CN115243724A

CN115243724A - 可用于治疗癌症的经调配和/或共调配的含有TFGβ拮抗剂前药的脂质体组合物和其方法

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Publication number: CN115243724A
Application number: CN202180019109.8A
Authority: CN
Inventors: D·斯托弗; D·巴拉利; B·A·哈伊; T·萨法伊
Original assignee: Nano Medical Co ltd
Current assignee: Nano Medical Co ltd
Priority date: 2020-02-19
Filing date: 2021-02-19
Publication date: 2022-10-25
Also published as: JP2023514324A; KR20220143063A; WO2021167703A1; EP4096716A1; CA3170142A1; US11801304B2; US20240050575A1; AU2021223336A1; US20210260197A1

Abstract

本文公开了经调配和/或共调配的包括TB前药的脂质体(LNP)和固体脂质纳米颗粒(SLNP)以及制备所述LNP和所述SLNP的方法。TB前药组合物包括药物部分、脂质部分和连接单元，所述TB前药组合物抑制ALK5。所述TB前药可以被调配和/或共调配到脂质体或固体脂质纳米颗粒中，以提供通过利用靶向药物递送媒剂来治疗癌症、免疫病症和其它疾病的方法。

Description

可用于治疗癌症的经调配和/或共调配的含有TFGβ拮抗剂前药的脂质体组合物和其方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年2月19日提交的美国临时专利申请第62/995,887号的优先权，所述美国临时专利申请的内容通过引用完全并入本文。

在联邦政府资助的研究下作出的发明的权利声明

不适用。

技术领域

本文所描述的本发明涉及在活性抑制剂从前药释放之后抑制由转化生长因子β1、2或3(“TGFβ”)蛋白诱导的信号转导的前药组合物和包括此类前药的纳米调配物。具体地，本发明涉及在纳米载剂(例如，脂质体)内调配并用作人癌症治疗的媒剂的前药组合物。本发明还涉及此类前药与其它免疫调节剂或前药的共调配物。本发明进一步涉及癌症以及其它免疫病症和疾病的治疗。

背景技术

癌症在全世界是仅次于冠心病的第二大死亡原因。每年有数百万人死于癌症，并且仅在美国，每年就有超过50万人死于癌症，其中2017年诊断出1,688,780例新癌症病例(美国癌症协会(American Cancer Society))。尽管因心脏病的死亡一直显著下降，但癌症导致的死亡总体上在增加。下个世纪初，除非医学发展改变目前的趋势，否则预测癌症将成为主要死因。

若干癌症的死亡率很高。具体地，肺癌(占所有癌症死亡的18.4％)、乳腺癌(占所有癌症死亡的6.6％)、结直肠癌(占所有癌症死亡的9.2％)、肝癌(占所有癌症死亡的8.2％)和胃癌(占所有癌症死亡的8.2％)是全世界各年龄段两性癌症死亡的主要原因(GLOBOCAN 2018)。这些癌和几乎所有其它癌共享共同的致命特征，即其转移到远离原发肿瘤的部位，并且除极少数例外，转移性疾病是致命的。此外，即使是最初在原发癌中幸存下来的那些癌症患者，共同的经验也已经表明，所述癌症患者的生活大大改变。许多癌症患者经历由意识到有复发或治疗失败的可能驱动的强烈的焦虑。许多癌症患者还在治疗后还经历身体虚弱。此外，许多癌症患者经历疾病复发。

尽管癌症疗法在过去的几十年中已经有所改善并且存活率已有所提高，但是癌症的异质性仍然需要利用多种治疗模式的新治疗性策略。这在治疗有时限制于标准放射疗法和/或化疗的解剖学关键部位处的实体瘤(例如，胶质母细胞瘤、头颈部鳞状细胞癌和肺腺癌)时尤其如此。但是，这些疗法的有害效应是化学抗性和辐射抗性，除了降低患者生活质量的严重副作用外，所述化学抗性和辐射抗性还促进局部复发、远处转移和第二原发肿瘤。

TGFβ是指细胞因子转化生长因子β超家族的多肽子集。其是进行许多细胞功能的分泌蛋白，所述细胞功能包含控制细胞生长、细胞增殖、细胞分化和细胞凋亡。在人体内，TGFβ1由TGFB1基因编码。在功能上，TGFβ在诱导转化时与TGF-α协同作用。其还充当负自分泌生长因子。TGFβ激活和信号传导的失调可能导致细胞凋亡。许多细胞合成TGFβ，并且几乎所有细胞都具有这些细胞因子的特异性受体。TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3都通过相同的受体信号传导系统发挥作用。TGFβ在控制免疫系统中起重要作用，并且对不同类型的细胞或处于不同发育阶段的细胞显示出不同的活性。大多数免疫细胞(或白细胞)分泌TGFβ。参见莱特里奥(LETTERIO)等人,TGF-β对免疫应答的调节(Regulation of Immune Responses byTGF-beta),免疫学年度评论(Annu.Rev.Immunol),16:第137-161页(1998)。据教导，一些T细胞(例如，调节性T细胞)释放TGFβ来抑制其它T细胞的作用。例如，通过TGF-β1的活性阻止激活的T细胞的白介素1依赖性增殖和白介素2依赖性增殖，以及静止辅助T细胞和细胞毒性T细胞的激活。参见吉尔伯特(GILBERT)等人,转化生长因子β1诱导原初T细胞抗原特异性无应答性(Transforming growth factor-beta 1induces antigen-specificunresponsiveness in

Tcells),免疫学研究(Immunol.Invest.),26(4):第459-472页(1997)和华尔(WAHL)等人,TGF-β：免疫特权的移动提供者(TGF-beta:a mobilepurveyor of immune privilege),免疫学综述(Immunol.Rev.),213:第213-227页(2006)。类似地，TGFβ可以抑制许多其它细胞因子的分泌和活性，包含干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和各种白介素。其还可以降低如IL-2受体等细胞因子受体的表达水平，以下调免疫细胞的活性。另外，TGFβ对B细胞也有类似的作用，所述作用也因细胞的分化状态而异。其抑制B细胞的增殖并刺激细胞凋亡，并在控制未成熟和成熟B细胞上的抗体、转铁蛋白和MHCII类蛋白的表达时发挥作用。勒布曼(LEBMAN)等人,TGF-β在b淋巴细胞的生长、分化和成熟中的作用(The role of TGF-beta in growth differentiation,and maturation of blymphocytes),微生物与感染(Microbes Infect.),1(15)第1297-1304页(1999)。最后，TGFβ对巨噬细胞和单核细胞的作用主要是抑制性的；此细胞因子可以抑制这些细胞的增殖并阻止其产生活性氧(例如，过氧化物(O₂ ^-))和氮(例如，一氧化氮(NO))中间体。然而，与其它细胞类型一样，TGFβ也可以对髓系来源的细胞产生相反的作用。参见华尔等人，同上。还表明，TGFβ降低了星形胶质细胞和树突状细胞中MHC II的功效，这进而降低了适当辅助T细胞群体的激活。参见唐(TANG)等人,Smad3蛋白参与TGF-β对II类反式激活因子和II类MHC表达的抑制(The Smad3 protein is involved in TGF-beta inhibition of class IItransactivator and class II MHC expression),免疫学杂志(J.of Immun),167(1):第311-319页(2001)。

TGFβ通过首先与TGFβ受体II(TGFβRII)结合而引发胞内信号，这随后募集第二受体TGFβRI(TGFβRI)，其也称为激活素样激酶5(ALK5)。在募集到TGFβ受体：配体复合物中后，TGFβRII磷酸化并激活介导下游信号传导的ALK5，从而导致转录调节。据教导，肿瘤中的ALK5缺失或突变似乎是通路改变的常见形式。然而，旨在抑制ALK5级联的努力已显示出希望。参见卢马斯(LOOMAS)等人,激活素受体样激酶：一个在癌症中发挥重要作用的多样化家族(Activin receptor-like kinases:a diverse family playing an important rolein cancer),美国癌症研究杂志(Am.J.Cancer Res.)6(11):第2431-2447页(2016)。

目前，已鉴定了多种选择性抑制ALK5的小分子激酶抑制剂，并已作为抗癌剂开发到临床阶段测试。Galunisertib(LY2157229)和Vactosortib(TEW-7197)是临床试验中最先进的治疗候选者，并已证明作为单一药剂和与经批准药物的组合疗法在人中具有抗癌疗效，从而验证了此机制作为具有临床意义的方法。然而，剂量受到这些分子诱导的心脏毒性的限制，并且与其它治疗风险的组合会增加全身性脱靶毒性。

前药是在施用后代谢(即在体内转化)成药理活性药物的药物或化合物。替代直接施用药物，使用对应前药来改善药物的吸收、分配、代谢和/或排泄方式。例如，当药物本身在胃肠道中吸收不良时，前药通常被设计成用于提高生物利用度。前药可以用于改善药物如何选择性地与不是其预期靶标的细胞或过程相互作用。这减少药物的不良作用或意外作用，这在像化疗等治疗中尤其重要，因为所述治疗可能会产生严重的意外和不期望副作用。因此，可以将前药视为含有特化的无毒保护基团的药物，这些无毒保护基团以瞬时方式用于改变或消除母体分子中的不期望特性。

最后，纳米载剂是用作运输另一种物质，如药物的纳米材料。存在许多不同类型的纳米载剂。例如，纳米载剂包含聚合物缀合物、聚合物纳米颗粒、基于脂质的载剂和树状大分子等，仅举几例。纳米载剂中使用的不同类型的纳米材料允许将疏水性药物和亲水性药物递送到全身。由于人体主要含有水，因此在人体内递送疏水性药物的能力是纳米载剂的主要治疗益处。纳米载剂在药物递送过程中显示出了前景，因为其可以将药物递送到部位特异性靶标，从而允许要将药物递送在某些器官或细胞中而不是在其它器官或细胞中。部位特异性是主要的治疗益处，因为其可以阻止药物被递送到错误的地方。另外，纳米载剂在化疗中显示出具体应用前景，因为其可以帮助减少化疗对身体周围的健康、快速生长的细胞的不良、更广泛的毒性。由于化疗药物可能对人体细胞具有极高的毒性，因此重要的是其在不释放到身体的其它部分的情况下被递送到肿瘤中。

根据前述内容，对于本领域技术人员而言将显而易见的是，在癌症和其它免疫疾病的治疗中需要新的治疗范例。通过将新型前药与现代纳米载剂模式结合使用，可以实现新的疾病治疗，其中总体目标是更有效的治疗，减少副作用，并在癌症治疗中发挥更大的治疗效用，特别是在实体瘤中的癌症治疗中。

考虑到与癌症治疗相关的当前缺陷，本发明的目的是提供利用纳米载剂内包封的前药治疗癌症、免疫病症和其它疾病的新的且经改进的方法。

发明内容

本发明提供了ALK5抑制剂前药(“TB前药”)组合物，所述组合物包括ALK5抑制剂、脂质和生物可切割接头。在某些实施例中，包括TB前药的纳米载剂被调配用作治疗人疾病，如癌症，包含实体肿瘤癌症以及其它免疫病症的递送模式。在某些实施例中，纳米载剂包括能够并入到药物递送媒剂(即，脂质体)的脂质双层。在另外的优选实施例中，脂质体包括胆固醇半琥珀酸酯(“CHEMS”)。在另外的优选实施例中，本发明的脂质体包括硬脂酸。

在另外的实施例中，本公开的TB前药包括TB4前药。

在另外的实施例中，本发明包括将ALK5抑制剂递送到肿瘤的方法，所述方法包括：(i)合成TB前药；(ii)将本发明的TB前药调配在本发明的纳米载剂中；以及(iii)将纳米载剂施用于患者。

在另一个实施例中，本发明包括将具有一或多种另外的免疫调节剂的ALK5抑制剂递送到肿瘤的方法，所述方法包括(i)合成TB前药；(ii)将本发明的TB前药与本发明的一或多种另外的免疫调节剂共调配在纳米载剂中；以及(iii)将纳米载剂施用于患者。

在另一个实施例中，免疫调节剂包括免疫原性细胞死亡诱导化疗剂、PD-1拮抗剂、toll受体激动剂、STING激动剂、IDO抑制剂、CTLA4抑制剂、CD1D激动剂和/或其前体药物。

在另一个实施例中，本公开教导了合成TB前药的方法。

在另一个实施例中，本公开教导了合成TB4前药的方法。

在另一个实施例中，本公开教导了将TB前药调配在纳米载剂内的方法，包含但不限于脂质体。

在另一个实施例中，本公开教导了将TB4前药调配在纳米载剂内的方法，包含但不限于脂质体。

在另一个实施例中，本公开教导了使用本公开的纳米载剂治疗人的一或多种癌症、免疫病症和其它疾病的方法。

附图说明

图1：TB4前药的化学合成。

图2：在到最终TB4前药途中的保护基团中间体的化学合成。

图3：在到最终TB4前药途中的保护基团中间体的化学合成。

图4：使用羧酸官能度的ALK5抑制剂前药合成方案。

图5：使用乙醇官能度的ALK5抑制剂前药合成方案。

图6：使用仲胺官能度、仲酰胺官能度或仲苯胺官能度的ALK5抑制剂前药合成方案。

图7：包括硬脂酸的TB4前药的化学合成。

图8：LNP-TB4脂质体的表征。

图9：LNP-TB4脂质体(ζ电位)的表征。

图10：LNP-TB4-ID3脂质体的表征。

图11：LNP-TB4-ID3脂质体的表征(ζ电位)。

图12：SLNP-TB4固体脂质纳米颗粒的表征。

图13：SLNP-TB4固体脂质纳米颗粒的表征(ζ电位)。

图14：SLNP-TB4-ID3固体脂质纳米颗粒的表征。

图15：SLNP-TB4-ID3固体脂质纳米颗粒的表征(ζ电位)。

图16：使用B16F10细胞，SLNP-TB4与LNP-MTO组合在体内的肿瘤抑制。

图17：使用B16F10细胞，LNP-TB4以多种组合在体内的肿瘤抑制。

图18：LNP-TB4和SLNP-TB4作用机制的体外验证。

具体实施方式

章节概要

I.)定义

II.)前药

III.)化学化合物

IV.)脂质

V.)连接单元(“LU”)

VI.)纳米载剂

VII.)脂质体

VIII.)药物调配物

IX.)组合疗法

X.)将包括前药的脂质体递送到细胞的方法

XI.)治疗癌症和其它免疫病症的方法

XII.)试剂盒/制品

I.)定义：

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术术语、符号和其它科学术语或用辞均旨在具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义，除非上下文另有明确说明。在一些情况下，为了清楚和/或便于参考起见，本文对具有通常理解的含义的术语进行了定义，并且本文中包含这些定义不应被必然解释为表示与本领域通常理解的含义相比的实质性差异。

当本文中使用商品名称时，除非上下文另外指出，否则对商品名称的引用还指商品名称产品的产品调配物、仿制药和一或多种活性药物成分。

如本文所使用的，术语“约”在指大小(即直径)、重量、浓度或百分比的值或量时意指涵盖在一个实例中偏离指定量±20％或±10％、在另一个实例中±5％、在另一个实例中±1％、以及在仍一个实例中±0.1％的变化，因为此类变化适合于执行所公开的方法。

如本文所使用的，当在实体列表的上下文中使用时，术语“和/或”是指以单独或组合形式存在的实体。因此，例如，短语“A、B、C和/或D”单独包含A、B、C和D，但还包含A、B、C和D的任何和所有组合和子组合。

通过端点在本文中叙述的数值范围包含归入所述范围内的所有数字和分数(例如，1至5，包含但不限于1、1.5、2、2.75、3、3.90、4和5)。

如本文所使用，短语“主要由……组成”将技术方案的范围限制于指定材料或步骤，以及不会实质上影响所要求的主题的基本和新颖特征的那些材料或步骤。

术语“晚期癌症”、“局部晚期癌症”、“晚期疾病”和“局部晚期疾病”意指已经延伸穿过相关组织包膜的癌症并且旨在包含按照美国泌尿外科协会(AUA)系统的C期疾病、按照惠特莫尔-朱厄特(Whitmore-Jewett)系统的C1-C2期疾病以及按照TNM(肿瘤、结节、转移)系统的T3-T4和N+期疾病。通常不建议对患局部晚期疾病的患者进行手术，并且与患有临床局部性(器官局限性)癌症的患者相比，这些患者的成果明显更不利。

