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EP2714706A1 - Sucroses octasulfates de calcium, leur préparation et leurs applications pharmaceutiques et cosmétiques - Google Patents

Sucroses octasulfates de calcium, leur préparation et leurs applications pharmaceutiques et cosmétiques

Info

Publication number
EP2714706A1
EP2714706A1 EP12724651.0A EP12724651A EP2714706A1 EP 2714706 A1 EP2714706 A1 EP 2714706A1 EP 12724651 A EP12724651 A EP 12724651A EP 2714706 A1 EP2714706 A1 EP 2714706A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
sucrose octasulfate
calcium
solution
salt
general formula
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP12724651.0A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Séverine JEULIN
Hélène HERNANDEZ-PIGEON
Luc Aguilar
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Original Assignee
Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA filed Critical Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Publication of EP2714706A1 publication Critical patent/EP2714706A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/08—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium
    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/06—Preparations for care of the skin for countering cellulitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to calcium octasulphate sucroses, processes for their preparation and their use in the pharmaceutical and / or cosmetic field.
  • Oligosaccharides are carbohydrates whose hydrolysis produces only simple sugars (oses). They are constituted by the union of at least two simple sugar molecules. Among the oligosaccharides, there is sucrose formed by the condensation of two monosaccharides: a glucose molecule and a fructose molecule.
  • Sulfated oligosaccharides are known in the literature and have multiple biological, cosmetic and / or therapeutic activities.
  • the application WO2006 / 017752 describes a method of treating inflammation of the airways using sulfated oligosaccharides as active substances.
  • sulfated oligosaccharides as active substances.
  • US5767104 discloses sulfated oligosaccharides, mainly aluminum sucrose octasulfate, in the treatment of alopecia.
  • sucrose octasulfate is used as active ingredient in the treatment of gastric ulcers for its healing / healing properties.
  • FR 2,646,604 describes formulations of sucrose octasulfate of aluminum, or sucralfate, with anti-inflammatory and healing properties, intended for the treatment of wounds or other ulcerous inflammations.
  • WO 1994/00476 discloses a method of treating lesions and / or inflammations of the digestive tract by administering a sulfated sucrose salt, more particularly sucrose octasulfate of potassium or sodium.
  • FR 1390007 describes the topical use of formulations containing sucralfate in combination with copper and zinc sulfate as tissue regenerators, healing and soothing.
  • EP0230023 describes the use of polysulfated oligosaccharides, more particularly potassium sucrose octasulfate, as an agent for healing wounds.
  • polysulfated oligosaccharides more particularly potassium sucrose octasulfate.
  • the problems of healing are found in a large number of pathologies, accidents or follow surgery. There is therefore a permanent need for alternative compositions to improve healing and / or accelerate.
  • the inventors have obtained novel compounds having surprising repairing, antimicrobial and anti-radical properties. Indeed, it has been unexpectedly shown that these compounds induce the migration of keratinocytes, the synthesis of hyaluronic acid, the differentiation of keratinocytes and the synthesis of antimicrobial peptides, unlike other sucrose metal octasulfates. Thus, these compounds allow the repair of the skin, the healing of wounds and promote healing, and this, in a very effective manner. Moreover, the inventors have shown that these compounds can also be used in cosmetics to maintain the comfort and beauty of the skin
  • FIG. 1 represents the induction of hyaluronic acid synthesis (in ng / ml) with 0.1 ⁇ M retinoic acid (control), 10 ⁇ M sucrose octasulfate Ca (SOS-Ca), sucrose Na octasulfate at 10 ⁇ (SOS-NA), sucrose octasulfate K at 10 ⁇ (SOS-K). Percentages indicate induction of synthesis over untreated control. * p ⁇ 0.05 compared to the untreated control
  • the present invention relates in particular to compounds of the following general formula I,
  • n is an integer
  • Y represents OH, Cl, Br, I, NO 3 , C 6 H 5 O 7 , CH 3 CO 2 , CF 3 CO 2 or -OCH 3 .
  • This compound is represented by the following formula III.
  • This compound is represented by the following formula IV.
  • This compound is represented by the following formula V.
  • This compound is represented by the following formula VI.
  • the compound of formula VI corresponds to a compound of formula I wherein n is 0.
  • Y represents OH, Cl, Fr, I, NO 3 , C 6 H 5 O 7 , CH 3 CO 2, CF 3 CO 2 or -OCH 3.
  • the compound according to the invention is in hydrated form.
  • the present invention further relates to a process for the preparation of the compounds of general formula I as above, wherein 0 ⁇ n ⁇ 4, or even 0 ⁇ n ⁇ 3 ,.
  • the invention relates to a process for the preparation of compounds of formula I according to the invention in which 0 ⁇ n ⁇ 4, or even 0 ⁇ n ⁇ 3, characterized in that it comprises the following steps:
  • sucrose octasulfate at. contacting the acid form of sucrose octasulfate in solution, preferably in aqueous solution such as water, with a calcium salt to form calcium sucrose octasulfate, and
  • the method according to the invention therefore comprises a first step a. wherein the acid form of sucrose octasulfate in solution is contacted with a calcium salt.
  • sucrose octasulfate in acid form comprises sucrose octasulfate of formula VII:
  • sucrose octasulfate in acid form bringing together the sucrose octasulfate in acid form and a calcium salt under conditions allowing their complexation.
  • the calcium salt is dissolved in the solution of sucrose octasulfate in acid form.
  • the relative amounts of sucrose octasulfate in acid form and the calcium salt in the solution are chosen so as to obtain the desired compound of formula I, that is to say in which 0 ⁇ n ⁇ 4 or even 0 ⁇ n ⁇ 3.
  • the contact time between the sucrose octasulfate in acid form and the calcium salt may be determined by routine tests and will depend in particular on the nature of the calcium salt used. When the salt used is calcium hydroxide, the contact time will preferably be between 8 and 15 hours.
  • the contacting will preferably be carried out with stirring, for example using a magnetic stirrer.
  • the "calcium salt” according to the invention is preferably chosen from calcium mineral salts such as, for example, Ca (OH) 2 , CaO, CaCl 2 , CaBr 2 , CaCl 2 , Ca (N o 3 ) 2 or Ca (BF 4 ) 2 or organic calcium salts such as, for example, Ca (CH 3 CO 2 ) 2 , Ca (CF 3 CO 2 ) 2 , Ca 3 (C 6 H 5 O 7 ) 2 or Ca (CH 3) 3 0) 2 .
  • the calcium salt according to the invention is calcium hydroxide Ca (OH) 2 .
  • the mixture obtained after step a. may optionally be filtered, in particular to remove any remaining calcium salts.
  • the method according to the invention comprises a second step b. wherein the calcium sucrose octasulfate obtained in step a. is recovered.
  • recovery according to the invention is preferably meant to obtain a sucrose sucrose octasulfate calcium, optionally a crystal.
  • the recovery according to the invention may be carried out by extraction / precipitation by adding a solvent to the mixture obtained in step a.
  • the solvent is added to the aqueous solution obtained in step a. and is mixed with it. The whole is then decanted. The least dense phase containing the crystal is then recovered. This phase will preferably be washed with water and then lyophilized to obtain calcium sucrose octasulfate in solid form.
  • the pH of the solution obtained in step a. is adjusted to basic pH, for example pH 9.
  • the dense phase obtained after decantation may be dissolved in water and then precipitated again in the solvent. This dissolution and re-extraction in the solvent can be carried out as many times as necessary to obtain the purity and the desired yield of calcium sucrose octasulfate.
  • Such a process for recovering calcium sucrose octasulfate is described in particular in the examples.
  • the solvent will preferably be an organic solvent or a mixture of organic solvents such as for example acetone, ethanol, ethyl acetate, methyl isobutyl ketone or methyl ethyl ketone, preferably acetone or ethanol.
  • Steps a. and B. are preferably carried out in the dark.
  • sucrose octasulfate in solution used in step a the method according to the invention can be obtained in any way known to those skilled in the art.
  • the sucrose octasulfate in acid form will be obtained from a sucrose octasulfate salt.
  • sucrose octasulfate in acid form is obtained from a sucrose octasulfate salt by the following steps: al. dissolving in a solution, preferably an aqueous solution such as water, a sucrose octasulfate salt,
  • sucrose octasulfate salt solution a2. desulfurization of the thus obtained sucrose octasulfate salt solution to form the acid form of sucrose octasulfate in solution.
  • sucrose octasulfate salt may be chosen from all existing sucrose octasulfate salts such as, for example, alkali metal salts (such as, for example, potassium, sodium, lithium, etc.).
  • the sucrose octasulfate salt is potassium sucrose octasulfate or sodium sucrose octasulfate.
  • Step al. allows obtaining a solution of sucrose octasulfate salt.
  • dissolution of the sucrose octasulfate salt is meant the dissolution of said compound.
  • volume of solution such as water
  • the dissolution is preferably carried out by stirring the salt in a solution, such as water, for example by means of a magnetic stirrer.
  • the method according to the invention may also comprise a step a.2 in which the dissolved salt solution obtained in step a1. is desalified.
  • dealting is meant dissociation in the sucrose octasulfate salt of the acid form of the sucrose octasulfate and the cation. This desalting step is followed by the recovery of the acid form of sucrose octasulfate. This step can be carried out by any technique known to those skilled in the art, in particular by passing through an ion exchange column.
  • the passage over an ion exchange column of the solution containing the acid sucrose octasulfate can be carried out several times in order to eliminate all the cations which are originally associated with it.
  • the ion exchange column preferably contains a cation exchange resin.
