DK157878B - Fremgangsmaade til analogifremstilling af erythromycinderivater - Google Patents

Description

- i -

DK 157878B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte oximderivater af erythromycin A med den i kravets indledning angivne almene formel I.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling 5 af forbindelserne med formlen I er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte.

I en foretrukket udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen benyttes forbindelsen med formlen III i form af salt, især hydrogenhalogenid, fortrinsvis hydro-10 chloridet eller hydrobromidet.

Reaktionen udføres da fortrinsvis i et stødpudemiljø, f.eks. i nærværelse af et overskud af organisk amineret base såsom triethylamin eller en blanding af organisk syre og alkalimetalsalt af denne syre, f.eks. en 15 blanding af eddikesyre og natriumacetat.

Man kan ligeledes arbejde i nærværelse af natriumeller kaliumcarbonat eller -bicarbonat eller calcium- eller bariumcarbonat.

Man arbejder fortrinsvis i et alkoholisk 20 opløsningsmiddel såsom methanol eller ethanol og fortrinsvis i vandfrit miljø.

Omsætningen af forbindelsen med formlen V med forbindelsen med formlen IV udføres fortrinsvis i nærværelse af en base såsom triethylamin eller i nærværelse af 25 natrium- eller kaliumcarbonat eller -bicarbonat eller calcium- eller bariumcarbonat.

Man kan ligeledes benytte et hydrid såsom natrium- hydrid.

Man arbejder fortrinsvis i et polært opløsnings-30 middel såsom acetone, dimethylformamid, dimethylsulfoxid eller hexamethylphosphotriamid. Man kan imidlertid benytte en ether såsom ethylether, tetrahydrofuran eller dioxan.

I ovenstående to tilfælde kan reaktionerne udføres ved temperaturer mellem stuetemperatur og opløsningsmidlets 35 tilbagesvalingstemperatur. Reaktionen kan vare flere timer eller endog dage til opnåelse af en fuldstændig omdannelse.

- 2 -

DK 157878B

Saltdannelsen og esterificeringen, som eventuelt finder sted, udføres efter gængse metoder.

Forbindelserne med den almene formel I har en meget god antibiotisk virkning på grampositive bakterier såsom 5 staphylococcer, streptococcer og pneumococcer, jfr. forsøg nedenfor.

, Disse egenskaber gør de omhandlede forbindelser egnede til anvendelse som lægemidler i behandlingen af lidelser fremkaldt af følsomme kim og navnlig ved behand-10 lingen af staphylococci såsom staphylococcusfrembragt sep-ticemi, ondartet staphylococci i ansigtet eller på huden, pyodermitis, septiske eller suppurante sår, furonkler, anthrax, phlegmone, erycipel, primitiv akut eller efter influenza optrædende staphylococci, bronchopneumoni, pulmo-15 nære suppurationer, streptococci såsom akut angina, otitis, sinusitis, scarlatine, pneumococci, såsom pneumoni, bronchitis, brucellose, difteri og gonococci. De omhandlede forbindelser er .ligeledes aktive mod infektioner, som skyldes sådanne kim som Haemophilus influenzae, Haemophilus 20 pertussis, rickettsier og Mycoplasma pneumoniae.

Forbindelserne med formlen I samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer kan benyttes til fremstilling af farmaceutiske præparater, der som aktiv bestanddel indeholder i det mindste en af disse for-25 bindeiser.

Disse forbindelser kan indgives ad oral, rektal eller parenteral vej eller lokalt i topisk applikation på huden og slimhinderne.

Indgift ad oral vej foretrækkes.

30 Præparaterne kan være faste .eller flydende og foreligge i de i den humane medicin gængse farmaceutiske former som f.eks. uoversukrede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granulater, stikpiller, injektionspræparater, pomade, creme og geler. De fremstilles efter gængse 35 metoder. Den eller de aktive bestanddele inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske præparater normalt benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummiarabicum, - 3 -

DK 157878 B

lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glycoler og diverse fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler 5 samt konserveringsmidler.

Disse præparater kan ligeledes foreligge i form af pulver beregnet til opløsning på stedet i et passende bærestof, f.eks. apyrogent sterilt vand.

Den indgivne dosis varierer efter den behandlede 10 lidelse, den pågældende patient, indgiftsmåden og det på gældende stof. Den kan f.eks. ligge mellem 0,250 g og 4 g pr. dag ad oral vej hos mennesker i tilfælde af forbindelserne fremstillet ifølge eksempel 1 eller 5.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen frem-15 stillede forbindelser har in vitro egenskaber, som ligger nær egenskaberne af erythromycin.

In vivo har de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser to meget interessante fordele: 20 - på den ene side udføres beskyttelsen af det eksperimentelt inficerede dyr i doser, som er mindre end doserne af erythromycin eller propionatet af erythromycin, 25 - på den anden side viser resultaterne af farmakokinetikken en klar overlegenhed i forhold til erythromycin.

Forbindelserne med formlen III kan f.eks. fremstilles efter den generelle fremgangsmåde, som er beskrevet 30 i Angew. Chem. 68, 1956 nr. 8 side 303.

Oximen af erythromycin af formlen IV er beskrevet i engelsk patentskrift nr. 1.100.504.

Forbindelserne med formlen V er kendte eller kan fremstilles efter kendte metoder.

35 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.

DK 157878B

A

Eksempel 1.

9-0-(2-methoxy ethoxy)-nethyloxim af erythromycin! = eks. 6)

Man oplaser 1,87 g oxim af erythromycin i 25 ml acetone og tilsætter 0,94 g natriumbicarbonat og 0,3 ail ((meth-5 oxy)-ethoxy)-methylchlorid, og derpå opvarmer man til tilba gesvaling under indifferent atmosfære i 16 timer, idet man tilsætter 0,3 ml((methoxy)-ethoxy)-methylchlorid4 man frasu-ger uopløseligt materiale og inddamper filtratet til 1/3 af dets rumfang, tilsætter en opløsning af natriumbiearbonat og 10 ekstraherer med ethylether, tørrer og inddamper til tørhed. Resten cbromatograferes på silicagel. lian e lue rer med en blanding af benøen og triethylamin (15:1) og får 1,29 g af den forventede forbindelse, - -77,5° +2° (0,45$, chloroform), Rf = 0,2 (benøen og triethylamin (9:1), bærer: sili-15 cagel), U.V.: Svag absorption

Analyse: 0/ jH7^2Io01c; = 837 ved ca. 210 nm, E1^ beregnet: C# 58,8 IIfo 9,16 M 3,35 ca.40. Cirkulær difundet: 59 9,20 5,30 chroisme: max.219-220 20 Eksempel 2.

9-0-(2-(4-chlorphenoxy)-eth.vl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 11,4 g p-ehlorphenoxy-2-ethoxyamin i 320 ml vandfrit methanol, tilsætter 18,5 ml saltsurt methanol (3,25 H) og omrører i 30 minutter ved stuetemperatur. Man 25 tilsætter 21 g erythromycin, 11 g bariumcarbonat og 3.5 ml. . methanol og omrører i 18 timer ved stuetemperatur. Man frafiltrerer det uopløselige materiale, hælder filtratet i 750 ml vand indeholdende 75 ml koncentreret ammoniakvand, ekstraherer med chloroform, vasker med en fortyndet 10$’s ammoniak— 30 opløsning, tørrer, inddamper og får 35 g harpiks.

Yed chromatografi på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og triethylamin (9:1) får man 1,925 g af den forventede forbindelse og 2,03 g uren forbindelse, som man renser ved chromatografi på silicagel ved hjælp af en 35 blanding af benzen og triethylamin (15:1). Man får da 1,42 g af den foryentede forbindelse, = 79,5° +2,5° (c = 1$, ethanol), 5

DK 157878 B

Eksempel 3.

9-0-(2-ethoxyethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 3,7 g erythromycin i 25 ml tørt methanol og tilsætter 1,4 ml triethylamin og derpå 2,8 g hydrochlorid 5 af 0-(2-ethoxyethyl)-hydroxylamin. Man omrører blandingen i 96 timer ved stuetemperatur under indifferent atmosfære og hælder derpå i fortyndet ammoniak (12 ml ammoniakvand koncentreret til 28# i 50 ml vand) og afkøler i iskoldt vand.

Een fremkomne udfældning vaskes med vand og optages i methy-10 lenchlorid. Man vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer, inddamper til tørhed og får 3,83 g råprodukt, som man renser ved chromatografi på si-licagel og eluerer med en blanding af benzen og triethylamin (15il), hvorved man isolerer 1,9 g af den forventede forbin-15 delse, = -73° ±3° (c - 0,6#, CHCl^).

Eksempel 4.

9-0-(2-ethox.vethox.vniethvl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 1,89 g oxim af erythromycin i 25 ml ace-20 tone, tilsætter 1 g natriumbicarbonat og får 0,36 ml l-(chlor-methoxy)-2-ethoxyethan, og derefter omrører man i 24 timer ved stuetemperatur og under tilbagesvaling i 75 timer under tilsætning af 0,2 ml og derpå 0,15 ml l-(chlormethoxy)-2-ethoxye-thon, Man frafiltrerer uopløseligt materiale, hælder 25 filtratet i 100 ml vand og eks+raherer med ethylether, tørrer, inddamper til tørhed under formindsket tryk og får 2,5 g råprodukt. Man chromatograferer dette på silicagel under elue-ring med en blanding af benzen og triethylamin (9:1) og får 1,72 g af den forventede forbindelse, = -79° +2° (c = 0,7#, ' 30 ethanol).

Eksempel 5.

9-0-(2-(dimeth.ylamino)-eth.vl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 5,6 g oxim af erythromycin i 80 ml ace-35 tone, tilsætter 6,3 g natriumbicarbonat og 1,65 g hydrochlorid af dimethylaminochlorethan og opvarmer til tilbagesvaling i 4 1/2 dag, idet man tilsætter i løbet af fire gange

DK 157878 B

O

3,3 g hydrochlorid af dimethylaminochlorethan, Lian frafiltre-rer uopløseligt materiale og inddamper filtratet, som krystalliserer, hvorved man får 4,5 g forbindelse« Lian hælder moderludene i 100 ml vand og ekstraherer med ethylether, 5 Man vasker etherfasen med en mættet vandig natriumchloridopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Resten og det ovenfor opnåede krystallinske produkt chromatograferes på silicagel.

Man eluerer med en blanding af chloroform og triethylamin (100:15) og får 4,38 g af den forventede forbindelse, = -99,5° 10 +2° (1$, ethanol).

Eksempel 6.

q-Q-(2-methoxyethoxv)-methyloxim af erythromycin.

Man opløser 99,6 g oxim af erythromycin i 1000 ml tør-15 ret acetone. Efter tilsætning af 56 g tørt natriumbicarbonat og 15,2 ml (methoxy)-ethoxymethylchlorid opvarmer man til tilbagesvaling i 15 timer under omrøring og nitrogenatmosfære.

Derpå tilsætter man 7,6 ml (methoxy)-ethoxymethylchlorid og opvarmer atter til tilbagesvaling i 8 timer. Efter en tredie 20 tilsætning af 5 ml af samme forbindelse tilbagesvaler man i yderligere 15 timer.

Derpå afkøler man blandingen, frafiltrerer uopløselig* materiale og skyller, med ao et on©.

Man afdamper acetonefiltratet og får en harpiks, som 25 man -.udriver med 500 ml koncentreret natriumbicarbonat opløsning .

Det opnåede amorfe stof filtreres, skylles med vand og tørres i varmeskab. Det+e gentages 3 gange. Man får i alt 335,6 g råprodukt svarende til kvantitativt udbytte, 30 De 335,6 g forbindelse opløses i 1,5 liter ren aceto ne. Man tilsætter 15 g aktivkul og 15 g kiselgur.

Man omrører nogle minutter, hvorpå man filtrerer, skyller og vasker med ca, 300 ml acetone. Man gentager samme behandling med 3 g aktivkKl og 15 g kiselgur.

