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CN112912144A - 抗cd33抗体及其使用方法 - Google Patents

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CN112912144A
CN112912144A CN201980070570.9A CN201980070570A CN112912144A CN 112912144 A CN112912144 A CN 112912144A CN 201980070570 A CN201980070570 A CN 201980070570A CN 112912144 A CN112912144 A CN 112912144A
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H·林
W-H·何
L·普雷斯塔
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Abstract

本公开总体上涉及组合物以及此类组合物在预防有此需要的个体、降低所述个体的风险或治疗所述个体方面的用途，所述组合物包含特异性结合CD33多肽，例如哺乳动物CD33或人CD33的抗体，例如，单克隆抗体、抗体片段等。

Description

抗CD33抗体及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年8月31日提交的第62/726,053号美国临时申请序列的权益，所述美国临时申请序列据此通过引用以其整体并入。
以ASCII文本文件提交序列表
以ASCII文本文件提交的以下内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：735022002840SEQLIST.TXT，记录日期：2019年8月26日，大小：112KB)。
发明领域
本公开涉及抗CD33抗体和此类抗体的治疗用途。
发明背景
髓样细胞表面抗原CD33前体(CD33)，也称为Siglec-3，是在免疫细胞和造血细胞，包括未成熟和成熟的髓样细胞、树突状细胞和小神经胶质细胞上表达的1型免疫球蛋白样跨膜蛋白。(Crocker等人(2007)Nat Rev Immunol.7:255–266；McMillan和Crocker(2008)Carbohydr Res.343:2050–2056；Von Gunten和Bochner(2008)Ann NY Acad Sci.1143:61–82；Handgretinger等人(1993)Immunol Lett.37:223–228；和Hernández-Caselles等人(2006)J Leukoc Biol.79:46–58)。CD33含有Ig样C2型(免疫球蛋白样)和Ig样V型(免疫球蛋白样)胞外结构域，以及在其胞质结构域中的两个ITIM样基序。CD33的三种选择性剪接形式(同种型)已被鉴定，包括命名为CD33M的较高分子量的变体和缺乏Ig样V型结构域(配体结合位点)以及连接V与C结构域的二硫键的较小的同种型CD33m。
对扩大的队列(例如，数千个个体)进行的全基因组关联研究(GWAS)已经将CD33中的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC(AKA rs3826656)和rs3865444AA鉴定为迟发性阿尔茨海默病(AD)风险的遗传调节剂。在肿瘤学中，导致CD33表达减少的CD33变体已被证明与儿童急性髓细胞性白血病(AML)生存率的提高相关。携带变体rs35112940GG(其与rs3865444AA变体处于强连锁不平衡中)的患者缓解后的3年总生存率为84％+/-8％，与CD33的较低全长表达相关。非保护性等位基因的缓解率为68％+/-15％。保护性等位基因的携带者也有较低的复发风险和较高的无病生存率。同样，rs12459419的次要变体等位基因(TT)纯合(这与全长CD33的表达降低46％以上相关)的患者，比变体CC和CT的携带者更有可能获得良好的疾病结局(52％对比31％)，并且诊断性原始CD33的表达比其它基因型低得多。即使在接受抗CD33抗体和毒性加利车霉素-γ衍生物治疗的患者中也是如此(Mortland等人，(2013)ClinCancer Res；1–8)。显示全长CD33的表达减少25％以上的2459419TT等位基因的携带者，以及rs12459419CT等位基因的携带者，也显示阿尔茨海默病风险降低(Malik M.等人(2015)Human Molecular Genetics,1–14)。这表明CD33表达或功能性的降低可能对阿尔茨海默病和癌症有益。
针对CD33的抗体已经在例如以下文献中进行了描述：US7,342,110、US7,557,189、US8,119,787、US8,337,855、US8,124,069、US5,730,982、WO2012/074097、WO2004/043344、WO1993/020848、WO2012/045752、WO2007/014743、WO2003/093298、WO2011/036183、WO1991/009058、WO2008/058021、WO2011/038301、WO2016/201389、WO2016/201388、Hoyer等人(2008)Am J Clin Pathol,129:316-323、Rollins-Ravel和Roth(2012)Histopathology60:933-942、Per ez-Olivia等人(2011)Glycobiol 21:757-770、Ferlasso等人(2000)E urJ Immunol 30:827-833、Vitale等人(2001)Proc Natl Acad Sci USA 98:5764-5769、Jandus等人(2011)Biochem Pharmacol 82:323-332、O’Reilly和Paulson(2009)TrendsPharmcol Sci 30:240-248、J urcic(2012)Curr Hematol Malig Rep 7:65-73以及Ricart(2011)Cl in Cancer Res 17:6417-6427。
因此，需要治疗与不期望的CD33活性相关的疾病、病症和疾患的治疗性抗CD33抗体。
本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请和出版物，据此通过引用以其整体并入。
发明内容
本公开总体上涉及组合物，以及使用此类组合物的方法，所述组合物包含特异性结合人CD33的抗体，例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等。
本公开的某些方面至少部分基于具有改善的和/或增强的功能特征的抗CD33抗体的鉴定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含相对于参考抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的一种或多种改善的和/或增强的功能特征。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对CD33(例如，人CD33)的亲和力高于参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的所述亲和力。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以低于参考抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的半最大有效浓度(EC50)的半最大有效浓度与人细胞，诸如人原代树突状细胞结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以低于参考抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的半最大有效浓度(EC50)的半最大有效浓度来降低CD33的细胞水平(例如，降低或减少细胞表面水平)。
因此，一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有选自SEQ ID NO:8-30的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有选自SEQ ID NO:39-40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1、含有选自SEQ ID NO:53-55的氨基酸序列的HVR-L2和含有选自SEQ ID NO:58-62的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含含有选自SEQID NO:68-93的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有选自SEQ ID NO:97-103的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本公开涉及与CD33蛋白结合的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
另一方面，本公开涉及与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；并且其中所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2以及含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L3。
另一方面，本公开涉及与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ IDNO:83的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区。
另一方面，本公开涉及与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)含有SEQ ID.NO:120的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:122的氨基酸序列的轻链；或者
(b)含有SEQ ID.NO:121的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:122的氨基酸序列的轻链。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含选自由SEQ IDNO:5-6组成的组的序列；VH FR2包含选自由SEQ ID NO:31-32组成的组的序列；VH FR3包含选自由SEQ ID NO:34-36组成的组的序列；以及VH FR4包含SEQ ID NO:41的序列；并且轻链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含选自由SEQ ID NO:42-46组成的组的序列；VL FR2包含选自由SEQ ID NO:48-51组成的组的的序列；VL·FR3包含选自由SEQ ID NO:56-57组成的组的的序列；以及VL FR4包含选自由SEQ ID NO:63-64组成的组的序列。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，抗体属于IgG类，并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体具有IgG4同种型，并且其中抗体包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代和在残基位置235处的L235A氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，抗体包含在Fc区中选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y及其任意组合，其中残基的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置L234A、L235A和P331A处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置L234A、L235A、P331A和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置K322A和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；Fc区包含在位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号；或者Fc区包含在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。
在一些可以与任何前述实施方案组合的实施方案中，CD33蛋白是哺乳动物蛋白或人蛋白。在一些实施方案中，CD33蛋白是野生型蛋白。在一些实施方案中，CD33蛋白是天然存在的变体。在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，CD33蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人中性粒细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。
在一些可与任何前述实施方案结合的实施方案中，抗体与人CD33蛋白特异性结合。在一些实施方案中，抗体与人CD33蛋白结合，并且不与来自另一物种的CD33直系同源物或同源物交叉反应。在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体是与包含人CD33或哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基的表位结合的抗体片段。在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体是与选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白结合的抗体片段：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。在一些实施方案中，抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段与选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白结合：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。在一些实施方案中，所述片段是Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv或scFv片段。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。在一些实施方案中，第一抗原是CD33，第二抗原是：促进穿过血脑屏障的转运的抗原；选自由以下组成的组的促进穿过血脑屏障的转运的抗原：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、羊驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿透素(penetratin)、多精氨酸肽、angiopep肽和ANG1005；选自由以下组成的组的致病因子：致病肽或蛋白和致病核酸，其中所述致病肽或蛋白选自由以下组成的组：β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白(ataxin)、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体(Lewy body)、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白(gelsolin)、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽，并且致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA；在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体和磷脂酰丝氨酸；以及在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，将抗体与一种或多种特异性结合致病因子的抗体组合使用，所述致病因子选自由以下组成的组：致病肽、致病蛋白、β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽及其任意组合；或者与一种或多种结合免疫调节蛋白的抗体组合使用，所述免疫调节蛋白选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA及其任意组合。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)比抗CD33抗体低至少1.8倍，所述抗CD33抗体包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)在约2nM至约200pM的范围内，或小于约200pM，并且其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体降低CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，CD33在人树突状细胞的表面上表达。在一些实施方案中，所述抗体在体外降低CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，如通过流式细胞术所测量的，所述抗体在体外以小于40pM的半最大有效浓度(EC50)降低CD33的细胞表面水平。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体增加一种或多种疾病相关小神经胶质细胞(DAM)标志物的表达。
在一些实施方案中，所述一种或多种DAM标志物是ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2或其任意组合。在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争与人CD33的结合：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，所述抗体与选自由以下组成的组的抗体结合基本上相同的CD33表位或重叠的CD33表位：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体具有包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列的Fc区。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中(a)HVR-H1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列,并且HVR-L3包含SEQ IDNO:58的氨基酸序列；(b)HVR-H1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(c)HVR-H1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(d)HVR-H1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(e)HVR-H1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(f)HVR-H1包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(g)HVR-H1包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(h)HVR-H1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(i)HVR-H1包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(j)HVR-H1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(k)HVR-H1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(l)HVR-H1包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(m)HVR-H1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(n)HVR-H1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(o)HVR-H1包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(p)HVR-H1包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(q)HVR-H1包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(r)HVR-H1包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(s)HVR-H1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(t)HVR-H1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(u)HVR-H1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(v)HVR-H1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(w)HVR-H1包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(x)HVR-H1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(y)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(z)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(aa)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(bb)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(cc)HVR-H1包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(dd)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(ee)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(ff)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(gg)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(hh)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(ii)HVR-H1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(jj)HVR-H1包含SEQID NO:23的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(kk)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(ll)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(mm)HVR-H1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ IDNO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID No:59的氨基酸序列；以及(nn)HVR-H1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列，并且HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:94-103中任一项的氨基酸序列的轻链可变区；和/或含有选自SEQ ID NO:65-93中任一项的氨基酸序列的重链可变结构域。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
另一方面，本公开涉及包含编码本文所述的任何抗体的核酸序列的分离的核酸。
另一方面，本公开涉及包含本文所述的任何核酸的载体。在一些实施方案中，所述载体是表达载体和/或展示载体(display vector)。
另一方面，本公开涉及包含本文所述的任何核酸或载体的分离的宿主细胞。
另一方面，本公开涉及产生与CD33结合的抗体的方法，其包括培养本文所述的任何宿主细胞，从而产生所述抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括回收由细胞产生的抗体。
另一方面，本公开涉及通过本文描述的任何方法产生的抗体。
另一方面，本公开涉及包含本文所述的任何抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体在制备药剂方面的用途。
另一方面，本发明涉及用于预防疾病、病症或损伤、降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、tau蛋白病、感染和癌症，所述方法包括向有此需要的个体施用治疗有效量的本文所述的任何抗体。在一些实施方案中，疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，本公开涉及本文所述的任何抗体用于制备药剂的用途，所述药剂用于预防疾病、病症或损伤、降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、tau蛋白病、感染和癌症。在一些实施方案中，疾病、病症或损伤是癌症。在一些实施方案中，癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和多发性骨髓瘤。
应当理解，可组合本文描述的各种实施方案的一个、一些或所有特性以形成本发明的其它实施方案。本发明的这些和其它方面对于本领域技术人员来说将变得显而易见。本发明的这些和其它实施方案将通过下面的详细描述来进一步描述。
附图说明
图1示出了显示本公开的抗CD33抗体与原代人树突状细胞结合的数据。
图2示出了显示本公开的抗CD33抗体下调人树突状细胞中CD33的细胞表面水平的数据。
图3示出了显示本公开的抗CD33抗体与原代人树突状细胞结合的数据。
图4示出了显示本公开的抗CD33抗体与人CD33和食蟹猴CD33蛋白结合的数据。
图5示出了显示本公开的抗CD33抗体下调人树突状细胞中CD33的细胞表面水平的数据。
图6A和图6B示出了显示本公开的抗CD33抗体结合重组人CD33的数据。
图7示出了显示本公开的抗CD33抗体结合原代人树突状细胞的数据。
图8A和图8B示出了比较本公开的各种抗CD33抗体对树突状细胞中CD33的细胞表面水平的降低的数据。
图9示出了显示本公开的抗CD33抗体变体与原代人树突状细胞结合的数据。
图10A和图10B示出了显示本公开的抗CD33抗体变体分别与人CD33蛋白和食蟹猴CD33蛋白结合的数据。
图11示出了显示本公开的抗CD33抗体变体降低原代人树突状细胞中CD33的细胞表面水平的数据。
图12A、图12B和图12C示出了显示具有Fc变体的抗CD33抗体变体降低原代人树突状细胞中CD33的细胞表面水平的数据。
具体实施方式
本公开涉及抗CD33抗体(例如，单克隆抗体)；制造和使用此类抗体的方法；包含此类抗体的药物组合物；编码此类抗体的核酸；和包含编码此类抗体的核酸的宿主细胞。
本文所述或引用的技术和程序通常被本领域技术人员很好地理解，并且通常由本领域技术人员使用常规方法，例如广泛使用的方法，诸如Sambrook等人MolecularCloning:A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编辑，(2003)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean，编辑，Oxford University Press,2000)所述的那些来采用。
I.定义
除非另有说明，否则术语“CD33”或“CD33多肽”在本文中可互换使用，指来自任何脊椎动物来源包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人和食蟹猴)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)的任何天然CD33。在一些实施方案中，所述术语涵盖野生型序列和天然存在的变体序列，例如剪接变体或等位基因变体。在一些实施方案中，所述术语涵盖“全长”、未加工的CD33以及在细胞中经加工产生的任何形式的CD33。在一些实施方案中，CD33是人CD33同种型1(NCBI参考序列：NP_001763.3)。在一些实施方案中，示例性人CD33的氨基酸序列为SEQID NO:1。食蟹猴CD33的氨基酸序列为SEQ ID NO:2(NCBI参考序列：XP_005590138.1)。
术语“抗CD33抗体”、“与CD33结合的抗体”和“特异性结合CD33的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD33的抗体，使得所述抗体可用作靶向CD33的诊断和/或治疗剂。在一个实施方案中，抗CD33抗体与不相关的非CD33多肽的结合程度小于所述抗体与CD33结合的约10％，如例如通过放射免疫测定法(RIA)测量的。在某些实施方案中，与CD33结合的抗体具有<1μΜ、<100nM、<10nM、<1nM、<0.1nM、<0.01nM或<0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)的解离常数(KD)。在某些实施方案中，抗CD33抗体与来自不同物种的CD33间保守的CD33的表位结合。
关于抗体与靶分子的结合，术语“特异性结合(specific binding)”或”特异性地结合”或”对......具有特异性”特定多肽或特定多肽靶标上的表位意指与非特异性相互作用明显不同的结合。例如，可通过确定与对照分子的结合相比的分子的结合来测量特异性结合。例如，特异性结合可通过与类似于靶标的对照分子(例如，过量的非标记的靶标)的竞争来确定。在这种情况下，如果标记的靶标与探针的结合被过量的未标记的靶标竞争性抑制，则表明特异性结合。如本文所用，术语“特异性结合”特定多肽或特定多肽靶标上的表位或与特定多肽或特定多肽靶标上的表位“特异性结合”或对特定多肽或特定多肽靶标上的表位“具有特异性”可以例如通过如下分子表现出来，所述分子对所述靶标具有10-4M或更低、10-5M或更低、10-6M或更低、10-7M或更低、10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M或更低、10-11M或更低、10-12M或更低中的任一个的KD、或在10-4M至10-6M或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M的范围内的KD。正如本领域技术人员将会理解的，亲和力与KD值呈反相关。对抗原的高亲和力通过低KD值来度量。在一个实施方案中，术语“特异性结合”是指其中分子与特定多肽或特定多肽上的表位结合，而基本上不与任何其它多肽或多肽表位结合的结合。
术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与“抗体”互换使用。术语“抗体”在本文中以最广泛的意义使用，具体涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，包括由至少两种完整抗体形成的那些和抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。
“天然抗体”通常是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(“L”)链和两条相同的重(“H”)链组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链之间二硫键联的数量不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫桥。每条重链的一端有一个可变结构域(VH)，后面是许多恒定结构域。每条轻链的一端有一个可变结构域(VL)，另一端有一个恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定区对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。特定的氨基酸残基被认为在轻链与重链可变结构域之间形成界面。
关于不同类抗体的结构和性质，参见，例如，Basic and Clinical Immunology，第8版，Daniel P.Stites,Abba I.Terr and Tristram G.Parslow(编辑),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994，第71页和第6章。
来自任何脊椎动物物种的轻链都可根据其恒定结构域的氨基酸序列指定为称为κ("κ")和λ("λ")的两种截然不同的类型。根据其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的类或同种型。有五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其分别具有命名为α("α")、δ("δ")、ε("ε")、γ("γ")和μ("μ")的重链。γ和α类别在CH序和功能的相对较小差异的基础上进一步分为亚类(同种型)，例如，人表达下列亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。不同类的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是公知的，并且通常描述于例如Abbas等人Cellular and Molecular Immunology，第4版(W.B.Saunders Co.,2000)中。
抗体诸如本公开的抗CD33抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体的最易变的部分(相对于同类的其它抗体)，并包含抗原结合位点。
术语“可变的”是指可变结构域的某些区段在抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)之间序列差异很大的事实。可变结构域介导抗原结合，并确定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性并不是均匀地分布在可变结构域的整个跨度上。相反，其集中在轻链和重链可变结构域中的三个称为高变区(HVR)的区段中。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含通过三个HVR连接的四个主要采用β-折叠构型的FR区，其所述HVR形成连接β-折叠结构的环，在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的HVR被FR区紧密地保持在一起，并且与来自另一条链的HVR一起，有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，Sequences of Immunological Interest，第5版，National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出多种效应功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
如本文中所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体中获得的抗体，诸如本公开的抗CD33单克隆抗体，即，除了可能的天然存的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化等)之外，组成所述群体的单个抗体是相同的，所述天然发生的突变和/或翻译后修饰可以少量存在。单克隆抗体具有高度特异性，针对单一抗原位点。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，所述单克隆抗体的有利方面在于它们是由杂交瘤培养物合成的，未被其它免疫球蛋白污染。修饰词“单克隆的”表示从基本上同质的抗体群体中获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本公开使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，所述技术包括但不限于以下方法中的一种或多种方法：用一种或多种DNA、病毒样颗粒、一种或多种多肽和/或一种或多种细胞中的一种或多种免疫动物(包括但不限于大鼠、小鼠、兔、豚鼠、仓鼠和/或鸡)的方法、杂交瘤方法、B细胞克隆方法、重组DNA方法，以及在具有编码人免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因座或基因的部分或全部的动物中产生人或人样抗体的技术。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“完全抗体”可互换使用，是指与抗体片段相对，以其基本上完整的形式存在的抗体，诸如本公开的抗CD33抗体。具体来说，完全抗体包括具有包括Fc区的重链和轻链的那些抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整的抗体可具有一种或多种效应功能。
“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包括结合完整抗体所结合的抗原的完整抗体的一部分。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5641870，实施例2；Zapata等人，Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；由抗体片段形成的单链抗体分子和多特异性抗体。
抗体诸如本公开的抗CD33抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，和残留的“Fc”片段，这一名称反映了易于结晶的能力。Fab片段由整个轻链和重链的可变区结构域(VH)以及一条重链的第一个恒定结构域(CH1)组成。就抗原结合而言，每个Fab片段都是单价的，即，其只有单个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生单一大的F(ab’)2片段，所述片段大致对应于两个二硫键连接的Fab片段，具有不同的抗原结合活性，并且仍然能够交联抗原。Fab’片段与Fab片段相异在于在CH1结构域的羧基末端有少数另外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基具有游离硫醇基团。F(ab’)2抗体片段最初是以成对的Fab’片段的形式产生的，所述Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
Fc片段包含由二硫键保持在一起的两条重链的羧基末端部分。抗体的效应功能由Fc区中的序列决定，所述Fc区也被某些类型细胞上的Fc受体(FcR)识别。
抗体诸如本公开的抗CD33抗体的“功能性片段”，包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区，或者保留或具有经修饰的FcR结合能力的抗体的Fc区。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“双抗体”是指通过构建在VH与VL结构域之间具有短接头(约5-10个残基)(使得实现可变结构域的链间而非链内配对，从而产生二价片段，即，具有两个抗原结合位点的片段)的sFv片段(参见上一段落)制备的小抗体片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。
如本文中所用，“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体(免疫球蛋白)，诸如本公开的嵌合抗CD33抗体，以及此类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。本文中的目标嵌合抗体包括
Figure BDA0003037444680000301
抗体，其中抗体的抗原结合区源自通过例如用目标抗原免疫猕猴产生的抗体。如本文中所用，“人源化抗体”是“嵌合抗体”的亚组。
非人(例如，鼠)抗体的“人源化”形式，诸如本公开的抗CD33抗体的人源化形式，是嵌合抗体，其包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些实施方案中，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个(通常是两个)可变结构域，其中所有或基本上所有的HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的那些。人源化抗体可任选地包含源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体例如非人抗体的“人源化形式”是指已经历过人源化的抗体。
“人抗体”是指具有与由人产生的/或使用本文公开的用于制备人抗体的任何技术制备的抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这一定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可使用本领域已知的各种技术(包括噬菌体展示文库和酵母展示文库)产生人抗体。人抗体可通过向转基因动物施用抗原来制备以及通过人B细胞杂交瘤技术产生，所述转基因动物已被修饰成响应于抗原攻击而产生此类抗体，但其内源基因座已经丧失能力，例如，经免疫的转基因小鼠(xenomice)。
当在本文中使用时，术语“高变区”、“HVR”或“HV”是指抗体可变结构域的区域，诸如本公开的抗CD33抗体的抗体可变结构域的区域，所述区域在序列上是高变的并且/或者形成结构上确定的环。一般来说，抗体包含6个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3显示出六种HVR的最大多样性，特别是H3被认为在赋予抗体良好的特异性方面发挥着独特的作用。仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体在轻链不存在的情况下是功能性的和稳定的。
许多HVR描述正在使用中，并包含在本文中。在一些实施方案中，基于序列可变性，HVR可以是Kabat互补决定区(CDR)，并且是最常用的(Kabat等人，同上)。在一些实施方案中，HVR可以是Chothia CDR。而Chothia指的是结构环的位置(Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，HVR可以是AbM HVR。AbM HVR代表了Kabat CDR与Chothia结构环之间的折中，并由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。在一些实施方案中，HVR可以是“contact”HVR。“contact”HVR基于对可用的复杂晶体结构的分析。下面显示来自这些HVR中的每一种的残基。
Figure BDA0003037444680000311
HVR可包含“扩展的HVR”如下：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(优选实施方案)(H2)以及93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些扩展HVR定义中的每一个，根据Kabat等人，同上，对可变结构域残基进行编号。
“框架”或“FR”残基是指除本文定义的HVR残基以外的可变结构域残基。
如本文中所用，“受体人框架”是包含源自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“源自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含其相同的氨基酸序列，或者其可包含预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、或2个或更少。当预先存在的氨基酸变化存在于VH中时，优选这些变化仅在位置71H、73H和78H中的三个、两个或一个位置处发生；例如，这些位置处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人共有框架”是代表了人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。一般来说，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。例如，对于VL，所述亚组可以是如Kabat等人(同上)中的kappa I、kappa II、kappaIII或kappa IV亚组。另外，对于VH，所述亚组可以是如Kabat等人，(同上)中的亚组I、亚组II或亚组III。
在例如本公开的抗CD33抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失，或者指定残基附近的至少一个氨基酸残基的插入。与指定残基“相邻”的插入意指其一至两个残基内的插入。插入可在指定残基的N端或C端。本文中的优选氨基酸修饰是取代。
“亲和力成熟的”抗体，诸如本公开的亲和力成熟的抗CD33抗体，是在其一个或多个HVR中具有一种或多种改变的抗体，与不具有这些改变的亲本抗体相比，其导致抗体对抗原的亲和力提高。在一个实施方案中，亲和力成熟的抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟的抗体通过本领域已知的方法产生。例如，Marks等人Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了通过VH-和VL-结构域改组的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变由例如：Barbas等人Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier等人Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人，J.Mol.Biol.226:889-896(1992)进行了描述。
“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的紧密、非共价缔合二聚体组成。从这两个结构域的折叠中产生六个高变环(3个环各自来自于H和L链)，所述高变环为抗原结合提供氨基酸残基，并赋予抗体抗原结合特异性。然而，即使是单个可变结构域(或Fv的一半只包含三个对抗原具有特异性的HVR)也具有识别并结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”(也缩写为“sFv”或“scFv”)是包含连接成单个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，这使得sFv能够形成抗原结合所需的结构。
抗体“效应功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性，并随抗体同种型而变化。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能不同，但人IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸到其羧基端。例如，在抗体的生产或纯化过程中，或者通过重组工程改造编码抗体重链的核酸，可以除去Fc区的C端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)。因此，完整抗体的组合物可包含去除了所有K447残基的抗体群，未去除K447残基的抗体群，以及具有带和不带K447残基的抗体混合物的抗体群。用于本公开的抗体的合适的天然序列Fc区包括人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc的区氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；以及天然序列人IgG4 Fc区及其天然存在的变体。
“变体Fc区”包含与天然序列Fc区的氨基酸序列相异在于至少一个氨基酸修饰，优选一个或多个氨基酸取代的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸取代，例如天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中约1个至约10个氨基酸取代，优选约1个至约5个氨基酸取代。本文的变体Fc区将优选与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，并且最优选与其具有至少约90％的同源性，更优选与其具有至少约95％的同源性。
