DE60014374T2

DE60014374T2 - Taxan-derivate und verfahren zu ihrer herstellung

Info

Publication number: DE60014374T2
Application number: DE60014374T
Authority: DE
Inventors: Ezio Bombardelli; Bruno Gabetta; Alessandro Pontiroli
Original assignee: Indena SpA
Current assignee: Indena SpA
Priority date: 1999-07-06
Filing date: 2000-07-03
Publication date: 2006-02-16
Anticipated expiration: 2020-07-04
Also published as: DE60014374D1; USRE40901E1; AU5823500A; CN1158286C; CA2373530A1; EP1192162A2; DE60032827T2; PL352278A1; IL172973A0; HK1068879A1; RU2245882C2; NO20020017L; PT1529777E; CN100418958C; CN1539831A; ATE350372T1; ITMI991483A1; DK1192162T3; IL147445A; ES2278254T3

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein neues Taxan, das als ein chemotherapeutisches Mittel verwendbar ist, auf die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die dieses enthalten und auf ein Verfahren zur Herstellung von 14β-Hydroxy-1,14-carbonat-baccatin III und V-Derivaten, die an der 13-Stellung durch einen Isoserinrest substituiert sind.
Taxane sind eine der wichtigsten Klassen von Medikamenten mit Wirkung gegen Krebs, die kürzlich entwickelt wurde. Die bemerkenswerte Effektivität von Paclitaxel und seines Analogons Docetaxel bei der Behandlung verschiedener Tumore hat die Forschung auf Substanzen mit antimikrotubulärer Wirkung gerichtet. Taxane sind jedoch dahingehend durch einen besonderen Wirkungsmechanismus gekennzeichnet, daß sie die Vereinigung von Mikrotubuli unterstützen und Tubulindepolymerisation inhibieren.
Die Hauptnachteile der derzeit verwendeten Taxane sind:
a) Unlöslichkeit in Wasser, was es dringend erforderlich macht, spezielle Träger zu verwenden, die Hypersensibilisierungsreaktionen verursachen können; (b) Toxizitäten, was die Dosierungen einschränkt, (c) Entwicklung von Resistenzmechanismen. Die Zellresistenz gegen Taxane ist mit dem MDR-Phenotyp („Arzneimittelmehrfachresistenz"), bewirkt durch den P-Glycoproteintransporter, durch Tubulinveränderungen und durch Veränderungen der Expression von Apoptoseregulationsproteinen in Zusammenhang gebracht worden.
Um neue aktive Moleküle mit hoher Löslichkeit und besserer Verträglichkeit zu finden, sind 14β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III und V-Taxan-Derivate synthetisiert worden.
Einige Derivate aus 14-Hydroxybaccatin III, die an der 13-Stellung durch Isoserinreste substituiert sind, werden in US 5,705,508 beschrieben, zusammen mit einem Verfahren zu ihrer Herstellung.
US 5750562 offenbart Derivate aus 10-Deacetylbaccatin III und aus 10-Deacetyl-14β-hydroxybaccatin III mit zytotoxischer und Antitumorwirkung und ein Verfahren zu deren Herstellung, das unter anderem das Zwischenprodukt 7-Triethylsilyl-14β-hydroxybaccatin III einsetzt.
Nunmehr ist herausgefunden worden, daß die Verbindung der Formel I, ein 14β-Hydroxy-1,14-carbonat-baccatin V-Derivat
bemerkenswerte zytotoxische und Antikrebswirkungen aufweist und fähig ist, die Resistenz von Zellinien, die den MDR-Phenotyp exprimieren, zu überwinden.
Die Verbindung unterscheidet sich von den in dem obigen amerikanischen Patent beschriebenen Derivaten aufgrund des Hydroxyls an der 7-Stellung, das in diesem Fall eine alfa-Konfiguration aufweist. 13-(N-Boc-β-isobutylisoserinyl)-14β-hydroxy-baccatin III-1,14-carbonat,das dem Derivat entspricht, auf das sich in US 5,705,508 als SB-T-101131 bezogen wird, kann als ein Ausgangsprodukt für die Herstellung der Verbindung (I) verwendet werden. In diesem Fall wird das Baccatin III-Derivat entweder mit DBU (Diazabicyclo[5,4,0]-7-undecen) in Methanol oder THF behandelt, oder es wird einfach in Lösung mit Methylenchlorid oder chlorierten Lösungsmitteln in Gegenwart von aliphatischen Alkoholen, wie Methanol, Ethanol oder Propanol mit basischem Aluminiumoxid für einen Zeitraum zwischen einer Stunde und 14 Tagen belassen. Die Verbindung, die an C-7 beta-Konfiguration aufweist, wird bei neutralem oder leicht basischem pH in das stabilere alfa-Isomer (Baccatin V-Derivat) umgewandelt.
Alternativ kann die Verbindung (I) durch ein Verfahren hergestellt werden, das es ebenso ermöglicht, das entsprechende beta-Epimer bei C-7 herzustellen.
Das Verfahren (A) umfaßt die folgenden Schritte:

a) Umwandlung von 14β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III oder V in das triethylsilylierte Derivat an der 7-Stellung;
(b) Herstellung des 1,14-Carbonatderivats aus dem Produkt aus Schritt (a);
(c) selektive Acetylierung des Hydroxyls an der 10-Stellung;
(d) Umsetzung des Produktes aus Schritt (c) mit (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure;
(e) Abspaltung der Triethylsilyl- und Dimethoxybenzyliden-Schutzgruppen aus dem Produkt aus Schritt (d).

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens (A), wird Triethylchlorsilan als Silylierungsmittel in Schritt (a) verwendet, wohingegen das 1,14-Carbonatderivat in Schritt (b) unter Verwendung von Phosgen in Toluen in einer 3 : 1 Methylenchlorid/Pyridinlösung unter Stickstoffatmosphäre hergestellt wird. Im folgenden Schritt (c) wird 14-β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III oder V-7-Tes-1,14-carbonat mit LiHMDS in wasserfreiem THF in ein Salz überführt, wodurch das 10-Hydroxyderivat-Lithiumsalz erhalten wird, das anschließend mit Acetylchlorid acetyliert wird. Die Kondensationsreaktion zwischen 14-β-Hydroxy-7-Tes-1,14-carbonat-baccatin III oder V und (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure (Schritt (d)) wird in einem wasserfreien apolaren organischen Lösungsmittel, in Gegenwart einer Base und eines Kondensationsmittels wie Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) durchgeführt.
