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CN113999226B - 作为kras抑制剂的杂环化合物的制备及其应用方法 - Google Patents

作为kras抑制剂的杂环化合物的制备及其应用方法 Download PDF

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CN113999226B CN202111225723.8A CN202111225723A CN113999226B CN 113999226 B CN113999226 B CN 113999226B CN 202111225723 A CN202111225723 A CN 202111225723A CN 113999226 B CN113999226 B CN 113999226B
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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、前药、互变异构体或立体异构体和溶剂化物，这类化合物可用于治疗哺乳动物中癌症和炎症。本发明还公开了式(I)化合物的制备方法以及包含所述化合物的药物组合物。

Description

作为KRAS抑制剂的杂环化合物的制备及其应用方法
技术领域
本发明涉及某些新型杂环化合物或其药学上可接受的盐，此类化合物及其盐可用于很多不同的癌症的治疗或预防。本发明还涉及包含所述化合物及其盐的药物组合物、所述化合物的制备中的中间体、和涉及利用所述化合物及其盐治疗各种不同癌症的方法。
背景技术
1982年Weinberg和Barbacid首先从人膀胱癌细胞系中分离出一种转化基因，可使NIH 3T3细胞发生恶性转化，而从正常人组织中提取的DNA则无此种作用。随后，Santos与Parada发现上述转化基因并非新型基因，而是Harvery鼠肉瘤病毒ras基因的人类同源基因，命名为H2ras。同年，Krontiris在人肺癌细胞中发现Kirsten鼠肉瘤病毒基因的同系物，称为K-ras。另一种相似的基因是在人神经母细胞瘤DNA感染NIH 3T3细胞时发现的与ras类似的基因，称为N2ras，此种基因和病毒无关.
ras基因在进化中相当保守，广泛存在于各种真核生物如哺乳类，果蝇，真菌，线虫及酵母中，提示它有重要的生理功能.哺乳动物的ras基因家族有三个成员，分别是H-ras、K-ras、N-ras，其中K-ras的第四个外显子有A、B两种变异体。各种ras基因具有相似的结构，均由四个外显子组成，分布于全长约30kb的DNA上。它们的编码产物为相对分子质量2.1万的蛋白质，故称为P21蛋白。已证明，H-ras位于人类11号染色体短臂上(11p15.1～p15.3)，K-ras位于12号染色体短臂上(12p1.1～pter)，N-ras位于1号染色体短臂上(1p22-p32)，除了K-ras第四个外显子有变异外，每个ras基因编码P21的序列都平均分配在四个外显子上，而内含子的序列及大小相差很大，因而整个基因也相差很大，如人K-ras有35kb长，而N-ras长为3kb。由于有两个第四号外显子，K-ras可以两种方式剪接，但编码K-ras-B的mRNA含量高。除K-ras-B含有188个氨基酸外，其他两种Ras蛋白均含有189个氨基酸.
Ras(P21)蛋白位于细胞膜内侧，它在传递细胞生长分化信号方面起重要作用。它属于三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白(一种细胞信息传递的耦联因子)，通过GTP与二磷酸鸟苷(GDP)的相互转化来调节信息的传递。P21与GTP和GDP有很强的亲和性，而且有较弱的GTP酶活性。正常情况下P21和GDP结合处于失活状态，当细胞外的生长分化因子把信号传导到胞膜内侧的P21时，可增强P21与GTP结合活性，使P21和GTP结合成为激活状态，信号系统开放。因为P21有GTP酶活性，可使GTP水解成GDP，P21和GDP结合后P21失活，信号系统关闭。正常情况下P21的GTP酶活性很弱，当和GTP酶激活蛋白(GAP)结合后其水解速度可提高1万倍而使P21失活。P21和GDP结合后可以激活鸟苷酸释放蛋白(GNRP)，GNRP使P21释放GDP结合GTP，因此通过GTP和GDP的相互转化可以有节制地调节P21对信号系统的开启和关闭，完成生长分化信号传入细胞内的过程.
超过1/5的癌症患者都伴有Ras基因突变，这些突变多发生在G12、G13及Q61残基上，突变导致GAP蛋白介导失灵，Ras信号持续处于激活状态；本发明设计合成了一系列化学分子，具有很强的抑制ras的生物活性，提供了通过抑制H-ras、K-ras或者N-ras来治疗相关癌症的方法。
发明内容
本发明提供能够调节G12C突变体KRAS、HRAS和/或NRAS蛋白质的化合物，包括其立体异构体、药物可接受的盐、互变异构体及前药。还提供使用这种化合物治疗不同疾病或病状(诸如癌症)的方法。
在本发明一方面，提供具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体、立体异构体或前药，其中所述式(I)化合物为：
Figure BDA0003314220280000021
其中：
环W是4至12元的饱和或部分饱和的单环、桥环或螺环，其中所述饱和的或部分饱和的单环任选地额外地被一个或多个R4取代，
其中
R4选自：氧代(oxo)、烷基、烯基、炔烃、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、氰基、硝基、-C(O)OR5或-C(O)N(R5)2，其中烷基是未取代的或被氰基、卤基、-OR5、-N(R5)2或杂芳基中的一个或多个取代，其中R5各自独立地为氢或烷基；
R1为-L1-T，
其中
L1为-O-、-S-、-NRa-、-C(O)-、-SO2-、-SO-、-C(＝NRa)-、-C(O)-O-、-OC(O)-、-C(O)-NRa-或-NRaC(O)-，
T为-CRa＝CRbRc、-C≡CRb、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，所述烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基各自是未取代的或被氧代、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、CN、硝基或NRxRy中的一个或多个取代；
其中
Ra为氢、氘、氰基、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳基、杂芳基或杂环基；
Rb和Rc各自独立为氢、氘、氰基、卤素、-C(O)ORx、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，所述烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基各自是未取代的或被氧代；卤素；羟基；烷基；卤代烷基；羟基烷基；烷氧基；CN；硝基；NRxRy；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的芳基；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的杂芳基；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的杂环基中的一个或两个取代，
或者，在T为-CRa＝CRbRc时，Ra与Rb或Ra与Rc，与它们所连接的碳原子一起，形成不饱和的5-至8-元环，所述环是未取代的或被氧代、羟基、卤素、烷基、羟基烷基、卤代烷基或烷氧基中的一个或两个取代；
Rx和Ry各自独立地为氢或烷基；
Q1、Q2和Q3各自独立地为N或CR11，M1和M2各自独立地为N或CR12，条件是Q1和M1中至少一个为N；
其中
R11和R12各自独立地为氢、卤素、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe或-NRdRe，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立被氧代、卤素、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、硝基、氰基和-NRdRe中的一个或多个取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、C3-C6环烷基、羟基烷基、卤代烷基和烷氧基烷基；
L为单键、-O-、-S-、-NRa-、-O-CH2-、-S-CH2-、-NRa-CH2-、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-NRa-、-C(O)-、-SO2-、-SO-、-C(O)-O-、-OC(O)-、-C(O)-NRa-或-NRaC(O)-；
R2为烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立地是未取代的或被卤素、氰基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氧代、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe、-NRdRe、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基和杂环基中的一个或多个取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、羟基烷基、卤代烷基和烷氧基烷基；
R3为环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，条件是当M1和Q1、Q2均为N时，R3为非芳香性的稠合二环杂环基，R3是未取代的或被一个或多个以下的基团取代：氧代、卤素、氰基、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe、-NRdCORe、-NRdRe、-S(O)2NRdRe、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立地被卤素、烷基、氰基、氨基甲酰基、烷氧基、羟基、环烷基和杂芳基取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、C3-C6环烷基、羟基烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、烯基或环烷基。
在一些实施方案中，提供具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体、立体异构体或前药，其中所述式(I)化合物为：
Figure BDA0003314220280000031
其中：
环W是4至12元的饱和或部分饱和的单环、桥环或螺环，其中所述饱和的或部分饱和的单环任选地额外地被一个或多个R4取代，
其中
R4选自：氧代(oxo)、烷基、烯基、炔烃、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、氰基、硝基、-C(O)OR5或-C(O)N(R5)2，其中烷基是未取代的或被氰基、卤基、-OR5、-N(R5)2或杂芳基中的一个或多个取代，其中R5各自独立地为氢或烷基；
R1为-L1-T，
其中
L1为-O-、-S-、-NRa-、-C(O)-、-SO2-、-SO-、-C(＝NRa)-、-C(O)-O-、-OC(O)-、-C(O)-NRa-或-NRaC(O)-，
T为-CRa＝CRbRc、-C≡CRb、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，所述烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基各自是未取代的或被氧代、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、CN、硝基或NRxRy中的一个或多个取代；
其中
Ra为氢、氘、氰基、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、芳基、杂芳基或杂环基；
Rb和Rc各自独立为氢、氘、氰基、卤素、-C(O)ORx、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，所述烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基各自是未取代的或被氧代；卤素；羟基；烷基；卤代烷基；羟基烷基；烷氧基；CN；硝基；NRxRy；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的芳基；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的杂芳基；未取代的或被烷基、羟基、卤素取代的杂环基中的一个或两个取代，
或者，在T为-CRa＝CRbRc时，Ra与Rb或Ra与Rc，与它们所连接的碳原子一起，形成不饱和的5-至8-元环，所述环是未取代的或被氧代、羟基、卤素、烷基、羟基烷基、卤代烷基或烷氧基中的一个或两个取代；
Rx和Ry各自独立地为氢或烷基；
Q1、Q2和Q3各自独立地为N或CR11，M1和M2各自独立地为N或CR12，条件是Q1和M1中至少一个为N；
其中
R11和R12各自独立地为氢、卤素、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe或-NRdRe，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立被氧代、卤素、羟基、烷氧基、烷基、环烷基、硝基、氰基和-NRdRe中的一个或多个取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、C3-C6环烷基、羟基烷基、卤代烷基和烷氧基烷基；
L为单键、-O-、-S-、-NRa-、-O-CH2-、-S-CH2-、-NRa-CH2-、-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-NRa-、-C(O)-、-SO2-、-SO-、-C(O)-O-、-OC(O)-、-C(O)-NRa-或-NRaC(O)-；
R2为烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立地是未取代的或被卤素、氰基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氧代、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe、-NRdRe、-CH2NRdRe、环烷基、环烷基烷基、芳基、杂芳基和杂环基中的一个或多个取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、羟基烷基、卤代烷基和烷氧基烷基；
R3为非芳香性的稠合二环杂环基，R3是未取代的或被一个或多个以下的基团取代：氧代、卤素、氰基、-ORd、-C(O)Rd、-CO2Rd、-CONRdRe、-NRdCORe、-NRdRe、-S(O)2NRdRe、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基，其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基各自独立地被卤素、烷基、氰基、氨基甲酰基、烷氧基、羟基、环烷基和杂芳基取代，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基、羟基烷基、卤代烷基、烷氧基烷基、烯基或环烷基。
在一些实施方案中，L1为-C(O)-或-SO2-。
在一些实施方案中，L1为-C(＝NRa)-，其中Ra为H、CN或羟基。
在一些实施方案中，T为-CRa＝CRbRc、-C≡CRb、烷基或杂环基，其中Ra和Rb如式(I)所定义。
在一些实施方案中，T为-CRa＝CRbRc或-C≡CRb，其中Ra为氢、氘、氰基、卤素、羟基或烷基，Rb和Rc各自独立为氢；卤素；未取代的烷基；被羟基、卤素、NRxRy或杂环基取代的烷基；未取代的芳基或杂芳基；被烷基、羟基或卤素取代的芳基或杂芳基，其中Rx和Ry各自独立为氢或烷基。优选地，上述实施方案中，所述芳基为苯基，其是未取代的或被卤素、羟基或C1-3烷基中的一个或两个取代。优选地，在上述实施方案中，所述杂芳基为噻唑基、噁唑基、吡啶基或嘧啶基，其是未取代的或被卤素、羟基或C1-3烷基中的一个或两个取代。
在一些实施方案中，T为-CRa＝CRbRc，其中Ra与Rb或Ra与Rc，与它们所连接的碳原子一起，形成不饱和的5-至8-元环，所述环是未取代的或被羟基、卤素、烷基、羟基烷基、卤代烷基或烷氧基中的一个或两个取代。在一些实施方案中，T为-CRa＝CRbRc，其中Ra与Rb或Ra与Rc，与它们所连接的碳原子一起，形成不饱和的5-、6-、7-或至8-元碳环，所述环是未取代的或被羟基、卤素、烷基、羟基烷基、卤代烷基或烷氧基中的一个或两个取代。优选地，不饱和的5-、6-、7-或至8-元碳环是环戊烯环、环己烯环、环庚烯环或环辛烯环。
在一些实施方案中，T为烷基，其是未取代的或被卤素、羟基、NRxRy、CN、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基或杂环基取代，其中Rx和Ry各自独立为氢或烷基。优选地，上述实施方案中的杂环基为含有一个或两个选自氧、氮和硫的4-至8元杂环，例如氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶基、吗啉基。
在一些实施方案中，T为杂环基，其是未取代的或被卤素、羟基、NRxRy、CN、烷基、卤代烷基、羟基烷基或烷氧基取代，其中Rx和Ry各自独立为氢或烷基。优选地，T为含有一个选自氧、氮和硫的3-至8元杂环，例如未取代的或甲基取代的环氧丙烷。
在一些实施方案中，L1为-C(O)-或-SO2-，以及T为-CH＝CH2。
在一些实施方案中，L为-O-CH2-或-O-。
在一些实施方案中，L为-O-CH2-，以及R2为杂环基，所述杂环基是未取代的或被卤素和烷基中的一个或多个取代。优选地，L为-O-CH2-，以及R2为杂环基，其中所述杂环基含有1、2或3个选自氧、氮、硫的杂原子的4-至8-元的单环，所述杂环基是未取代的或被卤素和烷基中的一个或多个取代。更优选地，所述杂环基为氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基，所述环是未取代的或被一个或两个卤素或烷基取代。在进一步优选实施方案中，L-R2为
Figure BDA0003314220280000051
在一些实施方案中，R3为芳基，其中所述芳基为苯基或萘基，所述苯基或萘基是未取代的或被1、2或3个以下的取代基取代：卤素；氰基；-ORd，其中Rd为氢、烷基或卤代烷基；-CONRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基或环烷基；-NRdCORe，其中Rd和Re各自独立为氢或烷基；烷基，其中所述烷基是未取代的或被卤素、环烷基、羟基或烷氧基取代；环烷基，其中所述环烷基是未取代的或被烷基、氰基或氨基甲酰基取代；炔基；-NRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢或烷基；或杂芳基。
在一些实施方案中，R3为部分氢化的萘基，其是未取代的或被羟基、烷基、羟基烷基、卤代烷基或卤素取代。优选地，R3为1,2,3,4-四氢萘基，其是未取代的或被羟基、烷基、羟基烷基、卤代烷基、卤素、氨基、烷基氨基或二烷基氨基取代。
在一些实施方案中，R3为杂芳基，所述杂芳基是未取代的或被1、2或3个以下的取代基取代：氧代、卤素；氰基；-ORd，其中Rd为氢、烷基或卤代烷基；-CONRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基或环烷基；-NRdCORe，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基或烯基；烷基，其中所述烷基是未取代的或被卤素、环烷基、羟基或烷氧基取代；环烷基，其中所述环烷基是未取代的或被烷基、氰基或氨基甲酰基取代；炔基；或-NRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢或烷基。优选地，上述杂芳基为单环杂芳基，例如噻吩、噻唑、吡唑、吡啶或嘧啶，其是未取代的或如上所述被取代。优选地，上述杂芳基为二环杂芳基，例如
Figure BDA0003314220280000061
Figure BDA0003314220280000062
Figure BDA0003314220280000063
Ra和Rb独立为氢、卤素、烷基，或Ra与Rb独连接成为取代或未取代的C3-C6环烷基。其是未取代的或如上所述被取代。
在一些实施方案中，R3为杂环基，优选为非芳香性的稠合二环杂环基，其是未取代的或被1、2或3个以下的取代基取代：氧代、卤素；氰基；-ORd，其中Rd为氢、烷基或卤代烷基；-CONRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基或环烷基；-NRdCORe，其中Rd和Re各自独立为氢、烷基或烯基；烷基，其中所述烷基是未取代的或被卤素、环烷基、羟基或烷氧基取代；环烷基，其中所述环烷基是未取代的或被烷基、氰基或氨基甲酰基取代；炔基；或-NRdRe，其中Rd和Re各自独立为氢或烷基。在另一些实施方案中，R3为非芳香性的稠合二环杂环基，其是未取代的或被1、2或3个以下的取代基取代：氧代、卤素；羟基、烷氧基和烷基；优选地，所述取代基为氧代、卤素、羟基、甲氧基或甲基。在进一步实施方案中，R3为非芳香性的稠合二环杂环基，其为
Figure BDA0003314220280000064
Figure BDA0003314220280000065
Figure BDA0003314220280000066
其是未取代的或被1、2或3个以下的取代基取代：氧代、卤素；羟基、烷氧基和烷基；优选地，所述取代基为氧代、卤素、羟基、甲氧基或甲基，其中X、Y和Z各自独立地为N或CR9，其中R9为氢、羟基、氰基、烷基、卤代烷基、卤素、羟基烷基、烷氧基烷基或烷基磺酰基。
在一些实施方案中，式(I)化合物为
Figure BDA0003314220280000071
其中：
R3优选为
Figure BDA0003314220280000072
Figure BDA0003314220280000073
其中X，Y，Z选自N或CR9，Ra和Rb独立为氢、卤素、烷基，或Ra与Rb独连接成为取代或未取代的C3-C6环烷基。其余变量如对式(I)所定义。
在一些实施方案中，式(I)化合物为
Figure BDA0003314220280000074
其中：L-R2为
Figure BDA0003314220280000081
Figure BDA0003314220280000082
R3优选为、
Figure BDA0003314220280000083
Figure BDA0003314220280000084
在一些实施方案中，式(I)化合物为如式(I-2)、(I-3)、(I-4)、(I-5)和(I-6)所示：
Figure BDA0003314220280000085
其中：
R3优选为
Figure BDA0003314220280000086
Figure BDA0003314220280000087
Ra和Rb独立为氢、卤素、烷基，或Ra与Rb独连接成为取代或未取代的C3-C6环烷基。
在一些实施方案中，R1-W为
Figure BDA0003314220280000091
其中哌嗪环任选地额外地被一个或多个R4取代，R4如式(I)所定义。在一些实施方案中，R4为C1-C3烷基，其中烷基是未取代的或被氰基取代。
在一些实施方案中，式(I)化合物中的R1-W为
Figure BDA0003314220280000092
在一些实施方案中，R1为基团：
Figure BDA0003314220280000093
在优选的实施方案中，R1-W为
Figure BDA0003314220280000094
在一些实施方案中，L-R2为
Figure BDA0003314220280000095
Figure BDA0003314220280000101
在优选的实施方案中，L-R2为
Figure BDA0003314220280000102
Figure BDA0003314220280000103
更优选为