“Fc受体”或“FcR”描述了与抗体的Fc区结合的受体。优选的FcR是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体(γ受体)的FcR，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式，FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活性受体”)和FcγRIIB(“抑制性受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，主要不同于其胞质结构域。激活性受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸基激活基序(“ITAM”)。抑制性受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸基抑制基序(“ITIM”)。本文中的术语“FcR”涵盖了其它FcR，包括那些将在未来鉴定的FcR。FcR还可延长抗体的血清半衰期。
如本文中所用，关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指在比对序列并引入缺口(如果需要)以获得最大序列同一性百分比，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分之后，与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的候选序列中的氨基酸残基的百分比。以确定氨基酸序列同一性百分比为目的的比对可通过本领域技术范围内的各种方式，例如，使用公开可用的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件来实现。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在被比较序列的全长上实现最大比对所需的本领域已知的任何算法。
术语“竞争”在用于竞争相同表位的抗体(例如，中和抗体)的上下文中时，意指通过测定确定的抗体之间的竞争，在所述测定中被检测的抗体阻止或抑制(例如，减少)参考分子(例如，配体或参考抗体)与共同抗原(例如，CD33或其片段)的特异性结合。许多类型的竞争性结合测定可用于确定抗体是否与另一种抗体竞争，例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见，例如，Stahli等人，1983,Methods in Enzymology 9:242-253)；；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见，例如，Kirkland等人，1986,J.Immunol.137:3614-3619)、固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见，例如，Harlow和Lane,1988,Antibodies,A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Press)；使用1-125标记物的固相直接标记RIA(参见，例如，Morel等人,1988,Molec.Immunol.25:7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见，例如，Cheung等人，1990,Virology 176:546-552)；和直接标记RIA(Moldenhauer等人，1990，Scand.J.Immunol.32:77-82)。通常，这种测定牵涉使用与携带有未标记的测试抗体和标记的参考抗体这两种之一的固体表面或细胞结合的纯化抗原。通过在测试抗体存在的情况下测定结合到固体表面或细胞上的标记物的量来测量竞争性抑制。通常测试抗体过量存在。通过竞争性测定鉴定的抗体(竞争性抗体)包括与参考抗体结合相同表位的抗体和与邻近表位结合的抗体，所述邻近表位与参考抗体所结合的表位足够接近以发生空间位阻。本文提供了关于确定竞争性结合的方法的另外细节。通常，当竞争性抗体过量存在时，其将抑制(例如，降低)参考抗体与共同抗原的特异性结合至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97.5％和/或接近100％。
如本文中所用，CD33多肽与第二多肽之间的“相互作用”包括但不限于蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合和离子结合。如本文中所用，当抗体破坏、减少或完全消除两种多肽之间的相互作用时，抗体“抑制两种多肽之间的相互作用”。当本公开的抗体与两种多肽之一结合时，其由此“抑制所述两种多肽之间的相互作用”。在一些实施方案中，相互作用可被抑制至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、97.5％和/或接近100％。
术语“表位”包括能够被抗体结合的任何决定簇。表位是抗原的区域，其被靶向该抗原的抗体结合，并且当抗原是多肽时，表位包括直接接触所述抗体的特定氨基酸。大多数情况下，表位存在于多肽上，但在一些情况下，可存在于其它种类的分子诸如核酸上。表位决定簇可包括诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基等的分子的化学活性表面分组，并且可具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。通常，对特定靶抗原具有特异性的抗体将优先识别多肽和/或大分子的复杂混合物中靶抗原上的表位。
“激动性”抗体或“激活”抗体是在抗体结合抗原后诱导(例如，增强)抗原的一种或多种活性或功能的抗体。
“拮抗剂”抗体或“阻断性”抗体或“抑制性”抗体是在抗体结合抗原后减少、抑制并且/或者消除(例如，减少)抗原与一种或多种配体结合的抗体，和/或在抗体结合抗原后减少、抑制并且/或者消除(例如，减弱)抗原的一种或多种活性或功能的抗体。在一些实施方案中，拮抗性抗体、或阻断性抗体或抑制性抗体基本上或完全抑制抗原与一种或多种配体的结合和/或抗原的一种或多种活性或功能。
“分离的”抗体，诸如本公开的分离的抗CD33抗体，是已(例如，天然地或重组地)从其产生环境的组分中鉴定、分离并且/或者回收的抗体。优选地，分离的抗体不与来自其产生环境的所有其它污染组分缔合。来自其产生环境的污染组分，诸如由重组转染的细胞产生的那些，是通常会干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选实施方案中，可将抗体纯化：(1)至大于95重量％的抗体，如通过例如Lowry法所测定的，并且在一些实施方案中，纯化至大于99重量％；(2)至足以通过使用旋转杯测序仪，获得至少15个残基的N端或内部氨基酸序列残基的程度，或(3)至使用考马斯亮蓝或优选银染色显示的在非还原或还原条件下通过SDS-PAGE达到的同质性。分离的抗体包括重组T细胞内的原位抗体，因为所述抗体的天然环境的至少有一种成分将不存在。然而，通常分离的多肽或抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。
编码抗体诸如本公开的抗CD33抗体的“分离的”核酸分子，是从在产生其的环境中通常与其缔合的至少一种污染性核酸分子中鉴定和分离的核酸分子。优选地，分离的核酸不与和产生环境缔合的所有组分缔合。编码本文中的多肽和抗体的分离的核酸分子的形式不同于其在自然界中存在的形式或背景。因此，分离的核酸分子不同于天然存在于细胞中的编码本文的多肽和抗体的核酸。
如本文中所用，术语“载体”旨在指能够运输与其相连的另一种核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA。另一种类型的载体是噬菌体载体。另一种类型的载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接到所述病毒基因组中。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在被引入宿主细胞后可整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中被称为“重组表达载体”，或简称为“表达载体”通常，重组DNA技术中有用的表达载体通常以质粒的形式存在。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。
如本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指具有任何长度的核苷酸聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物，或者可通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应掺入聚合物的任何底物。
“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可以是或已经是用于掺入多核苷酸插入物的一种或多种载体的接受者。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然、偶然或有意的突变，后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态学或基因组DNA互补物方面)。宿主细胞包括用本公开的一种或多种多核苷酸体内转染的细胞。
如本文中所用，“载剂”包括在所用的剂量和浓度下对暴露于其中的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂。
如本文中所用，术语“预防”包括针对个体中特定疾病、病症或疾患的发生或复发提供预防。个体可能倾向于、易于患特定的疾病、病症或疾患，或者有发展这种疾病、病症或疾患的风险，但尚未被诊断患有该疾病、病症或疾患。
如本文中所用，有发展特定疾病、病症或疾患的“风险”的个体可以具有或可以不具有可检测的疾病或疾病症状，并且在本文所述的治疗方法之前可以显示或可以不显示可检测的疾病或疾病症状。“有风险”是指个体具有一个或多个风险因素，所述风险因素是与特定疾病、病症或疾患的发展相关的可测量的参数，如本领域所知的。具有这些风险因素中的一个或多个因素的个体发展特定疾病、病症或疾患的概率比没有这些风险因素中的一个或多个因素的个体高。
如本文中所用，术语“治疗”是指被设计来在临床病理学过程中改变被治疗个体的自然病程的临床干预。治疗的理想效果包括降低进展速度、改善或减轻病理状态、缓解特定疾病、病症或疾患或改善其预后。例如，如果减轻或消除了与特定疾病、病症或疾患相关的一种或多种症状，则个体被成功地“治疗”。
“有效量”至少是指在所需的剂量和时间期达到所需治疗或预防结果的有效量。可在一次或多次施用中提供有效量。本文中的有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及治疗在个体中引起所需反应的能力等因素而变化。有效量也是其中治疗的任何毒性或有害作用被治疗的有益作用所超过的量。对于预防性使用，有益的或期望的结果包括诸如消除或降低风险、减轻严重性或延迟疾病(包括疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症和在疾病发展过程中出现的中间病理表型)发作的结果。对于治疗用途，有益的或期望的结果包括临床结果，诸如减少由疾病引起的一种或多种症状，提高患有疾病的那些人的生活质量，减少治疗疾病所需的其它药物的剂量，增强另一种药物(诸如通过靶向)的作用，延迟疾病的进展，并且/或者延长生存期。药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景中所理解的，可以与或可以不与另一种药物、化合物或药物组合物相结合来达到药物、化合物或药物组合物的有效量。因此，在施用一种或多种治疗剂的背景中，可以考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其它剂结合，可以达到或达到期望的结果，则可认为单一剂以有效量提供。
出于治疗、预防或降低风险的目的的“个体”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，诸如狗、马、兔子、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。在一些实施方案中，个体是人。
如本文中所用，与另一种化合物或组合物“结合”施用包括同时施用和/或在不同时间施用。结合施用还包括作为共同制剂施用或作为单独的组合物施用，包括以不同的给药频率或间隔，以及使用相同的施用途径或不同的施用途径进行施用。在一些实施方案中，结合施用是作为同一治疗方案的一部分施用。
如本文中所用，术语“约”是指该技术领域的技术人员容易知道的各个值的通常误差范围。本文中提及的“约”值或参数包括(并描述)针对该值或参数本身的实施方案。
除非上下文清楚地另有指示，否则如本文和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括复数的指代物。例如，提及“抗体”是提及一个至多个抗体(诸如摩尔量)，并且包括本领域技术人员已知的其等同物，等等。
应当理解，本文描述的本公开的方面和实施方案包括“包含”方面和实施方案、“组成”方面和实施方案和“基本上由方面和实施方案组成”。
概述
本公开部分涉及表现出一种或多种改善的和/或增强的功能特征(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的抗CD33抗体，包括例如能够以提高的/增强的动力学降低CD33的细胞表面水平并且/或者结合CD33的抗体；制备和使用此类抗体的方法；含有此类抗体的药物组合物；编码此类抗体的核酸；以及含有编码此类抗体的核酸的宿主细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有一种或多种活性，这至少部分归因于抗体抑制CD33与一种或多种天然聚糖配体之间相互作用的能力。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可具有一种或多种活性，这至少部分归因于抗体通过诱导CD33的降解、下调、切割、受体脱敏和/或溶酶体靶向来降低CD33的细胞表达(例如，细胞表面表达)的能力。在一些实施方案中，抗CD33抗体表现出以下性质中的一种或多种：a)对人CD33具有低于抗CD33抗体(其具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区)的解离常数的解离常数(KD)；b)与人细胞，如原代人树突状细胞结合；c)以低于抗CD33抗体(其具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区)的半最大有效浓度(EC50)的半最大有效浓度(EC50)降低CD33的细胞表面水平(例如，在体外降低原代人树突状细胞上CD33的细胞表面水平)；d)对人CD33具有可在约0.061nM至约0.40nM的范围内的解离常数(KD)，例如当KD通过表面等离子体共振或生物膜干涉测量法测定时；和/或e.降低CD33的细胞表面水平(例如，在体外降低原代人树突状细胞上CD33的细胞表面水平)，其中半最大有效浓度(EC50)可在约78pM至约40pM的范围内，例如当在体外通过流式细胞术测定EC50时。如本文所公开的，半最大有效浓度(EC50)是指本公开的抗CD33抗体将细胞上或细胞中CD33的细胞水平降低到未处理细胞的CD33的细胞水平的一半的浓度，或者抗体实现与细胞上的CD33的半最大结合的浓度。
有利地，本公开的抗CD33抗体相较于对照抗CD33抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)更高效地(例如，以较低的EC50)降低CD33的细胞表面表达(例如，高达约1.6倍或高达18倍)(参见例如，实施例3)。此外，有利的是，本公开的抗CD33抗体相较于对照抗CD33抗体(例如，具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)对CD33具有较高的亲和力(例如，高达约7倍的高亲和力)(例如，如通过表面等离子体共振测量的较低的KD值)。令人惊讶的是，对CD33的更高亲和力不一定与CD33的细胞表面表达减少的能力或效力的增加相关。
本公开的某些方面至少部分地基于抗CD33抗体或一种或多种化学治疗剂和/或多种癌症疫苗的鉴定，所述抗CD33抗体表现出一种或多种改善的和/或增强的功能特征(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的轻链可变区的抗CD33抗体)，所述改善的和/或增强的功能特征包括改善的/增强的降低细胞上CD33的细胞表达水平，从而导致一种或多种CD33活性的降低、中和、阻止或抑制的能力，所述能力包括但不限于减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；减少由树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活；减少中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的整体功能；抑制对不同类型癌症的有益免疫反应，所述癌症选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对不同类型神经病症的有益免疫反应，所述神经病症选自痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化疾病；与肿瘤细胞上的CD33配体结合；与树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体结合；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；在小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体诸如CD86的调节性表达；增强免疫抑制性树突状细胞、免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源的抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞、免疫抑制性中性粒细胞和调节性T细胞中的一种或多种向肿瘤的浸润；增加肿瘤、外周血或其它淋巴样器官中肿瘤促进性髓样/粒细胞免疫抑制性细胞的数量；增强髓样来源抑制性细胞的肿瘤促进活性；降低具有肿瘤杀伤潜能的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；减少具有肿瘤杀伤潜能的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；增加肿瘤生长速率；增加肿瘤复发率；降低调节抗肿瘤T细胞反应的一种或多种免疫疗法的功效，任选地，其中所述一种或多种免疫疗法是靶向一种或多种蛋白质的免疫疗法，所述蛋白质选自CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR-5、CD39、CD70、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD447、CSF-1受体及其任意组合。
在一些实施方案中，用本文所述的抗CD33抗体治疗癌症可以：(i)增加肿瘤浸润CD3+T细胞的数量；(ii)降低非致瘤CD14+髓样细胞中CD33的细胞水平，任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞是肿瘤浸润细胞，或任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞存在于血液中；(iii)减少非致瘤CD14+髓样细胞的数量，任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞是肿瘤浸润细胞，或任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞存在于血液中；(iv)降低一种或多种细胞中的PD-L1、PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性髓样来源抑制性细胞(MDSC)；(v)降低实体瘤的肿瘤生长速率；(vi)减小肿瘤体积；(vii)提高一种或多种PD-1抑制剂的功效；(viii)提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地，其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或其任意组合中的一种或多种；(ix)提高一种或多种化学治剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类、多柔比星
Figure BDA0003037444680000441
表柔比星
Figure BDA0003037444680000442
紫杉烷类、紫杉醇
Figure BDA0003037444680000443
多西他赛
Figure BDA0003037444680000444
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003037444680000445
卡铂
Figure BDA0003037444680000451
及其任意组合；(x)在非致瘤性髓样来源抑制性细胞(MDSC)存在的情况下，增加T细胞的增殖；(xi)抑制非致瘤性髓样来源抑制性细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；以及(xii)当与化学或放射性毒素缀合时，杀伤实体瘤和相关血管中CD33表达免疫抑制剂非致瘤性髓样细胞和/或非致瘤性CD14表达细胞。
在一些实施方案中，本公开的髓样细胞包括但不限于CD45+CD14+髓样细胞、CD14+髓样细胞和髓样来源抑制性细胞(MDSC)。在一些实施方案中，本公开的髓样细胞是非致瘤性髓样细胞。免疫抑制细胞有时也被称为髓样来源抑制性细胞(MDSC)。在人中，MDSC可由以下标志物的组合之一定义：(1)CD14+HLA-DRlow/-、(2)CD14+IL4Rα+、(3)CD14+HLA-DR-IL4Rα+、(4)CD34+CD14+CD11b+CD33+、(5)CD11b+CD14+CD33+、(6)CD33+HLA-DR-、(7)Lin-HLA-DR-、(8)Lin-HLA-DR-CD33+、(9)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+、(10)Lin-CD33+CD11b+CD15+、(11)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+CD14-CD15+、(12)CD11b+CD14-CD33+、(13)CD11b+CD14-HLA-DR-CD33+CD15+、(14)CD33+HLA-DR-CD15+、(15)CD15+IL4Rα+、(16)CD11b+CD15+CD66b+、(17)CD15+FSClow SSChigh、(18)CD15high CD33+、(19)CD11b+CD14-CD15+、(20)CD66b+SSChigh以及(21)CD11b+CD15+(也参见Solito S等人Annals of the NY Academy ofSciences,2014)。在小鼠中，MDSC可通过表面标志物CD45+、CD11b+、Gr1+和/或Il4Ra+的表达来定义。其它示例性免疫抑制性单核细胞谱系是CD45+、CD11b+、Gr1low；和CD45+、CD11c+。
CD33蛋白
一方面，本公开提供了抗体，诸如分离的(例如，单克隆)抗体，其与本公开的CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其它方式与所述区域结合。在一些实施方案中，抗体以提高/增强的动力学(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)与本公开的CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其它方式与所述区域结合。在一些实施方案中，抗体以低于对照抗体(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的半最大有效浓度(EC50)的半最大有效浓度与人细胞(诸如树突状细胞)上的CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其它方式与所述区域结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与CD33蛋白结合，并在与CD33蛋白结合后调节一种或多种CD33活性，例如，与细胞上CD33表达相关的活性。本公开的CD33蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、小鼠CD33蛋白和大鼠CD33蛋白。
CD33被不同地称为CD33分子、Siglec3、Siglec-3、CD33抗原(Gp67)、P67、Gp67、唾液酸-结合-Ig-样凝集素3、髓样细胞表面抗原CD33或FLJ00391。
CD33是主要在髓样谱系细胞(包括但不限于巨噬细胞、树突状细胞、破骨细胞、单核细胞和小神经胶质细胞)上表达的免疫球蛋白样受体。在一些实施方案中，CD33与CD64形成受体信号传导复合物。在一些实施方案中，CD33信号传导导致PI3K或其它细胞内信号的下游抑制。在髓样细胞上，Toll样受体(TLR)信号例如在感染反应的情况下对于抑制CD33活性很重要。TLR在病理性炎症反应中也起着关键作用，例如在巨噬细胞和树突状细胞中表达的TLR。
人CD33的氨基酸序列如下面SEQ ID NO:1所示：
MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ
食蟹猴CD33的氨基酸序列如下面SEQ ID NO:2所示：
MDGEHLKGRNQGAQETSASDMPLLLLPLLWAGALAMDPRVRLEVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPVPYHTRNSPVHGYWFREGAIVSLDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMEKGSTKYSYKSTQLSVHVTDLTHRPQILIPGALDPDHSKNLTCSVPWACEQGTPPIFSWMSAAPTSLGLRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFPGAGVTTERTIQLNVSYASQNPRTDIFLGDGSGKQGVVQGAIGGAGVTVLLALCLCLIFFTVKTHRRKAARTAVGRIDTHPATGPTSSKHQKKSKLHGATETSGCSGTTLTVEMDEELHYASLNFHGMNPSEDTSTEYSEVRTQ
在一些实施方案中，CD33是包含信号序列的前蛋白。在一些实施方案中，CD33是成熟蛋白。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白不包括信号序列。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白在细胞上表达。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白在细胞上(诸如细胞表面)表达，所述细胞包括但不限于人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人中性粒细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。本公开的抗CD33抗体可以结合在本文公开的任何细胞上表达的本公开的任何CD33蛋白。
本公开的CD33蛋白，诸如人CD33，包含几个结构域，包括但不限于，位于SEQ IDNO:1的氨基酸残基1-17处的信号序列、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基19-135处的胞外免疫球蛋白样可变型(IgV)结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基145-228处的Ig样C2型结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基260-282的跨膜结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基338-343处的ITIM基序1以及位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基356-361处的ITIM基序2。如本领域技术人员将理解的，本公开的结构域的起始和结束残基可根据所使用的计算机建模程序或用于确定域的方法而变化。
本公开的某些方面提供了与人CD33或其同源物，包括但不限于哺乳动物CD33蛋白和来自其它物种的CD33直系同源物结合的抗CD33抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以提高的/增强的结合动力学和/或提高的活性(诸如降低CD33的细胞水平(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体))与人CD33或其同源物结合。
因此，如本文中所用，本公开的“CD33”蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、灵长类动物CD33蛋白、小鼠CD33蛋白和大鼠CD33蛋白。此外，本公开的抗CD33抗体可以结合人CD33蛋白、灵长类动物CD33中的表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可与人CD33特异性结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可与食蟹猴CD33结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可与人CD33和食蟹猴CD33结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体可以以pH依赖性方式结合CD33。在一些实施方案中，本公开的抗体可以在中性pH值下与CD33结合，并被内化而不与CD33蛋白解离。或者，在酸性pH值下，本公开的抗体一旦被内化，就可从CD33解离，然后通过内体/溶酶体途径降解。在某些实施方案中，抗CD33抗体在5.5至8.0、5.5至7.5、5.5至7.0、5.5至6.5、5.5至6.0、6.0至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、7.5至8.0、6.0至7.5、6.0至7.0、6.5至7.5的度范围内的pH值下结合CD33。在某些实施方案中，抗CD33抗体在低于6.0、低于5.5、低于5.0、低于4.5、低于4.0、低于3.5、低于3.0、低于2.5或低于2.0的pH值下与CD33解离。
在一些实施方案中，本公开的抗体与本公开的野生型CD33蛋白、其天然存在的变体和/或其疾病变体结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体包含具有(C)核苷酸的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444C。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平并且/或者与CD33结合或相互作用的本公开的抗体与人CD33的变体结合，其中所述变体包含具有(A)核苷酸的SNP rs3865444。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33的变体，其中所述变体包含SNP rs3865444AC或rs3865444CC。
在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平并且/或者与CD33结合或相互作用的本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体包含具有GG核苷酸、AA核苷酸或AG核苷酸的SNP rs35112940。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平并且/或者结合CD33或与CD33相互作用的本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体包含具有CC、CT或TT基因型的SNPrs12459419。在某些实施方案中，受试者对于编码SNP(具有GG核苷酸、CG核苷酸或CC核苷酸的rs1803)为纯合子的或杂合子的。
在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平并且/或者与CD33结合或相互作用的本公开的抗体与在细胞表面上表达的CD33蛋白结合，所述细胞包括但不限于人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平并且/或者与CD33结合或相互作用的本公开的抗体，与在细胞表面上表达的CD33蛋白结合，并在与表面表达的CD33蛋白结合后调节(例如，诱导或抑制)本公开的至少一种CD33活性。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体与CD33蛋白特异性结合。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体还与至少一种另外的Siglec蛋白结合。在一些实施方案中，抗CD33抗体调节至少一种另外的Siglec蛋白或表达至少一种另外的Siglec蛋白的细胞的一种或多种活性。
CD33配体
本公开的CD33蛋白可与一种或多种CD33配体相互作用(例如，结合)。
示例性CD33配体包括但不限于唾液酸、含唾液酸的糖脂、含唾液酸的糖蛋白、含α-2,6-连接的唾液酸的糖脂、含α-2,6-连接的唾液酸的糖蛋白、含α-2,3-连接的唾液酸的糖脂、含α-2,3-连接的唾液酸的糖蛋白、α-1-酸糖蛋白(AGP)、CD24蛋白、神经节苷脂(例如，含与唾液酸化的聚糖连接的神经酰胺的糖脂)、分泌的粘蛋白、红细胞上表达的CD33配体、细菌细胞上表达的CD33配体、凋亡细胞上表达的CD33配体、肿瘤细胞上表达的CD33配体、病毒上表达的CD33配体、树突状细胞上表达的CD33配体、神经细胞上表达的CD33配体、神经胶质细胞上表达的CD33配体、小神经胶质细胞上表达的CD33配体、星形胶质细胞上表达的CD33配体、β淀粉样斑块上的CD33配体、Tau缠结上的CD33配体、致病蛋白上的CD33配体，致病肽上的CD33配体、巨噬细胞上表达的CD33配体、天然杀伤细胞上表达的CD33配体、T细胞上表达的CD33配体、辅助T细胞上表达的CD33配体、细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、B细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫抑制性巨噬细胞上表达的CD33配体、髓样来源抑制性细胞上表达的CD33配体以及调节性T细胞上表达的CD33配体。在一些实施方案中，本公开的CD33配体是神经节苷脂。神经节苷脂通常共享共同的乳神经酰胺(lacto-ceramide)核心和一个或多个唾液酸残基。
合适的神经节苷脂配体的其它实例列于表A中。一般来说，神经节苷脂是由糖链上连接有一个或多个唾液酸(例如，正-乙酰基-神经氨酸，NANA)的鞘糖脂组成的分子。
表A：示例性神经节苷脂CD33配体的结构
Figure BDA0003037444680000511
Figure BDA0003037444680000521
抗CD33抗体
本公开的某些方面涉及包含一种或多种改善的和/或增强的功能特征的抗CD33抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体相对于参考或对照抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)包含一种或多种改善的和/或增强的功能特征。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对CD33(例如，人CD33)的亲和力高于参考或对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)对CD33的亲和力。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人细胞，例如人原代树突状细胞结合，其半最大有效浓度(EC50)低于参考或对照抗体(例如，包含含有SEQ IDNO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的半最大有效浓度。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，降低或减少细胞表面水平)，其半最大有效浓度(EC50)低于参考或对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的半最大有效浓度。
CD33的细胞水平可以指但不限于CD33的细胞表面水平、CD33的细胞内水平和CD33的总水平。在一些实施方案中，CD33的细胞水平的降低包括CD33的细胞表面水平的降低。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平)的本公开的抗CD33抗体具有以下特征中的一种或多种：(1)抑制或降低一种或多种CD33活性；(2)抑制或减少CD33与其配体中的一种或多种配体结合的能力；(3)降低CD33表达细胞中CD33表达的能力；(4)与CD33蛋白相互作用、结合或识别CD33蛋白的能力；(5)与CD33蛋白特异性相互作用或结合CD33蛋白的能力；以及(6)治疗、改善或预防本文所述或预期的疾病或病症的任何方面的能力。
本公开的抗CD33抗体可对靶抗原(例如，人CD33)具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。在某些实施方案中，抗体的解离常数(KD)为约0.001nM至约100nM。在某些实施方案中，抗体的KD为约0.01nM至约10nM。在某些实施方案中，抗体的KD抗体为约0.23至约3.88nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约或等于约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM或.005nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约0.40nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约0.30nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约0.20nM。在一些实施方案中，KD小于约0.10nM。在一些实施方案中，抗体的KD约为0.061nM。在一些实施方案中，抗体的KD大于约或等于约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM 3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM。也就是说，抗体的KD可以是上限为约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、.05nM、.01nM或.005nM并且独立地选择的下限为约.001nM、.005nM、.01nM、.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM 3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM.20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM的亲和力范围中的任一个，其中所述下限小于所述上限。在一些实施方案中，抗体的KD是约10nM、约9nM、约8nM、约7nM、约6nM、约5nM、约4nM、约3nM、约2nM、约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约200pM或约100pM中的任一个。测量抗体亲和力的各种方法在本领域中是已知的，包括例如使用表面等离子体共振或生物膜干涉测量法(参见例如，下面的实施例3)。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测定CD33的KD。在一些实施方案中，在约4℃的温度下测定CD33的KD。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或单价形式的全长抗体来测定KD。在一些实施方案中，使用二价抗体和单体重组CD33蛋白来测定KD。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对CD33的解离常数(KD)比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)低。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对靶标(例如，人CD33)的KD比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)对靶标的KD低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对靶标(例如，人CD33)的KD比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)对靶标的KD低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的KD为具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体的至少7倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对人CD33的KD为具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体的至少1.8倍。在一些实施方案中，通过表面等离子体共振来测量亲和力。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，在约4℃的温度下测量亲和力。在一些实施方案中，使用如下面实施例中所述的实验方法来测量亲和力。
本公开的抗CD33抗体可以以皮摩尔范围内的半最大有效浓度(EC50)(例如，当使用原代人树突状细胞在体外测量时)降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在某些实施方案中，抗体的EC50为约0.1pM至约500pM。在某些实施方案中，抗体的EC50为约1pM至约250pM。在某些实施方案中，抗体的EC50为约27pM至约40pM。在某些实施方案中，抗体的EC50为约78pM至约40pM。在一些实施方案中，抗体的EC50小于约或等于约500pM、400pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM或0.5pM。在一些实施方案中，抗体的EC50小于约74.3pM。在一些实施方案中，抗体的EC50大于约或等于约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、300pM或400pM。也就是说，抗体的EC50可以是上限为约500pM、400pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM或0.5pM并且独立选择的下限为约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、300pM或400pM的范围中的任一个，其中所述下限小于所述上限。在一些实施方案中，抗体的EC50为约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、15pM、20pM、25pM、30pM、35pM、40pM、45pM、50pM、55pM、60pM、65pM、70pM、75pM、80pM、85pM、90pM、95pM、100pM、105pM、110pM、115pM、120pM、125pM、130pM、135pM、140pM、145pM、150pM、155pM、160pM、165pM、170pM、175pM、180pM、185pM、190pM、195pM或200pM中的任一个。测量抗体EC50值的各种方法在本领域中是已知的，包括例如通过流式细胞术(参见例如，下面的实施例3)。在一些实施方案中，EC50使用原代人树突状细胞来在体外进行测量。是在一些实施方案中，EC50是使用原代人单核细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，EC50是使用原代人巨噬细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，EC50是使用用人CD33转染的培养细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，在约4℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在约35℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在约37℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，EC50是使用单价抗体(例如，Fab)或单价形式的全长抗体来进行测定。在一些实施方案中，EC50是使用包含恒定区的抗体来测定，所述恒定区表现出增强的Fc受体结合。在一些实施方案中，EC50是使用包含恒定区的抗体来测定，所述恒定区显示出减少的Fc受体结合。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)低的EC50(例如，如使用原代人树突状细胞在体外测量的)降低CD33的细胞水平(例如，降低或减少细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，降低或减少细胞表面水平)，其EC50比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的EC50低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，降低或减少细胞表面水平)，其EC50比参考抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体)的EC50低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍或至少约100倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC50比具有包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.2倍至1.6倍或1.1倍至1.6倍。在一些实施方案中，使用原代人树突状细胞在体外测量EC50。在一些实施方案中，EC50是使用原代人单核细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，EC50是使用原代人巨噬细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，EC50是使用用人CD33转染的培养细胞来在体外进行测量。在一些实施方案中，通过流式细胞术测量EC50。在一些实施方案中，在约25℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在约35℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，在约37℃的温度下测量EC50。在一些实施方案中，EC50是用包含恒定区的抗体来测定，所述恒定区表现出增强的Fc受体结合。在一些实施方案中，EC50是使用包含恒定区的抗体来测定，所述恒定区显示出减少的Fc受体结合。在一些实施方案中，使用如下面实施例3中所述的实验方法来测量EC50。
