ES2340488T3 - Sales derivadas del acido lipoico y su utilizacion para el tratamiento de las enfermedades. - Google Patents
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Abstract
Una sal fisiológicamente aceptable de un compuesto de fórmula: **(Ver fórmula)** donde: x es 0-16 R1 y R2 son independientemente acilo CH3(CH2)n-1C(=O)-; alquilo CnH2n+1; alqueno CmH2m; alquino CmH2m-2; aromático; aroílo; sulfuro de alquilo CH3(CH2)t-S-; éster tiocarbámico CH3(CH2)n-1C=NH-; o semitioacetal CH3CH(OH)-S-; donde n es 1-10; m es 2-10 y t es 0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades.
Description
Sales derivadas del ácido lipoico y su
utilización para el tratamiento de las enfermedades.
La presente invención hace referencia a agentes
terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer y otras enfermedades
asociadas con enzimas metabólicas alteradas. En particular, la
invención hace referencia a una clase novedosa de agentes
terapéuticos que eligen como objetivo y eliminan selectivamente
células tumorales, y a otros ciertos tipos de células implicadas en
procesos de enfermedad.
Todas las células de mamíferos requieren energía
para vivir y crecer. Las células obtienen esta energía metabolizando
las moléculas de alimento. La inmensa mayoría de las células
normales utilizan una única ruta metabólica para metabolizar su
alimento. La primera etapa de esta ruta metabólica es la degradación
parcial de moléculas de glucosa a piruvato en un procedimiento
conocido como glicolisis o ciclo glicolítico. El piruvato es
degradado adicionalmente en la mitocondria mediante un
procedimiento conocido como ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) a
agua y dióxido de carbono, que después es eliminado. La conexión
crítica entre estos dos procesos es un gran complejo enzimático de
múltiples subunidades conocido como complejo piruvato deshidrogenasa
("PDH") (referido en adelante como "PDC"). El PDC
funciona como un catalizador que canaliza el piruvato desde el ciclo
glicolítico al ciclo TCA.
La mayor parte de los cánceres despliegan una
profunda perturbación del metabolismo energético. Este cambio en el
metabolismo de la energía representa una de las correlaciones más
robustas y bien documentadas de la transformación maligna.
Debido a que las células tumorales degradan la
glucosa principalmente de manera glicolítica, es decir, sin el
ciclo TCA, se deben desechar grandes cantidades de piruvato en
diversas rutas alternativas. Una ruta principal utilizada para la
eliminación del piruvato en exceso implica la unión de dos moléculas
de piruvato para formar el compuesto neutro acetoína. Esta
generación de acetoína es catalizada por una forma de PDC específica
de los tumores. Aunque el ciclo TCA todavía funciona en las células
cancerígenas, el ciclo TCA de las células tumorales es un ciclo
variante que depende de la glutamina como fuente de energía
primaria. El PDC específico de tumores juega un papel regulador en
este ciclo TCA variante. Así, la inhibición o activación de una
única enzima, es decir el PDC específico de tumores puede bloquear
la generación a gran escala de ATP y reducir el potencial en las
células tumorales.
A pesar del extenso trabajo que caracteriza el
metabolismo de la célula tumoral, la alteración sistemática del
metabolismo de la energía de la célula tumoral ha permanecido sin
explorar como diana para la quimioterapia del cáncer. Muchas
enfermedades malignas continúan presentando desafíos primordiales
para la oncología clínica. Por ejemplo el cáncer de próstata es la
segunda causa de muerte más común por cáncer en hombres. Los
protocolos de tratamiento actuales cuentan principalmente con
manipulaciones hormonales. Sin embargo, a pesar de las elevadas
tasas de respuesta inicial, los pacientes a menudo desarrollan
tumores refractarios a hormonas, conduciendo a un rápido progreso
de la enfermedad con una escasa prognosis. En resumen, los
resultados de la quimioterapia citotóxica han sido decepcionantes,
indicando una necesidad muy palpable de nuevos enfoques para la
prevención y el tratamiento de cánceres avanzados. Otras
enfermedades resultantes de una replicación celular anómala, por
ejemplo los melanomas metastásicos, los tumores cerebrales de origen
glial (v.g. astrocitomas), y el adenocarcinoma de pulmón, también
son malignidades muy agresivas con una escasa prognosis. La
incidencia del melanoma y del adenocarcinoma de pulmón ha sido
significativamente creciente en los últimos años. Los tratamientos
quirúrgicos de los tumores cerebrales a menudo fracasan al separar
todo el tejido tumoral, produciendo recurrencias. La quimioterapia
generalizada está impedida por las barreras sanguíneas. Por lo
tanto, existe una urgente necesidad de nuevos enfoques para el
tratamiento de malignidades en humanos incluyendo el cáncer de
próstata avanzado, el melanoma, los tumores de cerebro, y otras
malignidades tales como neuroblastomas, linfomas y gliomas.
El desarrollo de los métodos y las composiciones
de la presente invención estuvo guiado por la teoría de que los
rasgos metabólicos que distinguen las células tumorales de las
normales pueden conducir a dianas para la intervención terapéutica.
Por ejemplo, las células tumorales parecen funcionar metabólicamente
a través de un PDC específico de tumores. Así, los inhibidores de
este complejo enzimático pueden ser utilizados para bloquear el
metabolismo de las células tumorales, produciendo de ese modo la
muerte selectiva de las células tumorales.
Se ha propuesto una actividad anticancerosa para
ciertos compuestos lipoato que contienen paladio, donde el agente
específico causante del efecto anticanceroso fue identificado como
paladio. En la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.463.093, y
5.679.679. A diferencia de la técnica anterior, la presente
invención hace referencia a una nueva clase de compuestos lipoato
que no contienen paladio, que todavía poseen sorprendentemente una
potente actividad anticancerosa. Se cree que estos compuestos
funcionan a través de PDC, y de ese modo proporcionan una
contramedida eficaz contra el cáncer y otras células patológicas o
patogénicas que muestran igualmente un metabolismo energético
alterado.
Así, un objeto general de la invención es
proporcionar una nueva clase de agentes terapéuticos que se dirijan
a células tumorales y las eliminen eficazmente.
Otro objeto de la invención es proporcionar
composiciones farmacéuticas que comprenden derivados de ácido
lipoico y un portador farmacéuticamente aceptable capaz de dirigirse
específicamente a las células tumorales y eliminarlas.
Asimismo es un objeto de esta invención
proporcionar un método de tratamiento profiláctico o terapéutico
para una variedad de cánceres utilizando los derivados de ácido
lipoico descritos aquí.
Otro objeto de esta invención es proporcionar un
tratamiento profiláctico o terapéutico de patologías tales como
infecciones bacterianas, fúngicas, vegetales y protozoarias de
humanos y otros animales utilizando los derivados de ácido lipoico
descritos en la presente memoria.
La presente invención proporciona una clase de
compuestos para tratar diversas patologías en un sujeto. La clase
de compuestos comprende derivados de ácido lipoico y las sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos. La invención
proporciona un compuesto de fórmula:
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donde:
- x es 0-16
- R_{1} y R_{2} son independientemente acilo
- CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C(=O)-; alquilo C_{n}H_{2n+1}; alqueno C_{m}H_{2m}; alquino C_{m}H_{2m-2}; aromático; aroílo; sulfuro de alquilo CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-; éster tiocarbámico
- CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH-; y semitioacetal CH_{3}CH(OH) -S-; donde n es 1-10; m es 2-10 y t es 0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de la enfermedad.
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La presente invención también se refiere al uso
de un compuesto como se ha definido en la presente memoria antes en
la preparación de una composición farmacéutica para tratar o
prevenir en un paciente una enfermedad caracterizada por una
sensibilidad a los derivados de ácido lipoico. Tales usos pueden
consistir en un método de tratamiento de un mamífero, incluyendo un
ser humano que padece una afección, cuyo método comprende
administrar a dicho mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz
de al menos un compuesto como se ha definido en la presente memoria
antes.
Los compuestos encuentran uso en un método de
tratamiento o prevención de una afección neoplásica en un sujeto
que comprende administrar una cantidad eficaz de al menos un
compuesto como se ha definido en la presente memoria antes. Este
método abarca un método en el que el compuesto se administra solo o
combinado con otro reactivo. El método de tratamiento combinado
proporciona el uso simultáneo, sucesivo o separado en el tratamiento
de tales afecciones.
El tratamiento descrito en la presente memoria
permite la inhibición de las células tumorales en un paciente.
Alternativamente, la composición puede ser utilizada para ponerla en
contacto directamente con las células e inhibir o eliminar las
células tumorales in vitro.
Por otra parte, otros estados de enfermedad
pueden mostrar también sensibilidad a los derivados de ácido
lipoico. Por consiguiente, la invención contempla el uso de
derivados de ácido lipoico como agentes eficaces frente a
enfermedades de origen eubacteriano, arqueal, fúngico, vegetal,
algino y protozoico ya que estas enfermedades se presentan en seres
humanos y otros animales.
Algunos de los compuestos descritos antes son
novedosos per se. Por consiguiente, la presente invención
también se refiere a tales compuestos como se reivindica en la
reivindicación 10 y a las composiciones farmacéuticas que
comprenden un compuesto como se ha definido aquí antes o una sal
fisiológicamente aceptable del mismo junto con uno o más portadores
o excipientes fisiológicamente aceptables.
