DE69104948T2

DE69104948T2 - Spiro[4,5]decanderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen.

Info

Publication number: DE69104948T2
Application number: DE69104948T
Authority: DE
Inventors: Claude Guillonneau; Jean-Pierre Iliou; Albert Lenaers; Gilbert Regnier; Jean-Paul Vilaine
Original assignee: ADIR SARL
Current assignee: ADIR SARL
Priority date: 1990-09-06
Filing date: 1991-09-05
Publication date: 1995-06-08
Anticipated expiration: 2011-09-06
Also published as: FR2666583B1; EP0479631A1; FR2666583A1; ATE113595T1; EP0479631B1; ES2066390T3; JPH0786106B2; DE69104948D1; PT98871A; AU8369491A; DK0479631T3; ZA917107B; US5206247A; NZ239677A; AU638354B2; IE66024B1; JPH04247082A; CA2050730A1; IE913131A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Spiro[4.5]decan-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Zubereitungen.
Sie betrifft insbesondere die Spiro[4.5]decan-Derivate der allgemeinen Formel I:
in der:
- X ein Sauerstoff- oder Schwefelatom;
- A eine 2 bis 10 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthaltende Kohlenwasserstoffgruppe, die gegebenenfalls eine Doppelbindung aufweist und/oder gegebenenfalls durch eine Hydroxylgruppe substituiert ist;
- Y ein Sauerstoffatom, ein Schwefelatom oder eine Gruppe CH&sub2;;
- T ein Sauerstoff- oder Schwefelatom;
- Z:
entweder eine Gruppe CH-R&sub7;, worin R&sub7; ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen darstellt,
oder eine Carbonylgruppe;
- R&sub1; und R&sub3;:
entweder jeweils gleichzeitig ein Wasserstoffatom,
oder gemeinsam eine (CH&sub2;)n-Brücke, worin n die Werte 1 oder 2 aufweist,
oder R&sub1; eine Methylgruppe und gleichzeitig R&sub3; ein Wasserstoffatom;
- R&sub2; und R&sub6;, die gleichartig oder verschieden sein können, jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und
- R&sub4; und R&sub5;, die gleichartig oder verschieden sein können, jeweils eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen in gerader oder verzweigter Kette bedeuten.
Der Stand der Technik in diesem Bereich wird insbesondere durch folgendes repräsentiert:
- Französisches Patent Nr. 1 441 575, welches Spiro[4.5]decan-Derivate der Formel:
betrifft, worin R unter anderem eine Gruppe Ar-A'- darstellt, worin Ar insbesondere eine mit Alkylgruppen oder Hydroxylgruppen mono- oder disubstituierte Phenylgruppe darstellen kann und A' insbesondere eine Kette der Formel -O-CH&sub2;-CH&sub2; bedeutet; und
- das Arzneimittelpatent Nr. 4463 M, welches analgetische, antiinflammatorische und broncholytische Eigenschaften der genannten Derivate erwähnt, sowie deren Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung von Entzündungszuständen, Bronchospasmen und von Schmerzen.
Die EP-A-0 292 400 beschreibt Spiro[4.5]decan-Derlvate, die bei der Behandlung von Asthma, allergischen Phänomenen und Bronchopathien verwendet werden können.
Die Veränderungen der Struktur insbesondere im Bereich des Substituenten R haben zu den Derivaten (I) der vorliegenden Erfindung geführt, welche sich von den nächstkommenden Derivaten des Standes der Technik nicht nur durch ihre chemische Struktur unterscheiden, sondern auch durch ihr pharmakologisches Profil und ihre therapeutische Anwendung, wie es durch die nachfolgende pharmakologische Untersuchung verdeutlicht wird.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Derivate der allgemeinen Formel I, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man:
- ein Derivat der allgemeinen Formel II:
in der:
- X, A, R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,
- W ein Chlor- oder Bromatom oder eine Tosyloxygruppe und
- R ein Wasserstoffatom oder eine leicht hydrolysierbare Schutzgruppe, wie eine Acylgruppe oder Silylgruppe,
bedeuten,
- mit einem Derivat der allgemeinen Formel III:
in der Y, Z und T die in oben angegebenen Bedeutungen besitzen; kondensiert
- und, wenn R von Wasserstoff verschieden ist, das in dieser Weise erhaltene Derivat hydrolysiert.
