CN111556896A - 交叉免疫抗原疫苗及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种融合多肽，其为诱导针对病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a)和(b)的抗原或其片段且具有低聚化活性：(a)含有在该病毒的亚型间保守的B细胞表位的该病毒的抗原或其片段；和(b)含有在该病毒的亚型间保守的T细胞表位的该病毒的抗原或其片段(在此，(a)和/或(b)的抗原或其片段具有低聚化活性，或者该融合多肽除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外还包含(c)具有低聚化活性的多肽)。

Description

交叉免疫抗原疫苗及其制备方法

技术领域

本发明涉及诱导针对病毒的免疫反应的融合多肽、该融合多肽的多聚体、该融合多肽及其多聚体的药物用途、该多聚体的制备方法等。

背景技术

针对反复发生抗原突变的病毒和存在多个血清型亚型的病毒进行了各种疫苗的开发。例如，在流感病毒的情况下，存在于流感病毒颗粒的包膜上的HA抗原已作为季节性甲型流感病毒HA裂解疫苗上市。流感病毒HA基因在A亚型间发生遗传交换，并且通过碱基序列的突变而产生抗原突变，但突变集中地发生在HA蛋白三维结构的头部。由于HA的头部是主要的中和抗体表位，因此已上市的HA裂解疫苗和病毒灭活疫苗对新的突变株几乎没有效果。另一方面，茎部区的突变少，但免疫原性低，因此未被用作A亚型的疫苗抗原。日本阪大微研的奥野等人在1993年首次报道了能够交叉中和流感病毒A1型株和A2型株的抗茎部抗体被诱导(非专利文献1)。另外，该研究组在1996年报道了在用HA基因的头部区缺失的HA进行了免疫的动物中诱导出能够中和1型和2型的抗茎部抗体(非专利文献2)。之后，在全世界进行了利用茎部抗原的万能疫苗的开发(非专利文献3、4、5、6)。另一方面，单体(monomer)抗原蛋白的免疫原性低，因此HA裂解疫苗的效果低成为弱点。M.F.Bachmann等人分析了免疫原性与抗原结构的关系，并报道了：高度组织化(多聚化、低聚化)的抗原的免疫原性高、还可以进行记忆B细胞的诱导，因此疫苗抗原的组织化很重要(非专利文献7、8、9)。据报道，HA与铁蛋白的融合蛋白利用铁蛋白的低聚化活性而形成多聚体，由此使HA的免疫原性被强化(非专利文献10、11)。由流感病毒HA裂解疫苗和灭活疫苗引起的宿主免疫应答主要是通过诱导针对HA抗原的抗体而对病毒进行中和的体液免疫，但另一方面，破坏感染细胞、抑制病毒感染扩大的另一种免疫应答是细胞免疫。现在市售的流感病毒疫苗几乎不具有细胞免疫诱导能力。据报道，与感染细胞的主要组织相容性抗原I类分子结合而被细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体识别的流感病毒抗原(CTL表位)位于基质(M1)蛋白和核衣壳(NP)蛋白(非专利文献12、13、14)。基质(M1)蛋白和核衣壳(NP)蛋白在A亚型间氨基酸序列是保守的，因此交叉细胞免疫在A亚型间成立。M1蛋白具有聚合物(低聚物)形成能力，并且与NP结合(非专利文献15、16)。甲型流感病毒疫苗的开发状况参考非专利文献17、18。

另一方面，在登革病毒的情况下，有4个血清型亚型D1、D2、D3和D4，若感染一个型而诱导出抗体的患者感染另一个型，则抗体会增强二次感染的病毒增殖，引起重度的登革出血热、登革休克综合征(非专利文献19、20)。因此，单纯的D1、2、3、4的4价灭活或4价病毒颗粒表面蛋白包膜抗原疫苗由于存在风险而未进行开发。

已经报道了针对流感病毒或登革病毒的各种疫苗(专利文献1-8)。

如上所述，预测反复发生抗原突变的病毒或存在多个血清型亚型的病毒的流行是困难的，因此尚未开发出充分有效地覆盖突变体病毒和多个血清型的病毒的疫苗。期望开发出对突变体病毒和大范围的血清型亚型赋予有效的交叉免疫的抗病毒疫苗。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2017-19796号公报

专利文献2：日本特开2017-31225号公报

专利文献3：日本特开2001-46061号公报

专利文献4：日本特开2010-268804号公报

专利文献5：日本特表2013-542224号公报

专利文献6：日本特表2015-524422号公报

专利文献7：日本特开2016-33151号公报

专利文献8：日本特表2017-520252号公报

非专利文献

非专利文献1：Y.Okuno et al,A common neutralizing epitope conservedbetween the hemagglutinins of Influenza A virus H1 and H2 strains J.Virol,67,2552-2558(1993)

非专利文献2：H.Sagawa et al,The immunological activity of a deletionmutant of influenza virus haemagglutinin lacking the globularregion.J.Gen.Virol,77,1483-1487(1996)

非专利文献3：J.Steelet al,Influenza virus vaccine based on conservedhemagglutinin stalk domain.mBio,1,1-9(2010)

非专利文献4：F.Krammer et al,Chimeric hemagglutinin influenza virusVaccine constructs elicit broadly protective stalk-specificantibodies.J.Virol,87,6542-6550(2013)

非专利文献5：V.V.A.Mallajosyula et al,Influenza hemagglutinin stem-fragment immunogen elicites broadly neutralizing antibodies and confersheterologous protection.PNAS,E2514-E2523(2014)

非专利文献6：A.H.Ellebedy et al,Induction of broadly cross-reactiveantibody responses to the influenza HA stem region following H5N1 vaccinationin humans.PNAS,111,13133-13138(2014)

非专利文献7：M.F.Bachmann et al,The influence of antigen organizationon B cell responsiveness.Science,262,1448-1451(1993)

非专利文献8：M.F.Bachmann et al,T helper cell-independent neutralizingB cell response against vesicular stomatitis virus:role of antigen patternsin B cell induction？Eur.J.Immunol,25,3445-3451(1995)

非专利文献9：M.F.Bachmann and R.M.Zinkernagel,Neutralizing antiviral Bcell responses.Ann,Rev.Immunol,15,235-270(1997)

非专利文献10：M.Kanekiyo et al,Self-assembling influenza nanoparticlevaccines elicit broadly neutralizing H1N1 antibodies.Nature,499,102-108(2013)

非专利文献11：H.M.Yassine et al,Hemagglutinin-stem nanoparticlesgenerate heterosubtypic influenza protection.Nature Medicine,onlinepublication,doi:10.1038/nm.3927(2015)

非专利文献12：A.C.Hayward et al,Natural cell-mediated protectionagainst seasonal and pandemic influenza,American J.Respiratory and CriticalCare Medicine,191,1422-1431(2015)

非专利文献13：G.F.Rimmelzwaan,J.H.C.M Kreijtz,R.Bodewes,R.A.M Fouchierand A.D.M.E Osterhaus,Influenza virus CTL epitopes,remarkably conserved andremarkably variable.Vaccine,27,6363-6365(2009)

非专利文献14：C.E.van de Sandt et al,Differential recognition ofinfluenza A virus by M158-66 epitope-specific CD8+T cells is determinant byextraepitopic amino acid residues.J.Virol,90,1009-1022(2016)

非专利文献15：S.L.Noton et al,Identification of the domains of theinfluenza A virus M1 matrix protein required for NP binding,oligomerizationand incorporation into virions.J.Gen.Virol,88,2280-2290(2007)

非专利文献16：K.Zhang et al,Dissection of influenza A virus M1protein:pH-dependent oligomerization of N-terminal domain and dimerization of C-terminal domain.PLOS ONE,7,e37786,1-12(2012)

非专利文献17：S-S Wong and R.J.Webby,Traditional and new influenzavaccines.Clinical Microbiology Reviews 26,476-492(2013)

非专利文献18：A.Y.Egorov.The challenges of creating a universalinfluenza vaccine.MIR J.,5,32-41(2016)

非专利文献19：J.Cockburn et al,Structural insights into theneutralization mechanism of a higher primate antibody against denguevirus.EMBO J,31,767-779(2012)

非专利文献20：H-E.Lin et al,Analysis of epitopes on dengue virusenvelope protein recognized by monoclonal antibodies and polyclonal humansera by a high throughput assay.PLOS Neglected Tropical Diseases,6,e1447,1-12(2012)

非专利文献21：R.de Alwis et al,Identification of human neutralizingantibodies that bind to complex epitopes on dengue virions.PNAS,109,7439-7444(2012)

非专利文献22：O.Vratskikh,et al,Dissection of antibody specificitiesinduced by yellow fever vaccination.PLOS Pathogens,9,e1003458,1-12(2013)

非专利文献23：W.B.Messer,et al,Dengue virus envelope protein domainI/II hinge determines long-lived serotype-specific dengue immunity.PNAS,111,1939-1944(2014)

非专利文献24：L.Dai,et al,Structure of the Zika virus envelope proteinand its complex with a flavivirus broadly protective antibody.Cell Host&Microbe,19,1-9(2016)

非专利文献25：A.Mathew,et al,Elucidating the role of T cells inprotection against and pathogenesis of dengue virus infections.FutureMicrobiol.9,411-425(2014)