Figura 1: Muestra la eliminación de células
específica de las células cancerosas por lipoato de
bis-benzoilo (120 \mug/ml o 120 mg/kg) miembro de
la clase novedosa de compuestos que son objeto de esta invención.
Véase el Ejemplo 7. La columna de la izquierda contiene el tejido
de origen canceroso y, entre paréntesis, la denominación de la
línea celular específica. Las tres filas superiores muestran tres
tipos de células cancerosas distintas - cáncer de pulmón, cáncer de
hígado y cáncer embrionario. En contraste, la línea de más abajo
muestra una línea de células epiteliales de riñón normales (no
cancerosas). La columna central presenta las muestras no tratadas
(control), mientras la columna más a la derecha muestra los efectos
del tratamiento sobre cada tipo de célula (muestras
experimentales). Obsérvese que cada uno de los tres tipos de células
cancerosas es eficazmente eliminado, mientras las células normales
no resultan detectablemente afectadas. Estas imágenes fueron
fotografiadas aproximadamente a las 48 horas de la administración
del lipoato de bis-benzoilo. Obsérvese que casi
todas las células cancerosas han sido eliminadas en este tiempo. Las
pocas células restantes o fragmentos celulares tienen la morfología
característica de las células que experimentan muerte celular
(apoptosis; véase el Ejemplo 9; véanse también las Figuras 2 y 3).
Estas pocas células que quedan en los campos tratados morirán a las
pocas horas. En contraste, obsérvese que las células no cancerosas,
normales (fila inferior) no resultan detectablemente afectadas por
el tratamiento.
Figura 2: Se muestra la eliminación selectiva de
células NIH3T3 transformadas con ras en cultivo mediante el lipoato
de bis-benzoilo (120 \mug/ml o 120 mg/kg) miembro
de la clase novedosa de compuestos que son objeto de esta
invención. Véanse los Ejemplos 7 y 8. La columna de la izquierda
describe la línea celular NIH3T3 parental no cancerosa (no
transformada) y uno de sus derivados (T24) transformado al estado
maligno (canceroso) mediante la introducción de una forma activada
del oncogen ras. La columna central muestra estos dos tipos de
células no tratadas (muestras de control) y la columna más a la
derecha las muestra aproximadamente a las 24 horas del tratamiento
con lipoato de bis-benzoilo. Primero, las células
parentales no cancerosas no resultan afectadas por este
tratamiento. Segundo, en contraste, a las 24 horas de tratamiento
aproximadamente el 50% de las células cancerosas (transformadas)
son eliminadas y las células restantes se redondean y experimentan
muerte celular. Véanse las Figuras 1 y 3 para ejemplos de este
redondeo celular y muerte característicos. En aproximadamente 48
horas de tratamiento las células cancerosas estarán casi
completamente erradicadas (eliminadas) mientras las
correspondientes células parentales no cancerosas permanecen
inafectadas.
Figura 3: Se muestra el resultado de un análisis
TUNEL que demuestra que el bis-benzoilo miembro de
la clase novedosa de compuestos que son el objeto de esta invención
induce la apoptosis (muerte celular programada) en células
cancerosas. En este experimento, se trataron células HeLa (cáncer
cervical) durante aproximadamente 24 horas de manera que se
experimentara muerte celular pero de tal manera que quedara un
número significativo de células vivas. Todas las células cancerosas
fueron eliminadas en aproximadamente 48-60 horas en
estas condiciones. Véase el Ejemplo 9. Las fotografías más a la
izquierda muestran micrografías de las células con luz de contraste
de fase. Se indica con una flecha una célula que muestra la
apariencia muy redondeada, internamente fragmentada de una célula
experimentando apoptosis. Las fotografías centrales muestran estas
mismas células teñidas con DAPI y examinadas mediante microscopia
de fluorescencia indirecta. Ésta revela el ADN que muestra dónde
están los núcleos celulares. Obsérvese también la tinción desigual
característica del ADN en esta célula apoptótica (flecha). Las
fotografías más a la derecha muestran el resultado del análisis
TUNEL de estas mismas células examinadas mediante microscopia de
fluorescencia indirecta. Obsérvese el nivel muy bajo de tinción en
la mayoría de los núcleos - reflejando el pequeño número de roturas
de ADN (véase el Ejemplo 9). En contraste, obsérvese la señal
fluorescente muy fuerte de la célula apoptótica (flecha). Esto es un
diagnóstico del gran número de roturas de ADN característico de
células que experimentan muerte celular programada (apoptosis).
Los compuestos de la presente invención abarcan
ácido lipoico en el que la porción tiólica de la molécula ha sido
derivatizada por medio de grupos orgánicos. Se pueden utilizar
especies de ácido lipoico/dihidrolipoico que tienen cadenas
carbonadas más cortas o más largas, de hasta 20 carbonos de
longitud, preferiblemente entre 4 y 10 carbonos de longitud, para
poner en práctica esta invención. Entre las variantes de ácido
lipoico de la presente invención se incluyen aquellas en las que el
grupo ácido carboxílico no está alterado, y en las que uno o ambos
tioles y/o sulfhidrilos están bloqueados por derivatizaciones con el
fin de eliminar específicamente las células tumorales, por medio de
la interferencia en las funciones PDC específicas de las células
tumorales.
La presente invención hace referencia a una
clase de composiciones de ácido lipoico de fórmula:
Donde: X es 0-16 y
R_{1} y R_{2} pueden ser
independientemente:
- (1)
- Un grupo acilo conectado a través de un enlace tioéster. El grupo acilo comprende
- CH_{3}(CH_{2})_{n-1}(C=O)-, donde n es 1-10. Entre los ejemplos de los grupos acilo se incluyen pero no están limitados a acetilo y butirilo. Un ejemplo específico de ácido lipoico
- derivatizado con acilo es el lipoato de bis-acetilo (Ejemplo 1).
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- (2)
- Un grupo aromático conectado a través de un enlace tioéster. Entre los ejemplos de los grupos aromáticos se incluyen pero no están limitados a benzoilo o derivados de benzoilo. Un ejemplo específico de ácido lipoico derivatizado con benzoilo es el lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2).
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- (3)
- Un grupo alquilo conectado a través de un enlace tioéter. El grupo alquilo comprende C_{n}H_{2n+1} donde n es 1-10. Tales grupos alquilo pueden estar sustituidos con otros radicales tales como por ejemplo OH, Cl o NH_{2}. Entre los ejemplos de los grupos alquilo se incluyen pero no están limitados a, metilo, etilo, butilo, decanilo y metil lipoato de 6,8-bis-carbamoílo. (Ejemplo 3).
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- (4)
- Un grupo alqueno conectado a través de un enlace tioéter. El alqueno comprende C_{n}H_{2n} donde n es 2-10. Entre los ejemplos de los grupos alqueno se incluyen pero no están limitados a, propileno, 2,3-dimetil-2-buteno, y hepteno.
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- (5)
- Un grupo alquino conectado a través de un enlace tioéter. El alquino comprende C_{n}H_{2n-2} donde n es 2-10. Entre los ejemplos de los grupos alquino se incluyen pero no están limitados a, acetileno, propino y octino.
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- (6)
- Los grupos alquilo, alqueno y alquino pueden ser de cadena abierta o alicíclicos. Los grupos alicíclicos pueden tener adiciones o sustituciones de cualquiera de los carbonos para formar heterociclos. Entre los ejemplos de los grupos alicíclicos se incluyen pero no están limitados a ciclopropano, ciclopenteno y lipoato de 6,8-metilsuccinimida (Ejemplo 4).
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- (7)
- Los grupos alquilo, alqueno y alquino pueden tener adiciones en cualquiera de sus carbonos. Entre los ejemplos de las adiciones se incluyen pero no están limitados a hidroxilos y aminas.
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- (8)
- Un grupo aromático conectado a través de un enlace tioéter. Los grupos aromáticos pueden ser benceno o un derivado de benceno. Entre los ejemplos de los derivados de benceno se incluyen pero no están limitados a tolueno y anilina.
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- (9)
- Sulfuro de alquilo (CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-, donde t es 0-9).
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- (10)
- Grupo éster tiocarbámico [CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH- donde n es 1-10] conectado a través de un enlace tioamida; y
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- (11)
- Grupo semitioacetal [CH_{3}CH(OH)-S- donde R se limita a compuestos con sustituyentes con una potente captación de electrones. Entre los ejemplos se incluyen tricloroacetaldehído y ácido pirúvico.
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R_{1} y R_{2} también pueden comprender
tioésteres que pueden ser oxidados para producir sulfóxidos o
sulfonas, por ejemplo,
C-S(O)-R y
C-S(O)_{2}-R
respectivamente. R_{1} y R_{2} pueden comprender adicionalmente
disulfuros que pueden ser oxidados a ácidos tiosulfínicos o
tiosulfónicos, por ejemplo los tioles
C-S(O)-S-R y
C-S(O)_{2}-S-R
respectivamente, y todos estos compuestos son miembros de esta
clase.
Para las aplicaciones terapéuticas, se aplican
directamente a un paciente composiciones farmacéuticas que
comprenden una cantidad eficaz de los derivados de ácido lipoico
descritos antes junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones pueden estar en forma de comprimidos, cápsulas,
polvos, gránulos, grageas, supositorios, polvos reconstituibles, o
preparaciones líquidas tales como soluciones o suspensiones orales o
parenterales estériles. No obstante, para la consistencia de la
administración se prefiere que la composición del derivado de ácido
lipoico se encuentre en forma de una dosis unitaria. Para la
administración oral, los comprimidos y las cápsulas pueden contener
excipientes convencionales, tales como agentes aglutinantes,
lubricantes para comprimidos, o agentes humectantes
farmacéuticamente aceptables tales como laurilsulfato de sodio.