35 Efter filtrering får man en klar opløsning. Man vasker og skyller med 300 ml acetone. Filtratet inddampes til ca. 1,5 7

DK 157878B

liter under vakuum.

Ian tilsætter i varmen 800 ml destilleret vand og indleder derpå en krystallisation. Man lader krystallisationen udvikle sig ved 20-25°C indtil størkning før afkøling til 5 0-5°C.

Krystallerne frafiltreres og vaskes derpå med acetone tilsat 40io iskoldt vand.

Per fås et første udbytte på 154»5 g og et andet udbytte på 75,9 g og endelig et tredie udbytte på 15,5 g eller 10 i alt 225,7 g.

Man omkrystalliserer 215 g af det ovenfor opnåede stof ved opløsning i 645 ml acetone.

Man tilsætter 5 g kiselgur.

Man omrører nogle minutter, hvorpå man filtrerer* 15 per fås en klar og kun svagt farvet opløsning. Man tilsætter lidt efter lidt 525 ml destilleret vand. Man indleder en krystallisation ved hjælp af kim samt ved skrabning. Man lader krystallisationen udvikle sig ved 20-25°C. Efter 2 timers forløb sker der en størkning. Man afkøler til 0-5°C og lader hen-20 stå natten over.

Man frafiltrerer krystallerne, skyller og vasker med 100 ml acetone tilsat 40?£ vand. Man tørrer ved 40°0 under vakuum.

Per fås 170 g forbindelse.

25 Et andet udbytte på 16 g og derefter et tredie udbytte på 9,5 g krystalliserer af moderludene,

Per fås i alt 195,5 g ren forbindelse.

Eksempel 7.

30 9-0-(phenvlmethox.v)-methvloxim af erythromycin.

Man opløser 1,9 g oxim af erythromycin i 25 ml acetone og talsætter .1,2 g natriumbicarbonat og 0,55 ml chlormethyl-benzylether. Man omrører først 1 time ved stuetemperatur under nitrogenatmosfære. Man opvarmer suspensionen til tilbage-35 svaling i acetone ved 60°C i 25 timer. Man tilsætter 0,25 ml chlormethylbenzylether, og efter 41 timer 50 minutter tilsætter man samme mængde og standser reaktionen efter 45 timer.

O

8

DK 157878 B

Man frafiltrerer uopløseligt materiale og skyller med acetone. Man hælder i 100 ral vand og får en mælkeagtig opløsning, Derpå ekstraherer man 3 gange med 200 ml ethylether, vasker etherfaserne med en mættet natriumchloridopløsning, 5 tørrer, inddamper til tørhed under formindsket tryk og får 3,4 g harpiks, som man renser som følger: ' Man chromatograferer på silicagel med et eluerings- middel bestående af benzen og triethylamin (9:1). Man isolerer 1,2 g renset forbindelse. Denne forbindelse opløses i 20 10 ml acetone, og derpå inddamper man til et rumfang på 2 ml. Man optager i kulden i 60 ml petroleumsether (kp. 64-75°C). Forbindelsen krystalliserer, og man filtrerer den og skyller den med petroleumsether. Der fås 0,715 g forbindelse.

Man genopløser denne forbindelse i ca. 100 ml acetone 15 og omrører ved ca. 50°C med aktivkul i 10 minutter. Man filtrerer i varmen.

Man inddamper acetoneopløsningen til 2 ml og optager derpå i 100 ml petroleumsether (kp. 64-75°C), Forbindelsen krystalliserer atter. Man filtrerer krystallerne, skyller med 20 petroleumsether og tørrer under vakuum ved 60°0. Der fås 0,585 g ren forbindelse, = -74,5° +3° (0,25$, ethanol). Analyse: C^H^gl^O^ = 869,1 beregnet: C$ 62,19 H$ 8,81 3,22 fundet: 62,1 8,8 3,1 25

Eksempel 8.

9-0-(2-(dimeth.vlamino)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 11,2 g oxim af erythromycin i 160 ml acetone, og derpå indfører man 3,6 g natriumcarbonat og tilsæt-30 ter 3,24 g hydrochlorid af dimethylaminochlorethan. Man omrører under tilbagesvaling i 93 timer. Efter afkøling frafiltrerer man uopløseligt materiale og skyller med acetone. Man afdam-per under formindsket tryk en del af acetonen indtil et rumfang på 150 ml. Forbindelsen krystalliserer. Man lader henstå 35 ved 5°C og filtrerer derpå krystallerne fra, som skylles. Der fås 2,45 g krystaller = fraktion A. Man optager det uopløselige materiale i 200 ml acetone og omrører 30 minutter, ifen

DK 157878B

9 filtrerer og afdamper 2/3 af acetonen. Forbindelsen krystalliserer, og der fås 0,864 g forbindelse = fraktion B. Operationen gentages flere gange, og der fås en fraktion C = 3»37 g. Man optager atter det uopløselige materiale i ca. 200 ml 5 acetone og opvarmer derefter til 50°C under omrøring i 30 minutter. Man filtrerer i varmen, afdamper 2/3 af acetonen og afkøler. Man filtrerer krystallerne, skyller med kold acetone og tørrer derpå. Der fås en fraktion ; D = 2,63 g. Der fås yderligere 0,661 g stof ud fra moderludene fra fraktion A 10 eller i alt 9,989 g krystaller.

Man omkrystalliserer som følger:

De 9,989 g opløses i ca. 800 ml acetone i nærværelse af 1 g aktivkul. Man omrører ved 50°C i 15 minutter og filtrerer. Der fås en klar, farveløs opløsning, som man inddam-15 per til ca, 250 ml. Forbindelsen krystalliserer. Man afkøler, filtrerer krystallerne fra, vasker dem, tørrer dem og får et første udbytte på 8,27 g og derefter et andet udbytte på 0,714 g af den forventede forbindelse, = -86° +2° (1$, chloroform), 20 Forbindelsen er identisk med den i eksempel 5.

Eksempel 9.

9-0-(2-(dimethylamino)-ethyl)-Qxim af erythromycin.

Man indfører under argonatmosfære 40 ml af en blan-25 ding af hexamethylphosphotriamid og ethylether (3:1) og 2,447 g oxim af erythromycin og ad flere gange 0,159 g na-triumbydrid i 50$’e oliesuspension. Man omrører 15 minutter og indfører derefter dråbevis en opløsning af 21 ml hexamethyl-phosphotriamid, 0,518 g bydrochlorid af dimethylaminoethyl-30 chlorid og 0,173 g natriumhydrid og omrører 20 minutter. Reaktionen er afsluttet efter 4 timers forløb. Man hælder i 30 ml vand mættet med 60 g ammoniumacetat, ekstraherer med ether, vasker med vand, tørrer og inddamper til tørhed. Man fortynder med vand, ekstraherer med toluen, tørrer, inddamper under 35 formindsket tryk, optager med et minimum af pentan, indleder en krystallisation med den tidligere opnåede forbindelse, omrører 3 timer ved stuetemperatur, suger fra og tørrer ved

DK 157878B

10 60°C. Der fås 0,21 g af den forventede forbindelse, snip, 233°C. De forskellige moderlude ‘behandles ikke, Eorbindel-sen er identisk med dem i eksempel 5 og 8.

5 Eksempel 10.

9-0-(2-(diaethylamino)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Ved den i eksempel 9 beskrevne arbejdsmåde erstatter man blandingen af hexamethylphosphotriamid og ether med dime t hylf ormamid , Man indfører 0,75 g oxim af erythromycin i 10 3,5 ml dimethylformamid. Man tilsætter 53 mg natriumbydrid i halvkoncentreret oliesuspension. Man omrører 15 minutter og tilsætter 0,153 g hydrochlorid af dimethylaminoethylchlorid og 53 g natriumhydrid i halvkoncentreret oliesuspension. Efter 4 timers henstand ved stuetemperatur tilsætter man 29mg 15 hydrochlorid af dimethylaminoethylchlorid og 11 mg natrium hydrid i halvkoncentreret oliesuspension. Man omrører natten over, mætter med carbondioxid, hælder i 35 ml vand, suger fra, skyller, optager i chloroform, tørrer og fordamper. Hesten krystalliseres af 2 ml pentan. Der fås 0,428 g af den forven-20 tede forbindelse. Efter genoptagelse af moderludene får man et andet udbytte på 210 mg forbindelse, som er identisk med forbindelsen i eksempel 5, 8 og 9«

Eksempel 11.

25 9-0-((4-ohlorphenoxy)-methyl)-oxim af erythromycin, I 60 ml ethylether indfører man 2,247 g oxim af erythromycin, og man tilsætter ad flere gange 0,159 g natriumhydrid i 50$'s oliesuspension. Man omrører 15 minutter mere og tilsætter derpå 6 ml hexamethylphosphotriamid. Man indfører 30 derpå dråbevis i løbet af 15 minutter 6 ml af en etheropløs-ning indeholdende 0,45 ml p-chloranisolchlorid. Reaktionen er afsluttet på 40 minutter. Man hælder i 30 ml vand mættet med 60 g ammoniumacetat, ekstraherer med 3 gange 15 ml ether og vasker med vand. Der fås en udfældning. Man fortynder med 35 ethylaoetat indtil fuldstændig opløsning, dekanterer, vasker med vand og derpå med en mættet natriumchloridopløaning, tørrer, afdamper opløsningsmidlet, optager i pentan og omrører 11

DK 157878 B

16 timer ved stuetemperatur, Man suger fra, skyller med pen-tan, tørrer og får 1,99 g af <3en forventede forbindelse. Forbindelsen renses som følger:

Man omrører 1,89 g forbindelse med 3,8 g aktiveret 5 magnesiumsilicat i 40 ml benzen i 1 time, suger fra, skyller med 5 ml benzen og inddamper til tørhed. Man gentager operationen. Man optager i 5 ml pentan og omrører natten over ved stuetemperatur. Man suger fra, skyller med 0,5 ml pertan, tørrer og får 0,903 g af den forventede forbindelse, smp. 90°C, 10 0¾ = -64,5° +2,5° (c = 0,5% ethanol).

IT. M.E. spektrum (CDC17) ppm: 2,27 (il-CE^ ) ch3 5,65 (d,d, 7 Ez)-Ii^0CHP0 15 , -

Anaryse: beregnet: C# 59,41 i$ 8,27 1$ 3,15 Cl# 3,98 fundet: 59,5 8,4 3,0 4,0

Eksempel 12.

20 -*——— 9-0-(o.yanmethyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører under argon 80 ml acetone og 3 g oxim af erythromycin og tilsætter ad flere gange 0,21 g natriumfcydrid i oliesuspension, omrører 15 minutter og tilsætter derpå 0,384 g acetonitrilchlorid opløst i 1 ml acetone. Efter 20 mi-25 nutters forløb tilsætter iran 0,141 g natriunhydrid samt 10 minutter senere 0,256 g acetonitrilchlorid. Efter 10 minutters forløb tilsætter man 70 mg natr: umhydrid og 0,125 g acetonitrilchlorid. Ilan mætter med carbondioxid i 1 time 30 minutter, inddamper til tørhed under formindsket tryk og tørrer. Man chrcr-30 matograferer på silioagel under eluering med en blanding af ether cg triethylamin (85·15)« Man samler frektionerne, inddamper til tørhed og krystalliserer af petroleumsether (kp. 65-75°C). Efter frasugning, vaskning og tørring får man 1,8 g af den forventede forbindelse. Smp. 140°C, = *-74,5° +2,5° 35 (c = 0,6% CHClJ.

