ES2402253A1

ES2402253A1 - Uso de oxoisoaporfinas en el tratamiento contra la leishmaniosis.

Info

Publication number: ES2402253A1
Application number: ES201101090A
Authority: ES
Inventors: Eduardo Sobarzo Sánchez; Florencio MARTÍNEZ UBEIRA; Humberto GONZÁLEZ DÍAZ; María Auxiliadora DEA-AYUELA; Francisco BOLÁS FERNÁNDEZ; Pablo BILBAO RAMOS
Original assignee: CEU CARDENAL HERRERA, University of; UNIVERSIDAD CEU CARDENAL HERRERA; Universidade de Santiago de Compostela; Universidad Complutense de Madrid
Current assignee: CEU CARDENAL HERRERA, University of; UNIVERSIDAD CEU CARDENAL HERRERA; Universidade de Santiago de Compostela; Universidad Complutense de Madrid
Priority date: 2011-09-30
Filing date: 2011-09-30
Publication date: 2013-04-30
Anticipated expiration: 2031-09-30
Also published as: ES2402253B1; WO2013045730A1

Abstract

Uso de oxoisoaporfinas en el tratamiento contra la leishmaniasis. Se muestran los datos de actividad in vitro de compuestos con estructura de oxoisoaporfinas frente a las especies del género Leishmania: L. amazonensis, L. infantum, L. braziliensis y L. guyanensis. La invención también se refiere a las formulaciones farmacéuticas comprendiendo estos compuestos.

Description

USO DE OXOISOAPORFINAS EN EL TRATAMIENTO CONTRA LA LEISHMANIOSIS

Sector de la técnica La presente invención se refiere al uso de compuestos de estructura 1, 11, 111, IV, V, VI Y VII para el tratamiento de la Leishmaniosis. Más específicamente se refiere al
tratamiento frente a algunas especies del género Leishmania: L. amazonensis, L. infantum, L. braziliensis y L. guyanensis. Antecedentes La leishmaniosis es una enfermedad causada por especies del género Leishmania, un protozoo flagelado que se multiplica en el interior de los macrófagos de los mamíferos y es transmitido por la picadura de mosquitos (Géneros: Phlebotomus y Lutzomyia). Se considera que al menos 20 especies de Leishmania son responsables de las distintas formas clínicas con que se puede presentar la enfermedad: cutánea, (localizada o difusa), mucocutánea y visceral (kala-azar), cada una de ellas con sus distintas peculiaridades. La dificultad de controlar los vectores y la ausencia de vacunas hace que la principal forma de ataque sea el tratamiento de la enfermedad; sin embargo, existen muy pocos fármacos disponibles y además ninguno consigue la eliminación total del parásito y presentan en general graves efectos secundarios. Actualmente, según el Medical Letter (http://www.dpd.cdc.gov/dpdxlHTMLlPDF Files/ MedLetter/Leishmania.pdf), el número de fármacos disponibles para el tratamiento de las formas viscerales de la enfermedad es muy reducido. Entre los fármacos de primera elección están la Miltefosina (Impavido®), y la forma liposomal de Amfotericina B (Ambisome). En cuanto a su mecanismo de acción, el compuesto parece interferir con la membrana celular sin interactuar con el ADN Y modula la permeabilidad y fluidez de la membrana, la composición de los lípidos de membrana, el metabolismo de los lípidos y las señales de transducción. (Sundar S, Jha TK, Thakur CP, Engel J, Sindermann H, Fischer C, Junge K, Bryceson A, Berman J. Oral miltefosine for Indian visceral leishmaniosis. N Engl. J. Med. 2002, 347(22), 1739-46). En el caso de la miltefosina, ya se ha alertado de la aparición de resistencias al tratamiento y de presentar acción teratogénica, siendo además los tratamientos muy prolongados (Croft, S. L.; Sundar, S.; Fairlamb, A. H. Clin. Microbiol. Rev. 2006, 19, 111).

La anfotericina es un macrólido poliénico que presenta una fuerte actividad leishmanicida ya que se une al ergosterol en las membranas celulares del parásito, alterando así la permeabilidad del potasio intracelular. La fonna convencional de anfotericina como desoxicolato es altamente nefrotóxica; sin embargo, su vehiculación en liposomas (como el Ambisome) o en fonnulaciones asociadas a lípidos permiten reducir su toxicidad, administrar dosis más elevadas y más espaciadas. No obstante, el uso de estas fonnulaciones está limitada porque deben administrarse por vía endovenosa y bajo supervisión médica y son enonnemente costosas, lo que limita extraordinariamente su uso en zonas endémicas con escasos recursos económicos. (Torrado JJ, Espada R, Ballesteros MP, Torrado-Santiago S. Amphotericin B fonnulations and drug targeting. J. Pharm. Sci. 2008, 97(7), 2405-25). Para el tratamiento de la Leishmaniosis Cutánea o Leishmaniosis Cutánea Difusa, el Medical Letter, recomienda los antimoniales pentavalentes o la paramomicina por vía tópica. Éste último es un antibiótico aminoglucósido de amplio espectro que parece inhibir la síntesis de proteínas por interacción con la subunidad RNA ribosomal. Sin embargo, para las fonnas de Leishmaniosis Mucocutána están recomendados como fánnacos de primera elección los antimoniales y compuestos alternativos la anfotericina

o miltefosina. Hasta principios de 1990, los compuestos antimoniales pentavalentes como el antimoniato de N-Metilglucamina (Glucantime®), Estibogluconato sódico (Pentostan®) y la Estibamina (Demicheli, C.; Frézard, F.; Lecouvey, M.; Gamier-Suillerot, A. Biochim. Biophys. Acta 2002, 1570,192; Sereno, D.; Holzmuller, P.; Lemestre, J.L. Acta Tropica 2000, 74,25) fueron los únicos compuestos considerados de primera elección frente a la LV (Denton, H.; McGregor, J. C.; Coombs, G. H. Biochem. J. 2004, 381, 405). Su mecanismo de acción no se conoce completamente. Parece que actúan sobre el metabolismo energético inhibiendo las enzimas fosfofructoquinasa y piruvato dehidrogenasa, bloqueando la fonnación de ATP y GTP. Esta menor cantidad de nucleótidos tri fosfato favorecería la disminución de la síntesis de macromoléculas, contribuyendo a una menor viabilidad de los parásitos. (Berman JD, Waddell D, Hanson BD. Biochemical mechanisms of the antileishmanial activity of sodiumstibogluconate. AntimicrobAgents Ch 1985; 27 (6): 916-920) Sin embargo, la aparición de resistencias en zonas altamente endémicas ha restringido radicalmente su uso (Sundar, S.; More, D. K.; Singh, M. K.; Sharma, S.; Makharia, A. CUno Infect. Dis. 2000, 31, 1104).

