrado que el compuesto del ejemplo 2 inhibe citocinas que se asocian a la inflamación neutrofílica (por ejemplo, IL-6, IFNy).
La activación patológica de linfocitos T es fundamental en la etiología de múltiples enfermedades respiratorias. Los linfocitos T autorreactivos desempeñan una función en la neumonía organizativa por bronquiolitis obliterante (también denominada SOC). Al igual que en el caso del SOC, la etiología de los rechazos de trasplantes de pulmón está relacionada con una activación aberrante de los linfocitos T del receptor por el pulmón del donante trasplantado. Los rechazos de trasplantes de pulmón pueden producirse de forma temprana como la Disfunción Primaria del Injerto (DPI), la neumonía organizativa (NO), el rechazo agudo (RA) o la bronquiolitis linfocítica (BL), o pueden aparecer años después del trasplante de pulmón como la Disfunción Crónica del Aloinjerto Pulmonar (DCAp ). La DCAP se conocía anteriormente como bronquiolitis obliterante (BO), pero ahora se considera un síndrome que puede tener diferentes manifestaciones patológicas, incluyendo la BO, la DCAP restrictiva (DCAPr o SAR) y la disfunción neutrofílica del aloinjerto. La disfunción crónica del aloinjerto pulmonar (DCAP) es un reto importante en el tratamiento a largo plazo de los receptores de trasplantes de pulmón, ya que provoca que el pulmón trasplantado pierda progresivamente su funcionalidad (Gauthier et al., Curr Transplant Rep., 2016, 3(3), 185-191). La DCAP responde mal al tratamiento y, por tanto, sigue existiendo la necesidad de encontrar compuestos eficaces capaces de prevenir o tratar esta enfermedad. Varias citocinas dependientes de JAK, tales como IFNy e IL-5, se regulan positivamente en la DCAP y el rechazo de trasplante de pulmón (Berastegui et al., Clin Transplant. 2017, 31, e12898). Además, niveles elevados de quimiocinas CXCR3 en los pulmones, tales como CXCL9 y CXCL10, que se encuentran corriente abajo en la señalización de IFN dependiente de JAK, están relacionados con resultados peores en pacientes de trasplante de pulmón (Shino et al., PLOs One, 2017, 12 (7), e0180281). La inhibición sistémica de JAK ha demostrado ser eficaz en el rechazo de trasplante de riñón (Vicenti et al., American Journal of Transplantation, 2012, 12, 2446-56). Por tanto, los inhibidores de JAK tienen el potencial de ser eficaces en el tratamiento o la prevención del rechazo de trasplante de pulmón y de la DCAP. Eventos de activación de linfocitos T similares a los descritos como base del rechazo de trasplante de pulmón también se consideran el principal impulsor de la enfermedad de injerto contra hospedador (EICH) pulmonar que puede producirse después de los trasplantes de células madre hematopoyéticas. Análogamente al DCAP, la EICH pulmonar es una afección crónica y progresiva con resultados extremadamente malos y no hay tratamientos aprobados actualmente. Un estudio de sondeo multicéntrico retrospectivo de 95 pacientes con EICH aguda o crónica refractaria a esteroides que recibieron el inhibidor sistémico de JAK ruxolitinib como terapia de rescate demostró una respuesta completa o parcial a ruxolitinib en la mayoría de los pacientes, incluyendo aquellos con EICH pulmonar (Zeiser et al., Leukemia, 2015, 29, 10, 2062-68). Dado que la inhibición sistémica de la JAK se asocia a efectos adversos graves y a un índice terapéutico reducido, sigue existiendo la necesidad de un inhibidor de JAK no sistémico e inhalado dirigido al pulmón para prevenir y/o tratar el rechazo de trasplante de pulmón o la EICH pulmonar. Los compuestos de la divulgación tienen las características necesarias para satisfacer esta necesidad. Más recientemente, la neumonitis inducida por inhibidores del punto de control inmunitario, otra enfermedad pulmonar mediada por linfocitos T surgió con el aumento del uso de inhibidores del punto de control inmunitario. En pacientes con cáncer tratados con estos agentes estimuladores de linfocitos T, puede desarrollarse una neumonitis mortal. Se ha demostrado que el compuesto del ejemplo 2 inhibe la liberación de IFNy anti-CD3 e inducida por IL-2 de linfocitos T humanos aislados de sangre periférica activados y la producción de CXCL9 y CXCL10 en células epiteliales de las vías respiratorias y, por tanto, tiene el potencial de presentar un tratamiento novedoso para estas enfermedades respiratorias graves desatendidas. En un aspecto, por tanto, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad respiratoria en un mamífero (por ejemplo, un ser humano), comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la invención.
En un aspecto, la enfermedad respiratoria es el asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, neumonitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), fibrosis quística (FQ), neumonitis, enfermedades pulmonares intersticiales (incluyendo la fibrosis pulmonar idiopática), lesión pulmonar aguda, síndrome de dificultad respiratoria aguda, bronquitis, enfisema, bronquiolitis obliterante o sarcoidosis. En otro aspecto, la enfermedad respiratoria es el asma o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
En un aspecto, la enfermedad respiratoria es una infección pulmonar, una enfermedad eosinofílica, una infección helmíntica, hipertensión pulmonar arterial, sarcoidosis, linfangioleiomiomatosis, bronquiectasia, una enfermedad pulmonar infiltrante, neumonitis inducida por fármacos, neumonitis inducida por hongos, aspergilosis broncopulmonar alérgica, neumonitis por hipersensibilidad, granulomatosis eosinofílica con poliangeítis, neumonía eosinofílica aguda idiopática, neumonía eosinofílica crónica idiopática, síndrome hipereosinófilo, síndrome de Loffler, neumonía organizativa por bronquiolitis obliterante, rechazos agudos y crónicos de trasplantes de pulmón (incluyendo DPI, NO, BL, RA y DCAP, BO, DCAP restrictiva y disfunción neutrofílica del aloinjerto), la enfermedad pulmonar de injerto contra hospedador, la neumonía organizativa por bronquiolitis obliterante, hipertensión pulmonar arterial, bronquiectasia o neumonitis inducida por el punto de control inmunitario.
La invención proporciona adicionalmente un método para tratar el asma en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la invención.
Cuando se usan para tratar el asma, los compuestos de la invención normalmente se administrarán en una sola dosis diaria o en múltiples dosis por día, aunque pueden usarse otras formas de administración. La cantidad de agente activo administrada por dosis o la cantidad total administrada por día normalmente será determinada por un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado y su actividad relativa, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.
La invención proporciona adicionalmente un método para tratar una enfermedad respiratoria (incluyendo, pero sin limitación, la enfermedad descrita en el presente documento) en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la invención.
Cuando se usa para tratar una enfermedad respiratoria (incluyendo, pero sin limitación, la enfermedad descrita en el presente documento), los compuestos de la invención normalmente se administrarán en una sola dosis diaria o en múltiples dosis por día, aunque pueden usarse otras formas de administración. La cantidad de agente activo administrada por dosis o la cantidad total administrada por día normalmente será determinada por un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado y su actividad relativa, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente y similares.
Como inhibidores de JAK, los compuestos de la divulgación también pueden ser útiles para una diversidad de otras enfermedades. Los compuestos de la divulgación pueden ser útiles para una diversidad de indicaciones inflamatorias gastrointestinales que incluyen, pero sin limitación, enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa (proctosigmoiditis, pancolitis, proctitis ulcerosa y colitis del lado izquierdo), enfermedad de Crohn, colitis colagenosa, colitis linfocítica, enfermedad de Behcet, enfermedad celíaca, colitis inducida por el inhibidor del punto de control inmunitario, ileítis, esofagitis eosinofílica, colitis relacionada con la enfermedad de injerto contra hospedador y colitis infecciosa. Colitis ulcerosa (Reimund et al., J Clin Immunology, 1996, 16, 144-150), enfermedad de Crohn (Woywodt et al., Eur J Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), colitis colagenosa (Kumawat et al., Mol Immunology, 2013, 55, 355-364), colitis linfocítica (Kumawat et al., 2013), esofagitis eosinofílica (Weinbrand-Goichberg et al., Immunol Res, 2013, 56, 249-260), colitis relacionada con la enfermedad de injerto contra hospedador (Coghill et al., Blood, 2001, 117, 3268-3276), colitis infecciosa (Stallmach et al., Int J Colorectal Dis, 2004, 19, 308-315), enfermedad de Behcet (Zhou et al., Autoimmun Rev, 2012, 11, 699-704), enfermedad celíaca (de Nitto et al., World J Gastroenterol, 2009, 15, 4609-4614), la colitis inducida por inhibidor del punto de control inmunitario (por ejemplo, la colitis inducida por inhibidor de CTLA-4; (Yano et al., J Translation Med, 2014, 12, 191), colitis inducida por inhibidores de PD-1 o PD-L1) e ileítis (Yamamoto et al., Dig Liver Dis, 2008, 40, 253-259) se caracterizan por la elevación de determinados niveles de citocinas proinflamatorias. Como muchas citocinas proinflamatorias señalizan a través de la activación de JAK, los compuestos que se describen en la presente solicitud pueden ser capaces de aliviar la inflamación y proporcionar alivio de los síntomas. En particular, los compuestos de la divulgación pueden ser útiles para la inducción y el mantenimiento de la remisión de la colitis ulcerosa y para el tratamiento de la enfermedad de Crohn, la colitis inducida por el inhibidor del punto de control inmunitario y los efectos adversos gastrointestinales en la enfermedad de injerto contra hospedador. En un aspecto, por tanto, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad inflamatoria gastrointestinal en un mamífero (por ejemplo, un ser humano), comprendiendo el método administrar al mamífero un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La dermatitis atópica y otras enfermedades inflamatorias de la piel se han asociado a la elevación de citocinas proinflamatorias que dependen de la vía JAK-STAT. Por tanto, los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, pueden ser beneficiosos en una serie de afecciones inflamatorias o pruriginosas dérmicas que incluyen, pero sin limitación, dermatitis atópica, alopecia areata, vitíligo, psoriasis, dermatomiositis, linfoma cutáneo de linfocitos T (Netchiporouk et al., Cell Cycle. 2014; 13, 3331-3335) y subtipos (síndrome de Sezary, micosis fungoide, reticulosis pagetoide, piel floja granulomatosa, papulosis linfomatoide, pitiriasis liquenoide crónica, pitiriasis liquenoide y varioliforme aguda, linfoma cutáneo de linfocitos T CD30+, linfoma cutáneo secundario de células grandes CD30+, linfoma cutáneo de linfocitos T grandes CD30- no micosis fungoide, linfoma pleomórfico de linfocitos T, linfoma de Lennert, linfoma subcutáneo de linfocitos T, linfoma angiocéntrico, linfoma blástico de linfocitos NK), prurigo nodular, liquen plano, amiloidosis cutánea primaria localizada, penfigoide ampolloso, manifestaciones cutáneas de la enfermedad de injerto contra hospedador, penfigoide, lupus discoide, granuloma anular, liquen simple crónico, prurito vulvar/escrotal/perianal, liquen escleroso, picor de la neuralgia posherpética, liquen planopilar y foliculitis decalvana. En particular, la dermatitis atópica (Bao et al., JAK-STAT, 2013, 2, e24137), la alopecia areata (Xing et al., Nat Med. 2014, 20, 1043-1049), el vitíligo (Craiglow et al., JAMA Dermatol. 2015, 151, 1110-1112), el prurigo nodular (Sonkoly et al., J Allergy Clin Immunol. 2006, 117, 411-417), el liquen plano (Welz-Kubiak et al., J Immunol Res. 2015, ID: 854747), la amiloidosis cutánea primaria localizada (Tanaka et al., Br J Dermatol. 2009, 161, 1217-1224), el penfigoide ampolloso (Feliciani et al., Int J Immunopathol Pharmacol. 1999, 12, 55-61) y las manifestaciones dérmicas de la enfermedad de injerto contra hospedador (Okiyama et al., J Invest Dermatol. 2014, 134, 992-1000) se caracterizan por la elevación de determinadas citocinas que señalizan a través de la activación de JAK. En consecuencia, los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, pueden ser capaces de aliviar la inflamación dérmica asociada o el prurito provocado por estas citocinas. En particular, los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, puede esperarse que sean útiles para el tratamiento de la dermatitis atópica y otras enfermedades inflamatorias cutáneas. En un aspecto, por tanto, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad inflamatoria cutánea en un mamífero (por ejemplo, un ser humano), comprendiendo el método aplicar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéutico en la piel del mamífero. En un aspecto, la enfermedad inflamatoria cutánea es la dermatitis atópica.