  • the cation exchange resin is a sulfonic acid type resin (for example Amberlite TM).
  • the method according to the invention will comprise or consist of the following steps: al. dissolving in a solution, preferably an aqueous solution such as water, a sucrose octasulfate salt,
  • sucrose octasulfate salt solution a2. desulfurization of the thus obtained sucrose octasulfate salt solution to form the acid form of sucrose octasulfate in solution.
  • calcium sucrose octasulfate is obtained directly from sucralfate.
  • Sucralfate is first sulfated, for example in pyridine and then brought into the presence of a strong base, such as (Ca (OH) 2 ) for example.
  • the present invention further relates to compositions comprising one or more compounds of formula (I) wherein 0 ⁇ n ⁇ 4 or even 0 ⁇ n ⁇ 3 and at least one pharmaceutically or cosmetologically acceptable excipient.
  • the invention also relates to a medical device comprising one or more compounds of formula (I) in which 0 ⁇ n ⁇ 4 or even 0 ⁇ n ⁇ 3 and a pharmaceutically or cosmetically acceptable excipient.
  • composition according to the invention or the medical device according to the invention will contain only one type of compounds of formula I, preferentially the compound of formula II.
  • the "excipient" according to the invention may, for example, be alone or in combination one or more surfactants, one or more solvents, one or more water-soluble polymers, one or more thickeners or gelling agents, one or more preservatives, one or more antibacterial agents, one or more antiseptics, one or more cicatrizing agents, one or more antioxidant agents, one or more emollient and / or moisturizing agents, one or more pigments, one or more perfumes and / or one or more dyes, agents for pH adjustment such as salts, acids, bases.
  • compositions which produce no adverse, allergic or other adverse reactions when administered to an animal or a human.
  • the exact composition and the form of the composition according to the invention may be determined by those skilled in the art depending on the use and the route of administration envisaged for the composition.
  • composition according to the invention will preferably be formulated so that it can be administered topically or orally.
  • topical administration includes skin applications, oral applications (oral mucosa), genital applications (anal mucosa, vaginal).
  • oral administration includes in particular administrations by ingestion (including gastric).
  • the composition When the composition is formulated so that it can be administered topically, it will preferably be in a form allowing an easy application such as a powder, a milk, a cream, a balm, an oil, a lotion, a gel or a mousse. , a foaming gel, an ointment, a spray, a paste, a patch, etc.
  • the composition according to the invention may be in the form of a suppository, ovum or capsule.
  • composition When the composition is formulated so that it can be administered in oral form it will preferably be in the form of a gum, a lozenge, a tablet, a boiled sugar, a drinking gel, a powder to dissolve, a gastric bandage, etc.
  • the dosages of the compounds of formula (I) in which 0 ⁇ n ⁇ 4, or even 0 ⁇ n ⁇ 3, in the compositions will in particular be determined as a function of the quantity of active substance necessary to obtain the desired therapeutic and / or cosmetic response, depending on the intended mode of administration and the duration of the desired treatment.
  • the composition according to the invention has a calcium sucrose octasulfate content according to the general formula I of between 0.1 and 30% by weight.
  • the composition according to the invention for example for a topical application, will comprise between 0.5 and 7%, more preferably between 0.5 and 5% by weight of calcium sucrose octasulfate.
  • the composition according to the invention may further comprise at least one other active ingredient, preferably another scarring agent, a painkiller, an anti-radical agent, an antiseptic and / or an anti-inflammatory agent.
  • the present invention further relates to compounds according to the invention or compositions according to the invention for their use as medicaments.
  • the present invention further relates to the use of a compound of formula (I) in which 0 ⁇ n ⁇ 4 or even 0 ⁇ n ⁇ 3, or a composition according to the invention for the manufacture of a drug.
  • the present invention further relates to a method of treatment comprising administering to a patient in need thereof an effective dose of compounds of formula (I) wherein 0 ⁇ n ⁇ 4, or even 0 ⁇ n ⁇ 3 , or compositions according to the invention
  • the compounds of formula (I) in which 0 ⁇ n ⁇ 4, or even 0 ⁇ n ⁇ 3, or compositions according to the invention are used for the treatment of the skin, mucous membranes or organs, more preferably to promote the cicatrisation of the skin, mucous membranes or organs and / or to protect them from microbial infections and / or to fight against microbial infections and / or to fight against inflammation.
  • cicatrization is meant in particular the phenomena of regeneration and consolidation of tissues or organs to fill a lesion.
  • promoting healing it is meant in particular that the cicatrization is done more rapidly and / or more effectively (absence or reduction of scars, etc.) in the presence of the compound or of a composition according to the invention.
  • the use according to the invention will concern the cicatrization of acute or chronic wounds and burns.
  • the expression "acute or chronic wound” comprises, in particular, abrasions, scrapes, scratches, cuts, canker sores, various wounds in the oral sphere, scar acne, blisters, cheilites eczema, diaper rash, dermatoporosis, eg gastric or leg ulcers, pressure ulcers, diabetic sores (especially feet), various irritations, dermatitis or scars after surgery or post dermatological procedure aesthetic (laser, hair removal, peeling, injection).
  • burn includes burns of any origin including thermal, mechanical, chemical or radiation burns.
  • the burns according to the invention may especially be burns due to heat or sunburn, radiodermites, cryotherapy scars, scars after surgery or after cosmetic dermatology act (laser, hair removal, peeling).
  • Microbial infection means all skin or mucosal infections whether due to bacteria, yeasts, fungi or viruses.
  • the compositions according to the invention may be used for preventive purposes to prevent the appearance of a microbial or therapeutic infection to fight against an already existing microbial infection.
  • inflammation is meant an immune response of the body to an aggression characterized in particular by redness, swelling, feeling of heat and pain.
  • the present invention particularly relates to the treatment of inflammatory conditions of the skin.
  • sucralfate The amount of sucralfate to be administered to a patient will depend on the pathology to be treated and the mode of administration. For example, when a gastric application is envisaged, sucrose octasulfate calcium may be administered at a dose of 1 to 10 g / day, preferably 2 to 6 g / day.
  • the present invention further relates to the use of a compound of formula (I) in which 0 ⁇ n ⁇ 4 or even 0 ⁇ n ⁇ 3, or a cosmetic composition according to the invention to improve the appearance of the skin.
  • improving the appearance of the skin means the aesthetic improvement or comfort of a skin condition and / or mucous membranes.
  • the aesthetic degradation of the skin condition or its comfort may be due for example to age, external conditions or weight variations.
  • the cosmetic composition according to the invention may make it possible to restore the barrier function of the skin, the hydration of the skin, the increase of its elasticity and / or its tonicity and also the reduction of stretch marks, of cellulite or wrinkles and the disappearance of skin spots.
  • the compound or the composition according to the invention may be used to prevent skin aging.
  • the following examples are given for illustrative purposes and do not limit the scope of the invention.
  • the mixture is then filtered and 500 ml of acetone are added to the filtrate.
  • the resulting mixture is allowed to stand overnight.
  • the supernatant is decanted and the remaining syrup is dissolved in 15 ml of demineralised water, and 200 ml of acetone is added to the solution.
  • the resulting mixture is allowed to stand for 3 hours and the supernatant is decanted. Such an operation is repeated 3 times.
  • the syrup is dissolved in 30 ml of water and the mixture is lyophilized. A white sucrose octasulfate calcium solid is obtained (0.50 g, 38%).
  • sucrose octasulfate and calcium contained in the compound II obtained is carried out.
  • the same assay is carried out in control samples having a known Ca or sucrose octasulfate concentration: CaC12 and potassium sucrose octasulfate (SOS-K). The dosage is carried out as follows:
  • Table 1 Estimation of the Ca concentration of the SOS-Ca samples according to a CaCl 2 standard.
  • the ratio calcium / sucrose octasulfate in the compound of formula II SOS-Ca obtained is 3.2443 / 0.8237, or 3.94 which corresponds well to the expected ratio.
  • EXAMPLE 2 Effect of Ca Sucrose Octasulfate on Cell Migration Epithelial cell migration is an important step in the development and processes of tissue repair, such as embryogenesis and wound healing.
  • keratinocytes are "activated" to undertake the process of migration.
  • the cells then see their phenotype influenced by interactions with the extracellular matrix on the one hand and by cell-cell interactions on the other hand.
  • the keratinocytes of the basal seat of the banks of a wound migrate on the wound and cover it.
  • the keratinocyte line used is the HaCaT human keratinocyte line, spontaneously immortalized. This line is frequently cited as a reference model in the literature.
  • the protocol used for the study of cell migration is based on the use of a 96-well kit, Oris Cell Migration Assay (Platypus Technologies - TEBU), allowing the miniaturization and quantification of this cellular process.
  • the principle of this test is to study cell migration to the well center of the 96-well plate. It involves placing a stopper in wells to create a detection zone of 2 mm in diameter. Then remove the stoppers once the cells have adhered to the surface around them, and thus allow the cells to migrate to the detection zone. Plates without stoppers and with active ingredients are incubated at 37 ° C for 24 hours in DMEM 0% FCS. The amount of cells located in the area where the stopper was then analyzed for cell migration. A cache is used to view and count only cells in this area. For each condition, the average of 6 to 8 wells is achieved.
  • the products tested in this study are the SOS-Ca obtained in Example 1 at 10 ⁇ , SOS-K at 10 ⁇ (Sucrose octasulfate potassium), SOS-Na at 10 ⁇ (Sucrose octasulfate sodium) and EGF as a positive witness. A negative control is carried out in which no compound is added to the culture medium.
