DK170701B1 - Bis(DMF)- og mono(DMF) solvater af et beta-lactamantibiotikum og fremgangsmåder til fremstilling af sådanne solvater - Google Patents

Description

i DK 170701 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte solvat-former af et Ø-lactam-antibiotikum og fremgangsmåder til deres fremstilling, nærmere bestemt nye krystallinske bis(DMF)- og mono(DMF)-former af et Ø-lactam-antibiotikum 5 med formlen I

NHa H

.AAA Λ · r

io ! J I Π L

\/ </ \ /

Cooh 15 som er et kraftigt, peroralt aktivt middel. Dette antibiotikum er f.eks. beskrevet af J. Hashimoto et al, i U.S. patent nr. 4 335 211, udstedt 15. juni, 1982. For nemheds skyld, vil der i det følgende blive henvist til forbindelsen med formlen I som LY163892.

20

Den foreliggende opfindelse er rettet på det krystallinske bis(N,Ν'-dimethylformamid)-solvat af LY163892, og det krystallinske mono(N,Ν'-dimethylformamid)-solvat af LY163892. Disse solvater vil i det følgende blive omtalt 25 som "bi s (DMF)" og "mono (DMF) "-solvatet. Herved skal forstås, at disse forkortelser refererer til den krystallinske eller microkrystallinske form af de to solvater. Forbindelserne er ejendommelige ved det i krav 1 og 3 omhandlede .

30

Bis(DMF)-, og mono(DMF)-solvaterne er velegnede mellemprodukter ved fremstilling af LY163892 generelt og specielt for monohydratformen af LY163892. LY163892 monohydrat ("monohydrat") er et farmaceutisk fordelagtigt hydrat af 35 LY163892. Monohydratet udgør en stabil, forholdsvis let håndterbar form af LY162892, en forbindelse, som hidtil har været både vanskelig at oprense og opnå i en farma- 2 DK 170701 B1 ceutisk fordelagtig form.

Et aspekt ved opfindelsen angår det krystallinske bis-(DMF)-solvat af LY163892. Formlen for LY163892 er angivet 5 nedenfor i formel I. Opfindelsen angår mere specielt kry- * stallinsk LY163892 bis(DMF) med det nedenfor i tabel 1 angivne røntgen-pulver-difraktionsmønster.

Endnu et aspekt ved opfindelsen er det krystallinske mo-10 no(DMF)-solvat af LY163892. En foretrukken form af mono-(DMF)-solvatet er en krystallinsk forbindelse med det i tabel 3 nedenfor angivne røntgen-pulver-difraktionsmønster.

15 Forbindelserne ifølge opfindelsen er som nævnt mellemprodukter, der skal anvendes ved fremstilling af monohydra-tet af LY 163892. Disse slutforbindelser udviser betydeligt ændrede damptryksisothermer i forhold til hidtil kendte former af forbindelserne. Dette er af betydning 20 ved fremstillingen af slutproduktet, da processen kan forenkles med hensyn til krav til fugtighedskontrol, og endelig opnås ved anvendelsen af mellemprodukterne ifølge opfindelsen mere lagerstabile slutprodukter.

25 For at dokumentere fordelene ved forbindelserne Ifølge opfindelsen i forhold til kendte LY163892 forbindelser blev optaget damptryks isothermkurver af monohydratformen af slutforbindelsen (kurve 1), i forhold til en kendt form for slutforbindelsen (kurve 3) og endelig af en tri-30 hydratform af LY 163892 (kurve 2).

35

V

3 DK 170701 B1 Z0 i ' ---------- 1 2

5 S

1 jr* >- 10- \ O ^ 10 5~ jj χ __.__ O-f-- '""I---1---P 1-1-'- O 20 40 60 80 100 ^ % relativ fugtighed

Af ovenstående kurver fremgår de nævnte fordele ved den krystallinske monohydratform af LY163892 (kurve 1) i forhold til kurven for en forbindelse, der er en kendt form 20 af LY163892 (kurve 3). Yderligere er som sammenligning medtaget en kurve for trihydratformen af forbindelsen (kurve 2).