DK 157878B

12

Analyse: beregnet: Ofo 59,45 H# 8,83 T0> 5,33 fundet: 59,2 9,0 5,0 5 Eksempel 15« . 9-0-(2-ethylthioethyl)-oxim af erythromycin, 1. Man indfører under argonatmosfære 90 ml methylethyl- keton og 10 ml 2-chlorethylethylsulfid og 12,9 g natriumiodid. IJan opvarmer til tilbagesvaling i 1 time, afkøler, frasuger 10 indtil eliminering af det dannede natriumchlorid. Filtratet opbevares i en hermetisk tilproppet flaske, 2i Man indfører under argonatmosfære 3,75 g oxim af ery thromycin i 24 ml af en opløsning af hexamethylphosphotriamid og ether (1:]). Man uddriver etheren under formindsket tryk og 15 indfører derpå 0,26 g natriumhydrid i suspension i olie. Man fortsætter omrøringen 15 minutter og tilsætter i løbet af 20 minutter 50 ml af den ovenfor under 1 opnåede opløsning.

Man tilsætter ad flere gange 0,6 g natriumhydrid. Efter 50 minutters forløb tilsætter man 0,59 g natriumhydrid.

20 60 minutter senere hælder man reaktionsblandingen i 240 ml vandig opløsning af 3/4-mættet natriumchlorid og indeholdende 10 g natriumbicarbonat. Man omrører 10 minutter ved stuetemperatur, f'rasuger den dannede udfældning, opløser den i chloroform, tørrer den, inddamper til tørhed og får 5 g af 25 en væske, som man chromat ograf erer på sili.cagel (elueringsmid-del: toluen og triethylamin (9s 1))* Man forener de homogene fraktioner og inddamper dem til tørhed. Der fås 1,1 g af en harpiks, som man udriver med petroleumsether (kp. 65-75°C).

Man tørrer og får 1,036 g af den forventede forbindelse, smp, 30 110°0, aD = 72,5° ±2° (c = 196, CHClj).

Analyse: beregnet: 0$ 58,83 H# 9,15 W° 3,35 S# 3,83 fundet: 58,8 9,3 3,3 3,7 35 Eksempel 14.

9-0-(2-oyanethyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører under argonatmosfære 10 ml hexamethylphos-

13 DK 157878 B

photriamid og 3 g oxim af erythromycin. Efter opløsning tilsætter man 0,2 g natriumhydrid i oliesuspension samt dråbevis 0,4 ml renset brompropionitril. Efter 45 minutters forløb tilsætter man portionsvis ca. 0,1 g natriumhydrid og 4 dråber 5 brompropionitril. Man gentager operationen, idet man indfører yderligere 0,7 g natriumhydrid og 0,42 g brompropionitril.

Man hælder blandingen i en 3/4-mættet opløsning af natrium-chlorid i 240 ml vand indeholdende 2,4 g natriumbicarbonat. Efter 1 times omrøring frasuger man på filter og skyller med 10 natriumchloridmættet vand. Man optager udfældningen i 200 ml chloroform, omrører 1 time og frasuger derefter uopløseligt materiale og vasker det med chloroform. Filtratet og vaskevæskerne forenes og dekanteres derpå. Man tørrer chloroformfraktionen, filtrerer og inddamper til tørhed under formindsket 15 tryk. Der fås et amorft pulver på 3,26 g rå forbindelse. 2 g heraf ehroroatograferes på silicagel og elueres med en blanding af chloroform og triethylamin (95 -5)* Een homogene fraktion giver 1,348 g harpiks, som man optager i pentan, og man omrører 16 timer. Man inddamper til tørhed under formindsket tryk, op-20 tager i 10 ml pentan, omrører 30 minutter og suger fra, skyller og tørrer. Eer fås 0,766 g hvide krystaller, smp. 210°C, a2° = -77,5° +1,5° (c = 1$, CHClj).

Analyse: beregnet: 0fo 59,9 W° 3,92 Bfø 5,24 25 fundet: 59,6 9,0 5,5

Eksempel 15.

9-0-(5.5-dimethvl-2-oxobutvl)-oxim af erythromycin.

Man indfører under argonatmosfære 10 ml hexamethylphos-' 30 photriamid og tilsætter ad flere gange 3 g oxim af erythromycin. Til den fremkomne opløsning sætter man 0,22 g natriumhydrid i oliesuspension. Man afkøler til 10°C og tilsætter dråbevis 0,6 ml 3,3-dimethyl-2-oxobutylbromid. Man holder reaktionen på 10-12°C i 25 minutter. Man hælder langsomt i 200 ml vandig 35 opløsning af 3/4-mættet natriumchlorid og indeholdende 1,6 g natriumbicarbonat. Man skyller med en vandig opløsning af 3/4--mættet natriumchlorid. Man omrører 20 minutter, frasuger den 14

DK 157878 B

dannede udfældning, gør den opløselig med chloroform, dekanterer den organiske fase, vasker den, tørrer den og inddamper den til tørhed under formindsket tryk og får 3,28 g urent stof. De 3,28 g forenes med 5,1 g stof opnået på samme måde.

5 Man chromatograferer de 8,38 g stof på silicagel og eluerer med en blanding af toluen, chloroform og triethylamin (6:4:1). Man forener de homogene fraktioner, inddamper til tørhed under formindsket tryk, optager resten i pentan, rører om, inddamper til tørhed, rører om i 3 ml pentan, frasuger den dannede 10 udfældning og skyller den med 0,3 ml pentan. Man tørrer til konstant vægt og får 0,67 g hvidt pulver, smp. 146°C, α ^ = -63,5° +1,5° (c = 1$, σκσι3).

Analyse: beregnet: C$ 60,97 H$ 9,28 U$ 3,31 15 fundet: 60,8 9,3 3,2

Eksempel 16.

9-0-( 3-eth.vlthio-2-hydroxypropyl)-oxim af erythromycin.

Man blander 34 ml blanding af ether og hexamethylphos-20 photriamid (1:1) og 5 g oxim af erythromycin. Man uddriver etheren under formindsket tryk og indfører derpå ad flere gange under argon 0,352 g natriumhydrid med 50$ olie, omrører 15 minutter og tilsætter derpå 1,25 g 3-ethylthio-2-hydroxypropyl-chlorid. Man tilsætter efter 15 minutter 0,352 g natriumhy-25 drid. Uår reaktionen er afsluttet (man følger reaktionens udvikling ved tyndtlagsohromatografi), hælder man reaktionsblandingen i 400 ml af en 3/4-mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og indeholdende 1,7 g natriumbicarbønat. Man frasuger udfældningen, opløser den i chloroform, tørrer den og ind-30 damper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 3,6 g af en harpiks, som forenes med 3,7 g opnået ved et identisk forsøg, og man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og triethylamin (9:1). Man forener de homogene fraktioner, inddamper dem til tørhed og får 2,7 g 35 hvid harpiks. Man chromatograferer den atter på silicagel un?r der eluering med en blanding af chloroform og methanol (1:1). Man forener fraktionerne indeholdende den forventede forbin- 15

DK 157878 B

delse, inddamper dem til tørhed og får 1,116 g hvid harpiks, som man krystalliserer ved omrøring i 20 ml pentan. Man frasuger udfældningen, skyller den med pentan og tørrer til konstant vægt« Der fås 0,93 g af den forventede forbindelse, 5 smp. 142°C, a2° = -76,5° +2,5° (c = 0,8#, CHClj).

Analyse; beregnet: C# 58,17 H# 9,07 13# 3,23 S# 3,7 fundet: 58,o 9,1 3,2 3,6 10 Eksempel 17« 9-0-(2-(2-hydroxyethoxy)-eth.vl)-dxim af erythromycin.

Man indfører under argonatmosfære 10 ml hexamethyl-phosphotriamid og 3 g oxim af erythromycin. Man omrører 25 minutter og tilsætter ad flere gange 0,212 g 50#’s natrium-5 bydrid i olie, og efter 15 minutters omrøring tilsætter man 0,6 g 2-(2-chlorethoxy)-ethanol, Eft°r 15 minutters forløb tilsætter man 0,212 g natriunhydrid og derefter 0,6 g 2-(2--chlorethoxy)-ethanol. Efter 15 minutters forløb tilsætter man 0,212 g natriumbyd rid og derefter 0,6 g 2-(2-chlorethoxy)--ethanol. Efter 1 times forløb standser man reaktionen, idet 2 0 man langsomt hælder blandingen i 240 ml af en 3/4-mættet opløsning indeholdende 3 g natriumbiesxbonat. Man omrører 10 minutter, ^rasuger det dannede produkt, opløser det i chloroform, vasker med en mættet vandig nairirmchloridopløsning, tørrer, inddamper til tørhed og får 3,5 g harpiks, som man chromato-23 graferer på silicagel (elueringsmiddel: toluen og triethyl-amin (9s1)). ί%η inddamper fraktionerne med den forventede forbindelse, nemlig 2,9 g af en harpiks, som man atter chromato-graferer på silicagel (elueringsmiddel: chloroform og triethyl-amin (12,5*‘7,5)). Der fås 1,8 g af den forventede forbindelse, 3 0 gom man renser på følgende nåde* 1,063 g harpiks udrives og dekanteres derpå 3 gange efter hinanden med 5 ml af en mættet natriumchloridopløsning. Man fraeuger det uopløselige materiale og vasker det med en halvmættei opløsning af natrium-ch~orid og derefter med vand. Man tørrer og får 0,718 g hvidt 35 pulver, smp. 132°C, a2° = -83,5° ±2° (c = 1#, CHCl^).

DK 157878B

16

Analyse: beregnet: C$ 58,S3 H$ 9,15 D$ 3,35 fundet: 59,0 8,9 3,2 5 Sl.seia.pel 13.

9-0-((4~ehlorphenvlt,;io)-rietfc.yl)-oxiGi af erythromycin, ' Kan indfører under argonatmosfære 80 ml ethylether og 2,99 g oxim af erythromycin. Efter opløsning under omrøring indfører man 0,212 g natriumhydrid i 50$’s suspension i 10 olie og derefter 8 ml hexamethylphosphotriamid og 0,6 mi 4- “Chlorphenylthiomethylchlorid. Efter 65 timers forløb tilsætter man 0,15 ml chlorid, og 4 timer senere hælder man blandingen i en opløsning af 100 g amylacetat i 60 ni vand. Kan eks-traherer med ether, vasker etherekstrakterne med vand, tørrer 15 og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 3 g harpiks. Disse 3 g chromatograferes på silicagel (eluerings-middel: toluen og triethylamin (9:1)). Fraktionerne slås sammen og tørres ved stuetemperatur. Der fås 0,89 g af et .amorft stof. 0,852 g af dette stof omrøres med 13 ml pentan i 2 timer, 20 Kan suger fra og vasker 3 gange med pentan. Efter tørring får man 0,753 g hvidt pulver, smp. 126°C, = -3?,5° ±1,5° (c = 0,8$, CHClj).

Analyse: beregnet: 0$ 58,36 H$ 8,13 33$ 3,093 3$ 3,54 01$ 3,91 25 fundet: 58,6 8,1 3,0 3,7 4,2

Eksempel 19.

9-0-(2- (1,l-dimethyletboxy)—2-oxoethyl)-oxim af erythromycin, Han opløser 3 g oxim af erythromycin i 80 ml tør ether. 30 Man-'dypper i et bad ved 10°C og tilsætter i småportioner under omrøring 0,216 g 50$’s natriumhydrid i olie. Man indfører dråbevis efter 8 minutter 0,6 ml tert.-butylmonochloracetat og lader genantage stuetemperatur. Man tilsætter 8 ml vandfrit dimethylformamid. Efter 2 timers forløb tilsætter man 0,044 g 35 natriumhydrid og 0,12 ml tert.-butylmonochloracetat. Efter 1 times forløb lader man carbondioxid boble igennem indtil neutralitet, Man frasuger blandingen, inddamper den og hælder re- 17

DK 157878 B

sten under omrøring i 160 ml mættet vandig natriumchloridopløsning. Man omrører 1 time, frasuger udfældningen, vasker den med en mættet natriumchloridopløsning og tørrer den derpå under vakuum. Der fås 3,85 g hvidt fast stof, 3,7 g af 5 dette stof chromatopraferes på silicagel under eluering med en blanding af toluen og triethylamin (9*1). Man inddamper den homogene del til tørhed, udriver den fremkomne amorfe rest med pentan og uddriver opløsningsmidlet under formindsket tryk. Der fås 1,73 g af et hvidt pulver, smp. 214°C. Dis-10 se 1,73 g udrives med 5,1 ml pentan, suges fra og vaskes 2 gange med pentan. Efter tørring under vakuum fås 1,599 g af et hvidt pulver, smp, 214°C, a2^ = -71,5° ±2° (l$>t chloroform), Analyse: beregnet: Ofo 59,84 Hfo 9,11 B# 3,23 15 fundet: 60,1 9,4 3,1

Eksempel 20.

