CN111088308A - 一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分子肽制作技术领域，具体是一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：1)冷冻处理；2)电磁波溶胀；3)真空挤压膨化；4)酶解；5)高压均质；本发明方法具有酶解效率高，分子肽提取率高、酶解时间短，分子肽纯度好，小分子肽的生物活性、生物相容性等得到有效保障，茶叶资源得到充分利用。
Description
技术领域
本发明涉及分子肽制作技术领域，具体是一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法。
背景技术
茶叶中富含茶多酚、茶多酚、茶多糖、蛋白质、纤维素类等成分，均发挥不同的药用价值，如生津止渴、清凉降火、抗氧化、调节血脂等。有的研宄表明，茶叶中蛋白质含量约15％～30％(以干重计算)，其中约80％为谷蛋白，14％为醇溶蛋白，3.5％为白蛋白和约1％为球蛋白，大部分呈水难溶的状态，因此，传统茶叶的使用方法不能够使得茶叶蛋白充分溶出，虽然近些年的研宄相继报道茶叶蛋白的生物活性主要有抗氧化、抗诱变等，报道茶叶蛋白的种类主要有糖蛋白、多酚氧化酶等，但分子量大或者以多聚体状态存在，这使得茶叶蛋白的吸收利用率低。
小分子肽是由两个及以上的氨基酸以肽键相连的一种蛋白质片段，具有易吸收的特点，小分子肽早已成为药食品、保健品、日用化妆品等领域的开发热点。如专利号CN201710695843.1公开了一种石斛小分子肽及其制备方法，采用木聚糖酶、纤维素酶、碱性蛋白酶以及植物蛋白酶进行复合生物酶切的方式提取小分子肽；又如专利号CN201811609136.7公开了一种仿生法制备功能性蛋白多肽的方法，以天然植物蛋白为原料，利用非动物源性蛋白酶，模拟动物消化过程，生产酶解蛋白多肽。包括：将植物蛋白原料预粉碎，加水调制，采用非动物源性复合蛋白酶A、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶进行一次酶解，再加入复合蛋白酶B、赖氨酸氨肽酶和羧肽酶进行二次酶解，制得二次酶解蛋白浆液，然后均质、喷雾干燥、灭菌，即得；但关于茶叶蛋白制备小分子肽的研究鲜见，并且茶叶蛋白中连接键种类报道较少，以及多肽发生自组装的影响因子通常有温度、pH、离子强度、反应时间等，而酶解过程中液伴随着上述影响因子的变化，这使得小分子肽的生物活性、生物相容性等受到抑制，造成酶解时间长、提取率低、稳定性不理想。
鉴于夏秋茶供求量大，造成茶渣增多以及秋冬季茶园修剪的遗弃茶叶也较多，研究和开发茶叶蛋白质资源具有重要的现实意义。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，具体如下：
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将茶叶与改性β-环糊精按质量比10：(0.03～0.07) 的比例混合后，置于温度-17～-9℃条件下冷冻存储20～30min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：(2～ 4)的比例混合后，进行电磁波溶胀处理15～25min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理10～ 20min后，在3～5min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：(5～7)的比例混合后，加入茶叶重量0.01～0.05％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在75～95MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽。
本发明中茶叶为采摘后的鲜叶、茶园修剪的遗弃茶叶、浸泡后遗弃茶叶中的任意一种或几种。
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为45～55℃条件下磁力搅拌20～30min后，再置于70～80℃条件下干燥。
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠11～ 17％、酒石酸7～13％、磷酸三钠14～22％，余量为水。
所述电磁波的频率为0.1～0.2MHz。
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.06～0.18MPa、温度为110～150℃、螺杆转速为90～120r/min。
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶的混合物。
进一步地，所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按1：(2～3)：(4～5)：(0.7～0.8)的质量比的混合物。
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理10～15s，常压反向电流处理5～8s，酶解5～ 7min，循环处理时间不超过28min。
所述常压反向电流的电流密度为23～27A/m2。
所述辐照吸收剂量为0.8～1.7kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为35～40℃。
本发明制备的小分子肽用于制作食品、药品、保健品、化妆品。
本发明将茶叶与改性β-环糊精共混后进行冷冻处理，利用茶叶冻融过程中细胞会遭受损害，使得改性β-环糊精能够固化酚类、多糖类、酮类等杂质物质，提高了蛋白质纯度和质量；另外，利用维生素E改性β-环糊精，提高了β-环糊精的热稳定性，进而在电磁波溶胀或真空挤压膨胀过程中，不会破裂，进而保证了茶叶蛋白、茶叶小分子肽的纯度。