Figure BDA0003314220280000104
Figure BDA0003314220280000105
在一些实施方案中，R3为
Figure BDA0003314220280000106
Figure BDA0003314220280000111
在优选的实施方案中，R3为
Figure BDA0003314220280000112
Figure BDA0003314220280000113
在一些实施方案中，R11为氢、硝基、羟基、卤素、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基或烷氧基烷基；优选为氢、卤素、氰基、三氟甲基或硝基。在优选的实施方案中，R11为F。
在一些实施方案中，R12为氢、羟基、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C3-C6环烷基氧基、杂环基，C1-C6卤代烷基、芳基或杂芳基，其中所述芳基和杂芳基各自是未取代的或被C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基和C3-C6环烷基中的一个或多个取代。在优选的实施方案中，R12为F和环丙基氧基。
在一些实施方案中，式(I)化合物为
Figure BDA0003314220280000121
其中
R1-W为
Figure BDA0003314220280000122
R3为
Figure BDA0003314220280000123
Figure BDA0003314220280000124
Figure BDA0003314220280000125
以及
L-R2为
Figure BDA0003314220280000126
Figure BDA0003314220280000127
更优选为
Figure BDA0003314220280000128
Figure BDA0003314220280000129
R11和R12各自独立地为氢、羟基、烷基、C3-C6环烷基氧基、或卤素。
在一些实施方案中，式(I)化合物为
Figure BDA0003314220280000131
Figure BDA0003314220280000141
Figure BDA0003314220280000151
Figure BDA0003314220280000161
Figure BDA0003314220280000171
Figure BDA0003314220280000181
Figure BDA0003314220280000191
Figure BDA0003314220280000201
Figure BDA0003314220280000211
Figure BDA0003314220280000221
Figure BDA0003314220280000231
Figure BDA0003314220280000241
Figure BDA0003314220280000251
Figure BDA0003314220280000261
Figure BDA0003314220280000271
Figure BDA0003314220280000281
Figure BDA0003314220280000291
Figure BDA0003314220280000301
Figure BDA0003314220280000311
Figure BDA0003314220280000321
Figure BDA0003314220280000331
Figure BDA0003314220280000341
Figure BDA0003314220280000351
Figure BDA0003314220280000361
Figure BDA0003314220280000371
Figure BDA0003314220280000381
Figure BDA0003314220280000391
Figure BDA0003314220280000401
Figure BDA0003314220280000411
Figure BDA0003314220280000421
Figure BDA0003314220280000431
Figure BDA0003314220280000441
Figure BDA0003314220280000451
Figure BDA0003314220280000461
Figure BDA0003314220280000471
Figure BDA0003314220280000481
Figure BDA0003314220280000491
Figure BDA0003314220280000501
Figure BDA0003314220280000511
Figure BDA0003314220280000521
Figure BDA0003314220280000531
Figure BDA0003314220280000541
Figure BDA0003314220280000551
本发明的另一方面提供了所述式(I)化合物或其药物可接受的盐、互变异构体或立体异构体的例示性的制备方法：
制备方法1：
Figure BDA0003314220280000552
其中，R1，R2，R3，L，W如上文中所定义。PG是氨基的保护基团，如Boc-、Cbz等，X是Cl，OTf等基团。第一步在碱性条件(如三乙胺，二异丙基乙基胺等)下发生取代反应；第二步在氧化剂(如间氯过氧苯甲酸等)条件下发生氧化反应得到中间体亚砜；第三步是中间体亚砜在碱性条件(三乙胺、氢化钠、叔丁醇钠等)下发生取代反应得到目标中间体；第四步是Suzuki Coupling反应与R3-Bpin或R3-B(OH)2欧联反应得到中间体；第五步为脱去保护基(如Boc)；第六步是与相应的酸或酰氯反应得到目标化合物。
制备方法2：
Figure BDA0003314220280000561
其中，R1，R2，R3，Q2，Q3，M2，L，W如上文中所定义。X是Cl、Br、或I。PG是氨基的保护基团，如Boc-、Cbz等，第一步在碱性条件(如三乙胺，二异丙基乙基胺等)下发生取代反应；第二步是在碱性条件(三乙胺、氢化钠、叔丁醇钠等)下发生取代反应得到目标中间体；第三步是Suzuki Coupling反应与R3-Bpin或R3-B(OH)2欧联反应得到中间体；第四步为脱去保护基(如Boc)；第五步是与相应的酸或酰氯反应得到目标化合物。
制备方法3：
Figure BDA0003314220280000562
其中，R1，R2，R3，Q2，M2，L，W如上文中所定义。X是Cl、Br、或I。PG是氨基的保护基团，如Boc-、Cbz等，第一步是在缩合剂(如EDCI、HOBT、HATU等)条件下发生缩合反应，第二步是在碱条件(如氢化钠，甲醇钠，乙醇钠等)下环化反应，第三步是在三氯氧磷条件下发生氯代反应，第四步在碱性条件(如三乙胺，二异丙基乙基胺等)下发生取代反应；第五步是在碱性条件(三乙胺、氢化钠、叔丁醇钠等)下发生取代反应得到目标中间体；第六步是SuzukiCoupling反应与R3-Bpin或R3-B(OH)2偶联反应得到中间体；第七步为脱去保护基(如Boc)；第八步是与相应的酸或酰氯反应得到目标化合物。
制备方法4：
Figure BDA0003314220280000563
其中，R1，R2，R3，Q2，Q3，Rd，L，W如上文中所定义。X是Cl、Br、或I。PG是氨基的保护基团，如Boc-、Cbz等，第一步在碱性条件(如三乙胺，二异丙基乙基胺等)下发生取代反应；第二步是在碱性条件(三乙胺、氢化钠、叔丁醇钠等)下发生取代反应得到目标中间体；第三步是在强碱性条件(氰化钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、六甲基二硅基氨基钾等)下发生取代反应；第四步是Suzuki Coupling反应，卤代中间体与R3-Bpin或R3-B(OH)2偶联反应得到中间体；第五步为脱去保护基(如Boc)；第六步是与相应的酸或酰氯反应得到目标化合物。
实施例中提供其他一般合成方法。一般本领域普通技术人员显而易知，式(I)的化合物可根据一种或多种方法或以此项技术中已知的其他方式制备。显而易见的是，在一般情况下，当依循本文所述的一般路线时，需要使用经不同取代的起始物质和/或保护基来获得所要的化合物。还可在合成路线中的不同点添加不同取代基以制备所要的化合物。
本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、前药和溶剂化物的药物组合物。
本发明的又一方面提供使用本发明的化合物或药物组合物治疗疾病病状的方法，疾病病状包括但步限于与G12 KRAS、HRAS或NRAS突变的病状(例如癌症)。癌症是有G12C突变所介导的胰腺癌、肺癌、结直肠癌等。
本发明涉及式(I)的化合物具有较好的物理化学性质和安全毒性参数，可用于哺乳动物的癌症和炎症的治疗。
在其他实施例中，还提供抑制细胞群增殖的方法，该方法包括使细胞群与结构(I)的化合物中的任意一个接触。
其他实施方式涉及药物组合物。药物组合物包含任一种(或多种)前述化合物及药物可接受的载剂。在一些实施方式中，药物组合物系针对经口施用而配制。在其他实施方式中，药物组合物系针对注射而配制。在更多实施方式中，药物组合物包含本文公开的化合物及另一种治疗剂(例如抗癌剂)。这种治疗剂的非限制性实例描述于下文中。
适合给药途径包括但不限于经口、静脉内、直肠、气溶胶、非经肠、眼、肺、经黏膜、经皮、阴道、耳、鼻及局部给药。另外，仅举例而言，非经肠递送包括肌内、皮下、静脉内、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴管内及鼻内注射。
具体实施方式
如果没有另外指出，本发明全部公开内容采用以下术语定义：
术语“前药”是指可在生物体内转化为相应的活性药物化合物的任何衍生物。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
术语“药学上可接受的盐”，除非另有说明，包括可存在于本发明化合物中的酸性基团的盐(例如，但不限于，钾盐、钠盐、镁盐、钙盐等)或碱性基团的盐(例如，但不限于，甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐或硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐、碳酸盐等)。
术语“溶剂化物”是指在溶液中，溶质分子或离子通过库伦力、范德瓦尔斯力、电荷传递力、氢键等分子间力吸引相邻的溶剂分子形成的复合分子化合物。在一个实施方案中，溶剂为水，即本发明化合物形成水合物。
本发明化合物或其药物可接受的盐可含有一个或多个步对称中心，且因此可产生对映异构体、非对映异构体及其他立体异构形式，就氨基酸的绝对立体化学构型二言，其定义为(R)-或(S)-，或定义为(D)-或(L)-构型。本发明意欲包括所有这种可能的异构体，以及其外消旋及光学纯形式。光学活性(+)及(-)、(R)-及(S)-或(D)-及(L)-异构体可使用手性合成或手性制备，或使用常规技术(例如层析及分步结晶)解析而得。制备/分离个别对映异构体的常规技术包括自适合光学纯前驱物进行手性合成，使用例如手性高压液相层析(HPLC)解析外消旋物(或盐或衍生物的外消旋物)。本发明提供了纯异构体和异构体混合物，及其制备方法和用途，以及包括它们的组合物。为简便起见，下文中将其称为式(I)化合物，其既指纯的旋光异构体，如果合适也指不同比例的异构体混合物。
本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。
所述烷基、烯基、炔基、环烷基部分可各自独立地被一个或多个选自以下的基团任选取代：羟基、氧代、卤素、氰基、硝基、三氟甲基、叠氮基、氨基、羧基、巯基。
饱和或不饱和烃基，例如烷基、烷二基或烯基，包括与杂原子的结合，例如烷氧基，均可以分别是直链或带有支链的。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如Ar-L-R中L代表单键时表示该结构实际上是Ar-R。当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如Ar-L-R中L为空缺时，Ar-L-R表示该结构实际上是Ar。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所述的环包括单环，也包括螺环、并环和桥环等双环或多环体系。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5-7元环”是指环绕排列5-7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1-3个杂原子。因此，“5-7元环”包括例如苯基、吡啶基和哌啶基；另一方面，术语“5-7元杂环烷基”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合，表示由一定数目碳原子和至少一个杂原子，或杂原子团组成的，稳定的直链或支链的烷基原子团或其组合物。在一些实施方案中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。在另一些实施方案中，杂原子团选自-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-、-C(＝O)N(H)-、-N(H)-,-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-和-S(＝O)N(H)-。在一些实施方案中，所述杂烷基为C1-C6杂烷基；在另一些实施方案中，所述杂烷基为C1-C3杂烷基。杂原子或杂原子团可以位于杂烷基的任何内部位置，包括该烷基与分子其余部分的连接位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。杂烷基的实例包括但不限于-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-OCH2(CH3)2、-CH2-CH2-O-CH3、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCH2CH3、-N(CH3)(CH2CH3)、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-SCH3、-SCH2CH3、-SCH2CH2CH3、-SCH2(CH3)2、-CH2-SCH2-CH3、-CH2-CH2、-S(＝O)-CH3、-CH2-CH2-S(＝O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和-CH＝CHNCCH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。
除非另有规定，术语“杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示环化的“杂烷基”，其包括单环、双环和三环体系，其中双环和三环体系包括螺环、并环和桥环。此外，就该“杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。在一些实施方案中，所述杂环烷基为4～6元杂环烷基；在另一些实施方案中，所述杂环烷基为5～6元杂环烷基。杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基(包括四氢噻吩-2-基和四氢噻吩-3-基等)、四氢呋喃基(包括四氢呋喃-2-基等)、四氢吡喃基、哌啶基(包括1-哌啶基、2-哌啶基和3-哌啶基等)、哌嗪基(包括1-哌嗪基和2-哌嗪基等)、吗啉基(包括3-吗啉基和4-吗啉基等)、二噁烷基、二噻烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、1,2-噁嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基、高哌啶基或氧杂环庚烷基。
“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C1-C6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。在一些实施方案中，所述烷氧基为C1-C3烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和孓戊氧基。
除非另有规定，本发明术语“芳基”表示多不饱和的碳环体系，它可以是单环、双环或多环体系，其中至少一个环是芳香性的，所述双环和多环体系中的各个环稠合在一起。其可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，在一些实施方案中，所述芳基为C6-C12芳基；在另一些实施方案中，所述芳基为C6-C10芳基。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基(包括1-萘基和2-萘基等)。上述任意一个芳基环系的取代基选自本发明所述的可接受的取代基。
除非另有规定，本发明术语“杂芳基”是指含有1、2、3或4个独立选自B、N、O和S的杂原子的芳基，其可以是单环、双环或三环体系，其中氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文己经定义过的其他取代基)，且任选地被季铵化，氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p,p是1或2)。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。在一些实施方案中，所述杂芳基为5-10元杂芳基；在另一些实施方案中，所述杂芳基为5-6元杂芳基。所述杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基等)、吡唑基(包括2-吡唑基和3-吡唑基等)、咪唑基(包括咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基和5-咪唑基等)、噁唑基(包括2-噁唑基、4-噁唑基和5-噁唑基等)、三唑基(1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基和4H-1,2,4-三唑基等)、四唑基、异噁唑基(3-异噁唑基、4-异噁唑基和5-异噁唑基等)、噻唑基(包括2-噻唑基、4-噻唑基和5-噻唑基等)、呋喃基(包括2-呋喃基和3-呋喃基等)、噻吩基(包括2-噻吩基和3-噻吩基等)、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2-嘧啶基和4-嘧啶基等)、苯并噻唑基(包括5-苯并噻唑基等)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括2-苯并咪唑基等)、吲哚基(包括5-吲哚基等)、异喹啉基(包括1-异喹啉基和5-异喹啉基等)、喹喔啉基(包括2-喹喔啉基和5-喹喔啉基等)、喹啉基(包括3-喹啉基和6-喹啉基等)、吡嗪基、嘌呤基、苯基并噁哇基。上述任意一个杂芳基环系的取代基选自本发明所述的可接受的取代基。
合成
有机反应中常用的合适溶剂均可在以下本发明制备方法的各步反应中使用，例如，但不限于：脂肪族和芳香族的、任选烃或者卤化的烃(例如戊烷、己烷、庚烷、环己烷、石油醚、汽油、挥发油、苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、氯苯和邻二氯苯)，脂肪族和芳香族的、任选的醇类(例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、叔丁醇、乙二醇等)、醚(例如乙醚和二丁醚，乙二醇二甲醚和二甘醇二甲醚、四氢呋喃和二噁烷等)、酯(例如乙酸甲酯或乙酸乙酯等)、腈(例如乙腈或丙腈等)、酮(例如丙酮、丁酮等)、酰胺(例如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮等)，以及二甲基亚砜、四亚甲基砜和六甲基磷酰三胺和N,N-二甲基丙撑脲(DMPU)等。
本发明采用下述缩略词：DCM代表二氯甲烷；CHCl3代表三氯甲烷；EA代表乙酸乙酯；THF代表四氢呋喃；MeCN代表乙腈；MeOH代表甲醇；EtOH代表乙醇；i-PrOH代表异丙醇；PE代表石油醚；Toulene代表甲苯；DMSO代表二甲基亚砜；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DMA代表N,N-二甲基乙酰胺；CDCl3代表氘代氯仿；D2O代表重水；(CD3)2SO代表氘代DMSO；CD3OD代表氘代甲醇；CuI代表碘化亚铜；DIPEA代表二异丙基乙基胺；TEA代表三乙胺；K2CO3代表碳酸钾；Cs2CO3代表碳酸铯；Na2CO3代表碳酸钠；NaHCO3代表碳酸氢钠；NaOH代表氢氧化钠；KOH代表氢氧化钾；LiHMDS代表六甲基二硅基胺基锂；CDI代替1,1'-羰基咪唑；MS代表质谱；NMR代表核磁共振；TFA代表三氟乙酸；BINAP代表(2R,3S)-2.2'-二苯膦－1.1'-联萘；BOC代表叔丁氧羰基；Cbz代表苄氧羰基；DBU代表二环-1,5-二氮-5-十一烯；DCC代表1，3－二环己基碳化二亚胺；DCE代表1,2-二氯乙烷；DMAP代表4-二甲氨基吡啶；dppf代表双(二苯基膦基)二茂铁；LiAlH4代表氢化铝锂；LDA代表二异丙基胺基锂；m-CPBA代表间氯过氧苯甲酸；MTM代表二甲硫醚；NBS代表N-溴代丁二酰亚胺；NCS代表N-氯代丁二酰亚胺；NIS代表N-碘代丁二酰亚胺；PCC代表吡啶二铬酸盐；TBAF代表氟化四丁基胺；THP代表四氢吡喃基；TMEDA代表四甲基乙二胺；TMS代表三甲基硅烷基；TMP代表2,2,6,6-四甲基哌啶；Ts代表对甲苯磺酰基；Pd(PPh3)4代表四三苯基膦钯；PdCl2(dppf)代表1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯；Pd2(dba)3代表三二亚苄基丙酮二钯；HOBT代表1-羟基苯并三唑；HATU代表2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；TBTU代表O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯；Tf2O代表三氟乙酸酐；Pd(OAc)2代表二乙酸钯；RuPhos代表2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯；Pd(PPh3)2Cl2代表双三苯基膦二氯化钯；Sphos代表3，2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联；XantPhos代表4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽；MeONa代表甲醇钠；n-BuLi代表正丁基锂；t-BuONa代表叔丁醇钠；t-BuOK代表叔丁醇钾；KSCN代表硫氰化钾；CuBr代表溴化亚铜；NaNO2代表亚硝酸钠；Urea代表尿素；POCl3代表三氯氧磷；BBr3代表三溴化硼；NH4Cl代表氯化铵；MeI代表碘甲烷；NMP代表N-甲基吡咯烷酮；K3PO4代表磷酸钾；柱层析代表柱色谱分离；Ac代表乙酰基；Bn代表苄基；Fmoc代表芴甲氧羰基；Cy代表环己基；Tf代表三氟甲磺酰基；PDC代表重铬酸吡啶。
合成实施例：
中间体的制备：
4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷的合成
Figure BDA0003314220280000601
将化合物5-溴-1,2,3,4-四氢萘(5.00g,23.69mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(12.03g,47.37mmol)溶于无水1，4-二氧六环(50mL)中，加入醋酸钾(6.97g,71.07mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.73g,2.37mmol)，置换氮气，加热至100℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到淡黄色油状物。(5.0g，收率：82％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝6.9Hz,1H),7.11(s,1H),7.08(d,J＝7.3Hz,1H),3.03(t,J＝5.9Hz,2H),2.77(t,J＝5.8Hz,2H),1.78(dd,J＝7.1,4.3Hz,4H),1.34(s,12H).