Q-0«-(ethoxymethyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører 3 g oxim af erythromycin i 10 ml hexa-20 methylphosphotriamid. Lian skyller med 2 ml hexamethylphospho-triamid. Efter opløsning tilsætter man i 3 portioner 0,22 g 50$’s natriumhydrid i olie. Lian tilsætter derpå under kraftig omrøring 0,41 ml chlormethylethylether. Man lader reagere 2 timer i alt. Man hælder i 250 ml 3/4-mættet opløsning af natrium-25 chlorid og indeholdende 2 g natriumcicarbonat, Lian skyller med 20 ml 3/4-mættet opløsning af natriumchlorid. Lian omrører 30 minutter og lader henstå. Man frasuger den dannede udfældning, vasker den med samme opløsning, opløser den i chloroform, dekanterer og eliminerer uopløseligt materiale ved frasugning.

30 Filtratet vaskes, tørres og behandles med 0,8 g aktivku.l, og man eliminerer opløsningsmidlet under formindsket tryk og får 3,01 g af en gud* barpiks. Denne chromatograferes på silicagel (elueringsmiddel: toluen, chloroform og triethylamin (6:4:1)), Man forener de homogene faser og afdaraper under formindsket 35 tryk. Der fås 2 g hvid harpiks, som man konkretiserer ved udrivning med 3 ml isopropylether i 20 minutter. Man frasuger produktet, skyller det og tørrer det og får 1,54 g af et hvidt 13

DK 157878B

stof, smp. 123°0, oT^ = -78° +2,5° (c = 1$, chloroform). Analyse: beregnet: C$ 59,53 H$ 9,01 H$ 3,48 fundet: 59,8 9,3 3,3 5

Eksempel 21.

9-0-((2-chlorethox.v)-methyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser under argonatmosfære 3 g oxim af erythromycin i 80 ml tør ether. Man dypper kolben i et bad ved 10°C 10 og .indfører i løbet af 5 minutter portionsvis 0,216 g 50$’s natriumhydrid i olie og derefter 0,44 ml 1-ohlorethylchlor-methylether. Man lader henstå 5 timer 30 minutter ved stuetemperatur og lader derpå carbondioxid boble igennem. Man inddamper til tørhed under formindsket tryk, optager i petrole-15 umsether (kp. 65-75°C), omrører 30 minutter, suger fra og vasker med petroleumsefher. Efter tørring får man 3,54 g råprodukt. 3,47 g af denne forbindelse optages i 17,5 ml acetone. Man frasuger suspensionen, omrører filtratet i 30 minutter med 150 mg aktivkul og suger fra. Filtratet behandles atter 20 med aktivkul og inddampes til tørhed. Der fås 3,21 g forbindelse. 2,93 g heraf omrøres 30 minutter med 15 ml vand tilsat 10$ ethanol. Blandingen suges fra og vaskes med samme opløsningsmiddel (1,5 ml, 1 ml og 1 ml). Efter tørring får man 2.67 g forbindelse. Smp. ca. 129°C, = -78,5° +3° (c = 25 0,5$, chloroform).

Analyse: beregnet: C$ 57,04 H$ 8,74 01$ 4,21 E$ 3,33 fundet: 56,8 8,7 4,3 3,2 * 30 Eksempel 22.

9-0-( (2-dimethylaminoethox.v)-meth.vl)-oxim af erythromycin.

Man blander 8,86 g dimethylamin med 3 g 9-0-((2-chlor-ethoxy)-methyl)-oxim af erythromycin fremstillet i eksempel 21 og afkølet i et isbad. Man lukker hermetisk og anbringer i 35 et bad ved 30-32°G. Efter fuldstændig opløsning lader man henstå 74 timer ved denne temperatur. Efter afkøling på isbad åbnes beholderen. Man eliminerer dimethylaminen. Man tørrer

DK 157878B

19 resten under vakuum og får 3»286 g af et fast hvidt stof, 3,256 g af dette stof optages i 100 ml ethylacetat tilsat lidt ether og vaskes 6 gange med vand og derefter 3 gange med en mættet natriumchloridopløsning. Den organiske opløsning 5 tørres, hvorpå man afdamper og tørrer resten under vakuum.

Der fås 3,1 g forbindelse, 3 g af denne forbindelse omrøres i 2 timer med 10 ml pentan. Ved udrivning og vaskning og derefter tørring fås 2,79 g forbindelse, smp. 162°C, a2^ = -78° +2° (1$, chloroform).

10 Analyse: beregnet: Cio 59,34 W° 9,37 W° 4,94 fundet: 59,3 9,5 4,6

Eksempel 23.

15 9-0-((2-dieth.vlaminoethox.v)-methyl)-oxim af erythromycin.

Lian indfører 2,5 g 9-0-((2-chlorethoxy)-methyl)-oxim af erythromycin fremstillet i eksempel 21 og 10 ml diethyl-arain i en beholder, som man lukker hermetisk. Man opvarmer til 70°0 i 48 timer og bringer derefter på stuetemperatur, 20 Lian inddamper til tørhed under formindsket tryk. Der fås 3,1 g harpiks, som man chromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: toluen, chloroform og triethylamin (6:4:1)). Man forener de homogene fraktioner, inddamper til tørhed under formindsket tryk og får 1,5 g hvid harpiks, som man krystalliserer af 5 ml 25 isopropylether. Der fås et første udbytte på 0,924 g af et hvidt pulver, Smp, 135°C. Moderludene giver ved ind dampning og henstand et andet udbytte på 0,22 g, Smp. 122°c, a2^ = -74° +1,5° ( c =1$, chloroform),

Analyse: 30 beregnet: Ci 60,18 B# 9,53 M 4,78 fundet: 60,4 9,6 4,7

Eksempel 24.

9-0-((2-aminoethoxy)-methyl)-oxim af erythromycin.

35 Lian afkøler 2,5 g 9-0-((2-chlorethoxy)-methyl)-oxim af erythromycin fremstillet i eksempel 21 med en blanding af acetone og kulsyreis, og under argonatmosfssre kondenserer man 20

DK 157878 B

ammoniak indtil ?/3 af beholderen, lian lukker hermetisk, opvarmer til 50°C i 20 timer og afkøler derpå i et bad af acetone og kulsyreis, før man åbner igen og lader ammoniakken undvige. lian optager resten i chloroform, inddamper opløs-5 ningsmidlet under formindsket tryk og får 2,3 g hvid harpiks, som man cfcrcmatograferer på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og triethylamin (9*1)« Kan forener de homogene fraktioner, lian inddamper til tørhed og får 1,3 g harpiks, som man omrører 20 minutter i 3 ml pentan* Man størk-10 ner, frasuger det uopløselige materiale, skyller eet med 0,3 ml pentan, tørrer til- konstant vægt og får 0,92 g af et hvidt pulver, smp. 195°C, a2^ = -73° +2° (c ~ 1&, chloroform). Analyse: beregnet; Gfo 58,44 9,19 1$ 5,11 15 fundet; 58,1 9,3 4,9

Eksempel 25.

9-.0-,=( (2-(meth;;lamino)-etho3r.Y)-metkyl)-oxim af erythromycin.

Man afkøler til -70°G 2,5 g 9-0-( (2-eh lo'-'ethoxy )-me-20 tfcyl)-oxim af erythromycin fremstillet i eksempel 21 og kondenserer 13,5 g methylamin i en hermetisk beholder cg lader temperaturen stige til stuetemperatur. Man lader reaktionen fortsætte i 41 timer. Man afkøler atter til -70°C, åbner beholderen og lader genantage stuetemperatur under omrøring.

25 Ketkylaminet fordamper. Kan tørrer under formindsket tryk og får 2,7 g hvid harpiks, som man ohromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: chloroform og triethylamin (92,5:7,5)). Kan forener de homogene fraktioner cginddamper dem under formindsket tryk. Der fås 2,2 g hvid harpiks, som man krystalliserer 30 af 3 ml ethanol. Man frasuger udfældningen, skyller den med 0,3 ml ethanol, tørrer og får 1,7 g hvidt pulver, smp. 132°C, a2^ = -'79° +2° (c = 1$, chloroform).

Analyse: beregnet; Gi» 58,9 E$ 9,28 Wfo 5,03 35 fundet: 59,1 9,4 5,0 21

DK 157878 B

Eksempel 26.

9-0-( (2-(morpholin-4-yl)-ethox.v)-meth,yl)-oxim af erythromycin. Man blander under omrøring 2,5 g 9-0-((2-chlorethoxy)--methyl)-oxim af erythromycin fremstillet i eksempel 21 og 5 10 ml morpholin i en beholder, som er hermetisk tillukket, og omrører opløsningen i 6 dage ved stuetemperatur. Man inddamper til tørhed og får 3 g hvid harpiks, som man chromatografe-rer på silicagel (elueringsmiddel: toluen, chloroform og tri-ethylamin (6:4*1))* Man forener de homogene fraktioner og ind-10 damper dem til tørhed under formindsket tryk. Man får 2,4 g hvid harpiks, som man størkner ved udrivning med 3 ml af en blanding af pentan og isopropylether (1:1) i 20 minutter. Man frasuger det opnåede produkt, skyller det med 0,3 ml af samme blanding af pentan og isopropylether og tørrer til konstant 15 vægt, ler fås 1,?2 g af et hvidt pulver, smp. 130°C, = -72° +1,5° (c - lfct chloroform).

Analyse: beregnet: Cf 59,24 B# 9,15 % 4,71 fundet: 58,9 9,1 4,5 20

Eksempel 27.

9-0-((methylthio)-methyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører under argonatmosfære 3 g oxim af erythromycin i 80 ml etbylether. Efter opløsning indfører man 0,212 g 25 50$?s natriumhydrid i olie og omrører i yderligere 15 minutter.

Man talsætter derefter på én gang 0,386 g chlormethylmethyl-sulfid i 1 ml ether. Efter 30 minutters forløb tilsætter man 8 ml dimetbylforraamid. Efter 1 time 30 minutter tilsætter man atter 8 ml dimethylformamid, Efter henstand natten over tilsæt-» 30 ter man 70 mg natriumhydrid og 0,129 g chlormethylmethylsulfid.

1 time 30 minutter senere mætter man under voldsom gennembob-ling af carbondioxid i 1 time 30 minutter og fælder med 300 ml mættet natriumchloridopløsning. Man frasuger uopløseligt materiale, optager det i chloroform, vasker med en natriumchlorid-35 opløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Der fås 4,045 £ råprodukt, som man chromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: toluen og triethylamin (9:1)). Man samler de homogene fraktio- 22

DK 157878 B

ner, inddamper dem til tørhed under vakuum og får 1,3 g af en hvid harpiks, som krystalliserer ved udrivning med 7 ml petroleums ether (kp. 65-75°C). Man frasuger den dannede forbindelse, skyller den med 0,7 ml petroleumsether og tørrer. Der 5 fås 0,93 g hvidt pulver, smp. 132°C, a2° =-75,5° +2,5° (c = 0,45#, chloroform).

' Analyse: beregnet: C# 57,9 B$> 8,97 B# 3,46 S$ 3,96 fundet: 57,6 8,9 3,4 4,0 10

Eksempel 28.

9-0-((phenylthio)-methyl)-orim af erythromycin.

