CN118490598A - 一种退红修护因子的制备工艺与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种退红修护因子的制备工艺，具体步骤包括原料的粉碎、提取、发酵等步骤。使用积雪草、燕麦仁和玫瑰作为植物原料，通过水提获得植物提取物，再通过发酵生产工艺，控制发酵过程中的发酵温度、时间、发酵环境等条件，实现了一种新型修护原料的制备，提升了原料功效，同时降低产品毒性，改善了产品的安全性。本发明制备工艺简单，条件温和，制备的退红修护因子天然安全无毒副作用、刺激性低，具有抗菌抗炎、快速退红、促进伤口愈合、舒缓修护等效果。本发明同时提供一种止痒修护凝胶，其使用退红修护因子作为原料，同样具有优异的抗炎修护等效果。

Description

一种退红修护因子的制备工艺与应用

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种退红修护因子的制备工艺与应用。

背景技术

随着经济水平的提高，工业化的发展，我们所处的环境如空气、水等受到一定的污染，这直接间接或直接的影响这我们的皮肤，越来越多人的皮肤变得敏感脆弱，这使得人们越来越注重对皮肤的护理修护。

天然植物中存在多种活性物质，如多糖、多肽、黄酮、氨基酸等，但是天然植物原料中有效成分含量较低、传统提取不充分、提取难度较大。且由于植物提取物的成分复杂，不可避免会存在一些具有毒副作用或刺激性的成分，影响了其在化妆品原料中的应用。发酵技术是一种利用微生物的生物活性将有机物质转化为具有特定生物户型产物的过程，通过发酵可以促进活性物释放、富集或转化生成新的活性物、增强并拓展功效、降低毒副作用，有助于原料的生物利用度。植物发酵类化妆品由于具有绿色、环保、可生物降解性，安全性更高，已成为时下化妆品行业中的热潮。

但是发酵技术工艺难度较高，需要对发酵条件、发酵过程进行严格控制，发酵过程会受到微生物菌种、原料、生长条件等多因素影响，这些因素会影响发酵产物的活性和产量。如何针对更多植物资源通过现代发酵技术实现绿色生物制造，最大程度的促进植物功效成分的释放及转化，从而获取更多新型抗菌、抗炎、去皱、修护等功效成分，是美妆行业亟待解决的关键科学问题。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种退红修护因子的制备工艺，对植物原料进行活性成分提取后，使用乳酸杆菌对植物提取物进行发酵，促进了植物功效成分的释放和转化，实现了一种新型修护原料的制备，并成功将其应用于化妆品产品中。

本发明第一方面提供一种退红修护因子的制备工艺，所述制备工艺的具体步骤如下：

步骤S1：将积雪草、燕麦仁和玫瑰花分别洗净干燥，使用粉碎机粉碎后过80-100目筛，将过筛后的积雪草粉末、燕麦仁粉末和玫瑰花粉末置于提取器中混合，加水后在70-80℃浸泡3-5h，过滤后取滤液；重复浸泡至少两次后，合并滤液并浓缩至原体积的1/3-1/5，得到植物提取物；

步骤S2：使用接种环将乳酸杆菌接种至固体培养基，在35-37℃培养24-48h；挑取菌丝至新的液体培养基，在35-37℃进行摇床培养，得到乳酸杆菌菌种种子液；

步骤S3：将乳酸杆菌菌种种子液接入装有植物提取的发酵培养基中，搅拌均匀，在温度为35-40℃条件下摇床培养70-80h后，离心取上清液，过滤后加入溶剂，灭菌后即得所述退红修护因子。

优选的，所述步骤S1中，混合时的积雪草粉末、燕麦仁粉末和玫瑰花粉末的质量比为1:1-2:1-2。发明人发现，各原料在此添加量条件下，最终制得的退红修护因子具有最好的抗炎、修护等效果。

为了进一步提高对植物原料中活性成分的提取率，优选的，所述步骤S1中，料液比为1:20-25g/mL。例如，可列举的有：1:20g/mL、1:21g/mL、1:22g/mL、1:23g/mL、1:24g/mL、1:25g/mL。本发明中并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。