Die Kondensation der Derivate II und III wird in besonders geeigneter Weise derart durchgeführt, daß man in einem geeigneten Lösungsmittel arbeitet, wie beispielsweise Acetonitril, Methylethylketon, Tetrahydrofuran, Dimethylformamid, Ethanol oder Propanol, bei einer Temperatur zwischen 80 und 100ºC und in Gegenwart eines Akzeptors für die im Verlaufe der Reaktion gebildete Säure. Als Akzeptor kann man beispielsweise ein Alkalimetallcarbonat, Triethylamin oder einen Überschuß des bei der Reaktion eingesetzten Derivats der Formel III verwenden.
Die in dieser Weise erhaltenen Derivate können durch Blitzchromatographie über Siliciumdioxid (35 - 70 uM) unter Verwendung von H&sub3;CCOOC&sub2;H&sub5; oder CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH als Elutionsmittel oder durch Bildung der Salze und deren Kristallisation gereinigt werden.
Die bei dem oben beschriebenen Verfahren verwendeten Ausgangsmaterialien der Formel II und III sind entweder bekannte Produkte oder Produkte, die man ausgehend von bekannten Substanzen nach in der Literatur beschriebenen Verfahren zur Herstellung analoger Produkte herstellen kann.
Die Derivate der allgemeinen Formel I ergeben mit physiologisch verträglichen Säuren Salze, die ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind.
Darüber hinaus existieren dann, wenn in der Formel I R&sub1; von R&sub2; verschieden ist und/oder R&sub7; von einem Wasserstoffatom verschieden ist und/oder A eine verzweigte Kette darstellt, je nachdem eines oder mehrere Chiralitätszentren, welche zur Folge haben, daß die Derivate I in Form von Enantiomeren oder Diastereoisomeren vorliegen, die ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind.
Die Derivate der vorliegenden Erfindung besitzen interessante pharmakologische und therapeutische Eigenschaften. Insbesondere konnte für diese Derivate einerseits in vitro und ex vivo ihre Fähigkeit menschliche LDL (Lipoproteine geringer Dichte, welche den Cholesterintransport sicherstellen) gegen oxidative Veränderungen, die durch Kupfer und durch endotheliale Zellen verursacht werden, zu schützen und andererseits ihre Schutzwirkung in vitro auf die oxidative Nekrose von Herzzellen nachgewiesen werden.
Die oxidativen Veränderungen der LDL scheinen insbesondere einen wichtigen Mechanismus bei der Bildung und der Ausbreitung von atheromatösen Gefäßveränderungen zu sein. Aufgrund ihrer antioxidativen Wirkungen insbesondere im Bereich der LDL ermöglichen die erfindungsgemäßen Derivate ihre Anwendung als Arzneimittel bei der Behandlung von:
- Dyslipidämien zur Vorbeugung ihrer Insbesondere vaskulären Komplikationen,
- der Arteriosklerose mit ihren unterschiedlichen peripheren, koronaren und zerebralen Gefäßlokalisationen, und
- jedoch auch von pathologischen Zuständen, bei denen eine Membranlipid-Peroxidation eine auslösende und/oder erschwerende Rolle spielt, wie bei ischämischen Kardiopathien, der Reperfusion von Organen einschließlich von Transplantaten, traumatischen oder degenerativen ischämischen Pathologien des Zentralnervensystems oder des peripheren Nervensystems, von akuten oder chronischen Entzüngungszuständen und von Autoimmunerkrankungen.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff eine Verbindung der allgemeinen Formel I oder eines ihrer pharmazeutisch verträglichen Salze in Mischung oder in Kombination mit einem geeigneten pharmazeutischen Trägermaterial, wie beispielsweise Glucose, Lactose, Stärke, Talkum, Ethylcellulose, Magneslumstearat oder Kakaobutter, enthalten.
Die pharmazeutischen Zubereitungen liegen im allgemeinen in dosierter Form vor und können 5 bis 250 mg des Wirkstoffs enthalten.
Sie können beispielsweise in Form von Tabletten, Dragees, Gelkapseln, Suppositorien, injizierbaren oder trinkbaren Lösungen vorliegen und können je nachdem auf oralem, rektalem oder parenteralem Wege in Dosierungen von 5 bis 500 mg 1- bis 2-mal täglich verabreicht werden.
Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung. Die Schmelzpunkte wurden auf der Kofler-Heizplatte (K) oder im Kapillarröhrchen (Kap.) gemessen.

