ES2251782T3 - Producto para promover el crecimiento del tejido dural o meningeo que comprende colageno. - Google Patents

Abstract

Matriz reticulada para promover el crecimiento de tejidos meníngeos para substituir tejidos meníngeos dañados, cuya matriz comprende: un colágeno certificado preparado por un procedimiento certificado para conseguir un colágeno fisiológicamente compatible libre de cantidades efectivas de priones activos, y poros activos con un diámetro de 10-500 micras para permitir que el tejido meníngeo en crecimiento se infiltre en dicha matriz, encontrándose dicha matriz sustancialmente libre de proteínas no colágenas y adaptada para establecer contaco con dicho tejido meníngeo dañado para promover el crecimiento de tejido meníngeo a través de dicha matriz y su reabsorción, en el que dicho proceso certificado comprende: la limpieza de materias extrañas de la fuente nativa de colágeno de Tipo I; lavado del material que contiene dicho colágeno sometido a limpieza; triturar dicho material que contiene el colágeno lavado: digerir dicho material que contiene el colágeno triturado con una enzima proteolíticapara eliminar sustancialmente impurezas de elastina e impurezas no colágenas que pueden provocar actividad antigénica e hinchar dicho colágeno; inactivar dicha enzima proteolítica; lavar dicho material que contiene el colágeno digerido enzimáticamente para eliminar sustancialmente el exceso de enzima y las impurezas de proteínas no colágenas; alcalinizar dicho material que contiene el colágeno a un pH aproximado de 13 a 14, a una temperatura aproximada de 25oC hasta 30oC durante un período aproximado de 35 a 48 horas, para eliminar sustancialmente los contaminantes de glicoproteínas y lípidos; neutralizar dicho material que contiene colágeno alcalinizado con un ácido; lavar dicho material que contiene colágeno neutralizado; acidificar dicho material que contiene colágeno neutralizado lavado a pH de valor aproximadamente 2 a 3 para hinchar adicionalmente dicho material, de manera que dicha acidificación no utilice un ácido que provoque reticulación sustancial de colágeno; homogeneizar dichomaterial que contiene colágeno acidificado; filtrar dicho material que contiene colágeno homogeneizado para eliminar el material no colágeno no hinchado de fibras de colágeno y; recoger dichas fibras de colágeno filtradas para utilización en dicha matriz.

Description

Producto para promover el crecimiento del tejido dural o meníngeo que comprende colágeno.

Sector técnico que presenta la invención

La presente invención se refiere a la reparación de tejidos dañados y, más específicamente, a la utilización de un colágeno no infeccioso para la curación del tejido dural dañado.

Antecedentes de la invención

El cerebro y la espina dorsal humanos están recubiertos de membranas meníngeas cuya integridad es crítica para el funcionamiento del sistema nervioso central. Cuando la integridad de las membranas meníngeas de una persona es intencionadamente o accidentalmente alterada, pueden producirse graves consecuencias si las membranas no pueden ser reparadas.

La membrana meníngea comprende tres capas superpuestas de tejido que, por orden y desde el exterior al interior, son la dura mater (o dura), el aracnoide y la pia mater. La reparación de las membranas meníngeas dañadas se ha enfocado ampliamente en constructos implantables y/o reabsorvibles (conocidos como sustitutos durales) que son injertados sobre la dura mater dañada y que están diseñados para sustituir y/o regenerar los tejidos dañados. Los investigadores han experimentado con una amplia variedad de sustancias como sustitutos de los tejidos durales, pero no han encontrado un sustituto de los tejidos durales seguro, eficaz y comercializable en grandes cantidades.

Los injertos autólogos de tejidos de otras partes del cuerpo, tales como fascia lata y el pericardio, pueden ser efectivos como sustitutos de los tejidos durales; no obstante, los tejidos autólogos son relativamente difíciles de obtener y pueden requerir costes y riesgos adicionales de una segunda operación para el paciente. Por definición, dichos tejidos no pueden ser comercializados en masa.

También se ha utilizado dura mater de cadáveres como sustituto de los tejidos durales. Igual que los tejidos autólogos, los tejidos de cadáveres son difíciles de obtener y, por lo tanto, no se pueden comercializar de forma generalizada. Solamente se pueden preparar de cada donante unas 4 ó 5 unidades trasplantables y existen dificultades culturales para la obtención de donantes.

De modo más importante, los sustitutos de tejidos durales de cadáveres se han visto implicados en la transmisión de infecciones por priones. Una reunión de 6 de octubre de 1997 de la U.S Food and Drug Administration (FDA) respecto a dichos sustitutos de los tejidos durales ha resultado en una llamada para controles de proceso más estrictos, y un aviso de que dichos sustitutos de tejidos durales podrían ser prohibidos si no se utilizan precauciones de seguridad adecuadas para impedir la transmisión de infecciones, tales como la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (CJD). Organizaciones de regulación de otros países, tales como el Ministerio de Sanidad Japonés, han ido incluso más lejos prohibiendo la utilización de la dura mater de cadáveres en cirugía cerebral. Además, la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha recomendado la prohibición del uso de tejido de dura mater de cadáveres en cirugía cerebral por el riesgo de transmisión CJD.

Los sustitutos durales que comprenden oro, plata, platino, níquel, acero o gelatina han sido objeto de investigación: no obstante, se ha observado que no son aceptables por una amplia serie de razones incluyendo elevada rigidez, incorporación defectuosa, fibrosis, baja resistencia a la infección y excesiva respuesta a los cuerpos extraños o procesos regenerativos. Ver, por ejemplo, las referencias que se indican en la bibliografía adjunta.

Numerosos estudios han evaluado la seguridad y eficacia de los xenoinjertos utilizando tejidos no humanos como sustitutos de los tejidos durales. Si bien los tejidos no humanos son recogidos más fácilmente y permiten una mejor comercialización en masa en comparación con los tejidos humanos, no se han comportado de forma ideal como sustitutos de los tejidos durales humanos.

Los implantes de tejido de pericardio bovino intacto, si bien son quizás el sustituto de tejidos durales más conocido en U.S.A en este momento, pueden transmitir la encefalopatía espongiforme bovina (BSE). Los tejidos intactos pueden provocar excesiva fibrosis y encapsulación, resultando posiblemente en el desarrollo de complicaciones hemorrágicas, tales como la formación de hematomas subdurales y produciendo incluso la muerte. El xenoinjerto con biomembrana porcina se ha demostrado que tiene como resultado fuertes adherencias cuando tiene lugar infección en estudios con animales, y el xenoinjerto con ciertos laminados de colágeno o películas de colágeno se ha demostrado que tiene como resultado una fuerte respuesta inflamatoria comprendiendo fibrosis, formación de neomembrana y adherencias meningeocerebrales. Ver Bang-Zong y otros, “Study and clinical application of a porcine biomembrane for the repair of dural defects”, 69 J. Neurosurg. 707 (1988); Kline, “Dural replacement with resorbable collagen”, 91 Arch. Surg. 924 (1965); Jannetta y otras, “Formaldehyde-treated, regenerated collagen film and film-laminate as a substitute for dura mater”, 16 Surg. Forum 435 (1965); y Lee otros, “Experimental evaluation of silicone-coated Dracon and collagen fabric-film laminate as dural substitutes”, 27 Neurosurg. 558 (1967).