Kurverne viser således, at det krystallinske monohydrat 25 (1) udviser en næsten fuldstændig stabil isotherm fra 20 til 80% relativ fugtighed, med de heraf allerede nævnte fordele ved den industrielle fremstilling af LY163892 holdige farmaceutiske præparater.

30 Opfindelsen angår de krystallinske bis(DMF)-, og mono-(DMF)-solvater af forbindelsen med formlen I: NHs h AAA a

35 \/ 1 I

COOH

4 DK 170701 B1 I de omhandlede solvater med formlen I har C-2'-asymme-tricenter R-absolut konfiguration. Endvidere omfatter de omhandlede solvater den amfotere form af forbindelsen med formlen I.

5

En foretrukken udførelsesform af opfindelsen er et krystallinsk bis(DMF)-solvat af LY163892, som udviser det i tabel 1 angivne røntgenpulver-difraktionsmønster: 10 Tabel 1

Bis(DMF)-solvat d 1/1λ 15 15,23 0,01 12,27 1,00 10,91 0,04 7,75 0,01 5,57 0,02 20 5,37 0,05 4,84 0,02 4,74 0,09 4,44 0,03 4,11 0,30 25 3,80 0,03 3,62 0,03 3,36 0,01 3,08 0,04 2,86 0,01 30 2,73 0,02

Difraktionsmønstret i tabel 1 blev opnået med nikkelfiltreret kobberstråling (Cu:Ni) med bølgelængden λ = 1,5406 Å. De interplanarer mellemrum er angivet i kolonnen mær-35 ket "d" og er i Ångstrøm, og de relative intensiteter er angivet i kolonnen mærket 5 DK 170701 B1

En yderligere foretrukken udførelsesform er det krystallinske mono(DMF)-solvat af LY163892, som udviser det nedenfor i tabel 3 angivne røntgenpulver-difraktions-mønster: 5

Tabel 2

Mono(DMF)-solvat 10 d Ι/Ιχ 14,87 0,07 11,20 1,00 15 9,911 0,36 8,78 0,03 7,17 0,27 5,66 0,10 5.41 0,09 20 4,82 0,35 4,69 0,53 4,62 0,40 4.41 0,30 4,30 0,21 25 3,62 0,57 3,59 0,37 3,28 0,12 3,09 0,05 30 De i tabel 2 angivne røntgendata blev registreret under anvendelse af samme instrumentparametre, som anvendtes til registrering af data i tabel 1, bortset fra af λ =1,5418 Å.

35 Bis(DMF)-solvatet af LY163892 kan let fremstilles ved suspendering af en hvilken som helst form for LY163892, f.eks. anhydratet, ethanolsolvatet e.lign., i vandig DMF

6 DK 170701 B1 under anvendelse af en opløsning. En opløsning opnås oftest ved tilsætning af syre, typisk fortyndet saltsyre, skønt opløsning også kan udføres ved basetilsætning. Det ønskede bis(DMF)-solvat udfældes ved indstilling af pH i 5 opløsningen til ca. 5-6 ved tilsætning af syre eller base efter behov, ved en temperatur i området fra ca. 45 °C til ca. 55 °C, fortrinsvis ved ca. 50 °C. Det udfældede faste stof opsamles, typisk ved filtrering, og vakuumtørres til opnåelse af det omhandlede bis(DMF)-solvat.

10

De to solvater ifølge opfindelsen kan også fremstilles ved acylering af en 7Æ-amino("nucleus") forbindelse med formlen II

15 H*Y/*xr A\ h I 11 COORn 20

hvor R^ er en carboxy-beskyttelsesgruppe, med et acyle-ringsmiddel med formlen III

_ nhrs

25 OAr 1 XXX

— o hvor X er en fraspaltelig gruppe, og er hydrogen eller en aminobeskyttelsesgruppe, i DMF efterfulgt af fjernelse 30 af beskyttelsesgruppen. Nucleusforbindelsen og dens syn- * tese er beskrevet i U.S. patent nr. 4 734 494, der indgår i den foreliggende beskrivelse som reference.