本文所述或本领域已知的任何基于细胞的体外测定或合适的体内模型可用于测量CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抑制。在一些实施方案中，使用本文所述或本领域已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，本公开的抗CD33抗体在饱和抗体浓度下抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％、至少30％、至少31％、至少32％、至少33％、至少34％、至少35％、至少36％、至少37％、至少38％、至少39％、至少40％、至少41％、至少42％、至少43％、至少44％、至少45％、至少46％、至少47％、至少48％、至少49％、至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33的细胞表面簇聚。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于，抵消Src家族酪氨酸激酶(诸如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的一种或多种磷酸化；对酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的募集和结合；对PLC-γ1的募集和结合，所述PLC-γ1可作为动力蛋白-1(Dynamini-1)的鸟嘌呤核苷酸交换因子；对含有SH2结构域的蛋白质(例如，Crkl)的募集和结合；对脾酪氨酸激酶Syk的募集和结合；对SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的募集和结合；对含多个SH2的蛋白的募集和结合；蛋白激酶C对Ser-307和Ser-342的磷酸化；在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中调节一种或多种抗炎细胞因子、IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF以及TNF、INF-β1a、INF-β1b或IL-6的可溶性受体的表达；减少细胞内钙动员；在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中调节一种或多种促炎细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1和MIP-1-β的表达；调节一种或多种选自C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR和CCR2的蛋白质的表达；抑制细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化；减少多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小神经胶质细胞朝向表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；激活磷酸肌醇3-激酶；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；减少由树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率，或两者；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活率；减少中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；抑制中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的细胞死亡和凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的整体功能、磷酸化含ITAM的受体；磷酸化介导ITAM信号传导的信号传导分子；减少模式识别受体的激活；减少Toll样受体的激活；减少细胞和蛋白质碎片清除的损伤相关激活；CD33与其一个或多个配体之间的相互作用；CD33和诸如CD64等的共受体之间的相互作用；减少选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、功能障碍性突触清除、非神经组织碎片清除、细菌或其它异物清除、致病蛋白清除和肿瘤细胞清除中的一种或多种清除；抑制一种或多种凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其它异物、致病蛋白质、致病肽、致病核酸、致病脂质或肿瘤细胞的吞噬作用；抑制致病核酸(诸如致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA)的清除；激活选自β淀粉样蛋白、β淀粉样斑块、淀粉样前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽的致病蛋白的清除；抑制对不同类型癌症的有益免疫反应，所述癌症选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对不同类型神经病症的有益免疫反应，所述神经病症选自痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化疾病；抑制对不同类型的炎性和感染性病症的有益免疫反应，所述炎性和感染性病症选自狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、系统性感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病和骨佩吉特病；与肿瘤细胞上的CD33配体结合；与树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体结合；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫抑制性树突状细胞、免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞或调节性T细胞；抑制一种或多种含ITAM基序的受体，诸如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10和DAP12；抑制一种或多种含基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I的受体(SEQ ID NO:104)的受体；抑制通过一种或多种模式识别受体(PRR)诸如识别病原体相关分子模式(PAMP)的受体和识别损伤相关分子模式(DAMP)的受体进行的信号传导；抑制通过一种或多种Toll样受体进行的信号传导的抑制；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ-轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；减少在小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体诸如CD86的表达；增加一个或多个CD33依赖基因的表达；对破坏的CD33依赖性基因表达进行归一化；以及减少一个或多个ITAM依赖基因诸如NFAT转录因子的表达。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体表现出CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于：增加肿瘤浸润CD3+T细胞的数量；降低CD14+髓样细胞诸如肿瘤浸润CD14+髓样细胞和存在于血液中的CD14+髓样细胞中CD33的细胞水平；减少CD14+髓样细胞，诸肿瘤浸润CD14+细胞和存在于血液中的CD14+髓样细胞的数量；降低一种或多种细胞诸如髓样来源抑制性细胞(MDSC)中的PD-L1、PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206水平；降低实体瘤的肿瘤生长速率；减小肿瘤体积；提高一种或多种PD-1抑制剂的功效；提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或其任意组合中的一种或多种的检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法)的功效；提高一种或多种化学治剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类、多柔比星
Figure BDA0003037444680000631
表柔比星
Figure BDA0003037444680000632
紫杉烷类、紫杉醇
Figure BDA0003037444680000633
多西他赛
Figure BDA0003037444680000634
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003037444680000635
卡铂
Figure BDA0003037444680000636
奥沙利铂
Figure BDA0003037444680000637
醛氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0003037444680000638
及其任意组合；在髓样来源抑制性细胞(MDSC)存在的情况下，增加T细胞的增殖；抑制髓样来源抑制性细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；以及当与化学或放射性毒素缀合时，杀伤实体瘤和相关血管中表达CD33的免疫抑制剂非致瘤性髓样细胞和/或非致瘤性CD14表达细胞。
在一些实施方案中，抗CD33抗体抑制本公开的CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)，所述CD33配体包括但不限于在红细胞上表达的CD33配体、在细菌细胞上表达的CD33配体、在凋亡细胞上表达的CD33配体、在肿瘤细胞上表达的CD33配体、在病毒上表达的CD33配体、在树突状细胞上表达的CD33配体、在神经细胞上表达的CD33配体、在神经胶质细胞上表达的CD33配体、在小神经胶质细胞上表达的CD33配体、在星形胶质细胞上表达的CD33配体、β淀粉样斑块上的CD33配体、Tau缠结上的CD33配体、致病蛋白上的CD33配体、致病肽上的CD33配体、巨噬细胞上表达的CD33配体、天然杀伤细胞上表达的CD33配体、T细胞上表达的CD33配体、辅助性T细胞上表达的CD33配体、细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、B细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞上表达的CD33配体、肿瘤包埋的免疫抑性巨噬细胞上表达的CD33配体、髓样来源抑制性细胞上表达的CD33配体、调节性T细胞上表达的CD33配体、分泌性粘蛋白、唾液酸、含唾液酸的糖脂、含唾液酸的糖蛋白、含α-2,6-连接的唾液酸的糖脂、含α-2,6-连接的唾液酸的糖蛋白、含α-2,3-连接的唾液酸的糖脂、含α-2,3-连接的唾液酸的糖蛋白、含α-2,3-连接的唾液酸的糖蛋白、α-1-酸性糖蛋白(AGP)、CD24蛋白和神经节苷脂。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与在细胞表面表达的本公开的CD33蛋白结合，并且裸抗体抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，与本发明的CD33蛋白结合的本公开的抗CD33抗体通过降低细胞表面上或细胞内可用于与这些蛋白相互作用的CD33的有效水平，来抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，与本发明的CD33蛋白结合的本公开的抗CD33抗体通过诱导CD33的降解来抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。
如本文中所用，CD33的水平可以指编码CD33的基因的表达水平；编码CD33的一种或多种转录物的表达水平；CD33蛋白的表达水平；和/或存在于细胞内和/或细胞表面上的CD33蛋白的量。本领域已知的用于测量基因表达、转录、翻译和/或蛋白质丰度或定位水平的任何方法都可用于测定CD33的水平。
另外，本公开的抗CD33抗体可用于预防以下疾病、降低以下疾病的风险或治疗以下疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染、杜氏利什曼原虫(Leishmaniadonovani)感染、B组链球菌属(Streptococcus)感染、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感(Haemophilus influenza)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于诱导或促进有此需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖；或用于降低有此需要的个体中调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是单克隆抗体。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平和/或总水平)。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的下调。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的切割。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的降解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱敏。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物来瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33的细胞水平降低和/或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33降解之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33切割之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33内化之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33脱落之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33表达下调之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并在诱导CD33脱敏之前瞬时激活CD33。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体或嵌合抗体。在本公开全文中可找到此类抗体的示例性描述。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33或其同源物，包括但不限于哺乳动物CD33蛋白结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33特异性结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33结合，并且不与来自其它物种的CD33直系同源物或同源物交叉反应。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33，但不结合食蟹猴CD33。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33和食蟹猴CD33两者。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与在细胞表面表达的本公开的CD33蛋白结合，并在与表面表达的CD33蛋白结合后调节(例如，诱导或抑制)本公开的一种或多种CD33活性。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是惰性抗体。
抗CD33抗体结合区
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合构象表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合不连续的CD33表位。在一些实施方案中，不连续的CD33表位包括两个或更多个肽、三个或更多个肽、四个或更多个肽、五个或更多个肽、六个或多个肽、七个或更多个肽、八个或更多个肽、九个或更多个肽或者10个或更多个肽。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以结合包含一个或多个肽的CD33表位。如本文所公开的，CD33表位可包含一个或多个肽，所述肽包含5个或更多、6个或更多、7个或更多、8个或更多、9个或更多、10个或更多、11个或更多、12个或更多、13个或更多、14个或更多、15个或更多、16个或更多、17个或更多、18个或更多、19个或更多、或20个或更多个SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸残基，或者5个或更多、6个或更多，7个或更多、8个或更多、9个或更多、10个或更多、11个或更多、12个或更多、13个或更多、14个或更多、15个或更多、16个或更多、17个或更多、18个或更多、19个或更多、或20个或更多对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33的表位结合，所述表位与抗CD33抗体(其包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区)所结合的CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合与抗CD33抗体(其包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区)所结合的表位基本上相同的CD33表位。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体竞争与CD33(例如人CD33)的结合。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制至少一种选自表7、表8、表9、表10、表11和表12中所列的任何抗体的抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制至少一种抗体的结合，所述抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。在一些实施方案中，当本公开的抗CD33抗体使选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体与CD33的结合相较于在所述抗CD33抗体不存在的情况下的与CD33的结合减少在约50％至约100％的范围内的量时，所述抗CD33抗体与选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体竞争与CD33的结合。在一些实施方案中，当本公开的抗CD33抗体使选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体与CD33的结合相较于在所述抗CD33抗体不存在的情况下的与CD33的结合减少至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％时，所述抗CD33抗体与选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体竞争与CD33的结合。在一些实施方案中，使选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体与CD33的结合减少100％的本公开的抗CD33抗体表明，所述抗CD33抗体基本上完全阻断选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体与CD33的结合。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体和选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体以一定的量存在，所述量对应于10:1的比例、9:1的比例、8:1的比例、7:1的比例、6:1的比例、5:1的比例、4:1的比例、3:1的比例、2:1的比例、1:1的比例、0.75:1的比例、0.5:1的比例、0.25:1的比例、0.1:1的比例、0.075:1的比例、0.050:1的比例、0.025:1的比例、0.01:1的比例、0.0075:的比例、0.0050:1的比例、0.0025:1的比例、0.001:的比例、0.00075:1的比例、0.00050:1的比例、0.00025:1的比例、0.0001:的比例、1:10的比例、1:9的比例、1:8的比例、1:7的比例、1:6的比例、1:5的比例、1:4的比例、1:3的比例、1:2的比例、1:0.75的比例、1:0.5的比例、1:0.25的比例、1:0.1的比例、1:0.075的比例、1:0.050的比例、1:0.025的比例、1:0.01的比例、1:0.0075的比例、1:0.0050的比例、1:0.0025的比例、1:0.001的比例、1:0.00075的比例、1:0.00050的比例、1:0.00025的比例或1:0.0001的比例的抗CD33抗体与选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体。在一些实施方案中，抗CD33抗体以与选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体的量相比为约1.5倍至100倍，或大于100倍的量过量存在。在一些实施方案中，抗CD33抗体以与选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合的一种或多种抗体的量相比过量约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍或100倍的量存在。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33的表位结合，所述表位与由至少一种选自表7、表8、表9、表10、表11和表12中所列的任何抗体的抗体所结合的CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人CD33的表位结合，所述表位与由至少一种选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体所结合的CD33表位相同或重叠。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合由至少一种选自表7、表8、表9、表10、表11和表12中所列的任何抗体的抗体所结合的基本上相同的CD33表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合由至少一种选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体所结合的基本上相同的CD33表位。Morris(1996)Methods in Molecular Biology(Humana Press,Totowa,NJ)第66卷中的“EpitopeMapping Protocols”中提供了绘制抗体所结合的表位的详细示例性方法。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与一种或多种抗体竞争与CD33(例如，人CD33)的结合，所述一种或多种抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。
可利用本领域已知的任何合适的竞争测定或CD33结合测定，诸如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞术，来确定抗CD33抗体是否与一种或多种抗体竞争与CD33的结合，所述一种或多种抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。在示例性竞争测定中，将固定的CD33或在细胞表面上表达CD33的细胞在溶液中进行孵育，所述溶液包含与CD33结合的第一标记的抗体(例如，人或非人灵长类动物)和正对其测试其与所述第一抗体竞争与CD33的结合的能力的第二未标记的抗体。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的CD33或表达CD33的细胞在包含第一标记的抗体但不包含第二未标记的抗体的溶液中进行孵育。在允许第一抗体与CD33结合的条件下孵育后，除去过量的未结合的抗体，并测量与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记物的量。如果与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记物的量在测试样品中相对于对照样品显著减少，那么这表明第二抗体与第一抗体竞争与CD33的结合。参见，Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
抗CD33抗体轻链和重链可变区
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或多个或全部三个)选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表7所示)的HVR。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表7所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或多个或全部三个)选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表8所示)的HVR。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表8所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含(a)轻链可变区，其包含选自任一种抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的至少一个、两个或三个HVR，所述抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53、6C7H54及其任意组合；和/或(b)重链可变区，其包含选自任一种抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的至少一个、两个或三个HVR，所述抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53、6C7H54及其任意组合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下HVR的HVR：(i)HVR-L1，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列；(ii)HVR-L2，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列；(iii)HVR-L3，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列；(iv)HVR-H1，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列；(v)HVR-H2，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列；和(vi)HVR-H3，其包含来自选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3包含来自如下抗体的EU或Kabat CDR、Chothia CDR或Contact CDR序列，所述抗体选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含以下的一个或多个：(a)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有选自SEQ ID NO:52-55的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有选自SEQ IDNO:58-62的氨基酸序列的HVR-L3；并且/或者其中所述重链可变结构域包含以下的一个或多个：(a)含有选自SEQ ID NO:8-30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有选自SEQ ID NO:38-40的氨基酸序列的HVR-H3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中(a)HVR-H1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列,HVR-L2包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(b)HVR-H1包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(c)HVR-H1包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(d)HVR-H1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:的53氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(e)HVR-H1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(f)HVR-H1包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID 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NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；(y)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(z)HVR-H1包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(aa)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(bb)HVR-H1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列；(cc)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(dd)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(ee)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(ff)HVR-H1包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(gg)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(hh)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列；(ii)HVR-H1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；(jj)HVR-H1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(kk)HVR-H1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(ll)HVR-H1包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；(mm)HVR-H1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；以及(nn)HVR-H1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列，HVR-H2包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，HVR-H3包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，HVR-L1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，HVR-L2包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列以及HVR-L3包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体中的任一种的轻链可变区；和/或选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体中的任一种的重链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含表11中所列的或选自以下抗体的抗体中的任一种的轻链可变区：6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54，和/或表12中所列的或选自以下抗体的抗体中的任一种的重链可变区：6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:94-103中任一个的氨基酸序列的轻链可变区；和/或含有选自SEQ ID NO:65-93中任一个的氨基酸序列的重链可变结构域。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:98的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ IDNO:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列；并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
在一些实施方案中，提供了抗CD33抗体，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施方案中的VH和如以上提供的任何实施方案中的VL。在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施方案中的VH和如以上提供的任何实施方案中的VL。在一个实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含选自SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92和93的VH序列；和选自SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102和103的VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的VH序列和VL序列
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其中所述抗体包含如以上提供的任何实施方案中的VH和如以上提供的任何实施方案中的VL。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含选自SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92和93的VH序列；和选自SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102和103的VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含选自6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54的抗体的VH序列和VL序列
在另一方面，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域(VH)序列，其与SEQ IDNO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参考序列包含取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗CD33抗体保留与CD33结合的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93中共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗CD33抗体包含SEQ ID NO:65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92或93的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中，所述VH包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)含有表7所示的HVR-H1氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有表7所示的HVR-H1的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有表7所示的HVR-H3的氨基酸序列的HVR-H3。
在另一方面，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域(VL)，其与SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102或103的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在某些实施方案中，与SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102或103的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参考序列包含取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含该序列的抗CD33抗体保留与CD33结合的能力。在一些实施方案中，在SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102或103中总共有1至10个氨基酸被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102或103中总共有1至5个氨基酸被取代、插入和/或缺失。
在某些实施方案中，取代、插入或缺失在HVR之外的区域中(即，在FR中)发生。任选地，抗CD33抗体包含SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102或103的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含选自以下的一个、两个或三个HVR：(a)含有表8所示的HVR-L1的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有表8所示的HVR-L2的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有表8所示的HVR-L3的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H1。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H2。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H4。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H5。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H6。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H7。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H8。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H9。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H10。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H11。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H12。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H13。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H14。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H15。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H16。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H17。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H18。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H19。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H20。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H21。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H22。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H23。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H24。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H25。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H26。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H27。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H28。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H29。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H30。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H31。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H39。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H49。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H32。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H40。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H43。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H33。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H41。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H50。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H34。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H42。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H44。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H35。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H36。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H37。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H38。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H45。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H46。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H47。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H48。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H51。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H52。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H53。
在一些实施方案中，本文提供了抗CD33抗体，其包含(a)含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:的61氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体6C7H54。
本文提供了抗CD33抗体。所提供的抗体可用于例如CD33介导的和/或CD33相关的疾病、疾患或病症的诊断或治疗。
在一些实施方案中，根据上述实施方案中的任一个的抗CD33抗体是单克隆抗体，包括人源化抗体和/或人抗体。在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在一些实施方案中，抗CD33抗体是基本全长的抗体，例如，IgGl抗体、IgG2a抗体或如本文定义的其它抗体类或同种型。
在一些实施方案中，根据上述实施方案中的任一实施方案的抗CD33抗体可单独地或组合地包含所述特征中的任一特征，如下所述：
抗CD33抗体结合亲和力
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体具有<1μM、<100nM、<10nM、<1nM、<0.1nM、<0.01nM或<0.001nM(例如，10-8M或更小，例如，10-8M至10-13M，例如，10- 9M至10-13M)的解离常数(Kd)。解离常数可通过任何分析技术来确定，所述技术包括任何生化或生物物理技术，诸如ELISA、表面等离子体共振(SPR)、生物膜干涉测量法(参见，例如，ForteBio的Octet系统)、等温滴定量热法(ITC)、差示扫描量热法(DSC)、圆二色法(CD)、停流分析以及比色或荧光蛋白质熔化分析。在一个实施方案中，通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)来测量Kd。在一些实施方案中，例如如Chen等人J.Mol.Biol.293:865-881(1999))中所述，用目标抗体的Fab形式及其抗原进行RIA。在一些实施方案中，使用BIACORE表面等离子体共振测定来测量Kd，例如，在25℃下用约10个反应单位(RU)的固定化抗原CM5芯片进行使用BIACORE-2000或BIACORE-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的测定。在一些实施方案中，使用单价抗体(例如，Fab)或全长抗体来测定KD。在一些实施方案中，使用单价形式的全长抗体来测定KD。
抗体片段
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，以及下文描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，参见，例如，WO 93/16185；和美国专利第5571894号和第5587458号。关于包含补救受体结合表位残基并具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，参见美国专利第5869046号。
双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。参见，例如，EP404097；WO 1993/01161；Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)。在Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)中也描述了三抗体和四抗体。单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(参见，例如，美国专利第6248516号)。
抗体片段可通过各种技术制备，所述技术包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞(例如，大肠杆菌(E.coli)或噬菌体)产生，如本文所述的。
嵌合抗体和人源化抗体
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。例如，在美国专利第4816567号中描述了某些嵌合抗体。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物诸如猴子的可变区)和人恒定区。在另外的实例中，嵌合抗体是“类转换”抗体，其中所述类或亚类已经从亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体是人源化抗体。通常地，非人抗体被人源化以降低对人的免疫原性，同时保持亲本非人抗体的特异性和亲和力。在某些实施方案中，人源化抗体在人中基本上无免疫原性。在某些实施方案中，人源化抗体对靶标的亲和力与来自所述人源化抗体所源自的另一物种的抗体基本上相同。参见，例如，美国专利第5530101号、第5693761号、第5693762号和第5585089号。在某些实施方案中，鉴定了可被修饰而不降低抗原结合结构域的天然亲和力，同时降低其免疫原性的抗体可变结构域的氨基酸。参见，例如，美国专利第5766886号和第5869619号。通常，人源化抗体包含一个或多个其中HVR(或其部分)源自非人抗体，而FR(或其部分)源自人抗体序列的可变结构域。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，HVR残基所源自的抗体)的相应残基取代，例如，以恢复或提高抗体特异性或亲和力。
