CN110372105B - 一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物制品领域，特别涉及一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂及其制备方法。菌剂为枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、巨大芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、粪链球菌、环状芽孢杆菌、产朊假丝酵母、硝化细菌和反硝化细菌混合菌株发酵产物。本发明中的复合微生物菌剂中即包含有快速提供溶氧的微生物，又含有能分解水体中氨氮、硫化氢和亚硝酸盐的微生物，同时还含有能为水产动物提供生产发育所需营养物质的菌株。各菌株之间优势互补，协同发挥作用；进一步的施加至水体后能快速繁殖形成优势种群，快速分解水产养殖水体中的大分子有机质、残饵粪便等，降解水体中的氨氮、磷、亚硝酸盐、硫化氢等物质，净化水质，提高水体溶氧含量，并可以去除致病菌。
Description
技术领域
本发明属于微生物制品领域，特别涉及一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
我国是世界水产养殖大国，近年来，随着我国水产养殖业发展迅速，养殖规模的不断扩大，水质污染也越来越严重。水体是鱼虾等水产动物生存生长所必须依赖的环境，水质的好坏是水产养殖特别是集约化养殖成败的关键。我国的水产养殖多数采用的是高密度集约化的养殖模式，人类的活动和养殖对象自身的分泌物和排泄物、饵料过剩、药物残留等因素极易导致养殖水体污染，水质因子平衡失调，引起水产养殖动物发病甚至大批量死亡。
目前使用的水质改良剂主要包括物理型水质改良剂、化学型水质改良剂和生物型水质改良剂。物理型水质改良剂主要是通过吸附作用快速将有害物质进行吸附，作用效果缓慢不明显且不易降解。化学型水质改良剂可以与有害物质发生反应从而使其降解，但易形成二次污染，且对水产动物特别是苗期动物具有刺激性和不利影响。生物型水质改良剂能够抑制致病菌的生长繁殖，彻底分解有害物质，且能为水产动物提供微量元素，提升水产动物自身免疫力，修复水体的生态环境。
生物型水质改良剂具体指复合微生物菌剂，是由两种或两种以上且互不拮抗的有益微生物菌种制成，已广泛应用于水产养殖、污水处理等众多领域。但现有微生物制剂的使用受环境温度、水体中化学药物残留等外界条件的影响较大，投施时要求较高，并且菌剂的实际效果会有较大波动。菌剂中的微生物菌株在大量生长繁殖时耗氧，会导致水体中溶解氧的下降，生长过程中的代谢产物会改变水体环境，对水产动物造成一定程度的影响。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂。
本发明的第二目的在于提供该复合微生物菌剂的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供技术方案如下：
一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂，菌剂为枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、巨大芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、粪链球菌、环状芽孢杆菌、产朊假丝酵母、硝化细菌和反硝化细菌混合菌株发酵产物。
所述菌剂为混合菌株发酵液中加入牡蛎粉、生物肽和冻干保护剂，混匀后离心收集沉淀，得到所述复合微生物菌剂；其中，牡蛎粉、生物肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为(1～10)：(0.1～5):(10～20)：100。
所述生物肽为玉米肽；冻干保护剂为按质量比为1-3:1-2的甘油溶液和海藻糖溶液，其中，甘油溶液浓度为30％海藻糖溶液浓度为10％。
所述发酵液为将混合菌株按3％-5％的接种量于发酵液基液中，在30-37℃下光照培养5-8天，至发酵液中的总菌密度达到(1～10)×108个/L时停止发酵；其中，发酵液基液按重量份数计，乙酸30-50份、乙醇50-70份、蔗糖水150-200份、硫酸镁10-30份、磷酸二氢钾20-50份、氯化钠50-100份、碳酸钠20-50份、葡萄糖150-300份和蒸馏水300-500份。
所述混合菌株按重量份数计，枯草芽孢杆菌8-12份、沼泽红假单胞菌10-13份、巨大芽孢杆菌8-12份、嗜酸乳杆菌4-7份、粪链球菌5-8份、环状芽孢杆菌8-11份、产朊假丝酵母7-10份、硝化细菌4-9份和反硝化细菌5-8份。
进一步的，按照重量份，所述的发酵液基液中含有乙酸40份、乙醇60份、蔗糖水180份、硫酸镁20份、磷酸二氢钾35份、氯化钠75份、碳酸钠35份、葡萄糖240份和蒸馏水400份。
一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的制备方法，通过将混合菌株加入至发酵液基液中发酵得到。
所述菌剂为混合菌株发酵液中加入牡蛎粉、生物肽和冻干保护剂，混匀后离心收集沉淀，得到所述复合微生物菌剂；其中，牡蛎粉、生物肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为(1～10)：(0.1～5):(10～20)：100。