*

Carboxybeskyttelsesgruppen R^ i formlen II er en konven-35 tionel carboxybeskyttelsesgruppe og fortrinsvis en, som ikke er sterisk hindret. Eksempler på sådanne grupper er alkyl, benzyl og substituerede benzylgrupper, såsom 4- 7 DK 170701 B1

methoxybenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-methylbenzyl, 3,5-di-methylbenzyl og 4-chlorbenzyl; silylgrupper, såsom en trialkylsilylgruppe (trimethylsilyl); og halogen-substituerede alkylgrupper, såsom 2,2,2-trichlorethyl-, 2,2,2-5 tribromethyl-, og 2-iodethylgrupperne. En foretrukken estergruppe er en benzyl- eller en substitueret benzyl-estergruppe. Aminobeskyttelsesgruppen i formlen III

vælges blandt enten carbamaterne, såsom t-butoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl, eller enaminerne.

10

Acyleringen af p-nitrobenzylnucleusforbindelsen (R^ para-nitrobenzyl) finder fortrinsvis sted i afkølet (f.eks. -20 °C) DMF. Acyleringsmidlet, et aktiveret derivat af 2-(R)-2-phenyl-2-aminoeddikesyre, sættes til det 15 afkølede DMF. Et foretrukkent acyleringsmiddel er en forbindelse med formlen IV

,A.

20 Na+ ? χ CH3 25

Denne forbindelse kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge Dane et al. in Anqew. Chem., Vol. 74, 873 (1962).

Reaktionsopløsningen afkøles, og når IV er acyleringsmid-30 let, tilsættes i hurtig rækkefølge methansulfonsyre, di-methylbenzylamin og methylchlorformiat. Opløsningen omrøres og holdes ved en meget lav temperatur (ca. -45 °C), hvorefter pNB-esteren af nucleusforbindelsen tilsættes under omrøring. Reaktionsblandingen omrøres ved lav tem-35 peratur (f.eks. -45 °C), indtil acyleringsreaktionen er i det væsentlige fuldstændig (bestemt ved konventionelle metoder, såsom tyndtlagschromatografi). Blandingen opvar- 8 DK 170701 B1 mes derefter langsomt til ca. 0 °C, og reagenserne til fjernelse af amino- og carboxybeskyttelsesgrupperne (såsom vand, koncentreret saltsyre, og zinkstøv til pNB-esteren) tilsættes langsomt under opretholdelse af opløs-5 ningens oprindelige temperatur. Opløsningen omrøres ved stuetemperatur, indtil omsætningen er fuldstændig. I det tilfælde, hvor var pNB-esteren, hæves pH (f.eks. til 2,3) ved tilsætning af en base, såsom triethylamin, og den resulterende zinkremanens fjernes ved filtrering. pH 10 forøges gradvist indtil en hvid suspension er dannet, og pH forbliver stabil uden tilsætning af base (typisk omkring pH 5,6). (Blandingen kan podes med LY163892 ved ca. pH 4,6 for at inducere udkrystallisation). Den faste fase i suspensionen opsamles ved filtrering. Den våde filter-15 kage suspenderes i en 90:10 blanding af 9:1 DMF/H20, og der opløses med koncentreret saltsyre. Opløsningen afkøles, og pH hæves trinvis med en base (triethylamin), indtil en suspension dannes, og opløsningens pH er stabil ved yderligere tilsætninger af base (f.eks. til et pH på 20 ca. 5,6). Krystallerne opsamles igen ved filtrering og tørres til opnåelse af bis(DMF)-solvatet.

Alternativt kan bis(DMF)-solvatet fremstilles ud fra en koncentreret DMF-opløsning af mono(DMF)-solvat. Specifikt 25 tilsættes "antiopløsningsmiddel" (fortrinsvis acetroni- tril) i sammen volumen som den koncentrerede DMF-opløsning, og blandingen afkøles (f.eks. til 0 °C). Det faste bis(DMF)-bundfald opsamles ved filtrering som ovenfor.