非专利文献26：P.S.Lee and I.A.Wilson,Structural characterization ofviral epitopes recognized by broadly cross-reactive antibodies.Curr.Top.Microbiol.Immunol.386,323-341(2015)

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供对突变体病毒和大范围的亚型有效地赋予交叉免疫的抗病毒疫苗。

用于解决问题的方法

本发明人进行了深入研究，结果发现，若将通过将包含含有在亚型间保守的B细胞表位的病毒抗原或其片段(以下有时将“在亚型间保守的B细胞表位”称为“保守B细胞表位”、将“含有在亚型间保守的B细胞表位的抗原”称为“含有保守B细胞表位的抗原”等)以及含有在亚型间保守的T细胞表位的抗原或其片段(以下有时将“在亚型间保守的T细胞表位”称为“保守T细胞表位”、将“含有在亚型间保守的T细胞表位的抗原”称为“含有保守T细胞表位的抗原”等)、且具有低聚化活性的融合多肽低聚化而得到的融合多肽多聚体作为疫苗给药于哺乳动物，则可对大范围的亚型的病毒有效地诱导体液免疫反应(抗体产生)和细胞免疫反应(细胞毒性T细胞增殖)。

流感病毒中，在HA的茎部区内包含在亚型间高度保守的诱导中和抗体的B细胞表位，因此可将HA或包含该保守B细胞表位的HA的片段(例如：由HA的茎部区构成的片段、使高频率地发生突变的“头部区”从HA缺失而得到的头部区缺失HA、由该保守B细胞表位构成的片段)用作含有保守B细胞表位的抗原或其片段。另外，在基质蛋白1(M1)内包含在亚型间高度保守的细胞毒性T细胞表位，因此可将M1或包含该保守T细胞表位的M1的片段(例如：由该保守T细胞表位构成的片段)用作含有保守T细胞表位的抗原。M1具有低聚化活性，因此，通过使用具有低聚化活性的M1或其片段作为含有在亚型间保守的T细胞表位的抗原或其片段，可使融合多肽具有低聚化活性，利用该低聚化活性容易地形成多聚体。另外，在核衣壳蛋白(NP)内也包含在亚型间高度保守的细胞毒性T细胞表位，因此可将NP或包含该保守T细胞表位的NP的片段(例如：由该保守T细胞表位构成的片段)用作含有保守T细胞表位的抗原或其片段。NP能够与M1缔合，因此可以将NP整合到融合蛋白内，使其与融合蛋白内的M1抗原残基缔合。

登革病毒中，在E蛋白的DI和DII结构域内包含在亚型间高度保守的诱导中和抗体的B细胞表位，因此可将E蛋白或包含DI和DII结构域的E蛋白片段(例如由DI和DII结构域构成的片段)用作含有保守B细胞表位的抗原或其片段。此外，在登革病毒N3内包含在亚型间高度保守的细胞毒性T细胞表位，因此可将N3或包含该保守T细胞表位的N3的片段(例如：由该保守T细胞表位构成的片段)用作含有保守CTL表位的抗原残基(非专利文献25)。通过将基质蛋白(M1)等具有低聚化活性的多肽整合到融合多肽内，融合多肽发挥出低聚化活性，容易地形成多聚体。

本发明人基于上述发现进一步进行了研究，从而完成了本发明。

即，本发明如下所述。

[1]一种融合多肽，其为诱导针对病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a)和(b)的抗原或其片段且具有低聚化活性：

(a)含有在该病毒的亚型间保守的B细胞表位的该病毒的抗原或其片段；和

(b)含有在该病毒的亚型间保守的T细胞表位的该病毒的抗原或其片段。

(在此，(a)和/或(b)的抗原或其片段具有低聚化活性，或者该融合多肽除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外还包含(c)具有低聚化活性的多肽)

[2]如[1]所述的融合多肽，其中，病毒为甲型流感病毒。

[3]如[2]所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为血凝素或其片段。

[4]如[3]所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为头部缺失血凝素。

[5]如[3]或[4]所述的融合多肽，其中，包含由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln310～Asp 390构成的部分序列。

[6]如[2]～[5]中任一项所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段为基质蛋白1或其片段。

[7]如[6]所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段具有低聚化活性。

[8]如[6]或[7]所述的融合多肽，其中，该T细胞表位包含序列号3所表示的氨基酸序列。

[9]一种复合物，其包含[6]～[8]中任一项所述的融合多肽和核衣壳。

[10]如[1]所述的融合多肽，其中，病毒为登革病毒。

[11]如[10]所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为E蛋白或其片段。

[12]如[11]所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段包含E蛋白的DI和DII结构域。

[13]如[10]～[12]中任一项所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段为NS3或其片段。

[14]如[10]～[13]中任一项所述的融合多肽，其中，除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外，还包含具有低聚化活性的基质蛋白1或其片段。

[15]一种融合多肽或复合物的多聚体，其通过使[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽或[9]所述的复合物低聚化而形成。

[16]一种药物组合物，其包含[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽、[9]所述的复合物或[15]所述的多聚体。

[17]如[16]所述的药物组合物，其用于诱导针对该病毒的免疫反应。

[18]如[16]所述的药物组合物，其用于该病毒的感染性疾病的预防或治疗。

[19]一种在哺乳动物中诱导针对病毒的免疫反应的方法，其包括：对该哺乳动物给药有效量的[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽、[9]所述的复合物或[15]所述的多聚体。

[20]一种哺乳动物中的病毒的感染性疾病的预防或治疗方法，其包括：对该哺乳动物给药有效量的[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽、[9]所述的复合物或[15]所述的多聚体。

[21]如[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽、[9]所述的复合物或[15]所述的多聚体，其用于在针对该病毒的免疫反应的诱导中使用。

[22]如[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽、[9]所述的复合物或[15]所述的多聚体，其用于在该病毒的感染性疾病的预防或治疗中使用。

[23]一种用于诱导针对病毒的免疫反应、或者用于该病毒的预防或治疗的药物组合物的制备方法，其包括：将[1]～[8]和[10]～[14]中任一项所述的融合多肽或[9]所述的复合物低聚化而得到该融合多肽或该复合物的多聚体。

发明效果

根据本发明，提供对突变体病毒和大范围的亚型赋予有效的交叉免疫的抗病毒疫苗。根据本发明，可以期待提供对包括季节性流感病毒和预测的高病原性大流行流感病毒在内的大范围的A亚型流感病毒交叉有效的疫苗。

附图说明

图1示出甲型流感病毒疫苗抗原融合多肽(HA-M1融合多肽、缔合有NP的HA-MI融合多肽)的示意图。

图2示出甲型流感病毒密歇根株(H1N1)的HA抗原、M1抗原和NP抗原的氨基酸序列。

图3示出甲型流感病毒疫苗抗原融合多肽(HA-M1融合多肽、头部缺失HA-M1融合多肽)的氨基酸序列的示例。

图4示出在小麦无细胞系统中表达的甲型流感病毒疫苗抗原融合多肽(头部缺失HA-M1融合蛋白(+GS接头+6×His标签))的SDS-PAGE(A)和非变性PAGE(B)的结果。

图5是示出从接种了HA-M1抗原的小鼠的淋巴结采集细胞，添加HA-M1抗原(0(对照)、25、50或100μg/ml)并培养92小时后，进行上清的细胞因子(IL-10和IFN-γ)的定量的结果的图。

图6是示出从接种了HA-M1抗原的小鼠的淋巴结采集细胞，添加HA-M1抗原(0(对照)、25、50或100μg/ml)并培养92小时后，对细胞数进行计数的结果的图。

图7示出使用本发明的抗原蛋白进行了免疫的小鼠对流感病毒获得了抵抗性、从而存活率提高的图。

具体实施方式

1.多肽

本发明提供一种融合多肽，其为诱导针对病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a)和(b)的抗原或其片段且具有低聚化活性：

(a)含有在该病毒的亚型间保守的B细胞表位的该病毒的抗原或其片段；和

(b)含有在该病毒的亚型间保守的T细胞表位的该病毒的抗原或其片段。

(在此，(a)和/或(b)的抗原或其片段具有低聚化活性，或者该融合多肽除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外还包含(c)具有低聚化活性的多肽)

作为能够应用本发明的病毒，可以例示属于正黏液病毒科(Orthomyxoviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、腺病毒科(Adenoviridae)、乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)、多瘤病毒科(Polyomaviridae)、痘病毒科(Poxviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)、冠状病毒科(Coronaviridae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae)、星状病毒科(Astroviridae)、副黏液病毒科(Paramyxoviridae)、弹状病毒科(Rhabdoviridae)、丝状病毒科(Filoviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)等的病毒，但不限定于这些。应用本发明的病毒优选为属于正黏液病毒科的病毒或属于黄病毒科的病毒。作为属于正黏液病毒科的病毒，可以列举流感病毒(甲型、乙型、丙型)等，但不限定于这些，优选为甲型流感病毒。作为黄病毒科的病毒，可以列举登革病毒、乙型脑炎病毒、黄热病病毒、西尼罗热病毒等，但不限定于这些，优选为登革病毒。在优选的方式中，应用本发明的病毒为甲型流感病毒或登革病毒。

