CN110592053A - 一种胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及酶制剂领域，具体而言，涉及一种胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法。胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：碱性蛋白酶20～50份，中性蛋白酶7～18份，木瓜蛋白酶5～11份，风味酶5～15份以及海藻糖3～7份。通过多种酶的相互配合，可以将大分子的胶原蛋白变成多肽和氨基酸，通过内切酶和外切酶的共同作用，最大程度分解胶原蛋白分子，同时降低或避免水解过程中苦味肽的产生，或将苦味肽等降解为氨基酸，增进或改进水解物的口感风味，提高蛋白质的转化率和利用率，大大提高食品营养价值，降低成本，有利于人体的消化和吸收。

Description

一种胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法

技术领域

本申请涉及酶制剂领域，具体而言，涉及一种胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法。

背景技术

胶原(Collagen)是细胞外基质(ECM)的一种结构蛋白，含有一个或几个由α链组成的三螺旋结构的区域，又称胶原域。胶原是动物组织中一类重要的结构蛋白，由动物的成纤细胞合成的高分子纤维型蛋白质，广泛存在于动物肌腱、韧带、软骨、皮肤及其他结缔组织中，起着支撑、营养、免疫、保护、信息传递等重要生理功能。

胶原肽作为一种生物活性肽，是介于蛋白质和氨基酸之间的分子聚合物。通常将由2～10个氨基酸构成的胶原肽称为胶原低聚肽(Collagenous Oligopeptide)，其分子量为1000Da以下。现代研究认为，多肽较蛋白质而言，更易于消化吸收、能迅速给机体提供能量、无蛋白质变性、低过敏性、良好的水溶性等特点，而小分子低聚肽可以无需消化，被机体直接吸收利用，具有多重生物活性功能。目前多采用酶法生产胶原蛋白，但是现有技术中对胶原蛋白的分解不充分，水解率较低。

发明内容

本申请实施例的目的在于提供一种胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法，其旨在改善现有的蛋白质水解率较低的问题。

本申请第一方面提供一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：

碱性蛋白酶20～50份，中性蛋白酶7～18份，木瓜蛋白酶5～11份，风味酶5～15份以及海藻糖3～7份。

通过多种酶的相互配合，可以将大分子的胶原蛋白变成多肽和氨基酸，通过内切酶和外切酶的共同作用，最大程度分解胶原蛋白分子，同时降低或避免水解过程中苦味肽的产生，或将苦味肽等降解为氨基酸，增进或改进水解物的口感风味，提高蛋白质的转化率和利用率，大大提高食品营养价值，降低成本，有利于人体的消化和吸收。

在本申请第一方面的一些实施例中，上述胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：

碱性蛋白酶25～45份，中性蛋白酶8～15份，木瓜蛋白酶6～10份，风味酶8～12份以及海藻糖5～6份。

可选地，碱性蛋白酶30～40份，中性蛋白酶10～15份，木瓜蛋白酶8～10份，风味酶10份以及海藻糖5份。

上述胶原蛋白水解复合酶能将胶原蛋白分解为小分子肽，其分子量在1000以下的占比79％以上，且分子量小于180以下的较少，在10％左右。

在本申请第一方面的一些实施例中，胶原蛋白水解复合酶还包括载体20～45份。

可选地，胶原蛋白水解复合酶还包括载体30～45份。

可选地，上述载体选自麦芽糊精或水溶性淀粉中的至少一种。

麦芽糊精或水溶性淀粉可以用于负载酶。麦芽糊精或水溶性淀粉也可以增加胶原蛋白水解复合酶的分散性和溶解性。

在本申请第一方面的一些实施例中，上述碱性蛋白酶的酶活力为20-50万U/g，中性蛋白酶的酶活力为10-20万U/g，木瓜蛋白酶的酶活力为20-200万U/g，风味酶的酶活力500LAPU/g。

可选地，碱性蛋白酶的酶活力为50U/g，中性蛋白酶的酶活力为20万/g，木瓜蛋白酶的酶活力为200万U/g，风味酶的酶活力为500LAPU/g。

本申请第二方面提供一种蛋白低聚肽的制备方法，其包括采用本申请第一方面提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白原料。

采用上述的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白原料，能使蛋白质水解为小分子肽，且小分子肽的产率较高，有利于人体的吸收和分解。

