CN112094779B - 一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于微生物制剂技术领域，具体涉及一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂包括如下组分及其重量份数：复合微生物菌粉40～60份，复合载体20～30份，保护剂2～10份。本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，通过枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌相互协调作用，克服了抗生素滥用带来的副作用，为人类提供了安全、绿色的微生物复合制剂，同时有效提高了生物菌发酵过程中产生的芽孢数量，为后续生物菌制剂的制备过程中，有效延长微生物菌剂的使用寿命，保持微生物菌剂的药效和稳定性提供了重要保障。

Description

一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

技术领域

本发明属于微生物制剂技术领域，具体涉及一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

背景技术

仔猪消化道类疾病严重制约了生猪健康养殖的发展(“猪系统性疾病的流行现状与防控措施”，陈焕春，兽医导刊，2017年第11期，第6页摘要第1行，公开日2017年06月30日)。据统计，每年因仔猪消化道疾病的发病率高达50.47％，细菌性疾病致死率达50％以上，病毒性腹泻致死率可达到100％。近30年来，我国仔猪消化道类疾病在检测、防控等方面有了明显突破，但效果却不尽如人意，畜禽疫病不断暴发，新病不断出现。

目前养殖行业普遍实行规模化养殖，饲养禽畜一旦患上传染性疾病，极易造成疫情大范围传播，进而导致经济受损等一系列问题。因此养殖行业普遍存在使用抗生素的行为。大剂量的使用抗生素可以起到防治传染病的效果，而且禽畜类抗生素比专项药物价格低廉，还可以降低饲养成本，因此一些不良商家为了节约养殖成本或是相关知识储备不全对于大量使用抗生素并无防范意识的养殖户会出现滥用抗生素的行为。但是滥用抗生素不仅会干扰饲养禽畜的肠道菌群平衡，还会出现排泄不掉的抗生素遗留在禽畜机体内对食用者造成危害的情况。所以，研发无抗饲料是现行养殖业急需解决的技术问题。尤其是2020年7月起，国家将禁用饲用抗生素。那么在养殖过程中，仅依靠接种疫苗去防治各种传染性疾病，种类既不全面，预防力度也不够，因此，各种传染性疾病的发病率、腹泻率和死亡率都将大大增高。

微生物制剂是一类无毒、无害、无耐药性、无污染、绿色安全的生物制剂，不仅具有调节肠道微生态平衡、促进动物生长、产生消化酶及维生素提高饲料转化率和动物饲养效益的功效，而且部分有益菌可以产生抗菌肽类物质，具有抑制有害菌、增强机体免疫能力、减少腹泻、降低动物死亡率的作用。在部分替代和减少抗生素以及化学合成药物在生猪养殖中的用量方面发挥着越来越重要的作用，逐步成为绿色饲料添加剂行业的发展新趋势。

中国专利申请CN104126734A公开了一种兽用微生态制剂及其制备方法，包括枯草芽孢杆菌菌粉1～10份，地衣芽孢杆菌菌粉1～10份，酿酒酵母菌粉1～10份，EM菌菌粉1～3份。该发明的兽用微生物饲料添加剂可加快牲畜的生长，减少疾病的发生，替代抗生素的使用，但是对于基体抗病能力的提高效果并不突出，尤其是对于牲畜生长过程中出现的腹泻等情况，治疗和预防效果不明显。

中国专利申请CN108850472A公开了一种枯草芽孢杆菌饲料添加剂，由枯草芽孢杆菌、沙棘冻干粉、刺梨冻干粉、酸浆冻干粉、黑加仑冻干粉、仙人掌冻干粉混合均匀，再添加余量的发酵蛋壳粉混合均匀，复合包装制成：在每1000g饲料添加剂中枯草芽孢杆菌10000个亿-120000个亿，沙棘冻干粉5-50g，刺梨冻干粉5-50g、酸浆冻干粉3-30g、黑加仑冻干粉3-30g、仙人掌冻干粉50-150g，其余为发酵蛋壳粉。该发明为单一型枯草芽孢杆菌饲料添加剂，虽然能够提高枯草芽孢杆菌添加剂的营养价值，同时促进动物的新陈代谢，但是生产过程中枯草芽孢杆存在菌数偏低，特别是芽孢率偏低的问题，大大影响了制备的微生物制剂的质量以及在后续饲料中的添加量。

所以，需要研制一种复合微生物制剂，能有效促进动物的新陈代谢，提高机体的抗病能力，促进动物生长，同时还能够提高微生物的芽孢率，提高菌种活性。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂通过枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌协同作用，能够有效促进动物的新陈代谢，提高机体的抗病能力，保护动物胃肠道，抑制肠道病原微生物，降低腹泻率。

本发明的技术方案是：

一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，包括如下组分及其重量份数：复合微生物菌粉40～60份，复合载体20～30份，保护剂2～10份。