针对病毒的体液免疫反应是指针对病毒的抗体产生的诱导。该抗体可以是中和抗体。中和抗体与病毒抗原结合，抑制该病毒的感染、增殖，或者促进该病毒向生物体外的排除。针对病毒的细胞免疫反应是指杀伤病毒感染细胞的细胞毒性T细胞(CTL)的增殖。细胞毒性T细胞通过T细胞受体识别由主要组织相容性抗原I类分子提呈的来源于病毒抗原的肽，破坏被提呈了该肽的病毒感染细胞，由此抑制病毒感染扩大。本发明的融合多肽通过包含(a)含有在病毒的亚型间保守的B细胞表位的该病毒的抗原或其片段(含有保守B细胞表位的抗原或其片段)、和(b)含有在病毒的亚型间保守的T细胞表位的该病毒的抗原或其片段(含有保守T细胞表位的抗原或其片段)，具有诱导针对该病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的活性。

本发明中，B细胞表位是指在感染了病毒的宿主哺乳动物中被诱导的针对病毒抗原的抗体(优选中和抗体)所识别并结合的该病毒抗原的特定的结构单元。本发明中，使用在病毒的亚型间保守的B细胞表位。即，本发明中使用的B细胞表位在特定病毒的至少2个(例如3个以上、4个以上、5个以上、6个以上、7个以上、8个以上)的亚型中氨基酸序列或三维结构是保守的(即相同)，不包含突变。通过使用这样保守的B细胞表位，能够对反复发生抗原突变的病毒或存在多个血清型亚型的病毒交叉地诱导体液免疫反应(抗体产生)。已对各病毒中含有在亚型间保守的B细胞表位的各种病毒抗原进行了研究，可以在本发明中使用。例如，在甲型流感病毒中，可以使用血凝素(HA)作为含有在亚型间保守的B细胞表位的病毒抗原。另外，在登革病毒中，可以使用包膜蛋白(E蛋白)作为含有在亚型间保守的B细胞表位的病毒抗原。

甲型流感病毒的HA基因中，在亚型间发生遗传交换，通过碱基序列的突变产生抗原突变，但该突变集中在HA的三维结构的头部。另一方面，茎部区的突变少，在亚型间氨基酸序列是保守的，关于针对A亚型HA茎部区的共有的表位，认为包含膜融合结构域的三维结构为表位(非专利文献26)。据报道，该茎部区内的三维结构表位在流感病毒A亚型间是保守的，诱导能够在亚型间交叉中和的抗体(非专利文献26)。甲型流感病毒的HA在系统发生学上可以分类为群1(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18)和群2(H3、H4、H7、H10、H14和H15)，茎部区内的三维结构表位在该各群内良好地保守(非专利文献26)。

将甲型流感病毒的HA的氨基酸序列的一例(HA密歇根株(H1N1))示于图2和序列号1。

序列号1的Met 1～Ala 17为信号肽区。

序列号1的Asp 18～Arg 344为H1区。

序列号1的Gly 76～Gln 308为H1区中的头部区。

序列号1的Gly 345～Tyr 528为H2区。

序列号1的Gly 345～Val 399为H2区中的膜融合区。

序列号1的Gln 529～Met 554为跨膜区。

序列号1的Cys 555～Ile 566为胞质区。

从序列号1中除去信号肽区(Met 1～Ala 17)后的序列相当于成熟型的甲型流感病毒的HA的氨基酸序列。

甲型流感病毒的HA的氨基酸序列可能因突变而在亚型间、株间有所不同，但即使是具有与序列号1不同的氨基酸序列的甲型流感病毒HA，本领域技术人员也可以基于上述记载通过进行与序列号1的比对而分别容易地确定：

信号肽区为与序列号1的Met 1～Ala 17相当的区域，

H1区为与序列号1的Asp 18～Arg 344相当的区域，

头部区为与序列号1的Gly 76～Gln 308相当的区域，

H2区为与序列号1的Gly 345～Tyr 528相当的区域，

膜融合区为与序列号1的Gly 345～Val 399相当的区域，

跨膜区为与序列号1的Gln 529～Met 554相当的区域，

胞质区为与序列号1的Cys 555～Ile 566相当的区域。

序列号1的Gln 310～Asp 390为茎部区。在流感病毒A1型株与A3型株之间、或者具有群1的HA(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18)中的任意一者的流感病毒A亚型间保守的三维结构B细胞表位位于序列号1的Gln 310～Asp 390(茎部区)内。即使是具有与序列号1不同的氨基酸序列的甲型流感病毒HA，本领域技术人员也可以基于上述记载通过进行与序列号1的比对而容易地确定茎部区为与序列号1的Gln 310～Asp 390相当的区域。

若存在在亚型间保守的B细胞表位，则能够对该亚型的病毒交叉地诱导体液免疫反应(抗体产生)，因此，本发明中可以使用含有在甲型流感病毒的亚型间保守的B细胞表位(例如茎部区内的三维结构表位)的HA的片段。在使用含有茎部区内的三维结构表位的甲型流感病毒HA的片段的情况下，该片段的长度只要可诱导对茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗体则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。作为含有茎部区内的三维结构表位的HA的片段，可以列举包含序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390的、由序列号1所表示的氨基酸序列的部分序列构成的多肽。该部分序列的长度只要可诱导对茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗体则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下或80个氨基酸以下。由甲型流感病毒的HA的茎部区构成的多肽(例如由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln310～Asp 390构成的多肽)也可以在本发明中使用。如上所述，流感病毒的HA基因的突变集中在头部区，因此，在优选的方式中，含有在甲型流感病毒的亚型间保守的B细胞表位(例如茎部区内的三维结构表位)的HA的片段不包含该头部区的全部或一部分。作为含有在甲型流感病毒的亚型间保守的B细胞表位(例如茎部区内的三维结构表位)而不含有头部区的全部或一部分的HA的片段，可以列举由茎部区构成的多肽。从HA的全长中使头部区缺失而得到的头部缺失HA、以及含有茎部区内的三维结构表位的其片段也可以作为适合的HA片段在本发明中使用。将头部缺失HA的氨基酸序列的示例示于序列号2。从序列号2中除去信号肽区(Met 1～Ala 17)后的序列相当于成熟型的甲型流感病毒的头部缺失HA的氨基酸序列。

登革病毒中，在E蛋白的DI和DII结构域内包含在亚型间高度保守的诱导中和抗体的B细胞表位，因此，可以将E蛋白或包含DI和DII结构域的E蛋白片段(例如由DI和DII结构域构成的片段)用作含有在亚型间保守的B细胞表位的病毒抗原或其片段(非专利文献21、22、23、24)。

含有保守B细胞表位的抗原或其片段的大小没有特别限定，通常为2000个氨基酸以下(例如1000个氨基酸以下、750个氨基酸以下、600个氨基酸以下、500个氨基酸以下、400个氨基酸以下或300个氨基酸以下)。

本发明中，T细胞表位是指在感染了病毒的宿主哺乳动物中被诱导的细胞毒性T细胞表面的T细胞受体所识别并结合的病毒抗原的特定的结构单元。细胞毒性T细胞通过T细胞受体识别由主要组织相容性抗原I类分子提呈的包含T细胞表位的肽(或者由T细胞表位构成的肽)，破坏被提呈了该肽的病毒感染细胞。本发明中，使用在病毒的亚型间保守的T细胞表位。即，本发明中使用的T细胞表位在特定病毒的至少2个(例如3个以上、4个以上、5个以上、6个以上、7个以上、8个以上)的亚型中氨基酸序列是保守的(即相同)，不包含突变。通过使用这样保守的T细胞表位，能够对反复发生抗原突变的病毒或存在多个血清型亚型的病毒交叉地诱导细胞免疫反应(CTL增殖)。已对各病毒中含有在亚型间保守的T细胞表位的各种病毒抗原进行了研究，可以在本发明中使用。例如，在甲型流感病毒中，可以使用基质蛋白1(M1)或核衣壳(NP)作为含有在亚型间保守的T细胞表位的病毒抗原。另外，在登革病毒中，可以使用NS3作为含有在亚型间保守的T细胞表位的病毒抗原。

据报道，与感染细胞的主要组织相容性抗原I类分子结合并被细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体识别的T细胞表位存在于甲型流感病毒的M1和NP中(非专利文献12、13、14)。M1和NP在甲型流感病毒的亚型间氨基酸序列是保守的，因此交叉细胞免疫在亚型间成立。将甲型流感病毒的M1和NP的代表性的氨基酸序列分别示于图2、序列号4和序列号6。甲型流感病毒H1N1和H3N2的M1的保守T细胞表位的序列例如为gilgfvftl(序列号3)，位于M1的全长氨基酸序列(序列号4)的58-66位(非专利文献14)。甲型流感病毒H1N2和H3N2的NP的保守T细胞表位的序列例如为srywairtr(序列号5)，位于NP的全长氨基酸序列(序列号6)的383-391位(非专利文献13)。但是，作为人的抗原提呈分子的主要组织相容性抗原HLA的基因型是多样的，因此，与HLA结合的T细胞表位肽序列也不限定于上述序列。

若存在在亚型间保守的T细胞表位，则能够对该亚型的病毒交叉地诱导细胞免疫反应(CTL增殖)，因此，本发明中可以使用含有甲型流感病毒的保守T细胞表位的M1或NP的片段。作为含有保守T细胞表位的M1的片段，可以列举包含序列号3所表示的氨基酸序列的、由序列号4所表示的氨基酸序列的部分序列构成的多肽。该部分序列的长度只要可诱导对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。由序列号3所表示的氨基酸序列构成的多肽也可以作为含有保守T细胞表位的M1的片段在本发明中使用。