Un sustituto del tejido dural fisiológicamente compatible que no cree adherencias es particularmente importante cuando existe la necesidad de tratamiento quirúrgico repetido. En el tratamiento de cáncer cerebral, por ejemplo, el cáncer puede ser recurrente, requiriendo apertura y cierre repetidos de la dura mater para llegar al cáncer recurrente y/o incluso la retirada repetida de secciones cancerosas de la dura mater. Los resultados en los pacientes se podrían mejorar reparando los tejidos durales dañados con un sustituto dural fisiológicamente compatible que no cree adherencias potencialmente peligrosas para la vida. Además, los médicos estarían más dispuestos a intervenir quirúrgicamente en caso necesario si se redujera la probabilidad de crear adherencias.

Aparte de los problemas anteriormente indicados con xenoinjertos de colágeno, los inventores han continuado trabajando con colágeno como sustituto de los tejidos durales. En 1993 y 1995, Narotam y otros (grupos que incluyen algunos de los presentes inventores) informaron de que una esponja de colágeno se mostraba prometedora como sustituto de los tejidos durales. Ver Narotam y otros, “Experimental evaluation of collage sponge as a dural graft”, 7 British J. Neurosurg. 635 (1993), y Narotam y otros, “A clinicopathological study of callagen sponge as a dural graft in neurosurgery”, 82 J. Neurosurg. 406 (1995). Si bien la esponja de colágeno que se da a conocer en dichos documentos se demostró que funcionaba efectivamente como sustituto de los tejidos durales, se plantearon temas significativos de seguridad que tienen que ser todavía estudiados y resueltos.

La esponja de colágeno utilizada (es decir Bicol®) era de origen bovino y, a pesar de su uso anterior como material protector temporal de la superficie cerebral por debajo de los retractores, el colágeno no estaba suficientemente descontaminado a efectos de evitar la posibilidad de provocar una infección xenogénica en caso de implante permanente. Contrariamente al conocimiento y enseñanza del artículo de 1995 en la página 410, columna de la derecha, se sabe en la actualidad que la esponja de colágeno que se dio a conocer en los artículos de Narotam y otros presentan peligros sanitarios debido a la posibilidad de agentes infecciosos (por ejemplo, priones y virus) que sobreviven al proceso de fabricación. La pérdida de proceso químico significativo no proporciona un margen de seguridad adecuado para la inactivación de contaminantes víricos o de priones y por lo tanto no puede impedir de manera adecuada, o en su caso reducir, la probabilidad de infectar a los receptores sustitutivos de tejidos durales.

Por lo tanto, ha existido la necesidad de un sustituto de los tejidos durales basado en colágeno, ampliamente comercializable, que sea compatible fisiológicamente (es decir, no inflamatorio, no inductor de adherencias, etc.), suficientemente no infeccioso (es decir, descontaminado, etc.), para impedir la transmisión de virus y priones a los receptores de sustitutos de tejido dural, adaptable, disponible en diversos tamaños, con una elevada resistencia a la tracción, inerte, opcionalmente capaz de formar un cierre estanco al agua, y opcionalmente suturable.

Características de la invención

La presente invención se dirige como mínimo a las deficiencias antes mencionadas del estado de la técnica, proporcionando una matriz de crecimiento de tejido meníngeo producida por un método que comprende la preparación de colágeno fisiológicamente compatible que está sustancialmente libre de virus activos y priones, y formando con el mismo una matriz de crecimiento de tejidos meníngeos de tipo poroso.

La presente invención puede ser también utilizada en un método para promocionar el crecimiento de tejidos meníngeos, cuyo método comprende la preparación de un colágeno fisiológicamente compatible que está sustancialmente libre de virus y priones activos, formando una matriz con dicho colágeno, y estableciendo contacto dicha matriz y tejidos meníngeos dañados para promocionar el crecimiento de los tejidos meníngeos.

La invención puede ser también utilizada en un método para la preparación de una matriz de crecimiento de tejidos meníngeos, comprendiendo dicho método la preparación de un colágeno fisiológicamente compatible que se encuentra sustancialmente libre de virus y priones activos, disponiendo un cierto volumen de dicho colágeno en el medio líquido y evaporando dicho medio líquido para conseguir la matriz de crecimiento de tejidos meníngeos.

Descripción detallada de realizaciones preferentes

Los inventores han descubierto que el colágeno procesado utilizando el tratamiento de una sal alcalina de acuerdo con la Patente USA Nº 5.019.087 es un producto de sustitución de tejidos durales extremadamente eficaz que conducirá a la regeneración de los tejidos durales funcionales propios del paciente. El tratamiento preferente con sal alcalina se refiere a hidróxido sódico y sulfato sódico. Los métodos de la Patente Nº 5.019.087 proporcionan unas dimensiones de poros controladas y predictivas.

Además, el método para la producción del producto de la presente invención utiliza etapas que se reconocen como las más eficaces para inactivar la contaminación por virus y por priones. Eso proporciona al producto un nivel de seguridad muy elevado eliminando simultáneamente la respuesta inflamatoria. Es decir, el método para producir el producto de la presente invención da a conocer un producto sustancialmente libre de virus y de priones sin ser fisiológicamente incompatible. La frase “sustancialmente libre de virus y de priones“ significa que el producto no contiene cantidades efectivas para infección de virus y priones. De manera más específica, la invención comprende preferentemente la utilización de un colágeno tratado por un proceso suficiente para conseguir como mínimo una desaparición de virus 4 log, más preferentemente como mínimo una desaparición de virus 6 log e incluso de manera más preferente, como mínimo, una desaparición de virus 8 log, medida con un nivel de confianza estadística mínimo de 95%. Por ejemplo, si la concentración de virus antes de tratamiento es 10^{7} y después del tratamiento es 10^{1}, se ha producido una desaparición de virus 6 log.

En la preparación de sustitutos de los tejidos durales de la presente invención se prepara, en primer lugar, una dispersión de colágeno de manera bien conocida en la técnica. Un preparado de este tipo es el que se da a conocer en la Patente USA Nº 3.157.524. Otro preparado adecuado de colágeno es el que se da a conocer en la Patente USA
Nº 3.520.402.

En particular, las dispersiones de colágeno de la presente invención pueden ser preparadas por los métodos si-
guientes.

Una fuente nativa de colágeno de tipo I, tal como la piel, tendones, ligamentos o hueso, es limpiada en primer lugar mecánicamente o a mano de grasas, fascia y otras materias extrañas, y se efectúa un lavado. El material que contiene colágeno limpiado y lavado es triturado a continuación, en general, por corte o molturación.

El material es sometido a continuación a un tratamiento con enzimas sometido simultáneamente a agitación intermitente con una enzima proteolítica, tal como ficina, pepsina y similares, a efectos de eliminar impurezas no colágenas que pueden provocar actividad antigénica e hinchar el colágeno eliminando elastina. La cantidad de enzima añadida al colágeno en las condiciones en las que tiene lugar la digestión de la enzima depende de la enzima específica que se utiliza. De manera general, cuando se utiliza ficina, que se utiliza habitualmente, el pH se ajusta aproximadamente a 6,0 a 6,3, y el material del colágeno es sometido a digestión durante 1-2 horas a una temperatura aproximada de 36,5ºC a 37,5ºC con una parte de ficina para cada 150 partes de material de colágeno. Después del tiempo requerido, la enzima es inactivada por medios apropiados bien conocidos en esta técnica, tales como añadidura de una solución de un agente oxidante, tal como clorito sódico, cuando la enzima es
ficina.