在本申请第二方面的一些实施例中，上述蛋白低聚肽的制备方法包括：

取胶原蛋白原料、水以及胶原蛋白水解复合酶混合后在水解温度为45-60℃下水解3-10h。

可选地，在50-55℃下水解4-6h。

在酶解温度为45-60℃下酶解，通过多个酶以及海藻糖的配伍，使胶原蛋白水解复合酶在45-60℃下较稳定，避免酶失活的问题。

在本申请第二方面的一些实施例中，上述胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.4-1.2％。

可选地，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.6-0.8％。

胶原蛋白水解复合酶与胶原蛋白原料在上述配比下，能够提高胶原蛋白水解复合酶的利用率，避免胶原蛋白水解复合酶的浪费。

在本申请第二方面的一些实施例中，上述水与胶原蛋白原料的质量比为0.1:1～2:1。

可选地，水与胶原蛋白原料的质量比为0.5:1～1:1。

水与胶原蛋白原料的质量比为0.1:1～2:1，胶原蛋白水解复合酶能在水中有较好的扩散与胶原蛋白原料相互作用，以提高水解率。

在本申请第二方面的一些实施例中，胶原蛋白原料包括鱼皮、鱼鳞、鱼骨、猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨、猪皮、牛皮或者明胶中的至少一种。

鱼皮、鱼鳞、鱼骨、猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨、猪皮、牛皮或者明胶等被胶原蛋白水解复合酶分解后，易于消化吸收、能迅速给机体提供能量。具有低过敏性、良好的水溶性等特点。

本申请提供一种蛋白低聚肽，蛋白低聚肽通过本申请第二方面提供的蛋白低聚肽的制备方法制得。

采用上述蛋白低聚肽的制备方法得到的蛋白低聚肽可以使大分子蛋白质被水解为小分子肽，有利于人体吸收，且大分子蛋白质的水解率高。

具体实施方式

为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请实施例的胶原蛋白水解复合酶、蛋白低聚肽及其制备方法进行具体说明。

一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：

碱性蛋白酶20～50份，中性蛋白酶7～18份，木瓜蛋白酶5～11份，风味酶5～15份以及海藻糖3～7份。

碱性蛋白酶，是由地衣芽胞杆菌经发酵提炼而成的蛋白水解酶，主要成分为地衣芽胞杆菌蛋白酶，分子量约为27300。在pH5～11下稳定，低于5或大于11时很快失活。其活性中心含丝氨酸，故称丝氨酸蛋白酶。它不但能水解肽键，还具有水解酰胺键、酯键以及转酯和转肽的功能。由于酶的专一性，它只能对蛋白质水解，不能作用于淀粉、脂肪等物质。

作为示例性地，碱性蛋白酶的重量份可以为25～45份、30～40份；例如可以为20份、23份、25份、28份、30份、33份、35份、40份、42份、45份或者50份等。

进一步地，在本申请的一些实施例中，碱性蛋白酶的酶活力为20-50万U/g，例如可以为20万U/g、25万U/g、27万U/g、31万U/g、38万U/g、40万U/g、45万U/g或者50万U/g。

中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。中性蛋白酶的酶促反应，可把动植物的大分子蛋白质水解成小分子肽或氨基酸，以利于蛋白质的有效吸收和利用，水解度较高。

作为示例性地，中性蛋白酶的重量份可以为8～15份、10～15份。例如可以为7份、8份、10份、12份、13份、15份或者18份等。

在本申请的一些实施例中，中性蛋白酶的酶活力为10-20万U/g，例如可以为10万U/g、12万U/g、15万U/g、18万U/g或者20万U/g。

木瓜蛋白酶的最适合pH值为6～7(一般3～9.5皆可)，木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，且能最大程度避免苦味的产生。

作为示例性地，木瓜蛋白酶的重量份可以为6～10份，8～10份，例如可以为5份、6份、8份、10份或者11份等。

在本申请的一些实施例中，木瓜蛋白酶的酶活力为20-200万U/g，例如可以为20万U/g、25万U/g、27万U/g、35万U/g、38万U/g、42万U/g、68万U/g、100万U/g、135万U/g、186万U/g、190万U/g或者200万U/g。