De fonna general los tratamientos disponibles frente a todas las leishmaniosis cuentan con varios inconvenientes como son las vías de administración y la duración de los tratamientos, la toxicidad, el elevado precio de los tratamientos y la aparición de resistencias (Sundar, S.; Benjamin, B. J. Assoc. Physicians India 2003, 51, 195; Croft, S.

5 L.; Sundar, S.; Fairlamb,A. H. CUno Microbiol. Rev. 2006, 19,111). Entre las posibles estrategias en el desarrollo de nuevos compuestos leishmanicidas está la exploración de las rutas metabólicas esenciales para la supervivencia del parásito en el hospedador. Dentro de esta estrategia, los alcaloides isoquinolínicos son unos candidatos interesantes

10 por ser compuestos muy abundantes en la naturaleza y estar repartidos en una amplia variedad de plantas. Los alcaloides isoquinolínicos están constituidos por una estructura de quinolina o isoquinolina unidas por anillos aromáticos heterocíclicos o carbonados, y constituyen la base fundamental de muchas medicinas de origen natural administradas en la actualidad.

15 En este sentido, es interesante destacar la evaluación de compuestos extraídos de la corteza del tallo subterráneo de la Duguetia furfuraceae (Annonaceae): Duguetina (A), I3-N-óxido-Duguetina (B) y Dicentrinona (e), para los que se obtuvieron valores de ICso

de 4.32, 0.11 y 0.01 J.1M, respectivamente, frente a fonnas promastigotes axénicas de la Leishmania braziliensis (da Silva, D. B.; Tulli, E. C. O.; Militao, o. C. 0.; Costa-Lotufo,

20 L. Y.; Pessoa, C.; de Moraes, M. O.; Albuquerque, S.; de Siqueira, J. M. Phytomedicine, 2009, 16, 1059).

OMe OMe

(A) (B)

(C); R1 =R2 =OMe

(F); R1 =R2 =H Por otro lado, la bioactividad de las fracciones de alcaloides de plantas y arbustos provenientes de África como la Stephania dinklagei, que contienen oxoaporfinas como

(e) y derivados como la N-Metilliriodendronina (D), 2-0,N-Diimetilliriodendronina (E) Y Liriodenina (F) mostraron una mejoría en la actividad anti-leishmanicida sobre la L. donovani frente a las formas promastigotes (Camacho, M.; Kirby, G C.; Warhurst, D. C.; Croft, S. L.; Phillipson, J. D. Planta Med. 2000,66,478).

(E)

10 En general, los datos reportados en la actualidad nos presentan compuestos de diversa índole estructural que han sido testados mayoritariamente en ensayos in vitro bajo ciertas condiciones experimentales que no son siempre el fiel reflejo de lo que ocurre en organismos superiores como en animales. Así, cuando se han medido las citotoxicidades

15 de muchos compuestos con una interesante actividad leishmanicida han resultado dañinos tanto para la célula infectada como para el parásito.

Descripción de la invención El problema que plantea resolver la presente invención es proporcionar compuestos que presenten baja toxicidad y que sean capaces de inhibir de forma efectiva y selectiva el

5 crecimiento del parásito en las diversas especies de Leishmania en los órganos diana sin causar efectos secundarios a éstos. Así, la invención proporciona los compuestos de estructura 1, 11, 111, IV, V, VI Y VII como potentes y selectivos inhibidores del crecimiento de parásitos pertenecientes a algunas especies de Leishmania. Los compuestos de la presente invención mostraron una

10 interesante y efectiva actividad leishmanicida in vitro frente a formas amastigotes axénicos de la especie Leishmania amazonensis y frente a promastigotes de las especies Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis, Leishmania guyanensis y Leishmania infantum. La presente invención proporciona el uso de compuestos con una alta eficacia frente a determinadas especies de Leishmania, tanto en ensayos in vitro como in vivo, con

15 una elevada reducción de la carga parasitaria en los órganos diana y sin efectos secundarios.

En un aspecto, la presente invención se dirige al uso de compuestos con la fórmula general 1, 11, 111, IV, V, VI y VII, sus sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, 20 solvatos, tautómeros y N-óxidos, para la elaboración de medicamento para el tratamiento de la leishmaniosis,

R9
R9
R9

R8
R8
R8

R7
R7
R7

(1): (11) (111)

R3: R2 R3 R2 R3 R2

R1
R1
R1

R9
R9
R9

R8
R8
R8

R7
R7
R7

(IV): M (VI)

R3: R2

R'

(VII)

donde: -R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Y R9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, cic1oalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido,

cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, -OR b Y -NRaRb,.

R a y R b se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, o, Ra y Rb conjuntamente fonnan un anillo de heterociclo sustituido o no sustituido, de 4 a 7 miembros conteniendo 0-2 heteroátomos adicionales independientemente seleccionados entre oxígeno, azufre y N_Rc, donde RC se selecciona entre hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o C(O)Rb.

En un segundo aspecto, la invención se dirige al uso de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fónnula 1, 11, 111, IV, V, VI ó VII, como se describieron anterionnente, y un vehículo farmacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para el tratamiento de leishmaniosis.

Descripción detallada de la invención

"Alquilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada que no contiene ninguna instauración, de 1 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados entre halógeno, ciano, _ORb, -NRaS(O)mRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -S(O) mRb, -S(O)mNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, -C(O)Rb, -C02Rb, C(O)NRaRb, _NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, -NRaC(O)NRaRb, -CF3, -OCF3, cicloalquilo,

Ra Rb

cicloheteroalquilo, arilo y heteroarilo; donde y son como se definieron previamente. "Cicloalquilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada cíclica que no contiene ninguna instauración, de 3 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 5 a 6 átomos de carbono. El cicloalquilo puede ser monocíclico, bicíclico o tricíclico y puede incluir anillos fusionados. Opcionalmente el cicloalquilo puede estar sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre halógeno, ciano, _ORb, -NRaS(O)mRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -S(O) mRb, -S(O)mNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, -C(O)Rb, -C02Rb, _C(O)NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, _NRaC(O)NRaRb,

-: CF3, -OCF3, alquilo, arilo y heteroarilo; donde Ra y Rb son como se definieron previamente.