如本文所使用的，术语“烷基”可以指C₁-C₂₀(包含端值)直链(即“直链”)、支链或环状、饱和或至少部分并且在一些情况下是不饱和的(即，烯基和炔基)烃链，包含例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、辛基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、辛烯基、丁二烯基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基和丙二烯基。“支链”是指其中低级烷基，如甲基、乙基或丙基连接到直链烷基链的烷基。“低级烷基”是指具有1个至约8个碳原子，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个碳原子的烷基(即，C₁-C₈烷基)。“高级烷基”是指具有10个至约20个碳原子，例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个碳原子的烷基。在某些实施例中，“烷基”特别指C₁-C₈直链烷基。在其它实施例中，“烷基”特别指C_1-8支链烷基。

烷基可以任选地被可以相同或不同的一或多个烷基取代基取代(“经取代的烷基”)。术语“烷基取代基”包含但不限于烷基、经取代的烷基、卤基、芳基氨基、酰基、羟基、芳氧基、烷氧基、烷硫基、芳基硫基、芳烷氧基、芳烷硫基、羧基、烷氧羰基、氧基和环烷基。在一些实施例中，可以沿烷基链任选地插入一或多个氧原子、硫原子或经取代或未经取代的氮原子，其中氮取代基是氢、低级烷基(在本文中又称为“烷基氨基烷基”)或芳基。

因此，如本文所使用的，术语“经取代的烷基”包含如本文所定义的其中一或多个原子或官能团被另一原子或官能团，包含例如烷基、经取代的烷基、卤素、芳基、经取代的芳基、烷氧基、羟基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硫酸酯基和巯基替代的烷基。

术语“芳基”在本文中用于指芳香族取代基，所述芳香族取代基可以是单个芳香族环或稠合在一起、共价连接或连接到如但不限于亚甲基或乙烯部分等常见基团的多个芳香族环。常见的连接基团还可以是如在二苯甲酮中的羰基或如在二苯醚中的氧或如在二苯胺中的氮。术语“芳基”具体涵盖杂环芳香族化合物。芳香族环可以包括苯基、萘基、联苯基、二苯醚、二苯胺和二苯甲酮等。在具体实施例中，术语“芳基”意指包括约5个至约10个碳原子，例如5个、6个、7个、8个、9个或10个碳元素，并包含5元和6元芳香族环和杂芳香族环的环状芳香族物。芳基可以任选地被一或多个芳基取代基取代(“经取代的芳基”)，所述取代基可以相同或不同，其中“芳基取代基”包含烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、羧基、酰基、卤基、硝基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、酰氧基、酰氨基、芳酰基氨基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳硫基、烷硫基、亚烷基和-NR'R”，其中R'和R”可以各自独立地为氢、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基和芳烷基。芳基的具体实例包含但不限于环戊二烯基、苯基、呋喃、噻吩、吡咯、吡喃、吡啶、咪唑、苯并咪唑、异噻唑、异噁唑、吡唑、吡嗪、三嗪、嘧啶、喹啉、异喹啉、吲哚、咔唑等。

如本文所使用的，“杂芳基”是指在环结构的主链中含有一或多个非碳原子(例如，O、N、S、Se等)的芳基。含氮杂芳基部分包含但不限于吡啶、咪唑、苯并咪唑、吡唑、吡嗪、三嗪、嘧啶等。

术语“抗癌药物”、“化疗剂”和“抗癌前药”是指已知能够或疑似能够治疗癌症(即，杀伤癌细胞、阻止癌细胞增殖或治疗癌症相关症状)的药物(即，化学化合物)或前药。在一些实施例中，如本文所使用的，术语“化疗剂”是指用于治疗癌症和/或具有细胞毒性能力的非PS分子。更传统或常规的化疗剂可以通过作用机制或化学化合物种类来描述，并且可以包含但不限于烷化剂(例如，美法仑(melphalan))、蒽环类(例如，多柔比星(doxorubicin))、细胞骨架破坏剂(例如，紫杉醇)、埃博霉素、组蛋白去乙酰化酶抑制剂(例如，伏立诺他(vorinostat))、拓扑异构酶I或II抑制剂(例如，伊立替康(irinotecan)或依托泊苷(etoposide))、激酶抑制剂(例如，硼替佐米(bortezomib))、核苷酸类似物或其前体(例如，甲氨蝶呤)、肽抗生素(例如，博来霉素(bleomycin))、基于铂的药剂(例如，顺铂或奥沙利铂(oxaliplatin))、类维生素A(例如，维甲酸)和长春花生物碱(例如，长春碱)。

“芳烷基”是指-烷基-芳基，任选地其中烷基和/或芳基部分被取代。

“亚烷基”指具有1个至约20个碳原子，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个碳原子的直链或支链二价脂肪族烃基。亚烷基可以是直链的、支链的或环状的。亚烷基还可以是任选地不饱和的和/或被一或多个“烷基取代基”取代。可以沿亚烷基任选地插入一或多个氧原子、硫原子或经取代的或未经取代的氮原子(在本文中也称为“烷基氨基烷基”)，其中氮取代基是如先前所描述的烷基。示范性亚烷基包含亚甲基(-CH₂-)、乙烯(-CH₂-CH₂-)、丙烯(-(CH₂)3-)、亚环己基(-C₆H₁₀-)、-CH＝CH—CH＝CH-、-CH＝CH-CH₂-、-(CH₂)_q-N(R)-(CH₂)-，其中q中的每一个都是0至约20的整数，例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20，并且R为氢或低级烷基、亚甲基二氧基(-0-CH₂-0-)和亚乙基二氧基(-0-(CH₂)₂-0-)。亚烷基可以具有约2个至约3个碳原子并且可以进一步具有6-20个碳。

术语“亚芳基”是指二价芳香族基团，例如二价苯基或萘基。亚芳基可以任选地被一或多个芳基取代基取代和/或包含一或多个杂原子。

术语“氨基”是指基团-N(R)₂，其中每个R独立地为H、烷基、经取代的烷基、芳基、经取代的芳基、芳烷基或经取代的芳烷基。术语“氨基烷基”和“烷基氨基”可以指基团-N(R)₂，其中每个R为H、烷基或经取代的烷基，并且其中至少一个R为烷基或经取代的烷基。“芳基胺”和“氨基芳基”是指基团-N(R)₂，其中每个R为H、芳基或经取代的芳基，并且其中至少一个R为芳基或经取代的芳基，例如苯胺(即-NHC₆H₅)。

“散装药”(又称药品)意指尚未填充到最终容器进行分销的药品或药物产品。最终调配的散装药通常是指在填充前调配并储存或保存的药物产品。在调配成药物产品之前，药品可以“散装药”或“经浓缩的散装药”形式储存或保存。

术语“羧酸盐”和“羧酸”可以分别指基团-C(＝O)O^-和-C(＝O)OH。术语“羧基”还可以指-C(＝O)OH基团。

如本文所使用的，术语“缀合物”和“缀合的”可以指两种或多于两种组分(例如，化学化合物、聚合物、生物分子、颗粒等)彼此连接(例如，共价连接)。在一些实施例中，缀合物可以包括衍生自通过二价接头部分共价连接的两种不同化学化合物的单价部分(例如，任选地经取代的亚烷基或亚芳基)。在一些实施例中，接头可以含有一或多个可生物降解键，使得当前药暴露于特定生理环境或酶(例如，酯酶)时，接头中的一或多个键可能断裂。

术语“化合物”是指并涵盖化学化合物(例如，前药)本身，以及无论是否明确说明，并且除非上下文明确说明排除以下情况：化合物的无定形形式和结晶形式，包含多晶形式，其中这些形式可以是混合物的一部分或单独存在；化合物的游离酸形式和游离碱形式，其通常为本文所提供的结构中所示的形式；化合物的异构体，其是指光学异构体和互变异构体，其中光学异构体包含对映体和非对映体、手性异构体和非手性异构体，并且光学异构体包含分离的光学异构体以及光学异构体混合物，包含外消旋和非外消旋混合物，其中异构体可以是分离形式或与一或多种其它异构体的混合物；化合物的同位素，包含含氘和氚的化合物，并且包含含放射性同位素的化合物，包含治疗和诊断有效的放射性同位素；化合物的多聚体形式，包含二聚体、三聚体等形式；化合物的盐，优选地药学上可接受的盐，包含酸加成盐和碱加成盐，包含具有有机反离子和无机反离子的盐，并包含两性离子形式，其中如果一种化合物与两个或多于两个反离子缔合，则所述两个或多于两个反离子可以相同或不同；以及化合物的溶剂化物，包含半溶剂化物、单溶剂化物和二溶剂化物等，包含有机溶剂化物和无机溶剂化物，所述无机溶剂化物包含水合物，其中如果一种化合物与两个或多于两个溶剂分子缔合，则所述两个或多于两个溶剂分子可以相同或不同。在一些情况下，本文对本发明化合物的引用将包含明确引用上述形式中的一或多种，例如盐和/或溶剂化物；然而，此引用仅用于强调，并且不得解释为排除上文鉴定的其它形式。

“药物产品”意指含有活性药物成分(即含有ALK5抑制剂前药的脂质体)的最终调配物，通常但不一定与非活性成分相关。所述术语还包含不含活性成分但旨在用作安慰剂的成品剂型。

术语“二硫化物”可以指S-S-基团。

术语“空囊泡”意指本身无负载的脂囊泡。

如本文所使用的，术语“酯”意指衍生自酸(有机酸或无机酸)的化学化合物，其中至少一个-OH羟基被-O-烷基(烷氧基)或O-芳基(芳氧基)替代。

如本文所使用的，术语“酯酶”是将酯分解成酸和醇的水解酶。

“赋形剂”意指用作如疫苗等药物中活性成分载剂的非活性物质。赋形剂有时还用于使含有非常强效的活性成分的调配物膨胀，以使剂量方便且准确。赋形剂的实例包含但不限于抗粘附剂、粘合剂、涂层、崩解剂、填料、稀释剂、香料、色素、润滑剂和防腐剂。

如本文所使用的，术语“卤基”、“卤化物”或“卤素”是指氟基、氯基、溴基和碘基。

术语“羟基(hydroxyl和hydroxy)”是指-OH基团。

如本文所使用的，术语“抑制”或“对……的抑制”意指减少可测量量或完全防止。

如在本公开的上下文中使用的术语“个体”或“患者”可以互换使用。

如本文所使用的，术语“配体”通常是指以某种方式与另一物种相互作用，例如结合的物种，如分子或离子。参见马特尔A.E.(Martell,A.E.)和汉考克R.P.(Hancock,R.P.),水溶液中的金属络合物(Metal Complexes in Aqueous Solutions),普莱南：纽约(Plenum:New York),(1996)，所述文献通过引用整体并入本文。

如本文所使用的，术语“脂质”是指不溶于极性溶剂的一类天然存在的(有机)化合物。在本公开的上下文中，脂质是指常规脂质、磷脂、胆固醇、用于连接PEG和配体的化学官能化脂质等。

术语“脂质双层”或“LB”是指其中烃尾向内以形成连续非极性相的定向两亲性脂质分子的任何双层。

术语“脂质体”或“脂质囊泡”或“囊泡”可互换使用，以指如常规所定义的由脂质双层包围的水性隔室，(参见斯特莱尔(Stryer)(1981)生物化学(Biochemistry),第2版,W.H.弗里曼公司(W.H.Freeman&Co.),213)。

术语“哺乳动物”是指被分类为哺乳动物的任何生物，包含小鼠、大鼠、兔子、狗、猫、奶牛、马和人。在本发明的一个实施例中，哺乳动物是小鼠。在本发明的另一个实施例中，哺乳动物是人。

术语“巯基”或“硫醇”是指-SH基团。

术语“转移性癌症”和“转移性疾病”意指已扩散到区域淋巴结或远处部位的癌症并且意味着包含按照AUA系统的D期疾病和按照TNM系统的T×N×M+期。

术语“纳米载剂”、“纳米颗粒”和“纳米颗粒药物载剂”可互换使用，并且是指具有水性、固体或聚合物内部核的纳米结构。在某些实施例中，纳米载剂包括包裹(或围绕或包封)多孔颗粒核的脂质双层。在某些实施例中，纳米载剂是脂质体、脂质纳米颗粒(“LNP”)或固体脂质纳米颗粒(“SLNP”)。

术语“纳米级颗粒”、“纳米材料”、“纳米载剂”和“纳米颗粒”是指具有至少一个区域的尺寸(例如，长度、宽度、直径等)小于约1,000nm的结构。在一些实施例中，所述尺寸较小(例如，小于约500nm、小于约250nm、小于约200nm、小于约150nm、小于约125nm、小于约100nm、小于约80nm、小于约70nm、小于约60nm、小于约50nm、小于约40nm、小于约30nm或甚至小于约20nm)。在一些实施例中，所述尺寸介于约20nm与约250nm之间(例如，约20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、200nm、210nm、220nm、230nm、240nm或250nm)。

术语“纳米囊泡”是指直径(或具有平均直径的囊泡群体)在约20nm、或约30nm、或约40nm、或约50nm至约500nm、或至约400nm、或至约300nm、或至约200nm、或至150nm、或至约100nm、或至约80nm范围内的“脂质囊泡”。在某些实施例中，纳米囊泡的直径范围为约40nm至约80nm或约50nm至约70nm。

“药学上可接受的”是指与人或其它哺乳动物在生理上相容的无毒的、惰性和/或组合物。

“药物调配”意指将不同化学物质组合成纯药品以产生最终药物产品的过程。

术语“膦酸酯”是指-P(＝O)(OR)₂基团，其中每个R可以独立地为H、烷基、芳烷基、芳基或负电荷(即，其中实际上不存在R基团与氧原子键合，导致氧原子上存在非共享电子对)。因此，换句话说，每个R可以存在或不存在，并且当存在时，其选自H、烷基、芳烷基或芳基。

术语“磷酸酯”是指-OP(＝O)(OR')₂基团，其中R'为H或负电荷。

术语“前药”意指在施用之后代谢成药理活性药物的药物或化合物。出于本公开的目的，本发明的前药包括三(3)个组分：(i)药物部分；(ii)脂质部分和(iii)连接单元(“LU”)。

术语“TB前药”意指本发明的前药，其中药物部分包括ALK5抑制剂。

术语“焦脂质”是指脂质与卟啉、卟啉衍生物或卟啉类似物的缀合物。在一些实施例中，焦脂质可以包括脂质缀合物，其中卟啉或其衍生物或类似物共价连接到脂质侧链。参见例如美国专利申请公开第2014/0127763号。

如本文所使用的，术语“特异性”、“特异性结合(specifically binds)”和“特异性结合(binds specifically)”是指本发明的纳米载剂与靶TGFβ1或相关家族成员的选择性结合。

术语“支撑脂质双层”意指包围多孔颗粒核的脂质双层。如本公开中所示的这一定义是因为脂质双层定位于表面上并由多孔颗粒核支撑。在某些实施例中，脂质双层的厚度可以为约6nm至约7nm，其中包含疏水性核的3-4nm厚度，加上水合亲水性头基团层(每个约0.9nm)加上两个各自约0.3nm的部分水合区域。在各个实施例中，围绕脂质体的脂质双层包括有效包封和密封ALK5抑制剂的连续双层或基本上连续双层。

术语“硫代烷基”可以指基团-SR，其中R选自H、烷基、经取代的烷基、芳烷基、经取代的芳烷基、芳基和经取代的芳基。类似地，术语“硫代芳烷基”和“硫代芳基”是指-SR基团，其中R分别是芳烷基和芳基。

如本文所使用的，“用于治疗”或“治疗性”和语法上相关的术语是指疾病的任何后果的任何改善，如存活期延长、发病率降低和/或副作用减轻，这些是替代性治疗模式的副产物；如本领域中容易理解的，完全根除疾病是优选的，但尽管如此，并不是治疗行为的要求。