Las composiciones orales pueden ser preparadas
mediante métodos convencionales de mezclado, rellenado, formación
de comprimidos o similares. Se pueden utilizar operaciones de
mezclado repetidas para distribuir el derivado de ácido lipoico
completamente en cualquiera de las composiciones empleando cargas.
Tales operaciones son, por supuesto, convencionales en la técnica.
Véase por ejemplo Remington's Pharmaceutical Sciences,
17^{a} Edición, 1985, Gennaro ed., Mack Pub. Co., PA. USA. Los
comprimidos pueden ser recubiertos según los métodos bien conocidos
en la práctica farmacéutica normal, en particular con recubrimientos
entéricos. Las preparaciones líquidas orales pueden estar, por
ejemplo, en forma de emulsiones, jarabes, o elixires, o pueden
presentarse como un producto liofilizado para su reconstitución con
agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones
líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes
suspensores, agentes emulsionantes, vehículos no acuosos (que
pueden incluir aceites comestibles), y si se desea, agentes
aromatizantes o colorantes convencionales.
Para la administración parenteral, se preparan
formas de dosificación unitarias fluidas utilizando el derivado de
ácido lipoico y un vehículo estéril, y, dependiendo de la
concentración utilizada, puede ser o bien suspendido o bien
disuelto en el vehículo. Al preparar soluciones, se puede disolver
el derivado de ácido lipoico en agua para inyectables y filtrar en
condiciones estériles antes de cargar en un vial o ampolla adecuados
y sellar. Asimismo, se pueden disolver en el vehículo coadyuvantes
tales como anestésicos locales, un conservante, y agentes
tamponadores. Para aumentar la estabilidad, se puede liofilizar la
composición después de cargar en el vial y eliminar el agua a
vacío. Las suspensiones parenterales se preparan sustancialmente de
la misma manera, excepto que el derivado de ácido lipoico se
suspende en el vehículo estéril. Se puede incluir un tensioactivo o
un agente humectante en la composición para facilitar la
distribución uniforme del derivado de ácido lipoico.
En los métodos para prevenir o inhibir el
cáncer, el derivado de ácido lipoico, o una composición farmacéutica
que comprende el derivado de ácido lipoico, puede ser administrado
a través de numerosas rutas incluyendo intravenosa, intramuscular,
subcutánea, intradérmica, intraperitoneal, intratorácica,
intrapleural, intrauterina, tópica, o intratumoral.
Los expertos en la técnica reconocerán que el
modo de administrar del derivado de ácido lipoico depende del tipo
de cáncer, o del síntoma a tratar. Por ejemplo, un modo preferido de
administrar el ácido lipoico para el tratamiento de la leucemia
implicaría la administración intravenosa, mientras los métodos
preferidos para tratar el cáncer de piel implicaría, por ejemplo,
la administración tópica o intradérmica.
Las composiciones farmacéuticas de la invención
pueden contener de 0,1% a 99% en peso, preferiblemente de 10% a 25%
en peso del derivado de ácido lipoico, dependiendo del método de
administración.
Los derivados de ácido lipoico de la invención
pueden ser utilizados en un método para prevenir o inhibir las
enfermedades que implican una actividad de PDC celular alterada o
distinta. Tales enfermedades se caracterizan por una sensibilidad a
las composiciones de lipoato de la presente invención. Una de las
ventajas más importantes de los derivados de ácido lipoico de los
autores de la presente invención como agentes quimioterapéuticos es
su especificidad. Las células con un metabolismo energético
apropiadamente alterado o degenerado, es decir una actividad de PDC
alterada, son particularmente elegidas como diana y eliminadas,
mientras los tejidos sanos circundantes quedan sin dañar por el
reactivo de ácido lipoico. El artesano experto puede identificar
fácilmente las enfermedades que tienen alterada la actividad de PDC.
Alternativamente el artesano experto puede rastrear fácilmente su
enfermedad de interés por su sensibilidad a la presente clase de
compuestos.
En una método preferido de tratamiento, las
presentes composiciones de ácido lipoico se utilizan para la
prevención y el tratamiento de cánceres tales como melanoma
primario o metastásico, timoma, linfoma, sarcoma, cáncer de pulmón,
cáncer de hígado, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemias,
cáncer de útero, cáncer cervical, cáncer de vejiga, cáncer de
riñón, cáncer de colon, y adenocarcinomas tales como cáncer de mama,
cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer pancreático. Una
amplia variedad de tipos de tumores, incluyendo los carcinomas
cervicales y los cánceres de mama, son sensibles a esta nueva clase
de compuestos. Los resultados celulares que muestran la eliminación
celular específica del cáncer pueden ser observados, por ejemplo en
la Tabla 1, más abajo.
La dosificación preferida del derivado de ácido
lipoico, o la composición farmacéutica del mismo, se seleccionan
basándose en otros criterios, incluyendo la composición concreta
empleada y la edad, el peso, y el estado del individuo.
Importantemente, la cantidad de derivado de ácido lipoico utilizada
debe ser suficiente para inhibir o eliminar las células tumorales a
la vez que deja sustancialmente indemnes las células normales. En
general, es deseable proporcionar al paciente una dosificación de
derivado de ácido lipoico de la menos aproximadamente 10 \muM,
preferiblemente al menos aproximadamente 100 \muM, más
preferiblemente al menos aproximadamente 400 \muM, si bien se
contempla un intervalo de aproximadamente 10 \muM a
aproximadamente 1 mM, por supuesto, se puede administrar una dosis
mayor o menor, guiado por los datos in vivo mostrados en los
Ejemplos descritos en la presente memoria. Como se ha establecido
antes, una variedad de factores clínicos influirán en los
intervalos de dosificación preferidos.
Otra realización de la invención hace referencia
a un método de tratamiento de una enfermedad sensible a los
derivados lipoato que comprende administrar una cantidad eficaz de
un compuesto lipoato y un segundo reactivo para tratar dicha
enfermedad. Este segundo reactivo es preferiblemente un inhibidor
del metabolismo de la energía mitocondrial y/o uno que induce la
apoptosis. Entre tales reactivos se incluyen los reactivos
inhibidores del metabolismo. Muchos de tales reactivos son
conocidos en la técnica. Un reactivo particularmente preferido es
el dicloroacetato. Este segundo reactivo puede ser administrado
sucesivamente, simultáneamente o por separado, con el fin de
ampliar la respuesta del paciente a dicho método de tratamiento.
Adaptando los tratamientos descritos aquí, los
derivados de ácido lipoico también pueden ser utilizados en métodos
para tratar enfermedades distintas del cáncer, en las cuales las
células causantes de la enfermedad manifiestan patrones metabólicos
alterados. Por ejemplo, los patógenos eucarióticos de los seres
humanos y otros animales son generalmente mucho más difíciles de
tratar que los patógenos bacterianos debido a que las células
eucarióticas son mucho más similares a las células animales que las
células bacterianas. Entre tales patógenos eucarióticos se incluyen
protozoos tales como los que causan la malaria así como los
patógenos fúngicos y alginos. Debido a la notable carencia de
toxicidad de los derivados de ácido lipoico de la invención para
las células humanas y animales normales y debido a que es probable
que muchos patógenos eucarióticos pasen a través de las fases del
ciclo celular en las cuales su PDC se vuelve sensible a los miembros
de la clase novedosa de derivados lipoato descritos aquí, algunos
miembros de la clase novedosa de derivados lipoato descritos en la
presente memoria eliminan los PDC bacterianos y por tanto
representan una clase fundamentalmente nueva de agentes
antibacterianos. Como las bacterias resistentes a los antibióticos
tradicionales se están convirtiendo en un problema clínico
crecientemente grave, estos compuestos demostrarán tener importancia
terapéutica en este contexto.
En otras aplicaciones, los derivados de ácido
lipoico de la presente invención se utilizan como agentes de
diagnóstico in vitro. Como se ha establecido antes,
dependiendo de la célula tumoral específica o del tipo de célula en
cuestión, los diferentes derivados de ácido lipoico pueden ser más o
menos eficaces al inhibir distintas clases de tumores. Así, por
ejemplo, en los casos en los que pueden resultar difíciles la
diagnosis o la selección de una estrategia quimioterapéutica
apropiada, el análisis de un cultivo de células tumorales in
vitro con derivados de ácido lipoico conocidos por dirigirse a
tipos de células tumorales específicos proporciona un enfoque
alternativo para identificar los tipos de tumores y los tratamientos
eficaces.
\vskip1.000000\baselineskip
Con el fin de confirmar la existencia de una
nueva gran clase de agentes anticancerosos que consta de derivados
de ácido lipoico bloqueados y/o inutilizados, se han sintetizado y
se han sometido a ensayo numerosos derivados de ácido lipoico
nuevos. En este y en los cinco Ejemplos siguientes
(1-5), se describen la síntesis, la estructura y la
purificación de seis compuestos. Estos compuestos son sometidos a
ensayo después en los posteriores Ejemplos
(6-13).