"Alquenilo" se refiere a una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, cíclica o acíclica, que contiene al menos una instauración, de 2 a 10 átomos de carbono, preferiblemente de 2 a 5 átomos de carbono, opcionalmente sustituidos con uno a tres sustituyentes seleccionados entre halógeno, ciano, _ORb, -NRaS(O)rnRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -SeO) rnRb, -S(O)rnNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, -C(O)Rb, C02Rb, -C(O)NRaRb, -NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, _NRaC(O)NRaRb, -CF3, -OCF3, alquilo, cicloalquilo, cicloheteroalquilo, arilo y heteroarilo; donde Ra y Rb son como se definieron previamente. "Cicloheteroalquilo" se refiere a un cicloalquilo que contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre oxígeno, nitrógeno o azufre, por ejemplo: pirrolidinilo, morfolinilo, piperazinilo y piperidinilo. Opcionalmente el cicloheteroalquilo puede estar sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre _ORb, -NRaS(O)rnRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -SeO) rnRb, -S(O)rnNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, -C(O)Rb, -C0 2Rb, -C(O)NRaRb, _NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, _NRaC(O)NRaRb, -CF3, -OCF3, alquilo, arilo y heteroarilo; donde Ra y Rb son como se definieron previamente. "Arilo" se refiere a un hidrocarburo aromático de 6 a 1 Oátomos de carbono, por ejemplo: fenilo o naftilo; opcionalmente el arilo puede estar sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre _ORb, -NRaS(O)rnRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -SeO) rnRb, -S(O)rnNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, -C(O)Rb, -C02Rb, C(O)NRaRb, _NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, _NRaC(O)NRaRb, -CF3, -OCF3, alquilo, alquenilo, arilo y heteroarilo; donde Ra y Rb son como se definieron previamente. "Heteroarilo" se refiere a un arilo que contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre oxígeno, nitrógeno o azufre, por ejemplo: piridilo, pirazolilo, triazolilo, pirimidilo, isoxazolilo, indolilo y tiazolilo; opcionalmente el heteroarilo puede estar sustituido con uno a tres sustituyentes seleccionados entre _ORb, -NRaS(O)rnRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _SRb, -SeO) rnRb, -S(O)rnNRaRb donde m se selecciona entre 1 y 2, _NRaRb, C(O)Rb, -C02Rb, _C(O)NRaRb, _NRaC(O)Rb, -NRaC(O)ORb, _NRaC(O)NRaRb, -CF3, OCF3, alquilo, alquenilo, arilo y heteroarilo; donde Ra y Rb son como se definieron previamente.

De acuerdo a una realización particular, los valores R 1 Y R 2 en los compuestos de fórmula (1), según se definieron anteriormente, se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, alquenilo, _ORb y _NRaRb; y,

R3 R6R7R8

, R\ R5, , , Y R9 , en el compuesto de fórmula (1) se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, alquilo, cic1oalquilo, alquenilo, cic1oheteroalquilo, arilo, _ORb y-NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron anteriormente. De acuerdo a una realización más particular, los valores R1 y R2 en los compuestos de

R8

fórmula (1), son hidrógeno y R3, R4, R5, R6, R7, Y R9 se seleccionan de forma

independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

De acuerdo a una realización particular, los valores R1, R2, R3, R\ R5, R6, R7, R8 Y R9 en

los compuestos de fórmula (11), según se definieron anteriormente, se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, alquilo sustituido o no sustituido, cic1oalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o -ORb; donde Rb es como se definió anteriormente. De acuerdo a una realización más particular, los valores R I Y R2 en los compuestos de fórmula (11), se seleccionan independientemente entre hidrógeno y halógeno, y R3, R4,

R5, R6, R7, R8 Y R9 se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, y _ORb; donde Rb se selecciona preferentemente entre hidrógeno y alquilo.

De acuerdo a una realización particular, los valores RI, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 Y R9 en

los compuestos de fórmula (111), según se definieron anteriormente, se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

De acuerdo a una realización particular, los valores R1 y R2 en los compuestos de fórmula (IV), según se definieron anteriormente, se seleccionan independientemente entre R9

hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, _ORb y _NRaRb; R3, R4, R5, R6, R7, R8, se

seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, alquilo, cic1oalquilo, alquenilo, cic1oheteroalquilo, arilo, _ORb y _NRaRb; donde R a y Rb son como se definieron anteriormente.

De acuerdo a una realización más particular, los valores R 1, R2, R5, R6, R7, R8 Y R9 en los R5

compuestos de fórmula (IV), son hidrógeno; y R3, R4, se seleccionan independientemente entre hidrógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

R8

De acuerdo a una realización particular, los valores R1, R2, R6, R7, Y R9 en los

compuestos de fórmula (V), se seleccionan de forma independiente de entre el grupo R4 R5

consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, alquenilo, _ORb y _NRaRb; R3, ,

se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, alquilo, cic1oalquilo, alquenilo, cic1oheteroalquilo, arilo, _ORb y _NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron anteriormente.

R2 R6 R7 R8 R9 YRIO

De acuerdo a una realización más particular, los valores R1, , , , , en R3 R4 R5

los compuestos de fórmula (V), son hidrógeno, y , , se seleccionan independientemente entre hidrógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

R8

De acuerdo a una realización particular, los valores R" R2 R6, R7, Y R9 en los compuestos de fórmula (VI), se seleccionan de forma independiente de entre el grupo R5

consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, alquenilo, _ORb y _NRaRb; R3, R4, se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, cic1oalquilo, alquenilo, cic1oheteroalquilo, arilo, -ORb Y -NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron anteriormente.

De acuerdo a una realización más particular, los valores R1, R2, R6, R7, R8 Y R9 en los R5

compuestos de fórmula (VI), son hidrógeno y R3, R4, se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno y -ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

R4 Y R5

De acuerdo a una realización particular, los valores R3, en los compuestos de fórmula (VII), se seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, alquenilo, _ORb y-NRaRb; R1, R2, R6, R7, R8 YR9 se

seleccionan de forma independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo, cic1oalquilo, alquenilo, cicloheteroalquilo, arilo, _ORb y -NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron anteriormente.

De acuerdo a una realización más particular, los valores R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 Y R9

en los compuestos de fórmula (VII), se seleccionan independientemente entre hidrógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo.

De acuerdo a otra realización particular, los compuestos de fórmula 1, 11, 111, IV, V, VI Y VII, son seleccionados entre: -2,3-dihidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-2,3-dihidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-6-hidroxi-2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-6-hidroxi-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -5-metoxi-6H-dibenzo[de,h]quinolin-6-ona -5-hidroxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -7-hidroxi-l,2,3,11 b-tetrahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolina -5-metoxi-6-hidroxi-l ,2,3,7a,8,9,1 0,11 ,11 a,llb-decahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7ona -5-metoxi-7-hidroxi-l ,2,3, 11 b-tetrahidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolina -5-metoxi-2,3,8,9,1 0,II-hexahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -2,3,8,9,10,II-hexahidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7-ona -3-bromo-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -3-bromo-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -4-bromo-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -9-nitro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -4-nitro-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7-ona -5,6-dihidro-4H-dibenzo[de, h]quinolin-7 -01

La actividad de los compuestos de la invención fue testeada frente diferentes especies de Leishmania, y se comprobó que los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento frente a las especies Leishmania amazonensis, L. infantum, L. braziliensis y

L. guyanensis. Así en una realización particular, la invención se refiere al uso de cualquiera de los compuestos anteriormente descritos para la preparación de un medicamento para el tratamiento de Leishmania amazonensis, L. infantum, L. braziliensis y L. guyanensis.