Se ha mostrado que muchas enfermedades oculares se asocian a elevaciones de citocinas proinflamatorias que dependen de la vía JAK-STAT. Los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, por tanto, pueden ser útiles para el tratamiento de una serie de enfermedades oculares que incluyen, pero sin limitación, uveítis, retinopatía diabética, edema macular diabético, enfermedad del ojo seco, degeneración macular asociada a la edad y queratoconjuntivitis atópica. En particular, uveítis (Horai y Caspi, J Interferon Cytokine Res, 2011, 31, 733-744), retinopatía diabética (Abcouwer, J Clin Cell Immunol, 2013, Supl. 1, 1-12), edema macular diabético (Sohn et al., American Journal of Opthamology, 2011, 152, 686-694), enfermedad del ojo seco (Stevenson et al., Arch Ophthalmol, 2012, 130, 90-100) y degeneración macular relacionada con la edad (Knickelbein et al., Int Ophthalmol Clin, 2015, 55(3), 63-78) se caracterizan por la elevación de determinadas citocinas proinflamatorias que señalizan a través de la vía JAK-STAT. En consecuencia, los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, pueden ser capaces de aliviar la inflamación ocular asociada y revertir la progresión de la enfermedad o proporcionar alivio de los síntomas. En un aspecto, por tanto, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad ocular en un mamífero, comprendiendo el método administrar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéutico en el ojo del mamífero. En un aspecto, la enfermedad ocular es la uveítis, retinopatía diabética, edema macular diabético, enfermedad del ojo seco, degeneración macular asociada a la edad o queratoconjuntivitis atópica. En un aspecto, el método comprende administrar el compuesto de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por inyección intravítrea. Los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, también pueden usarse en combinación con uno o más compuestos útiles para enfermedades oculares.
Los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, también pueden ser útiles para tratar otras enfermedades tales como otras enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias o cánceres. Los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, pueden ser útiles para tratar una o más de entre artritis, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, rechazo de trasplante, xeroftalmia, artritis psoriásica, diabetes, diabetes insulinodependiente, enfermedad de la neurona motora, síndrome mielodisplásico, dolor, sarcopenia, caquexia, choque séptico, lupus eritematoso sistémico, leucemia, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, espondilitis anquilosante, mielofibrosis, linfoma de linfocitos B, carcinoma hepatocelular, enfermedad de Hodgkins, cáncer de mama, mieloma múltiple, melanoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de pulmón no microcítico, carcinoma de células claras de ovario, tumor de ovario, tumor de páncreas, policitemia vera, síndrome de Sjoegrens, sarcoma de tejidos blandos, sarcoma, esplenomegalia, linfoma de linfocitos T y talasemia mayor.
Terapia de combinación
Los compuestos de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, pueden usarse en combinación con uno o más agentes que actúan por el mismo mecanismo o por mecanismos diferentes para tratar una enfermedad. Los diferentes agentes pueden administrarse secuencial o simultáneamente, en composiciones separadas o en la misma composición. Las clases útiles de agentes para la terapia de combinación incluyen, pero sin limitación, un agonista de adrenorreceptores beta 2, un antagonista de receptores muscarínicos, un agonista de glucocorticoides, un antagonista del receptor 44 acoplado a proteína G, un antagonista del leucotrieno D4, un antagonista del receptor M3 muscarínico, un antagonista del receptor HI de histamina, un antagonista de inmunoglobulina E, un inhibidor de PDE 4, un antagonista de IL-4, un antagonista del receptor M1 muscarínico, un antagonista de receptores de histamina, un antagonista de IL-13, un antagonista de IL-5, un inhibidor de la 5-Lipoxigenasa, un agonista de adrenorreceptores beta, un antagonista de la quimiocina CCR3, un estimulador del CFTR, un modulador de inmunoglobulinas, un inhibidor del ligando de interleucina 33, un inhibidor de PDE 3, un inhibidor de la fosfoinosítido-3 cinasa delta, un antagonista del tromboxano A2, un inhibidor de elastasa, un inhibidor de la tirosina cinasa Kit, un antagonista del leucotrieno E4, un antagonista de leucotrienos, un antagonista de PGD2, un inhibidor del ligando del TNF alfa, un agente de unión al TNF, un inhibidor de la cascada del complemento, un inhibidor del ligando de la eotaxina, un inhibidor de la glutatión reductasa, un antagonista del receptor de histamina H4, un antagonista de IL-6, un estimulador del gen IL2, un modulador del receptor IIB de Fc de inmunoglobulina gamma, un ligando de interferón gamma, un inhibidor del ligando de interleucina 13, un inhibidor del ligando de interleucina 17, un antagonista de L-Selectina, un inhibidor de elastasa leucocitaria, un antagonista del leucotrieno C4, un inhibidor de la leucotrieno C4 sintasa, un inhibidor de la amina oxidasa de cobre de membrana, un inhibidor de la metaloproteasa-12, un inhibidor de la metaloproteasa-9, un modulador de alérgenos de ácaros, un modulador de receptores muscarínicos, un agonista de receptores nicotínicos de acetilcolina, un inhibidor del factor nuclear kappa B, un antagonista de p-Selectina, un inhibidor de PDE 5, un antagonista del receptor de PDGF, un inhibidor de la fosfoinosítido-3 cinasa gamma, un agonista de TLR-7, un antagonista de TNF, un inhibidor de la tirosina cinasa Abl, un antagonista de receptores de acetilcolina, un inhibidor ácido de la quitinasa de mamíferos, un agonista del receptor de ACTH, un modulador de la polimerización de actina, un antagonista del receptor A1 de adenosina, un estimulador de la adenilato ciclasa, un antagonista de adrenorreceptores, un ligando de la hormona adrenocorticotrófica, un inhibidor de la alcohol deshidrogenasa 5, un estimulador de la alfa 1 antitripsina, un inhibidor de la proteína alfa 1, un modulador de los receptores de andrógenos, un estimulador de la enzima convertidora de angiotensina 2, un agonista de PNA, un inhibidor de la proteína Bcr, un antagonista del adrenorreceptor beta 1, un antagonista del adrenorreceptor beta 2, un modulador del adrenorreceptor beta 2, un modulador de beta amiloide, un inhibidor del gen BMP10, un inhibidor del gen BMP15, un inhibidor de canales de calcio, un inhibidor de catepsina G, un inhibidor del gen CCL26, un modulador de la quimiocina CCR3, un antagonista de la quimiocina CCR4, un inhibidor de las moléculas de adhesión celular, un estimulador de chaperoninas, un inhibidor de la quitinasa, un antagonista del colágeno I, un inhibidor del complemento C3, un antagonista de CSF-1, un antagonista de la quimiocina CXCR2, un modulador de la cadena beta común de los receptores de citocinas, un estimulador de la proteína 4 de linfocitos T citotóxicos, un estimulador de la desoxirribonucleasa I, un estimulador de desoxirribonucleasas, un inhibidor de la dipeptidil peptidasa I, un inhibidor de la ADN girasa, un modulador de los receptores prostanoides DP, un antagonista de la E-Selectina, un inhibidor del receptor de la tirosina cinasa de la familia EGFR, un modulador de elastina, un antagonista de la endotelina ET-A, un antagonista de la endotelina ET-B, un inhibidor de la epóxido hidrolasa, un antagonista del receptor de FGF3, un inhibidor de la tirosina cinasa Fyn, un inhibidor del factor de transcripción GATA 3, un modulador de la glucosilceramidasa, un modulador de receptores de glutamato, un inhibidor del ligando de GM-CSF, un estimulador de la guanilato ciclasa, un inhibidor de la H+ K+ ATPasa, un modulador de hemoglobina, un agonista de heparina, un inhibidor de la histona desacetilasa, un estimulador de la histona desacetilasa-2, un inhibidor de la HMG CoA reductasa, un inhibidor de la I-kappa B cinasa beta, un inhibidor del gen ICAM1, un antagonista de IL-17, un modulador del receptor de IL-17, un antagonista de IL-23, un modulador del receptor de IL-4, un modulador de la inmunoglobulina G, un agonista de la inmunoglobulina G1, un modulador de la inmunoglobulina G1, un antagonista del receptor IA de Fc de inmunoglobulina épsilon, un antagonista del receptor IIB de Fc de inmunoglobulina gamma, un modulador de la inmunoglobulina kappa, un sensibilizador de la insulina, un ligando de Interferón beta, un antagonista del receptor similar a Interleucina 1, un inhibidor del ligando de interleucina 18, un antagonista del receptor de interleucina 17A, un inhibidor del ligando de interleucina 1 beta, un inhibidor del ligando de interleucina 5, un inhibidor del ligando de interleucina 6, un inhibidor del canal 3 de potasio activado por voltaje KCNA, un inhibidor del ligando Kit, un agonista de Laminina-5, un antagonista del receptor de leucotrienos CysLT1, un antagonista del receptor de leucotrienos CysLT2, un inhibidor del gen LOXL2, un inhibidor de la tirosina cinasa Lyn, un inhibidor de la proteína MARCKS, un inhibidor de la proteína 4 asociada a MDR, un modulador de la metaloproteasa 2, un modulador de la metaloproteasa 9, un antagonista de receptores de mineralocorticoides, un antagonista del receptor muscarínico M2, un antagonista del receptor muscarínico M4, un antagonista del receptor muscarínico M5, un agonista del receptor A del péptido natriurético, un modulador del receptor de linfocitos citolíticos naturales, un estimulador de la subunidad alfa 7 de receptores nicotínicos de ACh, un modulador de receptores de linfocitos NK, un modulador del factor nuclear kappa B, un agonista de receptores del factor de crecimiento opioide, un inhibidor de la P-Glicoproteína, un antagonista del purinorreceptor P2X3, un inhibidor de la MAP cinasa p38, un modulador de la Peptidasa 1, un inhibidor de la fosfolipasa A2, un inhibidor de la fosfolipasa C, un inhibidor del activador del plasminógeno 1, un antagonista del receptor del factor activador de plaquetas, un agonista de PPAR gamma, un agonista de prostaciclinas, un inhibidor de proteína tirosina cinasa, un estimulador de la inositol fosfatasa 1 de dominio SH2, un inhibidor de la transducción de señales, un inhibidor de los canales de sodio, un modulador de STAT-3, un inhibidor del antígeno-1 de células madre, un modulador de la superóxido dismutasa, un inhibidor de la glicoproteína de superficie de linfocitos T CD28, un inhibidor de la glicoproteína de superficie de linfocitos T CD8, un agonista de TGF beta, un antagonista de TGF beta, un inhibidor de la tromboxano sintetasa, un inhibidor del ligando de la linfoproteína del estroma tímico, un agonista de timosina, un ligando de timosina beta 4, un agonista de TLR-8, un agonista de TLR-9, un estimulador del gen TLR9, un inhibidor de la topoisomerasa IV, un estimulador del músculo esquelético rápido de Troponina I, un estimulador del músculo esquelético rápido de Troponina T, un antagonista del receptor de IL-1 de tipo I, un modulador del receptor de t Nf de tipo II, un modulador de canales iónicos, un estimulador de la uteroglobina y un agonista de VIP.