  • sucrose octasulfate potassium (SOS-K) and sucrose octasulfate sodium (SOS-Na) do not induce the migration of keratinocytes.
  • sucrose octasulphate calcium (SOS-Ca) statistically significantly induces the migration of keratinocytes.
  • SOS-Ca can significantly induce the migration of keratinocytes unlike SOS-K and SOS-Na.
  • Example 3 Effect of Ca Sucrose Octasulfate on Cell Differentiation
  • the epidermis plays a major protective role in providing a chemical and mechanical barrier for the body. It ensures the maintenance of the seal, namely the skin barrier function. Corneocytes, keratinocytes of the stratum corneum, associated with a lipid matrix, largely ensure this function. Nevertheless the deeper layers intervene in the setting up of the actors of this function. The differentiation capacity of the keratinocytes of the epidermis will guarantee the establishment of a barrier of selective functional permeability type.
  • Keratinocytes are spatiotemporally regulated, evolving from the deepest layers of the epidermis, the least differentiated basal layer, to the stratum corneum, the ultimate stage of differentiation of keratinocytes into corneocytes. From a protein point of view, the epidermal differentiation is mainly focused on the evolution of structural proteins that are keratins and that contribute to the architectural integrity of the epidermis. Their expression varies according to the degree of maturation of the keratinocytes. Basic keratin 1 and acidic keratin 1 are early markers of keratinocyte differentiation present in the basal layer of the epidermis.
  • transglutaminases such as transglutaminase 1 (TGM1) or 3.
  • Loricrin is a structural protein containing glutamine and lysine residues for attachment to other proteins in the horny envelope.
  • the basic filaggrin molecules (FLG) produced from its precursor profilaggrin (stored in the keratohyaline granules) associate with the cytokeratin filaments, thus allowing their aggregation.
  • Filaggrin can then be removed by the enzymes Peptidyl Arginine Deiminase (PAD) and in particular PAD 1 and PAD3.
  • PAD Peptidyl Arginine Deiminase
  • PAD Peptidyl Arginine Deiminase
  • PAD Peptidyl Arginine Deiminase
  • keratinocyte lipids are at the origin of the intercorneocyte lipid cement essential for the cutaneous barrier, the formation of which represents the final phase of epidermal terminal differentiation.
  • This extracellular lipid matrix provides the main barrier to transcutaneous movements of water and electrolytes.
  • a number of enzymes and lipid transporters have their keratinocyte expression increased with differentiation.
  • This cement results from a balance between three lipid species, the cholesterol, free fatty acids and ceramides. These lipids are derived from glucosylceramides, sphingomyelin, cholesterol and phospholipids synthesized in the spinous and granular layers.
  • the lamellar bodies contain numerous enzymes including lipid hydrolases such as Acid Sphyngomyelinase (aSmase), beta- glucocerebrosidase (GBA) or Plospholipase A2 (sPLA2) as well as acidic and neutral lipases.
  • lipid hydrolases such as Acid Sphyngomyelinase (aSmase), beta- glucocerebrosidase (GBA) or Plospholipase A2 (sPLA2) as well as acidic and neutral lipases.
  • the barrier function of the skin also includes a defense against microorganisms.
  • the epithelium plays an active role in the innate defenses of the host.
  • Skin antimicrobial systems are based, among other things, on the presence of certain surface lipids (oleic and palmitoleic acids of sebum and of certain constituent proteins which are increasingly expressed as a function of the differentiation state of keratinocytes (R Ase 7, proteinase Inhibitor 3) Rase 7 and inhibitory proteinase 3 (PI3 or elafin) possess antimicrobial activities, Rnase 7 is a member of the Rnase A family and has broad-spectrum antimicrobial activity. against Gram + or Gram - bacteria.
  • acidification of the epidermal surface plays an important role in cutaneous antimicrobial defenses.
  • the skin thus acts not only as a physical barrier, but also as a chemical barrier.
  • these antimicrobial peptides link the innate and adaptive immune response. They play an important role as mediators of inflammation by having effects on epithelial and inflammatory cells, influencing cell proliferation, scarring, cytokine production, chemokines and chemotaxis.
  • Antimicrobial peptides are generally synthesized in the upper layers of the spinous layer and the granular layer, but they are active in the stratum corneum where they are released. Their mode of action is to disrupt the plasma membrane of infectious microbes or to enter the microorganism to interfere with intracellular metabolism.
  • the most studied antimicrobial peptides in the skin are ⁇ -defensins and cathelicidines.
  • Human ⁇ -defensins are the major class of antimicrobial peptides found in human epithelia and four of them have been identified in the skin, hBD 1-4. Although they belong to the same family, they are regulated by different voices.
  • hBD-2 Human ⁇ -defensin 2 (hBD-2 or DEFB4), a 4 kDa peptide binding to heparin, is one of the major cutaneous antimicrobial peptides. Only bacteriostatic against S. aureus, hBD-2 has antimicrobial activity primarily directed against Gram-negative bacteria.
  • ⁇ -Defensin 3 (hBD-3), a 5 kDa antimicrobial peptide, has broad-spectrum antimicrobial activity including Staphylococcus aureus.
  • Psoriasin belongs to the S100 family of proteins, named after its discovery from psoriasis dander extracts. This 1 1 kDa peptide is in particular produced in cutaneous zones where bacterial colonization is abundant as well as in inflammatory zones. It is mainly directed against Escherichia coll.
  • the keratinocyte line used is the line of primary human keratinocytes or NHKs prepared from skin flaps from cosmetic surgery surgical waste (breast reduction).
  • test products are incubated with the keratinocytes for 72 hours.
  • the cells are then recovered and an analysis of the expression of target genes involved in epidermal differentiation by real-time PCR is performed.
  • the products tested are SOS-Ca at 10 ⁇ or 30 ⁇ , SOS-Na at 10 ⁇ or 30 ⁇ , SOS-K at 10 ⁇ or 30 ⁇ , and CaCl 2 at 1.5 mM as a positive control.
  • a negative control is carried out in which no product is added to the culture medium.
  • S100A7 49 49 133 50 59 205 884 binding protein A7 Table 4: expression of genes involved in cell differentiation in an NHKs keratinocyte line after incubation with SOS-Ca at 10 ⁇ or 30 ⁇ , SOS-Na at 10 ⁇ or 30 ⁇ , SOS-K at 10 ⁇ or 30 ⁇ M or CaCl 2 at 1.5 mM as a percentage of the expression of the different mRNAs relative to the negative control.
  • SOS-Ca strongly induced the expression of differentiation markers.
  • SOS-K and SOS-Na at 30 ⁇ induced differentiation of keratinocytes in a moderate manner. It can be seen that at 30 ⁇ , SOS-K and SOS-Na induce 8 and 11 targets, respectively, whereas SOS-Ca induces 17. Moreover, the induction of the expression of all genes is stronger by SOS-Ca than with the other two SOS.
  • SOS-Ca induced the expression of protein markers of differentiation, proteins involved in lipid synthesis (such as KLK7), involved in desquamation, and induced the expression of antimicrobial peptides like hBD2 (DEFB4). , PB and psoriasin (S100A7).
  • SOS-Ca By inducing the expression of Fabaggrin and Padil, SOS-Ca also participates in the synthesis of natural hydration factor.
  • SOS-Ca therefore plays a very important role in the differentiation of keratinocytes and activates the physical protein barrier function, lipid and antimicrobial and cutaneous hydration.
  • EXAMPLE 4 Effect of Ca Sucrose Octasulfate on the Synthesis of Hyaluronic Acid
  • Hyaluronic acid is a component of the extracellular matrix that can be synthesized by keratinocytes and has many functions.
  • hyaluronic acid is involved in maintaining cutaneous hydration, proliferation and stimulation of cellular motility during re-epithelialization.
  • the amount of hyaluronic acid present at the cutaneous level decreases with age, which is partly responsible for skin aging.
  • the keratinocyte line used is the line of primary human keratinocytes or NHKs, prepared from skin flaps from surgical plastic surgery waste (breast reduction).
  • test products are incubated with the keratinocytes for 72 hours.
  • the culture supernatants are then recovered and an analysis of hyaluronic acid expression is performed by the Duoset Hyaluronan ELISA Kit (ReD Systems) according to the supplier's instructions.
  • the products tested are SOS-Ca at 10 ⁇ , SOS-Na at 10 ⁇ , SOS-K at 10 ⁇ , and retinoic acid at 0.1 ⁇ as a positive control.
  • a negative control is carried out in which no product is added to the culture medium.
  • the values of the amount of hyaluronic acid obtained are shown in FIG. 1 as a percentage of induction relative to the untreated negative control.
  • 0.1 ⁇ l retinoic acid a positive control, induced the synthesis of hyaluronic acid by 80%.
  • SOS-K and Na do not induce an increase in hyaluronic acid synthesis.
  • SOS-Ca therefore plays an important role in the induction of hyaluronic acid synthesis and thus in the hydration and prevention of cutaneous aging.

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Abstract

La présente invention concerne un sucrose octasulfate de calcium de formule générale (I) dans laquelle 0 ≤ n ≤ 3, le procédé de préparation et l'utilisation d'un sucrose octasulfate de calcium de formule générale (I) dans laquelle 0 ≤ n ≤ 4 dans le domaine pharmaceutique et/ou cosmétique dans laquelle : n est un nombre entier Y représente OH, Cl, Br, I, NO3, C6H5O7, CH3CO2, CF3CO2 ou -OCH3.