术语“治疗有效量”是指在组织、系统、动物、个体或人中引引发生物或药物应答的活性前药、纳米胶囊前药或药剂的量。

术语“无支撑的脂质双层”是指脂质囊泡或脂质体中的未经涂覆的脂质双层。

II.)前药

如本公开所示，并且为了本发明的目的，通过本公开的LU(参见标题为连接单元的章节)将本发明的药物部分(参见标题为“药物部分”的章节)与本发明的脂质部分(参见标题为“脂质”的章节)缀合来形成合适的前药。出于本公开的目的，TB前药的形成可以利用若干种策略。(参见例如图4、图5和图6)。

因此，在一些实施例中，前药是包括本公开的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在一个实施例中，前药包括由式I表示的以下化学结构：

其中在式I的示范性实施例中：

R₁＝C₁₁-C₂₁饱和烷基；并且

R₂＝H、CH₃。

在另外的实施例中，前药包括由式II表示的以下化学结构：

其中在式II的示范性实施例中：

R₁＝C₁₁-C₂₁饱和烷基；并且

R₂＝H、CH₃。

在另外的实施例中，前药包括由式III表示的以下化学结构：

其中在式III的示范性实施例中：

R₁＝C₁₁-C₂₁饱和烷基；并且

R₂＝H、CH₃。

因此，在一个实施例中，前药是包括式I的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在另外的实施例中，前药是包括式II的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在另外的实施例中，前药是包括式III的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在一个实施例中，前药是包括如图4所示的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在一个实施例中，前药是包括如图5所示的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在一个实施例中，前药是包括如图6所示的ALK5抑制剂的药物脂质部分。

在另外的实施例中，TB前药是包括本公开的脂质的药物脂质部分。

在另外的实施例中，TB前药是药物脂质部分，由此脂质是CHEMS。

在另外的实施例中，TB前药是药物脂质部分，由此脂质是硬脂酸。

在另外的实施例中，TB前药是包括本公开的LU的药物脂质部分。

在另外的实施例中，TB前药是药物脂质部分，由此LU是羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括表示为TB4的化学组合物。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4，并具有以下化学结构：

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括本公开的具有以下化学式的脂质：

(“TB4前药”)

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括CHEMS。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括硬脂酸。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括CHEMS，并且由此LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括硬脂酸，并且由此LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在另外的实施例中，前药是包括本发明的ALK5抑制剂的药物脂质部分，其中ALK5抑制剂包括TB4并且进一步包括具有以下结构的硬脂酸：

在本公开的另外的实施例中，本主题提供了一种ALK5抑制剂前药，其包括脂质缀合的治疗剂母体药物。在一些实施例中，前药包括：(a)单价药物部分；(b)单价脂质部分；以及(c)二价接头部分，所述二价接头部分包括将在体内降解的连接单元，如二硫键，其中单价药物部分和单价脂质部分通过接头连接(例如，共价连接)。单价药物部分和单价脂质部分可以分别是化学化合物和脂质的单价衍生物。例如，单价衍生物可以是包括羟基、硫醇、氨基或羧酸基的化学化合物或脂质的去质子化衍生物。

在本公开的另外的实施例中，本主题提供了一种ALK5抑制剂前药，其包括脂质缀合的治疗剂母体药物。在一些实施例中，前药包括：(a)二价药物部分；(b)二价脂质部分；以及(c)二价接头部分，所述二价接头部分包括将在体内降解的键，其中二价药物部分和二价脂质部分通过接头连接(例如，共价连接)。二价药物部分和二价脂质部分可以分别是化学化合物和脂质的二价衍生物。例如，二价衍生物可以是包括羟基、硫醇、氨基或羧酸基的化学化合物或脂质的去质子化衍生物。

本领域的普通技术人员将理解所公开的实施例并且将使本领域的普通技术人员能够对所公开的实施例作出变化和修改，而不改变本文所公开的本发明的功能和目的。这种变化和修改旨在处于本公开的范围内。

III.)药物部分

本发明的另一方面提供新型TB前药化合物，其包括具有下式表示为TB4的ALK5抑制剂。

本领域技术人员将理解化合物可用作ALK5信号传导抑制剂(例如，抑制ALK5和其它家族成员)。作为简要背景，还称为TGFβ受体I(TGFβRI)的ALK5是属于细胞因子超家族的膜结合受体，所述细胞因子超家族作用于质膜处的蛋白激酶受体以诱导过多的生物信号，调节细胞生长和死亡、分化、免疫应答、血管生成和炎症。其通路的失调导致多种病理，包含癌症。TGFβ是上皮细胞中重要的调节性肿瘤抑制因子，其中其抑制早期增殖并诱导细胞凋亡。参见法布雷加特(FABREGAT)等人,癌症治疗中的TGF-β信号传导(TGF-beta Signalingin Cancer Treatment),当前药物设计(Curr.Pharm.Des.),20(17):第2934-2947页(2014)。研究表明，开发靶向TGFβ产生或阻断其作用的治疗性化合物可能有助于治疗癌症。参见哈克(HAQUE)等人,转化生长因子-β：癌症的治疗性靶标(Transforming growthfactor-β:A Therapeutic Target for Cancer),人疫苗和免疫疗法(Hum.Vaccin.Immunother.),13(8):第1741-1750页(2017)。

基于前述内容，本公开描述了一类TGFβ抑制剂。

在一个实施例中，本公开的药物部分包括具有以下化学结构(表示为TB4)的化合物：

在一个实施例中，本公开的药物部分包括如图2所示的在到最终TB4前药途中的保护基团中间体。

在另外的实施例中，本公开的药物部分包括如图3所示的在到最终TB4前药途中的保护基团中间体。

IV.)脂质

一般而言，并且出于本公开的目的，术语“脂质”以其最广泛的含义使用并且包括脂质的若干子类别，包含但不限于磷脂/脂肪酸。如本领域技术人员所理解的，磷脂表示一类属于所有细胞膜的主要组分的脂质。磷脂可以形成脂质双层，因为其具有两亲性特性。磷脂分子的结构通常由两个疏水性脂肪酸“尾部”和由磷酸基组成的一个亲水性“头部”组成，所述磷酸基可以用简单的有机分子，如胆碱、乙醇胺或丝氨酸进行修饰。这两种组分通常通过甘油分子连接在一起。表III中示出了本发明的磷脂/脂肪酸的代表性列表。

作为简要背景，在最基本的层面上，脂质体的特性取决于其组成中各种脂质物种之间微妙的物理化学相互作用。各个脂质可以组合以形成无数的超结构，包含双层，并且可以调整双层特性以调节药物释放和膜稳定性。在简化的双层模型中，酰基链长度决定了双层厚度和相变温度(Tm)，酰基链饱和度控制双层流动性，并且头部基团相互作用影响脂质间和脂质内的分子力。脂质体行为可以通过将合成脂质，如脂质前药、融合脂质和官能化脂质并入到双层中来调节。参见科力(KOHLI)等人,控制释放杂志(J.Control Release),0:第274-287页(2014年9月28日)。

在本公开的一个实施例中，TB前药包括单价脂质部分。

在一个实施例中，TB前药包括二价脂质部分。

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的胆固醇：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的DPPG：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的DMPG：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的Lyso PC：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的(Δ9-顺式)PG：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的Soy Lyso PC：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的PG：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的C16 PEG2000：

在一个实施例中，脂质包括具有以下化学结构的胆固醇半琥珀酸酯(“CHEMS”)：

作为参考，本文所公开的脂质的化学式和缩写的完整列表示出于表I中。

在另一个实施例中，脂质包括本文所公开的和表III中所示的磷脂/脂肪酸。

在另外的实施例中，脂质包括硬脂酸。

另外，本公开的TB前药和/或脂质体可以包括一或多种辅助脂质，其在本文中也称为“辅助脂质组分”。辅助脂质组分优选地选自包括磷脂和类固醇的群组。磷脂优选地为磷酸的二酯和单酯。磷脂的优选成员是磷酸甘油酯和鞘脂。如本文所使用的，类固醇是基于部分氢化的环戊烯并[a]菲的天然存在且合成的化合物。优选地，类固醇含有21个至30个C原子。特别优选的类固醇是胆固醇。

应注意，尽管不希望受任何理论束缚，但由于根据本发明的脂质组合物中所含的辅助脂质的特定摩尔百分比，所述辅助脂质可以是不含PEG的辅助脂质或具体地含PEG的辅助脂质，更特别是如果任何此类辅助脂质的含量含在本文指定的浓度范围内，可以实现令人惊讶的效果。

在本发明的另外的方面，优选地作为脂质复合物或脂质体存在的脂质组合物优选地显示出中性或总体阴离子电荷。阴离子脂质优选地为本文所描述的任何中性或阴离子脂质。脂质组合物在优选实施例中包括任何辅助脂质或辅助脂质组合以及本文所描述的任何ALK5抑制剂(例如，TB4)。在另外的实施例中，根据本发明的含有核酸的组合物形成脂质复合物。在优选实施例中，如本文所使用的术语脂质复合物是指由本发明的中性或阴离子脂质、中性辅助脂质和ALK5抑制剂构成的组合物。关于本领域中辅助脂质的使用的参考，参见，作为示例，美国专利申请公开2011/0178164；奥杰达(OJEDA)等人,国际药物学杂志(Int.J.of Pharmaceutics)(2016年3月)；达布科斯卡(DABKOWSKA)等人,皇家学会界面杂志(J.R.Soc.Interface)9,第548-561页(2012)；以及木津木奇(MOCHIZUKI)等人,生物化学与生物物理学报(Biochimica et.Biophysica Acta),1828,第412-418页(2013)。

在优选实施例中，本发明的辅助脂质包括表II中所示的辅助脂质。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是CHEMS并且其中药物部分是TB4。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是CHEMS并且其中药物部分是TB4，进一步包括LU并且其中LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是CHEMS并且其中药物部分是TB4，进一步包括LU并且其中LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头，进一步包括辅助脂质组分，其中辅助脂质组分包括表II中的辅助脂质。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是CHEMS并且其中药物部分是TB4，并且其中CHEMS是单价的。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是硬脂酸并且其中药物部分是TB4。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是硬脂酸并且其中药物部分是TB4并且其中硬脂酸是单价的。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是硬脂酸并且其中药物部分是TB4，进一步包括LU并且其中LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是硬脂酸并且其中化学组合物是TB4，进一步包括LU并且其中LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头，进一步包括辅助脂质组分，其中辅助脂质组分包括表II中的辅助脂质。

在一个实施例中，TB前药包括本发明的脂质，其中脂质是硬脂酸并且其中药物部分是TB4并且其中TB前药具有以下化学结构：

V.)连接单元(“LU”)

在一些实施例中，目前所公开的主题提供了包括药物-脂质缀合物的前药，所述药物-脂质缀合物包含可生物降解键，如酯、硫酯和本领域已知的其它接头。

本文示出了酯化学的示范性实施例：

在一些实施例中，前药是药物-脂质缀合物，由此药物-脂质缀合物被酯酶切割。

在一个实施例中，本发明的前药包括使用以下方案通过仲胺、仲酰胺或仲苯胺的LU：

示范性合成如下：

在以下示范性合成下，通过仲胺前药、仲酰胺前药或仲苯胺前药的酯酶水解获得包括仲胺、仲酰胺或仲苯胺的前药结构的切割：

其中：

R₁-NH-R₂可以为任何含有仲胺、仲酰胺或仲苯胺的分子。

在一个实施例中，TB4药物部分的仲酰胺氮通过羟基甲基氨基甲酸酯接头与CHEMS缀合。

VI.)纳米载剂

一般而言，并且出于本公开的目的，纳米载剂在本发明的范围内。纳米载剂是用作另一种物质，如药物的运输分子的纳米材料。常用的纳米载剂包含胶束、聚合物、碳基材料、脂质体和其它物质。由于其大小小，纳米载剂可以将药物递送到身体周围以其它方式难以接近的部位。纳米载剂可以包含聚合物缀合物、聚合物纳米颗粒、基于脂质的载剂、树状大分子、碳纳米管和金纳米颗粒。基于脂质的载剂均包含脂质体、固体脂质纳米颗粒和胶束。在某些实施例中，纳米载剂是脂质体、脂质纳米颗粒(“LNP”)或固体脂质纳米颗粒(“SLNP”)。

另外，纳米载剂在药物递送过程中很有用，因为其可以将药物递送到部位特异性靶标，从而允许要将药物递送在某些器官或细胞中而不是在其它器官或细胞中。位点特异性带来主要的治疗益处，因为其可以阻止药物被递送到错误的地方。另外，纳米载剂在化疗中显示出应用前景，因为其可以帮助减少化疗对身体周围的健康、快速生长的细胞的不良、更广泛的毒性。由于化疗药物可能对人体细胞具有极高的毒性，因此重要的是其在不释放到身体的其它部分的情况下被递送到肿瘤中。

一般而言，纳米载剂可以通过四(4)种方法递送药物，并且所述方法包含被动靶向、主动靶向、pH特异性和温度特异性。

被动靶向是指纳米载剂沿肿瘤血管系统向下行进、被捕获并积聚在肿瘤中的能力。这种积聚是由增强的渗透性和滞留效应引起的。肿瘤的渗漏血管系统是肿瘤中形成的血管网络，其含有许多小孔。这些孔允许纳米载剂进入，但还含有许多允许纳米载剂被捕获的弯曲部。随着更多的纳米载剂被捕获，药物积聚在肿瘤部位处。这种积聚导致大剂量的药物直接递送到肿瘤部位。

主动靶向涉及将靶向模块，如配体或抗体并入在纳米载剂表面上，所述纳米载剂对身体周围的某些类型的细胞具有特异性。通常，纳米载剂具有较高的表面积与体积比，从而允许在其表面上并入多个配体。

另外，某些纳米载剂将只在特定pH范围内释放其所含的药物。pH特异性还允许纳米载剂将药物直接递送到肿瘤部位。这是因为肿瘤通常比正常人细胞更具酸性，其中pH值为约6.8。正常组织的pH为约7.4。因此，仅在某些pH范围内释放药物的纳米载剂可以用于仅在酸性肿瘤环境中释放药物。由于酸性环境使纳米载剂的结构降解，高酸性环境导致药物释放。通常，这些纳米载剂将不会在中性或碱性环境中释放药物，从而有效地靶向肿瘤的酸性环境，同时保持正常身体细胞不受影响。还可以通过将共聚物链添加到胶束中在胶束系统中诱导这种pH敏感性，所述胶束已被确定为以pH非依赖性方式起作用。参见吴(WU)等人,生物材料(Biomaterials),34(4):1213-1222(2012)。这些胶束聚合物复合物还有助于防止癌细胞产生多药抗性。低pH环境触发胶束聚合物的快速释放，导致大多数药物一次释放，而不是像其它药物治疗一样逐渐释放。

另外，还已显示出一些纳米载剂可以在某些温度下更有效地递送药物。由于肿瘤温度通常高于身体其它部位的温度(大约40℃)，这种温度梯度有助于为肿瘤特异性部位递送充当保障。参见雷扎伊(REZAEI)等人,聚合物(Polymer),53(16):3485-3497(2012)。

如本文所公开的，基于脂质的纳米载剂，如脂质体在本发明的范围内。基于脂质的纳米颗粒(LBNP或LNP)，如脂质体、固体脂质纳米颗粒(SLN)和纳米结构脂质载剂(NLC)可以运输疏水性分子和亲水性分子，显示出最小的毒性或未显示出毒性，并通过延长半衰期和控制药物释放增加药物作用时间。脂质纳米颗粒可以包含化学修饰以避免免疫系统的检测(神经节苷脂或聚乙二醇(PEG))或提高药物的溶解度。另外，其可以制备成对pH敏感的调配物，以促进药物在酸性环境中的释放，并且还可以与小分子或识别肿瘤细胞或其受体的抗体(如叶酸(FoA))缔合。纳米药物还可以与其它治疗策略组合使用，以改善患者的应答。参见加西亚-皮内尔(GARCIA-PINEL)等人,纳米材料(Nanomaterials)9(639)(2019)。