BEISPIEL 1:

(R,S)-8-[3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthlo)-2-hydroxy-propyl]-1-oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan:

Man erhitzt eine Suspension von 6,5 g 3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthio)-2-hydroxy-1-chlorpropan, das bei 68ºC (K) schmilzt, und 9 g 1-Oxa-2- oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan, welches bei 202ºC (K) schmilzt, in Gegenwart von 0,5 g Kaliumiodid in 200 ml Acetonitril während 20 Stunden zum Sieden am Rückfluß.
Nachdem die Reaktion beendigt ist, kühlt man ab und filtriert das unlösliche Salz ab. Man dampft die Lösung ein und löst den Rückstand in CH&sub2;Cl&sub2;. Die erhaltene Lösung wird mit H&sub2;O und 10 %-iger NaHOC&sub3;-Lösung gewaschen. Nach dem Eindampfen chromatographiert man über Siliciumdioxid und eluiert mit CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH (95/5). Nach dem Elndampfen des Eluats erhält man 4g (R,S)-8- [3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthlo)-2-hydroxy-propyl]-1-oxa-2-oxo- 3,8-diazaspiro[4.5]decan in Form von beigefarbenen Kristallen, die bei 170ºC (K) schmelzen.
Das als Ausgangsmaterial eingesetzte Chlorderivat wurde durch Reaktion von Epichlorhydrin mit 3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-thiophenol in Tetrahydrofuran und in Gegenwart von BH&sub4; N Fθ als Katalysator hergestellt.

BEISPIEL 2:

8-[3-(2,3,5-Trimethyl-4-hydroxy-phenoxy)-propyl]-1-oxa-2-oxo-3,8- diazaspiro[4,5]decan:

Man erhitzt eine Lösung von 5,04 g 3-(4-Acetoxy-2,3,5-trimethyl-phenoxy)-1-brom-propan, das bei 54ºC (K) schmilzt und 5 g 1-Oxa-2-oxo-3,8-diazaspirol4.5]decan in Gegenwart von 1,2 g Kaliumiodid in 300 ml Acetonitril während 20 Stunden zum Sieden am Rückfluß. Nach Beendigung der Reaktion verdampft man das Lösungsmittel unter vermindertem Druck und nimmt den Rückstand mit 10 %-iger NaHCO&sub3;-Lösung und CH&sub2;Cl&sub2; auf. Man dekantiert die organische Schicht ab und wäscht sie mehrfach mit Wasser.
Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels chromatographiert man den Rückstand über 300 g Siliciumdioxid und eluiert mit dem System CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH (93/7). Nach dem Eindampfen der Eluate gewinnt man 5,2 g des acetylierten Produkts in Form eines Öls.
Man hydrolysiert 4,57g dieses Produkts in Lösungin 120 ml Ethanol mit 47 ml 4N HCl-Lösung durch Erhitzen während 2 Stunden zum Sieden am Rückfluß. Nach dem Verdampfen des Lösungsmlttels nimmt man den Rückstand mit CH&sub2;Cl&sub2; und 10 %-iger NaHCO&sub3;-Lösung auf, dekantiert und dampft die organische Phase ein.
Man reinigt durch Chromatographie über 200 g Siliciumdioxid unter Elutionmit CH&sub2;Cl&sub2;/CH&sub3;OH (90/10). Nach dem Eindampfen der Eluate gewinnt man 3,6g 8-[3-(2,3,5-Trimethyl-4-hydroxy-phenoxy)-propyl]-1-oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan in Form von Kristallen, die bei 155ºC (K) schmelzen.