Se preparó ácido
6,8-bisacetilmercaptooctanoico (referido en adelante
como ácido bis-acetil lipoico) a partir de ácido
lipoico asequible comercialmente utilizando un procedimiento de tres
etapas. Estas etapas fueron las siguientes: se redujo primero el
ácido lipoico a ácido 6,8-bismercaptooctanoico que
después fue acetilado para producir anhídrido
6,8-bisacetil-mercaptooctanoicoacético.
Este anhídrido
6,8-bisacetil-mercaptooctanoicoacético
fue hidrolizado después selectivamente para producir el ácido
6,8-bisacetilmercaptooctanoico.
Estas etapas se completaron después en detalle
como sigue.
Etapa 1: Ácido
6,8-Bismercaptoctanoico: Se suspendió ácido
a-lipoico (5,15 g, 25,0 mmoles) en 125 ml de agua y
se añadió bicarbonato de sodio (2,10 g, 25,0 mmoles). La mezcla fue
sometida a sonicación para generar la sal de sodio. La solución de
color amarillo pálido resultante se enfrió en un baño de hielo y se
añadió borohidruro de sodio (1,90 g, 50,0 mmoles) con agitación en
pequeñas porciones a lo largo de 20 minutos. La solución se agitó a
la temperatura de refrigeración con hielo otros 30 minutos, y
después a la temperatura ambiente durante 30 minutos. La solución
turbia se enfrió en un baño de hielo, y el pH se llevó a
aproximadamente 1 mediante la adición lenta de ácido clorhídrico
2M. Se produjo una evolución vigorosa de hidrógeno a medida que el
exceso de borohidruro de sodio se descomponía y se separaba un
líquido oleoso. Las siguientes operaciones se realizaron en
nitrógeno tanto cuanto fuera posible. La mezcla se extrajo con 3 x
50 ml de cloroformo. Los extractos de cloroformo combinados se
secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y el disolvente se
evaporó a presión reducida a la temperatura ambiente. El aceite
restante se secó adicionalmente a vacío para separar los últimos
vestigios de disolvente. El ácido
6,8-bismarcaptooctanoico fue aislado en forma de un
aceite incoloro que pesaba 5,2 g (rendimiento 100%). El producto
fue almacenado a -20ºC en nitrógeno.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (CDCl_{3}): 2,89 (multiplete, 1H,
S-C-H), 2,67 (multiplete, 2H,
S-CH2), 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2H, CH2C(O)),
1,4-1,92 (multipletes, 8H, (CH2)2), 1,33 (t,
J=8,0 Hz, 1H, S-H), 1,30 (t, J=7,6 Hz, 1H,
S-H).
RMN C^{13} (CDCl_{3}): 180, 0, 42, 7, 39, 2,
38, 6, 33, 8, 26,4, 24,2, 22,2.
Etapa 2: Anhídrido
6,8-bisacetilmercaptooctanoico-acético:
Se disolvió ácido 6,8-mercaptooctanoico (5,20 g, 25
mmoles) en 125 ml de cloruro de metileno seco en nitrógeno y se
añadió trietilamina (8,10 g, 80,0 mmoles, 11,25 ml). La solución se
enfrió en un baño de hielo y se añadió cloruro de acetilo (6,30 g,
80,0 mmoles) disuelto en 25 ml de cloruro de metileno con agitación
a lo largo de 15 minutos. Durante la adición precipitó cloruro de
trietilamonio. La solución permaneció incolora. Se continuó agitando
a la temperatura ambiente durante 90 minutos. El volumen se llevó a
300 ml con más cloruro de metileno (todo el sólido disuelto) y la
solución se transfirió a un embudo separador. Éste se extrajo
rápidamente con 300 ml de ácido cítrico al 10% (el pH de la fase
acuosa se verificó tras la extracción para asegurarse de que era
ácido). Se extrajo una segunda vez con 200 ml de solución de ácido
cítrico, y después se lavó con 200 ml de salmuera semisaturada. La
fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y el
cloruro de metileno se evaporó. Quedó un aceite casi incoloro que
pesó 8,0 g.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,49 (multiplete, 1H),
2,7-3,0 (multiplete, 2H), 2,36 (t, 2H,
CH2C(O)), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,26 (s, 3H, CH3), 2,15 (s, 3H,
CH3), 1,3-1,9 (multiplete, 8H).
RMN C^{13} (CDCl_{3}): 195, 4, 195, 2, 168,
9, 166, 3, 43, 2, 34, 8, 34, 5, 34, 2, 30, 6, 30, 4, 26, 3, 25, 7,
23, 7, 22, 0.
IR (tableta de KBr): 1821, 1749, 1691
cm^{-1}.
Etapa 3: Ácido
6,8-bisacetilmercaptooctanoico: El anhídrido de
la etapa 2 (8,0 g) se mezcló con 30 ml de agua y 30 ml de
2-propanol y se agitó a 40 durante 4,25 horas. Al
cabo de aproximadamente 2 horas había una solución clara. El
disolvente se evaporó a vacío (2 mm) a 25. El aceite restante se
evaporó con 10 ml de agua para separar cualquier
2-propanol y ácido acético residuales. Se aisló un
aceite casi incoloro que pesó 6,8 g.
Purificación: Un ejemplo de purificación
es el siguiente. El material de la etapa 3 se mezcló con 5 ml de
acetato de etilo-hexano-ácido acético (100:100:1,
v/v) añadido para hacerlo más fluido. La solución se aplicó a una
columna de 25 x 6,5 cm de Gel de Sílice 60 (aproximadamente 300 g de
sílice instantánea) empaquetada en acetato de
etilo-hexano-ácido acético (100:100:1, v/v). La
columna se hizo eluir con este disolvente. Se recogieron fracciones
de 75 ml a aproximadamente 5 ml/min. Se recogió una mezcla
aproximadamente 1:1 del producto y una impureza que eluyó
ligeramente más rápido en la fracción 13 (0,86 g). Las fracciones 14
(1,92 g) y 15 (1,61 g) contenían el producto con mucha menos
impureza. El material puro fue recogido en las fracciones
16-20 (2, 36 g) en forma de un aceite incoloro. Las
fracciones 14 y 15 fueron sometidas a cromatografía de nuevo (por
separado) en una columna de 25 x 4,5 cm (150 g de Gel de sílice). Se
aislaron 1,72 g y 1,55 g de producto bruto respectivamente. El
rendimiento global de producto puro fue de 5, 63 g (rendimiento del
77% basándose en el ácido
6,8-bismercaptooctanoico).
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,50 (multiplete, 1H),
2,7-3,0 (multiplete, 2H), 2,27 (t, 2H,
CH_{2}C(O)), 2,27 (s, 3H, CH3), 2,26 (s, 3H, CH3),
1,1-1,8 (multiplete, 8H).
RMN C^{13} (CDCl_{3}): 195,67, 195,50,
179,59, 43,34, 34,60, 34,30, 33,71, 30,68, 30,48, 26,40, 26,01,
24,20.
IR (líquido neto): 2935, 1736, 1691, 1423, 1355,
1134, 1118, 953, 744, 630.
TLC R_{f} = 0,40 (acetato de
etilo-hexano-ácido acético, 100:100:1, v/v).
Pureza: El análisis indica que el
producto final de esta síntesis (ácido bis-acetil
lipoico) tiene una pureza de más del 98%. Por otra parte, se
produjeron cinco lotes independientes en el transcurso de estos
estudios y las propiedades biológicas (resumidas en el Ejemplo 8)
de todos los lotes fueron indistinguibles en todos los detalles
sometidos a ensayo. La estructura de este compuesto se ilustra más
abajo.
\vskip1.000000\baselineskip
En una visión de conjunto, se preparó ácido
6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico mediante un
procedimiento de tres etapas a partir de un ácido
\alpha-lipoico asequible comercialmente. El ácido
lipoico fue reducido primero a ácido
6,8-bismercaptooctanoico con borohidruro de sodio en
agua en condiciones ligeramente alcalinas. El producto fue
benzoilado con tres equivalentes de cloruro de benzoilo en presencia
de trietilamina para captar el HCl subproducto para producir
anhídrido
6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoicobenzoico.
El anhídrido fue hidrolizado selectivamente con dioxano/agua para
producir ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico sin
la hidrólisis no deseada de los grupos éster del benzoiltio. El
producto fue purificado mediante cromatografía en columna sobre Gel
de Sílice. El ácido purificado se disolvió en metanol y se convirtió
en la sal de sodio mediante la adición lenta de una solución acuosa
que contenía un equivalente en moles de bicarbonato de sodio.
Con detalle estas etapas se llevaron a cabo
ilustradas por el siguiente ejemplo:
Etapa 1: Se preparó ácido
6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoico
exactamente como se describe en el Ejemplo 1.
Etapa 2: Anhídrido
6,8-bisbenzoil-mercaptooctanoico-benzoico.
Se disolvió ácido 6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico
(2,03 g, 10 mmoles) en 50 ml de cloruro de metileno seco en
nitrógeno y se añadió trietilamina (3,24 g, 32 mmoles, 4,50 ml). Se
añadió gota a gota cloruro de benzoilo (4,50 g, 32 mmoles) disuelto
en 20 ml de cloruro de metileno con agitación a lo largo de 20
minutos. Cuando se hubo añadido aproximadamente la mitad del cloruro
de benzoilo, precipitó cloruro de trietilamonio. La propia solución
permaneció incolora. La agitación continuó a 25-27º
durante 9 horas. El volumen se llevó a 100 ml con más cloruro de
metileno (todo el sólido disuelto) y la solución se transfirió a un
embudo separador. Esto se extrajo rápidamente con 2 x 50 ml de ácido
cítrico al 10% (el pH de la fase acuosa se verificó después de la
extracción para asegurarse de que era ácido), y después se lavó con
50 ml de salmuera saturada. La fase orgánica se secó sobre sulfato
de magnesio, se filtró, y el cloruro de metileno se evaporó. Quedó
un aceite casi incoloro que pesó aproximadamente 5,48 g.