作为含有保守T细胞表位的NP的片段，可以列举包含序列号5所表示的氨基酸序列的、由序列号6所表示的氨基酸序列的部分序列构成的多肽。该部分序列的长度只要可诱导对由序列号5所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。由序列号5所表示的氨基酸序列构成的多肽也可以作为含有保守T细胞表位的NP的片段在本发明中使用。

登革病毒中，在N3内包含在亚型间保守的T细胞表位，因此可以将N3或包含该保守T细胞表位的N3片段用作含有在亚型间保守的T细胞表位的病毒抗原或其片段。

含有保守T细胞表位的抗原或其片段的大小没有特别限定，通常为2000个氨基酸以下(例如1000个氨基酸以下、750个氨基酸以下、600个氨基酸以下、500个氨基酸以下、400个氨基酸以下或300个氨基酸以下)。

本发明的融合多肽具有低聚化活性。本发明中，低聚化活性是指相同分子彼此以非共价键缔合而形成低聚物的活性。即是指，本发明的融合多肽的相同分子彼此缔合而形成低聚物的活性。该低聚物的大小(构成1个低聚物的单体的数量)通常为2～50聚体、优选为8～25聚体，但没有特别限定。

M1通常形成2～20聚体，因此，在使用M1作为含有保守T细胞表位的抗原的情况下，低聚物的大小通常可以为2～20聚体、优选可以为8～20聚体。HA在天然状态下形成3聚体，因此，在使用HA作为含有保守B细胞表位的抗原的情况下，低聚物的大小通常为3的倍数、例如3～21聚体、优选9～21聚体。

在一个方式中，通过使上述(a)含有保守B细胞表位的抗原或其片段、和/或(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段具有低聚化活性，本发明的融合多肽自身具有低聚化活性。例如，甲型流感病毒的M1具有低聚化活性。如上所述使用M1或其片段作为(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段的情况下，通过使其具有低聚化活性，本发明的融合多肽自身也具有低聚化活性。已知甲型流感病毒的M1的低聚化活性区域主要存在于序列号4的87-165位的区域(低聚化区)(序列号7)(非专利文献15)，因此，在使用M1的片段作为含有保守T细胞表位的抗原的片段的情况下，该片段优选在包含保守T细胞表位(序列号3)的基础上还包含低聚化区(序列号7)。本发明的融合多肽通过进行低聚化，与单体的情况相比，可以期待具有高免疫原性。

在一个方式中，本发明的融合多肽通过在包含(a)含有保守B细胞表位的抗原或其片段、以及(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段的基础上还包含(c)具有低聚化活性的多肽，使本发明的融合多肽自身具有低聚化活性。本方式作为在(a)含有保守B细胞表位的抗原或其片段、和/或(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段不具有低聚化活性的情况下对本发明的融合多肽赋予低聚化活性的方法论是有用的。作为具有低聚化活性的多肽，可以列举甲型流感病毒的M1或具有低聚化活性的其片段、铁蛋白、热休克蛋白、补体蛋白家族、凝集素蛋白家族、肌动蛋白等，但不限定于这些。

具有低聚化活性的多肽的大小没有特别限定，通常为2000个氨基酸以下(例如，1000个氨基酸以下、750个氨基酸以下、600个氨基酸以下、500个氨基酸以下、400个氨基酸以下或300个氨基酸以下)。

本发明的融合多肽中，(a)含有保守B细胞表位的抗原或其片段、和(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段中的任意一者可以位于N末端侧。即，(a)和(b)的部位可以从N末端侧向C末端侧按照(a)→(b)和(b)→(a)中的任意一种顺序进行定位。

在本发明的融合多肽包含(c)具有低聚化活性的多肽的情况下，(a)含有保守B细胞表位的抗原或其片段、(b)含有保守T细胞表位的抗原或其片段、和(c)具有低聚化活性的多肽排列的顺序没有特别限定。即，(a)、(b)和(c)的部位可以从N末端侧向C末端侧按照(a)→(b)→(c)、(a)→(c)→(b)、(b)→(a)→(c)、(b)→(c)→(a)、(c)→(a)→(b)和(c)→(b)→(a)中的任意一种顺序进行定位。

(a)和(b)(以及任选的(c))的部位彼此可以通过结合键直接连接，也可以借助接头多肽进行连接。从避免因空间位阻而无法接近表位的情况的观点出发，优选(a)和(b)(以及任选的(c))的部位彼此借助接头多肽进行连接。关于接头多肽的长度，只要本发明的融合多肽可诱导针对目标病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应则没有特别限定，但长度过长时，产生由接头多肽引起的不必要的免疫诱导的风险升高。因此，接头多肽的长度通常设定为1～100个氨基酸、优选设定为1～50个氨基酸、更优选设定为1～25个氨基酸、进一步优选设定为1～15个氨基酸。作为接头多肽的示例，可以列举甘氨酸或丝氨酸等以肽键构成的不具有二级结构的柔性肽多个串联连接而成的接头肽、例如(GlyGlyGlyGlySer)n，但不限定于这些。

本发明的融合多肽可以在(a)和(b)(以及任选的(c))的部位中位于最靠N末端侧的部位的更靠N末端侧、以及/或者(a)和(b)(以及任选的(c))的部位中位于最靠C末端侧的部位的更靠C末端侧具有附加序列。关于该附加序列的长度，只要本发明的融合多肽可诱导针对目标病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应则没有特别限定，但长度过长时，产生由附加序列引起的不必要的免疫诱导的风险升高。因此，附加序列的长度通常为1～100个氨基酸、优选为1～50个氨基酸、更优选为1～25个氨基酸、进一步优选为1～15个氨基酸。

在一个方式中，该附加序列可以是用于容易地进行本发明的融合多肽的纯化或检测的标签序列。作为标签序列的种类，没有特别限定，可以列举例如FLAG(Hopp,T.P.etal.,BioTechnology(1988)6,1204-1210)、由6～10个His(组氨酸)残基构成的6×His～10×His、人c-myc的片段、α-微管蛋白的片段、B-标签、蛋白C的片段、GST(谷胱甘肽-S-转移酶)、β-半乳糖苷酶、MBP(麦芽糖结合蛋白)等。

在一个方式中，本发明的融合多肽在(a)和(b)(以及任选的(c))的部位中位于最靠N末端侧的部位的更靠N末端侧、以及/或者在(a)和(b)(以及任选的(c))的部位中位于最靠C末端侧的部位的更靠C末端侧不具有附加序列。

关于本发明的融合多肽的长度，只要可诱导针对目标病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应则没有特别限定，通常为10000个氨基酸以下(例如，8000个氨基酸以下、6000个氨基酸以下、4000个氨基酸以下、2000个氨基酸以下或1000个氨基酸以下)。

本发明的融合多肽可以通过使用公知的重组蛋白质产生方法来制造。

另外，本发明还提供上述本发明的融合多肽的低聚物。由于本发明的融合多肽具有低聚化活性，因此，本发明的融合多肽在水溶液中以非共价键缔合而形成低聚物。本发明的低聚物的大小(构成1个低聚物的单体(本发明的融合多肽)的数量)通常为2～50聚体、优选为8～20聚体，但没有特别限定。M1通常形成2～20聚体，因此，在使用M1作为含有保守T细胞表位的抗原的情况下，低聚物的大小通常可以为2～20聚体、优选可以为8～20聚体。HA在天然状态下形成3聚体，因此，在使用HA作为含有保守B细胞表位的抗原的情况下，低聚物的大小通常为3的倍数、例如3～21聚体、优选9～21聚体。本发明的低聚物与本发明的融合多肽的单体相比，可以期待具有高免疫原性。

在一个优选方式中，本发明提供一种融合多肽，其为诱导针对甲型流感病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a1)和(b1)的抗原或其片段且具有低聚化活性：

(a1)含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区的甲型流感病毒HA或其片段；和

(b1)含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的甲型流感病毒M1或其片段。

(在此，(b1)的甲型流感病毒M1或其片段具有低聚化活性)

该融合多肽能够针对具有含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp390构成的茎部区内的三维结构表位的HA和含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的M1的甲型流感病毒诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。该甲型流感病毒可以为A1型和A3型。该融合多肽诱导对由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp390构成的茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗甲型流感病毒HA抗体、以及对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL。

(a1)中，在使用含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位的甲型流感病毒HA的片段的情况下，该片段的长度只要可诱导对由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗体则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。作为该片段，可以列举包含由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区的、由序列号1所表示的氨基酸序列的部分序列构成的多肽。该部分序列的长度只要可诱导对由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln310～Asp390构成的茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗体则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp390构成的多肽也可以作为HA片段在本发明中使用。作为适合的HA片段，可以列举从HA的全长中使信号肽和头部区缺失而得到的头部缺失HA、和含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位的其片段。将头部缺失HA的氨基酸序列的示例示于序列号2。