30 Metoderne til acylering af 7 Ø-aminoforbindelserne med formlen II med en acylsidekæde er som metoderne for acylering af 6-amino-penicillansyre, 7-aminodesacetoxycepha-losporansyre og 7-aminocephalosporansyre. En metode er simpelthen at kombinerer en 75-amino-nucleus med et syre-35 chlorid eller syrebromid under tilstedeværelse af et syrefjernende middel. Syrechloridet eller syrebromidet kan dannes in situ. En anden metode er at kombinere en 9 DK 170701 B1 70-amino-nucleus med den frie carboxylsyreform af sidekæden (eller dens syresalt) og et kondensationsmiddel. Egnede kondensationsmidler omfatter N,N'-disubstituerede carbodiimider, såsom Ν,Ν'-dicyclohexyl-carbodiimid, N,N'-5 diethylcarbodiimid, N,N*-di(n-propyl)-diallylcarbodiimid, N,Nf-bis(p-dimethylamino-phenyl)carbodiimid, N-ethyl-N1-(4''-ethylmorpholinyl)-carbodiimid og lignende. Andre egnede carbodiimid-kondensationsmidler er beskrevet af Sheehan i US patent, nr. 2.938 892 og af Hofman et al i 10 US patent nr. 3 065 224. Azolider, såsom N,N'-carbonyldi-imidazol og N,N’-trionyldiimidazol, kan også anvendes som kondensationsmidler. Dehydratiseringsmidler, såsom phos-phoroxychlorid, alkoxyacetylener og 2-halogenpyridinium-salte (såsom 2-chlorpyridiniummethyliodid, 2-fluorpyridi-15 niummethyliodid, o. lign.) kan anvendes til at koble den frie syre eller dens syresalt med en 75-amino-nucleus.

Ved en anden acyleringsmetode omdannes den frie carboxylsyreform (eller det tilsvarende salt) af acylsidekæden 20 først til det tilsvarende aktive esterderivat, som derefter anvendes til at acylere nucleusforbindelsen. Det aktive esterderivat dannes ved forestering af den frie syreform med sådanne grupper som p-nitrophenol, 2,4-dini-trophenol, trichlorphenol, pentachlorphenol, 2-chlor-4,6-25 dimethoxytriazen, N-chlorsuccinimid, N-chlormaleinimid, N-chlorphthalimid, 1-hydroxy-lH-benzotriazol eller 1-hy-droxy-6-chlor-lH-benzotriazol. De aktive esterderivater kan også været blandede anhydrider, som dannes med sådanne grupper som methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, isobut-30 oxycarbonyl, trichlormethylcarhonyl og isobut-2-ylcarbo- yl, og carboxylsyren af acylsidekæde. De blandede anhydrider syntetiseres ved acylering af carboxylsyre i acylsidekæden.

35 Alternativt kan en 7 0-amino-nucleus acyleres med N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinolin (EEDQ) derivatet af acylsidekæden. Sædvanligvis omsættes den frie 10 DK 170701 B1 syreform af acylsidekæden og EEDQ i et inert, polært organisk opløsningsmiddel (såsom tetrahydrofuran, acetoni-tril o. lign.)· Det resulterende EEDQ-derivat anvendes in situ til acylering af 7/5-amino-nucleus’en.

5

Endnu en metode til acylering af 70-aminoforbindelserne omfatter anvendelsen af en enzymatisk støttet fremgangsmåde. En sådan fremgangsmåde er beskrevet i US patent nr.

4 335 211, udstedt 15. juni, 1982, der omfattes af den 10 foreliggende beskrivelse som reference.

En foretrukket fremgangsmåde til acylering generelt er først at silylere nucleusforbindelsen med f.eks. N,N' -bis(trimethylsilyl)urinstof (BSU) i DMF. DMF-opløsningen 15 afkøles til en lav temperatur (-45 °C til -50 °C), hvorefter pyridin og hydrochloridsaltet af syrechloridderivatet af phenylglycin tilsættes. Acyleringen undertrykkes ved tilsætning af stærk (5 eller 6 N) saltsyre og filtreres. Det acylerede produkt udvindes derefter ved indstil-20 ling af reaktionsopløsningens pH til ca. 6 (fortrinsvis 6,1) ved tilsætning af en base, såsom triethylamin. Opløsningen podes sædvanligvis med en mindre mængde LY163892 (såsom mono-DMF-dihydratformen) efter den første tilsætning af triethylamin. Krystallerne opsamles ved 25 filtrering. Yderligere detaljer om disse og andre fremgangsmåder til acylering er givet nedenfor i det eksperimentelle afsnit.