风味酶是由米曲霉菌株发酵，经提纯而成的复合酶，其包括多肽外切与内切两种活性酶。作用于不同的分子肽链的不同位置，可以弱化苦味，改善口感。

在本申请中，风味酶是选购于丹麦诺维信公司Flavourzyme500MG。

作为示例性地，风味酶的重量份可以为8～12份，例如可以为5份、7份、8份、10份、12份、13份或者15份等。

海藻糖又称漏芦糖、蕈糖等，可以作为一种天然保藏剂，有效地提高酶蛋白热稳定性。作为示例性地，海藻糖的重量份可以为5～6份，例如可以为3份、4份、5份、6份或者7份等。

本申请提供的胶原蛋白水解复合酶可以用于分解胶原蛋白，包括但不仅限于鱼皮、鱼鳞、鱼骨、猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨、猪皮、牛皮或者明胶。

本申请提供的胶原蛋白水解复合酶通过多种酶的相互配合，可以将大分子的蛋白变成多肽和氨基酸，通过内切酶和外切酶的共同作用，最大程度分解胶原蛋白分子，同时降低或避免水解过程中苦味肽的产生，或将苦味肽等降解为氨基酸，增进或改进水解物的口感风味，提高蛋白质的利用率和转化率，大大提高食品营养价值，降低成本，有利于人体的消化和吸收。

通过多个酶的复配，将蛋白质分解为小分子肽，其分子量在1000以下的占比79％以上，且分子量小于180以下的较少，10％左右。

海藻糖协调多个酶的活性，使胶原蛋白水解复合酶更稳定。

进一步地，在本申请的一些实施例中，胶原蛋白水解复合酶还包括载体20～45份；进一步地，胶原蛋白水解复合酶还包括载体30～45份；例如，载体的重量份可以为20份、26份、30份、36份、40份或者45份。

可选地，上述载体选自麦芽糊精或水溶性淀粉中的至少一种。

麦芽糊精或水溶性淀粉可以用于负载胶原蛋白水解复合酶。麦芽糊精或水溶性淀粉也可以增加胶原蛋白水解复合酶的分散性和溶解性。

本申请实施例提供的胶原蛋白水解复合酶至少具有以下优点：

本申请实施例提供的胶原蛋白水解复合酶可以增加蛋白质的水解率，且将大分子的蛋白质水解至分子量小于1000的小分子占比79％及以上，且分子量小于180的占比小于10％。

本申请还提供一种蛋白低聚肽的制备方法，其包括采用上述提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白原料。

承上所述，采用上述的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白原料，能使胶原蛋白水解为小分子肽，有利于人的吸收和分解。

进一步地，蛋白低聚肽的制备方法包括：取胶原蛋白原料、水以及胶原蛋白水解复合酶混合后在水解温度为45-60℃下水解3-10h。

在一些实施例中，水解温度可以为45℃、48℃、50℃、53℃、55℃、58℃或者60℃。水解时间可以为3h、4h、4.5h、4.8h、5h、6h、8h或者10h。

在酶解温度为45-60℃下酶解，通过多个酶以及海藻糖的配伍，使胶原蛋白水解复合酶在45-60℃较稳定，不存在酶失活的问题。

在一些实施例中，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.4-1.2％；进一步地，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.6-0.8％。例如可以为0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1.0％或者1.2％。

胶原蛋白水解复合酶与胶原蛋白原料在上述配比下，能够提高胶原蛋白水解复合酶的利用率，避免胶原蛋白水解复合酶的浪费。

在本申请的一些其他实施例中，如果不需要考虑胶原蛋白水解复合酶的利用率，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白原料中胶原蛋白重量也可以小于0.4％或者大于1.2％。

在一些实施例中，水与胶原蛋白原料的质量比为0.1:1～2:1；进一步地，水与胶原蛋白原料的质量比为0.5:1～1:1。例如水与胶原蛋白原料的质量比为0.1：1、0.2:1、0.4:1、0.5:1、0.8:1、1:1、1.5:1或者2:1等。

水与胶原蛋白原料的质量比为0.1:1～2:1，胶原蛋白水解复合酶能在水中有较好的扩散与胶原蛋白原料相互作用，以提高水解率。

作为示例性地，上述胶原蛋白原料包括胶原蛋白质。例如，包括鱼皮、鱼鳞、鱼骨、猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨、猪皮、牛皮或者明胶中的至少一种。

