DE69614417T2

DE69614417T2 - Merkaptoalkanoyldipeptide Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusmmensetzungen

Info

Publication number: DE69614417T2
Application number: DE69614417T
Authority: DE
Inventors: Marie-Claude Fournie-Zaluski; Bernard P. Roques
Original assignee: ADIR SARL; Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Current assignee: Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Laboratoires Servier SAS
Priority date: 1995-01-23
Filing date: 1996-01-22
Publication date: 2002-05-29
Anticipated expiration: 2016-01-23
Also published as: JPH08325290A; FI960284A; US5741781A; CN1137040A; ES2162986T3; AU699204B2; EP0723974A1; AU4210196A; EP0723974B1; CA2167763A1; GR3037041T3; FR2729668B1; NO960250L; NO960250D0; ZA96516B; DE69614417D1; FI960284A0; NZ280870A; PT723974E; DK0723974T3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Mercaptoalkanoyldipeptid-Derivate, welche gemischte Inhibitoren der neutralen Endopeptidase (NEP) und des Angiotensin umwandelnden Enzyms (ACE) darstellen, das Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Zubereitungen.
Die erfindungsgemäßen neuen Dipeptide besitzen die bemerkenswerte Eigenschaft, gleichzeitig die neutrale Endopeptidase (E.C. 3.4-24.11), welche die Inaktivierung des aurikularen natriuretischen Peptids verursacht und die Peptidyldipeptidase A (E.C. 3.4-15.1), welche Angiotensin II erzeugt, zu inhibieren. Sie verhalten sich somit als gemischte Inhibitoren der neutralen Endopeptidase (NEP) und der Peptidyldipeptidase A (ACE), die in der Lage sind, die natriuretischen, diuretischen und gefäßerweiternden Wirkungen des aurikularen natriuretischen Peptids zu potentialisieren und die durch Angiotensin II verursachten hypertensiven Wirkungen zu blockieren.
Es ist eine Vielzahl von Produkten bekannt, die die eine oder andere dieser Wirkungen besitzen.
In dem Patent EP-B-38758 sind Produkte beschrieben, welche Inhibitoren sind der neutralen Endopeptidase, die auch als "Enkephalinase" bezeichnet wird, da das Enzym die Enkephaline abbaut, welche endogene Liganden der Morphinrezeptoren sind. Diese Inhibitoren sind folglich als Analgetika nützlich.
So haben B.P. Roques et al. in Nature, 288 (1980), 286-288 gezeigt, daß (R,S)-(2-Mercaptomethyl-3-phenylpropionyl)-glycin (Thiorphan) in einer nanomolaren Konzentration eine inhibierende Wirkung entfaltet und sich als Analgetikum verhält, durch Potenzieren der Wirkung der Enkephaline, d. h. endogenen Opiatpeptiden.
Andere Inhibitoren der Enkephalinase, welche analgetische Wirkungen 1 besitzen, sind beispielsweise Gegenstand der Patente FR-B-2 556 721 und EP-B- 136 883.
In den Patenten US-A-4,053,651, US-A-4,684,660 und EP 059966 sind Inhibitoren der Peptidyldipeptidase A beschrieben, welche als antihypertensive Mittel nützlich sind.
So haben Koehn et al. (J. Biol. Chem., 262 (1987), 11623-11627) und S. L. Stephenson und A. J. Kenny (Biochem. J., 243 (1987), 183-187) berichtet, daß das durch das Herz, insbesondere im Fall einer Herzinsuffizienz, freigesetzte aurikulare natriuretische Peptid, welches die Natriurese und die Diurese erhöht und in dieser Weise eine gefäßerweiternde Wirkung ausübt, durch das periphere Enzym E. C. 24.11 inaktiviert wird. Somit sind der Inhibitor der neutralen Endopeptidase, nämlich Thiorphan und bestimmte Derivate davon, in der Lage, bei der Ratte die Halbwertszeit des zirkulierenden aurikularen natriuretischen Peptids zu erhöhen und den Blutdruck abzusenden (G. Olins et al., MoI. Cell. Endocrinol., 61 (1989), 201-208; A. A. Seymour et al., Hypertension, 14 (1989), 87-97).
Jedoch entfaltet keiner der bekannten Inhibitoren der neutralen Endopeptidase eine eigene anti-hypertensive Wirkung und kein Inhibitor der neutralen Endopeptidase, wie Thiorphan, zeigt bei klinischen Untersuchungen eine Natriurese und Diurese ohne irgendeine signifikante hypertensive Wirkung und ohne Verringerung der Herzüberbelastung.
In dem Patent US-A-4,879,309 sind Verbindungen der Formel:
beschrieben, welche zur Steigerung der Natriurese und der Diurese und zur Verringerung des Blutdrucks nützlich sind.
Gemischte Inhibitoren der NEP und des ACE sind in den Patenten FR- B-2 682 952, FR-A-2 679 564 und WO 94/17036 beschrieben. Für die beschriebenen Verbindungen sind als Formeln angegeben:
- für das Patent FR-B-2 682 952:
- für die Patente FR-A-2 679 564 und WO 94/17036:
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Dipeptide, welche in sehr geringen Konzentrationen gleichzeitig die neutrale Endopeptidase und die Peptidyldipeptidase A inhibieren. Die Verbindungen der Erfindung unterscheiden sich von den Verbindungen des Standes der Technik, insbesondere der Patente US-A- 4,879,309 und FR-A-2 679 564, durch die Tatsache, daß sämtliche Verbindungen der vorliegenden Erfindung in dem C-terminalen Ende eine Iminosäure mit 5 oder 6 Kettengliedern aufweisen, welche in der 5- oder 6-Stellung durch einen Phenylrest oder einen substituierten Phenylrest substituiert ist. Weiterhin bewirkt diese sehr sperrige Iminosäure, daß die Gly-Iminosäure-Verknüpfung zu einer ausgezeichneten inhibierenden Wirkung auf die beiden Enzyme führt. Diese Verknüpfung führt zu Verbindungen, welche sehr starke inhibierende Wirkungen auf die beiden Enzyme ausüben (K&sub1; im Bereich von 10&supmin;&sup9; M), wobei die Wirkungsdauern sehr lange und die biologischen Verfügbarkeiten dazu ausreichen, gleichzeitig das sich überwiegend in den Gefäßen findende Umwandlungsenzym und die neutrale Endopeptidase, welche das natriuretische Peptid insbesondere im Bereich der proximalen Nierenkanälchen abbaut, zu blockieren.
Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen die doppelte Wirkung, gleichzeitig die neutrale Endopetidase und Peptidyldipeptidase A zu inhibieren. Aufgrund dieser Tatsache ist die mit diesen gemischten Inhibitoren erzielte hypotensive Wirkung stärker als jene, die man mit den Inhibitoren der neutralen Endopeptidase und der Peptidyldipeptidase A erzielt, wenn diese allein oder in Mischung eingesetzt werden. Weiterhin zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen eine ausgeglichene Inhibierung der neutralen Endopeptidase und der Peptidyldipeptidase A. In der Tat sind die mit einer gegebenen Verbindung erhaltenen IC&sub5;&sub0;-Werte im wesentlichen identisch für die neutrale Endopeptidase und die Peptidyldipeptidase A. Dies verdeutlicht die Überlegenheit der erfindungsgemäßen. Verbindungen gegenüber dem Stand der Technik, wie er in den Patenten US-A-4,879,309 und FR-A-2 679 564 beschrieben ist.
Daher sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sehr wirksam bei der Behandlung von kongestiven Herzversagen und verschiedenen Arten der Hypertension, bei der Behandlung der Atherosklerose, der Herzischämie, von chronischen Nierenversagen und Herzvorfällen, die mit Lungenerkrankungen verknüpft sind. Sie sind weiterhin wirksam zur Verringerung der Nebenwirkungen als Folge einer Behandlung mit Cyclosporin.
Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die Verbindungen der allgemeinen Formel (I):