本发明利用含海藻酸钠的矿物质溶液进行电磁波溶胀，能够促进海藻酸钠在β-环糊精表面形成保护膜，进而提高其热稳定性能，进而防止了多糖分解成小分子糖类，进而防止了蛋白质发生美拉德反应，蛋白质发生美拉德反应不仅会导致茶叶蛋白提取率下降，还会使得蛋白发生变性，不利于其生物活性的保留。
本发明利用电磁波特性，提高了溶胀效率，进而有效防止了蛋白质变性。
本发明进行真空挤压膨化处理，使得纤维素、胶体物质等破裂，进而有利于茶叶蛋白的溶出，在真空挤压膨化前进行电磁波溶胀，改变茶叶含水量，使得水分的润滑作用得到一定增强，降低了茶叶受到的剪切、摩擦作用，防止了蛋白质的结构大面积损伤，还可以利用水分的缓冲作用，使得多糖吸收的热量较弱，不足以分解成小分子糖类；并且利用含酒石酸的矿物质溶液进行电磁波溶胀，使得酒石酸进入细胞膜内，在真空挤压膨化过程中由于剪切作用对蛋白结构进行机械破裂，酒石酸能够大面积接触蛋白质，进而使得蛋白质结构中被包裹住的易被酶解的位点暴露出来，提高了蛋白质的酶解敏感性，而本领域中许多疏水性蛋白质由于其活性部位包埋在内部，使蛋白酶接触不到，导致水解速度慢、水解度低。
本发明控制真空挤压膨化处理的工艺参数，使得茶叶中水分脱出，有利于粉碎。
本发明的复合酶作用位点无特异性，能够将蛋白质水解为小分子肽，并且还能抑制菌种的生存。
本发明通过控制高压均质的条件，提高滤液均匀化和分散性，同时还达到了灭酶效果，进而缩短了制作时间，保证了小分子肽的生物活性和安全性。
本发明利用间歇电子束处理，使得被包埋在蛋白质结构内部的分子肽片段暴露，利用电流作出使得溶液中物质发生迁移，进而有利于分子肽片段的溶出。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
本发明方法具有酶解效率高，分子肽提取率高、酶解时间短，分子肽纯度好，小分子肽的生物活性、生物相容性等得到有效保障，茶叶资源得到充分利用。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将500g茶叶与改性β-环糊精按质量比10：0.07的比例混合后，置于温度-9℃条件下冷冻存储30min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：4 的比例混合后，进行电磁波溶胀处理25min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理20min 后，在5min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：7的比例混合后，加入茶叶重量0.05％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在95MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽；
本实施例中茶叶为采摘后的鲜叶；
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为55℃条件下磁力搅拌30min后，再置于80℃条件下干燥；
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠17％、酒石酸13％、磷酸三钠22％，余量为水；
所述电磁波的频率为0.2MHz；
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.18MPa、温度为150℃、螺杆转速为120r/min；
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按 1：3：5：0.8的质量比的混合物；
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理15s，常压反向电流处理8s，酶解7min，循环处理时间不超过28min；
所述常压反向电流的电流密度为27A/m2；
所述辐照吸收剂量为1.7kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为40℃。
实施例2
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将500g茶叶与改性β-环糊精按质量比10：0.03的比例混合后，置于温度-17℃条件下冷冻存储20-30min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：2 的比例混合后，进行电磁波溶胀处理15min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理10min 后，在3min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：5的比例混合后，加入茶叶重量0.01％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在75MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽；
本实施例中茶叶为茶园修剪的遗弃茶叶；
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为45℃条件下磁力搅拌20min后，再置于70℃条件下干燥；
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠11％、酒石酸7％、磷酸三钠14％，余量为水；
所述电磁波的频率为0.1MHz；
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.06MPa、温度为110℃、螺杆转速为90r/min；
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按 1：2：4：0.7的质量比的混合物；
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理10s，常压反向电流处理5s，酶解5min，循环处理时间为28min；
所述常压反向电流的电流密度为23A/m2；