En una realización particular, la invención se refiere al uso de 5,6-dihidro-4Hdibenzo[de,h]quinolin-7-01 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de

Leishmania guayanensis.

Los compuestos de la invención son adecuados para preparar composiciones farmacéuticas para la preparación de un medicamento para el tratamiento de leishmaniosis. Y en una realización particular, la invención se refiere al uso de una composición farmacéutica que comprende 2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona o 5,6-dihidro4H-dibenzo[de,h] quinolin-7-01 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de leishmaniosis. El uso de las composiciones farmacéuticas de la invención se dirige a la administración por vía oral, inyectable o tópica. De entre las composiciones farmacéuticas que se pueden preparar son de especial interés para la invención las composiciones útiles para la administración por vía tópica. Así, en una realización particular, el uso de cualquiera de las composiciones farmacéuticas anteriormente descritas se dirige a la vía tópica. Las composiciones empleadas en la vía tópica pueden tener la forma de gel o pomada. En una realización particular, las composiciones administradas por vía tópica comprenden además carbopol.

Los compuestos de la invención pueden prepararse mediante técnicas habitualmente empleadas en la química y conocidas por un experto en la materia. Algunos de los compuestos de fórmulas (1), (11), (111), (IV), (V) y (VI) se describieron en [Fabre, J.-L; Farge, D.; James, C. u.s. Patent N° 4,128,650 (1978); Sobarzo-Sánchez, E, Cassels, B. K.; Castedo, L. Synlett. 11, 1647 (2003); Sobarzo-Sánchez, E., De la Fuente, J., Castedo,

L. Magn. Reson. Chem. 43, 1080 (2005)]. Algunos de los compuestos de fórmulas (11),

(IV) y (V) se describieron en "Procedimiento experimental de nuevos análogos de oxoisoaporfinas" de la solicitud de patente F201000501. Los compuestos de fórmula

(VII) pueden obtenerse a partir del correspondiente compuesto de fórmula (11) mediante reducción, por ejemplo mediante una hidrogenación catalítica empleando un catalizador de PdlC o Pt02. A continuación, para una mejor comprensión de la invención se proporcIOnan los siguientes ejemplos, sin que éstos supongan una limitación a la invención.

Ejemplos

Evaluación in vitro de la actividad leishmanicida sobre la especie L. amazonensis Los experimentos se realizaron sobre amastigotes axénicos de Leishmania amazonensis (cepa MHOMIBR/76/LTB-012) según Estevez et al. (Estevez Y, Castillo D, Jangoa M, Arevalo J, Rojas R, Alban J, Deharo E, Bourdy G, Souvain M. "Evaluation of the leishmanicidal activity of plants used by Peruvian chayahuita ethnic group", Journal Ethnopharmacology. 2007, 114, 254). Los amastigotes axénicos cultivados fueron mantenidos por subpasos semanales en el medio complementado con un 20 % de suero bovino fetal (Sereno, D.; Lemesre, J. L. "Use of an enzymatic in vitro micromethod to quantify amastigote stage ofaxenically-grown amastigote forms of Leishmania amazonensis". Parasitol. Res. 1997, 83, 401) a 32° C con C02 al 5 % en frascos de cultivo de 25 cm 2. Para determinar la actividad de los extractos, se empleó un método colorimétrico con bromuro de 3-( 4,5-dimetiltiazol-2-ilo )-2,5-difeniltetrazolio (MTT) fue usado según Sereno y Lemesre, 1997. A continuación, 100 ¡.tL de amastigotes cultivados, en fase de crecimiento logarítmico, fueron sembrados en placas de micro-titulación de 96 pocillos. Los extractos, disueltos en DMSO, fueron añadidos en concentraciones finales entre 100 a 10 mg/mL. La concentración final de DMSO nunca fue superior al 0.1 %. Después de 72 h de incubación, se añadieron 10 ¡.tI de la solución de MTT (10 mg/mL en PBS) a cada pocillo y las placas se incubaron 4 h. La reacción enzimática se frenó por adición de 100 J..lL de 50% de isopropanol -10% de dodecil sulfato de sodio y se mantuvo con agitación durante 30 minutos. Finalmente se leyó la Densidad Óptica (OD) en un lector de ELISA a 570 nm (Bio-Rad). Todos los experimentos fueron realizados por triplicado, y las desviaciones estándares fueron calculadas usando el software Excel. El porcentaje de inhibición del crecimiento fue calculado por la fórmula siguiente:

. b·h· ., Densidadópticacontrol -Densidadópticadroga 100

%o de In 1 IClOn = x

Densidadópticacontrol

La concentración que inhibe el 50 % del crecimiento de parásito (ICso) fue calculada después de evaluar el porcentaje de inhibición al crecimiento en diferentes concentraciones. El compuesto de referencia fue Anfotericina B.

Pruebas de eficacia in vitro frente a Leishmania spp Se dispusieron promastigotes en fase de crecimiento logarítmico de las distintas especies de Leishmania (L. infantum, L. braziliensis, L. amazonensis y L. guyanensis) a una concentración de 1,25 x 10 promastigotes/mL, en un volumen final de 200 JlL de medio Schneider en placas de micro-titulación. Para la determinación de la susceptibilidad a fármacos se prepararon diluciones seriadas de los compuestos en medio de cultivo Schneider (100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12, 1.56, 0.78 Jlg/mL), que se añadieron por triplicado a las placas de microtitulación. Se dejaron en incubación a 26°C en contacto con los compuestos y después de 48 horas, se añadieron 20 Jll de una solución de resazurina 2,5 mM en PBS, dejándose en incubación 3 h a 26° C. A continuación, se determinó la intensidad de fluorescencia en un espectrofluorímetro (lnfinite Tecan 1control) a 535 nm (excitación) /590 nm (emisión) de longitud de onda. Finalmente, se determinó el porcentaje de parásitos viables y la concentración inhibitoria media (lCso) por el método de Regresión Probit utilizando el paquete estadístico SPSS v.15.0.

Citotoxicidad Celular Se dispusieron macrófagos 1774 en fase de crecimiento logarítmico a una concentración de 2,5xlOs células/mI, en un volumen final de 200 Jll en placas de micro-titulación. Se prepararon diluciones seriadas de los compuestos de igual forma que en la determinación de la eficacia in vitro medio de cultivo RPMI-1640, que se añadieron por triplicado a las placas de microtitulación. Se dejaron en incubación a 37° C en contacto con los compuestos y después de 24 horas, se añadieron 20 Jll de una solución de resazurina 2,5 mM en PBS, dejándose en incubación 3 h a 37° C. A continuación, se determinó la intensidad de fluorescencia en espectrofluorímetro (lnfinite Tecan I-control) a 535 nm (excitación) -590 nm (emisión) de longitud de onda. Se determinó el porcentaje de parásitos viables y la concentración citotóxica media (CCso) por el método de Regresión Probit utilizando el paquete estadístico SPSS v.15.0.

