Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

ES2277785B1 - Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal. - Google Patents

Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal. Download PDF

Info

Publication number
ES2277785B1
ES2277785B1 ES200503203A ES200503203A ES2277785B1 ES 2277785 B1 ES2277785 B1 ES 2277785B1 ES 200503203 A ES200503203 A ES 200503203A ES 200503203 A ES200503203 A ES 200503203A ES 2277785 B1 ES2277785 B1 ES 2277785B1
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
colorectal cancer
expression analysis
differential expression
cancer according
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
ES200503203A
Other languages
English (en)
Other versions
ES2277785A1 (es
Inventor
Carlos Buesa Arjol
Simo Schwartz Navarro
Diego Arango del Corro
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Oryzon Genomics SA
Original Assignee
Oryzon Genomics SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to ES200503203A priority Critical patent/ES2277785B1/es
Application filed by Oryzon Genomics SA filed Critical Oryzon Genomics SA
Priority to CA002635127A priority patent/CA2635127A1/en
Priority to AU2006329794A priority patent/AU2006329794A1/en
Priority to EP06841756A priority patent/EP1980624A2/en
Priority to JP2008546496A priority patent/JP2009520486A/ja
Priority to PCT/ES2006/000704 priority patent/WO2007074193A2/es
Publication of ES2277785A1 publication Critical patent/ES2277785A1/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2277785B1 publication Critical patent/ES2277785B1/es
Priority to US12/214,522 priority patent/US20080286801A1/en
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57419—Specifically defined cancers of colon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal. La presente invención describe un método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal basado en la variación en los niveles de expresión de genes que codifican proteínas del complejo condensina y proteínas asociadas que tiene lugar en pacientes afectados de dicha enfermedad y que pueden ser utilizadas como marcadores para el diagnóstico de dichos tumores así como en la prevención y tratamiento de los mismos.