Etapa 3: Ácido
6,8-bisbenzoilmercaptooctanoico: El anhídrido
bruto (5,48 g) se disolvió en 20 ml de dioxano y se añadieron 20 ml
de agua. Esto hizo que el material se engrasara. La mezcla se agitó
a 40-45º durante 21 horas. El disolvente se evaporó
a vacío (2 mm) a 30º. El aceite restante se recogió en 80 ml de
cloroformo y se extrajo con 25 ml de ácido cítrico acuoso al 5%. La
fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y el
disolvente se evaporó. Se aisló un aceite de color débilmente
amarillo que pesó 5,7 g. Los espectros de RMN mostraron que sólo
aproximadamente un tercio del anhídrido había sido hidrolizado. Por
lo tanto, el material bruto se redisolvió en 20 ml de dioxano y se
añadieron 10 ml de agua. La mezcla se agitó a 45º durante 32 horas
más. El disolvente se evaporó a vacío. Después de este tratamiento,
la hidrólisis del anhídrido fue completa.
Purificación: El producto se mezcló con 2
ml de acetato de etilo y se aplicó a una columna de 25 x 4,5 cm de
Gel de Sílice 60 (150 g de sílice instantánea) empaquetada en
hexano-acetato de etilo-ácido acético (100:50:1,
V/V). La columna se hizo eluir con este disolvente. Se recogieron
fracciones de 40 ml a aproximadamente 5 ml/minuto. El material que
eluyó más rápido se recogió en las fracciones 10-12
(1,33 g de un sólido de color blanco - - probablemente
ácido benzoico). Una pequeña cantidad de este material que eluyó más
rápido junto con el producto fue recogida en las fracciones
13-15 (0,66 g). El producto bruto fue recogido en
las fracciones 16-21 (1,95 g de un aceite
incoloro).
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (CDCl_{3}): 8,0 (multiplete, 4H, ArH),
7,38-7,60 (multiplete, 6H, ArH), 3,89 (multiplete,
1H, CH-S), 3,0-3,3 (multiplete, 2H,
CH_{2}S), 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2H, CH_{2}C(O)),
1,1-2,2 (multiplete, 8H, -CH_{2}-).
RMN C^{13} (CDCl_{3}): 191, 71, 191, 46,
179, 72, 136, 98, 136,92, 133,29, 128,51, 127,25, 127,14, 43,60,
34,98, 34, 59, 33, 76, 26, 43, 26, 19, 24, 29.
TLC R_{f} = 0,30
(hexano-acetato de etilo-ácido acético, 100:50:1,
v/v).
IR (líquido neto): 2937, 1710, 1704, 1662, 1667,
1655, 1448, 1207, 1175, 911, 773, 757, 733, 648, 688 cm^{-1}.
Sal de sodio: La sal de sodio de este
derivado es más soluble y más fácil de elaborar. Por lo tanto se
prefiere producir generalmente el material en forma de sal como se
ilustra mediante el siguiente ejemplo. Se disolvió el ácido (1,95
g, 4,7 mmoles) en 10 ml de metanol, y se añadió una solución de
bicarbonato de sodio (0,39 g, 4,7 mmoles) en 10 ml de agua en
pequeñas porciones agitando vigorosamente a lo largo de
aproximadamente 10 minutos. Al principio el material se engrasó
pero una vez completada la adición hubo una solución homogénea
incolora. La solución se dejó a la temperatura ambiente otros 10
minutos, después el disolvente se separó a vacío (2 mm) a 20
dejando un sólido gomoso. El sólido se disolvió en 10 ml de metanol
y el disolvente se separó por evaporación instantánea a vacío. Esto
se repitió una segunda vez. Se produjo un sólido de color blanco
espumoso. Este se secó a vacío a P2O5 a la temperatura ambiente
durante la noche. Se aislaron 1,60 g de la sal.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (D_{2}O): 7,8-7,9 (multiplete, 4H,
ArH), 7,0-7,4 (multiplete, 6H, ArH), 3,57
(multiplete, 1H, CH-S), 2,9-3,1
(multiplete, 2H, CH_{2}S), 2,06 (t, 2H, CH_{2}C(O)),
1,0-2,1 (multiplete, 8H, -CH_{2}-).
RMN C^{13} (D_{2}O): 193, 49, 193, 11, 183,
39, 137, 10, 137,00, 134,21, 129,21, 127,70, 127,58, 44,69, 38,15,
34, 97, 27, 23, 27, 00, 26, 46.
Pureza: El análisis indicó que las
preparaciones de lipoato de bis-benzoilo tenían una
pureza de más de 98%. Por otra parte, cada una de las tres
preparaciones independientes de este agente mostró propiedades
biológicas indistinguibles (véase el Ejemplo 6).
La estructura de este compuesto se ilustra más
abajo.
\newpage
Se añadió yodoacetamida (1,11 g, 6,0 mmoles) a
una solución de ácido 6, 8-bismercaptooctanoico
(0,62 g, 3,0 mmoles) en 30 ml de metanol-agua (9:1,
v/v) desgasificada a 0. La solución se agitó en nitrógeno bajo una
luz suavizada y se añadió hidróxido de sodio acuoso 1,0 M (9,0 ml,
9,0 mmoles) a lo largo de 3 minutos. La solución transparente se
agitó a 0 durante 10 minutos y después a la temperatura ambiente
durante 4 horas. El grueso del metanol se evaporó a presión
reducida y el volumen se llevó a 25 ml con agua desgasificada. El
pH se ajustó a 1 con ácido clorhídrico 2 M. El agua se evaporó a
vacío a 25, y el aceite de color amarillo claro restante se sacudió
con 2 x 20 ml de acetato de etilo. El material insoluble de acetato
de etilo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice utilizando
cloroformo-metanol-ácido acético (120:60:1, v/v)
como eluyente proporcionando 1,0 g (100%) del ácido
6,8-biscarbamoilmetil-mercaptooctanoico
en forma de un sólido de color amarillo pardusco.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (D_{2}O): 3,44 (s, 2H,
-CH_{2}C(O)NH_{2}), 3,43 (s, 2H,
-CH_{2}C(O)NH_{2}), 3,00 (m, 1H, -CHS), 2,88 (t,
J=7,4 Hz, 2H, CH_{2}S), 2,51 (t, J=7,1 Hz, 2H, -CH_{2}COOH),
1,95 (m, 2H, -CH_{2}-), 1,5-1,8 (m, 6H,
-CH_{2}-).
RMN C^{13} (D_{2}O): 180,07, 175,51, 175,24,
46,00, 35,65, 35,09, 34,11, 34,09, 34,03, 30,29, 26,29, 25,13.
TLC R_{f} = 0,35; Gel de Sílice G: cloroformo,
metanol, ácido acético, 60:30:1, (v/v).
\vskip1.000000\baselineskip
Ácido
6,8-Bis-[S-(N-metilsuccinimido)]mercaptooctanoico:
Se mezcló ácido 6,8-bismercaptooctanoico (0,62 g,
3,0 mmoles) con bicarbonato de sodio (0,25 g, 3,0 mmoles) disuelto
en 25 ml de agua desgasificada y se agitó en nitrógeno a la
temperatura ambiente hasta que se produjo una solución transparente.
Se añadió N-metilmaleimida (0,67 g, 6,0 mmoles) y
la mezcla se agitó a la temperatura ambiente en nitrógeno durante 3
horas. La solución se filtró para separar un vestigio de material
insoluble, después se lavó con 20 ml de cloroformo. El pH de la
fase acuosa se ajustó a 1,5 con ácido clorhídrico 2 M y la mezcla se
extrajo con 3 x 15 ml de cloroformo. Los extractos de cloroformo se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron y el disolvente se evaporó
dejando un jarabe incoloro que pesó 1,30 g. La TLC [Gel de Sílice,
(cloroformo, metanol, 10:1 (v/v)] mostró numerosas manchas de
solapamiento con un Rf = 0,27 como se esperaba para la mezcla de
diastereoisómeros posible.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (CDCl_{3}): 3,72 (m, 2H), 2,7-3,3 (m,
5H), 2,93 (s, 6H, CH3), 2,25-2,55 (m, 4H),
2,0-1,35 (m, 8H).
RMN C^{13} (CDCl_{3}): 178,73, 176,81,
176,77, 176,65, 176,62, 176,54, 176,50, 174,75, 174,69, 45,22,
44,78, 44,57, 39,11, 38,96, 38,90, 38,77, 38,59, 38,51, 38,00,
37,68, 36,35, 36,30, 36,24, 35,87, 35,85, 35,78, 34,49, 34,34,
33,96, 33,79, 33,67, 33,52, 29,08, 28,70, 28,66, 28,45, 25,92,
25,86, 25,58, 25,45, 25,02, 24,98, 24,21, 24,14.