Schließlich wird in Schritt (e) Triethylsilyl mit Pyridiniumfluorid in Acetonitril/Pyridin-Lösung unter Stickstoff entfernt, wohingegen die Dimethoxybenzylidengruppe in Methylenchloridlösungsmittel durch die Zugabe von Methanol-HCl und anschließend von NaHCO₃ entfernt wird.
Die beschriebene Schrittfolge kann umgekehrt werden, um so das Endprodukt in vergleichbareren Ausbeuten zu erhalten. Das alternative Verfahren (B) umfaßt die folgenden Schritte:

a') selektive Acetylierung des Hydroxyls an der C-10-Stellung von 14β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III oder V;
(b') Herstellung des 1,14-Carbonatderivats aus dem Produkt aus Schritt (a');
(c') Silylierung des Hydroxyls an der C-7-Stellung;
(d') Umsetzung des Produktes aus Schritt (c') mit (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure;
(e') Abspaltung der Triethylsilyl- und Dimethoxybenzyliden-Schutzgruppen aus dem Produkt aus Schritt (d').

Das letztere Verfahren beinhaltet eine Vielzahl an Vorteilen, wie zum Beispiel die Möglichkeit,das gewünschte Synton (1,14-Carbonat-7-Tes-baccatin III oder V) ohne chromatographische Verunreinigungen lediglich durch Kristallisation zu erhalten.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform wird die selektive Acetylierung aus Schritt (a') mit Essigsäureanhydrid in der Gegenwart von Cer-, Scandium-, Ytterbiumsalzen, vorzugsweise CeCl₃ · 7H₂O, durchgeführt, wohingegen die verbleibenden Schritte wie oben angezeigt durchgeführt werden.
Die vorliegende Erfindung umfaßt ebenso als Zwischenprodukte des Verfahrens zur Herstellung von 14β-Hydroxy-1,14-carbonatbaccatin III oder V, die folgenden Verbindungen: 14β-Hydroxybaccatin III oder V, 14β-Hydroxybaccatin III oder V-1,14-carbonat, 14-β-Hydroxy-7-Tes-10-deacetylbaccatin III oder V, 14-β-Hydroxy-7-Tes-baccatin V, 14-β-Hydroxy-7-Tes-baccatin III oder V-1,14-carbonat.
Das Zwischenprodukt (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure, das bei der Herstellung der Verbindung I verwendet wird, kann gemäß dem folgenden Schema hergestellt werden:
Schema
Das Verfahren umfaßt die folgenden Schritte:

a) Schützung der Aminogruppe von Leucinol mit Boc;
b) Umwandlung von N-Boc-L-leucinol in N-Boc-L-leucinal;
c) Herstellung des Cyanhydrins des Produktes aus Schritt (b);
d) Umwandlung des Cyanhydrinnitrils in die entsprechende Carbonsäure;
e) Bildung des Carbonsäuremethylesters;
f) Reinigung des (2R,3S)-3-(N-Boc)-amino-2-hydroxy-5-methylhexansäuremethylesters;
g) Kondensation des Produktes aus Schritt (f) mit 2,4-Dimethoxybenzaldehyddimethylacetal;
h) Umwandlung des (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäuremethylesters in die entsprechende Carbonsäure

In Schritt (a) wird Leucinol mit Boc-Anhydrid umgesetzt und anschließend zu Aldehyd in DMSO/CH₂Cl₂ Lösungsmittel unter Verwendung von Oxalylchlorid bei einer Temperatur unter –60 °C oxidiert, wobei die gebildete Säure mit Triethylamin neutralisiert wird, oder mit Natriumhypochlorit bei –2 bis –5 °C oxidiert wird. Das Cyanhydrin aus Schritt (c) wird durch Substitution der Sulfongruppe des Zwischenproduktes 1-Hydroxy-2-(N-Boc)amino-4-methylpentansulfonat durch das Cyanidion hergestellt. Das Cyanhydrin wird dann in Schritt (d) durch Rückflußkochen in konzentrierter Chlorwasserstoffsäure zu der entsprechenden Carbonsäure hydrolysiert.
In Schritt (e) wird (2R/S,3S)-3-(N-Boc)-amino-2-hydroxy-5-methylhexansäure durch die Umsetzung mit Diazomethan in Etherlösung in den entsprechenden Methylester umgewandelt. In Schritt (f) wird das Diastereomer (2R,3S) durch Kristallisation aus Cyclohexan oder einem Hexan/Toluengemisch gereinigt. Schritt (g) wird in THF in Gegenwart von Pyridinium-p-toluensulfonat durchgeführt, wodurch das entwickelte Methanol entfernt wird; nach der Beendigung der Reaktion wird das Pyridinium-p-toluensulfonat mit Bicarbonat neutralisiert. In Schritt (h) wird der Ester in einem Methanol/Wasser-Gemisch mit Kaliumcarbonat hydrolysiert. Das Reaktionsgemisch wird anschließend angesäuert und das Endprodukt wird mit Methylenchlorid extrahiert.
Das neue Taxan der vorliegenden Erfindung zeigte eine starke Antikrebswirkung gegen Krebszellen der Brust, Lunge, Eierstock, Dickdarm, Prostata, Niere, Bauchspeicheldrüse, und ebenso gegen Zellen, die gegen bekannte Antikrebsmedikamente wie Adriamycin, Vinblastin und Platinumderivate resistent sind.
Daher bezieht sich die Erfindung auf pharmazeutische Formulierungen, die eine wirksame Menge an der Verbindung der Erfindung enthalten, zusammen mit pharmakologisch akzeptablen Trägern und Vehikeln. Insbesondere kann die Verbindung in Form von Tabletten, Pulvern, Granulaten, Kapseln, Injektionen, Lösungen, Zäpfchen, Emulsionen, Dispersionen und dergleichen formuliert werden. Für die intravenöse Verabreichung werden hauptsächlich Gemische aus Chremophor L und Ethanol, Polysorbat und Ethanol oder Liposomformulierungen, die mit natürlichem oder synthetischem Phosphatidylcholin, oder Gemischen aus natürlichen Phospholipiden in der Gegenwart von Cholesterol hergestellt wurden, verwendet; für die orale Verabreichung werden vorzugsweise weiche Gelatinekapseln, in denen das Produkt in Polysorbaten, PEG oder Gemischen hiervon, gegebenenfalls in der Gegenwart von Phospholipiden gelöst wird, hergestellt. Verbindung (I) kann Menschen in Konzentrationen von 50 bis 500 mg/m² verabreicht werden.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung ausführlicher.
