Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

CZ131796A3 - Plant pathogen control process - Google Patents

Plant pathogen control process Download PDF

Info

Publication number
CZ131796A3
CZ131796A3 CZ961317A CZ131796A CZ131796A3 CZ 131796 A3 CZ131796 A3 CZ 131796A3 CZ 961317 A CZ961317 A CZ 961317A CZ 131796 A CZ131796 A CZ 131796A CZ 131796 A3 CZ131796 A3 CZ 131796A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
ala
gly
leu
thr
promoter
Prior art date
Application number
CZ961317A
Other languages
English (en)
Inventor
Ellen Briskin Lawrence
Elaine Beatrice Levine
Dilipkumar Maganlal Shah
Original Assignee
Monsanto Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Monsanto Co filed Critical Monsanto Co
Publication of CZ131796A3 publication Critical patent/CZ131796A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8281—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for bacterial resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Způsob kontroly rostlinných pa
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu kontroly rostlinných pathogenů proteinem, který se získá genetickou modifikací rostliny, aby produkovala proteina ^-rootlin užitečných při tomto způsobuj
Dosavadní stav techniky
Je dobře známo, že enzymatický účinek oxidázy glukózy je antibakteriální. V přítomnosti kyslíku oxidáza glukózy katalyzuje oxidaci glukózy na delta-glukonolakton a peroxid vodíku. Antibakteriální působení je vyvoláno jak oxidačním potenciálem peroxidu vodíku, tak přítomností delta- glukonolaktonu, který je známý inhibitor glykosyltransferázy.
Antibakteriální účinek produktů tohoto enzymu vedlo k jeho velmi rozšířenému použití v potravinářském průmyslu, kde se považuje za GRAS sloučeninu (obecně považovaná za bezpečnou). Jako taková se oxidáza glukózy používá k zamezení bakteriálního zkažení připravených potravin. V lékařství se oxidáza glukózy používá jako enzymatický baktericid, který je součástí obvazů ran, zubních párátek, zubních vláken a miniaturních zubních kartáčků. Oxidáza glukózy byla rovněž zmíněna jako způsob kontroly zubního kazu.
Nejnovější zprávy ukázaly, že oxidáza glukózy je součástí biokontrolního mechanismu používaného Penicillium dangearii ke kontrole rostlinné pathogenní houby Verticil7?um dahliae (Kimaj., 1988, 1990).
Avšak použití oxidázy glukózy jako prostředku pro rostliny, aby se chránily samy proti pathogenním organismům, se považovalo za málo nadějné pro povahu enzymatického účinku. Za prvé je v rostlinách málo volné glukózy. Zdálo by se, že enzym bude mít nedostatek substrátu, aby produkoval dost peroxidu vodíku a nebo delta- glukonolaktonu, aby překonal útok pathogenu. Za druhé, přítomnost takového enzymu v rostlinné buňce, spotřebovávajícího glukózu a produkujícího i malé množství peroxidu vodíku, by se považovala za zhoubnou pro vitalitu buňky. Neočekávalo by se, že transgenní rostliny vyjadřující oxidázu glukózy by se vyvíjely normálně, at již jako regenerované rostliny nebo jako následující generace.
Předmětem tohoto vynálezu je zajištění oxidázy glukózy, která by se mohla bezpečně vyjádřit v rostlinných buňkách a zabezpečit odolnost těchto buněk. Dalším předmětem tohoto vynálezu je zajištění způsobu transformace rostlin, aby vyjadřovaly oxidázu glukózy, která by se mohla bezpečně vyjádřit v rostlinách a zabezpečit odolnost těchto rostlin.
Podstata vynálezu
Překvapivě se zjistilo, že gen pro oxidázu glukózy z Aspergillus niger lze použít k transformaci rostlin, které se vyvíjejí normálně a odolávaly útok pathogenu. Je tedy předmětem tohoto vynálezu zajištění genetických konstruktů obsahujících gen pro Aspergillus oxidázu glukózy (AGO) užitečnou pro vložení do rostlinných buněk. Je jiným předmětem tohoto vynálezu zajištění transformovaných rostlin odolných proti pathogenům, obsahujících takový genetický materiál.
Mimo to se rostliny mohou transformovat, aby také vyjadřovaly jiné antifungicidní proteiny nebo insekticidní proteiny, například s použitím genů Baci Hus thuringiensis (BT). Příklady rostlin transformovaných aby vyjadřovaly geny B.t. jsou popsány v Evropské patentové přihlášce číslo 0 385 962, která odpovídá US pořadové číslo 07/476,661, podané
12. února 1990 (Fishhoff aj.), která je sem zahrnuta touto referencí. Gen B.t. lze zabudovat do rostliny podle tohoto vynálezu současnou transformací, postupnou transformací, nebo šlechtěním.
V souladu s jedním aspektem tohoto vynálezu se zajišťuje rekombinantní molekula DNA s dvojitou šroubovnicí obsahující v pracovní sekvenci:
a) promotér, který vyvolává v rostlinné buňce produkci
RNA sekvence a
b) strukturní kódující sekvenci, která kóduje produkci
AGO,
c) 3' nepřeloženou oblast, která působí v řečené rostlinné buňce to, že se polyadenylátové nukleotidy připojí k 3' konci RNA sekvence.
V souladu s jiným aspektem tohoto vynálezu se zajišťuje způsob produkce geneticky transformovaných rostlin, které vyjadřují antipathogenní množství AGO zahrnující kroky:
a) vložení do genomu rostlinné buňky rekombinantní molekulu DNA s dvojitou šroubovnicí obsahující:
i) promoter, který vyvolává v rostlinné buňce produkci RNA sekvence, ii) strukturní kódující sekvenci, která kóduje prc.·,.
AGO, iii) 3' nepřeloženou oblast, která působí v rostlinné buňce to, že se polyadenylátové nukleotidy připojí k 3' kon4 ci RNA sekvence,
b) získání transformovaných rostlinných buněk a
c) regeneraci geneticky transformovaných rostlin, které vyjadřují antipathogenní množství AGO z transformovaných rostlinných buněk.
Také se zajišťují v souladu s jiným aspektem tohoto vynálezu transformované rostliny, které obsahují DNA mající shora zmíněné prvky (i), (ii) a (iii).
Tak jak se zde používá, výraz Aspergillus oxidáza glukózy nebo AGO se používá k označení oxidázy glukózy přirozeně produkované Aspergillus sp. nebo mající homologii alespoň 80 %, výhodně alespoň 90 % s takovým enzymem, například enzymem kódovaným SEQ ID NO: 1.
Tak jak se zde používá, výraz kontrola mikrobiálního poškození nebo odolnost proti pathogenům se používá k označení vlivu na redukci poškození úrody v důsledku infekce bakteriálními nebo houbovými pathogeny.
Tak jak je zde používán, výraz strukturní kódující sekvence znamená DNA sekvenci, která kóduje polypeptid, který může rovněž udělat buňka po transkripci DNA na mRNA s následující translací na žádoucí polypeptid.
Tak jak je zde používán, výraz stanoviště rostliny znamená oblast bezprostředně obklopující rostlinu včetně rostliny a oblasti jejích kořenů.
Příkladná provedeni vynálezu
Jedno provedení tohoto vynálezu zahrnuje protein isolovaný z Aspergillus niger. Tento protein, označený AGO, se čistil do homogenity. Inhibuje růst agronomicky důležitých houbových pathogenů včetně Verticillium dahliae, jednoho z nejrozšířenějších a nejškodlivějších houbových pathogenů, působícího nemoci mnoha rostlin, Phytophora infestans (Pi), pathogenů působícímu pozdní hnití brambor a rajčat, Botrytis cinerea (Bc) zdroji šedé plísně mnoha rostlin a zelenin, Septoria n od o rum (Sn) příčině skvrnitosti pšenice, Pseudocercosporella herpotrichoides (Ph) příčině oókovitosti pšenice, Gaeumannomyces graminis var tritici (Ggt) příčině hnití zelenin, v tak malém množství, jako je 50 ng, za pokusných podmínek. Také se zjistilo, že inhibuje Erwinia carotovora, příčinu měkké hniloby brambor, posklizňové nemoci brambor. Očekává se, že je schopný kontrolovat mnohé jiné pathogenní organismy rostlin, což je založeno na produktech jeho enzymatické aktivity delta- glukonolaktonu a peroxidu vodíku. Oba tyto koprodukty jsou toxické pro takové organismy.
Mnohé druhy rostlin se mohou chránit způsoby podle tohoto vynálezu. Například mnohé ovoce a zeleniny, jako jsou maliny, brambory se mohou chránit před rostlinnými pathogeny pomocí těchto způsobů. Různé druhy Phytophora jsou pathogenní pro mnohé jiné rostliny, jako jsou ovocné stromy a trávník, a tedy tyto rostliny se také mohou chránit pomocí způsobů podle tohoto vynálezu. Dále rostliny pšenice a ječmene se mohou chránit před Ggt, Sn a Ph tímto způsobem.