Man opløser 3 g oxim af erythromycin i 10 ml ether og 10 ml hex§B&thylphosphotriamid, Man afdamper etheren under 45 formindsket tryk. Han anbringer under argonatmosfære og tilsætter ad flere gange ved stuetemperatur 0,212 g 50#fs natri-umhydrid. Man omrører 15 minutter og tilsætter dråbevis 0,6 ml chlormethylphenylsulfid. Man standser reaktionen 1 time 10 minutter efter afslutningen af tilsætningen, idet man hælder 20 blandingen i 240 ml 3/4-mættet natriumchloridopløsning og indeholdende 1 g natriumbicarbonat. Man omrører 15 minutter ved stuetemperatur, frasuger den dannede udfældning og skyller den én gang med vand. Man opløser den i chloroform, vasker med en mættet opløsning af natriumchlorid, tørrer og inddamper til 25 tørhed under formindsket tryk. ler fås 4,48 g bleggul harpiks, som man chromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: chloroform og triethylamin (9:1)). Man forener de homogene fraktioner og inddamper dem til tørhed, ler fås 3,2 g af en hvid harpiks, som man krystalliserer af 10 ml pentan. Man omrører 30 30 minutter ved stuetemperatur, frasuger den dannede forbindelse og skyller denmed 0,5 ml pentan. Man tørrer og får 2,39 g hvidt-pulver, smp. 198°0, a2£ = -2,5° +1° (c = 0,5#, chloroform). Analyse: beregnet: C# 60,66 H# 8,56 B# 3,21 S# 3,68 35 fundet: 60,6 8,6 3,3 3,7 23

DK 157878 B

Eksempel 29.

9-0-(2.2-aimethoxyeth.yl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 3 g oxim af erythromycin i en blanding af 10 ml ether og 9,6 ml hexamethylphosphotriamid. Man uddri-5 ver etheren under vakuum og bringer på stuetemperatur. Man tilsætter derpå ad flere gange 0,212 g 50$’s natriumhydrid i olie, omrører 15 minutter og tilsætter dråbevis 0,6 ml brom-acetaldehyddimethylacetal. Man standser reaktionen efter 2 timers forløb, idet man hælder i 240 ml 3/4-mættet natriumchlo-10 ridopløsning indeholdende 1 g natriumbicarbonat. Man omrører 10 minutter, frasuger udfældningen, skyller den med den 3/4--mættede natriumchloridopløsning og vasker den med en tilstrækkelig mængde chloroform til opnåelse af solubilisering af den organiske del. Man tørrer filtratet, inddamper til tøris hed under formindsket tryk og får 5 g hvid harpiks, som man chromatorraferer på silicagel (elueringsmiddel: toluen og tri-ethylamin (9:1))« Der fås 3 g harpiks, som man krystalliserer af 5 ml pentan. Man frasuger den dannede forbindelse, skyller den med 0,5 ml pentan, tørrer under formindsket tryk og 20 får 1,912 g af den forventede forbindelse, Første snip. 146°C, andet smp. 186°C, = -80° +2,5° (c =0,6$, chloroform).

Analyse: beregnet: C$ 58,8? 9,15 3,35 fundet: 59,0 9,3 3,3 25

Eksempel 30.

9-0-((l43-dioxolan-2-vl)-methyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører 3 g oxim af erythromycin i 60 ml ether.

Man tilsætter derpå ad flere gange 0,212 g 50$’s natriumhydrid , 30 i olie og derpå 6 ml dimethylformamid. Man fortsætter omrøringen 15 minutter og tilsætter derpå dråbeyis 0,6 ml 2-brommethyl--1,3-dioxolan, Efter 3 timers forløb afdamper man etheren under argonatmosfære og skyller med 1 ml dimethylformamid. Man lader henstå natten over ved stuetemperatur under omrøring. Efter 35 19 timers reaktion tilsætter man 0,106 g natriumhydrid og 0,15 ml 2~brommethyl-l,3-dioxolan. Efter 5 timers forløb standser man reaktionen ved gennembobling af carbondioxid i 1 time, og 24

DK 157878 B

derpå hælder man i 140 ml mættet- natriumchl orid opløsning ,

Man omrører 10 minutter, frasuger den dannede udfældning og solubiliserer den i chloroform. lian tørrer opløsningen, inddamper til tørhed under formindsket tryk og får 3,7 g harpiks, 5 som man chromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: toluen og triethylamin (0:1)").Han forener de homogene fraktioner og • inddamper dem til tørhed. Der fås 1,55 g hvid harpiks, som man størkner i 5 ml pentan. Han frasuger den dannede udfældning og skyller den med C,5 al pentan, Efter tørring får man 1,227 10 g forbindelse, første smp, 140°0, andet smp. 208°C, a2^ = -67,5° +1,5° (c = lio, chloroform).

Analyse: beregnet: Gi 58,91 W° 8,93 3,35 fundet: 59 8,9 3,3 15

Eksempel 31.

9-0-(2-(diethylamino)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 5,62 g oxira af erythromycin i 50 ml tetra-hydrofuran, tilsætter 1 ml 0,04 M natriumcarbonntopløsning og 20 derefter 2,58 g hydrochlorid af 2-ohlor-l-diethylaminoethan.

Man tilbagesvaler reaktionsblandingen i 16 timer, Man eliminerer det uopløselige materiale, og filtratet behandles med aktivkul og inddampes derpå til tørhed, hvorved man får 6,21 g råprodukt. Efter omkrystallisation af en blanding af isopro-25 panol og vand får man 5,82 g farveløse krystaller, smp. ca, 220°C, = -83° +2,5° (c - 0,7i, ethanol).

Analyse: ^3^81^3^13 beregnet: C,·· 60,9 E* 9,o 1$ 4,95 fundet: 51,0 9,8 4,8 30

Eksempel 32.

9-0-(2-(pyrrolidin-l-yl)-eth.vl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 2,25 g osim af erythromycin i 50 ml vandfri acetone, tilsætter 0,720 g natriumcarbonat og 0,76 g hy-35 drochlorid af I-(p-chlorethyl)-pyrrolidin, Man opvarmer til tiIbagesvaling i 6 dage. Man tilsætter 40 ml acetone og frafiltrerer det uopløselige materiale i varmen. Man hælder 100 ml

DK 157878B

25 destilleret vand i filtratet og får ved udrivning 2 g råprodukt, som man renser ved passage gennem silioagel med en blanding af ether og triethylamin (9:1). Der fås 1,72 g af den forventede forbindelse, oc^ = -85° +2° (c = 1$, ethanol), 5

Eksempel 55.

9-0-(methoxvmethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 3,75 g oxim af erythromycin i 75 ml acetone, tilsætter 2,1 g natriumbicarbonat og 1,3 g chlormethyl-10 methylether og opvarmer blandingen til tilbagesvaling i 4 dage under tilsætning efter forløbet af 17 timer 30 minutter og 48 timer af 2 gange 0,45 ml reagens. Man hælder . reaktionsblandingen i 100 ml vand og ekstraherer med chloroform. Man vasker den organiske fase med en mættet vandig natriumchlorid-15 opløsning, tørrer og inddamper til tørhed under formindsket tryk. Man chromatograferer resten på silicagel, eluerer med en blanding af benzen, chloroform og triethylamin (5:4il) og får 2,06 g af den forventede forbindelse, = -80,5° +2,5° (c = 0,6$, ethanol).

20 Chlormethylmethyletheren fremstilles som følger;

Man omrører 45 ml dimethoxymethan med 1,2 ml vandfrit methanol og tilsætter dråbevis 35,3 ml acetylchlorid, idet man holder temperaturen på ca, 20°C, Man omrører således i 3 dage, hvorefter man umiddelbart benytter det opnåede reagens.

’ ’ 25

Eksempel 34.

9-0-(2-(plperidin-l-vl)-ethyl)-6xim af erythromycin.

Man opløser 2,25 g oxim af erythromycin i 50 ml vandfri acetone og tilsætter 0,72 g natriumcarbonat og 0,830 g hy-30 drochlorid af 2-chlorethyl-N-piperidin, Man bringer blandingen til tilbagesvaling i 4 dage. Derpå tilsætter man 40 ml acetone, opvarmer atter til tilbagesvaling, filtrerer uopløseligt materiale fra 1 varmen og inddamper derpå filtratet til tørhed.

Man chromatograferer resten på silicagel, eluerer med en blan-35 ding af benzen og chloroform og triethylamin (5:4:1) og får 1,7 g af den forventede forbindelse, a-j-, = -78° +2,5° (c = 0,6$, ethanol).

25

DK 157878 B

Eksempel 55.

9-0-(2-(morpholln-4-.yl)-ethyl)-oxiiii af erythromycin«

Man opløser 2,25 g oxim af erythromycin i 60 ml acetone, tilsætter 0,93 g natriumcarbonat og 1,120 g hydrochlo-5 rid af Ε-β-chlorethylmorpholin, Man opvarmer reaktionsblandin-gen til tilbagesvaling i 6 dage. Man tilsætter 50 ml acetone, opvarmer atter til tilbagesvaling, frafiltrerer uopløseligt materiale i varmen og inddamper filtratet til tørhed under formindsket tryk. Man optager resten i acetone i kulden og filtre-10 rer råproduktet. Efter opløsning i acetone, inddampning til lille rumfang og tilsætning af ether suger man fra, tørrer og får 1,45 g af den forventede forbindelse, = -73,5° +3° (c = 0,5$, ethanol).

Analyse: Ο^Ηγ^Ε^Ο^ = 862,112 15 beregnet: C# 59,9 H$ 9,2 E$ 4,87 ' fundet: 59,9 9,3 4,7

Eksempel 36.

9-0-(2-(dimethylamino)-l-methylethyl)-oxim af erythromycin.

20 Man opløser 20 g oxim af erythromycin i 300 ml acetone, tilsætter 6,4 g natriumcarbonat og 6,35 g 2-chlor-l-dimethyl-aminopropan. Man opvarmer reaktionsblandingen til tilbagesvaling i 3 dage. Man tilsætter 100 ml acetone og frafiltrerer uopløseltgt materiale. Man behandler filtratet med aktivkul 25 og tilsætter 500 ml vand* Man frasuger det krystallinske stof og får 19,8 g af den forventede forbindelse, α^ = -96° (c = 0,75$, ethanol).

Analyse: ^42^79%®13 = 834,10 beregnet: 0$ 60,48 H$ 9,54 H$ 5,03 30 fundet: 60,3 9,6 5,0

Eksempel 37.

9»0-((5-dimethylamino)-propyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 3,75 g oxim af erythromycin i 40 ml vand-35 fri acetone og tilsætter 1,2 g natriumcarbonat og 1,22 g hy-drochlorid af 3-chlordimethylaminopropyl. Man opvarmer reaktionsblandingen til tilbagesvaling i 7 dage. Man tilsætter 27

DK 157878 B

50 ml acetone, opvarmer atter og frafiltrerer uopløseligt materiale i varmen. Man inddamper filtratet til ca. 5 ml, tilsætter 100 ml petroleumsether (kp. 60-80°C) og frasuger råproduktet. Man opløser det i ca,60 ml acetone, behandler med 5 aktivkul ved 40°c og filtrerer. Man inddamper filtratet til lille rumfang, tilsætter lidt efter lidt petroleumsether (kp. 60-80°0) og lader derpå afkøle til stuetemperatur. Man frasuger 1,30 g af den forventede forbindelse, ctp = -70° +2° (c = 1$, chci5).

10 Analyse: Ο^Ηγ^Ο^ = 834,109 beregnet: C$ 60,5 H$ 9,5 W° 5*0 fundet: 60,6 9,7 4,9

Eksempel 38.

15 9-0-(2-brometh.vl)-oxim af erythromycin.