in der:
- R ausgewählt ist aus Wasserstoff, einer Acylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatomen in gerader oder verzweigter Kette enthält, der Benzoyl-, Naphthoyl- und Adamantoylgruppe und der Gruppe der Formel
in der R&sub1;, R&sub2;, R', X und n nachfolgend definiert werden,
- R&sub1; und R&sub2;, die gleichartig oder verschieden sind, unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, der Hydroxygruppe, einer Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einer Alkoxygruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einem Halogenatom, ausgewählt aus Fluor, Chlor, Brom und Iod, einer Nitrogruppe, einer Aminogruppe, der Carboxygruppe, einer Alkoxycarbonylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, der Benzyloxycarbonyloxygruppe, der Phosphonatgruppe, der Sulfonatgruppe, der Gruppe der Formel SO&sub2;-NH&sub2; und der Gruppe SO&sub2;-NH-Alkyl, worin der Begriff Alkyl für eine gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe steht, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält,
- R' ausgewählt ist aus Wasserstoff, einer Alkylgruppe, die 1 bis 20 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einer Aralkylgruppe und einer Cycloalkylalkylgruppe,
- X ausgewählt ist aus Sauerstoff, Schwefel, der CH&sub2;-Gruppe und der NH-Gruppe,
- n ausgewählt ist aus den ganzen Werten 1 und 2,
mit der Maßgabe:
- daß die "Aralkylgruppe" für eine Gruppe steht, die aus einer Arylgruppe, ausgewählt aus Phenyl und Naphthyl, die an eine Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, gebunden ist, gebildet ist,
- die "Cycloalkylalkylgruppe" für eine Gruppe steht, die aus einer Cycloalkylgruppe, die 3 bis 8 Kohlenstoffatome aufweist, und an eine Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette aufweist, gebunden ist, gebildet ist,
sowie deren stereoisomere Formen in reinem Zustand oder in Form von Mischungen und gegebenenfalls ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin das Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man das Dipeptid der Formel (II):
in der R&sub2;, R', X und n die bezüglich der Verbindung der Formel (I) angegebenen Bedeutungen besitzen,
einer Acylierungsreaktion mit Hilfe einer Säure der Formel (III):
in der R und R&sub1; die bezüglich der Verbindung der Formel (I) angegebenen Bedeutungen besitzen,
unter den üblicherweise in der Peptidsynthese angewandten und von Bodansky et al. ("Peptide Synthesis", J. Wiley and Sons Edit) beschriebenen Bedingungen.
Man erhält die Dipeptide der Formel (II) durch Kondensation des Acylchlorids des Z-Glycins der Formel (IV):
mit einem Ester der Formel (V):
in der R&sub2;, R', X und n die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, gefolgt von einer katalytischen Hydrierung.
Die Verbindung der Formel (III) kann ausgehend von der entsprechenden α-Aminosäure durch halogenierende Deaminierung gemäß Fisher et al. (Ann., 357 (1907), 1-24), gefolgt von einer nucleophilen Substitution des Halogenatoms hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (I) können auch erhalten werden durch Kondensation der Verbindungen der Formel (V) mit den Pseudopeptiden der Formel (VI):
in der R und R&sub1; die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, beispielsweise mit Hilfe des Castro-Reagens.
Man erhält die Pseudopeptide der Formel (VI) durch Kupplung der Säuren der Formel (III) mit dem tert.-Butylether des Glycins mit Hilfe von in klassischer Weise in der Peptidsynthese angewandten Methoden, gefolgt von einer Abspaltung der Schutzgruppe der Säure mit Trifluoressigsäure.
Man erhält die Verbindungen der Formel (V) mit Hilfe von Methoden, die beispielsweise von J. N. Barton et od. (J. Med. Chem., 30 (1990), 1606-1615) beschrieben worden sind.
Die Verbindungen der Formel (I), worin R' ein Wasserstoffatom darstellt, können pharmazeutisch annehmbaren Salze mit anorganischen oder organischen Basen bilden. Als anorganische oder organische Basen zur Bildung dieser Salze kann man insbesondere und in nicht einschränkender Weise nennen Ammoniumhydroxid, Natriumhydroxid, Calciumhydroxid, N-Methyl-D-glycamin, Lysin, Arginin oder Dicyclohexylamin.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können gegebenenfalls in Form der reinen Stereoisomeren oder in Form von Mischungen der Stereoisomeren vorliegen. Die reinen Stereoisomere sind für den Fachmann leicht zugänglich ausgehend von Mischung der Stereoisomeren unter Anwendung klassischer Trennmethoden oder durch asymmetrische Synthese der Ausgangsprodukte.
Die in der Formel (I) mit einem Sternchen (*) markierten Kohlenstoffatome sind Asymmetriezentren. Die bevorzugten Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind jene, bei denen:
- das den Rest
tragende Kohlenstoffatom die Konfiguration S aufweist und
- das den Rest
tragende Kohlenstoffatom die Konfiguration 5 besitzt und
- die Reste
einerseits und
andererseits in bezug auf die durchschnittliche Ebene des Ringes in der cis- Konfiguration angeordnet sind.
Die Anmelderin hat gefunden, daß die Verbindungen der Erfindung interessante pharmakologische Eigenschaften besitzen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind, wenn sie an Säuger verabreicht werden, nützlich bei der Behandlung und bei der Vorbeugung von kongestiven Herzversagen, essentiellen Hypertensionen, Hypertensionen, die mit einer Erhöhung des Blutvolumens einher gehen, Herzinsuffizienz und/oder Niereninsuffizienz, Angina pectoris und besitzen eine Schutzwirkung gegen die Verdickung der Gefäßwände. Dies ist eine Folge ihrer doppelten inhibierenden Wirkung auf die neutrale Endopeptidase und die Peptidyldipeptidase A. Aufgrund ihrer pharmakologischen Wirkungen sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung weiterhin nützlich bei der Behandlung und der Vorbeugung der Atherosklerose und der Herzischämie sowie weiterhin auch für die Vorbeugung der Hypertrophie, der linken ventrikulären Fibrose und des Cor pulmonale acutum. Patienten, welche einer Herz- und/oder Nierentransplantation unterzogen worden sind, werden häufig während längerer Zeit mit Cyclosporin behandelt. Dies führt als Nebenwirkung zu einer Erhöhung des Blutdrucks und der Salzretention. Die Verbindungen der Erfindung besitzen Wirkungen, die sich diesen Effekten entgegenstellen und die daher dazu nützlich sind, die Nebenwirkungen des Cyclosporins zu verringern.
Die Inhibitoren der Peptidyldipeptidase A sind bekannte Produkte für die Behandlung bestimmter Hypertensionen und sind in der Lage, eine Erhöhung des Blutdrucks durch eine Steigerung des Gefäßwiderstandes und des Blutvolumens als Folge der Bildung von Angiotensin II ausgehend von Angiotensin I zu blockieren.