Jak se poznamenalo shora, antibakteriální proteiny podle tohoto vynálezu se mohou použít v kombinaci s jinými antifungicidními proteiny, aby se dosáhlo široké spektrum aktivity, například kontrola dalších pathogenů a nebo aby se dosáhly mnohonásobné mody akce pro inhibici stejných houbových pathogenů. Zdroji takových jiných antifungicidních proteinů by mohly být mikrobiální, jako jsou proteiny podle tohoto vynálezu, nebo to mohou být rostliny. Řada takových antifungicidních genů je uvedena v literatuře.
Ačkoliv AGO bude chránit rostliny proti útoku pathogenů i při přirozeně se vyskytujících hladinách glukózy, může být žádoucí zajistit invertázu, která by působila hydrolýzu sacharózy a tak uvolňovala další glukózu, na kterou by AGO mohl působit. Invertáza bude s výhodou invertáza z buněčných stěn, jako z kvasnic (EP 0 442 592, Willmitzer aj., 1991, také AU 70898/91) nebo vakuolární enzym jako je z rajčat či jiných rostlin. V těchto případech se mohou použít přirozené signální sekvence, avšak může být lepší, aby invertáza byla do doby potřeby vázaná v mezibuněčném prostoru, nebo nebyla produkována před svou potřebou. Prvou alternativu lze dosáhnout použitím signální sekvence, která zaměří enzym do mezibuněčného prostoru. Jedním takovým signálem je signál inhibitoru proteázy brambor (Keil aj., 1986, Nelson aj., 1980). Promotor, který je aktivní pouze jako důsledek infekce pathogeny, by byl užitečný při omezení vyjádření invertázy na její opravdovou potřebu, aby produkovala glukózu jako substrát pro AGO.
Béhem skladování, kdy infekce Erwiniá může způsobit ztrátu celého skladu, hlízy brambor budou přirozeně obsahovat glukózu z rozkládajícího se škrobu. Tedy vložení genu pro invertázu není žádoucí nebo nutné pro ochranu proti můž, ké hnilobě.
Testy biologické účinnosti in vitro Protiplísňové testy
Oxidáza glukózy z Aspergillus niger se může dostat od Sigma Chemical Company, St. Louis (katalogové číslo G7141). Používala se k testování účinnosti in vitro proti řadě organismů.
Testy proti Pi a Bc se prováděly v mediu číslo 303 připraveném následovně: Jeden litr obsahuje 1 g MgSO47H2O, 2 g KH2PO4, 0,5 g Naci, 1 g CaCO3, 1 ml ZnSO4.7HO zásobního roztoku 1 mg/ml, 1 ml FeSO4.7HO zásobního roztoku 1 mg/ml, 0,5 ml FeEDTA zásobního roztoku 100 mM, 20 g maltrin M-100, 20 g kaseinu, 5 g výtažku z kvasnic, 5 g glukózy, 3,02 g Pipes 10 mM. pH se upravilo na 6,5 a sterilovalo se filtrací. Testy proti Ph se prováděly v CDAA.1% mediu, připraveném následovně: 35 g/1 Difco Czapek Dox vývar, 1 g/1 prolin, 500 mg/l asparagin, 500 mg/l cystein a 1 g/1 agar se autoklavují 23 minut a přidají se vitaminy sterilované filtrací (1 ppm thiamin a 1 ppm biotin).
Bc a Pi se testovaly v kapalném stavu na deskách s 96 jamkami. Bc se použilo při 5*102 sporách na jamku a nechalo se inkubovat při 20 °C 24-48 hodin. Pi se vysévalo při 5*103 sporangiích na jamku a nechalo se inkubovat při 18 °C 24-48 hodin. Růst se sledoval měřením OD při 595 nm. Růst Pi byl inhibován z 90 % při koncentracích tak nízkých jako je 3*10-5 IU/mikrolitr. Růst Bc byl inhibován z 95 % při koncentraci jako je 0.001 IU/mikrolitr.
Aktivita proti Gaeumannomyces se hodnotila na deskách pevného agaru. Kousky agaru asi 0,5 cm2, podporující silný růst houby, se daly do středu PDA desky poloviční síly a nechaly se růst několik dní při 22 °C. 1 cm za vedoucí o
hranou růstu se vyjmul asepticky 0,5 cnr kousek agaru sterilním korkovrtem. Přímo do těchto jamek se dal sterilní AGO zásobní roztok. Zřetelná zóna inhibice se pozorovala při množstvích tak nízkých jako je 0,02 IU/jamku.
Ph se testoval na deskách s 96 jamkami. 14 dní stará kultura Pseudocercosporella herpotrichoides var tritici na vodném agaru se použila k získání suspenze spor. Deska se zavodnila 5-10 ml CDAA.1% mediem a spory se zamíchaly do kapalného media jemným zakroužením. Koncentrovaná suspenze spor se odtáhla pipetou a přidala se k celkovému objemu CDAA potřebnému pro test s úpravou koncentrace spor na 100000 spór/ml. Inkubovalo se při 24 °C v temnu.
Suspenze spór se rozdělila po 50 mikrolitrech na jamku na deskách s 96 mikrotitračními jamkami. Tyto desky se daly do inkubátoru (10 hodin/ denního světla při 12 °C) na 24 hodin před aplikací vzorku. 50 mikrolitrový vzorek se přidal k 50 mikrolitrům inokula (připraveného 24 hodin předem) s celkovým objemem jamky 0,100 ml/ošetřená jamka/opakované ošetření. Zkušební desky se inkubovaly 48 hodin a výsledky se stanovily odečtením optické hustoty (OD) pomocí BioRad čítačem mikrotitračních desek model 3550 při jediné vlnové délce 595 nm. OD stanovení se provedlo v čase nula (tQ), který se dělal bezprostředně po aplikaci vzorku a OD stanovení se provedlo v čase 48 hodin po aplikaci vzorku (t48). Růst hub se stanovil z rozdílů OD mezi tQ a t48 násobeného výpočetní hodnotou pro biomasu houby. (Výpočetní hodnota pro biomasu houby je vztah mezi růstem hub a optickou hustotou a stanovil se ve zvláštních pokusech. Vztah mezi růstem hub a optickou hustotou se stanovil růstem hub na deskách s 96 mikrotitračními jamkami a sklizní mycelia během času při intervalech absorbance asi 0,1 OD. (Výpočetní hodnota vychází z lineární závislosti mezi biomasou houby a OD pro specifickou houbu. Hodnota jejího sklonu se dostane z lineární závislosti. Výpočetní hodnota pro Ph je 4,91). Pak se stanovilo % inhibice z rozdílů mezi biomasou ošetřených vzorků a biomasou kontrol. AGO vykazoval 60 % inhibici Ph při l,7*10-4 IU/mikrolitr.
Testy proti Sn se prováděly podstatně podobně jako proti Ph, s výjimkou preparace suspenze spor. Sedm dní stará kultura Septoria nodorum na YMA agaru se použila k získání suspenze spor. Malé množství (pod 1 ml) CDAA media se nakapalo na plochu kultury s hmotou růžových spor vycházejících z pyknidia. Spory se smíchaly s CDAA mediem opakovaným nasáváním a vypouštěním z pipety. Koncentrovaná suspenze spor se přidala k celkovému objemu CDAA potřebnému pro test s úpravou koncentrace spor na 50000 spór/ml. Výpočetní hodnota pro Sn je 0,508. AGO vykazoval 60 % inhibici Sn při l,7*10-4 IU/mikrolitr.
Bakteriální test
Kultura bakterií Erwin i a carotovora se udržovala rozprostřením na PDA desky a inkubovala se při 24 °C v temnu. Pro preparaci kapalného inokula se smyčka aktivně rostoucích bakterií (stará 5-9 dní) přidala do 50 ml PD výluhu síly 1/4 v 125 ml Erlenmayerově baňce. Baňka se dala do třepacího inkubátoru (130 otáček za minutu) při 24 °C v temnu. Po 24 hodinách se bakterie peletovaly, znovu suspendovaly v sterilní deionizované vodé a tři nebo čtyři 0.100 ml podíly se daly do jamek na deskách s 96 mikrotitračními jamkami. Čítač mikrotitračních desek se nastavil na 595 nm a stanovila se průměrná optická hustota. Číslo této absorbance optické hustoty (ABS) se použilo v následujícím vzorci pro výpočet jednotek tvořících kolonii (CFU) obsažených ve výluhu.
CFU = 3*106 + 3*106*ABS + 5*108*ABS2
Výluh se nastavil pro použití na 10 CFU.
AGO úplné kontroloval růst Ervinia carotovora při koncentracích tak nízkých jako je 3*10-5 IU/mikrolitr.
Identifikace enzymu
Pro zjištění produkce proteinu lze navrhnout řadu metod v heterologní soustavě, jakou jsou rostlinné buňky. Lze použít Western skvrnovou analýzu, aby se protein zjistil imunologicky, nebo lze použít enzymatické nebo biologické testy, aby se zjistila aktivita proteinu.
Enzymaticky test oxidázy glukózy