积雪草提取物中含有积雪草苷、羟基积雪草苷等多种三萜类化合物，其具有优异的抗氧化、促进蛋白再生、紧致去皱的效果和抗菌作用，能够镇定肌肤、促愈皮肤损害。燕麦仁提取物中主要含有β-葡聚糖、黄酮类化合物及多种抗氧化的物质(酚类物质、生物碱及维生素E等)，拥有优异的抗衰老功效，并且具有非常好的抗炎止痒活性，能够有效减少促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1的产生来抑制NF-κB的活化，从而抑制炎症反应基因的活化表达。玫瑰提取物含有大量的维生素、氨基酸、可溶性糖和生物碱等成分，具有舒缓抗敏、消炎抗菌、抗氧化等效果。

不同的植物来源含有不同种类和含量的发酵产物。本发明中使用积雪草、燕麦仁和玫瑰作为植物原料，对其提取物进行乳酸杆菌发酵，先将植物原料粉碎至特定目数后进行水提，水提过程中需特别控制温度为70-80℃及料液比为1:20-25g/mL，在该条件下，能够获得较多的活性成分。再通过控制发酵过程中的发酵温度和时间等条件，实现其活性成分的充分转化释放，同时降低产品毒性，改善了产品的安全性。

优选的，所述步骤S2中，液体培养基的装液量为100mL/250mL，摇床转速为140-170r/min。

优选的，所述步骤S2中，摇床培养至乳酸杆菌菌种种子液的浓度为10^7-9cfu/ml。

优选的，所述乳酸杆菌为嗜酸乳杆菌。

优选的，步骤S3中，所述乳酸杆菌菌种种子液的接种量为5-10％(v/v)。

优选的，所述步骤S3中，发酵培养基的pH为5.5-6.0。

发酵是利用微生物的活性将有机物进行转化的过程，在此过程中，菌种种子液的接种量会直接影响到发酵产物中的活性成分，影响所述退红修护因子的抗炎、修护等效果。若菌种接种量过小，其生长缓慢，且需要发育多代才能起到较好的发酵效果，会导致菌丝群体间差异较大，影响发酵的稳定性。但是若接种量过大，菌丝浓度过大，可能会导致前期菌丝代谢迅速、衰老过快，同样会影响发酵产品的稳定性和性能。并且，菌种的成长条件同样会影响发酵效果，由于乳酸杆菌是耐酸嗜酸的细菌，因此还需要控制发酵培养基pH值、温度等条件。

优选的，所述步骤S3中，摇床培养的转速为100-130r/min。

优选的，所述步骤S3中，离心速率为7000-9000r/min，时间为20-40min。

优选的，所述步骤S3中，过滤时使用0.5-1μm滤膜过滤。

优选的，步骤S3中，所述溶剂为丁二醇；所述丁二醇和滤液的质量比为5-6:4-5。

优选的，所述步骤S3中，灭菌的条件为110-125℃灭菌30-50min。

本发明第二方面提供根据上述制备工艺制备的退红修护因子在化妆品中的应用，所述退红修护因子在化妆品中的添加量为0.1-10％w/w。

优选的，所述退红修护因子用于制备一种止痒修护凝胶，按重量百分比计，所述止痒修护凝胶的原料由以下成分组成：卡波姆0.1-0.3％、保湿剂0.1-0.5％、对羟基苯乙酮0.3-0.5％、三乙醇胺0.1-0.3％、盐生杜氏藻提取物0.5-1.5％、SPG裂裥菌素2-4％、退红修护因子3--5％、二元醇0.3-0.5％、溶剂余量。