El material que contiene colágeno tratado con enzimas es lavado a continuación para eliminar el exceso de enzimas y las impurezas de proteínas no colágenas. Preferentemente, el lavado es llevado a cabo con agua ultrafiltrada y desionizada y opcionalmente se efectúa otro lavado con peróxido de hidrógeno en solución acuosa diluida.

En una realización preferente de la presente invención, el material que contiene colágeno digerido con enzimas es sometido a continuación a un tratamiento mediante un alcali a un pH aproximado de 13 a 14 y a una temperatura aproximada de 25ºC a 30ºC durante un periodo de 35 a 48 horas, preferentemente unas 40 horas. De manera adecuada, el tratamiento alcalino es llevado a cabo en una solución acuosa de hidróxido sódico al 5% y sulfato sódico al 20%. Este tratamiento alcalino elimina las glicoproteinas y lípidos contaminantes. La solución es neutralizada a continuación con un ácido adecuado, tal como ácido sulfúrico en solución acuosa, y es lavada por completo.

El material colágeno es sometido a hinchamiento posterior con una solución ácida adecuada, cuyo ácido no provoca reticulación del colágeno. Estos ácidos son bien conocidos por los técnicos en la materia e incluyen ácido acético, ácido clorhídrico, ácido láctico, y similares. Con independencia del ácido utilizado, el pH de la dispersión de colágeno ácido se encuentra aproximadamente entre 2 y 3.

La mezcla de colágeno dispersada es homogeneizada a continuación por cualesquiera medios convencionales, tales como un mezclador u homogeneizador, a efectos de disociar adicionalmente las fibras y filtrando luego para eliminar el material no hinchado, colágeno, por medios bien conocidos en la materia, tales como el paso de la dispersión por una rejilla de acero inoxidable de malla 100. La dispersión de colágeno filtrado resultante puede ser utilizada a continuación para preparar los productos de sustitución de tejidos durales de la presente invención.

De manera alternativa, el colágeno fisiológicamente compatible, que se encuentra sustancialmente libre de virus activos y priones, se puede obtener a partir de animales transgénicos criados para el objetivo de sintetizar el colágeno humano en una forma fácilmente recuperable. Ver, por ejemplo la Patente U.S.A. 5.667.839 de Berg. Dado que se pueden criar animales transgénicos y se pueden mantener en ambientes controlados, que impiden que se vean afectados por infecciones que deban ser inactivadas, el colágeno recogido de los mismos es fisiológicamente compatible y sustancialmente libre de virus y priones activos sin otro tratamiento (si bien se puede llevar a cabo un tratamiento adicional como medida añadida de seguridad).

El producto de la presente invención es preferentemente una matriz dispuesta en forma de una esponja de colágeno. El producto puede ser dispuesto en forma de matriz no-tejida, fieltro o película. Además, el producto puede ser dispuesto en forma de un compuesto de cualesquiera dos o más de las formas anteriormente indicadas, por ejemplo, película/esponja o película/esponja/película.

Una esponja de colágeno de acuerdo con la invención puede ser conseguida por adaptación de los métodos para formación de esponjas de colágeno que se dan a conocer en la Patente U.S.A. 5.019.087. La esponja puede ser preparada por liofilización de una dispersión de colágeno preparada de acuerdo con la Patente, poseyendo preferentemente una concentración comprendida entre 0,1 y 10% de sólidos (peso/peso) y más preferentemente un mínimo de 0,75% de sólidos. Se vierte un volumen de la dispersión dentro de una bandeja adecuada (preferentemente antiadherente) para conseguir una esponja que tiene la forma adecuada. Preferentemente, la esponja tiene un grosor comprendido entre 2,5 mm y 5 mm aproximadamente, y de modo más preferente 3 mm. La dispersión es congelada y liofilizada durante un tiempo aproximado de 1 a 48 horas, siendo el ciclo más preferible el que se describe en la Patente U.S.A. 5.019.087.

La densidad de la dispersión y el ciclo de liofilización determinan la densidad y tamaño de poros de la esponja. La densidad de la esponja es preferentemente de 0,0001 mg/mm^{3} hasta 0,12 mg/mm^{3} aproximadamente, más preferentemente y de forma aproximada 0,009 mg/mm^{3}.

Las esponjas de la invención tienen preferentemente poros de suficiente tamaño y cantidad para permitir que los tejidos meníngeos en crecimiento se infiltren en los mismos. El tamaño de los poros varía preferentemente desde 10 \mum hasta 500 \mum aproximadamente, de modo más preferente de 50 \mum a 150 \mum aproximadamente, con los poros superficiales más pequeños que los poros de la sección transversal (internos). En realizaciones especialmente preferentes, los poros superficiales están comprendidos en diámetros aproximadamente de 30 \mum a 150 \mum, siendo 70 \mum aproximadamente el valor más preferente, y variando el diámetro de los poros de la sección transversal aproximadamente entre 50 \mum y 300 \mum, siendo 150 \mum aproximadamente el valor más preferente.

Una película de acuerdo con la invención puede ser realizada moldeando una dispersión de colágeno con una concentración de colágeno aproximada de 0,1 a 10% de sólidos (peso/volumen) y, opcionalmente, de 0,005 a 0,5% (peso:peso sobre sólidos de colágeno) de un plastificante biocompatible adecuado, tal como glicerina. Preferentemente, la concentración del plastificante es de aproximadamente 0,1% y la concentración de colágeno es aproximadamente 1%, más preferentemente 0,75%. Un volumen de la dispersión es vertido en un contenedor antiadherente adecuado y evaporado para conseguir una película con un grosor aproximado de 0,05 a 2,0 mm aproximadamente, preferentemente 0,5 mm aproximadamente. La película puede ser reticulada por acción de calor o un agente reticulante químico adecuado. Ver, por ejemplo, Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking, (Wong, ed., CRC
Press, 1993).

Igual que con la esponja, las realizaciones de fieltro y no-tejidas de la invención, las películas de la invención tienen preferentemente poros de suficientes dimensiones y cantidad para permitir la infiltración dentro de los mismos de los tejidos meníngeos en crecimiento.

Una matriz no tejida de acuerdo con la invención es una distribución al azar de fibras de colágeno derivadas de dispersiones de colágeno preparadas tal como se ha descrito anteriormente. Las matrices no tejidas basadas en colágeno se dan a conocer, por ejemplo, en las Patentes U.S.A. 4.578.067 y 4.016.877.

Los fieltros basados en colágeno se dan a conocer, por ejemplo, en la Patente U.S.A. 9.066.083.

El producto puede ser también realizado en forma de una combinación de cualesquiera dos o más de las formas antes mencionadas. En esta realización todas las formas deben ser suficientemente porosas para promover el crecimiento de los tejidos a través de las mismas, siempre que como mínimo una forma suficientemente porosa sea accesible a los tejidos en crecimiento.

Es particularmente preferente disponer el producto de la invención en forma de un laminado de una esponja de colágeno y una película de colágeno. Este laminado, que puede ser formado por, por ejemplo, laminación de una esponja de colágeno sobre una película de colágeno con un adhesivo o polímero biocompatible (incluyendo colágeno), formando una esponja sobre una película, o formando una película sobre una esponja, posee la elevada impermeabilidad al agua y capacidad de saturación de una película, y la elevada porosidad de una esponja, lo que facilita el crecimiento de los tejidos durales a través del mismo. De manera similar, se puede disponer un laminado de tipo sandwich al disponer una esponja de colágeno entre hojas opuestas de película de colágeno.