Aby se zjistila aktivita GO, použil se kontinuální spektrofotometrický test (Frederick aj., 1990). GO Aspergillus niger (Sigma) se použil jako positivní kontrola. Reakční směs se skládala z 0,020 mg/ml peroxidázy z ředkve (Sigma), 0,32 mM Triton X-100 stabilizovaného o-dianisidinem (Sigma) a 0,1 M glukózy v 75 mM ústoji fosforečnanu sodného (pH 5,0). K tomu se přidalo 0,100 ml různých koncentrací GO Aspergillus niger pro kontrolu reakcí 0,100 ml vzorku odebraného z heterologního zdroje. Test se prováděl při pokc/ / teplotě a zvýšení absorbance se sledovalo při 460 nm.
Jiný test na oxidázu glukózy používající reagent 4aminoantipyrin (4-AAP) se optimalizoval pro použití. Je za11 ložen na Gallo, 1981. 5X 4-AAP reagent se připravil v celkovém objemu 10 ml s 0,68 g KH2PO4, 8,3 mg 4-AAP (0.82 mM) , 0,025 ml Triton X-100, 65,8 mg krystalického fenolu a 1000 jednotek peroxidázy z ředkve. pH se upravilo na 5,0 s KOH. Test se prováděl smícháním 0,200 ml tohoto 4-AAP reagentu s 0,005 ml 1 mM FAD, 0,050 ml 1 M glukózy a zkoušeného vzorku (až 0,750 ml). Výsledek se odečítal při OD 508.
Test biologické aktivity oxidázy glukózy
4-6 dní starý roub Ggt houby se přenesl na čerstvé desky (Difco) agaru bramborové dextrózy čtvrtinové síly. Houba rostla čtyři dny při 22 °C, dokud růstový kruh nebyl asi
2,5 cm. Pomocí sterilního korkovrtu se udělaly v agaru jamky 1 cm vně růstového kruhu a do jamek se dalo 0,100 ml ústoje nebo vzorku z heterologní soustavy. Houba rostla při pokojové teplotě 24 hodin a pak se zjistila inhibice růstu. Imunologicky test oxidázy glukózy
Polyklonální antičástice pro oxidázu glukózy produkovanou Aspergillus niger jsou dostupné komerčně z mnoha zdrojů, například Rockland, lne., Gilbertsville, Pensylvania. GENETICKÁ TRANSFORMACE
Z Aspergillus niger se isolovala úplná DNA (ATCC 9029) a použila se pro isolaci PCR genu pro oxidázu glukózy. PCR primery byly založeny na publikované sekvenci (Frederick aj., Kriechbaum aj.) a byly navrženy pro isolaci úplné sek vence genu včetně signální sekvence. Mimo to se pro usnadnění zabudování tohoto genu do vektorů vhodných pro vyjádření v heterologních bakteriálních, bakulovirových nebo rostliných soustavách 5'PCR primer (SEQ ID NO: 3) zavedl Xbal a BglII místa omezující endonukleázu po proudu od ATG počát12 ku translace genu. 3'PCR primer (SEQ ID NO: 4) zavedl BamHI a KpnI místa omezující endonukleázu ihned za končící kodon. Vzniklý PCR fragment se klonoval do pUC118 jako Xbal/KpnI fragment, aby vytvořil pMON22514 a byl úplné sekvencován.
Konstrukce rostlinného genu
Vyjádření rostlinného genu existujícího v dvojité formě DNA vyžaduje transkripci matricové RNA (mRNA) z jedné šroubovnice DNA enzymem RNA polymerázou a následující zpracování primárního mRNA transkriptu do jádra. Toto zpracování vyžaduje 3' nepřeloženou oblast, která aduje polyadenylátové nukleotidy na 3' konec RNA řetězce. Transkripce DNA do mRNA se reguluje oblastí DNA obyčejně označovanou jako promotor. Tato promotorova oblast obsahuje sekvenci baží, která signalizuje RNA polymeráze, aby se připojila k DNA a iniciovala transkripci mRNA pomocí jedné ze šroubovnic DNA jako formy, aby vytvořila odpovídající pás RNA.
V literatuře byla popsaná řada promotorů, které jsou aktivní v rostlinných buňkách. Tyto zahrnují promotory nopalin syntházu (NOS) a oktopin syntházu (OCS) (které se přenáší na tumory působící plasmidy Agrobacterium tumefaciens), promotory 19S a 35S mosaikového viru květáku (CaMV), promotor 35S mosaikového Figwort viru (FMV) a světlem buzený promotor z malé části ribulosy 1,5-bis- fosfát karboxylázy (ssRUBISCO, velmi hojný rostlinný polypeptid). Všechny tyto promotory se také použily k vytvoření různých typů DNA konstrukcí, které se vyjádřily v rostlinách. US patent čí^i^ 5,034,322 (Fraley aj, 1991), který je sem zahrnut touto referencí, popisuje takové použití.
Jsou známy promotory, které omezí vyjádření na jisté části rostlin, nebo na odpověď na zvláštní stimuly. Například promotory specifické pro hlízy brambor, jako jsou palatinové promotory, nebo promotory pro velké či malé podjednotky ADP pyrofosforylázy glukózy, by se mohly použít k dosažení vyjádření primárně v hlízách a tak v kombinaci s AGO zajistit resistenci proti útokům na hlízy, například Erwinií. Promotor specifický pro ovoce by byl žádoucí pro zajištění resistence proti Botrytis u malin nebo hroznů. Promotor specifický pro kořeny by byl žádoucí pro vyjádření AGO v pšenici a ječmeni pro zajištění resistence proti Ggt. Odborník bude vědět o mnoha takových promotorech specifických pro rostliny, které by byly užitečné podle tohoto vynálezu.
Alternativně lze promotory použité v dvojité šroubovnici DNA molekuly vybrat tak, aby se dosáhlo specifického vyjádření AGO jako odpověď na infekci houbami. Infekce rostlin pathogeny hub spouští indukci řady proteinů zvaných obranných nebo pathogen obranných (PR) (Bowles, Bol aj., Linthorst). Takové obranné nebo PR geny mohou kodovat enzymy fenylpropanoidového metabolismu (jako je lyáza fenylalanin amonia, chalkonová syntháza, coAligáza 4-kumarátu, 4- hydroxyláza kumarové kyseliny), proteiny modifikující stěny buněk rostlin (jako jsou glykoproteiny bohaté na hydroxyprolin, proteiny bohaté na glycin, peroxidázy), enzymy (jako jsou chitinázy a glutanázy), které degradují stěnu houby, proteiny podobné thamatinu nebo proteiny s dosud neznámou funkcí. Obranné nebo PR geny se isolovaly a charakterizovaly z řady druhů rostlin. Promotory těchto genů se mohou použít pro vyjádření AGO v transgenních rostlinách, když jsou napadeny pathogeny, zejména houbovým pathogenem, jako je Pi. Takové promotory lze odvodit od obranných nebo PR genů isolovaných ze samotných brambor (Fritzmeier aj . , Cuypers aj . , Longcman aj., Matton a Brisson, Taylor aj., Matton aj., Schrcder aj.). Aby se umístil AGO gen pod kontrolu promotoru indukovaného infekcí Phytophora infestans, lze dát přednost promotoru popsanému Taylorem aj. (1990).
Vybraný daný promotor by měl být schopen působit dostatečné vyjádření sekvence kódující enzym, aby vedly k produkci účinného množství AGO.
Promotory použité v DNA konstrukcích (například chimérní geny rostlin) podle tohoto vynálezu lze modifikovat, pokud je to žádáno, aby se ovlivnily jejich kontrolní charakteristiky. Například promotor CaMV35S lze spojit s částí genu ssRUBISCO, která potlačuje vyjádření ssRUBISCO při nepřítomnosti světla, aby vznikl promotor, který je aktivní v listech, ale ne v kořenech. Vzniklý chimérní promotor lze použít, jak je zde popsáno.
Pro účely tohoto popisu fráze CaMV35S promotor tedy zahrnuje variace CaMV35S promotoru, například promotory získané vázáním s operátorovými oblastmi, náhodnou a kontrolovanou mutagenezí, atd.. Promotory lze dále měnit, aby obsahovaly mnohonásobné zvýrazňovací sekvence, aby podporovaly zvýšené vyjádření genu. Příklady takových zvýrazňovacích sekvencí byly uvedeny Kay aj.
Zvýrazněný CaMV 35S promotor lze konstruovat následovně. Fragment CaMV 35S promotoru prostírající se mezi polv -343 a +9 se nejprve konstruuje v pUC13 (Oděli aj.). Tento segment obsahuje oblast identifikovanou jako nutnou pro maximální vyjádření CaMV 35S promotoru. Byl vyříznut jako Cla15
I- HindlII fragment, otupen na konci DNA polymerázou (Clalfragment) a vložen na HincII místo pUC18. Oblast po proudu
35S promotoru se vyřízla z tohoto plasmidu (prostírajícího se mezi polohou -343 a -90) a vložila se do stejného plasmidu mezi místa HindlII a Pstl. Zvýrazněný CaMV 35S promotor dále CaMV E35S) tedy obsahuje duplikaci sekvence mezi -343 a -90 (Kay aj.).
RNA produkovaná DNA konstruktem podle tohoto vynálezu také obsahuje 5' nepřeloženou vedoucí sekvenci. Tuto sekvenci lze získat z promotoru vybraného k vyjádření genu a lze ji specificky modifikovat, aby se zvýšila translace mRNA. 5' nepřeložené oblasti lze také získat z virových RNA, z vhodných eukaryotních genů, nebo ze syntetických sekvencí genu. Tento vynález není omezen na konstrukce, kde nepřeložená oblast je odvozena z 5' nepřeložené oblasti, která provází sekvenci promotoru. Nepřeloženou vedoucí sekvenci lze spíše odvodit z nepříbuzného promotoru nebo kódující sekvence. Například protein tepelného šoku petúnií 70 (Hsp70) obsahuje takovou vedoucí oblast (Winter).