Los agentes específicos que pueden usarse en combinación con los presentes compuestos inhibidores de JAK incluyen, pero sin limitación, acetato de rosiptor, bromuro de umeclidinio, secukinumab, acetato de metenkefalina, acetato de tridecactida, propionato de fluticasona, sulforafano estabilizado con alfa-ciclodextrina, tezepelumab, furoato de mometasona, BI-1467335, dupilumab, aclidinio, formoterol, AZD-1419, HI-1640V, rivipansel, CMP-001, manitol, ANB-020, omalizumab, tregalizumab, Mitizax, benralizumab, golimumab, roflumilast, imatinib, REGN-3500, masitinib, apremilast, RPL-554, Actimmune, adalimumab, rupatadina, parogrelilo, MK-1029, dipropionato de beclometasona, fumarato de formoterol, mogamulizumab, seratrodast, UCB-4144, nemiralisib, CK-2127107, fevipiprant, danirixina, bosentán, abatacept, EC-18, duvelisib, dociparstat, ciprofloxacino, salbutamol HFA, erdosteína, PrEP-001, nedocromilo, CDX-0158, salbutamol, enobosarm, R-TPR-022, lenzilumab, furoato de fluticasona, trifenatato de vilanterol, propionato de fluticasona, salmeterol, PT-007, PRS-060, remestemcel-L, citrulina, RPC-4046, óxido nítrico, DS-102, gerilimzumab, Actair, furoato de fluticasona, umeclidinio, vilanterol, AG-NPP709, Gamunex, infliximab, Ampion, acumapimod, canakinumab, INS-1007, CYP-001, sirukumab, propionato de fluticasona, mepolizumab, pitavastatina, solitromicina, etanercept, ivacaftor, anakinra, MPC-300-IV, bromuro de glicopirronio, bromuro de aclidinio, FP-025, risankizumab, glicopirronio, fumarato de formoterol, Adipocell, YPL-001, bromuro de tiotropio, bromuro de glicopirronio, maleato de indacaterol, andecaliximab, olodaterol, esomeprazol, vacuna contra los ácaros del polvo, vacuna contra el alérgeno de polen de artemisa, vamorolona, gefapixant, revefenacina, gefitinib, ReJoin, tipelukast, bedoradrina, SCM-CGH, Sh P-652, RNS-60, brodalumab, BIO-11006, bromuro de umeclidinio, trifenatato de vilanterol, bromuro de ipratropio, tralokinumab, PUR-1800, VX-561, VX-371, olopatadina, tulobuterol, fumarato de formoterol, acetónido de triamcinolona, reslizumab, xinafoato de salmeterol, propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, fumarato de formoterol, bromuro de tiotropio, ligelizumab, RUTI, bertilimumab, omalizumab, bromuro de glicopirronio, SENS-111, dipropionato de beclometasona, CHF-5992, LT-4001, indacaterol, bromuro de glicopirronio, furoato de mometasona, fexofenadina, bromuro de glicopirronio, azitromicina, AZD-7594, formoterol, Ch F-6001, batefenterol, OATD-01, olodaterol, CJM-112, rosiglitazona, salmeterol, setipiprant, interferón beta inhalado, AZD-8871, plecanatida, fluticasona, salmeterol, monoglicéridos de ácido eicosapentaenoico, lebrikizumab, RG-6149, QBKPN, Mometasona, indacaterol, AZD-9898, piruvato de sodio, zileutón, CG-201, imidafenacina, CNTO-6785, CLBS-03, mometasona, RGN-137, procaterol, formoterol, CCI-15106, POL-6014, indacaterol, beclometasona, MV-130, GC-1112, Allergovac depot, MEDI-3506, QBW-251, ZPL-389, udenafilo, GSK-3772847, levocetirizina, AXP-1275, ADC-3680, timapiprant, abediterol, AZD-7594, bromuro de ipratropio, sulfato de salbutamol, tadekinig alfa, ACT-774312, dornasa alfa, iloprost, batefenterol, furoato de fluticasona, alicaforsen, ciclesonida, emeramida, arformoterol, SB-010, Ozagrel, BTT-1023, dectrekumab, levalbuterol, pranlukast, ácido hialurónico, GSK-2292767, Formoterol, NOV-14, Lucinactant, salbutamol, prednisolona, ebastina, cipecilato de dexametasona, GSK-2586881, BI-443651, GSK-2256294, VR-179, VR-096, hdm-ASIT+, budesonida, GSK-2245035, VTX-1463, Emedastina, dexpramipexol, levalbuterol, N-6022, fosfato de sodio de dexametasona, PIN-201104, OPK-0018, TEV-48107, suplatast, BI-1060469, Gemilukast, interferón gamma, dalazatida, bilastina, propionato de fluticasona, xinafoato de salmeterol, RP-3128, bromuro de bencicloquidio, reslizumab, PBF-680, antagonista de CRTH2, Pranlukast, xinafoato de salmeterol, propionato de fluticasona, monohidrato de bromuro de tiotropio, masilukast, RG-7990, Doxofilina, abediterol, bromuro de glicopirronio, TEV-46017, ASM-024, propionato de fluticasona, bromuro de glicopirronio, xinafoato de salmeterol, salbutamol, TA-270, Flunisolida, cromoglicato de sodio, Epsi-gam, ZPL-521, salbutamol, aviptadilo, TRN-157, Zafirlukast, Stempeucel, pemirolast sodio, nadolol, propionato de fluticasona xinafoato de salmeterol, RV-1729, sulfato de salbutamol, dióxido de carbono bromuro de perfluorooctilo, APL-1, dectrekumab VAK-694, acetilsalicilato de lisina, zileutón, TR-4, terapia con células progenitoras mesenquimáticas alógenas humanas derivadas del tejido adiposo, MEDI-9314, PL-3994, HMP-301, Td -5471, NKTT-120, pemirolast, dipropionato de beclometasona, trantinterol, alfa luminol monosódico, IMD-1041, AM-211, TBS-5, ARr Y-502, seratrodast, midismasa recombinante, ASM-8, deflazacort, bambuterol, RBx-10017609, ipratropio fenoterol, fluticasona formoterol, epinastina, WIN-901X, VALERGEN-DS, OligoG-COPD-5/20, tulobuterol, oxis Turbuhaler, DSP-3025, ASM-024, mizolastina, budesonida salmeterol, LH-011, AXP-E, inmunoglobulina humana de histamina, YHD-001, teofilina, ambroxol erdosteína, ramatrobán, montelukast, pranlukast, AG-1321001, tulobuterol, ipratropio salbutamol, tranilast, suleptanato de metilprednisolona, daropato de colforsina, repirinast y doxofilina.
También se proporciona, en el presente documento, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más de otros agentes terapéuticos. El agente terapéutico puede seleccionarse entre la clase de agentes especificados anteriormente y de la lista de agentes específicos descritos anteriormente. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es adecuada para la entrega en los pulmones. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es adecuada para la administración por inhalación o nebulización. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es un polvo seco o una composición líquida.
Adicionalmente, en un aspecto del método, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero que comprende administrar al mamífero un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y uno o más de otros agentes terapéuticos.
Cuando se usan en terapia de combinación, los agentes pueden formularse en una única composición farmacéutica o los agentes pueden proporcionarse en composiciones separadas que se administran simultáneamente o en momentos separados, por la misma o por diferentes vías de administración. Dichas composiciones pueden envasarse por separado o pueden envasarse juntas en forma de un kit. Los dos o más agentes terapéuticos en el kit pueden administrarse por la misma vía de administración o por vías de administración diferentes.
Se ha demostrado que los compuestos de la invención son inhibidores potentes de las enzimas JAK1, JAK2, JAK3 y TYK2 en ensayos de unión de enzimas, tienen una potente actividad funcional sin citotoxicidad en ensayos celulares y ejercen los efectos farmacodinámicos de inhibición de JAK en modelos preclínicos, como se describe en los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos de síntesis y biológicos se ofrecen para ilustrar la invención y no han de interpretarse de ninguna manera como limitantes del alcance de la invención. En los ejemplos a continuación, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados a menos que se indique lo contrario. Las abreviaturas que no se definen a continuación tienen los significados generalmente aceptados.
ACN = acetonitrilo
DCM = diclorometano
DIPEA= W,W-diisopropiletilamina
DMF = W,W-dimetilformamida
EtOAc = acetato de etilo
h = hora u horas
HATU= hexafluorofosfato de W,W,W'W-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronio
IPA = alcohol isopropílico
IPAc = acetato de isopropilo
MeOH= metanol
min = minuto o minutos
Pd(PPh3)4 = tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0)
TA = temperatura ambiente
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
bis(pinacolato)diboro = 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[1,3,2] dioxaborolanilo]
Los reactivos y disolventes se adquirieron de proveedores comerciales (Aldrich, Fluka, Sigma, etc.) y se usaron sin purificación adicional. El progreso de las mezclas de reacción se controló mediante cromatografía en capa fina (CCF), cromatografía líquida de alto rendimiento analítica (HPLC anal.) y espectrometría de masas. Las mezclas de reacción se elaboraron como se describe específicamente en cada reacción; habitualmente se purificaron mediante extracción y otros métodos de purificación, tales como la precipitación y la cristalización dependiente de la temperatura y el disolvente. Además, las mezclas de reacción se purificaron como habitualmente mediante cromatografía en columna o mediante HPLC preparativa, normalmente usando rellenos de columna C18 o BDS y eluyentes convencionales. Se describen condiciones normales de HPLC preparativa a continuación.
La caracterización de los productos de reacción se realizó como habitualmente mediante espectrometría de masas y RMN 1H. Para el análisis por RMN, las muestras se disolvieron en disolvente deuterado (tal como CD3OD, CDCb o cfe-DMSO) y los espectros de RMN-1H se obtuvieron con un instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) en condiciones de observación convencionales. La identificación espectrométrica de masas de los compuestos se realizó mediante un método de ionización por electronebulización (EMEN) con un instrumento modelo API 150 EX de Applied Biosystems (Foster City, CA) o un instrumento 3100 de Waters (Milford, MA), acoplado a sistemas de autopurificación.
Condiciones de HPLC preparativa
Columna: C18, 5 |jm. 21,2 x 150 mm o C18, 5 jim 21 x 250 o C14, 5 |jm 21x150 mm Temperatura de la columna: Temperatura ambiente
Caudal: 20,0 ml/min
Fases móviles: A = Agua TFA al 0,05 %
B = ACN TFA al 0,05 %,
Volumen de inyección: (100-1500 jl)
Longitud de onda del detector: 214 nm
Los compuestos en bruto se disolvieron en agua:ácido acético 1:1 a aproximadamente 50 mg/ml. Se realizó una ejecución de ensayo de escala analítica de 4 minutos usando una columna C18 de 2,1 x 50 mm seguida de una ejecución a escala preparativa de 15 o 20 minutos usando una inyección de 100 j l con el gradiente basado en el % de retención de B de la ejecución de ensayo a escala analítica. Los gradientes exactos fueron dependientes de la muestra. Las muestras con impurezas corrientes cercanas se comprobaron con una columna C18 de 21 x 250 mm y/o una columna C14 de 21 x 150 mm para una mejor separación. Las fracciones que contenían el producto deseado se identificaron mediante análisis espectrométrico de masas.
