CN111939086A - 一种具有保湿祛黑作用的眼膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有保湿祛黑作用的眼膜及其制备方法，所述眼膜包括眼膜基材以及眼膜精华液，所述眼膜精华液包括以下质量分数的组分：黑柄炭角菌发酵产物提取物1～15％、1,3‑丙二醇1～3％、棕榈酰四肽‑70.3～0.6％、透明质酸0.1～1％、乙二胺四乙酸二钠0.01～0.03％、羟乙基纤维素1～3％及余量的去离子水。本发明通过改进黑柄炭角菌发酵基质，获得了一种多效的黑柄炭角菌发酵产物提取物，其具有优异的消除黑色素的能力，同时具有促进眼部微循环，保护和加固眼部毛细血管，抚平细纹，保湿的作用，且对皮肤无刺激性，可作为祛除色素性黑眼圈和血管性黑眼圈的产品。

Description

一种具有保湿祛黑作用的眼膜及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域。更具体地，涉及一种具有保湿祛黑作用的眼膜及其制备方法。

背景技术

眼部皮肤厚度非常薄，仅为面部皮肤厚度的1/3～1/5，且眼部周围只有皮脂腺和变态汗腺，对眼部皮肤保护小，同时眼部皮肤脂肪含量少，缺乏弹性纤维和胶原结构，眼周的神经纤维及毛细血管分布密度高，血液循环不畅等导致眼部暗淡，疲劳，继而生活作息不规律，用眼不当就会容易出现黑眼圈、眼袋、鱼尾纹、脂肪粒等问题。

其中，黑眼圈是位于双侧眶下区环形的，呈现青黑色或茶黑色的现象，是比较常见的眼部问题。黑眼圈根据其成因不同可分为色素性黑眼圈、血管性黑眼圈、结构性黑眼圈及同时合并上述多种黑眼圈的混合性黑眼圈。其中，色素性黑眼圈成因是长久的日光照射、缺乏营养物质、吸烟、衰老等导致黑色素在眼周局部堆积，经对眼周黑眼圈真皮层病检分析含有大量的黑色素颗粒存在；血管性黑眼圈主要由睡眠不足、眼睛疲劳等因素引起微血管内血液流速缓慢，血液量增多而氧气消耗量提高，缺氧血红素大增，造成眼周肌肤淤血及浮肿的现象，经过光线反射后呈现出黑眼圈。目前，大多人呈现的是多种黑眼圈合并的混合性黑眼圈，如色素性合并血管性黑眼圈，而现有产品多数针对色素性黑眼圈，无法同时有效改善两种类型黑眼圈。

基于此，有必要提供一种能够针对色素性黑眼圈和血管性黑眼圈的眼部产品。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有眼部产品的缺陷和不足，提供一种具有保湿祛黑作用的眼膜，该眼膜加入特制的功效成分黑柄炭角菌发酵产物提取物，能够显著促进眼部皮肤微循环，保护并加固毛细血管，抚平细纹，具有双重的去黑眼圈功效。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种具有保湿祛黑作用的眼膜，所述眼膜包括眼膜基材以及眼膜精华液，所述眼膜精华液包括以下质量分数的组分：黑柄炭角菌发酵产物提取物1～15％、1,3-丙二醇1～3％、棕榈酰四肽-70.3～0.6％、透明质酸0.1～1％、乙二胺四乙酸二钠0.01～0.03％、羟乙基纤维素1～3％及余量的去离子水。

进一步地，所述眼膜精华液包括以下质量分数的组分：黑柄炭角菌发酵产物提取物12％、1,3-丙二醇3％、棕榈酰四肽-7 0.5％、透明质酸0.5％、乙二胺四乙酸二钠0.02％、羟乙基纤维素1.5％及余量的去离子水。