Pruebas de eficacia in vivo frente a Leishmania infantum

1.: Infección experimental Para la infección experimental se emplearon ratones BALB/c. Dicha infección se realizó con promastigotes de la cepa M/CAN/ES/96/BCN150 de L. infantum en fase estacionaria, mantenidos previamente a 26° C en medio Schneider. A los animales se les inoculó una dosis de 107 promastigotes en 0.1 mL de PBS estéril por vía intracardiaca.

2.: Pauta posológica El tratamiento se realizó a los 35 días post-infección por vía intraperitoneal.

El compuesto se disolvió en DMSO a una concentración de 50 mg/mL y a continuación se diluyó en PBS hasta ajustar la dosis a administrar. Se probaron 3 dosis diferentes (10, 5 y 2.5 mg/kg de animal) y se dejó un grupo de animales como control. El tratamiento se aplicó durante 3 días consecutivos Los animales fueron sacrificados 5 días después de terminar el tratamiento.

3. Evaluación de la eficacia La determinación de la eficacia se realizó mediante el método de la dilución límite (Hill y cols., 1983; Titus Y cols., 1985). Una vez sacrificados los animales y tras pesar los órganos diana (Bazo e Hígado), se pesó una muestra alícuota de los mismos que fue homogenizada, en condiciones estériles, sobre una rejilla metálica, empleando PBS Glucosa-EDTA frío. Los restos celulares se eliminaron haciendo pasar el homogenado a través de una columna de lana de vidrio estéril. La solución obtenida se centrifugó a 3500

r.p.m. durante 15 minutos y 4° C. Posteriormente se eliminaron los sobrenadantes y los "pellets" fueron re-suspendidos en un volumen fijo de medio Schneider.

Previamente se prepararon placas de micro-titulación con medio semisólido NNN dispuesto en pico. A continuación se añadieron 100 J.11 de medio Schneider por pocillo, excepto en el primer pocillo, de forma que en este se añadieron 200 J.11 del homogenado de los órganos antes indicado. Desde este pocillo y a continuación, se fueron pasando 100 J.11 hasta el último pocillo, es decir, se realizó una dilución en base 2. Las placas se incubaron durante 7 días a 26° C, momento en el que se procedió a la visualización del número de pocillos positivos. Se asume que los amastigotes se han ido diluyendo de tal manera que en el último pocillo positivo la dilución es máxima, es decir, queda un solo amastigote. Los promastigotes que crecen en ese pocillo provienen de ese único amastigote. Si eso es cierto, la carga parasitaria inicial de ese pocillo fue 1.

Como la muestra estaba diluida tendremos que multiplicar por 2, es decir, que en el último pocillo positivo se considera que la carga parasitaria es 2. En el anterior es 4, en el anterior a este, es 8, y así sucesivamente. Así, mediante una tabla de transformación se obtiene el número de parásitos según el número de pocillos positivos y a partir del mismo se puede determinar el número de parásitos por miligramo de órgano. Finalmente la eficacia del tratamiento se expresa como porcentaje de reducción de la carga parasitaria en los grupos tratados en relación al grupo control.

,

I 1

EVALUACIÓN DE COMPUESTOS Los compuestos denominados OXO 17, OXO 1 a OXO 8, y OXO 10 a OXO 14, han sido sintetizados de acuerdo a las referencias bibliográficas mencionadas a continuación [Fabre, J.-L; Farge, D.; James, C. u.s. Patent N° 4,128,650 (1978); Sobarzo-Sánchez, E, Cassels, B. K.; Castedo, L. Synlett. 11, 1647 (2003); Sobarzo-Sánchez, E., De la Fuente, J., Castedo, L. Magn. Reson. Chem. 43, 1080 (2005)]. Los derivados de oxoisoaporfinas denominados OXO 9, OXO 10, OXO 15 y OXO 16 fueron obtenidos de acuerdo al procedimiento experimental descrito y expuesto en la sección "Procedimiento experimental de nuevos análogos de oxoisoaporjinas" de la solicitud de patente P201 000501. El compuesto OX019 se obtiene mediante el siguiente proceso: Una disolución de OX04 (80 mg, 0,34 mmol) en AcOH (50 mL) se hidrogenó a temperatura ambiente (20°C) con paladio al 10% sobre carbono (100 mg) por 24 h a 54 psi. La solución resultante se filtró y se diluyó en 100 mL de agua, basificándose con NH40H a pH 8-9 para ser luego extraída con CHCh. Los extractos orgánicos fueron secados con Na2S04 y concentrados al vacío para dar un residuo que fue purificado mediante cromatografía en gel de sílice (10% MeOH/CHCh), generando un sólido de OX019 que cristalizó en cic1ohexano como un polvo cristalino color amarillo pálido [80 mg, 100% de rendimiento]. RMN_1H () (DMSO-d6, ppm): 2,00 (m, 2H, H-5), 3,05 (m, 4H, H-4/H-6), 7,33 (d, 1H, J = 4,4 Hz, H-3), 7,70 (m, 2H, H-9/H-1O), 8,33 (dd, 1H, J = 8,2 Hz, J' = 1,3 Hz, H-8), 8,66 (d, 1H, J = 4,5 Hz, H-2), 9,14 (dd, 1H, J = 9,1 Hz, J' = 1,4 Hz, H-11), 9,36 (s, 1H, OH-7). IR (KBr,v, cm·l): 1098-1199 (OH). EMAR calculado para Cl6H13NO 235,2881, encontrado 235,09870.

A. 2,3-DIHIDRO-7H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-7-0NA (2,3-DIHIDROOXOISOAPORFINA), Fórmula general (1):

En que:

2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 1;

metoxilo, se trata de 5-metoxi-2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 2; y

R8

e) en que si:-R1, R2, R3, R6, R7, Y R9 es hidrógeno, R4 representa un metoxilo y R5 representa un hidroxilo; se trata de 5-metoxi-6-hidroxi-2,3-dihidro-7H10 dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 3.