\vskip1.000000\baselineskip
6,8-Dihidroxioctanoato de sodio:
Se disolvió 6,8-dihidroxioctanoato de metilo (0,15
g, 0,80 mmoles; conteniendo aproximadamente un 10% del isómero 6,7)
en 3 ml de metanol y se añadió hidróxido de sodio en metanol 1,00 M
(0,80 ml, 0,80 mmoles). La solución se agitó a reflujo durante 3
horas. El disolvente se evaporó a vacío rindiendo 0,15 g de
6,8-dihidroxioctanoato de sodio en forma de un polvo
de color blanco. El rendimiento fue cuantitativo.
El análisis produjo los siguientes resultados:
RMN H^{1} (D_{2}O): 3,74 (m, 1H, -CHOH-), 3,70 (t, J=6,6 Hz,
2H, -CH_{2}OH), 2,19 (t, J=7, 2 Hz, 2H, -CH_{2}COOH),
1,2-1,9 (m, 8H, -CH_{2}-).
RMN C^{13} (D_{2}O): 184, 47, 69, 25, 59,
42, 39, 01, 38, 21, 36, 77, 26, 47, 25, 32.
\vskip1.000000\baselineskip
Los Ejemplos 7-10 describen los
resultados de los sistemas de células cultivadas que demuestran las
propiedades y la eficacia de los compuestos derivados de ácido
lipoico que son el objeto de esta invención. En la Tabla 1 de más
abajo se resumen todos los resultados encontrados en los Ejemplos
7-10 de una forma abreviada y tabular.
En una visión de conjunto, todos los Ejemplos en
los que se utilizaban derivados de ácido lipoico sobre las células
en cultivo de tejidos mostraron que los derivados de ácido lipoico
tenían la capacidad de eliminar las células tumorales, mientras
dejaban las células no cancerosas, normales, con contacto inhibido
indemnes en los intervalos de dosificación apropiados.
Segundo, cada tipo de célula cancerosa sometido
a ensayo fue eliminado por uno o más miembros de la familia de
derivados de ácido lipoico bloqueados. Esto indicó que estos agentes
tienen una amplia gama de aplicaciones clínicas potenciales,
incluyendo muchos o la mayor parte de los cánceres humanos.
Tercero, los diferentes compuestos derivados de
ácido lipoico tenían características químicas algo diferentes
incluyendo, por ejemplo, solubilidad en entornos polares y no
polares, con los correspondientes efectos sobre cómo cruzaban
eficazmente los diferentes derivados la membrana celular y entraban
en la célula. Por otra parte, los derivados de ácido lipoico tenían
diferentes tasas de utilización por las enzimas celulares que
normalmente rige el propio ácido lipoico. Dadas estas propiedades,
se observó que los diferentes derivados de ácido lipoico tenían
potencias anticancerosas algo diferentes. Algunos derivados tenían
potencias muy elevadas, mientras otros tenían potencias más bajas,
pero todavía potencialmente útiles.
Cuarto, debido a que los diferentes tipos de
células tumorales tenían diferentes propiedades fisiológicas, estas
propiedades podían ejercer efectos indirectos tanto sobre la
absorción y la incorporación de derivados de ácido lipoico, como
sobre los efectos tóxicos de esta incorporación. Así, se descubrió
que los diferentes tipos de células cancerosas mostraban niveles
significativamente diferentes de sensibilidad. La sensibilidad de
las diferentes células cancerosas oscilaba entre los tipos de
células cancerosas relativamente sensibles que eran eliminadas por
todos los tipos de derivados de ácido lipoico sometidos a ensayo, a
los tipos de células cancerosas relativamente resistentes que sólo
eran eliminadas eficazmente por compuestos derivados de ácido
lipoico más potentes.
A pesar de estas diferencias de potencia, es
importante observar que los derivados de ácido lipoico comparten
propiedades comunes descritas en los Ejemplos de más abajo.
\newpage
Tabla 1: Se resumen las respuestas de las
células en cultivo a la eliminación por miembros ejemplares de la
familia de los derivados lipoato bloqueados que son el objeto de
esta invención así como un compuesto de control (ácido
dihidroxioctanoico). A la derecha se indica la línea celular
específica seguido del tejido de origen de la línea celular. A lo
largo del encabezamiento se enumeran los compuestos específicos
sometidos a ensayo. Cada derivado lipoato bloqueado fue utilizado
de dos a cuatro veces por encima de la concentración de eliminación
umbral. [Estas concentraciones oscilan de 0,15 mM (60 \mug/ml o 60
mg/kg) a 2,5 mM (800 \mug/ml u 800 mg/kg) (ver el Ejemplo 9)]. Se
sometió a ensayo el ácido dihidroxioctanoico hasta concentraciones 5
mM (3200 \mug/ml o 3200 mg/kg) sin un efecto detectable. "+"
indica que las células eran eliminadas por el tratamiento, mientras
"-" indica que no. "+/-" indica una escasa respuesta
marginal observada sólo en unos pocos casos especiales con
fibroblastos transformados experimentalmente mediante la
introducción del oncogen ras (Ejemplo 8).
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Este Ejemplo proporciona la evidencia de que los
derivados de ácido lipoico de esta invención eliminan las células
cancerosas con una elevada especificidad. Más específicamente, se
describe el uso de los derivados de ácido lipoico en sistemas
celulares cultivados. Los resultados muestran que los derivados
lipoato eliminaban las células cancerosas (transformadas)
eficazmente en condiciones en las que las células normales no
cancerosas (no transformadas) no resultaban aparentemente
afectadas. Los datos resumidos en la Tabla 1 del Ejemplo 6 fueron
generados utilizando el siguiente procedimiento:
- Primero, se cultivó en placa cada uno de los tipos celulares que iban a ser sometidos a ensayo a bajas densidades en los pocillos de una placa de cultivo de tejidos de 6 X 24 pocillos normalizada. (Se sembraron múltiples pocillos para cada tipo celular).
- Segundo, se dejó que las células crecieran a densidades moderadas. Las células transformadas están en contacto y las células no transformadas tienen el contacto inhibido en estas condiciones.
- Tercero, los derivados lipoato que se iban a someter a ensayo fueron añadidos a pocillos individuales. En estos experimentos se añadió cada compuesto dos a cuatro veces por encima de la concentración de eliminación umbral para las células cancerosas. (Ejemplo 9).
- Cuarto, las células fueron controladas a lo largo de los días siguientes.
\vskip1.000000\baselineskip
Para todos los derivados lipoato bloqueados
sometidos a ensayo, se encontró que cada tipo de célula cancerosa
sensible era eliminada eficazmente, mientras que cada uno de los
cuatro tipos de células no cancerosas, normales sometidos a ensayo
no resultaba afectado.
La Figura 1 muestra los resultados de los
experimentos en los que se utilizan derivados de ácido lipoico para
eliminar selectivamente numerosos tipos de células tumorales.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo, se presenta el sistema de
cultivo celular bien desarrollado, NIH 3T3 para someter a ensayo
los derivados de ácido lipoico de esta invención. Las células NIH
3T3 son células no cancerosas, relativamente normales. Sin embargo,
si un alelo activado del oncogen ras es introducido en estas células
se vuelven muy malignas (cancerosas) como se evalúa mediante
diversos análisis (Referencia).
Utilizando el procedimiento descrito en el
Ejemplo 7, se comparó la sensibilidad a los derivados de ácido
lipoico de las células NIH3T3 parentales y del derivado de estas
células T24 transformadas con ras. Se encontró que los derivados
lipoato bloqueados más potentes (ver la Tabla 1, Ejemplo 6)
eliminaban las células transformadas muy eficazmente, a la vez que
dejaban sin afectar las células parentales no transformadas. Los
resultados se muestran en la Figura 2.
Así, estos resultados proporcionan una evidencia
adicional de que los derivados lipoato bloqueados eliminan las
células cancerosas con una elevada especificidad.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo revisa algunas de las propiedades
compartidas por los derivados de ácido lipoico de la invención.
Primero, cada compuesto eliminaron células
cancerosas en cultivo a intervalos de concentración específicos,
relativamente estrechos, o por encima de ellos, pero no por debajo.
Las concentraciones umbral dadas más abajo representan el centro
aproximado de este intervalo que se extiende groseramente de dos a
tres veces. Este perfil de eliminación indicó que estos compuestos
saturaban uno o más procedimientos celulares o dianas para producir
la eliminación. Por debajo de estos intervalos de saturación, las
células sensibles sobrevivieron y crecieron. Podían ser separadas y
re-cultivadas en placa para crecer, aparentemente,
de manera indefinida, en estas condiciones. En contraste, por
encima de estos intervalos de concentración específicos del agente
de ácido lipoico, el crecimiento celular se detuvo y siguó la muerte
celular. Este fue un perfil de dosis/respuesta muy inusual. Las
concentraciones de eliminación umbral (intervalos) variaron entre
los compuestos individuales. Entre los ejemplos de estas
concentraciones de eliminación umbral estaban las siguientes:
lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2) 60 mg/litro (60
mg/kg); lipoato de bis-acetilo (Ejemplo 1) 600
mg/litro (600 mg/kg).