Preparación 1: 2-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (9)
Figure imgf000021_0001
(a) 1-(Benciloxi)-4-bromo-5-etil-2-fluorobenceno (21)
A una solución de 4-bromo-5-etil-2-fluorofenol (20) (20 g, 910,32 mmol) en ACN (250 ml) se le añadió K2CO3 (31,55 g, 228,3 mmol) seguido de bromuro de bencilo (13,10 ml, 109,58 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción resultante se agitó a 80 °C durante 2 h. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (tres veces), se combinó y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida para obtener el intermedio del título en forma de un líquido aceitoso de color amarillo pálido (25 g, rendimiento del 89 %). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 7,48 - 7,30 (m, 5H), 7,27 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 2,66 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
(b) 2-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (9)
A una solución del producto de la etapa anterior (21) (12,5 g, 40,45 mmol) en dioxano (100 ml) se le añadieron bis(pinacolato)diboro (15,40 g, 60,67 mmol) y KOAc (11,9 g, 121,35 mmol). La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno durante 15 min seguido de la adición de [1,1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II), complejo con diclorometano (1,65 g, 2,023 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó y se calentó a 110 °C durante 3 h, se filtró a través de Celite y el residuo se lavó con EtOAc. El filtrado se diluyó con exceso de EtOAc (200 ml) y se lavó con agua (100 ml) seguida de salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío para obtener producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (100-200), se eluyó con EtOAc al 3-5 %: hexano para obtener el producto deseado en forma de un sólido de color blanquecino (9,50 g, rendimiento del 66 %). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 7,54 - 7,27 (m, 6H), 6,81 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 2,84 (c, J = 7,5 Hz, 2H), 1,32 (s, 12H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Preparación 2: 6-(4-(benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3-(trimetilestanil)-1H-indazol (3')
Figure imgf000022_0001
(a) 6-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (22)
A una solución de 6-bromo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (10) (50 g, 178,57 mmol) y 2-(4-(benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (9) (76,3 g, 214,29 mmol) en DMF:H2O (480:120 ml) se le añadió K3PO4 (94,64 g, 446,86 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó con nitrógeno durante 15 min, después se añadió catalizador Pd(PPh3 )2Cl2 (6,26 g, 8,93 mmol) y la mezcla se desgasificó de nuevo con nitrógeno durante 5 min, se agitó y se calentó a 100-110 °C durante 5 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y el residuo se lavó con EtOAc. El filtrado se diluyó con EtOAc, se lavó con agua fría y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró al vacío para proporcionar el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida para obtener el intermedio del título en forma de un sólido de color blanco (65 g, rendimiento del 86 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C27H27FN2O2431,21 encontrado 431,46. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 68,06 - 7,98 (m, 2H), 7,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,51 - 7,32 (m, 5H), 7,08 (dd, J = 809,6; 8,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,76-5,64 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,04 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,72 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 2,52 (c, J = 7.5 Hz, 2H), 2,22 - 2,02 (m, 3H), 1,80 - 1,71 (m, 3H), 1,06 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
(b) 6-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1H-indazol (23)
A una solución del producto de la etapa anterior (22) (65 g, 151,16 mmol) en metanol (700 ml) se le añadió HCl conc. (120 ml) y la solución resultante se calentó a 60-65 °C durante 3 h, se enfrió a TA y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y agua. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío para obtener el intermedio del título en forma de un sólido de color blanco (52 g, 99 % (producto en bruto)). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 68,13 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,59 -7,30 (m, 6H), 7,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 2,53 (c, J = 7.5 Hz, 2H), 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
(c) 6-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-3-yodo-1 H-indazol (24)
A una solución de 6-(4-(benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1H-indazol (23) (56 g, 161,18 mmol) en DMF (400 ml) se le añadió KOH (36,2 g, 647,39 mmol) y la mezcla se agitó durante 5 min. Se añadió lentamente una solución de yodo (82,2 g, 323,69 mmol) en DMF (100 ml) a 0 °C y la mezcla se agitó a TA durante 30 min, se diluyó con agua (3 x 150 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de metabisulfito de sodio (3 x 200 ml) y agua (400 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para obtener el producto en bruto, que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida para obtener el intermedio del título en forma de un semisólido de color parduzco (64 g, rendimiento del 84 %). RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) 6 10,49 (s, 1H), 7,57 - 7,32 (m, 7H), 7,16 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,04 - 6,91 (m, 2H), 5,20 (s, 2H), 2,51 (c, J = 7,4 Hz, 2H), 1,04 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
(d) 6-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-3-yodo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (25)
A una solución helada del producto de la etapa anterior (24) (60 g, 127,12 mmol) en DCM (700 ml) se le añadió ácido p-toluenosulfónico (4,84 g, 25,423 mmol) seguido de 3,4-dihidro-2H-pirano (17,43 ml, 190,68 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche, se diluyó con DCM y se lavó con solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar el producto en bruto que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice) para obtener el intermedio del título en forma de un sólido de color blanquecino (64 g, rendimiento del 91 %). (m/z):
[M+H]+ calculado para C27H26FIN2O2557,10 encontrado 557,30. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 7,56 - 7,31 (m, 7H), 7,14 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,08-3,99 (m, 1H), 3,77 - 3,64 (m, 1H), 2,50 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 - 1,97 (m, 3H), 1,81 - 1,68 (m, 3H), 1,06 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
(e) 6-(4-(benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-3-(trimetilestanil)-1H-indazol (3')
A una solución de 6-(4-(benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-3-yodo-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol (25) (20 g, 35,97 mmol) en tolueno (150 ml) se lw añadió hexametilditina (9,2 ml, 43,17 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó con nitrógeno durante 20 min, seguido de la adición de tetraquis (2,0 g, 1,80 mmol) y la mezcla se agitó a 100 °C durante 2 h, se enfrió a TA, se filtró a través de Celite y el residuo se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna (sobre alúmina neutra), se eluyó con EtOAc al 2-5 %: hexano para obtener el compuesto del título (17,50 g, rendimiento del 82 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C27H26FIN2O2 557,10 encontrado 557,30. (mlz): [M+H]+ calculado para C30H35FN2O2Sn 595,17, 593,17 encontrado 595,49, 593,55. RMN 1H (400 MHz, cloroformo-d) ó 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,57 - 7,29 (m, 6H), 7,13 - 7,00 (m, 2H), 6,96 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,81 - 5,68 (m, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,13 - 4,00 (m, 1H), 3,81 - 3,66 (m, 1H), 2,54 (c, J = 7,3 Hz, 2H), 2,23 - 2,00 (m, 2H), 1,87 - 1,59 (m, 4H), 1,08 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,47 (s, 9H).
Preparación 3: (S)-2-yodo-3-((2-trimetilsilil)etoxi)metil)-3,4,6,7-tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato de 5-(ferc-butil) 6-metilo (4')
Figure imgf000023_0001
(a) Ácido (S)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (11)
A una suspensión agitada de L-histidina (26) (50 g, 322,24 mmol) en agua (420 ml) se le añadió HCl conc. (29 ml) gota a gota a 0 °C, seguido de formaldehído (55 ml, 676,72 mmol) en una porción a 0 °C. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 30 min y después se calentó a 75 °C durante 6 h y se concentró. El producto en bruto resultante se agitó durante 2 h con dietil éter, se filtró y se lavó con IPA:THF (100:300 ml) para proporcionar la sal de HCl del intermedio del título en forma de un sólido de color blanco (75 g, rendimiento del 99 % (producto en bruto)). (m/z): [M+H]+ calculado para C7H9N3O2168,07 encontrado 168,17.
(b) (S)-4,5,6,7-Tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxilato de metilo (27)
A una solución agitada del producto de la etapa anterior (11) (75,0 g, 312,5 mmol) en metanol (1500 ml) se le añadió SOCl2 (45,6 ml, 625 mmol) gota a gota a 0 °C y se agitó a TA durante 16 h, después se calentó hasta reflujo (70 °C) durante 1 h. El disolvente se retiró por destilación y el producto en bruto se trituró con metanol seguido de dietil éter para proporcionar la sal de HCl en bruto del intermedio del título en forma de un sólido de color blanquecino (80 g en bruto). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) ó 9,05 (s, 1H), 4,71 (dd, J = 9,4; 5,2 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,44 - 3,21 (m, 2H).
(c) (S)-3,4,6,7-tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato de 5-(terc-butil) 6-metilo (28)
A una solución agitada del producto de la etapa anterior (27) (80,0 g, 314,96 mmol) en metanol (1000 ml) se le añadió DIPEA (282 ml, 1574 mmol) seguido de dicarbonato de di-terc-butilo (172 ml, 787,48 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h y después se añadió NH3 líquido (150 ml, al 25 % en agua) y la mezcla de reacción se agitó de nuevo durante 16 h a TA, el metanol se retiró por destilación y el residuo se extrajo en DCM (3 x 200 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se concentraron y se purificaron mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de 100-200 mallas), se eluyeron con MeOH al 5 %:DCM para obtener el intermedio del título (41 g, rendimiento del 46 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C13H19N3O4282,14 encontrado 282,21. RMN 1H (400 MHz, DMSO-da) 511,85 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 5,18 (dd, J = 49,3; 5,1 Hz, 1H), 4,51 (t, J = 14,2 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 43,9; 16,1 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,08 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 2,94 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).
(d) (S)-2-yodo-3,4,6,7-tetrah¡dro-5H-¡m¡dazo[4,5-c]p¡r¡d¡na-5,6-d¡carbox¡lato de 5-(terc-but¡l) 6 -metilo (29)
A una soluc¡ón del producto de la etapa anter¡or (29) (41,0 g, 145,9 mmol) en THF (500 ml) se le añad¡ó N-yodosucc¡n¡m¡da (66,0 g, 291,8 mmol) a 0 °C y la soluc¡ón resultante se ag¡tó a TA durante 4 h, se d¡luyó con agua y se extrajo con acetato de et¡lo. La porc¡ón orgán¡ca se lavó con una soluc¡ón de t¡osulfato de sod¡o al 10 % (3 x 200 ml). La capa orgán¡ca comb¡nada se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro y se concentró para proporc¡onar el compuesto del título 60 g (producto en bruto), que se usó en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. (m/z):
[M+H]+ calculado para C13H18IN3O4408,03 encontrado 408,31. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 512,48 (s, 1H), 5,34 -4,97 (m, 1H), 4,67 - 4,35 (m, 1H), 4,12 - 3,95 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,14-2,82 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
(e) (S)-2-Yodo-3-((2-tr¡met¡ls¡l¡l)etox¡)met¡l)-3,4,6,7-tetrah¡dro-5H-¡m¡dazo[4,5-c]p¡r¡d¡na-5,6-d¡carbox¡lato de 5-(terc-but¡l) 6 -met¡lo (4')
A una soluc¡ón ag¡tada de (S)-2-yodo-3,4,6,7-tetrah¡dro-5H-¡m¡dazo[4,5-c]p¡r¡d¡na-5,6-d¡carbox¡lato de 5-(terc-but¡l) 6 -met¡lo (29) (40 g, 0,098 mol) en Dm F (150 ml) se añad¡ó DIPEA (35,1 ml, 0,19 mol) a 0 °C. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó durante 10 m¡n y después se añad¡ó cloruro de 2-(tr¡met¡ls¡l¡l)-etox¡met¡lo (19,1 ml, 0,10 mol) gota a gota a 0 °C. La mezcla de reacc¡ón resultante se ag¡tó durante 3 h a TA. Después de 4 h se añad¡ó agua fría y la mezcla de reacc¡ón se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro, se concentró y se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna ultrarráp¡da, se eluyó con EtOAc al 20-35 %:hexano, para obtener el producto del título en forma de un líqu¡do v¡scoso de color amar¡llo pál¡do (27 g). (m/z): [M+H]+ calculado para C19H32IN3O5S¡ 538,12 encontrado 538,42. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 55,33 - 5,04 (m, 3H), 4,79 - 4,56 (m, 1H), 4 , 5 4 - 4 , 1 4 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3,31 - 3,16 (m, 1H), 2,97 (t, J = 18,9 Hz, 1H), 1,44 (s, 9H), 0,92 - 0,74 (m, 2H), -0,03 (s, 9H).
Preparación 4: Ácido (6S)-5-(íerc-butoxicarbonilo)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (7')
Figure imgf000024_0001
(a) (6S)-2-(6-(4-(Benc¡lox¡)-2-et¡l-5-fluorofen¡l)-1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-1H-¡ndazol-3-¡l)-3-((2-(tr¡met¡ls¡l¡l) etox¡) met¡l)-3,4,6,7-tetrah¡dro-5H-¡m¡dazo[4,5-c]p¡r¡d¡na-5,6-d¡carbox¡lato de 5-(terc-but¡l) 6 -met¡lo (5')
A una soluc¡ón ag¡tada de (S)-2-yodo-3-((2-tr¡met¡ls¡l¡l)etox¡) met¡l)-3,4,6,7-tetrah¡dro -5H-¡m¡dazo[4,5-c]p¡r¡d¡na-5,6-d¡carbox¡lato de 5-(terc-but¡l) 6 -met¡lo (4') (17,0 g, 31,65 mmol) en tolueno (500 ml) se le añad¡ó 6-(4-(benc¡lox¡)-2-et¡l-5-fluorofen¡l)-1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-3-(tr¡met¡lestan¡l)-1H-¡ndazol (3') (20 g, 34,82 mmol). La mezcla de reacc¡ón se purgó con argón durante 15 m¡n, Se añad¡eron Pd(PPh3)4 (3,6 g, 3,16 mmol) y yoduro de cobre (1,20 g, 6,33 mmol) y la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 120 °C durante 16 h. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltró a través de Cel¡te, el f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce (columna Red¡sep de 80 g, elu¡da con DCM durante 10 m¡n y después con EtOAc al 15-20 % en Hexano para obtener el ¡ntermed¡o del título en forma de un sól¡do de color amar¡llo (15,10 g, rend¡m¡ento del 58 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C46H58FN5O7SÍ 840,41 encontrado 840,54. RMN 1H (400 MHz, Cloroformo-d) 58,43 (s, 1H), 7,54-7,33 (m, 6H), 7.20 (s, 1H), 7,05 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,09 - 5,69 (m, 3H), 5,59 - 5,36 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,97 - 4,80 (m, 1H), 4,12 - 3,90 (m, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,57 - 3,47 (m, 2H), 3,40 (d, 1H), 3,21 - 3,05 (m, 1H), 2,74 -2,34 (m, 4H), 2,25 - 2,07 (m, 2H), 1,94 - 1,65 (m, 4H), 1,54 (s, 9H), 1,12 - 0,99 (m, 3H), 0,91 - 0,75 (m, 2H), -0,12 (s, 9H).