在各个实施例中，本文所描述的硅质体(silicasome)药物载剂包括涂覆有脂质双层的多孔二氧化硅(或其它材料)纳米颗粒(例如，具有表面并限定多个适于在其中接收分子的孔的二氧化硅体)。纳米颗粒被称为二氧化硅纳米颗粒的事实并不排除除二氧化硅以外的材料也被并入到二氧化硅纳米颗粒中。在一些实施例中，二氧化硅纳米颗粒可以是基本上球形的，其中多个孔开口穿过表面，从而提供到孔的通路。然而，在各个实施例中，二氧化硅纳米颗粒可以具有除基本上球形以外的形状。因此，例如，在某些实施例中，二氧化硅纳米颗粒可以是基本上卵形、杆状、基本上规则多边形、不规则多边形等。

通常，二氧化硅纳米颗粒包括二氧化硅体，其限定了孔开口之间的外表面以及孔内的侧壁。孔可以延伸穿过二氧化硅体到达另一个孔开口，或者孔可以仅部分延伸穿过二氧化硅体，使得其具有由二氧化硅体限定的底表面。

在一些实施例中，二氧化硅体是介孔的。在其它实施例中，二氧化硅体是微孔的。如本文所使用的，“介孔”意指直径介于约2nm与约50nm之间的孔，而“微孔”意指直径小于约2nm的孔。通常，孔可以是任何大小，但在典型实施例中大到足以在其中含有一或多种治疗化合物。在此类实施例中，孔允许小分子，例如治疗性化合物，如抗癌化合物粘附或结合到孔的内表面，并在用于治疗目的时从二氧化硅体释放。在一些实施例中，孔是基本上圆柱形的。

在某些实施例中，纳米颗粒包括孔径直径介于约1nm与约10nm之间或介于约2nm与约8nm之间的孔。在某些实施例中，纳米颗粒包括孔径介于约1nm与约6nm之间或介于约2nm与约5nm之间的孔。其它实施例包含孔径小于2.5nm的颗粒。

在其它实施例中，孔径介于1.5nm与2.5nm之间。具有其它孔径的二氧化硅纳米颗粒可以例如通过在制备二氧化硅纳米颗粒期间使用不同的表面活性剂或溶胀剂来制备。在各个实施例中，纳米颗粒可以包含大到(例如平均直径或中值直径(或另一特性尺寸))约1000nm的颗粒。然而，在各个实施例中，纳米颗粒通常小于500nm或小于约300nm，因为通常大于300nm的颗粒在进入活细胞或血管开窗时可能不太有效。在某些实施例中，纳米颗粒的大小范围为约40nm、或约50nm、或约60nm至约100nm、或至约90nm、或至约80nm或至约70nm。在某些实施例中，纳米颗粒的大小范围为约60nm至约70nm。一些实施例包含平均最大尺寸介于约50nm与约1000nm之间的纳米颗粒。其它实施例包含平均最大尺寸介于约50nm与约500nm之间的纳米颗粒。其它实施例包含平均最大尺寸介于约50nm与约200nm之间的纳米颗粒。

在一些实施例中，平均最大尺寸大于约20nm、大于约30nm、大于约40nm或大于约50nm。其它实施例包含平均最大尺寸小于约500nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm或小于约75nm的纳米颗粒。如本文所使用的，纳米颗粒的大小是指如通过透射电子显微术(TEM)或本领域已知的类似可视化技术测量的初级颗粒的平均大小或中值大小。介孔二氧化硅纳米颗粒的另外的实例包含但不限于MCM-41、MCM-48和SBA-15。参见卡蒂亚尔(KATIYARE)等人,色谱杂志(J.Chromotog.)1122(1-2):13-20(2006)。

制备多孔二氧化硅纳米颗粒的方法为本领域技术人员所熟知。在某些实施例中，通过使原硅酸四乙酯(TEOS)与由胶束棒制成的模板反应来合成介孔二氧化硅纳米颗粒。结果是纳米大小的填充有规则排列的孔的球体或棒的集合。然后可以通过用调节到合适pH的溶剂洗涤来去除模板(参见例如特雷温(TREWYN)等人,(2007)化学工程杂志(Chem.Eng.J.)137(1):23-29)。

在某些实施例中，还可以使用简单的溶胶-凝胶方法合成介孔颗粒(参见例如南迪安托(NANDIYANTO)等人,(2009)微孔与介孔材料(Microporous and Mesoporous Mat.)120(3):447-453)。在某些实施例中，原硅酸四乙酯还可以与另外的聚合物单体一起用作模板。在某些实施例中，使用(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷(MPTMS)替代TEOS。

在某些实施例中，介孔二氧化硅纳米颗粒是通过改进描述于以下的溶胶/凝胶程序合成的核：孟(MENG)等人,(2015)ACS纳米(ACS Nano),9(4):3540-3557。

虽然本文所描述的方法已关于多孔二氧化硅纳米颗粒(例如，介孔二氧化硅)进行了证明，但本领域技术人员将认识到，类似方法可以用于其它多孔纳米颗粒。可以用于药物递送纳米颗粒的许多其它介孔材料是本领域技术人员已知的。例如，在某些实施例中，可以利用介孔碳纳米颗粒。

介孔碳纳米颗粒为本领域技术人员所熟知(参见例如黄(HUANG)等人,(2016)碳(Carbon),101:135-142；朱(ZHU)等人,(2014)亚洲药物科学杂志(Asian J.Pharm.Sci.),9(2):82-91；等)。

类似地，在某些实施例中，可以利用介孔聚合物颗粒。已通过以下报道了通过蒸发诱导的自组装策略从三嵌段共聚物与可溶性低分子量酚醛树脂前体的有机-有机组装合成高度有序的介孔聚合物和碳框架，见孟(MENG)等人,(2006)材料化学(Chem.Mat.)6(18):4447-4464。

本文所描述的纳米颗粒是说明性的和非限制性的。使用本文所提供的教导，本领域技术人员将可获得许多其它脂质双层涂覆的纳米颗粒。

在一个实施例中，本发明教导了包括TB前药的纳米载剂。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括CHEMS。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括硬脂酸。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括CHEMS并且由此脂质体进一步包括TB前药。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括CHEMS并且由此脂质体进一步包括TB4。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括硬脂酸并且由此脂质体进一步包括ALK5抑制剂。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括硬脂酸并且由此脂质体进一步包括TB4。

在一个实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括硬脂酸并且由此脂质体进一步包括TB4(表示为LNP-TB4)。

在另外的实施例中，本发明教导了包括脂质体的纳米载剂，其中脂质包括硬脂酸并且由此脂质体进一步包括TB4并且由此脂质体与ID3(表示为LNP-TB4-ID3)共调配。

在优选实施例中，脂质颗粒包括固体脂质纳米颗粒(SLNP)，所述固体脂质纳米颗粒包括包含TB4前药的脂质体。

在一个实施例中，本发明教导了包括固体脂质纳米颗粒(SLNP)的纳米载剂，其中固体脂质纳米颗粒包括硬脂酸并且由此固体脂质纳米颗粒进一步包括TB4(表示为SLNP-TB4)。

在另外的实施例中，本发明教导了包括固体脂质纳米颗粒(SLNP)的纳米载剂，其中固体脂质纳米颗粒包括硬脂酸并且由此固体脂质纳米颗粒进一步包括TB4并且由此SLNP与ID3(表示为SLNP-TB4-ID3)共调配。

在另外的优选实施例中，本发明的固体脂质纳米颗粒包括具有以下比率的组合物：

SLNP的成分	量(％w/w)
		脂质1(脂质-前药)	5-80
脂质2(脂质-前药)	0-40
		辅助脂质	0-80
DSPE-PEG2000	0-10
		稳定剂	0.5-20

由此脂质1包括TB4前药，其中脂质部分包括硬脂酸，并且由此辅助脂质是表II中所示的辅助脂质，并且由此稳定剂选自由以下组成的组：聚乙烯醇(例如，Moliwol 488)、泊洛沙姆(例如，Pluronic F127)、吐温80、PEG400和Kolliphor RH 40，并且由此脂质2(脂质前药)包括本公开的脂质前药或选自由以下组成的组的脂质前药：ID3、AR5、TR3、ID1抑制剂(例如，ID3-STEA、ID3-CHEM、AR5-STEA、TR3-STEA、ID1-CHOL等)、MPLA和替拉莫德(Telratolimod)。

另外，本公开的范围教导了使用本发明的经调配的前药的三(3)种可能的治疗模式。参见PCT专利公开第WO2018/213631号。

第一种治疗模式涉及将TB前药与另一种治疗剂(例如，抑制ALK5和其它家族成员的另一种经调配的前药、化疗剂(如ICD诱导的化疗)等)组合成单个脂质体，所述单个脂质体允许全身(或局部)生物分布和药物递送到肿瘤部位。双递送方法实现了适应性和先天免疫的协同增强，从而显著提高了动物存活率。在某些实施例中，纳米载剂包括囊泡(即包围流体的脂质双层)。

第二种治疗模式涉及将抑制ALK5和其它家族成员的药剂与包括ALK5信号传导抑制剂的脂质(例如，脂质体)组合局部递送到肿瘤或肿瘤周围区域。

第三种治疗模式涉及利用死亡癌细胞(例如，KPC细胞)进行疫苗接种，其中离体诱导ALK5的抑制。发现这种疫苗接种可以产生全身性免疫应答，所述全身性免疫应答可能干扰远处部位处的肿瘤生长，以及允许过继性转移到非免疫动物。本领域技术人员将理解并能够执行本文所提供的治疗模式的方法。

VII.)脂质体

在一个方面，目前所公开的主题基于一种用于提供本公开的TB前药的方法(参见标题为“前药”的章节)，所述TB前药适于并入到包括脂质涂层的纳米载剂中，以提供对应前药的增强递送，并提供包含前药的组合疗法。使用本发明的前药的优点包含有利于将受控调配物调配成本公开的LNP(例如，脂质体)。这允许前药在全身循环期间维持非活性形式，这允许脂质体在被细胞，例如在肿瘤内吞噬后释放活性剂。

在某些实施例中，一或多种TB前药(例如，式I、式II、式III和/或TB4前药中教导的TB前药抑制剂中的任何一或多种抑制剂)(参见标题为“前药”的章节)被调配成脂质部分，所述脂质部分在水溶液中形成囊泡(例如，脂质体)结构或可以形成包括脂质体的脂质双层的组分。脂质体可以直接使用，作为组合调配物中的组分提供(例如，与本文所公开的另一药物部分或治疗模式组合)。

在某些实施例中，用TB前药调配的脂质体包括脂质、PHGP、维生素E、胆固醇和/或脂肪酸。

在一个实施例中，脂质体包括胆固醇。

在一个实施例中，脂质体包括DSPC。

在一个实施例中，脂质体包括HSPC。

在一个实施例中，脂质体包括DSPE-PEG₂₀₀₀。

在一个实施例中，脂质体包括DPPG。

在一个实施例中，脂质体包括DMPG。

在一个实施例中，脂质体包括Lyso PC。

在一个实施例中，脂质体包括(Δ9-顺式)PG。

在一个实施例中，脂质体包括Soy Lyso PC。

在一个实施例中，脂质体包括PG。

在一个实施例中，脂质体包括PA-PEG3-甘露糖。

在一个实施例中，脂质体包括C16 PEG2000神经酰胺。

在一个实施例中，脂质体包括MPLA。

在一个实施例中，脂质体包括CHEMS。

在一个实施例中，脂质体包括硬脂酸。

在一个实施例中，脂质体包括表III所示的磷脂。

在一个实施例中，脂质体包括TB4，并且进一步包括CHEMS，并且进一步包括LU，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在一个实施例中，脂质体包括TB4，并且进一步包括硬脂酸，并且进一步包括LU，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

在一个实施例中，脂质体包括TB4，并且进一步包括CHEMS，并且进一步包括LU，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头，并且进一步包括表II所示的辅助脂质。

在一个实施例中，脂质体包括TB4，并且进一步包括硬脂酸，并且进一步包括LU，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头，并且进一步包括表II所示的辅助脂质。

在一个实施例中，本公开的脂质体包括与一或多种另外的免疫调节剂共调配的TB前药，由此免疫调节剂包含但不限于免疫原性细胞死亡诱导化疗剂、toll受体激动剂、sting激动剂、IDO抑制剂、CTLA4抑制剂、PD-1抑制剂和/或其前药。

在优选实施例中，脂质体包括与ICD诱导化疗剂共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与选自以下列表的ICD诱导化疗剂共调配的TB前药：多柔比星(DOX)、米托蒽醌(mitoxantrone，MTO)、奥沙利铂(OXA)、环磷酰胺(CP)、硼替佐米、卡非佐米(Carfilzimib)或紫杉醇。

在优选实施例中，脂质体包括与Toll受体TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在另外的优选实施例中，Toll受体TLR激动剂/前药选自由以下组成的组：TR3、TR4、TR5和TR6。

在优选实施例中，脂质体包括与选自以下列表的Toll受体(TLR)激动剂/前药共调配的TB前药：瑞喹莫特(Resiquimod，R848)、嘎德莫特(Gardiquimod)、852A、DSR 6434、替拉莫德、CU-T12-9、单磷酰脂质A(MPLA)、3D(6-酰基)-

SMU127、Pam3CSK4或3D-

或其前药。

在优选实施例中，脂质体包括与PD-1抑制剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与选自以下列表的PD-1抑制剂/前药共调配的TB前药：AUNP12、CA-170或BMS-986189或其前药。

在优选实施例中，脂质体包括与IDO-1抑制剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与选自以下列表的IDO-1抑制剂/前药共调配的TB前药：依帕卡哚司他(epacadostat)、L-1-甲基色氨酸(吲哚莫德(Indoximod))、D-1-甲基色氨酸、甲磺酸林罗司他(Linrodostat mesylate，BMS 986205)、MK-7162、LY-3381916、KHK-2455、HTI-1090、DN-1406131或BGB-5777。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)和PD-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)和PD-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)和IDO-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)和IDO-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)和TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)和TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)和PD-1前药以及TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)和PD-1前药以及TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与TLR激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与IDO拮抗剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与CD1D激动剂/前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与TLR激动剂/前药和PD-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与TLR激动剂/前药和IDO-1前药共调配的TB前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)共调配的TB4前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)共调配的TB4前药。

在优选实施例中，脂质体包括与多柔比星(DOX)和IDO前药和/或TLR激动剂/前药共调配的TB4前药。

在优选实施例中，脂质体包括与米托蒽醌(MTO)和/或IDO前药和/或TLR激动剂/前药共调配的TB4前药。

本领域技术人员将认识和理解溶解度是技术人员在药物开发过程中面临的最常见的问题之一。药物/抗癌剂通过脂质分子(即，基于脂质的前药)的化学缀合提供了用于解决在水性悬浮液中调配药物的问题的平台。利用脂质缀合(基于脂质的前药)递送药物的主要优势在于其改善药代动力学/半衰期和靶向递送的能力。

通过适当选择脂质分子，可以使用本领域已知的技术将基于脂质的前药整合/调配在脂质体调配物中，这比常规的药物递送系统具有更多的优点。(科力(KOHLI)等人,受控释放杂志(J.Controlled Release),0:第274-287页(2014年9月28日)；和加西亚-皮内尔等人,纳米材料9:638(2019))。将脂质前药与脂质体组合具有双重优点：(i)含有脂质前药的脂质体不仅增加了药物/前药本身的溶解度，而且(ii)还具有包封多种药物(亲水性药物和亲脂性药物两者)的能力(参见标题为“纳米载剂”的章节)。

出于本公开的目的，脂质体调配物的主要优点如下：

i)脂质体调配物的生物相容性/生物降解性以及不含一般毒性；

ii)根据所需目的的大小和表面电荷的灵活性和操纵性。出于本公开的目的，脂质体调配物的直径大小范围可以为40-150nm，并且表面电荷范围为-40至+40mV；并且

iii)本发明的脂质体具有单一或多种脂质前药作为脂质体的组成脂质部分。另外，可以在这些脂质体中(在脂质双层中或在亲水性核中)调配多种药物(例如，以不同的作用机制起作用)并且具有不同的溶解度曲线(亲水性或亲脂性)。