人源化抗体和制备它们的方法在例如Almagro等人Front.Biosci.13:161 9-1633(2008)中进行了综述，并进一步描述于例如美国专利第5821337号、第7527791号、第6982321号和第7087409号。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法(参见，例如，Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))选择的框架区；源自具有特定亚组的轻链或重链可变区的人抗体的共有序列的框架区(参见，例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285(1992)；和Presta等人，J.Immunol.151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(参见，例如，Almagro和FranssonFront.Biosci.13:1619-1633(2008))；和源自筛选FR文库的框架区(参见，例如，Baca等人J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
人抗体
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体是人抗体。人抗体可使用本领域已知的各种技术来产生。在van Dijk等人Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中一般性地描述了人抗体。
人抗体可通过向转基因动物施用免疫原来制备，所述转基因动物已被修饰成响应抗原攻击而产生完整的人抗体或具有人可变区的完整抗体。人们可用人Ig基因座的大片段来工程改造小鼠抗体产生缺陷的小鼠品系，预期这种小鼠在没有小鼠抗体的情况下会产生人抗体。大的人Ig片段可以保持大的可变基因多样性以及抗体产生和表达的适当调节。通过利用抗体多样化和选择以及缺乏对人蛋白的免疫耐受性的小鼠机制，在这些小鼠品系中复制的人抗体库可以产生针对任何目标抗原(包括人抗原)的高亲和力全人抗体。使用杂交瘤技术，可以产生和选择具有所需特异性的抗原特异性人MAb。在美国专利第5545807号、EP546073和EP 546073中描述了某些示例性方法。也参见，例如，描述XENOMOUSETM技术的美国专利第6075181号和第6150584号；描述
Figure BDA0003037444680001041
技术的美国专利第5770429号；描述K-M
Figure BDA0003037444680001042
技术的美国专利第7041870号和描述
Figure BDA0003037444680001043
技术的美国专利申请公布第US 2007/0061900号。可以例如通过与不同的人恒定区组合来进一步修饰由此类动物产生的完整抗体的人可变区。
人抗体还可通过基于杂交瘤的方法来制备。已经描述了用于生产人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异型骨髓瘤细胞系。(参见，例如，Kozbor J.Immunol.133:3001(1984)和Boerner等人J.Immunol.147:86(1991))。也在Li等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中描述了通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。其它方法包括例如美国专利第7189826号(描述了从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)中描述的那些方法。也在Vollmers等人Histology and Histopathology 20(3):927-937(2005)和Vollmers等人Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3):185-91(2005)中描述了人杂交瘤技术(Trioma技术)。人抗体也可通过分离从人来源的噬菌体展示文库中选择的Fv克隆可变结构域序列来产生。此类可变结构域序列然后可以与期望的人恒定结构域组合。下面描述从抗体文库中选择人抗体的技术。
在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体是通过体外方法和/或筛选具有所需活性的抗体的组合文库分离的人抗体。合适的实例包括但不限于噬菌体展示(CAT、Morphosys、Dyax、Biosite/Medarex、Xoma、Symphogen、Alexion(先前为Proliferon)、Affimed)、核糖体展示(CAT)、酵母展示(Adimab)等。在某些噬菌体展示方法中，通过聚合酶链式反应(PCR)分别克隆VH和VL基因的库，并且所述VH和VL基因的库在噬菌体文库中随机重组，然后可如Winter等人Ann.Rev.Immunol.12:433-455(1994)中所述筛选其抗原结合噬菌体。例如，本领域中已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选具有所需结合特性的此类抗体文库。还参见Sidhu等人J.Mol.Biol.338(2):299-310,2004；Lee等人J.Mol.Biol.340(5):1073-1093,2004；Fellouse Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；以及Lee等人J.Immunol.Methods 284(-2):1 19-132(2004)。噬菌体通常以单链抗体Fv(scFv)片段或Fab片段的形式展示抗体片段。来自免疫源(immunizedsources)的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而无需要构建杂交瘤。或者，如Griffiths等人EMBO J.12:725-734(1993)所述，可以克隆(例如，从人)原初库(naiverepertoire)以提供针对各种非自身抗原和自身抗原的单一抗体源，而无需任何免疫。最后，原始库还可通过从干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用包含随机序列的PCR引物来编码高度可变的HVR3区并在体外完成重排来合成地产生，如Hoogenboom等人J.Mol.Biol.,227:381-388,1992所述的。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利第5750373号、美国专利公开第2007/0292936号和第2009/0002360号。从人抗体文库中分离的抗体在本文中被认为是人抗体或人抗体片段。
包括Fc区的恒定区
在某些实施方案中，抗CD33抗体是拮抗性抗体。在某些实施方案中，抗CD33抗体是激动性抗体或惰性抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体属于IgG类，并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在本文提供的抗体中的任何抗体的一些实施方案中，抗体包含Fc。在一些实施方案中，Fc是人IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。
在某些实施方案中，Fc区包括下表E中所列的Fc变体。Fc变体可具有或不具有C端赖氨酸残基，如表E所示。
表E：人Fc变体
Figure BDA0003037444680001061
Figure BDA0003037444680001071
Figure BDA0003037444680001081
Figure BDA0003037444680001091
Figure BDA0003037444680001101
Figure BDA0003037444680001111
另外的抗CD33抗体，例如与本公开的CD33蛋白特异性结合的抗体，可以通过本领域已知的各种测定来鉴定、筛选和/或表征其物理/化学性质和/或生物活性。
能够结合Fcγ受体的抗CD33抗体
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体保持结合Fcγ受体的能力。在一些实施方案中，当此类抗体具有与受体激活相容的正确表位特异性时，它们可具有使它们能够簇聚并瞬时刺激例如CD33受体的特征。在一些实施方案中，此类抗体随后可通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33的溶酶体降解而作为CD33表达和/或CD33蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。
在体内，本公开的抗CD33抗体可通过多种潜在机制中的任一种或多种簇聚受体并瞬时激活CD33。人抗体的一些同种型，诸如IgG2，由于其独特的结构而具有簇聚受体或以簇聚的构型保留受体的内在能力，从而瞬时激活受体(诸如CD33)，而不结合Fc受体(例如，White等人，(2015)Cancer Cell 27,138–148)。
在一些实施方案中，其它抗体可通过与相邻细胞上的Fcg受体结合来簇聚受体(例如，CD33)。在一些实施方案中，抗体的恒定IgG Fc区与Fcg受体的结合可导致抗体的聚集，而抗体又可通过其可变区聚集与它们所结合的受体(Chu等人(2008)Mol Immunol,45:3926-3933；和Wilson等人,(2011)Cancer Cell 19,101–113)。在一些实施方案中，与不引起细胞因子分泌、氧化爆发、吞噬作用增强和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)增强的抑制性Fcg受体FcgR(FcgRIIB)的结合是体内簇聚抗体的优选方式，因为与FcgRIIB的结合与不利的免疫反应效应无关。
本公开的抗CD33抗体可通过其它机制簇聚受体。例如，如上所述，交联在一起的抗体片段(例如Fab片段)可用于以类似于具有结合Fcg受体的Fc区的抗体的方式簇聚受体(例如，CD33)。在一些实施方案中，如果交联的抗体片段(例如，Fab片段)在细胞表面上诱导受体簇聚并结合靶标(例如，CD33)上的适当表位，则它们可以暂时用作激动性抗体。
因此，在一些实施方案中，结合CD33蛋白的本公开的抗体可包括这样的抗体，所述抗体由于其表位特异性而结合CD33并在它们例如降低CD33的细胞水平、抑制一种或多种CD33活性和/或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)之前瞬时激活一种或多种CD33活性。在一些实施方案中，此类抗体可与CD33上的配体结合位点结合，并瞬时模拟天然配体的作用，或者通过与一个或多个不是配体结合位点的结构域结合来刺激靶抗原转导信号。在一些实施方案中，此类抗体不会干扰配体结合。在一些实施方案中，无论抗体是否与CD33上的配体结合位点结合，抗体都可随后通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33的溶酶体降解而作为CD33表达和/或CD33蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。在一些实施方案中，抗体在与细胞中表达的CD33蛋白结合后瞬时诱导一种或多种活性。在一些实施方案中，CD33蛋白在细胞表面上表达。在一些实施方案中，由本公开的抗CD33抗体瞬时诱导的CD33蛋白的一种或多种活性可包括但不限于，Src家族酪氨酸激酶(诸如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化；对酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的募集和结合；对PLC-γ1的募集和结合，所述PLC-γ1可作为动力蛋白-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；对含有SH2结构域的蛋白质(例如，Crkl)的募集和结合；对脾酪氨酸激酶Syk的募集和结合；对SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的募集和结合；对含多个SH2的蛋白的募集和结合；蛋白激酶C对Ser-307和Ser-342的磷酸化；在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中调节一种或多种抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF以及TNF、INF-β1a、INF-β1b或IL-6的可溶性受体的表达；减少细胞内钙动员；在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞中调节一种或多种促炎细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1和MIP-1-β的表达；调节一种或多种选自C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR和CCR2的蛋白质的表达；抑制细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化；减少多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小神经胶质细胞朝向表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；激活磷酸肌醇3-激酶；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小神经胶质细胞的细胞生长；减少由树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率，或两者；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的存活率；减少中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的增殖；抑制中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的迁移；降低中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的一种或多种功能；抑制中性粒细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小神经胶质细胞、M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和/或M2小神经胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的细胞死亡和凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的整体功能、磷酸化含ITAM的受体；磷酸化介导ITAM信号传导的信号传导分子；减少模式识别受体的激活；减少Toll样受体的激活；减少细胞和蛋白质碎片清除的损伤相关激活；CD33与其一个或多个配体之间的相互作用；CD33与诸如CD64等的共受体之间的相互作用；减少选自凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、功能障碍性突触清除、非神经组织碎片清除、细菌或其它异物清除、致病蛋白清除和肿瘤细胞清除中的一种或多种清除；抑制一种或多种凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其它异物、致病蛋白质、致病肽、致病核酸、致病脂质或肿瘤细胞的吞噬作用；抑制致病核酸(诸如致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA)的清除；激活选自β淀粉样蛋白、β淀粉样斑块、淀粉样前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽的致病蛋白的清除；抑制对不同类型癌症的有益免疫反应，所述癌症选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌；抑制对不同类型神经病症的有益免疫反应，所述神经病症选自痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性和多发性硬化疾病；抑制对不同类型的炎性和感染性病症的有益免疫反应，所述炎性和感染性病症选自狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、系统性感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病和骨佩吉特病；抑制凋亡神经元、神经组织碎片、功能障碍性突触、非神经组织碎片、细菌、其它异物、致病蛋白、致病肽、致病核酸或肿瘤细胞中的一种或多种的吞噬作用，其中致病核酸可以是反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA，致病蛋白可以包括β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、C9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽的致病蛋白的清除；并且肿瘤细胞可来自选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌的癌症；与肿瘤细胞上的CD33配体结合；与树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体结合；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫抑制性树突状细胞、免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞或调节性T细胞；抑制一种或多种含ITAM基序的受体，诸如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10和DAP12；抑制一种或多种含基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I的受体(SEQ ID NO:104)的受体；抑制通过一种或多种模式识别受体(PRR)诸如识别病原体相关分子模式(PAMP)的受体和识别损伤相关分子模式(DAMP)的受体进行的信号传导；抑制通过一种或多种Toll样受体进行的信号传导的抑制；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ-轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；调节减少在小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体诸如CD86的表达；增加一个或多个CD33依赖基因的表达；对破坏的CD33依赖性基因表达的标准化进行归一化；以及减少一个或多个ITAM依赖性基因诸如NFAT转录因子的表达。可以利用本领域已知的和本文公开的任何合适的技术或测定来测试本公开的抗CD33抗体的瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的能力。不管此类抗体瞬时诱导的活性如何，此类抗体可随后通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33溶酶体降解而作为CD33表达和/或CD33蛋白的一种或多种活性的长期抑制剂。在一些实施方案中，CD33抗体不依赖于与Fc受体的结合瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性。
示例性抗体Fc同种型和修饰提供于下表B中。在一些实施方案中，能够结合Fcγ受体的本公开的抗CD33抗体具有列于下表B中的Fc同种型。
表B：能够结合Fcγ受体的示例性抗CD33抗体Fc同种型
Figure BDA0003037444680001181
Figure BDA0003037444680001191
Figure BDA0003037444680001201
除了表B描述的同种型之外，并且不希望受理论的束缚，认为具有人IgG1或IgG3同种型及其突变体的抗体(例如Strohl(2009)Current Opinion in Biotechnology 2009,20:685–691)(所述抗体结合人的Fcg受体I、IIA、IIC、IIIA、IIIB和/或小鼠的Fcg受体I、III和IV)也可作为瞬时激动性抗体。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体在Fc区中的残基位置处以任意组合包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个或全部十三个)氨基酸取代，所述残基位置选自：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y(残基位置根据EU编号)。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置L234A、L235A和P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置L234A、L235A、P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置K322A和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置S267E和L328F处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置C127S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含在位置S267E和L328F处的氨基酸取代。在一些实施方案中，上述氨基酸取代的编号根据EU编号。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包含人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fcγ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自V234A(Alegre等人，(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人，(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Cole等人(1999)Transplantation,68:563-571)、H268Q、V309L、A330S、P331S(US 2007/0148167；Armour等人(1999)Eur J Immunol 29:2613-2624；Armour等人(2000)The Haematology Journal 1(增刊1):27；Armour等人(2000)The Haematology Journal 1(增刊1):27)、C232S和/或C233S(White等人(2015)Cancer Cell 27,138–148)、S267E、L328F(Chu等人，(2008)MolImmunol,45:3926-3933)、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据EU编号惯例。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，其重链恒定区包含C127S氨基酸取代，其中氨基酸位置根据EU编号惯例(White等人，(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人，(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和WO2008079246)。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，其κ轻链恒定结构域包含C214S氨基酸取代，其中氨基酸位置根据EU编号惯例(White等人，(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人，(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和WO2008079246)。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包含小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包含人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fcγ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自N297A(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A(Shields等人(2001)R.J.Biol.Chem.276,6591–6604)、D270A、L234A、L235A(Hutchins等人(1995)ProcNatl Acad Sci USA,92:11980-11984；Alegre等人，(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人，(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Alegre等人(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人(2000)Cell Immunol,200:16-26)、P238D、L328E、E233D、G237D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P331S(Sazinsky等人，(2008)Proc NatlAcad Sci USA 2008,105:20167-20172)、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A和/或T394D，其中氨基酸位置根据EU编号惯例。
在一些实施方案中，抗体包含IgG2同型重链恒定区1(CH1)和铰链区(White等人，(2015)Cancer Cell 27,138–148)。在某些实施方案中，IgG2同种型CH1和铰链区含有氨基酸序列ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:105)。在一些实施方案中，抗体Fc区包含S267E氨基酸取代、L328F氨基酸取代或两者，和/或N297A或N297Q氨基酸取代，其中所述氨基酸位置根据EU编号惯例。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包含人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fcγ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代选自L235A、G237A、S228P、L236E(Reddy等人，(2000)J Immunol,164:1925-1933)、S267E、E318A、L328F、M252Y、S254T和/或T256E,其中氨基酸位置根据EU编号惯例。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有杂交IgG2/4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包含如下氨基酸序列，所述氨基酸序列包含根据人IgG2的EU编号的氨基酸118至260和根据人IgG4的EU编号的氨基酸261-447(WO 1997/11971；WO 2007/106585)。
在某些实施方案中，抗体包含小鼠IgG4恒定区(Bartholomaeus等人(2014).J.Immunol.192,2091–2098)。
在一些实施方案中，Fc区还包含选自由以下组成的组的一个或多个另外的氨基酸取代：根据EU的A330L、L234F、L235E或P331S及其任意组合。
在某些实施方案中，抗体包含在Fc区中的选自C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y及其任意组合的残基位置处的一个或多个氨基酸取代，其中残基的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G、L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G和K322A处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G、K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G、K322A和A330S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E430G、K322A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含在位置L234A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。
惰性抗体
本公开的另一类抗CD33抗体包括惰性抗体。如本文中所用，“惰性”抗体是指特异性结合其靶抗原(例如，CD33)但不调节(例如，降低/抑制或激活/诱导)抗原功能的抗体。例如，在CD33的情况下，惰性抗体不调节CD33的细胞水平，不调节CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)，或者不调节CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，不具有在细胞表面上簇聚CD33能力的抗体可以是惰性抗体，即使它们具有与受体活化相容的表位特异性。
在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可包括结合CD33的抗体，但由于其表位特异性或特征，不会降低CD33的细胞水平并且/或者抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可以用作运载物(cargo)，以例如将毒素(例如，化疗药物)转运到肿瘤细胞中。因此，在一些实施方案中，本公开的抗体是结合CD33但不能降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)或诱导CD33蛋白的一种或多种活性的惰性抗体。
降低或不降低细胞上CD33的细胞水平的抗体可以与展示与一种或多种Fcg受体的结合减少的惰性Fc区组合。此类Fc区和修饰的实例提供于下表C中。在一些实施方案中，具有惰性Fc区的抗体具有列于下表C中的Fc同种型。
抑制性抗CD33抗体
本公开的第三类抗CD33抗体包括阻断或以其它方式抑制一种或多种CD33活性的抗体。在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可包括降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平)、抑制CD33和/或一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)以及抑制CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。此类抗体通过阻止CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)或通过阻止在一种或多种CD33配体存在的情况下信号从CD33的胞外结构域转导到细胞质中来抑制CD33蛋白的一种或多种活性。抗体还可通过降低CD33的细胞表面水平(通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33的溶酶体降解)来抑制CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，此类抗CD33抗体可能不会瞬时激活CD33。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可具有本公开的瞬时激动性抗CD33抗体的表位特异性，但具有不能结合Fcg受体的Fc结构域，因此不能例如瞬时簇聚和激活CD33。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有但不限于一种或多种以下活性：减少CD33蛋白与一种或多种CD33配体(诸如含唾液酸的糖脂或含唾液酸的糖蛋白)结合的能力；减少细胞因子信号传导抑制剂(SOCS)蛋白(例如，SOCS3蛋白)与CD33蛋白结合的能力；增加CD33蛋白的蛋白酶体降解的能力；减少CD33在循环树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞表面上的功能性表达的能力；减少Src家族酪氨酸激酶诸如LCK和FYN对Tyr-340和Tyr-358磷酸化的能力；减少酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的募集和与其的结合的能力；减少PLC-g1(其作为鸟嘌呤核苷酸，发动蛋白-1(Dynamin-1)的交换因子)的募集和与其的结合的能力；减少Crkl的募集和与其的结合的能力；减少脾酪氨酸激酶Syk的募集和与其的结合的能力；减少SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的募集和与其的结合的能力；减少含多个SH2的蛋白的募集和与其的结合的能力；增加细胞内钙动员的能力；调节促炎细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α产生的能力；减少磷酸肌醇3-激酶的激活的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞生长的能力；延长单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞存活期的能力；增加多种细胞蛋白质上的酪氨酸磷酸化的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或小神经胶质细胞的吞噬活性的能力；增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的细胞增殖的能力；增加介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化的能力；增强模式识别受体的功能的能力；增加Toll样受体功能的能力；增强损伤相关分子模式(DAMP)受体的功能的能力；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)表达的能力以及增加细胞和蛋白质碎片的清除的能力。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有Fc区，所述Fc区显示出与一种或多种Fcg受体的结合减少。此类Fc区和修饰的实例提供于下表C中。在一些实施方案中，抗体具有列于下表C中的Fc同种型。
与Fcγ受体结合减少的抗体Fc同种型
在一些实施方案中，与Fcγ受体结合减少的抗CD33抗体具有下表C中所列的Fc同种型。
表C：与Fcγ受体的结合减少的示例性抗CD33抗体Fc同种型
Figure BDA0003037444680001271
Figure BDA0003037444680001281
在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，抗体包含小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，抗体包含人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。
在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自N297A、N297Q(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A、D270A、L234A、L235A(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、C226S、C229S(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P238S(Davis等人，(2007)J Rheumatol,34:2204-2210)、E233P、L234V(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P238A、A327Q,A327G,P329A(Shields RL等人，(2001)J BiolChem.276(9):6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh等人，(2001)J Virol 75,12161–12168；Oganesyan等人，(2008).Acta Crystallographica 64,700–704)、P331S(Oganesyan等人，(2008)Acta Crystallographica 64,700–704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs 5(3):406–417)、A330L、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据EU编号惯例。在某些实施方案中，Fc区还包含在对应于根据EU编号惯例的甘氨酸236的位置处的氨基酸缺失。
在一些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型，其重链恒定区包含根据EU编号惯例的C220S氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区还包含一个或多个选自根据EU编号惯例的A330L、L234F、L235E和/或P331S的另外的氨基酸取代。在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自P238S、V234A、G237A、H268A、H268Q、H268E、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据EU编号惯例(Vafa O.等人，(2014)Methods 65:114–126)。
在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包含Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区包含一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自E233P、F234V、L235A、G237A、E318A(Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984)、S228P、L234A/F234A、L236E、S241P、L248E(Reddy等人，(2000)J Immunol,164:1925-1933；Angal等人，(1993)Mol Immunol.30(1):105-8；US 8614299B2；Vafa O.等人，(2014)Methods 65:114–126)、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A和/或N297Q,其中氨基酸位置根据EU编号惯例。在一些实施方案中，抗体具有IgG4同种型，并且包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代以及在残基位置235处的L235A氨基酸取代(残基位置根据EU编号)。
在一些实施方案中，Fc区还包含一个或多个选自M252Y、S254T和/或T256E的另外的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据EU编号惯例。
其它IgG突变
在一些实施方案中，可将本文所述的一种或多种IgG1变体与A330L突变(Lazar等人，(2006)Proc Natl Acad Sci USA,103:4005-4010)或L234F、L235E和/或P331S突变中的一种或多种(Sazinsky等人，(2008)Proc Natl Acad Sci USA,105:20167-20172)组合以消除补体激活，其中氨基酸位置根据EU编号惯例。在一些实施方案中，可将本文所述的IgG变体与一种或多种突变组合，以延长人血清中抗CD33抗体的半衰期(例如，根据EU编号惯例的M252Y、S254T、T256E突变)(Dall’Acqua等人，(2006)J Biol Chem,281:23514-23524；和Strohl等人，(2009)Current Opinion in Biotechnology,20:685–691)。
在一些实施方案中，可将本公开的IgG4变体与根据
Figure BDA0003037444680001301
惯例的S228P突变(Angal等人，(1993)Mol Immunol,30:105-108)和/或与Peters等人，(2012)J BiolChem.13；287(29):24525-33)中描述的一种或多种突变组合，以增强抗体的稳定性。
双特异性抗体
本公开的某些方面涉及与本公开的CD33蛋白和第二抗原上的一个或多个结构域结合的双特异性抗体。产生双特异性抗体的方法在本领域是公知的，并在本文中进行了描述。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体与本公开的CD33蛋白的一个或多个氨基酸残基，诸如人CD33(SEQ ID NO:1)的一个或多个氨基酸残基，或对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基的CD33蛋白上的氨基酸残基结合。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。在一些实施方案中，第一抗原是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原也是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原是促进穿过血脑屏障的转运的抗原(参见，例如，Gabathuler R.,Neurobiol.Dis.37(2010)48-57)。此类第二抗原包括但不限于转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM197、羊驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿透素、多精氨酸肽、Angiopep肽诸如ANG1005(参见，例如，Gabathuler,2010)和其它在血脑屏障内皮细胞中富集的细胞表面蛋白(参见，例如，Daneman等人，PLoS One.2010年10月29日；5(10):e13741)。在一些实施方案中，第二抗原是致病蛋白，包括但不限于β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽。在一些实施方案中，第二抗原是在免疫细胞上表达的一种或多种配体和/或蛋白质，包括但不限于CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、CD3和磷脂酰丝氨酸。在一些实施方案中，第二抗原是在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
抗体片段
本公开的某些方面涉及与本公开的CD33蛋白、CD33蛋白的天然存在的变体和CD33蛋白的疾病变体中的一种或多种结合的抗体片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv或scFv片段。
在一些实施方案中，将所述抗体片段与第二CD33抗体和/或与一种或多种特异性结合致病蛋白的抗体组合使用，所述致病蛋白选自：β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽；或者与一种或多种结合免疫调节蛋白的抗体结合使用，所述免疫调节蛋白选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、CD47、CSF-1受体、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、磷脂酰丝氨酸及其任意组合。
在一些实施方案中，本公开的抗体片段可以是与本公开的任何抗CD33抗体结合相同表位的功能性片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是本公开的抗CD33抗体或抗体片段的小型化形式，其具有相应全长抗体的相同表位，但具有小得多的分子量。此类小型化的抗CD33抗体片段可具有更好的脑渗透能力和更短的半衰期，这对于成像和诊断应用是有利的(参见例如，Lütje S等人，Bioconjug Chem.2014年2月19日；25(2):335-41；TavaréR等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2014年1月21日；111(3):1108-13和Wiehr S等人，Prostate.2014年5月；74(7):743-55)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体片段与其相应的全长抗体相比具有更好的脑渗透性，并且/或者与其相应的全长抗体相比具有更短的半衰期。
抗体框架
本文所述的任何抗体还包括框架。在一些实施方案中，框架是人免疫球蛋白框架。例如，在一些实施方案中，抗体(例如，抗CD33抗体)包含如上述任何实施方案中的HVR，并且还包含受体人框架，例如，人免疫球蛋白框架或人共有框架。人免疫球蛋白框架可以是人抗体的一部分，或者非人抗体可通过用一个或多个人框架区替换一个或多个内源性框架而被人源化。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法(参见，例如，Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))选择的框架区；源自特定亚组的轻链或重链可变区的人抗体的共有序列的框架区(参见，例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(参见，例如，Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和源自筛选FR文库的框架区(参见，例如，Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
全长抗体
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有上述可变重链序列的全长重链和含有上述可变轻链序列的全长轻链。在某些实施方案中，抗CD33抗体包含SEQ ID NO:120或121的全长重链序列和SEQ ID NO:122的全长轻链序列。
CD33活性
免疫相关蛋白的被调节的表达
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可在与细胞中表达的CD33蛋白结合后调节PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达。被调节(例如，增加的或减少)的表达可包括但不限于基因表达的调节、转录表达的调节或蛋白质表达的调节。可使用本领域已知的用于确定基因、转录物(例如，mRNA)和/或蛋白质表达的任何方法。例如，Northern印迹分析可用于测定抗炎介质基因表达水平，RT-PCR可用于测定抗炎介质转录水平，蛋白质印迹分析可用于测定抗炎介质蛋白水平。
如本文中所用，如果在用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中，PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达与在未用所述抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中表达的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达相比被调节(例如，增加或减少)，则所述PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206可具有被调节的表达。在一些实施方案中，例如与未用所述抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达相比，本公开的抗CD33抗体可在受试者的一种或多种细胞中调节PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达达至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如与未用所述抗体治疗的相应受试者的一种或多种细胞中PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达相比，本公开的抗CD33抗体在受试者的一种或多种细胞中调节PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的表达达至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防与PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的异常水平相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾
Figure BDA0003037444680001351
癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以调节(例如，增加)一种或多种与神经变性疾病相关的2期小神经胶质细胞类型(疾病相关小神经胶质细胞(DAM)标志物)的表达。与静息或未活化的小神经胶质细胞相比，疾病相关小神经胶质细胞是指表现出ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2表达增加，并且小神经胶质细胞稳态分子Cx3crl和P2ry12或P2ry13表达减少的小神经胶质细胞。
因此，在一些实施方案中，例如，与一种或多种DAM标志物诸如ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2及其任意组合在未用抗CD33抗体治疗的相应个体的一种或多种细胞中的表达相比，本公开的抗CD33抗体可在个体的一种或多种细胞中使一种或多种DAM标志物ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csfl、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2或其任意组合的表达增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。参见Keren-Shaul等人Cell 169:1276-1290(2017)，其通过引用以其整体并入。在其它实施方案中，例如，与一种或多种DAM标志物诸如ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csfl、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2及其任意组合在未用抗CD33抗体治疗的相应个体的一种或多种细胞中的表达相比，本公开的抗CD33抗体可在个体的一种或多种细胞中使一种或多种DAM标志物诸如ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csfl、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2、Trem2或其任意组合的表达调节(例如增加)至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，DAM标志物是Cst7。在一些实施方案中，DAM标志物是Ccl6。在一些实施方案中，DAM标志物是Itgax。在一些实施方案中，调节是增加的表达。在一些实施方案中，DAM数量或其表达的增加与小神经胶质细胞吞噬活性的增强(包括无炎症活性的小神经胶质细胞吞噬活性的增加)相关。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体通过释放或规避至少一种小神经胶质细胞检查点分子对小神经胶质细胞免疫活性施加的限制，导致DAM的数量或表达增加。
本文还提供了确定个体对抗CD33抗体治疗是应答者还是非应答者的方法，所述方法包括以下步骤：(a)测量在治疗前从所述个体获得的样品中的与神经变性疾病(DAM)标志物(诸如例如ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csfl、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2及其任意组合)相关的一种或多种2期小神经胶质细胞类型的水平，(b)测量在第一次治疗后的时间点从所述个体获得的样品中的与神经变性疾病(DAM)标志物(诸如ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2及其任意组合)相关的一种或多种2期小神经胶质细胞类型的水平，以及(c)将在步骤ii)测量的水平与在步骤i)测量的水平进行比较，其中所述水平之间的差异表明所述个体是应答者或非应答者。在一些实施方案中，所述水平之间的差异是增加，表示所述个体是应答者。在一些实施方案中，所述水平之间的差异是降低或无变化，表示所述个体是非应答者。在一些实施方案中，DAM标志物是Cst7。在一些实施方案中，DAM标志物是Ccl6。在一些实施方案中，DAM标志物是Itgax。
骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力的增强或正常化
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可增强骨髓来源的树突状细胞在与细胞中表达的CD33蛋白结合后诱导抗原特异性T细胞增殖的能力并且/或者使所述能力正常化。
在一些实施方案中，例如，与未用本发明的拮抗性抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓来源的树突状细胞中骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，本公开的拮抗性抗CD33抗体可使受试者的一种或多种骨髓来源的树突状细胞中骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％和/或正常化。在其它实施方案中，例如，与未用本发明的拮抗性抗CD33抗体治疗的相应受试者的一种或多种骨髓来源的树突状细胞中骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，拮抗性抗CD33抗体可使受试者的一种或多种骨髓来源的树突状细胞中骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍和/或正常化。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与骨髓来源的树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力降低或失调相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾孟癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。
CD33表达细胞的增殖和存活
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可在与细胞上表达的CD33蛋白结合后增加树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞和小神经胶质细胞的增殖、存活和/或功能。
小神经胶质细胞是一种类型的神经胶质细胞，其是脑和脊髓的常驻巨噬细胞，因此在中枢神经系统(CNS)中作为主动免疫防御的第一种和主要形式。小神经胶质细胞占脑内总的神经胶质细胞群的20％。小神经胶质细胞不断清除CNS中的斑块、受损神经元和感染因子。脑和脊髓被认为是“免疫豁免”器官，因为它们通过一系列被称为血脑屏障的内皮细胞与身体其余部分分开，所述血脑屏障阻止大多数病原体到达脆弱的神经组织。在感染因子直接进入脑或穿过血脑屏障的情况下，小神经胶质细胞必须快速反应以限制炎症并在感染因子损伤敏感的神经组织之前将其破坏。由于身体其余部位的抗体不可用(很少有抗体小到能穿过血脑屏障)，小神经胶质细胞必须能够识别异物，将其吞噬，并作为激活T细胞的抗原呈递细胞。由于这一过程必须迅速完成，以防止潜在的致命损害，小神经胶质细胞对CNS中即使是微小的病理变化也极其敏感。它们获得这种敏感性的部分原因是它们拥有独特的钾通道，其可对细胞外钾即使微小的变化产生反应。
如本文中所用，本公开的巨噬细胞包括但不限于M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞。如本文中所用，本公开的小神经胶质细胞包括但不限于M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和M2小神经胶质细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以增加CD80、CD83和/或CD86在树突状细胞、单核细胞和/或巨噬细胞上的表达。
如本文中所用，如果用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者中的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖率、存活率和/或功能大于未用所述抗体治疗的相应受试者中的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能，则巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、T细胞、中性粒细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能可包括表达的增加。在一些实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能相比，本公开的抗CD33抗体可使受试者中树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能相比，本公开的抗CD33抗体可使受试者中树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率和/或功能增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与树突状细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活减少、凋亡和/或功能增加相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾孟癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。
免疫细胞的CD33依赖性活化
在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体可以增强细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性。在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体有益于预防与细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性降低相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于肿瘤，包括诸如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌等的实体瘤。
在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体可诱导T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活率、活性和/或数量的增加。在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体在髓样来源的抑制性细胞(MDSC)存在的情况下诱导T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活率、活性和/或数量的增加。
如本文中所用，如果用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率、活性和/或数量大于未用所述抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率、活性和/或数量，则T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖速率、存活率、活性和/或数量可包括增加的率。在一些实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中的T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活率、活性和/或功能的水平相比，本公开的抗CD33抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活、活性和/或数量增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活率、活性和/或数量的水平相比，本公开的抗CD33抗体可使受试者中T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小神经胶质细胞的增殖、存活率、活性和/或数量增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
肿瘤相关免疫细胞的CD33依赖性抑制
在一些实施方案中，本公开的激动性抗CD33抗体可以降低活性、减少增殖、降低存活率、降低功能性、降低对肿瘤或淋巴样器官(例如，脾和淋巴结)的浸润、减少CD14+髓样细胞的数量、降低肿瘤生长速率、减小肿瘤体积、减少或抑制髓样来源的抑制性细胞(MDSC)的分化、存活率和/或一种或多种功能，并且/或者促进T调节细胞或抑制性肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞或肿瘤相关巨噬细胞或髓样来源的抑制性细胞的凋亡。在一些实施方案中，本公开的激动性抗CD33抗体有益于预防与一种或多种类型的免疫抑制性细胞的活性相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患和/或疾病包括但不限于肿瘤，包括不表达CD33的实体瘤，诸如如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、甲状腺癌和表达CD33的血液肿瘤，诸如白血病细胞。
在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体可减少CD14+髓样细胞的数量，降低肿瘤生长速率，减小肿瘤体积，或减少或抑制髓样来源的抑制性细胞(MDSC)的分化、存活率和/或一种或多种功能。
在一些实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中CD14+髓样细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积或髓样来源的抑制细胞(MDSC)的分化水平、存活率和/或一种或多种功能相比，所述抗CD33抗体可减少受试者中CD14+髓样细胞的数量、降低肿瘤生长速率、减小肿瘤体积或者减少或抑制髓样来源的抑制性细胞(MDSC)的分化、存活率和/或一种或多种功能至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的相应受试者中CD14+髓样细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积或髓样来源的抑制细胞(MDSC)的分化水平、存活率和/或一种或多种功能相比，所述抗CD33抗体可减少受试者中CD14+髓样细胞的数量、降低肿瘤生长速率、减小肿瘤体积或者减少或抑制髓样来源的抑制细胞(MDSC)的分化、存活率和/或一种或多种功能至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
检查点抑制剂疗法的功效提高
在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体可提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法，诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法的功效。
在一些实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的相应受试者中这样的一种或多种疗法的功效水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的受试者中这样的一种或多种疗法的功效提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的相应受试者中这样的一种或多种疗法的功效水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接受一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的受试者中这样的一种或多种疗法的功效提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
化学治疗剂的功效提高
在一些实施方案中，本公开的拮抗性抗CD33抗体可提高一种或多种化学治疗剂的功效，所述化疗剂是诸如吉西他滨、卡培他滨、蒽环类、多柔比星
Figure BDA0003037444680001471
表柔比星
Figure BDA0003037444680001472
紫杉烷类、紫杉醇
Figure BDA0003037444680001473
多西他赛
Figure BDA0003037444680001474
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003037444680001475
卡铂
Figure BDA0003037444680001476
奥沙利铂
Figure BDA0003037444680001477
醛氢叶酸和/或替莫唑胺
Figure BDA0003037444680001478
在一些实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种化学治疗剂的相应受试者中这样的一种或多种疗法的功效水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接受一种或多种化学治疗剂的受试者中这样的一种或多种疗法的功效提高至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其它实施方案中，例如，与未用本公开的抗CD33抗体治疗的接受一种或多种化学治疗剂的相应受试者中这样的一种或多种疗法的功效水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接受一种或多种化学治疗剂的受试者中这样的一种或多种疗法的功效提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
抗体制备
本公开的抗CD33抗体可包括多克隆抗体、单克隆抗体、人源化和嵌合抗体、人抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab’-SH、Fv、scFv和F(ab’)2)、双特异性和多特异性抗体、多价抗体、异源缀合抗体、缀合抗体、文库衍生抗体、具有经修饰的效应功能的抗体、含有抗体部分的融合蛋白、以及免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型(其包括抗原识别位点，诸如具有本公开的CD33蛋白的氨基酸残基的表位)，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗CD33抗体可以是人抗体、鼠抗体、大鼠抗体或任何其它来源(包括嵌合抗体或人源化抗体)。
(1)多克隆抗体
多克隆抗体，诸如多克隆抗CD33抗体，通常通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂在动物体内产生。可能有用的是使用双功能或衍生试剂将相关抗原(例如，本公开的纯化的或重组的CD33蛋白)与在待免疫的物种中为免疫原性的蛋白质(例如，匙孔戚血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂)缀合，所述双功能或衍生试剂是例如马来酰亚胺苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R和R1独立地是低级烷基。可使用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A、合成海藻糖(dicorynomycolate))。可以由本领域技术人员选择免疫方案，无需过多实验。
通过将例如100μg(对于兔子)或5μg(对于小鼠)的蛋白质或缀合物与3体积的弗氏完全佐剂组合，并在多个部位皮内注射该溶液，对动物进行针对所需抗原、免疫原性缀合物或衍生物的免疫。一个月后，通过在多个部位皮下注射，用1/5至1/10原始量的弗氏完全佐剂中的肽或缀合物来增强动物。7至14天后，给动物放血，并测定血清的抗体滴度。对动物进行增强直至滴度稳定。缀合物也可在重组细胞培养物中以蛋白质融合物的形式来制备。此外，聚集剂诸如明矾适合于增强免疫反应。
(2)单克隆抗体
单克隆抗体，诸如单克隆抗CD33抗体，获自基本上同质的抗体群体，即，除了可能以少量存在的可能的天然发生的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)之外，组成该群体的单个抗体是相同的。因此，修饰词“单克隆的”表示抗体的特征不是离散抗体的混合物。
例如，单克隆抗CD33抗体可使用由Kohler等人,Nature,256:495(1975)首先描述的杂交瘤方法制备，或者可通过重组DNA方法(美国专利第4,816,567号)制备。
在杂交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它合适的宿主动物，诸如仓鼠，以诱导产生或能够产生抗体的淋巴细胞，所述抗体将与用于免疫的蛋白质(例如，本公开的纯化的或重组的CD33蛋白)特异性结合。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。然后用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞(Goding,MonoclonalAntibodies:Principles and Practice，第59-103页(Academic Press,1986))。
免疫试剂将通常包括抗原性蛋白质(例如，本公开的纯化的或重组的CD33蛋白)或其融合变体。如果需要人来源的细胞，一般使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，而如果需要非人哺乳动物来源的细胞，则使用脾或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，形成杂交瘤细胞。Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,Academic Press(1986)，第59-103页。
永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿动物、牛或人来源的骨髓瘤细胞。通常，使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。将如此制备的杂交瘤细胞接种并在合适的培养基中生长，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合的亲代骨髓瘤细胞生长或存活的物质。例如，如果亲代骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常将包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培养基)，它们是阻止HGPRT缺陷型细胞生长的物质。
优选的永生化骨髓瘤细胞是那些高效融合、支持所选抗体产生性细胞稳定高水平产生抗体、并且对培养基诸如HAT培养基敏感的细胞。其中，优选的是鼠骨髓瘤细胞系，诸如源自MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤的那些细胞系(可从Salk Institute Cell DistributionCenter,San Diego,California USA获得)，以及SP-2细胞及其衍生物(例如X63-Ag8-653)(可从Manassas,Virginia USA的美国典型培养物保藏中心获得)。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也被描述用于产生人单克隆抗体(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
测定杂交瘤细胞在其中生长的培养基中针对抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体的产生。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)来确定。
可测定其中培养杂交瘤细胞的培养基中是否存在针对所需抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体。优选地，单克隆抗体的结合亲和力和特异性可通过免疫沉淀或通过体外结合测定诸如放射免疫测定(RIA)或酶联测定(ELISA)来确定。此类技术和测定在本领域中是已知的。例如，结合亲和力可通过Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)的Scatchard分析来确定。
在杂交瘤细胞被鉴定为产生所需特异性、亲和力和/或活性的抗体后，克隆可通过有限稀释程序来进行亚克隆，并通过标准方法(Goding，同上)生长。适用于此目的的培养基包括，例如，D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，可将杂交瘤细胞在哺乳动物中体内生长为肿瘤。
由亚克隆分泌的单克隆抗体通过常规免疫球蛋白纯化程序，例如蛋白A-琼脂糖凝胶色谱、羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析、亲和层析和上述其它方法，从培养基、腹水或血清中适当分离。
抗CD33单克隆抗体也可通过重组DNA方法，诸如美国专利第4,816,567号中公开的以及如上所述的方法制备。使用常规程序(例如，通过使用与编码鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)，可以容易地分离编码单克隆抗体的DNA并对其进行测序。杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA放入表达载体，然后将其转染入不以其它方式产生免疫球蛋白的宿主细胞诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以便在此类重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于编码抗体的DNA在细菌中重组表达的综述文章包括Skerra等人，Curr.Opin.Immunol.,5:256-262(1993)和Plückthun,Immunol.Rev.130:151-188(1992)。
在某些实施方案中，可从使用McCafferty等人，Nature,348:552-554(1990)中描述的技术产生的抗体噬菌体文库中分离抗CD33抗体。Clackson等人，Nature,352:624-628(1991)和Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)分别描述了从噬菌体文库中分离鼠抗体和人抗体。随后的出版物描述了通过链改组(Marks等人，Bio/Technology,10:779-783(1992))，以及组合感染和体内重组(作为构建非常大的噬菌体文库的策略)(Waterhouse等人,Nucl.Acids Res.,21:2265-2266(1993))产生高亲和力(纳摩尔(“nM”)范围)人抗体。因此，这些技术是用于分离具有所需特异性的单克隆抗体(例如，结合本公开的CD33蛋白的那些)的常规单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方案。
编码抗体或其片段的DNA也可例如通过用人重链和轻链恒定结构域的编码序列代替同源鼠序列(美国专利第4,816,567号；Morrison等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA,81:6851(1984))，或者通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或部分共价连接至免疫球蛋白编码序列来进行修饰。通常地，此类非免疫球蛋白多肽替代抗体的恒定结构域，或者它们替代抗体的一个抗原结合位点的可变结构域，以产生包含一个对抗原具有特异性的抗原结合位点和另一个对不同抗原具有特异性的抗原结合位点的嵌合二价抗体。
本文所述的单克隆抗体(例如，本公开的抗CD33抗体或其片段)可以是单价的，其制备在本领域中是公知的。例如，一种方法涉及免疫球蛋白轻链和经修饰的重链的重组表达。通常在Fc区中的任意点处将重链截短，以防止重链交联。或者，可用另一种氨基酸残基取代相关的半胱氨酸残基或缺失相关的半胱氨酸残基，以防止交联。体外方法也适用于制备单价抗体。可使用本领域已知的常规技术来完成抗体的消化以产生其片段，特别是Fab片段。
嵌合或杂交抗CD33抗体也可在体外使用合成蛋白质化学中已知的方法(包括涉及交联剂的那些方法)制备。例如，免疫毒素可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫醇盐(iminothiolate)和4-巯基丁酰亚胺酸甲酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)。
(3)人源化抗体
本公开的抗CD33抗体或其抗体片段还可包括人源化抗体或人抗体。非人(例如，鼠)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fab、Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2或抗体的其它抗原结合子序列)，其包含源自非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔的具有所需特异性、亲和力和能力的CDR的残基所替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人残基替代。人源化抗体还可包含既不存在于接受者抗体中也不存在于导入的CDR或框架序列中的残基。一般而言，人源化抗体将包含基本上全部的至少一个(通常两个)可变结构域，其中全部或基本上全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些可变结构域，并且全部或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人免疫球蛋白的恒定区)的至少一部分。Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)和Presta,Curr.Opin.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
用于人源化非人抗体的方法在本领域是公知的。通常，人源化抗体具有从非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。人源化可基本上可遵循Winter及同事的方法，Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988)，或通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的相应序列来进行。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中基本上少于完整的人可变结构域被非人物种的相应序列取代。在实践中，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。
用于制备人源化抗体的人可变结构域(包括轻结构域和重结构域)的选择对于降低抗原性非常重要。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。然后，最接近啮齿动物的人序列被接受作为人源化抗体的人框架(FR)。Sims等人，J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人，J.Mol.Biol.,196:901(1987)。另一种方法使用来源于轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可以用于几种不同的人源化抗体。Carter等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 89:4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.151:2623(1993)。
此外，重要的是使抗体人源化，同时保持对抗原的高亲和力和其它有利的生物学特性。为了实现这一目标，根据优选方法，通过使用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可用的，并且是本领域技术人员所熟悉的。计算机程序是可获得的，其说明和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构。对这些显示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受者和输入序列中选择并组合FR残基，从而获得所需的抗体特征，诸如对一种或多种靶抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的亲和力增加。一般来说，CDR残基直接且最实质性地参与影响抗原结合。
设想了各种形式的人源化抗CD33抗体。例如，人源化抗CD33抗体可以是抗体片段，诸如Fab，其任选地与一种或多种细胞毒剂缀合，以产生免疫缀合物。或者，人源化抗CD33抗体可以是完整的抗体，诸如完整的IgG1抗体。
(4)抗体片段
在某些实施方案中，使用抗CD33抗体片段比使用完整的抗CD33抗体有优势。较小的片段大小允许快速清除和更好的脑渗透。
各种技术已被开发来产生抗体片段。常规上，这些片段是通过完整抗体的蛋白水解消化获得的(参见，例如，Morimoto等人，J.Biochem.Biophys.Method.24:107-117(1992)；和Brennan等人，Science 229:81(1985))。然而，这些片段现在可以，例如，使用编码本公开的抗CD33抗体的核酸通过重组宿主细胞直接产生。Fab、Fv和scFv抗体片段都可在大肠杆菌中表达和从中分泌，因此允许直接大量产生这些片段。如上所论述，还可从抗体噬菌体文库中分离抗CD33抗体片段。或者，可将Fab’-SH片段直接从大肠杆菌中回收，并化学偶联以形成F(ab’)2片段(Carter等人，Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab’)2片段可以直接从重组宿主细胞培养物中分离。美国专利第5,869,046号中描述了具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2抗体片段的产生。在其它实施方案中，选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利第5,571,894号和美国专利第5,587,458号。抗CD33抗体片段也可以是“线性抗体”，例如，如美国专利5,641,870中所述。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
(5)双特异性抗体和多特异性抗体
双特异性抗体(BsAb)是对至少两种不同表位(包括在相同蛋白质或另一种蛋白质(例如，本公开的一种或多种CD33蛋白)上的那些)具有结合特异性的抗体。或者，可使BsAb的一部分作为臂与靶CD33抗原结合，另一部分可以与结合第二蛋白质的臂组合。此类抗体可源自全长抗体或抗体片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)。
制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的常规产生基于两个免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中所述两条链具有不同的特异性。Millstein等人,Nature,305:537-539(1983)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分类，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadromas))产生了10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和色谱步骤纯化正确的分子是相当麻烦的，并且产物产率低。WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.,10:3655-3659(1991)中公开了类似的程序。
根据不同的方法，将具有所需结合特异性的抗体可变结构域(抗体-抗原结合位点)与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。融合优选具有免疫球蛋白重链恒定结构域，包括铰链区、CH2区和CH3区的至少一部分。优选第一重链恒定区(CH1)包含轻链结合所需的位点，其存在于融合物中的至少一种中。将编码免疫球蛋白重链融合物和免疫球蛋白轻链(如果需要)的DNA插入到单独的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物体中。在实施方案中，当构建中使用的三条多肽链的不等比例提供最佳产率时，这在调整三条多肽片段的相互比例方面提供了很大的灵活性。然而，当至少两条多肽链以相等的比例表达导致高产率时，或者当该比例没有特别意义时，可以在一个表达载体中插入两条或所有三条多肽链的编码序列。
在该方法的优选实施方案中，双特异性抗体由在一个臂中具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和在另一个臂中的杂和免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)组成。发现这种不对称结构有助于将所需的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分离，因为仅一半的双特异性分子中存在免疫球蛋白轻链提供了简单的分离方式。WO94/04690中公开了这种方法。关于产生双特异性抗体的进一步细节，参见，例如，Suresh等人，Methods in Enzymology 121:210(1986)。
根据WO 96/27011或美国专利第5,731,168号中描述的另一种方法，一对抗体分子之间的界面可被工程改造成使从重组细胞培养物中回收的异二聚体的百分比最大化。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3区的至少一部分。在该方法中，来自第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链被较大的侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)替代。通过用较小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)替代较大的氨基酸侧链，在第二抗体分子的界面上产生与一种或多种大侧链大小相同或相似的补偿性“腔”。这提供了使异二聚体而非其它不想要的终产物诸如同二聚体的产率提高的机制。
文献中已经描述了从抗体片段产生双特异性抗体的技术。例如，双特异性抗体可以使用化学键联来制备。Brennan等人，Science 229:81(1985)描述了其中蛋白水解切割完整的抗体以产生F(ab’)2片段的程序。这些片段在二硫醇络合剂亚砷酸钠存在的情况下被还原，以稳定相邻的二硫醇并防止分子间二硫化物的形成。产生的Fab’片段然后被转化为硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后，将Fab’-TNB衍生物之一再转化为Fab’-TNB衍生物，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作选择性固定酶的剂。
可将Fab’片段直接从大肠杆菌中回收，并化学偶联形成双特异性抗体。Shalaby等人,J.Exp.Med.175:217-225(1992)描述了完全人源化的双特异性抗体F(ab’)2分子的产生。每个Fab’片段分别从大肠杆菌中分泌，并在体外进行定向化学偶联，以形成双特异性抗体。如此形成的双特异性抗体能够结合过表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞，并触发人细胞毒性淋巴细胞对人乳腺肿瘤靶标的裂解活性。
还描述了用于直接从重组细胞培养物中制备和分离二价抗体片段的各种技术。例如，已经使用亮氨酸拉链产生了二价异二聚体。Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合连接到两种不同抗体的Fab’部分。抗体同二聚体在铰链区被还原形成单体，然后再氧化形成抗体异二聚体。Hollinger等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)描述的“双抗体”技术提供了制备双特异性/双价抗体片段的替代机制。所述片段包含通过接头连接到轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)，所述接头太短而不允许同一链上的两个结构域配对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一个片段的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性/二价抗体片段的另一种策略。参见Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994)。
还设想了具有超过两价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tutt等人，J.Immunol.147:60(1991)。
示例性双特异性抗体可与给定分子(例如，本公开的CD33蛋白)上的两个不同表位结合。或者，靶向CD33信号传导组分的臂可以与结合白细胞上的触发分子的臂组合以便将细胞防御机制集中于表达特定蛋白质的细胞，所述触发分子是诸如T细胞受体分子(例如，CD2、CD3、CD28或B7)，或IgG的Fc受体(FcγR)，诸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。双特异性抗体也可用于将细胞毒剂定位于表达特定蛋白质的细胞。此类抗体具有蛋白质结合臂和结合细胞毒性剂或放射性核素螯合剂(诸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。另一种目标双特异性抗体结合目标蛋白质，并进一步结合组织因子(TF)。
(6)多价抗体
表达抗体所结合的抗原的细胞对多价抗体的内化(和/或分解代谢)可以比二价抗体更快。本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(其是不属于IgM类的抗体)(例如，四价抗体)，其可通过编码抗体的多肽链的核酸的重组表达而容易地产生。多价抗体可包含二聚化结构域和三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含Fc区或铰链区。在这种情况下，抗体将包含Fc区和Fc区氨基末端的三个或更多抗原结合位点。本文中的优选多价抗体包含3至约8个，但优选4个抗原结合位点。多价抗体包含至少一条多肽链(优选两条多肽链)，其中一条或多条多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，一条或多条多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一个多肽链，X1和X2代表氨基酸或多肽，并且n为0或1。类似地，一条或多条多肽链可包含VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文的多价抗体优选还包含至少两条(优选四条)轻链可变结构域多肽。本文的多价抗体可以例如包含约2至约8条轻链可变结构域多肽。此处设想的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选地，还包含CL结构域。多价抗体可识别CD33抗原以及但不限于其它抗原Aβ肽、抗原或α突触核蛋白(synuclain)蛋白抗原、或Tau蛋白抗原、或TDP-43蛋白抗原、或朊病毒蛋白抗原、或亨廷顿蛋白抗原、或RAN、翻译产物抗原，包括由甘氨酸-丙氨酸(GA)、甘氨酸-脯氨酸(GP)、甘氨酸-精氨酸(GR)、脯氨酸-丙氨酸(PA)或脯氨酸-精氨酸(PR)组成的二肽重复(DPR肽)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、转铁蛋白受体或任何其它促进抗体转移穿过血脑屏障的抗原。
(7)异源缀合抗体
异源缀合抗体也在本公开的范围内。异源缀合抗体由两个共价连接的抗体(例如，本公开的抗CD33抗体或其抗体片段)组成。例如，异源缀合物中的抗体之一可以与抗生物素蛋白偶联，另一种抗体可以与生物素偶联。例如，美国专利第4,676,980号已经提出此类抗体将免疫系统细胞靶向不想要的细胞，并且已经用于治疗HIV感染。国际公布第WO 91/00360号、WO 92/200373和EP 0308936。设想了可使用合成蛋白质化学中已知的方法(包括那些涉及交联剂的方法)在体外制备抗体。例如，可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫醇盐和4-巯基丁酰亚胺酸甲酯，以及例如在美国专利第4,676,980号中公开的那些。异源缀合抗体可使用任何方便的交联方法来制备。合适的交联剂在本领域中是公知的，并在美国专利第4,676,980中连同许多交联技术一起公开。
(8)效应功能工程改造
还可能需要修饰本公开的抗CD33抗体，以修饰效应功能和/或延长抗体的血清半衰期。例如，可修饰或突变恒定区上的Fc受体结合位点，以去除或降低对某些Fc受体诸如FcγRI、FcγRII和/或FcγRIII的结合亲和力。在一些实施方案中，通过去除抗体的Fc区(例如，在IgG的CH 2结构域中)的N-糖基化来损害效应功能。在一些实施方案中，如PCT WO 99/58572和Armour等人，Molecular Immunology 40:585-593(2003)；Reddy等人，J.Immunology 164:1925-1933(2000)中所述，通过修饰人IgG的诸如233-236、297和/或327-331等区域来损害效应功能。
例如，为了延长抗体的血清半衰期，如美国专利5,739,277所述，可将补救性受体结合表位整合到抗体(尤其是抗体片段)中。如本文中所用，术语“补救性受体结合表位”是指负责延长IgG分子体内血清半衰期的IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区的表位。
(9)其它氨基酸序列修饰
还设想了本公开的抗CD33抗体或其抗体片段的氨基酸序列修饰。例如，可能希望提高抗体或抗体片段的结合亲和力和/或其它生物学特性。通过将适当的核苷酸变化引入编码抗体或抗体片段的核酸中，或通过肽合成来制备抗体或抗体片段的氨基酸序列变体。此类修饰包括，例如，抗体氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。只要最终构建体具有所需的特征(即，与本公开的CD33蛋白结合或物理相互作用的能力)，可进行缺失、插入和取代的任何组合以得到最终构建体。氨基酸的变化也可改变抗体的翻译后加工，诸如改变糖基化位点的数量或位置。
Cunningham和Wells在Science,244:1081-1085(1989)中描述了用于鉴定抗CD33抗体的某些残基或区域(其为诱变的优选位置)的有用方法，所述方法被称为“丙氨酸扫描诱变”。此处，一个残基或一组靶残基被鉴定(例如，带电残基诸如arg、asp、his、lys和glu)，并被中性或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)替代，以影响氨基酸与靶抗原的相互作用。然后，通过在取代位点或针对取代位点引入进一步的或其它的变体，对那些对取代表现出功能敏感性的氨基酸位置进行精修。因此，虽然引入氨基酸序列变异的位点是预先确定的，但突变本身的性质不需要预先确定。例如，为了分析给定位点的突变性能，在目标密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并筛选表达的抗体变体的所需活性。
氨基酸序列插入包括长度从一个残基到包含一百个或更多残基的多肽的氨基-(“N”)和/或羧基-(“C”)末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括带有N端甲硫氨酰基残基的抗体或与细胞毒性多肽融合的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶或多肽的融合，这延长了抗体的血清半衰期。
另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中至少有一个氨基酸残基被不同的残基取代。取代诱变最感兴趣的位点包括高变区，但也设想了FR改变。保守取代显示在下表D的“优选取代”标题下。如果此类取代导致生物活性的改变，则可引入更实质性的改变(在表D中命名为“示例性取代”，或者如下面参照氨基酸类别进一步描述的)，并筛选产物。