Description

Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal.
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a un método de análisis de la expresión diferencial basado en la sobreexpresión de proteínas del complejo condensina y proteínas asociadas en pacientes de cáncer colorectal que puede ser utilizado como criterio de diagnóstico de dichos tumores así como en la prevención y tratamiento de los mismos.
Antecedentes de la invención
En términos absolutos, el cáncer es la segunda causa de muerte en España. De entre los múltiples tipos de cáncer destaca el cáncer colorectal que causó el 11% de las defunciones por cáncer en hombres y el 15% en mujeres según los datos de 1999. En España se estima que el número de casos nuevos por año se sitúa en torno a los 18.000 en ambos sexos frente a 11.300 defunciones. Los tumores de colon y recto suelen analizarse conjuntamente debido a los frecuentes errores de clasificación de los tumores de la porción recto-sigmoide. La mortalidad es muy elevada, constituyendo la segunda localización tumoral en importancia en hombres y en mujeres, con una tendencia temporal ascendente (2,2% anual en hombres y 0,7% en mujeres). En la actualidad la mortalidad es más alta en hombres, aunque en los años 60 lo era más en mujeres.
En estos tumores los datos de mortalidad no reflejan la verdadera incidencia de la enfermedad, ya que la supervivencia ha mejorado en los últimos años, principalmente en personas jóvenes. La tendencia a la estabilización de la mortalidad puede reflejar las mejoras terapéuticas obtenidas con un diagnóstico precoz, por tratarse de tumores bastante accesibles a la exploración con sigmoidoscopio y a la generalización de las colonoscopias completas en grupos de riesgo identificados.
El riesgo acumulativo durante la vida de contraer la enfermedad es del 5-6%, estando influenciado por hábitos de vida y factores hereditarios. La forma de cáncer colorectal más frecuente es el de tipo esporádico (90%) existiendo casos con componentes hereditarios: la poliposis adenomatosa familiar (0,01%) y el cáncer colorectal hereditario no-polipósico (5-10%). Estos últimos son causados por síndromes familiares definidos por unos pocos genes. Sin embargo, los genes responsables de los cánceres esporádicos permanecen sin identificar. Se considera que el desarrollo tumoral colorectal es posiblemente la consecuencia de una serie de eventos moleculares que se inician con una o varias mutaciones o eventos epigenéticos y sigue con fenómenos de progresión, en los que pueden estar involucrados factores tanto genéticos como ambientales.
En general, el cáncer colorectal no suele dar síntomas hasta fases avanzadas de crecimiento en la pared intestinal, por lo que se hace necesaria la identificación de nuevos genes y/o mutaciones responsables y/o indicadores de este tipo de cáncer y el consiguiente desarrollo de métodos analíticos que permitan un diagnóstico molecular selectivo y rápido de la enfermedad para que puedan ser incluidos en la práctica clínica habitual.
También se produciría un ahorro de costes sanitarios y una reducción en los tiempos de espera, la adopción de nuevos criterios pronósticos y de orientación terapéutica en los casos positivos así como el diseño de terapias selectivas relacionadas con estos genes.
La proteína codificada por el gen SMC2L1 (ortólogo humano de SMC2 de S. cerevisiae, también denominado hCAP-E) es una proteína central en los complejos de condensación y compactación cromosómica que podría tener funciones relacionadas con la regulación de la transcripción génica (Hagstrom & Meyer, 2003; Hirano, 2002;
Legagneux et al., 2004).
Esta proteína forma parte de una familia de proteínas denominadas SMC (por "structural maintenance of chromosomes") y que está formada por 6 proteínas numeradas de 1 a 6 (SMC1, SMC2, SMC3, SMC4, SMC5 y SMC6). Estas proteínas forman dímeros entre ellas y complejos activos con otras proteínas denominadas no-SMC (divididas en dos familias, HEAT y Kleisina). En su conjunto forman tres complejos principales: condensina (en humanos existen dos complejos diferenciados, condensina I y condensina II), cohesina y el complejo hSMC5-hSMC6, relacionado con la reparación genómica (Hagstrom & Meyer, 2003; Hirano, 2002). En las tablas 1 y 2 se describen las proteínas y los complejos que forman en distintas especies.
TABLA 1 Mantenimiento estructural de cromosomas
1 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 2 Complejos de Condensina
2
SMC2L1 forma parte de los complejos de condensina I y II. Ambos complejos tienen funciones relacionadas con la compactación de cromatina (Hirano et al., 1994; Ono et al., 2004; Ono et al., 2003):
Condensina I: formada por el dímero SMC2-SMC4 (hCAP-E-hCAP-C), las subunidades HEAT hCAP-D2/CNAPI y hCAP-G, y la subunidad Kleisina hCAP-H. El dímero hCAP-E-hCAP-C se encuentra en el citoplasma en células interfásicas (fuera de mitosis). Una vez llegada la mitosis, las subunidades no-SMC se fosforilan, interaccionan con el dímero hCAP-E-hCAP-C, forman el complejo y se trasladan al núcleo donde interaccionan con el DNA y lo compactan (Hagstrom & Meyer, 2003).
Condensina II: formada por el dímero SMC2-SMC4 (hCAP-E-hCAP-C), las subunidades HEAT hCAP-D3 y hCAP-G2, y la subunidad Kleisina hCAP-H2. Parece ser que el complejo se encuentra en el núcleo en células interfásicas (fuera de mitosis) (Fig. 1A) y podría tener relación con la regulación transcripcional génica, ayudando a compactar la zona promotora de determinados genes. Esto situaría la condensina en zonas de eucromatina y asociadas a regiones transcripcionalmente activas (las zonas donde existe regulación transcripcional, es decir, activación o inhibición de la transcripción), como son las equivalentes a la zona interna nuclear (Fig. 1A y 1B) y a las bandas R de los cromosomas, con otros factores reguladores como histonas acetiladas (por ejemplo la histona H3 acetilada en la lisina K3) (Fig. 2 y 3).