Segundo, cada derivado de ácido lipoico sometido
a ensayo produjo cambios morfológicos específicos en las células
diana sensibles a lo largo de todo el período entre las
12-24 horas iniciales del tratamiento. Entre estos
cambios se incluyeron cierto redondeo, así como la frecuente
formación de pares de células unidas por estructuras similares a
puentes reminiscentes de una citocinesis detenida. Estos cambios
estaban seguidos por último de muerte celular si continuaba el
tratamiento. No obstante, estos cambios morfológicos revertieron, y
las células se recuperaron, si el derivado lipoato se separaba
durante esta exposición inicial. Como con el perfil dosis/respuesta
del párrafo anterior, esta inducción reversible del cambio
morfológico seguida del paso a la muerte celular es altamente
idiosincrásico. El descubrimiento de que este comportamiento era
mostrado por todos los miembros sometidos a ensayo de los
compuestos que son objeto de esta invención fue, de nuevo, una muy
fuerte evidencia de que estos compuestos son, en efecto, una clase
funcionalmente coherente.
\vskip1.000000\baselineskip
Este ejemplo proporciona la evidencia de que los
derivados de ácido lipoico que son el objeto de esta invención
eliminan las células cancerosas induciendo la apoptosis (muerte
celular programada). Importantemente, todos los miembros sometidos
a ensayo tenían esta propiedad. Esto representó una fuerte prueba
adicional (ver también los Ejemplos 6, 7 y 9) de que estos
compuestos funcionaban de la misma manera. En efecto, estos
compuestos aparentemente inducían a las células cancerosas a
"cometer un suicidio". Adicionalmente, la inducción de la
apoptosis, en lugar de la necrosis, es una propiedad beneficiosa
para el uso clínico de estos compuestos. En condiciones
apoptóticas, el "suicidio" de las células cancerosas es menos
destructivo que la necrosis de las células normales
circundantes.
Con el fin de comprender el experimento descrito
en este Ejemplo es necesario revisar los detalles concernientes al
análisis especifico utilizado en los experimentos. El ADN nuclear de
estas células está normalmente presente en moléculas muy largas que
constituyen cromosomas. Estas moléculas poliméricas muy largas
tienen extremos libres sólo muy raramente. En contraste, tras la
inducción de la apoptosis la célula comienza a destruirse a sí
misma y, en el proceso, introduce un número extremadamente grande de
roturas en su ADN en el proceso de reducirlo a sus pequeños
constituyentes monoméricos. La enzima apropiada - transferasa
terminal - añadirá nucleótidos a los extremos libres de las
moléculas de ADN. Por otra parte, esta enzima utilizará monómeros
(nucleótidos) para esta reacción de adición que tienen grupos muy
fluorescentes añadidos a ellos. Así, si se exponen los núcleos de
las células normales - con pocos extremos de ADN libres - a la
transferasa terminal y a los monómeros fluorescentes, se añade a
estos núcleos muy poca fluorescencia. En contraste, cuando estos
componentes se añaden a los núcleos de las células que experimentan
apoptosis y se añaden números muy elevados de monómeros
fluorescentes - a los muchísimos extremos de ADN que están presentes
- dan como resultado una introducción masiva de fluorescencia. El
análisis convencional basado en estas propiedades es referido
mediante el acrónimo TUNEL.
Lo siguiente es un ejemplo de los experimentos
que demuestran que los derivados lipoato que son los objetos de
esta invención inducen apoptosis. Se cultivaron en placa células
cancerosas HeLa en numerosos pocillos de una placa para el cultivo
de tejidos. Algunos pocillos (experimentales) fueron tratados con el
derivado lipoato de bis-benzoilo (Ejemplo 2) a una
concentración de aproximadamente dos veces superior a la
concentración de eliminación umbral (Ejemplo 9) mientras los otros
pocillos (controles) se dejaron sin tratar. Al cabo de
aproximadamente 20 horas las células tratadas (experimentales)
habían comenzado a experimentar muerte. Las células experimentales
y de control fueron fijadas, permeabilizadas y expuestas después a
transferasa terminal y monómeros fluorescentes (nucleótidos). Este
análisis demuestra que el subgrupo de células cancerosas que mueren
activamente en el momento del análisis muestran la señal
fluorescente TUNEL esperada de las células que experimentaban
apoptosis. Esto indica que todos los miembros sometidos a ensayo de
los compuestos de ácido lipoico que son objeto de esta invención
inducen la apoptosis en las células cancerosas.
Los resultados del experimento anterior se
muestran en la Figura 3.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta sección revisa la toxicología en ratón de
los derivados de ácido lipoico de esta invención. Una cuestión
clave en la evaluación de la utilidad clínica práctica de los
agentes anti-cancerosos novedosos es su toxicidad
para los seres humanos y animales en los cuales van a ser
utilizados. Para ser muy útiles, tales agentes deben ser
relativamente inocuos para el anfitrión humano o animal en las
condiciones en las cuales eliminan o inhiben eficazmente las
células cancerosas. Los miembros de la familia de los derivados
lipoato bloqueados muestran esta propiedad esencial, deseable como
se indica mediante las siguientes observaciones.
\newpage
Durante muchos años se ha reconocido que incluso
las moléculas biogénicas, que aparecen normalmente son tóxicas si
se administran a dosis suficientemente elevadas. El ácido lipoico no
es aparentemente una excepción. A dosis suficientes acabarían con
un ratón. Los autores de la presente invención harán referencia a
esta eliminación en lo sucesivo como toxicidad no específica. Los
miembros sometidos a ensayo de la clase novedosa de compuestos de
los autores de la presente invención tienen toxicidades no
específicas inferiores a la del ácido lipoico normal. Por otra
parte, los miembros de esta clase con la mayor potencia sometidos a
ensayo frente a tumores en cultivo celular tienen las toxicidades
no específicas más bajas.
Como resultado, los miembros más potentes de
esta clase de compuestos pueden ser inyectados a los animales a
dosis muchas veces superiores a las que se espera que sean
suficientes para eliminar células tumorales en sistemas de células
cultivadas, sin una toxicidad perceptible para el animal.
Colectivamente, estos resultados indican que los
miembros de esta clase de agentes pueden ser administrados a
ratones y seres humanos a dosis que exceden bastante de las
requeridas para el tratamiento de tumores, sin efectos secundarios
significativos.
Los detalles relevantes de estos estudios son
los siguientes:
- Primero, el propio ácido lipoico (mezcla racémica D,L) tiene una LD-50 de aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal en ratones. (Todos los estudios descritos en esta sección se llevaron a cabo mediante inyección intraperitoneal (IP) en ratones C57/BL).
- Segundo, se encontró que la toxicidad no específica en el derivado de ácido bis-acil lipoico producía una DL-50 de aproximadamente 500 mg/kg con una dosis máxima bien tolerada de aproximadamente 200 mg/kg. Obsérvese, asimismo, que ésta es una toxicidad no específica significativamente menor que la del lipoato normal. [Obsérvese que la toxicidad no específica de éste y todos los demás compuestos sometidos a ensayo era aguda - la muerte del animal se produce en minutos tras la inyección IP. Esto, por lo tanto, parece no estar relacionado con la muerte celular que se produce a lo largo de un período de días en las células cancerosas tratadas en cultivo con los derivados lipoato bloqueados (Véanse, Ejemplos 6-10).
- Tercero, el derivado de ácido bis-bencil lipoico tenía una DL-50 de aproximadamente 1.000 mg/kg de peso corporal con una dosis máxima bien tolerada de aproximadamente 500 mg/kg. Esta era una toxicidad significativamente más baja que la del lipoato de bis-acetilo (anterior) y mucho más baja que la del lipoato normal.
- Cuarto, basándose en estos resultados se realizaron los siguientes cálculos: La masa animal total era de aproximadamente un 70% de agua. Esta estaba distribuida como sigue. Aproximadamente 50% de la masa de un adulto era agua intracelular, aproximadamente 15% de la masa total era fluido extracelular diferente de la sangre (referido generalmente como "fluido intersticial") y aproximadamente 5% de la masa total era sangre. Esto condujo a la siguiente secuencia proyectada. Aproximadamente 500 mg/kg de este derivado de bis-benzoilo fueron inyectados en la cavidad peritoneal de un ratón. Esta sustancia fue recogida muy rápidamente en la sangre. La dosis eficaz del derivado de bis-benzoilo en el cultivo celular fue de 60 \mug/ml o 60 mg/kg (véanse, Ejemplos 6 y 9). Se esperaba que esta inyección IP se equilibrara rápidamente con la sangre, produciendo concentraciones que se aproximaron transitoriamente a 10.000 mg/kg o aproximadamente 167 veces la concentración eficaz de este agente en sangre. Adicionalmente se esperaba que ésta se equilibrara con el fluido intersticial produciendo concentraciones que se aproximaron a 2.500 mg/kg o aproximadamente 42 veces la concentración eficaz en este fluido. Después esta se equilibró con los fluidos corporales totales para producir concentraciones que se aproximaron a 715 mg/kg o aproximadamente 12 veces la dosis eficaz en los fluidos corporales totales.
\vskip1.000000\baselineskip
En resumen, estos resultados tienen dos
implicaciones clave. Primero, indican que se podrían alcanzar
fácilmente concentraciones eficaces de los miembros más potentes de
esta clase de agentes - incluyendo lipoato de
bis-benzoilo - que se esperaba que fueran
suficientes para eliminar las células cancerosas del animal mientras
por otra parte dejaban el resto del animal aparentemente sin
afectar. Esta combinación de baja toxicidad no específica y elevada
toxicidad específica para las células tumorales fue sorprendente e
indicó que esta clase de agentes tenía un elevado potencial
clínico. Segundo, las propiedades relativas de los miembros de
bis-acetilo y bis-benzoilo de la
familia de derivados de ácido lipoico ilustraron este punto. Ambos
derivados tenían una actividad anti-cancerosa
específica que el lipoato normal no tenía, a la vez que tenían
simultáneamente niveles inferiores de toxicidad no específica.