Amino- og carboxybeskyttelsesgrupperne fjernes ved frem-30 gangsmåder, der er velkendt i teknikken. Eksempler på betingelser for fjernelsen af disse to typer beskyttelsesgrupper kan findes i standardarbejder om emnet, såsom E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J.G.W. McOmie, udg., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, kapitel 35 2 og 5, henholdsvis T.W. Greene, "Protective Groups in

Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1981, kapitel 5 og 7.

11 DK 170701 B1

Som nævnt ovenfor er LY163892 bis(DMF)-, og mono(DMF)-solvater nyttige som mellemprodukter for LY163892-monohydrat. Monohydratet fremstilles ved først at suspendere et vilkårligt af de overfor angivne udgangs-5 materialer i vand. Den mest almindelige fremgangsmåde er at fremstille en opløsning af udgangsmaterialet ved tilsætning af en minimal mængde syre, sædvanligvis 6 N (eller mere fortyndet) saltsyre. Alternativt fremstilles en opløsning af udgangsmaterialet ved tilsætning af en 10 minimal mængde base (f.eks. den mindste mængde 2 N natriumhydroxid, der resulterer i et pH på ca. 7,6).

Uanset hvordan opløsningen er udført, induceres krystallisation ved langsom indstilling af pH i opløsningen af 15 udgangsmaterialet til ca. 4 og fortrinsvis 4,8. Hvis opløsningen f.eks. udføres ved tilsætning af syre, foretrækkes det at hæve opløsningens temperatur til ca. 50 °C og langsomt sætte triethylamin (alternativt natriumhydroxid) til opløsningen, indtil et pH på ca. 4,8 er op-20 nået. Suspensionen, som gradvist frembringes, omrøres og holdes ved ca. 50 °C under tilsætningen af basen. Podning af opløsningen med en mindre mængde krystallinsk monohydrat tidligt under tilsætningen af base foretrækkes.

F.eks. sker podning ofte, når opløsningens pH er ca. 1,8.

25 Hvis opløsning af udgangsmaterialet er udført ved tilsætning af base, bringes pH langsomt til ca. 4 ved tilsætning af en syre (fortrinsvis 2 N saltsyre). Man foretrækker at udvirke opløsning af udgangsmaterialet med saltsyre og inducere krystallisation ved indstilling af opløs-30 ningens pH til ca. 4,8 med triethylamin.

Suspensionen, der fremkommer ved indstilling af pH af udgangsmaterialeopløsningen til ca. 4, isoleres ved konventionelle filtreringsteknikker, såsom vakuumfiltrering på 35 en Btichner tragt. De opsamlede krystaller vaskes og henstilles til lufttørring ved stuetemperatur. Alternativt afkøles de varme pH-indstillede suspensioner (50 °C) til DK 170701 B1 12 ca. 20 °C, omrøres, filtreres (f.eks. på Biichner tragt), og det opsamlede faststof tørres ved 30 °C i 24-48 timer ved konventionelle metoder (såsom en ovn med renset % luft).

5

Som yderligere aspekter ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes en fremgangsmåde til fremstilling af en krystallinsk bis(N,Ν'-dimethylformamid)-solvatform af forbindelsen ved formlen I, hvilken fremgangsmåde omfat-10 ter opløsning af en forbindelsen med formlen I i vandig N,Ν'-dimethylformamid, indstilling af pH til ca. 5-6, efterfulgt af filtrering og vakuum tørring.

