DE2054310C3 - Verfahren zur Herstellung von (-)-(cis-1 ^-EpoxypropyO-phosphonsaure - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von (-)-(cis-1 ^-EpoxypropyO-phosphonsaureInfo
- Publication number
- DE2054310C3 DE2054310C3 DE2054310A DE2054310A DE2054310C3 DE 2054310 C3 DE2054310 C3 DE 2054310C3 DE 2054310 A DE2054310 A DE 2054310A DE 2054310 A DE2054310 A DE 2054310A DE 2054310 C3 DE2054310 C3 DE 2054310C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- nrrl
- cis
- medium
- phosphonic acid
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- -1 2-epoxypropyl Chemical group 0.000 claims description 5
- 241000909532 Penicillium spinulosum Species 0.000 claims description 4
- XWCIXXXLOAAWPU-IHWYPQMZSA-N [(z)-prop-1-enyl]phosphonic acid Chemical compound C\C=C/P(O)(O)=O XWCIXXXLOAAWPU-IHWYPQMZSA-N 0.000 claims description 4
- 241000985530 Penicillium glabrum Species 0.000 claims description 3
- 241000985518 Penicillium purpurascens Species 0.000 claims description 3
- 241000985521 Penicillium soppii Species 0.000 claims description 3
- 241001136494 Talaromyces funiculosus Species 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 241001507683 Penicillium aurantiogriseum Species 0.000 claims description 2
- 241001507662 Penicillium crustosum Species 0.000 claims description 2
- 241001150385 Penicillium palitans Species 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N Alumina Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- IFEPHWRWPRCEHR-UHFFFAOYSA-N CC=COP(O)=O Chemical compound CC=COP(O)=O IFEPHWRWPRCEHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical compound [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003009 phosphonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
- C07F9/38—Phosphonic acids [RP(=O)(OH)2]; Thiophosphonic acids ; [RP(=X1)(X2H)2(X1, X2 are each independently O, S or Se)]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/933—Penicillium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
20
Die Epoxypropylphosphonsäure und ihre Derivate sind wertvolle Antibiotika, die gegenüber grampositiven
und gramnegativen Bakterien wirksam sind.
Verfahren zur Herstellung von (—)-(cis-l,2-Epoxypropyl)-phosphonsäure
und deren Salzen sind bereits bekannt. Diese Phosphonsäure wurde z. B. dadurch erhalten, daß man bestimmte Streptomyces-Arten, wie
Streptomyces· fradiae, in geeigneten Fermentationsmedien züchtete. Ferner wurde sie auch durch
chemische Synthese der racemischen Säure und Aufspaltung des racemischen Gemisches hergestellt.
Beide Methoden zur Herstellung der antibiotischen Substanz besitzen Nachteile; die Ausbeuten des
Fermentationsverfahrens sind niedrig und die Aufspaltung des racemischen Gemisches beim synthetischen
Verfahren ist im technischen Maßstab schwierig durchzuführen. Es wurde daher nach anderen
Methoden zur Herstellung der antibiotischen Substanz und deren Salzen gesucht, die die Schwierigkeiten der
bekannten Verfahren umgehen.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Schaffung eines verbesserten Verfahrens zur Umwandlung
von cis-Propenylphosphonsäure und ihren Salzen in ( —)-(cis-l,2-EpoxypropyI)-phosphonsäure und deren
Salze in guter Ausbeute, ohne daß dabei gleichzeitig das nicht gewünschte ( + )-Isomere erzeugt wird.
Der Gegenstand der Erfindung ist im Patentanspruch definiert.
Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens kann man den Schimmelpilz in einem geeigneten
Nährmedium züchten und das Phosphonat zu Beginn der Fermentationsperiode zugeben. Alternativ kann das
Phosphat aseptisch zugefügt werden, nachdem der Schimmelpilz bereits einige Zeit lang gezüchtet worden
ist.