中间体2-(4-氟-5,6,7,8-四氢萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷的合成：
Figure BDA0003314220280000602
将化合物5-溴-8-氟-1,2,3,4-四氢萘(2.00g,8.73mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(4.43g,17.46mmol)溶于无水1，4-二氧六环(30mL)中，加入醋酸钾(2.57g,26.19mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.64g,0.87mmol)，置换氮气，加热至100℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到淡黄色油状物。(2.1g，收率：87％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.63–7.54(m,1H),6.80(t,J＝8.8Hz,1H),3.03(s,2H),2.71(s,2H),1.82–1.72(m,4H),1.33(s,12H).
Figure BDA0003314220280000611
步骤1：5-氯-6-氟-1,4-二氢-1,4-环氧萘的合成
将化合物1-溴-3-氯-2,4-二氟苯(5.0g,21.98mmol)和呋喃(2.99g,43.97mmol)溶于无水甲苯(50mL)中，在氮气氛围下，将反应液冷却到-15℃后，向反应液中滴加n-BuLi(10.6mL,26.38mmol)，滴加完毕后，缓慢升至室温，搅拌反应12个小时，反应完毕后，用饱和氯化铵淬灭反应，用甲基叔丁基醚萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到棕色的油状物直接用于下一步。(4.3g，收率：100％)。
步骤2：8-氯-7-氟萘-1-醇的合成
将上一步得到的粗品化合物8-氯-7-氟萘-1-醇的合成5-氯-6-氟-1,4-二氢-1,4-环氧萘(4.3g,21.98mmol)溶于乙醇(10ml)和浓盐酸(8mL)中，加热至80℃搅拌反应4个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到棕色油状物，将次油状物放置在冰箱中24个小时，析出固体，用石油醚稀释，过滤并用石油醚洗，干燥得到类白色固体。1.3g，收率：30％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H),7.75(dd,J＝9.1,5.6Hz,1H),7.44–7.34(m,2H),7.30(d,J＝8.7Hz,1H),7.08(d,J＝7.1Hz,1H).
步骤3：三氟甲磺酸8-氯-7-氟萘-1-基酯的合成
将化合物8-氯-7-氟萘-1-醇(1.0g,5.08mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，加入DIEA(3.94g,30.51mmol)和分子筛(1g)，室温下搅拌10分子后，冷却至-40℃，向反应液中滴加三氟甲磺酸酐(1.86g,6.61mmol)，搅拌反应20分钟后，用水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到黄色固体。(1.65g,收率：98.8％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝8.1Hz,1H),7.84(dd,J＝9.0,5.4Hz,1H),7.59(d,J＝7.7Hz,1H),7.51(s,1H),7.44(s,1H).
步骤4：2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷的合成
将化合物三氟甲磺酸8-氯-7-氟萘-1-基酯(1.65g,5.02mmol)、频哪醇硼酸酯(2.53g,10.04mmol)溶于无水DMF(20mL)中，加入醋酸钾(2.44g,24.85mmol)和Pd(dppf)Cl2(366mg,0.50mmol)，置换氮气，在氮气氛围下搅拌反应12个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到类白色固体。1.25g，收率：82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(t,J＝10.4Hz,1H),7.75(dd,J＝9.0,5.5Hz,1H),7.70(d,J＝6.8Hz,1H),7.50–7.44(m,1H),7.32(t,J＝8.7Hz,1H),1.45(s,12H).
中间体(四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇的合成：
Figure BDA0003314220280000612
步骤1：2-(3-氯丙基)吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯的合成：2-甲基吡咯烷1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯(5.8g,25.3mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中，冷却至-78℃，滴加LiHMDS(1M/L,37.9mmol)，30分钟后加入1-溴-3-氯丙烷(19.9g,126mmol),室温反应2小时，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取，浓缩后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得透明油状物。(5.1g,收率：65.9％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.83–3.28(m,7H),2.39–1.68(m,8H),1.43(d,J＝13.1Hz,9H)。
步骤2：2-(3-氯丙基)吡咯烷-2-羧酸甲酯的合成：
1-(叔丁基)2-(3-氯丙基)吡咯烷-1,2-二羧酸2-甲酯(1g,3.27mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，室温反应1小时，浓缩至干，直接用于下一步反应。
步骤3：四氢-1H-吡咯嗪7a(5H)-羧酸甲酯的合成：
2-(3-氯丙基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(670mg,3.27mmol)溶于甲醇(10mL)中，加入碳酸钾(1.35g,9.81mmol)，碘化钾(670mg,0.327mmol)，室温反应2小时，过滤固体，滤液浓缩后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得透明油状物。(400mg,收率：72.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.72(s,3H),3.21–3.11(m,2H),2.64(d,J＝10.2Hz,2H),2.38–2.24(m,2H),1.86–1.76(m,4H),1.72–1.66(m,2H)。
步骤4：(四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇的合成：
四氢-1H-吡咯嗪7a(5H)-羧酸甲酯(400mg,2.37mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴下分批加入四氢铝锂(270mg,7.10mmol)，1小时后TLC(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)检测反应完全，加入十水硫酸钠，过滤固体，滤液浓缩得透明油状物。(290mg,收率：87％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.36–3.28(m,2H),2.96(dt,J＝10.4,6.1Hz,2H),2.64(ddd,J＝10.5,7.3,6.0Hz,2H),1.97–1.81(m,4H),1.73(dt,J＝12.6,6.8Hz,2H),1.64–1.52(m,2H)。
中间体(1R,5R)2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成：
Figure BDA0003314220280000621
步骤1：(2S,3S)-1-(叔丁氧羰基)-3-羟基吡咯烷-2-羧酸的合成：
(2S,3S)-3-羟基吡咯烷-2-羧酸(1.31g,10mmol)溶于四氢呋喃(20mL)与水(10mL)中，加入氢氧化钠(0.80g,20mmol)与Boc酸酐(3.30g,15mmol)，室温搅拌15小时，乙酸乙酯萃取，水层用1N盐酸调pH＝2.0，乙酸乙酯萃取，浓缩得白色固体。(1.5g,收率：65％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.82(s,1H),4.25(s,1H),3.62(q,J＝9.3Hz,1H),3.48(s,1H),2.12(dd,J＝8.9,4.5Hz,1H),1.94(ddd,J＝10.0,6.7,3.3Hz,1H),1.51(s,9H)。
步骤2：(2R,3S)-3-羟基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成：
(2S,3S)-1-(叔丁氧羰基)-3-羟基吡咯烷-2-羧酸(1.5g,6.5mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入硼烷二甲硫醚(2M/L,14.3mmol)，加热至回流3小时，冷却至室温，滴加甲醇淬灭反应，浓缩后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得透明油状物。(1.2g,收率：85.7％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.42–4.21(m,1H),3.66(d,J＝8.8Hz,2H),3.52–3.35(m,3H),2.19–2.04(m,1H),1.90–1.74(m,1H),1.47(s,9H)。
步骤3：(2R,3S)3-(甲基磺酰氧基)-2-((甲基磺酰氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：
(2R,3S)-3-羟基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.16g,5.3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，冰浴下加入三乙胺(2.26g,22.4mmol)，甲磺酰氯(1.83g,16mmol)，室温反应2小时，加入冰水，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后直接用于下一步反应。
步骤4：(1R,5R)-6-苄基-2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成：
(2R,3S)3-(甲基磺酰氧基)-2-((甲基磺酰氧基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.0g,5.3mmol)溶于甲苯(20mL)中，加入苄胺(1.71g,16mmol)，加热至110℃，反应15小时，冷却至室温，过滤固体，滤液浓缩后柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得淡黄油状物。(890mg,收率：58％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.42–7.18(m,5H),4.31–4.15(m,1H),3.99(d,J＝5.0Hz,1H),3.67(d,J＝14.7Hz,4H),3.18(dd,J＝6.4,4.3Hz,2H),1.69–1.53(m,2H),1.44(d,J＝15.2Hz,9H)。
步骤5：(1R,5R)2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯的合成：
(1R,5R)-6-苄基-2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-羧酸叔丁酯(145mg,0.5mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入钯碳(10％,100mg)，氢气球压力下反应20小时，过滤，滤液浓缩得透明固体。(90mg,收率：90.3％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.11(dd,J＝10.7,6.0Hz,1H),3.92(s,1H),3.72(td,J＝10.8,6.9Hz,2H),3.44–3.33(m,2H),2.07(tt,J＝16.0,7.9Hz,2H),1.47(d,J＝4.2Hz,12H)。
实施例1：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000631
步骤1：2-氯-3-氟-5-碘吡啶-4-胺
将化合物2-氯-3-氟吡啶-4-胺(4.22g,28.80mmol)溶于乙腈(50mL)中，然后加入NIS(7.77g,34.55mmol)和对甲基苯磺酸(248mg,1.44mmol)，加热至70℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，析出固体，过滤，用饱和硫代硫酸钠水溶液洗，水洗，真空干燥得到目标化合物直接用于下一步。(7.5g，收率：98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),4.83(s,2H).
步骤2：4-氨基-6-氯-5-氟烟腈的合成
将化合物2-氯-3-氟-5-碘吡啶-4-胺(7.7g,28.26mmol)和Zn(CN)2(4.32g,36.74mmol)溶于无水DMF(150mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(1.63g,1.41mmol)和4A分子筛(2.5g)，置换氮气，在氮气氛围下加热至100℃搅拌反应3个小时。反应完毕后，过滤除去固体，溶液冷却至室温，加入300mL水稀释反应液，析出固体，过滤，固体用水洗，真空干燥得到粗产品直接用于下一步。(4.85g,收率：100％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.20(s,1H),7.66(s,2H).
步骤3：4-氨基-6-氯-5-氟烟酸的合成
将化合物4-氨基-6-氯-5-氟烟腈(4.85g,28.26mmol)溶于50％H2SO4(50mL)中，加热至120℃搅拌反应6个小时。反应完毕后，冷却至室温，将反应液缓慢倒入碎冰中，析出固体，过滤，固体用水洗。用乙酸乙酯溶解固体，加入饱和碳酸钠水溶液洗，收集水相，水相用10％盐酸调节PH至2-3，析出固体，过滤，真空干燥得到类白色固体。(4.62g，收率：85.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36(s,1H),7.59(s,2H).
步骤4：7-氯-8-氟-4-羟基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2(1H)-硫酮的合成
将化合物4-氨基-6-氯-5-氟烟酸加入反应瓶中，然后加入POCl3(50mL)，加热至90℃搅拌反应4个小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩反应液得到油状物溶于无水四氢呋喃(20mL)中，然后滴加到硫氰酸铵(3.67g,48.28mmol)的四氢呋喃(80mL)中，室温搅拌反应24个小时。反应完毕后，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和使用水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色固体。然后加入10ml乙酸乙酯打浆，过滤，得到淡黄色固体。(4.52g,收率：80.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.29(s,1H),12.85(s,1H),8.64(s,1H).
步骤5：7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇的合成
将化合物7-氯-8-氟-4-羟基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2(1H)-硫酮(4.52g,19.51mmol)溶于无水DMF(50mL)中，然后加入甲醇钠(1.06g,19.51mmol)，室温下搅拌10分钟后，滴加碘甲烷(2.77g,1.21mL,19.51mmol)，室温搅拌反应2小时。反应完毕后，加入冷水稀释反应液，析出固体，过滤，固体用水洗，真空干燥得到黄色固体。(3.0g,收率：66％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.24(s,1H),8.81(s,1H),2.62(s,3H).
步骤6：4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶的合成
将化合物7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-醇(420mg,1.71mmol)溶于三氯氧磷(4mL)中，然后加入DIEA(442mg,3.42mmol)，加热至90℃反应3个小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩除去过量的三氯氧磷。然后溶于乙酸乙酯中，依次饱和食盐水和水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品直接用于下一步。(450mg,收率：100％)。
步骤7：(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物4,7-二氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶(450mg,1.71mmol)溶于无水DMF(10mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(1.10g,8.55mmol)和(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(339mg,1.71mmol)，在冰水浴冷却下搅拌10分钟后，然后加入二碳酸二叔丁酯(747mg,3.42mmol)，室温下搅拌反应16个小时。反应完毕后，搅拌下加入100mL冷水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到类白色固体。(710mg,收率：91.6％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),4.62(s,1H),4.45(dd,J＝13.9,3.5Hz,1H),4.28(d,J＝12.8Hz,1H),4.08(s,1H),3.84(s,1H),3.66(d,J＝8.6Hz,1H),3.39(s,1H),2.87–2.74(m,1H),2.69(dd,J＝16.8,5.9Hz,1H),2.64(s,3H),1.51(s,9H).
步骤8：(2S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲硫基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(700mg,1.55mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，在冰水浴冷却下加入85％间氯过氧苯甲酸(378mg,1.86mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应30分钟。反应完毕后，用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和碳酸氢钠和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品直接用于下一步。(725mg,收率：100％)。
步骤9：(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成：
将化合物(2S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(725mg,1.55mmol)溶于无水甲苯(10mL)中，然后加入(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(0.31g,2.71mmol)，在冰水浴冷却下加入叔丁醇钠(0.30g,3.09mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应30分钟。反应完毕后，用冷水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到类白色固体。(510mg,收率：63％)。
步骤10：(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg,0.08mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(30mg,0.12mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5/1(3mL)中，加入碳酸铯(76mg,0.23mmol)和Pd(PPh3)4(45mg,0.04mmol)，置换氮气，在氮气氛围下加热至95℃搅拌反应1个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离得到类白色固体。(20mg,收率：42％)。
步骤11：2-((S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg,0.03mmoL)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应1个小时。反应完毕后，浓缩反应液，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠溶液调节PH至8-9，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品直接用于下一步。(14mg,yield:98％)。
步骤12：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物2-((S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(14mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(5mg,0.03mmol)和丙烯酰氯(3mg,0.03mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后，用饱和碳酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(10mg,收率：62％％).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.10(s,1H),7.26-7.21(dd,m,3H),6.62-6.57(m,1H),6.48–6.31(m,1H),5.83(dd,J＝19.7,11.2Hz,1H),5.02(s,2H),4.62-4.58(m,1H),4.49-4.44(m,3H),4.10(d,J＝12.0Hz,1H),3.87-3.83(m,2H),3.65(dd,J＝13.5,6.8Hz,1H),3.57-3.51(m,2H),3.34-3.31(m,1H),3.14–2.95(m,2H),2.87-2.83(m,6H),2.75-2.71(m,1H),2.62(t,J＝5.7Hz,3H),2.30-2.25(m,2H),2.16-2.11(m,2H).MS m/z:570.75[M+H]+
实施例2：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000651
步骤1：(S)-4-(7-氯-8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(2S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.21mmol)溶于无水甲苯(3mL)中，在冰水浴冷却下加入(四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(46mg,0.32mmol)和叔丁醇钠(31mg,0.32mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应3个小时，反应完毕后，用冷水淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，柱层析分率得到类白色固体。(55mg,收率：47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),4.75(dt,J＝23.5,12.9Hz,3H),4.58(s,1H),4.31(d,J＝11.7Hz,1H),4.18–3.88(m,4H),3.82(t,J＝10.1Hz,1H),3.37(s,1H),3.23(dd,J＝16.7,8.9Hz,1H),3.01(s,2H),2.80(dd,J＝16.7,3.9Hz,1H),2.55–2.37(m,2H),2.34–2.21(m,3H),2.15(dt,J＝13.5,6.8Hz,2H),2.02(dd,J＝11.3,6.9Hz,2H),1.49(s,9H).