Beispiel 1:
Synthese von 13-(N-Boc-β-isobutylserinyl)-14β-hydroxybaccatin-III-1,14-carbonat
43,26 g 14β-Hydroxy-deacetylbaccatin III zusammen mit 22,3 ml N-Methyl-imidazol wurden in 230 ml DMF in einem runden 500 ml-Glaskolben gelöst; dieser Lösung wurden unter starkem Rühren bei Raumtemperatur in einer Stunde 14 ml Triethylchlorsilan zugegeben. Als die Reaktion vorbei war, wurde das Reaktionsgemisch unter starkem Rühren in 21 Wasser gegossen. Es bildete sich ein ergiebiger Niederschlag, der bei 4 °C über Nacht stehen gelassen wurde. Der Niederschlag wurde dann filtriert, gründlich mit Wasser und anschließend mit n-Hexan gewaschen. Nach dem Trocknen unter Vakuum wurden 48,1 g 7-Tes-10-deacetylbaccatin III (XII), das einen kleinen Prozentsatz an dem 7,10-Derivat enthält, mit den folgenden chemisch-physikalischen Eigenschaften erhalten:
¹H-NMR (CDCl₃ 200 MHz): δ (ppm) = 0,55(6H, t, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH₂), 0,94(9H, q, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH₃), 1,18(3H, s, C16H₃), 1,20(3H, s, C17H₃), 1,77(3H, s, C19H₃), 1,90 (1H, ddd, J = 2,4, 10,8, 13,2 Hz, C6Hβ), 2,12(3H, d, J = 1,6 Hz, C18H₃), 2,31(3H, s, 4-OCOCH₃), 2,48(3H, ddd, J = 14,3, 9,8, 6,5 Hz, C6Hα), 2,73(1H, d, J = 5,5Hz, OH); 3,79 (1H, d, J = 7,1 Hz, C3H), 4,20(1H, dd, J = 1,0, 8,3 Hz, C20Hβ), 4,31(1H, d, J = 8,6 Hz, C20Hα), 4,39(1H, dd, J = 6,4, 10,7 Hz, C7H), 4,77(1H, d, J = 5,8 Hz, C14H), 4,94(1H, dd, J = 2,1, 9,7 Hz, (C5H)), 5,05 (1H, m, C13H), 5,13(1H, d, J = 1,9 Hz, C10H), 6,05(1H, d, J = 7,3 Hz, C2H), 7,41 – 8,09(5H, m, Ph).
Massenspektrum (NH₃, DEP/CI, positive Ionen): (m/z) 718 [(M+NH₄)⁺, 100 %], 701 [M+H)⁺, 39 %].
Die resultierende Verbindung wurde in 300 ml eines Methylenchlorid/Pyridin 3 : 1-Gemisches unter Stickstoffatomsphäre gelöst; diese Lösung wurde unter Rühren zu einer Phosgenlösung (214 ml aus einer 1,9M Lösung in Toluen), die bei –10 °C vorgekühlt war, zugegeben, wobei die Temperatur während der Zugabe bei –5 bis –10 °C gehalten wurde.
Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten gerührt, dann mit 700 ml einer gesättigten NaHCO₃-Lösung geschüttelt, wobei die Temperatur unter oder bei 2 °C gehalten wurde. Die Phasen wurden getrennt und die organische Phase wurde gewaschen, um das Pyridin zu entfernen. Die organische Phase wurde über MgSO₄ dehydratisiert und zur Trockne konzentriert.
46,6 g 10-Deacetylbaccatin III-7-Tes-1,14-carbonat wurden erhalten, die direkt für die folgenden Reaktionen verwendet werden konnten.
31 g der Verbindung wurden in 250 ml strikt wasserfreiem THF gelöst; die Lösung wurde bei –50 °C gekühlt und ihr wurden 48 ml einer 1M LiHMDS-Lösung in 2 Minuten zugegeben und sie wurde 20 Minuten bei der gleichen Temperatur gerührt. 3,7 g Acetylchlorid wurden während 40 Minuten unter Rühren zugegeben. Die Reaktionsgemisch wurde stehengelassen, damit es sich auf 0 °C erhöht, wobei das Rühren für 2 Stunden fortgesetzt wurde. Bei Beendigung der Reaktion wurde das Gemisch mit einer gesättigten NH₄Cl-Lösung behandelt und mit Ethylacetat verdünnt. Die Phasen wurden getrennt und die wässerige Lösung wurde mit Ethylacetat bis zur Erschöpfung des Produktes verdünnt. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet und zur Trockne konzentriert. 33 g 14β-Hydroxy-7-Tes-1,14-carbonat-baccatin III wurden aufgrund der Verbindungen aus den vorherigen Reaktionen unrein erhalten. Diese Verbindung wurde auf Kieselgel chromatographiert, das mit einem Ethylacetat/CH₂Cl₂ 9 : 1 Gemisch eluierte. 30 g des gewünschten Produktes (XIII) wurden erhalten, das die folgenden Merkmale aufwies:
¹H-NMR (CDCl₃ 200 MHz): δ (ppm) = 0,55(6H, t, J = 7,8Hz,7-OTES CH₂), 0,95(9H, q, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH₃), 1,16(3H, s, C16H₃), 1,32(3H, s, C17H₃), 1,77(3H, s, C19H₃), 1,88 (1H, ddd, J = 2,4, 10,8, 13,2 Hz, C6Hβ), 2,21(3H, d, J = 1,6 Hz, C18H₃), 2,19(3H, s, 10-OCOCH₃), 2,31(3H, s, 4-OCOCH₃), 2,48(3H, ddd, J = 14,3,9,8,6,5Hz,C6Hα), 2,73(1H, d, J = 5,5 Hz, OH) 3,72(1H, d, J = 7,1 Hz, C3H), 4,20(1H, d, J = 8,3 Hz, C20Hß), 4,31(1H, d, J = 8,6 Hz, C20Hα), 4,46(1H, dd, J = 6,4, 10,7 Hz, C7H), 4,79(1H, d, J = 5,8 Hz, C14H), 4,94(1H, dd, J = 2,1, 9,7 Hz, (C5H)), 5,02(1H, m, C10H), 5,05(1H, m, C13H), 6,09(1H, d, J = 7,3 Hz, C2H), 7,41 – 8,09(5H, m, Ph).
Massenspektrum (NH₃, DEP/CI, positive Ionen): (m/z) 759 [(M+NH₄)⁺, 19 %], 743 [M+H)⁺, 100 %].