(b) (6S)-2-(6-(4-(Benciloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil) etoxi) metil)-3,4,6,7-tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato de 6-bencil 5-(ferc-butilo) (6')
A un matraz de fondo redondo se le añadieron producto de la etapa anterior (5') (15,0 g, 17,85 mmol) en tolueno (400 ml), alcohol bencílico (46,3 ml) y Ti(OEt)4 (7,15 ml, 35,70 mmol) y la mezcla de reacción se sometió a reflujo vigoroso (140 °C) durante 48 h, se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La suspensión se filtró, el filtrado se secó sobre Na2SO4, se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (columna Redisep de 80 g, EtOAc al 0-5 % en hexanos) durante 20 min para retirar el exceso de alcohol bencílico, después se eluyó con EtOAc al 10-15 % en Hexano) para proporcionar el intermedio del título. RMN 1H coherente con la estructura. (m/z): [M+H]+ calculado para C52H62FN5O7Si 916,44 encontrado 916,86.
(c) Ácido (6S)-5-(ferc-butoxicarbonilo)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (7')
A una solución agitada del producto de la etapa anterior (6') (21,0 g, 22,92 mmol) en IPA:THF 1:1 (400 ml)) se le añadió Pd(OH)2 (5,0 g). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h con un globo de hidrógeno, se filtró a través de Celite, se concentró a presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (columna Redisep de 80 g, eluida con EtOAc al 25-40 % en Hexano) para proporcionar el compuesto del título (6,1 g, 8,29 mmol) en forma de un sólido de color blanquecino). (m/z): [M+H]+ calculado para C3sH50FN5O7Si 736,35 encontrado 736,5. RMN 1H coherente con la estructura. (m/z): [M+H]+ calculado para C3sH50FN5O7Si 736,35 encontrado 736,5. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 512,94 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7.20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,11 - 5,77 (m, 3H), 5,33 - 5,06 (m, 1H), 4,87-4,56 (m, 1H), 4,52-4,14 (m, 1H), 3,97 - 3,69 (m, 2H), 3,53 - 3,40 (m, 2H), 3,23 - 3,11 (m, 1H), 3,11 - 2,93 (m, 1H), 2,47 - 2,44 (m, 2H), 2,13 - 1,96 (m, 2H), 1,68 (d, J = 70,9 Hz, 4H), 1,48 (s, 9H), 1,02 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,86 -0,68 (m, 2H), -0,17 (s, 9H).
Preparación 5: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico (8')
Figure imgf000025_0001
A una solución agitada del ácido (6S)-5-(ferc-butoxicarbonil)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)-metil)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (7') (5,7 g, 7,75 mmol) en dioxano:agua 5:1 (60 ml) se le añadió HCl conc. (20 ml) gota a gota a 0 °C. La mezcla de reacción se calentó y se agitó a 90 °C durante 16 h y se destiló al vacío para proporcionar el residuo en bruto, que se trituró secuencialmente con dietil éter enfriado y acetonitrilo para proporcionar la sal de HCl del compuesto del título (3,6 g, rendimiento del 95 %) en forma de un sólido de color pardo claro. (m/z): [M+H]+ calculado para C22H20FN5O3422,16 encontrado 422,24. RMN 1H (400 MHz, D20/DMSO-d6) 58,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,19 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 6,91 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,56 - 4,51 (m, 1H), 4,36 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 3,35 - 3,25 (m, 1H), 3,15 - 3,05 (m, 1H), 2,4 - 2,55 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Preparación 6: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico
Figure imgf000026_0001
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6 -carboxílico, HCl (400 mg, 0,874 mmol) (8') y propionaldehído (0,095 ml, 1,310 mmol) en DMF (7 ml) se le añadió cianoborohidruro de sodio (165 mg, 2,62 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió borohidruro de sodio (33 mg, 0,874 mmol), la solución se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (179 mg, rendimiento del 37 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C25H26FN5O3464,20 encontrado 464,5.
Preparación 7: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico
Figure imgf000026_0002
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico, HCl (8') (400 mg, 0,874 mmol), acetona (0,192 ml, 2,62 mmol) y ácido acético (0,150 ml, 2,62 mmol) en DMF (7 ml), se le añadió cianoborohidruro de sodio (274 mg, 4,37 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió borohidruro de sodio (33 mg, 0,874 mmol), la solución se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (115 mg, rendimiento del 23 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C25 H26FN5O3 464,20 encontrado 464,5.
Preparación 8: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico
Figure imgf000026_0003
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico, HCl (8') (300 mg, 0,655 mmol) y formaldehído al 37 % en peso en agua (0,059 ml, 0,786 mmol) DMF (5 ml), se le añadió cianoborohidruro de sodio (165 mg, 2,62 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió borohidruro de sodio (25 mg, 0,655 mmol), la solución se concentró y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (columna de 100 g, ACN al 5-75 %/agua), para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (85 mg, rendimiento del 24 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C23H22FN5O3 436,17 encontrado 436,45.
Preparación 9: Ácido (S)-5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico
Figure imgf000027_0001
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxílico, HCl (8') (450 mg, 0,983 mmol) y acetaldehído (0,083 ml, 1,474 mmol) en DMF (7 ml), se le añadió cianoborohidruro de sodio (247 mg, 3,93 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió borohidruro de sodio (112 mg, 2,95 mmol), la solución se concentró, se disolvió en ácido acético: agua 1:1 300 pl de TFA (7 ml) y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (columna de 100 g, ACN al 5-65 %/agua), para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (165 mg, 0,293 mmol, rendimiento del 30 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C24H24FN5O3450,19 encontrado 450.
Ejemplo 2: (S)-(3-(Dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridin-6-il)metanona
Figure imgf000027_0002
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (179 mg, 0,310 mmol), W,W-dimetilazetidin-3-amina, 2 HCl (107 mg, 0,465 mmol) y DIPEA (0,162 ml 0,930 mmol) en DMF (4 ml), se le añadió HATU (177 mg, 0,465 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió hidrazina (5 eq), la mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (63 mg, rendimiento del 26 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C30H36FN7O2546,29 encontrado 546,7. RMN 1H (400 MHz, DMSO-Ó6) ó 9,90 (s, 1H), 8,29 (dd, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,07 (d, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 4,35 - 4,18 (m, 1H), 4,11 - 3,94 (m, 1H), 3,94 - 3,73 (m, 3H), 3,70 - 3,57 (m, 2H), 3,06 - 2,94 (m, 2H), 2,87 - 2,66 (m, 2H), 2,48 - 2,40 (m, 2H), 2,13 - 2,00 (m, 6H), 1,07 (t, 3H), 1,03 - 0,93 (m, 6H).
Ejemplo 4: (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona
Figure imgf000027_0003
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), W,W-dimetilazetidin-3-amina, 2HCl (27,0 mg, 0,156 mmol) y DIPEA (0,064 ml, 0,364 mmol) en DMF (1,5 ml), se le añadió HATU (29,6 mg, 0,078 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió hidrazina (5 eq), la mezcla de reacción se agitó a TA durante 10 min, se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (29,6 mg, rendimiento del 74 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C30H36FN7O2546,29 encontrado 546,6.
Ejemplo 8: (S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona
Figure imgf000028_0001
A una solución de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), W,W-3-trimetilazetidin-3-amina, 2 HCl (29,2 mg, 0,156 mmol) y DIPEA (0,073 ml, 0,416 mmol) en DMF (1 ml), se le añadió HATU (29,6 mg, 0,078 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a TA durante la noche. Se añadió hidrazina (5 eq), la mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (24,7 mg, rendimiento del 60 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C31H38FN7O2560,31 encontrado 560,2.
Ejemplo 8-22: (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona
Figure imgf000028_0002
Se disolvieron en DMF (1,0 ml) ácido (S)-5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,053 mmol), W,W-dimetilazetidin-3-amina (16 mg, 0,16 mmol) y DIPEA (0,037 ml, 0,213 mmol), después se añadió HATU (30,4 mg, 0,080 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Se añadió hidrazina (15 pl) y después la solución se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (27 mg, rendimiento del 66 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C29H34FN7O2532,6 encontrado 532,2.
Ejemplo 8-23: (S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona
Figure imgf000028_0003
Se disolvieron en DMF (1,0 ml) ácido (S)-5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TfA (30 mg, 0,053 mmol), N,N,3-trimetilazetidin-3-amina (18 mg, 0,16 mmol) y DIPEA (0,037 ml, 0,213 mmol), después se añadió HATU (30,4 mg, 0,080 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Se añadió hidrazina (15 pl) y después la solución se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (28 mg, rendimiento del 68 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C30H36FN7O2546,7 encontrado 546,2.
Ejemplo 8-14: (S)-(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo [4,5-c] pyridin-6-il)(3-(piperidin-1-il)azetidin-1-il)metanona, 2TFA
Figure imgf000029_0001
Se disolvieron en DMF (1,5 ml) ácido (S)-5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TfA (40 mg, 0,071 mmol), 1-(3-azetidinil)piperidina (29,9 mg, 0,213 mmol) y DIPEA (0,050 ml, 0,284 mmol), después se añadió HATU (40,5 mg, 0,106 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió hidrazina (0,011 ml, 0,355 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Después, la solución se concentró y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar la sal de TFA del compuesto del título (36 mg, rendimiento del 63 %). (m/z): [M+H]+ calculado para C32H38FN7O2572,7 encontrado 572,5.
Usando métodos de síntesis similares, se prepararon los compuestos de la Tabla 1. En las siguientes tablas, un espacio en blanco en cualquier columna indica un átomo de hidrógeno, un * en el encabezamiento de una estructura indica un centro quiral y la notación (R) o (S) delante de un sustituyente indica la configuración del átomo de carbono al que se une el sustituyente.
Tabla 1
Figure imgf000030_0001
continuación
Figure imgf000031_0001
Ensayos biológicos
Los compuestos de la invención se han caracterizado en uno o más de los siguientes ensayos biológicos.
Ensayo 1: Ensayos bioquímicos de cinasas JAK
Se realizó un panel de cuatro ensayos bioquímicos de JAK LanthaScreen (JAK1, 2, 3 y Tyk2) en un tampón de reacción de cinasa común (HEPES 50 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,01 %, MgCl2 10 mM y e GtA 1 mM). Se obtuvieron enzimas JAK marcadas con GST recombinantes y un sustrato peptídico STAT1 marcado con GFP en Life Technologies.
Se preincubaron compuestos diluidos en serie con cada una de las cuatro enzimas JAK y el sustrato en microplacas de color blanco de 384 pocillos (Corning) a temperatura ambiente durante 1 h. Posteriormente, se añadió ATP para iniciar las reacciones de la cinasa en un volumen total de 10 pl, con DMSO al 1 %. Las concentraciones finales de enzimas para JAK1, 2, 3 y Tyk2 son 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM y 0,25 nM respectivamente; las concentraciones de ATP Km correspondientes utilizadas son 25 pM, 3 pM, 1,6 pM y 10 pM; mientras que la concentración del sustrato es de 200 nM para los cuatro ensayos. Se permitió que las reacciones de las cinasas continuaran durante 1 hora a temperatura ambiente antes de que se añadiese una preparación de 10 pl de EDTA (concentración final 10 mM) y anticuerpo Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) (Life Technologies, concentración final 2 nM) en tampón de dilución TR-FRET (Life Technologies). Se dejaron incubar las placas a temperatura ambiente durante 1 h antes de que se leyesen en el lector EnVision (Perkin Elmer). Las señales de relación de emisión (520 nm/495 nm) se registraron y utilizaron para calcular los valores de porcentaje de inhibición basados en DMSO y controles de fondo.
Para el análisis de dosis-respuesta, se trazaron los datos de porcentaje de inhibición frente a las concentraciones de compuesto y se determinaron los valores de CI50 a partir de un modelo de ajuste robusto de 4 parámetros con el software Prism (software GraphPad). Los resultados se expresaron como pCl50 (logaritmo negativo de CI50) y posteriormente se convirtieron en pKi (logaritmo negativo de la constante de disociación, Ki) usando la ecuación de Cheng-Prusoff.
Los compuestos de ensayo que tienen un valor de Ki menor o un valor de pKi mayor en cada uno de los cuatro ensayos de JAK muestran una inhibición mayor de la actividad de JAK.