Ein weiteres wichtiges Peptid, welches bei der Regulierung der Arterienblutdrucks beteiligt ist, ist das durch das Herz freigesetzte aurikuläre natriuretische Peptid, welches eine vasodilatatorische Wirkung entfaltet und in der Lage ist, die Diurese und die Natriurese zu steuern. Das aurikuläre natriuretische Peptid wird durch die neutrale Endopeptidase in den peripheren Geweben abgebaut. Die Inhibitoren der neutralen Endopeptidase, wie Thiorphan, induzieren eine signifikante Diurese und Natriurese beim Menschen, ohne daß eine Erhöhung der Spiegel an Renin und Aldosteron auftritt, die man in der Regel bei üblicherweise in Kombination mit den ACE-Inhibitoren verwendeten Diuretika beobachtet. Jedoch sind die Wirkungen der Inhibitoren der neutralen Endopeptidase, wenn sie allein verwendet werden, auf den Blutdruck gering.
Die gemischten Inhibitoren der neutralen Endopeptidase und der Peptidyldipeptidase A sind für die Behandlung von Hypertensionen beim Menschen unterschiedlichen Ursprungs geeignet und können ohne die gleichzeitige Verabreichung von Diurtika und ohne Kaliumzufuhr verwendet werden.
Die neuen Produkte der vorliegenden Erfindung sind sehr wirksam im Hinblick auf die Vorbeugung und die Heilung bei der Behandlung von kongestiven Herzversagen und verschiedenen Arten von Hypertensionen, insbesondere Hypertensionen, die mit einer Erhöhung des Blutvolumens einhergehen, essentiellen Hypertensionen, der Atherosklerose, der Herzischämie, der Herz- und/oder Niereninsuffizienz, des Cor pulmonale acutum und der Angina pectoris, und sie besitzen eine Schutzwirkung gegen die Verdickung der Gefäßwände, indem sie Bradykinin und das aurikuläre natriuretische Peptid gegen Inaktivierung schützen und die Fähigkeit besitzen, die Nebenwirkungen bei der Behandlung mit Cyclosporin zu verringern.
Aufgrund der doppelten Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen, gleichzeitig die neutrale Endopeptidase und die Peptidyldipeptidase A zu inhibieren, ist der mit den gemischten Inhibitoren erzielte hypotensive Effekt stärker als jener, den man mit den Inhibitoren der neutralen Endopeptidase und der Peptidyldipeptidase A, die man allein oder in Mischung einsetzt, erzielt.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher auch pharmazeutische Zubereitungen, welche die Verbindungen der Formel (I) oder ihre reinen oder Stereoisomeren oder Mischungen davon in Form der Base oder der pharmazeutisch annehmbaren Salze in Kombination mit einem oder mehreren inerten und nichttoxischen Trägermaterialien oder Bindemitteln enthalten.
Als erfindungsgemäße pharmazeutische Zubereitungen kann man insbesondere jene nennen, die für die Verabreichung auf oralem, parenteralem, nasalem, rektalem, perlingualem, okularem oder respiratorischem Wege geeignet sind, und insbesondere einfache oder dragierte Tabletten, Sublingualtabletten, Sachets, Päckchen, Gelkapseln, Lutschtabletten, Compretten, Suppositorien, Cremes, Salben, Hautgele, injizierbare oder trinkbare Präparate, Aerosole, Augentropfen oder Nasentropfen.
Die Auswahl des Trägermaterials und der Gehalt der aktiven Substanz in dem Trägermaterial werden im allgemeinen in Abhängigkeit von der Löslichkeit und den chemischen Eigenschaften des Produkts, dem besonderen Verabreichungsweg und den Erfordernissen der pharmazeutischen Praxis bestimmt. Beispielsweise werden Trägermaterialien, wie Lactose, Natriumcitrat, Kaliumcarbonat, Dicalciumphosphat, Sprengmittel, wie Stärke, Algininsäuren und bestimmte komplexe Silicate, die mit Gleitmitteln behandelt worden sind, wie Magnesiumstearat, Natriumlaurylsulfat und Talkum, für die Herstellung von Tabletten verwendet werden. Für die Herstellung einer Kapsel ist es von Vorteil, Lactose und Polyethylenglykole mit höherem Molekulargewicht einzusetzen. Wenn wäßrige Suspensionen verwendet werden sollen, können sie Emulgiermittel oder Mittel, welche die Suspendierung erleichtern, enthalten. Man kann auch Verdünnungsmittel, wie Ethanol, Propylenglykol, Glycerol und Chloroform oder Mischungen davon verwenden.
Für die parenterale Verabreichung verwendet man Suspensionen oder Lösungen der erfindungsgemäßen Produkte in Sesamöl, Erdnußöl oder Olivenöl oder wäßrige Lösungen von Propylenglykol sowie wäßrige sterile Lösungen von pharmazeutisch annehmbaren Salzen. Die Lösungen der Salze der erfindungsgemäßen Produkte sind besonders nützlich für die Verabreichung durch intramuskuläre oder subkutane Injektion. Die wäßrigen Lösungen, die auch die Lösungen der Salze in reinem destilliertem Wasser einschließen, sind für die Verabreichung auf intravenösem Wege geeignet, vorausgesetzt daß ihr pH-Wert entsprechend eingestellt ist und daß sie genau gepuffert sind und durch Zugabe einer ausreichenden Menge von Glucose oder Natriumchlorid isotonisch eingestellt worden sind und durch Erhitzen oder Mikrofiltration sterilisiert worden sind.
Die bei den erfindungsgemäßen Methoden angewandten Dosierungen sind jene, welche zu einer maximalen therapeutischen Wirkung führen, damit eine Verbesserung erreicht wird. Im allgemeinen sind die verwendeten Dosierungen jene, die therapeutisch wirksam sind zur Absenkung des Blutdrucks bei der Behandlung der Hypertension. Im allgemeinen liegen die verabreichten Dosierungen bei oraler Gabe zwischen 0,1 und 100 mg/kg, vorzugsweise zwischen 1 und 10 mg/kg, während bei Verabreichung auf intravenösem Wege die Dosierungen zwischen 0,01 und 10 mg/kg, vorzugsweise zwischen 0,1 und 5 mg/kg liegen, wobei es sich jedoch versteht, daß im Einzelfall die Dosierungen in Abhängigkeit von Faktoren bestimmt werden, die von dem zu behandelnden Patienten abhängen, wie dem Alter, dem Gewicht, dem allgemein Gesundheitszustand und anderen Eigenschaften, welche einen Einfluß auf die Wirksamkeit des Arzneimittels haben können.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können so häufig wie notwendig zur Erzielung des gewünschten therapeutischen Effekts verabreicht werden. Bestimmte Kranke können schnell auf eine mehr oder weniger starke Dosis reagieren und können eine zufriedenstellende Wirkung bei deutlich niedrigeren aufrechterhaltenen Dosierungen zeigen. Bei anderen Kranken kann es notwendig sein, eine Behandlung auf der Grundlage von 1 bis 4 Dosierungen pro Tag in Abhängigkeit von den physiologischen Anforderungen eines jeden besonderen Patienten durchzuführen. Im allgemeinen kann der Wirkstoff oral 1- bis 4-mal täglich gegeben werden. Bei anderen Kranken kann es notwendig sein, nicht mehr als eine bis zwei Doeiserungen täglich zu verschreiben.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Notfällen der akuten Hypertension in injizierbarer Form verwendet werden. Eine solche Behandlung kann gefolgt werden von einer intravenösen Perfusion des Wirkstoffs, um den gewünschten therapeutischen Effekt zu erreichen und aufrechtzuerhalten.
In der vorliegenden Beschreibung entsprechen die verwendeten Abkürzungen den folgenden Produkten:
- PyBrOP: Bromoxy-tripyrrolidinophosphonium-hexafluorphosphat
- Cbz: Carbobenzoxy
- Z: Benzyloxycarbonyl
- BOP: Benzotriazol-1-yl-oxy-tris-(dimethylamino)-phosphonium-hexafluorphosphat
- DCC: Dicyclohexylcarbodiimid
Die folgenden Beispiele verdeutlichen die Erfindung, ohne sie jedoch in irgendeiner Weise einzuschränken. Die Ausgangsprodukte sind bekannt oder werden mit Hilfe bekannter Verfahrensweisen hergestellt.