No existen evidencias en la literatura que hayan relacionado estas proteínas con este tipo de cáncer. Sin embargo, la posible relación de la condensina con el silenciamiento transcripcional y la correcta compactación cromosómica hace pensar que podría estar alterada en cáncer. La mayoría de cánceres presentan hipometilación general del genoma acompañada de una hiperacetilación general. No obstante, se ha demostrado que determinadas zonas promotoras génicas ricas en islas CpG tiene hipermetilación y los genes están silenciados (no se transcriben). En la presente invención se describe que la condensina colabora en estos procesos de silenciamiento y que las proteínas que forman estos complejos y proteínas asociadas están sobreexpresadas. Asimismo, dado que se considera que la mayoría de alteraciones epigenéticas son muy iniciales en los procesos neoplásicos, esta sobreexpresión también puede ser característica de procesos incipientes como los adenomas.
Descripción de la invención
La presente invención tiene por objeto un método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal que comprende detectar en una muestra biológica aislada de un paciente una variación en los niveles de expresión de uno o más genes que codifican proteínas que forman parte del complejo condensina u otras proteínas que interaccionan con dicho complejo, donde dicha variación en los niveles de expresión del gen se utiliza como diagnóstico de la presencia de cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo.
En particular, el gen o genes a analizar se seleccionan entre el grupo formado por hCap-E, hCap-C, hCap-D2, hCap-D3, hCap-G, hCap-G2, hCap-H, y KIF4A y la variación en los niveles de expresión del gen o genes es un incremento en los niveles de expresión.
En particular, dicha muestra puede ser DNA o RNA y puede aislarse a partir de células obtenidas por biopsia o cualquier otro método de extracción.
En una realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante una amplificación por PCR, SDA o cualquier otro método de amplificación de ácidos nucleicos.
En otra realización de la invención, la detección se puede llevar a cabo mediante biochips de DNA elaborados con oligonucleótidos depositados por cualquier mecanismo o por biochips de DNA elaborados con oligonucleótidos sintetizados in situ mediante fotolitografía o por cualquier otro mecanismo.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante hibridación in situ utilizando sondas específicas marcadas con cualquier método de marcaje.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante geles de electroforesis. Opcionalmente, la detección se puede llevar a cabo mediante transferencia a membrana e hibridación con una sonda específica.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen mediante la utilización de nanopartículas paramagnéticas o cualquier otro tipo de nanopartículas detectables funcionalizadas con anticuerpos o por cualquier otro medio.
Opcionalmente, la muestra analizada puede ser la proteína codificada por el gen o fragmentos de la misma.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante incubación con un anticuerpo específico. Opcionalmente, la detección se puede llevar a cabo mediante Western blot o mediante inmunohistoquímica.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante geles de electroforesis de proteína.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante chips de proteína.
En otra realización de la invención, la detección se lleva a cabo mediante ELISA o cualquier otro método enzimático.
La presente invención también tiene por objeto un método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal donde la variación en los niveles de expresión de uno o más de los genes descritos se utiliza como pronóstico de la progresión del cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo o como pronóstico del riesgo de recurrencia de dicha enfermedad.
La presente invención también tiene por objeto un kit para llevar a cabo el método de análisis de expresión diferencial que comprende los reactivos y aditivos apropiados para detectar la variación en los niveles de expresión del gen o genes.
La presente invención tiene también por objeto adicional un método de análisis de compuestos con potencialidad terapéutica en cáncer colorectal que comprende determinar la capacidad de dichos compuestos de disminuir los niveles de expresión de uno o más de los genes descritos donde los compuestos son compuestos obtenidos de la información de la secuencia tales como oligonucleótidos antisentido o de interferencia de RNA u otros basados en la desestabilización y eliminación del mRNA o el impedimento de su traducción a proteína.
La presente invención tiene también por objeto adicional un método de análisis de compuestos con potencialidad terapéutica en cáncer colorectal que comprende determinar la capacidad de dichos compuestos de contrarrestar la variación en los niveles de expresión de uno o más de los genes descritos donde los compuestos son nanopartículas paramagnéticas o nanopartículas de excitación térmica.
La presente invención tiene también por objeto adicional un método de análisis de compuestos con potencialidad terapéutica en cáncer colorectal que comprende determinar la capacidad de dichos compuestos de contrarrestar la variación en los niveles de expresión de uno o más de los genes descritos donde los compuestos son nanopartículas funcionalizadas con anticuerpos específicos y compuestos tóxicos vehiculados de forma simple, binaria o modular para la célula maligna.