Ensayo 2: Ensayo de potencia de JAKI celular
El ensayo de potencia celular de JAKI AlphaScreen se realizó midiendo la fosforilación de STAT6 inducida por interleucina-13 (IL-13, R&D Systems) en células epiteliales pulmonares humanas BEAS-2B (ATCC). El anticuerpo anti-STAT6 (Cell Signaling Technologies) se conjugó con perlas aceptoras AlphaScreen (Perkin Elmer), mientras que el anticuerpo anti-pSTAT6 (pTyr641) (Cell Signaling Technologies) se biotiniló usando Sulfo-NHS-Biotina EZ-Link (Thermo Scientific).
Las células BEAS-2B se cultivaron a 37 °C en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % en DMEM al 50 %/medio F-12 al 50 % (Life Technologies) complementado con FBS al 10 % (Hyclone), penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 pg/ml (Life Technologies) y GlutaMAX 2 mM (Life Technologies). El día 1 del ensayo, las células se sembraron a una densidad de 7.500 células/pocillo en placas de color blanco de 384 pocillos recubiertas con poli-D-lisina (Corning) con 25 pl de medio y se les permitió adherirse durante la noche en la incubadora. El día 2 del ensayo, el medio se retiró y se reemplazó con 12 pl de tampón de ensayo (solución salina equilibrada de Hank/HBSS, HEPES 25 mM y albúmina sérica bovina 1 mg/ml/BSA) que contenía dosis-respuestas de compuestos de ensayo. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y después se diluyeron otras 1000 veces en medio para llevar la concentración final de DMSO a 0,1 %. Las células se incubaron con compuestos de ensayo a 37 °C durante 1 h seguido de la adición de 12 pl de IL-13 precalentada (80 ng/ml en tampón de ensayo) para la estimulación. Después de incubar a 37 °C durante 30 min, se retiró el tampón de ensayo (que contenía el compuesto e IL-13) y 10 pl de tampón de lisis celular (HEPES 25 mM, SDS al 0,1 %, NP-40 1 %, MgCl2 5 mM, EDTA 1,3 mM, EGTA 1 mM y complemento con inhibidores de proteasa Complete Ultra mini y PhosSTOP de Roche Diagnostics). Las placas se agitaron a temperatura ambiente durante 30 min antes de la adición de reactivos de detección. En primer lugar se añadió una mezcla de perlas aceptoras conjugadas con biotina-anti-pSTAT6 y anti-STAT6 y se incubó a temperatura ambiente durante 2 h, seguido de la adición de perlas donadoras conjugadas con estreptavidina (Perkin Elmer). Después de un mínimo de 2 h de incubación, las placas de ensayo se leyeron en el lector de placas EnVision. Se registraron señales de luminiscencia de AlphaScreen y se usaron para calcular los valores de porcentaje de inhibición basados en DMSO y controles de fondo.
Para el análisis de dosis-respuesta, se trazaron los datos de porcentaje de inhibición frente a las concentraciones de compuestos y se determinaron los valores de CI50 a partir de un modelo de ajuste robusto de 4 parámetros con el software Prism. Los resultados también pueden expresarse como el logaritmo negativo del valor de CI50, pCI50. Los compuestos de ensayo que tienen un valor de CI50 menor o un valor de pCI50 mayor en este ensayo muestran una inhibición mayor de la fosforilación de STAT6 inducida por IL-13.
Resultados del ensayo in vitro
Se sometieron a ensayo compuestos seleccionados de la invención en los cuatro ensayos de enzimas JAK; JAK1, JAK2, JAK3 y Tyk2, y el ensayo de potencia celular de BEAS-2B descrito anteriormente. Como se muestra en la Tabla 19 a continuación, se observó que la potencia de la enzima JAK1 era predictiva tanto de la actividad enzimática pan-JAK como de la potencia celular en el ensayo de BEAS-2B. Por tanto, todos los compuestos preparados se sometieron a ensayo en el ensayo de la enzima JAK1 y en el ensayo celular de BEAS-2B y la gran mayoría también se sometió a ensayo en el ensayo de la enzima JAK3. Todos los compuestos presentaron valores de Ki de JAK1 de entre 0,04 nM y 0,6 nM (pKi entre 9,2 y 10,4). Los compuestos sometidos a ensayo en el ensayo de la enzima JAK3 presentaron valores de Ki de entre 0,08 nM y 0,5 nM (pKi entre 9,3 y 10,1). Los compuestos sometidos a ensayo presentaron valores de CI50 en el ensayo de BEAS-2B de entre 3 nM y 100 nM (pCI50 entre 7 y 8,5).
Tabla 2
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Ensayo 3: Farmacocinética en plasma y pulmón en ratón
Los niveles plasmáticos y pulmonares de los compuestos de ensayo y las relaciones de los mismos se determinaron de la siguiente manera. En el ensayo se usaron ratones BALB/c de Charles River Laboratories. Los compuestos de ensayo se formularon individualmente en propilenglicol al 20 % en tampón de citrato de pH 4 a una concentración de 0,2 mg/ml y se introdujeron 50 pl de la solución de dosificación en la tráquea de un ratón por aspiración oral. En diversos puntos temporales (normalmente 0,167, 2, 6, 24 h) después de la dosificación, se extrajeron muestras de sangre a través de punción cardíaca y se extrajeron pulmones intactos de los ratones. Las muestras de sangre se centrifugaron (centrífuga Eppendorf, 5804R) durante 4 minutos a aproximadamente 12.000 rpm a 4 °C para recoger el plasma. Los pulmones estaban acolchados y secos, se pesaron y se homogeneizaron a una dilución de 1:3 en agua estéril. Los niveles en plasma y pulmón del compuesto de ensayo se determinaron mediante análisis por CL-EM frente a patrones analíticos construidos en una curva patrón en la matriz de ensayo. Se determinó una relación de pulmón a plasma como la relación del AUC pulmonar en pg h/g al AUC de plasma en pg h/ml, donde AUC se define convencionalmente como el área bajo la curva de la concentración del compuesto de ensayo frente al tiempo. Los compuestos de la invención presentaron una exposición en el pulmón de uno a dos órdenes de magnitud superior a la exposición en el plasma en ratón. Todos los compuestos perfilados en este ensayo presentaron una semivida de entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 14 horas.
Ensayo 4: Modelo murino (ratón) de inducción de pSTAT6 inducida por IL-13 en tejido pulmonar
11-13 es una citocina importante que subyace a la fisiopatología del asma (Kudlacz et al. Eur. J. Pharmacol, 2008, 582.154-161). La IL-13 se une a los receptores de la superficie celular activando los miembros de la familia Janus de cinasas (JAK) que después fosforilan STAT6 y posteriormente activan vías de transcripción adicionales. En el modelo descrito, se entregó una dosis de IL-13 localmente en los pulmones de los ratones para inducir la fosforilación de STAT6 (pSTAT6), que después se mide como criterio de valoración.
En el ensayo se usaron ratones balb/c adultos de Harlan. El día del estudio, los animales se anestesiaron ligeramente con isoflurano y se les administró el vehículo o el compuesto de ensayo (1 mg/ml, 50 pl de volumen total en varias respiraciones) a través de aspiración oral. Los animales se colocaron en decúbito lateral después de la dosis y se controlaron para que se recuperaran totalmente de la anestesia antes de devolverlos a su jaula. Cuatro horas más tarde, los animales se anestesiaron de nuevo brevemente y se expusieron a vehículo o IL-13 (0,03 pg de dosis total entregada, 50 pl de volumen total) a través de aspiración oral antes de controlarlos para determinar la recuperación de la anestesia y devolverlos a su jaula de origen. Una hora después de la administración de vehículo o IL-13, se recogieron pulmones para la detección de pSTAT6 usando un ELISA anti-pSTAT6 (anticuerpo de captura/recubrimiento de mAb de conejo; anticuerpo de detección/indicador de mAb de ratón: anti-pSTAT6-pY641; anticuerpo secundario: anti-IgG-HRP de ratón) y se analizaron para determinar la concentración total del fármaco como se ha descrito anteriormente en el Ensayo 3.
Se sometieron a ensayo compuestos seleccionados de la invención en el ensayo. La actividad en el modelo se evidencia por una disminución del nivel de pSTAT6 presente en los pulmones de los animales tratados a las 5 horas en comparación con los animales de control tratados con vehículo y expuestos a IL-13. La diferencia entre los animales de control que se trataron con vehículo y se expusieron a IL-13 y los animales de control que se trataron con vehículo y se expusieron a vehículo dictó el efecto inhibidor del 0 % y del 100 %, respectivamente, en cualquier experimento dado. Los compuestos de ejemplo de la invención se sometieron a ensayo en el ensayo y presentaron inhibición de la fosforilación de STAT6 4 horas después de la exposición a iL-13, como se documenta a continuación.
Confirmando la relevancia de la vía JAK-STAT en la inflamación de las vías respiratorias, los compuestos que han demostrado la participación de la diana in vivo en el modelo en ratón de pSTAT6 inducido por IL13 se someten a ensayo posteriormente y se demuestra su eficacia en un modelo en ratón de inflamación eosinofílica inducida por alérgenos.
Resultados del ensayo in vivo
Se caracterizaron compuestos seleccionados de la invención tanto en el ensayo farmacocinético (Ensayo 3) como en el ensayo farmacodinámico (Ensayo 4). Se observó una buena correlación entre la concentración de compuesto de ensayo en el pulmón determinada en el ensayo farmacocinético como en el ensayo farmacodinámico en puntos temporales similares después de la dosificación. La observación de una concentración significativa de compuesto en el pulmón del ratón en el ensayo farmacodinámico confirmó que la inhibición observada de la inducción de pSTAT6 inducida por IL-13 era resultado de la actividad del compuesto de ensayo.
En la siguiente tabla, para la relación entre la exposición pulmonar y la exposición plasmática (Ensayo 3), A indica una relación 100-200, B indica una relación entre 50 y 100 y C indica una relación entre 20 y 50. Para el porcentaje de inhibición de la inducción de pSTAT6 inducida por IL-13 (Ensayo 4), A representa entre el 60 % y el 80 % de inhibición, B representa entre el 40 % y el 60 % de inhibición y C representa entre el 25 % y el 40 % de inhibición.
Tabla 3
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n in i n
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Ensayo 5: Modelo murino de inflamación eosinofílica del pulmón inducida por Alternaria alternata
L a e o s in o fi l ia d e la s v ía s re s p ira to r ia s e s un ra s g o d is t in t iv o d e l a s m a h u m a n a . La Alternaría alternata e s un a e ro a lé rg e n o fú n g ic o q u e p u e d e e x a c e rb a r e l a s m a e n lo s s e re s h u m a n o s e in d u c e la in f la m a c ió n e o s in o fí l ic a e n los p u lm o n e s d e lo s ra to n e s (H a v a u x et al. Clin Exp Immunol. F e b re ro d e 2005 ; 139 (2 ): 179 -88 ). E n ra to n e s , s e ha d e m o s tra d o q u e la Alternaria a c t iv a in d ire c ta m e n te la s c é lu la s lin fo id e s in n a ta s d e t ip o 2 re s id e n te s e n lo s te jid o s p u lm o n a re s , q u e re s p o n d e n a (p o r e je m p lo , IL -2 e IL -7 ) y l ib e ra n c ito c in a s d e p e n d ie n te s d e J A K (p o r e je m p lo , iL-5 e IL -13 ) y c o o rd in a n la in f la m a c ió n e o s in o fí l ic a (B a r te m e s et al. J Immunol. 1 d e fe b re ro d e 2012 ; 188 (3 ): 1503 -13 ).