Som et yderligere aspekt ved opfindelsen tilvejebringes 15 en fremgangsmåde til fremstilling af en krystallinsk mono(N,N?-dimethylformamid)-solvatform af forbindelsen med formlen I, hvilken fremgangsmåde omfatter opløsning af en forbindelse med formlen I i vandig N,N1-dimethyl-formamid, indstilling af pH til ca. 5,9, tilsætning af 20 acetonitril, efterfulgt af filtrering af det resulterende faststof og lufttørring ved lidt over stuetemperatur.

I de følgende eksempler er udtrykkene dimethylformamid, kernemagnetisk resonansspektrum, massespektrum og infra-25 rød spektroskop! forkortet henholdsvis til DMF, NMR, MS og IR.

35 forbindelse med NMR spektre anvendes følgende forkortelser; "s" er singlet, "d" er dublet, "t" er triplet, "q" 30 er kvartet, og "m" er multiplet.

* NMR-spektrene blev opnået på et General Electric QE-300 MHz-instrument. Kemiske skift udtrykkes i ppm-værdier ("pars per million" nedenfor tetramethylsilan).

13 DK 170701 B1

Eksperimentel afsnit EKSEMPEL 1 5 Syntese af LY163892 mono(DMF)

Til en opløsning af 30 g (138,5 mmol) 70-amino-3-chlor-3-(l-carba-l-dethiacephem)-4-carboxylsyre i 500 ml DMF indeholdende 0,03% vand sattes ca. 10 dråber trimethyl-10 silylchlorid efterfulgt af 32,85 g N,N'-bis(trimethylsi-lyl)urinstof. Reaktionsblandingen blev omrørt i 90 min. ved stuetemperatur og afkølet til ca. -50 °C. Til blandingen blev sat 10,8 ml (10,6 g, 122,7 mmol) pyridin efterfulgt af 27,07 g (131,5 mmol) 2-(R)-2-phenyl-2-amino-15 acetylchlorid hydrochlorid. Blandingen blev omrørt ved ca. -35 °C i omtrent 1 time og afkølet til -50 °C. Til blandingen blev sat 7,32 ml methanol i 30 ml DMF. Reaktionsblandingen blev omrørt til 0 °C i løbet af 40 min., og der blev tilsat 54 ml vand. Man lod reaktionsblan-20 dingen opvarme til ca. 15 °C i løbet de følgende 30 min. og tilsatte langsomt triethylamin indtil pH i blandingen var ca. 3,2. Filtratet blev opvarmet til ca. 50 °C. Til blandingen blev sat triethylamin, indtil pH nåede 4,6, og blandingen blev henstillet ved stuetemperatur i 1 time.

25 Blandingen blev derefter omrørt ved ca. 40 °C, og en blanding af DMF: triethylamin (l:l,v:v) blev tilsat, indtil pH var ca. 5,9. Blandingen blev afkølet til 25 °C og omrørt i 20 min. Til blandingen blev sat 500 ml acetoni-tril, og den resulterende blanding blev omrørt i 30 min.

30 Blandingen blev filtreret og det bundfældede faste stof blev tørret i en luftovn ved 30 °C, indtil vægten af det faste stof var konstant, til opnåelse af LY163892 mono(DMF).

35 H-NMR (300 MHz, D20/DC1): 8,18 ppm (s, IH); 7,79 (s,IH); 5,65 (d, J-4,8 Hz, 1H);5,51 (s,IH); 4,21 (d af t, IH); 3,28 (s,3H); 3,12 (s,3H); 2,84 (m, 2H); 1,95 (m, IH); 14 DK 170701 B1 1,58 (m, IH).

13C-NMR (75,48 MHz, D20/DC1): 21,99, 31,85, 32,27, 37,77, 53,47, 57,37, 58,57, 123,5, 128,9, 130,6, 131,4, 132,5, 5 133,8, 164,4, 165,7, 166,3, 169,9 ppm.

IR (KBr-skive): 2950-3620 cm-1, (m og bred) 1772,7, 1691,7, 1658,9, 1598, 1566, 1409, 1389, 1378, 1349, 1325 (alle medium til stærke).

10 [a]D20= +17,85°, c - 1,02 i 0,1 N HC1.