En ciertas realizaciones, la película puede tener una forma que reproduce perfectamente la superficie situada por debajo de la esponja a la que está unida. En otras realizaciones, la superficie de unión de la esponja no corresponde de manera idéntica en forma y/o dimensiones a la superficie de unión de la película. Por ejemplo, una película puede ser dispuesta en sandwich entre dos esponjas opuestas que no superen los extremos de la película (dejando por lo tanto los bordes de la película sin cubrir), o una película puede ser dispuesta en sandwich entre dos esponjas opuestas que superan los extremos de la película y están unidas entre sí, así como a la película intermedia (encajando de esta manera de forma completa la película en las esponjas).

Los laminados de película y esponja son particularmente adecuados para su utilización como sustitutos de los tejidos durales para la base del cráneo, ya que se adaptan mejor para resistir la presión hidráulica elevada a la que están sometidos los defectos durales en la base del cráneo.

Es particularmente preferente preparar laminados de esponja/película por moldeo de una película de colágeno; secar la película; moldear una emulsión de colágeno sobre la película seca; liofilizar la combinación de emulsión/película; y reticular el producto laminado liofilizado por exposición del mismo a vapores procedentes de una solución de formaldehído acuosa (que tiene preferentemente una concentración de formaldehído de 9,6%) durante unos noventa minutos a unos 25ºC, seguido de ventilación con aire forzado durante una hora aproximadamente.

La película y emulsión de colágeno se moldean preferentemente a partir del ácido láctico derivado de fibras de colágeno. Estas fibras son producidas por un procedo que comprende la dispersión de una fuente de colágeno libre de priones y de virus (por ejemplo, fragmentos de tendón bovino con tratamiento alcalino) en una solución acuosa de ácido láctico (preferentemente 85% aproximadamente), homogeneizando la dispersión, filtrando la dispersión de ácido láctico homogeneizada y precipitando fibras de colágeno de la dispersión de ácido láctico homogeneizada por adición de hidróxido amónico en solución acuosa (preferentemente 0,35%) suficiente para ajustar el pH a un valor aproximado de 4,6-4,9.

Las fibras de colágeno derivadas de ácido láctico precipitadas en hidróxido amónico son mucho más largas que las fibras producidas por la disrupción mecánica/química del material de tendones bovinos en bruto. Durante la precipitación en hidróxido amónico las fibras de colágeno se extienden y son por lo tanto más largas. Las fibras más largas proporcionan mayor resistencia al producto final. La mayor resistencia de los productos de la invención conseguida de acuerdo con este método especialmente preferente puede ser suficientemente importante para conseguir carácter de estanqueidad al agua y ser suturable sin necesidad de reticulación, permitiendo por lo tanto la selección del grado de reticulación basándose en la tasa deseada de bio-reabsorción.

El producto puede comprender materiales biocompatibles y/o bio-reabsorbibles distintos del colágeno, si bien el colágeno es el más preferente. Por ejemplo, en ciertas realizaciones es ventajoso laminar la matriz de colágeno formando una película no-colágeno, tal como un polímero 50:50 dl lactida:co-glicólido con un peso molecular aproximado de 75.000, más preferentemente 100.000 aproximadamente. Otros polímeros adicionales adecuados incluyen, por ejemplo, lactidas, glicólidos y copolímeros de los mismos biocompatibles y/o bio-reabsorbibles, policaprolactonas, carbonato de polietileno, policarbonatos de tirosina, poliácidos de tirosina y polianhídridos. El peso molecular del polímero está comprendido preferentemente entre 5.000 y 500.000 aproximadamente.

El producto comprende preferentemente cantidades efectivas de factores de crecimiento de los tejidos meníngeos y/o péptidos bioactivos, tales como, por ejemplo, péptidos que contienen RGD, decorina, laminina, merosina, sulfato de condroitina, sulfato de dermatina, sulfato de heparán, sulfato de queratina, factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), fibronectina y otros ligandos de integrina, entactina y tenascina. En ciertas realizaciones, una cantidad efectiva de dicho aditivo es aproximadamente de 1 \mug/mg de colágeno.

El producto es preferentemente no antigénico, además de ser no infectivo y fisiológicamente compatible.

El producto es adecuado para reparar daños intencionales en los tejidos meníngeos, tal como en cirugía, y daños producidos como consecuencia en los tejidos meníngeos, tal como puede ocurrir como resultado de accidentes traumáticos en la cabeza.

Después de la cirugía cerebral, el producto de la presente invención es insertado para ocupar el espacio que queda por la eliminación resultante de la cirugía. En cuanto a la reparación de meninge después de craneotomía o laminectomía, particularmente con la incisión a través de los tejidos durales, el producto de la presente invención puede ser simplemente implantado en contacto con el defecto creado en los tejidos durales craneanos o de la espina dorsal producidos por la cirugía. Si bien puede ser preferente establecer simplemente contacto de los tejidos meníngeos dañados y tejidos adyacentes no dañados con el producto (particularmente cuando el producto es utilizado como sustituto de los tejidos durales craneanos), el producto puede ser unido también de forma mecánica (por ejemplo, suturado) y/o unido químicamente a los tejidos dañados y a los tejidos no dañados adyacentes (por ejemplo, cola de fibrina).

El producto conecta preferentemente zonas no dañadas de los tejidos meníngeos adyacentes a los tejidos meníngeos dañados por solape de estos tejidos no dañados. Los tejidos dañados pueden haber sufrido, por ejemplo, rotura, corte, excisión o laceración, y pueden estar situados, por ejemplo, en los tejidos durales de la espina dorsal humana o en los tejidos durales cerebrales humanos. Los tejidos meníngeos regenerados crecen dentro del producto, mientras que el producto permanece implantado en el cuerpo del paciente. Es decir, el producto actúa como matriz o andamio para el crecimiento de los tejidos, tal como para crecimiento reparativo de los tejidos.

El producto es sustancialmente reabsorbido dentro de un periodo de unos tres mese después de la implantación.

Si bien el producto de la invención es particularmente adecuado para reparación de tejidos durales, también es adecuado para promover el crecimiento de tejidos y/o curación de heridas en otros contextos. Por ejemplo, el producto es adecuado para su utilización como compresa bio-reabsorbible para ayudar en la sutura, dispositivo hemostático suturable, parches de hernia, parches de pericardio y similares.

En el producto, el colágeno es preferentemente un mínimo de 80% puro, sustancialmente libre de toda contaminación vírica y por priones, tiene menos de 0,03 eu/gm de endotoxinas, no tiene más de 5% de contenido de grasas, tiene como mínimo 10% de contenido de hidroxiprolina y no tiene más de 5% de contenido de cenizas. Si bien actualmente es preferible que el producto sea derivado del corium bovino o colágeno de tendón bovino, el colágeno puede ser obtenido de otras fuentes, incluyendo otros tejidos y otros animales, incluyendo animales transgénicos.

La invención se verá ilustrada de manera más detallada con referencia a los ejemplos siguientes.

Ejemplo 1 Preparación de una matriz de regeneración de tejidos durales suturable capaz de conseguir estanqueidad al agua

Se produjeron fragmentos de tendón bovino tratados por vía alcalina de acuerdo con el método descrito anteriormente y en la Patente U.S.A. 5.019.087. Se preparó a continuación una dispersión acuosa de 1250 ml contendiendo 0,75% en peso de los fragmentos de tendón bovino con tratamiento alcalino. A continuación se añadieron lentamente 7,5 ml de ácido láctico al 85% (calidad AR, volumen/volumen) a la dispersión con agitación continua.