所述辐照吸收剂量为0.8kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为35℃。
实施例3
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将500g茶叶与改性β-环糊精按质量比10：0.05的比例混合后，置于温度-13℃条件下冷冻存储25min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：3 的比例混合后，进行电磁波溶胀处理20min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理15min 后，在4min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：6的比例混合后，加入茶叶重量0.03％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在85MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽；
本实施例中茶叶为浸泡后遗弃茶叶；
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为50℃条件下磁力搅拌25min后，再置于75℃条件下干燥；
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠14％、酒石酸10％、磷酸三钠18％，余量为水；
所述电磁波的频率为0.15MHz；
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.12MPa、温度为130℃、螺杆转速为105r/min；
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按1：2.5：4.5：0.75的质量比的混合物；
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理12s，常压反向电流处理6s，酶解6min，循环处理时间为25min；
所述常压反向电流的电流密度为25A/m2；
所述辐照吸收剂量为1.1kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为38℃。
实施例4
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将500g茶叶与改性β-环糊精按质量比10：0.07的比例混合后，置于温度-17℃条件下冷冻存储20min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：2.5 的比例混合后，进行电磁波溶胀处理20min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理15min 后，在4min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：6.5的比例混合后，加入茶叶重量0.03％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在75MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽；
本实施例中茶叶为茶园修剪的遗弃茶叶；
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为55℃条件下磁力搅拌30min后，再置于70℃条件下干燥；
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠11％、酒石酸7％、磷酸三钠22％，余量为水；
所述电磁波的频率为0.12MHz；
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.18MPa、温度为150℃、螺杆转速为90r/min；
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按 1：2：4：0.8的质量比的混合物；
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理15s，常压反向电流处理8s，酶解5min，循环处理时间为20min；
所述常压反向电流的电流密度为23A/m2；
所述辐照吸收剂量为1.7kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为35℃。
实施例5
一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将500g茶叶与改性β-环糊精按质量比10：0.04的比例混合后，置于温度-10℃条件下冷冻存储30min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：3.5 的比例混合后，进行电磁波溶胀处理25min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理10min 后，在3min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：5.5的比例混合后，加入茶叶重量0.04％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在90Pa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽；
本实施例中茶叶为浸泡后遗弃茶叶；
所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为50℃条件下磁力搅拌25min后，再置于75℃条件下干燥；
所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠17％、酒石酸8％、磷酸三钠21％，余量为水；