Asimismo, la presente invención tiene por objeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de compuestos con potencialidad terapéutica obtenidos según los métodos descritos anteriormente y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Por otra parte, la presente invención también tiene por objeto el uso de compuestos con potencialidad terapéutica obtenidos según los métodos descritos anteriormente para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención del cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo.
La presente invención se basa en la sobreexpresión de las proteínas del complejo condensina y proteínas asociadas observada en pacientes afectados de cáncer colorectal. Los datos demostraban una sobreexpresión de hCAP-E en el análisis por Western blot utilizando anticuerpos específicos anti-hCAP-E en muestras de cáncer colorectal en comparación con muestras de tejido normal, de manera independiente de su estadiaje tumoral y con una incidencia de sobreexpresión del 90% de los tumores (18/20) (Fig. 4). Esta sobreexpresión también se observó en todos los análisis por inmunohistoquímica en tejidos tumorales de cáncer colorectal (Fig. 5).
Asimismo, se observó que la expresión de hCAP-E es también específica de las células pluripotenciales (stem) de la cripta del colon (Fig. 6), que son las células indiferenciadas a partir de las cuales se originan los tumores colorectales. Su patrón de expresión indica que ésta prácticamente desaparece conforme la célula pluripotencial se transforma en célula epitelial (célula Globbet) en una cripta normal para formar el epitelio, por lo que podría considerarse como un marcador de diferenciación celular.
En la Tabla 3 se muestran los niveles de sobreexpresión de hCAP-E en cáncer colorectal de acuerdo con el estadiaje.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 3 Sobreexpresión de hCAP-E en cáncer colorectal de acuerdo con el estadiaje
3
La incidencia de sobreexpresión (+) fue del 90% (18 sobre 20 tumores). Solamente se observó un caso en el que la expresión era inferior al normal (-) y un caso en el que el tejido normal y el tejido tumoral mostraban niveles similares de expresión (=).
Asimismo, se analizaron mediante PCR en tiempo real (real-time PCR) los niveles de expresión de otras proteínas que forman el complejo condensina, tales como hCap-C, hCap-D2, hCap-D3, hCap-G, hCap-G2 y hCap-H así como de otras proteínas asociadas que interactúan con el complejo, como KIF4A, en algunos casos tumorales en los que se había observado la sobreexpresión de hCap-E. Los resultados indicaron que todas las proteínas analizadas presentaban un incremento en los niveles de expresión en tejido tumoral en relación con los niveles en tejido normal (Fig. 7). Por lo tanto, se puede concluir que todas las proteínas que integran el complejo condensina y otras proteínas que interactúan con dicho complejo están sobreexpresadas en los tumores.
Así pues, las proteínas que forman el complejo condensina y otras proteínas asociadas que interactúan con el mismo pueden ser utilizadas como marcadores de cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo teniendo potencial como marcador de diagnóstico y/o de recomendación para la colonoscopia.
Asimismo, estas proteínas pueden ser marcadores de células pluripotenciales (stem cells) de la cripta del colon como marcadores de diferenciación celular. Por otra parte, estas proteínas pueden ser marcadores histológicos de cáncer y/o pueden tener utilidad en sistemas de análisis por imagen.
Además, estas proteínas pueden constituir dianas terapéuticas directas o indirectas, permitiendo la llegada de tratamientos antitumorales vehiculizados al tumor a través de interacciones con cualquiera de estas proteínas o mediante la modulación de sus niveles de expresión.
Cabe destacar que recientemente se ha descrito que los niveles de expresión de las proteínas del complejo condensina no varían a lo largo de ciclo celular y, por lo tanto, no varían durante la mitosis (Takemoto et al., 2004). Así pues, el hecho de encontrar niveles elevados de estas proteínas en células cancerosas tal como se describe en la presente invención no puede ser atribuido simplemente a un aumento de la actividad replicativa (mitosis) de la célula tumoral, sino que se trata de una sobreexpresión relativa real debida al desarrollo de la enfermedad.
Por lo tanto, la presente invención demuestra una asociación total entre los niveles de expresión de las proteínas que integran el complejo condensina y otras proteínas asociadas a dicho complejo y la presencia de cáncer colorectal cualquiera que sea su estadio de desarrollo, lo que supone disponer de una nueva herramienta molecular que permite el diagnóstico de la enfermedad incluso en sus estadios más iniciales, lo cual no es posible con los métodos actuales.
Bibliografía
- Hagstrom K, Meyer BJ. Condensin and cohesin: more than chromosome compactor and glue. Nat Rev Genet 2003 July 4:520-534.
- Hirano T. The ABC of SMC proteins: two-armed ATPases for chromosome condensation, cohesion and repair. Genes & Development, 2002 16:399-341.
- Legagneux V, Cubizolles F, Watrin E. Multiple roles of condensins: a complex story. Biology of the Cell, 2004 96:201-213.
- Hirano T, Mitchison TJ. A heterodimeric coiled-coil protein required for mitotic chromosome condensation in vitro. Cell 1994 Nov 4;79(3):449-58.
- Ono T, Fang Y, Spector DL, Hirano T. Spatial and temporal regulation of Condensins I and II in mitotic chromosome assembly in human cells. Mol Biol Cell. 2004 Jul; 15(7):3296-308.
- Ono T, Losada A, Hirano M, Myers MP, Neuwald AF, Hirano T. Differential contributions of condensin I and condensin II to mitotic chromosome architecture in vertebrate cells. Cell. 2003 Oct 3; 115(1):109-21.
- Takemoto A, Kimura K, Yokoyama S, Hanaoka F. Cell cycle-dependent phosphorylation, nuclear localization, and activation of human condensin. J Biol Chem. 2004 Feb 6; 279(6):4551-9.