Jak je shora poznamenáno, 3' nepřeložená oblast chimérních rostlinných genů podle tohoto vynálezu obsahuje polyadenylační signál, jehož funkcí v rostlinách je působit adici adenylových nukleotidů na 3' konec RNA. Příklady preferovaných 3' oblastí jsou (1) 3' přepsané, nepřeložené oblasti obsahující polyadenylační signál genů tumory působících plasmidů (Ti) Agrobacterium, jako je gen nopalin syntházy (NOS), a (2) rostlinné geny, jako jsou geny zásobních proteinů sóji a fazolový ssRUBISCO E9 gen (Fischhoff aj.).
Transformace a vyjádření v rostlině
Chimérní rostlinný gen obsahující strukturní kódující sekvenci podle tohoto vynálezu lze vložit do genomu rostliny každým vhodným způsobem. Vhodné transformační vektory zahrnují ty, které jsou odvozeny z Ti plasmidu Agrobacterium turné faciens jakož i ty, které popsali například Herrera- Estrella (1983), Bevan (1983), Klee (1985) a EPO publikace 0 120 516 (Schilperoort aj.). Navíc lze u rostlinných transfer mačních vektorů odvozených z Ti nebo zavádějících do kořenů (Ri) plasmidů Agrobacterium použít alternativní způsoby pro vložení DNA konstruktů podle tohoto vynálezu do rostlinných buněk. Takové způsoby mohou zahrnovat například použití liposomú, elektroporace, chemikálií, které zvyšují přijímání DNA, volné dodání DNA bombardováním mikroprojektily a transformaci viry nebo pylem.
Rostliny, které lze chránit podle tohoto vynálezu zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, brambory, rajčata, pšenici, kukuřici, maliny, hrozny a různé okrasné rostliny. Metody tkáňové kultury a regenerace rostlin jsou dostupné pro všechny tyto typy rostlin.
Přechodné vyjádření palatinu v buňkách tabáku
Zvlášť užitečný plasmidový kazetový vektor pro transformaci dvojděložných rostlin je pMON999. Kazeta exprese pMON 999 se skládá z CaMV E35S promotoru a 3' konce zahrnující polyadenylátové signály z genu NOS. pM0N999 obsahuje BglII, KpnI a EcoRI místa pro vložení kódující sekvence a Notl- iw; ti místa lemující kazetu pro vyjádření genu.
BglII/KpnI fragment pMON22514 obsahující AGO se vložil do pMON999, aby se vytvořil pMON22515. pMON22515 se elektro17 poroval do protoplastů tabáku. Vyjádření oxidázy glukózy transformovanými buňkami tabáku potvrdila Western skvrnová analýza jakož i enzymatické testy.
Stálá transformace dvoíděložných
Nosný vektor pro AGO se vytvořil vyříznutím oblasti kódující AGO jako BamHI/BglII fragment pMON22515. Ten se pak dal do vektoru založeného na pUC a vzniklý plasmid pMON22579 obsahuje FMV promotor, oblast kódující AGO a 3' konec včetně polyadenylátových signálů z genu NOS. Notl/Notl fragment z tohoto vektoru obsahující FMV promotor, oblast kódující AGO a 3' konec včetně polyadenylátových signálů se přenesl do Notl omezující oblasti pMON17227 (WO/0449, Barry aj.), aby se získal konečný Ti vektor pMON22587.
Jak se diskutovalo shora, Gen AGO se může také vyjádřit ve specifických částech rostlin pomocí specifických tkáňových promotorů. Promotor pro palatin se vyjádřuje primárně v hlízách brambor. Fragment KpnI/Xbal obsahující oblast kódující AGO se vyřízl z pMON22514 dal se do vektoru založeného na pUC obsahujícího 1.0 promotor palatinu (Bevan aj., 1986) a 3' konce zahrnující polyadenylátové signály z genu NOS, aby se vytvořil pMON22516. Fragment Notl pMON22516 obsahující promotor palatinu, oblast kódující AGO a 3' konec NOS včetně polyadenylátových signálů se pak přenesl do Notl omezující oblasti pMON17227, jak bylo popsáno shora, aby se získal plasmidový Ti vektor pMON22517.
Tyto vektory lze vložit do odzbrojeného Agrobacterium ABI a použít k transformaci brambor, rajčat nebo jiných částí rostlin v tkáňové kultuře. Po selekci na kanamycin nebo glyfosátovou odolnost a regeneraci rostliny, lze získat celé rostliny vyjadřující gen oxidázy glukózy. Vyjádření oxidázy glukózy transformovanými buňkami tabáku lze potvrdit Western skvrnovou analýzou, enzymatickými testy nebo biotesty. Vyjádření AGO v transformovaných rostlinách brambor
Z hlíz brambor transformovaných plasmidovým Ti vektorem pMON22517 se extrahoval protein a zkoušel se na přítomnost oxidázy glukózy Western skvrnovou analýzou. Zjistily se vysoké hladiny vyjádření oxidázy glukózy v některých rostlinách. Tyto hladiny vyjádření se potvrdily enzymatickými testy pomocí soustavy 4-aminoantipyrinu. Celkový protein se extrahoval z řady těchto hlíz rozemletím v 25 mM ústoji fosforečnanu sodného pH 7,0 + 5mM EDTA + 100 mM KC1. Protein se koncentroval a promyl 12,5 mM ústojem fosforečnanu sodného pH 7,0.
Protein extrahovaný z hlíz se testoval s Phytophora infestans na deskách s 96 mikrotitračními jamkami v 12,5 mM ústoji fosforečnanu sodného pH 7,0. Výsledek je ukázán v Tabulce 1. Při nejvyšší hladině zjištěného proteinu, 21,2 mg/ml, Pi spory bud) zůstávaly neplodné, nebo růst z těchto spor byl silně zmrzačen ve srovnání s prázdným vektorem (pMON17227) nebo s ústojnými extrakty z kontrolních rostlin.
Tabulka 1
Ošetření_Inhibice hub*
Kontrolní ústoj 0
Kontrolní prázdný vektor 2 pMON22517, linie 9 3
PMON22517, linie 30 * Stupnice: O = bez inhibice, 1 = lehká inhibice, 2 = mírná inhibice, 3 = silná inhibice.
Listy rostlin brambor transformovaných plasmidovým Ti vektorem pMON22587 se zkoušely na přítomnost AGO enzymatickými testy. Výsledek je ukázán v Tabulce 2. Jako shora, rostliny brambor transformované pMON17227 se použily jako kontrolní rostliny s prázdným vektorem.
Tabulka 2
Vyjádření oxidázy glukózy Ekvivalent
úroveň3 aktivity*3 kc
Linie číslo % (U/10 ng X 10-4) (U/gFW)
Rus. Bur. 0 0 0
22587-2 0.075 72.2 7.22
22587-3 0.150 126.4 12.64
22587-4 0.007 6.0 0.6
22587-12 0.125 88.2 8.82
22587-31 0.350 140.4 14.04
22587-32 0.350 121.0 12.10
22587-33 0.450 181.8 18.18
22587-34 0.003 1.2 0.12
a Hladina vyjádření je ukázána jako procento oxidázy glukózy v celkovém extrahovatelném proteinu.
b Aktivita oxidázy glukózy v extraktu se stanovila testem enzymatické aktivity a vypočetla se jako jednotky enzymatické aktivity v celkovém proteinu.
c Jednotky oxidázy glukózy na gram čerstvé hmotnosti tkáně listů (U/gFW) se vypočetly z aktivity v celkovém proteinu pomocí konversního faktoru 0,010 mg celkového proteinu na gram čerstvé hmotnosti tkáně listů.
Listy rostlin brambor transformovaných plasmidovýiu Ti vektorem pMON22587 se zkoušely na úroveň H2O2 srážením oxidu titaničitého. Bylo zjištěno, že ve dvou liniích listy měly úroveň H2O2 dva až čtyřikrát vyšší než listy netransformovaných kontrolních rostlin.
Brambory odolné nemocím
Hlízy vyjadřující AGO se testovaly proti e Erwinia carotovora v deskovém testu hlíz. Hlízy z 34 linií transformovaných pMON22517 se testovaly na odolnost proti měkké hnilobě. Linie se také testovaly na hladiny vyjádření Western skvrnovou analýzou. Hlízy se povrchově sterilovaly podle metody Yanga aj. (1989). Dvě nebo tři hlízy na linii se asepticky rozřezaly na plátky 7-10 mm tlusté, což dalo šest až dvanáct plátků na linii. Plátky se daly na zvlhčený sterilní filtrační papír Whatman číslo 1 v Petriho misce. Střed každého plátku se očkoval 50000 CFU bakterií v 0,010 ml. Misky se udržovaly v prostředí vysoké vlhkosti tři dny při 23 °C. Hodnocení nemoci zahrnovalo měření délky, poloměru a hloubky vzniklých poškození. Zředění macerovaných tkání z poškození se použily ke stanovení konečného počtu bakterií na poškození. Výsledky těchto stanovení jsou ukázány v Tabulce 3. U linií, které se zdály nejvíce chráněné, všechny měřené parametry byly lepší než u prázdného vektoru a ústojných kontrolních hlíz. Hlízy, u kterých se zjistila nejvysší hladina vyjádření AGO měly obvykle nejnižší hladinu bakterií v poškozeních.
Tabulka 3
Vyj ádření53
Linie číslo úroveň CFUa*
Kontrolní ústoj nulová 16.76