Description

SUCROSES OCTASULFATES DE CALCIUM, LEUR PREPARATION ET LEURS APPLICATIONS PHARMACEUTIQUES ET COSMETIQUES
La présente invention concerne des sucroses octasulfates de calcium, leurs procédés de préparation et leur utilisation dans le domaine pharmaceutique et/ou cosmétique.
Les oligosaccharides sont des glucides dont l'hydrolyse produit uniquement des sucres simples (oses). Ils sont constitués par l'union d'au moins deux molécules de sucres simples. Parmi les oligosaccharides, on trouve le sucrose formé par la condensation de deux oses : une molécule de glucose et une molécule de fructose.
Les oligosaccharides sulfatés sont connus dans la littérature et possèdent de multiples activités biologiques, cosmétiques et/ou thérapeutiques.
Par exemple, la demande WO2006/017752 décrit une méthode de traitement des inflammations des voies aériennes utilisant des oligosaccharides sulfatés comme substances actives. Parmi ceux ci se trouve, en particulier, un oligosaccharide issu de la condensation du glucose et du fructose et totalement sulfaté.
US5767104 décrit des oligosaccharides sulfatés, principalement le sucrose octasulfate d'aluminium, dans le traitement de l'alopécie.
Par ailleurs, le sucrose octasulfate est utilisé comme principe actif dans le traitement des ulcères gastriques pour ses propriétés réparatrices/cicatrisantes. FR 2 646 604 décrit des formulations de sucrose octasulfate d' aluminium, ou sucralfate, aux propriétés anti-inflammatoires et cicatrisantes, destinées au traitement de plaies ou autres inflammations ulcéreuses. WO 1994/00476 décrit une méthode de traitement des lésions et/ou inflammations de l'appareil digestif par administration d'un sel de sucrose sulfaté, plus particulièrement le sucrose octasulfate de potassium ou de sodium.
FR 1390007 décrit l'utilisation par voie topique de formulations contenant du sucralfate en association avec du sulfate de cuivre et de zinc comme régénérants tissulaires, cicatrisants et apaisants.
Enfin, EP0230023 décrit l'utilisation d'oligosaccharides polysulfatés, plus particulièrement du sucrose octasulfate de potassium, comme agent guérissant les blessures. Les problèmes de cicatrisation se retrouvent dans un grand nombre de pathologies, d'accidents ou font suite aux opérations chirurgicales. Il existe donc en permanence un besoin de compositions alternatives permettant d'améliorer la cicatrisation et/ou de l'accélérer.
Dans la présente invention, les inventeurs ont obtenu de nouveaux composés ayant des propriétés réparatrices, antimicrobiennes et anti-radicalaires surprenantes. En effet, de manière inattendue il a été montré que ces composés induisent la migration des kératinocytes, la synthèse d'acide hyaluronique, la différenciation des kératinocytes et la synthèse de peptides antimicrobiens, au contraire d'autres sucroses octasulfates métalliques. Ainsi, ces composés permettent la réparation de la peau, la guérison de blessures et favorisent la cicatrisation, et ce, d'une manière très efficace. Par ailleurs, les inventeurs ont montré que ces composés pouvaient aussi être utilisés en cosmétique pour maintenir le confort et la beauté de la peau
La Figure 1 représente l'induction de la synthèse d'acide hyaluronique (en ng/ml) par de l'acide rétinoïque 0,1 μΜ (Témoin), du sucrose octasulfate de Ca à 10 μΜ (SOS-Ca), du sucrose octasulfate de Na à 10 μΜ (SOS-NA), du sucrose octasulfate de K à 10 μΜ (SOS-K). Les pourcentages indiquent l'induction de la synthèse par rapport au témoin non traité. * p<0.05 par rapport au témoin non traité
La présente invention porte en particulier sur des composés de formule générale I suivante,
Formule I
dans laquelle :
0 < n < 4, préférentiellement 0 < n < 3
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3. Dans un mode de réalisation de l'invention, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=4. Ce composé est représenté par la formule II suivante.
Formule II
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=3. Ce composé est représenté par la formule III suivante.
Formule III
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=2. Ce composé est représenté par la formule IV suivante.
Formule IV
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=l . Ce composé est représenté par la formule V suivante.
Formule V
Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=0. Ce composé est représenté par la formule VI suivante.
Formule VI Dans ce mode de réalisation de l'invention, le composé de formule VI correspond à un composé de formule I dans lequel n est égal à 0.
Dans toutes les formules III à VI ci-dessus, Y représente OH, Cl, Fr, I, N03, C6H507, CH3CO2, CF3CO2 ou -OCH3.
Préférentiellement, le composé de formule I selon l'invention est tel que n=3. Dans un mode de réalisation, le composé selon l'invention est sous forme hydratée.
La présente invention porte en outre sur un procédé de préparation des composés de formule générale I comme ci-dessus, dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3,.
En particulier, l'invention porte sur un procédé de préparation des composés de formule I selon l'invention dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
a. mise en contact de la forme acide du sucrose octasulfate en solution, préférentiellement en solution aqueuse telle que l'eau, avec un sel de calcium pour former du sucrose octasulfate de calcium, et
b. récupération du sucrose octasulfate de calcium ainsi formé. Le procédé selon l'invention comprend donc une première étape a. dans laquelle la forme acide du sucrose octasulfate en solution est mise en contact avec un sel de calcium.
Par sucrose octasulfate sous forme acide on comprend du sucrose octasulfate de formule VII suivante :
Formule VII
Par « mise en contact » selon l'invention, on entend la mise en présence du sucrose octasulfate sous forme acide et d'un sel de calcium dans des conditions permettant leur complexation. Préférentiellement, le sel de calcium est dissout dans la solution de sucrose octasulfate sous forme acide. Les quantités relatives de sucrose octasulfate sous forme acide et du sel de calcium dans la solution sont choisies de manières à obtenir le composé de formule I souhaité, c'est-à-dire dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3.
Le temps de contact entre le sucrose octasulfate sous forme acide et le sel de calcium pourra être déterminé par des tests de routine et dépendra notamment de la nature du sel de calcium utilisé. Lorsque le sel utilisé est l'hydroxyde de calcium, le temps de contact sera préférentiellement compris entre 8 et 15 heures.
La mise en contact sera préférentiellement réalisée sous agitation par exemple à l'aide d'un agitateur magnétique.
Le « sel de calcium » selon l'invention est préférentiellement choisi parmi les sels minéraux de calcium tels que, par exemple, Ca(OH)2, CaO, CaCl2, CaBr2, CaCI2, Ca(N03)2 ou Ca(BF4)2 ou les sels organiques de calcium tels que, par exemple, Ca(CH3C02)2, Ca(CF3C02)2, Ca3(C6H507)2 ou Ca(CH30)2. Préférentiellement le sel de calcium selon l'invention est l'hydroxyde de calcium Ca(OH)2.
Le mélange obtenu après l'étape a. pourra éventuellement être filtré, notamment pour supprimer d'éventuels sels de calcium restants. Le procédé selon l'invention comprend une seconde étape b. dans laquelle le sucrose octasulfate de calcium obtenu à l'étape a. est récupéré.
Par récupération selon l'invention, on entend préférentiellement l'obtention d'un solide de sucrose octasulfate de calcium, éventuellement un cristal.
Les méthodes permettant de récupérer un tel solide sont bien connues de l'homme du métier par exemple la récupération selon l'invention pourra être réalisée par extraction/précipitation par ajout d'un solvant au mélange obtenu à l ' étape a. Alternativement, il est possible de récupérer le solide directement par lyophilisation d'une solution aqueuse obtenue à l'étape a. Dans un mode de réalisation préféré, le solvant est ajouté à la solution aqueuse obtenue à l'étape a. et est mélangé à celle ci. L'ensemble est ensuite décanté. La phase la moins dense contenant le cristal est ensuite récupérée. Cette phase sera préférentiellement lavée à l'eau puis sera lyophilisée afin d'obtenir le sucrose octasulfate de calcium sous forme solide. Dans un mode de réalisation, le pH de la solution obtenue à l'étape a. est ajusté à pH basique, par exemple pH 9.
Afin d'augmenter le rendement de la précipitation et la pureté du composé obtenu, la phase dense obtenue après décantation pourra être dissoute dans de l'eau puis à nouveau précipitée dans le solvant. Cette mise en solution et réextraction dans le solvant pourra être réalisée autant de fois que nécessaire pour obtenir la pureté et le rendement désiré en sucrose octasulfate de calcium. Un tel procédé de récupération du sucrose octasulfate de calcium est notamment décrit dans les exemples.
Le solvant sera préférentiellement un solvant organique ou un mélange de solvants organiques tels que par exemple l'acétone, l'éthanol, l'acétate d'éthyle, la méthylisobutylcétone ou la méthyléthylcétone, préférentiellement l' acétone ou l'éthanol.
Les étapes a. et b. sont préférentiellement réalisées à l'obscurité.
La forme acide du sucrose octasulfate en solution utilisée dans l'étape a. du procédé selon l'invention pourra être obtenue de toutes les façons connues de l'homme du métier. Préférentiellement, le sucrose octasulfate sous forme acide sera obtenu à partir d'un sel de sucrose octasulfate.
Dans un mode de réalisation préféré, le sucrose octasulfate sous forme acide est obtenu à partir d'un sel de sucrose octasulfate par les étapes suivantes : al . dissolution dans une solution, préférentiellement une solution aqueuse telle que l'eau, d'un sel de sucrose octasulfate,
a2. désalifîcation de la solution de sel de sucrose octasulfate ainsi obtenue pour former la forme acide du sucrose octasulfate en solution.