Breve descripción de las figuras
La figura 1A indica la localización de hCAP-E en células interfásicas, representado por los cúmulos blanquecinos. La figura 1B representa la imagen de un núcleo celular obtenida por microscopía electrónica. En ella pueden observarse separadas la heterocromatina y la eucromatina
La figura 2 representa la colocalización de hCAP-E en las regiones cromosómicas equivalentes a la eucromatina (bandas R). Se representa el mismo cromosoma teñido con hCAP-E y por bandas G. La heterocromatina se identifica por las zonas más oscuras, en cada una de las figuras la derecha.
La figura 3 indica la colocalización de hCAP-E con histona 4 acetilada (H4Ac) y las bandas R en cromosomas metafásicos (bandas claras en el cromosoma).
La figura 4 representa los resultados del análisis por Western blot de hCAP-E en muestras normales (N) y tumorales (T) de cáncer colorectal. La actina se utilizó como control de carga.
La figura 5 corresponde a un análisis por inmunohistoquímica de tejido colorectal utilizando un anticuerpo específico anti-hCAP-E. Se observa la zona correspondiente a la cripta normal (N) y la zona correspondiente al adenocarcinoma de colon (T) que presenta una mayor expresión de hCAP-E.
La figura 6 corresponde a un análisis por inmunohistoquímica en criptas normales de colon utilizando un anticuerpo específico anti-hCAP-E, en la que se observa que las células pluripotenciales (stem) presentan una tinción específica más fuerte para hCAP-E que las células Globbet.
La figura 7 representa los resultados del análisis por PCR a tiempo real de otras proteínas del complejo condensina y de la proteína asociada KIF4A. La muestra analizada fue la muestra 67T en la que se había observado previamente una sobreexpresión de hCAP-E en comparación con su muestra normal correspondiente. El análisis se hizo por triplicado y se utilizó el ribosomal 18S como control interno.
Descripción de una realización preferente
A continuación se describe una realización preferente, aunque no limitativa, de la invención.
Muestras de pacientes
Se obtuvieron biopsias de tejido normal y tumoral de 20 pacientes diagnosticados con cáncer colorectal. Las muestras obtenidas quirúrgicamente fueron congeladas de inmediato en nitrógeno líquido y mantenidas a -80ºC para la posterior extracción de proteínas y RNA. Además, se realizaron cortes histológicos para realizar pruebas de inmunohistoquímica. Se registraron las características clínico-patológicas incluyendo el estadio y grado de diferenciación de los tumores así como de un seguimiento de al menos tres años para detectar los casos con recidiva temprana.
Análisis de los niveles de expresión de hCAP-E
Western blot: Las proteínas fueron extraídas a partir de las muestras de tejido normal y colorectal mediante métodos estándar, utilizando tampón de tisis RIPA. Noventa \mug de proteína fueron fraccionados en un gel SDS-PAGE al 10%, transferidas a una membrana de nitrocelulosa (BioRad, USA), bloqueadas con 5% leche en TBS-T, e hibridadas con un anticuerpo primario anti-hCAP-E (Abcam, UK) diluido 1:2500 en solución de bloqueo, y luego con un anticuerpo secundario anti-conejo (Dako Cytomation, Denmark) diluido 1:500. La señal quimioluminescente fue detectada utilizando el kit ECL (Amersham, USA) y se compararon los niveles de expresión de las muestras tumorales con su contraparte normal. Finalmente, la membrana fue rehibridada con anticuerpo anti-actina (Invitrogen, USA) que fue utilizada como control de carga. Como se observa en la figura 4, todas las muestras tumorales presentaban un incremento en los niveles de expresión de hCAP-E.
Inmunohistoquímica: Los cortes histológicos correspondientes a los tejidos de pacientes con cáncer colorectal fueron desparafinados con xileno y rehidratados en series decrecientes de etanol y agua destilada. Las secciones fueron tratadas con tampón citrato pH 6 (5 min 800 W y 10 min 450 W, al microondas), la peroxidasa endógena fue bloqueada con H_{2}O_{2}, y luego fueron hibridadas con el anticuerpo primario anti-hCAP-E (Abcam, UK). Para el análisis inmunohistoquímico se empleó el kit EnVision + Dual Link System (Dako Cytomation, Denmark) de acuerdo a las recomendaciones del fabricante. Finalmente, se comparó el nivel de expresión de hCAP-E entre zonas de tejido normal y tumoral. En la figura 5 se observa una mayor expresión de hCAP-E en tejido tumoral respecto al tejido control.
Análisis de los niveles de expresión de otras proteínas del complejo condensina y proteínas asociadas
Real-time PCR: Los niveles de mRNA correspondientes a otras proteínas del complejo condensina y proteínas asociadas fueron cuantificados mediante PCR en tiempo real (real-time PCR), para lo cual el RNA fue extraído a partir de las muestras de tejido normal y colorectal mantenidas a -80ºC, utilizando Trizol (Invitrogen, USA). Diez \mug de RNA fueron retrotranscritos empleando el kit High Capacity cDNA Archive (Applied Biosystems, USA) y amplificados con TaqMan® Gene Expression Assays (Applied Biosystems, USA) para hCAP-C, hCAP-D2, hCAP-D3, hCAP-G, hCAP-G2, hCAP-H y KIF4A, respectivamente. La reacción de amplificación se llevó a cabo utilizando TaqMan Universal PCR Master Mix en el equipo 7500 Real Time PCR system (ambos de Applied Biosystems, USA). Los niveles relativos de mRNA de cada gen fueron cuantificados empleando el método \Delta\DeltaC_{T}, con el programa asociado al sistema. Se realizó el ensayo por triplicado y se utilizó 18S rRNA como control endógeno, y se comparó la expresión entre tejido normal y tumoral del mismo paciente. Como se observa en la figura 7, las muestras tumorales presentaban unos niveles de mRNA muy incrementados respecto a las muestras control para todos los genes analizados.