Prázdný vektor nulová 14.32
22517-10 nulová 20.7
22517-24 nulová 20.09
22517-13 nulová 16.3
22517-12 nulová 19.26
22517-9 nízká 9.34
22517-28 nízká 13.56
22517-33 nízká 9.57
22517-14 nízká 8.22
22517-17 nízká 8.36
22517-19 nízká 8.37
22517-32 nízká 7.17
22517-20 nízká 7.4
22517-21 nízká 6.25
22517-34 nízká 4.44
22517-11 nízká 3.06
22517-8 nízká 1.5
22517-7 střední 12.88
22517-31 střední 12.06
22517-1 střední 7.54
22517-15 střední 6.7
22517-25 střední 12.25
22517-35 střední 6.81
22517-2 střední 3.52
22517-3 střední 1.26
22517-5 střední 1.4
22517-6 vysoká 15.74
22517-18 vysoká 2.675
22517-26 vysoká 4.55
22517-29 vysoká 4.35
22517-4 vysoká 4.2
22517-30 vysoká 3.92
22517-16 vysoká 1.12
22517-23 vysoká 2.67
22517-36 vysoká 0.855
a CFU = Jednotky tvořících kolonii D Hladiny vyjádření se stanovily Western skvrnovou analýzou.
Listy rostlin brambor transformovaných pMON22587 a vyjádřující AGO se zkoušely na odolnost proti Pi. Zcela rozvinuté lístky (asi 20 cm2) se očkovaly přidáním kapiček 0,100 ml suspenze sporangií Phytophora infestans do středu listu mimo osu. Inokulum mělo hustotu 10^-10^ sporangií na ml, sebraných z 2-3 týdnů starých desek obsahujících LB-V8 medium. Očkované lístky se udržovaly v Nunc Bio-Assay miskách (243*243*18 cm) s vlhkostí danou vlhkým filtračním papírem na dně a inkubovaly se v růstových komorách asi při 19 °C s 16 hodinovou fotoperiodou. Pozoroval se rozvoj symptomů a nakažené oblasti lístků se měřily překrytím každého lístku transparentní mřížkou s oku 5*5 mm. Pro každou linii li ék se vypočetly průměrná nakažená oblast a standardní odchylka.
Transgenni linie vyjadřující AGO ukazovaly významnou kontrolu symptomů působených infekcí Phytophora infestans na lístcích. Výsledky dvou linií jsou ukázány v Tabulce 4. Redukce symptomů byla 47 a 57 % ve srovnání s kontrolami (jak netransformovaných tak transformovaných prázdným vektorem).
Tabulka 4
Linie číslo
Russet Bur.
17227-lc
22587-3d
22587-12d a b
c d
Nakažená oblast3 3 dpob 4 dpo 5 dpo
1.2 2.1 4.2
1.6 2.7 4.7
0.4 0.8 1.1
0.5 1.3 2.3
6dpo
7.1
8.7
3.0
3.7
Nakažená oblast je ukázána jako průměr pěti listů. Dny po očkování
Kontrolní linie transformovaná prázdným vektorem. Transgenní linie vyjadřující oxidázu glukózy.
Stálá transformace jednoděložných
Pro transformaci jednoděložných se vektor konstruoval s AGO a intronem zvlášú užitečným pro zvýšení frekvence získání transformovaných rostlin, které vyjadřují žádaný protein na vysoké úrovni. Použil se intron hsp70, popsaný v EP 602 193 (ekvivalent US pořadové číslo 08/181,634, Brown aj., která je sem zahrnuta touto referencí). pMON19477 tam popsaný se vyřízl a pak se klonoval 800 bp BglII- BamHI fragment obsahující intron hsp70 do jediného místa BglII v pMON22515. To dalo pMON22623.
PMON22623 se dal do buněk pšenice bombardováním mikroprojektily podle známých metod (Vasil aj . ).
Když se získají transformované rostliny, jejich odolnost vůči plísním, zejména proti Ggt se stanoví známými me24 todami.
Všechny publikace a patenty zmíněné v tomto popisu jsou sem zahrnuty referencí, jako kdyby každá individuální publikace či patent byly specificky a individuálně prohlášeny jako zahrnuté referencí.
Z předešlého bude zřejmé, že tento vynález je dobře přizpůsoben k dosažení všech cílů a předmětů shora vytyčených spolu s výhodami, které jsou nasnadě a které jsou vynálezu vlastní.
Rozumí se, že jisté rysy a podkombinace jsou užitečné a lze je použít bez odkazu na jiné rysy a podkombinace. To se vynálezem zamýšlí a je v rozsahu vynálezu.
Protože jsou možná mnohá provedení tohoto vynálezu, aniž by se opustil jeho rozsah, rozumí se, že všechno se má interpretovat v ilustrativním a nikoliv omezujícím smyslu.
REFERENCE
Bány, G.F., G. Kishore, and S.R. Padgette. Glyphosate Tolerant 5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate-Synthases. PCT Appl. WO 92/04449, 1991.
Bevan, M. et al. Nátuře. 304:184, 1983.
Bevan, M. et al. Nucleic Acid Research, 14:4625, 1986.
Bol, J. et al. Ann Rev of Phvtopathol.. 28:113-138, 1990.
Bowles, D. Ann Rev of Biochem.. 59:873-907, 1990.
Cuypers, B. et al. Mol Plant-Microbe Interactions. 1:157-160, 1988. Fischhoff, D.A. and Perlak, F.J. Synthetic plant genes and method for preparation. European Patent Application, Publication Number 0 385 962, 1990.
Frederick, K et al. J. Biol. Chem.. 265:3793-3802.
Fritzemeier, K et al. Plant Phvsiol. 85:34-41, 1987.
Gallo. Methods in Enzvmologv. 71:665-668, 1981.
Herrera-Estrella, L. et al. Nátuře. 303:20-9, 1983.
Kay, R. et al., Science. 236:1299-1302, 1987.
Keil, M. et al. Nucleic Acids Res.. 14:5641 - 5650, 1986.
Klee, H. J. et al. Bio/Technology, 3:637-642, 1985.
Kim , K. et al. Phvtopathologv. 78:488-492, 1988.
Kim, K. et al. Can. J. Microbiol.. 36:199-205, 1990.
Kriechbaum M. et al. FEBS Lett., 255:63-66, 1989.
Linthorst, H. J. M. Crit Rev Plant Sci. 10:123-150.
Logemann, J. et al. Plant Cell. 1:151-158, 1989.
Matton, D. and Brisson, N. Mol Plant-Microbe Interactions. 2:325-331,
1989.
Matton, D. et al. Plant Mol Biol. 14:863-865, 1990.
Nelson, C. et al. Proč. Nati. Acad. Sci. USA. 77:1975 - 1979, 1980.
Oděli, J. et al., Nátuře. 313:810, 1985.
Schroder, M.et al. Plant J. 2:161-172, 1992.
Taylor, J., et al. Molecular Plant-Microbe Interactions. 3:72-77, 1990.
Vasil et al. Bio/Technology 11: 1153-1158, 1993.
Winter et al. Mol. Gen. Genet.. 221(2):315-19, 1988.
Seznam řetězců (1) Obecná informace
i) Přihlašovatel:
(A) Název: Monsanto Company (B) Ulice: 800 North Lindbergh Boulevard (C) Město: St.Louis (D) Stát: Missouri (E) Země: USA (F) PSČ: 63198 (G) Telefon: (314) 537-7286 (H) Fax: (314) 537-6047 ii) Název vynálezu: Způsob kontroly rostlinných patogenú iii) Počet řetězců: 4 iv) Počítačové zpracování (A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilní (C) Operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Release #1.0, Verze #1.25 (EPO) vi) Údaje o původní přihlášce:
(A) Číslo přihlášky: US 08/161041 (B) Datum podání: 24.listopad 1993 (2) Informace o řetězci SEQ ID NO: 1
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 1848 párů baží
B) Typ: nukleová kyselina
C) Spirálovitost: dvojitá
D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA (genomická) ix) Rys:
A) Jméno/klíč: CDS
B) Lokace 16..1833 xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 1:
TCTAGAAGAT CTATC : ATG CAG ACT CTC CTT GTG AGC TCG CTT GTG GTC TCC 51
Met Gin Thr Leu Leu Val Ser Ser Leu Val Val Ser
1 5 10
CTC GCT GCG GCC CTG CCA CAC TAC . ATC . AGG AGC AAT ' GGC ATT * GAA i GCC 99
Leu Ala Ala Ala Leu Pro His Tyr Ile , Arg Ser Asn Gly Ile < Glu Ala
15 20 25
AGC CTC CTG ACT GAT CCC AAG GAT GTC TCC GGC CGC ACG GTC GAC TAC 147
Ser Leu Leu Thr Asp Pro Lys Asp Val Ser Gly Arg Thr Val Asp Tyr
30 35 40
ATC ATC GCT GGT GGA GGT CTG ACT GGA CTC ACC ACC GCT GCT CGT CTG 195
Xle Ile Ala Gly Gly Gly Leu Thr Gly Leu Ťhr Thr Ala Ala Arg Leu
45 50 55 60
ACG GAG AAC CCC AAC ATC AGT GTG CTC GTC ATC GAA AGT GGC TCC TAC 243
Thr Glu Asn Pro Asn Ile Ser Val Leu Val Ile Glu Ser Gly Ser Tyr
65 70 75
GAG TCG GAC AGA GGT CCT ATC ATT GAG GAC CTG AAC GCC TAC GGC GAC 291
Glu Ser Asp Arg Gly Pro Ile Ile Glu Asp Leu Asn Ala Tyr Gly Asp
80 35 90
ATC TTT GGC AGC AGT GTA GAC CAC GCC TAC GAG ACC GTG GAG CTC GCT 339
Ile Phe Gly Ser Ser Val Asp His Ala Tyr Glu Thr Val Glu Leu Ala
95 100 105
ACC AAC AAT CAA ACC GCG CTG ATC CGC TCC GGA AAT GGT CTC GGT GGC 387
Thr Asn Asn Gin Thr Ala Leu Ile Arg Ser Gly Asn Gly Leu Gly Gly
110 115 120
TCT ACT CTA GTG AAT GGT GGC ACC TGG ACT CGC CCC CAC AAG GCA CAG 435
Ser Thr Leu Val Asn Gly Gly Thr Trp Thr Arg Pro His Lys Ala Gin
125 130 135 140
GTT GAC TCT TGG GAG ACT GTC TTT GGA AAT GAG GGC TGG AAC TGG GAC 483
Val Asp Ser Trp Glu Thr Val Phe Gly Asn Glu Gly Trp Asn Trp Asp
145 150 155
AAT GTG GCC GCC TAC TCC CTC CAG GCT GAG CGT GCT CGC GCA CCA AAT 531