(b1)中，在使用含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的甲型流感病毒M1的片段的情况下，该片段的长度只要可诱导对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。作为该片段，可以列举包含序列号3所表示的氨基酸序列的、由序列号4所表示的氨基酸序列的部分序列构成的多肽。该部分序列的长度只要可诱导对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL则没有特别限定，例如为500个氨基酸以下、400个氨基酸以下、300个氨基酸以下、200个氨基酸以下、100个氨基酸以下、90个氨基酸以下、80个氨基酸以下、70个氨基酸以下、60个氨基酸以下、50个氨基酸以下、40个氨基酸以下、30个氨基酸以下、20个氨基酸以下、15个氨基酸以下或10个氨基酸以下。由序列号3所表示的氨基酸序列构成的多肽也可以作为含有保守T细胞表位的M1的片段在本发明中使用。

(b1)的甲型流感病毒M1或其片段通过包含M1的低聚化区(序列号7)而具有低聚化活性。

本方式的融合多肽中，(a1)和(b1)的部位中的任意一者可以位于N末端侧。即，(a1)和(b1)的部位可以从N末端侧向C末端侧按照(a1)→(b1)和(b1)→(a1)中的任意一种顺序进行定位。

(a1)和(b1)的部位可以通过结合键直接连接，也可以借助接头多肽进行连接。从避免因空间位阻而无法接近表位的情况的观点出发，优选(a1)和(b1)的部位彼此借助接头多肽进行连接。接头多肽的长度通常为1～100个氨基酸、优选为1～50个氨基酸、更优选为1～25个氨基酸、进一步优选为1～15个氨基酸。

本方式的融合多肽可以在(a1)和(b1)的部位中位于最靠N末端侧的部位的更靠N末端侧、以及/或者(a1)和(b1)的部位中位于最靠C末端侧的部位的更靠C末端侧具有附加序列。附加序列的长度通常为1～100个氨基酸、优选为1～50个氨基酸、更优选为1～25个氨基酸、进一步优选为1～15个氨基酸。该附加序列可以是用于容易地进行本发明的融合多肽的纯化或检测的标签序列。

在一个方式中，本方式的融合多肽在(a1)和(b1)的部位中位于最靠N末端侧的部位的更靠N末端侧、以及/或者(a1)和(b1)的部位中位于最靠C末端侧的部位的更靠C末端侧不具有附加序列。

关于本方式的融合多肽的长度，只要可诱导针对甲型流感病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应则没有特别限定，通常为10000个氨基酸以下(例如，8000个氨基酸以下、6000个氨基酸以下、4000个氨基酸以下、2000个氨基酸以下或1000个氨基酸以下)。

将本方式的融合多肽的具体例示于图3。图3的上段(序列号8)为成熟型的流感病毒HA与M1的融合多肽的氨基酸序列的一例。图3的下段(序列号9)为成熟型的头部缺失流感病毒HA与M1的融合多肽的氨基酸序列的一例。

甲型流感病毒的核衣壳蛋白(NP)在中性pH下与M1缔合。因此，通过将本方式的融合多肽和甲型流感病毒NP在中性pH下进行混合，形成本方式的融合多肽与NP的复合物。NP与M1以1:1的比例缔合，因此，混合摩尔比(融合多肽:NP)通常为1:0.5～2、优选为1:1。本发明还提供这样的复合物。本发明的复合物在包含(a1)含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位的甲型流感病毒HA或其片段、和(b1)含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的甲型流感病毒M1或其片段的基础上还包含NP。如上所述，在NP内包含在甲型流感病毒的亚型间保守的T细胞表位，因此，可以期待本发明的复合物针对甲型流感病毒更强地诱导体液免疫反应和细胞免疫反应。该甲型流感病毒可以为A1型(例如H1N1)和A3型(例如H3N2)。本发明的复合物诱导对由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗甲型流感病毒HA抗体、对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL、以及对NP内的T细胞表位进行识别的CTL。

另外，本发明提供上述本方式的融合多肽或复合物的低聚物(图1)。本方式的融合多肽通过包含M1或其片段而具有低聚化活性，因此，本方式的融合多肽在水溶液中以非共价键缔合而形成低聚物。HA在天然状态下也形成三聚体，因此，通过与M1的低聚化活性的协同效果，可以期待本方式的融合多肽容易地进行低聚化。在将上述复合物低聚化时，首先，将本方式的融合多肽低聚化而得到该融合多肽的低聚物。然后，在中性pH(例如pH6.5～7.5)下将本方式的融合多肽的低聚物与NP混合，使NP与该融合多肽内的M1或其片段缔合，由此形成复合物，结果得到上述复合物的低聚物(图1)。混合摩尔比(融合多肽:NP)通常为1:0.5～2、优选为1:1。本方式的低聚物的大小(构成1个低聚物的单体(本方式的融合多肽或复合物)的数量)通常为3～21聚体、优选为9～21聚体，但没有特别限定。本方式的低聚物与本方式的融合多肽或复合物的单体相比，可以期待具有高免疫原性。

2.药物组合物

本发明提供包含上述本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物的药物组合物。本发明的药物组合物可以通过按照常规方法将上述的融合多肽、复合物或它们的低聚物制剂化而得到。本发明的药物组合物包含本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物以及药物上可接受的载体。

作为药物上可接受的载体，可以列举例如蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙、碳酸钙等赋形剂、纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉等粘结剂、淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、淀粉甘醇酸钠、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙等崩解剂、硬脂酸镁、AEROSIL(气相二氧化硅)、滑石、十二烷基硫酸钠等润滑剂、柠檬酸、薄荷醇、甘草酸铵盐、甘氨酸、橘粉等芳香剂、苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等防腐剂、柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸等稳定剂、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、硬脂酸铝等助悬剂、表面活性剂等分散剂、水、生理盐水等稀释剂、可可脂、聚乙二醇、精制煤油等底蜡等，但不限定于这些。

为了增强本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物的免疫反应诱导效果，本发明的药物组合物可以进一步含有佐剂。作为佐剂，可以列举氢氧化铝、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、百日咳菌佐剂、多聚(I:C)、CpG-DNA等，但不限定于这些。

这样的药物组合物以适合于经口或非经口给药(优选非经口给药)的剂型提供。

作为用于非经口给药的组合物，例如使用注射剂、栓剂等，注射剂可以包含静脉注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、肌肉注射剂、点滴注射剂等剂型。这样的注射剂可以按照公知的方法来制备。作为注射剂的制备方法，例如，可以通过将上述本发明的寡脱氧核苷酸或复合物溶解或悬浮于通常用于注射剂的无菌的水性溶剂中来制备。作为注射用的水性溶剂，可以使用例如：蒸馏水；生理盐水；磷酸缓冲液、碳酸缓冲液、Tris缓冲液、乙酸缓冲液等缓冲液等。这样的水性溶剂的pH可以列举5～10，优选为6～8。所制备的注射液优选填充到适当的安瓿瓶中。

另外，也可以通过对本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物的溶液或悬浮液进行真空干燥、冷冻干燥等处理而制备本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物的粉末制剂。可以将本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物以粉末状态保存，在使用时通过将该粉末用注射用的水性溶剂进行分散而供于使用。

药物组合物中的本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物的含量通常为药物组合物整体的约0.1重量％～约100重量％、优选为约1重量％～约99重量％、进一步优选为约10重量％～约90重量％左右。

3.药物用途

本发明的融合多肽、复合物或它们的低聚物诱导针对病毒的免疫反应(体液免疫反应和细胞免疫反应)，预防或治疗该病毒的感染性疾病。通过将本发明的融合多肽、复合物、它们的低聚物或药物组合物给药于哺乳动物(人等灵长类、小鼠等啮齿类等)，能够在该哺乳动物中诱导针对该病毒的免疫反应(体液免疫反应和细胞免疫反应)，预防或治疗该病毒的感染性疾病。本发明的融合多肽通过包含含有在病毒的亚型间保守的B细胞表位的抗原或其片段和含有在该病毒的亚型间保守的T细胞表位抗原或其片段，可诱导对突变体病毒和大范围的亚型具有有效的交叉反应性的体液免疫反应(抗体(优选中和抗体)产生)和细胞免疫反应(CTL增殖)，因此，可以作为对各种亚型的病毒交叉有效的疫苗来预防或治疗该病毒的感染性疾病。

例如，通过将本发明的融合多肽、复合物、它们的低聚物或药物组合物给药于该病毒的感染性疾病的患者、或有可能感染该病毒的哺乳动物(人等灵长类、小鼠等啮齿类等)，在接受该给药的对象中诱导针对该病毒的体液免疫反应和细胞免疫、即诱导该哺乳动物的防御免疫反应，由此能够预防或治疗该病毒的感染性疾病。通过将本发明的融合多肽、复合物、它们的低聚物或药物组合物给药于有可能感染该病毒的哺乳动物(人等灵长类、小鼠等啮齿类等)，在接受该给药的对象中诱导针对该病毒的体液免疫反应和细胞免疫、即诱导该哺乳动物的防御免疫反应，由此能够降低感染该病毒的风险。