胶原蛋白被胶原蛋白水解复合酶分解后，易于消化吸收、能迅速给机体提供能量。具有低过敏性、良好的水溶性等特点。

本申请实施例提供的蛋白低聚肽的制备方法至少具有以下优点：

采用上述蛋白低聚肽的制备方法可以使大分子蛋白质被水解为小分子肽，有利于人体吸收，且大分子蛋白质的水解率高。

本申请还提供一种蛋白低聚肽，蛋白低聚肽通过上述的蛋白低聚肽的制备方法制得。

承上所述，上述蛋白低聚肽的制备方法制得的蛋白低聚肽中分子量小于1000Da的大于79％，更易于消化吸收、能迅速给机体提供能量。

以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶30％，中性蛋白酶12％，木瓜蛋白酶6％，风味酶7％，海藻糖4％以及麦芽糊精41％。

实施例2

本实施例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶40％，中性蛋白酶10％，木瓜蛋白酶8％，风味酶9％，海藻糖6％以及麦芽糊精27％。

实施例3

本实施例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶50％，中性蛋白酶7％，木瓜蛋白酶5％，风味酶9％，海藻糖7％以及麦芽糊精23％。

实施例4

本实施例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶20％，中性蛋白酶15％，木瓜蛋白酶10％，风味酶5％，海藻糖5％以及麦芽糊精45％。

实施例5

本实施例提供一种蛋白低聚肽的制备方法，主要包括以下步骤：

将新鲜的真鳕鳕鱼皮进行清洗，在80℃下水煮1h提取胶原蛋白。

用300目纱布过滤，得到胶原蛋白水溶液，测定胶原蛋白含量。控制提取步骤加水量，使胶原蛋白含量与水的质量比为1:0.5。

将胶原蛋白水溶液与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶转移至1000ml圆底烧瓶，其中，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白质量分数的0.6％。

搅拌并加热，控制酶解温度50℃，酶解6h后，经活性炭脱色脱腥，过滤，浓缩，冷冻干燥得到胶原蛋白肽。

实施例6

本实施例提供一种蛋白低聚肽的制备方法，主要包括以下步骤：

将鱼鳞用盐酸进行脱钙，脱钙后的鱼鳞于0.5mol/L氢氧化钠溶液中浸泡3h脱除非胶原蛋白，料液比(w/v)1:4。

将经脱钙和除去非胶原蛋白后的鱼鳞置于0.5mol/L乙酸溶液中，添加1％胃蛋白酶提取胶原蛋白。用300目纱布过滤，得到胶原蛋白水溶液，测定胶原蛋白含量。

将胶原蛋白水溶液中转移至1000ml圆底烧瓶中，加入实施例2提供的胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白质量分数的0.7％。

搅拌并加热，控制酶解温度50℃，酶解4h后，经活性炭脱色脱腥，过滤，浓缩，冷冻干燥得到胶原蛋白肽。

实施例7

本实施例提供一种蛋白低聚肽的制备方法，主要包括以下步骤：

用明胶与1.5倍水混合成胶原蛋白水溶液。

将胶原蛋白水溶液中转移至1000ml圆底烧瓶中，加入实施例3提供的胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白质量分数的0.6％。

搅拌并加热，控制酶解温度50℃，酶解4h后，经活性炭脱色脱腥，过滤，浓缩，冷冻干燥得到胶原蛋白肽。

实施例8

本实施例提供一种蛋白低聚肽的制备方法，主要包括以下步骤：

取新鲜骨头去除表面残肉及多余杂质，洗净。高压蒸煮30min，煮至骨头软化。冷冻去乙醚回流除脂肪，0.48％盐酸脱钙，骨头粉碎备用。粉碎的骨头加1％胃蛋白酶，提取骨胶原蛋白。

用300目纱布过滤，得到胶原蛋白水溶液，测定胶原蛋白含量。将胶原蛋白水溶液中转移至1000ml圆底烧瓶中。加入实施例4提供的胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶占胶原蛋白质量分数的1.0％。