如本领域普通技术人员将理解的，制备脂质体的所有方法都涉及四(4)个基本阶段：

(i)从有机溶剂中干燥脂质；

(ii)将脂质分散在水溶液中；

(iii)纯化所得脂质体；以及

(iv)分析最终产物。

参见阿克巴扎德(AKBARZADEH)等人,纳米研究快讯(Nanoscale ResearchLetters),8:102(2013)。

本发明的另一方面公开了脂质体包封技术(LET)，其是一种用于传输药物的递送技术。LET是一种产生被称为脂质体的亚微观泡沫的方法，所述技术包封了许多材料。这些“脂质体”在其内含物周围形成屏障，其抵抗口腔和胃中的酶、碱性溶液、消化液、胆盐和人体内产生的肠道菌群以及自由基。因此，脂质体的内含物受到保护免于氧化和降解。这种保护性磷脂屏蔽物或屏障保持完好，直到脂质体的内含物被递送到将使用内含物的确切靶腺、靶器官或靶系统(参见标题为“纳米载剂”的章节)。

在一个实施例中，本公开的脂质体是使用多种不同比率的TB前药、脂质和/或脂质前药合成的。如本文所公开的，TB前药可以包括如本文所公开的辅助脂质(参见例如表II)。

在一个实施例中，本公开的脂质体是使用多种不同比率的TB前药、脂质和/或脂质前药合成的。如本文所公开的，TB前药可以进一步包括DSPE-PEG。

在优选实施例中，本发明的脂质体包括具有以下比率的组合物：

脂质体的成分	量(％w/w)
		脂质1(脂质-前药)	5-60
脂质2(脂质-前药)	0-40
		辅助脂质	50-80
DSPE-PEG 2000	2-5

在另外的优选实施例中，本发明的脂质体包括具有以下比率的组合物：

脂质体的成分	量(％w/w)
		脂质1(脂质-前药)	5-60
辅助脂质	50-80
		DSPEG-PEG 2000	2-5

由此脂质1包括TB4前药，其中脂质部分包括CHEMS。

由此脂质1包括TB4前药，其中脂质部分包括硬脂酸。

VIII.)药物调配物

如本文所使用的，术语“药物(drug)”与“药物(pharmaceutical)”同义。在某些实施例中，将本公开的脂质体制造成经包封的剂型并给予患者以治疗疾病。

一般而言，药物调配是将不同化学物质组合成纯药品以产生最终药物产品的过程。调配研究涉及开发一种既稳定又能被患者接受的药物制剂。对于口服药物，这通常涉及将药物并入到片剂或胶囊中。重要的是要认识到，剂型除了药物本身之外还含有多种其它物质，并且必须进行研究以确保药物与这些其它物质相容。

赋形剂是用作药物产品活性成分载剂的非活性物质，在这种情况下是包括TB前药的脂质体。另外，赋形剂可以用于帮助制造药物产品的过程。然后将活性物质溶解或与赋形剂混合。赋形剂有时还用于使含有非常强效的活性成分的调配物膨胀，以使剂量方便且准确。一旦活性成分被纯化，就不能在延长的时间段内保持纯化状态。在许多情况下，其会变性、从溶液中脱落或粘在容器的侧面。

为了使活性成分稳定，添加赋形剂以确保活性成分保持活性并在足够长的时间段内保持稳定，从而使产品的保质期能够与其它产品竞争，并对最终用户而言是安全的。赋形剂的实例包含但不限于抗粘附剂、粘合剂、涂层、崩解剂、填料、稀释剂、香料、色素、润滑剂和防腐剂。最终调配物包括活性成分和赋形剂，然后将其包封在药物剂型中。

预调配涉及药物物理特性、化学特性和机械特性的表征，以便选择制剂中应使用的其它成分。然后，调配研究考虑如稳定性、粒度、多晶型、pH和溶解度等此类因素，因为所有这些因素可能影响生物利用度，并且由此影响药物的活性。药物必须通过确保每个剂量单位(例如，每个小瓶)中存在的药物量是一致的方法与非活性添加剂结合。剂量应具有均匀的外观。

这些研究不太可能在临床试验开始时完成。这意味着最初开发的简单制剂用于I期临床试验。这些通常由小瓶、含有少量药物和稀释剂的手动填充胶囊组成。不需要证明这些调配物的长期稳定性，因为其将在几天内使用(测试)。然而，长期稳定性在供应链管理中至关重要，因为最终调配物从包装到其到达患者手中的时间可能长达数月或数年。必须考虑所谓的载药量(即活性药物与总剂量含量的比率)。低载药量可能导致同质性问题。如果化合物的体积密度低，高载药量可能引起流动问题或需要大的胶囊。到III期临床试验完成时，药物的调配物应该已开发到接近最终将在市场上使用的制剂。

在这一阶段，对稳定性的了解是至关重要的，并且必须开发条件以确保药物在制剂中稳定。如果药物被证明是不稳定的，其将使来自临床试验的结果无效，因为不可能知道实际施用的剂量是多少。进行稳定性研究以测试温度、湿度、氧化或光解(紫外光或可见光)是否有任何影响，并分析制剂以查看是否形成任何降解产物。检查制剂与容器之间是否存在任何不想要的相互作用也很重要。如果使用塑料容器，则应进行测试，以查看是否有任何成分吸附在塑料上，以及是否有任何增塑剂、润滑剂、颜料或稳定剂从塑料中渗出到制剂中。甚至容器标签的粘合剂也需要进行测试，以确保其不会通过塑料容器渗入到制剂中。药物的调配方式可以避免与口服施用相关的一些问题。药物通常以片剂或胶囊的形式口服。药物(活性物质)本身需要以受控的速率可溶于水溶液中。此类因素，如粒度和晶型等可能显著影响溶解。快速溶解并不总是理想的。例如，缓慢的溶解速率可以延长作用的持续时间或避免最初的高血浆水平。

在一些实施例中，纳米载剂(例如，包括TB前药的脂质体)和/或包括TB前药并与免疫调节剂共调配的脂质体单独施用或与根据施用途径和标准药学实践选择的生理学可接受载剂(如生理盐水或磷酸盐缓冲液)一起以混合物形式施用。例如，当用作注射剂时，纳米载剂可以与药学上可接受的载剂一起调配成无菌悬浮液、分散体或乳液。在某些实施例中，生理盐水可以用作药学上可接受的载剂。其它合适的载剂包含例如水、缓冲水、0.4％盐水、0.3％甘氨酸、5％葡萄糖等，包含用于增强稳定性的糖蛋白，如白蛋白、脂蛋白、球蛋白等。在包括盐水或其它含盐载剂的组合物中，载剂优选地在纳米载剂形成后添加。因此，在纳米载剂形成并装载合适的药物之后，可以将纳米载剂稀释成药学上可接受的载剂，如生理盐水。类似地，可以将TB前药脂质体引入到促进纳米材料悬浮的载剂(例如，乳液、稀释液等)中。

药物组合物可以通过常规的公知的灭菌技术进行灭菌。所得水溶液、悬浮液、分散液、乳液等可以包装以供使用或在无菌条件下过滤。在某些实施例中，将药物递送纳米载剂(例如，LB涂覆的纳米颗粒)冻干，经冻干的制剂在施用之前与无菌水溶液组合。药物组合物还可以含有接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂等，例如乙酸钠、乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙等。

另外，在某些实施例中，药物调配物可以包含脂质保护剂，其在储存时保护脂质免受自由基和脂质过氧化损伤。亲脂性自由基猝灭剂，如α-生育酚和水溶性铁特异性螯合剂，如铁氧胺是合适的并在本文所设想的。药物调配物中纳米载剂(例如，包括TB前药的脂质体)的浓度可以变化很大，例如，从小于大约0.05重量％，通常至少大约2-5重量％至高达10重量％至50重量％，或至40重量％，或至30重量％，并且主要根据所选特定施用模式通过流体体积、粘度等进行选择。例如，可以增加浓度以降低与治疗相关的流体负荷。这在患有动脉粥样硬化相关充血性心力衰竭或严重高血压的患者中可能是特别期望的。可替代地，由刺激性脂质构成的纳米载剂可以稀释到低浓度，以减轻施用部位处的炎症。纳米载剂的施用量将取决于所使用的特定药物、正在治疗的疾病状态和临床医生的判断，但所述量通常介于大约0.01与大约50mg每千克体重之间，优选地为大约0.1与大约5mg每千克体重之间。

本领域技术人员将理解，确切剂量将根据如特定TB前药和任何共调配的免疫调节剂和期望的医学效果等此类因素以及如年龄、性别、一般病状等患者因素而变化。本领域技术人员可以容易地将这些因素考虑在内，并使用其来建立有效的治疗浓度，而无需进行过度的实验。

为了在本文所描述的疾病的治愈性、缓解性、延迟性或预防性治疗中施用于人(或非人哺乳动物)，处方医师将最终确定给定人(或非人)受试者的适当药物剂量，并且这可以预期根据个体的年龄、体重和应答以及患者的疾病的性质和严重程度而变化。在某些实施例中，由纳米载剂提供的药物的剂量可以大约等于采用的游离药物的剂量。然而，如上所述，本文所描述的纳米载剂可以显著降低由此施用的药物的毒性并显著增加治疗窗。因此，在一些情况下，将使用超过游离药物的处方剂量。

IX.)组合疗法

如本领域技术人员将认识和理解的，癌细胞的生长和存活可能受多种信号传导通路的影响。因此，将在其调节活性的靶标上表现出不同的偏好的不同的酶/蛋白/受体抑制剂组合来治疗此类病状是有用的。靶向多于一个的信号传导通路(或参与一个给定的信号传导通路的多于一个生物分子)可以降低细胞群体中产生耐药性的可能性和/或降低治疗的毒性。

因此，包括本公开的TB前药的脂质体可以与一或多种其它酶/蛋白质/受体抑制剂或用于治疗疾病，如癌症或感染的一或多种疗法组合使用。可用组合疗法治疗的疾病和适应症的实例包含本公开所示的那些疾病和适应症。癌症的实例包含但不限于实体瘤和液体肿瘤，如血癌。感染的实例包含病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。

例如，包括本公开的TB前药的脂质体可以与以下激酶的一或多种抑制剂组合以用于治疗癌症：Akt1、Akt2、Akt3、TGF-βR、PKA、PKG、PKC、CaM-激酶、磷酸化酶激酶、MEKK、ERK、MAPK、mTOR、EGFR、HER2、HER3、HER4、INS-R、IGF-1R、IR-R、PDGFαR、PDGFβR、PI3K(α、β、γ、δ)、CSFIR、KIT、FLK-II、KDR/FLK-1、FLK-4、flt-1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、c-Met、Ron、Sea、TRKA、TRKB、TRKC、TAM激酶(Axl、Mer、Tyro3)、FLT3、VEGFR/Flt2、Flt4、EphA1、EphA2、EphA3、EphB2、EphB4、Tie2、Src、Fyn、Lck、Fgr、Btk、Fak、SYK、FRK、JAK、ABL、ALK和B-Raf。

在另外的实施例中，包括本公开的TB前药的脂质体可以与以下抑制剂中的一或多种抑制剂组合以用于治疗癌症或感染。可以与本公开的化合物组合以用于治疗癌症和感染的抑制剂的非限制性实例包含FGFR抑制剂(FGFR1、FGFR2、FGFR3或FGFR4，例如，INCB54828、INCB62079和INCB63904)、JAK抑制剂(JAK1和/或JAK2，例如，鲁索替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)或INCB39110)、IDO抑制剂(例如，依帕卡哚司他、NLG919或BMS-986205)、LSD1抑制剂(例如，INCB59872和INCB60003)、TDO抑制剂、PI3K-δ抑制剂(例如，INCB50797和INCB50465)、PI3K-γ抑制剂，如PI3K-γ选择性抑制剂、Pim抑制剂(例如，INCB53914)、CSF1R抑制剂、TAM受体酪氨酸激酶(Tyro-3、Axl和Mer)、腺苷受体拮抗剂(例如，A2a/A2b受体拮抗剂)、HPK1抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC)，如HDAC8抑制剂、血管生成抑制剂、白介素受体抑制剂、溴和额外末端家族成员抑制剂(例如，溴结构域抑制剂或BET抑制剂，如INCB54329和INCB57643)、聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂，如卢卡帕尼(rucaparib)、奥拉帕尼(olaparib)、尼拉帕利(niraparib)、维利帕尼(veliparib)或他拉唑帕利(talazoparib)、精氨酸酶抑制剂(INCB01158)、PD-1抑制剂、PD-1/L-1抑制剂、PD-1/L-2抑制剂、CTLA-4拮抗剂和腺苷受体拮抗剂或其组合。

另外，包括本公开的TB前药的脂质体可以进一步与其它治疗癌症的方法组合使用，例如通过化疗、照射疗法、肿瘤靶向疗法、辅助疗法、免疫疗法或手术。

免疫疗法的实例包含细胞因子治疗(例如，干扰素、GM-CSF、g-CSF和IL-2)、CRS-207免疫疗法、癌症疫苗、单克隆抗体、过继性T细胞转移、Toll受体激动剂、STING激动剂、溶瘤病毒疗法和免疫调节小分子，包含沙利度胺(thalidomide)或JAK1/2抑制剂等。

包括TB前药的脂质体可以与一或多种抗癌药物，如化疗剂组合施用。示例化疗剂包含以下中的任何一种：阿巴瑞克(abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿屈替诺(alitretinoin)、别嘌醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、阿那曲唑(anastrozole)、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷(azacitidine)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、巴瑞替尼(baricitinib)、博来霉素、硼替佐米、硼替佐米、静脉用白消安(busulfan intravenous)、口服用白消安(busulfan oral)、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素(dactinomycin)、达肝素钠(dalteparin sodium)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地尼白介素(denileukin)、地尼白介素(denileukin diftitox)、右雷佐生(dexrazoxane)、多西他赛(docetaxel)、阿霉素(doxorubicin)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、依库丽单抗(eculizumab)、表柔比星(epirubicin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌莫司汀(estramustine)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、依托泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸组氨瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、干扰素α-2a(interferon alfa 2a)、伊立替康(irinotecan)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、盐酸氮芥(meclorethamine)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、美法仑(melphalan)、巯嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、丝裂霉素C(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌、苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)、奈拉滨(nelarabine)、诺非单抗(nofetumomab)、奥拉帕尼(olaparib)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇、帕米膦酸酯(pamidronate)、帕尼单抗(panitumumab)、培门冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)、喷司他丁(pentostatin)、哌泊溴烷(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、奎纳克林(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、利妥昔单抗(rituximab)、鲁索替尼、卢卡帕尼、索拉非尼(sorafenib)、链脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、马来酸舒尼替尼(sunitinib maleate)、它莫西芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾内酯(testolactone)、沙利度胺、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派(thiotepa)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维甲酸(tretinoin)、乌拉莫司汀(uracil mustard)、戊柔比星(valrubicin)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏立诺他(vorinostat)、尼拉帕尼(niraparib)、维利帕尼(veliparib)、他拉唑帕尼(talazoparib)和唑来膦酸酯(zoledronate)。

其它抗癌剂包含抗体治疗剂，如曲妥珠单抗(赫赛汀)、共刺激分子的抗体，如CTLA-4(例如，易普利姆玛(ipilimumab))、4-1BB(例如，乌瑞芦单抗(urelumab)、乌托鲁单抗(utomilumab))、针对PD-1和PD-L1/L2的抗体或细胞因子抗体(IL-10、TGF-β等)。

可以与本公开的化合物组合以用于治疗癌症或感染，如病毒、细菌、真菌和寄生虫感染的针对PD-1和/或PD-L1/L2抗体的实例包含但不限于纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、MEDI-4736和SHR-1210。

另外，包括本公开的TB前药的脂质体可以与一或多种免疫检查点抑制剂组合以用于治疗疾病，如癌症或感染。示范性免疫检查点抑制剂包含针对免疫检查点分子的抑制剂，如CD27、CD28、CD40、CD122、CD96、CD73、CD47、OX40、GITR、CSF1R、JAK、PI3Kδ、PI3Kγ、TAM、精氨酸酶、CD137(又称4-1BB)、ICOS、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、LAG3、TIM3、VISTA、PD-1、PD-L1和PD-L2。