Das für die Züchtung der epoxydierenden Stämme geeignete wäßrige Nährmedium sollte für den Schimmelpilz
assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen enthalten sowie geringere Mengen anorganischer
Salze, die für ihr Wachstum erforderlich sind. Es können die üblicherwebe bei Fermentationsverfahren fa5
verwendeten Quellen für assimilierbaren Kohlenstoff, wie Dextrose, Invertmelasse und Rübenmelasse,
verwendet werden. Ebenso können die bei Fermentationsverfahren verwendeten Stickstoffquellen, wie
Peptone, Sojabohnenmehl, Maisquellwasser. Polypeptide und enzymatische Caseinauszüge, verwendet
werden. Darüber hinaus kann das Medium geringe Mengen mineralische Bestandteile, wie lösliche Salze
des Magnesiums, Natriums, und Kaliums, sowie Wachstumsfaktoren, wie Vitamine enthalten oder es
können andere wachstumsstimulierende Substanzen dem Medium zugesetzt werden. Geeignete Medien sind
weiter unten in den Beispielen beschrieben.
Das Nährmedium wird gewöhnlich mit einer vegetativen
Zucht des Schimmelpilzes inokuliert, obgleich es auch dadurch inokuliert werden kann, daß man
Schimmelpilzsporen zum Medium gibt. Das Wachstum der Mikroorganismen wird dadurch gefördert, daß man
die Inkubation bei Temperaturen zwischen etwa Raumtemperatur und 30° C durchführt, obgleich auch
höhere oder niedrigere Temperaturen angewendet werden können, je nach der für die Züchtung spezieller
Schimmelpilze optimalen Temperatur. Der pH des Mediums ist nicht entscheidend und wird auf den Wert
eingestellt, der für das optimale Wachstum des speziellen Schimmelpilzes benötigt wird und liegt
gewöhnlich zwischen etwa 6,0 und 8,0. Die Züchtung des Schimmelpilzes wird aerob nach bekannten
Methoden durchgeführt. Die Zeit, die erforderlich ist, um die gewünschte Epoxydierung durchzuführen,
schwankt mit dem speziell verwendeten Schimmelpilz, im allgemeinen aber ist es wünschenswert, die
Fermentation so lange vonstatten gehen zu lassen, bis ein gutes Wachstum des Schimmelpilzes erreicht
worden ist. Es kann daher erforderlich sein, die Fermentation bis zu 10 Tage lang zu betreiben.
Die Konzentration des cis-Propenylphosphonates im Medium ist nicht übermäßig kritisch und es können
Konzentrationen von 0,1 bis 5g/Ltr. angewendet werden; die optimale Menge für jeden Pilz läßt sich
leicht durch wenige einfache Versuche bestimmen. Das Phosphonatsalz kann in Form einer Lösung in einem
geeigneten biologisch verträglichen Lösungsmittel, z. B. Wasser, einem niedrigen Alkohol oder einem Glykol, in
Form einer Suspension in einer geeigneten Flüssigkeit oder in fester Form, vorzugsweise in sehr fein verteilter
Form dem Medium zugesetzt werden, das die epoxydierenden Enzyme enthält oder einem Medium, in
welchem sie erzeugt werden. Im allgemeinen zieht man es vor, das Phosphonat in Form einer wäßrigen Lösung
eines löslichen Salzes, wie eines Alkalimetallsalzes oder eines Aminsalzes, dem Medium zuzusetzen, obgleich es
auch als unlösliches Salz oder als die Säure per se zugegeben werden kann.
Das erfindungsgemäße Verfahren liefert hauptsächlich die ( — )-Form der (cis-l^-EpoxypropylJ-Phosphonsäure,
die dann leicht nach an sich bekannten Verfahren aus dem Medium gewonnen werden kann. So kann sie
an einem basischen Anionenaustauscherharz der Chlorid-Form adsorbiert werden und dann mit
wäßrigem Natriumchlorid eluiert werden. Alternativ kann die Epoxyphosphonsäure durch Adsorption an
aktiviertem Aluminiumoxyd abgetrennt werden, aus dem sie mit wäßrigen oder wäßrig-alkoholischen Ammoniumhydroxydlösungen
eluiert werden kann.
Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung erläutern, ohne sie jedoch einzuschränken.
Man stellte ein Medium her, das 0,8% Nährbrühe, 0,2% Hefeextrakt, 3% Dextrose und 0,3% Malzextrakt
in destilliertem Wasser enthielt und stellte den pH auf 7,0 ein. 10 ml des entstandenen Mediums wurden in
25 χ 200 mm Teströhrchen gegeben, die dann 15 Minuten lang bei 121° C im Autoklaven sterilisiert wurden.
Man stellte eine Impf-Suspension her, indem man eine lyophilisierte Kultur von Penicillium purpurrescens
NRRL-720 zu 5 ml des oben beschriebenen sterilisierten Mediums gab. Die entstandene Impf-Suspension
wurde zum Animpfen eines Teströhrchens, das 10 ml sterilisiertes Medium enthielt und zum
Animpfen eines zweiten Röhrchens verwendet, das 10 ml sterilisiertes Medium enthielt, zu dem 1 ml einer
sterilen wäßrigen Lösung, die 250 γ Natrium-cis-propenylphosphonat enthielt gegeben wurde.
Die inokulierten Röhrchen wurden bei 28° C auf einer mechanischen Schüttelvorrichtung, die bei 220 bpM
arbeitete, inkubiert bis gutes Wachstum der Kultur feststand. Nach 6 Tagen wurden die inkubierten Brühen
zentrifugiert (25 000 χ G), um die Zellen abzutrennen. Die überstehende Brühe wurde durch Scheibenprobe
mit sensitiven und resistenten Stämmen von Proteus vulgaris auf biologische Aktivität untersucht, wobei
man die folgenden Ergebnisse erhielt:
Inhibierungszone (mm)
sensitiv resistent
sensitiv resistent
Vergleichsmedium 0
Phosphonathaltiges 21
Medium
Bei- Pilz
spiel
spiel
Inhibierungszone
(mm)
(mm)
sensitiv
2 P.crustosum NRRL-949
3 P.charesii NRRL-778
4 P.soppiiNRRL-912
5 P. funiculosum NRRL-1132
6 P.puberulum NRRL-988
7 P.funiculosum NRRL-1768
8 P.frequentans NRRL-1189
9 P.spinulosum NRRL-727
10 P.spinulosum NRRL-728
11 P.frequentans NRRL-763
12 P.palitansNRRL-966
| 24,0 | 0 |
| 35,0 | 0 |
| 42,0 | 0 |
| 23,0 | 0 |
| 16,0 | 0 |
| 33,0 | 0 |
| 20,0 | 0 |
| 32,0 | 0 |
| 41,0 | 0 |
| 34,0 | 0 |
| 32,0 | 0 |
10
15
20
30
Ein nicht angeimpftes Röhrchen, das 10 ml des sterilisierten Mediums und 1 ml einer wäßrigen
250y Natrium-cis-propenylphosphonsäure enthaltenden
Lösung enthielt, wurde zusammen mit den beiden angeimpften Röhrchen inkubiert. Nach 6 Tagen wurde
zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit er-vvies sich
als inaktiv bei den Proteus-vulgaris-Tests.
Beispiele 2 bis 12
Gemäß Beispiel 1 wurden bei Verwendung der nachstehend aufgeführten Schimmelpilze die folgenden
Ergebnisse mit angeimpften Röhrchen, die 250 γ Natrium-cis-propenylphosphonat
enthielten, erzielt:
50
resislent
55
60
65
NRRL = Northern Utilization Research and Development Division, U.S. Department of Agriculture, Peoria,
Illinois.