例如，通过将下述物质给药于甲型流感病毒感染性疾病的患者、或有可能感染甲型流感病毒的哺乳动物(人等灵长类、小鼠等啮齿类等)，能够在该哺乳动物中诱导针对甲型流感病毒的免疫反应(体液免疫反应和细胞免疫反应)，预防或治疗甲型流感病毒的感染性疾病，所述物质为：一种融合多肽，其为诱导针对甲型流感病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a1)和(b1)的抗原或其片段且具有低聚化活性：(a1)含有由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位的甲型流感病毒HA或其片段、和(b1)含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的甲型流感病毒M1或其片段(在此，(b1)的甲型流感病毒M1或其片段具有低聚化活性)；该融合多肽与甲型流感病毒NP的复合物；该融合多肽或复合物的低聚物；或者包含该融合多肽、该复合物或该低聚物的药物组合物。更详细而言，通过诱导针对具有含有由序列号1所表示的氨基酸序列构成的B细胞表位的HA和含有由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位的M1的甲型流感病毒(例如流感病毒A1型(例如H1N1)和A3型(例如H3N2))的体液免疫反应和细胞免疫反应(对由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln 310～Asp 390构成的茎部区内的三维结构表位进行识别并结合的抗甲型流感病毒HA抗体产生、和对由序列号3所表示的氨基酸序列构成的T细胞表位进行识别的CTL的增殖)，能够预防或治疗该甲型流感病毒的感染性疾病。通过将包含该融合多肽、该复合物或该低聚物的药物组合物给药于有可能感染甲型流感病毒的哺乳动物(人等灵长类、小鼠等啮齿类等)，能够在该哺乳动物中诱导针对甲型流感病毒的免疫反应(体液免疫反应和细胞免疫反应)，能够降低感染甲型流感病毒的风险。包含该融合多肽、该复合物或该低聚物的药物组合物作为可以期待对包括季节性流感病毒和预测的高病原性大流行流感病毒在内的大范围的A亚型流感病毒交叉有效的疫苗是有用的。

在下述的实施例中进一步具体地对本发明进行说明，但本发明不受这些示例的任何限定。

[基因的合成]

由流感病毒密歇根株的序列设计出在中间夹着编码GS接头(序列号12)的核苷酸而使编码头部缺失型血凝素的核苷酸与编码基质蛋白的核苷酸连接、进一步在C末端附加有编码6×His标签(序列号13)的核苷酸的基因(序列号10)。由该序列人工合成在5’末端附加有EcoRV序列和起始密码子(ATG)、在3’末端附加有终止密码子(TGA)和NotI序列的序列。利用附加的限制酶位点，将合成的序列插入到作为小麦无细胞系统专用的蛋白表达载体的pEU-EU1-MCS(CellFree Sciences公司)的MCS内存在的EcoRV与NotI之间。通过序列分析确认到插入的序列没有突变。所得到的质粒使用大肠杆菌DH5进行大量制备。

[抗原蛋白的合成]

以质粒作为模板，利用质粒上的SP6启动子，进行37℃、6小时的转录反应，合成mRNA。使用所合成的mRNA，利用反应规模为6mL规模×12次反应的多层法在15℃、20小时的条件下进行翻译反应。小麦胚芽提取液使用对His标签融合蛋白的合成/纯化进行优化而得到的WEPRO7240H。将合成的蛋白质(粗制)溶液进行离心处理(21600×g、4℃、10分钟)后，将沉淀级分用翻译缓冲液清洗2次。对于该沉淀级分，利用增溶剂使其可溶化，制成抗原蛋白(头部缺失HA-M1融合蛋白(+GS接头+6×His标签)、序列号11)(图4)。

[T细胞对流感病毒抗原(HA-M1抗原)的抗原特异性反应行为的分析]

试验方法

准备5只BALB/cAJcl小鼠(雌性)，将HA-M1/完全弗氏佐剂(250μg/ml)以各25μl皮下免疫于足底、以50μl皮下免疫于尾根部。在第7天进行解剖，采集腹股沟淋巴结和腘窝淋巴结。用网将采集的淋巴结弄碎，制成细胞分散液。制作共培养用的抗原稀释液，使孔内的浓度为100、50、25、0μg/ml。使用HA-M1抗原液(0、25、50、100μg/ml)对单细胞分散液(5×10⁵个细胞/孔)进行92小时刺激后，评价淋巴结细胞的增殖程度。另外，利用ELISA法测定培养上清中的IL-10和IFN-γ的浓度。即，回收上清后，补充培养基，以20μl/孔在各孔中添加用培养基进行了2倍稀释的CCK-8(Cell Counting Kit-8：株式会社同仁化学)，测定添加3小时后的吸光值(450nm)，由此计算出各孔内的细胞数。另一方面，将培养上清稀释2倍(IL-10)和20倍(IFN-γ)，使用小鼠IL-10Duoset ELISA(R&D)、小鼠IFN-γDuoset ELISA(R&D)试剂盒进行测定。

结果

将与HA-M1抗原特异性T细胞的活化相关的结果示于图5。作为T细胞亚群的Th1产生IFN-γ、Th2产生IL-10，因此对这些细胞因子的浓度进行测定，结果，这些细胞因子生产以抗原特异性的方式急剧增加，因此认为该HA-M1抗原作为能够诱导体液免疫和细胞免疫的疫苗抗原是优良的候选。另外，将与HA-M1抗原特异性淋巴结细胞增殖相关的结果示于图6。在用HA-M1抗原进行了免疫的小鼠的淋巴结细胞中添加HA-M1抗原并进行培养，结果在25、50、100μg/ml的抗原浓度下均显著观察到细胞增殖。由于不存在因抗原浓度所致的细胞增殖活化的大幅差异，因此可以认为抗原浓度达到饱和，但培养细胞中存在的抗原提呈细胞摄取HA-M1抗原并消化成肽抗原，由组织相容性抗原(I类MHC)进行提呈，结果显示T细胞被活化。

[HA-M1抗原给药小鼠血清的流感病毒中和活性]

方法

对各试验区准备3只BALB/cAJcl小鼠(雌性)，将HA-M1抗原液以50或100μg/只+明矾(Alum)2mg/只(Imject alum，Thermo：#77161，批号TE267860B)对腹腔内给药，进行致敏。在第0天和第11天实施2次致敏。试验区设定为在初次致敏日起第14天进行采血的组(#1～#3)、在第21天进行采血的组(#4～#6)和对照组((#7～#9))这3组。在麻醉下进行全血采集来采集血清。所得到的血清在56℃下孵育45分钟，使其灭活。

由各血清的10倍稀释液进行2倍连续稀释，将50μl的血清稀释液分别与200TCID₅₀的流感病毒A1型(A/密歇根/45/2015(H1N1pdm09))和流感病毒A3型(A/香港/4801/2014(H3N2))50μl进行混合，在37℃下反应30分钟后，使其感染在48孔板中培养的MDCK细胞，加入添加有胰蛋白酶的培养基100μl，进行4天培养，通过有无细胞变性来测定中和抗体效价。

结果

在第14天采血的抗原给药组中，对甲型流感病毒亚型H1N1型和H3N2型的中和活性与对照组相比未观察到差异，但在第21天采血的抗原给药组中，得到了优越的中和活性(表1)。通过A型H1N1的头部缺失HA和M1的融合蛋白抗原的免疫，得到了与H3N2型交叉的中和活性，由此确认到本发明中构建的抗原具有甲型流感病毒的亚型共有的中和表位。

[表1]

HA-M1抗原给药小鼠的对流感病毒的血清中和抗体效价

[利用流感病毒感染小鼠的药效试验]

使用小鼠(BALB/c、雌性、5周龄)，实施下述的4组试验。

试验区1：抗原蛋白给药×H1N1型流感病毒接种(6只)

试验区2：磷酸缓冲生理盐水给药×H1N1型流感病毒接种(5只)

试验区3：抗原蛋白给药×H3N2型流感病毒接种(6只)

试验区4：磷酸缓冲生理盐水给药×H3N2型流感病毒接种(5只)

小鼠以3-5只/笼在室温24±3℃、湿度50±20％、换气10-25次/小时、照明12小时的环境下饲养。通过使小鼠自由摄取MF(东方酵母工业)来喂食饲料。作为抗原蛋白的给药法，制备在抗原蛋白(蛋白浓度250μg/mL)中添加有等量Imject明矾佐剂(Thermo FisherScientific公司)的抗原蛋白，对每1只小鼠，相隔7天的间隔以0.2mL通过皮下注射进行2次给药，总计给药0.4mL。对于试验区2和4，在磷酸缓冲生理盐水中添加与试验区1和3相同的佐剂，同样进行给药。关于流感病毒接种，在第二次抗原蛋白给药后第7天，在异氟烷麻醉下经鼻接种50μL的接种病毒。流感病毒使用H1N1(株名：A/PR/8/34、ATCC No.：VR-1469、BSL：2、病毒滴度：1.6×10⁸TCID₅₀/mL)和H3N2(株名：A/查尔姆斯港/1/73、ATCC No.：VR-810、BSL：2、病毒滴度：1.3×10⁷TCID₅₀/mL)这两种亚型。为了掌握小鼠的状态，在小鼠的到货日、病毒接种的14天前(Day-14)、7天前(Day-7)、病毒接种日(Day0)、病毒接种日起3天后(Day3)、7天后(Day7)、10天后(Day10)、14天后(Day14)进行体重测定。另外，在从病毒接种日的14天前至病毒接种日14天后的期间内，对小鼠的一般状态(活动性的降低和被毛的粗硬)也进行评价。

将结果示于下述的表2-1和表2-2(一般状态)、表3(体重)和表4(存活率)。另外，将与存活率有关的图示于图7。

如表2-1、2-2、3、4和图7所示，接种了本发明的抗原蛋白的小鼠(1组和3组)与未接种该抗原蛋白的组(2组和4组)相比，获得了对流感病毒(H1N1型和H3N2型)的抵抗性，因此表明，本发明的抗原蛋白作为能够在甲型流感病毒亚型间赋予交叉免疫的疫苗是有用的。