Herstellungsbeispiel A: tert.-Butylester des N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycins

Man gibt zu 5 g 2-Acetylthio-3-phenylpropansäure in Lösung in 40 ml Tetrahydrofuran nach und nach eine Lösung von 3,7 g des Hydrochlorids des tert.-Butylesters von Glycin und 3,8 ml Triethylamin in 40 ml Chloroform, eine Lösung von 3 g 1-Hydroxybenzotriazol in 30 ml Tetrahydrofuran und eine Lösung von 6,9 g DCC in Trichlormethan. Nach dem Rühren über Nacht bei Raumtemperatur filtriert man die Reaktionsmischung und dampft zur Trockne ein. Man nimmt den Rückstand in Ethylacetat auf und wäscht in nacheinander mit einer 10%-igen Lösung von Citronensäure, Wasser, einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung, Wasser und einer gesättigten Natriumchloridlösung und trocknet über Natriumsulfat. Nach dem Filtrieren und dem Eindampfen zur Trockne erhält man 7,5 g eines Öls.
Ausbeute: 98%, Rf: 0,65 (n-Hexan/Ethylacetat, 2/1)

Herstellungsbeispiel B: N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycin

Man löst 7,5 g der in dem Herstellungsbeispiel A erhaltenen Verbindung in 10 ml Dichlormethan. Man gibt dann bei OºC 17 ml Trifluoressigsäure zu. Nach 30 Minuten bei 0ºC rührt man die Mischung während 3 Stunden bei Raumtemperatur und dampft zur Trockne ein. Man nimmt den Rückstand dreimal mit einer Ethylether/n-Hexan-Mischung (50/50) auf und erhält 6,2 g eines Öls, welches dem erwarteten Produkt entspricht.
Ausbeute: 97%
Rf: 0,53 (Dichlormethan/Methanol, 9/1)

Herstellungsbeispiel C: 2-Acetylthio-3-(para-benzyloxycarbonyloxyphenyl)- propansäure

Man gibt zu 10 g 2-Brom-3-(para-benzyloxycarbonyloxyphenyl)-propansäure (hergestellt gemäß K. Koga et al., Chem. Pharm. Bull., 26 (1978), 178) in Lösung in 1M Natriumhydroxid zu einer Lösung von Kaliumthioacetat (hergestellt ausgehend von 2,5 ml Thioessigsäure und 2 g Kaliumcarbonat in Wasser). Man rührt die Mischung während 2 Tagen bei Raumtemperatur. Nach dem Ansäuern mit 1 N Chlorwasserstoffsäure extrahiert man die wäßrige Phase dreimal mit Ethylacetat, wäscht mit einer gesättigten Natriumchloridlösung und trocknet über Natriumsulfat. Nach dem Filtrieren und dem Eindampfen zur Trockne erhält man ein gelbes Öl, welches chromatographisch über Kieselgel (Elutionsmittel: n- Hexan/Ethylacetat/Essigsäure, 8/2/0,5) gereinigt wird und 6,4 g eines öligen Produkts ergibt.
Ausbeute: 65%
Rf: 0,49 (n-Hexan/Ethylacetat/Essigsäure, 6/4/0,5).

Herstellungsbeispiel D: tert.-Butylester von N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glcyin

Man kondensiert 1,6 g der in dem Herstellungsbeispiel C erhaltenen Verbindung unter den Bedingungen des Herstellungsbeispiels A mit 0,72 g Glycin-tert.-butylester und erhält 2 g eines hellgelben Öls.
Ausbeute: 96%
Rf: 0,57 (Hexan/Ethylacetat, 1/1)

Herstellungsbeispiel E: N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxycarbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glycin

Man behandelt 2 g der in dem Herstellungsbeispiel D erhaltenen Verbindung unter den Bedingungen des Herstellungsbeispiels B. Nach der Chromatographie über Kieselgel in einer Hexan/Ethylacetat/Essigsäure-Mischung (4/6/ 0,5) erhält man 1,35 g eines Öls, welches langsam kristallisiert.
Ausbeute: 76%
Rf: 0,25.(Hexan/Ethylacetat/Essigsäure, 4/6/0,5)

Herstellungsbeispiel F: 2-Acetylthio-3-(para-nitrophenyl)-propansäure

Man gibt zu einer Lösung von Natriumthioacetat (welches man ausgehend von 0,73 g Natriumhydrid und 1,05 ml Thioessigsäure hergestellt hat) in Dimethylformamid bei 0ºC und unter Stickstoff 2,7 g 2-Brom-3-(para-nitrophenyl)- propansäure (hergestellt ausgehend von (para-Nitrophenyl)-alanin). Nach dem Rühren während 48 Stunden bei Raumtemperatur und dem Eindampfen zur Trockne und der Aufnahme des Rückstands mit Wasser behandelt man die Mischung wie in dem Herstellungsbeispiel C beschrieben und erhält 2,3 g eines hellgelben Öls.
Ausbeute: 88%
Rs: 0,63 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,2)

Herstellungsbeispiel G: Methylester von N-Glycyl-5-(meta-hydroxyphenyl)- prolin

Stufe a: Methylester von N-[(N-Cbz)-Glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin
Man kuppelt 0,6 g Z-Glycin in Lösung in Dichlormethan in Gegenwart von 2,06 g PyBrOP und 2,6 ml Diisopropylethylamin mit 0,83 g des Methylesters von 5-(meta-Hydroxyphenyl)-prolin. Nach dem Rühren während 4 Stunden bei Raumtemperatur wäscht man die organische Phase (Natriumhydrogencarbonat, Wasser, Citronensäure, Wasser), trocknet über Natriumsulfat, filtriert und engt zur Trockne ein. Man chromatographiert den öligen Rückstand über Kieselgel (n- Hexan/Ethylacetat, 4/6) und erhält einen weißen Feststoff, der dem erwarteten Produkt entspricht.
Ausbeute: 33%
Schmelzpunkt: 173ºC
Rf 0,17 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)
Stufe b: Methylester von N-Glycyl-5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin
Man hydriert 0,39 g der in der Stufe a erhaltenen Verbindung bei Normaltemperatur und Normaldruck in Gegenwart von 10% Palladium-auf-Kohlenstoff und 1 Äquivalent 1N Chlorwasserstoffsäure in Lösung in Methanol. Nach dem Rühren während 3 Stunden bei Raumtemperatur filtriert man den Katalysator ab und verdampft das Lösungsmittel bis zur Trockne.
Ausbeute: 100%

Herstellungsbeispiel H: Methylester von N-[(N-Cbz)-Glycyl]-5-(para-methylphenyl)-prolin

Man behandelt 1 Äquivalent Z-Glycin in Lösung in Aceton mit Cyanurchlorid in Gegenwart von Triethylamin. Nach dem Rühren während 3 Stunden bei Raumtemperatur dampft man die Mischung zur Trockne ein, nimmt den Rückstand mit Tetrachlorkohlenstoff auf und gibt 1 Äquivalent des Methylesters von 5-(para-Methylphenyl)-prolin in Lösung in Dichlormethan und in Gegenwart von Triethylamin zu. Nach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur dampft man das Reaktionsmedium zur Trockne ein, nimmt mit Ethylacetat auf, wäscht, trocknet und dampft erneut zur Trockne ein. Man chromatographiert den in dieser Weise erhaltenen öligen Rückstand in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 41%
Rf: 0,18 (n-Hexan/Ethylacetat, 1/1)

Herstellungsbeispiel I: Methylester von N-[(N-Cbz)-glycyl]-5-(ortho-methylphenyl)-prolin

Man erhält diese Verbindung ausgehend von Z-Glycin und dem Methylester von 5-(ortho-Methylphenyl)-prolin nach dem in dem Herstellungsbeispiel H beschriebenen Verfahren. Man reinigt das in dieser Weise erhaltene ölige Produkt durch Chromatographie in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (55/45) und erhält ein farbloses Öl.
Ausbeute: 42%
Rf: 0,21 (n-Hexan/Ethylacetat, 1/1)

BEISPIEL 1: tert.-Butylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl]- glycyl]-5-phenylprolin

Man gibt zu 6,1 g der in dem Herstellungsbeispiel B erhaltenen Verbindung in Lösung in 40 ml Tetrahydrofuran nacheinander bei 0ºC eine Lösung von 5,4 g des tert.-Butylesters von 5-Phenylprolin und 3,35 ml Triethylamin in 40 ml Trichlormethan, eine Lösung von 2,96 g 1-Hydroxybenzotriazol in 30 ml Tetrahydrofuran und eine Lösung von 6,76 g DCC in 30 ml Trichlormethan. Man behandelt die Reaktionsmischung wie in dem Herstellungsbeispiel A beschrieben, reinigt das rohe Produkt chromatographisch über Kieselgel mit einer Hexan/Ethylacetat-Mischung (2/1) als Elutionsmittel und erhält 6,47 g einer öligen Verbindung.
Ausbeute: 60%
R: 0,49 (Ethylacetet/Hexan, 1/1)