步骤2：(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-氯-8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(57mg,0.10mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(33mg,0.13mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5/1(3mL)中，加入碳酸铯(102mg,0.31mmol)和Pd(PPh3)4(60mg,0.05mmol)，置换氮气，在氮气氛围下加热至95℃搅拌反应1个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离得到类白色固体。(38mg，收率：57％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.09(s,1H),7.26-7.21(m,3H),4.82(s,2H),4.73–4.57(m,2H),4.41-4.38(m,1H),3.98-3.92(m,4H),3.87-3.82(m,1H),3.47-3.40(m,2H),3.23-3.20(m,1H),3.00(s,2H),2.87(t,J＝6.2Hz,2H),2.63-2.61(m,2H),2.54–2.38(m,2H),2.38–2.20(m,2H),2.14(s,2H),2.03-1.98(m,2H),1.81(d,J＝6.1Hz,2H),1.73-1.71(m,2H),1.50(s,9H).
步骤3：(S)-2-(4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(38mg,0.06mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应1个小时。反应完毕后，浓缩反应液，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠调节PH至8-9，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品直接用于下一步。(32mg,收率：100％)。
步骤4：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(5mg,0.033mmol)和丙烯酰氯(3mg,0.03mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后用饱和碳酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(8mg，收率：49％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.13(s,1H),7.21(d,J＝3.8Hz,3H),6.56(s,1H),6.38(d,J＝15.4Hz,1H),5.82(d,J＝9.6Hz,1H),4.82(s,2H),4.62(d,J＝14.6Hz,1H),4.47(d,J＝11.3Hz,1H),4.25-4.22(m,1H),3.93(s,4H),3.66(d,J＝4.6Hz,1H),3.35(dd,J＝16.9,7.6Hz,1H),3.15–2.94(m,4H),2.87(t,J＝6.1Hz,2H),2.63(d,J＝5.9Hz,2H),2.45(ddd,J＝26.5,13.0,6.6Hz,2H),2.28(dd,J＝16.8,8.4Hz,2H),2.18-2.11(m,2H),2.06-1.99(m,2H),1.81(d,J＝6.4Hz,2H),1.73(d,J＝6.2Hz,2H).MS m/z:596.68[M+H]+
实施例3：(S)-2-(4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000661
将化合物(S)-2-(4-(8-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15mg,0.03mmol)和2-氟丙烯酸(4mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入HATU(16mg,0.04mmol)，用冰水浴冷却至0℃-10℃后，加入DIEA(6mg,0.04mmol)，在0℃-10℃搅拌反应4个小时。反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液稀释反应液，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(8mg,收率：47％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),7.26-7.22(m,3H),5.60-5.38(m,1H),5.28(dd,J＝16.8Hz,1H),,4.82(s,2H),4.62(d,J＝14.6Hz,1H),4.47(d,J＝11.3Hz,1H),4.25-4.22(m,1H),3.93(s,4H),3.66(d,J＝4.6Hz,1H),3.35(dd,J＝16.9,7.6Hz,1H),3.15–2.94(m,4H),2.87(t,J＝6.1Hz,2H),2.63(d,J＝5.9Hz,2H),2.45(ddd,J＝26.5,13.0,6.6Hz,2H),2.28(dd,J＝16.8,8.4Hz,2H),2.18-2.11(m,2H),2.06-1.99(m,2H),1.81(d,J＝6.4Hz,2H),1.73(d,J＝6.2Hz,2H)MS m/z:614.6[M+H]+
应用制备方法1制备得到实施例4-48化合物
Figure BDA0003314220280000671
Figure BDA0003314220280000681
Figure BDA0003314220280000691
Figure BDA0003314220280000701
Figure BDA0003314220280000711
Figure BDA0003314220280000721
实施例49：2-((S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫色满-8-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000722
步骤1：4,4,5,5-四甲基-2-(硫代色满8-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷的合成
向圆底烧瓶中加入8-溴-硫代色满(114mg,0.5mmol)，双联频那醇硼酸酯(279mg，1.1mmol)，Pd(dppf)Cl2(37mg，0.05mmol)和醋酸钾(147mg，1.5mmol)。置换氮气后，加入预先除氧的无水1，4-二氧六环(5mL)。所得悬浊液在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，用水(20mL)和甲基叔丁基醚(20mL)萃取反应混合物。分层后，用甲基叔丁基醚萃取水相。合并后的有机相经饱和食盐水洗(50mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余黑褐色油状物经柱层析(硅胶,乙酸乙酯：石油醚＝1：40)纯化得无色粘稠物。(42mg,0.152mmol，收率：30％)
步骤2：(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫氰酸-8-基)吡啶基[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向圆底烧瓶中加入(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(52mg,0.1mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(硫代色满8-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷(42mg,0.15mmol)、四三苯基膦钯(46mg,0.4mmol)和碳酸铯(98mg,0.3mmol)。置换氮气后，加入预先脱氧的1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)。反应液在100℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯(15mL)和水(15mL)。摇震、分层后，水相被乙酸乙酯萃取(10mL×2)。合并后的有机相被饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余棕色粘稠物被制备TLC(硅胶,甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到浅黄色固体。(32mg,0.05mmol，收率：50％)MS m/z:634.7[M+H]+。
步骤3：2-((S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫色满-8-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
室温下，向(S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫氰酸-8-基)吡啶基[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(32mg,0.05mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时。加入二氯甲烷(7mL)并真空浓缩。向所得残留物中加入二氯甲烷(5mL)再次浓缩并重复此过程一次。所得黄色固体直接用于下一步。
步骤4：2-((S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫色满-8-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在室温下，向2-((S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(硫色满-8-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈和三乙胺(0.05mL，0.35mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中慢滴丙烯酰氯(0.01mL,0.122mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将反应液在室温下搅拌15分钟。加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)，摇振、分离后用二氯甲烷(10mL)萃取水相。合并有机相，经饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，旋蒸得粘稠物。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：8)纯化得到白色固体(17mg,两步总收率：57％)。MS m/z:588.6[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.11(s,1H),7.27(t,J＝7.7Hz,1H),7.16-7.12(m,2H),6.66-6.56(m,1H),6.42(d,J＝16Hz,1H),5.86(d,J＝12Hz,1H),5.10-4.98(m,2H),4.65–4.60(m,1H),4.52-4.40(m,2H),4.10–4.07(m,1H),3.85–3.81(m,1H),3.72–3.25(m,4H),3.06-2.78(m,10H),2.32–1.98(m,3H),1.80-1.55(m,3H).
实施例50：2-((S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-7-(异色胺-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000731
步骤1：2-(异色满-5-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷的合成
向圆底烧瓶中加入5-溴异色满(198mg,0.93mmol)，双联频那醇硼酸酯(709mg，2.8mmol)，Pd(dppf)Cl2(102mg，0.14mmol)和醋酸钾(274mg，2.8mmol)。置换氮气后，加入预先除氧的无水1，4-二氧六环(10mL)。所得悬浊液在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，用水(20mL)和甲基叔丁基醚(20mL)萃取反应混合物。分层后，用甲基叔丁基醚萃取水相。合并后的有机相经饱和食盐水洗(50mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余黑褐色油状物经柱层析(硅胶,乙酸乙酯：石油醚＝1：30)纯化得无色油状物。(196mg,0.754mmol，收率：81％)
步骤2：(S)-2-(氰甲基)-4-(8-氟-7-(异色满-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向圆底烧瓶中加入(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(55mg,0.106mmol)、2-(异色满-5-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷(52mg,0.2mmol)、四三苯基膦钯(49mg,0.0424mmol)和碳酸铯(104mg,0.32mmol)。置换氮气后，加入预先脱氧的1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)。反应液在100℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯(15mL)和水(15mL)。摇震、分层后，水相被乙酸乙酯萃取(10mL×2)。合并后的有机相被饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余棕色粘稠物被制备TLC(硅胶,甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到浅黄色粉末。(16mg,0.0259mmol，收率：24％)MS m/z:618.7[M+H]+。
步骤3：2-((S)-4-(8-氟-7-(等色胺-5-基)-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
室温下，向(S)-2-(氰甲基)-4-(8-氟-7-(异色满-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(16mg,0.0259mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时。加入二氯甲烷(7mL)并真空浓缩。向所得残留物中加入二氯甲烷(5mL)再次浓缩并重复此过程一次。所得黄色固体直接用于下一步。
步骤4：2-((S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-7-(异色胺-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在室温下，向2-((S)-4-(8-氟-7-(等色胺-5-基)-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈和三乙胺(0.06mL，0.42mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中慢滴丙烯酰氯(0.01mL,0.122mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将反应液在室温下搅拌15分钟。加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)，摇振、分离后用二氯甲烷(10mL)萃取水相。合并有机相，经饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，旋蒸得粘稠物。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到白色固体(3mg,0.0052mmol，两步总收率：20％)。MS m/z:572.7[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.11(s,1H),7.34-7.32(m,2H),7.13(d,J＝4.0Hz,1H),6.66-6.56(m,1H),6.42(d,J＝16Hz,1H),5.86(d,J＝12Hz,1H),5.10-4.98(m,2H),4.89(s,2H),4.56-4.40(m,3H),4.10–4.14(m,1H),3.94(t,J＝8.0Hz,2H),3.85–3.81(m,1H),3.72–3.25(m,2H),3.06-3.00(m,1H),2.80-2.52(m,7H),2.32–1.98(m,3H),1.80-1.55(m,3H).
实施例51：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(苯并[b]噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000741
步骤1：2-(苯并噻吩-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷的合成
向圆底烧瓶中加入7-溴苯并[b]噻吩(150mg,0.7mmol)，双联频那醇硼酸酯(533mg，2.1mmol)，Pd(dppf)Cl2(102mg，0.14mmol)和醋酸钾(206mg，2.1mmol)。置换氮气后，加入预先除氧的无水1，4-二氧六环(5mL)。所得悬浊液在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，用水(20mL)和甲基叔丁基醚(20mL)萃取反应混合物。分层后，用甲基叔丁基醚萃取水相。合并后的有机相经饱和食盐水洗(50mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余黑褐色油状物经柱层析(硅胶,乙酸乙酯：石油醚＝1：40)纯化得无色粘稠物。(160mg,0.615mmol，收率：99％)
步骤2：(S)-4-(7-(苯并噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向圆底烧瓶中加入(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(26mg,0.05mmol)、2-(苯并噻吩-7-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊烷(26mg,0.1mmol)、四三苯基膦钯(23mg,0.02mmol)和碳酸铯(29mg,0.15mmol)。置换氮气后，加入预先脱氧的1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)。反应液在100℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯(15mL)和水(15mL)。摇震、分层后，水相被乙酸乙酯萃取(10mL×2)。合并后的有机相被饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余棕色粘稠物被制备TLC(硅胶,甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到浅黄色固体。(16mg,0.0259mmol，收率：52％)MS m/z:618.7[M+H]+。
步骤3：2-((S)-4-(7-(苯并[b]噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
室室温下，向(S)-4-(7-(苯并噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(16mg,0.0259mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时。加入二氯甲烷(10mL)并真空浓缩。向所得残留物中加入二氯甲烷(5mL)再次浓缩并重复此过程一次。所得黄色固体直接用于下一步。
步骤4：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(苯并[b]噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在室温下，向2-((S)-4-(7-(苯并[b]噻吩-7-基)-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈和三乙胺(0.06mL，0.42mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中慢滴丙烯酰氯(0.01mL,0.122mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将反应液在室温下搅拌15分钟。加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)，摇振、分离后用二氯甲烷(10mL)萃取水相。合并有机相，经饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，旋蒸得粘稠物。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：8)纯化得到浅黄色粉末(10mg,0.0175mmol，两步总收率：67％)。MS m/z:572.6[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.24(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.57-7.53(m,2H),7.45(d,J＝4.0Hz,1H),6.66-6.56(m,1H),6.40(d,J＝16Hz,1H),5.86(d,J＝12Hz,1H),5.10-4.98(m,2H),4.67-4.65(m,1H),4.57-4.49(m,2H),4.10–4.14(m,1H),3.89–3.85(m,1H),3.70–3.30(m,2H),2.86(s,3H),2.75-2.65(m,1H),2.32–1.70(m,8H).
实施例52：2-((2S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000751
步骤1：4,4,5,5-四甲基-2-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷的合成
向圆底烧瓶中加入2-溴-1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚(180mg,0.86mmol)，双联频那醇硼酸酯(655mg，2.58mmol)，Pd(dppf)Cl2(126mg，0.172mmol)和醋酸钾(253mg，2.58mmol)。置换氮气后，加入预先除氧的无水1，4-二氧六环(6mL)。所得悬浊液在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，用水(20mL)和甲基叔丁基醚(20mL)萃取反应混合物。分层后，用甲基叔丁基醚萃取水相。合并后的有机相经饱和食盐水洗(50mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余黑褐色油状物经柱层析(硅胶,乙酸乙酯：石油醚＝1：40)纯化得无色粘稠物。(101mg,0.395mmol，收率：46％)
步骤2：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
向圆底烧瓶中加入(S)-4-(7-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.058mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷(26mg,0.104mmol)、四三苯基膦钯(27mg,0.023mmol)和碳酸铯(57mg,0.174mmol)。置换氮气后，加入预先脱氧的1,4-二氧六环(2mL)和水(0.4mL)。反应液在100℃下搅拌3小时。加入乙酸乙酯(15mL)和水(15mL)。摇震、分层后，水相被乙酸乙酯萃取(10mL×2)。合并后的有机相被饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余棕色粘稠物被制备TLC(硅胶,甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到浅黄色固体。(15mg,0.0244mmol，收率：42％)MS m/z:614.7[M+H]+。
步骤3：2-((2S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
室室温下，向(2S)-2-(氰基甲基)-4-(8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15mg,0.0244mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中滴加三氟乙酸(1mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时。加入二氯甲烷(10mL)并真空浓缩。向所得残留物中加入二氯甲烷(5mL)再次浓缩并重复此过程一次。所得黄色固体直接用于下一步。
步骤4：2-((2S)-1-丙烯酰-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在室温下，向2-((2S)-4-(8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)吡啶[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈和三乙胺(0.03mL，0.21mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中慢滴丙烯酰氯(0.005mL,0.061mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液。将反应液在室温下搅拌15分钟。加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)，摇振、分离后用二氯甲烷(10mL)萃取水相。合并有机相，经饱和食盐水洗(10mL)，硫酸钠干燥，旋蒸得粘稠物。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：8)纯化得到浅黄色粉末(10mg,0.0176mmol，两步总收率：72％)。MS m/z:568.6[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.09(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.37-7.35(m,2H),6.66-6.56(m,1H),6.42(d,J＝16Hz,1H),5.86(d,J＝12Hz,1H),5.04-4.98(m,2H),4.61–4.45(m,3H),4.11–4.07(m,1H),3.81–3.76(m,1H),3.60–3.38(m,1H),3.34-3.24(m,2H),3.06-2.97(m,2H),2.83(s,3H),2.75-2.70(m,1H),2.48-2.44(m,1H),2.32–1.80(m,8H),1.10-1.04(m,1H),0.15-0.11(m,1H).
应用制备方法1制备得到实施例53-72化合物
Figure BDA0003314220280000761
Figure BDA0003314220280000771
Figure BDA0003314220280000781
Figure BDA0003314220280000791
实施例73：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000801
步骤1：(S)-4-(7-溴-2-氯喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4-二氯喹唑啉(200mg,0.72mmol)溶于DMF(5mL)中，然后加入DIEA(465mg,3.60mmol)和(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(142mg,0.72mmol)，室温下搅拌反应30分钟。然后加入二碳酸二叔丁酯(472mg,2.16mmol)，加热至60℃反应搅拌反应16个小时。反应完毕后，搅拌下加入20mL冷水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到类白色固体。(200mg，收率：60％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝1.9Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,1H),7.60(dd,J＝8.9,1.9Hz,1H),4.68(s,1H),4.37(d,J＝13.3Hz,1H),4.27(d,J＝11.7Hz,1H),4.15(d,J＝7.1Hz,1H),3.71(dd,J＝13.6,3.7Hz,1H),3.59–3.48(m,1H),3.42(s,1H),2.87(s,1H),2.75(s,1H),1.54(s,9H).