La dispersión se dejó reposar a continuación a temperatura ambiente durante una hora, durante la cual fue sometida a agitación con una varilla de acero durante veinte segundos tres veces, a los quince, treinta y cuarenta y cinco minutos dentro de la hora.

La dispersión fue homogeneizada a continuación utilizando un aparato Silverson Model L4R (Thomas Scientific, USA) que funcionaba a toda velocidad utilizando círculos de 9,5 mm (cabezal de desintegración) durante 30 segundos, círculos de 2,25 mm (cabezal de alta cizalladura) durante 30 segundos, y círculos de 1,5 mm (cabezal emulsionador) durante 20 segundos.

La dispersión fue filtrada a continuación por vacío a través de un filtro de acero inoxidable de malla 100, y a continuación a través de un filtro de acero inoxidable de malla 200. El filtrado fue desgasificado hasta que no se observaron burbujas de aire visibles (unos 30 minutos), consiguiendo de esta manera una dispersión de ácido
láctico.

Se precipitaron fibras de colágeno desde la dispersión de ácido láctico al añadir lentamente 0,35% (calidad AR, volumen/volumen) de hidróxido amónico a la dispersión en cantidades de 0,5 a 1 ml, hasta alcanzar un pH final aproximado de 4,6 a 4,9.

Se moldearon a continuación 60 gramos de la dispersión (0,76%) en una bandeja de acero de 20 cm x 10 cm y se secaron al aire durante 5 días a temperatura ambiente. Se obtuvo una película con un grosor de 0,25 mm y una densidad de 25 mg/cm^{2}. Después de rehidratación, esta película opaca y flexible fue capaz de retener un material de sutura de tipo crónico -410-, resistiendo una fuerza de extracción superior a 400 gramos, a pesar del hecho de que la película no estaba reticulada.

Ejemplo 2 Preparación de una matriz de regeneración de tejidos durales suturable capaz de conseguir estanqueidad al agua

Una solución al 10% (peso/peso) de un polímero de 50:50 dl lactida: co-glicólido, MW = 75.000, (Sigma) en acetato de etilo fue preparada pesando 90 gramos (\pm 0,5 gramos) de acetato de etilo seco (Aldrich) en un recipiente de vidrio adecuado dotado de una varilla de agitación magnética. El frasco fue colocado a continuación sobre una placa magnética de agitación caliente y agitada suavemente. La temperatura subió aproximadamente a
30ºC - 35ºC. A continuación, se añadieron lentamente al acetato de etilo 10 gramos (\pm 0,1 gramo) del polímero de lactida:glicólido para conseguir la solución de polímero. La solución se dejó enfriar a continuación a temperatura
ambiente.

Después de enfriar a temperatura ambiente, se vertieron 50 gramos de la solución de polímero en una bandeja de 3,5'' x 3,5'' recubierta con Teflón. Se dejó evaporar de forma rápida el disolvente y la película resultante se dejó secar durante una noche a temperatura ambiente. La solución de polímero restante fue cubierta y almacenada para su utilización en la etapa siguiente.

Después de que la película se secó durante una noche a temperatura ambiente, fue retirada de la bandeja y colocada sobre una bandeja grande, plana con recubrimiento de Teflón. Se aplicó a la superficie correspondiente al aire de la película moldeada, una cantidad suficiente de la solución de polímero para conseguir una superficie pegajosa. La aplicación de la solución de polímero con un cepillo de pintar funciona satisfactoriamente. A continuación, se dispuso una esponja de 3,5'' x 3,5'' de acuerdo con la invención y se colocó inmediatamente sobre la superficie pegajosa de la película de polímero. Se aplicó una presión suave para asegurar una unión completa entre la esponja de colágeno y la película de copolímero.

Después de unos cinco minutos, la construcción laminada fue colocada en una cámara de vacío, y sometida a vacío mínimo de 50 micras durante 24 horas para retirar cualesquiera residuos de disolvente.

La construcción laminada resultante es un material suave y adaptable que puede ser suturado utilizando técnicas quirúrgicas estándar.

Ejemplo 3 Preparación de una plantilla de regeneración de tejido dural de densidad dual, suturable

10 gramos de una dispersión al 3% de colágeno en agua desionizada ajustada a pH 6,5-7,5 y pretratada de manera tal que se elimina o se inactiva esencialmente toda la contaminación de virus y priones, fueron vertidos en una bandeja de policarbonato de 3,5'' x 3,5'' y congelada en un liofilizador con una temperatura de almacenamiento de \leq 35ºC. Después de congelado el colágeno se vertieron 20 gramos de una segunda dispersión de colágeno (0,8%, pH 6,5 a 7,5) sobre la primera dispersión y se volvió a colocar inmediatamente en el liofilizador. Después de congelar la bandeja de las dispersiones de colágeno a -35ºC durante cuatro horas, se conectó el vacío y se liofilizó el material. La esponja resultante fue reticulada deshidrotérmicamente a 110ºC durante 48 horas a vacío completo mínimo de 50 micras. La esponja reticulada tenía excelentes características físicas y pudo ser suturada, pasando a ser un excelente candidato para injerto de tejidos durales.

Ejemplo 4 Preparación de un injerto de tejidos durales, laminado de densidad dual

La matriz de densidad dual del Ejemplo 2 fue laminada sobre una película de lactida:glicólido, tal como se ha descrito en el Ejemplo 1. La matriz resultante tenía excelentes características físicas, pudo ser suturada utilizando técnicas quirúrgicas estándar y constituyó una barrera estanca al agua.

Ejemplo 5 Preparación de una matriz de regeneración de tejidos durales suturable que proporciona estanqueidad al agua

Se moldeó una película de colágeno inactivada de priones y virus a partir de una dispersión acuosa (0,85% de sólidos) que incluía entre 0,1% y 0,2% de glicerina como plastificante. Se vertieron 30 gramos de la dispersión en una bandeja de 3,5'' x 3,5'' y se dejó evaporar el agua. La película resultante fue reticulada a continuación a 110ºC en vacío mínimo de 50 micras durante 48 horas. La película reticulada fue colocada nuevamente en la bandeja de moldeo y se añadió agua desionizada a la bandeja para humedecer la película. Después de 1 minuto aproximadamente, se vertió el exceso de agua y a continuación se vertieron sobre la película 30 gramos de la misma dispersión de colágeno inactivada de priones y virus. El combinado fue sometido a continuación a congelación y liofilización. El material combinado resultante de esponja/película fue sometido a reticulación con formaldehído. El material combinado era suturable y proporciona estanqueidad al agua una vez implantado.

Ejemplo 6 Preparación de una matriz de tipo sandwich de hidrogenación de tejido dural suturable que consigue estanqueidad al agua

Se prepararon películas tal como se ha descrito anteriormente. No obstante, en este caso, se vertieron en primer lugar 15 gramos de la emulsión en la bandeja de moldeo de 3,5'' x 3,5'' y se congeló. La película fue humedecida a continuación, tal como se ha descrito anteriormente, y se colocó sobre la dispersión de colágeno congelada. Finalmente, se vertieron 15 gramos de la dispersión de colágeno sobre la película y el nuevo combinado o compuesto en sandwich fue liofilizado y reticulado con formaldehído.

En los Ejemplos 4 y 5, la película de colágeno fue reticulada por acción de calor antes de preparar el combinado. Es posible utilizar una película no reticulada y utilizar el tratamiento de formaldehído final para reticular la totalidad del combinado al final de la preparación.