BEISPIEL 2: N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-phenylprolin

Man gibt zu einer Lösung von 3,2 g der in Beispiel 1 erhaltenen Verbindung in 10 ml Dichlormethan bei 0ºC 5 ml Trifluoressigsäure und rührt die Mischung während 30 Minuten bei 0ºC und dann während 2 Stunden und 30 Minuten bei Raumtemperatur. Nach dem Eindampfen zur Trockne fällt man den öligen Rückstand aus einer Ether/Hexan-Mischung (1/1) aus und erhält 1,66 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 58,5%
Rf: 0,57 (Dichlormethan/Methanol, 9/1)

BEISPIEL 3: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl]-glycyl]-5-phenylprolin

Man löst 0,700 g der in dem Beispiel 2 erhaltenen Verbindung in 10 ml entgastem Methanol, gibt bei 0ºC 5 ml einer entgasten 1M Lösung von Natriumhydroxid zu und rührt die Mischung während 1 Stunde bei 0ºC und dann während 3 Stunden bei Raumtemperatur. Man säuert das Medium mit 1M Chlorwasserstoffsäure bis zu einem pH-Wert von 1 an und engt im Vakuum ein. Man nimmt den Rückstand mit Wasser auf, extrahiert die wäßrige Phase mit Ethylacetat, wäscht die organische Phase mit Wasser und einer gesättigten Natriumchloridlösung und trocknet über Natriumsulfat. Nach dem Filtrieren und dem Eindampfen zur Trockne erhält man 610 mg eines hellgelben Öls, welches langsam kristallisiert.
Ausbeute: 96%
Schmelzpunkt: 75ºC
Rf: 0,24 (Dichlormethan/Methanol, 95/5)

BEISPIEL 4: Methylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl]- 5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Man kondensiert 0,500 g der in dem Herstellungsbeispiel B erhaltenen Verbindung und 0,400 g des Methylesters von 5-(ortho-Hydroxyphenyl)-prolin unter den Bedingungen des Beispiels 1. Nach der Chromatographie über Kieselgel mit einer Hexan/Ethylacetat-Mischung (6/4) erhält man 0,32 g des erwarteten Produkts in Form eines Öls.
Ausbeute: 50%
Rf: 0,2 (Cyclohexan/Ethylacetat, 1/1)

BEISPIEL 5: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Man behandelt 0,300 g der in dem Beispiel 4 erhaltenen Verbindung wie in Beispiel 3 beschrieben und erhält 0,200 g der erwarteten Verbindung. Ausbeute: 88%
Rf: 0,69 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 6: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]-5-(ortho-hydroxy-phenyl)- prolin

Man gibt zu einer Lösung von 0,500 g der in dem Herstellungsbeispiel E erhaltenen Verbindung in Dichlormethan bei 0ºC 0,65 g des Methylesters von 5-(ortho-Hydroxyphenyl)-prolin, 0,7 ml Diisopropylethylamin und 1,27 g BOP. Man setzt das Rühren während 48 Stunden bei Raumtemperatur fort. Nach der Behandlung bei klassischen Bedingungen reinigt man das erhaltene Produkt chromatographisch in einer Hexan/Ethylacetat-Mischung (4/6) und erhält 0,35 g eines öligen Produkts.
Ausbeute: 47%
Rf: 0,53 (Cyclohexan/Ethylacetat/Essigsäure, 3/7/0,2)

BEISPIEL 7: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Man gibt zu 0,200 g der in Beispiel 6 erhaltenen Verbindung in 1 ml entgastem Methanol bei 0ºC 2 ml entgastes IM Natriumhydroxid und rührt während I Stunde bei 0ºC und dann während 2 Stunden bei Raumtemperatur, wonach man die Reaktionsmischung nach der in Beispiel 3 beschriebenen Weise behandelt. Man erhält 0.125 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 89%
Rf: 0,34 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,2)

BEISPIEL 8: tert.-Butylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]-5-phenylprolin

Man kondensiert 0,590 g der in dem Herstellungsbeispiel C erhaltenen Verbindung mit dem tert.-Butylester des Dipeptids Gly-(5-Phenyl)-Pro unter den Bedingungen des Herstellungsbeispiels A und erhält 1 g der erwarteten Verbindung.
Ausbeute: 98%
Rf: 0,46 (Hexan/Ethylacetat, 1/2j

BEISPIEL 9: N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-phenylprolin

Man löst 1 g der in Beispiel 8 erhaltenen Verbindung unter Stickstoff bei 0ºC in einer Mischung aus Bor-tris(trifluoracetat) und Trifluoressigsäure. Man rührt die Mischung bei dieser Temperatur während 20 Minuten, dampft dann zur Trockne ein, nimmt den Rückstand 3-mal mit Methanol auf und dampft erneut zur Trockne ein. Man fällt den öligen Rückstand dann in Ethylether aus und erhält in dieser Weise 710 mg eines hellgelben Pulvers.
Ausbeute: 75%
Rf: 0,71 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 10: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-phenylprolin

Man löst 450 mg der in Beispiel 9 erhaltenen Verbindung in 5 ml entgastem Methanol, gibt bei 0ºC 2 ml 1M Natriumhydroxidlösung zu und setzt die Reaktion wie in Beispiel 3 beschrieben fort. Man erhält 400 mg der erwarteten Verbindung in Form eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 97%
Rf: 0,83 (Trichlormethan/Methanol/Essigsäure, 7/3/0,5)

BEISPIEL 11: tert.-Butylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-nitrophenyl)- propanoyl]-glycyl]-5-phenylprolin

Durch Umsetzen von 1 g der in dem Herstellungsbeispiel F erhaltenen Verbindung und 1,15 g des tert.-Butylesters von N-Glycyl-5-phenylproplin unter Anwendung der in Beispiel 1 beschriebenen Bedingungen erhält man eine ölige Verbindung, die man chromatographisch über Kieselgel in einer Cyclohexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) reinigt und 1,09 g eines hellgelben Öls ergibt.
Ausbeute: 53%

BEISPIEL 12: N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-nitrophenyl)-propanoyl]-glycyl]-5- phenylprolin

Man gibt zu 0,72 g der in Beispiel 11 erhaltenen Verbindung in Lösung in 2 ml Dichlormethan bei 0ºC 2 ml Trifluoressigsäure. Nach der Behandlung bei den in Beispiel 2 beschriebenen Bedingungen erhält man 0,58 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 90%
Rf: 0,39 (Dichlormethan/Methanol, 9/1)

BEISPIEL 13: N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-aminophenyl]-propanoyl]-glycyl] - 5-phenylprolin

Man löst 300 mg der in Beispiel 12 erhaltenen Verbindung in 15 ml Methanol, gibt einige Tropfen Essigsäure zu und hydriert unter Normaldruck in Gegenwart von Palladium-auf-Kohlenstoff. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators und dem Verdampfen des Lösungsmittels erhält man 0,280 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 100%
Rf: 0,31 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,25)

BEISPIEL 14: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-aminophenyl)-propanoyl]-glycyl]-5- phenylprolin

Man behandelt 0,150 g der in Beispiel 13 erhaltenen Verbindung unter Anwendung der in Beispiel 3 beschriebenen Bedingungen. Nach der üblichen Behandlung der organischen Phase erhält man 0,103 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 89%
Es: 0,36 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,3)

BEISPIEL 15: Methylester von N-(N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl]-propanoyl]-glycyl]-5-(para-aminophenyl)- prolin

Man kuppelt die Verbindung des Herstellungsbeispiels E mit dem Methylester von 5-(para-Aminophenyl)-prolin bei den in Beispiel 6 beschriebenen Bedingungen. Man erhält ein öliges Produkt, welches in einer Dichlormethan/Methanol-Essigsäure-Mischung (15/0,4/0,1) chromatographiert wird, wobei man ein weißes schaumiges Produkt erhält.
Ausbeute: 35%
Rt: 0,25 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,25)