Claims (23)

1. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal caracterizado porque comprende detectar en una muestra biológica aislada de un paciente un incremento en los niveles de expresión de uno o más genes que codifican proteínas que forman parte del complejo condensina u otras proteínas que interaccionan con dicho complejo, seleccionados entre el grupo formado por hCap-E, hCap-C, hCap-D2, hCap-D3, hCap-G, hCap-G2, hCap-H, y KIF4A, donde dicho incremento en los niveles de expresión del gen se utiliza como diagnóstico de la presencia de cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo.
2. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 1, caracterizado porque la muestra es aislada de células obtenidas por biopsia o cualquier otro método de extracción.
3. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque la muestra a analizar es DNA.
4. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque la muestra a analizar es RNA.
5. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se realiza mediante una amplificación por PCR, SDA o cualquier otro método de amplificación de ácidos nucleicos.
6. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo por chips de DNA elaborados con oligonucleótidos depositados por cualquier mecanismo.
7. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo por chips de DNA elaborados con oligonucleótidos sintetizados in situ mediante fotolitografía o por cualquier otro mecanismo.
8. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante hibridación in situ utilizando sondas específicas marcadas con cualquier método de marcaje.
9. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante geles de electroforesis.
10. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 9, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante transferencia a membrana e hibridación con una sonda específica.
11. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por
imagen.
12. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen mediante la utilización de nanopartículas paramagnéticas o cualquier otro tipo de nanopartículas detectables funcionalizadas con anticuerpos o por cualquier otro medio.
13. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la muestra analizada es la proteína codificada por el gen o fragmentos de la misma.
14. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante incubación con un anticuerpo específico.
15. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 14, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante Western blot.
16. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 14, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante inmunohistoquímica.
17. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante geles de electroforesis.
18. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante chips de proteína.
19. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante ELISA o cualquier otro método enzimático.
20. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen.
21. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según la reivindicación 13, caracterizado porque la detección se lleva a cabo mediante RMN o cualquier otra técnica de diagnóstico por imagen mediante la utilización de nanopartículas paramagnéticas o cualquier otro tipo de nanopartículas detectables funcionalizadas con anticuerpos o por cualquier otro medio.
22. Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el incremento en los niveles de expresión del gen o genes se utiliza como pronóstico de la progresión del cáncer colorectal o de una condición pre-maligna del mismo o como pronóstico del riesgo de recurrencia de dicha enfermedad.
23. Kit para llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 que comprende los reactivos y aditivos apropiados para detectar el incremento en los niveles de expresión del gen o genes.
ES200503203A 2005-12-21 2005-12-21 Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal. Expired - Fee Related ES2277785B1 (es)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES200503203A ES2277785B1 (es) 2005-12-21 2005-12-21 Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal.
AU2006329794A AU2006329794A1 (en) 2005-12-21 2006-12-19 Method for the analysis of differential expression in colorectal cancer
EP06841756A EP1980624A2 (en) 2005-12-21 2006-12-19 Method for the analysis of differential expression in colorectal cancer
JP2008546496A JP2009520486A (ja) 2005-12-21 2006-12-19 結腸直腸癌における差次的発現の分析方法
CA002635127A CA2635127A1 (en) 2005-12-21 2006-12-19 Method for the analysis of differential expression in colorectal cancer
PCT/ES2006/000704 WO2007074193A2 (es) 2005-12-21 2006-12-19 Método de análisis de expresión diferencial en cáncer colorectal
US12/214,522 US20080286801A1 (en) 2005-12-21 2008-06-18 Method for the analysis of differential expression in colorectal cancer