E n e l e s tu d io se u s a ro n ra to n e s C 57 m a c h o d e s ie te a n u e v e s e m a n a s d e e d a d d e T a c o n ic . E l d ía d e l e s tu d io , los a n im a le s s e a n e s te s ia ro n lig e ra m e n te co n is o f lu ra n o y se le s a d m in is tró e l v e h íc u lo o e l c o m p u e s to d e e n s a y o (0 ,03 - 1 ,0 m g /m l, 50 p l d e v o lu m e n to ta l e n v a r ia s re s p ira c io n e s ) a t ra v é s d e a s p ira c ió n o ro fa r ín g e a . L o s a n im a le s se c o lo c a ro n en d e c ú b ito la te ra l d e s p u é s d e la d o s is y s e c o n tro la ro n p a ra q u e s e re c u p e ra ra n to ta lm e n te d e la a n e s te s ia a n te s d e d e v o lv e r lo s a su ja u la . U n a h o ra m á s ta rd e , lo s a n im a le s s e a n e s te s ia ro n d e n u e v o b re v e m e n te y s e e x p u s ie ro n a v e h íc u lo o e x tra c to d e Alternaria (200 ug d e e x tra c to to ta l e n tre g a d o , 50 p l d e v o lu m e n to ta l) a t ra v é s d e a s p ira c ió n o ro fa r ín g e a a n te s d e c o n tro la r lo s p a ra d e te rm in a r la re c u p e ra c ió n d e la a n e s te s ia y d e v o lv e r lo s a su ja u la d e o r ig e n . C u a re n ta y o c h o h o ra s d e s p u é s d e la a d m in is t ra c ió n d e Alternaria, s e re c o g ió líq u id o d e la v a d o b ro n c o a lv e o la r (L L B A ) y s e c o n ta ro n lo s e o s in ó fi lo s e n e l L L B A u s a n d o e l s is te m a d e h e m a to lo g ía A d v ia 120 (S ie m e n s ) .
L o s c o m p u e s to s s e le c c io n a d o s d e la in v e n c ió n q u e d e m o s tra ro n a c t iv id a d in vivo en el e n s a y o fa rm a c o d in á m ic o d e IL -13 -p S T A T 6 se s o m e tie ro n a e n s a y o e n e s te e n s a y o d e Alternaria. L a a c t iv id a d e n e l m o d e lo se e v id e n c ia p o r u n a d is m in u c ió n d e l n iv e l d e e o s in ó fi lo s p re s e n te s e n e l L L B A d e lo s a n im a le s tra ta d o s a la s c u a re n ta y o c h o h o ra s en c o m p a ra c ió n c o n lo s a n im a le s d e c o n tro l t ra ta d o s c o n v e h íc u lo y e x p u e s to s a Alternaria. L o s d a to s se e x p re s a n c o m o p o rc e n ta je d e in h ib ic ió n d e la re s p u e s ta d e lo s e o s in ó fi lo s d e L L B A d e ra to n e s tra ta d o s c o n v e h íc u lo y e x p u e s to s a Alternaria. P a ra c a lc u la r e l p o rc e n ta je d e in h ib ic ió n , e l n ú m e ro d e e o s in ó fi lo s d e L L B A p a ra c a d a c o n d ic ió n s e c o n v ie r te e n p o rc e n ta je d e l p ro m e d io d e e o s in ó fi lo s d e L L B A d e ra to n e s tra ta d o s c o n v e h íc u lo y e x p u e s to s a Alternaria y se re s ta d e l c ie n p o r c ie n . L o s c o m p u e s to s d e e je m p lo d e la in v e n c ió n s e s o m e tie ro n a e n s a y o e n e l e n s a y o y p re s e n ta ro n in h ib ic ió n d e lo s re c u e n to s d e e o s in ó fi lo s d e L L B A c u a re n ta y o c h o h o ra s d e s p u é s d e la e x p o s ic ió n a Alternaria , c o m o s e d o c u m e n ta a c o n tin u a c ió n .
R e s u lta d o s d e l e n s a y o in vivo
T o d o s lo s c o m p u e s to s s o m e tid o s a e n s a y o d e m o s tra ro n un in te rv a lo d e in h ib ic ió n (73 % - 93 % ) d e e o s in ó fi lo s d e L L B A in d u c id o s p o r Alternaria. L a s ig u ie n te ta b la re f le ja e l p o rc e n ta je m á x im o d e in h ib ic ió n e s ta d ís t ic a m e n te s ig n if ic a t iv o d e l n iv e l d e in d u c c ió n d e e o s in ó fi lo s d e ra to n e s tra ta d o s c o n v e h íc u lo y e x p u e s to s a Alternaria .
Tabla 4
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Ensayo 6: Ensayo de supervivencia de eosinófilos mediada por IL-5
L a p o te n c ia d e l c o m p u e s to d e e n s a y o p a ra la s u p e rv iv e n c ia d e e o s in ó fi lo s m e d ia d a p o r IL -5 s e m id ió en e o s in ó fi lo s h u m a n o s a is la d o s d e s a n g re h u m a n a e n te ra (A N C e lls ) . D e b id o a q u e IL -5 s e ñ a liz a a t ra v é s d e J A K , e s te e n s a y o p ro p o rc io n a u n a m e d id a d e la p o te n c ia c e lu la r d e J A K .
L o s e o s in ó fi lo s h u m a n o s s e a is la ro n d e s a n g re h u m a n a e n te ra f re s c a (A llC e lls ) d e d o n a n te s s a n o s . L a s a n g re se m e z c ló c o n d e x tra n o a l 4 ,5 % (S ig m a -A ld r ic h ) en u n a s o lu c ió n d e c lo ru ro d e s o d io a l 0 ,9 % (S ig m a -A ld r ic h ) . L o s e r itro c ito s s e d e ja ro n s e d im e n ta r d u ra n te 35 m in u to s . L a c a p a s u p e r io r r ic a e n le u c o c ito s s e re t iró y s e d is p u s o en c a p a s s o b re F ic o ll-P a q u e (G E H e a lth c a re ) y s e c e n tr ifu g ó a 600 g d u ra n te 30 m in u to s . L a s c a p a s d e p la s m a y c é lu la s m o n o n u c le a re s s e re t ira ro n a n te s d e l is a r la c a p a d e g ra n u lo c ito s c o n a g u a p a ra re t ira r c u a le s q u ie r e r itro c ito s c o n ta m in a n te s . L o s e o s in ó fi lo s s e p u r if ic a ro n a d ic io n a lm e n te u s a n d o un k it d e a is la m ie n to d e e o s in ó fi lo s h u m a n o s (M ilte n y i B io te c ) . U n a fra c c ió n d e lo s e o s in ó fi lo s p u r if ic a d o s s e in c u b ó co n F IT C a n t i-C D 16 (M ilte n y i B io te c ) d u ra n te 10 minutos a 4 °C en la oscuridad. La pureza se analizó con un citómetro de flujo LSRII (BD Biosciences).
Las células se cultivaron en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % a 37 °C en RPMI 1640 (Life Technologies) complementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10 % (FBS, Life Technologies), Glutamax 2 mM (Life Technologies), HEPES 25 mM (Life Technologies) y Pen/Estrep IX (Life Technologies). Las células se sembraron a 10.000 células/pocillo en medio (50 pl). La placa se centrifugó a 300g durante 5 minutos y se retiró el sobrenadante. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y después se diluyeron otras 500 veces hasta una concentración de ensayo final 2x en medio. Se añadieron compuestos de ensayo (50 pl/pocillo) a las células y se incubaron a 37 °C, CO2 al 5 % durante 1 hora, seguido de la adición de IL-5 (R&D Systems; concentraciones finales de 1 ng/ml y 10 pg/ml) en medio de ensayo precalentado (50 pl) durante 72 horas.
Después de la estimulación con citocinas, las células se centrifugaron a 300 g durante 5 min y se lavaron dos veces con DPBS frío (Life Technologies). Para acceder a la viabilidad y la apoptosis, las células se incubaron con yoduro de propidio (Thermo Fisher Scientific) y APC Annexina V (BD Biosciences) y se analizaron usando un citómetro de flujo LSRII (BD Biosciences). Se determinaron valores de CI50 a partir del análisis de las curvas de viabilidad del porcentaje de viabilidad celular frente a la concentración de compuesto. Los datos se expresan como valores de pCI50 (logaritmo decimal negativo de CI50). El compuesto del ejemplo 2 presentó un valor de pCI50 de 7,6±0,5 en presencia de IL-510 pg/ml y un valor de pCI50 de 6,2±0,1 en presencia de IL-51 ng/ml.
Ensayo 7: Inhibición de las quimiocinas CXCL9 y CXCL10 inducidas por IFNy e IL-27 en cultivos 3D de vías respiratorias humanas
Se obtuvieron cultivos de tejido EpiAirway de Mattek (AIR-100). Los cultivos procedían de donantes asmáticos. En un inserto de cultivo celular, se cultivaron y diferenciaron células epiteliales traqueales/bronquiales derivadas de seres humanos en un soporte de membrana porosa, permitiendo una interfaz aire-líquido con un medio de cultivo calentado por debajo de las células y una atmósfera de ensayo gaseosa por encima. Los tejidos se cultivaron en medio de mantenimiento (Mattek, AIR-100-MM) en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % a 37 °C. Se sometieron a ensayo cuatro donantes. El día 0, los cultivos tisulares se trataron con compuestos de ensayo a 10pM, 1 pM y/o 0,1 pM. Los compuestos se diluyeron en dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma) a una concentración final del 0,1 %. Se usó DMSO al 0,1 % como vehículo de control. Los compuestos de ensayo se incubaron con cultivos durante 1 hora a 37 °C, CO2 al 5 %, seguido de la adición de medio precalentado que contenía IFNy (R&D Systems) o IL-27 (R&D Systems) a una concentración final de 100 ng/ml. Los cultivos tisulares se mantuvieron durante 8 días. Los medios se reemplazaron cada 2 días con medio fresco que contenía compuestos e IFNy o IL-27. El día 8, se recogieron los cultivos tisulares y los sobrenadantes para su análisis. Las muestras de sobrenadante se analizaron para determinar CXCL10 (IP-10) y CXCL9 (MIG) usando el análisis luminex (EMD Millipore). Los datos se expresan como % de inhibición /- desviación típica (±DT). El porcentaje de inhibición se determinó por la potencia inhibidora del compuesto frente a la secreción de CXCL10 o CXCL9 inducida por IFNy o IL-27 en comparación con las células tratadas con vehículo. Los datos son el promedio de 3 o 4 donantes. El compuesto del ejemplo 2 fue capaz de inhibir la secreción de CXCL10 inducida por IFNy en un 101 % ±2,0 (a 10 pM), un 6 5 % ±29 (a pM) y un 6 % ±11 (a 0,1 pM) en comparación con el control de vehículo. El compuesto del ejemplo 2 fue capaz de inhibir la secreción de CXCL9 inducida por IFNy en un 93 % ±13 (a 10 pM) y en un 24 % ±49 (a 1 pM) en comparación con el vehículo. El compuesto del ejemplo 2 fue capaz de inhibir la secreción de CXCL10 inducida por IL-27 en un 108 % ±11 (a 10 pM), un 101 % ±6 (a 1 pM) y un 69 % ±10 (a 0,1 pM) en comparación con el control de vehículo. El compuesto del ejemplo 2 fue capaz de inhibir la secreción de CXCL9 inducida por IL-27 en un 100 % ±0 (a 10 pM), un 97 % ±3,6 (a 1 pM) y un 57 % ±28 (a 0,1 pM) en comparación con el control de vehículo.
Ensayo 8: Ensayo celular de potencia de JAK: Inhibición de IFNy estimulado por IL-2/anticuerpo anti-CD3 en CMSP humanas
La potencia del compuesto de ensayo para la inhibición de interferón gamma (IFNy) estimulado por interleucina-2 (IL-2)/anticuerpo anti-CD3 se midió en células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) aisladas de sangre completa humana (Stanford Blood Center). Debido a que IL-2 señaliza a través de JAK, este ensayo proporciona una medida de la potencia celular de JAK.
(1) Se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) de sangre completa humana de donantes sanos usando un gradiente de ficol. Las células se cultivaron en una incubadora humidificada con CO2 al 5 % a 37 °C en RPMI (Life Technologies) complementado con suero bovino fetal inactivado por calor al 10 % (FBS, Life Technologies), Glutamax 2 mM (Life Technologies), HEPES 25 mM (Life Technologies) y IX Pen/Estrep (Life Technologies). Las células se sembraron a 200.000 células/pocillo en medio (50 pl) y se cultivaron durante 1 h. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y después se diluyeron otras 500 veces (hasta una concentración de ensayo final 2x) en medio. Se añadieron compuestos de ensayo (100 pl/pocillo) a las células y se incubaron a 37 °C, CO2 al 5 % durante 1 h, seguido de la adición de iL-2 (R&D Systems; concentración final 100 ng/ml) y anti-CD3 (BD Biosciences; concentración final 1 pg/ml) en medio de ensayo precalentado (50 pl) durante 24 h.