优选的，所述保湿剂为透明质酸钠和小核菌胶，所述透明质酸钠和小核菌胶的质量比为1:0.8-1.2。

优选的，所述透明质酸钠的分子量为1500k-2000k Da。

小核菌胶在所述止痒修护凝胶中不仅具有保湿锁水效果，同时其可以提高产品的粘度，使凝胶保持较好的胶状体系。同时本发明配合使用分子量为1500k-2000k Da的透明质酸钠，其具有粘弹性、润滑性和保湿性，并且由于其更大的链长，与小核菌胶互相缠绕形成更稳定的凝胶体系，同时分子间可能会自缠绕或形成互相交联的网络结构，能够使产品体系中的小分子活性成分更好的分散与被固定。如体系中使用的退红修护因子中就含有大量的多糖、多肽等成分，当其分散于网络结构中，能使其更长久的稳定分散，并且在使用时随着透明质酸钠在皮肤表层形成的保护膜而被固定在皮肤表面，起到更持久的渗透、修护效果。

优选的，所述二元醇为己二醇、丁二醇、丙二醇中的一种或多种混合。本发明中，优选的为己二醇。

优选的，所述溶剂为甘油和水。更优选的，所述甘油和水的质量比为1-1.3:1。

优选的，所述止痒修护凝胶的制备方法如下：

将卡波姆、保湿剂、对羟基苯乙酮、溶剂加入主锅中，搅拌加热至85℃均质溶解后保温20min以上；在降温至45℃时加入三乙醇胺、盐生杜氏藻提取物、SPG裂裥菌素、退红修护因子和二元醇，搅拌均匀后，即得所述止痒修护凝胶。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明中使用积雪草、燕麦仁和玫瑰作为植物原料，通过水提获得植物提取物，再通过发酵生产工艺，控制发酵过程中的发酵温度、时间、发酵环境等条件，实现了一种新型修护原料的制备，提升了原料功效，同时降低产品毒性，改善了产品的安全性。本发明制备工艺简单，条件温和，制备的退红修护因子天然安全无毒副作用、刺激性低，具有抗菌抗炎、快速退红、促进伤口愈合、舒缓修护等效果。应用于化妆品中具有极好的配伍性和稳定性，制得的化妆品产品同样具有优异的抗炎修护等效果。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的退红修护因子的样品图。

图2为本发明实施例1制备的退红修护因子的修护效果测试图。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下面结合具体的实施方式对本发明做进一步的解释说明。

实施例

实施例1

本实施例提供一种退红修护因子的制备工艺，所述制备工艺的具体步骤如下：

步骤S1：将积雪草、燕麦仁和玫瑰花分别洗净干燥，使用粉碎机粉碎后过80目筛，将过筛后的10g积雪草粉末、15g燕麦仁粉末和15g玫瑰花粉末置于提取器中混合，加入料液比为1:25g/mL的水后在75℃浸泡4h，过滤后取滤液；在滤渣中再次加入料液比1:20g/mL的水后在75℃浸泡4h，过滤取滤液，合并滤液并浓缩至原体积的1/5，得到植物提取物；

步骤S2：使用接种环将乳酸杆菌(嗜酸乳杆菌，菌种编号为SHMCC(SHBCC)D24723，购于上海保藏微生物有限公司)接种至固体培养基(LBS琼脂培养基，购于青岛海博生物)，在36℃培养40h；挑取菌丝至新的液体培养基，液体培养基的装液量为100mL/250mL，在36℃进行摇床培养2d，摇床转速为140-170r/min，得到乳酸杆菌菌种种子液；

步骤S3：按8％(v/v)的接种量将乳酸杆菌菌种种子液接入装有植物提取的发酵培养基中，控制发酵培养基的pH为5.5-6.0，搅拌均匀，在温度为38℃条件下摇床培养75h后，摇床培养的转速为120r/min；8000r/min离心30min后取上清液，使用1μm滤膜过滤加入丁二醇，丁二醇和滤液的质量比为1:1，灭菌后即得所述退红修护因子。

实施例2

本实施例提供一种退红修护因子的制备工艺，具体实施方式同实施例，与实施例1的区别在于，步骤S3中，菌种种子液的接种量为12％。

(1)修护效果测试：

根据T/OGCML450-2022《化妆品修复功效的测定斑马鱼胚胎法》对实施例1和实施例2的退红修护因子进行修护功效的测试(鱼胚法)，通过空白对照组验证样品的组织修护功效。通过检测样品对斑马鱼幼鱼损伤尾鳍生长的影响，探究样品的修护功效。