Asn Val Ala Ala Tyr Ser Leu Gin Ala Glu Arg Ala Arg Ala Pro Asn
160 165 170
GCC AAA CAG ATC GCT GCT GGC CAC TAC TTC AAC CCA TCC TGC CAT GGT 579
Ala Lys Gin Ile Ala Ala Gly His Tyr Phe Asn Ala Ser Cys His Gly
175 180 185
GTT AAT GGT Val Aan Gly ACT GTC CAT His GCC GGA CCC CGC GAC ACC GGC GAT GAC TAT 827
Thr Val Ala 195 Gly Pro Arg Asp Thr 200 Gly Asp Asp Tyr
190
TCT CCC ATC GTC AAG GCT CTC ATG AGC GCT GTC GAA GAC CGG GGC GTT 675
Ser Pro Ile Val Lya Ala Leu Met Ser Ala Val Glu A3p Arg Gly Val
205 210 215 220
CCC ACC AAG AAA GAC TTC GGA TGC GGT GAC CCC CAT CGT GTG TCC ATC 723
Pro Thr Lys Lys Asp Phe Gly Cys Gly Aep Pro His Gly Val Ser Met
225 230 235
TTC CCC AAC ACC TTG CAC GAA GAC CAA GTG CGC TCC GAT GCC GCT CGC 771
Phe Pro Asn Thr Leu His Glu Asp Gin Val Arg Ser Asp Ala Ala Arg
240 245 250
GAA TGG CTA CTT CCC AAC TAC CAA CGT CCC AAC CTG CAA GTC CTG ACC 819
Glu Trp Leu Leu Pro Asn Tyr Gin Arg Pro Asn Leu Gin Val Leu Thr
255 260 265
GGA CAG TAT GTT GGT AAG GTG CTC CTT AGC CAG AAC GGC ACC ACC CCT 867
Gly Gin Tyr Val Gly Lys Val Leu Leu Ser Gin A3n Gly Thr Thr Pro
270 275 280
CGT GCC GTT GGC GTG GAA TTC GGC ACC CAC AAG GGC AAC ACC CAC AAC 915
Arg Ala Val Gly Val Glu Phe Gly Thr His Ly3 Gly Asn Thr HÍ3 Asn
285 290 295 300
GTT TAC GCT AAG CAC GAG GTC CTC CTG GCC GCG GGC TCC GCT GTC TCT 963
Val Tyr Ala Lys His Glu Val Leu Leu Ala Ala Gly Ser Ala Val Ser
305 310 315
CCC ACA ATC CTC GAA TAT TCC GGT ATC GGA ATG AAG TCC ATC CTG GAG 1011
Pro Thr Ile Leu Glu Tyr Ser Gly Ile Gly Met Lys Ser Ile Leu Glu
320 325 330
CCC CTT GGT ATC GAC ACC GTC GTT GAC CTG CCC GTC GGC TTG AAC CTG 1059
Pro Leu Gly Ile Asp Thr Val Val Asp Leu Pro Val Gly Leu Asn Leu
335 340 345
CAG GAC CAG ACC ACC GCT ACC GTC CGC TCC CGC ATC ACC TCT GCT GGT 1107
Gin Asp Gin Thr Thr Ala Thr Val Arg Ser Arg Ile Thr Ser Ala Gly
350 355 360
GCA GGA CAG GGA CAG GCC GCT TGG TTC GCC ACC TTC AAC GAG ACC TTT 1155
Ala Gly Gin Gly Gin Ala Ala Trp Phe Ala Thr Phe Asn Glu Thr Phe
365 370 375 380
GGT GAC TAT TCC GAA AAG GCA CAC GAG CTG CTC AAC ACC AAG CTG GAG 1203
Gly Asp Tyr Ser Glu Lys Ala HÍ3 Glu Leu Leu Asn Thr Lys Leu Glu
385 390 395
CAG TGG GCC GAA GAG GCC GTC GCC CGT GGC GGA TTC CAC AAC ACC ACC 1251
Gin Trp Ala Glu Glu Ala Val Ala Arg Gly Gly Phe His Asn Thr Thr
400 405 410
VWr TTG CTC ATC CAG TAC CAG AAC TAC CCC GAC TGG ATT GTC AAC CAC 1299
Ala Leu Leu Ile Gin Tyr Glu Asn Tyr Arg Asp Trp Ile Val Asn His
415 420 425
1347
AAC Asn GTC Val 430 GCG TAC Ala Tyr TCG Ser GAA CTC TTC CTC GAC Asp ACT GCC CCA GTA GCC AGC Ser
Glu Leu 435 Phe Leu Thr Ala 440 Gly Val Ala
TTC GAT GTG TGG GAC CTT CTG CCC TTC ACC CGA GGA TAC GTT CAC ATC
Phe Asp Val Trp Asp Leu Leu Pro Phe Thr Arg Gly Tyr Val Hi3 Ue
445 450 455 460
CTC GAC AAG GAC CCC TAC CTT CAC CAC TTC GCC TAC GAC CCT CAG TAC
Leu Asp Lys Asp Pro Tyr Leu His His Phe Ala Tyr Asp Pro Gin Tyr
465 470 475
TTC CTC AAC GAG CTG GAC CTG CTC GGT CAG GCT GCC GCT ACT CAA CTG
Phe Leu Asn Glu Leu Asp Leu Leu Gly Gin Ala Ala Ala Thr Gin Leu
430 485 490
GCC CGC AAC ATC TCC AAC TCC GGT GCC ATG CAG ACC TAC TTC GCT GGG
Ala Arg Asn lle Ser Asn Ser Gly Ala Met Gin Thr Tyr Phe Ala Gly
495 500 505
GAG ACT ATC CCC GGT GAT AAC CTC GCG TAT GAT GCC GAT TTG AGC GCC
Glu Thr lle Pro Gly Asp Asn Leu Ala Tyr Asp Ala Asp Leu Ser Ala
510 515 520
TGG ACT GAG TAC ATC CCG TAC CAC TTC CGT CCT AAC TAC CAT GGC GTG
Trp Thr Glu Tyr lle Pro Tyr His Phe Arg Pro Asn Tyr His Gly Val
525 530 535 540
GGT ACT TGC TCC ATG ATG CCG AAG GAG ATG GGC GGT GTT GTT GAT AAT
Gly Thr Cys Ser Met Met Pro Lys Glu Met Gly Gly Val Val Asp Asn
545 550 555
GCT GCC CGT GTG TAT GGT GTG CAG GGA CTG CGT GTC ATT GAT GGT TCT
Ala Ala Arg Val Tyr Gly Val Gin Gly Leu Arg Val Ue Asp Gly Ser
560 565 570
1395
1443
1491
1539
1587
1635
1683
1731
ATT CCT CCT ACG CAA ATG TCG TCC CAT GTC ATG ACG GTG TTC TAT GCC
Ue Pro Pro 575 Thr Gin Met Ser Ser 580 His Val Met Thr Val 585 Phe Tyr Ala
ATG GCG CTA AAA ATT TCG GAT GCT ATC TTG GAA GAT TAT GCT TCC ATG
Met Ala Leu Lys Ue Ser Asp Ala Ue Leu Glu Asp Tyr Ala Ser Met
590
595
600
1779
1827
CAG TGATAAGGAT CCGGTACC
Gin
605
1848
Informace o řetězci SEQ ID NO: 2
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 605 aminokyselin B) Typ: aminokyselina
D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: protein
Xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 2
Met 1 Gin Thr Leu Leu Val 5 Ser Ser Leu Val Val Ser Leu Ala Ala Ala 10 15
Leu Pro His Tyr Ile Arg 20 Ser Asn Gly 25 Ile Glu Ala Ser Leu Leu Thr 30
Asp Pro Lys 35 Asp Val Ser Gly Arg 40 Thr Val Asp Tyr Ile Ile Ala Gly 45
Gly Gly Leu 50 Thr Gly Leu Thr 55 Thr Ala Ala Arg Leu Thr Glu Asn Pro 60
Asn 65 Ile Ser Val Leu Val 70 Ile Glu Ser Gly Ser Tyr Glu Ser Asp Arg .75 80
Gly Pro Ile Ile Glu Asp 85 Leu Asn Ala Tyr Gly Asp Ile Phe Gly Ser 90 95
Ser Val Asp His Ala Tyr 100 Glu Thr Val 105 Glu Leu Ala Thr Asn Asn Gin 110
Thr Ala Leu 115 Ile Arg Ser Gly Asn 120 Gly Leu Gly Gly Ser Thr Leu Val 125
Asn Gly Gly 130 Thr Trp Thr Arg 135 Pro His Lys Ala Gin Val Asp Ser Trp 140
Glu 145 Thr Val Phe Gly Asn 150 Glu Gly Trp Asn Trp Asp Asn Val Ala Ala 155 160
Tyr Ser Leu Gin Ala Glu 155 Arg Ala Arg Ala Pro Asn Ala Lys Gin Ile 170 175
Ala Ala Gly His Tyr Phe 180 Asn Ala Ser 185 Cys His Gly Val Asn Gly Thr 190
Val His Ala 195 Gly Pro Arg Asp Thr 200 Gly Asp Asp Tyr Ser Pro Ile Val 205
Lys Ala Leu 210 Met Ser Ala Val 215 Glu Asp Arg Gly Val Pro Thr Lys Lys 220
Asp 225 Phe Gly Cys Gly Asp 230 Pro His Gly Val Ser Met Phe Pro Asn Thr 235 240
Leu His Glu Asp Gin Val 245 Arg Ser Asp Ala Ala Arg Glu Trp Leu Leu 250 255
Pro Asn Tyr Gin Arg Pro 260 Asn Leu Gin 265 Val Leu Thr Gly Gin Tyr Val 270
Gly Lys Val 275 Leu Leu Ser Gin Asn 280 Gly Thr Thr Pro Arg Ala Val Gly 285
Val Glu Phe Gly Thr His Lys Gly Asn Thr His Asn Val Tyr Ala Lya
290 295 300
His Glu Val Leu 305 Leu Ala Ala Gly Ser Ala Val Ser Pro Thr Ile Leu 320
310 315
Glu Tyr Ser Gly Ile Gly Met Lys Ser Ile Leu Glu Pro Leu Gly Ile
325 330 335
Asp Thr Val Val Asp Leu Pro Val Gly Leu Asn Leu Gin Asp Gin Thr
340 345 350
Thr Ala Thr Val Arg Ser Arg Ile Thr Ser Ala Gly Ala Gly Gin Gly
355 360 365
Gin Ala Ala Trp Phe Ala Thr Phe Asn Glu Thr Phe Gly Asp Tyr Ser
370 375 • 380
Glu Lys Ala His Glu Leu Leu Asn Thr Lys Leu Glu Gin Trp Ala Glu
385 390 395 400
Glu Ala Val Ala Arg Gly Gly Phe His Asn Thr Thr Ala Leu Leu Ile
405 410 415
Gin Tyr Glu Asn Tyr Arg Asp Trp Ile Val Asn His Asn Val Ala Tyr
420 425 430
Ser Glu Leu Phe Leu Asp Thr Ala Gly Val Ala Ser Phe Asp Val Trp
435 440 445
Asp Leu Leu Pro Phe Thr Arg Gly Tyr Val His Ile Leu Asp Lys Asp
450 455 460
Pro Tyr Leu His His Phe Ala Tyr Asp Pro Gin Tyr Phe Leu Asn Glu
465 470 475 480
Leu Asp Leu Leu Gly Gin Ala Ala Ala Thr Gin Leu Ala Arg Asn Ile
485 490 495
Ser Asn Ser Gly Ala Met Gin Thr Tyr Phe Ala Gly Glu Thr Ile Pro
500 505 510
Gly Asp Asn Leu Ala Tyr Asp Ala Asp Leu Ser Ala Trp Thr Glu Tyr
515 520 525
Ile Pro Tyr His Phe Arg Pro Asn Tyr His Gly Val Gly Thr Cys Ser
530 535 540
Met Met Pro Lys Glu Met Gly Gly Val Val Asp Asn Ala Ala Arg Val
545 550 555 560
Tyr Gly Val Gin Gly Leu Arg Val Ile Asp Gly Ser Ile Pro Pro Thr
565 570 575
Gin Met Ser Ser His Val Met Thr Val Phe Tyr Ala Met Ala Leu Lys
580 585 590
Ile Ser Asp Ala Ile Leu Glu Asp Tyr Ala Ser Met Gin 595 600 605
Informace o řetězci SEQ ID NO : 3
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 33 párů baží
B) Typ: nukleová kyselina
C) Spirálovítost: jednoduchá
D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA (genomická) xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 3
CCATCTAGAA GATCTATCAT GCAGACTCTCTC CTT
Informace o řetězci SEQ ID NO: 4
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 36 párů baží
B) Typ: nukleová kyselina
C) Spirálovítost: jednoduchá
D) Topologie: lineární ii) Typ molekuly: DNA (genomická) xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 4
TGGGGTACCG GATCCTTATC ACTGCATGGA AGCATA