在一些实施例中，免疫检查点分子是选自以下的刺激性检查点分子：CD27、CD28、CD40、ICOS、OX40、GITR和CD137。在另外的实施例中，免疫检查点分子是选自以下的抑制性检查点分子：A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、IDO、KIR、LAG3、PD-1、TIM3和VISTA。在另外的实施例中，包括本文所提供的TB前药的脂质体可以与选自以下的一或多种药剂组合使用：KIR抑制剂、TIGIT抑制剂、LAIR1抑制剂、CD160抑制剂、2B4抑制剂和TGFβ抑制剂。

X.)将包括TB前药的纳米载剂递送到表达ALK5的细胞的方法

如本领域所知，用于使用前药和/或纳米载剂杀伤肿瘤细胞的多种组合物和方法是本领域已知的。在癌症的上下文中，典型的方法需要向患有肿瘤的哺乳动物施用生物有效量的本公开的TB前药和/或本公开的包括TB前药的纳米载剂。

典型实施例是一种将治疗剂递送到表达ALK5的细胞的方法，所述方法包括：通过连接单元将本公开的药物部分与本公开的脂质缀合来形成TB前药，以及将细胞暴露于TB前药。

在一个实施例中，TB前药包括式I的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的CHEMS。

在一个实施例中，TB前药包括式I的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的硬脂酸。

在一个实施例中，TB前药包括式II的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的CHEMS。

在一个实施例中，TB前药包括式II的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的硬脂酸。

在一个实施例中，TB前药包括式III的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的CHEMS。

在一个实施例中，TB前药包括式III的药物部分和通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的硬脂酸。

在一个实施例中，TB前药包括TB4前药，其中脂质部分包括通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的CHEMS。

在一个实施例中，TB前药包括TB4前药，其中脂质部分包括通过包括羟基甲基氨基甲酸酯接头的LU缀合的硬脂酸。

另一个说明性实施例是一种治疗疑似患有转移性癌症的个体的方法，所述方法包括以下步骤：向所述个体肠胃外施用药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的通过连接单元将药物部分与本公开的脂质缀合产生的TB前药，以及将细胞暴露于TB前药。

本公开的TB前药、脂质体和共调配的脂质体抑制TGFβ蛋白质/蛋白质相互作用的活性，并且因此可用于治疗与TGFβ活性相关的疾病和病症以及与激酶抑制相关的疾病和病症。在本公开的另外的实施例中，TB前药、脂质体或其药学上可接受的盐或立体异构体可用于治疗性施用以增强、刺激和/或增加癌症、慢性感染或败血症中的免疫力，包含增强对疫苗接种的应答。

在另外的实施例中，本公开提供了一种用于抑制ALK5 T细胞功能的方法。所述方法包含向个体或患者施用TB前药、脂质体、SLNP和/或如本文所描述的任何式(例如，TB4和/或TB4前药)、或根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的ALK5抑制剂前药、或其药学上可接受的盐或立体异构体。本公开的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的ALK5抑制剂前药可以单独使用、与其它药剂或疗法组合使用或作为佐剂或新佐剂以用于治疗疾病或病症，包含癌症和其它疾病。对于本文所描述的用途和方法，可以使用本公开的TB前药、脂质体和纳米包封的TB前药中的任一种，包含其任何实施例。

另外，本公开的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的TB前药抑制ALK5和/或T细胞功能，导致TGFβ通路阻断。

在另外的实施例中，本公开使用TB前药、脂质体和纳米包封的TB前药或其盐或立体异构体向个体或患者提供体内治疗，使得抑制癌性肿瘤的生长。

TB前药、脂质体和纳米包封的TB前药、或如本文所描述的任何式(例如，TB4前药)、或根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的TB前药、或其盐或立体异构体可以用于抑制癌性肿瘤的生长。

作为替代，本公开的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的TB前药，或如本文所描述的任何式，或根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的化合物(例如，TB4前药)、或其盐或立体异构体可以与如本公开所描述的其它药剂或标准癌症治疗结合使用。

在另外的实施例中，本公开提供了一种用于体外抑制肿瘤细胞生长的方法。所述方法包含使肿瘤细胞在体外与本公开的TB前药、脂质体和纳米包封的TB前药、或如本文所描述的任何式(例如，TB4前药)、或根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的TB前药、或其盐或立体异构体接触。

在另外的实施例中，本公开提供了一种用于抑制患者的肿瘤细胞生长的方法。所述方法包含使肿瘤细胞与本公开的TB前药、脂质体和纳米包封的TB前药、或如本文所描述的任何式(例如，TB4前药)，或根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的TB前药、脂质体、SLNP和纳米包封的TB前药、或其盐或立体异构体接触。

XI.)治疗癌症和其它免疫病症的方法

本公开的另一个实施例是一种用于治疗癌症的方法。所述方法包括向患者施用治疗有效量的脂质体，所述脂质体包括本文的TB前药(即，TB4前药)、根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的化合物或其盐。癌症的实例包含可以使用本公开的ALK5抑制剂和本公开的TB前药抑制其生长的那些癌症以及通常对免疫疗法有应答的癌症。

在一些实施例中，本公开提供了一种增强、刺激和/或增加患者免疫应答的方法。所述方法包含向患者施用治疗有效量的TB前药和/或包括所述前药(即，TB4前药)的纳米载剂、根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的化合物或组合物或其盐。

在一个实施例中，所述方法包含向患者施用治疗有效量的LNP-TB4或其盐。

在另外的实施例中，所述方法包含向患者施用治疗有效量的SLNP-TB4或其盐。

可使用包括本公开的包括TB前药的脂质体、TB前药和共调配的脂质体治疗的癌症的非限制性实例包含但不限于骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌(carcinoma ofthe endometrium)、子宫内膜癌(endometrial cancer)、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包含急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包含由石棉诱发的癌症)以及所述癌症的组合。本公开的化合物还可用于治疗转移性癌症，尤其是表达ALK5的转移性癌症。

在一些实施例中，可用本公开的脂质体或TB前药治疗的癌症包含黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤)、肾癌(例如，透明细胞癌)、前列腺癌(例如，激素难治性前列腺腺癌)、乳腺癌、结肠癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、鳞状细胞头颈癌、尿路上皮癌(例如，膀胱癌)和高微卫星不稳定性癌(MSI^高)。另外，本公开包含可以使用本公开的脂质体或TB前药或共调配的脂质体抑制其生长的难治性或复发性恶性肿瘤。

在另外的实施例中，可使用本公开的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药治疗的癌症包含但不限于实体瘤(例如，前列腺癌、结肠癌、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、肉瘤、膀胱癌等)、血液癌(例如，淋巴瘤、白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)、DLBCL、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(包含复发或难治性NHL和复发性滤泡)、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)或多发性骨髓瘤)以及所述癌症的组合。

在另外的实施例中，可使用本公开的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药治疗的癌症包含但不限于胆管癌(cholangiocarcinoma)、胆管癌(bile duct cancer)、三阴性乳腺癌、横纹肌肉瘤、小细胞肺癌、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、脑癌、脑肿瘤、星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、基底细胞癌、软骨肉瘤、上皮样肉瘤、眼癌、输卵管癌、胃肠道癌、胃肠道间质瘤、毛细胞白血病、肠癌、胰岛细胞癌、口腔癌(oral cancer)、口腔癌(mouth cancer)、喉癌(throat cancer)、喉癌(laryngealcancer)、唇癌、间皮瘤、颈癌、鼻腔癌、眼癌、眼黑色素瘤、盆腔癌、直肠癌、肾细胞癌、唾液腺癌、鼻窦癌、脊柱癌、舌癌、小管癌、尿道癌和输尿管癌。

另外，在一些实施例中，本公开的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药可以用于治疗镰状细胞病和镰状细胞贫血。

此外，在一些实施例中，可使用本公开的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药治疗的疾病和适应症包含但不限于血液癌、肉瘤、肺癌、胃肠道癌、泌尿生殖道癌、肝癌、骨癌、神经系统癌、妇科癌和皮肤癌。

示范性血液癌包含淋巴瘤和白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(包含复发性或难治性NHL和复发性滤泡性NHL)、霍奇金淋巴瘤、骨髓增生性疾病(例如，原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症(PV)和原发性血小板增多症(ET))、骨髓发育不良综合征(MDS)、T细胞急性淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL)和多发性骨髓瘤(MM)。

示范性肉瘤包含软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、粘液瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂肪瘤、血肿和畸胎瘤。

示范性肺癌包含非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、支气管癌(鳞状细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、软骨瘤性错构瘤和间皮瘤。

示范性胃肠道癌包含食道癌(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺癌(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌、舒血管肠肽瘤)、小肠癌(腺癌、淋巴瘤、类癌、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌癌)和结直肠癌。

示范性泌尿生殖道癌包含肾癌(腺癌、维尔姆氏肿瘤(Wilm's tumor)[肾母细胞瘤])、膀胱和尿道癌(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(腺癌、肉瘤)和睾丸癌(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)。

示范性肝癌包含肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤和血管瘤。

示范性骨癌包含例如骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤。

示范性神经系统癌包含头骨癌(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜癌(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质过多)、脑癌(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)和脊髓癌(神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)以及神经母细胞瘤和埃尔米特-杜多斯病(Lhermitte-Duclos disease)。

示范性妇科癌包含子宫癌(子宫内膜癌)、宫颈癌(宫颈癌、前肿瘤子宫颈非典型增生)、卵巢癌(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌症)、粒膜细胞肿瘤、塞-莱二氏细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、阴门癌(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道癌(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)和输卵管(癌)。

示范性皮肤癌包含黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、痣发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤和痣发育不良痣。在一些实施例中，可使用本公开的化合物治疗的疾病和适应症包含但不限于镰状细胞病(例如，镰状细胞贫血)、三阴性乳腺癌(TNBC)、骨髓增生异常综合征、睾丸癌、胆管癌、食管癌和尿路上皮癌。

另外，本公开的用经调配和/或共调配的脂质体或TB前药阻断TGFβ、ALK5和/或激酶通路还可以用于治疗感染，如病毒、细菌、真菌和寄生虫感染。

本公开提供了一种用于治疗如病毒感染等感染的方法。所述方法包含向患者施用治疗有效量的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药或如本文所描述的根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的任何式(即，TB4前药)、其盐。

可通过本公开的方法治疗的引起感染的病毒的实例包含但不限于人免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒、流感、甲型、乙型、丙型或丁型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、严重急性呼吸综合征病毒、埃博拉病毒(Ebola virus)和麻疹病毒。在一些实施例中，可通过本公开的方法治疗的引起感染的病毒包含但不限于肝炎(甲型、乙型或丙型)、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II和CMV、人疱疹病毒第四型)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒和虫媒病毒性脑炎病毒。

另外，本公开提供了一种用于治疗细菌感染的方法。所述方法包含向患者施用治疗有效量的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药或如本文所描述的根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的任何式(即，TB4前药)或其盐。

可通过本公开的方法治疗的引起感染的病原性细菌的实例包含但不限于衣原体、立克次氏菌(rickettsial bacteria)、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌、克雷伯氏菌、变形杆菌、沙雷氏菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙门氏菌、杆菌、霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌(Lyme's diseasebacteria)。

另外，本公开提供了一种用于治疗真菌感染的方法。所述方法包含向患者施用治疗有效量的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药或如本文所描述的根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的任何式(即，TB4前药)或其盐。

可通过本公开的方法治疗的引起感染的病原性真菌的实例包含但不限于假丝酵母(白色念珠菌、克柔假丝酵母、光滑念珠菌、热带念珠菌等)、新型隐球菌、曲霉菌(烟曲霉菌、黑曲霉等)、毛霉菌属(毛霉菌、梨头霉、如根霉)、申克氏孢子丝菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌和荚膜组织胞浆菌。

另外，本公开提供了一种用于治疗寄生虫感染的方法。所述方法包含向患者施用治疗有效量的经调配和/或共调配的脂质体或TB前药或如本文所描述的根据技术方案中任一技术方案所述和本文所描述的任何式(即，TB4前药)或其盐。

可通过本公开的方法治疗的引起感染的病原性寄生虫的实例包含但不限于痢疾内变形虫(Entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleriafowleri)、棘阿米巴(Acanthamoeba sp.)、鞭毛虫(Giardia Zambia)、隐孢子虫(Cryptosporidium sp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、田鼠巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼虫(Leishmania donovani)、弓形虫(Toxoplasma gondi)和巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。

在本公开范围内的另外一组实施例中，经调配和/或共调配的纳米载剂、脂质体、SLNP或TB前药、或如本文所描述的任何式(即，TB4前药)可用于预防或降低发生本公开中提及的任何疾病的风险；例如，预防或降低可能易患疾病、病状或病症但尚未经历或显示疾病的病理学或症状学的个体患上所述疾病、病状或病症的风险。

XII.)试剂盒/制品

为了在本文所描述的实验室、预后、预防、诊断和治疗应用中使用，试剂盒在本发明的范围内。这种试剂盒可以包括被分隔开以收纳一或多个容器如小瓶、试管等的载剂、包装或容器，所述一或多个容器中的每个容器包括用于所述方法中的单独元件中的一个单独元件以及包括使用说明如本文所描述用途的标签或插页。例如，容器可以包括经调配和/或共调配的纳米载剂，所述纳米载剂是或可以可检测地标记和/或装载有本公开的TB前药。试剂盒可以包括包含药物单位的容器。试剂盒可以包含所有或部分经调配和/或共调配的纳米载剂和/或TB前药。

本发明的试剂盒通常将包括上述容器和与之相关的一或多个其它容器，所述一或多个其它容器包括从商业和用户的角度来看合乎期望的材料，所述材料包含：缓冲剂、稀释剂、过滤器、针、注射器；列出内容和/或使用说明的载剂、包装、容器、小瓶和/或试管标签；以及带有使用说明的包装插页。

标签可以呈现在容器上或与容器一起呈现，以指示组合物用于特定疗法或非治疗应用如预后、预防、诊断或实验室应用并且还可以指示体内或体外使用指南，如本文所描述的用途。指南和或其它信息也可以包含在与试剂盒一起包含在内或试剂盒上包含的一或多个插页或一或多个标签上。标签可以在容器上或与容器相关。当将形成标签的字母、数字或其它字符模制或蚀刻到容器本身中时，标签可以在容器上；当标签存在于也容纳容器的接收器或载剂中例如作为包装插页时，标签可以与容器相关。标签可以表明组合物用于诊断、治疗、预防或预测病状，如癌症或其它免疫病症。

术语“试剂盒”和“制品”可以用作同义词。

在本发明的另一个实施例中，含有组合物的制品，如经调配和/或共调配的纳米载剂和/或TB前药在本公开的范围内。制品通常包括至少一个容器和至少一个标签。合适的容器包含例如瓶子、小瓶、注射器和试管。容器可以由各种材料如玻璃、金属或塑料形成。容器可以容纳经调配和/或共调配的装载有TB前药的纳米载剂。

容器还可以可替代地容纳有效用于治疗、诊断、预测和预防病状的组合物并且可以具有无菌接入端口(例如，容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的活性剂可以被调配和/或共调配成载有TB前药和/或如本文所公开的TB前药的纳米载剂。

制品可以进一步包括第二容器，所述第二容器包括药学上可接受的缓冲剂，如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)和/或右旋糖溶液。所述制品可以进一步包含从商业和用户的角度来看合乎期望的其它材料，所述其它材料包含其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、搅拌器、针、注射器和/或具有使用指示和/或使用说明的包装插页。