BEISPIEL 16: N-[N'-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(para-aminophenyl)-prolin

Man behandelt die in Beispiel 15 erhaltene Verbindung unter Anwendung der Bedingungen des Beispiels 7 und erhält einen weißen Feststoff, der dem erwarteten Produkt entspricht.
Ausbeute: 60%
Rt: 0,37 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 17: Methylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)- prolin

Man kuppelt 0,35 g der in dem Herstellungsbeispiel C erhaltenen Verbindung nach dem in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahren mit 0,3 g der in dem Herstellungsbeispiel 6 erhaltenen Verbindung. Man erhält ein öliges Produkt, welches über Kieselgel in einer Hexan/Ethylacetat-Mischung (4/ 6) chromatographiert wird und 0,24 g des erwarteten Produkts ergibt.
Ausbeute: 40%
Rf: 0,37 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 18: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin

Man löst 0,24 g der in Beispiel 17 erhaltenen Verbindung in entgastem Methanol und behandelt mit 4 Äquivalenten einer entgasten wäßrigen 1 N Natriumhydroxidlösung. Nach dem Rühren während 30 Minuten bei 0ºC und während 2 Stunden bei Raumtemperatur säuert man das Reaktionsmedium an und extrahiert mit Ethylacetat. Nach dem Eindampfen zur Trockne erhält man 0,12 g eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 71%
Rf: 0,34 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 19: Methylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl] - 5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin

Man kuppelt die in dem Herstellungsbeispiel 6 erhaltene Verbindung nach dem in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahren mit 2-Acetylthio-3-phenylpropansäure und erhält ein öliges Produkt, welches man in einer n- Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1] chromatographiert.
Ausbeute: 50%
Rf: 0,28 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 20: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-[meta-hydroxyphenyl)-prolin

Man behandelt die in Beispiel 19 erhaltene Verbindung nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren und erhält ein pastenförmiges Produkt, welches der erwarteten Verbindung entspricht.
Ausbeute: 85%
Rf: 0,29 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/0,5/0,25)

BEISPIEL 21: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-benzyloxy-carbonyloxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]-5-(para-hydroxyphenyl)- prolin

Man kuppelt die in dem Herstellungsbeispiel C erhaltene Verbindung mit dem Methylester von N-Glycyl-5-(para-hydroxyphenyl)-prolin, den man nach dem in den Stufen a und b des Herstellungsbeispiels G erhaltenen Verfahren hergestellt hat, wobei man ein öliges Produkt erhält, das der erwarteten Verbindung entspricht.
Ausbeute: 50%
Rf: 0,26 (Cyclohexan/Ethylacetat/Essigsäure, 5, 5/4, 5/0,5)

BEISPIEL 22: N-[N-(2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(para-hydroxyphenyl)-prolin

Man behandelt die Verbindung des Beispiels 21 nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren und erhält ein pastenförmiges Produkt.
Ausbeute: 77%
Rf: 0,24 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 23: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-chlorphenyl) - propanoyl]-glycyl]-5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Die Kondensation der 2-Acetylthio-3-(para-chlorphenyl)-propansäure mit dem unter Anwendung der in dem Herstellungsbeispiel 6 beschriebenen Verfahren erhaltenen Methylester von N-Glycyl-5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin führt nach der Chromatographie in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) zu dem erwarteten Produkt in Form eines Öls.
Ausbeute: 53%
Rf: 0,38 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 24: N-[N-(2-Mercapto-3-(para-chlorphenyl)-propanoyl]-glycyl]-5- (ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Man behandelt die in dem Beispiel 23 erhaltene Verbindung nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren und erhält einen weißen pastenförmigen Feststoff.
Ausbeute: 88%
Rf: 0,26 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/0,5/0,25)

BEISPIEL 25: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-methoxyphenyl)- propanoyl]-glycyl]-5-(ortho-hydroxyphenyl)-proplin

Die Kondensation der 2-Acetylthio-3-(para-methoxyphenyl)-propansäure mit dem nach den Verfahrensweisen, die in dem Herstellungsbeispiel 6 beschrieben sind, erhaltenenen Methylester von N-Glycyl-5-(ortho-hydroxyphenyl)- proplin führt nach der Chromatographie in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (4/6) zu dem erwarteten Produkt in Form eines Öls.
Ausbeute: 50%
Rf: 0,28 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 26: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-methoxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(ortho-hydroxyphenyl)-prolin

Durch Behandeln der in dem Beispiel 25 erhaltenen Verbindung unter Anwendung der in Beispiel 3 beschriebenen Bedingungen erhält man einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 88%
Rf: 0,42 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/0,5/0,25)

BEISPIEL 27: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-methoxyphenyl)- propanoyl]-glycyl]-5-(ortho-methoxyphenyl)-prolin

Die Kondensation von 2-Acetylthio-3-(para-methoxyphenyl)-propansäure mit dem unter Anwendung der in dem Herstellungsbeispiel 6 beschriebenen Verfahrensweisen erhaltenen Methylester von N-Glycyl-5-(ortho-methoxyphenyl)- prolin führt nach der Chromatographie aus einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) zu dem erwarteten Produkt in Form eines weißen Feststoffs.
Ausbeute: 59%
Rf: 0,26 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 28: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-methoxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(ortho-methoxyphenyl)-prolin

Die Behandlung der in Beispiel 27 erhaltenen Verbindung unter Anwendung der Bedingungen des Beispiels 3 führt zu einem weißen Feststoff.
Ausbeute: 89%
Rt: 0,22 (Cyclohexan/Ethylacetat/Essigsäure, 5/5/0,5)

BEISPIEL 29: Methylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)- glycyl]-5-(para-methylphenyl)-prolin

Man spaltet von der in dem Herstellungsbeispiel H erhaltenen Verbindung die Schutzgruppe nach dem in der Stufe b des Herstellungsbeispiels G beschriebenen Verfahrensweise ab und kuppelt das erhaltene Dipeptid mit 2-Acetylthio-3-phenylpropansäure nach dem in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahren. Man chromatographiert das in dieser Weise erhaltene ölige Produkt in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (5,5/4,5) und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 69%
Rf: 0,55 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 30: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-(para-methylphenyl)-prolin

Man behandelt die in Beispiel 29 erhaltene Verbindung nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren und erhält einen weißen Feststoff. Ausbeute: 89%
Rf: 0,59 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/0,5/0,5)

BEISPIEL 31: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-hydroxyphenyl)- propanoyl]-glycyl]-5-(para-methylphenyl)-prolin

Man spaltet von der in dem Herstellungsbeispiel H beschriebenen Verbindung die Schutzgruppe nach dem in der Stufe B des Herstellungsbeispiels G beschriebenen Verfahren ab und kuppelt das erhaltene Dipeptid mit der in dem Herstellungsbeispiel C erhaltenen Verbindung nach dem in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahren. Man chromatographiert das in dieser Weise erhaltene ölige Produkt in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 52%
Rf: 0,14 (n-Hexan/Ethylacetat, 1/1)

BEISPIEL 32: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(para-methylphenyl)-prolin

Man behandelt die in Beispiel 31 erhaltene Verbindung nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 92%
Rf: 0,60 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/1/0,5)

BEISPIEL 33: Methylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-hydroxyphenyl)- propanoyl]-glycyl[-5-(ortho-methylphenyl)-prolin

Man spaltet von der in dem Herstellungsbeispiel I beschriebenen Verbindung nach dem in der Stufe b des Herstellungsbeispiels G beschriebenen Verfahren die Schutzgruppe ab und kuppelt das erhaltene Dipeptid mit der in dem Herstellungsbeispiel C erhaltenen Verbindung nach dem in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahren. Man reinigt das in dieser Weise erhaltene ölige Produkt chromatographisch in einer n-Hexan/Ethylacetat-Mischung (1/1) und erhält ein Öl.
Ausbeute: 56%
Rf: 0,28 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 34: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(ortho-methylphenyl)-proplin