Además, en la totalidad de los ejemplos de compuesto (o laminado) que se han descrito, la longitud de la película y la anchura de la misma corresponden de manera exacta a la longitud y anchura de la esponja. Es también posible preparar un combinado en el que la película es mayor que la esponja. En el caso de una película que tenga esponjas en superficies opuestas de la misma, las esponjas en oposición pueden acoplarse para formar un margen que rodea la esponja, proporcionando de esta manera un combinado de tipo isla.

Ejemplo 7 Reparación de tejidos durales en el tratamiento de cáncer cerebral

Las imágenes de diagnóstico indicaban que una mujer de cuarenta años, que había sufrido anteriormente cirugía de carcinoma de un seno, tenía una lesión en la fosa posterior del hemisferio del cerebelo izquierdo y dos pequeños depósitos en el lóbulo frontal izquierdo. Además, la lesión de la fosa posterior empezaba a generar edema, con el peligro potencial de ocluir el cuarto ventrículo y provocar hidrocéfalo y aumento de presión intracraneal.

Se llevó a cabo una craneoctomía de la fosa posterior bajo anestesia general para la excisión de la metástasis del cerebelo. Se realizó una incisión de línea media y se diseccionaron a continuación los músculos del cuello posterior para dejar al descubierto la región suboccipital ósea. La disección fue llevada cabo hasta -C2-, y se identificaron el arco de -C1- y la fosa posterior remota. Se realizó un orificio en la región suboccipital izquierda. Esto fue seguido de craneotomía llevada cabo en la región del seno tonsilar. El tejido dural fue abierto para poner al descubierto y permitir la excisión del depósito metaestásico. Después de inspeccionar la cavidad de resección para observar tumor residual, se llenó de esponjas de peróxido de hidrógeno para conseguir hemostasis. A continuación la cavidad fue recubierta con Surgicel. Los bordes de los tejidos durales fueron coagulados a continuación en los lugares necesarios para conseguir hemostasis y se aplicó una esponja según la invención sobre la herida de los tejidos para promover la reparación dural. Se instaló una sonda Hemovac, los músculos y la piel fueron cerrados utilizando grapas, y se aplicó un ungüento de Bacitracin y vendajes de Mepore a la herida. El paciente fue transferido al recinto de recuperación en condiciones estables.

Ejemplo 8 Reparación de tejidos durales en el tratamiento de aneurismo

Un paciente que presentaba hemorragia subaracnoide de aneurismo debido a una ruptura del aneurismo de arteria de comunicación anterior, fue tratado mediante craneotomía pterional. El músculo temporal fue reflectado inferiormente junto con la aleta del cuero cabelludo y se creó una aleta de hueso libre sobre el pterion utilizando un taladro. Después de ello, se niveló el reborde esfenoide para permitir un mayor acceso. Una vez se llevó a cabo la decompresión ósea, se efectuó el corte de los tejidos durales. El aneurismo fue diseccionado de sus adherencias y después de ello engrapado satisfactoriamente. Las grapas temporales fueron retiradas y se consiguió la hemostasis. Las cisternas basales fueron irrigadas de forma copiosa. Se aplicó temporalmente a los vasos Gelfoam empapado de Papaverina y a continuación se retiraron. Una vez conseguida la hemostasis, los tejidos durales fueron reconstruidos por solape de los tejidos durales dañados y tejidos durales adyacentes no dañados con una esponja según la invención. Después de ello, la aleta ósea fue fijada en posición utilizando enlaces de Nilón. Se insertó una sonda Hemovac por debajo de la galea, y el cuero cabelludo fue cerrado en dos capas y fijado con grapas.

El paciente fue transferido a continuación a la unidad de cuidados intensivos en condiciones estables.

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Claims (55)

1. Matriz reticulada para promover el crecimiento de tejidos meníngeos para substituir tejidos meníngeos dañados, cuya matriz comprende:

un colágeno certificado preparado por un procedimiento certificado para conseguir un colágeno fisiológicamente compatible libre de cantidades efectivas de priones activos, y

poros activos con un diámetro de 10-500 micras para permitir que el tejido meníngeo en crecimiento se infiltre en dicha matriz,

encontrándose dicha matriz sustancialmente libre de proteínas no colágenas y adaptada para establecer contacto con dicho tejido meníngeo dañado para promover el crecimiento de tejido meníngeo a través de dicha matriz y su reabsorción,

en el que dicho proceso certificado comprende:

la limpieza de materias extrañas de la fuente nativa de colágeno de Tipo I;

lavado del material que contiene dicho colágeno sometido a limpieza;

triturar dicho material que contiene el colágeno lavado;

digerir dicho material que contiene el colágeno triturado con una enzima proteolítica para eliminar sustancialmente impurezas de elastina e impurezas no colágenas que pueden provocar actividad antigénica e hinchar dicho colágeno;

inactivar dicha enzima proteolítica;

lavar dicho material que contiene el colágeno digerido enzimáticamente para eliminar sustancialmente el exceso de enzima y las impurezas de proteínas no colágenas;

alcalinizar dicho material que contiene el colágeno a un pH aproximado de 13 a 14, a una temperatura aproximada de 25ºC hasta 30ºC durante un período aproximado de 35 a 48 horas, para eliminar sustancialmente los contaminantes de glicoproteínas y lípidos;

neutralizar dicho material que contiene colágeno alcalinizado con un ácido;

lavar dicho material que contiene colágeno neutralizado;

acidificar dicho material que contiene colágeno neutralizado lavado a pH de valor aproximadamente 2 a 3 para hinchar adicionalmente dicho material, de manera que dicha acidificación no utilice un ácido que provoque reticulación sustancial de colágeno;

homogeneizar dicho material que contiene colágeno acidificado;

filtrar dicho material que contiene colágeno homogeneizado para eliminar el material no colágeno no hinchado de fibras de colágeno y;

recoger dichas fibras de colágeno filtradas para utilización en dicha matriz.

2. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha enzima proteolítica es ficina o pepsina.

3. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha etapa de digestión comprende la adición aproximada de una parte de enzima proteolítica por 150 partes de dicho material que contiene el colágeno, ajustando al pH de dicho material que contiene el colágeno hasta aproximadamente 6,0 a 6,3 aproximadamente y provocar la digestión de dicho material que contiene el colágeno durante 1 hasta 2 horas aproximadamente a una temperatura aproximada de 36,5ºC a 37,5ºC.

4. Matriz, según la reivindicación 3, en la que dicha enzima proteolítica es ficina.

5. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha enzima es inactivada por adición de un agente oxidante a dicho material que contiene colágeno digerido enzimáticamente.

6. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicho agente oxidante es clorito sódico.

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7. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicho proceso certificado comprende además el lavado adicional con peróxido de hidrógeno acuoso diluido, de dicho material que contiene el colágeno inactivado por enzima y lavado.

8. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha etapa de alcalinización utiliza una solución acuosa de 5% de hidróxido sódico aproximadamente y 20% de sulfato sódico aproximadamente.

9. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha etapa de acidificación utiliza ácido acético, ácido clohídico o ácido láctico para ajustar dicho pH.

10. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha etapa de acidificación utiliza ácido láctico acuoso para ajustar el pH y dicho proceso certificado comprende además:

formación de una dispersión acuosa de dichas fibras de colágeno filtradas;

precipitar las fibras de colágeno de dicha dispersión acuosa por adición de hidróxido amónico; y

moldear una dispersión de dichas fibras de colágeno precipitadas para formar dicha matriz.

11. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dichos poros en las proximidades de la superficie de dicha matriz son poros externos con diámetro comprendido aproximadamente entre 30 \mum y 150 \mum y el resto de dichos poros son poros internos con diámetros comprendidos aproximadamente entre 50 \mum y 300 \mum.

12. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicho proceso certificado comprende la alcalinización de dicho material que contiene colágeno a un pH aproximado de 13 a 14 para eliminar sustancialmente los contaminantes de glicoproteínas y lípidos.

13. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicho colágeno es no antigénico.

14. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz está adaptada para conectar partes no dañadas de tejidos meníngeos adyacentes a dichos tejidos meníngeos dañados.

15. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dichos tejidos meníngeos dañados son los tejidos durales de la espina dorsal humana.

16. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dichos tejidos meníngeos dañados son tejidos durales cerebrales humanos.

17. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dichos tejidos meníngeos dañados en contacto con dicha matriz definen un margen de tejidos presumiblemente benignos que rodean una sección quirúrgicamente sometida a excisión de tejidos cancerosos.

18. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz está adaptada para su sutura a los tejidos meníngeos.

19. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz comprende además una cantidad efectiva de un factor de crecimiento de tejidos meníngeos.

20. Matriz, según la reivindicación 1 ó 19, en la que dichos poros próximos a la superficie de dicha matriz son en su mayor parte poros con un diámetro comprendido aproximadamente entre 30 \mum y 150 \mum y el resto de dichos poros son poros internos con diámetros comprendidos aproximadamente entre 50 \mum y 300 \mum.

21. Matriz, según la reivindicación 20, en la que dicha etapa de acidificación utiliza ácido láctico acuoso para ajustar el pH y dicho proceso comprende además:

formación de dispersión acuosa de dichas fibras de colágeno filtradas;

precipitación de las fibras de colágeno de la dispersión acuosa por adición de hidróxido amónico; y

moldeo de una dispersión de dichas fibras de colágeno precipitadas para formar dicha matriz.

22. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicho colágeno certificado está formado como mínimo en dos membranas distintas seleccionadas del grupo que consiste en una película, una esponja, un material no tejido y un fieltro, y los dos elementos diferentes mencionados son unidos entre sí para conseguir la matriz.

23. Matriz, según la reivindicación 22, en la que los dos elementos distintos mencionados son una película y una esponja.

24. Matriz, según la reivindicación 22, en la que los dos elementos distintos mencionados son una esponja y dos hojas de película, y dicha esponja está laminada entre las dos hojas mencionadas de película.

25. Matriz, según la reivindicación 22, que comprende además una cantidad efectiva de un factor de crecimiento de los tejidos meníngeos.

26. Matriz, según la reivindicación 19 ó 25, en la que dicho factor de crecimiento de los tejidos meníngeos es seleccionado entre el grupo que consiste en péptidos que contienen RGD, decorina, laminina, merosina, sulfato de condroitina, sulfato de dermatina, sulfato de heparán, sulfato de keratina, factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), fibronectina y entactina y tenascina.

27. Matriz, según la reivindicación 19 ó 25, en la que dicho factor de crecimiento de los tejidos meníngeos es un ligando para una integrina.

28. Matriz, según la reivindicación 22, en la que, como mínimo, un elemento poroso de los dos elementos distintos mencionados tiene poros en tamaño y cantidad suficiente para permitir que los tejidos meníngeos en crecimiento se infiltren en su interior y, como mínimo, un elemento saturable de los dos elementos distintos mencionados es suficientemente duradero para retener una sutura.

29. Matriz, según la reivindicación 28, en la que dichos poros en la proximidad de la superficie de dicho elemento poroso son poros que en su mayoría están comprendidos en un diámetro entre 30 \mum y 150 \mum, y el resto de dichos poros son poros internos con diámetros comprendidos aproximadamente entre 50 \mum y 300 \mum.

30. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 20 y 29, en la que dichos poros externos tienen un diámetro aproximado de 70 \mum y dichos poros internos tienen un diámetro aproximado de 150 \mum.

31. Matriz, según la reivindicación 22, en la que dicha matriz es plana.

32. Matriz, según la reivindicación 22, en la que dicha etapa de acidificación utiliza ácido láctico acuoso para ajustar el pH y dicho proceso comprende además:

formación de una dispersión acuosa de dichas fibras de colágeno filtradas;

precipitar las fibras de colágeno de dicha dispersión acuosa por adición de hidróxido amónico y;

moldear una dispersión de dichas fibras de colágeno precipitadas para formar dicha matriz.

33. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 20 y 22, en la que dicho colágeno es derivado de una fuente bovina.

34. Matriz, según la reivindicación 33, en la que dicho colágeno es derivado de corium bovino.

35. Matriz, según la reivindicación 33, en la que dicho colágeno es derivado de tendón bovino.

36. Matriz, según la reivindicación 20 ó 22, en la que dicho colágeno es colágeno humano expresado por un animal transgénico que no es humano.

37. Matriz, según la reivindicación 22, en la que dichos dos elementos distintos mencionados del grupo que consiste en una película, una esponja, un material no tejido y un fieltro, son realizados por evaporación de un medio líquido que contiene dicho colágeno certificado de cada uno de un mínimo de dos volúmenes distintos.

38. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz es realizada por evaporación de un medio líquido que contiene dicho colágeno certificado de un volumen.

39. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz es realizada con una serie de capas, incluyendo una capa de alta porosidad y una capa de baja porosidad, siendo dicha capa de alta porosidad más porosa que dicha capa de baja porosidad.

40. Matriz, según la reivindicación 39, en la que dicha capa del alta porosidad es una esponja de colágeno y dicha capa de baja porosidad es una película suturable, sustancialmente impermeable al agua, unida a dicha esponja de colágeno.

41. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz está adaptada para su reabsorción sustancial dentro de unos tres meses después de implantación.

42. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz tiene una densidad aproximada de 0,0001 mg/mm^{3} hasta 0,12 mg/mm^{3},

43. Matriz, según la reivindicación 1, en la que dicha matriz tiene una densidad aproximada de 0,009 mg/mm^{3}.

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44. Matriz reticulada para promover crecimiento de tejido meníngeo para sustituir tejido meníngeo dañado, consistiendo dicha matriz esencialmente en un colágeno certificado preparado por un proceso certificado para conseguir un colágeno fisiológicamente compatible libre de cantidades efectivas de virus y priones activos, opcionalmente de como mínimo un factor de crecimiento de tejido meníngeo,

en la que dicha matriz se encuentra sustancialmente libre de proteínas no colágeno y tiene poros con un diámetro de 10 - 500 micras que permiten que el tejido meníngeo en crecimiento se infiltre en dicha matriz y es adaptada para establecer contacto con el tejido meníngeo dañado y para su reabsorción sustancial,

y en la que dicho proceso certificado comprende:

limpieza de materias extrañas de una fuente nativa de colágeno de tipo I;

lavado de dicho material que contiene colágeno sometido a limpieza;

trituración de dicho material que contiene colágeno lavado;

digestión de dicho material que contiene colágeno triturado con una enzima proteolítica para eliminar sustancialmente las impurezas de elastina y no colágeno que pueden provocar actividad antigénica y proceder al hinchado de dicho colágeno;

inactivar dicha enzima proteolítica;

lavar dicho material que contiene colágeno digerido enzimáticamente para eliminar sustancialmente el exceso de enzima y las impurezas de proteínas no colágeno

alcalinizar dicho material que contiene colágeno a un pH aproximado de 13 a 14 a una temperatura aproximada de 25ºC a 30ºC durante un período aproximado de 35 a 48 horas, para eliminar sustancialmente contaminantes de glicoproteinas y lípidos;

neutralizar dicho material que contiene colágeno alcalinizado con un ácido;

lavar dicho material que contiene colágeno neutralizado;

acidificar dicho material que contiene colágeno neutralizado y lavado a un pH comprendido entre 2 y 3 aproximadamente para hinchar adicionalmente dicho material, de manera que dicha acidificación no utilice un ácido que provoque reticulación sustancial del colágeno;

homogeneizar dicho material que contiene colágeno acidificado;

filtrar dicho material que contiene colágeno homogeneizado para eliminar material no hinchado, no colágeno, de las fibras de colágeno; y

recoger dichas fibras de colágeno filtrado para su utilización en dicha matriz.