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES200503203A ES2277785B1 (es) 2005-12-21 2005-12-21 Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2277785A1 ES2277785A1 (es) 2007-07-16
ES2277785B1 true ES2277785B1 (es) 2008-06-16

Family

ID=38218339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES200503203A Expired - Fee Related ES2277785B1 (es) 2005-12-21 2005-12-21 Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal.

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20080286801A1 (es)
EP (1) EP1980624A2 (es)
JP (1) JP2009520486A (es)
AU (1) AU2006329794A1 (es)
CA (1) CA2635127A1 (es)
ES (1) ES2277785B1 (es)
WO (1) WO2007074193A2 (es)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0307403D0 (en) 2003-03-31 2003-05-07 Medical Res Council Selection by compartmentalised screening
US20060078893A1 (en) 2004-10-12 2006-04-13 Medical Research Council Compartmentalised combinatorial chemistry by microfluidic control
GB0307428D0 (en) 2003-03-31 2003-05-07 Medical Res Council Compartmentalised combinatorial chemistry
US20050221339A1 (en) 2004-03-31 2005-10-06 Medical Research Council Harvard University Compartmentalised screening by microfluidic control
US7968287B2 (en) 2004-10-08 2011-06-28 Medical Research Council Harvard University In vitro evolution in microfluidic systems
EP3913375A1 (en) 2006-01-11 2021-11-24 Bio-Rad Laboratories, Inc. Microfluidic devices and methods of use in the formation and control of nanoreactors
US9562837B2 (en) 2006-05-11 2017-02-07 Raindance Technologies, Inc. Systems for handling microfludic droplets
WO2007133710A2 (en) 2006-05-11 2007-11-22 Raindance Technologies, Inc. Microfluidic devices and methods of use thereof
EP3536396B1 (en) 2006-08-07 2022-03-30 The President and Fellows of Harvard College Fluorocarbon emulsion stabilizing surfactants
WO2008097559A2 (en) 2007-02-06 2008-08-14 Brandeis University Manipulation of fluids and reactions in microfluidic systems
US8592221B2 (en) 2007-04-19 2013-11-26 Brandeis University Manipulation of fluids, fluid components and reactions in microfluidic systems
US12038438B2 (en) 2008-07-18 2024-07-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Enzyme quantification
WO2010009365A1 (en) 2008-07-18 2010-01-21 Raindance Technologies, Inc. Droplet libraries
EP2411148B1 (en) 2009-03-23 2018-02-21 Raindance Technologies, Inc. Manipulation of microfluidic droplets
WO2011042564A1 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Universite De Strasbourg Labelled silica-based nanomaterial with enhanced properties and uses thereof
US10837883B2 (en) 2009-12-23 2020-11-17 Bio-Rad Laboratories, Inc. Microfluidic systems and methods for reducing the exchange of molecules between droplets
WO2011100604A2 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US9399797B2 (en) 2010-02-12 2016-07-26 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US9366632B2 (en) 2010-02-12 2016-06-14 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US10351905B2 (en) 2010-02-12 2019-07-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Digital analyte analysis
US9141756B1 (en) 2010-07-20 2015-09-22 University Of Southern California Multi-scale complex systems transdisciplinary analysis of response to therapy
EP2622103B2 (en) 2010-09-30 2022-11-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Sandwich assays in droplets
EP3859011A1 (en) 2011-02-11 2021-08-04 Bio-Rad Laboratories, Inc. Methods for forming mixed droplets
WO2012112804A1 (en) 2011-02-18 2012-08-23 Raindance Technoligies, Inc. Compositions and methods for molecular labeling
US8841071B2 (en) 2011-06-02 2014-09-23 Raindance Technologies, Inc. Sample multiplexing
DE202012013668U1 (de) 2011-06-02 2019-04-18 Raindance Technologies, Inc. Enzymquantifizierung
US8658430B2 (en) 2011-07-20 2014-02-25 Raindance Technologies, Inc. Manipulating droplet size
WO2013120089A1 (en) 2012-02-10 2013-08-15 Raindance Technologies, Inc. Molecular diagnostic screening assay
EP2844768B1 (en) 2012-04-30 2019-03-13 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
WO2014172288A2 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Raindance Technologies, Inc. Digital analyte analysis
US11901041B2 (en) 2013-10-04 2024-02-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Digital analysis of nucleic acid modification
US9944977B2 (en) 2013-12-12 2018-04-17 Raindance Technologies, Inc. Distinguishing rare variations in a nucleic acid sequence from a sample
US11193176B2 (en) 2013-12-31 2021-12-07 Bio-Rad Laboratories, Inc. Method for detecting and quantifying latent retroviral RNA species
JP2018517892A (ja) 2015-04-10 2018-07-05 アプライド プロテオミクス，インク． 結腸直腸癌と進行腺腫を検知するためのタンパク質バイオマーカーパネル
US10647981B1 (en) 2015-09-08 2020-05-12 Bio-Rad Laboratories, Inc. Nucleic acid library generation methods and compositions
US10998178B2 (en) 2017-08-28 2021-05-04 Purdue Research Foundation Systems and methods for sample analysis using swabs

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2002252144A1 (en) * 2001-02-27 2002-09-12 Case Western Reserve University Novel methods of diagnosis of metastatic colorectal cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic colorectal cancer
AU2003287564A1 (en) * 2002-11-04 2004-06-07 Howard Hughes Medical Institute Methods of detecting colorectal cancer
ES2309485T3 (es) * 2003-01-06 2008-12-16 Wyeth Composiciones y procedimientos para diagnosticar y tratar los canceres de colon.
WO2004074436A2 (en) * 2003-02-19 2004-09-02 Incyte Corporation Methods of use of a gpcr in the diagnosis and treatment of colon and lung cancer
AU2004227018A1 (en) * 2003-04-08 2004-10-21 Colotech A/S A method for detection of colorectal cancer in human samples