Le « sel de sucrose octasulfate » selon l'invention peut être choisi parmi tous les sels de sucrose octasulfate existants tel que par exemple les sels de métaux alcalins (tel que par exemple le potassium, le sodium, le lithium, etc.). Préférentiellement, le sel de sucrose octasulfate est le sucrose octasulfate de potassium ou le sucrose octasulfate de sodium.
L'étape al . permet l'obtention d'une solution de sel de sucrose octasulfate.
Par « dissolution » du sel de sucrose octasulfate on entend la mise en solution dudit composé. L'homme du métier peut facilement estimer le volume de solution, telle que l'eau, à ajouter pour solubiliser totalement la quantité de sel de sucrose octasulfate souhaitée et pour obtenir une solution à la concentration requise (par exemple entre 0,01M et 1M). La dissolution est préférentiellement réalisée par agitation du sel dans une solution, telle que l'eau, par exemple grâce à un agitateur magnétique.
Le procédé selon l'invention peut également comprendre une étape a.2 dans laquelle la solution de sel dissous obtenu à l'étape al . est désalifiée.
Par « désalifîcation » on entend la dissociation dans le sel de sucrose octasulfate de la forme acide du sucrose octasulfate et du cation. Cette étape de désalifîcation est suivie de la récupération de la forme acide du sucrose octasulfate. Cette étape peut être réalisée par toutes les techniques connues de l'homme du métier notamment par passage sur une colonne échangeuse d'ions.
Le passage sur une colonne échangeuse d'ions de la solution contenant le sucrose octasulfate acide peut être effectué plusieurs fois afin d'éliminer l'ensemble des cations qui lui sont originellement associés.
La colonne échangeuse d'ions contient préférentiellement une résine échangeuse de cations. Dans un mode de réalisation de l'invention, la résine échangeuse de cations est une résine de type acide sulfonique (par exemple l'Amberlite™).
Dans un mode de réalisation préféré, le procédé selon l'invention comprendra ou consistera en les étapes suivantes : al . dissolution dans une solution, préférentiellement une solution aqueuse telle que l'eau, d'un sel de sucrose octasulfate,
a2. désalifîcation de la solution de sel de sucrose octasulfate ainsi obtenue pour former la forme acide du sucrose octasulfate en solution.
a. mise en contact de la forme acide du sucrose octasulfate en solution avec un sel de calcium pour former du sucrose octasulfate de calcium, et
b. précipitation du sucrose octasulfate de calcium ainsi formé.
Dans un autre mode de réalisation, le sucrose octasulfate de calcium est obtenu directement à partir du sucralfate. Le sucralfate est tout d'abord sulfaté, par exemple dans la pyridine puis mis en présence d'une base forte, telle le (Ca(OH)2) par exemple.
La présente invention porte, en outre, sur des compositions comprenant un ou plusieurs composés de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3 et au moins un excipient pharmaceutiquement ou cosméto logiquement acceptable.
L'invention a également pour objet un dispositif médical comprenant un ou plusieurs composés de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3 et un excipient pharmaceutiquement ou cosméto logiquement acceptable.
Préférentiellement, la composition selon l'invention ou le dispositif médical selon l ' invention ne contiendront qu 'un seul type de composés de formule I , préférentiellement le composé de formule II.
« L'excipient » selon l'invention pourra, par exemple, être seuls ou en association un ou plusieurs tensioactifs, un ou plusieurs solvants, un ou plusieurs polymères hydrosolubles, un ou plusieurs épaississants ou gélifiants, un ou plusieurs conservateurs, un ou plusieurs antibactériens, un ou plusieurs antiseptiques, un ou plusieurs agents cicatrisants, un ou plusieurs agents antioxydants, un ou plusieurs agents émollients et/ou hydratants, un ou plusieurs pigments, un ou plusieurs parfums et/ou un ou plusieurs colorants, des agents d'ajustement du pH tels que les sels, des acides, des bases.
Par « pharmaceutiquement et/ou cosméto logiquement acceptable » selon l'invention on se réfère à des entités moléculaires et des compositions qui ne produisent aucun effet adverse, allergique ou autre réaction indésirable quand elles sont administrées à un animal ou un humain. La composition exacte et la forme de la composition selon l'invention pourra être déterminée par l'homme du métier en fonction de l'utilisation et la voie d'administration envisagées pour la composition.
La composition selon l'invention sera préférentiellement formulée de manière à pouvoir être administrée par voie topique ou orale.
Par « administration par voie topique » selon l'invention on comprend notamment les applications cutanées, les applications buccales (muqueuse buccale), les applications génitales (muqueuse anale, vaginale).
Par « administration par voie orale » selon l'invention on comprend notamment les administrations par ingestion (dont gastriques).
Lorsque la composition est formulée de manière à pouvoir être administrée par voie topique, elle sera préférentiellement sous une forme permettant une application facilité telle que une poudre, un lait, une crème, un baume, une huile, une lotion, un gel, une mousse, un gel moussant, une pommade, d'un spray, une pâte, un patch, etc. Alternativement, lorsque les voies d'administration anale ou vaginale sont envisagées, la composition selon l'invention pourra être sous forme de suppositoire, ovule ou capsule.
Lorsque la composition est formulée de manière à pouvoir être administrée sous forme orale elle sera préférentiellement sous forme d'une gomme, d'une pastille, d'un comprimé, d'un sucre cuit, d'un gel à boire, d'une poudre à dissoudre, d'un pansement gastrique, etc.
Les dosages des composés de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, dans les compositions seront notamment déterminés en fonction de la quantité de substance active nécessaire pour obtenir la réponse thérapeutique et/ou cosmétique désirée, en fonction du mode d'administration envisagé et de la durée du traitement désiré.
Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention présente une teneur en sucrose octasulfate de calcium selon la formule générale I comprise entre 0, 1 et 30 % en poids. Préférentiellement la composition selon l'invention, par exemple pour une application topique, comprendra entre 0,5 et 7%, encore préférentiellement entre 0,5 et 5% en poids de sucrose octasulfate de calcium. La composition selon l'invention pourra en outre comprendre au moins un autre principe actif, préférentiellement un autre cicatrisant, un antidouleur, un agent anti radicalaire, un antiseptique et/ou un anti-inflammatoire.
La présente invention porte, en outre, sur des composés selon l'invention ou des compositions selon l'invention pour leur utilisation en tant que médicaments.
La présente invention porte, en outre, sur l'utilisation d'un composé de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, ou d'une composition selon l'invention pour la fabrication d'un médicament.
La présente invention porte, en outre, sur une méthode de traitement comprenant l'administration à un patient en ayant besoin, d'une dose efficace de composés de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, ou compositions selon l'invention
Préférentiellement, les composés de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, ou compositions selon l'invention sont utilisés pour le traitement de la peau, des muqueuses ou des organes, encore préférentiellement pour favoriser la cicatrisation de la peau, des muqueuses ou des organes et/ou pour les protéger des infections microbiennes et/ou pour lutter contre des infections microbiennes et/ou pour lutter contre l'inflammation.
Par « cicatrisation » selon l'invention, on entend notamment les phénomènes de régénération et de consolidation des tissus ou des organes afin de combler une lésion.
Par « favorisation de la cicatrisation » on entend notamment que la cicatrisation se fait de façon plus rapide et/ou plus efficace (absence ou diminution des cicatrices...) en présence du composé ou d'une composition selon l'invention.
Préférentiellement, l'utilisation selon l'invention concernera la cicatrisation des plaies aiguës ou chroniques et des brûlures.
L'expression « plaie aiguë ou chronique » selon l'invention comprend notamment les écorchures, les éraflures, les égratignures, les coupures, les aphtes, les diverses plaies de la sphère buccale, l'acné cicatriciel, les ampoules, les chéilites, l'eczéma, les érythèmes fessiers, les dermatoporoses, les ulcères par exemple gastrique ou de la jambe, les escarres, les plaies du diabétique (en particulier des pieds), les irritations diverses, les dermites ou les cicatrices post chirurgie ou post acte de dermatologie esthétique (laser, épilation, peeling, injection). Le terme « brûlure » selon l'invention comprend les brûlures de toute origine dont les brûlures thermiques, mécaniques, chimiques ou dues aux rayonnements. Les brûlures selon l'invention peuvent notamment être les brûlures dues à la chaleur ou à un coup de soleil, les radiodermites, les cicatrices de cryothérapie, les cicatrices post chirurgie ou post acte de dermatologie esthétique (laser, épilation, peeling).
Par « infection microbienne » on entend toutes les infections cutanées ou des muqueuses qu'elles soient dues à des bactéries, des levures, des champignons ou des virus. Les compositions selon l'invention peuvent être utilisées dans un but préventif pour éviter l'apparition d'une infection microbienne ou à but thérapeutique pour lutter contre une infection microbienne déjà existante.
Par « inflammation » on entend une réaction de défense immunitaire du corps à une agression caractérisée notamment par une rougeur, un gonflement, une sensation de chaleur et de douleur. La présente invention concerne particulièrement le traitement des états inflammatoires de la peau.
La quantité de sucralfate à administrer à un patient dépendra de la pathologie à traiter et du mode d'administration. Par exemple, lorsqu'une application gastrique est envisagée, le sucrose octasulfate de calcium pourra être administré à une dose de 1 à 10 g/jour, préférentiellement de 2 à 6 g/jour.
La présente invention porte, en outre, sur l'utilisation d'un composé de formule (I) dans laquelle 0 < n <4, voire 0 < n <3, ou d'une composition cosmétique selon l'invention pour améliorer l'aspect de la peau.