Claims (9)

  1. P A*JT entové nároky
    1. Rekombinantní molekula DNA s dvojitou šroubovnicí obsahující v pracovní sekvenci:
    a) promotér, který vyvolává v rostlinné buňce produkci RNA sekvence,
    b) strukturní kódující sekvenci, která kóduje produkci
    AGO,
    c) 3’ nepřeloženou oblast, která působí v řečené rostlinné buňce to, že se polyadenylátové nukleotidy připojí k 3 ’ konci RNA sekvence.
    I
  2. 2. Molekula DNA podle nároku 1 vyznačená tím, že řečená strukturní sekvence je SEQ ID NO: 1.
  3. 3. Molekula DNA podle nároku 1 vyznačená tím, že řečený promotor je vybrán z FMV35S a CaMV35S promotorů.
  4. 4. Molekula DNA podle nároku 1 vyznačená tím, že řečený promotér je indukován pathogenní infekcí.
  5. 5. Způsob produkce geneticky transformovaných rostlin, které vyjadřují antipathogenní množství AGO, zahrnující kroky:
    a) vložení do genomu rostlinné buňky rekombinantní mo·» lekulu DNA s dvojitou šroubovnicí obsahující:
    i) promotér, který vyvolává v rostlinné buňce produkci RNA sekvence, ii) strukturní kódující sekvenci, která kóduje produkci
    — -v . ·«— — —II to O z: > rr o cn 2> —u Q o ** · *Z3 * < -Ti £ >- — O O uo CT» O 5? O < x _ CN 0. c.
    AGO, iii) 3' nepřeloženou oblast, která působí v rostlinné buňce to, že se polyadenylátové nukleotidy připojí k 3' konci RNA sekvence,
    b) získání transformovaných rostlinných buněk a
    c) regeneraci geneticky transformovaných rostlin, které vyjadřuji AGO v množství účinném pro snížení poškození působenému infekcí bakteriálními a houbovými pathogeny
  6. 6. Způsob podle nároku 5 vyznačený tím, že řečená strukturní kódující sekvence je SEQ ID NO: 1.
  7. 7. Způsob podle nároku 5 vyznačený tím, že řečený promotér je vybrán z FMV35S a CaMV35S promotérů.
  8. 8. Způsob podle nároku 5 vyznačený tím, že řečený promotér je indukován pathogenní infekcí.
  9. 9. Způsob podle nároku 5 vyznačený tím, že řečené rostliny jsou rostliny brambor nebo pšenice.
CZ961317A 1993-11-24 1994-10-25 Plant pathogen control process CZ131796A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16104193A 1993-11-24 1993-11-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ131796A3 true CZ131796A3 (en) 1996-10-16