BEISPIELE 3 bis 36:

Nach der Verfahrensweise des Beispiels 1 wurden die in der folgenden Tabelle I angegebenen Derivate der Beispiele hergestellt: TABELLE I Derivate der Formel I: Beispiel Nr. Schmelzpunkt (ºC) Beispiel Nr. Schmelzpunkt (ºC) (Schaum) Beispiel Nr. Beispiel Nr. Beispiel Nr. Schmelzpunkt (ºC) (Kap.) (Schaum)
Die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Derivate verwendeten Ausgangsmaterialien sind in den folgenden Tabelle II und III aufgeführt: TABELLE II Derivate der Formel: Physikalische Eigenschaften Herstellungsverfahren (*) Schmelzpunkt (K) = ºC Öl Physikalische Eigenschaften Herstellungsverfahren (*) Tosyloxy Öl Schmelzpunkt (K) = ºC
(*) Herstellungsverfahren: (im Überschuß)
T. YOSHIOKA und Koll., J. Med. Chem. 32 (1989), 421-428 (im Überschuß)
Tosylierung des nach J. SCOTT und Koll., J. Am. Oil. Chem. Soc. 51, (5) (1974), 200-203 hergestellten Alkohols. TABELLE III Derivate der Formel III: Physikalische Eigenschaften Herstellungsverfahren Schmelzpunkt (K) = ºC G. REGNIER und Koll., Chimie Thérap. (1969) (3), 185 - 194 J. MAILLARD und Koll., Chim. Thérap. (1973) (4), 393 - 397 Detritylierung (HCl) des entsprechenden 8-Trityl-Derivats, Schmelzpunkt (K) = 248 - 250ºC Herstellung des 8-Benzylderivats nach Y. NAGAI, Chem. Pharm. Bull. 24 (6) (1976), 1179-1188 und Debenzylierung mit H&sub2;/Pd-C Herstellung des 8-Benzylderivats, Schmelzpunkt (K): 187ºC, ausgehend von: Harnstoff nach MCELVAIN und Koll., Am. Soc. 71 (1949), 901 und Debenzylierung mit H&sub2;/Pd-C

BEISPIEL 37

Pharmakologische Untersuchung

Die Wirkung der erfindungsgemäßen Derivate wurde an menschlichen und tierischen LDL nachgewiesen. Die inhibierende Wirkung der Verbindungen gegenüber der oxidativen Modifizierung der LDL, die durch Kupfersulfat und durch endotheliale Zellen der Kaninchenaorta verursacht werden, konnte sowohl in vitro als auch nach der oralen Verabreichung an Kaninchen (Watanabe) gezeigt werden. Die Wirkung der Verbindungen wurde im Vergleich zu Probucol und Vitamin E als Vergleichssubstanzen untersucht.

1. UNTERSUCHUNG IN VITRO

1.1 Materialien und Methoden

1.1.1. Modifizierung von LDL durch Kupfersulfat

Man inkubiert menschliche LDL während 24 Stunden in Gegenwart von Kupfersulfat (5 10&supmin;&sup5;M oder 5 10&supmin;&sup6;M) und in Abwesenheit oder in Gegenwart von den zu untersuchenden Verbindungen (10&supmin;&sup7; M bis 10&supmin;&sup4; M).
Nach der Inkubation bewertet man die Peroxidation der LDL durch Gelelektrophorese auf Agar und durch Bildung eines der Produkte der Lipidperoxidation, nämlich von Mallondialdehyd (MDA) (S. Parthasarathy, S.G. Young, J.L. Witztum, R.C. Pittman und D. Steinberg: J. Clin. Invest. 77 (1986), 641-644).
Die Wirkung der untersuchten Verbindungen wurde durch Berechnung der Konzentrationen bewertet, die die Bildung vonMDA im Vergleich zu den Kontrolluntersuchungen in Abwesenheit des Produkts um 50 % verringern (IC&sub5;&sub0;).

1.1.2. Modifizierung der LDL durch entothellale Zellen

Man inkubiert menschliche LDL während 24 Stunden in Gegenwart von endothelialen Zellen der Kaninchenaorta (Zellinie RECL B4 erhalten von Professor Steinberg, USA) und in Abwesenheit oder in Gegenwart der zu untersuchenden Verbindungen (10&supmin;&sup7; M bis 10&supmin;&sup4; M).
Nach der Inkubation bewertet man die Peroxidation der LDL durch Gelelektrophorese auf Agar und durch Bildung eines der Produkte der Llpidperoxidation, nämlich von Malondialdehyd (MDA) (U.P. Steinbrecher, S. Parthasarathy, D.5. Leake, J.L. Witztum und D. Steinberg: Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81 (1984), 3883-3887).
Die Aktivität der untersuchten Verbindungen wurde durch Berechnung der Konzentrationen bewertet, die die Bildung von MDA im Vergleich zu den Kontrolluntersuchungen in Abwesenheit des Produkts um 50 % verringern (IC&sub5;&sub0;).