进一步地，所述眼膜基材以竹炭纤维、蚕丝纤维、海藻纤维或棉纤维中的一种为原料制备而成。更进一步地，所述眼膜基材优选以蚕丝纤维为原料制备得到蚕丝眼膜。

进一步地，所述黑柄炭角菌发酵产物提取物是以1～12％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、0.1～2％重量的葡萄糖、0.5～1％重量的硫酸镁、0.1～0.5％重量的柠檬酸及余量的去离子水作为发酵基质，接种10～15％的黑柄炭角菌进行发酵制备得到。

进一步地，所述发酵基质组成为：5～12％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、1～2％重量的葡萄糖、0.5～0.8％重量的硫酸镁、0.2～0.5％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

进一步地，所述液态发酵工艺参数为：pH5.3～5.6；培养温度为22～25℃；培养时间6～8天；搅拌速度为100～200rpm；通气量为1～4vvm；罐压为0.02～0.06MPa。

进一步地，所述液态发酵还包括将发酵滤液采用溶剂提取、过滤、冷冻干燥得到黑柄炭角菌发酵产物提取物的步骤。

进一步地，所述溶剂为水或有机溶剂中的一种或两种。优选采用体积分数为80～95％的乙醇溶液。

进一步地，所述乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物的制备方法为：

S1、取大豆复合型外植体洗净，干燥后，加入蒸馏水，打浆，过滤浆液，灭菌后得培养液；

S2、取经二级培养后的乳酸杆菌按5～10％的接种量接种于上述培养液中，添加0.5～2％葡萄糖，于37℃下发酵1～3天，发酵结束后，将发酵产物冷冻干燥，研细后，即得；所述发酵过程中：罐压为0.01～0.03MPa；通气量为1～3vvm；转速为140～160rpm。

进一步地，所述大豆复合型外植体的制备步骤为：取大豆种子，洗净灭菌后，在萌发培养基中经光照培养催芽，催芽后，从种子眼处去掉种皮即为所述大豆复合型外植体。

有研究指出，黑柄炭角菌[Xylaria nigripes(KI)Sacc.]分泌的代谢产物包含具有抗氧化功能的化合物，因此，经液态培养发酵获得的黑柄炭角菌发酵产物已被公开作为美白保湿提取物的用途，但是不同的培养方式获得的代谢产物也必然存在差异，具备的功效水平不同，甚至有可能产生新的用途和功效。在此之间，未发现采用本文中“乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物”作为主要发酵基质原料对黑柄炭角菌进行发酵。

本发明独特之处在于，采用乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物作为黑柄炭角菌液态发酵主要发酵基质，获得一种黑柄炭角菌发酵产物提取物。试验发现，与采用传统培养基相比，采用特殊发酵基质获得的黑柄炭角菌发酵产物提取物具有更优异的消除黑色素的能力，同时具有促进眼部微循环，保护和加固眼部毛细血管，抚平细纹，保湿的作用，且对皮肤无刺激性，因此可作为祛除色素性黑眼圈和血管性黑眼圈的产品。

本发明另一目的在于提供一种所述具有保湿祛黑作用的眼膜的方法，包括以下步骤：

A)往搅拌锅中加入去离子水、乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀；

B)将羟乙基纤维素、透明质酸分散在1,3-丙二醇中，投入搅拌锅中，加热至80～85℃，均质1～5min；降温到40～45℃，加入黑柄炭角菌发酵产物提取物和棕榈酰四肽-7，搅拌均匀；降温至30～35℃，检验合格后出料，将眼膜精华液灌入预先装有眼膜基材的眼膜袋中即可。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过改进黑柄炭角菌发酵基质，获得了一种多效功能的黑柄炭角菌发酵产物提取物，其具有优异的消除黑色素的能力，同时具有促进眼部微循环，保护和加固眼部毛细血管，抚平细纹，保湿的作用，且对皮肤无刺激性，可作为祛除色素性黑眼圈和血管性黑眼圈的产品。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1大豆复合型外植体制备

所述大豆复合型外植体的制备步骤为：取大豆种子，洗净灭菌后，在萌发培养基中经光照培养催芽，催芽后，从种子眼处去掉种皮，即得。

所述萌发培养基的组成为：20g/L葡萄糖和质量百分浓度为0.8％的琼脂，pH5.6。

实施例2、乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物制备

S1、取实施例1制备的大豆复合型外植体洗净，干燥后，加入蒸馏水，打浆，过滤去渣，浆液121℃灭菌后得培养液；

S2、将植物乳酸杆菌与灭菌牛乳混合，36℃培养24h，从已培养好的牛乳混液中取1ml接种MRS肉汤培养基，培养48h；

S3、取经二级培养后的乳酸杆菌按10％的接种量接种于上述培养液中，添加1％葡萄糖，于37℃下发酵3天，发酵结束后，将发酵产物过滤，冷冻干燥，研细后，即得；所述发酵过程中：罐压为0.01～0.03MPa；通气量为1～3vvm；转速为140rpm。

实施例3、黑柄炭角菌发酵产物提取物制备

步骤一、取黑柄炭角菌按6％的接种量接种于种子罐中，在pH5.0～5.5，温度为25℃的条件下培养4天；种子培养基组成为：每1000ml水中含有：葡萄糖30g、硫酸铵2g、三水磷酸氢二钾1g、谷氨酸3g、柠檬酸三铵3g和硫酸锌3mg；

步骤二、取步骤一黑柄炭角菌种子培养液按照10v/v％转移到含有发酵基质的发酵中，在pH5.3～5.6，培养温度为25℃的条件下培养6天，待发酵基质充满菌丝后终止发酵；搅拌速度为100～200rpm；通气量为1～4vvm；罐压为0.02～0.06MPa；

步骤三、取发酵滤液，浓缩，静置12h，搅拌状态下加入发酵滤液1.2倍量的体积分数为85％的乙醇溶液，静置沉淀完全，取上清液经灭菌、超滤膜过滤、冷冻干燥和研细步骤，得到所述黑柄炭角菌发酵产物提取物。

所述发酵基质组成为：10％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、1.5％重量的葡萄糖、0.6％重量的硫酸镁、0.4％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

实施例4、黑柄炭角菌发酵产物提取物制备

步骤一、取黑柄炭角菌按6％的接种量接种于种子罐中，在pH5.0～5.5，温度为25℃的条件下培养4天；种子培养基组成为：每1000ml水中含有：葡萄糖30g、硫酸铵2g、三水磷酸氢二钾1g、谷氨酸3g、柠檬酸三铵3g和硫酸锌3mg；

步骤二、取步骤一黑柄炭角菌种子培养液按照12v/v％转移到含有发酵基质的发酵中，在pH5.3～5.6，培养温度为25℃的条件下培养8天，待发酵基质充满菌丝后终止发酵；搅拌速度为100～200rpm；通气量为1～4vvm；罐压为0.02～0.06MPa；

步骤三、取发酵滤液，浓缩，静置12h，搅拌状态下加入发酵滤液2倍量的体积分数为90％的乙醇溶液，静置沉淀完全，取上清液经灭菌、超滤膜过滤、冷冻干燥和研细步骤，得到所述黑柄炭角菌发酵产物提取物。

所述发酵基质组成为：8％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、1.0％重量的葡萄糖、0.5％重量的硫酸镁、0.4％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

实施例5、黑柄炭角菌发酵产物提取物制备

步骤一、取黑柄炭角菌按6％的接种量接种于种子罐中，在pH5.0～5.5，温度为25℃的条件下培养4天；种子培养基组成为：每1000ml水中含有：葡萄糖30g、硫酸铵2g、三水磷酸氢二钾1g、谷氨酸3g、柠檬酸三铵3g和硫酸锌3mg；

步骤二、取步骤一黑柄炭角菌种子培养液按照15v/v％转移到含有发酵基质的发酵中，在pH5.3～5.6，培养温度为25℃的条件下培养6天，待发酵基质充满菌丝后终止发酵；搅拌速度为100～200rpm；通气量为1～4vvm；罐压为0.02～0.06MPa；

步骤三、取发酵滤液，浓缩，静置12h，搅拌状态下加入发酵滤液1.5倍量的体积分数为92％的乙醇溶液，静置沉淀完全，取上清液经灭菌、超滤膜过滤、冷冻干燥和研细步骤，得到所述黑柄炭角菌发酵产物提取物。

所述发酵基质组成为：12％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、2％重量的葡萄糖、0.8％重量的硫酸镁、0.5％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

实施例6～8眼膜精华液配方组成及其用量(质量分数％)

制备方法：

A)往搅拌锅中加入去离子水、乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀；

B)将羟乙基纤维素、透明质酸分散在1,3-丙二醇中，投入搅拌锅中，加热至80℃，均质5min；降温到40℃，加入黑柄炭角菌发酵产物提取物和棕榈酰四肽-7，搅拌均匀；降温至35℃，检验合格后出料，将眼膜精华液灌入预先装有眼膜基材的眼膜袋中即可。

对比例1

与实施例6区别在于，黑柄炭角菌发酵产物提取物制备中，步骤一中采用的发酵基质组成为：10％重量的乳酸杆菌/大豆提取物发酵产物滤液、1.5％重量的葡萄糖、0.6％重量的硫酸镁、0.4％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

对比例2

与实施例6区别在于，黑柄炭角菌发酵产物提取物制备中，步骤一中采用的发酵基质组成为：1.5％重量的葡萄糖、0.6％重量的硫酸镁、0.4％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

对比例3

与实施例6区别在于，采用中国专利CN105411951B中实施例1制备的黑柄炭角菌提取物替代本发明黑柄炭角菌发酵产物提取物制备得到的眼部精华。

试验一、皮肤刺激性试验

参考《化妆品卫生规范》(2007年版)中的多次皮肤刺激性试验方法中的反应对实施例6～8眼膜精华液进行多次皮肤刺激性试验，试验前，将试验动物背部脊柱两侧背毛剪掉，去毛范围2cm×2cm，涂抹面积为1.5×1.5cm，一侧涂2ml受试样品，一侧做对照，每天涂抹一次，连续涂抹14d，从第2d开始，每次涂抹前进行剪毛，用温水清除残留受试样品，1h后观察结果。按照《化妆品卫生规范》(2007年版)中的评分标准对试验结果进行评分，计算每天每只动物平均积分，按下表1判断皮肤刺激强度，试验结果如下表1所示。

表1刺激强度等级

积分均值	强度
		0～＜0.5	无刺激性
0.5～＜2.0	轻刺激性
		2.0～＜6.0	中刺激性
6.0～8.0	强刺激性

表2多次皮肤刺激试验结果

样品	每天每只动物积分均值	刺激强度
			实施例6	0.10	无刺激性
实施例7	0.13	无刺激性
			实施例8	0.15	无刺激性

试验二、色素性黑眼圈祛除试验

1.1受试者入选标准及排除标准：选取70例色素性黑眼圈患者，平均年龄32±1岁，入选标准：①自我评价有黑眼圈；②经临床医生评估具有较明显的色素性黑眼圈，包括单纯色素性黑眼圈和以色素性为主的混合性黑眼圈，且采用VISIA面部成像仪检测可见明显上下眼睑色素沉着。排除标准：①妊娠及哺乳期女性；②对产品的成分过敏者；③眼周存在感染性或炎症患者；④眼周有明显瘢痕者；⑤近2周使用过外用药物或类似产品者；⑥近半年眼周接受过任何美容治疗者。

1.2试验方法：将上述70例患者随机分为7组，分别为实施例6～8以及对比例1～3组和空白对照组，除空白对照组外的各组受试者于每日早晚外用产品1次，每次使用15min，连续使用56天，采用德国Mexameter MX-18红斑/黑素指数测试仪测试受试者使用前及使用第28天、56天的皮肤黑色素含量MI值，每次测量重复测量3次，取平均值，进行统计学差异分析，测试结果如表3。

表3皮肤黑色素MI值

注：与使用前相比，^*P＜0.05；^**P＜0.01，皮肤黑色素含量MI值越大，表示皮肤黑色素含量越高。

由上表可知，使用本发明实施例6-8眼部修护精华28天后，眼部皮肤黑色素含量与使用前有显著地变化，使用第56天后，眼部皮肤黑色素含量与使用前存在极显著变化，提示，其对色素性黑眼圈具有优异的改善作用。

对比例1采用乳酸杆菌/大豆提取物发酵产物滤液替代本发明乳酸菌/大豆复合型外植体发酵产物获得眼部精华在使用第28天，眼部黑色素含量与使用前无明显变化，在使用第56天后存在显著变化；对比例2作用与对比例1相似；对比例3采用中国专利CN105411951B中实施例1制备的黑柄炭角菌提取物作为功效成分制得眼部精华液，其对色素性黑眼圈亦具备较好的祛除效果。

试验三、血管性黑眼圈祛除试验

1.1受试者入选标准及排除标准：选取60例色素性黑眼圈患者，平均年龄30±1岁，入选标准：①自我评价有黑眼圈，日光下呈现下粉红色(氧合血红蛋白)或蓝紫色(血红蛋白)；②经临床医生评估具有较明显的血管性黑眼圈，且伍德式灯下观察与日光灯下对比无明显变化。排除标准：①妊娠及哺乳期女性；②对产品的成分过敏者；③眼周存在感染性或炎症患者；④眼周有明显瘢痕者；⑤近2周使用过外用药物或类似产品者；⑥近半年眼周接受过任何美容治疗者。

1.2试验方法：将上述60例患者随机分为6组，分别为实施例6～8以及对比例1～3组，各组受试者于每日早晚外用产品1次，每次15min，连续使用56天，采用德国MexameterMX-18红斑/黑素指数测试仪测试受试者使用前及使用第56天的皮肤红斑指数(EI)，每次测量重复测量3次，取平均值，进行统计学差异分析，测试结果如表4。

表4皮肤红斑指数检测结果

注：与使用前相比，^*P＜0.05；^**P＜0.01，皮肤EI值越大，表示皮肤血红素含量越高。

由上表可知，使用本发明实施例6-8眼部修护精华56天后，与使用前相比，眼部皮肤红斑指数值显著降低，证明其可用于改善血管性黑眼圈，而其余各组红斑指数与使用前无明显变低。

试验四、保湿试验

选取60名受试者，年龄区段在28～40岁之间，平均年龄为34岁，随机分为6组，各组受试者外用本发明实施例6～8以及对比例1～3所述眼部修护精华产品，采用CorneometerCM 825皮肤水分含量测试仪测量受试者使用前及使用后30min、60min、2h、4h的眼部皮肤含水量，按照下述公式计算皮肤水分含量增长率，测试结果如下表5所示。

式中，MMV₀为使用前皮肤MMV；MMV_t为使用后t时段皮肤MMV。

表5眼部皮肤水分含量增长率

由上表可知，采用本发明乳酸菌/大豆复合型外植体发酵产物作为黑柄炭角菌液态发酵主要发酵基质获得的黑柄炭角菌发酵产物提取物具备更优异的保湿效果，皮肤含水量呈现逐渐增长的趋势，在使用后4h达到峰值，具有瞬时保湿和长效保湿的效果。

试验五、抚平细纹试验

选取符合条件的60名平均年龄在32岁的受试者，各组受试者于每日早晚外用产品1次，每次15min，连续使用56天，每次使用前采用洁面乳清洁面部。采用VISA皮肤检测仪检测各组受试者使用前和使用第56天后面部皮肤皱纹数据，测试环境：20～22℃，湿度40～60％，测试结果如下表6所示。

表6去皱试验结果

样品	皱纹特征技术变化率(％)	皱纹分值变化率(％)
			实施例6	-18.68％	-12.13％
实施例7	-15.37％	-10.35％
			实施例8	-16.25％	-10.47％
对比例1	-12.73％	-6.15％
			对比例2	-9.28％	-4.39％
对比例3	-10.41％	-5.60％

注：

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有保湿祛黑作用的眼膜，所述眼膜包括眼膜基材以及眼膜精华液，其特征在于，所述眼膜精华液包括以下质量分数的组分：黑柄炭角菌发酵产物提取物1～15％、1,3-丙二醇1～3％、棕榈酰四肽-70.3～0.6％、透明质酸0.1～1％、乙二胺四乙酸二钠0.01～0.03％、羟乙基纤维素1～3％及余量的去离子水。

2.如权利要求1所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述眼膜精华液包括以下质量分数的组分：黑柄炭角菌发酵产物提取物12％、1,3-丙二醇3％、棕榈酰四肽-7 0.5％、透明质酸0.5％、乙二胺四乙酸二钠0.02％、羟乙基纤维素1.5％及余量的去离子水。

3.如权利要求1所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述黑柄炭角菌发酵产物提取物是以1～12％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、0.1～2％重量的葡萄糖、0.5～1％重量的硫酸镁、0.1～0.5％重量的柠檬酸及余量的去离子水作为发酵基质，接种10～15％的黑柄炭角菌进行发酵制备得到。

4.如权利要求3所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述发酵基质组成为：5～12％重量的乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物、1～2％重量的葡萄糖、0.5～0.8％重量的硫酸镁、0.2～0.5％重量的柠檬酸及余量的去离子水。

5.如权利要求3或4所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述液态发酵工艺参数为：pH 5.3～5.6；培养温度为22～25℃；培养时间6～8天；搅拌速度为100～200rpm；通气量为1～4vvm；罐压为0.02～0.06MPa。

6.如权利要求5所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述液态发酵还包括将发酵滤液采用溶剂提取、过滤、冷冻干燥得到黑柄炭角菌发酵产物提取物的步骤。

7.如权利要求6所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述溶剂为水或有机溶剂中的一种或两种。

8.如权利要求3和4所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述乳酸杆菌/大豆复合型外植体发酵产物的制备方法为：

S1、取大豆复合型外植体洗净，干燥后，加入蒸馏水，打浆，过滤浆液，灭菌后得培养液；

S2、取经二级培养后的乳酸杆菌按5～10％的接种量接种于上述培养液中，添加0.5～2％葡萄糖，于37℃下发酵1～3天，发酵结束后，将发酵产物冷冻干燥，研细后，即得；所述发酵过程中：罐压为0.01～0.03MPa；通气量为1～3vvm；转速为140～160rpm。

9.如权利要求8所述具有保湿祛黑作用的眼膜，其特征在于，所述大豆复合型外植体的制备步骤为：取大豆种子，洗净灭菌后，在萌发培养基中经光照培养催芽，催芽后，从种子眼处去掉种皮即为所述大豆复合型外植体。

10.一种制备如权利要求1～9任一所述具有保湿祛黑作用的眼膜的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)往搅拌锅中加入去离子水、乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀；

B)将羟乙基纤维素、透明质酸分散在1,3-丙二醇中，投入搅拌锅中，加热至80～85℃，均质1～5min；降温到40～45℃，加入黑柄炭角菌发酵产物提取物和棕榈酰四肽-7，搅拌均匀；降温至30～35℃，检验合格后出料，将眼膜精华液灌入预先装有眼膜基材的眼膜袋中即可。