进一步的说：
(1)按照所述发酵液基液中各组分重量，分别称取各基料，充分溶解，调pH至7.0，高压灭菌，制成发酵液基液备用；
(2)按照重量份，取枯草芽孢杆菌8-12份、沼泽红假单胞菌10-13份、巨大芽孢杆菌8-12份、嗜酸乳杆菌4-7份、粪链球菌5-8份、环状芽孢杆菌8-11份、产朊假丝酵母7-10份、硝化细菌4-9份和反硝化细菌5-8份，将各菌种分别接种至发酵基液于30-37℃下光照培养3-7天；
(3)将步骤(2)中所获得的各菌液再次分别转接至发酵基液中扩大培养，于30-37℃下光照培养5-8天，至发酵液中的总菌密度达到(1～10)×108个/L时停止发酵；
(4)向所述的发酵液中加入牡蛎粉、生物肽和冻干保护剂，充分搅拌混合8-12h，离心机离心，去除上清液，将沉淀真空冷冻干燥，得到所述复合微生物菌剂。
所述冻干保护剂为按质量比为1-3:1-2的甘油溶液和海藻糖溶液，其中，甘油溶液浓度为30％、藻糖溶液浓度为10％；其中，甘油溶液、海藻糖溶液均为市购产品。
一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的制备方法，所述菌剂作为水产养殖水体的杀菌剂、养殖水体的净化剂或养殖作为的促生长剂中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明中的复合微生物菌剂中即包含有快速提供溶氧的微生物，又含有能分解水体中氨氮、硫化氢和亚硝酸盐的微生物，同时还含有能为水产动物提供生产发育所需营养物质的菌株。各菌株之间优势互补，协同发挥作用；进一步的施加至水体后能快速繁殖形成优势种群，快速分解水产养殖水体中的大分子有机质、残饵粪便等，降解水体中的氨氮、磷、亚硝酸盐、硫化氢等物质，净化水质，提高水体溶氧含量，并可以去除致病菌，如致病性大肠杆菌、霉菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等。该复合菌剂具有良好的稳定性和高效性，可强化水生动物体质并提升动物品质，降低养殖过程中的死亡率。并且该微生物菌剂的制备方法简单，生产成本低。
具体实施方式:
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，但本发明所保护范围不限于此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
实施例1：一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的制备方法，按如下步骤进行：
(1)按照所述发酵液基液中各组分重量，分别称取发酵液基液基料乙酸30克、乙醇50克、蔗糖水150克、硫酸镁10克、磷酸二氢钾20克、氯化钠50克、碳酸钠20克、葡萄糖150克和蒸馏水300克。充分溶解，调pH至7.0，高压灭菌，制成发酵液基液备用；
(2)按照重量份，按照重量份，取枯草芽孢杆菌8克、沼泽红假单胞菌10克、巨大芽孢杆菌8克、嗜酸乳杆菌4克、粪链球菌5克、环状芽孢杆菌8克、产朊假丝酵母7克、硝化细菌4克和反硝化细菌5克，将各菌种按质量比为3％接种量接种至发酵基液于30-32℃下光照培养3-7天后将各菌液再次按质量比为3％接种量接种转接至发酵基液中扩大培养，于30-32℃下光照培养5-8天，至发酵液中的总菌密度达到(8～10)×108个/L时停止发酵。
(3)牡蛎粉、玉米肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为3：1:10：100，其中冻干保护剂为质量分数为30％甘油溶液(即为30g甘油溶于70g水中)和10％海藻糖溶液，两者质量比为3:1。充分搅拌混合10h，4000rpm/min离心，去除上清液，将沉淀按-50℃预冻5h，逐步升温至30℃主干燥共12h进行真空冷冻干燥，得到所述复合微生物菌剂。
实施例2：
复合微生物菌剂按实施例1记载的步骤制备，与实施例1不同之处在于：
(1)按照所述发酵液基液中各组分重量，分别称取发酵液基液基料乙酸40克、乙醇60克、蔗糖水180克、硫酸镁20克、磷酸二氢钾35克、氯化钠75克、碳酸钠35克、葡萄糖240克和蒸馏水400克。充分溶解，调pH至7.0，高压灭菌，制成发酵液基液备用；
(2)按照重量份，按照重量份，取枯草芽孢杆菌10克、沼泽红假单胞菌12克、巨大芽孢杆菌10克、嗜酸乳杆菌5克、粪链球菌7克、环状芽孢杆菌9克、产朊假丝酵母8克、硝化细菌7克和反硝化细菌6克。
(3)牡蛎粉、玉米肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为5：3:15：100(实施例用具体点值)
实施例3：
复合微生物菌剂按实施例1记载的步骤制备，与实施例1不同之处在于：
(1)按照所述发酵液基液中各组分重量，分别称取发酵液基液基料乙酸50克、乙醇70克、蔗糖水200克、硫酸镁30克、磷酸二氢钾50克、氯化钠100克、碳酸钠50克、葡萄糖300克和蒸馏水500克。充分溶解，调pH至7.0，高压灭菌，制成发酵液基液备用；
(2)按照重量份，按照重量份，取枯草芽孢杆菌12克、沼泽红假单胞菌13克、巨大芽孢杆菌12克、嗜酸乳杆菌7克、粪链球菌8克、环状芽孢杆菌11克、产朊假丝酵母10克、硝化细菌9克和反硝化细菌8克。
(3)牡蛎粉、玉米肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为9：5:20：100。