MS = 350, 352 15 EKSEMPEL 2

Syntese af LY163892 bis(DMF)

Pulveriseret natrium-2-(R)-2-phenyl-2-(((Z)-methyl but-2-20 en-3-yloat)amino)acetat (4,59 g. 16,92 mmol) blev hældt i en 250 ml rundbundet kolbe indeholdende 75 ml omrørt DMF under en nitrogenatmosfære. Derefter sattes 22 al methan-sulfonsyre til reaktionsblandingen, der blev afkølet til ca. -45 °C. Til blandingen sattes 47,6 al dimethylbenzyl-25 amin efterfulgt af 1,53 g (1,25 ml, 16,15 mmol) methyl-chlorformiat. Reaktionsblandingen blev omrørt ved -45 °C i ca. 50 min. Til reaktionsblandingen sattes dråbevis 25 ml DMF og 5,41 g (15,38 mmol) 70-amino-3-chlor-3-(l-car-ba-l-dethiacephem)-4-carboxylsyre(4-nitrophenyl)methyl-30 ester. Blandingen blev omrørt i 2 timer og opvarmet til ca. 0 °C i ca. 45 min. Under opretholdelse af reaktionsblandingens temperatur på mellem 5 0C og 10 °C tilsattes 6,89 ml vand, 12,32 ml koncentreret saltsyre, 3,55 g * zinkstøv og 8,93 ml koncentreret saltsyre. Blandingen 35 blev omrørt ved stuetemperatur i ca. 5 timer, og pH blev indstillet til 2,35 med triethylamin. Blandingen blev filtreret, og pH blev atter indstillet til 4,6 med tri- 15 DK 170701 B1 ethylamin. Blandingen blev omrørt 45 min., og pH hævedes til 5,75 med triethylamin. Blandingen blev omrørt i yderligere 15 min. Det udfældede faste stof blev opsamlet ved vakuumfiltrering og vasket med 30 ml DMF:vand (9;l,v:v).

5 Det faste stof blev vakuumtørret i ca. 10 timer til opnåelse af 4,8 g bis(DMF)-solvat af LY163892.

Dette materiale blev yderligere renset ved at suspendere dette i 40 ml DMF:vand (9,1, v:v). Opløsningen blev af-10 kølet til 10 °C, og pH blev indstillet til 1,7 med koncentreret saltsyre. Blandingen blev filtreret, og pH blev hævet til 5,6 med triethylamin. Det udfældede faste stof blev opsamlet ved vakuumfiltrering, vasket med DMF:vand (9:1, v:v) og vakuumtørret ved 26 °C til opnåelse af 3,72 15 g bis(DMF) Lyl63892.

H-NMR (300 MHz, D20/DC1): 8,18 ppm (s, 2H); 7,79 (s,IH); 5,65 (d, IH); 5,51 (s,IH); 4,21 (d af t, IH); 3,28 (s,6H); 3,12 (s,6H); 2,84 (m, 2H); 1,95 (m,lH); 1,58 20 (m,IH).

IR (KBr-skive): 1772,7 cm-1, 1691,7, 1659,9, 1599,1, 1566,3, 1407,2, 1389,8, 1378,2, 1349,3, 1325,2, (alle medium til stærke) 25 [a]2°D= +12,68°, c= 0,35 i 0,01 N HC1.

MS = 350, 352 30 EKSEMPEL 3

Omdannelse af LY163892 bis(DMF) solvat til LY163892 monohydrat .

35 pH af en suspension af 4,0 g bis(DMF)-LY163892 i vand blev indstillet til 1,57 med koncentreret saltsyre. Blandingen blev podet med LY163892-monohydrat. pH blev ind- DK 170701 B1 16 stillet til ca. 4,9 under opretholdelse af temperaturen i blandingen på ca. 50 °C. Blandingen blev afkølet til stuetemperatur, og det udfældede faste stof blev opsamlet ved vakuumfiltrering, vasket med 6 ml vand og lufttørret.

5 Et røntgenpulver-difraktionsmønster for det isolerede produkt var identisk med en autentisk referencestandard. Karl Fischer analyse: 4,36% fugtighed.