In jedem Falle besaß die geklärte Brühe des im gleichen Medium durchgeführten Vergleichsversuches
ohne zugefügtes Phosphonatsalz beim Test nach dem gleicher. Prüfungsverfahren keine Aktivität
Es wurde ein Medium aus 0,8% Nährbrühe, 0,2% Hefeextrakt, 3% Dextrose und 0,3% Malzextrakt
hergestellt Der pH-Wert wurde auf 7,0* eingestellt Jeweils 40 ml dieses Mediums wurden in einen 250 ml
Erlenmeyer-Kolben gegeben und 15 Minuten lang bei 121°Cund 1,05 kg/cm2 autoklavisiert Sodann wurde
das Medium mit einer Öse voll Inokulum aus einem Schrägagar mit einem der folgenden Mikroorganismen
angeimpft: Penicillium purpurrescens NRRL-720, P. s'oppii NRRL-912, P. spinuiosum NRRL-728.
Die Kolben wurden auf einer mechanischen Schüttelvorrichtung (220 UpM) bei 28° C bebrütet, bis die
Kulturen gut gewachsen waren (2 bis 4 Tage). Diese Impfsuspension wurde verwendet, um Kolben anzuimpfen,
die 40 ml des oben beschriebenen Mediums bzw. 40 ml dbses Mediums, das mit cis-Propenylphosphonsäure
(200 y/ml) versetzt worden war, enthielten. Die Kolben wurden auf einer mechanischen Schüttelvorrichtung
(220UpM) bei 28°C inkubiert bis die Kulturen gut gewachsen waren (6 bis 10 Tage). Na-h
dem Brüten wurden die Zellen durch Zentrifugieren (25 000 χ G) entfernt und die überstehenden Flüssigkeiten
nach dem Scheibentest mit empfindlichen und resistenten Proteus-vulgaris-Stämmen auf biologische
Aktivität hin untersucht.
Kultur
cis-Propenylphosphonat
Inhibierungszone
(mm)
(mm)
sensitiv
resistenl
P. purpurrescens
P. purpurrescens
P. purpurrescens
P.spinulosum
P.spinulosum
P.spinulosum
P. soppfi
P. soppii
P. soppii
-ι-
30
0
35
35
0
40
40
Die Aktivität von 450 ml Fermentationsbrühe, die durch Züchtung von Penicillium soppii NRRL-912 in
Schüttelkolben wie oben beschrieben erhalten wurde, adsorbierte man auf einer 36 cm Kolonne eines stark
basischen Polystyrol-Anionenaustauscherharzes in der Chlorid-Form. Das Harz-Adsorbat wurde dann mit
3%igem wäßrigem Natriumchlorid in 5-ml-Fraktionen eluiert. Die Fraktionen 15 bis 24, welche die gesamte
Bioaktivität enthielten, wurden vereinigt und der Gefriertrocknung unterworfen, wobei man 1,94 g
Festsubstanz erhielt. Die Festsubstanz wurde in 10,0 ml
Wasser gelöst, durch Zugabe von 1,65 ml einer 2,5 η HCl wurde der pH auf 5,70 eingestellt. Diese Lösung
schickte man über eine 15 cm Kolonne eines Aluminiumoxyds, das sauer gewaschen, dann mit 15 ml
Wasser und schließlich mit 15 ml eines 3:1-Methanol/Wasser-Gemisches
gewaschen worden war. Die gesamte Bioaktivität wurde auf der Aluminiumoxyd-Kolonne
adsorbiert und mit 1 η Ammoniumhydroxyd in einem 3 : 1-Methanol/Wasser-Gemisch in
Fraktionen von jeweils 5 ml eluiert. Die Bioaktivität, die
5 6
in Fraktion 3 aufzutreten begann, lag in den Fraktionen Extrakte wurden konzentriert, wobei man 120,6 mg
3 bis 8 vor, der größte Teil der Aktivität war in den eines weißen, amorphen Feststoffs vom F. 94°C erhielt,
Fraktionen 3 und 4 vorhanden. Fraktion 3, die gemäß der gemäß biologischem Test 1,85% (—)-(cisl,2-
biologischem Test 3,00 mg (-)-(ris-l,2-Epoxypropyl)- Epoxypropyl)-phosphonsäure enthielt. Die Dampfpha-
phosphonsäure enthielt, wurde der Gefriertrocknung 5 senchromatographie der amorphen Festsubstanz
unterworfen und ergab 324,0 mg festen Rückstand. zeigte, daß die Festsubstanz 1,2% (—)-(cis-l,2-Epoxy-
Dieses feste Produkt wurde unter leichtem Erwärmen propyl)-phosphonsäure und nich's von dem ( + )-
dreimal mit 3 ml Methanol aufgeschlämmt. Die Isomeren enthielt.