步骤2：(S)-4-(7-溴-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(149mg,1.29mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)中，在冰水浴冷却下加入60％NaH(52mg,1.29mmol)，室温下搅拌反应20分钟后，加入(S)-4-(7-溴-2-氯喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.43mmol)，室温下搅拌反应1个小时。反应完毕后，用冷水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和是用水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到类白色固体。(200mg,收率：85％)
步骤3：(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.06mmol)和2-(8-氯萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(19mg,0.07)溶于二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入碳酸铯(54mg,0.17mmol)和Pd(PPh3)4(30mg,0.03mmol)，置换氮气，加热至90℃搅拌反应1小时。反应完毕后，冷却至室温，加水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(28mg,收率：80％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.96(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),7.90(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.82(d,J＝8.5Hz,1H),7.75(t,J＝1.7Hz,1H),7.60–7.52(m,2H),7.45(dd,J＝5.6,2.7Hz,1H),7.33(dd,J＝8.5,1.6Hz,1H),7.23(d,J＝7.6Hz,1H),4.86(d,J＝5.8Hz,1H),4.71(s,1H),4.57(d,J＝11.5Hz,1H),4.47–4.25(m,2H),4.15(s,1H),3.64–3.22(m,4H),3.01–2.55(m,6H),2.25(d,J＝6.3Hz,1H),2.18–1.89(m,3H),1.54(s,9H).
步骤4：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(28mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，在室温下搅拌反应一个小时。反应完毕后，浓缩反应液，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠水溶液调节PH至8-9，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品直接用于下一步。(23mg,收率：100％)。
步骤5：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(23mg,0.04mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(8mg,0.06mmol)和丙烯酰氯(5mg,0.05mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后，用饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离得到类白色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.96-7.74(m,4H),7.54(d,J＝7.1Hz,2H),7.43(d,J＝4.9Hz,2H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),6.70-6.61(m,1H),6.49–6.32(m,1H),5.84(d,J＝10.5Hz,1H),5.42-5.34(m,1H),5.13-5.06(m,1H),4.71-4.67(m,1H),4.55–4.31(m,2H),3.89–3.43(m,4H),3.10-2.88(m,6H),2.33(s,2H),2.21-1.96(m,4H).MS m/z:581.58[M+H]+
实施例74：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(6-氯-8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基喹唑啉-4-基哌嗪-2-基乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000811
步骤1：化合物2-氨基-3-氟-4-溴苯甲酰胺的合成
将化合物2-氨基-3-氟-4-溴苯甲酸(5.0g，20mmol)溶于50ml DMF中，搅拌溶解后在室温下一次加入TBTU(16.0g,50mmol)，NH4Cl(27.0g,50mmol),DIEA(14ml，80mmol)，反应体系在室温下搅拌3小时。反应结束后，向反应体系中加入约300ml的水，有大量固体析出。待固体不在析出时，抽滤得到淡黄色固体直接用于下一步。(3.7g，收率：74％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.92(s,2H),7.66(s,1H),6.94(s,1H),6.25(s,2H).
步骤2：化合物7-溴-8-氟喹唑啉-2,4-二醇的合成
将化合物2-氨基-4-溴-5-氯苯甲酰胺(3.6g，14.4mmol)溶于40ml DMF中，搅拌溶解后在室温下一次加入CDI(9.3g,57.7mmol)，K2CO3(8.0g,50mmol),反应体系加热到80℃搅拌过夜。反应结束后，向反应体系中加入约300ml的水，有大量固体析出。待固体不在析出时，抽滤得到淡黄色固体直接用于下一步。(3.9g，收率：90％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.34(s,1H),11.40(s,1H),8.12(s,1H),7.93(s,1H).
步骤3：化合物7-溴-2,4-二氯-8-氟喹唑啉的合成
将化合物7-溴-6-氯喹唑啉-2,4-二醇(3.9g,14mmol)溶于50ml的POCl3中，室温下加入约5ml N,N-二乙基苯胺。将反应体系加热到110℃搅拌过夜。反应结束后，将反应体系减压出去溶剂得粗产物。粗产物经柱层析分离(石油醚)得到黄色的固体。(2.62g,60％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.93(s,1H).
步骤4：(S)-4-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4,6-三氯喹唑啉(312mg,1mmol)和DIEA(0.6ml,3.5mmol)溶于10ml的DMF中，在冰水浴条件下分批加入2-氰基哌嗪(198mg,1mmol)。反应搅拌恢复至室温，TLC监测反应结束后，加入Boc2O(0.6ml,2.5mmol),反应在室温条件下继续搅拌2小时，反应结束后，向反应体系中加入约70ml的饱和氯化钠溶液，并用乙酸乙酯萃取分液。有机相经无水硫酸钠干燥后，减压除去溶剂得淡黄色固体直接用于下一步反应。(450mg,收率90％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(s,1H),7.95(s,1H),3.5(m,1H),3.38-3.13(m,4H),3.02-2.98(m,2H),2.73(m,1H),2.48(m,1H),1.42(s,9H).
步骤5：叔丁基(S)-4-(7-溴-8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸盐的合成
将(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(173mg,1.5mmol)溶于超干THF(15mL)中，冰水浴条件下，加入60％的氢化钠(36mg,1.5mmol),搅拌30min后，加入化合物(S)-4-(7-溴-2,6-二氯喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.5mmol)，反应体系在室温搅拌一个小时。待反应结束后，向反应体系中加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取分液后，有机相用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂后的得到粗产物，粗产物经柱色谱分离得淡黄色固体。(133mg,收率：50％)。
步骤6：叔丁基(S)-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸的合成
将化合物叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸盐(64mg,0.11mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(43mg,0.17mmol)和Cs2CO3(72mg,0.22mmol)溶于1,4-二氧六环和水(4ml/1ml)的共溶剂中,抽换氮气后加入Pd(PPh3)4催化剂(13mg,0.01mmol)。反应体系在90℃下搅拌一小时，反应结束后，将反应体系用乙酸乙酯萃取，分液，有机相干燥后减压除去溶剂得粗产物。粗产物经柱色谱分离得淡黄色固体(50mg,收率：80％)。
步骤7：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(6-氯-8-氟-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基喹唑啉-4-基哌嗪-2-基乙腈的合成
将化合物叔丁基(S)-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(31mg,0.1mmol)溶于DCM和CF3COOH(3ml/1ml)的共溶剂中，室温搅拌一个小时，反应结束后将反应体系里的有机溶剂减压除去，加入二氯甲烷溶解后再次旋干，同样的操作再重复一次。得到的粗产物直接用于下一步的反应溶于3ml超干二氯甲烷中，加入三乙胺(0.1ml,0.5mmol)和丙烯酰氯(0.05ml,0.2mmol)后，反应体系在室温条件下搅拌一小时。反应结束后，将反应体系旋干，加入乙酸乙酯溶解，有机相用饱和碳酸钠溶液中和，萃取分液后，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后得粗产物，粗产物经PLC分离后得类白色固体。(10mg,收率：34％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),8.23(s,1H),7.27(m,1H),7.21(m,1H),7.02(m,1H),6.62(m,1H),6.04(m,1H),5.58(m,1H),3.65-3.40(m,3H),3.38-3.13(m,4H),3.02-2.98(m,2H),2.85(m,1H),2.75-2.70(m,5H),2.50-2.30(m,3H),2.26(s,3H),1.74-1.41(m,8H).MS m/z:585.27[M+H]+
实施例75：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成：
Figure BDA0003314220280000831
步骤1：化合物2-氨基-4-溴-5-氯苯甲酰胺的合成
将化合物2-氨基-4-溴-5-氯苯甲酸(5.0g，20mmol)溶于50ml DMF中，搅拌溶解后在室温下一次加入TBTU(16.0g,50mmol)，NH4Cl(27.0g,50mmol),DIEA(14ml，80mmol)，反应体系在室温下搅拌3小时。反应结束后，向反应体系中加入约300ml的水，有大量固体析出。待固体不在析出时，抽滤得到淡黄色固体直接用于下一步。(3.6g，收率：72％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(s,2H),7.68(s,1H),6.96(s,1H),6.27(s,2H).
步骤2：化合物7-溴-6-氯喹唑啉-2,4-二醇的合成
将化合物2-氨基-4-溴-5-氯苯甲酰胺(3.6g，14.4mmol)溶于40ml DMF中，搅拌溶解后在室温下一次加入CDI(9.3g,57.7mmol)，K2CO3(8.0g,50mmol),反应体系加热到80℃搅拌过夜。反应结束后，向反应体系中加入约300ml的水，有大量固体析出。待固体不在析出时，抽滤得到淡黄色固体直接用于下一步。(3.9g，收率：90％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.34(s,1H),11.40(s,1H),8.12(s,1H),7.93(s,1H).
步骤3：化合物7-溴-2,4,6-三氯喹唑啉的合成
将化合物7-溴-6-氯喹唑啉-2,4-二醇(3.9g,14mmol)溶于50ml的POCl3中，室温下加入约5ml N,N-二乙基苯胺。将反应体系加热到110℃搅拌过夜。反应结束后，将反应体系减压出去溶剂得粗产物。粗产物经柱层析分离(石油醚)得到黄色的固体。(2.62g,60％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.12(s,1H),7.93(s,1H).
步骤4：化合物(S)-4-(7-溴-2,6-二氯喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4,6-三氯喹唑啉(312mg,1mmol)和DIEA(0.6ml,3.5mmol)溶于10ml的DMF中，在冰水浴条件下分批加入2-氰基哌嗪(198mg,1mmol)。反应搅拌恢复至室温，TLC监测反应结束后，加入Boc2O(0.6ml,2.5mmol),反应在室温条件下继续搅拌2小时，反应结束后，向反应体系中加入约70ml的饱和氯化钠溶液，并用乙酸乙酯萃取分液。有机相经无水硫酸钠干燥后，减压除去溶剂得淡黄色固体直接用于下一步反应。(450mg,收率90％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(s,1H),7.95(s,1H),3.5(m,1H),3.38-3.13(m,4H),3.02-2.98(m,2H),2.73(m,1H),2.48(m,1H),1.42(s,9H).
步骤5：叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸盐的合成
将(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(173mg,1.5mmol)溶于超干THF(15mL)中，冰水浴条件下，加入60％的氢化钠(36mg,1.5mmol),搅拌30min后，加入化合物(S)-4-(7-溴-2,6-二氯喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg,0.5mmol)，反应体系在室温搅拌一个小时。待反应结束后，向反应体系中加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取分液后，有机相用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂后的得到粗产物，粗产物经柱色谱分离得淡黄色固体。(150mg,收率：52％)。
步骤6：叔丁基(S)-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸的合成
将化合物叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸盐(64mg,0.11mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(43mg,0.17mmol)和Cs2CO3(72mg,0.22mmol)溶于1,4-二氧六环和水(4ml/1ml)的共溶剂中,抽换氮气后加入Pd(PPh3)4催化剂(13mg,0.01mmol)。反应体系在90℃下搅拌一小时，反应结束后，将反应体系用乙酸乙酯萃取，分液，有机相干燥后减压除去溶剂得粗产物。粗产物经柱色谱分离得淡黄色固体(62mg,收率：89％)。
步骤7：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物叔丁基(S)-4-(6-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸(62mg,0.1mmol)溶于DCM和CF3COOH(3ml/1ml)的共溶剂中，室温搅拌一个小时，反应结束后将反应体系里的有机溶剂减压除去，加入二氯甲烷溶解后再次旋干，同样的操作再重复一次。得到的粗产物直接用于下一步的反应溶于3ml超干二氯甲烷中，加入三乙胺(0.1ml,0.5mmol)和丙烯酰氯(0.05ml,0.2mmol)后，反应体系在室温条件下搅拌一小时。反应结束后，将反应体系旋干，加入乙酸乙酯溶解，有机相用饱和碳酸钠溶液中和，萃取分液后，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后得粗产物，粗产物经PLC分离后得类白色固体。(20mg,收率：34％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),8.23(s,1H),7.27(m,1H),7.21(m,1H),7.02(m,1H),6.62(m,1H),6.04(m,1H),5.58(m,1H),3.65-3.40(m,3H),3.38-3.13(m,4H),3.02-2.98(m,2H),2.85(m,1H),2.75-2.70(m,5H),2.50-2.30(m,3H),2.26(s,3H),1.74-1.41(m,8H).MS m/z:585.27[M+H]+
实施例76：1-(4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的合成
Figure BDA0003314220280000841
步骤1：4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(56mg,0.11mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(43mg,0.17mmol)和Cs2CO3(72mg,0.22mmol)溶于1,4-二氧六环和水(4ml/1ml)的共溶剂中,抽换氮气后加入Pd(PPh3)4催化剂(13mg,0.01mmol)。反应体系在90℃下搅拌一小时，反应结束后，将反应体系用乙酸乙酯萃取，分液，有机相干燥后减压除去溶剂得粗产物。粗产物经柱色谱分离得淡黄色固体(33mg,收率：50％)。
步骤2：1-(4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的合成
将化合物4-(6-氯-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(33mg,0.05mmol)溶于DCM和CF3COOH(3ml/1ml)的共溶剂中，室温搅拌一个小时，反应结束后将反应体系里的有机溶剂减压除去，加入二氯甲烷溶解后再次旋干，同样的操作再重复一次。得到的粗产物直接用于下一步的反应溶于3ml超干二氯甲烷中，加入三乙胺(0.1ml,0.5mmol)和丙烯酰氯(0.05ml,0.2mmol)后，反应体系在室温条件下搅拌一小时。反应结束后，将反应体系旋干，加入乙酸乙酯溶解，有机相用饱和碳酸钠溶液中和，萃取分液后，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后得粗产物，粗产物经PLC分离后得类白色固体。(8mg,收率：28％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.00(s,1H),7.27(m,1H),7.11(m,1H),7.02(m,1H),6.62(m,1H),6.04(m,1H),5.58(m,1H),3.65-3.40(m,2H),3.38-3.13(m,4H),2.85(m,1H),2.75-2.70(m,5H),2.50-2.30(m,3H),2.26(s,3H),1.74-1.41(m,8H).MS m/z:585.27[M+H]+
实施例77：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280000851
步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物2,4,7-三氯吡啶并[2,3-d]嘧啶(200mg,0.85mmol)溶于无水DMF(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(552mg,4.27mmol)和(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(169mg,0.85mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应10分钟，然后加入二碳酸二叔丁酯(372g,1.70mmol)，加热至40℃搅拌反应3个小时。反应完毕后，冷却至室温，加入饱和食盐水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到淡黄色固体。(335mg,收率：93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),4.65(s,1H),4.47(dd,J＝13.9,3.0Hz,1H),4.30(d,J＝12.0Hz,1H),4.12(d,J＝7.1Hz,1H),3.82(d,J＝12.2Hz,1H),3.69(s,1H),3.54(s,1H),3.02–2.87(m,1H),2.80(d,J＝13.8Hz,1H),1.52(s,9H).
步骤2：(S)-4-(7-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-2-(氰基甲基)-4-(2,7-二氯吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.24mmol)和(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(82mg,0.71mmol)溶于无水1，4-二氧六环(5mL)中，加入DIEA(92mg,0.71mmol)，加热至80℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(70mg,收率：59％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.26(d,J＝8.6Hz,1H),5.04(s,1H),4.82(s,1H),4.61(s,1H),4.45(d,J＝13.9Hz,1H),4.21(d,J＝12.6Hz,1H),4.07(s,1H),3.73(d,J＝10.6Hz,2H),3.64–3.47(m,2H),3.45–3.25(m,2H),2.95(s,3H),2.86–2.61(m,3H),2.28(s,2H),2.10(d,J＝21.3Hz,2H),1.51(s,9H).
步骤3：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-氯-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.06mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(19mg,0.07mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5/1(3mL)中，加入碳酸铯(59mg,0.18mmol)和Pd(PPh3)4(35mg,0.03mmol)，置换氮气，在氮气氛围下加热至95℃搅拌反应1个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离得到类白色固体。(27mg，收率：75％)。MS m/z:598.84[M+H]+.
步骤4：2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(27mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，在室温下搅拌反应1个小时。反应完毕后，浓缩反应液，加入饱和碳酸钠水溶液和二氯甲烷，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗产物直接用于下一步。
步骤5：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成将化合物2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(22mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(8mg,0.06mmol)和丙烯酰氯(5mg,0.05mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后，加入饱和碳酸钠淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(18mg，收率：74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.22-7.16(m,3H),6.59(s,1H),6.41(d,J＝16.3Hz,1H),5.84(d,J＝11.7Hz,1H),5.02(s,2H),4.84(d,J＝11.2Hz,1H),4.47(d,J＝14.0Hz,1H),4.37-4.34(m,1H),3.84(d,J＝10.3Hz,1H),3.77-3.49(m,4H),3.08(ddd,J＝16.9,11.4,7.7Hz,2H),2.97(s,3H),2.89-2.73(m,6H),2.42–2.17(m,4H),2.09-2.03(m,4H).MS m/z:552.64[M+H]+.