表D：氨基酸取代
Figure BDA0003037444680001611
Figure BDA0003037444680001621
抗体生物学特性的实质性修饰是通过选择取代来实现的，所述取代在它们对维持(a)取代区域中的多肽骨架结构(例如，折叠或螺旋构象)，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性或(c)侧链的体积的作用方面具有显著差异。根据常见的侧链性质，天然存在的残基被分为几组：
(1)疏水性的：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性的：cys、ser、thr；
(3)酸性的：asp、glu；
(4)碱性的：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基：gly、pro；和
(6)芳族的：trp、tyr、phe。
非保守取代需要将这些类别之一的成员换成另一个类别。
任何不参与维持抗体正确构象的半胱氨酸残基也可以被取代，通常用丝氨酸取代，以提高分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可向抗体中添加一个或多个半胱氨酸键以提高其稳定性(特别是当抗体是抗体片段，如Fv片段时)。
一种特别优选类型的取代变体包括取代亲本抗体(例如人源化或人抗CD33抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的一种或多种所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改善的生物学特性。产生这种取代变体的方便的方式包括使用噬菌体展示的亲和力成熟。简言之，使几个高变区位点(例如，6-7个位点)突变以在每个位点产生所有可能的氨基取代。如此产生的抗体变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒中展示为与包装在每个颗粒中的M13的基因III产物的融合物。然后如本文所公开的，筛选噬菌体展示的变体的生物活性(例如，结合亲和力)。为了鉴定进行修饰的候选高变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变来鉴定对抗原结合有显著贡献的高变区残基。可选地或另外地，可能有益的是分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原(例如，本公开的CD33蛋白)之间的接触点。根据本文详述的技术，此类接触残基和相邻残基是取代的候选物。一旦产生了此类变体，就如本文所述对该小组变体进行筛选，并且可以选择在一种或多种相关测定中具有优异特性的抗体用于进一步开发。
抗体的另一种类型的氨基酸变体改变了抗体的原始糖基化模式。改变是指缺失抗体中存在的一个或多个碳水化合物部分，并且/或者添加抗体中不存在的一个或多个糖基化位点。
抗体的糖基化通常是N连接或O连接的。N连接是指碳水化合物部分连接到天冬酰胺残基的侧链上。天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸三肽序列(其中X是除脯氨酸之外的任意氨基酸)是碳水化合物部分与天冬酰胺侧链酶促连接的识别序列。因此，这些三肽序列中的任一个在多肽中的存在都会产生潜在的糖基化位点。O连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一与羟基氨基酸(最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)的连接。
通过改变氨基酸序列，使其包含一个或多个上述三肽序列，可以方便地将糖基化位点添加到抗体中(对于N连接的糖基化位点)。所述改变也可通过在原始抗体的序列中添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来实现(对于O-连接的糖基化位点)。
编码抗IgE抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过抗体(例如，本公开的抗CD33抗体)或抗体片段的早期制备的变体或非变体形式的寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒诱变进行的制备。
(10)抗体缀合物
可将本公开的抗CD33抗体或其抗体片段与可检测的标志物、毒素或治疗剂缀合。可使用本领域已知的用于将分子(诸如可检测的标志物、毒素或治疗剂)与抗体缀合的任何合适的方法。
例如，药物缀合包括将生物活性细胞毒性(抗癌)有效载荷或药物与特异性靶向特定肿瘤标志物(例如，理想情况下仅存在于肿瘤细胞中或肿瘤细胞上的蛋白质)的抗体偶联。抗体在体内追踪这些蛋白质，并将其自身附着在癌细胞表面。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生化反应在肿瘤细胞中触发信号，然后所述肿瘤细胞将抗体和细胞毒素一起吸收或内化。ADC被内化后，细胞毒性药物释放出来并杀灭癌症。由于这种靶向性，理想情况下，所述药物比其它化学治疗剂具有更低的副作用并提供更宽的治疗窗。缀合抗体的技术在本领域中是公开的和已知的(参见，例如，Jane de Lartigue,OncLive 2012年7月5日；ADC Reviewon antibody-drug conjugates；和Ducry等人，(2010).Bioconjugate Chemistry 21(1):5–13)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以与选自以下的毒素缀合：蓖麻毒素、蓖麻毒素A链、多柔比星、柔红霉素、美登木素、紫杉醇、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、二羟基蒽环二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲菌素、白树毒素、丝裂蛋白、局限曲菌素(retstrictocin)、酚霉素、依诺霉素、curicin、巴豆毒蛋白、加利车霉素、肥皂草(Saponaria officinalis)抑制剂、糖皮质激素、奥瑞斯他汀、金霉素、钇、铋、康博司汀(combrestatin)、多卡米星(duocarmycins)、多拉司他汀(dolastatin)、cc1065和顺铂。
(11)其它抗体修饰
本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可被进一步修饰以包含本领域已知且容易获得的另外的非蛋白质性质部分。优选地，适于抗体衍生的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(同聚物或无规共聚物)和葡聚糖或聚(正乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇同聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性，在制造上可能具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可以是分支的或未分支的。附接于抗体的聚合物的数量可以不同，并且如果附接了超过一种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。一般来说，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可以基于以下考虑来确定，包括但不限于待改善的抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将用于特定条件下的疗法等。此类技术和其它合适的制剂公开于Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Alfonso Gennaro，编辑，Philadelphia College of Pharmacy and Science(2000)中。
结合测定和其它测定
可以例如通过已知方法诸如ELISA、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹等测试本公开的抗CD33抗体的抗原结合活性。
在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与本文所述的任何抗体竞争的抗体。在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与表7、表8、表9、表10、表11和表12中所列的或者选自以下抗体中的任何抗体竞争与CD33的结合的抗体：6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54。在某些实施方案中，这种竞争性抗体与表7、表8、表9、表10、表11和表12中所列的或者选自以下抗体中的任何抗体所结合的相同表位(例如，线性或构象表位)结合：6C7H1、6C7H2、6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6、6C7H7、6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54。Morris(1996)Methods in Molecular Biology(Humana Press,Totowa,NJ)第66卷中的“Epitope Mapping Protocols”中提供了绘制抗体所结合的表位的详细示例性方法。
在示例性竞争测定中，将固定的CD33或在细胞表面表达CD33的细胞在溶液中孵育，所述溶液包含与CD33(例如，人或非人灵长类动物)结合的第一标记的抗体和正在测试其与所述第一抗体竞争与CD33的结合的能力的第二未标记的抗体。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定的CD33或表达CD33的细胞在包含第一标记的抗体但不包含第二未标记的抗体的溶液中进行孵育。在允许第一抗体与CD33结合的条件下孵育后，除去过量的未结合的抗体，并测量与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记物的量。如果与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记物的量在测试样品中相对于对照样品显著减少，那么这表明第二抗体与第一抗体竞争与CD33的结合。参见，Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,ColdSpring Harbor,NY)。
核酸、载体和宿主细胞
本公开的抗CD33抗体可使用重组方法和组合物来产生，例如，如美国专利第4,816,567号中所述。在一些实施方案中，提供了具有编码本公开的任何抗CD33抗体的核苷酸序列的分离的核酸。此类核酸可编码组成抗CD33抗体的VL的氨基酸序列和/或组成VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供了一种或多种包含此类核酸的载体(例如，表达载体)。在一些实施方案中，还提供了包含这种核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞包含以下载体(例如，已被以下载体转导)：(1)载体，其包含编码组成抗体的VL的氨基酸序列和组成抗体的VH的氨基酸序列的核酸，或(2)第一载体，其包含编码组成抗体的VL的氨基酸序列的核酸，和第二载体，其包含编码组成抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。本公开的宿主细胞还包括但不限于分离的细胞、体外培养的细胞和离体培养的细胞。
提供了制备本公开的抗CD33抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适合抗体表达的条件下培养包含编码抗CD33抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
为了重组生产本公开的抗CD33抗体，将编码抗CD33抗体的核酸分离并插入到一个或多个载体中，用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)可以容易地分离这种核酸以及对其进行测序。
包含编码本公开的任何抗CD33抗体或其片段、本文所述的多肽(包括抗体)的核酸序列的合适载体包括但不限于克隆载体和表达载体。合适的克隆载体可以根据标准技术构建，或者可以从本领域可获得的大量克隆载体中选择。虽然选择的克隆载体可以根据打算使用的宿主细胞而变化，但有用的克隆载体通常具有自我复制的能力，可以具有特定限制性内切核苷酸酶的单一靶标，并且/或者可以携带可用于选择包含所述载体的克隆的标志物的基因。合适的实例包括质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA和穿梭载体诸如pSA3和pAT28。这些和许多其它克隆载体可从商业供应商诸如BioRad、Strategene和Invitrogen处获得。
用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞包括原核细胞或真核细胞。例如，本公开的抗CD33抗体可以在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应功能时。关于在细菌中进行的抗体片段和多肽的表达(例如，美国专利第5,648,237、第5,789,199号和第5,840,523号)。表达后，可从可溶性级分中的细菌细胞浆中分离出抗体，并可将其进一步纯化。
除了原核生物之外，真核微生物，诸如丝状真菌或酵母，也是抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”，从而导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株(例如，Gerngross Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人Nat.Biotech.24:210-215(2006))。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也可源自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于草地夜蛾细胞的转染。植物细胞培养物也可以用作宿主(例如，美国专利第5,959,177号、第6,040,498号、第6,420,548号、第7,125,978号和第6,417,429号，描述了在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于悬浮生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是由SV40转化的猴肾CV1细胞系(COS-7)；人胚胎肾系(如在例如，Graham等人J.Gen Virol.36:59(1977)中描述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(sertoli cell)(如例如，在Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中描述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如，在Mather等人Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中描述的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如，Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo，编辑，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
药物组合物/制剂
本文提供了包含本公开的抗CD33抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物和/或药物制剂。
在一些实施方案中，药学上可接受的载剂优选在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒。本文所述的抗体可以配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制剂。此类制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球和气雾剂。根据所需的制剂，药学上可接受的载剂可包括药学上可接受的、无毒的稀释剂载剂，所述载剂是通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。在某些实施方案中，药物组合物可包含用于修饰、维持或保存例如组合物的pH值、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或渗透的制剂材料。
在某些实施方案中，药学上可接受的载剂包括但不限于氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗菌剂；抗氧化剂(诸如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(诸如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其它有机酸)；填充剂(诸如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(诸如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充物；单糖；二糖；和其它碳水化合物(诸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐抗衡离子(诸如钠)；防腐剂(诸如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(诸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(诸如甘露醇或山梨醇)；助悬剂；表面活性剂或润湿剂(诸如普朗尼克、PEG、脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙帕(tyloxapal))；稳定性增强剂(诸如蔗糖或山梨醇)；张力增强剂(诸如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾、甘露醇山梨醇)；递送媒介物；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。适用于各种施用类型的制剂的其它实例可见于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Pharmaceutical Press第22版(2013)中。关于药物递送方法的简要综述，参见，Langer,Science249:1527-1533(1990)。
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包含助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
可优化配方以在脑或中枢神经系统中保留和稳定。当剂被施用到颅室中时，希望剂保留在室中，并且不扩散或以其它方式穿过血脑屏障。稳定技术包括交联、多聚化或连接到诸聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白载体等基团上，以便实现分子量的增加。
用于增加保留的其它策略包括将抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)截留在可生物降解或可生物侵蚀的植入物中。治疗活性剂的释放速率由通过聚合物基质的转运速率和植入物的生物降解来控制。植入物可以是颗粒、薄片、贴片、斑块、纤维、微胶囊等，并且可具有与所选插入部位相容的任何尺寸或形状。可使用的可生物降解的聚合物组合物可以是有机酯或醚，当降解时其产生生理上可接受的降解产物，包括单体。酸酐、酰胺、原酸酯等可单独或与其它单体结合使用。聚合物将是缩聚物。聚合物可以是交联的或非交联的。特别感兴趣的是羟基脂族羧酸的聚合物(无论是同聚物还是共聚物)以及多糖。目标聚酯中包括D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、聚己内酯及其组合的聚合物。目标多糖中包括海藻酸钙和功能化纤维素，特别是羧甲基纤维素酯，其特征是不溶于水，分子量为约5kD至500kD等。可生物降解的水凝胶也可用于本公开的植入物。水凝胶通常是一种共聚物材料，其特征在于吸取液体的能力。Heller在Hydrogels in Medicine and Pharmacy,N.A.Peppes编辑，第III卷，CRC Press,Boca Raton,Fla.,1987，第137-149页中描述了可使用的示例性可生物降解的水凝胶。
药物剂量
可按照已知方法向需要利用抗体治疗的个体，优选人施用含有本公开的抗CD33抗体的本公开的药物组合物，诸如作为快速推注或通过在一段时间内连续输注来静脉内施用，通过肌内、腹膜内、脑脊髓内(intracerobrospinal)、颅内、脊柱内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径。
本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可根据所设想的特定用途而变化。确定合适的剂量或施用途径完全在普通技术人员的技能范围内。动物实验为确定人治疗的有效剂量提供了可靠的指导。有效剂量的种间换算可以按照Mordenti,J.和Chappell,W.“TheUse of Interspecies Scaling in Toxicokinetics,”Toxicokinetics and New DrugDevelopment,Yacobi等人，编辑，Pergamon Press,New York 1989，第42-46页中所述的原则进行。
对于本公开的任何抗CD33抗体的体内施用，正常剂量可以从每天约10ng/kg多至约100mg/kg个体体重或更多，优选约1mg/kg/天至10mg/kg/天，这取决于施用途径。对于在数天或更长时间内的重复施用，根据待治疗疾病、病症或疾患的严重程度，持续治疗直至达到所需的症状抑制。
示例性给药方案可包括施用约2mg/kg的抗CD33的抗体初始剂量，随后每隔一周施用约1mg/kg的每周维持剂量。根据医生希望达到的药代动力学衰减模式，其它剂量方案可以是有用的。例如，本文设想每周向个体给药1至21次。在某些实施方案中，可使用约3μg/kg至约2mg/kg(诸如约3μg/kg、约10μg/kg、约30μg/kg、约100μg/kg、约300μg/kg、约1mg/kg和约2/mg/kg)的剂量范围。在某些实施方案中，给药频率为每日三次、每日两次、每日一次、每隔一日一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每10周一次或每月一次、每两个月一次、每三个月一次或更长时间。治疗进展很容易通过常规技术和测定来监测。给药方案，包括施用的抗CD33抗体，可以随着时间的推移而变化，与使用的剂量无关。
特定抗CD33抗体的剂量可以在已经给予一次或多次抗CD33抗体施用的个体中凭经验确定。向个体给予递增剂量的抗CD33抗体。为了评估抗CD33抗体的功效，可以监测本公开的任何疾病、病症或疾患(例如，额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、长期抑郁症、动脉粥样硬化性血管疾病和正常衰老的不良症状)的临床症状。
本公开的抗CD33抗体的施用可以是连续的或间歇性的，这取决于例如接受者的生理状况、给药的目的是治疗性的还是预防性的，以及熟练从业者已知的其它因素。抗CD33抗体的施用可以在预选的一段时间内基本上是连续的，或者可以是一系列间隔的剂量。
文献中提供了关于特定剂量和递送方法的指导；参见，例如，美国专利第4,657,760号、第5,206,344号或第5,225,212号。在本公开的范围内，不同的制剂对于不同的治疗和不同的病症是有效的，并且旨在治疗特定器官或组织的施用可能需要以不同于对另一个器官或组织的方式进行递送。此外，剂量可以通过一次或多次单独施用，或者通过连续输注来施用。对于根据疾患在数天或更长时间内重复施用，持续治疗直至出现所需的疾病症状的抑制。然而，其它剂量方案可以是有用的。这种疗法的进展很容易通过常规技术和测定来监测。
治疗用途
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体可用于预防各种疾病和病症、降低所述疾病和病症的风险或治疗所述疾病和病症。
本公开的抗CD33抗体可用于预防以下疾病、降低以下疾病的风险或治疗以下疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾孟癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。在一些实施方案中，CD33抗体是激动性抗体。在一些实施方案中，抗体是惰性抗体。在一些实施方案中，抗体是拮抗性抗体。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向有此需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗体(所述抗体降低CD33的细胞水平，抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用，或两者兼有)预防以下疾病、降低以下疾病的风险或治疗以下疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾孟癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向有此需要的个体施用治疗有效量的本公开内容的抗体(所述抗体降低CD33的细胞水平，抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用，或两者兼有)预防癌症、降低癌症风险或治疗癌症的方法。在一些实施方案中，所述抗体抑制一种或多种CD33活性，所述活性选自：(a)促进免疫抑制性树突状细胞、免疫抑制性巨噬细胞、免疫抑制性中性粒细胞、非致瘤性髓样来源的抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞、非致瘤性CD14+髓样细胞和调节性T细胞中的一种或多种的增殖、成熟、迁移、分化和/或功能性；(b)增强免疫抑制性树突状细胞、免疫抑制性巨噬细胞、免疫抑制性中性粒细胞、非致瘤性髓样来源的抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞和调节性T细胞中的一种或多种向肿瘤的浸润；(c)增加肿瘤、外周血或其它淋巴样器官中肿瘤促进性髓样/粒细胞免疫抑制性细胞和/或非致瘤性CD14+髓样细胞的数量；(d)降低具有肿瘤杀伤效力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；(e)减少具有肿瘤杀伤效力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；(f)增加肿瘤体积；(g)增加肿瘤生长速率；(h)增加转移；(i)增加肿瘤复发率；(j)增加一种或多种PD-1配体的表达；(k)降低调节抗肿瘤T细胞反应的一种或多种免疫疗法或者一种或多种癌症疫苗的功效，任选地，其中所述一种或多种免疫疗法是靶向一种或多种蛋白质的免疫疗法，所述蛋白质选自CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF-1受体及其任意组合；以及(l)降低一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类、多柔比星
Figure BDA0003037444680001761
表柔比星
Figure BDA0003037444680001762
紫杉烷类、紫杉醇
Figure BDA0003037444680001763
多西他赛
Figure BDA0003037444680001764
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003037444680001765
卡铂
Figure BDA0003037444680001766
奥沙利铂
Figure BDA0003037444680001767
醛氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0003037444680001768
及其任意组合。在一些实施方案中，抗体表现出选自以下的一种或多种活性：(a)增加肿瘤浸润CD3+T细胞的数量；(b)降低非致瘤CD14+髓样细胞中CD33的细胞水平，任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞是肿瘤浸润细胞，或任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞存在于血液中；(c)减少非致瘤CD14+髓样细胞的数量，任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞是肿瘤浸润细胞，或任选地其中非致瘤CD14+髓样细胞任存在于血液中；(d)降低一种或多种细胞中的PD-L1水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性髓样来源抑制性细胞(MDSC)；(e)降低实体瘤的肿瘤生长速率；(f)减小肿瘤体积；(g)提高一种或多种PD-1抑制剂的功效；(h)提高一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地，其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或其任意组合中的一种或多种；(i)提高一种或多种化学治剂的功效，任选地其中所述一种或多种化学治疗剂是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类、多柔比星
Figure BDA0003037444680001771
表柔比星
Figure BDA0003037444680001772
紫杉烷类、紫杉醇
Figure BDA0003037444680001773
多西他赛
Figure BDA0003037444680001774
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003037444680001775
卡铂
Figure BDA0003037444680001776
奥沙利铂
Figure BDA0003037444680001777
醛氢叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0003037444680001778
及其任意组合；以及(j)当与化学或放射性毒素缀合时，杀伤实体瘤和相关血管中表达CD33的免疫抑制性髓样细胞和/或CD14表达细胞。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体也可用于诱导和/或促进一种或多种免疫细胞(例如，先天免疫细胞或适应性免疫细胞)的存活成熟、功能性、迁移或增殖。在一些实施方案中，本公开提供了通过向个体施用治疗有效量的本公开的抗体(所述抗体降低CD33的细胞水平，抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用，或两者兼有)来诱导或促进有此需要的个体中一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖的方法。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫细胞选自树突状细胞、巨噬细胞、小神经胶质细胞、中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞及其任意组合。
在一些实施方案中，所述抗体是激动性抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的瞬时激动性抗CD33抗体，其最初充当激动剂，然后充当长期拮抗性抗体。在一些实施方案中，抗体是惰性抗CD33抗体。在一些实施方案中，抗体是拮抗性抗CD33抗体。在一些实施方案中，抗CD33抗体降低CD33的细胞(例如，细胞表面、细胞内或全部)水平。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的切割。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33的切割。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33，然后诱导CD33表达降低。在某些实施方案中，个体具有CD33变体等位基因，所述等位基因具有单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC或AC。在某些实施方案中，个体具有CD33变体等位基因，所述等位基因具有单核苷酸多态性(SNP)2459419CC或CT。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体还可用于降低调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源的抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活率。在一些实施方案中，本公开提供了通过向有此需要的个体施用治疗有效量的与CD33结合或相互作用的抗体来降低调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性巨噬细胞、髓样来源的抑制性细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞或慢性骨髓性白血病(CML)细胞的活性、功能性或存活率。在一些实施方案中，所述抗体选自拮抗性抗体、惰性抗体或激动性抗体。在一些实施方案中，所述抗体是本公开的分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体缀合物。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体缀合物包含与可检测标志物、毒素或治疗剂缀合的抗CD33抗体。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体可用于在体外或体内在一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平，抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用，或两者兼有。在一些实施方案中，本公开提供了通过向个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来在有此需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者兼有的方法。在一些实施方案中，抗CD33抗体在体内降低CD33的细胞水平。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体可用于在一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平，所述细胞包括但不限于树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞和/或细胞系。在一些实施方案中，本公开提供了通过向个体施用治疗有效量的本公开的抗CD33抗体来在有此需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平的方法。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞选自树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞及其任意组合。在一些实施方案中，抗CD33抗体在体内降低CD33的细胞水平。CD33的细胞水平可以指但不限于CD33的细胞表面水平、CD33的细胞内水平和CD33的总水平。在一些实施方案中，CD33的细胞水平的降低包括CD33的细胞表面水平的降低。如本文中所用，CD33的细胞表面水平可以通过本文所述或本领域已知的任何基于细胞的体外测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，CD33的细胞水平的降低包括CD33细胞内水平的降低。如本文中所用，CD33的细胞内水平可通过本文所述或本领域已知的任何基于细胞的体外测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，CD33的细胞水平的降低包括CD33总水平的降低。在一些实施方案中，CD33的总水平可通过本文所述或本领域已知的任何基于细胞的体外测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33降解、CD33切割、CD33内化、CD33脱落和/或CD33表达下调。在一些实施方案中，利用体外细胞测定测量在原代细胞(例如，树突状细胞、骨髓来源的树突状细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞和巨噬细胞)上或在细胞系上CD33的细胞水平。
本公开的其它方面涉及选择有此需要的受试者以用抗CD33抗体进行治疗的方法，所述方法包括：a.从受试者获得样品(例如，血液样品)；b.检测受试者中存在的CD33等位基因；以及c.如果受试者具有一个或多个CD33等位基因，则选择受试者以用与CD33结合或相互作用的抗体进行治疗，其中一种或多种CD33等位基因选自由rs3865444AC和rs3865444CC组成的组。本公开的其它方面涉及评估有此需要的受试者对结合CD33或与CD33相互作用的抗体的反应性的方法，所述方法包括：a.在向受试者施用抗CD33抗体之前，测量从受试者获得的血液样品中非致瘤性髓样细胞上CD45+和CD14+的表达水平；b.向受试者施用治疗有效量的抗体；以及c.测量施用抗CD33抗体后从受试者获得的血液样品中非致瘤性髓样细胞上CD45+和CD14+的表达水平，其中施用抗CD33抗体后非致瘤性髓样细胞上CD45+CD14+水平的降低表明受试者对所述剂有反应。可使用任何合适的用于获取样品诸如血液样品的方法。另外，应当理解，可使用任何已知的检测CD33变体和/或等位基因的方法，诸如SNP分析。在一些实施方案中，评估反应性的方法还包括施用一种或多种另外的治疗有效量的抗体。在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，个体具有CD33的变体。在一些实施方案中，变体包括但不限于一种或多种选自以下的多态性：(a)SNP rs3865444AC；(b)SNP rs3865444CC；(c)SNPrs35112940GG、AA、AG；和(d)SNP rs12459419CC、CT或TT；及其任意组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括抗CD33抗体或双特异性抗CD33抗体和与模式识别受体结合的抗体、与Toll样受体结合的抗体、与损伤相关分子模式(DAMP)受体结合的抗体和/或与细胞因子结合的抗体或针对白细胞介素的抗体的共同施用。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体，和/或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，将至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B-和T-淋巴细胞衰减子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗TNFa抗体、抗Siglec-5抗体、抗Siglec-7抗体、抗Siglec-9抗体、抗Siglec-11抗体、拮抗性抗TREM1抗体、拮抗性抗TREM2抗体及其任意组合。在一些实施方案中，所述一种或多种标准或研究性抗癌疗法选自放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼疗法、曲妥珠单抗疗法、依那西普疗法、过继细胞转移(ACT)疗法、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)疗法、疫苗疗法和细胞因子疗法。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体。在一些实施方案中，将至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体及其任意组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种与刺激性检查点蛋白特异性结合的激动性抗体。在一些实施方案中，将至少一种与刺激性检查点蛋白特异性结合的激动性抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与刺激性检查点蛋白特异性结合的激动性抗体选自激动性抗CD40抗体、激动性抗OX40抗体、激动性抗ICOS抗体、激动性抗CD28抗体、激动性抗TREM1抗体、激动性抗TREM2抗体、激动剂性CD137/4-1BB抗体、激动性抗CD27抗体、激动性抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体及其任意组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，将至少一种刺激性细胞因子与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子选自IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、MIP-1-β及其任意组合。
在一些实施方案中，受试者或个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如，母牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴子)、兔子和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者或个体是人。
痴呆
痴呆是一种非特异性综合征(即，一组体征和症状)，表现为以前未受影响的人的整体认知能力严重丧失，超出了正常衰老的预期。由于独特的整体性脑损伤，痴呆可能是静止的。或者，痴呆可能是进行性的，由于身体的损伤或疾病而导致长期下降。虽然痴呆在老年群体中更为常见，但其也可能在65岁之前发生。受痴呆影响的认知领域包括但不限于记忆、注意力广度、语言和问题解决。一般来说，在个体被诊断为痴呆之前，症状必须存在至少六个月。
痴呆的示例性形式包括但不限于额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、语义性痴呆和路易体痴呆。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防痴呆、降低痴呆的风险和/或治疗痴呆。在一些实施方案中，抗CD33抗体可以调节患有痴呆症的个体中的一种或多种CD33活性。
额颞叶痴呆
额颞叶痴呆(FTD)是一种由脑额叶的进行性恶化引起的疾患。随着时间的推移，恶化可能会发展到颞叶。在患病率方面，FTD仅次于阿尔茨海默病(AD)，占老年前期痴呆病例的20％。FTD的临床特征包括记忆缺陷、行为异常、人格改变和语言障碍(Cruts,M.&VanBroeckhoven,C.,Trends Genet.24:186-194(2008)；Neary,D.等人，Neurology 51:1546-1554(1998)；Ratnavalli,E.,Brayne,C.,Dawson,K.&Hodges,J.R.,Neurology 58:1615-1621(2002))。
相当大一部分FTD病例是以常染色体显性方式遗传的，但即使在一个家族中，症状也可能跨越一个范围，从行为障碍的FTD，到原发性进行性失语，到皮质基底神经节变性。像大多数神经变性疾病一样，FTD的特征是在患病的脑中病理性存在特定的蛋白质聚集体。历史上，FTD的第一次描述认识到在神经原纤维缠结或皮克体(Pick body)中存在过度磷酸化的Tau蛋白的神经内积累。微管结合蛋白Tau的因果作用受到几个家族中编码Tau蛋白的基因突变的鉴定支持(Hutton,M.等人，Nature 393:702-705(1998)。然而，大多数FTD脑未显示过度磷酸化的Tau的积累，但对遍在蛋白(Ub)和TAR DNA结合蛋白(TDP43)确实表现出免疫反应性(Neumann,M.等人，Arch.Neurol.64:1388-1394(2007))。大多数带有Ub包涵体的FTD病例(FTD-U)都显示出携带了颗粒蛋白前体(Progranulin)基因的突变。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防FTD、降低FTD的风险和/或治疗FTD。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可以调节患有FTD的个体中的一种或多种CD33活性。
阿耳茨海默病
阿尔茨海默病(AD)是最常见的痴呆形式。该疾病无法治愈，随着其发展，疾病会恶化，最终导致死亡。最常见的是，在65岁以上的人中诊断出AD。然而，不太流行的早发性阿尔茨海默病可以更早得多发生。
阿尔茨海默病的常见症状包括行为症状，诸如记忆近期事件困难；认知症状、困惑、易怒和攻击性、情绪波动、语言障碍和长期记忆丧失。随着疾病的发展，身体功能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默病在变得完全明显之前会发展一段未知和可变的时间，并且其可以在多年内进展而不被诊断出。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防阿尔茨海默病、降低阿尔茨海默病风险和/或治疗阿尔茨海默病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可以调节患有阿尔茨海默病的个体中的一种或多种CD33活性。
帕金森病
帕金森病，可被称为特发性或原发性帕金森综合征、运动迟缓刚性综合征(hypokinetic rigid syndrome,HRS)或震颤麻痹，是一种影响运动系统控制的神经变性脑病症。脑中产生多巴胺的细胞的逐渐死亡导致帕金森病的主要症状。最常见的是，帕金森病在50岁以上的人身上诊断出来。帕金森病在大多数人中是特发性的(原因不明)。然而，遗传因素也在疾病中起作用。
帕金森病的症状包括但不限于手、臂、腿、颌和脸的震颤、四肢和躯干的肌肉僵硬、运动缓慢(运动迟缓)、姿势不稳定、行走困难、神经精神问题、言语或行为改变、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉和睡眠问题。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防帕金森病、降低帕金森病的风险和/或治疗帕金森病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有帕金森病的个体的一种或多种CD33活性。
肌萎缩侧索硬化(ALS)
如本文中所用，肌萎缩侧索硬化(ALS)或运动神经元疾病或卢·格里克氏病(LouGehrig's disease)可互换使用，是指具有各种病因的衰弱性疾病，其特征为快速进行性虚弱、肌肉萎缩和肌束震颤、肌肉痉挛、说话困难(构音障碍)、吞咽困难(吞咽障碍(dysphagia))和呼吸困难(呼吸困难(dyspnea))。
已经表明，颗粒蛋白前体在ALS中起作用(Schymick,JC等人，(2007)J NeurolNeurosurg Psychiatry.；78:754-6)，并再次保护以免受由引起ALS的蛋白诸如TDP-43引起的损伤(Laird,AS等人，(2010).PLoS ONE 5:e13368)。还证明了pro-NGF诱导脊髓损伤后少突神经胶质细胞和皮质脊髓神经元的p75介导的死亡(Beatty等人，Neuron(2002),36，第375-386页；Giehl等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA(2004),101，第6226-30页)。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防ALS、降低ALS的风险和/或治疗ALS。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有肌萎缩侧索硬化的个体中的一种或多种CD33活性。
亨廷顿病
亨廷顿病(HD)是由亨廷顿蛋白基因(HTT)的常染色体显性突变引起的遗传性神经变性疾病。亨廷顿蛋白基因中细胞因子-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)三联体重复序列的扩增导致由该基因编码的亨廷顿蛋白(Htt)的突变形式产生。这种突变亨廷顿蛋白(mHtt)是有毒的，并导致神经元死亡。亨廷顿病的症状最常见于35岁至44岁之间，尽管它们可以在任何年龄出现。
亨廷顿病的症状包括但不限于运动控制问题、痉挛、随机运动(舞蹈症)、异常眼球运动、平衡受损、癫痫发作、咀嚼困难、吞咽困难、认知问题、言语改变、记忆缺陷、思维困难、失眠、疲劳、痴呆、性格变化、抑郁、焦虑和强迫行为。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防亨廷顿病(HD)、降低亨廷顿病(HD)的风险和/或治疗亨廷顿病(HD)。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可以调节患有亨廷顿病的个体中的一种或多种CD33活性。