Par « améliorer l'aspect de la peau» selon l'invention on entend l'amélioration esthétique ou de confort d'un état de la peau et/ou des muqueuses.
La dégradation esthétique de l'état de la peau ou de son confort peut être due par exemple à l'âge, aux conditions extérieures ou aux variations de poids. Par exemple, la composition cosmétique selon l'invention pourra permettre de restaurer la fonction barrière de la peau, l'hydratation de la peau, l'augmentation de son élasticité et/ou de sa tonicité et aussi la réduction des vergetures, de la cellulite ou des rides ainsi que la disparition des taches cutanées.
Alternativement le composé ou la composition selon l'invention pourra être utilisé afin de prévenir le vieillissement cutané. Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif et ne limitent pas la portée de l'invention.
EXEMPLES
Exemple 1 : Préparation et caractérisation du composé de Formule II
1.1 Méthode de préparation du composé de formule II.
Une solution de sucrose octasulfate de potassium (1,50 g ; 1,16 mmol, 1,00 equiv,
99%) dans l'eau (50 ml) est placée dans un ballon de 100 ml. La solution est passée à travers une colonne (Φ 40x500 mm) contenant 250 g de résine échangeuse d'ions
o
d'Amberlite IR 120 H à un débit de 1 ml/min à 0 C. La fraction acide (120 ml ; pH < 1,5) est collectée et neutralisée immédiatement par ajout d'une suspension d'hydroxyde de calcium jusqu'à pH = 8,15. Le mélange résultant, est laissé sous agitation pendant une nuit à température ambiante et à pH = 8,05.
Le mélange est ensuite filtré et 500 ml d'acétone sont ajoutés au filtrat. Le mélange résultant est laissé au repos pour la nuit. Le surnageant est décanté et le sirop restant est dissous dans 15 ml d'eau déminéralisée, et 200 ml d'acétone sont ajoutés à la solution. Le mélange résultant est laissé au repos pendant 3 heures et le surnageant est décanté. Une telle opération est répétée 3 fois. Puis le sirop est dissous dans 30 ml d'eau et le mélange est lyophilisé. Un solide blanc de sucrose octasulfate de calcium est obtenu (0,50 g ; 38%).
Toutes ces étapes ont été réalisées à l'abri de la lumière en enveloppant le milieu réactionnel avec du papier d'aluminium. 1.2 Caractérisation du composé de formule II obtenu
1
Le spectre RMN du composé de formule II obtenu est le suivant: RMN H (D20,
300 MHz, ppm): δ: 4,14-4,44 (m, 9 H); 4,50 (m, 1 H); 4,67 (m, 2 H); 5,04 (d, J = 8,1 Hz, 1 H); 5,73 (d, J= 3,6 Hz, 1 H).
Par ailleurs un dosage du sucrose octasulfate et du calcium contenu dans le composé II obtenu (SOS-Ca) est effectué. Le même dosage est réalisé dans des échantillons témoins ayant une concentration en Ca ou en sucrose octasulfate connue : le CaC12 et le sucrose octasulfate de potassium (SOS-K). Le dosage est réalisé de la manière suivante :
- Solution standard et préparation des échantillons :
7,6 mg de CaCl2 (pureté : 96%) pesés avec précision dans une fiole jaugée de 10 ml et dissous complètement dans une solution aqueuse à 0.05%> en TFA, la concentration finale étant de 0,76 mg/ml.
12,1 mg de SOS-K (teneur en eau : 8.82%>) pesés avec précision dans une fiole jaugée de 10 ml et dissous complètement dans une solution aqueuse à 0.05%> en TFA, la concentration finale étant de 1,21 mg/ml.
16,0 mg de SOS-Ca pesés avec précision dans une fiole jaugée de 10 ml et dissous complètement dans une solution aqueuse à 0.05%> en TFA, la concentration finale étant de 1 ,60 mg/ml. Un échantillon de 7,0 ml est dilué avec une solution aqueuse à 0,05%> en TFA dans une fiole jaugée de 10 ml, pour l'analyse du sucrose octasulfate dans SOS-Ca.
- Analyse par HPLC :
Les échantillons SOS-Ca, SOS-K et Cacl2 ainsi obtenus sont caractérisés par HPLC grâce au matériel et conditions suivants :
Colonne : Atlantis T3 (4,6* 100 mm ; 3,0 μιη), température de la colonne : 30°C, débit : 0,6 ml/min, volume d'injection : 5 μΐ pour l'analyse de Ca dans SOS-Ca, 20 μΐ pour l'analyse de SOS dans SOS-Ca, Détection : ELSD (température « tube de transfert » = 50°C ; débit gazeux = 2,0 1/min, phase mobile A : 0,05 %> TFA/Eau, phase mobile B : 0,05 %/ Acétonitrile (gradient : T0 A : 100%, T2 A : 100%, T5 A :5%>, B :95%). Les résultats obtenus quant à la teneur en calcium et en sucrose octasulfate sont représentés dans les tableaux 1 et 2 suivants :
Tableau 1 : Estimation de la concentration en Ca des échantillons SOS-Ca en fonction d'un standard CaCl2.
Le calcul de la concentration en Ca dans l'échantillon de SOS-Ca permet d'obtenir une valeur de 3,2443 mmol/g.
Tableau 2 : Estimation de la concentration en sucrose octasulfate des l'échantillon
SOS-Ca en fonction d'un standard SOS-K.
Le calcul de la concentration en SOS dans l'échantillon de SOS-Ca permet d'obtenir une valeur de 0,8237 mmol/g.
Comme on peut le constater, le ratio calcium / sucrose octasulfate dans le composé de formule II SOS-Ca obtenu est de 3,2443/0,8237, soit de 3,94 ce qui correspond bien au ratio attendu.
Exemple 2 : Effet du sucrose octasulfate de Ca sur la migration des cellules La migration des cellules épithéliales est une étape importante du développement et des processus de réparation tissulaire, tels que l'embryogenèse et la cicatrisation.
Lors de la cicatrisation cutanée et dans les affections inflammatoires chroniques dermatologiques, les kératinocytes sont "activés" pour entreprendre le processus de migration. Les cellules voient alors leur phénotype influencé par les interactions avec la matrice extracellulaire d'une part et par les interactions cellules-cellules, d'autre part. Les kératinocytes de l'assise basale des berges d'une plaie, migrent sur la plaie et la recouvrent.
Afin d'évaluer l'impact du sucrose octasulfate de calcium sur la migration cellulaire de lignées de kératinocytes HaCAT, des études ont été réalisées à l'aide du Kit de migration cellulaire Oris Cell Migration Assay (Platypus Technologies). Cette étude a été menée en parallèle avec le sucrose octasulfate de potassium, et le sucrose octasulfate de sodium pour comparaison.
Matériels et méthodes
-Matériel biologique
La lignée de kératinocytes utilisée est la lignée de kératinocytes humains HaCaT, spontanément immortalisée. Cette lignée est fréquemment citée comme modèle de référence dans la littérature.
- Protocole de migration cellulaire
Le protocole utilisé pour l'étude de la migration cellulaire repose sur l'utilisation d'un kit 96 puits, Oris Cell Migration Assay (Platypus Technologies - TEBU), permettant la miniaturisation et la quantification de ce processus cellulaire.
Le principe de ce test consiste à étudier la migration cellulaire vers le centre du puits de la plaque de 96 puits. Il consiste à placer un stoppeur dans des puits, afin de créer une zone de détection de 2 mm de diamètre. Puis de retirer les stoppeurs une fois que les cellules ont bien adhéré à la surface autour de ceux-ci, et ainsi, de permettre aux cellules de migrer vers la zone de détection. Les plaques sans les stoppeurs et avec les actifs sont mises à incuber à 37°C pendant 24 heures dans du DMEM 0% SVF. On analyse ensuite la quantité de cellules situées dans la zone où il y avait le stoppeur, afin d'évaluer la migration des cellules. Un cache permet de visualiser et de comptabiliser uniquement les cellules situées dans cette zone. Pour chaque condition, la moyenne de 6 à 8 puits est réalisée.
Les produits testés dans cette étude sont le SOS-Ca obtenu dans l'exemple 1 à 10μΜ, du SOS-K à 10μΜ (Sucrose octasulfate de potassium), du SOS-Na à 10μΜ (Sucrose octasulfate de sodium) et de l'EGF en tant que témoin positif. Un témoin négatif est réalisé dans lequel aucun composé n'est ajouté au milieu de culture. Résultats
L'effet des 3 sucroses a été testé sur la migration des cellules HaCat.
Les résultats sont quantifiés grâce à la formule suivante :
IF traité
IF témoin 0% SVF
- en IF (Intensité de Fluorescence, proportionnelle à la quantité des cellules ayant migrées).
- en pourcentage d'activité par rapport au témoin 0% SVF :
Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau 3.
MOY IF
% activité / témoin
Tableau 3 : Effet des 3 sucroses sur la migration des kératinocytes. *** p<0.001 par rapport au témoin 0%SVF.
De ce tableau on peut déduire que :
- L'EGF à 33 ng/ml, contrôle positif de nos expériences, induit la migration (et la prolifération) des kératinocytes de façon importante et significative.
- A 10 μΜ, le sucrose octasulfate de potassium (SOS-K) et le sucrose octasulfate de sodium (SOS-Na) n'induisent pas la migration des kératinocytes.
- A 10 μΜ, le sucrose octasulfate de calcium (SOS-Ca) induit de façon statistiquement significative la migration des kératinocytes.