Family

ID=22579557

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ961317A CZ131796A3 (en) 1993-11-24 1994-10-25 Plant pathogen control process

Country Status (13)

Country Link
US (1) US5516671A (cs)
EP (1) EP0733116A1 (cs)
JP (1) JPH09506249A (cs)
CN (1) CN1066198C (cs)
AU (1) AU678640B2 (cs)
BG (1) BG61548B1 (cs)
BR (1) BR9408140A (cs)
CA (1) CA2172628A1 (cs)
CZ (1) CZ131796A3 (cs)
HU (1) HUT74393A (cs)
PL (1) PL178652B1 (cs)
SK (1) SK280613B6 (cs)
WO (1) WO1995014784A1 (cs)

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AUPM379294A0 (en) * 1994-02-10 1994-03-03 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Expression of the glucose oxidase gene in transgenic organisms
US5856127A (en) * 1996-07-26 1999-01-05 The Research Foundation Of State University Of New York Antimicrobial peptides
US5850019A (en) * 1996-08-06 1998-12-15 University Of Kentucky Research Foundation Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants
EP0939798B1 (en) * 1996-09-04 2004-11-17 Syngenta Mogen B.V. Antifungal proteins, dna coding therefore, and hosts incorporating same
US5879921A (en) * 1996-11-07 1999-03-09 Novo Nordisk A/S Recombinant expression of a glucose oxidase from a cladosporium strain
ZA986308B (en) * 1997-07-18 1999-11-24 Pioneer Hi Bred Int The induction of stress-related factors in plants.
US6166291A (en) 1997-07-18 2000-12-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Production of pathogen resistant plants
AU5851299A (en) * 1998-07-28 2000-02-21 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Methods and means for inducing tolerance to stress
US6555732B1 (en) 1998-09-14 2003-04-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rac-like genes and methods of use
CN1098931C (zh) * 1999-01-28 2003-01-15 中国农业科学院生物技术研究所 葡萄糖氧化酶基因在培育抗病转基因植物中的应用
ATE346141T1 (de) * 2001-09-13 2006-12-15 Bayer Cropscience Ag Glyoxal oxidasen aus pilzen
CN1681923B (zh) 2002-07-18 2010-06-02 孟山都技术有限公司 利用人工的多核苷酸及其组合物来减少转基因沉默的方法
ATE542913T1 (de) * 2002-11-18 2012-02-15 Novozymes Inc Promotorvarianten zur expression von genen in einer pilzzelle
AU2004225483B2 (en) 2003-03-28 2009-07-23 Monsanto Technology, Llc Novel plant promoters for use in early seed development
ES2625486T3 (es) 2003-08-25 2017-07-19 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de tubulina para su uso en plantas
EP2177600B1 (en) * 2003-10-29 2013-09-18 Kureha Corporation Fungus having activity of controlling disease of gramineous plant, controlling agent using the same, method of controlling and biological material
WO2005069986A2 (en) 2004-01-20 2005-08-04 Monsanto Technology Llc Chimeric promoters for use in plants
WO2006023869A2 (en) 2004-08-24 2006-03-02 Monsanto Technology Llc Adenylate translocator protein gene non-coding regulatory elements for use in plants
US20060064777A1 (en) 2004-09-14 2006-03-23 Monsanto Technology, L.L.C. Promoter molecules for use in plants
US9580695B2 (en) * 2004-12-23 2017-02-28 Philip Morris Usa Inc. Reduction of tobacco-specific nitrosamines using genetic modification to elevate production of native antioxidants in tobacco
CN101128591B (zh) 2005-02-26 2013-02-13 巴斯福植物科学有限公司 用于植物中种子偏好性表达的表达盒
CN101198701B (zh) 2005-04-19 2013-04-24 巴斯福植物科学有限公司 单子叶植物中的淀粉胚乳特异性和/或萌芽胚特异性表达
EP1882037A2 (en) 2005-05-10 2008-01-30 BASF Plant Science GmbH Expression cassettes for seed-preferential expression in plants
US8993846B2 (en) 2005-09-06 2015-03-31 Monsanto Technology Llc Vectors and methods for improved plant transformation efficiency
US20070204367A1 (en) 2006-02-17 2007-08-30 Stanislaw Flasinski Chimeric regulatory sequences comprising introns for plant gene expression
CN101631868B (zh) 2007-02-16 2016-02-10 巴斯福植物科学有限公司 用于在单子叶植物中调节胚特异性表达的核酸序列
US7838729B2 (en) 2007-02-26 2010-11-23 Monsanto Technology Llc Chloroplast transit peptides for efficient targeting of DMO and uses thereof
ES2562908T3 (es) 2008-04-07 2016-03-09 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de plantas y sus usos
WO2010099431A2 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Monsanto Technology Llc Hydroponic apparatus and methods of use
CN102471777B (zh) 2009-07-10 2014-09-24 巴斯夫植物科学有限公司 用于在植物中胚乳-特异性表达的表达盒
US8937214B2 (en) 2009-10-23 2015-01-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for expression of transgenes in plants
BR112012013156A2 (pt) 2009-12-03 2017-06-13 Basf Plant Science Co Gmbh cassete de expressão, vetor, célula horpedeira, tecido de planta transgênica e método para a produção de um tecido de planta transgênica
KR101814588B1 (ko) 2009-12-05 2018-01-04 아마노 엔자임 가부시키가이샤 변이 효소 및 그 용도
BR122021001281B1 (pt) 2010-01-14 2022-03-03 Monsanto Technology Llc Molécula de dna compreendendo elementos reguladores de plantas
PL2611925T3 (pl) 2010-08-30 2018-05-30 Dow Agrosciences, Llc Wzmacniacz z bacilokształtnego wirusa trzciny cukrowej (SCBV) i jego zastosowanie w genomice funkcjonalnej roślin
BR112013024144A2 (pt) 2011-03-25 2016-11-22 Monsanto Technology Llc elementos reguladores de plantas e utilizações dos mesmos
CN107090455A (zh) 2011-05-13 2017-08-25 孟山都技术公司 植物调控元件及其应用
KR20140130506A (ko) 2012-02-29 2014-11-10 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 사탕수수 바실루스형 바이러스 (scbv) 인핸서 및 식물 기능성 유전체학에서의 이의 용도
US9663793B2 (en) 2012-04-20 2017-05-30 Monsanto Technology, Llc Plant regulatory elements and uses thereof
CA2895184C (en) 2012-12-19 2021-11-23 Monsanto Technology Llc Plant regulatory elements and uses thereof
WO2014114810A1 (en) * 2013-01-28 2014-07-31 Roche Diagnostics Gmbh Novel glucose oxidases derived from aspergillus niger
BR122020011595B1 (pt) 2013-03-14 2021-10-13 Monsanto Technology Llc Cassete de expressão compreendendo elemento regulador de planta e método para produzir uma planta transgênica
CN110066796B (zh) 2013-03-14 2023-11-10 孟山都技术有限公司 植物调控元件和其用途
CN104711273B (zh) * 2015-03-17 2018-01-26 中国科学院微生物研究所 一种重组黑曲霉葡萄糖氧化酶的制备方法及其应用
WO2016154631A1 (en) 2015-03-26 2016-09-29 The Texas A&M University System Conversion of lignin into bioplastics and lipid fuels
EP3426788B1 (en) 2016-03-11 2021-09-08 Monsanto Technology LLC Plant regulatory elements and uses thereof
EP3462844B1 (en) 2016-05-24 2024-11-27 Monsanto Technology LLC Plant regulatory elements and uses thereof
CA3029271A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Cellectis Altering expression of gene products in plants through targeted insertion of nucleic acid sequences
BR112019014797A2 (pt) 2017-01-19 2020-02-27 Monsanto Technology Llc Elementos reguladores de planta e usos dos mesmos
CN108251389A (zh) * 2017-08-18 2018-07-06 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种耐热性提高的葡萄糖氧化酶突变体
EP3737747A1 (en) 2018-01-12 2020-11-18 The Texas A&M University System Increasing plant bioproduct yield
EP4314289A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations VII, LLC Production of circular polyribonucleotides in a prokaryotic system
WO2022204464A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Production of circular polyribonucleotides in a eukaryotic system
TW202305129A (zh) 2021-03-26 2023-02-01 美商旗艦先鋒創新有限責任（Ｖｉｉ）公司 用於產生環狀多核糖核苷酸之組成物及方法
MX2024005239A (es) 2021-11-01 2024-07-22 Flagship Pioneering Innovations Vii Llc Polinucleotidos para modificar organismos.
JP2024545942A (ja) 2021-11-12 2024-12-16 モンサント テクノロジー エルエルシー 植物の有限性を変えるための組成物及び方法
WO2023141540A2 (en) 2022-01-20 2023-07-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Polynucleotides for modifying organisms
US12004476B2 (en) 2022-01-26 2024-06-11 Monsanto Technology Llc. Cotton variety 20R750B3XF
AU2023272468A1 (en) * 2022-05-14 2024-11-14 Novonesis Plant Biosolutions A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections
US20240093220A1 (en) 2022-09-09 2024-03-21 Friedrich Alexander Universität Erlangen-Nürnberg Plant regulatory elements and uses thereof
WO2024229347A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial tombusviridae satellite rnas
WO2024229395A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Partitiviral satellite rna amplification systems for plants
WO2024229398A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial amalgavirus satellite rnas
WO2024229356A2 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial solemoviridae satellite rnas
WO2024229385A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial ghabrivirales satellite rnas
WO2024229362A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc ARTIFICIAL MARTELLIVIRALES SATELLITE RNAs
WO2024229351A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial secoviridae satellite rnas
WO2024229359A2 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Artificial tymovirales satellite rnas
WO2024229403A1 (en) 2023-05-03 2024-11-07 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Endornaviral satellite rna amplification systems for plants

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4940840A (en) * 1984-03-26 1990-07-10 Dna Plant Technology Corporation Novel chitinase-producing bacteria and plants
SE8500341L (sv) * 1985-01-24 1986-07-25 Pharmacia Ab Desinfektionssats samt sett for desinfektion
US4696674A (en) * 1986-02-10 1987-09-29 Frito-Lay, Inc Novel potato cultivar
US4723052A (en) * 1986-06-13 1988-02-02 S. Lynn Loosli Potato variety named LC-1
DK501686A (da) * 1986-10-20 1988-04-21 Otto Melchior Poulsen Enzymholdigt, baktericidt middel samt tandplejemidler og saarbehandlingsmidler, som indeholder det
US5094951A (en) * 1988-06-21 1992-03-10 Chiron Corporation Production of glucose oxidase in recombinant systems
US5266688A (en) * 1988-06-21 1993-11-30 Chiron Corporation Polynucleotide sequence for production of glucose oxidase in recombinant systems
US5270194A (en) * 1989-08-31 1993-12-14 Instrumentation Laboratory Spa Stabilized glucose oxidase from Aspergillus Niger
FI88246C (fi) * 1989-10-27 1993-04-26 Genencor Int Europ Foerfarande foer bekaempning av mikroorganismer
ATE196978T1 (de) * 1991-12-10 2000-11-15 Genencor Int Fungistatische zusammensetzung und fungistatisches verfahren unter verwendung der zusammensetzung

Also Published As

Publication number Publication date
CN1136329A (zh) 1996-11-20
PL178652B1 (pl) 2000-05-31
HUT74393A (en) 1996-12-30
AU8120994A (en) 1995-06-13
BR9408140A (pt) 1997-08-12
BG100619A (bg) 1996-12-31
WO1995014784A1 (en) 1995-06-01
PL314590A1 (en) 1996-09-16
HU9601403D0 (en) 1996-07-29
AU678640B2 (en) 1997-06-05
CN1066198C (zh) 2001-05-23
BG61548B1 (en) 1997-12-30
CA2172628A1 (en) 1995-06-01
SK65596A3 (en) 1996-10-02
SK280613B6 (sk) 2000-05-16
JPH09506249A (ja) 1997-06-24
US5516671A (en) 1996-05-14
EP0733116A1 (en) 1996-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ131796A3 (en) Plant pathogen control process
Thomzik et al. Synthesis of a grapevine phytoalexin in transgenic tomatoes (Lycopersicon esculentumMill.) conditions resistance againstPhytophthora infestans
Wu et al. Disease resistance conferred by expression of a gene encoding H2O2-generating glucose oxidase in transgenic potato plants.
JP5907657B2 (ja) 新規な除草剤抵抗性遺伝子
Polidoros et al. Transgenic tobacco plants expressing the maize Cat2 gene have altered catalase levels that affect plant-pathogen interactions and resistance to oxidative stress
US5716820A (en) Fumonisin detoxification enzymes
US6054318A (en) Expression of the glucose oxidase gene in transgenic organisms
EP3167051B1 (en) Phytophthora resistant plants belonging to the solanaceae family
KR101957550B1 (ko) 항진균성 식물 단백질, 펩티드 및 사용 방법
JP2001512028A (ja) 穀物改良のためのｔｄｃ遺伝子を用いたトランスジェニック植物
EP0939798B1 (en) Antifungal proteins, dna coding therefore, and hosts incorporating same
US7419812B2 (en) Sequences encoding PhzO and methods
NZ502178A (en) Fumonisin detoxification compositions
WO1994008010A1 (en) Method of controlling plant pathogenic fungi
Panabieres et al. Heterologous expression of a basic elicitin from Phytophthora cryptogea in Phytophthora infestans increases its ability to cause leaf necrosis in tobacco
US6703540B1 (en) Transformation of plants with a chloroperoxidase gene to enhance disease resistance
AU692228B2 (en) Expression of the glucose oxidase gene in transgenic organisms
JP2013514771A (ja) サトウキビでのＣｒｙ抵抗性のシュガーケーンボーラーの防除および昆虫抵抗性管理のためのＣＲＹ１ＦａおよびＣＲＹ１Ａｂタンパク質の併用
US6063987A (en) Isolated genes and proteins encoding resistance to photosensitizers
Jacks et al. Transformation of plants with a chloroperoxidase gene to enhance disease resistance
CN119177246A (zh) VdR4基因在提高棉花黄萎病抗病性中的应用
Perl-Treves Molecular cloning and expression of copper, zinc superoxide dismutases in tomato
MeeDo et al. Expression of peroxidase-like genes, H (2) O (2) production, and peroxidase activity during the hypersensitive response to Xanthomonas campestris pv. vesicatoria in Capsicum annuum
WO1994018335A2 (en) Method of controlling plant pathogenic fungi
US20040259080A1 (en) Apparatus and method for increasing insect resistance in transgenic plants