45. Matriz, según la reclamación 46, en la que dicha matriz consiste esencialmente en dicho colágeno certificado y dicho factor o factores de crecimiento de tejido meníngeo.

46. Matriz para promover el crecimiento meníngeo para la sustitución de tejido meníngeo dañado, cuya matriz es preparada por un procedimiento que comprende:

disponer fibras de colágeno certificado que son fisiológicamente compatibles y certificadas como libres de cantidades efectivas de virus y priones activos:

dispersar dichas fibras de colágeno certificado en un medio líquido para conseguir una dispersión de colágeno; y

evaporar dicho medio líquido de dicha dispersión de colágeno para conseguir dicha matriz;

en la que dicha matriz comprende dichas fibras de colágeno certificado y poros que tienen un diámetro de
50-150 \mum adaptadas para permitir que el tejido meníngeo en crecimiento se infiltre en dichos poros; encontrándose dicha matriz sustancialmente libre de proteínas no colágeno, y estando dicha matriz adaptada para su reabsorción dentro de un período de tres meses después de la implantación,

y en la que dichas fibras de colágeno certificado son obtenidas por un método que comprende:

limpieza de materia extraña de una fuente nativa de colágeno de tipo I,

lavado de dicho material que contiene el colágeno sometido a limpieza,

triturar dicho material que contiene el colágeno lavado,

someter a digestión dicho material que contiene el colágeno triturado con una enzima protoelítica para eliminar sustancialmente las impurezas de elastina y no colágeno que pueden provocar actividad antigénica y el hinchamiento de dicho colágeno,

inactivar dicha enzima proteolítica,

lavar dicho material que contiene el colágeno digerido enzimáticamente para eliminar sustancialmente las enzimas en exceso y las impurezas de proteínas no colágeno,

alcalinizar dicho material que contiene un colágeno a un pH comprendido aproximadamente entre 13 y 14 a una temperatura aproximada de 25ºC a 30ºC durante un período de 35 a 48 horas aproximadamente, para eliminar sustancialmente los contaminantes de glicoproteínas y lípidos;

neutralizar dicho material que contiene el colágeno alcalinizado con un ácido,

lavar dicho material que contiene el colágeno neutralizado,

acidificar dicho material que contiene el colágeno neutralizado y lavado a un pH aproximado de 2 a 3 para el hinchamiento adicional de dicho material, de manera que dicha acidificación no utiliza un ácido que provoque reticulación sustancial del colágeno;

homogeneizar dicho material que contiene el colágeno acidificado;

filtrar dicho material que contiene el colágeno homogeneizado para eliminar el material no hinchado, no colágeno, de las fibras de colágeno; y

recoger dichas fibras de colágeno filtrado para su utilización en dicha matriz.

47. Matriz, según la reivindicación 1 ó 46, en la que dicha matriz es un objeto plano adaptado para adaptarse en el contacto al contorno de una superficie de un órgano situado por debajo de los tejidos meníngeos dañados que son objeto de sustitución.

48. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 19, 28 y 46, en la que dichos poros tienen un diámetro promedio aproximado de 50 a 150 \mum.

49. Matriz, según la reivindicación 46, en la que dichos poros próximos a una superficie de dicha matriz son en su mayor parte poros con un diámetro comprendido aproximadamente entre 50 \mum y menos de 150 \mum y el resto de dichos poros son poros internos con un diámetro mayor que dichos poros externos.

50. Matriz, según la reivindicación 46, en la que dichos poros próximos en la superficie de dicha matriz son en su mayoría poros que tienen un diámetro promedio aproximado de 70 \mum y el resto de dichos poros son poros internos con un diámetro promedio de unos 150 \mum.

51. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 20 y 46, en la que dicha matriz es una esponja.

52. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 20 y 46, en la que dicha matriz es una película.

53. Matriz, según cualquiera de las reivindicaciones 1, 20 y 46, en la que dicha matriz es un material no tejido o un fieltro.

54. Matriz, según la reivindicación 46, en la que dicha matriz está adaptada para proporcionar estanqueidad a los líquidos contra fuga de fluido cerebroespinal sin unión mecánica o química al tejido meníngeo.

55. Matriz para promover crecimiento de tejido meníngeo para sustituir tejido meníngeo dañado, cuya matriz es preparada por un procedimiento que comprende:

disponer fibras de colágeno certificado que son fisiológicamente compatibles y certificadas como libres de cantidades efectivas de virus y priones activos;

disponer como mínimo dos volúmenes distintos de un medio líquido que contiene dicho colágeno certificado; y

evaporar dicho medio líquido de cada uno de dichos volúmenes distintos para conseguir, como mínimo, dos elementos distintos del grupo consistente en una película, una esponja, un género no tejido y un fieltro; y

en la que dicha matriz comprende como mínimo dos elementos distintos, dichas fibras de colágeno certificado y poros con un diámetro de 50 - 150 \mum adaptados para permitir que el tejido meníngeo en crecimiento se infiltre en dichos poros, y en la que dicha matriz se encuentra sustancialmente libre de proteínas no colágeno y dicha matriz está adaptada para su reabsorción dentro de un período aproximado de tres meses después de la implantación,

y en la que dichas fibras de colágeno certificado son obtenidas por un método que comprende:

limpieza de la materia extraña de una fuente nativa de colágeno de tipo I,

lavado de dicho material que contiene dicho colágeno sometido a limpieza,

trituración de dicho material que contiene colágeno lavado,

someter a digestión dicho material que contiene colágeno triturado con una enzima proteolítica para eliminar sustancialmente las impurezas de elastina y no colágeno que pueden provocar actividad antigénica y el hinchamiento de dicho colágeno,

inactivar dicha enzima proteolítica,

lavar dicho material que contiene dicho colágeno digerido encimáticamente para eliminar sustancialmente el exceso de enzima y las impurezas de proteína no colágeno,

alcalinizar dicho material que contiene el colágeno a un pH aproximado de 13 a 14, a una temperatura aproximada de 25ºC a 30ºC durante un período de tiempo aproximado de 35 a 48 horas para eliminar sustancialmente los contaminantes de glicoproteínas y lípidos,

neutralizar dicho material que contiene colágeno alcalinizado con un ácido,

lavar dicho material que contiene el colágeno neutralizado,

acidificar dicho material que contiene colágeno neutralizado y lavado a un pH aproximado de 2 a 3 para el hinchamiento adicional de dicho material, de manera que dicha acidificación no utiliza un ácido que provoque reticulación sustancial del colágeno,

homogeneizar dicho material que contiene colágeno acidificado,

filtrar dicho material que contiene colágeno homogeneizado para eliminar material no colágeno no hinchado de las fibras de colágeno ; y

recoger dichas fibras de colágeno filtrado para su utilización en dicha matriz.