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GHISELLI, G. et al. "The cohesin SMC3 is a target for the eta-catenin/TCF4 transactivation pathway" J. Biol. Chem. 30 Mayo 2003, vol 278, nº 22, páginas 20259-20267. Ver todo el documento, especialmente resumen; procedimientos experimentales y discusión. *
HAMADA, K., et al. "Increase expression of the genes for mitotic spindle assembly and chromosome segregation in both lung and pancreatic carcinomas". Cancer Genomics an Proteomics. 2004, vol 1, páginas 231-240. Ver todo el documento. *
JÄGER, D., et al. "Serological cloning of a melanocyte rab guanosine 5'-triphosphate-binding protein and a choromosome condensatin protein from a melanoma complementary DNA library". Cancer Res. 1 Julio 2000, vol 60, páginas 3584-3591. Ver todo el documento, especialmente resumen; páginas 3587,3588,3590. *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2635127A1 (en) 2007-07-05
AU2006329794A1 (en) 2007-07-05
WO2007074193A3 (es) 2008-10-30
WO2007074193A2 (es) 2007-07-05
US20080286801A1 (en) 2008-11-20
ES2277785A1 (es) 2007-07-16
JP2009520486A (ja) 2009-05-28
EP1980624A2 (en) 2008-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2277785B1 (es) Metodo de analisis de expresion diferencial en cancer colorectal.
Micalizzi et al. The Six1 homeoprotein induces human mammary carcinoma cells to undergo epithelial-mesenchymal transition and metastasis in mice through increasing TGF-β signaling
ES2900301T3 (es) Biomarcadores asociados con la inhibición de BRM
Li et al. Increased levels of the long intergenic non–protein coding RNA POU3F3 promote DNA methylation in esophageal squamous cell carcinoma cells
Zhang et al. MicroRNA-608 and microRNA-34a regulate chordoma malignancy by targeting EGFR, Bcl-xL and MET
Freeman et al. Smad4-mediated signaling inhibits intestinal neoplasia by inhibiting expression of β-catenin
Gebre-Medhin et al. Recurrent rearrangement of the PHF1 gene in ossifying fibromyxoid tumors
Emmanuel et al. Comparison of expression profiles in ovarian epithelium in vivo and ovarian cancer identifies novel candidate genes involved in disease pathogenesis
Gore et al. Pancreatic cancer–associated retinoblastoma 1 dysfunction enables TGF-β to promote proliferation
ES2906586T3 (es) Método para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de metástasis de cáncer de próstata
Rutkowski et al. Current treatment options for dermatofibrosarcoma protuberans
Kim et al. GREM1 is expressed in the cancer-associated myofibroblasts of basal cell carcinomas
Song et al. Critical role of a survivin/TGF-β/mTORC1 axis in IGF-I-mediated growth of prostate epithelial cells
ES2650387T3 (es) Firmas epigenéticas como marcador de cardiomiopatías e insuficiencias miocárdicas
Hwang et al. A rare malignancy of the parotid gland in a 13-year-old Taiwanese boy: case report of a mammary analogue secretory carcinoma of the salivary gland with molecular study
Cao et al. Silencing NKD2 by promoter region hypermethylation promotes esophageal cancer progression by activating Wnt signaling
Li et al. Overexpression of Sox3 is associated with diminished prognosis in esophageal squamous cell carcinoma
Sung et al. Promoter methylation of the SALL2 tumor suppressor gene in ovarian cancers
CN102165074A (zh) 预测和检测肿瘤转移的方法
Panagopoulos et al. Novel TNS3-MAP3K3 and ZFPM2-ELF5 fusion genes identified by RNA sequencing in multicystic mesothelioma with t (7; 17)(p12; q23) and t (8; 11)(q23; p13)
Lai et al. Elevation of WNT5A expression in polyp formation in Lkb1+/− mice and Peutz–Jeghers syndrome
Mo et al. Circ-APBB1IP as a prognostic biomarker promotes clear cell renal cell carcinoma progression through the ERK1/2 signaling pathway
Alkhatib et al. Stepwise activation of p63 and the MEK/ERK pathway induces the expression of ARL4C to promote oral squamous cell carcinoma cell proliferation
Jiang et al. E1AF promotes breast cancer cell cycle progression via upregulation of Cyclin D3 transcription
Coosemans et al. Wilms' tumor gene 1 (WT1) in endometrial carcinoma

Legal Events

Date Code Title Description
EC2A Search report published

Date of ref document: 20070716

Kind code of ref document: A1

FG2A Definitive protection

Ref document number: 2277785B1

Country of ref document: ES

FD2A Announcement of lapse in spain

Effective date: 20180912