所述电磁波的频率为0.17MHz；
所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.12MPa、温度为130℃、螺杆转速为90r/min；
所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按 1：3：4：0.7的质量比的混合物；
本发明中在酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理15s，常压反向电流处理5s，酶解7min，循环处理时间为28min；
所述常压反向电流的电流密度为25A/m2；
所述辐照吸收剂量为1.5kGy；
所述酶解的工艺参数为温度为38℃。
对比例1
与实施例3的区别在于：β-环糊精未改性。
对比例2
与实施例3的区别在于：利用维生素C改性β-环糊精。
对比例3
与实施例3的区别在于：矿物质溶液中不含有海藻酸钠。
对比例4
与实施例3的区别在于：矿物质溶液中不含有酒石酸。
对比例5
与实施例3的区别在于：复合酶中没有碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶。
对比例6
与实施例3的区别在于：复合酶中没有溶菌酶。
对比例7
与实施例3的区别在于：酶解过程中未辅以常压反向电流处理。
对比例8
与实施例3的区别在于：先真空挤压膨化，再电磁波溶胀。
对比例9
与实施例3的区别在于：均质的压力为72MPa。
对比例10
与实施例3的区别在于：均质的压力为100MPa。
试验例1
对实施例以及对比例进行蛋白质提取率以及蛋白质水解度的测定以及产率计算，总氮含量测定方法参考GB 5009.5-2016《食品中蛋白质的测定》，游离氨基氮含量测定方法参考茚三酮法。测定方法如下：
将步骤3)所得物与去离子水中混合后，得混合物，检测混合物中总氮含量；
将滤液均质处理后，未冷冻干燥前，检测均质后滤液中游离氨基酸含量；
蛋白质提取率(％)＝(1g混合物中总氮含量/1g茶叶中总氮含量)× 100％；
蛋白质分解度的测定(％)＝(1g均质后滤液中游离氨基酸含量/1g 茶叶中总氮含量)×100％；
各组蛋白质提取率结果如下：
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 提取率/％ | 98.3 | 97.6 | 99.0 | 98.6 | 98.1 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | |
| 提取率/％ | 93.2 | 95.6 | 93.7 | 94.7 | 98.2 |
| 对比例6 | 对比例7 | 对比例8 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 提取率/％ | 98.5 | 97.3 | 97.9 | 98.0 | 98.8 |
各组蛋白质分解度结果如下：
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 分解度/％ | 25.5 | 24.9 | 25.7 | 25.3 | 25.2 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | |
| 分解度/％ | 12.5 | 13.1 | 12.8 | 12.1 | 18.7 |
| 对比例6 | 对比例7 | 对比例8 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 分解度/％ | 16.4 | 20.1 | 19.1 | 17.3 | 18.4 |
试验例2
对实施例以及对比例所得产物进行抗氧化性测定，具体如下：
羟自由基清除能力的测定：取1.0mL均质后滤液依次加入2mL 0.0018mol/LFeSO4，1.5mL 0.0018mol/L水杨酸-乙醇和0.1mL 0.0088mol/L H2O2，37℃水浴30min。反应结束后于510nm处测定吸光值Ai，以去离子水代替样品液测得的吸光值为A0。选取200μg/mL抗坏血酸作为阳性对照。按下式计算:羟自由基清除率(％)＝((A0-Ai)/A0) ×100％；
超氧阴离子自由基清除能力的测定：1mL均质后滤液和4.5mL 0.1 mol/L pH8.2的Tris﹣HCl缓冲液混合置于25℃水浴锅中保温20min，加入0.4mL同样25℃预热的0.0045mol/L的邻苯三酚溶液(用0.01mol/L HCl配制)，迅速混合均匀后25℃水浴反应5min，加入0.1mL8mol/L HCl终止反应。样品液于325nm处测定的吸光值为AS，以去离子水代替样品液测得的吸光值为Ab，以0.01mol/L HCl代替邻苯三酚测得的吸光值为A0。选取200μg/m L抗坏血酸作为阳性对照。按下式计算：超氧自由基清除率(％)＝((1-(As-A0))/Ab)×100％；
各组羟自由基清除率结果如下：
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 清除率/％ | 75.1 | 74.5 | 76.6 | 74.8 | 75.3 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | |
| 清除率/％ | 47.2 | 50.7 | 64.8 | 65.5 | 42.3 |
| 对比例6 | 对比例7 | 对比例8 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 清除率/％ | 53.6 | 62.9 | 65.1 | 55.8 | 57.6 |
各组超氧自由基清除率结果如下：
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
| 清除率/％ | 93.1 | 92.4 | 94.0 | 93.6 | 92.8 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 对比例5 | |