Man behandelt die in Beispiel 33 erhaltene Verbindung nach dem Verfahren des Beispiels 3 und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 87%
Schmelzpunkt: 130ºC (Zersetzung)
Rf: 0,24 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 35: Methylester von N-[N-(2-Acetylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-(ortho-methylphenyl)-prolin

Man spaltet von der in dem Herstellungsbeispiel I erhaltenen Verbindung nach dem in der Stufe b des Herstellungsbeispiels G beschriebenen Verfahren die Schutzgruppe ab und kuppelt das erhaltene Dipeptid nach dem Verfahren des Herstellungsbeispiel A mit 2-Acetylthio-3-phenylpropansäure. Man chromatographiert den in dieser Weise erhaltenen weißen Feststoff in einer n-Hexan/- Ethylacetat-Mischung (55/45).
Ausbeute: 58%
Schmelzpunkt: 97ºC
R: 0,40 (n-Hexan/Ethylacetat, 4/6)

BEISPIEL 36: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-(ortho-methylphenyl)-prolin

Man behandelt die in dem Beispiel 35 erhaltene Verbindung nach dem Verfahren des Beispiels 3 und erhält einen weißen Feststoff.
Ausbeute: 63%
Schmelzpunkt: 110ºC (Zersetzung)
Rf: 0,15 (Dichlormethan/Methanol/Essigsäure, 9/0,7/0,25)
Unter Anwendung analoger Verfahrensweisen erhält man die Verbindungen der folgenden Beispiele:

BEISPIEL 37: N-[N-(2-Propanoylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-(orthohydroxyphenyl)-prolin

BEISPIEL 38: N-[N-(2-Benzoylthio-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-5-phenylprolin

BEISPIEL 39: N-[N-(2-Mercapto-3-(para-sulfamoylphenyl)-propanoyl]-glycyl] - 5-phenylprolin

BEISPIEL 40: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-propylsulfamoylphenyl)-propanoyl] - glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin

BEISPIEL 41: Cyclohexylmethylester von N-[N-[2-Acetylthio-3-(para-sulfamoyl-phenyl)-propanoyl]-glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)- prolin

BEISPIEL 42: Benzylester von N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl) - propanoyl]-glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)-prolin

BEISPIEL 43: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-chlorphenyl)-propanoyl]-glycyl]-2- (ortho-hydroxyphenyl)-imidazolidin-5-carbonsäure

BEISPIEL 44: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-2-phenyloxazolidin-5-carbonsäure

BEISPIEL 45: N-[N-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl]-2-(ortho-hydroxyphenyl)-thiazolidin-5-carbonsäure

BEISPIEL 46: N-[N-[2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]-2- (meta-hydroxyphenyl)-hexahydropyrimidinyl-6-carbonsäure BEISPIEL 47: N-[N-(5R)-[(2S)-2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)-L-prolin

Man behandelt das nach der von J. Ezquerra et al. (Tetrahedron Letters, 34(39), (1993), 6317-6320) beschriebenen Verfahrensweise erhaltene (5R)-5-( meta-Hydroxyphenyl)-L-prolin unter Anwendung der in dem Herstellungsbeispiel G beschriebenen Bedingungen und kuppelt dann nach der in dem Herstellungsbeispiel A beschriebenen Verfahrensweise mit (2S)-2-Acetylthio-3-(para-benzyloxycarbonyloxyphenyl)-propansäure, die man in dem Herstellungsbeispiel C erhalten hat. Man verseift den in dieser Weise erhaltenen Ester, wie in Beispiel 18 beschrieben, und erhält die erwartete Titelverbindung.
Man erhält die Verbindungen der Beispiele 48 bis 53 nach der Verfahrensweise des Beispiels 47.

BEISPIEL 48: N-[N-(5R)-[(2S)-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl]-glycyl]-5- phenyl]-L-prolin

BEISPIEL 49: N-[N-(5R)-[(2S)-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl]-glycyl]-5- (ortho-hydroxyphenyl)-L-prolin

BEISPIEL 50: N-[N-(5R)-[(2S)-[2-Mercapto-3-(para-chlorphenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-(ortho-hydroxyphenyl)-L-prolin

BEISPIEL 51: N-(N-(5R)-[(2S)-((2-Mercapto-3-(para-aminophenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-phenyl]-L-prolin

BEISPIEL 52: N-[N-(55)-[(2S)-2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)]-D-prolin

BEISPIEL 53: N-[N-(5R)-[(2R)-2-Mercapto-34para-hydroxyphenyl)-propanoyl] - glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)]-L-prolin

BEISPIEL 54: N-[N-(55)-[(2S)-2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)]-L-prolin

Stufe a: (2S)-5-(meta-Hydroxyphenyl)-3,4-dihydro[2H]pyrrol-2-carbonsäure
Man erhält die Verbindung nach dem von Gershon et al. (J. Med. Chem., 8 (1965), 877-881) beschriebenen Verfahren.
Stufe b: (55)-5-(meta-Hydroxyphenyl)-L-prolin
Man reduziert die in der Stufe a erhaltene Verbindung (Behandlung mit OH&supmin;, H&spplus; und dann NaBH&sub4;) zur Bildung einer Mischung aus den (2S,5R)- und (25,55)-Isomeren, die mit der von C. G. Overberger et al. (Macromolecules, 5(4) (1972), 368-372) beschriebenen Verfahrensweise getrennt werden.
Stufe c: N-[N-(55)-[(2S)-2-Mercapto-3-(para-hydroxyphenyl)-propanoyl]-glycyl]- 5-(meta-hydroxyphenyl]-L-prolin
Man erhält die Titelverbindung ausgehend von dem in der vorhergehenden Stufe erhaltenen Produkt nach der in Beispiel 47 beschriebenen Verfahrensweise.

BEISPIEL 55: N-[N-(5R)-[(2S)-2-Mercapto-3-para-hydroxyphenyl)-propanoyl]- glycyl]-5-(meta-hydroxyphenyl)]-D-prolin

Man erhält die Verbindung nach der in Beispiel 54 beschriebenen Verfahrensweise ausgehend von (2R)-5-(meta-Hydroxyphenyl)-3,4-dihydro(2H]pyrrol- 2-carbonsäure.

PHARMAKOLOGISCHE UNTERSUCHUNG

BEISPIEL A: Inhibierende Wirkung in vitro auf die neutrale Endopeptidase (NEP) und die Peptidyldipeptidase A (ACE)

Man mißt die inhibierenden Wirkungen der erfindungsgemäßen Verbindungen unter Verwendung von [3H]-D-Ala²-Leu-Enkephalin als Substrat für die neutrale Endopeptidase nach der von Llorens et al. (Biochem. Blophys. Res. Commun., 96 (1980), 1710ff) beschriebenen Verfahrensweise und unter Verwendung von Z-Phe-His-Leu als Substrat im Fall der Peptidyldipeptidase A nach dem in Biochem. Biophys. Acta, 206 (1970), 136-142 beschriebenen Verfahren.
Die erhaltenen Ergebnisse sind in der Tabelle I zusammengefaßt, in der auch die Daten angegeben sind, die mit N-(2-Mercaptomethyl-3-phenyl-1-oxopropyl)-glycin (Thiorphan) erhalten worden sind, einer Verbindung mit sehr ähnlicher Struktur, die jedoch nur eine Wirkung gegenüber der neutralen Endopeptidase (NEP) entfaltet. Tabelle I Inhibierende Wirkung auf die neutrale Endopeptidase (NEP) und das Angiotensin umwandelnde Enzym (ACE)

BEISPIEL B: Inhibierende Wirkung in vivo auf die neutrale Endopeptidae der Niere (NEP) und der Peptidyldipeptidase A (ACE) der Lunge