实施例4：利用该方法制备的水产动物专用复合微生物菌剂，选取两个20亩对虾养殖池塘，将上述实施例2菌剂投放至其中一池塘中进行应用试验，其中，投加量为1kg；另一个不作投加作为对照，试验结果如表1：
表1：水产动物应用试验
试验组与对照组相比，试验组池塘中的化学需氧量(COD)，氨氮(NH4+-N)，亚硝基氮(NO2-N)的降解效果明显，复合微生物菌剂投放后，产品的释放周期为1-2个月，投放1个月后，水产养殖池塘水体的各项指标稳定，水质良好。复合微生物菌剂中的有益微生物在生长过程中代谢产生有助于水产动物生长的物质，其效果不仅使水质方面得到极大改善，更进一步的增强了水产动物的自身免疫力和肠道微环境，并且抑制水体中病原微生物的繁殖，其中，试验组比对照组对虾的发病率降低了54％，而对虾产量相对提高了30％，提高了水产养殖的经济效益。
同时将上述实施例获得复合微生物菌剂应用于养殖水体中，也同样具有上述效果。
对比例1：某生物科技有限公司生产的水产养殖用微生物菌剂
方法：取5份水产养殖水体2L，分别加入上述实施例2与某生物科技有限公司生产的水产养殖用微生物菌剂(主要含枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌)2g，每三天加菌剂一次，连续投料三周后，测定结果。
试验前水体各成分含量表如表1
表1
| COD(mg/L) | NH<sub>4</sub><sup>+</sup>-N(mg/L) | 总氮(mg/L) | 总磷(mg/L) | NO<sub>2</sub><sup>-</sup>-N(mg/L) |
| 193 | 9.5 | 17.4 | 2.07 | 1.88 |
加微生物菌剂后水体检测具体情况如表2
表2
由上述对比可知，本发明所生产的微生物菌剂，有效解决水产养殖的水体污染问题，且不易产生二次污染。
对比例2：某生物科技有限公司生产的水产养殖用微生物菌剂
方法：选取4个20亩对虾养殖池塘，分别施加实施例2与对比例(某生物科技有限公司生产的水产养殖用微生物菌剂，其含枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌)所制备的微生物菌剂1000g，其中一个不添加任何微生物菌剂，每15天施加菌剂一次，连续投料三月后，测定结果。
| 检测项目 | 实施例2 | 对比例 | 未添加菌剂组 |
| 平均每只对虾重量g | 30.4 | 24.7 | 20.3 |
由上述对比可知，本发明所生产的微生物菌剂，改善了水产动物的生长状况，提高水产品的产量和质量。是一种安全高效的水产养殖用微生物菌剂，值得推广和使用。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (4)
1.一种改良水产养殖水体的复合微生物菌剂，其特征在于：菌剂为混合菌株发酵液中加入牡蛎粉、生物肽和冻干保护剂，混匀后离心收集沉淀，得到所述复合微生物菌剂；其中，牡蛎粉、生物肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为(1~10):(0.1~5):(10~20):100；混合菌株为枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、巨大芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、粪链球菌、环状芽孢杆菌、产朊假丝酵母、硝化细菌和反硝化细菌的混合菌株；
所述水产为对虾；
所述冻干保护剂为按质量比为1-3:1-2的甘油溶液和海藻糖溶液；其中，甘油溶液浓度为30%，海藻糖溶液浓度为10%；
所述发酵液为将混合菌株按3%-5%的接种量于发酵液基液中，在30-37℃下光照培养5-8天，至发酵液中的总菌密度达到(1~10)×108个/L时停止发酵；其中，发酵液基液按重量份数计，乙酸30-50份、乙醇50-70份、蔗糖水150-200份、硫酸镁10-30份、磷酸二氢钾20-50份、氯化钠50-100份、碳酸钠20-50份、葡萄糖150-300份和蒸馏水300-500份；
所述混合菌株按重量份数计，枯草芽孢杆菌8-12份、沼泽红假单胞菌10-13份、巨大芽孢杆菌8-12份、嗜酸乳杆菌4-7份、粪链球菌5-8份、环状芽孢杆菌8-11份、产朊假丝酵母7-10份、硝化细菌4-9份和反硝化细菌5-8份。
2.一种权利要求1所述的改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：通过将混合菌株加入至发酵液基液中发酵得到发酵液，发酵液中加入牡蛎粉、生物肽和冻干保护剂，混匀后离心收集沉淀，得到所述复合微生物菌剂；其中，牡蛎粉、生物肽、冻干保护剂与所述发酵液的质量比为(1~10):(0.1~5):(10~20):100。
3.按权利要求2所述的改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述冻干保护剂为按质量比为1-3:1-2的甘油溶液和海藻糖溶液；其中，甘油溶液浓度为30%，海藻糖溶液浓度为10%。
4.一种权利要求1所述的改良水产养殖水体的复合微生物菌剂的应用，其特征在于：所述菌剂作为水产养殖水体的杀菌剂、养殖水体的净化剂或作为养殖的促生长剂的应用。
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