tau蛋白病
tau蛋白病，或tau病变(Tauopathies)，是一类由脑中微管结合蛋白tau的聚集引起的神经变性疾病。阿尔茨海默病(AD)是最著名的tau蛋白病，涉及tau蛋白在神经元内以不溶性神经原纤维缠结(NFT)的形式积累。其它tau蛋白病和病症包括进行性核上性麻痹、拳击性痴呆(dementia pugilistica)(慢性创伤性脑病)、额颞叶痴呆和与17号染色体相关的帕金森综合征、Lytico-Bodig病(关岛帕金森-痴呆综合征(Parkinson-dementiacomplex of Guam))、缠结为主的痴呆(Tangle-predominant dementia)、神经节神经胶质瘤和神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅脑病、结节性硬化症、Hallervorden-Spatz病、脂褐质沉积症、皮克病、皮质基底节变性、嗜银粒病(AGD)、亨廷顿病和额颞叶变性。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可预防tau蛋白病、降低tau蛋白病的风险和/或治疗tau蛋白病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可以调节患有tau蛋白病的个体中的一种或多种CD33活性。
多发性硬化
多发性硬化(MS)也可称为播散性硬化或播散性脑脊髓炎。MS是炎性疾病，其中脑和脊髓的轴突周围的脂肪髓鞘受损，导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛的体征和症状。MS影响脑和脊髓中的神经细胞有效地相互通信的能力。神经细胞通过沿着称为轴突的长纤维发送称为动作电位的电信号进行通信，所述轴突包含在称为髓鞘的绝缘物质中。在MS中，身体自身的免疫系统攻击并破坏髓鞘。当髓鞘丧失时，轴突不再能有效地传导信号。MS通常发生在年轻成人中，在女性中更为常见。http://en.wikipedia.org/wiki/Multiple_ sclerosis-cite_note-pmid18970977-1
MS的症状包括但不限于感觉的变化，诸如敏感性丧失或麻刺感；刺痛或麻木，诸如感觉减退和感觉异常；肌肉无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，诸如共济失调；言语问题，诸如构音障碍，或吞咽问题，诸如吞咽困难；视觉问题，诸如眼球震颤、视神经炎(包括幻视)和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难(bladder and boweldifficulties)；不同程度的认知障碍；抑郁或情绪不稳定的情绪症状；Uhthoff现象，其为由于暴露在高于正常的环境温度下而导致的现存症状的恶化；和莱尔米特征(Lhermitte'ssign)，其为弯曲脖子时会沿着背部传下来的触电感(electrical sensation)。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防多发性硬化、降低多发性硬化的风险和/或治疗多发性硬化。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可以调节患有多发性硬化的个体中的一种或多种CD33活性。
癌症
本公开的其它方面提供了用于通过向有此需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症的方法。本公开的任何分离的抗体可用于这些方法中。在一些实施方案中，分离的抗体是本公开的激动性抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的拮抗性抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的惰性抗体。在其它实施方案中，分离的抗体是本公开的抗体缀合物。
如本文所公开的，已知肿瘤微环境包含异质免疫浸润物，其包括T淋巴细胞、巨噬细胞和髓样/粒细胞谱系的细胞。肿瘤中T调节性细胞、肿瘤包埋的免疫抑制性髓样细胞和/或M2巨噬细胞的存在和活性与预后不良相关。相反地，细胞毒性T细胞的存在和活性有利于癌症治疗。直接或间接增强细胞毒性T细胞活性并减少各种免疫抑制性细胞的数量和活性的疗法预计将提供显著的治疗益处。一项开创性的临床前研究表明，靶向免疫抑制性细胞的药物(例如，CSF1/CSF1R阻断抗体)与激活细胞毒性T细胞的免疫检查点阻断抗体之间存在协同作用，表明在个体疗法效果不佳的肿瘤模型中，操纵这两种细胞类型显示出功效(Zhu Y；Cancer Res.2014年9月15日；74(18):5057-69)。因此，在一些实施方案中，阻断在髓样细胞、T细胞亚群和肿瘤相关免疫细胞上表达的CD33可以刺激有益的抗肿瘤免疫反应，从而产生治疗性抗肿瘤免疫反应。
在一些实施方案中，用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗患有癌症的个体的方法还包括向个体施用至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体。特异性结合抑制性检查点分子的抗体的实例包括但不限于抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗BTLA抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体及其任意组合。在一些实施方案中，将至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体与本公开的拮抗性抗CD33抗体组合施用。
在一些实施方案中，通过本公开的方法预防或治疗的癌症包括但不限于鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)(包括胃肠癌和胃肠间质癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer)或肾癌(renalcancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑素瘤、浅表播散性黑素瘤、恶性雀斑样痣性黑素瘤(lentigo maligna melanoma)、肢端雀斑样痣性黑素瘤、结节性黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；急性髓母细胞性白血病；和移植后淋巴增生性病症(PTLD病)，以及与斑痣性错构瘤病(phakomatoses)相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑瘤相关的水肿)、梅格斯综合征、脑癌、头颈癌和相关转移瘤。在一些实施方案中，癌症是结直肠癌。在一些实施方案中，癌症选自非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾细胞癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、乳腺癌、胃癌和肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些实施方案中，癌症可以是原发性肿瘤。在一些实施方案中，癌症可以是源自任何上述类型癌症的第二部位的转移性肿瘤。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防癌症、降低癌症的风险或治疗癌症，所述癌症包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠和直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤和甲状腺癌。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向个体施用治疗有效量的本公开的抗CD33抗体来预防癌症、降低癌症的风险或治疗患有癌症的个体的方法。
在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种与抑制性免疫检查点分子特异性结合的抗体，和/或另一种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，将特异性结合抑制性检查点分子的至少一种抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体和抗HVEM抗体、抗B-和T-淋巴细胞衰减子(BTLA)抗体、抗杀伤抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体及其任意组合。在一些实施方案中，标准或研究性抗癌疗法是选自放疗、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼
Figure BDA0003037444680001891
曲妥珠单抗
Figure BDA0003037444680001892
过继细胞转移(ACT)、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)、疫苗疗法和细胞因子疗法的一种或多种疗法。
在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体。在一些实施方案中，将至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体及其任意组合。
在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种与刺激性免疫检查点蛋白特异性结合的激动性抗体。在一些实施方案中，将至少一种与刺激性检查点蛋白特异性结合的激动性抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种与刺激检查点蛋白特异性结合的激动性抗体选自激动性抗CD40抗体、激动性抗OX40抗体、激动性抗ICOS抗体、激动性抗CD28抗体、激动性抗CD137/4-1BB抗体、激动性抗CD27抗体、激动性抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体及其任意组合。
在一些实施方案中，所述方法还包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，将至少一种刺激性细胞因子与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子选自TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、OSM、CNTF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-8、CRP、IFN-α、IFN-β、IL-2、IL-18、GM-CSF、G-CSF及其任意组合。
在一些实施方案中，受试者或个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家养动物(例如，母牛、绵羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴子)、兔子和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者或个体是人。
本文提供的抗体(和任何另外的治疗剂)可通过任何合适的手段施用，包括胃肠外、肺内、鼻内、病变内施用、脑脊髓内、颅内、脊柱内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径。肠胃外输注包括肌内施用、作为快速推注或通过在一段时间内连续输注的静脉内施用、动脉内、关节内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，施用是静脉内施用。在一些实施方案中，施用是皮下施用。给药可以通过任何合适的途径，例如通过注射，诸如静脉内注射或皮下注射，这部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文设想了各种给药方案，包括但不限于在不同时间点的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
本文提供的抗体将以符合良好医学实践的方式进行配制、给药和施用。在这种情况下，需要考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、病症的原因、剂的递送部位、施用方法、施用时间安排以及医生已知的其它因素。抗体不必，但任选地用目前用于预防或治疗所述病症的一种或多种剂配制。此类其它剂的有效量取决于制剂中存在的抗体量、病症或治疗的类型以及上述其它因素。这些剂通常以与本文所述相同的剂量和施用途径使用，或约为本文所述剂量的1-99％，或以任何剂量和通过经验/临床确定为合适的任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本公开的抗体的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其它另外的治疗剂组合使用时)将取决于待治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重程度和病程、抗体是出于预防还是治疗目的而被施用、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体的反应以及主治医生的判断。所述抗体适合在一次或一系列治疗中向患者施用。
根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至15mg/kg(例如，0.1mg/kg至10mg/kg)的抗体可作为向患者施用的初始候选剂量，无论是例如通过一次或多次单独施用，还是通过连续输注。一个典型的日剂量可能在约1μg/kg至100mg/kg或更高的范围内，这取决于上述因素。对于数天或更长时间的重复施用，根据病情，治疗通常会持续到出现所需的疾病症状的遏制为止。抗体的一个示例性剂量将在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。因此，可向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意组合)的一种或多种剂量。此类剂量可以间歇施用，例如，每周或每三周一次(例如，使得患者接受约2至约20个剂量，或例如约6个剂量的抗体)。在某些实施方案中，给药频率为每日三次、每日两次、每日一次、每隔一日一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每10周一次或每月一次、每两个月一次、每三个月一次或更长时间。可以施用初始较高的负荷剂量，随后施用一个或多个较低剂量。然而，其它剂量方案可以是有用的。这种疗法的进展很容易通过常规技术和测定来监测。
诊断用途
在任何抗体的一些实施方案中，本文提供的任何抗CD33抗体可用于检测样品或个体中CD33的存在。如本文中所用，术语“检测”涵盖定量或定性检测。本文提供了将本公开的抗体用于诊断目的的方法，诸如检测个体或源自个体的组织样品中的CD33。在一些实施方案中，个体是人。
检测方法可包括抗原结合的抗体的定量。生物样品中的抗体检测可用本领域已知的任何方法进行，所述方法包括免疫荧光显微镜检查、免疫细胞化学、免疫组织化学、ELISA、FACS分析、免疫沉淀或微正电子发射断层扫描。在某些实施方案中，对抗体进行放射性标记，例如用18F标记，随后利用微正电子发射断层扫描分析进行检测。抗体结合也可通过非侵入性技术在患者体内进行定量，诸如正电子发射断层扫描(PET)、X射线计算机断层扫描、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、计算机断层扫描(CT)和计算机轴向断层扫描(CAT)。
药盒/制品
本文提供了包含本文所述抗CD33抗体的制品(例如，药盒)。制品可包括一个或多个包含本文所述抗体的容器。容器可以是任何合适的包装，包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(例如，密封聚酯薄膜(Mylar)或塑料袋)等。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。
在一些实施方案中，药盒还可包括第二剂。在一些实施方案中，第二剂是药学上可接受的缓冲剂或稀释剂，包括但不限于，诸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。在一些实施方案中，第二剂是药物活性剂。
在任何制品的一些实施方案中，制品还包括根据本公开的方法使用的说明书。说明书通常包括关于剂量、给药方案和预期治疗的施用途径的信息。在一些实施方案中，这些说明书包括对施用本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)的描述，以根据本公开的任何方法预防个体患以下疾病、病症或损伤、降低个体患所述疾病、病症或损伤的风险或治疗患有所述疾病、病症或损伤的个体，所述疾病、病症或损伤选自痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、克-雅氏病、正常压力脑积水、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿性关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、白塞病、帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩、Shy-Drager综合征、进行性核上性麻痹、皮质基底神经节变性、急性散播性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、衰老疾病、癫痫、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身性感染、狼疮、关节炎、多发性硬化、低骨密度、骨质疏松症、骨发生、骨硬化性疾病、骨佩吉特病和癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾孟癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性骨髓硬化、髓样来源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、克鲁兹感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B组链球菌属感染、空肠弯曲菌感染、脑膜炎奈瑟球菌感染、I型HIV和/或嗜血杆菌流感。在一些实施方案中，说明书包括抗CD33抗体和第二剂(例如，第二药物活性剂)的使用说明。
在一些实施方案中，说明包括如何检测例如个体、组织样品或细胞中的CD33蛋白的描述。药盒和/或制品还可包括基于鉴定个体是否患有疾病和疾病的分期来选择适合治疗的个体的描述。
在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括本公开的另一种抗体(例如，至少一种与抑制性检查点分子特异性结合的抗体，至少一种与抑制性细胞因子特异性结合的抗体，和/或至少一种与刺激性检查点蛋白特异性结合的激动性抗体)和/或至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括根据本公开的任何方法，使用抗体和/或刺激性细胞因子与本文所述的抗CD33抗体的组合的说明，使用本文所述的抗CD33抗体与抗体和/或刺激性细胞因子的组合的说明，或使用本文所述的抗CD33抗体和抗体和/或刺激性细胞因子的说明。
说明书通常包括关于剂量、给药方案和预期治疗的施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。在本公开的药盒和/或制品中提供的说明通常是标签或包装插页(例如，药盒中包括的纸张)上的书面说明，但是机器可读的说明(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明)也是可接受的。
标签或包装插页指示该组合物用于治疗例如本公开的疾病。可以提供用于实践本文描述的任何方法的说明。
本公开的药盒和/或制品在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(例如，密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。还设想了与特定装置，诸如吸入器、鼻腔施用装置(例如，雾化器)或输注装置，诸如微型泵组合使用的包装。药盒和/或制品可具有无菌入口(例如，容器可以是静脉注射液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器还可具有无菌入口(例如，容器可以是静脉注射液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本文所述的抗CD33抗体。容器还可包含第二药物活性剂。
药盒和/或制品可以任选地提供另外组分，诸如缓冲剂和解释信息。通常，药盒包括容器和容器上或与之相关的标签或一张或多张包装插页。
通过参考以下实施例，将更全面地理解本公开。然而，它们不应被解释为限制本公开的范围。本公开通篇的所有引用据此明确地通过引用并入。
实施例
实施例1：鼠抗CD33抗体的人源化，以及此类人源化变体的结合参数
以下实施例的目的是产生小鼠抗人CD33抗体6C7的人源化变体，并表征人源化抗体与CD33的结合。小鼠6C7抗体含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含序列EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVGSGFTFSNYCMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYVTNYVESVKGRFTISRDDSKSRVYLQMNNLRGEDTGFYYCTRDGYYVPFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:3)，所述轻链可变区包含序列QLVLTQSSSASFSLGASAKLTCTLSSQHSTYTIEWYQQQPLKPPKYVMELKKDGSHSTGD GIPDRFSGSSSGADRYLSISNIQPEDEAIYICGVGDTIKEQFVYVFGGGTKVTVL(SEQ ID NO:4)。抗CD33抗体6C7先前公开于WO2016/201388中，其中重链可变区由SEQ ID NO:65编码，轻链可变区由SEQ ID NO:242编码。
抗CD33抗体6C7是通过将亲本小鼠抗体的CDR移植到序列最接近小鼠抗体的人种系框架上而人源化的。还产生了具有一个或多个框架回复突变的抗体。总共产生了7种抗CD33抗体6C7的人源化抗体：6C7H1至6C7H7。抗CD33抗体的重链可变区序列如下表11所示。抗CD33抗体的轻链可变区序列如下表12所示。
通过流式细胞术评估6C7的7种人源化抗CD33抗体与原代树突状细胞的结合，并将结合与包含抗CD33抗体6C7的可变重链序列和可变轻链序列的抗CD33 6C7嵌合抗体的结合进行比较。使用RosetteSepTM单核细胞分离抗体混合物(StemCell Technologies)从健康人供体的血液中分离单核细胞。将分离的单核细胞用100ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-4(Peprotech)分化为树突状细胞。将树突状细胞与抗CD33抗体的稀释液在冰上于黑暗中孵育30分钟，然后与荧光缀合的抗人IgG二抗一起孵育30分钟。将细胞在FACS缓冲液(PBS+2％FBS，2mM EDTA)中洗涤两次，并且在BD FACS Canto上进行流式细胞术。使用FlowJo软件(Ashland,OR)分析数据。结果如图1所示。
在7种测试其与树突状细胞的结合的人源化抗体中，只有5种抗体与细胞结合：6C7H3、6C7H4、6C7H5、6C7H6和6C7H7。在这些实验中，抗CD33抗体6C7H1和6C7H2不与树突状细胞结合。
实施例2：通过人源化抗CD33抗体进行的CD33的细胞表面下调
以下实施例的目的是测试人源化抗CD33 6C7抗体(如以上文实施例1所述的)是否能够降低原代人树突状细胞上CD33的细胞表面水平。
使用RosetteSepTM单核细胞分离抗体混合物(StemCell Technologies)从健康人供体的血液中分离单核细胞。将分离的单核细胞用100ng/mL GM-CSF和100ng/mL IL-4(Peprotech)分化为树突状细胞。将树突状细胞以每孔100,000个细胞涂铺在96孔板中，以200,000个细胞/mL涂铺在24孔板中，或者以500,000个细胞/2mL RPMI(补充有10％HycloneFBS,2mM谷氨酰胺，pen/strep和非必需氨基酸)涂铺在6孔培养皿中。将抗CD33抗体或同种型对照抗体加入孔中，并在37℃和5％CO2下孵育24小时。根据标准技术，通过FACS分析检测细胞表面受体表达。简言之，将细胞与抗CD33-FITC克隆HIM3-4(BD Biosciences)在冰上于黑暗中孵育30分钟。将细胞在FACS缓冲液(PBS+2％FBS，2mM EDTA)中洗涤两次，并且在BDFACS Canto上进行流式细胞术。使用FlowJo软件(Ashland，OR)分析数据，并且将CD33表面表达计算为受体表达相对于抗体不存在时的表达的百分比。结果如图2所示。
测试的所有四种人源化抗CD33抗体(6C7H3、6C7H5、6C7H6、6C7H7)以及抗CD33嵌合抗体6C7能够降低树突状细胞表面上CD33的细胞表面水平，其中抗CD33抗体6C7H5是最强效的人源化抗体。
实施例3：抗CD33抗体6C7H5的工程改造和此类经修饰的抗体的表征
以下实施例的目的是产生和表征抗CD33抗体6C7H5的变体，所述变体去除了可能导致抗体不稳定的序列，同时保持了抗CD33抗体6C7H5的结合和其它期望的功能特性。
抗CD33抗体6C7H5的工程改造通过在人源化抗体的重链和/或轻链中进行靶向诱变来进行，之后将抗体变体在哺乳动物细胞中表达并纯化以用于进一步分析。产生了24种在HVR H3和HVR L2中包含修饰的6C7H5的变体抗体。通过ELISA检测这24种抗体与重组CD33的结合，并且所述24种抗体中只有1种抗体显示出高于背景水平的结合(数据未显示)。该抗体(抗体6C7H8)的重链可变区HVR序列描绘于下表7中。该抗体的轻链可变区HVR序列描绘于下表8中。该抗体的重链框架区描绘于下表9中。该抗体的轻链框架区描绘于下表10中。该抗体的重链可变区序列描绘于下表11中。该抗体的轻链可变区序列描绘于下表12中。
与树突状细胞和食蟹猴CD33的结合
使用上述实施例1中描述的方法，在2μg/mL的抗体浓度下，通过流式细胞术测试抗CD33抗体6C7H8与哺乳动物细胞的结合。结果如图3所示。
发现抗CD33抗体6C7H8以与亲本人源化抗体抗CD33抗体6C7H5和抗CD33抗体6C7嵌合抗体相似的水平与树突状细胞结合。
也通过ELISA评估抗CD33抗体6C7H8与食蟹猴CD33的结合。简言之，将ELISA板用重组人CD33蛋白(Sino Biologicals)或重组食蟹猴CD33蛋白(NovoProtein)涂覆过夜，之后加入抗体并孵育2小时。结合的抗体用缀合有辣根过氧化物酶的抗人IgG抗体(JacksonImmunoresearch)检测，并用TMB显影。结果如图4所示，并概述于下表4中。
抗体6C7H8、其亲本抗体6C7H5和6C7嵌合抗体，都以类似方式与人CD33结合。相反，尽管抗体6C7H5和6C7嵌合抗体显示与食蟹猴CD33适度结合，但抗CD33抗体6C7H8显示几乎未与食蟹猴CD33结合或未与食蟹猴CD33结合。
表面CD33的下调
使用上述实施例2中描述的方法，评估抗CD33抗体6C7H8降低树突状细胞表面上的CD33水平的能力。结果如图5所示，并概述于下表1中。
表1：通过6C7嵌合抗体、亲本人源化6C7H5和6C7H8进行的CD33的细胞表面下调
抗体 受体下调，(EC<sub>50</sub>)(pM):
6C7嵌合抗体 43.0
6C7H5 42.4
6C7H8 77.9
抗CD33抗体6C7H8降低了树突状细胞表面上的CD33水平，但与亲本人源化抗体(抗体6C7H5)和6C7嵌合抗体相比，表现出效力有所降低。
人源化6C7H8的变体
对抗CD33抗体6C7H8进行另外的蛋白质工程改造，以恢复抗体6C7H5中包含但在抗体6C7H8中降低的结合和其它功能特性。对抗体6C7H8重链中的HVR H1、HVR L2以及框架1和框架2进行了靶向诱变，由此产生了35种另外的抗CD33抗体。在单独的工程改造方法中，通过靶向诱变对抗体6C7H8中的HVR H1进行靶向诱变，产生了另外19种变体抗CD33抗体。通过ELISA测试抗CD33抗体与重组CD33的结合。结果如图6A和图6B所示。
在35种含有在HVR H1和HVR L2中的修饰的抗CD33抗体中，只有3种抗体表现出高于背景水平的与CD33的结合。这3种抗CD33抗体(6C7H9、6C7H10和6C7H11)与CD33的结合如图6A所示。19种含有在HVR H1中的修饰的抗CD33抗体，抗体变体6C7H12至6C7H30，表现出一系列的与CD33的结合，其中抗体6C7H25显示出最强的结合，而一些抗体包括6C7H13、6C7H19、6C7H27和6C7H30，仅显示出高于背景水平的适度结合，如图6B所示。抗体变体6C7H9至6C7H30的重链可变区HVR序列描绘于下表7中。抗体的轻链可变区HVR序列描绘于下表8中。抗体的重链框架区描绘于下表9中。抗体的轻链框架区描绘于下表10中。抗体的重链可变区序列描绘于下表11中。抗体的轻链可变区序列描绘于下表12中。
人源化6C7H8的变体：亲和力参数
根据标准技术(Estep等人(2013)MAbs 5(2):270-8)，在ForteBio测定中通过生物膜干涉测量法测量抗体变体对人CD33的亲和力参数，并将其与亲本抗体(抗体6C7H8)和亲本人源化抗体(抗体6C7H5)的亲和力参数进行比较。简言之，抗体被捕获在抗人Fc生物传感器(Pall ForteBio)上。然后将重组人CD33(10nM,Sino Biologicals)结合到捕获的抗CD33表面(缔合时间为200s，解离时间为1200s)。局部拟合用于提取每种抗体的缔合速率常数和解离速率常数(分别为ka和kd)。表观亲和常数(KD)由比率kd/ka计算而来。结果如下表2所示。
表2：抗体变体的亲和力参数
抗体 表观k<sub>a</sub>(Ms)<sup>-1</sup> 表观k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>) 表观K<sub>D</sub>(nM)
6C7H5 2.75E+05 1.20E-04 0.436
6C7H8 5.72E+05 4.13E-04 0.722
6C7H10 1.47E+06 8.23E-04 0.561
6C7H12 7.49E+05 6.94E-04 0.926
6C7H13 8.01E+05 3.10E-03 3.88
6C7H14 9.91E+05 7.98E-04 0.805
6C7H15 8.01E+05 8.25E-04 1.03
6C7H16 1.30E+06 1.02E-03 0.782
6C7H17 6.13E+05 5.23E-04 0.853
6C7H18 1.05E+06 6.40E-04 0.609
6C7H19 4.79E+06 1.14E-03 0.238
6C7H20 7.39E+05 4.57E-04 0.619
6C7H21 4.98E+05 2.63E-04 0.528
6C7H22 2.41E+06 1.13E-03 0.467
6C7H23 1.24E+06 6.91E-04 0.558
6C7H24 1.37E+06 7.57E-04 0.552
6C7H25 5.29E+05 1.30E-04 0.246
6C7H26 1.32E+06 9.44E-04 0.718
6C7H27 1.34E+06 3.65E-03 2.73
6C7H28 1.13E+06 8.59E-04 0.76
6C7H29 8.75E+05 8.68E-04 0.991
6C7H30 4.65E+06 5.90E-03 1.27
人源化6C7H8的变体：树突状细胞结合
根据实施例1中描述的方法，在2μg/mL的抗体浓度下，评估抗体变体与原代人树突状细胞的结合。结果如图7所示。
在3种具有在HVR H1和HVR L2中的修饰的抗体变体中，只有两种抗体6C7H10和6C7H11，以与亲本抗体(6C7H8)、亲本人源化抗体(6C7H5)或6C7嵌合抗体相似的水平与树突状细胞结合。6C7H9抗体变体表现出与树突状细胞的结合显著减少。在19种具有在HVR1中的修饰的抗CD33抗体变体中，14种抗体以与亲本抗体(6C7H8)、亲本人源化抗体(6C7H5)或6C7嵌合抗体相似的水平与树突状细胞结合。五种抗CD33抗体(6C7H13、6C7H19、6C7H22、6C7H27和6C7H30)表现出的结合少于任何亲本抗体的结合的60％。虽然这五种抗CD33抗体的表观亲和力常数(KD)在亲本抗体的10倍以内，但所有五种表现出与细胞的结合减少的抗CD33抗体具有最快的解离速率常数。
人源化6C7H8的变体：表面CD33的下调
根据实施例2中描述的方法，评估抗CD33抗体变体6C7H9至6C7H30降低树突状细胞表面上CD33水平的能力。将抗CD33抗体变体与亲本抗体(6C7H8)、亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体进行比较。半最大有效浓度(EC50)和CD33的最大减少概述于下表3中。11种抗CD33抗体变体(6C7H10、6C7H13、6C7H17、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25和6C7H30)的这些研究的结果如图8A和图8B所示；此处，将它们与亲本6C7H8抗体、亲本6C7H5人源化抗体和6C7嵌合抗体进行了比较。
表3：由6C7嵌合抗体、亲本人源化6C7H5、6C7H8和6C7H8的抗体变体引起的CD33的细胞表面下调
Figure BDA0003037444680002011
Figure BDA0003037444680002021
nd:由于效力弱而无法赋值
所述抗体表现出一系列降低树突状细胞表面上CD33水平的效力。正如预期的那样，抗CD33抗体显示出与细胞的结合显著减少，这由6C7H13、6C7H19、6C7H22、6C7H27和6C7H30下调CD33的效力显著降低来例示。另外10种抗CD33抗体也表现出降低细胞表面CD33水平的效力降低(例如，与用亲本人源化抗体6C7H5观察到的相比，降低细胞表面CD33水平的效力提高了0.1至0.3倍)。四种抗CD33抗体(6C7H17、6C7H20、6C7H21和6C7H25)在降低细胞表面CD33水平方面显示出相似或略有提高的效力，与用亲本人源化抗CD33抗体6C7H5所观察到的效力相比，提高了0.8至1.6倍。令人惊讶的是，几种具有相似或提高的效力的抗CD33抗体的亲和力与在下调CD33方面显示出降低的效力的抗体(如由抗体6C7H10、6C7H14、6C7H16、6C7H18、6C7H24、6C7H26和6C7H28所例示的)的亲和力相似。因此，抗CD33抗体对其靶标的亲和力不能预测抗CD33抗体下调细胞表面上的CD33的能力。
虽然抗CD33抗体6C7H17、6C7H20、6C7H21和6C7H25与用亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体所观察到的相比，在下调CD33方面具有相似或稍微提高的效力，但具有相似或提高的效力的抗CD33抗体变体没有显示出CD33水平的广泛最大降低。
另外的抗体变体
为了获得具有提高的结合和功能活性的抗体，通过在HVR H1、HVR H3、HVR L2、HVRL3、重链框架1、重链框架2、重链框架3、轻链框架1和轻链框架2中进行靶向诱变来进一步工程改造本公开的抗CD33抗体，产生24个另外的抗CD33抗体变体(6C7H31至6C7H54)。抗CD33抗体变体6C7H31至6C7H54的重链可变区HVR序列描绘于下表7中。抗体的轻链可变区HVR序列描绘于下表8中。抗体的重链框架区描绘于下表9中。抗体的轻链框架区描绘于下表10中。抗体的重链可变区序列描绘于下表11中。抗体的轻链可变区序列描绘于下表12中。
另外的抗体变体：与树突状细胞和食蟹猴CD33的结合
根据实施例1中描述的方法，在1μg/mL的抗体浓度下，通过流式细胞术评估抗CD33抗体变体6C7H31至6C7H54与原代人树突状细胞的结合。将抗CD33抗体变体与亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体进行了比较。这些研究的结果如图9所示。
在测试其与树突状细胞的结合的24种抗CD33抗体变体中，18种抗CD33抗体变体表现出与用亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体观察到的相似的与原代人树突状细胞的结合。六种抗CD33抗体(6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H42和6C7H43)显示与这些细胞的结合略有减少。
根据上述方法，在ELISA测定中进一步评估抗CD33抗体变体与食蟹猴CD33结合的能力。将抗CD33抗体变体与亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体进行了比较。结果概述于下表4中，并且8种抗CD33抗体变体的结合数据在图10A和图10B示出。
表4：抗CD33抗体变体与人CD33和食蟹猴CD33的结合
Figure BDA0003037444680002041
nd:由于与食蟹猴CD33的结合差，无法计算数值
在测试的26种抗CD33抗体变体中，与用亲本人源化抗体(6C7H5)或6C7嵌合抗体观察到的结合相比，19种显示没有与食蟹猴CD33结合或结合显著减少。三种抗CD33抗体(6C7H36、6C7H37和6C7H38)与食蟹猴CD33结合相似，如用亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体所观察到的。四种抗CD33抗体(6C7H47、6C7H48、6C7H52和6C7H54)显示与食蟹猴CD33的结合显著提高。一种抗CD33抗体6C7H54，令人惊讶地显示出提高的效力和最强的与食蟹猴CD33的最大结合。
另外的抗体变体：亲和力参数
根据上述方法，在ForteBio测定中通过生物膜干涉测量法测量抗CD33抗体6C7H54对人CD33和食蟹猴CD33的亲和力参数。结果概述于下表5中。
表5：6C7H54对人CD33和食蟹猴CD33的结合亲和力
抗原 表观k<sub>a</sub>(Ms)<sup>-1</sup> 表观k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>) 表观K<sub>D</sub>(nM)
人CD33 5.45E+05 3.32E-05 0.061
食蟹猴CD33 5.89E+05 1.05E-04 0.178
发现抗CD33抗体6C7H54对人CD33的亲和力，与用亲本人源化抗体(6C7H5)或6C7嵌合抗体观察到的亲和力相比，被出乎意料地提高(参见表2)。此外，发现抗体6C7H54对食蟹猴CD33的结合亲和力在该抗体对人CD33的结合亲和力的3倍以内。
另外的抗体变体：表面CD33的下调
根据上述实施例2中描述的方法，进一步评估24种抗CD33抗体变体(6C7H31至6C7H54)降低树突状细胞表面上CD33的水平的能力。将抗CD33抗体变体的降低人树突状细胞上CD33的细胞表面水平的能力与亲本人源化抗体6C7H5和6C7嵌合抗体进行了比较。半最大有效浓度(EC50)概述于下表6中，并且3种抗CD33变体(6C7H38、6C7H47和6C7H54)的结果如图11所示，其中将它们与亲本6C7H5人源化抗体和6C7嵌合抗体进行了比较。
表6：抗体变体6C7H31至6C7H54对细胞表面CD33的下调
Figure BDA0003037444680002061
所有的抗CD33抗体都减少了树突状细胞表面上的CD33，并且表现出为用亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体观察到的效力的2倍以内的效力。在显示出与食蟹猴CD33的结合最强的两种抗CD33抗体(6C7H47和6C7H54)中，抗体6C7H54在下调CD33方面更有效，并且在降低或减少这些细胞上CD33的细胞表面水平方面比亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体更有效。所有抗体都表现出相似的最大CD33减少(图11和数据未显示)。在使用如上所述的工程改造方法产生的24种抗CD33抗体变体中，并且在通过四次工程改造活动产生的总共102种抗CD33抗体变体中，抗CD33抗体6C7H54表现出CD33的强效下调和细胞表面CD33水平的最大降低；另外，与用亲本人源化抗体(6C7H5)和6C7嵌合抗体观察到的亲和力相比，这种抗CD33抗体表现出对人CD33和食蟹猴CD33的亲和力出乎意料地提高。
表7：抗CD33抗体的重链HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3序列
Figure BDA0003037444680002071
Figure BDA0003037444680002081
Figure BDA0003037444680002091
Figure BDA0003037444680002101
表8：抗CD33抗体的轻链HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3序列
Figure BDA0003037444680002102
Figure BDA0003037444680002111
表9：抗CD33抗体的重链框架序列
Figure BDA0003037444680002112
Figure BDA0003037444680002121
Figure BDA0003037444680002131
表10：抗CD33抗体的轻链框架序列
Figure BDA0003037444680002132
Figure BDA0003037444680002141
Figure BDA0003037444680002151
表11：抗CD33抗体的重链可变区序列
Figure BDA0003037444680002152
Figure BDA0003037444680002161
Figure BDA0003037444680002171
Figure BDA0003037444680002181
Figure BDA0003037444680002191
表12：抗CD33抗体的轻链可变区序列
Figure BDA0003037444680002192
Figure BDA0003037444680002201
Figure BDA0003037444680002211
实施例4：Fc区对内化抗CD33抗体的影响的表征
本实施例的目的是评估Fc对抗CD33抗体在体外和体内降低原代髓样细胞表面上CD33的细胞水平的能力的影响。
抗体的Fc区可以与在细胞表面上表达的Fcγ受体相互作用，并且内源性表达CD33的髓样细胞和其它免疫细胞也表达多种Fcγ受体。因此，测试了不同人IgG同种型的抗体的Fc与细胞表面Fcγ受体之间的相互作用和抗体的簇聚能力对抗体内化受体的能力的影响。
产生了包含6C7H8、6C7H10或6C7H54可变区和不同人IgG变体的抗CD33抗体。测试的Fc’包括IgG1，其结合所有Fcγ受体；IgG1P331S，其包含P331S突变并且显示与C1q的结合减少，但结合所有Fcγ受体；IgG1 IgG1 SELF，其包含S267E和L328F突变并表现出与CD32B和CD32A的R131变体的结合增强；IgG2，其显示仅与CD32A的实质性结合；和IgG1 LALAPS，其包含L234A、L235A和P331S突变，并且表现出几乎不与或不与任何Fcγ受体结合。根据实施例2中描述的方法，评估抗体降低原代人树突状细胞上细胞表面CD33的水平的能力。数据如图12A、图12B和图12C所示；表13概述了抗体的半最大有效浓度(EC50)和最大CD33下调。
表13：利用Fc变体抗CD33抗体进行的CD33的细胞表面下调
Figure BDA0003037444680002221
使用不同Fc变体构建的抗CD33抗体表现出一系列降低树突状细胞表面上CD33的水平的能力。IgG1 SELF同种型传达了最强的效力，因为IgG1 SELF上的抗体6C7H10在下调CD33方面的效力是抗体6C7H10 IgG1抗体的25.8倍，并且这两种抗体显示了相似的最大CD33降低水平。令人惊讶的是，抗体6C7H8 IgG1 LALAPS和抗体6C7H10 IgG1 LALAPS抗体在下调CD33方面的效果明显低于其同源野生型IgG1抗体，其中两种IgG1 LALAPS抗体均将CD33水平降低了不到40％。抗体6C7H10 IgG2和抗体6C7H54 IgG2在效力上与它们的野生型IgG1对应物相似。虽然抗体6C7H10 IgG2抗体最大程度地将CD33降低到与抗体6C7H10 IgG1相似的水平，但抗体6C7H54 IgG2抗体显示出比抗体6C7H54 IgG1更广泛的最大CD33降低。相反地，与用抗体6C7H54 IgG1所观察到的相比，抗体6C7H54 IgG1 PS在下调CD33方面显示出稍微提高的效力，但这两种抗体显示出相似的最大CD33降低。这些数据表明，Fc区强烈影响抗CD33抗体的效力和最大受体减少量，表明抗体与一种或多种Fcγ受体的相互作用增强了受体下调。
非正式序列列表
CD33序列(SEQ ID NO:1-2)
人CD33的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)：
MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ
食蟹猴CD33的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)
MDGEHLKGRNQGAQETSASDMPLLLLPLLWAGALAMDPRVRLEVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPVPYHTRNSPVHGYWFREGAIVSLDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMEKGSTKYSYKSTQLSVHVTDLTHRPQILIPGALDPDHSKNLTCSVPWACEQGTPPIFSWMSAAPTSLGLRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFPGAGVTTERTIQLNVSYASQNPRTDIFLGDGSGKQGVVQGAIGGAGVTVLLALCLCLIFFTVKTHRRKAARTAVGRIDTHPATGPTSSKHQKKSKLHGATETSGCSGTTLTVEMDEELHYASLNFHGMNPSEDTSTEYSEVRTQ
参考抗CD33抗体序列(SEQ ID NO: 3-4)
小鼠6C7抗体的重链可变区(SEQ ID NO:3)EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVGSGFTFSNYCMNWVRQSPEKGLEWVAEIRLKSNNYVTNYVESVKGRFTISRDDSKSRVYLQMNNLRGEDTGFYYCTRDGYYVPFAYWGQGTLVTVSA
小鼠6C7抗体的轻链可变区(SEQ ID NO:4)
QLVLTQSSSASFSLGASAKLTCTLSSQHSTYTIEWYQQQPLKPPKYVMELKKDGSHSTGDGIPDRFSGSSSGADRYLSISNIQPEDEAIYICGVGDTIKEQFVYVFGGGTKVTVL
重链高变区序列(SEQ ID NO:8-30，33，38-40)
Figure BDA0003037444680002241
Figure BDA0003037444680002251
Figure BDA0003037444680002261
Figure BDA0003037444680002271
轻链高变区序列(SEQ ID NO:47，52-55，58-62)
Figure BDA0003037444680002272
Figure BDA0003037444680002281
重链框架序列(SEQ ID NOs：5-7，31-32，34-37，41)
Figure BDA0003037444680002291
Figure BDA0003037444680002301
轻链框架序列(SEQ ID NO：42-46，48-51，56-57，63-64)
Figure BDA0003037444680002302
Figure BDA0003037444680002311
Figure BDA0003037444680002321
重链可变区序列(SEQ ID NO：65-93)
Figure BDA0003037444680002322
Figure BDA0003037444680002331
Figure BDA0003037444680002341
Figure BDA0003037444680002351
Figure BDA0003037444680002361
轻链可变区序列(SEQ ID NO:94-103)
Figure BDA0003037444680002362
Figure BDA0003037444680002371
Figure BDA0003037444680002381
混杂序列
基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I(SEQ ID NO:104)
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP(SEQ ID NO:105)
人Fc变体序列
Figure BDA0003037444680002382
Figure BDA0003037444680002391
Figure BDA0003037444680002401
Figure BDA0003037444680002411
Figure BDA0003037444680002421
Figure BDA0003037444680002431
全长抗体序列(6C7H54可变区；IgG2)