20 g 14β-Hydroxy-7-Tes-1,14-carbonat-baccatin III zusammen mit 300 ml strikt wasserfreiem Toluen wurden in einen runden 1 l-Stehkolben gegeben, 10 g (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-Dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure und 2 g N,N-Dimethylaminopyridin (DMAP) und 9,5 g Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), gelöst in CH₂Cl₂, wurden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden unter Rückfluß erhitzt, dann abgekühlt, das Harnstoffprodukt wurde ausgefällt und Stammlaugen wurden mit einer gesättigten NaHCO₃-Lösung gewaschen, um die nichtumgesetzte Säure zu entfernen, dann mit Chlorwasserstoffsäure, um DMAP zu entfernen, und schließlich wieder mit NaHCO₃ bis zur Neutralität verdünnt. Die organische Phase wurde zur Trockne konzentriert, um 41,5 g des Produktes zu erhalten, das direkt in dem anschließenden Schritt verwendet werden konnte.
40 g dieser Verbindung wurden in zwei Schritten entschützt, indem zuerst Tes und dann 2,4-Dimethoxybenzaldehyd entfernt wurde. 40 g der Verbindung wurden in 100 ml eines Acetonitril/Pyridin-Gemisches (80 : 100) unter Stickstoff gelöst und bei 0 °C gekühlt; 13 ml Pyridiniumfluorid wurden zugegeben und das ganze wurde unter Rühren 24 Stunden stehengelassen. Die Lösung wurde in 21 Wasser gegossen und das Produkt wurde filtriert und unter Vakuum getrocknet.
Der Rest wurde in 60 ml Methylenchlorid gelöst und dieser Lösung wurden 40 ml 0,6N HCl in Methanol unter starkem Rühren und bei 0 °C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden unter Rühren stehengelassen, dann mit 150 ml Methylenchlorid verdünnt und mit einer NaHCO₃-Lösung geschüttelt, wodurch der pH auf 6 – 7 eingestellt wurde. Die organische Phase wurde zur Trockne konzentriert und der Rese wurde aus Acetonhexan kristallisiert. Nach dem Trocknen wurden 16 g 13-(N-Boc-β-Iisobutylisoserinyl)-14β-hydroxybaccatin-1,14-carbonat erhalten, das die folgenden chemisch-physikalischen und spektroskopischen Eigenschaften aufwies:
Formel: C₄₄H₅₇NO₁₇
Form: weißes Pulver.
Schmelzpunkt: 245 °C
Tabelle 1: Chemische Verschiebungen (ppm) ¹H NMR in CDCl₃-Lösung (200 MHz)
Tabelle 2: Chemische Verschiebungen (ppm) ¹³C NMR in CDCl₃-Lösung (50,308 MHz)
Massenspektren:
(NH₃, DEP/CI, positive Ionen): (m/z) 889 [(MNH₄)⁺], 832[(MNH₄-(CH₃)₃C)⁺], 772[(MNH₄-BocNH₂)⁺]
(NH₃, DEP/CI, negative Ionen): (m/z) 871 (M^-), 260 (Seitenkette)
Infrarotspektrum (KBr-Scheibe): 3521, 3321, 2971, 2953, 1826, 1762, 1706, 1526, 1366, 1238, 1165, 1072, 723 cm^–1
UV-Spektrum (MeOH): 231,276 und 284 nm;
-E₁% bei 231 nm = 180,99
-E₁% bei 276 nm = 14,094
-E₁% bei 284 nm = 12,182
Beispiel 2:
Synthese von 13-(N-Boc-β-isobutylserinyl)-14β-hydroxybaccatin V-1 14-carbonat
5 g 13-(N-Boc-β-isobutylserinyl)-14β-hydroxybaccatin III, 1,14-Carbonat wurden in 500 ml Toluen unter Argonatmosphäre gelöst, was die Lösung vollständig desoxydierte; 80 mg DBU (Diazabicyclo[5,4,0]-7-undecen) wurden zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde eine Stunde unter Rückfluß unter Argonatmosphäre erhitzt. Die Lösung wurde mit 100 ml Ethylacetat verdünnt und mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde zur Trockne verdampft, um 4,5 g 13-(N-Boc-β-isobutylserinyl)-14β-hydroxybaccatin V-1,14-carbonat mit den folgenden chemisch-physikalischen und spektroskopsichen Eigenschaften zu erhalten:
Formel: C₄₄H₅₇NO₁₇
Form: weißes Pulver
Schmelzpunkt: 245 °C
Tabelle 3: Chemische Verschiebungen (ppm) ¹H NMR in CDCl₃-Lösung (200 MHz)
Tabelle 4: Chemische Verschiebungen (ppm) ¹³C NMR in CDCl₃-Lösung (50,308 MHz)
Massenspektrum (TSP+): (m/z) 872 (MH+); 816 (MH+(CH₃)₂C=CHz); 772 (816-CO₂); 756 (816-AcOH); 712 (772-AcOH)
Infrarotspektrum (KBr-Scheibe): 3450, 2963, 1813, 1740, 1702, 1247, 1091, 710 cm^–1 W-Spektrum (MeOH): 200 e 230 nm
-E₁% bei 200 nm = 370,9
-E₁% bei 230 nm = 193,2
Beispiel 3:
Herstellung von (4S,SR)-N-Boc-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure
Herstellung von N-Boc-L-leucinol (III):
46,8 g L-leucinol II (400 mmol) wurden in 300 ml CH₂Cl₂ in einem runden 21-Dreihalsstehkolben, der mit einem mechanischen Rührer, einem Thermometer und einem Tropftrichter ausgestattet ist, gelöst. Der gerührten Lösung wurde dann bei Raumtemperatur Tropfen für Tropfen die Lösung aus Boc-Anhydrid (87,2 g, 400 mmol) in CH₂Cl₂ (100 ml) in 90 Minuten zugegeben. Während der Zugabe der ersten 25 % des Boc-Anhydrids war die Reaktion exotherm und sie erreichte 20 – 30 °C, wodurch eine Aufschlämmung erhalten wurde, die nach dem Rühren bei Raumtemperatur für weitere drei Stunden klar wurde. Das ganze wurde bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen. Das Lösungsmittel wurde unter hohem Vakuum verdampft, um das gewünschte Produkt als ein dickes Öl in einer quantitativen Ausbeute zu erhalten (87 g). Das Produkt wurde anschließend ohne weitere Reinigung behandelt.
Herstellung von N-Boc-L-leucinal (IV)
Einer Lösung aus Oxalylchlorid (26,274 ml, 300 mmol) in 130 ml Methylenchlorid, bei –60/-65 °C vorgekühlt, wurde langsam DMSO (28,4 ml, 400 mmol) zugegeben.
Die Lösung wurde klar, als die Zugabe von DMSO beendet war. Nach 20 Minuten Rühren bei der gleichen Temperatur wurde das Reaktionsgemisch anschließend mit einer Lösung aus Alkohol III (43,7 g, 200 mmol) in CH₂Cl₂ (200 ml) für 25 min behandelt, wobei die Temperatur unter –60 °C gehalten wurde.