Man blander 5,62 g oxim af erythromycin og 100 ml ether. Man tilsætter 0,75 g natriumhydrid og efter afslutningen af gasudviklingen 15 ml 1,2 -dibromethan. Man opvarmer reaktionsblandingen til tilbagesvaling i 16 timer, afkøler til 20°C og 20 tilsætter 0,75 g natriumhydrid, og derefter opvarmer man atter til tilbagesvaling i 6 timer. Man afkøler blandingen til ca, 0°C, tilsætter 100 ml methylenohlorid og dråbevis under omrøring 3 ml eddikesyre. Man lader derpå genantage stuetemperatur og hælder reaktionsblandingen i 50 ml vand indeholdende 4 ml 25 28$’s ammoniakvand. Man fraskiller den organiske fase, ekstra- herer den vandige fase med methylenohlorid, og de organiske faser forenes, vaskes med vand, tørres og inddampes til tørhed, Man chromatograferer den opnåede rest på silicagel, elue-rer med en blanding af methylenohlorid og triethylamin (25:0,5) 30 og får 4,78 g af den forventede forbindelse, Up = -87° +2,5° (c = 0,5$, ethanol).

Analyse: C^gH^Brl^O*^ = 855,9 beregnet: C$ 54,7 H$ 8,3 W° 3,27 Br$ 9,3 fundet: 54,6 8,3 3,2 9,2 35 28

DK 157878 B

Eksempel 39.

9-0-(2-( (l-methylethyl-amino)-eth.vl)-oxim af erythromycin« I 15 timer omrører man 2,58 g 9-0-(2-bromethyl)-oxim af erythromycin i 12 ml isopropylamin ved stuetemperatur og 5 under indifferent atmosfære. Man hælder reaktionsblandingen i 600 ml vand, frasuger deh opnåede udfældning , vasker med vand, tørrer den og får 2,29 g råprodukt. Man renser ved chro-matografi på silicage1 under eluering med en blanding af me-thylenchlorid og triethylamin (25:0,5). Der fås 1,60 g af den 10 forventede forbindelse, = -78,5° (c = 0,5$, ethanol). Analyse: Ο^Ξγ^Ν^Ο-^ = 834 beregnet: 0$ 60,5 H$ 9,55 W° 5.04 fundet: 60,6 9,5 4,9 15 Eksempel 40.

9-0-( (2-methylpropox.v)-methyl)-oxim af erythromycin.

Ilan opløser 4,49 g oxim af erythromycin i 40 ml acetone og tilsætter 2,52 g natriumbicarbonat og 0,76 g chlormethyl-isobutylether. Man opvarmer reaktionsblandingen til tilbage-20 svaling i 41 timer, idet man tilsætter efter forløbet af 18 timer og 26 timer 2 gange 0,4 ml chlormethylisobutylether. Man frafiltrerer uopløseligt materiale og inddamper filtratet til tørhed. Man optager resten i 20 ml af en mættet vandig natrium-bicarbonatopløsning, frasuger uopløseligt materiale og renser 25 den ved chromatogråfi på silicagel under eluering med en blanding af benzen og triethylamin (15:1). Eer fås 3,07 g af den forventede forbindelse, a-p = -79,5° +3° (c = 0,5$, ethanol).

Analyse: C42H78^2°14 “ beregnet: 0$ 60,4 H$ 9,4 W° 3,35 30 fundet: 60,7 9,7 3,5

Eksempel 41.

9-0-(2-(bis-(l-methylethyl)-amino)-eth.vl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 5,62 g oxim af erythromycin i 50 ml tetra-35 hydrofuran, tilsætter 5,04 g natriumbicarbonat og 1,25 g hy-drochlorid af 2-chlor-l-(bis-(l-methylethyl)-amino)-ethan.

Man opvarmer reaktionsblandingen til tilbagesvaling i 4 dage, 29

DK 157878 B

idet man efter 64 timers forløft tilsætter 0,82 g hydrochloric! af 2-chlor-l-(bis-(l-methylethyl)-amino)-ethan. Man frafiltrerer uopløseligt materfale og inddamper filtratet til tørhed. Den opnåede rest chromatograferes på silicagel. Man eluerer 5 med en ftlanding af methylenchlorid og triethylamin (25:05) og får 4,37 g af den forventede forbindelse, a-p = -73° +3° (c = 0,5$, ethanol).

Analyse: ^45^85^3^13 = 8?6 beregnet: C$ 61,7 H$ 9,8 N$ 4,8 10 fundet: 61,7 9,9 4,7

Eksempel 42.

9-0-( 2-(diethox.v)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 5,62 g oxim af erythromycin i en blanding 15 af 18 ml hexamethylphosphotriamid og 5 ml ethylether. Man tilsætter 0,4 g 50$fs natriumhydrid i olie, omrører 15 minutter og tilsætter derpå dråbevis 1,55 ml bromacetaldehyddiethyl-acetal. Man omrører i 3 timer 50 minutter ved 20°C og hælder derpå!500 mi vandig natriumchloridopløsning indeholdende 2 g 20 natriumbicarbonat, Man ekstraherer med ether, vasker etherfa-sen med saltvand, tørrer den og inddamper den til tørhed.

Der fås 6,55 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af benzen og triethylamin (9:1) og derefter med en blanding af benzen, chloroform og 25 triethylamin (7:2:1), Der fås 1,7 g af den forventede forbindelse , aD = -75,5° ±2,5° (c = 0,65$, ethanol).

Analyse: C43^80^2°15 = 8^5,120 beregnet: C$ 59,70 E$ 9,32 IT$ 5,23 fundet: 60,1 9,4 3,3 30

Eksempel 43» q„0-.(2-(4-methylPiperazin-l-yl)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 2,31 g af det i eksempel 38 opnåede brom-deriyat i 10 ml N-methylpiperazin og omrører ved 20°C i 20 ti-35 mer. Man hælder i 50 ml vand indeholdende 0,5 g kaliumcarbo-nat, frafiltrerer udfældningen, vasker den med vand, tørrer den og får 1,99 g råprodukt. Man opløser forbindelsen i methy-

DK 157878B

30 lenchlorid, vasker med en vandig natriumcarbonatopløsning, tørrer, inddamper til tørhed, optager i isopropylether, filtrerer, eliminerer opløsningsmidlet og vasker resten med pen-tan; der fås 0,94 g af den forventede forbindelse, = -81° 5 +2° (c = 1$, ethanol).

Analyse: = beregnet: Ofo 60,4 9,45 Tfø 6,40 fundet1 60,5 9,4 6,2 10 Eksempel 44, 9-0-(2-(ethylamino)-ethyl)-oxim af erythromycin.

Man indfører 2,31 g af det i eksempel 38 opnåede bromderivat i en beholder på 50 ml, afkøler ved hjælp af en blanding af acetone og kulsyreis og indfører derpå monoethylamin 15 indtil 2/3 af rumfanget. Man lukker hermetisk, lader genantage stuetemperatur under omrøring, fortsætter omrøringen i 20 timer, afkøler, åbner beholderen, eliminerer monoethylaminet, optager resten i vand, filtrerer, vasker med vand, tørrer og får 2,3 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel un-20 der eluering med en blanding af methylenchlorid og triethyl-amin (25:0,5) og får 1,76 g af den forventede forbindelse, otp = -82° 42° (c = Ifo, ethanol).

Analyse: °4= S20 beregnet: Cfo ‘60,05 W° 9,47 B* 5,12 25 fundet: 60,5 9,5 4,7

Eksempel 45.

9-0-(2-aminoeth.vl)-oxim af erythromycin.

Man indfører 4,5 g af det i eksempel 38 opnåede brom-30 derivat.i en beholder på 50 ml. Man afkøler ved hjælp af en blanding af acetone og kulsyreis og indfører 20 ml ammoniak. Man lukker hermetisk, lader genantage en temperatur på 20°0 og holder under omrøring i 68 timer. Man afkøler, eliminerer ammoniakken, optager i methylenchlorid, vasker med vand, tør-35 rer og inddamper til tørhed. Der fås 3,97 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af methylenchlorid og triethylamin (19:1). Man optager

DK 157878B

31 den fremkomne forbindelse i methylenchlorid, vasker opløsningen med en vandig natriumcarbonatopløsning, tørrer og inddamper til tørhed. Man chromatograferer atter resten på sili-cagel under eluering med en blanding af chloroform og triethyl-5 amin (15:1) og får 1,67 g af den forventede forbindelse, oc^ = -76° +2° (c = 0,8$, ethanol),

Analyse: ^9^73^30^ = 792 beregnet: C $ 59,1 H$ 9,5 M$ 5,5 fundet: 59,4 9,4 5,2 10

Eksempel 46.

9~0-(2-(dieth.vlamino)-l-meth.vlethyl)~oxim af erythromycin.

Man opløser 2 g oxim af erythromycin i 50 ml acetone.

Man tilsætter 0,64 g natriumcarbonat og derpå 0,8 g hydro-15 chlorid af l-diethylamino-2-chlorpropan og tilbagesvaler i 23 timer. Man filtrerer mineralsaltene, sætter vand til filtratet, frasuger krystallerne, vasker dem ved hjælp af en opløsning af acetone i vand, tørrer dem og får 1,9 g af den forventede forbindelse, = -84° +2,5° (c = 0,75$, ethanol).

20 Analyse: “ 862,164 beregnet: 0$ 61,3 H$ 9,7 N$ 4,87 fundet: 61,4 9,7 4,8

Eksempel 47.

25 9-0-(oxiramylmethyl)-oxim af erythromycin.

Man opløser 5 g oxim af erythromycin i 23 ml dimethyl-formamid og tilsætter derpå langsomt 354 mg 50$fs natriumhy-drid i olie, omrører i 15 minutter og tilsætter derpå dråbevis 1 g epibromhydrin opløst i 1 ml dimethylformamid. Man neu-30 traliserer derpå ved gennembobling af carbondioxid, hælder blandingen i 250 ml mættet vandig natriumchloridopløsning, omrører 10 minutter og frasuger derpå den dannede udfældning. Man skyller den med vand og opløser den derpå i chloroform, tørrer, behandler med aktivkul, inddamper til tørhed og krystallise-35 rer af pentan. Der fås 4,1 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel under eluering med en blanding af chloroform og triethylamin (9:l). Der fås efter krystallisation af pentan

DK 157878B

32 0,87 g af den forventede forbindelse, smp. 154°C, oc^ = -79° +2,5° (c = 0,5$, chloroform).

Analyse: O^qE^^O·^ = 805 beregnet: C $ 59,68 H$ 9,01 IT$ 3,48 5 fundet: 59,6 9,1 3,5

Eksempel 48.

9-0-(3-(di methylanino)-2-hydroxypropyl)-oxia af erythromycin, lian indfører 2,5 g af den i eksempel 47 fremstillede 10 forbindelse i en beholder, som man lukker hermetisk, og man afkøler i et isbad, lian indforer hurtigt 2,8 g dimethylamin, lukker beholderen igen og omrører ved 20°C i 4 timer 10 minutter, lian afkøler atter, åbner beholderen og eliminerer dime thylaninet. lian ch romat ograf erer resten på silicagel under 15 eluering med en blanding af chloroform og triethylamin (9:1) og får efter krystallisation af pentan og tørring 1,21 g af den forventede forbindelse, smp. 144°C, = -84,5° +2,5° (c » 0,6$, chloroform).

Analyse: O^H^li^O^ = 850,10 20 beregnet: ' C$ 59,34 H$ 9,37 IJ$ 4,94 fundet: 59,1 9,4 4,8

Aksempel 49.

9-Q-(2-(diethylamlno )-ethyl)-oxim af erythromycin, en anden 25 isomer ued hensyn ‘til oximen end forbindelsen ifølge eksempel 31.

lian går ud fra 4,5 g oxim af erythromycin (en isomer, som e.r forskellig fra den i eksempel 31 benyttede), som man opløser i 45 ml tetrahydrofuran, lian tilsætter 2,6 g natrium-30 carbonat og derpå 2,1 g hydrochlorid af diethylaminoethylchlo- rid, lian tilbagesvaler i 5 timer 30 minutter, filtrerer, inddamper filtratet til tørhed og chromatograferer resten på silicagel under eluering med en blanding af benzen, chloroform og triethylamin (5:4:1) og derpå med en blanding af methylenchlo-35 rid og triethylamin (15:1). Der fås 0,5 g af den forventede forbindelse, oc-j = r-52° +2,5° (c = 0,5$, ethanol).