更进一步地，所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份。

进一步地，所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为3～10％，培养温度34～36℃，摇床转速160～200r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

更进一步地，所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为5～12％，培养温度为30～38℃，混合发酵15～20h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌；

进一步地，所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1；

进一步地，所述步骤S3中所得复合微生物菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g，蜡样芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；菊糖芽孢乳杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g。

进一步地，所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨6～18g、酵母粉6～16g，玉米粉10～15g，葡萄糖5～20g、大米水解蛋白5～10g，罗望子多糖2～8g，磷酸二氢钾0.1～1.6g、硫酸铵0.1～0.6g、碳酸钙1～4g，纯化水1000mL，调节pH值至6～7.5，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

更进一步地，所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨12g、酵母粉8g，玉米粉12g，葡萄糖15g、大米水解蛋白8g，罗望子多糖6g，磷酸二氢钾0.6g、硫酸铵0.3g、碳酸钙2g，纯化水1000mL，调节pH值为7，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

进一步地，所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比6～13:1～5组成。

更进一步地，所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比10:3组成。

进一步地，所述复合载体为玉米粉、谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、海藻糖中的两种或以上。

另外，本发明还提供了一种所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法，所述制备步骤如下：

将复合微生物菌粉，保护剂和复合载体经混合机混合均匀，20～40℃下干燥后分装得到含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

进一步地，所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为1～8％。

本发明提供的复合微生物制剂采用了多菌种联合发酵和菌种配伍技术制备而成，通过对枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌一特定的比例进行复合使用，伴随饲料进入动物体内时，能够产生大量的胞外酶(如淀粉酶、蛋白酶和半纤维素水解酶等)，这些酶类可以促进饲料的消化和吸收，提高饲料的利用率，从而能够有效促进动物的生长，提高猪仔生长率，减少饲料消耗和药物开支。另外，还能够产生有机酸，降低肠道中的pH，有效抑制大肠杆菌、沙门杆菌、梭菌的增殖，减少肠道疾病的发病率，提高动物机体的抗病能力和免疫力。

本发明提供的复合微生物制剂中，对复合生物菌的发酵过程使用的培养基进行了改进，现有技术中，对于微生物制剂的发酵培养过程中，得到的菌种的芽孢率较低，约在80％左右，这大大影响可后续制备过程中的菌种数量和菌种活性，而本申请发明人，通过大量的研究后，发现发酵培养过程中，培养基的组成对于菌种产生的芽孢率具有较大的影响，发明人意外的发现，当向本发明添加的一定量的大米水解蛋白和罗望子多糖后，能够有效提高复合生物菌在发酵过程的产生的芽孢数量，芽孢率能达到99％，较现有技术的芽孢率有了大大的提高。

本发明提供的复合微生物制剂中，还添加了由鼠李糖脂和没食子酸丙酯一定比例组成的保护剂，能够有效提高微生物菌剂的抗氧化性，延长微生物菌剂的使用寿命，保持微生物菌剂的药效和稳定性，试验证明，本发明制备的复合微生物制剂经100℃下处理20min后，芽孢率仍能达到90％以上。

与现有技术相比，本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂具有以下优势：

(1)本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，通过枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌相互协调作用，有效的提高了猪仔的生长率，降低了料肉比，同时有效提高了动物的免疫能力和肠道吸收能力，克服了抗生素滥用带来的副作用，为人类提供了安全、绿色的饲料添加剂。

(2)本发明提供的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，在复合生物菌的发酵过程中，采用的特定的培养基，有效提高了生物菌发酵过程中产生的芽孢数量，为后续生物菌制剂的制备过程中，有效延长微生物菌剂的使用寿命，保持微生物菌剂的药效和稳定性提供了重要保障。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。

枯草芽孢杆菌、菊糖芽孢乳杆菌购自上海西格生物科技有限公司，蜡样芽孢杆菌购自南京百慕达生物科技有限公司；鼠李糖脂购自西安博联特化工有限公司，大米水解蛋白购自南京通盈生物科技有限公司，罗望子多糖购自江苏瑞多生物工程有限公司。

本发明所用的其他试剂均为常用试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。

实施例1一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉40份，复合载体20份，保护剂2份。

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为3％，培养温度34℃，摇床转速160r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为5％，培养温度为30℃，混合发酵15h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌粉。

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨6g、酵母粉6g，玉米粉10g，葡萄糖5g、大米水解蛋白5g，罗望子多糖2g，磷酸二氢钾0.1g、硫酸铵0.1g、碳酸钙1g，纯化水1000mL，调节pH值至6，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1。

所述步骤S3中所得复合微生物菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g，蜡样芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；菊糖芽孢乳杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比6:5组成。