Adicionalmente, se observó una relación similar entre los derivados
lipoato bloqueados como sigue. El lipoato de
bis-benzoilo tenía simultáneamente una toxicidad no
específica inferior y una potencia anticancerosa muy superior a la
del derivado de bis-acetilo. Este, y similares
resultados demostraron claramente que la actividad anticancerosa y
la toxicidad no específica varían independientemente.
\vskip1.000000\baselineskip
Los descubrimientos descritos antes indican que
se pueden eliminar células cancerosas sin dañar al ser humano o al
animal en tratamiento utilizando los miembros de la clase novedosa
de compuestos que son los objetos de esta invención (véanse,
especialmente, Ejemplos 6 y 11). En este ejemplo, los resultados de
estudios en ratones apoyan esta expectativa. Los resultados
relevantes son los siguientes.
Se introdujo la cepa de melanoma
B-16 subcutáneamente o intraperitonealmente en
individuos de la cepa de ratones singeneicos C57/BL (7). Cuando se
dejaban sin tratar tales ratones desarrollaban tumores masivos en el
área inmediata de la inyección así como metástasis secundarias en
todo el animal - incluyendo el hígado y los pulmones. Estos
desarrollos malignos dieron como resultado la muerte temprana de los
animales. Por otra parte, los desarrollos malignos resultantes
están constituidos por melanocitos malignos oscuramente pigmentados
- haciendo su evaluación conveniente y altamente fiable. Los
autores de la presente invención se referirán a esto en lo sucesivo
como "sistema B-16".
Utilizando el sistema B-16 los
autores de la presente invención han utilizado los miembros lipoato
de bis-benzoilo y de bis-acetilo
para demostrar que los miembros de la clase novedosa de compuestos
que son objeto de esta invención tienen la eficacia anticancerosa
esperada basándose en los descubrimientos descritos en los Ejemplos
precedentes. Los resultados relevantes son los siguientes.
Primero, se inyectaron IP células
B-16 a un grupo de ratones. El grupo al que se había
inyectado se dividió al azar en dos subgrupos iguales. A un
subgrupo (experimental) se le inyectaron IP dos veces al día 100
mg/kg del miembro de la clase de compuestos lipoato de
bis-benzoilo en 200 \mul de etanol al 10% [Véanse
los Ejemplos 2, 6 y 9 para las descripciones del lipoato de
bis-benzoilo]. Al segundo subgrupo (control) se le
inyectaron 200 \mul de etanol al 10% solo.
Al cabo de 16 días, se examinaron los animales -
incluyendo la disección cuando fuera apropiado. Los animales de
control tenían numerosas masas de tumores IP masivos. En contraste,
los correspondientes animales experimentales tenían un número y una
masa sustancialmente reducidos - tanto como una masa menor del
30-50% que la muestra de control.
Segundo, se inyectaron en un lugar subcutáneo
células B-16 en un grupo de animales. Al cabo de
6-8 días, se observaron tumores grandes, esféricos,
fácilmente palpables (aproximadamente 3-5 mm de
diámetro) en el lugar de la inyección de células inicial. En este
momento, en un grupo de animales (experimentales) se inició una
serie de inyecciones dos veces al día del derivado lipoato de
bis-acetilo (100 mg/kg en 100 \mul de solución
salina isotónica) y en un segundo grupo (controles) las
correspondientes inyecciones de disolvente salino solo. [Véanse los
Ejemplos 1, 6 y 9 para los detalles del derivado lipoato de
bis-acetilo]. En los animales experimentales - pero
no en los controles - los autores de la presente invención
observaron comúnmente un ablandamiento palpable y una licuefacción
aparentemente parcial de la masa tumoral seguido de una
estabilización o una reducción del tamaño. Esto indica que el
derivado bis-acetilado está produciendo una muerte
celular significativa en estos tumores en estas circunstancias.
Tercero, en numerosos animales se produjeron
tumores subcutáneos como en el párrafo anterior. Una vez que los
tumores hubieron crecido hasta ser visibles, de tamaño palpable,
estos animales recibieron una dosis dos veces al día IP (sistémica)
de 50 mg/kg de lipoato de bis-benzoilo así como una
inyección directa dos veces al día con una segunda dosis del mismo
volumen directamente en la masa tumoral. Estos animales mostraron
aparentemente una respuesta especialmente robusta, incluyendo un
caso en el cual la masa tumoral disminuía espectacularmente y
desaparecía en gran parte o totalmente en el transcurso del
tratamiento.
En resumen, estos resultados indican claramente
que los derivados lipoato de bis-benzoilo y de
bis-acetilo tienen la eficacia y la especificidad
anticancerosa esperadas en el animal intacto. Basándose en estos
resultados, los expertos en la técnica podrían ajustar las dosis y
los regímenes de dosificación para producir el control parcial o
completo y/o la eliminación de estos tumores en estos animales.
\vskip1.000000\baselineskip
Un probable mecanismo de acción de los derivados
lipoato bloqueados que son el objeto de esta invención es que
inhiben el PDC específicamente en las células cancerosas dando como
resultado la pérdida de polarización de la membrana mitocondrial y
la consiguiente inducción de la apoptosis en las células cancerosas.
Se espera que los derivados lipoato bloqueados puedan interaccionar
sinérgicamente con otros agentes que inhiben el metabolismo
energético mitocondrial y/o inducen la apoptosis de alguna otra
manera.
Esto fue sometido a ensayo en este Ejemplo con
dicloroacetato (abreviado en lo sucesivo como DCA) (8). Este
compuesto es un análogo de piruvato. Como tal, se espera que uno de
sus efectos sea la inhibición competitiva del PDC. Se encontró que
este compuesto interacciona sinérgicamente con los derivados lipoato
bloqueados como cabría esperar. Una observación experimental
relevante es la siguiente.
Se cultivaron en placa células HeLa a densidades
moderadas y se dejó que se anclaran y crecieran durante
aproximadamente 24 horas en una serie de pocillos de placas de
cultivo de múltiples pocillos. A los pocillos individuales del
primer subgrupo (control) se les añadieron lipoato de
bis-acetilo o lipoato de
bis-benzoilo - cada uno a una dosis aproximadamente
el doble que la dosis de eliminación umbral (Ejemplo 9). A un
subgrupo equivalente (experimental) de pocillos se les añadieron
estos mismos compuestos a la misma dosis junto con la adición
simultánea de DCA a una concentración final 5 mM. Los autores de la
presente invención encontraron que las células del subgrupo
experimental fueron eliminadas aproximadamente dos veces más rápido
que en el subgrupo de control.
Este era un efecto sorprendente. A las 24 horas
del tratamiento el grupo experimental estuvo casi completamente
eliminado, mientras no se observó un nivel similar de eliminación
casi completa hasta aproximadamente las 48 horas en el subgrupo de
control.
Basándose en las observaciones experimentales de
esta clase, es probable que estos derivados lipoato de esta
invención interaccionen sinérgicamente con otros inhibidores
metabólicos y/u otros agentes quimioterapéuticos para eliminar las
células cancerosas más eficazmente. De hecho, una aplicación clínica
eficaz de los compuestos novedosos que son objeto de esta invención
puede ser junto con otros agentes.
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Claims (15)
1. Una sal fisiológicamente aceptable de un
compuesto de fórmula:
donde:
x es 0-16
R_{1} y R_{2} son independientemente acilo
CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C(=O)-;
alquilo C_{n}H_{2n+1}; alqueno C_{m}H_{2m}; alquino
C_{m}H_{2m-2}; aromático; aroílo; sulfuro de
alquilo CH_{3}(CH_{2})_{t}-S-;
éster tiocarbámico
CH_{3}(CH_{2})_{n-1}C=NH-; o
semitioacetal CH_{3}CH(OH)-S-; donde n es
1-10; m es 2-10 y t es
0-9 para su uso en el tratamiento o la prevención de
enfermedades.
2. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{1} y R_{2} son grupos acetilo.
3. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
grupo aromático es benceno o un derivado de benceno.
4. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{1} y R_{2} son grupos benzoilo.
5. El compuesto de la reivindicación 4, donde x
es 4.
6. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
grupo alqueno se selecciona del grupo formado por propileno,
2,3-dimetil-2-buteno
y hepteno.
7. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
alquino se selecciona del grupo formado por acetileno, propino y
octino.
8. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
grupo alquilo es ciclopropano.
9. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
grupo alqueno es ciclopenteno.
10. Un compuesto según se define en una
cualquiera de las reivindicaciones 4 a 9.
11. El uso de una cantidad terapéutica de
compuesto de ácido lipoico según se refiere en una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 9 en la preparación de una composición
farmacéutica para el tratamiento o la prevención en un paciente de
una enfermedad caracterizada por una sensibilidad a derivados
de ácido lipoico.
12. El uso de la reivindicación 11, donde dicha
enfermedad comprende una enfermedad neoplásica.
13. Una composición farmacéutica que comprende
un compuesto según se ha referido en una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9 y un portador farmacéuticamente
aceptable.
14. La composición farmacéutica de la
reivindicación 13, que comprende adicionalmente un segundo
reactivo.
15. La composición farmacéutica de la
reivindicación 14, donde el segundo reactivo es dicloroacetato.
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