具有末端赖氨酸的重链(SEQ ID NO:120)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSNYEMNWVRQAPGKGLEWVAEIRLKSNNYVTNYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTGVYYCTRAGYYVPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
无末端赖氨酸的重链(SEQ ID NO:121)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAGSGFTFSNYEMNWVRQAPGKGLEWVAEIRLKSNNYVTNYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTGVYYCTRAGYYVPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
轻链(SEQ ID NO:122)
QLMLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSQHSTYTIEWYQQQPGKGPRYLMELKKEGSHSTGDGIPDRFSGSSSGAERYLTISSLQSEDEADYYCGVGHTIKEQFVYVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
序列表
<110> 艾利妥(ALECTOR LLC)
<120> 抗CD33抗体及其使用方法
<130> 73502-20028.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/726,053
<151> 2018-08-19
<160> 122
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 364
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln
20 25 30
Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro
35 40 45
Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly
50 55 60
Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln
65 70 75 80
Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro
85 90 95
Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp
100 105 110
Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser
115 120 125
Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg
130 135 140
Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn
145 150 155 160
Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile
165 170 175
Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr
180 185 190
His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr
195 200 205
Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu
210 215 220
Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr
225 230 235 240
Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly
245 250 255
Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala
260 265 270
Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys
275 280 285
Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly
290 295 300
Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr
305 310 315 320
Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu
325 330 335
Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys
340 345 350
Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln
355 360
<210> 2
<211> 379
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 2
Met Asp Gly Glu His Leu Lys Gly Arg Asn Gln Gly Ala Gln Glu Thr
1 5 10 15
Ser Ala Ser Asp Met Pro Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly
20 25 30
Ala Leu Ala Met Asp Pro Arg Val Arg Leu Glu Val Gln Glu Ser Val
35 40 45
Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His
50 55 60
Pro Val Pro Tyr His Thr Arg Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe
65 70 75 80
Arg Glu Gly Ala Ile Val Ser Leu Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys
85 90 95
Leu Asp Gln Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu
100 105 110
Gly Asp Pro Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg
115 120 125
Arg Arg Asp Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Lys Gly Ser Thr
130 135 140
Lys Tyr Ser Tyr Lys Ser Thr Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu
145 150 155 160
Thr His Arg Pro Gln Ile Leu Ile Pro Gly Ala Leu Asp Pro Asp His
165 170 175
Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr
180 185 190
Pro Pro Ile Phe Ser Trp Met Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Leu
195 200 205
Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp
210 215 220
His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Pro Gly Ala Gly Val
225 230 235 240
Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Ser Tyr Ala Ser Gln Asn
245 250 255
Pro Arg Thr Asp Ile Phe Leu Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Gly Val
260 265 270
Val Gln Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Val Leu Leu Ala Leu
275 280 285
Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Thr Val Lys Thr His Arg Arg Lys Ala
290 295 300
Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Ile Asp Thr His Pro Ala Thr Gly Pro
305 310 315 320
Thr Ser Ser Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Ala Thr Glu
325 330 335
Thr Ser Gly Cys Ser Gly Thr Thr Leu Thr Val Glu Met Asp Glu Glu
340 345 350
Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Glu Asp
355 360 365
Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln
370 375
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 3
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Cys Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Val Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Arg
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Gly Glu Asp Thr Gly Phe Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Asp Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 4
<211> 115
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 4
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser
65 70 75 80
Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 5
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Asn Tyr Cys Met Asn
1 5
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Glu Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Asn Tyr Phe Met Asn
1 5
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Asn Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Asn Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Asn Tyr Leu Met Asn
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Asn Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Asn Tyr His Met Asn
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Asn Tyr Arg Met Asn
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Asn Tyr Pro Met Asn
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
Asn Tyr Gln Met Asn
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Asn Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
Asn Tyr Val Met Asn
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Asn Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Asn Tyr Glu Met Asn
1 5
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Asn Tyr Ile Met Asn
1 5
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Asp Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Asp Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Glu Tyr Asp Met Leu
1 5
<210> 30
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Glu Tyr Ala Met Leu
1 5
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
1 5 10
<210> 32
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 33
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 34
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 35
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 36
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 37
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Thr Lys Asn Ser Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
20 25 30
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Asp Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr
1 5
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 39
Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Thr Tyr
1 5
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys
20
<210> 43
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys
20
<210> 44
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 44
Gln Pro Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys
20
<210> 45
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 45
Gln Leu Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys
20
<210> 46
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 46
Gln Pro Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys
20
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 47
Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr Ile Glu
1 5 10
<210> 48
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met Lys
1 5 10 15
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 49
Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met Glu
1 5 10 15
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Val Met Glu
1 5 10 15
<210> 51
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 51
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
<400> 84
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<223> 合成构建体
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<223> 合成构建体
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<220>
<223> 合成构建体
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85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 88
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 89
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Asp Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 90
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Asp Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Thr Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 92
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Asp Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Glu Tyr
20 25 30
Ala Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 94
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 94
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Lys Leu Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 95
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 95
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 96
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 96
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Val Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Ile Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 97
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 97
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 98
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 98
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Lys Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 99
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 99
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Gly Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 100
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 100
Gln Pro Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Val
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 101
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 101
Gln Leu Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly His
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Glu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 102
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 102
Gln Leu Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly His
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 103
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 103
Gln Pro Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Leu
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 104
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 2, 3
<223> Xaa = 任意氨基酸，并且最多两个可以存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 5, 6
<223> Xaa = 任意氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Leu或Ile
<220>
<221> 变体
<222> 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15
<223> Xaa = 任意氨基酸，并且最多两个可以存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 17, 18
<223> Xaa = 任意氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 19
<223> Xaa = Leu或Ile
<400> 104
Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa
<210> 105
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 105
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 106
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 106
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 107
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 107
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 108
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 108
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 109
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 109
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
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Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 120
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 120
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65 70 75 80
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
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225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
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Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 121
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Glu Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Val Thr Asn Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Tyr Tyr Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val
210 215 220
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 122
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 122
Gln Leu Met Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Ser Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Leu Lys Lys Glu Gly Ser His Ser Thr Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly His
85 90 95
Thr Ile Lys Glu Gln Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
100 105 110
Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro
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Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
130 135 140
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145 150 155 160
Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln
165 170 175
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180 185 190
Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly
195 200 205
Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215 220

Claims (63)

1.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有选自SEQ ID NO:8-30的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有选自SEQ ID NO:39-40的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQ IDNO:47的氨基酸序列的HVR-L1、含有选自SEQ ID NO:53-55的氨基酸序列的HVR-L2，以及含有选自SEQ ID NO:58-62的氨基酸序列的HVR-L3。
2.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
3.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
4.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
5.如权利要求4所述的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述抗体包含以下抗体的的轻链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含选自VH FR1、VHFR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VH FR1包含选自由SEQ IDNO:5-6组成的组的序列；VH FR2包含选自由SEQ ID NO:31-32组成的组的序列；VH FR3包含选自由SEQ ID NO:34-36组成的组的序列；以及VH FR4包含SEQ ID NO:41的序列；并且所述轻链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：VL FR1包含选自由SEQ ID NO:42-46组成的组的序列；VL FR2包含选自由SEQ ID NO:48-51组成的组的序列；VL·FR3包含选自由SEQ ID NO:56-57组成的组的序列；以及VL FR4包含选自由SEQ ID NO:63-64组成的组的序列。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有选自SEQ ID NO:68-93的氨基酸序列的重链可变区；和/或含有选自SEQ ID NO:97-103的氨基酸序列的轻链可变区。
8.如权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
9.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有选自由SEQ ID NO:68-93组成的组的氨基酸序列的重链可变区；和含有选自由SEQ ID NO:97-103组成的组的氨基酸序列的轻链可变区。
10.如权利要求9所述的抗体，其中所述抗体包含以下抗体的重链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54；并且所述抗体包含以下抗体的轻链可变区：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53或6C7H54。
11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中所述抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。
13.如权利要求12所述的抗体，其中所述抗体属于IgG类，并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
14.如权利要求13所述的抗体，其中所述抗体包含在Fc区中的残基位置处的一个或多个氨基酸取代，所述残基位置选自由以下组成的组：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y及其任意组合，其中所述残基的编号根据EU编号。
15.如权利要求13所述的抗体，其中所述抗体具有IgG4同种型，并且其中所述抗体包含在残基位置228处的S228P氨基酸取代、在残基位置234处的F234A氨基酸取代以及在残基位置235处的L235A氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号。
16.如权利要求15所述的抗体，其中：
(a)所述Fc区包含在位置E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(b)所述Fc区包含在位置L234A、L235A和P331A处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(c)所述Fc区包含在位置L234A、L235A、P331A和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(d)所述Fc区包含在位置K322A和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(e)所述Fc区包含在位置P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(f)所述Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(g)所述Fc区包含在位置K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(h)所述Fc区包含在位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(i)所述Fc区包含在位置E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(j)所述Fc区包含在位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(k)所述Fc区包含在位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(l)所述Fc区包含在位置C127S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(m)所述Fc区包含在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；
(n)所述Fc区包含在位置P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号；或者
(o)所述Fc区包含在位置L234A、L235A、P331S处的氨基酸取代，其中所述残基位置的编号根据EU编号。
17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是哺乳动物蛋白或人蛋白。
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是野生型蛋白。
19.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白是天然存在的变体。
20.如权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中所述CD33蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达：人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人中性粒细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小神经胶质细胞。
21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体，其中所述抗体与人CD33蛋白特异性结合。
22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体，其中所述抗体是与包含人CD33蛋白或哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基的表位结合的抗体片段。
23.如权利要求1-22中任一项所述的抗体，其中所述抗体是与选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白结合的抗体片段：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。
24.如权利要求22或权利要求23所述的抗体，其中所述抗体片段与第二抗体片段交联，所述第二抗体片段与选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白质结合：人CD33、人CD33的天然存在的变体和人CD33的疾病变体。
25.如权利要求22-24中任一项所述的抗体，其中所述片段是Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv或scFv片段。
26.如权利要求1-25中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。
27.如权利要求1-26中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
28.如权利要求1-26中任一项所述的抗体，其中所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。
29.如权利要求28所述的抗体，其中所述第一抗原是CD33，并且第二抗原是：
(a)促进穿过血脑屏障的转运的抗原；
(b)选自由以下组成的组的促进穿过血脑屏障的转运的抗原：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和LPR-2)、白喉毒素受体、CRM197、羊驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白质转导结构域、TAT、Syn-B、穿透素、多精氨酸肽、angiopep肽和ANG1005；
(c)选自由以下组成的组的致病因子：致病肽或蛋白和致病核酸，其中所述致病肽或蛋白选自由以下组成的组：β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽，并且所述致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA；
(d)在免疫细胞上表达的配体和/或蛋白质，其中所述配体和/或蛋白质选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体和磷脂酰丝氨酸；以及
(e)在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
30.如权利要求1-29中任一项所述的抗体，其中将所述抗体与一种或多种特异性结合致病因子的抗体组合使用，所述致病因子选自由以下组成的组：致病肽、致病蛋白、β淀粉样蛋白、寡聚β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白斑块、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(9号染色体开放阅读框72)、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易体、心钠素、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、遍在蛋白和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽及其任意组合；或者与一种或多种结合免疫调节蛋白的抗体组合使用，所述免疫调节蛋白选自由以下组成的组：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR3、DR5、CD39、CD70、CD73、LAG3、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF1-受体、磷脂酰丝氨酸、致病核酸、反义GGCCCC(G2C4)重复扩展RNA及其任意组合。
31.如权利要求1-30中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)比抗CD33抗体低至少1.8倍，所述抗CD33抗体包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
32.如权利要求1-31中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)在约2nM至约200pM的范围内，或小于约200pM，并且其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
33.如权利要求1-32中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低CD33的细胞表面水平。
34.如权利要求33所述的抗体，其中所述CD33在人树突状细胞的表面上表达。
35.如权利要求33或权利要求34所述的抗体，其中所述抗体在体外降低CD33的细胞表面水平。
36.如权利要求33-35中任一项所述的抗体，其中如通过流式细胞术所测量的，所述抗体在体外以小于40pM的半最大有效浓度(EC50)降低CD33的细胞表面水平。
37.如权利要求1-36中任一项所述的抗体，其中所述抗体增加一种或多种疾病相关小神经胶质细胞(DAM)标志物的表达。
38.如权利要求37所述的抗体，其中所述一种或多种DAM标志物是ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2或其任意组合。
39.如权利要求1-38中任一项所述的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争与CD33的结合：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54及其任意组合。
40.权利要求1-38中任一项所述的抗体，其中所述抗体与选自由以下组成的组的抗体结合基本上相同的CD33表位或重叠的CD33表位：6C7H8、6C7H9、6C7H10、6C7H11、6C7H12、6C7H13、6C7H14、6C7H15、6C7H16、6C7H17、6C7H18、6C7H19、6C7H20、6C7H21、6C7H22、6C7H23、6C7H24、6C7H25、6C7H26、6C7H27、6C7H28、6C7H29、6C7H30、6C7H31、6C7H32、6C7H33、6C7H34、6C7H35、6C7H36、6C7H37、6C7H38、6C7H39、6C7H40、6C7H41、6C7H42、6C7H43、6C7H44、6C7H45、6C7H46、6C7H47、6C7H48、6C7H49、6C7H50、6C7H51、6C7H52、6C7H53和6C7H54。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:118的氨基酸序列的Fc区。
42.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含：含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的HVR-H2、含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的HVR-H3；并且其中所述轻链可变区包含：含有SEQ ID NO:47的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L2，以及含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-L3。
43.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的轻链可变区。
44.一种与CD33结合的分离的抗体，其中所述抗体包含
(a)含有SEQ ID.NO:120的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:122的氨基酸序列的轻链；或者
(b)含有SEQ ID.NO:121的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:122的氨基酸序列的轻链。
45.如权利要求41-44中任一项所述的抗体，其中所述抗体与人CD33蛋白特异性结合。
46.如权利要求41-45中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)比抗CD33抗体的低至少1.8倍，所述抗CD33抗体包含含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
47.如权利要求41-46中任一项所述的抗体，其中所述抗体对于人CD33的解离常数(KD)在约2nM至约200pM的范围内，或小于约200pM，并且其中所述KD由生物膜干涉测量法来测定。
48.如权利要求41-47中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低CD33的细胞表面水平。
49.如权利要求48所述的抗体，其中所述CD33在人树突状细胞的表面上表达。
50.如权利要求48或权利要求49所述的抗体，其中所述抗体在体外降低CD33的细胞表面水平。
51.如权利要求48-50中任一项所述的抗体，其中如通过流式细胞术所测量的，所述抗体在体外以小于40pM的半最大有效浓度(EC50)降低CD33的细胞表面水平。
52.如权利要求41-51中任一项所述的抗体，其中所述抗体增加一种或多种疾病相关小神经胶质细胞(DAM)标志物的表达。
53.如权利要求52所述的抗体，其中所述一种或多种DAM标志物是ApoE3、Tyrobp、B2m、Trem2、Cst7、Ctsl、Lpl、Cd9、Axl、Csf1、Ccl6、Itgax、Clec7a、Lilrb4、Timp2或其任意组合。
54.一种分离的核酸，其包含编码权利要求1-53中任一项所述的抗体的核酸序列。
55.一种载体，其包含权利要求54所述的核酸。
56.一种分离的宿主细胞，其包含权利要求55所述的载体。
57.一种产生与CD33结合的抗体的方法，所述方法包括培养权利要求56所述的细胞，从而产生所述抗体。
58.如权利要求57所述的方法，所述方法还包括回收由所述细胞产生的所述抗体。
59.一种分离的抗体，其与通过权利要求57或58所述的方法产生的CD33结合。
60.一种药物组合物，其包含权利要求1-53和59中任一项所述的抗体和药学上可接受的载剂。
61.一种预防疾病、病症或损伤，降低所述疾病、病症或损伤的风险或治疗所述疾病、病症或损伤的方法，所述疾病、病症或损伤选自由以下组成的组：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆、tau蛋白病、感染和癌症，所述方法包括向有此需要的个体施用治疗有效量的权利要求1-53和59中任一项所述的抗体。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述疾病、病症或损伤是癌症。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)和多发性骨髓瘤。
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