产业上的可利用性

根据本发明，提供对突变体病毒和大范围的亚型赋予有效的交叉免疫的抗病毒疫苗。根据本发明，可以期待提供对包括季节性流感病毒和预测的高病原性大流行流感病毒在内的大范围的A亚型流感病毒交叉有效的疫苗。

本申请以在日本提交的日本特愿2017-245606(申请日：2017年12月21日)为基础，其内容全部包含在本说明书中。

序列表

<110> 株式会社绿色生物医药（Green BioMed Inc.）

麒麟控股株式会社（KIRIN KABUSHIKI KAISHA）

<120> 交叉免疫抗原疫苗及其制备方法（Cross-Immunizing Antigen Vaccine andPreparation Method Thereof）

<130> 092829

<150> JP2017-245606

<151> 2017-12-21

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 566

<212> PRT

<213> 甲型流感病毒

<400> 1

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Thr Thr Ala Asn

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val

50 55 60

Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly

65 70 75 80

Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile

85 90 95

Val Glu Thr Ser Asn Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe

100 105 110

Ile Asn Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe

115 120 125

Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp

130 135 140

Ser Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser

145 150 155 160

Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro

165 170 175

Lys Leu Asn Gln Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val

180 185 190

Leu Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Thr Ala Asp Gln Gln Ser Leu

195 200 205

Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Thr Ser Arg Tyr Ser

210 215 220

Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln

225 230 235 240

Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys

245 250 255

Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe

260 265 270

Thr Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro

275 280 285

Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Glu Gly Ala Ile Asn

290 295 300

Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys

305 310 315 320

Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg

325 330 335

Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly

340 345 350

Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr

355 360 365

His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser

370 375 380

Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile

385 390 395 400

Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His

405 410 415

Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe

420 425 430

Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn

435 440 445

Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu

450 455 460

Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly

465 470 475 480

Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val

485 490 495

Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu

500 505 510

Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr

515 520 525

Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val

530 535 540

Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu

545 550 555 560

Gln Cys Arg Ile Cys Ile

565

<210> 2

<211> 307

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 头部区缺失的HA

<400> 2

Met Lys Ala Ile Leu Val Val Leu Leu Tyr Thr Phe Thr Thr Ala Asn

1 5 10 15

Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

20 25 30

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

35 40 45

Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val

50 55 60

Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Phe Gln Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu

85 90 95

Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly

100 105 110

Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met

115 120 125

Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly

130 135 140

Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr

145 150 155 160

Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala

165 170 175

Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn

180 185 190

Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu

195 200 205

Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser

210 215 220

Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn

225 230 235 240

Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp

245 250 255

Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys

260 265 270

Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys

275 280 285

Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg

290 295 300

Ile Cys Ile

305

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1中的T细胞表位

<400> 3

Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu

1 5

<210> 4

<211> 252

<212> PRT

<213> 甲型流感病毒

<400> 4

Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Ile Pro

1 5 10 15

Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Ser Val Phe

20 25 30

Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr

35 40 45

Arg Pro Ile Leu Ser Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe

50 55 60

Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Ile

65 70 75 80

Gln Asn Ala Leu Asn Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Arg Ala

85 90 95

Val Lys Leu Tyr Lys Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala

100 105 110

Lys Glu Val Ser Leu Ser Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met

115 120 125

Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Ala Ala Phe

130 135 140

Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg

145 150 155 160

Ser His Arg Gln Met Ala Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu

165 170 175

Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Val

180 185 190

Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Asn Lys

195 200 205

Thr Arg Gln Met Val His Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser

210 215 220

Ser Ser Ala Gly Leu Arg Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr

225 230 235 240

Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys

245 250

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NP中的T细胞表位

<400> 5

Ser Arg Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg

1 5

<210> 6

<211> 498

<212> PRT

<213> 甲型流感病毒

<400> 6

Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Gly

1 5 10 15

Gly Glu Arg Gln Asp Thr Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Arg Met

20 25 30

Ile Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys

35 40 45

Leu Ser Asp Tyr Asp Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu

50 55 60

Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu

65 70 75 80

Glu His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile

85 90 95

Tyr Arg Arg Ile Asp Gly Lys Trp Thr Arg Glu Leu Ile Leu Tyr Asp

100 105 110

Lys Glu Glu Ile Arg Arg Val Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp

115 120 125

Ala Thr Ala Gly Leu Thr His Ile Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn

130 135 140

Asp Ala Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp

145 150 155 160

Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser

165 170 175

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Ile Ala Met Glu

180 185 190

Leu Ile Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg

195 200 205

Gly Glu Asn Gly Arg Arg Thr Arg Val Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn

210 215 220

Ile Leu Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Arg Ala Met Met Asp

225 230 235 240

Gln Val Arg Glu Ser Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Ile Glu Asp Leu

245 250 255

Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His

260 265 270

Lys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val Ala Ser Gly

275 280 285

His Asp Phe Glu Arg Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe

290 295 300

Lys Leu Leu Gln Asn Ser Gln Val Val Ser Leu Met Arg Pro Asn Glu

305 310 315 320

Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala

325 330 335

Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Ser Ser Phe Ile Arg Gly Lys Lys Val

340 345 350

Ile Pro Arg Gly Lys Leu Ser Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn

355 360 365

Glu Asn Val Glu Thr Met Asp Ser Asn Thr Leu Glu Leu Arg Ser Arg

370 375 380

Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Asn Gln Gln Lys

385 390 395 400

Ala Ser Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg

405 410 415

Asn Leu Pro Phe Glu Arg Ala Thr Val Met Ala Ala Phe Ser Gly Asn

420 425 430

Asn Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Val Ile Arg Met Met

435 440 445

Glu Ser Ala Lys Pro Glu Asp Leu Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe

450 455 460

Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp

465 470 475 480

Met Ser Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Tyr

485 490 495

Asp Asn

<210> 7

<211> 79

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1的低聚化序列

<400> 7

Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Arg Ala Val Lys Leu Tyr Lys Lys

1 5 10 15

Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala Lys Glu Val Ser Leu Ser

20 25 30

Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn Arg

35 40 45

Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Ala Ala Phe Gly Leu Val Cys Ala Thr

50 55 60

Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg Ser His Arg Gln Met

65 70 75

<210> 8

<211> 775

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HA-M1融合蛋白

<400> 8

Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr Val

1 5 10 15

Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn Leu

20 25 30

Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val Ala

35 40 45

Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly Asn

50 55 60

Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ser Trp Ser Tyr Ile Val

65 70 75 80

Glu Thr Ser Asn Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Ile

85 90 95

Asn Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe Glu

100 105 110

Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp Ser

115 120 125

Asn Lys Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser Phe

130 135 140

Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Asn Ser Tyr Pro Lys

145 150 155 160

Leu Asn Gln Ser Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu

165 170 175

Trp Gly Ile His His Pro Ser Thr Thr Ala Asp Gln Gln Ser Leu Tyr

180 185 190

Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Thr Ser Arg Tyr Ser Lys

195 200 205

Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln Glu

210 215 220

Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys Ile

225 230 235 240

Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Val Pro Arg Tyr Ala Phe Thr

245 250 255

Met Glu Arg Asn Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro Val

260 265 270

His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Glu Gly Ala Ile Asn Thr

275 280 285

Ser Leu Pro Phe Gln Asn Ile His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro

290 295 300

Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn

305 310 315 320

Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe

325 330 335

Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His

340 345 350

His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr

355 360 365

Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile Glu

370 375 380

Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His Leu

385 390 395 400

Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu

405 410 415

Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu

420 425 430

Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys

435 440 445

Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys

450 455 460

Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val Lys

465 470 475 480

Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn

485 490 495

Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Glu Ser Thr Arg Ile Tyr Cys

500 505 510

Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile Cys Ile Met Ser Leu Leu Thr

515 520 525

Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Ile Pro Ser Gly Pro Leu Lys

530 535 540

Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Ser Val Phe Ala Gly Lys Asn Thr

545 550 555 560

Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr Arg Pro Ile Leu Ser

565 570 575

Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu Thr Val Pro

580 585 590

Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Ile Gln Asn Ala Leu Asn

595 600 605

Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Arg Ala Val Lys Leu Tyr Lys

610 615 620

Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala Lys Glu Val Ser Leu

625 630 635 640

Ser Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn

645 650 655

Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Ala Ala Phe Gly Leu Val Cys Ala

660 665 670

Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg Ser His Arg Gln Met

675 680 685

Ala Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu Asn Arg Met Val Leu

690 695 700

Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Val Ala Gly Ser Ser Glu

705 710 715 720

Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Asn Lys Thr Arg Gln Met Val

725 730 735

His Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser Ser Ser Ala Gly Leu

740 745 750

Arg Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr Gln Lys Arg Met Gly

755 760 765

Val Gln Met Gln Arg Phe Lys

770 775

<210> 9

<211> 542

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 头部缺失HA-M1融合蛋白

<400> 9

Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr Val

1 5 10 15

Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn Leu

20 25 30

Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val Ala

35 40 45

Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Phe Gln Asn Ile His Pro

50 55 60

Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg

65 70 75 80

Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu

85 90 95

Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val

100 105 110

Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr

115 120 125

Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn

130 135 140

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

145 150 155 160

Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

165 170 175

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

180 185 190

Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn

195 200 205

Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala

210 215 220

Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn

225 230 235 240

Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr

245 250 255

Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu

260 265 270

Glu Ser Thr Arg Ile Tyr Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile

275 280 285

Cys Ile Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile

290 295 300

Ile Pro Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Ser

305 310 315 320

Val Phe Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu

325 330 335

Lys Thr Arg Pro Ile Leu Ser Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe

340 345 350

Val Phe Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg

355 360 365

Phe Ile Gln Asn Ala Leu Asn Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp

370 375 380

Arg Ala Val Lys Leu Tyr Lys Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His

385 390 395 400

Gly Ala Lys Glu Val Ser Leu Ser Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser

405 410 415

Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Ala

420 425 430

Ala Phe Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln

435 440 445

His Arg Ser His Arg Gln Met Ala Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg

450 455 460

His Glu Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu

465 470 475 480

Gln Val Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala

485 490 495

Asn Lys Thr Arg Gln Met Val His Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His

500 505 510

Pro Ser Ser Ser Ala Gly Leu Arg Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln

515 520 525

Ala Tyr Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys

530 535 540

<210> 10

<211> 1695

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码带有GS接头和6xHis标签的头部缺失HA-M1融合蛋白的多核苷酸序列

<400> 10

atggacacat tatgtatagg ttatcatgcg aacaattcaa cagacactgt agacacagta 60

ctagaaaaga atgtaacagt aacacactct gttaaccttc tggaagacaa gcataacgga 120

aaactatgca aactaagagg ggtagcccca ttgcatttgg gtaaatgtaa cattgctggt 180

ggaggaggtt ctggtggagg aggttctggt ggaggaggtt cttttcagaa tatacatccg 240

atcacaattg gaaaatgtcc aaagtatgta aaaagcacaa aattgagact ggccacagga 300

ttgaggaatg ttccgtctat tcaatctaga ggcctattcg gggccattgc cggcttcatt 360

gaaggggggt ggacagggat ggtagatgga tggtacggtt atcaccatca aaatgagcag 420

gggtcaggat atgcagccga cctgaagagc acacaaaatg ccattgacaa gattactaac 480

aaagtaaatt ctgttattga aaagatgaat acacagttca cagcagtggg taaagagttc 540

aaccacctgg aaaaaagaat agagaatcta aataaaaaag ttgatgatgg tttcctggac 600

atttggactt acaatgccga actgttggtt ctattggaaa atgaaagaac tttggactat 660

cacgattcaa atgtgaagaa cttgtatgaa aaagtaagaa accagttaaa aaacaatgcc 720

aaggaaattg gaaacggctg ctttgaattt taccacaaat gcgataacac gtgcatggaa 780

agtgtcaaaa atgggactta tgactaccca aaatactcag aggaagcaaa attaaacaga 840

gaaaaaatag atggggtaaa gctggaatca acaaggattt actgctctaa tgggtctcta 900

cagtgtagaa tatgtattat gagtcttcta accgaggtcg aaacgtatgt tctctctatc 960

gtcccgtcag gccccctcaa agccgagata gcacagagac tcgaagacgt ttttgcaggg 1020

aaaaacaccg atcttgaggc tctcatggaa tggctaaaga caagaccaat cttgtcacct 1080

ctgactaagg ggattttagg gtttgtgttc acgctcaccg tgcccagtga gcgaggactg 1140

cagcgtagac gttttgtcca gaatgccctc aatgggaatg gtgacccgaa caacatggac 1200

aaggcggtca aactgtacag gaaactaaaa agggagataa cattccatgg ggccaaagaa 1260

gtagcgctca gttactctgc tggtgcactt gccagttgca tgggcctcat atacaacaga 1320

atggggactg tcaccactga ggtggccttt ggtctggtat gcgcaacctg tgaacagatt 1380

gctgattctc agcatcgatc tcatagacaa atggtgacaa caaccaatcc actaatcagg 1440

cacgagaaca gaatggtaat agccagcaca acagctaaag ccatggaaca aatggctgga 1500

tcaagcgaac aagcagcaga ggctatggag gttgccagcc aggctagaca aatggtacag 1560

gcaatgagaa caattgggac tcaccctagt tccagcactg gtctaaaaga tgatctcctt 1620

gaaaatttac aggcctatca gaaacggatg ggagtgcaaa tgcaacgatt caaacatcat 1680

catcatcatc actga 1695

<210> 11

<211> 564

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有GS接头和6xHis标签的头部缺失HA-M1融合蛋白的氨基酸序列

<400> 11

Met Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr

1 5 10 15

Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn

20 25 30

Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val

35 40 45

Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Gly Gly Gly Ser

50 55 60

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Gln Asn Ile His Pro

65 70 75 80

Ile Thr Ile Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg

85 90 95

Leu Ala Thr Gly Leu Arg Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu

100 105 110

Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val

115 120 125

Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr

130 135 140

Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn

145 150 155 160

Lys Val Asn Ser Val Ile Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val

165 170 175

Gly Lys Glu Phe Asn His Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys

180 185 190

Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu

195 200 205

Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn

210 215 220

Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala

225 230 235 240

Lys Glu Ile Gly Asn Gly Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn

245 250 255

Thr Cys Met Glu Ser Val Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr

260 265 270

Ser Glu Glu Ala Lys Leu Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu

275 280 285

Glu Ser Thr Arg Ile Tyr Cys Ser Asn Gly Ser Leu Gln Cys Arg Ile

290 295 300

Cys Ile Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile

305 310 315 320

Val Pro Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp

325 330 335

Val Phe Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu

340 345 350

Lys Thr Arg Pro Ile Leu Ser Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe

355 360 365

Val Phe Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg

370 375 380

Phe Val Gln Asn Ala Leu Asn Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp

385 390 395 400

Lys Ala Val Lys Leu Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His

405 410 415

Gly Ala Lys Glu Val Ala Leu Ser Tyr Ser Ala Gly Ala Leu Ala Ser

420 425 430

Cys Met Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val

435 440 445

Ala Phe Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln

450 455 460

His Arg Ser His Arg Gln Met Val Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg

465 470 475 480

His Glu Asn Arg Met Val Ile Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu

485 490 495

Gln Met Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala

500 505 510

Ser Gln Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His

515 520 525

Pro Ser Ser Ser Thr Gly Leu Lys Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln

530 535 540

Ala Tyr Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys His His

545 550 555 560

His His His His

<210> 12

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> GS 接头

<400> 12

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 13

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 6xHis标签

<400> 13

His His His His His His

1 5

Claims (23)

1.一种融合多肽，其为诱导针对病毒的体液免疫反应和细胞免疫反应的融合多肽，其包含下述(a)和(b)的抗原或其片段且具有低聚化活性：

(a)含有在该病毒的亚型间保守的B细胞表位的该病毒的抗原或其片段；和

(b)含有在该病毒的亚型间保守的T细胞表位的该病毒的抗原或其片段，

在此，(a)和/或(b)的抗原或其片段具有低聚化活性，或者该融合多肽除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外还包含(c)具有低聚化活性的多肽。

2.如权利要求1所述的融合多肽，其中，病毒为甲型流感病毒。

3.如权利要求2所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为血凝素或其片段。

4.如权利要求3所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为头部缺失血凝素。

5.如权利要求3或4所述的融合多肽，其中，包含由序列号1所表示的氨基酸序列的Gln310～Asp 390构成的部分序列。

6.如权利要求2～5中任一项所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段为基质蛋白1或其片段。

7.如权利要求6所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段具有低聚化活性。

8.如权利要求6或7所述的融合多肽，其中，该T细胞表位包含序列号3所表示的氨基酸序列。

9.一种复合物，其包含权利要求6～8中任一项所述的融合多肽和核衣壳。

10.如权利要求1所述的融合多肽，其中，病毒为登革病毒。

11.如权利要求10所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段为E蛋白或其片段。

12.如权利要求11所述的融合多肽，其中，(a)的抗原或其片段包含E蛋白的DI和DII结构域。

13.如权利要求10～12中任一项所述的融合多肽，其中，(b)的抗原或其片段为NS3或其片段。

14.如权利要求10～13中任一项所述的融合多肽，其中，除了包含(a)和(b)的抗原或其片段以外，还包含具有低聚化活性的基质蛋白1或其片段。

15.一种融合多肽或复合物的多聚体，其通过使权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽或权利要求9所述的复合物低聚化而形成。

16.一种药物组合物，其包含权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽、权利要求9所述的复合物或权利要求15所述的多聚体。

17.如权利要求16所述的药物组合物，其用于诱导针对该病毒的免疫反应。

18.如权利要求16所述的药物组合物，其用于该病毒的感染性疾病的预防或治疗。

19.一种在哺乳动物中诱导针对病毒的免疫反应的方法，其包括：对该哺乳动物给药有效量的权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽、权利要求9所述的复合物或权利要求15所述的多聚体。

20.一种哺乳动物中的病毒的感染性疾病的预防或治疗方法，其包括：对该哺乳动物给药有效量的权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽、权利要求9所述的复合物或权利要求15所述的多聚体。

21.如权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽、权利要求9所述的复合物或权利要求15所述的多聚体，其用于在针对该病毒的免疫反应的诱导中使用。

22.如权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽、权利要求9所述的复合物或权利要求15所述的多聚体，其用于在该病毒的感染性疾病的预防或治疗中使用。

23.一种用于诱导针对病毒的免疫反应、或者用于该病毒的预防或治疗的药物组合物的制备方法，其包括：将权利要求1～8和10～14中任一项所述的融合多肽或权利要求9所述的复合物低聚化而得到该融合多肽或该复合物的多聚体。

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