Man verabreicht die Verbindungen in einer einzigen Dosis auf oralem Wege an Mäuse und mißt die Inhibierung der beiden Enzyme im Verlaufe einer Zeitdauer, die sich von 1 Stunde bis 16 Stunden bei den kompetitiven Untersuchungen mit spezifischen radioaktiven Markern für jedes Enzym erstrecken.
Nach der intravenösen Verabreichung eines radioaktiv markierten ACE- Inhibitors ([³H]-Trandolaprilat) oder eines radioaktiv markierten NEP-Inhibitors ([³H]HACBOGly) tötet man das Tier und entnimmt die Lungen oder die Nieren.
Man homogenisiert die Organe und mißt die mit den Homogenisaten verbundene Radioaktivität durch Flüssigszintillation, wie in der Methode von M. C. Fournier- Zaluski et coll. beschrieben (J. Med. Chem., 37 (1994), 1070-1083).
Beispielsweise liefert die Verbindung des Beispiels 47 die in der nachfolgenden Tabelle II angegebenen Ergebnisse: Tabelle II in vivo-Inhibierung von NEP der Niere und ACE der Lunge (Verbindung von Beispiel 47: verabreichte Dosis p.o.: 2,6.10-s Mol/kg entsprechend 11,5 mg/kg)

BEISPIEL C: Antihypertensive Wirkungen

Man bestimmt die anti-hypertensive Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen in vivo an der Ratte, die die Verabreichung des DOCA-Salzes (Desoxy-corticosteron-acetat) verursachten Hypertension und an der spontan hypertensiven männlichen Ratte (SHR) nach der von Trapani et al. (J. Cardiovasc. Pharmacol., 14, (1989), 419-424) beschriebenen Methode. Bei diesem Test zeigen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen als starke anti-hypertensive Mittel, die keinerlei Toxizität zeigen.
Beispielsweise liefert die in Beispiel 47 beschriebene Verbindung an der SHR-Ratte die in der folgenden Tabelle III aufgeführten Ergebnisse: Tabelle III Antihypertensive Wirkung an der SHR-Ratte (Verabreichung p.o. in einer einzigen Dosis pro Tag von 25 mg/kg; die Tiere werden während 6 Tagen behandelt mit einer ersten Verabreichung am Tag 1 und einer letzten Verabreichung am Tag 6)
*: p < 0,01
Behandlung

BEISPIEL D: Pharmazeutische Zubereitung: Tabletten

Bestandteile für die Herstellung von 1000 Tabletten mit einem Wirkstoffgehalt von 10 mg
Verbindung von Beispiel 5 10 g
Lactose 50 g
Magnesiumstearat 10 g
Weizenstärke 20 g
Maisstärke 10 g
Siliciumdioxid 5 g
Hydroxypropylcellulose 5 g

Claims

1. Verbindungen der Formel (I):

in der:

- R ausgewählt ist aus Wasserstoff, einer Acylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatomen in gerader oder verzweigter Kette enthält, der Benzoyl-, Naphthoyl- und Adamantoylgruppe und der Gruppe der Formel

in der R&sub1;, R&sub2;, R', X und n nachfolgend definiert werden,

- R&sub1; und R&sub2;, die gleichartig oder verschieden sind, unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, der Hydroxygruppe, einer Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einer Alkoxygruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einem Halogenatom, ausgewählt aus Fluor, Chlor, Brom und Iod, einer Nitrogruppe, einer Aminogruppe, der Carboxygruppe, einer Alkoxycarbonylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, der Benzyloxycarbonyloxygruppe, der Phosphonatgruppe, der Sulfonatgruppe, der Gruppe der Formel SO&sub2;-NH&sub2; und der Gruppe SO&sub2;-NH-Alkyl, worin der Begriff Alkyl für eine gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe steht, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält,

- R' ausgewählt ist aus Wasserstoff, einer Alkylgruppe, die 1 bis 20 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, einer Aralkylgruppe und einer Cycloalkylalkylgruppe,

- X ausgewählt ist aus Sauerstoff, Schwefel, der CH&sub2;-Gruppe und der NH-Gruppe,

- n ausgewählt ist aus den ganzen Werten 1 und 2, mit der Maßgabe:

- daß die "Aralkylgruppe" für eine Gruppe steht, die aus einer Arylgruppe, ausgewählt aus Phenyl und Naphthyl, die an eine Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette enthält, gebunden ist, gebildet ist,

- die "Cycloalkylalkylgruppe" für eine Gruppe steht, die aus einer Cycloalkylgruppe, die 3 bis 8 Kohlenstoffatome aufweist, und an eine Alkylgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome in gerader oder verzweigter Kette aufweist, gebunden ist, gebildet ist,

sowie deren stereoisomere Formen in reinem Zustand oder in Form von Mischungen und gegebenenfalls ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze.

2. Verbindungen nach Anspruch 1, worin n = 1 und X die CH&sub2;-Gruppe bedeuten, deren stereoisomere Formen in reinem Zustand oder in Form einer Mischung und deren eventuellen pharmazeutisch annehmbaren Salze.

3. Verbindungen nach Anspruch 1, worin:

- das die Gruppe

tragende Kohlenstoffatom in der Konfiguration S vorliegt und

- das die Gruppe

tragende Kohlenstoffatom in der Konfiguration S vorliegt, und

- die Gruppen

einerseits und

andererseits in bezug auf die Mittelebene des Rings in der cis-Konfiguration angeordnet sind,

deren stereoisomere Formen in reinem Zustand oder in Form einer Mischung und deren eventuelle pharmazeutisch annehmbaren Salze.

4. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich N-[N-(5R)-[(2S)-2-Mercapto-3-(parahydroxyphenyl)-propanoyl)-glycyl)-5-(meta-hydroxyphenyl)-L-prolin.

5. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich N-[N-(5R)-[(2S)-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl)-5-phenyl)-L-prolin.

6. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich N-[N-(5R)-[(2S)-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-glycyl)-5-(ortho-hydroxyphenyl)-L-prolin.

7. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich N-[N-(5R)-((2S)-[2-Mercapto-3-(parachlorphenyl)-propanoyl]-glycyl)-5-(ortho-hydroxyphenyl)-L-prolin.

8. Verbindung nach Anspruch 1, nämlich N-[N-(5R)-((2S)-[2-Mercapto-3-(paraaminophenyl)-propanoyl)-glycyl]-5-phenyl)-L-prolin.

9. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man das Dipeptid der Formel (II):

in der R&sub2;, R', X und n die bezüglich der Verbindung der Formel (I) angegebenen Bedeutungen besitzen, einer Acylierungsreaktion mit Hilfe einer Säure der Formel (III):

in der R und R&sub1; die bezüglich der Verbindung der Formel (I) angegebenen Bedeutungen besitzen, unter den üblicherweise in der Peptidsynthese angewandten Bedingungen unterwirft, wobei die Dipeptide der Formel (II) erhalten worden sind durch Kondensation des Acylchlorids des Z-Glycins der Formel (IV):

mit einem Ester der Formel (V):

in der R&sub2;, R', X und n die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, gefolgt von einer katalytischen Hydrierung.

10. Pharmazeutische Zubereitungen enthaltend als Wirkstoff mindestens eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 8 in Kombination mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen und pharmazeutisch annehmbaren Trägermaterialien.

11. Pharmazeutische Zubereitung nach Anspruch 10 mit einer gemischten inhibierenden Wirkung auf neutrale Endopeptidase (NEP) und Peptidyldipeptidase A (ACE) zur Vorbeugung und Zur Behandlung von kongestiven Herzstörungen und essentiellen Hypertonien, Hypertonien, die mit einer Erhöhung des Blutvolumens verbunden sind, der Atherosklerose, der kardialen Ischämie, der Herz- und/oder Niereninsuffizienz, Lungenembolie und Angina pectoris und die aufgrund ihrer schützenden Wirkung auf die Verdickung der Gefäßwandungen sowie aufgrund ihrer Fähigkeit, die Nebenwirkungen der Behandlungen mit Cyclosporin zu verringern, nützlich sind.