在一个实施例中，试剂盒或制品包括LNP-TB4和/或治疗有效量的LNP-TB4。

在一个实施例中，试剂盒或制品包括SLNP-TB4和/或治疗有效量的SLNP-TB4。

示范性实施例

所提供的实施例包括：

1)一种TB前药组合物，其包括：

(i)药物部分；

(ii)脂质部分；以及

(iii)连接单元(“LU”)，

由此所述药物部分包括TGFβ拮抗剂，并且由此所述LU使所述药物部分与所述脂质部分缀合。

2)根据技术方案1所述的TB前药，其进一步包括如式I所示的化学结构。

3)根据技术方案1所述的TB前药，其进一步包括如式II所示的化学结构。

4)根据技术方案1所述的TB前药，其进一步包括如式III所示的化学结构。

5)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述药物部分包括如TB4所示的化学结构。

6)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

7)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述脂质部分包括如表I所示的脂质。

8)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述脂质部分包括如表III所示的脂质。

9)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述脂质部分包括CHEMS。

10)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述脂质部分包括硬脂酸。

11)根据技术方案1所述的TB前药，其中所述药物部分包括如TB4所示的化学结构，并且其中所述脂质部分包括硬脂酸，并且其中所述化合物具有以下化学结构：

12)一种TB前药组合物，其包括：

(i)药物部分，由此所述药物部分包括TB4；

(ii)脂质部分，由此所述脂质部分包括CHEMS；以及

(iii)LU，由此所述LU包括羟基甲基氨基甲酸酯接头。

13)一种TB前药组合物，其包括：

(i)药物部分，由此所述药物部分包括TB4；

(ii)脂质部分，由此所述脂质部分包括硬脂酸；以及

(iii)LU，由此所述LU包括羟基甲基氨基甲酸酯接头。

14)根据技术方案13所述的TB前药组合物，其具有以下化学结构：

15)一种纳米载剂，其包括TB前药，由此所述纳米载剂在切割LU之后释放活性ALK5抑制剂。

16)根据技术方案15所述的纳米载剂，其中所述LU为羟基甲基氨基甲酸酯接头。

17)根据技术方案15所述的纳米载剂，其进一步包括辅助脂质，由此所述辅助脂质示出于表II中。

18)根据技术方案15所述的纳米载剂，其中所述TB前药包括TB4。

19)根据技术方案15所述的纳米载剂，其中所述纳米载剂为脂质体。

20)根据技术方案19所述的脂质体，其中所述TB前药包括TB4并且表示为LNP-TB4。

21)根据技术方案19所述的脂质体，由此所述脂质体进一步与一或多种免疫调节剂或其脂质前药共调配，其中所述免疫调节剂选自由以下组成的组：免疫原性细胞死亡诱导化疗剂、toll受体激动剂、STING激动剂、CTLA-4抑制剂、IDO抑制剂、PD-1/PD-L1抑制剂、CD1D激动剂和/或其前药。

22)根据技术方案19所述的脂质体，由此所述脂质体进一步与ICD诱导化疗剂共调配，其中所述ICD诱导化疗剂选自由以下组成的组：DOX、MTO、OXA、CP、硼替佐米、卡非佐米或紫杉醇。

23)根据技术方案19所述的脂质体，其进一步包括DOX。

24)根据技术方案19所述的脂质体，其进一步包括MTO。

25)根据技术方案22所述的脂质体，其进一步包括DOX。

26)根据技术方案22所述的脂质体，其进一步包括MTO。

27)根据技术方案19所述的脂质体，由此所述脂质体进一步与toll受体激动剂或其脂质前药共调配，其中所述toll受体激动剂选自由以下组成的组：瑞喹莫德(R848)、嘎德莫特、852A、DSR 6434、替拉莫德、CU-T12-9、单磷酰脂质A(MPLA)、3D(6-酰基)-

SMU127、Pam3CSK4或3D-

28)根据技术方案19所述的脂质体，由此所述脂质体进一步与PD-1/PD-L1拮抗剂或其脂质前药共调配，其中所述PD-1/PD-L1拮抗剂选自由以下组成的组：AUNP12、CA-170或BMS-986189。

29)一种试剂盒，其包括根据技术方案15至28任一项所述的脂质体。

30)根据技术方案15所述的纳米载剂，其中所述纳米载剂为固体脂质纳米颗粒(SLNP)。

31)根据技术方案30所述的SLNP，其中所述TB前药包括TB4并且表示为SLNP-TB4。

32)根据技术方案30所述的SLNP，由此所述SLNP进一步与一或多种免疫调节剂或其脂质前药共调配，其中所述免疫调节剂选自由以下组成的组：免疫原性细胞死亡诱导化疗剂、toll受体激动剂、STING激动剂、CTLA-4抑制剂、IDO抑制剂、PD-1/PD-L1抑制剂、CD1D激动剂和/或其前药。

33)根据技术方案30所述的SLNP，由此所述SLNP进一步与ICD诱导化疗剂共调配，其中所述ICD诱导化疗剂选自由以下组成的组：DOX、MTO、OXA、CP、硼替佐米、卡非佐米或紫杉醇。

34)根据技术方案30所述的SLNP，其进一步包括DOX。

35)根据技术方案30所述的SLNP，其进一步包括MTO。

36)根据技术方案33所述的SLNP，其进一步包括DOX。

37)根据技术方案33所述的SLNP，其进一步包括MTO。

38)根据技术方案30所述的SLNP，由此所述脂质体进一步与toll受体激动剂或其脂质前药共调配，其中所述toll受体激动剂选自由以下组成的组：瑞喹莫德(R848)、嘎德莫特、852A、DSR 6434、替拉莫德、CU-T12-9、单磷酰脂质A(MPLA)、3D(6-酰基)-

SMU127、Pam3CSK4或3D-

39)根据技术方案30所述的SLNP，由此所述脂质体进一步与PD-1/PD-L1拮抗剂或其脂质前药共调配，其中所述PD-1/PD-L1拮抗剂选自由以下组成的组：AUNP12、CA-170或BMS-986189。

40)一种试剂盒，其包括根据技术方案30至39任一项所述的SLNP。

41)一种治疗患有癌症或被诊断为患有癌症的受试者的方法，所述方法包括：

(i)向需要此类治疗的受试者施用有效量的纳米载剂，其中所述纳米载剂包括TB前药；以及

(ii)其药学上可接受的盐。

42)根据技术方案41所述的方法，其中所述TB前药包括TB4前药。

43)根据技术方案41所述的方法，其中所述纳米载剂包括进一步与ICD诱导化疗剂共调配的TB4前药。

44)根据技术方案41所述的方法，其中所述纳米载剂包括进一步与免疫调节剂共调配的TB4前药。

45)根据技术方案41所述的方法，其中所述纳米载剂为脂质体。

46)根据技术方案45所述的方法，其中所述脂质体为LNP-TB4。

47)根据技术方案41所述的方法，其中所述纳米载剂为固体脂质纳米颗粒。

48)根据技术方案47所述的方法，其中所述脂质体为SLNP-TB4。

49)一种治疗患有癌症或被诊断为患有癌症的受试者的方法，所述方法包括：

(iii)向需要此类治疗的受试者施用有效量的纳米载剂，其中所述纳米载剂包括TB前药；以及

(iv)其药学上可接受的盐。

50)根据技术方案49所述的方法，其中所述TB前药包括TB4前药。

51)根据技术方案49所述的方法，其中所述纳米载剂包括进一步与ICD诱导化疗剂共调配的TB4前药。

52)根据技术方案49所述的方法，其中所述纳米载剂包括进一步与免疫调节剂共调配的TB4前药。

53)根据技术方案49所述的方法，其中所述纳米载剂为固体脂质纳米颗粒(“SLNP”)。

54)根据技术方案53所述的方法，其中所述SLNP为SLNP-TB4。

55)根据技术方案49所述的方法，其中所述纳米载剂为脂质体。

56)根据技术方案55所述的方法，其中所述脂质体为LNP-TB4。

57)一种TB4前药，其具有以下化学结构：

58)一种脂质体，其包括根据技术方案57所述的TB4前药。

59)一种脂质体，其包括根据技术方案57所述的TB4前药，其进一步包括辅助脂质。

60)一种根据技术方案59所述的脂质体，其中所述辅助脂质示出于表II中。

61)一种固体脂质纳米颗粒(SLNP)，其包括根据技术方案57所述的TB4前药。

62)一种TB4前药，其具有以下化学结构：

63)一种脂质体，其包括根据技术方案62所述的TB4前药。

64)一种脂质体，其包括根据技术方案62所述的TB4前药，其进一步包括辅助脂质。

65)一种根据技术方案64所述的脂质体，其中所述辅助脂质示出于表II中。

66)一种根据技术方案62所述的脂质体，其表示为LNP-TB4。

67)一种固体脂质纳米颗粒(SLNP)，其包括根据技术方案62所述的TB4前药。

68)根据技术方案67所述的SLNP，其表示为SLNP-TB4。

69)根据技术方案63所述的脂质体，其与AR5共调配。

70)根据技术方案63所述的脂质体，其与TR6共调配。

71)根据技术方案63所述的脂质体，其与ID3共调配。

72)根据技术方案63所述的脂质体，其与PD3共调配。

73)根据技术方案63所述的脂质体，其与MTO共调配。

74)根据技术方案63所述的脂质体，其与MTO和ID3共调配。

75)根据技术方案63所述的脂质体，其与MTO和AR5共调配。

76)根据技术方案68所述的SLNP，其与MTO共调配。

77)根据技术方案68所述的SLNP，其与AR5共调配。

78)根据技术方案68所述的SLNP，其与ID3共调配。

79)根据技术方案68所述的SLNP，其与PD3共调配。

80)根据技术方案68所述的SLNP，其与MTO和ID3共调配。

81)根据技术方案68所述的SLNP，其与MTO和AR5共调配。

实例：

本发明的各个方面将通过下面的几个实施例进一步描述和说明，所述实例均不旨在限制本发明的范围。

实例1：包括硬脂酸的TB4前药的化学合成。

包括硬脂酸的TB4前药的化学合成使用以下方案合成。首先，用化合物(2)和KHMDS处理化合物(1)，以产生中间体3。然后，依次用DMF二甲基缩醛处理中间体3，然后将其用水合肼处理，以产生中间体4。然后，用三苯基氯甲烷处理中间体4，以产生中间体5。接下来，用试剂(6)和钯化三苯基膦处理中间体5，然后用氢氧化钠水解，以产生中间体7。然后，用试剂(8)和EDCI/HOBt处理中间体7，以产生中间体9。然后，用六甲基二硅叠氮化锂处理中间体9，然后用氯甲酸氯甲酯(10)处理，以产生中间体11。最后，依次用硬脂酸处理DMF中的中间体11，然后用碳酸银处理，然后在80℃下用碘化钠处理，然后再用含HCl的甲醇处理，以产生包括硬脂酸的最终前药TB4。(12)。(图1)。此实例所示的合成产生具有以下化学结构的TB4前药：

实例2：在到TB4前药途中的保护基团中间体的化学合成。

为了合成保护基团中间体，使用了以下方案。简而言之，在15℃下向TB4(13.0g，30.5mmol，1.00当量)于DCM(1.50L)中的溶液中添加Boc₂O(8.00g，36.7mmol，8.42mL，1.20当量)和DMAP(746mg，6.11mmol，0.20当量)。在添加之后，将反应混合物在30℃下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示出TB4(R_f＝0.2)被消耗并且形成一个主要的新斑点(Rf＝0.5)。LCMS确认检测到期望质量(RT＝0.850分钟)。将反应混合物在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗产物通过柱色谱法(SiO₂，二氯甲烷:甲醇＝50:1-30:1，R_f＝0.5)纯化，以得到呈白色固体的化合物2(13.0g，24.7mmol，产率80.9％)。所得化合物如图2所示。

实例3：在到TB4前药途中的保护基团中间体的化学合成。

在另一个实施例中，以以下方式合成另外的保护基团中间体。简而言之，在25℃下向化合物3(4.50g，7.28mmol，1.00当量)于DCM(225mL)中的溶液中添加TFA(16.6g，145mmol，10.8mL，20.0当量)。在添加之后，将反应混合物在25℃下搅拌另外4小时。LCMS确认反应已完成并且检测到期望质量(RT＝0.874分钟)。用饱和NaHCO₃溶液将反应混合物调节到pH＝7-8,并用DCM(150mL^*2)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的化合物4(3.50g，6.76mmol，产率92.81％)。所得化合物如图3所示。

实例4：包括硬脂酸的TB4前药的化学合成。

包括硬脂酸的TB4前药的化学合成使用以下方案合成。首先，在15℃下向TB4(13.0g，30.5mmol，1.00当量)于DCM(1.50L)中的溶液中添加Boc₂O(8.00g，36.7mmol，8.42mL，1.20当量)和DMAP(746mg，6.11mmol，0.20当量)。在添加之后，将反应混合物在30℃下搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示出TB4(R_f＝0.2)被消耗并且形成一个主要的新斑点(Rf＝0.5)。LCMS显示出检测到期望质量(RT＝0.850分钟)。将反应混合物在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗产物通过柱色谱法(SiO₂，二氯甲烷:甲醇＝50:1-30:1，R_f＝0.5)纯化，以得到呈白色固体的化合物2(13.0g，24.7mmol，产率80.9％)。然后，在-70℃下在N₂下向化合物2(9.00g，17.1mmol，1.00当量)于DCM(1000mL)中的溶液中添加LiHMDS(1M，37.6mL，2.20当量)，持续1小时。在-70℃下向混合物中添加含化合物2a(9.36g，72.5mmol，6.45mL，4.24当量)的DCM(50mL)。将混合物在-70℃下搅拌6小时。然后将混合物在15℃下搅拌另外6小时。LCMS显示出化合物2(RT＝1.038分钟)残留18.4％，并且检测到33.1％的期望质量(RT＝1.195分钟)。将混合物倒入到饱和NH₄Cl溶液(500mL)中，并用DCM(200mL^*2)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩，并经LCMS确认。通过反相MPLC法(ACN/H₂O，TFA条件)纯化粗产物，并且在去除ACN之后，并用乙酸乙酯(300mL^*3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的化合物3(6.20g，10.0mmol，产率29.2％)，这已经LCMS确认。然后，在25℃下向化合物3(4.50g，7.28mmol，1.00当量)于DCM(225mL)中的溶液中添加TFA(16.6g，145mmol，10.8mL，20.0当量)。在添加之后，将反应混合物在25℃下搅拌另外4小时。LCMS显示出反应已完成并且检测到期望质量(RT＝0.874分钟)。用饱和NaHCO₃溶液将反应混合物调节到pH＝7-8,并用DCM(150mL^*2)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的化合物4(3.50g，6.76mmol，产率92.81％)，所述化合物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。最后，向化合物4(3.50g，6.76mmol，1.00当量)和硬脂酸(2.88g，10.1mmol，3.41mL，1.50当量)于ACN(175mL)中的溶液中添加DIEA(2.62g，20.3mmol，3.53mL，3.00当量)。在添加之后，将反应混合物在80℃下搅拌另外36小时。LCMS显示出化合物4未完全完成，并检测到期望质量(RT＝1.383分钟)。将混合物在45℃下在减压下浓缩，以产生经LCMS确认的粗产物。将粗产物与ET34822-17合并，以通过反向MPLC(MeOH/H₂O/TFA条件)纯化，并且然后浓缩，以得到粗产物。将粗产物通过柱色谱法(SiO₂，石油醚:乙酸乙酯＝1:1对乙酸乙酯:甲醇＝10:1)，其由TLC检测(乙酸乙酯:甲醇＝10:1，R_f＝0.3)。获得呈黄色凝胶的包括硬脂酸(1.3g，1.59mmol，产率21.2％，纯度93.9％)的TB4，这通过¹H NMR、FNMR、LCMS和HPLC确认。所得化合物和合成过程如图7所示。此实例所示的合成产生具有以下化学结构的TB4前药：

实例5：LNP-TB4脂质体的合成和表征。

在另一个实验中，包括TB4前药的脂质体(表示为LNP-TB4)以下列方式合成。简而言之，在第一步中，分别在乙醇(20mg/ml)中制备POPC(1-棕榈酰基-2-油酰基-甘油-3-磷酸胆碱)、CHOL和DSPE-PEG的脂质储备溶液。在乙腈(20mg/ml)中制备TB4前药(TB4+硬脂酸)储备溶液，因为其不溶于乙醇。将POPC、CHOL、TB4+硬脂酸和DSPE-PEG的脂质混合物以51:29:16.5:3.5的摩尔比混合在一起，并且随后用乙醇稀释，以得到10mg/ml的总脂质浓度。使用微流化器中的加热块附件在55-60摄氏度下加热此脂质混合物。类似地，含有1mM PBS缓冲液的水相也在55-60摄氏度下预加热，然后以5:1(水相:有机相，脂质混合物)的流速穿过微流体盒。使用针对DI水的截止值大小为12KDa(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的透析膜去除溶剂，持续至少24小时。在24小时的时间段期间更换透析水至少5次，以最大限度地去除溶剂。在去除溶剂之后，根据需要使用Amicon离心过滤装置(3000g时截止值大小为10KDa)将LNP-TB4浓缩。