B. 7H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-7-ONA (OXOISOAPORFINA), Fórmula general (11):

15 En que:

a) en que si: -R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 Y R9 es hidrógeno, se trata de

7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 4; b) metoxilo, se trata de 5-metoxi-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 5;

R8

e) en que si:-R1, R2, R3, R6, R7, Y R9 es hidrógeno, R4 representa un R5

metoxilo y representa un hidroxilo; se trata de 5-metoxi-6-hidroxi-7H dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 6; d)

hidroxilo, se trata del compuesto 5-hidroxi-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 8; e) bromo, se trata de 3-bromo-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 14;

f) en que si; -R1, R\ R5, R6, R7, R8 Y R9 es hidrógeno, R2 representa un R4

bromo y representa un metoxilo; se trata de 3-bromo-5-metoxi-7Hdibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 15;

g) en que si: -R1, R2, R5, R6, R7, R8 Y R9 es hidrógeno, R3 representa un R4

bromo y representa un metoxilo; se trata de 4-bromo-5-metoxi-7Hdibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 16;

h)

trata de 9-nitro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 17; y

i) en que si: -R1, R2, R5, R6, R7, R8 Y R9 es hidrógeno, R3 representa un nitro

y R4 representa un metoxilo; se trata de 4-nitro-5-metoxi-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7ona, llamado de aquí en adelante OXO 18.

C. 6H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-6-0NA (6-0XOISOAPORFINA), Fórmula general (111):

En que:

R8

a) en que si: -R1, R2, R3, R5, R6, R7, Y R9 es hidrógeno y R4 representa un metoxilo, se trata de 5-metoxi-6H-dibenzo[de,h]quinolin-6-ona, llamado de aquí en adelante OXO 7.

D. 7-HIDROXI-I ,2,3,11 b-TETRAHIDRO-7H-DIBENZO[de,h]QUINOLINA (7-HIDROXI-l,2,3,llb-TETRAHIDRO-ISOAPORFINA), Fórmula general (IV):

En que:

R1 R2 R3 R4 R6 R7 R8

'. 9 RIO 11 h'd' 5 representa un metoxilo; se trata de 5-metoxi-7-hidroxi-l,2,3,llb-tetrahidro-7Hdibenzo[de,h]quinolina, llamado de aquí en adelante OXO 11; y '. I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 h'dr' .

a) en que SI. -, , , , , , , R , Y R es 1 rogeno y R

15 b) en que SI. -R , R , R , R , R , R , R , R , R , R Y R es 1 ogeno, se trata de 7-hidroxi-I,2,3,llb-tetrahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolina, llamado de aquí en adelante OXO 9.

E. 1,2,3,7a,8,9,1O,11,11a,11b-DECAHIDRO-7H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-7ONA (1,2,3,7a,8,9,10,1l,lla,llb-DECAHIDRO-OXOISOAPORFINA), Fónnula general (V):

En que:

a) en que si: -R1, R2, R3, R4, R7, R8, R9 Y R10 es hidrógeno, R5 representa un R6

metoxilo y representa un hidroxilo; se trata de 5-metoxi-6-hidroxi1,2,3,7 a,8,9, 1 O,11,11 a, 11b-decahidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona, llamado de aquí 10 en adelante OXO 10.

F. 2,3,8,9,10,11-HEXAHIDRO-7H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-7-0NA (2,3,8,9,10,1l-HEXAHIDRO-OXOISOAPORFINA), Fónnula general (VI):

En que:

1) en que si: -R1, R2, R3, RS, R6, R7, R8 Y R9 es hidrógeno y R4 representa un metoxilo; se trata de 5-metoxi -2,3,8,9,10, 11-hexahidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona, llamado de aquí en adelante OXO 12; y b)

5 2,3,8,9,1O,1l-hexahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona, llamado de aquí en adelante OXO 13;

G. 5,6-DIHIDRO-4H-DIBENZO[de,h]QUINOLIN-7-0L, Fórmula general (VII):

(VII)

10 En que: a) 4H-dibenzo[de,h]quinolin-7-01, llamado de aquí en adelante OXO 19.

RESULTADOS DE LAACTIVIDAD LEISHMANICIDA DE LAS

15 OXOISOAPORFINAS Teniendo en cuenta los diferentes derivados de oxoisoaporfina OXO 1 -OXO 18 esquematizados en las siete estructuras químicas base mencionadas anteriormente, se llevaron a cabo primeramente los estudios de evaluación in vitro frente a la especie Leishmania amazonensis utilizando la forma cultivada de amastigote axénico. Así, los

20 resultados de leso conjuntamente con los porcentajes de inhibición de crecimiento del parásito en diferentes concentraciones y utilizando como fármaco de control la Anfotericina B, son los siguientes:

Tabla 1. Evaluación in vitro de amastigotes axénicos de la especie Leishmania amazonensis con derivados de oxoisoaporfinas OXO 1 -OXO 18 expresados en IClO-90 (J.lg/mL).

Compuestos: Porcentaje de inhibición a las concentraciones Actividades anti-Leishmania (Probit)

50 uglml: 5 uglml 0.5 uglml 0.05 uglml IC90 ICso IC IO

OX01: 107,81 107,44 105,79 100,61 <0.05 <0.05 <0.05

OX02: 93,98 84,80 ° ° 16,45 0,21 0,00

OX03: 98,16 70,82 ° 2,00 19,56 5,51 1,57

OX04: 97,55 20,33 10,16 2,32 31,13 4,93 0,80

OX05: 65,51 ° 1,01 3,64 134,62 40,93 12,60

OX06: 100,00 88,80 15,25 7,95 9,76 1,49 0,23

OX07: 103,40 94,78 58,66 10,30 3,57 0,34 0,03

OX08: 98,95 87,46 5,45 3,00 12,80 2,63 0,55

OX09: 98,04 7,37 15,93 3,91 31,09 13,28 5,72

OX010: 101,53 23,88 10,77 2,83 19,49 3,78 0,75

OXOll: 100,86 0,14 1,77 1,06 29,43 15,18 7,88

OX012: 101,15 101,87 14,16 8,52 2,31 0,49 0,11

OX013: 106,94 103,23 108,05 106,75 <0.025 <0.025 <0.025

25 uglml: 2.5 uglml 0.25 uglml 0.025 uglml IC90 ICso IClo

OX014: 95,27 ° ° 2,05 19,95 10,40 5,46

OX015: 95,76 ° 2,36 ° 19,81 10,76 5,89

OX016: 88,04 ° 4,10 1,78 27,02 13,33 6,62

OX017: 98,31 ° 0,48 0,53 18,22 10,56 6,16

OX018: 103,33 99,37 ° ° 1,61 0,84 0,44

luM: 0.1 uM O.OluM 0.001 uM IC90 ICso ICIO

AnfB: 101,18 1,51 3,27 0,89 0,68 0,35 0,19

AnfB: 101,39 ° 0,46 0,88 0,61 0,34 0,19

AnfB: 103,28 ° ° ° 0,61 0,37 0,23

Anf B = Anfotericina B

Estos resultados fannacológicos nos indican que detenninado tipo de estructuras o fragmentos carbonados presente en las oxoisoaporfinas tienen una importante y 5 apreciable actividad leishmanicida in vitro en la fonna de amastigote axénico. Así, OXO 1 (2,3-dihidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona) y OXO 13 (2,3,8,9,10, ll-hexahidro-7 Hdibenzo[de,h]-quinolin-7-ona), que representan a dos diferentes tipos de estructura química, tienen valores de ICso muy por debajo del valor de porcent8je de inhibición de crecimiento del patrón de referencia. Sin embargo, el compuesto OXO 7 (5-metoxi-6H