所述复合载体为玉米粉、谷朊粉按重量比1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法，所述制备步骤如下：将复合微生物菌粉，保护剂和复合载体经混合机混合均匀，20℃下干燥后分装得到含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为1％。

实施例2一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份；

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为6％，培养温度35℃，摇床转速180r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为10％，培养温度为35℃，混合发酵18h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌粉。

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨12g、酵母粉8g，玉米粉12g，葡萄糖15g、大米水解蛋白8g，罗望子多糖6g，磷酸二氢钾0.6g、硫酸铵0.3g、碳酸钙2g，纯化水1000mL，调节pH值为7，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1。

所述步骤S3中所得复合微生物菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g，蜡样芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；菊糖芽孢乳杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比10:3组成。

所述复合载体为谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、按重量比1:1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法，所述制备步骤如下：将复合微生物菌粉，保护剂和复合载体经混合机混合均匀，30℃下干燥后分装得到含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为6％。

实施例3一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉60份，复合载体30份，保护剂10份。

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为10％，培养温度36℃，摇床转速200r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为12％，培养温度为38℃，混合发酵20h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌粉。

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨18g、酵母粉16g，玉米粉15g，葡萄糖20g、大米水解蛋白10g，罗望子多糖8g，磷酸二氢钾1.6g、硫酸铵0.6g、碳酸钙4g，纯化水1000mL，调节pH值至7.5，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1。

所述步骤S3中所得复合微生物菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g，蜡样芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；菊糖芽孢乳杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比13:1组成。

所述复合载体为谷朊粉和海藻糖按重量比1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法，所述制备步骤如下：将复合微生物菌粉，保护剂和复合载体经混合机混合均匀，40℃下干燥后分装得到含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为8％。

对比例1一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份；

所述复合微生物菌粉的制备方法与实施例2类似。

所述保护剂为鼠李糖脂。

所述复合载体为谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、按重量比1:1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法于实施例2类似。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为6％。

与实施例2的区别在于，所述保护剂中未添加没食子酸丙酯。

对比例2一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份；

所述复合微生物菌粉的制备方法与实施例2类似。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比1:1组成。

所述复合载体为谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、按重量比1:1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法于实施例2类似。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为6％。

与实施例2的区别在于，所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比1:1组成。

对比例3一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份；

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为6％，培养温度35℃，摇床转速180r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为10％，培养温度为35℃，混合发酵18h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌。

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨12g、酵母粉8g，玉米粉12g，葡萄糖15g、罗望子多糖6g，磷酸二氢钾0.6g、硫酸铵0.3g、碳酸钙2g，纯化水1000mL，调节pH值为7，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比10:3组成。

所述复合载体为谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、按重量比1:1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法于实施例2类似。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为6％。

与实施例2的区别在于，所述复合微生物菌粉的制备方法中步骤S2的复合培养基中未添加大米水解蛋白。

对比例4一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂，由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份；

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为6％，培养温度35℃，摇床转速180r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH 5。

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为10％，培养温度为35℃，混合发酵18h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌。

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨12g、酵母粉8g，玉米粉12g，葡萄糖15g、大米水解蛋白8g，磷酸二氢钾0.6g、硫酸铵0.3g、碳酸钙2g，纯化水1000mL，调节pH值为7，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1。

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比10:3组成。

所述复合载体为谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、按重量比1:1:1组成。

所述的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂的制备方法于实施例2类似。

所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为6％。

与实施例2的区别在于，所述复合微生物菌粉的制备方法中步骤S2的复合培养基中未添加罗望子多糖。

试验例一、本发明的复合微生物制剂的芽孢率检测

1、试验材料：本发明实施例1～3，对比例1～4制备的复合微生物粉和复合微生物制剂。

2、试验方法：(1)采用简单染色法对本发明实施例1～3，对比例1～4制备的复合微生物粉进行芽孢率检测，并记录实验数据。

(2)将本发明实施例1～3，对比例1～4制备的复合微生物制剂于100℃下处理20min，采用简单染色法检测其芽孢率并记录实验数据。

3、试验结果

试验结果如表1所示。

表1本发明的复合微生物制剂的芽孢率检测

由表1可知，本发明实施例1～3制备的复合微生物菌粉中，芽孢率均达到98％以上，其中实施例2的效果最好，芽孢率为99.1％，实施例2制备的含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂在100℃下处理20min后，其芽孢率仍能达到94.3％，为本发明的最佳实施例。而对比例1～2中改变了制备的复合微生物制剂的保护剂的组分时，制得的复合微生物制剂经100℃下处理20min后，其芽孢率大大降低，说明本发明添加的保护剂能有效保持恶劣环境下复合微生物菌剂的芽孢率，延长微生物菌剂的使用寿命，保持微生物菌剂的药效和稳定性。而对比例3～4中，当改变了本发明复合微生物菌发酵过程中采用的复合培养基的组分时，得到的复合微生物菌的芽孢率也有了明显的降低。