搅拌并加热，控制酶解温度50℃，酶解8h后，经活性炭脱色脱腥，过滤，浓缩，冷冻干燥得到胶原蛋白肽。

试验例1

检测实施例5-实施例8得到的胶原蛋白肽的分子量分布，检测结果如表1-表4所示。

表1 实施例5提供的胶原蛋白肽的分子量分布

表2 实施例6提供的胶原蛋白肽的分子量分布

表3 实施例7提供的胶原蛋白肽的分子量分布

表4 实施例8提供的胶原蛋白肽的分子量分布

从表1-表4可以看出，本申请实施例提供的1-实施例4提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白后得到的胶原蛋白肽平均分子量在520-740之间，分子量小于1000以下的大于79％。进一步地，实施例6、实施7中提供的胶原蛋白肽效果更佳，因为分子量大于180，小于1000的占比较大。

对比例1

本对比例将河南新仰韶生物科技有限公司提供的酶活力为20万U/g中性蛋白酶(简称中性蛋白酶A)与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶进行对比。具体地，采用相同用量的中性蛋白酶A与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例5提供的方法进行胶原蛋白水解，在加酶之前，需将pH调至7.5左右。检测不同反应时间得到的水解液的pH值。结果如表5所示。蛋白质水解度代表6个小时后各个组中蛋白质水解度。

表5 不同反应时间pH的变化

对比例2

本对比例将河南新仰韶生物科技有限公司提供的酶活力为20万U/g的碱性蛋白酶(以下简称碱性蛋白酶B)与实施例2提供的胶原蛋白水解复合酶进行对比。具体地，采用相同用量的碱性蛋白酶B与实施例2提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例6提供的方法进行胶原蛋白水解，在加酶之前，需将pH调至8左右。检测不同反应时间得到的水解液的pH值。结果如表6所示。蛋白质水解度代表4个小时后各个组中蛋白质水解度。

表6 不同反应时间pH的变化

对比例3

本对比例将碱性蛋白酶B与实施例3提供的胶原蛋白水解复合酶进行对比。具体地，采用相同用量的碱性蛋白酶B与实施例3提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例7提供的方法进行胶原蛋白水解，在加酶之前，需将pH调至8左右。检测不同反应时间得到的产物的pH值。结果如表7所示。蛋白质水解度代表4个小时后各个组中蛋白质水解度。

表7 不同反应时间pH的变化

对比例4

本对比例将中性蛋白酶A与实施例4提供的胶原蛋白水解复合酶进行对比。具体地，采用相同用量的中性蛋白酶A与实施例4提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例8提供的方法进行胶原蛋白水解，在加酶之前，需将pH调至7.5左右。检测不同反应时间得到的产物的pH值。结果如表8所示。蛋白质水解度代表8个小时后各个组中蛋白质水解度。

表8 不同反应时间pH的变化

pH越小表明水解程度越深，就表5-表8可以看出，在相同条件下本申请实施例提供的胶原蛋白水解复合酶比中性蛋白酶A/碱性蛋白酶B而言，水解度更高。有利于提高胶原蛋白的水解。

对比例4

本对比例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶30％，中性蛋白酶12％，木瓜蛋白酶6％，风味酶7％以及麦芽糊精45％。

采用相同用量的对比例提供的胶原蛋白水解复合酶与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例5提供的方法进行胶原蛋白水解，反应温度提升到60℃，检测产物的胶原蛋白肽的分子量分布。结果如表9所示。

表9 胶原蛋白肽的分子量分布对比

从表9可以看出，本申请实施例提供的1胶原蛋白水解复合酶与对比例4提供的胶原蛋白水解复合酶在60℃下水解胶原蛋白后得到的胶原蛋白肽平均分子量分布。可以看出：实施例1所提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白后得到的分子量1000以下的胶原蛋白肽占比更多，进一步也说明海藻糖的存在对于高温下的酶活更稳定。

对比例5

本对比例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶10％，中性蛋白酶5％，木瓜蛋白酶4％，风味酶7％，海藻糖3％以及麦芽糊精71％。

采用相同用量的对比例提供的胶原蛋白水解复合酶与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例5提供的方法进行胶原蛋白水解，检测产物的胶原蛋白肽的分子量分布。结果如表10所示：

表10 胶原蛋白肽的分子量分布对比

从表10可以看出，本申请实施例提供的1-对比例5提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白后得到的胶原蛋白肽平均分子量分布，对比例5中胶原蛋白肽分子量小于1000以下的在68.38％。说明实施例1所提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白的效果更佳，因为其分子量1000以下的占比79.66％。