10 dibenzo[de,h]quinolin-6-ona) tiene un valor de ICso similar al patrón de referencia que dista mucho de la baja actividad leishmanicida de su isómero oxidado OXO 5 (5-metoxi7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona). Una vez que se observó que tanto OXO 1 y OXO 13 tenían una potencial actividad leishmanicida frente aL. amazonensis, se seleccionaron estos dos compuestos más un

15 derivado bromado de oxoisoaporfina OXO 16 y un derivado hidroxilado y parcialmente hidrogenado, OXO 19, para detenninar la eficacia in vitro de estos cuatro compuestos frente a promastigotes en fase de crecimiento logarítmico de cuatro especies de

Leishmania; L. amazonensis, L. braziliensis, L. infantum y L. guyanensis y verificar la

citotoxicidad de cada uno de ellos frente a macrófagos de la línea J774. De este modo, se

pueden apreciar los valores de ICso-90 expresados en Ilg/mL en las siguientes tablas:

Tabla 2. Evaluación in vitro de la forma promastigote de varias especies de Leishmania expresados en ICso (llg/mL).

Compuestos: L infantum L. amazonensis L. braziliensis L. guyanensis

OXOl: 42,1 31,8 48,2 16,2

OX013: 4,4 3,6 4,3 1,8

OX019: >100 >100 41,2 2,07

OX016: Sin actividad Sin actividad Sin actividad Sin actividad

10 Tabla 3. Citotoxicidad in vitro sobre macrófagos de la línea J774 de los distintos compuestos expresado como ICso y IC90 en Ilg/ml.

Compuestos: ICso IC90

OXOl: >100 >100

OX013: 31,05 132,51

OX019: >100 >100

OX016: >100 >100

Observando los datos experimentales, se puede concluir que tanto OXO 1 como OXO 13

15 siguen siendo muy activos frente a las cuatro especies de Leishmania. Más aún, OXO 13 muestra una actividad leishmanicida superior al otro derivado, de acuerdo a los datos de la Tabla 1. Sin embargo, es notorio observar que la citotoxicidad es mucho mayor en el compuesto más activo, lo cual es un problema al usar este derivado en sistemas vivos. En este sentido, la utilidad de usar OXO 1 como compuesto de referencia en el tratamiento

20 de estas cuatro especies de Leishmania es una buena alternativa que no ofrece efectos secundarios indeseables como la citotoxicidad que regularmente acompaña a los compuestos.

También es destacable mencionar la selectiva actividad leishmanicida que ofrece OXO 19 (5,6-dihidro-4H-dibenzo[de,h]quinolin-7-01) contra la especie Leishmania guyanensis responsable de generar lesiones cutáneas y mucocutáneas en animales y en el hombre. Así, se muestra que OXO 19 es muy activo frente a esta especie de Leishmania, de

5 acuerdo al valor de leso de 2.07 ¡.tg/mL. Esta selectividad y baja citotoxicidad representa una buena alternativa a considerar, teniendo en cuenta que existen pocos compuestos de origen natural que sean específicos para determinadas enfermedades parasitarias y con alta tolerancia.

10 Finalmente, como modelo de leishmaniosis visceral (la forma más agresIva de la enfermedad) se empleó L.infantum en ratón BALB/c que permite evaluar adecuadamente la actividad farmacológica de los compuestos con posible actividad, a nivel de órganos diana (hígado y bazo). Así, se presentan los resultados de la reducción de la carga parasitaria en los órganos

15 diana de los dos compuestos más activos frente a las especies de Leishmania testadas, OXO 1 y OXO 13, de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla 4. Porcentajes de reducción de la carga parasitaria en Leishmania infantum en órganos diana, Hígado y Bazo.

COMPUESTOIDOSIS*: HIGADO% BAZO %

OXO 13 / 2,5 mg: 17,9 2,2

OXO 13/5mg: 14,7 13,8

OXO 13/ 10mg: 38,2 9,6

OXO 1/2,5mg: 88,9 54,9

OXO 1/5mg: 69,6 46,5

OXO 1/10mg: 98,6 77,9

*variación apreciable entre animales. Los valores indican el porcentaje de reducción (67 ratones). Número de dosis: 3 en días consecutivos Especie: L. Infantum. Grupos: 6 ratones en los tratados y 8 en los controles.

25 En base a estos resultados in vivo sobre animales de experimentación, podemos demostrar que el compuesto OXO 1 tiene una alta capacidad de reducir la carga

parasitaria en los órganos diana, hígado y bazo (porcentajes de reducción del 99 y 78%, respectivamente), aún a dosis relativamente bajas. Esto confinna los resultados in vitro anteriores, tanto en amastigotes como en promastigotes, donde la selectividad y baja citotoxicidad de este derivado de oxoisoaporfina sugieren que dicha molécula puede ser

5 un buena candidata para el tratamiento de las leishmaniosis producidas por distintas especies de Leishmania. En otro aspecto, la presente invención proporciona posibles fonnulaciones farmacéuticas para la preparación de un medicamento, basadas sobre los compuestos presentados aquí, para el tratamiento terapéutico y selectivo contra la leishmaniosis.

10 Las dosis en las cuales el compuesto podría ser administrado varían dentro de un amplio rango, ajustándose a los requerimientos de cada caso en particular. Las diferentes composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas por vía oral, tópica e inyectable de acuerdo a las diferentes fonnulaciones farmacéuticas descritas en las Tablas 5-9.

15 EJEMPLO A (Tableta) Tabla 5. Fonnulación fannacéutica y peso del ingrediente activo más los excipientes de una tableta.

Componente: mgffableta

Ingrediente activo: 150

Celulosa micro cristalina: 100

Almidón: 100

Croscarmellosa de sodio: 75

Estearato de magnesio: 75

Peso de la Tableta: 500

EJEMPLO B (Cápsula) Tabla 6. Fonnulación fannacéutica y peso del ingrediente activo más los excipientes de una cápsula.

Componente mglCápsula

Ingrediente activo: 80

Almidón de maíz pre-gelatinizada: 100

Microcristales de celulosa: 50

Opadry OYS 96-14: 20

Peso de la Cápsula: 250

EJEMPLO C (Gel) Tabla 7. Formulación farmacéutica y peso del ingrediente activo más los excipientes de un gel.