应用制备方法2制备得到实施例78-614化合物
Figure BDA0003314220280000861
Figure BDA0003314220280000871
Figure BDA0003314220280000881
Figure BDA0003314220280000891
Figure BDA0003314220280000901
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Figure BDA0003314220280001031
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Figure BDA0003314220280001061
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Figure BDA0003314220280001121
Figure BDA0003314220280001131
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Figure BDA0003314220280001241
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Figure BDA0003314220280001451
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Figure BDA0003314220280001481
Figure BDA0003314220280001491
Figure BDA0003314220280001501
Figure BDA0003314220280001511
Figure BDA0003314220280001521
Figure BDA0003314220280001531
Figure BDA0003314220280001541
Figure BDA0003314220280001551
实施例615：(S)-1-(4-(6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的合成
Figure BDA0003314220280001561
步骤1：2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸的合成
将2-氨基-4-溴-3-氟苯甲酸(2.30g，10mmol)和NCS(1.60g,12mmol)溶于30ml的DMF中，反应体系在70℃条件下搅拌过夜。反应结束后，向反应体系中加入300ml水，有大量固体析出。抽滤干燥称重得淡黄色固体。(1.34g,收率：50％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.11(s,1H),7.63(s,1H),6.62(s,2H)。
步骤2：7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-2,4-二醇的合成
将2-氨基-4-溴-5-氯-3-氟苯甲酸(1.34g,5mmol)和尿素(1.5g,25mmol)放入50ml单口瓶中，在氮气保护的条件下将反应体系加热到180℃，反应三个小时后，向反应体系加入30ml 1N/mol的NaOH溶液，搅拌，有大量不溶固体析出，抽滤得到淡黄色固体。(514mg,35％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.40(s,1H),11.34(s,1H),7.70(s,1H)。
步骤3：7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉的合成
将化合物7-溴-6-氯-8-氟喹唑啉-2,4-二醇(500mg,1.73mmol)溶于10ml三氯氧磷中，加入1ml DMF，将反应体系加热到110℃,搅拌过夜。反应结束后，将三氯氧磷减压除去得黑色糊状液体。在冰水浴条件下加入冰水并搅拌，有大量固体析出，抽滤干燥后得到黄色固体.(300mg,54％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(s,1H)。
步骤4：4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(300mg,0.9mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(167.4mg,0.9mmol)溶于4ml的1,4-二氧六环中，加入DIEA(0.5ml，2.25mmol)后，反应体系在55℃条件下加热三个小时。反应结束后，减压除去溶剂得到粗产物，粗产物经DCM溶解后，有机相用0.5mol/L的HCl洗涤三次，萃取分液后，有机相经干燥后减压除去得黄色固体。(414mg,收率：96％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(s,1H),3.73(m,4H),3.32(m,4H),1.44(s,9H)。
步骤5：(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将化合物4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(414mg,0.86mmol)和K2CO3(240mg,1.72mmol)溶于30ml的超干乙腈中，加入(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(96mg,0.86mmol)。反应体系在氮气保护的条件下加热到90℃,搅拌6个小时。反应结束后，减压除去溶剂得到粗产物，粗产物经柱色谱分离(DCM:MeOH＝10:1)得到棕色固体。(170mg,35％)
步骤6：叔丁基(S)-4-(6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-(((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-甲酸的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(38mg,0.05mmol),6-氟-1,2,3,4-四氢喹啉(26mg,0.18mmol),t-BuONa(34mg,0.34mmol),RuPhos(38mg,0.08mmol)溶于6ml甲苯中，抽换氮气后，加入Pd2(dba)3(38mg,0.04mmol),继续抽换氮气后，反应在100℃条件下反应过夜。反应结束后，减压除去溶剂得到粗产物。粗产物经柱色谱分离得淡黄色目标产物。(70mg,65％)。
步骤7：(S)-6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉的合成
将化合物叔丁基(S)-4-(6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-(((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-甲酸(62mg,0.1mmol)溶于DCM和CF3COOH(3ml/1ml)的共溶剂中，室温搅拌一个小时，反应结束后将反应体系里的有机溶剂减压除去，加入二氯甲烷溶解后再次旋干，同样的操作再重复一次。得到的粗产物直接用于下一步的反应。(53mg,收率：100％)
步骤8：(S)-1-(4-(6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮的合成
将化合物(S)-6-氯-8-氟-7-(6-氟-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)-2-((1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉(53mg,0.1mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(80mg,0.60mmol)，然后加入丙烯酰氯(18mg,0.13mmol)，在冰水浴下搅拌反应10分钟。反应完毕后用饱和碳酸氢钠淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，PLC分离(二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到类白色固体。(30mg,收率：50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47(d,J＝9.1Hz,1H),7.31–7.23(m,1H),6.93–6.80(m,1H),6.71(s,1H),6.54(dd,J＝16.7,10.5Hz,1H),6.30(d,J＝16.7Hz,1H),5.71(d,J＝11.9Hz,1H),5.12(s,1H),4.67(d,J＝10.9Hz,1H),4.10(t,J＝8.1Hz,2H),3.80(s,7H),3.13(t,J＝8.2Hz,2H),2.95(s,3H),2.77(s,1H),2.37–1.86(m,5H),1.61(s,4H).MS m/z:583.23[M+H]+
应用实施例615的方法制备得到实施例616-619化合物
Figure BDA0003314220280001571
Figure BDA0003314220280001581
实施例620：(S)-4-(4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
Figure BDA0003314220280001582
步骤1：4-溴-2-(2-氰基乙酰胺基)苯甲酸甲酯的合成
将化合物2-氨基-4-溴苯甲酸甲酯(10g,43.47mmol)和氰基乙酸(4.44g,52.16mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，在冰水浴冷却下加入EDCI(12.5g,65.10mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应1个小时。反应完毕后，加入水稀释反应液，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到目标化合物。(12.9g，收率：100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.73(s,1H),8.88(d,J＝1.5Hz,1H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.32(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),3.97(s,3H),3.61(s,2H).
步骤2：7-溴-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈
将化合物4-溴-2-(2-氰基乙酰胺基)苯甲酸甲酯(12.9g,43.42mmol)溶于无水甲醇(100mL)中，在冰水浴冷却下滴加30％的甲醇钠溶液(11.73g,65.13mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应30分钟，反应完毕后，用10％盐酸水溶液调PH至2-3，加入100mL水稀释反应液，析出固体，过滤，真空干燥得到类白色固体。(11.18g,收率：97％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),7.90(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝1.8Hz,1H),7.37(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H).
步骤3：7-溴-2,4-二氯喹啉-3-甲腈的合成
将化合物7-溴-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈(11.0g,41.50mmol)溶于乙腈(10mL)和POCl3(40mL)中，加热至90℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩得到淡黄色固体直接用于下一步。(12.53g,收率：100％)。
步骤4：(S)-4-(7-溴-2-氯-3-氰基喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4-二氯喹啉-3-甲腈(5.00g,16.56mmol)溶于无水DMF(50mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(12.84g,16.42mL,99.36mmol)，然后加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(3.6g,18.22mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应10分钟，然后加入二碳酸二叔丁酯(7.25g,33.12mmol)，室温下搅拌反应16个小时。反应完毕后，搅拌下加入100mL冷水稀释反应液，析出固体，过滤，固体用水洗，真空干燥得到淡黄色固体直接用于下一步。(7.2g,收率：88.59％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝1.8Hz,1H),7.84(d,J＝9.0Hz,1H),7.71(dd,J＝9.0,1.8Hz,1H),4.76(s,1H),4.20(s,1H),4.07(dd,J＝12.5,3.5Hz,1H),3.76(d,J＝13.0Hz,1H),3.67(d,J＝11.7Hz,1H),3.56(s,1H),3.44(s,1H),2.83(s,2H).
步骤5:(S)-4-(7-溴-3-氰基-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成：
将化合物(四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(44mg,0.31mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，在冰水浴冷却下加入60％NaH(13mg,0.31mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应20分钟后，(S)-4-(7-溴-2-氯-3-氰基喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.20mmol)加入反应液中，室温搅拌反应4个小时。反应完毕后，用冷水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到米黄色固体。(100mg,收率：82.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05–7.99(m,1H),7.77–7.68(m,1H),7.57–7.48(m,1H),4.81–4.62(m,3H),4.18(s,1H),4.00(dd,J＝12.4,3.5Hz,1H),3.82(d,J＝42.0Hz,2H),3.66(dd,J＝29.7,12.2Hz,2H),3.49(s,1H),3.35(t,J＝11.2Hz,1H),3.06–2.72(m,4H),2.29(d,J＝20.6Hz,4H),2.11(d,J＝5.8Hz,2H),1.98(s,2H),1.53(s,9H).
步骤6：(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-3-氰基-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-3-氰基-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35mg,0.06mmol)和2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(22mg,0.07mmol)溶于二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入碳酸铯(58mg,0.18mmol)和Pd(PPh3)4(34mg,0.03mmol)，置换氮气，加热至90℃搅拌反应1小时。反应完毕后，冷却至室温，加水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到米黄色固体。(22mg，收率：53％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝8.2Hz,1H),7.87(dd,J＝9.4,3.7Hz,1H),7.83(s,1H),7.57–7.50(m,2H),7.48–7.36(m,4H),4.93(dd,J＝20.0,11.4Hz,1H),4.84–4.65(m,2H),4.20(s,1H),4.11–3.97(m,3H),3.91–3.65(m,2H),3.46(d,J＝39.4Hz,3H),3.00(s,3H),2.93–2.70(m,1H),2.58–2.28(m,4H),2.22–1.95(m,4H),1.54(s,9H).
步骤7：(S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
将化合物(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-3-氰基-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(22mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应一个小时。反应完毕后，浓缩反应液除去过量的三氟乙酸，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠水溶液洗，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体直接用于下一步。(19mg,收率：100％)。
步骤8：(S)-4-(4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
将化合物(S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈(18mg,0.03mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(7mg,0.05mmol)和丙烯酰氯(3.2mg,0.04mmol)，在冰水浴下搅拌反应10分钟。反应完毕后用饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(18mg,收率：91.7％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94-7.84(m,4H),7.55–7.38(m,4H),6.67-6.64(m,1H),6.42(d,J＝16.7Hz,1H),5.85(d,J＝10.3Hz,1H),4.92(dd,J＝20.6,11.8Hz,1H),4.71(d,J＝11.6Hz,1H),4.16–3.75(m,6H),3.49(s,1H),3.01(s,4H),2.58–2.25(m,4H),2.15-2.12(m,2H),2.09–1.94(m,2H).MS m/z:649.67[M+H]+
实施例621：(S)-4-(4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
Figure BDA0003314220280001601
步骤1：4-溴-2-(2-氰基乙酰胺基)-5-氟苯甲酸甲酯的合成
将化合物2-氨基-4-溴-5-氟苯甲酸甲酯(1.2g,4.84mmol)和氰基乙酸(0.49g,5.81mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，在冰水浴冷却下加入EDCI(1.39g,7.26mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应1个小时。反应完毕后，加入水稀释反应液，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到目标化合物。(1.5g，收率：98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.58(s,1H),8.97(d,J＝6.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),3.99(s,3H),3.60(s,2H).
步骤2：7-溴-6-氟-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈的合成
将化合物4-溴-2-(2-氰基乙酰胺基)-5-氟苯甲酸甲酯(1.5g,4.76mmol)溶于无水甲醇(10mL)中，在冰水浴冷却下滴加30％的甲醇钠溶液(1.29g,7.14mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应30分钟，反应完毕后，用10％盐酸水溶液调PH至2-3，加入50mL水稀释反应液，析出固体，过滤，真空干燥得到类白色固体。(1.35g,收率：100％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.47(s,1H),7.82(d,J＝9.3Hz,1H),7.53(d,J＝5.9Hz,1H).
步骤3：7-溴-2,4-二氯-6-氟喹啉-3-甲腈的合成
将化合物7-溴-6-氟-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈(0.24g,0.85mmol)溶于乙腈(1mL)和POCl3(4mL)中，加热至90℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩得到淡黄色固体直接用于下一步。(271mg,收率：100％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(d,J＝6.3Hz,1H),7.94(d,J＝8.3Hz,1H).
步骤4：(S)-4-(7-溴-2-氯-3-氰基-6-氟喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4-二氯-6-氟喹啉-3-甲腈(271mg,0.85mmol)溶于无水DMF(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(659mg,5.09mmol)，然后加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(185mg,0.93mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应10分钟，然后加入二碳酸二叔丁酯(372mg,1.70mmol)，室温下搅拌反应16个小时。反应完毕后，搅拌下加入30mL冷水稀释反应液，析出固体，过滤，固体用水洗，真空干燥得到淡黄色固体直接用于下一步。(400mg，收率：93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(d,J＝6.6Hz,1H),7.64(d,J＝9.0Hz,1H),4.76(s,1H),4.21(s,1H),4.08(dd,J＝12.4,3.6Hz,1H),3.78–3.33(m,4H),2.83(qd,J＝16.9,7.6Hz,2H),1.53(s,9H).
步骤5：(S)-4-(7-溴-3-氰基-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(44mg,0.31mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，在冰水浴冷却下加入60％NaH(13mg,0.31mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应20分钟后，(S)-4-(7-溴-2-氯-3-氰基-6-氟喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.20mmol)加入反应液中，加热至60℃搅拌反应2个小时。反应完毕后，冷却至室温，用冷水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(100mg,收率：83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝6.6Hz,1H),7.53(d,J＝9.1Hz,1H),4.75(s,3H),4.19(s,1H),4.01(dd,J＝12.4,3.5Hz,1H),3.82(d,J＝42.0Hz,2H),3.66(dd,J＝29.7,12.2Hz,2H),3.49(s,1H),3.35(t,J＝11.2Hz,1H),3.06–2.72(m,4H),2.29(d,J＝20.6Hz,4H),2.11(d,J＝5.8Hz,2H),1.98(s,2H),1.53(s,9H).
步骤6：(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-3-氰基-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-3-氰基-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.05mmol)和2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(22mg,0.07mmol)溶于二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入碳酸铯(58mg,0.18mmol)和Pd(PPh3)4(34mg,0.03mmol)，置换氮气，加热至90℃搅拌反应1小时。反应完毕后，冷却至室温，加水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到米黄色固体。(20mg,收率：57％)。MS m/z:714[M+H]+
步骤7：(S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
将化合物(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-3-氰基-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应一个小时。反应完毕后，浓缩反应液除去过量的三氟乙酸，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠水溶液洗，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体直接用于下一步。(17mg,收率：100％)。
步骤8：(S)-4-(4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈的合成
将化合物(S)-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-6-氟-2-((四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹啉-3-甲腈(17mg,0.03mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(7mg,0.05mmol)和丙烯酰氯(3.2mg,0.04mmol)，在冰水浴下搅拌反应10分钟。反应完毕后用饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(10mg,收率：54％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93-7.84(m,4H),7.55–7.38(m,3H),6.67-6.63(m,1H),6.41(d,J＝16.7Hz,1H),5.84(d,J＝10.3Hz,1H),4.93(dd,J＝20.6,11.8Hz,1H),4.72(d,J＝11.6Hz,1H),4.17–3.75(m,6H),3.49(s,1H),3.01(s,4H),2.58–2.25(m,4H),2.15-2.12(m,2H),2.09–1.94(m,2H).MS m/z:667.6[M+H]+
实施例622：4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-3-腈的合成
Figure BDA0003314220280001611
步骤1：4-溴-5-氯-2-(2-氰基乙酰胺基)苯甲酸甲酯的合成
将化合物2-氨基-4-溴-5-氯苯甲酸甲酯(1.0g,3.78mmol)和氰基乙酸(0.39g,4.53mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，在冰水浴冷却下加入EDCI(1.08g,5.67mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应1个小时。反应完毕后，加入水稀释反应液，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到目标化合物。(1.19g，收率：95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.63(s,1H),9.03(s,1H),8.13(s,1H),3.99(s,3H),3.61(s,2H).
步骤2：7-溴-6-氯-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈的合成
将化合物4-溴-2-(2-氰基乙酰胺基)-5-氯苯甲酸甲酯(1.19g,3.59mmol)溶于无水甲醇(10mL)中，在冰水浴冷却下滴加30％的甲醇钠溶液(0.97g,5.39mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应30分钟，反应完毕后，用10％盐酸水溶液调PH至2-3，加入50mL水稀释反应液，析出固体，过滤，真空干燥得到类白色固体。(1.07g,收率：100％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.40(s,1H),8.06(s,1H),7.57(s,1H).
步骤3：7-溴-2,4,6-三氯喹啉-3-甲腈的合成
将化合物7-溴-6-氯-2,4-二羟基喹啉-3-甲腈(0.20g,0.67mmol)溶于乙腈(1mL)和POCl3(4mL)中，加热至90℃搅拌反应16个小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩得到淡黄色固体直接用于下一步。(225mg,收率：100％)。
步骤4：(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-3-氰基喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成
将化合物7-溴-2,4,6-三氯喹啉-3-甲腈(225mg,0.67mmol)溶于无水DMF(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(518mg,4.01mmol)，然后加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈2盐酸盐(146mg,0.74mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应10分钟，然后加入二碳酸二叔丁酯(2922mg,1.34mmol)，室温下搅拌反应4个小时。反应完毕后，搅拌下加入30mL冷水稀释反应液，析出固体，过滤，固体用水洗，真空干燥得到淡黄色固体直接用于下一步。(230mg,收率：89％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.05(s,1H),4.78(s,1H),4.51(s,1H),4.26(d,J＝22.4Hz,1H),3.82–3.39(m,4H),3.10(d,J＝13.7Hz,1H),2.83(qd,J＝16.9,7.6Hz,2H),1.55(s,9H).