对比例6

本对比例提供的一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶52％，中性蛋白酶20％，木瓜蛋白酶13％，风味酶3％，海藻糖2％以及麦芽糊精10％。

采用相同用量的对比例提供的胶原蛋白水解复合酶与实施例3提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例7提供的方法进行胶原蛋白水解，检测产物的胶原蛋白肽的分子量分布。结果如表11所示：

表11 胶原蛋白肽的分子量分布对比

从表11可以看出，本申请实施例提供的1-对比例6提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白后得到的胶原蛋白肽平均分子量分布，对比例中虽然胶原蛋白肽分子量小于1000以下的在89.72％，但180以下较多。实施例1的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白的效果更佳，因为其分子量1000以下，180以上的占比最多。

对比例7

本对比例提供一种胶原蛋白水解复合酶，胶原蛋白水解复合酶包括以下重量比的组分：

碱性蛋白酶30％，中性蛋白酶19％，木瓜蛋白酶6％，风味酶0％，海藻糖4％以及麦芽糊精41％。

采用相同用量的对比例提供的胶原蛋白水解复合酶与实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶就实施例5提供的方法进行胶原蛋白水解，产物进行口感评测。

评测标准：

优秀(4-5分)：酶解产物无苦味、口感醇厚；

良好(2-3分)：酶解产物无苦味、口感一般；

较差(0-1分)：酶解产物有苦味。

口感评测结果如表12所示。

表12 口感评测结果

从上表中可以看出，实施例1提供的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白后得到胶原蛋白肽的口感比较好，对比例7中不含风味酶的胶原蛋白水解酶水解胶原蛋白得到的胶原蛋白肽的口感较差，同时我们发现独立测评人3的苦味阈值较低。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种胶原蛋白水解复合酶，其特征在于，所述胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：

碱性蛋白酶20～50份，中性蛋白酶7～18份，木瓜蛋白酶5～11份，风味酶5～15份以及海藻糖3～7份。

2.根据权利要求1所述的胶原蛋白水解复合酶，其特征在于，所述胶原蛋白水解复合酶包括按重量份的以下组分：

所述碱性蛋白酶25～45份，所述中性蛋白酶8～15份，所述木瓜蛋白酶6～10份，所述风味酶8～12份以及所述海藻糖5～6份；

可选地，所述碱性蛋白酶30～40份，所述中性蛋白酶10～15份，所述木瓜蛋白酶8～10份，所述风味酶10份以及所述海藻糖5份。

3.根据权利要求1或2所述的胶原蛋白水解复合酶，其特征在于，所述胶原蛋白水解复合酶还包括载体20～45份；

可选地，所述胶原蛋白水解复合酶还包括载体30～45份；

可选地，所述载体选自麦芽糊精或水溶性淀粉中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的胶原蛋白水解复合酶，其特征在于，所述碱性蛋白酶的酶活力为20-50万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为10-20万U/g，所述木瓜蛋白酶的酶活力为20-200万U/g，所述风味酶的酶活力500LAPU/g；

可选地，所述碱性蛋白酶的酶活力为50U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为20万/g，所述木瓜蛋白酶的酶活力为200万U/g，所述风味酶的酶活力为500LAPU/g。

5.一种蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，其包括采用权利要求1-4任一项所述的胶原蛋白水解复合酶水解胶原蛋白原料。

6.根据权利要求5所述的蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白低聚肽的制备方法包括：

取所述胶原蛋白原料、水以及所述胶原蛋白水解复合酶混合后在水解温度为45-60℃下水解3-10h；

可选地，在50-55℃下水解4-6h。

7.根据权利要求6所述的蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白水解复合酶占所述胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.4-1.2％；

可选地，所述胶原蛋白水解复合酶占所述胶原蛋白原料中胶原蛋白重量的0.6-0.8％。

8.根据权利要求6所述的蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，所述水与所述胶原蛋白原料的质量比为0.1:1～2:1；

可选地，所述水与所述胶原蛋白原料的质量比为0.5:1～1:1。

9.根据权利要求7或8所述的蛋白低聚肽的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白原料包括鱼皮、鱼鳞、鱼骨、猪骨、牛骨、羊骨、鸡骨、猪皮、牛皮或者明胶中的至少一种。

10.一种蛋白低聚肽，其特征在于，所述蛋白低聚肽通过权利要求5-9任一项所述的蛋白低聚肽的制备方法制得。