10 15 20 25 30 35

Claims (8)

1. Krystallinsk bis(N,Ν'-dimethylformamid)-solvatform af 5 forbindelsen med formlen I NHa H /\/*\ A i ίο 1 ! I J-X \/ Y C00H

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den har følgende røntgenpulver-difraktionsmønster, som er opnået med en nikkelfiltreret kobberstråling med λ « 1,54Q6 Å, hvori d betyder det interplanare mellemrum og den relative intensitet: 20 _Wi 15,23 0,01 12,27 1,00 10,91 0,04 7,75 0,01 25 5,57 0,02 5,37 0,05 4,84 0,02 4,74 0,09 4,44 0,03 4,11 0,30 3,80 0,03 on 3,62 0,03 30 3,36 0,01 3,08 0,04 2,86 0,01 2,73 0,02 35 DK 170701 B1

3. Krystallinsk mono(N,Ν’-dimethylformamid)-solvatform af forbindelse med formlen 1: NHs H ‘ λΜγ/\ K.) 1 Λ/*' C00H 10

4. Forbindelse ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den har følgende røntgenpulver-difraktionsmønster, som er opnået med en nikkelfiltreret kobberstråling med λ 15 1,5418 Å, hvori d betyder det interplanare mellemrum og I/I1 den relative intensitet: d I/I1 20 14,87 0,07 11,20 1,00 9,91 0,36 8,78 0,03 7,17 0,27 25 5,66 0,10 5,41 0,09 4,82 0,35 4,69 0,53 4.62 0,40 30 4,41 0,30 4,30 0,21 3.62 0,57 3,59 0,57 c 3,28 0,12 35 3,09 0,05 DK 170701 B1

5 NH2 h Λ Α.Λ A / s A/^1 \/ s Y C00H 10 kendetegnet ved, at man opløser en forbindelse med formlen I i vandig N,N'-dimethylformamid, indstiller pH til ca. 5-6, og derefter filtrerer og vakuumtørrer. 15

5. Fremgangsmåde til fremstilling af en krystallinsk bisi^N’-dimethylformamidJ-solvatform af forbindelsen med formlen I:

6. Fremgangsmåde ifølge krav 5 til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen har følgende røntgenpulver-difraktionsmøns-ter, som er opnået med en nikkelfiltreret kobberstråling 20 med λ « 1,5406 Å, hvori d betyder det interplanare mellemrum og I/I^ den relative intensitet: d I/I1 25 15,23 0,01 12,27 1,00 10,91 0,04 7,75 0,01 5,57 0,02 30 5,37 0,05 4,84 0,02 4,74 0,09 4,44 0,03 4,11 0,30 35 3,80 0,03 3,62 0,03 3,36 0,01 DK 170701 B1 3,08 0,04 2,86 0,01 2,73 0,02

7. Fremgangsmåde til fremstilling af en krystallinsk * mono(N, N' -dimethylformamid)-solvatform af forbindelsen med formlen I: NH* H 10 /γνγΑ lift J-l i-ci \/ </ \/ * . L 15 kendetegnet ved, at man opløser en forbindelse med formlen I i vandigt N,N’-dimethylformamid, indstiller pH til ca. 5,9, tilsætter acetonitril, og derefter frafiltrerer det resulterende faste stof og lufttørrer dette 20 ved lidt over stuetemperatur.

8. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 7, kendetegnet ved, at forbindelsen har det følgende røntgen-pulver-difraktionsmønster, som 25 er opnået med en nikkel filtreret kobberstråling med λ = 1,5418 Å, hvori d betyder det interplanare mellemrum og I/l^ den relative intensitet: d I/I1 30 14,87 0,07 11,20 1,00 9,91 0,36 8,78 0,03 7,17 0,27 5,66 0,10 35 DK 170701 B1 5,41 0,09 4,82 0,35 4,69 0,53 4.62 0,40 5 4,41 0,30 4,30 0,21 3.62 0,57 3,59 0,37 3,28 0,12 10 3,09 0,05 15 20 25 30 35