33

DK 157878 B

Analyse: beregnet: C$ 60,89 W° 9,62 llfo 4,95 fundet: 61,2 9,7 4,9 5 Eksempler på farmaceutiske præparater.

Man fremstiller tabletter indeholdende: - forbindelse ifølge eksempel 31 0,5 g - tilsætningsstof ad 1 g (enkeltheder vedrørende tilsætningsstof: 10 stivelse, talkum, magneslumstearat)

Man fremstiller tabletter indeholdende: - forbindelse ifølge eksempel 1 0,2 g - tilsætningsstof ad 1 g (enkeltheder vedrørende tilsætningsstof: 15 stivelse, talkum, magnesiumstearat),

Farmakologisk undersøgelse af de omhandlede forbindelser.

A) Aktivitet in vitro.

Fortyndingsmetode 1 væskeformet milieu.

20 Man fremstiller en række glas, hvori man fordeler sam me mængde af sterilt næringsmilieu» Man fordeler i hvert glas voksende mængder af den forbindelse, som skal undersøges, og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme.

Efter inkubering i 24 timer i varmeskab ved 57°C vur-25 deres inhiberingen af væksten ved gennemlysning, hvilket gør det muligt at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer, 1,1.0, udtrykt i jig/ml.

Der fås følgende resultater: 30 35

DK 157878B

34 C"- in

• C\l in O Η Η H

W ·> " " * ·* *

X OH O O O O O

W

^ c\i ιτ\ *0 . O O O m JQ ·» ft ·« »

M HH H O O O O

W ^ . O in CM in tø ft ft ft » O)# CM m CM o o o o m w

H

$.

Ό 3 •h rn

(Q

d · tn in H cm cm cm Q {Q * **·*·*·*

ft .¾ OH OOOOO

W

CM

CM

• i—) in O Η H CM

tø * ft ·» ft ft ft

,y OH OOOOO

m s# h m

• vo in O CM CM CM

tfl Λ ·» » « »

,¾¾ O CM H O O O O

W O

ro C" Η H cm ft ^ . vo in m h · m -i ίο & o S* << m ^ ιό ΚΛ jd <d to >£ to to ·η o

u Cd ωω O ·Η H O

Φ S ij, 3 S H cd H

5 g O φ-Ρ φ φ CO O C

.5 Ψ P L« L bO O Φ

.p % 3.2 3 O <D CO W

S ig < en fr.S'nr!

•J· ro JA o . pi ‘H H

cm 2 w ω ·η 2 H 3¾ 3 wtdtn-p P H S O? O 3 3 3 £ φ £<H 03 O 0 0 0 3

4J o rt 03 OMD O O O M

£ O *H 0*d 0-4" O O O

φ O H Oj OH O O O OQ

Η Η ΗΠ H · o o O 3 . >,-H >>d >*<r 4f -p -ΰ η

rj ίο rim ft ft H

. ft-H ftd ft φ Φ ω ·Η lj cd 3 cd£ cd · P P P o . +5® -ΡΪ -P P -P -P -P cd S roft roftra3 ro ro ro w 35

DK 157878 B

H in in in in m in o o o ni «S ·* ft Λ Λ *v Λ

o o o O O O O

V/ h in

H <J· O O H CM

ζ\| * ·> ft λ ^ o o o o o o o

V

ni

KV <f VO O H H OJ

CM «. ·>·»»·» »

O H O O O O O

Η h in in φ <j- vo o o o ni

Pf\J ·» ·. ·*»·»·*·» g ni o o o o o o o CD 0 m ,¾ ni

<DH ni ni mOHH

cm ·> ·> » » » » I

<D o o o o o o u

H

IS

iH O »i VO <fHHHni •h ni ·> » ·- ·· ·- *- ·- o o o o o o o

CD

co h is m

ID H VD <f.QHHVD

·>, ft ft ft ft ft ft β o o o o o o o

•H

β in

o lO <f ID <1- O CM H

Γτ I «—I ft ft ^ Λ k ^

o O O O O O H

in ίο ίο η h ni vo j—| ψ. ·>·>»·»·»

o .H O O O O O

I ni in ni <1- o h o -i ft ft ft ft ft ft ft o o o o o o o I ni h ml-3- vo *J-OOH<f lo O o o o o o

(S

H

ιο ni fc in h · in cn tn vo -μ ft cn <J· o o β X <! in σι in Η O Φ Φ

μ CO W CQ CO

β CO CQ W CO 0) ·Η ·Η ·Η CD 3 3 Η 3 β Η Η Η g (D CD CO CD CDCØ'CdCd

•H β u <D k bOOOO

-μ β 3 β 3 O CD CD CD

cd g cd β cd >i cd cd cd

<f- β Ο *H ft «Η <H <H

CM CD CO CQ CQ H CQ

g 3 H 3 H 3 CQ CQ CQ CQ

β g oiso-ho 3333 CD cd Ο <Η Ο Ο O oooo

+J +3 Ο β OH O OOOO

«« cn ο ή ο β o oooo

CD OH O CD O OOOO

Η Η H ft r—1 Ο Ο Ο O

. >vH >> >Λ0 -P +> +5 +3 O Æ Ο Λ ,β-ΐ ft ft ft ft

. fVH ftOO ftH CD CD CD CD

h cd β cdni rt · β β β β . -μ cd ·μπ -μ-4· -μ -μ -μ -μ

s CQftCQH'CQinCQCOCQCQ

36

DK 157878 B

vol Cd in in O H Hin f<M « * Λ f» ·* «k #k 1 o o o o o o o V/ I in <j- M3 O CM <f * Λ *S ^

O H O O O OH

Η H m

φ <f -4- M) M3 O H O CM

n tn » ·» ·%»«·> ^ ** g ooooooo φ ψ

CO

jsA CM

φ tn H -4· CM O Η H CM

m « ·» ·» ·* ·> ·> ·» o ooooooo b£ s i h m

CM I -i M300 HCM

>H (n| » ·>*·>·.·> I O H o o o o o <D V/

W

H Cd

φ Hl in O H H

x) ml » » » * i

fil O Η HOO O

•H

P

fi in

o o I M3 -4- O ~4 CM

b. ml » »· ·>«··> *·

I o O OOO O CM

<J\ -4“ H -4" CM

(\j «. ·*#*·*·*

O H OOO OH

in CO -4" M3 M3 O CM CM -4 ΛΙ ·» Λ ·. * *1 O O OOO o o

M3 Μ) Η · M3 H CM CM

£\J ·> * ·*

O O OOO OH

CO

CM H

Η M3 CM m HH mm m M3 *4- -4" o o c in tn

H D

10 W M M

οι ro ro o> η η h

L fifififiHHH

m φ Q)-P Φ Φ (0 Cd fi

g fifififc&OOOO

•H fi fi φ fi O Φ Φ Φ +> cd S Cd -P cd >> cd cd cd

u O ro ft <H <H <H

φ ro ro ro h ro cm S fiHprofi rorora ro g O S O Φ O fififi fi

U Cd O <H O U O M3 OOO O

Φ -P Ofi Ofi OO- O O O o

-p 03 OH OH OH O O O O

<H OH OH O« O O O O

<D HH HH H -4" O O O <3* O

>»H >»H >iin -P -P HIS -P

o popop ftftft ft . ftH ftH ft · Φ Φ ΦΕυ Φ H (dficdficdftJ-it^f-i fn . ΗΦΗΦ-ΡΚ-ΡΗ-Ρί^-Ρ

g CO ft CO ft C/3 Φ 03 03 COCTi CO

37

DK 157878 B

in

CO VO O -4- H

K ·* ·> ·* ^ Λ

O O o O O O H

lf\

0- CM <f· -4- O CM CM CM

J· ft ·» ^ ^ ^

H O O OOOOO

0) g Φ i h m in

CQ vol CM MO -4- O O O H

VH -4-1 * * * * * * ·» φ I o o ooooo Μ- φ hi

H I H

s ml VO O -4 H CM

•Η I O Η HOOOO

0) V'

Hl h m (D |f\ O CM O <r •ri -^1 * ·*· *

g I H CM HOOOO

2 vy

L

o m

fa h m o cm CM

J- ·> ·> ·» * I

O Η H O O O

H m CM

a\ rn Ό -4-0 0 0 H

K"\ ^ λ * o o ooooo

M

-4 CO in CM Η , I-, H ID CM fa ^ η h in tn 5

vo -4- CD

o o <t; m ctn ^ H ^ rø oa w “ c ta ω W 0) *H ·Η S 2 Dj 2 β Η H ^ S β a> a) +5 o <d cd cd ^ •h a> u β β β ω o o £> -P S 3 ί φ i 00)0)¾

I cd β cd P cd ni ώ S

<1- cd OCQ Pi *H Ή Ή cj -p rara μή ra ca 2H 2 w 2 2222 β O 8 O 0) O 2 2 2 2

S 0<H O β OVO O O O O

+) o β o β o<j- o o o o

<H O-HO-HOHOOOO

0) OH OH O · O O O O

HH HH H -4" O O O O

. >vH >>·Η !>>m -P -P -P -P

O ^Ο,βΟΛ ft ft ft ft . ρ,.Η P)H p, · <D 0) 0) 0) Η £0β(0ββΡ<^Ρι£&

. -p 0) -P0) P X P P P P

g to p, rap ra Q) cn co co w

DK 157878B

38 B) Aktivitet in vivo.

a) Eksperimentel infektion aed Staphylococcus aureus exp» nr, 54146.

Han undersøger virkningen af nogle forbindelser iføl-5 ge eksemplerne og af erythromycin på en eksperimentel infektion med Staphylococcus aureus på mus.

Han inficerer hold På 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 21 g ved intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af en 22 timer gammel kultur i bouillon ved pH 7 af stammen af 10 Staphylococcus aureus nr, 54146 fortyndet til 1/6 med fysiologisk vand.

Han indgiver oralt 1 time, 5 timer og 24 timer efter infektionen en bestemt mængde af forbindelsen.

Han noterer dødeligheden den ottende dag, 15 Resultaterne er som følger:

Overlevende mus den 8, dag ved dosis:

Forbindelse 0,25 mg 0,5 mg 0,75 mg 1 mg 1,5 mg 2 mg ifl, eks, _ _ _ _ _ _ 1 7 10 20 3 7 9 9 4 0 4 9 10 5 2 8 10 15 1 9 lo 20 2 4 10 25 21 0. 6 10 29 2 8 9 10 30 2 7 10 31 4 10 33 7 10 30 35 2 8 9 10 36 3 9 10 41 9 10 erythromycin 5 9 9 10 b) Eksperimentel infektion med Streptococcus pyogenes A 561.

35 Han undersøger virkningen af forbindelserne ifølge eksempel 1 og 5 på en eksperimentel infektion med Streptococcus pyogenes A 561 på mus.

39

DK 157878 B

Man inficerer hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 21 g med en intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af en 22 timer gammel kultur i Todd Hewitt’s bouillon (pH = 7,8) af stammen Streptococcus pyogenes å 561 fortyndet til 5 1/1000 med fysiologisk vand.

Man indgiver oralt 1 time, 5 timer og 24 timer efter infektionen en bestemt mængde af den pågældende forbindelse.

Man noterer dødeligheden den 5. dag.

Resultaterne er som følger: 10 Overlevende mus den 5. dag ved dosis.:

Porbindelse ifølge 0.1 mg 0.5 mg 1 mg

Eksempel 1 2 10 eksempel 5 10 15

Yderligere farmakologiske undersøgelser

Man har først undersøgt virkningen af erythromycin og af forbindelsen 9-0-methyloxim af erythromycin A, som falder under den almene formel for de fra SE-patentskrift nr.375.535 kendte 20 forbindelser, på en eksperimentel infektion med Staphylococcus aureus på mus.