试验例二、本发明的复合微生物制剂对仔猪生长状况的影响

1、试验材料：本发明实施例1～3，对比例1～4制备的复合微生物制剂。

2、试验方法：在相同的养殖条件下，使用本发明实施例1～3，对比例1～4制备的微生物制剂作为饲料添加剂试验组，市场上的饲料作为对照组。将160头保育前期的仔猪(40日龄)分为8组，分别为实施例1～3组，对比例1～4组和对照组，每组20头；对照组喂食普通市售饲料，实施例1～3组，对比例1～4组在普通市售饲料中添加本发明实施例1～3，对比例1～4制备的微生物制剂，添加比重为饲料量的6％，饲养30天，观察仔猪平均日增重、料肉比、腹泻率等情况。

3、试验结果

试验结果如表2所示。

表2本发明的复合微生物制剂对仔猪生长状况的影响

组别	平均始重(kg)	平均末重(kg)	日增重(kg/天)	料肉比	腹泻率(％)
						实施例1组	13.39	37.39	0.80	1.92	3.5
实施例2组	12.81	37.71	0.83	1.83	3.2
						实施例3组	13.10	36.80	0.79	1.88	3.8
对比例1组	13.13	25.73	0.42	2.35	9.7
						对比例2组	12.55	26.95	0.48	2.41	10.5
对比例3组	13.05	22.65	0.32	2.52	12.3
						对比例4组	12.04	22.24	0.34	2.64	14.3
对照组	12.01	22.51	0.35	2.61	15.3

由表2可知，食用添加了本发明实施例1～3制备的复合微生物制剂的饲料与对照组(普通市售饲料)相比，有效预防了仔猪的产生腹泻的情况，腹泻率较低，且日增重有了明显的提高，其中实施例2组的效果最好，日增重显著增加为0.83kg，料肉比及腹泻率大大降低，结果表明，添加本发明微生物制剂的猪用饲料时，对保育前期仔猪的养殖效果好，有效提高仔猪的免疫力，成本低，可以显著提高仔猪的抗腹泻和饲料转化率，有效提升仔猪饲养经济效益。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (7)

1.一种含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂在制备饲料添加剂中的用途，其特征在于，所述复合微生物制剂包括如下组分及其重量份数：复合微生物菌粉40～60份，复合载体20～30份，保护剂2～10份；

所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比6～13:1～5组成；

所述复合微生物菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1、将活化好的枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌分别接种于种子培养基中，接种量各为3～10％，培养温度34～36℃，摇床转速160～200r/min，培养12h，得枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液；

所述种子培养基为牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，葡萄糖2％，NaCl 0.5％，加水至100％，pH5；

S2、将步骤S1所得的枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌和菊糖芽孢乳杆菌种子液混合接种于复合培养基中，接种量为5～12％，培养温度为30～38℃，混合发酵15～20h，得到复合生物菌发酵液；

S3、将步骤S2所得的复合生物菌发酵液在干燥箱中40℃烘干成干粉，即得复合微生物菌粉；

所述步骤S1中枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌和菊糖芽孢乳杆菌的重量比为7:2:1；所述步骤S3中所得复合微生物菌粉中，枯草芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g，蜡样芽孢杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；菊糖芽孢乳杆菌的活菌数≥1.0×10⁹cfu/g；

所述步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨6～18g、酵母粉6～16g，玉米粉10～15g，葡萄糖5～20g、大米水解蛋白5～10g，罗望子多糖2～8g，磷酸二氢钾0.1～1.6g、硫酸铵0.1～0.6g、碳酸钙1～4g，纯化水1000mL，调节pH值至6～7.5，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述复合微生物制剂由如下组分及其重量份数组成：复合微生物菌粉50份，复合载体25份，保护剂5份。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述复合微生物菌粉的制备方法的步骤S2中的复合培养基为：蛋白胨12g、酵母粉8g，玉米粉12g，葡萄糖15g、大米水解蛋白8g，罗望子多糖6g，磷酸二氢钾0.6g、硫酸铵0.3g、碳酸钙2g，纯化水1000mL，调节pH值为7，经112℃高温灭菌20分钟，冷却至室温即得。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述保护剂为鼠李糖脂和没食子酸丙酯按重量比10:3组成。

5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述复合载体为玉米粉、谷朊粉、低聚果糖、壳聚糖、海藻糖中的两种或以上。

6.如权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于，所述复合微生物制剂的制备步骤如下：

将复合微生物菌粉，保护剂和复合载体经混合机混合均匀，20～40℃下干燥后分装得到含有枯草芽孢杆菌的复合微生物制剂。

7.如权利要求1-6任一项所述的用途，其特征在于，所述复合微生物制剂在饲料中的添加量为1～8％。