1.1.3. Oxidative Nekrose von Herzzellen

Man verwendet Herzzellen von neugeborenen Ratten zwischen dem 5. und 6. Tag, nachdem diese in eine Kultur überführt worden waren. Man induziert die oxidative Nekrose durch das enzymatische System, welches freie Radikale bildet, nämlich Hypoxanthin (HX, 1 mM) und Xanthin-oxidase (XO, 10 mU/ml). Die Nekrose wird 4 Stunden nach der Zugabe von XO/HX bewertet durch spektrophotometrisches Ausmessen der in der überstehenden Flüssigkeit freigesetzten cytosollschen Wirkung von α-Hydroxybutyrat-deshydrogenase (α-HBDH). Es wurden zwei Vergleichsmoleküle (Probucol, Vitamin E) und drei repräsentative Moleküle der vorliegenden Erfindung (entsprechend den Beispielen 1, 3 und 4) untersucht. Die Zellen wurden 16 Stunden und 1 Stunde vor dem Beginn der Untersuchung nach der Erneuerung des Mediums mit den Molekülen behandelt. Zu Beginn der Untersuchung wird die Behandlung ein letztes Mal erneuert.

1.2. Ergebnisse

1.2.1. Wirkung auf die Veränderung der LDL:

Die Tabelle A vereinigt die IC&sub5;&sub0;-Werte, die das Vermögen, die Lipidperoxidation von menschlichen LDL zu inhibieren, widerspiegelt, welche mit einer Probe der Derivate der vorliegenden Erfindung und den Vergleichsprodukten Probucol und Vitamin E mit den beiden Inkubationstests der Oxidation von LDL, nämlich mit Kupfersulfat (Cu²&spplus;) oder mit endothelialen Zellen (EC) erhalten worden sind. TABELLE A Verbindungen Beispiel Probucol Vitamin E
Diese Ergebnisse lassen klar die stärkere Wirksamkeit der Verbindungen der Beispiele 1, 3, 4, 5, 6 und 31 im Vergleich zu Probucol oder Vitam E beim Schutz von menschlichen LDL gegenüber durch Kupfersulfat und endothellale Zellen verursachten Modifizierungen erkennen.
Diese Verbindungen, deren IC&sub5;&sub0;-Werte gegenüber der durch Kupfersulfat (5 10&supmin;&sup6;M) induzierte Peroxidation liegen zwischen 3 10&supmin;&sup7; und 8 10&supmin;&sup7; M, so daß die Verbindungen bei diesem Test damit zehnmal wirksamer sind als Probucol. Bei dem Test, bei dem endotheliale Zellen verwendet werden, haben sich insbesondere die Derivate der Beispiele 1, 3, 4 und 32 mit IC&sub5;&sub0;-Werten zwischen 2 10&supmin;&sup8; M und 5 10&supmin;&sup8; M als 100-mal wirksamer als Probucol erwiesen.
Als Beispiel sind die Wirkungen der Derivate der Beispiele 1 und 3 in den folgenden Figuren 1 und 2 graphisch dargestellt: FIGUR 1 PEROXIDATION VON LDL DURCH CuSO&sub4; 5 10&supmin;&sup6; M Vergleich der Wirkung von Probucol und der Derivate der Beispiele 1 und 3 % Peroxidation Probucol Derivat von Beispiel Konzentration in Mol FIGUR 2 PEROXIDATlON VON LDL DURCH ENDOTHELIALE ZELLEN Vergleich der Wirkungen von Probucol und der Derivate der Beispiele 1 und 3 % Peroxidation Probucol Derivat von Bsp. Konzentration in Mol