Man inficerer hold på 10 hanmus med en gennemsnitsvægt på 21 g ved intraperitoneal injektion af 0,5 ml af en 22 timers kultur af stammen nr. 54146 -af Staphylococcus aureus for-25 tyndet til 1/5 med fysiologisk .kogsaltvand.

Man indgiver per os en bestemt mængde af forbindelsen 1 time, 5 timer og 24 timer efter injektionen.

Man får følgende resultater for beskyttende dosis:

Erythromycin DP 50 = 40,9 mg/kg 30 9-0-methyloxim af erythromycin DP 50 = 45,2 mg/kg

Konklusion:

Erythromycin er mindst lige så aktivt som forbindelsen 9-0-methyloxim af erythromycin A.

Idet man benytter samme metode, bestemmer man forholdet 35 mellem den beskyttende dosis 50, DP50, for et vist antal forbindelser fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen og for erythromycin.

DK 157878B

40

Beregningen for forbindelsen ifølge eksempel 3 er som følger: DP 50 érythromycin = 2,35 DP 50 produkt ifølge eksempel 3 5

Idet man udfører den samme beregning for andre forbindelser, får man følgende forhold: - produkt ifl. eks. 5 = 2,36 10 - " " eks. 6 = 4,48 eks. 17 = 2,2 eks. 21 = 2,27 eks. 29 = 2,86 eks. 31 = 1,78 15 - " " eks. 33 = 2,78 eks. 35 = 1,88 eks. 36 = 2,12 eks. 41 = 2 - produkt A (se nedenfor)=2,49 2 q - produkt B =1,81

Konklusion:

Forbindelserne ifl. eksempel 3, 5, 6, 17, 21, 29, 31, 33, 35, 36, 41 og produkterne A og B, som in vivo er mere 25 aktive end érythromycin, er ligeledes - a fortiori - mere aktive end 9-O-methyloxim af erythromycin A, som falder under den almene formel for forbindelserne, som kendes fra SE-patent-skrift nr. 375.535.

Forbindelse A:9-(O-(2-diethylamino)-1,1-dimethylethyl)-oxim) 3 q af erythromyc in.

Man opløser under nitrogenatmosfære 2,99 g oxim af erythromycin i 30 ml acetone og tilsætter derpå 1,06 g na-triumcarbonat samt derefter 1,2 g chlorhydrat af N,N-diethyl-2-chlor-2-methylpropylamin. Man opvarmer til tilbagesvaling 35 under omrøring under nitrogenatmosfære. Efter 20 timers forløb tilsætter man 0,3 g chlorhydrat af N,N-diethyl-2-chlor-2-me-thylpropylamin og fortsætter tilbagesvalingen i 6 timer. Man

DK 157878B

41 frafiltrerer de uorganiske salte, skyller med acetone og udfælder med 50 ml vand. Der fås 3,5 g af et amorft fast stof, som man opløser i 60 ml acetone. Man opvarmer til tilbagesvaling og tilsætter 35 ml varmt vand. Den afkølede opløsning 5 krystalliserer. Man lader henstå i 2 timer ved stuetemperatur og derefter i 2 timer ved 0-5°C. Man filtrerer, skyller med en blanding af acetone og vand i forholdet 1:1 og får 2,756 g af det forventede produkt.

10 = -68,5° + 2,3° (c = 0,5% i ethanol).

Analyse : C45H85N3°13 beregnet: C%:61,8 H%:9,8 N%:4,8 fundet: 62 9,8 4,7

Forbindelse B: 9-(0-(2-((diethyl)-(oxido)-amino)-ethyl)-oxim) af erythromycin.

Man opløser 3 g oxim af erythromycin i 30 ml tetrahydro-furan og tilsætter 2,12 g natriumcarbonat og 1,5 g l-chlor-2-((diethyl)-oxido)-amino)-ethylchlorhydrat. Man opvarmer til 20 tilbagesvaling af tetrahydrofuranet i 76 timer og frafiltrerer derefter de uorganiske salte og skyller med tetrahydrofuran.

Man inddamper filtratet til et rumfang på 15-20 ml. Man filtrerer med 70 ml acetone og tilsætter 180 ml vand. Der fås en udfældning, som man filtrerer og skyller med en opløsning af 2 5 vand og acetone (2:1). Man tørrer og får 3 g råprodukt, som man chromatograferer på silicagel (elueringsmiddel: benzen, chloroform og triethylamin, 55:35:10). En første fraktion optages i 100 ml pentan. Der fås 1,12 g af den forventede forbindelse,og 0,41 g harpiks krystalliserer ikke. Man samler 30 en anden fraktion pa 0,077 g og de 0,41 g ikke krystalliseret materiale. Efter chromatografi på silicagel (elueringsmiddel: benzen og triethylamin, 9:1) får man yderligere 0,35 g af den forventede forbindelse.

<Å^= ”72° + 3° (c = 0,5% i ethanol).

35 Analyse: C43H81N3014 beregnet: C%: 59,77 H%: 9,45 N% 4,86 59,3 9,5 4,8 42

DK 157878 B

r

TABEL

A R

Produkt ifl. eksempel 3 -0-CH2-CH3 ” 5 -(C«,),- -Ν'"’" ' 3 ^CH3 " " 6 -CH2- -0-CH2-CH2-0-CII3

17 -(ch2)2- -0-CH2-CFI2-0H

21 _CH2~ -0-CH2-CH2 Cl „ ^OCH, "29 “CH - -CH"^ 3 2 \ och3 " 31 -(CH2)2 _N--Cil2CII3 \ CH2 CH3 II |t Λ Λ 33 “CH2~ _0CH3 “ 35 (CH .

35 -(CH2}2 -N 9 " 36 -(CH-η,, - I 2 \C„, ch3 ^iPr " " 41 - (CH ) - -ir 2 2 iPr CH3

Produkt Λ -CH2-C " ^3 1 \

CH

3 C»2 CH3 0

Γ .CH CH

” B “{CI12)2 " - " CI12 CH3

Claims (3)

10 H-C 9 OH 3 \ ^ r}i I HO.. / X;U13 n_l·· A ] 1 T......0 Nd ^ch (1) HOL · · Ul3 >J2 . y. ^ r<5 CH^ 0 5**3

15 Vz' Γ····ο....:./ Y |f^ CII3 L 3Vx'-. o ^x; "oh H,C OCIL • 5 D 20 hvor A betegner en ligekædet eller forgrenet alkylengruppe med 1-6 carbonatomer, og eventuelt substitueret med 25 hydroxy, og R betegner - enten alkyloxy med højst 6 carbonatomer, - eller alkylthio med højst 6 carbonatomer, idet svovl-atomet evt. er oxideret til sulfoxid, - eller en aryloxy- eller aralkyloxygruppe, 30. eller en arylthio- eller aralkylthiogruppe, idet svovl atomet eventuelt er oxideret til sulfoxid, idet alkoxy-gruppen eventuelt er substitueret med en eller flere af følgende grupper: Hydroxy, alkoxy eller alkylthio med 1-4 carbonatomer, chlor, brom, fluor, iod, amino, methyl-35 amino, dimethylamino, diethylamino, 1-piperazinyl, 4-methylpiperazin-l-yl, 1-piperidinyl, N-morpholino, DK 157878B - 44 - eller radikalerne aryloxy og arylthio eventuelt er substitueret med halogen, - eller en gruppe hvor R^ og R£, som kan være ens eller forskellige, betegner et hydrogenatom eller en 5 alkylgruppe med 1-6 carbonatomer, eller R^ og R2 danner sammen med det nitrogenatom, hvortil de er bundet, en heterocyklisk ring, som vælges blandt 1-piperidinyl, 4-methylpiperazin-l-yl, N-morpholinyl, 1-pyrrolyl, - eller R betegner 1,3-dioxolan-2-yl, 10. eller R betegner et halogenatom, - eller R betegner en 1,2-epoxyethylgruppe, - eller R betegner en fri eller til salt omdannet carboxyl-gruppe, alkoxycarbonyl med højst 7 carbonatomer, alkoxy-alkoxycarbonyl, alkylthiomethoxycarbonyl, acyloxyalkoxy- 15 carbonyl, hvori acylgruppen er afledt af en carboxylsyre med højst 5 carbonatomer, en nitrilgruppe eller en acyl-gruppe afledt af en carboxylsyre med højst 5 carbon atomer, og Ra betegner et hydrogenatom eller en acyl-gruppe afledt af en carboxylsyre med højst 5 carbon- 20 atomer, idet bølgelinien angiver, at forbindelserne kan foreligge i syn- eller anti-form eller i form af en blanding af syn og anti, - eller additionssaltene af disse forbindelser med mineralsyrer eller organiske syrer, kendetegnet ved, 25 at man enten a) behandler, eventuelt i nærværelse af en base, erythromycin med formlen II 30 35 DK 157878B - 45 - ςιι, N(CH,), j-v HO.. ..-

5 K,C. ”* A\ 1:0. -5 P ^3.-°-L X.. ^Cilj li0x ' (Π) 10 1W\ p--.o......./°γ“) Y CHi L^_..,-.. ο >< ϋ!ί ,: p" OCIi, "3~ ^ 15 med en forbindelse med formlen III 20 H2N-0—A-R III hvor A og R har samme betydning som ovenfor, eller med en stærk syres salt af denne forbindelse til opnåelse af en 25 forbindelse med formlen 1^ svarende til en forbindelse med formlen I, hvor Ra betegner et hydrogenatom, eller b) behandler, eventuelt i nærværelse af en base, 9-oximen af erythromycin med formlen IV 30 35 - 46 - DK 157878 B HO CM \ \J , ΝΑ Ηϋ···./\ "3C\9 0 ' H0'-^ ^'3-' \o^CM- I k HQ-J ' I (IV) 10 3h C'*'’ ^ /°\ /CM, n5 2 '-c______S' 3 <Nr^S:H- 4 - > kJ-. -OH · .. ' 'och, ;:7C 3. 15 3 1 den ene eller den anden af de isomere former eller i form 20 af en blanding med en forbindelse med formlen V Hal-A-R (V) hvor A og R har samme betydning som ovenfor, og Hal 25 betegner et halogenatom, til opnåelse af en forbindelse med formlen 1^ svarende til en forbindelse med formlen I, hvor Ra betegner et hydrogenatom, hvorpå denne forbindelse om ønsket, - såfremt R betegner et halogenatom behandles med en for-30 bindelse med formlen HN(R^)R2, hvor R^ og R2, som kan være identiske eller forskellige, betegner et hydrogenatom eller en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-6 carbonatomer eller sammen med nitrogenatomet danner en heterocyklisk ring, som vælges blandt 1-piperidinyl, 35 4-methylpiperazinyl, N-morpholinyl og 1-pyrrolyl, til opnåelse af en forbindelse med formlen I, hvor Ra betegner et hydrogenatom, og R betegner en gruppe DK 157878B - 47 - -N(R^)R2# hvori R·^ og R2 har samme betydning som ovenfor, eller - såfremt R betegner alkoxy, der er substitueret med et halogenatom, behandles med ammoniak, methylamin, 5 dimethylamin, diethylamin, piperazin, N-methyl-piperazin, piperidin eller morpholin til opnåelse af en forbindelse med formlen I, hvori Ra betegner hydrogen, og R betegner alkoxy, der er substitueret med amino, methylamino, dimethylamino, diethylamino, 1-piperazinyl, 4-methyl- 10 piperazin-l-yl, 1-piperidinyl eller N-morpholino, hvorpå de dannede forbindelser med formlen I, hvor Ra betegner et hydrogenatom, eventuelt esterificeres til opnåelse af forbindelser med formlen I, hvor Ra betegner en acyl-gruppe af den i kravets indledning angivne art, og de 15 dannede forbindelser med formlen I om ønsket omdannes til syreadditionssalte. 20 25 30 35