步骤5：(S)-4-(7-溴-6-氯-3-氰基-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(40mg,0.34mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，在冰水浴冷却下加入60％NaH(14mg,0.34mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应20分钟后，S)-4-(7-溴-2,6-二氯-3-氰基喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.11mmol)加入反应液中，加热至60℃搅拌反应2个小时。反应完毕后，冷却至室温，用冷水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(50mg,收率：83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),7.92(s,1H),4.75(s,1H),4.60(s,1H),4.19(s,1H),4.02(dd,J＝12.4,3.6Hz,1H),3.71–3.31(m,6H),2.84(s,3H),2.72(s,3H),2.52(s,1H),2.18(s,1H),2.03(s,1H),1.91(s,3H),1.53(s,9H).
步骤6：(S)-4-(6-氯-3-氰基-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-6-氯-3-氰基-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25mg,0.04mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(13mg,0.05mmol)溶于二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入碳酸铯(40mg,0.12mmol)和Pd(PPh3)4(24mg,0.02mmol)，置换氮气，加热至90℃搅拌反应1小时。反应完毕后，冷却至室温，加水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到米黄色固体。(27mg,收率：100％)。MS m/z:655.7[M+H]+
步骤7：6-氯-4-((S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-3-甲腈的合成
将化合物(S)-4-(6-氯-3-氰基-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(27mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应一个小时。反应完毕后，浓缩反应液除去过量的三氟乙酸，然后溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸钠水溶液洗，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到类白色固体直接用于下一步。(23mg,收率：100％)。
步骤8：4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-3-腈的合成
将化合物6-氯-4-((S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5,6,7,8-四氢萘-1-基)喹啉-3-甲腈(23mg,0.04mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(7mg,0.05mmol)和丙烯酰氯(5mg,0.05mmol)，在冰水浴下搅拌反应10分钟。反应完毕后用饱和碳酸钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，TLC分离纯化得到类白色固体。(8mg，收率：32％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.73(t,J＝10.6Hz,1H),7.19(t,J＝5.1Hz,2H),6.96(dd,J＝10.4,6.6Hz,1H),6.61(d,J＝10.6Hz,1H),6.43(d,J＝15.8Hz,1H),5.87(d,J＝10.9Hz,1H),4.69(s,1H),4.07(d,J＝12.9Hz,1H),3.93–3.69(m,3H),3.48(s,2H),3.01(d,J＝8.4Hz,2H),2.87-2.55(m,6H),2.54–2.14(m,4H),1.88-1.74(m,10H).MS m/z:609.67[M+H]+.
应用制备方法3制备得到实施例623-839的化合物。
Figure BDA0003314220280001631
Figure BDA0003314220280001641
Figure BDA0003314220280001651
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Figure BDA0003314220280001841
Figure BDA0003314220280001851
Figure BDA0003314220280001861
Figure BDA0003314220280001871
实施例840：2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈
Figure BDA0003314220280001872
步骤1：7-溴-2,4-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶的合成
室温下，向7-溴吡啶并[3,2-d]嘧啶-2,4-二酚(1.04g,4.3mmol)和三氯氧磷(10mL)的混合物中加入氮，氮-二乙基苯胺(1.41g，9.45mmol)。所得浅黄色悬浊液被搅拌5分钟，再在110℃油浴中加热搅拌16小时。冷却至室温后，减压浓缩。剩余物与甲苯(20mL×2)混合并被减压浓缩。得到浅棕色固体直接用于下一步反应。
步骤2：(S)-2-(4-(7-溴-2-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在冰水浴中向7-溴-2,4-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶和四氢呋喃(30mL)的混合物中一次性加入氮，氮-二异丙基乙胺(4.27mL，25.8mmol)。搅拌2分钟后，加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈盐酸盐(0.85g，4.3mmol)。反应液逐渐升到室温并搅拌5小时。该反应液不经处理直接用于下一步反应。
步骤3：(S)-4-(7-溴-2-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
室温下，向上一步的反应液中加入三乙胺(0.6mL，4.3mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(1.31g，6mmol)。反应液在室温下搅拌17小时。加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)萃取、分液。用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗，硫酸钠干燥，减压浓缩的深褐色粘稠物。柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：20至乙酸乙酯：石油醚＝1：5)纯化得到黄色固体。(210mg，0.449mmol，三步总产率：10％)。MS m/z:467.4[M+H]+。
步骤4:(S)-4-(7-溴-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成：
将溶于(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(77mg,0.67mmol)四氢呋喃(2mL),0℃下，加入氢化钠(16mg,0.67mmol),室温下反应0.5h。然后，加入化合物(S)-4-(7-溴-2-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.22mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液，室温条件下继续反应1h。反应混合液在减压条件下浓缩，PLC纯化得化合物(S)-4-(7-溴-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(82mg,67％)。MS m/z:[M+H]+＝546.6。
步骤5:(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成：
将化合物(S)-4-(7-溴-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.091mmol)和2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(56.1mg,0.18mmol)溶于1,4-二氧六环(2.0mL)。氮气氛围下，依次加入Pd(PPh3)4(31.7mg,0.027mmol)、碳酸铯(89.4mg,0.27mmol)和水(0.1mL)，然后加热至100℃，并在此温度下搅拌反应5h。反应混合液在减压条件下浓缩，PLC纯化得化合物(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35.5mg,60％)。MS m/z:[M+H]+＝646.7。
步骤6:2-((S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶基[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成：
将化合物(S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(34mg,0.053mmol)溶于CH2Cl2(1.5mL)，并滴加TFA(0.5mL)。反应液在室温下搅拌直至反应结束。然后，反应液用10％NaOH水溶液调节至pH＝10，分液，CH2Cl2萃取，饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，减压下浓缩得化合物2-((S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶基[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(24.3mg,84％)。MS m/z:[M+H]+＝546.6。
步骤7:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成：
将化合物2-((S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(23mg,0.042mmol)和三乙胺(13mg,0.13mmol)溶于CH2Cl2(1.0mL)，然后向溶液中滴加丙烯酰氯(7.6mg,0.08mmol)，室温下搅拌1h。反应液加压条件下浓缩，PLC纯化得化合物2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(24mg,94％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.59(s,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(dd,J＝8.9,5.5Hz,2H),7.56(dd,J＝15.5,7.4Hz,1H),7.50–7.38(m,2H),7.05–6.81(m,1H),6.45–6.30(m,1H),5.81(dd,J＝21.5,10.7Hz,1H),4.76–4.68(m,1H),4.43(s,1H),4.25–3.28(m,5H),3.05–2.91(m,4H),2.49–1.87(m,10H).MS m/z:[M+H]+＝600.6
应用实施例840的制备方法制备得到实施例841-853化合物
Figure BDA0003314220280001891
Figure BDA0003314220280001901
实施例854：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280001902
步骤1：(1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲醇的合成
将化合物(1-(氨基甲基)环丙基)甲醇(500mg,4.94mmol)和1,4-二溴丁烷(1.12g,5.19mmol)溶于乙腈(20mL)中，然后加入碳酸钾(1.78g,12.85mmol)，室温下搅拌反应12个小时。反应完毕后，过滤除去固体。浓缩有机相，柱层析分离(DCM/7M NH3 in MeOH＝100/1)得到无色油状物。(390mg,收率：50.8％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.55(s,2H),2.70–2.53(m,6H),1.83–1.69(m,4H),0.49(q,J＝4.6Hz,2H),0.36(t,J＝5.2Hz,2H).
步骤2：(S)-4-(7-氯-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(2S)-4-(7-氯-8-氟-2-(甲基亚磺酰基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg,0.21mmol)和(1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲醇(37mg,0.23mmol)溶于无水甲苯(3mL)中，在冰水浴冷却下加入叔丁醇钠(25mg,0.25mmol)，继续搅拌反应30分钟。反应液完毕后用冷水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，制备TLC分离纯化得到类白色固体。(50mg,收率：42％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.78(s,1H),4.62(s,1H),4.42(q,J＝10.9Hz,3H),4.29(d,J＝12.8Hz,1H),4.08(s,1H),3.88(s,1H),3.66(s,1H),3.46(s,1H),2.87–2.77(m,1H),2.73(d,J＝5.7Hz,1H),2.53(s,6H),1.74(s,4H),1.51(s,9H),0.68(s,2H),0.51(s,2H).
步骤3：(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-氯-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.09mmol)、2-(8-氯萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(34mg,0.12mmol)和碳酸铯(87mg,0.27mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入Pd(PPh3)4(52mg,0.04mmol)，置换氮气3次，加热至100℃搅拌反应2个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，制备TLC分离纯化得到类白色固体。(20mg，收率：33％)。
步骤4：(S)-2-(4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌反应30分钟。反应完毕后，浓缩反应液得到粗品直接用于下一步。
步骤5：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(17mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(5mg,0.03mmol)和丙烯酰氯(3mg,0.03mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，制备TLC分离纯化得到类白色固体。(10mg,收率：50％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),8.01(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.88(d,J＝8.1Hz,1H),7.66–7.50(m,3H),7.42(td,J＝7.8,2.4Hz,1H),6.59(s,1H),6.42(d,J＝16.8Hz,1H),5.85(d,J＝10.8Hz,1H),5.08(s,1H),4.46(d,J＝10.5Hz,4H),3.90(d,J＝103.6Hz,5H),3.06(s,1H),2.82(d,J＝17.1Hz,2H),2.55(s,4H),1.78(s,4H),0.73(s,2H),0.57(s,2H).MS m/z:[M+H]+＝640.59
实施例855：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280001911
步骤1：(S)-4-(7-溴-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲醇(84mg,0.54mmol)溶于无水THF(5mL)中，在冰水浴冷却下加入60％NaH(20mg,0.50mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应20分钟后，加入化合物(S)-4-(7-溴-2-氯-8-氟喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.41mmol)，室温下搅拌反应8个小时。反应完毕后，用冷水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得到浅黄色的固体。(150mg,收率：61％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(d,J＝9.1Hz,1H),7.38(dd,J＝9.0,6.0Hz,1H),4.65(s,1H),4.42(s,2H),4.24(d,J＝12.2Hz,1H),4.16(d,J＝10.8Hz,2H),3.54(dd,J＝13.8,3.6Hz,1H),3.32(d,J＝10.4Hz,2H),2.87–2.69(m,2H),2.50(s,6H),1.71(s,4H),1.52(s,11H),0.67(s,2H),0.48(s,2H).
步骤2：(S)-4-(7-(8-氯萘)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成
将化合物(S)-4-(7-溴-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg,0.22mmol)、2-(8-氯萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(93mg,0.0.32mmol)和碳酸钾(60mg,0.43mmol)溶于1,4-二氧六环/水＝5/1(3mL)中，然后加入Pd(dppf)Cl2(31mg,0.04mmol)，置换氮气3次，加热至100℃搅拌反应2个小时。反应完毕后，冷却至室温，用水稀释反应液，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，制备TLC分离纯化得到类白色固体。(80mg，收率：54.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.88(d,J＝7.4Hz,1H),7.54(dd,J＝14.2,4.9Hz,3H),7.45–7.38(m,2H),7.23(d,J＝6.6Hz,1H),4.70(s,1H),4.36(dd,J＝30.7,19.9Hz,4H),4.14(s,1H),3.55(d,J＝11.7Hz,1H),3.36(s,2H),2.87(s,2H),2.51(s,4H),1.71(s,4H),1.53(s,9H),0.67(s,2H),0.47(s,2H).
步骤3：(S)-2-(4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-4-(7-(8-氯萘)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg,0.12mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，在室温下搅拌反应1小时。反应完毕后，浓缩反应液得到粗品直接用于下一步。
步骤4：(S)-2-(1-丙烯酰基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物(S)-2-(4-(7-(8-氯萘-1-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(68mg,0.12mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，在冰水浴冷却下加入DIEA(18mg,0.14mmol)和丙烯酰氯(12mg,0.13mmol)，在冰水浴冷却下搅拌反应5分钟。反应完毕后，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，制备TLC分离纯化得到类白色固体。(42mg,收率：56％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.88(d,J＝7.4Hz,1H),7.68–7.60(m,1H),7.55(dd,J＝9.7,8.0Hz,2H),7.43(dd,J＝7.8,2.3Hz,2H),7.26(m,1H),6.61(s,1H),6.42(d,J＝16.8Hz,1H),5.84(d,J＝10.5Hz,1H),5.16(s,1H),4.54–4.26(m,4H),4.02(s,1H),3.53(d,J＝89.6Hz,4H),3.01(s,1H),2.89(d,J＝34.6Hz,1H),2.51(s,6H),1.72(s,4H),0.69(s,2H),0.48(s,2H).MS m/z:[M+H]+＝639.61.
应用实施例854和855的制备方法制备得到实施例856-871化合物
Figure BDA0003314220280001921
Figure BDA0003314220280001931
Figure BDA0003314220280001941
实施例872：2-((2S)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280001942
Figure BDA0003314220280001951
步骤1：5-溴-1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚的合成
二乙基锌/正己烷(1M，423mL)的无水二氯甲烷(200mL)溶液在冰水浴中冷却。滴加三氟乙酸(31mL，423mmol)的无水二氯甲烷(200mL)溶液。在此温度下搅拌20分钟后，加入二碘甲烷(34.3mL，423mmol)的无水二氯甲烷(100mL)溶液。继续搅拌20分钟后，缓慢滴加7-溴-1H-茚(22g，113mmol)的无水二氯甲烷(100mL)溶液。移走冰水浴，搅拌16小时得到白色悬浊液。在搅拌下缓慢加入稀盐酸(0.1M，500mL)。所得混合物被石油醚(500mL+200mL)萃取。合并有机相，经饱和碳酸氢钠溶液(300mL)洗，饱和食盐水(300mL)洗，硫酸钠干燥，真空浓缩得到黄色油状物。柱层析(硅胶，石油醚)得到5-溴-1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚产品为浅黄色油状物(22g，105mmol，产率93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24-7.20(m,2H),7.00-6.96(m,1H),3.13(dd,J＝17.6,6.7Hz,1H),2.97(d,J＝17.6Hz,1H),2.46-2.41(m,1H),1.91-1.85(m,1H),1.12-1.06(m,1H),0.13-0.10(m,1H)
步骤2：4,4,5,5-四甲基-2-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷的合成
向圆底烧瓶中加入5-溴-1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚(30g,144mmol)，双联频那醇硼酸酯(72.9g，287mmol)，Pd(dppf)Cl2(21g，28.7mmol)和醋酸钾(42g，431mmol)。置换氮气后，加入预先除氧的无水1，4-二氧六环(400mL)。所得悬浊液在100℃下搅拌16小时。冷却至室温后，用水(500mL)和甲基叔丁基醚(500mL)萃取反应混合物。分层后，用甲基叔丁基醚(300mL)萃取水相。合并后的有机相经饱和食盐水洗(300mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余黑褐色油状物经柱层析(硅胶,乙酸乙酯：石油醚＝1：40)纯化得无色油状物，经放置缓慢变成浅黄色固体(26g,101mmol，收率：70％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.38(dd,J＝8.0,0.2Hz,1H),7.11(t,J＝8.0Hz,1H),3.29(dd,J＝17.6,6.7Hz,1H),3.20(d,J＝17.6Hz,1H),2.36-2.31(m,1H),1.88-1.81(m,1H),1.55(s,12H),1.05-1.00(m,1H),0.06-0.01(m,1H)
步骤3：叔丁基(2S)-2-(氰甲基)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
向圆底烧瓶中加入(S)-4-(7-溴-8-氟-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg,0.53mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊烷(244mg,0.954mmol)、Pd(dppf)Cl2(78mg,0.106mmol)和碳酸钾(146mg,1.06mmol)。置换氮气后，加入预先脱氧的1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)。反应液在100℃下搅拌4小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)。摇震、分液后，水相被乙酸乙酯萃取(20mL)。合并后的有机相被饱和食盐水洗(20mL)，硫酸钠干燥，真空旋干。剩余棕色粘稠物被制备TLC(硅胶,甲醇：二氯甲烷＝1：9)纯化得到浅黄色固体。(140mg,0.228mmol，收率：43％)MS m/z:613.4[M+H]+。
步骤4：2-((2S)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
室室温下，向叔丁基(2S)-2-(氰甲基)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸酯(29mg,0.047mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中滴加三氟乙酸(0.8mL)。所得溶液在室温下搅拌4小时。加入二氯甲烷(10mL)并真空浓缩。向所得残留物中加入二氯甲烷(5mL)再次浓缩并重复此过程一次。所得黄色固体直接用于下一步。
步骤5：2-((2S)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在冰水浴中冷却2-氟丙烯酸(8.5mg，0.095mmol)和HATU(27mg，0.071mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液。滴加三乙胺(0.026mL，0.189mmol)。撤掉冰水浴搅拌20分钟。一次性加入2-((2S)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的二氯甲烷(2mL)溶液。在室温下搅拌6小时。加入二氯甲烷(17mL)、水(15mL)和饱和碳酸钠溶液(5mL)，摇震、分液，用二氯甲烷(20mL)萃取水相。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，硫酸钠干燥，减压旋蒸得到黄色固体。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：8)纯化得到2-((2S)-4-(8-氟-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(1,1a,6,6a-四氢环丙烷[a]茚-5-基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(60mg，0.103mmol，两步总产率：63％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.26–7.21(m,2H),7.09(d,J＝7.8Hz,1H),5.46(d,J＝16Hz,1H),5.27(dd,J＝16.4,4.0Hz,1H),4.99–4.94(m,1H),4.64(dd,J＝8.0,4.0Hz,1H),4.44(d,J＝16Hz,1H),4.34(d,J＝16Hz,1H),3.73–3.40(m,6H),3.16–3.05(m,2H),2.86(s,3H),2.77-2.73(m,1H),2.45-2.41(m,1H),2.30-2.25(m,1H),2.30-2.25(m,1H),2.16-2.00(m,3H),1.88-1.83(m,1H),1.11-1.06(m,1H),0.14-0.12(m,1H).MS m/z:[M+H]+＝585.4.