样品计量分组：0.25％的退红修护因子。

对照信息：空白对照组：标准稀释水。

主要操作步骤：随机挑选发育正常的72hpf斑马鱼幼鱼，0.02％三卡因麻醉后，切去尾鳍后，置于28℃生化培养箱孵育2h,体视显微镜下拍照记录,随后将斑马鱼幼鱼转移到96孔板中,每组20尾,每孔加入400μI的样品溶液，置于28℃生化培养箱孵育72h后，体视显微镜下拍照记录，并用1mageJ测量斑马鱼尾鳍前后生长情况。实验设置空白对照组和不同浓度的样品组。

实施例1的退红修护因子对斑马鱼幼鱼尾鳍组织修护的影响图1所示。实施例1和实施例2的影响如表1所示。

实验结果显示:经过0.25％的退红修复因子(实施例1)处理斑马鱼72h后尾鳍相对增长率为107.12±1.90％,与空白对照组(100.00±1.52％)相比增加7.12％(p<0.05)。在此实验条件下，0.25％的退红修复因子具有促进组织修护的功效(显著)。实施例2的退红修护因子同样具有修护效果，但是较实施例1的退红修护因子效果略差。

表1

试验组	空白对照组	0.25％(实施例1)	0.25％(实施例2)
				尾鳍再生增长率(％)	100.00±1.52	107.10±1.90	105.30±1.7
P值	/	0.0245	0.0297

(2)急性经皮毒性试验

根据《化妆品安全技术规范》(2015版)第六章3急性经皮毒性试验进行测试。试验结果如表2所示。

表2

染毒动物在14天观察期内体重均正常增长，且未见死亡及异常症状，试验结束对所有动物大体解剖，肉眼观察未见异常。

试验结果说明：该样品对大鼠的急性经皮毒性LDso>2180mg/kg体重，无显著毒性且无死亡。

(3)急性眼刺激性试验

根据《化妆品安全技术规范》(2015版)第六章5急性眼刺激性/腐蚀性试验进行测试。

试验结果显示，该样品(退红修护因子)滴眼后动物角膜、虹膜或结膜各自在24、48、72小时观察时点的刺激反应积分的均值为0。属无刺激性。

实施例3

本实施例提供一种止痒修护凝胶，按重量百分比计，止痒修护凝胶的原料由以下成分组成：卡波姆0.2％、保湿剂0.3％、对羟基苯乙酮0.5％、三乙醇胺0.2％、盐生杜氏藻提取物1％、SPG裂裥菌素3％、退红修护因子4％、己二醇0.5％、溶剂余量。

保湿剂为质量比为1:1的透明质酸钠(分子量为2000k Da)和小核菌胶。溶剂为质量比为1.2:1的甘油和水。盐生杜氏藻提取物、SPG裂裥菌素购于广州宾缇生物科技有限公司。卡波姆为卡波姆940，购于路博润。

本实施例还提供一种止痒修护凝胶的制备方法，具体步骤为：将卡波姆、保湿剂、对羟基苯乙酮、溶剂加入主锅中，搅拌加热至85℃均质溶解后保温30min；在降温至45℃时加入三乙醇胺、盐生杜氏藻提取物、SPG裂裥菌素、退红修护因子和己二醇，搅拌均匀后，即得所述止痒修护凝胶。

修护效果测试：

根据T/OGCML450-2022《化妆品修复功效的测定斑马鱼胚胎法》对实施例3的止痒修护凝胶进行修护功效的测试(鱼胚法)，实验结果显示：:经过止痒修护凝胶处理斑马鱼72h后尾鳍相对增长率为109.31±1.20％,与空白对照组(100.00±1.37％)相比增加9.31％(p<0.05)。在此实验条件下，止痒修护凝胶具有促进组织修护的功效(显著)。