1.2.2. Wirkung auf die oxidative Nekrose von Herzzellen

In der Tabelle B sind die Indizes der Nekrose von Herzzellen angegeben, die durch das System Hypoxanthin/Xanthin-oxidase allein oder in Gegenwart von wachsenden Konzentrationen der erfindungsgemäßen Derivate oder der Vergleichssubstanzen Probucol und Vitamin E verursacht worden sind.
Die Derivate der Beispiele 1, 3 und 4 (besonders repräsentative Vertreter der Erfindung) vermindern bei Konzentrationen von 10&supmin;&sup6; M und 10&supmin;&sup5; M die oxidative Nekrose der Kardiomyozyten um 80 % bzw. 95 % und sind den Vergleichssubstanzen deutlich überlegen, die eine wesentlich geringere Wirksamkeit aufweisen, welche erst bei 10&supmin;&sup5; M in Erscheinung tritt.
Das Derivat des Beispiels 1 erweist sich als besonders wirksam mit einer Schutzwirkung von mehr als 50 %, beginnend mit einer Konzentration von 10&supmin;&sup7; M. TABELLE B Wirkung auf die oxidative Nekrose von Herzzellen Derivat Kontrolle Vitamin E Probucol Beispiel
Der Nekroseindex von 100 entspricht einer Freisetzung von 43,6 ± 1,0 % des Cytosolgehalts an α-HBDH in die überstehende Flüssigkeit im Verlaufe von 4 Stunden.
Die Ergebnisse sind in Form der Mittelwerte ± der Standardabweichung (4 ≤ n ≤ 5, drei Wiederholungen pro Untersuchung) angegeben. GRAPHISCHE DARSTELLUNG DER ERGEBNISSE: Wirkung der erfindungsgemäßen Derivate auf die oxidative Nekrose von Kardiomyozyten (Xanthin-oxidase 10 mU/ml; Hypoxanthin 1 mM) Nekroseindex nach 4 Stunden (Basis 100) Index 100 = 43,6 ± 1,0 % freigesetztes α-HBDH Vitamin E Probucol Derivat von Bsp. Konzentration (uM)

2. EX VIVO-UNTERSUCHUNG

2.1 Materialien und Methoden

Man verwendet Watanabe-Kaninchen (Kaninchen, die genetisch hyperlipidämisch sind) mit einem Gewicht zwischen 3 kg und 5 kg. Die Tiere werden auf oralem Weg entweder mit dem Trägermaterial der untersuchten Verbindungen (Kontrollgruppe) oder mit den zu untersuchenden Produkten in Dosierungen von 10, 50 und 250 mg/kg/Tag während 3 Tagen behandelt.
Am Ende der Behandlung gewinnt man die LDL dieser Tiere durch Ultrazentrifugieren und unterwirft sie einer Oxidation mit Kupfersulfat (5 10&supmin;&sup6; M). Die Lipidperoxidation der LDL wird nach unterschiedlichen Inkubationszeiten mit Kupfersulfat (2 bis 24 Stunden) durch Messung der Bildung von MDA bewertet.

2.2 Ergebnisse

In der Tabelle C sind die Werte der Bildung von MDA in Abhängigkeit von der Inkubationsdauer mit Kupfersulfat aus von den Kontrolltieren und mit den Derivaten der Beispiele 1, 3 und 31 in unterschiedlichen Dosierungen und mit Probucol behandelten Tieren gewonnene LDL angegeben. TABELLE C Bildung von MDA (nM/mg Proteine) Inkubationszeit der LDL mit Kupfersulfat (Stunden) Verbindungen Anzahl d. Tiere Kontrolle Beispiel mg/kg/Tag
Nach diesen Ergebnissen, die ebenfalls in der Figur 3 graphisch dargestellt sind, wird die Peroxidation der LDLvon Watanabe-Kaninchen, die mit Probucol behandelt worden sind, um etwa 2 Stunden im Vergleich zu jenen der Kontrolltiere verzögert.
Im Gegensatz zu Probucol inhibieren die Derivate der Beispiele 1, 3 und 31 die durch Kupfersulfat induzierte Peroxidation von LDL beginnend mit einer Dosis von 50 mg/kg/Tag. Das Derivat des Beispiels 3 erweist sich als besonders wirksam bereits beginnend mit einer Dosis von 10 mg/kg/Tag (siehe Tabelle C). FIGUR 3 Vergleich der Wirkung von Probucol und des Derivats des Beispiels 1, die per os verabreicht worden sind, auf die Veränderung der LDL von Watanabe- Kaninchen (250 mg/kg/Tag während 3 Tagen) Lipidperoxidation nM MDA/mg Proteine Placebo Probucol Derivat von Beispiel 1 Inkubation (h)

3. SCHLUSSFOLGERUNG

Die oben angesprochenen Ergebnisse verdeutlichen einerseits, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen menschliche LDL in vitro gegenüber oxidativen Veränderungen deutlich besser schützen als Probucol und Vitamin E und daß diese Verbindungen andererseits nach der Verabreichung an Tiere auf oralem Wege einen Schutz der LDL verursachen, der deutlich größer und von längerer Dauer ist als der von Probucol verursachte.
Darüber hinaus schützen die Verbindungen der Erfindung Herzzellen in wesentlich stärkerer Weise als Probucol und Vitamin E gegenüber der in vitro induzierten oxidativen Nekrose.