Während der Zugabe des Alkohols wurde das Reaktionsgemisch wolkig und es bildete sich ein weißer Niederschlag. Nach 20 bis 25 Minuten Rühren bei der gleichen Temperatur wurde eine Lösung aus Triethylamin (112 ml, 800 mmol) in CH₂Cl₂ (100 ml) tropfenweise in 40 Minuten zugegeben, wobei die Temperatur zwischen –68 und –62 °C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde dann bei zwischen –60 und –65 °C für weitere 50 Minuten gerührt.
Die DSC des Reaktionsgemisches wurde unter Verwendung von 8 % Methanol in CH₂Cl₂ als Eluent durchgeführt, wobei kein Ausgangsprodukt festgestellt wurde.
Die kalte Lösung wurde dann in 800 ml einer vereisten Lösung, die 68 g (0,5 mol) KHSO₄ enthält, gegossen. Die organische Schicht wurde getrennt und die wässerige Phase wurde mit CH₂Cl₂ (100 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit wässerigem KHSO₄ (5 %, 1 × 200 ml), Salzlösung (100 ml, 50 ml) gewaschen und auf das halbe Volumen (250 ml) konzentriert. Das Material wurde direkt in dem nachfolgenden Schritt verwendet.
Derivat aus einer Aldehyd (V)-Bisulfitverbindung
Die Methylenchloridlösung aus dem Aldehyd (IV) in einem runden 21-Dreihalsstehkolben, der mit einem mechanischen Rührer, einem Thermometer und einem Tropftrichter ausgestattet ist, wurde in 10 Minuten und bei –5 °C mit einer Natriumbisulfitlösung (41,7 g, 400 mmol) in Wasser (200 ml) und anschließend mit n-Bu₄NHSO₄ (678 mg, 2 mmol) behandelt. Die Lösung wurde auf –5 °C abgekühlt. Das Reaktionsgemisch wurde bei –5 bis –0 °C für 5 bis 6 Stunden und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die wässerige Phase, die die Verbindung V enthält, wurde getrennt und mit CH₂Cl₂ (2 × 20 ml) gewaschen.
(2-Cyano-3-(N-Boc)-amino-5-methyl-hexanol (VI)
Der obigen wässerigen Lösung (250 ml) wurde CH₂Cl₂ (120 ml) zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde auf 0 bis 5 °C auf einem Eisbad abgekühlt. Anschließend wurde festes KCN (15 g, 230 mmol) zu dem Reaktionsgemisch zugegeben und die Lösung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Die organische Phase wurde getrennt und die wässerige Phase wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit Salzlösung (1 × 50 ml) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und verdampft, wodurch das Produkt als eine farblose viskose Flüssigkeit erhalten wurde (43 g). Das Produkt hatte einen [α]_D von 51,11 (c = 2, MeOH) und war ein etwa 2 : 1-Gemisch aus den VI 2(R),3(S)- und 2(S),3(S)-Derivaten. Die Ausbeute betrug 89 %, verglichen mit dem anfänglichen L-Leucinol.
(2RS,3S)-3-Amino-2-hydrosy-5-methylhexansäure (VII)
Das Gemisch aus dem obigen rohen Nitril VI (43 g) wurde mit 150 ml konzentrierter HCl (37 %) (150 ml) behandelt und über Nacht unter Rückfluß erhitzt, um die rohe Säure VII* zu erhalten. Der Chlorwasserstoffsäore-Überschuß wurde durch Rotationsverdampfung entfernt und der Rest wurde mit Wasser (100 ml) verdampft, um die HCl zu entfernen. Der Rest wurde dann in 150 ml Wasser gelöst und zu 100 ml Aceton zugegeben, dann mit 33 ml einer 6,25M NaOH-Lösung behandelt, um den pH auf 5 einzustellen. Eine weitere Menge an Aceton (500 ml) wurde dann zu der Lösung zugegeben, was über Nacht bei 4 °C stehengelassen wurde. Der ausgefällte Feststoff wurde anschließend filtriert und der feste Kuchen wurde mit Aceton gewaschen und unter Vakuum getrocknet, um die rohe Säure VII (6,5 g), die ein etwa 3: 1-Gemisch aus den 2(R),3(S)- und 2(S),3(S)-Derivaten der Verbindung VI enthält, zu erhalten.
Das Filtrat wurde verdampft und es wurde Wasser zugegeben, um das Volumen der Lösung auf 75 ml einzustellen.
Dann wurde Aceton (1 l) zu der Lösung zugegeben, was dann über Nacht bei 4 °C in einem Kühlschrank stehengelassen wurde. Der ausgefällte Feststoff wurde dann filtriert und der Kuchen wurde mit Aceton gewaschen und unter Vakuum getrocknet, um eine zweite Menge des Produktes (18 g) zu erhalten, das festes NaCl mit einem etwa 1 : 1-Gemisch aus den 2(R),3(S)- und 2(S),3(S)-Derivaten von VII enthält.
Das erste rückgewonnene Produkt VII (22,5 g) wurde in Wasser (120 ml) erhitzt, ohne daß eine vollständige Auflösung erreicht wurde, und dann in Eis gekühlt und filtriert, um 12,5 g der Säure VII zu erhalten, die noch immer durch etwa 10 % des nicht erwünschten des 2(R),3(S)-Derivats von VII verunreinigt war. Dieses Produkt wurde getrocknet und mit dem obigen 1 : 1-Gemisch aus den zweiten Kristallisationsprodukten gemischt (insgesamt ~27 g).
(2RS, 3S)-(N-Boc)-Amino-2-hydroxy-5-methylhexansäure (VIII)
(A) Die rohe Säure VI 2(R),3(S), etwa 90 % Reinheit, (2,5 g, 77,6 mmol) wurde in einem Wasser-THF-1 : 1-Gemisch (80 ml) gelöst, dann wurden Triethylamin (13,5 ml) und anschließend Boc-Anhydrid (18,5 g, 85 mmol) zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, die ganze Lösung wurde 40 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Rotationsverdampfung verdampft, es wurden 60 ml Wasser und 60 ml Ethylacetat zugegeben, während das ganze unter Rühren gehalten wurde. Die wässerige Phase wurde getrennt und mit Ethylacetat (30 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 10%igem wässerigem Natriumcarbonat (30 ml, 20 ml) extrahiert. Der basische Extrakt wurde dann mit einer wässerigen Phase vereinigt, die mit 2M Chlorwasserstoffsäure (~55 ml) angesäuert wurde, um den pH der Lösung auf 2 einzustellen. Die Säure VIII wurde dann aus der wässerigen Phase mit Ethylacetat (3 × 40 ml) extrahiert und die heteroessigsauren Extrakte wurden mit Wasser (20 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und verdampft, um das rohe VIII Boc-Derivat als Sirup zu erhalten (20 g, 99%).
(B) Die rohe Säure VII 2R,3S, mit einer Reinheit von etwa 50 %, kontaminiert durch NaCl (27 g), wurde in einem Wasser-Dioxan 1 : 1-Gemisch (120 ml) gelöst. Triethylamin (20 ml) wurde dann zu dem Reaktionsgemisch zugegeben, dann Boc-Anhydrid (26,16 g, 120 mmol). Die Lösung wurde 40 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Rotationsverdampfung verdampft und es wurden Wasser (100 ml) und Ethylacetat (100 ml) zu dem Rest zugegeben, wobei das Rühren für weitere wenige Minuten fortgesetzt wurde. Die organische Phase wurde getrennt und mit 10% wässerigem Natriumcarbonat (45 ml, 30 ml) extrahiert. Die Natriumcarbonatextrakte wurden mit der wässerigen Phase vereinigt, mit 1M Chlorwasserstoffsäure (165 ml) angesäuert und mit Ethylacetat (3 × 60 ml) extrahiert, danach mit Wasser (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO4) und verdampft, um das rohe VII Boc als Sirup (16 g) zu erhalten, der aus einem 1 : 1-Gemisch aus den 2R,3S- und 2S,3S-Isomeren besteht.
(2R,3S)-3-(N-Boc)-Amino-2-hydroxy-5-methylhexansäuremethylester (IX)
Diazomethan wurde aus Diazald, nach dem Verfahren, das in T. H. Black [Aldrichimica Acta, 16,3 (1983)] angegeben wird, hergestellt.
(A) Eine Lösung aus der rohen Säure VIII (20 g, 56,6 mmol) in CH₂Cl₂ (75 ml) wurde langsam zu einer kalten Diazomethanetherlösung (~77 mmol) zugegeben und das Gemisch wurde zwei Stunden in einem Eisbad stehengelassen. Die Farbe der Lösung wurde in diesem Schritt weiß, was ein Anzeichen dafür war, daß das Diazomethan adsorbiert worden ist. Die Lösung wurde dann konzentriert und der Rückstand aus einem Gemisch aus Toluen (20 ml) und Hexan (70 ml) kristallisiert. Nach dem Abkühlen über Nacht in einem Kühlschrank bei 4 °C wurden die Kristalle des reinen IXA 2R,3S-Derivats durch Filtration gesammelt. Die Ausbeute betrug 15 g. Die Stammlaugen ergaben etwa 5 g eines isomeren 1 : 1-Gemisches.
(B) Unter Verwendung des gleichen Verfahrens wurde ein 1 : 1-Gemisch aus der Säure VIII (16 g) in ein 1 : 1-Gemisch aus IXA- und IXB-Estern umgewandelt. Das Material aus den Stammlaugen (5 g aus Schritt A) wurde zugegeben und das Material wurde vereinigt und durch Säulenchromatographie unter Verwendung von Hexan-Ethylacetat als Eluent (9 : 1 bis 7 : 3) getrennt. Ninhydrin wurde als ein Entwickler für die DSC-Platten verwendet. Die apolare Verbindung, Rf 0,75 (Hexan-Ethylacetat 7 : 3) wurde als der gewünschte Ester IXA (2R,3S), der aus Cyclohexan umkristallisiert wurde, identifiziert, um IXA als farblose Nadeln (8 g) Smp. 95 bis 96 °C, [α]_D 72,4° (c = 1, MeOH) zu erhalten.
Die polare Verbindung, Rf 0,5 (Hexan-Ethylacetat 7 : 3) wurde als IXB (2S,3S) identifiziert und wurde aus Cyclohexan umkristallisiert, um 10 g IXB als farblose Nadeln zu erhalten.
2,4-Dimethoxybenzaldehydedimethvlacetal
Ein Gemisch aus 2,4-Dimethoxybenzaldehyd (41,25 g, 0,25 mol), wasserfreiem Trimethylorthoformiat (50 ml) und Ammoniumnitrat (2 g, gelöst in 20 ml Methanol) wurde 6 Stunden unter Rückfluß erhitzt (1HNMR des Reaktionsgemisches zeigte eine 65- bis 70%ige Umwandlung). Zuerst war das heiße Reaktionsgemisch eine klare Lösung, aber beim Fortlauf der Reaktion fiel der Feststoff aus. Ein zweiter Teil des wasserfreien Trimethylorthoformiats (20 ml) wurde zugegeben und ein Teil von Methanol wurde abdestilliert.
Wenn die Temperatur des Reaktionsgemisches 95 bis 100 °C erreichte, löste sich der gesamte Feststoff in dem Kolben auf. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und es wurde wasserfreies Na₂CO₃ (5 g) zugegeben, wobei 30 min gerührt wurde. Anschließend wurde die Lösung filtriert und der Rest wurde durch fraktionelle Destillation unter Vakuum bei 0,25 mmHg destilliert. Die erste Fraktion bei geringer Temperatur bestand hauptsächlich aus dem Trimethylorthoformiat-Überschuß und die zweite Fraktion, die als ein farbloses Öl bei 175 bis 180 °C destilliert wurde, war das gewünschte Acetal. Ausbeute: 37 g (70 %).
(4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-Dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäuremethylester
Einer Lösung aus (2R,3S)-3-(N-Boc)-amino-2-hydroxy-5-methylhexansäuremethylester (IXA) (34,375 g, 125 mmol) in wasserfreiem THF (150 ml) wurde destilliertes 2,4-Dimethoxybenzaldehyddimethylacetal (30 g, 142 mmol) und anschließend Pyridinium-p-toluensulfonat (Py. Tos; 400 mg) zugegeben.
Die Lösung wurde unter mäßigem Rückfluß in einem 500 ml-Dreihalskolben, der mit einem Dean-Stark-Separator ausgestattet ist, erhitzt. Nach etwa 6 Stunden unter Rückflußkochen wurden etwa 60 ml THF, das Methanol enthält, das während der Reaktion erzeugt wurde, entfernt. Eine Probe wurde für die ¹H NMR-Analyse (in CDCl₃) genommen.
Der Peak bei δ = 1,41 ppm verschwand (1) und ein neuer Peak erschien bei δ = 1,24 ppm für den geschützten Methylester (2). Nach 6 Stunden Rückflußkochen betrug die Umwandlung etwa 70 bis 75 %.
Ein frisches Aliquot wasserfreies THF (50 ml) wurde zugegeben und dann eine gewisse Menge an 2,4-Dimethoxybenzaldehydacetal (5,0 g; 24 mmol). Das Reaktionsgemisch wurde für weitere 2,5 Stunden unter Rückfluß erhitzt, wobei während dieser Zeit etwa 50 ml THF unter Verwendung des Dean-Stark-Gerätes entfernt wurden. Die anschließende ¹H-NMR-Analyse zeigte die vollständige Umwandlung des Ausgangsmaterials.
Dem Reaktionsgemisch wurde eine gesättigte, wässerige NaHCO3-Lösung (15 ml) zugegeben und das Gemisch wurde 15 Minuten gerührt, um das Py. Tos zu neutralisieren. t-Butylmethylether (85 ml) und Wasser (15 ml) wurden anschließend zugegeben und die organische Phase wurde getrennt. Die wässerige Phase wurde mit t-Butylmethylether (20 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser (30 ml) gewaschen und zu einem Rest (66 g) des Rohproduktes X verdampft.
Hydrolyse des Esters X, um die Säure XI zu erhalten
Der rohe Ester X (22 g, 42 mmol) wurde in 100 ml Methanol gelöst und es wurde Wasser (50 ml) zugegeben, das 8,7 g Kaliumcarbonat enthält. Nach dem Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde die Reaktion durch die DSC-Überwachung (Toluen-Ethylacetat: 4,5 : 1) als beendet betrachtet. Die DSC-Analyse wurde durch die ¹H NMR-Analyse bestätigt, in dem das Verschwinden des Methylesterpeaks überprüft wurde.
Methanol wurde bei einer Temperatur nicht über 40 °C unter Vakuum verdampft (etwa 60 g Rest) und Wasser (150 ml) wurde zu dem Rest zugegeben. Die wässerige Suspension wurde mit Ethylacetat (5 × 50 ml) extrahiert, um das Benzaldehyd und den Benzaldehyddimethylacetal-Überschuß zu entfernen. 90 ml Methylenchlorid wurden zu der wässerigen Phase zugegeben, das Gemisch wurde auf einem Eisbad abgekühlt und das Zweiphasensystem wurde mit etwa 125 ml 1M NaHSO₄ (pH = 3) unter starkem Rühren behandelt. Die Phasen wurden getrennt und die wässerige Phase wurde mit Methylenchlorid (75 ml) extrahiert. Die vereinigten Methylenchloridextrakte wurden mit Wasser (30 ml), Salzlösung (30 ml) gewaschen und über MgSO₄ getrocknet. Die Lösung wurde dann bei –60 °C gehalten, bis sie weiter verwendet wurde. Die Ausbeute des Endproduktes als ein farbloser Feststoff betrug 16 g, etwa 93 % basierend auf dem Ausgangsprodukt.
Beispiel 4:
Herstellung von 14β-Hydroxy-7-Tes-baccatin III-1,4-carbonat
Einer Lösung aus 11,2 g 10-Deacetyl-14-hydroxybaccatin III in 50 ml trockenem Tetrahydro-furan wurden 0,72 g CeCl₃ · 7H₂O und 7,3 ml Essigsäureanhydrid zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 5 Stunden gerührt; wobei während dieser Zeit das Gemisch homogen wurde. 10 g Eis wurden zugegeben und das ganze wurde eine Stunde gerührt. Das Tetrahydrofuran wurde unter Vakuum abgedampft und der Rest wurde mit 200 ml H₂O verdünnt. Der Niederschlag wurde filtriert und unter Vakuum in Gegenwart von P₂O₅ getrocknet: das Produkt wurde aus Ethylacetat kristallisiert, um 10 g 14-Hydroxybaccatin III mit den folgenden Eigenschaften zu erhalten:
Smp.: 236 – 8 °C; IR (KBr): 3474, 1739, 1400, 1240, 1090, 1049 cm^–1.
CDCl₃, 200 MHz); 8,07 (d, J = 8Hz, Bz), 7,55 (d, J = 8 Hz, Bz), 7,44 (t, J = 8 Hz, Bz), 6,31 (s, H-10), 5,80 (d, J = 7 Hz, H-2), 4,97 (br d, J = 8 Hz, H-5), 4,73 (br, d, J = 4 Hz, H-13), 4,41 (m, H-7), 4,24 (d, J = 4 Hz, H-14), 4,20 (d, J = 7 Hz, H-20a), 4,06 (d, J = 7 Hz, H20b), 3,89 (J = 0 Hz, H-3), 2,29 (s, OAc), 2,22 (s, OAc), 2,04 (s, H-18), 1,66 (s, H-19), 1,25, 1,11 (s, H-16 und H17).
In einen Vierhalskolben, der mit einem Rührer, einem Tropftrichter, einem Thermometer und einem Rückflußkondensator ausgestattet und auf –12 °C gekühlt ist, wurden 52,8 ml einer 1,9M Lösung aus Phosgen in Toluen eingebracht. Der Lösung wurden tropfenweise 11,6 g 14-Hydroxybaccatin III, gelöst in 53 ml Methylenchlorid, und 17,5 ml Pyridin unter Rühren in 30 Minuten zugegeben. Die Temperatur wurde zwischen –6 und –10 °C gehalten. Nach 30 Minuten wurden 50 ml gesättigte NaHCO₃-Lösung unter Rühren zugegeben, wobei die enge Temperaturkontrolle beibehalten wurde. Nach dem Erwärmen auf Raumtemperatur wurden die Phasen getrennt. Die wässerige Phase wurde mit Methylenchlorid kontraextrahiert und die organischen Phasen wurden mit 45 ml 2N HCl gewaschen, um den pH auf etwa 1 einzustellen. Die organische Phase wurde mit 0,1N HCl gewaschen und dann mit NaHCO₃, dann über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockne verdampft, um quantitativ 11,5 g 14-Hydroxybaccatin-1,14-carbonat zu erhalten.
11,5 g 14-Hydroxybaccatin-1,14-carbonat wurden in 50 ml DMF gelöst und 1,1 Äquivalente Chlortriethylsilan und 3 Äquivalente N-Methylimidazol wurden bei Raumtemperatur zugegeben. Nach Beendigung der Reaktion wurde das Gemisch in 500 ml H₂O gegossen und der Niederschlag wurde filtriert und gründlich mit H₂O gewaschen, dann getrocknet, um 12,8 g 14β-Hydroxy-7-Tes-baccatin III-1,14-carbonat mit den gleichen Eigenschaften wie die, die in Beispiel 1 angegeben sind, zu erhalten.