实施例4

本实施例提供一种止痒修护凝胶，具体实施方式同实施例2，与实施例2的区别在于，保湿剂为小核菌胶。

实施例5

本实施例提供一种止痒修护凝胶，具体实施方式同实施例2，与实施例2的区别在于，透明质酸钠的分子量为1000kDa。

对实施例3-5的止痒修护凝胶进行稳定性测试，取实施例3-5的止痒修护凝胶，分别置于密闭容器中，在37±2℃环境温度下进行存放，进行加速老化测试，在第2个月末取样检测pH、观察产品外观。测试结果如下表3。

表3

实施例	实施例3	实施例4	实施例5
				pH	5.1	5.0	4.8
外观	淡黄色凝胶	颜色略有加深	颜色加深，胶体不均匀

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种退红修护因子的制备工艺，其特征在于，所述制备工艺的具体步骤如下：

步骤S1：将积雪草、燕麦仁和玫瑰花分别洗净干燥，使用粉碎机粉碎后过80-100目筛，将过筛后的积雪草粉末、燕麦仁粉末和玫瑰花粉末置于提取器中混合，加水后在70-80℃浸泡3-5h，过滤后取滤液；重复浸泡至少两次后，合并滤液并浓缩至原体积的1/3-1/5，得到植物提取物；

步骤S2：使用接种环将乳酸杆菌接种至固体培养基，在35-37℃培养24-48h；挑取菌丝至新的液体培养基，在35-37℃进行摇床培养，得到乳酸杆菌菌种种子液；

步骤S3：将乳酸杆菌菌种种子液接入装有植物提取的发酵培养基中，搅拌均匀，在温度为35-40℃条件下摇床培养70-80h后，离心取上清液，过滤后加入溶剂，灭菌后即得所述退红修护因子。

2.根据权利要求1所述的一种退红修护因子的制备工艺，其特征在于，所述步骤S1中，混合时的积雪草粉末、燕麦仁粉末和玫瑰花粉末的质量比为1:1-2:1-2。

3.根据权利要求1所述的一种退红修护因子的制备工艺，其特征在于，所述步骤S1中，料液比为1:20-25g/mL。

4.根据权利要求1所述的一种退红修护因子的制备工艺，其特征在于，步骤S3中，所述乳酸杆菌菌种种子液的接种量为5-10％(v/v)。

5.根据权利要求1所述的一种退红修护因子的制备工艺，其特征在于，所述步骤S3中，发酵培养基的pH为5.5-6.0。

6.根据权利要求1-5任一项所述的制备工艺制备的退红修护因子在化妆品中的应用，其特征在于，所述退红修护因子在化妆品中的添加量为0.1-10％w/w。

7.一种止痒修护凝胶，其特征在于，所述止痒修护凝胶的原料包含根据权利要求1-5任一项所述的制备工艺制备的退红修护因子；按重量百分比计，所述止痒修护凝胶的原料由以下成分组成：卡波姆0.1-0.3％、保湿剂0.1-0.5％、对羟基苯乙酮0.3-0.5％、三乙醇胺0.1-0.3％、盐生杜氏藻提取物0.5-1.5％、SPG裂裥菌素2-4％、退红修护因子3-5％、二元醇0.3-0.5％、溶剂余量。

8.根据权利要求7所述的一种止痒修护凝胶，其特征在于，所述保湿剂为透明质酸钠和小核菌胶，所述透明质酸钠和小核菌胶的质量比为1:0.8-1.2。

9.根据权利要求7所述的一种止痒修护凝胶，其特征在于，所述二元醇为己二醇、丁二醇、丙二醇中的一种或多种混合。

10.根据权利要求7所述的一种止痒修护凝胶，其特征在于，所述止痒修护凝胶的制备方法如下：

将卡波姆、保湿剂、对羟基苯乙酮、溶剂加入主锅中，搅拌加热至85℃均质溶解后保温20min以上；在降温至45℃时加入三乙醇胺、盐生杜氏藻提取物、SPG裂裥菌素、退红修护因子和二元醇，搅拌均匀后，即得所述止痒修护凝胶。