Comme on peut le constater, le SOS-Ca permet d'induire signifïcativement la migration des kératinocytes contrairement au SOS-K et SOS-Na.
Exemple 3 : Effet du sucrose octasulfate de Ca sur la différenciation des cellules L'épiderme joue un rôle protecteur majeur en procurant une barrière chimique et mécanique pour le corps. Elle assure le maintien de l'étanchéité, à savoir la fonction barrière cutanée. Les cornéocytes, kératinocytes de la couche cornée, associés à une matrice lipidique, assurent en grande partie cette fonction. Néanmoins les couches plus profondes interviennent dans la mise en place des acteurs de cette fonction. La capacité de différenciation des kératinocytes de l'épiderme va garantir la mise en place d'une barrière de type perméabilité sélective fonctionnelle. Le programme de différenciation des kératinocytes est régulé de manière spatiotemporelle, évoluant des couches les plus profondes de l'épiderme, couche basale la moins différenciée, vers la couche cornée, stade ultime de différenciation des kératinocytes en cornéocytes. D'un point de vue protéique, la différenciation épidermique est majoritairement axée sur l'évolution de protéines de structure que sont les kératines et qui contribuent à l 'intégrité architecturale de l'épiderme. Leur expression varie en fonction du degré de maturation des kératinocytes. La kératine 1 basique et la kératine 10 acide, sont des marqueurs précoces de la différenciation kératinocytaire, présents dès la couche basale de l'épiderme. L'expression d'autres marqueurs de ce processus biologique, plus tardifs, peut être suivie telle que celle des protéines de l'enveloppe cornée, comme la cornéodesmosine (CDSN), les small prolin rich protein 1 (SPRR1A et SPRR1B), l'involucrine (IVL), ainsi que certaines enzymes majeures à l'origine du pontage des protéines de structure entre elles et avec des lipides kératinocytaires, les transglutaminases, telles que la transglutaminase 1 (TGM1) ou 3.
La formation de la matrice fibreuse présente dans les cornéocytes est initiée au niveau de la transition entre kératinocytes granuleux et les cornéocytes. La loricrine (LOR) est une protéine de structure contenant des résidus glutamine et lysine permettant la fixation avec d'autres protéines de l'enveloppe cornée. Les molécules basiques de filaggrine (FLG) produites à partir de son précurseur la profilaggrine (stockée dans les granules de kératohyaline) s'associent aux filaments de cytokératine, permettant ainsi leur agrégation. La filaggrine peut être ensuite déiminée par les enzymes Peptidyl Arginine Deiminase (PAD) et notamment PAD 1 et PAD3. La filaggrine déiminée, acide, se détache alors des filaments intermédiaires avant d'être complètement dégradée, engendrant les acides aminés qui constituent le facteur naturel d'hydratation (FNH).
Parallèlement, la synthèse et le transport de lipides kératinocytaires sont à l'origine du ciment lipidique intercornéocytaire indispensable à la barrière cutanée, dont la formation représente la phase ultime de la différenciation épidermique terminale. Cette matrice lipidique extracellulaire fournit la principale barrière aux mouvements transcutanés d'eau et d'électrolytes. Ainsi un certain nombre d'enzymes et de transporteurs lipidiques voient leur expression kératinocytaire augmentée avec la différenciation. Ce ciment résulte d'un équilibre entre trois espèces lipidiques, le cholestérol, les acides gras libres et les céramides. Ces lipides dérivent de glucosylcéramides, sphingomyeline, cholestérol et de phospholipides synthétisés dans les couches épineuses et granuleuses. Ils sont transportés via les corps lamellaires, petites vésicules sécrétoires qui fusionnent dans la couche granuleuse et déversent leur contenu à la jonction stratum granulosum/stratum corneum. En plus de ces précurseurs lipidiques, les corps lamellaires contiennent de nombreuses enzymes incluant des hydrolases lipidiques comme la Sphyngomyélinase acide (aSmase), la beta- glucocerebrosidase (GBA) ou les plospholipases A2 (sPLA2) ainsi que des lipases acides et neutres. Co-délivrés avec les précurseurs lipidiques dans les espaces extracellulaires, ces enzymes convertissent respectivement, la sphingomyeline en céramide, la beta-glucocérébroside en céramide et les phospholipides en acides gras libres et glycérol. ELOVL4 (elongation of very long chain fatty acids-4) et la Sphingolipid C4-hydroxylase/delta-4 desaturase (DESG2) interviennent aussi dans la synthèse des céramides et donc sur la fonction barrière de la peau. SULT2B 1 (cholestérol sulfotransferase) permet la sulfonatation du cholestérol dans les couches supérieures de l'épidémie. Finalement FABP5 (fatty acid binding protein) participe au transport et au métabolisme des acides gras.
La fonction barrière de la peau inclut aussi une défense contre les microorganismes. L'épithélium joue un rôle actif dans les défenses innées de l'hôte. Les systèmes antimicrobiens cutanés reposent entre autres sur la présence de certains lipides de surface (acides oléique et palmitoléique du sébum et de certaines protéines constitutives qui sont de plus en plus exprimées en fonction de l'état de différenciation des kératinocytes (R Ase 7, proteinase inhibiteur 3). La R ase 7 et la protéinase inhibiteur 3 (PI3 ou elafïn) possèdent des activités antimicrobiennes. Rnase 7 est un membre de la famille des Rnase A et possède une activité antimicrobienne à large spectre. Elle est ainsi capable d'agir contre des bactéries Gram + ou Gram -.
De plus, l'acidification de la surface épidermique joue un rôle important dans la défense antimicrobienne cutanée. La peau agit ainsi non seulement comme une barrière physique, mais aussi comme une barrière chimique. Il existe également une composante adaptative de l'immunité innée reposant sur la sécrétion inductible de peptides antimicrobiens. Ils possèdent des activités antimicrobiennes directes contre des bactéries variées, des virus et des champignons avec la capacité d'inhiber leur croissance. En plus, de par leur action chimiotactique, ces peptides antimicrobiens font le lien entre réponse immunitaire innée et adaptative. Ils jouent un rôle important comme médiateurs de l'inflammation en ayant des effets sur les cellules épithéliales et inflammatoires, en influençant la prolifération cellulaire, la cicatrisation, la production de cytokines, chimiokines et la chimiotaxie. Les peptides antimicrobiens sont généralement synthétisés dans les couches supérieures de la couche épineuse et la couche granuleuse, mais ils sont actifs dans la couche cornée où ils sont libérés. Leur mode d'action consiste à rompre la membrane plasmique des microbes infectieux ou à pénétrer dans le microorganisme afin d'interférer avec le métabolisme intracellulaire. Les peptides antimicrobiens les plus étudiés dans la peau sont les β-défensines et les cathélicidines.
Les β-défensines humaines constituent la classe maj eure des peptides antimicrobiens retrouvés dans les épithéliums humains et quatre d'entrés elles ont été identifiées dans la peau, hBD 1-4. Bien qu'elles appartiennent à la même famille, elles sont régulées par des voix différentes.
La β-défensine 2 humaine (hBD-2 ou DEFB4), un peptide de 4 kDa se liant à l'héparine est l'un des principaux peptides antimicrobiens cutanés. Seulement bactério statique face à S. aureus, hBD-2 possède une activité antimicrobienne essentiellement dirigée contre les bactéries à Gram négative.
La β-défensine 3 (hBD-3), un peptide antimicrobien de 5 kDa présente une activité antimicrobienne à large spectre incluant Staphylococcus aureus.
La psoriasine (S100A7), appartient à la famille des protéines S 100, tient son nom du fait qu'elle fut découverte à partir d'extraits de squames de psoriasis. Ce peptide de 1 1 kDa est notamment produit dans les zones cutanées où la colonisation bactérienne est abondante ainsi que dans les zones inflammatoires. Elle est principalement dirigée contre Escherichia coll.
L'effet du sucrose octasulfate de calcium et des sucroses octasulfates de potassium et de sodium sur la régulation de cibles moléculaires impliquées dans les processus de différenciation kératinocytaire a été évalué. Pour cela des kératinocytes normaux humains (NHK) ont été mis en présence des différents produits à tester et l'expression de différentes protéines impliquées dans la mise en place des structures protéiques de l'enveloppe cornée, mais aussi dans la synthèse lipidique ou les activités antimicrobiennes, a été estimée.
- Matériel biologique
La lignée de kératinocytes utilisée est la lignée de kératinocytes humains primaires ou NHKs préparée à partir de lambeaux cutanés issus de déchets opératoires de chirurgie esthétique (diminution mammaire).
- Protocole expérimental
Les produits à tester sont incubés avec les kératinocytes pendant 72 heures. Les cellules sont ensuite récupérées et une analyse de l'expression de gènes cibles impliqués dans la différenciation épidermique par PCR en temps réel est réalisée.
Les produits testés sont le SOS-Ca à 10 μΜ ou 30 μΜ, le SOS-Na à 10 μΜ ou 30 μΜ, le SOS-K à 10 μΜ ou 30 μΜ, du CaCl2 à l ,5mM en tant que témoin positif. Un témoin négatif est réalisé dans lequel aucun produit n'est ajouté au milieu de culture.
Résultats : Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau 4.