(2) Después de la estimulación con citocinas, las células se centrifugaron a 500 g durante 5 min y los sobrenadantes se retiraron y se congelaron a -80 °C. Para determinar la potencia inhibidora del compuesto de ensayo en respuesta a IL-2/anticuerpo anti-CD3, se midieron las concentraciones de IFNy en el sobrenadante a través de ELISA (R&D Systems). Se determinaron valores de CI50 a partir del análisis de las curvas de inhibición de concentración de IFNy frente a la concentración de compuesto. Los datos se expresan como valores de pCI50 (logaritmo decimal negativo de CI50). El compuesto del Ejemplo 2 presentó un valor de pCI50 de aproximadamente 7,1 en este ensayo.
E n s a y o 9: E n s a y o c e lu la r d e p o te n c ia d e J A K : I n h ib ic ió n d e p S T A T 5 e s t im u la d a p o r IL -2 e n l i n f o c i t o s T C D 4
Se midió la potencia del compuesto de ensayo para determinar la inhibición de la fosforilación de STAT5 estimulada por interleucina-2 (IL-2)/anticuerpo anti-CD3 en linfocitos T CD4 positivos (CD4+) en células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) aisladas de sangre completa humana (Stanford Blood Center) usando citometría de flujo. Debido a que IL-2 señaliza a través de JAK, este ensayo proporciona una medida de la potencia celular de JAK.
Se identificaron linfocitos T CD4+ usando un anticuerpo anti-CD4 conjugado con ficoeritrobilina (PE) (Clon RPA-T4, BD Biosciences), mientras que un anticuerpo anti-pSTAT5 conjugado con Alexa Fluor 647 (pY694, Clon 47, BD Biosciences) para detectar la fosforilación de STAT5.
(1) Se siguió el protocolo del apartado (1) del Ensayo 8 con la excepción de que la estimulación con citocinas anticuerpo anti-CD3 se realizó durante 30 min en lugar de 24 h.
(2) Después de la estimulación con citocinas, las células se fijaron con solución de fijación precalentada (200 pl; BD Biosciences) durante 10 min a 37 °C, CO2 5 %, se lavaron dos veces con tampón DPBS (1 ml, Life Technologies) y se resuspendieron en tampón Perm III enfriado con hielo (1000 pl, BD Biosciences) durante 30 min a 4 °C. Las células se lavaron dos veces con FBS al 2 % en DPBS (tampón FACS) y después se resuspendieron en tampón FACS (100 pl) que contenía PE anti-CD4 (dilución 1:50) y Alexa Fluor 647 anti-CD3 (dilución 1:5) durante 60 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Después de la incubación, las células se lavaron dos veces en tampón FACS antes de que se analizasen usando un citómetro de flujo LSRII (BD Biosciences). Para determinar la potencia inhibidora de los compuestos de ensayo en respuesta a IL-2/anticuerpo anti-CD3, se midió la intensidad fluorescente media (IFM) de pSTAT5 en linfocitos T CD4+. Se determinaron valores de CI50 a partir del análisis de las curvas de inhibición de IFM frente a la concentración de compuesto. Los datos se expresan como valores de pCI50 (logaritmo decimal negativo de CI50). El compuesto del Ejemplo 2 presentó un valor de pCI50 de aproximadamente 7,3 en este ensayo.
Figure imgf000036_0001
Se midió la potencia del compuesto de ensayo para determinar la inhibición de la fosforilación de STAT6 estimulada por interleucina-4 (IL-4) en linfocitos T CD3 positivos (CD3+) en células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) aisladas de sangre completa humana (Stanford Blood Center) usando citometría de flujo. Debido a que IL-4 señaliza a través de JAK, este ensayo proporciona una medida de la potencia celular de JAK.
Se identificaron linfocitos T CD3+ usando un anticuerpo anti-CD3 conjugado con ficoeritrobilina (PE) (Clon UCHT1, BD Biosciences), mientras que se usó un anticuerpo anti-pSTAT6 conjugado con Alexa Flúor 647 (pY641, Clon 18/P, BD Biosciences) para detectar la fosforilación de STAT6.
Se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (CMSP) de sangre completa humana de donantes sanos como en los Ensayos 8 y 9. Las células se sembraron a 250.000 células/pocillo en medio (200 pl), se cultivaron durante 1 h y después se resuspendieron en medio de ensayo (50 pl) (RPMI complementado con albúmina sérica bovina al 0,1 % (Sigma), Glutamax 2 mM, HEPES 25 mM y IX Pen/estrep) que contenía diversas concentraciones de compuestos de ensayo. Los compuestos se diluyeron en serie en DMSO y después se diluyeron otras 500 veces (hasta una concentración de ensayo final 2x) en medio de ensayo. Los compuestos de ensayo (50 pl) se incubaron con células a 37 °C, CO2 al 5 % durante 1 h, seguido de la adición de IL-4 (50 pl) (R&D Systems; concentración final 20 ng/ml) en medios de ensayo precalentados durante 30 min. Después de la estimulación con citocinas, las células se fijaron con solución fija precalentada (100 pl) (BD Biosciences) durante 10 min a 37 °C, CO2 al 5 %, se lavaron dos veces con tampón FACs (1 ml) (FBS al 2 % en DPBS) y se resuspendieron en tampón Perm III enfriado con hielo (1000 pl) (BD Biosciences) durante 30 min a 4 °C. Las células se lavaron dos veces con tampón FACS y después se resuspendieron en tampón FACS (100 pl) que contenía PE anti-CD3 (dilución 1:50) y Alexa Fluor 647 anti-pSTAT6 (dilución 1:5) durante 60 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Después de la incubación, las células se lavaron dos veces en tampón FACS antes de que se analizasen usando un citómetro de flujo LSRII (BD Biosciences).
Para determinar la potencia inhibidora del compuesto de ensayo en respuesta a IL-4, se midió la intensidad fluorescente media (IFM) de pSTAT6 en linfocitos T CD3+. Se determinaron valores de CI50 a partir del análisis de las curvas de inhibición de IFM frente a la concentración de compuesto. Los datos se expresan como pCI50 (logaritmo decimal negativo de CI50). El compuesto del Ejemplo 2 presentó un valor de pCI50 de 7,9 en este ensayo.
Ensayo 11: Ensayo celular de potencia de JAK: Inhibición de pSTAT3 estimulada por IL-6 en linfocitos T CD3+
Se usó un protocolo análogo al del Ensayo 10 para determinar la potencia del compuesto de ensayo para la inhibición de la fosforilación de STAT3 estimulada por interleucina 6 (IL-6). Se usó un anticuerpo anti-pSTAT3 conjugado con Alexa Flúor 647 (pY705, Clon 4/P, BD Biosciences) para detectar la fosforilación de STAT3.
El compuesto del Ejemplo 2 presentó un valor de pCI50 de 7,2 en este ensayo.
Estructura cristalina
Se obtuvo una estructura cocristalina del compuesto del Ejemplo 2 unido a JAK1 humana a una resolución de 2,28 A. Se observó que el ligando se unía en el sitio de unión a ATP. Se identificaron siete interacciones específicas de enlace de hidrógeno basadas en una distancia de 3,5 A o menos entre los átomos donadores y aceptores. Cabe destacar que se identificó una interacción de enlace de hidrógeno entre el carbonilo de la amida exocíclica del compuesto del Ejemplo 2 y la cadena lateral de Arg879 de JAK1. En estudios de modelización anteriores, esta interacción se había propuesto como una forma de proporcionar selectividad por JAK1 frente a otras tirosina cinasas, ya que otras cinasas estrechamente relacionadas (por ejemplo, TRKA, v Eg FR, ABL1) no poseían un resto de arginina en el lugar equivalente. Los resultados observados de la interacción de enlace de hidrógeno en la estructura cristalina y la mejora de la selectividad del cinoma en comparación con las series que no poseían la amida exocíclica validan esta hipótesis de diseño.
Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a aspectos o realizaciones específicos de la misma, los expertos habituales en la materia comprenderán que pueden realizarse diversos cambios o que pueden sustituirse equivalentes sin apartarse del alcance de la invención.

Claims (21)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000038_0001
en donde:
R1 se selecciona entre hidrógeno, alquilo C1-3 y cicloalquilo C3-6, y X es -C(O)R2 en donde
R2 es -NR13R14, en donde
R13 y R14 se toman junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 4 miembros, en donde el heterociclilo está opcionalmente sustituido con -NR5R6 y R7,
R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 5 o 6 miembros que incluye opcionalmente un átomo de oxígeno,
R7 es alquilo C1-3, opcionalmente sustituido con un heterociclilo de 5 o 6 miembros que contiene un átomo de nitrógeno,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de la Reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R1 es hidrógeno o alquilo C1-3.
3. El compuesto de la Reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R13 y R14 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 4 miembros, en donde el heterociclilo está opcionalmente sustituido con -NR5R6 y R7, o
R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo de 5 o 6 miembros, y
R7 es alquilo C1-3, opcionalmente sustituido con pirrolidinilo.
4. Un compuesto de fórmula (II) de acuerdo con la reivindicación 1:
Figure imgf000038_0002
en donde:
R1 es alquilo C1-3;
R2 es
Figure imgf000038_0003
en donde
R5 y R6 son independientemente alquilo C1-3 o R5 y R6 tomados juntos forman -(CH2)4-5-, en donde R7 es hidrógeno o alquilo C1-3,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. El compuesto de la Reivindicación 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R5 y R6 son alquilo C1-3.
6. El compuesto de la Reivindicación 4, en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
7. El compuesto de la Reivindicación 4, en donde el compuesto es (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(5-etil-2-(6-(2-eti l-5-fluoro-4-hi d roxife nil)-1 H-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[5,4-c]piridin-6-il)metanona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
8. El compuesto de la Reivindicación 4, en donde el compuesto se selecciona entre:
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
(S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
(S)-(3-(dimetilamino)-3-metilazetidin-1-il)(2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metanona,
y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de fórmula
Figure imgf000039_0001
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de fórmula
Figure imgf000039_0002
11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 10 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. Un proceso de preparación de un compuesto de fórmula (II):
Figure imgf000040_0001
en donde R1 y R2 son como se definen en la Reivindicación 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula 1:
Figure imgf000040_0002
con un compuesto de fórmula 2:
H-R2 2
para proporcionar un compuesto de fórmula (II) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. Un compuesto de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 10 para su uso en el tratamiento de una enfermedad respiratoria en un mamífero.
14. El compuesto para el uso de la Reivindicación 13, en donde la enfermedad respiratoria es el asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis quística, neumonitis, fibrosis pulmonar idiopática, lesión pulmonar aguda, síndrome de dificultad respiratoria aguda, bronquitis, enfisema, bronquiolitis obliterante o sarcoidosis.
15. El compuesto para el uso de la Reivindicación 13, en donde la enfermedad respiratoria es el asma.
16. El compuesto para el uso de la Reivindicación 13, en donde la enfermedad respiratoria es una enfermedad eosinofílica, una infección helmíntica, hipertensión pulmonar arterial, linfangioleiomiomatosis, bronquiectasia, una enfermedad pulmonar infiltrante, neumonitis inducida por fármacos, neumonitis inducida por hongos, aspergilosis broncopulmonar alérgica, neumonitis por hipersensibilidad, granulomatosis eosinofílica con poliangeítis, neumonía eosinofílica aguda idiopática, neumonía eosinofílica crónica idiopática, síndrome hipereosinófilo, síndrome de Loffler, neumonía organizativa por bronquiolitis obliterante, enfermedad pulmonar de injerto contra hospedador o neumonitis inducida por inhibidores del punto de control inmunitario.
17. Un compuesto de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 10 para su uso en el tratamiento del rechazo de trasplante de pulmón en un mamífero.
18. El compuesto para el uso de la Reivindicación 17, en donde el rechazo de trasplante de pulmón es la disfunción primaria del injerto, neumonía organizativa, rechazo agudo, bronquiolitis linfocítica o disfunción crónica de aloinjerto de pulmón.
19. El compuesto para el uso de la Reivindicación 17, en donde el rechazo de trasplante de pulmón es el rechazo de trasplante de pulmón agudo.
20. El compuesto para el uso de la Reivindicación 17, en donde el rechazo de trasplante de pulmón es la disfunción de aloinjerto pulmonar crónica.
21. El compuesto para el uso de la Reivindicación 17, en donde el rechazo de trasplante de pulmón es la bronquiolitis obliterante, la disfunción de aloinjerto pulmonar crónica restrictiva o la disfunción de aloinjerto neutrofílica.
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