| 清除率/％ | 43.2 | 45.9 | 52.1 | 65.9 | 33.7 |
| 对比例6 | 对比例7 | 对比例8 | 对比例9 | 对比例10 | |
| 清除率/％ | 50.4 | 58.5 | 71.6 | 52.3 | 47.7 |
其中抗坏血酸对照组的羟自由基清除率为70.0％，超氧自由基清除率96.7％。
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)冷冻处理：将茶叶与改性β-环糊精按质量比10：(0.03～0.07)的比例混合后，置于温度-17～-9℃条件下冷冻存储20～30min；
2)电磁波溶胀：将步骤1)所得物与矿物质溶液按质量比1：(2～4)的比例混合后，进行电磁波溶胀处理15～25min；
3)真空挤压膨化：将步骤2)所得物经真空挤压膨化处理10～20min后，在3～5min内冷却至室温，然后研磨至过80目筛；
4)酶解：将步骤3)所得物与去离子水按质量比1：(5～7)的比例混合后，加入茶叶重量0.01～0.05％的复合酶进行酶解，过滤，取滤液；
5)高压均质：滤液在75～95MPa条件下均质处理后，冷冻干燥，即得小分子肽。
2.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述改性β-环糊精的制备方法为：取3gβ-环糊精，用去离子水定容至100mL，然后加入20mg维生素E，在温度为45～55℃条件下磁力搅拌20～30min后，再置于70～80℃条件下干燥。
3.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述矿物质溶液由如下质量百分数组分组成：海藻酸钠11～17％、酒石酸7～13％、磷酸三钠14～22％，余量为水。
4.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述电磁波的频率为0.1～0.2MHz。
5.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述真空挤压膨化的工艺条件：真空度为0.06～0.18MPa、温度为110～150℃、螺杆转速为90～120r/min。
6.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶的混合物。
7.如权利要求1或6所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述复合酶为碳酸酐酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、溶菌酶按1：(2～3)：(4～5)：(0.7～0.8)的质量比的混合物。
8.如权利要求1所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，在所述酶解过程中辅以间歇电子束辐照处理、常压反向电流处理，即电子束辐照处理10～15s，常压反向电流处理5～8s，酶解5～7min，循环处理时间不超过28min。
9.如权利要求8所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述常压反向电流的电流密度为23～27A/m2。
10.如权利要求8所述以茶叶为原料制备小分子肽的方法，其特征在于，所述辐照吸收剂量为0.8～1.7kGy。
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Citations (4)
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| WO2013023520A1 (zh) * | 2011-08-16 | 2013-02-21 | 山东省花生研究所 | 一种超声波辅助酶解制备花生抗氧化肽的方法 |
| JP5646035B1 (ja) * | 2013-11-21 | 2014-12-24 | 三井農林株式会社 | 茶葉由来のタンパク質分解物の製造方法 |
| CN109371087A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-22 | 河北肽都生物科技有限公司 | 一种小分子茶叶肽的提取方法 |
| CN109593810A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-09 | 兰溪市沉默生物科技有限公司 | 马尾藻活性多肽的提取方法 |
-
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013023520A1 (zh) * | 2011-08-16 | 2013-02-21 | 山东省花生研究所 | 一种超声波辅助酶解制备花生抗氧化肽的方法 |
| JP5646035B1 (ja) * | 2013-11-21 | 2014-12-24 | 三井農林株式会社 | 茶葉由来のタンパク質分解物の製造方法 |
| CN109371087A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-22 | 河北肽都生物科技有限公司 | 一种小分子茶叶肽的提取方法 |
| CN109593810A (zh) * | 2018-12-27 | 2019-04-09 | 兰溪市沉默生物科技有限公司 | 马尾藻活性多肽的提取方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王传幸;李国英;: "小分子鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化性测定" * |
| 靳伟刚;张洋;罗琳;陈萍;林同宝;饶平凡;叶秀云;: "茶渣资源的开发与利用――茶渣中茶叶蛋白的酶法提取和酶法水解" * |
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