使用Malvern Zetasizer(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司(Malvern Instrumentation Co.,Westborough,MA,USA))测定LNP-TB4脂质体的表征。简而言之，将两(2)ml LNP-TB4脂质体(脂质体浓度为0.5-1mg/ml)置于4面透明塑料比色皿中，并在25℃下直接分析。图8所示的结果显示，纳米颗粒的Zav大小为约87nm，其中PDI为约0.265。

另外，使用Malvern zeta seizer仪器(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定水分散体中LNP-TB4脂质体的ζ电位。简而言之，将大约一(1)ml脂质体(在20mM NaCl中浓度为大约2mg/ml)放置于可用于Zetasizer的一次性毛细管ζ电位池中。测量在25℃下进行。结果显示LNP-TB4的ζ电位测定值为约-15.1mV(图9)。

实例6：LNP-TB4-ID3脂质体的合成和表征。

在另一个实验中，包括TB4前药的脂质体(表示为LNP-TB4)与ID3共调配并以下列方式合成。简而言之，在第一步中，分别在乙醇(20mg/ml)中制备POPC(1-棕榈酰基-2-油酰基-甘油-3-磷酸胆碱)、CHOL和DSPE-PEG的脂质储备溶液。然后在乙腈(20mg/ml)中制备TB4前药(TB4+硬脂酸)和ID3前药的储备溶液，因为其不溶于乙醇。然后将POPC、CHOL、TB4+硬脂酸、ID3和DSPE-PEG的脂质混合物以53:31:6:6:4的摩尔比混合在一起，并且随后用乙醇稀释，以得到10mg/ml的总脂质浓度。使用微流化器中的加热块附件在50摄氏度下加热此脂质混合物。类似地，含有1mM PBS缓冲液的水相也在50摄氏度下预加热，然后以4.5:1(水相:有机相，脂质混合物)的流速穿过微流体盒。使用针对DI水的截止值大小为12KDa(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的透析膜去除溶剂，持续至少24小时。在24小时的时间段期间更换透析水至少5次，以最大限度地去除溶剂。在去除溶剂之后，根据需要使用Amicon离心过滤装置(3000g时截止值大小为10KDa)将LNP-TB4-ID3浓缩。

使用Malvern Zetasizer(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定LNP-TB4-ID3脂质体的表征。简而言之，将两(2)ml LNP-TB4-ID3脂质体(脂质体浓度为0.5-1mg/ml)置于4面透明塑料比色皿中，并在25℃下直接分析。图10所示的结果显示，纳米颗粒的Zav大小为约87nm，其中PDI为约0.075。

另外，使用Malvern zeta seizer仪器(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定水分散体中LNP-TB4-ID3脂质体的ζ电位。简而言之，将大约一(1)ml脂质体(在20mM NaCl中浓度为大约2mg/ml)放置于可用于Zetasizer的一次性毛细管ζ电位池中。测量在25℃下进行。结果显示LNP-TB4-ID3的ζ电位测定值为约-11.5mV(图11)。

另外，表IV示出了另外的共调配的LNP-TB4的汇总表。

实例7：SLNP-TB4固体脂质纳米颗粒的合成和表征。

在另一个实验中，包括TB4前药(表示为SLNP-TB4)的固体脂质纳米颗粒(SLNP)以下列方式合成。简而言之，包括TB4前药的SLNP是使用不同类型的乳化剂制备的，如Moliwol488(聚乙烯醇)、Pluronic F 127和Kolliphor RH 40。在第一步中，分别在乙醇(20mg/ml)中制备POPC、CHOL、DSPE-PEG的脂质储备溶液。然后，在乙腈(20mg/ml)中制备TB4前药储备溶液。将POPC、CHOL、TB4和DSPE-PEG的脂质混合物以51:29:15:5的摩尔比混合在一起，并且然后用乙醇稀释，以得到10mg/ml的脂质浓度。使用微流化器中的加热块附件在55摄氏度下加热此脂质混合物。类似地，含有2％w/v Moliwol 488(或2％w/v Pluronic F127/Kolliphor RH 40)溶液的水相也在55摄氏度下预加热，然后以5:1(水相:有机相，脂质混合物)的流速穿过微流体盒。使用针对DI水的截止值大小为12KDa(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的透析膜去除溶剂，持续至少24小时。在24小时的时间段期间更换透析水至少5次，以最大限度地去除溶剂。在去除溶剂之后，将SLNP穿过0.2微米滤膜(乙酸纤维素)。根据需要使用Amicon离心过滤装置(3000g时截止值大小为10KDa)将SLNP-TB4浓缩。

使用Malvern Zetasizer(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定SLNP-TB4脂质体的表征。简而言之，将两(2)ml SLNP-TB4(SLNP浓度为0.5-1mg/ml)放置于4面透明塑料比色皿中，并在25℃下直接分析。图12所示的结果显示，纳米颗粒的Zav大小为约90nm，其中PDI为约0.074。

另外，使用Malvern zeta seizer仪器(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定水分散体中SLNP-TB4固体脂质纳米颗粒的ζ电位。简而言之，将大约一(1)mlSLNP(在20mM NaCl中浓度为大约2mg/ml)放置于可用于Zetasizer的一次性毛细管ζ电位池中。测量在25℃下进行。结果显示SLNP-TB4的ζ电位测定值为约-11.9mV(图13)。

实例8：SLNP-TB4-ID3固体脂质纳米颗粒的合成和表征。

在另一个实验中，包括与ID3共调配的TB4前药的固体脂质纳米颗粒(SLNP)(表示为SLNP-TB4-ID3)以下列方式合成。简而言之，包括TB4前药的SLNP是使用不同类型的乳化剂制备的，如Moliwol 488(聚乙烯醇)、Pluronic F 127和Kolliphor RH 40。在第一步中，分别在乙醇(20mg/ml)中制备POPC、CHOL、DSPE-PEG的脂质储备溶液。然后，在乙腈(20mg/ml)中制备TB4和ID3前药储备溶液。将POPC、CHOL、TB4、ID3和DSPE-PEG的脂质混合物以52:29:7:7:5的摩尔比混合在一起，然后用乙醇稀释，以得到10mg/ml的脂质浓度。使用微流化器中的加热块附件在55摄氏度下加热此脂质混合物。类似地，含有2％w/v Moliwol 488(或2％w/v Pluronic F127/Kolliphor RH 40)溶液的水相也在55摄氏度下预加热，然后以5:1(水相:有机相，脂质混合物)的流速穿过微流体盒。使用针对DI水的截止值大小为12KDa(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))的透析膜去除溶剂，持续至少24小时。在24小时的时间段期间更换透析水至少5次，以最大限度地去除溶剂。在去除溶剂之后，将SLNP穿过0.2微米滤膜(乙酸纤维素)。根据需要使用Amicon离心过滤装置(3000g时截止值大小为10KDa)将SLNP-TB4-ID3浓缩。

使用Malvern Zetasizer(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定SLNP-TB4-ID3的表征。简而言之，将两(2)ml SLNP-TB4-ID3(SLNP浓度为0.5-1mg/ml)放置于4面透明塑料比色皿中，并在25℃下直接分析。图14所示的结果显示，纳米颗粒的Zav大小为约104.3nm，其中PDI为约0.119。

另外，使用Malvern zeta seizer仪器(美国马塞诸塞州韦斯特伯鲁的马尔文仪器有限公司)测定水分散体中SLNP-TB4-ID3固体脂质纳米颗粒的ζ电位。简而言之，将大约一(1)ml SLNP(在20mM NaCl中浓度为大约2mg/ml)放置于可用于Zetasizer的一次性毛细管ζ电位池中。测量在25℃下进行。结果显示SLNP-TB4-ID3的ζ电位测定值为约-10.3mV(图15)。

另外，表V示出了另外的共调配的SLNP-TB4的汇总表。

实例9：使用B16F10细胞，SLNP-TB4在体内的肿瘤抑制。

在此实验中，使用以下方案对SLNP-TB4进行评估。将鼠黑色素瘤B16F10细胞(细胞数(0.2×10⁶))皮下接种在C57BL/6小鼠的右后侧区域。通过静脉内注射每周两次用以下处理动物：媒剂对照；3mg/kg的LNP-MTO(呈脂质体形式的米托蒽醌二盐酸盐)；3mg/kg的LNP-AR5(呈脂质体形式的AR5硬脂酸)；3mg/kg的LNP-AR5和LNP-TB4的组合(呈脂质体形式的TB4硬脂酸)；以及3mg/kg的LNP-MTO和SLNP-TB4(呈固体脂质纳米粒形式的TB4硬脂酸)。使用卡尺在二维空间测量肿瘤体积三(3)次，并使用以下式计算体积：V＝(L x W x W)X 0.5，其中V是肿瘤体积，L是肿瘤长度(最长的肿瘤尺寸)，并且W是肿瘤宽度(垂直于L的最长的肿瘤尺寸)。基于第15天的肿瘤大小数据计算肿瘤生长抑制(TGI)。

结果显示SLNP-TB4与LNP-MTO的组合提供了显著的抗肿瘤活性。TGI值计算为44.12％(所有p<0.05)。(图16)。

实例10：使用B16F10细胞，LNP-TB4以多种组合在体内的肿瘤抑制。

在此实验中，使用以下方案对LNP-TB4进行评估。将鼠黑色素瘤B16F10细胞(细胞数(0.2×10⁶))皮下接种在C57BL/6小鼠的右后侧区域。通过静脉内注射每周两次用以下处理动物：媒剂对照；3mg/kg的LNP-MTO(呈脂质体形式的米托蒽醌二盐酸盐)；3mg/kg的LNP-TB4(呈脂质体形式的TB4硬脂酸)和LNP-TR6(呈脂质体形式的TR6化学物)的组合；3mg/kg的另外的LNP-TB4和LNP-AR5(呈脂质体形式的AR5硬脂酸)的组合；3mg/kg的另外的LNP-TB4和LNP-ID3(呈脂质体形式的ID3硬脂酸)的组合；3mg/kg的另外的LNP-TB4和LNP-PD3(PD3胆固醇)的组合；3mg/kg的另外的LNP-TB4、LNP-MTO和LNP-ID3的组合；以及3mg/kg的另外的LNP-TB4、LNP-MTO和LNP-AR5的组合。使用卡尺在二维空间测量肿瘤体积三(3)次，并使用以下式计算体积：V＝(L x W x W)X 0.5，其中V是肿瘤体积，L是肿瘤长度(最长的肿瘤尺寸)，并且W是肿瘤宽度(垂直于L的最长的肿瘤尺寸)。基于第16天的肿瘤大小数据计算肿瘤生长抑制(TGI)。

结果表明，以3mg/kg的LNP-MTO作为单一药剂处理产生了抗肿瘤活性。TGI值计算为32.6％(p<0.05)。另外，LNP-TB4+LNP-MTO+LNP-ID3和LNP-AR5+LNP-MTO+LNP-TB4的组合产生抗肿瘤活性。TGI值分别计算为32.86％(p<0.05)和37.86％(p<0.05)。(图17)。

实例11：LNP-TB4和SLNP-TB4作用机制的体外验证。

在此实验中，使用以下方案在体外评估LNP-TB4和SLNP-TB4的作用机制。进行以下测定以确认呈脂质体形式(LNP)的TB4和呈固体脂质纳米颗粒形式(SLNP)中的TB4可以在体外具有生物学效应。简而言之，在使用标准方法的情况下，使用HEK-Blue^TMTGF-β细胞和QUANTI Blue^TM(加利福尼亚州圣地亚哥的InvivoGen公司(InvivoGen,San Diego,CA))测定。用TGF-β刺激HEK-Blue^TMTGF-β细胞会诱导TGF-β/Smad信号传导通路的激活，从而导致Smad3/Smad4复合物的形成。杂合物进入细胞核并结合SBE位点，从而诱导产生SEAP。使用QUANTI-Blue可以很容易地评估上清液中分泌的SEAP的量。在存在10ng/ml的TGF-β的情况下，将细胞与不同浓度的TB4、LNP-TB4和SLNP-TB4一起温育。在与相应化合物温育二十四(24)小时之后，通过使用QUANTI-Blue^TM测定测量SEAP最佳密度(OD)的水平并将数据相对于对照组(仅用TGF-β处理的细胞)归一化来评估TGF-β抑制的百分百(％)。

结果表明，用LNP-TB4和SLNP-TB4处理细胞可抑制TGF-β。(参见图18)。

实例12：通过使用经调配和/或共调配的包括TB前药的脂质体治疗人癌症的人临床试验。

根据本发明使用经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体，其特异性积聚在肿瘤细胞中并用于治疗某些肿瘤和其它免疫病症和/或其它疾病。结合这些适应症中的每种适应症，成功得到了两种临床方法。

I.)辅助疗法：在辅助疗法中，用经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体与化疗剂或药物或生物药剂或其组合治疗患者。在标准方案下，通过添加经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体来治疗原发性癌症靶标。方案设计解决了如以下实例所评估的有效性，包含但不限于原发性或转移性病变的肿瘤质量减小、无进展存活期增加、总存活期、患者健康改善、疾病稳定以及能够减少标准化疗和其它生物剂的常用剂量。这些剂量减少通过减少化疗剂或生物剂的剂量相关毒性而允许另外的和/或延长的疗法。

II.)单一疗法：结合经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体在肿瘤的单一疗法中的用途，在没有化疗剂或药物或生物药剂的情况下，向患者施用经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体。在一个实施例中，在临床上在患有广泛转移性疾病的晚期癌症患者中进行单一疗法。方案设计解决了如以下实例所评估的有效性，包含但不限于原发性或转移性病变的肿瘤质量减小、无进展存活期增加、总存活期、患者健康改善、疾病稳定以及能够减少标准化疗和其它生物剂的常用剂量。

剂量

可以调整剂量方案以提供最佳期望应答。例如，可以施用单次经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体，可以随时间推移施用若干分次剂量，或者可以按治疗状况的紧急情况所指出的成比例地减少或增加剂量。如本文所使用的，剂量单位形式是指适于作为要治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，所述预定量被计算为产生与所需的药物载剂相关的所期望的治疗效果。本发明的剂量单位形式的规格由以下决定并且直接取决于以下：(a)经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体的独特特性，(b)组合化合物(如果有的话)的单独机制，(c)要达到的特定治疗或预防效果，以及(d)用于治疗个体过敏的此类化合物的技术中固有的限制。

临床开发计划(CDP)

CDP遵循并开发了使用经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体与辅助疗法或单一疗法相结合的治疗。试验最初证明了安全性并且此后以重复剂量确认疗效。试验是开放标签的，比较标准化疗和/或当前疗法标准加上经调配和/或共调配的含有TB前药的脂质体。如将认识到的，可可以结合患者纳入利用的一个非限制性准则是如通过本领域已知的标准检测方法测定的肿瘤中的TGFβ的表达。

据信，经调配和/或共调配的脂质体或本文所公开的任何实施例可以具有令人满意的药理学特性和有前途的生物制药学特性，如毒理学特性、代谢和药代动力学特性、溶解度和渗透性。应当理解，确定合适的生物制药学特性在本领域技术人员的知识范围内，例如，确定细胞中的细胞毒性或抑制某些靶标或通道以确定潜在毒性。

本发明不限于本文所公开的实施例的范围，所述实施例旨在作为本发明的各个方面的简单说明，并且功能上相当的任何实施例均在本发明的范围内。除了本文描述的那些修改之外，对本发明的模型、方法和生命周期方法论的各种修改根据前述描述和教导对于本领域技术人员而言将变得显而易见并且类似地旨在落入本发明的范围内。这种修改或其它实施例可以在不背离本发明的实际范围和精神的情况下进行实践。

表I：脂质的实例。

表II：辅助脂质的实例。

表III：磷脂/脂肪酸的实例。

表IV：LNP-TB4共调配物的概括。

纳米调配物	以nm为单位的直径大小	PDI	ζ电位(mV)
				LNP-TB4-PD3	91.4	0.148	-12.1
LNP-TB4-ID3	87.29	0.075	-11.5
				LNP-TB4-TR5	101.4	0.136	-11.1

表V：SLNP-TB4调配物及和共调配物的概括。