Marqueurs de différenciation des 10 μΜ 30μΜ 1,5 mM kératinocytes SOS-K SOS-Na SOS-Ca SOS-K SOS-Na SOS-Ca Calcium
Calmodulin-like5 CALML5 88 56 211 196 184 266 220
Filaggrin FLG 156 135 225 204 241 562 230
Involcurin IVL 205 158 283 366 367 761 478
Loricrin LOR 190 79 202 300 218 1117 437
Peptidyl arginine
PAD11 133 108 139 105 174 270 243 deiminase, type I
Small proline-rich
SPRR1A 207 187 277 388 350 754 625 protein 1A
Small proline-rich
SPRR1B 151 170 184 256 264 581 512 protein lB(cornifm)
Corneodesmosin CDSN 127 95 138 152 142 198 174
Transglutaminase 1 TGM1 90 81 82 139 133 204 177
Synthèse des lipids
Fatty acid binding
FABP5 128 122 134 189 192 379 334 protein 5
Elongation of very
long chain fatty ELOVL4 148 117 147 169 147 188 165 acids
Degenerativatocyte
homolog 2 , lipid DEGS2 104 62 96 143 258 283 340 desaturase
Sulfotransferase
family, cytosolic, SULT2B1 88 84 102 150 138 256 317 2B, member 1
Desquamation
Kallikrein-related
KLK7 134 131 159 171 191 256 438 peptidase 7
Peptide anti-microbien, immunité innée
Defensin, beta 4 DEFB4 224 207 188 208 235 383 778
Peptidase inhibitor
PB 90 133 306 124 182 1989 5825 3, skin-derived
S 100 calcium
S100A7 49 49 133 50 59 205 884 binding protein A7 Tableau 4 : expression de gènes impliqués dans la différentiation cellulaire dans une lignée de kératynocyte NHKs après incubation avec du SOS-Ca à 10 μΜ ou 30 μΜ, du SOS-Na à 10 μΜ ou 30 μΜ, du SOS-K à 10 μΜ ou 30 μΜ ou du CaCl2 à l ,5mM en pourcentage de l'expression des différents ARNm par rapport au témoin négatif.
Comme on pouvait s'y attendre le calcium à 1.5 mM, contrôle positif des expériences, a bien induit l'expression des gènes impliqués dans la différenciation des kératinocytes ainsi que dans la synthèse de peptides antimicrobiens.
Le SOS-Ca a induit fortement l'expression des marqueurs de différentiation. Au contraire les SOS-K et SOS-Na à 30 μΜ ont induit la différenciation des kératinocytes de façon modérée. On peut constater que, à 30 μΜ, le SOS-K et le SOS-Na ont induit respectivement 8 et 11 cibles alors que le SOS-Ca en a induit 17. De plus, l'induction de l'expression de l'ensemble des gènes est plus forte par le SOS-Ca qu'avec les deux autres SOS.
Ainsi le SOS-Ca a induit l'expression des marqueurs protéiques de la différenciation, de protéines impliquées dans la synthèse des lipides (tel que KLK7), impliquées dans la desquamation, et a induit l'expression de peptides antimicrobiens comme hBD2 (DEFB4), PB et la psoriasine (S100A7).
En induisant l'expression de la fïlaggrine et de Padil, le SOS-Ca participe aussi à la synthèse de facteur naturel d'hydratation.
Par ailleurs, il est à noter que l'effet du SOS-Ca ne peut pas être imputé à la seule contribution de la partie Ca (équivalente à 120 μΜ). Cette concentration en calcium, 10 fois inférieure à celle du contrôle positif, n'est pas suffisante pour induire les marqueurs de la différenciation des cellules dans les conditions expérimentales. Par ailleurs, le tableau montre que le SOS-K et le SOS-Na n'induisent pas de façon dose dépendante et significative tous les marqueurs de cette différenciation. En conséquence, cette différenciation est donc bien induite, de façon inattendue, par la synergie du SOS et du Ca présents dans le SOS-Ca. De plus, les résultats montrent que les propriétés du SOS- Ca, notamment sur l'expression des marqueurs de la différenciation des kératinocytes, sont supérieures à celles obtenues avec le contrôle positif Ca à 1.5 mM. Le SOS-Ca joue donc un rôle très important dans la différenciation des kératinocytes et active la fonction barrière physique protéique, lipidique et antimicrobienne ainsi que l'hydratation cutanée. Exemple 4 : Effet du sucrose octasulfate de Ca sur la synthèse d' acide hyaluronique
L'acide hyaluronique est un composant de la matrice extracellulaire pouvant être synthétisé par les kératinocytes et ayant de nombreuses fonctions. En particulier, l'acide hyaluronique est impliqué dans le maintient de l'hydratation cutanée, dans la prolifération et la stimulation de la motilité cellulaire, pendant la ré-épithélialisation. La quantité d'acide hyaluronique présente au niveau cutané diminue avec l'âge ce qui est en partie responsable du vieillissement cutané.
L'effet du sucrose octasulfate de calcium sur la synthèse d'acide hyaluronique a été testé.
-Matériel biologique
La lignée de kératinocytes utilisée est la lignée est la lignée de kératinocytes humains primaires ou NHKs, préparée à partir de lambeaux cutanés issus de déchets opératoires de chirurgie esthétique (diminution mammaire).
-Protocole expérimental
Les produits à tester sont incubés avec les kératinocytes pendant 72 heures. Les surnageants de culture sont ensuite récupérés et une analyse de l'expression de l'acide hyaluronique est réalisée par le kit ELISA Duoset Hyaluronan (ReD Systems) selon les instructions du fournisseur. Les produits testés sont le SOS-Ca à 10 μΜ, le SOS-Na à 10 μΜ, le SOS-K à 10 μΜ, et l'acide retinoïque à 0,1 μΜ en tant que témoin positif. Un témoin négatif est réalisé dans lequel aucun produit n'est ajouté au milieu de culture.
Résultats
Les valeurs de la quantité d'acide hyaluronique obtenues sont représentées sur la Figure 1 en pourcentage d'induction par rapport au témoin négatif non traité.
Comme on pouvait s'y attendre, l'acide rétinoïque à 0.1 μΜ, témoin positif, a induit la synthèse d'acide hyaluronique de 80%. Les SOS-K et Na n'induisent pas une augmentation de la synthèse d'acide hyaluronique.
En revanche le SOS-Ca à 10 μΜ a bien induit la synthèse d'acide hyaluronique de 38%. Cette induction est statistiquement significative par rapport au témoin non traité.
Le SOS-Ca joue donc un rôle important dans l'induction de la synthèse de l'acide hyaluronique et donc dans l'hydratation et la prévention du vieillissement cutané.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de formule générale I
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 3
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3.
2. Composé selon la revendication 1, caractérisé ce que n = 3, 2, 1 ou 0.
3. Procédé de préparation des composés de formule I
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4, préférentiellement n=4
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
a. mise en contact de la forme acide du sucrose octasulfate en solution avec un sel de calcium pour former du sucrose octasulfate de calcium, et b. précipitation du sucrose octasulfate de calcium ainsi obtenu.
4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la forme acide du sucrose octasulfate en solution est obtenue par les étapes suivantes,
al . dissolution dans une solution d'un sel de sucrose octasulfate,
a2. désalifïcation de la solution de sel de sucrose octasulfate ainsi obtenue pour former la forme acide du sucrose octasulfate en solution.
5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel le sel de sucrose octasulfate est le sucrose octasulfate de potassium ou le sucrose octasulfate de sodium.
6. Procédé selon la revendication 4 ou 5, dans lequel l'étape de désalifïcation de la solution de sel de sucrose octasulfate en solution est réalisée par passage de ladite solution sur une colonne échangeuse d'ions.
7. Procédé selon l'une des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que ledit sel de calcium est un sel minéral de calcium, choisi dans le groupe comprenant le Ca(OH)2, CaCl2, CaBr2, Cal2, Ca(N03)2 et Ca(BF4)2, ou un sel organique de calcium, choisi dans le groupe comprenant le Ca(CH3C02)2, Ca(CF3C02)2, Ca3(C6H507)2 et Ca(CH30)2.
8. Composé de formule (I),
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4,
n est un nombre entier Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, pour son utilisation en tant que médicament.
9. Composé selon la revendication 8, pour favoriser la cicatrisation.
10. Composé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il s'agit de la cicatrisation des brûlures et plaies aiguës ou chroniques.
11. Composé selon la revendication 10, caractérisé en ce les brûlures et plaies aiguës ou chroniques sont dues à une brûlure par la chaleur ou un coup de soleil, une radiodermite, une irritation d'origine diverse, une dermite, une écorchure, une éraflure, une égratignure, une coupure, un ulcère par exemple de jambe ou gastrique, un escarre, une plaie du diabétique, un aphte, une plaie de la sphère buccale d'origine diverse, de l'acné cicatriciel, une cicatrice de cryothérapie, une cicatrice post chirurgie ou post acte de dermatologie esthétique, une ampoule, une chéilite, de l'eczéma, un érythème fessier ou une dermatoporose.
12. Composé selon la revendication 8, pour la prévention ou le traitement des infections microbiennes.
13. Utilisation d'un composé selon l'une des revendications 1 à 2,
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4,
n est un nombre entier Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, pour la préparation d'une composition cosmétique.
14. Composition pharmaceutique comprenant au moins un composé selon la revendication 1 ou 2,
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4,
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
15. Composition pharmaceutique selon la revendication 14,
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4,
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, contenant au moins un autre principe actif.
16. Composition cosmétique comprenant au moins un composé selon la revendication 1 ou 2,
Formule générale (I)
dans laquelle :
0 < n < 4,
n est un nombre entier
Y représente OH, Cl, Br, I, N03, BF4, C6H507, CH3C02, CF3C02 ou -OCH3, et un excipient cosméto logiquement acceptable.
17. Utilisation d'une composition selon la revendication 16 pour améliorer l'état de la peau.
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