Claims (1)
10
Patentanspruch:
Verfahren zur Herstellung von (-)-(cis-],2-Epoxypropyl)-phosphonsäure
und ihren Salzen unter Verwendung der Züchtung eines Mikroorganismus in einem wäßrigen Nährmedium unter
aeroben Bedingungen, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Mikroorganismus Penicillium purpurrescens NRRL-720, P. crustosum
NRRL-949, P. charesii NRRL-778, P. soppii
NRRL-912, P. funiculosum NRRL-1132 und
NRRL-1768, P. puberulum NRRL-988, P. spinulosum NRRL-727 und NRRL-728, P. frequentans
NRRL-1189 und NRRL-763 oder P. palitans NRRL-966 verwendet und die Fermentation
in Gegenwart von cis-Propenylphosphonsäure oder von einem ihrer Salze durchführt
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US87438769A | 1969-11-05 | 1969-11-05 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2054310A1 DE2054310A1 (de) | 1971-05-13 |
| DE2054310B2 DE2054310B2 (de) | 1979-08-16 |
| DE2054310C3 true DE2054310C3 (de) | 1980-06-04 |
Family
ID=25363625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2054310A Expired DE2054310C3 (de) | 1969-11-05 | 1970-11-04 | Verfahren zur Herstellung von (-)-(cis-1 ^-EpoxypropyO-phosphonsaure |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3657072A (de) |
| CA (1) | CA976100A (de) |
| CH (1) | CH548450A (de) |
| DE (1) | DE2054310C3 (de) |
| DK (1) | DK132279C (de) |
| ES (1) | ES385042A1 (de) |
| FR (1) | FR2069066A5 (de) |
| GB (1) | GB1289595A (de) |
| IL (1) | IL35541A (de) |
| NL (1) | NL7015293A (de) |
| NO (1) | NO132727C (de) |
| SE (1) | SE370544B (de) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5356810A (en) * | 1987-04-15 | 1994-10-18 | Gist-Brocades N.V. | Astaxanthin-producing yeast cells, methods for their preparation and their use |
| DK199887D0 (da) * | 1987-04-15 | 1987-04-15 | Danisco Bioteknologi As | Gaerstamme |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2830935A (en) * | 1955-08-01 | 1958-04-15 | Pfizer & Co C | Epoxidation of steroids |
-
1969
- 1969-11-05 US US874387A patent/US3657072A/en not_active Expired - Lifetime
-
1970
- 1970-10-19 NL NL7015293A patent/NL7015293A/xx not_active Application Discontinuation
- 1970-10-27 CA CA096,734A patent/CA976100A/en not_active Expired
- 1970-10-27 IL IL35541A patent/IL35541A/en unknown
- 1970-10-30 ES ES385042A patent/ES385042A1/es not_active Expired
- 1970-11-02 GB GB1289595D patent/GB1289595A/en not_active Expired
- 1970-11-03 CH CH1628270A patent/CH548450A/de not_active IP Right Cessation
- 1970-11-04 DK DK559670A patent/DK132279C/da active
- 1970-11-04 NO NO4196/70A patent/NO132727C/no unknown
- 1970-11-04 SE SE7014893A patent/SE370544B/xx unknown
- 1970-11-04 DE DE2054310A patent/DE2054310C3/de not_active Expired
- 1970-11-05 FR FR7039835A patent/FR2069066A5/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2054310A1 (de) | 1971-05-13 |
| ES385042A1 (es) | 1973-03-16 |
| DK132279B (da) | 1975-11-17 |
| IL35541A (en) | 1973-04-30 |
| GB1289595A (de) | 1972-09-20 |
| SE370544B (de) | 1974-10-21 |