Claims

1. Spiro[4.5]decan-Derivate der allgemeinen Formel I:

in der:

- X ein Sauerstoff- oder Schwefelatom;

- A eine 2 bis 10 Kohlenstoffatome in gerader oderverzweigter Kette enthaltende Kohlenwasserstoffgruppe, die gegebenenfalls eine Doppelbindung aufweist und/oder gegebenenfalls durch eine Hydroxylgruppe substituiert ist;

- Y ein Sauerstoffatom, ein Schwefelatom oder eine Gruppe CH&sub2;;

- T ein Sauerstoff- oder Schwefelatom;

- Z:

entweder eine Gruppe CH-R&sub7;, worin R&sub7; ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen darstellt,

oder eine Carbonylgruppe;

- R&sub1; und R&sub3;:

entweder jeweils gleichzeitig ein Wasserstoffatom,

oder gemeinsam eine (CH&sub2;)n-Brücke, worin n die Werte 1 oder 2 aufweist,

oder R&sub1; eine Methylgruppe und gleichzeitig R&sub3; ein Wasserstoffatom;

- R&sub2; und R&sub6;, die gleichartig oder verschieden sein können, jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und

- R&sub4; und R&sub5;, die gleichartig oder verschieden sein können, jeweils eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen in gerader oderverzweigter Kette bedeuten,

und, falls sie existieren, die entsprechenden Enantiomeren und Diastereoisomeren.

2. Die physiologisch verträglichen Salze der Derivate nach Anspruch 1 mit geeigneten Säuren.

3. (R,S)-8-[3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthio)-2-hydroxypropyl]-1- oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan nach Anspruch 1.

4. 8-[3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthio)-propyl]-1-oxa-2-oxo-3,8- diazaspiro[4.5]decan nach Anspruch 1.

5. 8-[5-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthio)-pentyl]-1-oxa-2-oxo-3,8- diazaspiro[4.5]decan nach Anspruch 1.

6. 8-[5-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenoxy)-pentyl]-1-oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5] decan nach Anspruch 1.

7. 8-[3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenoxy)-propyl]-1-oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan nach Anspruch 1.

8. 8-[3-(3,5-Ditert.-butyl-4-hydroxy-phenylthio)-3,3-dimethylpropyl]-1- oxa-2-oxo-3,8-diazaspiro[4.5]decan und dessen Hydrochlorid nach den Ansprüchen 1 bis 2.

9. Verfahren zur Herstellung der Derivate nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man:

- ein Derivat der allgemeinen Formel II:

in der:

- X, A, R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, R&sub4;, R&sub5; und R&sub6; die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen,

- W ein Chlor- oder Bromatom oder eine Tosyloxygruppe und

- R ein Wasserstoffatom oder eine leicht hydrolysierbare Schutzgruppe, wie eine Acylgruppe oder Silylgruppe,

bedeuten,

- mit einem Derivat der allgemeinen Formel III:

in der Y, Z und T die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzen; kondensiert

- und, wenn R von Wasserstoff verschieden ist, das in dieser Weise erhaltene Derivat hydrolysiert.

10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß man die Kondensation der Derivate II und III in einem geeigneten Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen 80 und 100ºC in Gegenwart eines Akzeptors für die im Verlaufe der Reaktion gebildete Säure durchführt.

11. Pharmazeutische Zubereitungen enthaltend als Wirkstoff ein Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zusammen mit geeigneten pharmazeutischen Trägermaterialien.

12. Pharmazeutische Zubereitungen nach Anspruch 11 in einer Form, die insbesondere zur Behandlung von Dyslipidämien, der Arteriosklerose und von pathologischen Zuständen, bei denen eine Membranlipid-Peroxidation eine auslösende und/oder erschwerende Rolle spielt, geeignet ist.