Beispiel 5:
Synthese von 13-(N-Boc-β-isobulserinyl-14β-Hydroxybaccatin III-1,14-carbonat
Ausgehend von 14β-Hydroxy-7-Tes-baccatin III-1,14-carbonat, das wie in dem obigen Beispiel beschrieben, erhalten wurde, war das Verfahren wie folgt:
In einen runden 1 l-Stehkolben wurden 20 g 14β-Hydroxy-7-Tes-1,14-carbonat-baccatin III zusammen mit 300 ml strikt wasserfreiem Toluen eingebracht; es wurden 10 g (4S,SR)-NBoc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure, gelöst in CH₂Cl₂, und 2 g N,N-Dimethylaminopyridin (DMAP) und 9,5 g Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden unter Rückfluß erhitzt, dann abgekühlt, um das Harnstoffprodukt auszufällen, und die Stammlaugen wurden mit einer gesättigten NaHCO₃-Lösung gewaschen, um die nicht umgesetzte Säure zu entfernen, dann mit Chlorwasserstoffsäure verdünnt, um DMAP zu entfernen, und schließlich zur Neutralität wieder mit NaHCO₃. Die organische Phase wurde zur Trockne konzentriert, um 41,5 g des Produktes zu erhalten, das direkt im nachfolgenden Schritt verwendet werden konnte.
40 g dieser Verbindung wurden in zwei Schritten entschützt, indem zuerst das Tes und dann 2,4-Dimethoxybenzaldehyd abgespalten wurde. 40 g der Verbindung wurden in 100 ml eines Acetonitril/Pyridingemisches (80 : 100) unter Stickstoff gelöst und das Gemisch wurde auf 0 °C abgekühlt; 13 ml Pyridiniumfluorid wurden zugegeben und das ganze wurde unter Rühren 24 Stunden stehengelassen. Die Lösung wurde in 21 Wasser gegossen und das Produkt wurde filtriert und unter Vakuum getrocknet. Der Rest wurde in 60 ml Methylenchlorid gelöst und dieser Lösung wurden 40 ml Methanol HCl 0,6N unter starkem Rühren und bei 0 °C zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 Stunden unter Rühren stehengelassen, dann mit 150 ml Methylenchlorid verdünnt und mit einer NaHCO₃-Lösung geschüttelt, um den pH auf 6 bis 7 einzustellen. Die organische Phase wurde zur Trockne konzentriert und der Rest wurde aus Acetonhexan kristallisiert, dann getrocknet, um 16,5 g 13-(N-Boc-(3-isobutylisoserinyl)-14β-hydroxybaccatin III-1,14-carbonat zu erhalten.

Claims

Verbindung der Formel (I):
Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel (I), wobei 13-(N-boc-β-isobutylisoserinyl)-14β-hydroxy-baccatin III-1,14-carbonat entweder mit DBU (Diazabicyclo[5,4,0]7-undecen) in Methanol oder THF behandelt wird, oder alternativ in Lösung mit Methylenchlorid oder chlorierten Lösungsmitteln in Gegenwart von aliphatischen Alkoholen, ausgewählt aus Methanol, Ethanol oder Propanol, und mit basischem Aluminiumoxid für einen Zeitraum zwischen einer Stunde und 14 Tagen belassen wird.
Verfahren zur Herstellung von 13-(N-boc-β-isobutylisoserinyl)-14β-hydroxy-baccatin III oder V-1,14-carbonat, umfassend die Schritte: a) Umwandlung von 14β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III oder V in das triethylsilylierte Derivat an der 7-Stellung; (b) Herstellung des 1,14-Carbonatderivats aus dem Produkt aus Schritt (a); (c) selektive Acetylierung des Hydroxyls an der 10-Stellung; (d) Umsetzung des Produktes aus Schritt (c) mit (4S,SR) N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure; (e) Abspaltung der Triethylsilyl- und Dimethoxybenzyliden-Schutzgruppen aus dem Produkt aus Schritt (d).
Verfahren nach Anspruch 3, wobei: das Silylierungsmittel aus Schritt (a) Triethylchlorsilan ist; das 1,14-Carbonatderivat in Schritt (b) unter Verwendung von Phosgen in Toluen in einer 3 : 1-Methylenchlorid/Pyridin-Lösung unter Stickstoffatmosphäre hergestellt wird; die Reduktion in Schritt (c) mit LiHMIDS in wasserfreiem THF durchgeführt wird und das resultierende 10-Hydroxyderivat anschließend mit Acetylchlorid acetyliert wird; die Kondensationsreaktion in Schritt (d) in einem wasserfreien, apolaren, organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Base und des Kondensationsmittels Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) durchgeführt wird; die Triethylsilyl-Schutzgruppe in Schritt (e) mit Pyridiniumfluorid in Acetonitril/Pyridinlösung unter Stickstoff entfernt wird und die Dimethoxybenzyliden-Schutzgruppe in Methylenchloridlösungsmittel durch die Zugabe von HCl in Methanol und anschließend NaHCO₃ entfernt wird.
Verfahren zur Herstellung von 13-(N-boc-β-isobutylisoserinyl)-14β-hydroxy-baccatin III oder V-1,14-carbonat, umfassend die folgenden Schritte: a') selektive Acetylierung des Hydroxyls an der C-10-Stellung von 14β-Hydroxy-10-deacetylbaccatin III oder V; (b') Herstellung des 1,14-Carbonatderivats aus dem Produkt aus Schritt (a'); (c') Silylierung des Hydroxyls an der C-7-Stellung; (d') Umsetzung des Produktes aus Schritt (c') mit (4S,SR)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-isobutyl-1-oxazolidin-5-carbonsäure; (e') Abspaltung der Triethylsilyl- und Dimethoxybenzyliden-Schutzgruppen aus dem Produkt aus Schritt (d').
Verfahren nach Anspruch 5, wobei die selektive Acetylierung aus Schritt (a') mit Essigsäureanhydrid in Gegenwart von Cer-, Scandium-, Ytterbiumsalzen, vorzugsweise CeCl₃ · 7H₂O durchgeführt wird, und die Schritte (b') bis (e') analog der Schritte (b), (a), (d) und (e) aus Anspruch 4 durchgeführt werden.
Die folgenden Synthesezwischenprodukte: 14β-Hydroxybaccatin III oder V, 14β-Hydroxybaccatin III oder V-1,14-carbonat, 14β-Hydroxy-7-Tes-10-deacetylbaccatin III oder V, 14β-Hydroxy-7-Tes-baccatin V, 14β-Hydroxy-7-Tes-baccatin III oder V-1,14-carbonat.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, enthaltend die Verbindung (I), zusammen mit pharmazeutisch akzeptablen Trägern und Bindemitteln.
Verwendung der Verbindung (I) zur Herstellung eines Medikaments mit Wirkung gegen Krebs.