| US3657072A (en) | 1972-04-18 |
| DE2054310B2 (de) | 1979-08-16 |
| FR2069066A5 (de) | 1971-09-03 |
| DK132279C (da) | 1976-04-12 |
| NO132727B (de) | 1975-09-15 |
| NL7015293A (de) | 1971-05-07 |
| CA976100A (en) | 1975-10-14 |
| NO132727C (de) | 1975-12-22 |
| IL35541A0 (en) | 1970-12-24 |
| CH548450A (de) | 1974-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0366060B1 (de) | Glykosidase-Inhibitor Salbostatin, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung | |
| DE2146400C3 (de) | Neuer biosynthetischer Wirkstoff, Verfahren zu seiner Herstellung und diesen Wirkstoff enthaltende Arzneimittelpräparate | |
| DE2816608A1 (de) | Antibiotisches n-acetyl-dehydro- thienamycin | |
| DE2109854C3 (de) | 7beta-(D-5- Amino- 5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und deren Salze, Verfahren zu Ihrer Herstellung und solche Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| DE2054310C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von (-)-(cis-1 ^-EpoxypropyO-phosphonsaure | |
| DE2455683A1 (de) | Verfahren zur herstellung von deacetoxycephalosporin c | |
| DE1945607C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von p-Amino benzylpenicillin | |
| DE2550110A1 (de) | Verfahren zur umwandlung von cephalosporinverbindungen | |
| DE2600589C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von L(+)-Weinsäure durch mikrobiologische Hydrolyse von Calcium-cis-epoxysuccinat | |
| DE2331295A1 (de) | Verfahren zur herstellung von 7-aminodesacetoxy-cephalosporansaeure | |
| EP0019148A1 (de) | Antibiotikum zur Unterdrückung des Wachstums von Mikroorganismen sowie dessen Herstellung durch Fermentation | |
| CH380133A (de) | Verfahren zur Herstellung von 6-Amino-Penicillansäure | |
| DE1925952C3 (de) | Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von L-Asparaginase mit Antitumorwirksamkeit | |
| AT215077B (de) | Verfahren zur Herstellung 5, 6-Dimethylbenzimidazolcobalamin | |
| DE2652681A1 (de) | Verfahren zur herstellung des antibioticums 924a1 | |
| DE958241C (de) | Verfahren zur Herstellung und Gewinnung einer antibiotisch wirkenden Verbindung | |
| AT200724B (de) | Verfahren zur Gewinnung von LLD-aktiven Substanzen der Vitamin B12-Gruppe | |
| CH621574A5 (en) | Process for the preparation of bicyclomycin | |
| DE1795777C3 (de) | ||
| DE1792550C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von 2-Thiouridylsäure | |
| DE1041896B (de) | Verfahren zur Herstellung von Aminosaeuren auf biotechnischem Wege | |
| CH643591A5 (de) | Antibiotikum bl580 zeta und verfahren zu seiner herstellung. | |
| DE1804519A1 (de) | Melinacidin und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE1467883A1 (de) | Neues Antibiotikum,Verfahren zu dessen Herstellung und dreses Antibiotikum enthaltendes Tierfutter | |
| DE1042841B (de) | Herstellung und Gewinnung des Antibiotikums Novobiocin auf biologischem Wege |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OD | Request for examination | ||
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |