CN111801341B

CN111801341B - 作为抗癌剂的环二核苷酸

Info

Publication number: CN111801341B
Application number: CN201980017031.9A
Authority: CN
Inventors: B·E·芬克; Z·鲁安
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2018-03-08
Filing date: 2019-03-07
Publication date: 2023-10-24
Anticipated expiration: 2039-03-07
Also published as: JP7250808B2; ES2980374T3; US20210002323A1; EP3762397B1; CN111801341A; EP3762397A1; US11945834B2; KR20200130362A; WO2019173587A1; JP2021515016A

Abstract

本发明涉及式(I)和(II)的化合物，其中所有取代基如本文所定义，以及包含本发明的化合物的药学上可接受的组合物，以及使用所述组合物治疗各种病症的方法。

Description

作为抗癌剂的环二核苷酸

相关申请的交叉引用

本申请要求保护2018年3月8日提交的美国临时申请62/640325的权益，其全部公开内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明提供了新型的化合物，包含所述化合物的药物组合物以及使用它们的方法，例如，将其用于某些癌症的治疗或预防，以及涉及其在治疗中的用途。

技术背景

免疫疗法是医学治疗领域中一个迅速发展的领域，其中患者的免疫系统被有意激活、抑制或以其它方式调节以产生积极的治疗效果。免疫治疗剂包括细胞、抗原、抗体、核酸、蛋白质、肽、天然存在的配体和合成制备的分子。细胞因子是小的糖蛋白分子，以其在通过复杂信号网络引起免疫响应中的作用而闻名。细胞因子作为免疫治疗剂已被研究，但是它们的直接给药受到许多因素的阻碍，包括它们在血液中的半衰期短，这只能通过频繁且经常地高剂量给药来补偿。一种非常有前景的方法是细胞因子诱导，其中用免疫调节剂治疗患者，所述免疫调节剂触发其体内产生一种或多种在治疗上有益的细胞因子。

产生细胞因子的一种试剂是衔接蛋白STING(干扰素基因刺激物，也称为MPYS、TMEM173、MITA和ERIS)。STING是位于内质网的细胞内受体。激动剂与STING的结合激活了信号传导途径，最终实现了I型IFN的诱导，这些I型IFN被分泌并保护了分泌细胞和附近的细胞。可通过两种不同的途径激活STING，每种途径都涉及不同类型的环二核苷酸(“CDN”)激动剂。在第一种途径中，激动剂是细菌病原体用作第二信使的外源性CDN(Burdette等人，2013)。在第二种途径中，酶环状GMP-AMP合酶(cGAS)检测胞质DNA，并作为响应合成CDN，该CDN用作内源性STING激动剂(Ablasser等人，2013；Gao等人，2013；Sun等人，2013)。

STING的激活导致IRF3和NF-κB途径的上调，从而导致干扰素-β和其它细胞因子的诱导。STING对病原体或宿主来源的胞质DNA的响应至关重要。

两种外源性细菌STING激动剂CDN是3’3’-cGAMP和c-GMP。cGAS生产的内源性STING激动剂CDN是2’3’-cGAMP。细菌CDN的特征是两个3′5′磷酸二酯桥，而cGAS生产的CDN的特征是一个2′5′和一个3′5′磷酸二酯桥。简而言之，前面的CDN称为3’3’CDN，而后者称为2’3’CDN。由于历史原因，3’3’CDN也被称为“规范”形式，而2’3’CDN被称为“非规范”形式。

除了保护生物体免于病原体感染外，据报道，STING激活还对治疗炎性疾病以及当前特别受关注的领域-癌症有益。合成CDN与癌症疫苗STINGVAX的组合在多种治疗模型中均显示出增强的抗肿瘤功效(Fu等人，2015)。据报道，仅在小鼠模型中给药STING激动剂即可显示出强大的抗肿瘤免疫功效(Corrales等人，2015a)。有关STING在感染、炎症和/或癌症中的作用的综述，请参见Ahn等人，2015；Corrales等人，2015b和2016；和Barber 2015。

因此，本发明提供新型的环二核苷酸，其可用于治疗癌症。

发明内容

本文提供式(I)的化合物

其中

X独立地为O或S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a为H、卤素、被0-6个R⁵取代的C_1-6烷基、被0-6个R⁵取代的C_3-6环烷基、CN、NO₂、OH、OR^a1、SR^a1、-C(O)NR^a1R^a1、-COOR^a1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^a1R^a1、-NR^a1R^a1、-NR^a1C(O)R^a1、-NR^a1COOR^a1、-NR^a1C(O)NR^a1R^a1、-NR^a1S(O)₂R^a1、-NR^a1S(O)₂NR^a1R^a1、-S(O)R^a1、-S(O)NR^a1R^a1、-S(O)₂R^a1或S(O)₂NR^a1R^a1；

R^b为H、被0-6个R⁵取代的C_1-6烷基、被0-6个R⁵取代的C_3-6环烷基、-C(O)R^a1、-C(O)NR^a1R^a1、-S(O)₂R^a1或S(O)₂NR^a1R^a1；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R⁵为H、卤素、被0-6个R^a取代的C_1-3烷基、被0-6个R^a取代的C_3-6环烷基、被0-6个R^a取代的芳基或被0-6个R^a取代的杂芳基、CN、NO₂、OH、OR^a1、SR^a1、-C(O)NR^a1R^a1、-COOR^a1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^a1R^a1、-NR^a1R^a1、-NR^a1C(O)R^a1、-NR^a1COOR^a1、-NR^a1C(O)NR^a1R^a1、-NR^a1S(O)₂R^a1、-NR^a1S(O)₂NR^a1R^a1、-S(O)R^a1、-S(O)NR^a1R^a1、-S(O)₂R^a1或S(O)₂NR^a1R^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

R⁶为H、卤素、被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基、CN、NO₂、OH、OR^a1、SR^a1、-C(O)NR^a1R^a1、-COOR^a1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^a1R^a1、-NR^a1R^a1、-NR^a1C(O)R^a1、-NR^a1COOR^a1、-NR^a1C(O)NR^a1R^a1、-NR^a1S(O)₂R^a1、-NR^a1S(O)₂NR^a1R^a1、-S(O)R^a1、-S(O)NR^a1R^a1、-S(O)₂R^a1或S(O)₂NR^a1R^a1；

R⁸为H、卤素、被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基、CN、NO₂、OH、OR^a1、SR^a1、-C(O)NR^a1R^a1、-COOR^a1、-OC(O)R^a1、-OC(O)NR^a1R^a1、-NR^a1R^a1、-NR^a1C(O)R^a1、-NR^a1COOR^a1、-NR^a1C(O)NR^a1R^a1、-NR^a1S(O)₂R^a1、-NR^a1S(O)₂NR^a1R^a1、-S(O)R^a1、-S(O)NR^a1R^a1、-S(O)₂R^a1或S(O)₂NR^a1R^a1；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在另一个方面中，提供一种药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在另一个方面中，提供治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药治疗有效量的STING的激活剂(式I)。

具体实施方式

在本发明的第1方面中，提供式(I)的化合物

其中

X独立地为O或S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第2方面中，提供式(I)的化合物，其中

R¹为

R²为

在本发明的第3方面中，提供式(I)的化合物，其中

R¹为

且

R²为

在本发明的第4方面中，提供式(I)的化合物

其中

X为S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第5方面中，提供式(I)的化合物

其中

X为O；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第6方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第7方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第8方面中，提供下式的化合物

其中

X独立地为O或S；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第9方面中，提供下式的化合物

其中

X为S；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第10方面中，提供下式的化合物

其中

X为O；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第11方面中，提供下式的化合物

其中

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第12方面中，提供下式的化合物

其中

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a和R^4a独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a或R⁴和R^4a可独立地一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第13方面中，提供下式的化合物

其中

X独立地为O或S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第14方面中，提供下式的化合物

其中

X为S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第15方面中，提供下式的化合物

其中

X为O；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第16方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第17方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³和R⁴独立地为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第18方面中，提供下式的化合物

其中

X为S；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第19方面中，提供下式的化合物

其中

X为O；

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第20方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第21方面中，提供下式的化合物

其中

X¹、X²、X³和X⁴各自独立地为O或NH；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第22方面中，提供下式的化合物

其中

X独立地为O或S；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R³为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^3a为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R³和R^3a可一起形成3-4元碳环；或

R³和R^3a可一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第23方面中，提供下式的化合物

其中

X独立地为O或S；

R¹和R²独立地为

其前提是R¹和R²之一必须为

Z¹各自独立地为N或CR^a；

Z²为NR^b；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

R⁴为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；

R^4a为H、CH₃、卤素、-NR^a1R^a1或OR^a1；或

R⁴和R^4a可一起形成3-4元碳环；或

R⁴和R^4a可一起形成C＝CH₂取代基；

R^5a为H或被0-6个R⁵取代的C_1-3烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

m为0、1、2或3；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第24方面中，提供下式的化合物

其中

X独立地为O或S；

Z¹各自独立地为N或CR^a；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第25方面中，提供下式的化合物

其中

Z¹各自独立地为N或CR^a；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第26方面中，提供下式的化合物

其中

Z¹各自独立地为N或CR^a；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第27方面中，提供下式的化合物

其中

Z¹各自独立地为N或CR^a；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第28方面中，提供下式的化合物

其中

Z¹各自独立地为N或CR^a；

R^a1为H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基；

Y各自独立地为CR^a或N；

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第29方面中，提供下式的化合物

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的第30方面中，提供下式的化合物

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的另一个方面中，提供下式的化合物

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在本发明的另一个方面中，提供下式的化合物

或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在另一方面中，提供选自在第1方面范围内的示例性实施例的化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体或立体异构体。

在另一方面中，提供一种在以上任何方面的范围内的化合物的任何子集列表中选择的化合物。

在本发明的另一个方面中，提供化合物，其为

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-羟基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺，

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-羟基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]-N-甲基吡啶-2-甲酰胺，或

4-[(1R,6R，8R，9R,10R，15S，17S)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-亚甲基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0⁶ ^，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺，

4-[(1S，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9，18-二氟-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺，

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-9-氟-18-羟基-8-{3H-咪唑并[2，1-f]嘌呤-3-基}-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺

或其药学上可接受的盐。

本发明的其它实施方案

在其它实施方案中，本发明提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和治疗有效量的本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或溶剂合物中的至少一种。

在其它实施方案中，本发明提供用于制备本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或溶剂合物的方法。

在其它实施方案中，本发明提供用于治疗和/或预防各种类型癌症的方法，包括向需要这种治疗和/或预防的患者单独给药治疗有效量的一种或多种本发明的化合物，或任选与本发明的另一种化合物和/或至少一种其它类型治疗剂组合给药。

在其它实施方案中，本发明提供用于治疗和/或预防各种类型癌症的方法，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、黑素瘤、肾细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、食道癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、泌尿道癌，脑瘤例如成胶质细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、肝细胞癌、多发性骨髓瘤、胃肠道间质瘤、间皮瘤和其它实体瘤或其它血液学癌症。

在其它实施方案中，本发明提供用于治疗和/或预防各种类型癌症的方法，包括但不限于，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、黑素瘤、肾细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。

在其它实施方案中，本发明提供用于治疗用途的本发明的化合物。

在其它实施方案中，本发明提供用于在治疗中同时、分开或依次使用的本发明的化合物以及其它治疗剂的组合制剂。

治疗应用

本发明的环二核苷酸在人细胞、动物细胞和人血液中体外诱导I型干扰素和/或促炎性细胞因子。这些CDN的细胞因子诱导活性需要STING的存在，正如在人或动物细胞中进行的体外实验所证实的那样。

本发明的CDN为受体STING的激动剂。

术语“激动剂”是指在体外或体内激活生物受体以引起生理反应的任何物质。

“STING”是“干扰素基因刺激物(stimulator of interferon genes)”的缩写，也称为“内质网干扰素刺激物(endoplasmic reticulum interferon stimulator，ERIS)”、“IRF3激活介体(mediator of IRF3 activation，MITA)”、“MPYS”或“跨膜蛋白173(transmembrane protein 173，TM173)”。STING是人类中的跨膜受体蛋白，由TMEM173基因编码。环二核苷酸(CDN)对STING的激活会导致IRF3和NF-κB途径的激活，因此分别导致I型干扰素和促炎性细胞因子的诱导。

本发明的另一个目的是用于人或动物的治疗的式(I)的环二核苷酸。特别地，本发明的化合物可用于人类或动物健康的治疗或诊断应用。

术语“治疗剂”是指一种或多种给药于人或动物以在该人或动物中获得某种治疗效果的物质，包括预防、治愈或减轻感染或疾病的影响，和/或改善该人或动物的健康状况。

术语“单一疗法”是指在任何临床或医学背景下使用单一物质和/或策略来治疗人或动物，与在相同的临床或医学背景下使用多种物质和/或策略来治疗人或动物相反(无论是否以任何顺序或同时使用多种物质和/或策略)。

本文中的术语“化疗剂”是指一种或多种化学物质，其被施用于人或动物以杀死肿瘤，或减慢或阻止肿瘤的生长，和/或减慢或阻止癌细胞的分裂，和/或预防或缓慢转移。通常给药化疗剂来治疗癌症，但也适用于其它疾病。

术语“化疗法”是指用一种或多种化疗剂对人或动物进行医学治疗(参见以上定义)。

术语“化学免疫疗法”是指化疗物质和/或策略以及免疫疗法物质和/或策略的组合使用，无论以任何顺序依次或并行进行。化学免疫疗法通常用于治疗癌症，但也可以用于治疗其它疾病。

术语“免疫系统”是指与预防体内感染、在感染或疾病期间保护身体、和/或在感染或疾病后帮助身体恢复健康有关的分子、物质(例如体液)、解剖结构(例如细胞，组织和器官)和生理过程的整体或任何一个或多个成分。“免疫系统”的完整定义超出了本专利的范围；但是，本领域的任何普通从业人员都应理解该术语。

术语“免疫剂”是指可与免疫系统的任何一个或多个成分相互作用的任何内源性或外源性物质。术语“免疫剂”包括抗体、抗原、疫苗及其组成成分、核酸、合成药物、天然或合成有机化合物、细胞因子、天然或修饰的细胞、其合成类似物和/或其片段。

术语“拮抗剂”是指在体外或体内抑制、抵消、下调和/或脱敏生物受体以引起生理反应的任何物质。

术语“免疫疗法”是指其中人或动物的免疫系统的一个或多个成分被故意调节以便直接或间接获得某种治疗益处的任何医学治疗，包括全身和/或局部作用以及预防性和/或治疗性作用。免疫疗法可涉及通过任何途径(例如口服、静脉内、皮肤、注射、吸入等)单独或以任何组合方式对人或动物受试者给药一种或多种免疫剂(参见上文定义)，无论是全身、局部或两者结合。

“免疫疗法”可涉及激发、增加、减少、停止、预防、阻断或以其它方式调节细胞因子的产生，和/或活化或失活细胞因子或免疫细胞，和/或调节免疫细胞的水平，和/或递送一种或多种治疗性或诊断性物质到达体内的特定位置或特定类型的细胞或组织，和/或破坏特定的细胞或组织。免疫疗法可用于达到局部作用、全身作用或两者结合。

术语“免疫抑制的”描述了其免疫系统功能性地降低、失活或否则受损的任何人或动物受试者的状态，或其中一种或多种免疫成分功能性地降低、失活或否则受损。

“免疫抑制”可为疾病、感染、力竭、营养不良、药物治疗或某些其它生理或临床状态的原因、结果或副产物。

此处同义使用的术语“免疫调节物质”、“免疫调节性物质”“免疫调节药剂”和“免疫调节剂”是指在给药人或动物后直接影响该人或动物免疫系统功能的任何物质。常见免疫调节剂的实例包括但不限于抗原、抗体和小分子药物。

术语“疫苗”是指给药人或动物的生物制剂，以引起或增强特异性免疫系统响应和/或针对该人或动物中的一种或多种抗原的保护。

术语“疫苗接种”是指用疫苗对人或动物的治疗或向人或动物给药疫苗的行为。

术语“佐剂”是指与主要治疗物质一起(以任何顺序依次或并行)一起给药的次要治疗物质，以实现某种互补的、协同的或其它有益效果，该效果是单独使用主要治疗物质无法达到的。佐剂可与疫苗、化学疗法或某些其它治疗物质一起使用。佐剂可增强主要治疗物质的功效、降低主要治疗物质的毒性或副作用，或为接受主要治疗物质的受试者提供某种保护，例如但不限于改善免疫系统的功能。

在一个实施方案中，式(I)的环二核苷酸可作为免疫疗法给药人或动物，以诱导体内产生对该人或动物治疗上有益的一种或多种细胞因子。这种类型的免疫疗法可单独使用，也可与其它治疗策略结合使用，无论以任何顺序依次使用或并行使用。它可用于预防、治愈和/或减轻该人或动物的感染或疾病的影响，和/或调节该人或动物的免疫系统以实现某些其它治疗益处。

在一个特定的实施方案中，本发明的环二核苷酸可用于免疫抑制的个体的细胞因子诱导免疫疗法。

在该实施例中，将式(I)的环二核苷酸给药免疫抑制的人或动物受试者，以诱导体内产生直接或间接增强该人或动物的免疫系统的一种或多种细胞因子。可能从这种治疗中受益的受试者包括患有自身免疫性疾病、免疫系统缺乏或缺陷、微生物或病毒感染、传染病或癌症的受试者。

因此，本发明公开了一种在免疫抑制的个体中诱导细胞因子的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药式(I)的环二核苷酸或其药学上可接受的盐或前药。

在其它实施方案中，本发明的环二核苷酸可与化学疗法联合用于细胞因子诱导免疫疗法。在该实施例中，将式(I)的环二核苷酸与一种或多种化疗剂一起以任何顺序依次或同时给药癌症患者以阻止该患者中肿瘤的生长、缩小和/或破坏肿瘤。相比于用作单一疗法的化疗剂，由本发明化合物提供的细胞因子诱导与化疗剂提供的细胞毒性相结合而产生的化学免疫疗法对患者的毒性可较小，对患者的副作用较少，和/或显示出更好的抗肿瘤功效。

因此，本发明公开一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药：化疗剂；和

式(I)的环二核苷酸或其药学上可接受的盐或前药。

本发明的另一个目的是用于治疗细菌感染、病毒感染或癌症的式(I)的环二核苷酸。

如本文所用，“癌症”是指受试者中以细胞生长或死亡的不受控或失调为特征的生理状况。术语“癌症”包括实体瘤和血源性肿瘤，无论是恶性还是良性的。

在一个优选的实施方案中，所述癌症选自：小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、黑素瘤、肾细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。

因此，本发明公开了一种用于治疗细菌感染、病毒感染或癌症的方法，所述方法包括向有此需要的患者给药式(I)的环二核苷酸或其药学上可接受的盐或前药。

本发明的另一个目的是用于治疗可通过经由STING途径诱导免疫响应而减轻的病理的式(I)的环二核苷酸。

虽然在治疗时，式(I)的化合物及其药学上可接受的盐可以化合物本身的形式给药，但更通常以药物组合物的形式提供。

药物组合物可以以包含预定量的活性成分pep单位剂量的单位剂量形式存在。优选的单位剂量组合物为包含日剂量或亚剂量或其适当分数的活性成分的那些。因此，这样的单位剂量可每天多次给药。优选的单位剂量组合物是包含如上文所述的日剂量或亚剂量(用于一天多次给药)或其适当分数的活性成分的那些。

可用本发明化合物治疗的癌症的类型包括但不限于脑癌、皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、血癌、肺癌和骨癌。上述癌症类型的实例包括成神经细胞瘤、肠癌诸如直肠癌、结肠癌、家族性腺瘤性息肉性癌和遗传性非息肉性结直肠癌，食管癌、唇癌、喉癌、鼻咽癌、口腔癌、唾液腺癌、腹膜癌、软组织肉瘤、尿路上皮癌、汗腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髓样癌、乳头状甲状腺癌、肾癌、肾实质癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、乳腺癌(包括HER2阴性乳腺癌)、泌尿癌、黑素瘤、脑肿瘤诸如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤和外周神经外胚层肿瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、成人T细胞白血病淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、肝细胞瘤、多发性骨髓瘤、精原细胞瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肛管癌、肾上腺皮质癌、脊索瘤、输卵管癌、胃肠道间质瘤、骨髓增生性疾病、间皮瘤、胆道癌、尤因肉瘤以及其它罕见的肿瘤类型。

本发明的化合物通过自身或与其它治疗剂或放射疗法联合使用可用于治疗某些类型的癌症。因此，在一个实施方案中，本发明的化合物与放射疗法或具有细胞生长抑制或抗肿瘤活性的第二治疗剂共同给药。适合的细胞抑制化学疗法化合物包括但不限于(i)抗代谢物；(ii)DNA-片段化剂，(iii)DNA-交联剂，(iv)嵌入剂，(v)蛋白质合成抑制剂，(vi)拓扑异构酶I毒剂，例如喜树碱或拓扑替康；(vii)拓扑异构酶II毒剂；(viii)微管导向剂；(ix)激酶抑制剂；(x)杂项研究药剂，(xi)激素和(xii)激素拮抗剂。可想到的是，本发明的化合物可与落入上述12类的任何已知药剂以及目前正在开发的任何未来药剂结合使用。特别地，可预期，本发明的化合物可与当前的护理标准以及在可预见的将来发展的任何护理标准结合使用。具体剂量和给药方案将基于医师不断发展的知识和本领域的一般技能。

本文还提供了治疗方法，其中将本发明的化合物与一种或多种免疫肿瘤药剂一起给药。本文使用的免疫肿瘤药剂，也称为癌症免疫疗法，可有效增强、刺激和/或上调受试者的免疫响应。在一个方面，与免疫肿瘤药剂一起给药本发明的化合物具有抑制肿瘤生长的协同作用。

在一个方面，本发明的化合物在给药所述免疫肿瘤药剂之前依次给药。在另一个方面，本发明的化合物与给药所述免疫肿瘤药剂并行地给药。在另一个方面，本发明的化合物在给药所述免疫肿瘤药剂之后依次给药。

在另一个方面，本发明的化合物可与免疫肿瘤药剂共同配制。

免疫肿瘤药剂包括例如小分子药物\抗体或其它生物分子。生物免疫肿瘤药剂的实例包括但不限于癌症疫苗、抗体和细胞因子。在一个方面，该抗体是单克隆抗体。在另一个方面，该单克隆抗体是人源化抗体或人抗体。

在一个方面，所述免疫肿瘤药剂为(i)刺激性(包括共刺激性)受体的激动剂，或(ii)T细胞上的抑制性(包括共抑制性)信号的拮抗剂，两者都会导致抗原特异性T细胞的增强响应(通常称为免疫检查点调节剂)。

某些刺激性和抑制性分子是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。与共刺激或共抑制受体结合的重要的膜结合配体的一个重要家族为B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6。与共刺激或共抑制受体结合的膜结合配体的另一个家族是与同源TNF受体家族成员结合的分子的TNF家族，其包括CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR。

在一个方面，T细胞响应可被本发明的化合物与一种或多种以下的组合刺激：(i)抑制T细胞活化的蛋白质的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，例如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳凝素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳凝素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4，以及(ii)刺激T细胞活化的蛋白质的激动剂，例如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。

用于治疗癌症的可与本发明的化合物组合的其它药剂包括NK细胞抑制受体的拮抗剂或NK细胞激活受体的激动剂。例如，本发明的化合物可与KIR的拮抗剂组合，例如lirilumab。

组合疗法的其它试剂包括抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的试剂，包括但不限于CSF-1R拮抗剂，例如CSF-1R拮抗剂抗体，包括RG7155(WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、WO13/87699、WO13/119716、WO13/132044)或FPA-008(WO11/140249；WO13169264；WO14/036357)。

另一个方面，本发明的化合物可与一种或多种以下药剂一起使用：结扎阳性共刺激受体的激动剂、通过抑制性受体减弱信号的阻断剂，拮抗剂以及一种或多种全身性增加抗肿瘤T细胞频率的药剂、克服肿瘤微环境中不同的免疫抑制途径(例如，阻断抑制性受体参与(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、消耗或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如，达克珠单抗)或通过体外抗CD25珠粒耗尽)、抑制代谢酶(例如IDO)或逆转/预防T细胞无能或耗竭)的药剂和触发先天性免疫激活和/或肿瘤部位炎症的药剂。

在一个方面，所述免疫肿瘤药剂为CTLA-4拮抗剂，例如拮抗性CTLA-4抗体。适合的CTLA-4抗体包括，例如，YERVOY(伊匹单抗)或曲美单抗。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为PD-1拮抗剂，例如拮抗性PD-1抗体。所述PD-1抗体可选自Opdivo(纳武单抗)、Keytruda(派姆单抗)、PDR001(Novartis；参见WO2015/112900)、MEDI-0680(AMP-514)(AstraZeneca；参见WO2012/145493)、REGN-2810(Sanofi/Regeneron；参见WO2015/112800)、JS001(Taizhou Junshi)、BGB-A317(Beigene；参见WO2015/35606)、INCSHR1210(SHR-1210)(Incyte/Jiangsu Hengrui Medicine；参见WO2015/085847)、TSR-042(ANB001)(Tesara/AnaptysBio；参见WO2014/179664)、GLS-010(Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals)、AM-0001(Armo/Ligand)或STI-1110(Sorrento；参见WO2014/194302)。所述免疫肿瘤药剂还可包括皮地利珠单抗(CT-011)，尽管其对PD-1结合的特异性受到质疑。靶向PD-1受体的另一种方法是重组蛋白，该蛋白由与IgG1的Fc部分融合的PD-L2的胞外域(B7-DC)构成，称为AMP-224。在一个方面。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为PD-L1拮抗剂，例如拮抗性PD-L1抗体。所述PD-L1抗体选自Tecentriq(阿特珠单抗)、德瓦鲁单抗、奥伐单抗、STI-1014(Sorrento；参见WO2013/181634)或CX-072(CytomX；参见WO2016/149201)。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为LAG-3拮抗剂，例如拮抗性LAG-3抗体。适合的LAG3抗体包括，例如，BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO09/44273)。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为CD137(4-1BB)激动剂，例如激动性CD137抗体。适合的CD137抗体包括，例如，urelumab和PF-05082566(WO12/32433)。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为GITR激动剂，例如激动性GITR抗体。适合的GITR抗体包括，例如，BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(WO06/105021、WO09/009116)和MK-4166(WO11/028683)。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为IDO拮抗剂。适合的IDO拮抗剂包括，例如，INCB-024360(WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、indoximod或NLG-919(WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为OX40激动剂，例如激动性OX40抗体。适合的OX40抗体包括，例如，MEDI-6383或MEDI-6469。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为OX40L拮抗剂，例如拮抗性OX40抗体。适合的OX40L拮抗剂包括，例如，RG-7888(WO06/029879)。

CD40激动剂，例如激动性CD40抗体。在另一个实施方案中，所述免疫肿瘤药剂为CD40拮抗剂，例如拮抗性CD40抗体。适合的CD40抗体包括，例如，鲁卡木单抗或达西珠单抗。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为CD27激动剂，例如激动性CD27抗体。适合的CD27抗体包括，例如，Varlilumab。

在另一个方面，所述免疫肿瘤药剂为MGA271(至B7H3)(WO 11/109400)。

组合治疗意在包括以依序的方式给予这些治疗剂，即其中每种治疗剂在不同的时间给药，及以基本上同时的方式给予这些治疗剂或至少两种所述治疗剂。例如通过向受试者给予具有固定比率的每种治疗剂或呈每种治疗剂的多个单一剂型形式可实现基本上同时给药。每种治疗剂的依序或基本上同时给药可通过任何适当途径来实现，其包括但不限于口服途径、静脉内途径、瘤内途径、肌内途径和通过粘膜组织直接吸收。所述治疗剂可通过相同途径或通过不同途径给药。例如，所选组合的第一治疗剂可通过静脉注射给药而所述组合的其它治疗剂可口服给药。可选择地，例如所有治疗剂可口服给药或所有治疗剂可通过静脉内注射给药。组合疗法也可包括与其它生物活性成分和非药物疗法(例如手术或放射治疗)进一步组合给予上述治疗剂。当组合治疗进一步包括非药物治疗时，非药物治疗可在任何适合的时间进行，只要实现来自治疗剂与非药物治疗的组合的共同作用的有益效果。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的给药暂时除去非药物治疗时，可能是数天或甚至数周，仍实现有益效果。

本发明可以以其它特定形式体现而不背离其精神或基本属性。本发明涵盖本文所述的本发明的优选方面的所有组合。应当理解，本发明的任何以及所有实施方案可与任何其它实施方案或实施方案结合以描述另外的实施方案。还应理解，实施方案的每个单独的元素是其自己的独立实施方案。此外，实施方案的任何元素意在与来自任何实施方案的任何以及所有其它元素组合以描述另外的实施方案。

药物组合物和剂量

本发明还提供药学上可接收的组合物，其包含治疗有效量的与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制的一种或多种本文所述的固体形式，和任选的一种或多种上述的其它治疗剂。如下所述，本发明的药物组合物可以经特殊配制以固体或液体形式给药，包括适合于以下的那些：(1)口服给药，例如，灌药(水溶液或非水溶液或悬浮液)、片剂，例如针对颊、舌下和全身吸收的片剂，大丸剂、散剂、颗粒剂、糊剂，其用于舌头；(2)肠胃外给药，例如通过皮下、肌内、瘤内、静脉内或硬膜外注射，例如无菌溶液或悬浮液，或缓释制剂；(3)局部给药，例如以霜剂、软膏或控释贴剂或喷雾剂的形式施用于皮肤上；或瘤内给药。

短语“药学上可接受的”在本文中用于指如下那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理医学判断的范围内，其适于与人类和动物的组织接触使用而无过高毒性、刺激性、过敏反应和/或其它问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。

本文使用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂包囊物质，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的部分携带或运送至另一个器官或身体的部分。每种载体在与制剂的其它成分相容和对患者无害的意义上必须是“可接受的”。

本发明的制剂包括适合于口服、肿瘤内、鼻腔、局部(包括颊和舌下)、直肠、阴道和/或肠胃外给药的那些。所述制剂可方便地以单位剂型存在，并且可通过药学领域公知的任何方法制备。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的患者和特定的给药方式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常将是产生治疗作用的化合物的量。通常，在百分之一百中，该量将为活性成分的约0.1％至约99％，优选为约5％至约70％，最优选为约10％至约30％。

在某些实施方案中，本发明的制剂包含选自环糊精、纤维素、脂质体、胶束形成剂(例如胆汁酸)和聚合物载体(例如聚酯和聚酸酐)的赋形剂；以及本发明的化合物。在某些实施方案中，上述制剂使本发明化合物具有口服生物利用度。

制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明化合物与载体和任选的一种或多种辅助成分结合的步骤。通常，通过使本发明的化合物与液体载体、或细分的固体载体或两者均匀且紧密地结合，然后若需要，则使产品成型来制备所述制剂。

适用于口服的本发明制剂可为胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味剂，通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂，或作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳剂，或作为酏剂或糖浆剂，或作为糖锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油，蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口水等，其各自均含有预定量的本发明化合物作为有效成分。本发明的化合物也可以大丸剂、煎膏剂或糊剂的形式给药。

适用于肠胃外给药的本发明药物组合物包含一种或多种本发明化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水溶液或非水溶液、分散液、混悬液或乳剂或无菌粉末，它们可在使用前即被重构为无菌注射溶液或分散液，可含有糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、会使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。

在某些情况下，为了延长药物的作用，需要减慢皮下、瘤内或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。然后，药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体尺寸和晶型。或者，通过将药物溶解或悬浮在油媒剂中来实现肠胃外给药的药物形式的延迟吸收。

通过在可生物降解的聚合物(例如聚乳酸-聚乙交酯)中形成主题化合物的微囊化基质来制备可注射的贮库形式。取决于药物与聚合物的比例以及所用特定聚合物的性质，可控制药物的释放速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳状液中来制备贮库形式的可注射制剂。

当将本发明的化合物作为药物向人和动物给药时，可给药其本身或作为药物组合物给药，该组合物含有例如0.1-99％(更优选10-30％)的活性成分与药学上可接受的载体。

不考虑所选择的给药路径，通过本领域技术人员已知的常规方法来将本发明的化合物(其可为适当的水合形式)和/或本发明的药物组合物配制成药用剂量形式。

可改变活性成分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平，从而获得对于实现特定患者的期望的治疗响应、组成和给药模式有效的而对患者无毒的活性成分量。

选定的剂量水平会取决于多种因素，包括所用的特定的本发明的化合物或其酯、盐或酰胺的活性；给药路径；给药时间；所用特定化合物的排泄速率；吸收速率和程度；治疗的持续时间；与所用特定化合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质；所治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和先前的就医史等医学领域公知的因素。

具有本领域普通技术的医生或兽医可容易地确定并开出有效量的所需药物组合物。例如，为了达到所期望的治疗效果，医师或兽医可在低于所需的水平开始药物组合物中所用的本发明化合物的较量，并逐步增加剂量直至实现所期望的效果。

通常，适合的日剂量的本发明的化合物将是有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。此种有效剂量通常取决于上述因素。通常，本发明化合物对患者的口服、静脉内、脑室内和皮下剂量范围为每天每千克体重约0.01至约50mg。

虽然本发明的化合物可单独给药，但优选以药物制剂(组合物)形式给药化合物。

定义

除非本文另有明确说明，否则单数形式的引用也可包括复数形式。例如，“一个”和“一种”可以指一个(种)，或一个(种)或多个(种)。

除非另有说明，否则假定具有不满足化合价的任何杂原子具有足以满足化合价的氢原子。

在整个说明书和所附的权利要求书中，给定的化学式或名称应涵盖存在的所有立体和光学异构体及其中此类异构体存在的外消旋体。除非另有说明，否则所有手性(对映异构体和非对映异构体)和外消旋形式均在本发明的范围内。化合物中还可存在C＝C双键、C＝N双键、环体系等的许多几何异构体，并且在本发明中考虑了所有这些稳定的异构体。描述了本发明化合物的顺式和反式(或E-和Z-)几何异构体，并且可作为异构体的混合物或作为分离的异构体形式分离。本发明化合物可以旋光或外消旋形式分离。旋光形式可通过拆分外消旋形式或由旋光原料合成而制备。用于制备本发明的化合物及其制备的中间体的所有方法均被视为本发明的一部分。当制备对映异构体或非对映异构体产物时，它们可以通过常规方法分离，例如通过色谱法或分步结晶法分离。根据工艺条件，本发明的最终产物可以以游离(中性)或盐的形式获得。这些最终产物的游离形式和盐均在本发明的范围内。若需要，则可以将一种形式的化合物转化为另一种形式。游离碱或酸可转化为盐；盐可以转化为游离化合物或另一种盐；本发明异构化合物的混合物可以分离为单个异构体。本发明的化合物、其游离形式及其盐可以多种互变异构形式存在，其中氢原子被转位到分子的其它部分，因此分子的原子之间的化学键被重新排列。应当理解的是，所有互变异构形式，只要它们可能存在，都包括在本发明之内。

为了清楚起见并根据本领域的标准惯例，在式和表中使用符号来显示键，该键是部分或取代基与所述结构的核心/核的连接点。

另外，为清楚起见，当取代基的破折号(-)不在两个字母或符号之间时；这用于表示取代基的连接点。例如，-CONH₂通过碳原子连接。

另外，为清楚起见，当在实线末端未显示取代基时，这表示存在与该键连接的甲基(CH₃)基团。

另外，硫代磷酸酯基团可被绘制为

术语“抗衡离子”用于表示带负电荷的物质，例如氯化物、溴化物、氢氧化物、乙酸盐和硫酸盐；或带正电荷的物质，例如钠(Na+)、钾(K+)、铵((R_nNH_m+，其中n＝0-4且m＝0-4)等。

术语“吸电子基团”(EWG)是指使键极化的取代基，其使电子密度朝向自身而远离其它键合原子。EWG的实例包括但不限于，CF₃、CF₂CF₃、CN、卤素、卤代烷基、NO₂、砜、亚砜、酯、磺酰胺、甲酰胺、烷氧基、烷氧基醚、烯基、炔基、OH、C(O)烷基、CO₂H、苯基、杂芳基、-O-苯基和-O-杂芳基。EWG的优选实例包括但不限于，CF₃、CF₂CF₃、CN、卤素、SO₂(C_1-4烷基)、CONH(C_1-4烷基)、CON(C_1-4烷基)₂和杂芳基。EWG更优选的实例包括但不限于，CF₃和CN。

如本文所用，术语“胺保护基”意指有机合成领域中用于保护胺基的任何基团，其对酯还原剂、双取代肼、R4-M和R7-M、亲核试剂、肼还原剂、活化剂、强碱、有位阻的胺碱和环化剂。符合这些标准的此类胺保护基包括那些在Wuts，P.G.M.和Greene，T.W.ProtectingGroups in Organic Synthesis，4th Edition，Wiley(2007)和The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中列举的，其公开内如通过引用并入本文。胺保护基的实例包括但不限于以下：(1)酰基类，例如甲酰基、三氟乙酰基、邻苯二甲酰基和对甲苯磺酰基；(2)芳族氨基甲酸酯类，例如苄基氧基羰基(Cbz)和经取代的苄基氧基羰基、1-(对-联苯基)-1-甲基乙氧基羰基和9-芴基甲基氧基羰基(Fmoc)；(3)脂族氨基甲酸酯类，例如叔丁基氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基和烯丙基氧基羰基；(4)环烷基氨基甲酸酯类，例如环戊基氧基羰基和金刚烷基氧基羰基；(5)烷基类，例如三苯基甲基和苄基；(6)三烷基硅烷，例如三甲基硅烷；(7)含硫醇类，例如苯基硫基羰基和二硫代琥珀酰基；和(8)烷基类，例如三苯基甲基、甲基和苄基；和经取代的烷基类，例如2，2，2-三氯乙基、2-苯基乙基和叔丁基；和三烷基硅烷类，例如三甲基硅烷。

如本文所指，术语“取代的”是指至少一个氢原子被非氢基团取代，只要保持正常价并且该取代产生稳定的化合物即可。如本文所用，环双键是在两个相邻的环原子之间形成的双键(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。

在本发明化合物上有氮原子(例如胺)的情况下，可通过用氧化剂(例如mCPBA和/或过氧化氢、)处理将它们转化为N-氧化物，从而得到本发明的其它化合物。因此，所示和要求保护的氮原子被认为涵盖所示氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。

当某个变量在化合物的任何成分或式中出现1次以上时，其在每次出现时的定义均独立于在其它每次出现时的定义。因此，例如，若显示一个基团被0-3个R取代，那么所述基团可任选地被最多三个R基团取代，并且在每次出现时，R是独立于R的定义选择的。仅当此类组合产生稳定的化合物时，才允许组合取代基和/或变量。

当显示出与取代基的键跨过连接环中两个原子的键时，则该取代基可与环上的任何原子键合。当列出的取代基未指明该取代基与给定式的化合物的其余部分键合的原子时，则该取代基可通过该取代基中的任何原子键合。仅当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，才允许这些组合。

本发明旨在包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。作为一般示例而非限制，氢的同位素包括氘和氚。氢的同位素可表示为¹H(氢)、²H(氘)和³H(氚)。它们通常也表示为D表示氘，T代表氚。在本申请中，CD₃表示其中所有氢原子都是氘的甲基。碳的同位素包括¹³C和¹⁴C。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述的那些类似的方法来制备，使用适当的同位素标记的试剂代替所采用的未标记的试剂。

如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱式盐而被修饰。药学上可接受的盐的实例包括但不限于，碱性基团例如胺的无机盐或有机酸盐；以及酸性基团例如羧酸的碱金属盐或有机盐。药学上可接受的盐包括，例如由无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，此类常规的无毒盐包括衍生自无机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；和由有机酸制备的盐，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸，帕莫酸，马来酸，羟基马来酸，苯基乙酸，谷氨酸，苯甲酸，水杨酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富马酸，甲苯磺酸，甲磺酸，乙二磺酸，草酸和羟乙磺酸，等等。

本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备此类盐；通常，优选非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。适合的盐清单见于Remington：The Science and Practiceof Pharmacy，22^nd Edition，Allen，L.V.Jr.，Ed.；Pharmaceutical Press，London，UK(2012)，其公开内容通过引用并入本文。

另外，式I化合物可具有前药形式。将在体内转化以提供生物活性剂的任何化合物(即式I化合物)是本发明范围和精神内的前药。各种形式的前药在本领域中是众所周知的。有关此类前药衍生物的实例，请参见：

a)Bundgaard，H.，ed.，Design of Prodrugs，Elsevier(1985)和Widder，K.等人，eds.，Methods in Enzymology，112：309-396，Academic Press(1985)；

b)Bundgaard，H.，Chapter 5，″Design and Application of Prodrugs，″ATextbook of Drug Design and Development，pp.113-191，Krosgaard-Larsen，P.等人，eds.，Harwood Academic Publishers(1991)；

c)Bundgaard，H.，Adv.Drug Deliv.Rev.，8：1-38(1992)；

d)Bundgaard，H.等人，J.Pharm.Sci.，77：285(1988)；

e)Kakeya，N.等人，Chem.Pharm.Bull.，32：692(1984)；和

f)Rautio，J(Editor).Prodrugs and Targeted Delivery(Methods andPrinciples in Medicinal Chemistry)，Vol 47，Wiley-VCH，2011。

含有羧基基团的化合物可形成生理学上可水解的酯，其通过在体内水解以产生式I化合物本身而用作前药。此类前药优选口服给药，因为在许多情况下水解主要在消化酶的影响下发生。在酯本身具有活性的情况下，或者在血液中发生水解的情况下，可使用肠胃外给药。式I化合物的生理可水解酯的实例包括C_1-6烷基、C_1-6烷基苄基、4-甲氧基苄基、茚满基、邻苯二甲酰基、甲氧基甲基、C_1-6烷酰基氧基-C_1-6烷基(例如，乙酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基或丙酰基氧基甲基)、C_1-6烷氧基羰基氧基-C_1-6烷基(例如，甲氧基羰基-氧基甲基或乙氧基羰基氧基甲基、甘氨酰基氧基甲基、苯基甘氨酰基氧基甲基、(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基)-甲基)，以及在例如青霉素和头孢菌素领域中使用的其它众所周知的生理可水解酯。此类酯可通过本领域已知的常规技术来制备。

制备前药在本领域中是众所周知的，并且在例如King，F.D.，ed.，MedicinalChemistry：Principles and Practice，The Royal Society of Chemistry，Cambridge，UK(第2版，重印，2006年)；Testa，B.等人，Hydrolysis in Drug and ProdrugMetabolism.Chemistry，Biochemistry and Enzymology，VCHA and Wiley-VCH，Zurich，Switzerland(2003)；Wermuth，C.G.，ed.，The Practice of Medicinal Chemistry，3^rdedition，Academic Press，San Diego，CA(2008)中描述。

术语“溶剂合物”意指本发明化合物与一种或多种有机或无机溶剂分子的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情况下，例如当在结晶固体的晶格中掺入一种或多种溶剂分子时，溶剂合物将能够分离。溶剂合物中的溶剂分子可以规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。示例性的溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。

本文使用的术语“患者”是指通过本发明的方法进行治疗的有机体。这类有机体优选包括但不限于哺乳动物(例如鼠类、猿/猴、马、牛、猪、犬、猫等)且最优选是指人类。

本文使用的术语“有效量”意指将会引起例如研究人员或临床医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂(即本发明化合物)的量。此外，术语“治疗有效量”意指这样的量：与未接受上述量的相应受试者相比，所述量导致改善的治疗、治愈、预防或减轻疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的进展速度。有效量可以一个或多个给药、施用或剂量给予且不意欲被特定的制剂或给药途径限制。该术语还包括在其范围内的增强正常生理机能的有效量。

如本文所用，术语“治疗”包括导致病况、疾病、病症等的改善或减轻其症状的任何效果，例如，减轻、降低、调节、改善或消除。

如本文所用，术语“药物组合物”是指活性药剂与惰性或活性载体的组合，使得该组合物特别适合于体内或体外的诊断或治疗用途。

碱的实例包括但不限于，碱金属(例如钠)氢氧化物，碱土金属(例如镁)氢氧化物，氨和式NW₄ ⁺的化合物，其中W为C_1-4烷基，等等。

对于治疗用途，本发明化合物的盐被认为是药学上可接受的。但是，非药学上可接受的酸和碱的盐也可用于例如药学上可接受的化合物的制备或提纯中。

制备方法

本发明的化合物可以通过有机合成领域的技术人员众所周知的多种方法来制备。可使用以下描述的方法，以及合成有机化学领域中已知的合成方法或本领域技术人员可理解的各种变化方法来合成本发明的化合物。优选的方法包括但不限于以下描述的方法。本文引用的所有参考文献通过引用其整体并入本文。

可使用本节中描述的反应和技术来制备本发明的化合物。将反应在适合于所用试剂和材料并且适合于进行转化的溶剂中进行。另外，在下述的合成方法的描述中，应当理解的是，所有提议的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和后处理程序均被选择为对于该反应的条件标准，对此本领域技术人员应容易理解。有机合成领域的技术人员应理解的是，存在于分子各个部分上的官能团必须与所提议的试剂和反应相容。对与反应条件相容的取代基的这种限制对本领域技术人员而言是明显的，然后必须使用替代方法。有时需要作出判断以修改合成步骤的顺序，或者选择一种特定的处理方案而不是另一种，以获得所需的本发明化合物。还将认识到的是，在该领域中任何合成路线的规划中，另一个主要考虑因素是对用于保护本发明所述化合物中存在的反应性官能团的保护基团的明智选择。描述受过培训的从业人员的许多替代选择的权威著作是Greene和Wuts(Protective Groups In Organic Synthesis，Fourth Edition，Wiley和Sons，2007)。

具有通式(I)和通式(II)的化合物可通过参考以下方案中所示的方法来制备。如其中所示，最终产物是具有与式(I)和式(II)相同的结构式的化合物。应理解的是，通过适当选择具有适当取代的试剂，可以通过该方案制备式(I)和式(II)的任何化合物。本领域普通技术人员可容易地选择溶剂、温度、压力和其它反应条件。起始原料是可商购的或由本领域普通技术人员立即制备的。化合物的成分如本文中或说明书中的其它地方所定义。

方案1

方法1

方案1中描述了制备本公开实施例的一种方法。该方法从核糖核苷(i)开始，其中核碱基(R¹或R²)被适当保护(PG₂或PG₃)，例如用苯甲酰基，并且5’-羟基被适当保护(PG₁)，例如用DMTr或MMTr醚保护，并且3’-位是亚磷酰胺官能团。在步骤1中，用适当的试剂，例如吡啶三氟乙酸盐处理，然后用丁胺处理，得到H-膦酸酯(ii)。随后在酸性条件下，在步骤2中除去5’-OH保护基(PG₁＝DMTr或MMTr)，得到式iii的化合物。可在步骤3中将所得的式iii化合物与完全保护的2’-亚磷酰胺(iv)反应，然后立即用例如DDTT(X＝S)进行硫醇化，得到式v的化合物。或者，用氧化剂例如叔丁基过氧化物处理，得到式v的化合物，其中X＝O。在酸性条件下，在步骤4中从第二个核糖核苷中除去5’-保护基(PG₁＝DMTr或MMTr)，得到式vi的化合物。在步骤5中用适当的环化试剂例如DMOCP处理化合物vi，得到式vii化合物。然后可用适当的试剂，例如3H-1，2-苯并二硫醇-3-酮立即将该物质硫醇化，从而在步骤6中得到式viii的化合物。可用适当的试剂处理式viii的化合物以除去核碱基的保护基团，例如NH₄OH/MeOH(PG₂和PG₃＝苯甲酰基)，得到式ix的化合物。可在步骤8中通过从化合物ix的3’-OH上除去剩余的保护基团来制备式(I)的化合物，所述化合物ix例如具有氟阴离子，其中PG₄＝甲硅烷基保护基团。

方案2

方法2

另一种方法(方案2)从适当取代的天然或修饰的核苷(x)开始，其中该核碱(R²)经适当地保护(PG＝保护基团)，例如用苯甲酰基基团。在步骤1中，用适当的有机磷(V)试剂例如使用那些在表1中列出的其中一种，在适当的溶剂中(例如，乙腈或二甲基甲酰胺)，用适当的碱(例如，DBU)对x保护，得到式xiii的化合物。在步骤2中，在适当的溶剂中(例如，乙腈或二甲基甲酰胺)在碱存在的条件下(例如DBU)用适当保护的取代的天然或修饰核苷处理(例如xi)，得到式xii的化合物。在步骤3中，在本领域技术人员已知的条件下，两种保护基团(PG₁和PG₂)可被除去，得到醇(二醇)(xiv)。在步骤4中，式xiv的化合物可用适当的环化试剂处理(例如亚磷酸二苯酯)然后用例如叔丁基氢过氧化物(X＝O)氧化或用例如DDTT(X＝S)硫化，得到式xv的化合物。除去剩余的保护基团，得到化合物通式(I)的化合物。

表1.有机磷试剂及相应的-P(V)基团

实施例

在以下实施例中进一步定义本发明。应该理解的是，这些实施例仅以举例说明的方式给出。通过以上讨论和实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可进行各种改变和修改以使本发明适应各种用途和条件。因此，本发明不受以下本文阐述的示例性实施例的限制，而是由所附权利要求书限定。

缩写

可在以下实施例分节中和本文其它地方使用以下缩写：

制备磷(V)试剂

根据2018年4月13日提交的USSN 62/657551、2018年5月7日提交的USSN 62/6568098、2018年7月13日提交的62/697896和2018年9月10日提交的USSN 62/729314中提供的程序制备本发明实施例的制备中使用的磷(V)试剂(试剂1-4)。

实施例1-1、1-2、1-3、1-4

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-羟基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺

1-1(非对映异构体1)

1-2(非对映异构体2)

1-3(非对映异构体3)

1-4(非对映异构体4)

制备1A：

在氮气气氛中，向二苯甲酸(2S，3R，4R，5R)-2-乙酰氧基-5-((苯甲酰基氧基)甲基)四氢呋喃-3，4-二基酯(10g，19.82mmol)的30mL DCM溶液中添加三甲基硅烷甲腈(3.47mL，27.8mmol)，然后添加三氟化硼乙醚合物(2.45mL，19.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌14小时。向该反应混合物添加100mL的饱和NaHCO₃，并继续在室温搅拌30分钟。将混合物用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥。随后将混合物真空浓缩，并将残余物通过硅胶色谱提纯(80g柱，0-50％EtOAc/己烷)，得到1A(7.56g，81％产率)。¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.17-8.09(m，2H)，8.04-7.90(m，4H)，7.63-7.55(m，3H)，7.51-7.34(m，6H)，6.03(dd，J＝5.3，4.5Hz，1H)，5.88(t，J＝5.5Hz，1H)，5.00(d，J＝4.4Hz，1H)，4.81-4.72(m，2H)，4.64(d，J＝8.4Hz，1H)。

制备1B：

向1A(15g，31.8mmol)的AcOH(40mL)溶液中添加氯化氢(5.30mL，63.6mmol)。将反应混合物加热至120℃持续40min。随后将混合物浓缩至干，然后通过硅胶色谱提纯(120g柱，0-60％EtOAc/己烷)，得到1B(12.6g，25.7mmol，81％产率)。HPLC：保留时间＝0.73min(H₂O/MeOH，其含有0.05％TFA，Shimadzu HPLC Xterra-S5-C18 4.6 x 50mm，梯度＝4min，波长＝220nm)；MS(ES)：m/z＝490[M+H]⁺。

制备1C：

(4，4′-二-叔丁基-2，2′-联吡啶)双[3，5-二氟-2-[5-三氟甲基-2-吡啶基-κn)苯基-κc]铱(III)六氟磷酸盐(0.24g，0.24mmol)、氯化镍(II)乙二醇二甲基醚配合物(0.26g，1.19mmol)和4，4′-二-叔丁基-2，2′-联吡啶(0.32g，1.2mmol)添加至50mL的装有磁力搅拌子的小瓶中。然后，添加1B(5.81g，11.85mmol)，然后添加甲基4-溴皮考啉酸酯(3.07g，14.22mmol)和Cs₂CO₃(6.18g，18.95mmol)。随后将小瓶置于氮气中，并添加无水DMA(120mL)。随后将溶液用氮气脱气15分钟。随后密封小瓶，在盖上缠绕封口膜。将小瓶放在距离34W蓝色LED约8厘米的位置，LED直射在小瓶的侧面。将反应随后搅拌72小时。将粗制反应混合物随后倒入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)的混合物中。水层用乙酸乙酯萃取3次，然后合并的有机层用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。随后将产物通过柱色谱提纯(120g柱，0-80％EtOAc/Hex，40min)，得到1C(2.8g，4.81mmol，40.6％产率)。¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.66(dd，J＝0.61，5.02Hz，1H)，8.29(s，1H)，7.93-8.07(m，6H)，7.65(d，J＝5.13Hz，1H)，7.49-7.56(m，3H)，7.28-7.41(m，6H)，5.74(t，J＝5.33Hz，1H)，5.54(t，J＝5.71Hz，1H)，5.38(d，J＝5.94Hz，1H)，4.91(dd，J＝3.04，12.17Hz，1H)，4.79(td，J＝3.39，5.10Hz，1H)，4.70(dd，J＝3.65，12.17Hz，1H)，1.21(t，J＝7.15Hz，1H)。

制备1D：

向1C(2.7g，4.59mmol)添加20mL的无水MeOH和甲醇钠(5.96mL，2.98mmol，0.5M)。将混合物搅拌14小时，然后用Dowex 50W-X8 H+树脂中和。将混合物过滤并将滤饼用MeOH洗涤，然后滤液浓缩至干。在0℃，向粗制中间体的吡啶(20mL)溶液中缓慢添加DCM(5mL)中的(氯(4-甲氧基苯基)亚甲基)二苯(1.67g，4.70mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。随后除去溶剂，并将残余物倒入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)的混合物中。将水层用乙酸乙酯萃取3次，然后合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将粗制反应随后通过柱色谱提纯(40g柱，0-10％MeOH/DCM)，得到1D(1.1g，45％产率)。¹HNMR(499MHz，氯仿-d)δ8.69(d，J＝4.71Hz，1H)，8.32(s，1H)，7.67(d，J＝4.93Hz，1H)，7.41-7.51(m，3H)，7.22-7.38(m，9H)，6.87(s，1H)，6.85(s，1H)，4.87(d，J＝6.79Hz，1H)，4.07-4.27(m，3H)，4.02(s，1H)，3.93(s，2H)，3.80-3.84(m，3H)，3.55(t，J＝1.00Hz，1H)，3.52(d，J＝3.34Hz，1H)，3.38(brd，J＝3.55Hz，1H)。

制备1E和1F：

向1D(1.1g，2.0mmol)和咪唑(0.42g，6.1mmol)的吡啶(30mL)溶液中缓慢添加DCM(2mL)中的TBS-Cl(0.34g，2.2mmol)。将混合物搅拌5小时，然后添加5mL的MeOH。随后将混合物搅拌1小时，然后浓缩至干。将粗物质通过硅胶色谱提纯(40g柱，0-100％EtOAc/己烷，35分钟梯度)，得到1E(445mg，0.68mmol，33％产率)和1F(418mg，0.64mmol，31％产率)。1E：¹HNMR(499MHz，甲醇-d₄)δ8.67(d，J＝5.02Hz，1H)，8.49(s，1H)，7.75(dd，J＝1.05，5.02Hz，1H)，7.42-7.55(m，4H)，7.22-7.40(m，8H)，6.86-6.93(m，2H)，4.90-4.92(m，1H)，4.25(dd，J＝5.02，8.05Hz，1H)，4.19(br d，J＝2.19Hz，1H)，4.05-4.14(m，1H)，4.00(s，1H)，3.80-3.81(m，3H)，3.74-3.75(m，3H)，3.58(dd，J＝2.72，10.56Hz，1H)，3.14-3.32(m，2H)，0.83-0.93(m，9H)，-0.05--0.02(m，3H)，-0.12--0.10(m，3H)。1F：¹H NMR(499MHz，甲醇-d₄)δ8.66(dd，J＝0.63，5.02Hz，1H)，8.49(s，1H)，7.78(d，J＝5.19Hz，1H)，7.43-7.54(m，4H)，7.22-7.39(m，8H)，6.89(s，1H)，6.88(s，1H)，4.89-4.92(m，1H)，4.07-4.21(m，3H)，3.90-4.05(m，1H)，3.79-3.81(m，3H)，3.75-3.78(m，2H)，3.58(dd，J＝2.87，10.61Hz，1H)，3.13-3.32(m，1H)，0.88-0.88(m，1H)，0.86-0.88(m，8H)，0.17(br d，J＝11.50Hz，1H)，0.06-0.08(m，3H)，-0.02-0.00(m，3H)。

制备1G：

在氮气气氛中，向1F(418mg，0.637mmol)的吡啶(6mL，74mmol)溶液中添加磷酸二苯基酯(0.37mL，1.9mmol)，并将混合物在室温搅拌20分钟。向混合物中添加水(0.80mL，45mmol)，然后添加三乙胺(0.89mL，6.4mmol)。将混合物搅拌另外的20分钟。随后将混合物蒸发并用MeOH共沸，然后通过柱色谱提纯(12g，0-15％MeOH/DCM)，得到粗制的中间体。向该粗物质中添加5mL的DCM，然后添加2，2-二氯乙酸(0.26mL，3.2mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后添加吡啶(0.5mL，6.2mmol)，并将反应混合物浓缩至干。将残余物通过反相(C18)色谱提纯(150g柱，0％至30％于水性NH₄Ac(0.04％)中的ACN)，得到甲基1G(130mg，0.29mmol，46％产率)。¹H NMR(499MHz，甲醇-d₄)δ8.64(d，J＝4.89Hz，1H)，8.35(s，1H)，7.86(d，J＝5.13Hz，1H)，7.39(s，1H)，5.12(d，J＝5.96Hz，1H)，4.36-4.46(m，1H)，4.31(t，J＝4.41Hz，1H)，4.10(q，J＝4.17Hz，1H)，3.99(s，3H)，3.83(dd，J＝3.81，12.04Hz，1H)，3.74(dd，J＝4.29，12.04Hz，1H)，0.96(s，9H)，0.17(d，J＝7.03Hz，6H)。

制备1H

将(2R，3R，4R，5R)-5-(6-苯甲酰氨基-9H-嘌呤-9-基)-2-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基(2-氰基乙基)二异丙基亚磷酰胺(Sigma-Aldrich，510mg，0.58mmol)溶于4mL的无水乙腈，然后浓缩至浓缩油状物(重复2次)。向该油状物添加第三份的无水乙腈(4mL)，然后添加分子筛(150mg)。向1G(130mg，0.29mmol)和1H-四唑(81mg，1.16mmol)的混合物中添加无水乙腈(4mL)。将该混合物浓缩至干。随后将混合物用无水CH₃CN(4mL)共沸另外的2次。在最后的共沸期间，将溶液浓缩至约2mL的体积，并在氮气中添加分子筛(150mg)。使用正压氮气管线，向该混合物中通过套管添加先前制备的溶液。随后将反应混合物搅拌3小时。将反应随后用(E)-N，N-二甲基-N′-(3-硫代-3H-1，2，4-二噻唑-5-基)甲亚酰胺(130mg，0.64mmol)处理，并将溶液搅拌20分钟。将所得的黄色溶液过滤并小心地真空浓缩(120mbar，36℃水浴)。将浓稠油状物转移到含有6％(m/v)碳酸氢钠水溶液的分液漏斗中。将产物用两部分乙酸乙酯萃取，并将合并的有机物通过硫酸镁干燥，过滤，并浓缩。将粗物质用无水乙腈共沸，然后溶于二氯甲烷(3mL)。添加三乙基硅烷(0.28mL，1.74mmol)，然后逐滴添加2，2-二氯乙酸(112mg，0.87mmol)。2小时后，将反应混合物用吡啶(0.5mL)处理，并继续搅拌10分钟。随后将混合物真空浓缩(300mbar，然后50mbar，35℃水浴)至粘稠油状物。将油状物溶于甲醇(5mL)并浓缩至干(重复2次)。将残余物随后通过反相(C18)色谱提纯(50g柱，0％至60％水性NH₄Ac(0.04％)中的AcCN)，得到1H，作为两种非对映异构体的混合物(193mg，69％)m/z：952.1(M+H)。

制备1I：

将中间体1H(100mg，0.11mmol)溶于无水吡啶(1mL)，并真空浓缩至干(重复2次)。将所得材料溶于无水吡啶(5mL)并在-10℃逐滴添加至2-氯-5，5-二甲基-1，3，2-二氧杂膦烷2-氧化物(78mg，0.42mmol)的吡啶(5mL)溶液中。将反应温热至室温并搅拌20分钟。随后添加(E)-N，N-二甲基-N′-(3-硫代-3H-1，2，4-二噻唑-5-基)甲亚酰胺(43mg，0.21mmol)，并将混合物在室温搅拌20分钟。添加水(0.50mL)，并继续搅拌另外的30分钟。随后将混合物浓缩至干。将残余物在饱和水性NaHCO₃(10mL)和EtOAc(15mL)之间分配。收集有机层，并将水层用EtOAc(15mL x 2)萃取。合并的有机层经Na₂SO₄干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱提纯(12g柱，0-20％MeOH/DCM)，得到1I(74mg，0.08mmol，73％产率)，为四种非对映异构体的混合物。m/z：966.3(M+H)。

制备实施例1-1、1-2、1-3和1-4：

1-1(非对映异构体1)

1-2(非对映异构体2)

1-3(非对映异构体3)

1-4(非对映异构体4)

向1I(74mg，0.077mmol)中添加MeOH中的氨(2mL，7N)。在50℃将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物随后蒸发至干。向粗制混合物中添加三乙胺三氢氟酸盐(1mL，6.1mmol)。将混合物加热至37℃2小时。将反应随后用1M NH₄OAc处理，然后在室温搅拌10分钟。将溶液随后过滤并将滤液通过制备型HPLC提纯(条件：柱：Agilent Bonus RP 21.2 x100mm，5-μm颗粒；流动相A：含20-mM乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：0％B保持0-6分钟，经16分钟0％-25％B，然后在100％B停留4分钟；流速：20mL/min)，得到1-1为单一的非对映异构体(13mg，24％产率)。三种另外的非对映异构体分离为混合物：非对映异构体1-2和1-3(4mg，7％产率)以及1-3和1-4(32mg，56％产率)。

实施例1-1 ¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ8.51(d，J＝4.88Hz，1H)，8.11(s，1H)，8.01(s，1H)，7.77(br d，J＝4.58Hz，1H)，7.56(br s，1H)，6.19(dd，J＝2.59，15.11Hz，1H)，5.66(m，1H)，4.87-5.04(m，1H)，4.75(br d，J＝9.16Hz，1H)，4.55(br s，1H)，4.41-4.51(m，1H)，4.30(br s，1H)，4.05-4.19(m，2H)，4.01(br dd，J＝6.26，11.44Hz，1H)，3.55(br s，1H)，3.17(s，1H)。保留时间：2.21min。(Agilent Bonus RP，2.1mm x 50mm，1.8μm颗粒；流动相A：含20mM乙酸铵的水；流动相B：乙腈。温度：50℃；梯度：0％B停留1min，然后在4min内0％B至100％B，然后在100％B停留0.75min；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。m/z：680.12。

实施例2-1、2-2、2-3和2-4

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-羟基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]-N-甲基吡啶-2-甲酰

2-1(非对映异构体1)

2-2(非对映异构体2)

2-3(非对映异构体4)

2-4(非对映异构体4)

将中间体1I(30mg，0.031mmol)溶于MeOH(0.5mL)，然后添加30％的甲基胺的EtOH(2mL)溶液。将混合物在50℃加热10小时。随后在氮气流中将混合物浓缩至干。将所得残余物悬浮于三乙胺三氢氟酸盐(1mL)，并在37℃加热3小时。随后向反应添加2M乙酸铵溶液(2mL)，并继续搅拌20分钟。随后将混合物过滤并通过制备型HPLC提纯(条件：柱：LunaPhenyl-Hex，柱，5μm，4.6X 250mm，流速：1mL/min，流动相：A：100mM NH₄OAc(pH 6.5)；流动相B：MeOH，其具有以下梯度：20％B，10min，20-95％B，1min和95％-20％，B 2min)，得到2-1(2.3mg，10％产率)为单一的非对映异构体，2-2和2-3为非对映异构体的2∶1混合物(2.6mg，12％产率)，且2-4为单一的非对映异构体(1.8mg，8％产率)。

实施例2-1：HPLC保留时间：10.87min。(Luna Phenyl-Hex 3um 3x150；流动相A：含20mM NH₄Ac的水；流动相B：含20mM NH₄Ac的MeOH；梯度：经20分钟0％-15％B。经1分钟15％-95％B，流速：0.5mL/min)；¹H NMR(500MHz，甲醇-d₄)δ8.49(d，J＝4.92Hz，1H)，8.36(s，1H)，8.18(s，2H)，7.81(d，J＝4.49Hz，1H)，6.31(dd，J＝2.24，14.64Hz，1H)，5.66-5.84(m，1H)，5.17(ddd，J＝3.47，6.63，9.88Hz，1H)，4.92-4.99(m，1H)，4.67-4.83(m，1H)，4.55(d，J＝3.95Hz，1H)，4.41-4.52(m，2H)，4.24-4.31(m，1H)，4.04-4.16(m，2H)，3.17-3.78(m，1H)，2.92(s，3H)。m/z：694.1(M+H)。

实施例2-2和2-3：HPLC保留时间：12.07min和12.45min。(Luna Phenyl-Hex 3um3x150；流动相A：含20mM NH₄Ac的水；流动相B：含20mM NH₄Ac的MeOH；梯度：经20分钟0％-15％B。经1分钟15％-95％B，流速：0.5mL/min)。m/z：694.1(M+H)。

实施例2-4：HPLC保留时间：13.62min。(Luna Phenyl-Hex 3um 3x150；流动相A：含20mM NH₄Ac的水；流动相B：含20mM NH₄Ac的MeOH；梯度：经20分钟0％-15％B。经1分钟15％-95％B，流速：0.5mL/min)；¹H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ8.21-8.24(m，1H)，8.17-8.20(m，1H)，8.07-8.11(m，1H)，7.96-8.02(m，2H)，6.22-6.29(m，1H)，5.84-6.02(m，1H)，4.98-5.02(m，1H)，4.65-4.71(m，1H)，4.43-4.48(m，1H)，4.33-4.43(m，2H)，4.29-4.33(m，1H)，4.26(s，2H)，3.44-3.49(m，1H)，3.17-3.26(m，1H)，2.91-2.93(m，3H)。m/z：694.1(M+H)。

实施例3-1、3-2、3-3和3-4

4-[(1R，6R，8R，9R，10R，15S，17S)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-18-亚甲基-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0⁶ ^，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺

3-1(非对映异构体1)

3-2(非对映异构体2)

3-3(非对映异构体3)

3-4(非对映异构体4)

制备3A：

向Dess-Martin高碘烷(323mg，0.76mmol)在无水DCM(5mL)的悬浮液中添加t-BuOH(0.08mL，0.80mmol)，并将所得混合物在室温搅拌10分钟，然后缓慢添加1E(250mg，0.381mmol)的无水DCM(5mL)溶液。将混合物在室温搅拌10小时。将反应混合物随后用EtOAc(30mL)稀释并用Na₂S₂O₃溶液(10mL，1M)处理，然后用NaCl饱和溶液(10mL)处理，然后用NaHCO₃饱和溶液(10mL)处理。分离各层并将水层用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物(235mg)，将其直接用于下一步骤中。

制备3B：

将甲基三苯基鏻溴化物(2140mg，6mmol)和酰胺钠(350mg，9.0mmol)在甲苯(30mL)中的悬浮液加热至回流2.5小时。随后将反应冷却至室温并静置2小时。向粗制3A(240mg，0.36mmol)的无水THF(8mL)溶液中添加上述溶液(5mL，1.4mmol)。将反应在室温搅拌1小时，然后浓缩至干。将粗产物溶于少量的DCM并装载至24g ISCO硅胶筒柱，并使用25min的EtOAc/己烷(0-100％)梯度洗脱，得到3B(85mg，0.13mmol，2个步骤的产率为36％)。m/z：652.08(M+H)。

制备3C：

向3B(85mg，0.13mmol)的THF(5mL)溶液中添加TBAF(0.08mL，0.08mmol)。随后将混合物在室温搅拌3小时。将反应混合物随后蒸发至干并将粗产物溶于少量的DCM，并装载至12g ISCO硅胶筒柱，并用20min的EtOAc/己烷(0-100％)梯度洗脱，得到3C。(61mg，87％产率)。¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.64(d，J＝4.89Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.65(dd，J＝1.13，4.95Hz，1H)，7.46-7.53(m，4H)，7.35-7.41(m，2H)，7.21-7.32(m，6H)，6.83-6.88(m，2H)，5.33(t，J＝2.32Hz，1H)，5.11(t，J＝2.27Hz，1H)，4.83(td，J＝1.98，3.78Hz，1H)，4.62(d，J＝8.34Hz，1H)，4.48(br d，J＝7.03Hz，1H)，3.93(s，3H)，3.80(s，3H)，3.35-3.43(m，2H)，0.02(s，1H)。

制备3D：

在氮气气氛中，向搅拌中的3C(61mg，0.11mmol)的吡啶(1.5mL，18.6mmol)溶液中添加磷酸二苯基酯(0.07mL，0.34mmol)，并将反应在室温搅拌20分钟。向反应混合物中依次添加水(0.14mL，7.9mmol)和三乙胺(0.16mL，1.14mmol)。将混合物搅拌20分钟。随后将混合物蒸发并与MeCN共沸数次。向搅拌中的粗制中间体和三乙基硅烷(0.18mL，1.14mmol)的DCM(3mL)溶液中添加2，2-二氯乙酸(0.05mL，0.57mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后添加吡啶(0.5mL，6.2mmol)，然后将溶液浓缩。将残余物通过反相(C18)色谱提纯，用0％至30％水性NH₄HCO₃(0.04％)中的AcCN洗脱，得到3D(27mg，0.08mmol，72％产率)为白色固体。

制备3E：

将(2R，3R，4R，5R)-5-(6-苯甲酰氨基-9H-嘌呤-9-基)-2-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-氟四氢呋喃-3-基(2-氰基乙基)二异丙基亚磷酰胺(Sigma-Aldrich，220mg，0.25mmol)溶于4mL的无水乙腈，然后浓缩至浓稠的油状物(重复2次)。向该油状物中添加第三份的无水乙腈(4mL)，然后在氮气中添加分子筛(100mg)。将该溶液静置，封盖，同时制备下一种溶液。向3D(27mg，0.082mmol)和1H-四唑(23mg，0.33mmol)的混合物中添加无水乙腈(2mL)。也将该混合物浓缩至干。将混合物与无水CH₃CN(2mL)共沸另外的两次。在最后共沸之后，在氮气中添加2mL的无水CH₃CN和分子筛(100mg)。使用正压氮气管线，将先前制备的溶液添加至3D溶液中。将反应混合物搅拌3小时，然后添加(E)-N，N-二甲基-N′-(3-硫代-3H-1，2，4-二噻唑-5-基)甲亚酰胺(67mg，0.33mmol)。将溶液搅拌20分钟，然后过滤并小心地真空浓缩(120mbar，36℃水浴)以除去MeCN。将得到的浓稠油状物转移到含有6％(m/v)碳酸氢钠水溶液的分液漏斗中。将所得混合物用EtOAc(2x)萃取。将合并的有机层通过硫酸镁干燥，过滤，并浓缩至黄色泡沫。将粗物质随后用无水乙腈共沸，然后添加二氯甲烷(3.0mL)以形成均相溶液。添加三乙基硅烷(0.08mL，0.50mmol)，然后逐滴添加2，2-二氯乙酸(32mg，0.25mmol)。1小时后，添加吡啶(0.5mL)，并将混合物搅拌10分钟，然后真空浓缩(300mbar，然后50mbar，35℃水浴)。将所得残余物通过反相(C18)色谱提纯(50g柱，0％至60％水性NH₄Ac(0.04％)中的AcCN)，得到3E为两种非对映异构体的混合物(35mg，51％)。m/z：834.08(M+H)。

制备3F：

使用类似于实施例1I的程序，将中间体3E转化为中间体3F。将粗产物通过硅胶柱色谱提纯(12g柱，0-20％MeOH/DCM，25min)，得到3F(30mg，0.04mmol，84％产率)为四种非对映异构体的混合物。m/z：848.2(M+H)。

制备实施例3-1、3-2、3-3和3-4：

向3F(30mg，0.035mmol)中添加MeOH中的氨(2mL，7N)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在50℃搅拌5小时。将反应混合物随后蒸发至干。将粗产物通过制备型HPLC提纯(条件：柱：Xselect RP Prep C18 19 x 150mm；流动相A：含20-mM TEAA的水；流动相B：乙腈/水(8∶2)，含20-mM TEAA；梯度：经20分钟8％-17％B，经2分钟17％-95％B，然后经3分钟95％-8％，流速：20mL/min)，得到3-1(0.9mg，4％产率)，3-2为(1.2mg，4％产率)、3-3(1.4mg，4％产率)和3-4(1.4mg，4％产率)。

实施例3-1：HPLC保留时间：7.56min。(Xselect CSH C18柱，3.5um，3x150mm；流动相A：含20-mM TEAA的水；流动相B：乙腈/水(8∶2)，含20-mM TEAA；梯度：经14分钟5％-21％B，经2分钟21％-95％B，然后经1分钟95％-5％，流速：0.5mL/min)；¹H NMR(500MHz，甲醇-d₄)δ8.53-8.59(m，1H)，8.41-8.48(m，2H)，8.20-8.24(m，2H)，6.27-6.40(m，1H)，5.66-5.72(m，2H)，5.54-5.62(m，1H)，5.24-5.30(m，1H)，4.77-4.79(m，1H)，4.56-4.63(m，2H)，4.31-4.46(m，3H)，4.08-4.19(m，2H)。m/z：675.9(M+H)。

实施例3-2：HPLC保留时间：9.20min。(Xselect CSH C18柱，3.5um，3x150mm；流动相A：含20-mM TEAA的水；流动相B：乙腈/水(8∶2)，含20-mM TEAA；梯度：经14分钟5％-21％B，经2分钟21％-95％B，然后经1分钟95％-5％，流速：0.5mL/min¹H NMR(500MHz，甲醇-d₄)δ8.49-8.63(m，1H)，8.38-8.46(m，1H)，8.13-8.27(m，1H)，7.80-8.02(m，1H)，7.30-7.61(m，1H)，6.23-6.43(m，1H)，5.76-5.88(m，1H)，5.52-5.74(m，2H)，5.19-5.45(m，1H)，4.72-4.83(m，1H)，4.49-4.64(m，1H)，4.22-4.47(m，1H)，4.06-4.20(m，3H)，3.84-4.02(m，2H)。m/z：675.9(M+H)。

实施例3-3：HPLC保留时间：9.65min。(Xselect CSH C18柱，3.5um，3x150mm；流动相A：含20-mM TEAA的水；流动相B：乙腈/水(8∶2)，含20-mM TEAA；梯度：经14分钟5％-21％B，经2分钟21％-95％B，然后经1分钟95％-5％，流速：0.5mL/min)；¹H NMR(500MHz，甲醇-d₄)δ8.52-8.61(m，1H)，8.41-8.47(m，1H)，8.16-8.31(m，2H)，7.90-8.00(m，1H)，6.27-6.40(m，1H)，5.52-5.82(m，2H)，5.17-5.39(m，2H)，4.71-4.81(m，1H)，4.52-4.63(m，2H)，4.27-4.45(m，2H)，4.09-4.24(m，2H)，3.86-4.05(m，1H)。m/z：675.9(M+H)。

实施例3-4：HPLC保留时间：12.06min。(Xselect CSH C18柱，3.5um，3x150mm；流动相A：含20-mM TEAA的水；流动相B：乙腈/水(8∶2)，含20-mM TEAA；梯度：经14分钟5％-21％B，经2分钟21％-95％B，然后经1分钟95％-5％，流速：0.5mL/min)；¹H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δ8.52-8.58(m，1H)，8.32(br s，1H)，8.24(s，1H)，8.18(s，1H)，7.87-7.93(m，1H)，6.33(d，J＝15.90Hz，1H)，5.65-5.69(m，1H)，5.49-5.65(m，1H)，5.32-5.43(m，1H)，5.25-5.32(m，1H)，4.95-5.07(m，1H)，4.73-4.80(m，1H)，4.61(d，J＝8.98Hz，1H)，4.26-4.49(m，3H)，4.04-4.21(m，2H)。m/z：675.9(M+H)。

实施例4-1和4-2

4-[(1S，6R，8R，9R，10R，15R，17S，18R)-8-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-9，18-二氟-3，12-二氧代-3，12-二硫烷基-2，4，7，11，13，16-六氧杂-3λ⁵，12λ⁵-二磷杂三环[13.2.1.0^6，10]十八烷-17-基]吡啶-2-甲酰胺

4-1(非对映异构体1)

4-2(非对映异构体2)

制备4A：

将(4，4′-二-叔丁基-2，2′-联吡啶)双[3，5-二-氟-2-[5-三氟甲基-2-吡啶基-κn)苯基-κc]铱(III)六氟磷酸盐(0.17g，0.16mmol)、氯化镍(II)乙二醇二甲基醚配合物(0.18g，0.81mmol)和4，4′-二-叔丁基-2，2′-联吡啶(0.22g，0.81mmol)添加至150mL的装有磁力搅拌子的小瓶中。然后添加(2R，3S，4R，5R)-3-(苄基氧基)-5-((苄基氧基)甲基)-4-氟四氢呋喃-2-羧酸(2.9g，8.05mmol)，然后添加4-溴皮考啉酸甲基酯(2.09g，9.7mmol)和Cs₂CO₃(4.2g，12.9mmol)。随后将小瓶置于氮气中，并添加无水DMA(80mL)。随后将溶液用氮气脱气15分钟。随后密封小瓶，在盖上缠绕封口膜。将小瓶放在距离34W蓝色LED约8厘米的位置，LED直射在小瓶的侧面。将反应随后搅拌22小时。将粗制反应混合物随后倒入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)的混合物中。将水层用乙酸乙酯萃取3次，然后将合并的有机层用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。产物随后通过硅胶柱色谱提纯(80g柱，0-80％EtOAc/Hex，40min)，得到4A(1.09g，2.41mmol，30％产率)。m/z：452.4(M+H)。

制备4B：

在氮气中，将中间体4A(1.0g，2.2mmol)溶于乙醇(40mL)和环己烯(20mL)。将反应混合物用氮气吹吸数次。添加Pd(OH)₂(0.23g，0.33mmol)，并将反应混合物加热至回流4小时。向反应混合物中添加硅藻土，并将其随后过滤，并用EtOH洗涤。将粗产物浓缩，然后通过柱色谱提纯(40g柱，0-25％MeOH/DCM，35min)，得到4B(160mg，0.59mmol，27％产率)。¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.75(d，J＝5.01Hz，1H)，8.27(s，1H)，7.65(dd，J＝1.07，5.01Hz，1H)，5.04-5.17(m，1H)，4.79-4.84(m，1H)，4.40-4.49(m，1H)，4.14-4.24(m，1H)，4.01-4.08(m，5H)，3.96-4.01(m，2H)，3.83-3.91(m，2H)，3.70-3.76(m，1H)，3.51(s，1H)。m/z：272.3(M+H)。

制备4C：

向4B(160mg，0.59mmol)的吡啶(6mL)溶液中缓慢添加(氯(4-甲氧基苯基)亚甲基)二苯(210mg，0.68mmol)的DCM(1mL)溶液。将混合物在室温搅拌过夜。添加另外的0.5当量的(氯(4-甲氧基苯基)亚甲基)二苯，并将反应搅拌另外的3小时。将反应随后用2mL的MeOH处理。随后除去溶剂，并将残余物通过硅胶柱色谱提纯(24g柱，0-100％EtOAc/Hex)，得到4C。(214mg，67％产率)。¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.73(d，J＝4.89Hz，1H)，8.39(s，1H)，7.69(dd，J＝1.01，4.95Hz，1H)，7.39-7.45(m，4H)，7.21-7.34(m，9H)，6.81-6.90(m，2H)，4.91-5.07(m，1H)，4.84(d，J＝8.82Hz，1H)，4.47(br s，1H)，4.41(br s，1H)，3.92(s，3H)，3.79-3.83(m，3H)，3.57(dd，J＝3.46，10.61Hz，1H)，3.30(dd，J＝3.16，10.55Hz，1H)，2.89-3.05(m，1H)。

制备中间体4D

向冷却(0℃)的N-(9-((2R，3R，4R，5R)-5-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-3-氟-4-羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(Astatech，500mg，0.74mmol)和咪唑(150mg，2.22mmol)的DMF(3.7mL)溶液中通过注射器添加叔丁基二苯基氯硅烷(290μl，1.11mmol)。随后移去冰水浴并将反应在室温在氮气气氛中搅拌。22小时后，将第二份的咪唑(50mg，0.74mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(95μl，0.37mmol)添加至反应中。在另外的3小时后，将第三份的咪唑(50mg，0.74mmol)和叔丁基二苯基氯硅烷(95μl，0.37mmol)添加至反应中，并将混合物搅拌24小时。将反应随后用甲醇(750μL，18.5mmol)处理，在室温搅拌30分钟，然后真空浓缩。在氮气流下除去残留的挥发物。将残余物在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配，并分离各层。将水相用EtOAc(1 x 20mL)萃取，并将合并的有机层用水(4 x10mL)，盐水(10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤，并浓缩。粗品4D无需进一步提纯即可用于下一步。LCMS，[M+H]⁺＝914。

制备4E：

向4D(680mg，0.74mmol)和三乙基硅烷(300μL，1.9mmol)的CH₂Cl₂(4mL)溶液中通过注射器逐滴添加三氟乙酸(110μL，1.48mmol)。在氮气气氛中，在室温搅拌反应。1.5小时后，将反应用MeOH(4mL)处理并搅拌10分钟。随后将混合物真空浓缩，并用MeOH(2 x 4mL)共沸2次。将粗产物溶于少量的CH₂Cl₂，吸收于SiO₂塞上，并通过快速色谱提纯(SiO₂，40g柱，0-50％丙酮/己烷，14.4min梯度，然后停留14.4min，40mL/min)，得到4E(384mg，85％产率)为白色固体。LCMS，[M+H]⁺＝612。¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δ8.71(s，1H)，8.15(s，1H)，8.05-7.99(m，2H)，7.74-7.66(m，4H)，7.65-7.59(m，1H)，7.56-7.51(m，2H)，7.50-7.37(m，6H)，6.27(dd，J＝11.3，6.8Hz，1H)，5.62(ddd，J＝51.8，6.7，4.8Hz，1H)，4.70-4.62(m，1H)，4.13(br s，1H)，3.68(d，J＝13.1Hz，1H)，3.10(dd，J＝13.1，1.6Hz，1H)，1.17(s，9H)。

制备4F：

将中间体4E(1.0g，1.64mmol)和试剂3在MeCN(15mL)中冷却至内部温度为0℃。一次性添加DBU(0.4mL，2.5mmol)，并将混合物在0℃搅拌3O分钟。在0℃向反应混合物中添加乙酸(280μL，4.9mmol)，然后添加硅胶并将混合物浓缩。将粗产物通过ISCO硅胶色谱提纯(80g，0-10％梯度MeOH/DCM)。将含所需产物的级分浓缩至白色泡沫，将其与庚烷(3 x50mL)共蒸发，得到4F(1.2g，87％产率)为白色固体。LCMS，[M+H]⁺＝858.8：¹H NMR(499MHz，氯仿-d)δ8.95(s，1H)，8.69(s，1H)，8.07(s，1H)，7.99-8.04(m，2H)，7.69-7.74(m，4H)，7.61-7.66(m，1H)，7.38-7.57(m，9H)，7.28(s，2H)，6.32(d，J＝2.03Hz，1H)，6.28-6.38(m，1H)，4.95(dd，J＝2.09，4.23Hz，1H)，4.85(dd，J＝2.15，4.29Hz，1H)，4.81-4.98(m，1H)，4.62-4.71(m，2H)，4.58-4.61(m，1H)，4.43(br s，1H)，4.25-4.37(m，2H)，4.15(ddd，J＝4.23，9.33，11.59Hz，1H)，2.51(br s，1H)，2.20-2.26(m，1H)，1.99-2.06(m，5H)，1.81-1.91(m，3H)，1.65-1.75(m，5H)，1.23-1.32(m，1H)，1.16(s，9H)。

制备4G：

向4C(210mg，0.39mmol)和4F(570mg，0.67mmol)的乙腈(8mL)溶液中逐滴添加DBU(180μl，1.20mmol)，得到淡黄色溶液。10分钟后，将反应混合物用DCM(4mL)稀释并用乙酸(110μL，2.0mmol)处理。将所得混合物与硅胶共蒸发，然后通过快速色谱、在40g的硅胶上提纯，用0-15％MeOH/DCM洗脱，得到4G(320mg，66％产率)为白色固体。LCMS，[M+H]⁺＝1233.0。

制备4H：

向4G(230mg，0.19mmol)中添加三乙胺三氢氟酸盐(2mL，12.3mmol)。将反应混合物在37℃搅拌2小时，用乙腈(3.4mL)稀释，然后用Et₃N(2.56mL，18.4mmol)和异丙氧基三甲基硅烷(4880mg，36.9mmol)处理。将混合物在室温搅拌10分钟，然后真空浓缩。将粗制中间体溶于DCM(6mL)。添加三乙基硅烷(0.24mL，1.49mmol)，然后添加2，2-二氯乙酸(96mg，0.75mmol)。将混合物搅拌2小时，然后浓缩至干。将粗产物溶于少量的MeOH，吸收于硅藻土塞上，并在反相ISCO Gold 50g C18柱上提纯(流动相A：5∶95乙腈：含0.01M乙酸铵的水；流动相B：95∶5乙腈：含0.01M乙酸铵的水；梯度：0％B停留5min，0-35％B梯度停留20min，并在100％停留5min，以30mL/min的速率运行)，在冻干后得到4H(168mg，91％产率)为白色固体。LCMS，[M+H]⁺＝723.08。

制备4I：

在20分钟内，向4H(138mg，0.191mmol)的吡啶(19mL)室温溶液中逐滴添加磷酸二苯基酯(74μL，0.38mmol)的DCM(1mL)溶液。向该反应混合物中添加(E)-N，N-二甲基-N′-(3-硫代-3H-1，2，4-二噻唑-5-基)甲亚酰胺(120mg，0.57mmol)并将混合物在室温搅拌20小时。将反应混合物随后浓缩至干。将残余物随后溶于甲醇并过滤。将滤液浓缩并将所得残余物在反相ISCO Gold 50g C18柱上提纯(流动相A：5∶95乙腈：含0.01M乙酸铵的水；流动相B：95∶5乙腈：含0.01M乙酸铵的水；梯度：经15分钟0-30％B梯度)，得到4I(93mg，61％产率)作为两种非对映异构体的混合物。LCMS，[M+H]⁺＝801.6。

制备实施例4-1和4-2：

将中间体4I(93mg，0.116mmol)用7N MeOH中的氨(5mL，35.0mmol)处理并将反应混合物在55℃搅拌5小时。将反应混合物随后浓缩并将粗产物通过制备型HPLC提纯(色谱条件：仪器：Waters Autopure；柱：Xselect RP Prep C18 OBD柱，5μm，19X150mm；流速：20.0mL/min；流动相：A：100mM NH₄OAc(pH：6.5)；B：ACN(％A＝100-％B))，梯度经12分钟0-20％B，经0.5分钟20-95％B，95％B停留0.5min，并在95-0％B停留0.5min)，分别得到实施例4-1和4-2。

实施例4-1(10.8mg，12％产率)；保留时间：6.53min，分析HPLC色谱条件1；所测质量：m/z 682.5。¹H NMR(499MHz，甲醇-d₄)δ8.24(s，1H)，8.08-8.18(m，3H)，7.91(s，1H)，6.24(d，J＝15.62Hz，1H)，5.90-5.98(m，1H)，5.80-5.88(m，1H)，4.89-4.94(m，1H)，4.77-4.84(m，1H)，4.37-4.56(m，2H)，4.27-4.36(m，2H)，4.15(m，1H)，3.34-3.38(m，1H)，3.24-3.32(m，1H)。³¹P NMR(202MHz，甲醇-d₄)δ57.15(s，1P)，54.05(s，1P)。

实施例4-2(28.7mg，32％产率))；保留时间：7.50min，分析HPLC色谱条件1；所测质量：m/z 682.5；¹H NMR(499MHz，甲醇-d₄)δ8.42(d，J＝5.0Hz，1H)，8.21(s，2H)，8.05(s，1H)，7.83(d，J＝4.2Hz，1H)，6.32-6.24(m，1H)，5.78-5.59(m，2H)，5.03-4.92(m，1H)，4.91-4.89(m，1H)，4.84-4.76(m，1H)，4.57-4.47(m，2H)，4.47-4.40(m，1H)，4.38-4.25(m，2H)，4.17-4.07(m，1H)。³¹P NMR(202MHz，甲醇-d₄)δ56.1(s，1P)，54.4(s，1P)，54.3(s，1P)。

分析HPLC色谱条件1：

仪器：Agilent 1290；柱：Xselect CSH C18柱，3.5μm，2.1X 150mm；流速：0.35mL/min；流动相：A：20mM NH₄OAc(pH 6.5)；B：20mM ACN中的NH₄OAc；梯度经15分钟0-35％B，经1分钟35-100％B。

实施例5-1和5-2

5-1(非对映异构体1)

5-2(非对映异构体2)

将实施例1-3和1-4(5.6mg，0.66mmol)以及2-氯乙醛(20mg，0.13mmol)在pH4.5AcOH/NaOAc缓冲液(0.5mL)中的非对映异构体混合物在室温搅拌10小时。将粗物质通过制备型HPLC用以下条件提纯：柱：Agilent Bonus RP21.2 x 100mm，5-μm颗粒；流动相A：含20-mM乙酸铵的水；流动相B：乙腈；梯度：0％B保持0-6分钟，经16分钟0％-25％B，然后在100％B停留4分钟；流速：20mL/min。将含所需产物的级分合并，并通过离心干燥，得到实施例5-1(0.8mg)和实施例5-2(0.5mg)。

实施例5-1：HPLC保留时间：2.26min。(柱：Agilent Bonus RP.2.1mm X 50mm，1.8um；流动相A：含20mM乙酸铵的水；流动相B：乙腈。温度：50℃；梯度：0％B停留1min，然后在4min内0％B至100％B，然后在100％B停留0.75min；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm))；所测质量：m/z 704.1；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ9.13(s，1H)，8.51(br d，J＝4.63Hz，1H)，8.40(s，1H)，8.09(m，2H)，7.71(br d，J＝3.62Hz，1H)，7.43(br s，1H)，6.35(br d，J＝14.39Hz，1H)，4.91-5.04(m，1H)，4.78(br d，J＝8.41Hz，1H)，4.36-4.58(m，2H)，4.19-4.36(m，2H)，4.13(br s，1H)，3.87-4.08(m，2H)，3.74(br d，J＝9.68Hz，1H)，3.45(m，1H)。

实施例5-2：HPLC保留时间：2.09min。(柱：Agilent Bonus RP.2.1mm X 50mm，1.8um；流动相A：含20mM乙酸铵的水；流动相B：乙腈。温度：50℃；梯度：0％B停留1min，然后在4min内0％B至100％B，然后在100％B停留0.75min；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm))；所测质量：m/z 703.85；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ9.24(s，1H)，8.35(s，1H)，8.25(d，J＝4.88Hz，1H)，8.21(br s，1H)，8.10s，1H)，7.88-7.92(m，2H)，6.36(br d，J＝14.65Hz，1H)，4.86-5.06(m，1H)，4.73(br d，J＝9.16Hz，1H)，4.42-4.58(m，2H)，4.21-4.37(m，2H)，4.11(br s，1H)，3.98(br d，J＝6.10Hz，2H)，3.69-3.90(m，1H)，3.38(m，1H)。

生物活性的评估

STING THP1报告基因测定方案

THP1-Dual^TM细胞通过两种诱导型报告基因构建物的稳定整合而衍生自人THP-1单核细胞。为此，THP1-Dual^TM细胞通过评估分泌的萤光素酶(Lucia)的活性来监测SEAP和IRF途径的活性，从而可以同时研究NF-κB途径。当使用SEAP检测试剂QUANTI-Blue^T ^M和萤光素酶检测试剂QUANTI-Luc^T ^M时，两种报告蛋白都可以在细胞培养上清液中轻松测量。

THP1-Dual^TM细胞响应STING激动剂而诱导NF-κB的激活。在用STING激动剂(例如cGAMP)刺激后，它们还会触发IRF途径。在这里，THP-1-Dual细胞用于评估STING结合物在细胞水平上的功能。

将化合物在DMSO中的系列稀释液以100nl/孔的量添加到小体积384孔板中，使用ECHO声学分配器(Labcyte，型号550)在细胞悬浮液中达到100μM的最终起始浓度。在用于SEAP分析的小体积384孔黑壁透明底部组织培养板(Corning，目录号3542)并用于萤光素酶分析的小体积固体白色板(Corning，目录号3826)上，在含有10％人血浆的RPMI培养基(Gibco，目录号11875)中，将THP-1 Dual^TMSTING报告细胞(Invivogen，目录号THPD-nfis的双细胞)以每孔10μL的15,000个细胞的浓度添加到具有化合物的板上。保留板的一列用于以100M的cGAMP进行处理用于100％激活计算，并保留一列不进行任何处理(仅DMSO)用于基线激活。然后将平板在5％CO₂的37℃温育箱中温育20小时。

在SEAP测定中，将5 l的2x QuantiBlue(Invivogen，目录号Rep-qb2)添加至384孔装有THP1细胞的黑色板中，并在37℃温育2小时。在Envision(Perkin Elmer)上以620nm波长(OD620)读取板。在萤光素酶测定中，将5 l的Quantiluc(Invivogen，Rep-qlc2)加入装有THP1细胞的白色384孔板中，并在5分钟时在Envision(Perkin Elmer)上使用发光方案(RLU)读取。对于两种细胞系，通过用100M的cGAMP(Invivogen，目录号TLRL-NACGA23-5)刺激的THP-1 Dual STING细胞的值(RLU)确定100％活化。

STING HTRF结合测定

时间分辨的基于FRET的竞争结合测定用于评估测试物与STING WT和STING AQ的结合。将浓度为20nM的带有His标记的STING细胞质结构域(WT或AQ)与2.5nM Tb标记的抗His抗体、测试化合物和荧光素标记的cGAMP类似物探针(BioLog目录号C195)(浓度为200nM(STING WT)或40nM(STING AQ))在含有0.005％Tween-20和0.1％BSA的PBS中孵育1小时。使用EnVision微孔板读数器测量495nm和520nm处的荧光，以定量Tb标记的抗His抗体和荧光素标记的探针之间的FRET。将背景定义为在不存在STING蛋白的情况下获得的信号，并将背景扣除的FRET比标准化为在不存在测试化合物的情况下获得的最大信号。这些值被转换为抑制百分数。确定了11种浓度的测试化合物的抑制百分比。使用4参数对数方程计算IC₅₀以拟合数据，其定义为将探针的特异性结合降低50％所需的竞争测试化合物的浓度。

STING WT：His-TVMV-S-hSTING(155-341)-H232R

STING AQ：His-TVMV-S-hSTING(155-341)-G230A-R293Q

序列表

<110> 百时美施贵宝公司

<120> 作为抗癌剂的环二核苷酸

<130> 13055-WO-PCT

<150> US 62/640,325

<151> 2018-03-08

<160> 2

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 智人

<400> 1

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Arg Phe Gln Gly His Met Ser Val Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile

35 40 45

Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser

50 55 60

Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn

65 70 75 80

Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln

85 90 95

Gln Thr Gly Asp Arg Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser

100 105 110

Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu

115 120 125

Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser

130 135 140

Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe

145 150 155 160

Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn

165 170 175

Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe

180 185 190

Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu

195 200 205

Glu Val

210

<210> 2

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 智人

<400> 2

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Glu Thr Val

1 5 10 15

Arg Phe Gln Gly His Met Ser Val Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr

20 25 30

Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile

35 40 45

Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser

50 55 60

Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn

65 70 75 80

Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln

85 90 95

Gln Thr Ala Asp Arg Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser

100 105 110

Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu

115 120 125

Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser

130 135 140

Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe

145 150 155 160

Cys Gln Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn

165 170 175

Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe

180 185 190

Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu

195 200 205

Glu Val

210

Claims

1.化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物为

2.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疾病和病况的药物中的用途，在所述疾病和病况中显示STING的调节。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其中所述癌症是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、黑素瘤、肾细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、食道癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、泌尿道癌、脑肿瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、肝细胞癌、多发性骨髓瘤、胃肠道间质瘤或间皮瘤。

6.根据权利要求5所述的用途，其中所述癌症是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、黑素瘤、肾细胞癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤或膀胱癌。

7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中使用所述化合物或其药学上可接受的盐与治疗有效量的一种或多种免疫肿瘤药剂联合给药。

8.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗罹患癌症的受试者的药物中的用途，其包括向所述受试者给药治疗有效量的：

a)根据权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，和

b)抗癌剂，其为抗体或其抗原结合部分，可特异性结合程序性死亡-1(PD-1)受体并抑制PD-1活性。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述抗体为纳武单抗或派姆单抗。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述抗体为纳武单抗。