Componente: Cantidad

Ingrediente activo: 10mg

Carbopol-940: 5mg

Propilenglicol: 1 mI

lMHCI: 10 ¡.tI

Trietanolamina: 20 ¡.tI

H20: c.s.p. 10 mI

EJEMPLO D (Pomada) 10 Tabla 8. Formulación farmacéutica y peso del ingrediente activo más los excipientes de una pomada.

Componente: Cantidad

Ingrediente activo: 3 mg/g pomada

Óxido de zinc: 2g

Vaselina: lOg

EJEMPLO E (Solución inyectable)

15: Tabla 9. Formulación farmacéutica y peso del ingrediente activo de una solución

inyectable.

Componente: Cantidad

Ingrediente activo: 10mg

lMHCI: 20 J-lI

NaCl: 9mg

H20: c.s.p. 1 mI

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de compuestos de fónnula 1, 11, 111, IV, V, VI o VII, sus sales fannacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, tautómeros, esteroisómeros y N-óxidos, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la leishmaniosis,

R9 R9 R9

R8 R8 R8 R7 R7 R7

(1) (11) (111)

R3 R2 R3 R2 R3 R2 R1 R1 R1

R9 R9 R9

R8 R8 R8 R7 R7 R7

(IV) (V) (VI)

R3 R2 R1

(VII)

donde -R\ R2, R3, R\ R5, R6, R7, R8, YR9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, -ORb Y -NRaRb,•

Ra y Rb se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, o, Ra y Rb conjuntamente fonnan un anillo de heterociclo sustituido o no sustituido, de 4 a 7 miembros conteniendo 0-2 heteroátomos adicionales independientemente seleccionados entre oxígeno, azufre y N-Re, donde Re se selecciona entre hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, o C(O)Rb•
2. Uso de compuestos con la fónnula (1), según la reivindicación 1, donde R1 y R2 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, -ORb Y_NRaRb; y, R3, R4, R5, R6, R7, R8 YR9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, -ORb Y -NRaRb,•

donde Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación 1.
3.

U so de compuestos con la fónnula (1), según la reivindicación 2, donde R 1 Y R 2 son hidrógeno y R3, R\ R5, R6, R7, R8 Y R9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
4.

Uso de compuestos con la fónnula (H), según la reivindicación 1, donde R1, R2, R3, R\ R5, R6, R7, R8 Y R9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o -ORb; donde Rb es como se definió en la reivindicación 1.
5. Uso de compuestos con la fónnula (11), según la reivindicación 4, donde R 1 Y R2 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y halógeno, y R3, R4, R5, R6, R7, R8 Y R9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, nitro, y _ORb; donde Rb se selecciona preferentemente entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
6. Uso de compuestos con la fónnula (111), según la reivindicación 1, donde R1, R2,

R3, R4, R5, R6, R7, R8 YR9 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno Y-ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
7. Uso de compuestos con la fónnula (IV), según la reivindicación 1, donde R1 y R2 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, _ORb y _NRaRb;

R4 RS R6 R7 R8 R9

_R3, , , , , , se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, _ORb y_NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación 1.
8. Uso de compuestos con la fónnula (IV), según la reivindicación onde R1, R2, RS, R6, R7, R8 YR9 son hidrógeno; y R3, R4, R5 se seleccionan independientemente entre

hidrógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
9. Uso de compuestos con la fónnula (V), según la reivindicación 1, donde R\ R2, R6, R7, R8 YR9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, _ORb y_NRaRb,•

R3R4 R5

, , se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cicloheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, _ORb y _NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación 1.
10.

Uso de compuestos con la fónnula (V), según la reivindicación 9, donde Rt, R2, R6, R7, R8, R9 YRIO son hidrógeno, y R3, R4, R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y _ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.

R2
11.

Uso de compuestos con la fónnula (VI), según la reivindicación 1, donde R1, R6, R7, R8 YR9 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, _ORb y_NRaRb;

R4 R5

R3, , se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, cic1oalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cic1oheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, _ORb y _NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación 1.
12.

Uso de compuestos con la fónnula (VI), según la reivindicación 11, donde R1, R2, R6, R7, R8 Y R9 son hidrógeno y R3, R4, R5 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno y -OR b; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
13.

Uso de compuestos con la fónnula (VII), según la reivindicación 1, donde R3, R4 y R5 se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, -ORb y_NRaRb;

R1 R2 R6 R7 R8 Y R9

, , , , se seleccionan de fonna independiente de entre el grupo consistente en hidrógeno, halógeno, ciano, alquilo sustituido o no sustituido, cic1oalquilo sustituido o no sustituido, alquenilo de sustituido o no sustituido, cic1oheteroalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, _ORb y _NRaRb; donde Ra y Rb son como se definieron en la reivindicación 1.
14.

Uso de compuestos con la fónnula (VII), según la reivindicación 13, donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 YR9 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y -ORb; donde Rb se selecciona entre hidrógeno y alquilo sustituido o no sustituido.
15.

Uso de compuestos de fónnula 1,11,111, IV, V, VI Y VII, según la reivindicación 1, seleccionados entre: -2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h ]quinolin-7-ona -5-metoxi-2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -5-metoxi-6-hidroxi-2,3-dihidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi -7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-6-hidroxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5-metoxi-6H-dibenzo[de,h]quinolin-6-ona -5-hidroxi-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-ona -7 -hidroxi -1,2,3,11 b-tetrahidro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolina -5-metoxi-6-hidroxi-1 ,2,3, 7a,8,9,1 0,11, 11a,11b-decahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolin-7ona -5-metoxi-7-hidroxi-1,2,3, 11b-tetrahidro-7H-dibenzo[de,h]quinolina -5-metoxi-2,3,8,9, 1 O, 11-hexahidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7-ona -2,3,8,9,10,11-hexahidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7-ona -3-bromo-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -3-bromo-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -4-bromo-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7-ona -9-nitro-7 H-dibenzo[ de, h]quinolin-7 -ona -4-nitro-5-metoxi-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona -5,6-dihidro-4H-dibenzo[de,h]quinolin-7-01
16.

Uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el tratamiento es frente a las especies Leishmania amazonensis, L. infantum, L. braziliensis y L. guyanensis.
17.

Uso de 5,6-dihidro-4H-dibenzo[de,h]quinolin-7-01, según las reivindicaciones 15 y 16, para el tratamiento de Leishmania guayanensis.
18.

Uso de una composición fannacéutica que comprende un compuesto de fónnula 1, 11, 111, IV, V, VI ó VII, según cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 15, y un vehículo fannacéuticamente aceptable para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la leishmaniosis.
19.

Uso de una composición farmacéutica, según la reivindicación 18, que comprende 2,3-dihidro-7 H-dibenzo[ de,h]quinolin-7 -ona o 5,6-dihidro-4H-dibenzo[de,h]quinolin-7
01.
20. Uso de una composición farmacéutica según las reivindicaciones 18 y 19, para la administración por vía oral, inyectable o por vía tópica.