应用实施例872的制备方法制备得到实施例873-902化合物
Figure BDA0003314220280001961
Figure BDA0003314220280001971
Figure BDA0003314220280001981
Figure BDA0003314220280001991
Figure BDA0003314220280002001
Figure BDA0003314220280002011
Figure BDA0003314220280002021
Figure BDA0003314220280002031
Figure BDA0003314220280002041
实施例915：2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯啉-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈的合成
Figure BDA0003314220280002042
步骤1：叔丁基(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在冰水浴中向7-溴-2,4,6-三氯-8-氟喹唑啉(2.5g，7.58mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(30mL)的混合物中一次性加入氮，氮-二异丙基乙胺(4.27mL，25.8mmol)。搅拌2分钟后，加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈盐酸盐(1.50g，7.60mmol)。反应在冰水浴中室温并搅拌1小时。
室温下，向上述反应液中加入氮，氮-二异丙基乙胺(1.42mL，8.6mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(1.96g，9mmol)。反应液在室温下搅拌4小时。加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取、分液。用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。合并有机相，用水(50mLx3)洗，饱和食盐水(50mL)洗，硫酸钠干燥，减压浓缩的深褐色粘稠物。柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：10至乙酸乙酯：石油醚＝1：5)纯化得到黄色固体。(3.8g，7.32mmol，产率：96％)。MS m/z:518.2[M+H]+。
步骤2:叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
用冰水浴冷却((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(1.4g,8.78mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液。加入氢化钠(0.32g,8.05mmol),室温下反应0.5h。加入叔丁基(S)-4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(3.8g,7.32mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液，室温条件下继续反应1h。加入乙酸乙酯(100mL)和稀释的碳酸钠水溶液(100mL)萃取，水相被乙酸乙酯(50mL)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗，硫酸钠干燥，减压条件下浓缩得浅褐色固体。经柱层析(硅胶，甲醇：二氯甲烷＝1：40)纯化得叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(2.1g,3.21mmol，产率：44％)。MS m/z:[M+H]+＝641.3。
步骤3:叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(1.9g,2.96mmol)和环丙醇(0.34g,6.0mmol)溶于四氢呋喃(20mL)。氮气氛围下加入钠氢(0.14g,3.5mmol)，加热至60℃反应2h。加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)萃取。有机相经饱和食盐水(30mL)洗，硫酸钠干燥后，减压条件下浓缩。剩余粘稠物经柱层析(硅胶，甲醇：二氯甲烷＝1：40)纯化得叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(0.8g,1.18mmol，产率：40％)。MS m/z:[M+H]+＝679.4。
步骤4:叔丁基(2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(200mg,0.294mmol)，2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(144mg,0.47mmol)，Pd(dppf)Cl2(22mg,0.0294mmol)、碳酸钾(81mg,0.59mmol)加入茄形烧瓶中。置换氮气三次。加入预先除氧的1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)混合溶剂。置换氮气三次。然后加热至100℃搅拌反应4h。冷却至室温以后，加入乙酸乙酯(50mL)和稀释的碳酸钠水溶液(50mL)萃取。有机相经饱和食盐水(20mL)洗，硫酸钠干燥，在减压条件下浓缩。所得褐色粘稠物经柱层析(硅胶，三乙胺：甲醇：二氯甲烷＝0.04：1：40)得到化合物叔丁基(2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(41mg,0.0525mmol，产率：18％)。MS m/z:[M+H]+＝779.5。
步骤5:2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物叔丁基(2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-(((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(40mg,0.0513mmol)溶于二氯甲烷(3mL)，滴加三氟乙酸(1mL)。反应液在室温下搅拌4h。加入二氯甲烷(30mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)萃取。水相被二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，硫酸钠干燥，减压下浓缩得2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。该产物不经进一步纯化直接用于下一步反应。MS m/z:[M+H]+＝679.4。
步骤6:2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在冰水浴中冷却2-氟丙烯酸(8.5mg，0.095mmol)和HATU(27mg，0.071mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液。滴加三乙胺(0.026mL，0.189mmol)。撤掉冰水浴搅拌20分钟。一次性加入2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的二氯甲烷(2mL)溶液。在室温下搅拌6小时。加入二氯甲烷(17mL)、水(15mL)和饱和碳酸钠溶液(5mL)，摇震、分液，用二氯甲烷(20mL)萃取水相。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，硫酸钠干燥，减压旋蒸得到黄色固体。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：10)纯化得到2-((2S)-4-(6-氯-7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-环丙氧基-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(19mg，0.0253mmol，两步总产率：48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝7.8Hz,1H),7.88-7.86(m,1H),7.65-7.63(m,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(s,1H),7.27–7.24(m,1H),5.45(d,J＝48Hz,1H),5.46(d,J＝16Hz,1H),5.27(dd,J＝16.4,4.0Hz,1H),4.89(brs,1H),4.45–4.24(m,4H),3.67-3.64(m,2H),3.48-3.44(m,2H),3.33-3.31(m,3H),3.24-3.19(m,2H),3.10-2.88(m,3H),2.29-2.16(m,2H),1.96-1.92(m,3H),0.30-0.10(m,4H).MS m/z:[M+H]+＝751.4
应用实施例915的制备方法制备得到实施例916-938化合物
Figure BDA0003314220280002061
Figure BDA0003314220280002071
Figure BDA0003314220280002081
Figure BDA0003314220280002091
实施例939：2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈合成
Figure BDA0003314220280002092
步骤1：叔丁基(S)-4-(7-溴-2-氯-8-氟-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
在冰水浴中向7-溴-2,4-二氯-8-氟-6-甲氧基喹唑啉(4.0g，12.3mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液中一次性加入氮，氮-二异丙基乙胺(6.6mL，40mmol)。搅拌1分钟后，加入(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈盐酸盐(2.55g，12.9mmol)。反应在冰水浴中室温并搅拌1小时。
室温下，向上述反应液中加入氮，氮-二异丙基乙胺(2.2mL，13.3mmol)和一缩二碳酸二叔丁酯(3.27g，15mmol)。反应液在室温下搅拌4小时。加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)萃取、分液。用乙酸乙酯(100mL)萃取水相。合并有机相，用水(60mLx3)洗，饱和食盐水(50mL)洗，硫酸钠干燥，减压浓缩的深褐色粘稠物。柱层析(硅胶，乙酸乙酯：石油醚＝1：10至乙酸乙酯：石油醚＝1：5)纯化得到黄色固体。(5.4g，10.5mmol，产率：85％)。MS m/z:514.2[M+H]+。
步骤2:叔丁基(S)-4-(7-溴-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
用冰水浴冷却((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲醇(1.9g,12mmol)的四氢呋喃(40mL)溶液。加入氢化钠(0.44g,11mmol),室温下反应0.5h。一次性加入叔丁基(S)-4-(7-溴-2-氯-8-氟-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(5.4g,10.5mmol)，室温条件下继续反应1h。加入乙酸乙酯(100mL)和稀释的碳酸钠水溶液(100mL)萃取，水相被乙酸乙酯(50mL)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗，硫酸钠干燥，减压条件下浓缩得浅褐色固体。经柱层析(硅胶，甲醇：二氯甲烷＝1：40)纯化得叔丁基(S)-4-(7-溴-6-氯-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(4.0g,6.27mmol，产率：60％)。MS m/z:[M+H]+＝637.4。
步骤3:叔丁基(2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯的合成
将叔丁基(S)-4-(7-溴-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(300mg,0.47mmol)，2-(8-氯-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(230mg,0.75mmol)，Pd(dppf)Cl2(34mg,0.047mmol)、碳酸钾(127mg,0.94mmol)加入茄形烧瓶中。置换氮气三次。加入预先除氧的1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)混合溶剂。置换氮气三次。然后加热至100℃搅拌反应4h。冷却至室温以后，加入乙酸乙酯(50mL)和稀释的碳酸钠水溶液(50mL)萃取。有机相经饱和食盐水(20mL)洗，硫酸钠干燥，在减压条件下浓缩。所得褐色粘稠物经柱层析(硅胶，三乙胺：甲醇：二氯甲烷＝0.04：1：50)得到化合物叔丁基(2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(71mg,0.096mmol，产率：20％)。MS m/z:[M+H]+＝737.5。
步骤4:2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的合成
将化合物叔丁基(2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸酯(70mg,0.096mmol)溶于二氯甲烷(6mL)，在冰水浴中冷却，滴加三溴化硼(0.057mL，0.77mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液。反应在冰水浴中搅拌1h。加入二氯甲烷(30mL)，缓慢低价甲醇(10mL)。减压下旋蒸，向残余物中加入二氯甲烷(20mL)和饱和碳酸钠水溶液(20mL)萃取。水相被二氯甲烷(10mLx2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，硫酸钠干燥，减压下浓缩得黄色粘稠物。经制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：7)纯化得到2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15mg，0.024mmol，产率：25％)。MS m/z:[M+H]+＝623.4。
步骤5:2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈的合成
在冰水浴中冷却2-氟丙烯酸(4.3mg，0.048mmol)和HATU(11mg，0.03mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液。滴加三乙胺(0.014mL，0.1mmol)。撤掉冰水浴搅拌20分钟。一次性加入2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15mg，0.024mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液。在室温下搅拌2小时。加入二氯甲烷(17mL)、水(15mL)和饱和碳酸钠溶液(5mL)，摇震、分液，用二氯甲烷(20mL)萃取水相。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗，硫酸钠干燥，减压旋蒸得到黄色固体。用制备TLC(甲醇：二氯甲烷＝1：10)纯化得到2-((2S)-4-(7-(8-氯-7-氟萘-1-基)-8-氟-2-((2R,7aS)-2-氟四氢-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基甲氧基)-6-羟基喹唑啉-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(5mg，0.0072mmol，产率：30％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88(d,J＝7.8Hz,1H),7.88-7.86(m,1H),7.65-7.63(m,1H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H),7.27–7.24(m,1H),7.01(s,1H),5.45(d,J＝48Hz,1H),5.46(d,J＝16Hz,1H),5.27(dd,J＝16.4,4.0Hz,1H),4.90(brs,1H),4.45–4.29(m,4H),3.68-3.64(m,2H),3.46-3.44(m,2H),3.33-3.31(m,2H),3.24-3.19(m,2H),3.10-2.88(m,3H),2.29-2.16(m,2H),1.96-1.92(m,3H).MSm/z:[M+H]+＝695.4
应用实施例939的制备方法制备得到实施例940-945化合物
Figure BDA0003314220280002111
Figure BDA0003314220280002121
实施例：细胞活性实验
1.细胞：H358购自上海酶研生物科技有限公司。
2.试剂：RPMI 1640培养基，Tryple，MTT(5mg/mL)，DMSO，DPBS。
3.仪器：37℃,5％CO2培养箱，UTRAO酶标仪，生物安全柜，细胞计数板，奥特光学显微镜。
4.实验耗材：96孔板货号：3599，96孔圆底配药板。
H358细胞的活性测试实验步骤：
1.铺板：将处于对数生长期的细胞用Tryple消化，新鲜培养基终止，对细胞进行计数，用新鲜培养基将细胞浓度调整到55555个/mL，每孔加90μL，其他边缘用无菌DPBS填充。
2.于37℃，5％CO2培养箱中孵育24小时，让细胞铺满孔底50％左右。
3.实验组配药：将药物用DMSO溶解，配成20mmol/L储液，再用DMSO将其进行稀释，制成2mmol/L，依次稀释3倍，8个浓度梯度，得到200×的化合物梯度溶液，取10μL梯度化合物溶液加到190μLμL RPMI1640培养基中，得到10×梯度化合物溶液，取10μL10×化合物溶液加到90μL 96孔细胞培养板中，每个梯度三个重复，化合物在96孔细胞培养板中的浓度梯度为0.05080526nM、1.524158nM、4.572474nM、13.717420nM、41.152260nM、123.456800nM、370.370400nM、1111.111000nM、3333.333000nM、10000.000000nM,每孔100μL,DMSO终浓度为0.5％。
对照组，含与实验组相同体积的溶剂，用完全培养基稀释，每孔100μL。
4.于37℃下在5％CO2培养箱中孵育5天。
5.5天后，每孔加入10μL MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4h。
6.终止培养，小心吸去孔内的培养液。
7.调零孔，实验组，对照组每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO)，在酶标仪中速震荡10s，结晶物充分溶解，492nm波长处测其吸光值。
部分化合物的IC50值如表1所示：
Figure BDA0003314220280002122
Figure BDA0003314220280002131
Figure BDA0003314220280002141
Figure BDA0003314220280002151
KRAS G12C-GDP交换测试：
1.在反应缓冲液中(25mM Hepes PH7.4，125mM NaCl，5mM MgCl2，0.01％Tween20，0.1％BSA)将4倍梯度稀释的化合物(共10个浓度点)分别与KRAS G12C-GDP(ICE，Kras20191018)在反应孔中预混合1小时；
2.加入SOS(Pharmaron，ZZY-20190823)，cRAF(Pharmaron，ZZY-20190823)，GTP(Sigma，A6885-100MG)，MAb Anti 6HIS-d2/MAb Anti GST-Eu(Cisbio，61HISDLB/61GSTKLB)的混合物进行催化反应2小时。
3.用Biotek酶标仪(Synergy4)读取320nm激发光下615nm和665nm的发射光的荧光信号。
4.利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50(半数抑制浓度)：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*Hill Slope))，用Graphpad 6.0软件进行数据分析。
实施例化合物编号 IC<sub>50</sub>((nM) 实施例化合物编号 IC<sub>50</sub>((nM)
1 20.31 840 4.52
2 10.59 854 0.59
3 13.85 873 0.79
10 8.0 877 0.71
17 1.65 879 0.59
73 1.34 881 0.71
254 8.90 883 0.49
286 9.91 887 1.02
358 2.40 895 1.29
394 1.44 903 0.89
395 1.32 904 0.93
465 2.23
SD大鼠药代动力学实验：
1.SPF级雄性大鼠进行随机分组，待测化合物分别采用静脉注射和口服灌胃方式进行给药，每个待测化合物每种给药方式各3只动物。给药溶媒为5％DMSO+10％Solutol+85％生理盐水或85％PBS，待测物溶解在溶媒中均得到澄清溶液。给药浓度和体积：1)单次静脉注射0.6mg/mL待测化合物，给药体积为5mL/kg，给药剂量为3mg/kg；2)单次口服灌胃1mg/mL待测化合物，给药体积10mL/kg，给药剂量为10mg/kg。给药前禁食过夜(10-14小时)，给药4小时后给食。
2.经颈静脉或其它合适方式采血200μL/时间点，K2-EDTA抗凝，采集后放置冰上并于1小时之内离心分离血浆(离心条件：6800g，6分钟，2-8℃)。静脉注射组动物采血点分别为：给药前、给药后5，15，30min，1，2，4，8，24h；口服给药组动物采血点分别为给药前、给药后15，30min，1，2，4，6，8，24h。
3.检测血药浓度，通过不同时间点的血药浓度数据，运用Phoenix WinNonlin计算药代动力学参数AUC(0-t)。进行药代参数计算时，Cmax之前的BLQ(包括“No peak”)按照0计算；Cmax之后出现的BLQ(包括“No peak”)一律不参与计算。口服生物利用度计算公式：F％＝AUC0-t口服/AUC0-t静脉*(10/3)*100％
实施例化合物编号 口服生物利用度F％
358 2.35％
367 11.57％
879 16.9％
887 25.85％
903 28.6％
904 30.28％
914 28.49％
WO2020/146613A1实施例229 22.69％

Claims (6)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，所述化合物为
Figure FDA0003843308900000011
其中：R1-W是
Figure FDA0003843308900000012
R1为
Figure FDA0003843308900000013
其中
R11为氢和R12为卤素；
L-R2为
Figure FDA0003843308900000014
R3为
Figure FDA0003843308900000015
2.权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其中R1为
Figure FDA0003843308900000016
3.权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其中R3为
Figure FDA0003843308900000017
4.一种化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体，其中所述化合物为：
Figure FDA0003843308900000018
。
5.一种包含如权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体的药物组合物。
6.一种如权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体和如权利要求5所述的药物组合物在制备治疗由KRAS G12C、HRAS G12C或NRASG12突变所介导的癌症的药物中的应用。
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